KR20140091674A - 줄기 세포의 동원 및 증진을 강화하는 foti의 용도 - Google Patents

Abstract

본 발명은 조혈 줄기 세포들 (HSCs) 및 골수 줄기 세포들 (BMSCs)을 포함하여 피험자에서 줄기 세포 동원을 증진시키기 위해 적하수오 또는 그의 추출물들을 사용하는 방법을 제공한다. 일구체예에서, 식물의 부분들, 과일, 버섯, 미생물들, 산모의 체액 및 그의 추출물들의 배합된 조성물은 줄기 세포들의 동원을 촉진하기 위해 사용되고, 결과적으로 조직들 및/또는 장기들 내의 유지 및 회복의 특정 부위들로의 줄기 세포들의 이주를 초래한다. 다른 구체예들에서, 이 방법은 말초 혈액에서 HSCs의 순환을 현저히 증가시킴으로써 나타내는 바와 같이, HSCs의 방출 및 순환을 지원하기 위해 적하수오 또는 그의 추출물들을 사용하는 것을 포함한다. HSCs 및/또는 BMSCs의 증가된 순환 및 유지 부위들을 향한 이주는 신체의 자연 재생 메커니즘들을 촉진한다. 적하수오의 투여를 위한 투약 식이요법 및 줄기 세포들의 방출 및 순환을 증진시키는 방법이 추가로 제공된다.

Description

줄기 세포의 동원 및 증진을 강화하는 FOTI의 용도 {USE OF FOTI TO ENHANCE STEM CELL MOBILIZATION AND PROLIFERATION}

본 발명은 줄기 세포들의 동원(mobilization)을 강화하기 위한 방법들 및 조성물들에 관한 것이다.

본원에서 모든 공고들은 각각의 개별적인 공고 또는 특허 출원이 구체적이고 개별적으로 참고 문헌으로 포함되도록 지시된 것과 동일한 정도로 참고 문헌으로 인용된다. 다음 설명은 본 발명을 이해하는데 유용할 수 있는 정보를 포함한다. 본원에 제공된 임의의 정보는 선행 기술이거나 또는 현재 특허 청구된 발명에 관련된 것이거나, 또는 구체적으로 또는 암시적으로 참조되는 임의의 간행물이 선행 기술이라는 것은 인정되지 않는다.

줄기 세포들 (SCs)은 유기체의 전체 수명에 걸쳐 자기 복제하고 신체의 다양한 세포 유형들로 분화하는 독특한 능력을 갖는 세포들로서 정의된다. 두 가지 잘 알려진 유형의 줄기 세포들은 배아 줄기 세포들 및 성체 줄기 세포들이다. 배아 줄기 세포들 (ESCs)은 포배들이라 칭하는 5 내지 10일령의 배아들로부터 추출된다. 일단 격리된 ESCs는 시험 관내에서 성장하고 다양한 유형의 조직 세포 (예, 심장 세포들, 간 세포들, 신경 세포들, 및 신장 세포들)로 분화하도록 유도되고, 그 후 그것들은 조직을 재생하기 위해 특정 조직들 내로 주입될 수 있다.

성체 줄기 세포들 (ASCs)은 다양한 조직들의 특화된 세포들로 자기 갱신 및 분화될 수 있는 미분화된 또는 원시 세포들이며 출생 후 임의의 살아있는 유기체에서 발견된다. ASCs는 간 (타원형 세포들) (Wang 등., 2003), 장 (장 묘실 줄기 세포들) (Barker 등., 2008), 근육들 (위성 세포들) (Kuang 등., 2008), 뇌 (신경 줄기 세포들) (Revishchin 등., 2008), 및 최근에 췌장 (네스틴 양성 췌장 줄기 세포들) (Burke 등., 2007).과 같은 다양한 조직들로부터 단리되어 왔다. 탯줄 줄기 세포들 및 태반 줄기 세포들은 ASCs로 간주된다.

조직들 (조직 줄기 세포들)에서 발견된 ASCs의 역할은, 최근의 연구들이 하나의 조직으로부터의 ASCs가 다른 조직들의 특징적인 세포 유형으로 발달할 수 있는 능력을 가질 수 있음을 보고해 왔지만, 그들이 발견되는 조직을 유지하고 복구하는 것이다. 예를 들면, 간 내의 타원형 세포들은 실험관 내에서 인슐린 생산 췌장 세포들이 되는 능력을 갖는 것으로 나타났다. (Yang 등. 2002) 그럼에도 불구하고, 일반적인 견해는 지엽적 줄기 세포들은 그것들이 존재하는 조직의 소소한 회복에 주로 관여한다는 것이다. 큰 부상 또는 퇴행의 경우에, 치유되고 있는 조직에서 발견되는 새로운 조직 세포들의 수는 복제 및 분화될 지엽 줄기 세포들의 용량을 훨씬 초과하고, 이는 다른 사이트들에서 오는 줄기 세포들이 회복 과정에 연루되어야 함을 제안한다.

많은 조직들이 그들 자신의 특정 개체수의 조직 줄기 세포들을 함유하더라도, 주요 관심 대상인 특정 ASCs는 주로 골수 및 혈액에서 발견되는 것들이다. 조직 줄기 세포들은 전통적으로 다른 조직들로 분화되는 그들의 능력에 있어서 제한될 것으로 믿어지지만, 골수 줄기 세포들 (BMSC)은 최근에 다른 조직들의 세포들이 되기에 현저한 능력을 갖는 것으로 나타났다.

신체의 재생 메커니즘의 응집적, 포괄적인 묘사를 제시간에 추출하는 이들 프로세스들을 동결시키기는 어렵다. 그럼에도 불구하고, BMSCs, HSCs, 골수 기질 세포들 (MSCs), 다능성 성체 전구 세포들 (MAPCs), 매우 작은 배아-형 줄기 세포들 (VSEL), 외배엽-형 줄기 세포 (ELSC) 또는 할구-형 줄기 세포 (BLSC)가 신체의 자연 치유 시스템의 광범위한 성분을 구성하든 아니든, 신체 내의 그러한 다른 줄기 세포들을 단언하기 위해 충분한 정보가 이용될 수 있다. 줄기 세포들이 광범위한 다양한 세포 유형들로 분화할 수 있기 때문에, 그것들은 다양한 조직들 및 장기들의 치유 및 재생 프로세스들에서 중요한 역할을 한다. 골수 기질 세포들 (MSCs)을 포함하는 골수 줄기 세포들은 장기의 조직들로부터 방출되고, 성숙하고, 최종적으로는 분화된 세포들로 될 여러 가지 장기들 및 조직들로 이주하도록 피험자의 순환계 또는 면역 체계 내에서 순환된다. 그러므로, 줄기 세포 트래피킹 (즉, 방출, 순환, 귀환 및/또는 이주)의 증진은 이들 생리적 프로세스들을 증폭할 수 있고, 다양한 병리 상태들에 대한 잠재적인 치료법들을 제공 할 수 있다. 치료적 접근법으로서 줄기 세포 동원을 활용하는 조성물들 및 방법들이 있다. 그러나, 줄기 세포 동원을 촉진하는 기존의 방법들은 불량한 키네틱 성능, 높은 비용, 불편한 투여 방법들 및 원치 않는 부작용을 포함하는 현저한 단점들로 고통 받는다. 하나의 선도적인 접근법인 과립구 집락-자극 인자 (G-CSF) 또는 그의 재조합 형태들의 주입은 정점의 순환하는 HSC 번호들을 달성하기 위한 날들을 필요로 한다. 반대 문제가 단지 몇 분 내에 작동하는 인터루킨-8 (IL-8)의 투여에 따라 존재하고, 혈류에서 순환하는 HSC 수준을 상승시키는데 대한 단기 효과를 갖는다. (Frenette 등, 2000; Jensen 등, 2007) G-CSF 및 상이한 분자, CXCR4 길항제 AMD3100은 무엇보다도 출혈, 비장의 파열, 피 섞인 가래, 뼈 질환을 포함하는 상당한 부작용들을 가질 수 있다. 따라서, 부작용 없이 저렴한 비용으로 긍정적인 임상적 혜택들을 얻기 위해 줄기 세포 동원화제들을 인간 피험자들에게 전달하는 효과적이고 편리한 방법이 당업계에 필요하다.

따라서, 본 명세서에 개시된 본 발명의 조성물들 및 방법들은 손상된 조직들의 치유 및 치료를 촉진하기 위해 신체 내에서 줄기 세포들의 방출, 순환, 귀환 및/또는 이주를 강화하고, 그뿐만 아니라 더 큰 활력과 감소된 발병률을 위해, 일부 수준의 세포 손실로 고통 받는 조직들의 재생에 도움을 준다.

발명의 요약

본 발명은 줄기 세포 동원을 증가시킬 수 있는 동원화제를 제공하는 단계, 및 피험자에서 줄기 세포 동원을 증가시키기에 충분한 양으로 피험자에게 일정량의 동원화제를 투여하는 단계를 포함하는, 피험자에서 줄기 세포 동원을 증가시키는 방법을 포함한다. 하나의 다른 구체예에서, 동원화제는 다음: 적하수오 또는 그의 추출물들, 영하구기자 또는 그의 추출물들, 남조류 또는 그의 추출물들, 초유 또는 그의 추출물들, 스피룰리나 또는 그의 추출물들, 후코이단, 노루궁뎅이 버섯 또는 그의 추출물들, 영지 또는 그의 추출물들, 및 동충하초 또는 그의 추출물들을 포함하는 군으로부터 선택된 1개 이상의 성분들을 포함하는 조성물이다. 하나의 다른 구체예에서, 동원화제는 적하수오 또는 그의 추출물들이다. 하나의 다른 구체예에서, 줄기 세포는 골수-유도된 줄기 세포 (BMSC)이다. 하나의 다른 구체예에서, 줄기 세포는 조혈 줄기 세포 (HSC)이다. 하나의 다른 구체예에서, 정량 투여는 경구 투여를 포함한다. 하나의 다른 구체예에서, 경구 투여는 캡슐 또는 알약의 사용을 포함한다.

명세서에 기재된 본 발명의 또 다른 국면은 적하수오 또는 그의 추출물들, 영하구기자 또는 그의 추출물들, 남조류 또는 그의 추출물들, 초유 또는 그의 추출물들, 스피룰리나 또는 그의 추출물들, 후코이단, 노루궁뎅이 버섯 또는 그의 추출물들, 영지 또는 그의 추출물들, 및/또는 동충하초 또는 그의 추출물인 군으로부터 선택되는 1개 이상의 성분들; 및 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약제학적 조성물이다. 하나의 다른 구체예에서, 적하수오 또는 그의 추출물들의 양은 단일 용량으로 10-2000 mg을 포함한다. 하나의 다른 구체예에서, 영하구기자 또는 그의 추출물들의 양은 단일 용량으로 10-2000 mg을 포함한다. 하나의 다른 구체예에서, 남조류 또는 그의 추출물들의 양은 단일 용량으로 10-2000 mg을 포함한다. 하나의 다른 구체예에서, 초유 또는 그의 추출물들의 양은 단일 용량으로 10-300 mg을 포함한다. 하나의 다른 구체예에서, 스피룰리나 또는 그의 추출물들의 양은 단일 용량으로 10-300 mg을 포함한다. 하나의 다른 구체예에서, 후코이단 또는 그의 추출물들의 양은 단일 용량으로 10-2000 mg을 포함한다. 하나의 다른 구체예에서, 노루궁뎅이 버섯 또는 그의 추출물들, 영지 또는 그의 추출물들, 및/또는 동충 하초 또는 그의 추출물들의 양은 단일 용량으로 10-1000 mg을 포함한다.

본 명세서에 기재된 본 발명의 또 다른 국면은 일정량의 적하수오를 제공하는 단계, 적하수오를 고체 분말로 분쇄하는 단계, 고체 분말을 건조시키는 단계, 고체 분말을 용매 중에 침지시키는 단계, 및 고체 분말을 용매로부터 분리하는 단계를 포함하는 적하수오의 추출물을 제조하는 방법이고, 여기서 상기 용매는 적하수오의 추출물을 포함한다.하나의 다른 구체예에서, 고체 분말을 침지시키는 단계는 저온에서 물 또는 또 다른 수용액인 용매 중에서 이루어진다. 하나의 다른 구체예에서, 저온은 대략적으로 4 ℃이다. 하나의 다른 구체예에서, 고체 분말을 침지시키는 단계는 고온에서 유기 용매인 용매 중에서 이루어진다. 하나의 다른 구체예에서, 고온은 유기 용매의 비등점 근처이다. 하나의 다른 구체예에서, 유기 용매는 메탄올 또는 에탄올이다. 하나의 다른 구체예에서, 그 적하수오는 분쇄 전에 동결된다.

예시적인 구체예들은 참조된 도면들에 도시된다. 본 명세서에 개시된 구체예들 및 도면들은 제한적이기보다 예시적인 것으로 간주되도록 의도된다.
도 1은 본 발명의 다양한 구체예들에 따른 내인성 줄기 세포들의 동원 및 이주를 묘사한다. 정상적인 생리 조건 하에서 또는 질병이나 부상에 대한 응답으로, 조혈 줄기 세포들은 뼈 (a)와 같은 구획들로부터 이동하고 혈류 (b) 내로 순환하고, 신체의 다른 부분들 (c) 내의 회복 및 재생을 촉진하기 위해 조직들을 향하여 이주된다.
도 2는 본 발명의 일 구체예에 따라, 줄기 세포의 이주와 연관된 단계들의 개략적 예시를 보여주고, CXCR4의 역할을 강조한다.
도 3은 본 발명의 다양한 구체예들에 따라 (a) 전체 영하구기자 (LB) 과일 및 (b) 초유 (Col)의 소비 후 인체 내의 줄기 세포 이주의 전형적인 시간 경과를 예시하는 그래프들을 제공한다. 두 제품들에 대해, 가는 선들은 개별적인 응답들을 보여준다. LB에 대해, 굵은 점선은 평균 응답을 나타내는 한편, 굵은 선은 45분에 평균 피크 응답을 갖는 응답의 시간 경과를 보여준다. Col에 대해, 모든 참여자들은 60분에 정점이었으므로, 굵은 선들은 응답의 평균 시간 경과를 보여준다.
도 4는 본 발명의 일 구체예에 따라 (a) 버섯 (동충하초, 영지, 노루궁뎅이 버섯)의 다당류가 풍부한 분획, 및 (b) 스피룰리나 또는 그의 추출물의 소비 후 인체 내의 줄기 세포 이주의 전형적인 시간 경과를 예시하는 그래프를 제공한다.
도 5a, 5b 및 5c는 본 발명의 일 구체예에 따라 영하구기자, 초유 및 버섯 다당류들 각각의 섭취 후 인간 지원자의 말초 혈액으로부터 CD34+ 림프구들의 비율을 보여주는 혈액 샘플들의 유세포분석기 프로파일들이다. X 축은 줄기 세포 마커의 형광 강도를 나타낸다. M1 마커는 줄기 세포 마커 CD34에 대한 양성을 보여주는 사건들을 지시한다.
도 6은 본 발명의 일 구체예에 따라 LB, Col, 및 버섯 다당류들의 소비 전후에 CD34+ 순환하는 줄기 세포들의 표면 상에서 CXCR4의 발현을 예시하는 그래프이다.
도 7은 본 발명의 일 구체예에 따라 영하구기자, 초유, 스피룰리나 및 버섯 (동충하초, 영지, 노루궁뎅이 버섯)의 다당류가 풍부한 분획의 소비 후 인체 내의 줄기 세포 이주의 전형적인 시간 경과를 예시하는 그래프를 제공한다.
도 8은 본 발명의 다양한 구체예들에 따라 미역으로부터 추출된 후코이단의 경구 투여 이후에 인간 지원자들에서 순환하는 CD34+ 조혈 줄기 세포들에서 변화를 묘사한다. 말초 혈액 줄기 세포들의 기선 레벨들은 지원자들에서 정량화되었다. 그 후, 지원자들은 미역으로부터 추출된 후코이단 250 mg을 섭취하였다. 줄기 세포들의 레벨들은 그 후 45, 90 및 180 분에 측정되었다. 순환하는 줄기 세포들의 수는 평균적으로 각각 17%, 23% (P<0.02) 및 32% (P<0.02) 만큼 증가하였다.
도 9는 본 발명의 다양한 구체예들에 따라 조류 종들, 민가지말 큰실말로부터 후코이단을 소비한 결과들을 묘사한다. 민가지말 큰실말로부터 후코이단 250 mg의 소비는 동일한 조건 하에서 순환하는 줄기 세포들의 수의 평균적 감소를 제공하였다.
도 10은 본 발명의 다양한 구체예들에 따라 적하수오 , 남조류, 및 후코이단의 조합물을 소비한 결과들을 묘사한다. 적하수오를 포함하는 조합물의 소비는 동일한 조건 하에서 위약에 비해 순환하는 줄기 세포들의 수에서 일시적 증가를 초래하였다. 적하수오 를 함유하는 조합물은 순환하는 줄기 세포들의 수에서 13±6 % (n=7) (p < 0.05) 만큼의 완만한 증가를 시동하는 것으로 나타났다. 그 증가는 참여자들 중의 2명에서 25%를 초과하였다.
발명의 상세한 설명
본원에 인용된 모든 참고 문헌들은 완전히 기재된 것처럼 그들의 전문으로서 참고로 인용된다. 달리 정의되지 않는 한, 본 명세서에 사용된 기술 및 과학 용어들은 본 발명이 속하는 당업계의 통상의 기술을 가진 자들에 의해 통상적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 갖는다. Singleton 등., 미생물학 및 분자 생물학 사전 제3 판, J. Wiley & Sons (뉴욕, NY 2001); 3월, 고급 유기 화학 반응들, 메커니즘들 및 구조 제5 판, J. Wiley & Sons (뉴욕, NY 2001); 및 Sambrook and Russell, 분자 클로닝 : 실험실 설명서 제3 판, 콜드 스프링 하버 연구소 출판 (콜드 스프링 하버, NY 2001), Remington 의 제약 과학, E. W.에 의함 Martin, Mack 출판사, 이스턴, 펜실베니아주, 제15 판 (1975)은 당업계의 통상의 기술을 가진 자에게 본원에 사용된 많은 용어들에 대한 일반적인 지침을 제공하는 본원에 기재된 독창적인 조성물들의 약제학적 전달에 적절한 조성물들 및 제형들을 기재한다.
당업계의 숙련된 기술자는 본 명세서에 기재된 것들과 유사하거나 또는 동등한 많은 방법들 및 물질들을 인식할 것이고, 이는 본 발명을 실시하는데 사용될 수 있다. 실제로, 본 발명은 어떤 방식으로든지 본원에 기재된 방법들로 제한되지 않는다. 본 발명의 목적들을 위해, 다음 용어들은 아래와 같이 정의된다.
본 명세서에 사용된 바의 "투여하는" 및/또는 "투여하다"는 약제학적 조성물 을 환자에게 전달하는 임의의 경로를 의미한다. 전달 경로들은 비-침습적 경구 (입을 통해), 국소 (피부), 점막 (코, 구강/설하, 질, 안구 및 직장) 및 흡입 경로들뿐만 아니라, 비경구 경로들, 및 당업계에 공지된 다른 방법들을 포함할 수 있다. 비경구적은 안와 내, 주입, 동맥내, 경동맥내, 관절낭내, 심장내, 피내, 근육내, 복강내, 폐 내, 척수내, 흉골내, 척수강내, 자궁내, 정맥내, 지주막하, 피막하, 피하, 경점막, 또는 경기관을 포함하여 일반적으로 주입과 관련된 전달 경로를 의미한다. 비경구 경로를 통해, 조성물들은 주입 또는 주사를 위한 용액들 또는 현탁액들의 형태이거나, 또는 동결 건조된 분말들일 수 있다.
본 명세서에 사용된 바의 "남조류"는 단세포, 군체, 또는 필라멘트 형태들로 존재할 수 있는 남조식물 문에 속하는 그람-음성 광합성 세균에 대한 공통의 명칭을 의미한다. 대표적인 남조류는 스피룰리나 및 아파니조메논 종들을 포함하지만 이들로만 제한되지 않고, 일 예는 남조류의 아파니조메논 플로스 아쿠아에 (AFA) 종들이다. "조류들"은 "조류"의 복수 형태이고, 이는 미세조류 종들의 세포이다. 예를 들면, "남조류들"은 단일 아파니조메논 종들의 다수의 세포들, 단일 스피룰리나 종들의 다수의 세포들, 또는 다수의 아파니조메논 및/또는 스피룰리나 종들로부터의 혼합물을 의미한다.
본 명세서에 사용된 바의 "순환계"는 혈관계 및 림프계들을 포함하여, 피험자의 신체를 통해 혈액 및 혈액 성분들을 이동하는 메커니즘을 의미한다. 순환계의 메커니즘들은 심장, 혈관들 (동맥들, 정맥들, 및 모세 혈관들), 및 림프 혈관들을 포함하지만 이들로만 한정되지 않는다.
본 명세서에 사용된 바의 "초유"는 처음 며칠의 수유기 동안 암컷 포유류들의 유선에 의해 분비되는 유체를 의미하고, 소화의 과정에 의해 그것이 파괴되는 것을 방지하는 다양한 영양소들 및 프로테아제 억제제들을 함유한다. 인간들은 출산 후 첫 이틀 동안 비교적 소량의 초유를 생산하지만, 소들은 약 9 갤런의 초유를 생산한다. 초유는 전달 인자, PRP, IGF-1, n-아세틸 뉴라민산, GMP, 핵산 및 디펜신들을 포함하여, 농축된 수준의 중요한 면역 조절제들을 함유한다. 초유 추출물들은 단핵구들에 의한 식균 작용을 활성화하고 다형체 유핵 세포들에서 파열된 반응성 산소를 증가시키는 것으로 나타나고 있다. 초유는 또한 시험관 내 세포-기반 분석들에서 천연 킬러 (NK) 세포 활성화를 시동하고, 또한 항-염증성 사이토킨의 분비를 시동하는 것으로 나타났다. 초유에 대한 본 명세서의 참고 문헌들은 또한 그의 유도체들 및 인공 대체물들을 포함한다.
본 명세서에 사용된 바의 "적하수오의 성분"은 적하수오로부터 임의의 분획, 추출물, 또는 단리된 또는 정제된 분자를 의미한다. 예를 들면, 성분은 적하수오의 단백질 또는 핵산 또는 다당류, 식물 화학물질, 또는 분획이다. 따라서, 본 발명의 특정 구체예들에서, 적하수오의 성분들은 적하수오를 방해하고, 무기 또는 용매를 첨가하고, 분획들을 수집함으로써 얻어진다. 분획들의 특정한 비제한적인 예들은 고성능 액체 크로마토그래피, 박막 크로마토그래피 또는 증류를 이용하여 단리된다. 분별 증류는 적하수오의 성분들의 분자량 또는 소수성에 기초할 수 있다. 적하수오에서 발견된 성분들의 예들은 무엇보다도 하이드록실 스틸벤들, 안트라퀴논들 및 유도체들, 레시틴, 크리소판산, 에모딘, 라인, 크리소판산 안트론, 및 2,3,5,4'-테트라하이드록시스틸벤-2-O-β-D-글루코시드를 포함한다.
본 명세서에 사용된 바의 "영하구기자의 성분"은 영하구기자로부터 임의의 분획, 추출물, 또는 단리된 또는 정제된 분자를 의미한다. 예를 들면, 성분은 영하구기자의 단백질 또는 핵산 또는 다당류, 식물 화학물질, 또는 분획이다. 따라서, 본 발명의 특정 구체예들에서, 영하구기자의 성분들은 영하구기자를 방해하고, 무기 또는 용매를 첨가하고, 분획들을 수집함으로써 얻어진다. 분획들의 특정한 비제한적인 예들은 고성능 액체 크로마토그래피, 박막 크로마토그래피 또는 증류를 이용하여 단리된다. 분별 증류는 영하구기자의 성분들의 분자량 또는 소수성에 기초할 수 있다.
본 명세서에 사용된 바의 "분화"는 그 과정에 의해 세포들이 생물학적 기능들을 수행하도록 더욱 특화되는 과정을 의미한다. 예를 들면, 조혈 줄기 세포들, 조혈 전구 세포들 및/또는 줄기 세포들은 다능성 줄기 세포들로부터 성숙한 체세포들과 같이 특징적인 기능들을 갖는 특정 계통 및/또는 세포들에 헌신적인 세포들로 변화할 수 있다. 분화는 종종 악성 변환을 겪은 세포들에 의해 전체적으로 또는 부분적으로 손실되는 속성이다.
본 명세서에 사용된 바의 "증진", "강화하다" 또는 "강화하는"은 세포 또는 유기체의 특정 매개 변수의 성능의 개선 또는 다른 생리학적으로 유익한 증가를 의미한다. 때때로, 현상의 개선은 특정 매개 변수의 측정치들에서 감소로 정량화된다. 예를 들면, 줄기 세포들의 이주는 순환계 내에서 순환하는 줄기 세포들의 수의 감소로서 측정될 수 있지만, 그럼에도 불구하고 이는 손실 또는 손상된 기능을 대체 또는 정정하는 세포들로 분화하는 것을 포함하지만, 이것으로만 제한되지 않는 유익한 생리적 결과를 수행하거나 또는 촉진할 수 있는 신체의 영역들로 이들 세포들의 이주에서의 증진을 나타낼 수 있다. 일 구체예에서, 증진은 순환하는 줄기 세포들의 수에서 15%, 20%, 30% 또는 50%를 초과하는 감소를 의미한다. 하나의 특정한 비제한적인 예에서, 줄기 세포 이주의 증진은 세포들의 모집단 또는 세포들의 모집단의 응답에서 15%, 20%, 30%, 50%, 75% 또는 그 이상의 감소와 같은 비-조혈 계통의 세포들의 모집단을 초래하거나 또는 그에 의해 측정될 수 있다. 일 구체 예에서, 강화된 매개 변수는 줄기 세포들의 트래피킹이다. 일 구체예에서, 강화된 매개 변수는 장기의 조직으로부터 줄기 세포들의 방출이다. 일 구체예에서, 강화된 매개 변수는 줄기 세포들의 이주이다. 또 다른 구체예에서, 매개 변수는 줄기 세포들의 분화이다. 다시 또 다른 구체예에서, 매개 변수는 줄기 세포들의 귀환이다.
본 명세서에 사용된 바의 "후코이단"은 조류들로부터 얻은 황산화된 푸칸들을 기재한다. 후코이단은 다음의 완전하지 않은 목록에 제공된 바의 광범위 조류 종들로부터 입수되어 왔다: 큰실말 오카무라누스 , 민가지말 , Ch . 그라실리스 , 썬더셀라 심플렉스, 데스마에스티아 인터미디어 , 딕토시폰 포에니쿨라세우스 , 딕티오타 디코토마 , 파디나 파보니카 , 스파토굴루썸 , 스크로에데리 , 아데르노시스티스 우트리쿨라리스 , 필라엘라 리토랄리스 , 아스코필럼 노도썸 , 비푸르카리아 비푸르카타 , 푸쿠스 . 비스쿨로서스 , F. 스피랄리스 , F. 세라터스 , F. 에베에센스 , 히만탈리아 로레아 , 히지키아 푸시포르메 , 펠베티아 카나리쿨라타 , P. 라이티 , 사르가썸 스테노필럼 , S. 호네리 , S. 크헬마니움 , S. 무티쿰 , 알라리아 피스툴로사 , A. 마르기나타 , 아르쓰로타머스 비피더스, 코르다필름 , 에클로니아 쿠로메 , E. 카바 , 아이세니아 바이사이클리스 , 라미나리아 안거스타타 , L. 브라실리엔시스 , L. 클라우스토니 , L. 디지타타 , L. 자포니카, L. 릴리지오시아 , L. 사카리나 , 마크로시스티스 인테그리폴리아 , M. 피리페라 , 네레오시스티스 루에케아나 , 운다리아 피나티피다 , 페탈로니아 파스시아 , 시스토시폰 로멘타리아 . 실질적인 제약 연구는 주로 두 가지 독특한 형태: >95%이 푸코스의 황산화 에스테르로 구성된 F-후코이단, 및 대략적으로 20% 글루크론산인 U-후코이단에 초점을 맞추고 후코이단에 대해 수행되었고, 이들 각각은 본 명세서에 사용된 바의 용어 "후코이단"에 포함되어 있다. 후코이단의 제공원에 따라, 후코이단은 특정 구체예들에서 이형제로서 작용할 수 있는 한편, 다른 구체예들에서, 후코이단은 이주화제로서 작용할 수 있다.
본 명세서에 사용된 바의 "조혈 작용"은 혈액 세포들의 형성 및 발달을 의미한다. 태아기에, 조혈 작용은 난황낭에서, 이어서 간에서, 및 결국에는 골수에서 발생한다. 정상적인 성체들에서, 그것은 주로 골수에서 및 림프 조직들에서 발생한다. 모든 혈액 세포들은 다분화능 줄기 세포들로부터 발달하고, 이는 셋, 둘, 또는 하나의 조혈 분화 경로들로 전념된다. 이는 B-세포들, T-세포들, 단핵구 대식 세포 계보의 세포들, 및 적혈구 세포들을 포함하여 조혈 세포들의 생산을 포함한다.
본 명세서에 사용된 바의 "조혈제"는 화합물, 항체, 핵산 분자, 단백질, 세포 또는 조혈 작용에 영향을 미치는 다른 분자를 의미한다. 분자화제는 자연적으로 발생하는 분자 또는 합성 분자일 수 있다. 몇몇 경우들에서, 작용제는 조혈 세포들의 성장, 증식, 성숙, 이주 또는 분화 또는 방출에 영향을 미친다. 다양한 구체예들에서, 작용제는 적하수오 또는 적하수오의 추출물 또는 성분 이다.
본 발명에 사용된 바의 "조혈 줄기 세포들"은 적혈구, 백혈구, 거대 핵 세포, 및 혈소판을 포함하여 결국은 전혈 세포들로 분화할 수 있는 다능성 줄기 세포들을 의미한다. 이것은 선조 세포들 또는 아세포들로의 분화의 중간 단계를 포함할 수 있다. 용어 "조혈 전구 세포들", "선조 세포들" 또는 "아세포들"은 본 발명에서 교환 가능하게 사용되고 감소된 분화 가능성을 갖는 성숙한 HSCs를 기재하지만, 여전히 골수성 또는 림프 계통 등의 특정 계통의 다른 세포들로 성숙할 수 있다. "조혈 전구 세포들"은 적혈구 버스트 형성 단위들, 과립구, 적혈구, 대식세포, 거대 핵 세포 집락 형성 단위들, 과립구, 적혈구, 대식세포, 및 과립구 대식세포 집락-형성 단위들을 포함한다.
본 명세서에 사용된 바의 "귀환"은 순환계로부터 조직 또는 기관 내로 세포가 이주하는 과정을 의미한다. 어떤 경우들에는, 귀환은 조직-특이적 접착 분자 및 접착 공정들을 통해 달성된다. 귀환은 골수로 다시 이주하는 것을 의미할 수 있다.
본 명세서에 사용된 바의 "면역학적으로 정상"은 개인이 속하는 종들에 대해 전형적인 면역 체계 특성들을 나타내는 피험자를 의미한다. 이러한 전형적인 특성들은 무엇보다도 B-세포들 및 T-세포들뿐만 아니라 특정 유기체의 면역학적 서명으로서 작용하는 세포 표면 항원들이라 칭하기도 하는 구조적 세포 성분들을 포함한다.
본 명세서에 사용된 바의 "면역학적으로 타협된"은 유전자형 또는 표현형을 면역 결핍을 갖는 피험자를 의미한다. 유전자형적으로-면역 결핍인 피험자는 체액성 또는 세포-매개된 반응들 중의 하나를 생성하는 능력이 없음을 초래하는 유전적 결함을 갖는다. 유전자형적으로 면역 결핍인 피험자의 특이적인 비제한적 예는 SCID 생쥐 또는 bg/nu/xid 생쥐와 같은 유전자형적으로 면역 결핍인 생쥐이다. "표현형적으로-면역 결핍인 피험자"는 어떤 응답도 나타나지 않도록 표현형적으로 변경된 면역 응답을 유전자 적으로 생성할 수 있는 피험자이다. 하나의 특정한 비제한적인 예에서, 표현형적으로-면역 결핍인 수혜자가 방사선 조사되어 왔다. 다른 특정한 비제한적인 예에서, 표현형적으로-면역 결핍인 피험자는 화학 요법으로 치료받아 왔다. 훨씬 더 또 다른 비제한적인 예에서, 표현형적으로-면역 결핍인 피험자는 인간 면역 결핍 바이러스 (HIV) 또는 유인원 면역 결핍 바이러스 (SIV)와 같은 세균 또는 바이러스 감염증으로 고통받고 있다.
본원에서 사용된 바의 "단리된 생물학적 성분" (핵산 분자, 폴리펩티드, 다당류 또는 다른 생물학적 분자 등)은 이 성분이 자연적으로 발생하는 다른 생물학적 성분들로부터 실질적으로 분리되거나 또는 정제된 생물학적 성분을 의미한다 핵산들 및 단백질들은 숙주 세포 내에서 표준 정제 방법들, 재조합 발현에 의해 단리될 수 있거나 또는 화학적으로 합성될 수 있다.
본 명세서에 사용된 바의 "영하구기자" 또는 "영하 구기자"는 성장한 작은 밝은 오렌지-레드색의 타원형 베리나 과일을 의미한다. 하나의 예시적인 제공원은 중국 북부, 주로 닝샤 후이족 자치구에 있다. 그것은 때때로 구기 베리나 구기자라 칭한다. 영하구기자는 가지 과, 즉 감자, 토마토, 가지 및 고추들 (파프리카)와 같은 수백 개의 식물성 식품들을 포함하는 가지과 채소에 속한다.
본 명세서에 사용된 바의 "림프구 증식"은 림프구들의 생산의 증가를 의미한다.
본 명세서에 사용된 바의 "조절" 또는 "조절한다" 또는 "조절하는"은 상향 조절 (즉, 활성화 또는 자극), 응답의 하향 조절 (즉, 저해 또는 억제) 또는 이들 둘의 조합이나 또는 별개를 의미한다.
본 명세서에 사용된 바의 "이주"는 다세포 유기물들의 발달 및 유지에 있어서 세포들의 이동을 위한 중심 공정을 의미한다. 세포들은 통상적으로 주화성이라 칭하는 특정 외부 신호들에 응답하여 그리고 그 신호를 향하여 종종 이주한다. 이주는 세포가 순환계로부터 조직 또는 장기로 이동하는 과정을 포함한다. 더 상세하게는, 순환하는 줄기 세포들은 세포 표면들의 접착 분자들의 발현을 통해 모세 혈관 내피의 표면에 닿게 되고, 내피 및 줄기 세포들 모두에서 세포 골격의 변화를 초래하고, 모세 혈관벽을 통해 조직 및/또는 장기 사이트로 가는 도중에 이동을 허용한다. 일부 경우들에서, 귀환은 조직-특이적 접착 분자들 및 접착 공정들을 통해 수행된다.
본 명세서에 사용된 바의 "이주화제"는 순환계로부터 조직 또는 장기 내로 세포가 이동하는 과정을 촉진할 수 있는 동원화제들이다. 줄기 세포들의 이주는 예를 들면 순환계 또는 면역 체계에서 순환하는 줄기 세포들의 감소에 의해, 또는 세포 표면들 상에서 표면 마커들 및/또는 접착 분자들의 발현에 의해 나타날 수 있고, 이는 귀환, 테더링, 및/또는 모세혈관 내피와 같은 혈관들의 표면으로의 순환하는 줄기 세포들의 관외 유출에 관련된다. 이주화제들의 예들은 적하수오 로부터 추출된 단리 또는 정제된 성분들 또는 그의 추출물들, 영하구기자 추출물의 다당류가 풍부한 분획 (분획 A)을 포함하는 영하구기자, 초유 추출물의 단백질이 풍부한 분획 (분획 B)을 포함하는 초유, 민가지말 큰실말 , 또는 기타 조류들을 포함하는 조류 추출물들의 다당류가 풍부한 분획 (분획 C)에서 발견되는 화합물과 같이 조류들로부터 추출되는 단리된 성분 또는 화합물을 포함하는 후코이단, 또는 그의 추출물들, 동충하초 또는 그의 추출물, 영지 또는 그의 추출물, 노루궁뎅이 버섯 또는 그의 추출물을 포함하는 버섯 추출물들의 다당류가 풍부한 분획 (분획 D)에서 발견되는 화합물 과 같이 버섯으로부터 추출된 단리된 성분 또는 화합물을 포함하는 버섯들, 아르쓰로스피라 플레이튼시스 , 아르쓰로스피라 맥시마, 를 포함하는 스피룰리나 또는 그의 추출물들을 포함한다. 상이한 구체예들에서, 이러한 작용제는 CD34^고등 (CD34+) 세포들과 같은 줄기 세포들의 이주에 영향을 미친다. 일 구체예에서, 이주화제는 골수-유도된 줄기 세포들 및/또는 말초 혈액 내에서 순환하는 조혈 줄기 세포들의 수를 감소시킨다. 또 다른 구체예에서, 이주화제는 순환하는 줄기 세포들 상의 CXCR4의 증진된 발현에 관한 것이다.
본 명세서에 사용된 바의 "버섯 다당류들"은 동충하초, 헤르시시움 에리나시우스, 및 영지와 같은 버섯들의 다양한 종들에서 주로 발견되는 글루칸을 의미한다. 이것은 또한 동물들 및 인간들에서 타고난 및 세포-매개된 면역 반응들을 증진시킬 수 있고, 항종양 활성들을 나타낼 수 있는 약용 버섯들로부터 수많은 생물 활성 다당류들 또는 다당류-단백질 착물들을 포함한다.
본 명세서에 사용된 바의 "제약학적으로 허용되는 담체들"은 본 발명에 유용할 수 있는 종래의 제약학적으로 허용되는 담체들을 의미한다.
본 명세서에 사용된 바의 "적하수오" 또는 "P. 멀티플로륨"은 중앙 및 남부 중국에서 고유한 나무가 우거진 괴경으로부터 2-4m 높이로 성장하는 초본 다년생 덩굴의 종들을 의미한다. 잎들은 3-7 cm 길이 및 2-5 cm 폭이고, 넓은 화살촉-형상이며, 전체적인 여백이 있다. 꽃들은 6-7mm 직경이고, 백색 또는 녹색을 띤 백색이며, 최장 10-20 cm 길이의 짧고, 치밀한 원추꽃차례들로 생산된다. 열매는 2.5-3 mm 길이의 수과이다. 그것은 또한 하수오, 적하수오, 적백하수오, 플리세플라워, 하수오, 또는 Fo-Ti로서 공지되어 있다.
본 명세서에 사용된 바의 "다당류"는 분지되거나 또는 분지되지 않은 사슬들에서 글리코시드에 의해 연결된 약 10 이상의 단당류 잔기들의 중합체를 의미한다.
본 명세서에 사용된 바의 "전구 세포"는 정의된 세포 계통에서 후손을 증가시키는 세포를 의미한다.
본 명세서에 사용된 바의 "촉진하다" 및/또는 "촉진하는"은 세포 또는 유기체의 특정 작용에서의 증대를 의미한다. 일 구체예에서, 촉진한다는 것은 멜라닌 세포 유도된 줄기 세포들의 동원에 관한 것이다. 또 다른 구체예에서, 촉진한다는 것은 줄기 세포들의 멜라닌 세포들로의 분화에 관한 것이다.
본 명세서에 사용된 바의 줄기 세포의 "모집"는 순환계 내의 줄기 조직 또는 장기 내의 특정 부위로 이주하는 과정을 의미한다. 모집은 화학 유인 물질 신호 또는 세포 수용체와 같은 화합물 또는 분자에 의해 촉진될 수 있다. 예를 들면, CXCR4 및 SDF-1 모두는 줄기 세포 귀환 및 이주에서 역할들을 확인하였다.
본 명세서에 사용된 바의 "이형제"는 장기의 조직으로부터 줄기 세포들의 방출 및 이탈을 촉진할 수 있는 동원화제들이다. 장기의 조직으로부터 줄기 세포들의 방출은 예를 들면, 순환계 또는 면역 체계 내의 순환하는 줄기 세포들의 증가에 의해, 또는 골수와 같이 장기의 조직으로부터 줄기 세포들의 이탈과 관련된 마커들의 발현에 의해 나타낼 수 있다. 이형제들의 예들은 미역, 및 적하수오 또는 그의 추출물들과 같은 조류의 추출물로부터 얻어진 바의 후코이단을 포함한다. 일 구체예에서, 이형제는 골수-유도된 줄기 세포들 및/또는 말초 혈액 내의 조혈 줄기 세포들의 수를 증가시킨다. 또 다른 구체예에서, 이형제는 말초 혈액 내에서 순환하는 CD34^고등 (CD34+) 세포들과 같은 줄기 세포들의 수에 영향을 미친다.
본 명세서에 사용된 바의 "위성 세포"는 종종 근육 조직의 주변부에 위치하고, 조직 복구 및 재건을 돕기 위해 근육 내로 이주할 수 있는 근육 특이적 줄기 세포를 의미한다.
본 명세서에 사용된 바의 "줄기 세포들"은 말기에 분화되지 않고, 그러므로 다른 유형의 세포들을 생산할 수 있는 세포들이다. 줄기 세포들의 특성은 심장 세포들, 피부 세포들, 또는 신경 세포들과 같이 특정 형상들 및 특화된 기능들을 갖는 성숙한 세포들로 발달할 잠재성이다. 줄기 세포들은 전능성, 다분화능, 및 다능성을 포함하는 3가지 유형들로 나뉘어진다. "전능성 줄기 세포들"은 체내의 임의의 세포로 성장 및 분화할 수 있고, 따라서 전체 유기체의 세포들 및 조직들을 형성할 수 있다. "다분화능 줄기 세포들"은 1개 이상의 세포 또는 조직 유형으로 자기-갱신 및 분화할 수 있다. "다능성 줄기 세포들"은 성체 세포 또는 조직 유형들로 분화할 뿐만 아니라 자기-갱신될 수 있는 클로날 세포들이다. 다능성 줄기 세포 분화는 감소된 분화 가능성의 선조 세포들 또는 아세포들로 분화되는 중간 단계를 포함할 수 있지만, 여전히 특정 계보의 다른 세포들로 성숙 할 수 있다. 본 명세서에 사용된 바의 용어 "줄기 세포들"은 자기-갱신 및 분화할 수 있는 다분화능 줄기 세포들 및 다능성 줄기 세포들을 의미한다. "골수-유도된 줄기 세포들"은 조혈 시스템을 재구성할 수 있고, 내피 세포, 중간엽, 및 다분화능 능력들을 소유할 수 있는 골수에서 발견되는 가장 원시적인 줄기 세포들이다. 줄기 세포들은 부착성 기질 세포 유형으로서, 또는 세포 표면 상에 또는 세포가 세포 표면 CD34에 대해 음성인 방식으로 CD34를 발현하는 더욱 분화된 세포로서, 골수 내에 상주할 수 있다. "성체 줄기 세포들"은 자기-갱신에 대한 일부 가능성이 있는 성체 유기체들에서 발견되는 줄기 세포들의 개체군이며, 여러 세포 유형들로 분화할 수 있다. 줄기 세포들의 다른 예들은 골수 기질 세포들 (MSCs), HSC, 다능성 성체 전구 세포들 (MAPCs), 매우 작은 배아-형 줄기 세포들 (VSEL), 외배엽-형 줄기 세포 (ELSC) 또는 할구-형 줄기 세포 (BLSC)이다.
본 명세서에 사용된 바의 "줄기 세포 순환제" (SCCA), "동원화제", 및/또는 "동원 인자"는 1개 이상의 화합물들, 항체들, 핵산 분자들, 단백질들, 다당류들, 세포들, 또는 순환계로부터 조직 또는 장기 내로 줄기 세포들의 방출, 순환, 귀환 및/또는 이주에 영향을 미치는 뉴로펩티드들 및 기타 시그널링 분자들을 포함하지만 이들로만 제한되지 않는 다른 분자들을 의미한다. 분자화제 자연적으로 발생하는 분자 또는 합성 분자일 수 있다. 동원화제들의 예는 이형제가 장기의 조직으로부터 줄기 세포들의 이탈을 촉진할 수 있는 "이형제들", 및 이주화제가 세포가 순환계로부터 조직 또는 장기 내로 이동하는 과정을 촉진할 수 있는 "이주화제들"를 포함한다.
본 명세서에 사용된 바의 "피험자"는 포유류 및 반려 동물들, 농장 동물들 및 동물원 동물들을 포함하지만 이들로만 제한되지 않는 다른 동물들을 포함하는 모든 동물들을 포함한다. 용어 "동물"은 예를 들면, 포유 동물, 새, 유인원, 개, 고양이, 말, 소, 설치류, 등을 포함하는 범주인 임의의 살아있는 다세포 척추 동물 유기체들을 포함할 수 있다. 마찬가지로, 용어 "포유 동물"은 인간 및 인간 이외의 포유 동물들 모두를 포함한다.
본 명세서에 사용된 바의 "치료학적 유효량"은 치료 중인 피험자에서 목적하는 효과를 얻기에 충분한 특정 조성물, 또는 조성물 중의 활성제의 양이다. 예를 들면, 이것은 조직을 보충, 복구, 또는 다시 젊게 하는 줄기 세포들의 이주를 증진시키는데 효과적인 양이다. 또 다른 구체예에서, "치료학적 유효량"은 혈류 중의 순환하는 줄기 세포들의 증가된 레벨들로 나타낼 수 있는 바와 같이, 줄기 세포들의 증가하는 방출과 같이 줄기 세포들의 트래피킹을 증진시키는데 효과적인 양이다. 훨씬 또 다른 구체예에서, "치료학적 유효량"은 혈류 중의 순환하는 줄기 세포들의 감소된 레벨들 및/또는 귀환 및 이주와 관련된 표면 마커들의 발현으로 나타낼 수 있는 바와 같이, 순환계로부터 조직들 또는 장기들로의 줄기 세포들의 귀환 및 이주을 증진시키는데 효과적인 양이다. 치료학적 유효량은 피험자의 생리적 상태 (연령, 성별, 질병 유형 및 단계, 일반적인 신체 상태, 주어진 복용량에 대한 응답성, 원하는 임상 효과를 포함함) 및 투여 경로를 포함하지만, 이들로만 제한되지 않는 각종 인자들에 따라 변화할 수 있다. 임상 분야 및 약리학적 분야의 숙련자라면 통상의 실험을 통해 치료학적 유효량을 결정할 수 있을 것이다.
본 명세서에 사용된 바의 "트래피킹"은 순환계 또는 면역 체계 내에서 여행하고, 조직 및/또는 장기 내의 사이트를 향하여 편재화되는 원래 조직으로부터 세포의 이동 과정을 의미한다. 트래피킹은 또한 골수로부터 줄기 세포들의 이탈과 같은 원래 조직으로부터 방출에 의해 시작하는 줄기 세포 동원을 포함한다. 트래피킹은 원래 조직으로부터 세포의 이동, 내피 세포로의 접착에 의한 귀환, 윤회, 및 표적 조직 및/또는 장기 내에서의 최종 이주를 추가로 포함한다. 게다가, 트래피킹은 면역 체계의 세포의 이동 과정을 포함할 수 있다. 트래피킹의 하나의 특정한 비제한적인 예는 줄기 세포의 표적 장기로의 이동이고, 이주라 칭하기도 한다. 트래피킹의 또 다른 특정한 비제한적인 예는 골수를 떠나 표적 장기로 이동하는 B-세포 또는 전-B-세포의 이동이다.
본 명세서에 사용된 바의 "치료한다", "치료하는" 및 "치료"는 치료적 처치 및 예방적 처치 모두 또는 예방 조치들을 의미하고, 여기서 그 목적은 치료가 궁극적으로 성공적이지 않더라도 표적화된 상태, 질병 또는 장애 (총체적으로 "질병")을 방지하거나 또는 느리게 (경감)시키는 것이다. 치료가 필요한 사람들은 이미 그 질병에 걸린 사람들뿐만 아니라 그 질병에 걸릴 경향이 있는 사람들 또는 그 질병이 방지되어야 하는 사람들을 포함할 수 있다.
기재된 바와 같이, 줄기 세포들은 더 특화된 세포들로 분화되는 능력을 갖는 독특한 세포들이다. 줄기 세포의 하나의 특정 유형인 조혈 줄기 세포들 (HSCs)은 많은 상이한 유형의 혈액 세포들로 분화할 수 있다. 또한, HSCs는 전형적으로 골수 내에 상주하며, 여기서 세포들의 증식 및 자기-갱신은 HSCs가 조혈 시스템의 지원 및 유지에 연관되게 한다. 기존 과학 문헌은 주로 조혈 계통 세포 유도체들로 발전할 HSCs의 잠재성에 초점을 맞추어 왔다. 부각되는 증거는 HSCs가 비조혈성 조직 특이적 세포들로 역시 분화하는 용량을 추가로 확인하였다. 최근에, HSCs는 근육 세포, 간세포, 골 세포, 신경교 세포들, 및 뉴런들과 같은 각종 조직-특이적 세포 유형들로 분화할 수 있는 능력을 갖는 것으로 밝혀졌다. 결과적으로, HSCs는 실질적으로 신체의 모든 세포 유형의 일정한 유지 및 면역 보호에 책임이 있는 혈액 및 면역 세포들을 형성한다.
마찬가지로, 골수줄기 세포들 (BMSCs)은 다른 조직들의 세포들로 될 현저한 능력을 갖는 것으로 최근에 밝혀졌다. 골수에서, 줄기 세포들은 "비대칭 세포 분열"로서 알려진 공정을 사용하여 복제되고, 에에 따르면 2개의 딸 세포들은 동일하지 않고; 그 중 하나의 세포는 원래의 DNA를 유지하고 골수 내에 남아있는 한편, 나머지 세포는 DNA 사본들을 함유하고 그것이 복구를 필요로 하는 다양한 조직들 내로 이주하는 혈액 내에 방출된다. BMSCs는 전통적으로 가소성에 대한 잠재성이 거의 없고, 그것들이 적혈구 세포들, 림프구들, 혈소판, 뼈 및 결합 조직으로 발달하는데 있어서 제한되는 것으로 간주되었다. 그러나, BMSC의 예외적인 가소성을 나타내는 많은 과학적 연구가 과거 수년간 출판되어 왔다. 예를 들면, 이식 후, BMSCs 및 HSCs는 근육세포들 (Abedi 등, 2004), 심장세포들 (Fraser 등, 2004), 내피 모세 혈관 세포들 (Asahara 등, 2004), 간 세포들 (Jang 등, 1999), 뿐만 아니라 폐, (Krause 등, 2001), 장 (Krause 등, 2001), 피부 (Branski 등, 2008), 및 뇌 세포들 (Dezawa 등, 2005)로 될 능력을 갖는 것으로 나타났다. 더 예시적인 예로써, Jang 등 (2004)은 HSC가 특정 간-유도된 분자들과 접촉함에 따라 간 세포들로 되는 능력을 나타낼 뿐만 아니라, 이러한 과정이 몇 시간 내에 발생하는 실험을 수행하였다. 간단히, HSCs는 반투과성 막 (분자들이 통과하기에 충분히 크지만, 세포들이 하나의 구획에서 다른 구획으로 통행하는 것을 방지하기 충분히 작은 공극들, 공극 크기 0.4 μm)에 의해 분리된 정상 또는 손상된 간 조직 중의 하나의 공동-배양되었다. HSCs (CD45) 또는 간 세포들 (알부민) 중의 하나에 특이적인 분자들을 검출하기 위한 면역 형광 분석 방법을 사용하여, 본 연구자들은 상부 구획에 놓인 세포들의 개체군의 변환에 따를 수 있었다. HSCs가 8시간 동안 단독으로 배양되었을 때, 그것들은 CD45만을 발현하였고 어떠한 알부민도 발현하지 않았으며, 이는 어떠한 HSCs도 간 세포들로 분화되지 않았음을 지시한다. 그러나, HSCs가 손상된 간 조직에 노출되었을 때, 그것들은 빠르게 알부민에 대해 양성으로 된다. 시간이 경과함에 따라, 알부민에 대해 양성인 개체군이 증가하기 시작하였을 때, CD45에 대해 양성인 세포들의 개체군은 감소하기 시작했다. 알부민-양성 세포들은 그 절차에서 8시간 만큼 일찍 나타났고 48시간에 3.0%로 빈도의 증가가 나타났다. 전환은 최소였고, HSCs가 손상되지 않은 간 (부상에 대해 대조군)에 노출되었을 때 지연되었다.
HSCs 및 BMSCs는 신체의 조혈 및 면역 체계들을 유지하는데 있어서 전통적인 이들의 역할을 넘어 신체 내의 다양한 조직들 및 장기들의 치유 및 재생 공정들에서 중요한 역할을 하기 때문에, 줄기 세포 트래피킹의 활성화 및 증진은 이들 생리적 공정들을 증폭시킬 수 있고 다양한 병리 현상들에 대한 잠재적 치료를 제공할 수 있다. HSCs 및 BMSCs의 고전적인 제공원은 골수이고, 이는 엉덩이, 갈비뼈, 흉골 및 다른 뼈 구조물들을 포함한다. 뼈는 특정 중간엽 세포 유형 (조골 세포), 세포외 매트릭스 당단백질들 및 독특하게 풍부한 미네랄 시그니처와의 상호 작용을 포함하여 HSCs 및 BMSCs에 대한 독특한 규제 미세 환경을 제공한다. (Adams 및 Scadden, 2006) 이러한 줄기 세포 "틈새"는 특정 생리적 조건들에 대한 많은 임계 분자 상호 작용들을 포함한다. 틈새는 줄기 세포 활성에 뿌리를 둔 재생 공정들의 변화를 초래하는 조직의 상태의 변화들에 대한 중요한 초점일 수 있다. (Adams 및 Scadden, 2006)
골수에서 발견된 HSCs의 개체군들을 넘어, HSCs는 또한 정상적인 건강한 사람들의 말초 혈류에 존재한다. 적은 수의 줄기 및 전구 세포들이 혈류에서 순환한다는 것이 수십 년 동안 알려져 왔지만, 더욱 최근의 연구들은 더 많은 수의 HSCs가 과립구-집락 자극 인자 (G-CSF)와 같은 사이토킨을 공여자에게 주입함으로써 골수로부터 혈액으로 동원되도록 회유될 수 있다. 이러한 진보에도 불구하고, 줄기 세포들이 골수로부터 방출되어 조직 및/또는 장기 내의 한 사이트를 향하여 이주하는 자연적인 과정은 완전히 이해되지 않는다. 선도적인 모델은 케모카인, 기질-유도된 인자-1 (SDF-1) 및 그의 특정 수용체인 CXCR4를 포함한다. 이 용량에서, SDF-1의 CXCR4에 대한 결합은 세포막 표면 상의 접착 분자들의 증가된 발현을 통해 줄기 세포들의 골수에 대한 접착을 유도한다. 따라서 줄기 세포들의 골수에 대한 접착의 중단은 줄기 세포들의 말초 혈류로의 동원을 촉진하다. (도 1C) G-CSF 또는 IL-8과 같은 일부 인자들은 프로테리틱 효소들의 상승된 활성화 또는 SDF-1 리간드의 악화를 통해 접착에 의해 방해할 수 있다. (Drapeau 2010) L-셀렉틴 차단제들과 같은 다른 유형의 분자들은 대신에 차례로 골수 환경으로의 줄기 세포 접착을 감소시키는 CXCR4 발현을 하향 조절할 수 있다. 일반적으로 말하자면, SDF-1의 CXCR4에 대한 결합을 증진시키는 것은 부착을 촉진하고, 그러므로 CXCR4 발현을 감소시키는 황산화된 푸칸들과 같은 L-셀렉틴 차단제들은 줄기 세포 동원을 시동할 수 있다. (Drapeau 2010)
말초 혈류 내에서 순환하는 줄기 세포들은 귀환 및 관외 유출을 통해 복구 및 재생을 필요로 하는 조직의 사이트들로 모집된다. 줄기 세포들의 혈류 내로의 동원 및 조직 부된 부위로의 후속 이주는 기계적 및 화학적 인 물질 신호들의 조합으로부터 기인한다. (Drapeau 2010) 기계적 힘 또는 다른 인자들은 줄기 세포들의 표면 상의 L-셀렉틴들을 활성화할 수 있다. L-셀렉틴들의 활성화는 차례대로 수용체인 CXCR4의 상승된 발현을 촉진할 수 있다. 조직 부상된 부위에서 세포들은 또한 SDF-1 리간드를 분비할 수 있고, 그에 따라 수용체 CXCR4를 발현하는 줄기 세포들을 부상 부위로 이끌 수 있다. SDF-1과 CXCR4의 상호 작용은 말초 혈류 내의 줄기 세포의 순환을 중단시키기에 충분한 접착을 촉진한다. (도 1B) 이러한 모델을 기반으로, 황산화된 푸칸들과 같은 L-셀렉틴 차단제들은 HSCs를 혈류 내로 동원할 수 있는 임계 용량을 소유할 수 있고, 유기체 내에서 세포들 및 조직들의 귀환, 관외 유출 및 그의 재생 유지 및 복구를 촉진하는 조직 내로의 이주가 후속한다. G-CSF가 부상된 조직으로부터 방출되고 혈류 중의 그의 존재가 골수로부터 HSC 방출을 시동하는 반면에, L-셀렉틴 차단제들로 구성된 식이 보조제들은 아마도 신체의 자연적인 재생 및 복구 현상을 지원할 수 있다.
놀랍게도, 고대의 전통적인 중국의 의학 (TCM) 문헌에서, Jing이라 칭하는 개념을 포함하여 유사한 공정들의 설명이 있다. 용어가 시간이 경과함에 따라 변하였고, 오늘날 본질적으로 "정액"를 의미한다 하더라도, 고대의 텍스트들은 2가지 상이한 Jing에 대해 언급였고: 즉, 수정 시점에 존재하고 태아의 형성으로 유도되는 하나의 원시적인 것과 신체 내에 남아있는 나머지 것은 재생되고 치유되었다. 현대적으로, 타고난 치유 및 재생 능력의 개념은 징의 TCM 개념에 의해 예시되는 바와 같이, 이들 공정들을 용이하게 하기 위해 배아 및 성체 줄기 세포들의 현저한 용량과 일치한다. (Yang 등 2009) 징을 지원하는 것으로 알려진 허브들이 "혈액을 탄력있게 하고", 두발을 그들의 자연적인 색상으로 되돌리고, 전체적인 재생 특성들을 위해 사용된다는 것에 주의하는 것은 흥미롭다. 일 예는 징을 지원하는 것으로 공지되고 장수를 위해 사용되는 고지 베리 (영하구기자)이고; 고지 베리는 줄기 세포 이주를 지원하는 것으로 나타나고 있다. 또 다른 예는 스템인핸스이고, 줄기 세포 동원을 지원하는 것으로 공지된 청-조류아파니조메논플로스 아쿠아에 (AFA)를 함유하는 보조제인 것은 두발 색채를 역으로 돌리는데 도움이 되고, 전체적인 치유 및 재생을 지원하는 것으로 나타났다. (Jensen 등, 2007) 스템인핸스와 같은 조성물들이 신체 내의 줄기 세포 활성에 영향을 미칠 때, 이들 효과는 징을 자극하는 것으로서 이해될 수 있다. 반대로, 징을 자극하는 것으로 공지된 TCM 의약품들 및 허브들이 증식, 이주 및 동원과 같이 줄기 세포 활성들에 대한 효과들을 갖는 것으로 나타낼 수 있는지를 이해하는 것은 크게 흥미롭다. 그러므로, 본 발명자들은 줄기 세포 이주 및 동원에 대한 영향들을 향한 특정 견해에 따라, 징, 적하수오를 자극하기 위해 널리 사용되는 허브의 효과들을 연구하였다.
적하수오 . 플리스플라워 뿌리로도 알려진 적하수오 식물의 건조된 뿌리 괴경은 하수오라 칭하는 전통적인 중국 의약품으로서 사용되어 왔고, 이러한 투약은 사망을 선고 받고 음식이나 음료 없이 투옥되었던 유명한 중국인 육군 장교의 이야기로부터 TCM의 악명을 얻었다. 덩굴형 잡초인 적하수오의 잎들 및 뿌리들을 소비함으로써 생존한, 그 장교의 체포자들은 후에 그의 유해가 여전히 윤기나는 검은 두발을 갖는 것을 발견하였다. 이 이야기의 기원은 출처가 의심스럽지만, 그것들은 적하수오가 신체의 재생 및 원기를 회복시키는 잠재력으로의 태핑을 위한 중요한 특성들을 갖는다는 오래된 관념을 설명하는 작용을 한다. 최근의 과학적 연구는 적하수오의 추출물들이 사실상 소닉 헤지호그 (Shh)의 증가된 발현 및 β-카테닌 발현을 통해 - 초기 배아 발생 및 줄기 세포 정체성을 유지하는 것 모두에 연관된 2개의 중요한 경로들을 통해 모낭 성장을 촉진할 수 있음을 확인하였다. (Park 등 2011)
적하수오 추출물들의 추가의 분석은 이 식물이 생물 활성화합물들의 풍부한 제공원임을 확인하였고, 2개의 현저한 예들은 안트라퀴논들 및 유도체들 및 하이드록시 스틸벤들이다. 안트라퀴논들 및 유도체들은 항말라리아, 완화제, 및 화학요법 치료들을 위한 근간으로서 작용해왔다. 2,3,5,4'-테트라하이드록시스틸벤-2-O-β-D-글루코시드와 같은 하이드록실 스틸벤들은 상이한 신경 퇴행성 질병들의 증상들을 막는 중요한 신경 보호 효과들을 제공하는 것으로 나타나고 있다. 함께, 이들 결과는 적하수오 추출물들의 성분들이 가능하게는 염증을 조절하고, 암 증식의 위험을 감소시키고(감소시키거나), 신체의 세포들, 조직들, 및 장기들에 대한 보호 효과들을 제공함으로써 신체를 치유 및 재생시키기 위한 중요한 특성들을 갖는 것을 지시한다.
적하수오 내의 이들 성분들의 효과는 특정한 특이적 조건들에 대해서는 다소 이해되지만, 적하수오의 성분들이 신체 내의 줄기 세포 활성에 구체적으로 어떻게 영향을 미칠 수 있는지에 관한 지식은 훨씬 적다. 이것은, 기재된 바와 같이, 줄기 세포들이 신체의 자연 치유 및 재생 메커니즘들에서 통합적 역할을 한다는 것을 고려하면 놀랍다. 피험자에 대한 몇몇 기존 연구들 중의 하나는 생쥐들에서 적하수오 추출물들의 투여 후 골수줄기 세포들 및 림프구성 전구 세포들의 수의 증가로 나타낸 바와 같이, 적하수오 추출물들이 줄기 세포들 및 전구 세포들의 증식을 촉진함을 지시한다. (Zhiweng 등 1991). 마찬가지로, 미국 특허 출원 제12/006,221호는 생쥐들에서 투여 후 GM-CSF 및 줄기 세포인자 (SCF) 발현의 증가를 기재하고 있다. 이들 결과들은 GM-CSF 및 SCF 모두가 상기 기재된 바와 같이 줄기 세포 이주 및 동원에서 중요한 역할들을 수행하는 것으로 연루되었음을 고려하면, 적하수오 추출물들의 줄기 세포 활성에 대한 잠재적인 효과들에 관한 흥미로운 질문들을 제공한다.
후코이단 . 후코이단은 정맥 내 주사 직후에 골수 내의 구획들로부터 말초 혈류 내로 HSCs의 이탈을 촉진하도록 문서화된 황산화된 푸칸 다당류 L-셀렉틴 효현제이지만, 이러한 효과는 L-셀렉틴의 그의 자극에 관련이 없는 것 같았다 (Frenette 등, 2000). 말초 혈류 내의 HSCs의 순환은 신체 내의 줄기 세포 재생 및 복구 메커니즘들을 촉진하는 임계적 단계이다. 황산화된 푸칸으로서, 후코이단은 조류의 다양한 종들에서 발견된다. 다른 황산화된 푸칸들은 또한 극피 동물 (예, 성게 및 해삼)와 같은 동물 종들에서 발견되고 있다.
정맥내 후코이단 투여 후 HSCs의 상승된 레벨들을 현저히 나타내는 동물 모델들에서 생체 내 데이터에도 불구하고, 인간 피험자에서 양성 임상 효과들의 관찰들은 훨씬 더 제한되었다. 보고된 연구들은 중요한 트래피킹 수용체인 CXCR4를 발현하는 HSCs의 백분율은 경구 후코이단 투여 후 4일 후에 현저히 증가하였음을 보였다. (Irhimeh 등, 2007) 그러나, 말초 혈액 내에서 순환하는 HSCs의 절대적인 수에 있어서 약간의 변화 만이 관찰되었다.
기재된 바와 같이, 후코이단 (또한 당업계에서 푸코이딘 또는 푸칸설페이트로 공지됨)은 황산화된 푸코스 다당류 L-셀렉틴 리간드이다. 셀렉틴 활성은 시알릴화, 푸코실화, 및 황산화 등의 중요한 탄수화물 또는 폴리펩티드 변이들에 좌우된다. 후코이단과 같은 황산화된 푸칸들의 P- 및 L-셀렉틴에 대한 결합 부위들의 존재는 적어도 부분적으로는 후코이단이 BM으로부터 HSCs의 분리를 촉진하는 메커니즘에 의한 것으로 나타나고 있다 (Frenette 등, 2000, 2461, Jensen 등, 2007, 190) 아마도 더 현저하게는, 후코이단과 같은 황산화된 푸칸들은 SDF-1 상에 존재하는 헤파린-결합 도메인으로의 완성적인 결합을 통해 내피 세포 표면들 또는 골수 상에 격리된 SDF-1을 치환하는 것으로 나타나고 있다. 후코이단에 의한 SDF-1의 헤파린-결합 부위의 점유는 세포 표면들에 테더링되는 것을 방지하고, 그에 따라 혈장 중의 순환하는 SDF-1을 증가시킨다. (Sweeney 등, 2008) 임의의 특정 이론에 의해 제한되지 않고, 혈류 중의 SDF-1 리간드의 증진된 레벨들은 BM으로부터 HSCs를 발현하는 CXCR4 수용체의 이탈을 촉진할 수 있다. (Sweeney 등, 2008) (도 1C) 이러한 모델에 기초하여, 본 발명자들은 후코이단과 같은 L-셀렉틴 리간드는 HSCs를 동원시키는 임계 용량을 가질 수 있고, 후코이단으로 구성된 식이 보충제의 경구 투여가 신체 내의 자연적인 재생 및 복구를 가장 잘 지원할 수 있다고 가설하였다.
현저한 단점들이 인간의 치료 용도에 대한 제한들을 제시하였다라도, 동물 모델들에서 생체 내 데이터를 강제하는 것은 생쥐들 및 영장류들에서 정맥내 (IV) 후코이단 투여 후 순환하는 HSCs의 현저하게 상승된 레벨들을 보여준다. 최근 보고서들은 후코이단 (출처를 알 수 없음)을 생쥐들에 주입한지 3시간 후 미처리된 대조군들에 비해, 순환하는 HSCs, HSC 전구 세포들 및 유도체 세포 유형들 (적혈구 버스트 형성 단위들, 과립구, 적혈구, 대식 세포, 거핵 세포 집락 형성 단위들, 과립구, 적혈구, 대식 세포, 및 과립구 대식 세포 집락-형성 단위들을 포함함)의 레벨에 있어서 극적인 12배의 증가를 보이고 있다. HSCs, HSCs 전구 세포들 및 유도체 세포유형들의 레벨들에 있어서 지속되는 증가의 유사한 결과들이 3일 동안 매일 주사한 후 보고되었다. (Sweeney 등, 2008) 영장류들에서 후코이단의 주입은 또한 투여 후 6시간 후에 11-26배 만큼 HSCs 및 HSC-유도체 레벨들을 증가시키는 것으로 나타났으며, 지속되는 상승이 이후 24시간에 이르기까지 관찰 가능하였다. (Sweeney 등, 2000) 이들 긍정적인 관찰들에도 불구하고, 몇몇 도전 과제들이 인간 피험자들에서 후코이단의 치료적 사용을 방해할 수 있었다. 지속되거나 또는 반복되는 상승 기간들이 치료적인 줄기 세포 활성 아래 놓인 줄기 세포 귀환 및 관외 유출 공정들을 가능케 하는데 필요할 수 있기 때문에, 순환하는 상승된 HSCs 및 골수-유도된 줄기 세포들의 임시적 및 일시적 효과가 줄기 세포 재생 및 복구 메커니즘들의 긍정적인 임상적 이점들을 완전히 실현하는 데는 실패할 것이다. 이러한 제한은 IV 주사를 정기적으로 투여하는 어려움 및 불편함의 관점에서 더 심각해졌다.
인간 피험자들에서 기존 관찰들은 제한되고, 인간들에서 경구 후코이단 투여에 대해 이용할 수 있는 데이터는 IV 주사를 사용하는 동물 연구들의 긍정적인 임상 효과들을 반영하지 않는다. 다른 사람들에 의해 보고된 연구들은 중요한 트래피킹 수용체, CXCR4를 발현하는 HSCs의 백분율이 경구 후코이단 투여 (미역으로부터 10% w/w 또는 75% w/w의 후코이단 추출물들 매일 3g)후 12일 후에 현저히 증가하였음(45%에서 90%로)을 보였다. 그러나, 단지 약간의 변화 (~ 12%)가 말초 혈액 중에서 순환하는 HSCs의 절대 수에서 관찰되었다 (최대 효과는 후코이단 추출물 투여 후 4일 후에 1.64 내지 1.85 세포들/μl였다). (Irhimeh 등, 2007) 중요하게는, 경구 투여를 포함하는 치료적 용도를 위해, 후코이단이 위의 산성 조건들을 생존할 수 있고, 부작용을 나타내지 않는다. (Irhimeh 등, 2007) 이는 후코이단을 대사하는 촉매적 후코이다나제가 지상 포유 동물들에서가 아니라 해양 무척추 동물들에서만 발견된다는 보고들과 일치한다. (Berteau 및 Mulloy, 2003) 이는 지속되는 치료 효과를 위해 후코이단을 포함하는 투여된 황산화된 푸칸의 높은 지속성 및 안정성의 중요한 치료 효과를 제공할 수 있다. 혈류 내로의 확산은 위의 고도의 산성 조건들 외에 먼저 입, 식도, 및 내장에서 효소적 공정들을 생존시켜야 하는 경구 용도로 특히 이상적이다.
본 발명자들은 후코이단 및 적절한 복용 양생법들의 제공원이 경구 후코이단 투여를 통해 HSC 동원을 촉진하기 위한 중요한 특징들임을 발견하였다. 후코이단은 황산화된 푸칸들의 더 광범위한 클래스의 구성원이고, 이는 L-푸코스 내에서 풍부한 다당류들이고 2개의 제공원: 즉, 조류 및 해양 무척추 동물들에서 주로 얻는다. 이들 2개의 제공원들로부터 얻은 황산화된 푸칸들은 조성물 및 구조에 있어서 크게 다르다. 분자 구조의 이러한 다양성은 상이한 종들의 조류로부터 후코이단들에 걸쳐 추가로 존재한다. 일반적으로 L-푸코스로 구성된 ~20,000 분자량 다당류로서 기재되었지만, 정확한 후코이단 구조들은 부분적으로 소스 유기체에 의존한다. 예로서, F. 베스쿨로서스로부터 가장 잘-연구된 후코이단은 α(1→3) 글루코시드 결합들 및 위치 4에 황산염 기들을 갖고, 5 단위들 마다 황산화된 푸코스 분지들을 갖는 L-푸코스로 주로 구성된 것으로 보고되었다. 이와 대조적으로, 상이한 조류인 아스코필럼 노도섬으로부터 후코이단은 다당류 형성을 위해 대체하고, 아마도 핵자기 공명(NMR) 연구들에서 보여주는 바와 같이 황산화된 분지화 지점들이 거의 없는 반복되는 α(1→3) 및 α(1→4) 글루코시드 결합들을 큰 비율로 갖는다 (Berteau, 2003). 요컨대, 상이한 종들로부터 후코이단들은 구조적으로 독특하고, 이질성이고, 다양하다.
본 발명은 동원화제를 투여함으로써 필요한 피험자에게 광범위한 임상적 및 생리학적 잇점들을 제공하는 신규한 조성물들 및 방법들을 제공한다. 임의의 특정 이론으로 한정하고자 하는 것은 아니지만, 본 연구자들은 본 발명의 조성물들의 투여를 통해 얻은 유리한 및 다른 생리적 결과들이 동원화제의 투여에 후속하는 줄기 세포 트래피킹 및 이주로부터 기인한다고 믿는다.
다양한 구체예들에서, 동원화제는 다음: 적하수오, 구기자 바라브룸, 남조류 (예아파니조메논플로스 아쿠아에 (AFA)), 초유, 버섯다당류들 (예, 동충하초, 노루궁뎅이 버섯 (사자의 갈기), 영지 (레이쉬)), 후코이단 (선택적으로 조류들로부터 추출됨, 예, 미역, 민가지말큰실말(리무 )), 스피룰리나 (예, 아르쓰로스피라 플레이튼시스 , 아르쓰로스피라 맥시마), 그의 유사체들, 그의 유도체들, 그의 추출물들, 그의 합성 또는 제약학적 등가물, 그의 분획들, 및 상기 아이템들 중의 임의의 것의 배합물들을 군으로부터 선택된 1개 이상의 성분들을 포함한다. 동원화제들은 1개 이상의 조성물들 중에서 함께 조합될 수 있거나 또는 그것들은 섭생의 일부로서 별개로 투여 또는 소비될 수 있다. 그것들은 이형제로서 및 이주화제로서 모두 작용하는 것과 같이 별개의 생리적 효과들, 부가적인 효과들 및/또는 상호 상승 효과들을 가질 수 있다. 일부 구체예들에서, 동원화제는 이주화제로서 기능할 수 있고, 촉진하는 순환계로부터 조직 또는 장기 내로의 세포의 이동 과정을 촉진할 수 있다. 일부 구체예들에서, 동원화제는 이형제로서 기능할 수 있고, 원래 조직으로부터 줄기 세포들의 방출 및 이탈을 촉진할 수 있다.
일 구체예에서, 피험자는 적하수오와 다른 동원화제들의 혼합물을 제공받을 수 있지만, 동원화제, 예를 들면적하수오가 피험자에게 투여된다. 일부 구체예들에서, 피험자는 전체 적하수오 뿌리, 잎들, 줄기, 씨앗들, 열매들, 및/또는 다른 식물 부분들을 소비하고 소화시킨다. 전체 적하수오 뿌리, 잎들, 줄기, 씨앗들, 열매들, 및/또는 다른 식물 부분들은 신선할 수 있고, 냉동, 동결 건조, 탈수, 발효, 또는 어떤 다른 방식으로 보존될 수 있다. 그러므로, 본 명세서에 기재된 바의 적하수오는 전체 적하수오 뿌리, 잎들, 줄기, 씨앗들, 열매들, 및/또는 다른 식물 부분들을 포함한다. 다른 구체예들에서, 동원화제는 적하수오의 추출물, 또는 적하수오 추출물들의 다당류가 풍부한 분획, 또는 수용액들에 가용성인 분획, 또는 유기 용매들에 가용성인 분획에서 발견되는 화합물과 같이 적하수오로부터 추출된 단리된 성분 또는 화합물이다. 적하수오는 단리된 또는 정제된 기질로서 단독으로 제공될 수 있거나, 또는 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 조성물의 일부일 수 있다. 일 구체예에서, 적하수오 또는 그의 추출물들은 이주화제로서 기능할 수 있다. 일 구체예에서, 적하수오 또는 그의 추출물들은 이형제로서 기능할 수 있다.
적하수오에서 발견된 성분들의 추출물은 안트라퀴논들 및 유도체들, 하이드록실 스틸벤들, 레시틴, 크리스판올, 크리소판산, 크리스판올 안트론, 에모딘, 피스키온, 라인, 크리소판산안트론, 레스페라트롤, 피세이드, 2,3,5,4'-테트라하이드록시스틸벤-2-O-O-D-글루코피라노사이드, 2,3,5,4'-테트라하이드록시스틸벤-2-O-β-D-글루코피라노사이드-2''-O-모노갈롤 에스테르, 2,3,5,4'-테트라하이드록시스틸벤-2-O-β-D-글루코피라노사이드-3''-O-모노갈롤 에스테르, 2,3,5,4'-테트라하이드록시스틸벤-2-O-β-D-글루코시드, 갈산, 카테킨, 에피카테킨, 3-O-갈로일(-)-카테킨, 3-O-갈로일(-)-에피카테킨, 3-O-갈로일-프로시아니딘 B-2,3,3'-디-O-갈로일-프로시아니딘 B-2, 및 β-시토스테롤을 포함한다.
제조된 적하수오 추출물들 중의 성분들의 정체성 및 특성 (예, 안정성)은 추출을 위해 사용된 방법에 따라 변화할 수 있다. 예를 들면, 물 추출은 적하수오로부터 성분들을 추출하는 선도적인 방법이다. 그러나, 안트라퀴논들 및 유도체들과 같은 특정 성분들은 물에 매우 불용성이다. 안트라퀴논들 및 유도체들은 또한 실온에서 유기 용매들에 불용성이지만, 메탄올 또는 에탄올과 같은 고온유기 용매들 (예, 비등 온도)에서 가용성이다. 마찬가지로, 2,3,5,4'-테트라하이드록시스틸벤-2-O-β-d-글리코시드는 온도 및 pH 의존 방식으로 수용액들 중에서 용이하게 분해되는 것으로 알려져 있다 (Ren 등 2011) 그러므로, 적하수오의 추출물들이 당업계에 공지된 임의의 방법에 따라 제조될 수 있음이 이해된다. 이것은 물 추출, 유기 용매 추출 (예, 미국 특허 출원 제 12/006,221호), 또는 그러한 예시적 방법들의 조합들 (예, 혼합물들)을 포함한다. 사용될 수 있는 유기 용매들의 예들은 메탄올, n-헥산, 에틸 아세테이트, 및 n-부탄올을 포함한다. 2개 이상의 물 및/또는 유기 용매들의 조합물들은 상이한 파티션 층들 내의 상이한 성분들을 추출하기 위해 추가의 파티션 층들을 발생시키기 위해 함께 추가될 수 있다. 마찬가지로, 적하수오로부터 추출물은 신선하고 가공되지 않은 전체 식물들 또는 그의 부분들로부터 제조될 수 있거나, 또는 추출물들은 가공된 적하수오 전체 식물들 또는 그의 부분들로부터 제조될 수 있다. 예를 들면, 공정은 일 예가 발효인 당업계의 임의의 공지된 방법에 의해 수행될 수 있다. 공정은 유산균과 같은 세균에 의한 발효를 통해서와 같이 (Park 등, 2011) 또는 검은 콩들의 추가를 통해서와 같이 적하수오로부터 추출물들 내의 성분들의 생체 이용률을 향상시킬 수 있다.
일 구체예에서, 피검자는 남조류와 다른 동원화제들의 혼합물을 제공받지만, 동원화제, 예를 들면 아파니조메논플로스 아쿠아에 (AFA)와 같은 남조류가 피험자에게 투여된다. 일부 구체예들에서, 피험자는 전체 남조류를 소비하고 및 소화한다. 남조류는 신선할 수 있고, 냉동, 동결-건조, 탈수, 또는 어떤 다른 방식으로 보존될 수 있다. 일 구체예에서, 동원화제는 남조류의 추출물, 또는 남조류 추출물의 다당류가 풍부한 분획에서 발견되는 화합물, 또는 남조류 추출물의 수용성 구획 내의 화합물과 같이 남조류로부터 추출된 단리된 성분 또는 화합물이다.. 남조류는 단리된 또는 정제된 기질로서 단독으로 제공될 수 있거나, 또는 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 조성물의 일부일 수 있다. 일 구체예에서, 남조류는 이주화제로서 기능할 수 있다. 일 구체예에서, 남조류는 이형제로서 기능할 수 있다.
일 구체예에서, 피험자는 영하구기자와 다른 동원화제들의 혼합물을 제공받을 수 있지만, 동원화제, 예를 들면 영하구기자가 피험자에게 투여된다. 일부 구체예들에서, 피험자는 전체 영하구기자 베리들을 소비하고 및 소화한다. 베리들은 신선할 수 있고, 냉동, 동결-건조, 탈수, 또는 어떤 다른 방식으로 보존될 수 있다. 그러므로, 본 명세서에 기재된 바의 영하구기자는 전체 베리, 또는 영하구기자식물의 부분들 모두를 포함한다. 일 구체예에서, 동원화제는 영하구기자의 추출물, 또는 영하구기자추출물의 다당류가 풍부한 분획에서 발견되는 화합물과 같이 영하구기자로부터 추출되는 단리된 성분 또는 화합물이다. 영하구기자는 단리된 또는 정제된 기질로서 단독으로 제공될 수 있거나, 또는 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 조성물의 일부일 수 있다. 일 구체예에서, 영하구기자는 이주화제로서 기능할 수 있다. 일 구체예에서, 영하구기자는 이형제로서 기능할 수 있다.
일 구체예에서, 피험자는 초유와 다른 동원화제들의 혼합물을 제공받을 수 있지만, 초유가 피험자에게 투여된다. 일부 구체예들에서, 피험자는 전체 초유를 소비하고 소화한다. 초유는 신선할 수 있고, 냉동, 동결-건조, 탈수, 또는 어떤 다른 방식으로 보존될 수 있다. 일 구체예에서, 동원화제는 초유의 추출물, 또는 초유 추출물의 단백질이 풍부한 분획 내에서 발견되는 화합물과 같이 초유로부터 추출되는 단리된 성분 또는 화합물이다. 초유는 단리된 또는 정제된 기질로서 단독으로 제공될 수 있거나, 또는 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 조성물의 일부일 수 있다. 일 구체예에서, 초유는 이주화제로서 기능할 수 있다. 일 구체예에서, 초유는 이형제로서 기능할 수 있다.
일 구체예에서, 피험자는 버섯들과 다른 동원화제들의 혼합물을 제공받을 수 있지만, 버섯 또는 버섯들의 배합물이 피험자에게 투여된다. 일부 구체예들에서, 피험자는 전체 버섯들을 소비하고 소화한다. 버섯들은 신선할 수 있고, 냉동, 동결-건조, 탈수, 또는 어떤 다른 방식으로 보존될 수 있다. 일 구체예에서, 시약은 동 충하초또는 그의 추출물이다. 일 구체예에서, 동원화제는 영지 또는 그의 추출물이다. 일 구체예에서, 동원화제는 노루궁뎅이 버섯 또는 그의 추출물이다. 버섯들은 단리된 또는 정제된 기질들로서 단독으로 제공될 수 있거나, 또는 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 조성물의 일부일 수 있다. 일 구체예에서, 버섯들, 동충하초, 영지, 및/또는 노루궁뎅이 버섯은 이주화제로서 기능할 수 있다. 일 구체예에서, 버섯들, 동충하초, 영지, 및/또는 노루궁뎅이 버섯은 이형제로서 기능할 수 있다.
일 구체예에서, 피험자는 조류와 다른 동원화제들의 혼합물을 제공받을 수 있지만, 조류가 피험자에게 투여된다. 일부 구체예들에서, 피험자는 전체 조류를 소비하고 소화한다. 조류는 신선할 수 있고, 냉동, 동결-건조, 탈수, 또는 어떤 다른 방식으로 보존될 수 있다. 일 구체예에서, 동원화제는 민가지말 큰실말 또는 그의 추출물이다. 조류는 단리된 또는 정제된 기질들로서 단독으로 제공될 수 있거나, 또는 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 조성물의 일부일 수 있다. 일 구체예에서, 조류, 민가지말 큰실말은 이주화제로서 기능할 수 있다. 일 구체예에서, 조류, 민가지말 큰실말은 이형제로서 기능할 수 있다.
일 구체예에서, 피험자는 스피룰리나와 다른 동원화제들의 혼합물을 제공받을 수 있지만, 스피룰리나가 피험자에게 투여된다. 일부 구체예들에서, 피험자는 전체 스피룰리나를 소비하고 소화한다. 스피룰리나는 신선할 수 있고, 냉동, 동결-건조, 탈수, 또는 어떤 다른 방식으로 보존될 수 있다. 일 구체예에서, 동원화제는 아르쓰로스피라 플레이튼시스 , 아르쓰로스피라 맥시마, 또는 그의 추출물이다. 스피룰리나는 단리된 또는 정제된 기질로서 단독으로 제공될 수 있거나, 또는 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 조성물의 일부일 수 있다. 일 구체예에서, 스피룰리나는 이주화제로서 기능할 수 있다. 일 구체예에서, 스피룰리나는 이형제로서 기능할 수 있다.
피험자에게 치료학적 유효량의 적하수오를 투여함으로써 줄기 트래피킹을 증진시키는 하나의 방법이 본 명세서에 기재되어 있다.
일 구체예에서, 피험자는 1개 이상의 성분의 혼합물을 제공받을 수 있지만, 적하수오가 피험자에게 투여된다. 일부 구체예들에서, 피험자는 전체 식물 또는 식물의 부분들을 소비하고 소화한다. 적하수오는 신선할 수 있고, 냉동, 동결-건조, 탈수, 또는 어떤 다른 방식으로 보존될 수 있다.
대안의 구체예들에서, 적하수오의 추출물은 피험자에게 제공되거나 또는 투여된다. 또 다른 구체예에서, 적하수오는 전체 식물, 식물의 부분들, 및 그의 추출물들 모두를 포함한다. 또 다른 구체예에서, 적하수오는 단리된 또는 정제된 기질로서 단독으로 제공될 수 있거나, 또는 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 조성물의 일부일 수 있다. 또 다른 구체예에서, 추출물은 안트라퀴논 및/또는 유도체이다. 또 다른 구체예에서, 추출물은 하이드록실스틸벤이다. 하나의 대안의 구체예에서, 전체 적하수오 식물이 피험자에게 투여된다. 또 다른 구체예에서, 적하수오식물의 부분들이 피험자에게 투여된다. 일 구체예에서, 적하수오의 추출물이 피험자에게 투여된다.
본 발명은 약제학적 제제를 추가로 제공한다. 일 구체예에서, 약제학적 제제는 90%, 80%, 70%, 60%, 50%, 40%, 30%, 20%, 10%, 5%, 또는 1% w/w의 적하수오 또는 그의 추출물들이다.
본 발명은 복용 양생법을 추가로 제공한다. 일 구체예에서, 복용 양생법은 단일 투여로부터 며칠 및/또는 몇 주에 걸쳐 반복 투여에 이르기까지 지속되는 치료 과정에 의해 치료되어야 할 질병 상태의 심각성 및 응답성에 의존한다. 또 다른 구체예에서, 복용 스케줄은 신체 내에 축적된 활성 성분의 측정치에 기초한다. 일 구체예에서, 활성 성분은 적하수오 또는 그의 추출물들이다. 또 다른 구체예에서, 복용 양생법은 피험자에서 줄기 세포 트래피킹의 레벨에 의존한다. 일 구체예에서, 복용 양생법은 피험자에게 투여된 이형제의 활성에 의존한다. 또 다른 구체예에서, 복용 양생법은 피험자의 말초 혈류 내에서 순환하는 CD34+ HSCs의 수에 의존한다. 또 다른 구체예에서, 복용 양생법은 피험자의 말초 혈류 내에서 순환하는 골수-유도된줄기 세포들의 수에 의존한다. 일 구체예에서, 복용 양생법은 매일 투여된 적하수오 또는 그의 추출물들 3 g이다. 또 다른 구체예에서, 복용 양생법은 매일 투여된 적하수오 또는 그의 추출물들 1g이다. 또 다른 구체예에서, 복용 양생법은 매일 투여된 적하수오 또는 그의 추출물들 500 mg이다. 일 구체예에서, 복용 양생법은 매일 투여된 적하수오 또는 그의 추출물들 250 mg이다. 또 다른 구체예에서, 복용 양생법은 매일 투여된 적하수오 또는 그의 추출물들 75 mg이다. 또 다른 구체예에서, 복용 양생법은 매일 투여된 적하수오 또는 그의 추출물들 25 mg이다.
피험자에게 치료학적 유효량의 후코이단을 투여함으로써 줄기 트래피킹을 증진시키는 하나의 방법이 본 명세서에 기재되어 있다.
일 구체예에서, 피험자는 1개 이상의 조류의 혼합물을 제공받을 수 있지만, 미역과 같은 조류가 피험자에게 투여된다. 일부 구체예들에서, 피험자는 전체 조류를 소비하고 소화한다. 조류는 신선할 수 있고, 냉동, 동결-건조, 탈수, 또는 어떤 다른 방식으로 보존될 수 있다.
대안의 구체예들에서, 조류의 추출물이 피험자에게 제공되고 투여된다. 또 다른 구체예에서, 조류는 전체 식물 및/또는 그의 추출물들 모두를 포함한다. 또 다른 구체예에서, 조류는 단리된 또는 정제된 기질로서 단독으로 제공될 수 있거나, 또는 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 조성물의 일부일 수 있다. 또 다른 구체예에서, 추출물은 고도로 황산화된 다중 음이온성의 수용성 섬유이다. 일 구체예에서, 추출물은 단리된 후코이단이다. 하나의 다른 구체예에서, 후코이단은 단리 후 정제된다. 하나의 대안의 구체예에서, 다당류 분획이 피험자에게 투여된다. 또 다른 구체예에서, 고도로 황산화된 다중 음이온성의 수용성 섬유가 피험자에게 투여된다. 일 구체예에서, 단리된 후 코이단이 피험자에게 투여된다. 하나의 다른 구체예에서, 정제된 후 코이단이 피험자에게 투여된다. 일 구체예에서, 미역은 피험자에게 투여 후 이형제로서 기능할 수 있다.
본 발명은 약제학적 제제를 추가로 제공한다. 일 구체예에서, 약제학적 제제는 90%, 80%, 70%, 60%, 50%, 40%, 30%, 20%, 10%, 5%, 또는 1% w/w의 후코이단이다.
피험자에게 치료학적 유효량의 남조류를 투여함으로써 줄기 트래피킹을 증진시키는 하나의 방법이 본 명세서에 기재되어 있다.
일 구체예에서, 피험자는 1개 이상의 조류의 혼합물을 제공받을 수 있지만, 아파니조메논플로스 아쿠아에 (AFA)와 같은 남조류가 피험자에게 투여된다, 일부 구체예들에서, 피험자는 전체 조류를 소비하고 소화한다. AFA는 신선할 수 있고, 냉동, 동결 건조, 탈수, 또는 어떤 다른 방식으로 보존될 수 있다.
대안의 구체예들에서, AFA의 추출물은 피험자에게 제공되고 투여된다. 또 다른 구체예에서, AFA는 전체 식물, 식물의 부분들, 및/또는 그의 추출물들 모두를 포함한다. 또 다른 구체예에서, AFA는 단리된 또는 정제된 기질로서 단독으로 제공될 수 있거나, 또는 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 조성물의 일부일 수 있다. 또 다른 구체예에서, 추출물은 수용성 구획이다. 또 다른 구체예에서, 추출물은 다당류가 풍부한 구획이다.
본 발명은 약제학적 제제를 추가로 제공한다. 일 구체예에서, 약제학적 제제는 90%, 80%, 70%, 60%, 50%, 40%, 30%, 20%, 10%, 5%, 또는 1% w/w의 AFA또는 그의 추출물들이다.
본 발명은 복용 양생법을 추가로 제공한다. 일 구체예에서, 복용 양생법은 단일 투여로부터 며칠 및/또는 몇 주에 걸쳐 반복 투여에 이르기까지 지속되는 치료 과정에 의해 치료되어야 할 질병 상태의 심각성 및 응답성에 의존한다. 또 다른 구체예에서, 복용 스케줄은 신체 내에 축적된 활성 성분의 측정치에 기초한다. 하나의 특정 구체예에서, 활성 성분은 후코이단이다. 일 구체예에서, 후코이단은 미역 또는 그의 추출물들로부터 단리된다. 또 다른 구체예에서, 복용 양생법은 피험자에서 줄기 세포 트래피킹의 레벨에 의존한다. 일 구체예에서, 복용 양생법은 피험자에게 투여된 이형제의 활성에 의존한다. 또 다른 구체예에서, 복용 양생법은 피험자의 말초 혈류 내에서 순환하는 CD34+ HSCs의 수에 의존한다. 또 다른 구체예에서, 복용 양생법은 피험자의 말초 혈류 내에서 순환하는 골수-유도된줄기 세포들의 수에 의존한다. 일 구체예에서, 복용 양생법은 매일 투여된 후코이단 3 g이다. 또 다른 구체예에서, 복용 양생법은 매일 투여된 후코이단 1 g이다. 또 다른 구체예에서, 복용 양생법은 매일 투여된 후코이단 500 mg이다. 또 다른 구체예에서, 복용 양생법은 매일 투여된 후코이단 75 mg이다. 일 구체예에서, 복용 양생법은 매일 투여된 후코이단 250 mg이다.
본 발명은 피험자에서 줄기 세포들의 트래피킹을 증진하는 방법을 추가로 제공한다. 일 구체예에서, 줄기 세포들의 트래피킹의 레벨은 피험자의 말초 혈액 내에서 순환하는 CD34+ HSCs의 수에 관한 것이다. 또 다른 구체예에서, 줄기 세포들의 트래피킹의 레벨은 피험자의 말초 혈액 내에서 순환하는 골수-유도된 줄기 세포들의 수에 관한 것이다.
또 다른 구체예에서, 본원에 제공된 방법은 피험자에서 줄기 세포들의 트래피킹을 증진시키고, 이는 다음 성분들: 즉, 적하수오 또는 그의 추출물들, 영하구기자 또는 그의 추출물들, 남조류 또는 그의 추출물들, 초유 또는 그의 추출물들, 스피룰리나 또는 그의 추출물들, 아르쓰로스피라 플레이튼시스 또는 그의 추출물들, 아르쓰로스피라 맥시마 또는 그의 추출물들, 후코이단, 민가지말큰실말 또는 그의 추출물들, 노루궁뎅이 버섯 또는 그의 추출물들, 영지 또는 그의 추출물들, 및/또는 동충하초 또는 그의 추출물들을 포함하는 군으로부터 선택된 1개 이상의 성분들을 함유하는 치료학적 유효량의 조성물을 투여하고, 그에 따라 피험자에서 줄기 세포들의 트래피킹을 증진시키는 것을 포함한다. 일 구체예에서, 줄기 세포 트래피킹의 증진은 다음 성분들: 즉, 적하수오 또는 그의 추출물들, 영하구기자 또는 그의 추출물들, 남조류 또는 그의 추출물들, 초유 또는 그의 추출물들, 스피룰리나 또는 그의 추출물들, 아르쓰로스피라 플레이튼시스 또는 그의 추출물들, 아르쓰로스피라 맥시마 또는 그의 추출물들, 후코이단 또는 그의 추출물들, 민가지말 큰실말 또는 그의 추출물들, 노루궁뎅이 버섯 또는 그의 추출물들, 영지 또는 그의 추출물들, 및/또는 동충하초 또는 그의 추출물들을 포함하는 군으로부터 선택된 1개 이상의 성분들을 함유하는 조성물의 특정 복용량에 대해 줄기 세포들의 응답을 평가하고, 그에 따라 피험자에서 줄기 세포들의 트래피킹을 증진시킴으로써 측정될 수 있다.
또 다른 구체예에서, 본 명세서에 제공된 방법은 피험자에서 줄기 세포들의 트래피킹을 증진시키고, 이는 후코이단을 함유하는 치료학적 유효량의 조성물을 투여하는 것을 포함한다. 일 구체예에서, 줄기 세포 트래피킹의 증진은 후코이단을 함유하는 조성물의 특정 복용량에 대한 줄기 세포들의 응답을 평가함으로써 측정될 수 있다. 일 구체예에서, 후코이단은 미역 또는 그의 추출물들에서 나온 것이다.
본 발명은 피험자에서 줄기 세포들의 트래피킹을 증진시키는 방법을 추가로 제공하고, 이는 치료학적 유효량의 동원화제를 투여하고, 그에 따라 투여 경로와 무관하게 피험자에서 줄기 세포들의 방출, 순환, 귀환 및/또는 이주를 증가시키는 것을 포함한다.
본 발명은 CD34+ 줄기 세포들과 같이 순환하는 줄기 세포들의 개체군에서 일시적인 감소를 유도하는 방법을 추가로 제공한다. 일 구체예에서, 동원화제의 투여는 투여 후 약 1 내지 약 3 시간 후에 순환으로부터 조직들로 줄기 세포들의 이주를 초래한다. 순환하는 줄기 세포들은 순환계를 떠날 것이고, 따라서 피험자의 신체 내의 순환하는 줄기 세포들의 수를 감소시킨다. 줄기 세포 이주의 증진은 적하수오의 특정 복용량에 대한 줄기 세포들의 응답을 분석함으로써 측정될 수 있다. 일 구체예에서, 동원화제를 피험자에게 제공하는 것은 투여 후 약 5시간 미만, 약 4시간 미만, 약 2시간 미만, 약 1시간 미만과 같은 특정 시간 내에 피험자의 줄기 세포들의 이주를 증진시킬 것이다. 다른 구체예들에서, 동원화제는 영하구기자 , 남조류, 초유, 동충하초, 노루궁뎅이 버섯, 영지를 포함하는 버섯다당류들, 민가지말큰실말 ,를 포함하는 후코이단, 아르쓰로스피라 플레이튼시스 , 및/또는 아르쓰로스피라 맥시마를 포함하는 스피룰리나이다
또 다른 구체예에서, 적하수오의 추출물의 투여는 피험자의 신체 내의 순환하는 줄기 세포들의 수의 일시적인 감소에 의해 측정된 줄기 세포들의 귀환 속도를 증가시킨다. 또 다른 구체예에서, 정상적인 기준선에 비해 순환하는 줄기 세포들의 수의 감소 백분율은 대조군에 비교한 바 약 25%, 약 50%, 약 75%, 또는 심지어 약 100%일 수 있다. 일 구체예에서, 대조군은 동일한 피험자로부터 기준선 값이다. 또 다른 구체예에서, 대조군은 치료받지 않은 피험자, 또는 위약 또는 약리학적 담체로 치료받은 피험자에서 순환하는 줄기 세포들의 수이다.
또 다른 구체예에서, 조류의 추출물의 투여는 피험자의 신체 내의 순환하는 줄기 세포들의 수의 일시적 감소에 의해 측정되는 줄기 세포들의 귀환 속도를 증가시킨다. 또 다른 구체예에서, 조류는 민가지말 큰실말이다 . 또 다른 구체예에서, 정상적인 기준선에 비해 순환하는 줄기 세포들의 수의 감소 백분율은 대조군에 비교한 바 약 25%, 약 50%, 약 75%, 또는 심지어 약 100%일 수 있다. 일 구체예에서, 대조군은 동일한 피험자로부터 기준선 값이다. 또 다른 구체예에서, 대조군은 치료받지 않은 피험자, 또는 위약 또는 약리학적 담체로 치료받은 피험자에서 순환하는 줄기 세포들의 수이다.
또 다른 구체예에서, 동원화제의 추출물의 투여는 피험자의 신체 내의 순환하는 줄기 세포들의 수의 일시적 감소에 의해 측정되는 줄기 세포들의 귀환 속도를 증가시킨다. 정상적인 기준선에 비해 순환하는 줄기 세포들의 수의 감소 백분율은 대조군에 비교한 바 약 25%, 약 50%, 약 75%, 또는 심지어 약 100%일 수 있다. 일 구체예에서, 대조군은 동일한 피험자로부터 기준선 값이다. 또 다른 구체예에서, 대조군은 치료받지 않은 피험자, 또는 위약 또는 약리학적 담체로 치료받은 피험자에서 순환하는 줄기 세포들의 수이다. 또 다른 구체예에서, 동원화제의 추출물의 투여는 순환하는 줄기 세포들에 대한 CXCR4 발현의 증가를 유도한다.
본 발명은 적하수오 또는 그의 추출물의 투여 후 CD34+ 줄기 세포들과 같은 순환하는 줄기 세포들의 개체군의 일시적 증가를 유도하는 방법을 추가로 제공한다. 일 구체예에서, 줄기 세포들은 조혈줄기 세포들 (HSCs)이다. 또 다른 구체예에서, 줄기 세포들은 골수-유도된 줄기 세포들이다. 일 구체예에서, 줄기 세포 트래피킹의 증진은 적하수오 또는 그의 추출물의 특정 복용량에 대한 줄기 세포들의 응답을 분석함으로써 측정될 수 있다. 일 구체예에서, 적하수오 또는 그의 추출물을 피험자에게 제공하는 것은 12일 미만, 6일 미만, 3일 미만, 2일 미만 또는 1일 미만과 같이 특정 기간 내에 피험자의 줄기 세포들의 방출을 증진시킬 것이다. 하나의 대안의 구체예에서, 이 기간은 투여 후 12시간 미만, 6시간 미만, 4시간 미만, 2시간 미만 또는 1시간 미만이다. 또 다른 구체예에서, 줄기 세포들은 골수-유도된 줄기 세포들이다.
일 구체예에서, 적하수오 또는 그의 추출물의 투여는 투여 후 약 2시간 내지 3시간의 순환 내로 줄기 세포들의 방출을 초래한다. 또 다른 구체예에서, 방출된 줄기 세포들은 순환계에 유입되고 피험자의 신체 내의 순환하는 줄기 세포들의 수를 증가시킨다. 또 다른 구체예에서, 정상적인 기준선에 비해 순환하는 줄기 세포들의 수의 증가 백분율은 대조군에 비교한 바 약 25%, 약 50%, 약 100%, 또는 약 100%를 초과하는 증가일 수 있다. 일 구체예에서, 대조군은 동일한 피험자로부터 기준선 값이다. 또 다른 구체예에서, 대조군은 치료받지 않은 피험자, 또는 위약 또는 약리학적 담체로 치료받은 피험자에서 순환하는 줄기 세포들의 수이다.
본 발명은 조류 추출물의 투여 후 CD34+ 줄기 세포들과 같은 순환하는 줄기 세포들의 개체군의 일시적 증가를 유도하는 방법을 추가로 제공한다. 일 구체예에서, 줄기 세포들은 조혈 줄기 세포들 (HSCs)이다. 또 다른 구체예에서, 줄기 세포들은 골수-유도된 줄기 세포들이다. 일 구체예에서, 줄기 세포 트래피킹의 증진은 조류 추출물의 특정 복용량에 대한 줄기 세포들의 응답을 분석함으로써 측정될 수 있다. 일 구체예에서, 조류 추출물을 피험자에게 제공하는 것은 12일 미만, 6일 미만, 3일 미만, 2일 미만 또는 1일 미만과 같이 특정 기간 내에 피험자의 줄기 세포들의 방출을 증진시킬 것이다. 하나의 대안의 구체예에서, 이 기간은 투여 후 12시간 미만, 6시간 미만, 4시간 미만, 2시간 미만 또는 1시간 미만이다. 또 다른 구체예에서, 줄기 세포들은 골수-유도된 줄기 세포들이다. 일 구체예에서, 조류 추출물은 미역으로부터 나온다.
일 구체예에서, 조류 추출물의 투여는 투여 후 약 2시간 내지 3시간의 순환 내로 줄기 세포들의 방출을 초래한다. 또 다른 구체예에서, 방출된 줄기 세포들은 순환계에 유입되고, 피험자의 신체 내의 순환하는 줄기 세포들의 수를 증가시킨다. 또 다른 구체예에서, 정상적인 기준선에 비해 순환하는 줄기 세포들의 수의 증가 백분율은 대조군에 비교한 바 약 25%, 약 50%, 약 100%, 또는 약 100%를 초과하는 증가일 수 있다. 일 구체예에서, 대조군은 동일한 피험자로부터 기준선 값이다. 또 다른 구체예에서, 대조군은 치료받지 않은 피험자, 또는 위약 또는 약리학적 담체로 치료받은 피험자에서 순환하는 줄기 세포들의 수이다.
일부 구체예들에서, 동원화제를 투여받은 피험자는 건강하다. 다른 구체예들에서, 피험자는 면역 억제, 만성 질환, 외상, 퇴행성 질환, 감염, 또는 이들의 조합들과 같은 질병 또는 생리학적 상태로 고통받고 있다. 특정 구체예들에서, 피험자는 피부, 소화기계, 신경계, 림프계, 심혈관계, 내분비계, 또는 이들의 조합의 질병 또는 상태로 고통받는다. 피부의 상태, 소화 시스템, 신경 시스템, 림프 시스템, 심장 혈관 시스템, 내분비 시스템, 또는 이들의 조합으로 고생 할 수 있습니다. 특정 구체예들에서, 피험자는 골다공증, 알츠하이머 병, 심근 경색, 파킨슨 병, 외상성 뇌 손상, 다발성 경화증, 간경화증, 아래 실시예들에 기재된 임의의 질병들 및 상태들, 또는 이들의 조합들로 고통받는다. 본 발명의 동원화제의 사용 및 진보적인 방법들의 적용이 이들 용도들로만 제한되지 않더라도, 치료학적 유효량의 동원화제의 투여는 상기 언급된 상태들 중의 임의의 것을 예방, 치료 및/또는 그의 심각도를 감소시킬 수 있거나 또는 그렇지 않으면 그에 관한 유리한 임상적 효과를 제공한다. 다양한 구체예들에서, 신규 조성물들 및 방법들은 무엇보다도 파킨슨 및 당뇨병과 같은 퇴행성 질환뿐만 아니라 뼈, 연골, 힘줄 및 인대 등과 같은 골격 조직들의 치료에서 그 치료적 용도를 찾을 수 있다. 혈액으로부터 조직들로의 줄기 세포들의 방출, 순환, 귀환 및/또는 이주를 증진시키는 것은 증가된 복구 효율을 위해 결함 부위로 줄기 세포들의 더욱 효율적인 전달로 유도할 수 있다. 본 발명의 신규 조성물들 및 방법들은 또한 유전자 치료적 접근법들과 관련하여 사용될 수 있다.
본 발명은 피험자에게 투여하기 위한 다양한 조성물들을 추가로 제공한다. 일 구체예에서, 투여는 안과, 질, 직장, 비강, 표피, 및 경피를 포함하여 국소적이다. 일 구체예에서, 투여는 경구적이다. 일 구체예에서, 경구 투여용 조성물은 분말들, 과립들, 현탁액들 또는 수용액들 또는 비 수성 매질, 캡슐제, 사쉐, 정제들, 로젠지제들, 또는 거품 형성제들을 포함한다. 또 다른 구체예에서, 경구 투여용 조성물은 증점제들, 향미제들, 희석제들, 유화제들, 분산 보조제들 또는 결합제들을 추가로 포함한다.
동원화제들 및 줄기 세포 트래피킹을 촉진하는 쪽으로 동원화제들을 사용하는 방법들이 본 명세서에 기재되어 있다. 이주화제들 및 줄기 세포들이 순환계로부터 조직 또는 장기 내로 이동하는 과정을 촉진하기 위해 이주화제를 사용하는 방법들이 본 명세서에 추가로 기재되어 있다. 또한, 이형제들 및 원래 조직으로부터 줄기 세포들의 이탈을 촉진하기 위해 이형제들을 사용하는 방법들이 기재되어 있다. 또한, HSCs의 말초 혈액 순환 내로의 현저한 방출을 초래하는 후코이단의 경구 투여 방법이 기재되어 있다. 본 발명자들은 줄기 세포 동원화제들의 효과적인 투여를 제시하였고, 그에 따라 인간 신체 내의 줄기 세포-관련된 유지 및 복구를 증진시키기 위해 안전하고, 편리하고, 효과적인 방법을 달성하였다. 줄기 세포들의 병리학이 매우 중요하고, 흥미롭고, 본 명세서에 개시된 주제에 관한 것이지만, 본 발명의 기본 범위는 혈액으로부터 조직들로 줄기 세포들의 방출, 순환, 귀환 및/또는 이주가 손상된 조직을 복구하는데 및 기존 조직의 활력 및 건강을 유지하는데 있어서 중요하다는 것이다. 따라서, 이러한 목적을 달성하기 위한 방법들 및 조성물들의 개발의 중요성은 본 발명의 초점과 목표들 사이에 있다.
따라서, 본 발명은 줄기 세포의 트래피킹을 지원함으로써 무엇보다도 신체 내의 자연적 조직 치유 및 재개를 증진시키는 신규한 조성물들 및 방법들을 제공한다. 또한, 본 발명은 포유 동물에서 줄기 세포의 트래피킹을 촉진함으로써 포유 동물에서 건강 문제들을 예방하거나, 서행시키거나, 또는 그렇지 않으면 감소시키기 위한 신규 조성물들 및 방법들을 제공한다. 본원에 개시된 조성물들 및 방법들은 조직 내로 줄기 세포들의 방출, 순환, 귀환 및/또는 이주를 지원하고, 그에 따라 조직 복구 과정을 지원함으로써 기존 조직의 재생을 추가로 증가시킬 수 있다.
실시예들
하기 실시예들은 특허 청구된 발명을 예시하기 위해 제공된 것이며, 주제의 범위를 제한하는 것으로 해석되지 않아야 한다. 특정 물질들이 언급되는 정도까지 예시의 목적에 불과하며, 발명을 제한하려는 것이 아니다. 당업계의 숙련자는 본 발명의 용량의 연습 없이 및 본 발명의 범위를 벗어나지 않고 동등한 수단, 조성물들 또는 반응물들을 개발할 수 있다.
실시예 1
영하구기자의 생산 및 제조
영하구기자로부터 다당류들은 루오 등의 방법에 의해 제조되었다 (2004). 말린 과일 샘플들 (100g)는 미세 분말로 분쇄하고, 끓는 물 1.5 l에 넣고 중국 약초에 대한 전통적인 방법으로 2 시간 동안 달였다. 탕액은 조악한 다당류들을 얻기 위해 실온에서 냉각되도록 방치하고, 여과되고, 이어서 동결-건조된다
건조된 조악한 다당류들은 클로로포름:메탄올 용매 (2:1) (v/v) 150 ml로 지질들을 제거하기 위해 3회 환류되었다. 여과 후, 잔류물들은 공기-건조되었다. 결과의 생성물은 뜨거운 물 (90 ℃) 300 ml로 3회 추출하고, 이어서 여과하였다. 합한 여과액을 각각 95 % 에탄올, 100 % 에탄올 및 아세톤을 각각 150 ml 사용하여 침전시켰다. 여과 및 원심 분리 후, 침전물을 수집하고, 진공-건조시켜 원하는 다당류들 (13 g)을 제공하였다. 다당류들의 함량은 페놀 황산법으로 측정했다 (Masuko 등, 2005). 결과는 추출물 중의 다당류들의 함량이 97.54%에 도달할 수 있다는 것을 보여주었다.
실시예 2
줄기 세포들은 영하구기자 소비 후 이주한다
영하구기자, 또는 그의 화합물들의 소비는 CD34+ 줄기 세포들의 모집 및 이주를 증진시킨다 (순환계에 진입하는 줄기 세포들의 도면에 대해 도 2 참조)
건강한 사람 지원자들이 확인되었고, CD34 + 세포의 비율은 영하구기자의 소비 전에 및 소비 후 4시간에 이르기까지 매 시간 각 사람의 말초 혈액 (순환하는 CD34+ 세포들) 중에서 평가되었다. 지원자들은 영하구기자의 소비 전후의 시간 동안 신체적 및 정신적 활성을 제한하도록 지시받았다.
각 사람은 건조된 영하구기자 5g 또는 영하구기자로부터 추출된 다당류 1g을 제공받았다. 각각의 지원자로부터 얻은 전체 혈액 샘플들 중의 적혈구들은 FACS 용균 용액을 사용하여 용해되었다 (Beckton Dickenson, 산 호세, 캘리포니아). 나머지 세포들은 형광 이소티오시아네이트로 콘주게이트된 모노클로날 항체 HPCA-2에 의해 세척되고 염색되었다. 샘플들은 1% 포르말린에 고정되었고 및 FacsCalibur 유세포 분석기 (Becton Dickenson, San Jose, Calif.) 및 CellQuest 소프트웨어 (Becton Dickenson, 산 호세, 캘리포니아)를 사용하여 유동 세포 계측법에 의해 분석되었다.
도 3a는 순환하는 줄기 세포들의 강한 일시적 감소를 시동하는 영하구기자의 소비를 예시한다. 특히, X-축은 대조군 레벨의 백분율로 표현되는, 영하구기자 섭취 후 전형적인 실험의 시간 경과를 보여준다. 섭취 시에, 순환하는 CD34+ 세포들의 비율은 대조군과 동일하다. 순환하는 CD34+ 세포들에서 피크 감소는 소비 후 약 1-2시간에 관찰되었다. 이 시점에서, 순환하는 CD34+ 세포들의 수는 대조군 값의 30% 이하까지 감소되었다. 영하구기자 섭취 후 4시간까지, 순환하는 CD34+ 세포들은 기준선 값으로 회귀되었다. 순환하는 줄기 세포들의 수의 감소는 순환하는 줄기 세포들의 막 상의 CXCR4의 발현의 증가에 의해 수반되었다 (도. 6).
그러므로, 영하구기자 (또는 영하구기자의 생물학적 성분)는 조직들로의 순환으로부터 내인성 줄기 세포들 (예 CD34+ 세포들)의 이주를 증진시킬 수 있다. 영하구기자(또는 영하구기자의 생물학정 성분)의 소비는 이주 CD34+ 줄기 세포들 (예, 도. 3 참조)을 시동하고, 그에 따라 이주화제로서 영하구기자의 효능을 나타낸다.
실시예 3
줄기 세포들은 초유 소비 후 이주한다
실시예 2에서와 같이, 및 도 3b를 참조하여, 초유의 투여는 줄기 세포 이주를 초래한다.
실시예 4
줄기 세포들은 버섯 소비 후 이주한다
실시예 2에서와 같이, 및 도 4를 참조하여, 버섯 (동충하초, 영지, 노루궁뎅 이 버섯)의 다당류가 풍부한 분획의 투여는 줄기 세포 이주를 초래한다.
실시예 5
줄기 세포들은 후코이단 또는 스피룰리나 소비 후 이주한다
실시예 2에서와 같이, 민가지말 큰실말과 같은 조류 해초들로부터 후코이단의 투여는 궁극적으로, 간접적이기는 하지만, 줄기 세포 이주에 의해 보조될 수 있는 특정한 유익한 결과를 촉진한다. 예를 들면, 민가지말 큰실말로부터 후코이단의 소비는 순환하는 CD34+ HSCs의 수의 감소를 초래하였고 (도 9), 줄기 세포 이주를 지원하는데 있어서 효과적인 역할을 제안하였다. 실시예 2에서와 같이, 스피룰리나의 투여는 줄기 세포 이주를 초래하였고 (도 4b), 및 스피룰리나와 함께 영하구기 자, 초유 및 버섯들의 투여는 또한 줄기 세포 이주를 초래하였다 (도 7).
실시예 6
줄기 세포들은 LB , 초유, 스피룰리나 및 버섯의 배합물의 소비 후 이주한다
표 1에 열거된 다음 성분들을 포함하는 조성물들은 포유 동물 피험자들에게 제공된다. 이들 조성물들의 투여는 줄기 세포 이주를 초래한다.
표 1

실시예 7
골수로부터 줄기 세포들은 다중 원거리 조직들을 채운다
생쥐 모델은 LB, 초유 및 버섯의 혼합물이 어떻게 조직들 내로 줄기 세포 이주를 자극 할 수 있고, 따라서 신체의 원거리 조직들을 채우고 복구할 수 있는지를 평가하도록 선택된다.
수컷 생쥐는 골수 공여자 동물들로서 선택되는 한편, 모든 수용체 생쥐들은 암컷들이다 암컷 수용체들은 그들의 꼬리 정맥들 내로 GFP+ 수컷 골수 세포들을 주입하기에 앞서 반치사적으로 방사선 조사 받는다. 두 그룹의 생쥐들이 평가된다. 20마리의 동물들의 첫 번째 그룹은 반치사적으로 조사되고, 골수로 주입되고, 일반 사료를 받는다. 20마리 동물들의 두 번째 그룹은 역시 반치사적으로 조사되고, 수컷 골수를 수용하고, 일반 사료에 더하여 LB, 초유 및 버섯의 혼합물의 규정식을 공급받는다. GFP + 세포들의 혼입은 뇌, 심장 근육, 근육들, 간, 췌장, 소장의 섹션들 및 폐 조직에서 검사되었다.
이들 데이터는 LB, 초유 및 버섯의 혼합물을 함유하는 규정식이 다양한 조직들로 골수줄기 세포들의 귀환 및 이주를 어디까지 촉진하는지 그 범위를 문서화한다.
실시예 8
외상 입은 조직의 증가된 줄기 세포 다시 채우기
생쥐 모델은 LB, 초유 및 버섯의 혼합물이 어떻게 조직들 내로 줄기 세포 이주를 자극 할 수 있고, 따라서 신체의 원거리 조직들을 채우고 복구할 수 있는지를 평가하도록 선택된다.
수컷 생쥐는 골수 공여자 동물들로서 선택되는 한편, 모든 수용체 생쥐들은 암컷들이다 암컷 수용체들은 그들의 꼬리 정맥들 내로 GFP+ 수컷 골수 세포들을 주입하기에 앞서 반치사적으로 방사선 조사 받는다. 두 그룹의 생쥐들이 평가된다. 20마리의 동물들의 첫 번째 그룹은 반치사적으로 조사되고, 골수로 주입되고, 일반 사료를 받는다. 20마리 동물들의 두 번째 그룹은 역시 반치사적으로 조사되고, 수컷 골수를 수용하고, 일반 사료에 더하여 LB, 초유 및 버섯의 혼합물의 규정식을 공급받는다.
골수 이식 후 및 급식 실험을 개시하기 며칠 전에, 동물들은 관상 동맥, 피부의 천공, 레이저-유도된 뇌졸중 또는 다른 부상들의 결찰에 의해 심장 마비를 시동하는, 경골 근육 내의 심장독의 주입과 같은 부상을 당하게 된다. 두 그룹의 생쥐들의 회복은 전신 형광 이미지화를 사용하여 6주 동안 모니터링된다. 6주 후, 동물들은 희생되고 부상된 조직은 조직 회복의 정도를 평가하기 위해 분석된다. GFP + 세포들의 혼입은 뇌, 심장 근육, 근육들, 간, 췌장, 소장의 섹션들 및 폐 조직에서 검사되었다.
이들 데이터는 LB, 초유 및 버섯의 혼합물을 함유하는 규정식이 다양한 조직들로 골수 줄기 세포들의 귀환 및 이주를 어디까지 촉진하고, 따라서 조직 복구 및 치유 과정을 증진시키는지 그 범위를 문서화한다.
실시예 9
줄기 세포 동원화제로서 후코이단에 대한 일반 연구 설계
2개의 소모품들: 즉, 미역속으로부터 추출된 후코이단 및 위약이 인간 피험자들에서 시험되었다. 말초 정맥 혈액 샘플들은 사전 동의한 20세 내지 45세의 건강한 인간 지원자들로부터 입수하였다. 혈액 및 골수 샘플들은 무균 조건 하에서 얻었고 즉시 처리하였다. 후코이단 또는 위약 1g이 4-6 oz의 물과 함께 지원자들에게 주어졌다. 위약의 외관은 후코이단의 그것과 동일하였고 식물성 캡슐들 내에 캡슐화된 황갈색-염색되고, 미세하게 분쇄된 감자 박편들로 구성되었다.
실시예 10
생체 내 연구 설계
다음의 배제 기준들이 사용되었다: 즉, 20세 미만 및 65세 초과 연령, 임신, 매일의 투약을 요하는 심한 천식 및 알레르기, 임의의 공지된 만성 질환 또는 이전의/현재의 성병, 빈번한 기분 전환 약물 사용, 및 손상된 소화 기능 (이전의 주요 위장 수술을 포함함). 3명의 지원자들이 일주일 간격으로 2회 연구 일들에 예정되었다. 시험은 항상 주기 변동의 영향을 최소화하기 위하여 하루 중 동일한 시간 (오전 8-11시)에 수행되었다 다른 유형의 림프구들의 방출 대 귀환에 의한 스트레스로부터의 간섭으로 인해, 시험하는 동안 임의의 신체적 및 정신적 스트레스를 최소화하기 위한 노력이 이루어졌다. 또한, 각 연구 일에, 지원자들은 특정 연구 일에 사람에게 영향을 미칠 수 있는 임의의 예외적인 스트레스 관련된 상황을 결정하는 데 목적을 둔 설문지를 작성하도록 지시받았다. 최종 분석에서 배제하기 위한 소정의 기준은 현저한 수면 부족 및 심각한 불안을 포함하였다. 설문 조사를 완료한 후, 지원자들은 편안하게 의자에 앉아 4 시간 동안 대기하도록 지시받았다. 최초의 시간 후에, 기준선 혈액 샘플이 인출되었다. 기준선 샘플을 인출한 직후에, 소포품이 제공되었다. 혈액 샘플들은 나중에 소모품의 섭취 후 60분, 90분, 및 180분에 인출되었다. 각 시점에서, 혈액 5 ml가 헤파린 내로 인출되었고, 혈액 2 ml가 EDTA 내로 인출되었다. 혈액 바이알들은 사용할 때까지 흔들 접시에 배치했다.
실시예 11
FACS 정렬을 사용한 줄기 세포 개체군들의 측정
EDTA 내로 인출된 혈액은 Coulter 카운터 (Micro Diff II, Beckman Coulter)를 사용하여 차동으로 완전한 혈구수 (CBC)를 얻기 위해 사용되었다. 모든 CBCs는 샘플을 인출하는 시간 내에 수행되었다. 모든 CBCs는 삼중으로 수행되었다. 헤파린이 가해진 혈액이 구배 원심 분리에 의해 PBMC 분획의 정제를 위해 사용되었고 면역 염색 및 유세포 분석기를 위해 처리되었다. 줄기 세포마커들 CD34-FITC (클론 8G12, BD BioSciences, San Jose, CA, USA) 및 CD133-PE (Miltenyi Biotech, Auburn, CA, USA)가 2가지 색상의 면역 형광을 위해 사용되었다. CD34-FITC/CD133-PE에 의한 모든 샘플들의 염색은 삼중으로 수행되었다. IgG1-FITC 및 IgG1-PE 이소타입 대조군들 (BD BioSciences)이 병렬 샘플들에 사용되었다. 각각의 공여자를 위한 별개의 양성 대조군 샘플들은 CD45-FITC 및 CD14-PE를 포함하였다. 염색된 PBMC는 1% 포르말린에 고정되었고, 즉시 유세포 분석기에 의해 획득되었다. 200,000 사건들의 파일이 각각의 삼중 샘플에 대해 수집되었다. CD34 + CD133-, CD34 + CD133 + 및 CD34-CD133 + 서브 세트들의 백분율은 별도로 분석하였고 CBC 차동 카운트에 의해 얻어지는 삼중 림프구 카운트들의 평균으로부터 얻어진 바와 같이, 림프구 세포 수들로 승산한 후에 다시 분석되었다.
실시예 12
미역으로부터의 후코이단의 경구 투여 후 말초 혈액에서 순환하는 CD34 + HSCs 의 증가.
본 발명자들은 인간 피험자들의 말초 혈류에서 HSC 동원을 실시하는 그들의 잠재력에 대한 여러 가지 상이한 조류 종들로부터 후코이단들의 경구 투여를 시험하였다. 하나의 종들, 미역으로부터의 후코이단은 45, 90 및 180 분의 측정 간격들로 발생하는 17%, 23% (P<0.02) 및 32% ((P<0.02)의 증가에 의해 순환하는 CD34+ HSCs의 수의 현저한 증가를 초래하였고, 그에 따라 이형제로서 효능을 나타냈다. (도 8) 본 발명자들이 아는 한, 이것은 문헌에 보고된 가장 현저한 증가이고, 또한 미역으로부터의 후코이단의 경구 투여를 역시 시험한 Irimeh 등에서 14일 후 이미 보고된 12% 증가에 비해 주목할만한 개선이다. 중요한게는, Irimeh 등은 매일 투여된 후코이단 3g을 보고한 반면에, 본 발명자들은 250 mg의 복용 양생법을 사양하여 개선된 결과를 성취하였다. 이것은 CD34+ HSCs의 방출 및 순환을 촉진하기 위해 후코이단을 경구 투여할 때 특정 복용량을 적용하기 위한 중요한 역할을 강조한다. 게다가, 낮은 복용량은 일상적인 매일 투여와 같은 장기간의 환자의 사용을 허용 할 수 있는 반면, 높은 복용량은 반복 및/또는 일상적인 사용과 호환되지 않을 수 있다.
실시예 13
민가지말큰실말로부터 후코이단의 경구 투여 후 말초 혈액 내에서 순환하는 CD34+ HSCs의 감소.
이러한 관찰들로부터 확장하여, 발명자들은 민가지말 큰실말을 포함하여 여러 가지 다른 조류 종들로부터 후코이단이 인간 피험자들에서 CD34+ HSCs의 순환하는 수를 증가시키는 데 실패하였음을 발견하였다(도 9). 상기한 바와 같이 미역으로부터의 후코이단의 효과적인 250 mg의 복용량을 포함하여 여러 가지 복용 양생법들의 적용에도 불구하고, 민가지말큰실말로부터의 후코이단은 순환하는 CD34+ HSCs의 수의 감소를 초래하였고, 아마도 결과적으로 순환하는 HSCs의 표면 상에 CXCR4 발현의 증가를 가져왔다. 이러한 결과들은 후코이단의 정확한 소스와 효과적인 치료 복용량을 확인하는 것 사이의 복잡한 상호 작용을 반영한다. 민가지말 큰실말로부터 이러한 후코이단 250 mg의 소비는 동일한 후코이단 제조 방법들을 사용하여 순환하는 줄기 세포들 (도 3)의 수의 평균 감소를 부여하고, 지원자들에서 동일한 조건들 하에 투여되고, 그에 따라 줄기 세포들의 이주를 지원하는데 있어서 효과적인 역할을 나타낸다.
이러한 결과들은 상이한 소스들로부터의 후코이단이 구조-활성 관계에서 갈라진다는 이전 보고서들과 일치한다. A. 노도섬 및 플레베티아 칸쿨라타로부터의 후코이단 분획들은 HSC 동원에 연관된 3황산화 이당류 헤파린-형 모티프를 통해 항-응고 활성을 갖는 것으로 보고되어 왔다. 특히 주목할만한 것은 황산 패턴들이 자신의 항응고 활성과 상관 관계가 있다는 보고였다. 글루칸들, 3-링크된 규칙적으로 3-O-항산화된 갈락탄 족으로부터 유사한 분자는 대응하는 2-링크된 규칙적으로 2-O-황산화 푸칸에서는 발견되지 않는 항응고 활성을 갖는다. (Berteau 및 Mulloy, 2003; Mourao 및 Pereira, 1999; Pereira 등, 2002) 항-응고 활성에 관한 이들 보고서들 및 HSC 동원에 대한 본 발명자의 관찰들은 후코이단을 포함하여 황산화된 푸칸들의 구조-활성 관계들이 특정 화학 기들의 존재 또는 부재로부터 전하 밀도와 같은 포괄적인 특징들로부터의 결과가 아님을 분명히 나타낸다. 대신에, 생물학적 활성은 비판적으로 다당류의 정확한 구조에 의존한다. 반드시, 조류의 독특한 종들로부터 다른 구조의 후코이단들은 HSC 동원을 포함하여 다양한 치료 용도들에 대한 복잡한 효능 범위를 제공할 것으로 기대된다. 상기한 바와 같이, 이것은 또한 다른 종들로부터 후코이단을 사용할 때 변화할 수 있는 효과적인 치료 용량들을 확립하는 것이 또한 필요할 것이다.
실시예 14
적하수오를 제조하는 여러가지 방법들
적하수오의 간단한 제제는 물에 세척되고, 세정되고, 조각들로 절단되고, 이어서 건조된 신선한 식물 뿌리의 일부를 획득함으로써 제조할 수 있다. 예를 들면, 분쇄된 뿌리는 간단한 제제로서 12:1 추출물 중의 물에 희석될 수 있다.
또 다른 제조 방법에서, 적하수오는 저온 (예, -70^oC, -20^oC, 또는 0^oC)에서 철야 냉동될 수 있고, 이어서 고체 분말을 형성하기 위해 분쇄될 수 있고, 이것은 실온에서 건조될 수 있거나, 또는 수분을 제거하기 위해 진공 증발기에 배치될 수 있다.
고체 분말은 적하수오로부터 상이한 성분들을 추출하기 위해 물, 수용액 또는 유기 용매에 침지 될 수 있다. 기재된 바와 같이, 유기 용매 (예, 에탄올 또는 메탄올)의 특정한 높은 온도 (예, 비등점)는 안트라퀴논들 및 유도체들과 같은 성분들의 추출을 촉진하고, 그렇지 않으면 그것들은 물, 및 실온에서 유기 용매들에 불용성이기 때문이다. 마찬가지로, 수성 분획들의 추출을 위해 저온 (4 ℃)을 적용하는 것은 특정 하이드록실 스틸벤들이 pH 또는 온도 의존 방식으로 저하됨에 따라 하이드록실 스틸벤들과 같은 특정 성분들의 안정적인 단리를 촉진한다. 다시, 물, 수용액, 또는 유기 용매 중의 침지는 실온에서 건조시킴으로써 후속될 수 있거나, 또는 수분을 제거하기 위해 진공 증발기에 배치 될 수 있다. 고체 분말들은 용해도를 보조하기 위해 여러 단계들에서 동결 건조될 수 있다.
실시예 15
줄기 세포 동원화제로서 적하수오에 대한 일반 연구 설계
2개의 소모품들: 즉, 적하수오 추출물들 및 위약이 인간 피험자들에서 시험되었다. 말초 정맥 혈액 샘플들은 사전 동의한 20세 내지 45세의 건강한 인간 지원자들로부터 입수하였다. 혈액 및 골수 샘플들은 무균 조건 하에서 얻었고 즉시 처리하였다. 적하수오 추출물들 또는 위약의 12:1 제제 1g이 4-6 oz의 물과 함께 지원자들에게 주어졌다. 위약의 외관은 적하수오 추출물들의 그것과 동일하였고 식물성 캡슐들 내에 캡슐화된 황갈색-염색되고, 미세하게 분쇄된 감자 박편들로 구성되었다. 실시예 10에 기재된 바와 같이, 다음의 배제 기준들이 사용되었다: 즉, 20세 미만 및 65세 초과 연령, 임신, 매일의 투약을 요하는 심한 천식 및 알레르기, 임의의 공지된 만성 질환 또는 이전의/현재의 성병, 빈번한 기분 전환 약물 사용, 및 손상된 소화 기능 (이전의 주요 위장 수술을 포함함). 7명의 지원자들이 일주일 간격으로 2회 연구 일들에 예정되었다. 시험은 항상 주기 변동의 영향을 최소화하기 위하여 하루 중 동일한 시간 (오전 8-11시)에 수행되었다 지원자들은 편안하게 의자에 앉아 4 시간 동안 대기하도록 지시받았다. 최초의 시간 후에, 기준선 혈액 샘플이 인출되었다. 기준선 샘플을 인출한 직후에, 소포품이 제공되었다. 혈액 샘플들은 나중에 소모품의 섭취 후 60분 및 120분에 인출되었다. 각 시점에서, 혈액 5 ml가 헤파린 내로 인출되었고, 혈액 2 ml가 EDTA 내로 인출되었다. 혈액 바이알들은 사용할 때까지 흔들 접시에 배치했다.
실시예 16
줄기 세포들은 적하수오 단독의 소비 후, 또는 적하수오 , 영하구기자 , 후코이단 , 초유, 스피룰리나및 버섯의 배합물에 포함되었을 때 이주한다
적하수오는 13±6 % (n=7) (p <0.05) 만큼 순환하는 줄기 세포들의 수의 완만한 증가를 시동하는 것으로 보였다. 그 증가는 2명 또는 참가자들에서 25% 초과하였다. 그 결과들은 도 10에 나타낸다.
실시예 17
줄기 세포들적하수오 , 영하구기자 , 후코이단 , 초유, 스피룰리나 및 버섯의 배합물 의 소비 후 이주한다
또한 적하수오를 포함하여 줄기 세포 동원화제들을 함유하는 각종 조성물들이 표 2 또는 3에 열거된 다음 성분들을 포함하여 제조될 수 있다. 이들 조성물들의 투여는 줄기 세포 이주 및/또는 동원을 초래한다.
표 2

표 3

상기한 다양한 방법들 및 기술들은 본 발명을 수행하기 위한 수많은 방식들을 제공한다. 물론, 반드시 기재된 모든 목적들 또는 이점들이 본원에 기재된 임의의 특정 구체예에 따라 달성 될 수는 없는 것이 이해되어야 한다. 따라서, 예를 들면, 당업계의 숙련자들은 그 방법들이 본원에서 교시되거나 또는 제안될 수 있으므로 다른 목적들 또는 장점들을 반드시 달성하지 않고 본원에 교시된 바의 하나의 장점 또는 일군의 장점들을 달성하거나 또는 최적화하는 방식으로 수행될 수 있음을 인식할 것이다. 여러 가지 유리하고 불리한 대안들이 본원에 언급되어 있다. 일부 바람직한 구체예들은 구체적으로 하나의, 또 다른 또는 여러 가지 유리한 특징들을 포함하는 한편, 다른 구체예들은 구체적으로 하나의, 또 다른 또는 여러 가지 불유리한 특징들을 배제하는 반면에, 또 다른 구체예들은 하나의, 또 다른 또는 여러 가지 유리한 특징들을 포함시킴으로써 구체적으로 현재의 불리한 특징을 완화시키는 것이 이해되어야 한다.
또한, 당업계의 숙련자는 상이한 구체예들로부터 다양한 특징들의 적용성을 인식할 것이다 마찬가지로, 상기 고찰한 다양한 요소들, 특징들 및 단계들은 각각의 그러한 요소, 특징 또는 단계에 대한 다른 공지된 등가물과 마찬가지로 본 명세서에 기재된 원리들에 따라 방법들을 수행하기 위해 당업계의 통상의 기술을 가진 자에 의해 혼합되고 일치될 수 있다. 다양한 요소들, 특징들, 및 단계들 가운데 일부는 구체적으로 다양한 구체예들에 포함될 것이고, 다른 것들은 다양한 구체예들에서 배제될 것이다.
본 발명이 특정 구체예들 및 실시예의 맥락에서 개시되었더라도, 본 발명의 구체예들은 구체적으로 개시된 구체예들 너머로 다른 대안적인 구체예들 및/또는 용도 및 그의 변형 및 등가물들로 확장된는 것이 당업계의 숙련자들에 의해 이해될 것이다.
많은 변화들 및 대안적 요소들이 본 발명의 구체예들에 개시되어 있다. 또 다른 변화들 및 대안적 요소들은 당업계의 숙련자에게 명백할 것이다. 이러한 변화들 가운데는, 제한 없이, 줄기 세포 동원화제들의 소스들, 줄기 세포 동원화제들, 그의 유사체들 및 유도체들을 제조, 단리 또는 정제하는 방법들, 줄기 세포동원화제들, 그의 유사체들 및 유도체들을 사용하여 다양한 질병들 및/또는 상태들을 치료하는 방법들 및 거기에 사용된 기술들 및 조성물들 및 용액들의 용도, 및 본 발명의 교시를 통해 생성된 생성물들의 특정 용도가 있다. 본 발명의 다양한 구체예들은 구체적으로 임의의 이들 변화들 또는 요소들을 포함하거나 또는 배제할 수 있다.
일부 구체예들에서, 본 발명의 특정 구체예들을 기재하고 특허 청구하기 위해 사용된 성분들의 양, 농도, 반응 조건들 등과 같은 특성들을 표현하는 숫자들은 경우에 따라 용어 "약"에 의해 변경되는 것으로서 이해되어야 한다. 따라서, 일부 구체예들에서, 서면 명세서 및 첨부된 특허 청구의 범위에 나타낸 수치 파라미터들은 특정 구체예에 의해 얻고자 하는 원하는 특성들에 따라 변화할 수 있는 근사치들이다. 일부 구체예들에서, 수치 매개 변수들은 보고된 유효 숫자의 수 및 비추어서 및 통상의 반올림 기법을 적용함으로써 해석되어야 한다 본 발명의 몇몇 구체예들의 광범위한 범위를 나타내는 수치 범위들 및 매개 변수들이 근사치들임에도 불구하고, 특정 예들에 기재된 수치 값들은 정확하게 실행 가능한 것으로 보고되어 있다. 본 발명의 일부 구체예들에 나타낸 수치 값들은 이들의 각각의 시험 측청치들 중에서 발견되는 표준 편차로부터 반드시 특정 오류들을 포함할 수 있다.
일부 구체예들에서, 용어들 "하나의" 및 "한 개의" 및 "그" 및 본 발명의 특정 구체예를 기재하는 맥락에서 사용된 유사한 참고 문헌들(특히 다음의 특허 청구의 범위의 특정 항의 맥락에서)은 단수 및 복수 모두를 커버하도록 해석될 수 있다. 본원에서 값들의 범위의 인용은 단지 그 범위 내에 속하는 각각의 별개의 값에 개별적으로 연관된 약식 방식으로 작용하도록 의도된다. 본원에 달리 지시되지 않는 한, 각각의 개별적인 값은 마치 그것이 개별적으로 본원에 재인용된 것처럼 명세서에 기재되어 있다. 본원에 기재된 모든 방법들은 본원에 달리 지시되지 않는 한 임의의 적절한 순서로 수행될 수 있거나, 또는 그렇지 않으면 문맥상 명백히 모순될 것이다. 본원의 특정 구체예들와 관련하여 제공된 임의의 및 모든 예들, 또는 예시적인 언어 (예, "와 같은")의 사용은 단지 본 발명을 더 잘 조명하도록 의도되고 달리 요구되지 않는 한 본 발명의 범위에 대한 어떠한 제한도 부여하지 않는다. 본 명세서의 어떤 언어도 본 발명의 실시에 필수적인 임의의 특허 청구되지 않은 요소로서 해석되지 않아야 한다.
본원에 개시된 발명의 대안의 요소들 또는 구체예들의 그룹화는 제한들로서 해석되지 않아야 된다. 각각의 그룹 구성원은 개별적으로, 또는 본원에서 발견된 그룹의 다른 구성원들 또는 다른 요소들과 조합하여 언급 및 특허 청구될 수 있다. 한 그룹의 하나 이상의 구성원들이 편의상 및/또는 특허 가능성의 이유로 포함될 수 있거나, 또는 그로부터 삭제될 수 있다. 임의의 그러한 포함 또는 삭제가 발생할 때, 본원에서 명세서는 수정된 그룹을 함유하고, 그에 따라 첨부된 특허 청구의 범위에 사용된 모든 마쿠쉬 그룹들의 서면 설명을 충족시킬 것으로 여겨진다.
본 발명의 바람직한 구체예들은, 본 발명을 실시하기 위하여 본 발명자에게 알려진 최선의 모드를 포함하여, 본원에 기재되어 있다. 이러한 바람직한 구체예들에 대한 변화들은 다음 설명을 읽게 됨에 따라 당업계의 통상의 기술을 가진 자들에게 명백할 것이다. 당업계의 숙련자들은 그러한 변형들을 적절히 사용할 수 있고, 본 발명은 본원에 구체적으로 기재된 것과 달리 실행될 수 있음이 예상된다. 따라서, 본 발명의 많은 구체예들은 적용 가능한 법에 의해 허용되는 바와 같이 이에 첨부된 특허 청구의 범위에 열거된 주제의 모든 변형 및 동등물들을 포함한다. 더우기, 모든 가능한 변화들에서 상기 요소들의 임의의 조합은 본원에 달리 지시되지 않는 한 본 발명에 의해 포함되거나 또는 그렇지 않으면 문맥에 의해 분명히 모순된다.
또한, 다수의 참고 문헌들이 본 명세서 전반에 걸쳐 특허들 및 인쇄 출판물들에 대해 이루어졌다. 상기 인용된 참고 문헌들 및 인쇄된 출판물들 각각은 참고 문헌에 의해 그들의 실체로서 개별적으로 혼입된다.
끝으로, 본 명세서에 개시된 본 발명의 구체예들은 본 발명의 원리를 예시하는 것으로 이해되어야 한다. 사용될 수 있는 다른 변형들은 본 발명의 범위 내에 있을 수 있다. 따라서, 예로서, 제한하지는 않지만, 본 발명의 대안적인 구성들은 본 명세서의 교시에 따라 이용될 수 있다. 따라서,본 발명의 구체예들은 정확하게 도시되고 설명된 것으로 제한되지 않는다.
참고 문헌들

Claims (22)

1. 하기를 포함하는, 피험자에서 줄기 세포 동원을 증가시키는 방법:
   줄기 세포 동원을 증가시킬 수 있는 동원화제를 제공하는 단계; 및
   상기 피험자에서 줄기 세포 동원을 증가시키기에 충분한 양으로 상기 피험자에게 일정량의 동원화제를 투여하는 단계.
2. 청구항 1에 있어서, 상기 동원화제는 하기로 구성되는 군으로부터 선택되는 성분들 중의 1개 이상을 포함하는 조성물인 방법: 적하수오 또는 그의 추출물들, 영하구기자 또는 그의 추출물들, 남조류 또는 그의 추출물들, 초유 또는 그의 추출물들, 스피룰리나 또는 그의 추출물들, 후코이단, 노루궁뎅이 버섯 또는 그의 추출물들, 영지 또는 그의 추출물들, 및 동충하초 또는 그의 추출물들.
3. 청구항 1에 있어서, 상기 동원화제는 적하수오 또는 그의 추출물들인 방법.
4. 청구항 1에 있어서, 상기 줄기 세포는 골수-유도된 줄기 세포 (BMSC)인 방법.
5. 청구항 1에 있어서, 상기 줄기 세포는 조혈 줄기 세포 (HSC)인 방법.
6. 청구항 1에 있어서, 상기 정량을 투여하는 단계는 경구 투여를 포함하는 것인 방법.
7. 청구항 6에 있어서, 상기 경구 투여는 캡슐 또는 알약의 사용을 포함하는 것인 방법.
8. 하기를 포함하는 약제학적 조성물:
   적하수오 또는 그의 추출물들, 영하구기자 또는 그의 추출물들, 남조류 또는 그의 추출물들, 초유 또는 그의 추출물들, 스피룰리나 또는 그의 추출물들, 후코이단, 노루궁뎅이 버섯 또는 그의 추출물들, 영지 또는 그의 추출물들, 및/또는 동충하초 또는 그의 추출물들로 구성된 군으로부터 선택되는 성분들 중의 1개 이상; 및
   약제학적으로 허용되는 담체.
9. 청구항 8에 있어서, 상기 적하수오 또는 그의 추출물들의 양이 단일 용량 중의 10-2000 mg 포함하는 것인 약제학적 조성물.
10. 청구항 8에 있어서, 상기 영하구기자 또는 그의 추출물들의 양이 단일 용량 중의 10-2000 mg을 포함하는 것인 약제학적 조성물.
11. 청구항 8에 있어서, 상기 남조류 또는 그의 추출물들의 양이 단일 용량 중의 10-2000 mg을 포함하는 것인 약제학적 조성물.
12. 청구항 8에 있어서, 상기 초유 또는 그의 추출물들의 양이 단일 용량 중의 10-300 mg을 포함하는 것인 약제학적 조성물.
13. 청구항 8에 있어서, 상기 스피룰리나 또는 그의 추출물들의 양이 단일 용량 중의 10-300 mg을 포함하는 것인 약제학적 조성물.
14. 청구항 8에 있어서, 상기 후코이단 또는 그의 추출물들의 양이 단일 용량 중의 10-2000 mg을 포함하는 것인 약제학적 조성물.
15. 청구항 8에 있어서, 상기 노루궁뎅이 버섯 또는 그의 추출물들, 영지 또는 그의 추출물들, 및/또는 동충하초 또는 그의 추출물들의 양이 단일 용량 중의 10-1000 mg을 포함하는 것인 약제학적 조성물.
16. a) 일정량의 적하수오를 제공하는 단계;
    b) 적하수오를 고체 분말로 분쇄하는 단계;
    c) 고체 분말을 건조시키는 단계;
    d) 고체 분말을 용매 중에 침지시키는 단계; 및
    e) 상기 분말을 용매로부터 분리하는 단계를 포함하는, 적하수오의 추출물을 제조하는 방법으로서,
    상기 용매는 적하수오의 추출물을 포함하는 방법.
17. 청구항 16에 있어서, 상기 고체 분말을 침지시키는 단계가 저온에서 물 또는 또 다른 수용액을 포함하는 용매를 포함하는 것인 방법.
18. 청구항 17에 있어서, 상기 저온이 대략적으로 4 ℃를 포함하는 것인 방법.
19. 청구항 18에 있어서, 상기 고체 분말을 침지시키는 단계가 고온에서 유기 용매를 포함하는 용매를 포함하는 것인 방법.
20. 청구항 19에 있어서, 상기 고온이 유기 용매의 비등점 근처의 온도를 포함하는 것인 방법.
21. 청구항 20에 있어서, 상기 유기 용매가 메탄올 또는 에탄올을 포함하는 것인 방법.
22. 청구항 16에 있어서, 상기 적하수오가 분쇄 전에 동결되는 것인 방법.
    

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