MX2014005652A

MX2014005652A - Uso de foti para potenciar la movilizacion y proliferacion de celulas madre.

Info

Publication number: MX2014005652A
Application number: MX2014005652A
Authority: MX
Inventors: Christian Drapeau; Gitte S Jensen
Original assignee: Stemtech International Inc
Priority date: 2011-11-18
Filing date: 2012-11-15
Publication date: 2014-09-01
Also published as: KR20140091674A; US9327003B2; EP2779834A1; EA201490995A1; HK1201686A1; US20140342010A1; WO2013074801A1; CA2848521A1; EP2779834A4

Abstract

La presente invención proporciona un método de uso de Polygonum multiflorum o sus extractos para potenciar la movilización de células madre en un sujeto, incluyendo células madre hematopoyéticas (HSC) y células madre de médula ósea (BMSC). En una realización, se utiliza una composición combinada de partes de plantas, frutos, hongos, microorganismos, líquidos maternos y extractos de estos para promover la movilización de células madre, dando como resultado la migración de células madre a sitios de mantenimiento y reparación específicos dentro de tejidos y/u órganos. En otras realizaciones, el método implica el uso de Polygonum multiflorum o sus extractos para reforzar la liberación y circulación de las HSC, como se demuestra por un aumento significativo de circulación de las HSC en la sangre periférica. La circulación aumentada de las HSC y/o BMSC y la migración hacia sitios de mantenimiento promueve los mecanismos de regeneración naturales en el organismo. Adicionalmente se proporciona un régimen de dosificación para la administración de Polygonum multiflorum y un método para potenciar la liberación y circulación de células madre.

Description

USO DE FOTI PARA POTENCIAR LA MOVILIZACIÓN Y PROLIFERACIÓN DE CÉLULAS MADRE Campo de la invención La presente invención se refiere a métodos y a composiciones para potenciar la movilización de células madre .

Antecedentes de la invención Todas las publicaciones citadas en el presente documento se incorporan por referencia al mismo grado como si cada publicación o solicitud de patente individual se indicase específica e individualmente incorporada por referencia. La siguiente descripción incluye información que puede ser útil para comprender la presente invención. No es una admisión el que cualquier información proporcionada en el presente documento sea técnica anterior o pertinente para la invención actualmente reivindicada, o el que cualquier publicación específica o implícitamente mencionada sea técnica anterior.

Las células madre (SC, Stem Cells) se definen como células con la capacidad exclusiva de autoreplicarse durante toda la vida de un organismo y de diferenciarse en diversos tipos de células del organismo. Dos tipos bien conocidos de células madre son las células madre embrionarias y las células madre adultas. Las células madre embrionarias (ESC, Embryonic Stem Cells) se extraen de embriones de 5-10 días de vida denominados blástulas. Una vez aisladas, las ESC pueden crecer in vitro y llegar a diferenciarse en diversos tipos de células tisulares tales como células cardiacas, células hepáticas, células nerviosas y células renales) , después de lo cual pueden inyectarse en tejidos específicos para regenerar el tejido.

Las células madre adultas (ASC, Adult Stem Cells) son células indiferenciadas o primitivas que pueden autorenovarse y diferenciarse en células especializadas de diversos tejidos y se encuentran en muchos organismos vivos después del nacimiento. Las ASC se han aislado de diversos tejidos, tales como hígado (células ovales) (Wang et al., 2003), intestino (células madre crípticas intestinales) (Barker et al., 2008), músculos (células satélite) (Kuang et al., 2008), cerebro (células madre neuronales) (Revishchin et al., 2008) y recientemente páncreas (células madre pancreáticas positivas a nestina) (Burke et al., 2007) . Las células madre de cordón umbilical y las células madre placentarias se consideran ASC.

La función de las ASC encontradas en tejidos (células madre tisulares) es conservar y reparar el tejido en el que se encuentran, aunque recientes estudios han informado sobre que las ASC de un tej ido pueden tener la capacidad de desarrollarse en tipos de células característicos de otros tejidos. Por ejemplo, se demostró que las células ovales presentes en el hígado tenían la capacidad de convertirse in vitro en células pancreáticas productoras de insulina (Yang et al. 2002) . Sin embargo, la creencia general es que las células madre locales están principalmente implicadas en la reparación de menor importancia del tejido en el que residen. En el caso de lesión o degeneración significativa, el número de nuevas células tisulares encontradas en tejido cicatricial supera con creces la capacidad de que las células madre locales se dupliquen y se diferencien, lo que sugiere que, en el proceso de reparación, deben estar implicadas células madre procedentes de otros sitios.

Aunque muchos tejidos contienen sus propias poblaciones específicas de células madre tisulares, algunas ASC de interés clave son aquellas principalmente encontradas en la médula ósea y en la sangre. Se cree que las células madre tisulares están tradicionalmente limitadas en cuanto a su capacidad para diferenciarse en otros tejidos, sin embargo, recientemente se ha demostrado que las células madre de médula ósea (BMSC, Bone Marrow Stem Cells) tienen capacidad significativa de convertirse en células de otros tejidos.

Es difícil paralizar estos procesos en el tiempo para extraer una impresión exhaustiva y consecuente de los mecanismo regeneradores presentes en el organismo No obstante, se dispone de suficiente información para afirmar que diferentes células madre presentes en el organismo, ya sea BMSC, HSC, células estromales medulares ( SC, Marrow Stromal Cells) , células progenitoras adultas multipotentes ( APC, Multipotent Adult Progenitor Cells) , células madre muy pequeñas de tipo embrionario (VSEL, Very Small Embryonic-like Stem Cells) , células madre de tipo epiblasto (ELSC, Epiblast-like Stem Cells ) o células madre de tipo blastómero (BLSC, Blastomere-like Stem Cells ) , constituyen un amplio componente del sistema de curación natural del organismo. Dado que las células madre pueden diferenciarse en una amplia variedad de tipos de células, estas desempeñan una función importante en los procesos de curación y regeneración de diversos tejidos y órganos. Las células madre de médula ósea, incluyendo células estromales medulares (MSC) , se liberan de los tejidos de origen, y circulan en un sistema circulatorio o inmunitario del sujeto para migrar a diversos órganos y tejidos para convertirse en células maduras, finalmente diferenciadas. Por lo tanto, la potenciación del tránsito de células madre (es decir, liberación, circulación, retorno dirigido y/o migración) puede amplificar estos procesos fisiológicos y proporcionar posibles terapias para diversas patologías. Hay composiciones y métodos que utilizan la movilización de células madre como una estrategia terapéutica. Sin embargo, los métodos existentes para promover la movilización de las células madre presentan inconvenientes significativos, incluyendo mal comportamiento cinético, coste elevado, métodos de administración no convenientes y efectos secundarios no deseados . Una estrategia destacada, inyección de factor estimulante de colonias de granulocitos (G-CSF) o formas recombinantes del mismo, requiere días para conseguir cantidades máximas de HSC circulantes. Existen problemas opuestos con la administración de interleucina 8 (IL-8) , que actúa al cabo de solo unos minutos y tiene un efecto efímero sobre la elevación de niveles de HSC circulantes en la corriente sanguínea (Frenette et al., 2000; Jensen et al., 2007). El G-CSF y una molécula diferente, AMD3100, antagonista de CXCR , puede o tener efectos secundarios significativos, incluyendo, entre otros, hemorragia, rotura de bazo, esputo sanguinolento y trastornos óseos. Por tanto, existe una necesidad en la técnica de conseguir un método que sea eficaz y conveniente para administrar a seres humanos agentes de movilización de células madre, para obtener beneficios clínicos positivos sin efectos secundarios y a un coste reducido.

Por consiguiente, las composiciones de la invención y los métodos descritos en el presente documento potencian la liberación, circulación, retorno dirigido y/o migración de células madre dentro del organismo para promover la curación y el tratamiento de tejidos dañados, así como para ayudar en la regeneración de tejidos que presentan cierto nivel de pérdida celular, para aumentar la vitalidad y reducir la frecuencia de enfermedades.

Compendio de la invención La presente invención incluye un método para aumentar la movilización de células madre en un sujeto, incluyendo proporcionar un agente de movilización capaz de aumentar la movilización de células madre, y administrar al sujeto una cantidad de agente de movilización en una cantidad suficiente para aumentar en el sujeto la movilización de células madre. En una realización diferente, el agente de movilización es una composición que incluye uno o más de los siguientes componentes seleccionados del grupo que incluye: Polygonum multiflorum o sus extractos, Lycium barbarum o sus extractos, algas verdeazules o sus extractos, calostro o sus extractos, espirulina o sus extractos, fucoidán, Hericium erinaceus o sus extractos, Ganoderma lucidum o sus extractos, y Cordyceps sinensis o sus extractos. En una realización diferente, el agente de movilización es Polygonum ultiflorum o sus extractos. En una realización diferente, la célula madre es una célula madre derivada de médula ósea (BMSC) . En una realización diferente, la célula madre es una célula madre nematopoyética (HSC) . En una realización diferente, la administración de la cantidad comprende administración oral. En una realización diferente, la administración oral comprende el uso de una cápsula o una pildora.

Otro aspecto de la presente invención descrito en el presente documento es una composición farmacéutica que incluye uno o más de los siguientes componentes seleccionados del grupo que es: Polygonum multiflorum o sus extractos, Lyclum barbarum o sus extractos, algas verdeazules o sus extractos, calostro o sus extractos, espirulina o sus extractos, fucoidán, Hericium erinaceus o sus extractos, Ganoderma Lucidum o sus extractos, y/o Cordyceps Sinensis o sus extractos; y un vehículo f rmacéuticamente aceptable. En una realización diferente, la cantidad de Polygonum multiflorum o sus extractos, comprende 10-2000 mg en una sola dosis. En una realización diferente, la cantidad de Lycium barbarum o sus extractos, comprende 10-2000 mg en una sola dosis. En una realización diferente, la cantidad de algas verdeazules o sus extractos, comprende 10-2000 mg en una sola dosis. En una realización diferente, la cantidad de calostro o sus extractos, comprende 10-300 mg en una sola dosis. En una realización diferente, la cantidad de espirulina o sus extractos, comprende 10-300 mg en una sola dosis. En una realización diferente, la cantidad de fucoidán o sus extractos, comprende 10-2000 mg en una sola dosis. En una realización diferente, la cantidad de Hericium erinaceus o sus extractos, Ganoderma lucidum o sus extractos y/o Cordyceps sinensis o sus extractos comprende 10-1000 mg en una sola dosis .

Otro aspecto de la presente invención descrita en el presente documento es el método de preparación de un extracto de Polygonum multifloru que incluye proporcionar una cantidad de Polygonum multiflorum, triturar la planta Polygonum multiflorum en un polvo sólido, secar el polvo sólido, sumergir el polvo sólido en un disolvente y separar el polvo sólido del disolvente, en el que el disolvente incluye un extracto de Polygonum multiflorum. En una realización diferente, la inmersión del polvo sólido es en un disolvente que es agua u otra solución acuosa a baja temperatura. En una realización diferente, la baja temperatura es de aproximadamente 4 °C. En una realización diferente, la inmersión del polvo sólido es en un disolvente que es un disolvente orgánico a alta temperatura. En una realización diferente, la alta temperatura está próxima al punto de ebullición del disolvente orgánico. En una realización diferente, el disolvente orgánico es metanol o etanol. En una realización diferente, la planta Polygonum multiflorum se congela antes de triturar.

Breve descripción de las figuras Se ilustran realizaciones ejemplares en figuras de referencia. Se pretende que las realizaciones y las figuras descritas en el presente documento se consideren como ilustrativas y no limitativas.

La Figura 1A-1C representa la movilización y migración de células madre endógenas de acuerdo con diversas realizaciones de la presente invención. En condiciones fisiológicas normales o en respuesta a enfermedad o lesión, las células madre hematopoyéticas se movilizan desde compartimentos, tales como hueso (A) y circulan en la corriente sanguínea (B) , migran hacia tejidos para promover la reparación y regeneración en diferentes partes del organismo (C) .

La Figura 2 muestra una ilustración esquemática de las etapas implicadas en la migración de una célula madre, resaltando la función de CXCR4, de acuerdo con una realización de la presente invención.

La Figura 3A-3B proporciona gráficos que ilustran una evolución típica de la migración de células madre en el organismo humano después de consumir (A) fruta entera de Lycium barbarum (LB) y (B) calostro (Cal) , de acuerdo con diversas realizaciones de la presente invención. Para ambos productos, las líneas finas muestran respuestas individuales. Para LB, la línea gruesa discontinua es la respuesta promedio mientras que la línea gruesa muestra la evolución de la respuesta con la respuesta promedio máxima a los 45 minutos. Para Cal, la respuesta máxima de todos los participantes se obtuvo a los 60 minutos, por tanto las líneas gruesas muestran la evolución promedio de la respuesta.

La Figura 4A-4B proporciona un gráfico que ilustra una evolución típica de la migración de células madre en el organismo humano después de consumir (A) una fracción de hongo (Cordyceps sinensis, Ganoderma lucidura, Hericium erinaceus) rica en polisacáridos y (B) espirulina o un extracto de la misma, de acuerdo con una realización de la presente invención.

Las Figuras 5A, 5B y 5C son perfiles de citometría de flujo de muestras de sangre que presentan las proporciones de linfocitos CD34+ de la sangre periférica de un voluntario humano después de ingerir L. barbarum, calostro y polisacáridos de hongo, respectivamente, de acuerdo con una realización de la presente invención. El eje X muestra la intensidad de fluorescencia del marcador de células madre. El marcador MI indica eventos que muestran positividad para el marcador CD34 de células madre.

La Figura 6 es un gráfico que ilustra la expresión de moléculas CXCR4 sobre la superficie de células madre CD34+ circulantes antes y después de consumir LB, Cal y polisacáridos de hongo, de acuerdo con una realización de la presente invención.

La Figura 7 proporciona un gráfico que ilustra una evolución típica de la migración de células madre en el organismo humano después de consumir Lycium barbarum, calostro, espirulina y una fracción de hongo (Cordyceps sinensis, Ganoderma lucidum, Hericium erinaceus) rica en polisacáridos, de acuerdo con una realización de la presente invención .

La Figura 8 representa cambios en células madre hematopoyéticas CD34+ circulantes en voluntarios humanos después de administración oral de fucoidán extraído de Undaria pinnatifida de acuerdo con diversas realizaciones de la presente invención. Los niveles b sales de células madre de sangre periférica se cuantificaron en voluntarios. Después, los voluntarios ingirieron 250 mg de fucoidán extraído de Undaria pinnatifida. Los niveles de células madre se midieron posteriormente a los 45, 90 y 180 minutos. El número de células madre circulantes aumentó en promedio un 17 %, 23 % (P<0,02) y 32 % (P<0,02), respectivamente.

La Figura 9 representa los resultados del consumo de fucoidán del alga de la especie Chordaria cladosiphon de acuerdo con diversas realizaciones de la presente invención. El consumo de 250 mg de fucoidán de Chordaria cladosiphon produjo una disminución promedio en el número de células madre circulantes en las mismas condiciones.

La Figura 10 representa los resultados de consumir una combinación de Polygonum multiflorumr algas verdeazules y fucoidán de acuerdo con diversas realizaciones de la presente invención. El consumo de la combinación que incluye Polygonum multiflorum produjo un aumento transitorio en el número de células madre circulantes en comparación con placebo en las mismas condiciones . Se observó que la combinación que contenía Polygonum multiflorum provocaba un aumento moderado en el número de células madre circulantes de 13±6 % (n=7) (p < 0,05) . El aumento superó 25 % en 2 de los participantes.

Descripción detallada de la invención Todas las referencias citadas en el presente documento se incorporan por referencia en su totalidad como si se expusieran por completo. A menos que se defina de otra manera, los términos científicos y técnicos utilizados en el presente documento tienen el mismo significado al normalmente entendido por un experto habitual en la materia a la cual pertenece la presente invención. Singleton et al., Dictionary of Microbiology and Molecular Biology 3' ed. , J. iley y Sons (Nueva York, NY 2001) ; March, Advanced Organic Chemistry Reactions , Mechanisms and Structure 5* ed. , J. Wiley y Sons (Nueva York, NY 2001) ; y Sambrook y Russell, Molecular Cloning: A Laboratory Manual 3a ed. , Cold Spring Harbor Laboratory Press (Cold Spring Harbor, NY 2001), Remington ' s Pharmaceutical Sciences, por E. W. Martin, Mack Publishing Co., Easton, Pa., 15a Edición (1975), describen composiciones y formulaciones adecuadas para la administración farmacéutica de las composiciones de la invención descritas en el presente documento proporcionando a un experto en la técnica una orientación general de muchos de los términos utilizados en la presente solicitud.

Un experto en la técnica reconocerá que muchos de los métodos y materiales similares o equivalentes a los descritos en el presente documento, podrían usarse en la realización práctica de la presente invención. De hecho, la presente invención no está de ningún modo limitada a los métodos descritos en el presente documento. Para los fines de la presente invención, a continuación se definen los siguientes términos .

"Administración" y/o "administrar", como se usa en el presente documento, se refiere a cualquier vía para administrar una composición farmacéutica a un paciente. Las vías de administración pueden incluir vías perórales (a través de la boca) no invasivas, tópicas (piel) , transmucosas (nasal, bucal/sublingual, vaginal, ocular y rectal) y por inhalación, así como vías parenterales y otros métodos conocidos en la técnica. Parenteral se refiere a una vía de administración que está generalmente asociada con inyección, incluyendo intraorbital, infusión, intraarterial , intracarótida, intracapsular, intracardiaca, intradérmica, intramuscular, intraperitoneal , intrapulmonar, intraespinal , intraesternal, intratecal, intrauterina, intravenosa, subaracnoidea, subcapsular, subcutánea, transmucosa o transtraqueal . A través de la vía parenteral, las composiciones pueden estar en forma de soluciones o suspensiones para infusión o para inyección, o como polvos liofilizados .

"Algas verdeazules" , como se usa en el presente documento, se refiere al nombre común de bacterias fotosintéticas gram negativas que pertenecen a la división Cyanophyta que pueden existir en forma unicelular, colonial o filamentosa. Las algas verdeazules representativas incluyen, a título enunciativo, especies de Spirulina y Aphanizomenon , siendo un ejemplo de algas verdeazules la especie Aphanizomenon flos aquae (AFA) . "Algas" es el plural de "alga", que es una célula de una especie de microalgas. Por ejemplo, "algas verdeazules" se refiere a células múltiples de una sola especie de Aphanizomenon, a células múltiples de una sola especie de Spirulina , o a una mezcla de células de especies múltiples de Aphanizomenon y/o Spírulina .

"Sistema circulatorio" , como se usa en el presente documento, se refiere a los mecanismos para transportar sangre y componentes sanguíneos a través del organismo de un sujeto, incluyendo el sistema vascular y linfático. Los mecanismos del sistema circulatorio incluyen, a título enunciativo, corazón, vasos sanguíneos (arterias, venas y capilares) y vasos linfáticos.

"Calostro", como se usa en el presente documento, se refiere a un liquido segregado por las glándulas mamarias de mamíferos hembra durante los primeros días de la lactancia, que contiene diversos nutrientes e inhibidores de proteasa que impiden su destrucción por los procesos de digestión. Los seres humanos producen cantidades relativamente pequeñas de calostro los dos primeros días posteriores al parto, si bien las vacas producen aproximadamente 3,79 1 (nueve galones) de calostro. El calostro contiene niveles concentrados de inmunomoduladores importantes, incluyendo Factor de Transferencia, PRP, IGF-1, ácido n-acetil neuramínico, GMP, ácido nucleico y defensinas. Se observado que los extractos de calostro activan la fagocitosis por monocitos y aumentan la explosión de oxígeno reactivo en células polimórficas nucleadas . También se ha observado que el calostro provoca la activación de linfocitos citolíticos (NK, Natural Killer) naturales y también provoca la secreción de citocinas antiinflamatorias en ensayos in vitro basados en células. Las referencias del presente documento respecto al calostro también incluyen derivados y sus sustitutos artificiales.

Como se usa en el presente documento "componente de Polygonum multiflorum" se refiere a cualquier fracción, extracto o molécula aislada o purificada de Polygonum multiflorum. Por ejemplo, el componente es una proteína o un ácido nucleico o un polisacárido, un fitoquímico o una fracción de Polygonum multiflorum. Por tanto, en determinadas realizaciones de la invención, se obtienen componentes de Polygonum multiflorum alterando Polygonum multiflorum, añadiendo un disolvente inorgánico u orgánico y recogiendo fracciones. Ejemplos específicos, no limitantes, de fracciones se aislan usando cromatografía líquida de alto rendimiento, cromatografía de capa fina o destilación. El fraccionamiento puede basarse en el peso molecular o en la hidrofobicidad de los componentes de Polygonum multiflorum . Los ejemplos de componentes encontrados en Polygonum multiflorum incluyen hidroxil estríbenos, antraquinonas y derivados, lecitina, ácido crisofánico, emodina, reina, ácido crisofánico antrona, y 2 , 3 , 5 , 4 ' -tetrahidroxiestilbeno-2-?-ß-D-glucósido, entre otros.

Como se usa en el presente documento "componente de Lycium barbarum" se refiere a cualquier fracción, extracto o molécula aislada o purificada de Lycium barbarum. Por ejemplo, el componente es una proteína o un ácido nucleico o un polisacárido, un fitoquímico o una fracción de Lycium barbarum. Por tanto, en determinadas realizaciones de la invención, los componentes de Lycium barbarum se obtienen alterando Lycium barbarum, añadiendo un disolvente inorgánico u orgánico y recogiendo fracciones. Son ejemplos específicos no limitantes de fracciones aislados usando cromatografía líquida de alto rendimiento, cromatografía de capa fina o destilación. El fraccionamiento puede basarse en el peso molecular o en la hidrofobicidad de los componentes de Lycium barbarum.

"Diferenciación" como se usa en el presente documento se refiere al proceso mediante el cual las células se hacen más especializadas para realizar funciones biológicas. Por ejemplo, las células madre hematopoyéticas , progenitores hematopoyéticos y/o células madre pueden cambiar de células madre multipotentes a células comprometidas con un linaje específico y/o células que tienen funciones características, tales como células somáticas maduras. La diferenciación es una propiedad que a menudo pierden total o parcialmente células que han experimentado transformación cancerosa.

"Potenciación" , "potenciar" o "potenciamiento" , como se usa en el presente documento, se refiere a una mejora en el rendimiento de, u otro aumento fisiológicamente beneficioso en, un parámetro particular de una célula u organismo. A veces, la potenciación de un fenómeno se cuantifica como una disminución en las mediciones de un parámetro específico. Por ejemplo, la migración de células madre puede medirse como una reducción en el número de células madre circulantes en el sistema circulatorio, pero no obstante esto puede representar una potenciación en la migración de estas células a áreas del organismo en las que pueden realizar o facilitar un resultado fisiológico beneficioso, incluyendo, a título enunciativo, diferenciación en células que reemplazan o corrigen la función perdida o dañada. En una realización, potenciación se refiere a una reducción de 15 %, 20 %, 30 % o mayor de 50 % en el número de células madre circulantes. En un ejemplo especifico, no limitante, la potenciación de la migración de células madre puede producirse o medirse por una disminución en una población de las células de un linaje no hematopoyético, tal como una disminución de 15 %, 20 %, 30 %, 50 %, 75 % o mayor en la población de células o en la respuesta de la población de células. En una realización, un parámetro potenciado es el tránsito de células madre. En una realización, el parámetro potenciado es la liberación de células madre de un tejido de origen. En una realización, un parámetro potenciado es la migración de células madre. En otra realización, el parámetro es la diferenciación de células madre. En otra realización adicional, el parámetro es el retorno dirigido de células madre .

"Fucoidán", como se usa en el presente documento, describe fucanos sulfatados obtenidos de algas . El fucoidán se ha obtenido de una amplia serie de especies de Algas como las proporcionadas en la siguiente lista no exhaustiva: Cladosiphon okamuranus, Chordaria flagelliformis, Ch. Gracilis, Saundersella simplex, Desmaestia intermedia , Dictyosiphon foeniculaceus , Dictyota dichotoma , Padina pavonica , Spatoglussum, Schroederi , Adernocystis utricularis, Pylayella littoralis , Ascophyllum nodosum, Bifurcaría bifurcata , Fucus. Visculosus, F. spiralis , F. serratus , F. evaescens , Himanthalia lorea, Hizikia fusiforme, Pelvetia canaliculata , P. wrightii , Sargassum stenophyllum, S. honeri, S. Khellmanium, S. muticum , Alaria fistulosa , A. marginata , Arthrothammus bifidus, Chorda film, Ecklonia kurome, E. cava, Eisenia bicyclis , Laminaria angustata , L. brasiliensis , L. cloustoni , L. digitata , L. japónica , L. religiosia , L. saccharina , Macrocystis integrifolia , M. pyrifera, Nereocystis luetkeana , Undaria pinnatifida , Petalonia fascia, Scytosiphon lomentaria. La investigación farmacéutica sustancial se ha realizado sobre flucoidán, centrándose principalmente en dos formas distintas: F-fucoidán, que está compuesto por >95 % de ésteres sulfatados de fucosa y U-fucoidán, que es aproximadamente 20 % de ácido glucurónico, cada uno de los cuales se incluye en el término "fucoidán", como se usa en el presente documento. Dependiendo de la fuente del fucoidán este puede actuar como un agente de liberación en determinadas realizaciones, mientras que en otras realizaciones, el fucoidán puede actuar como un agente de migración.

"Hematopoyesis", como se usa en el presente documento, se refiere a la formación y desarrollo de células sanguíneas . Prenatalmente, la hematopoyesis se produce en el saco vitelino, después en el hígado y eventualmente en la médula ósea. En adultos normales, se produce principalmente en la médula ósea y en los tejidos linfáticos. Todas las células sanguíneas se desarrollan a partir de células madre pluripotentes, que están comprometidas con tres, dos o una ruta de diferenciación hematopoyética. Esto incluye la producción de células hematopoyéticas incluyendo linfocitos B, linfocitos T, células de linaje macrófago-monocito y células sanguíneas.

"Agente hematopoyético" , como se usa en el presente documento, se refiere a un compuesto, anticuerpo, molécula de ácido nucleico, proteína, célula u otra molécula que afecta a la hematopoyesis. Un agente molecular puede ser una molécula de origen natural o una molécula sintética. En algunos casos, el agente afecta al crecimiento, proliferación, maduración, migración o diferenciación o liberación de células hematopoyéticas . En diversas realizaciones, el agente es Polygonum multiflorum o un extracto o componente de Polygonum multiflorum .

"Células madre hematopoyéticas" , como se usa en la presente invención, significa células madre multipotentes que pueden diferenciarse eventualmente en todas las células sanguíneas incluyendo, eritrocitos, leucocitos, megacariocitos y plaquetas. Esto puede implicar una fase de diferenciación intermedia en células progenitoras o blastocitos. La expresión "progenitores hematopoyéticos" , "células progenitoras" o "blastocitos" se usan indistintamente en la presente invención y describen maduración de las HSC con potencial de diferenciación reducido, pero que aún pueden madurar en células diferentes de un linaje específico, tal como un linaje mieloide o linfoide. Los "progenitores hematopoyéticos" incluyen unidades formadoras de estallidos eritroides, unidades formadoras de colonias de granulocitos, eritroides, macrófagos, megacariocitos y unidades formadoras de colonias de granulocitos, eritroides, macrófagos y granulocitos.

"Retorno dirigido", como se usa en el presente documento, se refiere al proceso de una célula que migra desde el sistema circulatorio hacia el interior de un tejido u órgano.

En algunos casos, el retorno dirigido se consigue mediante moléculas de adhesión específicas de tejidos y procedimientos de adhesión. El retorno dirigido puede referirse a la migración de retorno a la médula ósea.

"Inmunológicamente normal" , como se usa en el presente documento, se refiere a un sujeto que presenta características típicas del sistema inmunitario de la especie a la cual pertenece el individuo. Estas características típicas incluyen, entre otras, el funcionamiento de linfocitos B y linfocitos T así como componentes celulares estructurales, denominados antígenos de superficie celular, que actúan como la firma inmunológica de un organismo particular.

"Inmunológicamente comprometido", como se usa en el presente documento, se refiere a un sujeto que tiene una inmunodeficiencia genotípica o fenotípica. Un sujeto genotípicamente inmunodeficiente tiene un defecto genético que como consecuencia produce una incapacidad de generar respuestas tanto humorales como mediadas por células . Un ejemplo específico, no limitante, de un sujeto genotípicamente inmunodeficiente es un ratón genotípicamente inmunodeficiente, tal como un ratón SCID o un ratón bg/nu/xid. Un "sujeto fenotípicamente inmunodeficiente" es un sujeto, que genéticamente puede generar una respuesta inmunitaria, que se ha alterado fenotlpicamente de tal manera que no se observa respuesta. En un ejemplo específico, no limitante, se ha irradiado un receptor fenotípicamente inmunodeficiente . En otro ejemplo específico no limitante, se ha tratado con quimioterapia a un sujeto fenotípicamente inmunodeficiente . En otro ejemplo específico adicional, no limitante, el sujeto fenotípicamente inmunodeficiente ha padecido una infección bacteriana o vírica, tal como el virus de la inmunodeficiencia humana (VIH) o el virus de la inmunodeficiencia de simio (VIS) .

"Componente biológico aislado" (tal como una ! molécula de ácido nucleico, polipéptido, polisacárido u otra molécula biológica) como se usa en el presente documento se refiere a un componente biológico que se ha separado o purificado sustancialmente lejos de otros componentes biológicos en los que el componente se produce de manera la natural. Los ácidos nucleicos y las proteínas pueden aislarse por métodos de purificación convencionales, expresión recombinante en una célula hospedadora o sintetizarse químicamente.

"Lycium barbarum" o "L. barbarum" , como se usa en el presente documento, se refiere a una baya o un fruto desarrollado, elipsoidal, rojo anaranjado, pequeño brillante.

Una fuente ejemplar está en el norte de China, principalmente en la Región Autónoma de Ningxia Hui. Algunas veces se denomina baya de Goj i o baya del lobo. L. barbarum pertenece a la familia Solanaceae, la familia de las sombra de la noche (nightshade) que incluye cientos de alimentos vegetales como patata, tomate, berenjena y pimiento (paprika) .

"Linfoproliferación" como se usa en el presente documento se refiere a un aumento en la producción de linfocitos.

"Modulación" o "modula" o "modular" como se usa en el presente documento se refiere a la regulación positiva (es decir, activación o estimulación) , regulación negativa (es decir, inhibición o supresión) de una respuesta o las dos en combinación o separadas.

"Migración" como se usa en el presente documento se refiere al proceso principal del movimiento de células en el desarrollo y mantenimiento de organismos multicelulares. Frecuentemente las células migran en respuesta a, y hacia, señales externas específicas, comúnmente denominadas quimiotaxis . La migración incluye el proceso de una célula que se desplaza desde el sistema circulatorio hacia el interior de un tejido u órgano. Más específicamente, las células madre circulantes se ponen en contacto con la superficie del endotelio capilar mediante la expresión de moléculas de adhesión de las superficies celulares, dando como resultado cambios citoesqueléticos tanto en las células madre como en el endotelio y permiten el movimiento a través de la pared capilar en dirección a un tejido y/u órgano. En algunos casos, el retorno dirigido se realiza mediante moléculas de adhesión específicas de tejido y procesos de adhesión.

"Agente de migración" como se usa en el presente documento son agentes de movilización capaces de prometer el proceso de una célula que se mueve desde el sistema circulatorio hacia el interior de un tejido u órgano. La migración de células madre puede demostrarse, por ejemplo, por una disminución en las células madre circulantes en el sistema circulatorio o inmunitario, o mediante la expresión de marcadores de superficie y/o moléculas de adhesión sobre las superficies celulares, que está relacionada con el retorno dirigido, contacto y/o extravase de las células madre circulantes a la superficie de vasos tales como endotelio capilar. Como ejemplos de agentes de migración se incluyen componentes aislados o purificados extraídos de Polygonum multiflorum o sus extractos, Lycium barbarum, incluyendo una fracción rica en polisacáridos (fracción A) de extracto de Lycium barbarum, calostro, incluyendo una fracción rica en proteínas (fracción B) de extracto de calostro, fucoidán, incluyendo un componente aislado o un compuesto extraído de un alga, tal como un compuesto encontrado en una fracción rica en polisacáridos (fracción C) de extractos de algas, incluyendo Chordaria cladosiphon u otras algas, o sus extractos, hongos, incluyendo un componente aislado o compuesto extraído de un hongo, tal como un compuesto encontrado en una fracción rica en polisacáridos (fracción D) de extractos de hongo, incluyendo Cordyceps sinensis o un extracto del mismo, Ganoderma lucidura, o un extracto del mismo, Hericium erinaceus o un extracto del mismo, espirulina, incluyendo Arthrospira platensis , Arthrospira máxima o extractos de estas. En diferentes realizaciones, este agente afecta a la migración de células madre, tales como células cD34exp es ón alta (CD34+) . En una realización, el agente de migración disminuye el número de células madre derivadas de médula ósea y/o células madre hematopoyéticas circulantes en la sangre periférica. En otra realización, el agente de migración está relacionado con la expresión potenciada de CXCR4 en células madre circulantes.

"Polisacáridos de hongos" como se usa en el presente documento se refiere a glucanos encontrados principalmente en diversas especies de hongos tales como Cordyceps sinesis, Hercicium erinaceous y Ganoderma lucidum. Esto también incluye los numerosos polisacáridos bioactivos o complejos de polisacárido-proteína de hongos medicinales que pueden potenciar respuestas inmunitarias innatas y mediadas por células y presentar actividades antitumorales en animales y en seres humanos .

"Vehículos farmacéuticamente aceptables" como se usa en el presente documento se refiere a vehículos farmacéuticamente aceptables útiles en la presente invención.

"Polygonum multiflorum" o nP. multiflorum" , como se usa en el presente documento, se refiere a una especie de enredadera perenne herbácea que alcanza una altura de hasta 2-4 m a partir de un tubérculo leñoso, originaria de China central y meridional. Las hojas tienen 3-7 cm de longitud y 2-5 cm de anchura, son anchas y con forma sagital, con margen entero. Las flores tienen 6-7 mm de diámetro, son de color blanco o blanco verdoso y se producen en panículas cortas, densas, con una longitud de hasta 10-20 cm. La fruta es un aquenio de 2,5-3 mm de longitud. También se conoce como Fallopia multiflora , Radix polygoni , Radix polygoni multiflori, flor de la lana, He Shou Wu, o Fo-Ti .

"Polisacárido" , como se usa en el presente documento, se refiere a un polímero de más de aproximadamente diez restos de monosacáridos unidos por enlaces glucosídicos en cadenas ramificadas y no ramificadas.

"Célula progenitora" como se usa en el presente documento se refiere a una célula que da lugar a progenie en un linaje celular definido.

"Promueve" y/o "promover" como se usa en el presente documento se refiere a un aumento en un comportamiento particular de una célula u organismo. En una realización, promover se refiere a la movilización de células madre derivadas de melanocitos. En otra realización, promover se refiere a la diferenciación de las células madre en melanocitos .

"Reclutamiento" de una célula madre como se usa en el presente documento se refiere a un proceso mediante el cual una célula madre en el sistema circulatorio migra hacia el interior de un sitio específico dentro de un tejido u órgano. El reclutamiento puede verse facilitado por un compuesto o molécula, tal como una señal quimioatrayente o un receptor celular. Por ejemplo, tanto CXCR4 como SDF-1 tienen funciones identificadas en el retorno dirigido y migración de células madre .

"Agente de liberación" como se usa en el presente documento son agentes de movilización que pueden promover la liberación y la salida de células madre de un tejido de origen. La liberación de células madre de un tejido de origen puede demostrarse, por ejemplo, por un aumento de células madre circulantes en el sistema circulatorio o inmunitario, o por la expresión de marcadores relacionados con la salida de células madre de un tejido de origen, tal como médula ósea. Como ejemplos de agentes de liberación se incluyen fucoidán, como se obtiene de un extracto de algas tales como ündaria pinnatifida y Polygonum multiflorum o sus extractos. En una realización, el agente de liberación aumenta el número de células madre y/o células madre derivadas de médula ósea y/o de células madre hematopoyéticas en la sangre periférica. En otra realización, el agente de liberación afecta al número de células madre, tales como CD34expresión alta (CD34+) , circulantes en la sangre periférica.

"Célula satélite" como se usa en el presente documento se refiere a una célula madre específica de músculo, a menudo localizada en la periferia del tejido muscular y que puede migrar hacia el interior de un músculo para ayudar en la reparación y reconstrucción tisular.

"Células madre" como se usa en el presente documento son células que no están finalmente diferenciadas y por lo tanto puede producir células de otros tipos. Las células madre se caracterizan por su potencial de desarrollarse en células maduras que tienen formas particulares y funciones especializadas, tales como células cardiacas, células epiteliales o células nerviosas. Las células madre se dividen en tres tipos, que incluyen totipotentes , pluripotentes y multipotentes. Las "células madre totipotentes" pueden desarrollarse y diferenciarse en cualquier célula en el organismo y por tanto, pueden formar las células y tejidos de un organismo completo. Las "células madre pluripotentes" pueden autorenovarse y diferenciarse en más de un tipo de célula o tejido. Las "células madre multipotentes" son células clónales que pueden autorenovarse, así como diferenciarse en células adultas o tipos de tejido. La diferenciación de células madre multipotentes puede implicar una fase de diferenciación intermedia en células progenitoras o blastocitos de potencial de diferenciación reducido, pero que aún pueden madurar en células diferentes de un linaje específico. La expresión "células madre", como se usa en el o presente documento, se refiere a células madre pluripotentes y células madre multipotentes que pueden autorenovarse y diferenciarse. Las "células madre derivadas de médula ósea" son las células madre más primitivas encontradas en la médula ósea que pueden reconstituir el sistema hematopoyético, poseen capacidades endoteliales mesenquimales y pluripotentes . Las células madre pueden residir en la médula ósea, bien como un tipo de célula estromal adherente, o como una célula más diferenciada que exprese CD34, bien sobre la superficie celular o de una manera en la que la célula es negativa para CD34 de superficie celular. Las "células madre adultas" son una población de células madre encontradas en organismos adultos con cierto potencial de autoregeneracion y pueden diferenciarse en múltiples tipos de células. Otros ejemplos de células madre son las células estromales medulares (MSC) , HSC, células progenitoras adultas multipotentes (MAPC) , células madre muy pequeñas de tipo embrionario (VSEL) , células madre de tipo epiblasto (ELSC) o células madre de tipo blastómero (BLSC) .

"Agente de circulación de células madre" (SCCA) , "agente de movilización", y/o "factor de movilización", como se usa en el presente documento, se refiere a uno o más compuestos, anticuerpos, moléculas de ácido nucleico, proteínas, polisacáridos, células, u otras moléculas, incluyendo, a título enunciativo, neuropéptidos y otras moléculas de señalización que afectan a la liberación, circulación, retorno dirigido y/o migración de células madre del sistema circulatorio hacia el interior de tejidos u órganos. Un agente molecular puede ser una molécula de origen natural o una molécula sintética. Como ejemplos de agentes de movilización se incluyen "agentes de liberación" , en los que un agente de liberación puede promover la salida de células madre de un tej ido de origen y también "agentes de migración" , en los que un agente de migración puede promover el proceso de una célula que se mueve desde el sistema circulatorio hacia el interior de un tejido u órgano.

"Sujeto", como se usa en el presente documento, incluye a todos los animales, incluyendo mamíferos y otros animales, incluyendo, a título enunciativo, animales de compañía, animales de granja y animales de zoo. El término "animal" puede incluir cualquier organismo vertebrado multicelular vivo, una categoría que incluye, por ejemplo, un mamífero, un ave, un simio, un perro, un gato, un caballo, una vaca, un roedor y similar. Del mismo modo, el término "mamífero" incluye mamíferos tanto humanos como no humanos.

"Cantidad terapéuticamente eficaz" como se usa en el presente documento se refiere a la cantidad de una composición específica, o a un agente activo en la composición, suficiente para conseguir un efecto deseado en un sujeto que va a tratarse. Por ejemplo, esta cantidad puede ser la cantidad eficaz para potenciar la migración de células madre que reponga, repare o rejuvenezca los tejidos. En otra realización, una "cantidad terapéuticamente eficaz" es una cantidad eficaz para potenciar el tránsito de células madre, tal como aumentando la liberación de células madre, como puede demostrarse por niveles elevados de células madre circulantes en la corriente sanguínea. En otra realización adicional, la "cantidad terapéuticamente eficaz" es una cantidad eficaz para potenciar el retorno dirigido y migración de células madre del sistema circulatorio a diversos tejidos u órganos, como puede demostrarse por niveles disminuidos de células madre circulantes en la corriente sanguínea y/o por expresión de marcadores de superficie relacionados con el retorno dirigido y migración. Una cantidad terapéuticamente eficaz puede variar dependiendo de una diversidad de factores, incluyendo, a título enunciativo, la afección fisiológica del sujeto (incluyendo edad, sexo, tipo y fase de enfermedad, estado físico general, respuesta a una dosis determinada, efecto clínico deseado) y la vía de administración. Un experto en la técnica médica y farmacológica podrá determinar una cantidad terapéuticamente eficaz a través de experimentación rutinaria.

"Tránsito" como se usa en el presente documento se refiere al proceso de movimiento de una célula desde el tejido de origen, que viaja dentro del sistema circulatorio o inmunitario y se localiza hacia un sitio dentro de un tejido y/u órgano. El tránsito también incluye movilización de células madre, comenzando con la liberación desde un tejido de origen, tal como salida de células madre de la médula ósea. Adicionalmente, el tránsito incluye el movimiento de una célula desde el tej ido de origen, retorno dirigido por adhesión al endotelio, transmigración y migración final al interior del tejido y /u órgano diana. Adicionalmente, el tránsito puede incluir el proceso de movimiento a una célula del sistema inmunitario. Un ejemplo no limitante, específico, de tránsito en movimiento de una célula madre a un órgano diana, denominado también migración. Otro ejemplo específico no limitante de tránsito es el movimiento de un linfocito B o un prelinfocito B que abandona la médula ósea y que se mueve a un órgano diana.

"Tratar" , "tratando" , y "tratamiento" , como se usa en el presente documento se refiere a tratamiento tanto terapéutico como profiláctico o a medidas preventivas, en las que el objeto es prevenir o reducir (disminuir) la afección, enfermedad o trastorno diana (en su conjunto "dolencia"), incluso si finalmente fracasa el tratamiento. Los que requieren tratamiento pueden incluir los que ya tenían la dolencia así como los propensos a tener la dolencia o aquellos en los que va a prevenirse la dolencia.

Como se describe, las células madre son células exclusivas que poseen la capacidad de diferenciarse en células más especializadas. Un tipo particular de célula madre, las células madre hematopoyéticas (HSC) , pueden diferenciarse en muchos tipos de células sanguíneas diferentes. Además, las HSC residen típicamente en la médula ósea, donde la proliferación y autorenovacion de las células permite que las HSC estén implicadas en el apoyo y mantenimiento del sistema hematopoyético . La bibliografía científica existente se ha centrado sobre todo en el potencial de las HSC para desarrollarse en derivados de células de linaje hematopoyético. Adicionalmente, nuevas pruebas han identificados la capacidad de las HSC para diferenciarse también en células no hematopoyéticas, específicas de tejido. Recientemente, se ha encontrado que las HSC poseen la capacidad de diferenciarse en una diversidad de tipos de células específicas de tejido, tales como miocitos, hepatocitos, osteocitos, células gliales y neuronas. Como resultado, las HSC forman células sanguíneas e inmunitarias que son responsables del mantenimiento y protección inmunitaria constantes de prácticamente cada tipo de célula del organismo.

De manera similar, recientemente se ha demostrado que las células madre de médula ósea (BMSC) tienen una capacidad significativa para convertirse en células de otros tejidos. En la médula ósea, las células madre se duplican utilizando un proceso conocido como "visión celular asimétrica" de acuerdo con el cual las dos células hijas no son idénticas; una célula conserva el ADN original y permanece en la médula ósea mientras que la otra célula contiene las copias de ADN y se libera en la sangre donde migra hacia el interior de diversos tejidos que requieren reparación. Las BMSC se han considerado tradieionalmente que tienen poco potencial de plasticidad, estando limitadas en su desarrollo a células sanguíneas, linfocitos, plaquetas, tejido óseo y conectivo. Sin embargo, la mayor parte de los trabajos científicos que se han publicado hace algunos años demuestra la excepcional plasticidad de las BMSC. Por ejemplo, después de un trasplante, se observó que las BMSC y las HSC tenían la capacidad de convertirse en células musculares (Abedi et al., 2004), células cardiacas (Fraser et al., 2004), células capilares endoteliales (Asahara et al., 1999), células hepáticas (Jang et al., 2004), así como células pulmonares (Krause et al., 2001), intestinales (Krause et al., 2001), dérmicas (Branski et al., 2008), y cerebrales (Dezawa et al., 2005). Como un ejemplo ilustrativo adicional, Jang et al. (2004) realizaron un experimento que no solo demostró la capacidad de las HSC para convertirse en células hepáticas después del contacto con moléculas derivadas de hígado específicas, sino que este proceso se produjo en horas. Brevemente, las HSC se cultivaron simultáneamente con tejido hepático normal o dañado separado por una membrana semipermeable (poros lo suficientemente grandes para dejar que las moléculas pasen a su través, pero lo suficientemente pequeños para impedir el paso de células de un compartimento a otro, tamaño de poro 0,4 µt?) . Usando métodos de ensayo de inmunofluorescencia para detectar moléculas específicas de HSC (CD45) o de células hepáticas (albúmina) , los investigadores pudieron seguir la transformación de la población de células situadas en el compartimento superior. Cuando las HSC se cultivaron solas durante 8 horas, solo expresaron CD45 y no albúmina, indicando que ninguna HSC se había diferenciado en células hepáticas. Sin embargo, cuando las HSC se exponían a tejido hepático dañado, rápidamente se volvieron positivas para albúmina. A lo largo del tiempo, la población de células positivas para CD45 comenzó a disminuir a medida que la población positiva para albúmina comenzaba a aumentar. Las células positivas a albúmina se observaron a las 8 horas en el procedimiento y su frecuencia aumentó a 3,0 % a las 48 horas. La conversión fue mínima y se suspendió cuando las HSC se expusieron a tejido no dañado (control para daño) .

Dado que las HSC y BMSC desempeñan una función importante en los procesos de curación y regenerativos de diversos tejidos y órganos en el organismo además de su función tradicional en el mantenimiento de los sistemas hematopoyético e inmunitario del organismo, la activación y potenciación del tránsito de células madre puede amplificar estos procesos fisiológicos y proporcionar una posible terapia para diversas patologías. La fuente clásica de HSC y BMSC es la médula ósea, que incluye cadera, costillas, esternón y otras estructuras óseas. El hueso proporciona un microentorno regulador exclusivo para las HSC y BMSC, incluyendo la interacción con un tipo de célula mesenquimal específico (el osteoblasto) , glucoproteínas de la matriz extracelular y una firma mineral exclusivamente rica. (Adams y Scadden, 2006) Este "nicho" de células madre contiene muchas interacciones moleculares críticas que guían la respuesta de las células madre a condiciones fisiológicas específicas. El nicho puede ser un punto focal importante para cambios en el estado del tejido que da como resultado un cambio en los procesos regenerativos arraigados en la actividad de células madre. (Adams y Scadden, 2006).

Además de poblaciones de HSC encontradas en la médula ósea, las HSC también están presentes en la corriente sanguínea periférica de personas normales, sanas. Durante décadas se ha sabido que un pequeño número de células madre y progenitoras circulan en la corriente sanguínea, pero estudios más recientes han demostrado que inyectando al donante una citocina, tal como factor estimulante de colonias de granulocitos (G-CSF) , pueden obtenerse suscitarse números más elevados de HSC en la movilización desde la médula ósea a la sangre. A pesar de este avance, el proceso natural mediante el cual las células madre se liberan de la médula ósea y migran hacia un sitio dentro de un tejido y/o un órgano no se entiende completamente. Un modelo principal implica la quimiocina, Factor 1 Derivado del Estroma (SDF-l) y su receptor específico, CXCR4. En esta función, la unión del SDF-l al CXCR4 , conduce a la adherencia de las células madre a la médula ósea a través de la expresión aumentada de moléculas de adhesión sobre la superficie de la membrana celular. La alteración de la adhesión de células madre a la médula ósea promueve de este modo la movilización de células madre hacia el interior de la corriente sanguínea periférica. (Figura 1C) Algunos factores, tales como G-CSF o IL-8, pueden interferir con la adhesión a través de una activación elevada de enzimas proteolíticas o degradación del ligando DE SDF-1 (Drapeau 2010) . Otros tipos de moléculas, tales como bloqueadores de L-selectina, pueden en su lugar regular negativamente la expresión de CSCR4 que a su vez reduce la adhesión de células madre al entorno de médula ósea. Hablando en líneas generales la potenciación de la unión de SDF-1 a CXCR4 promueve la adherencia, por lo tanto, bloqueadores de L-selectina, tales como fucanos sulfatados, que reducen la expresión de CXCR4, pueden provocar la movilización de células madre. (Drapeau 2010) .

Las células madre circulantes en la corriente sanguínea periférica se reclutan a sitios de tejido que necesitan reparación y regeneración a través del retorno dirigido y extravasación. Esta movilización de células madre al interior de la corriente sanguínea y posterior migración al sitio del daño tisular da como resultado una combinación de señales mecánicas y quimioatrayentes . (Drapeau 2010) la fuerza mecánica u otros factores pueden activar las L-selectinas sobre la superficie de las células madre. La activación de L-selectinas, a su vez, puede promover la expresión elevada del receptor, CXCR4. Las células en el sitio de lesión tisular también pueden segregar el ligando de SDF-1, por lo tanto atrayendo a células madre que expresan al receptor CXCR4 al sitio de la lesión. La interacción de SDF-1 y CXCR4 promueve la suficiente adhesión para detener la circulación de una célula madre en la corriente sanguínea periférica. (Figura IB) En base a este modelo, los bloqueadores de L-selectina, tales como fucanos sulfatados, pueden poseer una capacidad crítica para movilizar las HSC en la corriente sanguínea, con posterior retorno dirigido, extravasación y migración hacia el interior de tejidos promoviendo el mantenimiento regenerativo y la reparación de células y tejidos en un organismo. Mientras que el G-CSF se libera de tejido lesionado y su presencia en la corriente sanguínea provoca la liberación de HSC de la médula ósea, complementos dietéticos compuestos de bloqueadores de L-selectina pueden reforzar posiblemente el fenómeno de regeneración y reparación natural en el organismo.

Extraordinariamente, en la bibliografía de la antigua medicina tradicional China (MTC) , hay una descripción de procesos similares, incluyendo un concepto denominado Jing. Aunque a lo largo del tiempo el término ha cambiado y actualmente se relaciona esencialmente con "semen", textos antiguos hacen referencia a dos Jing diferentes: uno primordial que estaba presente en el momento de la concepción y que conducía a la formación del feto, y el otro que permanecía en el organismo y que era regenerador y curativo. Actualmente, la idea de una curación innata y la capacidad regeneradora, como ilustra el concepto del Jing de la MTC, es coherente con la extraordinaria capacidad de las células madre embrionarias y adultas para facilitar estos procesos. (Yang et al. 2009). Es interesante observar que, para "tonificar la sangre", recuperar el color natural del cabello, y en general, para propiedades regeneradoras, se utilizan hierbas que se sabe que refuerzan el Jing. Un ejemplo es la baya de Goj i {Lycium barbarum) , que se sabe que refuerza el Jing y que se usa para la longevidad; se ha demostrado que la baya de Goji refuerza la migración de células madre. Otro ejemplo es StemEnhance, un complemento que contiene Aphanizomenon flos aquae (AFA) , un alga azul, que se sabe que refuerza la movilización de las células madre y que se ha demostrado que ayuda a recuperar el color del cabello y en general refuerza la curación y la regeneración. (Jensen et al., 2007). Dado que composiciones tales como StemEnhance influyen sobre la actividad de células madre en el organismo, estos efectos pueden entenderse como estimuladores del Jing. Por el contrario, es muy interesante comprender si puede demostrarse que la medicina MTC y las hierbas que se sabe que estimulan el Jing poseen efectos sobre las actividades de las células madre tales como proliferación, migración y movilización. Por lo tanto, los inventores estudiaron los efectos de una hierba ampliamente utilizada para estimular el Jing, Polygonum multiflorum, con una perspectiva particular hacia los efectos sobre la migración y movilización de las células madre.

Polygonum multiflorum. El tubérculo radicular seco de la planta Polygonum multiflorum, también conocida como raíz de la flor de lana, se ha usado como una medicina China tradicional denominada He shou wu, adquiriendo este remedio notoriedad en la MTC a partir de una fábula de un famoso oficial militar Chino condenado a morir y encarcelado sin comida ni bebida. Sobreviviendo consumiendo las hojas y las raíces de la hierba de tipo trepadora, Polygonum multiflorum, los secuestradores del oficial descubrieron más tarde que este aun tenía un cabello negro lustroso. Aunque los orígenes de esta fábula son apócrifos, sirven para ilustrar la idea arraigada de que Polygonum multiflorum posee importantes propiedades que repercuten en el potencial regenerador y restaurador del organismo. Recientes estudios científicos han confirmado que extractos de Polygonum multiflorum pueden ciertamente promover el crecimiento de folículos pilosos, a través de la expresión aumentada de la expresión del erizo sónico (Sonic Hedgehog) (Shh) y de la ß-catenina - dos rutas importantes implicadas tanto en la embriogénesis temprana como en el mantenimiento de la identidad de las células madre (Park et al. 2011) .

Análisis adicionales de extractos de Polygonum multiflorum han confirmado que esta planta es una fuente rica de compuestos bioactivos, siendo dos ejemplos notables las antraquinonas y derivados y los hidroxil estríbenos. Las antraquinonas y derivados se han utilizado como una base para tratamientos contra la malaria, como laxante y en quimioterapia. Se ha demostrado que los hidroxil estilbenos, tales como 2 , 3 , 5 , 4 ' -tetrahidroxiestilbeno-2-0-P-D-glucósido, proporcionan importantes efectos neuroprotectores impidiendo síntomas de diferentes enfermedades neurodegenerativas. En su conjunto, estos resultados indican que los componentes de extractos de Polygonum multiflorum poseen importantes propiedades para la curación y regeneración del organismo, posiblemente modulando la inflamación, reduciendo el riesgo de proliferación del cáncer y/o proporcionando efectos protectores para células, tejidos y órganos corporales.

Aunque en determinadas afecciones específicas los efectos de estos componentes de Polygonum multiflorum son algo conocidos, se sabe mucho menos sobre cómo pueden incidir específicamente los componentes de Polygonum multiflorum sobre la actividad de las células madre en el organismo. Esto es sorprendente dado que, como se ha descrito, las células madre desempeñan una función integral en la curación y en los mecanismos de curación y regeneración naturales del organismo. Uno de los pocos estudios existentes sobre el tema indican que los extractos de Polygonum multiflorum promueven la proliferación de células madre y progenitoras , como se demuestra por un aumento en el número de células madre de la médula ósea y progenitoras linfoides después de la administración a ratones de extractos de Polygonum multiflorum. (Zhiweng et al. 1991). De manera similar, la Solicitud de Patente de Estados Unidos N° 12/006.221 describe un aumento en la expresión de GM-CSF y del factor de células madre (SCF) después de la administración a ratones. Estos resultados plantean cuestiones interesantes sobre los posibles efectos de los extractos de Polygonum multiflorum en la actividad de las células madre, dado que, como se ha descrito anteriormente, tanto el GM-CSF como el SCF están implicados ya que desempeñan importantes funciones en la migración y movilización de células madre.

Fucoidán . El fucoidán es un agonista de L-selectina polisacárido de fucano sulfatado que se documentó que promovxa la salida de las HSC de compartimentos en la médula ósea hacia el interior de la corriente sanguínea periférica después de inyección intravenosa, aunque este efecto parece no estar relacionado con su estimulación de la L-selectina (Frenette et al., 2000) . La circulación de las HSC en la corriente sanguínea periférica es una etapa crítica en la promoción de los mecanismos de regeneración y reparación de células madre en el organismo. Como un fucano sulfatado, el fucoidán se encuentra en diversas especies de algas. Otros fucanos sulfatados también se han encontrado en especies de animales, tales como equinodermos (por ejemplo, erizos y pepinos de mar) .

Al margen de los datos in vivo en modelos animales que demuestran niveles significativamente elevados de HSC después de administración intravenosa de fucoidán, son mucho más limitadas las observaciones de efectos clínicos positivos en sujetos humanos. Estudios publicados han demostrado que el porcentaje de HSC que expresan un importante receptor de tránsito, CXCR4, aumenta significativamente después de 4 días de administración oral de fucoidán. (Irhimeh et al., 2007).

Sin embargo, solo se observó un ligero cambio en el número absoluto de HSC circulantes en la sangre periférica.

Como se ha descrito, el fucoidán (también conocido como fucoidina o fucanosulfato en la técnica) es un ligando de L-selectina polisacárido de fucosa sulfatado. La actividad de la selectina depende de importantes modificaciones de carbohidratos o polipéptidos tales como sialilación, fucosilación, y sulfatación. La presencia de sitios de unión para fucanos sulfatados tales como fucoidán sobre P- y L-Selectina se ha demostrado que es al menos parcialmente el mecanismo mediante el cual el fucoidán promueve la separación de las HSC de la BM. (Frenette et al., 2000, 2461, Jensen et al., 2007, 190). Quizá de manera más significativa, se ha demostrado que los fucanos sulfatados, tales como el fucoidán, desplazan al SDF-1 secuestrado sobre las superficies endoteliales o médula ósea a través de la unión competitiva a un dominio de unión a heparina presente en SDF-1. La ocupación del sitio de unión a heparina de SDF-1 por fucoidán impide el contacto con las superficies celulares, aumentando de este modo los niveles de SDF-1 circulantes en plasma. (Sweeney et al., 2008). Sin querer ligarse a ninguna teoría particular, los niveles potenciados del ligando SDF-1 en la corriente sanguínea pueden por tanto promover la salida del receptor CXCR4 que expresa las HSC de la BM. (Sweeney et al., 2008) (Figura 1C) . Basándose en este modelo, los inventores llegaron a la hipótesis de que el ligando de L-selectina, tal como fucoidán, puede poseer capacidad critica para movilizar las HSC y la administración oral de complementos dietéticos compuestos de fucoidán pueden reforzar mejor la regeneración natural y la reparación en el organismo .

Datos convincentes in vivo en modelos animales demuestran niveles significativamente elevados de HSC circulantes después de administración intravenosa (IV) de fucoidán en ratones y primates, aunque inconvenientes significativos podrían presentar limitaciones para el uso terapéutico en seres humanos. Recientes publicaciones han mostrado un aumento drástico de 12 veces en niveles de HSC circulantes, HSC progenitoras y tipos de células derivadas (incluyendo unidades formadoras de estallidos eritroides, unidades formadoras de colonias de granulocitos, eritroides, macrófagos, megacariocitos , unidades formadoras de colonias de granulocitos, eritroides, macrófagos y granulocitos) en comparación con controles no tratados, 3 horas después de inyección de fucoidán (fuente desconocida) en ratones. Se publicaron resultados similares de la elevación sostenida en niveles de HSC, HSC progenitoras y tipos de células derivadas, después de inyecciones diarias durante 3 días. (Sweeney et al., 2008) . También se ha demostrado que la inyección de fucoidán en primates aumenta los niveles HSC y derivados de HSC 11-26 veces 6 horas después de la administración, pudiendo aún observarse un aumento continuo hasta después de 24 horas (Sweeney et al. , 2000) . A pesar de estas observaciones positivas, diversas exposiciones impedirían el uso terapéutico de fucoidán en sujetos humanos. El efecto temporal y transitorio de las HSC circulantes y células madre derivadas de médula ósea elevadas pueden no producir completamente los beneficios clínicos positivos de los mecanismos regeneradores y reparadores de las células madre, ya que pueden ser necesarios periodos de elevación continuos o repetidos para permitir los procesos de retorno dirigido y extravasación de células madre que son la base de la actividad terapéutica de las células madre . Esta limitación se complica adicionalmente en vista de la dificultad e inconveniencia de administrar inyecciones IV de manera rutinaria.

Las observaciones existentes en sujetos humanos están limitadas y los datos disponibles sobre la administración oral de fucoidán en seres humanos no reflejan los efectos clínicos positivos de estudios animales usando inyección IV. Estudios publicados por otros han demostrado que el porcentaje de HSC que expresan un receptor de tránsito importante, CXCR4, aumentó significativamente (de 45 % a 90 %) 12 días después de la administración oral de fucoidán (3 gramos diarios de extractos de fucoidán de Undaria pinnatifida al 10 % p/p o 75 % p/p) . Sin embargo, solo se observó un ligero cambio (~ 12 %) en el número absoluto de HSC circulantes en sangre periférica (el efecto máximo fue de 1,64 a 1,85 células/µ? 4 días después de la administración de extracto de fucoidán). (Irhimeh et al., 2007). De manera importante, para aplicaciones terapéuticas que implican la administración oral, fucoidán puede sobrevivir a condiciones ácidas en el estómago y no demuestra efectos secundarios adversos. (Irhimeh et al., 2007). Esto coincide con informaciones de que la fucoidinasa catalítica, que metaboliza el fucoidán, solo se encuentra en invertebrados marinos y no en mamíferos terrestres. (Berteau y Mulloy, 2003) . Esto puede proporcionar un beneficio terapéutico vital de alta persistencia y estabilidad de un fucano sulfatado administrado, incluyendo fucoidán, para un efecto terapéutico continuo. Esto es particularmente ideal para usos orales en los que la difusión en la corriente sanguínea debe sobrevivir primero al procesamiento enzimático en la boca, esófago e intestino, además de a las altas condiciones ácidas del estómago.

Los inventores han descubierto que la fuente de fucoidán y los regímenes de dosificación apropiados son características críticas para promover la movilización de HSC a través de la administración oral de fucoidán. El fucoidán es un miembro de la amplia clase de fucanos sulfatados, que son polisacáridos ricos en L-fucosa y se obtienen principalmente de dos fuentes: algas e invertebrados marinos. Los fucanos sulfatados obtenidos de estas dos fuentes difieren enormemente en cuanto a su composición y estructura. Esta diversidad de estructura molecular existe adicionalmente entre los fucoidanos de diferentes especies de algas. Aunque generalmente se describe como un polisacárido de un peso molecular de ~20.000 compuesto de L-fucosa, las estructuras exactas del fucoidán dependen, en parte, del organismo fuente. Como ejemplo, el fucoidán de F. vesculosus , que más se ha estudiado, se describe como compuesto principalmente de L-fucosa con enlaces a(l->3) glucosídicos y grupos sulfato en la posición 4, con ramificaciones de fucosa sulfatada cada 5 unidades. Por otro lado, el fucoidán de un alga diferente, Ascophylum nodosum, tiene una gran proporción de enlaces glucosídicos a(1-»3) y a(1—4) que alternan para la formación del oligosacárido, posiblemente con pocos puntos de ramificación sulfatados que como se muestra en estudios de resonancia magnética nuclear (R N) (Berteau, 2003) . En definitiva, los fucoidanos de diferentes especies son estructuralmente distintos, heterogéneos y diversos.

La presente invención proporciona nuevas composiciones y métodos para proporcionar una amplia serie de beneficios clínicos y fisiológicos a un sujeto que lo necesite mediante la administración de un agente de movilización. Sin el deseo de limitarse a ninguna teoría particular, los inventores creen que los resultados beneficiosos y otros fisiológicos obtenidos a través de la administración de las composiciones de la invención son el resultado de la potenciación del tránsito y migración de las células madre que se produce después de la administración del agente de movilización.

En diversas realizaciones, el agente de movilización comprende uno o más componentes seleccionados del grupo que incluye: Polygonum multiflorum, Lycium Barabrum, algas verdeazules (por ejemplo Aphanizomenon flos aquae (AFA) ) , calostro, polisacáridos de hongos (por ejemplo, Cordyceps sinensis, Hericium erinaceus (Lion' s mane), Ganoderma lucidum (Reishi) ) , fucoidán (opcionalmente extraído de algas, por ejemplo, Undaria pinnatifida, Chordaria cladosiphon (Limu)), espirulina (por ejemplo, Arthrospira platensis, Arthrospira máxima) análogos de estos, derivados de estos, extractos de estos, equivalentes sintéticos o farmacéuticos de estos, fracciones de estos y combinaciones de cualquiera de los productos anteriores. Los agentes de movilización pueden combinarse entre sí en una o más composiciones o pueden administrarse o consumirse por separado como parte de un régimen. Pueden tener efectos fisiológicos individuales, efectos aditivos y/o efectos sinérgicos entre sí, de tal manera que actúan como un agente de liberación y como un agente de migración. En algunas realizaciones, el agente de movilización puede funcionar como un agente de migración, promoviendo el proceso de una célula que se mueve del sistema circulatorio hacia el interior de un tejido u órgano. En algunas realizaciones, el agente de movilización puede funcionar como un agente de liberación, promoviendo la liberación y la salida de células madre a partir de un tejido de origen.

En una realización, a un sujeto se le administra un agente de movilización, por ejemplo, Polygonum multiflorum, aunque al sujeto se le puede proporcionar una mezcla de Polygonum multiflorum y otros agentes de movilización. En algunas realizaciones, el sujeto consume y digiere raíces, hojas, tallos, semillas, frutas y/u otras partes enteras de de la planta Polygonum multiflorum. Las raíces, hojas, tallos, semillas, frutas y/u otras partes enteras de la planta de Polygonum multiflorum pueden ser recientes, congeladas, liofilizadas, deshidratadas, fermentadas o conservadas de alguna otra manera. Por lo tanto, Polygonum multiflorum, como se describe en el presente documento, incluye raíces, hojas, tallos, semillas, frutas y/u otras partes enteras de la planta Polygonum multiflorum. En otras realizaciones, el agente de movilización es un extracto de Polygonum multiflorum, o un componente aislado o un compuesto extraído de Polygonum multiflorum, tal como un compuesto encontrado en una fracción rica en polisacáridos de extractos de Polygonum multiflorum, o una fracción soluble en soluciones acuosas, o una fracción soluble en disolventes orgánicos. Polygonum multiflorum puede proporcionarse en solitario como una sustancia aislada o purificada, o puede formar parte de una composición que incluya un vehículo farmacéuticamente aceptable. En una realización, Polygonum multiflorum o sus extractos puede funcionar como un agente de migración. En una realización, Polygonum multiflorum o sus extractos puede funcionar como un agente de liberación.

Los extractos de componentes encontrados en Polygonum multiflorum incluyen antraquinonas y derivados, hidroxil estilbenos, lecitina, crisofanol, ácido crisofánico, crisofanol antrona, emodina, fisción, reina, ácido crisofánico antrona, resveratol, pice do, 2,3,5,4'-tetrahidroxiestilben-2-0-0-D-glucopiranósido, 2,3,5,4'-tetrahidroxiestilben-2-0-p-D-glucopiranósido-2' ' -0-mononogaloil ester, 2 , 3 , 5 , 4 ' -tetrahidroxiestilben-2-0-P-D-glucopiranósido-3 ' ' -O-monogaloil éster, 2,3,5,4'-tetrahidroxiestilben-2-0-p-D-glucósido, ácido gálico, catequina, epicatequina, 3-O-galoil (-) -catequina, 3-0-galoil (-) -epicatequina, 3 -O-galoil-procianidin B-2, 3 , 3 ' -di-0-galoil-procianidin B-2 y ß-sitosterol .

La identidad y naturaleza (por ejemplo, estabilidad) de los componentes en extractos preparados de Polygonum multiflorum puede variar dependiendo del método de extracción usado. Por ejemplo, la extracción con agua es un método de extracción principal de los componentes de Polygonum multiflorum. Sin embargo, determinados componentes, tales como antraquinonas y derivados son muy insolubles en agua. Las antraquinonas y derivados también son insolubles en disolventes orgánicos a temperatura ambiente, pero solubles en disolventes orgánicos calientes (por ejemplo, temperatura de ebullición) , tales como metanol o etanol. De manera similar, se sabe que el 2, 3, 5,4' -tetrahidroxiestilben-2-?-ß-d-glucósido se degrada fácilmente en soluciones acuosas de una manera dependiente de la temperatura y pH. (Ren et al. 2011) . Por lo tanto, se entiende que los extractos de Polygonum multiflorum pueden prepararse de acuerdo con cualquier método conocido en la técnica. Esto incluye, extracción con agua, extracción con disolventes orgánicos (por ejemplo, Solicitud de Patente de Estados Unidos N° 12/006.221), o combinaciones de dichos métodos ejemplares (por ejemplo, mezclas) . Los ejemplos de disolventes orgánicos que pueden usarse incluyen metanol, n-hexano, acetato de etilo y n-butanol . Pueden añadirse combinaciones simultáneas de dos o más disolventes acuosos y/u orgánicos para generar capas de separación adicionales para extraer diferentes componentes en diferentes capas de separación. De manera similar, pueden prepararse extractos de Polygonum multiflorum a partir de plantas o partes de estas sin procesar, recientes, o los extractos pueden prepararse a partir de plantas completas de Polygonum multiflorum procesadas o partes de estas. Por ejemplo, el procesamiento puede realizarse mediante cualquier método conocido en la técnica, siendo un ejemplo la fermentación. El procesamiento puede mejorar la biodisponibilidad de los componentes en extractos de Polygonum multiflorum, tales como a través de la fermentación con bacterias tales como Lactobacillus sp. (Park et al . , 2011) o a través de la adición de judías negras.

En una realización, a un sujeto se le administra un agente de movilización, por ejemplo, un alga verdeazul, tal como Aphanizomenon flos aquae (AFA) , aunque al sujeto se le puede proporcionar una mezcla de algas verdeazules u otros agentes de movilización. En algunas realizaciones, el sujeto consume y digiere algas verdeazules enteras . Las algas verdeazules pueden ser recientes, congeladas, liofilizadas, deshidratadas o conservarse de alguna otra manera. En una realización, el agente de movilización es un extracto de algas verdeazules, o un componente aislado o un compuesto extraído de algas verdeazules, tal como un compuesto encontrado en una fracción rica en polisacáridos de extractos de algas verdeazules, o un compuesto en un compartimento soluble en agua de un extracto de alga verdeazul . Las algas verdeazules pueden proporcionarse en solitario como un aislado o una sustancia purificada, o pueden formar parte de una composición que incluya un vehículo farmacéuticamente aceptable. En una realización, las algas verdeazules pueden funcionar como un agente de migración. En una realización, las algas verdeazules pueden funcionar como un agente de liberación.

En una realización, a un sujeto se la administra un agente de movilización, por ejemplo Lycium barbarum, aunque al sujeto se le puede proporcionar una mezcla de Lycium barbarum y otros agentes de movilización. En algunas realizaciones, el sujeto consume y digiere bayas de Lycium barbarum completas. Las bayas pueden ser recientes, congeladas, liofilizadas , deshidratadas o conservadas de otra manera. Por lo tanto, Lycium barbarum, como se describe en el presente documento, incluye bayas completas o partes de la planta Lycium barbarum. En una realización, el agente de movilización es un extracto de Lycium barbarum, o un componente aislado o un compuesto extraído de Lycium barbarum, tal como un compuesto encontrado en una fracción rica en polisacáridos de extracto de Lycium barbarum. Lycium barbarum puede proporcionarse en solitario como una sustancia aislada o purificada, o puede formar parte de una composición que incluya un vehículo farmacéuticamente aceptable. En una realización, Lycium barbarum puede funcionar como un agente de migración. En una realización, Lycium barbarum puede funcionar como un agente de liberación.

En una realización, a un sujeto se le administra calostro, aunque al sujeto se le puede proporcionar una mezcla de calostro y otros agentes de movilización. En algunas realizaciones, el sujeto consume y digiere calostro completo. El calostro puede ser reciente, congelado, liofilizado, deshidratado o conservado de alguna otra manera. En una realización, el agente de movilización es un extracto de calostro, o un componente aislado o un compuesto extraído de calostro, tal como un compuesto encontrado en una fracción rica en proteínas de extracto de calostro. El calostro puede proporcionarse en solitario como una sustancia aislada o purificada, o puede formar parte de una composición que incluya un vehículo farmacéuticamente aceptable. En una realización, el calostro puede funcionar como un agente de migración. En una realización, el calostro puede funcionar como un agente de liberación.

En una realización a un sujeto se le administra un hongo o una mezcla de hongos, si bien al sujeto se le puede proporcionar una mezcla de hongos y otros agentes de movilización. En algunas realizaciones, el sujeto consume y digiere hongos completos. Los hongos pueden ser recientes, congelados, liofilizados , deshidratados o conservarse de alguna otra manera. En una realización, el agente es Cordyceps sinensis o un extracto del mismo. En una realización, el agente de movilización es Ganoderma lucidum o un extracto del mismo. En una realización, el agente de movilización es Hericium erinaceus o un extracto del mismo. Los hongos pueden proporcionarse solos como sustancias aisladas o purificadas, o pueden formar parte de una composición que incluya un vehículo farmacéuticamente aceptable. En una realización, los hongos, Cordyceps sinensis, Ganoderma lucidum, y/o Hericium erinaceus pueden funcionar como un agente de migración. En una realización, los hongos, Cordyceps sinensis , Ganoderma lucidum, y/o Hericium erinaceus pueden funcionar como un agente de liberación.

En una realización, a un sujeto se le administran algas, aunque al sujeto se le puede proporcionar una mezcla de algas y otros agentes de movilización. En algunas realizaciones, el sujeto consume y digiere algas enteras. Las algas pueden ser recientes, congeladas, liofilizadas, deshidratadas o conservadas de alguna otra manera. En una realización, el agente de movilización es Chordaria cladosiphon o un extracto del mismo. Las algas pueden proporcionarse en solitario como sustancias aisladas o purificadas o pueden formar parte de una composición que incluya un vehículo farmacéuticamente aceptable. En una realización, el alga, Chordaria cladosiphon puede funcionar como un agente de migración. En una realización, el alga, Chordaria cladosiphon puede funcionar como un agente de liberación.

En una realización, a un sujeto se le administra espirulina, si bien al sujeto se le puede proporcionar una mezcla de espirulina u otros agentes de movilización. En algunas realizaciones, el sujeto consume y digiere espirulina entera. La espirulina puede ser reciente, congelada, liofilizada, deshidratada o conservada de alguna otra manera. En una realización, el agente de movilización es Arthrospira platensis, Arthrospira máxima o un extracto de estas La espirulina puede proporcionarse en solitario como una sustancia aislada o purificada o puede formar parte de una composición que incluya un vehículo farmacéuticamente aceptable. En una realización, la espirulina puede funcionar como un agente de migración. En una realización, la espirulina puede funcionar como un agente de liberación.

En el presente documento se describe un método para potenciar el tránsito de células madre administrando a un sujeto una cantidad terapéuticamente eficaz de Polygonum multiflorum.

En una realización, al sujeto se le administra Polygonum ultiflorum, aunque al sujeto se le puede proporcionar una mezcla de más de un ingrediente. En algunas realizaciones, el sujeto consume y digiere la planta entera o partes de la planta. Polygonum multiflorum puede ser reciente, congelada, liofilizada, deshidratada o conservada de otra manera.

En realizaciones alternativas, al sujeto se le proporciona o administra un extracto de Polygonum multiflorum. En otra realización, Polygonum multiflorum incluye la planta entera, partes de la planta y extractos de la misma. En otra realización, Polygonum multiflorum puede proporcionarse en solitario como una sustancia aislada o purificada, o puede ser parte de una composición que incluya un vehículo farmacéuticamente aceptable. En otra realización, el extracto es una antraquinona y/o un derivado. En otra realización, el extracto es un hidroxil estilbeno. En una realización alternativa, al sujeto se le administra la planta entera de Polygonum multiflorum. En otra realización, al sujeto se le administran partes de la planta Polygonum multiflorum. En una realización, al sujeto se le administra un extracto de Polygonum multifloru .

La presente invención también proporciona una preparación farmacéutica. En una realización, la preparación farmacéutica es Polygonum multiflorum o extractos de la misma al 90 %, 80 %, 70 %, 60 %, 50 %, 40 %, 30 %, 20 %, 10 %, 5 % o 1 % ?/?· La presente invención también proporciona un régimen de dosificación. En una realización, el régimen de dosificación depende de la gravedad y respuesta de una patología a tratar, durando el ciclo de tratamiento de una sola administración a una administración repetida durante varios días y/o semanas. En otra realización, el programa de dosificación se basa en la medición de un componente activo acumulado en el organismo. En una realización, el componente activo es Polygonum multiflorum o extractos de la misma. En otra realización, el régimen de dosificación depende del nivel de tránsito de células madre en el sujeto. En una realización, el régimen de dosificación depende de la actividad del agente de liberación administrado a un sujeto. En otra realización, el régimen de dosificación depende del número de HSC CD34+ circulantes en la corriente sanguínea periférica de un sujeto. En otra realización, el régimen de dosificación depende del número de células madre derivadas de médula ósea circulantes en la corriente sanguínea periférica de un sujeto. En una realización, el régimen de dosificación es de 3 gramos de Polygonum multiflorum o sus extractos, administrados diariamente. En otra realización, el régimen de dosificación es de 1 gramo de Polygonum multiflorum o sus extractos, administrado diariamente. En otra realización, el régimen de dosificación es de 500 miligramos de Polygonum multiflorum o sus extractos, administrados diariamente. En una realización, el régimen de dosificación es de 250 miligramos de Polygonum multiflorum o sus extractos, administrados diariamente. En otra realización, el régimen de dosificación es de 75 miligramos de Polygonum multiflorum o sus extractos, administrados diariamente. En otra realización, el régimen de dosificación es de 25 miligramos de Polygonum multiflorum o sus extractos, administrados diariamente .

En el presente documento se describe un método para potenciar el tránsito de células madre administrando a un sujeto una cantidad terapéuticamente eficaz de fucoidán.

En una realización, un alga, tal como Undaria pinnatifida, se administra a un sujeto, aunque al sujeto se le puede proporcionar una mezcla de más de un alga. En algunas realizaciones, el sujeto consume y digiere las algas enteras. Las algas pueden ser recientes, congeladas, liofilizadas, deshidratadas o conservadas de alguna otra manera .

En realizaciones alternativas, al sujeto se le proporciona o administra un extracto de las algas . En otra realización, las algas incluyen la planta entera y/o extractos de la misma. En otra realización, las algas pueden proporcionarse en solitario como una sustancia aislada o purificada o pueden formar parte de una composición que incluya un vehículo farmacéuticamente aceptable. En otra realización, el extracto es una fibra soluble polianiónica altamente sulfatada. En una realización, el extracto es un fucoidán aislado. En una realización diferente, el fucoidán se purifica después de aislar. En una realización alternativa, al sujeto se le administra una fracción de polisacárido . En otra realización, al sujeto se le administra la fibra soluble polianiónica altamente sulfatada. En una realización al sujeto se le . administra el fucoidán aislado. En una realización diferente, al sujeto se le administra el fucoidán purificado. En una realización, Undaria pinnatifida puede funcionar como un agente de liberación después de la administración a un sujeto.

La presente invención también proporciona una preparación farmacéutica. En una realización, la preparación farmacéutica es fucoidán al 90 %, 80 %, 70 %, 60 , 50 %, 40 %, 30 %, 20 %, 10 %, 5 % o 1 % p/p.

En el presente documento se describe un método para potenciar el tránsito de células madre administrando a un sujeto una cantidad terapéuticamente eficaz de algas verdeazules .

En una realización, las algas verdeazules, tales como Aphanizomenon flos aquae (AFA) se administran a un sujeto, aunque al sujeto se le puede administrar una mezcla de más de un alga. En algunas realizaciones, el sujeto consume y digiere algas completas. AFA puede ser reciente, congelada, liofilizada, deshidratada o conservarse de alguna otra manera.

En realizaciones alternativas, al sujeto se le proporciona o administra un extracto de AFA. En otra realización, AFA incluye tanto la planta completa como partes de la planta y/o sus extractos. En otra realización, AFA puede proporcionarse sola o como una sustancia aislada o purificada o puede formar parte de una composición que incluya un vehículo farmacéuticamente aceptable. En otra realización, el extracto es un compartimento soluble en agua. En otra realización, el extracto es un compartimento rico en polisacáridos .

La presente invención también proporciona una preparación farmacéutica. En una realización, la preparación farmacéutica es AFA o extractos de la misma al 90 %, 80 %, 70 %, 60 %, 50 %, 40 %, 30 %, 20 %, 10 %, 5 % o 1 % p/p.

La presente invención también proporciona un régimen de dosificación. En una realización, el régimen de dosificación depende de la gravedad y respuesta de una patología a tratar, durando la evolución del tratamiento de una sola administración a una administración repetida durante varios días y/o semanas. En otra realización, el régimen de dosificación se basa en la medición de un componente activo acumulado en el organismo. En una realización determinada, el componente activo es fucoidán. En una realización, el fucoidán se aisla de Undaria pinnatifida o de sus extractos. En otra realización, el régimen de dosificación depende del nivel de tránsito de las células madre en el sujeto. En una realización, el régimen de dosificación depende de la actividad de un agente de liberación administrado a un sujeto. En otra realización, el régimen de dosificación depende del número de HSC CD34+ circulantes en la corriente sanguínea periférica de un sujeto. En otra realización, el régimen de dosificación depende del número de células madre derivadas de médula ósea circulantes en la corriente sanguínea periférica de un sujeto. En una realización, el régimen de dosificación es de 3 gramos de fucoidán administrado diariamente. En otra realización, el régimen de dosificación es 1 gramo de fucoidán administrado diariamente. En otra realización, el régimen de dosificación es de 500 miligramos de fucoidán administrados diariamente. En una realización, el régimen de dosificación es de 75 miligramos de fucoidán administrados diariamente. En una realización, el régimen de dosificación es de 250 miligramos de fucoidán administrados diariamente.

La presente invención también proporciona un método para potenciar el movimiento de las células madre en un sujeto. En una realización, el nivel de tránsito de células madre se refiere al número de HSC CD34+ circulantes en la sangre periférica de un sujeto. En otra realización, el nivel de tránsito de células madre se refiere al número de células madre derivadas de médula ósea circulantes en la sangre periférica de un sujeto.

En otra realización, el método proporcionado en el presente documento potencia el tránsito de las células madre en un sujeto, incluyendo la administración de una cantidad terapéuticamente eficaz de una composición que contiene uno o más de los siguientes componentes seleccionados del grupo que incluye: Polygonum multiflorum o sus extractos, Lycium barbarum o sus extractos, algas verdeazules o sus extractos, calostro o sus extractos, espirulina o sus extractos, Arthrospira platensis o sus extractos, Arthrospira máxima o sus extractos, fucoidán, Chordaria cladosiphon o sus extractos, Hericium erinaceus o sus extractos, Ganoderma lucidum o sus extractos, y/o Cordyceps sinensis o sus extractos, potenciando de este modo el tránsito de las células madre en el sujeto. En una realización, la potenciación del tránsito de las células madre puede medirse ensayando la respuesta de las células madre frente a una dosis particular de una composición que contenga uno o más de los siguientes componentes seleccionados del grupo que incluye: Polygonum multiflorum o sus extractos, Lycium barbarum o sus extractos, algas verdeazules o sus extractos, calostro o sus extractos, espirulina o sus extractos, Arthrospira platensis o sus extractos, Arthrospira máxima o sus extractos, fucoidán o sus extractos, Chordaria cladosiphon o sus extractos, Hericium erinaceus o sus extractos, Ganoderma lucidum o sus extractos, y/o Cordyceps sinensis o sus extractos, potenciando de esta manera el tránsito de las células madre en el sujeto.

En otra realización, el método proporcionado en el presente documento potencia el tránsito de las células madre en un sujeto, incluyendo la administración de una cantidad terapéuticamente eficaz de una composición que contenga fucoidán. En una realización, la potenciación del tránsito de las células madre puede medirse ensayando la respuesta de las células madre frente a una dosis particular de una composición que contenga fucoidán. En una realización, el fucoidán procede de Undaria pinnatifida o de sus extractos.

La presente invención también proporciona un método para potenciar el tránsito de las células madre en un sujeto, que comprende administrar una cantidad terapéuticamente eficaz de un agente de movilización, por lo tanto aumentando la liberación, circulación, retorno dirigido y/o migración de las células madre en el sujeto, independientemente de la via de administración.

La presente invención también proporciona un método de inducción de una disminución transitoria en la población de células madre circulantes, tales como células madre CD34+. En una realización, la administración de un agente de movilización da como resultado la migración de células madre de la circulación a tejidos al cabo de aproximadamente 1 a aproximadamente 3 horas después de la administración. Las células madre circulantes dejarán el sistema circulatorio, disminuyendo así el número de células madre circulantes dentro del organismo del sujeto. La potenciación de la migración de las células madre puede medirse ensayando la respuesta de las células madre frente a una dosis particular de Polygonum multiflorum. En una realización, el suministro de un agente de movilización a un sujeto potenciará la migración de las . células madre de ese sujeto en un determinado periodo de tiempo, tal como en menos de aproximadamente 5 horas, menos aproximadamente 4 horas, menos de aproximadamente 2 horas, o menos de aproximadamente 1 hora, después de la administración. En otras realizaciones, el agente de movilización es Lycium barbarum, algas verdeazules, calostro, polisacáridos de hongos, incluyendo Cordyceps sinensis, Hericium erinaceus, Ganoderma lucidum, fucoidán incluyendo Chordaria cladosiphon, espirulina, incluyendo Arthrospíra platensis y/o Arthrospíra máxima.

En otra realización, la administración de un extracto de Polygonum multiflorum aumenta la tasa de retorno dirigido de las células madre medida por una disminución tránsitoria en el número de células madre circulantes en el organismo del sujeto. En otra realización, el porcentaje de disminución en el número de células madre circulantes en comparación con un nivel basal normal puede ser de aproximadamente 25 %, aproximadamente 50 %, aproximadamente 75 %, o incluso aproximadamente 100 % en comparación con un control. En una realización, el control es un valor de nivel basal del mismo sujeto. En otra realización, el control es el número de células madre circulantes en un sujeto no tratado, o en un sujeto tratado con un placebo o con un vehículo farmacológico .

En otra realización, la administración de un extracto de algas aumenta la tasa de retorno dirigido de las células madre medida por una disminución tránsitoria en el número de células madre circulantes en el organismo del sujeto. En otra realización, el alga es Chordaria cladosiphon . En otra realización, el porcentaje de disminución en el número de células madre circulantes en comparación con un nivel basal normal puede ser de aproximadamente 25 %, aproximadamente 50 %, aproximadamente 75 %, o incluso aproximadamente 100 % en comparación con un control. En una realización, el control es un valor de nivel basal del mismo sujeto. En otra realización, el control es el número de células madre circulantes en un sujeto no tratado, o en un sujeto tratado con un placebo o con un vehículo farmacológico.

En otra realización, la administración de un extracto de un agente de movilización aumenta la tasa de retorno dirigido de las células madre medida por una disminución tránsitoria en el número de células madre circulantes en el organismo del sujeto. El porcentaje de disminución en el número de células madre circulantes en comparación con un nivel basal normal puede ser de aproximadamente 25 %, aproximadamente 50 %, aproximadamente 75 %, o incluso aproximadamente 100 % en comparación con un control. En una realización, el control es un valor de nivel basal del mismo sujeto. En otra realización, el control es el número de células madre circulantes en un sujeto no tratado, o en un sujeto tratado con un placebo o con un vehículo farmacológico. En otra realización, la administración de un extracto de un agente de inmunización conduce a un aumento en la expresión de CXCR4 en las células madre circulantes.

La presente invención también proporciona un método para inducir un aumento transitorio en la población de células madre circulantes, tal como células madre CD34+ después de la administración de Polygonum multiflorum o un extracto de la misma. En una realización, las células madre son células madre hematopoyéticas (HSC) . En otra realización, las células madre son células madre derivadas de médula ósea. En una realización, la potenciación del tránsito de las células madre puede medirse ensayando la respuesta de las células madre frente una dosis particular de Polygonum multiflorum o de un extracto de la misma. En una realización, el suministro de Polygonum multiflorum, o de un extracto de la misma, a un sujeto potenciará la liberación de las células madre del sujeto en un determinado periodo de tiempo, tal como menos de 12 días, menos de 6 días, menos de 3 días, menos de 2 o menos de 1 día. En una realización alternativa, el periodo de tiempo es menor de 12 horas, 6 horas, menor de aproximadamente 4 horas, menor de aproximadamente 2 horas, o menor de aproximadamente 1 hora después de la administración. En otra realización, las células madre son células madre derivadas de médula ósea.

En una realización, la administración de Polygonum multiflorum, o de un extracto de la misma, da como resultado la liberación de células madre en la circulación después de aproximadamente 2 a aproximadamente 3 horas de la administración. En otra realización, las células madre liberadas entran en el sistema circulatorio y el número de células madre circulantes en el organismo del sujeto aumenta. En otra realización, el aumento del porcentaje de células madre circulantes en comparación con un nivel basal normal puede ser de aproximadamente 25 %, de aproximadamente 50 %, de aproximadamente 100 % o un aumento mayor de aproximadamente 100 % en comparación con un control. En una realización, el control es un valor de nivel basal del mismo sujeto. En otra realización, el control es el número de células madre circulantes en un sujeto no tratado, o en un sujeto tratado con placebo o con un vehículo farmacológico.

La presente invención también proporciona un método de inducción de un aumento transitorio en la población de células madre circulantes, tal como células madre CD34+ después de la administración de un extracto de algas. En otra realización, las células madre son células madre hematopoyéticas (HSC) . En otra realización, las células madre son células madre derivadas de médula ósea. En una realización, la potenciación del tránsito de las células madre puede medirse ensayando la respuesta de las células madre frente a una dosis particular de extractos de algas . En una realización, el suministro de extractos de algas a un sujeto potenciará la liberación de las células madre del sujeto en un determinado periodo de tiempo, tal como menos de 12 días, menos de 6 días, menos de 3 días, menos de 2 o menos de 1 día. En una realización alternativa, el periodo de tiempo es menor de 12 horas, menor de 6 horas, menor de aproximadamente 4 horas, menor de aproximadamente 2 horas o menor de aproximadamente 1 hora después de la administración. En otra realización, las células madre son células madre derivadas de médula ósea. En una realización, el extracto de algas es de Undaria pinnatifida.

En una realización, la administración del extracto de algas da como resultado la liberación de células madre en la circulación de aproximadamente 2 a aproximadamente 3 horas después de la administración. En otra realización, las células madre liberadas entran en el sistema circulatorio y aumentan el número de células madre circulantes en el organismo del sujeto. En otra realización, el aumento de porcentaje del número de células madre circulantes en comparación con un nivel basal normal puede ser un aumento de aproximadamente 25 %, aproximadamente 50 %, aproximadamente 100 % o mayor de aproximadamente 100 % en comparación con un control. En una realización, el control es un valor de nivel basal del mismo sujeto. En otra realización, el control es el número de células madre circulantes en un sujeto no tratado, o en un sujeto tratado con un placebo o con un vehículo farmacológico.

En algunas realizaciones, al sujeto al que se le administra un agente de movilización es un sujeto sano. En otras realizaciones, el sujeto padece una enfermedad o una afección fisiológica, tal como inmunosupresión, dolencia crónica, lesión traumática, enfermedad degenerativa, infección, o combinaciones de estas. En determinadas realizaciones, el sujeto puede padecer una enfermedad o afección de la piel, sistema digestivo, sistema nervioso, sistema linfático, sistema cardiovascular, sistema endocrino o combinaciones de estos. En realizaciones específicas, el sujeto padece osteoporosis, enfermedad de Alzheimer, infarto cardiaco, enfermedad de Parkinson, lesión cerebral traumática, esclerosis múltiple, cirrosis hepática, cualquiera de las enfermedades y afecciones descritas en los Ejemplos citados más adelante, o combinaciones de estos. La administración de una cantidad terapéuticamente eficaz de un agente de movilización puede prevenir, tratar y/o disminuir la gravedad de cualquiera de las afecciones anteriormente mencionadas, o de otra manera, proporcionar un beneficio clínico beneficioso, con respecto a cualquiera de estas, aunque la aplicación de los métodos de la invención y el uso del agente de movilización de la invención no está limitado a estos usos. En diversas realizaciones, las nuevas composiciones y métodos encuentran utilidad terapéutica en el tratamiento de, entre otras cosas, tejidos esqueléticos, tales como hueso, cartílago, tendones y ligamentos, así como en enfermedades degenerativas, tales como Parkinson y diabetes. La potenciación de la liberación, circulación, retorno dirigido y/o migración de células madre de la sangre a los tejidos puede conducir a una distribución más eficaz de las células madre a un sitio defectuoso para aumentar la eficacia de la reparación. Las nuevas composiciones y métodos de la presente invención también pueden usarse junto con estrategias terapéuticas genéticas .

La presente invención también proporciona diversas composiciones para la administración a un sujeto. En una realización, la administración es tópica, incluyendo oftálmica, vaginal, rectal, intranasal, epidérmica e intradérmica . En una realización, la administración es oral. En una realización, la composición para administración oral incluye polvos, gránulos, suspensiones o soluciones en medios acuosos o no acuosos, cápsulas, bolsitas, comprimidos, pastillas para chupar o efervescentes. En otra realización, la composición para administración oral también comprende espesantes, agentes saporíferos, diluyentes, emulsionantes, dispersantes o agentes aglutinantes .

En el presente documento se describen agentes de movilización y métodos para el uso de los agentes de movilización con objeto de promover el tránsito de células madre. En el presente documento también se describen agentes de migración y métodos de uso de agentes de migración para promover el proceso de movimiento de células madre del sistema circulatorio hacia el interior de tejidos u órganos.

En el presente documento también se describen agentes de liberación y métodos de uso de los agentes de liberación para promover la salida de células madre de un tejido de origen. En el presente documento también se describe un método de administración oral de fucoidán que da como resultado una liberación significativa de HSC en la circulación de sangre periférica. Los inventores han demostrado la administración eficaz de agentes de movilización de células madre, mediante lo cual se consigue un método seguro, conveniente y eficaz para potenciar el mantenimiento y reparación relacionados con las células madre en el organismo humano. Aunque la patología de las células madre es de gran importancia e interés, y se corresponde con la materia en cuestión descrita en el presente documento, el alcance subyacente de la presente invención es que la liberación, circulación, retorno dirigido y/o migración de las células madre de la sangre a los tejidos es trascendental en la reparación de los tejidos dañados y mantenimiento de la vitalidad y la salud de los tejidos existentes. Por tanto, la importancia de desarrollar métodos y composiciones para conseguir esta finalidad se encuentra entre los intereses y objetos de la presente invención.

Por consiguiente, la presente invención proporciona nuevas composiciones y métodos para, entre otras cosas, potenciar la curación y la renovación de tejidos naturales en el organismo reforzando el tránsito de las células madre. Adicionalmente, la presente invención proporciona nuevas composiciones y métodos para prevenir, reducir o, de otra manera, disminuir el desarrollo de problemas de salud en un mamífero promoviendo el tránsito de células madre en el mamífero. Las composiciones y métodos descritos en el presente documento también pueden aumentar la regeneración de tejidos existentes reforzando la liberación, circulación, retorno dirigido y/o migración de las células madre en los tejidos, reforzando por tanto el proceso de reparación tisular .

EJEMPLOS Para ilustrar mejor la invención reivindicada se proporcionan los siguientes ejemplos y no deben interpretarse como que limitan el alcance de la materia objeto. Hasta el grado en que se mencionan materiales específicos, esto es únicamente para fines ilustrativos y no se pretende limitar la invención. Un experto en la técnica puede desarrollar medios, composiciones o reactivos equivalentes sin ejercitar la capacidad inventiva y sin alejarse del alcance de la presente invención.

Ejemplo 1 Producción y preparación de L. barbarum Se prepararon polisacáridos de Lycium barbarum siguiendo el método de Luo et al. (2004) . Se trituraron muestras de frutos secos (100 g) hasta obtener un polvo fino y se pusieron en 1,5 1 de agua hirviendo y se decocieron durante 2 horas siguiendo un método tradicional para hierbas medicinales Chinas. La decocción se dejó enfriar a temperatura ambiente, se filtró y después se liofilizó para obtener polisacáridos en bruto.

Los polisacáridos secos en bruto se sometieron a reflujo tres veces para eliminar lípidos con 150 mi de disolvente cloroformo :metanol (2:1) (v/v) . Después de la filtraron los restos se secaron al aire. El producto resultante se extrajo tres veces en 300 mi de agua caliente (90 °C) y después se filtró. El filtrado combinado se precipitó usando 150 mi de etanol al 95 %, etanol y acetona al 100 %, respectivamente. Después de filtrar y centrifugar, el precipitado se recogió y se secó al vacío, proporcionando los polisacáridos deseados (13 g) . El contenido de los polisacáridos se midió siguiendo el método del fenosulfúrico (Masuko et al., 2005). Los resultados mostraron que, en el extracto, el contenido de los polisacáridos podía llegar a ser de 97,54 %.

Ej mplo 2 Las células madre migran después del consumo de Lycium barbarum El consumo de Lycium barbarum, o compuestos de estos, potencia el reclutamiento y la migración de células madre CD34+ (para un diagrama de células madre que entran en el sistema circulatorio véase la FIG. 2) .

Se identificaron voluntarios humanos sanos y la proporción de células CD34+ se evaluó en la sangre periférica (células CD34+ circulantes) de cada persona antes de consumir Lycium barbarum y a cada hora durante hasta 4 horas después de su consumo. Se solicitó a los voluntarios limitar la actividad física y mental durante un tiempo antes y después del consumo de Lycium barbarum .

A cada persona se le proporcionaron 5 gramos secos de Lycium barbarum o 1 gramo de polisacárido extraído de Lycium barbarum. Usando solución de lisis FACS (Beckton Dickenson, San José, Calif.) se realizó la lisis de glóbulos rojos en muestras de sangre entera obtenida de cada voluntario. Las restantes células se lavaron y se tiñeron con anticuerpo monoclonal HPCA-2 conjugado con isotiocianato de fluoresceína . Las muestras se fijaron en formalina al 1 % y se analizaron por citometría de flujo usando un citómetro de flujo FacsCalibur (Becton Dickenson, San José, Calif.) y el programa informático CellQuest (Becton Dickenson, San José, Calif .) .

La FIG. 3A ilustra que el consumo de Lycium barbarum provocó una fuerte disminución tránsitoria en las células madre circulantes. Específicamente el eje X muestra el transcurso de tiempo de un experimento típico después de la ingestión de Lycium barbarum, expresado como un porcentaje del nivel de control. En el momento de la ingestión, la proporción de células CD34+ circulantes es la misma que la del control. La disminución máxima en las células CD34+ circulantes se observó a aproximadamente 1-2 horas después del consumo. En este momento, el número de células CD34+ circulantes disminuyó al 30 % por debajo del valor control. A las 4 horas de la ingestión de Lycium barbarum, las células CD34+ circulantes habían vuelto al valor del nivel basal . La disminución en el número de células madre circulantes vino acompañada por un aumento en la expresión de CDCR4 sobre la membrana de las células madre circulantes (FIG. 6) .

Por lo tanto, Lycium barbarum (o un componente biológico de Lycium barbarum) puede potenciar la migración de células madre endógenas (por ejemplo células CD34+) de la circulación a los tejidos. El consumo de Lycium barbarum (o un componente biológico de Lycium barbarum) provoca la migración de células madre CD34+ (véase, por ejemplo, la FIG. 3A-B) , demostrando de esta manera la eficacia de Lycium barbarum como un agente de migración.

Ejemplo 3 Las células madre migran después del consumo de calostro Como en el Ejemplo 2, y con referencia a la FIG. 3B, la administración de calostro produce la migración de células madre .

Ejemplo 4 Las células madre migran después del consumo de hongos Como en el Ejemplo 2, y con referencia a la FIG. 4A-B, la administración de una fracción de hongos (Cordyceps sinensis, Ganoderma lucidum, Hericium erinaceus) rica en polisacáridos , produce la migración de células madre.

Ejemplo 5 Las células madre migran después del consumo de fucoídán o espirulina Como en el Ejemplo 2, la administración de fucoidán de algas marinas, tal como Chordaria ciadosiphon , promueve algunos resultados beneficiosos que finalmente, aunque de manera indirecta, ayudan a la migración de células madre. Por ejemplo, el consumo de fucoidán de Chordaria cladosiphon produce una disminución en el número de HSC CD34+ circulantes (FIG. 9) , lo que sugiere una función eficaz en el refuerzo de la migración de células madre. Como en el Ejemplo 2, la administración de espirulina produce la migración de células madre (FIG. 4B) , y la administración de espirulina con Lycium barbarum, calostro y hongos también produce la migración de células madre (FIG. 7) .

Ej emplo 6 Las células madre migran después del consumo de una mezcla de LB, calostro, espirulina y hongo Las composiciones que incluyen los componentes indicados en la siguiente Tabla 1 se proporcionan a sujetos humanos. La administración de estas composiciones produce la migración de células madre.

Tabla 1 Ejemplo 7 Células madre de médula ósea pueblan tejidos distantes múltiples Para evaluar cómo una mezcla de LB, calostro y hongo puede estimular la migración de células madre en los tejidos y por lo tanto poblar y reparar tej idos distantes del organismo, se selecciona un modelo murino.

Como animales donantes de médula ósea se seleccionan ratones macho, aunque todos los ratones receptores son hembras . Las hembras receptoras se someten a radiación subletal antes de inyectar en la vena de la cola células de médula ósea de machos GFP+ . Se evaluaron dos grupos de ratones. El primer grupo de 20 animales se sometió a radiación subletal, se les inyectó médula ósea y se alimentaron con pienso normal. El segundo grupo de 20 animales también se sometió a radiación subletal, recibió médula ósea de macho y se alimentaron con una dieta de pienso normal más una mezcla de LB, calostro y hongo. La incorporación de células GFP+ se examinó en el cerebro, músculo cardiaco, músculos, hígado, páncreas, secciones de intestino delgado y tejido pulmonar.

Estos datos documentan el grado al cual una dieta que contiene una mezcla de LB, calostro y hongo promueve el retorno dirigido y la migración de células madre de médula ósea a diversos tejidos.

Ejemplo 8 Repoblación aumentada de células madre de tejido traumatizado Para evaluar cómo una mezcla de LB, calostro y hongo puede estimular la migración de células madre a los tejidos y por lo tanto poblar y reparar tejidos distantes del organismo, se selecciona un modelo murino.

Como animales donantes de médula ósea se seleccionan ratones macho, aunque todos los ratones receptores son hembras. Las hembras receptoras se someten a radiación subletal antes de inyectar en la vena de la cola células de médula ósea de machos GFP+ . Se evaluaron dos grupos de ratones. El primer grupo de 20 animales se sometió a radiación subletal, se les inyectó médula ósea y se alimentaron con pienso normal. El segundo grupo de 20 animales también se sometió a radiación subletal, recibió médula ósea de macho y se alimentaron con una dieta de pienso normal más una mezcla de LB, calostro y hongo.

Después del trasplante de médula ósea y pocos días antes de iniciar el ensayo de alimentación, los animales se sometieron a una lesión tal como una inyección de cardiotoxina en el músculo tibial, desencadenamiento de ataque cardiaco por ligamiento de la arteria coronaría. punción de la piel, ictus inducido por láser, u otras lesiones. La recuperación de los ratones en ambos grupos se controló durante 6 semanas usando obtención de imágenes de fluorescencia de todo el organismo. Después de 6 semanas, se sacrificó a los animales y el tejido lesionado se analizó para evaluar el grado de reparación tisular. La incorporación de células GFP+ también se examinó en el cerebro, músculo cardiaco, músculos, hígado, páncreas, secciones del intestino delgado y tejido pulmonar.

Estos datos documentan el grado al cual una dieta que contiene una mezcla de LB, calostro y hongo promueve el retorno dirigido y la migración de células madre de médula ósea a tejidos lesionados, potenciando por tanto el proceso de reparación y curación tisular.

Ejemplo 9 Diseño del estudio general para fucoidán como un agente de movilización de células madre Se ensayaron dos consumibles en sujetos humanos: fucoidán extraído de Undaria y un placebo. Se obtuvieron muestras de sangre venosa periférica de voluntarios humanos sanos de entre 20 y 45 años tras su consentimiento con total conocimiento de causa. Se obtuvieron muestras de sangre y de médula ósea en condiciones asépticas y se procesaron inmediatamente . A los voluntarios se les proporcionó un gramo de fucoid n o placebo con 113,4-170,1 gr (4-6 oz) de agua. El aspecto del placebo era idéntico al del fucoidán y consistía en copos de patata finamente molida, de color tostado, encapsulados en cápsulas vegetales .

Ejemplo 10 Diseño de estudio in vivo Se utilizaron los siguientes criterios de exclusión: menores de 20 o mayores de 65 años, gestantes, asma grave y alergias que requieren medicación diaria y cualquier dolencia crónica conocida o enfermedad venérea previa/actual , uso frecuente de drogas recreativas, y función digestiva alterada (incluyendo cirugía gastrointestinal principal previa) . Se programaron dos estudios con tres voluntarios con una semana de diferencia. El ensayo se realizó siempre a la misma hora del día (8-11 a.m.) para minimizar el efecto de las fluctuaciones circadianas. Debido a la interferencia de estrés con la liberación frente al retorno dirigido de otros tipos de linfocitos, se intentó minimizar cualquier estrés físico y mental durante el ensayo. Además, a los voluntarios se les solicitó que, cada día del estudio, completasen un cuestionario con el propósito de determinar cualquier circunstancia excepcional que estuviese relacionada con el estrés, que pudiese influir en la persona ese día del estudio en particular. Los criterios de exclusión predeterminados del análisis final incluyeron ausencia significativa de sueño y ansiedad grave. Después de completar el cuestionario, a los voluntarios se les solicitó permanecer en reposo durante 4 horas, cómodamente sentados. Después de la primera hora, se extrajo una muestra de sangre inicial. Inmediatamente después de extraer la muestra inicial, se les proporcionó un consumible. Después las muestras de sangre se extrajeron 60, 90 y 180 minutos después de la ingestión del consumible. Cada vez se extrajeron 5 mi de sangre en heparina y 2 mi de sangre en EDTA. Los viales de sangre se colocaron en una placa oscilante hasta su uso.

Ejemplo 11 Medición de poblaciones de células madre usando FACS (separación de células activadas por fluorescencia) La sangre extraída en EDTA se usó para obtener un recuento completo de sangre (CBC, Complete Blood Count) con diferencial, usando un contador Coulter (Micro Diff II, Beckman Coulter) . Todos los CBC se realizaron a la hora de extraer la muestra. Todos los CBC se realizaron por triplicado. La sangre heparinizada se usó para la purificación de la fracción de PBMC por centrifugación en gradiente y se procesó para inmunotinción y citometría de flujo. Se usaron marcadores de células madre CD34-FITC (clon 8G12, BD BioSciences, San José, CA, USA) y CD133-PE (Miltenyi Biotech, Auburn, CA, USA) para dos inmunofluorescencias colorimétricas . La tinción de todas las muestras con CD34-FITC/CD133-PE se realizó por triplicado. En muestras paralelas se usaron controles isotipo IgGl-FITC e IgGl-PE (BD BioSciences) . Por separado, muestras de control positivas de cada donante incluyeron CD45-FITC y CD14-PE. Las PBMC teñidas se fijaron en formalina al 1 % y se obtuvieron por citometría de flujo inmediatamente. Se recogieron archivos de 200.000 eventos de cada muestra por triplicado. El porcentaje de CD34+CD133-, CD34+CD133+, y de los subconjuntos de CD34-CD133+ se analizaron por separado y se analizaron de nuevo después de multiplicar por el recuento de células linfocíticas, obtenido a partir del promedio de los recuentos de linfocitos por triplicado obtenidos en el recuento diferencial CBC.

Ejemplo 12 Aumento de HSC CD34+ circulantes en sangre periférica después de administración oral de fucoidán de Undaria pinnatifida.

Los inventores ensayaron la administración oral de fucoidanos de diferentes especies de algas con respecto a su potencial para efectuar la movilización de HSC en la corriente sanguínea periférica de sujetos humanos. El fucoidán de una especie, Undaria pinnatifida, da como resultado un aumento significativo en el número de HSC CD34+ circulantes, con aumentos de 17 %, 23 % (P<0,02) y 32 % (P<0,02) que se produce a los 45, 90 y 180 minutos de intervalos de medición, demostrando por tanto eficacia como un agente de liberación. (FIG. 8) . Para el mejor entendimiento de los inventores, este es el aumento más significativo descrito en la bibliografía y adicionalmente, es una notable mejora sobre el aumento previamente publicado, del 12 % después de 14 días, en Irimeh et al., que también ensayaron la administración oral de fucoidán de Undaria pinnatifida. Cabe destacar que, Irimeh et al. indicaron 3 gramos de fucoidán administrados diariamente, mientras que los autores de la presente invención consiguieron resultados mejorados usando un régimen de dosificación de 250 mg. Esto pone de manifiesto una función importante para la aplicación de una dosificación específica cuando el fucoidán se administra por vía oral para promover la liberación y circulación de HSC CD34+. Además, una dosificación inferior puede permitir un uso prolongado al paciente, tal como la administración diaria rutinaria, mientras que dosificaciones más altas pueden no ser compatibles con el uso repetido y/o rutinario .

Ejemplo 13 Disminución de HSC CD34+ circulantes en sangre periférica después de administración oral de fucoidán de Chordaria cladosiphon .

Ampliando estas observaciones, los autores de la presente invención descubrieron que el fucoidán de diversas otras especies de algas, incluyendo Chordaria cladosiphon, no elevaba los números de HSC CD34+ circulantes en sujetos humanos (FIG. 9) . A pesar de la aplicación de diversos regímenes de dosificación, incluyendo la dosificación eficaz de 250 mg de fucoidán de Undaria pinnatifida , como se ha descrito anteriormente, el fucoidán de Chordaria cladosiphon produce una disminución en el número de HSC CD34+ circulantes, probablemente como consecuencia de un aumento de expresión de CXCR4 sobre la superficie de HSC circulantes. Estos resultados reflejan la compleja interacción entre la fuente exacta de fucoidán y la identificación de una dosis terapéutica eficaz. El consumo de 250 mg de este fucoidán de Chordaria cladosiphon proporcionó una disminución promedio en el número de células madre circulantes (Figura 3A-B) usando los mismos procedimientos de preparación de fucoidán y administrándose en las mismas condiciones en voluntarios, demostrando por lo tanto una función eficaz en el refuerzo de la migración de células madre .

Estos resultados son coherentes con publicaciones anteriores de que el fucoidán de diferentes fuentes difiere en cuanto a relación estructura-actividad. Se han descrito fracciones de fucoidán de A. nodosum y Pelvetia canculata que poseen actividad anticoagulante a través del motivo heparínico disacárido trisulfatado implicado en la movilización de HSC. Particularmente notable fue el informe de que los patrones de sulfatación se correlacionaban con sus actividades anticoagulantes. Una molécula similar de la familia de galactanos, galactano 2 -O-sulfatado regularmente, unido en posición 3, posee actividad anticoagulante no encontrada en un fucano 2-O-sulfatado regularmente, unido en posición 3, correspondiente. (Berteau y Mulloy, 2003; Mouráo y Pereira, 1999; Pereira et al., 2002). Estos informes sobre actividad anticoagulante y las observaciones de los autores de la presente invención sobre la movilización de HSC, demuestran claramente que la relación estructura-actividad de fucanos sulfatados, incluyendo fucoidán, no es el resultado de características genéricas, tales como densidad de carga a partir de la presencia o ausencia de determinados grupos químicos. En cambio, la actividad biológica depende críticamente de la estructura exacta del polisacárido. Necesariamente, se espera que los fucoidanos estructurales diferentes de distintas especies de algas proporcionen un intervalo complejo de eficacias para diversas aplicaciones terapéuticas, incluyendo movilización de HSC. Como se ha descrito anteriormente, esto también requerirá el establecimiento de dosis terapéuticas eficaces, que pueden variar cuando se usen fucoidanos de especies diferentes.

Ejemplo 14 Diversos métodos de preparación de Polygonum multiflorum Puede prepararse una preparación sencilla de Polygonum multiflorum obteniendo una parte de la raíz de la planta reciente que después se lava con agua, se limpia, se corta en trozos y después se seca. Por ejemplo, como una preparación sencilla, la raíz triturada puede diluirse en agua en un extracto de 12:1.

En otro procedimiento de preparación, Polygonum multiflorum puede congelarse durante una noche a bajas temperaturas (por ejemplo, -70 °C, -20 °C o 0 °C), y después se tritura para formar un polvo sólido, que puede secarse a temperatura ambiente, o colocarse en un evaporador al vacío para eliminar la humedad.

El polvo sólido puede sumergirse en agua, en una solución acuosa, o en un disolvente orgánico para extraer los diferentes componentes de Polygonum multiflorum. Como se ha descrito, determinadas temperaturas elevadas (por ejemplo, ebullición) de disolventes orgánicos (por ejemplo etanol o metanol) promueven la extracción de componentes, tales como antraquinonas y derivados, ya que son, de otra manera, insolubles en agua, y disolventes orgánicos a temperatura ambiente. Del mismo modo, la aplicación de bajas temperaturas (4 °C) para la extracción de fracciones acuosas promueve el asilamiento estable de determinados compuestos, tales como hidroxil estilbenos, ya que determinados hidroxil estilbenos se degradan de una manera dependiente del pH o de la temperatura. De nuevo, después de la inmersión en agua, en una solución acuosa, o en un disolvente orgánico, puede realizarse el secado a temperatura ambiente, o colocarse en un evaporador al vacío para eliminar la humedad. Los polvos sólidos pueden liofilizarse a diversas fases para ayudar a la solubilidad.

Ejemplo 15 Diseño general del estudio para Polygonum multiflorum como un agente de movilización de células madre Se ensayaron dos consumibles en sujetos humanos: extractos de Polygonum multiflorum y un placebo. Se obtuvieron muestras de sangre venosa periférica de voluntarios humanos sanos de entre 20 y 45 años tras su consentimiento con total conocimiento de causa. Se obtuvieron muestras de sangre y de médula ósea en condiciones asépticas y se procesaron inmediatamente . A los voluntarios se les proporcionó un gramo de preparación 12:1 de extractos de Polygonum multiflorum o placebo con 113,4-170,1 gr (4-6 oz) de agua. El aspecto del placebo era idéntico al de los extractos de Polygonum multiflorum y consistía en copos de patata finamente molida, de color tostado, encapsulados en cápsulas vegetales. Como se ha descrito en el Ejemplo 10, se usaron los siguientes criterios de exclusión: menores de 20 o mayores de 65 años, gestantes, asma grave y alergias que requieren medicación diaria y cualquier dolencia crónica conocida o enfermedad venérea previa/actual, uso frecuente de drogas recreativas, y función digestiva alterada (incluyendo cirugía gastrointestinal principal previa) . Se programaron dos estudios con siete voluntarios con una semana de diferencia. El ensayo se realizó siempre a la misma hora del día (8-11 a.m.) para minimizar el efecto de las fluctuaciones circadianas . A los voluntarios se les solicitó permanecer en reposo durante 4 horas, cómodamente sentados. Después de la primera hora, se extrajo una muestra de sangre inicial. Inmediatamente después de extraer la muestra inicial, se les proporcionó un consumible. Después, las muestras de sangre se extrajeron 60 y 120 minutos después de la ingestión del consumible. Cada vez se extrajeron 5 mi de sangre en heparina y 2 mi de sangre en EDTA. Los viales de sangre se colocaron en una placa oscilante hasta su uso.

Ejemplo 16 Las células madre se movilizan después del consumo de Polygonum multiflorum solo, o cuando se incluye en una mezcla de Polygonum multiflorum, Lycium barbarum, f coidán , calostro, espirulina y hongo Se observó que Polygonum multiflorum provocaba un aumento moderado en el número de células madre circulantes de 13 ± 6 % (n=7) (p < 0,05). El aumento superó el 25 % en 2 de los participantes. Los resultados se muestran en la Figura 10.

Ejemplo 17 Las células madre se movilizan después del consumo de una mezcla de Polygonum multiflorum Lycium barbarum, fucoidán , calostro, espirulina y hongo Además, pueden prepararse diversas composiciones que contienen agentes de movilización de células madre, incluyendo Polygonum multiflorum, incluyendo los siguientes componentes indicados en Tabla 2 o 3. La administración estas composiciones da como resultado la migración movilización de células madre.

Tabla 2 Tabla 3 Los diversos procedimientos y técnicas descritos anteriormente proporcionan diversas formas de realizar la invención. Por supuesto, debe entenderse que, no necesariamente todos los objetivos o ventajas descritos pueden conseguirse de acuerdo con cualquier realización particular descrita en el presente documento. Por tanto, por ejemplo, los expertos en la materia reconocerán que los procedimientos pueden realizarse de una manera que se consiga u optimice una ventaja o grupos de ventajas como se enseña en el presente documento sin conseguir necesariamente otros objetivos o ventajas como se enseña o se sugiere en el presente documento. En el presente documento se mencionan diversas ventajas y desventajas alternativas. Debe entenderse que, algunas realizaciones preferidas incluyen específicamente una, otra o diversas características ventajosas, mientras que otras excluyen específicamente una, otra o diversas características desventajosas, mientras que otras mitigan específicamente una característica desventajosa presente por inclusión de una, otra o diversas características ventajosas.

Adicionalmente, el experto reconocerá la aplicabilidad de diversas características de diferentes realizaciones. De manera similar, los diversos elementos, características y etapas descritos anteriormente, así como otros equivalentes conocidos para cada uno de dicho elemento, característica o etapa, pueden mezclarse y combinarse por un experto habitual en la técnica para r«*lizar los procedimientos de acuerdo con los principios descritos en el presente documento. Entre los diversos elementos, características y etapas, algunos de ellos se incluirán específicamente y otros se excluirán específicamente en las diversas realizaciones.

Aunque la invención se ha descrito en el contexto de determinadas realizaciones y ejemplos, los expertos en la técnica entenderán que las realizaciones de la invención se extienden más allá de las realizaciones específicamente descritas a otras realizaciones alternativas y/o usos y modificaciones y equivalentes de estas.

Se han descrito muchas variaciones y elementos alternativos en las realizaciones de la presente invención. Incluso variaciones adicionales y elementos alternativos serán obvios para un experto habitual en la técnica. Entre estas variaciones, sin limitación, se encuentran las fuentes de agentes de movilización de células madre, los procedimientos de preparación, aislamiento o purificación de los agentes de movilización de células madre, análogos y derivados de estos, procedimientos de tratamiento de diversas enfermedades y/o afecciones usando agentes de movilización de células madre, análogos y derivados de estos, técnicas, composiciones y uso de las soluciones utilizadas en el presente documento, y en particular el uso de los productos creados a través de las enseñanzas de la invención. Diversas realizaciones de la invención pueden incluir o excluir específicamente cualquiera de estas variaciones o elementos.

En algunas realizaciones, debe entenderse que, en algunos casos, los números que expresan cantidades de principios activos, propiedades, tales como concentración, condiciones de reacción y etcétera., utilizados para describir y reivindicar determinadas realizaciones de la invención, se modifican por el término "aproximadamente". Por consiguiente, en algunas realizaciones, los parámetros numéricos expuestos en la descripción escrita y en las reivindicaciones adjuntas son aproximaciones que pueden variar dependiendo de las propiedades deseadas buscadas para obtener mediante una realización particular. En algunas realizaciones, los parámetros numéricos deben considerarse a tenor del número de dígitos significativos indicados y aplicando técnicas habituales de redondeo. No obstante los intervalos y parámetros numéricos que definen el amplio alcance de las reivindicaciones de la invención son aproximaciones, los valores numéricos definidos en los ejemplos específicos se indican como aplicables de forma precisa. Los valores numéricos presentados en algunas realizaciones de la invención pueden contener determinados errores necesariamente resultantes de la desviación típica encontrada en sus mediciones de ensayo respectivas .

En algunas realizaciones, los términos "un", "uno", "una" y "el" , "la" y referencias similares usadas en el contexto de la descripción de una realización particular de la invención (especialmente en el contexto de algunas de las siguientes reivindicaciones) puede considerarse que incluyen tanto el singular como el plural. La exposición de intervalos de valores en el presente documento pretende tan solo servir como un procedimiento abreviado de referirse individualmente a cada valor por separado que se encuentra dentro del intervalo. A menos que se indique de otra manera, cada valor individual se incorpora en la memoria descriptiva como si fuera individualmente indicado en el presente documento. Todos los métodos descritos en el presente documento pueden realizarse en cualquier orden adecuado salvo que se indique de otra manera en el presente documento o de otra manera lo contradiga claramente el contexto. El uso de cualquier y todos los ejemplos, o lenguaje ejemplar (por ejemplo, "tal como" ) , proporcionado con respecto a determinadas realizaciones del presente documento, solo pretende aclarar mejor la invención y no supone una limitación sobre el alcance de la invención de otra manera reivindicada. Ningún lenguaje en la memoria descriptiva debe considerarse como que indica cualquier elemento no reivindicado esencial para la realización práctica de la invención.

Los grupos de elementos o realizaciones alternativas de la invención descritos en el presente documento no deben considerarse como limitaciones. Cada miembro de grupo puede referirse y reivindicarse individualmente o en cualquier combinación con otros miembros del grupo u otros elementos encontrados en el presente documento. Uno o más miembros de un grupo pueden incluirse en, o suprimirse de, un grupo por razones de conveniencia y/o patentabilidad. Cuando se produzca cualquiera de dicha inclusión o supresión, la memoria descriptiva del presente documento considera contener el grupo como modificado, cumpliendo de este modo la descripción escrita con todos los grupos arkush usados en las reivindicaciones adjuntas.

En el presente documento se describen las realizaciones preferidas de la presente invención, incluyendo el mejor modo conocido por el inventor para realizar la invención. Las variaciones sobre estas realizaciones preferidas resultarán obvias para los expertos habituales en la técnica después de leer la anterior descripción. Se contempla que los expertos en la técnica pueden emplear dichas variaciones según sea apropiado, y la invención puede llevarse a la práctica de otro modo al específicamente descrito en el presente documento. Por consiguiente, muchas realizaciones de la presente invención incluyen todas las modificaciones y equivalentes de la materia objeto enumeradas en las reivindicaciones adjuntas a esta, permitidas por ley aplicable. Además, cualquier combinación de los elementos descritos anteriormente y todas las posibles variaciones de estos se incluyen en la invención salvo que se indique de otra manera en el presente documento o claramente se contradiga de otra manera en el contexto.

Además, a lo largo de la memoria descriptiva se han ofrecido números de referencia de patentes y publicaciones impresas. Cada una de las referencias y publicaciones impresas citadas anteriormente se incorporan individualmente en el presente documento por referencia en su totalidad.

Finalmente, debe entenderse que las realizaciones de la invención descritas en el presente documento son ilustrativas de los principios de la presente invención. Otras modificaciones que pueden emplearse pueden encontrarse dentro del alcance de la invención. Por tanto, a modo de ejemplo, pero no de limitación, las configuraciones alternativas de la presente invención pueden utilizarse de acuerdo con las enseñanzas del presente documento. Por consiguiente, las realizaciones de la presente invención no están limitadas a lo exactamente mostrado y descrito.

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Claims

REIVINDICACIONES

1. Un método para aumentar la movilización de células madre en un sujeto, que comprende: proporcionar un agente de movilización capaz de aumentar la movilización de células madre; y administrar una cantidad de agente de movilización al sujeto en una cantidad suficiente para aumentar la movilización de células madre en el sujeto.

2. El método de la reivindicación 1, en el que el agente de movilización es una composición que comprende uno o más de los siguientes componentes seleccionados del grupo que consiste en: Polygonum multiflorum o sus extractos, Lycium barbarum o sus extractos, algas verdeazules o sus extractos, calostro o sus extractos, espirulina o sus extractos, fucoidán, Hericium erinaceus o sus extractos, Ganoderma lucidum o sus extractos y Cordyceps sinensis o sus extractos.

3. El método de la reivindicación 1, en el que el agente de movilización es Polygonum multiflorum o sus extractos.

4. El método de la reivindicación 1, en el que la célula madre es una célula madre derivada de médula ósea (BMSC) .

5. El método de la reivindicación 1, en el que la célula madre es una célula madre hematopoyética (HSC) .

6. El método de la reivindicación 1, en el que la administración de la cantidad comprende administración oral .

7. El método de la reivindicación 6, en el que la administración oral comprende el uso de una cápsula o una pildora.

8. Una composición farmacéutica que comprende: uno o más de los siguientes componentes seleccionados del grupo que consiste en: Polygonum multiflorum o sus extractos, Lycium barbarum o sus extractos, algas verdeazules o sus extractos, calostro o sus extractos, espirulina o sus extractos, fucoidán, Hericium erinaceus o sus extractos, Ganoderma lucidum o sus extractos, y/o Cordyceps sinensis o sus extractos; y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

La composición farmacéutica de la reivindicación 8, en que la cantidad de Polygonum multiflorum o sus extractos, comprende 10-2000 mg en una sola dosis.

10. La composición farmacéutica de la reivindicación 8, en la que la cantidad de Lycium barbarum o sus extractos, comprende 10-2000 mg en una sola dosis.

11. La composición farmacéutica de la reivindicación 8, en la que la cantidad de algas verdeazules o sus extractos, comprende 10-2000 mg en una sola dosis.

12. La composición farmacéutica de la reivindicación 8, en la que la cantidad de calostro o sus extractos, comprende 10-300 mg en una sola dosis.

13. La composición farmacéutica de la reivindicación 8, en la que la cantidad de espirulina o sus extractos, comprende 10-300 mg en una sola dosis.

14. La composición farmacéutica de la reivindicación 8, en la que la cantidad de fucoidán o sus extractos, comprende 10-2000 mg en una sola dosis.

15. La composición farmacéutica de la reivindicación 8, en la que la cantidad de Hericium erinaceus o sus extractos, Ganoderma lucidum o sus extractos y/o Cozdyceps sinensis o sus extractos comprende 10-1000 mg en una sola dosis.

16. Un método de preparación de un extracto de Polygonum multiflorum que comprende: a) proporcionar una cantidad de Polygonum multiflorum; b) triturar Polygonum multiflorum en un polvo sólido; c) secar el polvo sólido; d) sumergir el polvo sólido en un disolvente; y e) separar el polvo sólido en el disolvente ,-en el que el disolvente comprende un extracto de Polygonum multiflorum .

17. El método de la reivindicación 16, en el que la inmersión del polvo sólido comprende un disolvente que comprende agua u otra solución acuosa a baja temperatura.

18. El método de la reivindicación 17, en el que la baja temperatura comprende aproximadamente 4 °C.

19. El método de la reivindicación 18, en el que la inmersión del polvo sólido comprende un disolvente que comprende un disolvente orgánico a alta temperatura.

20. El método de la reivindicación 19, en el que la alta temperatura comprende una temperatura cercana al punto de ebullición del disolvente orgánico.

21. El método de la reivindicación 20, en el que el disolvente orgánico comprende metanol o etanol .

22. El método de la reivindicación 16, en el que Polygonum multiflorum se congela antes de triturar.