KR20140030136A - 2차원 특징부를 이용한 측방 유동 분석법 - Google Patents

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브렌단 오파렐
토마스 씨. 타이슨
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심볼릭스 엘엘씨
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Abstract

본 발명은 2차원 특징부, 좋기로는 균일한 2차원 검사 및 대조 특징부를 이용하는 신규한 측방 유동 장치 및 측방 유동 장치를 이용하여 피검물을 검사하기 위한 방법, 및 측방 유동 장치를 제조하는 방법에 관한 것이다.

Description

2차원 특징부를 이용한 측방 유동 분석법{LATERAL FLOW ASSAYS USING TWO DIMENSIONAL FEATURES}
I. 관련 출원에 대한 교차 참조
[0001] 이 출원은 2011년 1월 18일자 미국 가특허출원 No. 61/461,499, filed January 18, 2011, 및 2012년 1월 4일자 미국 가특허출원 No. 13/343,681에 기초한 우선권 주장 출원으로서 상기 출원들의 내용은 그 전부가 본 발명에 참조 통합되었다.
II . 기술분야
[0002] 본 발명은 2차원 특징부(two dimensional features), 좋기로는 균일한 2차원 검사 및 대조 특징부를 이용한 신규한 측방 유동 장치 및 이 측방 유동 장치를 이용한 피검물의 검사 방법, 및 측방 유동 장치를 제조하는 방법에 관한 것이다.
III . 발명의 배경
[0003] 측방 유동 분석법은 인간을 대상으로 하는 비포도당 속성 검사법 시장에서 우위를 점하는 검사법이며, 이 밖에도 예컨대 수의용 진단검사, 농원예용 검사법, 세균전 검사 및 식품안전 검사를 비롯하여 신속한 검사 결과를 필요로 하는 분야에서 널리 사용되고 있다.
[0004] 측방 유동 분석 시스템 (LFIA)의 장점은 익히 알려져 있다 (표 1 참조). 여러 장점 중에서도 특히 중요한 장점은, 이 시스템이 시장에 신속하게 반영되고 비교적 적은 비용을 필요로 하며, 광범위한 응용 분야를 갖는, 현장 기술과 적절한 캐어 시점을 대표한다는 것이다.
Figure pct00001
[0005] 전통적으로 고안된 측방 유동 분석법은 대부분 낮은 감도와 재현성 불량으로 인하여 그 성능이 제한되어 있다. 이에 더해, 표준 포맷의 측방 유동 분석법은 검사선과 대조선 대역이 존재하는지 또는 부재하는지의 형태로 결과를 제공하는데 이는 육안으로 해석되어야 하는 결과이다. 이러한 주관적인 해석은 종종 난해하고 부정확하게 읽힐 위험이 있다. 이러한 한계는 전통적인 개발 및 제조 실무, 재료, 표지 및 육안 검사 시스템의 지속적인 사용에 의해 악화일로에 있다. 시스템 내의 피검물의 존재 또는 부재를 가리키는 연속선과 같은 선형 특징부의 생성에 의존하는 것은 동일 물질에 대한 다른 특징부들의 재생가능한 형성을 저해할 수 있는 많은 기계적 인자들의 기능이다. 많은 경우에 있어서, 하나의 샘플에서 복수종의 반응을 검사하는 것이 (다중화, 멀티플렉싱:multiplexing) 요망되고 있다. 선형 특징부를 이용할 경우, 이러한 멀티플렉싱이 어려우며, 경쟁 분석 결과의 해석이 오히려 반 직관적이고, 분석 결과에 사용자의 실수를 통한 변동성이 더해진다.
[0006] 또한, 종종 실험정보 시스템 (LIS)과 연관된 정량법 및 객관적인 판독/z레코드 기술은 증가하는 속도로 실시된다. 동일한 검사 시스템으로 두 가지 이상의 피검물의 검출이 요구되는 다중 시스템에 대한 요구 역시도 늘어나고 있는 추세이다. 현행의 측방 유동 검사 시스템은 일반적으로 이러한 요구 사항에 부응하지 못한다.
[0007] 현행의 측방 유동 분석 장치 및 방법의 한계는 비교적 저사양 검사법에 대한 이들의 응용력을 실제로 제한시켜왔다. 높은 감도, 정량 및 다중화를 필요로 하는 보다 난이도 높은 시스템과 직관적이고 신속하며 용이한 결과 해석이 요구되는, 군용, 소비자, 환경 또는 수의 학 분야의 검사와 같은 수많은 분야의 시장에 있어서, 현행의 측방 유동 시스템은 적절치 못하다.
[0008] 따라서, 현재 이용되는 기술과 방법론의 한계를 극복하고, 해석 오차를 일으킬 위험이 적으며, 정량적인 결과를 낼 수 있고, 재현가능하며, 다중화될 수 있고, 많은 시장 분야에 적용가능한 장치와 방법이 요구되고 있다. 본 발명은 이러한 요구사항 및 관련된 요구사항을 만족한다.
[0009] 본 발명은 이러한 장치를 제공하며, 비제한적인 예로서, 테스트 결과를 대표하는 독특한 지표(indicia)의 형태로 쉽게 해석가능한 결과를 제공할 수 있는, 신속한 분석을 가능케 하는 방법을 비롯한 분석법을 제공한다. 지표는 육안 또는 리더(reader)가 볼 수 있는 표준화된 심볼일 수 있고 또는 특수한 리더 장치에 의해 해석가능한 암호화된 지표일 수도 있다. 지표는 분석 유동 방향에 대해 어떠한 배향으로든 전개될 수 있다. 지표는 또한 분석법 및 시약 설계에 따라, 정성적 결과 (양성 또는 음성), 반정량적 또는 정량적인 결과를 나타낼 수도 있다.
측방 유동 분석법 포맷
[0010] 도 1은 이러한 측방 유동 분석법의 전형적인 배치도이다. 전통적으로 설계된 분석법은 압력 감지형 접착제를 이용하여 카드 뒷면에 서로 중첩 장착된, 각각 1 이상의 목적에 알맞은 다양한 물질들로 구성되어 있다.
[0011] 검사 장치는 대개 서로 다른 물질로 된 개별적인 세그먼트로 구성되어 있는 수개의 대역으로 이루어져 있는데, 이들 각각에 대하여 간략히 설명하기로 한다. 검사가 수행되는 동안, 검사하고자 하는 물질의 샘플(샘플)을 샘플 적용 패드 상의 스트립 근위 말단부에 부가한다. 여기서, 샘플을 첨가된 소정의 시약으로 처리하여, 나머지 검사에 적합하게 만든다. 처리된 샘플의 액상 구성요소들 (이들은 용해, 현탁, 유화되거나 또는 달리 액체화된 포맷일 수 있다)은 검사 장치의 다음 세그먼트, 즉 접합체 패드(Conjugate Pad)로 이동한다. 여기에는 일반적으로 시그널 분자 또는 입자(대개 콜로이드형 금이거나 또는 착색된 형광 또는 상자성 단분산 라텍스 입자이다 에 수동 또는 공유적으로 결합된 단백질로 이루어진 검사 시약이 고정되어 있다. 시그널 시약은 또한 비미립자 (non-particulates) (예컨대, 직접 표지된 플루오로포어 겔)를 비롯한, 또 다른 시약일 수도 있다. 이 표지는 특정 검사 장치의 분석 포맷에 따라, 항원 또는 항체인 분석법의 특이적인 생물학적 성분들 중 하나에 접합되어 있다. 액상 샘플은 건조된 접합체 물질을 재고정시켜 이것을 액상 샘플 물질 내로 통합시키는데, 샘플 중의 피검물과 접합체 두 가지 모두가 검사 스트립의 다음 섹션, 즉 반응 매트릭스(Reaction Matrix)로 이동함에 따라, 샘플 중의 피검물이 접합체와 상호반응한다. 반응 매트릭스는 시약 및 대조물(control)에 액체를 전달할 목적으로, 일반적으로 친수성의 개방형 구조를 갖는 다공성 막인데, 전형적으로 상기 막 위에는 일반적으로 그 위에 해당 분석법의 다른 특이적인 생물학적 성분들이 고정되어 있다. 이들은 대개 항체 또는 항원인 단백질로서, 막의 특정 영역 내의 밴드 또는 스트립에 놓여 있는데, 여기서 이들은 포획선을 통해 또는 포획선(capture lines)을 따라 이동함에 따라, 액상 샘플, 피검물 및 접합체의 성분들을 포획하는 역할을 한다. 과량의 액상 물질 (샘플 및 시약)들은 포획선을 지나 스트립을 통해 계속 이동하여 윅(Wick) 또는 흡수체 패드에 포획된다. 검사 결과는 반응 매트릭스 상에 전개되며 포획된 접합체의 존부 지표(indicia: 대체로 연속선임)로서 표시되는데 이것은 육안으로 읽거나 또는 리더 장치를 이용하여 읽는다.
[0012] 분석 포맷은 특성상 종종 샌드위치형(직접) 또는 경쟁형(경쟁 억제)이며, 정성, 반정량적 또는 특수한 경우, 완전히 정량적인 분석이 가능하다.
[0013] 직접 분석 포맷은 일반적으로 hCG, 뎅그(Dengue) 항체 또는 항원, 또는 HIV와 같이 다중 항원 부위를 갖는 크기가 큰 피검물을 검사할 때 사용된다. 이 경우, 검사선이 존재하면 양성 결과를 가리키는 것이다. 접합체 입자들 중 일부는 포획선에서 포획되지 않고, 계속 흘러서 고정된 항체, 대조선의 제2선까지 유동한다. 이 대조선은 일반적으로 접합체 상의 접합체 항체에 특이적인 종-특이적 항면역글로불린 항체로 이루어진다.
[0014] 경쟁적 분석 포맷은 일반적으로, 동시에 2개의 항체에 결합하지 못하는, 단일의 항원 결정인자를 갖는 작은 분자들을 검사하는데 이용된다. 이 포맷에서는, 반응 매트릭스 상의 검사선이 부재하면 양성 결과를 나타내는 것이다. 검사선 상의 결과와 관계없이, 대조선은 여전히 형성된다. 이들 두가지 포맷을 도 2a 및 2b에 도식적으로 나타냈다..
측방 유동 시스템에서의 유체 이동 및 시그널 전개
[0015] 현행의 측방 유동 검사 장치의 기능은 도 1에 도시된 바와 같이, 샘플 도임 패드로부터 흡수체 패드까지, 검사 스트립의 길이 방향을 따라 흐르는 액체의 모세관 유동에 기초한다. 따라서, 유동 기하학과 모세관 추진력은 반응 매트릭스 및 검사선과 대조선을 통한, 기본적으로 1차원적인 것이다. 니트로셀룰로스 막은 측방 유동 검사에서 널리 사용되는 반응 매트릭스이다. 측방 유동 장치에서 검사선 및 대조선은 일반적으로 단백질로 만들어지지만, 선형 포맷으로 반응 매트릭스에 결합하여, 일반적으로 유동 방향에 수직 배향되는 다른 유형의 바이오마커일 수도 있다.
[0016] 반응 매트릭스로서의 니트로셀룰로스의 가공 및 용법을 설명하는 한가지 예를 이 선형 포맷에 관한 사항들과 함께 설명한다.
[0017] 목적: 측방 유동 분석법에서 반응 매트릭스의 목적은 검사 및 대조 영역에서 단백질 또는 기타 포획 시약을 결합시키고, 이들의 안정성과 활성을 제품의 보관 기간 내내 유지시키는 데 있다. 검사가 실시되면, 이 매트릭스는 접합체 패드로부터 접합체 및 샘플을 수용하여, 이들을 반응 영역으로 지속적으로 흘려보내, 검사선과 대조선에서 반응이 일어나도록 하며, 과량의 유체, 표지 및 반응물들이 결합되지 않고 방출되게끔 하여야 한다.
[0018] 재료: 역사적으로 대다수의 측방 유동 분석 시스템에서 선택된 물질은 니트로셀룰로스였다. 나일론 및 PVDF 막을 비롯한 다른 유형의 재료를 시장에 도입하려는 시도가 있어왔지만, 비용, 제한적인 용도, 새로운 화학 및 프로세싱과 관련한 교육의 필요성, 및 니트로셀룰로스 사용과 관련하여 존재하는 다대한 경험에 따른 관성을 비롯한 인자들로 인해, 이러한 시도는 제한적인 성공을 거두었을 뿐이다. 제어된 방식으로 매트릭스 표면 상에 반응물을 유동시키는, 제어된 접촉각을 갖는 플라스틱 재료를 비롯한 기타 재료들도 개발 중에 있다.
[0019] 니트로셀룰로스는 기능이 매우 뛰어나긴 하지만, 항상 LFIA'의 분석 막을 위한 이상적인 매트릭스라고는 할 수 없다. 이것은 분명 어떤 유용한 특징을 가지고 있고, 오늘날까지 성공적으로 그리고 널리 사용되어 온 유일한 재료로서 남아 있다. 이러한 특징으로는 비교적 저렴한 단가, 진정한 모세관 유동 특징, 높은 단백질 결합능, 상대적으로 용이한 조작법(직접 캐스트법 또는 지지형 막), 및 다양한 위킹 속도 및 계면활성제 함량을 갖는 다양한 제품 이용성을 들 수 있다. 그러나, 이 재료는 또한 이것의 응용을 불완전하게 하는 다른 여러 특징들도 지니고 있다. 이러한 특징으로는 로트별로 성능의 재현성이 불완전하다는 것, 저장 기간 문제, 인화성(주로 비지지형 막의 경우), 상대습도와 같은 주변환경 조건에 기인하는 가변적 특징들 및 잘 부서진다는 점 (비지지형의 경우), 프로세싱 동안 압축 및 스코어링되기 쉽다는 점을 들 수 있다.
[0020] 이 물질이 가지고 있는 이러한 문제점으로 인해, 개발자와 제조업자는 이러한 내재적인 문제점을 극복하기 위한 화학을 최적화하고, 이 제품의 보관기간 전반에 걸쳐, 적합한 성능을 보장해주는 제조 기술을 개발하는데 막대한 시간과 노력을 기울여 왔다. 완제품 내로 부가적인 배리에이션이 유입되는 것을 방지하기 위해 막의 화학적 및 생물학적 처리에 주의를 기울이고, 분배, 침지 및 건조의 핵심 공정을 주의 깊게 제어하는 것이 성공의 주요 관건이다.
[0021] 유동 특성: 측방 유동 시스템의 반응 매트릭스로서 기능하기 위해, 이 재료는 일반적으로 친수성이며 지속적인 유동 특성을 갖는다. 기본 재료로서 니트로셀룰로스는 소수성이므로, 막 제조공정시 재보습제(rewetting agents)를 첨가하여 친수성으로 만든다. 이러한 재보습제는 게면활성제이며, 계면활성제의 양과 종류 및 계면활성제의 첨가법은 제조업체마다 다르고 같은 제조업체 내에서도 브랜드마다 다르다. 막 중의 계면활성제의 양과 종류는 초기 및 경시적으로 분석법의 성능에 영향을 미칠 수 있다. 모든 단백질이 모든 계면활성제와 공용될 수 있는 것은 아니다. 바로 이러한 이유로 개발과정에서 복수 종의 막을 스크리닝 할 필요가 있다. 니트로셀룰로스 막의 유동 특성은 경시적으로 변하는데, 이는 주로 보관시 막의 건조에 기인한다. 니트로셀룰로스 막은 스폰지의 포어가 물에 의해 개공 상태로 유지되는, 스폰지로서 구현될 수 있다. 만일 이 물이 제거되면, 포어가 붕괴하여, 그를 통하여 유체가 위킹(wick)하는 막의 능력이 파괴된다. 이로 인해 경시적으로, 유속에 변화 및 불일치가 야기된다. 그 결과, 니트로셀룰로스에 기초한 분석법은 속도가 분석 감도에 직접 영향을 미치고, 연장된 검사 기간이 거짓 양성 문제를 만들어 낼 수 있기 때문에, 경시적인 성능 특성에 영향을 미칠 수 있다. 이것이 측방 유동 분석법의 가변성의 주요 원인이다.
[0022] 측방 유동 시스템의 적절한 성능을 위해서는 소망되는 위치, 즉 검사선과 대조선에서만 시스템이 반응물질에 결합하는 것이 중요하다. 막의 단백질 결합능, 단백질과의 상호반응 및 단백질 결합 프로세스의 키네틱스는 주어진 단백질 세트를 막에 어떻게 적용할 수 있는지 그리고 결과적인 진단 검사법이 얼마나 민감할지를 결정하는 변수이다. 단백질은 정전 결합, 수소결합 및 소수성 결합의 조합을 통해 니트로셀룰로스에 결합한다. 측방 유동 또는 분석을 통한 유동에 있어서 검사선과 대조선에 대한 면역학적 활성 단백질의 지속적이고도 재현가능한 결합은 민감하고 재생가능한 분석법을 찰출하는데 있어 핵심 요소들 중 한가지이다.
[0023] 막 프로세싱: 니트로셀룰로스는 최종 장치 내로 통합되기 전에 몇몇 프로세스를 거쳐야 하는데, 그 전형적인 예는 정량적 분배기를 이용한 검사선 및 대조선 단백질의 침착(deposition), 대개 고온에서 강제식 공기 오븐을 이용한 건조, 및 블로킹을 위한 침지 프로세스가 그것이다. 검사선 및 대조선 단백질을 설정하기 위해, 접촉식 또는 비접촉식 분배 시스템을 이용하여 단백질로 막을 스트라이프한 다음, 이어서 일반적으로 유속 및 수화 특성을 제어 및 안정화시키고, 비특이적 결합을 방지하기 위해, 블로킹시킨다. 검사선 및 대조선에 사용되는 분배 방법은 가능한 한 정량적이어야 하며, 재료의 수화 또는 흡수 특징의 변동으로 인해 가변적이어서는 아니된다. 비접촉식 분배 방법은 니트로셀룰로스 상에 단백질을 정량적으로 분배하는 가장 우수한 용액을 제공한다. 니트로셀룰로스 막을 블로킹하는 목적은 단백질 및 표지된 접합체가, 이것이 특이적으로 결합할 수 있는 검사선과 대조선 이외의 영역에서 막에 결합하는 것을 방지하는데 있다. 블로킹은 다른 기능도 하는데, 이를테면 막의 수화 상태 유지, 위킹 속도의 변동 및 검사선 및 대조선 단백질의 안정화가 그것이다. 블로킹은 일반적으로 단백질, 계면활성제 및 폴리머를 함유하는 용액 내에 막을 침지시켜 수행하며 비교적 제어되지 않는 공정이다. 블로킹 방법은 보관기간 전체를 통해 최종 제품에 최적의 성능을 부여하도록 주의깊게 최적화 및 제어되어야 한다. 일반적으로 표면의 유체를 제거하기 위한 블로킹과 고온에서의 강제식 환기의 조합에 의해 후속적으로 건조가 수행된다. 이 건조 프로세스 역시 최종 제품에서의 가변성을 최소화하기 위해 주의깊게 최적화 및 제어되어야 한다.
[0024] 이 프로세스에 의해, 반응 매트릭스의 전체 폭 전반에 걸쳐 포획 시약의 결합선(bound lines)이 하나 이상 생성된다. 이 분석법이 수행되는 동안, 유동 샘플/접합체와 반응할 때 결합 단백질 및 후속적인 샌드위치의 형성의 조합이 검사선 및 대조선 영역에서의 유동 저항을 증가시킨다. 유동에 대한 저항은 선 중의 계면활성제가 분배 프로세스에 의해 그 영역으로부터 어느 정도 멀어짐으로 해서, 매트릭스를 통한 유체 유동 측면에서, 그 전후에 비해 영역보다 더 소수성인 선이 막에 나타난다는 사실에 의해 증가될 수 있다.
[0025] 그 결과, 표준 측방 유동 배열에서, 검사 및 대조 특징부는 시스템 내의 유체와 피검물의 유동을 교란시킨다. 장치의 폭 전체를 가로지르는 검사선과 대조선을 사용하는 일차적인 이유의 하나는 상기 교란이 장치의 폭을 통해서도 일어나고 길이 방향의 유동이 균일하고 효과적으로 일차원적으로 유지되도록 하기 위해서이다. 이것은 글자와 숫자(문자-숫자) 를 이용한 심볼 또는 정량적인 지표와 같은, 다른 보다 바람직한 검사 해석 특징부의 형성을 방지한다.
[0026] 현행의 측방 유동 장치 및 이들의 제조 프로세스는 이들의 용도, 정확성 및 재생성을 여러 측면에서 제약한다.
[0027] 1. 다중화(Multiplexing)가 어렵다.
[0028] a. 진단학 관점에서 단일 장치로 복수개의 피검물을 검출할 수 있는 분석법의 창출에 대한 수요가 점점 커지고 있다. 표준 배열에서, 이것은 유동 방향에 수직 방향인 복수개의 선들을 1 밀리미터 이상의 거리로 이격시켜 배치하는 것을 의미한다. 이러한 특성의 다중화된 분석법에서 관찰되는 전형적인 문제점은 하나의 선에서 생성된 시그널이, 접합체가 물리적으로 제한된 다음 선 내로 "흘러들어가(bleed)" 장치에 백그라운드를 생성시켜, 분석 감도를 저하시키고 거짓 양성을 결과시킬 수 있는, 소위 "라인 블리드(line bleed)" 문제이다.
[0029] b. 시스템에서의 각 분석법의 동력학은 서로 다르다. 측방 유동 분석법은 시간 측면에서 극히 민감한 분석법이다. 반응은 샘플과 접합체가 접합체 패드 또는 샘플 패드에서 혼합되지마자 개시되어, 장치를 통해 검사선과 대조선으로 이동이 되는 동안 지속된다. 검사선에서의 반응은 대개 30초 이내로 신속하게 일어난다. 장치를 통한 반응물질의 유속은 분석의 성능에 극히 중요할 수 있다. 분석막, 일반적으로 니트로셀룰로스를 통한 유속은 오리진으로부터의 거리가 멀어짐에 따라 비선형적인 방식으로 감소한다 그 결과, 다중선 분석에서, 제1 포획선까지 첫번째 반응이 도달하는데 걸리는 시간과, 반응이 최후선까지 도달하는데 걸리는 시간은 유의적으로 다를 수 있다. 이것은 다중화된 포맷에서 정량화된 분석을 생성하는 능력을 암시하는 것이다.
[0030] 2. 항체 선택은 매우 높은 친화도 및 "온-레이트(on-rate)" (Kon)를 갖는 항체를 선택하도록 촛점을 맞추어야 한다. 이것은 검사선에서의 반응이 수초 이내로 일어나야만 하기 때문이다. 이 때문에 항체 선택이 어려운데, 이는 서로 다른 결합 특징들을 갖는 항체를 고를 수도 있는 ELISA와 같은 오차가 많은 방법보다는, 보다 노동력을 필요로 하는 도트 블랏(dot blots) 또는 측방 유동 포맷이 사용되어야 함을 의미한다. 이와 같은 고친화도 때문에 유동 방향에서 대형 직경 특징부를 균일하게 전개하는 것이 불가능하다 (유동 방향에서 강도의 구배를 나타낼 수 있는, 선(lines)을 포함한다). 적절히 조합되어 보다 큰 특징부가 되는, 크기가 작은 특징부("픽셀")을 사용하면 이러한 문제를 해결할 수 있다.
[0031] 3. 오직 단일 포맷의 결과가 생성된다 (수평선). 측방 유동 분석법에서 유동 방향에 수직 방향 이외의 다른 모든 방향에서의 문자, 심볼 및 선의 생성은 유동 동력학 및 스트립 내의 접합체 결합에 의해 쉽지 않다. 측방 유동 시스템에서의 대체 형상 생성이 어렵다는 두가지 간단한 예가 도 3 및 도 4에 도시되어 있다 (도트들 및 +).
[0032] a. 도트(Dot): 만일 결합 시약이 막 상에 도트를 형성하면, 시약 플로우 및 결합 시약의 결합 특징들은 도 3에 도시된 바와 같이 일반적으로 다음의 3가지 결과 중 어느 하나에 해당하는 결과를 나타낸다: (a) 도트의 선단에 접합체가 결합되고 도트 형상의 나머지 부분은 채워지지 않은 것을 나타내는 반달 모양의 형상 (이것은 도트를 통한 더 이상의 유동을 방해하는, 선단에서의 고친화도 결합과, 시약의 나머지는 도트 주변에서 최소 저항 경로를 찾아내는 것의 조합을 가리킨다); (b) 채워진, 그러나 일반적으로 균일하지 않은 도트 (이것은 측방 유동 포맷에 최적이 아닌, 저친화도 결합 시약을 가리킨다); 및 (c) 무결합 (이것은 결합 시약의 결합이 비특이적임을 나타내거나 음성 샘플임을 가리킨다)
[0033] b. 플러스/마이너스: 이 포맷의 전형적인 한가지 구체예는 도 4에 도시된 바와 같이, 대조선은 마이너스로서, 그리고 검사선과 대조선의 조합은 플러스로서 나타나는 것이다. 도 4에는 1차원 유동에 평행하게 분배된 검사선에 의해 플러스가 실제로 전개되는 것이 도시되어 있다. 이 경우 플로우 유입부에 가장 근접한 검사선의 말단은 접합체에 의한 최고 전개 수준을 나타내는 반면, 다른 말단은 검사선 가장자리만을 따른 전개만을 나타낸다. 이 경우 접합체는 높은 내부 유동 저항으로 인해 선 내부로 유입하지 않는다. 만일 이 분석에서 검사선과 대조선의 위치가 바뀐 경우에도 동일한 결과가 예상된다.
[0034] 4. 선을 해석하는 것은, 어려우며, 특히 사용자의 육안에 의존해야하는 시스템의 경우에는 더욱 어렵다. 뿐만 아니라, 측방 유동 분석법은 일반적으로 그 폭이 2-8 mm 정도에 지나지 않는다. 전형적인 분석 막은 니트로셀룰로스인데, 이것은 서로 다른 로트들 간은 물론 하나의 로트 내에서도 서로 다른 불균일한 물질이다. 그 결과, 장치의 폭을 따라 불일치하는 선들의 생성을 유발하는, 유동 효과가 흔히 관찰된다. 라인 전개에 있어서 이와 같은 불균일성은 불량한 적층 또는 절단을 비롯하여, 공정과 관련한 인자들에 의하여도 발생할 수 있다. 이러한 불균일한 라인 전개는 또 다른 해석 상의 문제를 일으켜, 판독 시스템을 극히 어렵게 만들 수 있다.
[0035] 1차원 유동의 주요 효과가 도 5(a), (b) 및 (c)에 개략적으로 도시되어 있는데, 여기에는 분배된 단백질의 스팟 형태의 유동 저항이 라인들에 대해 서로 다른 위치에서 분배된 체적을 달리하는 소적들(drops)을 이용하여 검사선 및 대조선 앞에 유동 경로에 위치한다. 검사선의 전개는 단백질 스팟의 수립으로 인해 직접 교란된다. 측방 확산(lateral diffusion)은 시스템에서 일어나지 않지만 특징부의 균일한 전개를 야기하여, 두 개의 특징부들 간의 거리가 충분한 경우에만, 유체가 스팟 후에 도달할 수 있다. 필요한 거리는 막의 포어 크기와 스팟의 거리에 따라 다르지만, 일반적으로 당해 검사의 작업 크기 (working dimensions) 내에서, 해석가능한 글자 숫자 또는 기타 심볼의 형성을 불가능하게 하는 거리이다.
I. DISCLOSURE OF THE INVENTION
[0036] 일 측면에서, 본 발명은 액체 샘플에서 피검물을 검찰하기 위한, 매트릭스 상에 복수개의 시약 도트들을 포함하는 검사 장치를 제공하며, 여기서 상기 시약 도트들 중 적어도 2개는 서로 중첩됨이 없이 서로 충분히 이격되어 있어서, 상기 액체 샘플이 상기 매트릭스를 따라 측방향으로 유동할 때, 상기 2개의 시약 도트들 중 하나로, 하나를 통해 및/또는 하나를 따라 일어나는 상기 액체 샘플의 유동이, 상기 나머지 다른 시약으로의, 나머지 다른 시약을 통한 및/또는 나머지 다른 시약을 따라 일어나는 상기 액체 샘플의 유동에 실질적으로 영향을 미치지 않고, 상기 2가지 시약 도트들 각각은 상기 액체 샘플의 유동 방향에 수직 방향인 상기 매트릭스의 전체 폭에 걸친 시약 라인도 아니고, 시약 라인의 완전한 써클도 아니며, 액체 샘플이 상기 검사 장치를 따라 측방향으로 유동하여 상기 적어도 2개의 시약 도트를 통과한 후, 상기 적어도 2개의 시약 도트들이 소정의 패턴을 형성하여, 상기 액체 샘플 중의 상기 피검물의 존재 여부 및/또는 양을 가리키게끔 되어 있는 것이다.
[0037] 또 다른 측면에서, 본 발명은 상기 검사 장치를 이용한 피검물의 검출 방법을 제공한다. 일 구체예에서, 본 발명은 a) 액체 샘플을 상기 검사 장치와 접촉시키되, 상기 액체 샘플이 적어도 2개의 시약 도트들의 상류의 검사 장치 부분에 적용하는 단계; b) 피검물이 액체 샘플 중에 존재할 경우 피검물을 상기 적어도 2개의 시약 도트에 전달하는 단계; 및 c) 적어도 2개의 시약 도트들에서 생성된 시그널(들)의 존재 여부, 양 및/또는 패턴을 평가하여 액체 샘플 중의 피검물의 존재 여부 및/또는 양을 결정하는 단계를 포함하여 이루어지는, 액체 샘플 중의 피검물을 검사하는 방법을 제공한다. 시약 도트들 중의 시그널(들)은 화학적, 생화학적, 전기화학적 및/또는 피검물과 관련된 결합 반응에 의해 생성될 수 있으며, 시약 도트에 위치하는 시약, 액체 샘플에 첨가된 시약 및/또는 사용 전 검사 장치에 건조된 기타 시약들은 액체 샘플 또는 다른 액체에 의해 시약 도트들로 전달된다.
[0038] 또 다른 구체예에서, 시약 도트들에서의 시그널(들)은 사용 전 검사 장치 상에 건조되거나 또는 액체 샘플에 첨가된 표지된 시약과, 시약 도트들 상에 위치하는 시약 및 피검물을 포함하는 반응물을 결합시킴으로써 생성될 수 있으며 액체 샘플 또는 다른 액체에 의해 시약 도트들로 전달된다. 예를 들어, 이 방법은 액체 샘플을 상기 검사 장치와 접촉시키되, 상기 액체 샘플이 적어도 2개의 시약 도트들의 상류의 검사 장치 부분에 적용하는 단계; b) 피검물이 액체 샘플 중에 존재할 경우 피검물과 표지된 시약을 상기 적어도 2개의 시약 도트에 전달하는 단계; 및 c) 적어도 2개의 시약 도트들에서 생성된 시그널(들)의 존재 여부, 양 및/또는 패턴을 평가하여 액체 샘플 중의 피검물의 존재 여부 및/또는 양을 결정하는 단계를 포함한다.
[0039] 또 다른 측면에서, 본 발명은 액체 샘플에서 피검물을 검출하기 위한 검사 장치의 제조 방법을 제공하는 것으로서, 이 방법은 매트릭스 상에 복수개의 시약 도트들을 형성된 검사 장치를 제조하는 방법으로, 여기서 적어도 2개의 상기 도트들은 서로 중첩됨이 없이 충분히 이격되어 있어서, 상기 액체 샘플이 상기 매트릭스를 따라 측방향으로 유동할 때, 상기 2개의 시약 도트들 중 하나로, 하나를 통해 및/또는 하나를 따라 일어나는 상기 액체 샘플의 유동이, 상기 나머지 다른 시약으로의, 나머지 다른 시약을 통한 및/또는 나머지 다른 시약을 따라 일어나는 상기 액체 샘플의 유동에 실질적으로 영향을 미치지 않고, 상기 2가지 시약 도트들 각각은 상기 액체 샘플의 유동 방향에 수직 방향인 상기 매트릭스의 전체 폭에 걸친 시약 라인도 아니고, 시약 라인의 완전한 써클도 아니며, 액체 샘플이 상기 검사 장치를 따라 측방향으로 유동하여 상기 적어도 2개의 시약 도트를 통과한 후, 상기 적어도 2개의 시약 도트들이 소정의 패턴을 형성하여, 상기 액체 샘플 중의 상기 피검물의 존재 여부 및/또는 양을 가리키게끔 되어 있는 것이다.
[0040] 본 발명의 검사 장치 및 방법의 원리는 기술분야에 공지인 측방 유동 검사 장치 및 분석법에 적용되거나, 적용을 위해 변형될 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 검사 장치 및 방법의 원리는 미국특허 Nos. 3,641,235, 3,959,078, 3,966,897, 4,094,647, 4,168,146, 4,299,916, 4,347,312, 4,366,241, 4,391,904, 4,425,438, 4,517,288, 4,960,691, 5,141,875, 4,857,453, 5,073,484, 4,695,554, 4,703,017, 4,743,560, 5,075,078, 5,591,645, 5,656,448, RE 38,430 E, 5,602,040, 6,017,767, 6,319,676, 6,352,862, 6,485,982, 5,120,643, 4,956,302, RE 39,664 E, 5,252,496, 5,514,602, 7,238,538 B2, 7,175,992 B2, 6,770,487 B2, 5,712,170, 5,275,785, 5,504,013, 6,156,271, 6,187,269, 6,399,398, 7,317,532, EP 0,149,168 A1, EP 0,323,605 A1, EP 0,250,137 A2, GB 1,526,708 및 WO99/40438에 청구 및 기재된 측방 유동 검사 장치 및 분석법에 적용될 수 있다.
VI . 발명의 상세한 설명
A. 정의
[0063] 달리 정의하지 않는 한, 본 발명에 사용된 모든 기술적 및 과학적 용어들은 본 발명이 속한 기술분야의 당업자가 공통적으로 이해하는 바와 동일한 의미를 갖는다. 본 발명에 인용된 모든 특허, 특허출원(공개 또는 비공개), 및 기타 간행물들은 그 내용 전체가 본 발명에 참조되었다. 이 섹션에 제시된 정의가 본 발명에 인용된 특허, 특허출원, 공개된 출원 및 기타 간행물에 설정된 정의와 반대되거나 또는 다른 불일치하는 경우, 이 섹션에 제시된 정의가 인용된 문헌의 정의에 우선한다.
[0064] 본 발명에서 "a" 또는 "an"는 "적어도 하나" 또는 "1개 이상"을 의미한다.
[0065] 본 발명에서, "라인(선:line)이 액체 샘플 유동 방향에 대해 실제로 평형하다"라 함은 그 라인과 액체 샘플 유동 방향 간의 각도가 45도 미만이거나 또는 135도를 초과함을 의미한다. 몇몇 특정 구체예에서, 라인과 액체 샘플 유동 방향간의 각도는 약 40, 35, 30, 25, 20, 15, 10, 5, 4, 3, 2, 또는 1도이거나, 또는 라인이 액체 샘플 유동 방향에 대해 완전히 평행하다. 또 다른 특정 구체예에서, 라인과 액체 샘플 유동 방향간의 각도는 약 140, 145, 150, 155, 160, 165, 170, 175, 176, 177, 178, 또는 179도이거나, 또는 라인이 액체 샘플 유동 방향에 대해 완전히 평행하다.
[0066] 본 발명에서, "라인이 액체 샘플 유동 방향에 대해 실제로 수직이다"라 함은 라인과 액체 샘플 유동 방향 간의 각도가 적어도 45도 보다 크거나 136도 미만임을 의미한다. 몇몇 특정 구체예에서, 라인과 액체 샘플 유동 방향 간의 각도는 약 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 86, 87 88 또는 89도이거나, 또는 라인이 액체 샘플 유동 방향에 대해 완전히 수직이다. 또 다른 특정 구체예에서, 라인과 액체 샘플 유동 방향 간의 각도는 약 130, 125, 120, 115, 110, 105, 100, 95, 94, 93, 92 또는 91도이거나, 또는 라인이액체 샘플 유동 방향에 대해 완전히 수직이다.
[0067] 본 발명에서, "시약 도트들이 실제로 동일한 크기 또는 직경을 갖는다"라 함은 최대 도트와 최소 도트 간의 크기 또는 직경의 차이가 1배 이하이거나 또는 시약 도트의 평균 또는 중앙(median) 크기 또는 직경의 50% 미만임을 의미한다. 몇몇 특이적인 구체예에서, 최대 도트와 최소 도트 간의 크기 또는 직경의 차이는 시약 도트들의 평균 또는 중앙 크기 또는 직경의 45%, 40%, 30%, 20%, 10%, 5%, 또는 1% 이내이다. 또 다른 특정 구체예에서, 시약 도트들의 크기 또는 직경은 서로 같다.
[0068] 본 발명에서, "시약 도트들 간의 거리가 실제로 같다"라 함은 시약 도트들, 종종 인접하는 시약 도트들 간의 거리가 시약 도트 또는 인접하는 시약 도트들 간의 평균 또는 중앙 거리의 50% 편차(variation) 이내임을 의미한다. 몇몇 특정 구체예에서, 시약 도트들 또는 인접하는 시약 도트들 간의 거리는 시약 도트 또는 인접하는 시약 도트들 간의 평균 또는 중앙 거리의 45%, 40%, 30%, 20%, 10%, 5%, 또는 1% 편차 이내이다. 또 다른 특정 구체예에서, 시약 도트들 간의 거리는 동일하다. 이러한 거리 또는 간격은 적절한 수단으로 측정가능하다. 몇몇 특정 구체예에서, 시약 도트들 간의 간격(space) 또는 거리는 시약 도트들 인접하는 시약 도트들의 가장자리 간의 간격 또는 거리로서 측정된다. 또 다른 특정 구체예에서, 간격 또는 거리는 시약 도트들 인접하는 시약 도트들의 중심 또는 유효 중심들 간의 간격 또는 거리로서 측정된다.
[0069] 본 발명에서, "결합 시약(binding reagent)"이라 함은 소망되는 친화도 및/또는 특이성으로 표적이나 피검물에 결합하는 모든 물질을 의미한다. 결합 시약의 비제한적인 예로서 세포, 세포 소기관, 바이러스, 입자, 미립자, 분자, 집괴 또는 그의 복합체, 또는 분자의 집괴 또는 복합체를 들 수 있다. 예시적인 결합 시약으로 아미노산, 펩타이드, 단백질, 예컨대 항체 또는 수용체, 뉴클레오사이드, 뉴클레오타이드, 올리고뉴클레오타이드, 핵산, 예컨대, DNA 또는 RNA, 비타민, 단당류, 올리고당류, 탄수화물, 지질, 압타머 및 그의 복합체를 들 수 있다.
[0070] 본 발명에서, "항체"라 함은 온전한 폴리클로날 또는 모노클로날 항체 뿐만 아니라, 그의 단편 (예컨대 Fab, Fab', F(ab')2, Fv), 단일사슬 (ScFv), 다이아바디, 항체 단편들로 형성된 다중특이적 항체, 그의 돌연변이, 항체 부분을 포함하는 융합 단백질, 요망되는 특이성의 항체 인식부위를 포함하는 면역글로불린 분자의 여하한 기타 변형 배열을 의미한다. 항체로는 모든 클래스의 항체, 예컨대 IgG, IgA, 또는 IgM (또는 그의 서브클래스), 및 특정 클래스에 속하지 않는 항체를 들 수 있다.
[0071] 본 발명에서, "모노클로날 항체"라 함은 실제로 균질한 항체들의 집단으로부터 수득된 항체, 즉, 소량으로 존재하는 자연발생적인 가능한 돌연변이를 제외하고, 동이란 집단을 포함하는 항체들을 의미한다. 본 발명에서, "모노클로날 항체"라 함은 또한 모노클로날 항체들의 기능적 단편들도 의미하는 것이다.
[0072] 본 발명에서, "특이적으로 결합하다"라는 표현은 결합 시약, 예컨대 항체의 특이성을 의미하는 것으로, 정의된 피검물 또는 표적에 우선적으로 결합하는 것을 의미한다. 다른 잠재적인 표적 존재하에서 특정 피검물 또는 표적의 결합 시약 또는 항체에 의해 인식되는 것은 이러한 결합의 한가지 특징이다. 몇몇 구체예에서, 피검물에 특이적으로 결합하는 결합 시약은 검사하고자 하는 샘플 내의 다른 간섭 부분 또는 부분들과의 결합은 회피한다.
[0073] 본 발명에서 "결합을 회피하다"라는 표현은 특정한 결합 시약, 예컨대, 항체 또는 항체 단편들의 특이성과 관련하여 사용된다. 결합 시약, 특정 부분에 대한 결합을 회피하는 항체 또는 항체 단편들은 일반적으로 특이성을 가짐으로 해서, 그 특정 부분의 대부분이 그러한 결합 시약, 항체 또는 항체 단편들과의 결합에 의해 결합하지 않도록 한다. 여기서 대부분이라 함은 특이적인 표적을 검출하기 위한 결합 시약 또는 항체를 이용하는 분석의 간섭 부분과의 허용가능한 교차반응성 백분율 이내의 범위이다. 종종, 본 발명의 결합 시약, 항체 또는 항체 단편은, 비록 보다 높은 비율이 분명히 상정되고 선호되지만, 간섭 부분의 약 90%를 초과하는 결합을 회피한다. 예컨대, 본 발명의 결합 시약, 항체 또는 항체 단편은 간섭 부분의 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 약 99%, 및 약 99% 또는 그 이상의 결합을 회피한다. 이보다 빈도는 낮지만, 본 발명의 결합 시약, 항체 또는 항체 단편은 간섭 부분의 70% 초과, 또는 약 75% 초과, 또는 약 80% 초과, 또는 약 85% 초과의 결합을 회피한다.
[0074] 본 발명에서, "포유동물" 이라 함은 포유류 강에 속하는 모든 종을 가리킨다. 종종, "포유동물"이라 함은 본 발명에서 인간, 인간 대상자 또는 인간 ㅎ환자를 가리킨다.
[0075] 본 발명에서, "대상자(subject)"라 함은 특정한 종 또는 샘플 유형으로 한정되지 않는다. 예를 들어, "대상자"라는 용어는 환자, 종종 인간 환자를 ㄱ가리킨다. 그러나, 이 용어는 인간으로 한정되는 것은 아니며, 따라서, 다양한 포유동물 종들을 모두 포괄한다.
[0076] 본 발명에서 "샘플"이는 용어는 검사를 수행하고자 하는 피검물을 함유할 수 있는 것이면 무엇이든 이에 해당한다. 샘플은 생물학적 샘플, 예컨대 생물학적 유체(fluid) 또는 생물학적 조직일 수 있다. 생물학적 유체의 예로는 뇨, 혈액, 혈장, 혈청, 타액, 정액, 대변, 가래, 뇌척수액, 눈물, 점액, 양수 등을 들 수 있다. 생물학적 조직은 세포의 집괴로서, 대개 인간, 동물, 식물, 세균, 진균 또는 바이러스 구조물의 구조적 물질의 하나를 형성하는 세포내 물질들과의 특정 종류의 집괴로서 연결조직, 상피조직, 근육조직 및 신경 조직 등이 이에 해당한다. 생물학적 조직의 예에는 또한 장기, 종양, 림프절, 동맥 및 개별적인 세포(들)도 포함된다.
[0077] 본 발명에서, 핵산 혼성화 반응의 "스트린젠시(stringency)"는 당업자가 쉽게 결정할 수 있으며, 일반적으로 프로브 길이, 세척 조건 및 염 농도에 따라 달라지는 실험 계산에 의해 구한다. 일반적으로 프로브 길이가 길수록 적절한 아널링에 더 높은 온도가 요구되는 반면, 프로브 길이가 짧을수록, 요구되는 온도는 더 낮다. 혼성화는 일반적으로 변성된 핵산 서열이 이들의 용융 온도 미만의 환경에서 상보적인 가닥이 존재할 경우 재어닐링하는 능력에 의존한다. 프로브 및 혼성화 가능한 서열 간의 소망되는 상동성 정도가 높을수록, 이용가능한 상대적인 온도도 더 높다. 그 결과, 상대적인 온도가 높을수록 반응 조건이 더 스트린젠트해지는 반면, 온도가 낮아지면 반응 조건이 덜 스트린젠트해진다. 혼성화 반응의 스트린젠시에 관한 보다 상세한 내용은 문헌 [Current Protocols in Molecular Biology (Ausubel et al. eds., Wiley Interscience Publishers, 1995); Molecular Cloning: A Laboratory Manual (J. Sambrook, E. Fritsch, T. Maniatis eds., Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2d ed. 1989); Wood et al., Proc . Natl . Acad . Sci . USA, 82:1585-1588 (1985)]을 참조하면 알 수 있다.
[0078] 본 발명에서 "분리된(isolated)"이라는 표현은 그의 본래 환경으로부터 분리되어, 그의 본래 상태로부터 변경된 물질에 관한 표현이다. 예컨대, 분리된 폴리펩타이드는 담체에 커플링될 수 있는데, 그의 본래의 환경에 있는 것이 아니므로 여전히 "분리되어 있는" 것이다.
[0079] 본 발명에서, "검사 물질(또는 후보 화합물)"이라 함은 화학적으로 정의된 화합물 (예컨대, 유기 분자, 무기 분자, 유기/무기 분자, 단백질, 펩타이드, 핵산, 올리고뉴클레오타이드, 지질, 다당류, 당류 또는 당단백질과 같은 이들 분자들 간의 하이브리드 등) 또는 이 화합물들의 혼합물 (예컨대, 검사 화합물, 천연 추출물 또는 배양 상등액의 라이브러리 등)을 가리키며, 표적에 대한 이들의 효과는 본 발명의 명세서 및/또는 첨부된 청구범위에 의해 정해진다.
[0080] 본 발명에서, 고속대량 스크리닝(high-throughput screening (HTS))이라 함은 "히트(hits)"를 동정하기 위해, 질병 표적들에 대해 다양한 화학 구조를 갖는 샘플과 같은 샘플의 다수 검사하기 위한 공정을 가리킨다 (예컨대, Broach, et al ., High throughput screening for drug discovery, Nature , 384:14-16 (1996); Janzen, et al ., High throughput screening as a discovery tool in the pharmaceutical industry, Lab Robotics Automation : 8261-265 (1996); Fernandes, P.B., Letter from the society president, J. Biomol. Screening , 2:1 (1997); Burbaum, et al ., New technologies for high-throughput screening, Curr. Opin . Chem . Biol ., 1:72-78 (1997)참조). HTS 오퍼레이션은 샘플 표본 조작, 어TP이 공정 및 후속적인 대규모 데이터 처리와 관련하여 고도로 자동화 및 컴퓨터화되어 있다.
[0081] 본 발명에서, "식물"이라 함은 식물계 왕국의 다양한 모든 광합성, 진핵 다세포 생명체를 칭하며, 셀룰로스 세포벽을 갖고 엽록소를 함유하며 배아를 생성하지만 운동성은 없음을 특징으로 한다.
[0082] 본 발명에서, "동물"이라 함은 동물계 왕국의 다세포 생명체를 가리키는 것으로서, 운동성, 비광합성 대사, 자극에 대한 현저한 반응, 제한적인 성장 및 고정된 신체 구조를 특징으로 한다. 동물의 비제한적인 예로 예컨대 닭과 같은 조류, 어류 및 포유동물 예컨대 마우스, 래트, 토끼, 고양이, 개, 돼지, 암소, 황소, 양, 염소, 말, 원숭이 및 기타 비인간 영장류와 같은 척추동물을 들 수 있다.
[0083] 본 발명에서, "세균"이라 함은 구획화되어 있지 않은 원형 DNA 및 약 70S의 리보좀을 갖는 작은 원핵생물(크기가 약 1 마이크론의 선형 생명체)을 말한다. 세균 단백질 합성은 진균의 그것과 다르다. 많은 항균 항생제가 세균 단백질 합성을 간섭하지만 감염된 숙주에는 영향을 미치지 못한다.
[0084] 본 발명에서, "진정세균(eubacteria)"이라 함은 고세균(archaebacteria)을 제외한 세균의 주요 부류이다. 대부분의 그램-양성 세균, 시아노박테리아, 마이코플라즈마, 엔테로박테리아, 슈도모나스 및 클로로플라스트가 ㅈ진정세균이다. 진정세균의 세포질막은 에스테르 결합 지질을 함유하는데; 세포벽(존재할 경우)에는 펩티도글리칸이 있고; 진정세균에서는 인트론이 발견된 바 없다.
[0085] 본 발명에서 "고세균( archaebacteria)"이라 함은 진정세균을 제외한 세균의 주요 부류이다. 고세균에는 3가지 주요 목(order), 즉: 초호염군, 메타노겐 및 황의존성 초호열성균이 그것이다. 고세균은 리보좀 구조, 인트론 보유(몇몇 경우), 및 막 조성을 비롯한 몇몇 특징면에서 진정세균과 다르다.
[0086] 본 발명에서 "바이러스"라 함은 살아있지만 비세포 특성을 갖는, 편성 세포내 기생체로서 DNA 또는 RNA 및 단백질 코트로 이루어져 있다. 바이러스는 직경이 약 20 내지 약 300 nm이다. 클래스 I 바이러스 (볼티모어 분류)은 그들의 게놈으로서 이중나선 DNA를 가지며; 클래스 II 바이러스는 그들의 게놈으로서 단일가닥 DNA를 갖는다; 클래스 III 바이러스는 그들의 게놈으로서 이중나선 RNA를 가지며; 클래스 IV바이러스는 그들의 게놈으로서 포지티브 단일가닥 RNA를 가지고, 게놈 자체가 mRNA로서 작용한다; 클래스 V 바이러스는 mRNA 합성의 주형으로서 사용되는 그들의 게놈으로서 네가티브 단일가닥 RNA를 갖고; 클래스 VI 바이러스는 포지티브 단일가닥 RNA 게놈을 갖지만 복제시 뿐 아니라 mRNA 합성시에도 DNA 중간체를 갖는다. 바이러스 대부분은 식물, 동물 및 원핵생물에서 이들이 일으키는 질병에 의해 인식된다. 원핵생물의 바이러스는 박테리오파지로 알려져 있다.
[0087] 본 발명에서 "진균"이라 함은 함은 뿌리, 줄기 또는 잎도 없고, 엽록소나 기타 광합성을 가능케 하는 다른 색소 없이, 불규칙한 덩어리로 생장하는, 진핵생물의 일종을 가리킨다. 각각의 생명체(엽상체)는 단세포로부터 필라멘트상까지 다양하며, 글루칸이나 키틴 또는 두 가지 모두를 함유하는 세포벽으로 둘러싸인 분기상의 체세포 구조(균사)를 가지며 진짜 핵을 함유한다.
B. 2차원 특징부를 이용한 측방 유동 장치
[0088] 일 측면에서, 본 발명은 액체 샘플 중의 피검물을 검찰하기 위한 것으로, 매트릭스 상에 시약 도트들이 복수개 있는 검사 장치를 제공하며, 여기서 상기 시약 도트들 중 적어도 2개는 서로 중첩됨이 없이 서로 충분히 이격되어 있어서, 상기 액체 샘플이 상기 매트릭스를 따라 측방향으로 유동할 때, 상기 2개의 시약 도트들 중 하나로, 하나를 통해 및/또는 하나를 따라 일어나는 상기 액체 샘플의 유동이, 상기 나머지 다른 시약으로의, 나머지 다른 시약을 통한 및/또는 나머지 다른 시약을 따라 일어나는 상기 액체 샘플의 유동에 실질적으로 영향을 미치지 않고, 상기 2가지 시약 도트들 각각은 상기 액체 샘플의 유동 방향에 수직 방향인 상기 매트릭스의 전체 폭에 걸친 시약 라인도 아니고, 시약 라인의 완전한 써클도 아니며, 액체 샘플이 상기 검사 장치를 따라 측방향으로 유동하여 상기 적어도 2개의 시약 도트를 통과한 후, 상기 적어도 2개의 시약 도트들이 소정의 패턴을 형성하여, 상기 액체 샘플 중의 상기 피검물의 존재 여부 및/또는 양을 가리키게끔 되어 있는 것이다.
[0089] 시약 도트들이 중첩됨이 없이 서로 충분히 이격되어, 액체 샘플이 하나의 시약 도트로, 도트를 통해 및/또는 시약 도트를 따라 유동하거나 또는 시약 도트 세트들이 액체 샘플의 흐름이 다른 시약 도트 또는 다른 시약 도트들의 세트로, 이들을 통해 및/또는 이들을 따라 유동하는 것에 실질적으로 영향을 미치지 않도록 해주는, 수많은 다양한 방법들을 생각해 볼 수 있다. 이와 동시에, 검사 장치는 상기 액체 샘플 중의 상기 피검물의 존재여부 및/또는 양을 가리키는 시그널 판독값을 생성하는데 이용될 수 있는 시약 도트들을 충분한 수로 포함하여야 한다. 검사 장치를 만드는데 고려 및/또는 변경할 수 있는 변수들의 예로는 시약 도트의 갯수, 시약 도트의 크기 및/또는 형상, 예컨대 절대적인 크기 또는 매트릭스 크기에 대한 상대적인 크기, 시약 도트에 위치한 시약의 양 및 종류, 검사 장치 상의 일부 또는 모든 시약 도트들 간의 거리, 예컨대 간격의 절대적인 크기 또는 매트릭스 크기에 상대적인 간격의 크기 및/또는 매트릭스 상의 시약 도트들의 갯수, 액체 샘플 유동 방향에 대한 시약 도트들의 위치 또는 배향, 시약 도트들 간의 형상 및/또는 크기의 균일성 또는 변동성 및 매트릭스의 특성, 예컨대, 매트릭스의 재질 및/또는 다공도, 및/또는 시약이 스팟되는 용액의 특성 또는 조성을 들 수 있다. 예컨대 의도하거나 소망하는 분석 감도 및/또는 특이성가 같은, 의도된 검사 성능을 만족하는, 검사 장치를 만들기 위해 이들 변수들 중 일부 또는 전부를 검사, 조정 또는 측정할 수 있다.
[0090] 몇몇 특정 구체예에서, 시약 도트들은 중첩되어 서로 충분히 이격되지 않아, 액체 샘플이 하나의 시약 도트로, 도트를 통해 및/또는 도트를 따라 유동하거나 또는 시약 도트들의 세트가 액체 샘플 유동이 다른 시약 도트 또는 시약 도트들의 다른 세트로, 또는 이를 통해 및/또는 이를 따라 유동하는 것을 차단 또는 방지할 수 있다. 이어서 이들 변수들 중 일부 또는 전부를 조정하여 액체 샘플 유동 블로킹 효과를 적어도10%까지, 및 좋기로는 적어도 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%까지 저하시킬 수 있다. 또 다른 특정 구체예에서, 주어진 특정 배열에서, 다른 시약 도트 또는 시약 도트들의 다른 세트로, 이들을 통해 및/또는 이들을 따라 흐르는 액체 샘플 유동이 적어도 10%까지, 및 좋기로는 적어도 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%까지 증가되도록 이들 변수들의 전부 또는 일부를 조정할 수 있다. 다른 구체예에서, 주어진 특정 배열에서, 다른 시약 도트 또는 시약 도트들의 다른 세트로, 이들을 통해 및/또는 이들을 따라 흐르는 액체 샘플 유동이 적어도 1배, 2배, 3배, 4배, 5배, 6배, 7배, 8배, 9배, 10배 또는 그 이상 증가되도록 이들 변수들의 전부 또는 일부를 조정할 수 있다.
[0091] 검사 장치는 시약 도트들을 여하한 적절한 갯수로 포함할 수 있다. 일례에서, 검사 장치는 2개의 시약 도트들을 포함할 수 있다. 또 다른 구체예에서, 검사 장치는 시약 도트들을 2개 초과로, 즉 적어도 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 50, 100, 500, 1,000, 5,000, 10,000개 또는 그 이상 포함할 수 있다.
[0092] 검사 장치 내의 시약 도트들의 일부 또는 전부, 또는 적절한 갯수들을 서로 충분히 이격시킬 수 있다. 예컨대, 시약 도트들의 적어도 1/4, 1/3, 1/2 또는 모든 시약들을 중첩시키지 않고 서로 충분히 이격시켜, 액체 샘플이 매트릭스를 따라 측방으로 유동할 때, 시약 도트들 중 어느 하나로, 이를 통해 및/또는 이를 따라 흐르는 액체 샘플 유동이 다른 시약 도트로의, 이를 통한 및/또는 이를 따라 흐르는 유동에 실질적으로 영향을 미치지 않도록 할 수 있다.
[0093] 시약 도트들에 형성된 소정의 패턴은 어떠한 형태, 형상 및/또는 패턴이던 무방하다. 예컨대, 소정의 패턴은 하나의 선, 복수개의 선, 심볼, 기하학적 형상 및 또는 글자-숫자 형상, 규칙적 형상 또는 불규칙적 형상 또는 이들의 조합일 수 있다. 규칙적 형상의 예로는 라인, 원, 막대, 사각형, 삼각형 및 직사각형이리 수 있다. 글자-숫자 형상의 예로는 1개의 문자, 단어, 숫자 또는 이들의 조합일 수 있다.
[0094] 소정의 패턴이 하나의 선 또는 복수개의 선일 경우, 선(들)은 액체 샘플 유동 방향에 대해 상대적인 적당한 위치 또는 방향일 수 있다. 일례에서, 선(들)은 실질적으로 액체 샘플 유동 방향에 실제로 평형할 수 있다. 또 다른 예에서, 선(들)은 액체 샘플 유동 방향에 대해 수직일 수 있다. 또 다른 예에서, 소정의 패턴들은 복수개의 선의 형태일 수 있다. 복수개의 선들은 액체 샘플 유동 방향에 대해 실제로 평행한 적어도 1개의 선과 액체 샘플 유동 방향에 대해 실제로 수직인 적어도 1개의 선을 포함할 수 있다. 몇몇 구체예에서 선들의 적어도 1/4, 1/3, 1/2은 실제로 액체 샘플 유동 방향에 대해 평행이다. 또 다른 예에서, 선들의 적어도 1/4, 1/3, 1/2은 실제로 액체 샘플 유동 방향에 대해 실제로 수직이다.
[0095] 검사 장치는 액체 샘플 중 단일 피검물 또는 복수개의 피검물을 검출하는데 이용될 수 있다. 일례에서, 검사 장치 중 복수개의 시약 도트들은 서로 다른 시약들을 포함하여 검사 장치는 액체 샘플 내의 복수개의 피검물을 검출하는데 이용된다. 또 다른 예에서, 검사 장치 내의 복수개의 시약 도트들은 동일한 시약을 포함하며 검사 장치는 액체 샘플 내의 단일 피검물의 양을 검사하는데 사용된다.
[0096] 검사 장치 내의 시약 도트들은 시약(들)을 적절한 양으로 포함할 수 있다. 일례에서, 복수개의 시약 도트들은 시약(들)을 동일한 양으로 포함한다. 또 다른 예에서, 복수개의 시약 도트들은 시약(들)을 서로 다른 양으로 포함한다.
[0097] 검사 장치 중의 시약 도트들은 적절한 크기(들)을 가질 수 있다. 일례에서, 시약 도트들 중 적어도 1개는 직경이 약 0.1-1 um, 1-10 um, 10-50 um, 51-100 um, 101-200 um, 201-300 um, 301-400 um, 401-500 um 및 501-1000 um이다. 또 다른 예에서, 시약 도트들의 적어도 1/4, 1/3, 1/2 또는 모든 시약 도트들은 직경이 약 0.1-1 um, 1-10 um, 10-50 um, 51-100 um, 101-200 um, 201-300 um, 301-400 um, 401-500 um 또는 501-1000 um이다. 또 다른 예에서, 막의 폭과 길이로 산출했을 때, 시약 도트들 중 적어도 1개의 직경 또는 표면적은 매트릭스의 길이, 폭 또는 표면적의 직경 또는 표면적의 약 10%, 5%, 1%, 0.5%, 0.1%, 0.05%, 0.01%, 0.001% 또는 그 미만이다. 또 다른 예에서, 시약 도트들의 적어도 1/4, 1/3, 1/2 또는 모든 시약 도트들의 직경 또는 표면적은 매트릭스의 길이, 폭 또는 표면적의 직경 또는 표면적의 약 10%, 5%, 1%, 0.5%, 0.1%, 0.05%, 0.01%, 0.001% 또는 그 미만이다.
[0098] 적절한 부피의 소적을 이용하여 적절한 또는 소망되는 크기로 스팟을 만들 수 있다. 예시적인 구체예에서, 유동 막 상에 스팟 크기 범위를 만드는데 이용되는 소적의 부피 범위는 약 30-200 pL, 201-500 pL, 501 pL - 1.001 nL, 1.001 nL 내지 5.0 nL, 5.1-25 nL, 21.1-100 nL, 또는 100.1-500nL이다. 하기 표 1에, 상기한 소적 범위의 다양한 소적 크기의 구 및 반구 직경 두가지를 모두 기재하였다.
Figure pct00002
막 상의 시약 1 방울의 실제 전개된 스팟 크기는 반구 소적 직경보다 예컨대 약 10-25% 더 클 수 있다. 전술한 범위의 여러가지 소적 부피의 구 및 반구 크기를 상기 표 1에 나타내었다.
[0099] "직경"이라 함은 종종 도트의 모양에 의해 결정된다. 예컨대, 만일 도트가 원형이면, 원의 직경은 그 원의 중심을 가로지르는 직선 세그먼트이며 그의 종점은 원 위에 있을 것이다. 직경의 길이 역시도 직경이라 부른다. 평면 위에 볼록한 형상일 경우, 직경은 그의 원주에 접하는 2개의 반대되는 평행선들 간에 형성가능한 최대 거리로 정의된다. "직경"이라는 용어는 원형이나 기타 규칙적인 형상의 도트 모양에만 사용되는 것은 아니다. 몇몇 특정 구체예에서, 도트가 불규칙한 모양일 경우, "직경"은 예컨대 그 도트 상의 2개의 지점 간의 최대 거리로서 측정되는 바와 같이, 도트의 길이 또는 폭을 나타내는 변수로서 측정될 수 있다.
[00100] 검사 장치 중의 시약 도트들은 직경이 서로 같거나 다를 수 있다. 일례에서, 시약 도트들의 적어도 1/4, 1/3, 1/2 또는 모든 시약 도트들은 실제로 동일한 크기 또는 직경을 갖는다. 또 다른 예에서, 시약 도트들의 적어도 1/4, 1/3, 1/2 또는 모든 시약 도트들은 실제로 서로 다른 크기 또는 직경을 갖는다.
[00101] 검사 장치 내의 시약 도트들은 적절한 모든 형상을 가질 수 있으며, 예컨대 적절한 규칙적 또는 불규칙한 모양을 가질 수 있다. 일례에서, 시약 도트들 중 적어도 1개는 선, 원, 막대, 사각형, 삼각형, 직사각형 또는 불규칙한 모양일 수 있다. 또 다른 예에서, 시약 도트들의 적어도 1/4, 1/3, 1/2 또는 모든 시약 도트들은 선, 원, 막대, 사각형, 삼각형, 직사각형 또는 불규칙한 모양을 갖는다. 검사 장치 내의 시약 도트들은 같거나 다른 모양(들)을 갖는다. 일례에서, 시약 도트들의 적어도 1/4, 1/3, 1/2 또는 모든 시약 도트들은 동일한 형상을 갖는다. 또 다른 예에서, 시약 도트들의 적어도 1/4, 1/3, 1/2 또는 모든 시약 도트들은 서로 다른 형상을 갖는다.
[00102] 시약 도트들 사이의 간격(들) 또는 거리(들)은 적절히 정해질 수 있다. 일례에서, 시약 도트들 간의 거리는 약 1-10 um, 10-50 um, 51-100 um, 101-200 um, 201-300 um, 301-400, 401-500, 또는 501-600 um이다. 시약 도트들 간의 간격(들) 또는 거리(들)은 같거나 다를 수 있다. 일례에서, 시약 도트들의 적어도 1/4, 1/3, 1/2 또는 모든 시약 도트들 간의 간격 또는 거리는 실제로 동일하다. 또 다른 예에서, 시약 도트들의 적어도 1/4, 1/3, 1/2 또는 모든 시약 도트들 간의 간격 또는 거리는 서로 다르다. 이러한 간격 또는 거리는 적절한 수단으로 잴 수 있다. 몇몇 특정 구체예에서, 시약 도트들 간의 간격 또는 거리는 시약 도트들 또는 인접하는 시약 도트들의 가장자리 간의 간격 또는 거리로서, 예컨대, 시약들의 낮은 유동 경로 저항을 나타내는 도트들의 가장자리들 간의 거리로서 측정된다. 또 다른 특정 구체예에서, 시약 도트들 간의 간격 또는 거리는 시약 도트들 또는 인접하는 시약 도트들의 중심 또는 유효 중심들 간의 간격 또는 거리로서 측정된다.
[00103] 시약 도트들은 매트릭스 상의 적절한 장소 또는 사이드(들)에 위치할 수 있다. 일례에서, 검사 장치는 복수개의 시약 도트로 된 단일층을 포함한다. 또 다른 예에서, 검사 장치는 복수개의 도트들로 된 복수개의 층, 예컨대, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10개 또는 그 이상의 갯수의 층을 포함할 수도 있다. 또 다른 예에서, 검사 장치는 매트릭스의 한쪽 면에 복수개의 시약 도트들로 된 층을 적어도 1개 포함한다. 또 다른 예에서, 검사 장치는 매트릭스의 양면에 복수개의 시약 도트들로 된 층을 적어도 1개 포함한다.
[00104] 시약 도트들의 시그널(들)은 피검물, 시약 도트들에 위치한 시약, 액체 샘플 및/또는 다른 액체(들)에 첨가된 시약, 및/또는 사용 전에 검사 장치 상에서 건조되어 액체 샘플 또는 다른 액체에 의해 시약 도트로 옮겨진 다른 시약들과 연관된 모든 적절한 반응, 예컨대, 화학, 생화학, 전기화학 반응 및/또는 결합 반응에 의해 생성될 수 있다.
[00105] 몇몇 구체예에서, 시약 도트들의 시그널(들)은 피검물, 시약 도트들에 위치한 시약, 액체 샘플 및/또는 다른 액체(들)에 첨가된 시약, 및/또는 사용 전에 검사 장치 상에서 건조되어 액체 샘플 또는 다른 액체에 의해 시약 도트로 옮겨진 다른 시약들과 관련된 결합 반응에 기초하여 생성된다. 일례에서, 시약 도트들 중 적어도 1개는 피검물에 결합할 수 있는 시약 또는 피검물에 결합할 수 있는 다른 결합 시약을 포함한다. 좋기로는 시약은 피검물에 특이적으로 결합하거나 또는 피검물에 결하발 수 있는 다른 결합 시약인 것이 좋다. 또한, 시약은 검사 샘플 중 간섭 부분 (interfering moiety) 또는 부분들에 대한 결합을 회피하는 것이 좋다. 또 다른 ㅇ예에서, 시약 도트들의 적어도 1/4, 1/3, 1/2 또는 모든 시약 도트들은 피검물에 결합할 수 있는 시약 또는 피검물에 결합할 수 있는 다른 결합 시약을 포함한다. 좋기로는, 시약은 피검물 또는 피검물에 결합할 수 있는 또 다른 결합 시약에 특이적으로 결합할 수 있는 것이 바람직하다.
[00106] 시약 도트들에 위치하는 시약들은 적절한 물질이면 어느 것이든 무방하다. 예컨대, 시약은 무기 분자, 유기 분자 또는 이들의 복합체일 수 있다. 예시적인 무기 분자로는 소듐, 포타슘, 마그네슘, 칼슘, 염소, 철, 구리, 아연, 망간, 코발트, 요오드, 몰리브덴, 바나듐, 니켈, 크롬, 불소, 규소, 주석, 붕소 또는 비소 이온과 같은 이온을 들 수 있다. 예시적인 유기 분자로는 아미노산, 펩타이드, 단백질, 예컨대 항체 또는 수용체, 뉴클레오사이드, 뉴클레오타이드, 올리고뉴클레오타이드, 핵산, 예컨대 DNA 또는 RNA, 비타민, 단당류, 올리고당류, 탄수화물, 지질 및 이들의 복합체를 들 수 있다.
[00107] 예시적인 아미노산은 D- 또는 L-아미노산일 수 있다. 예시적인 ㅇ-아미노산은 또한 자연발생적인 펩타이드와 단백질의 빌딩 블록일 수도 있으며, 여기에는Ala (A), Arg (R), Asn (N), Asp (D), Cys (C), Gln (Q), Glu (E), Gly (G), His (H), Ile (I), Leu (L), Lys (K), Met (M), Phe (F), Pro (P) Ser (S), Thr (T), Trp (W), Tyr (Y) 및 Val (V)가 포함된다.
[00108] 적절한 단백질 또는 펩타이드를 검사 장치의 시약으로서 사용할 ㅅ수 있다. 예를 들어, 효소, 전달 단백질 예컨대 이온 채널 및 펌프, 영양물질 또는 저장 단백질, 예컨대 액틴 및 미오신과 같은 수축성 또는 운동성 단백질. 구조 단백질, 보호 단백질 또는 항체와 같은 조절 단백질, 호르몬 및 성장 인자를 이용할 수 있다. 단백질성 또는 펩타이드 항원 역시도 이용가능하다.
[00109] 단일, 이중 및 삼중가닥 핵산을 비롯한 적절한 핵산이 검사 장치의 시약으로서 이용될 수 있다. 이러한 핵산의 예로는 DNA, 예컨대 A-, B- 또는 Z-형 DNA, 및 RNA 예컨대 mRNA, tRNA 및 rRNA를 들 수 있다.
[00110] 적절한 모든 뉴클레오사이드를 검사 장치 상의 시약으로서 사용할 수 있다. 이러한 뉴클레오사이드의 예로는 아데노신, 구아노신, 시티딘, 티미딘 및 우리딘을 들 수 있다. 적절한 모든 뉴클레오타이드를 검사 장치 상의 시약으로서 사용할 수 있다. 이러한 뉴클레오타이드의 예로는 AMP, GMP, CMP, UMP, ADP, GDP, CDP, UDP, ATP, GTP, CTP, UTP, dAMP, dGMP, dCMP, dTMP, dADP, dGDP, dCDP, dTDP, dATP, dGTP, dCTP 및 dTTP를 들 수 있다.
[00111] 적절한 비타민을 검사 장치 상의 시약으로서 사용할 수 있다. 예컨대, 수용성 비타민, 예컨대 티아민, 리보플라빈, 니코틴산, 판토텐산, 피리독신, 바이오틴, 폴레이트, 비타민 B12 및 아스코르브산을 사용할 수 있다. 마찬가지로 지용성 비타민, 예컨대 비타민 A, 비타민 D, 비타민 E, 및 비타민 K을 사용할 수 있다.
[00112] D- 또는 L-단당류 및 알도스 또는 케토스의 적절한 단당류를 검사 장치 상의 시약으로서 사용할 수 있다. 단당류의 예로는 3탄당, 예컨대 글리세르알데히드, 4탄당 예컨대 에리쓰로스 및 쓰레오스, 5탄당, 예컨대 리보스, 아라비노스, 자일로스, 릭소스 및 리불로스, 6탄당, 예컨대 알로스, 알트로스, 글루코스, 만노스, 굴로스, 이도스, 탈로스 및 프럭토스 및 7탄당 예컨대 세도헵툴로스를 들 수 있다.
[00113] 적절한 지질을 검사 장치 상의 시약으로서 사용할 수 있다. 지질의 예로는 트리아실글리세롤, 예컨대 트리스테아린, 트리팔미틴 및 트리올레인, 왁스, 포스포글리세라이드 예컨대 포스파티딜에탄올아민, 포스파티딜콜린, 포스파티딜세린, 포스파티딜이노시톨 및 카르디올리핀, 스핑고지질 예컨대 스핑고미엘린, 세레브로사이드 및 강글리오사이드, 스테롤 예컨대 콜레스테롤 및 스티그마스테롤 및 스테롤 지방산 에스테르를 들 수 있다. 지방산은 포화지방산 예컨대 라우르산, 미리스트산, 팔미트산, 스테아르산, 아라키드산 및 리그노세르산이거나 또는 불포화지방산 예컨대 팔미톨레산, 올레산, 리놀레산, 리놀렌산 및 아라키돈산일 수 있다.
[00114] 특이적인 일 구체예에서, 검사하고자 하는 피검물은 항원을 포함하거나 항원이며, 검사 장치 상의 결합 시약은 항체를 포함하거나 항체이다. 좋기로는 항체는 피검물에 특이적으로 결합하는 것이 바람직하다. 일례에서, 검사 장치는 샌드위치 분석 포맷으로서 사용되는데, 여기서 결합 시약, 예컨대 항체는 시약 도트의 시약으로서 사용되고, 검출가능한 표지를 갖는 또 다른 결합 시약도 함께 사용되어, 시약 도트에서 표지된 결합 시약-피검물-결합 시약 또는 항체 시약을 형성하여 판독 시그널을 생성하게 된다. 별법으로, 결합 시약은 시약 도트에서 시약으로 사용되고, 검출 가능한 표지를 갖는 항체도 함께 사용되어 시약 도트에서 샌드위치된 표지된 항체-피검물-결합 시약을 형성하여 판독 시그널을 생성하는데 이용된다. 일례에서, 샌드위치 분석은 2개의 항체를 이용하며 그 중 1개는 포획 시약이고 다른 1개는 표지된 시약이다.
[00115] 검사 장치는 또한 경쟁적 분석 포맷에서 이용될 수도 있다. 일례에서, 예컨대 항체와 같은 결합 시약을 시약 도트에서 포획 시약으로서 사용한다. 액체에 첨가되거나 또는 검사 장치 상에 미리 건조되어 액체에 재용해 또는 재현탁된 검출가능한 표지를 갖는 피검물 또는 피검물 유사체가, 시약 도트의 포획 시약에 대한 결합을 두고 샘플 중의 피검물과 경쟁하게 된다. 또 다른 예에서, 피검물 또는 피검물 유사체가 시약 도트에서 포획 시약으로서 사용된다. 검출 가능한 표지를 갖는 항체와 같은 결합 시약이 액체에 첨가되거나 또는 검사 장치 상에 미리 건조되고 액체에 의해 재용해 또는 재현탁된다. 샘플 중의 피검물은 검출가능한 표지를 갖는 항체와 같은 결합 시약에 대한 결합을 두고, 시약 도트의 피검물 또는 피검물 유사체와 경쟁하게 된다.
[00116] 매트릭스는 여하한 적절한 구조를 가질 수 있다. 일례에서, 매트릭스는 다공성 구조를 가질 수 있다. 매트릭스는 적절한 재료(들)을 포함할 수 있다. 예컨대, 다공성 플라스틱 재료, 예컨대 폴리프로필렌 폴리에틸렌 (좋기로는 초고분자량) 폴리비닐리덴 플루오라이드, 에틸렌 비닐아세테이트, 아크릴로니트릴 및 폴리테트라플루오로-에틸렌을 사용할 수 있다. 예컨대, 미국특허 No. 6,187,598 참조. 구성요소를 제조과정 중 계면활성제로 전처리하는 것이 유리할 수 이는데, 이는 이러한 전처리가 구성요소 중의 내재적인 소수성을 저감시켜 수분기 있는 샘플을 흡수하여 신속하고 효과적으로 전달할 수 있는 능력을 증대시켜주기 때문이다. 매트릭스는 또한 종이 또는 기타 셀룰로스 물질로 만들어질 수도 있다. 몇몇 구체에에서, 매트릭스는 니트로셀룰로스 또는 유리섬유를 포함하거나 이들로 만들어질 수 있다.
[00117] 또 다른 예에서, 매트릭스는 비다공성 구조, 예컨대 무공성 (solid) 플라스틱 표면을 가질 수 있다. 몇몇 구체예에서, 매트릭스는 예컨대 채널 또는 다른 가이드된 유체 경로와 같은 다른 구조를 가질 수도 있다. 또 다른 예에서, 매트릭스는 플라스틱, 친수성 표면을 갖는 매트릭스 필름, 또는 샘플 액체와 제어된 접촉각을 갖는 재료를 포함한다.
[00118] 시약 도트는 적절한 시약을 포함할 수 있으며 적절한 패턴을 형성하도록 배치될 수 있다. 일례에서, 복수개의 시약 도트들은 피검물에 결합할 수 있는 동일한 결합 시약 또는 피검물에 결합할 수 있는 다른 결합 시약을 포함한다. 복수개의 시약 도트들은 액체 샘플 유동 방향과 실질적으로 평행한 선을 형성한다. 액체 샘플이 검사 장치를 따라 측방 유동함에 따라, 액체 샘플 중에 만일 피검물이 존재한다면, 피검물은 피검물이 상류 시약 도트(들)에 대한 결합에 의해 고갈될 때까지 시약 도트들 각각에서 결합 시약과 순차적으로 결합하게 된다. 시약 도트(들)에 대한 피검물의 결합은 시약 도트(들)에서 검출가능한 시그널을 생성시켜, 시약 도트(들)에서의 검출가능한 시그널의 강도 및/또는 갯수는 액체 샘플 중의 피검물의 정량화 또는 반정량화를 가능케한다.
[00119] 또 다른 예에서, 복수개의 시약 도트들은 피검물에 결합할 수 있는 다른 결합 시약 또는 피검물에 결합할 수 있는 또 다른 결합 시약을 포함한다. 복수개의 시약 도트들은 액체 샘플 유동 방향과 실제로 평행한 선을 형성한다. 액체 샘플이 검사 장치를 따라 측방 유동함에 따라, 액체 샘플 중에 피검물이 존재할 경우, 피검물은 시약 도트들 각각에서 결합 시약에 결합하게 된다. 시약 도트들에 대한 피검물의 결합은 시약 도트에서 검출가능한 시그널을 생성시키고, 시약 도트들에서의 검출가능한 시그널의 존재 및/또는 강도는 액체 샘플 중의 피검물의 존재여부 및/또는 양을 가리키게 된다.
[00120] 또 다른 예에서, 복수개의 시약 도트들은 서로 다른 그룹의 결합 시약들을 포함하며, 여기서 각각의 결합 시약 그룹은 동일한 피검물 또는 그 동일한 피검물에 결합할 수 있는 다른 결합 시약에 결합할 수 있는 것이고, 서로 다른 그룹 중의 결합 시약들은 다른 피검물 또는 다른 피검물들에 결합할 수 있는 다른 결합 시약들에 결합할 수 있는 것이다. 시약 도트들의 각각의 그룹은 액체 샘플 유동 방향과 실제로 펴앵한 선을 형성하며, 상이한 그룹의 시약 도트들에 의해 형성된 상이한 선들은 실제로 서로 평행하다. 액체 샘플이 검사 장치를 따라 측방 유동함에 따라, 액체 샘플 중에 피검물이 존재할 경우 당해 피검물은 피검물이 상류 시약 도트에 대한 결합에 의해 고갈될 때까지 시약 도트들의 각 그룹 중의 시약 도트 각각에서 결합 시약에 순차적으로 결합하게 된다. 시약 도트에 대한 피검물의 결합은 시약 도트에서 검출가능한 시그널을 형성하고 시약 도트에서의 검출가능한 시그날의 강도 및/또는 갯수는 액체 샘플 중의 서로 다른 피검물들의 정량화 또는 반정량화를 가능케 한다.
[00121] 또 다른 예에서, 복수개의 시약 도트들은 피검물에 결합가능한 동일한 결합 시약 또는 피검물에 결합할 수 있는 또 다른 결합 시약을 포함한다. 복수개의 시약 도트들은 액체 샘플 유동 방향에 실제로 평행한 복수개의 선들을 형성한다. 각각의 선 중의 시약 도트들은 동일한 양의 결합 시약을 포함하지만, 서로 다른 선 중의 시약 도트는 결합 시약의 양이 서로 다르다. 액체 샘플이 검사 장치를 따라 측방 유도함에 따라, 액체 샘플 중에 피검물이 존재할 경우, 피검물은, 피검물이 각각의 선들 중의 상류 시약 도트(들)에 대한 결합에 의해 고갈될 때까지, 각각의 선들 중의 시약 도트 각각에서 결합 시약과 순차적으로 결합하게 된다. 시약 도트(들)에 대한 피검물의 결합은 시약 도트(들)에서의 검출가능한 시그널을 생성시키고, 시약 도트(들)에서의 검출가능한 시그널의 강도 및/또는 갯수는 액체 샘플 내의 피검물의 정량 또는 반정량화를 가능케 한다. 서로 다른 선들 중의 시약 도트들은 결합 시약을 같거나 다른 양으로 함유할 수 있다. 일 구체예에서, 검사 장치의 한쪽 말단으로부터 다른쪽 말단까지, 상기 액체 샘플 유동에 수직 방향으로, 서로 다른 선들 중의 시약 도트들은 순차적으로 상이한 양의 결합 시약, 예컨대, 순차적으로 증가 또는 감소하는 양의 결합 시약을 포함한다.
[00122] 또 다른 예에서, 복수개의 시약 도트들은 서로 다른 2 그룹의 결합 시약들을 포함한다. 시약 도트들 중 하나의 그룹은 액체 샘플 유동 방향에 대해 제1 각도로 선을 형성하고, 시약 도트들 중 또 다른 그룹은 액체 샘플 유동 방향에 대해 상이한 제2 각도로 선을 형성한다. 액체 샘플이 검사 장치를 따라 측방 유동한 후, 하나의 선 중의 시약 도트들은 액체 샘플 중의 피검물의 존재 및/또는 양을 가리키는 시그널을 생성시키고, 다른 선 중의 시약 도트들은 검사가 적절히 수행되는지를 가리키는 대조 시그널을 생성한다. 액체 샘플이 피검물을 포함하고 검사가 적절히 수행된 경우, 시약 도트들의 2개의 선들은 액체 샘플 중에 피검물의 존재 및/또는 양을 가리키는 양성 심볼을 생성하게 된다. 액체 샘플이 피검물을 포함하지 않고, 검사가 적절히 수행된 경우에는, 시약 도트들의 오직 1개의 선만이 액체 샘플 중에 피검물이 부재함을 가리키는 음성 심볼을 생성한다.
[00123] 2개의 서로 다른 결합 시약 그룹들은 액체 샘플 유동 방향에 대해 적절한 여하한 각도로 선들을 형성할 수 있으며, 시약 도트는 액체 샘플 중의 피검물의 존재, 부재 및/또는 양을 가리키는 적절한 판독 시그널을 형성할 수 있다. 예컨대, 시약 도트들 중 하나의 그룹은 액체 샘플 유동 방향에 실제로 평행한 선을 형성하고, 시약 도트들의 또 다른 그룹은 액체 샘플 유동 방향에 대해 실질적으로 수직인 선을 형성한다. 액체 샘플이 피검물을 포함하고 검사가 적절히 수행된 경우, 시약 도트들의 2개의 선들은 액체 샘플 중에 피검물의 존재 및/또는 양을 가리키는 "+" 심볼을 형성하며, 만일 액체 샘플이 피검물을 포함하지 않고 검사가 적절히 수행된 경우에는, 시약 도트들의 오직 1개의 선만이 액체 샘플 중에 피검물이 부재함을 가리키는 "-" 심볼을 생성한다.
[00124] 또 다른 예에서, 복수개의 시약 도트들은 서로 다른 2개의 결합 시약 그룹들을 포함한다. 액체 샘플이 검사 장치를 따라 측방 유동한 후, 하나의 그룹 중의 시약 도트들은 액체 샘플 중의 피검물의 존재 및/또는 양을 가리키는 문자-숫자 시그널을 생성시키고, 다른 그룹 중의 시약 도트들은 검사가 적절히 수행되는지를 가리키는 대조 심볼 시그널을 생성한다. 문자-숫자 시그널은 여하한 적절한 형태일 수 있다. 예를 들어, 문자-숫자 시그널은 yes, Pos, 양성, Neg, 음성, No, 또는 OK와 같은 단어일 수 있다. 대조 심볼 시그널 역시도 적절한 여하한 형태일 수 있다. 예를 들어, 대조 심볼 시그널은 "+" 표시일 수 있다. 검사 장치는 예컨대 ㅅ샌드위치 검사 또는 경쟁적 검사와 같이 적절한 모든 유형의 검사법에 알맞게 설정될 수 있다.
[00125] 또 다른 예에서, 복수개의 시약 도트들은 의도된 결합제에 결합하는 시약을 포함하며 시약과 시약 도트 상에 형성된 결합제 간의 결합 패턴은 시약과 결합제 간의 결합의 운동학적 특성을 가리킨다. 시약과 의도된 결합제는 적절하거나 소망되는 어떤 물질이든 무방하다. 예컨대, 시약은 항원일 수 있고, 결합제는 그 항원에 대한 항체일 수 있으며 그 반대일 수도 있다. 시약 도트 상에 형성된 항원과 항체 간의 결합 패턴은 항원과 항체 간의 결합의 운동학적 특성을 나타낼 수 있다. 본 발명의 장치를 이용하여 항원과 항체 간의 결합의 적절한 운동학적 특성을 나타낼 수 있다. 예컨대, 운동학적 특성은 항원과 항체 간의 결합의 결합 친화도를 포함할 수 있다. 결합 친화도는 적절한 시그널 판독 수단으로 검출가능하다. 예컨대, 도트(들) 상의 선단부의 결합 패턴은 그 결합 시약 또는 항체가 항원에 대해 높은 결합 친화도를 가짐을 가리키는데, 채워졌지만 일반적으로 불일치한 도트는 결합 시약에 대한 친화도가 낮음을 나타내고, 블랭크 스팟은 결합 시약 또는 항체와 항원 간에 특이적인 결합이 존재하지 않음을 가리킨다. 예컨대 도 3 참조.
[00126] 또 다른 예에서, 검사 장치는 액체 샘플 중의 피검물의 존재, 부재 및/또는 양과 무관하거나 또는 검사가 적절히 수행되는지를 가리키는 부가적인 시그널을 생성하는 시약 도트들로 된 적어도 1개의 그룹을 포함할 수 있다. 이러한 부가적인 시약 도트들은 적절한 목적으로 사용될 수 있다. 예컨대, 이 부가적인 시그널을 이용하여 검사 장치의 진위, 품질 및/또는 확인, 또는 액체 샘플의 확인을 실시할 수 있다. 부가적인 시그널은 적절한 형태 또는 패턴을 가질 수 있다. 예컨대, 부가적인 시그널은 문자-숫자 시그널을 포함할 수 있다.
[00127] 또 다른 예에서, 검사 장치는 샘플 적용 위치 주변에 원을 형성하는 시약 도트로 된 적어도 1개의 그룹을 포함할 수 있으며, 상기 액체 샘플은 시약 도트들의 상기 그룹을 신속하게 통과 이동한다. 또 다른 예에서, 검사 장치는 장치의 일부를 흐르는 흐름을 더 포함할 수 있다.
[00128] 매트릭스는 적절한 형태 또는 모양을 가질 수 있다. 예컨대, 매트릭스는 스트립 또는 원의 형태일 수 있다. 매트릭스는 또한 적절한 갯수의 구성요소를 가질 수 있다. 예컨대, 매트릭스는 단일 구성요소 또는 복수개의 구성요소를 포함할 수 있다.
[00129] 검사 장치는 매트릭스로부터 상류에 매트릭스와 유체 교통하는 샘플 적용 구성요소를 더 포함할 수 있다. 샘플 적용 구성요소는 니트로셀룰로스, 유리섬유, 폴리프로필렌 폴리에틸렌 (좋기로는 초고분자량), 폴리비닐리덴 플루오라이드, 에틸렌 비닐아세테이트, 아크릴로니트릴 또는 폴리테트라플루오로에틸렌과 같은 적절한 재료로 만들어질 수 있다. 매트릭스와 샘플 적용 구성요소는 같거나 다른 물질을 포함할 수 있다.
[00130] 검사 장치는 또한 매트릭스로부터 하류에 매트릭스와 유체 교통하는 액체 흡수 구성요소를 더 포함할 수 있다. 액체 흡수 구성요소는 종이 또는 셀룰로스 물질과 같은 적절한 재료로 만들어질 수 있다.
[00131] 검사 장치는 액체 샘플의 적절한 유동 및/또는 타당한 검사 결과를 가리키기 위한 수단을 포함하는 대조 위치(control location)를 추가로 포함할 수 있다. 일례에서, 이 수단은 피검물에도 결합하는 검출가능한 표지가 붙은 결합 시약에 결합하는 결합 시약을 포함한다. 또 다른 예에서, 이 수단은 피검물에 결합하지 않는 검출가능한 표지가 붙은 결합 시약에 결합하는 결합 시약을 포함한다. 또 다른 예에서, 이 수단은 일단 액체가 대조 위치를 따라 또는 이를 통해 유동하면, 예컨대 색상 또는 전기적 시그널과 같은 검출가능한 시그널을 생성하는 물질을 포함한다.
[00132] 몇몇 구체예에서, 매트릭스의 적어도 일부분은 기공이 없는(solid) 지지체에 의해 지지된다. 또 다른 구체예에서, 매트릭스의 절반, 절반 이상 또는 매트릭스의 모든 부분은 무공성 지지체에 의해 지지된다. 무공성 지지체는 적절한 물질 예컨대 무공성 플라스틱으로 만들 수 있다. 만일 검사 장치가 전극 또는 다른 전기적 구성요소를 포함하는 경우 무공성 지지체는 일반적으로 비전도성 물질을 포함하여야 한다.
[00133] 몇몇 구체예에서, 표지된 시약은 검사 장치 상에서 건조될 수 있고 건조된 표지 시약은 예컨대 샘플 액체 및/또는 부가적인 액체에 의해 재용해 또는 재현탁되어 검사 장치를 따라 측방 전달되어 판독값, 대조 시그널 및/또는 기타 시그널을 생성하게 된다. 예컨대, 시약 도트들 중 적어도 2개로부터 상류에 형성된 매트릭스의 일부는 건조하고 표지된 시약을 포함할 수 있으며 표지된 시약은 액체 샘플 및/또는 추가 액체에 의해 적어도 2개의 시약 도트들 및/또는 대조 위치로 전달되어 검출가능한 시그널을 생성시킬 수 있다. 건조, 표지된 시약은 검사 장치의 적당한 곳에 위치될 수 있다 일례에서, 건조, 표지된 시약은 검사 장치 사의 샘플 적용 위치로부터 하류에 위치된다. 또 다른 예에서, 건조 표지된 시약은 검사 장치 상의 샘플 적용 장소로부터 상류에 위치된다. 표지된 시약의 종류는 의도하는 분석 포맷에 기초하여 결정할 수 있다. 예컨대, 만일 검사 장치를 샌드위치 분석에 사용할 경우, 표지된 시약은 피검물 또는 피검물에 결합하는 다른 물질에 결합, 좋기로는 특이적으로 결합할 수 있어야 한다. 동일한 표지된 시약은 또한 어떤 경쟁적 결합 분석법에 이용될 수도 있다. 경쟁적 결합 분석의 또 다른 유형에 있어서, 표지된 시약은 검출가능한 표지에 링크된 피검물이거나 피검물 유사체여야 한다.
[00134] 몇몇 구체예에서, 검사 장치는 적어도 2개의 시약 도트들로부터 상류에, 건조, 표지된 시약을 포함하는 접합체 구성요소를 더 포함할 수 있는데, 상기 표지된 시약은 액체 샘플 및/또는 추가의 액체에 의해, 적어도 2개의 시약 도트들 및/또는 대조 위치로 이동되어 검출가능한 시그널을 발생시킬 수 있는 것이다. 접합체 구성요소는 검사 장치 상의 샘플 적용 장소로부터 하류에 위치할 수 있다. 접합체 요소는 또한 검사 장치 상의 샘플 적용 장소로부터 상류에 위치할 수도 있다. 몇몇 구체예에서, 표지된 시약은 액체 샘플 중의 피검물에 결합한다. 또 다른 구체예에서, 표지된 시약은 적어도 2개의 시약 도트들에서 피검물에 있어서 결합 시약에 대한 결합을 두고 액체 샘플 중의 피검물과 경쟁한다.
[00135] 적절한 표지를 사용할 수 있다. 표지는 비색계, 방사능, 효소, 발광 또는 형광 표지와 같은 가용성 표지일 수 있다. 표지는 또한 특정의 직접 표지 또는 착색된 입자 수준과 같이 입자 또는 미립자 표지일 수도 있다. 예시적인 입자 또는 미립자 표지에는 콜로이드 금 표지, 라텍스 입자 표지, 나노입자 표지 및 퀀텀 도트 표지가 포함된다. 특이적인 배치에 따라, 비색, 방사능, 효소, 발광 또는 형광 표지와 같은 표지들은 가용성 표지 또는 입자 또는 미립자 표지일 수 있다.
[00136] 몇몇 구체예에서, 표지된 시약은 표지된 시약을 안정화시켜 액체 중에서의 표지된 시약의 안정화 또는 재현탁을 용이하게 하고, 및/또는 표지된 시약의 이동을 용이하게 해주는 물질의 존재 하에 건조된다. 적당한 모든 물질을 이용할 수 있다. 예컨대, 이 물질은 단백질, 예컨대, 메타-가용성 단백질, 펩타이드, 다당류, 당, 예컨대, 수크로스, 폴리머, 젤라틴 또는 세제일 수 있다. 예컨대 미국특허 Nos. 5,120,643 및 6,187,598 참조.
[00137] 본 발명의 검사 장치는 적당한 샘플 액체에 대해 이용될 수 있다. 일례에서, 샘플 액체를 단독으로 사용하여 피검물 및/또는 표지된 시약을 적어도 2개의 시약 도트들로 전달시킬 수 있다. 또 다른 예에서, 전개 액체 (developing liquid)를 사용하여 피검물 및/또는 표지된 시약을 적어도 2개의 시약 도트들에 ㅈ전달할 수 있다. 또 다른 예에서, 샘플 액체 및 전개 액체 두 가지 모두를 사용하여 피검물 및/또는 표지된 시약을 적어도 2개의 시약 도트들에 전달할 수 있다.
[00138] 몇몇 구체예에서, 검사 장치는 검사 장치의 적어도 일부를 커버하는 하우징을 추가로 포함할 수 있는데, 여기서 하우징은 적어도 2개의 시약 도트들의 상류로부터 또는 시약 도트들로 샘플을 적용할 수 있게 해주는 샘플 적용 포트 및 적어도 2개의 시약 도트들에서 시그널 검출을 가능케 하는 적어도 2개의 시약 도트들 주변의 옵틱 오프닝을 포함한다. 옵틱 오프닝은 적당한 방식으로 달성할 수 있다. 예컨대, 옵틱 오프닝은 단순히 개방된 공간일 수 있다. 또는 옵틱 오프닝은 투명한 커버일 수 있다.
[00139] 또 다른 구체예에서, 하우징은 검사 장치 전체를 커버할 수 있다. 또 다른 구체예에서, 매트릭스의 샘플 수납부 또는 샘플 적용 구성요소의 적어도 일부는 하우징에 의해 커버되지 않고 샘플이 하우징 외부의 매트릭스의 샘플 수납부 또는 샘플 적용 구성요소의 일부에 적용된 다음 적어도 2개의 시약 도트들로 전달된다. 하우징은 적절한 물질을 포함할 수 있다. 예컨대, 하우징은 플라스틱 재료, 생물분해성 재료 또는 셀룰로스 재료를 포함할 수 있다. 또 다른 예에서, 하우징은 그의 일부 또는 전부가 불투명, 반투명 및/또는 투명한 재료일 수 있다.
[00140] 몇몇 구체예에서, 본 발명은 액체 샘플이 검사 장치를 따라 측방 유동하여 적어도 2개의 시약 도트에서 검출가능한 시그널(들)을 생성하는 검사 장치를 제공한다.
C. 2차원 특징부를 갖는 측방 유동 장치를 이용한 피검물의 검사 방법
[00141] 또 다른 측면에서, 본 발명은 전술한 검사 장치를 이용하여 피검물을 검출하는 방법을 제공한다. 예시적인 일 구체예에서, 본 발명은 액체 샘플에서 피검물을 검출하는 방법을 제공하는데, 이 방법은 a) 액체 샘플을 전술한 검사 장치와 접촉시키되, 이 액체 샘플을 적어도 2개의 시약 도트들의 상류의 검사 장치 부위에 적용하는 단계; b) 액체 샘플에 피검물이 존재할 경우, 이 피검물을 적어도 2개의 시약 도트들에 전달하는 단계; 및 c) 적어도 2개의 시약 도트에서 생성된 시그널(들)의 존재, 부재, 양 및/또는 패턴을 평가하여 액체 샘플 중의 피검물의 존재, 부재 및/또는 양을 결정하는 단계를 포함한다. 시약 도트들에서의 시그널(들)은 피검물, 시약 도트에 위치하는 시약, 액체 샘플에 첨가된 시약 및/또는 사용전 검사 장치 상에서 건조된 다른 시약과 관련된 화학, 생화학, 전기화학 및/또는 결합 반응과 같은 적절한 반응에 의해 생성되어 액체 샘플 또는 다른 액체에 의해 시약 도트들로 전달된다.
[00142] 또 다른 예시적인 구체예에서, 시약 도트들의 시그널(들)은 피검물, 시약 도트에 위치하는 시약, 액체 샘플에 첨가된 시약 및/또는 사용전 검사 장치 상에서 건조된 다른 시약과 관련된 결합 반응에 의해 생성되어 액체 샘플 또는 다른 액체에 의해 시약 도트들로 전달된다. 예컨대, 이 방법은 a) 액체 샘플을 전술한 검사 장치와 접촉시키되, 이 액체 샘플을 적어도 2개의 시약 도트들의 상류의 검사 장치 부위에 적용하는 단계; b) 액체 샘플에 피검물이 존재할 경우, 이 피검물과 표지된 시약을 적어도 2개의 시약 도트들에 전달하는 단계; 및 c) 적어도 2개의 시약 도트에서 생성된 시그널(들)의 존재, 부재, 양 및/또는 패턴을 평가하여 액체 샘플 중의 피검물의 존재, 부재 및/또는 양을 결정하는 단계를 포함한다.
[00143] 몇몇 구체예에서, 액체 샘플 및 표지된 시약을 미리 혼합하여 혼합물을 형성하고 이 혼합물을 검사 장치에 적용한다. 예를 들어, 표지된 시약을 액체에 제공하거나 액체 중에 보관한 다음 샘플 액체와 예비 혼합하여 혼합물을 형성하고 이 혼합물을 검사 장치에 적용한다. 또 다른 예에서는, 표지된 시약을 검사 장치와 유체 교통하지 않는 용기 또는 장소, 예컨대 마이크로타이터 플레이트 웰과 같은 웰 또는 검사 튜브에서 건조시킬 수 있다. 사용시, 샘플 액체를 검사 튜브 또는 웰과 같은 용기에 첨가하여 혼합물을 형성시킨 다음 혼합물을 검사 장치로 적용할 수 있다.
[00144] 또 다른 구체예에서, 검사 장치는 사용 전에 건조 표지된 시약을 포함하며 이 건조 표지된 시약은 가용화 또는 재현탁되어 액체 샘플 및/또는 다른 액체에 의해 적어도 2개의 시약 도트들로 전달된다. 건조 표지된 시약은 검사 장치 상의 적절한 장소에 위치될 수 있다. 예컨대, 건조 표지된 시약은 샘플 적용 장소의 하류에 위치할 수 있으며, 건조 표지된 시약은 가용화 또는 재현탁되어 액체 샘플 및/또는 다른 액체에 의해 적어도 2개의 시약 도트들로 전달된다. 또 다른 예에서, 건조 표지된 시약은 샘플 적용 부위의 상류에 위치하고, 건조 표지된 시약은 가용화 또는 재현탁되어, 다른 액체에 의해 적어도 2개의 시약 도트로 전달된다.
[00145] 몇몇 구체예에서, 표지된 시약은 가용화 또는 재현탁되어, 액체 샘플 단독에 의해 적어도 2개의 시약 도트들로 전달된다. 또 다른 구체예에서, 피검물 및/또는 표지된 시약은 가용화 또는 재현탁되어 다른 액체에 의해 적어도 2개의 시약 도트들로 전달된다. 또 다른 구체예에서, 피검물 및/또는 표지된 시약은 가용화 또는 재현탁되어 액체 샘플 및 다른 액체 두 가지 모두에 의해 적어도 2개의 시약 도트들로 전달된다.
[00146] 본 발명의 검사 장치는 적절한 샘플 액체 중에서 피검물을 검사하는데 이용될 수 있다. 몇몇 구체예에서, 액체 샘플은 전혈, 혈청, 혈장, 뇨 샘플 또는 구강액과 같은 체액 샘플일 수 있다. 이러한 체액 샘플은 직접 또는 사용되거나 또는 사용 전에, 예컨대 강화, 정제 또는 희석 등의 가공 처리를 거칠 수 있다. 또 다른 구체예에서, 액체 샘플은 파지, 바이러스, 박테리아 세포, 진핵생물 세포, 진균 세포, 포유동물 세포, 배양된 세포, 세포 또는 서브세포 구조물, 세포 집괴, 조직 또는 장기와 같은 고형 또는 반고형 생물학적 물질로부터 유도된 액체 추출물, 현탁액 또는 용액일 수 있다. 특정 구체예에서, 액체 샘플은 생물학적, 법의학적, 식품, 세균전, 또는 환경 소스로부터 유래한 샘플이다. 또 다른 구체예에서, 샘플 액체는 임상 샘플, 예컨대 인간 또는 동물의 임상 샘플이다. 또 다른 구체예에서, 샘플 액체는 인공적으로 만들어진 샘플, 예컨대 품질 검사 또는 보정 목적의 표준 샘플일 수 있다.
[00147] 본 발명의 검사 장치는 적절한 샘플 액체 중의 피검물의 존재, 부재 및/또는 양을 검사하는데 이용될 수 있다. 몇몇 구체예에서, 본 발명의 검사 장치는 적절한 샘플 액체 중의 피검물의 존재 또는 부재를 검사하는데, 즉 yes 또는 no의 응답을 제공하는데 이용된다. 또 다른 구체예에서, 본 발명의 검사 장치는 액체 샘플 중의 피검물의 양을 정량 또는 반정량하는데 이용된다.
[00148] 본 발명의 검사 장치는 적절한 샘플 액체 중의 단일 피검물의 존재, 부재 및/또는 양을 검사하는데 이용될 수 있다. 별법으로, 본 발명의 검사 장치는 액체 샘플 중의 복수개의 피검물의 존재, 부재 및/또는 양을 검사하는데 이용될 수 있다. 또 다른 구체예에서, 본 발명의 검사 장치는 액체 샘플 중의 복수개의 피검물의 양을 정량 또는 반정량하는데 이용될 수 있다.
[00149] 본 발명의 검사 장치는 샘플 액체 중의 적절한 피검물의 존재, 부재 및/또는 양을 검사하는데 이용될 수 있다. 예시적인 피검물로는 무기 분자, 유기 분자 또는 그의 복합체를 들 수 있다. 예시적인 무기 분자로는 소듐, 포타슘, 마그네슘, 칼슘, 염소, 철, 구리, 아연, 망간, 코발트, 요오드, 몰리브덴, 바나듐, 니켈, 크롬, 불소, 규소, 주석, 붕소 또는 비소 이온과 같은 이온을 들 수 있다. 예시적인 유기 분자로는 아미노산, 펩타이드, 단백질, 뉴클레오사이드, 뉴클레오타이드, 올리고뉴클레오타이드, 핵산, 예컨대 DNA 또는 RNA 분자, 또는 이들의 하이브리드, 비타민, 단당류, 올리고당류, 탄수화물, 지질 및 이들의 복합체를 들 수 있다. 몇몇 구체에에서, 피검물은 세포, 바이러스 또는 분자이다. 다른 구체예에서, 피검물은 hCG, hLH, hFSH, hTSH, 질병 또는 질병 마커, 예컨대, 심장 마커, 감염성 생물체의 항원, 감염성 생물체에 대한 항체 등이다.
[00150] 본 발명의 방법은 적절한 목적에 이용될 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 방법은 임상 진단, 예후 판단, 위험 평가 및 예측, 전략화 및 치료 모니터링 및 조정을 위해 이용될 수 있다. 또 다른 예에서, 본 발명의 방법은 다양한 연구 목적, 예컨대 기초 연구, 약물 후보 스크리닝, 동물 연구 및 임상 연구에 이용될 수 있다. 또 다른 예에서, 본 발명의 방법은 표준 설정, 품질 검사, 불법 약물 스크리닝, 식품 안전성, 환경 안정성, 공업 안정성, 공해, 세균전 물질의 검출, 약물 또는 약품의 스크리닝, 및 원치않는 분자를 찾기 위해 바이오리액터를 사용하는 제조 공정의 품질 모니터링 등에 이용될 수 있다. 본 발명의 검사 장치와 방법은 실험실, 의원, 병원, 주치의의 사무실, 가정, 자연 환경, 전장 및 응급 환경, 예컨대 화재현장, 준의료 또는 경찰 업무 등에 이용될 수도 있다.
D. 2차원 특징부를 갖는 측방 유동 장치의 제조 방법
[00151] 또 다른 측면에서, 본 발명은 액체 샘플에서 피검물을 검출하기 n이한 검사 장치의 제조 방법을 제공하는데, 이 방법은 매트릭스 상에 복수개의 시약 도트들을 형성시키되, 여기서 상기 시약 도트들 중 적어도 2개는 서로 중첩됨이 없이 서로 충분히 이격되어 있어서, 상기 액체 샘플이 상기 매트릭스를 따라 측방향으로 유동할 때, 상기 2개의 시약 도트들 중 하나로, 하나를 통해 및/또는 하나를 따라 일어나는 상기 액체 샘플의 유동이, 상기 나머지 다른 시약으로의, 나머지 다른 시약을 통한 및/또는 나머지 다른 시약을 따라 일어나는 상기 액체 샘플의 유동에 실질적으로 영향을 미치지 않고, 상기 2가지 시약 도트들 각각은 상기 액체 샘플의 유동 방향에 수직 방향인 상기 매트릭스의 전체 폭에 걸친 시약 라인도 아니고, 시약 라인의 완전한 써클도 아니며, 액체 샘플이 상기 검사 장치를 따라 측방향으로 유동하여 상기 적어도 2개의 시약 도트를 통과한 후, 상기 적어도 2개의 시약 도트들이 소정의 패턴을 형성하여, 상기 액체 샘플 중의 상기 피검물의 존재 여부 및/또는 양을 가리키게끔 되어 있는 것이다.
[00152] 복수개의 시약 도트들은 소정의 적절한 패턴을 형성할 수 있다. 몇몇 구체예에서, 복수개의 시약 도트들은 복수개의 선, 심볼, 기하학적 형상 또는 문자-숫자 형상을 형성한다. 적절한 문자-숫자 형상은 어느 것이든 형성가능하다. 예시적인 문자-숫자 형상으로는 1개의 문자, 단어, 숫자, 또는 이들의 조합을 들 수 있다. 시약 도트 선은 적절한 방향으로 형성될 수 있다. 일례로, 선은 실질적으로 액체 샘플 유동 방향과 실제로 평행할 수 있다. 또 다른 예에서, 선은 액체 샘플 유동 방향에 대해 실제로 수직일 수 있다. 또 다른 예에서, 시약 도트들은 액체 샘플 유동 방향에 실질적으로 평행한 적어도 1개의 선과 액체 샘플 유동 방향에 대해 실제로 수직인 적어도 1개의 선을 포함한다.
[00153] 시약 도트들은 적절한 방법에 의해 매트릭스 상에 형성될 수 있다. 몇몇 구체예에서, 복수개의 시약 도트들은 매트릭스 상의 소장의 장소에 시약을 분배함으로써 형성된다. 적절한 분배 기술 또는 방법을 이용할 수 있다. 예컨대, 드롭 온 디맨드 (drop on demand) 방법 또는 시약의 기계적 전달을 이용하는 프린팅법에 의해 분배할 수 있다. 적절한 드롭 온 디맨드 방법을 이용할 수 있다. 예컨대, 드롭 온 디맨드 방법은 잉크젯 또는 솔레노이드 밸브 기반 디스펜서, 압전식 디스펜서, 스크린 프린팅, 에어젯 또는 에어브러쉬 기술, 할로우 핀 프린팅 또는 근접식 분배를 이용하여 수행될 수 있다.
[00154] 검사 장치 내의 시약 도트들은 적절한 크기(들)을 가질 수 있다. 일례로, 시약 도트들 중 적어도 1개는 직경이 약 0.1-1 um, 1-10 um, 10-50 um, 51-100 um, 101-200 um, 201-300 um, 301-400 um, 401-500 um 및 501-1000 um이다. 또 다른 예에서, 시약 도트들의 적어도 1/4, 1/3, 1/2 또는 모든 시약 도트들은 직경이 약 0.1-1 um, 1-10 um, 10-50 um, 51-100 um, 101-200 um, 201-300 um, 301-400 um, 401-500 um 또는 501-1000 um이다. 또 다른 예에서, 시약 도트들 중 적어도 1개는 막의 폭과 길이로 측정시 매트릭스의 길이, 폭 또는 표면적의 직경 또는 표면적의 직경 또는 표면적의 약 10%, 5%, 1%, 0.5%, 0.1%, 0.05%, 0.01%, 0.001% 또는 그 미만인 직경 또는 표면적을 갖는다. 또 다른 예에서, 시약 도트들의 적어도 1/4, 1/3, 1/2 또는 모든 시약 도트들은 매트릭스의 길이, 폭 또는 표면적의 직경 또는 표면적의 약 10%, 5%, 1%, 0.5%, 0.1%, 0.05%, 0.01%, 0.001% 또는 그 미만인 직경 또는 표면적을 갖는다.
[00155] 검사 장치 중의 시약 도트들은 같거나 다른 크기(들) 또는 직경(들)을 가질 수 있다. 일례로, 시약 도트들의 적어도 1/4, 1/3, 1/2 또는 모든 시약 도트들은 실제로 동일한 크기 또는 직경을 갖는다. 또 다른 예에서, 시약 도트들의 적어도 1/4, 1/3, 1/2 또는 모든 시약 도트들은 실제로 서로 다른 크기 또는 직경을 갖는다.
[00156] 검사 장치 내의 시약 도트들은 적절한 형상, 예컨대, 적절한 규칙적 또는 불규칙적 형상을 갖는다. 일례로, 시약 도트들 중 적어도 1개는 선, 원, 막대, 사각형, 삼각형, 직사각형 또는 불규칙한 모양을 갖는다. 또 다른 예에서, 시약 도트들의 적어도 1/4, 1/3, 1/2 또는 모든 시약 도트들은 그 모양이 선, 원, 막대, 사각형, 삼각형, 직사각형 또는 불규칙한 모양이다. 검사 장치 내의 시약 도트들은 같거나 다른 모양(들)을 가질 수 있다. 일례에서, 시약 도트들의 적어도 1/4, 1/3, 1/2 또는 모든 시약 도트들은 동일한 형상을 갖는다. 또 다른 예에서, 시약 도트들의 적어도 1/4, 1/3, 1/2 또는 모든 시약 도트들은 다른 모양을 갖는다.
[00157] 시약 도트들 간의 간격(들) 또는 거리(들)은 적절히 설정할 수 있다. 일례에서, 시약 도트들 간의 거리는 약 1-10 um, 10-50 um, 51-100 um, 101-200 um, 201-300 um, 301-400, 401-500, 또는 501-600 um이다. 시약 도트들 간의 간격(들) 또는 거리(들)은 같거나 다를 수 있다. 일례로, 시약 도트들의 적어도 1/4, 1/3, 1/2 또는 모든 시약 도트들 간의 간격 또는 거리는 실제로 동일하다. 또 다른 예에서, 시약 도트들의 적어도 1/4, 1/3, 1/2 또는 모든 시약 도트들 간의 간격 또는 거리는 서로 다르다.
[00158] 시약 도트들은 매트릭스의 적절한 장소 또는 사이드(들) 상에 형성될 수 있다. 일례로, 본 발명의 방법은 복수개의 시약 도트들의 단일층 또는 복수개의 층을 형성하는 단계를 포함한다. 또 다른 예에서, 본 발명의 방법은 매트릭스의 양쪽면 모두에서 복수개의 시약 도트들로 된 층을 적어도 1개 형성하는 단계를 포함한다. 또 다른 예에서, 본 발명의 방법은 매트릭스의 야쪽면 모두에서 복수개의 시약 도트들로 된 복수개의층을 형성하는 단계를 포함한다. 또 다른 예에서, 본 발명의 방법은 복수개의 시약 도트들로 된 복수개의 층을 형성하는 단계들 사이에 건조 단계를 더 포함한다.
[00159] 몇몇 구체예에서, 본 발명은 전술한 방법(들)에 의해 제작된, 액체 샘플 중에서 피검물을 검출하기 위한 검사 장치를 제공한다.
V. 도면의 간단한 설명
[0041] 이 특허 또는 출원 파일은 컬러 도면을 적어도 하나 포함한다. 컬러 도면(들)을 포함하는 이 특허 또는 특허출원공개문서의 사본은 필요한 비용 지불과 함께 신청시 특허청으로부터 제공받을 수 있다.
[0042] 도 1은 측방 유동 검사 포맷의 개략도이다.
[0043] 도 2(a)는 샌드위치 포맷의 검사 전개를 도식적으로 나타낸 도면이다. 도 2(b)는 경쟁적 포맷의 검사 전개를 도식적으로 나타낸 도면이다.
[0044] 도 3(a)는 친화도가 없는 포획 시약의 경우 도트들의 전개를 개략적으로 나타낸 도면이다. 도 3(b)는 친화도가 낮은 포획 시약의 경우 도트들의 전개를 개략적으로 나타낸 도면이다. 도 3(c)는 표적에 대한 친화도가 높은 포획 시약의 경우 도트들의 전개를 개략적으로 나타낸 도면이다.
[0045] 도 4는 표준 분배 방법의 경우 유동 방향에서 포획선에 대한 "플러스" 사인의 전개를 개략적으로 도시한 도면이다. 시약의 단일한 연속선이 사용된 경우, 유동 방향에 평행한 단일 검사(포획)선의 플러스 배열이 전개된다. 결합 시약 영역을 통한 유동 교란으로 인해 라인 전개가 불완전하다.
[0046] 도 5는 측방 유동 시스템에서의 1차원 유동 특성과 유동 경로에 저항을 설치한데 때한 유동 교란 효과를 도시한 도면이다. 결합 시약선 전방에 결합 시약 특징부를 위치시키자 측방 유동 시스템에서 선형 유동 특성이 입증되었다. 블로킹 특징부에 대한 결합은 유체 유동을 교란하고 유체를 차단체 주변으로 몰아서 차단체 후방의 결합 시약 선에 결합 시그널이 생성되는 것을 방지한다. 얼마간의 거리 후에 유동 방향에 수직한 확산이 일어나 얼마간의 전개가 일어나고 마지막으로 특징부가 충분히 멀리 위치하면 완전한 전개가 일어난다. 충분한 측방 확산이 일어나는데 필요한 거리는 블로킹 특징부의 크기와 다공성 물질의 포어 크기에 따라 달라진다.
[0047] 도 6은 1차원적인 정량 분석을 도식적으로 나타낸 도면이다. 적절한 크기의 특징부를 적절한 거리로 위치시키면 시약의 측방 유동이 특징부들 사이에서 교란되지 않아 모든 특징부들이 이동 중의 피검물에 균일하게 노출될 수 있다. 이에 따라 피검물이 점진적으로 결합할 수 있고 결합 영역을 피검물이 통과하여 이동함에 따라 피검물이 점진적으로 고갈될 수 있다. 따라서 유동 경로에 따른 추가적인 결합 시그널 강도의 변화는 피검물 농도를 나타낸다. 이러한 특징부는 정량적인 온도계와 같은 결과를 창출하는데 이용될 수 있다.
[0048] 도 7은 2차원적인 정량 분석을 도식적으로 나타낸 도면이다. 결합 시약이 2차원 픽셀로서 유동 경로 내에 위치되어 있다. 결합 시약의 농도는 유동 방향 내의 모든 픽셀에서 동일하지만, 농도는 유동 방향에 대해 수직인 각각의 행마다 다르다. 이 시스템은 도 6에서와 동일한 방식으로 정량을 수행하지만, 2차원 결합 시약의 적정으로 인해, 보다 역동적인 분석 범위를 생성하게 해준다.
[0049] 도 8은 다중 어레이 (4개의 피검물)의 도식적으로 나타낸 도면이다. 각 "채널"에 서로 다른 결합 시약을 사용함으로써 피검물 검출을 다중화할 수 있다.
[0050] 도 9는 예시적인 글자 숫자 픽셀 어레이를 나타낸 도면이다. 어레이는 어느 방향으로는 프린트할 수 있으므로 글자-숫자 결과를 만들 수 있다.
[0051] 도 10A 및 도 10B는 예시적인 시그널 판독값의 프로그램된 이미지와 실제 이미지를 도시한 것이다. 도 10A는 프로그램된 "X" 심볼을 나타낸 것이다. 도 10B는 실제 검사로부터 얻은 "X" 심볼을 나타낸 도면이다.
[0052] 도 11A 및 도 11B는 예시적인 시그널 판독값의 프로그램된 이미지와 실제 이미지를 도시한 것이다. 도 11A는 프로그램된 "+" 심볼을 나타낸 것이다. 도 11B는 실제 검사로부터 얻은 "+" 심볼을 나타낸 도면이다.
[0053] 도 12A 및 도 12B는 또 다른 예시적인 시그널 판독값의 프로그램된 이미지와 실제 이미지를 도시한 것이다. 도 12A는 프로그램된 "+" 심볼을 나타낸 것이다. 도 12B는 실제 검사로부터 얻은 "+" 심볼을 나타낸 도면이다.
[0054] 도 13A 및 도 13B는 예시적인 시그널 판독값의 프로그램된 이미지와 실제 이미지를 도시한 것이다. 도 13A는 프로그램된 "X" 심볼을 나타낸 것이다. 도 13B는 실제 검사로부터 얻은 "X" 심볼을 나타낸 도면이다.
[0055] 도 14A 및 도 14B는 예시적인 시그널 판독값의 프로그램된 이미지와 실제 이미지를 도시한 것이다. 도 14A는 프로그램된 "TC" 심볼을 나타낸 것이다. 도 14B는 실제 검사로부터 얻은 "TC" 심볼을 나타낸 도면이다.
[0056] 도 15A 및 도 15B는 예시적인 시그널 판독값의 프로그램된 이미지와 실제 이미지를 도시한 것이다. 도 15A는 프로그램된 "X" (박스 내) 심볼을 나타낸 것이다. 도 15B는 실제 검사로부터 얻은 "X" (박스 내) 심볼을 나타낸 도면이다.
[0057] 도 16A 및 도 16B는 예시적인 시그널 판독값의 프로그램된 이미지와 실제 이미지를 도시한 것이다. 도 16A는 또 다른 프로그램된 "YES" 및 "NO" 심볼을 나타낸 것이다. 도 16B는 실제 검사로부터 얻은 "YES" 및 "NO" 심볼을 나타낸 도면이다.
[0058] 도 17은 시그널의 선명도를 개선시키기 위한 실제 검사로부터 얻은 다양한 심볼을 나타낸 도면이다.
[0059] 도 18은 형광 표지 (유로피움)을 이용한 실제 검사로부터 얻은 "X" 심볼을 나타낸 도면이다.
[0060] 도 19A - 도 19E는 측방 유동 분석법에서 "픽셀" 개념을 이용한 시그널 전개의 최적화를 나타낸 도면이다.
[0061] 도 20A - 도 20D는 다중화된 측방 유동 분석법에서 "픽셀" 개념을 적용한 도면이다.
[0062] 도 21A - 도 21D는 보다 적은 분배 용량을 이용하여 다양한 스팟 패턴의 구조를 나타낸 도면이다.
E. 예시적인 구체예
[00160] 몇몇 구체예에서, 본 발명은 검사 매트릭스 내에서 시약의 유동을 교란하지 않음으로 해서, 복수개의 작은 시그널 특징부가 전개 및 조합되어 심볼과 문자를 형성할 수 있게 해주는, 도트들 (또는 "픽셀들")을 포함한 시그널을, 비표준 포맷으로 생성할 수 있게 해주는, 측방 유동 포맷에서 포획 시약 기하학을 분배하는 방법을 제공한다. 또 다른 구체예에서, 본 발명은 다중화 및 정량적 테스팅과 공용가능한 특징화 가능한 지표들을 이용하여 측방 유동 테스트에 사용가능한 새로운 장치를 제공한다. 이러한 본 발명의 방법의 결과 생성될 수 있는 신규하고 개선된 분석 포맷에 관한 구체예들, 단일 장치에서 수행될 다중 검사법을 가능케 해주는 독특한 장치 구조물 및 검사 결과의 정량적 및 정성적 해석을 개선시켜줄 수 있는 독특한 장치 구조물 역시도 제공된다.
[00161] 본 발명의 일 측면은 프린트된 시약을 통해, 유체 및 입자들의 유동에 대한 저항이 낮은 소정의 "픽셀화된" 패턴으로, 플라스틱 필름과 같은 다공성 및/또는 무공성 매트릭스 상에 화학적 또는 생물학적 시약들 ("시약들")을 분배하는 방법에 관한 것이다. 이러한 패턴들은 시스템 내의 이론적인 유동 방향에 대해 수직인 샘플/접합체 유동의 확산 거리 순서로 공간적으로 이격된 크기 특징부를 갖는다. 이들 특징부의 크기와 상호 간의 위치는 각 특징부로 하여금 반응 매트릭스를 폐색시키거나 달리 유동을 방해함이 없이, 검사 시스템 내의 시약들과 개별적으로 상호반응하게 해준다. 이러한 특징부의 크기와 상대적인 위치는 표면의 종류 (무공성/다공성), 다공성일 경우 포어의 크기 및 포획 시약 친화도와 같은 시약 특징 및 물질에 따라 달라질 것이다.
[00162] 본 발명의 방법을 이용하여 측방 유동 막 또는 기타 매트릭스 상에, 전통적인 측방 유동 시스템에서와 같이 유동방향에 수직방향으로 전개될 뿐 아니라 유동 방향에 평행하게 전개되기도 하는 복잡 또는 단순한 시약 패턴을 생성하는 것이 가능하다. 이 방법은 또한 니트로셀룰로스 막, 유리섭유 및 플라스틱 및 필름을 비롯하여 유체를 컨덕트할 수 있는 다양한 매트릭스 상에 이러한 특징부를 생성하는데 이용될 수도 있다. 이 방법은 또한 선, 도트 및 기하학적 문양 및 문자-숫자 형상을 비롯한 다양한 심볼을 생성하는데 이용될 수도 있다.
[00163] 본 발명의 특정 구체예에서, 본 발명의 방법을 정량적 검사 결과를 얻는데 이용할 수 있다. 픽셀 포맷은 피검물이 픽셀의 필드를 통해 유동함에 따라 피검물의 농도 고갈을 검출하는 능력을 제공한다. 이것은 도 6(a) 및 6(b)에 도식적으로 도시되어 있다. 동일한 원리가 입자 및 비입자(분자) 표지에 적용된다. 예시적인 검사 포맷은 다음과 같다: 1. 측방 검사 스트립 막에 픽셀 필드를 분배하되, 여기서 상기 픽셀 필드는 도시된 것과 같은 패턴으로 막의 폭에 걸쳐 일련의 시약 도트들로 이루어져 있는 것이다. 도트들은 측방 확산이 스팟 들간에 일어날 수 있도록 해주는 거리로 물리적으로 이격되어 있거나 옵셋될 수 있다. 샘플이 이 필드를 통해 유동하면, 피검물은 도트에 결합하여 피검물이 막을 따라 더 이동함에 따라 점차 고갈된다. 이어서 접합체가 시스템을 따라 후속적으로 유동하면, 매트릭스의 하부로부터 상부로 시그널 강도가 감소하는 것으로, 피검물 농도가 고갈되는 것을 알 수 있다. 이것은 육안 또는 판독기를 이용하여 농도 구배를 직접 측정함으로써 피검물의 적정 또는 정량화를 달성하는 검사 포맷의 기초를 형성할 수 있다.
[00164] 1차원으로 포획 시약을 적정함으로써 샘플이 스트립을 런업 할 때 2차원 결합 어레이가 형성되어, 이 기술을 보다 정교하게 만들 수 있다 (도 7에 도식적으로 나타나 있음). 이 시스템에서, 결합 픽셀의 선들이 유동 방향으로 나란히 분배되며, 각각의 선들은 결합 시약을 서로 다른 농도로 함유한다. 이렇게 생성된 2차원 결합 패턴은 광범한 동력학을 갖는 시스템에서 피검물의 정량적 측정을 가능케 하는 시스템을 만들어낸다.
[00165] 추가적인 개량은 이 포맷을 다중화 검출법 또는 정량법에 사용하는 것과 관련이 있다. 다중화 포맷에 픽셀 포맷을 어떻게 사용하는지에 관한 예가 도 8에 도시되어 있는데, 이 도면에는, 픽셀 크기가 약 250 um이고 픽셀들이 100 um 간격으로 이격되어 있는 4 x 20 픽셀의 포맷을 이용하는, 4개의 피검물에 대한 픽셀 패턴이 도시되어 있다. 샘플 유동 방향으로 20 픽셀 디멘젼이 레이 다운되어 있다.
[00166] 시그널 생성은 유동 방향에 수직한 포획 시약을 배향하는 것에 의존하지 않으므로 이 방법을 이용하여 문자-숫자 또는 그래픽 결과를 생성할 수 있다. 단어 또는 용이한 해석이 가능한 심볼 형태, 또는 암호화된 숫자 결과의 생성 또는 제품 상의 아이덴티파이어의 생성을 수반하는 복수개의 잠재적인 구체예들을 상정할 수 있다.
[00167] 이 구체예에서 분석 매트릭스의 생성은 개별적인 소적들을 분배하는 것이다. 어레이의 분배 방법은 잉크젯, 바이오젯, 할로우 핀 또는 압전식을 비롯한 다양한 기술에 기초할 수 있다. 다른 분배 방법도 고려할 수 있다.
[00168] 바람직한 일 구체예에서 분배 기술은 프린팅법이다. 이 구체예에서, 이 방법은 개별적인 특징부가 피검물과 시그널 시약을 포획하여 시약의 결합 친화도와 무관하게, 시약이 피검물에 대해 어느 정도의 친화도를 갖는 한, 완전히 전개되도록 하는 디멘젼(3개축 모두에서)을 갖는 개별적인 특징부들을 생성하도록, 유동 경로에서 시약 픽셀들을 프린팅하는 것을 포함한다.
[00169] 개별적인 특징부들의 3차원 매트릭스 어레인지먼트는 하나의 평면으로 볼 때 검사 해석에 이용될 수 있는 심볼 (문자-숫자, 선 또는 도트들)과 같은 검사 결과를 대표하는 지표를 생성하는 보다 큰 패턴을 생성한다. 결과 해석은 정량적 또는 정성적일 수 있으며 육안 또는 판독기에 의해 수행될 수 있다. 정성적 검사의 경우, 이러한 지표의 존재 또는 부재가 검사 결과를 나타낼 것이다. 검사 결과가 정량적인 특성일 경우, 지표의 양, 크기 또는 강도가 대표적인 척도가 될 수 있다.
[00170] 또 다른 바람직한 구체예에서 분배 기술은 다층 프린팅이다. 이 구체예에서, 이 방법은 각각의 개별적인 특징부가 피검물과 시그널 시약을 포획하여, 시약이 피검물에 대해 어느 정도의 친화도를 갖는 한, 시약의 결합 친화도와 관계없이 완전히 전개되도록 하는 디멘젼 (3개축 모두에서)을 갖는 개별적인 특징부들을 생성하기 위해 유동 경로의 다중층에 시약을 프린팅하는 것을 포함한다. 다중 프린팅 층은 매트릭스의 동일한 면에서 일어날 수도 있고 또는 매트릭스의 반대면들에서 일어나, 매트릭스 내에서 서로 다른 깊이로 특징부를 만들어낼 수 있다.
[00171] 개별적인 특징부들의 3차원적인 매트릭스 어레인지먼트는 하나의 평면으로 볼 때 검사 해석에 이용될 수 있는 심볼 (문자-숫자, 선 또는 도트들)과 같은 검사 결과를 대표하는 지표를 생성하는 보다 큰 특징부들을 생성한다. 결과 해석은 정량적 또는 정성적일 수 있으며 육안 또는 판독기에 의해 수행될 수 있다. 정성적 검사의 경우, 이러한 지표의 존재 또는 부재가 검사 결과를 나타낼 것이다. 검사 결과가 정량적인 특성일 경우, 지표의 양, 크기 또는 강도가 대표적인 척도가 될 수 있다.
잠재적인 구체예 예시
[00172] 설명된 모든 구체예에서, 검사시 시그널을 생성하는데 사용된 시그널 시약에는 육안관찰 가능한, 상자성, 광학 여기되는 입자들 또는 분자들이 포함된다. 광학 여기(optically excited)에는 형광, 발광, 업 컨버팅 인)이 포함되며 또한 육안, 형광 및 전기화학적 시그널링을 위한 효소도 추가된다. 다른 유형의 시그널 생성도 상정할 수 있다.
1. 측방 유동 스트립 상의 문자-숫자 심볼
[00173] 1.1. 적용예: + 및 - 가 양성 또는 음성을 가리키는 임신 검사. 특정 적용예로 제한되는 것은 아니며 설명 목적을 위해 제공된 것일 뿐이다. 이 예시는 측방 유동 스트립 상에 진성 + 및 -를 생성하는 방법을 설명한다.
[00174] 대부분의 임신 검사에서는, 양성 시그널을 생성하기 위해 hCG 분자에 결합하는 2개의 항체가 이용된다. 항hCG 알파는 검사선 상에 스트라이프되고 항hCG 베타는 표지에 접합되어 시그널을 생성할 수 있다. 이들은 종종 모노클로날 항체이다. 따라서 시스템 상의 대조선은 hCG가 존재하건 아니건, 접합된 항hCG 베타 항체에 직접 결합하는 항마우스 항체일 것이다. 전형적인 시스템에서 검사선과 대조선은 2개의 독립적인 선으로서 유동 방향에 대해 수직이다. 이 구체예에서, 하나의 선은 유동 방향에 수직으로 스트라이프 되어 있고, 다른 하나는 유동 방향으로 스트라이프 되어 있어, 스트립의 중심에서 서로 교차한다. 피검물이 존재하지 않을 경우, 오직 하나의 선만이 전개하여, "-"를 생성한다. 피검물이 존재하면, 두 개의 선 모두가 전개되어 "+"가 나타나게 된다. 이것은 본 발명의 시스템에서는 유동 방향에서 구별되는 선들을 전개시키는 것이 가능하기 때문에, 본 발명의 구체예에서는 가능하지만, 표준 측방 유동 시스템에서는 가능하지 않다. 이 포맷은 또한 선들이 유동 각도에 있을 때 "+" 보다는 "x"를 생성한다.
[00175] 1.2. 이 구체예는 약물 남용 검사와 같이, 분석이 경쟁적 분석인 상황에서도 기능한다. 이 경우, 피검물이 존재하면 두번째 선이 생성되지 못한다. 그러나, 이 시스템에서 양성은 "-" 심볼을 생성하므로, 다른 심볼이 이용될 수 있을 것이다 (예컨대 후술하는 구체예 2 참조).
[00176] "+" 또는 "-" 뿐만 아니라, 이 방법은 측방 유동에서의 리포팅 메카니즘으로서 단어를 만드는데도 이용할 수 있다. 스트립에 "Yes"라는 단어를 프린트하여 피검물 존재 하에 전개시킬 수 있다. 탄저병 검사와 같이 검사 결과의 해석이 극히 중요한 세균전 등의 응용예에서, 예컨대 "Danger(위험)"이라는 단어가 나타나면, 병사들 또는 기술자들은 가능한 노출 위험이 진행되고 있음을 알게 될 것이다.
2. 경쟁적 측방 유동 분석법에 있어서의 문자 숫자 양성 리포팅 시스템
[00177] 경쟁적인 분석 시스템에서, 피검물이 존재하면 검사선이 사라지게 된다. 이러한 리포팅 포맷은 양성인 경우 선이 나타나는데 익숙한 몇몇 사용자들에게 혼란을 야기할 수 있다. 경쟁적 분석법은 예컨대 남용 약물, 중요한 많은 바이오분자와 같은 소형 분자를 검출하는데 있어서 중요한 포맷이다. 측방 유동 스트립 상에서 심볼을 생성하는 시스템은 해석방법의 향상을 가져왔다. 예컨대, 대조선은 모든 경우에 있어서 전개되도록 설계되며 "+" 심볼로서 배열시킬 수 있다. 검사선은 예컨대 "Not"이라는 문자숫자 계열의 단어로 프린트될 수 있다. 따라서 피검물이 존재하지 않을 경우, "Not+"라는 결과가 나타난다. 피검물이 존재하면, "Not"이라는 단어는 전개되지 않고 오직 "+" 심볼만이 전개된다. 이 특징부의 다른 유형들도 얼마든지 고려할 수 있다.
3. 정량화
[00178] 3.1. 이 검사 포맷의 일 구체예는 검사 스트립의 판독 영역을 통해 "픽셀(Pixels)" 또는 포획 시약의 개별적인 일련의 도트들을 생성하기 위한 것이다. 샘플이 판독 영역을 통해 이동함에 따라, 피검물은 이들 포획 도트들 모두에 결합하게 된다. 이와 같이 샘플이 시스템을 따라 이동함에 따라 피검물은 고갈되게 되어, 잠재적으로 스트립의 길이방향을 따라 스팟 강도의 구배가 생기게 된다. 이것은 시스템에 전개된 영역의 높이와 강도가 시스템 내의 피검물의 농도와 관계될 수 있는 "온도계" 스타일의 결과를 생성하는데 이용될 수 있다. 이것은 정량적 또는 반정량적 시스템에서 피검물 (예컨대, TnI 또는 pro BNP, FABP 또는 CKMB, 또는 항체 농도와 같은 심장 바이오마커)을 적정하는데 이용될 수 있다.
[00179] 3.2. 두번째 구체예에서, 프린트된 시약들의 개별적인 채널들이 막 상에 생성된다. "채널"은 전술한 예에 설명된 바와 같이, 유동 방향으로 배향된 불연속적인 영영들로서 각각의 영역은 포획 픽셀 세트로 구성된 것이다. 유동 방향으로 2개 이상의 불연속적인 채널이 나란히 존재할 수 있다. 물리적 분리는 요구되지 않는다. 포획 시약은 다중화 검사의 예에서 다른 시약일 수 있으며 이에 따라 각 채널이 단일 샘플 내의 상이한 피검물을 검출할 수 있다. 그러나 포획 시약은 또한 다른 농도의 동일한 시약일 수도 있다. 따라서, 상기 3.1 섹션에 설명된 적정 효과가 2차원적으로, 즉 유동 방향에 수직인 축방향에서의 포획 시약 적정, 및 유동 방향에서 일어나는 피검물의 적정 샘플이 포획 및 판독 영역을 통해 이동함에 따라 샘플로부터 피검물이 고갈됨에 따라 유동 방향에서 일어나는 피검물의 적정을 이용하여 적정 효과가 수행될 수 있다. 이에 따라 매우 광범한 범위에 걸쳐 피검물의 적정 및 정량화가 가능하다. 이것은 정상 및 검사 대상자 또는 샘플 중에서 광범위하게 존재할 수 있는 샘플 중의 피검물 수준을 정량하는데 이용될 수 있다 (예컨대 대부분의 측방 유동 시스템으로는 조작할 수 없는 광범한 범위인, 낮게는 10mIU/ml, 높게는 250,000 mIU/ml의 검출 수준을 검출하기 위해 적용되는 hCG의 경우).
[00180] 이 포맷은 또한 측방 유동 또는 기타 분석 포맷에 사용되기 위한 ㅎ항체 또는 기타 시약을 스크리닝하고 결합 키네틱스를 평가하는데도 이용가능하다. 예를 들어, 측방 유동 포맷용 항체를 스크리닝할 경우, 고친화도를 갖는 항체를 스크리닝하는 것이 유용하다. 이 항체들은 픽실화(pixilated) 분석법에서 뚜렷한 결합 특징부를 생성하게 된다 (예컨대, 고친화도 결합은 일반적으로 균일하게 전개된 도트보다는, 선단이 강하게 전개된 도트로서 나타날 것이다). 친화도가 높을수록 항체가 스트립을 따라 이동함에 따라, 더 많은 항체들이 샘플로부터 신속히 빠져나오게 될 것이다. 따라서, 개별적인 도트들의 전개 패턴을 평가하는 것 뿐 아니라 스트립의 전개 패턴이 얼마나 높게 일어나는지를 관찰함으로써, 고친화도 결합 시스템을 판독할 수 있다.
4. 검사 동정( Identification )
[00181] 스트립이 전개되는 경우에만 나타나게 되는 스트립 상의 문자-숫자 정보의 프린팅. 이 코드는 대조선 결합 시스템을 이용하여 전개될 수 있으며, 사실상 대조선일 수 있거나 또는 디바이스 상에서 관찰될 수 있다. 이것은 QC에서 위조방지 또는 제품 동정 목적으로, 또는 스트립 아이덴티티의 검정을 요구하는 응용에 이용될 수 있다 (예컨대 처방과 관련된 전화 또는 인터넷 기반 진단법).
5. 비선형( Non - linear ) 구체예
[00182] 픽실화(pixilation) 개념에 따라, 샘플이 중앙 웰에 첨가되어 웰 주변의 모든 방향으로 이동하는, 방사형(radial) 시스템과 같은 또 다른 분석 포맷을 만들 수 있다. 이것은 상기 3. 섹션에 설명된 바와 같이 다중화 또는 정량화에 이용될 수 있다. 픽실화 개념은 또한 프린트된 액체형 서킷 또는 다른 마이크로 유체 포맷에서와 같이 복합 유동 패턴을 만드는데 이용될 수도 있다.
6. 플로우 쓰루 ( Flow through ) 또는 하이브리드 플로우 쓰루 /측방 유동 시스템
[00183] 이 픽실화 개념은 수평 이동 뿐 아니라 유체의 수직 이동도 존재하는 플로우 쓰루 분석 포맷에 적용될 수 있다. 다단계가 문제되지 않는다면, 시약들이 분석 수행 중 수평적이 아니라 수직적으로 이동하는 플로우 쓰루 분석법이 일반적으로 사용된다 (예컨대 숙련된 스태프가 검사를 수행하고 CLIA 웨이버가 요구되지 않는 임상 실험실의 경우). 이들은 또한 개발도상국에서의 HIV 검사와 같이, 저가이며 복잡하지 않은 환경에서도 사용된다. 플로우 쓰루 포맷에서 흔히 마주치게 되는 문제점들 중 하나는 육안 또는 종종 판독기에 의한 개별적인 도트의 해석과 관련된, 결과의 해석이다. 이 시스템은 해석하기가 더 쉬운 도트들의 패턴을 생성하는데 이용될 수 있다.
7. 비표준형 물질 및 배열
[00184] 픽실화 개념 또는 포맷은 그 자체로 다른 분석 배열의 적용에 도움을 준다. 기본적으로, 막 위에 시약 패턴을 제조하는 이 방법은 니트로셀룰로스와 같은 저가의 막에서 어레이를 만드는 것을 가능하게 해주고, 이는 다시 막을 통한 시약의 측방 유동을 이용하여 프로브될 수 있다. 이것은 종이 또는 다른 재료에 응용될 수 있다. 이 방법론은 또한 정량과학적 단백질 테더링 시스템과 같은 테더링법과 연계되어, 측방 유동 기술에 의해 프로브될 수 있고 사용이 간편하고, 복잡하고 값비싼 공정 장비 및 고가의 플레이트 또는 슬라이드를 사용할 필요가 없는, 사용하기 쉬운 2차원 어레이를 만드는데 이용될 수 있다.
8. 3차원 픽셀 어레이
[00185] 이 구체예에서, 니트로셀룰로스와 같은 다공성의 친수성 매트릭스 또는 플라즈마 처리되거나 달리 친수성 처리된 플라스틱과 같은 무공성 친수성 매트릭스의 각 면에 시약의 어레이가 프린트된다. 포획 시약들은 같거나 다른 피검물에 대한 것들일 수 있다. 검사가 실시되면 매트릭스의 양쪽면에 분석결과가 전개되어 개별적으로 분석이 가능하다.
9. 시그널 판독
[00186] 이들 구체예들 중 어느 하나 또는 모두는 육안 또는 판독기 시스템에 의해 해석되도록 의도된다.
[00187] 일 측면에서, 본 발명은 기판 상의 유체 유동을 방해하지 않는 방식으로 내부 공간 배치된 단일 스트립 상에 픽셀화 된 어레이로 배치된 1종 이상의 시약들의 어레이를 가짐으로 해서, 샘플과 다양한 시약들 간에 연속적인 반응이 검사 스트립 전반에 걸쳐 균일하게 일어나는 진단용 검사 장치를 제공한다. 시약들의 개별적인 픽셀들은 검사 샘플의 특이적 구성요소와 반응하여 집합적으로 또는 개별적으로 정량적 또는 정성적으로 해석가능한 시그널을 형성한다. 이 시그널은 소정의 지표 형상을 나타낼 수 있다.
[00188] 몇몇 구체예에서, 2종 이상의 물질을 나타내는 검출가능한 시그널들을 생성하기 위해, 단일 스트립 상에 2개 이상의 서로 다른 시약 세트를 순차적으로 분배할 수 있다. 검사 샘플 중 2종 이상의 물질을 가리키는 검출가능한 시그널을 생성하기 위해 이들 2종 이상의 다른 시약 세트들을 단일 스트립 상에 단일 어레이로 동시에 분배할 수 있다. 이 2종 이상의 시약들은 또한 중첩된 적어도 2개 층의 시약을 갖는 3차원 어레이로 분배될 수도 있다. 다른 구체예에서, 스트립의 유동 방향으로 시그널을 전개하게 해주는 패턴으로 시약 세트들을 분배하여, 정성 또는 정량적인 단일 또는 다중 결과의 전개를 가능케할 수 있다.
[00189] 또 다른 측면에서, 본 발명은 분석 매트릭스에서 액체화된 검사 샘플 매질 (물질)에 대해 낮은 유동 저항을 갖는 진단용 검사 장치의 제조 방법을 제공하며, 이 방법은: 적어도 1종의 시약 물질을 친수성 도는 수화된 기판 재료 상에 소정의 2차원적인 픽셀화 어레이 패턴으로 분배하되, 픽셀 각각이 그 사이에 배큐어스 유체 유동 부피를 가짐으로 해서, 각 픽셀이 장치의 유동 경로에서 유의적인 저항을 일으킴이 없이 전개되도록 하는 단계를 포함한다.
[00190] 몇몇 구체예에서, 시약은 샘플 물질 및 특이적인 시약 픽셀들 간의 반응에 의해, 기판 재료 상에, 검사 결과를 나타내는 동정가능한 심볼 또는 소정의 패턴과 같은 검출가능한 시그널이 적어도 1개 생성되도록 하는 방식으로 분배될 수 있다. 지표는 문자-숫자, 기하학적 또는 기타의 소정 형상일 수 있다. 예시적인 시약으로 항체, 항원, 핵산, 예컨대, DNA 또는 RNA, 베이스형 분자, 단백질, 펩타이드 또는 기타ㅏ 다른 대형 또는 소형 분자를 들 수 있다.
[00191] 픽셀은 적절한 크기일 수 있다. 몇몇 구체예에서, 픽셀은 약 0.1-1 um, 1-10 um, 10-50 um, 51-100 um, 101-200 um, 201-300 um, 301-400 um, 401-500 um, 또는 501-1000 um의 크기 또는 직경을 가질 수 있다. 픽셀들, 특히 인접한 픽셀들은 적절한 간격을 두고 이격될 수 있다. 몇몇 구체예에서, 픽셀 또는 인접 픽셀들의 최소 간격 또는 거리는 약 1-10 um, 10-50 um, 51-100 um, 101-200 um, 201-300 um, 301-400, 401-500, 또는 501-600 um일 수 있다.
[00192] 픽셀 분배를 위해 적절한 방법 또는 기술을 이용할 수 있다. 몇몇 구체예에서, 픽셀 분배 방법은 잉크젯 또는 솔레노이드 밸브 디스펜서를 이용하는 드롭 온 디맨드, 압전식 디스펜서, 스크린 프린팅, 에어젯 또는 에어브러쉬 기술, 할로우 핀 프린팅, 근접식 분배법 및 기계적으로 시약을 전달하는 기타 상업적인 프린팅 방법일 수 있다.
[00193] 또 다른 측면에서, 본 발명은: 소정의 픽셀화 패턴으로 시약을 분배하고, 분배된 시약을 건조한 다음, 적어도 1종의 부가적인 시약 픽셀들을 1차 분배된 시약 패턴 층 또는 다공성 매트릭스의 반대면에 분배하여, 매트릭스 내에 3차원 픽셀 구조를 생성시키고, 분배 후 각 층을 건조시킴으로써 검사용으로 3차원 반응 혼합물을 제조하는 방법을 제공한다.
[00194] 또 다른 측면에서, 본 발명은: 소정의 픽셀화된 패턴으로 시약을 분배 또는 전달하고, 분배된 시약을 건조시키고, 첫번째로 분배된 시약 패턴 층 위에, 또는 무공성 매트릭스의 반대면에 시약 픽셀의 적어도 1개의 부가적인 층을 분배 또는 전달하고, 분배 후 각 층을 건조시킴으로써, 매트릭스의 어느 한쪽 면에 픽셀화 유동 경로를 갖는 매트릭스응 생성시켜, 2가지 테스트를 동일 매트릭스에서 동시에 실시하는 단계를 포함하는 방법을 이용하여 프로세스된 반응 혼합물을 포함하는, 진단용 검사법의 제조방법을 제공한다.
[00195] 본 발명을 다음의 예시적인 구체예를 들어 더욱 상세히 설명한다:
[00196] 1. 매트릭스 상에 복수개의 시약 도트들을 포함하는, 액체 샘플 중의 피검물을 검출하기 위한 검사 장치로서, 여기서 상기 시약 도트들 중 적어도 2개는 서로 중첩됨이 없이 서로 충분히 이격되어 있어서, 상기 액체 샘플이 상기 매트릭스를 따라 측방향으로 유동할 때, 상기 2개의 시약 도트들 중 하나로, 하나를 통해 및/또는 하나를 따라 일어나는 상기 액체 샘플의 유동이, 상기 나머지 다른 시약으로의, 나머지 다른 시약을 통한 및/또는 나머지 다른 시약을 따라 일어나는 상기 액체 샘플의 유동에 실질적으로 영향을 미치지 않고, 상기 2가지 시약 도트들 각각은 상기 액체 샘플의 유동 방향에 수직 방향인 상기 매트릭스의 전체 폭에 걸친 시약 라인도 아니고, 시약 라인의 완전한 써클도 아니며, 액체 샘플이 상기 검사 장치를 따라 측방향으로 유동하여 상기 적어도 2개의 시약 도트를 통과한 후, 상기 적어도 2개의 시약 도트들이 소정의 패턴을 형성하여, 상기 액체 샘플 중의 상기 피검물의 존재 여부 및/또는 양을 가리키게끔 되어 있는 것인 검사 장치.
[00197] 2. 구체예 1에 있어서, 복수개의 시약 도트들은 2개의 시약 도트들을 포함하는 것인 검사 장치.
[00198] 3. 구체예 1에 있어서, 복수개의 시약 도트들은 2개를 초과하는 시약 도트들을 포함하는 것인 검사 장치.
[00199] 4. 구체예 1에 있어서, 복수개의 시약 도트들은 적어도 10, 50, 100, 500, 1,000, 5,000, 10,000개 이상의 시약 도트들을 포함하는 것인 검사 장치.
[00200] 5. 구체예 3-4 중 어느 하나에 있어서, 시약 도트들의 적어도 1/4, 1/3, 1/2 또는 모든 시약 도트들은 중첩되지 않고 서로 충분히 이격되어 있어서, 상기 액체 샘플이 상기 매트릭스를 따라 측방향으로 유동할 때, 시약 도트들 중 하나로, 하나를 통해 및/또는 하나를 따라 일어나는 상기 액체 샘플의 유동이, 다른 시약 도트로, 나머지 다른 도트를 통한 및/또는 나머지 다른 도트를 따라 일어나는 상기 액체 샘플의 유동에 실질적으로 영향을 미치지 않는 것인 검사 장치.
[00201] 6. 구체예 1에 있어서, 소정의 패턴은 하나의 선, 복수개의 선, 심볼, 기하학적 형상 및 문자-숫자 형상으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 검사 장치.
[00202] 7. 구체예 6에 있어서, 문자-숫자 형상은 1개의 문자, 단어, 숫자 또는 이들의 조합인 것인 검사 장치.
[00203] 8. 구체예 6에 있어서, 선은 액체 샘플 유동 방향에 실제로 평행한 것인 검사 장치.
[00204] 9. 구체예 6에 있어서, 선은 액체 샘플 유동 방향에 실제로 수직인 것인 검사 장치.
[00205] 10. 구체예 6에 있어서, 복수개의 선은 액체 샘플 유동 방향에 실제로 평행한 적어도 1개의 선과 액체 샘플 유동 방향에 수직인 적어도 1개의 선을 포함하는 것인 검사 장치.
[00206] 11. 구체예 1-10 중 어느 하나에 있어서, 복수개의 시약 도트들은 상이한 시약들을 포함하며 검사 장치는 액체 샘플 중의 복수개의 피검물을 검출하는데 이용되는 것인 검사 장치.
[00207] 12. 구체예 1-10 중 어느 하나에 있어서, 복수개의 시약 도트들은 동일한 시약을 포함하며, 검사 장치는 액체 샘플 중의 피검물의 양을 검사하는데 이용되는 것인 검사 장치.
[00208] 13. 구체예 12에 있어서, 복수개의 시약 도트들은 동일한 양의 시약을 포함하는 것인 검사 장치.
[00209] 14. 구체예 12에 있어서, 복수개의 시약 도트들은 상이한 양의 시약을 포함하는 것인 검사 장치.
[00210] 15. 구체예 1-14 중 어느 하나에 있어서, 시약 도트들 중 적어도 1개는 직경이 약 0.1-1 um, 1-10 um, 10-50 um, 51-100 um, 101-200 um, 201-300 um, 301-400 um, 401-500 um 및 501-1000 um이거나, 또는 시약 도트들 중 적어도 1개의 직경 또는 표면적은 매트릭스의 길이, 폭 또는 표면적의 직경 또는 표면적의 약 10%, 5%, 1%, 0.5%, 0.1%, 0.05%, 0.01%, 0.001% 또는 그 미만인 것인 검사 장치.
[00211] 16. 구체예 15에 있어서, 시약 도트들의 적어도 1/4, 1/3, 1/2 또는 모든 시약 도트들은 직경이 약 0.1-1 um, 1-10 um, 10-50 um, 51-100 um, 101-200 um, 201-300 um, 301-400 um, 401-500 um 또는 501-1000 um이거나, 또는 시약 도트들의 적어도 1/4, 1/3, 1/2 또는 모든 시약 도트들은 그 직경 또는 표면적이 매트릭스의 길이, 폭 또는 표면적의 직경 또는 표면적의 약 10%, 5%, 1%, 0.5%, 0.1%, 0.05%, 0.01%, 0.001% 또는 그 미만인 것인 검사 장치.
[00212] 17. 구체예 15에 있어서, 시약 도트들의 적어도 1/4, 1/3, 1/2 또는 모든 시약 도트들은 실제로 동일한 크기 또는 직경을 갖는 것인 검사 장치.
[00213] 18. 구쳉예 1-17 중 어느 하나에 있어서, 시약 도트들 중 적어도 하나는 선, 원, 막대, 사각형, 삼각형, 직사각형 및 불규칙한 형상으로 이루어진 군으로부터 선택되는 형상을 갖는 것인 검사 장치.
[00214] 19. 구체예 18에 있어서, 시약 도트들의 적어도 1/4, 1/3, 1/2 또는 모든 시약 도트들은 선, 원, 막대, 사각형, 삼각형, 직사각형 불규칙한 형상으로 이루어진 군으로부터 선택되는 형상을 갖는 것인 검사 장치.
[00215] 20. 구체예 18에 있어서, 시약 도트들의 적어도 1/4, 1/3, 1/2 또는 모든 시약 도트들은 동일한 형상을 갖는 것인 검사 장치.
[00216] 21. 구체예 1-20 중 어느 하나에 있어서, 적어도 2개의 시약 도트들의 가장자리들 간의 거리는 약 1-10 um, 10-50 um, 51-100 um, 101-200 um, 201-300 um, 301-400, 401-500, 또는 501-600 um인 것인 검사 장치.
[00217] 22. 구체예 21에 있어서, 시약 도트들의 적어도 1/4, 1/3, 1/2 또는 모든 시약 도트들 간의 거리는 실제로 동일한 것인 검사 장치.
[00218] 23. 구체예 1-22 중 어느 하나에 있어서, 시약 도트들 중 적어도 1개는 피검물에 결합 가능한 시약 또는 피검물에 결합 가능한 다른 시약을 포함하는 것인 검사 장치.
[00219] 24. 구체예 23에 있어서, 시약은 피검물에 특이적으로 결합가능하거나 피검물에 결합가능한 다른 결합 시약인 것인 검사 장치.
[00220] 25. 구체예 23에 있어서, 시약 도트들의 적어도 1/4, 1/3, 1/2 또는 모든 시약 도트들은 피검물에 결합가능한 시약 또는 피검물에 결합가능한 다른 결합 시약을 포함하는 것인 검사 장치.
[00221] 26. 구체예 25에 있어서, 시약은 피검물에 특이적으로 결합가능하거나 피검물에 결합가능한 다른 결합 시약인 것인 검사 장치.
[00222] 27. 구체예 1-26 중 어느 하나에 있어서, 복수개의 시약 도트들의 다중 층을 포함하는 것인 검사 장치.
[00223] 28. 구체예 1-27 중 어느 하나에 있어서, 매트릭스의 양면에 복수개의 시약 도트로 된 층을 적어도 1개 포함하는 것인 검사 장치.
[00224] 29. 구체예 1-27 중 어느 하나에 있어서, 시약들은 유기 분자, 무기 분자 또는 이들의 조합인 것인 검사 장치.
[00225] 30. 구체예 25에 있어서, 유기 분자는 아미노산, 펩타이드, 단백질, 뉴클레오사이드, 뉴클레오타이드, 올리고뉴클레오타이드, 핵산, 비타민, 단당류, 올리고당류, 탄수화물, 지질 및 이들의 조합인 것인 검사 장치.
[00226] 31. 구체예 30에 있어서, 단백질은 항원 또는 항체인 것인 검사 장치.
[00227] 32. 구체예 1-31 중 어느 하나에 있어서, 매트릭스는 다공성 구조를 갖는 것인 검사 장치.
[00228] 33. 구체예 32에 있어서, 매트릭스는 니트로셀룰로스, 유리섬유, 폴리프로필렌, 폴리에틸렌 (좋기로는 초고분자량), 폴리비닐리덴 플루오라이드, 에틸렌 비닐아세테이트, 아크릴로니트릴 및/또는 폴리테트라플루오로-에틸렌을 포함하는 것인 검사 장치.
[00229] 34. 구체예 1-31 중 어느 하나에 있어서, 매트릭스는 무공성 구조를 갖는 것인 검사 장치.
[00230] 35. 구체예 32에 있어서, 매트릭스는 플라스틱, 친수성 표면을 갖는 매트릭스 필름 또는 샘플 액체와 제어된 접촉각을 갖는 물질을 포함하는 것인 검사 장치.
[00231] 36. 구체예 1에 있어서, 복수개의 시약 도트들은 피검물에 결합가능한 동일한 결합 시약 또는 피검물에 결합가능한 다른 길합 시약을 포함하고, 복수개의 시약 도트들은 액체 샘플이 검사 장치를 따라 측방 유동함에 따라, 액체 샘플 유동 방향에 실제로 평행한 선을 형성하고, 액체 샘플 중에 피검물이 존재할 경우, 피검물은 피검물이 시약 도트(들)의 상류에 결합하여 피검물이 고갈될 때까지 시약 도트들 각각에서 결합 시약에 순차적으로 결합하며, 시약 도트(들)에 대한 피검물의 결합은 시약 도트(들)에서의 검출가능한 시그널을 생성시키고, 시약 도트(들)에서의 검출가능한 시약의 강도 및/또는 갯수는 액체 샘플 중의 피검물의 정량화 또는 반정량화를 제공하는 것인 검사 장치.
[00232] 37. 구체예 1에 있어서, 복수개의 시약 도트들은 상이한 피검물들에 결합가능한 상이한 결합 시약들 또는 피검물에 결합가능한 다른 결합 시약들을 포함하고, 복수개의 시약 도트들은 액체 샘플 유동 방향과 실제로 평행한 선을 형성하고, 액체 샘플이 검사 장치를 따라 측방 유동함에 따라, 액체 샘플 중에 피검물이 존재할 경우, 피검물은 시약 도트들 각각에서 결합 시약에 결합하게 되며, 시약 도트들에 대한 피검물의 결합은 시약 도트들에서 검출가능한 시그널을 생성시키고, 시야갸 도트들에서의 검출가능한 시그널의 존재 및/또는 강도는 액체 샘플 중의 피검물의 존재 및/또는 양을 가리키는 것인 검사 장치.
[00233] 38. 구체예 1에 있어서, 복수개의 시약 도트들은 상이한 그룹의 결합 시약들을 포함하고, 상기 결합 시약들의 각 그룹은 동일한 피검물에 결합가능하거나 또는 동일한 피검물에 결합가능한 다른 결합 시약에 결합할 수 있고, 상이한 그룹의 결합 시약들은 상이한 피검체에 결합가능하거나 또는 상이한 피검체에 결합가능한 다른 결합 시약이며,
시약 도트들의 각 그룹은 액체 샘플 유동 방향에 대해 실제로 평행한 선을 형성하고, 상이한 그룹의 시약 도트들에 의해 형성된 상이한 선들은 실제로 서로 평행하며,
액체 샘플이 검사 장치를 따라 측방 유동함에 따라, 액체 샘플 중에 피검물이 존재할 경우, 피검물은 피검물들이 상류 시약 도트에 대한 결합에 의해 고갈될 때까지, 시약 도트의 각 그룹의 각각의 시약 도트들에서 결합 시약에 순차적으로 결합하게 되며, 시약 도트들에 대한 피검물의 결합은 시약 도트들에서 검출가능한 시그널을 생성시키고, 시약 도트들에서의 검출가능한 시약의 강도 및/또는 갯수는 액체 샘플 중의 상이한 피검물들의 정량 또는 반정량을 제공하는 것인 검사 장치.
[00234] 39. 구체예 1에 있어서, 복수개의 시약 도트들은 피검물에 결합가능한 동일한 결합 시약 또는 피검물에 결합가능한 다른 결합 시약을 포함하고, 복수개의 시약 도트들은 액체 샘플 유동 방향에 실제로 평행한 복수개의 선들을 형성하며, 각 선의 시약 도트들은 결합 시약을 동일한 양으로 포함하지만, 상이한 선의 시약 도트들은 상이한 양의 결합 시약을 포함하며,
액체 샘플이 검사 장치를 따라 측방 유동함에 따라, 액체 샘플 중에 피검물이 존재할 경우, 피검물은 피검물이 각각의 선의 상류 시약 도트(들)에 대한 결합에 의해 고갈될 때까지, 각각의 선의 각각의 시약 도트들에서 결합 시약에 순차적으로 결합하게 되며, 시약 도트(들)에 대한 피검물의 결합은 시약 도트(들)에서 검출가능한 시그널을 생성시키고, 시약 도트(들)에서의 검출가능한 시약의 강도 및/또는 갯수는 액체 샘플 중의 상이한 피검물들의 정량 또는 반정량을 제공하는 것인 검사 장치.
[00235] 40. 구체예 39에 있어서, 검사 장치의 한쪽 말단부터 다른쪽 말단까지, 상기 액체 샘플 유동 방향에 수직 방향으로, 상이한 선들의 시약 도트들이 결합 시약의 순차적으로 다른 양을 포함하는 것인 검사 장치.
[00236] 41. 구체예 1에 있어서, 복수개의 시약 도트들은 2개의 상이한 그룹의 결합 시약들을 포함하고, 상기 시약 도트들 중 1개의 그룹은 액체 샘플 유동 방향에 대해 제1 각도의 선을 형성하고, 시약 도트들의 또 다른 그룹은 액체 샘플 유동 방향에 대해 제2의 다른 각도의 선을 형성하며,
액체 샘플이 검사 장치를 따라 측방 유동한 후, 선들 중 하나의 시약 도트들은 액체 샘플 중 피검물의 존재 및/또는 부재를 가리키는 시그널을 생성하고, 다른 산의 시약 도트들은 테스트가 적절히 수행됨을 가리키는 대조 시그널을 생성하며, 및
액체 샘플이 피검물을 포함하고 검사가 적절히 수행될 경우, 시약 도트들의 2개 선이 포지티브 심볼을 생성하는데 이는 액체 샘플 중의 피검물의 존재 및/또는 양을 가리키고, 액체 샘플이 피검물을 포함하지 않고 검사가 적절히 수행된 경우에는, 시약 도트들의 오직 1개의 선만이 네가티브 심볼을 생성하는데 이는 액체 샘플 중에 피검물이 부재함을 가리키는 것인 검사 장치.
[00237] 42. 구체예 41에 있어서, 시약 도트들 중 1개의 그룹은 액체 샘플 유동 방향에 대해 실제로 평행한 선을 형성하고, 시약 도트들의 또다른 그룹은 액체 샘플 유동 방향에 대해 실제로 수직인 선을 형성하며, 및
액체 샘플이 피검물을 포함하고 검사가 적절히 수행되는 경우, 시약 도트들의 2개의 선들은 "+" 심볼을 생성하는데, 이는 액체 샘플 중에 피검물의 존재 및/또는 양을 가리키는 것이고, 액체 샘플이 피검물을 함유하지 않고, 검사가 적절히 수행되는 경우에는 시약 도트들의 오직 1개의 선만이 "-" 심볼을 형성하며, 이는 액체 샘플 중에 피검물이 부재함을 나타내는 것인 검사 장치.
[00238] 43. 구체예 1에 있어서, 복수개의 시약 도트들은 2개의 상이한 결합 시약 그룹들을 포함하고, 액체 샘플이 검사 장치를 따라 측방 유동한 후, 하나의 그룹 내의 시약 도트들은 액체 샘플 내에 피검물의 존재 및/또는 양을 가리키는 문자-숫자 시그널을 생성하고, 다른 그룹의 시약 도트들은 검사가 적절히 수행됨을 가리키는 대조 심볼 시그널을 생성시키는 것인 검사 장치.
[00239] 44. 구체예 43에 있어서, 문자-숫자 시그널은 단어인 것인 검사 장치.
[00240] 45. 구체예 44에 있어서, 단어는 yes, Pos, 양성, Neg, 음성, No, 또는 OK인 것인 검사 장치.
[00241] 46. 구체예 43-45 중 어느 하나에 있어서, 대조 심볼 시그널은 "+" 사인인 것인 검사 장치.
[00242] 47. 구체예 43-46 중 어느 하나에 있어서, 경쟁적 검사를 위해 설정된 것인 검사 장치.
[00243] 48. 구체예 1에 있어서, 복수개의 시약 도트들은 의도된 결합제에 결합하고 시약과 시약 도트들 상에 형성된 결합제 간의 결합 패턴은 시약과 결합제 간의 결합의 운동학적 특성을 가리키는 것인 검사 장치.
[00244] 49. 구체예 48에 있어서, 시약은 항원이고, 결합제는 항원에 대한 항체이며, 시약 도트들 상에 형성된 항원과 항체 간의 결합 패턴은 항원과 항체 간의 결합의 운동학적 특성을 가리키는 것인 검사 장치.
[00245] 50. 구체예 49에 있어서, 운동학저거 특성은 항원과 항체 간의 결합의 결합 친화도를 포함하는 것인 검사 장치.
[00246] 51. 구체예 50에 있어서, 도트(들) 상의 선단의 결합 패턴은 항체가 ㅎd원에 대해 높은 결합 친화도를 가짐을 가리키는 것인 검사 장치.
[00247] 52. 구체예 1-51 중 어느 하나에 있어서, 액체 샘플 중의 피검물의 존재, 부재 및/또는 양과 무관하거나 검사가 적절히 수행되었음을 가리키는 부가적인 시그널을 생성하는 시약 도트들의 적어도 1개의그룹을 포함하는 것인 검사 장치.
[00248] 53. 구체예 52에 있어서, 부가적인 시그널은 검사 장치의 진위, 품질 및/또는 동정 또는 액체 샘플의 동정을 가리키는 것인 검사 장치.
[00249] 54. 구체예 52-53 중 어느 하나에 있어서, 부가적인 시그널은 문자-숫자 시그널을 포함하는 것인 검사 장치.
[00250] 55. 구체예 1에 있어서, 샘플 적용 위치 주변에 원을 형성하는 시약 도트들의 적어도 1개 그룹을 포함하고, 액체 샘플은 방사형으로 이동하여 시약 도트들의 그룹을 통과하는 것인 검사 장치.
[00251] 56. 구체예 1에 있어서, 플로우 쓰루 장치 부분을 더 포함하는 것인 검사 장치.
[00252] 57. 구체예 1-56 중 어느 하나에 있어서, 매트릭스는 스트립 또는 원 형태인 것인 검사 장치.
[00253] 58. 구체예 1-56 중 어느 하나에 있어서, 매트릭스는 단일 구성원소이거나 복수개의 구성원소를 포함하는 것인 검사 장치.
[00254] 59. 구체예 1-58 중 어느 하나에 있어서, 매트릭스 상류에 매트릭스와 유체 교통하는 매트릭스 상류에 샘플 적용 구성원소를 더 포함하는 것인 검사 장치.
[00255] 60. 구체예 1-59 중 어느 하나에 있어서, 매트릭스 하류에 매트릭스와 유체 교통하는 액체 흡수 구성원소를 더 포함하는 것인 검사 장치.
[00256] 61. 구체예 1-60 중 어느 하나에 있어서, 액체 샘플의 적절한 유동 및/또는 타당한 검사 결과를 가리키기 위한 수단을 포함하는 대조 위치를 더 포함하는 것인 검사 장치.
[00257] 62. 구체예 1-61 중 어느 하나에 있어서, 매트릭스의 적어도 일부분은 무공성 지지체에 의해 지지되는 것인 검사 장치
[00258] 63. 구체예 1-62 중 어느 하나에 있어서, 시약 도트들 중 적어도 2개로부터 상류의 매트릭스의 일부가 건조, 표지된 시약을 포함하고, 상기 표지된 시약은액체 샘플 및/또는 추가의 액체에 의해 적어도 2개의 시약 도트들 및/또는 대조 위치로 이동하여 검출가능한 시그널을 발생시킬 수 있는 것인 검사 장치.
[00259] 64. 구체예 63에 있어서, 상기 건조, 표지된 시약은 검사 장치 상의 샘플적용 장소로부터 하류에 위치하는 것인 검사 장치.
[00260] 65. 구체예 63에 있어서, 상기 건조, 표지된 시약은 검사 장치상의 샘플 적용 위치로부터 하류에 위치하는 것인 검사 장치.
[00261] 66. 구체예 1-62 중 어느 하나에 있어서, 적어도 2개의 도트들의 상류에, 건조, 표지된 시약을 포함하는 접합체 구성원소를 더 포함하며, 상기 표지된 시약은 액체 샘플 및/또는 추가의 액체에 의해 적어도 2개의 시약 도트들 및/또는 대조 위치로 이동되어 검출가능한 시그널을 생성시킬 수 있는 것인 검사 장치.
[00262] 67. 구체예 66에 있어서, 접합체 구성요소는 검사 장치 상의 샘플 적용 위치의 하류에 위치하는 것인 검사 장치.
[00263] 68. 구체예 66에 있어서, 접합체 구성요소는 검사 장치 상의 샘플 적용 위치의 상류에 위치하는 것인 검사 장치.
[00264] 69. 구체예 63-68 중 어느 하나에 있어서, 표지된 시약은 액체 샘플 중의 피검물에 결합하는 것인 검사 장치.
[00265] 70. 구체예 63-68 중 어느 하나에 있어서, 표지된 시약은 적어도 2개의 시약 도트들에서 피검물에 대한 결합 시약과의 반응을 두고 액체 샘플 중의 피검물과 경쟁하는 것인 검사 장치.
[00266] 71. 구체예 63-70 중 어느 하나에 있어서, 표지는 가용성 표지인 것인 검사 장치.
[00267] 72. 구체예 63-70 중 어느 하나에 있어서, 표지는 입자 표지인 ㄱ거것인 검사 장치.
[00268] 73. 구체예 63-72 중 어느 하나에 있어서, 표지된 시약은: a) 표지된 시약을 안정화시키고; b) 액체 중 표지된 시약의 가용화 또는 재현탁을 용이화시키고; 및/또는 c) 표지된 시약의 이동성을 용이하게 해주는 물질의 존재 하에 건조되는 것인 검사 장치.
[00269] 74. 구체예 73에 있어서, 물질은 단백질, 펩타이드, 다당류, 당, 폴리머, 젤라틴 및 세제로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 검사 장치.
[00270] 75. 구체예 1-74 중 어느 하나에 있어서, 피검물 및/또는 표지된 시약을 적어도 2개의 시약 도트에 전달하기 위해 샘플 액체를 단독으로 사용하는 것인 검사 장치.
[00271] 76. 구체예 1-74 중 어느 하나에 있어서, 전개 액체를 사용하여 피검물 및/또는 표지된 시약을 적어도 2개의 시약 도트들에 전달하는 것인 검사 장치.
[00272] 77. 구체예 1-76 중 어느 하나에 있어서, 검사 장치의 적어도 일부를 커버하는 하우징을 추가로 포함하고, 여기서 상기 하우징은 적어도 2개의 시약 도트들의 상류로부터 또는 시약 도트들로 샘플을 적용할 수 있게 해주는 샘플 적용 포트 및 적어도 2개의 시약 도트들에서 시그널 검출을 가능케 하는 적어도 2개의 시약 도트들 주변의 옵틱 오프닝을 포함하는 것인 검사 장치.
[00273] 78. 구체예 77에 있어서, 하우징은 검사 장치 전체를 커버하는 것인 검사 장치.
[00274] 79. 구체예 77에 있어서, 매트릭스의 샘플 수납부 또는 샘플 적용 구성요소의 적어도 일부는 하우징에 의해 커버되지 않고 샘플은 하우징 외부의 매트릭스의 샘플 수납부 또는 샘플 적용 구성요소의 일부에 적용된 다음 적어도 2개의 시약 도트들로 전달되는 것인 검사 장치.
[00275] 80. 구체예 77-79 중 어느 하나에 있어서, 하우징은 플라스틱 재료, 생물분해성 재료 또는 셀룰로스 재료를 포함하는 것인 검사 장치.
[00276] 81. 구체예 1-80 중 어느 하나에 있어서, 액체 샘플은 검사 장치의 측방으로 이동하여 적어도 2개의 시약 도트들에서 검출가능한 시그널(들)을 생성하는 것인 검사 장치.
[00277] 82. 액체 샘플에서 피검물을 검사하기 위한 방법으로서, 상기 방법은:
a) 액체 샘플을 구체예 1-80 중 어느 하나에 따른 검사 장치와 접촉시키는 단계로서, 여기서 상기 액체 샘플은 적어도 2개의 시약 도트들의 상류의 검사 장치 위치에 적용되는것인 단계;
b) 액체 샘플 중에 피검물이 존재할 경우 피검물과 표지된 시약을 적어도 2개의 시약 도트들에 전달하는 단계; 및
c) 적어도 2개의 시약 도트들에서 표지된 시약에 의해 생성된 시그널의 존재, 부재, 양 및/또는 패턴을 평가하여 액체 샘플 중의 피검물의 존재, 부재 및/또는 양을 결정하는 단계
를 포함하는 것인 액체 샘플에서 피검물을 검사하기 위한 방법.
[00278] 83. 구체예 82에 있어서, 액체 샘플 및 표지된 시약을 미리 혼합하여 혼합물을 형성하고 이 혼합물을 검사 장치에 적용하는 것인 방법.
[00279] 84. 구체예 82에 있어서, 검사 장치는 사용 전에 건조된 표지된 시약을 포함하고 상기 건조된 표지된 시약은 가용화 또는 재현탁되어, 액체 샘플에 의해 적어도 2개의 시약 도트들에 전달되는 것인 방법.
[00280] 85. 구체예 84에 있어서, 건조된 표지된 시약은 샘플 적용 장소의 하류에 위치하고, 상기 건조된 표지된 시약은 가용화 재현탁되어, 액체 샘플에 의해 적어도 2개의 시약 도트들에 전달되는 것인 방법.
[00281] 86. 구체예 84에 있어서, 건조된 표지된 시약은 샘플 적용 장소의 상류에 위치하고, 상기 건조된 표지된 시약은 가용화 재현탁되어, 다른 액체에 의해 적어도 2개의 시약 도트들에 전달되는 것인 방법.
[00282] 87. 구체예 84에 있어서, 표지된 시약은 가용화 또는 재현탁되어, 액체 샘플 단독에 의해 적어도 2개의 시약 도트들에 전달되는 것인 방법.
[00283] 88. 구체예 84에 있어서, 피검물 및/또는 표지된 시약은 가용화 또는 재현탁되어, 다른 액체에 의해 적어도 2개의 시약 도트들에 전달되는 것인 방법.
[00284] 89. 구체예 84-88 중 어느 하나에 있어서, 액체 샘플은 체액 샘플인 것인 방법.
[00285] 90. 구체예 89에 있어서, 체액 샘플은 혈액, 혈청, 혈장 및 뇨 샘플로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 방법.
[00286] 91. 구체예 84-88 중 어느 하나에 있어서, 액체 샘플은 생물학적, 법의학적, 식품, 세균전 또는 환경적 소스로부터 유도된 것인 방법.
[00287] 92. 구체예 82-91 중 어느 하나에 있어서, 액체 샘플 중의 피검물의 양을 정량 또는 반정량하기 위한 것인 방법.
[00288] 93. 구체예 82-91 중 어느 하나에 있어서, 액체 샘플 중 복수개의 피검물을 검사하기 위한 것인 방법.
[00289] 94. 구체예 93에 있어서, 액체 샘플 중 복수개의 피검물의 양을 정량 또는 반정량하기 위한 것인 방법.
[00290] 95. 구체예 82-94 중 어느 하나에 있어서, 피검물은 세포, 바이러스 및 분자로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 방법.
[00291] 96. 구체예 82-94 중 어느 하나에 있어서, 피검물은 hCG, hLH, hFSH, hTSH, 심장 바이오마커, 감염성 생명체의 항원, 감염성 생명체에 대한 항체 및 질병 마커로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 방법.
[00292] 97. 액체 샘플 중 피검물을 검사하기 위한 검사 장치의 제조방법으로서, 상기 방법은 매트릭스 상에 복수개의 시약 도트들을 형성하여 검사 장치를 만드는 방법을 포함하되 상기 검사 장치 중의 상기 시약 도트들 중 적어도 2개는 서로 중첩됨이 없이 서로 충분히 이격되어 있어서, 상기 액체 샘플이 상기 매트릭스를 따라 측방향으로 유동할 때, 상기 2개의 시약 도트들 중 하나로, 하나를 통해 및/또는 하나를 따라 일어나는 상기 액체 샘플의 유동이, 상기 나머지 다른 시약으로의, 나머지 다른 시약을 통한 및/또는 나머지 다른 시약을 따라 일어나는 상기 액체 샘플의 유동에 실질적으로 영향을 미치지 않고, 상기 2가지 시약 도트들 각각은 상기 액체 샘플의 유동 방향에 수직 방향인 상기 매트릭스의 전체 폭에 걸친 시약 라인도 아니고, 시약 라인의 완전한 써클도 아니며, 액체 샘플이 상기 검사 장치를 따라 측방향으로 유동하여 상기 적어도 2개의 시약 도트를 통과한 후, 상기 적어도 2개의 시약 도트들이 소정의 패턴을 형성하여, 상기 액체 샘플 중의 상기 피검물의 존재 여부 및/또는 양을 가리키게끔 되어 있는 것인 검사 장치를 제조하기 위한 것인 방법.
[00293] 98. 구체예 97에 있어서, 복수개의 시약 도트들은 하나의 선, 복수개의 선, 심볼, 기하학적 형상 및 문자-숫자 형상으로 이루어진 군으로부터 선택된 소정의 패턴을 형성하는 것인 방법.
[00294] 99. 구체예 98에 있어서, 문자-숫자 형상은 1문자, 단어, 숫자 또는 이들의 조합인 것인 방법.
[00295] 100. 구체예 98에 있어서, 선은 실제로 액체 샘플 유동 방향에 대해 평행한 것인 방법.
[00296] 101. 구체예 98에 있어서, 선은 실제로 액체 샘플 유동 방향에 대해 수직인 것인 방법.
[00297] 102. 구체예 98에 있어서, 복수개의 선은 액체 샘플 유동 방향에 대해 실제로 평행한 적어도 1개의 선과 액체 샘플 유동 방향에 대해 실제로 수직한 적어도 1개의 선을 포함하는 것인 방법.
[00298] 103. 구체예 97-102 중 어느 하나에 있어서, 복수개의 시약 도트들은 매트릭스 상의 소정의 위치에서 시약을 분배함으로써 형성되는 것인 방법.
[00299] 104. 구체예 103에 있어서, 시약은 드롭 온 디맨드 방법 또는 시약의 기계적 전달을 이용하는 프린팅 방법에 의해 분배되는 것인 방법.
[00300] 105. 구체예 104에 있어서, 드롭 온 디맨드 방법은 잉크젯 또는 솔레노이드 밸브 기반 디스펜서, 압전식 디스펜서, 스크린 프린팅, 에어젯 또는 에어브러쉬 기술, 할로우 핀 프린팅 및 근접 분배를 이용하여 수행되는 것인 방법.
[00301] 106. 구체예 97-105 중 어느 하나에 있어서, 시약 도트들 중 적어도 1개는 직경이 약 0.1-1 um, 1-10 um, 10-50 um, 51-100 um, 101-200 um, 201-300 um, 301-400 um, 401-500 um 및 501-1000 um인 것인 방법.
[00302] 107. 구체예 97-105 중 어느 하나에 있어서, 시약 도트들 중 적어도 1개의 직경 또는 표면적은 매트릭스의 길이, 폭 또는 표면적의 약 10%, 5%, 1%, 0.5%, 0.1%, 0.05%, 0.01%, 0.001% 또는 그 미만인 것인 방법.
[00303] 108. 구체예 97-107 중 어느 하나에 있어서, 적어도 2개의 시약 도트들 간의 거리는 약 1-10 um, 10-50 um, 51-100 um, 101-200 um, 201-300 um, 301-400, 401-500, 또는 501-600 um인 것인 방법.
[00304] 109. 구체예 97-108 중 어느 하나에 있어서, 복수개의 시약 도트들의 층을 복수개 형성하는 것을 포함하는 방법.
[00305] 110. 구체예 97-109 중 어느 하나에 있어서, 복수개의 시약 도트들의 적어도 1개 층을 매트릭스의 양면에 형성시키는 것을 포함하는 방법.
[00306] 111. 구체예 108-110 중 어느 하나에 있어서, 복수개의 시약 도트들의 층을 복수개 형성하는 사이에 건조 단계를 더 포함하는 방법.
[00307] 112. 구체예 97-111 중 어느 하나에 따른 방법으로 제조된, 액체 샘플 중의 피검물을 검출하기 위한 검사 장치.
[00308] 당업자들은 전술한 바람직한 특징들을 어느 방식으로든 조합한 것 역시 본 발명에 포함됨을 이해할 것이다.
[00309] 당업자들에 있어 본 발명의 추가의 특장점들은 첨부된 도면과 청구범위와, 본 명세서에 기재된 바람직한 구체예의 상세 설명을 참조하면 자명히 이해될 것이다.
[00310] 전술한 예들은 오직 설명 목적을 위해 제시된 것일 뿐 본 발명의 범위가 이에 한정되는 것은 아니다. 상기 내용에 대한 많은 변형예가 가능하다. 전술한 예시에 대한 변형 및 변경 역시 당업자에게 자명하므로, 본 발명은 첨부된 특허청구범위에 의해서만 한정되는 것이다.
F. 실시예
실시예 1
[00311] 이 실험은 측방 유동 분석법에서 시그널 전개를 위한 "픽셀" 개념 측면을 입증하기 위한 데이터 세트를 생성하기 위해 수행되었다. Scienion 흡착 및 분배 압전-밸브 시스템을 이용하여 도 10-16에 도시된 바와 같이 니트로셀룰로스 막 (CN 95, Sartorius)에 다양한 패턴과 스팟 크기를 갖는 도트들을 형성시켰다. 막 상의 포획 시약으로서 0.25mg/ml (DCN) 농도의 바이오틴-BSA를 이용하였다. 시그널 시약으로서 스트렙트아비딘-금 접합체 (40nm gold, OD10, DCN)를 이용하였다. 하프 스트립-포맷으로 니트로셀룰로스 막을 따라 스트렙트아비딘-금 접합체를 측방 유동시켜 스트립을 전개시켰다. 프로그램된 심볼은 도 10-16에서 A 파트에 나타내었고, 실제 검사로부터 얻은 심볼은 도 10-16의 B 파트에 나타내었다.
실시예 2
[00312] 이 실험은 다양한 막 블로킹 버퍼 및 러닝 희석액을 이용하여 배경 결합을 제거하고 금 접합체 농도를 적정함으로써 시그널 선명도를 개선시킬 수 있음을 설명하기 위해 수행되었다. 다양한 검사 스트립 배열 및 검사 조건을 하기 표 1 및 2에 나타내었다.
Figure pct00003
Figure pct00004
Figure pct00005
스캐닝 표 3 (문단번호 [0312])
[00313] 도 17에 도시된 바와 같이, 막 상의 배경 시그널이 검 접합체에 의해 현저히 감소되었다. "X" 막은 10ul 접합체에 의해 완벽하게 전개되었고, 최소의 배경 탈색을 결과시켰다 (분석 K 참조). "+" 배열은 적어도 25uL를 필요로 하며, 따라서 어두운 분홍색 막을 생성한다. 막 블로킹은 탈색을 감소시키지 않았다 (분석 N 참조). DCN 접합체 패드 블로킹 버퍼는 배경을 제거하지 않았다 (분석 S 참조). 이 실험에서, 최적의 배열은 K 및 S인 것으로 나타났다.
실시예 3
[00314] 이 실험은 형광 표지 예컨대, 유로피움의 사용을 설명하기 위해 수행되었다. BSA-바이오틴 포획 시약으로 스팟된 스트립들을 유로피움 라텍스-스트렙트아비딘 접합체 (100nm 입자, DCN에 의해 생성된 접합체)를 이용하여 전개시켰다. 이 실험에서, DCN 접합체 패드 블로킹 버퍼 (10mM Borate, 3%BSA, 1% PVP40, 0.25% Triton X 100, pH 8.0) 중의 100ul 1XPBS,, 25 uL (1:10 라텍스 희석물) Eu 라텍스 컨쥬게이트를 니트로셀룰로스 막을 따라 전개시켰다. 결과를 관찰하여 10분 런타임으로 흑광 ㅎ하에 사진을 찍었다. 도 18에 도시된 바와 같이, Eu-latex 접합체는 최소한의 배경을 나타내며 선명히 육안관찰가능한 시그널을 전개시켰다. 이는 형광 표지 및 금 입자보다 큰 입자를 이용한 이 시스팀의 유용성을 입증하는 것이다.
실시예 4. 측방 유동 분석법에서 "픽셀" 개념을 이용한 시그널 전개 최적화
[00315] Bio도트들 흡입-및-분배 마이크로솔레노이드 밸브 ("BioJet Plus") 시스템을 이용하여 도 19A - 19E에 도시된 바와 같이 니트로셀룰로스 막 (CN 95, Sartorius)에 도트들을 (5nL) 형성시켰다. 막 상의 포획 시약은 1mg/ml 농도의 항hCG 항체였다. 항hCG 항체/금 접합체 (40nm 금, OD10, DCN)를 시그널 시약으로서 사용하였다. hCG 피검물을 1UI/mL의 농도에서 검출하고 1XPBS 중 0.1% Tween-20에 희석시켰다. 액체 금 접합체ㄹ를 이용하여 하프 스트립 포맷으로 스트립을 전개시켰다.
[00316] 도 19A - 19E에 도시된 바와 같이, 스팟들의 수직 정렬은 접합체가 스트립 상에 균일하게 이동하는 것을 방지하였다. 검사선의 외부 가장자리는 가장 어두웠으며 분배된 스팟을 통과하거나 그 위로 유동하는 대신 유체가 그 주변을 벗어나 유동하는 것으로 입증되었다. 검사선 길이의 증가 및 지그재그 패턴과 같은 스팟 패턴의 변동은 결과를 개선시키지 않았다. 소적들 간의 간격 증가는 시그널 전개를 유의적으로 향상시킨 것으로 나타났다.
실시예 5. 다중화된 측방 유동 분석법에 있어서 "픽셀" 개념의 응용
[00317] BioDot 흡입-및-분배 마이크로솔레노이드-밸브 ("BioJet Plus") 시스템을 이용하여 도 20A - 20D에 도시된 바와 같이, 니트로셀룰로스 막 (CN 95, Sartorius)에 다양한 패턴으로 도트들 (5nL)을 형성시켰다. 막 상의 검사 시약들은 항hCG 항체 (1mg/ml), 및 항미오글로빈 항체 (0.5mg/ml)였다. 항마우스 항체 포획 시약을 시스템의 대조군으로서 0.5mg/ml의 농도로 사용하였다. 항hCG 항체/금 접합체 (40nm 금, OD10, DCN) 및 항미오글로빈 항체/금 접합체 (40nm, OD10, DCN)을 시그널 시약으로서 사용하였다. 액체 금 접합체를 이용하여 하프 스트립 포맷으로 스트립들을 전개시켰다.
[00318] 도 20A - 20D에 도시된 바와 같이, 이 분석법에 의해 샘플 중의 표적 피검물의 다양한 농도가 정확히 측정되었다. 항마우스, 항미오글로빈 및 항hCG 분석들은 어떠한 상호 반응성의 증거 없이 독립적으로 실시되었다.
실시예 6. 소량의 분배 부피를 이용한 다양한 스팻 패턴의 개선된 구축
[00319] BioDot Piezo 분배 시스템을 이용하여 도 21A - 21D에 도시된 바와 같이 니트로셀룰로스 막 (CN 95, Sartorius)에 다양한 패턴의 도트들 (1nL)을 형성시켰다. 막 상의 검사 시약은 1mg/ml 농도의 항hCB 항체였다. 항마우스 항체 포획 시약을 시스템에 대한 대조군으로서 0.5mg/ml의 농도로 사용하였다.항hCG 항체/금 접합체 (40nm 금, OD10, DCN)을 시그널 시약으로서 사용하였다. 1UI/mL의 농도에서 hCG 피검물이 검출되었고 이를 1XPBS 중 0.1% Tween-20에 희석하였다. 액체 금 접합체를 이용하여 하프 스트립 포맷으로 스트립들을 전개시켰다.
[00320] 도 21A - 21D에 도시된 바와 같이, 선의 위치에 관계없이, 균질한 접합체 분포와 함께 배열들이 선명한 이미지로 나타났다. 도 21C 및 21D의 시그널들은 피검물로서 hCG를 이용하여 생성된 것이었다. 유동은 방해받지 않았으며 선명한 양성 및 음성 결과를 나타내었다 (비록 도 21C 및 21D에서는 음성 샘플이 테스트에서 나타나지 않았으나).
[00321] 본 명세서에 인용된 모든 간행물 및 문헌들은 본원발명과 관련한 종래기술로서 인정되는 것은 아니며, 이들 간행물 또는 문헌의 내용 및 개시일과 관련하여 본 발명의 종래 기술이 되는 것도 아니다.

Claims (72)

  1. 매트릭스 상에 복수개의 시약 도트들을 포함하는, 액체 샘플 중의 피검물을 검출하기 위한 검사 장치로서, 여기서 상기 시약 도트들 중 적어도 2개는 서로 중첩됨이 없이 서로 충분히 이격되어 있어서, 상기 액체 샘플이 상기 매트릭스를 따라 측방향으로 유동할 때, 상기 2개의 시약 도트들 중 하나로, 하나를 통해 및/또는 하나를 따라 일어나는 상기 액체 샘플의 유동이, 상기 나머지 다른 시약으로의, 나머지 다른 시약을 통한 및/또는 나머지 다른 시약을 따라 일어나는 상기 액체 샘플의 유동에 실질적으로 영향을 미치지 않고, 상기 2가지 시약 도트들 각각은 상기 액체 샘플의 유동 방향에 수직 방향인 상기 매트릭스의 전체 폭에 걸친 시약 라인도 아니고, 시약 라인의 완전한 써클도 아니며, 액체 샘플이 상기 검사 장치를 따라 측방향으로 유동하여 상기 적어도 2개의 시약 도트를 통과한 후, 상기 적어도 2개의 시약 도트들이 소정의 패턴을 형성하여, 상기 액체 샘플 중의 상기 피검물의 존재 여부 및/또는 양을 가리키게끔 되어 있고,
    여기서 상기 복수개의 시약 도트들은 액체 샘플 유동 방향에 실제로 평행한 선을 형성하는 적어도 5개의 시약 도트들을 포함하고, 상기 5개의 시약 도트들은 중첩됨이 없이 서로 충분히 이격되어 있어서, 상기 액체 샘플이 상기 매트릭스를 따라 측방향으로 유동할 때, 상기 5개의 시약 도트들 중 하나로, 하나를 통해 및/또는 하나를 따라 일어나는 상기 액체 샘플의 유동이, 상기 나머지 다른 시약으로의, 나머지 다른 시약을 통한 및/또는 나머지 다른 시약을 따라 일어나는 상기 액체 샘플의 유동에 실질적으로 영향을 미치지 않는 것인 검사 장치.
  2. 제1항에 있어서, 복수개의 시약 도트들은 적어도 10, 50, 100, 500, 1,000, 5,000, 10,000 개의 시약 도트들을 포함하는 것인 검사 장치.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 시약 도트들의 적어도 1/4, 1/3, 1/2 또는 모든 시약 도트들은 중첩되지 않고 서로 충분히 이격되어 있어서, 상기 액체 샘플이 상기 매트릭스를 따라 측방향으로 유동할 때, 시약 도트들 중 하나로, 하나를 통해 및/또는 하나를 따라 일어나는 상기 액체 샘플의 유동이, 다른 시약 도트로, 나머지 다른 도트를 통한 및/또는 나머지 다른 도트를 따라 일어나는 상기 액체 샘플의 유동에 실질적으로 영향을 미치지 않는 것인 검사 장치.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 하나의 항에 있어서, 소정의 패턴은 하나의 선, 복수개의 선, 심볼, 기하학적 형상 및 문자-숫자 형상으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 검사 장치.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 하나의 항에 있어서, 액체 샘플 유동 방향에 실제로 평행한 적어도 1개의 선과 액체 샘플 유동 방향에 수직인 적어도 1개의 선을 포함하는 것인 검사 장치.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 하나의 항에 있어서, 복수개의 시약 도트들은 상이한 시약들을 포함하며 검사 장치는 액체 샘플 중의 복수개의 피검물을 검출하는데 이용되는 것인 검사 장치.
  7. 제1항 내지 제5항 중 어느 하나의 항에 있어서, 복수개의 시약 도트들은 동일한 시약을 포함하며, 검사 장치는 액체 샘플 중의 피검물의 양을 검사하는데 이용되는 것인 검사 장치.
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 하나의 항에 있어서, 복수개의 시약 도트들은 동일한 양의 시약을 포함하는 것인 검사 장치.
  9. 제1항 내지 제7항 중 어느 하나의 항에 있어서, 복수개의 시약 도트들은 상이한 양의 시약을 포함하는 것인 검사 장치.
  10. 제1항 내지 제9항 중 어느 하나의 항에 있어서, 시약 도트들 중 적어도 1개는 직경이 약 0.1-1 um, 1-10 um, 10-50 um, 51-100 um, 101-200 um, 201-300 um, 301-400 um, 401-500 um 및 501-1000 um이거나, 또는 시약 도트들 중 적어도 1개의 직경 또는 표면적은 매트릭스의 길이, 폭 또는 표면적의 직경 또는 표면적의 약 10%, 5%, 1%, 0.5%, 0.1%, 0.05%, 0.01%, 0.001% 또는 그 미만인 것인 검사 장치.
  11. 제10항에 있어서, 시약 도트들의 적어도 1/4, 1/3, 1/2 또는 모든 시약 도트들은 실제로 동일한 크기 또는 직경을 갖는 것인 검사 장치.
  12. 제1항 내지 제11항 중 어느 하나의 항에 있어서, 시약 도트들 중 적어도 하나는 선, 원, 막대, 사각형, 삼각형, 직사각형 및 불규칙한 형상으로 이루어진 군으로부터 선택되는 형상을 갖는 것인 검사 장치.
  13. 제12항에 있어서, 시약 도트들의 적어도 1/4, 1/3, 1/2 또는 모든 시약 도트들은 동일한 형상을 갖는 것인 검사 장치.
  14. 제1항 내지 제13항 중 어느 하나의 항에 있어서, 적어도 2개의 시약 도트들의 가장자리들 간의 거리는 약 1-10 um, 10-50 um, 51-100 um, 101-200 um, 201-300 um, 301-400, 401-500, 또는 501-600 um인 것인 검사 장치.
  15. 제14항에 있어서, 시약 도트들의 적어도 1/4, 1/3, 1/2 또는 모든 시약 도트들 간의 거리는 실제로 동일한 것인 검사 장치.
  16. 제1항 내지 제15항 중 어느 하나의 항에 있어서, 시약 도트들 중 적어도 1개는 피검물에 결합 가능한 시약 또는 피검물에 결합 가능한 다른 시약을 포함하는 것인 검사 장치.
  17. 제1항 내지 제16항 중 어느 하나의 항에 있어서, 복수개의 시약 도트들의 다중 층을 포함하는 것인 검사 장치.
  18. 제1항 내지 제17항 중 어느 하나의 항에 있어서, 매트릭스의 양면에 복수개의 시약 도트로 된 층을 적어도 1개 포함하는 것인 검사 장치.
  19. 제1항 내지 제18항 중 어느 하나의 항에 있어서, 시약들은 유기 분자, 무기 분자 또는 이들의 조합인 것인 검사 장치.
  20. 제19항에 있어서, 유기 분자는 항원 또는 항체인 것인 검사 장치.
  21. 제1항 내지 제20항 중 어느 하나의 항에 있어서, 매트릭스는 다공성 구조를 갖는 것인 검사 장치.
  22. 제1항 내지 제21항 중 어느 하나의 항에 있어서, 매트릭스는 비다공성 구조를 갖는 것인 검사 장치.
  23. 제1항에 있어서, 복수개의 시약 도트들은 피검물에 결합가능한 동일한 결합 시약 또는 피검물에 결합가능한 다른 길합 시약을 포함하고, 복수개의 시약 도트들은 액체 샘플이 검사 장치를 따라 측방 유동함에 따라, 액체 샘플 유동 방향에 실제로 평행한 선을 형성하고, 액체 샘플 중에 피검물이 존재할 경우, 피검물은 피검물이 시약 도트(들)의 상류에 결합하여 피검물이 고갈될 때까지 시약 도트들 각각에서 결합 시약에 순차적으로 결합하며, 시약 도트(들)에 대한 피검물의 결합은 시약 도트(들)에서의 검출가능한 시그널을 생성시키고, 시약 도트(들)에서의 검출가능한 시약의 강도 및/또는 갯수는 액체 샘플 중의 피검물의 정량화 또는 반정량화를 제공하는 것인 검사 장치.
  24. 제1항에 있어서, 복수개의 시약 도트들은 상이한 피검물들에 결합가능한 상이한 결합 시약들 또는 피검물에 결합가능한 다른 결합 시약들을 포함하고, 복수개의 시약 도트들은 액체 샘플 유동 방향과 실제로 평행한 선을 형성하고, 액체 샘플이 검사 장치를 따라 측방 유동함에 따라, 액체 샘플 중에 피검물이 존재할 경우, 피검물은 시약 도트들 각각에서 결합 시약에 결합하게 되며, 시약 도트들에 대한 피검물의 결합은 시약 도트들에서 검출가능한 시그널을 생성시키고, 시야갸 도트들에서의 검출가능한 시그널의 존재 및/또는 강도는 액체 샘플 중의 피검물의 존재 및/또는 양을 가리키는 것인 검사 장치.
  25. 제1항에 있어서, 복수개의 시약 도트들은 상이한 그룹의 결합 시약들을 포함하고, 상기 결합 시약들의 각 그룹은 동일한 피검물에 결합가능하거나 또는 동일한 피검물에 결합가능한 다른 결합 시약에 결합할 수 있고, 상이한 그룹의 결합 시약들은 상이한 피검체에 결합가능하거나 또는 상이한 피검체에 결합가능한 다른 결합 시약이며,
    시약 도트들의 각 그룹은 액체 샘플 유동 방향에 대해 실제로 평행한 선을 형성하고, 상이한 그룹의 시약 도트들에 의해 형성된 상이한 선들은 실제로 서로 평행하며,
    액체 샘플이 검사 장치를 따라 측방 유동함에 따라, 액체 샘플 중에 피검물이 존재할 경우, 피검물은 피검물들이 상류 시약 도트에 대한 결합에 의해 고갈될 때까지, 시약 도트의 각 그룹의 각각의 시약 도트들에서 결합 시약에 순차적으로 결합하게 되며, 시약 도트들에 대한 피검물의 결합은 시약 도트들에서 검출가능한 시그널을 생성시키고, 시약 도트들에서의 검출가능한 시약의 강도 및/또는 갯수는 액체 샘플 중의 상이한 피검물들의 정량 또는 반정량을 제공하는 것인 검사 장치.
  26. 제1항에 있어서, 복수개의 시약 도트들은 피검물에 결합가능한 동일한 결합 시약 또는 피검물에 결합가능한 다른 결합 시약을 포함하고, 복수개의 시약 도트들은 액체 샘플 유동 방향에 실제로 평행한 복수개의 선들을 형성하며, 각 선의 시약 도트들은 결합 시약을 동일한 양으로 포함하지만, 상이한 선의 시약 도트들은 상이한 양의 결합 시약을 포함하며,
    액체 샘플이 검사 장치를 따라 측방 유동함에 따라, 액체 샘플 중에 피검물이 존재할 경우, 피검물은 피검물이 각각의 선의 상류 시약 도트(들)에 대한 결합에 의해 고갈될 때까지, 각각의 선의 각각의 시약 도트들에서 결합 시약에 순차적으로 결합하게 되며, 시약 도트(들)에 대한 피검물의 결합은 시약 도트(들)에서 검출가능한 시그널을 생성시키고, 시약 도트(들)에서의 검출가능한 시약의 강도 및/또는 갯수는 액체 샘플 중의 상이한 피검물들의 정량 또는 반정량을 제공하는 것인 검사 장치.
  27. 제1항에 있어서, 복수개의 시약 도트들은 2개의 상이한 그룹의 결합 시약들을 포함하고, 상기 시약 도트들 중 1개의 그룹은 액체 샘플 유동 방향에 대해 제1 각도의 선을 형성하고, 시약 도트들의 또 다른 그룹은 액체 샘플 유동 방향에 대해 제2의 다른 각도의 선을 형성하며,
    액체 샘플이 검사 장치를 따라 측방 유동한 후, 선들 중 하나의 시약 도트들은 액체 샘플 중 피검물의 존재 및/또는 부재를 가리키는 시그널을 생성하고, 다른 산의 시약 도트들은 테스트가 적절히 수행됨을 가리키는 대조 시그널을 생성하며, 및
    액체 샘플이 피검물을 포함하고 검사가 적절히 수행될 경우, 시약 도트들의 2개 선이 포지티브 심볼을 생성하는데 이는 액체 샘플 중의 피검물의 존재 및/또는 양을 가리키고, 액체 샘플이 피검물을 포함하지 않고 검사가 적절히 수행된 경우에는, 시약 도트들의 오직 1개의 선만이 네가티브 심볼을 생성하는데 이는 액체 샘플 중에 피검물이 부재함을 가리키는 것인 검사 장치.
  28. 제27항에 있어서, 시약 도트들 중 1개의 그룹은 액체 샘플 유동 방향에 대해 실제로 평행한 선을 형성하고, 시약 도트들의 또다른 그룹은 액체 샘플 유동 방향에 대해 실제로 수직인 선을 형성하며, 및
    액체 샘플이 피검물을 포함하고 검사가 적절히 수행되는 경우, 시약 도트들의 2개의 선들은 "+" 심볼을 생성하는데, 이는 액체 샘플 중에 피검물의 존재 및/또는 양을 가리키는 것이고, 액체 샘플이 피검물을 함유하지 않고, 검사가 적절히 수행되는 경우에는 시약 도트들의 오직 1개의 선만이 "-" 심볼을 형성하며, 이는 액체 샘플 중에 피검물이 부재함을 나타내는 것인 검사 장치.
  29. 제1항에 있어서, 복수개의 시약 도트들은 2개의 상이한 결합 시약 그룹들을 포함하고, 액체 샘플이 검사 장치를 따라 측방 유동한 후, 하나의 그룹 내의 시약 도트들은 액체 샘플 내에 피검물의 존재 및/또는 양을 가리키는 문자-숫자 시그널을 생성하고, 다른 그룹의 시약 도트들은 검사가 적절히 수행됨을 가리키는 대조 심볼 시그널을 생성시키는 것인 검사 장치.
  30. 제1항 내지 제29항 중 어느 하나의 항에 있어서, 경쟁적 검사에 사용되는 것인 검사 장치.
  31. 제1항에 있어서, 복수개의 시약 도트들은 의도된 결합제에 결합하고 시약과 시약 도트들 상에 형성된 결합제 간의 결합 패턴은 시약과 결합제 간의 결합의 운동학적 특성을 가리키는 것인 검사 장치.
  32. 제31항에 있어서, 시약은 항원이고, 결합제는 항원에 대한 항체이며, 시약 도트들 상에 형성된 항원과 항체 간의 결합 패턴은 항원과 항체 간의 결합의 운동학적 특성을 가리키는 것인 검사 장치.
  33. 제1항 내지 제32항 중 어느 하나의 항에 있어서, 액체 샘플 중의 피검물의 존재, 부재 및/또는 양과 무관하거나 검사가 적절히 수행되었음을 가리키는 부가적인 시그널을 생성하는 시약 도트들의 적어도 1개의 그룹을 포함하는 것인 검사 장치.
  34. 제33항에 있어서, 부가적인 시그널은 검사 장치의 진위, 품질 및/또는 동정 또는 액체 샘플의 동정을 가리키는 것인 검사 장치.
  35. 제1항에 있어서, 샘플 적용 위치 주변에 원을 형성하는 시약 도트들의 적어도 1개 그룹을 포함하고, 액체 샘플은 방사형으로 이동하여 시약 도트들의 그룹을 통과하는 것인 검사 장치.
  36. 제1항에 있어서, 플로우 쓰루 장치 부분을 더 포함하는 것인 검사 장치.
  37. 제1항 내지 제36항 중 어느 하나의 항에 있어서, 매트릭스는 단일 구성원소이거나 복수개의 구성원소를 포함하는 것인 검사 장치.
  38. 제1항 내지 제37항 중 어느 하나의 항에 있어서, 매트릭스 상류에 매트릭스와 유체 교통하는 매트릭스 상류에 샘플 적용 구성원소를 더 포함하는 것인 검사 장치.
  39. 제1항 내지 제38항 중 어느 하나의 항에 있어서, 매트릭스 하류에 매트릭스와 유체 교통하는 액체 흡수 구성원소를 더 포함하는 것인 검사 장치.
  40. 제1항 내지 제40항 중 어느 하나의 항에 있어서, 액체 샘플의 적절한 유동 및/또는 타당한 검사 결과를 가리키기 위한 수단을 포함하는 대조 위치를 더 포함하는 것인 검사 장치.
  41. 제1항 내지 제40항 중 어느 하나의 항에 있어서, 매트릭스의 적어도 일부분은 무공성 지지체에 의해 지지되는 것인 검사 장치
  42. 제1항 내지 제41항 중 어느 하나에 있어서, 시약 도트들 중 적어도 2개로부터 상류의 매트릭스의 일부가 건조, 표지된 시약을 포함하고, 상기 표지된 시약은액체 샘플 및/또는 추가의 액체에 의해 적어도 2개의 시약 도트들 및/또는 대조 위치로 이동하여 검출가능한 시그널을 발생시킬 수 있는 것인 검사 장치.
  43. 제1항 내지 제42항 중 어느 하나의 항에 있어서, 적어도 2개의 도트들의 상류에, 건조, 표지된 시약을 포함하는 접합체 구성원소를 더 포함하며, 상기 표지된 시약은 액체 샘플 및/또는 추가의 액체에 의해 적어도 2개의 시약 도트들 및/또는 대조 위치로 이동되어 검출가능한 시그널을 생성시킬 수 있는 것인 검사 장치.
  44. 제42항 또는 제43항에 있어서, 표지된 시약은 액체 샘플 중의 피검물에 결합하는 것인 검사 장치.
  45. 제43항 또는 제43항에 있어서, 표지된 시약은 적어도 2개의 시약 도트들에서 피검물에 대한 결합 시약과의 반응을 두고 액체 샘플 중의 피검물과 경쟁하는 것인 검사 장치.
  46. 제42항 내지 제45항 중 어느 하나의 항에 있어서, 표지는 가용성 표지 또는 입자 표지인 것인 검사 장치.
  47. 제42항 내지 제46항 중 어느 하나의 항에 있어서, 표지된 시약은: a) 표지된 시약을 안정화시키고; b) 액체 중 표지된 시약의 가용화 또는 재현탁을 용이화시키고; 및/또는 c) 표지된 시약의 이동성을 용이하게 해주는 물질의 존재 하에 건조되는 것인 검사 장치.
  48. 제1항 내지 제47항 중 어느 하나의 항에 있어서, 피검물 및/또는 표지된 시약을 적어도 2개의 시약 도트들에 전달하기 위해 샘플 액체 단독 및/또는 전개 액체가 사용되는 것인 검사 장치.
  49. 제1항 내지 제48항 중 어느 하나의 항에 있어서, 검사 장치의 적어도 일부를 커버하는 하우징을 추가로 포함하고, 여기서 상기 하우징은 적어도 2개의 시약 도트들의 상류로부터 또는 시약 도트들로 샘플을 적용할 수 있게 해주는 샘플 적용 포트 및 적어도 2개의 시약 도트들에서 시그널 검출을 가능케 하는 적어도 2개의 시약 도트들 주변의 옵틱 오프닝을 포함하는 것인 검사 장치.
  50. 제49항에 있어서, 하우징은 플라스틱 물질, 생물분해성 물질 또는 셀룰로스계 물질을 포함하는 것인 검사 장치.
  51. 제1항 내지 제50항 중 어느 하나의 항에 있어서, 액체 샘플은 검사 장치의 측방으로 이동하여 적어도 2개의 시약 도트들에서 검출가능한 시그널(들)을 생성하는 것인 검사 장치.
  52. 액체 샘플에서 피검물을 검사하기 위한 방법으로서, 상기 방법은:
    a) 액체 샘플을 제1항 내지 제50항 중 어느 하나에 기재된 검사 장치와 접촉시키는 단계로서, 여기서 상기 액체 샘플은 적어도 2개의 시약 도트들의 상류의 검사 장치 위치에 적용되는것인 단계;
    b) 액체 샘플 중에 피검물이 존재할 경우 피검물과 표지된 시약을 적어도 2개의 시약 도트들에 전달하는 단계; 및
    c) 적어도 2개의 시약 도트들에서 표지된 시약에 의해 생성된 시그널의 존재, 부재, 양 및/또는 패턴을 평가하여 액체 샘플 중의 피검물의 존재, 부재 및/또는 양을 결정하는 단계
    를 포함하는 것인 액체 샘플에서 피검물을 검사하기 위한 방법.
  53. 제52항에 있어서, 액체 샘플 및 표지된 시약을 미리 혼합하여 혼합물을 형성하고 이 혼합물을 검사 장치에 적용하는 것인 방법.
  54. 제52항에 있어서, 검사 장치는 사용 전에 건조된 표지된 시약을 포함하고 상기 건조된 표지된 시약은 가용화 또는 재현탁되어, 액체 샘플에 의해 적어도 2개의 시약 도트들에 전달되는 것인 방법.
  55. 제52항 내지 제54항 중 어느 하나의 항에 있어서, 액체 샘플은 체액 샘플인 것인 방법.
  56. 제55항에 있어서, 체액 샘플은 전혈, 혈청, 혈장, 뇨 및 타액 샘플로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 방법.
  57. 제52항 내지 제56항 중 어느 하나의 항에 있어서, 액체 샘플은 생물학적, 법의학적, 식품, 세균전 또는 환경적 소스로부터 유도된 것인 방법.
  58. 제52항 내지 제57항 중 어느 하나의 항에 있어서, 액체 샘플 중의 피검물의 양을 정량 또는 반정량하기 위한 것인 방법.
  59. 제52항 내지 제58항 중 어느 하나의 항에 있어서, 액체 샘플 중 복수개의 피검물을 검사하기 위한 것인 방법.
  60. 제52항 내지 제59항 중 어느 하나의 항에 있어서, 피검물은 세포, 바이러스 및 분자로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 방법.
  61. 제52항 내지 제60항 중 어느 하나의 항에 있어서, 피검물은 hCG, hLH, hFSH, hTSH, 심장 바이오마커, 감염성 생명체의 항원, 감염성 생명체에 대한 항체 및 질병 마커로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 방법.
  62. 액체 샘플 중 피검물을 검사하기 위한 검사 장치의 제조방법으로서, 상기 방법은 매트릭스 상에 복수개의 시약 도트들을 형성하여 검사 장치를 만드는 방법을 포함하되 상기 검사 장치 중의 상기 시약 도트들 중 적어도 2개는 서로 중첩됨이 없이 서로 충분히 이격되어 있어서, 상기 액체 샘플이 상기 매트릭스를 따라 측방향으로 유동할 때, 상기 2개의 시약 도트들 중 하나로, 하나를 통해 및/또는 하나를 따라 일어나는 상기 액체 샘플의 유동이, 상기 나머지 다른 시약으로의, 나머지 다른 시약을 통한 및/또는 나머지 다른 시약을 따라 일어나는 상기 액체 샘플의 유동에 실질적으로 영향을 미치지 않고, 상기 2가지 시약 도트들 각각은 상기 액체 샘플의 유동 방향에 수직 방향인 상기 매트릭스의 전체 폭에 걸친 시약 라인도 아니고, 시약 라인의 완전한 써클도 아니며, 액체 샘플이 상기 검사 장치를 따라 측방향으로 유동하여 상기 적어도 2개의 시약 도트를 통과한 후, 상기 적어도 2개의 시약 도트들이 소정의 패턴을 형성하여, 상기 액체 샘플 중의 상기 피검물의 존재 여부 및/또는 양을 가리키게끔 되어 있고,
    여기서 상기 복수개의 시약 도트들은 액체 샘플 유동 방향에 실제로 평행한 선을 형성하는 적어도 5개의 시약 도트들을 포함하고, 상기 5개의 시약 도트들은 중첩됨이 없이 서로 충분히 이격되어 있어서, 상기 액체 샘플이 상기 매트릭스를 따라 측방향으로 유동할 때, 상기 5개의 시약 도트들 중 하나로, 하나를 통해 및/또는 하나를 따라 일어나는 상기 액체 샘플의 유동이, 상기 나머지 다른 시약으로의, 나머지 다른 시약을 통한 및/또는 나머지 다른 시약을 따라 일어나는 상기 액체 샘플의 유동에 실질적으로 영향을 미치지 않는 검사 장치를 제조하기 위한 방법.
  63. 제62항에 있어서, 복수개의 시약 도트들은 하나의 선, 복수개의 선, 심볼, 기하학적 형상 및 문자-숫자 형상으로 이루어진 군으로부터 선택된 소정의 패턴을 형성하는 것인 방법.
  64. 제62항 또는 제63항에 있어서, 검사 장치는 액체 샘플 유동 방향에 대해 실제로 평행한 적어도 1개의 선과 액체 샘플 유동 방향에 대해 실제로 수직한 적어도 1개의 선을 포함하는 복수개의 선을 형성하는 것인 방법.
  65. 제62항 내지 제64항 중 어느 하나의 항에 있어서, 복수개의 시약 도트들은 매트릭스 상의 소정의 위치에서 시약을 분배함으로써 형성되는 것인 방법.
  66. 제65항에 있어서, 시약은 드롭 온 디맨드 방법 또는 시약의 기계적 전달을 이용하는 프린팅 방법에 의해 분배되는 것인 방법.
  67. 제62항 내지 제66항 중 어느 하나의 항에 있어서, 시약 도트들 중 적어도 1개는 직경이 약 0.1-1 um, 1-10 um, 10-50 um, 51-100 um, 101-200 um, 201-300 um, 301-400 um, 401-500 um 및 501-1000 um이거나 또는 그 직경 또는 표면적이 매트릭스의 길이, 폭 또는 표면적의 약 10%, 5%, 1%, 0.5%, 0.1%, 0.05%, 0.01%, 0.001% 또는 그 미만인 것인 방법.
  68. 제62항 내지 제67항 중 어느 하나의 항에 있어서, 적어도 2개의 시약 도트들 간의 거리는 약 1-10 um, 10-50 um, 51-100 um, 101-200 um, 201-300 um, 301-400, 401-500, 또는 501-600 um인 것인 방법.
  69. 제62항 내지 제68항 중 어느 하나의 항에 있어서, 복수개의 시약 도트들의 층을 복수개 형성하는 것을 포함하는 방법.
  70. 제62항 내지 제69항 중 어느 하나의 항에 있어서, 복수개의 시약 도트들의 적어도 1개 층을 매트릭스의 양면에 형성시키는 것을 포함하는 방법.
  71. 제69항 또는 제70항에 있어서, 복수개의 시약 도트들의 층을 복수개 형성하는 사이에 건조 단계를 더 포함하는 방법.
  72. 제62항 내지 제71항 중 어느 하나의 항에 따른 방법으로 제조된, 액체 샘플 중의 피검물을 검출하기 위한 검사 장치.
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Families Citing this family (59)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB2450351B (en) * 2007-06-20 2012-01-18 Cozart Bioscience Ltd Monitoring an Immunoassay
US8956859B1 (en) 2010-08-13 2015-02-17 Aviex Technologies Llc Compositions and methods for determining successful immunization by one or more vaccines
US8486717B2 (en) 2011-01-18 2013-07-16 Symbolics, Llc Lateral flow assays using two dimensional features
US9804161B1 (en) * 2012-05-14 2017-10-31 Lawrence Livermore National Security, Llc Detector and related, devices, methods and systems
US9874556B2 (en) 2012-07-18 2018-01-23 Symbolics, Llc Lateral flow assays using two dimensional features
WO2014051998A1 (en) * 2012-09-28 2014-04-03 Clontech Laboratories, Inc. Lateral flow assays for tagged analytes
CN103048467B (zh) * 2012-12-06 2016-01-27 苏州海吉亚生物科技有限公司 利用管家蛋白对组织细胞蛋白进行检测的方法
CN103048469A (zh) * 2012-12-06 2013-04-17 苏州海吉亚生物科技有限公司 双抗体组织细胞蛋白定量检测方法
CN103048466A (zh) * 2012-12-06 2013-04-17 苏州海吉亚生物科技有限公司 用于对组织细胞蛋白进行快速定量的试纸条检测方法
EP2948249A1 (en) 2013-01-22 2015-12-02 University of Washington through its Center for Commercialization Sequential delivery of fluid volumes and associated devices, systems and methods
JP2015072249A (ja) * 2013-03-29 2015-04-16 富士フイルム株式会社 被検物質の測定方法、被検物質測定キット及び被検物質測定試薬
CN103499691A (zh) * 2013-07-11 2014-01-08 苏州默锐克生物科技有限责任公司 一种her2蛋白表达水平的检测试纸
IL227524A0 (en) * 2013-07-18 2013-12-31 Tatakoto Company Ltd A device and method for the analysis of multiple anal
EP2835645B1 (en) * 2013-08-08 2015-10-07 Sartorius Stedim Biotech GmbH Lateral flow membrane and immunoassay device
CN103412126B (zh) * 2013-08-25 2015-06-10 河南科技学院 六价钼离子快速检测金标试纸及其制备方法与应用
CN108051590B (zh) * 2013-09-13 2020-12-11 Symbolics有限责任公司 运用二维试验和对照信号读出模式的侧向层析检测
WO2015054546A1 (en) * 2013-10-10 2015-04-16 Song Diagnostic Research Llc. Improved lateral flow assays
FR3012982B1 (fr) * 2013-11-08 2015-12-25 Espci Innov Procede de stockage et de concentration d'un compose volatil
EP3578635B1 (en) 2014-04-02 2021-11-03 Chembio Diagnostic Systems, Inc. Immunoassay utilizing trapping conjugate
CN104749359A (zh) * 2014-05-14 2015-07-01 陈岩松 一种多项联合检测的免疫层析检测方法及试纸
CN104749358A (zh) * 2014-05-14 2015-07-01 陈岩松 一种半定量免疫层析检测方法及试纸
CN104764877A (zh) * 2014-05-14 2015-07-08 陈岩松 一种免疫层析检测方法及试纸
EP2955519B1 (en) 2014-06-10 2019-08-07 Sartorius Stedim Biotech GmbH Lateral flow membrane for multiparameter readouts and immunoassay device comprising the same
CN104062427B (zh) * 2014-07-07 2016-01-06 广州万孚生物技术股份有限公司 新型免疫层析试纸条及其制备方法
CN105329836B (zh) * 2014-07-22 2017-09-22 中国科学院微电子研究所 微流体通道、侧向层流检测器件和微流体阀
KR102435197B1 (ko) * 2014-10-07 2022-08-22 쓰리엠 이노베이티브 프로퍼티즈 컴파니 크로마토그래피 농축을 이용한 분석물 검출 방법
WO2016149522A1 (en) * 2015-03-18 2016-09-22 Bio-Rad Laboratories, Inc. Sample analysis systems and methods
US20160313358A1 (en) * 2015-04-23 2016-10-27 Ted Titmus Diagnostic test strips for detection of pre-specified blood alcohol levels
KR20180088382A (ko) * 2015-10-15 2018-08-03 인바이오스 인터네셔널, 인크. 다중 측면 흐름 분석 시스템 및 이를 이용하는 방법
US20180372734A1 (en) * 2015-10-26 2018-12-27 Aesd Research & Development Gmbh Lateral flow immunoassay device
US20180319657A1 (en) * 2015-11-04 2018-11-08 Biocifer Pty Ltd Multiplex Lateral Flow Devices and Assays
MX2019000591A (es) * 2016-07-18 2020-07-20 Siemens Healthcare Diagnostics Inc Tira mejorada de ensayo de analisis de orina de bajo volumen de muestra, kits analiticos y metodos de uso relacionados con la misma.
CN106370848A (zh) * 2016-10-21 2017-02-01 北京康思润业生物技术有限公司 免疫侧向层析检测系统及其制备方法
CN110573880B (zh) 2017-02-10 2023-05-16 奎多公司 具有受控流体流动通道的基底的横向流动测试
GB2563563B (en) * 2017-04-07 2020-06-03 Helier Scient Limited A specific, rapid test differentiating gram positive and gram negative bacteria
US20200064351A1 (en) * 2017-05-05 2020-02-27 Analytical Diagnostic Solutions, Inc. Point-of-care device for the quantitative determination of branched-chain amino acids in biological samples
CN111133113B (zh) 2017-09-21 2024-03-29 贝克顿·迪金森公司 有害污染物测试中的高动态范围测定物
JP7206257B2 (ja) 2017-09-21 2023-01-17 ベクトン・ディキンソン・アンド・カンパニー 危険汚染物質の収集キット及び迅速試験
CN117405433A (zh) 2017-09-21 2024-01-16 贝克顿·迪金森公司 危险污染物收集试剂盒和快速测试
WO2019060276A1 (en) 2017-09-21 2019-03-28 Becton, Dickinson And Company INCREASED REALITY DEVICES FOR DANGEROUS CONTAMINANT TESTING
CA3075779A1 (en) 2017-09-21 2019-03-28 Becton, Dickinson And Company Demarcation template for hazardous contaminant testing
CN111108363A (zh) 2017-09-21 2020-05-05 贝克顿·迪金森公司 用于有害污染物测试的反应性划分模板
WO2019060265A1 (en) 2017-09-21 2019-03-28 Becton, Dickinson And Company SAMPLING SYSTEMS AND TECHNIQUES FOR COLLECTING HAZARDOUS CONTAMINANTS WITH HIGH CAPTURING AND RELOADING EFFECTIVENESS
WO2019068802A1 (fr) * 2017-10-04 2019-04-11 Unisensor Dispositif de lecture optique à intensité de lumière contrôlée d'un support solide amovible pour la détection et/ou la quantification d'analytes présents dans un échantillon
CA3091428A1 (en) * 2018-02-19 2019-08-22 PragmaDx, Inc. Secure machine readable code-embedded diagnostic test
WO2020041423A1 (en) * 2018-08-21 2020-02-27 Intelligent Material Solutions, Inc. Multiplex device utilizing linear array with slanted test lines on a lateral flow strip or microfluidic device
WO2020047606A1 (en) * 2018-09-06 2020-03-12 The University Of Sydney Systems, sensors and methods for determining a concentration of an analyte
CA3125355A1 (en) 2019-01-28 2020-08-06 Becton, Dickinson And Company Hazardous contaminant collection device with integrated swab and test device
US10928394B2 (en) * 2019-02-07 2021-02-23 Julian R. K. Kage Rapid test for lyme bacteria
CN111686826B (zh) * 2019-03-15 2023-05-23 国家纳米科学中心 分层结构的微流控芯片及其应用
WO2020232313A1 (en) * 2019-05-14 2020-11-19 Inscent, Inc. Lateral flow device for target analyte detection using chemosensory proteins
CN111948400A (zh) * 2019-05-17 2020-11-17 糜军 快速定量检测组织细胞蛋白的测试片
CA3049972A1 (en) * 2019-07-15 2021-01-15 Youcount Inc. Urinalysis test strip for over-the-counter use
US20210129134A1 (en) * 2019-11-04 2021-05-06 Rarecyte, Inc. Reference slide
WO2021194635A1 (en) * 2020-03-24 2021-09-30 Mcgrew Stephen P Combinatorial affinity-based analysis assemblies and methods
WO2021201858A1 (en) * 2020-04-01 2021-10-07 Hewlett-Packard Development Company, L.P. Matrix dispense patterns
US20230236185A1 (en) * 2020-05-29 2023-07-27 Abbott Rapid Diagnostics International Unlimited Company Machine readable diagnostic tests and methods and apparatus to make and/or process the same
CN112529265B (zh) * 2020-11-27 2021-10-26 安徽泽众安全科技有限公司 一种燃气管线综合风险评估、预测方法及系统
WO2023167945A1 (en) * 2022-03-01 2023-09-07 Argonaut Manufacturing Services, Inc. Devices that include a dried reagent:substrate complex and methods for generating such complexes and devices

Family Cites Families (263)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US872357A (en) 1907-04-01 1907-12-03 Mapother Kerr And Lerch Combined package seal and fastener.
US5622871A (en) 1987-04-27 1997-04-22 Unilever Patent Holdings B.V. Capillary immunoassay and device therefor comprising mobilizable particulate labelled reagents
US7775976B2 (en) 1920-03-19 2010-08-17 Alere Switzerland Gmbh Method to determine a coagulation property of a fluid
US3641235A (en) 1968-11-01 1972-02-08 Miles Lab Immunological reagent and process for making same
US3966897A (en) 1973-04-02 1976-06-29 Marine Colloids, Inc. Medium for use in bioassay and method of using same
US3959078A (en) 1973-05-18 1976-05-25 Midwest Research Institute Enzyme immobilization with a thermochemical-photochemical bifunctional agent
SE388694B (sv) 1975-01-27 1976-10-11 Kabi Ab Sett att pavisa ett antigen exv i prov av kroppvetskor, med utnyttjande av till porost berarmaterial bundna eller adsorberande antikroppar
IL52322A (en) 1976-06-18 1980-10-26 Alfa Laval Ab Method of making reagent test device and device made accorording to this method
US4094647A (en) 1976-07-02 1978-06-13 Thyroid Diagnostics, Inc. Test device
JPS55162059A (en) 1979-06-05 1980-12-17 Mochida Pharmaceut Co Ltd Measuring method for antigen, antibody or their complex and measurement reagent kit
US4299916A (en) 1979-12-26 1981-11-10 Syva Company Preferential signal production on a surface in immunoassays
US4391904A (en) 1979-12-26 1983-07-05 Syva Company Test strip kits in immunoassays and compositions therein
NL8000173A (nl) 1980-01-11 1981-08-03 Akzo Nv Toepassing van in water dispergeerbare, hydrofobe kleurstoffen als label in immunochemische testen.
US4347312A (en) 1980-03-20 1982-08-31 Research Triangle Institute Detection of antibiotics in milk
US6406920B1 (en) 1980-06-20 2002-06-18 Inverness Medical Switzerland Gmbh Processes and apparatus for carrying out specific binding assays
US4366241A (en) 1980-08-07 1982-12-28 Syva Company Concentrating zone method in heterogeneous immunoassays
US4517288A (en) 1981-01-23 1985-05-14 American Hospital Supply Corp. Solid phase system for ligand assay
US4425438A (en) 1981-03-13 1984-01-10 Bauman David S Assay method and device
US5141875A (en) 1982-01-08 1992-08-25 Environmental Diagnostics, Inc. Rotary fluid manipulator
US5073484A (en) 1982-03-09 1991-12-17 Bio-Metric Systems, Inc. Quantitative analysis apparatus and method
EP0149168B1 (en) 1983-12-19 1991-04-24 Daiichi Pure Chemicals Co. Ltd. Immunoassay
US4695554A (en) 1984-02-14 1987-09-22 Becton Dickinson And Company Sac or liposome containing dye (sulforhodamine) for immunoassay
US4703017C1 (en) 1984-02-14 2001-12-04 Becton Dickinson Co Solid phase assay with visual readout
US4743560A (en) 1984-03-26 1988-05-10 Becton Dickinson And Company Solid phase assay
DE3445816C1 (de) 1984-12-15 1986-06-12 Behringwerke Ag, 3550 Marburg Flaechenfoermiges diagnostisches Mittel
US4740468A (en) 1985-02-14 1988-04-26 Syntex (U.S.A.) Inc. Concentrating immunochemical test device and method
US5501949A (en) 1985-12-10 1996-03-26 Murex Diagnostics Corporation Particle bound binding component immunoassay
US5236826A (en) 1985-12-10 1993-08-17 Murex Corporation Immunoassay for the detection or quantitation of an analyte
US5160701A (en) * 1986-02-18 1992-11-03 Abbott Laboratories Solid-phase analytical device and method for using same
US4778751A (en) 1986-05-12 1988-10-18 Diagnostic Products Corporation Method for measuring antigens or antibodies in biological fluids using ligand labeled antigens or ligand labeled antibodies
AU602694B2 (en) 1986-06-09 1990-10-25 Ortho Diagnostic Systems Inc. Improved colloidal gold membrane assay
US5514602A (en) 1986-06-09 1996-05-07 Ortho Diagnostic Systems, Inc. Method of producing a metal sol reagent containing colloidal metal particles
US4960691A (en) 1986-09-29 1990-10-02 Abbott Laboratories Chromatographic test strip for determining ligands or receptors
US5079142A (en) 1987-01-23 1992-01-07 Synbiotics Corporation Orthogonal flow immunoassays and devices
CA1303983C (en) 1987-03-27 1992-06-23 Robert W. Rosenstein Solid phase assay
USRE38430E1 (en) 1987-03-27 2004-02-17 Becton, Dickinson And Company Solid phase chromatographic immunoassay
US4857453A (en) 1987-04-07 1989-08-15 Syntex (U.S.A.) Inc. Immunoassay device
EP1248112A3 (en) 1987-04-27 2004-08-25 Inverness Medical Switzerland GmbH Immunochromatographic specific binding assay device
US5120643A (en) 1987-07-13 1992-06-09 Abbott Laboratories Process for immunochromatography with colloidal particles
AT389540B (de) 1987-07-23 1989-12-27 Plasser Bahnbaumasch Franz Anlage bzw. maschinenkombination und verfahren zum fortschreitenden teilweisen schwellen-auswechseln eines gleises
US4956302A (en) 1987-09-11 1990-09-11 Abbott Laboratories Lateral flow chromatographic binding assay device
US5275785A (en) 1987-10-30 1994-01-04 Unilever Patent Holdings B.V. Test device for detecting an analyte in a liquid sample
EP0323605B1 (en) 1987-12-21 1994-01-26 Abbott Laboratories Chromatographic binding assay devices and methods
AU2684488A (en) 1988-06-27 1990-01-04 Carter-Wallace, Inc. Test device and method for colored particle immunoassay
US5252459A (en) 1988-09-23 1993-10-12 Abbott Laboratories Indicator reagents, diagnostic assays and test kits employing organic polymer latex particles
US5200312A (en) * 1989-01-30 1993-04-06 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Navy Membrane based dot immunoassay and method of use
US6352862B1 (en) 1989-02-17 2002-03-05 Unilever Patent Holdings B.V. Analytical test device for imuno assays and methods of using same
US5714465A (en) 1989-05-19 1998-02-03 Amgen Inc. Method of inhibiting tumor cell dissemination with a metalloproteinase inhibitor
US5075078A (en) 1989-10-05 1991-12-24 Abbott Laboratories Self-performing immunochromatographic device
US5252496A (en) 1989-12-18 1993-10-12 Princeton Biomeditech Corporation Carbon black immunochemical label
KR910014706A (ko) 1990-01-10 1991-08-31 원본미기재 세척이 필요없는 개량된 이뮤노어세이(immunoassay)장치
US5132085A (en) 1991-02-28 1992-07-21 Eastman Kodak Company Test device with novel control symbolism
DE4024544A1 (de) * 1990-08-02 1992-02-06 Boehringer Mannheim Gmbh Analyseelement und verfahren zu seiner herstellung
JP3108115B2 (ja) 1991-03-28 2000-11-13 ロート製薬株式会社 イムノクロマトグラフ法による物質検出法
US5998220A (en) 1991-05-29 1999-12-07 Beckman Coulter, Inc. Opposable-element assay devices, kits, and methods employing them
US5869252A (en) 1992-03-31 1999-02-09 Abbott Laboratories Method of multiplex ligase chain reaction
US6100099A (en) 1994-09-06 2000-08-08 Abbott Laboratories Test strip having a diagonal array of capture spots
DE69322266T2 (de) 1992-04-03 1999-06-02 Perkin Elmer Corp Proben zusammensetzung und verfahren
GB9217808D0 (en) 1992-08-21 1992-10-07 Unilever Plc Advisory method
GB9217865D0 (en) 1992-08-21 1992-10-07 Unilever Plc Monitoring method
FI92882C (fi) 1992-12-29 1995-01-10 Medix Biochemica Ab Oy Kertakäyttöinen testiliuska ja menetelmä sen valmistamiseksi
US5422726A (en) 1993-02-16 1995-06-06 Tyler; Jonathan M. Solid state spectrofluorimeter and method of using the same
US5837546A (en) 1993-08-24 1998-11-17 Metrika, Inc. Electronic assay device and method
PT653639E (pt) 1993-11-12 2000-06-30 Unilever Nv Equipamentos analiticos e metodos para a sua utilizacao
US7141212B2 (en) 1993-11-12 2006-11-28 Inverness Medical Switzerland Gmbh Reading devices and assay devices for use therewith
US6319665B1 (en) 1994-06-07 2001-11-20 Inverness Medical Technology, Inc. Home test kit and method with telephone verification of results
US6451619B1 (en) 1994-06-29 2002-09-17 Inverness Medical Switzerland Gmbh Monitoring methods and devices for use therein
US6927064B1 (en) 1994-06-29 2005-08-09 Inverness Medical Switzerland Gmbh Fertility computing method
GB9419267D0 (en) 1994-09-23 1994-11-09 Unilever Plc Assay devices
GB9505425D0 (en) 1995-03-17 1995-05-03 Unilever Plc Assay devices
JP3458871B2 (ja) 1995-03-31 2003-10-20 日立金属株式会社 クロムタ−ゲットおよびその製造方法
US6627404B1 (en) 1995-04-18 2003-09-30 Biosite, Inc. Methods for improving the recovery of troponin I and T in membranes, filters and vessels
US6991907B1 (en) 1995-04-18 2006-01-31 Biosite, Inc. Methods for the assay of troponin I and T and complexes of troponin I and T and selection of antibodies for use in immunoassays
US6319676B1 (en) 1995-05-02 2001-11-20 Carter Wallace, Inc. Diagnostic detection device and method
US6241862B1 (en) 1996-02-14 2001-06-05 Inverness Medical Technology, Inc. Disposable test strips with integrated reagent/blood separation layer
AU740812B2 (en) 1996-03-20 2001-11-15 Serex, Inc. Chromatographic immunoassay device and method utilizing particle valency for quantitation
US5753517A (en) 1996-03-29 1998-05-19 University Of British Columbia Quantitative immunochromatographic assays
US5747273A (en) 1996-05-07 1998-05-05 Diagnostic Systems Laboratories, Inc. Immunoassay of total insulin-like growth factor binding protein-1
US5968839A (en) 1996-05-13 1999-10-19 Metrika, Inc. Method and device producing a predetermined distribution of detectable change in assays
DE19634873A1 (de) 1996-08-29 1998-03-12 Boehringer Mannheim Gmbh System zur Unterscheidung fluoreszierender Molekülgruppen durch zeitaufgelöste Fluoreszenzmessung
US6432630B1 (en) 1996-09-04 2002-08-13 Scandinanian Micro Biodevices A/S Micro-flow system for particle separation and analysis
US5798273A (en) 1996-09-25 1998-08-25 Becton Dickinson And Company Direct read lateral flow assay for small analytes
EP0833157B1 (en) 1996-09-27 2002-11-20 Inverness Medical Switzerland GmbH Assay reagents and devices
EP0833145B1 (en) 1996-09-27 2003-01-29 Inverness Medical Switzerland GmbH Test kit and devices
ATE213333T1 (de) 1996-09-27 2002-02-15 Unilever Nv Überwachungsverfahren
US6024965A (en) 1996-10-18 2000-02-15 Erasums University Rotterdam Induction of REV and TAT specific cytotoxic T-cells for prevention and treatment of human immunodeficiency virus (HIV) infection
US5710005A (en) 1996-10-29 1998-01-20 Biocode, Inc. Analyte detection with a gradient lateral flow device
US7153651B1 (en) 1996-10-31 2006-12-26 Inverness Medical - Biostar, Inc. Flow-through optical assay devices providing laminar flow of fluid samples, and methods of construction thereof
GB2322192B (en) 1997-02-14 2001-01-31 Unilever Plc Assay devices
US6544797B1 (en) 1997-04-09 2003-04-08 Biosite Diagnostics, Inc. Compositions and methods for inhibiting light-induced inactivation of biological reagents
US6103536A (en) 1997-05-02 2000-08-15 Silver Lake Research Corporation Internally referenced competitive assays
US6077222A (en) 1997-10-28 2000-06-20 Alere Incorporated Method and device for detecting edema
US5915386A (en) 1997-10-28 1999-06-29 Alere Medical Incorporated Method and device for detecting edema
US5957867A (en) 1997-10-28 1999-09-28 Alere Incorporated Method and device for detecting edema
US6080106A (en) 1997-10-28 2000-06-27 Alere Incorporated Patient interface system with a scale
CA2216214A1 (en) * 1997-11-17 1999-05-17 Jia Bei Zhu Single-device, multi-purposes membrane-based rapid immunoassay
JP4071330B2 (ja) 1997-11-20 2008-04-02 大日精化工業株式会社 抗ヒトメダラシンモノクローナル抗体、その製造方法及びそれを用いる免疫学的測定方法
US6551495B1 (en) 1997-11-21 2003-04-22 Inverness Medical Switzerland Gmbh Electrochemical assays
SE9704933D0 (sv) 1997-12-30 1997-12-30 Pharmacia & Upjohn Diag Ab Metod som utnyttjar en ny kalibrator och test kit som innehåller kalibratorn
US7713703B1 (en) 2000-11-13 2010-05-11 Biosite, Inc. Methods for monitoring the status of assays and immunoassays
US6194222B1 (en) 1998-01-05 2001-02-27 Biosite Diagnostics, Inc. Methods for monitoring the status of assays and immunoassays
US6830731B1 (en) 1998-01-05 2004-12-14 Biosite, Inc. Immunoassay fluorometer
WO1999040438A1 (en) 1998-02-03 1999-08-12 Synbiotics Corporation Device and method to detect immunoprotective antibody titers
US6267722B1 (en) 1998-02-03 2001-07-31 Adeza Biomedical Corporation Point of care diagnostic systems
US6394952B1 (en) 1998-02-03 2002-05-28 Adeza Biomedical Corporation Point of care diagnostic systems
USD408292S (en) 1998-03-10 1999-04-20 Selfcare, Inc. Combined bottle and cap
SE9801563D0 (sv) 1998-04-30 1998-04-30 Pharmacia & Upjohn Diag Ab Förfarande med separation och kit att användas vid förfarandet
DE19844500A1 (de) 1998-09-29 2000-03-30 Roche Diagnostics Gmbh Verfahren zur photometrischen Auswertung von Testelementen
US6379620B1 (en) 1998-11-16 2002-04-30 Barry M. Tydings Assaying device and method for in field urinalysis
US7763475B2 (en) 1999-04-22 2010-07-27 Inverness Medical Switzerland Gmbh Measurement and use of molecular interactions
US6452699B1 (en) 1999-09-28 2002-09-17 Holospex, Inc. Controlled diffraction efficiency far field viewing devices
US6812038B1 (en) 1999-11-18 2004-11-02 Pharmacia Diagnostics Ab Assay device and use thereof
US6734886B1 (en) 1999-12-21 2004-05-11 Personalpath Systems, Inc. Method of customizing a browsing experience on a world-wide-web site
ES2334972T3 (es) 2000-02-03 2010-03-18 DAINICHISEIKA COLOR & CHEMICALS MFG. CO. LTD. Inmunoensayo para medulasina humana y metodo de diagnostico de la esclerosis multiple.
JP2003531360A (ja) 2000-03-15 2003-10-21 スカンディナヴィアン マイクロ バイオデヴァイシズ アクティーゼルスカブ 外側が囲まれた少なくとも１つの流れをチャンネル内に確立する方法
CA2342683A1 (en) 2000-04-03 2001-10-03 Unilever Plc Test methods and devices
US7244392B1 (en) 2000-05-22 2007-07-17 Inverness Medical Switzerland Gmbh Slide-in cassette for a cup for testing of drugs of abuse
IL153295A0 (en) 2000-06-09 2003-07-06 Diabetes Diagnostics Inc Cap for a lancing device
US6777198B2 (en) 2000-10-11 2004-08-17 Pharmacia Diagnostics Ab Assay method and kit therefor
DE10052066A1 (de) 2000-10-19 2002-05-29 Inverness Medical Ltd Siebdruckfähige Paste zur Herstellung einer porösen Polymermembran für einen Biosensor
US6861214B1 (en) 2000-10-23 2005-03-01 Beckman Coulter, Inc. Immobilization of biopolymers to aminated substrates by direct adsorption
US6756202B2 (en) 2001-04-30 2004-06-29 Agilent Technologies, Inc. Reading multi-featured arrays
US6770487B2 (en) 2001-05-01 2004-08-03 Ischemia Technologies, Inc. Bar code readable diagnostic strip test
US6766817B2 (en) 2001-07-25 2004-07-27 Tubarc Technologies, Llc Fluid conduction utilizing a reversible unsaturated siphon with tubarc porosity action
US6862482B2 (en) 2001-08-06 2005-03-01 Emerson Electric Co. Appliance control system with LED operation indicators
SE0103072D0 (sv) 2001-09-17 2001-09-17 Pharmacia Diagnostics Ab Multi-analyte assay device with multi-spot detection zone
US6723500B2 (en) * 2001-12-05 2004-04-20 Lifescan, Inc. Test strips having reaction zones and channels defined by a thermally transferred hydrophobic barrier
WO2003058242A2 (en) 2001-12-24 2003-07-17 Kimberly-Clark Worldwide, Inc. Internal calibration system for flow-through assays
US8367013B2 (en) 2001-12-24 2013-02-05 Kimberly-Clark Worldwide, Inc. Reading device, method, and system for conducting lateral flow assays
US7049150B2 (en) 2001-12-28 2006-05-23 Varian, Inc. Binding assay device with non-absorbent carrier material
ATE438098T1 (de) 2002-01-09 2009-08-15 Inverness Medical Switzerland Teststreifen enthaltend kontrollmittel und zeitsetzermittel
WO2003062824A1 (en) 2002-01-23 2003-07-31 Boditech Inc. Lateral flow quantitative assay method and strip and laser-induced fluoerescence detection device therefor
US7399590B2 (en) 2002-02-21 2008-07-15 Asm Scientific, Inc. Recombinase polymerase amplification
US8030000B2 (en) 2002-02-21 2011-10-04 Alere San Diego, Inc. Recombinase polymerase amplification
US6805838B2 (en) 2002-03-04 2004-10-19 Barry M. Tydings Assaying device and method for in field urinalysis
EP1493029B1 (en) 2002-04-10 2010-03-31 Response Biomedical Corporation Sensitive immunochromatographic assay
US7175992B2 (en) 2002-04-10 2007-02-13 Response Biomedical Corporation Sensitive immunochromatographic assay
US7323139B2 (en) 2002-07-26 2008-01-29 Quantum Design, Inc. Accessible assay and method of use
USD497673S1 (en) 2002-08-22 2004-10-26 Inverness Medical Switzerland Gmbh Testing device
AU155895S (en) 2002-08-22 2004-07-16 Inverness Medical Switzerland G M B H Assay device with cap
US7256053B2 (en) 2002-10-24 2007-08-14 Nanogen, Inc. Diagnostic device for analyte detection
ES2228234B1 (es) 2002-11-06 2006-05-16 Eduardo Jaime Cadorniga Martinez Metodo para la autoejecucion del grupo sanguineo abo.
US7247500B2 (en) 2002-12-19 2007-07-24 Kimberly-Clark Worldwide, Inc. Reduction of the hook effect in membrane-based assay devices
USD484600S1 (en) 2003-01-27 2003-12-30 Inverness Medical Limited Blood glucose test meter
US7459314B2 (en) 2003-02-13 2008-12-02 Inverness Medical Switzerland Gmbh Lateral flow immunoassay controls
US7522762B2 (en) 2003-04-16 2009-04-21 Inverness Medical-Biostar, Inc. Detection, resolution, and identification of arrayed elements
USD509901S1 (en) 2003-05-13 2005-09-20 Inverness Medical Switzerland Gmbh Handheld medical test device
US7315378B2 (en) 2003-06-04 2008-01-01 Inverness Medical Switzerland Gmbh Optical arrangement for assay reading device
US7317532B2 (en) 2003-06-04 2008-01-08 Inverness Medical Switzerland Gmbh Flow sensing for determination of assay results
US7239394B2 (en) 2003-06-04 2007-07-03 Inverness Medical Switzerland Gmbh Early determination of assay results
GB0313015D0 (en) 2003-06-06 2003-07-09 Hall Effect Technologies Ltd Method and device for analysing a liquid
US7178416B2 (en) 2003-07-08 2007-02-20 Alexeter Technologies, Llc. Radio frequency identification (RFID) test information control and tracking system
DE10330981B4 (de) * 2003-07-09 2010-04-01 Medion Diagnostics Ag Vorrichtung und Verfahren zur simultanen Durchführung von Blutgruppenbestimmung, Serumgegenprobe und Antikörpersuch-Test
DE60325107D1 (de) 2003-08-25 2009-01-15 Marc Ramael Verfahren und kit zum quantitativen und/oder qualitativen nachweis von komponenten in einer probe
US7517495B2 (en) 2003-08-25 2009-04-14 Inverness Medical Switzerland Gmbh Biological specimen collection and analysis system
AU2004268431A1 (en) 2003-09-01 2005-03-10 Inverness Medical Switzerland Gmbh Sampling device with capillary action
US7238538B2 (en) 2003-09-19 2007-07-03 Freitag Helmut E Chromatographic assay device and methods
US7438852B2 (en) 2003-11-14 2008-10-21 Inverness Medical Switzerland Gmbh Sample collection cup with integrated sample analysis system
USD510711S1 (en) 2003-12-03 2005-10-18 Inverness Medical Limted Analyte test meter
WO2005059547A2 (en) 2003-12-12 2005-06-30 Inverness Medical Switzerland Gmbh Assay
GB0329288D0 (en) 2003-12-18 2004-01-21 Inverness Medical Switzerland Monitoring method and apparatus
US20050196817A1 (en) 2004-01-20 2005-09-08 Molecular Staging Inc. Biomarkers for sepsis
US7819822B2 (en) 2004-03-06 2010-10-26 Roche Diagnostics Operations, Inc. Body fluid sampling device
GB0405999D0 (en) * 2004-03-17 2004-04-21 Cozart Bioscience Ltd Procedure for manufacture of strips for lateral flow immunochromatographic devices
JP4980884B2 (ja) 2004-03-30 2012-07-18 ジーイー・ヘルスケア・バイオサイエンス・コーポレイション 側方流動方式、材料、及び方法
US7516845B2 (en) 2004-03-31 2009-04-14 Inverness Medical Limited Medical device package with deformable projections
US8128871B2 (en) 2005-04-22 2012-03-06 Alverix, Inc. Lateral flow assay systems and methods
US20070143035A1 (en) 2005-12-19 2007-06-21 Petruno Patrick T Diagnostic test reader with disabling unit
US20050221504A1 (en) 2004-04-01 2005-10-06 Petruno Patrick T Optoelectronic rapid diagnostic test system
US7521259B2 (en) 2004-04-01 2009-04-21 Alverix, Inc. Assay test strips with multiple labels and reading same
US20070185679A1 (en) 2004-04-01 2007-08-09 Petruno Patrick T Indicating status of a diagnostic test system
CN100530803C (zh) 2004-04-26 2009-08-19 丰田自动车株式会社 燃料电池模组
US20050244953A1 (en) 2004-04-30 2005-11-03 Kimberly-Clark Worldwide, Inc. Techniques for controlling the optical properties of assay devices
US7796266B2 (en) 2004-04-30 2010-09-14 Kimberly-Clark Worldwide, Inc. Optical detection system using electromagnetic radiation to detect presence or quantity of analyte
US20060019265A1 (en) 2004-04-30 2006-01-26 Kimberly-Clark Worldwide, Inc. Transmission-based luminescent detection systems
US7815854B2 (en) 2004-04-30 2010-10-19 Kimberly-Clark Worldwide, Inc. Electroluminescent illumination source for optical detection systems
CA2569491A1 (en) 2004-06-02 2005-12-15 Asm Scientific, Inc. 2'-nitrobenzyl-modified ribonucleotides
CN1713192A (zh) 2004-06-25 2005-12-28 国际商业机器公司 处理逻辑建模与执行方法和设备
US7521560B2 (en) 2004-06-29 2009-04-21 Rigel Pharmaceuticals, Inc. 2-substituted quinoline compounds and their uses
US7763454B2 (en) 2004-07-09 2010-07-27 Church & Dwight Co., Inc. Electronic analyte assaying device
AU2005294246A1 (en) 2004-10-04 2006-04-20 Akers Biosciences, Inc. Methods and kits for detecting heparin/platelet factor 4 antibodies
CA110575S (en) 2004-10-06 2006-10-12 Inverness Medical Switzerland Integral assay device and reader
CA110574S (en) 2004-10-06 2006-10-12 Inverness Medical Switzerland Integral assay device and reader
EP1657550A1 (en) * 2004-11-10 2006-05-17 Coris Bioconcept SPRL Double-sided device for multiplex dipstick immunodiagnostic
US7925445B2 (en) 2004-12-03 2011-04-12 Alverix, Inc. Read-write assay system
GB0427568D0 (en) 2004-12-16 2005-01-19 Resolution Chemicals Ltd Particle-size reduction apparatus, and the use thereof
US7297502B2 (en) * 2004-12-17 2007-11-20 Oakville Hong Kong Company Limited Devices and methods for analyte assays with built-in result reporting using recognizable symbols
US7280201B2 (en) 2004-12-17 2007-10-09 Avago Technologies General Ip Pte Ltd Sensor having integrated light detector and/or light source
US7391512B2 (en) 2004-12-22 2008-06-24 Avago Technologies General Ip Pte. Ltd. Integrated optoelectronic system for measuring fluorescence or luminescence emission decay
US7589037B2 (en) 2005-01-13 2009-09-15 Basofil Fibers, Llc Slickened or siliconized flame resistant fiber blends
WO2006078813A2 (en) 2005-01-21 2006-07-27 Biosite Incorporated Arginine analogs, and methods for their synthesis and use
ES2580107T3 (es) 2005-02-18 2016-08-19 Charm Sciences, Inc. Kit de ensayo de flujo lateral y método para detectar un analito
US7704753B2 (en) 2005-03-03 2010-04-27 Inverness Medical Switzerland Gmbh Devices and methods for analyte assays with built-in result reporting using recognizable symbols
US7516315B2 (en) 2005-03-18 2009-04-07 Research In Motion Ltd. Electronic device having an alterable configuration and methods of manufacturing and configuring the same
US7939342B2 (en) * 2005-03-30 2011-05-10 Kimberly-Clark Worldwide, Inc. Diagnostic test kits employing an internal calibration system
EP1864120B1 (en) 2005-04-01 2011-11-30 Alere Switzerland GmbH Docking station for a sensor cartridge
US9891217B2 (en) 2005-04-22 2018-02-13 Alverix, Inc. Assay test strips with multiple labels and reading same
US8062901B2 (en) 2005-04-30 2011-11-22 Alere Switzerland Gmbh Devices and methods for sample collection and analysis
EP1929049B1 (en) 2005-07-25 2013-04-10 Alere San Diego, Inc. Methods for multiplexing recombinase polymerase amplification
US7829347B2 (en) 2005-08-31 2010-11-09 Kimberly-Clark Worldwide, Inc. Diagnostic test kits with improved detection accuracy
WO2007053487A2 (en) 2005-10-28 2007-05-10 Binax, Inc. Methods and devices for detection of the strain of a pathogen
US7858396B2 (en) 2005-10-31 2010-12-28 Orasure Technologies, Inc. Lateral flow assay device with multiple equidistant capture zones
US7618810B2 (en) 2005-12-14 2009-11-17 Kimberly-Clark Worldwide, Inc. Metering strip and method for lateral flow assay devices
US8491850B2 (en) 2005-12-19 2013-07-23 Alverix, Inc. Diagnostic test reader with locking mechanism
US7226752B1 (en) 2006-01-19 2007-06-05 Avago Technologies General Ip (Singapore) Pte. Ltd. Methods for detecting an analyte in a sample
US20070211965A1 (en) 2006-03-07 2007-09-13 Helbing Rene P Hand-held diagnostic systems and methods of use thereof
WO2007109500A1 (en) 2006-03-16 2007-09-27 The Board Of Trustees Of The University Of Illinois Lateral flow devices
US8124359B2 (en) 2006-03-24 2012-02-28 Aokin Ag Use of additives for the reduction of non-specific binding in assays
US7741103B2 (en) 2006-03-31 2010-06-22 Guirguis Raouf A Integrated screening and confirmation device
EP2021773B1 (en) 2006-04-19 2015-03-25 IT-IS International Ltd Reaction monitoring method and apparatus
EP2029782B1 (en) 2006-05-04 2014-11-26 Alere San Diego, Inc. Recombinase polymerase amplification
WO2007133725A1 (en) 2006-05-12 2007-11-22 University Of Miami Biomarkers for detection and diagnosis of head and neck squamous cell carcinoma
KR101314999B1 (ko) 2006-05-24 2013-10-04 라이브니츠 인스티튜트 포 내추럴 프로덕트 리서치 앤드 인펙션 바이올로지 이.브이. 한스-크뇔-인스티튜트 (에이치케이아이) 신규한 벤조티아지논 유도체 및 그의 항균제로서의 용도
US7705976B2 (en) 2006-05-31 2010-04-27 Alverix, Inc. Method for recognizing patterns from assay results
WO2008084331A2 (en) 2006-06-21 2008-07-17 Hopitaux Universitaires De Geneve Biomarkers for renal disorders
WO2008014709A1 (fr) 2006-07-26 2008-02-07 Abon Biopharm (Hangzhou) Co., Ltd. Dispositif d'analyse d'un échantillon biologique
US20090269858A1 (en) 2006-08-02 2009-10-29 Koninklijke Philips Electronics N.V. Method of determining the concentration of an analyte using analyte sensor molecules coupled to a porous membrane
US7704702B2 (en) 2006-08-10 2010-04-27 Inverness Medical Switzerland Gmbh Test strip for lateral flow assays
WO2008105814A2 (en) 2006-08-22 2008-09-04 Los Alamos National Security, Llc Miniturized lateral flow device for rapid and sensitive detection of proteins or nucleic acids
US7625763B2 (en) 2006-09-11 2009-12-01 Alverix, Inc. Rapid diagnostic test systems and methods
US20080069732A1 (en) 2006-09-20 2008-03-20 Robert Yi Diagnostic test system
USD575876S1 (en) 2006-09-27 2008-08-26 Inverness Medical Switzerland Gmbh Body fluid assay device
US7532128B2 (en) 2006-10-25 2009-05-12 Alverix, Inc. Position sensitive indicator detection
EP2500723B1 (en) 2006-11-14 2015-07-08 Alere San Diego, Inc. Methods for monitoring and risk prediction in cardiorenal syndrome
US8405827B2 (en) 2006-11-21 2013-03-26 Ricardo Claps Time-resolved spectroscopy system and methods for multiple-species analysis in fluorescence and cavity-ringdown applications
US7679745B2 (en) 2006-11-21 2010-03-16 Neptec Optical Solutions Time-resolved fluorescence spectrometer for multiple-species analysis
DE102006062619B4 (de) * 2006-12-29 2012-04-26 Medion Diagnostics Ag Verfahren zur Bestimmung von minoren Zellpopulationen in heterogenen Zellpopulationen
CN101021526B (zh) 2007-03-16 2012-01-25 艾博生物医药(杭州)有限公司 一种直观显示检测结果的装置和方法
AU317853S (en) 2007-05-11 2008-02-04 Inverness Medical Switzerland Gmbh Pregnancy test device
US8038965B2 (en) 2007-05-30 2011-10-18 Alere Switzerland Gmbh Diagnostic kit
US7591791B2 (en) 2007-06-21 2009-09-22 Inverness Medical Switzerland Gmbh Diagnostic thimble
AU2008207371B2 (en) * 2007-09-01 2014-05-22 Abbott Rapid Diagnostics International Unlimited Company Assay device with shared zones
EP2200744B1 (en) 2007-09-14 2020-05-27 Biosensia Patents Limited An analysis system
EP2203742A4 (en) 2007-09-21 2011-01-26 Charm Sciences Inc TEST READING APPARATUS AND METHOD FOR MAINTAINING A READING DEVICE
USD621059S1 (en) 2007-10-02 2010-08-03 Alere Switzerland Gmbh Test strip
USD602599S1 (en) 2007-10-04 2009-10-20 Inverness Medical Switzerland Gmbh Testing device
CA125693S (en) 2007-10-23 2009-03-18 Inverness Medical Switzerland Diagnostic test device
US7988918B2 (en) 2007-11-01 2011-08-02 Complete Genomics, Inc. Structures for enhanced detection of fluorescence
US8901366B2 (en) 2007-12-14 2014-12-02 Kimberly Clark Worldwide, Inc. Urine volume hydration test devices
WO2009111254A2 (en) 2008-02-29 2009-09-11 Biomedomics, Inc. A rapid and sensitive method for quantitative determination of the level of heparin-pf4 complex induced immunoglobulin antibodies
WO2009116021A1 (en) 2008-03-18 2009-09-24 Biotrin Intellectual Properties Limited Method of assessing kidney function in a human subject
WO2009137059A1 (en) 2008-05-05 2009-11-12 Los Alamos National Security, Llc Highly simplified lateral flow-based nucleic acid sample preparation and passive fluid flow control
US7910309B2 (en) 2008-07-31 2011-03-22 Los Alamos National Security, Llc Multiplexed lateral flow microarray assay for detection of citrus pathogens Xylella fastidiosa and Xanthomonas axonopodis pv citri
US8501489B2 (en) 2008-09-26 2013-08-06 University of Pittsburgh—of the Commonwealth System of Higher Education Urinary biomarkers to predict long-term dialysis
US8046175B2 (en) 2008-10-13 2011-10-25 Actherm Inc Analytical strip reading apparatus and the analyical strip used therein
US20110244597A1 (en) * 2008-11-28 2011-10-06 Konica Minolta Medical & Graphic, Inc. Immunochromatographic medium and immunochromatographic method
JP2012510621A (ja) 2008-12-05 2012-05-10 紅電醫學科技股▲分▼有限公司 取り外し可能なファームウェアを備えた試験片読取装置
US20100173423A1 (en) 2009-01-06 2010-07-08 Inverness Medical Switzerland Gmbh Multiple testing apparatus and method
US8039783B2 (en) 2009-01-14 2011-10-18 Alverix, Inc. Methods and materials for detecting light released from a labeling material using self triggering excitation
US20100279301A1 (en) 2009-05-04 2010-11-04 The Regents Of The University Of Michigan Methods and compositions for diagnosing bladder cancer
USD617468S1 (en) 2009-05-27 2010-06-08 Inverness Medical Innovations, Inc. Test strip
EP2269737B1 (en) 2009-07-02 2017-09-13 Amic AB Assay device comprising serial reaction zones
EP2462443A4 (en) 2009-08-07 2013-01-30 Rules Based Medicine Inc METHODS AND DEVICES FOR DETECTING GLOMERULONEPHRITH AND ASSOCIATED DISORDERS
USD634620S1 (en) 2009-08-27 2011-03-22 Alere Switzerland Gmbh Package
USD634621S1 (en) 2009-08-27 2011-03-22 Alere Switzerland Gmbh Package
USD659847S1 (en) 2009-12-23 2012-05-15 Alere Switzerland Gmbh Digital test device
USD639977S1 (en) 2010-06-03 2011-06-14 Alere San Diego, Inc. Test strip base
USD640389S1 (en) 2010-06-03 2011-06-21 Alere San Diego, Inc. Test strip
USD639976S1 (en) 2010-06-03 2011-06-14 Alere San Diego, Inc. Test strip cover
US20120142023A1 (en) 2010-12-02 2012-06-07 Ascoli Carl A Proteins and method for detection of lyme disease
US8486717B2 (en) 2011-01-18 2013-07-16 Symbolics, Llc Lateral flow assays using two dimensional features
US9874556B2 (en) * 2012-07-18 2018-01-23 Symbolics, Llc Lateral flow assays using two dimensional features
CN108051590B (zh) * 2013-09-13 2020-12-11 Symbolics有限责任公司 运用二维试验和对照信号读出模式的侧向层析检测

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