KR20130055707A

KR20130055707A - 임의로 방사성-표지된 이마티닙의 제조를 위한 방법 및 중간체

Info

Publication number: KR20130055707A
Application number: KR1020137012395A
Authority: KR
Inventors: 라이스 살터; 마리아 이네스 로드리게즈 페레즈; 토마스 뫼니우스; 롤프 포게스; 헨드릭 안드레스; 커크 보르도
Original assignee: 노파르티스 아게
Priority date: 2005-06-14
Filing date: 2006-06-13
Publication date: 2013-05-28
Also published as: RU2440999C2; CA2610193C; US20120316338A1; BRPI0612578A2; MX2007015876A; IL187832A; AU2006257316A1; JP2009501137A; US20090299064A1; WO2006133904A2; IL187832A0; RU2007148244A; GB0512091D0; CN101198601B; WO2006133904A3; EP1896447A2; CA2610193A1; CN101198601A; KR20080042066A; JP5137824B2

Abstract

본 발명은 화학식 I의 N-{5-[4-(4-메틸-피페라지노-메틸)-벤조일아미도]-2-메틸페닐}-4-(3-피리딜)-2-피리미딘-아민의 새로운 제조 방법, 온혈 동물에의 상기 화합물 투여 후에 관측되는 N-{5-[4-(4-메틸-피페라지노-메틸)-벤조일아미도]-2-메틸페닐}-4-(3-피리딜)-2-피리미딘-아민의 대사물질의 새로운 제조 방법, 및 상기 과정에 사용된 중간체에 관한 것이다. 새로운 출발 물질 및 그들의 제조 방법은 본 발명의 주제와 같다. 본원에 기재된 방법들은 동위원소 표지를 갖는 상기 화합물들을 제공하는데 특히 적합하다. 그렇게 얻어진 표지 화합물들은 임상 및 전-임상 연구에 있어서, N-{5-[4-(4-메틸-피페라지노-메틸)-벤조일아미도]-2-메틸페닐}-4-(3-피리딜)-2-피리미딘-아민 및 그의 제약상 허용되는 염의 대사를 추적하고 조사하는데 특히 적합하다.
<화학식 I>

Description

임의로 방사성-표지된 이마티닙의 제조를 위한 방법 및 중간체 {METHODS AND INTERMEDIATES FOR THE PREPARATION OF OPTIONALLY RADIO-LABELED IMATINIB}

N-{5-[4-(4-메틸-피페라지노-메틸)-벤조일아미도]-2-메틸페닐}-4-(3-피리딜)-2-피리미딘-아민 (화학식 I의 화합물, 이마티닙 (Imatinib))의 메실레이트 염은 상표명 글리벡 (Glivec, 등록상표; Gleevec, 등록상표) 하에 시판되고 있다. 글리벡 (등록상표)은 만성 골수성 백혈병 및 GIST (위장관 간질 종양)의 치료에 적합한 티로신 키나제 억제제이다. N-{5-[4-(4-메틸-피페라지노-메틸)-벤조일아미도]-2-메틸페닐}-4-(3-피리딜)-2-피리미딘-아민은, 예를 들어 US 5,521,184에 개시된 바와 같이 제조될 수 있다. N-{5-[4-(4-메틸-피페라지노-메틸)-벤조일아미도]-2-메틸페닐}-4-(3-피리딜)-2-피리미딘-아민의 모노메실레이트 염은, 예를 들어 WO 99/03854의 실시예 4 및 6, 또는 WO 03/090720에 기재된 바와 같이 제조되고 제제화될 수 있다.

본 발명은 N-{5-[4-(4-메틸-피페라지노-메틸)-벤조일아미도]-2-메틸페닐}-4-(3-피리딜)-2-피리미딘-아민 (화학식 I의 화합물, 이마티닙)의 새로운 제조 방법, 온혈 동물에의 상기 화합물 투여 후에 관측되는 N-{5-[4-(4-메틸-피페라지노-메틸)-벤조일아미도]-2-메틸페닐}-4-(3-피리딜)-2-피리미딘-아민의 대사물질의 새로운 제조 방법, 및 상기 방법에 사용되는 중간체에 관한 것이다. 새로운 출발 물질 및 그들의 제조 방법도 유사하게 본 발명의 주제이다. 본원에 기재된 방법은 동위원소 표지를 갖는 상기 화합물들을 제공하는데 특히 적합하다. 그렇게 얻어진 표지 화합물들은 임상 및 전-임상 연구에 있어서, N-{5-[4-(4-메틸-피페라지노-메틸)-벤조일아미도]-2-메틸페닐}-4-(3-피리딜)-2-피리미딘-아민 및 그의 제약상 허용되는 염의 대사를 추적하고 조사하는데 특히 적합하다.

본 특허 명세서의 개시 내용에 기반하여, 당업자는 구체적으로 언급된 N-옥시드 이외에 본원에 기재된 화합물의 N-옥시드 유도체, 전구약물 유도체, 보호된 유도체, 개별 이성질체 및 그들의 이성질체 혼합물, 및 그들의 제약상 허용되는 염을 제조할 수 있다.

제1 실시양태에서, 화학식 I의 화합물의 메실레이트 염은 1-메틸피페라진을 화학식 II의 화합물과 반응시킴으로써 제조된다.

<화학식 I>

(식 중, R₁ 및 R₂는 모두 수소이고, C^*는 자연적 동위원소 분포의 탄소를 나타내거나, 또는 별법으로 한 탄소 동위원소 (예컨대, ¹⁴C)를 풍부하게 하여 표지한 탄소임)

<화학식 II>

(식 중, Hal은 할로겐, 바람직하게는 클로로를 나타내고, 다른 라디칼 및 기호들은 화학식 I의 화합물에 대해 상기 기재된 바와 같은 의미를 가짐)

Hal이 할로겐, 바람직하게는 클로로를 나타내고, 다른 라디칼 및 기호들이 화학식 I의 화합물에 대해 상기 기재된 바와 같은 의미를 갖는 화학식 II의 화합물은, 먼저 화학식 III의 염산 부가염을 H₂NC^*N (식 중, C^*는 자연적 동위원소 분포의 탄소를 나타내거나, 또는 별법으로 한 탄소 동위원소 (예컨대, ¹⁴C)를 풍부하게 하여 표지한 탄소임)과 반응시켜 화학식 IV의 구아니디닐 치환된 니트로페닐 유도체를 제공함으로써 얻어질 수 있다.

<화학식 III>

(식 중, R₁은 화학식 I의 화합물에 대해 상기 정의된 의미를 가짐)

<화학식 IV>

(식 중, 라디칼 및 기호들은 화학식 I의 화합물에 대해 상기 정의된 의미를 가짐)

제2 단계에서, 화학식 IV의 구아니디닐 치환된 니트로 페닐 유도체는 상응하는 화학식 V의 구아니디닐 치환된 아미노 페닐 유도체로 더 환원된다.

<화학식 V>

제3 단계에서, 상기 화학식 V의 구아니디닐 치환된 아미노 페닐 유도체를 화학식 VI의 피리딜 유도체와 반응시킴으로써, 화학식 VII의 피리딜 피리미딘이 얻어진다.

<화학식 VI>

(식 중, R₃ 및 R₄는 모두 C₁ _- ₄알킬임)

<화학식 VII>

최종적으로, 상기 화학식 VII의 피리딜 피리미딘은 4-할로메틸-벤조산과 반응하여 화학식 II의 아미드를 제공한다.

라디칼 및 기호들이 화학식 I의 화합물에 대해 상기 정의된 의미를 갖는 화학식 VII의 피리딜 피리미딘은, 또한 다음 경로에 의해 제조될 수 있다. 제1 단계에서, 라디칼 및 기호들이 상기 정의된 의미를 갖는 화학식 I의 화합물은, 질소 원자에 부착된 수소 원자를 보호기로 대체시키는 시약과 반응하여, 이에 따라 화학식 I의 화합물을 제공한다.

<화학식 I>

(식 중, R₁ 및 R₂는 모두 보호기를 나타내고, C^*는 자연적 동위원소 분포의 탄소를 나타내거나, 또는 별법으로 한 탄소 동위원소 (예컨대, ¹⁴C)를 풍부하게 하여 표지한 탄소임)

제2 단계에서, 분자 중의 벤조산 유닛은 가수분해에 의해 제거되어 화학식 XII의 유리 아민을 생성한 후에, 보호기 R₁ 및 R₂는 수소로 대체되고 (즉, 보호기가 제거되고), 라디칼 및 기호들이 화학식 I의 화합물에 대해 상기 정의된 의미를 갖는 화학식 II의 화합물이 도입된다.

<화학식 XII>

제2 실시양태에서, 화학식 VIII의 화합물은 화학식 X의 화합물을 화학식 XI과 반응시킨 후, R₅가 보호기를 나타내는 경우에 보호기 R₅를 제거함으로써 얻어질 수 있다.

<화학식 VIII>

(식 중, R₅는 수소 또는 C₁ _- ₄알킬이고, C^*는 자연적 동위원소 분포의 탄소를 나타내거나, 또는 별법으로 한 탄소 동위원소 (예컨대, ¹⁴C)를 풍부하게 하여 표지한 탄소임)

<화학식 X>

(식 중, R₅는 보호기 (예컨대, tert-부톡시카르보닐) 또는 C₁ _- ₄알킬이고, C^*는 자연적 동위원소 분포의 탄소를 나타내거나, 또는 별법으로 한 탄소 동위원소 (예컨대, ¹⁴C)를 풍부하게 하여 표지한 탄소임)

<화학식 XI>

화학식 X의 화합물은 화학식 IX의 화합물을 먼저 t-부틸 리튬과 반응시켜 상응하는 리티오 (lithio) 유도체를 제조하고, 상기 리티오 유도체를 C^*O₂ (식 중, C^*는 자연적 동위원소 분포의 탄소를 나타내거나, 또는 별법으로 한 탄소 동위원소 (예컨대, ¹⁴C)를 풍부하게 하여 표지한 탄소임)와 반응시켜 얻어질 수 있다.

<화학식 X>

(식 중, 라디칼 및 기호들은 상기 정의된 의미를 가짐)

<화학식 IX>

(식 중, R₅는 보호기 (예컨대, tert-부톡시카르보닐) 또는 C₁ _- ₄알킬임)

추가의 측면에서, 본 발명은 라디칼 및 기호들이 상기 정의된 의미를 갖는 화학식 I의 화합물의 산화에 의한 화학식 XIII의 화합물의 제법에 관한 것이다.

<화학식 XIII>

추가의 측면에서, 본 발명은 화학식 XVI의 화합물의 1-메틸피페라진과의 반응에 의한 화학식 XIV의 화합물의 제법에 관한 것이다.

<화학식 XIV>

<화학식 XVI>

(식 중, Hal은 할로겐, 바람직하게는 클로로를 나타내고, 다른 라디칼 및 기호들은 화학식 I의 화합물에 대해 상기 정의된 의미를 가짐)

Hal이 할로겐을 나타내고, 다른 라디칼 및 기호들이 화학식 I의 화합물에 대해 상기 정의된 의미를 갖는, 출발 물질인 화학식 XVI의 화합물은 다음 방법으로 얻어질 수 있다. 먼저, R₁ 및 R₂가 모두 수소인 화학식 VII의 유리 아민을, 2급 아미노기의 존재하에 1급 아민의 한 수소 원자를 선택적으로 대체시키는 조건하에서 보호기를 도입시키는 제제와 반응시킨 후에, 예를 들어 MCPBA로 피리딜 질소 원자를 산화시켜 화학식 XV의 N-옥시드를 제공한다.

<화학식 XV>

(식 중, R₁ 및 R₂는 모두 수소이고, PG는 보호기를 나타내고, 다른 기호들은 화학식 I의 화합물에 대해 상기 정의된 의미를 가짐)

상기 화학식 XV의 N-옥시드는, 먼저 보호기 PG를 제거시키는 상태가 되도록 하고, 이후에 얻어진 유리 아민을 4-할로메틸 벤조산과 반응시켜, Hal이 할로겐을 나타내고 다른 라디칼 및 기호들이 화학식 I의 화합물에 대해 상기 정의된 의미를 갖는 화학식 XVI의 화합물을 제공한다.

추가의 실시양태에서, 본 발명은 화학식 II의 화합물을 화학식 XVII의 피페라진 유도체와 반응시킴으로써 화학식 XVIII의 화합물을 제공한다.

<화학식 XVIII>

<화학식 II>

<화학식 XVII>

최종적으로, 본 발명은 화학식 XXI의 피리딘 유도체를 화학식 XXII의 페닐 구아니딘 유도체와 반응시키는 것을 포함하는, 화학식 XX의 화합물의 제법에 관한 것이다.

<화학식 XX>

(식 중, C^*는 자연적 동위원소 분포의 탄소를 나타내거나, 또는 별법으로 한 탄소 동위원소 (예컨대, ¹³C)를 풍부하게 하여 표지한 탄소이고, N^*은 자연적 동위원소 분포의 질소를 나타내거나, 또는 별법으로 한 질소 동위원소 (예컨대, ¹⁵N)를 풍부하게 하여 표지한 질소임)

<화학식 XXI>

(식 중, R₆ 및 R₇은 모두 C₁ _- ₄알킬이고, 다른 기호들은 화학식 XX의 화합물에 대해 상기 정의된 의미를 가짐)

<화학식 XXII>

(식 중, R₈ 및 R₉는 모두 수소이고, 다른 기호들은 화학식 XX의 화합물에 대해 상기 정의된 의미를 가짐)

R₆ 및 R₇이 모두 C₁ _- ₄알킬이고, 다른 기호들이 화학식 XX의 화합물에 대해 상기 정의된 의미를 갖는 화학식 XXI의 피리딘 유도체는 3-트리메틸스탄닐 피리딘에서부터 출발하여 상기 화합물을 화학식 XXIV의 아세틸 할라이드와 반응시켜 화학식 XXIII의 아세틸 피리딘을 생성함으로써 제조될 수 있다.

<화학식 XXIV>

(식 중, Hal은 할로를 나타내고, 다른 기호들은 화학식 XX의 화합물에 대해 상기 정의된 의미를 가짐)

<화학식 XXIII>

(식 중, 기호들은 화학식 XX의 화합물에 대해 상기 정의된 의미를 가짐)

상기 화학식 XXIII의 아세틸 피리딘은 디-C₁ _- ₄알킬 포름아미드 디-C₁ _- ₄알킬 아세탈과 더 반응하여, R₆ 및 R₇이 모두 C₁ _- ₄알킬이고, 다른 기호들이 화학식 XX의 화합물에 대해 상기 정의된 의미를 갖는 원하는 화학식 XXI의 피리딘 유도체를 생성한다.

R₈ 및 R₉가 모두 수소이고, 다른 기호들이 화학식 XX의 화합물에 대해 상기 정의된 의미를 갖는 화학식 XXII의 아미노 페닐 구아니딘 유도체는 화학식 XXV의 티오우레아 유도체에서부터 출발하여 상기 화학식 XXV의 티오우레아 유도체를 각 아미노기의 한 수소 원자를 보호기, 예컨대 tert-부틸옥시 카르보닐로 교환시키는 시약과 반응시켜 R₈ 및 R₉가 모두 보호기를 나타내는 화학식 XXV의 티오우레아 유도체를 생성함으로써 제조될 수 있다.

<화학식 XXV>

이후에, 상기 화학식 XXV의 보호된 티오우레아 유도체를 2-메틸-5-니트로아닐린과 반응시켜 화학식 XXVI의 니트로 페닐 구아니딘 유도체를 제공한다.

<화학식 XXVI>

(식 중, R₈ 및 R₉는 모두 보호기를 나타내고, 다른 기호들은 화학식 XX의 화합물에 대해 상기 정의된 의미를 가짐)

두 보호기들을 제거한 후에, 니트로 관능기를 환원시켜, 최종적으로 R₈ 및 R₉가 모두 수소이고, 다른 기호들이 화학식 XX의 화합물에 대해 상기 정의된 의미를 갖는 화학식 XXII의 아미노 페닐 구아니딘 유도체를 생성한다.

나머지 모든 출발 물질은 공지되어 있거나, 공지된 방법에 따라 제조될 수 있거나, 또는 시중에서 얻을 수 있고; 특히, 이들은 실시예에 기재된 방법들을 사용하여 제조될 수 있다.

본원에 기재된 모든 방법 단계들은 공지된 반응 조건, 바람직하게는 구체적으로 언급된 반응 조건하에; 용매 또는 희석제 (바람직하게는 시약에 불활성이고, 이들을 용해시킬 수 있는 것)의 부재 또는 일반적으로는 존재하에; 촉매, 축합제 또는 중화제 (예를 들어, 이온 교환제, 통상적으로 양이온 교환제, 예를 들어 H⁺ 형태의)의 부재 또는 존재하에; 반응의 유형 및/또는 반응물에 따라; 감온, 상온 또는 승온에서, 예를 들어 -100℃ 내지 약 190℃, 바람직하게는 약 -80℃ 내지 약 150℃의 범위에서, 예를 들어 -80 내지 -60℃, 실온, -20 내지 40℃ 또는 사용된 용매의 비점에서; 대기압 하에 또는 폐쇄 용기 (적절한 압력하의) 중에, 및/또는 불활성 대기 (예를 들어, 아르곤 또는 질소하의) 중에서 수행될 수 있다. 해당 반응에 적합한 것으로부터 선택될 수 있는 용매로는, 해당 방법의 설명에서 달리 언급되지 않는다면, 예를 들어 물, 에스테르, 통상적으로 저급 알킬-저급 알카노에이트, 예를 들어 디에틸 아세테이트, 에테르, 통상적으로 지방족 에테르, 예를 들어 디에틸에테르, 또는 시클릭 에테르, 예를 들어 테트라히드로푸란, 액체 방향족 탄화수소, 통상적으로 벤젠 또는 톨루엔, 알콜, 통상적으로 메탄올, 에탄올, 또는 1- 또는 2-프로판올, 니트릴, 통상적으로 아세토니트릴, 할로겐화된 탄화수소, 통상적으로 디클로로메탄, 산 아미드, 통상적으로 디메틸포름아미드, 염기, 통상적으로 헤테로시클릭 질소 염기, 예를 들어 피리딘, 카르복실산, 통상적으로 저급 알칸카르복실산, 예를 들어 아세트산, 카르복실산 무수물, 통상적으로 저급 알칸산 무수물, 예를 들어 아세트산 무수물, 시클릭, 직쇄 또는 분지쇄 탄화수소, 통상적으로 시클로헥산, 헥산 또는 이소펜탄, 또는 이들 용매의 혼합물 (예컨대, 수용액)이 있다. 상기 용매 혼합물들은 또한, 예를 들어 크로마토그래피 또는 분배를 통한 공정에 사용될 수 있다.

본 발명의 화합물은 화합물의 유리 염기 형태를 제약상 허용되는 무기 또는 유기산과 반응시킴으로써 제약상 허용되는 산 부가염으로 제조될 수 있다. 별법으로, 본 발명의 화합물의 제약상 허용되는 염기 부가염은 화합물의 유리 산 형태를 제약상 허용되는 무기 또는 유기 염기와 반응시킴으로써 제조될 수 있다. 별법으로, 본 발명의 화합물의 염 형태는 출발 물질 또는 중간체의 염을 사용하여 제조될 수 있다.

본 발명의 화합물의 유리산 또는 유리 염기 형태는 각각 상응하는 염기 부가염 또는 산 부가염 형태로부터 제조될 수 있다. 예를 들어, 산 부가염 형태의 본 발명의 화합물은 적합한 염기 (예를 들어, 수산화암모늄 용액, 수산화나트륨 등)로 처리함으로써 상응하는 유리 염기로 전환될 수 있다. 염기 부가염 형태의 본 발명의 화합물은 적합한 산 (예를 들어, 염산 등)으로 처리함으로써 상응하는 유리산으로 전환될 수 있다.

산화되지 않은 형태의 본 발명의 화합물은, 0 내지 80℃에서 적합한 불활성 유기 용매 (예를 들어, 아세토니트릴, 에탄올, 수성 디옥산 등) 중에서 본 발명의 화합물의 N-옥시드를 환원제 (예를 들어, 황, 이산화황, 트리페닐 포스핀, 리튬 보로하이드라이드, 나트륨 보로하이드라이드, 인 트리클로라이드, 트리브로마이드 등)로 처리함으로써 제조될 수 있다.

본 발명의 화합물의 전구약물 유도체는 당업자에게 공지된 방법으로 제조될 수 있다 (예를 들어, 추가의 상세한 내용은 문헌 [Saulnier et al., (1994), Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters, Vol. 4, p. 1985] 참조). 예를 들어, 적절한 전구약물은 본 발명의 화합물의 비-유도체화된 화합물을 적합한 카르바밀화제 (예를 들어, 1,1-아실옥시알킬카르바노클로리데이트, 파라-니트로페닐 카르보네이트 등)와 반응시켜 제조될 수 있다.

본 발명의 화합물의 보호된 유도체는 당업자에게 공지된 수단으로 만들어질 수 있다. 보호기의 생성 및 그들의 제거에 적용가능한 기술의 상세한 설명은 문헌 [T. W. Greene, "Protecting Groups in Organic Chemistry", 3rd edition, John Wiley and Sons, Inc., 1999]에서 찾아볼 수 있다.

본 발명의 화합물은 본 발명의 방법 중에 용매화물 (예를 들어, 수화물)로 편리하게 제조되거나 형성될 수 있다. 본 발명의 화합물의 수화물은 유기 용매, 예컨대 디옥신, 테트라히드로푸란 또는 메탄올을 사용하여, 수성/유기 용매 혼합물로부터의 재결정화에 의해 편리하게 제조될 수 있다.

본 발명의 화합물은 화합물의 라세미 혼합물을 광학적으로 활성인 분할제 (resolving agent)와 반응시켜 한 쌍의 부분입체이성질체 화합물을 형성하고, 부분입체이성질체들을 분리시키고, 광학적으로 순수한 거울상이성질체를 회수함으로써, 그들의 개별 입체이성질체로서 제조될 수 있다. 거울상이성질체의 분할이 본 발명의 화합물의 공유결합 상태의 부분입체이성질체 유도체를 사용하여 수행될 수 있기는 하지만, 해리성 복합체 (dissociable complex)가 바람직하다 (예를 들어, 결정질 부분입체이성질체 염). 부분입체이성질체는 뚜렷한 물리적 특성 (예를 들어, 융점, 비점, 용해도, 반응성 등)을 갖고, 이들 차이점을 이용하여 쉽게 분리될 수 있다. 부분입체이성질체는 크로마토그래피로 분리될 수 있거나, 또는 바람직하게는 용해도의 차이점에 기반한 분리/분할 기술로 분리될 수 있다. 이후에, 라세미화를 초래하지 않는 임의의 실용적인 수단에 의해 광학적으로 순수한 거울상이성질체가 분할제와 함께 회수된다. 화합물의 라세미 혼합물로부터 화합물의 입체이성질체의 분할에 적용가능한 기술의 보다 상세한 설명은 문헌 [Jean Jacques, Andre Collet, Samuel H. Wilen, "Enantiomers, Racemates and Resolutions", John Wiley And Sons, Inc., 1981]에서 찾아볼 수 있다.

상기 기재된 화합물의 합성에 대한 상세한 예는 하기 실시예에서 찾아볼 수 있다. 바람직한 실시양태에서, 상기 기재된 화합물들은 하기 실시예에서 정의된 방법 및 방법 단계에 따라, 또는 그와 유사하게 제조된다.

<실시예>

본 발명은 상기 기재된 화합물들의 제법을 설명하는 하기 실시예들에 의해 더 예시되나, 이에 제한되지 않는다.

약어

DMAP 디메틸 아미노피리딘

DMSO 디메틸 술폭시드

MCPBA m-클로로퍼벤조산

MeOH 메탄올

NMR 핵 자기 공명

RT 실온

THF 테트라히드로푸란

TLC 박층 크로마토그래피

w/v 부피 당 중량

실시예 1: 4-(4- 메틸 -피페라진-1- 일메틸 )-N-[4- 메틸 -3-(4-피리딘-3-일-[2- ¹⁴ C]피리미딘-2- 일아미노 )- 페닐 ]- 벤즈아미드 메실레이트

1-메틸피페라진 (3 ml, 27 mmol)을 에탄올 (20 ml) 중 4-클로로메틸-N-{4-메틸-3-[4-(1-옥시-피리딘-3-일)-[2-¹⁴C]피리미딘-2-일아미노]-페닐}-벤즈아미드의 히드로클로라이드 염 (단계 1.5, 335 mg, 0.71 mmol)의 용액에 첨가하고, 생성된 혼합물을 45℃에서 5시간 동안 교반하였다. 상기 현탁액을 실온으로 냉각시키고, 물 (4.4 ml)을 첨가한 후에, 20％ w/v 수산화나트륨 (130 ㎕)을 첨가하였다. 생성된 현탁액을 90℃에서 30분 동안 교반한 후에, 실온으로 냉각시키고, 원심분리시키고, 수성 용매를 제거하였다. 베이지색 결정을 물로 추가 2회 세척하고, 고진공하에 건조시켰다. 최종적으로, 고체를 디클로로메탄:MeOH 90:10 및 1％ 암모니아로 용리시키는 실리카 겔 상의 플래시 크로마토그래피로 정제하여 황색 오일로서의 중간체를 얻었다. 최종적으로 얻어진 중간체를 MeOH (4 ml) 중에 용해시키고, 메탄 술폰산을 첨가하고 (21 ㎕), 얻어진 용액을 교반하였다. 얻어진 생성물을 비활성인 기준 생성물로 시딩하여 용액으로부터 결정화시켜 비(比)활성 1.73 GBq/mmol의 표제 생성물을 얻었다.

단계 1.1: [ ¹⁴ C]시안아미드

바륨 [¹⁴C]카르보네이트 (1.18 g, 6 mmol, 10.4 GBq, 1.79 GBq/mmol)를 석영 유리 (quartz glass) 실린더형 튜브에 넣고, 암모니아 기체의 스트림 (stream)을 부드럽게 통과시키면서 800℃로 가열하였다. 3시간 후에, 조질의 바륨 [¹⁴C]시안아미드 생성물을 실온으로 냉각되게 하고, 암모니아의 스트림을 중지하였다. 조질의 바륨[¹⁴C]시안아미드 (1.063 g, 6 mmol)를 물 (10 ml) 중에 현탁시키고, 초음파처리에 의해 용해시켰다. pH 5.5가 될 때까지, 2 M 황산 (2.6 ml)을 교반하면서 조심스럽게 적가하였다. 물을 60℃, 23 Torr에서 제거하였다. 잔류물을 드라이 아이스/아세톤으로 냉각시키고, 잔류한 물을 동결건조시켜 결정질 고체 생성물을 얻었다. 이를 디에틸 에테르에 용해시키고, 여과시켜 불용성 잔류물을 제거하였다. 에테르를 제거하고, 얻어진 잔류물을 t-부탄올 중에 용해시켰다.

단계 1.2: N-(2- 메틸 -5-니트로- 페닐 )-[ ¹⁴ C]구아니딘

디옥산 중 4 M 염산 (5 ml)을 40℃에서 t-부탄올 중 2-메틸-4-니트로아닐린 (1.52 g, 19 mmol)의 교반된 용액에 첨가하여 황색 현탁액을 얻었다. 용매를 제거하고, 건조 잔류물을 t-부탄올 중 조질의 [¹⁴C]시안아미드 (단계 1.2)의 용액 (5 ml)에 첨가하여 황색 현탁액을 얻었다. 100℃로 1시간 동안 가열한 후에, 용액을 얻었다. 추가의 5시간 후에, 용매를 45℃에서 제거하고, 잔류물을 3％ w/v 수산화나트륨 (10 ml)으로 처리하고, 디클로로메탄 (3×30 ml)으로 추출하였다. 유기상을 합하고, 증발시키고, 75:25:0.5:0.5 디클로로메탄:MeOH:물:아세트산으로 용리시키는 실리카 겔 상의 크로마토그래피에 의해 표제 생성물 (6.07 GBq)을 얻었다.

단계 1.3: N-(5-아미노-2- 메틸 - 페닐 )-[ ¹⁴ C]구아니딘

10％ Pd/C (125 mg)를 함유하는 n-부탄올 (25 ml) 중 N-(2-메틸-5-니트로-페닐)[¹⁴C]구아니딘 (단계 1.2) (760 mg, 3.91 mmol)의 혼합물을 실온에서 수소 기체 1기압하에 4.5시간 동안 교반하였다. 상기 혼합물을 하이플로 (Hyflo) (셀라이트 (Celite))를 통해 여과시키고, 추가량의 n-부탄올 (3×10 ml)로 세척하고, 합하고, 45℃에서 회전식 증발기 상에서 n-부탄올을 제거시켜 무색 오일로서의 조 생성물을 얻었다. 라디오 (Radio) TLC, 80:25:0.5:0.5 디클로로메탄:MeOH:물:아세트산, 실리카 겔 F₂₅₄ 플레이트 상 (RF=0.34); 총 활성 3.7 GBq.

단계 1.4: 4- 메틸 -N ^* 3 ^* -(4-피리딘-3-일-[2- ¹⁴ C]피리미딘-2-일)-벤젠-1,3- 디아민

n-부탄올 (30 ml) 중 조질의 N-(5-아미노-2-메틸-페닐)-[¹⁴C]구아니딘 (단계 1.4, 476 mg, 2.89 mmol) 및 3-디메틸아미노-1-피리딘-3-일-프로페논 (509 mg, 2.89 mmol)의 용액을 3.5시간 동안 환류 온도 (130℃)에서 가열하였다. 용매를 제거하고, 2:98 펜탄:아세톤으로 용리시키는 플래시 크로마토그래피로 정제하여 황색 발포체로서의 표제 생성물을 얻었다. 라디오 TLC, 2:98 펜탄:아세톤, 실리카 겔 F₂₅₄ 플레이트 상 (RF=0.5). 총 활성 2.3 GBq.

단계 1.5: 4- 클로로메틸 -N-[4- 메틸 -3-(4-피리딘-3-일-[2- ¹⁴ C]피리미딘-2- 일아미노 )- 페닐 ]- 벤즈아미드

THF (10 ml) 중 4-(클로로메틸)-벤조일 클로라이드 (2.646 g, 14 mmol)의 용액을 0℃에서 아르곤 하에 무수 THF (20 ml) 중 4-메틸-N^*3^*-(4-피리딘-3-일-[2-¹⁴C]피리미딘-2-일)-벤젠-1,3-디아민 (단계 1.4, 655 mg, 2.36 mmol)의 용액에 적가하고, 상기 상응하는 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 생성된 현탁액을 원심분리시키고, 침전 생성물을 에테르로 세척하고, 재원심분리시키고, 에테르를 제거하고, 고체를 건조시켜 히드로클로라이드 염의 표제 생성물을 얻었다.

실시예 2: 4-(피페라진-1- 일메틸 )-N-[4- 메틸 -3-(4-피리딘-3-일-[2- ¹⁴ C]피리미딘-2- 일아미노 )- 페닐 ]- 벤즈아미드 히드로클로라이드

MeOH 중 3 M HCl (20 ml)을 4-{4-[4-메틸-3-(4-피리딘-3-일-피리미딘-2-일아미노)-페닐[¹⁴C]카르바모일]-벤질}-피페라진-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 (단계 2.3, 200.5 mg, 0.536 mmol, 486.8 MBq)에 첨가하였다. 30분 후에, MeOH 중 3 M HCl 추가 10 ml를 첨가하고, 반응물을 추가 60분 동안 교반하였다. 생성물을 유리 프릿 (glass frit)을 통해 흡인하에 여과시키고, 먼저 찬 MeOH (5 ml)로 세척한 후에, 에틸 아세테이트 (100 ml)로 세척하고, 고진공하에 건조되게 하여 오렌지색 결정으로서의 표제 화합물을 얻었다.

단계 2.1: 4-(4- 브로모 -벤질)-피페라진-1- 카르복실산 tert -부틸 에스테르

MeOH (50 ml) 중 N-boc-피페라진 (4.94 g, 26.5 mmol), p-브로모-벤질브로마이드 (5.52 g, 22 mmol) 및 K₂CO₃ (6.4 g, 46 mmol)의 혼합물을 실온에서 90분 동안 교반하였다. 상기 혼합물을 유리 프릿을 통해 여과시키고, 용매를 증발시켰다. 잔류물을 디클로로메탄에 용해시키고, 유리 프릿을 통해 두번째로 여과시키고, 디클로로메탄으로 세척하였다. 여액을 증발시키고, 조질의 무색 오일을 디에틸 에테르/n-헥산 (10:90에서 50:50까지)으로 용리시키는 실리카 겔 상의 크로마토그래피에 의해 백색 고체로서의 표제 생성물을 얻었다.

단계 2.2: 4-(4-[ ¹⁴ C] 카르복시 -벤질)-피페라진-1- 카르복실산 tert -부틸 에스테르

헥산 중 1.5 M t-부틸 리튬의 용액 (0.97 ml, 1.46 mmol)을 -78℃에서 무수 THF (5 ml) 중 4-(4-브로모-벤질)-피페라진-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 (단계 2.1, 285 mg, 0.8 mmol)의 용액에 첨가하고, 상기 혼합물을 -78℃에서 4분 동안 교반하였다. 생성된 리티오 유도체를 -192℃로 냉각시키고, 진한 황산을 바륨 [¹⁴C]카르보네이트 (0.85 당량, 122 mg, 0.62 mmol, 1378 MBq, 아머샴 파마시아 바이오테크 (Amersham Pharmacia Biotech))에 첨가함으로써 생성된 [¹⁴C]이산화탄소와 반응하도록 한 후에, -78℃로 가온하고, 30분 동안 교반하였다. 반응물을 -78℃에서 MeOH (1 ml)로 켄칭한 후에, 실온으로 가온되게 하였다. 용매를 진공에서 제거하고, 포화 염화암모늄을 첨가하였다. 혼합물을 에틸 아세테이트 (3×15 ml)로 추출하고, 합하고, 황산나트륨으로 건조시켰다. 여과시키고, 용매를 제거하여 조질의 백색 고체를 얻었다. 먼저 디에틸 에테르로 용리시키고, 이후에 10％ MeOH 90％ 디에틸로 용리시키는 실리카 겔 상의 크로마토그래피로 조 생성물을 정제하였다. 분획물들을 합하고, 회전식 증발기 상에서 증발시킨 후에, 고진공하에 건조시켜 백색 고체로서의 표제 생성물을 얻었다.

단계 2.3: 4-{4-[4- 메틸 -3-(4-피리딘-3-일-피리미딘-2- 일아미노 )- 페닐[ ¹⁴ C] 카르바모일]-벤질}-피페라진-1- 카르복실산 tert -부틸 에스테르

트리에틸아민 (332 ㎕, 2.4 mmol)을 실온에서 THF (5 ml) 중 4-(4-[¹⁴C]카르복시-벤질)-피페라진-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 (단계 2.2, 171.5 mg, 0.536 mmol, 1114.26 MBq)의 교반된 용액에 적가한 후에, 이소-부틸 클로로포르메이트 (78 ㎕, 1.0 mmol)를 적가하였다. 상기 혼합물을 추가 3분 동안 교반한 후에, 4-메틸-N-3-(4-피리딘-3-일-피리미딘-2-일)-벤젠-1,3-디아민 (165 mg, 1.0 mmol)을 첨가하였다. 18시간 후에, 용액을 증발시키고, 먼저 에틸 아세테이트로 용리시키고, 이후에 10％ MeOH / 90％ 에틸 아세테이트로 용리시키고, 이후에 35％ MeOH / 65％ 에틸 아세테이트로 용리시키는 실리카 상의 플래시 크로마토그래피에 잔류물을 적용시켜 담황색 고체로서의 표제 생성물을 단리하였다.

실시예 3: 4- 메틸 -N ^* 3 ^* -(4-피리딘-3-일-[2- ¹⁴ C]피리미딘-2-일)-벤젠-1,3- 디아민

(5-tert-부톡시카르보닐아미노-2-메틸-페닐)-(4-피리딘-3-일-[2-¹⁴C]피리미딘-2-일)-카르밤산 tert-부틸 에스테르 (단계 3.2, 86 mg, 0.18 mmol) 및 트리플루오로아세트산 (463 mg, 310 ㎕, 4.06 mmol)의 용액을 실온에서 밤새 교반하였다. 인-프로세스 컨트롤 (in-process control) (RTLC, 실리카 겔, CH₂Cl₂:MeOH 95:5)에 기반하여, 어떤 출발 물질도 검출되지 않았다. 용매를 진공에서 제거하고, 조질의 물질을 1 N 수성 HCl과 CH₂Cl₂ 사이에 분배시켰다. 유기상을 재추출한 후에, 산성인 수성 분획물들을 합하고, 2 N 수성 NaOH로 염기성화시키고, CH₂Cl₂로 3회 추출하였다. 유기상을 염수로 세척한 후에, 유기상을 Na₂SO₄로 건조시키고, 용매를 증발시켰다. 조질의 물질 (48 mg)을 플래시 크로마토그래피 (실리카 겔, CH₂Cl₂:MeOH 98.5:1.5)로 정제하여 표제 생성물을 얻었다. 비활성 1.934 GBq/mmol. MS: +cESI: 279.89 M+.

단계 3.1: (5-{ tert - 부톡시카르보닐 -[4-(4- 메틸 -피페라진-1- 일메틸 )- 벤조일 ]-아미노}-2- 메틸 - 페닐 )-(4-피리딘-3-일-[2- ¹⁴ C]피리미딘-2-일)- 카르밤산 tert -부틸 에스테르

4-디메틸아미노피리딘 (30 mg, 0.24 mmol)을 실온에서 아르곤 하에 CH₂Cl₂ (2 ml) 중 4-(4-메틸-피페라진-1-일메틸)-N-[4-메틸-3-(4-피리딘-3-일-[2-¹⁴C]피리미딘-2-일아미노)-페닐]-벤즈아미드 (실시예 1, 120 mg, 0.24 mmol) 및 디-tert-부틸 디카르보네이트 (265 mg, 1.22 mmol)의 현탁액에 첨가한 후에, 오렌지색 용액이 형성되었고, 이를 실온에서 밤새 교반하였다. 용매를 진공에서 제거하고, 조 생성물을 CH₂Cl₂:MeOH 93:7로 용리시키는 실리카 상의 크로마토그래피로 정제하였다. 분획물들을 합하고, 회전식 증발기 상에서 증발시킨 후에, 고진공하에서 건조시켜 표제 생성물을 얻었다.

단계 3.2: (5- tert - 부톡시카르보닐아미노 -2- 메틸 - 페닐 )-(4-피리딘-3-일-[2- ¹⁴ C]피리미딘-2-일)- 카르밤산 tert -부틸 에스테르

THF (0.8 ml) 중 (5-{tert-부톡시카르보닐-[4-(4-메틸-피페라진-1-일메틸)-벤조일]-아미노}-2-메틸-페닐)-(4-피리딘-3-일-[2-¹⁴C]피리미딘-2-일)-카르밤산 tert-부틸 에스테르 (단계 3.1, 153 mg, 0.22 mmol) 및 2-디에틸아미노에틸아민 (53 mg, 64 ㎕, 0.45 mmol)의 용액을 실온에서 밤새 교반하였다. 인-프로세스 컨트롤 (RTLC, 실리카 겔, CH₂Cl₂:MeOH 95:5)에 기반하여, 추가의 2-디에틸아미노에틸아민 (159 mg, 192 ㎕, 1.35 mmol)을 출발 물질이 거의 검출되지 않을 때까지 투입하였다. 용매를 진공에서 제거한 후에, 조 생성물을 플래시 크로마토그래피 (실리카 겔, CH₂Cl₂:MeOH 98:2)로 정제하여 표제 생성물을 얻었다.

실시예 4: 4-(4- 메틸 -4- 옥시 -피페라진-1- 일메틸 )-N-[4- 메틸 -3-(4-피리딘-3-일-피리미딘-2- 일아미노 )- 페닐 ]- 벤즈아미드

무수 디클로로메탄 (10 ml) 중 4-(4-메틸-피페라진-1-일메틸)-N-[4-메틸-3-(4-피리딘-3-일-[2-¹⁴C]피리미딘-2-일아미노)-페닐]-벤즈아미드 (실시예 1, 414 mg, 43.4 mCi, 1605.8 MBq)의 용액을 실온에서 2시간 동안 MCPBA (260 mg, 1.5 mmole)로 처리하였다. 형성된 침전물을 여과시켜 제거하고, 여액을 증발시키고, 조 생성물을 디클로로메탄:MeOH 70:35로 용리시키는 실리카 겔 상의 플래시 크로마토그래피로 정제하여 백색 고체로서의 표제 생성물을 얻었다. 생성물을 에탄올/에틸아세테이트로부터 결정화시켰다.

실시예 5: N-{4- 메틸 -3-[4-(1- 옥시 -피리딘-3-일)-[2- ¹⁴ C]피리미딘-2- 일아미노 ]- 페닐 }-4-(4- 메틸 -피페라진-1- 일메틸 )- 벤즈아미드

1-메틸피페라진 (2 ml, 18 mmol)을 에탄올 (20 ml) 중 4-클로로메틸-N-{4-메틸-3-[4-(1-옥시-피리딘-3-일)-[2-¹⁴C]피리미딘-2-일아미노]-페닐}-벤즈아미드 (단계 5.2, 151 mg, 0.34 mmole)의 용액에 첨가하고, 생성된 혼합물을 60℃에서 1시간 동안 교반하였다. 용액을 증발시키고, 잔류물을 디클로로메탄:MeOH 90:10 및 1％ 암모니아로 용리시키는 실리카 겔 상의 플래시 크로마토그래피로 정제하여 황색 오일을 얻었다. 오일을 디클로로메탄:MeOH로부터 결정화시켜 결정질 고체로서의 N-옥시드 생성물 (175.3 MBq)을 얻었다.

단계 5.1: {4- 메틸 -3-[4-(1- 옥시 -피리딘-3-일)-[2- ¹⁴ C]피리미딘-2- 일아미노 ]- 페닐 }- 카르밤산 tert -부틸 에스테르

THF (10 ml) 중 4-메틸-N-3-(4-피리딘-3-일-[2-¹⁴C]피리미딘-2-일)-벤젠-1,3-디아민 (실시예 3, 286 mg, 1.03 mmole, 1890 MBq)의 현탁액을 디-tert-부틸 디카르보네이트 (467 mg, 2.33 mmole) 및 촉매량의 DMAP로 처리하고, 2시간 동안 환류 온도에서 가열하였다. 용매를 진공에서 제거하고, 조 생성물을 디클로로메탄:MeOH 95:5로 용리시키는 실리카 상의 플래시 크로마토그래피로 정제하여 황색 발포체로서의 보호된 생성물을 얻었다. 상기 화합물을 디클로로메탄 중에 용해시키고, -10℃로 냉각하고, MCPBA (285 mg, 1.65 mmol)로 처리하고, 0℃에서 4시간 동안 교반하였다. 침전물을 여과시키고, 용매를 증발시키고, 조 생성물을 디클로로메탄:MeOH 95:5로 용리시키는 실리카 상의 플래시 크로마토그래피로 추가로 정제하여 황색 발포체로서의 표제 생성물을 얻었다.

단계 5.2: 4- 클로로메틸 -N-{4- 메틸 -3-[4-(1- 옥시 -피리딘-3-일)-[2- ¹⁴ C]피리미딘-2- 일아미노 ]- 페닐 }- 벤즈아미드

염산 (4 N 용액 4 ml)을 THF (10 ml) 중 {4-메틸-3-[4-(1-옥시-피리딘-3-일)-[2-¹⁴C]피리미딘-2-일아미노]-페닐}-카르밤산 tert-부틸 에스테르 (단계 5.1, 187 mg, 0.48 mmol)의 현탁액에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 70℃에서 1시간 동안 가열하였다. 냉각된 혼합물을 증발시켜 황색 고체를 얻었고, 이를 디클로로메탄:MeOH 75:35로 용리시키는 실리카 상의 플래시 크로마토그래피로 정제하여 황색 결정을 얻었다. 결정을 THF (10 ml) 중에 현탁시키고, 25％ 수성 수산화암모늄 (1 방울)으로 처리하고, 생성된 혼합물을 초음파 처리하였다. 현탁액을 여과시키고, 용매를 증발시켜 황색 발포체를 얻었다. 상기 발포체를 THF (10 ml) 중에 용해시키고, THF (2 ml) 중 4-(클로로메틸)-벤조일 클로라이드 (149 mg, 0.8 mmol)의 용액으로 적가 처리하고, 상기 상응하는 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 생성된 현탁액을 원심분리시키고, 침전 생성물을 에테르로 추가 세척하고, 재원심분리시키고, 에테르를 제거하고, 고체를 건조시켜 갈색 결정으로서의 표제 생성물을 얻었다.

실시예 6: 4-(4- 메틸 -[2,2,3,3,5,5,6,6- D8 ]피페라진-1- 일메틸 )-N-[4- 메틸 -3-(4-피리딘-3-일-피리미딘-2- 일아미노 )- 페닐 ]- 벤즈아미드

4-클로로메틸-N-[4-메틸-3-(4-피리딘-3-일-피리미딘-2-일아미노)-페닐]-벤즈아미드 (3.57 g, 8.30 mmol; 비-표지 출발 물질들을 사용하여 실시예 1에 따라 얻어질 수 있음)를 디메틸 포름아미드 (50 ml) 중에 용해시켰다. 상기 용액에 탄산칼륨 (5.74 g, 41.5 mmol) 및 N-메틸 피페라진-2,2,3,3,5,5,6,6-d8 (815 mg, 7.54 mmol, 이소텍, 인크. (Isotec, Inc.; Miamisburg, OH))을 첨가하였다. 상기 혼합물을 45 내지 50℃로 대략 12 내지 14시간 동안 가열하였다. 생성물의 Rf가 대략 0.30인, DCM/EtOAc/MeOH/NH₄OH (25％) (60/10/10/2)로 이루어진 용매계를 사용한 TLC에 의해 반응물을 모니터링하였다. DMF를 진공에서 제거하고, 잔류물을 물로 분쇄하였다. 상기 물 세척은 매우 점착성인 잔류물을 생성하고, 이를 에틸 아세테이트 중에 용해시키고, 수성상을 진공에서 농축시키고, 이의 잔류물을 에틸 아세테이트 중에 용해시켰다. 합한 물질을 상기 기재된 동일한 용매계를 사용하여 플래시 크로마토그래피로 4회 정제하였다. 생성물을 바이알에 넣은 후에, 65℃의 건조 온도 (메탄올 환류)에서 진공하에 (수은 0.01 mm) 아브더할덴 (Abderhalden) 건조 장치에 넣었다. MS ES +502.4 (100％) [M+H]+, 503.5 (40％), 504.5 (4％);

실시예 7: 4- 메틸 -N-(4-피리딘-3-일-[1,3- ¹⁵ N ₂ ,2,4,5- ¹³ C ₃ ]피리미딘-2-일)-벤젠-1,3- 디아민

n-부탄올 중 조질의 N-(5-아미노-2-메틸-페닐)-[¹³C,¹⁵N₂]구아니딘 (단계 7.7, 157 mg, 0.96 mmol) 및 3-디메틸아미노-1-피리딘-3-일-[1,2-¹³C₂]프로페논 (단계 7.3, 169 mg, 0.96 mmol)의 용액을 5시간 동안 환류 온도 (130℃)에서 가열하였다. 용매를 제거하고, 5:95 펜탄:아세톤으로 용리시키는 플래시 크로마토그래피로 정제하여 황색 고체로서의 순수한 표제 생성물을 얻었다.

단계 7.1: 3- 트리메틸스탄나닐 -피리딘

질소하에, 3-브로모피리딘 (4 g, 25.3 mmol)을 2구 플라스크에 넣은 후에, 디에틸 에테르 (40 ml)를 넣었다. 용액을 -78℃로 냉각시킨 후에, 헥산 중 1.5 M n-부틸 리튬 (20 ml, 30.4 mmol)을 첨가하였다. 생성된 황색 용액을 10분 동안 교반한 후에, 디에틸 에테르 (2 ml) 중 트리메틸주석 클로라이드 (5.04 g, 25.3 mmol)의 용액을 첨가하였다. 생성된 용액을 -78℃에서 20분 동안 교반한 후에, 1시간에 걸쳐 서서히 실온으로 가온되게 하였다. 용액을 헥산 (50 ml)과 물 (100 ml) 사이에 분배시키고, 진탕시키고, 유기층을 분리시켰다. 수성상을 헥산 (50 ml)으로 추가 2회 추출하고, 유기상을 합하고, 물 (100 ml)로 세척하였다. 헥산 상을 황산나트륨으로 건조시키고, 여과시키고, 여액을 증발시켜 조질의 오일을 얻었고, 이를 9:1 헥산:에틸 아세테이트로 용리시키는 실리카 겔 컬럼에 통과시켰고, 생성물 분획들을 수집하였다. 분획물들을 합하고, 증발시켜 담황색 오일을 얻었고, 이를 쿠겔로어 (Kugelrohr) 오븐에서 증류시킴으로써 추가로 정제하여 무색 오일로서의 표제 생성물 (50 mbar, 100℃에서 증류됨)을 얻었다.

단계 7.2: 1-피리딘-3-일-[ ¹³ C ₂ ] 에타논

3-트리메틸스탄닐 피리딘 (단계 7.1, 1.83 g, 7.56 mmol), 새로 증류된 [¹³C₂]아세틸 클로라이드 (0.67 g, 8.32 mmol), PdCl₂(PPh₃)₂ (0.3 g, 0.44 mmol) 및 무수 벤젠 (20 ml)을 30 ml 앰풀에 넣었다. 상기 앰풀을 밀봉하고, 95℃에서 밤새 오일조에 놓아두었다. 앰풀을 개봉하고, 내용물을 꺼내어 물 (30 ml)과 에틸아세테이트 (30 ml) 사이에 분배시키고, 진탕시켰다. 유기상을 분리시키고, 수성상을 에틸 아세테이트 (2×30 ml)로 추가 2회 재추출하였다. 유기상을 합하고, 물 (30 ml)로 세척하고, 황산나트륨으로 건조시키고, 여과시키고, 여액을 조심스럽게 증발시켰다. 조질의 오일을 1:1 헥산:에틸 아세테이트로 용리시키는 실리카 겔을 통해 정제하고, 조심스럽게 동결건조시킨 후에 표제 생성물을 얻었다.

단계 7.3: (E/Z)-3-디메틸아미노-1-피리딘-3-일-[1,2- ¹³ C ₂ ] 프로페논

1-피리딘-3-일-[¹³C₂]에타논 (단계 7.2, 500 mg, 4.06 mmol) 및 N,N-디메틸포름아미드 디메틸아세탈 (628 mg, 5.28 mmol)이 모두 든 밀봉된 앰풀을 100℃로 밤새 가열하였다. 조 생성물을 9:1 디클로로메탄:메탄올로 용리시키는 실리카 겔 상의 크로마토그래피로 정제하여 황색 결정으로서의 표제 생성물을 얻었다.

단계 7.4:[ ¹³ C, ¹⁵ N ₂ ] 티오우레아 -N, N' -디카르복실산 tert -부틸 에스테르

무수 THF (82 ml) 중 [¹³C,¹⁵N₂]티오우레아 (500 mg, 6.58 mmol)의 용액 (알드리치 켐. 코. (Aldrich Chem. Co.)로부터 얻음)을 0℃에서 아르곤 하에 무수 THF (50 ml) 중 수소화나트륨 (미네랄 오일 중 60％ 분산액, 1.18 g, 29.61 mmol)의 현탁액에 적가하였다. 적가를 완료한 후에, 상기 용액을 5분 동안 교반한 후, 디-tert-부틸 디카르보네이트 (3.16 g, 14.48 mmol)를 첨가하고, 상기 상응하는 용액을 1시간 동안 교반하였다. NaHCO₃ 포화 용액 (13 ml)을 적가한 후에, 물 (230 ml)을 적가하였다. 생성물을 에틸 아세테이트 (3×150 ml)로 추출하고, 유기상을 합하고, 염수로 세척하고, 황산나트륨으로 건조시키고, 여과시키고, 여액을 증발시켜 오일로서의 조 생성물을 얻었다.

단계 7.5: N-(2- 메틸 -5-니트로- 페닐 )-[ ¹³ C, ¹⁵ N ₂ ]구아니딘-N, N' -산 tert -부틸 에스테르

고체 염화수은(II) (1.97 g, 7.24 mmol)를 0℃에서 DMF 중 조질의 [¹³C,¹⁵N₂]티오우레아-N,N'-디카르복실산 tert-부틸 에스테르 (단계 7.4, 2.35 g, 6.58 mmol), 2-메틸-5-니트로아닐린 (1.00 g, 6.58 mmol), 트리에틸아민 (3.0 ml, 21.71 mmol)의 교반된 오렌지색 용액에 첨가하였다. 15분 동안 실온에서 교반한 후에, 에틸 아세테이트 (50 ml)를 첨가하고, 상기 혼합물을 하이플로 (셀라이트)를 통해 여과시켰다. 에틸 아세테이트 용액을 물 (50 ml)로 세척한 후에, 염수 (50 ml)로 세척하고, 황산나트륨으로 건조시켰다. 건조제를 여과시켜 제거하고, 여액을 증발시켜 오일을 얻었고, 이를 먼저 100％ 헥산으로, 이후에 90:10 헥산:에틸 아세테이트로, 이후에 80:20 헥산:에틸 아세테이트로 용리시키는 실리카 겔 상의 플래시 크로마토그래피로 정제하여 표제 생성물을 얻었다.

단계 7.6: N-(2- 메틸 -5-니트로- 페닐 )-[ ¹⁵ N ₂ , ¹³ C]구아니딘

1:1 트리플루오로아세트산 (9 ml):디클로로메탄 (9 ml) 중 N-(2-메틸-5-니트로-페닐)-[¹³C,¹⁵N₂]구아니딘-N,N'-산 tert-부틸 에스테르 (단계 7.5, 445 mg, 1.13 mmol)의 용액을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 2 M 수산화나트륨을 첨가하고 (50 ml), 황색 용액을 에틸 아세테이트 (3×30 ml)로 추출하고, 합하고, 물로 세척하였다. 유기상을 황산나트륨으로 건조시키고, 여과시키고, 여액을 증발시켜 황색 오일을 얻었고, 이를 90:10:0.5:0.5 디클로로메탄:메탄올:물:아세트산의 혼합물로 용리시키는 표준 실리카 겔 상의 플래시 크로마토그래피로 정제하여 표제 생성물을 얻었다.

단계 7.7: N-(5-아미노-2- 메틸 - 페닐 )-[ ¹⁵ N ₂ , ¹³ C]구아니딘

10％ Pd/C (12 mg)를 함유하는 n-부탄올 (3 ml) 중 N-(2-메틸-5-니트로-페닐)[¹³C,¹⁵N₂]구아니딘 (단계 7.6, 121 mg, 0.62 mmol)의 혼합물을 실온에서 수소 기체 1기압하에 16시간 동안 교반하였다. 10％ Pd/C 추가 12 mg을 첨가하고, 상기 혼합물을 추가 16시간 동안 교반하였다. 혼합물을 하이플로 (셀라이트)를 통해 여과시키고, 추가량의 n-부탄올 (3×2 ml)로 세척하고, 합하고, n-부탄올을 회전식 증발기 상에서 제거하여 조질의 표제 생성물을 얻었다.

Claims

화학식 I의 화합물.
<화학식 I>

식 중, R₁ 및 R₂는 모두 수소이고, C^*는 한 탄소 동위원소인 ¹⁴C를 풍부하게 하여 표지한 탄소를 나타낸다.
1-메틸피페라진을 화학식 II의 화합물과 반응시킴으로써, 화학식 I의 화합물을 제조하는 방법.
<화학식 I>

식 중, R₁ 및 R₂는 모두 수소이고, C^*는 한 탄소 동위원소를 풍부하게 하여 표지한 탄소를 나타낸다.
<화학식 II>

식 중, Hal은 할로겐을 나타내고, 다른 라디칼 및 기호들은 화학식 I의 화합물에 대해 상기 정의된 의미를 갖는다.