KR20140117706A - Ｉｌ－１ 결합 단백질 - Google Patents

Ｉｌ－１ 결합 단백질 Download PDF

Info

Publication number
KR20140117706A
KR20140117706A KR1020147026771A KR20147026771A KR20140117706A KR 20140117706 A KR20140117706 A KR 20140117706A KR 1020147026771 A KR1020147026771 A KR 1020147026771A KR 20147026771 A KR20147026771 A KR 20147026771A KR 20140117706 A KR20140117706 A KR 20140117706A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
seq
binding protein
residues
antibody
cdr
Prior art date
Application number
KR1020147026771A
Other languages
English (en)
Other versions
KR101539684B1 (ko
Inventor
청빈 우
도미니크 제이. 암브로시
춘-밍 시에
타리끄 갸유르
Original Assignee
애브비 인코포레이티드
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 애브비 인코포레이티드 filed Critical 애브비 인코포레이티드
Publication of KR20140117706A publication Critical patent/KR20140117706A/ko
Application granted granted Critical
Publication of KR101539684B1 publication Critical patent/KR101539684B1/ko

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/24—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
    • C07K16/244—Interleukins [IL]
    • C07K16/245—IL-1
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/3955—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against proteinaceous materials, e.g. enzymes, hormones, lymphokines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6875—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody being a hybrid immunoglobulin
    • A61K47/6879—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody being a hybrid immunoglobulin the immunoglobulin having two or more different antigen-binding sites, e.g. bispecific or multispecific immunoglobulin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0014—Skin, i.e. galenical aspects of topical compositions
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0031—Rectum, anus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0034—Urogenital system, e.g. vagina, uterus, cervix, penis, scrotum, urethra, bladder; Personal lubricants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0043—Nose
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0053—Mouth and digestive tract, i.e. intraoral and peroral administration
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0053—Mouth and digestive tract, i.e. intraoral and peroral administration
    • A61K9/006—Oral mucosa, e.g. mucoadhesive forms, sublingual droplets; Buccal patches or films; Buccal sprays
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/007—Pulmonary tract; Aromatherapy
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0085—Brain, e.g. brain implants; Spinal cord
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/14—Prodigestives, e.g. acids, enzymes, appetite stimulants, antidyspeptics, tonics, antiflatulents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/18—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for pancreatic disorders, e.g. pancreatic enzymes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/02—Nasal agents, e.g. decongestants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/04—Drugs for disorders of the respiratory system for throat disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/06—Antiasthmatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/16—Central respiratory analeptics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/02—Drugs for disorders of the urinary system of urine or of the urinary tract, e.g. urine acidifiers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/08—Drugs for disorders of the urinary system of the prostate
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
    • A61P15/02—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives for disorders of the vagina
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
    • A61P15/08—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives for gonadal disorders or for enhancing fertility, e.g. inducers of ovulation or of spermatogenesis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
    • A61P15/10—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives for impotence
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/04—Antipruritics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/06—Antipsoriatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/08—Antiseborrheics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/14—Drugs for dermatological disorders for baldness or alopecia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/06—Antigout agents, e.g. antihyperuricemic or uricosuric agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
    • A61P19/10—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease for osteoporosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A61P21/02—Muscle relaxants, e.g. for tetanus or cramps
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A61P21/04—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system for myasthenia gravis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/04—Centrally acting analgesics, e.g. opioids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/06—Antimigraine agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
    • A61P25/16—Anti-Parkinson drugs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/18—Antipsychotics, i.e. neuroleptics; Drugs for mania or schizophrenia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/22—Anxiolytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/24—Antidepressants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/30—Drugs for disorders of the nervous system for treating abuse or dependence
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/30—Drugs for disorders of the nervous system for treating abuse or dependence
    • A61P25/32—Alcohol-abuse
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A61P27/14—Decongestants or antiallergics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/02—Nutrients, e.g. vitamins, minerals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/06—Antihyperlipidemics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/12—Drugs for disorders of the metabolism for electrolyte homeostasis
    • A61P3/14—Drugs for disorders of the metabolism for electrolyte homeostasis for calcium homeostasis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A61P31/06—Antibacterial agents for tuberculosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A61P31/08—Antibacterial agents for leprosy
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/10—Antimycotics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/16—Antivirals for RNA viruses for influenza or rhinoviruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P33/00—Antiparasitic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P33/00—Antiparasitic agents
    • A61P33/02—Antiprotozoals, e.g. for leishmaniasis, trichomoniasis, toxoplasmosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P33/00—Antiparasitic agents
    • A61P33/02—Antiprotozoals, e.g. for leishmaniasis, trichomoniasis, toxoplasmosis
    • A61P33/06—Antimalarials
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P33/00—Antiparasitic agents
    • A61P33/02—Antiprotozoals, e.g. for leishmaniasis, trichomoniasis, toxoplasmosis
    • A61P33/08—Antiprotozoals, e.g. for leishmaniasis, trichomoniasis, toxoplasmosis for Pneumocystis carinii
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/08—Antiallergic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P39/00—General protective or antinoxious agents
    • A61P39/02—Antidotes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A61P5/14—Drugs for disorders of the endocrine system of the thyroid hormones, e.g. T3, T4
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A61P5/14—Drugs for disorders of the endocrine system of the thyroid hormones, e.g. T3, T4
    • A61P5/16—Drugs for disorders of the endocrine system of the thyroid hormones, e.g. T3, T4 for decreasing, blocking or antagonising the activity of the thyroid hormones
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A61P5/18—Drugs for disorders of the endocrine system of the parathyroid hormones
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A61P5/48—Drugs for disorders of the endocrine system of the pancreatic hormones
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A61P5/48—Drugs for disorders of the endocrine system of the pancreatic hormones
    • A61P5/50—Drugs for disorders of the endocrine system of the pancreatic hormones for increasing or potentiating the activity of insulin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/04—Antihaemorrhagics; Procoagulants; Haemostatic agents; Antifibrinolytic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/06—Antianaemics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/08—Plasma substitutes; Perfusion solutions; Dialytics or haemodialytics; Drugs for electrolytic or acid-base disorders, e.g. hypovolemic shock
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/10—Antioedematous agents; Diuretics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/04—Inotropic agents, i.e. stimulants of cardiac contraction; Drugs for heart failure
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/06—Antiarrhythmics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/08—Vasodilators for multiple indications
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/12—Antihypertensives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/14—Vasoprotectives; Antihaemorrhoidals; Drugs for varicose therapy; Capillary stabilisers
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • C07K14/54—Interleukins [IL]
    • C07K14/545—IL-1
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6863—Cytokines, i.e. immune system proteins modifying a biological response such as cell growth proliferation or differentiation, e.g. TNF, CNF, GM-CSF, lymphotoxin, MIF or their receptors
    • G01N33/6869—Interleukin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/46—Hybrid immunoglobulins
    • C07K16/468—Immunoglobulins having two or more different antigen binding sites, e.g. multifunctional antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/31—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency multispecific
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/33—Crossreactivity, e.g. for species or epitope, or lack of said crossreactivity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/35—Valency
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
    • C07K2317/64—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising a combination of variable region and constant region components
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
    • G01N2333/52—Assays involving cytokines
    • G01N2333/54—Interleukins [IL]
    • G01N2333/545—IL-1
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Abstract

IL-1α 및 IL-1β에 결합하는 단백질이, IL-1-관련 장애를 치료하고 예방하며 진단하기 위한 및, 세포, 조직, 시료, 및 조성물에서 IL-1α 및 IL-1β를 검출하기 위한 조성물 및 방법에서 이들의 용도와 함께 기술되어 있다.

Description

ＩＬ－１ 결합 단백질{IL-1 BINDING PROTEINS}
관련 출원의 전후 참조
본원은 2010년 5월 14일자로 출원된 미국 가특허원 제61/334,917호, 및 2010년 12월 21일자로 출원된 미국 가특허원 제61/425,701호의 우선권의 이익을 청구하며, 이들의 내용은 이들의 전문이 본원에 참조로 인용된다.
발명의 분야
본 발명은 IL-1 결합 단백질, 및 특히 류마티스 관절염, 골관절염, 건선, 다발경화증, 및 다른 자가면역 질환과 같은 급성 및 만성 면역학적 질환의 예방 및/또는 치료시 IL-1 결합 단백질의 용도에 관한 것이다.
발명의 배경
인터루킨-1 (IL-1) 및 종양 괴사 인자 (TNF)와 같은 사이토킨은 염증 과정의 매개인자인, 단핵세포 및 대식세포와 같은 다양한 세포들에 의해 생산된 분자이다. 인터루킨-1은 열, 프로스타글란딘 합성(예를 들면, 섬유모세포, 근육 세포 및 내피 세포), T-림프구 활성화, 및 인터루킨-2 생산을 포함하는, 광범위한 생물학적 및 생리학적 효과를 지닌 사이토킨이다.
IL-1 상과(superfamily)의 원래의 구성원들은 IL-1α, IL-1β 및 IL-1 수용체 길항제(IL-1Ra, IL-1RA, IL-1ra, IL-1Rα)이다. IL-1α 및 IL-1β는 감염에 대해 면역 방어에 관여하는 전-염증성(pro-inflammatory) 사이토킨이다. IL-1Rα는 IL-1α 및 IL-1β와 경쟁적으로 수용체에 결합하여, 면역 활성화시 이들의 역할을 차단하는 분자이다. 최근 몇해동안 IL-18[참조: Dinarello et al., FASEB　J., 8(15):1314-3225 (1994); Huising et al., Dev. Comp. Immunol., 28(5):395-413 (2004)] 및 IL-1α, IL-1β 또는 IL-1RA에 대해 구조적 상동성을 가진 6개 이상의 유전자를 포함하는 IL-1 상과에 다른 분자를 첨가하는 것이 알려져 왔다. 상기 후자의 6개의 구성원은 IL1F5, IL1F6, IL1F7, IL1F8, IL1F9, 및 IL1F10으로 명명된다. 따라서, IL-1α IL-1β 및 IL-1RA는 IL-1F1, IL-1F2, 및 IL-1F3으로 각각 재명명되어 왔다[참조: Sims et al., Trends Immunol., 22(10): 536-537 (2001); Dunn et al., Trends Immunol., 22(10): 533-536 (2001)]. IL-1 계열의 추가의 추정되는 구성원은, 비록 당해 명칭이 HGNC 유전자 계열 명명법 데이타베이스에서 공식적으로 허용되지 않지만, IL-33 또는 IL-1F11로 명명되어 기술되어 왔다.
IL-1α 및 IL-1β 둘 다는 대식세포, 단핵세포 및 수지상 세포에 의해 생산된다. 이들은 감염에 대해 신체의 면역 반응의 중요한 부분을 형성한다. 이들 사이토킨은 내피 세포에서 부착 인자의 발현을 증가시켜 병원체와 싸우는 세포인, 백혈구의 감염 부위로의 이행(transmigration)을 가능하도록 하고 시상하부 열조절 중심을 재설정하여, 열과 같이 자체 발현하는 상승된 체온을 초래한다. 따라서, IL-1은 내인성 발열원으로 명명된다. 상승된 체온은 신체의 면역계가 감염과 싸우는 것을 돕는다. IL-1은 또한 조혈의 조절시 중요하다. 말초 조직에서 IL-1β 생산은 또한 열과 관련된 통각과민(통증에 대한 증가된 민감성)과 관련되어 왔다[참조: Morgan et al., Brain Res., 1022(1-2): 96-100 (2004)]. 대부분의 경우, IL-1의 이들 2개 형태들은 동일한 세포 수용체에 결합한다. 당해 수용체는 2개의 관련되어 있지만 동일하지 않은, 대부분 특정의 다른 수용체와 공유된 경로를 통해 세포내 시그날을 전달하는 소 단위들로 구성된다. 이들은 선천적인 면역 수용체 및 IL-18에 대한 수용체의 톨 계열(Toll family)을 포함한다. IL-1α 및 IL-1β는 또한 열의 유도, 서파 수면(slow wave sleep), 및 중성구증가증, T- 및 B-림프구 활성화, 섬유모세포 증식, 특정 세포에 대한 세포독성, 콜라게나제의 유도, 간 급성상 단백질의 합성, 및 콜로니 자극인자 및 콜라겐의 증가된 생산을 포함하는, 유사한 생물학적 특성들을 소유한다.
IL-1의 2개의 명백한 형태를 암호화하는 cDNA는 분리되어 발현되어 왔으며; 이들 cDNA는 IL-1β[참조: Auron et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81: 7907-7911 (1984)] 및 IL-1α[참조: Lomedico et al., Nature, 312: 458-462 (1984)]로 명명된, 2개의 상이한 유전자 생성물들을 나타낸다. IL-1β는 mRNA 및 단백질 수준 둘다에서 사람 단핵세포에 의해 생산된 우세한 형태이다. 사람 IL-1의 2개 형태는 단지 26%의 아미노산 상동성을 공유한다. 이들의 명백한 폴리펩타이드 서열에도 불구하고, IL-1의 2개 형태는, 아미노산 상동성이 IL-1 분자의 별개의 영역으로 국한된다는 점에서, 구조적 유사성을 갖는다[참조: Auron et al., J.　Mol. Cell Immunol., 2: 169-177 (1985)].
IL-1α 및 IL-1β는 전구체 펩타이드로서 생산된다. 다시 말해서, 이들은 긴 단백질로 제조된 후, 성숙한 단백질로 명명되는, 보다 짧은, 활성 분자를 방출하기 위해 프로세싱(processing)된다. 예를 들어, 성숙한 IL-1β는, 카스파제-1 또는 인터루킨-1 전환 효소(ICE)로 명명되는, 단백질들의 카스파제 계열의 특정 구성원에 의한 절단 후 Pro-IL-1β로부터 방출된다. 사람 IL-1 상과의 각각의 구성원의 성숙한 형태의 3-차원 구조는 장벽-형 단백질(barrel-shaped protein)을 생산하는 12-14β-가닥으로 구성된다.
이러한 중요한 전염증성 사이토킨의 발견 이래로 거의 20년의 연구에서 IL-1에 대한 다양한 항체가 기술되어 왔지만, 염증 반응 및 자가면역 장애에 있어서 IL-1의 활성을 효과적으로 매개하거나 중화시킬 수 있는 개선된 항체에 대한 요구 및 시료 및 조직에서 IL-1β를 검출하는데 있어서의 용도의 요구가 여전히 있다.
발명의 요약
본 발명은 사람 IL-1α 및 IL-1β에 결합하는 단백질에 관한 것이다. 본 발명의 결합 단백질은 사람 IL-1α 및 IL-1β에 결합할 수 있는 항체, 이의 항원 결합 부분, 및 DVD-IgTM 결합 단백질과 같은 다가의, 다중특이적인 결합 단백질을 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 본 발명은 또한 본원에 기술된 IL-1α 및 IL-1β결합 단백질을 제조하고 사용하는 방법 뿐만 아니라, 시료에서 또는, IL-1 활성과 관련되거나 관련된 것으로 추측되는 개인에서 장애를 치료 또는 예방하는 방법에서 IL-1α 및 IL-1β를 검출하는 방법에 사용할 수 있는 각종 조성물도 제공한다.
하나의 양태에서, 본 발명은 제1의 VD1-(X1)n-VD2-C-(X2)n(여기서:
VD1은 제1의 중쇄 가변 도메인이고;
VD2는 제2의 중쇄 가변 도메인이며;
C는 중쇄 불변 도메인이고;
X1은 링커(linker)이며 단, CH1이 아니며;
X2는 Fc 영역이고;
n은 독립적으로 0 또는 1이다)를 포함하는 제1 폴리펩타이드 쇄; 및 제2의 VD1-(X1)n-VD2-C-(X2)n(여기서:
VD1은 제1의 경쇄 가변 도메인이고;
VD2는 제2의 경쇄 가변 도메인이며;
C는 경쇄 불변 도메인이고;
X1은 링커이며 단, CH1이 아니며;
X2는 Fc 영역을 포함하지 않고;
n은 독립적으로 0 또는 1이다)를 포함하는 제2의 폴리펩타이드 쇄를 포함하는, 결합 단백질을 제공하며, 여기서, 상기 제1의 폴리펩타이드 쇄에서, VD1은 서열 번호 60 내지 148, 196, 198, 200, 202, 204, 206, 208 및 210으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하고; VD2는 서열 번호 213 및 227로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하며;
여기서, 상기 제2의 폴리펩타이드 쇄에서, VD1은 서열 번호 149 내지 189, 197, 199, 201, 203, 205, 207, 209 및 211로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하고; VD2는 서열 번호 216 및 229로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하며;
여기서, 결합 단백질은 사람 IL-1β 및 사람 IL-1α에 결합한다.
하나의 양태에서, 위에서 기술한 결합 단백질은 서열 번호 212, 217, 226, 230, 232, 234, 및 236으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 제1의 폴리펩타이드 쇄를 포함한다.
다른 양태에서, 위에서 기술한 결합 단백질은 서열 번호 215, 218, 228, 231, 233, 235, 및 237로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 제2의 폴리펩타이드 쇄를 포함한다.
본 발명의 다른 국면에서, 결합 단백질은 제1의 VD1-(X1)n-VD2-C-(X2)n(여기서:
VD1은 제1의 중쇄 가변 도메인이고;
VD2는 제2의 중쇄 가변 도메인이며;
C는 중쇄 불변 도메인이고;
X1은 링커이며 단, CH1이 아니고;
X2는 Fc 영역이며;
n은 독립적으로 0 또는 1이다)를 포함하는 제1의 폴리펩타이드 쇄; 및
제2의 VD1-(X1)n-VD2-C-(X2)n(여기서:
VD1은 제1의 경쇄 가변 도메인이고;
VD2는 제2의 경쇄 가변 도메인이며;
C는 경쇄 불변 도메인이고;
X1은 링커이며 단, CH1이 아니며;
X2는 Fc 영역을 포함하지 않고;
n은 독립적으로 0 또는 1이다)를 포함하는 제2의 폴리펩타이드 쇄를 포함하며;
여기서, 상기 제1의 폴리펩타이드 쇄에서, VD1은 서열 번호 213 및 227로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하고; VD2는 서열 번호 60 내지 148, 196, 198, 200, 202, 204, 206, 208 및 210으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하며;
여기서, 상기 제2의 폴리펩타이드 쇄에서, VD1은 서열 번호 216 및 229로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하고; VD2는 서열 번호 149 내지 189, 197, 199, 201, 203, 205, 207, 209 및 211로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하며;
여기서, 결합 단백질은 사람 IL-1β 및 사람 IL-α에 결합한다.
다른 양태에서, 위에서 기술한 결합 단백질은 서열 번호 219 및 221로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 제1의 폴리펩타이드 쇄를 포함한다.
다른 양태에서, 위에서 기술한 결합 단백질은 서열 번호 220 및 222로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 제2의 폴리펩타이드 쇄를 포함한다.
다른 국면에서, 본 발명은 위에서 기술된 결합 단백질을 제공하며, 여기서:
상기 제1의 폴리펩타이드 쇄는 서열 번호 212의 아미노산 서열을 포함하는 경우, 상기 제2의 폴리펩타이드 쇄는 서열 번호 215, 228, 231, 233 및 235로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하고;
상기 제1의 폴리펩타이드 쇄는 서열 번호 217의 아미노산 서열을 포함하는 경우, 상기 제2의 폴리펩타이드 쇄는 서열 번호 218 및 237로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하며;
상기 제1의 폴리펩타이드 쇄는 서열 번호 219의 아미노산 서열을 포함하는 경우, 상기 제2의 폴리펩타이드 쇄는 서열 번호 220의 아미노산 서열을 포함하고;
상기 제1의 폴리펩타이드 쇄가 서열 번호 221의 아미노산 서열을 포함하는 경우, 상기 제2의 폴리펩타이드 쇄는 서열 번호 222를 포함하고;
상기 제1의 폴리펩타이드 쇄가 서열 번호 226의 아미노산 서열을 포함하는 경우, 상기 제2의 폴리펩타이드 쇄는 서열 번호 228, 215, 231, 233, 및 235로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하며;
상기 제1의 폴리펩타이드 쇄가 서열 번호 230의 아미노산 서열을 포함하는 경우, 상기 제2의 폴리펩타이드 쇄는 서열 번호 231, 215, 228, 233, 및 235로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하고;
상기 제1의 폴리펩타이드 쇄가 서열 번호 232의 아미노산 서열을 포함하는 경우, 상기 제2의 폴리펩타이드 쇄는 서열 번호 233, 215, 228, 231, 및 235로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하며;
상기 제1의 폴리펩타이드 쇄가 서열 번호 234의 아미노산 서열을 포함하는 경우, 상기 제2의 폴리펩타이드 쇄는 서열 번호 235, 215, 228, 231, 및 233으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하고;
상기 제1의 폴리펩타이드 쇄가 서열 번호 236의 아미노산 서열을 포함하는 경우, 상기 제2의 폴리펩타이드 쇄는 서열 번호 237의 아미노산 서열을 포함한다.
다른 국면에서, 본 발명은 위에서 기술한 단백질을 제공하며, 여기서:
상기 제1의 폴리펩타이드 쇄는 서열 번호 212를 포함하고, 상기 제2의 폴리펩타이드 쇄는 서열 번호 215를 포함하거나;
상기 제1의 폴리펩타이드 쇄는 서열 번호 217을 포함하고, 상기 제2의 폴리펩타이드 쇄는 서열 번호 218을 포함하거나;
상기 제1의 폴리펩타이드 쇄는 서열 번호 219를 포함하고, 상기 제2의 폴리펩타이드 쇄는 서열 번호 220을 포함하거나;
상기 제1의 폴리펩타이드 쇄는 서열 번호 221를 포함하고, 상기 제2의 폴리펩타이드 쇄는 서열 번호 222를 포함하거나;
상기 제1의 폴리펩타이드 쇄는 서열 번호 226을 포함하고, 상기 제2의 폴리펩타이드 쇄는 서열 번호 228을 포함하거나;
상기 제1의 폴리펩타이드 쇄는 서열 번호 230을 포함하고, 상기 제2의 폴리펩타이드 쇄는 서열 번호 231을 포함하거나;
상기 제1의 폴리펩타이드 쇄는 서열 번호 232를 포함하고, 상기 제2의 폴리펩타이드 쇄는 서열 번호 233을 포함하거나;
상기 제1의 폴리펩타이드 쇄는 서열 번호 234를 포함하고, 상기 제2의 폴리펩타이드 쇄는 서열 번호 235를 포함하거나;
상기 제1의 폴리펩타이드 쇄는 서열 번호 236을 포함하고, 상기 제2의 폴리펩타이드 쇄는 서열 번호 237을 포함한다.
하나의 양태에서, 위에서 기술한 본 발명의 결합 단백질은 2개의 제1의 폴리펩타이드 쇄 및 2개의 제2의 폴리펩타이드 쇄를 포함한다.
다른 국면에서, 위에서 기술한 결합 단백질에서 X1 또는 X2는 서열 번호 26 내지 57, 233, 224, 및 225로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 아미노산 서열이다.
다른 양태에서, 본 발명은 위에서 기술한 결합 단백질을 제공하며, 여기서 Fc 영역은 천연의 서열 Fc 영역 및 가변 서열 Fc 영역으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 다른 양태에서, Fc 영역은 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA, IgM, IgE, 및 IgD로부터의 Fc 영역으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.
다른 양태에서, 본 발명은 위에서 기술된 결합 단백질을 포함하고 제제를 추가로 포함하는 결합 단백질 접합체를 제공한다. 이러한 제제는 면역부착 분자, 영상화제(imaging agent), 치료제 및 세포독성제를 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 바람직한 영상화제는 방사선표지, 효소, 형광성 표지, 발광성 표지, 생물발광성 표지, 자기 표지, 및 바이오틴을 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 바람직한 방사선표지는 3H, 14C, 35S, 90Y, 99Tc, 111In, 125I, 131I, 177Lu, 166Ho, 및 153Sm을 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 바람직한 치료제 또는 세포독성제는 항-대사물질, 알킬화제, 항생제, 성장 인자, 사이토킨, 항-혈관형성제, 항-유사분열제, 안트라사이클린, 독소 및 세포사멸제(apoptotic agent)를 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
본 발명은 또한 항원 결합 도메인을 포함하는 결합 단백질을 제공하며, 여기서 결합 단백질은 사람 IL-1β에 결합할 수 있고 항원-결합 도메인은 6개의 CDR, 즉, 하기에 정의된 바와 같은 CDR-H1, CDR-H2, CDR-H3, CDR-L1, CDR-L2, 및 CDR-L3을 포함한다:
CDR-H1: X1-Y-D-M-S (서열 번호 190)(여기서, X1은 S, K 또는 R이다);
CDR-H2: Y-X2-S-X4-G-G-X7-G-T-Y-Y-P-D-X14-X15-K-G(서열 번호 191)(여기서,
X2는 I 또는 V이고;
X4는 S 또는 H이며;
X7은 G 또는 A이고;
X14는 T 또는 S이며;
X15는 V 또는 A이다);
CDR-H3: G-G-V-X4-K-G-X7-F-D-X10 (서열 번호 192)(여기서,
X4는 T 또는 Y이고;
X7은 Y 또는 C이며;
X10은 V, E, L, M, Q, 또는 Y이다);
CDR-L1: R-A-S-G-N-I-X7-X8-X9-L-X11 (서열 번호 193)(여기서,
X7은 H, Y, 또는 W이고;
X8은 N, G, T, Q, E, H, D, 또는 K이며;
X9는 Y 또는 W이고;
X11은 T, A, 또는 N이다);
CDR-L2: X1-A-K-X4-L-X6-X7(서열 번호 194)(여기서,
X1은 N, Q, 또는 D이고;
X4는 T, N, I, E, 또는 S이며;
X6은 A, M, 또는 E이고;
X7은 D, E, S, 또는 A이다); 및
CDR-L3: Q-X2-F-W-X5-X6-P-X8-X9 (서열 번호 195)(여기서,
X2는 H 또는 Q이고;
X5는 S, N, T, K, R, 또는 M이며;
X6은 I 또는 L이고;
X8은 Y 또는 A이며;
X9는 T, I, 및 N이고;
단, CDR-H1이 S-Y-D-M-S (서열 번호 17)인 경우, CDR-H2는 Y-I-S-S-G-G-G-G-T-Y-Y-P-D-T-V-K-G (서열 번호 18)일 수 없으며;
CDR-H3는 G-G-V-T-K-G-Y-F-D-V (서열 번호 19)일 수 없고;
CDR-L1은 R-A-S-G-N-I-H-N-Y-L-T (서열 번호 20)일 수 없으며;
CDR-L2는 N-A-K-T-L-A-D (서열 번호 21)일 수 없고; 및
CDR-L3는 Q-H-F-W-S-I-P-Y-T (서열 번호 22)일 수 없다.
하나의 양태에서, 위에서 기술된 분리된 결합 단백질은 하기로 이루어진 CDR 서열의 그룹으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 적어도 하나의 CDR을 포함한다:
Figure pat00001
Figure pat00002
Figure pat00003
Figure pat00004
Figure pat00005
Figure pat00006
Figure pat00007
Figure pat00008
Figure pat00009
Figure pat00010
Figure pat00011
Figure pat00012
Figure pat00013

다른 양태에서, 위에서 기술한 결합 단백질은 적어도 3개의 CDR을 포함하며, 여기서 3개의 CDR은 하기로 이루어진 CDR 세트의 그룹으로부터 선택되는 CDR로부터 온 것이다:
Figure pat00014
Figure pat00015
Figure pat00016
Figure pat00017
Figure pat00018
Figure pat00019
Figure pat00020
Figure pat00021
Figure pat00022
Figure pat00023
Figure pat00024
Figure pat00025
Figure pat00026
하나의 양태에서, 상기 기술된 결합 단백질은 CDR 세트의 상기 그룹으로부터 선택되는 2개의 CDR 세트로부터의 CDR을 포함한다.
다른 양태에서, 본 발명은 상기 그룹으로부터의 2개의 CDR 세트로부터의 CDR을 포함하는 결합 단백질을 제공하여, 여기서 2개의 CDR 세트는 하기로 이루어진 그룹으로부터 선택된다:
Figure pat00027
Figure pat00028

다른 양태에서, 위에서 기술된 결합 단백질은 사람 수용체 골격(framework)을 추가로 포함한다. 바람직하게는 사람 골격은 서열 번호 7 내지 10, 13 내지 16, 25, 240 내지 316, 및 317 내지 381로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함한다. 하나의 양태에서, 본 발명의 결합 단백질은 서열 번호 7 내지 10 및 13 내지 16으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 사람 골격 서열을 포함한다.
본 발명의 결합 단백질은 적어도 하나의 골격 영역 아미노산 치환을 포함하는 사람 수용체 골격을 포함하는 것들을 포함하며, 여기서 골격의 아미노산 서열은 상기 사람 수용체 골격의 서열에 대해 적어도 65% 동일하며 상기 사람 수용체 골격에 대해 동일한 적어도 70개 아미노산 잔기를 포함한다.
다른 양태에서, 본 발명의 결합 단백질은 사람 수용체 골격을 포함하며, 여기서 상기 수용체 골격은 주요(key) 잔기에서 적어도 하나의 골격 영역 아미노산 치환을 포함하며, 상기 주요 잔기는, CDR에 인접한 잔기; 글리코실화 부위 잔기; 드문 잔기(rare residue); 사람 IL-1β와 상호작용할 수 있는 잔기; CDR과 상호작용할 수 있는 잔기; 정규 잔기(canonical residue); 중쇄 가변 영역과 경쇄 가변 영역 사이의 접촉 잔기; 베르니에 영역(Vernier zone)내 잔기; 및 쵸티아(Chothia)-정의된 가변 중쇄 CDR1과 카밧(Kabat)-정의된 제1의 중쇄 골격 사이에서 오버랩된 영역내 잔기로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 예시적인 양태에서, 본 발명의 결합 단백질은 주요 잔기를 포함하고, 여기서 상기 주요 잔기는 2H, 4H, 24H, 26H, 27H, 29H, 34H, 35H, 37H, 39H, 44H, 45H, 47H, 48H, 49H, 50H, 51H, 58H, 59H, 60H, 63H, 67H, 69H, 71H, 73H, 76H, 78H, 91H, 93H, 94H, 2L, 4L, 25L, 29L, 27bL, 33L, 34L, 36L, 38L, 43L, 44L, 46L, 47L, 48L, 49L, 55L, 58L, 62L, 64L, 71L, 87L, 89L, 90L, 91L, 94L, 95L(모두 카밧 번호매김)으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 본 발명의 결합 단백질의 사람화를 위한 이들 잔기의 예시적인 서브세트는 27H, 48H, 67H, 69H, 93H, 36L, 43L, 46L, 47L, 49L, 58L, 71L, 및 87L로 이루어진다.
다른 양태에서, 본 발명의 결합 단백질은 컨센서스(consensus) 사람 가변 도메인을 포함한다.
하나의 양태에서, 본 발명의 IL-1β 결합 단백질은 서열 번호 60 내지 189로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 적어도 하나의 가변 도메인을 포함한다.
다른 양태에서, 본 발명의 결합 단백질은 서열 번호 60 내지 148, 196, 198, 200, 202, 204, 206, 208, 및 210으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 적어도 하나의 가변 중쇄(VH) 영역(또는 도메인)을 포함한다.
다른 양태에서, 본 발명에 따른 결합 단백질은 서열 번호 149 내지 189로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 적어도 하나의 가변 경쇄(VL) 영역(또는 도메인)을 포함한다.
여전히 다른 양태에서, 본 발명에 따른 결합 단백질은 서열 번호 60 내지 148, 196, 198, 200, 202, 204, 206, 208, 및 210으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 적어도 하나의 VH 영역, 및 서열 번호 149 내지 189, 197, 199, 201, 203, 205, 207, 209, 및 211로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 적어도 하나의 VL 영역을 포함한다.
하나의 양태에서, 본 발명에 따른 결합 단백질은 2개의 가변 도메인들을 포함하며, 여기서 2개의 가변 도메인은 하기로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함한다:
Figure pat00029
Figure pat00030
다른 양태에서, 본원에 기술된 IL-1β 결합 단백질은 면역글로불린 분자, scFv, 단클론 항체, 사람화된 항체, 키메라 항체, 사람화된 항체, Fab 단편, Fab' 단편, F(ab')2, Fv, 및 이황화물 연결된 Fv로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.
본 발명의 하나의 국면에서, 본원에 기술된 결합 단백질은 IL-1의 생물학적 기능을 조절할 수 있다. 다른 국면에서, 본원에 기술된 결합 단백질은 IL-1을 중화시킬 수 있다.
하나의 양태에서, 본원에 기술된 결합 단백질은 표면 플라스몬 공명에 의해 측정된 것으로서, 적어도 약 102M-1s-1; 적어도 약 103M-1s-1; 적어도 약 104M-1s-1; 적어도 약 105M-1s-1; 및 적어도 약 106M-1s-1으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 IL-1β에 대한 결합 속도 상수(on rate constant; Kon)를 갖는다.
다른 양태에서, 본원에 기술된 결합 단백질은 표면 플라스몬 공명에 의해 측정된 것으로서, 약 10-3s-1 이하; 약 10-4s-1 이하; 약 10-5s-1 이하; 및 약 10-6s-1 이하로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 IL-1β에 대한 해리 속도 상수(Koff)를 갖는다.
다른 양태에서, 본원에 기술된 결합 단백질은 약 10-7 M 이하; 약 10-8 M 이하; 약 10-9 M 이하; 약 10-10 M 이하; 약 10-11 M 이하; 약 10-12 M 이하; 및 10-13 M 이하로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 IL-1β에 대한 해리 상수 (KD)를 갖는다.
하나의 국면에서, 본 발명은 본원에 기술된 결합 단백질을 포함하고 링커 또는 면역글로불린 불변 도메인을 추가로 포함하는 결합 단백질 작제물을 제공한다. 하나의 양태에서, 결합 단백질 작제물은 결합 단백질을 포함하며, 여기서 결합 단백질은 면역글로불린 분자, 이황화물 연결된 Fv, 단클론 항체, scFv, 키메라 항체, CDR-이식된 항체, 디아바디(diabody), 사람화된 항체, 다중특이적 항체, Fab, 이중 특이적 항체, Fab', 이특이적 항체, 및 F(ab')2, DVD-IgTM 및 Fv로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.
하나의 양태에서, 결합 단백질 작제물은 사람 IgM 불변 도메인, 사람 IgG4 불변 도메인, 사람 IgG1 불변 도메인, 사람 IgE 불변 도메인, 사람 IgG2 불변 도메인, 및 사람 IgG3 불변 도메인, 및 사람 IgA 불변 도메인으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 중쇄 면역글로불린 불변 도메인을 포함한다.
다른 양태에서, 결합 단백질 작제물은 서열 번호 3, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 및 서열 번호 6으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 아미노산 서열을 갖는 면역글로불린 불변 도메인을 포함한다.
본 발명은 또한 본원에 기술된 결합 단백질 작제물을 포함하고 면역부착 분자, 영상화제, 치료제 및 세포독성제로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 제제를 추가로 포함하는 결합 단백질 접합체를 제공한다. 본원에 기술된 단백질 접합체를 결합시키는데 있어서 제제 모이어티(moiety)로 유용한 영상화제는 방사선표지, 효소, 형광성 표지, 발광성 표지, 생물발광성 표지, 자기 표지, 및 바이오틴을 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 하나의 양태에서, 방사선표지는 3H, 14C, 35S, 90Y, 99Tc, 111In, 125I, 131I, 177Lu, 166Ho, 및 153Sm으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.
다른 양태에서, 결합 단백질 접합체는 항-대사물질, 알킬화제, 항생제, 성장 인자, 사이토킨, 항-혈관형성제, 항-유사분열제, 안트라사이클린, 독소 및 세포사멸제로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 치료제 또는 세포독성제인 제제를 포함한다.
하나의 양태에서, 본원에 기술된 결합 단백질, 결합 단백질 작제물, 또는 결합 단백질 접합체는 사람 글리코실화 패턴을 보유한다.
본원에 기술된 결합 단백질, 결합 단백질 작제물, 및 결합 단백질 접합체는 가용성 단백질 또는 결정으로서 존재할 수 있다. 하나의 양태에서, 이러한 결정은 담체-유리된 약제학적 제어 방출형 결정이다. 다른 양태에서, 본원에 기술된 결합 단백질, 결합 단백질 작제물, 또는 결합 단백질 접합체의 결정성 형태는 이의 가용성 대응물보다 생체내 반감기가 더 크다. 다른 양태에서, 본원에 기술된 결합 단백질, 결합 단백질 작제물, 또는 결합 단백질 접합체의 결정은 이의 가용성 대응물의 생물학적 활성을 유지한다.
본 발명의 조성물은:
(a) 본원에 기술된 결정화된 결합 단백질, 결합 단백질 작제물, 또는 결합 단백질 접합체, 및 성분을 포함하는 제형; 및
(b) 적어도 하나의 중합체 담체를 포함하는, 본원에 기술된 결정화된 결합 단백질, 결합 단백질 작제물, 또는 결합 단백질 접합체의 방출을 위한 조성물을 포함한다.
본 발명의 조성물에 유용한 중합체 담체는 폴리(아크릴산), 폴리(시아노아크릴레이트), 폴리(아미노산), 폴리(무수물), 폴리(뎁시펩타이드), 폴리(에스테르), 폴리(락트산), 폴리(락틱-코-글리콜산) 또는 PLGA, 폴리(b-하이드록시부티레이트), 폴리(카프로락톤), 폴리(디옥사논); 폴리(에틸렌 글리콜), 폴리((하이드록시프로필)메타크릴아미드, 폴리[(오가노)포스파젠], 폴리(오르토 에스테르), 폴리(비닐 알코올), 폴리(비닐피롤리돈), 말레산 무수물-알킬 비닐 에테르 공중합체, 플루로닉 폴리올, 알부민, 알기네이트, 셀룰로즈 및 셀룰로즈 유도체, 콜라겐, 피브린, 젤라틴, 하이알루론산, 올리고사카라이드, 글리카미노글리칸, 황산화 다당류, 이들의 블렌드 및 공중합체로 이루어진 그룹 중 하나 이상을 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
다른 국면에서, 본 발명의 조성물의 성분은 알부민, 수크로즈, 트레할로즈, 락티톨, 젤라틴, 하이드록시프로필-β-사이클로덱스트린, 메톡시폴리에틸렌 글리콜 및 폴리에틸렌 글리콜로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.
본 발명은 또한 본원에 기술된 결합 단백질, 결합 단백질 작제물, 또는 결합 단백질 접합체, 및 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다. 본 발명의 약제학적 조성물은 적어도 하나의 추가의 제제를 추가로 포함할 수 있다. 하나의 양태에서, 이러한 추가의 제제는 치료제, 영상화제, 세포독성제, 혈관형성 억제제; 키나제 억제제; 동시-자극 분자 차단제; 부착 분자 차단제; 항-사이토킨 항체 또는 이의 기능성 단편; 메토트렉세이트; 사이클로스포린; 라파마이신; FK506; 검출가능한 표지 또는 리포터; TNF 길항제; 항류마티스제; 근육 이완제, 마약, 비-스테로이드성 소염 약물(NSAID), 진통제, 마취제, 진정제, 국소 마취제, 신경근 차단제, 항미생물제, 항건선제, 코르티코스테로이드, 단백동화 스테로이드, 적혈구형성인자, 면역제, 면역글로불린, 면역억제제, 성장 호르몬, 호르몬 대체 약물, 방사성 의약품, 항우울제, 정신병치료제, 자극인자, 천식 의약, 베타 작용제, 흡입성 스테로이드, 에피네프린 또는 이의 유사체, 사이토킨, 및 사이토킨 길항제를 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
하나의 양태에서, 본 발명의 약제학적 조성물을 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하며, 여기서 담체는 또한 조성물 속에서 결합 단백질, 결합 단백질 작제물, 또는 결합 단백질 접합체의 흡수 또는 분산을 증가시기기 위한 보조제로서 제공된다. 예시적인 보조제는 하이알루로니다제이다.
다른 양태에서, 약제학적 조성물은, IL-1β 활성이 유해한 장애를 치료하기 위한 적어도 하나의 추가의 치료제를 추가로 포함한다.
하나의 양태에서, 본 발명은 본원에 기술된 결합 단백질의 하나 이상의 아미노산 서열을 암호화하는 분리된 핵산을 제공한다. 이러한 핵산은 각종 유전적 분석을 수행하기 위해 또는 본원에 기술된 결합 단백질의 하나 이상의 특성을 발현시키거나, 특성화하거나 개선시키기 위해 벡터내로 삽입시킬 수 있다. 벡터는 본원에 기술된 결합 단백질의 하나 이상의 아미노산 서열을 암호화하는 하나 이상의 핵산 분자를 포함할 수 있으며, 여기서 하나 이상의 핵산 분자는 벡터를 수반하는 특정 숙주 세포내에서 결합 단백질의 발현을 허용하는 적절한 전사 및/또는 해독 서열에 작동적으로 연결된다. 본원에 기술된 결합 단백질의 아미노산 서열을 암호화하는 핵산을 클로닝하거나 발현시키기 위한 벡터의 예는 pcDNA, pTT, pTT3, pEFBOS, pBV, pJV, 및 pBJ를 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
본 발명은 또한 본원에 기술된 결합 단백질의 하나 이상의 아미노산 서열을 암호화하는 핵산을 포함하는 벡터를 포함하는 숙주 세포를 제공한다. 본 발명에 유용한 숙주 세포는 원핵 또는 진핵 세포일 수 있다. 예시적인 원핵 숙주 세포는 에스케리키아 콜라이(Escherichia coli)이다. 본 발명에서 숙주 세포로 유용한 진핵 세포는 원생생물 세포, 동물 세포, 식물 세포 및 진균 세포를 포함한다. 예시적인 진균 세포는 사카로마이세스 세레비지아에(Saccharomyces cerevisiae)를 포함하는 효모 세포이다. 본 발명에 따른 숙주 세포로서 유용한 예시적인 동물 세포는 포유동물 세포, 조류 세포, 및 곤충 세포를 포함하지만, 이에 한정되지 않는다. 바람직한 포유동물 세포는 CHO 및 COS 세포를 포함한다. 본 발명에 따른 숙주 세포로서 유용한 곤충 세포는 곤충 Sf9 세포이다.
다른 국면에서, 본 발명은 IL-1α 및/또는 IL-1β에 결합할 수 있는 결합 단백질을 생산하기에 충분한 조건하에서 배양 배지 속에서 결합 단백질을 암호화하는 벡터를 포함하는 숙주 세포를 배양함을 포함하여, 본원에 기술된 결합 단백질을 생산하는 방법을 제공한다. 이렇게 생산된 단백질은 분리하여 본원에 기술된 각종 조성물 및 방법에 사용될 수 있다.
다른 양태에서, 본 발명은 사람 IL-1을 본원에 기술된 결합 단백질과 접촉시켜, 사람 IL-1 활성이 감소되도록 함을 포함하여, 사람 IL-1 활성을 감소시키는 방법을 제공한다.
본 발명의 다른 양태는 대상체에게 본원에 기술된 결합 단백질을 투여함으로써 치료가 달성되도록 하는, 장애에 대해 대상체를 치료하는 방법을 제공한다.
다른 양태에서, 본원 기술된 결합 단백질은 하기로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 장애를 치료하는데 유용하다:
당뇨병, 포도막염, 신경병증성 통증, 골관절염성 통증, 염증성 통증, 류마티스 관절염, 골관절염, 소아 만성 관절염, 패혈성 관절염, 라임 관절염(Lyme arthritis), 건선 관절염, 반응성 관절염, 척추관절병(spondyloarthropathy), 전신 홍반 루푸스 (SLE), 크론 병(Crohn's disease), 궤양성 대장염, 염증성 장 질환, 자가면역 당뇨병, 인슐린 의존성 진성 당뇨병, 갑상샘염, 천식, 알레르기 질환, 건선, 피부염, 피부경화증, 이식 대 숙주 질환(graft versus host disease), 장기 이식 거부, 장기 이식과 관련된 급성 면역 질환; 장기 이식과 관련된 만성 면역 질환, 사르코이드증(sarcoidosis) , 죽상경화증, 파종성 혈관내 응고 (DIC), 가와사키 병(Kawasaki's disease), 그레이브 병(Grave's disease), 콩팥 증후군, 만성 피로 증후군, 베게너 육아종증(Wegener's granulomatosis), 헤노흐-쉔라인 자반증(Henoch-Schoenlein purpurea), 신장의 미세 혈관염, 만성 활성 간염, 자가면역 포도막염, 패혈 쇼크, 독성 쇼크 증후군, 패혈증 증후군, 악액질, 전염병, 기생충 질환, 급성 횡단성 척수염, 헌팅턴 무도병, 파킨슨 병, 알츠하이머 병, 뇌졸중, 원발성 담즙성 간경변, 용혈성 빈혈, 악성 종양(malignancy), 심부전, 심근 경색, 애디슨 병(Addison's disease), 산발성 다분비선 결핍 유형 I, 다분비선 결핍 유형 II (슈미트 증후군), 급성 호흡곤란 증후군 (ARDS), 탈모증, 원형 탈모증, 혈청반응 음성인 관절병증, 관절병증, 라이터 질환(Reiter's disease), 건선 관절병증, 궤양성 대장염 관절병증, 장병원성 윤활막염, 클라미디아, 예르시니아(Yersinia) 및 살모넬라 관련 관절병증, 척추관절병증, 아테롬성 질환/동맥경화, 아토피성 알레르기, 자가면역 수포성 질환, 보통 천포창, 낙엽상 천포창, 유사천포창, 선형 IgA 질환, 자가면역성 용혈성 빈혈, 쿰즈(Coombs) 양성 용혈성 빈혈, 후천성 악성 빈혈, 소아 악성 빈혈, 근육통성 뇌염/로얄 프리 질환(Royal Free disease), 만성 피부 점막 칸디다증, 거대 세포 동맥염 (GCA), 원발성 경화 간염, 잠복성 자가면역 간염, 후천성 면역 결핍증 (AIDS), 후천성 면역 결핍 관련 질환, B형 간염, C형 간염, 일반적인 다양한 면역 결핍증(보통의 가변성 저감마글로불린혈증), 확장성 심근병증, 여성 불임증, 난소 기능상실, 조기 폐경, 섬유성 폐 질환, 잠복성 섬유화 폐포 염, 사후 염증성 간질성 폐 질환, 간질성 폐렴, 결합 조직 질환 관련 간질성 폐 질환, 혼합된 결합 조직 질환 관련 폐 질환, 전신 경화증 관련된 간질성 폐 질환, 류마티스 관절염 관련 간질성 폐 질환, 전신 홍반 루푸스 관련 폐 질환, 피부근육염/다발근육염 관련 폐 질환, 쇼그렌 질환(Sjoegren's disease) 관련 폐 질환, 강직성 척추염 관련 폐 질환, 혈관염성 확산 폐 질환, 헤모시덴린증 관련 폐 질환, 약물 유발 간질성 폐 질환, 섬유증, 방사선 섬유증, 폐쇄 세기관지염, 만성 호산구성 폐렴, 림프구 침윤성 폐 질환, 감염후 간질성 폐 질환, 통풍성 관절염, 자가면역 간염, 제1형 자가면역 간염(전형적 자가면역 또는 루포이드 간염), 제2형 자가면역 간염(항-LKM 항체 간염), 자가면역 매개된 저혈당증, 흑색극세포증을 동반한 타입 B의 인슐린 내성, 부갑상샘저하증, 골관절염, 원발성 경화 담관염, 건선 1형, 건선 2형, 특발성 백혈구 감소증, 자가면역 중성구 감소증, 신장 질환 NOS, 사구체신장염, 신장의 미세 혈관염, 라임 질환, 원반모양 홍반 루푸스, 특발성 남성 불임, 질소 산화물-관련 남성 불임, 정자 자가면역, 다발성 경화증 (1차 진행성, 2차 진행성, 재발 완화성을 포함한 모든 하위 유형), 교감 안염, 결합 조직 질환에 부수적인 폐 고혈압, 굿패스춰(Goodpasture) 증후군, 결절성 다발의 폐 발현, 급성 류마티스 열, 류마티스 척추염, 스틸 병(Still's disease), 전신 경화증, 쇼그렌 증후군, 타카야스(Takayasu) 병/동맥염, 자가면역 저혈소판증 (AITP), 특발성 저혈소판증, 자가면역 갑상선 질환, 갑상선기능항진증, 갑상선종의 자가면역 갑상선기능저하증 (하시모토 병), 위축성 자가면역 갑상선기능저하증, 원발성 점액수종, 수정체성 포도막염, 원발성 혈관염, 백반증, 급성 간 질환, 만성 간 질환, 알코올성 간경변, 알코올 유발 간 손상, 쓸개즙정체, 특이한 간 질환, 약물 유발 간염, 비 알콜성 지방간염, 알레르기, 그룹 B 스트렙토코커스(Streptococci) (GBS) 감염, 정신 장애 (예를 들어, 우울증 및 정신 분열증), Th2 유형 및 Th1 유형 매개 질환, 급성 및 만성 통증 (통증의 상이한 형태들), 암(예를 들어, 폐, 유방, 위, 방광, 결장, 췌장, 난소, 전립선, 및 직장 암), 조혈성 악성종양, 백혈병, 림프종, 무 베타 지방단백혈증, 말단청색증, 급성 및 만성 기생성 또는 감염성 과정, 급성 백혈병, 급성 림프모구 백혈병 (ALL), T-세포 ALL, FAB ALL, 급성 골수성 백혈병 (AML), 급성 또는 만성 세균 감염, 급성 췌장염, 급성 신부전, 아데노암종(adenocarcinomas), 심방 이소성 박동, AIDS 치매 병변군, 알코올유도 간염, 알레르기성 결막염, 알레르기성 접촉 피부염, 알레르기성 비염, 동종 이식 거부, 알파-l-안티트립신 결핍증, 근육위축가쪽 경화증, 빈혈, 협심증, 전각 세포 변성, 항-CD3 치료요법, 항인지질 증후군, 항-수용체 과민성 반응, 대동맥 및 말초 동맥류, 대동맥 박리, 동맥 고혈압, 동맥 경화, 동정맥루, 운동 실조증, 심방 세동(지속성 또는 발작성), 심방 조동(atrial flutter), 심방 심실 블록, B 세포 림프종, 뼈 이식 거부, 골수 이식 (BMT) 거부, 번들 브랜치 블록(bundle branch block), 버킷 림프종(Burkitt's lymphoma), 화상, 심장성 부정맥, 심장마비 증후군, 심장 종양, 심근병증, 심폐 바이패스 염증 반응, 연골 이식 거부, 소뇌 피질 변성, 소뇌 장애, 혼란성 또는 다초점성 심방 빈맥, 화학 치료요법 관련 장애, 만성 골수구성 백혈병 (CML), 만성 알코올 중독, 만성 염증성 병리, 만성 림프성 백혈병 (CLL), 만성 폐쇄성 폐 질환 (COPD), 만성 살리실산의 중독, 결장직장 암종, 울혈성 심부전, 결막염, 접촉성 피부염, 폐 심장증, 관상 동맥 질환, 크로이츠펠트-야콥 병(Creutzfeldt-Jakob disease), 배양물 음성 패혈증, 낭성 섬유증, 사이토킨 치료요법 관련 장애, 권투선수 치매, 탈수초 병, 뎅기열 출혈성 발열, 피부염, 피부과 병태, 진성 당뇨병, 당뇨병성 동맥경화 질환, 광범위 레비소체 병(diffuse Lewy body disease), 확대 울혈성 심근병증, 기저 신경절의 장애, 중년의 다운 증후군, CNS 도파민 수용체를 차단하는 약물에 의해 유도된 약물-유발 운동 장애, 약물 민감도, 습진, 뇌척수염, 심내막염, 내분비병증, 후두개염, 엡슈타인-바 바이러스 감염(Epstein-Barr virus infection), 지단홍통증, 추체외로 및 소뇌 장애, 가족성 적혈구 포식성 림프조직구증, 태아 가슴샘 임플란트 제거, 프리드리히(Friedreich) 운동 실조증, 기능성 말초 동맥 장애, 진균성 패혈증, 가스 괴저(gas gangrene), 위궤양, 사구체 신염, 모든 장기 또는 조직의 이식 거부, 그람 음성 패혈증, 그람 양성 패혈증, 세포내 유기체로 인한 육아종, 모발 세포 백혈병, 할레르보르덴-스파츠 병(Hallervorden-Spatz disease), 하시모토의 갑상샘염, 건초열, 심장 이식 거부, 혈색소 침착증, 혈액 투석, 용혈성 요독성 증후군/혈전용해성 혈소판 감소성 자반증, 뇌출혈, A형 간염, His 번들 부정맥, HIV 감염/HIV 신경병증, 호지킨 병, 운동과다 장애, 과민성 반응, 과민성 폐렴, 고혈압, 운동과다 장애, 시상하부-뇌하수체-부신 축 평가, 특발성 애디슨 병(Addison's disease), 특발성 폐의 섬유증 (IPF), 항체 매개된 세포 독성, 무력증, 유아 척추 근육 위축, 대동맥의 염증, 인플루엔자 a, 이온화 방사선 노출, 홍채섬모체염/포도막염/시각 신경염, 허혈-재관류 손상, 허혈성 뇌졸중, 소아 류마티스 관절염, 소아 척추 근육 위축, 카포시 육종, 신장 이식 거부, 레지오넬라, 리슈만편모충증, 나병, 피질척수계의 병변, 지방부종, 간 이식 거부, 림프부종, 말라리아, 악성 림프종, 악성 조직구증, 악성 흑색종, 수막염, 수막구균혈증, 대사 증후군 편두통 두통, 특발성 편두통 두통, 미토콘드리아성 멀티시스템 장애, 혼합된 결합 조직 질환, 단클론성 감마글로불린병증, 다중골수종, 다중 시스템 변성(Menzel, Dejerine-Thomas, Shy-Drager, and Machado-Joseph), 중증근육무력증, 마이코박테리움 아비움 인트라셀룰라에, 마이코박테리움 결핵; 골수형성이상 증후군, 심근 경색, 심근 허혈성 장애, 코인두 암종, 신생아 만성 폐 질환, 신염, 콩팥증, 신경변성 질환, 신경성 I 근육 위축, 호중구감소증 발열, 비-호지킨 림프종, 복부 대동맥 및 이의 분지의 폐색, 폐색성 동맥 장애, OKT3® 치료요법, 고환염/부고환염, 고환염/정관절제술 반전 시술, 병원처방, 골다공증, 췌장 이식 거부, 췌장 암종, 악성종양의 신생물딸림 증후군/고칼슘 혈증, 부갑상샘 이식 거부, 골반 염증성 질환, 다년생 비염, 심낭 질환, 말초 죽상경화성 질환, 말초 혈관 장애, 복막염, 악성 빈혈, 주폐포자충 폐렴, 폐렴, POEMS 증후군 (다발신경병, 오가노메갈리, 내분비병증, 단클론 감마글로불린증, 및 피부 변화 증후군), 후 재관류 증후군, 후 펌프 증후군, 후-MI 심장절개 증후군, 자간전증, 진행성 핵상 마비, 원발성 폐 고혈압, 방사선 치료요법, 레이노드(Raynaud) 현상, 레이노드 질환, 레프섬(Refsum) 질환, 일반적인 협소한 QRS 빈맥, 신장혈관 고혈압, 재관류 손상, 제한 심근병증, 육종, 노인무도병, 레비 소체의 노인 치매, 혈청반응음성 관절병증, 쇼크(shock), 낫 세포 빈혈, 피부 동종이식 거부, 피부 변화 증후군, 작은 창자 이식 거부, 고형 종양, 특정 부정맥, 척추 운동 장애, 척수소뇌 변성, 연쇄구군 근육염, 소뇌의 구조 병변, 아급성 경화성번뇌염, 실신, 심혈관계 매독, 전신 아나필락시스, 전신 염증성 반응 증후군, 전신 발병 소아 류마티스 관절염, 모세혈관확장증, 폐쇄혈전혈관염, 혈소판 감소, 독성, 이식, 외상 / 출혈, 유형 III 과민성 반응, 유형 IV 과민증, 불안정 협심증, 요독증, 요로성패혈증, 두드러기, 판막 심장 질환, 정맥류, 혈관염, 정맥 질환, 정맥 혈전증, 심실 세동, 바이러스 및 진균 감염, 바이러스성 뇌염/무균 수막염, 바이러스-관련 식혈세포성 증후군, 베르닉케-코르사코프(Wernicke-Korsakoff) 증후군, 윌슨 병(Wilson's disease), 모든 장기 또는 조직의 이종이식 거부, 급성 관상 동맥 증후군, 급성 특발성의 다발신경염, 급성 염증 탈수초 다발성 신경병증, 급성 허혈, 성인 스틸 병, 원형 탈모증, 아나필락시스, 항 인지질 항체 증후군, 재생불량성 빈혈, 동맥 경화, 아토피성 습진, 아토피성 피부염, 자가면역 피부염, 스트렙토코커스 감염과 관련된 자가면역 장애, 자가면역 창자병증, 자가면역 청력 손실, 자가면역 림프구증식 증후군 (ALPS), 자가면역 심근염, 자가면역 조기 폐경, 눈꺼풀염, 기관지 확장증, 수포성 유사천포창, 심혈관 질환, 파국적 항인지질 증후군, 복강 질환, 자궁 경부 척추증, 만성 허혈, 반흔성 유사천포창, 다발성 경화증에 대한 위험을 갖는 임상적으로 분리된 증후군 (CIS), 결막염, 어린 시절 발병 정신 장애, 누낭염, 피부근육염, 당뇨병성 망막증, 디스크 이탈증, 디스크 탈출증, 약물 유발 면역 용혈성 빈혈, 심내막염, 자궁내막증, 안구내염, 상공막염, 다형홍반, 주요 다형홍반, 임신성 유사천포창, 귈라인-바레(Guillain-Barre) 증후군 (GBS), 건초열, 휴즈 증후군, 특발성 파킨슨 병, 특발성 간질성 폐렴, IgE로 인한 알레르기, 면역 용혈성 빈혈, 봉입체 근염, 감염성 눈 염증성 질환, 염증성 탈수초 질환, 염증성 심장 질환, 염증성 신장 질환, 홍채염, 각막염, 건조각막 결막염, 쿠쓰마울(Kussmaul) 질환 또는 쿠쓰마울-마이어 질환, 랜드리 마비, 랑게르한스 세포 조직구증, 그물 울혈반, 황반 변성, 현미경적 다발성혈관염, 모부스 베흐테레프(Morbus Bechterev), 운동 신경세포 장애, 점막 유사천포창, 다발성 장기 부전, 중증근육무력증, 골수혈성이상 증후군, 심근염, 신경근 장애, 신경병증, 비-A 비-B 형 간염, 시각 신경염, 골용해, 소수관절 JRA, 말초 동맥 폐색성 질환 (PAOD), 말초 혈관 장애 (PVD), 말초 동맥, 질환 (PAD), 정맥염, 결절다발동맥염 (또는 결절동맥주위염), 다발연골열, 류마티스성 다발성 근육통, 백모증, 다관절 JRA, 다내분비선 결핍증후근, 다발근육염, 류마티스성 다발성 근육통 (PMR), 후-펌프 증후군, 원발성 파킨슨증, 2차 파킨슨증, 전립샘염, 순수 적혈구 세포 무형성, 원발성 부신 기능부전, 재발성 시각신경 척수염, 재협착, 류마티스 심장 질환, SAPHO (윤활막염, 여드름, 농포증, 뼈과다증 및 골염), 2차 아밀로이드증, 쇼크 폐, 골막염, 좌골 신경통, 2차 부신 기능부전, 실리콘 관련된 결합 조직 질환, 스네돈-윌킨슨(Sneddon-Wilkinson) 피부병, 강직척추염, 스티븐스-존슨(Stevens-Johnson) 증후군 (SJS), 전신 염증성 반응 증후군, 측두 동맥염, 톡소플라스믹 망막염, 독성 표피 괴사용해, 횡 척수염, TRAPS (종양 괴사 인자 수용체 타입 1 (TNFR) 관련 정기 증후군), 흑색가시세포증을 동반한 타입 B의 인슐린 저항성, 제1형 알레르기 반응, 제II형 당뇨병, 두드러기, 보통 간질성 폐렴 (UIP), 봄철 결막염, 바이러스성 망막염, 보그트-코야나기-하라다(Vogt-Koyanagi-Harada) 증후군 (VKH 증후군), 습윤 황반 변성, 상처 치유, 예르시니아 및 살모넬라 관련 관절병증.
본원에 기술된 치료 방법의 추가의 양태에서, 대상체에게 본원에 기술된 결합 단백질 또는 결합 단백질 작제물 또는 결합 단백질 접합체를 투여하는 단계는 비경구, 피하, 근육내, 정맥내, 동맥내, 기관지내, 복부내(intraabdominal), 관절낭내, 연골내, 강내(intracavitary), 복강내(intracelial), 소뇌내, 뇌실내, 결장내, 경부내(intracervical), 위내, 간내, 심근내, 골내, 골반내, 심장횡경막내, 복강내, 흉강내, 전립샘내, 폐내, 직장내, 신장내, 망막내, 척수내, 윤활막내, 흉곽내, 자궁내, 방광내, 볼러스(bolus), 질, 직장, 볼, 설하, 비강내 및 경피로부터 선택된 적어도 하나의 방식에 의해서 수행된다.
본 발명의 다른 국면은 본원에 기술된 결합 단백질, 결합 단백질 작제물, 또는 결합 단백질 접합체를 제2 제제의 투여 전에, 동시에 또는 후에 투여하는 단계를 포함하여, IL-1이 유해한 장애로 고생하는 환자를 치료하는 방법이며, 여기서 제2 제제는 흡입된 스테로이드; 베타-작용제; 단기-작용성 또는 장기-작용성 베타-작용제; 류코트리엔 또는 류코트리엔 수용체의 길항제; ADVAIR; IgE 억제제; 항-IgE 항체; XOLAIR; 포스포디에스테라제 억제제; PDE4 억제제; 크산틴; 항콜린성 약물; 비만 세포-안정화제; 크로몰린; IL-4 억제제; IL-5 억제제; 에오탁신/CCR3 억제제; 히스타민 또는 H1, H2, H3, 및 H4를 포함하는 이의 수용체의 길항제; 프로스타글란딘 D 또는 이의 수용체 DP1 및 CRTH2의 길항제; TNF 길항제; TNF 수용체의 가용성 단편; ENBREL®; TNF 효소 길항제; TNF 전환 효소(TACE) 억제제; 무스카린성 수용체 길항제; TGF-베타 길항제; 인터페론 감마; 페르페니돈; 화학요법제, 메토트렉세이트; 레플루노미드; 시롤리무스(라파마이신) 또는 이의 유사체, CCI-779; COX2 또는 cPLA2 억제제; NSAID; 면역조절제; p38 억제제; TPL-2, MK-2 및 NFkB 억제제; 부데노시드; 상피 성장 인자; 코르티코스테로이드; 사이클로스포린; 설파살라진; 아미노살리실레이트; 6-머캅토푸린; 아자티오프린; 메트로니다졸; 리폭시게나제 억제제; 메살라민; 올살라진; 발살라지드; 항산화제; 트롬복산 억제제; IL-1 수용체 길항제; 항-IL-1β 항체; 항-IL-6 항체; 성장 인자; 엘라스타제 억제제; 피리디닐-이미다졸 화합물; TNF, LT, IL-1, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-10, IL-11, IL-12, IL-14, IL-15, IL-16, IL-17, IL-18, IL-19, IL-20, IL-21, IL-22, IL-23, IL-24, IL-25, IL-26, IL-27, IL-28, IL-29, IL-30, IL-31, IL-32, IL-33, EMAP-II, GM-CSF, FGF, 또는 PDGF의 항체 또는 작용제; CD2, CD3, CD4, CD8, CD25, CD28, CD30, CD40, CD45, CD69, CD90 또는 이들의 리간드의 항체; FK506; 라파마이신; 마이코페놀레이트 모페틸; 이부프로펜; 프레드니솔론; 포스포디에스테라제 억제제; 아데노신 작용제; 항혈전제; 상보체 억제제; 아드레날린제; IRAK, NIK, IKK, p38, 또는 MAP 키나제 억제제; IL-1β 전환 효소 억제제; TNF-α 전환 효소 억제제; T-세포 시그날링 억제제; 메탈로프로테이나제 억제제; 6-머캅토푸린; 안지오텐신 전환 효소 억제제; 가용성 사이토킨 수용체; 가용성 p55 TNF 수용체; 가용성 p75 TNF 수용체; sIL-1RI; sIL-1RII; sIL-6R; 소염성 사이토킨; IL-4; IL-10; IL-11; 및 TGF-β로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.
본 발명의 다른 국면은 본원에 기술된 적어도 하나의 IL-1 결합 단백질에 대한 적어도 하나의 IL-1 항-유전형 항체를 제공한다. 항-유전형 항체는 본 발명의 결합 단백질내로 혼입될 수 있는, 중쇄 또는 경쇄의 적어도 하나의 CDR 또는 이의 리간드 결합 부분, 중쇄 또는 경쇄 가변 영역, 중쇄 또는 경쇄 불변 영역, 골격 영역, 또는 이의 특정 부분과 같은, 그러나 이에 한정되지 않는 면역글로불린 분자의 적어도 일부를 포함하는 분자를 함유하는 모든 단백질 또는 펩타이드를 포함한다.
발명의 상세한 설명
본 발명은 IL-1β에 결합하는 항-IL-1β 항체, 또는 이의 항원-결합 부분, IL-1β 및 다른 표적에 결합하는 DVD-IgTM과 같은 다가의 다특이적인 결합 단백질을 포함하지만 이에 한정되지 않는, IL-1β 결합 단백질에 관한 것이다. 본 발명의 각종 국면은 항체 및 항체 단편, DVD-Ig 결합 단백질, 및 이의 약제학적 조성물 및 항체, DVD-Ig 결합 단백질, 및 이의 단편을 포함하는, 이러한 IL-1β 결합 단백질을 제조하기 위한 핵산, 재조합체 발현 벡터 및 숙주 세포에 관한 것이다. 사람 IL-1β를 검출하고; 사람 IL-1β를 시험관내 또는 생체내에서 억제하고; 유전자 발현을 조절하기 위해 본 발명의 IL-1β 결합 단백질을 사용하는 방법이 또한 본 발명에 포함된다.
본 발명은 또한 본원에 기술된 IL-1β 결합 단백질과 경쟁할 수 있는 모든 결합 단백질 또는 항체를 포함한다.
본원에 달리 정의하지 않는 한, 본 발명과 관련하여 사용된 과학적 및 기술적 용어들은 당해 분야의 통상의 기술자에 의해 일반적으로 이해되는 의미를 갖는다. 그러나, 용어들의 의미 및 범위는 어떠한 사전적 또는 고유한 정의를 앞서는 본원에 제공된 어떠한 잠재적인 애매한 정의의 경우에도 명백해야 한다. 또한, 내용에서 달리 요구하지 않는 한, 단수 용어들은 복수를 포함하며 복수 용어들은 단수를 포함한다. 본원에서, "또는"의 사용은 달리 기술하지 않는 한 "및/또는"을 의미한다. 또한, 용어 "포함하는", 및 "포함하다" 및 "포함된"과 같은 다른 형태의 사용은 제한되지 않는다. 또한, "요소" 또는 "성분"과 같은 용어들은, 구체적으로 달리 기술하지 않는 한, 하나의 단위를 포함하는 요소 및 성분과 하나 이상의 소단위를 포함하는 요소 및 성분들 둘다를 포함한다.
일반적으로, 본원에 기술된 세포 및 조직 배양, 분자 생물학, 면역학, 미생물학, 유전학 및 단백질 및 핵산 화학 및 하이브리드화와 연관되어 사용된 명명법및 이들 기술은 당해 분야에 잘 공지되어 있고 일반적으로 사용된다. 본 발명의 방법 및 기술은 일반적으로 당해 분야에 잘 공지된 통상의 방법에 따라 수행되며 달리 나타내지 않는 한 본 명세서 전체에서 인용되고 논의된 각종의 일반적이고 보다 특이적인 참조 문헌에 기술된 바와 같이 수행된다. 효소적 반응 및 정제 기술은 당해 분야에서 일반적으로 달성되거나 본원에 기술된 것으로서, 제조업자의 설명서에 따라 수행된다. 본원에 기술된 분석 화학, 합성 유기 화학, 및 의학 및 약제학적 화학과 연관되어 사용된 명명법, 및 이의 실험실 과정 및 기술은 당해 분야에 잘 공지되어 있고 일반적으로 사용되는 것들이다. 표준 기술은 화학 합성, 화학 분석, 약제학적 제제, 제형, 및 전달, 및 환자의 치료에 사용된다.
본 발명을 보다 용이하게 이해하기 위해, 선택된 용어들을 하기 정의한다.
용어 "폴리펩타이드"는 아미노산의 모든 중합체 쇄를 말한다. 용어 "펩타이드" 및 "단백질"은 용어 폴리펩타이드와 상호교환적으로 사용되며 또한 아미노산의 중합체 쇄를 말한다. 용어 "폴리펩타이드"는 천연 또는 인공 단백질, 단백질 단편 및 단백질 서열의 폴리펩타이드 유사체를 포함한다. 폴리펩타이드는 단량체 또는 중합체일 수 있다. 용어 "폴리펩타이드"는, 내용에서 부인하지 않는 한, 단편 및 이의 변이체(변이체의 단편 포함)를 포함한다. 항원성 폴리펩타이드에 관하여, 폴리펩타이드의 단편은 폴리펩타이드의 적어도 하나의 연속되거나 비선형인 에피토프를 임의로 함유한다. 적어도 하나의 에피토프 단편의 정확한 경계는 당해 분야의 통상의 기술을 사용하여 확인할 수 있다. 단편은 적어도 약 5개의 연속된 아미노산, 예를 들면, 적어도 약 10개의 연속된 아미노산, 적어도 약 15개의 연속된 아미노산, 또는 적어도 약 20개의 연속된 아미노산을 포함한다. 폴리펩타이드의 변이체는 본원에 기술된 바와 같다.
용어 "분리된 단백질" 또는 "분리된 폴리펩타이드"는 이의 기원 또는 유도체의 공급원에 의해 이의 천연 상태에서 이를 동반하는 천연적으로 관련된 성분과 관련되지 않거나; 동일한 종으로부터 다른 단백질을 실질적으로 함유하지 않거나; 상이한 종으로부터의 세포에 의해 발현되거나; 천연적으로 존재하지 않는 단백질 또는 폴리펩타이드이다. 따라서, 천연적으로 기원하는 세포와는 상이한 세포계내에서 합성되거나 화학적으로 합성된 폴리펩타이드는 이의 천연적으로 관련된 성분들로부터 "분리"될 것이다. 단백질은 또한 당해 분야에 잘 공지된 단백질 정제 기술을 사용하여, 분리에 의해 천연적으로 관련된 성분들을 실질적으로 함유하지 않도록 할 수 있다.
용어 "회수하는"은 예를 들면, 당해 분야에 잘 공지된 단백질 정제 기술을 사용하여 분리에 의해 천연적으로 관련된 성분들을 실질적으로 함유하지 않는 폴리펩타이드와 같은 화학 종이 되도록 하는 과정을 말한다.
용어 "사람 IL-1α"(본원에서 hIL-1α, 또는 IL-1α로 약술함)는 각종 면역 반응, 염증 과정 및 조혈에 관여된 다형질성 사이토킨을 포함한다. 예를 들면, IL-1α는 활성화된 대식세포에 의해 생산된 사람 사이토킨을 포함하며; 이는 IL-2 방출, B-세포 성숙 및 증식, 및 섬유모세포 성장 인자 활성을 유도함으로써 흉선세포 증식을 자극한다. 용어 사람 IL-1α는 표준 재조합체 발현 방법에 의해 제조될 수 있는 재조합체 사람 IL-1α(rh IL-1α)를 포함하는 것으로 의도된다.
용어 "사람 IL-1β"(본원에서 hIL-1β, 또는 IL-1β로 약술함)는 각종 면역 반응, 염증 과정 및 조혈에 관여된 다형질성 사이토킨을 포함한다. 용어 사람 IL-1β는 표준 재조합체 발현 방법에 의해 제조될 수 있는 재조합체 사람 IL-1β(rh IL-1β)를 포함한다.
사람 IL-1α 및 IL-1β의 아미노산 서열은 표 1에 나타낸다.
Figure pat00031
용어 "생물학적 활성"은 IL-1 사이토킨, 예를 들면, IL-1α 및/또는 IL-1β의 모든 고유의 생물학적 특성을 말한다. IL-1α 및 IL-1β의 생물학적 특성은 IL-1 수용체에 대한 결합을 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
항체, 단백질 또는 펩타이드와 제2 화학 종(chemical species)의 상호작용과 관련하여 용어 "특이적인 결합" 또는 "특이적으로 결합하는"은, 상호작용이 화학 종에서 특수 구조(예를 들면, 항원 결정인자 또는 에피토프)의 존재에 의존하며; 예를 들면, 항체가 일반적으로 단백질 이외에 특이적 단백질 구조를 인식하여 이에 결합함을 의미한다. 항체가 에피토프 "A"에 대해 특이적인 경우, 표지된 "A" 및 항체를 함유하는 반응에서 에피토프 A(또는 유리되고, 표지되지 않은 A)를 함유하는 분자의 존재는 항체에 결합된, 표지된 A의 양을 감소시킬 것이다.
용어 "항체"는 넓게는 4개의 폴리펩타이드 쇄, 2개의 중(H) 쇄 및 2개의 경(L) 쇄로 구성된 어떠한 면역글로불린(Ig) 분자, 또는 Ig 분자의 필수적인 에피토프 결합 특징을 보유한, 이의 모든 기능적 단편, 돌연변이체, 변이체, 또는 유도체를 말한다. 이러한 돌연변이체, 변이체, 또는 유도적 항체 양식은 당해 분야에 공지되어 있다. 이의 비제한적인 양태는 하기에 논의된다.
완전한 길이의 항체에서, 각각의 중쇄는 중쇄 가변 영역(본원에서 HCVR 또는 VH로 약술함) 및 중쇄 불변 영역으로 구성된다. 중쇄 불변 영역은 3개의 도메인: CH1, CH2, 및 CH3으로 구성된다. 각각의 경쇄는 경쇄 가변 영역(본원에서 LCVR 또는 VL로 약술함) 및 경쇄 불변 영역으로 구성된다. 경쇄 불변 영역은 하나의 도메인, CL로 구성된다. VH 및 VL 영역은 또한 골격 영역(FR)으로 명명된, 보다 보존된 영역들 사이에 배치된 상보성 결정 영역(CDR)으로 명명된 초가변성의 영역으로 추가로 아분될 수 있다. 각각의 VH 및 VL은 다음 순서로 아미노-말단으로부터 카복시-말단까지 배열된 3개의 CDR 및 4개의 FR로 구성된다: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4. 면역글로불린 분자는 어떠한 유형(예를 들면, IgG, IgE, IgM, IgD, IgA 및 IgY), 부류(예를 들면, IgG 1, IgG2, IgG 3, IgG4, IgA1 및 IgA2) 또는 소부류일 수 있다.
용어 "Fc 영역"은 완전한 항체의 파파인 분해에 의해 생성될 수 있는 면역글로불린 중쇄의 C-말단 영역을 정의하는데 사용된다. Fc 영역은 천연 서열 Fc 영역 또는 변이체 Fc 영역일 수 있다. 면역글로불린의 Fc 영역은 일반적으로 2개의 불변 도메인, CH2 도메인, 및 CH3 도메인을 포함하며, 임의로 CH4 도메인을 포함한다. 항체 효과기 기능을 변경시키기 위한 Fc 부분에서 아미노산 잔기의 교체는 당해 분야에 공지되어 있다(참조: Winter et al., 미국 특허 공보 제5,648,260호 및 제5,624,821호). 항체의 Fc 부분은 수개의 중요한 효과기 기능, 예를 들면, 사이토킨 유도, ADCC, 포식작용, 상보체 의존성 세포독성(CDC), 및 항체 및 항원-항체 복합체의 반감기/클리어런스 비율(clearance rate)을 매개한다. 일부 경우에, 이들 효과기 기능은 치료용 항체에 바람직하지만 기타 경우에는 치료학적 목적에 좌우되어, 불필요할 수 있거나 유해할 수도 있다. 특정의 사람 IgG 동형, 특히 IgG1 및 IgG3은 FcγR 및 상보체 C1q 각각에 대한 결합을 통해 ADCC 및 CDC를 매개한다. 신생 Fc 수용체(FcRn)는 항체의 순환하는 반감기를 측정하는 중요한 성분이다. 여전히 다른 양태에서 적어도 하나의 아미노산 잔기는 항체의 불변 영역, 예를 들면, 항체의 Fc 영역에서 교체됨으로써, 항체의 효과기 기능이 변경된다. 면역글로불린의 2개의 동일한 중쇄의 이합체화는 CH3 도메인의 이합체화에 의해 매개되며 힌지 영역내에서 이황화물 결합에 의해 안정화된다[참조: Huber et al., Nature, 264: 415-420 (1976); Thies et al., J.　Mol. Biol., 293: 67-79 (1999)]. 중쇄-중쇄 이황화물 결합을 방지하기 위한 힌지(hinge) 영역내 시스테인 잔기의 돌연변이는 CH3 도메인의 이합체화를 탈안정화시킬 것이다. CH3 이합체화에 관여하는 잔기는 확인되어 있다[참조: Dall'Acqua et al., Biochemistry, 37: 9266-9273 (1998)]. 따라서, 1가의 반-Ig를 생성하는 것이 가능하다. 흥미롭게도, 이들 1가의 반 Ig 분자는 IgG 및 IgA 소부류 둘 다의 경우 천연적으로 발견되어 왔다[참조: Seligmann et al., Ann. Immunol., 129 C: 855-870 (1978); Biewenga et al., Clin. Exp. Immunol., 51: 395-400 (1983)]. FcRn:Ig Fc 영역의 화학량론은 2:1인 것으로 측정되었으며[참조: West et al., Biochemistry, 39: 9698-9708 (2000)], 반 Fc는 FcRn 결합을 매개하는데 충분하다[참조: Kim et al., Eur. J. Immunol., 24: 542-548 (1994)]. CH3 도메인의 이합체화를 파괴하기 위한 돌연변이는, CH3 이합체화에 중요한 잔기가 CH3 β쉬트(sheet) 구조의 내부 계면에 위치한 반면, FcRn 결합에 관여하는 영역은 CH2-CH3 도메인의 외부 계면에 위치하므로, 이의 FcRn 결합에 있어 보다 큰 부작용을 가지지 않을 수 있다. 그러나, 반 Ig 분자는 정규의 항체보다 자체의 보다 작은 크기로 인하여 조직 침투에 있어 특정의 장점을 가질 수 있다. 하나의 양태에서, 적어도 하나의 아미노산 잔기는 본 발명의 결합 단백질의 불변 영역, 예를 들면, Fc 영역에서 대체됨으로써, 중쇄의 이합체화가 파괴되어, 반 DVD Ig 분자가 생성된다. IgG 의 소염 활성은 IgG Fc 단편의 N-연결된 글리칸의 시알릴화에 완전히 의존적이다. 소염 활성의 상세한 글리칸 요건은 측정되었으므로, 적절한 IgG1 Fc 단편을 생성함으로써 효능이 크게 향상된 완전한 재조합체, 시알릴화된 IgG1 Fc를 생성시킬 수 있다[참조: Anthony et al., Science, 320:373-376 (2008)].
용어 항체의 "항원-결합 부분"은 항원(예를 들면, hIL-1β)에 특이적으로 결합하는 능력을 보유하는 항체의 하나 이상의 단편을 말한다. 항체의 항원-결합 기능은 완전한 길이의 항체의 단편으로 수행할 수 있음이 밝혀졌다. 이러한 항체 양태는 또한 이특이적, 이중 특이적, 또는 다특이적 양식일 수 있으며; 2개 이상의 상이한 항원(예를 들면, hIL-1β 및 상이한 항원 분자, 예를 들면, hIL-1β 및 hIL-1α)에 특이적으로 결합할 수 있다. 용어 항체의 "항원-결합 부분"내에 포함된 결합 단편의 예는 (i) Fab 단편, VL, VH, CL, 및 CH1 도메인으로 이루어진 1가 단편; (ii) F(ab')2 단편, 힌지 영역에서 이황화물 브릿지에 의해 연결된 2개의 Fab 단편을 포함하는 2가 단편; (iii) VH 및 CH1 도메인으로 이루어진 Fd 단편; (iv) 항체의 단일 아암(arm)의 VL 및 VH 도메인으로 이루어진 Fv 단편; (v) 단일의 가변 도메인을 포함하는 dAb 단편[참조: Ward et al., Nature, 341: 544-546 (1989); PCT 공보 제WO　90/05144호]; 및 (vi) 분리된 상보성 결정 영역(CDR)을 포함한다. 또한, Fv 단편의 2개의 도메인, VL 및 VH가 별개의 유전자에 의해 암호화되어 있다고 해도, 이들은 재조합체 방법을 사용하여, 이들을 VL 및 VH 영역이 쌍을 이루어 1가 분자[단일쇄 Fv(scFv)로 공지됨; 참조: 예를 들면, Bird et al., Science, 242: 423-426 (1988); 및 Huston et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 85: 5879-5883 (1988)]를 형성하는 단일 단백질 쇄로 제조될 수 있도록 하는 합성 링커에 의해 결합될 수 있다. 이러한 단일쇄 항체는 또한 용어 항체의 "항원-결합 부분"내에 포함되는 것으로 의도된다. 디아바디와 같은 단일쇄 항체의 다른 형태 또한 포함된다. 디아바디는, VH 및 VL 도메인이 단일 폴리펩타이드 쇄에서 발현되지만 동일한 쇄에서 2개의 도메인 사이에 쌍을 이루도록 하기에는 너무 짧은 링커를 사용함으로써, 도메인이 다른 쇄의 상보성 도메인과 쌍을 이루어 2개의 항원 결합 부위를 생성하도록 하는 2가의, 이특이적인 항체이다[참조: 예를 들면, Holliger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90: 6444-6448 (1993); Poljak, R.J., Structure, 2: 1121-1123 (1994)]. 이러한 항체 결합 부분은 당해 분야에 공지되어 있다[참조: Kontermann and Duebel eds., Antibody Engineering (Springer-Verlag, New York, 2001), p. 790 (ISBN 3-540-41354-5)]. 추가로, 단일쇄 항체는 또한 상보성 경쇄 폴리펩타이드와 함께, 항원 결합 영역의 쌍을 형성하는 탄뎀(tandem) Fv 분절의 쌍(VH-CH1-VH-CH1)을 포함하는 "선형 항체"를 포함한다[참조: Zapata et al., Protein Eng., 8(10): 1057-1062 (1995); 및 미국 특허 공보 제 5,641,870호)].
면역글로불린 불변(C) 도메인은 중쇄(CH) 또는 경쇄(CL) 불변 도메인을 말한다. 뮤린(murine) 및 사람 IgG 중쇄 및 경쇄 불변 도메인 아미노산 서열은 당해 분야에 공지되어 있다.
용어 "IL-1β 결합 단백질 작제물"(또는 "결합 단백질 작제물")은 링커 또는 면역글로불린 불변 도메인에 연결된 본 발명의 항원 결합 부분 중 하나 이상을 포함하는 폴리펩타이드를 말한다. "링커 폴리펩타이드"는 펩타이드 결합에 의해 결합된 2개 이상의 아미노산 잔기를 포함하며 하나 이상의 항원 결합 부분을 연결하는데 사용된다. 이러한 링커 폴리펩타이드는 당해 분야에 잘 공지되어 있다[참조: 예를 들면, Holliger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90: 6444-6448 (1993); Poljak, R.J., Structure, 2: 1121-1123 (1994)]. 면역글로불린 불변 도메인은 중쇄 또는 경쇄 불변 도메인을 말한다. 사람 IgG 중쇄 및 경쇄 불변 도메인 아미노산 서열은 당해 분야에 공지되어 있으며 표 2에 나타낸다.
Figure pat00032
여전히 추가로, 항체 또는 이의 항원-결합 부분과 같은, IL-1β 결합 단백질은 항체 또는 항원-결합 부분과 하나 이상의 다른 단백질 또는 펩타이드의 공유 또는 비공유결합적 연합에 의해 형성된 보다 큰 면역부착 분자의 일부일 수 있다. 이러한 면역부착 분자의 예는 사합체 scFv 분자를 제조하기 위한 스트렙타비딘 코어 영역의 사용[참조: Kipriyanov et al., Human Antibod. Hybridomas, 6: 93-101 (1995)] 및 2가 및 바이오티닐화된 scFv 분자를 제조하기 위한 시스테인 잔기, 마커 펩타이드 및 C-말단 폴리히스티딘 태그의 사용을 포함한다[참조: Kipriyanov et al., Mol. Immunol., 31: 1047-1058 (1994)]. Fab 및 F(ab')2 단편과 같은 항체 부분은 전체 항체로부터 전체 항체의 파파인 또는 펩신 분해 각각과 같은 통상의 기술을 사용하여 제조할 수 있다. 또한, 항체, 이의 항원-결합 부분, 및 면역부착 분자들은 표준 재조합체 DNA 기술을 사용하여 수득할 수 있다.
"분리된 항체"는 상이한 항원 특이성을 갖는 다른 항체를 실질적으로 함유하지 않는 항체를 말하는 것으로 의도된다(예를 들면, hIL-1β에 특이적으로 결합하는 분리된 항체는 hIL-1β 이외의 항원에 특이적으로 결합한 항체를 실질적으로 함유하지 않는다). 그러나, hIL-1β에 특이적으로 결합하는 분리된 항체는 다른 종으로부터의 IL-1β 분자와 같은 다른 항원과 교차-반응성을 가질 수 있다. 또한, 분리된 항체는 다른 세포 물질 및/또는 화합물질을 실질적으로 함유하지 않을 수 있다.
용어 "단클론 항체" 또는 "mAb"는 실질적으로 동종 항체의 집단으로부터 수득된 항체, 즉, 소량으로 존재할 수 있는 가능한한 천연적으로 존재하는 돌연변이를 제외하고는 동일한 집단을 포함하는 개개 항체를 말한다. 단클론 항체는 단일 항원에 대해 직접적으로 고도로 특이적이다. 또한, 상이한 결정인자들(에피토프)에 대해 직접적인 상이한 항체들을 전형적으로 포함하는 다클론 항체 제제와는 대조적으로, 각각의 mAb는 항원에서 단일의 결정인자에 대해 직접적이다. 개질인자 "단클론"은 어떠한 특수 방법에 의해 항체의 생산에 요구되는 것으로 고려되지 않아야 한다.
용어 "사람 항체"는 사람 배선 면역글로불린 서열로부터 기원한 가변 및 불변 영역을 갖는 항체를 포함한다. 본 발명의 사람 항체는 예를 들면, CDR 및 특히 CDR3에서 사람 배선 면역글로불린 서열에 의해 암호화되지 않은 아미노산 잔기(예를 들면, 시험관내에서 무작위적 또는 부위-특이적 돌연변이유발에 의해 또는 생체내에서 체세포 돌연변이에 의해 도입된 돌연변이)를 포함할 수 있다. 그러나, 용어 "사람 항체"는 마우스와 같은 다른 포유동물 종의 배선으로부터 기원한 CDR 서열이 사람 골격 서열상으로 이식된 항체를 포함하지 않는다.
용어 "재조합체 사람 항체"는 재조합체 수단에 의해 제조되거나, 발현되거나, 생성되거나 분리된 모든 사람 항체, 예를 들면, 숙주 세포내로 형질감염된 재조합체 발현 벡터를 사용하여 발현된 항체(하기 단락 IIC에서 추가로 기술), 재조합체, 조합 사람 항체 라이브러리로부터 분리된 항체[참조: Hoogenboom, H.R., Trends Biotechnol., 15: 62-70 (1997); Azzazy and Highsmith, Clin. Biochem., 35: 425-445 (2002); Gavilondo and Larrick, BioTechniques, 29: 128-145 (2000); Hoogenboom and Chames, Immunol. Today, 21: 371-378 (2000)], 사람 면역글로불린 유전자에 대해 유전자삽입성인 동물(예를 들면, 마우스)로부터 분리된 항체[참조: 예를 들면, Taylor et al., Nucl. Acids Res., 20: 6287-6295 (1992); Kellermann and Green, Curr. Opin. Biotechnol., 13: 593-597 (2002); Little et al., Immunol. Today, 21: 364-370 (2000)]; 또는 다른 DNA 서열에 대해 사람 면역글로불린 유선자 서열의 스플라이싱(splicing)을 포함하는 어떠한 다른 수단에 의해 제조되거나, 발현되거나, 생성되거나 분리된 항체를 포함한다. 이러한 재조합체 사람 항체는 사람 배선 면역글로불린 서열로부터 기원한 가변 및 불변 영역을 갖는다. 그러나, 특정 양태에서, 이러한 재조합체 사람 항체는 시험관내 돌연변이유발(또는, 사람 Ig 서열에 대해 유전자삽입성인 동물을 사용하는 경우, 생체내 체세포 돌연변이유발)에 적용되므로 재조합체 항체의 VH 및 VL 영역의 아미노산 서열은 사람 배선 VH 및 VL 서열로부터 기원하고 이와 관련되지만 생체내에서 사람 항체 배선 레퍼토리내에 천연적으로 존재하지 않는 서열일 수 있다.
용어 "키메라 항체"는 하나의 종으로부터의 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열 및 다른 종으로부터의 불변 영역 서열을 포함하는 항체, 예를 들면, 사람 불변 영역에 연결된 뮤린 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 갖는 항체를 말한다.
용어 "CDR-이식된 항체"는 하나의 종으로부터의 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열을 포함하지만 여기서 VH 및/또는 VL의 CDR 영역 중 하나 이상의 서열이 다른 종의 CDR 서열로 교체된 항체, 예를 들면, 뮤린 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 갖고, 여기서 뮤린 CDR(예를 들면, CDR3) 중 하나 이상이 사람 CDR 서열로 교체된 항체를 말한다.
용어 "CDR"은 항체 가변 서열내 상보성 결정 영역을 말한다. 가변 영역 각각에 대해, CDR1, CDR2 및 CDR3으로 지정된, 중쇄 및 경쇄의 가변 영역 각각에서 3개의 CDR이 존재한다. 본원에 사용된 것으로서 용어 "CDR 세트"는 항원을 결합시킬 수 있는 단일의 가변 영역에 존재하는 3개의 CDR의 그룹을 말한다. 이들 CDR의 정확한 경계는 상이한 시스템에 따라 상이하게 정의되어 왔다. 카밧이 기술한 시스템[참조: Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest (National Institutes of Health, Bethesda, Maryland (1987) and (1991)]은 항체의 어떠한 가변 영역에도 적용가능한 명확한 잔기 번호매김 시스템을 제공할 뿐 아니라, 3개의 CDR을 정의하는 정밀한 잔기 경계도 제공한다. 이들 CDR은 카밧 CDR로 언급될 수 있다. 쵸티아 및 공동연구자들[참조: Chothia and Lesk, J.　Mol. Biol., 196: 901-917 (1987); 및 Chothia et al., Nature, 342: 877-883 (1989)]은, 카밧 CDR내 특정의 소-부분이 아미노산 서열의 수준에 있어서 큰 다양성을 가짐에도 불구하고, 거의 동일한 펩타이드 백본(backbone) 형태를 채택함을 발견하였다. 이들 소-부분은 L1, L2, 및 L3 또는 H1, H2, 및 H3로 지정되었으며, 여기서 "L" 및 "H"는 경쇄 및 중쇄 영역을 각각 나타낸다. 이들 영역은 쵸티아 CDR로 언급될 수 있으며, 이는 카밧 CDR과 오버랩되는 경계를 갖는다. 카밧 CDR과 오버랩되는 CDR을 정의하는 다른 경계는 파들란(Padlan) 등의 문헌[참조: FASEB　J., 9: 133-139 (1995)) 및 MacCallum et al. (J.　Mol. Biol., 262(5): 732-745 (1996)]에 기술되어 있다. 여전히 다른 CDR 경계부 정의는 상기 시스템들 중 하나를 엄격하게 따르지 않을 수 있지만, 이러한 특수 잔기들 또는 잔기들의 그룹 또는 심지어 전체 CDR이 항원 결합에 유의적으로 영향을 미치지 않는다는 예측 또는 실험적 발견의 관점에서 단축될 수 있거나 길어질 수 있다해도, 카밧 CDR과 오버랩되지 않을 것이다. 본원에 사용된 방법은, 예시적인 양태가 카밧 또는 쵸티아 정의된 CDR을 사용한다고 해도, 이들 시스템 중 어느 것에 따라 정의된 CDR을 이용할 수 있다.
용어 "카밧 번호매김", "카밧 정의", 및 "카밧 표지화"는 본원에서 상호교환적으로 사용된다. 당해 분야에서 인식되는 이들 용어들은 항체, 또는 이의 항원 결합 부분의 중쇄 및 경쇄 가변 영역내 다른 아미노산 잔기보다 더 가변성(즉, 초가변성)인 아미노산 잔기의 번호매김 시스템을 말한다[참조: Kabat et al., Ann. NY Acad. Sci., 190: 382-391 (1971); 및 Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH 공보 제91-3242 (1991)]. 중쇄 가변 영역의 경우, 초가변 영역은 CDR1의 경우 31 내지 35번 아미노산 위치, CDR2의 경우 50 내지 65번 아미노산 위치, 및 CDR3의 경우 95 내지 102번 아미노산 위치의 범위이다. 경쇄 가변 영역의 경우, 초가변 영역은 CDR1의 경우 24 내지 34번 아미노산 위치, CDR2의 경우 50 내지 56번 아미노산 위치, 및 CDR3의 경우 89 내지 97번 아미노산 위치의 범위이다.
과거 20년에 걸쳐 가변 중쇄 및 경쇄 영역의 아미노산 서열의 집중적인 공공의 데이타베이스의 성장 및 분석은 가변 영역 서열내 골격 영역(FR)과 CDR 서열 사이의 전형적인 경계의 이해를 가져왔으며 당해 분야의 숙련가가 카밧 번호매김, 초티아 번호매김, 또는 다른 시스템에 따라 CDR을 정밀하게 측정할 수 있도록 하였다[참조: 예를 들면, Martin, "Protein Sequence and Structure Analysis of Antibody Variable Domains," Chapter　31, In Antibody Engineering, (Kontermann and Duebel, eds.) (Springer-Verlag, Berlin, 2001), 특히 pages 432-433]. 가변 중쇄(VH) 및 가변 경쇄(VL) 영역의 아미노산 서열내에서 카밧 CDR의 아미노산 서열을 측정하는 유용한 방법은 하기 제공된다:
CDR-L1 아미노산 서열을 확인하기 위하여:
VL 영역의 아미노 말단으로부터 대략 23개 아미노산 잔기로부터 출발하고;
CDR-L1 서열 앞의 잔기는 항상 시스테인(C)이며;
CDR-L1 서열 이후의 잔기는 항상 트립토판(W) 잔기, 전형적으로 Trp-Tyr-Gln (W-Y-Q)이지만, 또한 Trp-Leu-Gln (W-L-Q), Trp-Phe-Gln (W-F-Q), 및 Trp-Tyr-Leu (W-Y-L)이고;
길이는 전형적으로 10 내지 17개 아미노산 잔기이다.
CDR-L2 아미노산 서열을 확인하기 위하여:
CDR-L1의 말단 후 16개 잔기로 항상 출발하고;
CDR-L2 서열 앞의 잔기는 일반적으로 Ile-Tyr (I-Y)이지만, 또한 Val-Tyr (V-Y), Ile-Lys (I-K), 및 Ile-Phe (I-F)이고;
길이는 항상 7개 아미노산 잔기이다.
CDR-L3 아미노산 서열을 확인하기 위하여:
CDR-L2의 말단 후 33개 아미노산으로 항상 출발하고;
CDR-L3 아미노산 서열 앞의 잔기는 항상 시스테인(C)이며;
CDR-L3 서열 이후의 잔기는 항상 Phe-Gly-X-Gly (F-G-X-G) (서열 번호 11)이고, 여기서 X는 어떠한 아미노산이며;
길이는 전형적으로 7 내지 11개 아미노산 잔기이다.
CDR-H1 아미노산 서열을 확인하기 위하여:
VH 영역의 아미노 말단으로부터 대략 31개 아미노산 잔기 및 시스테인(C) 이후 항상 9개 잔기로부터 출발하고;
CDR-H1 서열 앞의 잔기는 항상 Cys-X-X-X-X-X-X-X-X (서열 번호 12)이고, 여기서 X는 어떠한 아미노산이며;
CDR-H1 서열 이후의 잔기는 항상 Trp (W), 전형적으로 Trp-Val (W-V)이지만, 또한 Trp-Ile (W-I), 및 Trp-Ala (W-A)이고;
길이는 전형적으로 5 내지 7개 아미노산 잔기이다.
CDR-H2 아미노산 서열을 확인하기 위하여:
CDR-H1의 말단 이후 항상 15개 아미노산 잔기로 출발하고;
CDR-H2 서열 앞의 잔기들은 전형적으로 Leu-Glu-Trp-Ile-Gly (L-E-W-I-G) (서열 번호 23)이지만 다른 변이들이 또한 존재하고;
CDR-H2 서열 이후의 잔기는 Lys/Arg-Leu/Ile/Val/Phe/Thr/Ala-Thr/Ser/Ile/Ala (K/R-L/I/V/F/T/A-T/S/I/A)이며;
길이는 전형적으로 16 내지 19개 아미노산 잔기이다.
CDR-H3 아미노산 서열을 확인하기 위하여:
CDR-H2의 말단 이후에 항상 33개 아미노산 잔기 및 시스테인 (C)'이후에 항상 3개 아미노산 잔기로 출발하고;
CDR-H3 서열 앞의 잔기는 항상 Cys-X-X (C-X-X)(여기서 X는 어떠한 아미노산이다), 전형적으로 Cys-Ala-Arg (C-A-R)이며;
CDR-H3 서열 이후의 잔기는 항상 Trp-Gly-X-Gly (W-G-X-G) (서열 번호 24)(여기서, X는 어떠한 아미노산이다)이고;
길이는 전형적으로 3 내지 25개 아미노산 잔기이다.
본원에 사용된 것으로서, 용어 "정규(canonical)" 잔기는 둘다 본원에 참조로 인용된 쵸티아 등의 문헌[참조: J.　Mol. Biol., 196: 901-917 (1987)); 및 쵸티아 등의 문헌[참조: J.　Mol. Biol., 227: 799-817 (1992)]에 의해 정의된 바와 같은 특수 정규 CDR 구조를 정의하는 골격 또는 CDR내 잔기를 말한다. 쵸티아 등에 따라서, 많은 항체들의 CDR의 중요 부분은 아미노산 서열의 수준에 있어서 큰 다양성에도 불구하고 거의 동일한 펩타이드 백본 형태를 갖는다. 각각의 정규 구조는 루프를 형성하는 아미노산 잔기의 연속적인 분절에 대한 펩타이드 백본 비틀림 각의 세트를 주로 명시한다.
"친화성 성숙된" 항체는 변경(들)을 소유하지 않는 모 항체와 비교하여, 표적 항원에 대해 항체의 친화성에 있어서 개선을 초래하는 이의 하나 이상의 CDR에 있어서의 하나 이상의 변형을 갖는 항체이다. 예시적인 친화성 성숙된 항체는 표적 항원에 대해 나노몰(nanomolar) 또는 심지어 피코몰(picomolar) 친화성을 가질 것이다. 친화성 성숙된 항체를 생산하기 위한 각종 과정들이 당해 분야에 공지되어 있다. 예를 들면, 문헌[참조: Marks et al., BioTechnology, 10: 779-783 (1992)]에서는 VH 및 VL 도메인 셔플링(shuffling)에 의한 친화성 성숙을 기술한다. CDR 및/또는 골격 잔기의 무작위 돌연변이 유발은 문헌[참조: Barbas et al., Proc. Nat. Acad. Sci. USA, 91: 3809-3813 (1994); Schier et al., Gene, 169: 147-155 (1995); Yelton et al., J.　Immunol., 155: 1994-2004 (1995); Jackson et al., J.　Immunol., 154(7): 3310-3319 (1995); Hawkins et al., J.　Mol. Biol., 226: 889-896 (1992)]에 기술되어 있다. 선택적인 돌연변이유발 위치 및 활성 향상 아미노산 잔기와의 접촉 또는 초돌연변이 위치에서 선택적인 돌연변이는 미국 특허 공보 제6,914,128　B1호에 기술되어 있다.
용어 "다가 결합 단백질"은 2개 이상의 항원 결합 부위를 포함하는 결합 단백질을 나타낸다. 다가 결합 단백질은 바람직하게는 가공되어 3개 이상의 항원 결합 부위를 가지며, 일반적으로 천연적으로 존재하는 항체가 아니다. 용어 "다특이적 결합 단백질"은 2개 이상의 관련되거나 관련되지 않은 표적을 결합시킬 수 있는 결합 단백질을 말한다. 본 발명의 "이중 가변 도메인"("DVD") 결합 단백질은 2개 이상의 항원 결합 부위를 포함하며 4가 또는 다가 결합 단백질이다. DVD는 일특이적일 수 있으며, 즉, 하나의 항원에 결합할 수 있거나, 다특이적, 즉 2개 이상의 항원에 결합할 수 있다. 2개의 중쇄 DVD 폴리펩타이드 및 2개의 경쇄 DVD 폴리펩타이드를 포함하는 DVD 결합 단백질은 "DVD 면역글로불린" 또는 "DVD-Ig"로 언급된다. DVD-Ig의 각각의 반은 중쇄 DVD 폴리펩타이드 및 경쇄 DVD 폴리펩타이드, 및 2개 이상의 항원 결합 부위를 포함한다. 각각의 결합 부위는 항원 결합 부위당 항원 결합에 관여된 총 6개의 CDR을 갖는 중쇄 가변 도메인 및 경쇄 가변 도메인을 포함한다.
DVD-Ig 분자의 설계, 발현, 및 특성화의 기술은 PCT 공보 제WO　2007/024715호; 미국 특허 공보 제7,612,181호; 및 문헌[참조: Wu et al., Nature Biotechnol., 25: 1290-1297 (2007)]에서 제공된다. 이러한 DVD-Ig 분자의 바람직한 예는 구조식 VD1-(X1)n-VD2-C-(X2)n(여기서, VD1은 제1의 중쇄 가변 도메인이고, VD2는 제2의 중쇄 가변 도메인이며, C는 중쇄 불변 도메인이고, X1은 링커이며 단, 이것은 CH1이 아니고, X2는 Fc 영역이고, n은 0 또는 1이지만, 바람직하게는 1이다)를 포함하는 중쇄; 및 구조식 VD1-(X1)n-VD2-C-(X2)n(여기서, VD1은 제1의 경쇄 가변 도메인이고, VD2는 제2의 경쇄 가변 도메인이며, C는 경쇄 불변 도메인이고, X1은 링커이며 단, 이것은 CH1이 아니고, X2는 Fc 영역을 포함하지 않으며; n은 0 또는 1이지만, 바람직하게는 1이다)를 포함하는 경쇄를 포함한다. 이러한 DVD-Ig는 2개의 이러한 중쇄 및 2개의 이러한 경쇄를 포함할 수 있으며, 여기서 각각의 쇄는 가변 영역들 사이에 중간 불변 영역(intervening constant region)이 없이 탄뎀으로 연결된 가변 도메인을 포함하며, 여기서 중쇄 및 경쇄는 연합하여 탄뎀 기능성 항원 결합 부위를 형성하고, 중쇄 및 경쇄의 쌍은 중쇄 및 경쇄의 다른 쌍과 연합하여 4개의 기능성 항원 결합 부위를 갖는 사합체성 결합 단백질을 형성한다. 다른 예에서, DVD-Ig 분자는 가변 도메인들 사이에 중간 불변 영역없이 탄뎀으로 연결된 3개의 가변 도메인(VD1, VD2, VD3)을 각각 포함하는 중쇄 및 경쇄를 포함할 수 있으며, 여기서 중쇄 및 경쇄의 쌍은 연합하여 3개의 항원 결합 부위를 형성할 수 있고, 여기서 중쇄 및 경쇄의 쌍은 중쇄 및 경쇄의 다른 쌍과 연합하여 6개의 항원 결합 부위를 갖는 사합체성 결합 단백질을 형성할 수 있다.
DVD-Ig 결합 단백질은 IL-1β의 하나 이상의 에피토프에 결합할 수 있다. DVD-Ig 결합 단백질은 또한 IL-1β의 에피토프 및 IL-1β 폴리펩타이드 이외의 제2의 표적 항원의 에피토프에 또한 결합할 수 있다.
본원에 사용된 것으로서, 용어 "이특이적 항체"는 이의 단지 하나가 기능성의 이특이적 항체인 다수의 상이한 면역글로불린 종을 생성하는, 콰드로마 기술(quadroma technology)[참조: Milstein and Cuello, Nature, 305: 537-540 (1983)]에 의해, 2개의 상이한 단클론 항체의 화학적 접합에 의해[참조: Staerz et al., Nature, 314: 628-631 (1985)], 또는 놉-인투-홀(knob-into-hole) 또는 Fc 영역내에 돌연변이를 도입하는 유사한 시도[참조: Holliger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90(14): 6444-6448 (1993)]에 의해 생성되는 완전한 길이의 항체를 말한다. 분자 기능에 의해, 이특이적 항체는 이의 2개의 결합 아암 중 하나(HC/LC의 하나의 쌍)에서 하나의 항원(또는 에피토프)에 결합하고, 이의 제2의 아암(HC/LC의 상이한 쌍)의 상이한 항원(또는 에피토프)에 결합한다. 당해 정의에 의해, 이특이적 항체는 2개의 명백한 항원 결합 아암(특이성 및 CDR 서열 둘다)을 가지며, 이것이 결합하는 각각의 항원에 대해 1가이다.
본원에 사용된 것으로서, 용어 "이중-특이적인 항체"는 이의 2개의 결합 아암(HC/LC의 쌍)의 각각에서 2개의 상이한 항원(또는 에피토프)에 결합할 수 있는 완전한 길이의 항체를 말한다(참조: PCT 공보 제WO　02/02773호). 따라서, 이중-특이적인 결합 단백질은 동일한 특이성 및 동일한 CDR 서열을 갖는 2개의 동일한 항원 결합 아암을 가지며 이것이 결합하는 각각의 항원에 대해 2가이다.
결합 단백질의 "기능적 항원 결합 부위"는 표적 항원에 결합할 수 있는 것이다. 항원 결합 부위의 항원 결합 친화성은, 항원 결합 부위가 기원하는 모 항체와 같이 필수적으로 강력하지 않지만, 항원에 결합하는 능력은 항원에 대한 항체 결합을 평가하기 위해 공지된 각종 방법 중 어느 하나를 사용하여 측정할 수 있어야 한다. 또한, 본원의 다가 항체의 항원 결합 부위 각각의 항원 결합 친화성은 정량적으로 동일할 필요는 없다.
용어 "사이토킨"은 하나의 세포 집단에 의해 방출되고 세포내 매개인자로서 다른 세포 집단에서 작용하는 단백질에 대한 일반적인 용어이다. 이러한 사이토킨의 예는 림포킨, 모노킨, 및 전통적인 폴리펩타이드 호르몬이다. 사이토킨 중에는 사람 성장 호르몬, N-메티오닐 사람 성장 호르몬, 및 소 성장 호르몬과 같은 성장 호르몬; 부갑상샘 호르몬; 티록신; 인슐린; 프로인슐린; 렐락신; 프로렐락신; 난포 자극 호르몬(FSH), 갑상샘 자극 호르몬(TSH), 및 황체화 호르몬(LH)과 같은 당단백질 호르몬; 간 성장 인자; 섬유모세포 성장 인자; 프롤락틴; 태반 락토겐; 종양 괴사 인자-알파(TNF-α) 및 종양 괴사 인자-베타(TNF-β)와 같은 종양 괴사 인자; 뮬러리안(mullerian)-억제 물질; 마우스 고나도트로핀-결합된 펩타이드; 인히빈; 악티빈; 혈관 내피 성장 인자; 인테그린; 트롬보포이에틴(TPO); NGF-알파(NGF-α)와 같은 신경 성장 인자; 혈소판-성장 인자; 태반 성장 인자; TGF-알파(TGF-α) 및 TGF-베타(TGF-β)와 같은 형질전환 성장 인자(TGF); 인슐린-유사 성장 인자-1 및 -11; 에리트로포이에틴(EPO); 골 유도인자; 인터페론-알파(IFN-α), 인터페론-베타(IFN-β), 및 인터페론-감마(IFN-γ)와 같은 인터페론; 대식세포-CSF (M-CSF)와 같은 콜로니 자극 인자(CSF); 과립구 대식세포-CSF (GM-CSF); 및 과립구-CSF (G-CSF); IL-1, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-10, IL-11, IL-12, IL-13, IL-15, IL-17, IL-18, IL-21, IL-22, IL-23, IL-33과 같은 인터루킨(IL); 및 LIF를 포함하는 다른 폴리펩타이드 인자 및 키트 리간드(KL)가 포함된다. 본원에 사용된 것으로서, 용어 사이토킨은 천연 공급원으로부터 또는 재조합체 세포 배양물로부터의 단백질 및 천연 서열 사이토킨의 생물학적으로 활성인 등량체를 포함한다.
본원에 사용된 것으로서, 용어 "공여체" 및 "공여체 항체"는 하나 이상의 CDR을 제공하는 항체를 말한다. 예시적인 양태에서, 공여체 항체는, 골격 영역이 수득되거나 기원된 항체와 상이한 종으로부터의 항체이다. 사람화된 항체와 관련하여, 용어 "공여체 항체"는 하나 이상의 CDR을 제공하는 비-사람 항체를 말한다.
본원에 사용된 것으로서, 용어 "골격" 또는 "골격 서열"은 각종 영역에서 CDR을 뺀 나머지 서열을 말한다. CDR 서열의 정확한 정의는 상이한 시스템에 의해 측정될 수 있으므로, 골격 서열의 의미는 상응하게 상이한 해석에 적용된다. 6개의 CDR(경쇄의 CDR-L1, -L2, 및 -L3 및 중쇄의 CDR-H1, -H2, 및 -H3)은 또한 경쇄 및 중쇄 위의 골격 영역을 각각의 쇄 위의 4개의 소-영역(FR1, FR2, FR3 및 FR4)으로 나누며, 여기서 CDR1은 FR1과 FR2 사이에 위치하고, CDR2는 FR2와 FR3 사이에 위치하며, CDR3은 FR3와 FR4 사이에 위치한다. FR1, FR2, FR3 또는 FR4와 같은 특수한 소-영역을 명시하지 않고, 다른 것들에 의해 언급된 바와 같은, 골격 영역은 단일의 천연적으로 존재하는 면역글로불린 쇄의 가변 영역내 조합된 FR을 나타낸다. 본원에 사용된 것으로서, FR은 4개의 소-영역 중 하나를 나타내고, FR은 골격 영역을 구성하는 4개의 소-영역 중 2개 이상을 나타낸다.
본원에 사용된 것으로서, 용어 "수용체" 및 "수용체 항체"는 골격 영역 중 하나 이상의 아미노산 서열의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 100%를 제공하는 항체 또는 이를 암호화하는 핵산 서열을 말한다. 일부 양태에서, 용어 "수용체"는 불변 영역(들)을 제공하는 항체 아미노산 또는 이를 암호화하는 핵산 서열을 말한다. 여전히 다른 양태에서, 용어 "수용체"는 골격 영역 및 불변 영역(들) 중 하나 이상을 제공하는 항체 아미노산 또는 암호화하는 핵산 서열을 말한다. 특수 양태에서, 용어 "수용체"는 골격 영역 중 하나 이상의 아미노산 서열의 적어도 80%, 바람직하게는, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 100%를 제공하거나 이를 암호화하는 사람 항체 아미노산 또는 핵산 서열을 말한다. 본 양태에 따라서, 수용체는 사람 항체의 하나 이상의 특이적인 위치에서 발생하지 않는 적어도 1개, 적어도 2개, 적어도 3개, 적어도 4개, 적어도 5개, 또는 적어도 10개의 아미노산 잔기를 함유할 수 있다. 수용체 골격 영역 및/또는 수용체 불변 영역(들)은 예를 들면, 배선 항체 유전자, 성숙한 항체 유전자, 기능적 항체(예를 들면, 당해 분야에 잘 공지된 항체, 개발중인 항체, 또는 시판중인 항체)로부터 기원하거나 수득될 수 있다.
사람 중쇄 및 경쇄 수용체 서열은 당해 분야에 공지되어 있다. 본 발명의 하나의 양태에서, 사람 중쇄 및 경쇄 수용체 서열은 V-염기(http://vbase.mrc-cpe.cam.ac.uk/) 또는 IMGT® the international ImMunoGeneTics information system®(http://imgt.cines.fr/textes/IMGTrepertoire/LocusGenes/)으로부터 나열된 서열로부터 선택된다. 본 발명의 다른 양태에서 사람 중쇄 및 경쇄 수용체 서열은 표 3 및 표 4에 기술된 서열로부터 선택된다.
Figure pat00033
Figure pat00034
Figure pat00035

Figure pat00036
Figure pat00037

본원에 사용된 것으로서, 용어 "배선 항체 유전자" 또는 "유전자 단편"은 특수 면역글로불린의 발현을 위한 유전적 재배열 및 돌연변이를 초래하는 성숙과정을 겪지 않는 비-림프구 세포에 의해 암호화된 면역글로불린 서열을 말한다[참조: 예를 들면, Shapiro et al., Crit. Rev. Immunol., 22(3): 183-200 (2002); Marchalonis et al., Adv. Exp. Med. Biol., 484: 13-30 (2001)]. 본 발명의 각종 양태에 의해 제공된 장점들 중 하나는, 배아 항체 유전자가 성숙한 항체 유전자보다 종에서 개인의 필수적인 아미노산 서열 구조 특징을 보존하는 경향이 있어서, 이러한 종에서 치료학적으로 사용되는 경우 외부 공급원으로부터와 같이 인식되는 경향이 거의 없다는 인식에 기인한다.
본원에 사용된 것으로서, 용어 "주요" 잔기는 항체, 특히 사람화된 항체의 결합 특이성 및/또는 친화성에 보다 큰 영향을 갖는 가변 영역내 특정 잔기를 말한다. 주요 잔기는 다음 중 하나 이상을 포함하나, 이에 한정되지 않는다: CDR에 인접한 잔기, 강력한 글리코실화 잔기(N- 또는 O-글리코실화 부위일 수 있다), 드믄 잔기, 항원과 상호작용할 수 있는 잔기, CDR과 상호작용할 수 있는 잔기, 정규 잔기, 중쇄 가변 영역과 경쇄 가변 영역 사이의 접촉 잔기, 베르니에 영역내 잔기, 및 가변 중쇄 CDR1의 쵸티아 정의와 제1의 중쇄 골격의 카밧 정의 사이에서 오버랩되는 영역내 잔기.
용어 "사람화된 항체"는 비-사람 종(예를 들면, 마우스)으로부터의 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열을 포함하지만 여기서 VH 및/또는 VL 서열의 적어도 일부가 보다 "사람-유사"하게 되도록, 즉 사람 배선 가변 서열과 보다 유사하도록 변경된 항체를 말한다. 사람화된 항체의 하나의 유형은 CDR-이식된 항체이며, 여기서 사람 CDR 서열은 비-사람 VH 및 VL 서열내로 도입되어 상응하는 비사람 CDR 서열을 교체한다. 또한, "사람화된 항체"는 목적한 항원에 면역특이적으로 결합하며 실질적으로 사람 항체의 아미노산 서열을 갖는 골격(FR) 영역 및 실질적으로 비-사람 항체의 아미노산 서열을 갖는 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하는 항체 또는 변이체, 이의 유도체, 유사체 또는 단편이다. 본원에 사용된 것으로서, CDR과 관련하여 용어 "실질적으로"는 비-사람 항체 CDR의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 갖는 CDR을 말한다. 사람화된 항체는 실질적으로 적어도 1개, 및 전형적으로 2개의 가변 도메인(Fab, Fab', F(ab')2, FabC, Fv)을 모두 포함하며, 여기서 CDR 영역중 모두 또는 실질적으로 모두는 비-사람 면역글로불린(즉, 공여체 항체)의 것에 상응하며, 골격 영역의 모두 또는 실질적으로 모두는 사람 면역글로불린 컨센서스 서열의 것이다. 하나의 양태에서, 사람화된 항체는 또한 면역글로불린 불변 영역(Fc)의 적어도 일부, 전형적으로 사람 면역글로불린의 것을 포함한다. 일부 양태에서, 사람화된 항체는 경쇄 뿐만 아니라 적어도 중쇄의 가변 도메인 둘다를 함유한다. 항체는 또한 중쇄의 CH1, 힌지, CH2, CH3, 및 CH4 영역을 포함할 수 있다. 일부 양태에서, 사람화된 항체는 단지 사람화된 경쇄를 함유한다. 일부 양태에서, 사람화된 항체는 단지 사람화된 중쇄를 함유한다. 특이적인 양태에서, 사람화된 항체는 단지 경쇄 및/또는 사람화된 중쇄의 사람화된 가변 도메인을 함유한다.
사람화된 항체는 IgM, IgG, IgD, IgA 및 IgE를 포함하는, 면역글로불린의 모든 부류, 및 IgG1, IgG2, IgG3, 및 IgG4를 포함하나 이에 한정되지 않는 모든 동형으로부터 선택될 수 있다. 사람화된 항체는 하나 이상의 부류 또는 동형으로부터의 서열을 포함할 수 있으며, 특수한 불변 도메인은 당해 분야에 잘 공지된 기술을 사용하여 바람직한(desired) 효과기 기능을 최적화하기 위해 선택될 수 있다.
사람화된 항체의 골격 및 CDR 영역은 모 서열에 대해 정밀하게 상응할 필요는 없는데, 예를 들면, 공여체 항체 CDR 또는 컨센서스 골격은 적어도 하나의 아미노산 잔기의 치환, 삽입 및/또는 결실에 의해 돌연변이유발됨으로써 이러한 부위에서 CDR 또는 골격 잔기가 공여체 항체 또는 컨센서스 골격에 상응하지 않도록 할 수 있다. 그러나 예시적인 양태에서, 이러한 돌연변이는 대규모가 아닐 것이다. 일반적으로, 사람화된 항체 잔기의 적어도 80%, 바람직하게는 적어도 85%, 보다 바람직하게는 적어도 90%, 및 가장 바람직하게는 적어도 95%는 모 FR 및 CDR 서열의 것에 상응할 것이다. 본원에 사용된 바와 같이, 용어 "컨센서스 골격"은 컨센서스 면역글로불린 서열에서 골격 영역을 말한다. 본원에 사용된 것으로서, 용어 "컨센서스 면역글로불린 서열"은 관련된 면역글로불린 서열의 계열에서 가장 흔히 존재하는 아미노산(또는 뉴클레오타이드)로부터 형성된 서열을 말한다[참조: 예를 들면, Winnaker, From Genes to Clones (Verlagsgesellschaft, Weinheim, Germany 1987)]. 면역글로불린의 계열에서, 컨센서스 서열내 각각의 위치는 계열에서 이러한 위치에 가장 흔히 발생하는 아미노산에 의해 점유되어 있다. 2개의 아미노산이 동등하게 흔히 발생하는 경우, 하나는 컨센서스 서열내에 포함될 수 있다.
작제되는 DVD-Ig 또는 다른 결합 단백질 분자와 관련하여, "링커"는 펩타이드 결합에 의해 연결되고 하나 이상의 항원 결합 부분을 연결하는데 사용된 2개 이상의 아미노산 잔기를 포함하는 단일 아미노산 또는 폴리펩타이드("링커 폴리펩타이드")를 나타내는데 사용된다. 이러한 링커 폴리펩타이드는 당해 분야에 잘 공지되어 있다[참조: 예를 들면, Holliger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90: 6444-6448 (1993); Poljak, R.J., Structure, 2: 1121-1123 (1994)]. 예시적인 링커는 GGGGSG (서열 번호 26), GGSGG (서열 번호 27), GGGGSGGGGS (서열 번호 28), GGSGGGGSG (서열 번호 223), GGSGGGGSGS (서열 번호 29), GGSGGGGSGGGGS (서열 번호 30), GGGGSGGGGSGGGG (서열 번호 31), GGGGSGGGGSGGGGS (서열 번호 32), ASTKGP (서열 번호 33), ASTKGPSVFPLAP (서열 번호 34), TVAAP (서열 번호 35), RTVAAP (서열 번호 224),TVAAPSVFIFPP (서열 번호 36), RTVAAPSVFIFPP (서열 번호 225), AKTTPKLEEGEFSEAR (서열 번호 37), AKTTPKLEEGEFSEARV (서열 번호 38), AKTTPKLGG (서열 번호 39), SAKTTPKLGG (서열 번호 40), SAKTTP (서열 번호 41), RADAAP (서열 번호 42), RADAAPTVS (서열 번호 43), RADAAAAGGPGS (서열 번호 44), RADAAAAGGGGSGGGGSGGGGSGGGGS (서열 번호 45), SAKTTPKLEEGEFSEARV (서열 번호 46), ADAAP (서열 번호 47), ADAAPTVSIFPP (서열 번호 48), QPKAAP (서열 번호 49), QPKAAPSVTLFPP (서열 번호 50), AKTTPP (서열 번호 51), AKTTPPSVTPLAP (서열 번호 52), akttap (서열 번호 53), AKTTAPSVYPLAP (서열 번호 54), GENKVEYAPALMALS (서열 번호 55), GPAKELTPLKEAKVS (서열 번호 56), 및 GHEAAAVMQVQYPAS (서열 번호 57)를 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
본원에 사용된 것으로서, "베르니에" 영역은 본원에 참조로 인용된 문헌[참조: Foote and Winter, J.　Mol. Biol., 224:487-499 (1992)]에 기술된 바와 같이 CDR 구조를 조절할 수 있고 항원에 대한 적합도를 미세하게-조율할 수 있는 골격 잔기의 서브세트를 말한다. 베르니에 영역 잔기는 CDR이 근본이 되는 층을 형성하며 CDR의 구조 및 항체의 친화성에 영향을 미칠 수 있다.
본원에 사용된 것으로서, 용어 "중화"는, 결합 단백질이 항원에 특이적으로 결합하는 경우 항원(예를 들면, 사이토킨 IL-1β)의 생물학적 활성의 중화를 말한다. 바람직하게는 본원에 기술된 중화 결합 단백질은 hIL-1β의 생물학적 활성의 억제시 생성되는 hIL-1β에 결합한다. 바람직하게는, 중화 결합 단백질은 hIL-1β에 결합하여 hIL-1β의 생물학적 활성을 적어도 약 20%, 40%, 60%, 80%, 85%, 그 이상 감소시킨다. 중화 결합 단백질에 의한 hIL-1β의 생물학적 활성의 억제는 당해 분야에 잘 공지된 hIL-1β 생물학적 활성의 하나 이상의 지시인자를 측정함으로써 평가할 수 있다. 예를 들면, HS27 세포내에서 IL-1β 유도에 의한 사람 IL-6의 분비 억제이다.
용어 "활성"은 항원에 대한 항체, 예를 들면, IL-1β 항원에 결합하는 항-hIL-1β 항체의 결합 특이성/친화성 및/또는, 항체, 예를 들면 hIL-1β에 대한 이의 결합이 hIL-1β의 생물학적 활성을 억제하는, 항-IL-1β 항체의 중화 효능, 예를 들면, HS27 세포에서 IL-1β 유도에 의한 사람 IL-6 분비의 억제와 같은 활성을 포함한다.
용어 "에피토프"는 면역글로불린 또는 T-세포 수용체에 대해 특이적 결합할 수 있는 어떠한 펩타이드 결정인자를 포함한다. 특정 양태에서, 에피토프 결정인자는 아미노산, 당 측쇄, 포스포릴, 또는 설포닐과 같은 분자의 화학적으로 활성인 표면 그룹화를 포함하며, 특정 양태에서, 특이적인 3차원 구조적 특성 및/또는 특이적인 전하 특성을 가질 수 있다. 에피토프는 항체에 의해 결합되는 항원의 영역이다. 특정 양태에서, 항체는 단백질 및/또는 거대분자의 복합체 혼합물 속에서 이의 표적 항원을 우선적으로 인식하는 경우 항원에 특이적으로 결합하는 것으로 일컬어진다. 항체는, 항체가 교차-경쟁하는 경우(하나가 다른 것의 결합 또는 조절 효과를 방지하는 경우) "동일한 에피포트에 결합한다"로 일컬어진다. 또한, 에피토프의 구조적 정의(오버랩핑, 유사한, 동일한)은 유익하지만, 기능적 정의는, 이들이 구조적(결합) 및 기능적(조절, 경쟁) 매개변수를 포함하므로, 흔히 더 관련이 있다.
본원에 사용된 것으로서, 용어 "표면 플라스몬 공명"은 예를 들어, BIAcore 시스템[제조원: 파마시아 바이오센서 아베(Pharmacia Biosensor AB), 스웨덴 웁살라 및 뉴저지주 피츠카타웨이 소재]을 사용하여 바이오센서 매트릭스내에서 단백질 농도에 있어서의 변경을 검출함으로써 실시간 생물특이적인 상호작용의 분석을 허용하는 광학 현상을 말한다. 추가의 설명에 대해서는 문헌[참조: Joensson et al., Ann. Biol. Clin., 51: 19-26 (1993); Joensson et al., BioTechniques, 11: 620-627 (1991); Johnsson et al., J.　Mol. Recognit., 8: 125-131 (1995); 및 Johnsson et al., Anal. Biochem., 198: 268-277 (1991)]을 참조한다.
본원에 사용된 것으로서, 용어 "Kon"(또한 "Kon", "kon")은 결합 단백질(예를 들면, 항체)이 항원에 연합하여 연합 복합체, 예를 들면, 당해 분야에 공지된 바와 같은, 항체/항원 복합체를 형성하는 연합의 결합 속도 상수(on rate constant)를 나타내는 것을 의도한다. "Kon"은 또한 본원에 상호교환적으로 사용되는 것으로서, 용어 "연합 속도 상수" 또는 "ka"로서 공지되어 있다. 당해 값은 하기 방정식으로 나타내는 바와 같이 이의 표적 항원에 대한 항체의 결합 속도 또는 항체와 항원 사이의 복합체 형성의 속도를 나타낸다:
항체 ("Ab") + 항원 ("Ag")→Ab-Ag.
본원에 사용된 것으로서, 용어 "Koff"(또한 "Koff", "koff")는 당해 분야에 공지된 것으로서 연합 복합체(예를 들면, 항체/항원 복합체)로부터의 결합 단백질(예를 들면, 항체)의 해리를 위한 해리 속도 상수(off rate constant), 또는 "해리 속도 상수"를 말한다. 당해 값은 이의 표적 항원으로부터 항체의 해리 속도 또는 시간에 걸친 Ab-Ag 복합체의 유리 항체(free antibody) 및 항원으로의 분리를 나타낸다:
Ab + Ag←Ab-Ag.
본원에 사용된 것으로서, 용어 "KD"(또한 "Kd")는 "평형 해리 상수"를 말하며, 평형에서 적정 측정시 수득되거나, 해리 속도 상수(Koff)를 연합 속도 상수(Kon)로 나누어 수득된 값을 말한다. 연합 속도 상수(Kon), 해리 속도 상수(Koff), 및 평형 해리 상수(K)는 항원에 대한 항체의 결합 친화성을 나타낸다. 연합 및 해리 속도 상수를 측정하는 방법은 당해 분야에 잘 공지되어 있다. 형광성-계 기술을 사용하여 평형시 생리학적 완충액 속에서 시료를 시험하기 위한 고 민감성 및 능력을 제공한다. 다른 실험적 시도 및 BIAcore®(생물분자 상호작용 분석) 검사와 같은 장치를 사용할 수 있다[예를 들면, 스웨덴 웁살라에 소재하는 비아코어 인터네셔널 아베(BIAcore International AB), 지이 핼쓰케어 캄파니(GE Healthcare company)로부터 입수가능한 장치]. 또한, 사피다인 인스트루먼츠(Sapidyne Instruments, 아이다호 보이제 소재)로부터 입수가능한 KinExA®(역학적 배출 검사) 검사를 사용할 수 있다.
용어 "표지" 및 "검출가능한 표지"는 예를 들면, 검출가능한 항체 및 분석물과 같은 특이적인 결합 쌍의 구성원들 사이에서 반응하도록 하기 위한 항원 또는 분석물과 같은 특이적인 결합 파트너에 부착된 모이어티를 의미한다. 이렇게 표지된 특이적인 결합 파트너, 예를 들면, 항체 또는 분석물은 "검출가능하게 표지된" 것으로 언급된다. 따라서, 본원에 사용된 것으로서 용어 "표지된 결합 단백질"은 결합 단백질의 확인을 위해 제공되는 혼입된 표지를 지닌 단백질을 말한다. 하나의 양태에서, 표지는 가시적인 또는 장치적 수단, 예를 들면, 표시된 아비딘 또는 스트렙타비딘(예를 들면, 광학적 또는 비색 방법으로 검출할 수 있는 형광성 마커 또는 효소 활성을 함유하는 스트렙타비딘)에 의해 검출할 수 있는 바이오티닐 모이어티의 폴리펩타이드에 대한 부착 또는 방사선표지된 아미노산의 혼입에 의해 검출가능한 시그날을 생산할 수 있는 검출가능한 마커이다. 폴리펩타이드에 대한 표지의 예는 다음을 포함하나, 이에 한정되지 않는다: 방사성동위원소 또는 방사성핵종(예를 들면, 3H, 14C, 35S, 90Y, 99Tc, 111In, 125I, 131I, 177Lu, 166Ho, 또는 153Sm), 색소원, 형광성 표지(예를 들면, FITC, 로다민, 란타나이드 포스포르), 효소 표지(예를 들면, 서양고추냉이 퍼옥시다제, 루시퍼라제, 알칼린 포스파타제), 화학발광성 마커, 바이오티닐 그룹, 제2 리포터에 의해 인식된 예정된 폴리펩타이드 에피토프(예를 들면, 류신 지퍼 쌍 서열, 제2 항체에 대한 결합 부위, 금속 결합 도메인, 에피토프 태그), 및 자기 제제(예를 들면, 가돌리늄 킬레이트). 면역검사에 일반적으로 사용된 표지의 대표적인 예는 광을 생산하는 모이어티, 예를 들면, 아크리디늄 화합물, 및 형광성을 생산하는 모이어티, 예를 들면 플루오레세인을 포함한다. 다른 표지들은 본원에 기술되어 있다. 이와 관련하여, 모이어티 자체는 검출가능하게 표지되지 않을 수 있지만 여전히 다른 모이어티와 반응시 검출가능하게 될 수 있다. 용어 "검출가능하게 표지된"의 사용은 검출가능한 표지화의 후자의 유형을 포함하는 것으로 의도된다.
용어 "IL-1β 결합 단백질 접합체"는 치료제 또는 세포독성제와 같은, 제2 화학 모이어티에 화학적으로 연결된 본원에 기술된 IL-1β 결합 단백질을 말한다. 용어 "제제"는 본원에서 화학적 화합물, 화학적 화합물들의 혼합물, 생물학적 거대분자, 또는 생물학적 물질로부터 제조된 추출물을 나타내기 위해 사용된다. 바람직하게는 치료제 또는 세포독성제는 백일해 독소, 탁솔, 사이토칼라신 B, 그라미시딘 D, 에티디움 브로마이드, 에메틴, 미토마이신, 에토포시드, 테노포시드, 빈크리스틴, 빈블라스틴, 콜히친, 독소루비신, 다우노루비신, 디하이드록시 안트라신 디온, 미톡산트론, 미트라마이신, 악티노마이신 D, 1-데하이드로테스토스테론, 글루코코르티코이드, 프로카인, 테트라카인, 리도카인, 프로프라놀롤, 및 푸로마이신, 및 이의 유사체 또는 동족체를 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 면역검사와 관련하여 사용된 경우, IL-1β 결합 단백질 접합체는 검출 항체로 사용되는, 검출가능하게 표지된 항체일 수 있다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "결정" 및 "결정화된"은 결정의 형태로 존재하는 결합 단백질(예를 들면, 항체), 또는 이의 항원 결합 부분을 말한다. 결정은 무정형 고체 상태 또는 액체 결정성 상태와 같이 다른 형태와 구별되는 물질의 고체 상태중 하나의 형태이다. 결정은 원자, 이온, 분자(예를 들면, 항체와 같은 단백질), 또는 분자 조립체(예를 들면, 항원/항체 복합체)의 규칙적이고, 반복되는, 3차원 배열로 구성된다. 이들 3-차원 배열은 당해 분야에서 잘 이해되는 특수한 수학적 관계에 따라 배열된다. 결정에서 반복되는 기본 단위, 또는 빌딩 블록(building block)은 비대칭 단위로 일컬어진다. 제공되고 잘 정의된 결정학적 대칭을 따르는 배열내 비대칭 단위의 반복은 결정의 "단위 셀(unit cell)"을 제공한다. 모든 3차원에서 규칙적인 해독에 의한 단위 셀의 반복은 결정을 제공한다[참조: Giege et al., Chapter 1, In Crystallization of Nucleic Acids and Proteins, a Practical Approach, 2nd ed., (Ducruix and Giege, eds.) (Oxford University Press, New York, 1999) pp. 1-16].
용어 "폴리뉴클레오타이드"는 리보뉴클레오타이드 또는 데옥시뉴클레오타이드의 2개 이상의 뉴클레오타이드의 중합체 형태 또는 뉴클레오타이드 유형의 변형된 형태를 의미한다. 이 용어는 DNA의 단일가닥 및 이중가닥 형태를 포함한다.
용어 "분리된 폴리뉴클레오타이드"는 이의 기원 측면에서, "분리된 폴리뉴클레오타이드"가, 이것이 천연적으로 발견되는 폴리뉴클레오타이드의 모두 또는 일부와 연합되지 않거나; 천연적으로 연결되어 있지 않은 폴리뉴클레오타이드에 작동적으로 연결되어 있거나; 보다 큰 서열의 부분으로서 천연적으로 발생하지 않는 폴리뉴클레오타이드(예를 들면, 게놈성, cDNA, 또는 합성 기원, 또는 이의 일부 조합)을 의미할 수 있다.
본원에 사용된 것으로서, 용어 "벡터"는, 이것이 연결된 다른 핵산을 수송할 수 있는 핵산 분자를 말하는 것으로 의도된다. 벡터의 하나의 유형은 "플라스미드"이며, 이는, 추가의 DNA 분절(segment)이 연결될 수 있는 원형의 이중가닥 DNA 루프를 말하는 "플라스미드"이다. 벡터의 다른 유형은 바이러스 벡터이며, 여기서 추가의 DNA 분절은 바이러스 게놈내로 연결될 수 있다. 특정의 벡터는, 이들이 도입된 숙주 세포내에서 자가 복제할 수 있다(예를 들면, 세균 복제 오리진(origin)을 갖는 세균 벡터 및 에피소옴 포유동물 벡터). 다른 벡터(예를 들면, 비-에피소옴 포유동물 벡터)는 숙주 세포내로 도입시 숙주 세포의 게놈내로 통합됨으로써 숙주 게놈과 함께 복제될 수 있다. 또한, 특정의 벡터는, 이들이 작동적으로 연결되는 유전자의 발현을 지시할 수 있다. 이러한 벡터는 본원에서 "재조합체 발현 벡터"(또는 단순히, "발현 벡터")로 언급된다. 일반적으로, 재조합체 DNA 기술에서 이용되는 발현 벡터는 흔히 플라스미드의 형태이다. 본 명세서에서, "플라스미드" 및 "벡터"는, 플라스미드가 벡터의 형태로 가장 일반적으로 사용되므로 상호교환적으로 사용될 수 있다. 그러나, 본 발명은 동일한 기능을 제공하는, 바이러스 벡터(예를 들면, 복제 결핍성 레트로바이러스, 아데노바이러스 및 아데노-관련 바이러스)와 같은 이러한 발현 벡터의 다른 형태를 포함하는 것으로 의도된다.
용어 "작동적으로 연결된"은, 기술된 성분들이 이들의 의도된 방식으로 기능하도록 하는 관계에 있는 병렬을 말한다. 암호화 서열에 "작동적으로 연결된" 대조군 서열은, 암호화 서열의 발현이 대조군 서열과 혼화성인 조건하에서 달성되는 방식으로 연결된다. "작동적으로 연결된" 서열은, 목적한 유전자와 인접한 발현 조절 서열 및 트랜스(in trans)로 작용하거나 목적한 유전자를 조절하는 거리에 있는 발현 조절 서열 둘다를 포함한다. 본원에 사용된 바와 같은 용어 "발현 조절 서열"은, 이들이 연결되는 암호화 서열의 발현 및 프로세싱을 수행하는데 필수적인 폴리뉴클레오타이드 서열을 말한다. 발현 조절 서열은 적절한 전사 개시, 종결, 프로모터 및 인핸서 서열(enhancer sequence); 스플라이싱 및 폴리아데닐화 시그날과 같은 효율적인 RNA 프로세싱 시그날; 세포질성 mRNA를 안정화시키는 서열; 해독 효율을 향상시키는 서열(예를 들면, 코작 컨센서스 서열); 단백질 안정성을 향상시키는 서열; 및 목적하는 경우, 단백질 분비를 향상시키는 서열을 포함한다. 이러한 조절 서열의 특성은 숙주 유기체에 따라 상이하며; 원핵세포에서, 이러한 조절 서열은 일반적으로 프로모터, 리보소옴 결합 부위, 및 전사 종결 서열을 포함하며; 진핵 세포에서, 일반적으로, 이러한 조절 서열은 프로모터 및 전사 종결 서열을 포함한다. 용어 "대조군 서열"은, 이의 존재가 발현 및 프로세싱에 필수적인 성분을 포함하는 것으로 의도되며, 또한 이의 존재가 유리한 추가의 성분, 예를 들면, 리더(leader) 서열 및 융합 파트너 서열을 포함할 수 있다.
본원에 정의된 바와 같은, "형질전환"은, 외인성 DNA가 숙주 세포내로 도입되는 모든 과정을 말한다. 형질전환은 당해 분야에 잘 공지된 각종 방법을 사용하는 천연 또는 인공 조건하에서 발생할 수 있다. 형질전환은 외부 핵산 서열을 원핵 또는 진핵 숙주 세포내로 삽입하기 위한 모든 공지된 방법에 의존할 수 있다. 당해 방법은 형질전환되는 숙주 세포를 기반으로 선택되며, 바이러스 감염, 전기천공, 지질감염, 및 입자 충격(particle bombardment)을 포함할 수 있으나, 이에 한정되지 않는다. 이러한 "형질전환된" 세포는 안정하게 형질전환된 세포를 포함하며, 여기서 삽입된 DNA는 자동적으로 복제하는 플라스미드 또는 숙주 염색체의 일부로서 복제할 수 있다. 이들은 또한 제한된 기간 동안 삽입된 DNA 또는 RNA를 일시적으로 발현하는 세포를 포함한다.
용어 "재조합체 숙주 세포"(또는 단순히 "숙주 세포")는, 외인성 DNA가 도입된 세포를 말하는 것으로 의도된다. 하나의 양태에서, 숙주 세포는 예를 들면, 미국 특허 공보 제7,262,028호에 기술된 숙주 세포와 같이, 항체를 암호화하는 2개 이상(예를 들면, 다수)의 핵산을 포함한다. 이러한 용어는 특수한 대상체 세포뿐만 아니라, 이러한 세포의 후대세포도 언급하는 것으로 의도된다. 특정의 변형이 돌연변이 또는 환경적 영향으로 인하여 후속되는 세대에서 발생할 수 있으므로, 이러한 후대세포는 실제로 모 세포와 동일하지 않을 수 있지만, 여전히 본원에 사용된 것으로서, 용어 "숙주 세포"의 범위내에 포함된다. 하나의 양태에서, 숙주 세포는 모든 생물계로부터 선택된 원핵 및 진핵 세포를 포함한다. 다른 양태에서, 진핵 세포는 원생생물, 진균, 식물 및 동물 세포를 포함한다. 다른 양태에서, 숙주 세포는 원핵 세포주 에스케리키아 콜라이; 포유동물 세포주 CHO, HEK 293, COS, NS0, SP2 및 PER.C6; 곤충 세포주 Sf9; 및 진균 세포 사카로마이세스 세레비지아에(Saccharomyces cerevisiae)를 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
표준 기술을 재조합체 DNA, 올리고뉴클레오타이드 합성, 및 조직 배양 및 형질전환(예를 들면, 전기천공, 지질감염)에 사용할 수 있다. 효소 반응 및 정제 기술은 제조업자의 설명서에 따라 또는 당해 분야에서 일반적으로 달성된 바와 같이 또는 본원에 기술된 바와 같이 수행될 수 있다. 앞서의 기술 및 과정은 일반적으로 당해 분야에 잘 공지된 통상의 방법에 따라서 및 본 명세서 전체에서 인용되고 논의된 각종의 일반적이고 보다 특수한 참조문헌에 기술된 바와 같이 수행될 수 있다[참조: 예를 들면, Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2nd ed. (Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y., 1989].
당해 분야에 공지된 것으로서 "유전자삽입 유기체"는 삽입유전자를 함유하는 세포를 갖는 유기체를 말하며, 여기서 유기체(또는 유기체의 조상)내로 도입된 삽입유전자는 유기체내에서 천연적으로 발현되지 않는 폴리펩타이드를 발현한다. "삽입유전자"는 DNA 작제물이며, 이는, 유전자삽입 유기체가 발달하는 세포의 게놈내로 안정하게 및 작동적으로 통합되어, 유전자삽입 유기체의 하나 이상의 세포 유형 또는 조직에서 암호화된 유전자 생성물의 발현을 지시하는 DNA 작제물이다.
용어 "조절하다(regulate 및 modulate)"는 상호교환적으로 사용되며, 본원에 사용된 것으로서, 목적한 분자의 활성(예를 들면, hIL-1β의 생물학적 활성)에 있어서의 변화 또는 변경을 말한다. 조절은 목적한 분자의 특정 활성 또는 기능의 크기에 있어서의 증가 또는 감소일 수 있다. 분자의 예시적인 활성 및 기능은 결합 특성, 효소 활성, 세포 수용체 활성화, 및 시그날 형질도입을 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
상응하게, 본원에 사용된 것으로서, 용어 "조절인자"는 목적한 분자의 활성 또는 기능(예를 들면, hIL-1β의 생물학적 활성)을 변화시키거나 변경시킬 수 있는 화합물이다. 예를 들면, 조절인자는 조절인자의 부재하에서 관찰된 활성 또는 기능의 크기와 비교하여 분자의 특정 활성 또는 기능의 크기에 있어 증가 또는 감소를 유발할 수 있다. 특정 양태에서, 조절인자는 억제제이며, 이는 분자의 적어도 하나의 활성 또는 기능의 크기를 감소시키는 억제제이다. 예시적인 억제제는 단백질, 펩타이드, 항체, 펩티바디(peptibody), 탄수화물 또는 소 유기 분자를 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 펩티바디는 예를 들면, PCT 공보 제WO　01/83525호에 기술되어 있다.
본원에 사용된 것으로서, 용어 "작용제"는, 목적한 분자와 접촉시, 작용제의 부재하에서 관찰된 활성 또는 기능의 크기와 비교하여 분자의 특정 활성 또는 기능의 크기에 있어서 증가를 유발하는 조절인자를 말한다. 목적한 특수 작용제는 IL-1β 폴리펩타이드, 핵산, 탄수화물, 또는 hIL-1β에 결합하는 모든 다른 분자를 포함할 수 있으나, 이에 한정되지 않는다.
본원에 사용된 것으로서, 용어 "길항제" 및 "억제제"는 목적한 분자와 접촉 시, 길항제의 부재하에서 관찰된 활성 또는 기능의 크기와 비교하여 분자의 특정 활성 또는 기능의 크기에 있어서 감소를 유발하는 조절인자를 말한다. 특수한 목적 길항제는 사람 IL-1β의 생물학적 또는 면역학적 활성을 차단하거나 조절하는 것들을 포함한다. 사람 IL-1β의 길항제 및 억제제는 사람 IL-1β에 결합하는 단백질, 핵산, 탄수화물, 또는 모든 다른 분자를 포함할 수 있지만, 이에 한정되지 않는다.
본원에 사용된 것으로서, 용어 "유효량"은 장애 또는 이의 하나 이상의 증상의 중증도 및/또는 지속을 감소시키거나 완화시키거나; 장애의 진전을 방지하거나; 장애의 회귀를 유발하거나; 장애와 관련된 하나 이상의 증상의 재발, 발달, 발병, 또는 진행을 방지하거나, 장애를 검출하거나; 또는 다른 치료요법(예를 들면, 예방제 또는 치료제)의 예방학적 또는 치료학적 효과(들)을 향상시키거나 개선시키기에 충분한 치료요법제의 양을 말한다.
"환자" 및 "대상체"는 본원에서 상호교환적으로 사용되어 영장류(예를 들면, 사람, 원숭이, 및 침팬지), 비-영장류(예를 들면, 소, 돼지, 낙타, 라마, 말, 염소, 토끼, 양, 햄스터, 기니어 피그(guinea pig), 고양이, 개, 랫트, 마우스, 고래), 조류(예를 들면, 오리 또는 거위), 및 상어를 포함하는 동물, 예를 들면 포유동물을 말한다. 바람직하게는, 환자 또는 대상체는, 질환, 장애 또는 병태를 치료하거나 평가하는 사람, 질환, 장애 또는 병태에 걸릴 위험이 있는 사람, 질환, 장애 또는 병태를 갖는 사람 및/또는, 질환, 장애 또는 병태에 대해 치료중인 사람과 같은, 사람이다.
본원에 사용된 것으로서, 용어 "시료"는 가장 넓은 의미로 사용된다. 본원에 사용된 것으로서 "생물학적 시료"는 살아있는 것 또는 앞서 살아있던 것들로부터의 물질의 어떠한 양도 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 이러한 살아있는 것들은 사람, 비-사람 영장류, 마우스, 랫트, 원숭이, 개, 토끼 및 다른 동물을 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 이러한 물질은 혈액(예를 들면, 전혈), 혈장, 혈청, 뇨, 양수, 활액, 내피 세포, 백혈구, 단핵세포, 다른 세포, 기관, 조직, 골수, 림프절 및 비장을 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
"성분", "성분들", 및 "적어도 하나의 성분"은 일반적으로, 본원에 기술된 방법 및 당해 분야에 공지된 다른 방법에 따라 환자 뇨, 혈청 또는 혈장 시료와 같은 시험 시료의 검사를 위한 키트(kit)에 포함될 수 있는, 포획 항체, 검출 또는 접합체 항체, 대조군, 캘리브레이터(calibrator), 일련의 캘리브레이터, 민감성 패널, 용기, 완충액, 희석제, 염, 효소, 효소용 보조-인자, 검출 시약, 예비처리 시약/용액, 기질(예를 들면, 용액으로서), 정지 용액 등을 말한다. 따라서, 본 교시내용과 관련하여, "적어도 하나의 성분", "성분" 및 "성분들"은 항-분석물(예를 들면, 항-폴리펩타이드) 항체에 대한 결합에 의해서와 같이, 고체 지지체상에 임의로 고정된, 폴리펩타이드와 같은 분석물을 포함하는 조성물과 같이, 상기와 같은 폴리펩타이드 또는 다른 분석물을 포함할 수 있다. 일부 성분은 검사에서 사용하기 위해 재구성용으로 동결건조될 수 있거나 용액일 수 있다.
"대조군"은 분석 대상이 아니거나("음성 대조군") 분석물을 함유하는("양성 대조군") 것으로 공지된 조성물을 말한다. 양성 대조군은 분석물의 공지된 농도를 포함할 수 있다. "대조군", "양성 대조군" 및 "캘리브레이터(calibrator)"는 본원에서 공지된 농도의 분석물을 포함하는 조성물을 언급하기 위해 상호교환적으로 사용될 수 있다. "양성 대조군"은 검사 수행 특성을 달성하기 위해 사용될 수 있으며 시약(예를 들면, 분석물)의 완전성(integrity)의 유용한 지시인자이다.
"예정된 컷오프" 및 "예정된 수준"은 일반적으로 예정된 컷오프/수준에 대한 검사 결과를 비교함으로써 얻은 진단/예후/치료 효능을 평가하기 위해 사용된 검사 컷오프 값을 말하며, 여기서 예정된 컷오프/수준은 이미 각종 임상 매개변수(예를 들면, 질환의 중증도, 진행/비진행/개선 등)과 연결되거나 관련된다. 본 교시내용이 예시적인 예정된 수준을 제공할 수 있다고 해도, 컷오프 값은 면역검사의 특성(예를 들면, 사용된 항체 등)의 특성에 따라 변할 수 있음은 잘 공지되어 있다. 또한 본 교시내용을 기반으로 한 다른 면역검사를 위한 면역검사-특이적인 컷오프 값을 수득하기 위한 다른 면역검사를 위해 본원의 교시내용을 채택하는 것은 또한 본 발명의 통상의 기술내에 있다. 예정된 컷오프/수준의 정밀한 값은 검사들 사이에서 변할 수 있지만, 본원(존재하는 경우)에 기술된 관련성은 일반적으로 적용되어야 한다.
본원에 기술된 진단 검사에 사용된 것으로서, "예비처리 시약", 예를 들면, 분해, 침전 및/또는 가용화 시약은 시험 시료 속에 존재하는 어떠한 분해물도 가용화시키고/시키거나 어떠한 세포도 용해시키는 것이다. 예비처리는 본원에 추가로 기술된 바와 같이, 모든 시료에 필수적이지는 않다. 다른 것들 중에서, 분석물(예를 들면, 목적한 폴리펩타이드)의 가용화는 시료 속에 존재하는 어떠한 내인성 결합 단백질로부터의 분석물의 방출을 포함할 수 있다. 예비처리 시약은 동종(분리 단계가 요구되지 않음) 또는 이종(분리 단계가 요구됨)일 수 있다. 이종 예비처리 시약을 사용하여 검사의 다음 단계로 진행시키기 전에 시험 시료로부터 모든 침전된 분석물 결합 단백질을 제거한다.
본원에 기술된 면역검사 및 키트와 관련하여 "품질 대조군 시약"은 캘리브레이터, 대조군, 및 민감성 패널을 포함하나, 이에 한정되지 않는다. "캘리브레이터" 또는 "표준물"은 전형적으로 항체 또는 분석물과 같은, 분석물의 농도의 보간(interpolation)을 위한 교정(표준) 곡선을 확립하기 위해 사용된다(예를 들면, 다수와 같이, 하나 이상). 대안적으로, 예정된 양성/음성 컷오프 근처인 단일 캘리브레이터를 사용할 수 있다. 다수의 캘리브레이터(즉, 하나 이상의 캘리브레이터 또는 다양한 양의 캘리브레이터(들))를 함께 사용하여 "민감성 패널"을 포함하도록 할 수 있다.
"위험"은 현재 또는 미래의 어느 시점에서 존재하는 특수 현상의 가능성 또는 개연성을 말한다. "위험 계층화"는, 주치의가 환자를 특수 질환, 장애 또는 병태로 발전할 낮은, 중간의, 높은 또는 최대 위험으로 분류하도록 하는 공지된 임상 위험 인자들의 배열을 말한다.
특이적 결합 쌍[예를 들면, 항원(또는 이의 단편) 및 항체(또는 항원적으로 반응성인 이의 단편)]의 구성원들 사이의 상호작용과 관련하여 "특이적인" 및 "특이성"은 상호작용의 선택적인 반응성을 말한다. 어구 "에 특이적으로 결합하는" 및 유사한 어구는 분석물(또는 이의 단편)에 특이적으로 결합하고 다른 실체에 특이적으로 결합하지 않는 항체(또는 이의 항원적으로 반응성인 단편)의 능력을 말한다.
"특이적인 결합 파트너"는 특이적인 결합 쌍의 구성원이다. 특이적인 결합 쌍은 2개의 상이한 분자들을 포함하며, 이는 화학적 또는 물리적 수단을 통해 서로 특이적으로 결합한다. 따라서, 일반적인 면역검사의 항원 및 항체 특이적인 결합 쌍 외에도, 다른 특이적인 결합 쌍은 바이오틴 및 아비딘(또는 스트렙타비딘), 탄수화물 및 렉틴, 상보성 뉴클레오타이드 서열, 효과기 및 수용체 분자, 보조인자 및 효소, 효소 억제제 및 효소들 등을 포함할 수 있다. 또한, 특이적인 결합 쌍은 원래의 특이적인 결합 쌍 구성원의 유사체, 예를 들면, 분석물-유사체인 구성원을 포함할 수 있다. 면역반응성 특이적인 결합 구성원은, 분리되거나 재조합적으로 생산되는 것에 상관없이, 항원, 항원 단편, 및 단클론 및 다클론 항체를 포함하는 항체 및 이의 복합체, 단편, 및 변이체(변이체의 단편 포함)를 포함한다.
본원에 사용된 것으로서 "변이체"는 아미노산의 첨가(예를 들면, 삽입), 결실 또는 보존적 치환에 의해 아미노산 서열내 제공된 폴리펩타이드(예를 들면, IL-1β, BNP, NGAL, 또는 HIV 폴리펩타이드, 또는 항-폴리펩타이드 항체)와는 상이하지만, 제공된 폴리펩타이드의 생물학적 활성을 유지하는 폴리펩타이드를 의미한다(예를 들면, 변이체 IL-1β는 IL-1β에 대한 결합에 대해 항-IL-1β 항체와 경쟁할 수 있다). 아미노산을 보존적 치환, 즉, 아미노산을 유사한 특성(예를 들면, 친수성 및, 하전된 영역의 정도 및 분포)의 상이한 아미노산으로 교체하는 것은 당해 분야에서 일반적으로 약간의 변화를 포함하는 것으로 인식된다. 이들 약간의 변화는 당해 분야에서 이해되는 바와 같이[참조: 예를 들면, Kyte et al., J.　Mol. Biol., 157: 105-132 (1982)], 아미노산의 수치 지수(hydropathic index)를 고려함으로써, 부분적으로 확인될 수 있다. 아미노산의 수치 지수는 이의 소수성 및 전하의 고려를 기반으로 한다. 유사한 수치 지수의 아미노산은 치환될 수 있고 여전히 단백질 기능을 보유하는 것으로 당해 분야에 공지되어 있다. 하나의 국면에서, ±2의 수치 지표를 갖는 아미노산이 치환된다. 아미노산의 친수성은 또한 생물학적 기능을 보유하는 단백질을 생성할 수 있는 치환을 나타내는데 사용될 수 있다. 펩타이드와 관련하여 아미노산의 친수성의 고려는 항원성 및 면역원성과 매우 관련된 것으로 보고된(참조: 예를 들면, 미국 특허 공보 제4,554,101호) 유용한 척도인, 이러한 펩타이드의 최대 국소 평균 친수성의 계산을 허용한다. 유사한 친수성 값을 가진 아미노산의 치환은 당해 분야에서 이해되는 바와 같은, 생물학적 활성, 예를 들면, 면역원성을 보유하는 펩타이드를 생성할 수 있다. 하나의 국면에서, 치환은 서로에 대해 ±2내의 친수성 값을 갖는 아미노산으로 수행된다. 아미노산의 소수성 지수 및 친수성 값 둘 다는 이러한 아미노산의 특수 측쇄에 의해 영향받는다. 이러한 관찰과 일치하여, 생물학적 기능과 양립성인 아미노산 치환은 소수성, 친수성, 전하, 크기, 및 다른 특성들에 의해 나타나는 바와 같이, 아미노산의 상대적인 유사성, 및 특히 이들 아미노산의 측쇄의 상대적인 유사성에 의존하는 것으로 이해된다. "변이체"는 또한 예를 들어, 단백질분해, 포스포릴화, 또는 다른 해독후 변형에 의해, 차등적으로 프로세싱되지만, 여전히 이의 생물학적 활성 또는 항원 반응성, 예를 들면, IL-1β에 결합하는 능력을 보유하는 폴리펩타이드 또는 이의 단편을 기술하는데 사용될 수 있다. 본원에서 "변이체"의 사용은 달리 내용을 부정하지 않는 한, 하나의 변이체의 단편들을 포함하는 것으로 의도된다.
I. 사람 IL-1β에 결합하는 항체
본 발명의 하나의 국면은 IL-1β에 고 친화성, 느린 오프 속도 및 고 중화능으로 결합하는 분리된 뮤린 단클론 항체, 또는 이의 항원-결합 부분을 제공한다. 본 발명의 제2 국면은 IL-1β에 결합하는 키메라 항체를 제공한다. 본 발명의 제3 국면은 IL-1β에 결합하는 CDR 이식된 항체, 또는 이의 항원-결합 부분을 제공한다. 본 발명의 제4 국면은 IL-1β에 결합하는 사람화된 항체, 또는 이의 항원-결합 부분을 제공한다. 본 발명의 제5 국면은 IL-1β 및 하나의 다른 표적에 결합하는 이중 가변 도메인 면역글로불린 (DVD-IgTM) 분자를 제공한다. 바람직하게는, 항체 또는 이의 부위는 분리된 항체이다. 바람직하게는, 본 발명의 항체는 중화 사람 항-IL-1β 항체이다.
A. 항-IL-1β 항체의 제조방법
본 발명의 항-IL-1β 항체는 당해 분야에 공지된 모든 다수의 기술들에 의해 제조할 수 있다.
1. 하이브리도마 기술을 사용한 항 IL-1β 단클론 항체
단클론 항체는 하이브리도마, 재조합체, 및 파아지 디스플레이 기술, 또는 이의 조합의 사용을 포함하는 당해 분야에 공지된 광범위한 기술을 사용하여 제조할 수 있다. 예를 들어, 단클론 항체는 당해 분야에 공지되고, 예를 들면, 문헌[참조: Harlow et al., Antibodies: A Laboratory Manual, 2nd ed. (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1988); Hammerling et al., eds., "Monoclonal Antibodies and T-Cell Hybridomas," In Research Monographs in Immunology, vol.　3 (J.L. Turk, General Editor) (Elsevier, New York, 1981) pp.　563-587 (상기 참조문헌들은 이들의 전문이 참조로 인용된다)]에 교시된 것들을 포함하는 하이브리도마 기술을 사용하여 생산할 수 있다. 본원에 사용된 것으로서 용어 "단클론 항체"는 하이브리도마 기술을 통해 생산된 항체에 한정되지 않는다. 용어 "단클론 항체"는 어떠한 진핵, 원핵 또는 파아지 클론을 포함하는 단일 클론으로부터 기원한 항체를 말하며 이것이 생산되는 방법을 말하지 않는다.
하이브리도마 기술을 사용하여 특이적인 항-IL-1β 항체를 생산하고 스크리닝하는 방법은 통상적이며 당해 분야에 잘 공지되어 있다. 하나의 양태에서, 본 발명은 단클론 항체를 생성하는 방법 및 본 발명의 항체를 분비하는 하이브리도마 세포를 배양함을 포함하는 방법에 의해 생산된 항체를 제공하며, 여기서 바람직하게는, 하이브리도마는, 본 발명의 항원으로 면역화된 마우스로부터 분리된 비장세포를 흑색종 세포와 융합시킨 후 본 발명의 폴리펩타이드와 결합할 수 있는 항체를 분비하는 하이브리도마 클론에 대한 융합체로부터 생성된 하이브리도마를 스크리닝함으로써 생성된다. 요약하면, 마우스는 IL-1β 항원으로 면역화시킬 수 있다. 예시적인 양태에서, IL-1β 항원은 부형제와 함께 투여하여 면역 반응을 자극한다. 이러한 보조제는 완전 또는 불완전 프루언드 보조제(Freund's adjuvant), RIBI (무라밀 디펩타이드) 또는 ISCOM(면역자극 복합체)를 포함한다. 이러한 보조제는 이를 국소 저장소(local deposit) 속에 봉쇄함으로써 신속한 분산으로부터 폴리펩타이드를 보호하거나, 숙주를 자극하여 면역계의 대식구 및 다른 성분들에 대해 화학주성인 인자들을 분비하는 물질을 함유할 수 있다. 바람직하게는, 폴리펩타이드가 투여되는 경우, 면역화 스케쥴은 폴리펩타이드의 2회 이상의 투여, 수주에 걸친 확산을 포함할 것이다.
동물을 IL-1β 항원으로 면역화한 후, 항체 및/또는 항체-생산 세포를 동물로부터 수득할 수 있다. 항-IL-1β 항체-함유 혈청은 동물을 방혈시키거나 희생시킴으로써 동물로부터 수득된다. 혈청은 동물로부터 수득된 채로 사용할 수 있거나, 면역글로불린 분획은 혈청으로부터 수득할 수 있거나, 또는 항-IL-1β 항체는 혈청으로부터 정제할 수 있다. 이러한 방식으로 수득된 혈청 또는 면역글로불린은 다클론이므로, 특성의 이종 배열을 갖는다.
면역 반응이 검출되면, 예를 들어, 항원 IL-1β에 대해 특이적인 항체가 마우스 혈청 속에서 검출되면, 마우스 비장을 수거하고 비장세포를 분리한다. 이후에, 비장세포를 잘 공지된 기술에 의해 어떠한 적합한 흑색종 세포, 예를 들면, 아메리칸 타입 컬쳐 컬렉션(American Type Culture Collection: ATCC, 버지니아주 마나사스 소재)로부터 입수가능한 세포주 SP20으로부터의 세포에 융합시킨다. 하이브리도마는 제한 희석으로 선택하고 클로닝한다. 이후에, 하이브리도마 클론을 당해 분야에 공지된 방법에 의해 IL-1β에 결합할 수 있는 항체를 분비하는 세포에 대해 검사한다. 일반적으로 고 수준의 항체를 함유하는 복수액은 마우스를 양성 하이브리도마 클론으로 면역화시켜 생성할 수 있다.
다른 양태에서, 항체-생산 무한증식 하이브리도마는 면역화된 동물로부터 제조할 수 있다. 면역화한 후, 동물을 희생시키고 비장 B 세포를 무한증식된 흑색종 세포로 당해 분야에 잘 공지된 바와 같이 융합시킨다(참조: 예를 들면, Harlow et al., supra). 예시적인 양태에서, 흑색종 세포는 면역글로불린 폴리펩타이드(비-분비성 세포주)를 분비하지 않는다. 융합 및 항생제 선택 후, 하이브리도마는 IL-1β, 또는 이의 부분, 또는 IL-1β를 발현하는 세포를 사용하여 스크리닝한다. 예시적인 양태에서, 초기 스크리닝은 효소-연결된 면역흡착 검사(ELISA) 또는 방사면역검사(RIA), 바람직하게는 ELISA를 사용하여 수행한다. ELISA 스크리닝의 예는 본원에 참조로 인용된 PCT 공보 제WO　00/37504호에서 제공된다.
항-IL-1β 항체-생산 하이브리도마는 하기에 추가로 논의된 바와 같이, 왕성한 하이브리도마 성장, 고 항체 생산 및 바람직한 항체 특성을 포함하는 바람직한 특성에 대해 선택하고, 클로닝하며 추가로 스크리닝한다. 하이브리도마는 동계 동물, 면역계를 상실한 동물, 예를 들면, 누드 마우스(nude mouse)에서 생체내, 또는 시험관내 세포 배양물 속에서 배양하고 확장시킬 수 있다. 하이브리도마를 선택하고, 클로닝하며 확장시키는 방법은 당해 분야의 통상의 기술자에게 잘 공지되어 있다.
예시적인 양태에서, 하이브리도마는 상기 기술된 바와 같은, 마우스 하이브리도마이다. 다른 바람직한 양태에서, 하이브리도마는 비-사람, 비-마우스 종, 예를 들면, 랫트, 양, 돼지, 염소, 소 또는 말에서 생산된다. 다른 양태에서, 하이브리도마는 사람 하이브리도마이며, 여기서 사람 비-분비성 흑색종은 항-IL-1β 항체를 발현하는 사람 세포와 융합시킨다.
특이적인 에피토프를 인식하는 항체 단편은 공지된 기술로 생성시킬 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 Fab 및 F(ab')2 단편은 파파인(Fab 단편을 생산하기 위한 것) 또는 펩신[F(ab')2 단편을 생산하기 위한 것]과 같은 효소를 사용하여 면역글로불린 분자의 단백질분해적 절단에 의해 생산될 수 있다. F(ab')2 단편은 가변 영역, 경쇄 불변 영역, 및 중쇄의 CHI 도메인을 함유한다.
2. SLAM을 사용한 항-IL-1β 단클론 항체
본 발명의 다른 국면에서, 재조합체 항체는 미국 특허 공보 제5,627,052호; PCT 공보 제WO　92/02551호; 및 문헌[참조: Babcook et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 93: 7843-7848 (1996)]에 기술된 바와 같이, 선택된 림프구 항체 방법(SLAM)으로서 당해 분야에 언급된 과정을 사용하여 단일의 분리된 림프구로부터 생성된다. 당해 방법에서, 목적한 항체를 분비하는 단일 세포, 예를 들어, 단락 1에 기술된 면역화된 동물들 중 어느 하나로부터 기원한 림프구는 항원-특이적인 용혈 플라크 검사를 사용하여 스크리닝하며, 여기서 항원 IL-1β, IL-1β의 소단위, 또는 이의 단편은 양 적혈구 세포에 바이오틴과 같은 링커를 사용하여 커플링시켜 IL-1β에 대해 특이성을 갖는 항체를 분비하는 단일 세포를 확인하는데 사용한다. 목적한 항체-분비 세포의 확인에 이어서, 중쇄 및 경쇄 가변 영역(VH 및 VL) cDNA는 세포로부터 리버스 트랜스크립타제-PCR에 의해 구하고, 이들 가변 영역은 이후에 적절한 면역글로불린 불변 영역(예를 들면, 사람 불변 영역)과 관련하여, COS 또는 CHO 세포와 같은 포유동물 숙주 세포내에서 발현될 수 있다. 생체내에서 선택된 림프구로부터 기원한 증폭된 면역글로불린 서열로 형질감염된 숙주 세포는, 이후에 예를 들면, IL-1β에 대한 항체를 발현하는 세포를 분리하기 위한 형질감염된 세포를 패닝(panning)함으로써 시험관내에서 추가의 분석 및 선택에 적용시킬 수 있다. 증폭된 면역글로불린 서열은 또한 PCT 공보 제WO　97/29131호 및 PCT 공보 제WO　00/56772호에 기술된 것들과 같은 시험관내 친화성 성숙 방법에 의해 시험관내에서 추가로 조작할 수 있다.
3. 유전자삽입 동물을 사용한 항-IL-1β 단클론 항체
본 발명의 다른 양태에서, 항체는 사람 면역글로불린 유전자자리 중 일부 또는 모두를 포함하는 비-사람 동물을 IL-1β 항원으로 면역화시켜 생산한다. 예시적인 양태에서, 비-사람 동물은 XENOMOUSE 유전자삽입 마우스, 사람 면역글로불린 유전자자리의 거대 단편을 포함하고 마우스 항체 생산이 결손된 가공된 마우스 균주이다[참조: 예를 들면, Green et al., Nature Genetics, 7: 13-21 (1994) 및 미국 특허 공보 제5,916,771호; 제5,939,598호; 제5,985,615호; 제5,998,209호; 제6,075,181호; 제6,091,001호; 제6,114,598호 및 제6,130,364호]. 또한, 1991년 7월 25일자로 공개된 PCT 공보 제WO　91/10741호; 1994년 2월 3일자로 공개된 제WO　94/02602호; 둘다 1996년 10월 31일자로 공개된 제WO　96/34096호 및 제WO　96/33735호; 1998년 4월 23일자로 공개된 제WO　98/16654호, ; 1998년 6월 11일자로 공개된 제WO　98/24893호; 1998년 11월 12일자로 공개된 제WO　98/50433호, ; 1999년 9월 10일자로 공개된 제WO　99/45031호; 1999년 10월 21일자로 공개된 제WO　99/53049호; 2000년 2월 24일자로 공개된 제WO　00/09560호; 및 2000년 6월 29일자로 공개된 제WO　00/037504호]. XENOMOUSE® 유전자삽입 마우스는 완전한 사람 항체의 성인-유사 사람 레퍼토리를 생산하며, 항원-특이적인 사람 Mab를 생성한다. XENOMOUSE® 유전자삽입 마우스는 사람 중쇄 유전자자리 및 x경쇄 유전자자리의 메가염기 크기의, 배선 구조 YAC 단편의 도입을 통해 사람 항체 레퍼토리의 대략 80%를 함유한다[참조: Mendez et al., Nature Genetics, 15:146-156 (1997); 및 Green and Jakobovits, J.　Exp. Med., 188: 483-495 (1998), 이의 교시내용은 본원에 참조로 인용된다].
4. 재조합체 항체 라이브러리를 사용한 항-IL-1β 단클론 항체
시험관내 방법을 또한 사용하여 본 발명의 항체를 제조할 수 있으며, 여기서 항체 라이브러리를 스크리닝하여 바람직한 결합 특이성을 가진 항체를 확인한다. 재조합체 항체 라이브러리를 이와 같이 스크리닝하는 방법은 당해 분야에 잘 공지되어 있으며 예를 들면, 문헌[참조: Ladner et al., 미국 특허 공보 제5,223,409호; Kang et al., PCT 공보 제WO　92/18619호; Dower et al., PCT 공보 제WO　91/17271; Winter et al., PCT 공보 제WO　92/20791; Markland et al., PCT 공보 제WO　92/15679호; Breitling et al., PCT 공보 제WO　93/01288호; McCafferty et al., PCT 공보 제WO　92/01047호; Garrard et al., PCT 공보 제WO　92/09690호; Fuchs et al., Bio/Technology, 9: 1369-1372 (1991); Hay et al., Hum. Antibod. Hybridomas, 3: 81-85 (1992); Huse et al., Science, 246: 1275-1281 (1989); McCafferty et al., Nature, 348: 552-554 (1990); Griffiths et al., EMBO　J., 12: 725-734 (1993); Hawkins et al., J. Mol. Biol., 226: 889-896 (1992); Clackson et al., Nature, 352: 624-628 (1991); Gram et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89: 3576-3580 (1992); Garrard et al., Bio/Technology, 9: 1373-1377 (1991); Hoogenboom et al., Nucl. Acids Res., 19: 4133-4137 (1991); 및 Barbas et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 88: 7978-7982 (1991); US 공보 제2003/0186374; 및 PCT 공보 제WO　97/29131호, 이들 각각의 내용은 본원에 참조로 인용된다]에 기술된 방법을 포함한다.
재조합체 항체 라이브러리는 IL-1β 또는, IL-1β의 부분으로 면역화된 대상체로부터 일 수 있다. 대안적으로, 재조합체 항체 라이브러리는 나이브 대상체(naive subject), 즉, 사람 IL-1β로 면역화되지 않은 사람 대상체로부터의 사람 항체 라이브러리와 같은, IL-1β로 면역화되지 않은 대상체로부터일 수 있다. 본 발명의 항체는 재조합체 항체 라이브러리를, 사람 IL-1β를 포함하는 펩타이드를 사용하여 스크리닝함으로써 IL-1β을 인식하는 항체를 선택하여 선택한다. 이러한 스크리닝 및 선택을 수행하는 방법은 앞서의 단락에서 참조문헌들에 기술된 바와 같이, 당해 분야에 잘 공지되어 있다. 특수한 Koff 속도 상수를 가진 사람 IL-1β로부터 해리되는 것들과 같은, 사람 IL-1β에 대한 특수한 결합 친화성을 갖는 본 발명의 항체를 선택하기 위해, 표면 플라스몬 공명의 당해 분야에 공지된 방법을 사용하여 바람직한 Koff 속도 상수를 가진 항체를 선택할 수 있다. 특수한 IC50을 갖는 것들과 같은, 사람 IL-1β에 대한 특수한 중화 활성을 갖는 본 발명의 항체를 선택하기 위해, 사람 IL-1β 항체의 억제를 평가하기 위한 당해 분야에 공지된 표준 방법을 사용할 수 있다.
하나의 국면에서, 본 발명은 사람 IL-1β에 결합하는, 분리된 항체, 또는 이의 항원-결합 부분에 관한 것이다. 바람직하게는, 항체는 중화 항체이다. 각종 양태에서, 항체는 재조합체 항체 또는 단클론 항체이다.
예를 들면, 본 발명의 항체는 당해 분야에 공지된 각종의 파아지 디스플레이 방법을 사용하여 생성시킬 수 있다. 파아지 디스플레이 방법에서, 기능성 항체 도메인은 이들을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드 서열을 수반하는 파아지 입자의 표면에 디스플레이된다. 특히, 이러한 파아지를 이용하여 레퍼토리 또는 조합 항체 라이브러리(예를 들면, 사람 또는 뮤린)로부터 발현된 항원-결합 도메인을 디스플레이할 수 있다. 목적한 항원에 결합하는 항원 결합 도메인을 발현하는 파아지는 항원, 예를 들면, 표지된 항원 또는 고체 표면 또는 비드(bead)에 결합되거나 포획된 항원으로 선택되거나 확인될 수 있다. 이러한 방법에서 사용된 파아지는 전형적으로 파아지 유전자 III 또는 유전자 VIII 단백질에 재조합적으로 융합된 Fab, Fv, 또는 이황화물 안정화된 Fv 항체 도메인을 지닌 파아지로부터 발현된 fd 및 M13 결합 도메인을 포함하는 전형적으로 필라멘트성 파아지이다. 본 발명의 항체를 제조하는데 사용할 수 있는 파아지 디스플레이 방법의 예는 문헌[참조: Brinkmann et al., J.　Immunol. Methods, 182: 41-50 (1995); Ames et al., J.　Immunol. Methods, 184: 177-186 (1995); Kettleborough et al., Eur. J. Immunol., 24: 952-958 (1994); Persic et al., Gene, 187: 9-18 (1997); Burton et al., Adv. Immunol., 57: 191-280 (1994); PCT 공보 제WO　90/02809호; 제WO　91/10737호; 제WO　92/01047호(PCT/GB91/01134); 제WO　92/18619호; 제WO　93/11236호; 제WO　95/15982호; 제WO　95/20401호; 및 미국 특허 공보 제5,698,426호; 제5,223,409호; 제5,403,484호; 제5,580,717호; 제5,427,908호; 제5,821,047호; 제5,571,698호; 제5,427,908호; 제5,516,637호; 제5,780,225호; 제5,658,727호; 제5,733,743호 및 제5,969,108호; 이들 각각은, 전문이 본원에 참조로 인용되어 있다]에 기재된 것들을 포함한다.
상기 참조문헌에 기술된 바와 같이, 파아지 선택 후, 파아지로부터 항원 암호화 영역을 분리하여 사람 항체 또는 어떠한 다른 바람직한 항원 결합 단편을 포함하는 전체 항체를 생성하는데 사용할 수 있으며, 예를 들면, 하기 상세히 기술된 바와 같이, 포유동물 세포, 곤충 세포, 식물 세포, 효모, 및 세균을 포함하는 어떠한 바람직한 숙주내에서 발현시킬 수 있다. 예를 들면, Fab, Fab' 및 F(ab')2 단편을 재조합적으로 생산하기 위한 기술은 또한 PCT 공보 제WO　92/22324호; Mullinax et al., BioTechniques, 12(6): 864-869 (1992); 및 Sawai et al., Am. J. Reprod. Immunol., 34: 26-34 (1995); 및 Better et al., Science, 240: 1041-1043 (1988), (상기 참조문헌들은, 이들의 전문이 참조로 인용된다)에 기재된 것들과 같은 당해 분야에 공지된 방법을 사용하여 이용할 수 있다. 단일쇄 Fv 및 항체를 생산하는데 사용될 수 있는 기술의 예는 미국 특허 공보 제4,946,778호 및 제5,258,498호; Huston et al., Methods Enzymol., 203: 46-88 (1991); Shu et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90: 7995-7999 (1993); 및 Skerra et al., Science, 240: 1038-1041 (1988)에 기술된 것들을 포함한다.
파아지 디스플레이에 의해 재조합체 항체 라이브러리를 스크리닝하는 대안으로, 대형 조합 라이브러리를 스크리닝하기 위해 당해 분야에 공지된 다른 방법을 본 발명의 이중 특이성 항체의 확인에 적용시킬 수 있다. 대안적인 발현 시스템의 하나의 유형은, 재조합체 항체 라이브러리가 PCT 공보 제WO　98/31700호(Szostak 및 Roberts가 출원함); 및 문헌[참조: Roberts and Szostak, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 94: 12297-12302 (1997)]에 기술된 바와 같은 RNA-단백질 융합체로서 발현되는 것이다. 당해 시스템에서, 공유결합 융합체는, mRNA와, 이의 3' 말단에서, 푸로마이신, 펩티딜 수용체 항생제를 수반하는 합성 mRNA의 시험관내 해독에 의해 이것이 암호화하는 펩타이드 또는 단백질 사이에서 생성된다. 따라서, 특이적인 mRNA는 이중 특이성 항원에 대한 항체, 또는 이의 부분의 결합과 같은 암호화된 펩타이드 또는 단백질, 예를 들면, 항체, 또는 이의 부분의 특성을 기반으로 한 mRNA의 복합체 혼합물(예를 들면, 조합 라이브러리)로부터 농축될 수 있다. 이러한 라이브러리의 스크리닝으로부터 회수된, 항체, 또는 이의 부분을 암호화하는 핵산 서열은 위에서 기술된 바와 같이(예를 들면, 포유동물 숙주 세포내에서) 재조합체 수단으로 발현시킬 수 있으며, 또한 위에서 기술된 바와 같이, 돌연변이가 원래의 선택된 서열(들)내로 도입된 mRNA-펩타이드 융합체의 스크리닝의 추가 라운드에 의해, 또는 재조합체 항체의 시험관내 친화성 성숙에 대한 다른 방법에 의해 추가의 친화성 성숙에 적용시킬 수 있다.
다른 시도에서, 본 발명의 항체는 또한 당해 분야에 공지된 효모 디스플레이 방법을 사용하여 생성시킬 수 있다. 효모 디스플레이 방법에서, 유전 방법을 사용하여 효모 세포벽에 대해 항체 도메인을 묶고 이들을 효모 표면위에 디스플레이한다. 특히, 이러한 효모는 레퍼토리 또는 조합 항체 라이브러리(예를 들면, 사람 또는 뮤린)로부터 발현된 항원-결합 도메인을 디스플레이하기 위해 사용될 수 있다. 본 발명의 항체를 제조하기 위해 사용될 수 있는 효모 디스플레이 방법의 예는 본원에 참조로 인용된 문헌(참조: Wittrup et al.의 미국 특허 공보 제6,699,658호)에 개재된 것들을 포함한다.
B. 재조합체 IL-1β 항체의 생산
본 발명의 항체는 당해 분야에 공지된 다수의 기술들 중 어느 것에 의해 생산될 수 있다. 예를 들면,숙주 세포로부터의 발현에 의해 생산될 수 있으며, 여기서 중쇄 및 경쇄를 암호화하는 발현 벡터(들)는 표준 기술에 의해 숙주 세포내로 형질감염된다. 용어 "형질감염"의 각종 형태는 외인성 DNA를 원핵세포 또는 진핵 숙주 세포내로 예를 들면, 전기천공, 인산칼슘 침전, DEAE-덱스트란 형질감염 등에 의한 도입에 일반적으로 사용된 광범위한 기술을 포함하는 것으로 의도된다. 비록 본 발명의 항체를 원핵 또는 진핵 숙주 세포내에서 발현하는 것이 가능하다고 해도, 진핵 세포내에서 항체를 발현하는 것이 바람직하며, 포유동물 숙주 세포내에서가 가장 바람직한데, 이는, 이러한 진핵 세포(및 특히 포유동물 세포)가 원핵 세포보다 보다 더 적절하게 폴딩되고 면역학적으로 활성인 항체를 조립하고 분비하는 경향이 있기 때문이다.
본 발명의 재조합체 항체를 발현하기에 바람직한 포유동물 숙주 세포는 예를 들면, 문헌[참조: Kaufman and Sharp, J.　Mol. Biol., 159: 601-621 (1982)]에 기술된 바와 같이, DHFR 선택성 마커와 함께 사용된, 차이니즈 햄스터 난소(Chinese Hamster Ovary: CHO 세포)[dhfr- CHO 세포 포함, 문헌: Urlaub and Chasin, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 77: 4216-4220 (1980)에 기술됨], NS0 흑색종 세포, COS 세포 및 SP2 세포를 포함한다. 항체 유전자를 암호화하는 재조합체 발현 벡터를 포유동물 숙주 세포내로 도입하는 경우, 항체는 숙주 세포내에서 항체의 발현 또는, 보다 바람직하게는 숙주 세포가 성장하는 배양 배지내로 항체의 분비를 허용하기에 충분한 기간 동안 숙주 세포를 배양함으로써 생산된다. 항체는 표준 단백질 정제 방법을 사용하여 배양 배지로부터 회수할 수 있다.
숙주 세포는 또한 Fab 단편 또는 scFv 분자와 같은, 기능성 항체 단편을 생산하는데 사용될 수 있다. 상기 과정에서 변형은 본 발명의 영역내에 있음이 이해될 것이다. 예를 들면, 숙주 세포를 본 발명의 항체의 경쇄 및/또는 중쇄의 기능성 단편을 암호화하는 DNA로 형질감염시키는 것이 바람직할 수 있다. 재조합체 DNA 기술을 또한 사용하여 목적한 항원에 대한 결합에 필수적이지 않은 경쇄 및 중쇄 중의 하나 또는 이들 둘다를 암호화하는 DNA 중 일부, 또는 모두를 제거할 수 있다. 이러한 트렁케이트된(truncated) DNA 분자로부터 발현된 분자는 또한 본 발명의 항체에 포함된다. 또한, 하나의 중쇄 및 하나의 경쇄가 본 발명의 항체이고 다른 중쇄 및 경쇄가 본 발명의 항체를 표준 화학적 가교결합 방법에 의해 제2 항체에 교차연결시킴으로써 목적한 항원 이외의 항원에 대해 특이적인 이기능성 항체를 생산할 수 있다.
본 발명의 항체, 또는 이의 항원-결합 부분의 재조합체 발현을 위한 예시적인 시스템에서, 항체 중쇄 및 항체 경쇄 둘다를 암호화하는 재조합체 발현 벡터는 dhfr- CHO 세포내로 인산칼슘-매개된 형질감염에 의해 도입된다. 재조합체 발현 벡터내에서, 항체 중쇄 및 경쇄 유전자 각각은 CMV 인핸서/AdMLP 프로모터 조절 성분에 작동적으로 연결되어 유전자의 고수준 전사를 구동시킨다. 재조합체 발현 벡터는 또한 메토트렉세이트 선택/증폭을 사용하여 벡터로 형질감염시킨 CHO 세포의 선택을 허용하는, DHFR 유전자를 또한 수반한다. 선택된 형질전환체 숙주 세포를 배양하여 항체 중쇄 및 경쇄의 발현을 허용하며 완전한 항체는 배양 배지로부터 회수된다. 표준 분자 생물학 기술을 사용하여 재조합체 발현 벡터를 제조하고, 숙주 세포를 형질감염시키며, 형질전환체에 대해 선택하고, 숙주 세포를 배양하고 항체를 배양 배지로부터 회수한다. 또한 여전히 본 발명은 본 발명의 숙주 세포를 적합한 배양 배지 속에서 본 발명의 재조합체 항체가 합성될 때까지 배양함으로써 본 발명의 재조합체 항체를 합성하는 방법을 제공한다. 당해 방법은 배양 배지로부터 재조합체 항체를 분리함을 추가로 포함할 수 있다.
1. 항-사람 IL-1β 키메라 항체
키메라 항체는, 항체의 상이한 부분들이 상이한 동물 종(species)으로부터 기원한 분자, 예를 들면, 뮤린 단클론 항체로부터 기원한 가변 영역 및 사람 면역글로불린 불변 영역을 갖는 항체이다. 키메라 항체를 생산하는 방법은 당해 분야에 공지되어 있고, 실시예 단락에 상세히 논의되어 있다. 이의 전문이 본원에 참조로 인용된 문헌[참조: 예를 들면, Morrison, S.L., Science, 229: 1202-1207 (1985); Oi et al., BioTechniques, 4: 214-221 (1986); Gillies et al., J.　Immunol. Methods, 125: 191-202 (1989); 미국 특허 공보 제5,807,715호; 제4,816,567호; 및 제4,816,397호]을 참조. 또한, 적절한 항원 특이성의 마우스 항체 분자로부터의 유전자를 적절한 생물학적 활성의 사람 항체 분자로부터의 유전자와 함께 스플라이싱(splicing)시킴에 의한 "키메라 항체"의 생산을 위해 개발된 기술[참조: Morrison et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81: 6851-6855 (1984); Neuberger et al., Nature, 312: 604-608 (1984); Takeda et al., Nature, 314: 452-454 (1985), 이는, 이의 전문이 본원에 참조로 인용되어 있다]을 사용할 수 있다.
하나의 양태에서, 본 발명의 키메라 항체는 1 단락에 기술된 뮤린 단클론 항-사람 IL-1β 항체의 중쇄 불변 영역을 사람 IgG1 불변 영역으로 교체함으로써 생산된다.
2. 항-IL-1β CDR-이식된 항체
본 발명의 CDR-이식된 항체는 사람 항체로부터의 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열을 포함하며, 여기서 VH 및/또는 VL의 CDR 영역 중의 하나 이상은 본 발명의 뮤린 항체의 CDR 서열로 교체된다. 어떠한 사람 항체로부터의 골격 서열도 CDR 이식용 주형(template)으로서 공급될 수 있다. 그러나, 이러한 골격 상의 직쇄 교체는 흔히 항원의 결합 친화성의 일부 손실을 초래한다. 사람 항체가 원래의 뮤린 항체에 대해 보다 동종일수록, 뮤린 CDR과 사람 골격의 조합은 친화성을 감소시킬 수 있는 CDR내 뒤틀림을 유도할 가능성이 더 적어진다. 따라서, CDR로부터 떨어진 뮤린 가변 골격을 교체하기 위해 선택되는 사람 가변 골격은 뮤린 항체 가변 영역 골격과 적어도 65% 서열 동질성을 갖는 것이 바람직하다. CDR로부터 떨어진 사람 및 뮤린 가변 영역이 적어도 70% 서열 동질성을 갖는 것이 보다 더 바람직하다. CDR로부터 떨어진 사람 및 뮤린 가변 영역은 적어도 75% 서열 동질성을 갖는 것이 훨씬 더 바람직하다. CDR로부터 떨어진 사람 및 뮤린 가변 영역이 적어도 80% 서열 동질성을 갖는 것이 가장 바람직하다. 키메라 항체를 생산하는 방법은 당해 분야에 공지되어 있다[참조: 예를 들면, 유럽 특허 공보 제EP　0　239　400호; PCT 공보 제WO　91/09967호; 미국 특허 공보 제5,225,539호; 제5,530,101호; 및 제5,585,089호]. 항체의 베니어링(veneering) 또는 재표면화(resurfacing)에 대해서는, 예를 들면, 문헌[참조: 유럽 특허 공보 제EP　0　592　106호 및 제EP　0　519　596호; Padlan, Mol. Immunol., 28(4/5): 489-498 (1991); Studnicka et al., Protein Eng., 7(6): 805-814 (1994); 및 Roguska et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 91: 969-973 (1994)]을 참조한다. 항체 쇄 셔플링(chain shuffling)에 관해서는, 예를 들면, 미국 특허 공보 제5,565,352호를 참조한다.
3. 항-사람 IL-1β 사람화된 항체
사람화된 항체는 비-사람 종 항체로부터의 하나 이상의 상보성 결정 영역(CDR) 및 사람 면역글로불린 분자로부터의 골격 영역을 갖는 바람직한 항원에 결합하는 비-사람 종 항체로부터 기원한 항체 분자이다. 공지된 사람 Ig 서열은 예를 들면, 전세계적인 웹 사이트(worldwide web sites): www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez-/query.fcgi; www.atcc.org/phage/hdb.html; www.sciquest.com/; www.abcam.com/; www.antibodyresource.com/onlinecomp.html; www.public.iastate.edu/.about.pedro/research_tools.html; www.mgen.uni-heidelberg.de/SD/IT/IT.html; www.whfreeman.com/immunology/CH-05/kuby05.htm; www.library.thinkquest.org/12429/Immune/Antibody.html; www.hhmi.org/grants/lectures/1996/vlab/; www.path.cam.ac.uk/.about.mrc7/m- ikeimages.html; www.antibodyresource.com/; mcb.harvard.edu/BioLinks/Immuno- logy.html.www.immunologylink.com/; pathbox.wustl.edu/.about.hcenter/index.- html; www.biotech.ufl.edu/.about.hcl/; www.pebio.com/pa/340913/340913.html-; www.nal.usda.gov/awic/pubs/antibody/; www.m.ehime-u.acjp/.about.yasuhito-/Elisa.html; www.biodesign.com/table.asp; www.icnet.uk/axp/facs/davies/lin-ks.html; www.biotech.ufl.edu/.about.fccl/protocol.html; www.isac-net.org/sites_geo.html; aximtl.imt.uni-marburg.de/.about.rek/AEP-Start.html; baserv.uci.kun.nl/.about.jraats/linksl.html; www.recab.uni-hd.de/immuno.bme.nwu.edu/; www.mrc-cpe.cam.ac.uk/imt-doc/pu-blic/INTRO.html; www.ibt.unam.mx/vir/V_mice.html; imgt.cnusc.fr:8104/; www.biochem.ucl.ac.uk/.about.martin/abs/index.html; antibody.bath.ac.uk/; abgen.cvm.tamu.edu/lab/wwwabgen.html; www.unizh.ch/.about.honegger/AHOsem-inar/Slide01.html; www.cryst.bbk.ac.uk/.about.ubcg07s/; www.nimr.mrc.ac.uk/CC/ccaewg/ccaewg.htm; www.path.cam.ac.uk/.about.mrc7/h-umanisation/TAHHP.html; www.ibt.unam.mx/vir/structure/stat_aim.html; www.biosci.missouri.edu/smithgp/index.html; www.cryst.bioc.cam.ac.uk/.abo-ut.fmolina/Web-pages/Pept/spottech.html; www.jerini.de/fr roducts.htm; www.patents.ibm.com/ibm.html.Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, U.S. Dept. Health (1983)에 기재되어 있으며, 이들 각각은 본원에 참조로 전체적으로 인용된다. 이러한 불러온 서열(imported sequence)을 사용하여 당해 분야에 공지된 바와 같이, 면역원성을 감소시키거나 결합, 친화성, 온-속도, 오프-속도, 항원항체결합력, 특이성, 반감기, 또는 어떠한 다른 적합한 특성을 감소시키거나, 향상시키거나 변형시킬 수 있다.
사람 골격 영역내 골격(FR) 잔기는 CDR 공여체 항체로부터의 상응하는 잔기로 치환됨으로써 항원 결합을 변경, 바람직하게는 개선시킬 수 있다. 이들 골격 치환은 당해 분야에 잘 공지된 방법, 예를 들면, CDR 및 골격 잔기의 상호작용을 모델화하여 특수 위치에서 특수한 골격 잔기를 확인하기 위한 항원 결합 및 서열 비교를 위해 중요한 골격 잔기를 확인한다.[참조: 예를 들면, Queen et al., 미국 특허 공보 제5,585,089호; Riechmann et al., Nature, 332: 323-327 (1988), 이들은, 이들의 전문이 본원에 참조로 인용된다]. 3차원 면역글로불린 모델은 일반적으로 이용가능하며 당해 분야의 숙련가에게 친숙하다. 선택된 후보물 면역글로불린 서열의 가능한 3차원 구조적 구조물을 설명하고 디스플레이하는 컴퓨터 프로그램이 이용가능하다. 이들 디스플레이의 점검은 후보물 면역글로불린 서열의 기능화에 있어서 잔기의 가능한 역할의 분석, 즉, 이의 항원을 결합시키기 위한 후보물 면역글로불린의 능력에 영향을 미치는 잔기의 분석을 허용한다. 이러한 방식으로, FR 잔기를 선택하여 컨센서스 및 불러온 서열로부터 조합하여, 표적 항원(들)에 대한 증가된 친화성과 같은 바람직한 항체 특성을 달성하도록 할 수 있다. 일반적으로, CDR 잔기는 항원 결합에 영향을 미치는데 직접적으로 및 가장 실질적으로 관여된다. 항체는 하기에 기술된 것들과 같지만 이에 한정되지 않는 당해 분야에 공지된 각종 기술을 사용하여 사람화시킬 수 있다: Jones et al., Nature, 321:522-525 (1986); Verhoeyen et al., Science, 239:1534-1536 (1988); Sims et al., J.　Immunol., 151: 2296-2308 (1993); Chothia and Lesk, J.　Mol. Biol., 196: 901-917 (1987), Carter et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89: 4285-4289 (1992); Presta et al., J.　Immunol., 151: 2623-2632 (1993); Padlan, Mol. Immunol., 28(4/5): 489-498 (1991); Studnicka et al., Protein Eng., 7(6): 805-814 (1994); Roguska et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 91: 969-973 (1994); PCT 공보 제WO　91/09967호; 제WO　90/14443호; 제WO　90/14424호; 제WO　90/14430호; 제WO　99/06834호(PCT/US98/16280); 제WO　97/20032호(PCT/US96/18978); 제WO　92/11272호(PCT/US91/09630); 제WO　92/03461호(PCT/US91/05939); 제WO　94/18219호(PCT/US94/01234); 제WO　92/01047호(PCT/GB91/01134); 및 제WO　93/06213호(PCT/GB92/01755); 유럽 특허 공보 제EP　0　592　106호; 제EP　0　519　596호 및 제EP　0　239　400호; 미국 특허 공보 제5,565,332호; 제5,723,323호; 제5,976,862호; 제5,824,514호; 제5,817,483호; 제5,814,476호; 제5,763,192호; 제5,723,323호; 제5,766,886호; 제5,714,352호; 제6,204,023호; 제6,180,370호; 제5,693,762호; 제5,530,101호; 제5,585,089호; 제5,225,539호 및 제4,816,567호(이들 문헌에 인용된 문헌을 포함하여, 각각은 참조로 본원에 전체적으로 인용된다).
5. 항 IL-1β DVD-Ig TM 결합 단백질
또한 IL-1β의 하나 이상의 에피토프에 결합하는 이중 가변 도메인 면역글로불린 결합 단백질 (DVD-Ig)이 제공된다. DVD-Ig 결합 단백질은 또한 IL-1β의 에피토프 및 IL-1β 폴리펩타이드 이외의 제2 표적 항원의 에피토프에 결합할 수 있다. 이러한 DVD-Ig 분자의 예시적인 양태는 구조식 VD1-(X1)n-VD2-C-(X2)n(여기서, VD1은 제1의 중쇄 가변 도메인이고, VD2는 제2의 중쇄 가변 도메인이며, C는 중쇄 불변 도메인이고, X1은 링커이며 단, 이는 CH1이 아니고, X2는 Fc 영역이며, n은 0 또는 1이고, 바람직하게는 1이다)을 포함하는 중쇄; 및 구조식 VD1-(X1)n-VD2-C-(X2)n(여기서, VD1은 제1의 경쇄 가변 도메인이고, VD2는 제2의 경쇄 가변 도메인이며, C는 경쇄 불변 도메인이고, X1은 링커이며 단, 이는 CH1이 아니고, X2는 Fc 영역을 포함하지 않으며; n은 0 또는 1이고, 바람직하게는 1이다)을 포함하는 경쇄를 포함한다. 이러한 DVD-Ig는 2개의 이러한 중쇄 및 2개의 이러한 경쇄를 포함할 수 있으며, 여기서 각각의 쇄는 가변 영역들 사이에 개입된 불변 영역의 부재하에 탄뎀으로 연결된 가변 영역을 포함하며, 여기서 중쇄 및 경쇄는 연합하여 2개의 탄뎀 항원 결합 부위를 형성하고, 중쇄 및 경쇄의 쌍은 중쇄 및 경쇄의 다른 쌍과 연합하여 4개의 항원 결합 부위를 갖는 사합체성 결합 단백질을 형성할 수 있다. 다른 양태에서, DVD-Ig 분자는 가변 도메인들 사이의 개입 불변 영역의 부재하에서 탄뎀으로 연결된, 3개의 가변 도메인, 예를 들면, VD1, VD2, VD3을 각각을 포함하는 중쇄 및 경쇄를 포함할 수 있으며, 중쇄 및 경쇄의 쌍은 연합하여 3개의 항원 결합 부위를 형성하고, 여기서 중쇄 및 경쇄의 쌍은 중쇄 및 경쇄의 다른 쌍과 연합하여 6개의 항원 결합 부위를 갖는 사합체성 결합 단백질을 형성할 수 있다.
DVD-Ig에서 각각의 가변 도메인 (VD)은 IL-1β 및/또는 IL-1α 항원 또는 에피토프와 같은 하나 이상의 바람직한 항원 또는 에피토프에 결합하는 하나 이상의 "모(parent)" 단클론 항체로부터 수득될 수 있다.
A. 모 단클론 항체의 생성
DVD-Ig 결합 단백질의 가변 도메인은 목적한 항원과 결합할 수 있는 단클론 항체(mAb)를 포함하는, 모 항체로부터 수득될 수 있다. 이들 항체는 천연적으로 존재하거나 재조합체 기술에 의해 생성될 수 있다. 바람직한 표적 항원 또는 에피토프에 결합하는 항체가 다클론인 경우 이는 DVD-Ig를 생성하는데 사용하기 위해, 다클론 집단으로부터 단일 항체, 즉, 다클론 집단의 단일 단클론 구성원의 항원 결합 부위의 가변 도메인을 수득하기 위해 여전히 필수적이다. 단클론 항체는 본원에 기술된 것들(참조: 상기 단락 A.1. 내지 A.4.)을 포함하는, 당해 분야에 공지된 어떠한 각종 방법에 의해 생성될 수 있다.
B. 모 단클론 항체를 선택하기 위한 기준
본 발명의 양태는 DVD-Ig 분자내에서 바람직한 적어도 하나 이상의 특성을 갖는 모 항체를 선택하는 것에 관한 것이다. 하나의 양태에서, 바람직한 특성은 하나 이상의 항체 매개변수로부터 선택된다. 다른 양태에서, 항체 매개변수는 항원 특이성, 항원에 대한 친화성, 효능, 생물학적 기능, 에피토프 인지, 안정성, 가용성, 생산 효율, 면역원성, 약력학, 생물이용성, 조직 교차 반응성, 및 이종상동성(orthologous) 항원 결합으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.
B1. 항원에 대한 친화성
치료용 mAb의 바람직한 친화성은 항원의 특성, 및 바람직한 치료학적 종점에 의존할 수 있다. 하나의 양태에서, 단클론 항체는, 사이토킨-사이토킨 수용체 상호작용을 차단하는 경우 보다 높은 친화성(Kd = 0.01 내지 0.50 pM)을 가지는데, 이러한 친화성은 일반적으로 고 친화성 상호작용(예를 들면, <pM 내지 <nM 범위)이기 때문이다. 이러한 예에서, 이의 표적에 대한 mAb 친화성은 이의 수용체에 대한 사이토킨(리간드)의 친화성과 동일하거나 더 우수하여야 한다. 반면, 보다 적은 친화성(> nM 범위)을 갖는 mAb는 예를 들면 순환하는 잠재적으로 병원성인 단백질, 예를 들면, A-β 아밀로이드와 같은 표적 항원의 순환하는 종에 결합하고, 봉쇄하며 제거하는 단클론 항체를 제거하는데 있어 치료학적으로 효과적일 수 있다. 다른 예에서, 부위-지시된 돌연변이유발에 의한 또는 이의 표적에 대한 친화성이 낮은 mAb를 사용함에 의한 존재하는 고 친화성의 친화성을 감소시키는 것을 사용하여 잠재적인 부작용을 피할 수 있는데, 예를 들면, 고 친화성 mAb는 이의 의도된 표적 모두를 봉쇄하거나 중화시킴으로써 표적화된 단백질의 기능(들)을 완전히 고갈시키고/제거할 수 있다. 이러한 시나리오에서, 저 친화성 mAb는 질환 증상들(병리학적 또는 과-생산된 수준)에 관여할 수 있는 표적의 분획을 봉쇄하고/중화시킴으로써 표적의 분획이 이의 정상적인 생리학적 기능(들)을 수행하는 것을 지속하도록 할 수 있다. 따라서, Kd를 감소시켜 용량을 조절하고/하거나 부작용을 감소시키는 것이 가능할 수 있다. 모 mAb의 친화성은 세포 표면 분자를 적절히 표적화하여 바람직한 치료학적 결과를 달성하는데 있어서 중요한 역할을 할 수 있다. 예를 들면, 표적이 고 밀도의 암 세포 및 저 밀도의 정상 세포에서 발현되는 경우, 보다 낮은 친화성 mAb는 정상 세포보다 종양 세포상의 거대한 수의 표적과 결합함으로써, ADCC 또는 CDC를 통해 종양 세포 제거를 일으켜 치료학적으로 바람직한 효과를 가질 수 있다. 따라서, 바람직한 친화성을 가진 mAb를 선택하는 것은 가용성 및 표면 표적 둘다에 관련될 수 있다.
이의 리간드와의 상호작용시 수용체를 통한 시그날링은 수용체-리간드 상호작용의 친화성에 의존할 수 있다. 유사하게, 표면 수용체에 대한 mAb의 친화성은 세포내 시그날링의 특성을 측정할 수 있으며, mAb가 작용제 또는 길항제 시그날을 전달할 수 있는지 여부를 고려할 수 있다. mAb-매개된 시그날링의 친화성-계 특성은 이의 부작용 프로파일의 영향을 가질 수 있다. 따라서, 치료용 단클론 항체의 바람직한 친화성 및 바람직한 기능은 시험관내 및 생체내 실험에 의해 조심스럽게 측정될 필요가 있다.
결합 단백질(예를 들면, 항체)의 바람직한 Kd는 바람직한 치료학적 결과에 따라 실험적으로 측정할 수 있다. 하나의 양태에서, 동일한 항원에 대해 DVD-Ig의 바람직한 친화성과 동일하거나 더 우수한 특수 항원에 대한 친화성(Kd)을 갖는 모 항체를 선택한다. 항원 결합 친화성 및 역학은 비아코어(Biacore) 또는 다른 유사한 기술에 의해 평가한다. 하나의 양태에서, 각각의 모 항체는 약 10-7 M 이하; 약 10-8 M 이하; 약 10-9 M 이하; 약 10-10 M 이하; 약 10-11 M 이하; 약 10-12 M 이하; 및 10-13 M 이하로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 이의 항원에 대한 해리 상수(Kd)를 갖는다. VD1이 수득되는 제1의 모 항체 및 VD2가 수득되는 제2의 모 항체는 각각의 항원에 대해 유사하거나 상이한 친화성(KD)을 가질 수 있다. 각각의 모 항체는 표면 플라스몬 공명에 의해 측정된 것으로서, 적어도 약 102 M-1s-1; 적어도 약 103M-1s-1; 적어도 약 104 M-1s-1; 적어도 약 105 M-1s-1; 및 적어도 약 106 M-1s-1로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 항원에 대한 결합 속도 상수(Kon)를 가진다. 예를 들면, VD1이 수득되는 제1의 모 항체 및 VD2가 수득된 제2의 모 항체는 각각의 항원에 대해 유사하거나 상이한 결합 속도 상수(Kon)를 가질 수 있다. 하나의 양태에서, 각각의 모 항체는 표면 플라스몬 공명에 의해 측정된 것으로서, 약 10-3s-1 이하; 약 10-4 s-1 이하; 약 10-5 s-1 이하; 및 약 10-6 s-1로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 항원에 대한 해리 속도 상수(Koff)를 가진다. VD1이 수득되는 제1의 모 항체 및 VD2가 수득되는 제2의 모 항체는 각각의 항원에 대해 유사하거나 상이한 해리 속도 상수(Koff)를 가질 수 있다.
B2. 효능
모 단클론 항체의 바람직한 친화성/효능은 바람직한 치료학적 결과에 의존할 것이다. 예를 들면, 수용체-리간드(R-L) 상호작용의 경우, 친화성(kd)은 R-L kd (pM 범위)와 동등하거나 이 보다 우수하다. 병리학적 순환 단백질의 단순한 클리어런스, 예를 들면 순환하는 A-β 펩타이드의 각종 종의 클리어런스를 위해서, Kd는 낮은 nM 범위내에 존재할 수 있다. 또한, Kd는 표적이, 동일한 에피토프, 예를 들면, Aβ 올리고머에서 mAb 표적화 구조적 에피토프의 다수의 카피를 발현하는지 여부에도 의존할 것이다.
VDI 및 VD2가 동일한 항원에 결합하지만 구별되는 에피토프에 결합하는 경우, DVD-Ig는 동일한 항원에 대한 결합 부위를 함유함으로써 항원항체결합력을 증가시킴으로써 DVD-Ig의 명백한 Kd를 증가시킬 것이다. 하나의 양태에서, DVD-Ig에서 바람직한 Kd와 동등하거나 더 낮은 모 항체가 선택된다. 모 mAb의 친화성 고려는 또한, DVD-Ig가 4개 이상의 동일한 항원 결합 부위(예를 들면, 단일 mAb로부터의 DVD-Ig)를 함유하는지에 의존할 수 있다. 이 경우, 명백한 Kd는 항원항체결합력으로 인하여 mAb보다 더 클 수 있다. 이러한 DVD-Ig는 교차-결합 표면 수용체, 증가된 중화 효능, 병리학적 단백질의 향상된 클리어런스 등을 위해 사용될 수 있다.
다른 양태에서, 동일한 항원에 대한 DVD-Ig의 바람직한 중화 효능과 동등하거나 이보다 더 우수한 특이적인 항원에 대한 중화 효능을 갖는 모 항체를 선택한다. 중화 효능은 표적-의존성 생검사에 의해 평가할 수 있으며, 여기서 적절한 유형의 세포는 표적 자극에 대한 반응시 측정가능한 시그날(즉, 증식 또는 사이토킨 생산)을 생산하며, mAb에 의한 표적 중화는 투여량-의존적 방식으로 시그날을 감소시킬 수 있다.
B3. 생물학적 기능
단클론 항체는 잠재적으로 수개의 기능으로 수행할 수 있다. 이들 기능 중 일부는 표 5에 나열되어 있다. 이들 기능은 시험관내 검사(예를 들면, 세포-계 및 생화학적 검사) 및 생체내 동물 모델 둘다에 의해 평가될 수 있다.
Figure pat00038
본원의 실시예 및 표 5에 기술된 명백한 기능을 갖는 MAb를 선택하여 바람직한 치료학적 결과를 달성할 수 있다. 2개 이상의 선택된 모 단클론 항체를 이후에 DVD-Ig 양식에 사용하여 단일 DVD-Ig 분자에서 2개의 명백한 기능을 달성할 수 있다. 예를 들면, DVD-Ig는 IL-1β와 같은 특이적인 사이토킨의 기능을 중화시키는 모 mAb를 선택하고, 병리학적 단백질의 클리어런스를 향상시키는 모 mAb를 선택함으로써 생성시킬 수 있다. 유사하게, 2개의 상이한 세포 표면 수용체를 인지하는 2개의 모 mAb를 선택할 수 있으며, 하나의 mAb는 하나의 수용체에서 작용제 기능을 가지고 다른 mAb는 상이한 수용체에서 길항제 기능을 갖는다. 각각 명백한 기능을 갖는, 이들 2개의 선택된 mAb를 사용하여 단일 분자내에서 선택된 단클론 항체의 2개의 명백한 기능(작용제 및 길항제)을 소유할 단일의 DVD-Ig 분자를 작제할 수 있다. 유사하게, 각각의 수용체 리간드(예를 들면, EGF 및 IGF)의 결합을 각각 차단하는, 세포 표면 수용체에 대한 2개의 길항제 mAb를 DVD-Ig 양식에 사용할 수 있다. 역으로, 길항성 항-수용체 mAb(예를 들면, 항-EGFR) 및 중화 항-가용성 매개인자(예를 들면, 항-IGF1/2) mAb를 선택하여 DVD-Ig를 제조할 수 있다.
B4. 에피토프 인지:
단백질의 상이한 영역은 상이한 기능을 수행할 수 있다. 예를 들면, IL-1β와 같은 사이토킨의 특이적인 영역은 사이토킨 수용체와 상호작용하여 수용체 활성화를 유발하는 반면, 단백질의 다른 영역은 사이토킨을 안정화하는데 요구될 수 있다. 당해 예에서, 하나는 사이토킨에서 수용체 상호작용 영역(들)에 특이적으로 결합하는 mAb를 선택함으로써 사이토킨-수용체 상호작용을 차단할 수 있다. 일부 경우에, 예를 들면, 다수의 리간드와 결합하는 특정의 케모킨 수용체의 경우, 단지 하나의 리간드와 상호작용하는 에피토프(케모킨 수용체 상의 영역)에 결합하는 mAb를 선택할 수 있다. 다른 예에서, 단클론 항체는 단백질의 생리학적 기능에 직접적으로 관여하지 않는 표적 상의 에피토프에 결합할 수 있지만, 이들 영역에 대한 mAb의 결합은 생리학적 기능(입체 장애)으로 방해하거나 단백질의 구조를 변경시킴으로써 단백질이 기능하지 않을 수 있다(다수의 리간드를 가진 수용체에 대한 mAb는 수용체 구조를 변경시킴으로써 리간드 중 어느 것도 결합할 수 없다). 이의 수용체에 대한 사이토킨의 결합을 차단하지 않지만, 시그날 형질도입을 차단하는 항-사이토킨 단클론 항체가 또한 확인되었다(예를 들면, 125-2H, 항-IL-18 mAb).
에피토프 및 mAb 기능의 예는 수용체-리간드(R-L) 상호작용의 차단(R-상호작용 부위에 결합하는 중화 mAb); R-결합을 소멸시키거나 생성하지 않는 입체 장애를 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 항체는 수용체 결합 부위 이외의 부위에서 표적에 결합할 수 있지만, 구조적 변화를 유도시켜 R에 결합하지만 시그날링(125-2H mAb)을 차단하여 기능을 제거함으로써[예를 들면, XOLAIR® 오말리주마브, 진테크(Genetech)/노바티스(Novartis)] 수용체 결합 및 표적의 기능을 여전히 방해할 수 있다.
하나의 양태에서, 모 mAb는 최대 효능에 대해 적절한 에피토프를 표적화하는데 요구된다. 이러한 에피토프는 DVD-Ig에서 보존되어야 한다. mAb의 결합 에피토프는 동시-결정학, mAb-항원 복합체의 제한된 단백질분해와 질량 분석법 펩타이드 맵핑[참조: Legros et al., Protein Sci., 9: 1002-1010 (2000)], 파아지 디스플레이된 펩타이드 라이브러리[참조: O'Connor et al., J.　Immunol. Methods., 299: 21-35 (2005)], 및 돌연변이유발[참조: Wu C. et al., J.　Immunol., 170: 5571-5577 (2003)]을 포함하는, 수개의 시도들로 측정할 수 있다.
B5. 물리화학적 및 약제학적 특성
항체를 사용한 치료학적 치료는 흔히 수 mg/kg(전형적으로 큰 분자량의 결과로서 질량 기준으로 낮은 효능으로 인함)인, 고 용량의 투여를 필요로 한다. 환자 순응도를 제공하고 만성 질환 치료요법 및 외래환자 치료에 적절히 촛점을 맞추기 위하여, 치료용 mAb의 피하(s.c.) 또는 근육내(i.m.) 투여가 바람직하다. 예를 들면, s.c. 투여용의 최대 바람직한 용적은 ~1.0 mL이므로, >100 mg/mL의 농도가 투여량당 주사 수를 제한하는데 바람직하다. 하나의 양태에서, 치료용 항체는 하나의 용량으로 투여된다. 그러나, 이러한 제형의 개발은 단백질-단백질 상호작용(예를 들면, 면역원성 위험도를 잠재적으로 증가시키는 응집)에 의해 및 가공 및 전달 동안 제한(예를 들면, 점도)에 의해 구속된다. 결과적으로, 임상 효능 및 관련된 개발 구속에 요구되는 다량은 항체 제형의 효능 및 고-용량 요법에서 s.c. 투여의 효능의 제한된 완전한 이용을 제한한다. 단백질 분자 및 단백질 용액의 물리화학적 및 약제학적 특성, 예를 들어, 안정성, 가용성 및 점도 특성은 가장 중요하다는 것이 명백하다.
B5.1. 안정성
"안정한" 항체 제형은, 항체가, 저장시 이의 물리적 안정성 및/또는 화학적 안정성 및/또는 생물학적 활성을 필수적으로 보유하는 것이다. 안정성은 선택된 온도에서 선택된 기간 동안 측정할 수 있다. 하나의 양태에서, 제형중 항체는 실온(약 30℃) 또는 40℃에서 적어도 1개월 동안 안정하고/하거나 약 2 내지 8℃에서 적어도 1년 동안, 예를 들면, 적어도 2년 동안 안정하다. 또한, 하나의 양태에서, 제형은 제형의 동결(예를 들면, -70℃까지) 및 해동 후 안정하며, 이후, "동결/해동 주기"로 언급된다. 다른 예에서, "안정한" 제형은, 단백질의 약 10% 미만 및 약 5% 미만이 제형 속에 응집체로서 존재하는 것일 수 있다.
연장된 기간 동안 다양한 온도에서 시험관내에서 안정한 DVD-Ig가 바람직하다. 이는 시험관내에서 안정한 모 mAb를 상승된 온도, 예를 들면, 40℃에서 2 내지 4주 동안 신속하게 스크리닝한 후 안정성을 평가하여 달성할 수 있다. 2 내지 8℃에서 저장 동안, 단백질은 적어도 12 개월, 예를 들면, 적어도 24 개월 동안 안정성을 나타낸다. 안정성(단량체성의, 완전한 분자의 %)은 양이온 교환 크로마토그래피, 크기 배제 크로마토크래피, SDS-PAGE, 및 생물활성 시험과 같은 다양한 기술을 사용하여 평가할 수 있다. 공유 결합적 및 구조적 변형을 분석하기 위해 사용될 수 있는 분석 기술들의 보다 총괄적인 목록에 대해서는, 문헌[참조: Jones, A.J.S., "Analytical methods for the assessment of protein formulations and delivery systems," Chapter　2, In Formulation and delivery of peptides and proteins, 1st ed., (Cleland and Langer, eds.) (American Chemical Society, Washington, D.C., 1994) pp.　22-45; 및 Pearlman and Nguyen, "Analysis of protein drugs," Chapter　6, In Peptide and protein drug delivery, 1st ed. [In Advances in Parenteral Sciences, vol.　4] (Lee, V.H., ed.) (Marcel Dekker, Inc., New York, 1991) pp.　247-301]을 참조한다.
이질성 및 응집체 제형: 항체의 안정성은, 제형이, 응집체로서 존재하는 GMP 항체 물질 속에 약 10% 미만을 나타내도록, 및 하나의 양태에서, 약 5% 미만, 다른 양태에서, 약 2%, 또는, 하나의 양태에서, 0.5% 내지 1.5% 이하의 범위를 나타내도록 존재할 수 있다. 크기 배제 크로마토그래피는 단백질 응집체의 검출시 민감하고, 재생성이며 매우 강력한 방법이다.
낮은 응집체 수준 외에, 항체는 하나의 양태에서, 화학적으로 안정하여야 한다. 화학적 안정성은 이온 교환 크로마토그래피(예를 들면, 양이온 또는 음이온 교환 크로마토그래피), 소수성 상호작용 크로마토그래피, 또는 등전 포커싱 또는 모세관 전기영동과 같은 다른 방법으로 측정할 수 있다. 예를 들어, 항체의 화학적 안정성은, 2 내지 8℃에서 적어도 12개월의 저장 후 양이온 교환 크로마토그래피내에서 변형되지 않는 항체를 나타내는 피크가 저장 시험 전 항체 용액과 비교하여 20% 이하, 하나의 양태에서, 10% 이하, 또는, 다른 양태에서, 5% 이하로 증가될 수 있다.
하나의 양태에서, 모 항체는 구조적 통합성; 정확한 이황화물 결합 형성, 및 정확한 폴딩: 항체 활성에 영향을 미칠 수 있는 항체의 2차 또는 3차 구조에 있어서의 변화로 인한 화학적 불안정성을 나타낸다. 예를 들어, 항체의 활성에 의해 나타내는 바와 같은 안정성은 2 내지 8℃에서 적어도 12개월 저장한 후, 항체의 활성이 저장 시험 전 항체 용액과 비교하여 50% 이하, 하나의 양태에서 30% 이하, 또는 심지어 10% 이하, 또는 하나의 양태에서 5% 이하 또는 1%로 감소될 수 있다. 적합한 항원-결합 검사를 사용하여 항체 활성을 측정할 수 있다.
B5.2. 가용성(solubility)
mAb의 "가용성"은 정확하게 폴딩된, 단량체성 IgG의 생산과 관련된다. 따라서, IgG의 가용성은 HPLC로 평가할 수 있다. 예를 들면, 가용성(단량체성) IgG는 HPLC 크로마토그래피 상에서 단일 피크를 생성할 것인 반면, 불용성(예를 들면, 다합체성 및 응집된)은 다수의 피크를 생성할 것이다. 따라서, 당해 분야의 숙련가들은 통상의 HPLC 기술을 사용하여 IgG의 가용성에 있어 증가 또는 감소를 검출할 수 있을 것이다. 가용성을 분석하기 위해 사용될 수 있는 분석 기술의 보다 총괄적인 목록은 문헌[참조: Jones, A.G., Dep. Chem. Biochem. Eng., Univ. Coll. London, "Particle formation and separation in suspension crystallization processes," Chapter　4, In Process. Solid-Liquid Suspensions, (P. Ayazi Shamlou, ed.) (Butterworth-Heinemann, Oxford, UK, 1993) pp. 93-117; and Pearlman and Nguyen, "Analysis of protein drugs," Chapter　6, In Peptide and protein drug delivery, 1st ed. [In Advances in Parenteral Sciences, vol.　4] (Lee, V.H., ed.) (Marcel Dekker, Inc., New York, 1991) pp.　247-301]을 참조한다. 치료용 mAb의 가용성은 적절한 용량에서 흔히 요구되는 고 농도로 제형화하는데 있어 중요하다. 본원에 요약한 바와 같이, >100　mg/mL의 가용성이 효율적인 항체 용량을 제공하는데 요구될 수 있다. 예를 들면, 항체 가용성은 조기 조사 단계에서 약 5 mg/mL 이상, 하나의 양태에서, 개선된 과정 과학 단계에서 약 25 mg/mL 이상, 또는 하나의 양태에서 약 100 mg/mL 이상, 또는 하나의 양태에서 약 150 mg/mL 이상일 수 있다. 단백질 분자의 고유한 특성은 단백질 용액의 물리-화학적 특성, 예를 들면, 안정성, 가용성, 점도에 중요하다. 그러나, 당해 분야의 숙련가는, 최종 단백질 제형의 특징에 유리하게 영향을 미치기 위해 첨가제로서 사용될 수 있는 광범위한 부형제가 존재함을 인식할 것이다. 이들 부형제는 (i) 액체 용매, 보조용매(예를 들면, 에탄올과 같은 알코올); (ii) 완충제(예를 들면, 포스페이트, 아세테이트, 시트레이트, 아미노산 완충액); (iii) 당 또는 당 알코올(예를 들면, 수크로즈, 트레할로즈, 프럭토즈, 라피노즈, 만니톨, 소르비톨, 덱스트란); (iv) 표면활성제(예를 들면, 폴리소르베이트 20, 40, 60, 80, 폴록사머); (v) 등장성 개질제(예를 들면, NaCl와 같은 염, 당, 당 알코올); 및 (vi) 기타(예를 들면, 방부제, 킬레이트제, 항산화제, 킬레이팅 물질(예를 들면, EDTA), 생분해가능한 중합체, 담체 분자(예를 들면, HSA, PEG)]를 포함할 수 있다.
점도는 항체 제조 및 항체 프로세싱(예를 들면, 정용여과/한외여과), 충전-마무리 공정(fill-finish)(펌핑 국면(pumping aspect), 여과 국면) 및 전달 국면(주사가능성, 복잡한 장치 전달)과 관련하여 매우 중요한 매개변수이다. 저점도는, 농도가 보다 높은 항체의 액체 용액이 가능하도록 한다. 이는, 동일한 용량을 보다 적은 용적으로 투여할 수 있다. 소 주사 용적은 주사 동안 보다 낮은 통증의 장점을 제공하며, 용액은 환자에게 주사시 통증을 감소시키도록 필수적으로 등장성일 필요는 없다. 항체 용액의 점도는, 100 (1/s)의 전단 속도에서 항체 용액 점도가 200 mPa　s 미만, 하나의 양태에서 125 mPa　s 미만, 다른 양태에서 70 mPa　s 미만, 및 여전히 다른 양태에서 25 mPa　s 미만 또는 심지어 10 mPa　s 미만이도록 할 수 있다.
B5.3. 생산 효율
한 양태에서 포유동물, 예를 들면 차이니즈 햄스터 난소 세포(CHO)에서 효율적으로 발현되는 DVD-Ig의 생성은 포유동물 세포내에서 효율적으로 발현되는 2개의 모 단클론 항체를 필요로 할 것이다. 안정한 포유동물주(즉, CHO)로부터의 생산 수율은 약 0.5 g/L 초과, 하나의 양태에서 약 1g/L 초과, 및 다른 양태에서 약 2 내지 약 5 g/L 이상의 범위이어야 한다[참조: Kipriyanov et al., Mol. Biotechnol., 12:173-201 (1999); Carroll et al., Expert Opin Biol Ther., 4:1821-1829 (2004)].
포유동물 세포에서 항체 및 Ig 융합 단백질의 생산은 수개의 인자에 의해 영향받는다. 강력한 프로모터, 인핸서의 도입 및 선택 마커를 통한 발현 벡터의 가공은 통합된 벡터 카피로부터 목적 유전자의 전사를 최대화시킬 수 있다. 고 수준의 유전자 전사를 위해 허용되는 벡터 통합 부위의 확인은 벡터로부터 단백질 발현을 증강시킬 수 있다[참조: Wurm, F.M., Nature Biotechnol. , 22(11): 1393-1398 (2004)]. 또한, 생산 수준은 단백질 조립 및 분비의 과정에서 각종 단계 및 항체 중쇄와 경쇄의 비에 의해 영향받는다[참조: Jiang et al., Biotechnol. Prog., 22(1): 313-318 (2006)].
B6. 면역원성
치료용 mAb의 투여는 면역 반응(즉, 치료용 mAb에 대해 지시된 내인성 항체의 형성)의 특정 발생을 초래할 수 있다. 면역원성을 유도할 수 있는 잠재적인 성분은 모 단클론 항체의 선택 동안 분석되어야 하며, 이러한 위험을 감소시키기 위한 단계는 DVD-Ig 작제 이전에 모 단클론 항체를 최적화하기 위해 취할 수 있다. 마우스-기원한 항체는 환자에서 고도로 면역원성인 것으로 밝혀졌다. 마우스 가변 및 사람 불변 영역으로 구성된 키메라 항체의 생성은 치료용 항체의 면역원성을 감소시키기 위한 논리적 다음 단계를 나타낸다[참조: Morrison and Schlom, "Recombinant Chimeric Monoclonal Antibodies," Chapter　1, In Important Advances in Oncology 1990 (J.B. Lippincott Company, Philadelphia, 1990) pp. 3-18)]. 대안적으로, 면역원성은 문헌[참조: Riechmann et al., Nature, 332: 323-327 (1988)]에서 치료용 항체에 대해 기술된 바와 같이, 뮤린 CDR 서열을 사람 항체 골격내로 형질감염[재성형(reshaping)/CDR 이식/사람화]시킴으로써 감소시킬 수 있다. 다른 방법은 설치류 가변 경쇄 및 중쇄 도메인으로 출발하는 "재표면화(resurfacing)" 또는 "베니어링(veneering)"으로 언급되며, 표면-접근가능성 골격 아미노산만이 사람 것으로 변경되는 반면, CDR 및 묻혀진 아미노산은 모 설치류 항체로부터 잔류한다[참조: Roguska et al., Protein Eng., 9(10): 895-904 (1996)]. 사람화의 다른 유형에서, 전체 CDR을 이식하는 대신, 하나의 기술은 이의 표적으로 항체의 결합에 관여하는 CDR 잔기의 서브세트로 정의된[참조: Kashmiri et al., Methods, 36(1): 25-34 (2005)], "특이성-결정 영역(SDR)" 만을 이식시킨다. 이는 항체-표적 복합체의 이용가능한 3차원 구조의 분석 또는 표적과 상호작용하는 것을 측정하기 위한 항체 CDR 잔기의 돌연변이적 분석을 통해 SDR의 확인을 필요하도록 한다. 대안적으로, 완전한 사람 항체는 뮤린, 키메라 또는 사람화된 항체와 비교하여 면역원성을 감소시킬 수 있다.
치료용 항체의 면역원성을 감소시키기 위한 다른 시도는 면역원성인 것으로 예측되는 특정의 특이적인 서열의 제거이다. 하나의 시도에서, 제1 세대 생물제를 사람에서 시험하여 허용되지 않는 면역원성임이 밝혀진 후, B-세포 에피토프를 맵핑한 후 변경시켜 면역 검출을 피한다. 다른 시도는 잠재적인 T-세포 에피토프를 예측하여 제거하는 방법을 사용한다. 컴퓨터처리된 방법은 MHC 단백질에 결합시키기 위한 잠재능을 가진 생물학적 치료제의 펩타이드 서열을 스캐닝하여 확인하기 위해 개발되어 왔다[참조: Desmet et al., Proteins, 58: 53-69 (2005)]. 대안적으로, 사람 수지 세포-계 방법을 사용하여 잠재적인 단백질 알레르기항원에서 CD4+ T-세포 에피토프를 확인할 수 있다[참조: Stickler et al., J.　Immunother., 23: 654-660 (2000); Morrison and Schlom, Important Adv. Oncol. (1990) pp. 3-18; Riechmann et al. "Reshaping human antibodies for therapy," Nature. 332: 323-327 (1988); Roguska et al., "A comparison of two murine mAbs humanized by CDR-grafting and variable domain resurfacing, "Protein Eng., 9: 895-904 (1996); Kashmiri et al., "SDR grafting--a new approach to antibody humanization," Methods, 36(1): 25-34 (2005); Desmet et al., "Anchor profiles of HLA-specific peptides: analysis by novel affinity scoring method and experimental validation," Proteins, 58: 53-69 (2005); Stickler et al., "CD4+ T-cell epitope determination using unexposed human donor peripheral blood mononuclear cells," J.　Immunother., 23: 654-660 (2000)].
B7. 생체내 효능
바람직한 생체내 효능을 갖는 DVD-Ig 분자를 생성하기 위해서는, 함께 제공되는 경우 유사하게 바람직한 생체내 효능을 갖는 mAb를 생성하고 선택하는 것이 중요하다. 그러나, 일부 예에서, DVD-Ig는 2개의 별개의 mAb의 조합으로 달성될 수 없는 생체내 효능을 나타낼 수 있다. 예를 들면, DVD-Ig는 2개의 표적을 근접성이 되도록 하여 2개의 별개의 mAb의 조합으로 달성될 수 없는 활성을 초래할 수 있다. 추가의 바람직한 생물학적 기능은 본원에서 단락 B3에 기술되어 있다. DVD-Ig 분자에서 바람직한 특성을 갖는 모 항체는, 약력학적 반감기(t½); 조직 분포; 가용성 대 세포 표면 표적; 및 표적 농도-가용성/밀도-표면과 같은 인자들을 기본으로 선택될 수 있다.
B8. 생체내 조직 분포
바람직한 생체내 조직 분포를 갖는 DVD-Ig 분자를 생성하기 위해, 하나의 양태에서, 유사한 바람직한 생체내 조직 분포 프로파일을 갖는 모 mAb를 선택하여야만 한다. 대안적으로, 이중-특이적인 표적화 전략의 메커니즘을 기본으로 하여, 함께 제공되는 경우 이는 다른 때에 유사하게 바람직한 생체내 조직 분포를 갖는 모 mAb를 선택하는데 요구되지 않을 수 있다. 예를 들면, 하나의 결합 성분이 DVD-Ig를 특이적인 부위에 표적화함으로써 동일한 표적 부위에 제2 결합 성분을 가져오는 DVD-Ig의 경우이다. 예를 들면, DVD-Ig의 하나의 결합 특이성은 췌장(섬세포)을 표적화할 수 있으며 다른 특이성은, GLP1이 췌장에 대해 인슐린을 유도하도록 할 수 있다.
B9. 동형
동형, 효과기 기능, 및 순환하는 반감기를 포함하나, 이에 한정되지 않는 바람직한 특성을 가진 DVD-Ig 분자를 생성하기 위해, 치료학적 유용성 및 바람직한 치료학적 종점에 따라 적절한 Fc-효과기 기능을 보유하는 모 mAb를 선택한다. 5개의 주요 중쇄 부류 또는 동형이 존재하며, 이들 중 일부는 몇개의 소-유형을 가지며 이들은 항체 분자의 효과기 기능을 결정한다. 이들 효과기 기능은 항체 분자의 힌지 영역, CH2 및 CH3 도메인에 있다. 그러나, 항체 분자의 다른 부분에서 잔기는 또한 효과기 기능에 있어서 효과를 가질 수 있다. 힌지 영역 Fc-효과기 기능은 (i) 항체-의존성 세포 세포독성(ADCC), (ii) 상보체(C1q) 결합, 활성화, 및 상보체-의존성 세포독성(CDC), (iii) 항원-항체 복합체의 포식작용/클리어런스, 및 (iv) 일부 예에서 사이토킨 방출을 포함한다. 항체 분자의 이들 Fc-효과기 기능은 Fc-영역과 부류-특이적인 세포 표면 수용체의 세트의 상호작용을 통해 매개된다. IgG1 동형의 항체는 가장 활성인 반면 IgG2 및 IgG4는 최소의 효과기 기능을 가지거나 기능이 없다. IgG 항체의 효과기 기능은 3개의 구조적으로 상동성인 세포 Fc 수용체 유형(및 소-유형)(FcgR1, FcgRII, 및 FcgRIII)과의 상호작용을 통해 매개된다. 이러한 IgG1의 효과기 기능은 FcgR 및 C1q 결합에 요구되는 보다 낮은 힌지 영역(예를 들면, L234A, L235A)에서 특이적인 아미노산 잔기를 돌연변이시킴에 의해 제거될 수 있다. Fc 영역, 특히 CH2-CH3 도메인에서 아미노산 잔기는 또한 항체 분자의 순환하는 반감기를 결정한다. 이러한 Fc 기능은 산성 리소좀으로부터의 항체 분자의 일반적인 순환으로의 역 재순환에 관여하는 신생 Fc 수용체 (FcRn)에 대한 Fc-영역의 결합을 통해 매개된다.
mAb가 활성 또는 비활성 동형을 가질 수 있는지의 여부는 항체에 대한 바람직한 치료학적 종점에 의존할 것이다. 동형 및 바람직한 치료학적 결과의 용도의 일부 예는 하기에 나열되어 있다:
1. 바람직한 종점이 가용성 사이토킨의 기능적 중화인 경우, 이후에 비활성 동형이 사용될 수 있다;
2. 바람직한 결과가 병리학적 단백질의 클리어런스인 경우, 활성 동형이 사용될 수 있다;
3. 바람직한 결과가 단백질 응집체의 클리어런스인 경우, 활성 동형이 사용될 수 있다;
4. 바람직한 결과가 표면 수용체를 길항시키기 위한 것인 경우, 비활성 동형이 사용된다(티사브리(Tysabri), IgG4; OKT3® 돌연변이된 IgG1);
5. 바람직한 결과가 표적 세포를 제거하기 위한 것인 경우, 활성 동형이 사용된다(헤르셉틴, IgG1(및 향상된 효과기 기능); 및
6. 바람직한 결과가 CNS내로 도입하지 않고 순환으로부터 단백질을 제거하기 위한 경우, IgM 동형이 사용될 수 있다(예를 들면, 순환하는 Ab 펩타이드 종의 제거).
모 mAb의 Fc 효과기 기능은 당해 분야에 잘 공지된 각종 시험관내 방법으로 측정할 수 있다.
논의된 바와 같이, 동형의 선택, 및 이에 의한 효과기 기능은 바람직한 치료학적 종점에 의존할 것이다. 순환하는 표적의 단순한 중화, 예를 들면 수용체-리간드 상호작용의 차단이 요구되는 경우, 효과기 기능은 요구되지 않을 수 있다. 이러한 예에서, 효과기 기능을 제거하는 항체의 Fc-영역내 동형 또는 돌연변이가 바람직하다. 다른 예에서, 표적 세포의 제거가 치료학적 종점인 경우, 예를 들면, 효과기 기능을 향상시키는 Fc-영역내 종양 세포, 동형 또는 돌연변이 또는 탈-푸코실화의 제거가 바람직하다[참조: Presta, L.G., Adv. Drug Del. Rev., 58: 640-656 (2006); Satoh et al., Expert Opin. Biol. Ther., 6: 1161-1173 (2006)]. 유사하게, 치료학적 유용성에 따라서, 항체 분자의 순환하는 반감기는 Fc 영역내 특이적인 돌연변이를 유도시킴으로써 항체-FcRn 상호작용을 조절함에 의해 감소/연장될 수 있다[참조: Dall's Acqua et al., J.　Biol. Chem., 281: 23514-23524 (2006); Petkova et al., Int. Immunol., 18: 1759-1769 (2006); Vaccaro et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 103: 18709-18714 (2006)].
정상의 치료용 mAb의 상이한 효과기 기능에 영향을 미치는 각종 잔기에서 공개된 정보는 DVD-Ig에 대해 확인될 필요가 있을 수 있다. DVD-Ig 양식에서 단클론 항체 효과기 기능의 조절을 위해 확인된 것들 외에, 추가의(상이한) Fc-영역 잔기가 중요할 수 있다.
전체적으로, 어떠한 Fc-효과기 기능(동형)이 최종 DVD-Ig 양식에 중요할지에 대한 결정은 질환 징조, 치료학적 표적, 바람직한 치료학적 종점, 및 안정성 고려에 의존할 것이다. 하기 나열된 것은 IgG1-동종이형: G1mz; IgG1 돌연변이체-A234, A235; IgG2-동종이형: G2m(n-); Kappa-Km3; 및 람다를 포함하나, 이에 한정되지 않는 예시적인 적절한 중쇄 및 경쇄 불변 영역이다.
Fc 수용체 및 C1q 연구: 세포 막에서 어떠한 과발현된 표적에 대한 항체 복합체화에 의한 원치않는 항체-의존성 세포-매개된 세포독성(ADCC) 및 상보체-의존성 세포독성(CDC)의 가능성은 (예를 들면, L234A, L235A) 힌지-영역 돌연변이에 의해 제거될 수 있다. mAb의 IgG1 힌지 영역에 존재하는 이러한 치환된 아미노산은, FcgR 결합이 IgG1 힌지 영역에서 오버랩핑 부위내 존재하는 것으로 고려되므로, 사람 Fc 수용체(FcRn은 아니다)에 대한 mAb의 약화된 결합을 생성하는 것으로 예측된다. mAb의 이러한 특징은 야생형 IgG를 함유하는 항체에 비해 개선된 안정성 프로파일을 생성할 수 있다. 사람 Fc 수용체에 대한 mAb의 결합은 유동 세포분석 실험에 의해 세포주(예를 들면, THP-1, K562) 및 FcgRIIb(또는 다른 FcgR)를 발현하는 가공된 CHO 세포주를 사용하여 측정할 수 있다. IgG1 대조군 단클론 항체와 비교하여, mAb는 FcgRI 및 FcgRIIa에 대한 감소된 결합을 나타내는 반면, FcgRIIb에 대한 결합은 영향받지 않는다. 항원/IgG 면역 복합체에 의한 C1q의 결합 및 활성화는 후속적인 염증 및/또는 면역조절 반응을 사용한 전통적인 상보체 캐스케이드(cascade)를 개시한다. IgG 위의 C1q 결합 부위는 IgG 힌지 영역내에서 잔기에 국재화된다. 증가하는 농도의 mAb에 결합하는 C1q는 C1q ELISA로 평가하였다. 당해 결과는, mAb가 야생형 대조군 IgG1의 결합과 비교하는 경우 예측되는 바와 같이, C1q에 결합할 수 없다. 전체적으로, L234A, L235A 힌지 영역 돌연변이는 FcgRI, FcgRIIa, 및 C1q에 대한 mAb의 결합을 제거하지만, mAb와 FcgRIIb의 상호작용에 영향을 미치지 않는다. 이들 데이타는, 돌연변이체 Fc를 가진 생체내 mAb가 일반적으로 억제성 FcgRIIb와 상호작용하겠지만 활성화 FcgRI 및 FcgRIIa 수용체 또는 C1q와 상호작용하지 않을 것임을 제시한다.
사람 FcRn 결합: 신생 수용체(FcRn)는 태반을 거치는 IgG의 수송 및 IgG 분자의 이화작용적 반감기를 조절하는데 관여한다. 효능을 개선하거나, 용량 또는 투여의 횟수를 감소시키거나, 표적에 대한 국재화를 개선시키기 위해 항체의 말기 반감기를 증가시키는 것이 바람직할 수 있다. 대안적으로, 전체 항체 노출을 감소시키기 위해 항체의 말기 반감기를 감소시키거나, 표적-대-비-표적 결합 비를 개선시키는, 역을 수행하는 것이 유리할 수 있다. IgG와 이의 구조적 수용체, FcRn 사이의 상호작용의 맞춤은 IgG의 말기 반감기를 증가시키거나 감소시키는 방법을 제공한다. IgG를 포함하는 순환에서 단백질은 유체 상으로 미세포음작용을 통해 혈관 내피의 세포와 같은 특정 세포에 의해 취한다. IgG는 약산성 조건((pH 6.0 내지 6.5)하에서 엔도솜내에서 FcRn에 결합하여 세포 표면을 재생시킬 수 있으며, 여기서 이는 거의 중성 조건(pH 7.0 내지 7.4) 하에서 방출된다. FcRn80, 16, 17에서 Fc-영역-결합 부위의 맵핑은, 종을 가로질러 보존된 2개의 히스티딘 잔기, His310 및 His435가 이러한 상호작용의 pH 의존성에 관여함을 나타내었다. 파아지-디스플레이 기술을 사용하여, FcRn에 대한 결합을 증가시키고 마우스 IgG의 반감기를 연장시키는 마우스 Fc-영역 돌연변이를 확인하였다[참조: Ghetie et al., Nature Biotechnol., 15(7): 637-640 (1997)]. pH 6.0에서 FcRn에 대한 사람 IgG의 결합 친화성을 증가시키지만, pH 7.4에서는 증가시키지 않는 Fc-영역 돌연변이가 또한 확인되어 왔다[참조: Dall'Acqua et al., J.　Immunol., 169(9): 5171-5180 (2002)]. 또한, 하나의 경우에, 결합에 있어서 유사한 pH-의존성 증가(27배 이하)가 또한 레서스(rhesus) FcRn에서 관찰되었으며, 이는 모 IgG와 비교하여 레서스 원숭이에서 혈청 반감기의 2배 증가를 생성하였다[참조: Hinton et al., J. Biol. Chem., 279(8): 6213-6216 (2004)]. 이러한 발견은, 이것이 FcRn을 가진 Fc 영역의 상호작용을 맞춤으로써 항체 치료요법의 혈장 반감기를 연장시키기 용이함을 나타낸다. 역으로, FcRn과의 상호작용을 약화시키는 Fc-영역 돌연변이는 항체 반감기를 감소시킬 수 있다.
B.10. 약력학(PK)
바람직한 약력학적 프로파일을 지닌 DVD-Ig 분자를 생성하기 위하여, 하나의 양태에서, 유사한 바람직한 약력학적 프로파일을 가진 모 mAb를 선택한다. 하나의 고려사항은, 단클론 항체(즉, "HAHA", 사람 항-사람 항체 반응; "HACA", 사람 항-키메라 항체 반응)는 또한 이들 치료제의 약력학을 추가로 복잡하게 한다는 것이다. 하나의 양태에서, 면역원성이 최소이거나 없는 단클론 항체는 DVD-Ig 분자를 작제하는데 사용됨으로써 수득되는 DVD-Ig는 또한, 면역원성이 최소이거나 없게될 것이다. mAb의 PK를 측정하는 인자들 중 일부는 mAb의 고유 특성(VH 아미노산 서열); 면역원성; FcRn 결합 및 Fc 기능을 포함하지만, 이에 한정되지 않는다.
선택된 모 단클론 항체의 PK 프로파일은, 설치류에서 PK 프로파일이 사이노몰구스 원숭이 및 사람에서 단클론 항체의 PK 프로파일과 잘 관련되거나 (이를 밀접하게 예측되는) 바와 같이 설치류에서 용이하게 측정될 수 있다.
바람직한 PK 특성(및 본원에 논의된 것으로서 다른 바람직한 기능적 특성)을 가진 모 단클론 항체를 선택한 후에, DVD-Ig를 작제한다. DVD-Ig 분자는 2개의 모 단클론 항체로부터의 2개의 항원-결합 도메인을 함유하므로, DVD-Ig의 PK 특성이 또한 평가된다. 따라서, DVD-Ig의 PK 특성을 측정하는 동안, 2개의 모 단클론 항체로부터 기원한 항원-결합 도메인 둘다의 기능성을 기반으로 PK 프로파일을 측정하는 PK 검사를 사용할 수 있다. DVD-Ig의 PK 프로파일을 측정할 수 있다. DVD-Ig의 PK 프로파일에 영향을 미치는 추가의 인자는 항원-결합 도메인(CDR) 배향, 링커 크기, 및 Fc/FcRn 상호작용을 포함한다. 모 항체의 PK 특성은 다음 매개변수: 흡수, 분포, 대사 및 배출을 평가함으로써 평가할 수 있다.
흡수: 지금까지, 치료학적 단클론 항체의 투여는 비경구 투여(예를 들면, 정맥내[IV], 피하[SC], 또는 근육내[IM])를 통한다. 사이질 공간(interstitial space)으로부터 SC 또는 IM 투여 후 전신계 순환내로 mAb를 흡수시키는 것은 주로 림프구 경로를 통한다. 포화가능한, 전전신계적(presystemic), 단백질분해적 분해는 혈관외 투여 후 가변성의 절대 생물이용성을 생성할 수 있다. 일반적으로, 단클론 항체의 증가하는 용량을 사용한 절대적인 생물이용성에 있어서의 증가는 보다 높은 용량에서 포화된 단백질분해능으로 인해 관찰될 수 있다. mAb에 대한 흡수 과정은 일반적으로 림프액이 혈관계내로 서서히 유출되기 때문에 매우 느리며, 흡수 기간은 수 시간 내지 수 일에 걸쳐 발생할 수 있다. SC 투여 후 단클론 항체의 절대적인 생물이용성은 일반적으로 50% 내지 100%의 범위이다. DVD-Ig 작제물에 의해 표적화된 혈액-뇌 장벽(BBB)에서 수송-매개된 구조의 경우에, 혈장내 순환 횟수는 혈액 뇌 장벽(BBB)에서 CNS 구획내로 향상된 경-세포 수송(trans-cellular transport)으로 인해 감소될 수 있으며, 여기서 DVD-Ig는 이의 제2 항원 인식 부위를 통해 상호작용이 가능하도록 유리된다.
분포: IV 투여 후, 단클론 항체는 일반적으로 신속한 분포 상으로 개시한 후 느린 제거 상이 이어지는, 2상(biphasic) 혈청(또는 혈장) 농도-시간 프로파일을 따른다. 일반적으로, 이중지수 약력학적 모델(biexponential pharmacokinetic model)은 이러한 종류의 약력학적 프로파일을 가장 잘 기술한다. mAb에 대한 중심 구획(Vc)에서 분포 용적은 일반적으로 혈장 용적(2 내지 3 리터)과 동등하거나 이보다 약간 더 크다. 혈청(혈장) 농도 대 시간 프로파일에서 명백한 2상 패턴은, 혈청(혈장)농도-시간 곡선의 분포 상이 긴 흡수 부분에 의해 차폐되므로, IM 또는 SC와 같은 다른 비경구 투여 경로로 명백하지 않을 수 있다. 물리화학적 특성, 부위-특이적인 및 표적-기원한 수용체 매개된 흡수, 조직의 결합력, 및 mAb 용량을 포함하는 많은 인자들은 mAb의 생분포에 영향을 미칠 수 있다. 이들 인자들 중 일부는 mAb에 대한 생분포에서 비선형성에 기여할 수 있다.
대사 및 배출: 분자 크기로 인하여, 완전한 단클론 항체는 신장을 통해 뇨내로 배출되지 않는다. 이들은 주로 대사(예를 들면, 이화작용)에 의해 불활성화된다. IgG-계 치료용 단클론 항체의 경우, 반감기는 전형적으로 수시간 또는 1 내지 2일 내지 20일 초과의 범위이다. mAb의 제거는 FcRn 수용체에 대한 친화성, mAb의 면역원성, mAb의 글리코실화 정도, 단백질분해에 대한 mAb에 대한 민감성, 및 수용체-매개된 제거를 포함하나, 이에 한정되지 않는 많은 인자들에 의해 영향받을 수 있다.
B.11. 사람 및 독 종(tox species)에 있어서 조직 교차-반응성 패턴
동일한 염색 패턴은, 잠재적인 사람 독성이 독 종에서 평가될 수 있음을 제안한다. 독 종은, 관련되지 않은 독성이 연구된 동물이다.
개개 항체를 선택하여 다음과 같은 2개의 기준을 충족하도록 한다: (1) 항체 표적의 공지된 발현에 적절한 조직 염색 및 (2) 동일한 기관으로부터 사람 및 독 종 조직들 사이의 유사한 염색 패턴.
기준 1: 면역화 및/또는 항체 선택은 전형적으로 재조합체 또는 합성된 항원(단백질, 탄수화물 또는 다른 분자)를 사용한다. 관련되지 않은 항원에 대한 천연의 대응물 및 카운터스크린(counterscreen)은 흔히 치료용 항체에 대한 스크리닝 깔대기의 부분이다. 그러나, 다수의 항원에 대한 스크리닝은 흔히 실제적이지 않다. 따라서, 모든 주요 기관으로부터의 사람 조직을 사용한 조직 교차-반응성 연구는 어떠한 관련되지 않은 항원에 대한 항체의 원치않은 결합도 제외시키기 위해 제공된다.
기준 2: 사람 및 독 종 조직(사이노몰구스 원숭이, 개, 가능하게는 설치류, 및 기타, 사람 연구에서와 같이 시험 중인 동일한 36개 또는 37개 조직들)을 사용한 비교 조직 교차 반응성 연구는 독 종의 선택을 유효하도록 돕는다. 동결된 조직 단면에서의 전형적인 조직 교차-반응성 연구에서, 치료용 항체는 공지된 항원에 대한 예측된 결합 및/또는 저 수준의 상호작용(비특이적인 결합, 유사한 항원에 대한 저 수준 결합, 저 수준 전하계 상호작용 등)을 기반으로 하는 조직에 대한 보다 적은 정도의 결합을 입증할 수 있다. 어떠한 경우에서도, 대부분의 관련된 독성 동물 종은 사람 및 동물 조직에 대한 결합의 가장 큰 정도의 일치를 갖는 것이다.
조직 교차-반응성 연구는 문헌[EC CPMP Guideline III/5271/94 "Production and quality control of mAbs" and the 1997 US FDA/CBER "Points to Consider in the Manufacture and Testing of Monoclonal Antibody Products for Human Use"]을 포함하는 적절한 조절 안내서를 따른다. 부검 또는 생검으로 수득된 사람 조직의 동결단면(cryosection)(5μm)을 고정시키고 대물 렌즈 위에서 건조시켰다. 조직 단면의 퍼옥시다제 염색은 아비딘-바이오틴 시스템을 사용하여 수행한다(참조: FDA의 안내서 "Points to Consider in the Manufacture and Testing of Monoclonal Antibody Products for Human Use"). 관련된 참조문헌은 문헌[Clarke, J. (2004), Boon, L. (2002a), Boon, L. (2002b), Ryan, A. (1999)]을 포함한다.
조직-교차 반응성 연구는 흔히 2개 단계로 수행하며, 제1 단계는 하나의 사람 공여체로부터의 32개 조직의 동결단면(전형적으로, 부신, 위장관, 전립샘, 방광, 심장, 골격근, 혈액 세포, 신장, 피부, 골수, 간, 척수, 유방, 페, 비장, 소뇌, 림프절, 고환, 대뇌 피질, 난소, 가슴샘, 결장, 췌장, 갑상샘, 내피, 부갑상샘, 요관, 눈, 난관, 자궁, 난관 및 태반)을 포함한다. 제2 상에서, 완전한 교차 반응성 연구는 3명의 관련되지 않은 성인으로부터의 38개까지의 조직(부신, 혈액, 혈관, 골수, 소뇌, 대뇌, 경부, 식도, 눈, 심장, 신장, 대장, 간, 폐, 림프절, 유방 유선, 난소, 난관, 췌장, 부갑상샘, 말초 신경, 뇌하수체, 태반, 전립샘, 타액선, 피부, 소장, 척수, 비장, 위, 횡문근, 고환, 가슴샘, 갑상샘, 편도, 요관, 방광, 및 자궁을 포함)을 사용하여 수행한다. 연구는 최소 2회 용량 수준에서 전형적으로 수행된다.
치료용 항체(즉, 시험 제품) 및 동형 매치된 대조군 항체는 아비딘-바이오틴 복합체(ABC) 검출을 위해 바이오티닐화될 수 있으며; 다른 검출 방법은 FITC(또는 기타의 경우) 표지된 시험 제품에 대한 3차 항체 검출, 또는 표지되지 않은 시험 제품에 대한 표지된 항-사람 IgG와의 예비복합체화를 포함할 수 있다.
요약하면, 부검 또는 생검에서 수득된 사람 조직의 동결단면(약 5μm)을 고정시키고 대물 렌즈 위에서 건조시킨다. 조직 단면의 퍼옥시다제 염색은 아비딘-바이오틴 시스템을 사용하여 수행한다. 첫째로(예비복합체화 검출 시스템의 경우), 시험 제품을 제2의 바이오티닐화된 항-사람 IgG와 함께 항온처리하고 면역 복합체로 발달시켰다. 시험 제품의 2 및 10 ㎍/mL의 최종 농도에서 면역 복합체를 대물 렌즈 위의 조직 단면위에 가한 후 조직 단면을 30분 동안 아비딘-바이오틴-퍼옥시다제 키트로 반응시켰다. 후속적으로, 퍼옥시다제 반응에 대한 기질인, DAB(3,3'-디아미노벤지딘)을 4분 동안 조직 염색에 적용시켰다. 항원-세파로즈 비드(bead)를 양성 대조군 조직 단면으로 사용한다.
모든 특이적인 염색은 문제의 표적 항원의 공지된 발현을 기반으로 예측된(예를 들면, 항원 발현과 일치하는) 또는 예측되지 않은 반응성인 것으로 판단된다. 특이적인 것으로 판단된 모든 염색은 강도 및 횟수에 대해 점수매긴다. 항원 또는 혈청 경쟁 또는 차단 연구는 관찰된 염색이 특이적인지 또는 비특이적인지를 측정하는데 있어 추가로 보조할 수 있다.
2개의 선택된 항체가 선택 기준 - 적절한 조직 염색, 사람과 독성학 동물 특이적인 조직 사이에 매칭 염색을 충족하는 것으로 밝혀진 경우 - 이들은 DVD-Ig 생성을 위해 선택될 수 있다.
조직 교차-반응성 연구는 최종의 DVD-Ig 작제물을 사용하여 반복되어야 하지만, 이들 연구는 본원에 요약된 바와 동일한 프로토콜을 따르는 반면, 어떠한 결합도 2개의 모 항체 중 어느 것으로부터 올 수 있기 때문에, 이들은 평가하기에 보다 복잡하며, 어떠한 설명되지 않은 결합도 복합체 항원 경쟁 연구를 사용하여 수행할 필요가 있다.
DVD-Ig와 같은 다특이적 분자를 사용한 조직 교차-반응성을 착수하는 복합체는, 2개의 모 항체가 (1) 예측되지 않는 조직 교차-반응성 발견의 결여 및 (2) 상응하는 사람과 독성학 동물 종 조직 사이의 조직 교차-반응성 발견의 적절한 유사성에 대해 선택됨이 용이하게 드러난다.
B.12. 특이성 및 선택성
바람직한 특이성 및 선택성을 갖는 DVD-Ig 분자를 생성하기 위해, 유사하게 바람직한 특이성 및 선택성 프로파일을 갖는 모 mAb 생성하고 선택할 필요가 있다.
DVD-Ig를 사용한 특이성 및 선택성에 대한 결합 연구는, 각각의 항원에 대해 각각 2개인, 4개 이상의 결합 부위로 인하여 복잡할 수 있다. 요약하면, DVD-Ig를 사용한 ELISA, BIAcore, KinExA, 또는 다른 상호작용 연구를 이용하는 결합 연구는 DVD-Ig 분자에 대한 1 또는 2개 이상의 항원의 결합을 모니터링할 필요가 있다. BIAcore 기술은 다수의 항원의 순차적인, 독립적인 결합을 해결할 수 있는 반면, ELISA를 포함하는 보다 전통적인 방법 또는 KinExA와 같은 보다 현대적인 기술은 해결할 수 없다. 따라서, 각각의 모 항체의 조심스러운 특성화가 중요하다. 각각의 개별적인 항체가 특이성에 대해 특성화된 후, DVD-Ig 분자에서 개개 결합 부위의 특이성 보유의 구조는 크게 단순화된다.
DVD-Ig의 특이성의 측정을 수행하는 복합체는, 2개의 모 항체를 DVD-Ig내로 조합하기 전에 특이성에 대해 선택할 경우 크게 단순화됨이 용이하게 드러난다.
항원-항체 상호작용 연구는 ELISA(효소 연결된 면역흡착성 검사), 질량 분광법, 화학 교차 연결, 광 산란을 사용한 SEC, 평형 투석, 겔 침투, 한외여과, 겔 크로마토그래피, 거대-부위 분석 SEC, 미세제조 한외여과(침강 평형), 분광법, 적정 미세열량측정법, 침강 평형(분석적 한외원심분리), 침강 속도(분석적 원심분리), 표면 플라스몬 공명(BIAcore 포함)을 포함하는 많은 전통적인 형태를 취할 수 있다. 관련된 참조문헌은 Current Protocols in Protein Science, Volume 3, chapters 19 and 20, (Coligan et al., eds.) (John Wiley & Sons Inc.) and references included therein; and Current Protocols in Immunology, (Coligan et al., eds.) (John Wiley & Sons Inc.) 및 이에 포함된 관련 참조문헌을 포함한다.
전혈에서 사이토킨 방출: mAb와 사람 혈액 세포의 상호작용은 사이토킨 방출 검사[참조: Wing et al., Therapeutic Immunol., 2(4): 183-190 (1995); Current Protocols in Pharmacology, (Enna et al., eds.) (John Wiley & Sons Inc.); Madhusudan et al., Clin. Cancer Res., 10(19): 6528-6534 (2004); Cox et. al., Methods, 38(4): 274-282 (2006); Choi et al., Eur. J. Immunol., 31(1): 94-106 (2001)]으로 시험할 수 있다. 요약하면, 다양한 농도의 mAb를 사람 전혈과 24시간 동안 항온처리한다. 시험한 농도는 환자에서 전형적인 혈액 수준을 모사하는 최종 농도(100 ng/ml 내지 100 ㎍/ml을 포함하나 이에 한정되지 않음)를 포함하는 광범위한 범위를 포함하여야 한다. 항온처리 후, 상층액 및 세포 분해물을 IL-1Rα, TNF-α, IL-1b, IL-6 및 IL-8의 존재에 대해 분석한다. mAb에 대해 생성된 사이토킨 농도 프로파일을 음성 사람 IgG 대조군 및 양성 LPS 또는 PHA 대조군에 의해 생성된 프로파일과 비교한다. 세포 상층액 및 세포 분해물 둘다로부터의 mAb에 의해 디스플레이된 사이토킨 프로파일을 대조군 사람 IgG를 사용한 것과 비교한다. 하나의 양태에서, 단클론 항체는 사람 혈액 세포와 상호작용하여 염증성 사이토킨을 자발적으로 방출하지 않는다.
DVD-Ig에 대한 사이토킨 방출 연구는 각각의 항원에 대해 각각 2개인, 4개 이상의 결합 부위로 인해 복잡하다. 요약하면, 본원에 기술된 바와 같은 사이토킨 방출 연구는 전혈 또는 다른 세포 시스템에서 전체 DVD-Ig 분자의 효과를 측정하지만 분자의 어느 부위가 사이토킨 방출을 유발하는지를 해결할 수 없다. 사이토킨 방출이 검출되면, 일부 동시-정제하는 세포 성분들이 이들 자체에서 사이토킨 방출을 유발할 수 있으므로, DVD-Ig 제제의 순도를 확인하여야 한다. 순도가 쟁점이 아닌 경우, DVD-Ig의 단편화(Fc 부위의 제거, 결합 부위의 분리 등을 포함하나, 이에 한정되지 않는다), 결합 부위 돌연변이유발 또는 다른 방법들이 어떠한 관찰도 해결하는데 사용할 필요가 있을 수 있다. 이러한 복합체 수행은, 2개의 모 항체가 DVD-Ig내로 조합되기 전에 사이토킨 방출의 결여를 위해 선택되는 경우 크게 단순화됨이 용이하게 드러난다.
B.13. 독성학적 연구에 대한 다른 종에 대한 교차-반응성
하나의 양태에서, 개개 항체를 적절한 독 종, 예를 들면, 사이노몰구스 원숭이에 대한 충분한 교차-반응성을 사용하여 선택하였다. 모 항체는 이종상동성 종 표적(즉, 사이노몰구스 원숭이)에 결합하여 적절한 반응(조절, 중화, 활성화)을 유발할 필요가 있다. 하나의 양태에서, 이종상동성 종에 대한 교차-반응성(친화성/효능)은 사람 표적의 10배 이내이어야 한다. 실시시, 모 항체는 마우스, 랫트, 개, 원숭이(및 다른 비-사람 영장류), 및 질환 모델 종(즉, 천식 모델용 양)을 포함하는 다수 종에 대해 평가된다. 모 단클론 항체로부터의 독 종에 대한 허용되는 교차-반응성은 동일한 종에서 DVD-Ig의 미래의 독성학 연구를 허용한다. 이러한 이유로, 2개의 모 단클론 항체는 일반적인 독 종에 대해 허용되는 교차-반응성을 가져야 하므로 동일한 종에서 DVD-Ig의 독성학 연구를 허용한다.
모 mAb는 특이적인 표적에 결합할 수 있고 당해 분야에 잘 공지된 각종 mAb로부터 선택될 수 있다. 이는 IL-1β, 항-TNF 항체(미국 특허 공보 제6,258,562호), 항-IL-12 및/또는 항-IL-12p40 항체(미국 특허 공보 제6,914,128호); 항-IL-18 항체 (US 공보 제2005/0147610 A1호), 항-C5, 항-CBL, 항-CD147, 항-gp120, 항-VLA-4, 항-CD11a, 항-CD18, 항-VEGF, 항-CD40L, 항-CD-40 (예를 들면, PCT 공보 제WO　2007/124299호 참조) 항-Id, 항-ICAM-1, 항-CXCL13, 항-CD2, 항-EGFR, 항-TGF-베타 2, 항-HGF, 항-cMet, 항-DLL-4, 항-NPR1, 항-PLGF, 항-ErbB3, 항-E-셀렉틴, 항-Fact VII, 항-Her2/neu, 항-F gp, 항-CD11/18, 항-CD14, 항-ICAM-3, 항-RON, 항-CD-19, 항-CD80 (예를 들면, PCT 공보 제WO　2003/039486호 참조), 항-CD4, 항-CD3, 항-CD23, 항-베타2-인테그린, 항-알파4베타7, 항-CD52, 항-HLA DR, 항-CD22(참조: 예를 들면, 미국 특허 공보 제5,789,554호), 항-CD20, 항-MIF, 항-CD64 (FcR), 항-TCR 알파 베타, 항-CD2, 항-Hep B, 항-CA 125, 항-EpCAM, 항-gp120, 항-CMV, 항-gpIIbIIIa, 항-IgE, 항-CD25, 항-CD33, 항-HLA, 항-IGF1,2, 항-IGFR, 항-VNR인테그린, 항-IL-1알파, 항-IL-1베타, 항-IL-1 수용체, 항-IL-2 수용체, 항-IL-4, 항-IL-4 수용체, 항-IL5, 항-IL-5 수용체, 항-IL-6, 항-IL-6R, RANKL, NGF, DKK, 알파V베타3, 항-IL-8, 항-IL-9, 항-IL-13, 항-IL-13 수용체, 및 항-IL-23; IL-23p19[참조: Presta, L.G., "Selection, design, and engineering of therapeutic antibodies," J.　Allergy Clin. Immunol., 116: 731-736 (2005) 및 worldwide website http://www.path.cam.ac.uk/~mrc7/humanisation/antibodies.html]을 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
모 mAb는 또한 임상 시험, 또는 임상 용도에 대한 개발시 사용을 위해 승인된 각종 치료용 항체로부터 선택될 수 있다. 이러한 치료용 항체는 리툭시마브[Rituxan® IDEC/제조원:진테크(Genentech)/로슈(Roche)](참조: 예를 들면, 미국 특허 공보 제5,736,137호), 비-호지킨 림프종(Non-Hodgkin's lymphoma)을 치료하기 위해 승인된 키메라 항-CD20 항체; HuMax-CD20, 젠마브(Genmab)에 의해 현재 개발중인 항-CD20, 미국 특허 공보 제5,500,362호에 기술된 항-CD20 항체, AME-133[제조원: 어플라이드 몰레큘러 에볼류션(Applied Molecular Evolution)], hA20[제조원: 임뮤노메딕스, 인코포레이션(Immunomedics, Inc.)], HumaLYM[제조원: 인트라셀(Intracel)], 및 PRO70769 ["면역글로불린 변이체 및 이의 용도"라는 명칭의 PCT 공보 제WO　2004/056312호(PCT/US2003/040426)], 트라스투주마브[Herceptin® 제조원: 진테크(Genentech)](참조: 예를 들면, 미국 특허 공보 제5,677,171호), 유방암 치료를 위해 승인된 사람화된 항-Her2/neu 항체; 현재 진테크에 의해 개발중인 페르투주마브(rhuMab-2C4, Omnitarg®); 미국 특허 공보 제4,753,894호에 기술된 항-Her2 항체; 세툭시마브[Erbitux®, 제조원: 임클론(ImClone)](미국 특허 공보 제 4,943,533호; PCT 공보 제WO　96/40210호), 각종 암에 대한 임상 시험중인 키메라 항-EGFR 항체; 현재 아브게닉스-임뉴넥스-암젠(Abgenix-Immunex-Amgen)에 의해 개발중인 ABX-EGF (미국 특허 공보 제6,235,883호); 현재 젠마브(Genmab)에 의해 개발중인 HuMax-EGFr(US　제2003/0091561호로 발표되어, 현재 미국 특허 공보 제 7,247,301호인, 미국 일련 번호 제10/172,317호); 425, EMD55900, EMD62000, 및 EMD72000[제조원: 머크 케이지에이에이(Merck KGaA)][미국 특허 공보 제5,558,864호; Murthy et al., Arch. Biochem. Biophys., 252(2): 773-783 (1991)]; ICR62[제조원; 인스티튜트 오브 캔서 리서치(Institute of Cancer Research), PCT 공보 제WO　95/20045호; 549-560 (1987); Rodeck et al., J.　Cell Biochem., 35(4):315-320 (1987); Kettleborough et al., Protein Eng., 4(7): Modjtahedi et al., J.　Cell Biophys., 22(1-3):129-146 (1993); Modjtahedi et al., Br. J. Cancer, 67(2):247-253 (1993); Modjtahedi et al., Br. J. Cancer, 73(2):228-235 (1996); Modjtahedi et al., Int. J. Cancer, 105(2):273-280 (2003)); TheraCIM hR3 (YM Biosciences, Canada and Centro de Immunologia Molecular, Cuba (미국 특허 공보 제 5,891,996호; 미국 특허 공보 제6,506,883호; Mateo et al., Immunotechnology, 3(1):71-81(1997)]; mAb-806[제조원: 루드빅 인스티튜트 포 캔서 리서치(Ludwig Institute for Cancer Research), 메로리얼 스롤안-케터링 소재][참조: Jungbluth et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA., 100(2): 639-644 (2003)]; KSB-102[제조원: 케이에스 바이오메딕스(KS Biomedix)]; MR1-1[(IVAX), 제조원; 내셔널 캔서 인스티튜트(National Cancer Institute)(PCT 공보 제WO　01/62931호); 및 SC100[제조원: 스캔셀(Scancell)](PCT 공보 제WO　01/88138호); B-세포 만성 림프구 백혈병 치료용으로 현재 승인된 사람화된 mAb인, 알렘투부마브[Campath® 제조원: 밀레니움(Millennium)]; 무로모나브(muromonab)-CD3[Orthoclone OKT3®, 오르토 바이오테크(Ortho Biotech)/존슨 앤드 존슨(Johnson &　Johnson)에 의해 개발된 항-CD3 항체, 이브리투모마브 티욱세탄(Zevalin®), IDEC/쉐링 아게(Schering AG)에 의해 개발된 항-CD20 항체, 겜투주마브 오조가미신(Mylotarg®), 셀테크(Celltech)/와이어쓰(Wyeth)에 의해 개발된 항-CD33(p67 단백질) 항체, 알레파셉트(Amevive®), 바이오젠(Biogen)에 의해 개발된 항-LFA-3 Fc 융합체], 센토코르(Centocor)/릴리(Lilly)에 의해 개발된 아브킥시마브(ReoPro®), 노바티스(Novartis)에 의해 개발된 바실릭시마브(Simulect®), 메디뮨(Medimmune)에 의해 개발된 팔리비주마브(Synagis®), 센토코르(Centocor)에 의해 개발된 항-TNF알파 항체인 인플릭시마브(Remicade®), 애보트 래보러토리즈(Abbott Laboratories)에 의해 개발된 항-TNF알파 항체인 아달리무마브(Humira®), 셀테크에 의해 개발된 항-TNF알파 항체인 Humicade®, 센토코르에 의해 개발된 완전한 사람 TNF 항체인 골리무마브(CNTO-148), 에타네르셉트(Enbrel®), 임뮤넥스/암젠에 의해 개발된 p75 TNF 수용체 Fc 융합체, 레네르셉트, 로슈(Roche)에 의해 이미 개발된 p55TNF 수용체 Fc 융합체, ABX-CBL, 아브게닉스(Abgenix)에 의해 개발중인 항-CD147 항체, ABX-IL8, 아브게닉스에 의해 개발중인 항-IL8 항체, ABX-MA1, 아브게닉스에 의해 개발중인 항-MUC18 항체, 펜투모마브(R1549, 90Y-muHMFG1), 안티소마(Antisoma)에 의해 개발중인 항-MUC1, 테렉스(R1550), 안티소마에 의해 개발중인 항-MUC1 항체, 안티소마에 의해 개발중인 안지오맵(AS1405), 안티소마에 의해 개발중인 HuBC-1, 안티소마에 의해 개발중인 티오플라틴(AS1407), Antegren®(나탈리주마브), 바이오젠에 의해 개발중인 항-알파-4-베타-1 (VLA-4) 및 알파-4-베타-7 항체, VLA-1 mAb, 바이오젠에 의해 개발중인 항-VLA-1 인테그린 항체, LTBR mAb, 바이오젠에 의해 개발중인 항-림프독소 베타 수용체(LTBR) 항체, CAT-152, 캠브릿지 안티바디 테크놀로지(Cambridge Antibody Technology)에 의해 개발 중인 항-TGF-β2 항체, ABT 874 (J695), 애보트 래보러토리즈에 의해 개발중인 항-IL-12 p40 항체, CAT-192, 캠브릿지 안티바디 테크놀로지 및 젠자임(Genzyme)에 의해 개발중인 항-TGFβ1 항체, CAT-213, 캠브릿지 안티바디 테크놀로지에 의해 개발중인 항-에오탁신1 항체, 캠브릿지 안티바디 테크놀로지 및 휴먼 게놈 사이언시즈 인코포레이티드(Human Genome Sciences Inc.)에 의해 개발중인 LymphoStat-B® 항-Blys 항체, TRAIL-R1mAb, 캠브릿지 안티바디 테크놀로지 및 휴먼 게놈 사이언시즈 인코포레이티드에 의해 개발중인 항-TRAIL-R1 항체, Avastin® 베바키주마브, rhuMAb-VEGF), 진테크에 의해 개발중인 항-VEGF 항체, 진테크에 의해 개발중인 항-HER 수용체 계열 항체, 항-조직 인자(ATF), 진테크에 의해 개발중인 항-조직 인자 항체, Xolair®(오말리주마브), 진테크에 의해 개발중인 항-IgE 항체, Raptiva®(에팔리부마브), 진테크 및 크소마(Xoma)에 의해 개발중인 항-CD11a 항체, 진테크 및 밀레니엄 파마슈티칼즈에 의해 개발중인 MLN-02 항체 (앞서 LDP-02), HuMax CD4, 젠마브에 의해 개발중인 항-CD4 항체, HuMax-IL15, 젠마브 및 암젠에 의해 개발중인 항-IL15 항체, 젠마브 및 메다렉스(Medarex)에 의해 개발중인 HuMax-Inflam, HuMax-암, 젠마브 및 메다렉스 및 옥스포드 지코사이언시즈(Oxford GcoSciences)에 의해 개발중인 항-헤파라나제 I 항체, 젠마브 및 암젠에 의해 개발중인 HuMax-림프종, 젠마브에 의해 개발중인 HuMax-TAC, 아이디이씨 파마슈티칼즈(IDEC Pharmaceuticals)에 의해 개발중인 IDEC-131, 및 항-CD40L 항체, IDEC-151(클레놀릭시마브), 아이디이씨 파마슈티칼즈에 의해 개발중인 항-CD4 항체, IDEC-114, 아이디이씨 파마슈티칼즈에 의해 개발중인 항-CD80 항체, IDEC-152, 아이디이씨 파마슈티칼즈에 의해 개발중인 항-CD23, 아이디이씨 파마슈티칼즈에 의해 개발중인 항-대식세포 이주 인자(MIF) 항체, BEC2, 임클론(imClone)에 의해 개발중인 항-개별특이형 항체, IMC-1C11, 임클론에 의해 개발중인 항-KDR 항체, DC101, 임클론에 의해 개발중인 항-flk-1 항체, 임클론에 의해 개발중인 항-VE 카드헤린 항체, CEA-Cide®(라베투주마브), 임뮤노메딕스(Immunomedics)에 의해 개발중인 항-암배아 항원(CEA) 항체, LymphoCide®(에프라투주마브), 임뮤노메딕스에 의해 개발중인 항-CD22 항체, 임뮤노메딕스에 의해 개발중인 AFP-시드, 임뮤노메딕스에 의해 개발중인 마이엘로마시드, 임뮤노메딕스에 의해 개발중인 LkoCide, 임뮤노메딕스에 의해 개발중인 프로스타시드(ProstaCide), MDX-010, 메다렉스(Medarex)에 의해 개발중인 항-CTLA4 항체, MDX-060, 메다렉스에 의해 개발중인 항-CD30 항체, 메다렉스에 의해 개발중인 MDX-070, 메다렉스에 의해 개발중인 MDX-018, Osidem®(IDM-1), 및 메다렉스에 의해 개발중인 항-Her2 항체 및 면역-설계된 분자, HuMax®-CD4, 메다렉스 및 젠마브에 의해 개발중인 항-CD4 항체, HuMax-IL15, 메다렉스 및 젠마브에 의해 개발중인 항-IL15 항체, CNTO 148, 메다렉스 및 센토코르/존슨 앤드 존슨에 의해 개발중인 항-TNFα 항체, CNTO 1275, 센토코르/존슨 앤드 존슨에 의해 개발중인 항-사이토킨 항체, MOR101 및 MOR102, 모르포시스(MorphoSys)에 의해 개발중인 항-세포내 부착 분자-1 (ICAM-1)(CD54) 항체, MOR201, 모르포시스에 의해 개발중인 항-섬유모세포 성장 인자 수용체 3 (FGFR-3) 항체, Nuvion®(비실리주마브), 프로테인 디자인 랩스(Protein Design Labs)에 의해 개발중인 항-CD3 항체, HuZAF®, 프로테인 디자인 랩스에 의해 개발중인 항-감마 인터페론 항체, 프로테인 디자인 랩스에 의해 개발중인 항-α5β1 인테그린, 프로테인 디자인 랩스에 의해 개발중인 항-IL-12, ING-1, 크소마(Xoma)에 의해 개발중인 항-Ep-CAM 항체, 진테크 및 노바티스에 의해 개발된 Xolair®(오말리주마브) 사람화된 항-IgE 항체, 및 MLN01, 크소마에 의해 개발중인 항-베타2 인테그린 항체를 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 다른 양태에서, 치료제는 KRN330 (Kirin); huA33 항체(A33, 제조원: 루드빅 인스티튜트 포 캔서 리서치); CNTO 95 (알파 V 인테그린, 제조원: 센토코르); MEDI-522 (알파 Vβ3 인테그린, 제조원: 메드임뮨); 볼록식시마브(알파 Vβ1 인테그린, 제조원: 바이오젠/PDL); 사람 mAb 216(B 세포 글리코졸화된 에피토프, NCI); BiTE MT103(이특이적인 CD19 x CD3, 제조원: 메드임뮨); 4G7xH22(이특이적인 BcellxFcgammaR1, 제조원; 메다렉스/머크 케이지에이); rM28(이특이적인 CD28 x MAPG, 유럽 특허 공보 제1　444　268호); MDX447(EMD 82633)(이특이적인 CD64 x EGFR, 메다렉스); 카투막소마브(레모바브)(이특이적인 EpCAM x 항-CD3, 제조원; 트리온(Trion)/프레스(Fres)); 에르투막소마브[이특이적인 HER2/CD3, 제조원; 프레세니우스 바이오테크(Fresenius Biotech)]; 오레고보마브[제조원: 오바렉스(OvaRex)] (CA-125, ViRexx); Rencarex®(WX G250)[카보닉 안하이드라제 IX, 제조원: 윌렉스(Wilex)]; CNTO 888(CCL2, 제조원: 센토코르); TRC105[CD105(엔도글린), 제조원; 트라콘(Tracon)]; BMS-663513[CD137 작용제, 제조원: 브리스톨 마이어스 스퀴브(Brystol Myers Squibb)]; MDX-1342[(CD19, 제조원: 메다렉스(Medarex)]; 시프릴주마브(MEDI-507)(CD2, 제조원: 메드임뮨); 오파투무마브(휴막스-CD20) (CD20, 제조원: 젠마브); 리툭시마브(리툭산) (CD20, 제조원: 진테크); 벨투주마브(hA20)(CD20, 제조원: 임뮤노메딕스); 에프라투주마브(CD22, 제조원: 암젠); 루밀릭시마브(IDEC 152)(CD23, 제조원: 바이오젠); 무로모나브-CD3 (CD3, 제조원: 오르토); HuM291[CD3 fc 수용체, 제조원: 피디엘 바이오파마(PDL Biopharma)]; HeFi-1(CD30, 제조원: 엔씨아이); MDX-060(CD30, 제조원: 메다렉스); MDX-1401(CD30, 제조원: 메다렉스); SGN-30[CD30, 제조원: 시애틀 제네틱스(Seattle Genentics)]; SGN-33(린투주마브) (CD33, 제조원: 시애틀 제네틱스); 자롤리무마브(HuMax-CD4)(CD4, 제조원: 젠마브); HCD122 (CD40, 제조원; 노바티스); SGN-40 (CD40, 제조원: 시애틀 제네틱스); 캄파쓰1h(알렘투주마브) (CD52, 제조원: 젠자임); MDX-1411(CD70, 제조원: 메다렉스); hLL1 (EPB-1) (CD74.38, 제조원: 임뮤노메딕스); Galiximab(IDEC-144) (CD80, 제조원: 바이오젠); MT293 (TRC093/D93) [콜라겐에 의해 절단됨, 제조원: 트라콘(Tracon)]; HuLuc63 (CS1, 제조원: 피디엘 파마); 이필리무마브(MDX-010)[CTLA4, 제조원: 브리스톨 마이어스 스퀴브(Brystol Myers Squibb)]; 트레멜리무마브(티킬리무마브, CP-675,2)[CTLA4, 제조원: 화이자(Pfizer)]; HGS-ETR1(마파투무마브)(DR4 TRAIL-R1 작용제, 제조원: 휴먼 게놈 사이언스(Human Genome Science)/글락소 스미쓰 클라인(Glaxo Smith Kline)]; AMG-655 (DR5, 제조원: 암젠); Apomab (DR5, 제조원: 진테크); CS-1008[DR5, 제조원: 다이이치 산쿄(Daiichi Sankyo)]; HGS-ETR2(렉사투무마브)[DR5 TRAIL-R2 작용제, 제조원: 에이치지에스(HGS)]; 세툭시마브(에르비툭스)[EGFR, 제조원: 임클론(ImClone)]; IMC-11F8, (EGFR, 제조원: 임클론); 니모투주마브[EGFR, 제조원: 와이엠 바이오(YM Bio)]; 파니투무마브(벡타빅스) (EGFR, 제조원: 암젠); 잘루투마브(HuMaxEGFr)(EGFR, 제조원: 젠마브); CDX-110[EGFRvIII, 제조원: 아반트 임뮤노써라퓨틱스(AVANT Immunotherapeutics)]; 아데카투무마브(MT201)(엡캄, 제조원: 머크); 에드레콜로마브(파노렉스, 17-1A)(엡캄, 제조원: 글락소/센토코르); MORAb-003[엽산 수용체 a, 제조원: 모르포테크(Morphotech)]; KW-2871[강글리오사이드 GD3, 제조원: 교와(Kyowa)]; MORAb-009 (GP-9, 제조원: 모르포테크); CDX-1307 (MDX-1307) [hCGb, 제조원: 셀덱스(Celldex)]; 트라스투주마브(헤르셉틴) (HER2, 제조원: 셀덱스); 페르투주마브(rhuMAb 2C4) (HER2 (DI), 제조원: 진테크); 아폴리주마브(HLA-DR 베타 쇄, 제조원: 피디엘 파마); AMG-479 (IGF-1R, 제조원: 암젠); 항-IGF-1R R1507 [IGF1-R, 제조원: 로슈(Roche)]; CP 751871 (IGF1-R, 제조원: 화이자); IMC-A12 (IGF1-R, 제조원: 임클론); BIIB022 (IGF-1R , 제조원: 바이오젠); Mik-베타-1 [IL-2Rb (CD122), 제조원: 호프만 라로슈(Hoffman LaRoche)]; CNTO 328 (IL6, 제조원: 센토코르); 항-KIR (1-7F9)[킬러 세포 Ig-유사 수용체 (KIR), 제조원: 노보(Novo)]; Hu3S193(루이스(y), 제조원: 와이어쓰, 루드빅 인스티튜트 오브 캔서 리서치); hCBE-11 (LTβR, 제조원: 바이오젠); HuHMFG1 (MUC1, 제조원: 안티소마/엔씨아이); RAV12[N-연결된 탄수화물 에피토프, 제조원: 라벤(Raven)]; CAL[부갑상샘 호르몬-관련 단백질 (PTH-rP), 제조원: 유니버시티 오브 캘리포니아(University of California)]; CT-011[PD1, 제조원: 큐어테크(CureTech)]; MDX-1106(ono-4538) (PD1, 제조원: 메다렉스/Ono); MAb CT-011[PD1, 제조원: 큐어테크(Curetech)]; IMC-3G3 (PDGFRa, 제조원: 임클론); 바비툭시마브[포스파티딜세린, 제조원: 페레그린(Peregrine)]; huJ591[PSMA, 제조원: 코넬 리서치 파운데이션(Cornell Research Foundation)]; muJ591 (PSMA, 제조원: 코넬 리서치 파운데이션); GC1008 (TGFb (pan) 억제제 (IgG4), 제조원: 젠자임); 인플릭시마브(레미카데) (TNFa, 제조원: 센토코르); A27.15[트랜스페린 수용체, 제조원: 살크 인스티튜트(Salk Institute), INSERM, PCT 공보 제WO　2005/111082호]; E2.3 (트랜스페린 수용체, 제조원: 살크 인스티튜트); 베바키주마브(아바스틴) (VEGF, 제조원: 진테크); HuMV833[VEGF, 쓰쿠바 리서치 랩(Tsukuba Research Lab), PCT 공보 제WO　2000/034337호, 제조원: 유니버시티 오브 텍사스(University of Texas)]; IMC-18F1 (VEGFR1, 제조원: 임클론); IMC-1121 (VEGFR2, 제조원: 임클론)을 포함한다.
C. DVD-Ig TM 결합 단백질의 작제
다가의 다특이적인 이중 가변 도메인 면역글로불린(DVD-Ig TM ) 결합 단백질은, 상이한 모 단클론 항체로부터의 2개의 상이한 경쇄 가변 도메인(VL)이 재조합 DNA 기술에 이은, 경쇄 불변 도메인에 의해 직접 탄뎀으로 또는 짧은 링커를 통해 연결되도록 설계된다. 유사하게, 중쇄는 탄뎀으로 연결되고, 이어서 불변 도메인 CH1 및 Fc 영역에 의해 연결된 2개의 상이한 중쇄 가변 도메인(VH)을 포함한다.
가변 도메인은 본원에 기술된 방법들 중 어느 하나에 의해 생성된 모 항체로부터의 재조합 DNA 기술을 사용하여 수득할 수 있다. 하나의 양태에서, 가변 도메인은 뮤린 중쇄 또는 경쇄 가변 도메인이다. 다른 양태에서, 가변 도메인은 CDR-이식되거나 사람화된 가변 중쇄 또는 경쇄 도메인이다. 하나의 양태에서, 가변 도메인은 사람 중쇄 또는 경쇄 가변 도메인이다.
하나의 양태에서, 제1 및 제2의 가변 도메인은 재조합 DNA 기술을 사용하여 서로 직접 연결된다. 다른 양태에서 가변 도메인은 링커 서열을 통해 연결된다. 하나의 양태에서, 2개의 가변 도메인이 연결된다. 3개 이상의 가변 도메인이 또한 적접 또는 링커 서열을 통해 연결될 수 있다. 가변 도메인은 동일한 항원에 결합하거나 상이한 항원에 결합할 수 있다. 본 발명의 DVD-Ig 분자는 하나의 면역글로불린 가변 도메인 및 하나의 비-면역글로불린 가변 도메인, 예를 들면, 수용체의 리간드 결합 도메인, 효소의 활성 도메인을 포함할 수 있다. DVD-Ig 분자는 또한 2개 이상의 비-Ig 도메인을 포함할 수 있다.
링커 서열은 펩타이드 결합에 의해 연결된 2개 이상의 아미노산 잔기를 포함하는 단일의 아미노산 또는 링커 폴리펩타이드일 수 있다. 하나의 양태에서, 링커 서열은 GGGGSG (서열 번호 26), GGSGG (서열 번호 27), GGGGSGGGGS (서열 번호 28), GGSGGGGSG (서열 번호 223), GGSGGGGSGS (서열 번호 29), GGSGGGGSGGGGS (서열 번호 30), GGGGSGGGGSGGGG (서열 번호31), GGGGSGGGGSGGGGS (서열 번호 32), ASTKGP (서열 번호 33), ASTKGPSVFPLAP (서열 번호 34), TVAAP (서열 번호 35), RTVAAP (서열 번호 224), TVAAPSVFIFPP (서열 번호 36), RTVAAPSVFIFPP (서열 번호 225), AKTTPKLEEGEFSEAR (서열 번호 37), AKTTPKLEEGEFSEARV (서열 번호 38), AKTTPKLGG (서열 번호 3번호 4AKTTPKLGG (서열 번호 40), SAKTTP (서열 번호 41), RADAAP (서열 번호 42), RADAAPTVS (서열 번호 43), RADAAAAGGPGS (서열 번호 44), RADAAAAGGGGSGGGGSGGGGSGGGGS (서열 번호 45), SAKTTPKLEEGEFSEARV (서열 번호 46), ADAAP (서열 번호 47), ADAAPTVSIFPP (서열 번호 48), QPKAAP (서열 번호 4번호 4PKAAPSVTLFPP (서열 번호 50), AKTTPP (서열 번호 51), AKTTPPSVTPLAP (서열 번호 52), akttap (서열 번호 53), akttapsvyplap (서열 번호 54), GENKVEYAPALMALS (서열 번호 55), GPAKELTPLKEAKVS (서열 번호 56), 및 GHEAAAVMQVQYPAS (서열 번호 57)로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 링커 서열의 선택은 수개의 Fab 분자의 결정 구조 분석을 기반으로 한다. Fab 또는 항체 분자 구조에서 가변 도메인과 CH1/CL 불변 도메인 사이에 천연의 굴곡성 연결이 존재한다. 천연의 연결은 V 도메인의 C-말단으로부터의 4 내지 6개 잔기 및 CL/CH1 도메인의 N-말단으로부터의 4 내지 6개의 잔기에 의해 기여된 대략 10 내지 12개의 아미노산 잔기를 포함한다. 본원에 기술된 DVD-Ig는 각각 DVD-Ig의 경쇄 및 중쇄에서 링커로서 CL 또는 CH1의 11 내지 12개 아미노산 잔기, 또는 N-말단 5 내지 6개 아미노산 잔기를 사용하여 생성될 수 있다. CL 또는 CH1 도메인의 N-말단 잔기, 특히 처음 5 내지 6개 아미노산 잔기는 강력한 2차 구조없이 루프 구조를 채택함으로써, 2개의 가변 도메인들 사이의 굴곡성 링커로서 작용할 수 있다. CL 또는 CH1 도메인의 N-말단 잔기는 Ig 서열의 부분이므로, 가변 도메인의 천연 연장이며, 따라서 링커 및 연결부로부터 잠재적으로 발생하는 어떠한 면역원성도 큰 정도로 최소화한다.
다른 링커 서열은 CL/CH1 도메인의 어떠한 서열; 예를 들면, CL/CH1 도메인의 처음 5 내지 12개 아미노산 잔기를 포함할 수 있으며; 경쇄 링커는 Cκ 또는 Cλ로부터 기원할 수 있고; 중쇄 링커는 Cγ1, Cγ2, Cγ3, Cγ4, Cα1, Cα2, Cδ, Cε, 및 Cμ를 포함하는 어떠한 동형의 CH1으로부터 기원할 수 있다. 링커 서열은 또한 Ig-유사 단백질(예를 들면, TCR, FcR, KIR)과 같은 다른 단백질; G/S 계 서열; 힌지 영역-기원한 서열; 및 다른 단백질로부터의 다른 천연 서열로부터 기원할 수 있다.
하나의 양태에서 불변 도메인은 2개의 연결된 가변 도메인에 재조합 DNA 기술을 사용하여 연결된다. 하나의 양태에서, 탄뎀으로 연결된 중쇄 가변 도메인을 포함하는 서열은 중쇄 불변 도메인에 연결되며 탄뎀으로 연결된 경쇄 가변 도메인을 포함하는 서열은 경쇄 불변 도메인에 연결된다. 하나의 양태에서, 불변 도메인은 각각 사람 중쇄 불변 도메인 및 사람 경쇄 불변 도메인이다, 하나의 양태에서, DVD 중쇄는 또한 Fc 영역에 연결된다. Fc 영역은 천연의 서열 Fc 영역, 또는 변이체 Fc 영역일 수 있다. 다른 양태에서, Fc 영역은 사람 Fc 영역이다. 다른 양태에서 Fc 영역은 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA, IgM, IgE, 또는 IgD로부터의 Fc 영역을 포함한다.
가장 바람직한 양태에서, 2개의 중쇄 DVD 폴리펩타이드 및 2개의 경쇄 DVD 폴리펩타이드는 결합하여 DVD-Ig 분자를 형성한다. IL-1β와 같은, 특이적인 표적 항원에 결합할 수 있는 특이적인 DVD-Ig 분자의 상세한 설명, 및 이를 제조하는 방법은 하기 실시예 단락에서 제공된다.
D. DVD-Ig 결합 단백질의 생산
본 발명의 DVD-Ig 결합 단백질은 예를 들면, 숙주 세포로부터의 발현을 포함하는, 당해 분야에 공지된 다수의 기술 중 어느 것으로 생산될 수 있으며, 여기서 DVD-Ig 중쇄 및 DVD-Ig 경쇄를 암호화하는 발현 벡터(들)은 표준 기술에 의해 숙주 세포내로 형질감염된다. 용어 "형질감염"의 각종 형태는 외인성 DNA를 원핵 또는 진핵 숙주 세포내로 도입시키는데 일반적으로 사용된 광범위한 기술, 예를 들면, 전기천공, 인산칼슘 침전, DEAE-덱스트란 형질감염 등을 포함하는 것으로 의도된다. 비록 본 발명의 DVD-Ig 단백질을 원핵 또는 진핵 숙주 세포내에서 발현하는 것이 가능하다고 해도, DVD-Ig 단백질은 원핵 세포, 예를 들면, 포유동물 숙주 세포내에서 발현되는데, 이는, 이러한 진핵 세포(및 특히 포유동물 세포)가 원핵 세포보다 적절히 폴딩되고 면역학적으로 활성인 DVD-Ig 단백질을 조립하여 분비하는 경향이 있기 때문이다.
본 발명의 재조합체 항체를 발현하는 예시적인 포유동물 숙주 세포는 차이니즈 햄스터 난모(CHO 세포)(예를 들면, Kaufman and Sharp, J.　Mol. Biol., 159: 601-621 (1982)에 기술된 바와 같은, DHFR 선택성 마커와 함께 사용된, Urlaub and Chasin, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 77: 4216-4220 (1980)에 기술된, dhfr- CHO 세포 포함], NS0 흑색종 세포, COS 세포, SP2 및 PER.C6 세포를 포함한다. DVD-Ig 단백질을 암호화하는 재조합체 발현 벡터가 포유동물 숙주 세포내로 도입된 경우, DVD-Ig 단백질은 숙주 세포를 숙주 세포내에서 DVD-Ig 단백질을 발현시키거나 DVD 단백질을 숙주 세포가 성장한 배양 배지내로 분비시키기에 충분한 기간 동안 배양함으로써 생산된다. DVD-Ig 단백질은 표준 단백질 정제 방법을 사용하여 배양 배지로부터 회수될 수 있다.
본 발명의 DVD-Ig 단백질의 재조합체 발현에 대한 예시적인 시스템에서, DVD-Ig 중쇄 및 DVD-Ig 경쇄 둘다를 암호화하는 재조합체 발현 벡터는 인산칼슘-매개된 형질감염에 의해 dhfr- CHO 세포내로 도입된다. 재조합체 발현 벡터내에서, DVD-Ig 중쇄 및 경쇄 유전자는 각각 CMV 인핸서/AdMLP 프로모터 조절 성분에 작동적으로 연결되어 유전자의 고 수준의 전사를 구동시킨다. 재조합체 발현 벡터는 또한 DHFR 유전자를 수반하며, 이는 메톡트렉세이트 선택/증폭을 사용하여 벡터로 형질감염된 CHO 세포의 선택을 허용한다. 선택된 형질전환체 숙주 세포는 배양하여 DVD-Ig 중쇄 및 경쇄의 발현을 허용하고 완전한 DVD-Ig 단백질을 배양 배지로부터 회수한다. 표준 분자 생물학 기술을 사용하여 재조합체 발현 벡터를 제조하고, 숙주 세포를 형질감염시키며, 형질전환체에 대해 선택하고, 숙주 세포를 배양하며 배양 배지로부터 DVD-Ig 단백질을 회수한다. 여전히 또한 본 발명은 본 발명의 본 발명의 숙주 세포를 적합한 배양 배지 속에서 본 발명의 DVD-Ig 단백질이 합성될 때까지 배양시킴으로써 본 발명의 DVD-Ig 단백질을 합성하는 방법을 제공한다. 당해 방법은 배양 배지로부터 DVD-Ig 단백질을 분리함을 추가로 포함한다.
DVD-Ig의 중요한 특징은 통상의 항체와 유사한 방식으로 생산되고 정제될 수 있다는 것이다. DVD-Ig의 생산은 바람직한 이중-특이적인 활성을 지닌 균질한, 단일의 주요 생성물을 불변 영역의 어떠한 서열 변형 또는 어떠한 종류의 화학적 변형없이 생성한다. "이-특이적", "다-특이적", 및 "다-특이적 다가"의 완전한 길이의 결합 단백질을 생성하는 다른 앞서 기술된 방법은 단일의 주요 생성물을 초래하지 않지만 대신 조립된 불활성의, 일-특이적인, 다중-특이적인, 다가의 완전한 길이의 결합 단백질, 및 상이한 결합 부위의 조합을 가진 다가의 완전한 길이의 결합 단백질의 혼합물의 세포내 또는 분비된 생산을 초래한다. 예를 들면, 밀러(Miller) 및 프레스타(Presta)에 의해 기술된 설계를 기반으로(PCT 공보 제WO　2001/077342호), 중쇄 및 경쇄의 16개의 가능한 조합이 존재한다. 결과적으로, 단백질 중 단지 6.25%만이 바람직한 활성형으로 존재하는 경향이 있으며, 다른 15개의 가능한 조합과 비교하여 단일의 주요 생성물 또는 단일의 일차 생성물로 존재하는 않는다. 통상적으로 대규모 제조에 사용된, 표준 크로마토그래피 기술을 사용한 단백질의 불활성 및 부분적으로 활성인 형태로부터의 단백질의 완전한 활성형은 아직 입증되지 않고 있다.
놀랍게도, 본 발명의 "이중-특이적인 다가의 완전한 길이의 결합 단백질"은 바람직한 "이중-특이적인 다가의 완전한 길이의 결합 단백질"에 주로 조립되는 이중 가변 도메인 경쇄 및 이중 가변 도메인 중쇄를 생성한다.
조립되고, 발현된 DVD-Ig 분자의 적어도 50%, 적어도 75%, 및 적어도 90%는 바람직한 이중-특이적인 4가 단백질이다. 본 발명의 당해 국면은 특히 본 발명의 상업적인 유용성을 향상시킨다. 따라서, 본 발명은 "이중-특이적인 4가의 완전한 길이의 결합 단백질"의 단일의 일차 생성물을 초래하는 단일 세포내 이중 가변 도메인 경쇄 및 이중 가변 도메인 중쇄를 포함한다.
본 발명은 "이중-특이적인, 4가의, 완전한 길이의 결합 단백질"을 초래하는 단일 세포내에서 이중 가변 도메인 경쇄 및 이중 가변 도메인 중쇄를 발현시키는 방법을 제공하며, 여기서 "일차 생성물"은 이중 가변 도메인 경쇄 및 이중 가변 도메인 중쇄를 포함하는, 모든 조립된 단백질의 50% 이상이다.
본 발명은 "이중-특이적인, 4가의, 완전한 길이의 결합 단백질"의 단일의 "일차 생성물"을 초래하는 단일 세포내에서 이중 가변 도메인 경쇄 및 이중 가변 도메인 중쇄를 발현시키는 방법을 제공하며, 여기서 "일차 생성물"은 이중 가변 도메인 경쇄 및 이중 가변 도메인 중쇄를 포함하는, 모든 조립된 단백질의 75% 이상이다.
본 발명은 "이중-특이적인 4가의 완전한 길이의 결합 단백질"의 단일의 "일차 생성물"을 초래하는 단일 세포내에서 이중 가변 도메인 경쇄 및 이중 가변 도메인 중쇄를 발현시키는 방법을 제공하며, 여기서 "일차 생성물"은 이중 가변 도메인 경쇄 및 이중 가변 도메인 중쇄를 포함하는, 모든 조립된 단백질의 90% 이상이다.
6. IL-1β 결합 단백질 및 결합 단백질-생산 세포주의 생산
바람직하게는, 본 발명의 항-IL-1β 항체를 포함하는, IL-1β 결합 단백질은 예를 들면, 당해 분야에 공지된 수개의 시험관내 및 생체내 검사 중 어느 하나에 의해 평가된 것으로서, IL-1β 활성을 감소시키거나 중화시키는 고 능력을 나타낸다. 바람직하게는, 본 발명의 IL-1β 결합 단백질은 또한 IL-1β 활성을 감소시키거나 중화시키는 고 능력을 나타낸다.
바람직한 양태에서, 결합 단백질, 또는 이의 항원-결합 부분은 사람 IL-1β에 결합하며, 여기서 결합 단백질, 또는 이의 항원-결합 부분은 표면 플라스몬 공명에 의해 측정된 것으로서, 사람 IL-1β로부터 약 0.1s-1 이하의 koff 속도 상수를 나타내거나, 사람 IL-1β 활성을 약 1 x 10-6M 이하의 IC50로 억제한다. 대안적으로, 결합 단백질, 또는 이의 항원-결합 부분은 표면 플라스몬 공명에 의해 측정된 것으로서, 사람 IL-1β로부터 약 1 x 10-2s-1 이하의 koff 속도 상수를 나타내거나, 사람 IL-1β 활성을 약 1 x 10-7M 이하의 IC50로 억제할 수 있다. 대안적으로, 결합 단백질, 또는 이의 항원-결합 부분은 표면 플라스몬 공명에 의해 측정된 것으로서, 사람 IL-1β로부터 약 1 x 10-3s-1 이하의 koff 속도 상수를 나타내거나, 사람 IL-1β 활성을 약 1 x 10-8M 이하의 IC50로 억제할 수 있다. 대안적으로, 결합 단백질, 또는 이의 항원-결합 부분은 표면 플라스몬 공명에 의해 측정된 것으로서, 사람 IL-1β로부터 약 1 x 10-4s-1 이하의 koff 속도 상수를 나타내거나, 사람 IL-1β 활성을 약 1 x 10-9M 이하의 IC50로 억제할 수 있다. 대안적으로, 결합 단백질, 또는 이의 항원-결합 부분은 표면 플라스몬 공명에 의해 측정된 것으로서, 사람 IL-1β로부터 약 1 x 10-5s-1 이하의 koff 속도 상수를 나타내거나, 사람 IL IL-1β 활성을 약 1 x 10-10M 이하의 IC50로 억제할 수 있다. 대안적으로, 결합 단백질, 또는 이의 항원-결합 부분은 표면 플라스몬 공명에 의해 측정된 것으로서, 사람 IL-1β로부터 약 1 x 10-5s-1 이하의 koff 속도 상수를 나타내거나, 사람 IL-1β 활성을 약 1 x 10-11M 이하의 IC50로 억제할 수 있다.
특정 양태에서, 결합 단백질은 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA, IgE, IgM 또는 IgD 불변 영역과 같은 중쇄 불변 영역을 포함한다. 바람직하게는, 중쇄 불변 영역은 IgG1 중쇄 불변 영역 또는 IgG4 중쇄 불변 영역이다. 또한, 항체는 카파 경쇄 불변 영역 또는 람다 경쇄 불변 영역으로서, 경쇄 불변 영역을 포함할 수 있다. 바람직하게는, 항체는 카파 경쇄 불변 영역을 포함한다. 대안적으로, 항체 부위는 예를 들면, Fab 단편 또는 일본쇄 Fv 단편일 수 있다.
항체 효과기 기능을 변경시키기 위한 Fc 부위에서 아미노산 잔기의 교체는 당해 분야에 공지되어 있다(참조: Winter et al., 미국 특허 공보 제5,648,260호 및 제5,624,821호). 항체의 Fc 부위는 몇가지 중요한 효과기 기능, 예를 들면, 사이토킨 유도, ADCC, 포식작용, 상보체 의존성 세포독성(CDC) 및, 항체 및 항원-항체 복합체의 반감기/제거 속도를 매개한다. 일부 경우에 이들 효과기 기능은 치료용 항체에 바람직하지만 다른 경우에 치료학적 목적에 따라, 필수적이지 않거나 심지어 유해할 수 있다. 특정의 사람 IgG 동형, 특히 IgG1 및 IgG3은, FcγR 및 상보체 C1q 각각에 대한 결합을 통해 ADCC 및 CDC를 매개한다. 신생 Fc 수용체(FcRn)는 항체의 순환하는 반감기를 측정하는 중요 성분이다. 여전히 다른 양태에서, 적어도 하나의 아미노산 잔기가 항체의 불변 영역내에서 예를 들면, 항체의 Fc 영역으로 교체되어, 항체의 효과기 기능이 변경되도록 한다.
하나의 양태는 표지된 결합 단백질을 제공하며, 여기서 본 발명의 항체 또는 항체 부위는 다른 기능성 분자(예를 들면, 다른 펩타이드 또는 단백질)로 유도체화되거나 연결된다. 예를 들면, 본 발명의 표지된 결합 단백질은 본 발명의 항체 또는 항체 부위를(화학적 커플링, 유전적 융합, 비공유결합성 연합 또는 기타에 의해) 다른 항체(예를 들면, 이특이적인 항체 또는 디아바디), 검출가능한 제제, 세포독성제, 약제학적 제제, 및/또는 항체 또는 항체 부위와 다른 분자(예를 들면, 스트렙타비딘 코어 영역 또는 폴리히스티딘 태그의 연합을 매개할 수 있는 단백질 또는 펩타이드)에 기능적으로 연결시켜 유도체화할 수 있다.
본 발명의 항체 또는 항체 부위와 같은, 결합 단백질이 유도체화될 수 있는 유용한 검출가능한 제제는 형광성 화합물을 포함한다. 예시적인 형광성 검출가능한 제제는 플루오레세인, 플루오레세신 이소티오시아네이트, 로다민, 5-디메틸아민-1-나프탈렌설포닐 클로라이드, 피코에리트린 등을 포함한다. 항체는 또한 알칼린 포스파타제, 서양고추냉이 퍼옥시다제, 글루코즈 옥시다제 등과 같은 검출가능한 효소로 유도체화될 수 있다. 항체를 검출가능한 효소로 유도체화하는 경우, 이는 검출가능한 반응 생성물을 생산하는데 효소가 사용하는 추가의 제제를 가함으로써 검출된다. 예를 들면, 검출가능한 제제인 서양고추냉이 퍼옥시다제가 존재하는 경우, 과산화수소 및 디아미노벤지딘의 첨가는 착색된 반응 생성물을 생성하며, 이는 검출가능하다. 항체는 또한 바이오틴으로 유도체화시킬 수 있으며, 아비딘 또는 스트렙타비딘 결합의 간접적인 측정을 통해 검출된다.
본 발명의 다른 양태는 결정화된 결합 단백질을 제공한다. 바람직하게는 본 발명은 본원에 기술된 바와 같은 전체 항-IL-1β 항체 및 이의 단편의 결정, 및 이러한 결정을 포함하는 제형 및 조성물에 관한 것이다. 하나의 양태에서, 결정화된 결합 단백질은 결합 단백질의 가용성 대응물보다 생체내 반감기가 더 크다. 다른 양태에서, 결합 단백질은 결정화 후 생물학적 활성을 유지한다.
본 발명의 결정화된 결합 단백질은 본원에 참조로 인용된, PCT 공보 제WO　02/072636호에 기재되고 당해 분야에 공지된 방법에 따라 생산될 수 있다.
본 발명의 다른 양태는, 항체 또는 이의 항원-결합 부분이 하나 이상의 탄수화물 잔기를 포함하는 글리코실화된 결합 단백질을 제공한다. 초기의 생체내 단백질 생산은 해독 후 변형으로 알려진, 추가의 프로세싱을 겪을 수 있다. 특히, 당(글리코실) 잔기는 글리코실화로 공지된 공정인, 효소적으로 첨가될 수 있다. 공유결합으로 연결된 폴리사카라이드 측쇄를 갖는 수득되는 단백질은 글리코실화된 단백질 또는 당단백질로 공지되어 있다.
천연적으로 존재하는 항체는 Fc 도메인, 및 또한 가변 도메인내에 하나 이상의 탄수화물 잔기를 지닌 당단백질이다. Fc 도메인내 탄수화물 잔기는 Fc 도메인의 효과기 기능에 있어서 중요한 효과와, 항체의 항원 결합 또는 반감기에 있어 최소의 효과를 갖는다[참조: Jefferis, R., Biotechnol. Prog., 21: 11-16 (2005)]. 대조적으로, 가변도메인의 글리코실화는 항체의 항원 결합 활성에서 효과를 가질 수 있다. 가변 도메인에서 글리코실화는 입체 장애로 인하여, 항체 결합 친화성에 있어 부정적인 효과를 가질 수 있거나[참조: Co et al., Mol. Immunol., 30: 1361-1367 (1993), 또는 항원에 대한 증가된 친화성을 생성할 수 있다[참조: Wallick et al., J.　Exp. Med., 168:1099-1109 (1988); Wright et al., EMBO　J., 10: 2717-2723 (1991)].
본 발명의 하나의 국면은, 결합 단백질의 O- 또는 N-연결된 글리코실화 부위가 돌연변이된 글리코실화 부위 돌연변이체를 생성하는 것에 관한 것이다. 당해 분야의 숙련가는 표준의 잘-공지된 기술을 사용하여 이러한 돌연변이체를 생성할 수 있다. 생물학적 활성을 유지하지만 증가되거나 감소된 결합 활성을 갖는 글리코실화 부위 돌연변이체는 본 발명의 다른 목적이다.
여전히 다른 양태에서, 본 발명의 항체 또는 항원-결합 부분의 글리코실화는 변형된다. 예를 들면, 어글리코실화된 항체(aglycoslated antibody)가 제조될 수 있다(즉, 항체는 글리코실화를 결여하고 있다). 글리코실화는 예를 들면, 항원에 대한 항체의 친화성을 증가시키도록 변형시킬 수 있다. 이러한 탄수화물 변형은 예를 들면, 항체 서열내 글리코실화의 하나 이상의 부위를 변경시킴으로써 달성할 수 있다. 예를 들면, 하나 이상의 가변 영역 글리코실화 부위를 제거하여 이러한 부위에서 글리코실화를 제거하는 하나 이상의 아미노산 치환을 이룰 수 있다. 이러한 어글리코실화는 항원에 대한 항체의 친화성을 증가시킬 수 있다. 이러한 시도는 PCT 공보 제WO　2003/016466호, 및 미국 특허 공보 제5,714,350호 및 제6,350,861호에 추가로 상세히 기술되어 있다.
추가로 또는 대안으로, 푸코실 잔기의 양이 감소된 하이포푸코실화된 항체[참조: Kanda et al., J.　Biotechnol., 130(3): 300-310 (2007)] 또는 이등분된 GlcNAc 구조가 증가된 항체와 같은 본 발명의 변형된 결합 단백질을 제조할 수 있다. 이러한 변경된 글리코실화 양식은 항체의 ADCC 능력을 증가시키는 것으로 입증되어 왔다. 이러한 탄수화물 변형은 예를 들면, 항체를 변경된 글리코실화 기구(machinery)를 가진 숙주 세포내에서 발현시킴으로써 달성할 수 있다. 변경된 글리코실화 기구를 가진 세포는 당해 분야에 기술되어 있으며 본 발명의 재조합체 항체를 발현함으로써 변경된 글리코실화를 갖는 항체를 생산하는 숙주 세포로서 사용될 수 있다[참조: 예를 들면, Shields et al., J.　Biol. Chem., 277: 26733-26740 (2002); Umana et al., "Engineered glycoforms of an antineuroblastoma IgG1 with optimized antibody-dependent cellular cytotoxic activity," Nat. Biotechnol., 17: 176-180 (1999), 및 또한 유럽 공보 제EP　1　176　195호; PCT 공보 제WO　03/035835호 및 제WO　99/54342호].
단백질 글리코실화는 목적한 단백질의 아미노산 서열, 및 또한 단백질이 발현되는 숙주 세포에 의존한다. 상이한 유기체는 상이한 글리코실화 효소(예를 들면, 글리코실트랜스퍼라제 및 글리코시다제)를 생산할 수 있으며 이용가능한 상이한 기질(뉴클레오타이드 당)을 가진다. 이러한 인자로 인하여, 단백질 글리코실화 양식, 및 글리코실화 잔기의 조성은, 특수 단백질이 발현되는 숙주 시스템에 따라 상이할 수 있다. 본 발명에 유용한 글리코실 잔기는 글루코즈, 갈락토즈, 만노즈, 푸럭토즈, n-아세틸글루코사민 및 시알산을 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 바람직하게는, 글리코실화된 결합 단백질은 글리코실 잔기를 포함함으로써 글리코실화 패턴이 사람이 되도록 한다.
단백질 글리코실화의 차별화가 상이한 단백질 특성을 생성할 수 있음은 당해 분야의 숙련가에게 공지되어 있다. 예를 들면, 효모와 같은 미생물 숙주내에서 생산되고, 효모 내인성 경로를 이용하여 글리코실화된 치료학적 단백질의 효능은 CHO 세포주와 같은 포유동물 세포내에서 발현된 동일한 단백질의 효능과 비교하여 감소될 수 있다. 이러한 당단백질은 또한 사람에서 면역원성일 수 있으며 투여 후 생체내에서 감소된 반감기를 나타낼 수 있다. 사람 및 다른 동물에서 특이적인 수용체는 특이적인 글리코실 잔기를 인지할 수 있으며 혈류로부터 단백질의 신속한 정화를 촉진할 수 있다. 다른 부작용은 단백질 폴딩, 가용성, 프로테아제에 대한 민감성, 트래피킹(trafficking), 수송, 구획화(compartmentalization), 분비, 다른 단백질 또는 인자에 의한 인지, 항원성, 또는 알레르기항원성에 있어서의 변화를 포함할 수 있다. 따라서, 전문가는 특수 조성 및 글리코실화 양식, 예를 들면, 글리코실화 조성 및 사람 세포, 또는 의도된 대상체 동물의 종-특이적인 세포에서 생산된 것과 동일하거나 적어도 유사한 양식을 지닌 치료학적 단백질을 선호한다.
숙주 세포의 것과 상이한 글리코실화된 단백질의 발현은 숙주 세포를 유전적으로 변형시켜 이종 글리코실화 효소를 발현시킴으로써 달성할 수 있다. 당해 분야에 공지된 기술을 사용하여 전문가는 사람 단백질 글리코실화를 나타내는 항체 또는 이의 항원-결합 부분을 생성할 수 있다. 예를 들면, 효모 균주를 유전적으로 변형시켜 천연적으로 발생하지 않는 글리코실화 효소를 발현시킴에 의해 이들 효모 균주에서 생산된 글리코실화된 단백질(당단백질)이 동물 세포, 특히 사람 세포의 것과 동일한 단백질 글리코실화를 나타내도록 한다(참조: 미국 공보 제2004/0018590호 및 제2002/0137134호).
본 발명의 결합 단백질 외에도, 본 발명은 또한 본 발명의 이러한 결합 단백질에 대해 특이적인 항-동형(항-Id) 항체에 관한 것이다. 항-Id 항체는, 다른 항체의 항원-결합 영역과 유전적으로 연합된 유일한 결정인자를 인지하는 항체이다. 항-Id는 동물을 결합 단백질 또는 이의 CDR 함유 영역으로 면역화시켜 제조할 수 있다. 면역화된 동물은 면역화 항체의 동형 결정인자를 인지하여 반응할 것이며 항-Id 항체를 생산할 것이다. DVD-Ig 분자내로 혼입된 2개 이상의 모 항체에 대한 항-동형 항체를 생산하고; 당해 분야에 잘 인지된 방법(예를 들면, BIAcore, ELISA)에 의해 각각의 모 항체의 동형에 대해 특이적인 항-동형 항체가 또한 DVD-Ig와 관련하여 동형(예를 들면, 항원 결합 부위)를 인지하는지를 입증하는 것이 보다 용이해질 수 있음은 용이하게 드러난다. DVD-Ig의 2개 이상의 항원 결합 부위 각각에 대해 특이적인 항-동형 항체는 환자 혈청내 사람 DVD-Ig의 DVD-Ig 농도를 측정하기 위한 이상적인 시약을 제공한다. 예를 들면, DVD-Ig 농도 검사는 고체 상(예를 들면, BIAcore 칩, ELISA 플레이트 등) 위에 피복되고, 세정 완충액으로 세정되며, 혈청 시료와 함께 항온처리, 다른 세정 단계, 및 결합 반응의 정량화를 위해 효소로 자체 표지된, 궁극적으로 다른 항원 결합 부위에 대한 다른 항-동형 항체와 항온처리된 제1의 항원 결합 영역에 대한 항체로 "샌드위치 검사 ELISA 양식"을 사용하여 설정할 수 있다. 하나의 양태에서, 2개 이상의 상이한 결합 부위를 갖는 DVD-Ig의 경우, 2개의 최외각 결합 부위(불변 영역으로부터 가장 근접한 및 가장 먼 부위)를 갖는 항-동형 항체는 사람 혈청에서 DVD-Ig 농도를 측정하는데 도움을 줄 뿐 아니라 생체내애서 분자의 통합성을 기록하기도 할 것이다. 각각의 항-Id 항체는 또한 "면역원"으로 사용되어 여전히 다른 동물에서 면역 반응을 유발하여, 소위 항-항-Id 항체를 생산할 수 있다.
또한, 목적한 단백질이 각종 글리코실화 효소를 발현하도록 가공됨으로써 라이브러리의 구성원 숙주 세포가 변이체 글리코실화 양식을 갖는 목적한 단백질을 생산하도록 하는 숙주 세포의 라이브러리를 사용하여 발현시킬 수 있음은 당해 분야의 숙련가에게 인식될 것이다. 숙련가는 이후에 특수한 신규 글리코실화 양식을 갖는 목적한 단백질을 선택하고 분리할 수 있다. 바람직하게는, 특별히 선택된 신규 글리코실화 양식을 갖는 단백질은 개선되거나 변경된 생물학적 특성을 나타낸다.
7. IL-1β 결합 단백질의 용도
사람 IL-1β에 결합하기 위한 이들의 능력이 주어지면, 본 발명의 IL-1β결합 단백질, 또는 이의 항원 결합 부분을 사용하여 효소 연결된 면역흡착 검사(ELISA), 방사선면역검사(RIA) 또는 조직 면역조직화학과 같은 통상의 면역검사를 사용하여, IL-1β(예를 들면, 혈청 또는 혈장과 같은 생물학적 시료 속에서)를 검출할 수 있다. 본 발명은 생물학적 시료를 본 발명의 결합 단백질, 또는 항원 결합 부분과 접촉시키고 IL-1β에 결합되거나 결합되지 않은 결합 단백질(또는 항원 결합 부위)를 검출함으로써 생물학적 시료 속에서 IL-1β를 검출함을 포함하여, 생물학적 시료 속에서 IL-1β를 검출하는 방법을 제공한다. 결합 단백질은 검출가능한 물질로 직접 또는 간접적으로 표지됨으로써 결합되거나 결합되지 않은 항체의 검출을 촉진한다. 적합한 검출가능한 물질은 각종 효소, 보조 그룹, 형광성 물질, 발광성 물질 및 방사활성 물질을 포함한다. 적합한 효소의 예는 서양고추냉이 퍼옥시다제, 알칼린 포스파타제, β-갈락토시다제, 또는 아세틸콜린에스테라제를 포함하며; 적합한 보조 그룹 복합체의 예는 스트렙타비딘/바이오틴 및 아비딘/바이오틴을 포함하고; 적합한 형광성 물질의 예는 움벨리페론, 플루오레세인, 플루오레세인 이소티오시아네이트, 로다민, 디클로로트리아지닐아민 플루오레세인, 단실 클로라이드 또는 피코에리트린을 포함하며; 발광성 물질의 예는 루미놀을 포함하고; 적합한 방사활성 물질의 예는 3H, 14C, 35S, 90Y, 99Tc, 111In, 125I, 131I, 177Lu, 166Ho, 또는 153Sm을 포함한다.
결합 단백질을 표지하는 것에 대한 대안으로, 사람 IL-1β는 생물학적 유액 속에서 검출가능한 물질 및 표지되지 않은 사람 IL-1β 결합 단백질로 표지된 rh IL-1β 표준물을 이용하는 경쟁 면역검사에 의해 검사할 수 있다. 당해 검사에서, 생물학적 시료, 표지된 rh IL-1β 표준물, 및 사람 IL-1β 결합 단백질을 합하여 표지되지 않은 항체에 결합된 표지된 rh IL-1β 표준물의 양을 측정한다. 생물학적 시료중의 사람 IL-1β의 양은 IL-1β 결합 단백질에 결합된 표지된 IL-1β 표준물의 양에 역으로 비례한다. 유사하게, 사람 IL-1β는 또한 생물학적 유액 속에서 검출가능한 물질로 표지된 rh IL-1β 표준물 및 표지되지 않은 사람 IL-1β 결합 단백질을 이용하는 경쟁 면역검사에서 검사할 수 있다.
본 발명의 결합 단백질 및 IL-1β 결합 부위는 시험관내 및 생체내 둘다에서 사람 IL-1β 활성을 중화시킬 수 있다. 따라서, 본 발명의 이러한 결합 단백질 및 이의 IL-1β 결합 부위를 사용하여, 예를 들면, 사람 IL-1β를 함유하는 세포 배양물, 사람 대상체, 또는 본 발명의 항체가 교차-반응하는 IL-1β를 갖는 다른 포유동물 대상체에서, 사람 IL-1β 활성을 억제할 수 있다. 하나의 양태에서, 본 발명은 사람 IL-1β를 본 발명의 IL-1β 결합 단백질 또는 이의 결합 부위와 접촉시켜 사람 IL-1β 활성이 억제되도록 함을 포함하여 사람 IL-1β 활성을 억제하는 방법을 제공한다. 예를 들면, 사람 IL-1β를 함유하거나, 함유하는 것으로 추측되는 세포 배양물에서, 본 발명의 IL-1β 결합 단백질 또는 이의 결합 부위를 배양 배지에 가하여 배양물에서 사람 IL-1β 활성을 억제할 수 있다.
다른 양태에서, 본 발명은 대상체, 유리하게는, IL-1β 활성이 유해한 질환 또는 장애로 고생하는 대상체로부터 사람 IL-1β 활성을 감소시키는 방법을 제공한다. 본 발명은 이러한 질환 또는 장애로 고생하는 대상체에서 사람 IL-1β 활성을 감소시키는 방법을 제공하며, 당해 방법은 상기 대상체에게 본 발명의 항체 또는 항체 부위를 투여함으로써 대상체에서 IL-1β 활성이 감소되도록 함을 포함한다. 바람직하게는 IL-1β는 사람 IL-1β이고 대상체는 사람 대상체이다. 대안적으로, 대상체는, 본 발명의 항체가 결합할 수 있는 IL-1β를 발현하는 포유동물일 수 있다. 여전히 또한, 대상체는, IL-1β가 도입된(예를 들면, IL-1β의 투여 또는 IL-1β 삽입유전자의 발현에 의해) 포유동물이다. 본 발명의 IL-1β 결합 단백질은 치료 목적으로 사람 대상체에게 투여될 수 있다. 또한, 본 발명의 결합 단백질은, 항체가 수의학적 목적을 위해 또는 사람 질환의 동물 모델로서 결합할 수 있는 IL-1β를 발현하는 비-사람 포유동물에 투여될 수 있다. 후자와 관련하여, 이러한 동물 모델은 본 발명의 항체의 치료학적 효능을 평가(예를 들면, 용량 및 투여의 기간을 시험)하는데 유용할 수 있다.
본원에 사용된 바와 같은, "IL-1β 활성이 유해한 장애"는, 장애로 고생하는 대상체에서 IL-1β의 존재가 장애의 병태생리학 또는 장애를 악화시키는데 기여하는 인자에 관여하는 것으로 입증되거나 추측되는 질환 및 다른 장애를 포함하는 것으로 의도된다. 따라서, IL-1β 활성이 유해한 장애는, IL-1β활성의 감소가 장애의 증상 및/또는 진행을 완화시키는 것으로 예측되는 장애이다. 이러한 장애는 예를 들면, 위에서 기술한 항-IL-1β 항체를 사용하여 검출될 수 있는, 장애로 고생하는 대상체의 생물학적 유액에서 예를 들면, IL-1β의 농도에 있어서의 증가(예를 들면, 대상체의 혈청, 혈장, 활액 등의 농도의 증가)에 의해 입증될 수 있다. 본 발명의 항체로 치료될 수 있는 장애의 비-제한적 예는 본 발명의 항체의 약제학적 조성물에 대하여 하기 단락에서 논의한 장애를 포함한다.
본 발명의 DVD-Ig는 IL-1β 단독 또는 다수의 항원(예를 들면, 사람 IL-1β 및 다른 비-IL-1β 항원)에 결합할 수 있다. 따라서, DVD-Ig는 다른 표적 항원의 활성 및 hu IL-1β의 활성을 차단시키거나 감소시킬 수 있다. 이러한 다른 표적 항원은 가용성 표적(예를 들면, IL-1α) 및 세포 표면 수용체 표적(예를 들면, VEGFR, EGFR)을 포함할 수 있다.
이러한 다른 항원은 공공 이용가능한 데이타베이스에 나열된 표적을 포함하나, 이에 한정되지 않으며, 이러한 데이타베이스는 worldwide web 상에서 이용가능하고 본원에 참조로 인용된 것들을 포함한다. 이들 표적 데이타베이스는 다음을 포함한다:
치료학적 표적(http://xin.cz3.nus.edu.sg/group/cjttd/ttd.asp);
사이토킨 및 사이토킨 수용체(http://www.cytokinewebfacts.com/, http://www.copewithcytokines.de/cope.cgi, 및
http://cmbi.bjmu.edu.cn/cmbidata/cgf/CGF_Database/cytokine.medic.kumamoto-u.ac.jp/CFC/indexR.html);
케모킨(http://cytokine.medic.kumamoto-u.ac.jp/CFC/CK/Chemokine.html);
Chemokine receptors 및 GPCR (http://csp.medic.kumamoto-u.ac.jp/CSP/receptor.html, http://www.gpcr.org/7tm/);
후각 수용체(http://senselab.med.yale.edu/senselab/ORDB/default.asp);
수용체(http://www.iuphar-db.org/iuphar-rd/list/index.htm);
암 표적(http://cged.hgc.jp/cgi-bin/input.cgi);
잠재적인 항체 표적으로서 분비된 단백질(http://spd.cbi.pku.edu.cn/);
단백질 키나제(http://spd.cbi.pku.edu.cn/), 및
사람 CD마커(http://content.labvelocity.com/tools/6/1226/CD_table_final_locked.pdf) 및 (Zola et al., "CD molecules 2005: human cell differentiation molecules," Blood, 106: 3123-3126 (2005)].
DVD-Ig는 2개 이상의 상이한 표적, 예를 들면, 사람 IL-1β 및 하나 이상의 다른 비-IL-1β 표적 항원을 동시 차단함으로써 효능/안정성을 향상시키고/시키거나 환자 차폐율(patient coverage)을 증가시키는 치료제로서 유용한다. 이러한 표적은 가용성 표적(TNF) 및 세포 표면 수용체 표적(VEGFR 및 EGFR)을 포함할 수 있다.
또한, 본 발명의 DVD-Ig는 세포내 전달(내재화 수용체 및 세포내 분자의 표적화), 뇌 내부로 전달(트랜스페린 수용체 및, 혈액-뇌 장벽을 통과하기 위한 CNS 질환 매개인자를 표적화)을 포함하는 조직-특이적 전달(국소 PK를 향상시키기 위해 조직 마커 및 질환 매개인자를 표적화하여 더 높은 효능 및/또는 더 낮은 독성을 나타냄)을 사용할 수 있다. DVD-Ig는 또한 담체 단백질로서 제공되어 이러한 항원의 비-중화 에피토프에 대한 및 또한 항원의 반감기를 증가시키기 위한 결합을 통해 특이적 위치에 항원을 전달할 수 있다. 또한, DVD-Ig는 환자내로 이식된 의학 장치에 물리적으로 연결되거나 이들 의학 장치를 표적화하도록 설계할 수 있다[참조: Burke et al., "Zotarolimus eluting stents," Adv. Drug Deliv. Rev., 58(3): 437-446 (2006); Hildebrand et al., "Surface coatings for biological activation and functionalization of medical devices," Surface and Coatings Technology, 200(22-23): 6318-6324 (2006); Wu et al., "Drug/device combinations for local drug therapies and infection prophylaxis," Biomaterials, 27: 2450-2467 (2006); Marques et al., "Mediation of the Cytokine Network in the Implantation of Orthopedic Devices," Chapter 21, In Biodegradable Systems in Tissue Engineering and Regenerative Medicine, (Reis et al., eds.) (CRC Press LLC, Boca Raton, 2005) pp. 377-397]. 요약하면, 적절한 유형의 세포를 의학 이식체의 부위로 향하도록 하는 것은 정상 조직 기능의 치유 및 회복을 촉진할 수 있다. 대안적으로, 장치에 커플링되거나 표적화된 DVD-Ig에 의한 장치 이식시 방출된 매개인자(사이토킨을 포함하나 이에 한정되지 않음)의 억제가 또한 제공된다. 예를 들면, 스텐트(stent)를 중재 심장학(interventional cardiology)에서 수년동안 사용하여 차단된 동맥을 청소하고 심근으로 혈류를 개선시켜 왔다. 그러나, 전통적인 드러난 금속 스텐트는 일부 환자에서 재협착(치료된 부위에서 동맥의 재-협소화)를 유발하여 혈액 응괴를 초래할 수 있는 것으로 알려져 왔다. 최근에, 재협착을 감소시키고 혈액 전체를 순환하는 내피 후대세포(EPC)를 포획함에 의한 발생으로부터 혈액 응괴를 방지하는 항-CD34 항체 피복된 스텐트가 기술되어 왔다. 내피 세포는 혈관을 라이닝(lining)하여, 혈액이 부드럽게 흐르도록 하는 세포이다. EPC는 치유를 촉진할 뿐 아니라 스텐트의 사용과 앞서 관련된 합병증[참조: Aoki et al., J.　Am. Coll. Cardiol., 45(10): 1574-1579 (2005)]인 협착 및 혈액 응괴를 방지하는 부드러운 층을 형성하는 스텐트의 경질 표면에 부착한다. 스텐트가 요구되는 환자의 대한 결과를 개선시키는 것 외에도, 심혈관 우회로수술(cardiovascular bypass surgery)를 필요로 하는 환자에 대한 합병증이 또한 존재한다. 예를 들면, 항-EPC 항체로 피복된 보철 혈관 도관(인공 동맥)은 우회로 수술 이식을 위해 환자 다리 또는 팔로부터의 동맥을 사용할 필요성을 제거할 수 있다. 이는 수술 및 마취 횟수를 감소시킬 수 있으며, 결국 관상 수술 사망을 감소시킬 것이다. DVD-Ig는, 이것이 이식된 장치상에 피복되어 세포 공급을 촉진시키는 세포 표면 마커(예를 들면, CD34) 및 또한 단백질(또는 단백질, 지질 및 다당류를 포함하나 이에 한정되지 않는, 어떠한 종류의 에피토프)에 결합하는 방식으로 설계된다. 이러한 시도는 또한 일반적으로 다른 의학적 이식체에도 적용될 수 있다. 대안적으로, DVD-Ig는 의학 장치상에 피복되어 이식시 및 장치로부터 모든 DVD의 방출(또는 이미 로딩된 DVD-Ig의 노화 및 변성을 포함하는, 추가의 새로운 DVD-Ig를 요구할 수 있는 다른 어떠한 필요성)시, 장치를 새로운 DVD-Ig를 환자에게 전신계 투여하여 재로딩(reloading)할 수 있으며, 여기서, DVD-Ig는 결합 부위의 하나의 세트를 지닌 목적한 표적(사이토킨, 세포 표면 마커(예를 들면, CD34) 등) 및 다른 것을 지닌 장치 상에 피복된 표적(지질, 다당류 및 중합체를 포함하나, 이에 한정되지 않는 단백질, 어떠한 유형의 에피토프 포함)에 결합하도록 설계된다. 이러한 기술은 피복된 이식체의 유용성을 확장시키는 이점을 갖는다.
A. 각종 질환에서 DVD-Ig의 용도
본 발명의 DVD-Ig 분자는 각종 질환을 치료하기 위한 치료학적 분자로서 유용하다. 이러한 DVD 분자는 특수 질환에 관여된 하나 이상의 표적에 결합할 수 있다. 각종 질환에서 이러한 표적의 예는 하기 기술되어 있다.
사람 자가면역 및 염증성 반응
하나의 국면에서, 본 발명의 DVD-Ig 결합 단백질은 일반적인 자가면역 및 염증 반응에 관여하는 결합 사람 IL-1β 및 하나 이상의 항원에 결합할 수 있으며, 다음을 포함한다: C5, CCL1 (I-309), CCL11(에오탁신), CCL13 (mcp-4), CCL15 (MIP-1d), CCL16 (HCC-4), CCL17 (TARC), CCL18 (PARC), CCL19, CCL2 (mcp-1), CCL20 (MIP-3a), CCL21 (MIP-2), CCL23 (MPIF-1), CCL24 (MPIF-2/에오탁신-2), CCL25 (TECK), CCL26, CCL3 (MIP-1a), CCL4 (MIP-1b), CCL5 (RANTES), CCL7 (mcp-3), CCL8 (mcp-2), CXCL1, CXCL10 (IP-10), CXCL11 (I-TAC / IP-9), CXCL12 (SDF1), CXCL13, CXCL14, CXCL2, CXCL3, CXCL5 (ENA-78 / LIX), CXCL6 (GCP-2), CXCL9, IL13, IL8, CCL13 (mcp-4), CCR1, CCR2, CCR3, CCR4, CCR5, CCR6, CCR7, CCR8, CCR9, CX3CR1, IL8RA, XCR1 (CCXCR1), IFNA2, IL10, IL13, IL17C, IL1A, IL1B, IL1F10, IL1F5, IL1F6, IL1F7, IL1F8, IL1F9, IL22, IL5, IL8, IL9, LTA, LTB, MIF, SCYE1 (내피 단핵세포-활성화 사이토킨), SPP1, TNF, TNFSF5, IFNA2, IL10RA, IL10RB, IL13, IL13RA1, IL5RA, IL9, IL9R, ABCF1, BCL6, C3, C4A, CEBPB, CRP, ICEBERG, IL1R1, IL1RN, IL8RB, LTB4R, TOLLIP, FADD, IRAK1, IRAK2, MYD88, NCK2, TNFAIP3, TRADD, TRAF1, TRAF2, TRAF3, TRAF4, TRAF5, TRAF6, ACVR1, ACVR1B, ACVR2, ACVR2B, ACVRL1, CD28, CD3E, CD3G, CD3Z, CD69, CD80, CD86, CNR1, CTLA4, CYSLTR1, FCER1A, FCER2, FCGR3A, GPR44, HAVCR2, OPRD1, P2RX7, TLR2, TLR3, TLR4, TLR5, TLR6, TLR7, TLR8, TLR9, TLR10, BLR1, CCL1, CCL2, CCL3, CCL4, CCL5, CCL7, CCL8, CCL11, CCL13, CCL15, CCL16, CCL17, CCL18, CCL19, CCL20, CCL21, CCL22, CCL23, CCL24, CCL25, CCR1, CCR2, CCR3, CCR4, CCR5, CCR6, CCR7, CCR8, CCR9, CX3CL1, CX3CR1, CXCL1, CXCL2, CXCL3, CXCL5, CXCL6, CXCL10, CXCL11, CXCL12, CXCL13, CXCR4, GPR2, SCYE1, SDF2, XCL1, XCL2, XCR1, AMH, AMHR2, BMPR1A, BMPR1B, BMPR2, C19orf10 (IL27w), CER1, CSF1, CSF2, CSF3, DKFZp451J0118, FGF2, GFI1, IFNA1, IFNB1, IFNG, IGF1, IL1A, IL1B, IL1R1, IL1R2, IL2, IL2RA, IL2RB, IL2RG, IL3, IL4, IL4R, IL5, IL5RA, IL6, IL6R, IL6ST, IL7, IL8, IL8RA, IL8RB, IL9, IL9R, IL10, IL10RA, IL10RB, IL11, IL11RA, IL12A, IL12B, IL12RB1, IL12RB2, IL13, IL13RA1, IL13RA2, IL15, IL15RA, IL16, IL17, IL17R, IL18, IL18R1, IL19, IL20, KITLG, LEP, LTA, LTB, LTB4R, LTB4R2, LTBR, MIF, NPPB, PDGFB, TBX21, TDGF1, TGFA, TGFB1, TGFB1I1, TGFB2, TGFB3, TGFBI, TGFBR1, TGFBR2, TGFBR3, TH1L, TNF, TNFRSF1A, TNFRSF1B, TNFRSF7, TNFRSF8, TNFRSF9, TNFRSF11A, TNFRSF21, TNFSF4, TNFSF5, TNFSF6, TNFSF11, VEGF, ZFPM2, 및 RNF110 (ZNF144).
천식
알레르기성 천식은 호산구증가증, 술잔 세포 화생, 내피 세포 변경, 기도 과반응성(AHR), 및 Th2 및 Th1 사이토킨 발현, 및 또한 상승된 혈청 IgE 수준의 존재에 의해 특성화된다. 기도 염증은 T 세포, B 세포, 호중구, 비만 세포 및 대식세포의, 및 사이토킨 및 케모킨을 포함하는 이들의 분비된 매개인자의 복잡한 상호작용을 포함하는, 천식의 발병의 근원적인 주요 인자라는 것이 현재 광범위하게 수용된다. 코르티코스테로이드는 현재 천식에 대한 가장 중요한 소염 치료제이나, 이들의 작용 메커니즘은 비-특이적이고 특히 청소년 환자 집단에서 안정성 문제가 존재한다. 따라서 보다 특이적이고 표적화된 치료요법을 개발하는 것을 타당하게 만든다.
염증 및 AHR 둘다를 평가할 수 있는 OVA-유도된 천식 마우스 모델과 같은 동물 모델은 당해 분야에 공지되어 있으며 천식을 치료하기 위한 다양한 DVD-Ig 분자의 능력을 측정하는데 사용될 수 있다. 천식을 연구하기 위한 동물 모델은 문헌[참조: Coffman et al., J.　Exp. Med., 201(12): 1875-1879 (2005); Lloyd et al., Adv. Immunol., 77: 263-295 (2001); Boyce et al., J.　Exp. Med., 201(12): 1869-1873 (2005); 및 Snibson et al., Clin. Exp. Allergy, 35(2): 146-152 (2005)]에 기재되어 있다. 이들 표적 쌍의 통상적인 안정성 평가 외에도, 면역억제의 정도에 대한 구체적인 시험이 가장 우수한 표적 쌍을 선택하는데 보장되고 도움이 될 수 있다[참조: Luster et al., Toxicology, 92(1-3): 229-243 (1994); Descotes, J., Develop. Biol. Standard., 77: 99-102 (1992); Hart et al., J.　Allergy Clin. Immunol., 108(2): 250-257 (2001)].
본 발명의 하나의 국면은 IL-1β 및 IL-4, IL-5, IL-8, IL-9, IL-13, IL-18, IL-5R(α), TNFSF4, IL-4R(α), 인터페론 α, 에오탁신, TSLP, PAR-2, PGD2, 및 IgE로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 하나 이상, 예를 들면, 2개의 표적에 결합할 수 있는 DVD-Ig 분자에 관한 것이다. 하나의 양태는 천식의 치료에 유리한 치료제로서 이중-특이적인 항-IL-1β/IL-1α DVD-Ig를 포함한다.
류마티스 관절염 (RA)
전신계 질환인, 류마티스 관절염(RA)은 관절의 윤활막내 만성 염증 반응으로 특징화되며, 연골의 변성 및 관절곁 골의 미란(erosion)과 관련되어 있다. TNF, 케모킨, 및 성장 인자를 포함하는 많은 전-염증성 사이토킨이 장애가 있는 관절에서 발현된다. RA가 있는 마우스 모델에 대한 항-TNF 항체 또는 sTNFR 융합 단백질의 전신 투여는 소염성이고 관절 보호성임이 밝혀졌다. IL-1β를 포함한 각종 사이토킨이 RA에 관련되어 있다. RA 환자에서 TNF의 활성이 정맥내 투여된 인플릭시마브[참조: Harriman et al., "Summary of clinical trials in rheumatoid arthritis using infliximab, an anti-TNFalpha treatment," Ann. Rheum. Dis., 58 (Suppl 1): I61-I64 (1999)], 키메라 항-TNF mAb로 차단되는 임상 연구는, TNF가 IL-6, IL-8, MCP-1, 및 VEGF 생산, 면역 및 염증 세포 세포의 관절내로의 보충, 및 매트릭스 메탈로프로테이나제-1 및 -3의 혈액 수준의 감소를 조절한다는 증거를 제공하여 왔다. 류마티스 관절염에서 염증 경로에 대한 우수한 이해는 류마티스 관절염에 관여하는 다른 치료학적 표적의 확인을 이끌어 왔다. 인터루킨-6 길항제[IL-6 수용체 항체 MRA, 추가이(Chugai)에 의해 개발된, 로슈(Roche)(참조: Nishimoto et al., Arthritis Rheum., 50(6): 1761-1769 (2004)], CTLA4Ig[아바타셉트, 참조: Genovese et al., "Abatacept for rheumatoid arthritis refractory to tumor necrosis factor alpha inhibition," N. Engl. J. Med., 353: 1114-1123 (2005)], 및 항-B 세포 치료요법[리툭시마브, 참조: Okamoto et al., "Rituximab for rheumatoid arthritis," N. Engl. J. Med., 351: 1909 (2004)]과 같은 촉망되는 치료는 과거 수년에 걸쳐 무작위처리되고 조절된 시험들에서 이미 시험되어 왔다. IL-1β 및, IL-15 및 IL-18와 같은 다른 사이토킨은 RA 동물 모델[치료용 항체 HuMax-IL_15, AMG 714; 참조: Baslund et al., Arthritis Rheum., 52(9): 2686-2692 (2005)]를 사용하여 역할을 담당하는 것으로 확인되었다. 항-TNF 및 다른 매개인자, 예를 들면, IL-1β를 조합하는 이중-특이적인 항체 치료요법은 임상 효능 및/또는 환자 범위를 향상시키는데 있어 매우 강력하다. 예를 들면, TNF 및 VEGF 둘다의 차단은 염증 및 혈관형성을 잠재적으로 근절시킬 수 있으며, 이들 둘다는 RA의 병리생리학에 관여한다. IL-1α 및 IL-1β를 차단할 수 있는 DVD-Ig 결합 단백질이 고려된다. 이들 표적 쌍의 통상의 안정성 평가 외에, 면역억제의 정도에 대한 구체적인 시험이 보장될 수 있고 가장 우수한 표적 쌍을 선택하는데 도움이 될 수 있다[참조: Luster et al., Toxicology, 92(1-3): 229-243 (1994); Descotes et al., Develop. Biol. Standard., 77: 99-102 (1992); Hart et al., J.　Allergy Clin. Immunol., 108(2): 250-257 (2001)]. DVD-Ig 분자가 류마티스 관절염의 치료에 유용할 것인지는 콜라겐-유도된 관절염 마우스 모델과 같은 전-임상 동물 RA 모델을 사용하여 평가할 수 있다. 다른 유용한 모델은 또한 당해 분야에 잘 공지되어 있다[참조: Brand, D.D., Comp. Med., 55:114-122 (2005)]. 사람 및 마우스 이종상동성에 대한 모 항체의 교차-반응성(예를 들면, 사람 및 마우스 TNF, 사람 및 마우스 IL-15에 대한 반응성 등)을 기반으로 하여, 마우스 CIA 모델에서 확인 연구를 "매치된 대체 항체" 기원한 DVD-Ig 분자로 수행할 수 있다. 요약하면, 2개(또는 그 이상)의 마우스 표적 특이적인 항체를 기반으로 하는 DVD-Ig는 사람 DVD-Ig 작제에 사용된 모 사람 또는 사람화된 항체의 특성(유사한 친화성, 유사한 중화 효능, 유사한 반감기 등)의 특성에 대해 가능한 정도로 매치될 수 있다.
하나의 양태에서, 사람 IL-1β 및 다른 비-IL-1β 표적에 결합하는 본 발명의 DVD-Ig는 또한, IL-1β가 작용하는 다른 질환을 치료하는데 사용될 수 있다. 이러한 질환은 SLE, 다발경화증 (MS), 패혈증, 각종 신경학적 질환 및 암(경부, 유방, 위장 포함)을 포함하나, 이에 한정되지 않는다. IL-1β가 역할을 하는 질환 및 장애의 더 폭넓은 목록이 또한 하기 제공된다.
본 발명의 양태는 사람 IL-1β 및, IL-1α, TNFα, IL-12, TWEAK, IL-23, CXCL13, CD40, CD40L, IL-18, VEGF, VLA-4, TNFβ, CD45RB, CD200, IFN-γ, GM-CSF, FGF, C5, CD52, 스클레로스틴, 및 CCR2로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 하나 이상의 표적에 결합할 수 있는 DVD-Ig 분자에 관한 것이다.
전신 홍반 루푸스(SLE)
SLE의 면역병원성 특징은 고글로불린 혈증, 자가항체 생산 및 면역 복합체 형성을 초래하는 다클론 B 세포 활성화이다. 근본적인 기형은 일반화된 T 세포 조절곤란으로 인하여 T 세포가 금지된 B 세포 클론을 억제하는데 실패하는 것으로 여겨진다. 또한, B 및 T-세포 상호작용은 IL-10과 같은 수개의 사이토킨 뿐만 아니라 제2의 시그날을 개시하는 CD40 및 CD40L, B7 및 CD28 및 CTLA-4와 같은 동시-자극 분자에 의해서도 촉진된다. 면역 복합체 및 세포자멸사 물질의 손상된 포식작용 청소와 함께 이들 상호작용은 수득되는 조직 손상과 함께 면역 반응을 영구화한다.
하나의 국면에서, 본 발명의 DVD-Ig 결합 단백질은 사람 IL-1β 및 SLE에 관여된 다음 항원 중 하나 이상에 결합할 수 있다: B 세포 표적화된 치료요법: CD-20, CD-22, CD-19, CD28, CD4, CD80, HLA-DRA, IL10, IL2, IL4, TNFRSF5, TNFRSF6, TNFSF5, TNFSF6, BLR1, HDAC4, HDAC5, HDAC7A, HDAC9, ICOSL, IGBP1, MS4A1, RGS1, SLA2, CD81, IFNB1, IL10, TNFRSF5, TNFRSF7, TNFSF5, AICDA, BLNK, GALNAC4S-6ST, HDAC4, HDAC5, HDAC7A, HDAC9, IL10, IL11, IL4, INHA, INHBA, KLF6, TNFRSF7, CD28, CD38, CD69, CD80, CD83, CD86, DPP4, FCER2, IL2RA, TNFRSF8, TNFSF7, CD24, CD37, CD40, CD72, CD74, CD79A, CD79B, CR2, IL1R2, ITGA2, ITGA3, MS4A1, ST6GAL1, CD1C, CHST10, HLA-A, HLA-DRA, 및 NT5E.; 공-자극 시그날: CTLA4 또는 B7.1/B7.2; B 세포 생존의 억제: BlyS, BAFF; 상보체 불활성화: C5; 사이토킨 조절: 주요 원리는, 어떠한 조직에서도 총(net) 생물학적 반응이 전염증성 또는 소염 사이토킨의 국소 수준 사이의 균형의 결과라는 것이다[참조: Sfikakis et al., Curr. Opin. Rheumatol., 17:550-557 (2005)]. SLE는 혈청 IL-4, IL-6, IL-10에서 문서화된 상승을 갖는 Th-2 기원한 질환인 것으로 고려된다. IL-4, IL-6, IL-10, IFN-α 및 TNF-α로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 하나 이상의 표적에 결합할 수 있는 DVD-Ig가 또한 고려된다. 본원에 논의된 표적의 조합은 다수의 루푸스(lupus) 전임상 모델에서 시험될 수 있는 SLE에 대한 치료학적 효능을 향상시킬 것이다[참조: Peng S.L., Methods Mol. Med., 102: 227-272 (2004)]. 사람 및 마우스 이종상동성에 대한 모 항체의 교차-반응성(예를 들면, 사람 및 마우스 CD20, 사람 및 마우스 인테페론 알파에 대한 반응성 등)을 기반으로 하여, 마우스 루푸스 모델에서 확인 연구를 "매치된 대용 항체" 기원한 DVD-Ig 분자를 사용하여 수행할 수 있으며; 요약하면, DVD-Ig 계 2개(또는 이상)의 마우스 표적 특이적인 항체를 사람 DVD-Ig 작제에 사용된 모 사람 또는 사람화된 항체의 특성(유사한 친화성, 유사한 중화 효능, 유사한 반감기 등)에 대해 가능한 정도로 매치시킬 수 있다.
다발경화증 (MS)
다발경화증(MS)은 대부분 공지되지 않은 원인론을 가진 복잡한 사람 자가면역-유형 질환이다. 신경계를 통한 미엘린 염기성 단백질(MBP)의 면역원성 파괴는 다발경화증의 주요 병리학이다. MS는 중추신경계내의 반응의 및, CD4+ 및 CD8+ T 세포에 의한 침윤에 관여하는, 복합체 병리학의 질환이다. CNS내에서 사이토킨, 반응성 질소 종 및 고자극인자 분자의 발현은 모두 MS에 기술되어 왔다. 주요 고려대상은 자가면역성의 발달에 기여하는 면역학적 메커니즘이다. 특히, 항원 발현, 사이토킨 및 백혈구 상호작용, 및 Th1 및 Th2 세포와 같은 다른 T-세포를 조화시키고/조절하는 것을 돕는 조절성 T-세포는 치료학적 표적 확인을 위해 중요한 영역이다.
IL-12는 APC에 의해 생산되고 Th1 효과기 세포의 분화를 촉진하는 전염증성 사이토킨이다. IL-12는 MS 환자의 진행중인 병변에서 및 또한 EAE-영향받은 동물에서 생산된다. 앞서, IL-12 경로에서의 방해는 설치류에서 EAE를 효과적으로 방지하며, 항-IL-12 mAb를 사용한 IL-12p40의 생체내 중화는 일반적인 마모셋(marmoset)에서 미엘린-유도된 EAE 모델에서 유리한 효과를 가짐이 밝혀졌다.
TWEAK는 세포 유형에 의존하여 전-염증성, 증식성 또는 세포자멸사 효과를 갖는, 중추 신경계(CNS)내에서 구성적으로 발현된 TNF 계열의 구성원이다. 이의 수용체, Fn14은 CNS내에서 내피 세포, 반응성 별아교세포 및 뉴우런에 의해 발현된다. TWEAK 및 Fn14 mRNA 발현은 실험적인 자가면역 뇌염(EAE) 동안 척수에서 증가되었다. C57BL/6 마우스에서 올리고가지세포 당단백질(MOG) 유도된 EAE에서 항-TWEAK 항체 치료는 마우스를 프라이밍 상(priming phase) 후에 치료하는 경우 질환 중증도 및 백혈구 침윤의 감소를 생성하였다.
본 발명의 하나의 국면은 IL-1β 및, IL-12, TWEAK, IL-23, CXCL13, CD40, CD40L, IL-18, VEGF, VLA-4, TNF, CD45RB, CD200, IFN감마, GM-CSF, FGF, C5, CD52, 오스테오폰틴, 및 CCR2로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 하나 이상, 예를 들면, 2개의 표적에 결합할 수 있는 DVD-Ig 분자에 관한 것이다. 하나의 양태는 MS의 치료에 유리한 치료제로서 이중-특이적인 항-IL-1β/TWEAK DVD-Ig를 포함한다.
MS를 치료하기 위한 DVD-Ig 분자의 유용성을 평가하기 위한 몇가지 동물 모델은 당해 분야에 공지되어 있다[참조: Steinman et al., Trends Immunol., 26(11): 565-571 (2005); Lublin et al., Springer Semin Immunopathol., 8(3): 197-208 (1985); Genain et al., J.　Mol. Med., 75(3): 187-197 (1997); Tuohy et al., J.　Exp. Med., 189(7): 1033-1042 (1999); Owens et al., Neurol. Clin., 13(1): 51-73 (1995); and 't　Hart et al., J.　Immunol., 175(7): 4761-4768 (2005)]. 사람 및 동물 종 이종상동성에 대한 모 항체의 교차-반응성(예를 들면, 사람과 마우스 IL-1β, 사람 및 마우스 TWEAK 등에 대한 반응성)을 기반으로 하여, 마우스 EAE 모델에서 확인 연구를 "매치된 대리 항체" 기원한 DVD-Ig 분자를 사용하여 수행할 수 있으며; 요약하면, 2개(또는 그 이상)의 마우스 표적 특이적인 항체를 기반으로 한 DVD-Ig는 사람 DVD-Ig 작제를 위해 사용된 모 사람 또는 사람화된 항체의 특성(유사한 친화성, 유사한 중화 효능, 유사한 반감기 등)에 대해 가능한 정도로 매치될 수 있다. 동일한 개념이 다른 비-설치류 종에서 동물 모델에 적용되며, 여기서 "매치된 대리 항체" 기원한 DVD-Ig는 예측된 약력학 및 가능한 안정성 연구를 위해 선택될 수 있다. 이들 표적 쌍의 통상의 안정성 평가 외에, 면역억제의 정도에 대한 특이적인 시험은 가장 우수한 쌍을 선택하는데 있어 보장되고 도움이 될 수 있다[참조: Luster et al., Toxicology, 92(1-3): 229-243 (1994); Descotes et al., Develop. Biol. Standard., 77: 99-102 (1992); Jones, R., "Rovelizumab -ICOS Corp," IDrugs, 3(4):442-446 (2000)].
패혈증
패혈증의 병태생리학은 그람-음성 유기체(지다당류[LPS], 지질 A, 엔도톡신) 및 그람-양성 유기체(리포테이초익산, 펩티도글리칸)의 외막 성분에 의해 개시된다. 이들 외막 성분은 단핵 세포의 표면에서 CD14 수용체에 결합할 수 있다. 최근 기술된 톨-유사 수용체(toll-like receptor)에 의해, 시그날은 이후 세포로 전파되어, 전염증성 사이토킨 종양 괴사 인자-알파(TNF-알파) 및 인터루킨-1 (IL-1)의 궁극적인 생산을 초래한다. 압도적인 염증 및 면역 반응은 패혈증 쇼크의 필수적인 특징이며 조직 손상의 발병, 다발성 기관 부전, 및 패혈증에 의해 유발된 사망에서 중심적인 역할을 한다. 사이토킨, 특히 종양 괴사 인자(TNF) 및 인터루킨 (IL-1)은 패혈성 쇼크의 중요한 매개인자임이 밝혀졌다. 이들 사이토킨은 조직에서 직접적인 독성 효과를 가지며; 이들은 또한 포스포리파제 A2를 활성화시킨다. 이들 및 다른 효과는 혈소판-활성화 인자의 증가된 농도, 산화질소 신타제 활성의 촉진, 호중구에 의한 조직 침윤의 촉진, 및 호중구 활성의 촉진을 초래한다.
패혈증 및 패혈성 쇼크의 치료는 임상적 난제로 남아있으며, 염증성 반응에 목표를 둔 생물학적 반응 개질인자(예를 들면, 항-TNF, 항-MIF)를 사용한 최근의 예측된 시험은 단지 보통의 임상적 이점을 나타내었다. 최근에, 흥미는 면역 억제의 동반된 기간을 역전시키는데 목표를 둔 치료요법으로 이전되었다. 실험 동물 및 위독한 환자에 있어서의 연구는 림프구 기관 및 일부 실질 조직의 증가된 세포자멸사가 면역 억제, 무반응(anergy), 및 기관계 기능부전에 기여함을 입증하여 왔다. 패혈증 증후군 동안, 림프구 세포자멸사가 IL-2의 부재에 의해 또는 글루코코르티코이드, 그란자임, 또는 소위 '사멸' 사이토킨: 종양 괴사 인자 알파 또는 Fas 리간드의 방출에 의해 개시될 수 있다. 세포자멸사는 Bcl-2 계열의 전- 및 항-세포자멸사적 구성원에 의해 영향받을 수 있는, 세포질성 및/또는 미토콘드리아성 카스파제의 자가-활성화를 통해 진행된다. 실험 동물에서, 세포자멸사의 억제제를 사용한 치료는 림프구 세포 세포자멸사를 방지할 수 있을 뿐 아니라; 이는 또한 결과를 개선시킬 수 있다. 항-세포사멸제를 사용한 임상시험이 대부분 이들의 투여 및 조직 표적화와 관련된 기술적 난점으로 인하여 명백하게 남아있다고 해도, 림프구 세포자멸사의 억제는 패혈증 환자에 대한 매력적인 치료학적 표적이다. 유사하게, 염증성 매개인자 및 세포자멸사성 매개인자 둘다를 표적화하는 이중-특이적인 제제는 추가된 이점을 가질 수 있다. 본 발명의 하나의 국면은 IL-1β 및, TNF, IL-1, MIF, IL-6, IL-8, IL-18, IL-12, IL-23, FasL, LPS, 톨-유사 수용체, TLR-4, 조직 인자, MIP-2, ADORA2A, CASP1, CASP4, IL-10, IL-1B, NFKB1, PROC, TNFRSF1A, CSF3, CCR3, IL1RN, MIF, NFKB1, PTAFR, TLR2, TLR4, GPR44, HMOX1, HMG-B1, 미드킨, IRAK1, NFKB2, SERPINA1, SERPINE1, 및 TREM1로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 패혈증에 관여하는 하나 이상의 표적에 결합할 수 있는 DVD-Ig에 관한 것이다. 패혈증에 대한 이러한 DVD-Ig의 효능은 당해 분야에 공지된 전임상 동물 모델에서 평가할 수 있다[참조: Buras et al., Nat. Rev. Drug Discov., 4(10): 854-865 (2005); 및 Calandra et al., Nature Med., 6(2):164-170 (2000)].
신경학적 장애 및 신경변성 질환
신경변성 질환은, 이들이 일반적으로 연령-의존성인 만성 또는 급성(예를 들면, 뇌졸중, 외상성 뇌 손상, 척수 손상 등)이다. 이들은 뉴우런 기능(뉴우런 세포 사멸, 탈수초화)의 점진적인 상실, 운동성의 상실 및 기억 상실을 특징으로 한다. 만성 신경변성 질환(예를 들면, 알츠하이머병, AD)의 근본적인 메커니즘의 드러나는 지식은, 복잡한 병인(etiology) 및 다양한 인자, 예를 들면, 연령, 혈당 상태, 아밀로이드 생산 및 다합체화, 이들의 수용체(AGE에 대한 수용체)에 결합하는 진전된 당화-최종 생성물(AGE)의 축적, 증가된 뇌 산화성 스트레스, 감소된 대뇌 혈류, 염증성 사이토킨 및 케모킨의 방출을 포함하는 신경염증, 신경 기능장애 및 미세아교세포 활성화가 이들의 발달 및 진행에 기여하는 것으로 인식되어 왔음을 나타낸다. 따라서, 이들 만성 신경변성 질환은 다수의 세포유형과 매개인자 사이의 복잡한 상호작용을 나타낸다. 이러한 질환의 치료 전략은 제한되며 비-특이적인 소염제(예를 들면, 코르티코스테로이드, COX 억제제) 또는 뉴우런 상실 및/또는 시냅스 기능을 방지하는 제제를 주로 구성한다. 이러한 치료는 질환 진행을 정지시키는데 실패한다. 최근 연구는, 가용성 Aβ 펩타이드(Aβ 올리고머형 포함)에 대한 항체와 같은 보다 표적화된 치료요법이 질병 진행을 중지하는데 도움을 줄 수 있을 뿐 아니라 또한 기억을 유지하는데 도움을 줄 수 있음을 제안한다. 이러한 예비 관측은, 하나 이상의 질환 매개인자(예를 들면, Aβ 및 전-염증성 사이토킨, 예를 들면, TNF)를 표적화하는 특이적인 치료요법이 단일 질환 메커니즘(예를 들면, 가용성 Aβ 단독)을 표적화하여 관찰된 것보다 만성 신경변성 질환에 대해 훨씬 더 우수한 치료학적 효능을 제공할 수 있음을 제안한다[참조: Shepherd et al., Neuropathol. Appl. Neurobiol., 31: 503-511(2005); Nelson, R.B., Curr. Pharm. Des., 11: 3335-3352 (2005); Klein, W.L., Neurochem. Int., 41: 345-352 (2002); Janelsins et al., "Early correlation of microglial activation with enhanced tumor necrosis factor-alpha and monocyte chemoattractant protein-I expression specifically within the entorhinal cortex of triple transgenic Alzheimer's disease mice," J.　Neuroinflammation, 2(23): 1-12 (2005); Soloman, B., Curr. Alzheimer. Res., 1: 149-163 (2004); Klyubin et al., Nature Med., 11:556-561 (2005); Arancio et al., EMBO　J., 23: 4096-4105 (2004); Bornemann et al., Am.　J. Pathol., 158: 63-73 (2001); Deane et al., Nature Med., 9: 907-913 (2003); 및 Masliah et al., Neuron, 46: 857-868 (2005)].
본 발명의 DVD-Ig 분자는 IL-1β 및 알츠하이머 병과 같은 만성 신경변성 질환에 관여된 하나 이상의 표적에 결합할 수 있다. 이러한 표적은 AD 발병기전에 관여된, 어떠한 매개인자, 가용성 또는 세포 표면, 예를 들면, AGE (S100 A, 암포테리신), 전-염증성 사이토킨(예를 들면, IL-1), 케모킨(예를 들면, MCP 1), 신경 재생을 억제하는 분자(예를 들면, Nogo, RGM A), 신경돌기 성장을 향상시키는 분자(뉴로트로핀) 및 혈액 뇌 장벽에서 수송을 매개할 수 있는 분자(예를 들면, 트랜스페린 수용체, 인슐린 수용체 또는 RAGE)도 포함하나, 이에 한정되지 않는다. DVD-Ig 분자의 효능은 아밀로이드 전구체 단백질 또는 RAGE를 과-발현하고 알츠하이머 병-유사 증후군으로 발전하는 유전자삽입 마우스와 같은 전-임상 동물 모델에서 입증될 수 있다. 또한, DVD-Ig 분자는 동물 모델에서 작제되어 효능에 대해 시험될 수 있으며 가장 우수한 치료학적 DVD-Ig를 사람 환자에서 시험하기 위해 선택할 수 있다. DVD-Ig 분자는 또한 다른 신경변성 질환, 예를 들면, 파킨슨병의 치료를 위해 사용될 수 있다. 알파-시누클레인은 파킨슨 병리학에 관여한다. IL-1β 및 LINGO-1을 표적화할 수 있는 DVD-Ig, 알파-시누클레인, 및/또는 TNF, IL-17, MCP-1과 같은 염증성 매개인자는 파킨슨병에 대한 효과적인 치료요법을 입증할 수 있으며 본 발명에서 고려된다.
신경 재생 및 척수 손상
병리학적 메커니즘의 지식에 있어서 증가에도 불구하고, 척수 손상(SCI)은 여전히 충격적인 상태이며 높은 의학적 요구도를 특징으로 하는 의학적 징후를 나타낸다. 대부분의 척수 손상은 타박상 또는 압착 손상이며, 1차 손상은 일반적으로 초기 손상을 악화시켜 병병 부위의 유의적인 확장, 때때로 10배 이상의 확장을 생성하는 2차 손상 메커니즘(염증 매개인자, 예를 들면, 사이토킨 및 케모킨)을 수반한다. SCI에서 이들 1차 및 2차 메커니즘은 다른 수단 예를 들면, 뇌졸중에 의해 유발된 뇌 손상에서의 것들과 매우 유사하다. 만족된 치료는 존재하지 않으며 메틸프레드니솔론(MP)의 고 투여량 거환 주사(bolus injection)가 손상 후 8시간의 협소한 시간 윈도우(time window)내에서 유일하게 사용된 치료요법이다. 그러나, 당해 치료는 어떠한 유의적인 기능적 회복을 유발하지 않으면서 2차 손상을 예방하기 위해 단지 의도된다. 이는 분명한 효능의 결여 및 후속적인 감염 및 심각한 조직병리학적 근육 변경을 갖는 면역억제와 같은 심각한 부작용으로 매우 비난받고 있다. 내인성의 재생성인 가능성을 자극하는 다른 약물, 생물제 또는 소 분자는 입증되지 않았지만, 촉망되는 치료 원리 및 약물 후보물은 최근 몇년 동안 SCI의 동물 모델에서 효능이 입증되어 왔다. 사람 SCI에서 기능적 회복의 큰 정도의 결여는 수초내에서 뿐만 아니라, 손상-관련 세포에서도, 반흔 조직내 병변 부위에서 신경돌기 성장을 억제하는 인자에 의해 유발된다. 이러한 인자는 수초-관련 단백질, NogoA, OMgp 및 MAG, RGM A, 반흔-관련 CSPG(콘드로이틴 설페이트 프로테오글리칸) 및, 반응성 별아교 세포 상의 억제 인자(일부 세마포린 및 에프린)이다. 그러나, 병변 부위에서 성장 억제 분자 뿐 아니라 뉴로트로핀, 라미닌, L1 및 기타의 것들과 같은 신경돌기 성장 자극 인자도 밝혀져 있다. 신경돌기 성장 억제 및 성장 촉진 분자의 이러한 조합은, NogoA 또는 RGM A와 같은 단일 인자를 차단하는 것이 설치류 SCI 모델에서 유의적인 기능적 회복을 초래하는데, 그 이유는 억제성 영향의 감소가 성장 억제로부터 성장 촉진까지 균형을 이동시킬 수 있기 때문이다. 그러나, 단일의 신경돌기 증식(outgrowth) 억제 분자를 차단하여 관찰된 회복은 완전하지 않았다. 보다 신속하고 보다 확연한 회복을 달성하기 위해, 2개의 신경돌기 증식 억제 분자, 예를 들면, Nogo 및 RGM A를 차단하거나, 신경돌기 증식 향상 분자, 예를 들면, Nogo 및 뉴로트로핀의 기능을 향상시키거나, 신경돌기 성장 억제 분자, 예를 들면, Nogo 및 전-염증성 분자, 예를 들면, TNF를 차단하는 것이 바람직할 수 있다[참조: McGee et al., Trends Neurosci., 26: 193-198 (2003); Domeniconi et al., J.　Neurol. Sci., 233: 43-47 (2005); Makwana et al., FEBS　J., 272: 2628-2638 (2005); Dickson, B.J., Science, 298: 1959-1964 (2002); Teng et al., J.　Neurosci. Res., 79: 273-278 (2005); Karnezis et al., Nature Neurosci., 7: 736 (2004); Xu et al., J.　Neurochem., 91: 1018-1023 (2004)].
하나의 국면에서, 사람 IL-1β에 결합하는 DVD-Ig는 NgR 및 RGM A; NogoA 및 RGM A; MAG 및 RGM A; OMgp 및 RGM A; RGM 및 RGM B; CSPGs 및 RGM A; 아그레칸, 미드킨, 뉴로칸, 베르시칸, 포스파칸, Te38 및 TNF-α; 수지 및 액손 발아(axon sprouting)를 촉진하는 항체와 조합된 Aβ 글로불로머-특이적인 항체가 제공된다. 수지 병리학은 AD의 매우 조기의 신호이며 NOGO A는 가지돌기 성장을 제한하는 것으로 공지되어 있다. 이러한 유형의 ab를 어떠한 SCI-후보물(메엘린-단백질) Ab와 합할 수 있다. 다른 DVD-Ig 표적은 NgR-p75, NgR-Troy, NgR-Nogo66(Nogo), NgR-Lingo, Lingo-Troy, Lingo-p75, MAG 또는 OMgp의 어떠한 조합도 포함할 수 있다. 또한, 표적은 또한 신경돌기의 억제에 연관된 어떠한 매개인자, 가용성 또는 세포 표면, 예를 들면, Nogo, OMgp, MAG, RGM A, 세마포린, 에프린, 가용성 Aβ, 전-염증성 사이토킨(예를 들면, IL-1), 케모킨(예를 들면, MIP 1a), 신경 재생을 억제하는 분자를 포함할 수 있다. 항-nogo/항-RGM 또는 유사한 DVD-Ig 분자의 효능은 척수 손상의 전-임상 동물 모델에서 입증될 수 있다. 또한, 이들 DVD-Ig 분자는 작제되어 동물 모델에서 효능에 대해 시험될 수 있으며, 가장 우수한 치료학적 DVD-Ig를 사람 환자에서 시험을 위해 선택할 수 있다. 또한, 단일의 수용체, 예를 들면, 3개의 리간드 Nogo, OMgp, 및 MAG에 결합하는 Nogo 수용체 및 Aβ 및, S100 A에 결합하는 RAGE 상에서 2개의 명백한 리간드 결합 부위를 표적하는 DVD-Ig 분자가 작제될 수 있다. 또한, 신경돌기 증식 억제인자, 예를 들면, nogo 및 nogo 수용체는 또한 다발경화증과 같은 면역학적 질환에서 신경 재생을 예방하는데 역할을 담당한다. nogo-nogo 수용체 상호작용의 억제는 다발 경화증의 동물 모델에서 회복을 향상시키는 것으로 밝혀졌다. 따라서, 하나의 면역 매개인자의 기능을 차단할 수 있는 DVD-Ig 분자, 예를 들면, IL-12와 같은 사이토킨, 및 신경돌기 증식 억제제 분자, 예를 들면, Nogo 또는 RGM은 면역 또는 신경돌기 성장 억제제 분자 단독을 차단하는 것보다 더 신속하고 보다 높은 효능을 제공할 수 있다.
일반적으로, 항체는 효율적이고 관련된 방식으로 혈액 뇌 장벽(BBB)을 통과하지 않는다. 그러나, 특정의 신경 질환, 예를 들면, 뇌졸증, 외상 뇌 손상, 다발 경화증 등에서, BBB는 뇌내로의 DVD-Ig 및 항체의 증가된 침투를 타협하고 허용할 수 있다. BBB 유출이 발생하지 않는 다른 신경학적 상태에서, 글루코즈 및 아미노산 담체와 같은 담체-매개된 수송인자 및 수용체-매개된 통과세포외배출-매개된 세포 구조/수용체를 포함하는 내인성 수송 시스템의 표적화를 BBB의 혈관 내피에서 사용함으로써 DVD-Ig의 트랜스-BBB 수송을 가능하도록 할 수 있다. 이러한 수송을 가능하도록 하는 BBB에서 구조물은 인슐린 수용체, 트랜스페린 수용체, LRP 및 RACE를 포함하나 이에 한정되지 않는다. 또한, 전략들은 강력한 약물을 저 분자량 약물, 나노입자 및 핵산을 포함하는 CNS내로 수송하기 위한 셔틀(shuttle)로서 또한 DVD-Ig의 사용이 가능하도록 한다[참조: Coloma et al., Pharm. Res., 17(3):266-274 (2000); Boado et al., Bioconjug. Chem., 18(2):447-455 (2007)].
종양학적 장애
단클론 항체 치료요법은 암에 대한 중요한 치료학적 양식으로서 출현되었다[참조: von Mehren et al., Ann. Rev. Med., 54: 343-369 (2003)]. 항체는 세포자멸사, 재지시된 세포독성을 유도하거나, 리간드-수용체 상호작용을 방해하거나, 신생물 표현형에 중요한 단백질의 발현을 방지함에 의해 항종양 효과를 발휘할 수 있다. 또한, 항체는 종양 미세환경의 성분을 표적화하여, 종양-관련 혈관화의 형성과 같은 필수적인 구조물을 교란시킬 수 있다. 항체는 또한, 이의 리간드가 내피 성장 인자 수용체와 같은 성장 인자인 수용체를 표적화할 수 있다. 따라서, 항체는 표적화된 종양 세포에 대한 결합으로부터 세포 성장을 자극하는 천연 리간드를 억제한다. 대안적으로, 항체는 항-동형 네트워크, 상보체-매개된 세포독성, 또는 항체-의존성 세포 세포독성(ADCC)을 유도할 수 있다. 2개의 별개의 종양 매개인자를 표적화하는 이중-특이적인 항체의 사용은 일-특이적인 치료요법과 비교하여 추가의 이점을 제공할 것이다.
다른 양태에서, 본 발명의 사람 IL-1β에 결합하는 DVD-Ig는 또한 다음을 포함하나, 이에 한정되지 않는 종양학적 질환에 관여된 다른 표적에 결합시킬 수 있다: IGFR, IGF, VGFR1, PDGFRb, PDGFRa, IGF1,2, ERB3, CDCP, 1BSG2, ErbB3, CD52, CD20, CD19, CD3, CD4, CD8, BMP6, IL12A, IL1A, IL1B, IL2, IL24, INHA, TNF, TNFSF10, BMP6, EGF, FGF1, FGF10, FGF11, FGF12, FGF13, FGF14, FGF16, FGF17, FGF18, FGF19, FGF2, FGF20, FGF21, FGF22, FGF23, FGF3, FGF4, FGF5, FGF6, FGF7, FGF8, FGF9, GRP, IGF1, IGF2, IL12A, IL1A, IL1B, IL2, INHA, TGFA, TGFB1, TGFB2, TGFB3, VEGF, CDK2, FGF10, FGF18, FGF2, FGF4, FGF7, IGF1R, IL2, BCL2, CD164, CDKN1A, CDKN1B, CDKN1C, CDKN2A, CDKN2B, CDKN2C, CDKN3, GNRH1, IGFBP6, IL1A, IL1B, ODZ1, PAWR, PLG, TGFB1I1, AR, BRCA1, CDK3, CDK4, CDK5, CDK6, CDK7, CDK9, E2F1, EGFR, ENO1, ERBB2, ESR1, ESR2, IGFBP3, IGFBP6, IL2, INSL4, MYC, NOX5, NR6A1, PAP, PCNA, PRKCQ, PRKD1, PRL, TP53, FGF22, FGF23, FGF9, IGFBP3, IL2, INHA, KLK6, TP53, CHGB, GNRH1, IGF1, IGF2, INHA, INSL3, INSL4, PRL, KLK6, SHBG, NR1D1, NR1H3, NR1I3, NR2F6, NR4A3, ESR1, ESR2, NR0B1, NR0B2, NR1D2, NR1H2, NR1H4, NR1I2, NR2C1, NR2C2, NR2E1, NR2E3, NR2F1, NR2F2, NR3C1, NR3C2, NR4A1, NR4A2, NR5A1, NR5A2, NR6A1, PGR, RARB, FGF1, FGF2, FGF6, KLK3, KRT1, APOC1, BRCA1, CHGA, CHGB, CLU, COL1A1, COL6A1, EGF, ERBB2, ERK8, FGF1, FGF10, FGF11, FGF13, FGF14, FGF16, FGF17, FGF18, FGF2, FGF20, FGF21, FGF22, FGF23, FGF3, FGF4, FGF5, FGF6, FGF7, FGF8, FGF9, GNRH1, IGF1, IGF2, IGFBP3, IGFBP6, IL12A, IL1A, IL1B, IL2, IL24, INHA, INSL3, INSL4, KLK10, KLK12, KLK13, KLK14, KLK15, KLK3, KLK4, KLK5, KLK6, KLK9, MMP2, MMP9, MSMB, NTN4, ODZ1, PAP, PLAU, PRL, PSAP, SERPINA3, SHBG, TGFA, TIMP3, CD44, CDH1, CDH10, CDH19, CDH20, CDH7, CDH9, CDH1, CDH10, CDH13, CDH18, CDH19, CDH20, CDH7, CDH8, CDH9, ROBO2, CD44, ILK, ITGA1, APC, CD164, COL6A1, MTSS1, PAP, TGFB1I1, AGR2, AIG1, AKAP1, AKAP2, CANT1, CAV1, CDH12, CLDN3, CLN3, CYB5, CYC1, DAB2IP, DES, DNCL1, ELAC2, ENO2, ENO3, FASN, FLJ12584, FLJ25530, GAGEB1, GAGEC1, GGT1, GSTP1, HIP1, HUMCYT2A, IL29, K6HF, KAI1, KRT2A, MIB1, PART1, PATE, PCA3, PIAS2, PIK3CG, PPID, PR1, PSCA, SLC2A2, SLC33A1, SLC43A1, STEAP, STEAP2, TPM1, TPM2, TRPC6, ANGPT1, ANGPT2, ANPEP, ECGF1, EREG, FGF1, FGF2, FIGF, FLT1, JAG1, KDR, LAMA5, NRP1, NRP2, PGF, PLXDC1, STAB1, VEGF, VEGFC, ANGPTL3, BAI1, COL4A3, IL8, LAMA5, NRP1, NRP2, STAB1, ANGPTL4, PECAM1, PF4, PROK2, SERPINF1, TNFAIP2, CCL11, CCL2, CXCL1, CXCL10, CXCL3, CXCL5, CXCL6, CXCL9, IFNA1, IFNB1, IFNG, IL1B, IL6, MDK, EDG1, EFNA1, EFNA3, EFNB2, EGF, EPHB4, FGFR3, HGF, IGF1, ITGB3, PDGFA, TEK, TGFA, TGFB1, TGFB2, TGFBR1, CCL2, CDH5, COL18A1, EDG1, ENG, ITGAV, ITGB3, THBS1, THBS2, BAD, BAG1, BCL2, CCNA1, CCNA2, CCND1, CCNE1, CCNE2, CDH1 (E-카드헤린), CDKN1B (p27Kip1), CDKN2A (p16INK4a), COL6A1, CTNNB1 (b-카테닌), CTSB (카텝신 B), ERBB2 (Her-2), ESR1, ESR2, F3 (TF), FOSL1 (FRA-1), GATA3, GSN (젤솔린), IGFBP2, IL2RA, IL6, IL6R, IL6ST (당단백질 130), ITGA6 (a6 인테그린), JUN, KLK5, KRT19, MAP2K7 (c-Jun), MKI67 (Ki-67), NGFB (NGF), NGFR, NME1 (NM23A), PGR, PLAU (uPA), PTEN, SERPINB5 (마스핀), SERPINE1 (PAI-1), TGFA, THBS1 (트롬보스폰딘-1), TIE (Tie-1), TNFRSF6 (Fas), TNFSF6 (FasL), TOP2A (토포이소머라제 Iia), TP53, AZGP1 (아연-a-당단백질), BPAG1 (플렉틴), CDKN1A (p21Wap1/Cip1), CLDN7 (클라우딘-7), CLU (클러스테린), ERBB2 (Her-2), FGF1, FLRT1 (피브로넥틴), GABRP (GABAa), GNAS1, ID2, ITGA6 (a6 인테그린), ITGB4 (b 4 인테그린), KLF5 (GC Box BP), KRT19 (케라틴 19), KRTHB6 (모발-특이적인 제II형 케라틴), MACMARCKS, MT3 (메탈로티오넥틴-III), MUC1 (무친), PTGS2 (COX-2), RAC2 (p21Rac2), S100A2, SCGB1D2 (리포필린 B), SCGB2A1 (맘마글로빈 2), SCGB2A2 (맘마글로빈 1), SPRR1B (Spr1), THBS1, THBS2, THBS4, 및 TNFAIP2 (B94), RON, c-Met, CD64, DLL4, PLGF, CTLA4, 포스파티딜세린, ROBO4, CD80, CD22, CD40, CD23, CD28, CD55, CD38, CD70, CD74, CD30, CD138, CD56, CD33, CD2, CD137, DR4, DR5, RANKL, VEGFR2, PDGFR, VEGFR1, MTSP1, MSP, EPHB2, EPHA1, EPHA2, EpCAM, PGE2, NKG2D, LPA, SIP, APRIL, BCMA, MAPG, FLT3, PDGFR 알파, PDGFR 베타, ROR1, PSMA, PSCA, SCD1, 및 CD59.
D. 약제학적 조성물
본 발명은 또한 본 발명의 항체(본원에 기술된 DVD-Ig 포함), 또는 이의 항원-결합 부분 및 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다. 본 발명의 항체를 포함하는 약제학적 조성물은 장애를 진단하거나, 검출하거나 모니터링하거나, 장애 또는 이의 하나 이상의 증상을 예방하거나, 치료하거나, 유지하거나 완화시키고/시키거나 조사하는데 사용된다. 구체적인 양태에서, 조성물은 본 발명의 하나 이상의 양태를 포함한다. 다른 양태에서, 약제학적 조성물은, IL-1β 활성이 유해한 장애를 치료하기 위한, 본 발명의 하나 이상의 항체 및 본 발명의 항체 이외의 하나 이상의 예방학적 또는 치료학적 제제를 포함한다. 하나의 양태에서, 예방제 또는 치료제는 장애 또는 이의 하나 이상의 증상의 예방, 치료, 유지, 또는 완화에 사용되어 왔거나 현재 사용중이거나 유용한 것으로 공지되어 있다. 이들 양태에 따라서, 조성물은 담체, 희석제 또는 부형제를 추가로 포함할 수 있다.
본 발명의 항체 및 항체 부위는 대상체에게 투여하기에 적합한 약제학적 조성물내로 혼입시킬 수 있다. 전형적으로, 약제학적 조성물은 본 발명의 항체 또는 항체 부위 및 약제학적으로 허용되는 담체를 포함한다. 본원에 사용된 것으로서, "약제학적으로 허용되는 담체"는 생리학적으로 혼화성인 특정의 및 모든 용매, 분산 매질, 피복제, 항세균제 및 항진균제, 등장성 제제, 흡수 지연제 등을 포함한다. 약제학적으로 허용되는 담체의 예는 물, 염수, 인산염 완충된 염수, 덱스트로즈, 글리세롤, 에탄올 등, 및 이들의 조합 중 하나 이상을 포함한다. 많은 경우에, 등장성 제제, 예를 들면, 당, 만니톨, 소르비톨과 같은 다가알코올, 또는 염화나트륨을 조성물 속에 포함하는 것이 바람직할 것이다. 약제학적으로 허용되는 담체는 항체 또는 항체 일부의 저장 수명 또는 유효성을 향상시키는 습윤제 또는 유화제, 방부제 또는 완충제와 같은 보조 물질의 소량을 추가로 포함할 수 있다.
각종 전달 시스템이 공지되어 있으며 본 발명의 하나 이상의 항체 또는, 본 발명의 하나 이상의 항체와, 장애 또는 이의 하나 이상의 증상을 예방하거나, 유지하거나, 치료하거나 완화시키는데 유용한 예방제 또는 치료제, 예를 들면, 리포좀내 캡슐화, 미세입자, 마이크로캡슐, 항체 또는 항체 단편을 발현시킬 수 있는 재조합체 세포, 수용체-매개된 세포내이입[참조: 예를 들면, Wu and Wu, J.　Biol. Chem., 262: 4429-4432 (1987)], 레트로바이러스 또는 다른 벡터의 일부로서 핵산의 작제물의 조합물을 투여하는데 사용될 수 있다. 본 발명의 예방제 또는 치료제의 투여방법은 비경구 투여(예를 들면, 피내, 근육내, 복강내, 정맥내 및 피하), 경막외 투여, 종양내 투여, 및 점막 투여(예를 들면, 비강 및 경구 경로)를 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 또한, 폐 투여는 예를 들면, 흡입기 또는 분무기, 및 에어로졸화제를 사용한 제형을 사용함으로써 수행할 수 있다(참조: 예를 들면, 이의 각각의 전문이 본원에 참조로 인용된 미국 특허 공보 제6,019,968호; 제5,985,320호; 제5,985,309호; 제5,934,272호; 제5,874,064호; 제5,855,913호 및 제5,290,540호; 및 PCT 공보 제WO　92/19244호, 제WO　97/32572호, 제WO　97/44013호, 제WO　98/31346호, 및 제WO　99/66903호). 하나의 양태에서, 본 발명의 항체 또는 항체 부위, 본 발명의 조합 치료요법, 또는 조성물은 Alkermes AIR® 폐 약물 전달 기술[알케르메스, 인코포레이티드(Alkermes, Inc.), 매사츄세츠주 캠브릿지]을 사용하여 투여된다. 특이적인 양태에서, 본 발명의 예방제 또는 치료제는 근육내, 정맥내, 종양내, 경구적으로, 비강내, 폐 또는 피하로 투여된다. 예방제 또는 치료제는 어떠한 편리한 경로, 예를 들면, 주입 또는 거환 주입에 의해, 상피 또는 점막피부 라이닝(예를 들면, 경구 점막, 직장, 및 장 점막 등)에 의해 투여될 수 있으며 다른 생물학적 활성제와 함께 투여될 수 있다. 투여는 전신계 또는 국소일 수 있다.
하나의 양태에서, 시험관내에서 종양 세포로의 항체-커플링된 탄소 나노튜브(CNT)의 특이적인 결합에 이은 근-적외선(NIR) 광을 사용한 이들의 고 특이적인 제거(ablation)를 사용하여 종양 세포를 표적화할 수 있다. 예를 들면, 바이오티닐화된 극성 지질을 사용하여 안정하고, 생적합성이며, 무세포독성인 CNT 분산액을 제조할 수 있으며 이후 이를 하나 이상의 종양 항원(예를 들면, CD22)에 대해 1개 또는 2개의 상이한 신경돌기 아비딘-유도체화된 DVD-Ig에 부착시킨다[참조: Chakravarty et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 105: 8697-8702 (2008)].
구체적인 양태에서, 본 발명의 예방제 또는 치료제를 치료가 요구되는 부위에 국소 투여하는 것이 바람직할 수 있으며; 이는 예를 들면 국소 주입에 의해, 주사에 의해, 또는 이식체의 수단에 의해 달성할 수 있으나 이에 한정되지 않으며, 상기 이식체는 시알라스틱 막, 중합체, 섬유 매트릭스(예를 들면, Tissuel®), 또는 콜라겐 매트릭스와 같은 막 및 매트릭스를 포함하는 다공성 또는 비-다공성 물질이다. 하나의 양태에서, 본 발명의 길항제의 하나 이상의 항체의 유효량은 대상체에 대해 영향받은 부위에 국소 투여되어 장애 또는 이의 증상을 예방하고/하거나 치료하고/하거나 유지하고/하거나 완화시킨다. 다른 양태에서, 본 발명의 하나 이상의 항체의 유효량은 본 발명의 항체 이외의 하나 이상의 치료요법제의 유효량과 함께 대상체의 영향받은 부위에 국소 투여하여 장애 또는 하나 이상의 이의 증상을 예방하고/하거나, 치료하고/하거나, 유지하고/하거나 완화시킨다.
다른 양태에서, 예방제 또는 치료제는 조절된 방출 또는 지연된 방출 시스템으로 전달될 수 있다. 하나의 양태에서, 펌프는 조절되거나 지연된 방출을 달성하기 위해 사용될 수 있다[참조: Langer, supra; Sefton, M.V., CRC Crit. Rev. Biomed. Eng., 14: 201-240 (1987); Buchwald et al., Surgery, 88: 507-516 (1980); Saudek et al., N. Engl. J. Med., 321: 574-579 (1989)]. 다른 양태에서, 중합체 물질을 사용하여 본 발명의 치료요법제의 조절되거나 지연된 방출을 달성할 수 있다[참조: 예를 들면, Goodson, J.M., Chapter 6, In Medical Applications of Controlled Release, Vol. II, Applications and Evaluation, (Langer and Wise, eds.) (CRC Press, Inc., Boca Raton, 1984) pp. 115-138; Langer and Peppas, J.　Macromol. Sci. Rev. Macromol. Chem. Phys., C23(1): 61-126 (1983); 또한 Levy et al., Science, 228:190-192 (1985); During et al., Ann. Neurol., 25:351-356 (1989); Howard et al., J.　Neurosurg., 71:105-112 (1989) 참조; 미국 특허 공보 제5,679,377호; 미국 특허 공보 제5,916,597호; 미국 특허 공보 제 5,912,015호; 미국 특허 공보 제5,989,463호; 미국 특허 공보 제5,128,326호; PCT 공보 제WO　99/15154호; 및 PCT 공보 제WO　99/20253호]. 지연된 방출 제형에 사용된 중합체의 예는 폴리(2-하이드록시 에틸 메타크릴레이트), 폴리(메틸 메타크릴레이트), 폴리(아크릴산), 폴리(에틸렌-공-비닐 아세테이트), 폴리(메타크릴산), 폴리글리콜라이드(PLG), 다무수물(polyanhydride), 폴리(N-비닐 피롤리돈), 폴리(비닐 알코올), 폴리아크릴아미드, 폴리(에틸렌 글리콜), 폴리락타이드(PLA), 폴리(락타이드-공-글리콜라이드)(PLGA), 및 폴리오르토에스테르를 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 예시적인 양태에서, 서방성 제형에 사용된 중합체는 불활성의 유출가능한 불순물을 함유하지 않고, 저장시 안정하며, 멸균성이고 생분해성이다. 여전히 다른 양태에서, 조절되거나 지연된 방출(서방성) 시스템은 예방 표적 또는 치료 표적에 근접하여 위치함으로써, 전신 투여량의 분획만을 필요로 할 수 있다[참조: 예를 들면, Goodson, in Medical Applications of Controlled Release, supra, vol. 2, pp. 115-138 (1984)].
조절된 방출 시스템은 문헌[참조: Langer (Science, 249:1527-1533 (1990)]에 의해 고찰시 논의된다. 당해 분야의 숙련가에게 공지된 어떠한 기술도 사용하여 본 발명의 하나 이상의 치료제를 포함하는 서방성 제형을 생산할 수 있다[참조: 예를 들면, 미국 특허 공보 제4,526,938호, PCT 공보 제WO　91/05548호, PCT 공보 제WO　96/20698호; Ning et al., "Intratumoral radioimmunotherapy of a human colon cancer xenograft using a sustained-release gel," Radiotherapy Oncol., 39: 179-189 (1996); Song et al., "Antibody Mediated Lung Targeting of Long-Circulating Emulsions," PDA J. Pharm. Sci.Technol., 50: 372-377 (1996); Cleek et al., "Biodegradable Polymeric Carriers for a bFGF Antibody for Cardiovascular Application," Proceed. Int'l. Symp. Control. Rel. Bioact. Mater., 24: 853-854 (1997); 및 Lam et al., "Microencapsulation of Recombinant Humanized Monoclonal Antibody for Local Delivery," Proceed. Int'l. Symp. Control Rel. Bioact. Mater., 24: 759-760 (1997), 이들 각각은 본원에 이들의 전문이 참조로 인용되어 있다].
구체적인 양태에서, 본 발명의 조성물이 예방제 또는 치료제를 암호화하는 핵산인 경우, 핵산은 이를 적절한 핵산 발현 벡터의 일부로서 작제하고 이를 투여하여 예를 들면, 레트로바이러스 벡터의 사용(참조: 미국 특허 공보 제4,980,286호)에 의해, 또는 직접적인 주사에 의해, 또는 미세입자 충격[예를 들면, 유전자 총; Biolistic® 제조원: 듀퐁(DuPont)]의 사용에 의해, 또는 지질 또는 세포-표면 수용체 또는 형질감염제로 피복시킴에 의해, 또는 이를 핵으로 도입되는 것으로 공지된 호메오박스-유사 펩타이드에 연결시켜 투여함으로써 생체내에서 투여되어 이의 암호화된 예방제 또는 치료제의 발현을 촉진시킬 수 있다[참조: 예를 들면, Joliot et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 88: 1864-1868 (1991)]. 대안적으로, 핵산을 세포내로 도입시키고 동종 재조합에 의해 발현에 대해 숙주 세포 DNA내에 혼입시킬 수 있다.
본 발명의 약제학적 조성물은 의도된 투여 경로와 상용성이 되도록 제형화된다. 투여 경로의 예는 비경구, 예를 들면, 정맥내, 피내, 피하, 경구, 비강내(예를 들면, 흡입), 경피(예를 들면, 국소), 경점막, 및 직장 투여를 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 구체적인 양태에서, 조성물은 사람에게 정맥내, 피하, 근육내, 경구, 비강내 또는 국소 투여를 위해 채택된 약제학적 조성물로서 통상의 과정에 따라 제형화된다. 전형적으로, 정맥내 투여를 위한 조성물은 멸균 등장성 수성 완충액 속의 용액이다. 경우에 따라, 조성물은 또한 리그노캄네와 같은 국소 마취제 및 가용화제를 포함함으로써 주사 부위에서 통증을 덜어줄 수 있다.
본 발명의 조성물이 국소 투여되는 경우, 조성물은 연고제, 크림제, 경피 패치, 로션제, 겔제, 샴푸, 분무제(spray), 에어로졸, 액제, 유제 또는 당해 분야의 숙련가에게 잘 공지된 다른 형태로 제형화될 수 있다[참조: 예를 들면, Remington's Pharmaceutical Sciences and Introduction to Pharmaceutical Dosage Forms, 19th ed., Mack Pub. Co., Easton, Pennsylvania (1995)]. 분무가능하지 않은 국소 용량형의 경우, 국소 적용과 혼화성인 담체 또는 하나 이상의 부형제를 포함하고 물보다 바람직하게는 더 큰 역학적 점도를 갖는 점성 내지 반-고체 또는 고체형이 전형적으로 사용된다. 적합한 제형은 액체, 현탁제, 유제, 크림제, 연고제, 산제, 도찰제(liniment), 연고(salve) 등을 포함하며, 이들은 경우에 따라, 예를 들면, 삼투압과 같은 각종 특성에 영향을 미치는 보조제(예를 들면, 방부제, 안정화제, 습윤제, 완충제 또는 염)으로 안정화되거나 이와 혼합된다. 다른 적합한 국소 용량형은 분무가능한 에어로졸 제제를 포함하며, 여기서 활성 성분은 바람직하게는 고체 또는 액체 불활성 담체와 함께, 가압된 휘발물(예를 들면, 가스성 추진제, 예를 들면, FREON®)과의 혼합물 속에 또는 스퀴즈 병(squeeze bottle) 속에 포장된다. 보습제 또는 습윤제는 또한 필요한 경우, 약제학적 조성물 및 용량형에 첨가될 수 있다. 이러한 추가의 성분의 예는 당해 분야에 잘 공지되어 있다.
본 발명의 방법이 조성물의 비강내 투여를 포함하는 경우, 당해 조성물은 에어로졸 형, 분무제, 연무제(mist), 또는 점적제의 형태로 제형화될 수 있다. 특히, 본 발명에 따라 사용하기 위한 예방제 또는 치료제는 편리하게는 가압된 팩 또는 네불라이저(nebulizer)로부터의 에어로졸 분무 표시의 형태로, 적합한 추진제(예를 들면, 디클로로디플루오로메탄, 트리클로로플루오로메탄, 디클로로테트라플루오로에탄, 이산화탄소 또는 다른 적합한 가스)를 사용하여 편리하게 전달될 수 있다. 가압된 에어로졸의 경우, 용량 단위는 계량된 양을 전달하기 위한 밸브를 제공함으로써 측정할 수 있다. 흡입기 또는 취입기에서 사용하기 위한 캅셀제 및 카트리지(예를 들면, 젤라틴으로 구성된)는 화합물 및, 락토즈 또는 전분과 같은 적합한 분말 혼합물을 함유하여 제형화될 수 있다.
본 발명의 방법이 경구 투여를 포함하는 경우, 조성물은 정제, 캅셀제, 카쉐제(cachet), 젤캅제(gelcap), 액제, 현탁제 등의 형태로 경구 투여될 수 있다. 정제 또는 캅셀제는 통상의 수단에 의해 결합제(예를 들면, 예비젤라틴화된 옥수수 전분, 폴리비닐피롤리돈, 또는 하이드록시프로필 메틸셀룰로즈); 충전제(예를 들면, 락토즈, 미세결정성 셀룰로즈, 또는 인산수소칼슘); 윤활제(예를 들면, 스테아르산마그네슘, 활석, 또는 실리카); 붕해제(예를 들면, 감자 전분 또는 나트륨 전분 글리콜레이트); 또는 습윤제(예를 들면, 나트륨 라우릴 설페이트)와 같은 약제학적으로 허용되는 부형제를 사용하여 제조할 수 있다. 정제는 당해 분야에 잘 공지된 방법으로 피복시킬 수 있다. 경구 투여용 액체 제제는 액제, 시럽제 또는 현탁제의 형태를 취할 수 있으나, 이에 한정되지 않거나, 이들은 사용 전에 물 또는 다른 적합한 비히클과 함께 구성시키기 위한 무수 생성물로서 제공될 수 있다. 이러한 액체 제제는 통상의 수단에 의해 현탁화제(예를 들면, 소르비톨 시럽, 셀룰로즈 유도체, 또는 수소화된 식용 지방); 유화제(예를 들면, 레시틴 또는 아카시아); 비-수성 비히클(예를 들면, 아몬드 오일, 오일성에스테르, 에틸 알코올, 또는 분획화된 야채 오일); 및 방부제(예를 들면, 메틸 또는 프로필-p-하이드록시벤조에이트 또는 소르브산)과 같은 약제학적으로 허용되는 첨가제와 함께 제조할 수 있다. 제제는 또한 경우에 따라 완충제 염, 풍미제, 착색제, 및 감미제를 함유할 수 있다. 경구 투여용 제제는 예방제 또는 치료제(들)의 서 방출, 조절된 방출, 또는 지연된 방출을 위해 적합하게 제형화될 수 있다.
본 발명의 방법은 예를 들면, 에어로졸화제와 함께 제형화된 조성물의, 예를 들면, 흡입제 또는 네불라이저를 사용함으로써, 폐 투여를 포함할 수 있다(참조: 예를 들면, 미국 특허 공보 제6,019,968호; 제5,985,320호; 제5,985,309호; 제5,934,272호; 제5,874,064호; 제5,855,913호; 및 제5,290,540호; 및 PCT 공보 제WO　92/19244호, 제WO　97/32572호, 제WO　97/44013호, 제WO　98/31346호, 및 제WO　99/66903호, 이들 각각은, 이들의 전문이 본원에 참조로 인용된다). 구체적인 양태에서, 본 발명의 항체, 조합 치료요법, 및/또는 본 발명의 조성물은 Alkermes AIR® 폐 약물 전달 기술(제조원: 알케르메스 인코포레이티드, 매사츄세츠주 캠브릿지 소재)을 사용하여 투여된다.
본 발명의 방법은 주사에 의한(예를 들면, 거환 주사 또는 연속 주입에 의해) 비경구 투여용으로 제형화된 조성물의 투여를 포함할 수 있다. 주사용 제형은 단위 용량형(예를 들면, 앰플 또는 다중-투여량 용기 속에) 속에 첨가된 방부제와 함께 제공될 수 있다. 조성물은 오일성 또는 수성 비히클(vehicle) 속에 현탁제, 액제 또는 유제와 같은 형태를 취할 수 있으며, 현탁화제, 안정화제 및/또는 분산제와 같은 제형제를 함유할 수 있다. 대안적으로, 활성 성분은 사용전에 적절한 비히클(예를 들어, 멸균 주사용 증류수)로 작제되기 위해 분말형일 수 있다.
본 발명의 방법은 데포트 제제(depot preparation)로 제형화된 조성물의 투여를 추가로 포함한다. 이러한 장기간 작용하는 제형은 이식(예를 들면, 피하 또는 근육내)에 의해 또는 근육내 주사에 의해 투여될 수 있다. 따라서, 예를 들면, 조성물은 적합한 중합체성 또는 소수성 물질(예를 들면, 허용되는 오일 중 유제로서) 또는 이온 교환 수지와 함께 또는 난용성 유도체(예를 들면, 난용성 염으로서)로서 제형화될 수 있다.
본 발명의 방법은 중성 또는 염 형태로 제형화된 조성물의 투여를 포함한다. 약제학적으로 허용되는 염은 염화수소산, 인산, 아세트산, 옥살산, 타르타르산 등으로부터 기원한 것들과 같은 음이온과 함께 형성된 것들, 및 나트륨, 칼륨, 암모늄, 칼슘, 수산화철, 이소프로필아민, 트리에틸아민, 2-에틸아민 에탄올, 히스티딘, 프로카인 등으로부터 기원한 것들과 같은 양이온과 함께 형성된 것들을 포함한다.
일반적으로, 조성물의 성분은 단위 용량형 속에 무수동결건조된 분말로서 또는 물을 함유하지 않는 농축물로서, 활성 제제의 양을 나타내는 앰플 또는 사쉐제(sachet)와 같은 밀폐적으로 밀봉된 용기 속에 단위 용량형 속에 별도로 또는 함께 혼합되어 공급된다. 투여 방식이 주입인 경우, 조성물은 멸균 약제학적 등급 수 또는 염수를 함유하는 주입 병으로 분산될 수 있다. 투여 방식이 주사에 의한 경우, 주사용 멸균수 또는 염수의 앰플을 제공하여 성분들이 투여 전에 혼합되도록 할 수 있다.
특히, 본 발명은, 본 발명의 예방제 또는 치료제, 또는 약제학적 조성물 중 하나 이상을 제제의 양을 나타내는 앰플 또는 사쉐제와 같은 밀폐적으로 밀봉된 용기 속에 패킹할 수 있다. 하나의 양태에서, 본 발명의 예방제 또는 치료제, 또는 약제학적 조성물 중 하나 이상은 밀폐적으로 밀봉된 용기 속에 무수 멸균되고 동결건조된 분말 또는 물을 함유하지 않는 농축물로서 공급되며 대상체에게 투여하기에 적절한 농도로 재구성(예를 들면, 물 또는 염수를 사용함)될 수 있다. 바람직하게는, 본 발명의 예방제 또는 치료제 또는 약제학적 조성물 중 하나 이상은 밀폐적으로 밀봉된 용기 속에 무수 멸균 동결건조된 분말로서 적어도 5 mg, 보다 바람직하게는 적어도 10 mg, 적어도 15 mg, 적어도 25 mg, 적어도 35 mg, 적어도 45 mg, 적어도 50 mg, 적어도 75 mg, 또는 적어도 100 mg의 단위 용량에서 제공된다. 본 발명의 동결건조된 예방제 또는 치료제 또는 약제학적 조성물은 2℃와 8℃의 사이에서 이의 원래의 용기 속에 저장되어야 하며 본 발명의 예방제, 치료제 또는 약제학적 조성물은 재구성된 후 1주 이내, 바람직하게는 5일 내, 72시간 내, 48시간 내, 24시간 내, 12시간 내, 6시간 내, 5시간 내, 3시간 내, 또는 1시간 내에서 투여하여야 한다. 대체 양태에서, 본 발명의 예방제, 치료제 또는 약제학적 조성물 중 하나 이상은 제제의 양 및 농도를 나타내는 밀폐적으로 밀봉된 용기내 액체 형태로 공급된다. 바람직하게는, 투여된 조성물의 액체 형은 밀폐적으로 밀봉된 용기 속에 적어도 0.25 mg/ml, 보다 바람직하게는 적어도 0.5 mg/ml, 적어도 1 mg/ml, 적어도 2.5 mg/ml, 적어도 5 mg/ml, 적어도 8 mg/ml, 적어도 10 mg/ml, 적어도 15 mg/kg, 적어도 25 mg/ml, 적어도 50 mg/ml, 적어도 75 mg/ml 또는 적어도 100 mg/ml으로 공급된다. 액체 형은 이의 원래의 용기 속에 2℃와 8℃ 사이에서 저장되어야 한다.
본 발명의 항체 및 항체 부위는 비경구 투여에 적합한 약제학적 조성물내로 혼입될 수 있다. 바람직하게는, 항체 또는 항체 부위는 0.1 내지 250 mg/ml의 항체를 함유하는 주사가능한 용액으로 제조될 것이다. 주사가능한 용액은 플린트(flint) 또는 호박색 바이알, 앰플 또는 예비-충전된 주사기의 형태로 액체 또는 동결건조된 용량형으로 구성될 수 있다. 완충액은 pH 5.0 내지 7.0(최적으로 pH 6.0)에서 L-히스티딘(1 내지 50 mM), 최적으로 5 내지 10mM일 수 있다. 다른 적합한 완충액은 석신산나트륨, 시트르산나트륨, 인산나트륨 또는 인산칼륨을 포함하나 이에 한정되지 않는다. 염화나트륨은 0 내지 300 mM(액체 용량형의 경우 최적으로 150 mM)의 농도에서 용액의 독성을 개질시키는데 사용될 수 있다. 동결보호제는 동결건조된 용량형을 위해, 기본적으로 0 내지 10% 수크로즈(최적으로 0.5 내지 1.0%)를 포함할 수 있다. 다른 적합한 동결보호제는 트레할로즈 및 락토즈를 포함한다. 증량제가 동결건조된 용량형을 위해, 원칙적으로 1 내지 10% 만니톨(최적으로 2 내지 4%)로 포함될 수 있다. 다른 적합한 증량제는 글리신, 아르기닌을 포함하며, 기본적으로 1 내지 50 mM L-메티오닌(임의로 5 내지 10 mM)로 포함될 수 있다. 다른 적합한 증량제는 글리신, 아르기닌을 포함하며, 0 내지 0.05% 폴리소르베이트-80(최적으로 0.005 내지 0.01%)으로 포함될 수 있다. 추가의 표면활성제는 폴리소르베이트 20 및 BRIJ 표면활성제를 포함하나 이에 한정되지 않는다. 비경구 투여용의 주사가능한 용액으로서 제조된 본 발명의 항체 또는 항체 부위를 포함하는 약제학적 조성물은 치료학적 단백질(예를 들면, 항체)의 흡수 또는 분산을 증가시키는데 사용된 것들과 같은 보조제로서 유용한 제제를 추가로 포함할 수 있다. 특히 유용한 보조제는 하이알루로니다제(예를 들면, Hylenex® 재조합체 사람 하이알루로니다제)이다. 주사가능한 용액 중 하이알루로니다제의 첨가는 비경구 투여, 특히 피하 투여 후 사람 생이용성을 개선시킨다. 이는 통증 및 불편없이 보다 큰 주사 부위 용적(즉, 1　ml 초과), 및 주사 부위 반응의 최소의 발생을 허용한다(참조: PCT 공보 제WO　2004/078140호 및 US 공보 제2006/104968호).
본 발명의 조성물은 다양한 형태로 존재할 수 있다. 이들은 예를 들면, 액체, 반-고체 및 고체 용량형, 예를 들면, 액체 용액(예를 들면, 주사가능하고 주입가능한 용액), 분산제 또는 현탁제, 정제, 환제, 산제, 리포좀 및 좌제를 포함한다. 바람직한 형태는 의도된 투여 방식 및 치료학적 적용에 의존한다. 대표적인 바람직한 조성물은 다른 항체를 사용한 사람의 수동적 면역화에 사용된 것들과 유사한 조성물과 같은 주사가능하거나 주입가능한 용액의 형태이다. 바람직한 투여 방식은 비경구(예를 들면, 정맥내, 피하, 복강내, 근육내)이다. 예시적인 양태에서, 항체는 정맥내 주입 또는 주사로 투여된다. 다른 바람직한 양태에서, 항체는 근육내 또는 피하 주사로 투여된다.
치료학적 조성물은 전형적으로 제조 및 저장 조건하에서 멸균성이고 안정하여야만 한다. 조성물은 액제, 미세유제, 분산제, 리포좀, 또는 고 약물 농도에 적합한 다른 주문된 구조로 제형화될 수 있다. 멸균 주사가능한 액제는 활성 화합물(즉, 항체 또는 항체 부위)를, 필요에 따라, 위에서 나열한 성분들 중 하나 또는 조합과 함께 적절한 용매 속에 요구되는 양으로 혼입시킨 후 여과된 멸균을 수행함으로써 제조할 수 있다. 일반적으로, 분산제는 활성 화합물을, 염기성 분산 매질 및 상기 나열된 것들로부터의 필요한 다른 성분들을 함유하는 멸균 비히클내로 혼입시켜 제조한다. 멸균성의 주사가능한 액제의 제조를 위한 멸균성의, 동결건조된 분말의 경우에, 바람직한 제조 방법은 앞서 멸균-여과된 이의 용액으로부터 활성 성분의 분말과 어떠한 추가의 바람직한 성분의 분말을 생성하는 진공 건조 및 분무-건조이다. 용액의 적절한 유동성은 예를 들면, 레시틴과 같은 피복제의 사용에 의해, 분산제의 경우에 요구되는 입자 크기의 유지에 의해 및 표면활성제의 사용에 의해 유지될 수 있다. 주사가능한 조성물의 연장된 흡수는 조성물 속에서 흡수를 지연시키는 제제, 예를 들면, 모노스테아레이트 염 및 젤라틴을 포함시킴으로써 수행될 수 있다.
본 발명의 결합 단백질은, 당해 분야에 공지된 각종 방법으로 투여할 수 있으며, 많은 치료학적 적용에도 불구하고, 바람직한 투여 방식/유형은 피하 주사, 정맥내 주사 또는 주입이다. 당해 분야의 숙련가에 의해 익숙해질 것인 바와 같이, 투여 경로 및/또는 방식은 바람직한 결과에 따라 변할 것이다. 특정 양태에서, 활성 화합물은 신속한 방출, 예를 들면, 이식체, 경피 패취, 및 미세캡슐화된 전달 시스템을 포함하는 조절된 방출 제형에 대해 화합물을 보호할 담체를 사용하여 제조할 수 있다. 생분해가능하고, 생적합성인 중합체, 예를 들면, 에틸렌 비닐 아세테이트, 다무수물, 폴리글리콜산, 콜라겐, 폴리오르토에스테르, 및 폴리락트산이 사용될 수 있다. 이러한 제형의 많은 제조 방법들이 특허되어 있거나 일반적으로 당해 분야의 숙련가에게 공지되어 있다[참조: 예를 들면, Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems, (J.R. Robinson, ed.) (Marcel Dekker, Inc., New York, 1978].
특정 양태에서, 본 발명의 항체 또는 항체 부위는 예를 들면, 불활성 희석제 또는 동화가능한 식용 담체와 함께 경구 투여될 수 있다. 화합물(및 필요한 경우, 다른 성분)은 또한 경질 또는 연질 쉘 젤라틴 캅셀 속에 봉입되거나, 정제로 압착되거나 대상체 식이내로 직접 혼입될 수 있다. 경구 치료학적 투여의 경우, 화합물은 부형제와 함께 혼입될 수 있으며 섭취가능한 정제, 볼내 정제, 트로키제, 캅셀제, 엘릭서르제, 현탁제, 시럽제, 웨이퍼제(wafer) 등의 형태로 사용될 수 있다. 본 발명의 화합물을 비경구 투여 외의 방법으로 투여하기 위해, 화합물을 이의 불활성화를 방지하는 물질로 피복시키거나, 화합물을 이러한 물질과 함께 공-투여하는 것이 필수적일 수 있다.
보충적인 활성 화합물은 또한 조성물내로 혼입시킬 수 있다. 특정 양태에서, 본 발명의 항체 또는 항체 부위는, IL-1β 활성이 유해한 장애를 치료하는데 유용한 하나 이상의 추가의 치료제와 함께 공제형화되고/되거나 공투여된다. 예를 들면, 본 발명의 항-사람 IL-1β 항체 또는 항체 부위는 다른 표적(예를 들면, 다른 사이토킨과 결합하거나 세포 표면 분자와 결합하는 항체)와 함께 공제형화되고/되거나 공투여될 수 있다. 또한, 본 발명의 하나 이상의 항체는 앞서의 치료제 중 2개 이상과 함께 사용될 수 있다. 이러한 조합 치료요법은 투여된 치료제의 보다 적은 용량을 유리하게 이용할 수 있으므로, 각종 단독치료요법과 관련된 가능한 독성 또는 합병증을 피할 수 있다.
특정 양태에서, IL-1β에 대한 항체 또는 이의 단편은 당해 분야에 공지된 반감기 연장 비히클에 연결된다. 이러한 비히클은 Fc 도메인, 폴리에틸렌 글리콜 및 덱스트란을 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 이러한 비히클은 예를 들면, 미국 출원번호 제09/428,082호(현재 미국 특허 공보 제6,660,843호)에 기술되어 있으며 이는 본원에 의해 어떠한 목적을 위해서도 참조로 인용되어 있다.
구체적인 양태에서, 본 발명의 항체 또는 본 발명의 다른 예방제 또는 치료제를 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 핵산 서열을 투여하여 유전자 치료요법에 의한 장애 또는 이의 하나 이상의 증상을 치료하거나, 예방하거나, 유지하거나 완화시킨다. 유전자 치료요법은 발현된 또는 발현가능한 핵산을 대상체에게 투여함으로써 수행된 치료요법을 말한다. 본 발명의 당해 양태에서, 핵산은 이들의 암호화된 항체 또는, 예방 또는 치료 효과를 매개하는 본 발명의 예방제 또는 치료제를 생산한다.
당해 분야에서 이용가능한 유전자 치료요법을 위한 방법들 중 어느 것도 본 발명에 따라서 사용될 수 있다. 유전자 치료요법의 방법의 일반적인 고찰에 대해서는, 문헌[참조: Goldspiel et al., Clinical Pharm., 12: 488-505 (1993); Wu et al., "Delivery systems for gene therapy," Biotherapy, 3: 87-95 (1991); Tolstoshev, P., Ann. Rev. Pharmacol. Toxicol., 32: 573-596 (1993); Mulligan, R.C., Science, 260: 926-932 (1993); 및 Morgan and Anderson, "Human Gene Therapy," Ann. Rev. Biochem., 62:191-217 (1993); Robinson, C., Trends Biotechnol., 11:155 (1993)]을 참조한다. 사용될 수 있는 재조합체 DNA 기술의 분야에 일반적으로 공지된 방법은 문헌[참조: Ausubel et al. (eds.), Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley &Sons, New York (1993); and Kriegler, Gene Transfer and Expression, A Laboratory Manual, Stockton Press, New York (1990)]에 기술되어 있다. 유전자 치료요법의 각종 방법의 상세한 설명은 본원에 참조로 인용된 미국 공보 제2005/0042664 A1호에 기재되어 있다.
IL-1 계열 구성원(IL-1β 및 IL-1α)는 면역 및 염증 성분들을 포함하는 각종 장애와 관련된 병리학에서 중요한 역할을 담당한다. 본원에 기술된 IL-1 결합 단백질은 이러한 장애를 치료하기 위해 개인에게 투여될 수 있다. 하나의 양태에서, 대상체에게 본원에 기술된 IL-1 결합 단백질을 투여함을 포함하는 본 발명의 방법에 의해 치료될 수 있는 장애는 당뇨병; 포도막염; 신경병증성 통증; 골관절염성 통증; 염증성 통증; 류마티스 관절염; 골관절염; 소아 만성 관절염; 패혈성 관절염; 라임 관절염(Lyme arthritis); 건선 관절염; 반응성 관절염; 척추관절병; 전신 홍반 루푸스 (SLE); 크론 병; 궤양성 대장염; 염증성 장 질환; 자가면역 당뇨병; 인슐린 의존성 진성 당뇨병; 갑상샘염; 천식; 알레르기 질환; 건선; 피부염; 피부경화증; 이식 대 숙주 질환; 장기 이식 거부; 장기 이식과 관련된 급성 면역 질환; 장기 이식과 관련된 만성 면역 질환, 사르코이드증; 죽상경화증; 파종성 혈관내 응고(DIC);; 가와사키 병; 그레이브 병; 콩팥 증후군; 만성 피로 증후군; 베게너 육아종증; 헤노흐-쉔라인 자반증; 신장의 미세 혈관염;; 만성 활성 간염;; 자가면역 포도막염; 패혈 쇼크; 독성 쇼크 증후군; 패혈증 증후군; 악액질; 전염병; 기생충 질환; 급성 횡단성 척수염; 헌팅턴 무도병; 파킨슨 병; 알츠하이머 병; 뇌졸중; 원발성 담즙성 간경변; 용혈성 빈혈; 악성 종양; 심부전; 심근 경색; 애디슨 병; 산발성 다분비선 결핍 유형 I; 다분비선 결핍 유형 II (슈미트 증후군); 급성 호흡곤란 증후군 (ARDS); 탈모증; 원형 탈모증; 혈청반응 음성인 관절병증; 관절병증; 라이터 질환; 건선 관절병증; 궤양성 대장염 관절병증; 장병원성 윤활막염; 클라미디아; 예르시니아 및 살모넬라 관련 관절병증; 척추관절병증; 아테롬성 질환/동맥경화; 아토피성 알레르기; 자가면역 수포성 질환; 보통 천포창; 낙엽상 천포창; 유사천포창; 선형 IgA 질환; 자가면역성 용혈성 빈혈; 쿰즈 양성 용혈성 빈혈; 후천성 악성 빈혈; 소아 악성 빈혈; 근육통성 뇌염/로얄 프리 질환(Royal Free disease); 만성 피부 점막 칸디다증; 거대 세포 동맥염 (GCA); 원발성 경화 간염; 잠복성 자가면역 간염; 후천성 면역 결핍증 (AIDS); 후천성 면역 결핍 관련 질환; B형 간염; C형 간염; 일반적인 다양한 면역 결핍증(보통의 가변성 저감마글로불린혈증); 확장성 심근병증; 여성 불임증; 난소 기능상실; 조기 폐경; 섬유성 폐 질환; 잠복성 섬유화 폐포 염; 사후 염증성 간질성 폐 질환; 간질성 폐렴; 간질성 폐 질환과 관련된 결합 조직 질환; 혼합된 결합 조직 질환 관련 폐 질환; 전신 경화증 관련된 간질성 폐 질환; 류마티스 관절염 관련 간질성 폐 질환; 전신 홍반 루푸스 관련 폐 질환; 피부근육염/다발근육염 관련 폐 질환; 쇼그렌 질환 관련 폐 질환; 강직성 척추염 관련 폐 질환; 혈관염성 확산 폐 질환; 헤모시덴린증 관련 폐 질환; 약물 유발 간질성 폐 질환; 섬유증; 방사선 섬유증; 폐쇄 세기관지염; 만성 호산구성 폐렴; 림프구 침윤성 폐 질환; 감염후 간질성 폐 질환; 통풍성 관절염; 자가면역 간염; 제1형 자가면역 간염(전형적 자가면역 또는 루포이드 간염); 제2형 자가면역 간염(항-LKM 항체 간염); 자가면역 매개된 저혈당증; 흑색극세포증을 동반한 타입 B의 인슐린 내성; 부갑상샘저하증; 골관절염; 원발성 경화 담관염; 건선 1형; 건선 2형; 특발성 백혈구 감소증; 자가면역 중성구 감소증; 신장 질환 NOS; 사구체신장염; 신장의 미세 혈관염; 라임 질환; 원반모양 홍반 루푸스; 특발성 남성 불임; 질소 산화물-관련 남성 불임; 정자 자가면역; 다발성 경화증 (1차 진행성, 2차 진행성, 재발 완화성을 포함한 모든 하위 유형); 교감 안염; 결합 조직 질환에 부수적인 폐 고혈압; 굿패스춰 증후군; 결절성 다발의 폐 발현; 급성 류마티스 열; 류마티스 척추염; 스틸 병; 전신 경화증; 쇼그렌 증후군; 타카야스 병/동맥염; 자가면역 저혈소판증 (AITP); 특발성 저혈소판증; 자가면역 갑상선 질환; 갑상선기능항진증; 갑상선종의 자가면역 갑상선기능저하증 (하시모토 병); 위축성 자가면역 갑상선기능저하증; 원발성 점액수종; 수정체성 포도막염; 원발성 혈관염; 백반증; 급성 간 질환; 만성 간 질환; 알코올성 간경변; 알코올 유발 간 손상; 쓸개즙정체; 특이한 간 질환; 약물 유발 간염; 비 알콜성 지방간염; 알레르기; 그룹 B 스트렙토코커스 (GBS) 감염; 정신 장애 (예를 들어, 우울증 및 정신 분열증); Th2 유형 및 Th1 유형 매개 질환; 급성 및 만성 통증 (통증의 상이한 형태들); 암(예를 들어, 폐, 유방, 위, 방광, 결장, 췌장, 난소, 전립선, 및 직장 암); 조혈성 악성종양; 백혈병; 림프종; 무 베타 지방단백혈증; 말단청색증; 급성 및 만성 기생성 또는 감염성 과정; 급성 백혈병; 급성 림프모구 백혈병 (ALL); T-세포 ALL; FAB ALL; 급성 골수성 백혈병 (AML); 급성 또는 만성 세균 감염; 급성 췌장염; 급성 신부전; 아데노암종; 심방 이소성 박동; AIDS 치매 병변군; 알코올유도 간염; 알레르기성 결막염; 알레르기성 접촉 피부염; 알레르기성 비염; 동종 이식 거부; 알파-l-안티트립신 결핍증; 근육위축가쪽 경화증; 빈혈; 협심증; 전각 세포 변성; 항-CD3 치료요법; 항인지질 증후군; 항-수용체 과민성 반응; 대동맥 및 말초 동맥류; 대동맥 박리; 동맥 고혈압; 동맥 경화; 동정맥루; 운동 실조증; 심방 세동(지속성 또는 발작성); 심방 조동; 심방 심실 블록; B 세포 림프종; 뼈 이식 거부; 골수 이식 (BMT) 거부; 번들 브랜치 블록; 버킷 림프종; 화상; 심장성 부정맥; 심장마비 증후군; 심장 종양; 심근병증; 심폐 바이패스 염증 반응; 연골 이식 거부; 소뇌 피질 변성; 소뇌 장애; 혼란성 또는 다초점성 심방 빈맥; 화학 치료요법 관련 장애; 만성 골수구성 백혈병 (CML); 만성 알코올 중독; 만성 염증성 병리; 만성 림프성 백혈병 (CLL); 만성 폐쇄성 폐 질환 (COPD); 만성 살리실산의 중독; 결장직장 암종; 울혈성 심부전; 결막염; 접촉성 피부염; 폐 심장증; 관상 동맥 질환; 크로이츠펠트-야콥 병; 배양물 음성 패혈증; 낭성 섬유증; 사이토킨 치료요법 관련 장애; 권투선수 치매; 탈수초 병; 뎅기열 출혈성 발열; 피부염; 피부과 병태; 진성 당뇨병; 당뇨병성 동맥경화 질환; 광범위 레비소체 병; 확대 울혈성 심근병증; 기저 신경절의 장애; 중년의 다운 증후군; CNS 도파민 수용체를 차단하는 약물에 의해 유도된 약물-유발 운동 장애; 약물 민감도; 습진; 뇌척수염; 심내막염; 내분비병증; 후두개염; 엡슈타인-바 바이러스 감염; 지단홍통증; 추체외로 및 소뇌 장애; 가족성 적혈구 포식성 림프조직구증; 태아 가슴샘 임플란트 제거; 프리드리히 운동 실조증; 기능성 말초 동맥 장애; 진균성 패혈증; 가스 괴저, 위궤양; 사구체 신염; 모든 장기 또는 조직의 이식 거부; 그람 음성 패혈증; 그람 양성 패혈증; 세포내 유기체로 인한 육아종; 모발 세포 백혈병; 할레르보르덴-스파츠 병; 하시모토의 갑상샘염; 건초열; 심장 이식 거부; 혈색소 침착증; 혈액 투석; 용혈성 요독성 증후군/혈전용해성 혈소판 감소성 자반증; 뇌출혈; A형 간염; His 번들 부정맥; HIV 감염/HIV 신경병증; 호지킨 병; 운동과다 장애; 과민성 반응; 과민성 폐렴; 고혈압; 운동과다 장애; 시상하부-뇌하수체-부신 축 평가; 특발성 애디슨 병; 특발성 폐의 섬유증 (IPF); 항체 매개된 세포 독성; 무력증; 유아 척추 근육 위축; 대동맥의 염증; 인플루엔자 a; 이온화 방사선 노출; 홍채섬모체염/포도막염/시각 신경염; 허혈-재관류 손상; 허혈성 뇌졸중; 소아 류마티스 관절염; 소아 척추 근육 위축; 카포시 육종; 신장 이식 거부; 레지오넬라; 리슈만편모충증; 나병; 피질척수계의 병변; 지방부종; 간 이식 거부; 림프부종; 말라리아; 악성 림프종; 악성 조직구증; 악성 흑색종; 수막염; 수막구균혈증; 대사 증후군 편두통 두통; 특발성 편두통 두통; 미토콘드리아성 멀티시스템 장애; 혼합된 결합 조직 질환; 단클론성 감마글로불린병증; 다중골수종; 다중 시스템 변성, 중증근육무력증; 마이코박테리움 아비움 인트라셀룰라에; 마이코박테리움 결핵; 골수형성이상 증후군; 심근 경색; 심근 허혈성 장애; 코인두 암종; 신생아 만성 폐 질환; 신염; 콩팥증; 신경변성 질환; 신경성 I 근육 위축; 호중구감소증 발열; 비-호지킨 림프종; 복부 대동맥 및 이의 분지의 폐색; 폐색성 동맥 장애; OKT3® 치료요법; 고환염/부고환염; 고환염/정관절제술 반전 시술; 병원처방; 골다공증; 췌장 이식 거부; 췌장 암종; 악성종양의 신생물딸림 증후군/고칼슘 혈증; 부갑상샘 이식 거부; 골반 염증성 질환; 다년생 비염; 심낭 질환; 말초 죽상경화성 질환; 말초 혈관 장애; 복막염; 악성 빈혈; 주폐포자충 폐렴; 폐렴, POEMS 증후군 (다발신경병, 오가노메갈리, 내분비병증, 단클론 감마글로불린증, 및 피부 변화 증후군), 후 재관류 증후군; 후 펌프 증후군; 후-MI 심장절개 증후군; 자간전증; 진행성 핵상 마비; 원발성 폐 고혈압; 방사선 치료요법; 레이노드 현상; 레이노드 질환; 레프섬(Refsum) 질환; 일반적인 협소한 QRS 빈맥; 신장혈관 고혈압; 재관류 손상; 제한 심근병증; 육종; 노인무도병; 레비 소체의 노인 치매; 혈청반응음성 관절병증; 쇼크(shock); 낫 세포 빈혈; 피부 동종이식 거부; 피부 변화 증후군; 작은 창자 이식 거부; 고형 종양; 특정 부정맥; 척추 운동 장애; 척수소뇌 변성; 연쇄구군 근육염; 소뇌의 구조 병변; 아급성 경화성번뇌염; 실신; 심혈관계 매독; 전신 아나필락시스; 전신 염증성 반응 증후군; 전신 발병 소아 류마티스 관절염; 모세혈관확장증; 폐쇄혈전혈관염; 혈소판 감소; 독성; 이식; 외상 / 출혈; 유형 III 과민성 반응; 유형 IV 과민증; 불안정 협심증; 요독증; 요로성패혈증; 두드러기; 판막 심장 질환; 정맥류; 혈관염; 정맥 질환; 정맥 혈전증; 심실 세동; 바이러스 및 진균 감염; 바이러스성 뇌염/무균 수막염; 바이러스-관련 식혈세포성 증후군; 베르닉케-코르사코프 증후군; 윌슨 병; 모든 장기 또는 조직의 이종이식 거부; 급성 관상 동맥 증후군; 급성 특발성의 다발신경염; 급성 염증 탈수초 다발성 신경병증; 급성 허혈; 성인 스틸 병; 원형 탈모증; 아나필락시스; 항 인지질 항체 증후군; 재생불량성 빈혈; 동맥 경화; 아토피성 습진; 아토피성 피부염; 자가면역 피부염; 스트렙토코커스 감염과 관련된 자가면역 장애; 자가면역 창자병증; 자가면역 청력 손실; 자가면역 림프구증식 증후군 (ALPS); 자가면역 심근염; 자가면역 조기 폐경; 눈꺼풀염; 기관지 확장증; 수포성 유사천포창; 심혈관 질환; 파국적 항인지질 증후군; 복강 질환; 자궁 경부 척추증; 만성 허혈; 반흔성 유사천포창; 다발성 경화증에 대한 위험을 갖는 임상적으로 분리된 증후군 (CIS); 결막염; 어린 시절 발병 정신 장애; 누낭염; 피부근육염; 당뇨병성 망막증; 디스크 이탈증; 디스크 탈출증; 약물 유발 면역 용혈성 빈혈; 심내막염; 자궁내막증; 안구내염; 상공막염; 다형홍반; 주요 다형홍반; 임신성 유사천포창; 귈라인-바레 증후군 (GBS); 건초열; 휴즈 증후군; 특발성 파킨슨 병; 특발성 간질성 폐렴; IgE로 인한 알레르기; 면역 용혈성 빈혈; 봉입체 근염; 감염성 눈 염증성 질환; 염증성 탈수초 질환; 염증성 심장 질환; 염증성 신장 질환; 홍채염; 각막염; 건조각막 결막염; 쿠쓰마울 질환 또는 쿠쓰마울-마이어 질환; 랜드리 마비; 랑게르한스 세포 조직구증; 그물 울혈반; 황반 변성; 현미경적 다발성혈관염; 모부스 베흐테레프; 운동 신경세포 장애; 점막 유사천포창; 다발성 장기 부전; 중증근육무력증; 골수혈성이상 증후군; 심근염; 신경근 장애; 신경병증; 비-A 비-B 형 간염; 시각 신경염; 골용해; 소수관절 JRA; 말초 동맥 폐색성 질환 (PAOD); 말초 혈관 장애 (PVD); 말초 동맥; 질환 (PAD); 정맥염; 결절다발동맥염 (또는 결절동맥주위염); 다발연골열; 류마티스성 다발성 근육통; 백모증; 다관절 JRA; 다내분비선 결핍증후근; 다발근육염; 류마티스성 다발성 근육통 (PMR); 후-펌프 증후군; 원발성 파킨슨증; 2차 파킨슨증; 전립샘염; 순수 적혈구 세포 무형성; 원발성 부신 기능부전; 재발성 시각신경 척수염; 재협착; 류마티스 심장 질환; SAPHO (윤활막염; 여드름; 농포증; 뼈과다증 및 골염); 2차 아밀로이드증; 쇼크 폐; 골막염; 좌골 신경통; 2차 부신 기능부전; 실리콘 관련된 결합 조직 질환; 스네돈-윌킨슨 피부병; 강직척추염, 스티븐스-존슨 증후군 (SJS); 전신 염증성 반응 증후군; 측두 동맥염; 톡소플라스믹 망막염; 독성 표피 괴사용해; 횡 척수염; TRAPS (종양 괴사 인자 수용체 타입 1 (TNFR) 관련 정기 증후군); 흑색가시세포증을 동반한 타입 B의 인슐린 저항성; 제1형 알레르기 반응; 제II형 당뇨병; 두드러기; 보통 간질성 폐렴 (UIP); 봄철 결막염; 바이러스성 망막염; 보그트-코야나기-하라다 증후군 (VKH 증후군); 습윤 황반 변성; 상처 치유; 예르시니아 및 살모넬라 관련 관절병증을 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
본 발명의 결합 단백질은 자가면역 질환, 특히 염증, 류마티스 관절염(RA), 골관절염, 건선, 다발경화증(MS), 및 다른 자가면역 질환으로 고생하는 사람을 치료하는데 사용될 수 있다.
본 발명의 항체 또는 항체 부위는 또한 자가면역 질환 및 염증 질환의 치료에 유용한 하나 이상의 추가의 치료제와 함께 투여될 수 있다.
하나의 양태에서, 본 발명의 조성물 및 방법으로 치료되거나 진단될 수 있는 질환은 유방, 결장, 직장, 폐, 인두중앙부, 하인두, 식도, 위, 췌장, 간, 방광 및 담즙관, 소장, 뇨관(신장, 방광 및 요로상피 포함), 여성 생식관(경부, 자궁 및 난소, 및 또한 융모막암종 및 임신영양막병 포함), 남성 생식관(전립샘, 정낭, 고환, 및 정자 세포 종양), 내분비샘(갑상샘, 부신, 및 뇌하수체 포함), 및 피부의 암종, 및 또한 혈관종, 흑색종, 육종(골 및 연조직으로부터 발생한 것들 및 또한 카포시 육종(Kaposi's sarcoma) 포함), 뇌, 신경, 눈 및 수막의 종양(별아교세포종, 신경아교종, 아교모세포종, 망막모세포종, 신경종, 신경모세포종, 슈반세포종, 및 수막종 포함), 백혈병, 및 림프종(호지킨 및 비-호지킨 림프종 둘다)과 같은 조혈성 악성종양으로부터 기원한 고형 종양을 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
다른 양태에서, 본 발명의 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 종양으로부터의 전이를 예방하거나 암을 치료하는데 사용된다. 이러한 치료는 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 단독으로 또는 다른 치료제 또는 방사선치료요법 및/또는 화학요법제와 같은 치료와 함께 투여함을 포함할 수 있다.
본 발명의 항체, 또는 이의 항원 결합 부분은 항신생물제, 방사선치료요법, 화학치료요법, 예를 들면, DNA 알킬화제, 시스플라틴, 카르보플라틴, 항-투불린제, 파클리탁셀, 도세탁셀, 탁솔, 독소루비신, 겜시타빈, 겜자르, 안트라사이클린, 아드리아마이신, 토포이소머라제 I 억제제, 토포이소머라제 II 억제제, 5-플루오로우라실((5-FU), 류코보린, 이리노테칸, 수용체 타이로신 키나제 억제제(예를 들면, 에를로티니브, 게피니티브), COX-2 억제제(예를 들면, 셀레콕시브), 키나제 억제제, 및 siRNA를 포함하나 이에 한정되지 않는 제제와 조합될 수 있다.
본 발명의 결합 단백질은 또한 각종 질환의 치료시 유용한 하나 이상의 추가의 치료제와 함께 투여될 수 있다.
본 발명의 항체, 또는 이의 항원 결합 부분은 이러한 질환을 치료하기 위해 단독으로 또는 함께 사용될 수 있다. 본 발명의 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 단독으로 또는 추가의 제제, 예를 들면, 치료제와 함께 사용될 수 있으며, 상기 추가의 제제는 이의 의도된 목적을 위해 당해 분야의 숙련가에 의해 선택된다. 예를 들면, 추가의 제제는 본 발명의 항체에 의해 치료되는 질환 또는 병태를 치료하는데 유용한 것으로 당해 분야에 인지된 치료제일 수 있다. 추가의 제제는 또한 치요학적 조성물에 대해 유리한 기여를 부여하는 제제, 예를 들면, 조성물의 점도에 영향을 미치는 제제일 수 있다.
본 발명내에 포함될 조합물은 이의 의도된 목적에 유용한 조합물임이 또한 이해되어야 한다. 하기 설정된 제제는 나열의 목적이며 이로 제한함을 의도하지는 않는다. 본 발명의 일부인 조합물은, 본 발명의 항체 및 하기 목록으로부터 선택된 적어도 하나의 추가의 제제일 수 있다. 조합이, 형성된 조성물이 이의 의도된 기능을 수행할 수 있도록 하는 경우, 조합은 또한 하나 이상의 추가의 제제, 예를 들면, 2개 또는 3개의 제제를 포함할 수 있다.
바람직한 조합은 이부프로펜과 같은 약물을 포함하는 NSAIDS로 또한 언급된 비-스테로이드성 소염 약물이다. 다른 바람직한 조합물은 프레드니솔론을 포함하는 코르티코스테로이드이며; 스테로이드 사용의 익히 공지된 부작용은, 본 발명의 항-IL-1β 항체와 함께 환자를 치료하는 경우 요구되는 스테로이드 투여량을 줄임으로써 감소시키거나 심지어 제거할 수 있다. 본 발명의 항체 또는 항체 부위가 조합될 수 있는 류마티스 관절염용 치료제의 비-제한적 예는 다음을 포함하나, 이에 한정되지 않는다: 사이토킨 억제성 소염 약물(CSAID); 다른 사람 사이토킨 또는 성장 인자, 예를 들면, TNF, LT, IL-1, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-15, IL-16, IL-18, IL-21, 인터페론, EMAP-II, GM-CSF, FGF, 및 PDGF에 대한 항체 또는 상기한 것의 길항제. 본 발명의 항체, 또는 이의 항원 결합 부분은 CD2, CD3, CD4, CD8, CD25, CD28, CD30, CD40, CD45, CD69, CD80 (B7.1), CD86 (B7.2), CD90, CTLA 또는, CD154(gp39 또는 CD40L)를 포함하는 이들의 리간드와 같은 세포 표면 분자에 대한 항체와 조합될 수 있다.
치료제의 바람직한 조합물은 자가면역 및 후속적인 염증 캐스케이드(cascade)에서 상이한 시점에서 방해할 수 있으며; 바람직한 예는 키메라성, 사람화되거나 사람 TNF 항체, D2E7, (PCT 공보 제WO　97/29131호), CA2 (RemicadeTM), CDP 571, 및 가용성 p55 또는 p75 TNF 수용체, 이의 유도체, (p75TNFR1gG (EnbrelTM) 또는 p55TNFR1gG (레네르셉트)와 같은 TNF 길항제, 및 또한 TNFα 전환 효소(TACE) 억제제를 포함하며; 유사하게 IL-1 억제제(인터루킨-1-전환 효소 억제제, IL-1RA 등)는 동일한 이유로 효과적일 수 있다. 다른 바람직한 조합물은 인터루킨 11을 포함한다. 여전히 다른 바람직한 조합물은, IL-1β 기능과 평행하거나, 의존하거나 이와 함께 작용할 수 있는 자가면역 반응의 다른 주요 작용인자이다. 여전히 다른 바람직한 조합물은 비-고갈성 항-CD4 억제제이다. 여전히 다른 바람직한 조합물은 항체, 가용성 수용체 또는 길항성 리간드를 포함하는 공-자극 경로 CD80 (B7.1) 또는 CD86 (B7.2)의 길항제를 포함한다.
본 발명의 항체, 또는 이의 항원 결합 부분은 또한 메토트렉세이트, 6-MP, 아자티오프린 설파살라진, 메살라진, 올살라진, 클로로퀴닌/하이드록시클로로퀸, 페니실라민, 아우로티오말레이트(근육내 및 경구), 아자티오프린, 콜히친, 코르티코스테로이드(경구, 흡입 및 국소 주사), 베타-2 아드레노수용체 작용제(살부타몰, 테르부탈린, 살메테랄), 크산틴(테오필린, 아미노필린), 크로모글리케이트, 네도크로밀, 케토티펜, 이프라트로피움 및 옥시트로피움, 사이클로스포린, FK506, 라파마이신, 마이코페놀레이트 모페틸, 레플루노마이드, NSAID, 예를 들면, 이부프로펜, 코르티코스테로이드, 예를 들면, 프레드니솔론, 포스포디에스테라제 억제제, 아데노신 작용제, 항혈전제, 상보체 억제제, 아드레날린성 제제, 전염증성 사이토킨, 예를 들면, TNF-α 또는 IL-1(예를 들면, IRAK, NIK, IKK, p38, 또는 MAP 키나제 억제제)에 의한 시그날링을 방해하는 제제, IL-1β 전환 효소 억제제, TNFα 전환 효소(TACE) 억제제, T-세포 시그날링 억제제, 예를 들면, 키나제 억제제, 메탈로프로테이나제 억제제, 설파살라진, 아자티오프린, 6-머캅토푸린, 안지오텐신 전환 효소 억제제, 가용성 사이토킨 수용체 및 이의 유도체(예를 들면, 가용성 p55 또는 p75 TNF 수용체 및 유도체 p75TNFRIgG (EnbrelTM 및 p55TNFRIgG (레네르셉트)), sIL-1RI, sIL-1RII, sIL-6R), 소염성 사이토킨(예를 들면, IL-4, IL-10, IL-11, IL-13 및 TGFβ), 셀레콕시브, 엽산, 하이드록시클로로퀸 설페이트, 로페콕시브, 에타네르셉트, 인플릭시마브, 나프록센, 발데콕시브, 설파살라진, 메틸프레드니솔론, 멜록시캄, 메틸프레드니솔론 아세테이트, 금 나트륨 티오말레이트, 아스피린, 트리암시놀론 아세토나이드, 프로폭시펜 납실레이트/apap, 폴레이트, 나부메톤, 디클로페낙, 피록시캄, 에토돌락, 디클로페낙 나트륨, 옥사프로진, 옥시코돈 hcl, 하이드로코돈 비타르트레이트/apap, 디클로페낙 나트륨/미소프로스톨, 펜타닐, 아나킨라, 사람 재조합체, 트라마돌 hcl, 살살레이트, 술린닥, 시아노코발라민/fa/피리독신, 아세트아미노펜, 알렌드로네이트 나트륨, 프레드니솔론, 모르핀 설페이트, 리도카인 하이드로클로라이드, 인도메타신, 글루코사민 설프/콘드로이틴, 아미트립틸린 hcl, 설파디아진, 옥시코돈 hcl/아세트아미노펜, 올로파타딘 hcl, 미소프로스톨, 나프록센 나트륨, 오메프라졸, 사이클로포스파미드, 리툭시마브, IL-1 TRAP, MRA, CTLA4-IG, IL-18 BP, 항-IL-18, 항-IL15, BIRB-796, SCIO-469, VX-702, AMG-548, VX-740, 로플루미라스트, IC-485, CDC-801, 및 메소프람을 포함한다. 바람직한 조합물은 메토트렉세이트 또는 루플루노마이드를 포함하며, 중간 또는 심각한 류마티스 관절염의 경우에는 사이클로스포린을 포함한다.
류마티스 관절염(RA)을 치료하기 위한 결합 단백질과 함께 또한 사용될 수 있는 비-제한적인 추가의 제제는 다음을 포함하나, 이에 한정되지 않는다: 비-스테로이드성 소염 약물(들) (NSAID); 사이토킨 억제성 소염 약물(들)(CSAID); CDP-571/BAY-10-3356[사람화된 항-TNFα 항체; 제조원: 셀테크(Celltech)/바이엘(Bayer)]; cA2/인플릭시마브[키메라 항-TNFa 항체; 제조원: 센토코르); 75 kdTNFR-IgG/에타네르셉트(75 kD TNF 수용체-IgG 융합 단백질; 제조원: 임뮤넥스; 참조: 예를 들면, Moreland et al. (Abstract No. 813), Arthritis Rheum., 37: S295 (1994); Baumgartner et al., J.　Invest. Med., 44(3): 235A (March 1996)]; 55 kdTNF-IgG [55 kD TNF 수용체-IgG 융합 단백질; 제조원; 호프만-라로슈(Hoffmann-LaRoche)]; IDEC-CE9.1/SB 210396[비-고갈 영장류화된 항-CD4 항체; 제조원: 이이디이씨(IDEC)/스미쓰클라인(SmithKline); 참조: 예를 들면, Kaine et al. (Abstract No. 195), Arthritis Rheum., 38: S185 (1995)]; DAB 486-IL-2 및/또는 DAB 389-IL-2[IL-2 융합 단백질; 제조원: 세라젠; 참조: 예를 들면, Sewell et al., Arthritis Rheum., 36(9): 1223-1233 (September 1993)]; 항-Tac (사람화된 항-IL-2Rα; 제조원: 프로테인 디자인 랩스(Protein Design Labs)/로슈]; IL-4 (소염 사이토킨; 제조원: 디엔에이엑스(DNAX)/쉐링); IL-10 (SCH 52000; 재조합체 IL-10, 소염 사이토킨; 제조원: 디엔에이엑스/쉐링); IL-4; IL-10 및/또는 IL-4 작용제(예를 들면, 작용제 항체); IL-1RA[IL-1 수용체 길항제; 제조원; 시네르젠(Synergen)/암젠(Amgen)]; 아나킨라(Kineret®/제조원: 암젠); TNF-bp/s-TNF [가용성 TNF 결합 단백질; 참조: 예를 들면, Evans et al. (Abstract No. 1540), Arthritis Rheum.,39(9)(보충판): S284 (1996)); Kapadia et al., Amer. J. Physiol. - Heart 및 Circulatory Physiology, 268: H517-H525 (1995)]; RP73401[포스포디에스테라제 제IV형 억제제; 참조: 예를 들면, Chikanza et al. (Abstract No. 1527), Arthritis Rheum., 39(9)(보충판): S282 (1996)]; MK-966[COX-2 억제제; 참조: 예를 들면, Erich et al. (Abstract Nos. 328 및 329), Arthritis Rheum., 39(9)(supplement): S81 (1996)]; 일로프로스트[참조: 예를 들면, Scholz, P. (Abstract No. 336), Arthritis Rheum., 39(9) (보충판): S82 (1996)]; 메토트렉세이트; 탈리도마이드[참조: 예를 들면, Lee et al. (Abstract No. 1524), Arthritis Rheum., 39(9)(보충판): S282 (1996)] 및 탈리도마이드-관련 약물(예를 들면, 셀젠); 레플루노미드[소염 및 사이토킨 억제제; 참조: 예를 들면, Finnegan et al. (Abstract No. 627), Arthritis Rheum., 39(9)(보충판): S131 (1996)); Thoss et al., Inflamm. Res., 45: 103-107 (1996)]; 트라넥삼산(플라스미노겐 활성화 억제제; 참조: 예를 들면, Ronday et al. (Abstract No. 1541), Arthritis Rheum., 39(9)(보충판): S284 (1996)]; T-614 [사이토킨 억제제; 참조: 예를 들면, Hara et al. (Abstract No. 1526), Arthritis Rheum., 39(9)(보충판): S282 (1996)]; 프로스타글란딘 E1 [참조: 예를 들면, Moriuchi et al. (Abstract No. 1528), Arthritis Rheum., 39(9)(보충판): S282 (1996)]; 테니답[비-스테로이드성 소염 약물; 참조: 예를 들면, Guttadauria, M. (Abstract No. 1516), Arthritis Rheum., 39(9)(보충판): S280 (1996)]; 나프록센[비-스테로이드성 소염 약물; 참조: 예를 들면, Fiebich et al., Neuro Report, 7: 1209-1213 (1996)]; 멜록시캄(비-스테로이드성 소염 약물); 이부프로펜(비-스테로이드성 소염 약물); 피록시캄(비-스테로이드성 소염 약물); 디클로페낙(비-스테로이드성 소염 약물); 인도메타신(비-스테로이드성 소염 약물); 설파살라진[참조: 예를 들면, Farr et al. (Abstract No. 1519), Arthritis Rheum., 39(9)(보충판): S281 (1996)]; 아자티오프린[참조: 예를 들면, Hickey et al. (Abstract No. 1521), Arthritis Rheum., 39(9)(보충판): S281 (1996)]; ICE 억제제(효소 인터루킨-1β 전환 효소 억제제); zap-70 및/또는 lck 억제제 (타이로신 키나제 zap-70 또는 lck의 억제제); VEGF 억제제 및/또는 VEGF-R 억제제(혈관 내피 세포 성장 인자 또는 혈관 내피 세포 성장 인자 수용체의 억제제; 혈관형성 억제제); 코르티코스테로이드 소염 약물(예를 들면, SB203580); TNF-컨버타제 억제제; 항-IL-12 항체; 항-IL-18 항체; 인터루킨-11[참조: 예를 들면, Keith Jr. et al. (Abstract No. 1613), Arthritis Rheum., 39(9)(보충판): S296 (1996)]; 인터루킨-13[참조: 예를 들면, Bessis et al. (Abstract No. 1681), Arthritis Rheum., 39(9)(보충판): S308 (1996)]; 인터루킨-17 억제제[참조: 예를 들면, Lotz et al. (Abstract No. 559), Arthritis Rheum., 39(9)(보충판): S120 (1996)]; 금; 페니실라민; 클로로퀸; 클로람부실; 하이드록시클로로퀸; 사이클로스포린; 사이클로포스파미드; 총 림프구 조사; 항-흉선샘 글로불린; 항-CD4 항체; CD5-독소; 경구-투여된 펩타이드 및 콜라겐; 로벤자리트 이나트륨; 사이토킨 조절제(CRAs) HP228 및 HP466[제조원:호프텐 파마슈티칼스, 인크.(Houghten Pharmaceuticals, Inc.)]; ICAM-1 안티센스 포스포로티오에이트 올리고-데옥시뉴클레오타이드[ISIS 2302; 제조원: 아이시스 파마슈티칼스, 인크.(Isis Pharmaceuticals, Inc.)]; 가용성 상보체 수용체 1 [TP10; 제조원: 티 셀 사이언스, 인크.(T Cell Sciences, Inc.)]; 프레드니손; 오르고테인; 글리코사미노글리칸 폴리설페이트; 미노사이클린; 항-IL2R 항체; 해양 및 식물 지질[어류 및 식물 종자 지방산; 참조: 예를 들면, DeLuca et al., Rheum. Dis. Clin. North Am., 21: 759-777 (1995)]; 아우라노핀; 페닐부타존; 메클로페남산; 플루페남산; 정맥내 면역 글로불린; 질레우톤; 아자리빈; 마이코페놀산(RS-61443); 타크롤리무스(FK-506); 시롤리무스(라파마이신); 아미프릴로즈(테라펙틴); 클라드리빈(2-클로로데옥시아데노신); 메토트렉세이트; bcl-2 억제제[참조: Bruncko et al., J.　Med. Chem., 50(4), 641-662 (2007)]; 항바이러스 및 면역 조절제.
하나의 양태에서, 결합 단백질 또는 이의 항원-결합 부분은 류마티스 관절염(RA)의 치료를 위한 다음 제제들 중 하나와 함께 투여된다: KDR의 소 분자 억제제, Tie-2의 소 분자 억제제; 메토트렉세이트; 프레드니손; 셀렉콕시브; 엽산; 하이드록시클로로퀸 설페이트; 로페콕시브; 에타네르셉트; 인플릭시마브; 레플루노미드; 나프록센; 발데콕시브; 설파살라진; 메틸프레드니솔론; 이부프로펜; 멜록시캄; 메틸프레드니솔론 아세테이트; 금 나트륨 티오말레이트; 아스피린; 아자티오프린; 트리암시놀론 아세토니드; 프로폭시펜 납실레이트/apap; 폴레이트; 나부메톤; 디클로페낙; 피록시캄; 에토돌락; 디클로페낙 나트륨; 옥사프로진; 옥시코돈 hcl; 하이드로코돈 비타르트레이트/apap; 디클로페낙 나트륨/미소프로스톨; 펜타닐; 아나킨라, 사람 재조합체; 트라마돌 hcl; 살살레이트; 술린닥; 시아노코발라민/fa/피리독신; 아세트아미노펜; 알렌드로네이트 나트륨; 프레드니솔론; 모르핀 설페이트; 리도카인 하이드로클로라이드; 인도메타신; 글루코사민 설페이트/콘드로이틴; 사이클로스포린; 아미트립틸린 hcl; 설파디아진; 옥시코돈 hcl/아세트아미노펜; 올로파타딘 hcl; 미소프로스톨; 나프록센 나트륨; 오메프라졸; 미코페놀레이트 모페틸; 사이클로포스파미드; 리툭시마브; IL-1 TRAP; MRA; CTLA4-IG; IL-18 BP; IL-12/23; 항-IL 18; 항-IL 15; BIRB-796; SCIO-469; VX-702; AMG-548; VX-740; 로플루밀라스트; IC-485; CDC-801; 및 메소프람.
본 발명의 결합 단백질이 조합될 수 있는 염증성 창자병용 치료제의 비-제한적 예는 다음을 포함할 수 있다: 부데노시드; 상피 성장 인자; 코르티코스테로이드; 사이클로스포린, 설파살라진; 아미노살리실레이트; 6-머캅토푸린; 아자티오프린; 메트로니다졸; 리폭시게나제 억제제; 메살라민; 올살라진; 발살라지드; 항산화제; 트롬복산 억제제; IL-1 수용체 길항제; 항-IL-1β mAb; 항-IL-6 mAb; 성장 인자; 엘라스타제 억제제; 피리디닐-이미다졸 화합물; 다른 사람 사이토킨 또는 성장 인자의 항체 또는 길항제, 예를 들면, TNF, LT, IL-1, IL-2, IL-6, IL-7, IL-8, IL-15, IL-16, IL-17, IL-18, EMAP-II, GM-CSF, FGF, 및 PDGF. 본 발명의 항체, 또는 이의 항원 결합 부분은 세포 표면 분자, 예를 들면, CD2, CD3, CD4, CD8, CD25, CD28, CD30, CD40, CD45, CD69, CD90 또는 이들의 리간드와 조합될 수 있다. 본 발명의 항체, 또는 이의 항원 결합 부분은 또한 메토트렉세이트, 사이클로스포린, FK506, 라파마이신, 마이코페놀레이트 모페틸, 레플루노마이드, NSAID, 예를 들면, 이부프로펜, 코르티코스테로이드, 예를 들면, 프레드니솔론, 포스포디에스테라제 억제제, 아데노신 작용제, 항혈전제, 상보체 억제제, 아드레날린제, 전염증성 사이토킨, 예를 들면, TNFα 또는 IL-1에 의한 시그날링을 방해하는 아드레날린제(예를 들면, IRAK, NIK, IKK, p38 또는 MAP 키나제 억제제), IL-1β 전환 효소 억제제, TNFα 전환 효소 억제제, T-세포 시그날링 억제제, 예를 들면, 키나제 억제제, 메탈로프로테이나제 억제제, 설파살라진, 아자티오프린, 6-머캅토푸린, 안지오텐신 전환 효소 억제제, 가용성 사이토킨 수용체 및 이의 유도체(예를 들면, 가용성 p55 또는 p75 TNF 수용체, sIL-1RI, sIL-1RII, sIL-6R) 및 소염 사이토킨 (예를 들면, IL-4, IL-10, IL-11, IL-13 및 TGFb) 및 bcl-2 억제제와 같은 제제와 조합될 수 있다.
결합 단백질이 조합될 수 있는 크론병용 치료제의 예는 다음을 포함한다: TNF 길항제, 예를 들면, 항-TNF 항체, 아달리무마브(PCT 공보 제WO　97/29131호; HUMIRA®, CA2(REMICADE), CDP 571, TNFR-Ig 작제물, (p75TNFRIgG (ENBREL ® ) 및 p55TNFRIgG (LenerceptTM) 억제제 및 PDE4 억제제. 본 발명의 항체, 또는 이의 항원 결합 부분은 코르티코스테로이드, 예를 들면, 부데노시드 및 덱사메타손과 조합될 수 있다. 본 발명의 결합 단백질 또는 이의 항원 결합 부분은 또한 설파살라진, 5-아미노살리실산 및 올살라진, 및 IL-1과 같은 전염증성 사이토킨의 합성 또는 작용을 방해하는 제제, 예를 들면, IL-1 전환 효소 억제제 및 IL-1ra와 조합될 수 있다. 본 발명의 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 또한 T 세포 시그날링 억제제, 예를 들면, 타이로신 키나제 억제제 6-머캅토푸린과 함께 사용될 수 있다. 본 발명의 결합 단백질, 또는 이의 항원 결합 부분은 IL-11과 조합될 수 있다. 본 발명의 결합 단백질, 또는 이의 항원 결합 부분은 메살라민, 프레드니손, 아자티오프린, 머캅토푸린, 인플릭시마브, 메틸프레드니솔론 나트륨 석시네이트, 디페녹실레이트/아트롭 설페이트, 로페라미드 하이드로클로라이드, 메토트렉세이트, 오메프라졸, 폴레이트, 시프로플록사신/덱스트로즈-물, 하이드로코돈 비타르트레이트/apap, 테트라사이클린 하이드로클로라이드, 플루오시노나이드, 메트로니다졸, 티메로살/붕산, 콜레스티라민/수크로즈, 시크로플록사신 하이드로클로라이드, 효스시아민 설페이트, 메페리딘 하이드로클로라이드, 메다졸람 하이드로클로라이드, 옥시코돈 hcl/아세트아미노펜, 프로메타진 하이드로클로라이드, 인산나트륨, 설파메톡사졸/트리메토프림, 셀레콕시브, 폴리카르보필, 프로폭시펜 납실레이트, 하이드로코르티손, 다가비타민, 발살라지드 이나트륨, 인산코데인/apap, 콜레세벨람 hcl, 시아노코발라민, 엽산, 레보플록사신, 메틸프레드니솔론, 나탈리주마브 및 인터페론-감마와 조합될 수 있다.
본 발명의 결합 단백질이 조합될 수 있는 다발경화증(MS) 용 치료제의 비-제한적 예는 다음을 포함한다: 코르티코스테로이드, 프레드니솔론; 메틸프레드니솔론; 아자티오프린; 사이클로포스파미드; 사이클로스포린; 메토트렉세이트; 4-아미노피리딘; 티자니딘; 인터페론-β1a(Avonex; 제조원: 바이오젠); 인터페론-β1b(베타세론; 제조원: 키론/베를렉스); 인터페론 α-n3)(제조원: 인터페론 사이언시즈/후지모토), 인터페론-α[제조원: 알파 와쎄만(Alfa Wassermann)/존슨 앤드 존슨), 인터페론 β1A-IF (제조원: 세로노/인할레 써라퓨틱스), Peg인터페론 2β(제조원: 엔존/쉐링-플라우), 공중합체 1[Cop-1; 코팍손; 제조원: 테바 파마슈티칼 인더스트리즈, 인크.(Teva Pharmaceutical Industries, Inc.]; 하이퍼바릭 산소; 정맥내 면역글로불린; 클라브리빈; 다른 사람 사이토킨 또는 성장 인자에 대한 항체 또는 이의 길항제 및 이들의 수용체, 예를 들면, TNF, LT, IL-1, IL-2, IL-6, IL-7, IL-8, IL-23, IL-15, IL-16, IL-18, EMAP-II, GM-CSF, FGF, 및 PDGF. 본 발명의 결합 단백질은 CD2, CD3, CD4, CD8, CD19, CD20, CD25, CD28, CD30, CD40, CD45, CD69, CD80, CD86, CD90와 같은 세포 표면 분자 또는 이들의 리간드에 대한 항체와 조합될 수 있다. 본 발명의 결합 단백질은 메토트렉세이트, 사이클로스포린, FK506, 라파마이신, 마이코페놀레이트 모페틸, 레플루노마이드, NSAID, 예를 들면, 이부프로펜, 코르티코스테로이드 예를 들면, 프레드니솔론, 포스포디에스테라제 억제제, 아덴소신 작용제, 항혈전제, 상보체 억제제, 아드레날린제, 전염증성 사이토킨 예를 들면, TNFα 또는 IL-1 (예를 들면, IRAK, NIK, IKK, p38 또는 MAP 키나제 억제제)에 의한 시그날링을 방해하는 제제, IL-1β 전환 효소 억제제, TACE 억제제, T-세포 시그날링 억제제, 예를 들면, 키나제 억제제, 메탈로프로테이나제 억제제, 설파살라진, 아자티오프린, 6-머캅토푸린, 안지오텐신 전환 효소 억제제, 가용성 사이토킨 수용체 및 이의 유도체(예를 들면, 가용성 p55 또는 p75 TNF 수용체, sIL-1RI, sIL-1RII, sIL-6R), 소염 사이토킨 (예를 들면, IL-4, IL-10, IL-13 및 TGFβ) 및 bcl-2 억제제.
본 발명의 결합 단백질이 조합될 수 있는 다발경화증용 치료제의 예는 인터페론-β, 예를 들면, IFNβ1a 및 IFNβ1b; 코팍신; 코르티코스테로이드; 카스파제 억제제, 예를 들면, 카스파제-1의 억제제; IL-1 억제제; TNF 억제제; 및 CD40 리간드 및 CD80에 대한 항체를 포함할 수 있다.
본 발명의 결합 단백질은 또한 알렘투주마브, 드로나비놀, 유니메드, 다클리주마브, 미톡산트론, 크살리프로덴 하이드로클로라이드, 팜프리딘, 글라티라머 아세테이트, 나탈리주마브, 신나비돌, α-임뉴노킨 NNSO3, ABR-215062, AnergiX.MS, 케모킨 수용체 길항제, BBR-2778, 칼라구알린, CPI-1189, LEM (리포좀-봉입된 미톡산트론), THC.CBD (칸나비노이드 작용제) MBP-8298, 메소프람(PDE4 억제제), MNA-715, 항-IL-6 수용체 항체, 뉴로박스, 피르페니돈 알로트랍 1258 (RDP-1258), sTNF-R1, 탈람파넬, 테리플루노마이드, TGF-베타2, 티플리모티드, VLA-4 길항제 (예를 들면, TR-14035, VLA4 Ultrahaler, 안테그란-ELAN/제조원: 바이오젠), 인터페론 감마 길항제, IL-4 작용제와 같은 제제와 조합될 수 있다.
본 발명의 결합 단백질이 조합될 수 있는 협심증용 치료제의 비-제한적 예는 다음을 포함할 수 있다: 아스피린, 니트로글리세린, 이소소르바이드 모노니트레이트, 메토프롤롤 석시네이트, 아테놀롤, 메토프롤롤 타르트레이트, 암로디핀 베실레이트, 딜티아젬 하이드로클로라이드, 이소소르바이드 디니트레이트, 클로피도그렐 비설페이트, 니페디핀, 아토르바스타틴 칼슘, 염화칼륨, 푸로세미드, 심바스틴, 베라파밀 hcl, 디곡신, 프로프라놀롤 하이드로클로라이드, 카르베딜롤, 리시노프릴, 스피로놀락톤, 하이드로클로로티아지드, 에날라프릴 말레이트, 나돌롤, 라미프릴, 에녹사파린 나트륨, 헤파린 나트륨, 발사르단 소탈롤 하이드로클로라이드, 페노피브레이트, 에제티미베, 부메타니드, 로사르탄 칼륨, 이시노프릴/하이드로클로로티아지드, 펠로디핀, 캅토프릴, 비소프롤롤 푸마레이트.
본 발명의 결합 단백질이 조합될 수 있는 강직성 척추염용 치료제의 비-제한적 예는 다음을 포함한다: 이부프로펜, 디클로페낙 및 미소프로스톨, 나프록센, 멜록시캄, 인도메타신, 디클로페낙, 셀레콕시브, 로페콕시브, 설파살라진, 메토트렉세이트, 아자티오프린, 미노사이클린, 프레드니손, 에타네르셉트, 인플릭시마브.
본 발명의 결합 단백질이 조합될 수 있는 천식용 치료제의 비-제한적 예는 다음을 포함한다: 알부테롤, 살메테롤/플루티카손, 몬테루카스트 나트륨, 플루티카손 프로피오네이트, 부데소니드, 프레드니손, 살메테롤 크시나포에이트, 레브알부테롤 hcl, 알부테롤 설페이트/이프라트로피움, 프레드니솔론 인산나트륨, 트리암시놀론 아세토니드, 베클로메타손 디프로피오네이트, 이프라트로피움 브로마이드, 아지트로마이신, 피르부테롤 아세테이트, 프레드니솔론, 무수 테오필린, 메틸프레드니솔론 나트륨 석시네이트, 클라리트로마이신, 자피를루카스트, 포르모테롤 푸마레이트, 인플루엔자 바이러스 백신, 메틸프레드니솔론, 아목실린 삼수화물, 플루니솔라이드, 알레르기 주사제, 크로몰린 나트륨, 펙소페나딘 하이드로클로라이드, 플루니솔라이드/멘톨, 아목시실린/클라불라네이트, 레보플록사신, 흡입기 보조 장치, 구아이페네신, 덱사메타손 인산나트륨, 목시플록사신 hcl, 독소사이클린 하이클레이트, 구아이페네신/d-메토르판, p-에페드린/cod/클로르페니르, 가티플록사신, 세티리진 하이드로클로라이드, 모메타손 푸로에이트, 살메테롤 크시나포에이트, 벤조나테이트, 세팔렉신, pe/하이드로코돈/클로르페니르, 세티리진 hcl/슈도에페드, 페닐에프린/cod/프로메타진, 코데인/프로메타진, 세프프로질, 덱사메타손, 구아이페네신/슈도에페드린, 클로르페니라민/하이드로코돈, 네도크로밀 나트륨, 테르부탈린 설페이트, 에피네프린, 메틸프레드니솔론, 메타프로테레놀 설페이트.
본 발명의 결합 단백질이 조합될 수 있는 COPD용 치료제의 비-제한적 예는 다음을 포함한다: 알부테롤 설페이트/이프라트로피움, 이프라트로피움 브로마이드, 살메테롤/플루티카손, 알부테롤, 살메테롤 크시나포에이트, 플루티카손 프로피오네이트, 프레드니손, 무수 테오필린, 메틸프레드니솔론 나트륨 석시네이트, 몬테루카스트 나트륨, 부데소니드, 포르모테롤 푸마레이트, 트리암시놀론 아세토니드, 레보플록사신, 구아이페네신, 아지트로마이신, 베클로메타손 디프로피오네이트, 레발부테롤 hcl, 플루니솔라이드, 세프트리악손 나트륨, 아목실린 삼수화물, 가티플록사신, 자피를루카스트, 아목시실린/클라불라네이트, 플루니솔라이드/멘톨, 클로르페니라민/하이드로코돈, 메타프로테레놀 설페이트, 메틸프레드니솔론, 모메타손 푸로에이트, p-에페드린/cod/클로르페니르, 피르부테롤 아세테이트, p-에페드린/로라타딘, 테르부탈린 설페이트, 티오프로피움 브로마이드, (R,R)-포르모테롤, TgAAT, 실로밀라스트, 로플루밀라스트.
본 발명의 결합 단백질이 조합될 수 있는 HCV용 치료제의 비-제한적 예는 다음을 포함한다: 인터페론-알파-2a, 인터페론-알파-2b, 인터페론-알파 con1, 인터페론-알파-n1, 페길화된 인터페론-알파-2a, 페길화된 인터페론-알파-2b, 리바비린, Peg인터페론 alfa-2b + 리바비린, 우르소데옥시콜산, 글리실릭산, 티말파신, 막사민, VX-497 및 다음 표적과의 개입을 통해 HCV를 치료하는데 사용된 특정 화합물: HCV 폴리머라제, HCV 프로테아제, HCV 헬리카제, HCV IRES(내부 리보소옴 도입 부위).
본 발명의 결합 단백질이 조합될 수 있는 특발성 폐 섬유증용 치료제의 비-제한적 예는 다음을 포함한다: 프레드니손, 아자티오프린, 알부테롤, 콜히친, 알부테롤 설페이트, 디곡신, 감마 인터페론, 메틸프레드니솔론 sod succ, 로라제팜, 푸로세미드, 리시노프릴, 니트로글리세린, 스피로놀락톤, 사이클로포스파미드, 이프라트로피움 브로마이드, 악티노마이신 d, 알테플라제, 플루티카손 프로피오네이트, 레보플록사신, 메타프로테레놀 설페이트, 모르핀 설페이트, 옥시코돈 hcl, 염화칼륨, 트리암시놀론 아세토니드, 타크롤리무스 무수물, 칼슘, 인터페론-알파, 메토트렉세이트, 마이코페놀레이트 모페틸, 인터페론-감마-1β.
본 발명의 결합 단백질이 조합될 수 있는 심근경색용 치료제의 비-제한적 예는 다음을 포함한다: 아스피린, 니트로글리세린, 메토프롤롤 타르트레이트, 에녹사파린 나트륨, 헤파린 나트륨, 클로피도그렐 비설페이트, 카르베딜롤, 아테놀롤, 모르핀 설페이트, 메토프롤롤 석시네이트, 와르파린 나트륨, 리시노프릴, 이소소르바이드 모노니트레이트, 디곡신, 푸로세미드, 심바스타틴, 라미프릴, 테넥테플라제, 에날라프릴, 토르세미드, 레타바제, 로사르탄 칼륨, 퀴나프릴 hcl/mag carb, 부메타니드, 알테플라제, 에날라프릴라트, 아미오다론 하이드로클로라이드, 티로피반 hcl m-수화물, 딜티아젬 하이드로클로라이드, 캅토프릴, 이르베사르탄, 발사르탄, 프로프라놀롤 하이드로클로라이드, 포시노프릴 나트륨, 리도카인 하이드로클로라이드, 에프티피바타이드, 세파졸린 나트륨, 아트로핀 설페이트, 아미노카프로인산, 스피로놀락톤, 인터페론, 소탈롤 하이드로클로라이드, 염화칼륨, 도쿠세이트 나트륨, 도부타민 hcl, 알프라졸람, 프라바스타틴 나트륨, 아토르바스타틴 칼슘, 미다졸람 하이드로클로라이드, 메페리딘 하이드로클로라이드, 이소소르바이드 디니트레이트, 에피네프린, 도파민 하이드로클로라이드, 비발리루딘, 로수바스타틴, 에제티미베/심바스틴, 아바시미베, 카리포라이드.
본 발명의 결합 단백질이 조합될 수 있는 건선용 치료제의 비-제한적 예는 다음을 포함한다: KDR의 소 분자 억제제, Tie-2의 소 분자 억제제, 칼시포트리엔, 클로베타졸 프로피오네이트, 트리암시놀론 아세토니드, 할로베타졸 프로피오네이트, 타자로텐, 메토트렉세이트, 플루오시노나이드, 증강된 베타메타손 디프로프, 플루오시놀론 아세토니드, 악시트레틴, 타르 샴푸, 베타메타손 발러레이트, 모메타손 푸로에이트, 케토코나졸, 프라목신/플루오시놀론, 하이드로코르티손 발러레이트, 플루란드레놀리드, 우레아, 베타메타손, 클로베타졸 프로피오네이트/에몰, 플루티카손 프로피오네이트, 아지트로마이신, 하이드로코르티손, 습윤화 제형, 엽산, 데소니드, 피메크롤리무스, 코울 타르(coal tar), 디플로라손 디아세테이트, 에타네르셉트 폴레이트, 락트산, 메톡살렌, hc/비스무쓰 서브갈/znox/resor, 메틸프레드니솔론 아세테이트, 프레드니손, 선스크린, 할시노나이드, 살리실산, 안트랄린, 클로코르톨론 피발레이트, 석탄 추출물, 코울 타르/살리실산, 코울 타르/살리실산/황, 데속시메타손, 디아제팜, 연화제, 플루오시노나이드/연화제, 광오일/카스터 오일/na lact, 광 오일/땅콩 오일, 석유/이소프로필 미리스테이트, 소랄렌, 살리실산, 비누/트리브롬살란, 티메로살/붕산, 셀레콕시브, 인플릭시마브, 사이클로스포린, 알레파셉트, 에팔리주마브, 타크롤리무스, 피메크롤리무스, PUVA, UVB, 설파살라진.
본 발명의 결합 단백질이 조합될 수 있는 건선 관절염의 치료제의 비-제한적 예는 다음을 포함한다: 메토트렉세이트, 에타네르셉트, 로페콕시브, 셀레콕시브, 엽산, 설파살라진, 나프록센, 레플루노마이드, 메틸프레드니솔론 아세테이트, 인도메타신, 하이드록시클로로퀸 설페이트, 프레드니손, 술린닥, 증강된 베타메타손 디프로프, 인플릭시마브, 메토트렉세이트, 폴레이트, 트리암시놀론 아세토니드, 디클로페낙, 디메틸설폭사이드, 피록시캄, 디클로페낙 나트륨, 케토프로펜, 멜록시캄, 메틸프레드니솔론, 나부메톤, 톨메틴 나트륨, 칼시포트리엔, 사이클로스포린, 디클로페낙 나트륨/미소프로스톨, 플루오시노나이드, 글루코사민 설페이트, 금 나트륨 티오말레이트, 하이드로코돈 비타르트레이트/apap, 이부프로펜, 리세드로네이트 나트륨, 설파디아진, 티오구아닌, 발데콕시브, 알레파셉트, 에팔리주마브 및 bcl-2 억제제.
본 발명의 결합 단백질이 조합될 수 있는 재협착용 치료제의 비-제한적 예는 다음을 포함한다: 시롤리무스, 파클리탁셀, 에베롤리무스, 타크롤리무스, 조타롤리무스, 아세트아미노펜.
본 발명의 결합 단백질이 조합될 수 있는 좌골신경통용 치료제의 비-제한적 예는 다음을 포함한다: 하이드로코돈 비타르트레이트/apap, 로페콕시브, 사이클로벤자프린 hcl, 메틸프레드니솔론, 나프록센, 이부프로펜, 옥시코돈 hcl/아세트아미노펜, 셀레콕시브, 발데콕시브, 메틸프레드니솔론 아세테이트, 프레드니손, 코데인 포스페이트/apap, 트라마돌 hcl/아세트아미노펜, 메탁살론, 멜록시캄, 메토카르바몰, 리도카인 하이드로클로라이드, 디클로페낙 나트륨, 가바펜틴, 덱사메타손, 카르이소프로돌, 케토롤락 트로메타민, 인도메타신, 아세트아미노펜, 디아제팜, 나부메톤, 옥시코돈 hcl, 티자니딘 hcl, 디클로페낙 나트륨/미소프로스톨, 프로폭시펜 납실레이트/apap, asa/옥시코드/옥시코돈 ter, 이부프로펜/하이드로코돈 bit, 트라마돌 hcl, 에토돌락, 프로폭시펜 hcl, 아미트리프틸린 hcl, 카르이소프로돌/코데인 phos/asa, 모르핀 설페이트, 다가비타민, 나프록센 나트륨, 오르페나드린 시트레이트, 테마제팜.
본 발명의 결합 단백질이 조합될 수 있는 SLE(루푸스)용 치료제의 예는 다음을 포함한다: NSAIDS, 예를 들면, 디클로페낙, 나프록센, 이부프로펜, 피록시캄, 인도메타신; COX2 억제제, 예를 들면, 셀레콕시브, 로페콕시브, 발데콕시브; 항-말라리아, 예를 들면, 하이드록시클로로퀸; 스테로이드, 예를 들면, 프레드니손, 프레드니솔론, 부데노시드, 덱사메타손; 세포독소, 예를 들면, 아자티오프린, 사이클로포스파미드, 마이코페놀레이트 모페틸, 메토트렉세이트; PDE4의 억제제 또는 푸린 합성 억제제, 예를 들면 셀셉트. 본 발명의 결합 단백질은 또한 설파살라진, 5-아미노살리실산, 올살라진, 이무란 및, IL-1과 같은 전염증성 사이토킨의 합성, 생산 또는 작용을 방해하는 제제, 예를 들면, IL-1β 전환 효소 억제제 및 IL-1ra와 같은 카스파제 억제제와 조합될 수 있다. 본 발명의 결합 단백질은 또한 T 세포 시그날링 억제제, 예를 들면, 타이로신 키나제 억제제; 또는 T 세포 활성화 분자를 표적화하는 분자, 예를 들면, CTLA-4-IgG 또는 항-B7 계열 항체, 항-PD-1 계열 항체와 함께 사용될 수 있다. 본 발명의 결합 단백질은 IL-11 또는 항-사이토킨 항체, 예를 들면, 포노톨리주마브(항-IFNg 항체), 또는 항-수용체 수용체 항체, 예를 들면, 항-IL-6 수용체 항체 및, B-세포 표면 분자에 대한 항체와 조합될 수 있다. 본 발명의 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 또한, LJP 394 (아베티무스), B-세포를 고갈시키거나 불활성화시키는 제제, 예를 들면, 리툭시마브(항-CD20 항체), 림포스타트-B (항-BlyS 항체), TNF 길항제, 예를 들면, 항-TNF 항체, 아달리무마브(PCT 공보 제WO　97/29131호; HUMIRA®, CA2 (REMICADE®, CDP 571, TNFR-Ig 작제물, (p75TNFRIgG (ENBREL® 및 p55TNFRIgG (Lenercept®) 및 bcl-2 억제제와 함께 사용될 수 있는데, 이는 유전자삽입 마우스에서 bcl-2 과발현이 루푸스 유사 표현형을 유발하는 것으로 입증되었기 때문이며(참조: Marquina et al., J.　Immunol., 172(11): 7177-7185 (2004)), 이에 따라 억제는 치료학적 효과를 갖는 것으로 기대된다.
본 발명의 약제학적 조성물은 본 발명의 항체 또는 항체 부위의 "치료학적 유효량" 또는 "예방학적 유효량)을 포함할 수 있다. "치료학적 유효량"은 바람직한 치료학적 결과를 달성하기 위해, 필수적인 용량에서 및 필수적인 기간 동안, 효과적인 양을 말한다. 항체 또는 항체 부위의 치료학적 유효량은 당해 분야의 숙련가에 의해 결정될 수 있으며 개인의 질환 상태, 연령, 성별, 및 체중, 및 개인에서 바람직한 반응을 유발하는 항체 또는 항체 부위의 능력에 의해 결정될 수 있다. 치료학적 유효량은 또한, 항체, 또는 항체 부위의 어떠한 독성 또는 유해한 효과보다 치료학적으로 유리한 효과가 더 큰 것이다. "예방학적 유효량"은 바람직한 예방학적 결과를 달성하는데 필수적인 용량에서 필수적인 기간에서 효과적인 양을 말한다. 전형적으로, 예방학적 유효량은 대상체에서 질환의 조기 단계 이전에 또는 조기 단계에 사용되므로, 예방학적 유효량은 치료학적 유효량 미만일 것이다.
용량 요법(dosage regimen)은 최적의 바람직한 반응(예를 들면, 치료학적 또는 예방학적 반응)을 제공하기 위해 조절될 수 있다. 예를 들면, 단일 거환제가 투여될 수 있으며, 수개의 나누어진 투여량이 시간에 걸쳐 투여될 수 있거나 투여량은 치료학적 상황의 긴급성에 의해 나타나는 바와 같이 비례적으로 감소되거나 증가될 수 있다. 투여의 용이성 및 용량의 균일성을 위해 비경구 조성물을 용량 단위 형으로 제형화하는 것이 특히 유리할 수 있다. 본원에 사용된 용량 단위 형은 치료되는 포유동물 대상체에 대한 통합된 용량으로 적합한 물리적으로 별개인 단위를 말하며; 각각의 단위는 요구되는 약제학적 담체와 함께 바람직한 치료학적 효과를 생산하도록 계산된 활성 화합물의 예정된 양을 함유한다. 본 발명의 용량 단위형에 대한 명세는 (a) 활성 화합물의 독특한 특성 및 달성될 특수 치료학적 또는 예방학적 효과, 및 (b) 개인에서 민감성의 치료를 위한 이러한 활성 화합물을 화합하는 당해 분야에서 고유한 제한에 의해서 및 의존하여 직접 해석된다.
용량 값은 완화될 상태의 유형 및 중증도에 따라 변할 수 있음을 주목하여야 한다. 어떠한 특수 대상체의 경우, 특이적인 용량 요법을 개인 필요성 및, 조성물을 투여하거나 이의 투여를 관리하는 사람의 전문적인 판단에 따라 시간에 따라 조절되어야 하며, 본원에 설정된 용량 범위는 단지 예시적인 것이고 청구된 조성물의 영역 또는 실시를 한정하는 것으로 의도되지 않는다.
진단제
본원의 교시내용은 또한 진단 적용을 제공한다. 이는 또한 하기에 설명된다. 본 발명의 IL-1β에 결합하는 항체를 각종 양식 중 어느 것에서 사용하여 생체내, 시험관내 또는 생체외(즉, 살아있는 개인으로부터 수득되어, 과정에 적용된 후 개인에게 다시 제공된 세포 또는 조직내)에서 IL-1β를 검출하기 위한 각종 양식 중 어느 것에서 사용될 수 있다. 본 발명의 DVD-Ig는 IL-1β는 각종의 진단 및 검출 검사 양식으로 IL-1β의 에피토프 및 또한 다른 항원 또는 에피토프에 결합할 수 있는 추가의 이점들을 제공한다.
I. 검사 방법
본 교시내용은 또한 본원에 기술된 것으로서, 적어도 하나의 항-IL-1β 결합 단백질 또는, DVD-Ig를 포함하는, 이의 항원 결합 부분을 사용하여 시험 시료에서 IL-1β, 또는 이의 단편("분석물")의 존재, 양 또는 농도를 측정하는 방법을 제공한다. 당해 분야에 공지된 것으로서 어떠한 적합한 검사도 당해 방법에서 사용될 수 있다. 예는 샌드위치 면역검사[예를 들면, 방사선동위원소 검출(방사면역검사(RIA))를 포함하는, 단클론/다클론 및/또는 DVD-Ig 샌드위치 면역검사 또는 이의 어떠한 변이체(예를 들면, 단클론/DVD-Ig, DVD-Ig/다클론 등)], 및 효소 검출[효소 면역검사(EIA) 또는 효소-연결된 면역흡착성 검사(ELISA)(예를 들면, 콴티킨(Quantikine) ELISA 검사, 제조원: 알앤드디 시스템스(R&D Systems), 미네소타주 미니아폴리스 소재)], 경쟁적 억제 면역검사(예를 들면, 전방 및 역방), 형광성 분광 면역검사(FPIA), 효소 증대된 면역검사 기술(EMIT), 생물발광성 공명 에너지 전달(BRET), 및 균질한 화학발광 검사 등을 포함하나, 이에 한정되지 않는다. SELDI-계 면역검사에서, 목적한 분석물(또는 이의 단편)에 특이적으로 결합하는 포획 시약은 예비-활성화된 단백질 칩 배열과 같은 질량 분광계 프로브의 표면에 부착된다. 이후에, 분석물(또는 이의 단편)은 바이오칩 위에 특이적으로 포획되며, 포획된 분석물(또는 이의 단편)은 질량분광계로 검출한다. 대안적으로, 분석물(또는 이의 단편)은 포획 시약으로부터 용출시키고 전통적인 MALDI (매트릭스-보조된 레이저 탈착/이온화) 또는 SELDI를 사용하여 용출시킬 수 있다. 화학발광성 미세입자 면역검사, 특히 ARCHITECT® 자동 분석기(제조원: 애보트 래보러토리즈, 일리노이주 애보트 파크 소재)를 사용하는 것은 예시적인 면역검사의 예이다.
뇨, 혈액, 혈청 및 혈장, 및 다른 체액을 수집하고, 취급하며 가공하기 위한 당해 분야에 잘-공지된 방법은 예를 들면, 본원에 기술된 항-IL-1β결합 단백질이 면역진단 시약 및/또는 분석물 면여검사 키트로서 사용되는 경우, 본 교시내용의 실시예서 사용된다. 시험 시료는 목적한 분석물, 예를 들면, 항체, 항원, 합텐, 호르몬, 약물, 효소, 수용체, 단백질, 펩타이드, 폴리펩타이드, 올리고뉴클레오타이드 및/또는 폴리뉴클레오타이드외에 추가의 모이어티를 포함할 수 있다. 예를 들면, 시료는 대상체로부터 수득한 전혈 시료일 수 있다. 시험 시료, 특히, 전혈이 본원에 기술된 바와 같은 면역검사 전에, 예를 들면, 예비처리 시약을 사용하여 처리되는 것이 필수적이거나 바람직할 수 있다. 예비처리가 필수적이지 않는 경우에도(예를 들면, 대부분의 뇨 시료), 예비처리가 임의로(예를 들면, 상업적인 플랫폼(platform)에서 요법의 일부로서) 수행될 수 있다.
예비처리 시약은 본 발명의 면역검사 및 키트와 함께 사용하기에 적절한 어떠한 시약일 수 있다. 예비처리는 임의로 (a) 하나 이상의 용매(예를 들면, 메탄올 및 에틸렌 글리콜) 및 임의로, 염, (b) 하나 이상의 용매 및 염, 임의로 세제, (c) 세제, 또는 (d) 세제 및 염을 포함한다. 예비처리 시약은 당해 분야에 공지되어 있으며, 이러한 예비처리는 문헌[참조: 예를 들면, Yatscoff et al., "Abbott TDx Monoclonal Antibody Assay Evaluated for Measuring Cyclosporine in Whole Blood," Clin. Chem., 36: 1969-1973 (1990); 및 Wallemacq et al., "Evaluation of the New AxSYM Cyclosporine Assay: Comparison with TDx Monoclonal Whole Blood and EMIT Cyclosporins Assays," Clin. Chem., 45: 432-435 (1999)]에 기술된 바와 같이, 및/또는 시판되는 것으로서, 예를 들면, Abbott TDx, AxSYM® 및 ARCHITECT® 분석기(제조원: 애보트 래보러토리즈, 일리노이주 애보트 파크 소재)에서 검사에 사용된 바와 같이 사용될 수 있다. 또한, 예비처리는 애보트의 미국 특허 공보 제5,135,875호; 유럽 공보 제EP　0　471　293호; PCT 공보 제WO　2008/082984호; 및 US 공보 제2008/0020401호(이의 전문이 예비처리에 관한 이의 교시를 위해 참조로 인용됨)에 기술된 바와 같이 수행될 수 있다. 예비처리 시약은 불균질 제제 또는 균질 제제일 수 있다.
균질한 예비처리 시약을 사용하는 경우, 예비처리 시약은 시료내에 존재하는 분석물 결합 단백질(예를 들면, 분석물 또는 이의 단편에 결합할 수 있는 단백질)을 침전시킨다. 이러한 예비처리 단계는 침전된 분석물 결합 단백질로부터 샘플에 예비처리 제제를 첨가함에 의해 형성된 혼합물의 상층액을 분리함으로써 어떠한 분석물 결합 단백질을 제거함을 포함한다. 이러한 검사에서, 어떠한 결합 단백질도 함유하지 않는 혼합물의 상층액이 항체 포획 단계로 직접 진행되는 검사에 사용된다.
균질한 예비처리 시약을 사용하면, 이러한 분리 단계는 존재하지 않는다. 시험 시료및 예비처리 시약의 전체 혼합물을 분석물(또는 이의 단편), 예를 들면, 표지된 항-분석물 항체(또는 항원적으로 반응성인 이의 단편)에 대한 표지된 특이적인 결합 파트너와 접촉시킨다. 이러한 검사에 사용된 예비처리 시약은 전형적으로 예비처리된 시험 시료 혼합물 속에서 제1의 특이적인 결합 파트너에 의한 포획 전 또는 동안에 희석된다. 이러한 희석에도 불구하고, 예비처리 시약의 특정 양은 포획 동안 시험 시료 혼합물 속에 여전히 존재(또는 잔존)한다. 본 발명에 따라서, 예시적인 표지된 특이적인 결합 파트너는 DVD-Ig(또는 이의 단편, 변이체, 또는 변이체의 단편)일 수 있다.
균질항 양식에서, 시험 시료를 대상체로부터 수득한 후, 제1 혼합물을 제조한다. 혼합물은 분석물(또는 이의 단편) 및 제1의 특이적인 결합 파트너에 대해 평가된 시험 시료를 함유하며, 여기서 시험 시료에 함유된 제1의 특이적인 결합 파트너 및 어떠한 분석물도 제1의 특이적인 결합 파트너-분석물 복합체를 형성한다. 바람직하게는, 제1의 특이적인 결합 파트너는 항-분석물 항체 또는 이의 단편이다. 제1의 특이적인 결합 파트너는 본원에 기술된 바와 같은 DVD-Ig(또는 이의 단편, 변이체, 또는 변이체의 단편)일 수 있다. 시험 시료 및 제1의 특이적인 결합 파트너가 첨가되어 혼합물을 형성하는 순서는 중요하지 않다. 바람직하게는, 제1의 특이적인 결합 파트너는 고체 상에 고정된다. 면역검사(제1의 특이적인 결합 파트너 및, 임의로, 제2의 특이적인 결합 파트너에 대한 것)에 사용된 고체 상은 자기 입자, 비드, 시험 튜브, 미세역가 플레이트, 큐베트(cuvette), 막, 스캐폴딩 분자(scaffolding molecule), 필름, 여과지, 디스크 및 칩과 같은, 그러나 이에 한정되지 않는, 당해 분야에 공지된 어떠한 고체상일 수 있다.
제1의 특이적인 결합 파트너-분석물 복합체를 함유하는 혼합물이 형성된 후, 어떠한 결합되지 않는 분석물을 복합체로부터 당해 분야에 공지된 어떠한 기술을 사용하여 제거한다. 예를 들면, 결합되지 않은 분석물을 세척에 의해 제거할 수 있다. 그러나, 바람직하게는, 제1의 특이적인 결합 파트너는 시험 시료에 존재하는 과량의 어떠한 분석물에 존재함으로써, 시험 시료 속에 존재하는 모든 분석물이 제1의 특이적인 결합 파트너에 의해 결합되도록 한다.
어떠한 결합되지 않은 분석물도 제거한 후, 제2의 특이적인 결합 파트너를 혼합물에 가하여 제1의 특이적인 결합 파트너-분석물-제2의 특이적인 결합 파트너 복합체를 형성시킨다. 제2의 특이적인 결합 파트너는 바람직하게는 제1의 특이적인 결합 파트너에 의해 결합된 분석물 상의 에피토프와는 상이한 분석물 상의 에피토프에 결합하는 항-분석물이다. 더우기, 또한 바람직하게는, 제2의 특이적인 결합 파트너는 위에서 기술한 바와 같은 검출가능한 표지로 표지되거나 이를 함유한다. 제2의 특이적인 결합 파트너는 본원에 기술된 바와 같은 DVD-Ig(또는 이의 단편, 변이체, 또는 변이체의 단편)일 수 있다.
당해 분야에 공지된 어떠한 적합한 검출가능한 표지도 사용될 수 있다. 예를 들면, 검출가능한 표지는 방사활성 표지(예를 들면, 3H, 125I, 35S, 14C, 32P, 및 33P), 효소 표지(예를 들면, 서양고추냉이 퍼옥시다제, 알카린 퍼옥시다제, 글루코즈-6-포스페이트 데하이드로게나제 등), 화학발광성 표지(예를 들면, 아크리디늄 에스테르, 티오에스테르 또는 설폰아미드; 루미놀, 이소루미놀, 페난트리디늄 에스테르 등), 형광성 표지(예를 들면, 플루오레세인(예를 들면, 5-플루오레세인, 6-카복시플루오레세인, 3',6-카복시플루오레세인, 5(6)-카복시플루오레세인, 6-헥사클로로-플루오레세인, 6-테트라클로로플루오레세인, 플루오레세인 이소티오시아네이트 등)), 로다민, 피코빌리단백질, R-피코에리트린, 양자점(quantum dot)(예를 들면, 아황산아연-포획된 카드늄 셀레나이드), 써모메트릭 표지(thermometric label), 또는 이미노-폴리머라제 쇄 반응 표지일 수 있다. 표지의 도입, 표지화 과정 및 표지의 검출은 문헌[참조: Polak and Van Noorden, Introduction to Immunocytochemistry, 2nd ed., Springer Verlag, N.Y. (1997), and in Haugland, Handbook of Fluorescent Probes 및 Research Chemicals (1996), 이는 오레간주의 유젠에 소재하는 몰레큘러 프로브스, 인크.에서 발표한 결합된 핸드북 및 카탈로그이다]. 형광성 표지는 FPIA(참조: 예를 들면, 미국 특허 공보 제5,593,896호; 제5,573,904호; 제5,496,925호; 제5,359,093호, 및 제5,352,803호)에서 사용될 있다. 아크리디늄 화합물은 동종 또는 이종 화학발광성 검사에서 검출가능한 표지로 사용될 수 있다[참조: 예를 들면, Adamczyk et al., Bioorg. Med. Chem. Lett., 16: 1324-1328 (2006); Adamczyk et al., Bioorg. Med. Chem. Lett., 14: 2313-2317 (2004); Adamczyk et al., Biorg. Med. Chem. Lett., 14: 3917-3921 (2004); 및 Adamczyk et al., Org. Lett., 5: 3779-3782 (2003)].
예시적인 아크리디늄 화합물은 아크리디늄-9-카복스아미드이다. 아크리디늄 9-카복스아미드를 제조하는 방법은 문헌[참조: Mattingly, J.　Biolumin. Chemilumin., 6: 107-114 (1991); Adamczyk et al., J.　Org. Chem., 63: 5636-5639 (1998); Adamczyk et al., Tetrahedron, 55: 10899-10914 (1999); Adamczyk et al., Org. Lett., 1: 779-781 (1999); Adamczyk et al., Bioconjugate Chem., 11: 714-724 (2000); Adamczyk and Mattingly, In Luminescence Biotechnology: Instruments and Applications; (Dyke, K.V., ed.) (CRC Press: Boca Raton, 2002) pp. 77-105; Adamczyk et al., Org. Lett., 5: 3779-3782 (2003); 및 미국 특허 공보 제5,468,646호, 제5,543,524호 및 제5,783,699호]에 기술되어 있다. 다른 바람직한 아크리디늄 화합물은 아크리디늄-9-카복실레이트 아릴 에스테르이다. 아크리디늄-9-카복실레이트 아릴 에스테르의 예는 10-메틸-9-(페녹시카보닐)아크리디늄 플루오로설포네이트[미시간주 안 아르보에 소재하는 카이만 케미칼(Cayman Chemical)에서 시판]이다. 아크리디늄 9-카복실레이트 아릴 에스테르를 제조하는 방법은 문헌[참조: McCapra et al., Photochem. Photobiol., 4: 1111-21 (1965); Razavi et al., Luminescence, 15: 245-249 (2000); Razavi et al., Luminescence, 15: 239-244 (2000); 및 미국 특허 공보 제 5,241,070]에 기술되어 있다. 아크리디늄-9-카복실레이트 아릴 에스테르 및 이의 용도에 관한 추가의 세부사항은 US 공보 제2008/0248493호에 설정되어 있다.
화학발광성 검사(예를 들면, 상기 기술된 바와 같은 아크리디늄 또는 다른 화학발광성 제제 사용)은 문헌[참조: Adamczyk et al., Anal. Chim. Acta, 579(1): 61-67 (2006)]에 기술된 방법에 따라 수행될 수 있다. 비록 어떠한 적합한 검사 양식도 사용될 수 있다고 해도, 미세플레이트 화학발광계[Mithras LB-940, 제조원; 베르톨드 테크놀로지스 유에스에이, 엘엘씨(Berthold Technologies USA., LLC), 테네시주 옥크 릿지 소재]는 소 용적의 다수의 시료의 검사를 신속하게 할 수 있다.
시험 시료 및 특이적인 결합 파트너(들)이 첨가되어 화학발광성 검사용 혼합물을 형성하는 순서는 중요하지 않다. 제1의 특이적인 결합 파트너가 아크리디늄 화합물과 같은 화학발광성 제제로 검출가능하게 표지되는 경우, 검출가능하게 표지된 제1의 특이적인 결합 파트너-분석물 복합체가 형성된다. 달리는, 제2의 특이적인 결합 파트너가 사용되고 제2의 특이적인 결합 파트너가 아크리디늄 화합물과 같은 화학발광성 제제로 검출가능하게 표지되는 경우, 검출가능하게 표지 제1의 특이적인 결합 파트너-분석물-제2의 특이적인 결합 파트너 복합체가 형성된다. 어떠한 결합되지 않은 특이적인 결합 파트너도, 표지되거나 표지되지 않은 것에 상관없이, 세척과 같은, 당해 분야에 공지된 어떠한 기술을 사용하여 혼합물로부터 제거할 수 있다.
과산화수소는 혼합물 속에서 반응계내에서 생성될 수 있거나 상술한 아크리디늄 화합물의 첨가 전, 첨가와 동시, 또는 첨가 후에 혼합물(예를 들면, 과산화수소를 함유하는 것으로 공지된 하나 이상의 완충액 또는 다른 용액인 과산화수소의 공급원)에 제공되거나 공급될 수 있다. 과산화수소는 반응계내에서 당해 분야의 숙련가에게 명백할 수 있는 것과 같은 다수의 방법으로 반응계내에서 생성될 수 있다.
시료에 적어도 하나의 염기성 용액을 동시에 또는 연속적으로 첨가시, 분석물의 존재의 지표인, 검출가능한 시그날, 즉, 화학발광성 시그날이 생성된다. 염기성 용액은 적어도 하나의 염기를 함유하며 pH가 10 이상, 바람직하게는, 12 이상이다. 염기성 용액의 예는 수산화나트륨, 수산화칼륨, 수산화칼슘, 수산화알루미늄, 수산화마그네슘, 탄산나트륨, 중탄산나트륨, 수산화칼슘, 탄산칼슘, 및 중탄산칼슘을 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 시료에 첨가된 염기성 용액의 양은 염기성 용액의 농도에 의존한다. 사용된 염기성 용액의 농도를 기반으로 하여, 당해 분야의 숙련가는 시료에 첨가될 염기성 용액의 양을 용이하게 측정할 수 있다.
생성되는 화학발광성 시그날은 당해 분야의 숙련가에게 공지된 통상의 기술을 사용하여 검출할 수 있다. 생성된 시그날의 강도를 기반으로 하여, 시료속의 분석물의 양을 정량화할 수 있다. 구체적으로, 시료 중의 분석물의 양은 생성된 시그날의 강도에 비례한다. 존재하는 분석물의 양은 분석물에 대한 표준 곡선에 대해 생성된 광의 양을 비교하거나 참조 표준물에 대해 비교함으로써 정량화할 수 있다. 표준 곡선은 질량 분광기, 중량분석법 및, 당해 분야에 공지된 다른 기술들에 의해 분석물의 공지된 농도의 용액 또는 일련 희석물을 사용하여 생성할 수 있다. 상기에 화학발광성 제제로서 아크리딘 화합물의 용도가 강조되어 기술되어 있지만, 당해 분야의 숙련가는 다른 화학발광성 제제의 사용에 대한 당해 설명을 용이하게 채택할 것이다.
분석 면역검사는 일반적으로 샌드위치 방식과 같지만 이에 한정되지 않는, 당해 분야에 공지된 어떠한 양식을 사용하여 수행할 수 있다. 구체적으로, 하나의 면역검사 양식에서, 적어도 2개의 항체를 사용하여 시료속에서 사람 분석물과 같은 분석물, 또는 이의 단편을 분리하고 정량화한다. 보다 구체적으로, 적어도 2개의 항체가 "샌드위치"로 언급되는, 면역 복합체를 형성하는 분석물(또는 이의 단편) 상의 상이한 에피토프에 결합한다. 일반적으로, 면역검사에서, 하나 이상의 항체를 사용하여 시험 시료 속에서 분석물(또는 이의 단편)을 포획할 수 있으며(이들 항체는 흔히 "포획" 항체 또는 "포획" 항체들로 언급된다) 하나 이상의 항체를 사용하여 샌드위치에 검출가능한(즉, 정량가능한) 표지를 결합시킬 수 있다(이들 항체는 흔히 "검출 항체", "검출 항체들", "접합체", 또는 "접합체들"로 언급된다). 따라서, 샌드위치 면역검사 양식과 관련하여, 본원에 기술된 DVD-Ig (또는 단편, 변이체, 또는 이의 변이체의 단편)는 포획 항체, 검출 항체, 또는 이들 둘다로 사용될 수 있다. 예를 들면, 분석물(또는 이의 단편) 상에서 제1의 에피토프에 결합할 수 있는 도메인을 갖는 하나의 DVD-Ig를 포획 항체로 사용할 수 있고/있거나 분석물(또는 이의 단편) 상에서 제2의 에피토프에 결합할 수 있는 도메인을 갖는 다른 DVD-Ig를 검출 항체로 사용할 수 있다. 이와 관련하여, 분석물(또는 이의 단편) 상에서 제1의 에피토프에 결합할 수 있는 제1의 도메인 및 분석물(또는 이의 단편) 상에서 제2의 에피토프에 결합할 수 있는 제2의 도메인을 갖는 DVD-Ig를 포획 항체 및/또는 검출 항체로서 사용할 수 있다. 대안적으로, 제1의 분석물(또는 이의 단편) 상에서 에피토프에 결합할 수 있는 제1의 도메인 및 제2의 분석물(또는 이의 단편) 상에서 에피토프에 결합할 수 있는 제2의 도메인을 갖는 하나의 DVD-Ig를 2개 이상의 분석물을 검출하고, 임의로 정량화하기 위한 포획 항체 및/또는 검출 항체로서 사용할 수 있다. 분석물이 하나 이상의 형태, 예를 들면, 등가 또는 이가일 수 있는, 단량체 형태 및 이합체/다합체 형태로 시료 속에 존재할 수 있는 경우, 단량체 형태에 단지 노출된 에피토프에 결합할 수 있는 도메인을 갖는 하나의 DVD-Ig 및 이합체/다합체 형태의 상이한 부분에 에피토프에 결합할 수 있는 도메인을 갖는 다른 DVD-Ig를 포획 항체 및/또는 검출 항체로 사용함으로써 제공된 분석물의 상이한 형태의 검출, 및 임의의 정량화를 가능하도록 한다. 또한, 하나의 DVD-Ig내에서 및/또는 DVD-Ig들 사이에서 차등적인 친화성을 갖는 DVD-Ig를 사용하여 항원항체 결합력 장점을 제공할 수 있다. 본원에 기술된 바와 같은 면역검사와 관련하여, 이는 일반적으로 DVD-Ig의 구조내에서 하나 이상의 링커를 혼입시키기 위해 도움이 되거나 요구될 수 있다. 존재하는 경우, 최적으로 링커는 내부도메인에 의한 에피토프의 결합 및 또한 외부 도메인에 의한 다른 에피토프의 결합이 가능하도록 충분한 길이 및 구조적 가요성(flexibility)이 있어야 한다. 이와 관련하여, DVD-Ig는 2개의 상이한 분석물에 결합할 수 있으며, 하나의 분석물은 다른 것보다 더 크고, 바람직하게는 보다 큰 분석물은 외부 도메인에 의해 결합된다.
일반적으로 말해서, IL-1β 단백질(또는 이의 단편)에 대해 시험되는(예를 들면, 함유하는 것으로 추측된) 시료는 하나 이상의 포획 항체(또는 항체) 및 적어도 하나의 검출 항체(이는 제2의 검출 항체 또는 제3의 검출 항체 또는 심지어 연속적으로 번호매겨진 항체, 예를 들면, 다수의 항체를 포함하는 포획 및/또는 검출 항체의 경우)를 동시에 또는 순차적으로 및 어떠한 순서로도 접촉시킬 수 있다. 예를 들면, 시험 시료는 우선 적어도 하나의 포획 항체와 접촉시킨 후 (순차적으로) 적어도 하나의 검출 항체와 접촉시킬 수 있다. 대안적으로, 시험 시료를 우선 적어도 하나의 검출 항체와 접촉시킨 후 (순차적으로) 적어도 하나의 포획 항체와 접촉시킬 수 있다. 여전히 다른 대안에서, 시험 시료는 포획 항체 및 검출 항체와 동시에 접촉시킬 수 있다.
샌드위치 검사 양식에서, IL-1β(또는 이의 단편)을 함유하는 것으로 추정된 시료를 우선 적어도 하나의 제1의 포획 결합 단백질 (예를 들면, IL-1β항체)와 제1의 결합 단백질/IL-1β 복합체를 형성하도록 하는 조건하에서 접촉시킨다. 하나 이상의 포획 결합 단백질을 사용하는 경우, 2개 이상의 포획 결합 단백질을 포함하는 제1의 포획 결합 단백질/IL-1β 복합체가 형성된다. 샌드위치 검사에서, 결합 단백질, 즉, 바람직하게는, 적어도 하나의 포획 결합 단백질을 시험 시료 속에서 예측된 IL-1β 분석물(또는 이의 단편)의 최대 양의 몰 과량으로 사용한다. 예를 들면, 약 5㎍ 내지 약 1 mg의 항체/mL의 완충액(예를 들면, 미세입자 피복 완충액)을 사용할 수 있다.
단지 하나의 항체에 의한 결합이 요구되기 때문에 소 분석물을 측정하는데 흔히 사용되는, 경쟁적 억제 면역검사는 순차적이고 전통적인 양식을 포함한다. 순차적인 경쟁적 억제 면역검사에서, IL-1β에 대한 포획 결합 단백질은 미세역가 플레이트의 웰(well) 또는 다른 고체 지지체 위에 피복된다. IL-1β를 함유하는 시료를 웰에 가하는 경우, IL-1β는 포획 결합 단백질에 결합한다. 세척한 후, 공지된 양의 표지된(예를 들면, 바이오틴 또는 서양고추냉이 퍼옥시다제(HRP)) IL-1β를 웰에 가한다. 효소 표지에 대한 기질은 시그날을 생성하는데 필수적이다. HRP에 대한적합한 기질의 예는 3,3',5,5'-테트라메틸벤지딘(TMB)이다. 세척 후에, 표지된 분석물에 의해 생성된 시그날을 측정하며 이는 시료 속의 IL-1β의 양에 역으로 비례한다. 전통적인 경쟁적 억제 면역검사에서, IL-1β에 대한 결합 단백질은 고체 지지체(예를 들면, 미세역가 플레이트의 웰)에 피복된다. 그러나, 순차적인 경쟁적 억제 면역검사와는 달리, 시료 및 표지된 IL-1β는 동시에 웰에 가해진다. 시료 속의 어떠한 IL-1β도 표지된 IL-1β와 포획 결합 단백질에 대한 결합에 대해 경쟁한다. 세척 후, 표지된 IL-1β에 의해 생성된 시그날을 측정하며 시료 속의 IL-1β의 양에 역으로 비례한다.
임의로, 시험 시료를 적어도 하나의 포획 결합 단백질(예를 들면, 제1의 포획 항체)와 접촉시키기 전에, 적어도 하나의 포획 결합 단백질을 고체 지지체에 결합시킬 수 있으며, 이는 시험 시료로부터 제1의 결합 단백질/IL-1β(또는 이의 단편) 복합체의 분리를 촉진한다. 포획 결합 단백질이 결합된 기질은 시료로부터 포획 항체-분석물 복합체의 분리를 촉진하는 어떠한 적합한 고체 지지체 또는 고체 상일 수 있다.
예는 미세역가 플레이트와 같은 플레이트, 시험 튜브, 다공성 겔(예를 들면, 실리카 겔, 아가로즈, 덱스트란, 또는 젤라틴), 중합체성 필름(예를 들면, 폴리아클리아미드), 비드(예를 들면, 폴리스티렌 비드 또는 자기 비드), 여과기/막의 스트립(예를 들면, 니트로셀룰로즈 또는 나일론), 미세입자[예를 들면, 라텍스 입자, 자기화가능한 미세입자(예를 들면, 산화 철 또는 산화크롬 코어(core) 및 단독- 또는 헤테로-중합체 피복물을 갖고 반경이 약 1 내지 10 마이크론인 미세입자)를 포함한다. 기질은 항원에 결합하기에 적합한 표면 친화성 및 검출 항체에 의한 접근을 허용하는 충분한 다공성을 포함할 수 있다. 비록 수화된 상태의 젤라틴성 물질이 사용될 수 있다고 해도, 미세다공성 물질이 일반적으로 바람직하다. 이러한 다공성 지질은 바람직하게는, 두께가 약 0.01 내지 약 0.5 mm, 바람직하게는 약 0.1 mm인 쉬이트(sheet) 형태이다. 공극 크기가 약간씩 변할 수 있지만, 바람직하게 공극 크기는 약 0.025 내지 약 15 마이크론, 보다 바람직하게는 약 0.15 내지 약 15 마이크론이다. 이러한 기질의 표면은 기질에 대한 항체의 공유 연결을 유발하는 화학 공정에 의해 활성화될 수 있다. 일반적으로, 기질에 대한 항원 또는 항체의 소수성 힘을 통한 흡수에 의한 비가역적인 결합이 생성되고; 대안적으로, 화학적 커플링제 또는 다른 수단을 사용하여 항체를 기질에 공유결합적으로 결합시킬 수 있으며, 단 이러한 결합은 항체가 분석물에 결합하는 능력을 방해하지 않는다. 대안적으로, 항체는 스트렙타비딘(예를 들면, DYNAL® 자기 비드, 제조원: 인비트로겐, 캘리포니아주 칼스바드 소재) 또는 바이오틴[예를 들면, 파워-BindTM-SA-MP 스트렙타비딘-피복된 미세입자(제조원: 세라다인, 인디아나주 인디아나폴리스 소재)] 또는 항-종-특이적인 단클론 항체로 미리 피복된 미세입자와 결합시킬 수 있다. 필요한 경우, 기질은 유도체화시켜 항체 상의 각종 기능성 그룹과의 반응성을 허용하도록 유도체화할 수 있다. 이러한 유도체화는 특정의 커플링 제제의 사용을 필요로 하며, 이러한 커플링제의 예는 말레산 무수물, N-하이드록시석신아미드, 및 1-에틸-3-(3-디메틸아미노프로필)카보디이미드를 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 목적하는, 하나 이상의 포획 시약, 예를 들면, 이들 각각이 분석물(들)에 대해 특이적인 항체(또는 이의 단편)를 상이한 물리적 또는 다룰 수 있는 위치[예를 들면, 바이오칩 구조내(참조: 예를 들면, 미국 특허 공보 제 6,225,047호; PCT 공보 제WO　99/51773호; 미국 특허 공보 제6,329,209호; PCT 공보 제WO　00/56934호; 및 미국 특허 공보 제 5,242,828호]에서 고체 상에 부착시킬 수 있다. 포획 시약이 고체 지지체로서 질량 분광기 프로브에 부착되는 경우, 프로브에 결합된 분석물의 양은 레이저 탈착 이온화 질량 분광법으로 검출할 수 있다. 대안적으로, 단일 컬럼을 상이한 비드로 패킹할 수 있으며, 당해 비드는 하나 이상의 포획 시약으로 유도체화됨으로써, 단일 위치에서 분석물을 포획한다[참조: 항체-유도체화된, 비드-계 기술, 예를 들면, 루미넥스(Luminex)(텍사스주 오스틴 소재)의 xMAP 기술].
분석물(또는 이의 단편)에 대해 분석될 시험 시료를 적어도 하나의 포획 항체(예를 들면, 제1의 포획 항체)와 접촉시킨 후, 혼합물을 항온처리하여 제1의 항체(또는 다수 항체)-분석물 (또는 이의 단편) 복합체의 형성을 허용한다. 항온처리는, 약 4.5 내지 약 10.0의 pH에서, 약 2℃ 내지 약 45℃의 온도에서, 및 적어도 약 1 분 내지 약 18 시간, 바람직하게는 약 1 내지 약 24 분, 가장 바람직하게는 약 4 내지 약 18분 동안의 기간 동안 수행할 수 있다. 본원에 기술된 면역검사는 1 단계(시험 시료, 적어도 하나의 포획 항체 및 적어도 하나의 검출 항체가 모두 반응 용기에 순차적으로 또는 동시에 첨가됨을 의미)로 또는 1회 이상의 단계, 예를 들면, 2 단계, 3 단계 등으로 수행될 수 있다.
(제1 또는 다수의) 포획 항체/분석물(또는 이의 단편) 복합체의 형성 후, 복합체를 이후에 적어도 하나의 검출 항체와 (제1 또는 다수의) 포획 항체/분석물(또는 이의 단편)/제2 검출 항체 복합체)의 형성을 허용하는 조건하에서 접촉시킨다. 실제로, 다수의 항체가 포획 및/또는 검출에 사용되는, "제2"의 항체(예를 들면, 제2 검출 항체)로서 명확성에 대해 포획하는 동안, 적어도 하나의 검출 항체는 면역검사에 사용된 제2, 제3, 제4 등의 항체일 수 있다. 포획 항체/분석물 (또는 이의 단편) 복합체를 하나 이상의 검출 항체와 접촉시키는 경우, (제1 또는 다수의) 포획 항체/분석물 (또는 이의 단편)/(다수의) 검출 항체 복합체가 형성된다. 포획 항체(예를 들면, 제1의 포획 항체)를 사용하는 경우와 같이, 적어도 하나의 (예를 들면, 제2 및 어떠한 순차적인) 검출 항체를 포획 항체/분석물 (또는 이의 단편) 복합체와 접촉시키는 경우, 상기한 바와 유사한 조건들하의 배양 기간은 (제1 또는 다수의) 포획 항체/분석물 (또는 이의 단편)/(제2 또는 다수의) 검출 항체 복합체의 형성에 필요하다. 바람직하게는, 적어도 하나의 검출 항체는 검출가능한 표지를 함유한다. 검출가능한 표지는 적어도 하나의 검출 항체 (예를 들면, 제2 검출 항체)에 (제1 또는 다수의) 포획 항체/분석물 (또는 이의 단편)/(제2 또는 다수의) 검출 항체 복합체의 형성 전에, 동시에, 또는 후에 결합될 수 있다. 당해 분야에 공지된 어떠한 검출가능한 표지도 사용될 수 있다[Polak and Van Noorden (1997) and Haugland (1996) 참조문헌을 포함하는, 상기 논의 참조).
검출가능한 표지는 항체에 직접 또는 커플링제를 통해 결합될 수 있다. 사용될 수 있는 커플링제의 예는 EDAC (1-에틸-3-(3-디메틸아미노프로필)카르보디이미드, 하이드로클로라이드)이며, 이는 미주리주 세인트 루이스 소재의 시그마-알드리히(Sigma-Aldrich)로부터 시판된다. 사용될 수 있는 다른 커플링제는 당해 분야에 공지되어 있다. 항체에 검출가능한 표지를 결합시키는 방법은 당해 분야에 공지되어 있다. 또한, CPSP-아크리디늄 에스테르(즉, 9-[N-토실-N-(3-카복실프로필)]-10-(3-설포프로필)아크리디늄 카복사미드) 또는 SPSP-아크리디늄 에스테르(즉, N10-(3-설포프로필)-N-(3-설포프로필)-아크리디늄-9-카복사미드)에 대한 검출가능한 표지의 커플링을 촉진시키는 말단 그룹을 이미 함유하는 많은 검출가능한 표지는 시판되거나 합성될 수 있다.
(제1 또는 다수의) 포획 항체/분석물/(제2 또는 다수의) 검출 항체 복합체는 표지의 정량화 전에 시험 시료의 나머지로부터 분리될 수 있지만 분리해야만 하는 것은 아니다. 예를 들면, 적어도 하나의 포획 항체 (예를 들면, 제1의 포획 항체)가 웰 또는 비드와 같은 고체 지지체에 결합된 경우, 분리는 고체 지지체와의 접촉으로부터 (시험 시료의) 유액을 제거함으로써 달성할 수 있다. 대안적으로, 적어도 제1 포획 항체가 고체 지지체에 결합된 경우, 이를 분석물-함유 시료 및 적어도 하나의 제2 검출 항체와 동시에 접촉시켜 제1 (다수의) 항체/분석물/제2 (다수의) 항체 복합체를 형성시킨 후, 고체 지지체와 접촉시켜 유액(시험 시료)을 제거한다. 적어도 하나의 제1의 포획 항체가 고체 지지체에 결합하지 않은 경우, (제1 또는 다수의) 포획 항체/분석물/(제2 또는 다수의) 검출 항체 복합체를 표지의 양의 정량화하기 위해 시험 시료로부터 제거하여야 하는 것은 아니다.
표지된 포획 항체/분석물/검출 항체 복합체 (예를 들면, 제1의 포획 항체/분석물/제2 검출 항체 복합체)가 형성된 후, 복합체내 표지의 양을 당해 분야에 공지된 기술을 사용하여 정량화한다. 예를 들면, 효소 표지를 사용하는 경우, 표지된 복합체를 색상의 개발과 같은 정량화가능한 반응을 제공하는 표지에 대한 기질과 반응시킨다. 표지가 방사활성 표지인 경우, 표지는 적절한 수단, 예를 들면, 신틸레이션 계수기를 사용하여 정량화한다. 표지가 형광성 표지인 경우, 표지는 단색광(이는 "여기 파장(excitation wavelength)"으로 공지되어 있다)으로 표지를 자극시킴으로써 정량화하고 자극에 대한 반응시 표지에 의해 방사되는 다른 색상(이는 "방사 파장"으로 공지되어 있다)을 검출함으로써 정량화한다. 표지가 화학발광성 표지인 경우, 표지는 가시적으로 또는 광도계, x-선 필름, 고속 사진 필름, CCD 카메라 등을 사용하여 방사된 광을 검출시킴으로써 정량화한다. 복합체내 표지의 양이 정량화되면, 시험 시료내 분석물 또는 이의 단편의 농도는 공지된 농도의 분석물 또는 이의 단편의 일련 희석물을 사용하여 생성된 표준 곡선을 사용하는 것과 같이, 적절한 수단으로 측정한다. 분석물 또는 이의 단편의 일련 희석물을 사용하는 것 외에, 표준 곡선을 분광 광도계에 의해 및 당해 분야에 공지된 다른 기술에 의해 중량 분석으로 생성시킬 수 있다.
ARCHITECT® 분석기를 사용하는 화학발광성 미세입자 검사에서, 접합체 희석물 pH는 약 6.0 +/- 0.2일 수 있으며, 미세입자 피복 완충액은 약 실온(예를 들면, 약 17℃ 내지 약 27℃)에서 유지되어야 하고, 미세입자 피복 완충액 pH는 약 6.5 +/- 0.2이어야 하고, 미세입자 희석물 pH는 약 7.8 +/- 0.2이어야 한다. 고체는 바람직하게는 약 0.2% 미만, 예를 들면, 약 0.15% 미만, 약 0.14% 미만, 약 0.13% 미만, 약 0.12% 미만, 또는 약 0.11% 미만, 예를 들면, 약 0.10% 미만이다.
FPIA는 경쟁적 결합 면역검사 원리를 기반으로 한다. 형광적으로 표지된 화합물은, 선형적으로 편광화된 광으로 여기되는 경우, 이의 회전율에 역으로 비례하는 편광도를 갖는 형광성을 방사할 것이다. 형광적으로 표지된 트레이서-항체 복합체가 선형으로 편광화된 광으로 여기되는 경우, 형광단은 광이 흡수된 시간과 광이 방사된 시간 사이에서의 회전으로부터 구속된다. "유리" 트레이서 화합물(즉, 항체에 결합하지 않은 화합물)이 선형으로 편광된 광에 의해 여기되는 경우, 이의 회전은 경쟁적 결합 면역검사에서 생산된 상응하는 트레이서-항체 접합체보다 훨씬 더 빠르다. FPIA는 특별한 취급 및 폐기가 요구되는 방사활성 물질이 없는 만큼 RIA보다 유리하다. 또한, FPIA는 용이하고 신속하게 수행될 수 있는 균질한 검사가다.
상기 측면에서, 시험 시료 속에서 분석물(또는 이의 단편)의 존재, 양, 또는 농도를 측정하는 방법이 제공된다. 당해 방법은 (i) (i') 항체, 분석물에 결합할 수 있는 항체의 단편, 분석물에 결합할 수 있는 항체의 변이체, 분석물에 결합할 수 있는 항체의 변이체의 단편, 및 분석물에 결합할 수 있는 DVD-Ig(또는 이의 단편, 변이체, 또는 변이체의 단편), 및 (ii') 적어도 하나의 검출가능한 표지를 사용하고, (ii) 대조군 또는 캘리브레이터내에서 분석물(또는 이의 단편)의 존재, 양 또는 농도의 직접적 또는 간접적인 지표로서 생성된 시그날에 대해 시험 시료 속에서 분석물(또는 이의 단편)의 존재, 양 또는 농도의 직접적인 또는 간접적인 지표로서의 검출가능한 표지에 의해 생성된 시그날을 비교함을 포함하는 검사에 의해 분석물(또는 이의 단편)에 대해 시험 시료를 검사함을 포함한다. 캘리브레이터는 임의로 일련의 캘리브레이터의 부분이며, 여기서 캘리브레이터 각각은 분석물의 농도에 의해 다른 캘리브레이터와는 상이하다.
당해 방법은 (i) 항체, 분석물에 결합할 수 있는 항체의 단편, 분석물에 결합할 수 있는 항체의 변이체, 분석물에 결합할 수 있는 항체의 변이체의 단편, 및 분석물에 결합할 수 있는 DVD-Ig(또는 이의 단편, 변이체, 또는 변이체의 단편)를 접촉시켜 제1의 특이적인 결합 파트너/분석물 (또는 이의 단편) 복합체를 형성시키고, (ii) 제1의 특이적인 결합 파트너/분석물 (또는 이의 단편) 복합체를 검출가능하게 표지된 항-분석물 항체, 분석물에 결합할 수 있는 항-분석물 항체의 검출가능하게 표지된 단편, 분석물에 결합할 수 있는 항-분석물 항체의 검출가능하게 표지된 변이체, 분석물에 결합할 수 있는 항-분석물 항체의 변이체의 검출가능하게 표지된 단편, 및 검출가능하게 표지된 DVD-Ig(또는 이의 단편, 변이체, 또는 변이체의 단편)으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 분석물(또는 이의 단편)에 대한 적어도 하나의 제2의 특이적인 결합 파트너를 접촉시켜서 제1의 특이적인 결합 파트너/분석물(또는 이의 단편)/제2의 특이적인 결합 파트너 복합체를 형성시키는 단계, 및 (iii) (ii)에서 형성된 제1의 특이적인 결합 파트너/분석물 (또는 이의 단편)/제2의 특이적인 결합 파트너 복합체 속의 검출가능한 표지에 의해 생성된 시그날을 검출하거나 측정함으로써 시험 시료내 분석물의 존재, 양 또는 농도를 측정하는 단계를 포함할 수 있다. 본원에 기술된 바와 같은 분석물 (또는 이의 단편)에 대한 적어도 하나의 제1의 특이적인 결합 파트너 및/또는 분석물 (또는 이의 단편)에 대한 적어도 하나의 제2의 특이적인 결합 파트너가 DVD-Ig (또는 이의 단편, 변이체, 또는 변이체의 단편)인 방법이 바람직할 수 있다.
대안적으로, 당해 방법은 시험 시료를 항체, 분석물에 결합할 수 있는 항체의 단편, 분석물에 결합할 수 있는 항체의 변이체, 분석물에 결합할 수 있는 항체의 변이체의 단편, 및 DVD-Ig(또는 이의 단편, 변이체, 또는 변이체의 단편)로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 IL-1β 분석물(또는 이의 단편)에 대한 적어도 하나의 제1의 특이적인 결합 파트너와 동시에 또는 순차적으로 어떠한 순서로 접촉시키고, 시험 시료를, 적어도 하나의 제1의 특이적인 결합 파트너에 대한 결합에 대해 분석물(또는 이의 단편)과 경쟁할 수 있고 제1의 특이적인 결합 파트너에 결합할 수 있는 분석물의 검출가능하게 표지 분석물, 제1의 특이적인 결합 파트너에 결합할 수 있는 분석물의 검출가능하게 표지된 단편, 제1의 특이적인 결합 파트너에 결합할 수 있는 분석물의 검출가능하게 표지된 변이체, 및 제1의 특이적인 결합 파트너에 결합할 수 있는 분석물의 변이체의 검출가능하게 표지된 단편으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는, 적어도 하나의 제2의 특이적인 결합 파트너와 접촉시킴을 포함한다. 시험 시료 속에 존재하는 어떠한 IL-1β(또는 이의 단편) 및 적어도 하나의 제2의 특이적인 결합 파트너는 서로 경쟁하여 제1의 특이적인 결합 파트너/분석물 (또는 이의 단편) 복합체 및 제1의 특이적인 결합 파트너/제2의 특이적인 결합 파트너 복합체를 각각 형성한다. 당해 방법은 (ii)에서 형성된 제1의 특이적인 결합 파트너/제2의 특이적인 결합 파트너 복합체에서 검출가능한 표지에 의해 생성된 시그날을 검출하거나 측정함으로써 시험 시료 속의 분석물의 존재, 양 또는 농도를 측정함을 추가로 포함하며, 여기서 형성된 제1의 특이적인 결합 파트너/제2의 특이적인 결합 파트너 복합체에서 검출가능한 표지에 의해 생성된 시그날은 시험 시료 속의 분석물의 양 또는 농도에 역으로 비례한다.
상기 방법은, 시험 시료가 수득된 환자의 치료학적/예방학적 치료의 효능을 진단하거나, 예후하거나, 평가함을 추가로 포함할 수 있다. 당해 방법이, 시험 시료가 수득된 환자의 치료학적/예방학적 치료의 효능을 평가함을 추가로 포함하는 경우, 당해 방법은 효능을 개선시키기 위해 요구되는 환자의 치료학적/예방학적 치료를 변형시킴을 임의로 추가로 포함한다. 당해 방법은 자동화된 시스템 또는 반-자동화된 시스템에서 사용하기 위해 조정할 수 있다.
검사 방법(및 이를 위한 키트)과 관련하여, 문헌에 기술된 바와 같은 항-분석물의 생산을 위한 방법 또는 상업적으로 이용가능한 항-분석물 항체를 사용하는 것이 가능할 수 있다. 각종 항체의 시판 공급원은 산타 크루즈 바이로테크놀로지 인크.(Santa Cruz Biotechnology Inc.(캘리포니아주 산타 크루즈), 겐웨이 바이오테크, 인크.(GenWay Biotech, Inc.)(캘리포니아주 샌 디에고 소재), 및 알 앤드 디 시스템즈(R&D System)(RDS; 미네소타주 미네아폴리스 소재)를 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
일반적으로, 예정된 수준은, 예를 들면, 질환 또는 질환의 위험을 검출하기 위한 분석물 또는 이의 단편에 대해 시험 시료를 검사할 때 수득된 결과를 평가하기 위해 이에 대해 기준으로 사용될 수 있다. 일반적으로, 이러한 비교시, 예정된 수준은 특수 검사를 충분한 횟수 및 적절한 조건하에 수행함으로써 분석물 존재, 양 또는 농도와 질환, 장애 또는 병태의 특수 단계 또는 종점 또는, 특수 임상 지표의 연결 또는 연합이 이루어질 수 있도록 수행함으로써 수득된다. 전형적으로, 예정된 수준은 참조 대상체(또는 대상체들의 집단)의 검사으로 수득된다. 측정된 분석물은 이의 단편, 이의 분해 생성물 및/또는 이의 효소적 분해 생성물을 포함할 수 있다.
특히, 질환 진행 및/또는 치료를 모니터링하기 위해 사용되는 바와 같은 예정된 수준과 관련하여, 분석물 또는 이의 단편의 양 또는 농도는 "변하지 않거나", "양호하거나"(또는 "양호하게 변경되거나"), 또는 "양호하지 않은"(또는 "양호하지 않게 변경된")일 수 있다. "상승된" 또는 "증가된"은, 전형적인 또는 정상의 수준 또는 범위(예를 들면, 예정된 수준)보다 높거나, 다른 참조 수준 또는 범위(예를 들면, 조기 또는 기본 시료)보다 높은 시험 시료 속에서의 농도 또는 양을 말한다. 용어 "저하된" 또는 "감소된"은 전형적인 또는 정상 수준 또는 범위(예를 들면, 예정된 수준)보다 낮거나, 다른 참조 수준 또는 범위(예를 들면, 조기 또는 기본 시료)보다 낮은 시험 시료 속에서의 농도 또는 양을 말한다. 용어 "변경된"은 전형적이거나 정상인 수준 또는 범위(예를 들면, 예정된 수준)보다, 또는 다른 참조 수준 또는 범위(예를 들면, 조기 또는 기본 시료)보다 변경된(증가 또는 감소된) 시료 속에서의 양 또는 농도를 말한다.
분석물에 대한 전형적이거나 정상인 수준 또는 범위는 표준 실시에 따라 정의된다. 일부 예에서 분석물의 수준은 매우 낮을 것이므로, 소위 변경된 수준 또는 변경은, 전형적인 또는 정상 수준 또는 범위, 또는 실험적 오차 또는 시료 변이에 의해 설명될 수 없는 참조 수준 또는 범위와 비교하여 어떠한 전체적인 변화가 존재하는 경우 발생되는 것으로 고려될 수 있다. 따라서, 특수 시료 속에서 측정된 수준은 소위 정상 대상체로부터의 유사한 시료 속에서 측정된 수준 또는 수준의 범위와 비교될 것이다. 이와 관련하여, "정상 대상체"는 예를 들면, 검출가능한 질환이 없는 개인이며, "정상"(때때로 "대조군"으로 명명됨) 환자 또는 집단은 예를 들면, 각각 검출가능한 질환을 나타내지 않는 것(들)이다. 또한, 분석물이 사람 집단의 대부분에서 고 수준으로 통상적으로 발견되지 않는 것을 고려하여, "정상 대조군"은, 실질적인 검출가능한 증가 또는 상승된 분석물의 양 또는 농도가 없는 개인으로 고려될 수 있으며, "정상"(때때로 "대조군"으로 명명됨) 환자 또는 집단은 분석물의 실질적으로 검출가능한 증가되거나 상승된 양 또는 농도를 나타내지 않는 것(들)이다. "명확하게 정상인 대상체"는, 분석물이 아직 평가되지 않거나 현재 평가중인 것이다. 분석물의 수준은, 분석물이 정상적으로 검출가능하지 않지만(예를 들어, 정상 수준은 0이거나 정상 집단의 약 25 내지 약 75 퍼센트의 범위 내이다), 시험 시료 속에서 검출되는 경우, 및 또한 분석물이 시험 시료 속에서 정상 수준보다 높게 존재하는 경우 "상승된"으로 일컬어진다. 따라서, 특히, 교시내용은 특수 질환, 장애 또는 병태를 갖거나, 가질 위험이 있는 대상체에 대해 스크리닝하는 방법을 제공한다. 검사 방법은 또한 다른 마커 등의 검사를 포함할 수 있다.
따라서, 본원에 기술된 방법은, 대상체가 제공된 질환, 장애 또는 병태를 가지거나 이것으로 발전될 위험이 있는지를 측정하기 위해 사용될 수 있다. 구체적으로, 이러한 방법은:
(a) 대상체로부터의 시험 시료 속에서 IL-1β(또는 이의 단편)의 농도 또는 양을 측정하는 단계(예를 들면, 본원에 기술된 방법, 또는 당해 분야에 공지된 방법을 사용); 및
(b) 단계 (a)에서 측정된 IL-1β(또는 이의 단편)의 농도 또는 양을 예정된 수준과 비교하는 단계를 포함할 수 있으며, 여기서 단계 (a)에서 측정된 분석물의 농도 또는 양이 예정된 수준과 관련하여 양호한 경우, 대상체는 제공된 질환, 장애 또는 병태를 가지지 않거나 위험에 있지 않은 것으로 측정된다. 그러나, 단계 (a)에서 측정된 IL-1β의 농도 또는 양이 예정된 수준과 관련하여 양호하지 않은 경우, 대상체는 제공된 질환, 장애 또는 병태를 가지거나 위험이 있는 것으로 측정된다.
또한, 대상체에서 질환의 진행을 모니터링하는 방법이 본원에 제공된다. 최적으로, 당해 방법은:
(a) 대상체로부터의 시험 시료 속에서 IL-1β의 양 또는 농도를 측정하는 단계;
(b) 대상체로부터의 말기 시험 시료 속에서 IL-1β의 양 또는 농도를 측정하는 단계; 및
(c) 단계 (b)에서 측정된 분석물의 농도 또는 양을 단계 (a)에서 측정된 IL-1β의 농도 또는 양과 비교하는 단계를 포함하며, 여기서 단계 (b)에서 측정된 농도 또는 양이 변화하지 않거나 단계 (a)에서 측정된 IL-1β의 농도 또는 양과 비교하여 양호한 경우, 대상체에서 질환은 지속되거나, 진행되거나 악화되는 것으로 측정된다. 비교에 의해, 단계 (b)에서 측정된 IL-1β의 농도 또는 양이 단계 (a)에서 측정된 IL-1β의 농도 또는 양과 비교시 양호한 경우, 대상체에서 질환은 중지되거나, 회복되거나 개선된 것으로 측정된다.
임의로, 당해 방법은 단계 (b)에서 측정된 IL-1β 분석물의 농도 또는 양을, 예를 들면, 예정된 수준과 비교함을 추가로 포함한다. 또한, 임의로, 당해 방법은, 당해 비교가 단계 (b)에서 측정된 분석물의 농도 또는 양이 예를 들면, 예정된 수준과 관련하여 양호하지 않게 변경되는지를 나타내는 경우 대상체를 하나 이상의 약제학적 조성물로 일정한 기간 동안 치료함을 포함한다.
여전히 또한, 당해 방법은 하나 이상의 약제학적 조성물을 사용한 치료를 제공받은 대상체에서 치료를 모니터링하기 위해 사용될 수 있다. 구체적으로, 이러한 방법은 대상체에게 하나 이상의 약제학적 조성물을 투여하기 전에 대상체로부터 제1의 시험 시료를 제공함을 포함한다. 다음에, 대상체로부터의 제1의 시험 시료에서 IL-1β의 농도 또는 양을 측정한다(예를 들면, 본원에 기술되거나 당해 분야에 공지된 방법을 사용함). IL-1β의 농도 또는 양을 측정한 후, 임의로 IL-1β의 농도 또는 양을 예정된 수준과 비교한다. 제1의 시험 시료 속에서 측정된 IL-1β의 농도 또는 양이 예정된 수준보다 낮은 경우, 대상체를 하나 이상의 약제학적 조성물로 치료하지 않는다. 그러나, 제1의 시험 시료 속에서 측정된 IL-1β의 농도 또는 양이 예정된 수준보다 높은 경우, 대상체는 하나 이상의 약제학적 조성물로 일정 기간 동안 치료된다. 대상체가 하나 이상의 약제학적 조성물로 치료되는 기간은 당해 분야의 숙련가에 의해 결정될 수 있다(예를 들면, 당해 기간은 약 7일 내지 약 2년, 바람직하게는 약 14일 내지 약 1년일 수 있다).
하나 이상의 약제학적 조성물을 사용한 치료 기간 동안, 제2 및 후속적인 시험 시료를 이후에 대상체로부터 수득한다. 시험 시료의 수 및 상기 시험 시료가 대상체로부터 수득되는 시기는 중요하지 않다. 예를 들면, 제2 시험 시료는 대상체에게 하나 이상의 약제학적 조성물을 최초 투여한 후 7일째에 수득할 수 있었으며, 제3의 시험 시료는, 대상체가 하나 이상의 약제학적 조성물을 최초 투여받은 후 2주째에 수득할 수 있었고, 제4의 시험 시료는, 대상체가 하나 이상의 약제학적 조성물의 최초 투여 후 3주 째에 수득할 수 있었으며, 제5의 시험 시료는, 대상체가 하나 이상의 약제학적 조성물을 최초 투여받은 후 4주째에 수득할 수 있었다.
각각의 제2 또는 후속적인 시험 시료를 대상체로부터 수득한 후, 제2 또는 후속적인 시험 시료 속에서 측정된 IL-1β 분석물의 농도 또는 양을 측정한다(예를 들면, 본원에 기술되거나 당해 분야에 공지된 방법을 사용함). 제2 및 후속적인 시험 시료의 각각에서 측정된 IL-1β의 농도 또는 양은 제1 시험 시료(예를 들면, 예정된 수준에 대해 원래 임의로 비교된 시험 시료) 속에서 측정된 분석물의 농도 또는 양과 비교한다. 단계 (c)에서 측정된 IL-1β의 농도 또는 양은, 단계 (a)에서 측정된 분석물의 농도 또는 양과 비교하여 양호한 경우, 대상체에서 질환은 중지되거나, 회복되거나 개선된 것으로 측정되며, 대상체는 단계 (b)의 약제학적 조성물중 하나를 지속적으로 투여받아야 한다. 그러나, 단계 (c)에서 측정된 양 또는 농도가 변하지 않거나 단계 (a)에서 측정된 것으로서 분석물의 농도 또는 양과 비교하여 양호하지 않은 경우, 대상체에서 질환은 지속되거나, 진행되거나 악화된 것으로 측정되며, 대상체는 단계 (b)에서 대상체에게 투여된 하나 이상의 약제학적 조성물의 보다 높은 농도를 사용하여 치료되어야 하거나 대상체는 단계 (b)에서 대상체에게 투여된 하나 이상의 약제학적 조성물과는 상이한 하나 이상의 약제학적 조성물로 치료되어야 한다. 구체적으로, 대상체는, 대상체가 대상체의 분석물 수준을 감소시키거나 저하시키기 위해 이미 제공받은 하나 이상의 약제학적 조성물과는 상이한 하나 이상의 약제학적 조성물로 치료될 수 있다.
일반적으로, 반복 시험이 수행될 수 있는(예를 들면, 질환 진행 및/또는 치료에 대한 반응을 모니터링하는) 검사를 위해, 제2 또는 후속적인 시험 시료를 제1의 시험 시료가 대상체로부터 수득된 후 기간 동안 수득한다. 구체적으로, 대상체로부터의 제2 시험 시료는, 제1 시험 시료가 대상체로부터 수득된 후 수분, 수시간, 수일, 수주 또는 수년 동안 수득될 수 있다. 예를 들면, 제2 시험 시료는, 대상체로부터 제1의 시험 시료가 수득된 후, 대상체로부터 약 1분, 약 5분, 약 10분, 약 15분, 약 30분, 약 45분, 약 60분, 약 2시간, 약 3시간, 약 4시간, 약 5시간, 약 6시간, 약 7시간, 약 8시간, 약 9시간, 약 10시간, 약 11시간, 약 12시간, 약 13시간, 약 14시간, 약 15시간, 약 16시간, 약 17시간, 약 18 시간, 약 19시간, 약 20시간, 약 21시간, 약 22시간, 약 23시간, 약 24시간, 약 2일, 약 3일, 약 4일, 약 5일, 약 6일, 약 7일, 약 2주, 약 3주, 약 4주, 약 5주, 약 6주, 약 7주, 약 8주, 약 9주, 약 10주, 약 11주, 약 12주, 약 13주, 약 14주, 약 15주, 약 16주, 약 17주, 약 18주, 약 19주, 약 20주, 약 21주, 약 22주, 약 23주, 약 24주, 약 25주, 약 26주, 약 27주, 약 28주, 약 29주, 약 30주, 약 31주, 약 32주, 약 33주, 약 34주, 약 35주, 약 36주, 약 37주, 약 38주, 약 39주, 약 40주, 약 41주, 약 42주, 약 43주, 약 44주, 약 45주, 약 46주, 약 47주, 약 48주, 약 49주, 약 50주, 약 51주 , 약 52주, 약 1.5년, 약 2년, 약 2.5년, 약 3.0년, 약 3.5년, 약 4.0년, 약 4.5년, 약 5.0년, 약 5.5.년, 약 6.0년, 약 6.5년, 약 7.0년, 약 7.5년, 약 8.0년, 약 8.5년, 약 9.0년, 약 9.5년 또는 약 10.0년의 기간에 수득될 수 있다.
질환 진행을 모니터하는데 사용된 경우, 상기 검사를 사용하여 급성 상태로 고생하는 대상체에서 질환의 진행을 모니터할 수 있다. 중환자 상태로 또한 공지된 급성 상태는 예를 들면, 심혈관계 또는 분비계를 포함하는 급성의, 생명을 위협하는 질환 또는 다른 위독한 의학 상태를 말하다. 전형적으로, 중환자 상태는 병원을 기반으로 하는 셋팅(응급실, 중환자실, 외상 센터, 또는 다른 응급 환자 셋팅)에서 급성의 의학적 중재 또는 긴급 의료원 또는 다른 분야를 기반으로 하는 의료인에 의한 투여를 필요로 하는 상태를 말한다. 중환자 상태의 경우, 반복된 모니터링은 일반적으로 보다 짧은 기간, 즉, 수 분, 수 시간 또는 수 일(예를 들면, 약 1분, 약 5분, 약 10분, 약 15분, 약 30분, 약 45분, 약 60분, 약 2시간, 약 3시간, 약 4시간, 약 5시간, 약 6시간, 약 7시간, 약 8시간, 약 9시간, 약 10시간, 약 11시간, 약 12시간, 약 13시간, 약 14시간, 약 15시간, 약 16시간, 약 17시간, 약 18시간, 약 19시간, 약 20시간, 약 21시간, 약 22시간, 약 23시간, 약 24시간, 약 2일, 약 3일, 약 4일, 약 5일, 약 6일 또는 약 7일)내에 수행되며, 초기 검사는 마찬가지로 일반적으로 보다 짧은 기간, 예를 들면, 질환 또는 병태의 발병의 약 수 분, 수 시간 또는 수 일내에 수행된다.
검사는 또한 만성 또는 비-급성 상태로 고생하는 대상체에서 질환의 진행을 모니터링하는데 사용될 수 있다. 비-중환자 또는, 비-급성 병태는, 예를 들면, 심혈관계 및/또는 분비계를 포함하는 급성의, 생명을 위협하는 질환 또는 다른 중환자 의학 병태 이외의 병태를 말한다. 전형적으로, 비-급성 상태는 보다 긴-기간 또는 만성 기간의 것을 포함한다. 비-급성 상태의 경우, 반복된 모니터링이 일반적으로 보다 긴 기간, 예를 들면, 수 시간, 수 일, 수 주, 수 개월 또는 수 년(예를 들면, 약 1시간, 약 2시간, 약 3시간, 약 4시간, 약 5시간, 약 6시간, 약 7시간, 약 8시간, 약 9시간, 약 10시간, 약 11시간, 약 12시간, 약 13시간, 약 14시간, 약 15시간, 약 16시간, 약 17시간, 약 18시간, 약 19시간, 약 20시간, 약 21시간, 약 22시간, 약 23시간, 약 24시간, 약 2일, 약 3일, 약 4일, 약 5일, 약 6일, 약 7일, 약 2주, 약 3주, 약 4주, 약 5주, 약 6주, 약 7주, 약 8주, 약 9주, 약 10주, 약 11주, 약 12주, 약 13주, 약 14주, 약 15주, 약 16주, 약 17주, 약 18주, 약 19주, 약 20주, 약 21주, 약 22주, 약 23주, 약 24주, 약 25주, 약 26주, 약 27주, 약 28주, 약 29주, 약 30주, 약 31주, 약 32주, 약 33주, 약 34주, 약 35주, 약 36주, 약 37주, 약 38주, 약 39주, 약 40주, 약 41주, 약 42주, 약 43주, 약 44주, 약 45주, 약 46주, 약 47주, 약 48주, 약 49주, 약 50주, 약 51주 , 약 52주, 약 1.5년, 약 2년, 약 2.5년, 약 3.0년, 약 3.5년, 약 4.0년, 약 4.5년, 약 5.0년, 약 5.5.년, 약 6.0년, 약 6.5년, 약 7.0년, 약 7.5년, 약 8.0년, 약 8.5년, 약 9.0년, 약 9.5년 또는 약 10.0년)으로 수행되며, 초기 검사는 마찬가지로 일반적으로 보다 긴 기간, 예를 들면, 질환 또는 병태의 발병의 약 수 시간, 수 일, 수 개월 또는 수 년내에 수행된다.
또한, 상기 검사는, 대상체로부터 수득된 제1의 시험 시료를 사용하여 수행될 수 있으며, 여기서 제1의 시험 시료는 뇨, 혈청 또는 혈장과 같은 하나의 공급원으로부터 수득된다. 임의로, 상기 검사는 이후에 대상체로부터 수득된 제2의 시험 시료를 사용하여 반복할 수 있으며, 여기서 제2의 시험 시료는 다른 공급원으로부터 수득된다. 예를 들면, 제1의 시험 시료가 뇨로부터 수득된 경우, 제2의 시험 시료를 혈청 또는 혈장으로부터 수득할 수 있다. 제1의 시험 시료 및 제2의 시험 시료를 사용하는 검사으로부터 수득된 결과를 비교할 수 있다. 비교는 대상체에서 질환 또는 병태의 상을 평가하는데 사용될 수 있다.
또한, 본 교시내용은 또한 제공된 질환, 장애 또는 병태에 걸리기 쉽거나 이로 고생하는 대상체가 치료로부터 유리할지를 측정하는 방법에 관한 것이다. 특히, 본 교시내용은 동반 진단 방법 및 생성물을 분석하는 것에 관한 것이다. 따라서, 본원에 기술된 "대상체에서 질환의 치료를 모니터링하는" 방법은 임의로 또한 치료요법에 대해 후보물을 선택하거나 확인함을 포함할 수 있다.
따라서, 특수 양태에서, 본 교시내용은, 제공된 질환, 장애 또는 병태를 가지거나, 이러한 위험에 있는 대상체가 치료요법에 대한 후보물인지를 측정하는 방법을 제공한다. 일반적으로, 대상체는 제공된 질환, 장애 또는 병태의 일부 증상을 경험하거나 실제로 제공된 질환, 장애 또는 병태를 가지거나 가질 위험이 있는 대상체, 및/또는 본원에 기술된 것으로서, 분석물의 양호하지 않은 농도 또는 양, 또는 이의 단편을 증명하는 대상체이다.
당해 방법은 임의로, 본원에 기술된 바와 같은 검사를 포함하며, 여기서 IL-1β는 하나 이상의 약제학적 조성물(예를 들면, 특히 분석물을 포함하는 작용 메커니즘과 관련된 약제를 사용), 면역억제 치료요법, 또는 면역흡착 치료요법을 사용한 치료 전 및 후에 평가하거나, 분석물을 이러한 치료 후 평가하고 분석물의 농도 또는 양을 예정된 수준에 대해 비교한다. 치료 후 관찰된 IL-1β의 양의 양호하지 않은 농도는 추가의 또는 지속된 치료를 제공받는 것으로부터 유리하지 않을 것이며, 반면 치료 후 관찰된 분석물의 양호한 농도 또는 양은, 대상체가 추가의 또는 지속된 치료를 제공받는 것으로부터 유리할 것이라는 것을 확인해 준다. 이러한 확인은 임상 연구의 관리, 및 개선된 환자 보호의 제공 등을 보조한다.
본원의 특정 양태들이 본원에 논의된 바와 같은 제공된 질환, 장애 또는 병태를 평가하기 위해 사용된 경우 유리한 반면, 검사 및 키트를 사용하여 다른 질병, 질환 및 상태에서 분석물을 평가하기 위해 사용될 수 있음은 두말할 나위없다. 검사 방법은 또한 다른 표적 등의 검사를 포함할 수 있다.
검사 방법을 또한 사용하여 제공된 질환, 장애 또는 병태를 완화시키는 화합물을 확인할 수 있다. 예를 들면, 분석물을 발현하는 세포를 후보물 화합물과 접촉시킬 수 있다. 화합물과 접촉된 세포내 분석물의 발현 수준은 본원에 기술된 검사 방법을 사용하여 대조군 세포내에서의 것과 비교할 수 있다.
II. 키트
시험 시료속에서 분석물(또는 이의 단편)의 존재, 양 또는 농도에 대해 시험 시료를 검사하기 위한 키트가 또한 제공된다. 당해 키트는 시험 시료를 IL-1β(또는 이의 단편)에 대해 검사하기 위한 적어도 하나의 성분 및 시험 시료를 분석물(또는 이의 단편)에 대해 검사하기 위한 지시사항을 포함한다. 시험 시료를 분석물(또는 이의 단편)에 대해 검사하기 위한 적어도 하나의 성분은 본원에 기술되고 고체 상에 임의로 고정된, 항-IL-1β 결합 단백질, 예를 들면, 단클론 항체 또는 DVD-Ig(또는 이의 단편, 변이체, 또는 변이체의 단편)을 포함할 수 있다.
키트는 면역검사, 예를 들면, 화학발광성 미세입자 면역검사에 의해 IL-1β분석물에 대해 시험 시료를 검사하기 위한 적어도 하나의 성분, 및 면역검사, 예를 들면, 화학발광성 미세입자 면역검사에 의해 IL-1β 분석물에 대해 시험 시료를 검사하기 위한 지시사항을 포함한다. 예를 들면, 당해 키트는 L-1β에 대한 적어도 하나의 특이적인 결합 파트너, 예를 들면, 항-IL-1β단클론/다클론 항체(또는 IL-1β에 결합할 수 있는 이의 단편, 분석물에 결합할 수 있는 이의 변이체, 또는 분석물에 결합할 수 있는 변이체의 단편) 또는 항-IL-1βDVD-Ig (또는 이의 단편, 변이체, 또는 변이체의 단편)를 포함할 수 있으며, 이들 중 어느 것도 검출가능하게 표지될 수 있다. 대안적으로 또는 추가로, 키트는 시험 시료 속에서, 각각이 고체 지지체 상에 고정될 수 있는, 항-분석물 단클론/다클론 항체(또는 분석물에 결합할 수 있는 이의 단편, 분석물에 결합할 수 있는 이의 변이체, 또는 분석물에 결합할 수 있는 변이체의 단편) 또는 항-분석물 DVD-Ig(또는 이의 단편, 변이체, 또는 변이체의 단편)에 대한 결합에 대해 시험 시료 속에서 어떠한 분석물과 경쟁할 수 있는, IL-1β 분석물(또는 항-분석물, 단클론/다클론 항체 또는 항-분석물 DVD-Ig(또는 이의 단편, 변이체, 또는 변이체의 단편)에 결합할 수 있는 이의 단편))을 포함할 수 있다. 키트는 교정기 또는 대조군, 예를 들면, 분리되거나 정제된 분석물을 포함할 수 있다. 키트는 검사를 수행하기 위한 적어도 하나의 용기(예를 들면, 제1의 특이적인 결합 파트너로 이미 피복될 수 있는 튜브, 미세역가 플레이트 또는 스트립), 및/또는 검사 완충액 또는 세척 완충액과 같은 완충액을 포함할 수 있으며, 완충액 중 하나는 농축 용액, 검출가능한 표지(예를 들면, 효소 표지)에 대한 기질 용액, 또는 정지 용액으로 제공될 수 있다. 바람직하게는, 키트는 검사를 수행하는데 필수적인 모든 성분, 즉, 시약, 표준물, 완충액, 희석액 등을 포함한다. 지시사항은 디스크, CD, DVD 등과 같은 컴퓨터-판독가능한 형태 또는 종이 형태일 수 있다.
항-IL-1β 결합 단백질 또는 항-분석물 DVD-Ig와 같은 어떠한 결합 단백질, 또는 트레이서도 형광단, 방사활성 모이어티, 효소, 바이오틴/아비딘 표지, 발색단, 화학발광성 표지 등과 같이, 본원에 기술된 바와 같은, 검출가능한 표지를 혼입시킬 수 있거나, 키트는 검출가능한 표지화를 수행하기 위한 시약을 포함할 수 있다. 항체, 교정기 및/또는 대조군은 별도의 용기내에 제공되거나 적절한 검사 양식, 예를 들면, 미세역가 플레이트내로 예비 분산시킬 수 있다.
임의로, 키트는 품질 조절 성분(예를 들면, 민감성 패널, 교정기, 및 양성 대조군)을 포함한다. 품질 조절 시약의 제조는 당해 분야에 잘 공지되어 있으며 각종 면역진단 제품을 위한 삽입 쉬이트에 기술되어 있다. 민감성 패널 구성원은 임의로 검사 수행 특성을 확립하기 위해 사용되며, 추가로 면역검사 키트 시약의 완전성, 및 검사의 표준화의 유용한 지표이다.
키트는 또한 진단 검사를 수행하거나 완충액, 염, 효소, 효소 보조-인자, 효소 기질, 검출 시약 등과 같은 품질 조절 평가를 촉진하는데 요구되는 다른 시약을 임의로 포함할 수 있다. 완충액 및 시험 시료의 분리 및/또는 처리를 위한 용액(예를 들면, 예비처리 시약)과 같은 다른 성분을 또한 키트에 포함시킬 수 있다. 키트는 임의로 하나 이상의 다른 대조군을 포함한다. 키트의 성분 중 하나 이상은 동결건조시킬 수 있으며, 이 경우 키트는 동결건조된 성분의 재구성에 적합한 시약을 추가로 포함할 수 있다.
키트의 각종 성분들이 필요에 따라 적합한 용기, 예를 들면, 미세역가 플레이트 속에 제공된다. 키트는 또한 시료를 유지시키거나 저장하기 위한 용기(예를 들면, 뇨 시료용 용기 또는 카트릿지)를 추가로 포함할 수 있다. 경우에 따라, 키트는 또한 반응 용기, 혼합 용기, 및 시약 또는 시험 시료의 제조를 촉진시키는 다른 성분을 함유할 수 있다. 키트는 또한 시험 시료를 수득하는 것을 보조하기 위한 하나 이상의 장치, 예를 들면, 주사기, 피펫, 포셉(forcep), 계량 스푼 등을 포함할 수 있다.
검출가능한 표지가 적어도 하나의 아크리디늄 화합물인 경우, 키트는 적어도 하나의 아크리디늄-9-카복스아미드, 적어도 하나의 아크리디늄-9-카복실레이트 아릴 에스테르, 또는 이의 어떠한 조합도 포함할 수 있다. 검출가능한 표지가 적어도 하나의 아크리디늄 화합물인 경우, 키트는 또한 완충액, 용액, 및/또는 적어도 하나의 염기성 용액과 같은 과산화수소의 공급원을 포함할 수 있다. 목적하는 경우, 키트는 자기 입자, 비드, 시험 튜브, 미세역가 플레이트, 큐베트, 막, 스캐폴딩 분자, 필름, 여과지, 디스크 또는 칩과 같은, 고체 상을 함유할 수 있다.
III. 키트 및 방법의 채택
키트(또는 이의 성분), 및 또한 본원에 기술된 바와 같은 면역검사와 같은, 검사에 의해 시험 시료 속에서 분석물의 존재, 양 또는 농도를 측정하는 방법은 예를 들면, 미국 특허 공보 제5,089,424호 및 제5,006,309호에 기술되고, 예를 들면, 애보트 래보러토리즈(일리노이주 애보트 파크 소재)에 의해 ARCHITECT®로서 상업적으로 시판되는 바와 같은 다양한 자동화된 및 반-자동화된 시스템(고체 상이 미세입자를 포함하는 것들을 포함)에서 사용하기 위해 채택될 수 있다.
비-자동화된 시스템(예를 들면, ELISA)와 비교한 것으로서 자동화된 또는 반-자동화된 시스템 사이의 차이점들 중 일부는 제1의 특이적인 결합 파트너[예를 들면, 항-분석물, 단클론/다클론 항체(또는 이의 단편, 이의 변이체, 또는 이의 변이체의 단편) 또는 항-분석물 DVD-Ig(또는 이의 단편, 이의 변이체, 또는 이의 변이체의 단편)가 부착되고; 어떠한 방식으로도, 샌드위치 형성 및 분석물 반응성은 영향받을 수 있다], 및 포획, 검출 및/또는 어떠한 임의의 세척 단계의 길이 및 시기를 포함한다. ELISA와 같은 비-자동화된 양식은 시료 및 포획 시약을 사용한 비교적 보다 긴 항온처리 시간(예를 들면, 약 2시간)을 필요로 할 수 있는 반면, 자동화되거나 반-자동화된 양식(예를 들면, ARCHITECT®, 제조원: 애보트 래보러토리즈)은 비교적 짧은 항온처리 시간(예를 들면, ARCHITECT®의 경우 대략 18분)을 가질 수 있다. 유사하게, ELISA와 같은 비-자동화된 양식은 접합체 시약과 같은 검출 항체를 비교적 보다 긴 항온처리 시간(예를 들면, 약 2시간) 동안 항온처리할 수 있는 반면, 자동화되거나 반-자동화된 양식(예를 들면, ARCHITECT®)는 비교적 보다 짧은 항온처리 시간(예를 들면, ARCHITECT®의 경우 대략 4분)을 가질 수 있다.
애보트 래보러토리즈로부터 이용가능한 다른 플랫포옴은 AxSYM®, IMx®(참조: 예를 들면, 미국 특허 공보 제5,294,404호), PRISM®, EIA(비드), 및 Quantum® II, 및 또한 다른 플랫포옴을 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 또한, 검사, 키트 및 키트 성분은 다른 양식, 예를 들면, 전기화학적 또는 다른 수동((hand-held) 또는 현장-현시(point-of-care) 검사 시스템에서 다른 양식으로 사용될 수 있다. 본 교시내용은 예를 들면, 샌드위치 면역검사를 수행하는 시판되는 애포트 포인트 오브 케어(Abbott Point of Care)(i-STAT®, 제조원: 애보트 래보러토리즈) 전기화학적 면역검사 시스템에 적용가능하다. 면역센서 및 1회용 시험 장치에서 이들의 제조 및 작동 방법은 예를 들면, 미국 특허 공보 제5,063,081호, US 공개공보 제2003/0170881호, US 공개공보 제2004/0018577호, US 공개공보 제2005/0054078호, 및 US 공개공보 제2006/0160164호에 기술되어 있다.
특히, I-STAT® 시스템에 대한 분석물 검사의 채택과 관련하여, 다음 구조가 바람직하다. 미세제작된 규소 칩을 금 전류 작업 전극 및 은-염화은 참조 전극의 쌍으로 제작한다. 작업 전극들 중 하나 위에, 고정된 항-분석물, 단클론/다클론 항체(또는 이의 단편, 변이체, 또는 변이체의 단편) 또는 항-분석물 DVD-Ig(또는 이의 단편, 이의 변이체, 또는 이의 변이체의 단편)을 지닌 폴리스티렌 비드(0.2mm 직경)를 전극 위에 패턴화된 폴리비닐 알코올의 중합체 피복물에 부착시킨다. 당해 칩을 면역검사에 적합한 유동성 양식을 지닌 I-STAT® 카트릿지로 조립한다. 카트릿지의 시료-보유 챔버의 벽의 부위에는, 각각 검출가능하게 표지된, 분석물에 대한 특이적인 결합 파트너, 예를 들면, 항-분석물, 단클론/다클론 항체(또는 이의 단편, 이의 변이체, 또는 분석물에 결합할 수 있는 이의 변이체의 단편) 또는 항-분석물 DVD-Ig(또는 이의 단편, 이의 변이체, 또는 분석물에 결합할 수 있는 이의 변이체의 단편)을 포함하는 층이 존재한다. 카트릿지의 유액 주머니내에는 p-아미노페놀 포스페이트를 포함하는 수성 시약이 있다.
작동시, 분석물을 함유하는 것으로 추정된 시료를 시험 카트릿지의 보유 체임버(chamber)에 가하고, 카트릿지를 I-STAT® 판독기내로 삽입한다. 분석물에 대한 특이적인 결합 파트너를 시료내로 용해한 후, 카트릿지내 펌프 성분은 시료를 칩을 함유하는 도관내로 진행시킨다. 여기에서, 이는 진동하여 샌드위치의 형성을 촉진한다. 검사의 끝에서 두번째 단계에서, 유액을 주머니 밖으로 및 도관내로 진행시켜 시료가 칩에서 폐기 체임버내로 세척 제거되도록 한다. 검사의 최종 단계에서, 알칼리성 포스파타제 표지는 p-아미노페놀 포스페이트와 반응시켜 포스페이트 그룹을 절단시키고 유리된 p-아미노페놀이 작업 전극에서 전기화학적으로 산화되도록 한다. 측정된 전류를 기반으로 하여, 판독자는 내장형 알고리즘 및 공장-측정된 교정기 곡선을 이용하여 시료 속에서 분석물의 양을 계산한다.
본원에 기술된 방법 및 키트가 면역검사를 수행하기 위한 다른 시약 및 방법을 필수적으로 포함하는 것은 또한 두말할 나위 없다. 예를 들면, 당해 분야에 공지된 바와 같고/같거나 용이하게 제조되거나 최적화되어 사용될 수 있는, 예를 들면, 세척용, 접합체 희석액, 미세입자 희석액 및/또는 교정기 희석액으로서 다양한 완충액이 포함된다. 예시적인 접합체 완충액은 특정의 키트(일리노이주 애보트 파크에 소재하는 애보트 래보러토리즈)에 사용되고 2-(N-모르폴리노)에탄설폰산(MES), 염, 단백질 차단제, 항미생물제, 및 세제를 함유하는 ARCHITECT® 접합체 희석액이다. 예시적인 교정기 희석액은 특정의 키트(제조원: 애보트 래보러토리즈, 일리노이주 애보트 파크 소재)에 사용되고 MES, 다른 염, 단백질 차단제, 및 항미생물제를 함유하는 ARCHITECT® 사람 교정기 희석액이다. 또한, 미국 출원번호 제12/650,241호(US 공개공보 제2010/0167301호; 또한 PCT 공보 제WO　2010/078443호 참조)에 기술된 바와 같이, 개선된 시그날 생성이, 예를 들면, I-Stat 카트릿지 양식에서, 시그날 증폭인자로서 시그날 항체에 연결된 핵산 서열을 사용하여 수득될 수 있다.
본원에 기술된 본 발명의 다른 적합한 변형 및 채택이 명백하며 본 발명의 영역 또는 본원에 기재된 양태에서 벗어남이 없이 적합한 등량체를 사용하여 이룰 수 있음은 당해 분야의 숙련가에게 용이하게 명백할 것이다.
지금까지, 본 발명을 상세히 기술하였고 다음 실시예들을 참조로 보다 명확하게 이해될 것이며, 이는 본 발명을 설명할 목적으로만 포함되고 본 발명을 한정하는 것으로 의도되지 않는다.
실시예
실시예 1: 클론 E26으로부터의 친화성-성숙된 사람화된 IL-1β항체의 생성
표 6은 사람화된 마우스 E26 항체[제조원: 글락소스미쓰클라인(GlaxoSmithKline), PCT 공보 제WO　95/01997호]의 VH 및 VL의 아미노산 서열을 제공한다. 각각의 VH 및 VL 서열의 개개 CDR의 아미노산 잔기는 굵은 글씨체로 나타낸다.
Figure pat00039
친화성 성숙된 사람화된 마우스 E26 항체를 다음과 같이 수득하였다. 하나의 경쇄 라이브러리를 다음 잔기에서 제한된 돌연변이유발을 함유하도록 작제하였다: CDRL1: 30, 31, 32; CDRL2: 50, 53, 55, 56; CDRL3: 92, 93, 94, 96, 및 97 (카밧 번호매김). 2개의 중쇄 라이브러리를 제조하여 31, 33, 50, 52a, 55, 56, 57, 58, 및 60(카밧 번호매김)번 잔기에서 CDRH1 및 CDRH2내에 또는 95, 96, 97, 98, 99, 100, 100a, 100b, 및 102번 잔기에서 CDRH3내에 제한된 돌연변이유발을 함유하도록 하였다. 중쇄 라이브러리는 또한 23(A/S), 24(A/S), 62(T/S), 84(P/A), 88(G/A), 91(F/Y), 및 108(P/L) 잔기에서 이원 다양성을 함유함으로써 라이브러리 선택 동안 골격 배선-라이닝(framework germ-lining)이 허용되도록 하였다. 모든 3개의 라이브러리는 사이노몰구스(cyno) IL-1β의 농도를 감소시킴으로써 별도로 선택하였다. 이후에, 모든 돌연변이된 CDR 서열을 VH CDR에서만 돌연변이를 갖는 하나의 라이브러리내 및 모든 6개의 CDR내 돌연변이를 갖는 다른 라이브러리내로 합하였다. 이들 2개의 합해진 라이브러리를 보다 엄격한 선택 조건에 사람 및 cyno IL-1β와 함께, 개개 항체를 확인하고 추가의 특성화를 위해 IgG 단백질로서 발현시키기 전에 적용시켰다.
표 7은 사람화된 E26으로부터 기원한 친화성 성숙된 IL-1β항체의 VH 영역의 아미노산 서열의 목록을 제공한다. 각각의 VH 서열의 개개 CDR의 아미노산 잔기는 굵은 글씨체로 나타낸다.
Figure pat00040
Figure pat00041
Figure pat00042
Figure pat00043
Figure pat00044

Figure pat00045

표 8은 E26으로부터 기원한 친화성 성숙된 사람화된 IL-1β항체의 VL 영역의 아미노산 서열의 목록을 제공한다. 각각의 VL 서열의 개개 CDR의 아미노산 잔기는 굵은 글씨체로 나타낸다. 하기 표 8에서 친화성 성숙된 VL 서열 중 일부에서 관찰된 N-말단 D (Asp)에서 G (Gly)로의 돌연변이는 라이브러리 작제 동안 수행된 폴리머라제 쇄 반응(PCR) 동안 발생된 의도되지 않은 돌연변이유발의 대부분의 유사한 결과이었다. N-말단 G 잔기는, 이들 영역이 IgG 분자의 작제시 사용된 경우 결과없이 제거될 수 있었다.
Figure pat00046
Figure pat00047
Figure pat00048

상기 표에서 사람화된 E26으로부터의 친화성 성숙된 IL-1β항체의 VH 및 VL 영역의 개개 CDR의 서열을 정렬하여 표 9에서의 것들과 같은 컨센서스 CDR 서열을 제공할 수 있다.
Figure pat00049
표 10에서 서열은 추가의 특성화를 위해 IgG로 전환시켰다. 클론 E26.13을 각각 E26.13 JM VH 및 E26.13 JM VL로 불리는 가변 중쇄 및 경쇄의 J-영역내에서 돌연변이시켜 비-배선 골격 돌연변이를 제거하였다. 개개의 CDR의 아미노산 잔기를 굵은 글씨체로 나타낸다.
Figure pat00050
Figure pat00051
Figure pat00052
Figure pat00053
Figure pat00054
Figure pat00055

실시예 2: IL-1β항체의 기능적 특성화
실시예 2.1: IL-1β 효소-결합된 면역흡착 검사 프로토콜
항-IL-1β mAb가 사람 IL-1β에 결합하는지를 측정하기 위해, ELISA 플레이트[Nunc, MaxiSorp, 제조원: 로체스터(Rochester), 뉴욕 소재]를 4℃에서 피어스 피복물 완충액 속에 희석된 항-사람 Fc 항체와 함께 2㎍/ml[제조원: 잭슨 임뮤노리서치(Jackson Immunoresearch), 펜실바이아주 웨스트 그로브 소재]에서 밤새 항온처리하였다. 플레이트를 세척 완충액(0.05% 트윈 20을 함유하는 PBS) 속에서 5회 세척하고, 1시간 동안 25℃에서 슈퍼블록 차단 완충액(superblock blocking buffer)[제조원: 써모 사이언티픽(Thermo scientific), No. 37515]의 웰 당 200 μl를 사용하여 차단하였다. 차단 완충액은 플레이트를 탭핑(tapping)하여 제거하고, 10% 슈퍼블록, 0.5% 트윈-20을 함유하는 PBS 속에서 2 μg/ml의 각각의 항체를 100 μl/웰에서 웰에 가하고 25℃에서 1시간 동안 항온처리하였다. 웰을 1X PBST 속에서 5회 세척하고, 1 μg/ml의 바이오티닐화된 항원을 1:6의 일련 희석(10% 슈프블록, 0.05% 트윈 20을 함유하는 PBS 속에서 ㎍ 내지 pg 범위에 대해)으로 적정(titrating)하였다. 이후에, 항원의 각각의 희석물을 플레이트에 가하고 1시간 동안 25℃에서 항온처리하였다. 1XPBST 속에서 5회 세척하고, 폴리HRP 스트렙타비딘(KPL No. 474-3000, 메릴랜드주 게이터스부르크 소재)과 함께 25℃에서 1시간 동안 항온처리하였다. 상기 웰을 1XPBST 속에서 5회 세척하고, 100μl의 ULTRA-TMB ELISA[제조원: 피어스, 일리노이주 록포드 소재)를 웰당 가하였다. 발색(color development) 후 반응을 1N HCL로 중지시키고 450 nM에서 흡광도를 측정하였다. 결과는 표 11에 나타내며, 수치는 사람 IL-1β에 대한 항-IL-1β 항체의 결합을 나타낸다.
Figure pat00056
실시예 2.2: IL-1β 항체의 중화 효능
본 발명에서 항-사람 IL-1β 항체의 기능적 활성을 시험하기 위해, 항체를 IL-1β 활성을 억제하는 항체의 능력을 측정하는 MRC-5 검사에서 사용하였다. MRC-5 세포주는 용량-의존적 방식으로 사람 IL-1β에 대한 반응시 IL-8을 생산하는 사람 폐 섬유모 세포주이다. 당해 세포주는 또한 사이노몰구스 IL-1β(cyno IL-1β)에 대한 반응시 IL-8을 생산한다. MRC-5 세포는 원래 ATCC로부터 수득하였으며 10% FBS 완전 MEM 속에서 아배양(subculturing)하고 37℃로 5% CO2 항온처리기 속에서 성장시켰다. IL-1β에 대한 항체의 중화 효능을 측정하기 위해, 항체(50 μl)를 96 웰 플레이트(1E-7 내지 1E-15 M의 최종 농도 범위)에 가하고 50μl의 사람 또는 cyno IL-1β(50 pg/mL의 최종 농도)와 함께 1시간 동안 37℃, 5% CO2에서 예비-항온처리하였다. 이후에, 항원 항체 복합체 (100μl)를 MRC-5 세포(1E5/ml의 농도에서 100μl의 세포/웰로 24시간 전에 플레이팅함)에 가하였다. 검사 플레이트를 밤새 37℃에서 5% CO2 항온처리기 속에서 항온처리하였다. 항체 효능은 IL-8 생산을 억제하는 이의 능력으로 측정하였다. 사람 IL-8 생산은 화학발광성-계 검사으로 측정하였다. 표 12는 사람 및 cyno IL-1β에 대한 항체 효능을 요약한다.
Figure pat00057
실시예 2.3: 표면 플라스몬 공명에 의한 IL-1β 항체의 친화성 측정
BIACORE 검사(제조원: 비아코어, 인크, 뉴 저지주 피스카타웨이)는 온-속도 및 오프-속도 상수의 역학적 측정으로 항체의 친화성을 측정한다. 재조합체 정제된 사람 IL-1β 및 사이노몰구스 IL-1β에 대한 항체의 결합은 표면 플라스몬 공명-계 측정에 의해 Biacore® 3000 장치(Biacore® AB, 스웨덴 웁살라 소재)로 이동하는 HBS-EP(10 mM HEPES [pH 7.4], 150 mM NaCl, 3 mM EDTA, 및 0.005% 표면활성제 P20)를 사용하여 25℃에서 측정하였다. 모든 화학물질을 Biacore® AB(스웨덴 웁살라 소재)로부터 또는 기타의 경우 본원에 기술된 바와 같은 상이한 공급원으로부터 수득하였다. 10 mM 아세트산나트륨(pH 4.5) 중에 희석된 대략 5000 RU의 염소 항-마우스 IgG, (Fcg), 단편 특이적인 다클론 항체[제조원: 피어스 바이오테크놀로지 인크.(Pierce Biotechnology Inc.), 일리노이주 록포드 소재]를 제조업자의 설명서 및 공정에 따라 25 μg/ml에서 표준 아민 커플링 키트를 사용하여 CM5 연구 등급 바이오센서 칩을 따라 직접 고정시켰다. 바이오센서 표면에서 반응하지 않은 모이어티를 에탄올아민으로 차단시켰다. 플로우셀(flowcell) 2 및 4에서 변형된 카복시메틸 덱스트란 표면을 반응 표면으로서 사용하였다. 플로우 셀 1 및 3에서 염소 항-마우스 IgG가 없는 변형되지 않은 카복시메틸 덱스트란을 참조 표면으로 사용하였다. 역학적 분석을 위해, 1:1 랑뮈르 결합 모델(Langmuir binding model)로부터 기원한 속도 방정식을 Biaevaluation 4.0.1 소프트웨어를 사용하여 모든 8개의 주입의 연합 및 해리 상에 대해 동시에 핏팅하였다[세계 핏트 분석(global fit analysis) 사용]. 정제된 항체를 염소 항-사람 IgG 특이적인 반응 표면을 따라 포획에 대해 HEPES-완충된 염수 속에서 희석시켰다. 리간드로서 포획될 항체(25 μg/ml)를 반응 매트릭스 위에 5 μl/분의 유동 속도(flow rate)에서 주입하였다. 연합 및 해리 속도 상수, kon (단위 M-1s-1) 및 koff (단위 s-1)를 25 μl/분의 연속된 유동 속도하에 측정하였다. 속도 상수는 10 내지 200 nM 범위의 10개의 상이한 항원 농도에서 역학적 결합 측정을 수행함으로써 유도하였다. 이후에, 항체와 표적 항원 사이의 반응의 평형 해리 상수(단위 M)를 다음 식: KD = koff/kon에 의해 역학적 속도 상수로부터 계산하였다. 결합을 시간의 함수로 기록하고 역학적 속도 상수를 계산한다. 당해 검사에서, 106 M-1s-1와 같이 빠른 온-속도 및 10-6 s-1와 같이 느린 오프-속도를 측정할 수 있다. 표 13은 사람 항-IL-1β 항체에 대한 친화성 측정을 나타낸다.
Figure pat00058
실시예 3: IL-1α/β DVD-Ig TM 분자의 생성
실시예 3.1: IL-1α/β DVD-Ig DNA 작제물의 작제
항-IL-1α 항체("X3"; 참조: PCT 공보 제WO 95/14780호) 가변 도메인을 다수 IL-1β 항체 가변 도메인과 DVD-Ig 양식[참조: Wu et al., Nature Biotechnol., 25: 1290-1297 (2007); PCT 공보 제WO 2007/024715 A2호]내로 개입 링커 DNA 서열을 사용한 오버랩핑 PCR 증폭에 의해 합하였다. X3은 또한 각각 X3 JM VH 및 X3 JM VL로 명명되는 가변 중쇄 및 경쇄 영역의 J-영역내에서 돌연변이시켜, 비-배선 골격 돌연변이를 제거하였다. 증폭된 PCR 생성물을 HEK293 세포내에서 일시적인 발현에 적합한 발현 벡터내로 서브클로닝(subcloning)하고 개방 판독 프레임 영역을 DVD-Ig 발현 전에 서열분석으로 확인하였다.
실시예 3.2: IL-1α/β DVD-Ig 결합 단백질의 발현 및 생산
DNA 서열 확인 후, 모든 DVD-Ig DNA 작제물을 이. 콜라이 속에서 증식시키고 DNA를 퀴아젠 하이스피드 맥시 프렙(Qiagen Hispeed Maxi Prep)(제품 번호 12662, QIAGEN)을 사용하여 정제하였다. DVD-Ig DNA를 로그 상(log phase) 293E 세포(0.5 x106/ml, 생존능 >95%)내로 PEI 및 DNA를 0.2 μg/ml 중쇄 DNA 및 0.3 μg/ml 경쇄 DNA와 2:1의 비로 혼합하여 형질감염시켰다. DNA:PEI 복합체를 실온에서 TC 후드(hood) 속에서 15분 동안 형성시킨 후 293E 세포에 가하였다. 24 후, 0.5% TN1을 293E 세포에 가하였다. 5일째에, 상층액을 사람 IgG1 역가 측정을 위해 수집하였다. 세포 상층액을 7일째에 수집하고 0.2 μM PES 여과기를 통해 여과하였다. 상층액을 단백질 A 세파로즈 친화성 크로마토그래피를 사용함으로써 제조업자의 설명서에 따라 정제하였다. 정제된 DVD-Ig를 0.1 M 글리신(pH 2.99)에 의해 컬럼으로부터 용출 제거하고 15 mM의 히스티딘 완충액(pH 6.0) 내로 즉시 투석시켰다. 결합 단백질을 A280에 의해 정량화하고 질량 분광계 및 SEC로 분석하였다.
실시예 3.3: IL-1α/β DVD-Ig 작제물의 서열
사람 IL-1β 및 사람 IL-1α에 결합할 수 있는 DVD-Ig 단백질의 경쇄 및 중쇄의 아미노산 서열을 측정하였다. IL-1α/β DVD-Ig 결합 단백질의 가변 중쇄(VH), 가변 경쇄(VL), 고정 경쇄(CL), 및 고정 중쇄 (CH) 영역의 아미노산 서열을 하기 표 14에 나타낸다. 표 14에서, E26.13 및 E26.35 VL 영역에 대한 아미노산 서열을 C-말단 아르기닌(R) 잔기의 혼입에 대해 고려하여, 표 10에 앞서 나타낸 바와 같은 서열 번호 205 및 서열 번호 209 대신, 서열 번호 238 및 서열 번호 239로 지정한다. 당해 C-말단 아르기닌 잔기는 당해 분야의 숙련가에 의해 IgG 분자내 VL 및 CL 카파 영역의 연결부에서 아미노산 잔기가 되도록 가공된 항체이며 때때로 CL 영역내에 또는, 하기 표 14에서와 같이 VL 영역내에 포함되는 것이 당해 분야의 숙련가에 의해 이해된다.
Figure pat00059
Figure pat00060
Figure pat00061
Figure pat00062
Figure pat00063
Figure pat00064
Figure pat00065
Figure pat00066
Figure pat00067
Figure pat00068
Figure pat00069
Figure pat00070
Figure pat00071
실시예 4: IL-1α/β DVD-Ig 단백질의 기능적 특성화
실시예 4.1: IL-1α/β 효소-결합된 면역흡착성 검사 프로토콜
IL-1β/α DVD-Ig 결합 단백질에 의한 IL-1β 및 IL-1α결합을 ELISA(상기 기술된 검사, 실시예 2.1)로 평가하였다. 결과는 표 15에 나타낸다.
Figure pat00073
실시예 4.2: IL-1α/β 생검사 및 중화 검사
MRC5 세포를 웰당 1.5 내지 2 x 104 세포에서 100 μL의 용적으로 플레이팅하고 밤새 37℃, 5% CO2에서 항온처리하였다. DVD-Ig(4X 농축됨)의 20 μg/mL의 작업 스톡(working stock)을 완전 MEM 배지에서 제조하였다. 8점 일련 희석을 마르쉬 희석 플레이트(Marsh dilution plate)내 완전 MEM 속에서 수행하였다(5 μg/mL 내지 0.0003 μg/mL). 65 μL/웰의 각각의 항체 희석물을, 96 웰 v-바닥(Costar No. 3894) 플레이트 및 65 μL의 IL-1α 또는 IL-1β의 200 pg/mL 용액 또는 IL-1α 또는 IL-1β 둘다의 50 pg/mL 용액을 함유하는 65μL의 혼합 용액에 4회 가하였다. 대조군 웰에 65 μL의 200 pg/ml의 IL-1α 또는 IL-1β 또는 50 pg/mL의 혼합된 IL-1α/β (4x 농축됨)와 65 μL의 MEM 배지 및, 130 μL의 배지가 들어있는 배지 대조군 웰을 제공하였다. 1시간 항온처리 후, 100 μL의 DVD-Ig/Ag 혼합물을 MRC5 세포에 가하였다. 모든 웰 용적은 200 μL로 동일하였다. 이후에, 모든 플레이트 시약을 1X 농축시켰다. 16 내지 20시간 항온처리 후, 웰 내용물(150 μL)을 96-웰 환저 플레이트(Costar No. 3799)내로 이전시키고 -20℃의 냉동실에 두었다. 상층액을 hIL-8 수준에 대해 사람 IL-8 ELISA 키트(제조원: 알앤드디 시스템스, 미네소타주 미네아폴리소 소재) 또는 MSD hIL-8(화학발광성 키트)를 사용하여 시험하였다. 중화 효능은 IL-1α, IL-1β, 또는 IL-1α/β 단독 대조군 값에 대한 억제 퍼센트를 계산함으로써 측정하였다(표 16).
Figure pat00074
실시예 4.3: IL-1α/β DVD-Ig 분자의 친화성 측정
정제된 재조합체 사람 IL-1β 및 IL-1α 및 사이노몰구스 IL-1β 및 IL-1α에 대한 IL-1α/β DVD-Ig의 결합을 실시예 2.3에 기술된 바와 같이 표면 플라스몬 공명을 사용하여 측정하고 결과를 도 17에 나타낸다.
Figure pat00075
참조 문헌
본 발명은 분자 생물학 및 약물 전달의 분야에 잘 공지된 이들의 전체 기술을 참조로 포함한다. 이들 기술들은 다음 문헌에 기재된 기술들을 포함하나, 이에 한정되지 않는다: Ausubel et al. (eds.), Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, NY (1993); Ausubel, F. M. et al. eds., Short Protocols In Molecular Biology (4th Ed. 1999) John Wiley & Sons, NY. (ISBN 0-471-32938-X). Controlled Drug Bioavailability Drug Product Design and Performance, Smolen and Ball (eds.), Wiley, New York (1984); Giege et al., Chapter 1, In Crystallization of Nucleic Acids and Proteins, A Practical Approach, 2nd ed., (Ducruix and Giege eds.) (Oxford University Press, New York, 1999) pp. 1-16; Goodson, J.M., Chapter　6, In Medical Applications of Controlled Release, Vol.　II, Applications and Evaluation, (Langer and Wise, eds.) (CRC Press, Inc., Boca Raton, 1984), pp. 115-138; Hammerling et al., eds., "Monoclonal Antibodies and T-Cell Hybridomas," In Research Monographs in Immunology, vol. 3 (J.L. Turk, General Editor) (Elsevier, New York, 1981), pp. 563-587; Harlow et al., Antibodies: A Laboratory Manual, (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2nd ed. 1988); Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest (National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1987); Kabat, E. A., et al. (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242; Kontermann and Duebel, eds., Antibody Engineering (2001) Springer-Verlag. New York. 790 pp. (ISBN 3-540-41354-5); Kriegler, Gene Transfer and Expression, A Laboratory Manual, Stockton Press, NY (1990); Lu and Weiner eds., Cloning and Expression Vectors for Gene Function Analysis (2001) BioTechniques Press. Westborough, Mass. 298 pp. (ISBN 1-881299-21-X); Goodson, J.M., Medical Applications of Controlled Release, (Langer and Wise, eds.) (CRC Press, Boca Raton, 1974); Old and Primrose, Principles of Gene Manipulation: An Introduction To Genetic Engineering (3d Ed. 1985) Blackwell Scientific Publications, Boston; Studies in Microbiology, V.2:409 pp. (ISBN 0-632-01318-4); Sambrook, J. et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual (2d Ed. 1989) Cold Spring Harbor Laboratory Press, NY. Vols. 1-3 (ISBN 0-87969-309-6); Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems, (J.R. Robinson, ed.) (Marcel Dekker, Inc., New York, 1978); Winnacker, E.L. From Genes To Clones: Introduction To Gene Technology (1987) VCH Publishers, N.Y. (translated by Horst Ibelgaufts), 634 pp. (ISBN 0-89573-614-4).
본 명세서 전체에서 인용되는 문헌(문헌 참조, 특허, 특허원 및 웹사이트 포함) 모두의 내용은, 이에 인용된 참조문헌과 같이, 본원에 이의 전문이 참조로 표현하여 인용된다. 본 발명의 실시는 달리 나타내지 않는 한, 당해 분야에 잘 공지된 면역학, 분자 생물학 및 세포 생물학의 통상의 기술을 사용할 것이다.
등가물
본 발명은 이의 취지 또는 필수적인 특징으로부터 벗어남이 없이 다른 구체적인 형태로 구현될 수 있다. 따라서, 상기한 양태들은 모든 관점에서 본원에 기술된 발명을 제한하기 보다는 오히려 설명하는 것으로 고려되어야 한다. 본 발명의 영역은 따라서 앞서의 설명에 의해서라기 보다는 첨부된 특허청구범위로 나타내며, 특허청구범위의 의미 및 등가물의 범위에 있는 모든 변화는 본원에 포함되는 것으로 의도된다.
SEQUENCE LISTING <110> ABBVIE INC. <120> IL-1 BINDING PROTEINS <130> ABT-121.2PCT (10489WOO1) <150> 61/334,917 <151> 2010-05-14 <150> 61/425,701 <151> 2010-12-21 <160> 381 <170> KopatentIn 1.71 <210> 1 <211> 159 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1 Ser Ala Pro Phe Ser Phe Leu Ser Asn Val Lys Tyr Asn Phe Met Arg 1 5 10 15 Ile Ile Lys Tyr Glu Phe Ile Leu Asn Asp Ala Leu Asn Gln Ser Ile 20 25 30 Ile Arg Ala Asn Asp Gln Tyr Leu Thr Ala Ala Ala Leu His Asn Leu 35 40 45 Asp Glu Ala Val Lys Phe Asp Met Gly Ala Tyr Lys Ser Ser Lys Asp 50 55 60 Asp Ala Lys Ile Thr Val Ile Leu Arg Ile Ser Lys Thr Gln Leu Tyr 65 70 75 80 Val Thr Ala Gln Asp Glu Asp Gln Pro Val Leu Leu Lys Glu Met Pro 85 90 95 Glu Ile Pro Lys Thr Ile Thr Gly Ser Glu Thr Asn Leu Leu Phe Phe 100 105 110 Trp Glu Thr His Gly Thr Lys Asn Tyr Phe Thr Ser Val Ala His Pro 115 120 125 Asn Leu Phe Ile Ala Thr Lys Gln Asp Tyr Trp Val Cys Leu Ala Gly 130 135 140 Gly Pro Pro Ser Ile Thr Asp Phe Gln Ile Leu Glu Asn Gln Ala 145 150 155 <210> 2 <211> 153 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 2 Ala Pro Val Arg Ser Leu Asn Cys Thr Leu Arg Asp Ser Gln Gln Lys 1 5 10 15 Ser Leu Val Met Ser Gly Pro Tyr Glu Leu Lys Ala Leu His Leu Gln 20 25 30 Gly Gln Asp Met Glu Gln Gln Val Val Phe Ser Met Ser Phe Val Gln 35 40 45 Gly Glu Glu Ser Asn Asp Lys Ile Pro Val Ala Leu Gly Leu Lys Glu 50 55 60 Lys Asn Leu Tyr Leu Ser Cys Val Leu Lys Asp Asp Lys Pro Thr Leu 65 70 75 80 Gln Leu Glu Ser Val Asp Pro Lys Asn Tyr Pro Lys Lys Lys Met Glu 85 90 95 Lys Arg Phe Val Phe Asn Lys Ile Glu Ile Asn Asn Lys Leu Glu Phe 100 105 110 Glu Ser Ala Gln Phe Pro Asn Trp Tyr Ile Ser Thr Ser Gln Ala Glu 115 120 125 Asn Met Pro Val Phe Leu Gly Gly Thr Lys Gly Gly Gln Asp Ile Thr 130 135 140 Asp Phe Thr Met Gln Phe Val Ser Ser 145 150 <210> 3 <211> 330 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 3 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Phe Leu Ala Pro Ser Ser Lys 1 5 10 15 Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys 100 105 110 Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro 115 120 125 Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys 130 135 140 Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp 145 150 155 160 Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu 165 170 175 Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu 180 185 190 His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn 195 200 205 Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly 210 215 220 Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu 225 230 235 240 Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr 245 250 255 Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn 260 265 270 Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe 275 280 285 Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn 290 295 300 Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr 305 310 315 320 Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325 330 <210> 4 <211> 330 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 4 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys 1 5 10 15 Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys 100 105 110 Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro 115 120 125 Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys 130 135 140 Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp 145 150 155 160 Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu 165 170 175 Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu 180 185 190 His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn 195 200 205 Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly 210 215 220 Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu 225 230 235 240 Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr 245 250 255 Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn 260 265 270 Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe 275 280 285 Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn 290 295 300 Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr 305 310 315 320 Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325 330 <210> 5 <211> 106 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 5 Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln 1 5 10 15 Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr 20 25 30 Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser 35 40 45 Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr 50 55 60 Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys 65 70 75 80 His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro 85 90 95 Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 100 105 <210> 6 <211> 105 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 6 Gln Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu 1 5 10 15 Glu Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe 20 25 30 Tyr Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val 35 40 45 Lys Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys 50 55 60 Tyr Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser 65 70 75 80 His Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu 85 90 95 Lys Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser 100 105 <210> 7 <211> 30 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 7 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ser Ser Gly Phe Ile Phe Ser 20 25 30 <210> 8 <211> 14 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 8 Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala 1 5 10 <210> 9 <211> 32 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 9 Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe Leu Gln 1 5 10 15 Met Asp Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Gly Val Tyr Phe Cys Ala Arg 20 25 30 <210> 10 <211> 11 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 10 Trp Gly Gln Gly Thr Pro Val Thr Val Ser Ser 1 5 10 <210> 11 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (3)..(3) <223> Any amino acid <400> 11 Phe Gly Xaa Gly 1 <210> 12 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(9) <223> Any amino acid <400> 12 Cys Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 1 5 <210> 13 <211> 23 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 13 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys 20 <210> 14 <211> 15 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 14 Trp Tyr Gln Gln Thr Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr 1 5 10 15 <210> 15 <211> 32 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 15 Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr 1 5 10 15 Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys 20 25 30 <210> 16 <211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 16 Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Gln Ile Thr 1 5 10 <210> 17 <211> 5 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 17 Ser Tyr Asp Met Ser 1 5 <210> 18 <211> 17 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 18 Tyr Ile Ser Ser Gly Gly Gly Gly Thr Tyr Tyr Pro Asp Thr Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 19 <211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 19 Gly Gly Val Thr Lys Gly Tyr Phe Asp Val 1 5 10 <210> 20 <211> 11 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 20 Arg Ala Ser Gly Asn Ile His Asn Tyr Leu Thr 1 5 10 <210> 21 <211> 7 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 21 Asn Ala Lys Thr Leu Ala Asp 1 5 <210> 22 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 22 Gln His Phe Trp Ser Ile Pro Tyr Thr 1 5 <210> 23 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 23 Leu Glu Trp Ile Gly 1 5 <210> 24 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (3)..(3) <223> Any amino acid <400> 24 Trp Gly Xaa Gly 1 <210> 25 <211> 23 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 25 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys 20 <210> 26 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 26 Gly Gly Gly Gly Ser Gly 1 5 <210> 27 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 27 Gly Gly Ser Gly Gly 1 5 <210> 28 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 28 Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 1 5 10 <210> 29 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 29 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Ser 1 5 10 <210> 30 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 30 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 1 5 10 <210> 31 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 31 Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly 1 5 10 <210> 32 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 32 Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 1 5 10 15 <210> 33 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 33 Ala Ser Thr Lys Gly Pro 1 5 <210> 34 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 34 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro 1 5 10 <210> 35 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 35 Thr Val Ala Ala Pro 1 5 <210> 36 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 36 Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro 1 5 10 <210> 37 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 37 Ala Lys Thr Thr Pro Lys Leu Glu Glu Gly Glu Phe Ser Glu Ala Arg 1 5 10 15 <210> 38 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 38 Ala Lys Thr Thr Pro Lys Leu Glu Glu Gly Glu Phe Ser Glu Ala Arg 1 5 10 15 Val <210> 39 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 39 Ala Lys Thr Thr Pro Lys Leu Gly Gly 1 5 <210> 40 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 40 Ser Ala Lys Thr Thr Pro Lys Leu Gly Gly 1 5 10 <210> 41 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 41 Ser Ala Lys Thr Thr Pro 1 5 <210> 42 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 42 Arg Ala Asp Ala Ala Pro 1 5 <210> 43 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 43 Arg Ala Asp Ala Ala Pro Thr Val Ser 1 5 <210> 44 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 44 Arg Ala Asp Ala Ala Ala Ala Gly Gly Pro Gly Ser 1 5 10 <210> 45 <211> 27 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 45 Arg Ala Asp Ala Ala Ala Ala Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly 1 5 10 15 Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 20 25 <210> 46 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 46 Ser Ala Lys Thr Thr Pro Lys Leu Glu Glu Gly Glu Phe Ser Glu Ala 1 5 10 15 Arg Val <210> 47 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 47 Ala Asp Ala Ala Pro 1 5 <210> 48 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 48 Ala Asp Ala Ala Pro Thr Val Ser Ile Phe Pro Pro 1 5 10 <210> 49 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 49 Gln Pro Lys Ala Ala Pro 1 5 <210> 50 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 50 Gln Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro 1 5 10 <210> 51 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 51 Ala Lys Thr Thr Pro Pro 1 5 <210> 52 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 52 Ala Lys Thr Thr Pro Pro Ser Val Thr Pro Leu Ala Pro 1 5 10 <210> 53 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 53 Ala Lys Thr Thr Ala Pro 1 5 <210> 54 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 54 Ala Lys Thr Thr Ala Pro Ser Val Tyr Pro Leu Ala Pro 1 5 10 <210> 55 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 55 Gly Glu Asn Lys Val Glu Tyr Ala Pro Ala Leu Met Ala Leu Ser 1 5 10 15 <210> 56 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 56 Gly Pro Ala Lys Glu Leu Thr Pro Leu Lys Glu Ala Lys Val Ser 1 5 10 15 <210> 57 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 57 Gly His Glu Ala Ala Ala Val Met Gln Val Gln Tyr Pro Ala Ser 1 5 10 15 <210> 58 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 58 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ser Ser Gly Phe Ile Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Tyr Ile Ser Ser Gly Gly Gly Gly Thr Tyr Tyr Pro Asp Thr Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe 65 70 75 80 Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Gly Val Tyr Phe Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Val Thr Lys Gly Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Pro Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 59 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 59 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gly Asn Ile His Asn Tyr 20 25 30 Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Thr Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asn Ala Lys Thr Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Phe Trp Ser Ile Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Gln Ile Thr 100 105 <210> 60 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 60 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ala Ser Gly Phe Ile Phe Ser Lys Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Tyr Ile Ser His Gly Gly Ala Gly Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe 65 70 75 80 Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Gly Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Val Tyr Lys Gly Tyr Phe Asp Glu Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Pro Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 61 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 61 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ala Ser Gly Phe Ile Phe Ser Arg Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Tyr Ile Ser His Gly Gly Ala Gly Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe 65 70 75 80 Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Val Tyr Lys Gly Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Pro Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 62 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 62 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ala Ser Gly Phe Ile Phe Ser Arg Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Tyr Ile Ser His Gly Gly Ala Gly Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe 65 70 75 80 Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Val Tyr Lys Gly Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Pro Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 63 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 63 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ala Ser Gly Phe Ile Phe Ser Lys Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Tyr Ile Ser His Gly Gly Ala Gly Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe 65 70 75 80 Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Gly Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Val Tyr Lys Gly Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Pro Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 64 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 64 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ile Phe Ser Lys Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Tyr Ile Ser His Gly Gly Ala Gly Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe 65 70 75 80 Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Gly Val Tyr Phe Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Val Thr Lys Gly Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Pro Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 65 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 65 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ile Phe Ser Arg Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Tyr Ile Ser His Gly Gly Ala Gly Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe 65 70 75 80 Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Gly Val Tyr Phe Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Val Thr Lys Gly Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Pro Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 66 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 66 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ala Ser Gly Phe Ile Phe Ser Arg Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Tyr Ile Ser His Gly Gly Ala Gly Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe 65 70 75 80 Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Gly Val Tyr Phe Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Val Thr Lys Gly Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Pro Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 67 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 67 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ala Ser Gly Phe Ile Phe Ser Lys Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Tyr Ile Ser His Gly Gly Ala Gly Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe 65 70 75 80 Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Val Tyr Lys Gly Tyr Phe Asp Glu Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Pro Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 68 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 68 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ala Ser Gly Phe Ile Phe Ser Lys Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Tyr Ile Ser His Gly Gly Ala Gly Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe 65 70 75 80 Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Val Tyr Lys Gly Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 69 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 69 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ala Ser Gly Phe Ile Phe Ser Lys Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Tyr Ile Ser His Gly Gly Ala Gly Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe 65 70 75 80 Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Gly Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Val Tyr Lys Gly Tyr Phe Asp Glu Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Pro Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 70 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 70 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ala Ser Gly Phe Ile Phe Ser Lys Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Tyr Ile Ser His Gly Gly Ala Gly Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe 65 70 75 80 Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Gly Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Val Tyr Lys Gly Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Pro Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 71 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 71 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ala Ser Gly Phe Ile Phe Ser Arg Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Tyr Ile Ser His Gly Gly Ala Gly Thr Tyr Tyr Pro Asp Thr Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe 65 70 75 80 Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Gly Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Val Tyr Lys Gly Tyr Phe Asp Glu Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Pro Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 72 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 72 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ala Ser Gly Phe Ile Phe Ser Arg Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Tyr Ile Ser His Gly Gly Ala Gly Thr Tyr Tyr Pro Asp Thr Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe 65 70 75 80 Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Gly Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Val Tyr Lys Gly Tyr Phe Asp Glu Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Pro Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 73 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 73 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ser Ser Gly Phe Ile Phe Ser Arg Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Tyr Ile Ser His Gly Gly Ala Gly Thr Tyr Tyr Pro Asp Thr Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe 65 70 75 80 Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Gly Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Val Tyr Lys Gly Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Pro Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 74 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 74 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ser Ser Gly Phe Ile Phe Ser Arg Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Tyr Ile Ser His Gly Gly Ala Gly Thr Tyr Tyr Pro Asp Thr Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe 65 70 75 80 Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Gly Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Val Tyr Lys Gly Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Pro Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 75 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 75 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ser Ser Gly Phe Ile Phe Ser Arg Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Tyr Ile Ser His Gly Gly Ala Gly Thr Tyr Tyr Pro Asp Thr Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe 65 70 75 80 Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Val Tyr Lys Gly Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Pro Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 76 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 76 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ser Ser Gly Phe Ile Phe Ser Arg Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Tyr Ile Ser His Gly Gly Ala Gly Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe 65 70 75 80 Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Val Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Val Tyr Lys Gly Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Pro Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 77 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 77 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ala Ser Gly Phe Ile Phe Ser Arg Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Tyr Ile Ser His Gly Gly Ala Gly Thr Tyr Tyr Pro Asp Thr Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe 65 70 75 80 Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Val Tyr Lys Gly Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Pro Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 78 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 78 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ala Ser Gly Phe Ile Phe Ser Arg Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Tyr Ile Ser His Gly Gly Ala Gly Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe 65 70 75 80 Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Val Tyr Lys Gly Tyr Phe Asp Leu Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Pro Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 79 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 79 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ala Ser Gly Phe Ile Phe Ser Arg Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Tyr Ile Ser His Gly Gly Ala Gly Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe 65 70 75 80 Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Val Tyr Lys Gly Tyr Phe Asp Leu Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Pro Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 80 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 80 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ala Ser Gly Phe Ile Phe Ser Arg Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Tyr Ile Ser His Gly Gly Ala Gly Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe 65 70 75 80 Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Val Tyr Lys Gly Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Pro Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 81 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 81 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ala Ser Gly Phe Ile Phe Ser Arg Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Tyr Ile Ser His Gly Gly Ala Gly Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Val Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe 65 70 75 80 Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Val Tyr Lys Gly Tyr Phe Asp Glu Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Pro Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 82 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 82 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ser Ser Gly Phe Ile Phe Ser Arg Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Tyr Ile Ser His Gly Gly Ala Gly Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe 65 70 75 80 Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Val Tyr Lys Gly Tyr Phe Asp Glu Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Pro Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 83 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 83 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ser Ser Gly Phe Ile Phe Ser Arg Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Tyr Ile Ser His Gly Gly Ala Gly Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe 65 70 75 80 Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Gly Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Val Tyr Lys Gly Tyr Phe Asp Glu Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Pro Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 84 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 84 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ser Ser Gly Phe Ile Phe Ser Arg Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Tyr Ile Ser His Gly Gly Ala Gly Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe 65 70 75 80 Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Gly Val Tyr Phe Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Val Tyr Lys Gly Tyr Phe Asp Glu Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Pro Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 85 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 85 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ser Ser Gly Phe Ile Phe Ser Lys Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Tyr Ile Ser His Gly Gly Ala Gly Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe 65 70 75 80 Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Val Tyr Lys Gly Tyr Phe Asp Glu Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Pro Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 86 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 86 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ser Ser Gly Phe Ile Phe Ser Arg Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Tyr Ile Ser His Gly Gly Ala Gly Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe 65 70 75 80 Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Val Tyr Lys Gly Tyr Phe Asp Glu Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Pro Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 87 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 87 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ser Ser Gly Phe Ile Phe Ser Lys Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Tyr Ile Ser His Gly Gly Ala Gly Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe 65 70 75 80 Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Val Tyr Lys Gly Tyr Phe Asp Met Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Pro Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 88 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 88 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ser Ser Gly Phe Ile Phe Ser Arg Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Tyr Ile Ser His Gly Gly Ala Gly Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe 65 70 75 80 Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Val Tyr Lys Gly Tyr Phe Asp Glu Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 89 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 89 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ser Ser Gly Phe Ile Phe Ser Arg Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Tyr Ile Ser His Gly Gly Ala Gly Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe 65 70 75 80 Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Val Tyr Lys Gly Tyr Phe Asp Glu Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 90 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 90 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ala Ser Gly Phe Ile Phe Ser Arg Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Tyr Ile Ser His Gly Gly Ala Gly Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe 65 70 75 80 Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Val Tyr Lys Gly Tyr Phe Asp Glu Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 91 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 91 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ala Ser Gly Phe Ile Phe Ser Arg Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Tyr Ile Ser His Gly Gly Ala Gly Thr Tyr Tyr Pro Asp Thr Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe 65 70 75 80 Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Val Tyr Lys Gly Tyr Phe Asp Glu Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 92 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 92 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ser Ser Gly Phe Ile Phe Ser Arg Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Tyr Ile Ser His Gly Gly Ala Gly Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe 65 70 75 80 Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Val Arg Gly Gly Val Tyr Lys Gly Tyr Phe Asp Gln Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 93 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 93 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ala Ser Gly Phe Ile Phe Ser Arg Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Tyr Ile Ser His Gly Gly Ala Gly Thr Tyr Tyr Pro Asp Thr Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe 65 70 75 80 Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Val Arg Gly Gly Val Tyr Lys Gly Tyr Phe Asp Gln Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 94 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 94 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ser Ser Gly Phe Ile Phe Ser Arg Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Tyr Ile Ser His Gly Gly Ala Gly Thr Tyr Tyr Pro Asp Thr Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe 65 70 75 80 Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Val Tyr Lys Gly Tyr Phe Asp Glu Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 95 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 95 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ser Ser Gly Phe Ile Phe Ser Lys Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Tyr Ile Ser His Gly Gly Ala Gly Thr Tyr Tyr Pro Asp Thr Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe 65 70 75 80 Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Val Tyr Lys Gly Tyr Phe Asp Glu Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Gly Ser 115 <210> 96 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 96 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ser Ser Gly Phe Ile Phe Ser Lys Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Tyr Ile Ser His Gly Gly Ala Gly Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe 65 70 75 80 Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Val Tyr Lys Gly Tyr Phe Asp Glu Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 97 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 97 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Asp Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ala Ser Gly Phe Ile Phe Ser Lys Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Tyr Ile Ser His Gly Gly Ala Gly Thr Tyr Tyr Pro Asp Thr Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe 65 70 75 80 Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Gly Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Val Tyr Lys Gly Tyr Phe Asp Glu Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 98 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 98 Glu Val Gln Leu Val Glu Gly Gly Gly Asp Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ala Ser Gly Phe Ile Phe Ser Lys Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Tyr Ile Ser His Gly Gly Ala Gly Thr Tyr Tyr Pro Asp Thr Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe 65 70 75 80 Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Val Tyr Lys Gly Tyr Phe Asp Glu Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 99 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 99 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Asp Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ala Ser Gly Phe Ile Phe Ser Lys Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Tyr Ile Ser His Gly Gly Ala Gly Thr Tyr Tyr Pro Asp Thr Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe 65 70 75 80 Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Val Tyr Lys Gly Tyr Phe Asp Glu Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 100 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 100 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Asp Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ala Ser Gly Phe Ile Phe Ser Lys Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Tyr Ile Ser His Gly Gly Ala Gly Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe 65 70 75 80 Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Val Tyr Lys Gly Tyr Phe Asp Glu Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 101 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 101 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ala Ser Gly Phe Ile Phe Ser Lys Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Tyr Ile Ser His Gly Gly Ala Gly Thr Tyr Tyr Pro Asp Thr Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe 65 70 75 80 Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Val Tyr Lys Gly Tyr Phe Asp Glu Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 102 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 102 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ala Ser Gly Phe Ile Phe Ser Lys Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Tyr Ile Ser His Gly Gly Ala Gly Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe 65 70 75 80 Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Val Tyr Lys Gly Tyr Phe Asp Glu Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 103 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 103 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ala Ser Gly Phe Ile Phe Ser Lys Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Tyr Ile Ser His Gly Gly Ala Gly Thr Tyr Tyr Pro Asp Thr Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe 65 70 75 80 Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Val Tyr Lys Gly Tyr Phe Asp Glu Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Pro Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 104 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 104 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Gly Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ala Ser Gly Phe Ile Phe Ser Arg Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Tyr Ile Ser His Gly Gly Ala Gly Thr Tyr Tyr Pro Asp Thr Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Arg Asn Thr Leu Phe 65 70 75 80 Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Val Tyr Lys Gly Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Pro Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 105 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 105 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ala Ser Gly Phe Ile Phe Ser Arg Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Tyr Val Ser His Gly Gly Ala Gly Thr Tyr Tyr Pro Asp Thr Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe 65 70 75 80 Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Val Tyr Lys Gly Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Pro Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 106 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 106 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ala Ser Gly Phe Ile Phe Ser Arg Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Tyr Ile Ser His Gly Gly Ala Gly Thr Tyr Tyr Pro Asp Thr Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe 65 70 75 80 Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Val Tyr Lys Gly Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Pro Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 107 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 107 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ser Ser Gly Phe Ile Phe Ser Arg Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Tyr Ile Ser His Gly Gly Ala Gly Thr Tyr Tyr Pro Asp Thr Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe 65 70 75 80 Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Val Tyr Lys Gly Tyr Phe Asp Glu Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Pro Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 108 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 108 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ala Ser Gly Phe Ile Phe Ser Arg Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Tyr Ile Ser His Gly Gly Ala Gly Thr Tyr Tyr Pro Asp Thr Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe 65 70 75 80 Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Val Tyr Lys Gly Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Pro Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 109 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 109 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Gly Cys Ser Ala Ser Gly Phe Ile Phe Ser Arg Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Tyr Ile Ser His Gly Gly Ala Gly Thr Tyr Tyr Pro Asp Thr Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe 65 70 75 80 Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Val Tyr Lys Gly Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Pro Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 110 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 110 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ser Ser Gly Phe Ile Phe Ser Arg Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Tyr Ile Ser His Gly Gly Ala Gly Thr Tyr Tyr Pro Asp Thr Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe 65 70 75 80 Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Gly Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Val Tyr Lys Gly Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Pro Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 111 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 111 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ser Ser Gly Phe Ile Phe Ser Arg Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Tyr Ile Ser His Gly Gly Ala Gly Thr Tyr Tyr Pro Asp Thr Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Gly Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Val Tyr Lys Gly Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Pro Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 112 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 112 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ala Ser Gly Phe Ile Phe Ser Arg Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Tyr Ile Ser His Gly Gly Ala Gly Thr Tyr Tyr Pro Asp Thr Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe 65 70 75 80 Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Gly Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Val Tyr Lys Gly Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Pro Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 113 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 113 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Asp Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ala Ser Gly Phe Ile Phe Ser Lys Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Tyr Ile Ser His Gly Gly Ala Gly Thr Tyr Tyr Pro Asp Thr Ala 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe 65 70 75 80 Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Gly Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Val Tyr Lys Gly Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Pro Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 114 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 114 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Asp Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ala Ser Gly Phe Ile Phe Ser Lys Tyr 20 25 30 Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Tyr Ile Ser His Gly Gly Ala Gly Thr Tyr Tyr Pro Asp Thr Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe 65 70 75 80 Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Gly Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Val Tyr Lys Gly Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Pro Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 115 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 115 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Asp Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ala Gly Gly Phe Ile Phe Ser Lys Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Tyr Ile Ser His Gly Gly Ala Gly Thr Tyr Tyr Pro Asp Thr Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe 65 70 75 80 Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Gly Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Val Tyr Lys Gly Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Pro Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 116 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 116 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Asp Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ala Ser Gly Phe Ile Phe Ser Lys Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Tyr Ile Ser His Gly Gly Ala Gly Thr Tyr Tyr Pro Asp Thr Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe 65 70 75 80 Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Gly Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Val Tyr Lys Gly Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Pro Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 117 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 117 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Asp Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ala Ser Gly Phe Ile Phe Ser Lys Tyr 20 25 30 Asp Met Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Tyr Ile Ser His Gly Gly Ala Gly Thr Tyr Tyr Pro Asp Thr Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe 65 70 75 80 Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Gly Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Val Tyr Lys Gly Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Pro Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 118 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 118 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Asp Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ala Ser Gly Phe Ile Phe Ser Lys Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val His Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Tyr Ile Ser His Gly Gly Ala Gly Thr Tyr Tyr Pro Asp Thr Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe 65 70 75 80 Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Val Tyr Lys Gly Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Pro Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 119 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 119 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Asp Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ala Ser Gly Phe Ile Phe Ser Lys Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Tyr Ile Ser His Gly Gly Ala Gly Thr Tyr Tyr Pro Asp Thr Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe 65 70 75 80 Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Val Tyr Lys Gly Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Pro Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 120 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 120 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Asp Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ala Ser Gly Phe Ile Phe Ser Lys Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Tyr Ile Ser His Gly Gly Ala Gly Thr Tyr Tyr Pro Asp Thr Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe 65 70 75 80 Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Gly Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Val Tyr Lys Gly Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Pro Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 121 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 121 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Asp Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ala Ser Gly Phe Ile Phe Ser Lys Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Tyr Ile Ser His Gly Gly Ala Gly Thr Tyr Tyr Pro Asp Thr Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe 65 70 75 80 Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Gly Val Tyr Phe Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Val Tyr Lys Gly Tyr Phe Asp Gln Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Pro Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 122 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 122 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Asp Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ala Ser Gly Phe Ile Phe Ser Lys Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Tyr Ile Ser His Gly Gly Ala Gly Thr Tyr Tyr Pro Asp Thr Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe 65 70 75 80 Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Val Tyr Lys Gly Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Pro Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 123 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 123 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ser Ser Gly Phe Ile Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Tyr Ile Ser Ser Gly Gly Gly Gly Thr Tyr Tyr Pro Asp Thr Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe 65 70 75 80 Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Gly Val Tyr Phe Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Val Thr Lys Gly Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Pro Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 124 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 124 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ser Ser Gly Phe Ile Phe Ser Lys Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Tyr Ile Ser His Gly Gly Ala Gly Thr Tyr Tyr Pro Asp Thr Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe 65 70 75 80 Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Val Tyr Lys Gly Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Pro Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 125 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 125 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ser Ser Gly Phe Ile Phe Ser Lys Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Tyr Ile Ser His Gly Gly Ala Gly Thr Tyr Tyr Pro Asp Thr Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe 65 70 75 80 Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Val Tyr Lys Gly Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Pro Val Thr Val Ser Leu 115 <210> 126 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 126 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ser Ser Gly Phe Ile Phe Ser Lys Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Tyr Ile Ser His Gly Gly Ala Gly Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe 65 70 75 80 Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Val Arg Gly Gly Val Tyr Lys Gly Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Pro Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 127 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 127 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ala Ser Gly Phe Ile Phe Ser Arg Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Tyr Ile Ser His Gly Gly Ala Gly Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe 65 70 75 80 Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Val Tyr Lys Gly Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Pro Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 128 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 128 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ala Ser Gly Phe Ile Phe Ser Arg Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Tyr Ile Ser His Gly Gly Ala Gly Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe 65 70 75 80 Leu Gln Met Asp Ser Pro Arg Ala Glu Asp Thr Gly Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Val Tyr Lys Gly Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Pro Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 129 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 129 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ala Ser Gly Phe Ile Phe Ser Arg Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Tyr Ile Ser His Gly Gly Ala Gly Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe 65 70 75 80 Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Gly Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Val Tyr Lys Gly Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Pro Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 130 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 130 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ala Ser Gly Phe Ile Phe Ser Arg Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Tyr Ile Ser His Gly Gly Ala Gly Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe 65 70 75 80 Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Val Tyr Lys Gly Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Pro Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 131 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 131 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ala Ser Gly Phe Ile Phe Ser Arg Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Arg Val Arg Leu Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Tyr Ile Ser His Gly Gly Ala Gly Thr Tyr His Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe 65 70 75 80 Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Val Tyr Lys Gly Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Pro Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 132 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 132 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ala Ser Gly Phe Ile Phe Ser Lys Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Tyr Ile Ser His Gly Gly Ala Gly Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe 65 70 75 80 Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Val Tyr Lys Gly Tyr Phe Asp Glu Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 133 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 133 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Asp Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ala Ser Gly Phe Ile Phe Ser Lys Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Tyr Ile Gly His Gly Gly Ala Gly Thr Tyr Tyr Pro Asp Thr Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asn Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe 65 70 75 80 Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Val Tyr Lys Gly Tyr Phe Asp Glu Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 134 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 134 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ser Ser Gly Phe Ile Phe Ser Arg Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Tyr Ile Ser His Gly Gly Ala Gly Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe 65 70 75 80 Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Val Tyr Lys Gly Tyr Phe Asp Glu Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 135 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 135 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ala Ser Gly Phe Ile Phe Ser Arg Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Tyr Ile Ser His Gly Gly Ala Gly Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe 65 70 75 80 Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Val Tyr Lys Gly Tyr Phe Asp Leu Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Pro Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 136 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 136 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ser Ser Gly Phe Ile Phe Ser Arg Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Tyr Ile Ser His Gly Gly Ala Gly Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe 65 70 75 80 Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Gly Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Val Tyr Lys Gly Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Pro Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 137 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 137 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ser Ser Gly Phe Ile Phe Ser Arg Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Tyr Ile Ser His Gly Gly Ala Gly Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe 65 70 75 80 Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Gly Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Val Tyr Lys Gly Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Pro Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 138 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 138 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ser Ser Gly Phe Ile Phe Ser Arg Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Tyr Ile Ser His Gly Gly Ala Gly Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe 65 70 75 80 Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Gly Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Val Tyr Lys Gly Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Pro Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 139 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 139 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ser Ser Gly Phe Ile Phe Ser Arg Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Pro Glu Trp Val 35 40 45 Ala Tyr Ile Ser His Gly Gly Ala Gly Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe 65 70 75 80 Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Gly Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Val Tyr Lys Gly Tyr Phe Asp Glu Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Pro Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 140 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 140 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ser Ser Gly Phe Ile Phe Ser Arg Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Tyr Ile Ser His Gly Gly Ala Gly Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe 65 70 75 80 Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Val Tyr Lys Gly Cys Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Pro Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 141 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 141 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ser Ser Gly Phe Ile Phe Ser Arg Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Tyr Ile Ser His Gly Gly Ala Gly Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe 65 70 75 80 Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Val Tyr Lys Gly Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Pro Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 142 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 142 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ala Ser Gly Phe Ile Phe Ser Arg Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Tyr Ile Ser His Gly Gly Ala Gly Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe 65 70 75 80 Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Gly Val Tyr Phe Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Val Tyr Lys Gly Tyr Phe Asp Glu Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Pro Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 143 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 143 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ala Ser Gly Phe Ile Phe Ser Arg Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Tyr Ile Ser His Gly Gly Ala Gly Thr Tyr Tyr Pro Asp Thr Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe 65 70 75 80 Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Gly Val Tyr Phe Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Val Tyr Lys Gly Tyr Phe Asp Glu Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Pro Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 144 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 144 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ala Ser Gly Phe Ile Phe Ser Arg Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Tyr Ile Ser His Gly Gly Ala Gly Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe 65 70 75 80 Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Gly Val Tyr Phe Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Val Tyr Lys Gly Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Pro Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 145 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 145 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ala Ser Gly Phe Ile Phe Ser Arg Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Tyr Ile Ser His Gly Gly Ala Gly Thr Tyr Tyr Pro Asp Thr Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe 65 70 75 80 Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Gly Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Val Tyr Lys Gly Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Pro Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 146 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 146 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ala Ser Gly Phe Ile Phe Ser Lys Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Tyr Ile Ser His Gly Gly Ala Gly Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe 65 70 75 80 Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Gly Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Val Tyr Lys Gly Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Pro Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 147 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 147 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ala Ser Gly Phe Ile Phe Ser Arg Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Tyr Ile Ser His Gly Gly Ala Gly Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe 65 70 75 80 Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Gly Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Val Tyr Lys Gly Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 148 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 148 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ala Ser Gly Phe Ile Phe Ser Arg Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Tyr Ile Ser His Gly Gly Ala Gly Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe 65 70 75 80 Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Gly Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Val Tyr Lys Gly Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Pro Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 149 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 149 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gly Asn Ile Tyr Gly Trp 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Thr Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Gln Ala Lys Thr Leu Met Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Phe Trp Asn Ile Pro Ala 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Gln Ile Thr 100 105 <210> 150 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 150 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gly Asn Ile Tyr Thr Tyr 20 25 30 Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Thr Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asn Ala Lys Thr Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Phe Trp Thr Leu Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Gln Ile Thr 100 105 <210> 151 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 151 Gly Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gly Asn Ile Tyr Gln Tyr 20 25 30 Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Thr Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asn Ala Lys Thr Leu Ala Glu Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Ser Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Phe Trp Lys Leu Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Gln Ile Thr 100 105 <210> 152 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 152 Gly Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gly Asn Ile Tyr Gln Tyr 20 25 30 Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Thr Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asn Ala Lys Thr Leu Ala Glu Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Ser Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Phe Trp Lys Leu Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Gln Ile Thr 100 105 <210> 153 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 153 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gly Asn Ile Tyr Glu Tyr 20 25 30 Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Thr Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asn Ala Lys Thr Leu Ala Glu Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Ser Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Phe Trp Lys Leu Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Gln Ile Thr 100 105 <210> 154 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 154 Gly Ile Gln Met Ala Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gly Asn Ile Tyr Glu Tyr 20 25 30 Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Thr Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asn Ala Lys Thr Leu Ala Glu Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Ser Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Phe Trp Lys Leu Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Gln Ile Thr 100 105 <210> 155 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 155 Gly Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gly Asn Ile Tyr Thr Tyr 20 25 30 Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Thr Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asn Ala Lys Thr Leu Ala Glu Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Ser Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Phe Trp Ser Leu Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Gln Ile Thr 100 105 <210> 156 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 156 Gly Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gly Asn Ile Tyr His Tyr 20 25 30 Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Thr Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asp Ala Lys Thr Leu Ala Glu Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Ser Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Phe Trp Ser Leu Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Gln Ile Thr 100 105 <210> 157 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 157 Gly Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gly Asn Ile Tyr His Tyr 20 25 30 Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Thr Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asn Ala Lys Thr Leu Ala Glu Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Ser Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Phe Trp Ser Leu Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Gln Ile Thr 100 105 <210> 158 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 158 Gly Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gly Asn Ile Tyr His Tyr 20 25 30 Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Thr Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asn Ala Lys Thr Leu Ala Glu Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Cys Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Phe Trp Ser Leu Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Gln Ile Thr 100 105 <210> 159 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 159 Gly Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gly Asn Ile Tyr Asn Tyr 20 25 30 Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Thr Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asn Ala Lys Thr Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Ser Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Phe Trp Thr Leu Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Gln Ile Thr 100 105 <210> 160 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 160 Gly Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gly Asn Ile Tyr Asn Tyr 20 25 30 Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Thr Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asn Ala Lys Thr Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Ser Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Phe Trp Thr Leu Pro Tyr 85 90 95 Ile Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Gln Ile Thr 100 105 <210> 161 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 161 Gly Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gly Asn Ile Tyr Thr Tyr 20 25 30 Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Thr Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asn Ala Lys Thr Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Phe Trp Thr Leu Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Gln Ile Thr 100 105 <210> 162 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 162 Gly Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gly Asn Ile Tyr Gln Tyr 20 25 30 Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Thr Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asn Ala Lys Thr Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Phe Trp Thr Leu Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Gln Ile Thr 100 105 <210> 163 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 163 Gly Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gly Asn Ile Tyr Asn Tyr 20 25 30 Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Thr Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asn Ala Lys Thr Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Phe Trp Thr Leu Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Gln Ile Thr 100 105 <210> 164 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 164 Gly Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gly Asn Ile Tyr Asp Tyr 20 25 30 Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Thr Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asn Ala Lys Thr Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Cys Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Phe Trp Thr Leu Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Gln Ile Thr 100 105 <210> 165 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 165 Gly Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gly Asn Ile Tyr Asp Tyr 20 25 30 Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Thr Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asn Ala Lys Thr Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Cys Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Phe Trp Ser Leu Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Gln Ile Thr 100 105 <210> 166 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 166 Gly Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gly Asn Ile Tyr Asn Tyr 20 25 30 Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Thr Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asn Ala Lys Thr Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Cys Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Phe Trp Lys Leu Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Gln Ile Thr 100 105 <210> 167 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 167 Gly Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gly Asn Ile Tyr Lys Tyr 20 25 30 Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Thr Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asp Ala Lys Thr Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Val Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Phe Trp Arg Leu Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Gln Ile Thr 100 105 <210> 168 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 168 Gly Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gly Asn Ile Tyr Lys Tyr 20 25 30 Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Thr Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asp Ala Lys Thr Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Ser Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Phe Trp Arg Leu Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Gln Ile Thr 100 105 <210> 169 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 169 Gly Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gly Asn Ile Tyr His Tyr 20 25 30 Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Thr Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asp Ala Lys Asn Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Cys Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Phe Trp Ser Leu Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Gln Ile Thr 100 105 <210> 170 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 170 Gly Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gly Asn Ile Tyr His Tyr 20 25 30 Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Thr Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asp Ala Lys Thr Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Ser Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Phe Trp Ser Leu Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Gln Ile Thr 100 105 <210> 171 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 171 Gly Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gly Asn Ile Tyr Gln Tyr 20 25 30 Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Thr Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asp Ala Lys Ile Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Ser Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Phe Trp Lys Leu Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Gln Ile Thr 100 105 <210> 172 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 172 Gly Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gly Asn Ile Tyr His Tyr 20 25 30 Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Thr Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asp Ala Lys Ile Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Ser Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Phe Trp Lys Leu Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Gln Ile Thr 100 105 <210> 173 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 173 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gly Asn Ile Tyr Gly Trp 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Thr Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Gln Ala Lys Thr Leu Met Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Phe Trp Asn Ile Pro Ala 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Gln Ile Thr 100 105 <210> 174 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 174 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gly Asn Ile Tyr Thr Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Thr Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asp Ala Lys Thr Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Ser Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Phe Trp Arg Leu Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Gln Ile Thr 100 105 <210> 175 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 175 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gly Asn Ile Tyr Thr Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Thr Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asn Ala Lys Glu Leu Ala Glu Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Phe Trp Arg Leu Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Gln Ile Thr 100 105 <210> 176 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 176 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gly Asn Ile Tyr Thr Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Thr Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asn Ala Lys Ser Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Cys Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Phe Trp Arg Ile Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Gln Ile Thr 100 105 <210> 177 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 177 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gly Asn Ile Tyr Thr Tyr 20 25 30 Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Thr Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asp Ala Lys Thr Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Ser Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Phe Trp Lys Leu Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Gln Ile Thr 100 105 <210> 178 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 178 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gly Asn Ile Tyr Asn Tyr 20 25 30 Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Thr Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asn Ala Lys Asn Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Val Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Phe Trp Arg Leu Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Gln Ile Thr 100 105 <210> 179 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 179 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gly Asn Ile Trp His Tyr 20 25 30 Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Thr Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asp Ala Lys Thr Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Ser Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Phe Trp Arg Leu Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Gln Ile Thr 100 105 <210> 180 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 180 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gly Asn Ile Tyr His Tyr 20 25 30 Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Thr Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asn Ala Lys Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Ser Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Phe Trp Lys Leu Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Gln Ile Thr 100 105 <210> 181 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 181 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gly Asn Ile Tyr Asp Tyr 20 25 30 Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Thr Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asn Ala Lys Ile Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Phe Trp Met Leu Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Gln Ile Thr 100 105 <210> 182 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 182 Gly Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gly Asn Ile Tyr Thr Tyr 20 25 30 Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Ile Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asp Ala Lys Thr Leu Ala Glu Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Phe Trp Lys Ile Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Gln Ile Thr 100 105 <210> 183 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 183 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gly Asn Ile Tyr His Tyr 20 25 30 Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Thr Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asn Ala Lys Thr Leu Ala Glu Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Cys Ser Gly Ala Asp Tyr Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Trp Lys Ile Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Gln Ile Thr 100 105 <210> 184 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 184 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gly Asn Ile Tyr Asn Tyr 20 25 30 Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Thr Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asn Ala Lys Thr Leu Ala Glu Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Asp Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Phe Trp Lys Leu Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Gln Ile Thr 100 105 <210> 185 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 185 Gly Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gly Asn Ile Tyr Asn Tyr 20 25 30 Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Thr Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asn Ala Lys Thr Leu Ala Ala Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Phe Trp Lys Leu Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Gln Ile Thr 100 105 <210> 186 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 186 Gly Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gly Asn Ile Tyr Asn Tyr 20 25 30 Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Thr Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asn Ala Lys Thr Leu Ala Glu Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Phe Trp Lys Leu Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Gln Ile Thr 100 105 <210> 187 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 187 Gly Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gly Asn Ile Tyr Asn Tyr 20 25 30 Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Thr Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asn Ala Lys Thr Leu Glu Glu Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Ser Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Phe Trp Thr Leu Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Gln Ile Thr 100 105 <210> 188 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 188 Gly Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gly Asn Ile Tyr Gly Tyr 20 25 30 Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Thr Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asn Ala Lys Thr Leu Glu Glu Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Phe Trp Thr Leu Pro Tyr 85 90 95 Asn Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Gln Ile Thr 100 105 <210> 189 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 189 Gly Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gly Asn Ile Tyr Asp Tyr 20 25 30 Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Thr Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asn Ala Lys Thr Leu Ala Glu Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Phe Trp Thr Leu Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Gln Ile Thr 100 105 <210> 190 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> Ser, Lys or Arg <400> 190 Xaa Tyr Asp Met Ser 1 5 <210> 191 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Ile or Val <220> <221> MOD_RES <222> (4)..(4) <223> Ser or His <220> <221> MOD_RES <222> (7)..(7) <223> Gly or Ala <220> <221> MOD_RES <222> (14)..(14) <223> Thr or Ser <220> <221> MOD_RES <222> (15)..(15) <223> Val or Ala <400> 191 Tyr Xaa Ser Xaa Gly Gly Xaa Gly Thr Tyr Tyr Pro Asp Xaa Xaa Lys 1 5 10 15 Gly <210> 192 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (4)..(4) <223> Thr or Tyr <220> <221> MOD_RES <222> (7)..(7) <223> Tyr or Cys <220> <221> MOD_RES <222> (10)..(10) <223> Val, Glu, Leu, Met, Gln or Tyr <400> 192 Gly Gly Val Xaa Lys Gly Xaa Phe Asp Xaa 1 5 10 <210> 193 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (7)..(7) <223> His, Tyr or Trp <220> <221> MOD_RES <222> (8)..(8) <223> Asn, Gly, Thr, Gln, Glu, His, Asp or Lys <220> <221> MOD_RES <222> (9)..(9) <223> Tyr or Trp <220> <221> MOD_RES <222> (11)..(11) <223> Thr, Ala or Asn <400> 193 Arg Ala Ser Gly Asn Ile Xaa Xaa Xaa Leu Xaa 1 5 10 <210> 194 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> Asn, Gln or Asp <220> <221> MOD_RES <222> (4)..(4) <223> Thr, Asn, Ile, Glu or Ser <220> <221> MOD_RES <222> (6)..(6) <223> Ala, Met or Glu <220> <221> MOD_RES <222> (7)..(7) <223> Asp, Glu, Ser or Ala <400> 194 Xaa Ala Lys Xaa Leu Xaa Xaa 1 5 <210> 195 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> His or Gln <220> <221> MOD_RES <222> (5)..(5) <223> Ser, Asn, Thr, Lys, Arg or Met <220> <221> MOD_RES <222> (6)..(6) <223> Ile or Leu <220> <221> MOD_RES <222> (8)..(8) <223> Tyr or Ala <220> <221> MOD_RES <222> (9)..(9) <223> Thr, Ile or Asn <400> 195 Gln Xaa Phe Trp Xaa Xaa Pro Xaa Xaa 1 5 <210> 196 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 196 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ala Ser Gly Phe Ile Phe Ser Lys Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Tyr Ile Ser His Gly Gly Ala Gly Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe 65 70 75 80 Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Gly Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Val Tyr Lys Gly Tyr Phe Asp Glu Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Pro Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 197 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 197 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gly Asn Ile Tyr Gly Trp 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Thr Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Gln Ala Lys Thr Leu Met Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Phe Trp Asn Ile Pro Ala 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Gln Ile Thr 100 105 <210> 198 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 198 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ile Phe Ser Lys Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Tyr Ile Ser His Gly Gly Ala Gly Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe 65 70 75 80 Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Gly Val Tyr Phe Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Val Thr Lys Gly Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Pro Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 199 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 199 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gly Asn Ile His Asn Tyr 20 25 30 Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Thr Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asn Ala Lys Thr Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Phe Trp Ser Ile Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Gln Ile Thr 100 105 <210> 200 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 200 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ala Ser Gly Phe Ile Phe Ser Arg Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Tyr Ile Ser His Gly Gly Ala Gly Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe 65 70 75 80 Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Val Tyr Lys Gly Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Pro Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 201 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 201 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gly Asn Ile His Asn Tyr 20 25 30 Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Thr Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asn Ala Lys Thr Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Phe Trp Ser Ile Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Gln Ile Thr 100 105 <210> 202 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 202 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ile Phe Ser Arg Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Tyr Ile Ser His Gly Gly Ala Gly Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe 65 70 75 80 Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Gly Val Tyr Phe Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Val Thr Lys Gly Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Pro Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 203 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 203 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gly Asn Ile His Asn Tyr 20 25 30 Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Thr Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asn Ala Lys Thr Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Phe Trp Ser Ile Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Gln Ile Thr 100 105 <210> 204 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 204 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ala Ser Gly Phe Ile Phe Ser Arg Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Tyr Ile Ser His Gly Gly Ala Gly Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe 65 70 75 80 Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Gly Val Tyr Phe Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Val Thr Lys Gly Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Pro Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 205 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 205 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gly Asn Ile His Asn Tyr 20 25 30 Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Thr Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asn Ala Lys Thr Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Phe Trp Ser Ile Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Gln Ile Thr 100 105 <210> 206 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 206 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ala Ser Gly Phe Ile Phe Ser Arg Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Tyr Ile Ser His Gly Gly Ala Gly Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe 65 70 75 80 Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Gly Val Tyr Phe Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Val Thr Lys Gly Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 207 <211> 108 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 207 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gly Asn Ile His Asn Tyr 20 25 30 Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Thr Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asn Ala Lys Thr Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Phe Trp Ser Ile Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg 100 105 <210> 208 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 208 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ala Ser Gly Phe Ile Phe Ser Arg Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Tyr Ile Ser His Gly Gly Ala Gly Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe 65 70 75 80 Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Val Tyr Lys Gly Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Pro Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 209 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 209 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gly Asn Ile His Asn Tyr 20 25 30 Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Thr Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asn Ala Lys Thr Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Phe Trp Ser Ile Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Gln Ile Thr 100 105 <210> 210 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 210 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ala Ser Gly Phe Ile Phe Ser Lys Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Tyr Ile Ser His Gly Gly Ala Gly Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe 65 70 75 80 Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Gly Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Val Tyr Lys Gly Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Pro Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 211 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 211 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gly Asn Ile Tyr Thr Tyr 20 25 30 Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Thr Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asn Ala Lys Thr Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Phe Trp Thr Leu Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Gln Ile Thr 100 105 <210> 212 <211> 247 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 212 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ala Ser Gly Phe Ile Phe Ser Arg Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Tyr Ile Ser His Gly Gly Ala Gly Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe 65 70 75 80 Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Gly Val Tyr Phe Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Val Thr Lys Gly Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Pro Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Gln Val Gln 115 120 125 Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg Ser Leu Arg 130 135 140 Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Met Phe Gly Val His 145 150 155 160 Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Ala Val 165 170 175 Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Glu Ser Val Lys Gly Arg 180 185 190 Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Ile Leu Phe Leu Gln Met 195 200 205 Asp Ser Leu Arg Leu Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly 210 215 220 Arg Pro Lys Val Val Ile Pro Ala Pro Leu Ala His Trp Gly Gln Gly 225 230 235 240 Thr Leu Val Thr Phe Ser Ser 245 <210> 213 <211> 122 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 213 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Met Phe 20 25 30 Gly Val His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Ala Val Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Glu Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Ile Leu Phe 65 70 75 80 Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Leu Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Arg Pro Lys Val Val Ile Pro Ala Pro Leu Ala His Trp 100 105 110 Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Phe Ser Ser 115 120 <210> 214 <211> 330 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 214 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys 1 5 10 15 Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys 100 105 110 Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro 115 120 125 Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys 130 135 140 Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp 145 150 155 160 Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu 165 170 175 Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu 180 185 190 His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn 195 200 205 Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly 210 215 220 Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu 225 230 235 240 Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr 245 250 255 Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn 260 265 270 Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe 275 280 285 Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn 290 295 300 Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr 305 310 315 320 Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325 330 <210> 215 <211> 221 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 215 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gly Asn Ile His Asn Tyr 20 25 30 Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Thr Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asn Ala Lys Thr Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Phe Trp Ser Ile Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Gln Ile Thr Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 Pro Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val 115 120 125 Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser 130 135 140 Trp Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu 145 150 155 160 Ile Tyr Glu Ala Ser Asn Leu Glu Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser 165 170 175 Gly Ser Gly Ser Gly Ser Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln 180 185 190 Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Thr Ser Ser Phe Leu 195 200 205 Leu Ser Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu His Lys Arg 210 215 220 <210> 216 <211> 108 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 216 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Glu Ala Ser Asn Leu Glu Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Ser Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Thr Ser Ser Phe Leu Leu 85 90 95 Ser Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu His Lys Arg 100 105 <210> 217 <211> 254 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 217 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ala Ser Gly Phe Ile Phe Ser Arg Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Tyr Ile Ser His Gly Gly Ala Gly Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe 65 70 75 80 Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Gly Val Tyr Phe Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Val Thr Lys Gly Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Pro Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe 115 120 125 Pro Leu Ala Pro Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val 130 135 140 Gln Pro Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr 145 150 155 160 Phe Ser Met Phe Gly Val His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly 165 170 175 Leu Glu Trp Val Ala Ala Val Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr 180 185 190 Ala Glu Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys 195 200 205 Asn Ile Leu Phe Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Leu Glu Asp Thr Ala 210 215 220 Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly Arg Pro Lys Val Val Ile Pro Ala Pro 225 230 235 240 Leu Ala His Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Phe Ser Ser 245 250 <210> 218 <211> 228 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 218 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gly Asn Ile His Asn Tyr 20 25 30 Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Thr Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asn Ala Lys Thr Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Phe Trp Ser Ile Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Gln Ile Thr Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro 115 120 125 Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg 130 135 140 Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro 145 150 155 160 Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Glu Ala Ser Asn Leu Glu Thr 165 170 175 Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Asp Phe Thr 180 185 190 Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys 195 200 205 Gln Gln Thr Ser Ser Phe Leu Leu Ser Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val 210 215 220 Glu His Lys Arg 225 <210> 219 <211> 247 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 219 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Met Phe 20 25 30 Gly Val His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Ala Val Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Glu Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Ile Leu Phe 65 70 75 80 Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Leu Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Arg Pro Lys Val Val Ile Pro Ala Pro Leu Ala His Trp 100 105 110 Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Phe Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro 115 120 125 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 130 135 140 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ala Ser Gly Phe Ile Phe Ser Arg Tyr 145 150 155 160 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 165 170 175 Ala Tyr Ile Ser His Gly Gly Ala Gly Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 180 185 190 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe 195 200 205 Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Gly Val Tyr Phe Cys 210 215 220 Ala Arg Gly Gly Val Thr Lys Gly Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly 225 230 235 240 Thr Pro Val Thr Val Ser Ser 245 <210> 220 <211> 221 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 220 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Glu Ala Ser Asn Leu Glu Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Ser Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Thr Ser Ser Phe Leu Leu 85 90 95 Ser Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu His Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 Pro Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val 115 120 125 Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gly Asn Ile His Asn 130 135 140 Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Thr Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu 145 150 155 160 Ile Tyr Asn Ala Lys Thr Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser 165 170 175 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln 180 185 190 Pro Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Phe Trp Ser Ile Pro 195 200 205 Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Gln Ile Thr Arg 210 215 220 <210> 221 <211> 254 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 221 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Met Phe 20 25 30 Gly Val His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Ala Val Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Glu Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Ile Leu Phe 65 70 75 80 Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Leu Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Arg Pro Lys Val Val Ile Pro Ala Pro Leu Ala His Trp 100 105 110 Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Phe Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro 115 120 125 Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly 130 135 140 Gly Val Val Gln Pro Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ala Ser 145 150 155 160 Gly Phe Ile Phe Ser Arg Tyr Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro 165 170 175 Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Tyr Ile Ser His Gly Gly Ala Gly 180 185 190 Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp 195 200 205 Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Pro Glu 210 215 220 Asp Thr Gly Val Tyr Phe Cys Ala Arg Gly Gly Val Thr Lys Gly Tyr 225 230 235 240 Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Pro Val Thr Val Ser Ser 245 250 <210> 222 <211> 228 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 222 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Glu Ala Ser Asn Leu Glu Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Ser Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Thr Ser Ser Phe Leu Leu 85 90 95 Ser Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu His Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro 115 120 125 Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg 130 135 140 Ala Ser Gly Asn Ile His Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Thr Pro 145 150 155 160 Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Asn Ala Lys Thr Leu Ala Asp 165 170 175 Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr 180 185 190 Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys 195 200 205 Gln His Phe Trp Ser Ile Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu 210 215 220 Gln Ile Thr Arg 225 <210> 223 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 223 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly 1 5 <210> 224 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 224 Arg Thr Val Ala Ala Pro 1 5 <210> 225 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 225 Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro 1 5 10 <210> 226 <211> 247 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 226 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ala Ser Gly Phe Ile Phe Ser Arg Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Tyr Ile Ser His Gly Gly Ala Gly Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe 65 70 75 80 Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Val Tyr Lys Gly Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Pro Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Gln Val Gln 115 120 125 Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg Ser Leu Arg 130 135 140 Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Met Phe Gly Val His 145 150 155 160 Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Ala Val 165 170 175 Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Glu Ser Val Lys Gly Arg 180 185 190 Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Ile Leu Phe Leu Gln Met 195 200 205 Asp Ser Leu Arg Leu Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly 210 215 220 Arg Pro Lys Val Val Ile Pro Ala Pro Leu Ala His Trp Gly Gln Gly 225 230 235 240 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 245 <210> 227 <211> 122 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 227 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Met Phe 20 25 30 Gly Val His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Ala Val Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Glu Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Ile Leu Phe 65 70 75 80 Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Leu Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Arg Pro Lys Val Val Ile Pro Ala Pro Leu Ala His Trp 100 105 110 Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 228 <211> 221 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 228 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gly Asn Ile His Asn Tyr 20 25 30 Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Thr Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asn Ala Lys Thr Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Phe Trp Ser Ile Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Gln Ile Thr Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 Pro Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val 115 120 125 Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser 130 135 140 Trp Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu 145 150 155 160 Ile Tyr Glu Ala Ser Asn Leu Glu Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser 165 170 175 Gly Ser Gly Ser Gly Ser Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln 180 185 190 Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Thr Ser Ser Phe Leu 195 200 205 Leu Ser Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg 210 215 220 <210> 229 <211> 108 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 229 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Glu Ala Ser Asn Leu Glu Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Ser Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Thr Ser Ser Phe Leu Leu 85 90 95 Ser Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg 100 105 <210> 230 <211> 247 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 230 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ala Ser Gly Phe Ile Phe Ser Arg Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Tyr Ile Ser His Gly Gly Ala Gly Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe 65 70 75 80 Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Gly Val Tyr Phe Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Val Thr Lys Gly Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Gln Val Gln 115 120 125 Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg Ser Leu Arg 130 135 140 Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Met Phe Gly Val His 145 150 155 160 Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Ala Val 165 170 175 Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Glu Ser Val Lys Gly Arg 180 185 190 Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Ile Leu Phe Leu Gln Met 195 200 205 Asp Ser Leu Arg Leu Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly 210 215 220 Arg Pro Lys Val Val Ile Pro Ala Pro Leu Ala His Trp Gly Gln Gly 225 230 235 240 Thr Leu Val Thr Phe Ser Ser 245 <210> 231 <211> 221 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 231 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gly Asn Ile His Asn Tyr 20 25 30 Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Thr Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asn Ala Lys Thr Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Phe Trp Ser Ile Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 Pro Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val 115 120 125 Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser 130 135 140 Trp Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu 145 150 155 160 Ile Tyr Glu Ala Ser Asn Leu Glu Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser 165 170 175 Gly Ser Gly Ser Gly Ser Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln 180 185 190 Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Thr Ser Ser Phe Leu 195 200 205 Leu Ser Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu His Lys Arg 210 215 220 <210> 232 <211> 247 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 232 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ala Ser Gly Phe Ile Phe Ser Arg Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Tyr Ile Ser His Gly Gly Ala Gly Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe 65 70 75 80 Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Val Tyr Lys Gly Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Pro Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Gln Val Gln 115 120 125 Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg Ser Leu Arg 130 135 140 Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Met Phe Gly Val His 145 150 155 160 Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Ala Val 165 170 175 Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Glu Ser Val Lys Gly Arg 180 185 190 Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Ile Leu Phe Leu Gln Met 195 200 205 Asp Ser Leu Arg Leu Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly 210 215 220 Arg Pro Lys Val Val Ile Pro Ala Pro Leu Ala His Trp Gly Gln Gly 225 230 235 240 Thr Leu Val Thr Phe Ser Ser 245 <210> 233 <211> 221 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 233 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gly Asn Ile His Asn Tyr 20 25 30 Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Thr Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asn Ala Lys Thr Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Phe Trp Ser Ile Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Gln Ile Thr Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 Pro Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val 115 120 125 Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser 130 135 140 Trp Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu 145 150 155 160 Ile Tyr Glu Ala Ser Asn Leu Glu Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser 165 170 175 Gly Ser Gly Ser Gly Ser Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln 180 185 190 Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Thr Ser Ser Phe Leu 195 200 205 Leu Ser Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu His Lys Arg 210 215 220 <210> 234 <211> 247 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 234 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ala Ser Gly Phe Ile Phe Ser Arg Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Tyr Ile Ser His Gly Gly Ala Gly Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe 65 70 75 80 Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Gly Val Tyr Phe Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Val Thr Lys Gly Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Pro Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Gln Val Gln 115 120 125 Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg Ser Leu Arg 130 135 140 Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Met Phe Gly Val His 145 150 155 160 Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Ala Val 165 170 175 Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Glu Ser Val Lys Gly Arg 180 185 190 Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Ile Leu Phe Leu Gln Met 195 200 205 Asp Ser Leu Arg Leu Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly 210 215 220 Arg Pro Lys Val Val Ile Pro Ala Pro Leu Ala His Trp Gly Gln Gly 225 230 235 240 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 245 <210> 235 <211> 221 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 235 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gly Asn Ile His Asn Tyr 20 25 30 Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Thr Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asn Ala Lys Thr Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Phe Trp Ser Ile Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Gln Ile Thr Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 Pro Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val 115 120 125 Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser 130 135 140 Trp Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu 145 150 155 160 Ile Tyr Glu Ala Ser Asn Leu Glu Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser 165 170 175 Gly Ser Gly Ser Gly Ser Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln 180 185 190 Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Thr Ser Ser Phe Leu 195 200 205 Leu Ser Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg 210 215 220 <210> 236 <211> 254 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 236 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ala Ser Gly Phe Ile Phe Ser Arg Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Tyr Ile Ser His Gly Gly Ala Gly Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe 65 70 75 80 Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Gly Val Tyr Phe Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Val Thr Lys Gly Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe 115 120 125 Pro Leu Ala Pro Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val 130 135 140 Gln Pro Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr 145 150 155 160 Phe Ser Met Phe Gly Val His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly 165 170 175 Leu Glu Trp Val Ala Ala Val Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr 180 185 190 Ala Glu Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys 195 200 205 Asn Ile Leu Phe Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Leu Glu Asp Thr Ala 210 215 220 Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly Arg Pro Lys Val Val Ile Pro Ala Pro 225 230 235 240 Leu Ala His Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Phe Ser Ser 245 250 <210> 237 <211> 228 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 237 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gly Asn Ile His Asn Tyr 20 25 30 Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Thr Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asn Ala Lys Thr Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Phe Trp Ser Ile Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro 115 120 125 Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg 130 135 140 Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro 145 150 155 160 Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Glu Ala Ser Asn Leu Glu Thr 165 170 175 Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Asp Phe Thr 180 185 190 Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys 195 200 205 Gln Gln Thr Ser Ser Phe Leu Leu Ser Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val 210 215 220 Glu His Lys Arg 225 <210> 238 <211> 108 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 238 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gly Asn Ile His Asn Tyr 20 25 30 Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Thr Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asn Ala Lys Thr Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Phe Trp Ser Ile Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Gln Ile Thr Arg 100 105 <210> 239 <211> 108 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 239 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gly Asn Ile His Asn Tyr 20 25 30 Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Thr Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asn Ala Lys Thr Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Phe Trp Ser Ile Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Gln Ile Thr Arg 100 105 <210> 240 <211> 30 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 240 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser 20 25 30 <210> 241 <211> 14 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 241 Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala 1 5 10 <210> 242 <211> 32 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 242 Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln 1 5 10 15 Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg 20 25 30 <210> 243 <211> 11 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 243 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 1 5 10 <210> 244 <211> 30 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 244 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser 20 25 30 <210> 245 <211> 14 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 245 Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser 1 5 10 <210> 246 <211> 32 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 246 Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln 1 5 10 15 Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg 20 25 30 <210> 247 <211> 11 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 247 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 1 5 10 <210> 248 <211> 30 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 248 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr 20 25 30 <210> 249 <211> 14 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 249 Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met Gly 1 5 10 <210> 250 <211> 32 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 250 Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr Met Glu 1 5 10 15 Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg 20 25 30 <210> 251 <211> 11 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 251 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 1 5 10 <210> 252 <211> 30 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 252 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser 20 25 30 <210> 253 <211> 14 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 253 Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala 1 5 10 <210> 254 <211> 32 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 254 Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln 1 5 10 15 Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg 20 25 30 <210> 255 <211> 11 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 255 Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser 1 5 10 <210> 256 <211> 30 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 256 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser 20 25 30 <210> 257 <211> 14 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 257 Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser 1 5 10 <210> 258 <211> 32 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 258 Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln 1 5 10 15 Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg 20 25 30 <210> 259 <211> 11 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 259 Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser 1 5 10 <210> 260 <211> 30 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 260 Glu Val Thr Leu Arg Glu Ser Gly Pro Ala Leu Val Lys Pro Thr Gln 1 5 10 15 Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser 20 25 30 <210> 261 <211> 14 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 261 Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu Trp Leu Ala 1 5 10 <210> 262 <211> 32 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 262 Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val Val Leu Thr 1 5 10 15 Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Arg 20 25 30 <210> 263 <211> 11 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 263 Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 1 5 10 <210> 264 <211> 30 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 264 Glu Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Val Leu Val Lys Pro Thr Glu 1 5 10 15 Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser 20 25 30 <210> 265 <211> 14 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 265 Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu Trp Leu Ala 1 5 10 <210> 266 <211> 32 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 266 Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Ser Gln Val Val Leu Thr 1 5 10 15 Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Arg 20 25 30 <210> 267 <211> 11 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 267 Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 1 5 10 <210> 268 <211> 30 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 268 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser 20 25 30 <210> 269 <211> 14 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 269 Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Gly 1 5 10 <210> 270 <211> 32 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 270 Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln 1 5 10 15 Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg 20 25 30 <210> 271 <211> 11 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 271 Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 1 5 10 <210> 272 <211> 30 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 272 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser 20 25 30 <210> 273 <211> 14 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 273 Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser 1 5 10 <210> 274 <211> 32 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 274 Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln 1 5 10 15 Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg 20 25 30 <210> 275 <211> 11 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 275 Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 1 5 10 <210> 276 <211> 30 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 276 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser 20 25 30 <210> 277 <211> 14 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 277 Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met Gly 1 5 10 <210> 278 <211> 32 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 278 Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu 1 5 10 15 Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg 20 25 30 <210> 279 <211> 11 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 279 Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 1 5 10 <210> 280 <211> 30 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 280 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr 20 25 30 <210> 281 <211> 14 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 281 Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met Gly 1 5 10 <210> 282 <211> 32 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 282 Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu 1 5 10 15 Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg 20 25 30 <210> 283 <211> 11 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 283 Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 1 5 10 <210> 284 <211> 30 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 284 Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser 20 25 30 <210> 285 <211> 14 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 285 Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly 1 5 10 <210> 286 <211> 32 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 286 Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu Lys 1 5 10 15 Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg 20 25 30 <210> 287 <211> 11 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 287 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 1 5 10 <210> 288 <211> 30 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 288 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser 20 25 30 <210> 289 <211> 14 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 289 Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly 1 5 10 <210> 290 <211> 32 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 290 Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Ser Phe Tyr Leu Gln 1 5 10 15 Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg 20 25 30 <210> 291 <211> 11 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 291 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 1 5 10 <210> 292 <211> 30 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 292 Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Gly Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser 20 25 30 <210> 293 <211> 14 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 293 Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly 1 5 10 <210> 294 <211> 32 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 294 Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Tyr Leu Lys 1 5 10 15 Leu Ser Ser Val Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg 20 25 30 <210> 295 <211> 11 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 295 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 1 5 10 <210> 296 <211> 30 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 296 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Thr Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu 1 5 10 15 Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser 20 25 30 <210> 297 <211> 14 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 297 Trp Ile Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly 1 5 10 <210> 298 <211> 32 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 298 Gln Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Phe Asn Thr Phe Phe Leu Gln 1 5 10 15 Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Ala Arg 20 25 30 <210> 299 <211> 11 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 299 Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser 1 5 10 <210> 300 <211> 30 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 300 Glu Val Thr Leu Arg Glu Ser Gly Pro Ala Leu Val Lys Pro Thr Gln 1 5 10 15 Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser 20 25 30 <210> 301 <211> 14 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 301 Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly 1 5 10 <210> 302 <211> 32 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 302 Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Val Leu Thr 1 5 10 15 Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Arg 20 25 30 <210> 303 <211> 11 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 303 Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 1 5 10 <210> 304 <211> 30 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 304 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Ser Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Arg 20 25 30 <210> 305 <211> 14 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 305 Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala 1 5 10 <210> 306 <211> 32 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 306 Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln 1 5 10 15 Leu Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Lys 20 25 30 <210> 307 <211> 11 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 307 Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser 1 5 10 <210> 308 <211> 30 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 308 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Gly 20 25 30 <210> 309 <211> 14 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 309 Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala 1 5 10 <210> 310 <211> 32 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 310 Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln 1 5 10 15 Leu Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Lys 20 25 30 <210> 311 <211> 11 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 311 Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser 1 5 10 <210> 312 <211> 11 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 312 Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 1 5 10 <210> 313 <211> 30 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 313 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ser Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr 20 25 30 <210> 314 <211> 14 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 314 Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met Gly 1 5 10 <210> 315 <211> 32 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 315 Arg Phe Val Phe Ser Leu Asp Thr Ser Val Ser Thr Ala Tyr Leu Gln 1 5 10 15 Ile Ser Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg 20 25 30 <210> 316 <211> 11 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 316 Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 1 5 10 <210> 317 <211> 15 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 317 Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr 1 5 10 15 <210> 318 <211> 32 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 318 Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr 1 5 10 15 Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys 20 25 30 <210> 319 <211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 319 Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 1 5 10 <210> 320 <211> 23 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 320 Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys 20 <210> 321 <211> 15 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 321 Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr 1 5 10 15 <210> 322 <211> 32 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 322 Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr 1 5 10 15 Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys 20 25 30 <210> 323 <211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 323 Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 1 5 10 <210> 324 <211> 23 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 324 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys 20 <210> 325 <211> 15 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 325 Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr 1 5 10 15 <210> 326 <211> 32 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 326 Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr 1 5 10 15 Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys 20 25 30 <210> 327 <211> 11 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 327 Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg 1 5 10 <210> 328 <211> 23 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 328 Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys 20 <210> 329 <211> 15 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 329 Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr 1 5 10 15 <210> 330 <211> 32 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 330 Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr 1 5 10 15 Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys 20 25 30 <210> 331 <211> 11 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 331 Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg 1 5 10 <210> 332 <211> 23 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 332 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys 20 <210> 333 <211> 15 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 333 Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Glu Lys Ala Pro Lys Ser Leu Ile Tyr 1 5 10 15 <210> 334 <211> 32 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 334 Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr 1 5 10 15 Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys 20 25 30 <210> 335 <211> 11 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 335 Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg 1 5 10 <210> 336 <211> 23 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 336 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys 20 <210> 337 <211> 15 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 337 Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr 1 5 10 15 <210> 338 <211> 32 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 338 Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr 1 5 10 15 Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys 20 25 30 <210> 339 <211> 11 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 339 Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg 1 5 10 <210> 340 <211> 22 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 340 Ser Tyr Glu Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ser Pro Gly Gln 1 5 10 15 Thr Ala Ser Ile Thr Cys 20 <210> 341 <211> 15 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 341 Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Val Leu Val Ile Tyr 1 5 10 15 <210> 342 <211> 32 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 342 Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser Asn Ser Gly Asp Thr Ala Thr 1 5 10 15 Leu Thr Ile Ser Gly Thr Gln Pro Met Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys 20 25 30 <210> 343 <211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 343 Phe Gly Tyr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu 1 5 10 <210> 344 <211> 22 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 344 Ser Tyr Glu Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ser Pro Gly Gln 1 5 10 15 Thr Ala Ser Ile Thr Cys 20 <210> 345 <211> 15 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 345 Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Val Leu Val Ile Tyr 1 5 10 15 <210> 346 <211> 32 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 346 Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser Asn Ser Gly Asp Thr Ala Thr 1 5 10 15 Leu Thr Ile Ser Gly Thr Gln Pro Met Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys 20 25 30 <210> 347 <211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 347 Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly 1 5 10 <210> 348 <211> 21 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 348 Tyr Glu Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ser Pro Gly Gln Thr 1 5 10 15 Ala Ser Ile Thr Cys 20 <210> 349 <211> 15 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 349 Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Val Leu Val Ile Tyr 1 5 10 15 <210> 350 <211> 32 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 350 Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser Asn Ser Gly Asp Thr Ala Thr 1 5 10 15 Leu Thr Ile Ser Gly Thr Gln Pro Met Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys 20 25 30 <210> 351 <211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 351 Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly 1 5 10 <210> 352 <211> 22 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 352 Leu Tyr Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ser Pro Gly Gln 1 5 10 15 Thr Ala Ser Ile Thr Cys 20 <210> 353 <211> 15 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 353 Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Val Leu Val Ile Tyr 1 5 10 15 <210> 354 <211> 32 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 354 Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser Asn Ser Gly Asp Thr Ala Thr 1 5 10 15 Leu Thr Ile Ser Gly Thr Gln Thr Met Asp Glu Ala Asp Tyr Leu Cys 20 25 30 <210> 355 <211> 11 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 355 Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly 1 5 10 <210> 356 <211> 23 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 356 Glu Tyr Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Phe Gln Ser Val Thr Pro Lys 1 5 10 15 Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys 20 <210> 357 <211> 15 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 357 Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gln Ser Pro Lys Leu Val Ile Tyr 1 5 10 15 <210> 358 <211> 32 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 358 Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Asn Ser Gly Asp Asp Ala Thr 1 5 10 15 Leu Thr Ile Asn Ser Leu Glu Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys 20 25 30 <210> 359 <211> 11 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 359 Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg 1 5 10 <210> 360 <211> 23 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 360 Glu Tyr Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys 20 <210> 361 <211> 15 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 361 Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Arg Leu Val Ile Tyr 1 5 10 15 <210> 362 <211> 32 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 362 Asp Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Asn Ser Gly Asp Glu Ala Thr 1 5 10 15 Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys 20 25 30 <210> 363 <211> 11 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 363 Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys Arg 1 5 10 <210> 364 <211> 23 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 364 Asp Tyr Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys 20 <210> 365 <211> 15 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 365 Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Val Ile Tyr 1 5 10 15 <210> 366 <211> 32 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 366 Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Asn Ser Gly Asp Asp Ala Thr 1 5 10 15 Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys 20 25 30 <210> 367 <211> 11 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 367 Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg 1 5 10 <210> 368 <211> 22 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 368 Leu Pro Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ser Pro Gly Gln 1 5 10 15 Thr Ala Ser Ile Thr Cys 20 <210> 369 <211> 15 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 369 Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Val Leu Val Ile Tyr 1 5 10 15 <210> 370 <211> 32 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 370 Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr 1 5 10 15 Leu Thr Ile Ser Gly Thr Gln Thr Met Asp Glu Ala Asp Tyr Leu Cys 20 25 30 <210> 371 <211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 371 Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Thr Val Leu 1 5 10 <210> 372 <211> 22 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 372 Ser Tyr Glu Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ser Pro Gly Gln 1 5 10 15 Thr Ala Ser Ile Thr Cys 20 <210> 373 <211> 15 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 373 Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Val Leu Val Ile Tyr 1 5 10 15 <210> 374 <211> 32 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 374 Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr 1 5 10 15 Leu Thr Ile Ser Gly Thr Gln Thr Met Asp Glu Ala Asp Tyr Leu Cys 20 25 30 <210> 375 <211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 375 Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 1 5 10 <210> 376 <211> 23 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 376 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys 20 <210> 377 <211> 15 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 377 Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr 1 5 10 15 <210> 378 <211> 32 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 378 Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr 1 5 10 15 Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys 20 25 30 <210> 379 <211> 11 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 379 Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg 1 5 10 <210> 380 <211> 11 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 380 Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg 1 5 10 <210> 381 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 381 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ala Ser Gly Phe Ile Phe Ser Lys Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Tyr Ile Ser His Gly Gly Ala Gly Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe 65 70 75 80 Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Val Tyr Lys Gly Tyr Phe Asp Glu Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Pro Val Thr Val Ser Ser 115

Claims (63)

  1. 하기에서 정의되는 바와 같은 CDR-H1, CDR-H2, CDR-H3, CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3의 6개의 CDR을 포함하는 항원 결합 도메인을 포함하고, 사람 IL-1β에 결합할 수 있는 결합 단백질:
    CDR-H1: X1-Y-D-M-S (서열 번호 190)(여기서, X1은 S, K 또는 R이다);
    CDR-H2: Y-X2-S-X4-G-G-X7-G-T-Y-Y-P-D-X14-X15-K-G(서열 번호 191)(여기서,
    X2는 I 또는 V이고;
    X4는 S 또는 H이며;
    X7은 G 또는 A이고;
    X14는 T 또는 S이며;
    X15는 V 또는 A이다);
    CDR-H3: G-G-V-X4-K-G-X7-F-D-X10 (서열 번호 192)(여기서,
    X4는 T 또는 Y이고;
    X7은 Y 또는 C이며;
    X10은 V, E, L, M, Q 또는 Y이다);
    CDR-L1: R-A-S-G-N-I-X7-X8-X9-L-X11 (서열 번호 193)(여기서,
    X7은 H, Y 또는 W이고;
    X8은 N, G, T, Q, E, H, D 또는 K이며;
    X9는 Y 또는 W이고;
    X11은 T, A 또는 N이다);
    CDR-L2: X1-A-K-X4-L-X6-X7(서열 번호 194)(여기서,
    X1은 N, Q 또는 D이고;
    X4는 T, N, I, E 또는 S이며;
    X6은 A, M 또는 E이고;
    X7은 D, E, S 또는 A이다); 및
    CDR-L3: Q-X2-F-W-X5-X6-P-X8-X9 (서열 번호 195)(여기서,
    X2는 H 또는 Q이고;
    X5는 S, N, T, K, R 또는 M이며;
    X6은 I 또는 L이고;
    X8은 Y 또는 A이며;
    X9는 T, I 또는 N이다);
    단, CDR-H2는 Y-I-S-S-G-G-G-G-T-Y-Y-P-D-T-V-K-G (서열 번호 18)일 수 없으며;
    CDR-H3는 G-G-V-T-K-G-Y-F-D-V (서열 번호 19)일 수 없고;
    CDR-L1은 R-A-S-G-N-I-H-N-Y-L-T (서열 번호 20)일 수 없으며;
    CDR-L2는 N-A-K-T-L-A-D (서열 번호 21)일 수 없고;
    CDR-L3는 Q-H-F-W-S-I-P-Y-T (서열 번호 22)일 수 없다.
  2. 제1항에 있어서, 하기의 CDR-H1, CDR-H2, CDR-H3, CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3를 포함하는, 결합 단백질:
    CDR-H1은
    서열 번호 60의 31-35번 잔기;
    서열 번호 61의 31-35번 잔기;
    서열 번호 114의 31-35번 잔기; 및
    서열 번호 117의 31-35번 잔기로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 아미노산이고;
    CDR-H2는
    서열 번호 60의 50-66번 잔기;
    서열 번호 71의 50-66번 잔기;
    서열 번호 105의 50-66번 잔기;
    서열 번호 113의 50-66번 잔기;
    서열 번호 123의 50-66번 잔기;
    서열 번호 131의 50-66번 잔기; 및
    서열 번호 133의 50-66번 잔기로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 아미노산이고;
    CDR-H3는
    서열 번호 60의 99-108번 잔기;
    서열 번호 61의 99-108번 잔기;
    서열 번호 64의 99-108번 잔기;
    서열 번호 78의 99-108번 잔기;
    서열 번호 87의 99-108번 잔기;
    서열 번호 92의 99-108번 잔기;
    서열 번호 104의 99-108번 잔기; 및
    서열 번호 140의 99-108번 잔기로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 아미노산이고;
    CDR-L1은
    서열 번호 59의 24-34번 잔기;
    서열 번호 149의 24-34번 잔기;
    서열 번호 150의 24-34번 잔기;
    서열 번호 151의 24-34번 잔기;
    서열 번호 153의 24-34번 잔기;
    서열 번호 156의 24-34번 잔기;
    서열 번호 159의 24-34번 잔기;
    서열 번호 164의 24-34번 잔기;
    서열 번호 167의 24-34번 잔기;
    서열 번호 174의 24-34번 잔기;
    서열 번호 179의 24-34번 잔기; 및
    서열 번호 188의 24-34번 잔기로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 아미노산이고;
    CDR-L2는
    서열 번호 59의 50-56번 잔기;
    서열 번호 149의 50-56번 잔기;
    서열 번호 151의 50-56번 잔기;
    서열 번호 156의 50-56번 잔기;
    서열 번호 167의 50-56번 잔기;
    서열 번호 169의 50-56번 잔기;
    서열 번호 171의 50-56번 잔기;
    서열 번호 175의 50-56번 잔기;
    서열 번호 176의 50-56번 잔기;
    서열 번호 178의 50-56번 잔기;
    서열 번호 180의 50-56번 잔기;
    서열 번호 181의 50-56번 잔기;
    서열 번호 185의 50-56번 잔기; 및
    서열 번호 187의 50-56번 잔기로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 아미노산이고;
    CDR-L3는
    서열 번호 59의 89-97번 잔기;
    서열 번호 149의 89-97번 잔기;
    서열 번호 150의 89-97번 잔기;
    서열 번호 151의 89-97번 잔기;
    서열 번호 155의 89-97번 잔기;
    서열 번호 160의 89-97번 잔기;
    서열 번호 167의 89-97번 잔기;
    서열 번호 176의 89-97번 잔기;
    서열 번호 181의 89-97번 잔기;
    서열 번호 182의 89-97번 잔기;
    서열 번호 183의 89-97번 잔기; 및
    서열 번호 188의 89-97번 잔기로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 아미노산이다.
  3. 제1항에 있어서, 3개 이상의 CDR이 하기로 이루어진 CDR 세트의 그룹으로부터 선택되는 CDR의 세트로부터의 것인, 결합 단백질:
    Figure pat00076

    Figure pat00077

    Figure pat00078

    Figure pat00079
  4. 제3항에 있어서, 2개의 CDR 세트로부터의 CDR들을 포함하고, 상기 2개의 CDR 세트가 CDR 세트 1 내지 23으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 VH CDR 세트 및 CDR 세트 24 내지 56으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 VL CDR 세트를 포함하는, 결합 단백질.
  5. 제1항, 제2항 및 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 사람 수용체 골격을 추가로 포함하는, 결합 단백질.
  6. 제5항에 있어서, 상기 사람 수용체 골격이 서열 번호 7 내지 10, 13 내지 16, 25, 240 내지 316 및 317 내지 381로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하는, 결합 단백질.
  7. 제5항에 있어서, 상기 사람 수용체 골격이 하나 이상의 골격 영역 아미노산 치환을 포함하고, 상기 골격의 아미노산 서열이 상기 사람 수용체 골격의 서열에 대해 65% 이상 동일하며 상기 사람 수용체 골격과 동일한 70개 이상의 아미노산 잔기를 포함하는, 결합 단백질.
  8. 제5항에 있어서, 상기 사람 수용체 골격이 주요 잔기에서 하나 이상의 골격 영역 아미노산 치환을 포함하며, 상기 주요 잔기는 CDR에 인접한 잔기; 글리코실화 부위 잔기; 드문 잔기; 사람 IL-1β와 상호작용할 수 있는 잔기; CDR과 상호작용할 수 있는 잔기; 정규 잔기; 중쇄 가변 영역과 경쇄 가변 영역 사이의 접촉 잔기; 베르니에 영역 내 잔기; 및 쵸티아-정의된 가변 중쇄 CDR1과 카밧-정의된 제1의 중쇄 골격 사이에서 오버랩되는 영역내 잔기로 이루어진 그룹으로부터 선택되는, 결합 단백질.
  9. 제8항에 있어서, 카밧 번호매김에 의한 상기 주요 잔기가 2H, 4H, 24H, 26H, 27H, 29H, 34H, 35H, 37H, 39H, 44H, 45H, 47H, 48H, 49H, 50H, 51H, 58H, 59H, 60H, 63H, 67H, 69H, 71H, 73H, 76H, 78H, 91H, 93H, 94H, 2L, 4L, 25L, 29L, 27bL, 33L, 34L, 36L, 38L, 43L, 44L, 46L, 47L, 48L, 49L, 55L, 58L, 62L, 64L, 71L, 87L, 89L, 90L, 91L, 94L 및 95L로 이루어진 그룹으로부터 선택되는, 결합 단백질.
  10. 제5항에 있어서, 상기 결합 단백질이 컨센서스 사람 가변 도메인을 포함하는, 결합 단백질.
  11. 제4항에 있어서, 상기 결합 단백질이 서열 번호 59 내지 122 및 124 내지 211로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 아미노산 서열을 갖는 하나 이상의 가변 도메인을 포함하는, 결합 단백질.
  12. 제11항에 있어서, 상기 결합 단백질이 2개의 가변 도메인을 포함하는, 결합 단백질.
  13. 제12항에 있어서, 상기 2개의 가변 도메인이 하기로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하는, 결합 단백질:
    Figure pat00080

    Figure pat00081
  14. 제1항, 제2항 및 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 결합 단백질이 IL-1의 생물학적 기능을 조절할 수 있는, 결합 단백질.
  15. 제1항, 제2항 및 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 결합 단백질이 IL-1을 중화시킬 수 있는, 결합 단백질.
  16. 제1항, 제2항 및 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 결합 단백질이 표면 플라스몬 공명으로 측정시 약 102M-1s-1 이하; 약 103M-1s-1 이하; 약 104M-1s-1 이하; 약 105M-1s-1 이하; 및 약 106M-1s- 1이하로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 IL-1β에 대한 결합 속도 상수(on rate constant: Kon)를 갖는, 결합 단백질.
  17. 제1항, 제2항 및 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 결합 단백질이 표면 플라스몬 공명으로 측정시 약 10-3s-1 이하; 약 10-4s-1 이하; 약 10-5s-1 이하; 및 약 10-6s-1 이하로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 IL-1β에 대한 해리 속도 상수(off rate constant: Koff)를 갖는, 결합 단백질.
  18. 제1항, 제2항 및 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 결합 단백질이 약 10-7 M 이하; 약 10-8 M 이하; 약 10-9 M 이하; 약 10-10 M 이하; 약 10-11 M 이하; 약 10-12 M 이하; 및 10-13 M 이하로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 IL-1β에 대한 해리 상수 (KD)를 갖는, 결합 단백질.
  19. 제1항에 기재된 결합 단백질을 포함하고, 링커 또는 면역글로불린 불변 도메인을 추가로 포함하는, IL-1β 결합 단백질 작제물.
  20. 제19항에 있어서, 상기 IL-1β 결합 단백질이 면역글로불린 분자, 이황화물 연결된 Fv, 단클론 항체, scFv, 키메라 항체, CDR-이식된 항체, 디아바디, 사람화된 항체, 다중특이적 항체, Fab, 이중 특이적 항체, Fab', 이특이적 항체, 및 F(ab')2, 이중 가변 도메인 면역글로불린 (DVD-Ig) 및 Fv로 이루어진 그룹으로부터 선택되는, IL-1β 결합 단백질 작제물.
  21. 제19항에 있어서, 상기 IL-1β 결합 단백질 작제물이, 사람 IgM 불변 도메인, 사람 IgG4 불변 도메인, 사람 IgG1 불변 도메인, 사람 IgE 불변 도메인, 사람 IgG2 불변 도메인, 및 사람 IgG3 불변 도메인, 및 사람 IgA 불변 도메인으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 중쇄 면역글로불린 불변 도메인을 포함하는, IL-1β 결합 단백질 작제물.
  22. 제19항에 있어서, 상기 결합 단백질 작제물이 서열 번호 3, 서열 번호 4, 서열 번호 5 및 서열 번호 6으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 아미노산 서열을 갖는 면역글로불린 불변 도메인을 포함하는, IL-1β 결합 단백질 작제물.
  23. 제19항에 기재된 IL-1β 결합 단백질 작제물을 포함하고, 면역부착 분자, 영상화제, 치료제 및 세포독성제로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 제제를 추가로 포함하는, IL-1β 결합 단백질 접합체.
  24. 제23항에 있어서, 상기 제제가 방사선표지, 효소, 형광성 표지, 발광성 표지, 생물발광성 표지, 자기 표지 및 바이오틴으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 영상화제인, IL-1β 결합 단백질 접합체.
  25. 제24항에 있어서, 상기 방사선표지가 3H, 14C, 35S, 90Y, 99Tc, 111In, 125I, 131I, 177Lu, 166Ho 및 153Sm으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는, IL-1β 결합 단백질 접합체.
  26. 제23항에 있어서, 상기 제제가 항-대사물질, 알킬화제, 항생제, 성장 인자, 사이토킨, 항-혈관형성제, 항-유사분열제, 안트라사이클린, 독소 및 세포사멸제로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 치료제 또는 세포독성제인, IL-1β 결합 단백질 접합체.
  27. 제19항에 있어서, 상기 결합 단백질이 사람 글리코실화 패턴을 보유하는, IL-1β 결합 단백질 작제물.
  28. 제1항에 있어서, 상기 결합 단백질이 결정화된 결합 단백질인, IL-1β 결합 단백질.
  29. 제19항에 있어서, 상기 IL-1β 결합 단백질 작제물이 결정화된 IL-1β 결합 단백질 작제물인, IL-1β 결합 단백질 작제물.
  30. 제23항에 있어서, 상기 IL-1β 결합 단백질 접합체가 결정화된 결합 단백질인, IL-1β 결합 단백질 접합체.
  31. 제28항에 있어서, 상기 결정화된 IL-1β 결합 단백질이 담체-비함유 약제학적 제어 방출형 결정화된 IL-1β 결합 단백질인, 결정화된 IL-1β 결합 단백질.
  32. 제29항에 있어서, 상기 결정화된 IL-1β 결합 단백질 작제물이 담체-비함유 약제학적 제어 방출형 결정화된 IL-1β 결합 단백질 작제물인, 결정화된 IL-1β 결합 단백질 작제물.
  33. 제30항에 있어서, 상기 결정화된 IL-1β 결합 단백질 접합체가 담체-비함유 약제학적 제어 방출형 결정화된 IL-1β 결합 단백질 접합체인, 결정화된 IL-1β 결합 단백질 접합체.
  34. 제28항에 있어서, 상기 결정화된 IL-1β 결합 단백질이 가용성 대응물보다 생체내 반감기가 더 큰, 결정화된 IL-1β 결합 단백질.
  35. 제29항에 있어서, 상기 결정화된 IL-1β 결합 단백질 작제물이, 가용성 대응물보다 더 큰 생체내 반감기를 갖는, IL-1β 결합 단백질 작제물.
  36. 제30항에 있어서, 상기 결정화된 IL-1β 결합 단백질 접합체가, 가용성 대응물보다 더 큰 생체내 반감기를 갖는, 결정화된 IL-1β 결합 단백질 접합체.
  37. 제28항에 있어서, 상기 결정화된 IL-1β 결합 단백질이 생물학적 활성을 유지하는, 결정화된 IL-1β 결합 단백질.
  38. 제29항에 있어서, 상기 결정화된 IL-1β 결합 단백질 작제물이 생물학적 활성을 유지하는, 결정화된 IL-1β 결합 단백질 작제물.
  39. 제30항에 있어서, 상기 결정화된 IL-1β 결합 단백질 접합체가 생물학적 활성을 유지하는, 결정화된 IL-1β 결합 단백질 접합체.
  40. (a) 제28항에 따른 결정화된 IL-1β 결합 단백질, 제29항에 따른 결정화된 IL-1β 결합 단백질 작제물 또는 제30항에 따른 결정화된 IL-1β 결합 단백질 접합체, 및 성분을 포함하는 제형; 및
    (b) 하나 이상의 중합체 담체를 포함하는,
    제28항에 따른 결정화된 IL-1β 결합 단백질, 제29항에 따른 결정화된 IL-1β 결합 단백질 작제물 또는 제30항에 따른 결정화된 IL-1β 결합 단백질 접합체를 방출시키기 위한 조성물.
  41. 제40항에 있어서, 상기 중합체 담체가 폴리(아크릴산), 폴리(시아노아크릴레이트), 폴리(아미노산), 폴리(무수물), 폴리(뎁시펩타이드), 폴리(에스테르), 폴리(락트산), 폴리(락틱-코-글리콜산) 또는 PLGA, 폴리(b-하이드록시부티레이트), 폴리(카프로락톤), 폴리(디옥사논); 폴리(에틸렌 글리콜), 폴리((하이드록시프로필)메타크릴아미드, 폴리[(오가노)포스파젠], 폴리(오르토 에스테르), 폴리(비닐 알코올), 폴리(비닐피롤리돈), 말레산 무수물-알킬 비닐 에테르 공중합체, 플루로닉 폴리올, 알부민, 알기네이트, 셀룰로즈 및 셀룰로즈 유도체, 콜라겐, 피브린, 젤라틴, 하이알루론산, 올리고사카라이드, 글리카미노글리칸, 황산화 다당류, 이들의 블렌드 및 공중합체로 이루어진 그룹 중 하나 이상으로부터 선택되는 중합체인, 조성물.
  42. 제40항에 있어서, 상기 성분이 알부민, 수크로즈, 트레할로즈, 락티톨, 젤라틴, 하이드록시프로필-β-사이클로덱스트린, 메톡시폴리에틸렌 글리콜 및 폴리에틸렌 글리콜로 이루어진 그룹으로부터 선택되는, 조성물.
  43. 제1항에 기재된 결합 단백질 및 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약제학적 조성물.
  44. 제43항에 있어서, 하나 이상의 추가의 제제를 추가로 포함하는, 약제학적 조성물.
  45. 제44항에 있어서, 상기 추가의 제제가 치료제; 영상화제; 세포독성제; 혈관형성 억제제; 키나제 억제제; 동시-자극 분자 차단제; 부착 분자 차단제; 항-사이토킨 항체 또는 이의 기능성 단편; 메토트렉세이트; 사이클로스포린; 라파마이신; FK506; 검출가능한 표지 또는 리포터; TNF 길항제; 항류마티스제; 근육 이완제; 마약; 비-스테로이드성 소염 약물(NSAID); 진통제; 마취제; 진정제; 국소 마취제; 신경근 차단제; 항미생물제; 항건선제; 코르티코스테로이드; 단백동화 스테로이드; 적혈구형성인자; 면역제; 면역글로불린; 면역억제제; 성장 호르몬; 호르몬 대체 약물; 방사성 의약품; 항우울제; 정신병치료제; 자극인자; 천식 의약; 베타 작용제; 흡입성 스테로이드; 에피네프린 또는 이의 유사체; 사이토킨; 및 사이토킨 길항제로 이루어진 그룹으로부터 선택되는, 약제학적 조성물.
  46. 제23항에 기재된 IL-1β 결합 단백질 접합체 및 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약제학적 조성물.
  47. 제46항에 있어서, IL-1β 결합 단백질 접합체가 방사선표지, 효소, 형광성 표지, 발광성 표지, 생물발광성 표지, 자기 표지 및 바이오틴으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 영상화제를 포함하는, 약제학적 조성물.
  48. 제47항에 있어서, 상기 영상화제가 3H, 14C, 35S, 90Y, 99Tc, 111In, 125I, 131I, 177Lu, 166Ho 및 153Sm으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 방사선표지인, 약제학적 조성물.
  49. 제46항에 있어서, 상기 IL-1β 결합 단백질 접합제가 항-대사물질, 알킬화제, 항생제, 성장 인자, 사이토킨, 항-혈관형성제, 항-유사분열제, 안트라사이클린, 독소 및 세포사멸제로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 치료제 또는 세포독성제를 포함하는, 약제학적 조성물.
  50. 제4항에 있어서, 상기 2개의 CDR 세트가 CDR 세트 1 및 CDR 세트 24를 포함하는, 결합 단백질.
  51. 제4항에 있어서, 상기 2개의 CDR 세트가 CDR 세트 4 및 CDR 세트 56을 포함하는, 결합 단백질.
  52. 제4항에 있어서, 상기 2개의 CDR 세트가 CDR 세트 2 및 CDR 세트 56을 포함하는, 결합 단백질.
  53. 제4항에 있어서, 상기 2개의 CDR 세트가 CDR 세트 5 및 CDR 세트 56을 포함하는, 결합 단백질.
  54. 제4항에 있어서, 상기 2개의 CDR 세트가 CDR 세트 3 및 CDR 세트 25를 포함하는, 결합 단백질.
  55. 제11항에 있어서, 상기 하나 이상의 가변 도메인이 서열 번호 196 및 서열번호 197의 아미노산 서열을 포함하는, 결합 단백질.
  56. 제11항에 있어서, 상기 하나 이상의 가변 도메인이 서열 번호 198 및 서열번호 199의 아미노산 서열을 포함하는, 결합 단백질.
  57. 제11항에 있어서, 상기 하나 이상의 가변 도메인이 서열 번호 200 및 서열번호 201의 아미노산 서열을 포함하는, 결합 단백질.
  58. 제11항에 있어서, 상기 하나 이상의 가변 도메인이 서열 번호 202 및 서열번호 203의 아미노산 서열을 포함하는, 결합 단백질.
  59. 제11항에 있어서, 상기 하나 이상의 가변 도메인이 서열 번호 204 및 서열번호 205의 아미노산 서열을 포함하는, 결합 단백질.
  60. 제11항에 있어서, 상기 하나 이상의 가변 도메인이 서열 번호 206 및 서열번호 207의 아미노산 서열을 포함하는, 결합 단백질.
  61. 제11항에 있어서, 상기 하나 이상의 가변 도메인이 서열 번호 208 및 서열번호 209의 아미노산 서열을 포함하는, 결합 단백질.
  62. 제11항에 있어서, 상기 하나 이상의 가변 도메인이 서열 번호 210 및 서열번호 211의 아미노산 서열을 포함하는, 결합 단백질.
  63. 제50항 내지 제62항 중 어느 한 항에 따른 결합 단백질 및 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는, 약제학적 조성물.
KR1020147026771A 2010-05-14 2011-05-13 Ｉｌ－１ 결합 단백질 KR101539684B1 (ko)

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US33491710P 2010-05-14 2010-05-14
US61/334,917 2010-05-14
US201061425701P 2010-12-21 2010-12-21
US61/425,701 2010-12-21
PCT/US2011/036444 WO2011143562A2 (en) 2010-05-14 2011-05-13 Il-1 binding proteins

Related Parent Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020127032684A Division KR101539683B1 (ko) 2010-05-14 2011-05-13 Ｉｌ－１ 결합 단백질

Publications (2)

Publication Number Publication Date
KR20140117706A true KR20140117706A (ko) 2014-10-07
KR101539684B1 KR101539684B1 (ko) 2015-07-27

Family

ID=44911961

Family Applications (3)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020147026771A KR101539684B1 (ko) 2010-05-14 2011-05-13 Ｉｌ－１ 결합 단백질
KR1020127032684A KR101539683B1 (ko) 2010-05-14 2011-05-13 Ｉｌ－１ 결합 단백질
KR1020157008539A KR101848225B1 (ko) 2010-05-14 2011-05-13 Ｉｌ－１ 결합 단백질

Family Applications After (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020127032684A KR101539683B1 (ko) 2010-05-14 2011-05-13 Ｉｌ－１ 결합 단백질
KR1020157008539A KR101848225B1 (ko) 2010-05-14 2011-05-13 Ｉｌ－１ 결합 단백질

Country Status (36)

Country Link
US (10) US8841417B2 (ko)
EP (1) EP2571532B1 (ko)
JP (3) JP5684372B2 (ko)
KR (3) KR101539684B1 (ko)
CN (2) CN103025758B (ko)
AR (1) AR081246A1 (ko)
AU (1) AU2011252883B2 (ko)
BR (2) BR122014011544A2 (ko)
CA (1) CA2799046C (ko)
CL (2) CL2012003187A1 (ko)
CO (1) CO6640269A2 (ko)
CR (1) CR20120581A (ko)
CY (1) CY1120434T1 (ko)
DK (1) DK2571532T3 (ko)
DO (1) DOP2012000288A (ko)
EC (1) ECSP12012307A (ko)
ES (1) ES2635594T3 (ko)
GT (1) GT201200308A (ko)
HR (1) HRP20171144T1 (ko)
HU (1) HUE033063T2 (ko)
IL (1) IL222980B (ko)
LT (1) LT2571532T (ko)
MX (2) MX350723B (ko)
MY (1) MY161302A (ko)
NZ (2) NZ604360A (ko)
PE (1) PE20130205A1 (ko)
PH (1) PH12016501036A1 (ko)
PL (1) PL2571532T3 (ko)
PT (1) PT2571532T (ko)
RS (1) RS56316B1 (ko)
RU (1) RU2615173C2 (ko)
SG (2) SG10201509747VA (ko)
SI (1) SI2571532T1 (ko)
TW (3) TWI522365B (ko)
UY (1) UY33386A (ko)
WO (1) WO2011143562A2 (ko)

Families Citing this family (78)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2008130587A2 (en) 2007-04-16 2008-10-30 Corium International, Inc. Solvent-cast microneedle arrays containing active
US8883146B2 (en) 2007-11-30 2014-11-11 Abbvie Inc. Protein formulations and methods of making same
CA2726087A1 (en) 2008-06-03 2009-12-10 Tariq Ghayur Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
KR20110110349A (ko) * 2009-01-29 2011-10-06 아보트 러보러터리즈 Ｉｌ-1 결합 단백질
US20120178100A1 (en) * 2009-07-28 2012-07-12 Centocor Ortho Biotech Inc. Serum Markers Predicting Clinical Response to Anti-TNF Alpha Antibodies in Patients with Psoriatic Arthritis
EP3029070A1 (en) 2009-08-29 2016-06-08 AbbVie Inc. Therapeutic dll4 binding proteins
US8398966B2 (en) * 2009-10-15 2013-03-19 Abbvie Inc. IL-1 binding proteins
EP2542582A4 (en) 2010-03-02 2013-12-04 Abbvie Inc THERAPEUTIC PROTEINS LINKING TO DLL4
AU2011248108B2 (en) 2010-05-04 2016-05-26 Corium Pharma Solutions, Inc. Method and device for transdermal delivery of parathyroid hormone using a microprojection array
SI2571532T1 (sl) 2010-05-14 2017-10-30 Abbvie Inc. Proteini, ki vežejo IL-1
KR20130100118A (ko) * 2010-08-03 2013-09-09 아비에 인코포레이티드 이원 가변 도메인 면역글로불린 및 이의 용도
CA2809433A1 (en) 2010-08-26 2012-03-01 Abbvie Inc. Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
KR20130133247A (ko) 2010-12-21 2013-12-06 애브비 인코포레이티드 Ｉｌ-1-알파 및 -베타 이특이적 이원 가변 도메인 면역글로불린 및 이의 용도
CN103596591B (zh) * 2011-02-08 2016-08-24 Abbvie公司 骨关节炎和疼痛的治疗
WO2013078135A2 (en) * 2011-11-21 2013-05-30 Abbott Laboratories Il-1 binding proteins
TW201333035A (zh) 2011-12-30 2013-08-16 Abbvie Inc 針對ｉｌ－１３及／或ｉｌ－１７之雙特異性結合蛋白
US20150023920A1 (en) * 2012-03-29 2015-01-22 Drexel University Novel compositions and methods for preventing or treating cancer metastasis
WO2014011955A2 (en) 2012-07-12 2014-01-16 Abbvie, Inc. Il-1 binding proteins
CN103588878A (zh) * 2012-08-15 2014-02-19 江苏泰康生物医药有限公司 一种人源化抗人白细胞介素1 β单克隆抗体及其制备与应用
CA2890263C (en) 2012-11-01 2020-03-10 Abbvie Inc. Anti-vegf/dll4 dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
SG10201802044RA (en) * 2012-11-01 2018-05-30 Abbvie Inc Stable dual variable domain immunoglobulin protein formulations
CN105073178B (zh) 2012-12-21 2019-07-30 考里安国际公司 用于治疗剂递送的微阵列及其使用方法
US10172789B2 (en) 2013-01-24 2019-01-08 Palvella Therapeutics Llc Compositions for transdermal delivery of mTOR inhibitors
JP2016515093A (ja) * 2013-02-05 2016-05-26 サノフイ 抗体−薬物コンジュゲート療法とともに使用するための免疫イメージング剤
US9989524B2 (en) 2013-02-05 2018-06-05 Sanofi Immuno imaging agent for use with antibody-drug conjugate therapy
WO2014164314A1 (en) 2013-03-12 2014-10-09 Corium International, Inc. Microprojection applicators
EP2968116A1 (en) * 2013-03-15 2016-01-20 Corium International, Inc. Microarray with polymer-free microstructures, methods of making, and methods of use
WO2014150285A2 (en) 2013-03-15 2014-09-25 Corium International, Inc. Multiple impact microprojection applicators and methods of use
EP2968118B1 (en) 2013-03-15 2022-02-09 Corium, Inc. Microarray for delivery of therapeutic agent and methods of use
WO2014144280A2 (en) * 2013-03-15 2014-09-18 Abbvie Inc. DUAL SPECIFIC BINDING PROTEINS DIRECTED AGAINST IL-1β AND / OR IL-17
US20160153973A1 (en) * 2013-07-09 2016-06-02 Lucas David Smith Device and method of rapid linker mediated label-based immunoassays
EP3049442A4 (en) 2013-09-26 2017-06-28 Costim Pharmaceuticals Inc. Methods for treating hematologic cancers
CA2931978A1 (en) 2013-12-02 2015-06-11 Abbvie Inc. Compositions and methods for treating osteoarthritis
RU2019118984A (ru) 2014-01-10 2019-08-06 Анаптисбайо, Инк. Антитела, направленные против интерлейкина-33 (il-33)
JOP20200094A1 (ar) 2014-01-24 2017-06-16 Dana Farber Cancer Inst Inc جزيئات جسم مضاد لـ pd-1 واستخداماتها
JOP20200096A1 (ar) 2014-01-31 2017-06-16 Children’S Medical Center Corp جزيئات جسم مضاد لـ tim-3 واستخداماتها
SI3104853T1 (sl) 2014-02-10 2020-03-31 Respivant Sciences Gmbh Zdravljenje s stabilizatorji mastocitov za sistemske motnje
US20150224078A1 (en) 2014-02-10 2015-08-13 Patara Pharma, LLC Methods for the Treatment of Lung Diseases with Mast Cell Stabilizers
WO2015191783A2 (en) 2014-06-10 2015-12-17 Abbvie Inc. Biomarkers for inflammatory disease and methods of using same
US10624843B2 (en) 2014-09-04 2020-04-21 Corium, Inc. Microstructure array, methods of making, and methods of use
US9993551B2 (en) 2014-09-13 2018-06-12 Novartis Ag Combination therapies of EGFR inhibitors
US9616114B1 (en) 2014-09-18 2017-04-11 David Gordon Bermudes Modified bacteria having improved pharmacokinetics and tumor colonization enhancing antitumor activity
CR20170240A (es) 2014-11-10 2018-04-03 Genentech Inc Anticuerpos anti-interleucina-33 y sus usos
JP7231326B2 (ja) 2014-11-10 2023-03-01 ジェネンテック， インコーポレイテッド Ｉｌ－３３媒介性障害のための治療及び診断方法
US10093733B2 (en) 2014-12-11 2018-10-09 Abbvie Inc. LRP-8 binding dual variable domain immunoglobulin proteins
KR101676542B1 (ko) 2014-12-30 2016-11-16 건국대학교 산학협력단 프로인슐린의 면역학적 용도
TW201710286A (zh) 2015-06-15 2017-03-16 艾伯維有限公司 抗ｖｅｇｆ、ｐｄｇｆ及／或其受體之結合蛋白
WO2017004067A1 (en) 2015-06-29 2017-01-05 Corium International, Inc. Microarray for delivery of therapeutic agent, methods of use, and methods of making
KR20180030180A (ko) * 2015-07-16 2018-03-21 필로겐 에스.피.에이. Il22 면역컨쥬게이트
WO2017027402A1 (en) 2015-08-07 2017-02-16 Patara Pharma, LLC Methods for the treatment of systemic disorders treatable with mast cell stabilizers, including mast cell related disorders
US10238625B2 (en) 2015-08-07 2019-03-26 Respivant Sciences Gmbh Methods for the treatment of mast cell related disorders with mast cell stabilizers
LT3423105T (lt) 2016-03-02 2021-09-10 Eisai R&D Management Co., Ltd. Antikūno-vaisto konjugatai eribulino pagrindu ir jų panaudojimo būdai
CN109563153B (zh) 2016-03-28 2022-09-02 加利福尼亚大学董事会 抗-ryk抗体及使用其的方法
EP3448874A4 (en) 2016-04-29 2020-04-22 Voyager Therapeutics, Inc. COMPOSITIONS FOR TREATING A DISEASE
WO2017189964A2 (en) 2016-04-29 2017-11-02 Voyager Therapeutics, Inc. Compositions for the treatment of disease
CN115317603A (zh) 2016-07-07 2022-11-11 小利兰·斯坦福大学托管委员会 抗体佐剂缀合物
SG10201606949QA (en) 2016-08-19 2018-03-28 Singapore Health Serv Pte Ltd Immunosuppressive composition for use in treating immunological disorders
CA3035528A1 (en) 2016-08-31 2018-03-08 Respivant Sciences Gmbh Cromolyn compositions for treatment of chronic cough due to idiopathic pulmonary fibrosis
RU2760682C2 (ru) 2016-09-08 2021-11-29 Имерго Терапьютикс, Инк. Стабилизаторы тучных клеток лечения гиперцитокинемии и вирусной инфекции
EP3522983A4 (en) 2016-10-07 2020-06-03 Respivant Sciences GmbH CROMOLYNE-BASED COMPOSITIONS FOR THE TREATMENT OF PULMONARY FIBROSIS
WO2018075574A1 (en) 2016-10-18 2018-04-26 Emergo Therapeutics, Inc. Mast cell stabilizers for treatment of chronic inflammatory conditions
EP3312608B1 (en) * 2016-10-24 2019-10-02 Akribes Biomedical GmbH Methods for identifying a non-healing skin wound and for monitoring the healing of a skin wound
US11129906B1 (en) 2016-12-07 2021-09-28 David Gordon Bermudes Chimeric protein toxins for expression by therapeutic bacteria
US11180535B1 (en) 2016-12-07 2021-11-23 David Gordon Bermudes Saccharide binding, tumor penetration, and cytotoxic antitumor chimeric peptides from therapeutic bacteria
EP3565520A4 (en) 2017-01-06 2020-08-19 Palvella Therapeutics, Inc. Anhydrous compositions of MTOR inhibitors and method of use
WO2018156180A1 (en) 2017-02-24 2018-08-30 Kindred Biosciences, Inc. Anti-il31 antibodies for veterinary use
US20210031012A1 (en) * 2018-01-26 2021-02-04 Progenity, Inc. Treatment of a disease of the gastrointestinal tract with a pde4 inhibitor
US11000513B2 (en) 2018-07-02 2021-05-11 Palvella Therapeutics, Inc. Anhydrous compositions of mTOR inhibitors and methods of use
CN109187943B (zh) * 2018-08-24 2021-07-30 四川新健康成生物股份有限公司 一种抗干扰试剂杯以及试剂杯内抗干扰涂层的制备方法
WO2020172622A1 (en) * 2019-02-21 2020-08-27 Washington University Methods of detecting septic arthritis, transient synovitis and osteomyelitis
WO2020190725A1 (en) 2019-03-15 2020-09-24 Bolt Biotherapeutics, Inc. Immunoconjugates targeting her2
CA3137752A1 (en) * 2019-05-02 2020-11-05 Thiolab, Llc, Inhibition of il-1 and il-6 inflammation
KR102503349B1 (ko) 2019-05-14 2023-02-23 프로벤션 바이오, 인코포레이티드 제1형 당뇨병을 예방하기 위한 방법 및 조성물
KR102267495B1 (ko) * 2019-08-07 2021-06-22 연세대학교 산학협력단 미토콘드리아 타겟팅용 폴리펩타이드 및 그 용도
CN110680905A (zh) * 2019-10-24 2020-01-14 内蒙古医科大学第二附属医院 Tslp在制备治疗腰椎间盘突出药物中的应用
CN111057733A (zh) * 2020-01-31 2020-04-24 桂林理工大学 一种从生物质石灰废渣中提取胶原蛋白的方法
WO2021183849A1 (en) 2020-03-13 2021-09-16 Genentech, Inc. Anti-interleukin-33 antibodies and uses thereof
CN111679073B (zh) * 2020-06-17 2021-10-19 南京市妇幼保健院 Klk13在制备诊断宫颈腺癌检测试剂盒上的应用

Family Cites Families (177)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CU22545A1 (es) 1994-11-18 1999-03-31 Centro Inmunologia Molecular Obtención de un anticuerpo quimérico y humanizado contra el receptor del factor de crecimiento epidérmico para uso diagnóstico y terapéutico
US4554101A (en) 1981-01-09 1985-11-19 New York Blood Center, Inc. Identification and preparation of epitopes on antigens and allergens on the basis of hydrophilicity
ATE37983T1 (de) 1982-04-22 1988-11-15 Ici Plc Mittel mit verzoegerter freigabe.
GB8308235D0 (en) 1983-03-25 1983-05-05 Celltech Ltd Polypeptides
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
US4753894A (en) 1984-02-08 1988-06-28 Cetus Corporation Monoclonal anti-human breast cancer antibodies
US4943533A (en) 1984-03-01 1990-07-24 The Regents Of The University Of California Hybrid cell lines that produce monoclonal antibodies to epidermal growth factor receptor
US5807715A (en) 1984-08-27 1998-09-15 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Methods and transformed mammalian lymphocyte cells for producing functional antigen-binding protein including chimeric immunoglobulin
US5128326A (en) 1984-12-06 1992-07-07 Biomatrix, Inc. Drug delivery systems based on hyaluronans derivatives thereof and their salts and methods of producing same
US6492107B1 (en) 1986-11-20 2002-12-10 Stuart Kauffman Process for obtaining DNA, RNA, peptides, polypeptides, or protein, by recombinant DNA technique
EP0229046B1 (fr) 1985-03-30 1994-05-04 BALLIVET, Marc Procede d'obtention d'adn, arn, peptides, polypeptides ou proteines, par une technique de recombinaison d'adn
US4980286A (en) 1985-07-05 1990-12-25 Whitehead Institute For Biomedical Research In vivo introduction and expression of foreign genetic material in epithelial cells
US5618920A (en) 1985-11-01 1997-04-08 Xoma Corporation Modular assembly of antibody genes, antibodies prepared thereby and use
US4699784A (en) 1986-02-25 1987-10-13 Center For Molecular Medicine & Immunology Tumoricidal methotrexate-antibody conjugate
GB8607679D0 (en) 1986-03-27 1986-04-30 Winter G P Recombinant dna product
US5225539A (en) 1986-03-27 1993-07-06 Medical Research Council Recombinant altered antibodies and methods of making altered antibodies
US4946778A (en) 1987-09-21 1990-08-07 Genex Corporation Single polypeptide chain binding molecules
EP0273115B1 (en) 1986-10-22 1994-09-07 Abbott Laboratories Chemiluminescent acridinium and phenanthridinium salts
IL85035A0 (en) 1987-01-08 1988-06-30 Int Genetic Eng Polynucleotide molecule,a chimeric antibody with specificity for human b cell surface antigen,a process for the preparation and methods utilizing the same
EP0307434B2 (en) 1987-03-18 1998-07-29 Scotgen Biopharmaceuticals, Inc. Altered antibodies
US5258498A (en) 1987-05-21 1993-11-02 Creative Biomolecules, Inc. Polypeptide linkers for production of biosynthetic proteins
WO1989006692A1 (en) 1988-01-12 1989-07-27 Genentech, Inc. Method of treating tumor cells by inhibiting growth factor receptor function
US5006309A (en) 1988-04-22 1991-04-09 Abbott Laboratories Immunoassay device with liquid transfer between wells by washing
US5089424A (en) 1988-06-14 1992-02-18 Abbott Laboratories Method and apparatus for heterogeneous chemiluminescence assay
US5223409A (en) 1988-09-02 1993-06-29 Protein Engineering Corp. Directed evolution of novel binding proteins
DE768377T1 (de) 1988-09-02 1998-01-02 Dyax Corp Herstellung und Auswahl von Rekombinantproteinen mit verschiedenen Bindestellen
US5241070A (en) 1988-09-26 1993-08-31 Ciba Corning Diagnostics Corp. Nucleophilic polysubstituted aryl acridinium esters and uses thereof
SE462454B (sv) 1988-11-10 1990-06-25 Pharmacia Ab Maetyta foer anvaendning i biosensorer
KR0184860B1 (ko) 1988-11-11 1999-04-01 메디칼 리써어치 카운실 단일영역 리간드와 이를 포함하는 수용체 및 이들의 제조방법과 이용(법)
US5063081A (en) 1988-11-14 1991-11-05 I-Stat Corporation Method of manufacturing a plurality of uniform microfabricated sensing devices having an immobilized ligand receptor
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
CA2016841C (en) 1989-05-16 1999-09-21 William D. Huse A method for producing polymers having a preselected activity
CA2016842A1 (en) 1989-05-16 1990-11-16 Richard A. Lerner Method for tapping the immunological repertoire
WO1990014443A1 (en) 1989-05-16 1990-11-29 Huse William D Co-expression of heteromeric receptors
AU6430190A (en) 1989-10-10 1991-05-16 Pitman-Moore, Inc. Sustained release composition for macromolecular proteins
JP2571874B2 (ja) 1989-11-06 1997-01-16 アルカーメス コントロールド セラピューティクス，インコーポレイテッド タンパク質マイクロスフェア組成物
GB8928874D0 (en) 1989-12-21 1990-02-28 Celltech Ltd Humanised antibodies
AU7247191A (en) 1990-01-11 1991-08-05 Molecular Affinities Corporation Production of antibodies using gene libraries
US5780225A (en) 1990-01-12 1998-07-14 Stratagene Method for generating libaries of antibody genes comprising amplification of diverse antibody DNAs and methods for using these libraries for the production of diverse antigen combining molecules
US6075181A (en) 1990-01-12 2000-06-13 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
DE69120146T2 (de) 1990-01-12 1996-12-12 Cell Genesys Inc Erzeugung xenogener antikörper
US5427908A (en) 1990-05-01 1995-06-27 Affymax Technologies N.V. Recombinant library screening methods
DK0585287T3 (da) 1990-07-10 2000-04-17 Cambridge Antibody Tech Fremgangsmåde til fremstilling af specifikke bindingsparelementer
GB9015198D0 (en) 1990-07-10 1990-08-29 Brien Caroline J O Binding substance
CA2090126C (en) 1990-08-02 2002-10-22 John W. Schrader Methods for the production of proteins with a desired function
US5135875A (en) 1990-08-15 1992-08-04 Abbott Laboratories Protein precipitation reagent
CA2048302A1 (en) 1990-08-15 1992-02-16 Victoria P. Meucci Solubilization reagent for biological test samples
WO1992003461A1 (en) 1990-08-24 1992-03-05 Ixsys, Inc. Methods of synthesizing oligonucleotides with random codons
US5698426A (en) 1990-09-28 1997-12-16 Ixsys, Incorporated Surface expression libraries of heteromeric receptors
ES2113940T3 (es) 1990-12-03 1998-05-16 Genentech Inc Metodo de enriquecimiento para variantes de proteinas con propiedades de union alteradas.
DE69131017T2 (de) 1990-12-20 1999-07-15 Ixsys Inc Optimierung von bindenden proteinen
DE69233697T2 (de) 1991-03-01 2008-01-24 Dyax Corp., Cambridge Verfahren zur Entwicklung von bindenden Mikroproteinen
JP3854306B2 (ja) 1991-03-06 2006-12-06 メルク パテント ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフトング ヒト化及びキメラモノクローナル抗体
DE69233750D1 (de) 1991-04-10 2009-01-02 Scripps Research Inst Bibliotheken heterodimerer Rezeptoren mittels Phagemiden
JPH06507404A (ja) 1991-05-01 1994-08-25 ヘンリー　エム．ジャクソン　ファウンデイション　フォー　ザ　アドバンスメント　オブ　ミリタリー　メディスン 感染性の呼吸性疾患の治療方法
EP0519596B1 (en) 1991-05-17 2005-02-23 Merck & Co. Inc. A method for reducing the immunogenicity of antibody variable domains
CA2069530A1 (en) 1991-06-03 1992-12-04 Cass J. Grandone Reagent pack for immunoassays
DE4118120A1 (de) 1991-06-03 1992-12-10 Behringwerke Ag Tetravalente bispezifische rezeptoren, ihre herstellung und verwendung
AU2238292A (en) 1991-06-14 1993-01-12 Xoma Corporation Microbially-produced antibody fragments and their conjugates
DE4122599C2 (de) 1991-07-08 1993-11-11 Deutsches Krebsforsch Phagemid zum Screenen von Antikörpern
DK0605522T3 (da) 1991-09-23 2000-01-17 Medical Res Council Fremgangsmåde til fremstilling af humaniserede antistoffer
ES2136092T3 (es) 1991-09-23 1999-11-16 Medical Res Council Procedimientos para la produccion de anticuerpos humanizados.
DK1024191T3 (da) 1991-12-02 2008-12-08 Medical Res Council Fremstilling af autoantistoffer fremvist på fag-overflader ud fra antistofsegmentbiblioteker
ES2202310T3 (es) 1991-12-13 2004-04-01 Xoma Corporation Metodos y materiales para la preparacion de dominios variables de anticuerpos modificados y sus usos terapeuticos.
US5714350A (en) 1992-03-09 1998-02-03 Protein Design Labs, Inc. Increasing antibody affinity by altering glycosylation in the immunoglobulin variable region
US5912015A (en) 1992-03-12 1999-06-15 Alkermes Controlled Therapeutics, Inc. Modulated release from biocompatible polymers
US5733743A (en) 1992-03-24 1998-03-31 Cambridge Antibody Technology Limited Methods for producing members of specific binding pairs
US5352803A (en) 1992-03-30 1994-10-04 Abbott Laboratories 5(6)-methyl substituted fluorescein derivatives
ES2198823T3 (es) 1992-03-30 2004-02-01 Abbott Laboratories Reactivos que permiten la deteccion y la cuantificacion de la tiroxina en muestras de fluido.
ATE381614T1 (de) 1992-07-24 2008-01-15 Amgen Fremont Inc Bildung von xenogenen antikörpern
US5639641A (en) 1992-09-09 1997-06-17 Immunogen Inc. Resurfacing of rodent antibodies
US5736137A (en) 1992-11-13 1998-04-07 Idec Pharmaceuticals Corporation Therapeutic application of chimeric and radiolabeled antibodies to human B lymphocyte restricted differentiation antigen for treatment of B cell lymphoma
US5934272A (en) 1993-01-29 1999-08-10 Aradigm Corporation Device and method of creating aerosolized mist of respiratory drug
AU6132994A (en) 1993-02-02 1994-08-29 Scripps Research Institute, The Methods for producing antibody libraries using universal or randomized immunoglobulin light chains
GB9314098D0 (en) 1993-07-08 1993-08-18 Unilever Plc Apparatus and methods for producing packets
WO1995001997A1 (en) * 1993-07-09 1995-01-19 Smithkline Beecham Corporation RECOMBINANT AND HUMANIZED IL-1β ANTIBODIES FOR TREATMENT OF IL-1 MEDIATED INFLAMMATORY DISORDERS IN MAN
US5959085A (en) 1993-11-23 1999-09-28 Schering Corporation Human monoclonal antibodies against human cytokines and methods of making and using such antibodies
US5565352A (en) 1993-11-24 1996-10-15 Arch Development Corporation Deubiquitinating enzyme: compositions and methods
EP0733070A1 (en) 1993-12-08 1996-09-25 Genzyme Corporation Process for generating specific antibodies
GB9401182D0 (en) 1994-01-21 1994-03-16 Inst Of Cancer The Research Antibodies to EGF receptor and their antitumour effect
DK0744958T3 (da) 1994-01-31 2003-10-20 Univ Boston Polyklonale antistofbiblioteker
US5516637A (en) 1994-06-10 1996-05-14 Dade International Inc. Method involving display of protein binding pairs on the surface of bacterial pili and bacteriophage
ATE306930T1 (de) 1994-08-12 2005-11-15 Immunomedics Inc Für b-zell-lymphom und leukämiezellen spezifische immunkonjugate und humane antikörper
WO1996020698A2 (en) 1995-01-05 1996-07-11 The Board Of Regents Acting For And On Behalf Of The University Of Michigan Surface-modified nanoparticles and method of making and using same
US6091001A (en) 1995-03-29 2000-07-18 Abgenix, Inc. Production of antibodies using Cre-mediated site-specific recombination
US6130364A (en) 1995-03-29 2000-10-10 Abgenix, Inc. Production of antibodies using Cre-mediated site-specific recombination
US5641870A (en) 1995-04-20 1997-06-24 Genentech, Inc. Low pH hydrophobic interaction chromatography for antibody purification
US6019968A (en) 1995-04-14 2000-02-01 Inhale Therapeutic Systems, Inc. Dispersible antibody compositions and methods for their preparation and use
EP0826034A4 (en) 1995-04-21 2002-06-19 Cell Genesys Inc PRODUCTION OF LARGE GENOMIC DNA DELETIONS
ES2304786T3 (es) 1995-04-27 2008-10-16 Amgen Fremont Inc. Anticuerpos anti-il-8 humanos, derivados a partir de xenoratones inmunizados.
EP0823941A4 (en) 1995-04-28 2001-09-19 Abgenix Inc HUMAN ANTIBODIES DERIVED FROM IMMUNIZED XENO MOUSES
CA2222231A1 (en) 1995-06-07 1996-12-19 Imclone Systems Incorporated Antibody and antibody fragments for inhibiting the growth of tumors
EP0850051A2 (en) 1995-08-31 1998-07-01 Alkermes Controlled Therapeutics, Inc. Composition for sustained release of an agent
US6331431B1 (en) 1995-11-28 2001-12-18 Ixsys, Inc. Vacuum device and method for isolating periplasmic fraction from cells
RU2270030C2 (ru) 1996-02-09 2006-02-20 Абботт Байотекнолоджи эЛтиди. СПОСОБ ИНГИБИРОВАНИЯ АКТИВНОСТИ ЧЕЛОВЕЧЕСКОГО TNFα (ВАРИАНТЫ), ПРИМЕНЕНИЕ ВЫДЕЛЕННОГО АНТИТЕЛА ЧЕЛОВЕКА ИЛИ ЕГО АНТИГЕНСВЯЗЫВАЮЩЕГО ФРАГМЕНТА В КАЧЕСТВЕ КОМПОНЕНТА ДЛЯ ПРОИЗВОДСТВА ЛЕКАРСТВЕННОГО СРЕДСТВА (ВАРИАНТЫ) И ВЫДЕЛЕННОЕ ЧЕЛОВЕЧЕСКОЕ АНТИТЕЛО ИЛИ ЕГО АНТИГЕНСВЯЗЫВАЮЩИЙ ФРАГМЕНТ
US5985320A (en) 1996-03-04 1999-11-16 The Penn State Research Foundation Materials and methods for enhancing cellular internalization
US5714352A (en) 1996-03-20 1998-02-03 Xenotech Incorporated Directed switch-mediated DNA recombination
US5874064A (en) 1996-05-24 1999-02-23 Massachusetts Institute Of Technology Aerodynamically light particles for pulmonary drug delivery
US5985309A (en) 1996-05-24 1999-11-16 Massachusetts Institute Of Technology Preparation of particles for inhalation
US5855913A (en) 1997-01-16 1999-01-05 Massachusetts Instite Of Technology Particles incorporating surfactants for pulmonary drug delivery
US6699658B1 (en) 1996-05-31 2004-03-02 Board Of Trustees Of The University Of Illinois Yeast cell surface display of proteins and uses thereof
US5916771A (en) 1996-10-11 1999-06-29 Abgenix, Inc. Production of a multimeric protein by cell fusion method
DK1500329T3 (da) 1996-12-03 2012-07-09 Amgen Fremont Inc Humane antistoffer, der specifikt binder TNF-alfa
PT954282E (pt) 1997-01-16 2005-06-30 Massachusetts Inst Technology Preparacao de particulas para inalacao
WO1998031700A1 (en) 1997-01-21 1998-07-23 The General Hospital Corporation Selection of proteins using rna-protein fusions
US6235883B1 (en) 1997-05-05 2001-05-22 Abgenix, Inc. Human monoclonal antibodies to epidermal growth factor receptor
NZ516848A (en) 1997-06-20 2004-03-26 Ciphergen Biosystems Inc Retentate chromatography apparatus with applications in biology and medicine
WO1999006834A2 (en) 1997-08-04 1999-02-11 Ixsys, Incorporated Methods for identifying ligand specific binding molecules
US5989463A (en) 1997-09-24 1999-11-23 Alkermes Controlled Therapeutics, Inc. Methods for fabricating polymer-based controlled release devices
SE512663C2 (sv) 1997-10-23 2000-04-17 Biogram Ab Inkapslingsförfarande för aktiv substans i en bionedbrytbar polymer
JP2002505097A (ja) 1998-03-03 2002-02-19 アブジェニックス インク． 治療薬としてのｃｄ１４７結合分子
EP1068356B8 (en) 1998-04-03 2007-01-03 Adnexus Therapeutics, Inc. Addressable protein arrays
US20020029391A1 (en) 1998-04-15 2002-03-07 Claude Geoffrey Davis Epitope-driven human antibody production and gene expression profiling
AU3657899A (en) 1998-04-20 1999-11-08 James E. Bailey Glycosylation engineering of antibodies for improving antibody-dependent cellular cytotoxicity
CA2336139C (en) 1998-06-24 2008-10-14 Advanced Inhalation Research, Inc. Large porous particles emitted from an inhaler
US6406921B1 (en) 1998-07-14 2002-06-18 Zyomyx, Incorporated Protein arrays for high-throughput screening
EP1105427A2 (en) 1998-08-17 2001-06-13 Abgenix, Inc. Generation of modified molecules with increased serum half-lives
US6660843B1 (en) 1998-10-23 2003-12-09 Amgen Inc. Modified peptides as therapeutic agents
WO2000034337A1 (en) 1998-12-10 2000-06-15 Tsukuba Research Laboratory, Toagosei Co., Ltd. Humanized monoclonal antibodies against vascular endothelial cell growth factor
KR100856446B1 (ko) 1998-12-23 2008-09-04 화이자 인크. Ｃｔｌａ－４에 대한 인간 단일클론 항체
AU4025300A (en) 1999-03-24 2000-10-09 Packard Bioscience Company Continuous porous matrix arrays
US6914128B1 (en) 1999-03-25 2005-07-05 Abbott Gmbh & Co. Kg Human antibodies that bind human IL-12 and methods for producing
KR101222450B1 (ko) 1999-03-25 2013-01-16 애보트 게엠베하 운트 콤파니 카게 사람 ｉｌ-12에 결합하는 사람 항체 및 이의 제조방법
EP2275540B1 (en) 1999-04-09 2016-03-23 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. Method for controlling the activity of immunologically functional molecule
EP1266009B1 (en) 2000-02-25 2008-12-31 THE GOVERNMENT OF THE UNITED STATES OF AMERICA, as represented by THE SECRETARY, DEPARTMENT OF HEALTH AND HUMAN SERVICES ANTI-EGFRvIII SCFVS WITH IMPROVED CYTOTOXICITY AND YIELD, IMMUNOTOXINS BASED THEREON, AND METHODS OF USE THEREOF
ES2528794T3 (es) 2000-04-11 2015-02-12 Genentech, Inc. Anticuerpos multivalentes y usos de los mismos
CA2407956A1 (en) 2000-05-03 2001-11-08 Amgen Inc. Modified peptides as therapeutic agents
CN1239701C (zh) 2000-05-19 2006-02-01 梨树化学株式会社 抗表皮生长因子受体的人源化抗体
US7449308B2 (en) 2000-06-28 2008-11-11 Glycofi, Inc. Combinatorial DNA library for producing modified N-glycans in lower eukaryotes
KR100787073B1 (ko) 2000-06-28 2007-12-21 글리코파이, 인크. 변형된 당단백질의 제조방법
DE60137421D1 (de) 2000-06-29 2009-03-05 Abbott Lab Antikörper mit zwei spezifizitäten und verfahren zur deren herstellung und verwendung
KR20030074693A (ko) 2000-12-28 2003-09-19 알투스 바이올로직스 인코포레이티드 전항체 및 이의 단편의 결정과 이의 제조 및 사용 방법
JP2002270125A (ja) 2001-03-07 2002-09-20 Hitachi Ltd 高電圧電気機器
CN100497389C (zh) 2001-06-13 2009-06-10 根马布股份公司 表皮生长因子受体(egfr)的人单克隆抗体
WO2003016466A2 (en) 2001-08-17 2003-02-27 Eli Lilly And Company ANTI-Aβ ANTIBODIES
EP1438400B1 (en) 2001-10-01 2009-06-17 Dyax Corp. Multi-chain eukaryotic display vectors and uses thereof
ES2326964T3 (es) 2001-10-25 2009-10-22 Genentech, Inc. Composiciones de glicoproteina.
AU2002346373A1 (en) 2001-11-09 2003-05-19 Idec Pharmaceuticals Corporation Anti-cd80 antibody having adcc activity for adcc mediated killing of b cell lymphoma cells alone or in combination with other therapies
DE10156482A1 (de) 2001-11-12 2003-05-28 Gundram Jung Bispezifisches Antikörper-Molekül
US7419821B2 (en) 2002-03-05 2008-09-02 I-Stat Corporation Apparatus and methods for analyte measurement and immunoassay
EP1513879B1 (en) * 2002-06-03 2018-08-22 Genentech, Inc. Synthetic antibody phage libraries
ES2368733T3 (es) 2002-07-18 2011-11-21 Merus B.V. Producción recombinante de mezclas de anticuerpos.
US20040018577A1 (en) 2002-07-29 2004-01-29 Emerson Campbell John Lewis Multiple hybrid immunoassay
DE60332957D1 (de) 2002-12-16 2010-07-22 Genentech Inc Immunoglobulinvarianten und deren verwendungen
GB0303337D0 (en) * 2003-02-13 2003-03-19 Celltech R&D Ltd Biological products
CA2517145C (en) 2003-03-05 2017-08-01 Halozyme, Inc. Soluble hyaluronidase glycoprotein (shasegp), process for preparing the same, uses and pharmaceutical compositions comprising thereof
US20060104968A1 (en) 2003-03-05 2006-05-18 Halozyme, Inc. Soluble glycosaminoglycanases and methods of preparing and using soluble glycosaminogly ycanases
EP1660534A2 (en) 2003-08-22 2006-05-31 MedImmune, Inc. Humanization of antibodies
US7723099B2 (en) 2003-09-10 2010-05-25 Abbott Point Of Care Inc. Immunoassay device with immuno-reference electrode
US7682833B2 (en) 2003-09-10 2010-03-23 Abbott Point Of Care Inc. Immunoassay device with improved sample closure
US7968684B2 (en) * 2003-11-12 2011-06-28 Abbott Laboratories IL-18 binding proteins
AU2005233387B2 (en) 2004-04-15 2011-05-26 Glycofi, Inc. Production of galactosylated glycoproteins in lower eukaryotes
US7976841B2 (en) 2004-04-30 2011-07-12 Institut National De La Sante Et De La Recherche Anti TfR antibody
EP1877075A4 (en) 2005-04-25 2008-07-30 Pfizer ANTIBODIES DIRECTED AGAINST MYOSTATIN
US7700739B2 (en) 2005-06-30 2010-04-20 Abbott Laboratories IL-12/p40 binding proteins
CN109187944A (zh) 2005-08-02 2019-01-11 埃克斯生物科技公司 使用IL-1α自身抗体诊断、治疗和预防血管疾病
RU2515108C2 (ru) * 2005-08-19 2014-05-10 Эббви Инк Иммуноглобулин с двойными вариабельными доменами и его применения
US7612181B2 (en) 2005-08-19 2009-11-03 Abbott Laboratories Dual variable domain immunoglobulin and uses thereof
US20090215992A1 (en) 2005-08-19 2009-08-27 Chengbin Wu Dual variable domain immunoglobulin and uses thereof
JP2009513645A (ja) * 2005-10-26 2009-04-02 ノバルティス アクチエンゲゼルシャフト ＩＬ−１β化合物の新規使用
WO2007077042A1 (en) 2006-01-06 2007-07-12 Topotarget Switzerland Sa New method for the treatment of gout or pseudogout
MEP39508A (en) 2006-04-21 2011-02-10 Novartis Ag Antagonist anti-cd40 antibody pharmaceutical compositions
CN102580086A (zh) 2006-05-22 2012-07-18 埃克斯生物科技公司 使用抗IL-1α抗体治疗癌症
US7883855B2 (en) 2006-07-21 2011-02-08 Abbott Laboratories Immunosuppressant drug extraction reagent for immunoassays
US8455626B2 (en) 2006-11-30 2013-06-04 Abbott Laboratories Aβ conformer selective anti-aβ globulomer monoclonal antibodies
WO2008082984A2 (en) 2006-12-29 2008-07-10 Abbott Laboratories Non-denaturing lysis reagent for use with capture-in-solution immunoassay
EP2114443A4 (en) * 2006-12-29 2011-08-10 Abbott Lab IL-1A / IL-1B ANTIBODY WITH DOUBLE SPECIFICITY
US7906293B2 (en) 2007-04-09 2011-03-15 Abbott Laboratories Acridinium phenyl esters useful in the analysis of biological
JP5522405B2 (ja) * 2008-04-25 2014-06-18 協和発酵キリン株式会社 安定な多価抗体
NZ590033A (en) 2008-05-30 2011-08-26 Xbiotech Inc Interleukin-1alpha antibodies and methods of use
CA2726087A1 (en) * 2008-06-03 2009-12-10 Tariq Ghayur Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
EP2326347A4 (en) 2008-09-12 2013-03-06 Xbiotech Inc TARGETING PATHOGENIC MONOCYTES
TW201028432A (en) 2008-09-30 2010-08-01 Abbott Lab Improved antibody libraries
CN105388293A (zh) 2008-12-31 2016-03-09 雅培医护站股份有限公司 用于使用核苷酸缀合物的免疫测定的方法和设备
EP2810652A3 (en) 2009-03-05 2015-03-11 AbbVie Inc. IL-17 binding proteins
SI2571532T1 (sl) 2010-05-14 2017-10-30 Abbvie Inc. Proteini, ki vežejo IL-1
KR20130100118A (ko) * 2010-08-03 2013-09-09 아비에 인코포레이티드 이원 가변 도메인 면역글로불린 및 이의 용도

Also Published As

Publication number Publication date
US20170058027A1 (en) 2017-03-02
CA2799046A1 (en) 2011-11-17
UY33386A (es) 2011-12-30
CA2799046C (en) 2019-06-11
JP5881766B2 (ja) 2016-03-09
TWI500427B (zh) 2015-09-21
HRP20171144T1 (hr) 2017-10-06
HUE033063T2 (hu) 2017-11-28
EP2571532A2 (en) 2013-03-27
US9441038B2 (en) 2016-09-13
KR101539684B1 (ko) 2015-07-27
DOP2012000288A (es) 2013-02-15
CL2016000333A1 (es) 2016-10-07
PE20130205A1 (es) 2013-03-24
MX350723B (es) 2017-09-14
US20140212925A1 (en) 2014-07-31
US20190389945A1 (en) 2019-12-26
US20110280800A1 (en) 2011-11-17
RU2615173C2 (ru) 2017-04-04
TWI522365B (zh) 2016-02-21
TW201446801A (zh) 2014-12-16
US8664367B2 (en) 2014-03-04
AR081246A1 (es) 2012-07-18
KR20130109966A (ko) 2013-10-08
US9409986B2 (en) 2016-08-09
US20140220020A1 (en) 2014-08-07
US9303085B2 (en) 2016-04-05
ECSP12012307A (es) 2012-12-28
AU2011252883A1 (en) 2013-01-10
EP2571532B1 (en) 2017-05-03
JP2014168474A (ja) 2014-09-18
CO6640269A2 (es) 2013-03-22
JP2013532959A (ja) 2013-08-22
JP6189980B2 (ja) 2017-08-30
SG185502A1 (en) 2012-12-28
KR101848225B1 (ko) 2018-04-12
PH12016501036A1 (en) 2019-09-02
ES2635594T3 (es) 2017-10-04
CY1120434T1 (el) 2019-07-10
PT2571532T (pt) 2017-08-04
US20130195754A1 (en) 2013-08-01
WO2011143562A3 (en) 2012-03-01
KR101539683B1 (ko) 2015-07-30
CN103025758A (zh) 2013-04-03
RU2012154210A (ru) 2014-06-20
AU2011252883B2 (en) 2015-09-10
IL222980A0 (en) 2013-02-03
SI2571532T1 (sl) 2017-10-30
MY161302A (en) 2017-04-14
BR112012031071B1 (pt) 2021-08-10
MX2012013187A (es) 2013-03-22
TW201138809A (en) 2011-11-16
CR20120581A (es) 2013-04-08
CN104804089A (zh) 2015-07-29
SG10201509747VA (en) 2015-12-30
GT201200308A (es) 2014-03-14
CL2012003187A1 (es) 2013-07-12
JP5684372B2 (ja) 2015-03-11
NZ604360A (en) 2014-09-26
BR122014011544A2 (pt) 2019-08-13
IL222980B (en) 2019-05-30
WO2011143562A2 (en) 2011-11-17
US8841417B2 (en) 2014-09-23
NZ628792A (en) 2016-03-31
LT2571532T (lt) 2017-08-10
EP2571532A4 (en) 2013-11-20
US20230112863A1 (en) 2023-04-13
KR20150041195A (ko) 2015-04-15
CN103025758B (zh) 2017-01-18
US9447184B2 (en) 2016-09-20
US20140205562A1 (en) 2014-07-24
RS56316B1 (sr) 2017-12-29
BR112012031071A2 (pt) 2018-06-19
JP2016136945A (ja) 2016-08-04
PL2571532T3 (pl) 2017-10-31
TW201636365A (zh) 2016-10-16
US9447183B2 (en) 2016-09-20
US20140099671A1 (en) 2014-04-10
US20140212379A1 (en) 2014-07-31
TWI615405B (zh) 2018-02-21
DK2571532T3 (en) 2017-08-28

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP6189980B2 (ja) Ｉｌ−１結合タンパク質
TWI541021B (zh) Ｉｌ－１７結合蛋白
US20140348838A1 (en) Il-1 binding proteins
TW201323440A (zh) 抗骨硬化素（ｓｃｌｅｒｏｓｔｉｎ）之免疫結合物
AU2016222339B2 (en) IL-1 binding proteins
AU2015215878A1 (en) IL-1 binding proteins

Legal Events

Date Code Title Description
A107 Divisional application of patent
A201 Request for examination
A302 Request for accelerated examination
E902 Notification of reason for refusal
E701 Decision to grant or registration of patent right
GRNT Written decision to grant
FPAY Annual fee payment

Payment date: 20180628

Year of fee payment: 4

FPAY Annual fee payment

Payment date: 20190624

Year of fee payment: 5