MX2007015876A

MX2007015876A - Metodos e intermediarios para la preparacion de imatinib opcionalmente radio-marcado.

Info

Publication number: MX2007015876A
Application number: MX2007015876A
Authority: MX
Inventors: Rhys Salter; Maria Ines Rodriguez; Thomas Moenius; Rolf Voges; Hendrik Andres; Kirk Bordeaux
Original assignee: Novartis Ag
Priority date: 2005-06-14
Filing date: 2006-06-13
Publication date: 2008-03-04
Also published as: CA2610193C; IL187832A0; RU2007148244A; WO2006133904A3; JP5137824B2; CN101198601A; BRPI0612578A2; IL187832A; GB0512091D0; KR20130055707A; WO2006133904A2; CN101198601B; CA2610193A1; RU2440999C2; AU2006257316A1; US20120316338A1; EP1896447A2; US20090299064A1; KR20080042066A; JP2009501137A

Abstract

La invencion se refiere a nuevos procesos para la fabricacion de N-{5-[4-(4-metil-piperazino-metil)-benzoilamido]-2-metilfenil}-4- (3-piridil)-2-pirimidinamina de la formula (I) (ver formula (I)): a nuevos procesos para la fabricacion de metabolitos de N-{5-[4-(4-metil-piperazino-metil)-benzoilamido]-2-metilfenil}-4- (3-piridil)-2-pirimidinamina observados despues de la administracion del compuesto a animales de sangre caliente, asi como a los intermediarios usados en dichos procesos. Asimismo son objeto de esta invencion nuevos materiales de partida, asi como los procesos para su preparacion. Son especialmente adecuados los procesos descritos aqui para proveer dichos compuestos que tengan marcacion isotopica. Los compuestos marcados obtenidos son adecuados en particular, para rastrear e investigar el metabolismo de la N-{5-[4-(4-metil-piperazino-metil)-benzoilamido] -2-metilfenil}-4-(3-piridil)-2-pirimidinamina y sus sales aceptables para uso farmaceutico, en estudios clinicos y preclinicos.

Description

MÉTODOS E INTERMEDIARIOS PARA LA PREPARACIOM DE IMATINIB OPCIONALM ENTE RADBQ-MARCADO La sal mesilato de N-{5[4-(4-metil-piperazino-metíl)-benzoil-amido]-2-metílfenil}-4-(3-p¡ridil)-2-p¡rim¡dinamina (compuesto de la fórmula I , Imatinib), es vendido bajo la marca Glivec®. El Glivec® es un inhibidor de tirosina-quinasa, adecuado para el tratamiento de la leucemia mieloide crónica y GIST (tumores estromales gastrointestinales). Se puede preparar la N-{5-[4-(4-metil-piperazino-metil)-benzoílamido]-2-metilfenil}-4-(3-p¡r¡dil)-2-pirimid¡n-amina , por ejemplo, como se describe en US 5,521 , 184. Se puede preparar y formular la salmonomesílato de N-{5-[4-(4-metil-piperaz¡no-metil)-benzoilamido]-2-metilfenil}-4-(3-p¡rid¡l-2-p¡rim¡din-amina , por ejemplo, como se describe en los ejemplos 4 y 6 de WO 99/03854, o como se describe en WO 03/090720. La invención se refiere a nuevos procesos para la fabricación de N-{5-[4-(4-metil-piperazino-mete¡l)-benzoilamido]-2-metilfen¡l}-4-(3-piridil)-2-pirimidin-am¡na (compuesto de la fórmula I , Imatinib); a nuevos procesos para la fabricación de metabolitos de N-{5-[4-(4-metil-piperazino-metil)-benzoilamido]-2-metílfenil}-4-(3-p¡ridil)-2-pirimidin-amina, observados después de la administración del compuesto a animales de sangre caliente, así como a los intermediarios utilizados en dichos procesos. Asimismo son objetivo de la presente invención nuevos materiales, así como los procesos para su preparación. Los procesos descritos aquí son especialmente adecuados para proveer dichos compuestos que tienen marcación isotópica . Dichos compuestos marcados, obtenidos, son particularmente adecuados para rastrear e investigar el metabolismo de N-{5-[4-(4-metíl-piperazíno-metil)-benzoilamido]-2-metilfenil}-4-(3-piridil)-2-pirimidin-amina, y sus sales farmacéuticamente aceptables, en estudios clínicos y preclínicos. Con base en la descripción de la presente memoria descriptiva de patente, una persona con experiencia en la técnica es capaz de preparar derivados de N-óxido de los compuestos descritos aquí, además de los N-óxidos específicamente mencionados, derivados profármaco, derivados protegidos, isómeros individuales y mezclas de sus isómeros, así como sus sales aceptables para uso farmacéutico. En una primera modalidad se prepara la sal mesilato de un compuesto de la fórmula I : en la que tanto R1 como R2 son hidrógeno y C* denota un carbono que tiene la distribución natural de isótopos o, alternativamente, que está marcado mediante enriquecimiento de un isótopo de carbono, por ejemplo, 1 C, haciendo reaccionar 1 metilpiperazina con un compuesto de la fórmula II: en la que Hal representa halógeno, de preferencia cloro, y los demás radicales y símbolos tienen los significados definidos más arriba para un compuesto de la fórmula I. Se puede obtener un compuesto de la fórmula II, en el que Hal representa halógeno, de preferencia cloro, y los demás radicales y símbolos tienen los significados definidos más atrás para un compuesto de la fórmula I, haciendo reaccionar primeramente la sal de adición de ácido clorhídrico de la fórmula lll: en la que Ri tiene el significado que se definió aquí con anterioridad para un compuesto de la fórmula I, con H2NC*N; donde C* denota un carbono que tiene la distribución natural de isótopos o, alternativamente, que está marcado mediante enriquecimiento de un isótopo de carbono, por ejemplo, 14C; lo que provee el derivado de nitrofenilo sustituido con guanidínilo , de la fórmula IV en la que los radicales y símbolos tienen los significados definidos más atrás para un compuesto de la fórmula I . En un segundo paso , se reduce adicionalmente el derivado de fenilo de la fórmula IV, sustitu ido con guanidinilo, al derivado de aminofenilo correspondiente, sustituido con guanidinilo, de la fórmula V: en la que los radicales y símbolos tienen los significados definidos más arriba para un compuesto de la fórmula I . Mediante la reacción de dicho derivado de aminofenilo sustituido con guanidinilo , de la fórmula V, en un tercer paso, con el derivado de piridilo de la fórmula VI : (V5) en la que R3 y R son ambos alquilo de 1 a 4 átomos de carbono, se obtiene la piridil-pirimidina de la fórmula Vil: en la que los radicales y símbolos tienen los significados definidos aquí con anterioridad para un compuesto de la fórmula I.

Se hace reaccionar finalmente dicha piridil-pirimidina de la fórmula Vil con ácido 4-halometil-benzoico para dar así la amida de la fórmula II. También se puede preparar la piridil-pirimidina de la fórmula Vil, en la que los radicales y símbolos tienen los significados que fueron definidos más atrás para un compuesto de la fórmula I, mediante la siguiente ruta: En un primer paso se hace reaccionar el compuesto de la fórmula I, en la que los radicales y símbolos fienen los significados definidos más arriba, con un reactivo que reemplaza los átomos de hidrógeno fijados a los átomos de nitrógeno mediante grupos protectores, dando así un compuesto de la fórmula I: en la que R^ y R2 representan ambos grupos protectores y C* denota carbono q ue tiene la distribución natural de isótopos o , alternativamente, que está marcado medíante enriquecimiento de un isótopo de carbono, por ejemplo, 14C . En un segundo paso, la unidad ácido benzoico de la molécula es eliminada por hidrólisis , dando por resultado la amina libre de la fórmula XI I : en la que tanto R-\ como R2 representan grupos protectores y C* denota carbono que tiene la distribución natural de isótopos o , alternativamente, que está marcado por enriquecimiento de un isótopo de carbono, por ejemplo, 14C; seguida por reemplazo de los grupos protectores R-\ y R2 por hidrógeno, es decir, la eliminación de los grupos protectores , lo que provee un compuesto de la fórmula I I en la q ue los radicales y símbolos tienen los significados definidos aqu í con anterioridad para un compuesto de la fórmula I . En una segunda modalidad se puede obtener un compuesto de la fórmula VI I I : en la que R5 es hidrógeno o alquilo de 1 a 4 átomos de carbono, y C* denota carbono que tiene la distribución natural de isótopos o, alternativamente, que está marcado por enriquecimiento de un isótopo de carbono, por ejemplo, 14C; mediante reacción de un compuesto de la fórmula X: en la que R5 es un gru po protector, por ejemplo, terbutoxicar-bonilo , o un alquilo de 1 a 4 átomos de carbono, y C* denota carbono que tiene la distribución natural de isótopos o , alternativamente, q ue está ma rcado por enriquecimiento de un isótopo de carbono, por ejemplo , 14C , con un compuesto de la fórmula XI : seguido por separación del grupo protector R5, en el caso de que R5 constituya u n grupo protector. Se puede obtener el compuesto de la fórmula X : en la que los radicales y los símbolos tienen los significados definidos aquí con anterioridad , haciendo reaccionar un compuesto de la fórmula IX: en la que R5 es un grupo protector, por ejemplo, terbutoxi-carbonílo o alquilo de 1 a 4 átomos de carbono, primero con terbutil-litio, para preparar el derivado de litio correspondiente, y hacer reaccionar dicho derivado de litio con C*O2 ; donde C* denota carbono que tiene la distribución natural de isótopos o , alternativamente, que está marcado mediante enriquecimiento de un isótopo de carbono , por ejemplo, 14C . En otro aspecto, la presente ¡nvención se refiere a la preparación de un compuesto de la fórmula Xl l l : en la que los radicales y símbolos tienen los significados definidos aqu í con anterioridad para un compuesto de la fórmula I , mediante oxidación de un compuesto de la fórmula I , donde los radicales y s ímbolos tienen los significados definidos más atrás.

En un aspecto adicional , la presente invención se refiere a la preparación de un compuesto de la fórmula XIV: en la que los radicales y los símbolos tienen los significados que fueron definidos más arriba para un compuesto de la fórmula I , haciendo reaccionar un compuesto de la fórmula XVI : en la que Hal representa halógeno, de preferencia cloro, y los demás radicales y símbolos tienen los significados definidos más atrás para un compuesto de la fórmula I , con 1 -metilpiperazina . El material de partida , el compuesto de la fórmula XVI en la que Hal representa halógeno y los demás radicales y símbolos tienen los significados que fueron definidos aqu í con anterioridad para un compuesto de la fórmula I , pueden ser obtenidos mediante el siguiente proceso. Primeramente se hace reaccionar la amina libre de la fórmula Vi l , en la que R y R2 son ambos hidrógeno, con un agente que introduzca un grupo protector, bajo condiciones que efectúen el reemplazo selectivo de un átomo de hidrógeno de una amina primaria , en presencia de un grupo amino secundario, seguido por oxidación del átomo de nitrógeno del piridilo, por ejemplo, con MCPBA, lo que da el N-óxido de la fórmula XV: en la que Ri y R2 son ambos hidrógeno; PG denota un grupo protector, y los demás símbolos tienen los significados que fueron definidos aquí con anterioridad para un compuesto de la fórmula I . Dicho N-óxido de la fórmula XV es sometido primeramente a condiciones que eliminen el grupo protector PG, y posteriormente se hace reaccionar la amina libre obtenida, con ácido 4-halometilbenzoico, lo que da el compuesto de la fórmula XVI , en la que Hal representa halógeno y los demás radicales y símbolos íienen los significados definidos más atrás para un compuesto de la fórmula En otra modalidad, la presente invención provee un compuesto de la fórmula XVI I I : (XVIII) en la que los radicales y símbolos tienen los significados definidos aquí con anterioridad para un compuesto de la fórmula I , haciendo reaccionar un compuesto de la fórmula I I : en la que Hal representa halógeno, de preferencia cloro, y los demás radicales y símbolos tienen los significados definidos aquí con anterioridad para un compuesto de la fórmula I , con el derivado de piperazina de la fórmula XVI I : Finalmente, la presente ¡nvención se refiere a la preparación de u n compuesto de la fórmula XX: en la que C* denota carbono que tiene la distribución natural de isótopos o, alternativamente , que está marcado por enriquecimiento de un isótopo de carbono , por ejemplo 1 3C, y N* denota nitrógeno que tiene la distribución natural de isótopos o, alternativamente, que está marcado mediante enriquecimiento de un isótopo de nitrógeno, por ejemplo, 1 5N ; que comprende hacer reaccionar el derivado de piridina de la fórmula XXI : en la que tanto R6 como R7 son alquilo de 1 a 4 átomos de carbono, y los demás símbolos tienen los significados que fueron definidos más arriba para un compuesto de la fórmula XX, con el derivado de fenilguanidina de la fórmula XXI I : en la que R8 y R9 son ambos hidrógeno, y los demás símbolos tienen los significados que fueron definidos aqu í con anterioridad para un compuesto de la fórmula XX. El derivado de piridina de la fórmula XXI , en la que tanto R6 como R7 son alquilo de 1 a 4 átomos de carbono , y los demás símbolos tienen los significados defi nidos aqu í más atrás para un compuesto de la fórmula XX , pueden ser preparados a partir de la 3-trimetilestanílpirídina , y haciendo reaccionar dicho compuesto con el haiogenuro de acetilo de la fórmula XXIV: ,C cß "H w (XXSV) en la que Hal denota halógeno y los demás símbolos tienen los significados definidos aquí con anterioridad para un compuesto de la fórmula XX; lo que da por resultado la acetilpiridina de la fórmula XXI I I : (XXIII) en la que los símbolos tienen los significados que fueron definidos aqu í con anterioridad para u n compuesto de la fórmula XX. Se hace reaccionar adicionalmente dicha acetílpiridina de la fórmula XXI I I con di(alquil de 1 a 4 átomos de carbono)formamida-di(alquil de 1 a 4 átomos de carbono)acetal , lo que da por resultado el derivado deseado de piridi na de la fórmula XX I , en la q ue tanto R6 como R7 son alquilo de 1 a 4 átomos de carbono , y los demás símbolos tienen los significados definidos aqu í con anterioridad para un compuesto de la fórmula XX. El derivado de aminofenilguanidi na de la fórmula XXI I , en la que tanto R8 como R9 son hidrógeno, y los demás símbolos tienen los significados que fueron definidos aqu í con anterioridad para un compuesto de la fórmula XX, pueden ser preparados a partir del derivado de tiourea de la fórmula XXV: en la que tanto R8 como R9 son hidrógeno, y los demás símbolos tienen los significados definidos aquí con anterioridad para un compuesto de la fórmula XX; y hacer reaccionar dicho derivado de tiourea de la fórmula XXV con un reactivo que cambie un átomo de hidrógeno de cada grupo amino por un grupo protector, por ejemplo, terbutiloxicarbonilo, lo que da por resultado un derivado de tiourea de la fórmula XXV en el que tanto R8 como Rg representan un grupo protector. Se hace reaccionar entonces dicho derivado de tiourea protegido de la fórmula XXV con 2-metil-5-nitroanilina para dar el derivado de nitrofenilguanidina de la fórmula XXVI : en la que tanto R8 como Rg representan un grupo protector, y los demás símbolos tienen los significados que fueron definidos aquí con anterioridad para un compuesto de la fórmula XX. La separación de ambos grupos protectores, seguida por la reducción de la función nitro, da por resultado, finalmente, el derivado de aminofenilguanidina de la fórmula XXI I en la que tanto R9 como R9 son hidrógeno, y los demás símbolos tienen los significados definidos aquí anteriormente para un compuesto de la fórmula XX. Todos los materiales de partida restantes son conocidos, pueden ser preparados de acuerdo con procesos conocidos o pueden ser obtenidos comercialmente; en particular, pueden ser preparados usando procesos como los que se describen en los ejemplos. Todos los pasos de proceso descritos pueden ser llevados a cabo bajo condiciones de reacción conocidas, de preferencia bajo las que se mencionan específicamente, en ausencia de solventes o diluyentes o, usualmente, en presencia de ellos, de preferencia aquellos que sean inertes para los reactivos usados y puedan disolverlos; en ausencia o presencia de catalizadores, agentes de condensación o agentes neutralizantes, por ejemplo, cambiadores de iones, típicamente cambiadores de cationes, por ejemplo, en la forma H + , dependiendo del tipo de reacción y/o de los reactivos, a una temperatura reducida , normal o elevada, por ejemplo, en la escala de -100°C a alrededor de 190°C, de preferencia de alrededor de -80°C a alrededor de 150°C, por ejemplo, a -80 hasta -60°C, a la temperatura ambiente, a -20 hasta 40°C, o al punto de ebullición del solvente usado, bajo presión atmosférica o en un recipiente cerrado; cuando sea apropiado a presión , y/o en una atmósfera inerte, por ejemplo, bajo argón o nitrógeno. Los solventes de los que se pueden seleccionar los que son adecuados para la reacción en cuestión incluyen, por ejemplo: agua , esteres, típicamente alcanoatos inferiores de alquilo inferior, por ejemplo, acetato de dietílo; éteres, típicamente éteres alifáticos, por ejemplo, éter dietílico; o éteres cíclicos, por ejemplo, tetrahídrofurano; hidrocarburos aromáticos líquidos, típicamente benceno o tolueno; alcoholes, típicamente metanol, etanol o 1 - o 2-propanol; nitrilos, típicamente acetonitrilo; hidrocarburos halogenados, típicamente diclorometano; amidas de ácido, típicamente dimetilformamida; bases, típicamente bases nitrogenadas heterocíclicas, por ejemplo, pirldína; ácidos carboxílicos, típicamente ácidos alcancarboxílicos inferiores, por ejemplo, ácido acético; anhídridos de ácido carboxílico, típicamente anhídridos de ácido alcano inferior, por ejemplo, anhídrido acético; hidrocarburos cíclicos, lineales o ramificados, típicamente ciciohexano, hexano o isopentano; o mezclas de esos solventes, por ejemplo, soluciones acuosas, a menos que se señale de otra manera en la descripción del proceso . Dichas mezclas de solventes también pueden ser usadas en el procesamiento, por ejemplo , por medio de cromatografía o distribución . Se pueden preparar los compuestos de la invención como sales de adición de ácido aceptables para uso farmacéutico , haciendo reaccionar la forma de base libre de los compuestos con ácidos inorgánicos u orgánicos aceptables para uso farmacéutico. Alternativamente se puede preparar una sal de adición de ácido, aceptable para uso farmacéutico , de un compuesto de la invención , haciendo reaccionar la forma de ácido libre del compuesto con una base inorgánica u orgánica aceptable para uso farmacéutico . Alternativamente se pueden preparar las formas de sal de los compuestos de la invención usando las sales de los materiales de partida o de intermediarios. Se pueden preparar las formas de ácido libre o de base libre de los compuestos de la ¡nvención a partir de la forma de sal de adición de base o la forma de sal de adición de ácido correspondientes, respectivamente. Por ejemplo, se puede convertir un compuesto de la invención en forma de la sal de adición de ácido a la base libre correspondiente tratando con una base adecuada (por ejemplo, solución de hidróxido de amonio , hidróxido de sodio y similares). Se puede convertir un compuesto de la invención en forma de una sal de adición de base a la forma ácido libre correspondiente , con un ácido adecuado (por ejemplo, ácido clorhídrico, etc. ). Se pueden preparar los compuestos de la invención en forma no oxidada, a partir de los N-óxidos de los compuestos de la invención , tratando con un agente reductor (por ejemplo: azufre, dióxido de azufre, trifenilfosfina, borohidruro de litio, borohidruro de sodio, tricloruro de fósforo, tribromuro de fósforo o similares) en un solvente orgánico inerte adecuado (por ejemplo, acetonítrilo, etanol , dioxano acuoso, o similares) a temperaturas de 0 a 80°C. Se pueden preparar los derivados profármaco de los compuestos de la invención mediante métodos conocidos para quienes tengan experiencia en la materia (por ejemplo, para más detalles, véase Saulnier y coautores (1994), Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters, tomo 4, página 1985). Por ejemplo, se pueden preparar los profármacos apropiados haciendo reaccionar un compuesto de la invención no formado a derivado, con un agente carbamilante adecuado (por ejemplo, 1 , 1 -aciloxialquil-carbanocloridato, para-nitrofenilcarbonato, o similares). Se pueden formar los derivados protegidos de los compuestos de la ¡nvención por medios conocidos para quienes tengan experiencia en la materia. Una descripción detallada de las técnicas aplicables a la creación de grupos protectores, y su eliminación, puede encontrarse en T. W. Greene, Protecting Groups in Organic Chemistry, 3a. edición, John Wiley and Sons, Inc., 1999. Se pueden preparar convenientemente los compuestos de la presente invención, o se los puede formar durante el proceso de la invención , como solvatos (por ejemplo, como hidratos). Los hidratos de los compuestos de la presente invención pueden ser preparados convenientemente mediante recristalización en una mezcla de solventes acuosa/orgánica, usando solventes orgánicos tales como dioxina, tetrahidrofurano o metanol . Se pueden preparar los compuestos de la invención como sus estereoisómeros individuales, haciendo reaccionar una mezcla racémica del compuesto con un agente de resolución ópticamente activo, para formar un par de compuestos diastereoisoméricos; separando los diastereómeros y recuperando los enantiómeros ópticamente puros. Si bien se puede llevar a cabo la resolución de los enantiómeros usando derivados diasteroméricos covalentes de los compuestos de la invención , se prefieren los complejos disociables (por ejemplo, las sales diasteroméricas cristalinas). Los diastereómeros tienen propiedades físicas distintas (por ejemplo, puntos de fusión, puntos de ebullición, solubilidades, reactividad, etc.), y pueden ser separados fácilmente aprovechando estas diferencias. Se pueden separar los diastereómeros mediante cromatografía o, de preferencia, mediante técnicas de separación/ resolución basadas en las diferencias en la solubilidad. Luego se recupera el enantiómero ópticamente puro, junto con el agente de resolución, mediante cualquier medio práctico que no dé por resultado la racemización. Una descripción más detallada de las técnicas aplicables a la resolución de los estereoisómeros de los compuestos a partir de su mezcla racémica, puede encontrarse en Jean Jacques, André Collet, Samuel H . Wilen Enantiomers, Racemates and Resolutions, John Wiley and Sons, Inc. , 1981 .

Se puede encontrar en los ejemplos un ejemplo detallado de la síntesis del compuesto descrito en lo q ue antecede. En la modalidad preferida , los compuestos descritos arriba pueden ser preparados de acuerdo con , o en analog ía con , los procesos y los pasos de proceso definidos en los ejemplos . Ejemplos Se ejemplifica adicionalmente la presente invención, pero sin restricciones, mediante los siguientes ejemplos q ue ilustran la preparación de los compuestos descritos en lo que antecede. Abreviaturas DMAP = dimetilaminopiridina DMSO = sulfóxido de dímetílo MCPBA = ácido m-cloroperbenzoico MeOH = metanol RMN = resonancia magnética nuclear TA = temperatura ambiente TH F = tetrahidrofurano TLC = cromatografía de capa delgada peso/vol = peso por volumen Eiem plo 1 : Mesilato de 4-(4-pnetill°piperazi¡t?°1l °ilmeftip-N-ff4°?ppiTt5i°3° (í4°piridán--3°il°f2°14C1pirlmñdin°2°S lami no|°fe?r? il-berii2amid.a Se añade 3 mL (27 mmoles) de 1 -metilpiperazina a una solución 335 mg (0.71 mmol ) de la sal clorhidrato de 4-clorometil-N- {4-metil-3-[4-(1 -oxi-piridin-3-il )-[2-14C]pirimidin-2-ilamino]-fen¡l}-benz-amida (paso 1 .5) en 20 mL de etanol , y se agita la mezcla resultante durante cinco horas a 45°C. Se enfría la suspensión hasta la TA y se añade 4.4 mL de agua, seguidos por 130 µL de hidróxido de sodio al 20 por ciento en peso/vol. Se agita la suspensión resultante durante 30 minutos a 90°C; luego se enfría a la TA, se centrífuga y se elimina el solvente acuoso. Se lavan adicionalmente los cristales color crudo dos veces con agua y se secan al alto vacío. Finalmente se purifica el sólido mediante cromatografía rápida sobre gel de sílice, eluyendo con diclorometano:MeOH 90:10 y 1 por ciento de amoniaco, para dar el intermediario, como un aceite amarillo. Finalmente se disuelve el intermediario obtenido en 4 mL de MeOH, se añaden 21 µL de ácido metansulfónico y se agita la solución obtenida. Se cristaliza el producto obtenido de la solución, sembrando con producto de referencia inactivo, para dar el producto del título, con actividad específica de 1.73 GBq/mmol. 1H RMN 400 MHz (DMSO-d6) d: 2.21 (s, 3H), 2.3 (s, 3H), 2.8 (s, 3H), 2.85-3.1 (m, 4H), 3.25-3.4 (m, 4H), 3.62 (s ancha, 3H), 7.18 (d, J = 8 Hz, 1H), 7.38-7.51 (m, 4H), 7.91 (d, 7.6 Hz, 1H); 8.5 (d, J = 1.4 Hz, 1H), 8.45 (d, J = 7.8, 1H), 8.45 (d, J = 7.8, 1H), 8.49 (d, J = 5 Hz, 1H); 8.65 (dd, J = 1.5 y 4.6 Hz, 1H), 8.95 (s, 1H), 9.22 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 9.29 (s ancha, 1H), 10.12 (s, 1H). MS: (MH + , 496.4). Paso 1.1: [T14CTlc¡anamBda Se coloca 1.18 g (6 mmoles, 10.4 GBq, 1.79 GBq/mmol) de [14C]carbonato de bario en un tubo cilindrico de cuarzo y vidrio, y se calienta a 800°C mientras se hace pasar a través de él una corriente moderada de amoniaco gaseoso . Después de tres horas se deja enfriar el producto [14C]cianamida de bario cruda hasta la temperatura ambiente y se detiene la corriente de amoniaco . Se suspende 1 .063 g (6 mmoles) de [14C]cianamida de bario cruda en 1 0 mL de agua y se disuelve mediante tratamiento ultrasónico. Se añade cuidadosamente , a gotas, 2.6 mL de ácido sulfúrico 2M , con agitación , hasta un pH de 5.5. Se elimina el agua a 60°C y 23 Torr. Se enfría el residuo con hielo seco/acetona y se liofiliza el agua residual para dar u n producto sólido cristalino. Se recoge éste en éter dietílico y se filtra para eliminar el residuo ¡nsoluble . Se retira el éter y se disuelve en terbutanol el residuo obtenido. Paso 1 .2 : N-(2-metil-5-n¡tro-fenin-r14C1quan idina A una solución agitada de 1 .52 g ( 1 9 mmoles) de 2-metil-4-nitroanílina en terbutanol , a 40° C , se añade 5 mL de ácido clorh ídrico 4M en dioxano, para dar una suspensión amarilla . Se elimina el solvente y se añade el residuo seco a una solución de [14C]cianamída cruda en 5 mL de terbutanol , para dar una suspensión amarilla . Después de calentar a 1 00°C durante una hora se obtiene una solución . Después de otras 5 horas se elimina el solvente a 45°C y se trata el residuo con 1 0 mL de hidróxido de sodio al 3 por ciento en peso/vol y se extrae con 3 x 30 mL de diclorometano. Se combinan las fases orgánicas y se evaporan , y se cromatografía sobre gel de sílice, eluyendo con 75:25:0.5:0.5 de diclorometano:MeO H :agua:ácido acético, para dar el producto del título, 6.07 GBq .

Paso 1.3: N°(5°amino°2°np?etil°fenil) 14ClquaLmidi?p?a Se agita bajo 1 atmósfera de hidrógeno gaseoso, a la temperatura ambiente, durante 4.5 horas, una mezcla de 760 mg (3.91 mmoles) de N-(2-metil-5-nitro-fenil)[14C]guanina (paso 1.2) en 25 mL de n-butanol que contiene 125 mg de Pd/C al 10 por ciento. Se filtra la mezcla a través de Hyflo (Celite), se lava con otra porción de 3 x 10 mL de n-butanol, se combina y se elimina el n-butanol en un evaporador giratorio a 45°C para dar el producto crudo como un aceite incoloro. Radio TLC 80:25:0.5:0.5 de diclorometano: MeOH:agua:ácido acético, sobre gel de sílice, placas F254, RF= 0.34; actividad total: 3.7 Gbq. Paso 1.4: 4°meti8°N*3*°(4°-piridit?°3--i¡ 2°14C1pirlmi ñn-2-8?°bence???° H.3°diam5na Se calienta al reflujo (130°C) durante 3.5 horas, una solución de 476 mg (2.89 mmoles) de N-(5-amíno-2-metil-fenil)-[14C]guanidina cruda (paso 1.4) y 509 mg (2.89 mmoles) de 3-dimetilamino-l-piridin-3-il-propenona en 30 mL de n-butanol. La eliminación del solvente y la purificación mediante cromatografía rápida, eluyendo con 2:98 de pentano:acetofenona, da el producto del título como una espuma amarilla. Radio TLC, 2:98 de pentano:acetona sobre placas F254 de gel de sílice, RF = 0.5. Actividad total: 2.3 GBq. Paso 1.5: 4-clorometil-NI 4-metil°3--(4°pJrádirt?°3°i8°r2°14Clp5írom5dap° 2-»lam¡no)-feniil-bemzamBda A una solución de 655 mg (2.36 mmoles) de 4-metil-N*3*-(4-píridin-3-il-[2-14C]pirimidin-2-il)-bencen-1 ,3-diamina (paso 1.4) en 20 mL de THF seco, bajo argón, a 0°C, se añade a gotas una solución de 2.646 g (14 mmoles) de cloruro de 4-(clorometíl)-benzoílo en 10 mL de THF, y se agita la mezcla correspondiente a la TA durante 16 horas. Se centrifuga la suspensión resultante, se lava con éter el producto precipitado, se vuelve a centrifugar, se elimina el éter y se seca el sólido para producir la sal clorhidrato del producto del título. Eiemplo 2: Clorhidrato de 4-(piperazíp 1 Ji etiy N T4-m; : S-! pirídin-3-iir2-14C1pipmidin-2-ilamino)-fenip-benzarr?ida A 200.5 mg (0.536 mmol, 486.8 MBq) del éster de ácido 4-{4-[4-metil-3-(4-pírid¡n-3-il-pirimidin-2-¡lamino)-fen¡l[14C]carbamoil]-bencil}-piperazin-1-carboxílico (paso 2.3), se añade HCl 3M en 20 mL de MeOH. Después de 30 minutos se añaden otros 10 mL de HCl 3M en MeOH y se agita la reacción durante otros 60 minutos. Se filtra el producto con succión a través de un frito de vidrio y se lava primero con 5 mL de MeOH frío, seguido por 100 mL de acetato de etilo, y se deja secar al alto vacío, para dar el compuesto del título como cristales de color naranja. Paso 2.1] : Éster terbutílico del ácido 4-í4-bromQ°bencil)pnpe[razñr¡?-11 -carboxílico Se agita durante 90 minutos a la TA una mezcla de 4.94 g (26.5 mmoles) de N-boc-piperazina, 5.52 g (22 mmoles) de bromuro de p-bromo-bencilo y 6.4 g (46 mmoles) de K2CO3 en 50 mL de MeOH. Se filtra la mezcla a través de un frito de vidrio y se evapora el solvente. Se recoge el residuo en diclorometano, se filtra por segunda vez a través de un frito de vidrio y se lava con diclorometano. Se evapora el filtrado y se cromatografía el aceite incoloro crudo sobre gel de sílice, eluyendo con éter dietílico/n-hexano (10:90 a 50:50) para dar el producto del título como un sólido blanco. Paso 2.2: éster terbutílico del ácido 4°(4-F14Clcarboxó°lbe?p?cill)° piperazin-1 °carboxíüco Se añade a -78°C durante cuatro minutos, una solución de terbutil-lítio en 0.97 mL (1.46 mmol) de hexano, a 285 mg (0.8 mmol) de éster terbutílico del ácido 4-(4-bromo-bencil)-piperazin-carboxílíco (paso 2.1) en 5 mL de THF anhidro, y se agita la mezcla a -78°C durante 4 minutos. Se enfría el derivado de litio resultante a -192°C, se deja reaccionar con dióxido de dióxido de [14C]carbono generado por la adición de ácido sulfúrico concentrado a 122 mg (0.85 eq., 0.62 mmol, 1378 MBq) de [14C]carbonato de bario (Amersham Pharmacia Bíotech), y luego se calienta a -78°C y se agita durante 30 minutos. Se inactiva la reacción con 1 mL de MeOH a -78°C; luego se deja calentar hasta la temperatura ambiente. Se elimina al vacío el solvente y se añade cloruro de amonio saturado. Se extrae la mezcla con 3 x 15 mL de acetato de etilo, se combina y se seca sobre sulfato de sodio. La filtración y la eliminación del solvente dan el sólido blanco crudo. Se cromatografía el producto crudo sobre gel de sílice, eluyendo primero con éter dietílico, seguido por 10 por ciento de MeOH y 90 por ciento de éter dietílíco. Se combinan las fracciones, se evaporan en un evaporador giratorio, luego al alto vacío para dar el producto del título, como un sólido blanco.

Paso 2.3: éster terbutílico del ácido 4-(4 4°metió8-3°(4-pñ[r5rili??i"3° óll-pi?rimidin°2-ilamino) e?p?iir14C1carbamoip-benci¡>°piperazó?p?°1]° carboxílico A una solución agitada de 171.5 mg (0.536 mmol, 1114.26 MBq) de éster terbutílico del ácido 4-(4-[14C]carboxi-bencíl)piperazin-1-carboxílico (paso 2.2) en 5 mL de THF, se añade a la TA 332 µL (2.4 mmoles) de trietilamina, a gotas, seguida por la adición a gotas de 78 µL (1.0 mmol) de cloroformiato de isobutilo. Se agita la mezcla durante otros tres minutos, seguidos por la adición de 165 mg (1.0 mmoles) de 4-metil-N-3-(4-piridin-3-il-pirimid¡n-2-il)bencen-1 ,3-diamina. Después de 18 horas se evapora la solución y se somete el residuo a cromatografía rápida sobre gel de sílice, eluyendo primero con acetato de etilo, luego con 10 por ciento de MeOH/90 por ciento de acetato de etilo; a continuación con 35 por ciento de MeOH/65 por ciento de acetato de etilo, para aislar el producto del título, como un sólido amarillo claro. Eiemplo 3: 4-metii-iM*3<r°|f4-piridBn°3°il 2°14ClpiriiT8ñdin°2-i81)beo?ce?p? -11,3-dianra?na Se agita durante la noche, a la temperatura ambiente, una solución de 86 mg (0.18 mmol) de éster terbutílico del ácido (5-ter-butox¡carbon¡lam¡no-2-metil-fenil)-(4-piridin-3-il-[2- 4C]pir¡mid¡n-2-¡l)-carbámico (paso 3.2), y 463 mg (310 µL, 4.06 mmoles) de ácido trifluoroacético. Con base en un control incorporado en el proceso (RTLC, gel de sílice, CH2CI2:MeOH, 95:5), no se puede detectar material de partida. Se elimina el solvente al vacío y se distribuye el material crudo entre HCl acuoso 1N y cloruro de metileno. Después de volver a extraer la fase orgánica se combinan las fracciones acuosas acidas, se basifican con NaOH acuoso 2N y se extrae tres veces con cloruro de metileno. Después de lavar la fase orgánica con salmuera se seca la fase orgánica sobre sulfato de sodio y se evapora el solvente. Se purifican 48 mg del material crudo mediante cromatografía rápida (gel de sílice, cloruro de metileno:metanol, 98.5:1.5) para dar el producto del título. Actividad específica 1.934 GBq/mmol. MS: +cESI: 279.89 M + . 1H RMN (500.1 MHz (DMSO-d6) 2.08 (s, 3H), 4.88 (s, 2H), 6.35 (dd, 1H, J = 2 Hz, J = 7.9 Hz), 6.8 (d, 1H, J = 1.7 Hz), 6.80 (d, 1H, 8.1 Hz), 7.37 (d, 1H, 5.3 Hz), 7.55 (dd, 1H, J = 4.8 Hz, J = 8 Hz), 8.41 (m, 1H), 8.47 (d, 1H, J = 5.2 Hz), 8.67 (s, 1H), 8.70 (dd, 1H, J = 1.5 Hz, J = 4.9 Hz, 9.25 (d, 1H, J = 1.9 Hz). Paso 3.1: Éster terbutíióco del ácido (f5°(terbutoxBcarborañll°í4°(4° metSI-piperazin°1-ilmetil)-benzoin-amino>°2°metil°fe?nil)-(4°pn[rñdBrii° 3°il-r2-14Clpipmidip?°2°Sn°carbám5co. Después de la adición de 30 mg (0.24 mmol) de 4-dimetilaminopiridina a una suspensión de 120 mg (0.24 mmol) de 4-(4-metil-pipe razin- 1 -ilmetil )-N-[4-metil-3-(4-piridín-3-il[2-14C]p¡rimidin-2-ilamino)-fenil]-benzamida (ejemplo 1) y 265 mg (1.22 mmoles) de dicarbonato de díterbutilo en 2 mL de cloruro de metileno, bajo argón, a la temperatura ambiente, se forma una solución de color naranja que se agita a la TA durante la noche. Se elimina al vacío el solvente y se cromatografía el producto crudo sobre sílice, eluyendo con cloruro de metileno:metanol, 93:7. Se combinan las fracciones, se evapora en un evaporador giratorio, luego al alto vacío, para dar el producto del título. Paso 3.2: éster terbutílico del ácido (5°terbutoxicarbora?l]a?pp??i[]i?o°2° metil-fenil)°í4-piridin-3°ilf2°14C1pirimidira°2°?n)°carbámico. Se agita durante la noche, a la TA, una solución de 153 mg (0.22 mmol) de (5-{terbutoxicarbonil-[4-(4-metil-piperazín-1-ilmet¡l)-benzoil]amino}-2-metil-fenil)-(4-piridin-3-il-[2-14C]pirim¡din-2-¡l)-carbámíco (paso 3.1) y 53 mg (64 µL, 0.45 mmol) de 2-dietilaminoetilamína en 0.8 mL de THF. Con base en un control incorporado en el proceso (RTLC, gel de sílice, cloruro de metileno:metanol 95:5), se dosifican 159 mg (192 µL, 1.35 mmol) adicionales de 2-dietilaminoetilamina hasta que casi no se pueda detectar ningún material de partida. Después de eliminar el solvente al vacío, se purifica el producto crudo mediante cromatografía rápida (gel de sílice, cloruro de metileno:metanol, 98:2), para dar el producto del título. Ejem lo 4: 4-(4°me il-4°oxi-peperzin°1°iBr,p?etil)°M°f4-metL:?l°3°(4° piri din °3°iB-pirimidin-2°i lamino) -fenip-benzamida Se trata una solución de 414 mg (43.4 mCi, 1605.8 MBq) de 4- (4-metil-piperazin-1-ilmetil)-N-[4-metil-3-(4-piridin-3-il-[2-14C]pir¡rnidin -2-¡lamino)-fenil]-benzamida en 10 mL de diclorometano, con 260 mg (1.5 mmol) de MCPBA, a la temperatura ambiente, durante dos horas. Se separa por filtración el precipitado formado, se evapora el filtrado y se purifica el producto crudo mediante cromatografía rápida sobre gel de sílice, eluyendo con diclorometano:metanol, 70:35, para producir el producto del título como un sólido blanco. Se cristaliza el producto en etanol/acetato de etilo. 1H RMN 400 MHz (DMSO-d6) d: 2.21 (s, 3H), 2.78-2.89 (m, 4H), 3.01 (s, 3H), 3.28-3.38 (m, 4H), 3.6 (s, 2H), 7.18 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.38-7.51 (m, 5H), 7.89 (s, 1H), 7.91 (s, 1H), 8.03 (s, 1H), 8.45 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 8.49 (d, J = 5.4 Hz, 1H), 8.66 (dd, J = 2, 4.2 1H), 8.98 (s, 1H), 9.25 (d, J = 2, 1H), 10.2 (s, 1H). MS: (MH+ = 512). Eiemplo 5: N-f4-metin°3 4- 1°oxi°pir8din-3°i8)°r2°14C1pirB0ip?ódñm?-2° ilamino1fenil>-4-(4-meti8°p8perazi?p?°1l-ilmetil)°benza?rat?ñ a Se añade 2 mL (18 mmoles) de 1-metilpiperazina a una solución de 151 mg (0.34 mmol) de 4-clorometil-N-{4-metíl-3-[4-(1-oxí-piridin-3-il)- [2-14C]pirímid¡n-2-ilamino]fen¡l}-benzamida (paso 5.2) en 20 mL de etanol, y se agita la mezcla resultante durante 1 hora a 60°C. Se evapora la solución y se purifica el residuo mediante cromatografía rápida sobre gel de sílice, eluyendo con diclorometano:metanol, 90:10 y 1 por ciento de amoniaco, para producir un aceite amarillo. Se cristaliza el aceite en diclorometano:metanol para dar el producto N-óxido como un sólido cristalino, 175.3 Mbq. 1H RMN 400 MHz (DMSO-d6) d: 2.15 (s, 3H), 2.21 (s, 3H), 2.25-2.42 (m, 4H), 3.28-3.34 (m, 4H), 3.52 (s, 2H), 7.19 (d, J = 9. Hz, 1H), 7.38-7.2 (m, 3H), 7.45-7.52 (m, 2H), 7.88 (s, 1H), 7.89 (s, 1H), 7.99-8.2 (m, 2H), 8.28 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 8.5 (d, J = 5.4 Hz, 1H), 8.8 (2, 1H), 9.2 (s, 1H), 10.1 (s, 1H).

Paso 5.1: Éster terbutílico del ácido (4-metil-3 4-(1-oxii°pirídi?p?-3-iP" ri-14Clpirimidin-2-ila ino1°fenil)°carbámico. Se trata una suspensión de 286 mg (1.03 mmol, 1890 MBq) de 4-metil-N-3-{4-piridin-3-il[2-14C]pirimidin-2-il)bencen-1,3-diamina (ejemplo 3) en 10 mL de THF, con 467 mg (2.33 mmoles) de dicarbonato de diterbutilo y cantidades catalíticas de DMAP, y se calienta al reflujo durante dos horas. Se elimina al vacío el solvente y se purifica el producto crudo mediante cromatografía sobre sílice, eluyendo con diclorometano:metanol, 95:5, para producir el producto protegido, como una espuma amarilla. Se disuelve el compuesto en diclorometano, se enfría a -10°C, se trata con 285 mg (1.65 mmol) de MCPBA y se agita a 0°C durante cuatro horas. Se filtra el precipitado, se evapora el solvente, se purifica adicionalmente el producto crudo mediante cromatografía rápida sobre sílice, eluyendo con diclorometano:metanol, 95:5, para producir el producto del título como una espuma amarilla. Paso 5.2: 4-cBorometBB-N-{4-metiB"3 4 1"?xi°PÍrídirt)"3°igH2°14C1° pirimidin-2°ilamino1fenil}-benzami a Se añade 4 mL de una solución 4N de ácido clorhídrico, a una suspensión de 187 mg (0.48 mmol) de éster terbutílico de ácido {4-metil-3-[4-(1-oxipirídin-3-¡l)[2-14C]pirim¡din-2-¡lamino]-fenil}-carbámi-co (paso 5.1) en 10 mL de THF. Se calienta a 70°C la mezcla resultante durante una hora. Se evapora la mezcla enfriada para dar un sólido amarillo que se purifica mediante cromatografía rápida sobre sílice, eluyendo con diclorometano:metanol, 75:35, para dar cristales amarillos. Se suspenden los cristales en 10 mL de THF, se tratan con 1 gota de hidróxido de amonio acuoso al 25 por ciento, y se somete a ultrasonido la mezcla resultante. Se filtra la suspensión y se evapora el solvente para producir una espuma amarilla. Se disuelve esta espuma en 10 mL de THF, se trata a gotas con una solución de 149 mg (0.8 mmol) de cloruro de 4-(clorometil)-benzoílo en 2 mL de THF, y se agita la mezcla correspondiente, a la temperatura ambiente, durante dos horas. Se centrifuga la suspensión resultante, se lava adicionalmente con éter el producto precipitado, se vuelve a centrifugar, se elimina el éter y se seca el sólido para dar el producto del título, como cristales pardos. Eiemplo 6: 4-(4-met¡l-r2.2.3.3.5.5.6.6-D81plpe?raz¡?p?-1-¡lmTltin °N-r4-metil"3°(4-pirid8n-3°il-p¡rimBdin-2-iBamino)fen5l]-benzamida. Se disuelve en 50 mL de dimetilformamida, 3.57 g (8.30 mmoles) de 4-clorometil-N-[4-metíl-3-(4-pir¡din-3-il-p¡rimidin-2-ilamino)-fenil]-benzamida, obtenible de acuerdo con el ejemplo 1, ufilizando materiales de partida no marcados). Se añade a esta solución 5.74 g (41.5 mmoles) de carbonato de potasio y 815 mg (7.54 mmoles) de N-metilpiperazin-2,2,3,3,5,5,6,6-d8 (Isotec, Inc., de Miamísburg, OH). Se calienta la mezcla a 45-50°C durante aproximadamente 12-14 horas. Se vigila la reacción medíante TLC usando un sistema solvente que consiste de DCM/EtOAc/MeOH/ NH4OH (25 por ciento) (60/10/10/2), siendo la Rf del producto aproximadamente 0.30. Se elimina al vacío la DMF y se tritura el residuo con agua. Este lavado con agua produce un residuo muy gomoso, que se disuelve en acetato de etilo. Se concentra al vacío la fase acuosa y se disuelve su residuo en acetato de etilo. Se purifica el material combinado cuatro veces usando cromatografía rápida, utilizando el mismo sistema solvente que se describió más arriba. Se coloca el producto en un frasco, luego se coloca en un aparato secador Abderhalden al vacío (0.01 mm de mercurio) a una temperatura de secado de 65°C (metanol al reflujo). MS ES+ 502.4 (100 por ciento). [M + H] + , 503.5 (40 por ciento), 504.5 (4 por ciento). 1H RMN (DMSO-d6) d: 2.1 (3H, s), 2.4 (3H, s), 3.6 (2H, s), 7.2 (1H, d), 7.5 (3H, m), 7.8 (2H, d), 8.1 (1H, s), 8.5 (2H, m), 8.8 (1H, s), 9.0 (1H, s), 9.2 (1H, s), 10.1 (1H, s). Eiemplo 7: 4-rnet¡n-N-(4-piridin-3-¡¡ H.3-15N7. 2.4.5-13CTpó[rñpp?ñd5?p?-2 -i H -ben ce n-1, 3-d ¡amina. Se calienta al reflujo (130°C) durante cinco horas, una solución de 157 mg (0.96 mmol) de N-(5-amino-2-metil-fenil)-[13C,15N2]guanídina (paso 7.7) y 169 mg (0.96 mmol) de 3-dimetilamino-1-piridin-3-M[1 ,2-13C2]propenona (paso 7.3). La eliminación del solvente y la purificación mediante cromatografía rápida, eluyendo con 5:95 de pentano:acetona, da el producto del título puro, como un sólido amarillo. 1H RMN 400 MHz (CDCl) d: 9.14 (1H, s, ArH), 8.73 (1H, d, J4, ArH), 8.50 (1H, d octeto J7, 1.2, ArH), 8.37 (1H, m, ArH), 7.70 (1H, s, NH), 7.45 (1H, dd, J8, 5), 7.17 (1H, dm, J168, ArH), 7.03-6.99 (2H, m, ArH), 6.46 (1H, dd, J8, 1.2, ArH), 2.27 (3H, s, CH3). MS (c+ESI): 283.3 (100 por ciento [M + H]+, 284.4 (15%).

Paso 7.1: 3°trimetilesta?p?anil-pirídina Se coloca en un matraz de dos cuellos 4 g (25.3 mmoles) de 3-bromopíridina, seguidos por 40 mL de éter dietílico, bajo nitrógeno. Se enfría la solución a -78°C, después de lo cual se añade 1.5 M de n-butil-litio en 20 mL (30.4 mmoles) de hexanos. Se agita la solución amarilla resultante durante 10 minutos, después de lo cual se añade una solución de 5.04 (25.3 mmoles) de cloruro de trimetilestaño en 2 mL de éter dietílico. Se agita la solución resultante a -78°C durante 20 minutos; luego se deja calentar a la TA lentamente durante un periodo de una hora. Se divide la solución entre 50 mL de hexano y 100 mL de agua; se sacude y se separa la capa orgánica. Se extrae la fase acuosa otras dos veces con 50 mL de hexano, se combinan las fases orgánicas y se lavan con 100 mL de agua. Se seca la fase de hexano sobre sulfato de sodio, se filtra y se evapora el filtrado para dar un aceite crudo que se hace pasar a través de una columna de gel de sílice, eluyendo con 9:1 de hexano:acetato de etilo, y se recogen las fracciones del producto. Se combinan las fracciones, se evaporan para dar un aceite amarillo claro que se purifica adicionalmente medíante destilación en un horno Kugeirohr, para dar el producto del título, que se destila a 50 mbar, 100°C, como aceite incoloro. Paso 7.2: 1°pirñdin°3°i¡-r13C?1etanona Se coloca en una ampolla de 30 mL 1.83 g (7.56 mmoles) de 3-trimetilestanilpiridina (paso 7.1), 0.67 g (8.32 mmoles) de cloruro de [13C2]acetilo recién destilado, 0.3 g (0.44 mmol) de PdCI2(PPt3)2 y 20 mL de benceno seco. Se sella la ampolla y se la coloca en un baño de aceite a 95°C durante la noche. Se abre la ampolla y se eliminan los contenidos y se divide entre 30 mL de agua y 30 mL de acetato de etilo, y se sacude. Se separa la fase orgánica y se vuelve a extraer la fase acuosa otras dos veces con 2 x 30 mL de acetato de etilo. Se combinan las fases orgánicas y se lavan con 30 L de agua, y se secan sobre sulfato de sodio, se filtran y se evapora cuidadosamente el filtrado. Se purifica el aceite crudo sobre gel de sílice, eluyendo con 1:1 de hexano:acetato de etilo, para dar el producto del título, después de liofílizacíón cuidadosa. Paso 7.3: (E/Z)-3-dimetillamino-1°piridin°3-ill°í1,2°13C2lprope?n?oíp?a Se calienta a 100°C durante la noche, en ampolla sellada, tanto 400 mg (4.06 mmoles) de 1-piridin-3-il-[13C2)etanona (paso 7.2) como 628 mg (5.28 mmoles) de N,N-dimetilformamida-dimetilacetal. Se purifica el producto crudo mediante cromatografía sobre gel de sílice, eluyendo con 9:1 de diclorometano:metanol, para dar el producto del título, como cristales amarillos. Paso 7.4: Éster terbutílico deB ácido r13C.15M?ltiourea°M.N'° dicarboxílico Se añade a una suspensión de 1.18 g (29.61 mmoles) de hidruro de sodio (dispersión al 60 por ciento en aceite mineral) en 50 mL de THF seco, a 0°C, bajo argón, a gotas, una solución de 500 mg (6.58 mmoles) de [13C, 15N2]tiourea, obtenida de Aldrich Chem. Co., en 82 mL de THF seco. Después que se completa la adición se agita la solución durante cinco minutos, seguida por la adición de 3.16 g (14.48 mmoles) de dicarbonato de diterbutilo y se agita la solución correspondiente durante una hora. Se añade a gotas una solución saturada de 13 mL de bicarbonato de sodio, seguida por 230 mL de agua. Se extrae el producto en 3 x 150 mL de acetato de etilo, se combinan las fases orgánicas, se lavan con salmuera y se secan sobre sulfato de sodio, se filtran y se evapora el filtrado para dar un producto crudo, como un aceite. Paso 7.5: Éster terbutíBico del ácido N- 2°metBD°5°(p?ñtro°fe?p)ñni) 13C. 15N?1iquanidin-N-N'-dicarboxíB¡co Se añade a una solución agitada, color naranja, de 2.35 g (6.58 mmoles) del éster terbutílico del ácido [13C, 15N2]tiourea-N,N'-dicarboxílico crudo, 1.00 g (6.58 mmoles) de 2-metíl-5-nítroanilina, 3.0 mL (21.71 mmoles) de trietílamina, en DMF a 0°C, 1.97 g (7.24 mmoles) de cloruro de mercurio II sólido. Después de 15 minutos de agitar a la temperatura ambiente, se añade 50 mL de acetato de etilo y se filtra la mezcla a través de Hyflo (Celite). Se lava con 50 mL de agua la solución de acetato de etilo, luego con 50 mL de salmuera y se seca sobre sulfato de sodio. Se separa por filtración el agente secador y se evapora el filtrado para dar un aceite que se purifica mediante cromatografía rápida sobre gel de sílice, eluyendo primero con hexano al 100 por ciento, luego con 90:10 de hexano. acetato de etilo, y a continuación con 80:20 de hexano:acetato de etilo, para dar el producto del título. Paso 7: N°(2°metil°5°nitro°fenil)-í15tM?.13ClguapBdi[p?a Se agita a la temperatura ambiente durante una hora una solución de 445 mg (1.13 mmol) de éster terbutílico del ácido N-(2-metil-5-nítro-fenil)-[13C, 15N2]guanidin-N,N'-carboxílico (paso 7.5) en 9 mL de ácido trifluoroacético y 9 mL de diclorometano (1:1). Se añade 50 mL de hidróxido de sodio 2M y se extrae la solución amarilla en 3 x 30 mL de acetato de etilo, se combina y se lava con agua. Se seca la fase orgánica sobre sulfato de sodio, se filtra y se evapora el filtrado para producir un aceite amarillo que se purifica mediante cromatografía rápida sobre gel de sílice normal, eluyendo con una mezcla 90:10:0.5:0.5 de diclorometano:metanol:agua:ácido acético, para dar el producto del título. Paso 7.7: N°(5-amino-2°meti!°fenil])-r15N7.13C1 quamBdina Se agita bajo 1 atmósfera de gas hidrógeno, a la temperatura ambiente, durante 16 horas, una mezcla de 121 mg (0.62 mmoles) de N-(2-metil-5-nitro-fenil)[13C, 15N2]guanidina en 3 mL de n-butanol, que contiene 12 mg de Pd al 10 por ciento/C. Se añaden otros 12 mg de Pd/C al 10 por ciento, y se agita la mezcla durante otras 16 horas. Se filtra la mezcla a través de Hyflo (Celite), se lava con otras 3 porciones de 2 mL de n-butanol, y se elimina el n-butanol en un evaporador giratorio, para dar el producto crudo del título.

Claims

RE1VI N DJCAC1QNES Un compuesto de la fórmula I : en la que tanto R-, como R2 son hidrógeno y C* denota carbono que está marcado mediante enriquecimiento de un isótopo de carbono 14C . 2. Un método para la preparación de la sal mesilato de un compuesto de la fórmula I : en la que tanto Ri como R2 son hidrógeno y C* denota carbono que tiene la distribución natu ral de isótopos, o que está marcado por enriquecimiento de un isótopo de carbono, que se prepara haciendo reaccionar 1 -metilpiperazina con un compuesto de la fórmula I I : en la que Hal representa halógeno, y los demás radicales y símbolos tienen los significados que fueron definidos más atrás para un compuesto de la fórmula I . 3. Un compuesto de la fórmula VI II : en la que R5 es hidrógeno o alquilo de 1 a 4 átomos de carbono, y C* denota carbono que está marcado mediante enriquecimiento del isótopo de carbono 4C. 4. Un método para la preparación de un compuesto de la fórmula VI I I : (VIII) en la que R5 es hidrógeno o alquilo de 1 a 4 átomos de carbono y C* denota carbono que tiene la distribución natu ral de isótopos o, alternativamente, que está marcado por en riquecimiento de un isótopo de carbono , que se obtiene mediante reacción de un compuesto de la fórmula X en la que R5 es un grupo protector o alquilo de 1 a 4 átomos de carbono y C* denota carbono que tiene la distribución natural de isótopos , o que está marcado por enriquecimiento de un isótopo de carbono con un compuesto de la fórmula XI : después de lo cual se desprende del grupo protector R5, en caso de que R5 constituya un grupo protector. 5. Un compuesto de la fórmula Xl l l : en la q ue tanto R1 como R2 son hidrógeno y C* denota carbono que está ma rcado por enriquecimiento del isótopo de carbono 14C. 6. Un método para la preparación de un compuesto de la fórmula Xl l l : en la que tanto R^ como R2 son hidrógeno y C* denota carbono que tiene la distribución natural de isótopos o que está marcado por enriquecimiento de un isótopo de carbono, mediante la oxidación de un compuesto de la fórmula I : en la que tanto R-i como R2 son hidrógeno y C* denota carbono que tiene la distribución natural de isótopos o que está marcado mediante enriquecimiento de un isótopo de carbono . 7. Un compuesto de la fórmula XIV: en la que tanto R^ como R2 son hidrógeno y C* denota carbono que está marcado por enriquecimiento del isótopo de carbono 14C. 8. Un método para la preparación de un compuesto de la fórmula XIV: en la que tanto Ri como R2 son hidrógeno y C* denota carbono que tiene la distribución natural de isótopos o que está marcado por enriquecimiento de un isótopo de carbono , haciendo reaccionar un compuesto de la fórmula XVI : (XVI) en la que H al representa halógeno; tanto R- como R2 son hidrógeno y C* denota carbono que tiene la distribución natural de isótopos o que está marcado por enriquecimiento de un isótopo de carbono, con 1 -metilpiperazina . 9. Un compuesto de la fórmula XVI II : (XVIII) en la que tanto R, como R2 son hidrógeno y C* denota carbono que tiene la distribución natu ral de isótopos , o que está marcado por enriquecimiento de un isótopo de carbono. 1 0. Un método para la preparación de un compuesto de la fórmula XVI I I : (XVIII) en la q ue tanto RT como R2 son hidrógeno y C* denota carbono que tiene la distribución natural de isótopos , o que está marcado por enriquecimiento de un isótopo de carbono, haciendo reaccionar un compuesto de la fórmula I I : en la que Hal representa halógeno; tanto Ri como R2 son hidrógeno y C* denota carbono que tiene la distribución natural de isótopos, o que está marcado por enriquecimiento de un isótopo de carbono , con el derivado de piperazína de la fórmula XVI I : 1 1 . Un compuesto de la fórmula XX: en la que C* denota carbono que está marcado por enriquecimiento del isótopo de carbono 1 3C , y N* denota nitrógeno que tiene la distribución natural de isótopos o , alternativamente , que está marcado por enriquecimiento del isótopo de nitrógeno 15N . 12. Un método para la preparación de un compuesto de la fórmula XX: en la que C* denota carbono que tiene la distribución natural de isótopos o que está marcado por enriquecimiento de un isótopo de carbono y N* denota nitrógeno que tiene la distribución natural de isótopos o que está marcado por en riquecimiento de un isótopo de nitrógeno 1 5N , que comprende hacer reaccionar el derivado de piridina de la fórmula XXI : en la que tanto R6 como R7 son alquilo de 1 a 4 átomos de carbono , y C* denota carbono que tiene la distribución natural de isótopos , o que está marcado por enriquecimiento de un isótopo de carbono, con el derivado de fenilguanidina de la fórmula XXI I : en la q ue tanto R8 como R9 son hidrógeno, C* denota carbono que tiene la distribución natural de isótopos o que está marcado por enriquecimiento de un isótopo de carbono, y N* denota nitrógeno que tiene la distribución natural de isótopos o que está marcado por enriquecimiento de un isótopo de nitrógeno 1 5N . 1 3. Un compuesto de la fórmula X en la que R5 es un grupo protector o alquilo de 1 a 4 átomos de carbono , y C* denota carbono que tiene la distribución natural de isótopos, o que está marcado por enriquecimiento de un isótopo de carbono .