KR20130132904A - 인간 모노클로날 항체 - Google Patents

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Abstract

본 발명은, 인간용 의약품으로서 유용한 항CD81 항체를 제공한다. 구체적으로는, 서열번호 22에 나타내는 아미노산 서열 중 아미노산 번호 80∼175의 아미노산 서열로 이루어지는 펩티드 영역에 결합할 수 있는 항인간 CD81 항체를 제공한다.

Description

인간 모노클로날 항체{HUMAN MONOCLONAL ANTIBODY}
본 발명은 인간 모노클로날 항체 분자에 관한 것이다. 구체적으로는, 인간 CD81에 대한 인간 항체 분자 및 그것을 유효 성분으로서 포함하는 의약 조성물에 관한 것이다.
장은, 생체의 생명 활동에 필수인 영양분·수분을 소화 흡수하는 기관이다. 한편으로 병원체 등의 이물질을 배제시키기 위한 면역 방어 기능도 구비하고 있어 상반되는 성질을 양호한 밸런스로 제어함으로써 생명의 유지를 담당하고 있는 기관이기도 하다. 그러나 이들 기능 밸런스에 이상이 생기면, 이 동적 평형 상태가 무너져 여러가지 장질환이 야기되는 것으로 알려져 있다. 특히 최근 환자수가 증가하고 있는 염증성 장질환(inflammatory bowel disease; IBD라고 약기함)은, 복통·설사·점혈변 등의 소화기 이상이 발생하는 질환으로서, 그 병태로부터 궤양성 대장염(ulcerative colitis)과 크론병(Crohn's disease)으로 분류된다.
궤양성 대장염은 대장에 국한된, 미만성(diffuse)의 장점막 염증이 주체인 질환으로, 염증의 반복에 의해 대장암의 발증을 초래하여, 수술이 필요해지는 경우도 많고 수술 후에도 변 횟수의 증가, 누변(漏便), 낭염(pouchitis) 발증의 문제가 있다. 크론병은 소장부터 대장에 걸친 병변으로, 비연속성의 점막하를 중심으로 전층성의 염증이 강한 질환이며, 염증을 반복함으로써 장관 합병증(협착, 누공, 농양)을 발생시켜 수술을 필요로 한다고 되어 있다(비특허문헌 1).
최근, 항TNF-α 항체가 크론병이나 궤양성 대장염의 치료제로서 유효하다는 것이 알려져 있다(비특허문헌 2). 또한 항α4 인테그린 항체인 나탈리주마브(Natalizumab)가, 크론병의 치료약으로서 유효하다는 것이 보고되어 있다(비특허문헌 3). 그러나 상기 항체도 포함하는 현재의 치료에서는, 40-60%의 IBD 환자가 아직 만족할 만한 의료 상황에 놓여 있지 않은 것이 현상황이다. 그 때문에 IBD의 유효한 치료약의 개발이 의료 현장에서 갈망되고 있다(비특허문헌 4).
CD81은, 광범위한 세포에 발현하고 있는 26 kDa의 막표면 단백질이다. B 세포 상에서는 CD21, CD19, Leu13과 복합체를 형성하여 B 세포 활성화의 임계치를 낮추는 작용이 있다. 또한 T 세포 상에서는 CD4, CD8과 회합하여 세포 내에 자극 정보를 전달한다. 이러한 점에서 CD81은, 이종 항원에 대한 면역 응답에 중요한 기능을 하고 있는 것으로 생각된다. 또한, 각종 인테그린류와 생리적이고 또한 기능적으로 관여하고 있어, B 세포 상의 VLA-4(α4β1 인테그린)나, 흉선 세포 상의 LFA-1(αLβ2 인테그린)을 활성화시킨다.
CD81과 관련이 있는 질환으로는 C형 간염이 알려져 있다(비특허문헌 5).
최근, 항CD81 항체가 IBD 치료에 유용하다는 것이 보고되어 있다(특허문헌 1). IBD에는 T 세포 유주가 관련되어 있고(비특허문헌 3, 6, 7), 그 밖에도 다발성 경화증, 건선이 T 세포 유주와 관련되는 질환으로서 알려져 있다(비특허문헌 3, 8, 9).
구체적으로는, 염증성 장질환인 크론병이나 궤양성 대장염 환자의 장점막층 T 세포나 말초혈 T 세포가 케모카인 수용체인 CXCR4를 고발현하고, 케모카인인 CXCL12에 대하여 강한 유주 반응을 나타내는 것(비특허문헌 6), IBD 모델인 덱스트란 황산 수용액 유발 마우스 대장염 모델에 대한 CXCR4 저해제의 투여에 의해 대장염이 치유되는 것(비특허문헌 7), T 세포 유주 억제 작용에 의해 IBD를 치료하는 항α4 인테그린 항체 나탈리주마브(Natalizumab)가, 의약품으로서 승인되어 있는 것(비특허문헌 3) 등이 보고되어 있다.
또한, 다발성 경화증 모델 동물인 실험적 자기 면역 뇌척수염(EAE) 마우스에 있어서, T 세포 유주가 병태에 중요하다는 것이 보고되어 있다(비특허문헌 8). 나탈리주마브는, EAE 마우스에서의 혈액뇌관문에 대한, α4 인테그린을 통한 순환 T 세포의 접착을 차단함으로써, 치료 효과를 발휘하는 것으로 생각되고 있다(비특허문헌 3). 나탈리주마브는 다발성 경화증의 치료에도 유효하다.
또한, 건선 피부에는 T 세포가 많이 집적되어 있고, T 세포의 유주를 억제하는 항LFA-1 항체인 에팔리주마브(Efalizumab; 상품명 : Raptiva)가 건선의 치료에 유효하다는 것이 보고되어 있다(비특허문헌 9).
항CD81 항체의 인간에 대한 임상 응용을 염두에 둔 경우에 종(種) 간의 차이에 기초한 여러가지 문제가 발생한다. 예컨대 마우스 항체를 인간에게 투여하고자 할 경우, 혈청 중에서의 단반감기, 어느 종의 인간의 이펙터 기능의 방아쇠를 당길 수 없는 점 및 인간에서의 마우스 항체에 대한 바람직하지 않은 면역 응답(「인간 항마우스 항체」(HAMA) 반응)의 유도로 인해 인간에의 투여가 제한될 수 있다(비특허문헌 10, 11). 더욱이, 설치류의 항체의 가변 (V) 영역을 인간의 정상 (C) 영역에 결합시킨 키메라 분자인 항TNF 항체(Remicade)에서조차, 인간 항키메라 항체(HACA)를 발생시켜, 주입 반응이나 약효의 소실 등을 야기할 수 있다(비특허문헌 12).
특허문헌 1 : 국제 공개 제2005/021792호 팜플렛
비특허문헌 1 : Inflamm. Bowel. Dis., 8, 244-250, 2002 비특허문헌 2 : N. Engl. J. Med., 353, 2462-2476, 2005 비특허문헌 3 : J. Clin. Invest., 118, 825-826, 2008 비특허문헌 4 : J. Clin. Gastroenterol., 41, 799-809, 2007 비특허문헌 5 : Science, 282, 938-941, 1998 비특허문헌 6 : Inflamm. Bowel Dis., 16(4), 583-592, 2010 비특허문헌 7 : J. Pharmacol. Exp. Ther., 327(2), 383-392, 2008 비특허문헌 8 : J. Neuroimmunol., 60, 17-28, 1995 비특허문헌 9 : Expert Opinion on Biological Therapy, 3(2), 361-370, 2003 비특허문헌 10 : Blood, 62, 988-995, 1983 비특허문헌 11 : Cancer Res., 45, 879-885, 1985 비특허문헌 12 : Current Gastroenterology Reports, 5(6), 501-505, 2003
이러한 상황하에서, 의약품으로서 이용할 수 있는 항CD81 항체가 갈망되고 있지만, 아직 그러한 항체는 알려지지 않았으며, 본 발명의 과제는, 인간용 의약품으로서 이용할 수 있는 항CD81 항체를 제공하는 것에 있다.
본 발명자들은, 상기 과제를 해결하기 위해, 인간 상보성 결정 영역(CDR) 라이브러리로부터 파지(phage) 라이브러리법을 이용하여 완전 인간 항체를 제작하고, 이들 항체가 결합하는 인간 CD81의 영역을 평가하여, 어느 영역에 결합하는 항체이면, 우수한 약효를 나타냄과 동시에, 인간에서의 안정성이 높은 항체가 되는 것을 발견하여, 본 발명을 완성시키기에 이르렀다. 즉, 본 발명은 인간 CD81에 대한 인간 모노클로날 항체를 제공한다. 또한, 본 발명자들은 항CD81 항체가 T 세포의 유주를 억제한다는 새로운 지견도 얻었기 때문에, 본 발명의 항체는, 크론병이나 궤양성 대장염 등의 염증성 장질환뿐만 아니라, 다발성 경화증, 건선 등의 T 세포 유주가 관련되는 질환의 예방, 개선 또는 치료에도 유용하다는 것을 알아냈다. 또한, 본 발명의 항체는, 단지 CD81을 발현하고 있는 암세포에 결합할 수 있을 뿐만 아니라, 보체 의존성 세포 장해 활성(CDC)에 의해, 결합한 암세포에 대하여 살세포 효과를 나타내기 때문에, 혈액암을 비롯한 CD81을 발현하고 있는 암세포에 의한 암의 예방, 개선 또는 치료에도 유용하다는 것을 알아냈다.
즉, 본 발명은 이하와 같다.
[항 1]
인간 CD81에 대한 항체로서, 서열번호 22에 기재된 아미노산 서열 중 80번째 아미노산부터 175번째 아미노산 영역에 결합하는 항체.
[항 2]
결합하는 아미노산 영역이 113번째 아미노산부터 175번째 아미노산 영역인 항 1에 기재된 항체.
[항 3]
하기 (1)∼(13) 중 어느 것에 기재된 인간 CD81 변이체에 대한 결합 친화성이, 서열번호 22에 기재된 아미노산 서열을 갖는 천연의 인간 CD81에 대한 결합 친화성을 100%로 할 때, 40% 미만인 항 1 또는 항 2에 기재된 항체.
(1) 서열번호 22에 기재된 아미노산 서열을 갖는 천연의 인간 CD81의 127번째 티로신을 페닐알라닌 또는 트립토판으로 치환한 CD81 변이체
(2) 서열번호 22에 기재된 아미노산 서열을 갖는 천연의 인간 CD81의 130번째 알라닌을 트레오닌 또는 발린으로 치환한 CD81 변이체
(3) 서열번호 22에 기재된 아미노산 서열을 갖는 천연의 인간 CD81의 135번째 발린을 알라닌 또는 류신으로 치환한 CD81 변이체
(4) 서열번호 22에 기재된 아미노산 서열을 갖는 천연의 인간 CD81의 137번째 아스파라긴산을 알라닌 또는 글루타민산으로 치환한 CD81 변이체
(5) 서열번호 22에 기재된 아미노산 서열을 갖는 천연의 인간 CD81의 143번째 알라닌을 트레오닌 또는 발린으로 치환한 CD81 변이체
(6) 서열번호 22에 기재된 아미노산 서열을 갖는 천연의 인간 CD81의 151번째 히스티딘을 알라닌 또는 아르기닌으로 치환한 CD81 변이체
(7) 서열번호 22에 기재된 아미노산 서열을 갖는 천연의 인간 CD81의 154번째 류신을 알라닌 또는 이소류신으로 치환한 CD81 변이체
(8) 서열번호 22에 기재된 아미노산 서열을 갖는 천연의 인간 CD81의 158번째 글리신을 알라닌 또는 세린으로 치환한 CD81 변이체
(9) 서열번호 22에 기재된 아미노산 서열을 갖는 천연의 인간 CD81의 164번째 알라닌을 트레오닌 또는 발린으로 치환한 CD81 변이체
(10) 서열번호 22에 기재된 아미노산 서열을 갖는 천연의 인간 CD81의 168번째 세린을 알라닌 또는 트레오닌으로 치환한 CD81 변이체
(11) 서열번호 22에 기재된 아미노산 서열을 갖는 천연의 인간 CD81의 169번째 발린을 알라닌 또는 류신으로 치환한 CD81 변이체
(12) 서열번호 22에 기재된 아미노산 서열을 갖는 천연의 인간 CD81의 170번째 류신을 알라닌 또는 이소류신으로 치환한 CD81 변이체
(13) 서열번호 22에 기재된 아미노산 서열을 갖는 천연의 인간 CD81의 172번째 아스파라긴을 알라닌 또는 글루타민으로 치환한 CD81 변이체.
[항 4]
상기 (9) 및 (11)에 기재된 인간 CD81 변이체에 대한 결합 친화성이, 서열번호 22에 기재된 아미노산 서열을 갖는 천연의 인간 CD81에 대한 결합 친화성을 100%로 할 때, 40% 미만인 항 1∼3 중 어느 한 항에 기재된 항체.
[항 5]
항 1∼4 중 어느 한 항에 기재된 항체와 동등한 결합 특성을 갖거나, 혹은, 항 1∼4 중 어느 한 항에 기재된 항체와 경합적으로, 서열번호 22에 기재된 아미노산 서열을 갖는 천연의 인간 CD81에 결합하는, 항체.
[항 6]
항 1∼4 중 어느 한 항에 기재된 항체와 경합적으로, 서열번호 22에 기재된 아미노산 서열을 갖는 천연의 인간 CD81에 결합하며, 또한 T 세포 유주 억제 작용을 갖는 항체.
[항 7]
하기 군 1∼24 중, 어느 하나의 군에 기재된 6종의 CDR을 전부 포함하는, 인간 CD81에 대한 항체.
군 1
(a-1) 서열번호 1로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(b-1) 서열번호 2로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(c-1) 서열번호 3으로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(d-1) 서열번호 4로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(e-1) 서열번호 5로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR, 및
(f-1) 서열번호 6으로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR
군 2
(a-2) 서열번호 1로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(b-2) 서열번호 2로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(c-2) 서열번호 37로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(d-2) 서열번호 4로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(e-2) 서열번호 5로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR, 및
(f-2) 서열번호 6으로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR
군 3
(a-3) 서열번호 1로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(b-3) 서열번호 2로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(c-3) 서열번호 40으로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(d-3) 서열번호 4로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(e-3) 서열번호 5로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR, 및
(f-3) 서열번호 6으로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR
군 4
(a-4) 서열번호 1로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(b-4) 서열번호 2로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(c-4) 서열번호 43으로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(d-4) 서열번호 4로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(e-4) 서열번호 5로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR, 및
(f-4) 서열번호 6으로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR
군 5
(a-5) 서열번호 1로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(b-5) 서열번호 2로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(c-5) 서열번호 46으로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(d-5) 서열번호 4로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(e-5) 서열번호 5로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR, 및
(f-5) 서열번호 6으로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR
군 6
(a-6) 서열번호 1로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(b-6) 서열번호 2로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(c-6) 서열번호 49로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(d-6) 서열번호 4로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(e-6) 서열번호 5로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR, 및
(f-6) 서열번호 6으로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR
군 7
(a-7) 서열번호 1로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(b-7) 서열번호 2로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(c-7) 서열번호 52로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(d-7) 서열번호 4로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(e-7) 서열번호 5로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR, 및
(f-7) 서열번호 6으로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR
군 8
(a-8) 서열번호 1로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(b-8) 서열번호 2로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(c-8) 서열번호 43으로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(d-8) 서열번호 4로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(e-8) 서열번호 5로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR, 및
(f-8) 서열번호 55로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR
군 9
(a-9) 서열번호 60으로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(b-9) 서열번호 2로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(c-9) 서열번호 3으로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(d-9) 서열번호 4로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(e-9) 서열번호 5로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR, 및
(f-9) 서열번호 61로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR
군 10
(a-10) 서열번호 1로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(b-10) 서열번호 2로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(c-10) 서열번호 66으로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(d-10) 서열번호 4로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(e-10) 서열번호 5로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR, 및
(f-10) 서열번호 6으로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR
군 11
(a-11) 서열번호 1로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(b-11) 서열번호 2로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(c-11) 서열번호 3으로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(d-11) 서열번호 4로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(e-11) 서열번호 69로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR, 및
(f-11) 서열번호 70으로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR
군 12
(a-12) 서열번호 60으로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(b-12) 서열번호 2로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(c-12) 서열번호 66으로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(d-12) 서열번호 4로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(e-12) 서열번호 5로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR, 및
(f-12) 서열번호 6으로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR
군 13
(a-13) 서열번호 1로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(b-13) 서열번호 2로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(c-13) 서열번호 3으로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(d-13) 서열번호 77로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(e-13) 서열번호 5로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR, 및
(f-13) 서열번호 6으로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR
군 14
(a-14) 서열번호 80으로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(b-14) 서열번호 2로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(c-14) 서열번호 3으로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(d-14) 서열번호 4로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(e-14) 서열번호 81로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR, 및
(f-14) 서열번호 6으로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR
군 15
(a-15) 서열번호 1로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(b-15) 서열번호 2로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(c-15) 서열번호 66으로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(d-15) 서열번호 4로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(e-15) 서열번호 5로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR, 및
(f-15) 서열번호 6으로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR
군 16
(a-16) 서열번호 1로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(b-16) 서열번호 2로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(c-16) 서열번호 90으로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(d-16) 서열번호 4로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(e-16) 서열번호 5로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR, 및
(f-16) 서열번호 6으로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR
군 17
(a-17) 서열번호 1로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(b-17) 서열번호 2로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(c-17) 서열번호 52로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(d-17) 서열번호 4로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(e-17) 서열번호 5로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR, 및
(f-17) 서열번호 93으로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR
군 18
(a-18) 서열번호 98로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(b-18) 서열번호 2로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(c-18) 서열번호 3으로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(d-18) 서열번호 4로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(e-18) 서열번호 5로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR, 및
(f-18) 서열번호 99로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR
군 19
(a-19) 서열번호 60으로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(b-19) 서열번호 2로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(c-19) 서열번호 3으로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(d-19) 서열번호 4로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(e-19) 서열번호 5로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR, 및
(f-19) 서열번호 99로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR
군 20
(a-20) 서열번호 1로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(b-20) 서열번호 2로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(c-20) 서열번호 90으로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(d-20) 서열번호 4로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(e-20) 서열번호 5로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR, 및
(f-20) 서열번호 6으로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR
군 21
(a-21) 서열번호 1로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(b-21) 서열번호 2로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(c-21) 서열번호 3으로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(d-21) 서열번호 4로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(e-21) 서열번호 5로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR, 및
(f-21) 서열번호 55로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR
군 22
(a-22) 서열번호 1로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(b-22) 서열번호 2로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(c-22) 서열번호 66으로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(d-22) 서열번호 110으로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(e-22) 서열번호 5로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR, 및
(f-22) 서열번호 6으로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR
군 23
(a-23) 서열번호 1로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(b-23) 서열번호 2로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(c-23) 서열번호 3으로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(d-23) 서열번호 4로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(e-23) 서열번호 5로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR, 및
(f-23) 서열번호 115로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR
군 24
(a-24) 서열번호 1로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(b-24) 서열번호 2로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(c-24) 서열번호 90으로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(d-24) 서열번호 4로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(e-24) 서열번호 120으로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR, 및
(f-24) 서열번호 6으로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR.
[항 8]
하기 군 25∼48 중, 어느 하나의 군에 기재된 경쇄 가변 영역 및 중쇄 가변 영역의 조합을 포함하는 항 7에 기재된 항체.
군 25
(g-1) 상기 (a-1)∼(c-1)을 포함하는 경쇄 가변 영역 및
(h-1) 상기 (d-1)∼(f-1)을 포함하는 중쇄 가변 영역
군 26
(g-2) 상기 (a-2)∼(c-2)를 포함하는 경쇄 가변 영역 및
(h-2) 상기 (d-2)∼(f-2)를 포함하는 중쇄 가변 영역
군 27
(g-3) 상기 (a-3)∼(c-3)을 포함하는 경쇄 가변 영역 및
(h-3) 상기 (d-3)∼(f-3)을 포함하는 중쇄 가변 영역
군 28
(g-4) 상기 (a-4)∼(c-4)를 포함하는 경쇄 가변 영역 및
(h-4) 상기 (d-4)∼(f-4)를 포함하는 중쇄 가변 영역
군 29
(g-5) 상기 (a-5)∼(c-5)를 포함하는 경쇄 가변 영역 및
(h-5) 상기 (d-5)∼(f-5)를 포함하는 중쇄 가변 영역
군 30
(g-6) 상기 (a-6)∼(c-6)을 포함하는 경쇄 가변 영역 및
(h-6) 상기 (d-6)∼(f-6)을 포함하는 중쇄 가변 영역
군 31
(g-7) 상기 (a-7)∼(c-7)을 포함하는 경쇄 가변 영역 및
(h-7) 상기 (d-7)∼(f-7)을 포함하는 중쇄 가변 영역
군 32
(g-8) 상기 (a-8)∼(c-8)을 포함하는 경쇄 가변 영역 및
(h-8) 상기 (d-8)∼(f-8)을 포함하는 중쇄 가변 영역
군 33
(g-9) 상기 (a-9)∼(c-9)를 포함하는 경쇄 가변 영역 및
(h-9) 상기 (d-9)∼(f-9)를 포함하는 중쇄 가변 영역
군 34
(g-10) 상기 (a-10)∼(c-10)을 포함하는 경쇄 가변 영역 및
(h-10) 상기 (d-10)∼(f-10)을 포함하는 중쇄 가변 영역
군 35
(g-11) 상기 (a-11)∼(c-11)을 포함하는 경쇄 가변 영역 및
(h-11) 상기 (d-11)∼(f-11)을 포함하는 중쇄 가변 영역
군 36
(g-12) 상기 (a-12)∼(c-12)를 포함하는 경쇄 가변 영역 및
(h-12) 상기 (d-12)∼(f-12)를 포함하는 중쇄 가변 영역
군 37
(g-13) 상기 (a-13)∼(c-13)을 포함하는 경쇄 가변 영역 및
(h-13) 상기 (d-13)∼(f-13)을 포함하는 중쇄 가변 영역
군 38
(g-14) 상기 (a-14)∼(c-14)를 포함하는 경쇄 가변 영역 및
(h-14) 상기 (d-14)∼(f-14)를 포함하는 중쇄 가변 영역
군 39
(g-15) 상기 (a-15)∼(c-15)를 포함하는 경쇄 가변 영역 및
(h-15) 상기 (d-15)∼(f-15)를 포함하는 중쇄 가변 영역
군 40
(g-16) 상기 (a-16)∼(c-16)을 포함하는 경쇄 가변 영역 및
(h-16) 상기 (d-16)∼(f-16)을 포함하는 중쇄 가변 영역
군 41
(g-17) 상기 (a-17)∼(c-17)을 포함하는 경쇄 가변 영역 및
(h-17) 상기 (d-17)∼(f-17)을 포함하는 중쇄 가변 영역
군 42
(g-18) 상기 (a-18)∼(c-18)을 포함하는 경쇄 가변 영역 및
(h-18) 상기 (d-18)∼(f-18)을 포함하는 중쇄 가변 영역
군 43
(g-19) 상기 (a-19)∼(c-19)를 포함하는 경쇄 가변 영역 및
(h-19) 상기 (d-19)∼(f-19)를 포함하는 중쇄 가변 영역
군 44
(g-20) 상기 (a-20)∼(c-20)을 포함하는 경쇄 가변 영역 및
(h-20) 상기 (d-20)∼(f-20)을 포함하는 중쇄 가변 영역
군 45
(g-21) 상기 (a-21)∼(c-21)을 포함하는 경쇄 가변 영역 및
(h-21) 상기 (d-21)∼(f-21)을 포함하는 중쇄 가변 영역
군 46
(g-22) 상기 (a-22)∼(c-22)를 포함하는 경쇄 가변 영역 및
(h-22) 상기 (d-22)∼(f-22)를 포함하는 중쇄 가변 영역
군 47
(g-23) 상기 (a-23)∼(c-23)을 포함하는 경쇄 가변 영역 및
(h-23) 상기 (d-23)∼(f-23)을 포함하는 중쇄 가변 영역
군 48
(g-24) 상기 (a-24)∼(c-24)를 포함하는 경쇄 가변 영역 및
(h-24) 상기 (d-24)∼(f-24)를 포함하는 중쇄 가변 영역.
[항 9]
하기 군 49∼72 중, 어느 하나의 군에 기재된 경쇄 가변 영역 및 중쇄 가변 영역의 조합을 포함하는 항 8에 기재된 항체.
군 49
(i-1) 서열번호 8에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 및
(j-1) 서열번호 10에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역
군 50
(i-2) 서열번호 38에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 및
(j-2) 서열번호 10에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역
군 51
(i-3) 서열번호 41에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 및
(j-3) 서열번호 10에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역
군 52
(i-4) 서열번호 44에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 및
(j-4) 서열번호 10에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역
군 53
(i-5) 서열번호 47에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 및
(j-5) 서열번호 10에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역
군 54
(i-6) 서열번호 50에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 및
(j-6) 서열번호 10에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역
군 55
(i-7) 서열번호 53에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 및
(j-7) 서열번호 10에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역
군 56
(i-8) 서열번호 56에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 및
(j-8) 서열번호 57에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역
군 57
(i-9) 서열번호 62에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 및
(j-9) 서열번호 63에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역
군 58
(i-10) 서열번호 67에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 및
(j-10) 서열번호 10에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역
군 59
(i-11) 서열번호 71에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 및
(j-11) 서열번호 72에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역
군 60
(i-12) 서열번호 75에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 및
(j-12) 서열번호 10에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역
군 61
(i-13) 서열번호 8에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 및
(j-13) 서열번호 78에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역
군 62
(i-14) 서열번호 82에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 및
(j-14) 서열번호 83에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역
군 63
(i-15) 서열번호 86에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 및
(j-15) 서열번호 87에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역
군 64
(i-16) 서열번호 91에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 및
(j-16) 서열번호 10에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역
군 65
(i-17) 서열번호 94에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 및
(j-17) 서열번호 95에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역
군 66
(i-18) 서열번호 100에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 및
(j-18) 서열번호 101에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역
군 67
(i-19) 서열 번호 104에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 및
(j-19) 서열번호 101에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역
군 68
(i-20) 서열번호 106에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 및
(j-20) 서열번호 10에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역
군 69
(i-21) 서열번호 108에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 및
(j-21) 서열번호 57에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역
군 70
(i-22) 서열번호 111에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 및
(j-22) 서열번호 112에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역
군 71
(i-23) 서열번호 116에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 및
(j-23) 서열번호 117에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역
군 72
(i-24) 서열번호 121에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 및
(j-24) 서열번호 122에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역.
[항 10]
하기 군 73∼96 중, 어느 하나의 군에 기재된 경쇄 및 중쇄의 조합을 포함하는 항 8 또는 항 9에 기재된 항체.
군 73
(k-1) 서열번호 26에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 및
(l-1) 서열번호 28에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄
군 74
(k-2) 서열번호 39에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 및
(l-2) 서열번호 28에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄
군 75
(k-3) 서열번호 42에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 및
(l-3) 서열번호 28에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄
군 76
(k-4) 서열번호 45에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 및
(l-4) 서열번호 28에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄
군 77
(k-5) 서열번호 48에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 및
(l-5) 서열번호 28에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄
군 78
(k-6) 서열번호 51에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 및
(l-6) 서열번호 28에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄
군 79
(k-7) 서열번호 54에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 및
(l-7) 서열번호 28에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄
군 80
(k-8) 서열번호 58에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 및
(l-8) 서열번호 59에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄
군 81
(k-9) 서열번호 64에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 및
(l-9) 서열번호 65에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄
군 82
(k-10) 서열번호 68에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 및
(l-10) 서열번호 28에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄
군 83
(k-11) 서열번호 73에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 및
(l-11) 서열번호 74에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄
군 84
(k-12) 서열번호 76에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 및
(l-12) 서열번호 28에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄
군 85
(k-13) 서열번호 26에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 및
(l-13) 서열번호 79에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄
군 86
(k-14) 서열번호 84에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 및
(l-14) 서열번호 85에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄
군 87
(k-15) 서열번호 88에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 및
(l-15) 서열번호 89에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄
군 88
(k-16) 서열번호 92에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 및
(l-16) 서열번호 28에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄
군 89
(k-17) 서열번호 96에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 및
(l-17) 서열번호 97에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄
군 90
(k-18) 서열번호 102에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 및
(l-18) 서열번호 103에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄
군 91
(k-19) 서열번호 105에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 및
(l-19) 서열번호 103에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄
군 92
(k-20) 서열번호 107에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 및
(l-20) 서열번호 28에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄
군 93
(k-21) 서열번호 109에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 및
(l-21) 서열번호 59에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄
군 94
(k-22) 서열번호 113에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 및
(l-22) 서열번호 114에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄
군 95
(k-23) 서열번호 118에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 및
(l-23) 서열번호 119에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄
군 96
(k-24) 서열번호 123에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 및
(l-24) 서열번호 124에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄.
[항 11]
항 7∼10 중 어느 한 항에 기재된 항체와 경합적으로, 서열번호 22에 기재된 아미노산 서열을 갖는 천연의 인간 CD81에 결합하는, 항체.
[항 12]
항 11에 기재된 항체로서, T 세포 유주 억제 작용을 갖는 항체.
[항 13]
항 7에 기재된 군 1∼군 24 중 어느 하나의 군에 기재된 6종으로부터 선택되는 적어도 하나의 CDR을 포함하는 항체로서, 상기 군의 6종의 CDR을 전부 포함하는 인간 CD81에 대한 항체와 경합적으로, 서열번호 22에 기재된 아미노산 서열을 갖는 천연의 인간 CD81에 결합하는, 인간 CD81에 대한 항체.
[항 14]
항 7에 기재된 어느 하나의 항체와 90% 이상의 상동성을 갖고, 상기 항체와 경합적으로, 서열번호 22에 기재된 아미노산 서열을 갖는 천연의 인간 CD81에 결합하는, 인간 CD81에 대한 항체.
[항 15]
하기 CDR을 포함하는 인간 CD81에 대한 항체.
(a-25) 서열번호 11로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(b-25) 서열번호 12로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(c-25) 서열번호 13으로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(d-25) 서열번호 14로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(e-25) 서열번호 15로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR, 및
(f-25) 서열번호 16으로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR.
[항 16]
하기 가변 영역을 포함하는 항 15에 기재된 항체.
(g-25) 상기 (a-25)∼(c-25)를 포함하는 경쇄 가변 영역 및
(h-25) 상기 (d-25)∼(f-25)를 포함하는 중쇄 가변 영역.
[항 17]
하기 가변 영역을 포함하는 항 16에 기재된 항체.
(i-25) 서열번호 18에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 및
(j-25) 서열번호 20에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역.
[항 18]
하기 경쇄 및 중쇄를 포함하는 항 16 또는 항 17에 기재된 항체.
(k-25) 서열번호 30에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 및
(l-25) 서열번호 32에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄.
[항 19]
항 15∼18 중 어느 한 항에 기재된 항체와 경합적으로, 서열번호 22에 기재된 아미노산 서열을 갖는 천연의 인간 CD81에 결합하는, 항체.
[항 20]
항 19에 기재된 항체로서, T 세포 유주 억제 작용을 갖는 항체.
[항 21]
항 15에 기재된 적어도 하나의 CDR을 포함하는 항체로서, 항 15에 기재된 항체와 경합적으로, 서열번호 22에 기재된 아미노산 서열을 갖는 천연의 인간 CD81에 결합하는, 인간 CD81에 대한 항체.
[항 22]
항 15에 기재된 항체와 90% 이상의 상동성을 갖고, 상기 항체와 경합적으로, 서열번호 22에 기재된 아미노산 서열을 갖는 천연의 인간 CD81에 결합하는, 인간 CD81에 대한 항체.
[항 23]
인간화 항체 혹은 인간 항체인 항 1∼6, 11∼14 및 19∼22 중 어느 한 항에 기재된 항체.
[항 24]
인간화 항체 혹은 인간 항체인 항 7∼10 및 15∼18 중 어느 한 항에 기재된 항체.
[항 25]
항 1∼24 중 어느 한 항에 기재된 항체의 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 코드하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드.
[항 26]
항 1∼6, 11∼14 및 19∼23 중 어느 한 항에 기재된 항체의 중쇄 가변 영역을 코드하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드와, 항 1∼6, 11∼14 및 19∼23 중 어느 한 항에 기재된 항체의 경쇄 가변 영역을 코드하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드의 조합.
[항 27]
항 7∼10, 15∼18 및 24 중 어느 한 항에 기재된 항체의 중쇄 가변 영역을 코드하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드와, 항 7∼10, 15∼18 및 24 중 어느 한 항에 기재된, 중쇄 가변 영역에 대응하는 경쇄 가변 영역을 코드하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드의 조합.
[항 28]
항 1∼24 중 어느 한 항에 기재된 항체의 중쇄 및 경쇄를 코드하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드.
[항 29]
항 1∼6, 11∼14 및 19∼23 중 어느 한 항에 기재된 항체의 중쇄를 코드하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드와, 항 1∼6, 11∼14 및 19∼23 중 어느 한 항에 기재된 항체의 경쇄를 코드하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드의 조합.
[항 30]
항 7∼10, 15∼18 및 24 중 어느 한 항에 기재된 항체의 중쇄를 코드하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드와, 항 7∼10, 15∼18 및 24 중 어느 한 항에 기재된, 중쇄에 대응하는 경쇄를 코드하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드의 조합.
[항 31]
항 25 또는 28에 기재된 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터.
[항 32]
항 31에 기재된 발현 벡터에 의해 형질 전환한 재조합 세포.
[항 33]
항 1∼6, 11∼14 및 19∼22 중 어느 한 항에 기재된 항체의 중쇄를 코드하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터와, 항 1∼6, 11∼14 및 19∼22 중 어느 한 항에 기재된 항체의 경쇄를 코드하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터에 의해 형질 전환한 재조합 세포.
[항 34]
항 7∼10, 15∼18 및 24 중 어느 한 항에 기재된 항체의 중쇄를 코드하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터와, 항 7∼10, 15∼18 및 24 중 어느 한 항에 기재된, 중쇄에 대응하는 경쇄를 코드하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터에 의해 형질 전환한 재조합 세포.
[항 35]
항 32∼34 중 어느 한 항에 기재된 재조합 세포를 배양하고, 얻어진 배양 상청으로부터 항체를 회수하는 것으로 이루어지는, 항인간 CD81 항체의 제조 방법.
[항 36]
항 1∼24 중 어느 한 항에 기재된 항체를 함유하는, 의약 조성물.
[항 37]
항 1∼24 중 어느 한 항에 기재된 항체를 유효 성분으로 하는, 염증성 장질환, 다발성 경화증, 건선 또는 혈액암의 예방, 개선 또는 치료제.
[항 38]
상기 (3), (4), (8), (11) 및 (12)에 기재된 인간 CD81 변이체에 대한 결합 친화성이, 서열번호 22에 기재된 아미노산 서열을 갖는 천연의 인간 CD81에 대한 결합 친화성을 100%로 할 때, 40% 미만인 항 1∼3 중 어느 한 항에 기재된 항체.
[항 39]
상기 (3), (4), (6) 및 (8)∼(13)에 기재된 인간 CD81 변이체에 대한 결합 친화성이, 서열번호 22에 기재된 아미노산 서열을 갖는 천연의 인간 CD81에 대한 결합 친화성을 100%로 할 때, 40% 미만인 항 1∼3 중 어느 한 항에 기재된 항체.
[항 40]
상기 (1)∼(5), (7), (8), (11) 및 (12)에 기재된 인간 CD81 변이체에 대한 결합 친화성이, 서열번호 22에 기재된 아미노산 서열을 갖는 천연의 인간 CD81에 대한 결합 친화성을 100%로 할 때, 40% 미만인 항 1∼3 중 어느 한 항에 기재된 항체.
본 발명은, 우수한 약효를 나타내고, 덧붙여, 인간에 대한 면역원성이 낮은, 인간 CD81에 대한 인간 모노클로날 항체를 제공할 수 있다. 또한, 항CD81 항체가 T 세포의 유주를 억제하고, 또한 암세포에 대하여 살세포 효과를 나타낸다는 새로운 지견을 얻었기 때문에, 본 발명의 항체는, 염증성 장질환을 포함하는 염증성 질환, 다발성 경화증, 건선 등의 자기 면역 질환을 비롯한 T 세포 유주가 관련되는 질환, 및 혈액암을 비롯한 CD81을 발현하고 있는 암세포에 의한 암의 예방, 개선 및 치료에 유용하다.
본 명세서에 있어서, 아미노산, (폴리)펩티드, (폴리)뉴클레오티드 등의 약호에 의한 표시는, IUPAC-IUB의 규정〔IUPAC-IUB Communication on Biological Nomenclature, Eur. J. Biochem., 138:9(1984)〕, 「염기 서열 또는 아미노산 서열을 포함하는 명세서 등의 작성을 위한 가이드라인」(일본 특허청편), 및 상기 분야에서의 관용 기호에 따른다.
본 명세서에 있어서 「유전자」 또는 「DNA」란, 2본쇄 DNA뿐만 아니라, 그것을 구성하는 센스쇄 및 안티센스쇄와 같은 각 1본쇄 DNA를 포함하는 취지로 사용된다. 또한 그 길이에 의해 특별히 제한되는 것은 아니다. 따라서, 본 명세서에 있어서 유전자(DNA)란, 특별히 언급하지 않는 한, 인간 게놈 DNA를 포함하는 2본쇄 DNA, cDNA를 포함하는 1본쇄 DNA(플러스쇄) 및 상기 플러스쇄와 상보적인 서열을 갖는 1본쇄 DNA(상보쇄), 및 이들의 단편 모두가 포함된다.
본 명세서에 있어서 「CD81 유전자」라는 용어는, 서열번호 21로 나타내는 인간 CD81 유전자(DNA) 또는 그 천연의 변이체 혹은 다형 배리언트(Polymorphic variant)(단, 상기 변이 혹은 다형의 결과로서, 후술하는 (1)∼(13)의 변이체 단백질을 발생시키는 것을 제외함)를 의미한다. 이들 변이체·다형 배리언트로는, 예컨대 NCBI가 제공하는 SNP 데이터베이스에 등록되어 있는 것을 들 수 있다.
본 명세서에 있어서 「CD81 단백질」또는 간단히「CD81」이라고 하는 용어는 서열번호 22로 나타내는 인간 CD81 단백질 또는 상기 천연의 변이체 혹은 다형 배리언트 DNA에 코드되는 단백질을 의미한다.
본 명세서에서 말하는 「항체」에는, 폴리클로날 항체, 모노클로날 항체, 키메라 항체, 1본쇄 항체, 또는 Fab 프래그먼트나 Fab 발현 라이브러리에 의해 생성되는 프래그먼트 등과 같이 항원 결합성을 갖는, 상기 항체의 일부가 포함된다.
본 명세서에 있어서 에피토프란, 항체가 결합하는 항원의 영역이다. 어느 종류의 실시형태에서는, 면역 글로불린 또는 T 세포 리셉터 또는 B 세포 리셉터에 특이적으로 결합할 수 있는 항원의 임의의 부위를 포함한다. 항원 결정기는, 분자의 화학적으로 활성인 표면기, 예컨대 아미노산, 당 측쇄, 포스포릴기 또는 술포닐기를 포함하고, 어느 종류의 실시형태에서는, 특이적인 삼차원 구조 특징 및/또는 특이적인 하전 특징을 가져도 좋다. 어느 종류의 실시형태에서는, 항체는, 단백질 및/또는 거대 분자의 복잡한 혼합물에 있어서, 이 항체가 표적 항원을 우선적으로 인식하는 경우, 항원에 특이적으로 결합한다고 할 수 있다.
항체의 구조
항체 분자의 기본 구조는, 각 클래스 공통으로, 분자량 5-7만의 중쇄와 2-3만의 경쇄로 구성된다(면역학 일러스트레이티드(I. Roitt, J. Brostoff, D. Male편)). 중쇄는, 통상 약 440개의 아미노산을 포함하는 폴리펩티드 사슬로 이루어지고, 클래스마다 특징적인 구조를 가지며, IgG, IgM, IgA, IgD, IgE에 대응하여 γ, μ, α, δ, ε 사슬이라고 불린다. 또한 IgG에는, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4가 존재하고, 각각 γ1, γ2, γ3, γ4라고 불리고 있다. 경쇄는, 통상 약 220개의 아미노산을 포함하는 폴리펩티드 사슬로 이루어지고, L형과 K형의 2종이 알려져 있으며, 각각 λ, κ 사슬이라고 불린다. 항체 분자의 기본 구조의 펩티드 구성은, 각각 상동인 2본의 중쇄 및 2본의 경쇄가, 디술피드 결합(S-S 결합) 및 비공유 결합에 의해 결합되고, 분자량 15-19만이다. 2종의 경쇄는, 어떤 중쇄와도 쌍을 이룰 수 있다. 개개의 항체 분자는, 항상 동일한 경쇄 2개와 동일한 중쇄 2개로 되어 있다.
사슬 내 S-S 결합은, 중쇄에 4개(μ, ε 사슬에는 5개), 경쇄에는 2개 있고, 아미노산 100-110 잔기마다 하나의 루프를 형성하며, 이 입체 구조는 각 루프 사이에서 유사하고, 구조 단위 혹은 도메인이라고 불린다. 중쇄, 경쇄 모두, N 말단에 위치하는 도메인은, 동종 동물의 동일 클래스(서브클래스)로부터의 표품이더라도, 그 아미노산 서열이 일정하지 않아, 가변 영역(V 영역)이라고 불리고 있다(중쇄 가변 영역 도메인은 VH, 경쇄 가변 영역 도메인은 VL로 나타냄). 이로부터 C 말단측의 아미노산 서열은, 각 클래스 혹은 서브클래스마다 거의 일정하여 정상 영역(C 영역)이라고 불리고 있다(각 도메인은, 각각, CH1, CH2, CH3 혹은 CL로 나타냄).
항체의 항원 결정 부위는 VH 및 VL에 의해 구성되고, 결합의 특이성은 이 부위의 아미노산 서열에 의한다. 한편, 보체나 각종 세포와의 결합과 같은 생물학적 활성은 각 클래스 Ig의 C 영역의 구조의 차를 반영하고 있다. 경쇄와 중쇄의 가변 영역의 가변성은, 어느쪽의 사슬에도 존재하는 3개의 작은 초가변 영역에 거의 한정되는 것을 알 수 있고, 이들 영역을 상보성 결정 영역(CDR)이라고 부르고 있다. CDR을 동정하기 위한 몇가지 넘버링 시스템이 일반적으로 사용되고 있다. Kabat 정의는, 서열 변화성에 기초하고, Chothia 정의는, 구조 루프 영역의 위치에 기초한다. AbM 정의는, Kabat 및 Chothia 어프로치 사이의 절충이다. 경쇄·중쇄의 가변 영역의 CDR은, Kabat, Chothia 또는 AbM 알고리즘에 따라, 경계를 나타낼 수 있다(Martin et al.(1989) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86 : 9268-9272; Martin et al.(1991) Methods Enzymol. 203 : 121-153; Pedersen et al. (1992) Immunomethods 1 : 126; 및 Rees et al. (1996) In Sternberg M.J.E.(ed.), Protein Structure Prediction, Oxford University Press, Oxford, pp.141-172).
002-A07 항체의 경우, 중쇄 가변 영역의 CDR은, 서열번호 10으로 나타내는 아미노산 서열 중 아미노산 번호 29∼42(CDR1-H), 49∼67(CDR2-H) 및 97∼108(CDR3-H)이고, 경쇄 가변 영역의 CDR은, 서열번호 8로 나타내는 아미노산 서열 중 아미노산 번호 22∼36(CDR1-L), 52∼58(CDR2-L) 및 90∼101(CDR3-L)의 잔기에 의해 경계가 나타내어진다. 또한, 005-C01 항체의 경우, 중쇄 가변 영역의 CDR은, 서열번호 20으로 나타내는 아미노산 서열 중 아미노산 번호 29∼42(CDR1-H), 49∼67(CDR2-H) 및 97∼102(CDR3-H)이고, 경쇄 가변 영역의 CDR은, 서열번호 18로 나타내는 아미노산 서열 중 아미노산 번호 22∼35(CDR1-L), 51∼57(CDR2-L) 및 89∼99(CDR3-L)의 잔기에 의해 경계가 나타내어진다.
가변 영역 중, CDR을 제외한 부분은 프레임워크 영역(FR)이라고 불리며, 비교적 일정하다. 프레임워크 영역은, β 시트 칸포메이션(conformation)을 채용하고 있으며, 그리고 CDR은 β 시트 구조를 접속하는 루프를 형성할 수 있다. 각 사슬에서의 CDR은, 프레임워크 영역에 의해 이들의 삼차원 구조로 유지되며 그리고 다른 사슬로부터의 CDR과 함께 항원 결합 부위를 형성한다.
항체의 결합 분석
항체 결합성의 확인은 임의의 주지된 분석 방법, 예컨대, 직접 및 간접 샌드위치 분석, 플로우 사이토메트리 및 면역 침강 분석 등으로 행할 수 있다(Zola, Monoclonal Antibodies : A Manual of Techniques, (CRC Press, Inc. 1987) pp.147-158). 본 발명에 있어서, 항인간 CD81 인간 모노클로날 항체의 인간 CD81 폴리펩티드 또는 그것을 표면 상에 제시하는 세포와의 결합은, 예컨대 이하의 방법에 따라 측정할 수 있다.
전형적인 방법으로서, 인간 CD81 폴리펩티드(항원)를 고상에 흡착시키고, 항원 항체 반응이나 효소 반응에 관여하지 않는 단백질(스킴 밀크, 알부민 등)로 블로킹한 후, 인간 항인간 CD81 모노클로날 항체(피검 항체)를 고상에 접촉시켜 인큐베이트하고, B/F 분리에 의해 미반응의 항체를 제외시킨 후, 피검 항체와 특이적으로 반응하는 표지화 2차 항체(항인간 IgG 등)를 작용시켜, 고상 상의 표지량을 측정하는 방법을 들 수 있다. 고상으로는, 예컨대, 아가로오스, 덱스트란, 셀룰로오스 등의 불용성 다당류, 플라스틱, 폴리스티렌, 폴리아크릴아미드, 실리콘 등의 합성 수지(튜브, 마이크로플레이트 등), 혹은 유리(비드, 튜브 등) 등을 이용할 수 있다. 고상에 흡착시키는 항원으로서, 후술하는 시험예 7(2)와 같이, 인간 CD81 폴리펩티드를 발현하는 세포의 막 분획을 이용해도 좋다. 또한, 고상화의 수단으로서, 시험예 7(2)와 같이, 항원을 고상과 결합할 수 있는 펩티드(His 태그, GST, MBP 등)와의 융합 단백질로서 재조합 발현시키고, 고상(Ni, 글루타티온, 말토오스 담체 등)과 어피니티(affinity) 결합시켜도 좋다. 표지제로는, 예컨대, 방사성 동위 원소, 효소, 형광 물질, 발광 물질 등이 이용된다. 방사성 동위 원소로는, 예컨대, 〔125I〕,〔131I〕,〔3H〕,〔14C〕등이 이용된다. 상기 효소로는, 안정적이고 비활성인 큰 것이 바람직하고, 예컨대, β-갈락토시다아제, β-글루코시다아제, 알칼리포스파타아제, 퍼옥시다아제, 말산 탈수소 효소 등이 이용된다. 형광 물질로는, 예컨대, 플루오레사민, 플루오레세인 이소티오시아네이트 등이 이용된다. 발광 물질로는, 예컨대, 루미놀, 루미놀 유도체, 루시페린, 루시게닌 등이 이용된다.
샌드위치법에 있어서는, 고상화한 항인간 CD81 항체(본 발명의 항체와는, 인간 CD81에 결합하는 부위가 상이한 항체)에 인간 CD81 폴리펩티드(항원), 또한 인간 항인간 CD81 모노클로날 항체(피검 항체)를 반응시킨 후, B/F 분리에 의해 미반응의 항체를 제외시키고, 피검 항체와 특이적으로 반응하는 표지화 2차 항체(항인간 IgG 등)를 작용시켜, 고상 상의 표지량을 측정한다. 표지제 및 고상은 상기와 동일한 것을 이용할 수 있다.
항인간 CD81 인간 모노클로날 항체의 인간 CD81 폴리펩티드를 발현하는 생세포와의 결합을 조사하기 위해, 플로우 사이토메트리를 사용할 수 있다. 개략으로는, 인간 CD81을 발현하는 세포(표준적인 증식 조건하에서 증식시킴)를, 예컨대 0.1% BSA를 함유하는 PBS 중, 항인간 CD81 항체(피검 항체)와 혼합하고, 37℃에서 1시간 인큐베이트하고, 세정 후, 피검 항체와의 반응과 동일한 조건하에서, 상기 세포를 플루오레세인이나 PE(피코에리트린)로 형광 표지한 2차 항체(항인간 IgG 항체)와 반응시킨다. 이 샘플을, 단세포에 대하여 게이트를 개방하는 광 산란 및 측방 산란 특성을 이용한 플로우 사이토미터에 의해 분석할 수 있다. 예컨대, 비특이적 항체(인간 IgG 등)를 이용했을 때의 형광 강도보다 강한 형광 강도를 나타내는 세포의 비율이 90% 이상, 바람직하게는 95% 이상, 보다 바람직하게는 97% 이상인 경우에, 피검 항체는「항원에 특이적으로 결합한다」라고 할 수 있다. 플로우 사이토메트리 분석에 덧붙여, 또는 그 대신에, 형광 현미경을 이용하는 별도의 분석을 사용할 수도 있다. 세포를 상기한 바와 같이 엄밀히 염색하여, 형광 현미경에 의해 조사할 수 있다. 이 방법에 의해 개개의 세포의 가시화가 가능해진다.
경합 분석
본 발명의 항인간 CD81 인간 모노클로날 항체의 결합 상수(Ka)의 측정이나, 이미 얻어진 본 발명의 항체와 경합적으로 인간 CD81에 결합하는 본 발명의 다른 항체의 동정에는, 경합 ELISA 등의 경합 분석을 이용할 수 있다. 경합 분석은, 상기한 항원 고정화 고상을 이용하는 결합 분석에 있어서, 고상과 피검 항체의 반응계에 유리(遊離)의 항원 혹은 이미 알려진 항체를 공존시킴으로써 실시된다. 예컨대, 이미 알려진 농도의 피검 항체액, 및 여러가지 농도의 항원을 상기 피검 항체액에 가한 혼합액을 항원 고정화 고상에 접촉시켜 인큐베이트하고, 고상 상의 표지량을 각각 측정한다. 각 유리 항원 농도에서의 측정치로부터 스캐차드(Scatchard) 해석을 행하고, 그래프의 기울기를 결합 상수로서 산출할 수 있다. 한편, 항원 고정화 고상에 대하여, 표지한 이미 알려진 항체(본 발명의 항체)와, 여러가지 농도의 피검 항체를 반응시키고, 고상 상의 표지량을 농도 의존적으로 감소시킨 피검 항체를 선택함으로써, 본 발명의 항체와 경합적으로 인간 CD81에 결합하는 항체를 동정할 수 있다.
본 발명의 항체
본 발명의 항체는, 서열번호 22에 나타내는 아미노산 서열 중 아미노산 번호 80∼175, 바람직하게는 아미노산 번호 113∼175의 아미노산 서열로 이루어지는 펩티드 영역에 결합할 수 있는 항인간 CD81 항체, 혹은 상기 항체와 경합적으로, 서열번호 22에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 인간 CD81에 결합하는 항체이다. 서열번호 22에 나타내는 아미노산 서열은, 보고되어 있는 인간 CD81 단백질의 아미노산 서열이고(EMBO J., 20 : 12-18, 2001), NCBI 데이터베이스에 Refseq ID : NP_004347로서 등록되어 있다. 본 명세서에서는 이후, 상기 아미노산 서열로 이루어지는 단백질을, 「천연의 인간 CD81」, 「야생형 CD81」 혹은 「야생형 인간 CD81」이라고도 한다.
본 발명은, 상기 펩티드 영역을 에피토프 영역으로서 인식하는 항인간 CD81 항체가, T 세포 유주 억제 등의 치료 작용을 발휘하며, 또한 부작용이 없거나 거의 없는 것을 알아낸 것에 기초한다.
본 발명의 항체는, 상기한 야생형 인간 CD81의 특정한 펩티드 영역에 결합하거나, 혹은 상기 펩티드 영역에 결합하는 항체와 경합적으로 야생형 인간 CD81에 결합하는 한, 어떠한 모노클로날 항체여도 좋다.
에피토프 해석
에피토프 해석은, 공지된 여러가지 방법으로 실시할 수 있다(Epitope Mapping Protocols/Second Edition, Mike Schutkowski, Ulrich Reineke, Ann N Y Acad Sci. 2010 Jan; 1183:267-87.). 본 항체의 에피토프의 보다 상세한 해석은, 결합 저해 분석, 호몰로그 스캔 및/또는 알라닌 스캔에 의해 실시할 수 있다(예컨대, 일본 특허 공개 제2009-159948호 공보, Science, 244 : 1081-1085(1989)).
알라닌 스캔은, 야생형 인간 CD81의 아미노산 잔기의 하나 하나를 알라닌으로 변환한 변이체를 제작하고, 야생형 인간 CD81과 변이체 CD81에 대한 항체의 결합 활성의 변화를 조사함으로써, 항체의 인간 CD81에의 결합에 필요한 인간 CD81 아미노산 잔기인지의 여부를 결정하는 방법이다.
호몰로그 스캔은, 야생형 인간 CD81 폴리펩티드의 적어도 하나의 아미노산을 다른 호몰로그 아미노산으로 치환함으로써, 어떤 아미노산 잔기가 활성에 악영향을 미치지 않고 삽입, 치환 또는 결실될 수 있는지를 결정하는 방법이며, 이 방법에 의해, 인간 CD81 폴리펩티드의 서열을 이미 알려진 상동 단백질 분자의 서열과 비교하여, 상동성이 높은 영역 내에 발생하는 아미노산 서열 변화의 수를 최소로 한다(Protein Science(2005), 14, 2405).
본 발명에 있어서 실시된 호몰로그 스캔 및 알라닌 스캔 변이(시험예 8 및 9 등 참조)에 의해, 상기 펩티드 영역 중의 특정한 아미노산 잔기를 다른 아미노산으로 치환하면, 상기 인간 CD81 변이체에 대한 항인간 CD81 항체의 결합 친화성이 현저히 저하되는 것이 밝혀졌다. 이들 지견은, 치환된 아미노산 잔기가 상기 항체의 야생형 인간 CD81과의 결합에 주로 기여하는 것을 나타내고 있다.
따라서, 적합한 실시양태에 있어서, 본 발명의 항체는, 상기한 야생형 인간 CD81에 대한 결합 친화성을 100%로 했을 때의, 하기 (1)∼(13)으로부터 선택되는 적어도 하나의 인간 CD81 변이체에 대한 결합 친화성이 40% 미만인 것을 특징으로 한다.
(1) 야생형 인간 CD81의 127번째 티로신(Y)을 페닐알라닌(F) 또는 트립토판(W)으로 치환한 CD81 변이체(Y127F 또는 Y127W)
(2) 야생형 인간 CD81의 130번째 알라닌(A)을 트레오닌(T) 또는 발린(V)으로 치환한 CD81 변이체(A130T 또는 A130V)
(3) 야생형 인간 CD81의 135번째 발린(V)을 알라닌 또는 류신으로 치환한 CD81 변이체(V135A 또는 V135L)
(4) 야생형 인간 CD81의 137번째 아스파라긴산(D)을 알라닌(A) 또는 글루타민산(E)으로 치환한 CD81 변이체(D137A 또는 D137E)
(5) 야생형 인간 CD81의 143번째 알라닌(A)을 트레오닌(T) 또는 발린(V)으로 치환한 CD81 변이체(A143T 또는 A143V)
(6) 야생형 인간 CD81의 151번째 히스티딘(H)을 알라닌(A) 또는 아르기닌(R)으로 치환한 CD81 변이체(H151A 또는 H151R)
(7) 야생형 인간 CD81의 154번째 류신(L)을 알라닌(A) 또는 이소류신(I)으로 치환한 CD81 변이체(L154A 또는 L154I)
(8) 야생형 인간 CD81의 158번째 글리신(G)을 알라닌(A) 또는 세린(S)으로 치환한 CD81 변이체(G158A 또는 G158S)
(9) 야생형 인간 CD81의 164번째 알라닌(A)을 트레오닌(T) 또는 발린(V)으로 치환한 CD81 변이체(A164T 또는 A164V)
(10) 야생형 인간 CD81의 168번째 세린(S)을 알라닌(A) 또는 트레오닌(T)으로 치환한 CD81 변이체(S168A 또는 S168T)
(11) 야생형 인간 CD81의 169번째 발린(V)을 알라닌(A) 또는 류신(L)으로 치환한 CD81 변이체(V169A 또는 V169L)
(12) 야생형 인간 CD81의 170번째 류신(L)을 알라닌(A) 또는 이소류신(I)으로 치환한 CD81 변이체(L170A 또는 L170I)
(13) 야생형 인간 CD81의 172번째 아스파라긴(N)을 알라닌(A) 또는 글루타민(Q)으로 치환한 CD81 변이체(N172A 또는 N172Q)
(여기서, 치환되는 아미노산 잔기의 위치는 서열번호 22에 나타내는 아미노산 서열의 아미노산 번호로 나타냄.)
여기서, 상기 CD81 변이체는, 후술하는 시험예의 기재 또는 공지된 수법, 예컨대, 야생형 인간 CD81 폴리펩티드를 코드하는 DNA에 아미노산 치환을 야기하는 적당한 뉴클레오티드 변화를 도입함으로써, 혹은 원하는 변이 폴리펩티드를 화학적으로 합성함으로써 제조할 수 있다. 본 명세서에 기재된 인간 CD81 폴리펩티드의 변이는, 예컨대, 미국 특허 제5,364,934호에 나타내는 보존적 혹은 비보존적 변이에 관한 기술 또는 지침을 이용하여 제작할 수 있다(예컨대, 본 명세서 중의 시험예 8, 시험예 9 참조).
야생형 혹은 변이 인간 CD81에 대한 항체의 결합 친화성은, 상기한 여러가지 결합 분석에 의해 측정할 수 있다. 야생형 인간 CD81에 대한 본 발명의 항체의 결합 상수(Ka)는, 적어도 1×107 M-1, 바람직하게는 1×108 M-1 이상, 보다 바람직하게는 1×109 M-1 이상, 특히 바람직하게는 1×1010 M-1 이상이다. 항체의 결합 상수는 상기한 경합 분석, 혹은 표면 플라즈몬 공명(SPR) 등의 다른 주지된 방법에 의해 결정할 수 있다.
보다 바람직하게는, 본 발명의 항체는, 야생형 인간 CD81에 대한 결합 친화성을 100%로 했을 때의, 상기 (9) 및 (11)의 각 변이 인간 CD81에 대한 결합 친화성이 40% 미만인 것을 특징으로 한다. 또한, 야생형 인간 CD81에 대한 결합 친화성을 100%로 했을 때의, 상기 (3), (4), (9) 및 (11)의 각 변이 인간 CD81에 대한 결합 친화성이 40% 미만인 것, 상기 (3), (4), (9), (10) 및 (11)의 각 변이 인간 CD81에 대한 결합 친화성이 40% 미만인 것, 상기 (3), (4), (8), (9), (10) 및 (11)의 각 변이 인간 CD81에 대한 결합 친화성이 40% 미만인 것, 혹은, 상기 (3), (4), (6), (8), (9), (10), (11) 및 (12)의 각 변이 인간 CD81에 대한 결합 친화성이 40% 미만인 것을 특징으로 한다. 상기 결합 특성을 갖는 항체 시리즈에 관해서는, 하기 (i)에서 상술한다. 하기 (i)에 기재되는 구체적인 일실시양태인, 군 1에 기재된 6종의 CDR을 전부 포함하는 항체의 경우, 상기 (3), (4), (6) 및 (8)∼(13)의 각 변이 인간 CD81에 대한 결합 친화성이 40% 미만이다.
다른 바람직한 양태에 있어서는, 본 발명의 항체는, 야생형 인간 CD81에 대한 결합 친화성을 100%로 했을 때의, 상기 (1)∼(5), (7), (8), (11) 및 (12)의 각 변이 인간 CD81에 대한 결합 친화성이 40% 미만인 것을 특징으로 한다. 상기 결합 특성을 갖는 항체 시리즈에 관해서는, 하기 (ii)에서 상술한다. 또한, 본 항체와, 상기한 하기 (i)의 구체적 실시양태의 항체 사이에서, 야생형 인간 CD81에 대한 결합 친화성을 100%로 했을 때의 상대 결합 친화성이 40% 미만인 공통된 변이 인간 CD81은 상기 (3), (4), (8), (11) 및 (12)의 각 변이 인간 CD81이다.
본 발명은 또한, 상기한 어느 본 발명 항체와 경합적으로 야생형 인간 CD81에 결합하는 항체를 제공한다. 또한, 상기 항체는, T 세포 유주 억제 효과 및/또는 CD81 발현 암세포에 대한 살세포 효과를 갖는 한, 서열번호 22에 나타내는 아미노산 서열 중 아미노산 번호 80∼175의 아미노산 영역 이외의 아미노산을 포함하는 영역에서, 야생형 인간 CD81에 결합하는 것이어도 좋다. T 세포 유주 억제 활성, CD81 발현 암세포에 대한 살세포 활성은, 서열번호 22에 나타내는 아미노산 서열 중 아미노산 번호 80∼175 혹은 아미노산 번호 113∼175의 아미노산 서열로 이루어지는 펩티드 영역에서 야생형 인간 CD81에 결합하는 항체와 동등(예컨대, 0.5∼2배)한 것이 바람직하지만, 인간의 염증성 장질환, 다발성 경화증, 건선 또는 혈액암에 대하여 예방·개선·치료 효과를 발휘하는 한, 활성의 정도는 상이해도 좋다. 항체의 「경합적 결합」은 상기한 경합 분석에 의해 조사할 수 있다.
(i) 하나의 구체적 양태
바람직한 일실시양태로는, 야생형 인간 CD81에 대한 결합 친화성을 100%로 했을 때의, 상기 (9) 및 (11)의 각 변이 인간 CD81에 대한 결합 친화성이 40% 미만인 항체이다.
상기한 결합 특성을 갖는 항체의 적합한 예는,
(1) 하기 군 1∼24 :
군 1
(a-1) 서열번호 1로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(b-1) 서열번호 2로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(c-1) 서열번호 3으로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(d-1) 서열번호 4로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(e-1) 서열번호 5로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR, 및
(f-1) 서열번호 6으로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR
군 2
(a-2) 서열번호 1로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(b-2) 서열번호 2로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(c-2) 서열번호 37로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(d-2) 서열번호 4로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(e-2) 서열번호 5로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR, 및
(f-2) 서열번호 6으로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR
군 3
(a-3) 서열번호 1로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(b-3) 서열번호 2로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(c-3) 서열번호 40으로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(d-3) 서열번호 4로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(e-3) 서열번호 5로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR, 및
(f-3) 서열번호 6으로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR
군 4
(a-4) 서열번호 1로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(b-4) 서열번호 2로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(c-4) 서열번호 43으로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(d-4) 서열번호 4로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(e-4) 서열번호 5로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR, 및
(f-4) 서열번호 6으로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR
군 5
(a-5) 서열번호 1로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(b-5) 서열번호 2로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(c-5) 서열번호 46으로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(d-5) 서열번호 4로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(e-5) 서열번호 5로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR, 및
(f-5) 서열번호 6으로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR
군 6
(a-6) 서열번호 1로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(b-6) 서열번호 2로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(c-6) 서열번호 49로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(d-6) 서열번호 4로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(e-6) 서열번호 5로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR, 및
(f-6) 서열번호 6으로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR
군 7
(a-7) 서열번호 1로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(b-7) 서열번호 2로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(c-7) 서열번호 52로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(d-7) 서열번호 4로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(e-7) 서열번호 5로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR, 및
(f-7) 서열번호 6으로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR
군 8
(a-8) 서열번호 1로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(b-8) 서열번호 2로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(c-8) 서열번호 43으로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(d-8) 서열번호 4로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(e-8) 서열번호 5로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR, 및
(f-8) 서열번호 55로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR
군 9
(a-9) 서열번호 60으로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(b-9) 서열번호 2로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(c-9) 서열번호 3으로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(d-9) 서열번호 4로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(e-9) 서열번호 5로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR, 및
(f-9) 서열번호 61로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR
군 10
(a-10) 서열번호 1로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(b-10) 서열번호 2로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(c-10) 서열번호 66으로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(d-10) 서열번호 4로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(e-10) 서열번호 5로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR, 및
(f-10) 서열번호 6으로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR
군 11
(a-11) 서열번호 1로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(b-11) 서열번호 2로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(c-11) 서열번호 3으로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(d-11) 서열번호 4로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(e-11) 서열번호 69로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR, 및
(f-11) 서열번호 70으로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR
군 12
(a-12) 서열번호 60으로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(b-12) 서열번호 2로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(c-12) 서열번호 66으로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(d-12) 서열번호 4로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(e-12) 서열번호 5로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR, 및
(f-12) 서열번호 6으로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR
군 13
(a-13) 서열번호 1로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(b-13) 서열번호 2로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(c-13) 서열번호 3으로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(d-13) 서열번호 77로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(e-13) 서열번호 5로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR, 및
(f-13) 서열번호 6으로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR
군 14
(a-14) 서열번호 80으로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(b-14) 서열번호 2로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(c-14) 서열번호 3으로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(d-14) 서열번호 4로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(e-14) 서열번호 81로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR, 및
(f-14) 서열번호 6으로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR
군 15
(a-15) 서열번호 1로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(b-15) 서열번호 2로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(c-15) 서열번호 66으로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(d-15) 서열번호 4로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(e-15) 서열번호 5로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR, 및
(f-15) 서열번호 6으로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR
군 16
(a-16) 서열번호 1로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(b-16) 서열번호 2로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(c-16) 서열번호 90으로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(d-16) 서열번호 4로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(e-16) 서열번호 5로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR, 및
(f-16) 서열번호 6으로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR
군 17
(a-17) 서열번호 1로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(b-17) 서열번호 2로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(c-17) 서열번호 52로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(d-17) 서열번호 4로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(e-17) 서열번호 5로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR, 및
(f-17) 서열번호 93으로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR
군 18
(a-18) 서열번호 98로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(b-18) 서열번호 2로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(c-18) 서열번호 3으로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(d-18) 서열번호 4로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(e-18) 서열번호 5로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR, 및
(f-18) 서열번호 99로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR
군 19
(a-19) 서열번호 60으로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(b-19) 서열번호 2로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(c-19) 서열번호 3으로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(d-19) 서열번호 4로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(e-19) 서열번호 5로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR, 및
(f-19) 서열번호 99로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR
군 20
(a-20) 서열번호 1로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(b-20) 서열번호 2로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(c-20) 서열번호 90으로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(d-20) 서열번호 4로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(e-20) 서열번호 5로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR, 및
(f-20) 서열번호 6으로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR
군 21
(a-21) 서열번호 1로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(b-21) 서열번호 2로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(c-21) 서열번호 3으로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(d-21) 서열번호 4로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(e-21) 서열번호 5로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR, 및
(f-21) 서열번호 55로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR
군 22
(a-22) 서열번호 1로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(b-22) 서열번호 2로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(c-22) 서열번호 66으로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(d-22) 서열번호 110으로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(e-22) 서열번호 5로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR, 및
(f-22) 서열번호 6으로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR
군 23
(a-23) 서열번호 1로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(b-23) 서열번호 2로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(c-23) 서열번호 3으로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(d-23) 서열번호 4로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(e-23) 서열번호 5로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR, 및
(f-23) 서열번호 115로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR
군 24
(a-24) 서열번호 1로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(b-24) 서열번호 2로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(c-24) 서열번호 90으로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(d-24) 서열번호 4로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(e-24) 서열번호 120으로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR, 및
(f-24) 서열번호 6으로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR
중, 어느 하나의 군에 기재된 6종의 CDR을 전부 포함하는 항체, 또는 (2) (a-X)∼(f-X)(X는 1∼24, 이하 동일)에 나타내는 아미노산 서열로부터 선택되는 1 이상(예, 1, 2, 3, 4, 5 혹은 6)의 아미노산 서열에 있어서, 1 이상, 바람직하게는 1∼여러(예, 1, 2, 3, 4 혹은 5)개의 아미노산 잔기가 치환 및/또는 결실 및/또는 부가 및/또는 삽입된 상기 (a-X)∼(f-X)의 CDR을 포함하는 항체로서, 상기한 어느 항체의 결합 특성과 동등한 결합 특성을 갖거나, 혹은, 상기한 어느 항체와 경합적으로 야생형 인간 CD81에 결합하는 항체이다. 여기서 「동등한 결합 특성」이란, 적어도 야생형 인간 CD81 폴리펩티드의 80번째∼175번째 혹은 113번째∼175번째 아미노산 잔기로 이루어지는 펩티드 영역과 결합하는 것을 의미하며, 바람직하게는, 또한, 야생형 인간 CD81에 대한 결합 친화성을 100%로 하면, 상기 (1)∼(13)으로부터 선택되는 적어도 하나의 인간 CD81 변이체(보다 바람직하게는 변이체 (9) 및 (11))와 40% 미만의 결합 친화성으로 결합하는 것을 의미한다.
상기 (2)의 항체는, 예컨대, 상기 (1)의 항체의 가변 영역의 염기 서열을 코드하는 벡터를 주형으로 하고, PCR을 이용하여 망라적으로 변이를 도입함으로써, 파지 디스플레이 변이 항체 라이브러리를 조제하고, 인간 CD81에 대한 결합 활성, 혹은 상기 (1)의 항체와의 경합적 결합을 지표로 하여 라이브러리를 스크리닝하고, 패닝(panning)을 행하는 등, 공지된 방법에 의해 얻을 수 있다.
항체의 결합 특성 및 경합적 결합은, 전술한 여러가지 결합 분석 및 경합 분석에 의해 측정할 수 있다. 분석 결과, 「동등한 결합 특성」 또는 「경합적 결합」이 확인되면, 계속해서, 그 치료 작용을 이후에 상술하는 세포 유주 시험에 의해 시험할 수 있다.
상기한 결합 특성을 갖는 항체의 보다 바람직한 예는,
(1) 상기 (a-X)∼(c-X)의 CDR을 포함하는 경쇄 가변 영역과, 상기 (d-X)∼(f-X)의 CDR을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 항체, 또는
(2) (a-X)∼(f-X)에 나타내는 아미노산 서열로부터 선택되는 1 이상(예, 1, 2, 3, 4, 5 혹은 6)의 아미노산 서열에 있어서, 1 이상, 바람직하게는 1∼여러(예, 1, 2, 3, 4 혹은 5)개의 아미노산 잔기가 치환 및/또는 결실 및/또는 부가 및/또는 삽입된 상기 (1)의 경쇄 및 중쇄 가변 영역을 포함하는 항체로서, 상기한 어느 항체의 결합 특성과 동등한 결합 특성을 갖거나, 혹은, 상기한 어느 항체와 경합적으로 야생형 인간 CD81에 결합하는 항체이다. 여기서 「동등한 결합 특성」이란 상기와 동의이다.
보다 바람직하게는, 상기한 항체에 있어서, (a-X), (b-X) 및 (c-X)의 CDR은, 경쇄의 N 말단으로부터 이 순서대로 배치된다. 즉, (a-X), (b-X) 및 (c-X)의 CDR은, 각각 경쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3에 상당한다. 마찬가지로, (d-X), (e-X) 및 (f-X)의 CDR은, 중쇄의 N 말단으로부터 이 순서대로 배치된다. 즉, (d-X), (e-X) 및 (f-X)의 CDR은, 각각 중쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3에 상당한다.
상기한 결합 특성을 갖는 항체의 더욱 바람직한 예는,
(1) (i-X)에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역과, (j-X)에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 항체, 또는
(2) (i-X) 및 (j-X) 중 어느 일방 혹은 양방에 있어서, 1 이상, 바람직하게는 1∼20개, 보다 바람직하게는 1∼10개, 더욱 바람직하게는 1∼여러(예, 1, 2, 3, 4 혹은 5)개의 아미노산 잔기가 치환 및/또는 결실 및/또는 부가 및/또는 삽입된 상기 (1)의 경쇄 및 중쇄 가변 영역을 포함하는 항체로서, 상기한 어느 항체의 결합 특성과 동등한 결합 특성을 갖거나, 혹은, 상기한 어느 항체와 경합적으로 야생형 인간 CD81에 결합하는 항체이다. 여기서 「동등한 결합 특성」이란 상기와 동의이다.
상기한 결합 특성을 갖는 항체의 다른 적합한 예는, (i-X)에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역과, (j-X)에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 항체가 결합하는 것과, 동일 혹은 실질적으로 동일한 에피토프에 결합하는 항체이다. 또한 바람직하게는, (k-X)에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄와, (l-X)에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는 항체가 결합하는 것과, 동일 혹은 실질적으로 동일한 에피토프에 결합하는 항체이다. 여기서 「실질적으로 동일한 에피토프」란, 상기 특정한 경쇄(가변 영역) 및 중쇄(가변 영역) 서열을 갖는 항체가 인식하는 에피토프와는 상이하지만, 입체적으로 중복되는 에피토프를 의미하며, 상기 실질적으로 동일한 에피토프를 인식하는 항체는, 야생형 인간 CD81과의 결합에 관해, 상기 특정한 경쇄(가변 영역) 및 중쇄(가변 영역) 서열을 갖는 항체와 경합한다.
2개의 항체가 동일 또는 입체적으로 중복되는 에피토프에 결합하는지의 여부를 결정하기 위한, 가장 광범위하게 이용되고, 신속한 방법은, 표지된 항원 또는 표지된 항체 중 어느 것을 이용하여, 모든 많은 상이한 형식으로 구성될 수 있는 경합 분석이다. 통상, 항원은, 기판 상에 고정되고, 미표지의 항체가 표지된 항체의 결합을 블록하는 능력이, 방사성 동위체 또는 효소 표지를 이용하여 측정된다.
본 발명의 항체는 또한, 상기 군 1∼24 중 어느 하나의 군에 기재된 6종의 CDR로부터 선택되는 적어도 하나의 CDR을 포함하는 항체로서, 상기 6종의 CDR을 전부 포함하는 항체와 경합적으로, 야생형 인간 CD81에 결합하는 항체여도 좋다.
그리고 또한, 본 발명의 항체는, 상기 군 1∼24 중 어느 하나의 군에 기재된 6종의 CDR을 전부 포함하는 항체의 경쇄 및 중쇄의 아미노산 서열과 80% 이상, 바람직하게는 90% 이상, 보다 바람직하게는 95% 이상의 상동성을 가지며, 또한 상기 항체와 경합적으로, 야생형 인간 CD81에 결합하는 항체여도 좋다. 여기서 아미노산 서열의 상동성은 NCBI BLAST(National Center for Biotechnology Information Basic Local Alignment Search Tool)의 blastp 프로그램을 이용하여, 이하의 조건(기대치 = 10; 갭을 허용함; 매트릭스 = BLOSUM62; 필터링 = OFF)으로 계산할 수 있다.
(ii) 다른 구체적 양태
다른 바람직한 실시양태로는, 야생형 인간 CD81에 대한 결합 친화성을 100%로 했을 때의, 상기 (1)∼(5), (7), (8), (11) 및 (12)의 각 변이 인간 CD81에 대한 결합 친화성이 40% 미만인 항체이다.
상기한 결합 특성을 갖는 항체의 적합한 예는,
(1) (a-25) 서열번호 11에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(b-25) 서열번호 12에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(c-25) 서열번호 13에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(d-25) 서열번호 14에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
(e-25) 서열번호 15에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR, 및
(f-25) 서열번호 16에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR
을 갖는 항체, 또는
(2) 서열번호 11∼16에 나타내는 아미노산 서열로부터 선택되는 1 이상(예, 1, 2, 3, 4, 5 혹은 6)의 아미노산 서열에 있어서, 1 이상, 바람직하게는 1∼여러(예, 1, 2, 3, 4 혹은 5)개의 아미노산 잔기가 치환 및/또는 결실 및/또는 부가 및/또는 삽입된 상기 (a-25)∼(f-25)의 CDR을 포함하는 항체로서, 상기한 어느 항체의 결합 특성과 동등한 결합 특성을 갖거나, 혹은, 상기한 어느 항체와 경합적으로 야생형 인간 CD81에 결합하는 항체이다. 여기서 「동등한 결합 특성」이란 상기와 동의이다.
항원의 결합 특성 및 경합적 결합은, 전술한 여러가지 결합 분석 및 경합 분석에 의해 측정할 수 있다. 분석 결과, 「동등한 결합 특성」 또는 「경합적 결합」이 확인되면, 계속해서, 그 치료 작용을 이후에 상술하는 세포 유주 시험에 의해 시험할 수 있다.
상기한 결합 특성을 갖는 항체의 보다 바람직한 예는,
(1) 상기 (a-25)∼(c-25)의 CDR을 포함하는 경쇄 가변 영역과, 상기 (d-25)∼(f-25)의 CDR을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 항체, 또는
(2) 서열번호 11∼16에 나타내는 아미노산 서열로부터 선택되는 1 이상(예, 1, 2, 3, 4, 5 혹은 6)의 아미노산 서열에 있어서, 1 이상, 바람직하게는 1∼여러(예, 1, 2, 3, 4 혹은 5)개의 아미노산 잔기가 치환 및/또는 결실 및/또는 부가 및/또는 삽입된 상기 (1)의 경쇄 및 중쇄 가변 영역을 포함하는 항체로서, 상기한 어느 항체의 결합 특성과 동등한 결합 특성을 갖거나, 혹은, 상기한 어느 항체와 경합적으로 야생형 인간 CD81에 결합하는 항체이다. 여기서 「동등한 결합 특성」이란 상기와 동의이다.
보다 바람직하게는, 상기한 항체에 있어서, (a-25), (b-25) 및 (c-25)의 CDR은, 경쇄의 N 말단으로부터 이 순서대로 배치된다. 즉, (a-25), (b-25) 및 (c-25)의 CDR은, 각각 경쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3에 상당한다. 마찬가지로, (d-25), (e-25) 및 (f-25)의 CDR은, 중쇄의 N 말단으로부터 이 순서대로 배치된다. 즉, (d-25), (e-25) 및 (f-25)의 CDR은, 각각 중쇄의 CDR1, CDR2 및 CDR3에 상당한다.
상기한 결합 특성을 갖는 항체의 더욱 바람직한 예는,
(1) 서열번호 18에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역과, 서열번호 20에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 항체, 또는
(2) 서열번호 18 및 20 중 어느 일방 혹은 양방에 있어서, 1 이상, 바람직하게는 1∼20개, 보다 바람직하게는 1∼10개, 더욱 바람직하게는 1∼여러(예, 1, 2, 3, 4 혹은 5)개의 아미노산 잔기가 치환 및/또는 결실 및/또는 부가 및/또는 삽입된 상기 (1)의 경쇄 및 중쇄 가변 영역을 포함하는 항체로서, 상기한 어느 항체의 결합 특성과 동등한 결합 특성을 갖거나, 혹은, 상기한 어느 항체와 경합적으로 야생형 인간 CD81에 결합하는 항체이다. 여기서 「동등한 결합 특성」이란 상기와 동의이다.
상기한 결합 특성을 갖는 항체의 다른 적합한 예는, 서열번호 18에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역과, 서열번호 20에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 항체가 결합하는 것과, 동일 혹은 실질적으로 동일한 에피토프에 결합하는 항체이다. 또한 바람직하게는, 서열번호 30에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄와, 서열번호 32에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는 항체가 결합하는 것과, 동일 혹은 실질적으로 동일한 에피토프에 결합하는 항체이다. 여기서 「실질적으로 동일한 에피토프」는 상기와 동의이다.
본 발명의 항체는 또한, 상기 (a-25)∼(f-25)의 6종의 CDR로부터 선택되는 적어도 하나의 CDR을 포함하는 항체로서, 상기 6종의 CDR을 전부 포함하는 항체와 경합적으로, 야생형 인간 CD81에 결합하는 항체여도 좋다.
그리고 또한, 본 발명의 항체는, 상기 (a-25)∼(f-25)의 6종의 CDR을 전부 포함하는 항체의 경쇄 및 중쇄의 아미노산 서열과 80% 이상, 바람직하게는 90% 이상, 보다 바람직하게는 95% 이상의 상동성을 가지며, 또한 상기 항체와 경합적으로, 야생형 인간 CD81에 결합하는 항체여도 좋다. 여기서 아미노산 서열의 상동성은 상기와 동일하게 하여 계산할 수 있다.
(I) 항체의 제작
본 발명의 항체는, 상기한 야생형 인간 CD81의 특정한 펩티드 영역에 결합하는 한, 어떠한 모노클로날 항체여도 좋다. 항체의 아이소 타입은 특별히 한정되지 않지만, 바람직하게는 IgG, IgM 또는 IgA, 특히 바람직하게는 IgG를 들 수 있다. 또한, 항체의 분자 타입도 특별히 제한은 없고, 완전 항체 분자 외에, 예컨대 Fab, Fab', F(ab')2 등의 프래그먼트, scFv, scFv-Fc, 미니보디(minibody), 다이아보디(diabody) 등의 유전자 공학적으로 제작된 콘주게이트(conjugate) 분자, 혹은 폴리에틸렌글리콜(PEG) 등의 안정화 작용을 갖는 분자 등으로 수식된 이들의 유도체 등이어도 좋다.
본 발명의 항체는 인간을 투여 대상으로 하는 의약품으로서 사용되는 점에서, 본 발명의 항체는 인간에게 투여한 경우에 항원성을 나타낼 위험성이 저감된 항체, 구체적으로는, 완전 인간 항체(간단히 인간 항체라고도 함), 인간화 항체, 비인간(예, 마우스)-인간 키메라 항체 등이고, 특히 바람직하게는 완전 인간 항체이다. 인간화 항체 및 키메라 항체는, 후술하는 방법에 따라 유전자 공학적으로 제작할 수 있다. 또한, 완전 인간 항체는, 인간-인간(혹은 인간-마우스) 하이브리도마로부터 제조하는 것도 가능하기는 하지만, 대량의 항체를 안정적으로 또한 저비용으로 제공하기 위해서는, 후술하는 바와 같이 파지 디스플레이법 또는 인간 항체 생성 동물(예, 마우스)을 이용하여 제조하는 것이 바람직하다.
(II) 본 발명의 항체의 제작 방법
본 발명의 항체는, 후술하는 실시예에 기재된 방법 또는 공지된 방법에 의해 제작할 수 있다.
(i) 항원의 조제
본 발명의 항체를 조제하기 위해 사용되는 항원으로는, 야생형 인간 CD81 단백질 혹은 그 부분 펩티드, 혹은 그것과 동일한 항원 결정기를 1종 이상 갖는 (합성)펩티드 등을 사용할 수 있다(이하, 이들을 간단히 본 발명의 항원이라고 하는 경우도 있음).
야생형 인간 CD81 단백질 혹은 그 부분 펩티드는, 예컨대, (a) 인간의 조직 또는 세포로부터 공지된 방법 혹은 그것에 준하는 방법을 이용하여 조제, (b) 펩티드·신시사이저(synthesizer) 등을 사용하는 공지된 펩티드 합성법에 의해 화학적으로 합성, (c) 야생형 인간 CD81 혹은 그 부분 펩티드를 코드하는 DNA를 포함하는 형질 전환체를 배양, 혹은 (d) 야생형 인간 CD81 혹은 그 부분 펩티드를 코드하는 핵산을 주형으로 하고, 무세포 전사/번역계를 이용하여 생화학적으로 합성함으로써 조제된다.
(iia) 파지 디스플레이 인간 항체 라이브러리를 이용한 인간 항체의 제작
인간 항체의 제작은 파지 디스플레이에 의해서도 가능하다(Hoogenboom and Winter, J. Mol. Biol., 227:381 (1991); Marks et al., J. Mol. Biol., 222:581 (1991); Cole et al., Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss, p.77 (1985) 및 Boermer et al., J.Immunol., 147(1) : 86-95 (1991)). 파지 디스플레이 인간 항체 라이브러리의 제작 방법으로는, 예컨대 이하의 것을 들 수 있지만, 이것에 한정되지 않는다.
이용되는 파지는 특별히 한정되지 않지만, 통상 섬유형 파지(Ff 박테리오파지)가 바람직하게 이용된다. 파지 표면에 외래 단백질을 제시하는 방법으로는, g3p, g6p∼g9p의 코트 단백질 중 어느 것과의 융합 단백질로서 상기 코트 단백질 상에서 발현·제시시키는 방법을 들 수 있는데, 자주 이용되는 것은 g3p 혹은 g8p의 N 말단측에 융합시키는 방법이다. 파지 디스플레이 벡터로는, 1) 파지 게놈의 코트 단백질 유전자에 외래 유전자를 융합한 형태로 도입하여, 파지 표면 상에 제시되는 코트 단백질을 전부 외래 단백질과의 융합 단백질로서 제시시키는 것 외에, 2) 융합 단백질을 코드하는 유전자를 야생형 코트 단백질 유전자와는 별도로 삽입하여, 융합 단백질과 야생형 코트 단백질을 동시에 발현시키는 것이나, 3) 융합 단백질을 코드하는 유전자를 갖는 파지미드 벡터를 갖는 대장균에 야생형 코트 단백질 유전자를 갖는 헬퍼 파지를 감염시켜 융합 단백질과 야생형 코트 단백질을 동시에 발현하는 파지 입자를 생성시키는 것 등을 들 수 있지만, 1)의 경우에는 큰 외래 단백질을 융합시키면 감염 능력이 상실되기 때문에, 항체 라이브러리의 제작을 위해서는 2) 또는 3)의 타입이 이용된다.
구체적인 벡터로는, Holt등(Curr. Opin. Biotechnol., 11 : 445-449, 2000)에 기재된 것이 예시된다. 예컨대, pCES1(J. Biol. Chem., 274: 18218-18230, 1999 참조)은, 하나의 락토오스 프로모터의 제어하에 g3p의 시그널 펩티드의 하류에 κ 경쇄 정상 영역을 코드하는 DNA와 g3p 시그널 펩티드의 하류에 CH3을 코드하는 DNA, His-tag, c-myc tag, 앰버 종지 코돈(TAG)을 통해 g3p 코드 서열이 배치된 Fab 발현형 파지미드 벡터이다. 앰버 변이를 갖는 대장균에 도입하면 g3p 코트 단백질 상에 Fab를 제시하지만, 앰버 변이를 갖지 않는 HB2151주 등에서 발현시키면 가용성 Fab 항체를 생성시킨다. 또한, scFv 발현형 파지미드 벡터로는, 예컨대 pHEN1(J. Mol. Biol., 222:581-597, 1991) 등이 이용된다. 한편, 헬퍼 파지로는, 예컨대 M13-KO7, VCSM13 등을 들 수 있다.
또한, 다른 파지 디스플레이 벡터로서, 항체 유전자의 3' 말단과 코트 단백질 유전자의 5' 말단에 각각 시스테인을 코드하는 코돈을 포함하는 서열을 연결하고, 양유전자를 동시에 별개로(융합 단백질로서가 아니라) 발현시켜, 도입된 시스테인 잔기끼리에 의한 S-S 결합을 통해 파지 표면의 코트 단백질 상에 항체를 제시할 수 있도록 디자인된 것(Morphosys사의 CysDisplayTM 기술) 등도 들 수 있다.
인간 항체 라이브러리의 종류로는, 나이브/비면역 라이브러리, 합성 라이브러리, 면역 라이브러리 등을 들 수 있다.
나이브/비면역(non-immunized) 라이브러리는, 정상적인 인간이 보유하는 VH 및 VL 유전자를 RT-PCR에 의해 취득하고, 이들을 랜덤으로 상기한 파지 디스플레이 벡터에 클로닝하여 얻어지는 라이브러리이다. 통상, 정상인의 말초혈, 골수, 편도선 등의 림프구 유래의 mRNA 등이 주형으로서 이용된다. 질병 이력 등의 V 유전자의 바이어스를 없애기 위해, 항원 감작에 의한 클래스 스위치가 일어나고 있지 않은 IgM 유래의 mRNA만을 증폭한 것을 특히 나이브 라이브러리라고 부르고 있다. 대표적인 것으로는, CAT사의 라이브러리(J. Mol. Biol., 222: 581-597, 1991; Nat. Biotechnol., 14: 309-314, 1996 참조), MRC사의 라이브러리(Annu. Rev. Immunol., 12: 433-455, 1994 참조), Dyax사의 라이브러리(J. Biol. Chem., 1999(전술); Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 14: 7969-7974, 2000 참조) 등을 들 수 있다.
합성 라이브러리는, 인간 B 세포 내의 기능적인 특정한 항체 유전자를 선택하여, V 유전자 단편의, 예컨대 CDR3 등의 항원 결합 영역의 부분을 적당한 길이의 랜덤인 아미노산 서열을 코드하는 DNA로 치환하고, 라이브러리화한 것이다. 처음부터 기능적인 scFv나 Fab를 생성하는 VH 및 VL 유전자의 조합으로 라이브러리를 구축할 수 있기 때문에, 항체의 발현 효율이나 안정성이 우수하다고 여겨진다. 대표적인 것으로는, Morphosys사의 HuCAL 라이브러리(J.Mol. Biol., 296: 57-86, 2000 참조), BioInvent사의 라이브러리(Nat. Biotechnol., 18: 852, 2000 참조), Crucell사의 라이브러리(Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 92: 3938, 1995; J. Immunol. Methods, 272: 219-233, 2003 참조) 등을 들 수 있다.
면역(immunized) 라이브러리는, 암, 자기 면역 질환, 감염증 등의 환자나 백신 접종을 받은 자 등, 표적 항원에 대한 혈중 항체가(antibody titer)가 상승한 인간으로부터 채취한 림프구, 혹은 상기 체외 면역법에 의해 표적 항원을 인위적으로 면역한 인간 림프구 등으로부터, 상기 나이브/비면역 라이브러리의 경우와 동일하게 하여 mRNA를 조제하고, RT-PCR법에 의해 VH 및 VL 유전자를 증폭하여, 라이브러리화한 것이다. 처음부터 원하는 항체 유전자가 라이브러리 중에 포함되기 때문에, 비교적 작은 사이즈의 라이브러리로부터라도 원하는 항체를 얻을 수 있다.
표적 항원에 대한 항체를 파지 디스플레이법으로 선별하는 공정을 패닝이라고 한다. 구체적으로는, 예컨대, 항원을 고정화한 담체와 파지 라이브러리를 접촉시키고, 비결합 파지를 세정 제거한 후, 결합한 파지를 담체로부터 용출시키고, 대장균에 감염시켜 상기 파지를 증식시킨다는 일련의 조작을 3∼5회 정도 반복함으로써 항원 특이적인 항체를 제시하는 파지를 농축시킨다. 항원을 고정화하는 담체로는, 통상의 항원 항체 반응이나 어피니티 크로마토그래피에서 이용되는 각종 담체, 예컨대 아가로오스, 덱스트란, 셀룰로오스 등의 불용성 다당류, 폴리스티렌, 폴리아크릴아미드, 실리콘 등의 합성 수지, 혹은 유리, 금속 등으로 이루어지는 마이크로플레이트, 튜브, 멤브레인, 칼럼, 비드 등, 또한 표면 플라즈몬 공명(SPR)의 센서칩 등을 들 수 있다. 항원의 고정화에는 물리적 흡착을 이용해도 좋고, 또한, 단백질 혹은 효소 등을 불용화, 고정화하는 데에 이용되는 화학 결합을 이용하는 방법이어도 좋다. 예컨대 비오틴-(스트렙트)아비딘계 등이 바람직하게 이용된다. 비결합 파지의 세정에는, BSA 용액 등의 블로킹액(1-2회), Tween 등의 계면 활성제를 포함하는 PBS(3-5회) 등을 순차 이용할 수 있다. 시트르산 완충액(pH 5) 등의 사용이 바람직하다는 보고도 있다. 특이적 파지의 용출에는, 통상 산(예, 0.1 M 염산 등)이 이용되지만, 특이적 프로테아제에 의한 절단(예컨대, 항체 유전자와 코트 단백질 유전자의 연결부에 트립신 절단 부위를 코드하는 유전자 서열을 도입할 수 있음. 이 경우, 용출하는 파지 표면에는 야생형 코트 단백질이 제시되기 때문에, 코트 단백질의 전부가 융합 단백질로서 발현되더라도 대장균에의 감염·증식이 가능해짐)이나 가용성 항원에 의한 경합적 용출, 혹은 S-S 결합의 환원(예컨대, 상기한 CysDisplayTM에서는, 패닝 후, 적당한 환원제를 이용하여 항체와 코트 단백질을 해리시킴으로써 항원 특이적 파지를 회수할 수 있음)에 의한 용출도 가능하다. 산으로 용출한 경우에는, 트리스 등으로 중화한 후에 용출 파지를 대장균에 감염시켜, 배양 후, 통상법에 의해 파지를 회수한다.
항원 특이적 항체를 제시하는 파지가 패닝에 의해 농축된 후, 파지를 대장균에 감염시키고, 그 대장균을 플레이트 상에 파종하여 세포의 클로닝을 행한다. 다시 파지를 회수하여, 전술한 항체가 측정법(예, ELISA, RIA 등)이나 FACS 혹은 SPR을 이용한 측정에 의해 항원 결합 활성을 확인한다.
선택된 항원 특이적 항체를 제시하는 파지 클론으로부터의 항체의 단리·정제는, 예컨대, 파지 디스플레이 벡터로서 항체 유전자와 코트 단백질 유전자의 연결부에 앰버 종지 코돈이 도입된 벡터를 이용하는 경우에는, 상기 파지를 앰버 변이를 갖지 않는 대장균(예, HB2151주)에 감염시키면, 가용성 항체 분자가 생성되어 페리플라즘 혹은 배지 중에 분비되기 때문에, 세포벽을 리소자임 등으로 용해하여 세포외 분획을 회수하고, 상기와 동일한 정제 기술을 이용하여 행할 수 있다. His-tag나 c-myc tag를 도입해 두면, Immobilized Metal Affinity Chromatography(IMAC)법이나 항c-myc 항체 칼럼 등을 이용하여 용이하게 정제할 수 있다. 또한, 패닝시에 특이적 프로테아제에 의한 절단을 이용하는 경우에는, 상기 프로테아제를 작용시키면 항체 분자가 파지 표면으로부터 분리되기 때문에, 동일한 정제 조작을 실시함으로써 원하는 항체를 정제할 수 있다.
이와 같이 하여 얻어진 인간 항체(scFv, Fab 등)가 야생형 인간 CD81의 에피토프 영역에 결합할 수 있는 것은 상기 펩티드 영역을 포함하는 폴리펩티드를 이용한 전술한 결합 분석에 의해 확인할 수 있다.
(iib) 인간 항체 생성 동물을 이용한 인간 항체의 제작
내인성 면역 글로불린(Ig) 유전자를 녹아웃(KO)한 비인간 온혈 동물에게 기능적인 인간 Ig 유전자를 도입하고, 이것을 항원으로 면역하면, 상기 동물 유래의 항체 대신에 인간 항체가 생성된다. 따라서, 마우스 등과 같이 하이브리도마 제작 기술이 확립되어 있는 동물을 이용하면, 종래의 마우스 모노클로날 항체의 제작과 동일한 방법에 의해 완전 인간 모노클로날 항체를 취득하는 것이 가능해진다. 즉, 인간 Ig의 중쇄 및 경쇄의 미니 유전자를 통상의 트랜스제닉(Tg) 기술을 이용하여 도입한 마우스와, 내인성 마우스 Ig 유전자를 통상의 KO 기술을 이용하여 불활성화한 마우스를 교배하여 얻어진 인간 항체 생성 마우스(Immunol. Today, 17: 391-397, 1996)를 이용하여 인간 모노클로날 항체를 제작할 수 있다(국제 공개 제93/12227호, 국제 공개 제92/03918호, 국제 공개 제94/02602호, 국제 공개 제94/25585호, 국제 공개 제96/34096호, 국제 공개 제96/33735호).
인간 항체 생성 마우스로부터 채취한 항인간 CD81 항체 생성 세포와 미엘로마 세포의 융합에 의해 얻어진 하이브리도마를 배양하고, 항인간 CD81 항체를 그 배양 상청으로부터 회수하여, 통상법에 의해 정제할 수 있다. 이와 같이 하여 얻어진 인간 항체가 야생형 인간 CD81의 에피토프 영역에 결합할 수 있는 것은 상기 펩티드 영역을 포함하는 폴리펩티드를 이용한 전술한 결합 분석에 의해 확인할 수 있다.
(iic) 키메라 항체의 제작
본 명세서에 있어서「키메라 항체」란, 중쇄 및 경쇄의 가변 영역(VH 및 VL)의 서열이 비인간 동물종에서 유래되고, 정상 영역(CH 및 CL)의 서열이 인간에서 유래되는 항체를 의미한다. 가변 영역의 서열은, 예컨대 마우스, 래트, 토끼 등의 용이하게 하이브리도마를 제작할 수 있는 동물종 유래인 것이 바람직하고, 정상 영역의 서열은 투여 대상이 되는 동물종 유래인 것이 바람직하다.
키메라 항체의 제작법으로는, 예컨대 미국 특허 제6,331,415호 명세서에 기재된 방법 혹은 그것을 일부 개변한 방법 등을 들 수 있다.
얻어진 키메라 중쇄 및 키메라 경쇄 발현 벡터로 숙주 세포를 형질 전환한다. 숙주 세포로는, 동물 세포, 예컨대 상기한 마우스 골수종 세포 외에, 차이니즈 햄스터 난소(CHO) 세포, 원숭이 유래의 COS-7 세포, Vero 세포, 래트 유래의 GHS 세포 등을 들 수 있다. 형질 전환은 동물 세포에 적용 가능한 어떠한 방법을 이용해도 좋지만, 바람직하게는 일렉트로포레이션법 등을 들 수 있다. 숙주 세포에 알맞은 배지 중에서 일정 기간 배양 후, 배양 상청을 회수하여 상기와 동일한 방법으로 정제함으로써, 키메라 모노클로날 항체를 단리할 수 있다. 혹은, 숙주 세포로서 소, 염소, 닭 등의 트랜스제닉 기술이 확립되고, 또한 가축(가금)으로서 대량 번식의 노하우가 축적되어 있는 동물의 생식 계열 세포를 이용하여, 통상법에 의해 트랜스제닉 동물을 제작함으로써, 얻어지는 동물의 유즙 혹은 알로부터 용이하게 또한 대량으로 키메라 모노클로날 항체를 얻을 수도 있다. 또한, 옥수수, 벼, 밀, 콩, 담배 등의 트랜스제닉 기술이 확립되고, 또한 주요 작물로서 대량으로 재배되고 있는 식물 세포를 숙주 세포로 하여, 프로토플라스트에의 마이크로 인젝션이나 일렉트로포레이션, 무상 세포에의 파티클건법(particle gun method)이나 Ti 벡터법 등을 이용하여 트랜스제닉 식물을 제작하고, 얻어지는 종자나 잎 등으로부터 대량으로 키메라 모노클로날 항체를 얻는 것도 가능하다.
(iii) 인간화 항체
본 명세서에 있어서 「인간화 항체」란, 가변 영역에 존재하는 상보성 결정 영역(CDR) 이외의 모든 영역(즉, 정상 영역 및 가변 영역 중의 프레임워크 영역(FR))의 서열이 인간 유래이고, CDR의 서열만이 다른 포유 동물종 유래인 항체를 의미한다. 다른 포유 동물종으로는, 예컨대 마우스, 래트, 토끼 등의 용이하게 하이브리도마를 제작할 수 있는 동물종이 바람직하다.
인간화 항체의 제작법으로는, 예컨대 미국 특허 제5,225,539호, 제5,585,089호, 제5,693,761호, 제5,693,762호, 유럽 특허 출원 공개 제239400호, 국제 공개 제92/19759호에 기재된 방법 혹은 이들을 일부 개변한 방법 등을 들 수 있다. 구체적으로는, 상기 키메라 항체의 경우와 동일하게 하여, 인간 이외의 포유 동물종(예, 마우스) 유래의 VH 및 VL을 코드하는 DNA를 단리한 후, 통상법에 의해 자동 DNA 시퀀서(예, Applied Biosystems사 제조 등)를 이용하여 시퀀스를 행하고, 얻어지는 염기 서열 혹은 그것으로부터 추정되는 아미노산 서열을 공지된 항체 서열 데이터베이스[예컨대, Kabat database (Kabat 등, 「Sequences of Proteins of Immunological Interest」, US Department of Health and Human Services, Public Health Service, NIH편, 제5판, 1991 참조) 등]를 이용하여 해석하고, 양사슬의 CDR 및 FR을 결정한다. 결정된 FR 서열에 유사한 FR 서열을 갖는 인간 항체의 경쇄 및 중쇄를 코드하는 염기 서열의 CDR 코드 영역을, 결정된 이종 CDR을 코드하는 염기 서열로 치환한 염기 서열을 설계하고, 상기 염기 서열을 20∼40 염기 정도의 프래그먼트로 구분하고, 또한 상기 염기 서열에 상보적인 서열을, 상기 프래그먼트와 교대로 오버랩되도록 20∼40 염기 정도의 프래그먼트로 구분한다. 각 프래그먼트를 DNA 신시사이저를 이용하여 합성하고, 통상법에 따라 이들을 하이브리다이즈(hybridizing) 및 라이게이트(ligating)시킴으로써, 인간 유래의 FR과 다른 포유 동물종 유래의 CDR을 갖는 VH 및 VL을 코드하는 DNA를 구축할 수 있다. 보다 신속하고 또한 효율적으로 다른 포유 동물종 유래 CDR을 인간 유래 VH 및 VL에 이식하기 위해서는, PCR에 의한 부위 특이적 변이 유발을 이용하는 것이 바람직하다. 그와 같은 방법으로는, 예컨대 일본 특허 공개 평5-227970호 공보에 기재된 축차 CDR 이식법 등을 들 수 있다.
또, 상기와 같은 방법에 의한 인간화 항체의 제작에 있어서, CDR의 아미노산 서열만을 주형의 인간 항체 FR에 이식한 것만으로는, 오리지널의 비인간 항체보다 항원 결합 활성이 저하되는 경우가 있다. 이러한 경우, CDR 주변의 FR 아미노산의 몇개를 더불어 이식하는 것이 효과적이다. 이식되는 비인간 항체 FR 아미노산으로는, 각 CDR의 입체 구조를 유지하는 데에 중요한 아미노산 잔기를 들 수 있고, 그와 같은 아미노산 잔기는 컴퓨터를 이용한 입체 구조 예측에 의해 추정할 수 있다.
이와 같이 하여 얻어지는 VH 및 VL을 코드하는 DNA를, 인간 유래의 CH 및 CL을 코드하는 DNA와 각각 연결하여 적당한 숙주 세포에 도입함으로써, 인간화 항체를 생성하는 세포 혹은 트랜스제닉 동식물을 얻을 수 있다.
마우스 CDR을 인간 항체의 가변 영역에 이식하는 CDR 그래프팅을 이용하지 않고 인간화 항체를 제작하는 대체적 방법으로서, 예컨대, 항체 사이에서의 보존된 구조-기능 상관에 기초하여, 비인간 가변 영역 내의 어떤 아미노산 잔기가 치환할 수 있는 후보인지를 결정하는 방법을 들 수 있다. 이 방법은, 예컨대 유럽 특허 제0571613호, 미국 특허 제5,766,886호, 미국 특허 제5,770,196호, 미국 특허 제5,821,123호, 미국 특허 제5,869,619호 등의 기재에 따라 실시할 수 있다. 또한, 상기 방법을 이용한 인간화 항체 제작은, 기초가 되는 비인간 항체의 VH 및 VL의 각 아미노산 서열 정보가 얻어지면, 예컨대, Xoma사가 제공하는 수탁 항체 제작 서비스를 이용함으로써 용이하게 행할 수 있다.
인간화 항체도 키메라 항체와 동일하게 유전자 공학적 수법을 이용하여 scFv, scFv-Fc, minibody, dsFv, Fv 등으로 개변할 수 있고, 적당한 프로모터를 이용함으로써 대장균이나 효모 등의 미생물에서도 생성시킬 수 있다.
이와 같이 하여 얻어진 인간화 항체가 야생형 인간 CD81의 에피토프 영역에 결합할 수 있는 것은 상기 펩티드 영역을 포함하는 폴리펩티드를 이용한 전술한 결합 분석에 의해 확인할 수 있다.
(III) 항체의 최적화
상기한 본 발명의 항인간 CD81 항체는, 용이하게, 여러가지 변화, 치환, 삽입 및 결실을 포함하도록 조제될 수 있다. 예컨대, 항체 발현량을 최대화하기 위해, 항체 유전자의 염기 서열은, 항체 발현에 사용되는 세포의 코돈 사용 빈도에 맞춰, 최적화할 수 있다. 항체 안정성을 증가시키기 위한 부가적인 수식 방법으로서, 힌지 영역의 228번째 Ser을 Pro로 치환하는 후술하는 IgG4의 수식법이 있다. 그 밖에는, 항체와 약물의 콘주게이트에서의 효력을 최적화하기 위해 필요해지는 치환도 할 수 있다. 예컨대, 항체는, 약물 부착을 위한 아미노산을 포함하도록, 그 카르복실 말단에서 수식되어 있어도 좋다. 예컨대, 1 이상의 시스테인 잔기가 부가되어 있어도 좋다. 정상 영역은, 탄수화물 또는 다른 기의 결합을 위한 부위를 도입하도록 수식되어 있어도 좋다.
본 발명의 항CD81 항체의 변이체는, 부위 특이적 변이 유발을 포함하는 표준적인 재조합 기술, 또는 재조합 클로닝을 이용하여 제작할 수 있다.
특히 바람직한 형의 치환 변이체는, 모항체(예컨대, 인간화 항체 또는 인간 항체)의 하나 또는 복수의 초가변 영역 잔기의 치환을 포함한다. 일반적으로, 더 나은 개발을 위해 얻어진 변이체는, 이들이 생성된 모항체와 비교하여 향상된 생물학적 특성을 갖고 있다. 그와 같은 치환 변이체를 생성하는 간편한 방법에는, 파지 디스플레이를 사용하는 친화성 성숙이 포함된다. 간결히 말하면, 초가변 영역을 변이시켜 각 부위에서의 모든 가능한 아미노산 치환을 생성시킨다. 이와 같이 생성된 항체 변이체는, 섬유형 파지 M13의 코트 단백 g3p와의 융합물로서 파지에 제시된다. 파지 표시 변이체는, 계속해서, 이곳에 개시된 바와 같은 그들의 생물학적 활성(예컨대, 결합 친화성)에 관해 스크리닝된다. 개변의 후보가 되는 초가변 영역 부위를 확인하기 위해, 알라닌 스캐닝 돌연변이 유발을 실시하여, 항원 결합에 유의적으로 기여하는 초가변 영역 잔기를 동정할 수 있다. 그와 같은 변이체가 생성되면, 변이체의 패널에 이곳에 기재한 바와 같은 스크리닝을 실시하여, 하나 또는 복수의 관련 분석에 있어서 우수한 특성을 갖는 항체를 더 나은 개발을 위해 선택할 수 있다. 항인간 CD81 항체의 아미노산 서열 변이체를 코드하는 핵산 분자는, 상기 분야에서 주지된 여러가지 방법에 의해 조제된다. 이들 방법에는, 한정되는 것은 아니지만, 올리고뉴클레오티드 매개(또는 부위 특이적) 돌연변이 유발, PCR 돌연변이 유발, 그리고 항인간 CD81 항체의 조기에 조제한 변이체 또는 비변이체형의 카세트 돌연변이 유발에 의한, 천연 소스로부터의 단리(천연 발생 아미노산 서열 변이체의 경우) 또는 조제가 포함된다.
어피니티 매추레이션(affinity maturation)법에 의해 얻어지는 바람직한 항체는, 상기 항체의 제작에 이용한 출발 항체보다 5배, 보다 바람직하게는 10배, 더욱 바람직하게는 20 또는 30배 큰 친화성을 갖는다.
IgG4 변이
IgG4 항체를 인간 및 일부의 동물에게 투여한 경우에 생체 내의 IgG4와 swapping을 일으켜 혈중 농도가 저하된다는 현상이 관찰되고 있다. 이 IgG4 교환은, 힌지 영역의 228번째 Ser을 Pro로 포인트 뮤테이션함으로써 저해되는 것이 공지되어 있다(Mol. Immunol. 30, 105, 1993; Protein Sci. 6, 407, 1997; Mol Immunol. 38, 1, 2001; Nat Biotech. 27, 767, 2009).
(IV) 항체의 치료 작용의 확인
본 발명의 항체는 T 세포 유주 억제 작용을 갖는다. 이 작용은, 널리 알려져 있는 림프구의 기능 평가계를 이용하여 검출할 수 있다. 예컨대 유주에 대한 영향은, 시토킨(예컨대 PHA, IL-2, TNF-α, IL-22, IL-7 및 VIP)의 존재하에서 배양한 인간 말초혈 단핵구(PBMC)나 각종 세포주를 피검 항체와 접촉시키고, 유주 자극(예컨대 케모카인의 stromal cell-derived factor 1(SDF-1, CXCL12로서도 알려짐)을 가하여, 유주 저해를 측정함으로써 평가된다(Blood. 2009 August 13; 114(7): 1366-1373). 구체적으로는, 이하의 세포 유주 시험을 이용할 수 있다.
림프구로는, 주화된 세포, 예컨대 Jurkat 세포(Clone E6-1, ATCC Number TIB-152)나, 인간 말초혈 유래 세포를 이용할 수 있다. 인간 말초혈 유래 세포는 시판되고 있다(KAC 등). 혹은, 인간 말초혈 유래 세포는, The Journal of Immunology, 147, 2251(1991)에 따라, 건강한 사람의 말초혈로부터, Ficoll/Paque 밀도 구배 원심법을 이용하여, 단구 및 림프구를 포함하는 단핵구 분획을 단리함으로써도 조제 가능하다.
세포 유주 시험
세포 유주 시험을 이용하여, 항원의 세포 유주에 관련되는 기능을 저해하는 항체 또는 그 기능적 단편의 능력을 평가할 수도 있다. 일반적으로, 세포 유주 시험은, (백혈구(예컨대, 림프구, 호산구, 호염기구)와 같은) 적당한 세포와, 유주 자극 인자를, 배리어(barrier)(예컨대, 내피, 필터)를 사이에 두고 배치하고, 상기 배리어를 향해서의, 또는 그것을 통과해서의, 상기 세포의 이동을 모니터함으로써 실시된다. 예컨대, 96-well 유주 플레이트의 웰(제1 챔버)에 SDF-1 등의 유주 자극 인자를 포함하는 배지를 첨가하고, 세포 투과성의 미다공성막으로 이루어지는 바닥면을 갖는 트랜스웰(제2 챔버)을 그 위에 올려놓고, 피검 항체와 세포를 첨가하여, 제2 챔버로부터 제1 챔버로의 세포의 이동을 측정하고, 항체의 비존재하 혹은 비특이적 항체의 존재하에서의 세포의 이동과 비교함으로써, 피검 항체의 세포 유주 억제 활성을 검정할 수 있다(Immunol. Invest. 17: 625-677(1988).
(V) 재조합 항체의 제조
본 발명에서 사용되는 항체의 제조를 위해, 임의의 생성계를 사용할 수 있다. 항체 제조를 위한 생성계는, in vitro 및 in vivo의 생성계가 있다. in vitro의 생성계로는, 진핵 세포를 사용하는 생성계나 원핵 세포를 사용하는 생성계를 들 수 있다.
상기한 바와 같이 구축한 항체 유전자는, 공지된 방법에 의해 발현시켜 취득할 수 있다. 포유류 세포의 경우, 상용되는 유용한 프로모터, 발현되는 항체 유전자, 그 3’측 하류에 폴리 A 시그널을 기능적으로 결합시킨 DNA 혹은 그것을 포함하는 벡터에 의해 발현시킬 수 있다. 예컨대 프로모터/인핸서로는, 인간 사이토메갈로바이러스 전기 프로모터/인핸서(human cytomegalovirus immediate early promoter/enhancer)를 들 수 있다.
또한, 그 밖에 본 발명에서 사용되는 항체 발현에 사용할 수 있는 프로모터/인핸서로서, 레토로바이러스, 폴리오마바이러스, 아데노바이러스, 시미안바이러스 40(SV40) 등의 바이러스 프로모터/인핸서나 인간 일롱게이션 팩터 1α(hEF1α) 등의 포유류 세포 유래의 프로모터/인핸서를 이용하면 된다.
예컨대, SV40 프로모터/인핸서를 사용하는 경우, Mulligan등의 방법(Mulligan, R.C. et al., Nature (1979) 277, 108-114), 또한, hEF1α 프로모터/인핸서를 사용하는 경우, Mizushima등의 방법(Mizushima, S. and Nagata, S. Nucleic Acids Res. (1990) 18, 5322)에 따르면 용이하게 실시할 수 있다.
대장균의 경우, 상용되는 유용한 프로모터, 항체 분비를 위한 시그널 서열, 발현시키는 항체 유전자를 기능적으로 결합시켜 발현시킬 수 있다. 예컨대 프로모터로는, lacZ 프로모터, araB 프로모터를 들 수 있다. lacZ 프로모터를 사용하는 경우, Ward등의 방법(Ward, E.S. et al., Nature (1989) 341, 544-546; Ward, E.S. et al., FASEB J. (1992) 6, 2422-2427), araB 프로모터를 사용하는 경우, Better등의 방법(Better, M. et al., Science (1988) 240, 1041-1043)에 따르면 된다.
항체 분비를 위한 시그널 서열로는, 대장균의 페리플라즘에 생성시키는 경우, pelB 시그널 서열(Lei, S.P. et al., J. Bacteriol. (1987) 169, 4379-4383)을 사용하면 된다. 페리플라즘에 생성된 항체를 분리한 후, 항체의 구조를 적절히 리폴드(refold)하여 사용한다(예컨대, 국제 공개 제96/30394호를 참조).
복제 기원으로는, SV40, 폴리오마바이러스, 아데노바이러스, 소 파필로마 바이러스(BPV) 등의 유래의 것을 이용할 수 있고, 또한, 숙주 세포계에서 유전자 카피수 증폭을 위해, 발현 벡터는 선택 마커로서, 아미노글리코시드 포스포트랜스퍼라아제(APH) 유전자, 티미딘 키나아제(TK) 유전자, 대장균 크산틴 구아닌포스포리보실 트랜스퍼라아제(Ecogpt) 유전자, 디히드로엽산 환원 효소(dhfr) 유전자 등을 포함할 수 있다.
진핵 세포를 사용하는 경우, 동물 세포, 식물 세포, 또는 진균 세포를 이용하는 생성계가 있다. 동물 세포로는, (1) 포유류 세포, 예컨대 CHO, COS, 미엘로마, BHK(baby hamster kidney), HeLa, Vero 등, (2) 양서류 세포, 예컨대 아프리카 제노푸스 난모 세포, 혹은 (3) 곤충 세포, 예컨대 sf9, sf21, Tn5 등이 알려져 있다. 식물 세포로는, 니코티아나·타바쿰(Nicotiana tabacum) 유래의 세포가 알려져 있고, 이것을 캘러스 배양하면 된다. 진균 세포로는, 효모, 예컨대 사카로미세스(Saccharomyces)속, 예컨대 사카로미세스·세레비시에(Saccharomyces cerevisiae), 사상균, 예컨대 아스페르길루스(Aspergillus)속, 예컨대 아스페르길루스·니게르(Aspergillus niger) 등이 알려져 있다.
원핵 세포를 사용하는 경우, 세균 세포를 이용하는 생성계가 있다. 세균 세포로는, 대장균(E. coli), 고초균이 알려져 있다.
이들 세포에, 목적으로 하는 항체 유전자를 형질 전환에 의해 도입하고, 형질 전환된 세포를 in vitro에서 배양함으로써 항체가 얻어진다. 배양은, 공지된 방법에 따라 행한다. 예컨대, 배양액으로서, DMEM, MEM, RPMI1640, IMDM을 사용할 수 있고, 소태아 혈청(FCS) 등의 혈청 보액을 병용할 수도 있다. 또한, 항체 유전자를 도입한 세포를 동물의 복강 등에 옮김으로써, in vivo에서 항체를 생성해도 좋다.
in vivo의 생성계로는, 동물을 사용하는 생성계나 식물을 사용하는 생성계를 들 수 있다. 동물을 사용하는 경우, 포유류 동물, 곤충을 이용하는 생성계 등이 있다.
포유류 동물로는, 염소, 돼지, 양, 마우스, 소 등을 이용할 수 있다(Vicki Glaser, SPECTRUM Biotechnology Applications, 1993). 또한, 곤충으로는, 누에를 이용할 수 있다. 식물을 사용하는 경우, 예컨대 담배를 이용할 수 있다.
이들 동물 또는 식물에 항체 유전자를 도입하고, 동물 또는 식물의 체내에서 항체를 생성시켜 회수한다. 예컨대, 항체 유전자를 염소 β-카제인과 같은 유즙 중에 고유하게 생성되는 단백질을 코드하는 유전자의 도중에 삽입하여 융합 유전자로서 조제한다. 항체 유전자가 삽입된 융합 유전자를 포함하는 DNA 단편을 염소의 배(胚)에 주입하고, 이 배를 암컷 염소에 도입한다. 배를 수용한 염소로부터 태어나는 트랜스제닉 염소 또는 그 자손이 생성하는 유즙으로부터 원하는 항체를 얻는다. 트랜스제닉 염소로부터 생성되는 원하는 항체를 포함하는 유즙량을 증가시키기 위해, 적절하게 호르몬을 트랜스제닉 염소에 사용해도 좋다(Ebert, K.M. et al., Bio/Technology (1994) 12, 699-702).
또한, 누에를 이용하는 경우, 원하는 항체 유전자를 삽입한 바큘로바이러스를 누에에 감염시켜, 이 누에의 체액으로부터 원하는 항체를 얻는다(Maeda, S. et al., Nature (1985) 315, 592-594). 또한, 담배를 이용하는 경우, 원하는 항체 유전자를 식물 발현용 벡터, 예컨대 pMON 530에 삽입하고, 이 벡터를 Agrobacterium tumefaciens와 같은 박테리아에 도입한다. 이 박테리아를 담배, 예컨대 Nicotiana tabacum에 감염시켜, 본 담배의 잎으로부터 원하는 항체를 얻는다(Julian, K.-C.Ma et al., Eur. J. Immunol. (1994) 24, 131-138).
전술된 바와 같이 in vitro 또는 in vivo의 생성계에서 항체를 생성하는 경우, 항체 중쇄(H 사슬) 또는 경쇄(L 사슬)를 코드하는 DNA를 따로따로 발현 벡터에 삽입하여 숙주를 동시 형질 전환시켜도 좋고, 혹은 H 사슬 및 L 사슬을 코드하는 DNA를 단일의 발현 벡터에 삽입하여, 숙주를 형질 전환시켜도 좋다(국제 특허 출원 공개 제94/11523호 참조).
본 발명에서 사용되는 항체는, 본 발명에 적합하게 사용될 수 있는 한, 항체의 단편이나 그 수식물이어도 좋다. 예컨대, 항체의 단편으로는, Fab, F(ab')2, Fv 또는 H 사슬과 L 사슬의 Fv를 적당한 링커로 연결시킨 싱글 체인 Fv(scFv)를 들 수 있다. 구체적으로는, 항체를 효소, 예컨대, 파파인, 펩신으로 처리하여 항체 단편을 생성시키거나, 또는, 이들 항체 단편을 코드하는 유전자를 구축하여, 이것을 발현 벡터에 도입한 후, 적당한 숙주 세포에서 발현시킨다(예컨대, Co, M.S. et al., J. Immunol. (1994) 152, 2968-2976, Better, M. & Horwitz, A.H., Methods in Enzymology (1989) 178, 476-496, Plueckthun, A. & Skerra, A., Methods in Enzymology (1989) 178, 476-496, Lamoyi, E., Methods in Enzymology (1986) 121, 652-663, Rousseaux, J. et al., Methods in Enzymology (1986) 121, 663-669, Bird, R.E. et al., TIBTECH (1991) 9, 132-137 참조).
scFv는, 항체의 H 사슬 V 영역과 L 사슬 V 영역을 연결함으로써 얻어진다. 이 scFv에서, H 사슬 V 영역과 L 사슬 V 영역은 링커, 바람직하게는, 펩티드 링커를 통해 연결된다(Huston, J.S. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. (1988) 85, 5879-5883). scFv에서의 H 사슬 V 영역 및 L 사슬 V 영역은, 상기 항체로서 기재된 것 중 어느 것의 유래여도 좋다. V 영역을 연결하는 펩티드 링커로는, 예컨대 아미노산 12-19 잔기로 이루어지는 임의의 1본쇄 펩티드가 이용된다.
scFv를 코드하는 DNA는, 상기 항체의 H 사슬 또는, H 사슬 V 영역을 코드하는 DNA, 및 L 사슬 또는, L 사슬 V 영역을 코드하는 DNA를 주형으로 하여, 이들의 서열 중의 원하는 아미노산 서열을 코드하는 DNA 부분을, 그 양끝을 규정하는 프라이머쌍을 이용하여 PCR법에 의해 증폭시키고, 계속해서, 또한 펩티드 링커 부분을 코드하는 DNA 및 그 양끝을 각각 H 사슬, L 사슬과 연결되도록 규정하는 프라이머쌍을 조합하여 증폭시킴으로써 얻어진다.
일단 scFv를 코드하는 DNA가 제작되면, 이들을 함유하는 발현 벡터, 및 상기발현 벡터에 의해 형질 전환된 숙주를 통상법에 따라 얻을 수 있고, 또한, 그 숙주를 이용하여 통상법에 따라 scFv를 얻을 수 있다.
이들 항체의 단편은, 상기와 동일하게 하여 그 유전자를 취득하여 발현시키고, 숙주에 의해 생성시킬 수 있다. 본 명세서에서 말하는 「항체」에는 이들 항체의 단편도 포함된다.
항체의 수식물로서, 폴리에틸렌글리콜(PEG) 등의 각종 분자와 결합한 항체를 사용할 수도 있다. 본 명세서에서 말하는 「항체」에는 이들 항체 수식물도 포함된다. 이러한 항체 수식물은, 얻어진 항체에 화학적인 수식을 실시함으로써 얻을 수 있다. 이들 방법은 이 분야에서 이미 확립되어 있다.
상기한 바와 같이 생성, 발현된 항체는, 세포 내외, 숙주로부터 분리하여 균일하게까지 정제할 수 있다. 본 발명에서 사용되는 항체의 분리, 정제는 어피니티 크로마토그래피에 의해 행할 수 있다. 어피니티 크로마토그래피에 이용하는 칼럼으로는, 예컨대, 프로테인 A 칼럼, 프로테인 G 칼럼을 들 수 있다. 프로테인 A 칼럼에 이용하는 담체로서, 예컨대, Hyper D, POROS, Sepharose F.F. 등을 들 수 있다. 그 밖에, 통상의 단백질에서 사용되고 있는 분리, 정제 방법을 사용하면 되고, 전혀 한정되는 것은 아니다. 필요에 따라, 상기 어피니티 크로마토그래피 이외의 크로마토그래피, 여과, 초여과, 염석, 투석 등을 조합함으로써, 본 발명에 사용되는 항체를 분리, 정제할 수도 있다. 크로마토그래피로는, 예컨대, 이온 교환 크로마토그래피, 소수성 크로마토그래피, 겔여과 등을 들 수 있다. 이들 크로마토그래피는 HPLC(High performance liquid chromatography)에 적용할 수 있다. 또한, 역상 HPLC(reverse phase HPLC)를 이용해도 좋다.
상기에서 얻어진 항체의 농도 측정은 흡광도의 측정 또는 ELISA 등에 의해 행할 수 있다. 즉, 흡광도의 측정에 의한 경우에는, PBS(-)로 적당히 희석한 후, 280 nm의 흡광도를 측정하고, 1 mg/ml를 1.35 OD로서 산출한다. 또한, ELISA에 의한 경우에는 이하와 같이 측정할 수 있다. 즉, 0.1 M 중탄산 완충액(pH 9.6)으로 1 ㎍/ml로 희석한 염소 항인간 IgG(TAGO 제조) 100 ㎕를 96 웰 플레이트(Nunc 제조)에 첨가하여, 4℃에서 하룻밤 인큐베이트하고, 항체를 고상화한다.
블로킹 후, 적절하게 희석한 본 발명에서 사용되는 항체 또는 항체를 포함하는 샘플, 혹은 표품으로서 인간 IgG(CAPPEL 제조) 100 ㎕를 첨가하고, 실온에서 1시간 인큐베이트한다. 세정 후, 5000배 희석한 알칼리 포스파타아제 표지 항인간 IgG(BIO SOURCE 제조) 100 ㎕를 첨가하고, 실온에서 1시간 인큐베이트한다. 세정 후, 기질 용액을 첨가하여 인큐베이트하고, MICROPLATE READER Model 3550(Bio-Rad 제조)을 이용하여 405 nm에서의 흡광도를 측정하여, 원하는 항체의 농도를 산출한다.
(VI) 본 발명의 항체를 함유하는 의약 조성물
본 발명은 또한, 본 발명의 항체를 함유하여 이루어지는 염증성 장질환(IBD), 다발성 경화증, 건선 또는 혈액암의 예방 및/또는 치료제를 제공한다. 여기서 「치료」라는 용어는, 완전 치유뿐만 아니라 증상의 개선도 포함하는 의미이다. CD81이 IBD 환자에서 과잉 발현되고, 항CD81 항체가 IBD의 예방, 개선 또는 치료에 유용한 것은 알려져 있다. 여기서 「염증성 장질환(IBD)」이란, 궤양성 대장염과 크론병을 포함하는 질환이다.
또한, 본 발명자들은 항CD81 항체가 T 세포의 유주를 억제한다는 새로운 지견도 얻었기 때문에, 본 발명의 항체는, 다발성 경화증, 건선 등의 T 세포 유주가 관련되는 질환의 예방, 개선 또는 치료에도 유용하다.
본 발명의 항체는 T 세포로부터의 예컨대 인터류킨-2와 같은 시토킨의 생성을 증대시키지 않기 때문에, 상기 항체를 함유하는 의약 조성물은 시토킨의 과잉 생성에 의한 바람직하지 않은 부작용을 야기하지 않는다. 림프구로부터의 시토킨 생성에 미치는 영향에 관해서는, 공지된 방법으로 확인할 수 있다. 예컨대, Nature Immunology, VOLUME 8 NUMBER 9 SEPTEMBER 2007, 942에 기재되어 있는 바와 같이, 여러가지 조건으로 배양한 림프구의 배양 상청에서의 시토킨을 ELISA를 이용하여 정량할 수 있고, 혹은 처치 후의 림프구에서의 세포내 시토킨 염색을 행할 수도 있다.
본 발명자들은 또한, 본 발명 항체의 혈액암 환자 유래의 암세포에 대한 살작용(殺作用)을 밝혀, 본 발명의 항체가 혈액암의 예방, 개선 또는 치료제로서 유용하다는 지견도 얻었다. 혈액암은 WHO 분류로, 백혈병, 악성 림프종, 다발성 골수종, 골수 이형성 증후군으로 분류된다. 또한 백혈병은, 급성 골수성 백혈병, 급성 림프성 백혈병, 만성 골수성 백혈병, 만성 림프성 백혈병으로 분류되고 있다. 악성 림프종은, 호지킨 림프종과 비(非)호지킨 림프종으로 분류되고 있다.
급성 골수성 백혈병은, 성인의 백혈병에서 가장 많은 타입이다. 급성 림프성 백혈병은, 소아에게 많지만, 성인에서도 어느 일정한 비율로 발생한다. 만성 골수성 백혈병은 최근 눈에 띄게 치료 성적이 개선된 질환이다. 만성 림프성 백혈병은 구미에서 많은 타입의 백혈병인데, 일본인에서는 적다. 악성 림프종 중 비호지킨 림프종에는, 성인 T 세포 림프종이나 림프아구성 림프종, 미만성 대세포형 림프종이나 버킷 림프종, 여포성 림프종, MALT 림프종, 말초성 T 세포 림프종, 맨틀 세포 림프종 등이 있다. MALT 림프종이나 여포성 림프종은 진행이 느려 몇년 동안이나 그다지 진행되지 않는 악성도가 낮은 종양이다. 이에 반하여, 버킷 림프종, 림프아구성 림프종이나 성인 T 세포형 림프종은 주단위로 악화되어가는 매우 악성도가 높은 종양이다. 그 중간에 있는 것이, 말초성 T 세포 림프종, 미만성 대세포형 림프종이나 맨틀 세포 림프종이다. 이들 종양은, 월단위로 진행되어간다. 다발성 골수종은, 림프구 중의 B 세포가 성숙하여, 면역 글로불린을 생성하는 형질 세포 단계의 종양이다. 골수 이형성 증후군은, 골수 줄기세포의 형태와 기능의 이상을 수반하는 병의 총칭이다.
혈액암의 치료는, 화학 요법, 방사선 요법, 분자 표적 치료, 조혈간세포 이식을 병용한 대량 화학 요법이 있다. 소아 급성 림프성 백혈병은 80%의 장기 생존이 얻어졌지만, 성인의 급성 림프성 백혈병은 60-80%는 완전 완화되기는 하지만, 장기 생존율은 15-35%로 낮다. 만성 림프성 백혈병은, 글리벡(메실산이마티니브)의 등장에 의해 치료 성적이 향상되고 있다. 호지킨 림프종이나 저중 악성도의 비호지킨 림프종에서 치료 성적의 향상이 확인되고 있다. 한편으로, 성인 T 세포형 림프종에서는 여러가지 요법으로도 치료 성적이 향상되지 않아, 생존 기간 중앙치는 1년간 정도이다(의학의 진보 212권 No.5 p461-466, 2005). 림프아구성 림프종은, 비호지킨 림프종 중에서도 악성도가 높은 림프종으로 분류되는 질환군이다. 버킷 림프종은, 단기 대량 화학 요법으로 예후가 개선되고 있으며, 2년 생존율은 약 70% 정도 이상으로 치료 성적의 향상이 인정되지만(Magrath, I. et al. J. Clin. Oncol., 14: 925-943, 1996, Mead, G. M. et al. Ann. Oncol., 13: 1264-1274, 2002), 3년 생존율은 49%로 치료 성적의 더 나은 개선이 요구되고 있다(Thomas, D. A. et al. J. Clin. Oncol., 17: 2461-2470, 1999). 또한, 미만성 대세포형 림프종에서는 청년 진행기의 저리스크 증례에 있어서는, 항CD20 항체(리툭시마브)와 CHOP 요법(시클로포스파미드, 독소루비신, 빈크리스틴, 프레드니솔론)의 병용 요법으로 치료 성적이 향상되어 표준 치료가 되고 있지만, 청년 진행기의 고리스크 증례에서는, CHOP 요법을 상회하는 치료법은 없는 상황이다. 다발성 골수종의 치료로는, 항암제가 어느 정도의 효과를 나타내기는 하지만, 백혈병이나 림프종만큼은 효과를 나타내지 않는 악성도가 높은 질환이다. 골수 이형성 증후군의 5∼10년 생존율은, 30-40% 정도이다. 앞으로, 더욱 치료 효과의 개선이 기대되는 혈액암으로는, 급성 골수성 백혈병, 급성 림프성 백혈병, 림프아구성 림프종, 미만성 대세포형 림프종, 버킷 림프종, 맨틀 세포 림프종, 말초성 T 세포 림프종, 성인 T 세포성 림프종, 다발성 골수종, 골수 이형성 증후군 등이 있다.
이와 같이 중고 악성도의 혈액암에서는, 치료 효과에 만족할 만한 치료법이나 치료약이 없어, 신규한 치료법·치료약이 요구되고 있다. 종래는 혈액암에 대한 치료약으로서의 포텐셜이 분명하지 않았던 항CD81 항체가, 치료 효과가 부족한 혈액암인, 급성 림프성 백혈병 환자 유래의 암세포주 Jurkat 세포와 버킷 림프종 환자 유래의 암세포주 Ramos 세포에 대하여, 보체 의존성 세포 장해 활성에 의해 살작용 효과를 나타내는 것을 알아냈다. 지금까지 항CD81 항체가 암세포에 대한 살작용을 나타내는 지견은 알려져 있지 않았다.
즉, 본 발명의 항체를 유효 성분으로 하는 혈액암의 예방, 개선 또는 치료제, 바람직하게는 악성도가 높은 혈액암의 예방, 개선 또는 치료제도 제공한다.
본 발명은, 혈액암에 한정되지 않고, CD81을 발현하고 있는 암세포이면, 어떠한 종류의 암세포에도 적용할 수 있다. 즉, 본 발명의 항체를 유효 성분으로 하는 약제는, CD81을 발현하고 있는 암세포에 의한 암의 예방, 개선 또는 치료제로서 유효하다.
항CD81 항체를 유효 성분으로서 함유하는 약제 자체는, 공지된 제제학적 방법에 의해 제제화한 약제로서 투여를 행한다. 예컨대, 물 혹은 그것 이외의 약학적으로 허용할 수 있는 액과의 무균성 용액, 또는 현탁액제의 주사제의 형태로 사용할 수 있다. 또한, 예컨대, 약리학상 허용되는 담체 혹은 매체, 구체적으로는, 멸균수나 생리 식염수, 유화제, 현탁제, 계면 활성제, 안정제, 비히클, 방부제 등과 적절하게 조합하여, 일반적으로 인정된 제약 실시에 요구되는 단위 용량 형태로 혼화함으로써 제제화하는 것을 생각할 수 있다. 이들 제제에서의 유효 성분량은 지시된 범위의 적당한 용량이 얻어지도록 하는 것이다.
주사를 위한 무균 조성물은 주사용 증류수와 같은 비히클을 이용하여 통상의 제제 실시에 따라 처방할 수 있다. 주사용 수용액으로는, 예컨대 생리 식염수, 포도당이나 그 밖의 보조약을 포함하는 등장액, 예컨대 D-소르비톨, D-만노오스, D-만니톨, 염화나트륨을 들 수 있고, 적당한 용해 보조제, 예컨대 알콜, 구체적으로는 에탄올, 폴리알콜, 예컨대 프로필렌글리콜, 폴리에틸렌글리콜, 비이온성 계면 활성제, 예컨대 폴리소르베이트 80TM, HCO-50과 병용해도 좋다.
유성액으로는 참깨유, 대두유를 들 수 있고, 용해 보조제로서 안식향산벤질, 벤질알콜과 병용해도 좋다. 또한, 완충제, 예컨대 인산염 완충액, 초산나트륨 완충액, 무통화제, 예컨대 염산프로카인, 안정제, 예컨대 벤질알콜, 페놀, 산화 방지제와 배합해도 좋다. 조제된 주사액은 통상, 적당한 앰플에 충전시킨다.
본 발명의 항체를 유효 성분으로서 함유하는 약제는, 경구, 비경구 투여 모두 가능하지만, 바람직하게는 비경구 투여이고, 구체적으로는, 주사제형, 경비 투여제형, 경폐 투여제형, 경피 투여형 등을 들 수 있다. 주사제형의 예로는, 예컨대, 정맥내 주사, 근육내 주사, 복강내 주사, 피하 주사 등에 의해 전신 또는 국부적으로 투여할 수 있다.
투여량은, 환자의 연령 및 증상에 따라 적정하게 선택할 수 있다. 예컨대, 투여량은, 1회 투여량으로서, 0.0001 mg∼1,000 mg/kg 체중의 범위 내에서 선택할 수 있다. 혹은, 환자당, 0.001∼100,000 mg의 범위 내에서 선택할 수도 있다. 그러나, 본 발명의 치료제의 투여량은 이들에 한정되지 않는다.
이하의 실시예에 의해 본 발명을 보다 구체적으로 설명하지만, 본 발명은 이들에 의해 한정되는 것은 아니다.
실시예
실시예 1 인간 항CD81 항체의 제작
(1) 인간 항인간 CD81 항체 프래그먼트의 선발
인간 CD81과의 특이적 결합에 관해, CD81 단백질과 CD81에 호몰로지를 갖는 인간 CD9 단백질, 혹은 인간 CD81 발현 세포와 인간 CD81 비발현 세포를 이용하여, 완전 인간 항체 라이브러리 n-CoDeR(Nature Biotechnol. 18: 852-856, 2000, WO98/32845)의 스크리닝을 실시하고, 인간 CD81과 특이적으로 결합하는 인간 항체 프래그먼트(scFv)를 얻었다. 우선 처음에 CD9 단백을 경합시킨 상태에서 비오틴화 CD81 단백 결합 파지를 스트렙트아비딘으로 표지한 자기 비드로 회수했다. 비결합 파지는 세정하고, 결합 파지를 트립신 처리로 용출했다. 패닝을 3회 실시한 후에, 대장균에서 선발된 파지 라이브러리를 항체 프래그먼트로서 발현시켜, CD81 발현 세포에 결합하고 CD81 비발현 세포에 결합하지 않는 항체 프래그먼트를 FMAT(Fluorometric Microvolume Assay Techonology)를 이용하여 스크리닝했다. FMAT는 384 웰 배양 플레이트에 고정화한 세포에 항체 프래그먼트를 첨가하고, 결합의 유무를 형광 표지한 항scFv 항체로 검출했다. 스크리닝 결과, 2개의 인간 CD81 특이적인 인간 항체 프래그먼트를 선발하고, 시퀀스를 행하여 각 프래그먼트의 뉴클레오티드 서열(scFv-002-A07 : 서열번호 33, scFv-005-C01 : 서열번호 35) 및 아미노산 서열을 결정했다(scFv-002-A07 : 서열번호 34, scFv-005-C01 : 서열번호 36).
(2) 항인간 CD81 항체의 생산
상기 (1)에서 얻어진 프래그먼트의 정보를 이용하여, 항인간 CD81 항체 유전자(중쇄 가변 영역(VH) : 서열번호 9(002-A07); 서열번호 19(005-C01), 및 경쇄 가변 영역(VL) : 서열번호 7(002-A07); 서열번호 17(005-C01))를 공지된 방법(Nat Biotechnol., 18, 852-856, 2000)에 의해 제작하고, BsmI 및 NheI의 인식 부위를 갖는 프라이머쌍을 이용하여 PCR로 증폭시켰다. 증폭된 프래그먼트는 BsmI 및 NheI에서 소화한 후, pCEP4(invitrogen사) 유래의 벡터에 서브클로닝했다. 중쇄 발현 벡터에는, 228번째 Ser이 Pro로 치환된 변이 인간 γ4(S288P)의 게놈 영역이 삽입되어 있고, 경쇄 발현 벡터에는, 인간 λ의 게놈 영역이 삽입되어 있다. 구축된 중쇄 및 경쇄 발현 벡터를, FuGene6(Roche)을 이용하여, 첨부의 프로토콜에 따라 HEK-293-EBNA 세포(ATCC-CRL-10852)에 동시 트랜스펙션하여, 세포를 배양했다. 배양 6일 후에 세포 상청으로부터 IgG4 항체의 정제를 행했다. 단시간에 배양 용액을 원심하고, 상청을 Protein A 칼럼에 가했다. 정제물을 10 mM NaP buffer(0.15 M NaCl, pH 6.5)로 투석했다. 이렇게 하여 얻어진 002-A07 IgG4 항체는 서열번호 28에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중쇄와, 서열번호 26에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경쇄를 갖는다. 또한, 005-C01 IgG4 항체는 서열번호 32에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중쇄와, 서열번호 30에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경쇄를 갖는다.
시험예 1 항CD81 항체의 CD81 발현 세포에 대한 결합 작용
(1) 세포의 준비
인간 CD81 발현 세포로서 공지 정보(JOURNAL OF VIROLOGY., 79, 4316-4328, 2005)로부터 Jurkat E6.1 세포와 인간 PBMC(Peripheral Blood Mononuclear Cells : 말초혈 단핵 세포)를 인간 CD81 발현 세포로서 사용하고, 실시예 1에서 얻어진 본 발명의 항체의 인간 CD81 발현 세포에 대한 결합을 확인했다. Jurkat E6.1 세포는 European Collection of Cell Cultures(ECACC)(Cat No.88042803)로부터 구입하여 실험에 사용했다. 인간 PBMC는 주식회사 케이·에이·씨(KAC)로부터 입수했다. 각각의 세포를 원심(4,000 rpm 3분, 4℃)하고, FACS 염색 buffer(0.09% 아지화나트륨, 1% 소혈청 알부민(BSA; Hyclone사 제조) 함유 인산 buffer)에 현탁했다. 트리판 블루로 생세포수를 계측하여, 세포 106개/100 ㎕를 에펜도르프 튜브에 넣었다.
(2) 세포의 염색
상기 (1)에서 조제한 세포를 에펜도르프 튜브에 넣고, 106개/100 ㎕에 대하여, 실시예 1에서 제작한 항인간 CD81 항체(002-A07 및 005-C01) 또는 컨트롤로서 인간 IgG4(Acris사 제조)를 0.1 ㎍ 첨가하고, 4℃, 20분간 인큐베이트했다. FACS 염색 buffer로 세포를 세정 후, PE(피코에리트린) 표지 항인간 IgG4 항체(Beckman coulter사 제조)를 0.05 ㎍ 첨가하고, 4℃, 15분간 인큐베이트했다. FACS 염색 buffer로 세포를 2회 세정한 후, 원심 분리(4,000 rpm 3분, 4℃)하여 상청을 제외시키고, 침전된 세포를 BD Cytefix/Cyteperm buffer(BD Biosciences사 제조)로 고정시켰다. 세정 후, 상기 buffer를 PBS(nacalai tesque사 제조)로 치환했다. 항인간 CD81 항체의 세포 결합률(%)은, FACS Calibur(BD Biosciences사 제조)를 이용한 플로우 사이토메트리에 의해 컨트롤 IgG4의 PE에서 유래되는 형광 강도보다 강한 형광 강도를 갖는 세포의 비율로 해석했다. 결과를 표 1에 나타낸다. 002-A07 및 005-C01은, Jurkat 세포, 인간 PBMC에 강하게 결합하는 것을 확인할 수 있었다.
Figure pct00001
시험예 2 항인간 CD81 항체의 Jurkat 세포에 대한 유주 억제 효과
(1) Jurkat 세포의 계대 배양
Jurkat E6.1 세포(ECACC(Cat No.88042803)로부터 구입)는 10% 소태아 혈청(FCS; Hyclone사 제조)을 첨가한 RPMI-1640 배지(GIBCO사 제조) 중, 5% CO2, 37℃의 가습 인큐베이터 안에서 유지했다. 배지로 희석함으로써, 세포 밀도를 2×105 cells/ml∼1×106 cells/ml 사이에서 유지했다.
(2) 항체 처리
Jurkat E6.1 세포를 유주 배지(0.5% BSA(SIGMA사 제조), 50 mM HEPES(GIBCO사 제조) 함유 RPMI1640 배지(GIBCO사 제조))에 4×106 cells/ml가 되도록 현탁했다. 항인간 CD81 항체(002-A07 또는 005-C01) 또는 컨트롤로서 인간 IgG4(Acris사 제조)를, 표 2에 기재된 최종 농도가 되도록 상기 세포에 첨가했다. 상기 세포를 5% CO2, 37℃의 가습 인큐베이터 안에서 2시간 인큐베이트했다.
(3) 세포 유주 시험
96-well 유주 플레이트(Corning Coster사 제조; 포어 사이즈 5 ㎛)를 이용하여 세포 유주를 시험했다. 하층부에 10 ng/ml SDF-1(PEPROTECH사 제조)을 첨가한 유주 배지를 235 ㎕로 충전했다. Transwell을 올려놓은 후, 상기 예비 인큐베이트한, 항인간 CD81 항체 함유 또는 비함유 Jurkat 세포를 각 well의 상층부에 75 ㎕씩 첨가하고, 5% CO2, 37℃의 가습 인큐베이터 안에서 2시간 인큐베이트했다. 인큐베이션 종료 후, Transwell을 제거하고, 하층부의 세포 현탁액 50 ㎕를 96-well black plate(Corning Coster사 제조)에 옮기고, 세포 검출 시약인 ATPlite(Parkin Elmer사 제조)를 50 ㎕ 첨가했다. Envision 2102 multilabelreader(Perkin Elmer사 제조)를 이용하여 발광 강도를 측정함으로써 유주한 세포수를 측정했다.
(4) 세포 유주 시험의 해석
세포의 유주율은, 컨트롤 IgG4를 첨가한 Jurkat 세포의 유주 세포수에 대한, 항인간 CD81 항체를 첨가한 Jurkat 세포의 유주 세포수의 비로서 산출했다. 그 결과, 002-A07, 005-C01 어느 항인간 CD81 항체도 Jurkat 세포의 유주를 저해했다(표 2). 인간 T 세포주인 Jurkat 세포에 대한 002-A07과 005-C01의 세포 유주 억제 작용이 인정된 점에서, 항CD81 항체(002-A07, 005-C01)가 IBD 치료약이 될 수 있다는 것이 확인되었다.
Figure pct00002
시험예 3 항인간 CD81 항체의 인간 PBMC (인간 말초혈 단핵구 세포)에 대한 유주 억제 효과
인간 PBMC에 대한 항인간 CD81 항체의 유주 억제 효과를, Biologicals, 2007 Oct; 35(4): 227-33, Epub 2007 Aug 28에 기재된 방법에 준하여 시험했다.
(1) 세포의 조제
인간 PBMC는 KAC로부터 구입했다. KAC의 첨부 정보에 의하면, 사용한 인간 PBMC 중의 60%는 T 세포(CD3 양성 세포)였다. 인간 PBMC는 10% 소태아 혈청(FCS; Hyclone사 제조)을 첨가한 RPMI1640 배지(GIBCO사 제조) 중, 5% CO2, 37℃의 가습 인큐베이터 안에서 유지했다. 상기 세포(1×106 cells/ml)는 5 ㎍/ml 피토헤마글루티닌(PHA, Wako사 제조)과, 50 ng/ml 재조합 인간 IL-2(R&D system사 제조)를 첨가하고, 5% CO2, 37℃의 가습 인큐베이터 안에서 4일간 배양했다.
(2) 항체 처리
인간 PBMC를 유주 배지(0.5% BSA(SIGMA사 제조), 50 mM HEPES(GIBCO사 제조) 함유 RPMI1640 배지(GIBCO사 제조))에 4×106 cells/ml가 되도록 현탁했다. 항인간 CD81 항체(002-A07 또는 005-C01) 또는 컨트롤로서 인간 IgG4(Acris사 제조)를, 표 3에 기재된 여러가지 농도로 상기 세포에 첨가했다. 상기 세포를 5% CO2, 37℃의 가습 인큐베이터 안에서 2시간 인큐베이트했다.
(3) 세포 유주 시험
96-well 유주 플레이트(Corning Coster사 제조; 포어 사이즈 5 ㎛)를 이용하여 세포 유주를 시험했다. 하층부를 10 ng/ml SDF-1(PEPROTECH사 제조)을 첨가한 유주 배지를 235 ㎕로 충전했다. Transwell을 올려놓은 후, 상기 예비 인큐베이트한, 항인간 CD81 항체 함유 또는 비함유 인간 PBMC를 각 well의 상층부에 75 ㎕씩 첨가하고, 5% CO2, 37℃의 가습 인큐베이터 안에서 2시간 인큐베이트했다. 인큐베이션 종료 후, Transwell을 제거하고, 하층부의 세포 현탁액 50 ㎕를 96-well black plate(Corning Coster사 제조)에 옮기고, 세포 검출 시약인 ATPlite(Parkin Elmer사 제조)를 50 ㎕ 첨가했다. Envision 2102 multilabelreader(Perkin Elmer)를 이용하여 발광 강도를 측정함으로써 유주한 세포수를 측정했다.
(4) 세포 유주 시험의 해석
세포의 유주율은, 컨트롤 IgG4를 첨가한 상기 인간 PBMC의 유주 세포수에 대한, 항인간 CD81 항체를 첨가한 인간 PBMC의 유주 세포수의 비로부터 산출했다. 그 결과, 어느 항인간 CD81 항체도 인간 PBMC의 유주를 저해했다(표 3). 초대 인간 T 세포를 함유하는 인간 PBMC에 대한 002-A07과 005-C01의 세포 유주 억제 작용으로서 인정된 점에서, 항CD81 항체(002-A07, 005-C01)가 IBD 치료약이 될 수 있다는 것을 확인할 수 있었다.
Figure pct00003
시험예 4 인간 PBMC 의 시토킨 생성 및 세포 증식에 미치는 항인간 CD81 항체의 효과
인간 PBMC에서의 시토킨 생성은, Life Sci. 2001 Nov 21; 70(1): 81-96에 따라 측정했다.
(1) 세포의 배양 및 자극
인간 PBMC는 KAC로부터 구입했다. KAC의 첨부 정보로부터 사용한 인간 PBMC 중의 T 세포(CD3 양성 세포)는 60%였다. 인간 PBMC는 10% 소태아 혈청(FCS)(Hyclone사 제조)을 첨가한 RPMI1640 배지(GIBCO사 제조)에서, 5% CO2, 37℃의 가습 인큐베이터 안에서 유지했다. 96-well 플레이트(IWAKI사 제조)에, 항인간 CD81 항체(002-A07 및 005-C01) 또는 컨트롤로서 인간 IgG4(Acris사 제조)를, 표 4에 기재된 여러가지 농도로 첨가하고, 인간 PBMC(1×105 cells/ml)를 각 100 ㎕/well 첨가했다. 상기 세포에 1000 ng/well 항CD3 항체(Clone : OKT3, BioLegend사 제조) 및 1000 ng/well 항CD28 항체(BD Biosciences사 제조)를 50 ㎕/well 첨가하고, 5% CO2, 37℃의 가습 인큐베이터 안에서 48시간 인큐베이트했다. 인큐베이션 후, 상청을 채취하고, ELISA 시험에 의해 IL-2 생성량을 측정했다.
(2) IL-2 ELISA 시험
항체를 첨가한 인간 PBMC로부터 생성되는 IL-2량은 human IL-2 ELISA kit(R&D system사 제조)를 이용하여 측정했다. ELISA 시험은 kit 첨부의 프로토콜에 따라 실시했다. IL-2 생성률은, 컨트롤 IgG4를 첨가했을 때에 인간 PBMC로부터 생성되는 IL-2량에 대한, 항인간 CD81 항체를 첨가했을 때에 인간 PBMC로부터 생성되는 IL-2량의 비로부터 산출했다. 결과를 표 4에 나타낸다.
(3) Alamar blue 시험
세포 증식은 Alamar blue(BIOSOURCE)를 이용하여 측정했다. 본 시험은 kit 첨부의 프로토콜에 따라 실시했다. 세포 증식률은, 컨트롤 IgG4를 첨가했을 때의 인간 PBMC의 세포 증식에 대한, 항인간 CD81 항체를 첨가했을 때의 인간 PBMC의 세포 증식의 비로부터 산출했다. 결과를 표 5에 나타낸다.
Figure pct00004
Figure pct00005
이들 결과는, 어느 항인간 CD81 항체도, 인간 PBMC의 시토킨 생성 및 세포 증식을 자극하지 않는 것을 나타내고 있다. 이들 결과로부터, T 세포의 활성화의 지표가 되는 시토킨 생성이나 세포 증식에 대하여, 002-A07과 005-C01이 영향을 주지 않는 점에서, 시토킨 과잉 생성에서 기인되는 시토킨 스톰이나, T 세포 기능을 억제하는 것에서 기인되는 면역 억제 등의 부작용의 우려가 없는 것이 확인되었다.
시험예 5 인간 IBD 환자 유래 PBMC에 대한 항인간 CD81 항체의 유주 억제 효과
(1) 세포의 조제
IBD 환자의 PBMC(Tissue solution사 등으로부터 구입)는 10% 소태아 혈청(FCS)(Hyclone사 제조)을 첨가한 RPMI1640 배지(GIBCO사 제조)에서, 5% CO2, 37℃의 가습 인큐베이터 안에서 유지한다. 상기 세포에 자극제(피토헤마글루티닌(PHA), 인간 IL-2, 인간 TNFα, Vasoactive intestinal peptide, IL-22, IL-7)를 첨가 혹은 무첨가로, 5% CO2, 37℃의 가습 인큐베이터 안에서 4일간 인큐베이트한다.
(2) 항체 처리
IBD 환자 유래 PBMC를 유주 배지(0.5% BSA(SIGMA사 제조), 50 mM HEPES(GIBCO사 제조) 함유 RPMI1640 배지(GIBCO사 제조))에 현탁한다. 항인간 CD81 항체(002-A07 및 005-C01) 또는 컨트롤로서 인간 IgG4(Acris사 제조)를, 여러가지 농도로 상기 세포에 첨가한다. 세포를 5% CO2, 37℃의 가습 인큐베이터 안에서 2시간 인큐베이트한다.
(3) 세포 유주 시험
96-well 유주 플레이트(Corning Coster사 제조; 포어 사이즈 5 ㎛)를 이용하여 세포 유주를 시험한다. 하층부에 SDF-1(PEPROTECH사 제조)을 첨가한 유주 배지 235 ㎕를 충전한다. Transwell을 올려놓은 후, 상기 예비 인큐베이트한 항인간 CD81 항체 함유 또는 비함유 IBD 환자 유래 PBMC를 각 well의 상층부에 75 ㎕씩 첨가하고, 5% CO2, 37℃의 가습 인큐베이터 안에서 2시간 인큐베이트한다. 인큐베이션 종료 후, Transwell을 제거하고, 하층부의 세포 현탁액 50 ㎕를 96-well black plate(Corning Coster사 제조)에 옮기고, 세포 검출 시약인 ATPlite(Parkin Elmer사 제조)를 50 ㎕ 첨가한다. Envision 2102 multilabelreader(Perkin Elmer사 제조)를 이용하여 발광 강도를 측정함으로써 유주한 세포수를 측정한다.
(4) 세포 유주 시험의 해석
세포의 유주율은, 컨트롤 IgG4를 첨가한 IBD 환자 유래 PBMC의 유주 세포수에 대한, 항인간 CD81 항체를 첨가한 IBD 환자 유래 PBMC의 유주 세포수의 비로부터 산출한다.
시험예 6 IBD 환자 유래 PBMC의 시토킨 생성에 미치는 항인간 CD81 항체의 효과
(1) 세포의 배양 및 자극
IBD 환자 유래 PBMC는 Tissue solution사 등으로부터 구입한다. IBD 환자 유래 PBMC는 10% 소태아 혈청(FCS)(Hyclone사 제조)을 첨가한 RPMI1640 배지(GIBCO사 제조)에서, 5% CO2, 37℃의 가습 인큐베이터 안에서 유지한다. 96-well 플레이트(IWAKI사 제조)에, 항인간 CD81 항체(002-A07 및 005-C01) 또는 컨트롤로서 인간 IgG4(Acris사 제조)를, 여러가지 농도로 첨가하고, IBD 환자 유래 PBMC를 각 well에 첨가했다. 상기 세포에 1000 ng/well 항CD3 항체(Clone : OKT3, BioLegend사 제조) 및 1000 ng/well 항CD28 항체(BD Biosciences사 제조)를 각각 50 ㎕/well 첨가하고, 5% CO2, 37℃의 가습 인큐베이터 안에서 48시간 인큐베이트한다. 인큐베이션 후, 상청을 채취하고, ELISA 시험에 의해 IL-2 생성량을 측정한다.
(2) IL-2 ELISA 시험
항체를 첨가한 IBD 환자 유래 PBMC로부터 생성되는 IL-2량은 human IL-2 ELISA kit(R&D system사 제조)를 이용하여 측정한다. ELISA 시험은 kit 첨부의 프로토콜에 따라 실시한다. IL-2 생성률은, 컨트롤 IgG4를 첨가했을 때에 IBD 환자 유래 PBMC로부터 생성되는 IL-2량에 대한, 항인간 CD81 항체를 첨가했을 때에 IBD 환자 유래 PBMC로부터 생성되는 IL-2량의 비로부터 산출한다.
시험예 7 인간-닭 키메라 CD81을 이용한 항인간 CD81 항체의 에피토프 매핑
항인간 CD81 항체(002-A07 및 005-C01)가 결합하는 에피토프를 동정하기 위해, 표 6에 나타내는 인간-닭 CD81 키메라 구축물을 이용하여 ELISA 시험을 행했다. 각 키메라 구축물을 CHO 세포로 일과적으로 발현시키고, 그 세포막 분획을 detergent에 의해 가용화하여 plate에 고정시켰다. 결과를 표 7에 정리했다.
(1) CD81 키메라 단백질의 발현
인간 CD81 유전자(서열번호 21) 및 닭 CD81 유전자(서열번호 23)를 이용하여, 표 6에 나타내는 10종의 인간-닭 키메라 CD81 유전자를 구축했다. 각 키메라 CD81 유전자 및 야생형 인간 및 닭 CD81 유전자의 총12 종류의 유전자를, C 말단에 V5 태그, 6xHis 태그를 갖는 융합 단백질로서 발현하도록, pcDNA-DEST40 벡터에 서브클로닝했다. 유전자 도입 시약 TransIT-LT1(TAKARA BIO, code : MIR2304)을 이용하여, 메이커의 첨부서에 따라, 각 인간-닭 키메라 CD81 구축물을, 일과적으로 CHO 세포에서 발현시키고, 48시간 후에 이하의 순서로 막 분획을 조제했다. 키메라 CD81 발현 CHO 세포에, 1%(W/V) 옥틸글루코시드를 포함하는 HBS(20 mM Hepes(Invitrogen, code : 15630), 150 mM NaCl(NACALAI TESQUE, INC.))을 첨가하고, 4℃에서 5분간 인큐베이트했다. 계속해서, 세포 현탁액을 10000 g에서 20분간 원심하고, 상청을 회수했다. 상청 중의 단백질량을, BCA Protein Assay Kit(ThermoScientific Pierce, code : 23225)를 이용하여 측정했다.
(2) ELISA 시험
컨트롤 항체로서 인간 IgG4 항체(Acris Antibodies GmbH)와 마우스 IgG 항체를 이용했다. 인간-닭 키메라 CD81 단백질은, 상기 (1)에서 조제한 막 분획(5 ㎍/100 μL/well)을, 1%(W/V) 옥틸글루코시드 존재하에서 Ni NTA HisSorb plate(QIAGEN, code : 35023)에 첨가하고, 4℃에서 3시간 인큐베이트함으로써, C 말단에 도입한 His 태그를 통해 플레이트 상에 포착했다. 상기 막 분획을 TBST(0.05%(V/V) Tween20을 포함하는 TBS)로 3회 세정 후, 각 항인간 CD81 항체 또는 컨트롤 항체(50 μL/well)를 첨가하고, 실온에서 1시간 인큐베이트했다. 세정 후, 2000배 희석한 HRP 표지 항IgG4 항체(Mouse anti-human IgG4 HRP clone : HP6023 Beckman Coulter) 혹은 1000배 희석한 HRP 표지 항마우스 IgG 항체(Invitrogen)(50 μL/well)를 첨가했다. 플레이트를 실온에서 1시간 인큐베이트한 후, TBST에 의한 세정을 3회 행했다. 계속해서, TMB One solution(Promega사, code : 53025)을 이용하여 퍼옥시다아제 활성을 측정했다. 2 M H2SO4 50 μL를 첨가하여 반응을 정지시킨 후, 450 nm에서의 흡광도를 측정했다.
(3) 결과의 해석
인간 CD81은 2개의 세포외 도메인을 갖고 있다. 002-A07 및 005-C01은, hCD81, c80h, h175c 및 h190c와는 결합했지만, cCD81, c138h, c156h, c175h, c190h, h80c, h138c 및 h156c와는 결합하지 않았다. 이들 결과는, 002-A07 및 005-C01 항체가 인간 CD81에 결합하고, 인식하는 에피토프가, 인간 CD81 폴리펩티드의 80번째 잔기와 175번째 잔기 사이에 존재하는 것을 나타내고 있다.
Figure pct00006
Figure pct00007
시험예 8 알라닌 스캔을 이용한 항인간 CD81 항체의 에피토프 매핑
시험예 7에 나타낸 바와 같이, 항인간 CD81 항체인 002-A07 및 005-C01 항체에 대한 인간 CD81의 에피토프 영역이 결정되었다. 본 시험예에서는, 상기 항인간 CD81 항체와 결합하는 에피토프 영역 중의 개개의 아미노산 잔기를 조사하고, 상세한 에피토프 잔기를 동정하기 위해, 시험예 7에서 결정된 에피토프 영역 중의 서열에 있어서 알라닌 스캔 변이 유발(Cunningham & Wells, Science 244: 1081-1085 (1989))을 실시했다. 인간 CD81 변이체는 부위 특이적인 변이 도입에 의해 작성하고(다카라 바이오에 위탁), pcDNA-DEST40 벡터에 서브클로닝했다. 계속해서, 이들 변이체를 CHO 세포에서 발현시키고, 시험예 7과 동일하게 하여, 개개의 변이체에 대한 002-A07 및 005-C01 항체의 결합을 조사했다. 야생형 인간 CD81과 002-A07 및 005-C01 항체의 결합 친화성에 대한, 인간 CD81의 각 변이체와 002-A07 및 005-C01 항체의 결합 친화성의 비로부터, 002-A07 및 005-C01 항체와의 결합 친화성의 정도에 기초하여, 변이체를 3개의 그룹으로 분류했다. 인간 CD81의 각 변이체의 발현 레벨은 변이체의 C 말단에 삽입한 V5 태그의 발현 레벨을 이용하여 보정했다. 결과를 표 8에 나타낸다.
시험예 7에 나타낸 바와 같이, 항인간 CD81 항체인 002-A07과 005-C01은, 인간 CD81의 80번째 아미노산 잔기와 175번째 아미노산 잔기 사이에 위치하는 동일한 에피토프 영역을 인식한다. 알라닌 스캔의 결과는, 인간 CD81은, 002-A07 항체가 결합하는 데에 중요한 13의 아미노산 잔기(V135, D137, A143, H151, G158, T163, A164, L165, S168, V169, L170, N172, L174)를 갖고, 005-C01 항체가 결합하는 데에 중요한 17의 아미노산 잔기(Y127, A130, L131, V135, V136, D137, N142, A143, L154, G158, T163, L165, S168, V169, L170, K171, L174)를 갖는 것을 나타내고 있다.
Figure pct00008
시험예 9 호몰로그 스캔을 이용한 항인간 CD81 항체의 에피토프 매핑
알라닌 스캔은 바람직하지 않은 입체 구조 변화 및 물리 화학적 파탄을 야기할 가능성이 있기 때문에(Cunningham and Wells, Science 244: 1081-1085 (1989)), 기능적인 에피토프의 에너지적 프로파일링을 더욱 심화하기 위한 별도의 체계적인 스캔 방법인 호몰로그 스캔법을 실시했다. 호몰로그 스캔 변이 유발은, 단백질의 구조 및 기능을 유지할 수 있는 치환기를 도입함으로써, 측쇄의 치환시에 발생하는 구조의 파탄을 최소로 하는 설계로 되어 있다(Protein Science (2005), 14:2405-2413).
시험예 8에 나타낸 바와 같이, 인간 CD81은, 002-A07에 대해서는 13개소, 005-C01에 대해서는 17개소, 에피토프 영역 내에 각각의 항체가 결합하기 위해 중요한 잔기를 갖고 있다. 호몰로그 변이체는 Protein Science(2005), 14:2405-2413에 기재된 규칙에 따라, 이들 잔기에 관해 제작했다. 이들 호몰로그 변이체를 CHO 세포에서 발현시키고, 시험예 8과 동일하게 하여, 개개의 변이체에 대한 항인간 CD81 항체의 결합을 조사했다.
결과를 표 9에 정리했다. 호몰로그 스캔의 결과, 인간 CD81은, 에피토프 영역 내에, 002-A07에 대해서는 9개소의, 005-C01에 대해서는 9개소의, 각각의 항체의 결합에 대하여 중요한 아미노산 잔기를 갖는 것이 밝혀졌다. 또한, 002-A07에 대해서는, 151, 164, 168 및 172번째 아미노산 잔기, 005-C01에 대해서는, 127, 130, 143 및 154번째 아미노산 잔기가, 각 항체에 대하여 고유의 결합에 중요한 아미노산 잔기였다.
Figure pct00009
실시예 2 002-A07 변이 항체의 제작
글리코실화 부위 변이체의 제작
n-CoDeR(등록 상표) 클론 002-A07로부터의 VL 영역을 수식하여 CDR3 중에 위치하는 잠재적 N-글리코실화 부위(아미노산 서열 : NLS)를 제거했다. 6개의 VL 배리언트 : N113S, N113G, N113Q, S115A, S115G 및 S115N을 설계하여 Geneart AG(Regensburg Germany)로부터 구입했다. 이들을 실시예 1에 기재된 바와 같은 λ 정상 영역을 함유하는 발현 벡터에 삽입했다. 6개의 배리언트의 경쇄는, 002-A07 γ4 S228P 중쇄와 함께 HEK293-EBNA 세포에 트랜스펙션했다. 항체를 실시예 1에 기재된 바와 같이 발현시켜, 정제했다.
어피니티 매추레이션으로부터의 클론의 단리
라이브러리의 제작
n-CoDeR(등록 상표) 클론 002-A07에 관해 변이 라이브러리를 제작했다. 에러프론(error-prone)의 PCR의 프로토콜(Saviranta et al. 1998)에 있어서 플라스미드 DNA를 주형으로서 이용하고, 항체 가변 영역 전체에 걸쳐 랜덤으로 변이를 도입했다. Fab 라이브러리 제작을 위해, 결과로 발생하는 단편을 파지미드 벡터에 라이게이션하여 E. coli HB101F’(F’플라스미드의 HB101(Invitrogen)주에의 콘주게이션에 의해 제작)에 일렉트로포레이션했다. 라이브러리를 박테리아의 글리세롤 스톡으로서 -80℃에서 보존했다.(Saviranta P, Pajunen M, Jauria P, Karp M, Pettersson K, Mantsala P and Lovgren T(1998) “Engineering the steroid-specificity of an anti-17β-estradiol Fab by random mutagenesis and competitive phage panning”. Prot Eng 11(2) 143-152.)
각각의 가용성 Fab의 파지 디스플레이에 의한 패닝 및 스크리닝
Fab를 디스플레이하는 파지를, 헬퍼 파지 R408(Stratagene)을 이용하여 E. coli 라이브러리로부터 발현시키고, PEG 침전을 이용하여 배양물 상청으로부터 정제했다.
친화성이 향상된 CD81 특이적 클론을 파지 디스플레이 기술에 의해 단리했다. 각각이 2개의 연속적인 패닝으로 이루어지는 2개의 평행적인 패닝 전략(A 및 B)을, 친화성이 향상된 클론을 단리하기 위해 이용했다. 전략 A에서는, 폴리스티렌 비드 상에 코팅한 재조합 인간 CD81 단백질을 표적으로서 이용했다. 전략 B에서는, 인간 CD81을 내생적으로 발현하는 Jurkat 세포를 표적으로서 이용했다. 세정에 의해 비결합 파지를 제거했다. 트립신을 이용하여 표적에 결합한 Fab-파지를 용출하고, E. coli HB101F’중에서 증폭시켰다.
2회째 패닝 후, 클론의 증폭 풀(pool)로부터 파지미드 DNA를 단리했다. Gene III를 제한 효소 소화와 그 후의 재-라이게이션에 의해 절제하여, Fab를 발현하는 플라스미드 풀로 했다. 플라스미드를 E. coli TOP10(Invitrogen)으로 형질 전환하고, 각각의 가용성 Fab를 발현하는 형질 전환체를 항생 물질 함유 한천 플레이트 상에서 셀렉션했다. C 말단에 His 태그가 부착된 가용성 Fab의 발현을 위해, 각각의 박테리아 콜로니를 한천 플레이트로부터 마이크로타이터 플레이트에 옮겼다.
이하의 시약 :
1) 항His 태그 모노클로날 항체의 코팅; 2) 친화성 성숙으로부터의 His 태그 부착 Fab; 3) FLAG 태그 부착 재조합 인간 CD81 단백질; 4) AP-결합 항FLAG 항체; 5) 발광 기질
의 연속 첨가에 의해 구성되는 ELISA를 이용하여 1차 스크리닝을 행했다. 1차 스크리닝에 있어서 매우 높은 활성을 갖는 클론을 선택적으로 새로운 마이크로타이터 플레이트에 채취하고, 재발현시켰다. 1차 스크리닝에 관해 기재한 ELISA의 구성과 동일한 구성에 의해 2차 스크리닝을 행했다. Fab형의 모클론(parent clone) 002-A07에 비교하여 결합성이 향상된 클론을 DNA 시퀀싱에 의해 해석했다. E. coli의 페리플라즘으로부터, Ni-NTA 크로마토그래피를 이용하여 유니크한 Fab 클론을 정제했다. Jurkat 세포에 의한 플로우 사이토메트리 및 고정화 재조합 인간 CD81 단백질에 의한 비아코어를 이용하여, 정제 Fab 클론의 친화성의 서열화를 행했다.
IgG4-S228P의 생성
모클론에 비교하여 친화성이 향상된 클론을 IgG4-S228P형으로 변환하고, 실시예 1에 기재된 바와 같이 발현시켜 정제했다.
DNA 시퀀싱의 결과로부터, 얻어진 002-A07 변이 항체의 서열을 이하의 표 10의 대응 관계에 따라 서열표에 기재했다.
Figure pct00010
시험예 10 002-A07 변이 항체의 Jurkat 세포에 대한 유주 억제 효과
시험예 2와 동일하게 행했다. 그 결과, 어느 002-A07 변이 항체에 있어서도, 인간 T 세포주인 Jurkat 세포에 대한 세포 유주 억제 작용이 확인되었다(표 11).
Figure pct00011
시험예 11 인간 PBMC 의 시토킨 생성 및 세포 증식에 미치는 002-A07 변이 항체의 효과
시험예 4와 동일하게 행했다. 5A6은, T 세포 유주 억제 작용을 나타내지만, 한편으로는 IL-2 생성 증강 작용을 나타내는, 시판의 마우스 항인간 CD81 항체(santa cruz사 제조)이고, 컨트롤로서 이용했다. 그 결과, 어느 002-A07 변이 항체도 표 12에 나타낸 바와 같이 인간 PBMC의 IL-2 생성 증강 작용을 나타내지 않고, 표 13에 나타낸 바와 같이 세포 증식 작용에 대해서도 특별히 영향을 미치지 않는 것이 밝혀졌다.
Figure pct00012
Figure pct00013
시험예 12 알라닌 스캔을 이용한 002-A07 변이 항체의 에피토프 매핑
시험예 8과 동일하게 행했다. 1부터 43번째, 63부터 112번째, 202번째 이후는 막 관통 혹은 세포내 도메인이기(Levy, S. et al., Annu. Rev. Immunol. (1998) 16, 89-109) 때문에, 알라닌 변이체는 제작하지 않았다. 또한, 156번째, 157번째, 175번째, 190번째는 시스테인 잔기이기 때문에, 알라닌 변이체는 제작하지 않았다. 표 14에 나타내고 있지 않은 알라닌 변이체에 대한 상대 결합 강도는, 어느 002-A07 변이 항체에 있어서도 야생형 인간 CD81과 동등 혹은 약간 약한(상대 결합 강도는 40-100%) 것이었다.
Figure pct00014
시험예 13 호몰로그 스캔을 이용한 002-A07 변이 항체의 에피토프 매핑
알라닌 스캔의 결과로부터, 002-A07 변이 항체가 결합하는 데에 중요하다고 생각된 아미노산 잔기에 관해 호몰로그 스캔을 행했다. 시험예 9와 동일하게 행했다. 그 결과, 002-A07 변이 항체 각각에 있어서, 하기에 나타낸 결합에 중요한 아미노산 잔기가 특정되었다. 어느 002-A07 변이 항체도, 002-A07과 동일한 에피토프에 결합하는 것을 알 수 있었다.
002-A07 N113G : V135, D137, H151, G158, A164, S168, V169, L170
002-A07 N113Q : V135, D137, H151, G158, A164, S168, V169, L170
002-A07 N113S : V135, D137, H151, G158, A164, S168, V169, L170
002-A07 S115A : Y127, V135, D137, A143, H151, G158, A164, S168, V169, L170
002-A07 S115G : V135, D137, H151, G158, A164, S168, V169, L170, N172
002-A07 S115N : V135, D137, A164, S168, V169
001-B06 : A164, V169
002-B05 : V135, D137, H151, G158, A164, V169, L170
002-B07 : V135, A164, V169
002-C02 : V135, D137, A164, V169
002-C09 : A164, V169
002-D03 : V135, D137, A164, V169
002-D08 : A164, V169
002-D10 : A164, V169
002-F01 : V135, D137, G158, A164, S168, V169
002-F05 : V135, D137, A164, S168, V169
002-F07 : V135, D137, A164, V169
002-H02 : A164, V169
002-H03 : A164, V169
003-A10 : A164, V169
003-A11 : A164, V169
003-D07 : V135, D137, H151, G158, A164, V169
003-F08 : V135, D137, H151, G158, A164, V169, L170
Figure pct00015
실시예 3 IgG1형 인간 항CD81 항체의 제작
002-A07의 L 사슬을 코드하는 염기 서열의 N 말단 부분에 인간 IL-2 시그널 서열을 부가한 DNA 단편의 양끝에 EcoRI 사이트와 XhoI 사이트를 부가하고, pcDNA3.1(+)(Invitogen사)의 EcoRI-XhoI 사이트에 삽입했다(a). 마찬가지로, 002-A07의 H 사슬을 코드하는 염기 서열의 N 말단 부분에 인간 IL-2 시그널 서열을 부가한 DNA 단편의 양끝에 EcoRI 사이트와 XhoI 사이트를 부가하고, pcDNA3.1(+)의 EcoRI-XhoI 사이트에 삽입했다. 또한, 상기 H 사슬 유전자가 삽입된 플라스미드를 주형으로 하고, 이하의 DNA 프라이머를 이용하여 PCR법에 의해 DNA 단편을 증폭시켰다.
5'측 DNA 프라이머(EcoRI 사이트 부분의 서열); 5'-GGTGGAATTCCCACCATGTACAGGATGCAAC-3'(서열번호 161)
3'측 DNA 프라이머(H 사슬의 가변 영역의 C 말단 부분 서열에 pFUSE-CHIg-hG1(Invitrogen사)의 XhoI 사이트 부분 서열을 연결시킨 서열); 5'-TGCACTCGAGACGGTGACCAGTGTACCTTGGCCCC-3'(서열번호 162)
증폭된 DNA를 EcoRI 및 XhoI에서 소화한 후, pFUSE-CHIg-hG1의 EcoRI-XhoI 사이트에 삽입하고, IgG1화된 H 사슬 발현 플라스미드를 취득했다(b). IgG1형 인간 항CD81 항체 단백을 조제하기 위해, (a), (b)의 플라스미드를 CHO-S 세포에 일과성으로 도입하고, 부유 배양했다. 배양 상청을 회수하고, Protein A 칼럼에 의해 IgG1형 인간 항CD81 항체를 정제했다. 상기 항체의 L 사슬 및 H 사슬의 뉴클레오티드 서열 및 아미노산 서열을 서열표에 나타낸다.
L 사슬 :
뉴클레오티드 서열 : 서열번호 163
아미노산 서열 : 서열번호 164
H 사슬 :
뉴클레오티드 서열 : 서열번호 165
아미노산 서열 : 서열번호 166
시험예 14 IgG1형 인간 항CD81 항체의 암세포에 대한 결합 작용
인간 급성 림프성 백혈병 환자 유래 Jurkat E6.1 세포(Cat No.88042803)와 인간 버킷 림프종 환자 유래 Ramos(RA1) 세포(Cat No.EC85030802)에 대한 IgG1형 인간 항CD81 항체의 결합을 시험예 1과 동일하게 조사했다. 다만, 컨트롤에는 인간 IgG(AbD Serotec사 제조)를 이용하고, 염색에는 PE(피코에리트린) 표지 항인간 Ig 항체(Beckman Coulter사 제조)를 이용했다. FACS Calibur(BD Biosciences사 제조) 로 해석한 결과를 표 16에 나타낸다. 표 중의 수치는 FACS Calibur의 FL2에서의 Geo.Mean의 값을 나타내고 있다. 그 결과, Jurkat 세포, Ramos 세포에 대한 IgG1형 인간 항CD81 항체의 결합이 확인되었다.
Figure pct00016
시험예 15 IgG1형 인간 항CD81 항체의 암세포에 대한 살작용 효과(CDC : 보체 의존성 세포 장해 활성)
Jurkat 세포와 Ramos 세포를 원심(4,000 rpm 3분, 4℃)하여 회수 후, CDC assay buffer(20 mM Hepes, 0.1% 소혈청 알부민 함유 RPMI1640 배지)에 현탁했다. 트리판 블루(GIBCO사 제조)로 생세포수를 계측하고, 세포 밀도가 106개/mL가 되도록 세포를 CDC assay buffer로 현탁했다. 현탁한 세포를 96 웰 세포 배양용 플레이트에 50 μL씩 나누어 붓고, 표 17에 기재한 항체를 50 μL씩 첨가하여 37℃, 30분간 인큐베이션했다. 건조 토끼 보체(CEDARRLANE사 제조)를 멸균한 증류수에 의해 복귀시키고, CDC assay buffer로 10배 희석한 후, 각 웰에 50 μL씩 첨가하여 다시 2시간, 37℃에서 인큐베이션했다. 배양 상청 100 μL를 LDH 측정 kit(Roche사 제조, Cat. No.744934001)의 반응액 100 μL와 혼합하고, 실온에서 30분 반응 후, 플레이트 리더로 490 nm의 흡광도를 측정했다. CDC 활성은, Triton X-100처리로 완전히 세포를 사멸시켰을 때의 LDH 활성치와의 비율로 산출했다. 그 결과, Jurkat 세포, Ramos 세포에 대한 IgG1형 인간 항CD81 항체의 보체 의존성 세포 장해 활성이 확인되었다.
Figure pct00017
Figure pct00018
본 발명의 항인간 CD81 항체는 염증성 장질환(IBD), 및 다발성 경화증이나 건선 등의 T 세포 유주와 관련되는 질환, 또는 혈액암의 예방, 개선 또는 치료에 유용하다.
본 발명은, 2010년 12월 6일 출원의 일본 특허 출원(2010-272046)을 기초로 하고 있으며, 그 내용은 전부 본 명세서에 포함된다.
SEQUENCE LISTING <110> Dainippon Sumitomo Pharma Co., Ltd. <120> Human Monoclonal Antibody <130> 091788 <150> JP 2010-272046 <151> 2010-12-06 <160> 166 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 15 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1 Cys Thr Gly Ser Thr Ser Asn Ile Gly Ala Gly Tyr Asp Thr His 1 5 10 15 <210> 2 <211> 7 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 2 Gly Asn Ser Asn Arg Pro Ser 1 5 <210> 3 <211> 12 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 3 Cys Gln Ser Tyr Asp Thr Asn Leu Ser Val Trp Val 1 5 10 <210> 4 <211> 14 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 4 Phe Ser Ser Asn Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly 1 5 10 <210> 5 <211> 19 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 5 Ser Tyr Ile Ser Ser Ser Ser Thr Tyr Thr Asp Tyr Ala Asp Ser Val 1 5 10 15 Lys Gly Arg <210> 6 <211> 12 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 6 Ala Arg Tyr Ser Tyr Gly Arg Asp Asn Phe Asp Tyr 1 5 10 <210> 7 <211> 336 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> CDS <222> (1)..(336) <400> 7 cag tct gtg ctg act cag cca ccc tca gcg tct ggg acc ccc ggg cag 48 Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln 1 5 10 15 agg gtc acc atc tcc tgc act ggg agc acc tcc aac atc ggg gca ggt 96 Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Thr Ser Asn Ile Gly Ala Gly 20 25 30 tat gac aca cac tgg tat cag cag ctc cca gga acg gcc ccc aaa ctc 144 Tyr Asp Thr His Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu 35 40 45 ctc atc tat ggt aac agc aat cgg ccc tca ggg gtc cct gac cga ttc 192 Leu Ile Tyr Gly Asn Ser Asn Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe 50 55 60 tct ggc tcc aag tct ggc acc tca gcc tcc ctg gcc atc agt ggg ctc 240 Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu 65 70 75 80 cgg tcc gag gat gag gct gat tat tac tgc cag tcc tat gac acc aac 288 Arg Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Asp Thr Asn 85 90 95 ctg agt gtt tgg gtg ttc ggc gga gga acc aag ctg acg gtc cta ggt 336 Leu Ser Val Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly 100 105 110 <210> 8 <211> 112 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 8 Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Thr Ser Asn Ile Gly Ala Gly 20 25 30 Tyr Asp Thr His Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu 35 40 45 Leu Ile Tyr Gly Asn Ser Asn Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu 65 70 75 80 Arg Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Asp Thr Asn 85 90 95 Leu Ser Val Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly 100 105 110 <210> 9 <211> 357 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> CDS <222> (1)..(357) <400> 9 gag gtg cag ctg ttg gag tct ggg gga ggc ttg gta cag cct ggg ggg 48 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 tcc ctg aga ctc tcc tgt gca gcc tct gga ttc acc ttc agt agc aac 96 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Asn 20 25 30 tac atg agc tgg gtc cgc cag gct cca ggg aag ggg ctg gag tgg gtt 144 Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 tca tac att agt agt agt agt act tac aca gac tac gca gac tct gtg 192 Ser Tyr Ile Ser Ser Ser Ser Thr Tyr Thr Asp Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 aag ggc cga ttc acc atc tcc aga gac aat tcc aag aac acg ctg tat 240 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 ctg caa atg aac agc ctg aga gcc gag gac act gcc gtg tat tac tgt 288 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 gcg aga tac agt tat ggc cgc gac aat ttt gac tac tgg ggc caa ggt 336 Ala Arg Tyr Ser Tyr Gly Arg Asp Asn Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 aca ctg gtc acc gtg agc tca 357 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 10 <211> 119 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 10 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Asn 20 25 30 Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Tyr Ile Ser Ser Ser Ser Thr Tyr Thr Asp Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Tyr Ser Tyr Gly Arg Asp Asn Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 11 <211> 14 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 11 Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Leu Gly Ser Asn Thr Val Asn 1 5 10 <210> 12 <211> 7 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 12 Gly Asn Ser Asn Arg Pro Ser 1 5 <210> 13 <211> 11 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 13 Cys Glu Val Trp Asp Ser Asp Ser Tyr Val Thr 1 5 10 <210> 14 <211> 14 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 14 Leu Gly Ser Tyr Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Val Pro Gly 1 5 10 <210> 15 <211> 19 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 15 Ser Ser Ile Ser Ser Ser Ser Ser Tyr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 1 5 10 15 Lys Gly Arg <210> 16 <211> 16 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 16 Ala Arg Gln Arg Ile Gly Asp Leu Val Val His Tyr Gly Leu Asp Val 1 5 10 15 <210> 17 <211> 330 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> CDS <222> (1)..(330) <400> 17 cag tct gtg ctg act cag cca ccc tca gcg tct ggg acc ccc ggg cag 48 Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln 1 5 10 15 agg gtc acc atc tct tgt tct gga agc agc tcc aac ctc gga agt aat 96 Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Leu Gly Ser Asn 20 25 30 act gta aac tgg tat cag cag ctc cca gga acg gcc ccc aaa ctc ctc 144 Thr Val Asn Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 atc tat ggt aac agc aat cgg ccc tca ggg gtc cct gac cga ttc tct 192 Ile Tyr Gly Asn Ser Asn Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 ggc tcc aag tct ggc acc aca gcc tcc ctg gcc atc agt ggg ctc cgg 240 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Thr Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg 65 70 75 80 tcc gag gat gag gct gat tat tac tgt gaa gtc tgg gac agt gac tct 288 Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Glu Val Trp Asp Ser Asp Ser 85 90 95 tat gtg aca ttc ggc gga gga acc aag ctg acg gtc cta ggt 330 Tyr Val Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly 100 105 110 <210> 18 <211> 110 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 18 Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Leu Gly Ser Asn 20 25 30 Thr Val Asn Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Gly Asn Ser Asn Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Thr Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg 65 70 75 80 Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Glu Val Trp Asp Ser Asp Ser 85 90 95 Tyr Val Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly 100 105 110 <210> 19 <211> 369 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> CDS <222> (1)..(369) <400> 19 gag gtg cag ctg ttg gag tct ggg gga ggc ttg gta cag cct ggg ggg 48 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 tcc ctg aga ctc tcc tgt gca gcc tct gga ttc acc ttg ggt agc tat 96 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Leu Gly Ser Tyr 20 25 30 tgg atg agc tgg gtc cgc cag gtt cca ggg aag ggg ctg gag tgg gtc 144 Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Val Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 tca tcc att agt agt agt agt agt tac ata tac tac gca gac tca gtg 192 Ser Ser Ile Ser Ser Ser Ser Ser Tyr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 aag ggc cga ttc acc atc tcc aga gac aat tcc aag aac acg ctg tat 240 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 ctg caa atg aac agc ctg aga gcc gag gac act gcc gtg tat tac tgt 288 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 gcg aga caa cgg att ggc gac tta gtg gtt cac tac ggt ttg gac gtc 336 Ala Arg Gln Arg Ile Gly Asp Leu Val Val His Tyr Gly Leu Asp Val 100 105 110 tgg ggc caa ggt aca ctg gtc acc gtg agc tca 369 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 20 <211> 123 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 20 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Leu Gly Ser Tyr 20 25 30 Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Val Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ser Ile Ser Ser Ser Ser Ser Tyr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gln Arg Ile Gly Asp Leu Val Val His Tyr Gly Leu Asp Val 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 21 <211> 711 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> CDS <222> (1)..(711) <400> 21 atg gga gtg gag ggc tgc acc aag tgc atc aag tac ctg ctc ttc gtc 48 Met Gly Val Glu Gly Cys Thr Lys Cys Ile Lys Tyr Leu Leu Phe Val 1 5 10 15 ttc aat ttc gtc ttc tgg ctg gct gga ggc gtg atc ctg ggt gtg gcc 96 Phe Asn Phe Val Phe Trp Leu Ala Gly Gly Val Ile Leu Gly Val Ala 20 25 30 ctg tgg ctc cgc cat gac ccg cag acc acc aac ctc ctg tat ctg gag 144 Leu Trp Leu Arg His Asp Pro Gln Thr Thr Asn Leu Leu Tyr Leu Glu 35 40 45 ctg gga gac aag ccc gcg ccc aac acc ttc tat gta ggc atc tac atc 192 Leu Gly Asp Lys Pro Ala Pro Asn Thr Phe Tyr Val Gly Ile Tyr Ile 50 55 60 ctc atc gct gtg ggc gct gtc atg atg ttc gtt ggc ttc ctg ggc tgc 240 Leu Ile Ala Val Gly Ala Val Met Met Phe Val Gly Phe Leu Gly Cys 65 70 75 80 tac ggg gcc atc cag gaa tcc cag tgc ctg ctg ggg acg ttc ttc acc 288 Tyr Gly Ala Ile Gln Glu Ser Gln Cys Leu Leu Gly Thr Phe Phe Thr 85 90 95 tgc ctg gtc atc ctg ttt gcc tgt gag gtg gcc gcc ggc atc tgg ggc 336 Cys Leu Val Ile Leu Phe Ala Cys Glu Val Ala Ala Gly Ile Trp Gly 100 105 110 ttt gtc aac aag gac cag atc gcc aag gat gtg aag cag ttc tat gac 384 Phe Val Asn Lys Asp Gln Ile Ala Lys Asp Val Lys Gln Phe Tyr Asp 115 120 125 cag gcc cta cag cag gcc gtg gtg gat gat gac gcc aac aac gcc aag 432 Gln Ala Leu Gln Gln Ala Val Val Asp Asp Asp Ala Asn Asn Ala Lys 130 135 140 gct gtg gtg aag acc ttc cac gag acg ctt gac tgc tgt ggc tcc agc 480 Ala Val Val Lys Thr Phe His Glu Thr Leu Asp Cys Cys Gly Ser Ser 145 150 155 160 aca ctg act gct ttg acc acc tca gtg ctc aag aac aat ttg tgt ccc 528 Thr Leu Thr Ala Leu Thr Thr Ser Val Leu Lys Asn Asn Leu Cys Pro 165 170 175 tcg ggc agc aac atc atc agc aac ctc ttc aag gag gac tgc cac cag 576 Ser Gly Ser Asn Ile Ile Ser Asn Leu Phe Lys Glu Asp Cys His Gln 180 185 190 aag atc gat gac ctc ttc tcc ggg aag ctg tac ctc atc ggc att gct 624 Lys Ile Asp Asp Leu Phe Ser Gly Lys Leu Tyr Leu Ile Gly Ile Ala 195 200 205 gcc atc gtg gtc gct gtg atc atg atc ttc gag atg atc ctg agc atg 672 Ala Ile Val Val Ala Val Ile Met Ile Phe Glu Met Ile Leu Ser Met 210 215 220 gtg ctg tgc tgt ggc atc cgg aac agc tcc gtg tac tga 711 Val Leu Cys Cys Gly Ile Arg Asn Ser Ser Val Tyr 225 230 235 <210> 22 <211> 236 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 22 Met Gly Val Glu Gly Cys Thr Lys Cys Ile Lys Tyr Leu Leu Phe Val 1 5 10 15 Phe Asn Phe Val Phe Trp Leu Ala Gly Gly Val Ile Leu Gly Val Ala 20 25 30 Leu Trp Leu Arg His Asp Pro Gln Thr Thr Asn Leu Leu Tyr Leu Glu 35 40 45 Leu Gly Asp Lys Pro Ala Pro Asn Thr Phe Tyr Val Gly Ile Tyr Ile 50 55 60 Leu Ile Ala Val Gly Ala Val Met Met Phe Val Gly Phe Leu Gly Cys 65 70 75 80 Tyr Gly Ala Ile Gln Glu Ser Gln Cys Leu Leu Gly Thr Phe Phe Thr 85 90 95 Cys Leu Val Ile Leu Phe Ala Cys Glu Val Ala Ala Gly Ile Trp Gly 100 105 110 Phe Val Asn Lys Asp Gln Ile Ala Lys Asp Val Lys Gln Phe Tyr Asp 115 120 125 Gln Ala Leu Gln Gln Ala Val Val Asp Asp Asp Ala Asn Asn Ala Lys 130 135 140 Ala Val Val Lys Thr Phe His Glu Thr Leu Asp Cys Cys Gly Ser Ser 145 150 155 160 Thr Leu Thr Ala Leu Thr Thr Ser Val Leu Lys Asn Asn Leu Cys Pro 165 170 175 Ser Gly Ser Asn Ile Ile Ser Asn Leu Phe Lys Glu Asp Cys His Gln 180 185 190 Lys Ile Asp Asp Leu Phe Ser Gly Lys Leu Tyr Leu Ile Gly Ile Ala 195 200 205 Ala Ile Val Val Ala Val Ile Met Ile Phe Glu Met Ile Leu Ser Met 210 215 220 Val Leu Cys Cys Gly Ile Arg Asn Ser Ser Val Tyr 225 230 235 <210> 23 <211> 714 <212> DNA <213> Gallus gallus <220> <221> CDS <222> (1)..(714) <400> 23 atg ggg gtg gaa ggc tgc acc aag tgc atc aaa tat ctg ctc ttc gtc 48 Met Gly Val Glu Gly Cys Thr Lys Cys 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Lys Gln Phe Tyr Asp 115 120 125 caa gcg ttc caa cag gcg ctc atg gcg gat tcg gac tcg agc aac ggg 432 Gln Ala Phe Gln Gln Ala Leu Met Ala Asp Ser Asp Ser Ser Asn Gly 130 135 140 aag gct gtg gtg aag act ttc cat gaa acg ttg gac tgc tgt ggt cct 480 Lys Ala Val Val Lys Thr Phe His Glu Thr Leu Asp Cys Cys Gly Pro 145 150 155 160 gat act atg gtt gga acg ctc act cct ctg tgg aga gat gac ctg tgc 528 Asp Thr Met Val Gly Thr Leu Thr Pro Leu Trp Arg Asp Asp Leu Cys 165 170 175 tcg aag gac tta ctg aaa ggc ttg ctg aag cgt gag gaa aac tgc cac 576 Ser Lys Asp Leu Leu Lys Gly Leu Leu Lys Arg Glu Glu Asn Cys His 180 185 190 aaa aag atc gac gag ctc ttc tct ggg aag ctg tac ctg atc ggt att 624 Lys Lys Ile Asp Glu Leu Phe Ser Gly Lys Leu Tyr Leu Ile Gly Ile 195 200 205 gct gcc atc gtg gtt gcc gtg atc atg atc ttc gaa atg atc ctg agc 672 Ala Ala Ile Val Val Ala Val Ile Met Ile Phe Glu Met Ile Leu Ser 210 215 220 atg gtg ctg tgc tgc ggc ata agg aac agc tcc gtc tac tga 714 Met Val Leu Cys Cys Gly Ile Arg Asn Ser Ser Val Tyr 225 230 235 <210> 24 <211> 237 <212> PRT <213> Gallus gallus <400> 24 Met Gly Val Glu Gly Cys Thr Lys Cys Ile Lys Tyr Leu Leu Phe Val 1 5 10 15 Phe Asn Phe Ile Phe Trp Leu Ala Gly Gly Ile Ile Leu Gly Val Ala 20 25 30 Leu Trp Leu Arg His Asp Ser Gln Thr Thr Asn Ile Leu Tyr Leu Gln 35 40 45 Leu Gly Asp Lys Gln Ala Pro Asn Thr Phe Tyr Val Gly Ile Tyr Ile 50 55 60 Leu Ile Ala Val Gly Ala Val Met Met Phe Val Gly Phe Leu Gly Cys 65 70 75 80 Tyr Gly Ala Ile Gln Glu Ser Gln Cys Leu Leu Gly Ala Phe Phe Thr 85 90 95 Cys Leu Val Ile Leu Phe Ala Cys Glu Val Ala Ala Gly Ile Trp Gly 100 105 110 Phe Val Asn Lys Asp Gln Ile Ala Lys Asp Val Lys Gln Phe Tyr Asp 115 120 125 Gln Ala Phe Gln Gln Ala Leu Met Ala Asp Ser Asp Ser Ser Asn Gly 130 135 140 Lys Ala Val Val Lys Thr Phe His Glu Thr Leu Asp Cys Cys Gly Pro 145 150 155 160 Asp Thr Met Val Gly Thr Leu Thr Pro Leu Trp Arg Asp Asp Leu Cys 165 170 175 Ser Lys Asp Leu Leu Lys Gly Leu Leu Lys Arg Glu Glu Asn Cys His 180 185 190 Lys Lys Ile Asp Glu Leu Phe Ser Gly Lys Leu Tyr Leu Ile Gly Ile 195 200 205 Ala Ala Ile Val Val Ala Val Ile Met Ile Phe Glu Met Ile Leu Ser 210 215 220 Met Val Leu Cys Cys Gly Ile Arg Asn Ser Ser Val Tyr 225 230 235 <210> 25 <211> 651 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Light chain of 002-A07 IgG antibody <220> <221> CDS <222> (1)..(651) <400> 25 cag tct gtg ctg act cag cca ccc tca gcg tct ggg acc ccc ggg cag 48 Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln 1 5 10 15 agg gtc acc atc tcc tgc act ggg agc acc tcc aac atc ggg gca ggt 96 Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Thr Ser Asn Ile Gly Ala Gly 20 25 30 tat gac aca cac tgg tat cag cag ctc cca gga acg gcc ccc aaa ctc 144 Tyr Asp Thr His Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu 35 40 45 ctc atc tat ggt aac agc aat cgg ccc tca ggg gtc cct gac cga ttc 192 Leu Ile Tyr Gly Asn Ser Asn Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe 50 55 60 tct ggc tcc aag tct ggc acc tca gcc tcc ctg gcc atc agt ggg ctc 240 Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu 65 70 75 80 cgg tcc gag gat gag gct gat tat tac tgc cag tcc tat gac acc aac 288 Arg Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Asp Thr Asn 85 90 95 ctg agt gtt tgg gtg ttc ggc gga gga acc aag ctg acg gtc cta ggt 336 Leu Ser Val Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly 100 105 110 cag ccc aag gct gcc ccc tcg gtc act ctg ttc ccg ccc tcc tct gag 384 Gln Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu 115 120 125 gag ctt caa gcc aac aag gcc aca ctg gtg tgt ctc ata agt gac ttc 432 Glu Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe 130 135 140 tac ccg gga gcc gtg aca gtg gcc tgg aag gca gat agc agc ccc gtc 480 Tyr Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val 145 150 155 160 aag gcg gga gtg gag acc acc aca ccc tcc aaa caa agc aac aac aag 528 Lys Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys 165 170 175 tac gcg gcc agc agc tat ctg agc ctg acg cct gag cag tgg aag tcc 576 Tyr Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser 180 185 190 cac aga agc tac agc tgc cag gtc acg cat gaa ggg agc acc gtg gag 624 His Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu 195 200 205 aag aca gtg gcc cct aca gaa tgt tca 651 Lys Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser 210 215 <210> 26 <211> 217 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 26 Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Thr Ser Asn Ile Gly Ala Gly 20 25 30 Tyr Asp Thr His Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu 35 40 45 Leu Ile Tyr Gly Asn Ser Asn Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu 65 70 75 80 Arg Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Asp Thr Asn 85 90 95 Leu Ser Val Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly 100 105 110 Gln Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu 115 120 125 Glu Leu Gln Ala Asn 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agt act tac aca gac tac gca gac tct gtg 192 Ser Tyr Ile Ser Ser Ser Ser Thr Tyr Thr Asp Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 aag ggc cga ttc acc atc tcc aga gac aat tcc aag aac acg ctg tat 240 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 ctg caa atg aac agc ctg aga gcc gag gac act gcc gtg tat tac tgt 288 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 gcg aga tac agt tat ggc cgc gac aat ttt gac tac tgg ggc caa ggt 336 Ala Arg Tyr Ser Tyr Gly Arg Asp Asn Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 aca ctg gtc acc gtg agc tca gct tcc acc aag ggc cca tcc gtc ttc 384 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe 115 120 125 ccc ctg gcg ccc tgc tcc agg agc acc tcc gag agc aca gcc gcc ctg 432 Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu 130 135 140 ggc tgc ctg gtc aag gac tac ttc ccc gaa ccg gtg acg gtg tcg tgg 480 Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp 145 150 155 160 aac tca ggc gcc ctg acc agc ggc gtg cac acc ttc ccg gct gtc cta 528 Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu 165 170 175 cag tcc tca gga ctc tac tcc ctc agc agc gtg gtg acc gtg ccc tcc 576 Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser 180 185 190 agc agc ttg ggc acg aag acc tac acc tgc aac gta gat cac aag ccc 624 Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro 195 200 205 agc aac acc aag gtg gac aag aga gtt gag tcc aaa tat ggt ccc cca 672 Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro 210 215 220 tgc cca cca tgc cca gca cct gag ttc ctg ggg gga cca tca gtc ttc 720 Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe 225 230 235 240 ctg ttc ccc cca aaa ccc aag gac act ctc atg atc tcc cgg acc cct 768 Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro 245 250 255 gag gtc acg tgc gtg gtg gtg gac gtg agc cag gaa gac ccc gag gtc 816 Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val 260 265 270 cag ttc aac tgg tac gtg gat ggc gtg gag gtg cat aat gcc aag aca 864 Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr 275 280 285 aag ccg cgg gag gag cag ttc aac agc acg tac cgt gtg gtc agc gtc 912 Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val 290 295 300 ctc acc gtc ctg cac cag gac tgg ctg aac ggc aag gag tac aag tgc 960 Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys 305 310 315 320 aag gtc tcc aac aaa ggc ctc ccg tcc tcc atc gag aaa acc atc tcc 1008 Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser 325 330 335 aaa gcc aaa ggg cag ccc cga gag cca cag gtg tac acc ctg ccc cca 1056 Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro 340 345 350 tcc cag gag gag atg acc aag aac cag gtc agc ctg acc tgc ctg gtc 1104 Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val 355 360 365 aaa ggc ttc tac ccc agc gac atc gcc gtg gag tgg gag agc aat ggg 1152 Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly 370 375 380 cag ccg gag aac aac tac aag acc acg cct ccc gtg ctg gac tcc gac 1200 Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp 385 390 395 400 ggc tcc ttc ttc ctc tac agc agg cta acc gtg gac aag agc agg tgg 1248 Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp 405 410 415 cag gag ggg aat gtc ttc tca tgc tcc gtg atg cat gag gct ctg cac 1296 Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His 420 425 430 aac cac tac aca cag aag agc ctc tcc ctg tct ctg ggt aaa 1338 Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys 435 440 445 <210> 28 <211> 446 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 28 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Asn 20 25 30 Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Tyr Ile Ser Ser Ser Ser Thr Tyr Thr Asp Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Tyr Ser Tyr Gly Arg Asp Asn Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe 115 120 125 Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu 130 135 140 Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp 145 150 155 160 Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu 165 170 175 Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser 180 185 190 Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro 195 200 205 Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro 210 215 220 Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe 225 230 235 240 Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro 245 250 255 Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val 260 265 270 Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu 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Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu Leu 115 120 125 caa gcc aac aag gcc aca ctg gtg tgt ctc ata agt gac ttc tac ccg 432 Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr Pro 130 135 140 gga gcc gtg aca gtg gcc tgg aag gca gat agc agc ccc gtc aag gcg 480 Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys Ala 145 150 155 160 gga gtg gag acc acc aca ccc tcc aaa caa agc aac aac aag tac gcg 528 Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr Ala 165 170 175 gcc agc agc tat ctg agc ctg acg cct gag cag tgg aag tcc cac aga 576 Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His Arg 180 185 190 agc tac agc tgc cag gtc acg cat gaa ggg agc acc gtg gag aag aca 624 Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys Thr 195 200 205 gtg gcc cct aca gaa tgt tca 645 Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser 210 215 <210> 30 <211> 215 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 30 Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser 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gac tta gtg gtt cac tac ggt ttg gac gtc 336 Ala Arg Gln Arg Ile Gly Asp Leu Val Val His Tyr Gly Leu Asp Val 100 105 110 tgg ggc caa ggt aca ctg gtc acc gtg agc tca gct tcc acc aag ggc 384 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly 115 120 125 cca tcc gtc ttc ccc ctg gcg ccc tgc tcc agg agc acc tcc gag agc 432 Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser 130 135 140 aca gcc gcc ctg ggc tgc ctg gtc aag gac tac ttc ccc gaa ccg gtg 480 Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val 145 150 155 160 acg gtg tcg tgg aac tca ggc gcc ctg acc agc ggc gtg cac acc ttc 528 Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe 165 170 175 ccg gct gtc cta cag tcc tca gga ctc tac tcc ctc agc agc gtg gtg 576 Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val 180 185 190 acc gtg ccc tcc agc agc ttg ggc acg aag acc tac acc tgc aac gta 624 Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val 195 200 205 gat cac aag ccc agc aac acc aag gtg gac aag aga gtt gag tcc aaa 672 Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys 210 215 220 tat ggt ccc cca tgc cca cca tgc cca gca cct gag ttc ctg ggg gga 720 Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly 225 230 235 240 cca tca gtc ttc ctg ttc ccc cca aaa ccc aag gac act ctc atg atc 768 Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile 245 250 255 tcc cgg acc cct gag gtc acg tgc gtg gtg gtg gac gtg agc cag gaa 816 Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu 260 265 270 gac ccc gag gtc cag ttc aac tgg tac gtg gat ggc gtg gag gtg cat 864 Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 275 280 285 aat gcc aag aca aag ccg cgg gag gag cag ttc aac agc acg tac cgt 912 Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg 290 295 300 gtg gtc agc gtc ctc acc gtc ctg cac cag gac tgg ctg aac ggc aag 960 Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys 305 310 315 320 gag tac aag tgc aag gtc tcc aac aaa ggc ctc ccg tcc tcc atc gag 1008 Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu 325 330 335 aaa acc atc tcc aaa gcc aaa ggg cag ccc cga gag cca cag gtg tac 1056 Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr 340 345 350 acc ctg ccc cca tcc cag gag gag atg acc aag aac cag gtc agc ctg 1104 Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu 355 360 365 acc tgc ctg gtc aaa ggc ttc tac ccc agc gac atc gcc gtg gag tgg 1152 Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp 370 375 380 gag agc aat ggg cag ccg gag aac aac tac aag acc acg cct ccc gtg 1200 Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val 385 390 395 400 ctg gac tcc gac ggc tcc ttc ttc ctc tac agc agg cta acc gtg gac 1248 Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp 405 410 415 aag agc agg tgg cag gag ggg aat gtc ttc tca tgc tcc gtg atg cat 1296 Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser 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agt act tac aca gac tac gca gac tct gtg 192 Ser Tyr Ile Ser Ser Ser Ser Thr Tyr Thr Asp Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 aag ggc cga ttc acc atc tcc aga gac aat tcc aag aac acg ctg tat 240 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 ctg caa atg aac agc ctg aga gcc gag gac act gcc gtg tat tac tgt 288 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 gcg aga tac agt tat ggc cgc gac aat ttt gac tac tgg ggc caa ggt 336 Ala Arg Tyr Ser Tyr Gly Arg Asp Asn Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 aca ctg gtc acc gtg agc agc ggt gga ggc ggt tca ggc gga ggt gga 384 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly 115 120 125 tcc ggc ggt ggc gga tcg cag tct gtg ctg act cag cca ccc tca gcg 432 Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala 130 135 140 tct ggg acc ccc ggg cag agg gtc acc atc tcc tgc act ggg agc acc 480 Ser Gly Thr Pro Gly Gln Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Thr 145 150 155 160 tcc aac atc ggg gca ggt tat gac aca cac tgg tat cag cag ctc cca 528 Ser Asn Ile Gly Ala Gly Tyr Asp Thr His Trp Tyr Gln Gln Leu Pro 165 170 175 gga acg gcc ccc aaa ctc ctc atc tat ggt aac agc aat cgg ccc tca 576 Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Gly Asn Ser Asn Arg Pro Ser 180 185 190 ggg gtc cct gac cga ttc tct ggc tcc aag tct ggc acc tca gcc tcc 624 Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser 195 200 205 ctg gcc atc agt ggg ctc cgg tcc gag gat gag gct gat tat tac tgc 672 Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys 210 215 220 cag tcc tat gac acc aac ctg agt gtt tgg gtg ttc ggc gga gga acc 720 Gln Ser Tyr Asp Thr Asn Leu Ser Val Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr 225 230 235 240 aag ctg acg gtc cta ggt gaa caa aaa ctc atc tca gaa gag gat ctg 768 Lys Leu Thr Val Leu Gly Glu Gln Lys Leu Ile Ser Glu Glu Asp Leu 245 250 255 tct gga tca gcg gcc gcc cat cat cat cat cat cat 804 Ser Gly Ser Ala Ala Ala His His His His His His 260 265 <210> 34 <211> 268 <212> PRT <213> 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gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt caccttcaga agcaactaca tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtttcatac attagtagta gtagtactta cacagactac 180 gcagactctg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac actgccgtgt attactgtgc gagatacagt 300 tatggccgcg acaattttga ctactggggc caaggtaccc tggtcaccgt gagctca 357 <210> 141 <211> 336 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 141 cagtctgtgc tgactcagcc atcctcagcg tctgggaccc ccgggcagag ggtcaccatc 60 tcctgcactg ggagcacctc caacatcggg gcaggttatg ccacacactg gtatcagcag 120 ctcccaggaa cggcccccaa actcctcatc tatggtaaca gcaatcggcc ctcaggggtc 180 cctgaccgat tctctggctc caagtctggc acctcagcct ccctggccat cagtgggctc 240 cggtccgagg atgaggctga ttattactgc cagtcctatg acaccaacct gagtgtttgg 300 gtgttcggcg gaggaaccaa gctgacggtc ctaggt 336 <210> 142 <211> 357 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 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Construct <400> 146 cagtctgtgc tgactcagcc agcctcagcg tctgggaccc ccgggcagag ggtcaccatc 60 tcctgcactg ggagcacctc caacatcggg gcaggttatg acacacactg gtatcagcag 120 ctcccaggaa cggcccccaa actcctcatc tatggtaaca gcaatcggcc ctcaggggtc 180 cctgaccgat tctctggctc caagtctggc acctcagcct ccctggccat cagtgggctc 240 cggtccgagg atgaggctga ttattactgc cagtcctatg acaccaacct gaacgtttgg 300 gtgttcggcg gaggaaccaa gctgacggtc ctaggt 336 <210> 147 <211> 357 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 147 gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgaggctc 60 tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt agcaactaca tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtttcatac attagtagta gtagtactta cacagactac 180 gcagactctg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac actgccgtgt attactgtgc gagatacagt 300 tatggccgcg acgattttga ctactggggc caaggtaccc tggtcaccgt gagctca 357 <210> 148 <211> 336 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 148 cagtctgtgc tgactcagcc attctcagcg tctgggaccc ccgggcagag ggtcaccatc 60 tcctgcactg ggagcacctc caacatcggg gcaggttttg acacacactg gtatcagcag 120 ctcccaggaa cggcccccaa actcctcatc tatggtaaca gcaatcggcc ctcaggggtc 180 cctgaccgat tctctggctc caagtctggc accacagcct ccctggccat cagtgggctc 240 cggtccgagg atgaggctga ttattactgc cagtcctatg acaccaacct gagtgtttgg 300 gtgttcggcg gaggaaccaa gctgacggtc ctaggt 336 <210> 149 <211> 357 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 149 gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt agcaactaca tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtttcatac attagtagta gtagtactta cacagactac 180 gcagactctg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac actgccgtgt attactgtgc gagatacagt 300 tatggccgcg acagttttga ctactggggc caaggtaccc tggtcaccgt gagctca 357 <210> 150 <211> 336 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> 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Construct <400> 152 gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt agcaactaca tgagctgggt ccgccaggcc 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtttcatac attagtagta gtagtactta cacagactac 180 gctgactctg tgaagggccg attcaccatt tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agctgaggac actgccgtgt attactgtgc tagatacagt 300 tatggccgcg acaattttga ctactggggc caaggtaccc tggtcaccgt gagctca 357 <210> 153 <211> 336 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 153 cagtctgtgc tgactcagcc attctcagcg tctgggaccc ccgggcagag ggtcaccatc 60 tcctgcactg ggagcacctc caacatcggg gcaggttatg acacacactg gtatcagcag 120 ctcccaggaa cggcccccaa actcctcatc tatggtaaca gcaatcggcc ctcaggggtc 180 cctgaccgat tctctggctc caagtctggc acctcagcct ccctggccat cagtgggctc 240 cggtccgagg atgaggctga ttattactgc cagtcctatg acaccaacct gagtgtttgg 300 gtgttcggcg gaggaaccaa gctgacggtc ctaggt 336 <210> 154 <211> 357 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 154 gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt agcaactaca tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtttcatac attagtagta gtagcactta cacagactac 180 gcagactctg tgaagggccg attcaccatc tccagggaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac actgccgtgt attactgtgc gagatacagt 300 tatggccgcg acacttttga ctactggggc caaggtaccc tggtcaccgt gagctca 357 <210> 155 <211> 336 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 155 cagtctgtgc tgactcagcc accctcagcg tctgggaccc ccgggcagag ggtcaccatc 60 tcctgcactg ggagcacctc caacatcggg gcaggttatg acacacactg gtatcagcag 120 ctcccaggaa cggcccccaa actcctcatc tatggtaaca gcaatcggcc ctcaggggtc 180 cctgaccgat tctctggctc caagtctggc acctcagcct ccctggccat cagtgggctc 240 cggtccgagg atgaggctga ttattactgc cagtcctatg acaccaacct gagtggttgg 300 gtgttcggcg gaggaaccaa gctgacggtc ctaggt 336 <210> 156 <211> 357 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> 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Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 160 gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcgg cctctggatt caccttcagt agcaactaca tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggccggagtg ggtttcatac attagtagta gtagtactta cgcagactac 180 gcagactctg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac actgccgtgt attactgtgc gagatacagt 300 tatggccgcg acaattttga ctactggggc caaggtaccc tggtcaccgt gagctca 357 <210> 161 <211> 31 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Primer <400> 161 ggtggaattc ccaccatgta caggatgcaa c 31 <210> 162 <211> 35 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Primer <400> 162 tgcactcgag acggtgacca gtgtaccttg gcccc 35 <210> 163 <211> 651 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> CDS <222> (1)..(651) <400> 163 cag tct gtg ctg act cag cca ccc tca gcg tct ggg acc ccc ggg cag 48 Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln 1 5 10 15 agg gtc acc 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Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys 210 215 220 act cac aca tgc cca ccg tgc cca gca cct gaa ctc ctg ggg gga ccg 720 Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro 225 230 235 240 tca gtc ttc ctc ttc ccc cca aaa ccc aag gac acc ctc atg atc tcc 768 Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser 245 250 255 cgg acc cct gag gtc aca tgc gtg gtg gtg gac gtg agc cac gaa gac 816 Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp 260 265 270 cct gag gtc aag ttc aac tgg tac gtg gac ggc gtg gag gtg cat aat 864 Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn 275 280 285 gcc aag aca aag ccg cgg gag gag cag tac aac agc acg tac cgt gtg 912 Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val 290 295 300 gtc agc gtc ctc acc gtc ctg cac cag gac tgg ctg aat ggc aag gag 960 Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu 305 310 315 320 tac aag tgc aag gtc tcc aac aaa gcc ctc cca gcc ccc atc gag aaa 1008 Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys 325 330 335 acc atc tcc aaa gcc aaa ggg cag ccc cga gaa cca cag gtg tac acc 1056 Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr 340 345 350 ctg ccc cca tcc cgg gag gag atg acc aag aac cag gtc agc ctg acc 1104 Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr 355 360 365 tgc ctg gtc aaa ggc ttc tat ccc agc gac atc gcc gtg gag tgg gag 1152 Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu 370 375 380 agc aat ggg cag ccg gag aac aac tac aag acc acg cct ccc gtg ctg 1200 Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu 385 390 395 400 gac tcc gac ggc tcc ttc ttc ctc tac agc aag ctc acc gtg gac aag 1248 Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys 405 410 415 agc agg tgg cag cag ggg aac gtc ttc tca tgc tcc gtg atg cat gag 1296 Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu 420 425 430 gct ctg cac aac cac tac acg cag aag agc ctc tcc ctg tct ccg ggt 1344 Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 435 440 445 aaa 1347 Lys <210> 166 <211> 449 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 166 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Asn 20 25 30 Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Tyr Ile Ser Ser Ser Ser Thr Tyr Thr Asp Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Tyr Ser Tyr Gly Arg Asp Asn Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe 115 120 125 Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu 130 135 140 Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp 145 150 155 160 Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu 165 170 175 Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser 180 185 190 Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro 195 200 205 Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys 210 215 220 Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro 225 230 235 240 Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser 245 250 255 Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp 260 265 270 Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn 275 280 285 Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val 290 295 300 Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu 305 310 315 320 Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys 325 330 335 Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr 340 345 350 Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr 355 360 365 Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu 370 375 380 Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu 385 390 395 400 Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys 405 410 415 Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu 420 425 430 Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 435 440 445 Lys

Claims (37)

  1. 인간 CD81에 대한 항체로서, 서열번호 22에 기재된 아미노산 서열 중 80번째 아미노산부터 175번째 아미노산 영역에 결합하는 항체.
  2. 제1항에 있어서, 결합하는 아미노산 영역이 113번째 아미노산부터 175번째 아미노산 영역인 항체.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 하기 (1)∼(13) 중 어느 것에 기재된 인간 CD81 변이체에 대한 결합 친화성이, 서열번호 22에 기재된 아미노산 서열을 갖는 천연의 인간 CD81에 대한 결합 친화성을 100%로 할 때, 40% 미만인 항체:
    (1) 서열번호 22에 기재된 아미노산 서열을 갖는 천연의 인간 CD81의 127번째 티로신을 페닐알라닌 또는 트립토판으로 치환한 CD81 변이체
    (2) 서열번호 22에 기재된 아미노산 서열을 갖는 천연의 인간 CD81의 130번째 알라닌을 트레오닌 또는 발린으로 치환한 CD81 변이체
    (3) 서열번호 22에 기재된 아미노산 서열을 갖는 천연의 인간 CD81의 135번째 발린을 알라닌 또는 류신으로 치환한 CD81 변이체
    (4) 서열번호 22에 기재된 아미노산 서열을 갖는 천연의 인간 CD81의 137번째 아스파라긴산을 알라닌 또는 글루타민산으로 치환한 CD81 변이체
    (5) 서열번호 22에 기재된 아미노산 서열을 갖는 천연의 인간 CD81의 143번째 알라닌을 트레오닌 또는 발린으로 치환한 CD81 변이체
    (6) 서열번호 22에 기재된 아미노산 서열을 갖는 천연의 인간 CD81의 151번째 히스티딘을 알라닌 또는 아르기닌으로 치환한 CD81 변이체
    (7) 서열번호 22에 기재된 아미노산 서열을 갖는 천연의 인간 CD81의 154번째 류신을 알라닌 또는 이소류신으로 치환한 CD81 변이체
    (8) 서열번호 22에 기재된 아미노산 서열을 갖는 천연의 인간 CD81의 158번째 글리신을 알라닌 또는 세린으로 치환한 CD81 변이체
    (9) 서열번호 22에 기재된 아미노산 서열을 갖는 천연의 인간 CD81의 164번째 알라닌을 트레오닌 또는 발린으로 치환한 CD81 변이체
    (10) 서열번호 22에 기재된 아미노산 서열을 갖는 천연의 인간 CD81의 168번째 세린을 알라닌 또는 트레오닌으로 치환한 CD81 변이체
    (11) 서열번호 22에 기재된 아미노산 서열을 갖는 천연의 인간 CD81의 169번째 발린을 알라닌 또는 류신으로 치환한 CD81 변이체
    (12) 서열번호 22에 기재된 아미노산 서열을 갖는 천연의 인간 CD81의 170번째 류신을 알라닌 또는 이소류신으로 치환한 CD81 변이체
    (13) 서열번호 22에 기재된 아미노산 서열을 갖는 천연의 인간 CD81의 172번째 아스파라긴을 알라닌 또는 글루타민으로 치환한 CD81 변이체.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 (9) 및 (11)에 기재된 인간 CD81 변이체에 대한 결합 친화성이, 서열번호 22에 기재된 아미노산 서열을 갖는 천연의 인간 CD81에 대한 결합 친화성을 100%로 할 때, 40% 미만인 항체.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 기재된 항체와 동등한 결합 특성을 갖거나, 혹은, 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 기재된 항체와 경합적으로, 서열번호 22에 기재된 아미노산 서열을 갖는 천연의 인간 CD81에 결합하는 항체.
  6. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 기재된 항체와 경합적으로, 서열번호 22에 기재된 아미노산 서열을 갖는 천연의 인간 CD81에 결합하며, 또한 T 세포 유주 억제 작용을 갖는 항체.
  7. 하기 군 1∼24 중, 어느 하나의 군에 기재된 6종의 CDR을 전부 포함하는, 인간 CD81에 대한 항체:
    군 1
    (a-1) 서열번호 1로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
    (b-1) 서열번호 2로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
    (c-1) 서열번호 3으로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
    (d-1) 서열번호 4로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
    (e-1) 서열번호 5로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR, 및
    (f-1) 서열번호 6으로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR
    군 2
    (a-2) 서열번호 1로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
    (b-2) 서열번호 2로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
    (c-2) 서열번호 37로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
    (d-2) 서열번호 4로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
    (e-2) 서열번호 5로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR, 및
    (f-2) 서열번호 6으로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR
    군 3
    (a-3) 서열번호 1로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
    (b-3) 서열번호 2로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
    (c-3) 서열번호 40으로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
    (d-3) 서열번호 4로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
    (e-3) 서열번호 5로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR, 및
    (f-3) 서열번호 6으로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR
    군 4
    (a-4) 서열번호 1로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
    (b-4) 서열번호 2로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
    (c-4) 서열번호 43으로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
    (d-4) 서열번호 4로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
    (e-4) 서열번호 5로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR, 및
    (f-4) 서열번호 6으로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR
    군 5
    (a-5) 서열번호 1로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
    (b-5) 서열번호 2로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
    (c-5) 서열번호 46으로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
    (d-5) 서열번호 4로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
    (e-5) 서열번호 5로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR, 및
    (f-5) 서열번호 6으로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR
    군 6
    (a-6) 서열번호 1로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
    (b-6) 서열번호 2로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
    (c-6) 서열번호 49로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
    (d-6) 서열번호 4로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
    (e-6) 서열번호 5로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR, 및
    (f-6) 서열번호 6으로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR
    군 7
    (a-7) 서열번호 1로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
    (b-7) 서열번호 2로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
    (c-7) 서열번호 52로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
    (d-7) 서열번호 4로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
    (e-7) 서열번호 5로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR, 및
    (f-7) 서열번호 6으로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR
    군 8
    (a-8) 서열번호 1로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
    (b-8) 서열번호 2로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
    (c-8) 서열번호 43으로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
    (d-8) 서열번호 4로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
    (e-8) 서열번호 5로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR, 및
    (f-8) 서열번호 55로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR
    군 9
    (a-9) 서열번호 60으로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
    (b-9) 서열번호 2로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
    (c-9) 서열번호 3으로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
    (d-9) 서열번호 4로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
    (e-9) 서열번호 5로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR, 및
    (f-9) 서열번호 61로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR
    군 10
    (a-10) 서열번호 1로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
    (b-10) 서열번호 2로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
    (c-10) 서열번호 66으로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
    (d-10) 서열번호 4로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
    (e-10) 서열번호 5로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR, 및
    (f-10) 서열번호 6으로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR
    군 11
    (a-11) 서열번호 1로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
    (b-11) 서열번호 2로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
    (c-11) 서열번호 3으로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
    (d-11) 서열번호 4로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
    (e-11) 서열번호 69로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR, 및
    (f-11) 서열번호 70으로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR
    군 12
    (a-12) 서열번호 60으로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
    (b-12) 서열번호 2로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
    (c-12) 서열번호 66으로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
    (d-12) 서열번호 4로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
    (e-12) 서열번호 5로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR, 및
    (f-12) 서열번호 6으로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR
    군 13
    (a-13) 서열번호 1로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
    (b-13) 서열번호 2로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
    (c-13) 서열번호 3으로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
    (d-13) 서열번호 77로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
    (e-13) 서열번호 5로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR, 및
    (f-13) 서열번호 6으로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR
    군 14
    (a-14) 서열번호 80으로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
    (b-14) 서열번호 2로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
    (c-14) 서열번호 3으로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
    (d-14) 서열번호 4로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
    (e-14) 서열번호 81로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR, 및
    (f-14) 서열번호 6으로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR
    군 15
    (a-15) 서열번호 1로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
    (b-15) 서열번호 2로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
    (c-15) 서열번호 66으로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
    (d-15) 서열번호 4로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
    (e-15) 서열번호 5로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR, 및
    (f-15) 서열번호 6으로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR
    군 16
    (a-16) 서열번호 1로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
    (b-16) 서열번호 2로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
    (c-16) 서열번호 90으로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
    (d-16) 서열번호 4로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
    (e-16) 서열번호 5로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR, 및
    (f-16) 서열번호 6으로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR
    군 17
    (a-17) 서열번호 1로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
    (b-17) 서열번호 2로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
    (c-17) 서열번호 52로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
    (d-17) 서열번호 4로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
    (e-17) 서열번호 5로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR, 및
    (f-17) 서열번호 93으로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR
    군 18
    (a-18) 서열번호 98로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
    (b-18) 서열번호 2로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
    (c-18) 서열번호 3으로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
    (d-18) 서열번호 4로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
    (e-18) 서열번호 5로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR, 및
    (f-18) 서열번호 99로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR
    군 19
    (a-19) 서열번호 60으로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
    (b-19) 서열번호 2로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
    (c-19) 서열번호 3으로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
    (d-19) 서열번호 4로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
    (e-19) 서열번호 5로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR, 및
    (f-19) 서열번호 99로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR
    군 20
    (a-20) 서열번호 1로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
    (b-20) 서열번호 2로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
    (c-20) 서열번호 90으로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
    (d-20) 서열번호 4로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
    (e-20) 서열번호 5로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR, 및
    (f-20) 서열번호 6으로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR
    군 21
    (a-21) 서열번호 1로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
    (b-21) 서열번호 2로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
    (c-21) 서열번호 3으로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
    (d-21) 서열번호 4로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
    (e-21) 서열번호 5로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR, 및
    (f-21) 서열번호 55로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR
    군 22
    (a-22) 서열번호 1로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
    (b-22) 서열번호 2로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
    (c-22) 서열번호 66으로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
    (d-22) 서열번호 110으로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
    (e-22) 서열번호 5로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR, 및
    (f-22) 서열번호 6으로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR
    군 23
    (a-23) 서열번호 1로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
    (b-23) 서열번호 2로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
    (c-23) 서열번호 3으로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
    (d-23) 서열번호 4로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
    (e-23) 서열번호 5로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR, 및
    (f-23) 서열번호 115로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR
    군 24
    (a-24) 서열번호 1로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
    (b-24) 서열번호 2로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
    (c-24) 서열번호 90으로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
    (d-24) 서열번호 4로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
    (e-24) 서열번호 120으로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR, 및
    (f-24) 서열번호 6으로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR.
  8. 제7항에 있어서, 하기 군 25∼48 중, 어느 하나의 군에 기재된 경쇄 가변 영역 및 중쇄 가변 영역의 조합을 포함하는 항체.
    군 25
    (g-1) 상기 (a-1)∼(c-1)을 포함하는 경쇄 가변 영역 및
    (h-1) 상기 (d-1)∼(f-1)을 포함하는 중쇄 가변 영역
    군 26
    (g-2) 상기 (a-2)∼(c-2)를 포함하는 경쇄 가변 영역 및
    (h-2) 상기 (d-2)∼(f-2)를 포함하는 중쇄 가변 영역
    군 27
    (g-3) 상기 (a-3)∼(c-3)을 포함하는 경쇄 가변 영역 및
    (h-3) 상기 (d-3)∼(f-3)을 포함하는 중쇄 가변 영역
    군 28
    (g-4) 상기 (a-4)∼(c-4)를 포함하는 경쇄 가변 영역 및
    (h-4) 상기 (d-4)∼(f-4)를 포함하는 중쇄 가변 영역
    군 29
    (g-5) 상기 (a-5)∼(c-5)를 포함하는 경쇄 가변 영역 및
    (h-5) 상기 (d-5)∼(f-5)를 포함하는 중쇄 가변 영역
    군 30
    (g-6) 상기 (a-6)∼(c-6)을 포함하는 경쇄 가변 영역 및
    (h-6) 상기 (d-6)∼(f-6)을 포함하는 중쇄 가변 영역
    군 31
    (g-7) 상기 (a-7)∼(c-7)을 포함하는 경쇄 가변 영역 및
    (h-7) 상기 (d-7)∼(f-7)을 포함하는 중쇄 가변 영역
    군 32
    (g-8) 상기 (a-8)∼(c-8)을 포함하는 경쇄 가변 영역 및
    (h-8) 상기 (d-8)∼(f-8)을 포함하는 중쇄 가변 영역
    군 33
    (g-9) 상기 (a-9)∼(c-9)를 포함하는 경쇄 가변 영역 및
    (h-9) 상기 (d-9)∼(f-9)를 포함하는 중쇄 가변 영역
    군 34
    (g-10) 상기 (a-10)∼(c-10)을 포함하는 경쇄 가변 영역 및
    (h-10) 상기 (d-10)∼(f-10)을 포함하는 중쇄 가변 영역
    군 35
    (g-11) 상기 (a-11)∼(c-11)을 포함하는 경쇄 가변 영역 및
    (h-11) 상기 (d-11)∼(f-11)을 포함하는 중쇄 가변 영역
    군 36
    (g-12) 상기 (a-12)∼(c-12)를 포함하는 경쇄 가변 영역 및
    (h-12) 상기 (d-12)∼(f-12)를 포함하는 중쇄 가변 영역
    군 37
    (g-13) 상기 (a-13)∼(c-13)을 포함하는 경쇄 가변 영역 및
    (h-13) 상기 (d-13)∼(f-13)을 포함하는 중쇄 가변 영역
    군 38
    (g-14) 상기 (a-14)∼(c-14)를 포함하는 경쇄 가변 영역 및
    (h-14) 상기 (d-14)∼(f-14)를 포함하는 중쇄 가변 영역
    군 39
    (g-15) 상기 (a-15)∼(c-15)를 포함하는 경쇄 가변 영역 및
    (h-15) 상기 (d-15)∼(f-15)를 포함하는 중쇄 가변 영역
    군 40
    (g-16) 상기 (a-16)∼(c-16)을 포함하는 경쇄 가변 영역 및
    (h-16) 상기 (d-16)∼(f-16)을 포함하는 중쇄 가변 영역
    군 41
    (g-17) 상기 (a-17)∼(c-17)을 포함하는 경쇄 가변 영역 및
    (h-17) 상기 (d-17)∼(f-17)을 포함하는 중쇄 가변 영역
    군 42
    (g-18) 상기 (a-18)∼(c-18)을 포함하는 경쇄 가변 영역 및
    (h-18) 상기 (d-18)∼(f-18)을 포함하는 중쇄 가변 영역
    군 43
    (g-19) 상기 (a-19)∼(c-19)를 포함하는 경쇄 가변 영역 및
    (h-19) 상기 (d-19)∼(f-19)를 포함하는 중쇄 가변 영역
    군 44
    (g-20) 상기 (a-20)∼(c-20)을 포함하는 경쇄 가변 영역 및
    (h-20) 상기 (d-20)∼(f-20)을 포함하는 중쇄 가변 영역
    군 45
    (g-21) 상기 (a-21)∼(c-21)을 포함하는 경쇄 가변 영역 및
    (h-21) 상기 (d-21)∼(f-21)을 포함하는 중쇄 가변 영역
    군 46
    (g-22) 상기 (a-22)∼(c-22)를 포함하는 경쇄 가변 영역 및
    (h-22) 상기 (d-22)∼(f-22)를 포함하는 중쇄 가변 영역
    군 47
    (g-23) 상기 (a-23)∼(c-23)을 포함하는 경쇄 가변 영역 및
    (h-23) 상기 (d-23)∼(f-23)을 포함하는 중쇄 가변 영역
    군 48
    (g-24) 상기 (a-24)∼(c-24)를 포함하는 경쇄 가변 영역 및
    (h-24) 상기 (d-24)∼(f-24)를 포함하는 중쇄 가변 영역.
  9. 제8항에 있어서, 하기 군 49∼72 중, 어느 하나의 군에 기재된 경쇄 가변 영역 및 중쇄 가변 영역의 조합을 포함하는 항체.
    군 49
    (i-1) 서열번호 8에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 및
    (j-1) 서열번호 10에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역
    군 50
    (i-2) 서열번호 38에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 및
    (j-2) 서열번호 10에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역
    군 51
    (i-3) 서열번호 41에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 및
    (j-3) 서열번호 10에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역
    군 52
    (i-4) 서열번호 44에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 및
    (j-4) 서열번호 10에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역
    군 53
    (i-5) 서열번호 47에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 및
    (j-5) 서열번호 10에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역
    군 54
    (i-6) 서열번호 50에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 및
    (j-6) 서열번호 10에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역
    군 55
    (i-7) 서열번호 53에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 및
    (j-7) 서열번호 10에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역
    군 56
    (i-8) 서열번호 56에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 및
    (j-8) 서열번호 57에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역
    군 57
    (i-9) 서열번호 62에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 및
    (j-9) 서열번호 63에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역
    군 58
    (i-10) 서열번호 67에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 및
    (j-10) 서열번호 10에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역
    군 59
    (i-11) 서열번호 71에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 및
    (j-11) 서열번호 72에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역
    군 60
    (i-12) 서열번호 75에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 및
    (j-12) 서열번호 10에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역
    군 61
    (i-13) 서열번호 8에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 및
    (j-13) 서열번호 78에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역
    군 62
    (i-14) 서열번호 82에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 및
    (j-14) 서열번호 83에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역
    군 63
    (i-15) 서열번호 86에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 및
    (j-15) 서열번호 87에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역
    군 64
    (i-16) 서열번호 91에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 및
    (j-16) 서열번호 10에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역
    군 65
    (i-17) 서열번호 94에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 및
    (j-17) 서열번호 95에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역
    군 66
    (i-18) 서열번호 100에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 및
    (j-18) 서열번호 101에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역
    군 67
    (i-19) 서열번호 104에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 및
    (j-19) 서열번호 101에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역
    군 68
    (i-20) 서열번호 106에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 및
    (j-20) 서열번호 10에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역
    군 69
    (i-21) 서열번호 108에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 및
    (j-21) 서열번호 57에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역
    군 70
    (i-22) 서열번호 111에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 및
    (j-22) 서열번호 112에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역
    군 71
    (i-23) 서열번호 116에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 및
    (j-23) 서열번호 117에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역
    군 72
    (i-24) 서열번호 121에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 및
    (j-24) 서열번호 122에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역.
  10. 제8항 또는 제9항에 있어서, 하기 군 73∼96 중, 어느 하나의 군에 기재된 경쇄 및 중쇄의 조합을 포함하는 항체.
    군 73
    (k-1) 서열번호 26에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 및
    (l-1) 서열번호 28에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄
    군 74
    (k-2) 서열번호 39에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 및
    (l-2) 서열번호 28에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄
    군 75
    (k-3) 서열번호 42에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 및
    (l-3) 서열번호 28에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄
    군 76
    (k-4) 서열번호 45에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 및
    (l-4) 서열번호 28에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄
    군 77
    (k-5) 서열번호 48에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 및
    (l-5) 서열번호 28에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄
    군 78
    (k-6) 서열번호 51에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 및
    (l-6) 서열번호 28에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄
    군 79
    (k-7) 서열번호 54에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 및
    (l-7) 서열번호 28에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄
    군 80
    (k-8) 서열번호 58에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 및
    (l-8) 서열번호 59에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄
    군 81
    (k-9) 서열번호 64에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 및
    (l-9) 서열번호 65에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄
    군 82
    (k-10) 서열번호 68에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 및
    (l-10) 서열번호 28에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄
    군 83
    (k-11) 서열번호 73에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 및
    (l-11) 서열번호 74에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄
    군 84
    (k-12) 서열번호 76에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 및
    (l-12) 서열번호 28에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄
    군 85
    (k-13) 서열번호 26에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 및
    (l-13) 서열번호 79에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄
    군 86
    (k-14) 서열번호 84에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 및
    (l-14) 서열번호 85에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄
    군 87
    (k-15) 서열번호 88에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 및
    (l-15) 서열번호 89에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄
    군 88
    (k-16) 서열번호 92에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 및
    (l-16) 서열번호 28에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄
    군 89
    (k-17) 서열번호 96에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 및
    (l-17) 서열번호 97에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄
    군 90
    (k-18) 서열번호 102에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 및
    (l-18) 서열번호 103에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄
    군 91
    (k-19) 서열번호 105에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 및
    (l-19) 서열번호 103에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄
    군 92
    (k-20) 서열번호 107에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 및
    (l-20) 서열번호 28에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄
    군 93
    (k-21) 서열번호 109에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 및
    (l-21) 서열번호 59에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄
    군 94
    (k-22) 서열번호 113에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 및
    (l-22) 서열번호 114에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄
    군 95
    (k-23) 서열번호 118에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 및
    (l-23) 서열번호 119에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄
    군 96
    (k-24) 서열번호 123에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 및
    (l-24) 서열번호 124에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄.
  11. 제7항 내지 제10항 중 어느 한 항에 기재된 항체와 경합적으로, 서열번호 22에 기재된 아미노산 서열을 갖는 천연의 인간 CD81에 결합하는 항체.
  12. 제11항에 있어서, T 세포 유주 억제 작용을 갖는 항체.
  13. 제7항에 기재된 군 1∼군 24 중 어느 하나의 군에 기재된 6종으로부터 선택되는 적어도 하나의 CDR을 포함하는 항체로서, 상기 군의 6종의 CDR을 전부 포함하는 인간 CD81에 대한 항체와 경합적으로, 서열번호 22에 기재된 아미노산 서열을 갖는 천연의 인간 CD81에 결합하는, 인간 CD81에 대한 항체.
  14. 제7항에 기재된 어느 하나의 항체와 90% 이상의 상동성을 갖고, 상기 항체와 경합적으로, 서열번호 22에 기재된 아미노산 서열을 갖는 천연의 인간 CD81에 결합하는, 인간 CD81에 대한 항체.
  15. 하기 CDR을 포함하는 인간 CD81에 대한 항체:
    (a-25) 서열번호 11로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
    (b-25) 서열번호 12로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
    (c-25) 서열번호 13으로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
    (d-25) 서열번호 14로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR,
    (e-25) 서열번호 15로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR, 및
    (f-25) 서열번호 16으로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 CDR.
  16. 제15항에 있어서, 하기 가변 영역을 포함하는 항체:
    (g-25) 상기 (a-25)∼(c-25)를 포함하는 경쇄 가변 영역 및
    (h-25) 상기 (d-25)∼(f-25)를 포함하는 중쇄 가변 영역.
  17. 제16항에 있어서, 하기 가변 영역을 포함하는 항체:
    (i-25) 서열번호 18에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 및
    (j-25) 서열번호 20에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역.
  18. 제16항 또는 제17항에 있어서, 하기 경쇄 및 중쇄를 포함하는 항체.
    (k-25) 서열번호 30에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 및
    (l-25) 서열번호 32에 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄
  19. 제15항 내지 제18항 중 어느 한 항에 기재된 항체와 경합적으로, 서열번호 22에 기재된 아미노산 서열을 갖는 천연의 인간 CD81에 결합하는 항체.
  20. 제19항에 있어서, T 세포 유주 억제 작용을 갖는 항체.
  21. 제15항에 기재된 적어도 하나의 CDR을 포함하는 항체로서, 제15항에 기재된 항체와 경합적으로, 서열번호 22에 기재된 아미노산 서열을 갖는 천연의 인간 CD81에 결합하는, 인간 CD81에 대한 항체.
  22. 제15항에 기재된 항체와 90% 이상의 상동성을 갖고, 상기 항체와 경합적으로, 서열번호 22에 기재된 아미노산 서열을 갖는 천연의 인간 CD81에 결합하는, 인간 CD81에 대한 항체.
  23. 제1항 내지 제6항, 제11항 내지 제14항 및 제19항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, 인간화 항체 혹은 인간 항체인 항체.
  24. 제7항 내지 제10항 및 제15항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 인간화 항체 혹은 인간 항체인 항체.
  25. 제1항 내지 제24항 중 어느 한 항에 기재된 항체의 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 코드하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드.
  26. 제1항 내지 제6항, 제11항 내지 제14항 및 제19항 내지 제23항 중 어느 한 항에 기재된 항체의 중쇄 가변 영역을 코드하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드와, 제1항 내지 제6항, 제11항 내지 제14항 및 제19항 내지 제23항 중 어느 한 항에 기재된 항체의 경쇄 가변 영역을 코드하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드의 조합.
  27. 제7항 내지 제10항, 제15항 내지 제18항 및 제24항 중 어느 한 항에 기재된 항체의 중쇄 가변 영역을 코드하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드와, 제7항 내지 제10항, 제15항 내지 제18항 및 제24항 중 어느 한 항에 기재된, 중쇄 가변 영역에 대응하는 경쇄 가변 영역을 코드하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드의 조합.
  28. 제1항 내지 제24항 중 어느 한 항에 기재된 항체의 중쇄 및 경쇄를 코드하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드.
  29. 제1항 내지 제6항, 제11항 내지 제14항 및 제19항 내지 제23항 중 어느 한 항에 기재된 항체의 중쇄를 코드하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드와, 제1항 내지 제6항, 제11항 내지 제14항 및 제19항 내지 제23항 중 어느 한 항에 기재된 항체의 경쇄를 코드하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드의 조합.
  30. 제7항 내지 제10항, 제15항 내지 제18항 및 제24항 중 어느 한 항에 기재된 항체의 중쇄를 코드하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드와, 제7항 내지 제10항, 제15항 내지 제18항 및 제24항 중 어느 한 항에 기재된, 중쇄에 대응하는 경쇄를 코드하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드의 조합.
  31. 제25항 또는 제28항에 기재된 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터.
  32. 제31항에 기재된 발현 벡터에 의해 형질 전환한 재조합 세포.
  33. 제1항 내지 제6항, 제11항 내지 제14항 및 제19항 내지 제22항 중 어느 한 항에 기재된 항체의 중쇄를 코드하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터와, 제1항 내지 제6항, 제11항 내지 제14항 및 제19항 내지 제22항 중 어느 한 항에 기재된 항체의 경쇄를 코드하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터에 의해 형질 전환한 재조합 세포.
  34. 제7항 내지 제10항, 제15항 내지 제18항 및 제24항 중 어느 한 항에 기재된 항체의 중쇄를 코드하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터와, 제7항 내지 제10항, 제15항 내지 제18항 및 제24항 중 어느 한 항에 기재된, 중쇄에 대응하는 경쇄를 코드하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터에 의해 형질 전환한 재조합 세포.
  35. 제32항 내지 제34항 중 어느 한 항에 기재된 재조합 세포를 배양하고, 얻어진 배양 상청으로부터 항체를 회수하는 것으로 이루어지는, 항인간 CD81 항체의 제조 방법.
  36. 제1항 내지 제24항 중 어느 한 항에 기재된 항체를 함유하는 의약 조성물.
  37. 제1항 내지 제24항 중 어느 한 항에 기재된 항체를 유효 성분으로 하는, 염증성 장질환, 다발성 경화증, 건선 또는 혈액암의 예방, 개선 또는 치료제.
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