KR20140000710A - 구강 건강 증진 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 감각적으로 중립적인 구강 관리제로서, 특히 치석 예방용의, 항-우식증제 및/또는 항-구취제로서의 미생물 또는 그의 단편에 관한 것이다. 본 발명은 나아가 뮤탄스 연쇄상구균을 줄이기 위해 상기 미생물 또는 그의 단편을 함유하는 조성물에 관한 것이다. 그러한 조성물은 예를 들어 우식증 예방 또는 치석 또는 구취의 예방을 위한 구강 관리 조성물에 사용될 수 있다. 이들은 또한 또는 그 대신에 구취의 예방 또는 치료에 사용될 수 있다. 본 발명에 따른 미생물 및 그의 단편은 매우 적은, 티나지 않는 냄새 및 맛을 가져, 이들은 특히 치석, 우식증, 구강 생물막 형성의 예방 및/또는 구취의 예방 또는 치료를 위한 감각적으로 중립적인 약제로서 특히 적합하다. 상기 미생물 및 그의 단편, 및 또한 상기 미생물 및 단편을 함유하는 조성물은 이에 따라 유리하게는 특히 애완 동물 식품에서의 식품 및 사료 조성물에 사용될 수 있다. 나아가, 본 발명은 그러한 미생물, 단편, 조성물, 식품 및 사료의 제조 방법에 관한 것이다.

Description

구강 건강 증진 조성물 {ORAL HEALTH IMPROVING COMPOSITIONS}

본 발명은 특별하게는 치석 예방용의, 항우식증제 및/또는 항-구취제로서의 감각적으로 중립적인 구강 관리제로서의 미생물 또는 그의 단편에 관한 것이다. 나아가, 본 발명은 뮤탄스 연쇄상구균 (mutans Streptococci) 을 줄이기 위한 미생물 또는 그의 단편을 함유하는 조성물에 관한 것이다. 그러한 조성물은 예를 들어 우식증 예방 또는 치석 또는 구취 예방을 위한 구강 관리 조성물에 사용될 수 있다. 이들은 또한, 또는 그 대신, 구취의 예방 또는 치료를 위해 사용될 수도 있다. 본 발명의 미생물 또는 그의 단편은 매우 경미한, 티나지 않는 냄새 및 맛을 갖고 있기 때문에, 치석, 우식증, 구강 생물막 형성의 예방 및/또는 구취의 예방 또는 치료를 위한 감각적으로 중립적인 약제로서 특히 적합하다. 따라서, 상기 미생물 또는 그의 단편 또는 상기 미생물 또는 그의 단편을 함유하는 조성물은 식품 및 사료 조성물, 특히 애완동물 식품에 유리하게 사용될 수 있다. 나아가, 본 발명은 그러한 미생물, 단편, 조성물, 식품 및 사료의 제조 방법에 관한 것이다.

치아를 가진 동물의 악성적인 문제들 중 하나는 그 치아의 부패이다. 그 문제는 특히 상어처럼 그들의 치아를 연속적으로 새로운 셋트로 교체하여 치아를 갈 수 없는 동물들에게 특히 중요한 문제이다. 치아 부패의 가장 중요한 원인들 중에는 단연 우식증이 있다. 구강에 서식하는 미생물들의 작용에 의해 치아의 에나멜은 계속하여 약화되며, 궁극적으로는 녹아버려, 우식증 병변 형성을 유도한다. 그러한 병변은 이어서 추가적인 미생물의 서식에 적합하게 되어, 우식증의 문제를 악화시킨다.

우식증의 형성과 무관한 문제는 구취 발생이다. 구취는 구강에 서식하는 바람직하지 않은 미생물로 인한 결과로 간주된다. 그러나, 한가지 미생물이 구취에 대한 1 차적인 원인으로 지목되지는 않는다. 그러나, 구취가 치아 없이 발생할 수 있고, 우식증도 구취 없이 발생할 수 있기 때문에, 우식증 및 구취의 형성은 독립적인 프로세스의 것이다.

동물에서의 구강 건강의 또다른 문제점은 치석의 형성이다. 치아 상에 석회화되는 침적물들이 치아 표면에 서식하는 미생물에 의해 형성된다. 전형적으로는, 7 내지 10 일 내에, 치아 위의 석회화된 침적물들은 육안으로도 볼 수 있는 정도로 늘어난다. 치석은 추가 미생물에 의한 치아에서의 서식을 가능케 한다는 점에서 주목해 줘야 한다. 이는 이어서 구취, 우식증 및 잇몸 조직의 염증 발생을 유도할 수 있다. 따라서, 예를 들어 치석 형성 둔화로 치석의 발생을 예방할 필요가 있다.

따라서, 그러한 문제점들을 독립적으로 개선해 나가기 위한 시도가 있었다. 가장 주목할 만한 해법들 중, 당업자에게 가장 일반적인 것은 치약 및 마우스 워시이다. 그러한 치약 및 마우스 워시는 일반적으로 치아 서식 미생물, 특히 우식증 원인 미생물 및/또는 구취 생성 미생물의 개체수를 줄이거나 또는 그의 활성을 억제하는 항미생물성의 유효한 약제를 함유한다. 그러나, 우식증과 구취 형성 사이에는 상관성이 없기 때문에, 우식증에 대해 유효한 수많은 약제들이 구취의 예방 또는 치료에는 무효하며, 반대의 경우에도 마찬가지이다. 또한, 치석 형성에 대한 효능도 개선되어야 한다.

또다른 문제점은 항미생물성의 유효한 물질들은 종종 강력한 본연의 냄새 또는 맛을 갖고 있다는 점인데, 이는 소비자, 특히 애완 동물에 의해서 배척당할 수 있는 소지가 된다. 따라서, 구강 관리용 조성물은 종종 추가로 항미생물성의 유효한 물질들 고유의 맛 또는 냄새를 차폐하거나 또는 변경하기 위한 후각적 활성제를 함유한다. 그러나, 그러한 추가적인 약제들이 또한 그들의 더욱 강력한 내재적 맛 또는 냄새 때문에 소비자에 의해 쉽게 받아들여 지지 않는다. 이는 그러한 구강 관리 조성물 제조사의 적용 권장에 대해 소비자의 탐탁치 않은 낮은 호응을 초래한다.

호응의 문제는 어린이 및 동물에게 특히 중요하다. 그 둘은 예를 들어 삼켜버림으로써 항미생물성의 유효한 약제 또는 약제들이 그의 의도하는 작용을 완전히 수행할 수 없도록 하여 구강 관리 조성물을 피하거나 또는 사용하지 않는 교활한 방법을 강구하는 경향이 있다. 임의의 형태의 의약에 대한, 특히 고양이 및 개와 같은 애완동물의 저항성은 종종 애석하다. 또한, 그러한 동물들은 그들이 왠만하면 수용하는 사료에 숨겨둔 경우라도 항미생물성의 유효한 구강 관리 조성물을 포함하는 의약은 피하는 것으로 알려져 있다. 추가로, 동물들은 가글하는 것이 불가능하므로, 구강 관리 조성물을 위한 특정한 적용 형태가 동물에는 이용가능하지 않다. 또한, 특정한 충치 치료는 특히 동물에게 스트레스를 주며, 마취제를 필요로 하기도 한다. 예를 들어, 고양이 및 개와 같은 동물들은 치석 제거에 굉장히 저항적이다.

요약하면, 구강 위생은 어린이를 포함하는 인간, 및 예를 들어 애완동물을 포함한 동물에게 성가신 것으로 간주된다. 따라서, 본 발명은 선행기술의 그러한 문제점들을 개선하려고 한다. 특히, 본 발명은 인간 및 동물, 특히 애완 동물을 위한 구강 관리 지침에 대한 순응을 증가시키는 것을 목표로 한다.

본 발명에 따르면, 호응을 더 얻기 위해서는 치석, 우식증의 예방 및/또는 구취의 예방 또는 치료에 사용되는 약제 또는 약제들은 적은 본연의 맛 및 향미를 갖는 것이 중요하다. 따라서, 강력하게 맛을 내거나 또는 냄새를 제공하는 약제를 더 첨가하여 그러한 약제의 맛 및 냄새를 차폐하거나 또는 변경하는 대신, 본 발명은 상이한 접근법에 관한 것이다. 구강 관리제 고유의 맛 및 냄새는 이제까지 간과되어 오거나 또는 주된 쟁점으로 간주되지 않았다. 나아가, 놀랍게도 강력한 고유의 맛 또는 냄새없이 치석, 우식증의 예방 및/또는 구취의 예방 또는 치료 모두에 유효한 약제가 이용가능하다는 점을 밝혀냈다. 또한, 놀랍게도 그러한 약제가 어린이를 포함한 인간 및 애완 동물을 포함한 동물에서 구강 관리 지시사항에 대한 순응을 증대시키고 특히 구강 관리 회피 거동을 줄이는데 유용하다는 점을 발견했다. 또한, 본 발명은 항치석제, 항우식증제 및/또는 항구취제의 맛 또는 냄새를 차폐하거나 또는 변경하기 위해 선행기술에서 필요했던 여타 향미 또는 향을 가진 구강 관리 조성물을 제조할 수 있도록 해 준다. .

본 발명은 감각적으로 중립적인 구강 관리제로서의 미생물 또는 그의 단편에 관한 것이다. 본 발명은 나아가 뮤탄스 연쇄상구균 (mutans Streptococci) 을 줄이기 위한 미생물 또는 그의 단편을 함유하는 조성물에 관한 것이다. 그러한 미생물 및 그의 단편, 및 또한 그러한 조성물은 또한 우식증 치료 또는 예방에 사용될 수도 있다. 이들은 또한, 또는 그 대신에, 구취의 예방 또는 치료에 사용될 수 있다. 본 발명의 미생물 및 그의 단편은 매우 낮은 수준의, 티나지 않는 냄새 및 맛을 지니므로, 이들은 특히 우식증, 치석의 형성을 포함하는 구강 생물막 형성의 예방 및/또는 구취의 예방 또는 치료를 위한 감각적으로 중립적인 약제로서 적합하다. 그러한 미생물 및 그의 단편, 및 또한 그것을 함유하는 조성물은 이에 따라 유리하게는 식품 및 사료 조성물, 특히 애완 동물 식품에 사용될 수 있다. 나아가, 본 발명은 그러한 미생물, 단편, 조성물, 식품 및 사료의 제조 방법에 관한 것이다.

본 발명에 따르면, 감각적으로 중립적인 구강 관리제로서 유용한 미생물 또는 그의 단편은 바람직하게는 젖산균이다.

상기 언급한 바와 같이, 젖산균은 특히 치석의 예방 및 치료를 위한 감각적으로 중립적인 구강 관리제로서, 항우식증제로서 및/또는 항구취제로서 사용될 수 있다. 이는 젖산균이 보통 예를 들어 요거트 및 여타 낙농 제품에서 강력하게 신맛의 또는 산성의 풍미 및/또는 냄새를 나타내는 것으로 공지되어 있기 때문에 예측되지 못한 것이다.

본 발명에 따르면, 젖산균은 분류학적으로 락토바실랄 (Lactobacillales) 목의 미생물로, 바람직하게는 락토박테리아세아에 (lactobacteriaceae) 과의 것이다. 본 발명에 따른 미생물은 플라스미드 및 비-통합형 바이러스를 제외하고, 그들의 각 유전 물질 비교를 근거로 한 분석에서 해당하는 분류학적 집단 내에서 동일 유형 균주와 더욱 유사하다면 또는 해당 집단 이외의 분류학적 집단에 속하는 임의의 유형의 균주에 비해 분류학적 순위가 더 낮다면 명시된 분류학적 집단에 속하는 것으로 간주한다. 따라서, 미생물은 앞 문장에서 정의된 바와 같이 락토바실랄 목의 여타 과에 속하는 종 또는 속 유형의 균주에 비해 락토바실라세아에 과의 종 또는 속의 균주 유형과 유전자적으로 더욱 유사하다면 락토바실라세아에 과에 속하는 것으로 간주된다.

본 발명에서 유사성은 Needleman-Wunsch 글로벌 정렬 알고리즘을 이용해 평가된다. 상기 알고리즘은 두 핵산 서열의 갭을 포함하는 최적의 정렬을 그의 전체 길이를 따라가며 찾아내는 표준 알고리즘이다. Needleman 및 Wunsch 의 알고리즘은 1970 년에 문헌 [J. Mol. Biol. 48, 443-453] 에 공개되었으며, 여기서 n 위치에서의 한 갭에 대한 페널티는 하기 수학식에 따라 계산된다:

갭 오픈 페널티 (gap opening penalty) + (n-1) x 갭 익스텐션 페널티 (gap extension penalty).

말단에는 페널티가 없다.

본 발명의 문맥에서 갭 오픈 페널티는 10.0 이다. 본 발명의 문맥에서 갭 익스텐션 페널티는 0.5 이다. 본 발명의 문맥에서 핵산 서열 비교를 위한 스코어링 매트릭스는 일원화된 DNA 고유식별 매트릭스로, 이는 각각의 식별되는 염기 "치환" 에 대해서는 1 의 스코어를, 모든 여타 염기 치환에 대해서는 -10000 의 스코어를 지정한다. 서열 정렬은 예를 들어 EBI 에 의해 제공되는 공개적으로 이용한 도구를 통해 그러한 파라미터를 이용해 수행될 수 있다.

락토바실라세아에 과 미생물 고유의 특별한 장점은, 그들이 일반적으로 인간 및 동물에 의해 소비될 수 있는 것으로 간주된다는 점이다. 예를 들어, 젖산균은 예를 들어 유가공에 의해 식품 제조에 장기간 이용되어 왔다. 이들은 또한 인간 또는 동물 건강에 대한 그들의 낮은 위험성 때문에 취급하기에 용이하고, 대량으로, 예를 들어 500 L 배양 배지 중의 회분으로 배양하기에 용이하다. 특히 바람직한 배양 방법은 이후에 기재된다.

락토바실라세아에 과의 구성원들 중에서, 락토바실러스 (Lactobacillus), 파라락토바실러스 (Paralactobacillus), 페디오코커스 (Pediococcus) 또는 샤르페아 (Sharpea) 속에 속하는 젖산균들이 본 발명에서 특히 바람직한데, 여기서 락토바실러스 속의 미생물들이 가장 바람직하다. 그러한 미생물은 식품 및 사료 제조에 널리 사용되어 왔고; 취급하기에 용이하고 대량으로 제조될 수 있다. 나아가, 락토바실라세아에 과는 락토바실러스 속 가운데서도 감각적으로 중립적이며, 구강 관리제로서, 특히 항치석제, 항우식증제 및/또는 항구취제로서 유효한 미생물이 수득될 수 있다는 점에서 특별하다.

상기 언급된 젖산균은 바람직하게는 길고 가느다란 것부터 짧고 구부러진 막대까지 변화하는 막대-형 또는 구형이며, 또한 바람직하게는 부동성 및/또는 무포자성으로서, 발효 대사의 주 생성물 또는 유일한 생성물로서 젖산을 생산한다. 상기 언급된 미생물이 속하는 락토바실러스 속은 하기의 특징들에 의해 3종의 주요 하위군으로 나누어지며, 그에 따라 상기 언급된 락토바실러스 종은 하기 3종의 주요 하위군 중 하나에 속할 수 있는 것으로 간주된다:

(a) 동종발효성 (homofermentative) 락토바실러스

(i) 엠덴-마이어호프 경로 (Embden-Meyerhof pathway) 를 통하여 글루코스로부터 85％ 이상의 양으로 젖산, 바람직하게는 젖산의 L-, D- 또는 DL-이성질체(들)을 생산함;

(ii) 45 ℃의 온도에서는 생장하나, 15 ℃의 온도에서는 그렇지 않음;

(iii) 긴-막대 형상임; 및

(iv) 세포 벽에 글리세롤 타이코산 (teichoic acid) 을 가짐;

(b) 동종발효성 락토바실러스

(i) 엠덴-마이어호프 경로를 통하여 젖산, 바람직하게는 젖산의 L- 또는 DL-이성질체(들)을 생산함;

(ii) 15 ℃의 온도에서 생장하며, 45 ℃의 온도에서는 변이 생장을 나타냄;

(iii) 짧은-막대 형상 또는 곤봉형임; 및

(iv) 그의 세포 벽에 리비톨 및/또는 글리세롤 타이코산을 가짐;

(c) 이종발효성 락토바실러스

(i) 펜토스-포스페이트 경로를 통하여 글루코스로부터 50％ 이상의 양으로 젖산, 바람직하게는 젖산의 DL-이성질체를 생산함;

(ii) 이산화탄소 및 에탄올을 생산함;

(iii) 15 ℃ 또는 45 ℃의 온도에서 변이 생장을 나타냄;

(iv) 길거나 짧은 막대 형상임; 및

(v) 그의 세포 벽에 글리세롤 타이코산을 가짐.

상기한 특징들을 기준으로, 본 발명에 따라 바람직한 미생물은 젖산균 군, 특히 락토바실러스 속에 속하는 것으로 분류될 수 있다.

바람직한 구현예에서, 본 발명의 미생물은 하기로 구성되는 군에서 선택되는 대사 지문을 가진다:

(i) D-락토스는 대사하나, L-소르보스 및/또는 D-사카로스 및/또는 D-이눌린은 그렇지 않음,

(ii) 이눌린을 대사함,

(iii) L-소르보스는 대사하나, D-락토스 및/또는 D-사카로스 및/또는 이눌린은 그렇지 않음, 및

(iv) L-소르보스, D-락토스 및 이눌린을 대사함.

바람직하게는, 상기 언급된 미생물은 하기로 구성되는 군에서 선택되는 대사 지문을 가진다:

(i) D-락토스는 대사하나, L-소르보스, D-사카로스 및 이눌린은 그렇지 않음,

(ii) L-소르보스, D-락토스 및 이눌린은 대사하나, D-사카로스는 그렇지 않음,

(iii) L-소르보스는 대사하나, D-락토스, D-사카로스 및 이눌린은 그렇지 않음, 및

(iv) L-소르보스, D-락토스, D-사카로스는 대사하나, 이눌린은 그렇지 않음.

물론, 본 발명의 미생물이 상기언급된 대사 지문 패턴에 언급되어 있는 당들의 대사로 제한되는 것은 아니며, 대사되는 다른 당들을 대사할 수 있을 수도 있다.

본 발명에서 용어 "미생물" 은 적당한 배양 조건 하에서 증식가능한 미생물(살아있는 미생물) 만을 의미하는 것은 아니다. 본 발명의 특별한 장점은 그러한 독자 생존 가능한 미생물 대신 상응하는 열 불활성화되거나 또는 동결건조된 미생물도 또한 사용될 수 있다는 점이다. 이것은 그러한 독자 생존 가능한 미생물은, 건강에 유익할 것이라고 믿더라도 독자 생존 가능한 미생물을 소비한다거나, 또는 그러한 독자 생존 가능한 미생물을 유아 또는 애완 동물에게 제공하는 것에 대해 거부감을 가질 수 있는 일부 소비자에게 특히 유용하다. 본 발명은 구강 관리 지시사항에 대한 순응을 증가시키는 것에 관한 것이기 때문에, 그렇게 미처 발견하지 못했던 거부사항도 고려할 수 있다는 점은 특별히 유리하다. 따라서, 장황하게 설명하지 않더라도, 본 명세서 및 첨부된 실시예, 도면 및 특허청구범위는 독자 생존 가능하거나, 열 불활성화되거나 또는 동결건조된 미생물을 차별하지 않는다.

본 발명에 따르면, 열 불활성화된 세포는 바람직하게는 독자 생존 가능한 미생물을 121℃ 의 온도에서 20 분 이상 2 바아의 주위 압력에서의 포화된 스팀 존재 하에 오토클레이브하여 수득된다. 열 불활성화된 미생물의 그러한 제조는, 오토클레이브 과정이 미생물학 및 해당하는 생명공학 분야에 공지된 표준 기법이기 때문에, 표준 실험실 장비를 이용해 수행될 수 있다. 그것은 매우 신속한 기법으로, 락토바실라세아에 과, 특히 락토바실러스 속의 미생물을 불활성화하는 것으로 밝혀졌다.

대안적으로, 본 발명에 따른 미생물의 열 불활성화는 그러한 세포들을 -20℃ 의 온도로 동결하여 달성될 수 있다. 그러한 동결도 또한 표준 실험실 장비를 이용해 수행하기에 용이하다.

열 불활성화 방식과는 무관하게, 즉 오토클레이브 또는 동결과 무관하게, 본 발명에 따르면 독자 생존 가능한 미생물의 농도는 그러한 처리에 의해 85%, 90% 또는 95% 이상, 특히 바람직하게는 97%, 98%, 99% 이상, 더욱 특별히 바람직하게는 99.1%, 99.2%, 99.3%, 99.4%, 99.5%, 99.6%, 99.7%, 99.8% 또는 99.9% 이상 줄어든다. 독자 생존 가능한 미생물의 농도를 세자릿수 이상 (즉, 1000 의 인수로), 더욱 바람직하게는 네자릿수 이상, 더욱더 바람직하게는 다섯자릿수 이상 줄이는 그러한 오토클레이브 또는 동결이 특히 바람직하다.

본 발명의 미생물의 특별한 장점은 그들의 감각적으로 중립적인 구강 관리제로서, 바람직하게는 항치석제, 항우식증 및/또는 항구취제로서의 유용성을 심지어 오토클레이브 또는 동결에 의한 그러한 불활성화 후에도 보유한다는 점이다. 그러한 열 불활성화된 형태에서, 본 발명의 미생물은 20℃ 의 온도에서 80% 상대 습도를 가진 표준 분위기에서 그 온도로 저장하기에 특별히 용이하다. 그러한 저장안정성은 본 발명의 불활성화된 미생물이 "유효 기간" 기일을 어기지 않으면 그러한 불활성화된 형태를 포함하는 식품 또는 사료를 제공할 수 있도록 하기 때문에 특히 중요하다.

본 발명의 동결건조된 미생물, 즉 락토바실라세아에 과의 동결건조된 미생물, 특히 락토바실러스 속의 동결건조된 젖산균을 이용하면 본 발명에 따라 동일한 장점이 수득될 수 있다. 본 발명에 따른 동결건조는 바람직하게는 실온, 즉 16℃ 내지 25℃ 의 온도에서 2 시간 이상 동안이다.

본 발명의 미생물에 추가하여, 또는 그에 대안적으로, 예를 들어 독자 생존 가능하거나, 열 불활성화되거나 또는 동결건조된 형태로 그의 단편이 사용될 수 있다. 미생물의 단편화는 당 업계의 표준 방법에 의해, 특히 세포 용균 및/또는 저온 살균에 의해 용이하게 수행될 수 있다. 열 불활성화 및/또는 동결건조 형태를 포함하는 본 발명에 따른 미생물의 용균 또는 단편화에 사용되는 방법은 특별히 정해진 건 없다. 바람직하게는 예를 들어 프로테이나제 K, 리파아제 또는 글리코시다아제에 의한 하나 이상의 프로테아제에 의한 효소 처리를 포함하는 화학적 방법들 중에서 적당한 방법이 선택될 수 있고; 기타 화학물의 비제한적 예시는 예를 들어 이오노포어, 계면활성제, 예를 들어 나트륨도데실 설페이트, 산 또는 염기이고; 물리적 수단의 비제한적 예시는 고압, 프렌치-프레싱, 삼투압 및, 예를 들어 유리 또는 철 비트 (iron beat) 를 이용한 밀링이다. 본 발명에 따른 열 불안정화 및/또는 동결건조 미생물 및 그의 단편의 제조를 위한 특별히 바람직한 방법은 WO 2006/027265 A1 의 제 25 내지 28 페이지 및 WO 2009/149816 A1 의 제 28 내지 34 페이지에 기재되어 있다. "본 발명의 미생물의 단편" 은 본 발명의 미생물의 세포들의 임의의 부분을 포함한다. 바람직하게는, 상기 단편은 멤브레인-제조에 의해 수득되는 멤브레인 분획이다. 락토바실라세아에 과, 바람직하게는 락토바실러스 속에 속하는 결합성 미생물의 멤브레인 제제는 예를 들어 문헌 [Rollan et al. Int. J. Food Microbiol. 70 (2001 ), 303-307, Matsuquchi et al, Clin. Diagn. Lab. Immunol. 10 (2003), 259-266 또는 Stentz et al. Appl. Environ. Microbiol. 66 (2000), 4272-4278 또는 Varmanen et al. J. Bacteriology 182 (2000), 146-154] 에 기재된 방법을 채용하여 당업계에 공지된 방법으로 수득될 수 있다. 대안적으로, 전체 세포 제제가 또한 포함된다. 바람직하게는, 본원에 기재된 본 발명의 결합성 미생물의 단편은 뮤탄스 연쇄상구균, 더욱 바람직하게는 본원에서 상세히 기재될 스트렙토코커스 뮤탄스 (Streptococcus mutans) 에 특이적으로 결합하는 능력을 보유한다.

본 발명에 사용되는 미생물, 즉 각각 그의 열 불활성화 또는 동결건조 형태를 포함하는, 바람직하게는 락토바실라세아에 과 또는 락토바실러스 속의, 젖산균이 바람직하게는 항우식증제로 이용된다. 본 발명에 따르면, 용어 "항-우식증제" 는 인간 또는 개, 고양이, 래트, 마우스, 햅스터, 기니 피그 또는 원숭이와 같은 애완 동물을 포함하는 동물의 구강에 그것이 존재하는 것으로도 신규한 우식증 병변의 발생 위험을 낮추는 임의의 약제로 정의된다. 항-우식증제로서 사용되는 미생물이 자체로 항미생물적으로 유효해야 할 필요는 없다는 점이 본 발명의 특별한 장점이다. 따라서, 본 발명에 따르면 항우식증제로 사용되는 미생물 또는 그의 단편이 공동배양에서 우식증-생성 미생물, 특히 뮤탄스 연쇄상구균의 군에 속하는 미생물의 갯수를 줄이는 것이 반드시 필수조건은 아니다.

따라서, 본 발명의 또다른 장점은 항우식증제로 사용되는 미생물이 인간 또는 동물, 특히 애완 동물의 구강의 정상적인 세균총에 매우 제한적인 영향을 준다는 점이다. 적합한 미생물은 하기에 기재될 것이다.

본 발명에 사용되는 미생물, 즉 각각 그의 열 불안정화 또는 동결건조 형태를 포함하는, 바람직하게는 락토바실라세아에 과 또는 락토바실러스 속의, 젖산균 및 그의 단편이 바람직하게는 항치석제로 사용된다. 본 발명에 따르면, "항치석제" 는 인간 또는 애완 동물을 포함하는 동물의 구강에 그것이 존재한 것만으로도 치석 발생 위험을 줄이거나, 또는 치석의 추가적인 발생을 둔화시키는 임의의 약제로 정의된다. 본 발명의 항치석제가 치아에 이미 형성된 치석을 실질적으로 제거하는 것은 필요조건이 아니다.

또한, 본 발명에 사용되는 미생물, 즉 각각 그의 열 불안정화 또는 동결건조 형태를 포함하는, 바람직하게는 락토바실라세아에 과 또는 락토바실러스 속의, 젖산균 및 그의 단편이 바람직하게는 항-구취제로 사용된다. 본 발명에 따르면, 용어 "구취" 는 구강으로부터 기원하는 임의의 불쾌한 냄새를 지칭한다. 따라서, 상기 용어는 본 발명에서 질병으로 간주되지는 않는 "입 냄새" 로도 지칭되는 악취의 약한 형태 및 예를 들어 그의 강도 또는 냄새 자취로 인해 질병의 징후로 간주되는 악취의 형태 모두에 사용되며; 후자 형태의 구취는 또한 "구취증 (halitosis)" 으로 지칭된다. 임상적으로 관련있는 형태의 구취, 즉 구취증에는 다양한 원인이 있을 수 있다. 모든 유형의 구취에 대해 가장 주목할 것이 구강에 서식하는 미생물에 의한 감염인데, 여기서 상기 미생물은 유기 물질, 예를 들어 죽은 외피 세포, 텨아 미생물 또는 잔류 식품 또는 사료를 소화한다. 바람직하게는 본 발명은 입 냄새 또는 임상적으로 관련있는 구취증인 구취 발병 지연 및/또는 구취의 강도 감소 또는 냄새 자취 변경을 위해 제시된다. 그러나, 본원에 달리 언급되지 않는다면, 용어 "구취" 는 구강 너머, 예를 들어 식도 또는 위장에서 기원하는 악취까지 포함하지는 않는다. 그러한 악취는 예를 들어 트림하는 동안 심해질 수 있다.

본 발명에서, 용어 "구강" 은 입술부터 치아까지의 구강을 나타내나, 구개수 (uvula) 까지 포함하지는 않는다.

입은 구강 점막 (잇몸, 입술, 뺨, 구개 및 입천장), 혀 및 치아 (인공 구조물 포함) 로 이루어지는, 포유류, 바람직하게는 인간 또는 애완 동물과 같은 동물의 구강을 말한다.

또한, 본 발명에 따르면, 용어 "감각적으로 중립적인" 은 2 중량% 이하의 통밀가루를 본 발명에 따른 미생물 및/또는 단편의 혼합물로 대체했을 때, 그 혼합물의 맛 및 냄새 자취가, 차이 없음, 약간 변경, 알 수 있을 만큼 변경, 명백히 변경을 범위로 하는 기준을 바탕으로 판단했을 때, 10 명의 훈련된 패널들 중 많아봐야 5 명이 그것을 알 수 있을 만큼 변경된 것으로 판단할 정도가 되는, 바람직하게는 5 중량% 이하의 통밀가루를 해당 미생물 및/또는 그의 단편으로 대체했을 때, 10 명의 패널들 중 많아야 5 명이 그 혼합물의 맛 및/또는 냄새 자취가 알 수 있을만큼 변경된 것으로 판단할 정도가 되는 약제로 정의된다.

본 발명에 따르면, 하기를 함유하는 조성물이 또한 제공된다:

- (a) 감각적으로 중립적이며, (b) 인간 또는 동물의 구강에서 뮤탄스 연쇄상구균을 줄이고/줄이거나 구취 감소에 유효한 양의 결합성 미생물 또는 그의 단편, 여기서 상기 미생물은 젖산균임.

놀랍게도, 감각적으로 중립적인 약제로 항우식증 유효성을 발휘하기 위해서는, 구강에서 뮤탄스 연쇄상구균 감소를 위해 결합성 젖산균을 사용하는 것으로 충분하다는 것을 발견했다. 상기 기재된 바와 같이, 그러한 결합성 젖산균, 그의 열 불활성화 또는 동결건조 형태 및 또한 그러한 결합성 젖산균의 단편이 항미생물적 유효성 없이, 즉 우식원성 미생물을 자체로 살상하거나 또는 그의 생장을 억제하지 않고도 항우식증제로서 이용될 수 있다. 대신, 결합성 미생물 또는 그의 단편이 뮤탄스 연쇄상구균의 하나 이상의 종에 결합하는 것으로 충분하다. 그러한 결합은 결합되어 있는 뮤탄스 연쇄상구균의 유착을 유도할 수 있고, 이는 이어서 정상적인 타액 넘김에 의해 그리고 섭식 동안 구강으로부터 제거된다. WO 2008/074473 A2 에 기재된 바와 같이, 구강으로부터의 뮤탄스 연쇄상구균의 제거는 구강 및 치아에서의 생물막 형성 위험을 현저히 줄여줌으로써, 간접적으로 우식증 발생 위험을 낮춰준다. 이는 WO 2006/027265 A1 에 기재된 바와 같이 스트렙토코커스 뮤탄스에 결합하는 그러한 미생물에 대해 특히 사실인 것으로 나타났다. 그러나, 그러한 결합성 미생물이 감각적으로 중립적인 약제로서, 즉 상기 및 하기의 발명의 상세한 설명에 기재된 바와 같은 감각적으로 중립적인 농축물에 사용될 수 있는 것인지는 아직까지 공지된 바 없다. 또한, 뮤탄스 연쇄상구균, 특히 스트렙토코커스 뮤탄스에 대한 그러한 결합이 구취 발생의 위험을 감소시킬 수 있다는 사실도 아직까지 공지된 바 없다.

따라서, 본 발명에 따르면, 뮤탄스 연쇄상구균 무리에 속하는 박테리아에 특이적으로 결합할 수 있는 미생물 또는 그의 단편을 함유하는 조성물이 바람직한데, 여기서 상기 특이적 결합은 다음과 같다:

(i) 열 처리에 대해 내성임; 및/또는

(ii) 프로테아제 처리에 대해 내성임; 및/또는

(iii) 칼슘에 좌우됨; 및/또는

(iv) 4.5 내지 8.5 의 pH 범위에서 형성됨; 및/또는

(v) 타액의 존재 하에 형성됨.

본 발명의 맥락에서 용어 "특이적으로 결합" 은 결합성 미생물 또는 그의 단편, 바람직하게는 락토바실라세아에 과, 더욱 바람직하게는 락토바실러스 속에 속하는 미생물 (또는 상응하는 단편) 이 뮤탄스 연쇄상구균, 바람직하게는 스트렙토코커스 뮤탄스에 속하는 하나 이상의 균주에는 결합하나, 대부분의 타 균주에, 바람직하게는 스트렙토코커스 오랄리스 (Streptococcus oralis) 및/또는 스트렙토코커스 미티스 (Streptococcus mitis) 및/또는 스트렙토코커스 상귀니스 (Streptococcus sanguinis) 에 속하는 타 종의 박테리아에는 결합하지 않음을 의미한다. 즉, 결합성 미생물 또는 그의 단편이 스트렙토코커스 오랄리스 및/또는 스트렙토코커스 미티스 및/또는 스트렙토코커스 상귀니스의 종에 속하는 박테리아에는 결합하지 않는다. 더욱더 바람직하게는, 결합성 미생물이 또한 스트렙토코커스 살리바리우스 (Streptococcus salivarius) 종, 더욱 바람직하게는 테르모필러스 (thermophilus) 아종에 속하는 박테리아에 결합하지 않는다. 더욱 바람직하게는, 결합성 미생물 또는 그의 단편은 스트렙토코커스 오랄리스 DSMZ 20066, 스트렙토코커스 오랄리스 DSMZ 20395, 스트렙토코커스 오랄리스 DSMZ 20627, 스트렙토코커스 미티스 DSMZ 12643 및/또는 스트렙토코커스 상귀니스 DSMZ 20567 에 결합하지 않는다. 더욱더 바람직하게는, 결합성 미생물 또는 그의 단편은 또한 스트렙토코커스 살리바리우스 아종 테르모필러스 (Streptococcus salivarius ssp . thermophilus) 에 결합하지 않는다.

특이적 결합 반응은 입안에서의 그의 단편을 포함하는 본 발명의 결합성 미생물에 의한 본원에 기재된 바와 같은 스트렙토코커스 뮤탄스 또는 기타 뮤탄스 연쇄상구균에 대한 결합 및 바람직하게는 그의 응집을 포함한다. 그러한 특이적 결합은 그 결과로 예를 들어 타액의 유동에 의해 또는 본원에 기재된 바와 같은 세구제 헹굼 또는 구강 세정제 등에 의해 결합되었던 세포들을 쏟아버리게 된다. 바람직하게는, 본 발명의 결합성 미생물 및 그의 단편의 스트렙토코커스 뮤탄스 및/또는 여타 뮤탄스 연쇄상구균에 대한 특이적 결합 반응이 그러한 연쇄상구균 세포가 치아 표면에 달라붙는 것을 막게 되거나, 또는 이론에 구애됨 없이, 치아 표면으로부터 연쇄상구균 세포들의 탈착을 유도하게 된다. 그 결과, 특이적 결합 반응은 결합되었던 연쇄상구균 세포들을 입 밖으로 쏟아버리는 결과를 가져와, 우식증을 예방 및/또는 치료하게 된다.

결합성 미생물 또는 그의 단편은 항원 B, IF, P1, SR, MSL-1 또는 PAc 로도 공지되어 있는 연쇄상구균의 항원 I/II 에 특이적으로 결합할 수 있는 것으로 여겨진다. 그러나, 결합성 미생물 또는 그의 단편은 스트렙토코커스 뮤탄스의 임의의 여타 단백질 또는 표면 구조에 결합할 수 있어, 스트렙토코커스 뮤탄스를 응집시키고, 그것을 본원에 기재된 바와 같이 구강 밖으로 쏟아내 버리게 된다. 스트렙토코커스 뮤탄스는 상기 연쇄상구균 항원 I/II 를 통해 펠리클에 결합하는 것으로 공지되어 있다. 따라서, 본 발명의 결합제 미생물이 예를 들어 상기 연쇄상구균 항원 I/II 에 결합하는 경우, 스트렙토코커스 뮤탄스 또는 여타 각각의 뮤탄스 연쇄상구균이 치아 표면에 결합하는 것을 훼방하여, 이에 따라 우식증의 예방 및/또는 치료를 보조하게 된다.

펠리클은 타액에서 발견되는 단백질 및 지질 (지방)을 함유하는 투명하고 얇은 외피이다. 이는 치아 표면이 세정된 후 수초내에 형성된다. 펠리클 형성은 치아 플라크 형성의 제 1 단계이다. 치아 플라크는 치아 상에 축적되는 연질 침착물이다. 플라크는 1 밀리그람 당 10¹⁰개 초과의 세균을 함유하는 복잡한 미생물계로서 정의될 수 있다. 400 종이나 되는 많은 구분되는 세균 종들이 플라크에서 발견될 수 있다고 추정되었다. 플라크는 세균 세포 이외에 소수의 상피 세포, 백혈구 및 마크로파지를 함유한다. 세포는 세균 생성물 및 타액으로부터 형성된 세포외 매트릭스 내에 함유된다. 세포외 매트릭스는 단백질, 다당류 및 지질을 함유한다. 타액에 존재하는 단백질 중 하나는, 한편으로는 입으로부터 스트렙토코커스 뮤탄스의 부분적 제거를 초래하는 것으로 여겨지나, 다른 한편으로는 치아 표면으로의 스트렙토코커스 뮤탄스의 접착을 용이하게 함으로써, 치아에 대한 스트렙토코커스 뮤탄스의 초기 부착을 용이하게 하여, 우식증 발병을 용이하게 하는 것으로 의심되는 응집소이다.

바람직하게는, 상기 언급된 젖산균의 무리에 속하는 결합성 미생물 - 또는 그의 분절 - 은 스트렙토코커스 뮤탄스 혈청형 c (DSMZ 20523) 및/또는 스트렙토코커스 뮤탄스 혈청형 e (NCTC 10923) 및/또는 스트렙토코커스 뮤탄스 혈청형 f (NCTC 11060) 및/또는 스트렙토코커스 소브리누스 (Streptococcus sobrinus) DSM 20742 및/또는 스트렙토코커스 라티 (Streptococcus ratti) DSM 20564 및/또는 스트렙토코커스 크리세투스 (Streptococcus cricetus) DSM 20562 및/또는 스트렙토코커스 페루스 (Streptococcus ferus) DSM 20646 및/또는 스트렙토코커스 마카카에 (Streptococcus macacae) DSM 20714에 속한 미생물에 특이적으로 결합할 수 있다.

이는, 상기 언급된 젖산균 무리에 속하는 결합성 미생물 또는 그의 단편이, 바람직하게는 스트렙토코커스 뮤탄스 혈청형 c (DSMZ 20523), 스트렙토코커스 뮤탄스 혈청형 e (NCTC 10923), 스트렙토코커스 뮤탄스 혈청형 f (NCTC 11060), 스트렙토코커스 소브리누스 DSM 20742, 스트렙토코커스 라티 DSM 20564, 스트렙토코커스 크리세투스 DSM 20562, 스트렙토코커스 페루스 DSM 20646 또는 스트렙토코커스 마카카에 DSM 20714 로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 미생물에 결합한다. 더욱 바람직하게는, 젖산균 무리에 속하는 상기 언급된 결합성 미생물 또는 그의 단편이 상기 언급한 박테리아의 임의의 조합, 무리 또는 하위그룹에 결합한다. 더욱더 바람직하게는, 젖산균 무리에 속하는 상기 언급된 결합성 미생물 또는 그의 단편은 상기 언급된 박테리아 전부에 결합한다. 본 발명에 따르면, "혈청형"은 당분야에 공지된 혈청학적 방법에 의해 확인된 세균 세포, 바람직하게는 스트렙토코커스 뮤탄스 세포 또는 스트렙토코커스 소브리누스 세포의 항원성 특성이다.

상기 기재된 바와 같이, 뮤탄스 연쇄상구균, 바람직하게는 스트렙토코커스 뮤탄스에 대한 결합성 미생물 또는 그의 단편의 특이적 결합은 열 처리에 내성이다. 따라서, 본 발명의 결합성 미생물은 열에 의해, 예를 들어 55℃ 초과, 보다 더 바람직하게는 65℃ 초과, 특히 바람직하게는 95℃ 초과, 가장 바람직하게는 121℃의 온도에서 처리된다. 냉각후, 뮤탄스 연쇄상구균에 특이적으로 결합할 수 있는 상기 언급된 본 발명의 결합성 미생물 또는 그의 단편의 능력은 본원에 기재된 바와 같이 결정된다.

상응하는 온도는 특이적 락토바실러스 종에 의존할 수 있으나, 통상적인 실험에 의해, 예를 들어 상이한 온도에서 해당하는 세포를 인큐베이션하고, 본원에 제시된 방법을 이용함으로써 뮤탄스 연쇄상구균 및/또는 스트렙토코커스 뮤탄스에 특이적으로 결합할 수 있는 결합성 세포 또는 그의 단편의 양을 결정함으로써, 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다. 일반적으로, 열 처리는 1분 이상의 기간 동안 지속되어야 한다. 바람직하게는, 열 처리는 n 분 이상의 기간 동안 지속된다 (여기서, n 은 2 내지 60 범위의 정수이고, n 이 20 인 것이 특히 바람직함). 그러나, 원칙적으로 인큐베이션 시간에 대한 상한은 없다. 그러나, 이는 바람직하게는 4, 3, 2 또는 1시간(들)보다 길지 않다. 가장 바람직한 열 처리는 2 바아의 상압(常壓)을 갖는 포화된 스팀에서 121℃의 온도에서 20분 이상이다. 이에, 오토클레이브에 의해 수득되는 본 발명의 미생물의 열 불활성화 형태가 특히 바람직하다. 가장 바람직한 열 처리는 단백질의 임의의 기능 및 세포의 임의의 활력도를 파괴하는 것으로 간주되고, 따라서 뮤탄스 연쇄상구균에 특이적으로 결합할 수 있다는 점에서 본 발명의 미생물은 다른 미생물과 구별된다. 그러므로, 미생물이 살아있지 않아야 하는 것이 바람직한 경우, 이는 본 발명의 식품, 사료, 음료 또는 조성물에서 매우 유용하다.

결합성 미생물 또는 그의 단편의 특이적 결합은 더욱 바람직하게는 프로테아제 처리에 대한 그의 내성을 특징으로 한다. 바람직하게는, 상기 결합은 프로나아제 E, 프로테이나제 K, 트립신 및 키모트립신으로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 프로테아제를 이용한 처리에 대해 내성이다. 상기 프로테아제는 특이성을 나타내지 않으며, 따라서 미생물의 세포 표면에 있는 임의의 단백질을 분해하는 것으로 간주된다. 특정 패턴의 아미노산 잔기를 선호하는 것으로 공지된 여타 프로테아제는 엘라스타제 엘라스타제, 트롬빈, 아미노펩티다제 I, 카르복시펩티다제, 도스트리페인, 엔도프로테이나제, 파파인, 카텝신 B, 펩신, 가스트리신, 키모신, 카텝신 D 이다. 후에 언급한 프로테아제들은 또한, 결합성 미생물 또는 그의 단편의 스트렙토코커스 뮤탄스 또는 또다른 뮤탄스 연쇄상구균에 대한 특이적 결합이 후에 언급한 더욱 구체적인 프로테아제에 대해서도 내성인지 여부를 알기 위한 시험에 이용될 수 있다. 따라서, 본원에 참고문헌으로 포함되는 WO 2008/074473 A2 또는 WO 2006/027265 A1 의 실시예에 기재된 프로테아제 처리 후, 결합성 미생물 또는 단편이 스트렙토코커스 뮤탄스/뮤탄스 연쇄상구균에 특이적으로 결합할 수 있다.

추가로, 결합성 미생물 또는 단편의 특이적 결합은 칼슘에 대한 그의 의존성을 추가로 특징으로 한다. 바람직하게는, 특이적 결합은 0.05 mM 내지 500 mM, 바람직하게는 1 mM 내지 100 mM 의 칼슘 이온 농도의 존재하에 발생한다. 특히 바람직하게는, 칼슘 농도는 2 mM 내지 30 mM 이다. 칼슘에 대한 특이적 결합의 의존성은 본원에 참고문헌으로 포함되는 WO 2008/074473 A2 또는 WO 2006/027265 A1 의 실시예에 기재된 바와 같이 시험될 수 있다. 또한, 결합성 미생물 또는 그의 단편의 특이적 결합은 바람직하게는 4.0 내지 9.0, 바람직하게는 4.0 및 7.0의 pH 범위에 걸쳐 유지된다. 구체적으로, 특이적 결합이 발생하는 pH 값은 바람직하게는 4.5이다. 상기 기재된 pH 범위에 걸친 특이적 결합의 유지에 대한 검정은 첨부된 실시예에 제시된다.

특이적 결합은 바람직하게는 마그네슘에 대해 독립적이다. 따라서, 마그네슘 이온 또는 마그네슘 염의 존재는 필요하지 않다.

특이적 결합의 추가 특징은 타액의 존재하에 그의 발생이다. 타액은 타액선에 의해 합성되는 외인성 분비물이다. 이는 약 99％ 물 이외에 다수의 유기 및 무기 화합물을 함유하는 복잡한 액체이다. 타액의 생리적 성분은 특히, 효소, 예를 들어 아밀라제, 탄산탈수효소, 리소자임, 퍼옥시다제 또는 단백질, 예를 들어 뮤신, 락토페린, 프롤린-풍부 단백질, 시스타틴, 히스타틴 또는 스타테린 또는 가용성 IgA이다. 따라서, 다양한 잠재적으로 방해하는 물질이 타액에 존재하지만, 상기 언급된 젖산균 군에 속한 미생물의 특이적 결합은 교란되거나 방해되지 않는다. 타액의 존재하 특이적 결합의 시험을 위해, 바람직하게는 상기 기재된 스트렙토코커스 종을 함유하는 타액을 사용하는 것이 바람직하다. 그러나, 상기 기재된 락토바실러스 람노수스 종을 타액의 존재하에 뮤탄스 연쇄상구균으로의 특이적 결합에 대해 시험하는 경우, 스트렙토코커스 살리바리우스 아종 테르모필러스를 생략하는 것이 바람직하다. 특이적 결합은 본원에 기재된 바와 같이 검정된다. 상기 언급된 젖산균 군에 속한 미생물 또는 그의 단편의 상기 언급된 특징은, 상기 미생물이 특히 탄수화물 함유 식료품의 섭취후 특정 프로테아제 및 낮은 pH 값을 포함하는 타액이 존재하는 구강 및 치아를 포함한 입으로 다양한 형태로 주로 투여되기 때문에, 우식증의 예방 및/또는 치료를 위한 강건하고 효과적인 작용제가 되게 한다. 또한, 열에 대한 내성은 상기 식품 또는 사료의 제조 중에 본 발명의 미생물을 첨가제로서 식품 또는 사료에 첨가하는 것에 대해 이로운 효과를 갖는다. 즉, 식품 및 사료는 종종 가열 멸균, 예비요리, 저온살균되며, 이는 미생물의 생존력에 대해 해롭다.

본 발명의 결합성 미생물, 및/또는 그의 상응하는 단편은 하나이상의 뮤탄스 연쇄상구균, 바람직하게는 스트렙토코커스 뮤탄스에 특이적으로 결합하고, 여기서 상기 특이적 결합은 하기와 같다:

(i) 열 처리에 대해 내성임, 및

(ii) 프로테아제 처리에 대해 내성임, 및

(v) 타액의 존재 하에 형성됨.

상기 결합성 미생물 및 그의 단편은 상기 언급한 장점들을 조합한다. 특히, 그들의 특이적 결합은 열 처리에 내성이기 때문에, 그들은 멸균을 위해 열처리되는 제품에 혼입될 수 있고, 이에 따라 바람직하게는 제품의 항치석 유효성, 항우식증 유효성 또는 항구취 유효성에 변함없이, 미생물 또는 그의 단편에 의해 제품에 제공되는 구강 건강 특성에 변함없이 제품의 유효 기간을 연장시킬 수 있다. 또한, 프로테아제 내성으로 인해, 결합성 미생물 및 단편이 단백질 변성을 위한 해당 제품의 열처리 전에도 상이한 조성물의 다양한 제품에 혼입될 수 있다. 타액 존재 하의 특이적 결합의 형성은 결합성 미생물 및 그의 단편이 또한 구강으로부터 타액을 이끌어내지 않는 제품에도 사용될 수 있도록 해 준다는 점에서 중요하다. 그러한 능력은 특히 유아 및 애완 동물을 포함한 동물에서 소비자 순응성을 증대시키는데, 이는 상기 언급한 소비자들이 마른 구강을 유도하는 제품을 이용하는 것을 꺼리는 경향이 있기 때문이다.

그러한 이유로, 본 발명의 결합성 미생물 및/또는 그의 해당 단편들은 더욱더 바람직하게는 하나 이상의 뮤탄스 연쇄상구균 및 바람직하게는 스트렙토코커스 뮤탄스에 특이적으로 결합할 수 있고, 여기서 상기 특이적 결합은 하기와 같다:

(i) 2 바아의 주변 압력을 가진 포화된 스팀에서 121℃ 의 온도에서 20 분간의 열 처리에 내성임, 및

(ii) 프로나제 E, 프로테이나제 K, 트립신 및 키모트립신으로부터 선택되는 하나 이상의 효소에 의한 처리에 내성임, 및

(v) 타액의 존재 하에 형성됨.

바람직하게는, 본 발명의 결합성 미생물 및/또는 그의 해당 단편의 특이적 결합은 또한 하기와 같다:

(iii) 칼슘에 좌우됨, 및

(iv) 4.5 내지 8.5 의 pH 범위에서 형성됨.

결합성 미생물 및 그의 단편의 뮤탄스 연쇄상구균에 대한 결합을 결정하는 방법은 본원에 참고문헌으로 포함되는 문헌 [Lang et al (2010) Journal of Dental Research 89(2) 175-179] 에 기재되어 있다.

바람직하게는, 결합성 미생물 또는 그의 단편의 특이적 결합이 하기와 같이 검정될 수 있다:

(a) 상기 결합성 미생물을 정지기로 생장시킴, 또는 단편을 시험하려는 경우 상기 단편을 수득함,

(b) 상기 결합성 미생물 또는 단편을 정지기로 생장한 뮤탄스 연쇄상구균과 혼합함,

(c) 단계 (b) 에서 수득된 혼합물을 상기 미생물 및 상기 연쇄상구균의 응집물이 형성되도록 하는 조건 하에 인큐베이션함, 및

(d) 펠렛의 발생에 의해 응집물을 검출함.

바람직한 구현예에서, 상기 검정에 사용되는 뮤탄스 연쇄상구균의 무리에 속하는 박테리아는 스트렙토코커스 뮤탄스이다. 뮤탄스 연쇄상구균에 대한 특이적 결합을 위해서는, 스트렙토코커스 살리바리우스 아종 테르모필러스, 스트렙토코커스 오랄리스 DSMZ 20066, 스트렙토코커스 오랄리스 DSMZ 20395, 스트렙토코커스 오랄리스 DSMZ 20627, 스트렙토코커스 미티스 DSMZ 12643 및 스트렙토코커스 상귀니스 DSMZ 20567 로 이루어진 군으로부터 선택되는 미생물 중 하나 이상, 바람직하게는 둘 이상, 더욱 바람직하게는 셋 이상, 더욱더 바람직하게는 전부에 대해 결합이 검출되지 않는다.

특히, 젖산균 무리, 바람직하게는 락토바실라세아에 과, 더욱더 바람직하게는 락토바실러스 속에 속하는 결합성 미생물 또는 상응하는 단편은 바람직하게는 세포-대-세포 비율을 3:1 내지 60:1 (뮤탄스 연쇄상구균:결합성 미생물) 로 하여 뮤탄스 연쇄상구균과 혼합된다. 락트산 결합성 박테리아 및 뮤탄스 연쇄상구균의 두가지 모두가 액체 배양에서 정지기까지 생장된다. 바람직하게는, 광학 밀도는 600 nm 의 파장에서 광도계로 측정된다.

언급된 비율은 1:50 내지 1:2.5 의 콜로니 생성 단위 비율에 해당한다. 바람직하게는, 1 mL 에서의 OD600=1 는 3 × 10⁸ 의 콜로니 형성 단위의 뮤탄스 연쇄상구균에 해당한다. 바람직하게는, 1 mL 에서의 OD600=1 은 7 × 10⁹ 의 콜로니 형성 단위의 젖산균에 해당한다. 바람직하게는, 펠렛 형성에 의한 반응 검정을 위해서는, 박테리아는 15 mL Falcon 튜브에 2 ml 의 부피로 존재한다. 필요한 경우, 배양 현탁액은 상기 언급한 부피비를 수득하도록 PBS-완충액으로 희석하고, 최종 부피를 2 mL 로 유지한다.

바람직하게는, 연쇄상구균 및 결합성 젖산균 또는 그의 단편의 혼합물을 약 15 초 동안 와류시키고, 이어서 적어도 5, 10, 15 분 동안, 더욱 바람직하게는 20 분 동안 실온, 즉 16℃ 내지 25℃ 의 임의의 온도에 그대로 둔다. 응집은 현탁액의 즉각적인 탁함으로 가시화되는데, 20 분 이상 후 육안으로 보이는 펠렛으로 가라앉은 응집물에 의해 응집이 가시화되는 반면, 뮤탄스 연쇄상구균이 아닌 응집 혼합물은 현탁액 그대로 남아있는다. 대조군으로서, 각 결합제 박테리아 또는 단편 및 뮤탄스 연쇄상구균 균주의 자가-응집은 뮤탄스 연쇄상구균 또는 결합성 미생물/단편을 제외시킴으로써 검정될 수 있다.

상기 기재된 검정에 따른 결합성 미생물 및 뮤탄스 연쇄상구균의 응집은 문헌 [Lang et al (2010) Journal of Dental Research 89(2) 175-179] 에 기재된 바와 같이 형성된 응집물을 분리하여, 또는 예를 들어 500 x g 에서 30 초간 원심분리하여 정량될 수 있다. 후속하여, 응집량은 상청액에 남아있는 비-응집 세포의 양을 측정하여 결정될 수 있다. 그러한 결정은 당업자에게 공지된 임의의 적합한 수단으로 실시될 수 있다. 바람직하게는, 상기 결정은 특정 부피, 예를 들어 1 mL 의 상청액을 제거하여 실시된다. 후속하여, 제거한 상청액의 광학 밀도를 당업자에게 공지된 임의의 적합한 파장, 예를 들어 600 nm 에서 측정할 수 있다. 젖산균없는 대조 시험에 해당하는 값을 차감한 후 측정된 값은 응집되지 않은 세포의 양을 나타낸다.

본 발명에 따른 특이적 결합의 측정 방법은 WO 2008/74473 A2 의 실시예 4 에, 동일 공보의 실시예 1 에 제공된 각 미생물의 배양에 대한 해당 지시사항과 함께 기재되어 있다. 두 실시예는 모두 본 발명에 따른 특이적 결합 결정 방법을 개시하는 목적으로 본원에 포함된다.

대안으로, 자가-응집의 가능한 문제점을 해결하기 위해, 염색, 바람직하게는 형광 염색이 사용될 수 있다. 따라서, 보다 바람직한 구현예에서, 특이적 결합은 아래와 같이 검정될 수 있다:

(a) 상기 미생물을 정지기로 생장시키고;

(b) 정지기로 생장되고 적합한 염색, 바람직하게는 형광 염색약을 사용하여 염색된 뮤탄스 연쇄상구균 군에 속한 세균과 상기 미생물을 혼합하고;

(c) 상기 미생물 및 뮤탄스 연쇄상구균 군의 세균의 응집물을 형성시키는 조건하에, 단계 (b)에서 얻은 혼합물을 인큐베이션하고;

(d) 염색, 바람직하게는 형광 염색의 검출에 의해 응집물을 검출한다.

다시, 바람직한 구현예에서, 이러한 검정법에서 사용되는 뮤탄스 연쇄상구균 군에 속한 세균은 스트렙토코커스 뮤탄스이다.

바람직하게는, 먼저 결합성 미생물 및 뮤탄스 연쇄상구균을 상기 기재된 바와 같이 정지기로 생장시켜 수행될 수 있다. 바람직하게는, 광학 밀도는 광학측정으로 600 nm의 파장에서 측정한다. 바람직하게는, 1 ml 중 OD₆₀₀ = 1 은 뮤탄스 연쇄상구균의 콜로니 형성 단위 3 × 10⁸ 개와 상관관계가 있다. 바람직하게는, 1 ml 중 OD₆₀₀ = 1 은 하기 기재된 결합성 미생물, 특히 락토바실라세아에 (lactobacillaceae) 과, 더욱더 바람직하게는 락토바실러스 속의 콜로니 형성 단위 7 × 10⁹개와 상관관계가 있다.

후속적으로, 뮤탄스 연쇄상구균을 염색한다. 추가 바람직한 구현예에서, 결합성 미생물은 염색되나, 연쇄상구균은 염색되지 않는다. 염색약으로서 임의의 적합한 염색약을 사용할 수 있으며, 바람직하게는 당업자에게 공지된 형광 염색약을 사용할 수 있다. 바람직하게는, 특이적 또는 비특이적 형광 염색약, 예를 들어 CFDA-SE를 사용할 수 있고, 여타 유용한 염색약에는 카르복시플루오레신 디아세테이트 아세톡시메틸 에스테르, BCECF AM 및 Calcein AM 이 포함된다. 구체적으로, 세포를 예를 들어 원심분리에 의해, 바람직하게는 3200×g 에서 5분 동안 원심분리에 의해 수확한다. 후속적으로, 수득된 펠렛을 당업자에게 공지된 임의의 적합한 완충액, 바람직하게는 PBS-완충액에서 재현탁할 수 있다. 완충액의 양은 얻어진 현탁액이 예를 들어, 4.2/ml의 OD₆₀₀을 갖도록 계산할 수 있다. 후속적으로, 현탁액을 적합한 염색약, 예를 들어 형광 염색약, 바람직하게는 5,6-카르복시플루오레세인 디아세테이트, 숙신이미딜 에스테르 (CFDA-SE)와, 보다 바람직하게는 CFDA-SE 용액 (Invitrogen) 2 ㎕ 와 혼합할 수 있다. 후속적으로, 세포를 당업자에게 공지된 적합한 시간 동안, 예를 들어 2 시간 동안 당업자에게 공지된 적합한 온도에서, 예를 들어 37℃ 에서 인큐베이션할 수 있다. 추가 단계에서, 염색된 세포를 예를 들어 원심분리에 의해 수확할 수 있다. 바람직하게는, 3200×g 에서 5분 동안 원심분리를 수행한다. 그 후, 세포를 당업자에게 공지된 적합한 완충액, 예를 들어 PBS-완충액 2 ml 에서 재현탁할 수 있다.

응집을 위해, 결합성 미생물을 바람직하게는 뮤탄스 연쇄상구균과 3:1 내지 1:3 (뮤탄스 연쇄상구균:락토바실리)의 부피비로 혼합한다. 보다 바람직하게는, 혼합물의 부피비는 1:1이다. 언급된 비는 1:50 내지 1:150의 콜로니 형성 단위의 비에 상응한다. 염색, 바람직하게는 형광의 측정을 통한 응집 반응의 검정을 위해, 결합성 미생물 및 뮤탄스 연쇄상구균을 당업자에게 공지된 임의의 적합한 부피, 바람직하게는 50 ㎕의 부피로 사용한다. 바람직하게는, 미량역가 플레이트, 예를 들어 96 웰 미량역가 플레이트에서 혼합한다. 후속적으로, 혼합물을 바람직하게는 12분 동안 전속력으로 볼텍싱할 수 있다. 그 후, 혼합물을 예를 들어 10초 동안 500 x g 에서 원심분리할 수 있다. 그 후, 상청액을 제거하고, 펠렛을 당업자에게 공지된 임의의 적합한 완충제, 바람직하게는 PBS-완충액에서 임의의 적합한 부피, 예를 들어 100 ㎕ 로 재현탁할 수 있다. 현탁액의 염색을 혼합물에서 당업자에게 공지된 임의의 적합한 수단에 의해 측정할 수 있다. 바람직하게는, 형광의 경우, 형광 판독기에서, 예를 들어 495 nm (여기) 및 525 nm (방출)의 파장에서 형광을 검출할 수 있다. 대조군으로서, 결합성 미생물만 단독으로 및 염색된 뮤탄스 연쇄상구균만 단독으로 검정할 수 있다. 임의의 배경 염색, 예를 들어 형광을 시험된 뮤탄스 연쇄상구균에 대해 단독적으로 측정할 수 있고, 바람직하게는 결합성 미생물 각각에 의한 응집에 대한 값에서 공제될 수 있다. 상기 나타낸 바와 같이 측정된 배경 염색, 예를 들어 형광을, 상기 기재된 락토바실러스 및 상기 기재된 시험된 뮤탄스 연쇄상구균을 함유하는 샘플에서의 측정된 염색, 예를 들어 형광에서 공제한 후 얻어진 값이 0 초과인 경우, 응집 효과가 존재한다. 보다 바람직하게는, 상기 기재된 바와 같이 수행된 일련의 시험에서 얻어진 값이 재현가능하게 0 초과인 경우 응집 효과가 존재한다. "일련의 실험"은 적어도 2 회, 바람직하게는 3 회, 보다 바람직하게는 4 회, 가장 바람직하게는 5 회의 시험을 의미한다.

대안적인 결합 시험 방법은 본원에 참고문헌으로 포함되는 WO 2008/074473 A2 의 실시예 5 에 기재된 바와 같이 수행될 수 있다.

결합성 미생물의 단편에 관하여, 결합은 특히 상기 기재된 살아있거나 또는 불활성화된 결합성 미생물로서 결정된다. 결합 결정 또는 결합성 미생물 세포 대신 본 발명에 따른 식품 또는 사료 조성물의 제조를 위해 사용되는 단편의 양은 바람직하게는 살아있거나 또는 열 불활성화된 결합성 미생물의 세포벽 재료의 양과 동일하다. 예를 들어, 결합성 미생물 내용물의 펩티도글리칸 함량은 적절한 염료를 이용해 측정될 수 있고, 그러한 염료 측정을 기반으로 한 동일한 양의 단편이 사용될 수 있다.

상기 언급된 미생물은 바람직하게는 본원에 기재된 락토바실러스 속, 보다 바람직하게는 락토바실러스 종에 속하는 젖산균이다. 보다 더 바람직하게는, 상기 락토바실러스는 락토바실러스 파라카세이 (Lactobacillus paracasei) 또는 락토바실러스 람노수스 (Lactobacillus rhamnosus) 이다. 그러나, 락토바실러스 종은 이에 제한되지 않는다. 상기 언급된 미생물은 바람직하게는 "단리"되거나 "정제"될 수 있다. 용어 "단리된"은 물질이 그의 최초 환경으로부터, 예를 들어 천연 유래인 경우 자연 환경으로부터 제거된 것을 의미한다. 예를 들어, 자연계에 공존하는 물질 중 일부 또는 모두로부터 분리된 천연 미생물, 바람직하게는 락토바실러스 종은 단리된다. 이러한 미생물은 조성물의 일부일 수 있고, 조성물이 자연 환경의 일부가 아닌 단리된 것으로 간주된다. 이에 따라, 순수한 배양 중에 생장된 미생물은 여전히 단리된 미생물로 간주된다. 마찬가지로, 그 미생물의 단편도 각 미생물의 적어도 일부분의 재료로부터 분리된다면 본 발명에 따라 "단리된" 것으로 간주된다.

용어 "정제된" 은 절대 순도를 필요로 하지 않고, 오히려 상대적 정의로서 의도된다. 라이브러리로부터 얻은 개별 미생물은 통상적으로 미생물학적 균질성으로 정제된다, 즉 이는 당분야에 공지된 방법에 의해 한천 플레이트 상에서 스트리킹하는 경우 단일 콜로니로서 생장한다. 바람직하게는, 이 목적을 위해 사용되는 한천 플레이트 젖산균, 특히 바람직하게는 락토바실러스 종에 대해 선택적이다. 이러한 선택적 한천 플레이트는 당분야에 공지되어 있다.

단편을 수득하기 위해, 당업계에 공지된 방법, 예를 들어 초음파처리, 프렌치 프레스 또는 볼 밀링에 의해 살아있거나 또는 열 불활성화된 결합제 미생물을 파열하고, 원심분리에 의해 단편을 나머지 세포 잔여물로부터 분리하는 것이 바람직하다. 단편 펠렛은 이어서 세척하고 원심분리하여 단편 펠렛을 수득할 수 있다.

보다 바람직하게는, 상기 언급된 젖산균 무리에 속한 결합성 미생물은 DSMZ 관리 번호 DSM 16667 (락토바실러스 파라카세이 아종 파라카세이 Lb-Ob-K1), DSMZ 관리 번호 DSM 16668 (락토바실러스 파라카세이 아종 파라카세이 Lb-Ob-K2), DSMZ 관리 번호 DSM 16669 (락토바실러스 파라카세이 아종 파라카세이 Lb-Ob-K3), DSMZ 관리 번호 DSM 16670 (락토바실러스 파라카세이 아종 파라카세이 Lb-Ob-K4), DSMZ 관리 번호 DSM 16671 (락토바실러스 파라카세이 아종 파라카세이 Lb-Ob-K5), DSMZ 관리 번호 DSM 16672 (락토바실러스 람노수스 Lb-Ob-K6) 및 DSM 관리 번호 DSM 16673 (락토바실러스 람노수스 Lb-Ob-K7)을 갖는 락토바실러스 파라카세이 또는 락토바실러스 람노수스 또는 이들의 돌연변이체 또는 유도체로 이루어진 군에서 선택되며, 여기서 상기 돌연변이체 또는 유도체는 뮤탄스 연쇄상구균에 특이적으로 결합할 수 있는 능력을 보유한다. 용어 "DSMZ 관리 번호를 갖는 락토바실러스 파라카세이 또는 락토바실러스 람노수스"는 2004 년 8 월 26 일에 도이치 잠룽 퓌르 미크로오르가니스멘 운트 첼쿨투렌 게엠베하 ("DSMZ") 에 기탁된 락토바실러스 파라카세이 또는 락토바실러스 람노수스 종에 속하고 기탁 번호 DSM 16667, 16668, 16669, 16670, 16671, 16672 또는 16673을 갖는 미생물의 세포에 관한 것이다. DSMZ는 독일 데-38124 브라운슈바익 마쉐로더 벡 1베에 위치한다. 상기 언급된 DSMZ 기탁은 특허 절차를 위해 미생물의 기탁의 국제 인정에 대한 부다페스트 조약의 조항과 관련하여 이루어졌다.

상기 언급된 젖산균 군에 속한 미생물, 바람직하게는 기탁된 락토바실러스 파라카세이 또는 락토바실러스 람노수스 세포의 "돌연변이체 또는 유도체"는 바람직하게는 각각의 기탁된 균주와 동일한 특징을 갖는다, 즉 이는 뮤탄스 연쇄상구균에 특이적으로 결합할 수 있는 능력을, 바람직하게는 상기 기재된 결합 특징과 함께 보유한다. 예를 들어, 상기 유도체는 유전자 조작될 수 있다. 본 발명의 맥락에서, 용어 "유전자 조작된"은 유전자 변형이 영향을 받고 유전자가 재조합 DNA 기술에 의해 변형되도록, 시험관내에서 및 생체내에서 바람직한 핵산을 변형하는 당업자에게 공지된 방법과 관련하여 가장 넓은 의미로 사용된다. 따라서, 상기 방법은 재조합 핵산의 클로닝, 서열분석 및 형질전환을 포함하는 것이 바람직하다. 이 목적을 위해, 락토바실러스 종을 위한 발현 벡터를 포함한 적절한 벡터는 예를 들어 EP-B1 506 789, EP-B1 316 677, EP-B1 251 064, EP-B1 218 230, EP-B1 133 046 또는 WO 89/01970 에 기재되어 있다.

중간체 구조물 등의 클로닝을 위한 프라이머, 효소, 추가 숙주 세포 등이 사용될 수 있고, 이는 당업자에게 공지되어 있다. 바람직하게는, 유전자 조작된 돌연변이체는 그의 세균 염색체에 또는 하나 이상의 플라스미드(들) 상에 포함되거나 그의 세균 염색체 및/또는 하나 이상의 플라스미드(들)에 포함된 재조합 핵산을 보유하는, 상기 언급된 젖산균 군에 속한 미생물의 세포, 바람직하게는 기탁된 락토바실러스 종의 세포를 포함한다. 상기 재조합 핵산은 바람직하게는 상기 언급된 젖산균 군에 속한 미생물에 대해 외래이다. "외래"는 폴리뉴클레오티드 또는 핵산 분자가 숙주 세포와 관련하여 이종이라는 것을 의미하며, 이는 상이한 게놈 배경을 갖는 세포 또는 유기체로부터 유래되거나, 또는 상기 핵산 분자의 본연의 대응부 이외에 상이한 게놈 환경에 위치되었으나 숙주 세포와 관련하여 상동성인 것을 의미한다. 이는 핵산 분자가 숙주 세포와 관련하여 상동성인 경우, 상기 숙주 세포의 게놈에서의 그의 본연의 위치에 위치하지 않고, 구체적으로 상이한 유전자에 의해 둘러싸여 있는 것을 의미한다. 이 경우, 이종성 폴리뉴클레오티드는 그 자신의 프로모터의 제어하에 또는 이종 프로모터의 제어하에 있을 수 있다. 숙주 세포에 존재하는 상기 기재된 벡터 또는 핵산 분자는 숙주 세포의 게놈으로 통합되거나, 염색체외에서 몇몇 형태로 유지될 수 있다. 이와 관련하여, 또한 상기 기재된 핵산 분자가 상동성 재조합을 통해 돌연변이체 유전자를 저장하거나 생성하는데 사용될 수 있는 것으로 이해된다. 플라스미드는 적은, 중간 또는 많은 복제 개수 플라스미드일 수 있다. 상기 유전자 조작된 돌연변이체는 사카로스 서브유닛의 뮤탄 특이적 1,3-글리코시드 결합을 분해할 수 있는 글루카나제 또는 뮤타나제를 코딩하는 핵산을 보유할 수 있다. 진균 글루카나제는 예를 들어 문헌 [Fuglsang et al., J. Biol. Chem. 275 (2000), 2009-2018]에 기재되어 있다. 또한, 유전자 조작된 돌연변이체는 바람직하게는 세균 세포벽에서 분비되거나 앵커링된 항체를 코딩하는 재조합 핵산을 보유하는 세포를 포함하는 것으로 고려된다. 용어 "항체"는 온전한 항체 뿐만 아니라 그의 항체 단편, 예컨대 분리된 경쇄 및 중쇄, Fab, Fab/c, Fv, Fab', F(ab')₂를 포함한다. 용어 "항체"는 또한 인간화 항체, 이관능성 항체 및 항체 구조물, 예컨대 단일 사슬 Fvs (scFv) 또는 항체-융합 단백질을 포함한다. 본 발명의 맥락에서, 용어 "항체"는 상기 언급된 기탁된 미생물의 유도체의 세포에서 발현될 수 있는 항체 구조물, 예를 들어 특히 벡터를 통해 당분야에 공지된 방법에 의해 형질전환될 수 있는 항체 구조물을 포함하는 것으로 또한 고려된다. 구체적으로, 이러한 항체 구조물은 예를 들어 연쇄상구균 항원 I/II를 특이적으로 인식하는 것으로 고려된다. 이러한 접근법은 예를 들어 문헌 [Krueger et al., Nat. Biotechnol. 20 (2002), 702-706] 또는 문헌 [Shiroza, Biochim Biophys Acta 1626 (2003), 57-64]에 기재되어 있다.

발현된 항체의 분비는 바람직하게는 항체를 코딩하는 핵산을 분비 신호 서열에 작동가능하게 연결함으로써 달성된다. 세균 세포벽에서의 앵커링은 효소 소르타제의 메카니즘을 이용함으로써 달성될 수 있다. 즉, 그람-양성 세균의 표면 단백질은 보존된 Leu-Pro-X-Thr-Gly (LPXTG) 모티프의 절단을 포함하고, 펩티도글리칸 세포벽의 어셈블리 중에 발생하는 메카니즘에 의해 세균 세포벽에 연결된다. 따라서, 항체를 코딩하는 핵산 분자는 세균 세포벽에서 단백질을 앵커링하는데 소르타제에 의해 사용되는 상기 언급된 보존된 모티프를 코딩하는 서열에 융합될 수 있다.

또한, 상기 언급된 젖산균 군에 속한 미생물, 바람직하게는 기탁된 락토바실러스 종은 항미생물 물질 (특히, 스트렙토코커스 뮤탄스에 대해 효과적인 항미생물 물질)인 류테린을 코딩하는 핵산 분자를 보유하도록 유전자 변형된 것으로 고려된다. 류테린은 예를 들어 문헌 [Talarico et al., Chemother. 33 (1989), 674-679]에 기재되어 있다.

상기 언급된 젖산균 군에 속한 미생물의 돌연변이체, 바람직하게는 기탁된 락토바실러스 균주의 돌연변이체는 바람직하게는 인공으로 돌연변이된다. 본 발명에 따라, 용어 "돌연변이된"은 예를 들어 자연적으로 또는 물리적 수단에 의해 또는 화학적 화합물/물질/작용제, 예컨대 EMS 또는 ENU에 의해 유발된 유전 물질, 즉 핵산의 영구 변형(들)을 의미한다. 상기 변형에는 점 돌연변이, 예컨대 전좌 또는 전환, 핵산/유전자/염색체 내의 1개 이상의 염기의 결실/삽입/부가가 포함되며, 이에 의해 핵산/유전자/염색체가 변형되어, 특히 비정상적 유전자 발현/전사/번역 또는 불활성 유전자 생성물, 구성적 활성/불활성 유전자 생성물을 야기할 수 있고, 예를 들어 우성-음성 (dominent-negative) 효과를 초래한다. 바람직하게는, 돌연변이는 뮤탄스 연쇄상구균에 특이적으로 결합할 수 있는 증가된 능력을 초래한다. 따라서, 기탁된 미생물의 돌연변이체 세포가 바람직한 유전자(들)에 돌연변이(들)를 보유하거나, 바람직한 유전자(들)의 돌연변이(들)가 당업자에게 공지된 방법에 의해 유도되는 것이 또한 바람직하다. 돌연변이된 또는 유전자 조작된 세균 세포가 임의의 적합한 방법/표현형에 의해 선택될 수 있다는 것이 선행기술에 또한 공지되어 있다. 본 발명의 맥락에서, 뮤탄스 연쇄상구균에 특이적으로 결합할 수 있는 증가된 능력을 갖는 돌연변이체는 첨부된 실시예에 기재된 방법에 따라 시험될 수 있다. 그러나, 용어 "돌연변이체"는 또한 상기 언급된 젖산균 군에 속한 미생물의 세포, 바람직하게는 그의 게놈, 즉 세균 염색체에 본연의 자연 돌연변이를 보유하는 기탁된 미생물의 세포를 포함한다. "자연 돌연변이"는 자연적으로, 즉 인간에 의한 또는 돌연변이유발원으로의 노출에 의한 직접 유전자 조작 없이 발생하는 돌여변이이다. 자연 돌연변이체의 선택은 균주를 배양하고, 바람직한 변이체를, 예를 들어 뮤탄스 연쇄상구균으로의 개선된 결합을 나타내는 변이체 세균의 능력에 의해 선택함으로써 달성될 수 있다. 자연 돌연변이체의 선택 방법은 당분야에 익히 공지되어 있다 (예를 들어, 문헌 [Sambrook. Russell "Molecular Cloning, A Laboratory Manual", Cold Spring Harbor Laboratory, N.Y. (2001)]; [Ausubel, "Current Protocols in Molecular Biology", Green Publishing Associates and Wiley Interscience, N.Y. (1989)] 참조). 예를 들어, 이러한 돌연변이는 배양 중에, 예를 들어 DNA 복제와 커플링된 정상적인 세포 분열 프로세스 중에 또는 상기 언급된 젖산균 군에 속한 미생물의 돌연변이체의 계대 및/또는 보존 중에 발생할 수 있다.

그러나, 미생물의 유전자 취급이 미생물에 유익하거나 또는 훨씬 더 유익한 특성을 부여한다고 하더라도, 대안적으로 바람직하게는 본 발명에 따라 사용되는 결합성 미생물 및 바람직하게는 모든 미생물은 본 출원의 출원일에 적용가능한 각각의 버젼에서 Directive 2001/18/EC 의 Article 2(2) 에서 정의된 유전자 변형 미생물이 아니다. 그러나, 본 발명에 따라 상기 Directive 2001/18/EC 의 Annex 1B 에 열거된 유전자 변형 기법을 통해 수득되는 미생물은 바람직하게는 Directive 2001/18/EC 의 Article 2(2) 에서 정의하는 유전자 변형 미생물로 간주되지 않는다. 유전자 변형 미생물을 배제함으로써, 소비자의 합리적인 피치 못할 공포감을 피할 수 있고, 이로써 구강 건강 관리 지침에 대한 소비자의 순응성을 증대시킬 수 있다.

본 발명에 따르면, 바람직하게는 락토바실라세아에 과, 더욱 바람직하게는 바실러스 속, 가장 바람직하게는 상기 언급한 특히 바람직한 균주들 중 하나인 결합성 미생물은 교미 및/또는 자연적인 재조합에 의해 일어난 것이 아닌 방식으로 변형된 유전자 물질을 포함하지 않는다. 그러한 기법은 하기의 것을 포함한다:

(1) 유기체 외부의 임의의 수단에 의해 제공되는 핵산 분자의 임의의 바이러스, 박테리아, 플라스미드 또는 여타 벡터 시스템으로의 삽입 및 자연적으로는 일어나지 않지만, 지속하여 증식가능한 숙주 유기체로의 혼입을 수반하는 재조합 핵산 기법;

(2) 마이크로인젝션, 마크로인젝션 및 마이크로캡슐화를 포함하는, 유기체 외부에서 제조된 유전성 물질을 유기체에 직접 도입하는 것을 수반하는 기법;

(3) 자연적으로는 일어나지 않는 방법을 수단으로 하여 두가지 이상의 세포의 융합을 통해 유전성 물질의 새로운 조합을 가진 살아있는 세포가 형성되는, 원형질 융합 또는 혼성화 기법을 포함하는 세포 융합.

그러나, 컨쥬게이션, 형질도입 및 형질전환과 같은 자연적인 프로세스는 바람직하게는 본 발명에서 배제되지 않는다. 이후 열거되는 하나 이상의 기법/방법으로 제조되는 것 이외의 재조합 핵산 분자 또는 유전자 조작 유기체의 이용을 수반하지 않는 한 본 발명에 따라 배제되지 않는 추가적인 바람직한 기법은 다음과 같다:

(1) 자연 돌연변이 또는 유도된 돌연변이에 의한 돌연변이유발, 및

(2) 전통적인 육종방법을 통해 유전 물질을 교환할 수 있는 원형질 융합을 포함하는 세포 융합.

본 발명에 따르면, 결합성 미생물 및 바람직하게는 본 발명에 따라 사용되는 임의의 여타 미생물들도 고세균 (archaea) 또는 진핵생물 (eukaryota) 의 초계 (super kingdom) 의 유기체의 유전자 물질을 함유하지 않는 것이 바람직하며, 여기서 물론 동일 종의 균주, 또는 덜 바람직하게는 본 발명에 사용되는 미생물과 적어도 동일한 속에 속하는 균주에서 자연적으로 발견될 수 있는 유전자 물질은 예외로 한다. 더욱 바람직하게는, 본 발명에 따라 사용되는 미생물은 피르미쿠테스 (firmicutes) 이외의 문에서만 발견되는 미생물의 유전자 물질을 함유하지 않고, 더욱더 바람직하게는 바실리 이외의 계의 미생물에서만 발견되거나 또는 그로부터 취해지는 유전자 물질을 함유하지 않고, 더욱더 바람직하게는 락토바실랄 (Lactobacillales) 이외의 목의 미생물에서만 발견되거나 또는 그로부터 취해지는 유전자 물질을 함유하지 않는다.

본 발명에 따라 사용되는 미생물 및 특별하게는 결합성 미생물이 락토바실라세아에 과의 것이면, 각 미생물이 락토바실라세아에 이외의 과의 미생물에서만 발견되거나 또는 그로부터 취해지는 유전자 물질을 함유하지 않는다. 더욱더 바람직하게는, 본 발명의 미생물 및 특별하게는 결합성 미생물이 락토바실러스 속의 것이면, 각 미생물은 락토바실러스 이외의 속의 미생물에서만 발견되거나 또는 그로부터 취해지는 유전자 물질을 함유하지 않는다.

본 발명에 따른 조성물은 바람직하게는 항우식증 식품 또는 사료 조성물, 또는 항우식성 약제학적 조성물이다. 이에 따라, 본 발명은 항우식성 조성물, 바람직하게는 뮤탄스 연쇄상구균 및/또는 스트렙토코커스 뮤탄스에 의해 유발되는 우식증의 치료 또는 예방을 위한 약제학적 또는 화장용 조성물의 제조를 위한 상기 언급된 결합성 미생물 또는 그의 단편의 용도에 관한 것이다.

본 발명에 따라 사용되는 용어 "조성물"은 상기 기재된 1종 이상의 미생물 또는 돌연변이체 또는 유도체, 바람직하게는 상기 기재된 기탁된 미생물 또는 상기 미생물의 유사체 또는 단편을 포함하는 조성물(들)에 관한 것이다. 하기 기재된 본 발명에 따라 사용되는 조성물은 상기 언급된 성분들을 임의의 조합으로 포함하는 것으로 고려된다. 이는 우식증의 예방 및/또는 치료에 적합한 1종 이상의 추가 성분을 임의로 포함할 수 있다. 따라서, 이는 하기 기재된 추가 성분들의 임의의 조합물을 임의로 포함할 수 있다. 용어 "우식증의 예방 및/또는 치료에 적합한 성분"은 치아 표면으로의, 펠리클로의 뮤탄스 연쇄상구균의 결합을 억제하고/거나 뮤탄스 연쇄상구균을 불활성화시키는 화합물 또는 그의 조성물 및/또는 조합물물을 포함한다. 보다 바람직하게는, 상기 용어는 하기 기재된 바와 같이, 치아 표면으로의 뮤탄스 연쇄상구균의 접착을 억제하고/거나, 뮤탄스 연쇄상구균의 글리코실트랜스퍼라제의 활성을 억제하고/거나, 뮤탄스 연쇄상구균을 억제하거나 불활성화시키고/거나, 뮤탄스 연쇄상구균의 응집소-의존적 결합을 억제하고/거나, 뮤탄스 연쇄상구균의 사카로스-의존적 결합을 억제할 수 있는 화합물 또는 그의 조성물 및/또는 조합물을 포함한다.

본 발명의 조성물은 바람직하게는 애완 동물의 구강 건강을 위한 조성물, 더욱더 바람직하게는 치석의 예방 또는 감소를 위한 조성물이다. 그러한 조성물은 예를 들어 EP 01 41 645 A2, WO 0150882 A2, WO 2001/070043 A2, WO 02/078462 A1 , WO 2004/082518 A2, WO 2005/092087 A2 및 WO 2010/052467 A2 에서 공지되어 있다. 상기 문헌 및 특히 상기 문헌에서 언급되는 실시예에 기재된 식품 및 사료들은 본원에 바람직한 베이스 조성물의 예시로 포함된다. 본 발명에 따른 그러한 베이스 조성물은 추가로 본 발명의 결합성 미생물 또는 그의 단편의 혼입에 의해 변경될 수 있다.

결합성 미생물 또는 그의 단편의 작용, 즉 뮤탄스 연쇄상구균에 대한 특이적 결합에 의해, 가장 바람직하게는 스트렙토코커스 뮤탄스에 대한 특이적 결합에 의해, 구강 내 미생물을 살상하는 살박테리아제 또는 여타 화학물 약제의 작용에 의존하지 않고도 치석의 증가를 지연 또는 둔화시킬 수 있다는 점이 본 발명의 특별한 장점이다. 정상적인 구강 세균총들은 예를 들어 그러한 정상적 세균총의 미생물들이 영양공급을 위해 병원체들과 경쟁함으로써 병원체들의 생장을 제한하고 감염을 방지하여 인간 및 동물에게 이로울 것으로 추측된다. 본 발명은 정상적인 구강 세균총이 크게 방해받지 않고 여전히 구강 관리 특성, 바람직하게는 치석 형성의 예방 또는 둔화를 발휘하도록 한다.

치석의 예방 및 치료에 있어서의 본 발명의 또다른 장점은 본 발명이 아연 설페이트, 가용성 피로포스페이트, 나트륨 트리폴리포스페이트 및 가용성 디포스페이트와 같은 칼슘제거제를 필요로 하지 않는다는 점이다. 그러한 약제는 칼슘을 구강으로부터 격리시켜, 치석 형성의 중요 구성성분을 제거한다. 그러나, 치아 에나멜은 대개 칼슘 함량이 높은 무기물인 히드록실 아파타이트로 구성된다. 따라서, 구강에서 칼슘을 제거하는 것은 치아를 약하게 만들게 되고, 이는 바람직하지 않다. 반면에, 본 발명은 건강한 치아 에나멜 유지에 필요한 칼슘을 격리시키지 않고도 치석의 형성을 치료 또는 예방할 수 있게 해 준다.

따라서, 치석 형성 예방에서 최선의 결과를 위해 본 발명의 조성물은 결합성 미생물 또는 그의 단편을 함유하는데, 여기서 결합성 미생물은 바람직하게는 락토바실라세아에 과, 더욱 바람직하게는 락토바실러스 속, 가장 바람직하게는 결합성 미생물의 상기 언급된 기탁된 균주들 중 하나이고, 추가로 상기 조성물은 결합제 미생물 또는 그의 단편의 뮤탄스 연쇄상구균에 대한 결합이 혼탁법으로 측정하여 최대 10% 감소하도록 하는 농도로 칼슘 제거제를 함유하고, 바람직하게는 그러한 약제는 함유하지 않는다. 그러한 바람직한 조성물에서, 칼슘 제거제는 바람직하게는 아연 설페이트, 아연 클로라이드, 가용성 피로포스페이트, 나트륨트리폴리포스페이트 및 가용성 디포스페이트로 이루어진 군으로부터 선택된다.

본 발명은 또한 바람직하게는 유아 또는 애완 동물에서, 치석의 예방 또는 치료를 위한 의약 제조를 위한 상기 기재된 바와 같은 결합성 미생물 또는 그의 단편의 용도를 제공한다. 상기 언급된 바와 같이, 결합성 미생물은 또한 열 불활성화 형태, 특히 오토클레이브된 형태, 또는 동결건조된 형태일 수 있다. 결합성 미생물은 바람직하게는 락토바실라세아에 과, 더욱 바람직하게는 락토바실러스 속, 더욱더 바람직하게는 락토바실러스 파라카세이 (Lactobacillus paracasei) 또는 락토바실러스 람노수스 (Lactobacillus rhamnosus) 종의 것이다. 구체적으로, 본 발명의 결합성 미생물은 DSMZ 접근 번호가 16667 내지 16673 인 락토바실러스 파라카세이 (L. paracasei) 또는 락토바실러스 람노수스 (L. rhamnosus) 의 상기 표시된 균주들 또는 그의 돌연변이 또는 유도체로부터 선택될 수 있다.

가장 바람직하게는, 본 발명에 따른 조성물은 특히 유아 또는 애완 동물을 위한 식품 또는 사료 조성물이다. 그러한 구강 건강 식품 또는 사료 조성물은 종종 기능성 식품 또는 기능성 사료로 지칭된다. 용어 "식품" 및 "사료" 는 본 발명에 따른 해당 조성물의 영양가와 무관하게 본 발명에 사용되며, 이에 따라 본 발명에 따른 식품 및 사료 조성물이 그러한 특별한 목적에 맞게 설계될 수 있음에도 불구하고 특별한 영양적 목적으로 한정되지 않는다. 따라서, 용어 "식품" 및 "사료" 는 각 조성물이 구강에 위치하고 소화되기에 적합하다.

본 발명에 따라 특별히 중요한 것은 동물, 특히 애완 동물, 가장 바람직하게는 고양이, 개, 래트, 햄스터 및 기니 피그용의 식품 또는 사료 조성물이다. 그러한 동물에서, 우식증의 형성이 특히 악명높으며 또한 치료하기 어려운데, 이는 치석 제거와 같은 임의의 치과적 치료가 애완 동물의 마취를 필요로 하기 때문이다. 따라서, 본 발명은 그러한 스트레스가 심한 치료가 필요한 상황을 예방하기에 특히 적합하다.

본 발명의 사료 조성물은 바람직하게는 애완 동물 사료, 즉 동물을 먹이거나, 키우거나 또는 유지하기 위한, 그리고 유럽 공동체에서는 일반적으로 인간 소비용으로는 사용하지 않는 애완 동물 사료이다. 바람직하게는, 본 발명에서 "애완 동물" 은 육식 동물 목의, 더욱더 바람직하게는 개아목 (caniformia) 또는 고양이아목 (feliformia) 의, 가장 바람직하게는 개과 (canidae) 또는 고양이과 (felidae) 의 포유류이다. 추가적인 바람직한 애완 동물은 쥐목 (rodentia) 의 것들인데, 여기서 특히 바람직한 동물은 마우스, 토끼, 햄스터 및 기니 피그이다.

애완 동물 사료를 위해서는, 본 발명의 화합물을 배합 사료, 완전 사료, 보충 사료 또는 미네랄 사료인 것이 바람직하다. 본 발명에 따르면, 용어 "배합 사료" 는 완전 또는 보충 사료의 형태로 경구적으로 동물에게 제공하기 위한, 사료 첨가제를 함유하든 또는 함유하지 않든 두가지 이상의 사료 재료의 혼합물을 의미한다. 용어 "완전 사료" 는 그의 조성상 일당 사료로 충분한 배합 사료를 의미한다. 본 발명에 따라 용어 "보충 사료" 는 특정 물질을 높은 함량으로 포함하나, 그의 조성상 다른 사료와 병용하는 경우에만 일당 사료로 충분한 배합 사료를 의미한다. 용어 "미네랄 사료" 는 40% 미상의 미정제 회분을 함유하는 보충 사료를 의미한다. 최종적으로, 본 발명에 따른 용어 "사료 재료" 는 그의 본래 목적이 신선한 상태 또는 보존처리된 상태의 그의 본래 상태에서 동물의 영양 요구를 맞춰주기 위한 것인 식물 또는 동물 기원의 제품, 및 그의 공업적 가공으로 유도되는 제품, 및 배합 사료의 제조에서, 또는 예비혼합물의 담체로서 있는 그대로 직접 또는 가공 후에 경구적으로 동물에게 제공하기 위해 사용하는 것을 의도로 하는 사료 첨가제를 포함하거나 또는 포함하지 않는 유기 또는 무기 물질을 의미한다. 용어 "경구적으로 동물에게 제공하는" 은 동물의 영양적 요구를 충족시키고/시키거나 정상적으로 건강한 동물의 생산성을 유지하기 위한 목적으로 입을 통해 위장관으로 사료를 도입하는 것을 의미한다.

본 발명에 따르면, 결합성 미생물을 함유하는 조성물은 또한 구강 건강 조성물일 수 있다. 본 발명에 따른 구강 관리 조성물의 바람직한 예시는 치약, 치제, 치아용 분말, 국소 구강 겔, 세구제, 의치용 제품, 구강 스프레이, 로젠지제, 구강 정제, 추잉검, 치실 또는 치과용 테이프, 특히 동물용의 저작용 제품이다.

본 발명에 따라 바람직한 구강 관리 조성물은 결합성 미생물 또는 그의 단편 뿐만 아니라, 경구적으로 허용되는 담체를 함유하는데, 그러한 담체는 본 발명의 결합성 미생물 및/또는 그의 단편이 뮤탄스 연쇄상구균의 하나 이상의 균주, 바람직하게는 스트렙토코커스 뮤탄스의 하나 이상의 균주에 결합하여 항치석 및/또는 항우식증 및/또는 항구취 유효성을 발휘할 수 있도록 하는 안전하고 유효한 방식으로 구강에 적용될 수 있는 임의의 적합한 비히클일 수 있다. 구강 관리 조성물은 단일상 또는 다중상 조성물일 수 있다.

특히, 본원에서 치제는 달리 특정되지 않는 한 페이스트, 겔 또는 액체 제형을 의미한다. 치제 조성물은 임의의 바람직한 형태, 예컨대 깊은 줄무늬, 표면 줄무늬, 페이스트를 둘러싼 겔을 갖는 다층, 또는 임의의 이들의 조합의 형태일 수 있다. 치제 조성물은 분배기의 물리적으로 분리된 구획에 함유되고, 나란히 분배될 수 있다. 치제 조성물은 예를 들어 EP-B1 0 617 608 에 기재되어 있다.

바람직한 치제 조성물은 WO 2008/074473 A2 의 실시예 21 내지 24에 기재되어 있다. 본 발명의 치제 조성물은 상기 기재된 성분 이외에 다양한 임의의 치제 성분들을 함유할 수 있으며, 이들 중 몇몇은 하기 기재되어 있다. 임의의 성분에는 예를 들어 접착제, 발포제, 향미제, 감미제, 추가 플라크 형성 억제제, 추가 연마제 및 착색제가 포함되나 이에 제한되지 않는다. 이들 및 다른 임의의 성분은 예를 들어 US 5,004,597, US 4,885,155, US 3,959,458 및 US 3,937,807에 추가로 기재되어 있다.

예를 들어, 치약은 계면활성제, 킬레이팅제, 플루오라이드 공급원, 치아 미백제 및 치아색 변형 물질, 증점제, 보습제, 향미제 및 감미제, 알칼리 금속 중탄산염, 잡다한 담체 및/또는 다른 활성제를 포함할 수 있다.

본 발명에 따라 사용되는 바람직한 임의의 작용제 중 하나는 계면활성제이고, 바람직하게는 사르코시네이트 계면활성제, 이세티오네이트 계면활성제 및 타우레이트 계면활성제로 이루어진 군에서 선택된다. 이들 계면활성제의 알칼리 금속 또는 암모늄 염이 본원에서 사용하기에 바람직하다. 라우로일 사르코시네이트, 미리스토일 사르코시네이트, 팔미토일 사르코시네이트, 스테아로일 사르코시네이트 및 올레오일 사르코시네이트의 나트륨 및 칼륨 염이 본원에서 가장 바람직하다.

다른 바람직한 임의의 작용제는 킬레이팅제, 예컨대 타르타르산 및 그의 약제학적으로 허용되는 염, 시트르산 및 알칼리 금속 시트레이트 및 이들의 혼합물이다. 킬레이팅제는 세균의 세포벽에서 발견되는 칼슘과 착물을 형성할 수 있다. 킬레이팅제는 또한 이러한 생물집단을 온전한으로 유지하는 것을 돕는, 칼슘 브릿지로부터 칼슘을 제거함으로써 플라크를 붕괴시킬 수 있다. 그러나, 상기 언급한 바와 같이, 특히 치아의 약한 처리를 의도로 하는 상기 약제 또는 상기 조성물의 바람직한 최대 농도가 있다.

추가 항우식성 효율성을 제공하기 위해 25℃에서 조성물 중 플루오라이드 이온 농도를 제공하기에 충분한 양으로 및/또는 사용시 약 0.0025 중량％ 내지 약 5.0 중량％, 바람직하게는 약 0.005 중량％ 내지 약 2.0 중량％의 양으로 치제 및 다른 구강 조성물에 존재하는 추가 수용성 플루오라이드 화합물을 갖는 것이 통상적이다. 다양한 플루오라이드 이온-제공 물질은 본 조성물에서 가용성 플루오라이드의 공급원으로서 사용될 수 있다. 적합한 플루오라이드 이온-제공 물질의 예는 US 3,535,421 및 US 3,678,154 에 기재되어 있다. 대표적인 플루오라이드 이온 공급원에는 불화제1주석, 불화나트륨, 불화칼륨, 일불소인산나트륨 등이 포함된다. 불화제1주석 및 불화나트륨, 뿐만 아니라 이들의 혼합물이 특히 바람직하다.

본 발명에 따라 사용되는 구강 관리 조성물은 또한 치아 미백제, 예를 들어 표백제 또는 산화제, 예컨대 퍼옥시드, 퍼보레이트, 퍼카르보네이트, 퍼옥시산, 퍼술페이트, 금속 클로라이트 및 이들의 조합을 포함할 수 있다. 적합한 퍼옥시드 화합물에는 수소 퍼옥시드, 우레아 퍼옥시드, 칼슘 퍼옥시드 및 이들의 혼합물이 포함된다. 바람직한 퍼카르보네이트는 나트륨 퍼카르보네이트이다. 다른 적합한 미백제에는 칼륨, 암모늄, 나트륨 및 리튬 퍼술페이트 및 퍼보레이트 모노- 및 테트라히드레이트, 및 나트륨 피로포스페이트 퍼옥시히드레이트가 포함된다. 적합한 금속 클로라이트에는 칼슘 클로라이트, 바륨 클로라이트, 마그네슘 클로라이트, 리튬 클로라이트, 나트륨 클로라이트 및 칼륨 클로라이트가 포함된다. 바람직한 클로라이트는 나트륨 클로라이트이다. 추가 미백 활성제는 하이포클로라이트 및 이산화염소일 수 있다.

치아 미백제로서 표백제 이외에, 치아색 변형 물질이 본 발명에 유용한 구강 관리 활성제 중에서 고려될 수 있다. 이들 물질은 소비자를 만족시키기 위해 치아색을 변형시키기에 적합하다. 이들 물질은 치아 표면에 적용시 빛의 흡수 및/또는 반사와 관련하여 표면을 변형시키는 입자를 포함한다. 이러한 입자는 이러한 입자를 함유하는 필름을 치아 또는 치아들의 표면에 적용시 외관상 이익을 제공한다.

치약 또는 겔의 제조에서, 조성물의 바람직한 점조도를 제공하고, 사용시 바람직한 활성제 방출 특징을 제공하고, 저장 안정성을 제공하고, 조성물의 안정성을 제공하는 몇몇 증점제 등을 첨가하는 것이 필수적이다. 바람직한 증점제는 카르복시비닐 폴리머, 카라게난, 히드록시에틸 셀룰로스, 라포나이트 및 셀룰로스 에테르의 수용성 염, 예컨대 나트륨 카르복시메틸셀룰로스 및 나트륨 카르복시메틸 히드록시에틸 셀룰로스이다. 천연 검, 예컨대 카라야 검, 잔탄 검, 아라비안 검 및 트라가칸트 검이 또한 사용될 수 있다. 콜로이드상 마그네슘 알루미늄 실리케이트 또는 미분 실리카가 질감을 추가로 개선하기 위해 증점제의 일부로서 사용될 수 있다.

본 발명의 조성물의 국소 구강 담체의 다른 임의의 성분은 보습제이다. 보습제는 공기에 노출시 치약 조성물이 경화되는 것을 방지하고, 입에 대한 촉촉한 감을 조성물에 제공하고, 특정 보습제의 경우, 향미제의 바람직한 단맛을 치약 조성물에 부여한다. 보습제는 순수한 보습제를 기준으로 일반적으로 조성물의 약 0 중량％ 내지 약 70 중량％, 바람직하게는 약 5 중량％ 내지 약 25 중량％를 차지한다. 본 발명의 조성물에서 사용하기에 적합한 보습제에는 식용 다가 알콜, 예컨대 글리세린, 소르비톨, 자일리톨, 부틸렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜 및 프로필렌 글리콜, 특히 소르비톨 및 글리세린이 포함된다.

향미제 및 감미제가 또한 조성물에 첨가될 수 있다. 적합한 향미제에는 윈터그린 오일, 박하유, 스피어민트 오일, 클로브 버드 오일, 멘톨, 아네톨, 메틸 살리실레이트, 유칼리프톨, 계피, 1-멘틸 아세테이트, 세이지, 유제놀, 파슬리유, 옥사논, 알파-이리손, 마조람, 레몬, 오렌지, 프로페닐 구에톨, 시나몬, 바닐린, 티몰, 리날로올, 신남알데히드 글리세롤 아세탈 (CGA 라고 공지됨), 및 이들의 혼합물이 포함된다. 향미제는 일반적으로 조성물의 약 0.001 중량％ 내지 약 5 중량％의 수준으로 조성물에서 사용된다.

사용될 수 있는 감미제에는 수크로스, 글루코스, 사카린, 덱스트로스, 레불로스, 락토스 (상기 기재됨), 만니톨, 소르비톨, 프룩토스, 말토스, 크실리톨, 사카린 염, 타우마틴, 아스파르탐, D-트립토판, 디히드로칼콘, 아세술팜 및 시클라메이트 염, 특히 나트륨 시클라메이트 및 나트륨 사카린, 및 이들의 혼합물이 포함된다. 조성물은 바람직하게는 이들 작용제를 조성물의 약 0.1 중량％ 내지 약 10 중량％, 바람직하게는 약 0.1 중량％ 내지 약 1 중량％로 함유한다. 바람직하게는, 본 발명에 따른 애완 동물 식품은 뮤탄스 연쇄상구균 및 바람직하게는 연쇄상구균 돌연변이에 의해 대사될 수 있는 그러한 당을 적은 함량으로만 함유함으로써, 뮤탄스 연쇄상구균의 우식 활성을 피하고자 한다. 따라서, 수크로오스, 사탕수수당, 캐러멜, 옥수수 시럽, 옥수수 당밀, 글루코오스, 프룩토오스 및 소르비톨의 함량은 바람지하게는 낮게 유지되어, 최대 함량이 전체 유아용 또는 애완 동물용 시품의 20 중량% 으로 하는 것이 바람직하고; 5 중량% 의 최대 함량이 더욱더 바람직하고, 2 중량% 의 최대 함량이 가장 바람직하다. 또한 바람직하게는, 각각의 사카린, 덱스트로오스, 레불로오스, 락토오스, 만니톨, 말토오스 및 자일리톨의 함량이 20 중량% 미만, 더욱 바람직하게는 5 중량% 미만, 가장 바람직하게는 2 중량% 미만이며, 자일리톨이 바람직하게는 애완 동물 식품에 전혀 포함되지 않는다.

본 발명은 또한 알칼리 금속 중탄산염을 포함할 수 있다. 알칼리 금속 중탄산염은 수용성이고, 안정화되지 않는 한 수성계에서 이산화탄소를 방출하는 경향이 있다. 중탄산나트륨 (또한 베이킹 소다라고 공지됨) 은 바람직한 알칼리 금속 중탄산염이다. 본 조성물은 알칼리 금속 중탄산염을 약 0.5％ 내지 약 30％, 바람직하게는 약 0.5％ 내지 약 15％, 가장 바람직하게는 약 0.5％ 내지 약 5％로 함유할 수 있다. 상업적으로 적합한 구강 조성물의 제조에서 사용되는 물은 바람직하게는 이온 함량이 낮고 유기 불순물이 없어야 한다. 물은 일반적으로 수성 치약 조성물의 약 10 중량％ 내지 약 50 중량％, 바람직하게는 약 20 중량％ 내지 약 40 중량％를 차지한다. 이들 양의 물은 자유수, 및 다른 물질, 예컨대 소르비톨이 도입된 물을 포함한다. 이산화티타늄이 또한 본 조성물에 첨가될 수 있다. 이산화티타늄은 조성물에 불투명도를 부여하는 백색 분말이다. 이산화티타늄은 일반적으로 치제 조성물의 약 0.25 중량％ 내지 약 5 중량％를 차지한다.

본 조성물의 pH 는 바람직하게는 완충제를 사용하여 조절된다. 본원에서 사용되는 완충제는 조성물의 pH 를 약 4.5 내지 약 9.5 범위로 조절하기 위해 사용될 수 있는 작용제를 지칭한다. 완충제에는 인산일나트륨, 인산삼나트륨, 수산화나트륨, 탄산나트륨, 피로인산나트륨, 시트르산 및 시트르산나트륨이 포함된다. 완충제는 본 조성물의 약 0.5 중량％ 내지 약 10 중량％의 수준으로 투여될 수 있다. 치제 조성물의 pH 는 3:1 치제의 수성 슬러리, 예를 들어 물 3 부 대 치약 1부로부터 측정된다.

본 조성물에서 사용될 수 있는 다른 임의의 작용제에는 알킬- 및 알콕시-디메티콘 코폴리올, 예컨대 C12 내지 C20 알킬 디메티콘 코폴리올 및 이들의 혼합물에서 선택된 디메티콘 코폴리올이 포함된다. 상표명 Abil EM90 로 시판되는 세틸 디메티콘 코폴리올이 매우 바람직하다. 디메티콘 코폴리올은 일반적으로 약 0.01 중량％ 내지 약 25 중량％, 바람직하게는 약 0.1 중량％ 내지 약 5 중량％, 보다 바람직하게는 약 0.5 중량％ 내지 약 1.5 중량％의 수준으로 존재한다. 디메티콘 코폴리올은 긍정적인 치아감 이익의 제공을 돕는다. 다른 유용한 담체에는 US 5,213,790, US 5,145,666, US 5,281,410, US 4,849,213 및 US 4,528,180 에 개시된 바와 같은 2 상 치제 제형이 포함된다.

본 미용 조성물은 또한 다른 활성제, 예컨대 항미생물제를 포함할 수 있다. 이러한 항미생물제에는 수불용성 비-양이온 항미생물제, 예컨대 할로겐화된 디페닐 에테르, 페놀성 화합물, 예를 들어 페놀 및 그의 상동체, 모노 및 폴리-알킬 및 방향족 할로페놀, 레소르시놀 및 그의 유도체, 비스페놀 화합물 및 할로겐화된 살리실아닐리드, 벤조산 에스테르 및 할로겐화된 카르바닐리드가 포함된다. 수용성 항미생물에는 4 차 암모늄 염 및 비스-바이쿠아니드 염 등이 포함된다. 트리클로산 모노포스페이트는 추가 수용성 항미생물제이다. 4 차 암모늄 항미생물제는, 4 차 질소 상의 1 또는 2개의 치환기는 약 8 내지 약 20개, 전형적으로 약 10 내지 약 18개의 탄소 원자의 탄소 사슬 길이 (전형적으로 알킬기)를 가지나, 나머지 치환기 (전형적으로 알킬 또는 벤질 기)는 더 적은 탄소 원자, 예컨대 약 1 내지 약 7개의 탄소 원자, 전형적으로 메틸 또는 에틸 기를 갖는 것을 포함한다. 도데실 트리메틸 암모늄 브로마이드, 테트라데실피리디늄 클로라이드, 도미펜 브로마이드, N-테트라데실-4-에틸 피리디늄 클로라이드, 도데실 디메틸 (2-페녹시에틸) 암모늄 브로마이드, 벤질 디메틸스테아릴 암모늄 클로라이드, 세틸 피리디늄 클로라이드, 4 차화 5-아미노-1,3-비스(2-에틸-헥실)-5-메틸 헥사 히드로피리미딘, 벤잘코늄 클로라이드, 벤제토늄 클로라이드 및 메틸 벤제토늄 클로라이드가 전형적인 4 차 암모늄 항세균제의 예이다. 다른 화합물은 US 4,206,215 에 개시된 비스[4-(R-아미노)-1-피리디늄]알칸이다. 다른 항미생물제, 예컨대 구리 비스글리시네이트, 구리 글리시네이트, 아연 시트레이트 및 아연 락테이트가 또한 포함될 수 있다. 효소는 본 조성물에서 사용될 수 있는 다른 유형의 활성제이다. 유용한 효소에는 프로테아제, 용균 효소, 플라크 매트릭스 억제제 및 옥시다제의 종류에 속하는 효소가 포함된다. 프로테아제에는 파파인, 펩신, 트립신, 피신, 브로멜린이 포함되고; 세포벽 용균 효소에는 리소자임이 포함되고; 플라크 매트릭스 억제제에는 덱스트란제, 뮤타나제가 포함되고; 옥시다제에는 글루코스 옥시다제, 락테이트 옥시다제, 갈락토스 옥시다제, 요산 옥시다제, 퍼옥시다제, 예를 들어 양고추냉이 퍼옥시다제, 미엘로퍼옥시다제, 락토퍼옥시다제, 클로로퍼옥시다제가 포함된다. 옥시다제는 또한 항미생물 특성 이외에 미백/세정 활성을 갖는다. 이러한 작용제는 US 2,946,725 및 US 4,051,234 에 기재되어 있다. 다른 항미생물제에는 클로르헥시딘, 트리클로산, 트리클로산 모노포스페이트 및 향미제 오일, 예컨대 티몰이 포함된다. 트리클로산 및 이 유형의 다른 작용제는 US 5,015,466 및 US 4,894,220 에 개시되어 있다. 항-플라크 이익을 제공하는 이들 작용제는 치제 조성물의 약 0.01 중량％ 내지 약 5.0 중량％의 수준으로 존재할 수 있다.

본원에서 정의된 용어 "추잉검"은 씹기 적합하고 당업자에게 공지된 임의의 적합한 양, 바람직하게는 조성물의 2 중량％ 이상의 양의 엘라스토머를 포함하는 제과 조성물을 의미한다. 적합한 로젠지제 및 추잉검 성분은 예를 들어 US 4,083,955, US 6,770,264 또는 US 6,270,781 에 개시되어 있다. 바람직한 로젠지제는 WO 2008/074473 A2 의 실시예 19 및 20에 기재되어 있다. 바람직한 추잉검 조성물은 WO 2008/074473 A2 의 실시예 25 에 기재되어 있다.

본 발명에 따라 사용되는 조성물은 바람직하게는 엘라스토머 또는 여러 상이한 엘라스토머들의 혼합물을 포함한다. 엘라스토머성 물질은 일반적으로 당분야에 공지되어 있으나, 예시적 예로는 스티렌-부타디엔 고무 (SBR); 합성 검; 폴리이소부틸렌 및 이소부틸렌-이소프렌 공중합체; 천연 검; 치클; 천연 고무; 젤루통; 발라타; 구타페르카; 레키 카스피; 소르바 및 이들의 혼합물이 포함된다. 본 발명에 따라 사용되는 조성물은 엘라스토머를 바람직하게는 약 2 중량％ 내지 약 30 중량％, 보다 바람직하게는 약 5 중량％ 내지 약 25 중량％로 포함한다. 이들 수준은 추잉검의 바람직한 최종 질감에 의해 결정되는데, 이는 엘라스토머의 총 수준이 약 2％ 미만인 경우, 베이스 조성물이 탄성, 씹는 질감 및 응집성이 결핍되나, 약 30％ 초과 수준에서는 제형이 단단한 고무같이 되고, 단단한 씹는감을 유지하기 때문이다. 엘라스토머 용매는 엘라스토머 성분의 연화를 돕기 때문에 또한 바람직하게는 본 발명에 따라 사용되는 조성물에 존재한다. 본원에서 사용하기 위한 엘라스토머 용매의 바람직한 예에는 부분적으로 수소화된 우드 로진의 펜타에리트리톨 에스테르, 우드 로진의 펜타에리트리톨 에스테르, 부분적으로 이량체화된 로진의 글리세롤 에스테르, 중합된 로진의 글리세롤 에스테르, 톨유, 목재 또는 검 로진의 글리세롤 에스테르, 부분적으로 수소화된 로진의 글리세롤 에스테르, 부분적으로 수소화된 로진의 메틸 에스테르, 및 이들의 혼합물이 포함된다. 본 발명에 따라 사용되는 조성물은 엘라스토머 용매를 바람직하게는 약 2 중량％ 내지 약 50 중량％, 보다 바람직하게는 약 10 중량％ 내지 약 35 중량％로 포함한다.

본 발명에 따라 사용하기 위한 로젠지제는 예를 들어 이당류를 압축성 고체 담체 상에 분산시키고, 임의로 윤활제 (예를 들어, 스테아르산마그네슘) 와 같은 임의의 적절한 타정 보조제와 합하고, 정제로 압축하는, 당분야에서 인정된 압축 정제의 제조 기술에 의해 제조될 수 있다. 이러한 정제 제형화를 위한 고체 담체 성분은, 로젠지제가 입에서 유지되는 경우 구강/인두 점막과 접촉 및 흡수를 위해 로젠지제가 입에서 용이하게 용해되어 함유된 이당류 산을 타액 용액에서 방출시키도록, 타액-가용성 고체, 예컨대 냉각 수용성 전분 또는 단당류일 수 있다. 상기 기재된 제형의 pH는 약 4 내지 약 8.5의 범위일 수 있다. 본 발명에 따라 사용하기 위한 로젠지제는 또한 다른 분야에서 인정된 고체 단위 투여량 제제화 기술을 이용하여 제조될 수 있다.

본 발명의 구강세정제 또는 세구제는 EtOH 를 포함할 수 있거나, 또는 EtOH 를 포함하지 않을 수 있고, 예를 들어 클로로헥시딘과 같은 항미생물제 같은 기타 활성 성분을 포함할 수 있다. 본 발명에 따른 바람직한 구강세정제 또는 세구제는 아래와 같을 수 있다:

A 박하유 1.2 부

아르니카 틴트 3.0 부

몰약 틴트 3.0 부

트윈 5.0 부

B 스피리투스 90％ 50.0 부

C 벤조산나트륨 0.2 부

감미제 (예를 들어 아스파르탐) 0.02 부

증류수 100 까지

A 를 잘 혼합하고, B 를 교반하면서 첨가하고, 후속적으로 C 를 첨가한다. 제조후 48 시간 내에 얻어진 투명한 액체를 여과한다. 다른 바람직한 구강세정제는 WO 2008074473 A2 의 실시예 26 에 기재되어 있다.

액체이든 또는 고체이든, 투여 형태와 상관없이, 본 발명의 한 바람직한 구현예에서, 투여 형태는 상기 언급된 젖산균 군에 속한 미생물 또는 상기 미생물의 유사체 또는 단편이 환자의 구강과 접촉하는 것을 촉진하기 위해 일정 시간 동안 환자의 입에서 유지된다.

본원에서 사용되는 용어 "치실" 및 "치과용 테이프"는 치간 및 치은하 표면에서 축적된 분해되는 식품 물질을 몰아내고 제거하고, 구강에 축적된 세균, 플라크 및/또는 치석을 몰아내고 제거하는 물질을 지칭한다. 치실 또는 치과용 테이프는 본 발명에 따른 상기 기재된 미생물 이외에, 세정제, 연마제, 타르타르 제어 성분, 미백제, 계면활성제 및/또는 활성 성분, 예컨대 플루오라이드, 항미생물제, 화학요법제 또는 항생제를 추가로 함유할 수 있다. 추가 첨가제는 플라크 형성 억제제, 향미제 및 착색제이다. 치실 또는 치과용 테이프는 당업자에게 공지된 임의의 적합한 형태, 예를 들어 PTFE (테플론 (Teflon)) 치실 형태 (예를 들어, US 3,664,915, US 3,953,566, US 3,962,153, US 4,096,227, US 4,187,390, US 4,256,806, US 4,385,093, US 4,478,665, US 4,776,358, US 5,033,488, US 5,209,251, US 5,220,932, US 5,518,012, US 5,718,251, US 5,765,576 또는 US 5,911,228 에 기재됨), 단사 치간 디바이스 형태 (예를 들어, US 3,800,812, US 4,974,615, US 5,760,117, US 5,433,226, US 5,479,952, US 5,503,842, US 5,755,243, US 5,884,639, US 6,003,525 또는 US 6,027,592 에 기재됨) 또는 생체성분 테이프 형태일 수 있다. 바람직하게는, 치실 또는 치과용 테이프는 엘라스토머성 코팅된 단사 형태 (예를 들어, US 20050226820 에 기재됨) 또는 배향된 열가소성 기재 치과용 테이프 형태 (예를 들어, US 20020144704 에 기재됨)일 수 있다.

상기 기재된 구강 관리 미용 조성물, 특히 항치석 조성물, 항-우식증 조성물 및 항구취 조성물은 인간 구강 투여의 범위, 뿐만 아니라 수의 구강 투여, 바람직하게는 비-인간 포유동물, 보다 바람직하게는 애완동물의 구강 투여의 범위로 사용될 수 있다. 항우식성 미용 조성물이 수의 구강 투여의 범위로 사용되는 경우, 조성물은 당업자에 의해 공지된 바와 같은 이러한 투여에 적합한 추가 성분을 함유할 수 있다.

본 발명에 따른 약제학적 조성물은 바람직하게는 약제학적으로 허용되는 담체 또는 부형제를 추가로 포함한다.

약제학적 조성물은 본 발명에 따라 사용되는 조성물과 관련하여 기재된 치료 유효량의 상기 언급된 젖산균 군에 속한 미생물, 또는 상기 미생물의 유도체, 돌연변이체 또는 유사체 또는 단편을 포함하고, 다양한 형태, 예를 들어 고체, 액체, 분말, 수성, 동결건조된 형태로 제형화될 수 있다.

약제학적 조성물은 본원에 기재된 바와 같이 약제학적으로 허용되는 담체와 함께 환자에게 투여될 수 있다. 특정 구현예에서, 용어 "약제학적으로 허용되는"은 동물 및 보다 구체적으로 인간에서 사용하기 위해 규제 기관 또는 다른 일반적으로 인정된 약전에 의해 승인된 것을 의미한다. 본 발명에 따라 사용되는 바람직한 약제학적 조성물은 1％ (w/w) 내지 6％ (w/w)의 범위의 락토스를 함유하지 않는다. 약제학적 조성물이 1％ (w/w) 이하의 락토스, 예를 들어 1％ (w/w) 미만, 바람직하게는 0.9％ (w/w) 미만, 0.8％ (w/w) 미만 등의 락토스를 함유하거나, 약제학적 조성물이 6％, 7％, 8％ (w/w) 초과 등의 락토스를 함유하는 것이 또한 바람직하다. 그러나, 대안으로, 약제학적 조성물이 락토스를 함유하지 않는 것이 또한 바람직하다.

용어 "담체"는 치료제와 함께 투여되는 희석제, 아쥬반트, 부형제 또는 비히클을 지칭한다. 이러한 담체는 약제학적으로 허용된다, 즉 사용되는 투여량 및 농도에서 수용자에게 무독성이다. 이는 바람직하게는 등장성, 저장성 또는 약간 고장성이고, 상대적으로 낮은 이온 강도 (예컨대, 수크로스 용액에 의해 제공됨)를 갖는다. 이러한 약제학적 담체는 멸균 액체, 예컨대 물 및 오일 (석유, 동물, 식물 또는 합성 유래의 오일, 예컨대 땅콩유, 대두유, 광유, 참기름 등을 포함함)일 수 있다. 염수 용액 및 수성 덱스트로스 및 글리세롤 용액이 또한 액체 담체, 구체적으로 주사가능한 용액으로 사용될 수 있다. 적합한 제약 부형제에는 전분, 글루코스, 수크로스, 젤라틴, 맥아, 쌀, 곡분, 백악, 실리카 겔, 스테아르산나트륨, 글리세롤 모노스테아레이트, 탈크, 나트륨 이온, 건조된 탈지유, 글리세롤, 프로필렌 글리콜, 물, 에탄올 등이 포함된다. 부형제는 상기 기재된 바와 같이 락토스를 함유할 수 있으며, 가장 바람직하게는 락토스를 함유하지 않는다. 필요하다면, 조성물은 또한 소량의 습윤제 또는 유화제 또는 pH 완충제를 함유할 수 있다. 이들 조성물은 용액, 현탁액, 에멀젼, 정제, 환제, 캡슐, 산제, 서방형 제형 등의 형태를 취할 수 있다. 구강 제형은 표준 담체, 예컨대 제약 등급의 만니톨, 전분, 스테아르산마그네슘, 나트륨 사카린, 셀룰로스, 탄산마그네슘 등을 포함할 수 있다. 적합한 약제학적 담체의 예는 문헌 ["Remington's Pharmaceutical Sciences" by E.W. Martin]에 기재되어 있다. 탈지유, 탈지유 분말, 비-우유 또는 비-락토스 함유 생성물이 또한 사용될 수 있다. 탈지유 분말은 통상적으로 포스페이트 완충된 염수 (PBS)에 현탁되고, 단백질성 및 살아있는 오염물질을 박멸하기 위해 오토클레이브되거나 또는 여과된 후, 동결 건조, 열 건조, 진공 건조 또는 동결건조된다. 약제학적 담체로서 작용할 수 있는 물질의 몇몇 다른 예는 당, 예컨대 글루코스 및 수크로스; 전분, 예컨대 옥수수 전분 및 감자 전분; 셀룰로스 및 그의 유도체, 예컨대 나트륨 카르복시메틸셀룰로스, 에틸셀룰로스 및 셀룰로스 아세테이트; 분말 트라가칸트; 맥아; 젤라틴; 탈크; 스테아르산; 스테아르산마그네슘; 황산칼슘; 탄산칼슘; 식물성유, 예컨대 땅콩유, 면실유, 참기름, 올리브유, 옥수수유 및 테오브로마 오일; 폴리올, 예컨대 프로필렌 글리콜, 글리세린, 소르비톨, 만니톨 및 폴리에틸렌 글리콜; 한천; 알긴산; 발열원-비함유 물; 등장성 염수; 크랜베리 추출물 및 포스페이트 완충 용액; 탈지유 분말; 뿐만 아니라 제약 제형에서 사용되는 다른 비독성 상용성 물질, 예컨대 비타민 C, 에스트로겐 및 에키나시아이다. 습윤제 및 윤활제, 예컨대 나트륨 라우릴 술페이트, 뿐만 아니라 착색제, 향미제, 윤활제, 부형제, 타정제, 안정화제, 항산화제 및 보존제가 또한 존재할 수 있다.

바람직하게는, 구강 제형은 본원에 기재된 바와 같이 락토스를 함유하고, 가장 바람직하게는 락토스를 함유하지 않는다. 당분야에 익히 공지된 구강 투여에 적합한 다양한 담체 및/또는 부형제는 본 발명의 목적을 위해 사용될 수 있다. 필요하다면, 비-우식원성 조성물은 다양한 공지된 첨가제, 예를 들어 보존제, 경화제, 윤활제, 윤화제, 안정화제, 에센스 등을 추가로 함유할 수 있다. 이러한 조성물은 환자에게 적절한 투여 형태를 제공하기 위해 치료 유효량의 상기 언급된 화합물 (바람직하게는 정제된 형태) 을 적합한 양의 담체와 함께 함유할 것이다. 제형은 투여 방식에 맞아야 한다.

본 발명의 바람직한 조성물은 1% (w/w) 내지 6% (w/w) 범위로는 락토오스를 포함하지 않는다. 조성물은 1% (w/w) 이하의 락토오스, 예를 들어 1% 미만, 바람직하게는 0.9% (w/w), 0.8% (w/w) 미만의 락토오스를 포함하지 않거나, 또는 6%, 7%, 8% 등 (w/w) 초과의 락토오스를 포함하는 것이 바람직하다. 대안적으로, 또한 바람직하게는 조성물은 락토오스를 포함하지 않는다.

추가 국면에서, 본 발명의 조성물은 그의 결합성 미생물 단편을 화장용으로, 경구용으로 또는 약제학적으로 허용되는 담체 또는 부형제와 제형화하는 단계를 포함하여 제조될 수 있다. 바람직하게는, 상기 미생물은 상기 본원에 기재된 바와 같이 기탁된 미생물, 또는 그의 돌연변이체, 유도체, 유사체 또는 단편이다. 본 발명에 따라 바람직한 조성물은 1% (w/w) 내지 6% (w/w) 범위로는 락토오스를 포함하지 않는다. 또한 조성물이 1%(w/w) 이하의 락토오스, 예를 들어 1% 미만, 바람직하게는 0.9% (w/w), 0.8% (w/w) 미만 등의 락토오스를 포함하거나, 또는 조성물이 6%, 7%, 8% 등을 초과하여 (w/w) 락토오스를 포함하는 것이 바람직하다. 대안적으로, 또한 바람직하게는 조성물은 락토오스를 포함하지 않는다.

본 발명의 조성물은 바람직하게는 잠재적으로는 열 불활성화되거나 또는 동결건조된 형태인 결합성 미생물을, 조성물의 고체 형태 mg 당 10² 내지 10¹² 세포, 바람직하게는 10³ 내지 10⁸ 세포의 양으로 함유한다. 액체 형태의 조성물인 경우, 미생물의 양은 ml 당 10² 내지 10¹³ 세포이다.

그러나, 특별한 조성물을 위해서는 본 발명의 미생물의 양은 본원에 기재된 것과 상이할 수 있다.

바람직하게는, 본 발명의 조성물 중의 결합성 미생물의 농도는 조성물의 총 질량 대비 0.01 중량% 내지 10 중량% 이다. 더욱더 바람직하게는, 본 발명의 조성물 내 결합성 미생물의 농도는 0.025 중량% 내지 2 중량% 이다. 상기 기재된 바와 같이, 결합제 세포 대신 단편이 사용되는 경우, 단편의 농도는 결합제 세포의 펩티도글리칸 함량과 동일하게 선택된다.

본 발명에 따르면, 용어 식료품은 모든 식용가능 및 음용가능 식품 및 음료를 포괄한다. 따라서, 상기 미생물, 그의 불활성화 형태, 유도체, 유사체 또는 단편은 식품 또는 음료에 포함될 수 있다. 이들은 예를 들면 검, 스프레이, 음료, 캔디, 이유식, 아이스크림, 냉동 디저트, 스위트 샐러드 드레싱, 우유 조제물, 치즈, 쿠아르크, 무-락토스 요구르트, 산성화 우유, 커피 크림 또는 거품 크림 등이다.

우유-기재의 제품들이 본 발명의 영역 내에서 고려된다. 그러나, 우유는 소, 염소, 양, 버펄로, 얼룩말, 말, 당나귀, 또는 낙타 등과 같은 동물 유래의 것을 의미하는 것으로 이해된다. 우유는 천연 상태, 재구성 우유, 탈지 우유, 또는 예를 들면 지방, 효모 추출물의 단백질, 펩톤 및/또는 계면활성제와 같이 세균의 생장 또는 발효 우유의 차후 처리에 필요한 화합물이 보충된 우유일 수 있다. 우유라는 용어는 보통 식물성 우유로 지칭되는 것들, 다시 말하자면 해당 추출물이 용액 또는 콜로이드성 현탁액 중에 단백질을 함유하며, 화학적 작용, 산 발효 및/또는 열에 의해 응고가능한, 콩과 식물 (대두, 이집트콩, 렌즈콩 등) 또는 지방종자 (평지, 대두, 참깨, 면 등) 와 같이, 처리되었거나 그렇지 않은 식물 재료의 추출물에도 적용된다. 마지막으로, 우유라는 용어는 동물 우유와 식물성 우유의 혼합물을 나타내기도 한다.

본 발명의 결합성 미생물, 그의 불활성화 형태, 또는 유도체 또는 유사체 또는 단편이 유사한 내용물을 가지는 요구르트 등에 첨가되는 경우, 약 10⁵-10⁷ 세포 또는 동등한 양의 그의 단편/ml의 농도로 본 발명의 미생물을 첨가하는 것이면 일반적으로 충분하다. 그러한 경우, 뮤탄스 연쇄상구균, 바람직하게는 스트렙토코커스 뮤탄스에 의한 생물막의 형성을 완전히 예방 또는 억제하는 것이 가능하고, 이에 따라 음료 자체의 품질에서 현저한 부작용없이 우식증 유발성 균주에 의해 유발되는 치석, 구취 또는 치아 우식증을 예방하거나 또는 그의 발생을 둔화시키는 것이 가능하다.

그와 같은 식품, 음료 또는 사료는 식품, 음료 또는 사료의 미가공 또는 조리된 재료에 활성 성분을 첨가하는 것을 포함하는 일반적인 식품 및 음료 또는 사료 제조 방법에 의해 제조될 수 있다. 본 발명에 따른 식품, 음료 또는 사료는 식품, 음료 또는 사료에 일반적으로 사용되는 것과 동일한 방식으로 성형 및 과립화될 수 있다. 상기 성형 및 과립화 방법에는 과립화 방법 예컨대 유동 층 과립화, 진탕 과립화, 압출 과립화, 롤링 과립화, 기체 스트림 과립화, 압밀 성형 과립화, 크래킹 과립화, 분무 과립화, 및 사출 과립화, 코팅 방법 예컨대 팬 코팅, 유동 층 코팅, 및 건조 코팅, 퍼프 (puff) 건조, 과스트림법, 발포 매트법, 팽창법 예컨대 마이크로파 배양법, 및 압출 과립화 기계 및 압출기를 사용한 압출법이 포함된다.

본 발명의 식품, 음료 또는 사료에는 활성 성분으로서 본 발명의 미생물, 그의 불활성화 형태, 유도체 또는 유사체 또는 단편을 포함하는 모든 식품, 음료 또는 사료가 포함된다. 생성되는 식품, 음료 또는 사료가 구취를 감소시키는 그의 활성을 제공할 수만 있다면, 상기 식품, 음료 또는 사료 중의 활성 성분은 어떠한 농도로도 구체적으로 제한되지는 않는다. 활성 성분의 농도는 해당 활성 성분을 포함하는 식품, 음료 또는 사료의, 또는 본원에서 기술되는 세포 수들과 관련하여, 바람직하게는 0.001 내지 100 중량％, 더욱 바람직하게는 0.01 내지 100 중량％, 가장 바람직하게는 0.1 내지 100 중량％이다.

활성 성분이 첨가되는 구체적인 식품 또는 음료에는 예를 들면 쥬스, 활력 음료, 스프, 차, 신 우유 음료, 낙농 제품 예컨대 발효 우유, 빙과류, 버터, 치즈, 가공 우유 및 탈지 우유, 육류 제품 예컨대 햄, 소시지, 및 햄버거, 생선 육류 케이크 제품, 난류 (卵類) 제품, 예컨대 조미 난류 롤 및 난류 응고유, 과자류, 예컨대 쿠키, 젤리, 스낵, 및 츄잉 검, 빵, 국수, 피클, 훈제 제품, 건조 생선 및 조미료가 포함된다. 식품 또는 음료의 형태에는 예를 들면 분말 식품, 캔디형 (sweet-like) 식품, 병입 식품, 캔입 식품, 레토르트 식품, 캡슐 식품, 정제 식품 및 유체 식품이 포함된다.

유아가 섭식할 본 발명에 따른 식품 또는 음료는 바람직하게는 유아용의 영양 조성물이다. 그와 같은 유아용 영양 조성물에는 유아용으로 제조된 개질 우유, 단백질-분해 우유, 특정 영양 개질 우유, 또는 유아 식품 및 아동용으로 제조된 식품이 포함된다. 유아용 영양 조성물의 형태에는 건조 및 분쇄된 분말 우유, 및 유아 식품이 포함되며, 아이스크림, 발효 우유, 및 유아 섭취용 젤리와 같은 일반 식품도 포함되나, 구체적으로 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명에 따른 유아용 영양 조성물, 및 또한 동물, 특히 애완 동물용 영양 식품 또는 사료 조성물은 원칙적으로 단백질, 지질, 당류, 비타민 및/또는 무기질로 구성된다. 상기 영양 조성물에서, 활성 성분은 이러한 성분들과 블렌딩된다. 단백질에는 우유 단백질, 예컨대 탈지 우유, 카세인, 치즈 유장, 유장 단백질 농축물, 및 유장 단백질 분리물 및 그의 분획 예컨대 알파 s-카세인, 베타-카세인, 알파-락토알부민 및 베타-락토글로뷸린이 포함된다. 또한, 난류 단백질 예컨대 난류 난황 단백질, 난류 흰자 단백질, 및 오발부민, 또는 대두 단백질, 예컨대 탈지 대두 단백질, 분리 대두 단백질, 및 농축 대두 단백질이 사용될 수 있다. 이밖에, 밀 글루텐, 생선 육류 단백질, 소 육류 단백질 및 콜라겐과 같은 단백질들이 만족스럽게 사용될 수도 있다. 또한, 이러한 단백질들의 분획, 그의 산 또는 효소 처리 유래의 펩티드, 또는 유리 아미노산 역시 만족스럽게 사용될 수 있다. 상기 유리 아미노산은 질소 공급원으로서 기능할 수 있으며, 특정 생리학적 작용을 제공하기 위하여 추가적으로 사용될 수 있다. 그와 같은 유리 아미노산에는 예를 들면 타우린, 아르기닌, 시스테인, 시스틴 및 글루타민이 포함된다. 상기 지질에는 동물 지방 및 오일 예컨대 우유 지방, 라드, 쇠고기 지방 및 생선 오일, 식물성 오일 예컨대 대두 오일, 평지씨 오일, 옥수수 오일, 코코넛 오일, 야자 오일, 야자인 오일, 홍화 오일, 들깨 오일, 아마씨 오일, 달맞이꽃 오일, 중간 사슬 지방산 트리글리세리드, 및 면실 오일, 세균 생성 지방 및 오일, 그리고 이들의 분획화 오일, 이들의 수소화 오일, 및 이들의 에스테르 교환 오일이 포함된다. 블렌딩될 지질의 양은 용도에 따라 달라진다.

식품 및 사료, 특히 애완동물 사료의 추가적인 바람직한 성분은 오메가-6 지방산 및 오메가-3 지방산이다. 특히 바람직한 것은 옥수수, 콩, 캐놀라, 홍화 및 해바라기 오일, 전곡 및/또는 가금육의 바디 팻 형태인 리놀레산; 바람직하게는 가금육의 바디 팻, 살코기, 난류 노른자 및/또는 어유 형태의 아라키돈산; 바람직하게는 까치밥나무 열매 종자 오일, 서양지치 오일 및/또는 달맞이꽃 오일의 형태인 감마 리놀레산; 바람직하게는 gla 유래의 비장, 신장, 부신 및/또는 대사된 형태인 디호모감마 리놀렌산; 바람직하게는 아마기름, 캐놀라, 대두 및/또는 호두 오일 형태인 알파 리놀렌산; 바람직하게는 냉수성 어류 및 그의 오일 형태인 에이코사펜타엔산; 바람직하게는 냉수성 어류 및 그의 오일 형태인 도코사헥사엔산이다.

상기 당류에는 예를 들면 1종 이상의 전분, 가용성 다당류, 덱스트린, 단당류 예컨대 슈크로스, 본원에서 기술되는 바와 같은 락토스, 말토스, 글루코스, 및 프럭토스 및 기타 올리고당류가 포함된다. 바람직한 당류에는 글루코스, 프럭토스, 꿀, 갈락토스, 락토스, 슈크로스, 말토스, 덱스트린, 글리코겐 및 전분이 포함된다. 그러나, 상기 기재된 바와 같이, 글루코오스, 프럭토스, 꿀, 갈락토오스, 락토스, 수크로스 및 말토스의 최대 함량은 전체 조성물의 20 중량%, 더욱 바람직하게는 전체 조성물의 5 중량%, 가장 바람직하게는 전체 조성물의 2 중량% 이다. 더욱더 바람직하게는, 20 중량%, 더욱 바람직하게는 5 중량%, 가장 바람직하게는 2 중량% 의 상기 언급된 최대 함량이 사탕수수, 캐러멜, 옥수수 당밀, 옥수수 시럽, 덱스트로오스, 프룩토오스, 갈락토오스, 글루코오스, 꿀, 락토오스, 레불로오스, 말토오스, 만니톨, 사카린, 소르비톨, 수크로오스 및 자일리톨의 군의 모든 물질들 전체에, 가장 바람직하게는 단당류 및 이당류 전체에 적용된다.

셀룰로오스, 헤미셀룰로오스, 펙틴, 식물 검 및 점액, 사탕무우박, 구아 검, 검 아라빅, 잔탄 검 및 커스트 빈 검으로부터 선택되는 식이 섬유가 또한 바람직하다. 그러한 당류의 양은 바람직하게는 영양 조성물 중 전체 고형분에 대해 중량 기준으로 40 내지 80% 이다. 더욱이, 아스파탐과 같은 인공 감미료도 만족스럽게 사용될 수 있다. 인공 감미료의 양은 적절하게는 영양 조성물의 전체 고형물에 중량 기준으로 0.05 내지 1.0% 이다.

상기 비타민에는 필수 성분으로서의 라이코펜이 포함되며, 해당 비타민이 유아 또는 애완 동물에게 투여될 수 있기만 하다면, 추가적으로 예를 들어 비타민 예컨대 비타민 A, 비타민 B 군, 비타민 C, D, 및 E, 및 비타민 K 군, 엽산, 판토텐산, 니우틴아미드, 카르니틴, 콜린, 이노시톨 및 바이오틴이 포함되나, 이에 제한되는 것은 아니다. 그와 같은 비타민은 바람직하게는 유아용 영양 조성물 중 총 고체 당 10 mg 내지 5 g 중량으로 존재한다. 유아 및/또는 동물, 바람직하게는 애완 동물용 영양 조성물을 위한 바람직한 비타민은 하기를 포함한다:

비타민 A (레티놀), 및/또는 전구체로서의 베타 카로틴. 이 비타민은 바람직하게는 간, 간유, 당근, 녹색잎의 채소류, 난류 노른자 및/또는 황색 과일의 형태로 또는 비타민 A 및/또는 베타-카로틴의 합성 형의 형태로 존재한다.

비타민 D (칼시페롤). 이 비타민은 바람직하게는 큰 넙치 및/또는 대구 간유, 염수어, 치즈, 요거트 및/또는 난류의 형태로 또는 비타민 D 의 합성 형태의 형태로 존재한다.

비타민 E (토코페롤). 이 비타민은 바람직하게는 씨눈, 옥수수, 넛트, 종자, 시금치 및/또는 여타 녹색잎 야채들, 아스파라거스, 식물성 오일의 형태로 또는 비타민 E 의 합성 형태의 형태로 존재한다.

비타민 K (나프토퀴논). 이 비타민은 바람직하게는 양배추, 콜리플라워, 시금치 및/또는 여타 녹색잎 야채들, 곡물, 대두 및/또는 여타 야채들의 형태로 또는 비타민 K 의 합성 형태의 형태로 존재한다. 바람직하게는 식품 및 사료는 메나디온을 함유하지 않는다.

비타민 B1 (티아민). 이 비타민은 바람직하게는 밀의 씨눈, 쌀 및/또는 여타 통곡물, 살코기 (특히 돼지고기), 간, 생선, 효모, 말린 콩, 완두콩 및/또는 대두의 형태로 또는 비타민 B1 의 합성 형태의 형태로 존재한다.

비타민 B2 (리보플라빈). 이 비타민은 바람직하게는 살코기, 간, 어류, 난류, 효모, 치즈, 콩과식물들, 넛트 및/또는 녹색잎 야채들의 형태로 또는 비타민 B2 의 합성 형태의 형태로 존재한다.

비타민 B3 (나이아신). 이 비타민은 바람직하게는 간, 살코기, 가금육, 생선, 넛트, 효모, 콩과식물들, 아스파라거스, 종자들 및/또는 녹색잎 야채들의 형태로 또는 비타민 B3 의 합성 형태의 형태로 존재한다.

비타민 B5 (판토텐산). 이 비타민은 바람직하게는 난류, 생선, 살코기, 콩과식물들, 효모, 브로콜리 및/또는 양배추과의 여타 야채들, 감자 및/또는 고구마의 형태로 또는 비타민 B5 의 합성 형태의 형태로 존재한다.

비타민 B6 (피리독신). 이 비타민은 바람직하게는 육류, 생선, 난류, 바나나 및/또는 통곡물의 형태로 또는 비타민 B6 의 합성 형태의 형태로 존재한다.

비타민 B8 (비오틴). 이 비타민은 바람직하게는 날계란 노른자, 간 및/또는 야채류의 형태로 또는 비타민 B8 의 합성 형태의 형태로 존재한다.

비타민 B9 (엽산, 폴레이트). 이 비타민은 바람직하게는 당근, 효모, 간, 노른자, 멜론, 복숭아, 호박, 콩, 귀리, 통밀 및/또는 녹색잎 야채들의 형태로 또는 비타민 B9 의 합성 형태의 형태로 존재한다.

비타민 B12 (코브알라민). 이 비타민은 바람직하게는 생선, 간, 육류, 가금육, 난류 및/또는 치즈의 형태로 또는 비타민 B12 의 합성 형태의 형태로 존재한다.

비타민 C (아스코르브산). 이 비타민은 바람직하게는 감귤류 과일쥬스 또는 감귤박, 딸기류, 토마토, 콜리플라워, 감자, 녹색잎 야채들 및/또는 피망의 형태로 또는 비타민 C 의 합성 형태의 형태로 존재한다. 칼슘 아스코르베이트와 같은 적절한 형태의 공급물이 만성 관절 및 근골격계 장애를 앓는 개들에 대한 그의 유익한 유효성 대문에 바람직하다. 강아지에게는, 그러한 장애 발생을 예방하는데 도움이 된다.

또한, 상기 무기질에는 칼슘, 마그네슘, 칼륨, 나트륨, 철, 구리, 아연, 인, 염소, 망간, 셀레늄 및 요오드가 포함된다. 그와 같은 무기질은 바람직하게는 유아용 영양 조성물 중 총 고체 당 1 mg 내지 5 g 중량으로 존재한다.

상기한 성분들 이외에도, 본 발명에 따라 사용되는 유아용 영양 조성물, 및 또한 동물, 바람직하게는 애완 동물용 식품 또는 사료 조성물은 영양 조성물에 바람직하게 블렌딩되는 임의의 성분, 예를 들면 식이 섬유, 뉴클레오티드, 핵산, 향미제, 및 착색제와 함께 블렌딩될 수 있다.

본 발명에 따른 식품 또는 음료는 건강 식품 또는 음료, 또는 우식증의 예방 및/또는 치료 및/또는 구취의 예방 및/또는 치료 및/또는 치석의 예방 및/또는 치료를 위한 기능성 식품 또는 음료로서 사용될 수 있다.

본 발명에 따른 식품 또는 음료가 섭취될 때, 섭취되는 양이 구체적으로 제한되는 것은 아니다. 섭취되는 양은 일반적으로 활성 성분의 총량 기준 매일 0.1 내지 50 g, 바람직하게는 0.5 g 내지 20 g 이다.

상기 식품 또는 음료는 하루에서 5 년까지, 바람직하게는 2 주 내지 1 년의 기간 동안 상기 양으로 계속해서 섭취된다. 본원에서, 섭취되는 양은 식품 또는 음료를 섭취하는 개체의 증상의 중증도, 그의 연령 및 체중 등에 따라 적절한 범위로 조정될 수 있다.

본 발명의 조성물은, 결합성 미생물 또는 그의 분절에 추가하여, 곡물, 겨, 지방종자 가루, 동물-유래 미가공 사료 재료, 기타 미가공 사료 재료 및 정제 제품을 포함한 미가공 사료 재료에 전기한 바와 같은 활성 성분을 함유할 수 있다. 상기 곡물에는 예를 들면 마일 (mile), 밀, 보리, 귀리, 호밀, 현미, 메밀, 조, 중국 조, 피, 옥수수, 및 대두가 포함된다. 상기 겨에는 예를 들면 쌀겨, 탈지 쌀겨, 왕겨, 최저-등급 밀가루, 맥아, 보리 겨, 체질 펠렛 (screening pellet), 옥수수 겨, 및 옥수수 눈이 포함된다. 상기 지방종자 가루에는 예를 들면 대두 가루, 대두 분말, 아마씨 가루, 면실 가루, 땅콩 가루, 홍화 가루, 코코넛 가루, 야자 가루, 참깨 가루, 해바라기 가루, 평지씨 가루, 케이폭 (kapok) 씨 가루 및 겨자 가루가 포함된다. 동물-유래의 미가공 사료 재료에는 예를 들면 생선 분말, 수입 분말, 전립소맥분, 및 코스트 (coast) 가루, 생선 가용성물질, 육류 분말, 육류 및 뼈 분말, 혈액 분말, 분해 모발, 뼈 분말, 도살 부산물, 깃털 가루, 누에 번데기, 탈지 우유, 카세인, 건조 유장 및 크릴이 포함된다. 기타 미가공 사료 재료에는 예를 들면 식물 줄기 및 잎 예컨대 알팔파, 건초 더미 (hey cube), 알팔파 잎 가루, 및 개아카시아 잎 가루, 옥수수 가공 산업 유래의 부산물, 예컨대 옥수수 글루텐 가루, 옥수수 글루텐 사료 및 옥수수 함침액, 전분, 당, 효모, 발효 산업 유래의 부산물 예컨대 맥주 잔류물, 맥아 뿌리, 증류주 잔류물 및 콩 소스 잔류물, 그리고 농업 부산물 예컨대 감귤 가공 잔류물, 대두 응고유 잔류물, 커피 잔류물, 및 코코아 잔류물, 카사바, 잠두, 구아 가루, 해초, 스피룰리나 (spirulina) 및 클로렐라가 포함된다. 상기 정제 제품에는 예를 들면 단백질 예컨대 카세인 및 알부민, 아미노산, 전분, 셀룰로스, 당류 예컨대 슈크로스 및 글루코스, 무기질 및 비타민이 포함된다.

본 발명의 조성물은 추가로 하나 이상의 첨가제를 함유할 수 있다. 상기 식품용 첨가제는 식품, 음료 또는 사료용 첨가제를 제조하는 일반적인 방법에 의해 제조될 수 있다. 필요할 경우, 식품, 음료 또는 사료에서의 일반적인 용도를 위한 첨가제들, 예를 들면 문헌 [Food Additive Handbook] (문헌 [The Japan Food Additives Association; issued on January 6, 1997])에 기술되어 있는 첨가제들이 만족스럽게 첨가될 수 있는데, 감미제, 착색제, 보존제, 증점제 및 안정화제, 항산화제, 색상 고정제, 표백제, 방부제, 검 베이스, 고미제, 효소, 증백제, 산성화제, 조미료, 에멀션화제, 강화제, 제조용 제제, 향미제, 및 향신료 추출물이 포함된다. 또한, 약제학적 정제에 대하여 전기에 언급하였던 통상적인 당류, 전분, 무기 물질, 식물 분말, 부형제, 분해제, 윤활제, 바인더, 계면활성제, 및 가소제가 만족스럽게 첨가될 수 있다.

감미료에는, 브랏제인 (Brazzein); 커쿨린 (Curculin); 에리트리톨 (Erythritol); 글리시리진 (Glycyrrhizin); 글리세롤 (Glycerol), E422; 수소첨가된 전분 가수분해물; 이눌린 (Inulin); 이소말트 (Isomalt), E953; 락티톨 (Lactitol), E966; 루오 한 구오 (Luo han guo); 마빈린 (Mabinlin); 말티톨 (Maltitol), E965; 말토-올리고당 (Malto-oligosaccharide); 만니톨 (Mannitol), E421; 미라쿨린 (Miraculin); 모나틴 (Monatin); 모넬린 (Monellin); 펜타딘 (Pentadin); 소르비톨 (Sorbitol), E420; 스테비아 추출물 또는 스테비롤 글리코시드, 특히 스테비오사이드 (Stevioside), 레바우디시드 A (Rebaudioside A), 레바우디시드 C (Rebaudioside C), 둘코시드 A (Dulcoside A), 루부소시드 (Rubusoside), 스테비오비오시드 H (Steviolbioside H) 및 레바우디오시드 B (Rebaudioside B); 타가토오스 (Tagatose); 타우마틴 (Thaumatin), E957; 자일리톨 (Xylitol), E967; 아세술팜 칼륨 (Acesulfame potassium), E950; 알리탐 (Alitame); 아스파탐 (Aspartame), E951 ; 아스파탄-아세술팜의 염, E962; 시클라메이트 (Cyclamate), E952; 둘신 (Dulcin); 글루신 (Glucin); 네오헤스페리딘 디히드로칼콘 (Neohesperidin dihydrochalcone), E959; 네오탐 (Neotame); P-4000; 사카린 (Saccharin), E954; 수크랄로오스 (Sucralose), E955; 리코라이스 (감초); 자일로오스 및 라칸카 (rakanka) (여주 (Momordica grosvenori) 열매) 가 포함된다.

착색제에는 카로틴계 및 강황계 올레오레신, 플라보놀드, 캐러멜 색소, 스피루리나 색소, 클로로필, 자색 고구마 색소, 자주색 참마 색소, 들깨 색소 및 블루베리 색소가 포함된다.

상기 보존제에는 예를 들면 나트륨 술파이트, 벤조에이트, 벤조인 추출물, 소르베이트, 및 프로피오네이트가 포함된다.

상기 증점제 및 안정화제에는 예를 들면 고무 예컨대 아라비아 고무 및 크산탄 고무, 알기네이트, 키틴, 키토산, 알로에 추출물, 구아 고무, 히드록시프로필 셀룰로스, 나트륨 카세인, 옥수수 전분, 카르복시메틸 셀룰로스, 젤라틴, 아가, 덱스트린, 메틸 셀룰로스, 폴리비닐 알콜, 미세섬유 셀룰로스, 미세결정질 셀룰로스, 해초 셀룰로스, 나트륨 폴리아크릴레이트, 나트륨 폴리포스페이트, 카라기난 또는 효모 세포 벽이 포함된다.

상기 항산화제에는 예를 들면 비타민 C 군, 나트륨 에틸렌디아민테트라아세테이트, 칼슘 에틸렌디아민테트라아세테이트, 에리토르브산, 오리자놀, 카테킨, 퀘르세틴, 정향나무 추출물, 효소-처리 루틴, 사과 추출물, 참깨 씨 추출물, 디부틸히드록시톨루엔, 회향 추출물, 양고추냉이 추출물, 미나리 추출물, 차 추출물, 토코페롤, 평지씨 추출물, 커피 콩 추출물, 해바라기 씨 추출물, 페룰리오산, 부틸히드록시아니솔, 블루베리 잎 추출물, 밀랍 추출물, 후추 추출물, 봉선화 추출물, 마늘산, 유칼립투스 추출물, 및 로즈마리 추출물이 포함된다.

상기 색상 고정제에는 예를 들면 나트륨 니트라이트가 포함된다. 상기 표백제에는 예를 들면 나트륨 술파이트가 포함된다.

상기 방부제에는 예를 들면 o-페닐 페놀이 포함된다. 상기 검 기제에는 예를 들면 아세틸리시놀레에이트 메틸, 우루시 왁스, 에스테르 검, 엘레미 수지, 우루큐리 왁스, 카우리검, 카르나우바왁스, 글리세린 지방산 에스테르, 경랍 왁스, 코파이바발삼, 코팔 수지, 고무, 쌀 겨 왁스, 케인 왁스, 셸락, 젤루통, 슈크로스 지방산 에스테르, 탈중합 천연 고무, 파라핀 왁스, 전나무 발삼, 프로필렌 글리콜 지방산 에스테르, 분말화 펄프, 분말화 쌀 외피, 호호바 오일, 폴리이소부틸렌, 폴리부텐, 미세결정질 왁스, 유향수지 검, 밀랍 및 칼슘 포스페이트가 포함된다. 상기 고미제에는 예를 들면 이소-알파-비터산, 카페인, 카와라타케 (운지 (Coriolus versieolor)) 추출물, 기나수피 (redbark cinchona) 추출물, 황벽나무 수피 추출물, 용담 뿌리 추출물, 향신료 추출물, 효소적으로 개질된 나린진, 자마이카 카시아 (Jamaica cassia) 추출물, 테아브로민, 나린진, 카시아 추출물, 압생트 추출물, 이소도니스 추출물, 올리브 차, 비터 오렌지 (시트러스 아루란튬 (Citrus aurantium)) 추출물, 호프 추출물 및 웜우드 추출물이 포함된다. 상기 효소에는 예를 들면 아밀라제, 트립신 또는 레닛 (rennet) 이 포함된다. 상기 증백제에는 예를 들면 우루시 왁스 및 재팬 왁스가 포함된다. 상기 산성화제에는 예를 들면 아디프산, 이타카니아산, 시트르산, 숙신산, 나트륨 아세테이트, 타르타르산, 이산화 탄소, 젖산, 파이트산, 푸마리오산, 말산 및 인산이 포함된다. 상기 조미료에는 예를 들면 아미노산 예컨대 아스파라긴, 아스파르트산, 글루탐산, 글루타민, 알라닌, 이소류신, 글리신, 세린, 시스틴, 타이로신, 류신, 및 프랄린, 핵산 예컨대 나트륨 이노시네이트, 나트륨 우리디네이트, 나트륨 구아닐레이트, 나트륨 시티딜레이트, 칼슘 리보뉴클레오티드 및 나트륨 리보뉴클레오티드, 유기 산 예컨대 시트르산 및 숙신산, 염화 칼륨, 염화 나트륨-감소 염수, 조 염화 칼륨, 유장 염, 트리칼륨 포스페이트, 디칼륨 수소 포스페이트, 칼륨 디수소 포스페이트, 디나트륨 수소 포스페이트, 나트륨 디수소 포스페이트, 트리나트륨 포스페이트 및 클로렐라 추출물이 포함된다.

상기 강화제에는 예를 들면 아연 염, 비타민 C 군, 다양한 아미노산, 5-아데닐산, 염화 철, 헤스페리딘, 다양한 소성 칼슘, 다양한 비-소성 칼슘, 디벤조일티아민, 수산화 칼슘, 칼슘 카르보네이트, 티아민 히드로클로리드 염, 두날렐라 (Dunallella), 오아로텐 (Oarotene), 토코페롤, 니코틴산, 당근 카로텐, 야자 오일 카로텐, 칼슘 판토테네이트, 비타민 A, 히드록시프롤린, 칼슘 디수소 피로포스페이트, 제1철 피로포스페이트, 제2철 피로포스페이트, 페리틴, 헴 철, 메나퀴논, 엽산 및 리보플라빈이 포함된다.

상기 제조용 제제에는 예를 들면 가공 보조제 예컨대 아세톤 및 이온 교환 수지가 포함된다.

상기 향미제에는 예를 들면 바닐라 에센스가 포함되며, 상기 향신료 추출물에는 예를 들면 고추 추출물이 포함된다.

본 발명에 있어서, 이러한 다양한 첨가제들은 투여 방식을 고려하여 활성 성분에 첨가될 수 있다.

본 발명에 따른 조성물은 바람직하게는 식품 또는 사료 조성물 또는 약제학적 조성물에 프로바이오틱 미생물의 형태의 젖산균 무리에 속하는 상기 언급된 결합성 미생물을 포함하는 것이 고려된다. 즉, 프로바이오틱 효과 이외에도, 젖산균 군에 속하는 상기 언급된 프로바이오틱 미생물은 뮤탄스 연쇄상구균에 의해 유발되는 생물막 형성을 치료 및/또는 예방하는 데에 유용하다. 상기 프로바이오틱 미생물의 양은 치료될 상태, 바람직하게는 우식증, 치석 및/또는 구취를 상당히 긍정적으로 변형시키기에 충분하도록 많으나, 순수한 의료적 판단의 범위 내에서 심각한 부작용을 방지하기에 충분하도록 적은 (합리적인 이익/위험 비인) 것이다. 상기 프로바이오틱 미생물의 유효량은 달성될 구체적인 목표, 치료되는 환자의 연령 및 신체적 이상, 기본 질병의 중증도, 치료 기간, 동시 치료의 특성 및 사용되는 구체적인 미생물에 따라 달라지게 된다. 따라서, 상기 프로바이오틱 미생물의 유효량은 원하는 효과를 제공하게 될 최소량이 된다. 예를 들어, 0.05 ml의 포스페이트 버퍼링된 염수 용액, 또는 0.05 ml의 아가 현탁액 중에 생존가능 또는 비-생존가능 전세포 (whole cell) 로서의 1×10⁹ 세균, 또는 건조 중량 등가의 세포 벽 단편이 존재하게 되면, 약 0.05 ml 내지 약 20 ml의 양으로 투여될 경우 효과적이다. 결정적인 실질적 장점은 상기 프로바이오틱 생물체가 구강 경로에 의한 것과 같은 편리한 방식으로 투여될 수 있다는 것이다. 투여 경로에 따라, 상기 프로바이오틱 생물체를 포함하는 활성 성분은 해당 생물체를 불활성화할 수 있는 효소, 산 및 기타 천연 조건의 작용으로부터 해당 생물체를 보호하는 재료로 코팅될 필요가 있을 수 있다. 비구강 투여가 아닌 다른 것에 의해 프로바이오틱 생물체를 투여하기 위해서는, 그것이 불활성화를 방지하는 재료에 의해 코팅되거나, 또는 그것과 함께 투여되어야 한다. 예를 들면, 프로바이오틱 생물체는 효소 억제제와 함께 공동-투여되거나, 또는 리포좀 내에서 공동-투여될 수 있다. 효소 억제제에는 췌장 트립신 억제제, 디이소프로필플루오로포스페이트 (DFP) 및 트라실올이 포함된다. 리포좀에는 수-중-유-중-수 P40 에멀션은 물론, 락토바실러스 또는 그의 부산물을 비뇨생식 표면으로 수송하는 통상적이거나 특별하게 설계된 리포좀이 포함된다. 예를 들면 글리세롤, 액체 폴리에틸렌 글리콜, 및 이들의 혼합물, 그리고 오일 중의 분산액이 제조될 수도 있다. 일반적으로, 분산액은 기본 분산 매체 및 상기 열거된 것들에 속하는 필요로 하는 다른 성분들을 함유하는 살균 운반체에 다양한 살균 프로바이오틱 생물체를 도입함으로써 제조된다. 살균 주사가능 용액 제조용 살균 분말의 경우, 바람직한 제조 방법은 그의 미리 살균-여과된 용액으로부터 활성 성분 플러스 임의의 추가적으로 원하는 성분의 분말을 산출하는 진공-건조 및 동결-건조 기술이다. 추가적인 바람직한 제조 방법에는 동결건조 및 열-건조가 포함되나, 이에 제한되는 것은 아니다.

상기 조성물에는 젖산균 군에 속하는 상기 언급된 미생물의 세포가 예컨대 생균, 농축 또는 건조 형태로 거기에 첨가되는 본원에서 기술되는 바와 같은 허용가능한 약제학적 담체를 포함하는, 구강 또는 협측 투여를 목적으로 하는 생성물 역시 포함된다. 이러한 생성물들은 섭취가능 현탁액, 젤, 디퓨저(diffuser), 캡슐, 경질 젤라틴 캡슐, 시럽의 형태로, 또는 업계 숙련자에게 알려져 있는 임의의 다른 생약 형태로 제공될 수 있다.

상기 프로바이오틱 생물체가 상기한 바와 같이 적합하게 보호되는 경우라면, 활성 화합물은 예를 들면 불활성의 희석제 또는 동화가능한 식용 담체와 함께 구강 투여될 수 있거나, 또는 그것은 경질 또는 연질의 외피 젤라틴 캡슐에 봉입될 수 있거나, 또는 그것은 위장을 통과하도록 설계되는 (즉, 장 코팅되는) 정제로 압축될 수 있거나, 또는 그것은 직접 음식의 식품과 함께 도입될 수 있다. 구강 치료 투여를 위해서는, 프로바이오틱 생물체가 부형제와 함께 도입되어, 섭취가능한 정제, 협측 정제, 트로키, 캡슐, 엘릭시르, 현탁액, 시럽, 웨이퍼 (wafer) 등의 형태로 사용될 수 있다. 본 발명에 따른 조성물 또는 조제물은 구강 투약 단위 형태가 예를 들면 ml 당 약 1×10⁹ 생존가능 또는 비-생존가능의 예컨대 락토바실러스를 함유하도록 제조된다. 프로바이오틱 생물체는 편리하고 효과적으로 투여되도록, 적합한 약제학적으로 또는 식품으로 허용가능한 담체와 함께 전기 개시된 바와 같은 투약 단위 형태에 유효량으로 배합된다. 단위 투약 형태는 예를 들면 ml 당 대략 10⁹ 생존가능 또는 비-생존가능한 예컨대 락토바실러스의 양으로 주 활성 화합물을 함유할 수 있다. 프레바이오틱스 (prebiotics) 와 같은 보충 성분을 함유하는 조성물의 경우, 투약량은 일반적인 투여량 및 상기 성분들의 투여 방식을 참고하여 결정된다.

본 발명에 따른 식품 및 사료 조성물에 바람직한 성분들은 다음과 같다: 알팔파, 알팔파 농축 분말, 알팔파 건조 추말, 알팔파 영양분 농축물, 알파-리포산, 동물 다이제스트, 동물성 지방, 알게닌, 인공 조미료, 아스코르브산, 아스파라거스, 고초균 (bacillus subtilis), 베이컨, 베이컨 풍미제, 보리, 보리 순, 엿기름 분말, 바질, 콩류, 쇠고기, 쇠고기 & 사골 추말, 쇠고기 브로쓰, 쇠고기 부산물, 쇠고기 풍미제, 쇠고기 간, 쇠고기 추말, 쇠고기 탤로우, 사탕무우박, 사탕무우박 (sugar removed), 사탕무우, 베타 카로틴, BHA, 비피도박테리움 롱검 (bifidobacterium longum), 비피도박테리움 슈도롱검 (bifidobacterium pseudolongum), 비피도박테리움 테르모필룸 비오틴 (bifidobacterium thermophilum, 비오틴), 청색 2 호, 청색 2 호 및 타 색소, 블루베리, 사골 추말, 서양지치 오일, 건조 맥주 효모, 양조 효모, 양조 효모 추출물 (사카로마이세스 세레비시애 (saccharomyces cerevisiae) 발효 가용물), 양조용 쌀, 브로콜리, 현미, 현미 분말, 칼슘, 칼슘 아스코르베이트, 칼슘 카르보네이트, 칼슘 클로라이드, 칼슘 요오데이트, 칼슘 판토테네이트, 칼슘 포스페이트, 칼슘 프로피오네이트, 칼슘 설페이트, 케인 (cane) 당밀, 캐놀라 추말, 캐놀라 오일, 칸타잔틴, 캐러멜, 캐러맬 색소, 카민 (carmine), 카라기난, 카라기난 검, 당근 분말, 당근, 카제인, 메기, 메기 추말, 셀러리, 셀룰로오스, 셀룰로오스 분말, 치즈 분말, 킬레이트화 코발트, 킬레이트화 구리, 킬레이트화 철, 킬레이트화 칼륨, 닭고기, 닭고기 브로쓰, 닭고기 부산물 내장, 닭고기 부산물, 닭고기 부산물 추말, 닭고기 부산물 내장 고기, 닭고기 연골 내추럴, 닭고기 지방, 있는 그대로의 닭고기 지방, 닭고기 풍미제, 닭고기 내장, 닭 간, 닭 간 다이제스트, 닭 간 풍미제, 닭고기 추말, 닭고기 내추럴, 닭고기 육수, 치커리 추출물, 콜린 클로라이드, 콘드로이틴 설페이트, 계피, 시트르산, 시트르산 및 로즈마리, 시트르산 및 로즈마리 추출물, 시트러스 펙틴, 정향싹 오일, 코발트 아미노산 킬레이트, 코발트 카르보네이트, 코발트 단백질 화합물, 대구, 구리, 구리 아미노산 킬레이트, 구리 아미노산 복합체, 구리 산화물, 구리 단백질 화합물, 구리 설페이트, 옥수수, 옥수수겨, 옥수수 분말, 옥수수 배아 추말, 옥수수 글루텐, 옥수수 글루텐 추말, 굵게 빻은 옥수수, 옥수수 추말, 옥수수 오일 옥수수 전분, 개질된 옥수수 전분, 옥수수 시럽, 빻은 보리, 빻은 통보리, 크랜베리, 크랜베리 분말, 뼈를 발라낸 닭고기, 뼈를 발라낸 양고기, 뼈를 발라낸 칠면조, 말린 알팔파, 말린 알팔파 추말, 말린 당근, 말린 감자, 덱스트로오스, DHA, 디칼슘 포스페이트, DL-알파 토코페롤 아세테이트, DL-메티오닌, 말린 동물 다이제스트, 말린 사과, 말린 바실러스 리체니포르미스 (bacillus licheniformis) 발효 추출물, 말린 고초균 발효 추출물, 말린 사탕무우박, 말린 사탕무우박 (당 제거), 말린 블루베리, 말린 양조 효모, 말린 버터밀크, 말린 고추, 말린 당근, 말린 셀룰로오스, 말린 체다 치즈, 말린 치즈, 말린 치즈 분말, 말린 닭고기 연골, 말린 닭 간, 말린 닭고기 육수, 말린 치커리 뿌리, 말린 감귤박, 말린 추말된 칠면조, 말린 크랜베리, 말린 난(卵) , 말린 난분, 말린 난 제품, 말린 난류, 말린 마늘, 말린 생강, 말린 포도주박, 말린 껍질콩, 말린 켈프, 말린 켈프 추말, 말린 간 다이제스트, 말린 고기 부산물, 말린 파프리카, 말린 파슬리 플레이크, 말린 완두콩, 말린 플레인 사탕무우박, 말린 감자, 말린 시금치, 말린 고구마, 말린 토마토박, 말린 식물성 섬유 당근, 말린 유장, 말린 마, 오리, 듀럼밀 밀가루, 티아민 모노니트레이트가 풍부한 듀럼밀 세몰리나, 난류 국수, 난류 낱개, 난류 제품, 난류, 엔테로코코스 파에시움 (enterococcus faecium), 에톡시퀸 (ethoxyquin), 유칼립투스 오일, 황산 제1철, 섬유, 생선, 생선 브로쓰, 어류 추말, 어류 추말 내추럴, 어유, 아마 추말, 아마씨, 아마씨 추말, 엽산, 엽산 피리독신 히드로클로라이드, 식용 전분, 날 것, 익히지 않은 닭고기, 익히지 않은 닭고기 부산물, 프룩토오스올리고당. 푸마르산, 마늘, 마늘 추출물, 마늘향, 마늘 오일, 마늘 분말, 젤라틴, 생강, 생강 추출물, 글루코사민, 글루코사민 히드로클로라이드, 글리신, 글리세린, 글리세릴 모노스테아레이트, 글리신, 껍질콩, 녹차, 분쇄시킨 옥수수, 분쇄시킨 아마씨, 분쇄시킨 차전자, 분쇄시킨 쌀, 분쇄시킨 밀, 분쇄시킨 밀가루, 갈아낸 통곡물 보리, 갈아낸 통곡물 옥수수, 갈아낸 통곡물 수수, 갈아낸 통곡물 밀, 분쇄한 통완두콩, 분쇄된 통밀, 분쇄시킨 사료용 옥수수, 구아 검, 검 아라빅, 큰 넙치, 청어 추말, 청어 오일, 염산, 이노시톨, 요오드, 요오드화된 염, 철 아미노산 킬레이트, 철 아미노산 복합체, 철 산화물, 철 단백질 화합물, 철 설페이트, L-알라닌, L-아르기닌, L-아스코르빌-2-폴리포스페이트, L-아스코르빌-2-폴리포스페이트 a, L-카르니틴, L-라이신, L-라이신 모노히드로클로라이드, L-트립토판, 락토바실러스 아시도필루스 (lactobacillus acidophilus), 양고기, 양고기 브로쓰 , 양고기 부산물, 양고기 다이제스트, 양고기 지방, 양고기 간, 양고기 추말, 양고기 스톡, 양고기 양, 레시틴, 편두, 상추, 간, 로커스트 빈 검, 루테인, 라이코펜, 라이신, 고등어, 마그네슘 산화물, 엿기름 추출물, 엿기름 분말, 망간 황산염, 망간 아미노산 킬레이트, 망간 산화물, 망간 단백질 화합물, 망간 황산염, 망간 산화물 (manganous oxide), 산화망간 칼슘 요오데이트, 망간 단백질 화합물, 망간 황화물, 메이플 시럽, 금잔화 추출물, 금잔화 추말, 고기 및 본 밀 내추럴 (bone meal natural), 고기 및 간 추말, 고기 부산물, 메나디온 디메틸피리미디놀 비설파이트, 메나디온 아황산수소나트륨 복합체, 메나디온 비타민 K3, 청어 추말, 청어 어유, 우유, 혼합 토코페롤, 혼합 식물 섬유 당근, 변성 전분, 개질 전분, 당밀, 모노칼슘 포스페이트, 모노나트륨 포스페이트, 천연 및 인공 닭고기 향, 천연 및 인공 풍미제, 천연 닭고기 향, 천연 색소, 천연 조미료, 천연 가금육 향, 천연 훈연 향기, 나이아신, 나이아신 & 황산 제1철, 무지방 요거트, 귀리 시리얼, 귀리 섬유, 귀리 가루, 귀리 추말, 귀리, 해수어, 해수어 추말, 해수의 화이트피쉬, 오메가 지방산, 양파 추출물, 양파 분말, 판토테네이트, 파프리카 올레오레신, 파슬리, 파슬리 플레이크, 파슬리 오일, 파슬리 분말, 부분적으로 수소첨가된 대두유, 파스타, 완두콩 섬유, 완두콩 단백질, 땅콩 껍질 10.8%, 통보리, 완두콩, 후추, 석유, 필로퀴논, 비타민 K1, 인산, 돼지고기 브로쓰, 돼지 부산물, 돼지 간, 칼륨 소르베이트, 칼륨 아미노산 복합체, 염화칼륨, 칼륨 시트레이트, 요오드화칼륨, 칼륨 요오딘, 칼륨 소르베이트, 감자, 감자 섬유, 감자 전분, 가금류, 가금류 부산물 추말, 가금류 부산물, 가금류 지방, 가금류 내장, 가금류 간, 분말로 만든 셀룰로오스, 분말로 만든 셀룰로오스 11.1 %, 프로피온산, 프로필 갈레이트 및 시트르산, 프로필렌 글리콜, 피리독신 히드로클로라이드, 차전자피, 토끼, 토끼 부산물, 토끼고기 육수, 레드 3, 레드 40 및 여타 색소, 빨간 피망, 리보플라빈, 쌀, 쌀겨, 미분, 쌀 글루텐, 왕겨, 쌀 단백질 농축물, 로즈마리, 로즈마리 추출물, 로즈마리 추출물 및 시트르산, 호밀, 세이지, 연어, 연어 브로쓰, 연어 추말, 연어 오일, 염, 바다 소금, 셀레늄, 새우, 훈연 향기, 나트륨 알기네이트, 나트륨 아스코르베이트, 나트륨 비설페이트, 나트륨 카르보네이트, 나트륨 카세이네이트, 나트륨 클로라이드, 나트륨 헥사메타포스페이트, 나트륨 메타비설페이트, 염색 유지를 위한 아질산나트륨, 나트륨 포스페이트, 나트륨 프로피오네이트, 나트륨 셀레나이트, 나트륨 실리코 알루미네이트, 나트륨 트리폴리포스페이트, 나트륨 트리포스페이트, 소르브산, 소르비톨, 대두분, 콩깍지, 대두 레시틴, 대두 단백질 농축물, 대두 단백질 분리물, 콩기름, 대두 깍지, 대두 추말, 대두 밀 런, 대두유, 스피어민트, 시금치, 스피루리나, 전분, 사골 찜 추말, 수크로오스, 가공에 충분한 물, 당, 일광건조 알팔파 추말, 해바라기 추말, 해바라기 오일, 고구마 분말, 고구마, 탤로우, 타피오카 전분, 타우린, 테트라 나트륨 피로포스페이트, 질감을 살린 식물성 단백질, 티아민, 티아민 히드로클로라이드, 티아민 모노니트레이트, 타임, 티탄 디옥시드, 티탄 디옥시드 염료, 토마토 조각, 토마토 페이스트, 토마토박, 토마토, 미량 무기질 (칼슘 설페이트), 미량 무기질 (구리 설페이트), 미량 무기질 (염화칼륨), 미량 무기질 (나트륨 트리폴리포스페이트), 미량 무기질 (아연 산화물), 미량 무기질 (아연 단백질 화합물), 미량 무기질 (황산아연), 트리칼슘 포스페이트, 참치, 참치 추말, 칠면조, 칠면조 브로쓰, 칠면조 부산물 추말, 칠면조 내추럴, 칠면조 육수, 강황, 송아지, 송아지 브로쓰, 식물성 오일, 사슴고기, 사슴고기 부산물, 사슴 간, 사슴고기 추말, 사슴 고기, 사슴고기 스톡, 비타민 A, 비타민 A & D3, 비타민 A 아세테이트, 비타민 B1 , 비타민 B12, 비타민 B12 및 D3, 비타민 B2, 비타민 B6, 비타민 C, 비타민 D3, 비타민 D3 및 E, 비타민 E, 비타민 K, 물, 미나리, 가공에 충분한 물, 물냉이 및 시금치, 밀, 밀기울, 밀가루, 밀 배아 추말, 밀 글루텐, 밀 분쇄물, 밀 밀 런 (mill run), 밀 전분, 유장, 흰살생선, 화이트피쉬, 화이트피쉬 추말, 완전 현미, 통당근, 통 크랜베리, 통째의 난류, 통마늘 정향, 통곡물 옥수수, 통곡물 밀, 통째로 갈아낸 보리, 전체를 분쇄한 현미, 통째로 갈아낸 귀리, 전체를 분쇄한 밀, 통쌀, 통고구마, 통밀, 통밀가루, 풀줄, 잔탄 검, 효모 배양물, 옐로우 5, 옐로우 6, 노란 호박, 노란 주키니 호박, 유카, 유카 추출물, 아연 아미노산 킬레이트, 아연 아미노산 복합체, 아연 산화물, 아연 단백질 화합물, 아연 단백질 화합물 및 황산아연.

가장 바람직한 성분은 하기와 같다: 바람직하게는 건강한 피부 및/또는 외피의 형성을 촉진하기에 충분한 양의, 알파-리포산; 항생제 목적으로 바람직한 성분은 알파-리포산, 말린 마늘, 마늘 추출물, 마늘 오일 및 마늘 분말이고; 바람직하게는 항산화제로서의 레시틴이고; 빻은 보리, 빻은 통보리, 갈아낸 통곡물 옥수수, 갈아낸 통곡물 수수, 청어 오일, 고등어, 청어 어유, 해수어, 완전 현미 및 통고구마는 바람직한 에너지원이고; 바람직한 섬유 공급원은 말린 당근, 말린 사과, 갈아낸 통곡물 보리, 귀리 시리얼, 귀리 가루, 귀리 추말, 통째로 갈아낸 보리, 통째로 갈아낸 귀리; 코발트 단백질 화합물 (킬레이트화된 코발트의 공급원), 구리 단백질 화합물, 철 단백질 화합물, 망간 단백질 화합물, 망간의 단백질 화합물, 미량 무기질 및 아연 단백질 화합물은 바람직한 무기질 공급원이며; 오메가-3 지방산의 바람직한 공급원은 서양지치 오일, 캐놀라 오일, 캐놀라 오일 (혼합 토코페롤로 방부처리) 및 아마씨이고; 로즈마리 추출물 및 시트르산은 바람직한 보존제이고; 단백질의 바람직한 공급원은 쇠고기 추말, 닭고기 추말, 건조시킨 완두콩, 큰 넙치, 양고기 추말, 청어 추말, 해수의 화이트피쉬, 완두콩, 사슴고기 추말, 전체를 분쇄한 현미 및 전체를 분쇄한 밀이고; 비타민의 바람직한 공급원은 칼슘 아스코르베이트, 당근, 말린 당근, 혼합 토코페롤, 통당근이고; 맹물을 위한 바람직한 대체물, 및 또한 바람직한 풍미제는 쇠고기 브로쓰, 닭고기 브로쓰, 양고기 브로쓰, 양고기 스톡 및 칠면조 브로쓰이다.

가장 바람직한 것은 아니지만 매우 바람직한 성분은 다음과 같다: 에너지원으로서의 알팔파 농축 분말, 알팔파 건조 추말, 닭고기 지방, 닭 간, 신선한 해수어 추말 및 통보리; 섬유 공급원으로서의 껍질콩, 분쇄한 통완두콩, 귀리 및 완두콩 섬유; 무기질 공급원으로서의 코발트 아미노산 킬레이트, 구리 아미노산 킬레이트, 구리 아미노산 복합체, 말린 켈프 추말, 철 아미노산 킬레이트, 망간 아미노산 킬레이트, 망간 설페이트, 칼륨 아미노산 복합체, 아연 아미노산 킬레이트; 프레바이오틱으로서의 치커리 추출물, 생강 추출물 및 유카 추출물; 훌륭한 보존제는 마늘, 로즈마리 및 세이지이고; 알팔파 영양분 농축물, 메기, 메기 추말, 대구, 오리, 난류, 분쇄된 통밀, 청어 추말, 완두콩 단백질, 토끼, 새우, 참치, 사슴, 사슴 고기, 흰살생선, 화이트피쉬, 화이트피쉬 추말, 통밀은 단백질의 공급원으로 바람직하며; 베타 카로틴 및 엽산은 비타민의 바람직한 공급원이고; 닭고기 육수, 토끼고기 육수, 칠면조 육수, 송아지 브로쓰 및 사슴고기 스톡은 맹물의 바람직한 대체물이자 바람직한 풍미제이다.

본 발명의 사료 조성물의 표준 식품, 바람직하게는 애완동물 식품은, 바람직하게는 비타민 B-12, 비오틴, 칼슘 카르보네이트, 칼슘 판토테네이트, 콜린 클로라이드, 코발트 카르보네이트, 구리 설페이트, 비타민 D3 및 E 보충물, DL-메티오닌, 말린 켈프, 황산 제1철, 엽산, 이노시톨, 망간 산화물, 망간의 산화물, 망간의 황산염, 메나디온 아황산수소나트륨 복합체, 황산아연, 천연 조미료, 나이아신 및 황산 제1철을 포함하는 무기질 보충물, 나이아신 보충물, 염화칼륨, 요오드화칼륨, 피리독신 히드로클로라이드, 리보플라빈, 나트륨 셀레나이트, 타우린, 티아민, 티아민 모노니트레이트, 티아민 모노니트레이트, 비타민 A, 비타민 A 및 D3, 비타민 A 아세테이트, 비타민 B12, 비타민 D3, 물, 아연 산화물 및 황산아연으로 이루어진 군의 하나 이상의 성분을 함유한다.

본 발명에 따라 사용되는 사료는 활성 성분으로 결합 단백질 또는 그의 단편을 함유하는 임의의 사료일 수 있다. 사료에는 예를 들어 개, 고양이 및 래트를 위한 애완동물 사료 및 소 및 돼지용의 가축 사료가 포함된다.

사료는 예를 들어, 곡물, 겨, 유박류, 동물-유래 사료 원료, 다른 사료 원료 및 정제된 생성물을 포함한 사료 원료에 상기 기재된 활성 성분을 적절히 블렌딩하여 제조될 수 있다. 본 발명의 바람직한 사료는 저작용 제품이다. 바람직한 제품은 예를 들어, 섬유, 겨 등과 같은 식물 재료를 함유하는, 본 발명의 바람직한 사료는 저작용 제품이다. 바람직한 제품은, 돼지 귀 (pig ears), 소 힘줄 (bull sinews), 소 꼬리 (cattle tails), 식도 (oesophagus), 말린 근육 고기 (dried muscle meat), 돈족 (pig feet) 및 말린 압축 소가죽 (dried pressed cowhide), 버팔로 가죽 (buffalo hide) 또는 복합 저작 제품들이다. 여타 저작용 제품은 당업계에 공지되어 있고, 또한 US 2,988,045, WO 01/50882 A2, EP 1 151 674 A1, EP 1 006 789 A1 및 CH 676200 A5 의 저작용 제품이 바람직하다. 저작용 제품은 바람직하게는 뼈, 롤, 도넛, 보우, 프렛첼, 8 자형 또는 칩의 형태이다.

본 발명에 따른 사료를 동물에 제공하는 경우, 섭취될 사료의 양이 구체적으로 제한되는 것은 아니나, 예를 들어 바람직하게는 활성 성분의 양을 기준으로 일 당 1 kg 체중 당 0.1 mg 내지 50 g, 바람직하게는 일 당 1 kg 체중 당 0.5 mg 내지 20 g이다. 사료는 하루에서 5년까지, 바람직하게는 2주 내지 1년의 기간 동안 이와 같은 양으로 계속 섭취된다. 역시, 섭취되는 양은 사료를 섭취하는 동물의 종, 연령 및 체중 등에 따라 적절한 범위로 조정될 수 있다.

마찬가지로, 본 발명의 조성물이 결합성 미생물 및 그의 단편과는 독립적으로 하나 이상의 프로바이오틱 미생물 또는 그로부터 수득되는 생산물을 함유하는 것이 바람직하다. 바람직한 프로바이오틱 미생물 및 그의 각 생산물은 고초균, 비피도박테리움 롱검, 비피도박테리움 슈도롱검, 비피도박테리움 테르모필룸, 말린 바실러스 리체니포르미스 발효 추출물, 말린 고초균 발효 추출물, 엔테로코코스 파에시움 및 락토바실러스 아시도필루스이다.

특히 바람직한 것은 결합성 미생물 또는 그의 단편에 추가하여, 구취 예방 및/또는 치료를 위한 추가적인 미생물을 추가로 함유하는 식품 및 사료 조성물이다. 가장 바람직한 것은 본원에 전체가 참고문헌으로 포함되는 WO 2009/149816 A1 에 개시된 미생물을 추가로 함유하는 식품 및 사료 조성물이다. 물론, 추가 미생물은 바람직하게는 DSMZ 접근 번호 DSMZ 19825, DSMZ 19826, DSMZ 19827 를 가진 락토바실러스 아시도필러스로 이루어진 군으로부터 선택된다.

본 발명은 선별된 실시예 및 구현예에 의해 추가로 기재될 것이다. 이들 구현예 및 실시예는 그 기재 내용 범위 또는 특허청구범위를 제한함 없이 본 발명의 특정한 바람직한 특질을 나타내기 위한 의도의 것이다. 당업자라면 그의 일반적인 지식 및 상기 발명의 상세한 설명 및 참고문헌으로 본원에 포함되는 문헌에서 제공되는 지시사항 및 설명에 의해 추가적인 실행 실시예 및 구현예를 고안할 수 있음이 이해될 것이다.

실시예 1: 결합성 미생물의 저장 및 생장

균주의 저장 및 생장을 통상적인 절차에 따라 수행하였다. 예를 들어, 균주를 -80℃에서 동결된 스톡으로서 저장하였다. 배양액 1 ml를 MRS-배지에서 정지기 (OD₆₀₀/mL 4 내지 8) 로 생장시키고, 멸균 50％ 글리세린 용액 500 ㎕와 혼합하고, 동결하였다. 뮤탄스 연쇄상구균의 배양액을 TSY-배지에서 정지기 (OD₆₀₀/mL 1 내지 2) 로 생장시키고, 상기 언급된 바와 같이 처리하였다.

뮤탄스 연쇄상구균 (스트렙토코커스 뮤탄스, 스트렙토코커스 소브리누스, 스트렙토코커스 라티, 스트렙토코커스 크리세투스, 스트렙토코커스 페루스 또는 스트렙토코커스 마카카에) 의 배양 뿐만 아니라 락토바실리의 배양을 밤새 교반 없이 37℃에서 폐쇄된 팔콘 튜브에서 5 ml 에서 수행하였다.

구체적으로, 본원에서 사용되는 균주를 동결된 스톡으로서 -80℃ 에서 저장하였다. MRS-브로쓰에서 정지기 (OD₆₀₀/mL 4 내지 8) 로 생장된 배양액 1 ml 를 멸균 50％ 글리세린 용액 500 ㎕ 와 혼합하고, 동결하였다.

구체적으로, 뮤탄스 연쇄상구균의 배양액을 TSY-브로쓰에서 정지기 (OD₆₀₀/mL 1 내지 2) 로 생장시키고, 상기 언급된 바와 같이 처리하였다.

뮤탄스 연쇄상구균 (스트렙토코커스 뮤탄스 (DSM 20523, 혈청형 c; NCTC 10923, 혈청형 e; NCTC 11060, 혈청형 f), 스트렙토코커스 소브리누스 DSM 20742, 스트렙토코커스 라티 DSM 20564, 스트렙토코커스 크리세투스 DSM 20562, 스트렙토코커스 페루스 DSM 20646 또는 스트렙토코커스 마카카에 DSM 20714) 의 배양, 및 락토바실리의 배양을 밤새 교반 없이 37℃ 에서 폐쇄된 팔콘 튜브에서 5 ml 에서 수행하였다. 실시예 5 에 기재된 형광 검정법을 위해, 스트렙토코커스 뮤탄스 DSM 20523 을 사용하였다.

응집 검정법을 위해, 락토바실리를 MRS-배지에서 생장시켰다. MRS-배지 5 ml 를 스톡 10 ㎕ 로 접종하고, 3 일 동안 37℃ 에서 호기 조건하에 인큐베이션하였다. 600 nm에서 배양액의 광학 밀도 (OD₆₀₀) 를 측정하였다. PBS-완충액를 사용하여 2 의 OD₆₀₀ 로 배양액을 희석하였다. 뮤탄스 연쇄상구균을 TSY-배지 7 ml에서 생장시켰다. TSY-배지 7 ml 를 스톡 10 ㎕ 로 접종하고, 37℃ 에서 혐기 조건하에 인큐베이션하였다.

MRS-브로쓰:

MRS-혼합물 (디프코, USA) 55 g/l, pH: 6.5

TSY-브로쓰:

TSY-혼합물 (디프코, USA) 30 g/l

효모 추출물 (Deutsche Hefewerke, 독일) 3 g/l

완충액:

PBS-완충액:

Na₂HP0₄·2H₂0 1 .5 g/l

KH₂P0₄ 0.2 g/l

NaCl 8.8 g/l

HCl 로 pH 조정

실시예 2: 결합성 균주 및 연쇄상구균 균주의 분류학적 분류

균주의 분류학적 분류를 그의 탄수화물 발효 패턴에 따라 수행하였다. 이를 API 50 CH (바이오메리에욱스, 프랑스) 시스템을 이용하여 결정하고, APILAB PLUS 소프트웨어 버젼 3.3.3 (바이오메리에욱스, 프랑스)을 이용하여 분석하였다.

실시예 3: 세포의 염색

실시예 1에 기재된 바와 같이 락토바실리 및 뮤탄스 연쇄상구균을 생장시킨 후, 형광 염색약을 사용하여 뮤탄스 연쇄상구균을 염색하였다. 이를 위해, 배양액의 OD₆₀₀ 을 측정하였다. 3200 x g 에서 5 분 동안 원심분리에 의해 배양액을 수확하였다. 펠렛을 PBS-완충액에서 재현탁하였다. 얻어진 현탁액이 현탁액 4.2 ml 의 OD₆₀₀ 을 갖도록 완충액의 양을 계산하고, 제조자의 지시사항에 따라 제조된 CFDA-SE 용액 (인비트로젠, USA) 2 ㎕ 와 혼합하였다. 혼합물을 2 시간 동안 37℃ 에서 인큐베이션함으로써 세포의 염색을 수행하였다. 3200 x g 에서 5분 동안 원심분리에 의해 염색된 세포를 수확하였다. 후속적으로, 세포를 PBS-완충액 2 ml에서 재현탁하였다.

실시예 4: 뮤탄스 연쇄상구균의 펠렛화 응집 검정

검정을 위해, 락토바실리 및 뮤탄스 연쇄상구균의 혼합을 3:1 내지 60:1 (뮤탄스 연쇄상구균:락토바실리) 의 부피비로 수행하였으며, 상기 비는 1:50 내지 1:2.5의 콜로니 형성 단위 비에 상응하였다.

1 ml 중 600 nm의 파장에서 측정된 광학 밀도는 뮤탄스 연쇄상구균에 대해 바람직하게는 3 × 10⁸개의 콜로니 형성 단위 및 락토바실리에 대해 바람직하게는 7 × 10⁹개의 콜로니 형성 단위를 의미한다. 혼합을 15 ml 팔콘 튜브에서 부피 2 ml로 수행하였다. 배양 현탁액을 PBS-완충액으로 희석하여, 상기 언급된 부피비를 얻었으며, 최종 부피를 2 ml에서 유지하였다. 혼합물을 15초 동안 볼텍싱하였다. 응집은 현탁액의 즉시 탁도로서 육안으로 확인가능하였다. 튜브를 20 분 동안 교란되지 않은 상태로 방치한 후, 응집물은 육안으로 확인가능한 펠렛으로서 침강한 반면, 응집하지 않은 혼합물은 현탁액에 남았다. 형성된 응집물을 500 x g 에서 30 초 동안 원심분리에 의해 분리하였다. 그 후, 상청액에 남은 응집되지 않은 세포의 양을 측정함으로써 응집의 양을 정량하였다. 상응하게, 광학 밀도를 측정하기 위해 상청액 1 ml 를 주의깊게 제거하였다. 광학 밀도를 600 nm 에서 측정하였다. 락토바실리가 없는 각 대조군 실험의 공제 후 값은 응집되지 않은 세포의 양을 나타낸다.

대조군으로서, 튜브에 첨가된 락토바실러스 또는 뮤탄스 연쇄상구균 균주만에 의해 시험을 수행함으로써, 락토바실러스 균주 및 뮤탄스 연쇄상구균 균주 각각의 자가-응집을 항상 연구하였다. 락토바실러스에 의한 스트렙토코커스 뮤탄스의 응집은 도 1 (왼쪽 튜브) 및 2에 나타낸다.

상기 기재된 락토바실리 균주 (구체적으로, DSMZ에 기탁됨) 는 자가-응집 거동을 나타내지 않고 모든 스트렙토코커스 뮤탄스 혈청형의 응집을 나타내었다.

실시예 5: 뮤탄스 연쇄상구균의 형광 응집 검정

검정을 위해, 각각의 락토바실러스와 각각의 염색된 뮤탄스 연쇄상구균 (스트렙토코커스 뮤탄스 DSM 20523과 Lb-OB-K1 (DSM 16667), 스트렙토코커스 뮤탄스 DSM 20523과 Lb-OB-K2 (DSM 16668), 스트렙토코커스 뮤탄스 DSM 20523과 Lb-OB-K3 (DSM 16669), 스트렙토코커스 뮤탄스 DSM 20523과 Lb-OB-K4 (DSM 16670), 스트렙토코커스 뮤탄스 DSM 20523과 Lb-OB-K5 (DSM 16671), 스트렙토코커스 뮤탄스 DSM 20523과 Lb-OB-K6 (DSM 16672), 스트렙토코커스 뮤탄스 DSM 20523과 Lb-OB-K7 (DSM 16673); 스트렙토코커스 소브리누스 DSM 20742와 Lb-OB-K1 (DSM 16667), 스트렙토코커스 소브리누스 DSM 20742와 Lb-OB-K2 (DSM 16668), 스트렙토코커스 소브리누스 DSM 20742와 Lb-OB-K3 (DSM 16669), 스트렙토코커스 소브리누스 DSM 20742와 Lb-OB-K4 (DSM 16670), 스트렙토코커스 소브리누스 DSM 20742와 Lb-OB-K5 (DSM 16671), 스트렙토코커스 소브리누스 DSM 20742와 Lb-OB-K6 (DSM 16672), 스트렙토코커스 소브리누스 DSM 20742와 Lb-OB-K7 (DSM 16673); 스트렙토코커스 크리세투스 DSM 20562와 Lb-OB-K1 (DSM 16667), 스트렙토코커스 크리세투스 DSM 20562와 Lb-OB-K2 (DSM 16668), 스트렙토코커스 크리세투스 DSM 20562와 Lb-OB-K3 (DSM 16669), 스트렙토코커스 크리세투스 DSM 20562와 Lb-OB-K4 (DSM 16670), 스트렙토코커스 크리세투스 DSM 20562와 Lb-OB-K5 (DSM 16671), 스트렙토코커스 크리세투스 DSM 20562와 Lb-OB-K6 (DSM 16672), 스트렙토코커스 크리세투스 DSM 20562와 Lb-OB-K7 (DSM 16673);

스트렙토코커스 라티 DSM 20564와 Lb-OB-K1 (DSM 16667), 스트렙토코커스 라티 DSM 20564와 Lb-OB-K2 (DSM 16668), 스트렙토코커스 라티 DSM 20564와 Lb-OB-K3 (DSM 16669), 스트렙토코커스 라티 DSM 20564와 Lb-OB-K4 (DSM 16670), 스트렙토코커스 라티 DSM 20564와 Lb-OB-K5 (DSM 16671), 스트렙토코커스 라티 DSM 20564와 Lb-OB-K6 (DSM 16672), 스트렙토코커스 라티 DSM 20564와 Lb-OB-K7 (DSM 16673);

스트렙토코커스 페루스 DSM 20646과 Lb-OB-K1 (DSM 16667), 스트렙토코커스 페루스 DSM 20646과 Lb-OB-K2 (DSM 16668), 스트렙토코커스 페루스 DSM 20646과 Lb-OB-K3 (DSM 16669), 스트렙토코커스 페루스 DSM 20646과 Lb-OB-K4 (DSM 16670), 스트렙토코커스 페루스 DSM 20646과 Lb-OB-K5 (DSM 16671), 스트렙토코커스 페루스 DSM 20646과 Lb-OB-K6 (DSM 16672), 스트렙토코커스 페루스 DSM 20646과 Lb-OB-K7 (DSM 16673);

스트렙토코커스 마카카에 DSM 20724와 Lb-OB-K1 (DSM 16667), 스트렙토코커스 마카카에 DSM 20724와 Lb-OB-K2 (DSM 16668), 스트렙토코커스 마카카에 DSM 20724와 Lb-OB-K3 (DSM 16669), 스트렙토코커스 마카카에 DSM 20724와 Lb-OB-K4 (DSM 16670), 스트렙토코커스 마카카에 DSM 20724와 Lb-OB-K5 (DSM 16671), 스트렙토코커스 마카카에 DSM 20724와 Lb-OB-K6 (DSM 16672) 및 스트렙토코커스 마카카에 DSM 20724와 Lb-OB-K7 (DSM 16673))의 현탁액을 혼합하였다. 락토바실러스 현탁액 50 ㎕를 96 웰 미량역가 플레이트에서 염색된 뮤탄스 연쇄상구균 50 ㎕에 첨가하였다. 플레이트를 전속으로 12분 동안 볼텍싱하였다. 그 후, 플레이트를 500 x g에서 10초 동안 원심분리하였다. 상청액을 주의깊게 제거하고 폐기하였다. 펠렛을 PBS-완충액 100 ㎕에서 재현탁하였다. 현탁액의 형광을 495 nm (여기) 및 525 nm (방출)의 파장에서 미량역가 플레이트 형광 판독기에서 측정하였다. 대조군으로서, 락토바실리 단독 뿐만 아니라 염색된 뮤탄스 연쇄상구균을 기재된 바와 같이 처리하고 측정하였다. 각각의 락토바실러스에 의한 응집에 대해 측정된 값으로부터 각각의 뮤탄스 연쇄상구균 단독에 대해 측정된 배경 형광을 공제하였다. 모든 측정을 삼중으로 수행하였다. 뮤탄스 연쇄상구균을 모든 시험된 락토바실리에 의해 응집시켰다 (도 3 참조).

실시예 6: 구강 세균총의 전형적인 구성원을 향한 응집의 특이성

실시예 1에 기재된 바와 같이 락토바실러스 배양액을 생장시켰다. 구강 세균 (즉, 스트렙토코커스 살리바리우스 아종 테르모필러스 (제조자의 지시사항에 따라 오르가노밸런스(OrganoBalance)에 의해 단리되고 API 50 CH (바이오메리에욱스, 프랑스)에 의해 확인됨); 스트렙토코커스 오랄리스 (DSMZ 20066); 스트렙토코커스 오랄리스 (DSMZ 20395); 스트렙토코커스 오랄리스 (DSMZ 20627); 스타필로코쿠스 에피데르미디스 (DSMZ 1798); 스타필로코쿠스 에피데르미디스 (DSMZ 20044); 스트렙토코커스 미티스 (DSMZ 12643); 스트렙토코커스 상귀니스 (DSMZ 20567))를 폐쇄된 15 mL 팔콘 튜브에서 37℃에서 밤새 BHI-배지 5 mL에서 생장시켰다. 상기 언급된 구강 세균 각각을 바람직하게는 락토바실러스 배양액과 3:1의 부피비로 혼합하고, 응집을 실시예 4에서와 같이 검정하였다. 응집/비-응집 시험 각각을 위해, 시험의 결과를 즉시 결정하기 위해 바람직하게는 상기 언급된 세균 중 하나만을 사용하였다.

대조군으로서, 튜브에 첨가된 구강 세균총 균주 또는 락토바실리만에 의해 시험을 수행함으로써 각각의 구강 세균 뿐만 아니라 시험된 락토바실러스 균주의 자가-응집을 항상 연구하였다.

락토바실러스 파라카세이 아종 파라카세이 균주 Lb-OB-K1 (DSM 16667), Lb-OB-K2 (DSM 16668), Lb-OB-K3 (DSM 16669), Lb-OB-K4 (DSM 16670), Lb-OB-K5 (DSM 16671)는 상기 언급된 구강 세균을 응집시키지 않았다. 따라서, 이들은 상기 정의에 따라 "뮤탄스 연쇄상구균에 특이적으로 결합" 한다. 락토바실러스 람노수스 균주 Lb-OB-K6 (DSM 16672) 및 Lb-OB-K7 (DSM 16673)은 스트렙토코커스 살리바리우스 아종 테르모필러스를 응집시켰다. 이들은 상기의 덜 바람직한 것으로 정해진 것에 따라 "뮤탄스 연쇄상구균에 특이적으로 결합" 하는 것으로 간주된다.

BHI-브로쓰:

BHI-혼합물 (디프코, USA) 37 g/L

pH: 7.2

실시예 7: 락토바실리의 응집 능력의 온도 내성

세균을 실시예 1 에서와 같이 생장시켰다. 생장된 락토바실리 배양액을 121℃에서 2 바아에서 포화된 스팀에서 20분 동안 오토클레이브했다. 오토클레이브된 배양액을 실온으로 냉각한 후, 락토바실리를 생장된 스트렙토코커스 뮤탄스 배양액과 1:3의 부피비로 혼합하고, 대조군 실험을 포함한 응집을 실시예 4에서와 같이 검정하였다. 실시예 6 에 요약된 바와 같이 구강 세균을 사용하여 응집을 또한 검정하였다. 락토바실리의 응집 거동은 오토클레이브 절차에 의해 시험된 스트렙토코커스 뮤탄스 혈청형을 향해 또는 구강 세균을 향해 변하지 않은 것으로 밝혀졌다.

실시예 8: 열-불활성화된 락토바실리에 의한 응집

락토바실리를 실시예 1에 기재된 바와 같이 생장시켰다. 뮤탄스 연쇄상구균을 실시예 1 및 3 에 기재된 바와 같이 생장시키고 염색하였다. 생장된 락토바실리 배양액을 실시예 1 에 기재된 바와 같이 2 의 OD₆₀₀ 으로 조절하였다. 현탁액 1 ml 를 121℃ 에서 2 바아에서 20 분 동안 오토클레이브했다. 오토클레이브된 배양액을 실온으로 냉각한 후, 대조군 실험을 포함한 응집을 실시예 5에 기재된 바와 같이 측정하였다. 열-불활성화된 락토바실리는 또한 모든 뮤탄스 연쇄상구균을 응집시켰다.

실시예 9: pH -값에 대한 응집의 의존성

세균을 실시예 1 에서와 같이 생장시켰다. 락토바실리 0.5 ml 및 스트렙토코커스 뮤탄스 1.5 ml를 3200 x g 에서 10 분 동안 원심분리에 의해 수확하고, 상청액을 폐기하였다. 세포를 상이한 pH-값으로 조절된 상이한 PBS-완충액에서 그의 최초 부피 (각각 0.5 ml 및 1.5 ml) 로 재현탁하였다. 완충액의 pH-값을 0.5 pH-단위의 단계로 7.0으로부터 3.0의 값으로 조절하였다. 배양액을 각각의 pH-값의 완충액에서 재현탁하였으며, 이를 응집 거동 검정을 위해 사용하였다.

그 후, 락토바실리를 바람직하게는 스트렙토코커스 뮤탄스 배양액과 1:3의 부피비로 혼합하고, 대조군 실험을 포함한 응집을 실시예 4에서와 같이 검정하였다. 4.5 미만의 pH 값에서 락토바실리에 의한 스트렙토코커스 뮤탄스의 육안으로 확인가능한 응집은 발생하지 않았다.

실시예 10: pH -값에 대한 응집의 의존성

락토바실리를 실시예 1에 기재된 바와 같이 생장시켰다. 뮤탄스 연쇄상구균을 실시예 1 및 3에 기재된 바와 같이 생장시키고 염색하였다. 그 후, 응집을 상이한 pH-값에서 검정하였다. 이 목적을 위해, 락토바실리 뿐만 아니라 연쇄상구균을 각각의 pH로 조절된 아세테이트 완충액에서 재현탁하였다. 시험된 pH 값은 4.0, 4.5 및 5.0이었다. 응집을 실시예 5에 기재된 바와 같이 검정하였다. 4.5 미만의 pH 값에서 뮤탄스 연쇄상구균의 응집은 발생하지 않았다.

실시예 11: 동결건조에 대한 응집 거동의 감수성

세균을 실시예 1 에서와 같이 생장시켰다. 락토바실리 배양액의 1 ml 분취액을 3200 x g에서 10분 동안 원심분리에 의해 수확하였다. 상청액을 폐기하고, 펠렛을 실온에서 진공하에 2시간 동안 동결건조시켰다. 각각의 시험된 락토바실러스 균주의 얻어진 건조 펠렛을 실온에서 및 4℃에서 각각 1일, 1주, 2주, 3주 및 4주 동안 저장하였다. 저장 시간 후, 동결건조된 펠렛을 pH 7.0의 PBS-완충액 1 ml에서 재현탁하였다. 재현탁된 락토바실리를 새로 생장된 스트렙토코커스 뮤탄스 배양액과 1:3의 부피비로 혼합하고, 대조군 실험을 포함한 응집을 실시예 4에서와 같이 검정하였다.

스트렙토코커스 뮤탄스를 향한 언급된 락토바실리의 응집 거동은 동결건조 또는 저장 절차에 의해 변화되지 않았다.

실시예 12: 동결건조에 대한 응집 거동의 감수성

락토바실리를 실시예 1에 기재된 바와 같이 생장시켰다. 뮤탄스 연쇄상구균을 실시예 1 및 3에 기재된 바와 같이 생장시키고 염색하였다. 생장된 락토바실리 배양액을 실시예 1에 기재된 바와 같이 2의 OD₆₀₀으로 조절하였다. 현탁액 1 ml를 실온에서 진공하에 2시간 동안 동결건조시켰다. 그 후, 동결건조된 펠렛을 PBS-완충액 1 ml에서 재현탁하였다. 대조군 실험을 포함한 응집을 실시예 5에 기재된 바와 같이 측정하였다.

뮤탄스 연쇄상구균을 향한 언급된 락토바실리의 응집 거동은 동결건조에 의해 변화되지 않았다.

실시예 13: 프로테아제 내성에 대한 시험

세균을 실시예 1 에서와 같이 생장시켰다.

사용된 프로테아제는 프로나제 E, 프로테이나제 K, 트립신, 키모트립신 (모두 독일 소재의 시그마(Sigma)로부터 수득됨)이었다. 3200 x g에서 10분 동안 원심분리에 의해 세포를 수확하고, PBS-완충액 (pH 7.0) 1 ml에서 펠렛을 재현탁함으로써, 락토바실리 1 ml 분취액을 PBS-완충액에서 세척하였다. 그 후, 세포를 상기 기재된 바와 같이 다시 수확하고, 2.5 mg/mL의 최종 농도로 각각의 프로테아제를 함유하는 PBS-완충액 (pH 7.0)에서 재현탁하였다. 현탁액을 1시간 동안 37℃에서 인큐베이션하였다. 그 후, 세포를 세척하고, 상기 기재된 바와 같이 PBS-완충액 (pH 7.0)에서 재현탁하였다.

대조군 실험을 포함한 응집을 실시예 3에서와 같이 검정하였다. 스트렙토코커스 뮤탄스를 향한 언급된 락토바실리의 응집 거동은 어떠한 언급된 프로테아제에 의한 처리에 의해서도 변하지 않았다.

실시예 14: 락토바실리의 응집 거동의 프로테아제 감수성

실시예 1에 기재된 바와 같이 락토바실리를 생장시켰다. 뮤탄스 연쇄상구균을 실시예 1 및 3에 기재된 바와 같이 생장시키고 염색하였다. 사용된 프로테아제는 프로나제 E, 프로테이나제 K, 트립신, 키모트립신 (모두 독일 소재의 시그마로부터 수득됨)이었다. 3200 x g에서 10분 동안 원심분리에 의해 세포를 수확하고, PBS-완충액 (pH 7.0) 1 ml에서 펠렛을 재현탁함으로써, 락토바실리 1 ml 분취액을 PBS-완충액에서 세척하였다. 그 후, 세포를 상기 기재된 바와 같이 다시 수확하고, 2.5 mg/mL의 최종 농도로 각각의 프로테아제를 함유하는 PBS-완충액 (pH 7.0)에서 재현탁하였다. 현탁액을 1시간 동안 37℃에서 인큐베이션하였다. 그 후, 세포를 세척하고, 상기 기재된 바와 같이 PBS-완충액 (pH 7.0)에서 재현탁하였다. 대조군 실험을 포함한 응집을 실시예 5에 기재된 바와 같이 검정하였다. 뮤탄스 연쇄상구균을 향한 언급된 락토바실리의 응집 거동은 어떠한 언급된 프로테아제에 의한 처리에 의해서도 변하지 않았다.

실시예 15: 응집 거동의 이온 의존성

실시예 1 에서와 같이 세균을 생장시켰다. 락토바실리 1 ml 분취액을 200 mM EDTA 용액 1 ml에서 상기 기재된 바와 같이 2회 세척하였다. 그 후, 세포를 수확하고, PBS-완충액 (pH 7.0) 1 ml에서 재현탁하였다.

응집을 실시예 4에서와 같이 검정하고, 응집 능력의 완전한 손실을 관찰하였다. 200 mM EDTA-용액에서 2회 세척한 후, 2 mM 칼슘 용액 1 ml 중 락토바실리의 재현탁액은 스트렙토코커스 뮤탄스를 응집시킬 수 있는 능력을 회복하였다. 최대 100 mM 마그네슘 용액 중 EDTA 세척 세포의 재현탁액은 스트렙토코커스 뮤탄스를 응집시킬 수 있는 능력을 회복하지 못하였다.

실시예 16: 응집 거동의 이온 의존성

실시예 1에 기재된 바와 같이 락토바실리를 생장시켰다. 뮤탄스 연쇄상구균을 실시예 1 및 3에 기재된 바와 같이 생장시키고 염색하였다. 락토바실리 1 ml 분취액을 200 mM EDTA 용액 1 ml에서 상기 기재된 바와 같이 2회 세척하였다. 그 후, 세포를 수확하고, PBS-완충액 (pH 7.0) 1 ml에서 재현탁하였다. 응집을 실시예 5에 기재된 바와 같이 검정하고, 응집 능력의 완전한 손실을 관찰하였다. 200 mM EDTA-용액에서 2회 세척한 후, 2 mM 칼슘 용액 1 ml 중 락토바실리의 재현탁액은 스트렙토코커스 뮤탄스를 응집시킬 수 있는 능력을 회복하였다. 최대 100 mM 마그네슘 용액 중 EDTA 세척 세포의 재현탁액은 뮤탄스 연쇄상구균을 응집시킬 수 있는 능력을 회복하지 못하였다.

실시예 17: 타액의 존재하에 응집 시험

실시예 1에 기재된 바와 같이 세균을 생장시켰다. 스트렙토코커스 뮤탄스 배양액의 2 ml 분취액을 상기 기재된 바와 같이 수확하고, 타액 2 ml에서 재현탁하였다. 2 명의 지원자가 타액을 제공하고, 수득후 즉시 사용하였다. 실시예 4 에서와 같이 응집을 검정하였다.

스트렙토코커스 뮤탄스를 향한 언급된 락토바실리의 응집 거동은 타액의 존재하에 변화하지 않았다.

실시예 18: 타액의 존재하에 뮤탄스 연쇄상구균의 응집

지원자로부터 신선한 타액을 샘플링하였다. 당-비함유 추잉검을 씹게 하여 타액-흐름을 유도하였다. 지원자는 샘플링 각각에 의해 타액 15 ml를 수집하였다. 신선하게 수집된 타액을 검정 절차를 위해 PBS-완충액에 의해 1:2로 희석하였다. 실시예 1에 기재된 바와 같이 락토바실리 및 뮤탄스 연쇄상구균을 배양하였다. 염색 절차후 염색된 세포를 PBS-완충액 대신에 타액에서 재현탁한 것을 제외하고, 실시예 3에 기재된 바와 같이 뮤탄스 연쇄상구균을 염색하였다. 실시예 5에 기재된 바와 같이 대조군 실험을 포함한 응집을 측정하였다. 타액 존재는 응집을 억제하지 않았다.

단리 실시예 1 : 추가 락토바실리의 수득

락토바실리는 예를 들어 적은 양의 우식증 및/또는 치석이 있는 지원자들의 구강용 면봉에 의해 임의의 공급원으로 수득될 수 있다. 또한, 락토바실리는 DSMZ 및 ATCC 과 같은 세포 배양 수집소에서, 또는 젖산균들의 여타 공급원, 예를 들어 식물, 식품 및 사료로부터 수득될 수 있다. 이어서, 수득한 균주들은 표준 미생물학적 기법으로 정제된다. 젖산균에 대한 선별 배지는 예를 들어 문헌 [Rogosa et al. 1951, A selective medium for the isolation of oral and fecal lactobacilli, J. Bacteriol. 62: 132-133] 에 기재되어 있다.

선별 균주는 실시예 1 에 기재된 바와 같이 생장시켰다. 결합에 대한 선별은 단리 실시예 2 에 기재된 바와 같이 수행한다.

단리 실시예 2:

염색된 스트렙토코커스 뮤탄스 (DSMZ 20523) 를 제조하고, 실시예 5 에 기재된 바와 같이 96 웰 마이크로타이트 플레이트에 분배했다. 실시예 5 에 기재된 바와 같이, 실시예 1 에 따라 생장시킨 결합용의 50 μl 의 균주를 각 마이크로타이터 플레이트에 첨가하고, 최대 속도로 12 분 동안 와류시켰다. 이후, 플레이트를 500 x g 에서 10 초간 원심분리하고 상청액을 조심스럽게 제거했다. 펠렛을 100 μl PBS 에 재현탁시키고, 현탁액의 형광을 실시예 5 에 기재된 바와 같이 측정했다.

이어서, 스크리닝할 균주를 S. mutans DSMZ 20523, S. sobrinus DSMZ 20742, S. cricetus DSMZ 20562, S. ratti DSMZ 20564, S. ferus DSMZ 20646 및 S. macacae DSMZ 20724 에 대한 결합에 대해 상기 실시예 5 에 기재된 바와 같이 시험했다. 양성 결합제들은 응집물을 제공하는 것으로 나타났다.

식품 및 사료 실시예 1: 강아지 사료

주성분: 쇠고기, 현미, 캐놀라 종자, 아마씨 추말, 해바라기씨, 메밀씨 (소바), 보리, 기장.

더 적은 성분: 당근, 붉은 비트, 브로콜리, 올레산이 풍부한 해바라기 오일, 캐놀라 오일, 바다 소금, 오레가노, 마늘, 소르브산, 프로폴리스, 비타민 (비타민 A, B12, D3, C, E, 티아민, 리보플라빈, 피리독신, 비오틴, 엽산, 판토테네이트, 나이아신), 무기질 (크롬, 나트륨셀레나이트, 철, 구리 시트레이트, 아연 설페이트, 코발트).

상기 주성분 및 더 적은 성분이 있는 1 kg 의 베이스 조성물에, 3 g 의 말린 오토클레이브한 결합성 미생물 및 그의 단편을 첨가했다. 미생물 재료는 결합성 미생물을 실시예 1 에 기재된 바와 같이 생장시켜 준비했다. 즉, 젖산균을 MRS-배지에서 생장시켰다. 5 ml MRS-배지에 10 μl 의 스톡을 접종하고, 3 일간 37℃ 에서 호기성 조건 하에 인큐베이션했다. 원심분리로 미생물을 펠렛으로 만들고, PBS 로 1 회 세척했다. 재현탁된 미생물을 상기 실시예 8 에 기재된 바와 같이 오토클레이브했다. 오토클레이브한 미생물을 오븐에서 75℃ 로 밤새 건조시켜 말린 열-불활성화 결합성 미생물 및 그의 단편을 수득했다. 강아지 사료는 각각의 기탁된 락토바실리 균주 DSMZ 16667, 16668, 16669, 16670, 16671, 16672 및 16673 를 따로따로 이용해 제조하여 7 개의 개별적인 강아지 사료를 수득했다.

하기 부의 총 함량이 존재했다 (전체 사료의 중량%):

단백질 (최소값) 26.0

지방 (최소값) 14.0

섬유소 (최대값) 5.0

수분 (최대값) 10.5

개 사료

주성분: 쇠고기, 현미, 캐놀라 종자, 아마씨 추말, 해바라기씨, 메밀씨 (소바), 보리, 기장.

더 적은 성분: 당근, 붉은 비트, 브로콜리, 올레산이 풍부한 해바라기 오일, 캐놀라 오일, 바다 소금, 오레가노, 마늘, 아스코르브산, 프로폴리스, 비타민 (즉, 비타민 A, B12, D3, C, E, 티아민, 리보플라빈, 피리독신, 비오틴, 엽산, 판토테네이트, 나이아신), 무기질 (크롬, 나트륨셀레나이트, 철, 구리 시트레이트, 아연 설페이트, 코발트).

강아지 사료에 대해 기재한 바와 같이, 7 개의 개 사료 제제를 기탁된 젖산균 균주 DSMZ 16667, 16668, 16669, 16670, 16671, 16672 및 16673 를 따로따로 이용하여 제조했다.

하기 부의 총 함량이 존재했다 (전체 사료의 중량%):

단백질 (최소값) 20.0

지방 (최소값) 12.0

섬유소 (최대값) 5.0

수분 (최대값) 10.5

식물만 섭취하는 개 사료.

주성분: 대두 추말, 현미, 캐놀라 종자, 아마씨 추말, 해바라기씨, 메밀씨, 보리, 기장,

더 적은 성분: 당근, 붉은 비트, 브로콜리, 올레산이 풍부한 해바라기 오일, 캐놀라 오일, 바다 소금, 오레가노, 마늘, 아스코르브산, 프로폴리스, 비타민 (즉, 비타민 A, B12, D3, C, E, 티아민, 리보플라빈, 피리독신, 비오틴, 엽산, 판토테네이트, 나이아신), 무기질 (즉, 크롬, 나트륨셀레나이트, 철, 구리 시트레이트, 아연 설페이트, 코발트).

강아지 사료에 대해 기재한 바와 같이 7 가지의 식물만 섭취하는 개 사료 제제를 기탁된 젖산균 균주 DSMZ 16667, 16668, 16669, 16670, 16671, 16672 및 16673 를 따로따로 이용하여 제조했다.

하기 부의 전체 함량이 존재했다 (전체 사료의 중량%):

단백질 (최소값) 20.0

지방 (최소값) 12.0

섬유소 (최대값) 9.0

수분 (최대값) 10.5.

모든 식품 제제를 적정 연령 (각각, 1 내지 8 월령, 2 내지 4 세 및 2 내지 4 세) 의 5 마리 개가 있는 각각의 군에 1 일 1 회 제공했다. 개가 원하는 대로, 다른 표준 사료를 하루 중 다른 시간에 제공했다. 그러나, 본 발명에 따른 상기 식품 제제를 제외하고는, 특히 구강 건강을 촉진하는 것으로 광고하는 각 제조사의 여타 사료는 제공하지 않았다. 6 개월 후, 개들에게서 치석이 발생하지 않았다. 또한, 최종 사료제공 3 시간 후 10 명의 지원자가 측정한 개의 구취는 용인가능한 것으로 간주되었다.

식품 및 사료 실시예 2: 개 저작용 제품

각각의 결합성 미생물 균주 DSMZ 16667, 16668, 16669, 16670, 16671, 16672 및 16673 의 배양에 소의 생가죽 조각을 담갔다. 결합성 미생물을 식품 및 사료 실시예 1 에 기재된 바와 같이 생장시켰다. 이어서, 생가죽 조각을 뼈 모양으로 만들고, 식품 및 사료 실시예 1 에 기재된 바와 같이 오토클레이브했다.

오토클레이브한 조각을 대기 중에 건조시켰다. 말린 뼈 모양의 조각을 치석을 제거한 5 내지 8 세의 개 5 마리에 제공했다. 이어서, 새로이 말린 뼈 모양의 스트립을 주 2 회씩 제공했다. 말린 뼈 모양의 조각을 제외하고는, 개들에게 치석 제거 전과 같이 사료를 제공했다. 8 개월 내에, 개들에게서 치석이 다시 발생하지 않았다. 또한, 최종 사료제공 3 시간 후 10 명의 지원자가 측정한 개의 구취는 용인가능한 것으로 간주되었다.

식품 및 사료 실시예 3: 추가적인 개 사료

강아지 사료:

주성분: 닭고기, 닭고기 추말, 보리, 완두콩, 현미, 분쇄하여 압출시킨 통째의 대두, 닭고기 지방 (혼합 토코페롤로 보존처리).

더 적은 성분: 연어 추말, 천연 닭고기 간 풍미제, 말린 양조 효모, 통째의 아마씨, 말린 난류, 사과, 당근, 디칼슘 포스페이트, 칼륨 클로라이드, 소금, 무기질 (즉, 아연 단백질 화합물, 철 단백질 화합물, 구리 단백질 화합물, 망간 단백질 화합물, 나트륨셀레나이트, 코발트 단백질 화합물, 칼슘 요오데이트), 콜린 클로라이드, 비타민 (즉, 비타민 E 보충물, 1-아스코르빌-2-폴리포스페이트, 비타민 B12 보충물, d-칼슘 판토테네이트, 비타민 A 보충물, 나이아신, 리보플라빈, 엽산, 비오틴, 피리독신 히드로클로라이드, 티아민 모노니트레이트, 비타민 D3 보충물, 칼슘 카르보네이트), 효모 배양물 (saccharomyces cerevisiae), 말린 엔테로코커스 파에시움 발효 생성물, 말린 락토바실러스 아시도필러스 발효 추출물, 말린 아스페르길루스 니게르 발효 생성물, 발린 트리코데르마 롱기브라치아툼 발효 추출물, 말린 고초균 발효 추출물 및 발효 가용화물들.

하기 부 수의 전체 함량이 존재했다 (전체 사료의 중량%):

단백질 중량% (최소값): 28.0

지방 중량% (최소값): 15.0

섬유소 중량% (최대값): 3.5

수분 중량% (최대값): 10.0.

개 사료:

주성분: 닭고기, 닭고기 추말, 보리, 완두콩, 귀리, 현미, 닭고기 지방 (혼합 토코페롤로 보존처리).

더 적은 성분: 천연 닭고기 간 풍미제, 말린 양조 효모, 연어 추말, 말린 난류, 사과, 통째의 아마씨, 당근, 디칼슘 포스페이트, 칼륨 클로라이드, 소금, 무기질 (즉, 아연 단백질 화합물, 철 단백질 화합물, 구리 단백질 화합물, 망간 단백질 화합물, 나트륨셀레나이트, 코발트 단백질 화합물, 칼슘 요오데이트), 콜린 클로라이드, 비타민 (즉, 비타민 E 보충물, 1-아스코르빌-2-폴리포스페이트, 비타민 B12 보충물, d-칼슘 판토테네이트, 비타민 A 보충물, 나이아신, 리보플라빈, 엽산, 비오틴, 피리독신 히드로클로라이드, 티아민 모노니트레이트, 비타민 D3 보충물), 글루코사민 히드로클로라이드, 콘드로이틴 설페이트, 효모 배양물 (saccharomyces cerevisiae), 말린 엔테로코커스 파에시움 발효 생성물, 말린 락토바실러스 아시도필러스 발효 추출물, 말린 아스페르길루스 니게르 발효 추출물, 발린 트리코데르마 롱기브라치아툼 발효 추출물, 말린 고초균 발효 추출물 및 발효 가용화물들.

하기 부 수의 전체 함량이 존재했다 (전체 사료의 중량%):

단백질 중량% (최소값): 26.0

지방 중량% (최소값): 13.0

섬유소 중량% (최대값): 3.5

수분 중량% (최대값): 10.0.

체중조절용 개 사료:

주성분: 현미, 닭고기 추말, 보리, 귀리, 완두콩, 닭고기, 닭고기 지방 (혼합 토코페롤로 보존처리).

더 적은 성분: 천연 닭고기 간 풍미제, 말린 양조 효모, 연어 추말, 말린 난류, 사과, 전체 아마씨, 당근, 디칼슘 포스페이트, 칼륨 클로라이드, 소금, 무기질 (즉, 아연 단백질 화합물, 철 단백질 화합물, 구리 단백질 화합물, 망간 단백질 화합물, 나트륨셀레나이트, 코발트 단백질 화합물, 칼슘 요오데이트), 콜린 클로라이드, 비타민 (즉, 비타민 E 보충물, 1-아스코르빌-2-폴리포스페이트, 비타민 B12 보충물, d-칼슘 판토테네이트, 비타민 A 보충물, 나이아신, 리보플라빈, 엽산, 비오틴, 피리독신 히드로클로라이드, 티아민 모노니트레이트, 비타민 D3 보충물), 글루코사민 히드로클로라이드, 콘드로이틴 설페이트, 효모 배양물 (saccharomyces cerevisiae), 말린 엔테로코커스 파에시움 발효 생성물, 말린 락토바실러스 아시도필러스 발효 생성물, 말린 아스페르길루스 니게르 발효 추출물, 발린 트리코데르마 롱기브라치아툼 발효 추출물, 말린 고초균 발효 추출물 및 발효 가용화물들.

하기와 같은 부 수의 총 함량이 있었다 (전체 사료의 중량%):

단백질 중량% (최소값): 24.0

지방 중량% (최소값): 10.0

섬유소 중량% (최대값): 3.5

수분 중량% (최대값): 10.0.

식품 및 사료 실시예 1, 7 의 강아지용 사료에 기재된 바와 같이, 상응하는 개 사료 제제를 기탁된 락토바실러스 균주 DSMZ 16667, 16668, 16669, 16670, 16671, 16672 및 16673 를 따로따로 이용해 제조했다.

고단백 식이 개 사료:

주성분: 뼈를 발라낸 닭고기, 닭고기 추말, 칠면조 추말, 적갈색 감자, 민물 화이트피쉬, 닭고기 지방 (토코페롤로 보존처리).

더 적은 성분: 고구마, 통째의 난류, 칠면조, 연어 추말, 연어 및 앤초비 오일, 연어, 천연 치킨 풍미, 해바라기 오일, 일광건조 알파파, 건조시킨 브라운 켈프, 당근, 시금치, 완두콩, 토마토, 사과, 금불초, 덜스, 치커리 뿌리, 감초 뿌리, 울금 뿌리, 호로파, 글루코사민 HCI, 크랜베리, 까치밥나무 열매, 금잔화 꽃, L-카르니틴, 스위트 펜넬, 옥수수, 페퍼민트 잎, 카모마일 꽃, 민들레, 여름 세이보리, 로즈마리 추출물, 콘드로이틴 설페이트, 로즈힙, 비타민 (즉, 비타민 E, 콜린 클로라이드, 비타민 A, 비타민 D3, 티아민 모노니트레이트, 비타민 B12, 엽산, 비오틴), 바다 소금, 무기질 (즉, 철 단백질 화합물, 아연 단백질 화합물, 망간 단백질 화합물, 구리 단백질 화합물), 말린 락토바실러스 아시도필러스 발효 생성물, 말린 엔테로코코스 파에시움 발효 생성물.

하기와 같은 부수의 전체 함량이 존재했다 (전체 사료의 중량%):

단백질 최소량: 42 중량%

지방 최소량: 16 중량%

섬유소 최대량 3 중량%

수분 최대량: 10 중량%

회분 최대량: 7 중량%.

식품 및 사료 실시예 1, 7 의 강아지용 사료에 기재된 바와 같이, 상응하는 개 사료 제제를 기탁된 락토바실러스 균주 DSMZ 16667, 16668, 16669, 16670, 16671, 16672 및 16673 를 따로따로 이용해 제조했다.

식물만 섭취하는 개 사료:

주성분: 현미, 캐놀라 종자, 아마씨 추말, 해바라기씨, 메밀씨 (소바), 보리, 기장, 당근, 붉은 비트, 브로콜리, 올레산이 풍부한 해바라기 오일.

더 적은 성분: 캐놀라 오일, 바다 소금, 오레가노, 마늘, 아스코르브산, 프로폴리스, 비타민 (즉, 비타민 A, B12, D3, C, E, K3, 티아민, 리보플라빈, 피리독신, 비오틴, 엽산, 판토테네이트, 나이아신), 무기질 (즉, 크롬, 나트륨셀레나이트, 철, 구리 시트레이트, 아연 설페이트, 코발트).

하기 부 수의 전체 함량이 존재했다 (전체 사료의 중량%):

단백질 최소량: 20 중량%

지방 최소량: 12 중량%

섬유소 최대량: 9 중량%

수분 최대량: 10.5 중량%.

식품 및 사료 실시예 1, 7 의 강아지용 사료에 기재된 바와 같이, 상응하는 개 사료 제제를 기탁된 락토바실러스 균주 DSMZ 16667, 16668, 16669, 16670, 16671, 16672 및 16673 를 따로따로 이용해 제조했다.

추가 구현예들 :

1. 결합성 미생물 또는 그의 단편으로서, 상기미생물 또는 그의 단편이 뮤탄스 연쇄상구균 (mutans Streptococci) 의 군의 연쇄상구균 균주의 한가지 이상, 바람직하게는 두가지 이상, 더욱 바람직하게는 세가지 이상에 결합할 수 있고, 상기 결합이 열 처리에 내성이고/이거나 프로테아제 처리에 대해 내성이고/이거나 칼슘에 좌우되고/되거나 4.0 을 상회하는 pH 범위에서 형성되고/되거나 마그네슘에 독립적이고/이거나 타액의 존재 하에 형성되는, 구강 관리제로서의 결합성 미생물 또는 그의 단편.

2. 구현예 1 에 있어서, 상기 결합이 55℃, 바람직하게는 65℃, 더욱 바람직하게는 95 내지 121℃, 가장 바람직하게는 121℃ 의 열 처리에 내성인 결합성 미생물 또는 그의 단편.

3. 구현예 1 에 있어서, 상기 결합이 15 분 이상, 바람직하게는 15 내지 120 분, 바람직하게는 15 내지 30 분, 가장 바람직하게는 20 분 동안의 열 처리에 내성인 결합성 미생물 또는 그의 단편.

4. 구현예 3 에 있어서, 상기 결합이 1 내지 5 바아, 바람직하게는 1 내지 3 바아, 더욱 바람직하게는 2 바아의 압력의 포화된 스팀 중의 열 처리에 내성인결합성 미생물 또는 그의 단편.

5. 구현예 1 에 있어서, 상기 결합이 1 내지 5 바아, 바람직하게는 1 내지 3 바아, 더욱 바람직하게는 2 바아의 압력의 포화된 스팀 중의, 95 내지 121℃, 더욱 바람직하게는 121℃ 의 온도에서의, 15 분 이상, 바람직하게는 15 내지 120 분, 바람직하게는 15 내지 30 분, 가장 바람직하게는 20 분 동안의 열 처리에 내성인 결합성 미생물 또는 그의 단편.

6. 구현예 1 에 있어서, 상기 결합이 2 바아 이상의 압력 및 121℃ 의 온도에서의 20 분 동안의 포화된 스팀 중의 열 처리에 있는 것인 결합성 미생물 또는 그의 단편.

7. 구현예 1 에 있어서, 결합성 미생물 또는 그의 단편이 상기 결합이 프로나아제 E, 프로테이나제 K, 트립신 및/또는 키모트립신에 의한프로테아제 처리에 대해 내성이고, 바람직하게는 엘라스타아제, 트롬빈, 아미노펩티다아제 I, 카르복시펩티다아제, 도스트리페인, 엔도프로테이나제, 파파인, 카텝신 B, 펩신, 가스트로신, 키모신 및/또는 카텝신 D 에 의한 프로테아제 처리에 대해 내성인 결합성 미생물 또는 그의 단편.

8. 구현예 7 에 있어서, 상기 결합이 프로나아제 E, 프로테이나제 K, 트립신 및 키모트립신에 의한 프로테아제 처리에 대해 내성인 결합성 미생물 또는 그의 단편.

9. 구현예 7 에 있어서, 상기 결합이 엘라스타아제, 트롬빈, 아미노펩티다아제 I, 카르복시펩티다아제, 도스트리페인, 엔도프로테이나제, 파파인, 카텝신 B, 펩신, 가스트리신, 키모신 및 카텝신 D 에 의한 프로테아제 처리에 대해 내성인 결합성 미생물 또는 그의 단편.

10. 구현예 1 에 있어서, 상기 결합이 1 내지 5 바아, 바람직하게는 1 내지 3 바아, 더욱 바람직하게는 2 바아의 압력에서의, 95 내지 121℃, 더욱 바람직하게는 121℃ 의 온도에서의, 15 분 이상, 바람직하게는 15 내지 120 분, 바람직하게는 15 내지 30 분, 가장 바람직하게는 20 분 동안의 열처리에 내성이고; 또한 프로나아제 E, 프로테이나제 K, 트립신 및/또는 키모트립신에 의한 프로테아제 처리에 대해 내성이고, 바람직하게는 또한 엘라스타아제, 트롬빈, 아미노펩티다아제 I, 카르복시펩티다아제, 도스트리페인, 엔도프로테이나제, 파파인, 카텝신 B, 펩신, 가스트리신, 키모틴 및/또는 카텝신 D 에 의한 프로테아제 처리에 대해 내성인 결합성 미생물 또는 그의 단편.

11. 구현예 6 에 있어서, 상기 결합이 프로나아제 E, 프로테이나제 K, 트립신 및/또는 키모트립신에 의한 프로테아제 처리에 대해 내성이고, 바람직하게는 또한 엘라스타아제, 트롬빈, 아미노펩티다아제 I, 카르복시펩티다아제, 도스트리페인, 엔도프로테이나제, 파파인, 카텝신 B, 펩신, 가스트리신, 키모신 및/또는 카텝신 D 에 의한 프로테아제 처리에 대해 내성인 결합성 미생물 또는 그의 단편.

12. 구현예 8 에 있어서, 상기 결합이 열 처리에 내성이고, 상기 열 처리가 2 바아의 압력에서 121℃ 의 온도에서 20 분 동안의 포화된 스팀 중에 있는 결합성 미생물 또는 그의 단편.

13. 구현예 1 에 있어서, 상기 결합이 2 mM 이상, 더욱 바람직하게는 1 mM 이상, 가장 바람직하게는 0.05 mM 이상의 농도의 Ca^{2 +} 이온의 존재 여부에 의존성인 결합성 미생물 또는 그의 단편.

14. 구현예 1 에 있어서, 상기 결합이 0.05 내지 500 mM, 더욱 바람직하게는 1 내지 100 mM, 가장 바람직하게는 2 내지 30 mM 의 농도의 Ca^{2 +} 이온의 존재 여부에 의존성인 결합성 미생물 또는 그의 단편..

15. 구현예 12 또는 13 에 있어서, 상기 결합이 열 처리에 내성이고, 상기 열 처리가 2 바아의 압력에서 121℃ 의 온도에서 20 분 동안의 포화된 스팀 중에 있는 것인 결합성 미생물 또는 그의 단편.

16. 구현예 12 또는 13 에 있어서, 상기 결합이 프로나아제 E, 프로테이나제 K, 트립신 및/또는 키모트립신에 의한 프로테아제 처리에 대해 내성이고, 바람직하게는 또한 엘라스타아제, 트롬빈, 아미노펩티다아제 I, 카르복시펩티다아제, 도스트리페인, 엔도프로테이나제, 파파인, 카텝신 B, 펩신, 가스트리신, 키모신 및/또는 카텝신 D 에 의한 프로테아제 처리에 대해 내성인 결합성 미생물 또는 그의 단편.

17. 구현예 1 에 있어서, 상기 결합이 4.0 내지 9.0, 바람직하게는 4.0 내지 7.0, 더욱 바람직하게는 4.2 내지 5.0, 가장 바람직하게는 4.5 의 pH 에서 형성되는 결합성 미생물 또는 그의 단편.

18. 구현예 16 에 있어서, 상기 결합이 열 처리에 내성이고, 상기 열 처리가 2 바아의 압력에서 121℃ 의 온도에서 20 분 동안의 포화된 스팀 중에 있는 것인 결합성 미생물 또는 그의 단편.

19. 구현예 16 에 있어서, 상기 결합이 프로나아제 E, 프로테이나제 K, 트립신 및/또는 키모트립신에 의한 프로테아제 처리에 대해 내성이고, 바람직하게는 또한 엘라스타아제, 트롬빈, 아미노펩티다아제 I, 카르복시펩티다아제, 도스트리페인, 엔도프로테이나제, 파파인, 카텝신 B, 펩신, 가스트리신, 키모신 및/또는 카텝신 D 에 의한 프로테아제 처리에 대해 내성인 결합성 미생물 또는 그의 단편.

20. 구현예 16 에 있어서, 상기 결합이 2 mM 이상, 더욱 바람직하게는 1 mM 이상, 가장 바람직하게는 0.05 mM 이상의 농도의 Ca^{2 +} 이온의 존재 여부에 의존성인 결합성 미생물 또는 그의 단편.

21. 구현예 1 에 있어서, 상기 결합이 마그네슘 이온의 존재 여부에 독립적이고, 바람직하게는 열 처리에 내성이고, 상기 열 처리는 2 바아의 압력에서 121℃ 의 온도에서 20 분 동안의 포화된 스팀 중에 있는 것인 결합성 미생물 또는 그의 단편.

22. 구현예 1 에 있어서, 상기 결합이 타액의 존재 하에 형성되고, 바람직하게는 열 처리에 내성이고, 상기 열 처리는 2 바아의 압력에서 121℃ 의 온도에서 20 분 동안의 포화된 스팀 중에 있는 것인 결합성 미생물 또는 그의 단편.

23. 구현예 1 에 있어서, 상기 결합이 열 처리에 내성이고, 프로테아제 처리에 대해 내성이고, 타액의 존재 하에 형성되는 결합성 미생물 또는 그의 단편.

24. 상기 구현예들 중 임의의 것에 있어서, 돌연변이 연쇄상구균의 균주가 스트렙토코커스 뮤탄스 혈청형 c (DSMZ 20523), 스트렙토코커스 뮤탄스 혈청형 e (NCTC 10923), 스트렙토코커스 뮤탄스 혈청형 f (NCTC 11060), 스트렙토코커스 소브리누스 (Streptococcus sobrinus) DSM 20742, 스트렙토코커스 라티 (Streptococcus ratti) DSM 20564, 스트렙토코커스 크리세투스 (Streptococcus cricetus) DSM 20562, 스트렙토코커스 페루스 (Streptococcus ferus) DSM 20646 또는 스트렙토코커스 마카카에 DSM 20714 로 이루어진 군으로부터 선택되고, 바람직하게는 결합성 미생물 또는 그의 단편의 특이적 결합이 하기와 같이 검정될 수 있는 결합성 미생물 또는 그의 단편:

(a) 상기 결합성 미생물을 정지기로 생장시키거나, 또는 단편이 시험되는 경우, 상기 단편을 수득하고;

(b) 정지기로 생장된 돌연변이 뮤탄스 연쇄상구균과 상기 결합성 미생물 또는 그의 단편을 혼합하고;

(c) 상기 미생물 및 상기 뮤탄스 연쇄상구균의 응집물을 형성시키는 조건하에, 단계 (b)에서 얻은 혼합물을 인큐베이션하고;

(d) 펠렛의 발생에 의해 응집물을 검출함.

25. 구현예 1 내지 22 중 임의의 것에 있어서, 스트렙토코커스 뮤탄스 혈청형 c (DSMZ 20523), 스트렙토코커스 뮤탄스 혈청형 e (NCTC 10923), 스트렙토코커스 뮤탄스 혈청형 f (NCTC 11060) 로 이루어진 군으로부터 선택되는 각 균주에 결합할 수 있는 결합성 미생물 또는 그의 단편.

26. 구현예 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23 또는 24 에 있어서, 상기 미생물 또는 그의 단편이 스트렙토코커스 살리바리우스 아종 테르모필러스 (Streptococcus salivarius ssp . thermophilus), 스트렙토코커스 오랄리스 (Streptococcus oralis) (DSMZ 20066), 스트렙토코커스 오랄리스 (DSMZ 20395), 스트렙토코커스 오랄리스 (DSMZ 20627), 스트렙토코커스 미티스 (Streptococcus mitis) (DSMZ 12643) 및 스트렙토코커스 상귀니스 (Streptococcus sanguinis) (DSMZ 20567) 로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상, 바람직하게는 둘 이상, 더욱 바람직하게는 셋 이상, 더욱더 바람직하게는 전부에 결합하지 않는 결합성 미생물 또는 그의 단편.

27. 구현예 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24 또는 25 에 있어서, 상기 결합성 미생물이 락토바실러스 과, 바람직하게는 락토바실러스 속, 파라락토바실러스 속, 페디오코코스 속 또는 샤르페아 속, 더욱 바람직하게는 락토바실러스 파라카세이 종, 락토바실러스 람노수스 종, 락토바실러스 카세이 종 또는 락토바실러스 제애 종, 가장 바람직하게는 임의의 균주 DSMZ 16667, DSMZ 16668, DSMZ 16669, DSMZ 16670, DSMZ 16671, DSMZ 16672 또는 DSMZ 16673, 또는 이들의 돌연변이 또는 유도체인 결합성 미생물 또는 그의 단편.

28. 구현예 26 에 있어서, 상기 미생물 또는 그의 단편이 스트렙토코커스 뮤탄스 혈청형 c (DSMZ 20523), 스트렙토코커스 뮤탄스 혈청형 e (NCTC 10923), 스트렙토코커스 뮤탄스 혈청형 f (NCTC 11060) 로 이루어진 군으로부터 선택되는 각각의 균주에 결합할 수 있고, 스트렙토코커스 살리바리우스 아종 테르모필러스, 스트렙토코커스 오랄리스 (DSMZ 20066), 스트렙토코커스 오랄리스 (DSMZ 20395), 스트렙토코커스 오랄리스 (DSMZ 20627), 스트렙토코커스 미티스 (DSMZ 12643) 및/또는 스트렙토코커스 상귀니스 (DSMZ 20567) 로 이루어진 군으로부터 선택되는 미생물에는 결합할 수 없는 결합성 미생물 또는 그의 단편.

29. 구현예 26 또는 27 에 있어서, 2 바아의 압력 및 121℃ 의 온도에서 20 분간 포화된 스팀 중의 열 처리 후, 스트렙토코커스 뮤탄스 혈청형 c (DSMZ 20523), 스트렙토코커스 뮤탄스 혈청형 e (NCTC 10923), 스트렙토코커스 뮤탄스 혈청형 f (NCTC 11060), 스트렙토코커스 소브리누스 (Streptococcus sobrinus) DSM 20742, 스트렙토코커스 라티 (Streptococcus ratti) DSM 20564, 스트렙토코커스 크리세투스 (Streptococcus cricetus) DSM 20562, 스트렙토코커스 페루스 (Streptococcus ferus) DSM 20646 또는 스트렙토코커스 마카카에 (Streptococcus macacae) DSM 20714 로 이루어진 군으로부터 선택되는 뮤탄스 연쇄상구균에, 0.05 mM 이상의 칼슘 이온의 존재 하에, 그리고 타액의 존재 하에 프로나아제 E, 프로테이나제 K, 트립신 및/또는 키모트립신의 처리와는 독립적으로 결합하는 능력을 보유하고, 그러한 조건 하에 열 처리된 미생물 또는 그의 단편으로서, 스트렙토코커스 살리바리우스 아종 테르모필러스, 스트렙토코커스 오랄리스 (DSMZ 20066), 스트렙토코커스 오랄리스 (DSMZ 20395), 스트렙토코커스 오랄리스 (DSMZ 20627), 스트렙토코커스 미티스 (DSMZ 12643) 및/또는 스트렙토코커스 상귀니스 (DSMZ 20567) 로 이루어진 군으로부터 선택되는 미생물에는 결합할 수 없는 결합성 미생물 또는 그의 단편.

30. 구현예 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 또는 30 에 있어서, 결합성 미생물이 열 불활성화, 동결건조 또는 분사 건조에 의해 수득가능하거나 또는 수득되는 불활성화된 상태에 있고, 열 불활성화가 바람직하게는 하기에 의해 달성되는 결합성 미생물:

- 상기 결합성 미생물의 세포들을 121℃의 온도에서 20분 이상 동안 포화된 스팀의 존재하에 2 바아의 상압 (常壓) 에서 오토클레이브함, 또는

- 1시간 이상 동안 -20℃에서 동결시킴.

31. 구현예 29 에 있어서, 55℃ 이상, 바람직하게는 65℃ 이상, 더욱더 바람직하게는 95 내지 121℃ 의 온도, 가장 바람직하게는 121℃ 의 온도에서 열 불활성화에 의해 수득가능하거나 또는 수득되는 불활성화된 결합성 미생물.

32. 구현예 30 에 있어서, 15 분 이상, 바람직하게는 15 내지 120 분, 바람직하게는 15 내지 30　분, 가장 바람직하게는 20 분 동안의 열 불활성화에 의해 수득가능하거나 또는 수득되는 불활성화된 결합성 미생물.

33. 구현예 29, 30 또는 31 에 있어서, 1 내지 5 바아, 바람직하게는 1 내지 3 바아, 더욱 바람직하게는 2 바아의 압력에서, 가장 바람직하게는 2 바아의 압력 및 121℃ 의 온도에서의 20 분 동안의 포화된 스팀에서의 열 불활성화에 의해 수득가능하거나 또는 수득되는 불활성화된 결합성 미생물.

34. 상기 구현예 중 임의의 것에 있어서, 단편이 결합성 미생물의 용균물 또는 멤브레인 단편인 결합성 미생물의 단편.

35. 구현예 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32 또는 33 중 임의의 것에 있어서, 감각적으로 중립적인 구강 관리제로서의 결합성 미생물 또는 그의 단편.

36. 구현예 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32 또는 33 에 있어서, 항치석제, 감각적으로 중립적인 항-우식증제 및/또는 항구취제로서의 결합성 미생물 또는 그의 단편.

37. 구현예 35 에 있어서, 감각적으로 중립적인 항치석제, 감각적으로 중립적인 항-우식증제 및/또는 감각적으로 중립적인 항구취제로서의 결합성 미생물 또는 그의 단편.

38. 구현예 34, 35 또는 36 중 임의의 것에 있어서, 결합성 미생물 또는 그의 단편이 단리되거나 또는 정제된 결합성 미생물 또는 그의 단편인 결합성 미생물 또는 그의 단편.

39. 구현예 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36 또는 37 중 임의의 것에 따른 결합성 미생물 또는 그의 단편을 구강 관리제로서, 바람직하게는 항치석제, 항-우식증제 및/또는 항구취제로서 함유하는 조성물.

40. 구현예 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36 또는 37 에 따른 결합성 미생물 또는 그의 단편을 감각적으로 중립적인 구강 관리제로서, 바람직하게는 감각적으로 중립적인 항치석제, 감각적으로 중립적인 항-우식증제 및/또는 감각적으로 중립적인 항구취제로서 함유하는 조성물.

41. 구현예 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36 또는 37 중 임의의 것에 따른 결합성 미생물 또는 그의 단편을 하기와 같은 양으로 함유하는 조성물:

- 구취를 예방하거나 또는 그 정도를 감소시키기에 충분한 양, 및/또는

- 우식증을 예방하거나 또는 우식증 생성을 둔화시키기에 충분한 양,

- 치석 형성을 방지하거나 또는 치석 형성을 둔화시키기에 충분한 양.

42. 구현예 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 34, 35, 36 또는 37 중 임의의 것에 따른 결합성 미생물을 하기와 같은 농도로 함유하는 조성물:

- 10²-10¹³ 세포/mg, 바람직하게는 10²-10¹² 세포/mg, 더욱더 바람직하게는 10³-10⁸ 세포/mg, 또는

- 10²-10¹³ 세포/ml, 또는

- 전체 조성물에 대해 0.01 중량% 이상, 바람직하게는 0.01 내지 10 중량%, 더욱 바람직하게는 0.025 내지 2 중량%, 또는

- 0.01 mg 이상의 건 중량/전체 조성물 g, 바람직하게는 0.01 내지 100 mg 건 중량/전체 조성물 g, 더욱 바람직하게는 0.025 내지 2 mg 건 중량/전체 조성물 g.

43. 구현예 32, 33, 34, 35, 36 또는 37 중 임의의 것에 따른 결합성 미생물의 절편을 하기의 농도로 함유하는 조성물:

- 전체 조성물에 대해 0.01 중량% 이상, 바람직하게는 0.01 내지 10 중량%, 더욱 바람직하게는 0.025 내지 2 중량%, 또는

- 0.01 mg 이상의 건 중량/전체 조성물 g, 바람직하게는 0.01 내지 100 mg 건 중량/전체 조성물 g, 더욱 바람직하게는 0.025 내지 2 mg 건 중량/전체 조성물 g.

44. 구현예 38, 39, 40, 41 또는 42 중 임의의 것에 따라, 살아있거나, 열 불활성화되거나 또는 동결건조된 형태의 추가 미생물을 함유하고, 상기 열 불활성화된 형태가 1 내지 5 바아, 바람직하게는 1 내지 3 바아, 더욱 바람직하게는 2 바아의 압력에서의 포화된 스팀에서의 처리에 의해, 가장 바람직하게는 2 바아의 압력 및 121℃ 의 온도에서의 20 분간의 포화된 스팀에서의 열 불활성화에 의해 수득가능하거나 또는 수득되는 조성물.

45. 구현예 43 에 있어서, 추가적인 미생물이 바람직하게는 스트렙토코커스 살리바리우스의 생장을 자극할 수 있고, 스트렙토코커스 뮤탄스 및/또는 포르피로모나스 깅기발리스 (Porphyromonas gingivalis) 의 생장은 자극하지 않는, 구취를 예방, 개질 또는 감소시키기에 충분한 농도의 항구취 미생물인 조성물.

46. 구현예 44 에 있어서, 항구취 미생물이 락토바실러스 아시도필러스 (Lactobacillus acidophilus) 종의, 바람직하게는 락토바실러스 균주 DSMZ 19825, DSMZ 19826 또는 DSMZ 19827 의 임의의 것인 조성물.

47. 구현예 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44 또는 45 중 임의의 것에 있어서 하기와 같은 조성물,

- 조성물이 인간 또는 동물용으로, 치약, 치제, 치아용 분말, 국소 구강 겔, 세구제, 의치용 제품, 구강 스프레이, 로젠지제, 구강 정제, 추잉검, 마우스 워시, 치실, 저작용 제품 또는 식품, 사료 또는 음료용 첨가제이거나, 또는

- 조성물이 분말, 정제, 필름 조제물, 용액, 에어로졸, 과립, 환약, 현탁액, 에멀션, 캡슐, 시럽, 액체, 엘릭시르, 추출물, 팅크제 또는 액체 추출물, 시트형 식품, 병으로 가공한 식품, 캔으로 가공한 식품, 레토르트 식품 또는 액체 식품의 형태이거나, 또는

- 조성물이 검, 스프레이, 음료, 캔디, 이유식, 아이스크림, 냉동 디저트, 스위트 샐러드 드레싱, 우유 조제물, 치즈, 쿠아르크, 요구르트, 산성화 우유, 커피 크림, 거품 크림, 버터, 치즈, 가공 우유 및 탈지 우유, 육류 제품 - 바람직하게는 햄, 소시지, 및 햄버거, 생선 육류, 케이크 제품, 계란 제품 - 바람직하게는 조미 계란 롤 및 계란 응고유, 과자류 - 바람직하게는 쿠키, 젤리, 스낵, 및 츄잉 검 -, 빵, 국수, 피클, 훈제 제품, 건조 생선 및 조미료로 이루어진 군으로부터 선택되는 식품 또는 음료임.

48. 구현예 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44 또는 45 중 임의의 것에 있어서, 조성물이 식품 또는 사료 조성물인 조성물.

49. 구현예 47 에 있어서, 조성물이 유아용 또는 애완 동물, 바람직하게는 개, 고양이, 래트, 마우스, 햄스터, 기니 피그 또는 원숭이를 위한 조성물인 식품 또는 사료 조성물.

50. 구현예 48 에 있어서, 조성물이 애완 동물 저작용 제품, 바람직하게는 뼈, 롤, 도넛, 보우, 프렛첼, 8 자형 또는 칩의 형태인 애완 동물 식품 또는 사료 조성물.

51. 구현예 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47 또는 48 에 있어서, 조성물이 화장용, 약제학적 또는 수의학적 조성물인 조성물.

52. 하기를 함유하는 애완 동물 식품 또는 사료 조성물:

열 불활성화되거나 또는 동결건조된 형태의 불활성화된 결합성 미생물, 여기서 상기 불활성화된 미생물은 뮤탄스 연쇄상구균 군의 연쇄상구균 균주에 결합할 수 있고, 상기 결합은 타액의 존재 하에 형성되고, 열 처리에 내성이고, 칼슘에 좌우되고, 상기 열 처리는 2 바아의 압력 및 121℃ 의 온도에서 20　분 동안의 포화된 스팀 중의 처리임,

여기서, 상기 뮤탄스 연쇄상구균 균주는 스트렙토코커스 뮤탄스 혈청형 c (DSMZ 20523), 스트렙토코커스 뮤탄스 혈청형 e (NCTC 10923) 및 스트렙토코커스 뮤탄스 혈청형 f (NCTC 11060) 로 이루어진 군으로부터 선택되고,

그의 불활성화된 결합성 미생물은 스트렙토코커스 살리바리우스 아종 테르모필러스, 스트렙토코커스 오랄리스 (DSMZ 20066), 스트렙토코커스 오랄리스 (DSMZ 20395), 스트렙토코커스 오랄리스 (DSMZ 20627), 스트렙토코커스 미티스 (DSMZ 12643) 및/또는 스트렙토코커스 상귀니스 (DSMZ 20567) 로 이루어진 군으로부터 선택되는 미생물에는 결합할 수 없으며,

상기 결합성 미생물은, 감각적으로 중립적인 하기와 같은 양으로 존재함:

- 구취를 예방하거나 또는 그 정도를 감소시키기에 충분한 양, 및/또는

- 우식증을 예방하거나 또는 우식증 생성을 둔화시키기에 충분한 양, 및/또는

- 치석 형성을 방지하거나 또는 치석 형성을 둔화시키기에 충분한 양, 및/또는

53. 구현예 51 에 있어서, 불활성화된 결합성 미생물의 농도가 하기와 같은 애완 동물 식품 조성물:

- 10² 내지 10¹³ 세포/mg, 바람직하게는 10² 내지 10¹² 세포/mg, 더욱더 바람직하게는 10³ 내지 10⁸ 세포/mg, 또는

- 10² 내지 10¹³ 세포/ml, 또는

- 전체 조성물에 대해 0.01 중량% 이상, 바람직하게는 0.01 내지 10 중량%, 더욱 바람직하게는 0.025 내지 2 중량%, 또는

- 0.01 mg 이상의 건 중량/전체 조성물 g, 바람직하게는 0.01 내지 100 mg 건 중량/전체 조성물 g, 더욱 바람직하게는 0.025 내지 2 mg 건 중량/전체 조성물 g.

54. 구현예 33 의 단편을 하기와 같은 농도로 함유하는 애완 동물 식품 또는 사료 조성물:

- 전체 조성물에 대해 0.01 중량% 이상, 바람직하게는 0.01 내지 10 중량%, 더욱 바람직하게는 0.025 내지 2 중량%, 또는

- 0.01 mg 이상의 건 중량/전체 조성물 g, 바람직하게는 0.01 내지 100 mg 건 중량/전체 조성물 g, 더욱 바람직하게는 0.025 내지 2 mg 건 중량/전체 조성물 g.

55. 구현예 1 내지 37 중 임의의 것에 따른 결합성 미생물 또는 그의 단편의, 감각적으로 중립적인 구강 관리제로서의, 바람직하게는 감각적으로 중립적인 항치석제 및/또는 감각적으로 중립적인 항-우식증제 및/또는 감각적으로 중립적인 항구취제로서의 용도.

56. 임의의 하기 의약 제조를 위한 구현예 1 내지 37 중 임의의 것에 다른 결합성 미생물 또는 그의 단편의 용도:

- 치석 형성의 예방 또는 치료용 의약,

- 우식증의 예방 또는 치료용 의약,

- 구취의 예방 또는 치료용 의약,

여기서, 결합성 미생물 및/또는 그의 단편은 감각적으로 중립적인 양으로 존재함.

Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH DSMZDSM16667 20040826 Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH DSMZDSM16668 20040826 Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH DSMZDSM16669 20040826 Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH DSMZDSM16670 20040826 Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH DSMZDSM16671 20040826 Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH DSMZDSM16672 20040826 Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH DSMZDSM16673 20040826

Claims (15)

1. 결합성 미생물 또는 그의 단편의 바람직하게는 감각적으로 중립적인 구강 관리제로서의 용도로서, 여기서 결합성 미생물이 젖산균이고, 결합성 미생물 또는 그의 단편이 각각 뮤탄스 연쇄상구균 (mutans Streptococci) 의 군의 미생물에 결합할 수 있으며, 상기 결합이 하기와 같은 용도:
   (i) 열 처리에 대해 내성임 및/또는
   (ii) 프로테아제 처리에 대해 내성임 및/또는
   (iii) 칼슘에 좌우됨 및/또는
   (iv) 4.5 내지 8.5 의 pH 범위에서 형성됨, 및/또는
   (v) 타액의 존재 하에 형성됨 및/또는
   (vi) 마그네슘에 독립적임.
2. 화장용, 제약용 또는 수의용 조성물 제조를 위한 결합성 미생물 또는 그의 단편의 용도로서, 상기 조성물이 구강 관리 조성물이고, 결합성 미생물이 감각적으로 중립적인 양으로 사용되고, 결합성 미생물이 젖산균이고, 결합성 미생물 또는 그의 단편이 각각 뮤탄스 연쇄상구균의 군의 미생물에 결합할 수 있고 상기 결합이 하기와 같은, 용도:
   (i) 열 처리에 대해 내성임 및/또는
   (ii) 프로테아제 처리에 대해 내성임 및/또는
   (iii) 칼슘에 좌우됨 및/또는
   (iv) 4.5 내지 8.5 의 pH 범위에서 형성됨, 및/또는
   (v) 타액의 존재 하에 형성됨 및/또는
   (vi) 마그네슘에 독립적임.
3. 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서, 결합성 미생물 또는 그의 단편이 하나 이상의 균주, 바람직하게는 둘 이상의 균주, 더욱 바람직하게는 셋 이상의 균주에 결합할 수 있고, 상기 균주가 스트렙토코커스 뮤탄스 혈청형 c (DSMZ 20523), 스트렙토코커스 뮤탄스 혈청형 e (NCTC 10923), 스트렙토코커스 뮤탄스 혈청형 f (NCTC 11060), 스트렙토코커스 소브리누스 (Streptococcus sobrinus) DSM 20742, 스트렙토코커스 라티 (Streptococcus ratti) DSM 20564, 스트렙토코커스 크리세투스 (Streptococcus cricetus) DSM 20562, 스트렙토코커스 페루스 (Streptococcus ferus) DSM 20646 또는 스트렙토코커스 마카카에 (Streptococcus macacae) DSM 20714 로 이루어진 군으로부터 선택되는 용도.
4. 제 1 항 내지 제 3 항 중 어느 한 항에 있어서, 결합성 미생물 또는 그의 단편이 스트렙토코커스 살리바리우스 아종 테르모필러스 (Streptococcus salivarius ssp. thermophilus), 스트렙토코커스 오랄리스 (Streptococcus oralis) (DSMZ 20066), 스트렙토코커스 오랄리스 (DSMZ 20395), 스트렙토코커스 오랄리스 (DSMZ 20627), 스트렙토코커스 미티스 (Streptococcus mitis) (DSMZ 12643) 및/또는 스트렙토코커스 상귀니스 (Streptococcus sanguinis) (DSMZ 20567) 로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상, 바람직하게는 둘 이상, 더욱 바람직하게는 셋 이상, 가장 바람직하게는 임의의 미생물에 결합하지 않는 용도.
5. 제 1 항 내지 제 4 항 중 어느 한 항에 있어서, 결합성 미생물이 열 불활성화되거나 또는 동결건조된 형태이고/이거나,
   결합성 미생물이 락토바실러스 (Lactobacillaceae) 과, 바람직하게는 락토바실러스 (Lactobacillus) 속, 파라락토바실러스 (Paralactobacillus) 속, 페디오코코스 (Pediococcus) 속 또는 샤르페아 (Sharpea) 속, 더욱 바람직하게는 락토바실러스 파라카세이 (Lactobacillus paracasei) 종, 락토바실러스 람노수스 (Lactobacillus rhamnosus) 종, 락토바실러스 카세이 (Lactobacillus casei) 종 또는 락토바실러스 제애 (Lactobacillus zeae) 종, 가장 바람직하게는 임의의 균주 DSMZ 16667, DSMZ 16668, DSMZ 16669, DSMZ 16670, DSMZ 16671, DSMZ 16672 또는 DSMZ 16673, 또는 이들의 돌연변이 또는 유도체인 용도.
6. 제 1 항 내지 제 5 항 중 어느 한 항에 있어서, 결합성 미생물 또는 그의 단편의
   - 바람직하게는 감각적으로 중립적인 항치석제로서의 또는 치석의 예방 또는 치료용 조성물 제조용 및/또는
   - 감각적으로 중립적인 항우식제로서의 또는 우식증의 예방 또는 치료용인 감각적으로 중립적인 조성물 제조용 및/또는
   - 바람직하게는 감각적으로 중립적인 구취 방지제로서의 또는 구취의 예방 또는 치료용 조성물의 제조용
   의 용도.
7. 제 1 항 내지 제 6 항 중 어느 한 항에 있어서, 미생물이 하기와 같은 미생물로 이루어진 군으로부터 선택되고:
   (i) D-락토스를 대사하나, L-소르보스 및/또는 D-사카로스 및/또는 D-이눌린을 대사하지 않고,
   (ii) 이눌린을 대사하고,
   (iii) L-소르보스를 대사하나, D-락토스 및/또는 D-사카로스 및/또는 이눌린을 대사하지 않고,
   (iv) L-소르보스, D-락토스 및 이눌린을 대사함
   바람직하게는, 상기 미생물이 하기와 같은 미생물로 이루어진 군으로부터 선택되는 용도:
   (i) D-락토스를 대사하나, L-소르보스, D-사카로스 및 이눌린을 대사하지 않고,
   (ii) L-소르보스, D-락토스 및 이눌린을 대사하나, D-사카로스를 대사하지 않고,
   (iii) L-소르보스를 대사하나, D-락토스, D-사카로스 및 이눌린을 대사하지 않고,
   (iv) L-소르보스, D-락토스, D-사카로스를 대사하나, 이눌린을 대사하지 않음.
8. 제 1 항 내지 제 7 항 중 어느 한 항에 있어서, 연쇄상구균 균주에 대한 결합이 하기와 같이 검정될 수 있는 용도:
   (a) 상기 미생물을 정지기로 생장시키고;
   (b) 정지기로 생장된 상기 연쇄상구균과 상기 미생물을 혼합하고;
   (c) 상기 미생물 및 상기 연쇄상구균의 응집물을 형성시키는 조건하에, 단계 (b) 에서 수득한 혼합물을 인큐베이션하고;
   (d) 펠렛의 발생에 의해 응집물을 검출함.
9. 치석의 예방 또는 치료를 위한 조성물의 제조 및/또는 우식증의 예방 또는 치료를 위한 감각적으로 중립적인 조성물의 제조 및/또는 구취의 예방 또는 치료를 위한 조성물을 제조를 위한 방법으로서,
   결합성 미생물 또는 그의 단편을 베이스 조성물에 첨가하는 단계를 포함하고, 상기 결합성 미생물을 감각적으로 중립적인 양으로 첨가하고, 상기 결합성 미생물이 젖산균이고, 상기 결합성 미생물이 뮤탄스 연쇄상구균 군의 미생물에 결합할 수 있고, 상기 결합이 하기와 같으며:
   (i) 열 처리에 대해 내성임 및/또는
   (ii) 프로테아제 처리에 대해 내성임 및/또는
   (iii) 칼슘에 좌우됨 및/또는
   (iv) 4.5 내지 8.5 의 pH 범위에서 형성됨, 및/또는
   (v) 타액의 존재 하에 형성됨 및/또는
   (vi) 마그네슘에 독립적임,
   베이스 조성물이 화장용으로, 약제학적으로 또는 수의학적으로 상용적인 담체를 함유하는 방법.
10. 제 9 항에 있어서, 결합성 미생물이 열 불활성화되거나 또는 동결건조된 형태이고/이거나
    결합성 미생물 또는 그의 단편이 하나 이상의 균주, 바람직하게는 둘 이상의 균주, 더욱더 바람직하게는 셋 이상의 균주에 결합할 수 있고, 상기 균주가 스트렙토코커스 뮤탄스 혈청형 c (DSMZ 20523), 스트렙토코커스 뮤탄스 혈청형 e (NCTC 10923), 스트렙토코커스 뮤탄스 혈청형 f (NCTC 11060), 스트렙토코커스 소브리누스 DSM 20742, 스트렙토코커스 라티 DSM 20564, 스트렙토코커스 크리세투스 DSM 20562, 스트렙토코커스 페루스 DSM 20646 또는 스트렙토코커스 마카카에 DSM 20714 로 이루어진 군으로부터 선택되고, 바람직하게는 스트렙토코커스 살리바리우스 아종 테르모필러스, 스트렙토코커스 오랄리스 (Streptococcus oralis) (DSMZ 20066), 스트렙토코커스 오랄리스 (DSMZ 20395), 스트렙토코커스 오랄리스 (DSMZ 20627), 스트렙토코커스 미티스 (DSMZ 12643) 및/또는 스트렙토코커스 상귀니스 (DSMZ 20567) 로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상, 바람직하게는 둘 이상, 더욱 바람직하게는 셋 이상, 가장 바람직하게는 임의의 미생물에는 결합할 수 없고/없거나
    상기 결합성 미생물이 락토바실러스 과, 바람직하게는 락토바실러스 속, 파라락토바실러스 속, 페디오코코스 속 또는 샤르페아 속, 더욱 바람직하게는 락토바실러스 파라카세이 종, 락토바실러스 람노수스 종, 락토바실러스 카세이 종 또는 락토바실러스 제애 종, 가장 바람직하게는 임의의 균주 DSMZ 16667, DSMZ 16668, DSMZ 16669, DSMZ 16670, DSMZ 16671, DSMZ 16672 또는 DSMZ 16673, 또는 이들의 돌연변이 또는 유도체인 방법.
11. 바람직하게는 단리되거나 또는 정제된 결합성 미생물 또는 그의 단리되거나 또는 정제된 단편을 하기와 같은 양으로 함유하며:
    - 치석 형성을 방지하거나 또는 치석 형성을 둔화시키기에 충분한 양, 및/또는
    - 구취를 예방하거나 또는 그 정도를 감소시키기에 충분한 양, 및/또는
    - 우식증을 예방하거나 또는 우식증 생성을 둔화시키기에 충분한 양,
    그리고 바람직하게는 감각적으로 중립적인 양,
    결합성 미생물이 젖산균이고, 바람직하게는 결합성 미생물이 락토바실러스 과, 바람직하게는 락토바실러스 속, 파라락토바실러스 속, 페디오코코스 속 또는 샤르페아 속, 더욱 바람직하게는 락토바실러스 파라카세이 종, 락토바실러스 람노수스 종, 락토바실러스 카세이 종 또는 락토바실러스 제애 종, 가장 바람직하게는 임의의 균주 DSMZ 16667, DSMZ 16668, DSMZ 16669, DSMZ 16670, DSMZ 16671, DSMZ 16672 또는 DSMZ 16673, 또는 이들의 돌연변이 또는 유도체이고,
    결합성 미생물이 뮤탄스 연쇄상구균의 군의 미생물에 결합할 수 있고, 상기 결합이 하기와 같으며:
    (i) 열 처리에 대해 내성임 및/또는
    (ii) 프로테아제 처리에 대해 내성임 및/또는
    (iii) 칼슘에 좌우됨 및/또는
    (iv) 4.5 내지 8.5 의 pH 범위에서 형성됨, 및/또는
    (v) 타액의 존재 하에 형성됨 및/또는
    (vi) 마그네슘에 독립적임,
    바람직하게는 모노- 및 디글리세리드의 총 함량이 전체 조성물의 20 중량% 이하, 더욱더 바람직하게는 5 중량% 이하, 가장 바람직하게는 2 중량% 이하인 조성물.
12. 제 11 항에 있어서, 조성물이 인간 또는 동물이 이용하기 위한 것이고,
    - 조성물이 치약, 치제, 치아용 분말, 국소 구강 겔, 세구제, 의치용 제품, 구강 스프레이, 로젠지제, 구강 정제, 추잉검, 구강 세정제, 치실, 저작용 제품 또는 식품, 사료 또는 음료용 첨가제이거나, 또는
    - 조성물이 분말, 정제, 필름 조제물, 용액, 에어로졸, 과립, 환약, 현탁액, 에멀션, 캡슐, 시럽, 액체, 엘릭시르, 추출물, 팅크제 또는 액체 추출물, 시트형 식품, 병으로 가공한 식품, 캔으로 가공한 식품, 레토르트 식품 또는 액체 식품의 형태이거나, 또는
    - 조성물이 검, 스프레이, 음료, 캔디, 이유식, 아이스크림, 냉동 디저트, 스위트 샐러드 드레싱, 우유 조제물, 치즈, 쿠아르크, 무-락토스 요구르트, 산성화 우유, 커피 크림 또는 거품 크림, 버터, 치즈, 가공 우유 및 탈지 우유, 육류 제품 - 바람직하게는 햄, 소시지, 및 햄버거 -, 생선 육류 케이크 제품, 난류 제품 -바람직하게는 조미 난류 롤 및 난류 응고유 -, 과자류 - 바람직하게는 쿠키, 젤리, 스낵, 및 츄잉 검 -, 빵, 국수, 피클, 훈제 제품, 건조 생선 및 조미료로 이루어진 군으로부터 선택되는 식품 또는 음료인 조성물.
13. 제 11 항 또는 제 12 항에 있어서, 결합성 미생물 또는 그의 단편이 각각,
    - Directive 2001/18/EC 의 Annex 1B 에 열거된 유전자 변형 기법을 통해 수득되는 것 이외의 Directive 2001/18/EC 의 Article 2(2) 에서 정의된 유전자 변형 미생물이 아니고, 바람직하게는 상기 Directive 2001/18/EC 의 Annex 1B 에 열거된 유전자 변형 기법을 통해 수득되는 미생물도 배제하며,
    - 결합성 미생물의 목 (order), 바람직하게는 과 (family), 더욱 바람직하게는 속 (genus), 가장 바람직하게는 종 (species) 에 대해 비상동인 유전자 재료의 발현 결과 수득되는 생성물을 함유하지 않는 조성물.
14. 다음과 같은 용도의 결합성 미생물 또는 그의 단편으로서:
    - 인간 또는 동물, 바람직하게는 애완 동물에서의 바람직하게는 감각적으로 중립적인 항치석제로서 또는 치석의 예방 또는 치료용 및/또는
    - 인간 또는 동물, 바람직하게는 애완 동물에서의 감각적으로 중립적인 항우식제로서 또는 우식증 예방 또는 치료용 및/또는
    - 인간 또는 동물, 바람직하게는 애완 동물에서의 바람직하게는 감각적으로 중립적인 구취 방지제로서 또는 구취의 예방 또는 치료용,
    상기 결합성 미생물이 젖산균이고, 바람직하게는 상기 결합성 미생물이 락토바실러스 과, 바람직하게는 락토바실러스 속, 파라락토바실러스 속, 페디오코코스 속 또는 샤르페아 속, 더욱 바람직하게는 락토바실러스 파라카세이 종, 락토바실러스 람노수스 종, 락토바실러스 카세이 종 또는 락토바실러스 제애 종, 가장 바람직하게는 임의의 균주 DSMZ 16667, DSMZ 16668, DSMZ 16669, DSMZ 16670, DSMZ 16671, DSMZ 16672 또는 DSMZ 16673 의 것이고,
    결합성 미생물 또는 그의 단편이 각각 뮤탄스 연쇄상구균의 미생물에 결합할 수 있고, 상기 결합이 하기와 같은 결합성 미생물 또는 그의 단편:
    (i) 열 처리에 대해 내성임, 및/또는
    (ii) 프로테아제 처리에 대해 내성임, 및/또는
    (iii) 칼슘에 좌우됨, 및/또는
    (iv) 4.5 내지 8.5 의 pH 범위에서 형성됨, 및/또는
    (v) 타액의 존재 하에 형성됨, 및/또는
    (vi) 마그네슘에 독립적임.
15. 제 14 항에 있어서, 살아있거나, 열 불활성화되거나 또는 동결건조된 형태의 결합성 미생물로서 열 불활성화된 형태가 하기에 의해 수득가능하거나 또는 수득되는 결합성 미생물:
    - 1 내지 5 바아, 바람직하게는 1 내지 3 바아, 더욱 바람직하게는 2 바아의 압력에서 포화된 스팀에서 처리하고, 가장 바람직하게는 2 바아의 압력에서 121℃ 의 온도에서 20 분간 포화된 스팀에서 열 불활성화함, 또는
    - 상기 세포를 1 h 이상 -20℃ 에서 동결시킴.

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