KR20130086820A - 탄시논을 유효성분으로 함유하는 자연살해세포 분화 또는 활성 증진용 조성물 - Google Patents

탄시논을 유효성분으로 함유하는 자연살해세포 분화 또는 활성 증진용 조성물 Download PDF

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Abstract

본 발명은 탄시논(tanshinone)을 유효성분으로 함유하는 자연살해세포(natural killer cell, NK 세포) 분화 또는 활성 증진용 조성물에 관한 것으로, 보다 구체적으로 크립토탄시논(cryptotanshinone) 또는 탄시논 ⅡA(tanshinone ⅡA)가 조혈줄기세포에서 NK 세포의 분화를 유도 및 촉진시키며 NK 세포 분화와 관련된 유전자인 ID2의 발현을 증가시키고, 암세포인 YAC-1에 대하여 세포독성을 지니며 IFN-γ의 생성 또한 증가시켜 NK 세포의 활성을 증진시키므로, NK 세포 분화 또는 활성 증진용 조성물의 유효성분으로 유용하게 사용될 수 있다.

Description

탄시논을 유효성분으로 함유하는 자연살해세포 분화 또는 활성 증진용 조성물{A composition for differentiating natural killer cell or enhancing natural killer cell activation containing tanshinone as active ingredient}
본 발명은 탄시논(tanshinone)을 유효성분으로 함유하는 자연살해세포 분화 또는 활성 증진용 조성물, 및 조혈줄기세포로부터 자연살해세포로의 분화를 유도하는 방법에 관한 것이다.
NK 세포(natural killer cell, 이하 NK 세포라 약칭함)는 암이나 바이러스 감염이 된 세포를 파괴함으로서 선천성 면역반응에서 중요한 역할을 수행하는 면역세포이다(J. Immunol., 136: 3910-3915, 1986; Melanoma Res., 13: 349-356, 2003; Lung Cancer, 35: 23-28, 2002). 또한, 자극(stimulation)을 통해 사이토카인(cytokine)을 분비하여 다른 면역 체계(immune system)를 동원(recruiting)함으로서 간접적인 면역반응을 수행하기도 한다. 이러한 NK 세포의 파괴능은 림포카인 활성세포(lymphokine activated killer cell, LAK) 및 종양침윤림프구(tumor infiltration lymphocytes, TIL)를 이용하여 고형암(solid tumor) 치료에 이용하거나, 공여자 임파구 주입(donor lymphocyte infusion)을 통한 면역치료법(Tilden. A. B. et al., J. Immunol., 136: 3910-3915, 1986; Bordignon C, et al., Hematologia 84: 1110-1149, 1999)을 수행함으로써, 골수이식이나 장기 이식시 발생하는 거부반응을 방지하기 위한 새로운 세포치료 요법으로 응용이 시도되고 있다. 또한, NK 세포의 분화와 활성의 결함은 유방암(Konjevic G, et al., Breast Cancer Res. Treat., 66: 255-263, 2001), 흑색종암(Ryuke Y, et al., Melanoma Res., 13: 349-356, 2003), 폐암(Villegas FR, et al., Lung Cancer, 35: 23-28, 2002) 등 다양한 암 질환과 관련되어 있음이 보고되어 상기와 같은 질환들을 치료하기 위해 NK 세포 치료법이 대두되고 있다.
또한, NK 세포는 골수(bone marrow)의 조혈줄기세포 (hematopoietic stem cell, HSC)로부터 유래된다고 알려져 있다. 생체 외(In vitro) 배양의 방법으로는 조혈줄기세포를 분리하여 사이토카인을 처리하여 배양함으로서 NK 세포로 분화시키는 방법들이 보고되었다(Immunity 3: 459-473, 1995; Blood 87:2632-2640, 1996; Eur J Immunol. 33:3439-3447, 2003; Blood 108: 3824-3833, 2006). 즉, 조혈줄기세포에 Flt-3L, IL-7, SCF 및 IL-15 등을 첨가하여 일정기간을 배양함으로서 일반적인 NK 세포로 분화시킬 수 있다. 생체 내(In vivo) NK 세포는 골수에서 분화 과정을 거치며 골수의 미세 환경은 NK 세포의 분화에 필수적이다. NK 세포는 분화 과정을 거침에 따라 다양한 표면 분자들을 순차적으로 발현하는 것을 특징으로 한다. 마우스 모델(model)에서 NK 세포는 분화 과정 중에 CD122, NK1.1, NKG2 패밀리(family), Ly49 패밀리, DX5(CD49b) 및 CD43을 순차적으로 발현한다(Nat Immunol, 3: 523-528, 2008).
IL-15는 NK 세포 분화에 관여하고, 이것은 IL-15 생성에 요구되는 전사인자 인터페론(transcription factor interferon, IFN)-조절 인자 1이 결핍된 쥐에서는 NK 세포가 결핍되며(Kouetsu et al., Nature 391, 700-703, 1998), IL-15 또는 IL-15Ra가 결핍된 쥐에서는 NK 세포가 발견되지 않는다는 것에 의해 알게 되었다. 이로써 IL-15는 NK 세포에서 발현되는 IL-15 수용체를 통해서 NK 세포의 성장과 분화를 직접적으로 증진시킨다는 것이 보고되었다(MrozekE et al., Blood 87, 2632-2640,1Ⅱ996).
그 동안의 연구들에 의하면 탄시논(Tanshinone) 계열의 화합물들은 급성 전골수성 백혈병(acute promyelocytic leukemia, APL) 세포의 분화에 영향을 준다는 것이 밝혀졌다(Zhonghua Xueyexue Zazhi 2000,21:23-26). 또한, 암(cancer)의 증식을 억제하며 세포자멸사(apoptosis)를 유도한다는 것이 알려져 있다(Chin J Cancer 2003,22:1363-1366; Int J Mol Med 2010 Sep, 26(3):379-85). 그러나 아직까지 이러한 탄시논 계열의 화합물들이 NK 세포를 비롯한 림프구(lymphocyte)의 분화 및 면역반응을 유도하는 역할을 수행할지에 대해서는 보고가 되지 않았다. 따라서 특정 세포의 분화를 유도하는 탄시논 계열 화합물의 작용이 NK 세포에도 적용이 된다면 기존의 NK 세포를 분화시키는 방법보다 효율적으로 NK 세포를 획득함으로써 염증, 감염, 암 등의 질환 치료에 적극적으로 응용이 가능하다.
이에 본 발명자들은 탄시논이 NK 세포의 분화 및 면역반응에 미치는 영향을 알아보기 위하여 연구한 결과, 크립토탄시논(cryptotanshinone) 또는 탄시논 ⅡA(tanshinone ⅡA)가 조혈줄기세포에서 NK 세포의 분화를 유도 및 촉진시키며 NK 세포 분화와 관련된 유전자인 ID2의 발현을 증가시키고, 암세포인 YAC-1에 대하여 세포독성을 지니며 IFN-γ의 생성 또한 증가시켜 NK 세포의 활성을 증진시키는 것을 확인함으로써, 탄시논을 NK 세포 분화 또는 활성 증진용 조성물의 유효성분으로 사용할 수 있음을 밝힘으로써 본 발명을 완성하였다.
본 발명의 목적은 탄시논(tanshinone)을 유효성분으로 함유하는 자연살해세포(natural killer cell, NK 세포) 분화 또는 활성 증진용 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은 자연살해세포 전구체 세포에 탄시논을 투여하는 단계를 포함하는 조혈줄기세포로부터 자연살해세포로의 분화 유도 방법을 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은 조혈줄기세포에서 분화된 자연살해세포 전구체 세포에 탄시논을 처리하는 단계를 포함하는 자연살해세포의 활성 증진 방법을 제공하는 것이다.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 탄시논(tanshinone)을 유효성분으로 함유하는 자연살해세포(natural killer cell, NK 세포) 분화 또는 활성 증진용 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 탄시논 및 IL-15(interleukin-15)를 유효성분으로 함유하는 자연살해세포 분화 또는 활성 증진용 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은
1) 조혈줄기세포에서 자연살해세포 전구체 유도제를 첨가하여 자연살해세포 전구체 세포로의 증식을 유도하는 단계; 및
2) 단계 1)의 자연살해세포 전구체 세포에 탄시논을 투여하는 단계를 포함하는 조혈줄기세포로부터 자연살해세포로의 분화 유도 방법을 제공한다.
또한, 본 발명은 조혈줄기세포에서 분화된 자연살해세포 전구체 세포에 탄시논을 처리하는 단계를 포함하는 자연살해세포의 활성 증진 방법을 제공한다.
아울러, 본 발명은 본 발명의 자연살해세포 분화 또는 활성 증진용 조성물을 유효성분으로 함유하는 항암 세포 예방 및 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
본 발명은 크립토탄시논(cryptotanshinone) 또는 탄시논 ⅡA(tanshinone ⅡA)가 조혈줄기세포에서 NK 세포의 분화를 유도 및 촉진시키며 NK 세포 분화와 관련된 유전자인 ID2의 발현을 증가시키고, 암세포인 YAC-1에 대하여 세포독성을 지니며 IFN-γ의 생성 또한 증가시켜 NK 세포의 활성을 증진시키므로, NK 세포 분화 또는 활성 증진용 조성물의 유효성분으로 유용하게 사용될 수 있다.
도 1은 생쥐의 조혈줄기세포로부터 NK 세포로 분화한 결과를 나타낸 도이다.
A: IL-15(25ng/㎖), 크립토탄시논(cryptotanshinone, CRY)(5uM) 및 탄시논 ⅡA(tanshinone ⅡA, TA)(10uM)로 분화시킨 NK 세포를 유동세포분석법(Flow cytometry)으로 분석한 결과; 및
B: 크립토탄시논 또는 탄시논 ⅡA의 각 농도별로 처리하여 분화시킨 NK 세포(CD3-NK1.1+)를 유동세포분석법으로 분석한 결과.
도 2는 생쥐의 조혈줄기세포로부터 화합물을 처리하여 분화한 NK 세포를 분석한 결과를 나타낸 도이다.
A: 대조군(control), IL-15, 크립토탄시논(cryptotanshinone, CRY) 및 IL-15과 함께 크립토탄시논으로 분화시킨 NK 세포(CD3-NK1.1+)의 전체 세포 수의 변화를 분석한 결과; 및
B: 대조군(control), IL-15, 탄시논 ⅡA(tanshinone ⅡA, TA) 및 IL-15과 함께 탄시논 ⅡA로 분화시킨 NK 세포(CD3-NK1.1+)의 세포 수의 변화를 분석한 결과.
도 3은 조혈줄기세포로부터 화합물을 처리하여 분화시킨 NK 세포에서 성숙(maturation)과 관련된 유전자 발현(gene expression)을 실시간 PCR(real-time PCR)로 측정한 결과를 나타낸 도이다.
도 4는 생쥐의 조혈줄기세포로부터 다양한 조건으로 배양시킨 NK 세포의 세포독성(cytotoxicity) 및 IFN-γ 생성능을 분석한 결과를 나타낸 도이다.
A: 줄기세포로부터 각 각 대조군(control), IL-15(25ng), 크립토탄시논(cryptotanshinone, CRY)(5uM) 및 IL-15(25ng)과 함께 크립토탄시논(5uM)을 처리하여 분화시킨 성숙한 NK(mature NK, mNK) 세포를 가지고 YAC-1에 대한 세포독성을 측정한 결과; 및
B: 조혈줄기세포로부터 각 각 대조군(control), IL-15(25ng), 크립토탄시논(5uM), 탄시논 ⅡA(10uM), IL-15(25ng)과 함께 크립토탄시논(5uM) 및 IL-15(25ng)과 함께 탄시논 ⅡA(10uM)을 처리하여 분화시킨 성숙한 NK 세포를 가지고 IL-12(20ng)로 활성화시킨 후 IFN-γ 생성량을 ELISA로 측정한 결과.
이하, 본 발명을 상세히 설명한다.
본 발명은 탄시논(tanshinone)을 유효성분으로 함유하는 자연살해세포(natural killer cell, NK 세포) 분화 또는 활성 증진용 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 탄시논 및 IL-15(interleukin-15)를 유효성분으로 함유하는 자연살해세포 분화 또는 활성 증진용 조성물을 제공한다.
상기 탄시논은 구체적으로 단삼(Salvia miotiorrhiza bunge)이라고 불리는 중국 약초(Chinese medicinal plant)의 뿌리로부터 추출한 화학물질(chemical)이고 크립토탄시논(cryptotanshinone) 또는 탄시논 ⅡA이며, 보다 구체적으로 크립토탄시논(cryptotanshinone)의 구조식은 C19H20O3이고 화학식은
Figure pat00001
이며 퀴노이드-디테르펜(quinoid-diterpene) 구조로 활성산소의 발생에 의한 항균성, 항돌연변이성을 갖는 것이고, 탄시논 ⅡA의 구조식은 C19H18O3이고 화학식은
Figure pat00002
이며 다양한 인간 암 세포주(human cancer cell line)에 대해 세포독성을 가지며 항알레르기성이 있는 것이나, 이에 한정되는 것은 아니다.
또한, 상기 탄시논은 조혈줄기세포에서 NK 세포로의 분화를 유도하거나 촉진시키고, NK 세포 분화와 관련된 유전자인 ID2의 발현을 증가시키며 암 세포인 YAC-1 세포에 대하여 세포독성을 가질 뿐만 아니라 IFN-γ의 생성을 증가시키는 것이나, 이에 한정되는 것은 아니다.
또한, 구체적으로 상기 탄시논을 IL-15(interleukin-15)과 함께 조혈줄기세포에 처리하는 것이고, 보다 구체적으로 상기 크립토탄시논 또는 탄시논 ⅡA는 2uM 내지 10uM의 농도로, 상기 IL-15는 10 내지 50ng/㎖으로 처리하는 것이며, 가장 구체적으로 상기 크립토탄시논은 5uM의 농도로, 상기 탄시논 ⅡA는 10uM의 농도로, 상기 IL-15는 25ng/㎖의 농도로 처리하는 것이나, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명자들은 조혈줄기세포로부터 NK 세포를 분화시키기 위하여 마우스 골수로부터 조혈줄기세포를 분리하여 NK 세포로의 분화를 위해 7일간 배양한 중간단계의 전구체 세포들을 회수하여 다양한 농도의 쥐의 IL-15과 크립토탄시논(crptotanshinone) 또는 탄시논 ⅡA(tanshinone ⅡA)를 포함하는 배지에서 배양한 후 2일, 4일 및 6일 별로 항(anti)-NK1.1(PE) 및 항(anti)-CD3(FITC) 항체를 이용하여 NK1.1+CD3-인 NK 세포의 순도를 분석하고, 다양한 NK 세포 표면 분자에 대한 항체를 이용하여 NK 세포의 분화 정도를 유동세포분석법(flow cytometry)으로 분석한 결과, 조혈줄기세포로부터 NK 세포로 분화시켰을 때 IL-15(25ng/㎖)만을 첨가한 경우 약 30%가 CD3-NK+세포로 분화된 반면, 크립토탄시논(5uM) 또는 탄시논 ⅡA(crptotanshinone/tanshinone ⅡA)(10uM)를 함께 첨가한 경우 약 65%, 62%가 NK 세포로 분화되었다는 것을 확인하였다(도 1의 A 참조).
또한, 본 발명자들은 조혈줄기세포로부터 NK 세포 분화를 유도하는 크립토탄시논/탄시논 ⅡA의 적정 처리 농도를 알기 위하여 각 2, 5 및 10uM의 농도별로 처리한 결과, 크립토탄시논(cryptotanshinone)의 경우, NK 세포로의 분화율이 5uM을 처리하였을 때 약 56%로 가장 높았고 탄시논 ⅡA(tanshinone ⅡA)의 경우에는 10uM을 처리하였을 때 약 62%로 가장 높게 나왔다는 것을 확인하였다(도 1의 B 참조). 따라서, 적정 농도의 크립토탄시논 또는 탄시논 ⅡA를 IL-15과 함께 처리를 했을 경우, NK 세포의 분화 유도 및 증식이 증가됨을 알 수 있었다.
또한, 본 발명자들은 NK 세포의 분화율 증가가 실제로 NK 집단(population) 변화와 연관성이 있는지를 알기 위하여 분화 중간단계인 전구체에 IL-15을 처리한 시점부터 날짜별로 수거한 세포의 수를 세고, 전체 세포 수로부터 NK 세포 분화도(%)를 이용하여 NK 세포 수를 계산한 결과, IL-15를 처리하지 않은 대조군, IL-15 단독 처리군, 크립토탄시논 단독 처리군, 및 IL-15 및 크립토탄시논을 함께 처리한 군에서 시간이 경과함에 따라 전체 세포 수는 전반적으로 큰 차이 없이 감소하는 양상을 보였지만 NK 세포 수를 비교한 결과 IL-15 및 크립토탄시논을 함께 처리한 군에서 IL-15만을 처리한 경우보다 NK 세포 수가 크게 증가한 것을 확인할 수 있었고, IL-15 및 탄시논 ⅡA를 처리한 군에서도 상기와 유사한 양상을 보였다는 것을 확인하였다(도 2의 A 및 도 2의 B 참조).
또한, 본 발명자들은 NK 세포로 분화되는 과정에서 발현되는 표적 유전자(target gene)를 알아내기 위하여 기존의 NK 세포 분화와 관련된 유전자들의 발현을 날짜별로 실시간 PCR(real-time PCR)로 측정한 결과, TRAF, IRF2 및 PU.1은 각 각의 처리조건에서 유전자 발현량이 크게 차이를 보이지 않았지만, ID2의 경우 크립토탄시논 단독 처리군, IL-15 및 크립토탄시논을 함께 처리한 군에서만 발현량이 높게 유지되고 있다는 것을 확인하였다(도 3 참조). 따라서, 크립토탄시논 또는 탄시논 ⅡA(cryptotanshinone/tanshinone ⅡA)를 첨가한 경우 ID2의 발현양이 증가함으로서 NK 세포분화에 영향을 미칠 것으로 생각된다.
아울러, 본 발명자들은 분화 중간단계의 전구체에 IL-15과 크립토탄시논 또는 탄시논 ⅡA를 함께 처리하였을 때 NK 세포로의 분화율이 증가됨을 확인하였고, 상기와 같은 과정으로 분화된 NK 세포가 제대로된 면역 반응을 수행하는지 확인하기 위하여 암세포인 YAC-1 세포에 대한 세포독성을 알아보고, NK 세포의 활성을 확인할 수 있는 주요한 특성인 IFN-γ의 생성을 측정하였다. 그 결과, IL-15(25ng/㎖) 및 크립토탄시논(cryptotanshinone)(5uM)을 함께 처리한 조건에서 세포독성이 가장 높게 나왔고(도 4의 A 참조), 세포독성과 마찬가지로 IL-15(25ng/㎖)과 크립토탄시논(5uM) 또는 IL-15(25ng/㎖)과 탄시논 ⅡA(10uM)를 함께 처리한 조건에서 IFN-γ의 분비량이 가장 높게 나왔다는 것을 확인하였다(도 4의 B 참조).
그러므로, 본 발명의 크립토탄시논 및 탄시논 ⅡA는 IL-15와 함께 처리하여 조혈줄기세포에서 NK 세포의 분화를 유도 및 촉진시키며 NK 세포 분화와 관련된 유전자인 ID2의 발현을 증가시키고 IFN-γ의 생성량을 증가시켜 NK 세포의 활성을 증진시키므로 NK 세포의 분화 또는 활성 증진용 조성물로 유용하게 사용될 수 있다.
또한, 본 발명은
1) 조혈줄기세포에서 자연살해세포 전구체 유도제를 첨가하여 자연살해세포 전구체 세포로의 증식을 유도하는 단계; 및
2) 단계 1)의 자연살해세포 전구체 세포에 탄시논을 투여하는 단계를 포함하는 조혈줄기세포로부터 자연살해세포로의 분화 유도 방법을 제공한다.
상기 방법에 있어서, 단계 1)의 자연살해세포 전구체 유도제는 구체적으로 SCF(stem cell factor), Flt3L(Fms-like tyrosine kinase3 ligand) 및 IL-7(interleukin-7)로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나이나, 이에 한정되는 것은 아니다.
상기 방법에 있어서, 단계 2)의 탄시논은 구체적으로 크립토탄시논(cryptotanshinone) 또는 탄시논 ⅡA이나, 이에 한정되는 것은 아니다.
상기 방법에 있어서, 구체적으로 단계 2)의 자연살해세포 전구체 세포에 IL-15를 함께 투여하는 것이나, 이에 한정되는 것은 아니다.
상기 방법에 있어서, 구체적으로 상기 크립토탄시논 또는 탄시논 ⅡA는 2uM 내지 10uM의 농도로, 상기 IL-15는 10 내지 50ng/㎖으로 처리하는 것이며, 보다 구체적으로 상기 크립토탄시논은 5uM의 농도로, 상기 탄시논 ⅡA는 10uM의 농도로, 상기 IL-15는 25ng/㎖의 농도로 처리하는 것이나, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 크립토탄시논 및 탄시논 ⅡA는 IL-15와 함께 처리하여 조혈줄기세포에서 NK 세포의 분화를 유도 및 촉진시키고 NK 세포의 수를 증가시키며 NK 세포 분화와 관련된 중요한 유전자인 ID2의 발현을 증가시키므로 조혈줄기세포로부터 자연살해세로의 분화 유도 방법에 유용하게 사용될 수 있다.
또한, 본 발명은 조혈줄기세포에서 분화된 자연살해세포 전구체 세포에 탄시논을 처리하는 단계를 포함하는 자연살해세포의 활성 증진 방법을 제공한다.
상기 탄시논은 구체적으로 크립토탄시논 또는 탄시논 ⅡA이고 2uM 내지 10uM의 농도로 처리하는 것이고, 보다 구체적으로 상기 크립토탄시논은 5uM의 농도로, 상기 탄시논 ⅡA는 10uM의 농도로 처리하는 것이나, 이에 한정되는 것은 아니다.
또한, 구체적으로 상기 탄시논을 IL-15(interleukin-15)와 함께 조혈줄기세포에 처리하는 것이고, 보다 구체적으로 상기 IL-15는 10 내지 50ng/㎖으로 처리하는 것이고, 가장 구체적으로 25ng/㎖의 농도로 처리하는 것이나, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 크립토탄시논 또는 탄시논 ⅡA는 IL-15와 함께 처리하여 조혈줄기세포에서 NK 세포의 분화를 유도 및 촉진시키며 NK 세포 분화와 관련된 유전자인 ID2의 발현을 증가시키고 IFN-γ의 생성량을 증가시켜 NK 세포의 활성을 증진시키므로 NK 세포의 활성 증진 방법으로 유용하게 사용될 수 있다.
아울러, 본 발명은 본 발명의 자연살해세포 분화 또는 활성 증진용 조성물을 유효성분으로 함유하는 항암 세포 예방 및 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
상기 암은 구체적으로 유방암, 흑색종암, 위암, 간암 및 폐암으로 구성된 군으로부터 선택되는 것이나, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 크립토탄시논 및 탄시논 ⅡA는 조혈줄기세포에서 NK 세포의 분화를 유도 및 촉진시키고 암세포인 YAC-1에 대하여 세포독성을 지니며 IFN-γ의 생성량을 증가시켜 NK 세포의 활성을 증진시키므로 항암 세포 예방 및 치료용 약학적 조성물로서 유용하게 사용될 수 있다.
본 발명의 조성물은 상기 NK 세포에 추가로 동일 또는 유사한 기능을 나타내는 유효성분을 1종 이상 함유할 수 있다. 투여를 위해서는 추가로 약제학적으로 허용 가능한 담체를 1종 이상 포함하여 제조할 수 있다. 약제학적으로 허용 가능한 담체는 식염수, 멸균수, 링거액, 완충 식염수, 덱스트로스 용액, 말토 덱스트린 용액, 글리세롤, 에탄올 및 이들 성분 중 1 성분 이상을 혼합하여 이용할 수 있으며, 필요에 따라 항산화제, 완충액, 정균제 등 다른 통상의 첨가제를 첨가할 수 있다. 또한, 희석제, 분산제, 계면활성제, 결합제 및 윤활제를 부가적으로 첨가하여 수용액, 현탁액, 유탁액 등과 같은 주이용 제형, 산제, 정제, 캡슐제, 환, 과립 또는 주사액제로 제제화할 수 있다. 더 나아가 당 분야의 적정한 방법으로 또는 Remington's Pharmaceutical Science(Mack Publishing Company, Easton PA, 18th, 1990)에 개시되어 있는 방법을 이용하여 각 질환에 따라 또는 성분에 따라 구체적으로 제제화할 수 있다.
본 발명의 조성물은 구체적으로 비경구 투여(예를 들어 정맥 내, 피하, 복강 내 또는 국소에 적용)할 수 있으며, 투여량은 환자의 체중, 연령, 성별, 건강상태, 식이, 투여시간, 투여방법, 배설율 및 질환의 중증도 등에 따라 그 범위가 다양하다. 본 발명에 따른 조성물의 일일 투여량은 구체적으로 0.01 내지 5000 ㎎/㎏이며, 보다 구체적으로 0.01 내지 10 ㎎/㎏ 이며, 가장 구체적으로 하루 일 회 내지 수회에 나누어 투여하는 것이나 이에 한정되는 것은 아니다.
이하, 본 발명을 실시예 및 제조예에 의해 상세히 설명한다.
단, 하기 실시예 및 제조예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예 및 제조예에 한정되는 것은 아니다.
< 실시예 1> 마우스 골수로부터 조혈줄기세포의 분리
실험용 마우스(중앙실험동물(주), 한국)의 종아리뼈, 넓적다리뼈, 골반뼈를 분리하고 이로부터 당 업계에 알려진 방법에 의해 총 골수 세포를 추출하였다. 골수에서 추출한 세포에 ACK 용액을 처리하여 적혈구를 제거한 후, B220, CD2, NK1.1, CD11b, Gr-1, 및 TER-119 항체를 처리하여 각각에 해당하는 B 세포, T 세포, NK/NKT 세포, 단핵구, 과립구 및 적혈구에 붙이고, 이를 MACS(magnetic-activated cell sorting) 세포 분리 키트(Cell Separation Kit)(Miltenyi Biotec, Bergisch Gladbach, Germany)를 이용하여 음성 선택(negative selection)으로 제거하였다. 이와 같이 분화된 면역세포들을 제거한 후, 조혈줄기세포의 특이 표면 분자인 CD117(c-kit)에 대한 마이크로-비드(micro-bead) 및 MACS를 이용하여 양성 선택(positive selection)으로 조혈줄기세포를 분리하였다.
< 실시예 2> 골수로부터 분리된 조혈줄기세포로부터 NK 세포로의 분화 유도
골수에서 분리한 조혈줄기세포를 24-웰(well) 플레이트(plate)(Becton and Dickinson Bioscience, San Diego, CA)에 1.0 × 106세포/웰(cells/well)의 농도로 10% 소태아혈청(fetal bovine serum, FBS), 2 ㎍/㎖ 인도메타신(indometacin)(Sigma-Aldrich, St. Louis), 2 ㎍/㎖ 젠타마이신(gentamicin)(Sigma-Aldrich), 30 ng/㎖ 쥐의(murine) SCF(PeproTech, Rocky Hill, NJ), 50 ng/㎖ 쥐의 Flt3L(PeproTech), 0.5 ng/㎖ 쥐의 IL-7(PeproTech)을 포함하는 RPMI 1640 배지를 사용하여 37℃, 5% CO2에서 7일간 배양하였다. 최초 배양 3일 후 절반의 배양 상층액을 같은 조성의 사이토카인(cytokine)이 함유된 새로운 배지로 교체하였다. NK 세포로의 분화를 위해 7일간 배양한 중간단계의 전구체 세포들을 회수하여 다양한 농도의 쥐의 IL-15 및 크립토탄시논/탄시논 ⅡA(crptotanshinone/tanshinone ⅡA)를 포함하는 배지에서 7일간 추가 배양하였다. 3일 후 절반의 배지를 같은 조성의 사이토카인이 함유된 새로운 배지로 교체하였다. 2일, 4일 및 6일 별로 항(anti)-NK1.1(PE) 및 항(anti)-CD3(FITC) 항체를 이용하여 NK1.1+CD3-인 NK 세포의 순도를 분석하고, 다양한 NK 세포 표면 분자에 대한 항체를 이용하여 NK 세포의 분화 정도를 유동세포분석법(flow cytometry)으로 분석하였다.
그 결과, 도 1의 A에서 보는 바와 같이 조혈줄기세포로부터 NK 세포로 분화시켰을 때 IL-15(25ng/㎖)만을 첨가한 경우 약 30%가 CD3-NK+세포로 분화되었지만, 크립토탄시논(5uM)/탄시논 ⅡA(crptotanshinone/tanshinone ⅡA)(10uM)를 함께 첨가한 경우 약 65%, 62%가 NK 세포로 분화되었다는 것을 확인하였다(도 1의 A).
또한, 조혈줄기세포로부터 NK 세포 분화를 유도하는 크립토탄시논/탄시논 ⅡA의 적정 처리 농도를 알기 위해 각 2, 5 및 10uM의 농도별로 처리하였다.
그 결과, 도 1의 B에서 보는 바와 같이 크립토탄시논(cryptotanshinone)의 경우, NK 세포로의 분화율이 5uM을 처리하였을 때 약 56%로 가장 높았고 탄시논 ⅡA(tanshinone ⅡA)의 경우에는 10uM을 처리하였을 때 약 62%로 가장 높게 나왔으므로 적정 농도의 크립토탄시논/탄시논 ⅡA를 IL-15과 함께 처리를 했을 경우, NK 세포의 분화 유도 및 증식이 증가됨을 확인하였다(도 1의 B).
< 실시예 3> NK 세포의 분화도 확인
상기 <실시예 2>에서 분석한 NK 세포의 분화율 증가가 실제로 NK 집단(population) 변화와 연관성이 있는지를 알기 위하여 분화 중간단계인 전구체에 IL-15(25 ng)을 처리한 시점부터 날짜별로 수거한 세포의 수를 세었다. 전체 세포 수로부터 NK 세포 분화도(%)를 이용하여 NK 세포 수를 계산하였다.
그 결과, 도 2의 A 및 도 2의 B에서 보는 바와 같이 IL-15를 처리하지 않은 대조군, IL-15 단독 처리군(25 ng), 크립토탄시논(5uM) 단독 처리군, 및 IL-15(25 ng) 및 크립토탄시논(5uM)을 함께 처리한 군에서 시간이 경과함에 따라 전체 세포 수는 전반적으로 큰 차이 없이 감소하는 양상을 보였지만 NK 세포 수를 비교한 결과 IL-15 및 크립토탄시논을 함께 처리한 군에서 IL-15만을 처리한 경우보다 세포 수가 크게 증가한 것을 확인할 수 있었고, IL-15(25 ng) 및 탄시논 ⅡA(10uM)를 함께 처리한 군에도 상기와 유사한 양상을 보였다는 것을 확인하였다(도 2의 A 및 도 2의 B).
또한, NK 세포로 분화되는 과정에서 발현되는 표적 유전자(target gene)를 알아내기 위해 기존의 NK 세포 분화와 관련된 유전자들의 발현을 날짜별로 실시간 PCR(real-time PCR)로 측정하였다.
구체적으로, 분화 과정 중의 NK 세포를 회수하고 트리졸 시약(Trizol Reagent)(Invitrogen, Carlsbad, CA)/클로로포름(chloroform)/이소프로필 알코올(isopropyl alcohol)을 이용하여 총 RNA를 분리하였다. 1 내지 3 ㎍의 RNA를 2.5 U의 몰로니 뮤린 백혈병 바이러스(Moloney murine leukemia virus, M-MLV) 역전사 효소(reverse transcriptase)(Roche Diagnostics, Basel, Switzerland)와 함께 37℃에서 1시간 동안 반응시켜 cDNA를 합성하였다. 합성된 cDNA의 전사체는 SYBR Premix Ex Taq(Takara Bio, Tokyo, Japan) 및 Real-time system TP 800(Takara Bio)을 이용하여 정량하였으며, 시료의 표준화를 위하여 GAPDH를 사용하였다. 각각의 프라이머(primer)는 Primer3 소프트웨어(software)를 사용하여 제작하였다. 사용된 프라이머는 하기와 같다:
ID2 정방향 프라이머 5'-GCAAAAGAAAGAGAAAGTAAGA-3'(서열번호 1) 및 ID2 역방향 프라이머 5'-GAACACGGACATCAGCATC-3'(서열번호 2);
TRAF 정방향 프라이머 5'-CAGACAGAGGAGACAGCAGGA-3'(서열번호 3) 및 TRAF 역방향 프라이머 5'-CACACAGAAGAGGAACTA-3'(서열번호 4);
IRF2 정방향 프라이머 5'-GCTTCCTCTTGGTTTTGCTC-3'(서열번호 5) 및 IRF2 역방향 프라이머 5'-CTCTGCTGTGCGGGTGTA-3'(서열번호 6); 및
PU.1 정방향 프라이머 5'-GGTCATCTTCTTGCGGTTCT-3'(서열번호 7) 및 PU.1 역방향 프라이머 5'-CCTTCCAGTTCTCGTCCA-3'(서열번호 8).
그 결과, 도 3에서 보는 바와 같이 TRAF, IRF2 및 PU.1은 각 각의 처리조건에서 유전자 발현량이 크게 차이를 보이지 않았지만, ID2의 경우 크립토탄시논(5uM) 단독 처리군, IL-15(25ng) 및 크립토탄시논(5uM)을 함께 처리한 군에서만 발현량이 높게 유지되고 있다는 것을 확인하였다(도 3).
< 실시예 4> 전구체로부터 분화한 NK 세포의 기능 확인
표적 세포(target cell)인 YAC-1에 대한 NK 세포의 세포독성(cytotoxicity)을 측정하기 위하여 4-h 51Cr-방출 분석(51Cr-release assay) 방법을 이용하였다. 51Cr이 라벨된 표적(51Cr-labeled target) YAC-1 세포(5 × 103세포/웰)에 대하여 각 각 50:1, 25:1 및 5:1로 희석하여 상기 <실시예 2>의 방법으로 분화된 NK 세포를 처리함으로서 실시하였고, 상층액에 분비된 51Cr을 γ-카운터(γ-counter)를 사용하여 측정하였다.
그 결과, 도 4의 A에서 보는 바와 같이 IL-15(25ng/㎖) 및 크립토탄시논(5uM)을 함께 처리한 조건에서 세포독성이 가장 높게 나왔다는 것을 확인하였다(도 4의 A).
또한, NK 세포의 기능을 알아보는 또 다른 방법인 IFN-γ의 분비량을 측정하기 위하여 상기 <실시예 2>의 방법으로 분화시킨 NK 세포(2 × 105세포/웰)를 mIL-12(20ng/㎖) 및 mIL-15(25ng/㎖)로 16시간 동안 자극 시킨 후에 상층액을 ELISA(enzyme-linked immunosorbent assay) 키트(kit)(R&D systems, CA)로 측정하였다.
그 결과, 도 4의 B에서 보는 바와 같이 세포독성과 마찬가지로 IL-15(25ng/㎖)과 크립토탄시논(5uM), 또는 IL-15(25ng/㎖)과 탄시논 ⅡA(10uM)를 함께 처리한 조건에서 IFN-γ의 분비량이 가장 높게 나왔다는 것을 확인하였다(도 4의 B).
하기에 본 발명의 조성물을 위한 제조예를 예시한다.
< 제조예 1> 약학적 제제의 제조
<1-1> 산제의 제조
탄시논 또는 크립토탄시논 25 ㎎
IL-15 25 ㎎
유당 50 ㎎
상기의 성분을 혼합한 후, 기밀포에 충진하여 산제를 제조하였다.
<1-2> 정제의 제조
탄시논 또는 크립토탄시논 25 ㎎
IL-15 25 ㎎
유 당 50 ㎎
스테아린산 마그네슘 2 ㎎
상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조하였다.
<1-3> 캡슐제의 제조
탄시논 또는 크립토탄시논 25 ㎎
IL-15 25 ㎎
유 당 50 ㎎
스테아린산 마그네슘 2 ㎎
상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 캡슐제의 제조방법에 따라서 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조하였다.
<1-4> 환의 제조
탄시논 또는 크립토탄시논 25 ㎎
IL-15 25 ㎎
유 당 50 ㎎
글리세린 100 ㎎
자일리톨 100 ㎎
상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 방법에 따라 1 환 당 300 ㎎이 되도록 제조하였다.
<1-5> 과립의 제조
탄시논 또는 크립토탄시논 25 ㎎
IL-15 25 ㎎
대두추출물 50 ㎎
포도당 100 ㎎
전분 100 ㎎
상기의 성분을 혼합한 후, 30% 에탄올 100 ㎎을 첨가하여 섭씨 60℃에서 건조하여 과립을 형성한 후 포에 충진하였다.
<1-6> 주사액제의 제조
탄시논 또는 크립토탄시논 25 ㎎
IL-15 50 ㎍/㎖
묽은 염산 BP pH 7.6로 될 때까지
주이용 염화나트륨 BP 최대 1 ㎖
적당한 용적의 주이용 염화나트륨 BP 중에 탄시논/크립토탄시논 및 IL-15을 용해시키고, 생성된 용액의 pH를 묽은 염산 BP를 이용하여 pH 7.6로 조절하고, 주이용 염화나트륨 BP를 이용하여 용적을 조절하고 충분히 혼합하였다. 용액을 투명 유리로 된 5 ㎖ 타입 I 앰플 중에 충전시키고, 유리를 용해시킴으로써 공기의 상부 격자하에 봉입시키고, 120℃에서 15분 이상 오토클래이브시켜 살균하여 주사액제를 제조하였다.
<110> Korea Research Institute of Bioscience and Biotechnology <120> A composition for differentiating natural killer cell or enhancing natural killer cell activation containing tanshinone as active ingredient <130> 11p-09-30 <160> 8 <170> KopatentIn 2.0 <210> 1 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> ID2 forward primer <400> 1 gcaaaagaaa gagaaagtaa ga 22 <210> 2 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> ID2 reverse primer <400> 2 gaacacggac atcagcatc 19 <210> 3 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> TRAF forward primer <400> 3 cagacagagg agacagcagg a 21 <210> 4 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> TRAF reverse primer <400> 4 cacacagaag aggaacta 18 <210> 5 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> IRF2 forward primer <400> 5 gcttcctctt ggttttgctc 20 <210> 6 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> IRF2 reverse primer <400> 6 ctctgctgtg cgggtgta 18 <210> 7 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> PU.1 forward primer <400> 7 ggtcatcttc ttgcggttct 20 <210> 8 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> PU.1 reverse primer <400> 8 ccttccagtt ctcgtcca 18

Claims (13)

  1. 탄시논(tanshinone)을 유효성분으로 함유하는 자연살해세포(natural killer cell, NK 세포) 분화 또는 활성 증진용 조성물.
  2. 제 1항에 있어서, 상기 탄시논은 하기 화학식 1로 표시되는 크립토탄시논(cryptotanshinone) 또는 하기 화학식 2로 표시되는 탄시논 ⅡA인 것을 특징으로 하는 자연살해세포 분화 또는 활성 증진용 조성물:
    [화학식 1]
    Figure pat00003
    ,
    [화학식 2]
    Figure pat00004
    .
  3. 제 1항에 있어서, 상기 탄시논은 조혈줄기세포에서 자연살해세포로의 분화를 유도하거나 촉진시키는 것을 특징으로 하는 자연살해세포 분화 또는 활성 증진용 조성물.
  4. 제 1항에 있어서, 상기 탄시논은 ID2의 발현을 증가시키는 것을 특징으로 하는 자연살해세포 분화 또는 활성 증진용 조성물.
  5. 제 1항에 있어서, 상기 탄시논은 YAC-1 세포에 대하여 세포독성을 가지며 IFN-γ의 생성을 증가시키는 것을 특징으로 하는 자연살해세포 분화 또는 활성 증진용 조성물.
  6. 탄시논 및 IL-15(interleukin-15)를 유효성분으로 함유하는 자연살해세포 분화 또는 활성 증진용 조성물.
  7. 1) 조혈줄기세포에서 자연살해세포 전구체 유도제를 첨가하여 자연살해세포 전구체 세포로의 증식을 유도하는 단계; 및
    2) 단계 1)의 자연살해세포 전구체 세포에 탄시논을 투여하는 단계를 포함하는 조혈줄기세포로부터 자연살해세포로의 분화 유도 방법.
  8. 제 7항에 있어서, 단계 2)의 탄시논은 크립토탄시논 또는 탄시논 ⅡA인 것을 특징으로 하는 조혈줄기세포로부터 자연살해세포로의 분화 유도 방법.
  9. 제 7항에 있어서, 단계 2)의 자연살해세포 전구체 세포에 IL-15를 함께 투여하는 것을 특징으로 하는 조혈줄기세포로부터 자연살해세포로의 분화 유도 방법.
  10. 조혈줄기세포에서 분화된 자연살해세포 전구체 세포에 탄시논을 처리하는 단계를 포함하는 자연살해세포의 활성 증진 방법.
  11. 제 10항에 있어서, 상기 탄시논과 IL-15를 함께 처리하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 자연살해세포의 활성 증진 방법.
  12. 제 1항의 자연살해세포 분화 또는 활성 증진용 조성물을 유효성분으로 함유하는 항암 세포 예방 및 치료용 약학적 조성물.
  13. 제 12항에 있어서, 상기 암은 유방암, 흑색종암, 위암, 간암 및 폐암으로 구성된 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 항암 세포 예방 및 치료용 약학적 조성물.
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Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104341450A (zh) * 2013-08-09 2015-02-11 付翌秋 一种磺酰胺衍生物的合成与药学应用
KR20190093500A (ko) 2018-02-01 2019-08-09 주식회사 엔케이맥스 Cd56+ 자연살해세포를 포함하는 항암용 조성물
KR20190093499A (ko) 2018-02-01 2019-08-09 주식회사 엔케이맥스 자연살해세포의 생산방법
KR20210067776A (ko) 2019-11-29 2021-06-08 주식회사 엔케이맥스 냉동 및 해동 과정을 포함하는 자연살해세포의 대량생산방법

Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110433290A (zh) * 2019-03-15 2019-11-12 中山大学 隐丹参酮和TKI抑制剂联用在制备Ph+急性淋巴细胞白血病化疗药物中的应用
US20210393585A1 (en) * 2020-06-19 2021-12-23 Tzu Chi University Method for preventing and/or treating a stress-induced disease
CN114874984B (zh) * 2022-06-16 2024-05-03 杭州中赢生物医疗科技有限公司 一种采用植物提取物体外诱导扩增nk细胞的方法

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1304723A (zh) * 2001-01-16 2001-07-25 中山大学 含二氢呋喃环结构的丹参酮类化合物用于治疗肝性脑病的药物
WO2005063232A1 (en) * 2003-12-30 2005-07-14 Md Bioalpha Co., Ltd. Obesity and metabolic syndrome treatment with tanshinone derivatives which increase metabolic activity
WO2007084419A2 (en) * 2006-01-13 2007-07-26 The Feinstein Institute For Medical Research Inhibition of inflammatory cytokine production with tanshinones
KR101182199B1 (ko) * 2010-05-27 2012-09-12 동국대학교 경주캠퍼스 산학협력단 단삼 추출물 또는 크립토탄시논을 유효성분으로 함유하는 뇌졸중의 예방 또는 치료용 조성물

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104341450A (zh) * 2013-08-09 2015-02-11 付翌秋 一种磺酰胺衍生物的合成与药学应用
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