KR20130031247A

KR20130031247A - 항―신경 성장 인자（ｎｇｆ） 항체 조성물

Info

Publication number: KR20130031247A
Application number: KR1020127026996A
Authority: KR
Inventors: 볼프강 프라운호퍼; 라비 차리; 비넷 쿠마르; 라이너 새들러; 미하엘 지들러; 윌리암 비. 스타인; 카르슈텐 베버
Original assignee: 애보트 리서치 비.브이.
Priority date: 2010-03-17
Filing date: 2011-03-16
Publication date: 2013-03-28
Also published as: SG10201504808XA; CR20120490A; CN102892430A; DOP2012000246A; GT201200258A; CL2012002536A1; UY33280A; WO2011116090A1; ECSP12012211A; EP2547365A1; JP2013522313A; AU2011227335A1; TW201201835A; BR112012023895A2; AU2011227335B2; CO6640289A2; US20110256135A1; PE20130203A1; MX2012010728A; AR080685A1

Abstract

본 발명은 항-NGF 항체 및 이의 항원-결합 단편의 안정한 조성물 및 NGF 활성이 유해하게 작용하여 발생하는 여러 가지 질환 및 장애(예를 들어, 통증 장애)의 예방 및/또는 치료에 사용하기 위한 상기 조성물의 용도에 관한 것이다.

Description

항―신경 성장 인자（ＮＧＦ） 항체 조성물{ANTI-NERVE GROWTH FACTOR(NGF) ANTIBODY COMPOSITIONS}

본원은 2010년 3월 17일에 출원된 미국 가특허출원 제61/314,984호에 대해 우선권을 주장하며, 이의 내용은 본 명세서에 참고로 인용된다.

신경 성장 인자(NGF)는 50년 이전부터 감각신경세포와 교감신경세포의 생존과 분화를 촉진하는 분자로서 발견되었던 분비 단백질이다. NGF의 베타쇄가 유일하게 NGF의 신경 성장 자극 활성을 위해 작용한다. 베타쇄는 단독이량체를 형성하고 좀더 큰 단백질 복합체내로 혼입된다. NGF는 뉴로트로핀(neurotrophin)으로 알려진 신경영양인자 계열의 일원이다. NGF는 TrkA로 알려진 트로포마이오신 수용체 키나제와 고 친화성으로 결합한다. 또한, NGF는 종양 괴사 인자 수용체 상위계열의 일원이며 다른 뉴로트로핀과도 상호작용하는 p75^NTR로 알려진 수용체와 결합할 수 있다. NGF의 구조 및 기능은 예를 들어 문헌[참조: Sofroniew, M.V. et al. (2001) Annu . Rev . Neurosci. 24:1217-1281; Weismann, C. and de Vos, A.M. (2001) Cell . Mol . Life Sci. 58:748-759; Fahnestock, M. (1991) Curr. Top. Microbiol. Immunol. 165:1-26]에 공지되어 있다.

비록 처음에 NGF가 신경세포의 생존 및 분화를 촉진하는 능력으로 동정되었지만 이러한 발생적 효과는 NGF의 생물학의 한 가지 관점에 불과하다는 증거가 계속 밝혀지고 있다. 특히, NGF는 지속적이거나 만성적인 통증의 전파 및 유지에 연루되어 있다. 예를 들어, NGF의 국소 및 전신 투여 둘 다는 통각과민증 및 이질통을 유발하는 것으로 나타났다(참조: Lewin, G.R. et al. (1994) Eur. J. Neurosci. 6:1903-1912). 인간에게 NGF의 정맥내 주입은 전신 근육통을 유발하는 한편 국소 투여는 전신 효과이외에 주사 부위 통각 과민증 및 이질통을 야기한다(참조: Apfel, S.C. et al. (1998) Neurology 51:695-702). 게다가, 특정 유형의 암에서 과다한 NGF는 암 통증의 유도와 함께 신경 섬유의 성장 및 침윤을 촉진한다(참조: Zhu, Z. et al. (1999) J. Clin . Oncol. 17:241-228).

만성 통증에 대한 NGF의 연관성은 NGF의 효과에 대한 억제를 기초로 하는 치료요법적 접근에 상당한 관심을 불러 일으켰다(예를 들어, 참조: Saragovi, H.U. and Gehring, K. (2000) Trends Pharmacol . Sci. 21:93-98). 예를 들어, TrkA 수용체의 가용성 형태가 NGF의 활성을 차단시키기 위해 사용되었으며, 이러한 차단은 병소 신경세포의 세포체에 손상을 주지 않으면서 신경병증성 통증의 원인이 되는 신경종의 형성을 상당히 감소시키는 것으로 알려졌다(참조: Kryger, G.S. et al. (2001) J. Hand Surg. (Am.) 26:635-644).

NGF 활성을 중화시키는 다른 접근은 항-NGF 항체를 사용하는 것으로서 그러한 항체의 예는 국제 특허 출원 공보 제WO 2001/78698호, 제WO 2001/64247호, 제WO 2002/096458호, 제WO 2004/032870호, 제WO 2005/061540호, 제WO 2006/131951호, 제WO 2006/110883호; 미국특허 공보 제7,449,616호 및; 미국특허 출원공보 제20050074821호, 제20080033157호, 제20080182978호 및 제20090041717호에 기재되어 있다. 신경병증성 통증의 동물 모델에서(예를 들어, 신경간 또는 척수 신경 결찰), NGF에 대한 중화성 항체의 전신 주사는 이질통 및 통각 과민증 둘 다를 예방한다(참조: Ramer, M.S. and Bisby, M.A. (1999) Eur . J. Neurosci. 11:837-846; Ro, L.S. et al . (1999) Pain 79:265-274). 또한, 중화성 항-NGF 항체를 사용한 치료는 뮤린(murine) 암 통증 모델에서 상당한 통증 완화를 유도하였다(참조: Sevcik, M.A. et al. (2005) Pain 115:128-141).

항-NGF 항체(예를 들어, PG110)를 함유한 초창기 제형은 항체가 제형 중에서 물리적으로 불안정성을 나타내어 심각하게 가시적 입자 형성과 침강 현상을 보였다. 따라서, 당해 분야에서 항-NGF 항체를 함유한 제형은 물리적 안정성을 유지하고 입자 형성 민감성을 줄여야 하는 필요성이 제기된다.

본 발명은 적어도 부분적으로는, 항-NGF 항체(예를 들어, 인간화 PG110 항체)를 함유하고 물리적으로 안정하며 입자 형성 민감성을 겪지 않는 신규한 제형의 발견에 기초한다.

따라서, 본 발명은 (a) 항-신경 성장 인자(NGF) 항체 또는 이의 항원 결합 단편, (b) 약 5 내지 약 60 mM 농도의 히스티딘 완충제 및 (c) 약 0.01% 내지 약 0.1% 농도의 폴리소르베이트 80을 포함하고 pH가 약 5.0 내지 약 6.0인 약제학적 조성물을 제공한다. 특정 양태로서, 본 발명의 조성물은 추가로 본 명세서에 기재된 것과 같은 당 및/또는 폴리올을 포함한다. 다른 양태로서, 본 발명의 조성물은 폴리올 또는 당을 포함하지 않는다. 또 다른 양태로서, 본 발명의 조성물은 메티오닌을 포함하지 않는다.

특정 양태로서, 본 발명은 (a) 항-신경 성장 인자(NGF) 항체 또는 이의 항원 결합 단편, (b) 약 5 내지 약 60 mM 농도의 히스티딘 완충제 및 (c) 약 0.01% 내지 약 0.1% 농도의 폴리소르베이트 80으로 구성되거나 필수적으로 구성되고, pH가 약 5.0 내지 약 6.0인 약제학적 조성물을 제공한다.

특정 양태로서, 본 발명은 (a) 항-신경 성장 인자(NGF) 항체 또는 이의 항원 결합 단편, (b) 약 5 내지 약 60 mM 농도의 히스티딘 완충제, (c) 약 0.01% 내지 약 0.1% 농도의 폴리소르베이트 80 및 (d) 폴리올 및/또는 당으로 구성되거나 필수적으로 구성되고, pH가 약 5.0 내지 약 6.0인 약제학적 조성물을 제공한다.

특정 양태로서, 본 발명은 (a) 항-신경 성장 인자(NGF) 항체 또는 이의 항원 결합 단편, (b) 약 5 내지 약 60 mM 농도의 히스티딘 완충제, (c) 약 0.01% 내지 약 0.1% 농도의 폴리소르베이트 80 및 (d) 폴리올로 구성되거나 필수적으로 구성되고, pH가 약 5.0 내지 약 6.0인 약제학적 조성물을 제공한다.

특정 양태로서, 본 발명은 (a) 항-신경 성장 인자(NGF) 항체 또는 이의 항원 결합 단편, (b) 약 5 내지 약 60 mM 농도의 히스티딘 완충제, (c) 약 0.01% 내지 약 0.1% 농도의 폴리소르베이트 80 및 (d) 당으로 구성되거나 필수적으로 구성되고, pH가 약 5.0 내지 약 6.0인 약제학적 조성물을 제공한다.

특정 양태로서, 본 발명의 약제학적 조성물은 액상의 약제학적 조성물이다. 다른 양태로서, 상기 약제학적 조성물은 동결건조에 적합하다. 따라서, 추가로 본 발명은 (a) 약 1 내지 약 240 mg의 항-NGF 항체 또는 이의 항원 결합 단편, (b) 약 1 내지 약 10 mg의 히스티딘 및 (c) 약 0.1 내지 약 0.4 mg의 폴리소르베이트 80을 포함하는 동결건조된 약제학적 조성물을 제공한다. 특정 양태로서, 동결건조된 조성물은 추가로 당 및/또는 폴리올을 포함한다. 다른 양태로서, 동결건조된 조성물은 폴리올 또는 당을 포함하지 않는다.

특정 양태로서, 본 발명은 (a) 약 1 내지 약 240 mg의 항-NGF 항체 또는 이의 항원 결합 단편, (b) 약 1 내지 약 10 mg의 히스티딘 및 (c) 약 0.1 내지 약 0.4 mg의 폴리소르베이트 80으로 구성되거나 필수적으로 구성되는 약제학적 조성물을 제공한다.

특정 양태로서, 본 발명은 (a) 약 1 내지 약 240 mg의 항-NGF 항체 또는 이의 항원 결합 단편, (b) 약 1 내지 약 10 mg의 히스티딘, (c) 약 0.1 내지 약 0.4 mg의 폴리소르베이트 80 및 (d) 약 1 내지 약 100 mg의 폴리올 및/또는 약 1 내지 약 100 mg의 당으로 구성되거나 필수적으로 구성되는 약제학적 조성물을 제공한다.

다른 양태로서, 본 발명은 (a) 약 1 내지 약 240 mg의 항-NGF 항체 또는 이의 항원 결합 단편, (b) 약 1 내지 약 10 mg의 히스티딘, (c) 약 0.1 내지 약 0.4 mg의 폴리소르베이트 80 및 (d) 약 1 내지 약 100 mg의 폴리올로 구성되거나 필수적으로 구성되는 약제학적 조성물을 제공한다.

또 다른 특정 양태로서, 본 발명은 (a) 약 1 내지 약 240 mg의 항-NGF 항체 또는 이의 항원 결합 단편, (b) 약 1 내지 약 10 mg의 히스티딘, (c) 약 0.1 내지 약 0.4 mg의 폴리소르베이트 80 및 (d) 약 1 내지 약 100 mg의 당으로 구성되거나 필수적으로 구성되는 약제학적 조성물을 제공한다. 특정 양태로서, 항-NGF 항체 또는 이의 항원-결합 부분은 인간 NGF와 결합한다. 다른 양태로서, 항체 또는 이의 항원-결합 부분은 인간 IgG4 불변영역을 포함하며, 인간 IgG4 불변영역은 힌지 영역 돌연변이를 포함한다. 바람직하게는, IgG4 불변영역내의 힌지 영역 돌연변이는 서열번호 9 (인간 IgG4 불변영역의 야생형 아미노산 서열을 나타냄)의 아미노산 위치 108에 있는 세린의 돌연변이를 포함한다. 더욱 바람직하게는, 서열번호 9의 아미노산 위치 108에 존재하는 세린이 프롤린으로 돌연변이된다. 바람직한 양태로서, 항-NGF 항체의 인간 IgG4 불변영역은 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함한다.

본 발명의 조성물에 함유된 바람직한 항-NGF 항체는 항체 PG110이며, 이 항체의 중쇄 아미노산 서열은 서열번호 13에 해당하고 경쇄 아미노산 서열은 서열번호 16에 해당한다. 다른 양태로서, 본 발명은 서열번호 11의 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 중쇄와 서열번호 14의 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 경쇄를 포함하는 항-NGF 항체를 함유하는 조성물을 제공한다. 다른 양태로서, 항-NGF 항체는 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변영역(PG110의 중쇄 가변영역을 나타낸다)을 포함한다. 또 다른 양태로서, 항-NGF 항체는 서열번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변영역(PG110의 경쇄 가변영역을 나타낸다)을 포함한다. 또 다른 양태로서, 항-NGF 항체는 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변영역과 서열번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변영역을 포함한다. 또 다른 양태로서, 항-NGF 항체는 NGF와의 결합에 대해 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변영역과 서열번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변영역을 포함하는 항체와 경쟁한다.

다른 양태로서, 항-NGF 항체는 서열번호 3, 4 및 5의 아미노산 서열을 각각 갖는 CDR 1, 2 및 3을 포함하는 중쇄 가변영역을 포함한다(여기서, 서열번호 3, 4 및 5는 PG110의 중쇄 가변영역 CDR 1, 2 및 3을 각각 나타낸다). 다른 양태로서, 항-NGF 항체는 서열번호 6, 7 및 8의 아미노산 서열을 각각 갖는 CDR 1, 2 및 3을 포함하는 경쇄 가변영역을 포함한다(여기서 서열번호 6, 7 및 8은 PG110의 경쇄 가변영역 CDR 1, 2 및 3을 각각 나타낸다). 또 다른 양태로서, 항-NGF 항체는 서열번호 3, 4 및 5의 아미노산 서열을 각각 갖는 CDR 1, 2 및 3을 포함하는 중쇄 가변영역을 포함하고 서열번호 6, 7 및 8의 아미노산 서열을 각각 갖는 CDR 1, 2 및 3을 포함하는 경쇄 가변영역을 포함한다.

또 다른 양태로서, 항체 또는 이의 항원-결합 부분은

a) 인간 NGF와 결합하지만 인간 뇌-유도되는 신경영양인자 (BDNF), 인간 뉴로트로핀 3 (NT-3) 또는 인간 뉴로트로핀 4 (NT-4)와 결합하지 않는 작용 특성;

b) 인간 또는 랫트 NGF와 100 pM 이하의 K_D로 결합하는 작용 특성;

c) TrkA 또는 p75^NTR에 대한 NGF의 결합을 억제하는 작용 특성;

d) TF-1 세포의 NGF-의존성 증식을 억제하는 작용 특성;

e) NGF-의존성 병아리 배근신경절 생존을 억제하는 작용 특성; 및

f) NGF-의존성 PC12 세포 신경돌기 돌출을 억제하는 작용 특성 중 하나 이상의 기능적 특성을 갖는다.

또 다른 양태로서, 항체 또는 이의 항원-결합 부분은 단클론 항체, 인간 항체, 인간화 항체, 키메라 항체, CDR-이식 항체, Fab, Fab', F(ab')2, Fv, 디설파이드 연결된 Fv, scFv, 단일 도메인 항체, 디아바디(diabody), 다중특이성(multispecific) 항체, 이중특이성(dual specific) 항체, 이특이성(bispecific) 항체 또는 잠재적 T 세포 에피토프가 제거된 항체로 이루어진 그룹에서 선택된다. 추가의 양태로서, 항체 또는 이의 항원-결합 부분은 인간화된다.

특히 바람직한 양태로서, 본 발명은 최종 소실 반감기(terminal elimination half life) 연장과 통증 완화의 기간 연장의 조합된 유익한 특징을 갖는 항-NGF 항체를 함유하는 조성물을 제공한다. 따라서, 본 발명은 또한, 돌연변이(바람직하게는 힌지 영역 돌연변이)를 포함하는 인간 IgG4 불변영역을 포함하고, 게먹이원숭이에서 적어도 15일, 더 바람직하게는 적어도 21일의 최종 소실 반감기를 가지며, 대상자에게 일회용량의 항체를 투여한 후 적어도 약 1주 내지 약 12주의 기간 동안 통증을 완화시키는, 항-NGF 항체를 제공한다.

또한, 본 발명은 NGF 연관된 질환 또는 상태를 앓고 있는 인간 대상자에게 본 발명의 약제학적 조성물을 투여함으로써 인간 대상자에게서 NGF 활성을 억제하는 방법에 관한 것이다. 다른 양태로서, 본 명세서에 기술된 제2 약제학적 제제가 대상자에게 투여된다. 특정 양태로서, NGF 연관된 질환 또는 상태는 통증이다. NGF-연관된 질환 및 상태의 비제한적 예는 염증성 통증, 수술후 통증, 신경병증성 통증, 골절 통증, 통풍성 관절 통증, 대상포진후 신경통, 암 통증, 골관절염 또는 류마티스성 관절염 통증, 좌골신경통, 겸상적혈구병증과 연관된 통증, 두통, 월경통, 자궁내막증, 근골격 통증, 만성 요통, 섬유근육통, 염좌, 내장통, 난포낭종, 전립선염, 방광염, 간질성 방광염, 절개통증, 편두통, 삼차신경병증, 화상 및/또는 상처에 의한 통증, 외상과 연관된 통증, 근골격계 질환과 연관된 통증, 강직성 척추염, 관절주변병증, 골 전이에 의한 통증, HIV에 의한 통증, 피부홍통증, 또는 췌장염 또는 신장결석에 의해 유발된 통증을 포함한다. NGF-연관된 질환 및 상태의 다른 예는 악성 흑색종, 쇼그렌증후군 및 천식(예를 들어, 중증 기도 과민반응성 및 난치성 기침을 동반한 비조절성 천식)을 포함한다. 본 발명의 방법에 따라 치료하기에 특히 바람직한 질환 및 상태는 염증성 통증(특히, 골관절염 또는 류마티스성 관절염 통증), 근골격계 통증(특히 만성 요통), 신경병증성 통증(특히, 당뇨성 신경병증), 암 통증 및 골 전이에 의한 통증, 간질성 방광염/방광통증 증후군, 만성 비세균성 전립선염과 연관된 통증, 자궁내막증 및/또는 자궁근종과 연관된 통증 및 수술후 통증을 포함한다. 바람직하게는, 통증은 골관절염 통증, 만성 요통, 당뇨성 신경병증 통증, 암 통증, 골 전이에 의한 통증, 간질성 방광염, 방광통증 증후군, 만성 비세균성 전립선염과 연관된 통증, 자궁내막증과 연관된 통증, 자궁근종과 연관된 통증 및 수술후 통증으로 이루어진 그룹에서 선택된다.

본 발명의 약제학적 조성물은 다른 적합한 투여 경로가 본 명세서에 기재되어 있으나, 예를 들어 정맥내, 피하(예를 들어, 주사펜 또는 피하이식을 통해), 근육내 또는 관절내로 투여될 수 있다.

또한 본 발명의 약제학적 조성물을 포함하는 키트 또는 제품(article)들이 본 명세서에서 제공된다.

도 1은 경과 시간에 따른 제형 1과 제형 2의 안정성을 비교한 그래프이다.

본 발명은 개선된 안정성을 갖는 항-NGF 항체 또는 이의 항원-결합 부분의 개선된 조성물(예를 들어, 약제학적 조성물)에 관한 것이다. 일반적으로 본 발명의 조성물은 항-NGF 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 적합한 완충제(예를 들어, 히스티딘 완충제), 적합한 부형제(예를 들어, 폴리소르베이트 80)를 포함하고 약 5.0 내지 약 6.0의 pH를 갖는다. 본 발명의 조성물은 동결건조에 적합한 액체일 수 있고/있거나 동결건조될 수 있다.

본 발명을 보다 더 쉽게 이해할 수 있도록 먼저 용어를 정의한다. 추가적인 정의들은 상세한 설명 전반에 걸쳐 기술된다.

I. 정의

본 명세서에 사용된 단수 표현은 해당 대상물이 하나 또는 하나 이상(즉, 적어도 하나)인 복수 표현을 가리킨다. 예를 들면, "요소"라는 표현은 하나의 요소 또는 하나 이상의 요소들을 의미한다.

용어 "약제학적 제형"은 활성 성분(들)의 생물학적 활성이 명확한 효과로 나타나도록 해 주는 형태이고, 상기 제형을 투여받는 대상자에게 유의한 독성을 나타내는 어떠한 추가의 성분도 함유하지 않는 제제를 가리킨다.

용어 "약제학적으로 허용되는 담체"는 인간과 같은 포유동물에게 투여하기에 적합한 약제학적으로 허용되는 물질, 조성물 또는 비히클을 포함하는 것으로 인정된 제품이다. 이와 같은 담체는 대상 제제를 한 기관 또는 신체 일부로부터 다른 기관 또는 신체 일부로 전달 또는 수송하는데 연관된 액체 또는 고체 충전제, 희석제, 부형제, 용매 또는 캡슐화 물질을 포함한다. 각 담체는 조성물의 다른 성분과 혼합가능한 의미로 "허용되는" 것이고 인간 대상에게 유해하지 않거나 안전성에 영향을 미치지 않아야 한다.

"완충제"는 산-염기 결합 성분의 작용에 의해 pH의 변화를 막아주는 완충액을 가리킨다. 본 발명의 완충제는 pH 범위가 약 4 내지 약 8이다. 이 범위에서 pH를 조절하는 완충제의 예는 포스페이트, 아세테이트(예를 들어, 아세트산나트륨), 석시네이트(예를 들어, 나트륨 석시네이트), 글루코네이트, 글루타메이트, 히스티딘, 시트레이트 및 기타 유기산 완충제를 포함한다.

용어 "부형제"는 예를 들어 체적특성에 변화를 줌으로써 목적하는 점조도를 제공하고/하거나, 안정성을 개선하고/하거나, 삼투압을 조정하는 것으로 조성물에 첨가될 수 있는 제제를 가리킨다. 흔히 사용되는 부형제의 예는 이로써 한정되는 것은 아니지만 당, 폴리올, 아미노산, 계면활성제 및 폴리머를 포함한다. "약제학적으로 허용되는 부형제"(예를 들어, 비히클, 첨가제)는 포유동물(예를 들어, 인간)에게 합당하게 투여되어 사용된 활성성분의 유효량을 제공할 수 있는 것이다.

본 명세서에 사용된 "폴리올"은 다수의 하이드록실 그룹을 갖는 물질이며 당 알코올과 당 산을 포함한다. 특정 폴리올은 약 600 D 미만(예를 들어, 약 120 D 내지 약 400 D의 범위)인 분자량을 갖는다. 폴리올의 비제한적 예는 프럭토즈, 만노즈, 말토즈, 락토즈, 아라비노즈, 크실로즈, 리보스, 람노스, 갈락토즈, 글루코즈, 소르보스, 멜레지토즈, 라피노즈, 만니톨, 자일리톨, 에리트리톨, 트레이톨, 소르비톨, 글리세롤, L-글루코네이트 및 이의 금속염을 포함한다.

"당"은 특징적인 감미를 나타내는 탄수화물이다. 당은 단당류, 이당류 및 다당류로 분류될 수 있다. "단당류"는 단당 자체로서 예를 들면 프럭토즈, 레불로즈, 글루코즈 및 덱스트로즈 또는 포도당이다. "이당류"는 락토즈 또는 젖당, 말토즈 또는 맥아당, 결정성 이당류, 수크로즈 및 트레할로즈(또한 마이코즈 또는 트레말로즈로도 알려짐)를 포함한다. 가수분해시 이당류 분자는 2개의 단당류 분자를 생성한다. "다당류"는 셀룰로즈, 덱스트린, 글리코겐 및 전분과 같은 물질을 포함한다. 다당류는 단당으로 구성된 중합체 화합물이며 가수분해되어 단당을 생성할 수 있다. 이당류는 때때로 좀 더 단순한 다당류(보통 3개 또는 4개의 단당 유닛(unit)들로 구성된 것)와 함께 그룹화하여 "올리고사카라이드"라고 하는 탄수화물 부류를 형성한다.

"당"은 또한 "환원당" 또는 "비환원당"으로 분류될 수 있다. 환원당은 이들의 유리 또는 잠재적 유리 알데하이드 그룹 또는 케톤 그룹으로 인해 구리, 은, 비스무스, 수은 및 철 염과 같은 많은 금속염의 용이한 환원성 알카리 용액의 특성을 갖는다는 사실에 의해 구분된다. 환원당은 예를 들어 말토즈, 락토즈, 셀로비오즈, 젠티오비오즈, 멜리비오즈 및 투라노즈를 포함한다. 비환원당의 비제한적 예는 수크로즈, 트레할로즈, 라피노즈, 멜레지토즈, 스타키오즈 및 베르바스코즈를 포함한다.

용어 "계면활성제"는 일반적으로 공기/용액 계면-유도된 스트레스 및 용액/표면 유도된-스트레스로부터 조성물중의 단백질을 보호하는 제제를 포함한다. 예를 들어, 계면활성제는 단백질이 응집되지 않게 보호할 수 있다. 적합한 계면활성제는 예를 들어 폴리소르베이트, 폴리옥시에틸렌 알킬 에테르(예를 들어, Brij 35.RTM.) 또는 폴록사머(예를 들어, 트윈 20, 트윈 80 또는 폴록사머 188)를 포함할 수 있다. 바람직한 세정제는 폴리옥시에틸렌 알킬 에테르(예를 들어, Brij 35.RTM., Cremophor A25, Sympatens ALM/230), 폴리소르베이트/트윈[예를 들어, 폴리소르베이트 20, 폴리소르베이트 80, Mirj 및 폴록사머(예를 들어, 폴록사머 188, 폴록사머 407) 및 트윈(예를 들어, 트윈 20 및 트윈 80)]이다.

"안정한" 조성물은 이에 함유된 활성 성분(예를 들어, 항체)이 제조 과정 동안 및/또는 저장시에 이의 물리적 안정성 및/또는 화학적 안정성 및/또는 생물학적 활성을 필수적으로 유지하는 것이다. 단백질 안정성을 측정하는 여러 가지 분석기술이 본 분야에 사용되고 있고 문헌[참조: Peptide and Protein Drug Delivery, 247-301, Vincent Lee Ed., Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., Pubs. (1991) and Jones (1993) Adv. Drug Delivery Rev. 10:29-90]을 참고할 수 있다.

항체는, 색상 및/또는 탁도의 시각적 검사 또는 UV 광산란 또는 크기별배제 크로마토그래피에 의한 측정에서 예를 들어 응집, 침전 및/또는 변성의 징후를 실질적으로 나타내지 않으면, 약제학적 조성물에서 "물리적 안정성을 유지한다"는 것이다. 응집은 개개의 단백질 분자 또는 복합체가 공유 또는 비공유 결합하여 응집체를 형성하는 과정이다. 응집은 가시적 침전물이 형성되는 정도로 진행될 수 있다. 항-NGF 항체를 함유하는 약제학적 조성물의 물리적 안정성은 예를 들어 용액중의 단량체 단백질의 비율에 따라 결정될 수 있으며, 분해된(예를 들어, 단편화된) 및/또는 응집된 단백질의 낮은 비율(예를 들어, 3% 미만)은 조성물이 안정하다는 것을 가리킨다.

항체는, 주어진 시간에서 아래에 정의된 바와 같이 생물학적 활성을 계속 유지하도록 화학적으로 안정한 경우 본 발명의 약제학적 조성물에서 항체가 "화학적 안정성을 유지한다"는 것이다. 화학적 안정성은 예를 들어 항체의 화학적 변형 형태를 검출 및 정량함으로써 평가할 수 있다. 화학적 변형은 크기 변형(예를 들어, 클립핑(clipping))을 포함할 수 있으며, 이러한 변형은 크기별 배제 크로마토그래피, SDS-PAGE 및/또는 매트릭스-보조 레이저 탈착 이온화/비행시간형질량분석기(MALDI/TOF MS)를 사용하여 평가할 수 있다. 화학적 변형의 다른 유형은 전하 변화(예를 들어, 탈아미드화 또는 산화의 결과로서 발생)를 포함하며, 이는 예를 들어 이온교환 크로마토그래피에 의해 평가할 수 있다.

본 발명의 약제학적 조성물 중의 항체가 이의 의도하는 목적을 위해 생물학적으로 활성인 경우, 상기 항체는 약제학적 조성물 중에서 "생물학적 활성을 유지한다"는 것이다. 예를 들어, 약제학적 조성물 중의 항체의 생물학적 활성이, 예를 들어 항원 결합 검사로 측정했을 때 상기 약제학적 조성물의 제조 시점에서 나타난 생물학적 활성의 약 30%, 약 20% 또는 약 10% 내(검사의 오차내)에 있는 경우 생물학적 활성은 유지된 것이다. 본 발명의 제형내에 함유된 항-NGF 항체의 생물학적 활성은 이로써 한정되는 것은 아니지만 인간 NGF와의 결합, TrkA 또는 p75^NTR의 NGF로의 결합 억제, TF-1 세포의 NGF-의존성 증식의 억제, 신경세포의 NGF-의존성 생존 및 분화 억제 및 NGF-의존성 통증 전도 억제를 포함한다. 용어 "활성"은 항원에 대한 항체, 예를 들어 NGF 항원과 결합하는 항-NGF 항체의 결합 특이성/친화성과 같은 활성을 추가로 포함한다.

본 명세서에 사용된 용어 "억제"는 활성의 완전한 차단을 포함하여 생물학적 활성의 임의의 통계상 유의적 감소를 가리킨다. 예를 들어 "억제"는 생물학적 활성의 약 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 또는 100% 감소를 가리킬 수 있다.

용어 "신경 성장 인자" 또는 "NGF"는 본 명세서에서 상호교환적으로 사용되며, 변이체, 이소형, 상동체, 오솔로그(ortholog) 및 파랄로그(paralog)를 포함한다. 예를 들어, 인간 NGF에 특이적인 항체는 특정 경우에 인간외의 다른 종으로부터 유래된 NGF와 교차반응할 수 있다. 다른 양태로서, 인간 NGF에 대해 특이적인 항체는 인간 NGF에 대해 완전히 특이적일 수 있으며 종 또는 다른 유형의 교차반응성을 나타내지 않을 수 있다. 용어 "인간 NGF"는 인간 NGF-β 쇄의 아미노산 서열(이의 전구체 형태는 진뱅크 등록번호 NM_002506의 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 진뱅크 등록번호 NP_002497을 갖는다)을 포함하는 것과 같은 인간 서열 NGF를 가리킨다. 인간 NGF-β쇄 서열은 예를 들어 보존치환 또는 비보존영역의 치환을 가짐으로써 진뱅크 등록번호 NP_002497의 인간 NGF-β와 상이할 수 있고, 여기서 인간 NGF-β는 진뱅크 등록번호 NP_002497의 인간 NGF-β와 실질적으로 동일한 생물학적 기능을 갖는다. 용어 "랫트 NGF"는 랫트 NGF-β 쇄의 아미노산 서열을 포함하는 것과 같은 랫트 서열 NGF를 가리키며, 이의 전구 형태는 진뱅크 등록번호 XP_227525의 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 진뱅크 등록번호 XP_227525를 갖는다. 용어 "마우스 NGF"는 마우스 NGF-β 쇄의 아미노산 서열을 포함하는 것과 같은 랫트 서열 NGF를 가리키며, 이의 전구체 형태는 진뱅크 등록번호 NM_013609의 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 진뱅크 등록번호 NP_038637을 갖는다.

본 명세서에 사용된 용어 "TrkA 수용체"는 본 분야에서 트로포마이오신 키나제 수용체 A 및 신경영향 티로신 키나제 수용체 1형 (NTRK1)으로도 알려진 NGF 수용체를 가리킨다. 인간 TrkA 수용체의 예시적인 비제한적 서열은 진뱅크 등록번호 NP_001012331(이소형 1), NP_002520(이소형 2) 및 NP_001007793(이소형 3)의 아미노산 서열을 포함한다.

본 명세서에 사용된 용어 "p75^NTR 수용체"는 NGF 및 다른 뉴로트로핀과 결합하는 분자량 약 75 kDa의 뉴로트로핀 수용체를 가리키며, 이 수용체는 예를 들어 문헌[참조: Bothwell, M. (1996) Science 272:506-507]에 기재되어 있다. 인간 p75^NTR 수용체의 예시적인 비제한적 서열은 진뱅크 등록번호 NM_002507의 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 진뱅크 등록번호 NP_002498의 아미노산 서열이다.

항-NGF 항체와 관련하여 본 명세서에 사용된 용어 "최종 소실 반감기"는 항체를 투여받은 대상자의 혈청중에서 측정된 것으로서, 일단 항체의 흡착과 재분포가 완결되면 절반으로 감소되는 항체의 농도에 대해 필요한 시간을 가리킨다. 일군의 대상자들이 사용되는 경우, 대상자들에 대한 최종 소실 반감기의 기하평균이 항체의 최종 소실 반감기의 측정으로서 사용될 수 있다.

항-NGF 항체와 관련하여 본 명세서에 사용된 용어 "약리학적 반감기"는 생체내 약물 효과를 유지하는 평균시간(약물효과에 대한 MRT)을 가리킨다. 이것은 아래의 수학식을 사용하여 1차 모멘트 기준치-교정 효과-시간 곡선(AUMEC) 대 경과시간에 따른 누적 기준치-교정 약물 효과(효과-시간 곡선하의 면적, AUEC)의 면적비율로서 계산할 수 있다:

약리학적 반감기=

일군의 대상자들이 사용된 경우, 대상자들에 대한 약리학적 반감기의 기하평균이 항체의 약리학적 반감기의 측정으로서 사용될 수 있다.

본 명세서에 사용된 용어 "억제"는 생물학적 활성의 완전한 차단을 포함하여 상기 활성의 임의의 통계상 유의적 감소를 가리킨다. 예를 들어, "억제"는 생물학적 활성의 약 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 또는 100% 감소를 의미할 수 있다.

본 명세서에서 상호교환적으로 사용되는 용어 "항체" 또는 "면역글로불린"은 완전한 항체 및 임의의 항원 결합 단편(즉, "항원-결합 부분") 또는 항원(예를 들어, NGF)에 특이적으로 결합하는 능력을 보유하는 그의 단일쇄를 포함한다. 완전한 항체에서 각 중쇄는 중쇄 가변영역(HCVR 또는 VH로 약칭) 및 중쇄 불변영역으로 구성된다. 중쇄 불변영역은 세개의 도메인 CH1, CH2 및 CH3으로 구성된다. 각 경쇄는 경쇄 가변영역(LCVR 또는 VL로 약칭) 및 경쇄 불변영역으로 구성된다. 경쇄 불변영역은 하나의 도메인 CL로 구성된다. VH 및 VL 영역은 상보성 결정 영역(CDR)이라고 하는 초가변성의 영역으로 추가로 세분될 수 있고 CDR 영역은 더 보존적인 영역인 골격 영역(framework region: FR)사이에 삽입되어 있다. 각 VH 및 VL은 3개 CDR과 4개 FR로 구성되며 아미노 말단에서 카르복시 말단으로 다음의 순서로 배열된다: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3 및 FR4. 중쇄 및 경쇄의 가변영역은 항원과 상호작용하는 결합 도메인을 함유한다. 항체의 불변영역은 면역계의 다양한 세포(예를 들어, 주효세포) 및 고전 보체계의 제1 성분(Clq)를 포함하여 숙주 조직 또는 인자에 면역글로불린의 결합을 매개할 수 있다. 면역글로불린 분자는 임의의 유형(예를 들어, IgG, IgE, IgM, IgD, IgA 및 IgY), 부류(예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 및 IgA2) 또는 아부류일 수 있다.

용어 항체의 "항원-결합 부분" 또는 "항원-결합 단편" (또는 간단하게 "항체 부분")은 항원(예를 들어, NGF)과 특이적으로 결합하는 능력을 보유하는 항체의 단편 하나 이상을 가리킨다. 이러한 항체 양태는 또한 이특이성, 이중특이성 또는 다중특이성 포맷으로서 둘 이상의 상이한 항원들과 특이적으로 결합할 수 있다. 용어 항체의 "항원-결합 부분"에 내포되는 결합 단편의 예는 (i) VL, VH, CL과 CH1 도메인으로 구성된 일가 단편인 Fab 단편, (ii) 힌지 영역에서 디설파이드 브릿지에 의해 연결된 두 Fab 단편들을 포함한 이가 단편인 F(ab')₂ 단편, (iii) VH와 CH1 도메인으로 구성된 Fd 단편, (iv) 항체의 한개 아암(arm)의 VL 및 VH 도메인으로 구성된 Fv 단편, (v) 한개 가변 도메인을 포함하는 dAb 단편(참조: Ward et al. (1989) Nature 341:544-546, Winter et al., 국제 특허 출원 공보 제WO 90/05144 A1호) 및 (vi) 분리된 상보성 결정 영역(CDR)을 포함한다. 또한, 비록 Fv 단편의 두 도메인 (VL 및 VH)이 별개의 유전자에 의해 암호화되어 있지만, 이들은 재조합 방법을 사용하여 합성 링커(linker)에 의해 결합시켜 VL과 VH 영역이 쌍을 이루어 일가 분자를 형성한 단일 단백질 쇄(단일쇄 Fv(scFv)로 알려져 있음; 예를 들어, 참조: Bird et al. (1988) Science 242:423-426 and Huston et al. (1988) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879-5883)로 제조될 수 있다. 또한, 디아바디(diabody)와 같은 단일쇄 항체의 다른 형태가 포함된다. 디아바디는 이가 이특이성 항체로서, 이들의 경우 VH와 VL 도메인이 단일 폴리펩타이드 쇄에 발현되어 있으나 너무 짧아서 동일한 쇄상에서 두 도메인이 서로 쌍을 형성하도록 할 수 없는 링커를 사용함으로써 도메인이 다른 쇄의 상보적 도메인과 강제적으로 쌍을 형성하도록 하여 2개의 항원 결합 부위를 형성한 것이다(예를 들어, 참조: Holliger et al. (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:6444-6448; Poljak et al. (1994) Structure 2:1121-1123). 이와 같은 단일쇄 항체 또한 본 분야에 잘 알려진 바와 같이 용어 항체의 "항원-결합 부분"에 내포된다(참조: Kontermann and Dubel eds., Antibody Engineering (2001) Springer-Verlag. New York, 790 (ISBN 3-540-41354-5).

본 명세서에 사용된 용어 "힌지 영역 돌연변이"는 면역글로불린 불변도메인의 힌지 영역에서 점 돌연변이, 치환, 부가 또는 결실과 같은 돌연변이를 가리킨다.

본 명세서에 사용된 용어 "단클론 항체"는 실질적으로 동질한 항체의 집단으로부터 수득된 항체를 가리키며, 즉, 그 집단에 포함된 개개의 항체들은 소량 존재할 수 있는 자연발생적 돌연변이 가능성을 제외하고 동일하다. 단클론 항체는 단일 항원 부위에 대해서 고도로 특이적이다. 또한, 상이한 결정부위(에피토프)에 대해 상이한 항체를 전형적으로 포함하는 통상적인(다클론) 항체 제제와 대조적으로, 각 단클론 항체는 항원상의 단일 결정소에 대해 특이적이다. 단클론 항체는, 예를 들어, 문헌(참조: Kohler et al. (1975) Nature, 256:495)에 기술된 하이브리도마 방법, 문헌(참조: Lonberg, et al . (1994) Nature 368(6474): 856-859)에 기술된 트랜스제닉(transgenic) 동물, 미국특허 공보 제4,816,567호에 기술된 재조합 DNA 방법과 같은 임의의 공지 기술을 사용하거나 문헌(참조: Clarkson et al., Nature, 352:624-628 (1991) and Marks et al ., J. Mol . Biol., 222:581-597 (1991))에 기술된 기술을 사용한 파아지 항체 라이브러리를 사용하여 제조할 수 있다. 단클론 항체는 키메라 항체, 인간 항체 및 인간화 항체를 포함하며 천연적이거나 재조합으로 제조될 수 있다.

용어 "재조합 항체"는 재조합 수단에 의해 제조, 발현, 생성 또는 분리된 항체를 가리키며, 예를 들어 (a) 면역글로불린 유전자(예를 들어, 인간 면역글로불린 유전자)에 대해 형질전환성이거나 염색체전환성인 동물(예를 들어, 마우스) 또는 이로부터 제조된 하이브리도마로부터 분리된 항체, (b) 항체를 발현하도록 형질전환된 숙주 세포(예를 들어, 형질주입종)로부터 분리된 항체, (c) 파아지 디스플레이를 사용하여 재조합된 조합 항체 라이브러리(예를 들어, 인간 항체 서열을 함유)로부터 분리된 항체 및 (d) 다른 DNA 서열에 면역글로불린 유전자 서열(예를 들어, 인간 면역글로불린 유전자)의 스플라이싱(splicing)을 포함한 임의의 다른 수단에 의해 제조, 발현, 생성 또는 분리된 항체이다. 이와 같은 재조합 항체는 인간 생식세포계열 면역글로불린 서열로부터 유도된 가변 및 불변 영역을 가질 수 있다. 그러나, 특정 양태로서, 이와 같은 재조합 인간 항체는 시험관내 돌연변이유도에 적용할 수 있고 그 결과로 재조합 항체의 V_H 및 V_L 영역의 아미노산 서열은 인간 생색세포계열 V_H 및 V_L 서열로부터 유도되고 이와 연관된 한편, 생체내 인간 항체 생식세포계열 레퍼토리내에 천연적으로 존재할 수 없는 서열이다.

용어 "키메라 면역글로불린" 또는 항체는 이의 가변영역이 제1 종으로부터 유래되고 이의 불변영역이 제2 종으로부터 유래된 면역글로불린 또는 항체를 가리킨다. 키메라 면역글로불린 또는 항체는 예를 들어 유전자 조작에 의해 다른 종에 속하는 면역글로불린 유전자 분절로부터 작제할 수 있다.

용어 "인간화 항체" 또는 "인간화 면역글로불린"은 적어도 하나의 인간화 항체 또는 면역글로불린 쇄(즉, 적어도 하나의 인간화 경쇄 또는 중쇄)를 포함하는 항체 또는 면역글로불린을 가리킨다. 용어 "인간화 면역글로불린 쇄" 또는 "인간화 항체 쇄" (즉, "인간화 면역글로불린 경쇄" 또는 "인간화 면역글로불린 중쇄")는, 실질적으로 인간 면역글로불린 또는 항체의 가변 골격 영역 및 실질적으로 비인간 면역글로불린 또는 항체의 상보성 결정 영역(CDR)(예를 들어, 적어도 하나의 CDR, 바람직하게는 두개의 CDR, 더욱 바람직하게는 세개의 CDR)을 포함하는 가변영역 및 추가로 불변영역(예를 들어, 경쇄의 경우 적어도 하나의 불변영역 또는 이의 부분 및 바람직하게는 중쇄의 경우 3개의 불변영역)을 포함하는 가변영역을 갖는 면역글로불린 또는 항체 쇄(즉, 각각 경쇄 또는 중쇄)를 가리킨다. 용어 "인간화 가변영역"(예를 들어, "인간화 경쇄 가변영역" 또는 "인간화 중쇄 가변영역")은 실질적으로 인간 면역글로불린 또는 항체의 가변 골격 영역 및 실질적으로 비인간 면역글로불린 또는 항체의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하는 가변영역을 가리킨다.

한 가지 양태로서, 용어 "인간화 항체"는, 해당 항원에 면역특이적으로 결합하고 인간 항체의 아미노산 서열을 실질적으로 갖는 골격(FR) 영역 및 비인간 항체의 아미노산 서열을 실질적으로 갖는 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하는 항체 또는 이의 변이체, 유도체, 유사체 또는 단편이다. CDR과 관련하여 본 명세서에 사용된 용어 "실질적으로"는 비인간 항체 CDR의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 갖는 CDR을 가리킨다. 인간화 항체는 적어도 하나 및 전형적으로 두 개의 가변 도메인 (Fab, Fab', F(ab')2, FabC, Fv)을 실질적으로 모두 포함하며, 여기서 CDR 영역 모두 또는 실질적으로 모두는 비인간 면역글로불린(즉, 공여자 항체)의 것에 상응하고 FR 영역 모두 또는 실질적으로 모두는 인간 면역글로불린 공통 서열의 것에 상응한다. 한 가지 양태로서, 인간화 항체는 또한 면역글로불린 불변영역(Fc)의 적어도 일부분, 전형적으로 인간 면역글로불린의 것을 포함한다. 일부 양태로서, 인간화 항체는 경쇄뿐만 아니라 적어도 중쇄의 가변 도메인을 함유한다. 항체는 또한 중쇄의 CH1, 힌지, CH2, CH3 및 CH4 영역을 포함할 수 있다. 한 가지 양태로서, 인간화 항체는 인간화 경쇄만을 함유한다. 다른 양태로서, 인간화 항체는 인간화 중쇄만을 함유한다. 특정 양태로서, 인간화 항체는 경쇄의 인간화 가변 도메인 및/또는 인간화 중쇄만을 함유한다. 인간화 항체는 IgM, IgG, IgD, IgA 및 IgE를 포함한 면역글로불린의 임의의 부류 및 이로써 한정되는 것은 아니지만 IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4를 포함한 임의의 이소형에서 선택될 수 있다. 인간화 항체는 하나 이상의 부류 또는 이소형의 서열을 포함할 수 있고 특정 불변 도메인은 본 분야에 잘 알려진 기술을 사용하여 목적하는 이팩터(effector) 기능을 최적화하기 위해 선택될 수 있다.

용어 "에피토프"는 면역글로불린과 특이적으로 결합할 수 있는 임의의 x 결정소(예를 들어, 폴리펩타이드)를 포함한다. 특정 양태로서, 에피토프 결정소는, 아미노산, 당 측쇄, 포스포릴, 설포닐과 같은 화학적 활성 표면 분자기를 포함하며, 특이적인 삼차원 구조 특징 및/또는 특이적인 전하 특징을 가질 수 있다. 에피토프는 항체에 의해 결합되는 항원의 영역이다. 특정 양태로서, 항체는 단백질 및/또는 거대분자의 복합 혼합물에서 상기 항체의 표적 항원을 우선적으로 인지하는 경우 항원과 특이적으로 결합한다고 말한다.

본 명세서에 사용된 용어 "인간 항체"는 예를 들어 Kabat 등에 의해 기재된 바와 같이 골격 및 CDR 영역 둘 다가 인간 생식세포계열 면역글로불린 서열로부터 유도된 가변 영역을 갖는 항체를 포함한다(참조: Kabat, et al. (1991) Sequences of proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242). 또한, 만일 항체가 불변영역을 함유하는 경우, 불변영역은 또한 인간 생식세포계열 면역글로불린 서열로부터 유도된 것이다. 인간 항체는 인간 생식세포계열 면역글로불린 서열에 의해 암호화되지 않은 아미노산 잔기(시험관내에서 무작위 또는 부위-특정 돌연변이유도에 의해 또는 생체내 체세포 돌연변이에 의해 도입된 돌연변이)를 포함할 수 있다. 그러나, 본 명세서에 사용된 용어 "인간 항체"는, 마우스와 같은 다른 포유동물 종의 생식세포계열로부터 유래된 CDR 서열이 인간 골격 서열상에 이식된, 항체를 포함하지 않는다.

본 명세서에 사용된 용어 "분리된 항체"는 상이한 항원 특이성을 갖는 다른 항체로부터 실질적으로 유리된 항체를 가리킨다(예를 들어, NGF와 특이적으로 결합하는 분리된 항체는 NGF외의 항원과 특이적으로 결합하는 항체로부터 실질적으로 유리되어 있다). 또한, 분리된 항체는 전형적으로 다른 세포 물질 및/또는 화학물질로부터 실질적으로 유리되어 있다.

본 명세서에 사용된 용어 "특이적 결합", "특이적으로 결합하는", "선택적 결합" 및 "선택적으로 결합하는"은 항체 또는 이의 항원-결합 부분이 특정 항원 또는 에피토프에 대해 측정가능한 친화성을 나타내며 일반적으로 다른 항원 및 에피토프와의 유의적인 교차반응성을 나타내지 않음을 의미한다. "측정가능한" 또는 바람직한 결합은 적어도 10⁶, 10⁷, 10⁸, 10⁹ M^-1 또는 10¹⁰M^-1의 친화성을 갖는 결합을 포함한다. 10⁷M^-1 초과, 바람직하게는 10⁸M^-1 초과의 친화성이 더 바람직하다. 본 명세서에 기재된 것의 중간값 또한 본 발명의 범위내에 속하며 바람직한 결합 친화성은 예를 들어 10⁶ 내지 10¹⁰M^-1, 바람직하게는 10⁷ 내지 10¹⁰M^-1, 더 바람직하게는 10⁸ 내지 10¹⁰M^-1의 친화성 범위로 나타낼 수 있다. "유의적인 교차반응성을 나타내지 않는" 항체는 원치않는 실체(예를 들어, 원치않는 단백질성 실체)와 측정가능하게 결합하지 않는 것이다. 특이적 또는 선택적 결합은 예를 들어 스캐차드 분석 및/또는 경쟁 결합 검사를 포함하여 본 분야에 공지된 임의의 결합 결정 수단에 따라 결정할 수 있다.

본 명세서에 사용된 용어 "K_D"는 특정 항체-항원 상호작용의 해리 평형 상수 또는 예를 들어 평형에서 적정 측정으로 수득되거나 해리 속도 상수(Koff)를 결합 속도 상수(Kon)으로 나눔으로써 수득된 항원에 대한 항체의 친화성을 가리킨다. 결합 속도 상수(Kon), 해리 속도 상수(Koff) 및 평형 해리 상수(K)는 항원에 대한 항체의 결합 친화성을 나타내기 위해 사용된다. 결합 및 해리 속도 상수를 결정하는 방법은 본 분야에 잘 알려져 있다. 형광-기초 기술은 고민감성 및 평형 상태에서 생리학적 완충액중의 시료를 검사하는 능력을 제공한다. 다른 실험 접근 및 장비[예를 들어, BIAcore? (생체분자 상호작용 분석) 검사]가 사용될 수 있다[예를 들어, BIAcore International AB (GE Healthcare Company, Uppsala, Sweden)로부터 입수가능한 장비]. 또한, 사피딘 장비(Sapidyne Instruments; Boise, Idaho)로부터 입수 가능한 KinExA?[운동 배제 검사(Kinetic Exclusion Assay)]이 또한 사용될 수 있다.

한 가지 양태로서, 본 발명에 따른 항체는 표면 플라스몬 공명 검사 또는 세포 결합 검사를 사용하여 측정했을 때 약 100 pM 이하(즉, 또는 보다 더 양호한)(예를 들어, 약 90 pM 또는 약 80 pM 또는 약 70 pM 또는 약 60 pM 또는 약 50 pM 또는 약 40 pM 또는 약 30 pM)의 친화성(K_D)으로 항원(예를 들어, NGF)와 결합한다. 바람직한 양태로서, 상기 항체는 약 25 내지 35 pM 범위의 친화성(K_D)으로 NGF와 결합한다.

본 명세서에 사용된 용어 "K_ass", "K_a" 및 "K_on"은 항체/항원 복합체내로의 항체의 결합에 대한 결합 속도 상수를 가리킨다. 이 값은 표적 항원에 대한 항체의 결합 속도 또는 항체와 항원간의 복합체 형성 속도를 가리키며 아래의 등식으로 나타낸다:

항체("Ab") + 항원("Ag") → Ab-Ag

본 명세서에 사용된 용어 "K_diss", "K_d" 및 "K_off"는 항체/항원 복합체로부터 항체의 해리에 대한 해리 속도 상수를 가리킨다. 이 값은 표적 항원으로부터 항체의 해리 속도를 가리키거나 경과 시간에 따라 Ab-Ag 복합체로부터 유리 항체 및 항원으로 분리되는 것을 가리키며 아래의 등식으로 나타낸다:

Ab + Ag ← Ab-Ag

본 명세서에 사용된 용어 "IC₅₀"은 최대 억제 반응의 50%(즉, 최대 억제 반응과 비처리 반응사이의 절반)인 수준으로 시험관내 또는 생체내 검사에서 반응을 억제하는 항체의 농도를 가리킨다.

본 명세서에 사용된 "치료하는", "치료된", 및 "치료"는 본 명세서에 기술된 치료적 또는 예방적 조치를 가리킨다. "치료" 방법은, 예를 들어 NGF-연관된 질환 또는 상태를 갖는 대상자에게 그 질환 또는 상태의 중증도를 예방, 치유, 지연, 경감시키거나 그 질환 또는 상태의 증상들 중 하나 이상을 완화시키기 위해 본 발명의 항체의 대상자로의 투여를 사용한다.

본 명세서에 사용된 용어 "NGF-연관된 질환 또는 상태"는 상기 질환 또는 상태의 하나 이상의 증상들이 NGF 활성에 포함되거나, NGF 활성과 연관되어 있거나 NGF 활성에 의해 매개되거나 촉진되는 것을 가리킨다.

본 명세서에 사용된 용어 "대상자"는 모든 인간 또는 비인간 동물을 포함한다. 특정 양태로서, 대상자는 인간이다. 용어 "비인간 동물"은 모든 척추동물, 예를 들어 포유동물 및 비포유동물(예를 들어, 비인간 영장류, 양, 개, 소, 닭, 양서류, 파충류 등)을 포함한다.

본 명세서에 사용된 용어 "반동 효과"는 단회 또는 반복 투여 이후에 초기 효능 기간 후 대상자에게서 발생하는 것으로 항-NGF 항체와 같은 NGF 봉쇄제의 감소된 효능을 가리킨다. 예를 들어, 항-NGF 항체로의 치료는 예를 들어 염증 또는 신경 손상 또는 다른 원인으로 인한 통증을 초기에 완화시킬 수 있으며, 그런 후 궁극적으로는 통증이 치료전에 비해 점점 더 강력하게 발전하여 감소된 진통 효과 기간이 이어진다. 다른 예로서, 항-NGF 항체는 단회 또는 반복 투여 후 일정 기간 동안, 예를 들어 투여 후 1주 기간(예를 들어, 투여 후 1 내지 7일) 동안 대상자에게서 초기 효능을 나타낼 수 있으며, 그 후 감소된 효능 기간, 예를 들어 투여 후 1 내지 2 주 기간(예를 들어, 투여 후 7 내지 14일)이 이어진다. 이러한 "반동" 기간은 이후로 항-NGF 항체의 효능 회복 기간을 수반할 수 있다. 예를 들어, 항-NGF 항체의 단회 또는 반복 투여 후 감소된 효능의 중간 기간 또는 훨씬 강력한 통증 감각과 함께 무통증의 이상성 프로필이 있을 수 있다. 이러한 반동 효과는 예를 들어 항-NGF 효능에 대한 임상 통증 연구, 통증의 실험실 모델 및/또는 기타 모델로 평가할 수 있다. 이 반동 효과는 예를 들어 반동 기간 동안에 대상자에게 증가된 통증 및/또는 증가된 부작용(예를 들어, 이질통에서부터 감각장애, 지각이상, 및 지각과민 또는 지각감퇴에 이르는 비정상적인 감각)과 연관이 있을 수 있다. 비록 기전에 한정하고자 하는 것은 아니지만 반동 효과는 변화된 NGF 발현, 변화된 TrkA 또는 p75 수용체 발현 또는 신호전달에 의해 발생되거나, 초기 효능 기간 이후에 항-NGF의 단회 또는 반복 투여 후 일시적 감소 효능을 유발하는 기타 임의의 기전에 의해 발생될 수 있다.

본 발명의 여러 가지 관점들은 아래 단락에서 추가적으로 상세히 설명된다.

II. 본 발명의 약제학적 조성물 .

본 발명은 항-NGF 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하고 공지된 조성물에 비하여 향상된 특성을 갖는 액체 및 동결건조 약제학적 조성물을 제공한다. 본 발명의 조성물은, 예를 들어 제조, 저장 및/또는 반복된 동결/해동 단계 또는 상승된 공기-액체 계면에 연장된 노출 동안에 항-NGF 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 용해성 및 안정성을 유지할 수 있다(예를 들어, 유의적인 단백광, 응집 또는 침전을 나타내지 않는다). 예를 들어, 본 발명의 조성물은 다량의 항체 또는 이의 항원 결합 단편(예를 들어, 약 10 내지 약 240 mg/mL)을 함유함에도 불구하고 저 수준의 단백질 침전(즉, 3% 미만)을 유지한다. 본 발명의 조성물은 또한 다량의 항체(예를 들어, 약 10 내지 약 240 mg/mL)를 함유함에도 불구하고 피하 주사에 적합한 범위내에서 저 점도를 유지한다. 또한, 본 발명의 조성물은 용해성을 유지하고, 피하 또는 정맥내 주사에 적합한 저 점도를 유지하며, 예를 들어 약 pH 5.0 내지 약 pH 6.0의 pH 범위에 걸쳐 안정성을 유지한다. 따라서, 본 발명의 항체 조성물은 안정성, 점도, 탁도 및 물리적 분해 장애(challenge)를 포함하여 항체 조성물에 대한 많은 공지된 장애들을 극복한다.

따라서, 한 가지 관점으로서, 약제학적 조성물은 액체 및/또는 동결건조 형태에서 항-NGF 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 안정성을 유지하기에 충분한 완충제 및 부형제를 항-NGF 항체 또는 이의 항원 결합 단편과 함께 포함한다.

본 발명의 조성물에 사용될 수 있는 항-NGF 항체 및 이의 항원-결합 단편 및 이와 같은 항체 및 이의 항원-결합 단편의 제조 방법은 본 명세서에 상세히 기재되어 있다. 조성물중에 존재하는 항체의 양은 예를 들어 목적하는 용량, 체적 및 투여방식을 고려하여 결정된다. 본 발명의 특정 양태로서, 본 발명의 조성물, 예를 들어, 액체 및/또는 동결건조 조성물(재구성시)은 단백질 농도가 약 10 내지 약 240 mg/mL, 약 20 내지 약 120 mg/mL, 약 40 내지 약 240 mg/mL, 약 50 내지 150 mg/mL, 약 15 내지 약 75 mg/mL 또는 약 10 내지 약 20 mg/mL인 항-인간 NGF 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함한다. 비록 본 발명의 바람직한 양태가 고 단백질 농도를 포함하는 조성물이지만, 또한 본 발명의 조성물은 약 1 mg/mL 내지 약 240 mg/mL, 약 1 mg/ml 내지 약 150 mg/ml, 약 50 mg/mL 내지 약 150 mg/mL 또는 약 30 mg/mL 내지 약 50 mg/mL의 항체 농도를 포함할 수 있다. 본 발명의 한 가지 양태로서, 항체 농도는 약 100 mg/mL이다. 본 발명의 한 가지 양태로서, 항체 농도는 약 60 mg/mL이다. 본 발명의 한 가지 양태로서, 항체 농도는 약 30 mg/mL이다. 다른 양태로서, 항체 농도는 약 20 mg/mL이다. 다른 양태로서, 항체 농도는 약 10 mg/mL이다. 본 발명의 다른 양태로서 조성물은 약 55 mg/mL의 항체 농도를 포함한다.

예를 들어, 상기된 범위의 중간 범위, 예를 들어 75 내지 90 mg/ml 또한 본 발명의 일부이다. 예를 들어, 상한값 및/또는 하한값으로서 모든 상기된 값들의 조합을 사용한 값의 범위가 포함된다. 추가로, 항-NGF 항체의 상기된 양 및 농도에서 중간 농도도 본 발명의 일부이다(예를 들어, 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24,25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150, 151, 152, 153, 154, 155, 156, 157, 158, 159, 160, 161, 162, 163, 164, 165, 166, 167, 168, 169, 170, 171, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 181, 182, 183, 184, 185, 186, 187, 188, 189, 190, 191, 192, 193, 194, 195, 196, 197, 198, 199, 200, 201, 202, 203, 204, 205, 206, 207, 208, 209, 210, 211, 212, 213, 214, 215, 216, 217, 218, 219, 220, 221, 222, 223, 224, 225, 226, 227, 228, 229, 230, 231, 232, 233, 234, 235, 236, 237, 238, 239 또는 약 240 mg/mL).

본 발명의 일부 양태로서, 상기 조성물(예를 들어, 동결건조 조성물)은 약 1 내지 100 mg, 1 내지 75 mg, 1 내지 55 mg, 1 내지 30 mg, 1 내지 20 mg, 1 내지 10 mg, 10 내지 20 mg, 15 내지 75 mg, 100 내지 150 mg, 110 내지 150 mg, 100 내지 140 mg, 110 내지 140 mg, 120 내지 140 mg, 130 내지 140 mg의 항-NGF 항체를 포함한다. 다른 양태로서, 상기 조성물(예를 들어, 동결건조 조성물)은 약 40 내지 240 mg, 40 내지 200 mg, 40 내지 180 mg, 40 내지 160 mg, 40 내지 140 mg, 40 내지 120 mg, 45 내지 100 mg, 50 내지 80 mg 또는 55 내지 70 mg의 항체를 포함한다. 한 가지 양태로서, 상기 조성물(예를 들어, 동결건조 조성물)은 약 10 mg의 항체를 포함한다. 다른 양태로서, 상기 조성물(예를 들어, 동결건조 조성물)은 약 20 mg의 항체를 포함한다.

상기된 범위의 중간 범위(예를 들어, 132 내지 138 또는 55 내지 65) 또한 본 발명의 일부이다. 예를 들어, 상한값 및/또는 하한값으로서 모든 상기된 값들의 조합을 사용한 값의 범위가 포함된다. 추가로, 항-NGF 항체의 상기된 양 및 농도에서 중간의 양 및 농도도 본 발명의 일부이다(예를 들어, 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 134.1, 134.2, 134.3, 134.4, 134.5, 134.6, 134.7, 134.8, 134.9, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149 또는 약 150 mg의 항체).

본 발명의 약제학적 조성물에 사용된 완충제는 조성물의 pH를 약 4.0 내지 약 8.0, 약 5.0 내지 약 7.0, 약 5.0 내지 약 6.5, 약 5.5 내지 약 7.0의 범위로 유지하는데 적합한 것이다. 바람직하게는, 상기 완충제는 본 발명의 약제학적 조성물의 pH를 약 5.0 내지 약 6.0, 약 6.0 내지 약 7.0, 약 5.5 내지 약 6.0, 약 6.0 내지 약 6.5, 약 5.75 내지 약 6.25 및 약 5.25 내지 약 5.75의 범위로 유지한다. 한 가지 양태로서, 본 발명의 조성물의 pH는 약 6.0이다. 한 가지 양태로서, 본 발명의 조성물의 pH는 약 5.5이다. 한 가지 양태로서, 본 발명의 조성물의 pH는 약 5.0이다. 상기된 pH의 중간 범위 및 값(예를 들어, pH5.0, 5.1, 5.2, 5.3, 5.4, 5.5, 5.6, 5.7, 5.8, 5.9, 6.0, 6.1, 6.2, 6.3 또는 6.4)은 또한 본 발명의 일부이다. 예를 들어, 상한값 및/또는 하한값으로서 모든 상기된 값들의 조합을 사용한 값의 범위가 포함된다.

약 5.5 내지 약 7.0의 범위내에서 pH를 조절할 수 있는 완충제의 예는 포스페이트, 아세테이트(예를 들어, 나트륨 아세테이트), 석시네이트(예를 들어, 나트륨 석시네이트), 아르기닌, 글루코네이트, 글루타메이트, 히스티딘, 시트레이트 및 기타 유기산 완충제를 포함한다.

한 가지 양태로서, 상기 완충제는 히스티딘이다. 본 발명의 특정 양태로서, 조성물중의 히스티딘의 농도는 약 1 내지 100 mM, 약 1 내지 30 mM, 약 5 내지 30 mM, 약 10 내지 30 mM, 약 30 내지 60 mM, 약 30 내지 40 mM, 약 10 내지 50 mM, 약 15 내지 60 mM, 약 15 내지 45 mM, 약 15 내지 30 mM, 약 15 내지 25 또는 약 15 내지 20 mM이다. 한 가지 양태로서, 조성물중의 히스티딘의 농도는 약 20 mM이다. 다른 양태로서, 조성물중의 히스티딘의 농도는 약 15 mM이다. 또 다른 양태로서, 조성물중의 히스티딘의 농도는 약 30 mM이다. 히스티딘의 상기된 농도의 중간 농도 및 범위(예를 들어, 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100 또는 약 100 mM의 히스티딘) 또한 본 발명의 일부이다. 상한값 및/또는 하한값으로서 모든 상기된 값들의 조합을 사용한 농도의 범위가 포함된다.

본 발명의 다른 양태로서, 상기 조성물(예를 들어, 동결건조 조성물)은 약 1 내지 10 mg의 히스티딘 또는 약 2 내지 5 mg의 히스티딘을 포함한다. 한 가지 양태로서, 조성물은 약 6 mg(예를 들어, 약 5.7 mg)의 히스티딘을 포함한다. 한 가지 양태로서, 조성물은 약 5 mg(예를 들어, 약 4.7 mg)의 히스티딘을 포함한다. 한 가지 양태로서, 조성물은 약 2 내지 3 mg의 히스티딘을 포함한다. 히스티딘의 상기된 양의 중간량 및 범위(예를 들어, 약 1, 1.5, 2, 2.2, 2.3, 2.5, 3, 3.5, 4, 4.5 5, 5.1, 5.2, 5.3, 5.4, 5.5, 5.6, 5.7, 5.8, 5.9, 6, 6.5, 7, 7.5 8, 8.5, 9, 9.5 또는 약 10 mg의 히스티딘 ) 또한 본 발명의 일부이다. 예를 들어, 상한값 및/또는 하한값으로서 모든 상기된 값들의 조합을 사용한 양의 범위가 포함된다.

세정제 또는 계면활성제가 또한 본 발명의 항체 조성물에 부형제로서 첨가될 수 있다. 세정제의 예는 폴리소르베이트(예를 들어, 폴리소르베이트 20, 80 등) 또는 폴록사머(예를 들어, 폴록사머 188)과 같은 비이온성 계면활성제를 포함한다. 첨가된 세정제의 양은 세정제가 제형된 항체의 응집을 감소시키고/시키거나 조성물중의 입자 형성을 최소화하고/하거나 흡착을 감소시키는 정도이다. 적합한 계면활성제는 예를 들어 폴리소르베이트, 폴리옥시에틸렌 알킬 에테르(예를 들어, Brij 35.RTM.) 또는 폴록사머(예를 들어, 트윈 20, 트윈 80 또는 폴록사머 188)를 포함할 수 있다. 바람직한 세정제는 폴리옥시에틸렌 알킬 에테르(예를 들어, Brij 35. RTM., 크레모포(Cremophor) A25, 심파텐스(Sympatens) ALM/230), 폴리소르베이트/트윈(예를 들어, 폴리소르베이트 20, 폴리소르베이트 80, Mirj) 및 폴록사머(예를 들어, 폴록사머 188, 폴록사머 407) 및 트윈(예를 들어, 트윈 20 및 트윈 80)이다.

본 발명의 바람직한 양태로서, 상기 조성물은 폴리소르베이트인 계면활성제를 포함한다. 본 발명의 다른 바람직한 양태로서, 조성물은 세정제 폴리소르베이트 80을 함유한다. 한 가지 양태로서, 조성물은 폴리소르베이트 80을 약 0.01 내지 약 2.0 mg/mL, 약 0.01 내지 약 1 mg/mL, 약 0.05 내지 약 2.0 mg/mL, 약 0.05 내지 약 1.0 mg/mL, 약 0.05 내지 약 0.5 mg/mL, 약 0.05 내지 약 0.1 mg/mL의 폴리소르베이트 80을 함유한다. 한 가지 양태로서, 조성물은 약 1 mg/mL의 폴리소르베이트 80을 포함한다. 다른 양태로서, 조성물은 약 0.1 mg/mL의 폴리소르베이트 80을 포함한다. 또 다른 양태로서, 조성물은 약 0.05 mg/mL의 폴리소르베이트 80을 포함한다. 한 가지 양태로서, 조성물은 폴리소르베이트 80을 약 0.001% 내지 약 0.1%, 약 0.005% 내지 약 0.08%, 약 0.007% 내지 약 0.06%, 약 0.01% 내지 약 0.04%, 약 0.01% 내지 약 0.03% 또는 약 0.01% 내지 0.02% 포함한다. 한 가지 양태로서, 조성물은 약 0.01% 폴리소르베이트 80을 포함한다. 한가지 양태로서, 조성물은 약 0.02% 폴리소르베이트 80을 포함한다. 그러나, 본 발명의 다른 양태로서, 조성물은 트윈 또는 폴리소르베이트와 같은 계면활성제로부터 필수적으로 유리되거나 이를 함유하지 않는다.

본 발명의 특정 양태로서, 조성물(예를 들어, 동결건조 조성물)은 약 0.01 내지 0.5 mg, 예를 들어 약 0.05, 0.1, 0.15, 0.2, 0.25, 0.3, 0.35, 0.4, 0.45 또는 약 0.5 mg의 계면활성제를 포함할 수 있다. 한 가지 양태로서, 조성물(예를 들어, 동결건조 조성물)은 약 0.20 mg의 계면활성제(예를 들어, 폴리소르베이트 80)를 포함한다. 한 가지 양태로서, 조성물(예를 들어, 동결건조 조성물)은 약 0.10 mg의 계면활성제(예를 들어, 폴리소르베이트 80)를 포함한다. 계면활성제의 상기된 농도 및 양에서 중간 범위 및 양(예를 들어, 0.01, 0.02, 0.03, 0.04, 0.05, 0.06, 0.07, 0.08, 0.09, 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 1, 1.1, 1.2, 1.3, 1.4, 1.5, 1.6, 1.7, 1.8, 1.9 및 2.0 mg/mL의 계면활성제) 또한 본 발명의 일부이다. 또한, 상한값 및/또는 하한값으로서 모든 상기된 값들의 조합을 사용한 값의 범위(예를 들어, 0.04 내지 1.8 mg/mL의 계면활성제)가 포함된다.

본 발명의 조성물은 또한 폴리올을 포함할 수 있다. 본 발명의 조성물에 유용한 폴리올은 이로써 한정되는 것은 아니지만 트레할로즈, 프럭토즈, 만노즈, 말토즈, 락토즈, 아라비노즈, 자일로즈, 리보스, 람노스, 갈락토즈, 글루코즈, 소르보즈, 멜레지토즈, 라피노즈, 만니톨, 자일리톨, 에리트리톨, 트레이톨, 소르비톨, 글리세롤, L-글루코네이트 및 이의 금속염 하나 이상을 포함한다.

한 가지 양태로서, 폴리올은 소르비톨, 글리세롤, 트레할로즈 및 만니톨 또는 이의 배합물로 이루어진 그룹에서 선택된다. 한 가지 양태로서, 폴리올은 만니톨이 아니다. 특정 양태로서, 본 발명의 조성물중의 폴리올의 농도는 약 1 내지 약 100 mg/mL, 약 10 내지 약 90 mg/mL, 약 20 내지 약 80 mg/mL, 약 30 내지 약 70 mg/mL, 약 40 내지 약 60 mg/mL 또는 약 50 내지 약 60 mg/mL이다. 다른 양태로서, 본 발명의 조성물(예를 들어, 동결건조 조성물)은 폴리올을 약 10 내지 100 mg, 약 10 내지 약 90 mg/mL, 약 20 내지 약 80 mg/mL, 약 30 내지 약 70 mg/mL, 약 40 내지 약 60 mg/mL 또는 약 50 내지 약 60 mg/mL의 농도로 포함한다. 다른 양태로서, 본 발명의 조성물(예를 들어, 동결건조에 적합한 조성물)은 약 1 내지 50 mg/mL, 약 10 내지 30 mg/mL 또는 약 20 내지 25 mg/mL의 폴리올을 포함한다.

또 다른 양태로서, 본 발명의 조성물(예를 들어, 동결건조 조성물)은 약 10 내지 120, 약 20 내지 120, 약 30 내지 120, 약 40 내지 120, 약 50 내지 120, 약 60 내지 120, 약 10 내지 110, 약 10 내지 100, 약 10 내지 90, 약 10 내지 80, 약 10 내지 70 mg의 폴리올 또는 이의 조합을 포함한다. 폴리올의 상기된 농도에서 중간 농도 및 범위(예를 들어, 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100 또는 약 100 mg/mL의 폴리올) 또한 본 발명의 일부이다. 상한값 및/또는 하한값으로서 모든 상기된 값들의 조합을 사용한 폴리올의 농도의 범위(예를 들어, 35 내지 70 mg/mL의 폴리올)가 포함된다.

한 가지 양태로서, 본 발명의 조성물에 사용하기에 적합한 폴리올은 당 알코올(예를 들어, 소르비톨)이다. 본 발명의 조성물은 약 20 내지 60 mg/mL, 약 30 내지 60 mg/mL, 약 20 내지 50 mg/mL 또는 약 35 내지 45 mg/mL의 소르비톨을 포함할 수 있다. 한 가지 양태로서, 조성물은 약 40 mg/mL의 소르비톨을 포함한다.

다른 양태로서, 본 발명의 조성물에 사용하기에 적합한 폴리올은 만니톨이다. 본 발명의 조성물은 약 1 내지 50 mg/mL, 약 10 내지 40 mg/mL, 약 20 내지 30 mg/mL, 약 20 내지 25 mg/mL의 만니톨을 포함할 수 있다. 한 가지 양태로서, 조성물은 약 20 mg/mL의 만니톨을 포함한다. 한 가지 양태로서, 본 발명의 조성물(예를 들어, 동결건조에 적합한 조성물)은 약 1 내지 50 mg/mL, 약 10 내지 30 mg/mL 또는 약 20 내지 25 mg/mL의 만니톨을 포함하고, 바람직하게는 20 mg/mL의 만니톨을 포함한다. 또 다른 양태로서, 본 발명의 조성물(예를 들어, 동결건조 조성물)은 약 40 내지 60 mg, 약 45 내지 55 mg 또는 약 48 내지 52 mg의 만니톨을 포함한다. 한 가지 양태로서, 조성물은 약 50 mg(예를 들어, 약 49.5 mg)의 만니톨을 포함한다.

다른 양태로서, 본 발명의 조성물에 사용하기에 적합한 폴리올은 글리세롤이다. 본 발명의 조성물은 약 1 내지 50 mg/mL, 약 10 내지 40 mg/mL, 약 20 내지 30 mg/mL, 약 20 내지 25 mg/mL 또는 약 20 mg/mL의 글리세롤을 포함할 수 있다.

또한 한 가지 이상의 당이 본 발명의 조성물에 첨가될 수 있다. 본 발명의 조성물에 유용한 당의 비제한적 예는 말토즈, 락토즈, 셀로비오즈, 젠티오비오즈, 멜리비오즈, 및 투라노즈, 프럭토즈, 레불로즈, 글로코즈, 덱스트로즈, 락토즈, 수크로즈, 및 트레할로즈(또한 마이코즈 또는 트레말로즈로도 알려져 있음), 라피노즈, 멜레지토즈, 스타치오즈 및 베르바스코즈를 포함한다. 특정 양태로서, 당의 농도는 약 1 내지 약 120 mg/ml, 약 1 내지 약 100 mg/mL, 약 10 내지 약 90 mg/mL, 약 20 내지 약 80 mg/mL, 약 30 내지 약 70 mg/mL, 약 40 내지 약 60 mg/mL 또는 약 50 내지 약 60 mg/mL이다. 다른 양태로서, 본 발명의 조성물(예를 들어, 동결건조 조성물)은 당을 약 10 내지 120, 약 20 내지 120, 약 30 내지 120, 약 40 내지 120, 약 50 내지 120, 약 60 내지 120, 약 10 내지 110, 약 10 내지 100, 약 10 내지 90, 약 10 내지 80, 약 10 내지 70 mg으로 포함한다.

특정 양태로서, 당은 수크로즈이고 본 발명의 조성물에 수크로즈는 약 10 내지 100 mg/mL, 약 10 내지 90 mg/mL, 약 10 내지 80 mg/mL, 약 10 내지 70 mg/mL, 약 20 내지 90 mg/mL, 약 20 내지 80 mg/mL, 약 20 내지 70 mg/mL, 약 30 내지 70 mg/mL 또는 약 25 내지 65 mg/mL로 존재한다. 한 가지 양태로서, 조성물은 약 70 mg/mL의 수크로즈를 포함한다. 한 가지 양태로서, 조성물(예를 들어, 동결건조에 적합한 조성물)은 약 5 mg/mL의 수크로즈를 포함한다. 한 가지 양태로서, 조성물(예를 들어, 동결건조에 적합한 조성물)은 약 45 mg/mL의 수크로즈를 포함한다. 다른 양태로서, 조성물(예를 들어, 동결건조에 적합한 조성물)은 약 46 mg/mL의 수크로즈를 포함한다.

또 다른 양태로서, 본 발명의 조성물(예를 들어, 동결건조 조성물)은 약 1 내지 100, 약 1 내지 70, 약 1 내지 50, 약 10 내지 120 mg, 약 10 내지 100 mg, 약 10 내지 50 mg, 약 10 내지 20 mg 또는 약 12 mg(예를 들어, 약 12.25 mg)의 수크로즈를 포함한다. 한 가지 양태로서, 조성물(예를 들어, 동결건조 조성물)은 약 50 내지 120 mg, 약 75 내지 120 mg 또는 약 100 내지 120 mg의 수크로즈(예를 들어, 약 110, 11, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119 또는 120 mg의 수크로즈)를 포함한다. 한 가지 양태로서, 조성물(예를 들어, 동결건조 조성물)은 약 113 mg의 수크로즈를 포함한다. 다른 양태로서, 조성물(예를 들어, 동결건조 조성물)은 약 70 mg의 수크로즈를 포함한다. 다른 양태로서, 조성물(예를 들어, 동결건조 조성물)은 약 20 mg의 수크로즈를 포함한다. 다른 양태로서, 조성물(예를 들어, 동결건조 조성물)은 약 10 mg의 수크로즈를 포함한다. 다른 양태로서, 조성물(예를 들어, 동결건조 조성물)은 약 5 mg의 수크로즈를 포함한다.

다른 양태로서, 당은 트레할로즈이다. 트레할로즈는 약 10 내지 100 mg/mL, 약 10 내지 90 mg/mL, 약 10 내지 80 mg/mL, 약 10 내지 70 mg/mL, 약 20 내지 90 mg/mL, 약 20 내지 80 mg/mL, 약 20 내지 70 mg/mL, 약 30 내지 70 mg/mL, 약 25 내지 65 mg/mL 또는 약 35 내지 55 mg/ml로 조성물에 존재할 수 있다. 한 가지 양태로서, 조성물(예를 들어, 동결건조에 적합한 조성물)은 약 40 내지 50 mg/ml(예를 들어, 약 45 mg/mL)의 트레할로즈를 포함한다.

상기된 당 농도의 중간 농도 및 범위 또한 본 발명의 일부이다(예를 들어, 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24,25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119 또는 약 120 mg/mL의 당). 상한값 및/또는 하한값으로서 모든 상기된 값들의 조합을 사용한 당의 농도 범위(예를 들어, 35 내지 70 mg/mL의 당)가 포함된다.

다른 양태로서, 상기 당 중 하나 이상과 상기 폴리올 중 하나 이상의 임의의 배합물이 본 발명의 조성물에 함께 포함될 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 조성물(예를 들어, 동결건조에 적합한 조성물)은 폴리올(예를 들어, 만니톨)과 당(예를 들어, 수크로즈)을 포함할 수 있다. 특정 양태로서, 항-NGF 항체 또는 이의 항원 결합 단편 대 폴리올(예를 들어, 만니톨), 당(예를 들어, 수크로즈) 또는 이의 배합물(예를 들어, 만니톨과 수크로즈)의 몰비(molar ratio)는 약 1:1200 초과, 바람직하게는 약 1:1400 초과, 더 바람직하게는 약 1:1400 내지 1:1500 또는 약 1:1500 초과이다.

본 발명의 특정 양태로서, 조성물은 추가로 아미노산(예를 들어, 메티오닌)을 포함한다. 한 가지 양태로서, 조성물은 약 1 내지 10 mM, 약 2 내지 10 mM, 약 2 내지 9 mM, 약 2 내지 8 mM, 약 2 내지 7 mM, 약 2 내지 6 mM, 약 2 내지 5 mM, 약 3 내지 8 mM, 약 3 내지 7 mM, 약 3 내지 6 mM 또는 약 3 내지 5 mM의 메티오닌을 포함한다. 한 가지 양태로서, 조성물은 약 4 mM의 메티오닌을 포함한다. 다른 양태로서, 조성물은 약 5 mM의 메티오닌을 포함한다. 한 가지 양태로서, 메티오닌을 포함한 조성물은 또한 폴리올(예를 들어, 만니톨) 및/또는 당(예를 들어, 수크로즈)을 포함한다. 한 가지 양태로서, 조성물은 메티오닌, 만니톨 및 수크로즈를 포함한다. 한 가지 양태로서, 조성물은 아미노산(예를 들어, 메티오닌)을 포함하지 않는다.

본 발명의 특정 양태로서, 조성물(예를 들어, 동결건조 조성물)은 메티오닌을 약 0.1 내지 10 mg, 0.5 내지 9 mg, 1.0 내지 8 mg, 1 내지 6 mg, 1 내지 5 mg, 1 내지 4 mg, 1 내지 3 mg 또는 1 내지 2 mg(예를 들어, 약 1.5, 1.6, 1.7, 1.75, 1.8, 1.81, 1.82, 1.83, 1.84, 1.85, 1.9 또는 2.0 mg)으로 포함할 수 있다. 한 가지 양태로서, 조성물(예를 들어, 동결건조 조성물)은 약 1.8 mg(예를 들어, 1.83 mg)의 메티오닌을 포함한다. 상기된 메티오닌 농도 및 양의 중간 범위 및 양도 본 발명의 일부이다(예를 들어, 1, 1.5, 2, 2.5, 3, 3.5, 4, 4.5, 5, 5.5, 6, 6.5, 7, 7.5, 8, 8.5, 9, 9.5 및 10 mM). 또한, 상한값 및/또는 하한값으로서 모든 상기된 값들의 조합을 사용한 값의 범위(예를 들어, 3.5 내지 9 mM)가 포함된다.

한 가지 양태로서, 조성물은 벤질 알코올, 페놀, m-크레졸, 클로로부탄올 및 벤즈에토늄 Cl과 같은 보존제로부터 필수적으로 유리된다. 다른 양태로서, 보존제가 조성물에 포함될 수 있다. 문헌(참조: Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. (1980))에 기재된 것과 같은 한 가지 이상의 다른 약제학적으로 허용되는 담체, 부형제 또는 안정화제가 조성물의 목적하는 특징에 유의하게 유해한 영향을 미치지 않는 한 조성물에 포함될 수 있다. 허용되는 담체, 부형제 또는 안정화제는 사용된 투여량 및 농도로 투여대상자에게 무독성이며, 추가의 완충제, 보조용매, 산화방지제(아스코르브산 및 메티오닌 포함), 킬레이트화제(예를 들어, EDTA), 금속착화합물(예를 들어, Zn-단백질 착화합물), 생체분해성 중합체(예를 들어, 폴리에스테르) 및/또는 염형성 대이온(예를 들어, 나트륨)을 포함한다.

특정 양태로서, 본 발명의 약제학적 조성물은, (a) 약 1 내지 10, 5 내지 15, 10 내지 20, 10 내지 30, 20 내지 50 또는 20 내지 75 mg/mL의 항-NGF 항체 또는 이의 항원 결합 단편, (b) 약 5 내지 50, 5 내지 30, 5 내지 20 또는 10 내지 20 mM 히스티딘 및 (c) 약 0.01 내지 0.02% 폴리소르베이트 80을 포함하거나, 이들로 구성되거나, 이들로 필수적으로 구성되는 액체로서 제형되고, 상기 조성물의 pH는 약 5.0 내지 6.0 또는 약 5.5이다. 특정 바람직한 양태로서, 항-NGF 항체는 PG100 또는 PG110의 항원 결합 단편이다. 특정 바람직한 양태로서, 히스티딘의 농도는 약 10 또는 15 mM이다.

특정 양태로서, 본 발명의 약제학적 조성물은 (a) 약 1 내지 10, 5 내지 15, 10 내지 20, 10 내지 30, 20 내지 50 또는 20 내지 75 mg/mL의 항-NGF 항체 또는 이의 항원 결합 단편, (b) 약 5 내지 50, 5 내지 30, 5 내지 20 또는 10 내지 20 mM 히스티딘, (c) 약 0.01 내지 0.2% 폴리소르베이트 80 및 (d) 약 20 내지 80, 30 내지 80 또는 40 내지 80 mg의 폴리올을 포함하거나, 이들로 구성되거나, 이들로 필수적으로 구성되는 액체로서 제형되고, 상기 조성물의 pH는 약 5.0 내지 6.0 또는 약 5.5이다. 특정 바람직한 양태로서, 항-NGF 항체는 PG100 또는 PG110의 항원 결합 단편이다. 특정 바람직한 양태로서, 히스티딘의 농도는 약 10 또는 15 mM이다. 특정 바람직한 양태로서, 폴리올은 만니톨 또는 소르비톨이다. 다른 바람직한 양태로서, 폴리올의 농도는 20, 30 또는 40 mg/mL이다. 다른 바람직한 양태로서, 조성물은 추가로 약 10 내지 20, 20 내지 50 또는 30 내지 80 mg/mL의 당, 바람직하게는 수크로즈 또는 트레할로즈를 포함한다.

특정 양태로서, 본 발명의 약제학적 조성물은 (a) 약 1 내지 10, 5 내지 15, 10 내지 20, 10 내지 30, 20 내지 50 또는 20 내지 75 mg/mL의 항-NGF 항체 또는 이의 항원 결합 단편, (b) 약 5 내지 50, 5 내지 30, 5 내지 20 또는 10 내지 20 mM 히스티딘, (c) 약 0.01 내지 0.2% 폴리소르베이트 80 및 (d) 약 20 내지 80, 30 내지 80 또는 40 내지 80 mg/mL의 당을 포함하거나, 이들로 구성되거나, 이들로 필수적으로 구성되는 액체로서 제형되고, 상기 조성물의 pH가 약 5.0 내지 6.0 또는 약 5.5이다. 특정 바람직한 양태로서, 항-NGF 항체는 PG100 또는 PG110의 항원 결합 단편이다. 특정 바람직한 양태로서, 히스티딘의 농도는 약 10 또는 15 mM이다. 특정 바람직한 양태로서, 당은 수크로즈 또는 트레할로즈이다. 다른 바람직한 양태로서, 당의 농도는 70 또는 80 mg/mL이다. 특정 양태로서, 본 발명의 약제학적 조성물은 액체 형태로 재구성하기 위해 적합한 동결건조 형태로 제공된다. 재구성된 액체의 각 mL에 대해, 동결건조 조성물은 (a) 약 1 내지 10, 5 내지 15, 10 내지 20, 10 내지 30, 20 내지 50 또는 20 내지 75 mg의 항-NGF 항체 또는 이의 항원 결합 단편, (b) 약 1 내지 20, 1 내지 10, 1 내지 5 또는 2 내지 4 mg 히스티딘 및 (c) 약 0.1 내지 0.2 mg 폴리소르베이트 80을 포함하거나, 이들로 구성되거나, 이들로 필수적으로 구성된다. 특정 바람직한 양태로서, 상기 조성물은 PG100 또는 PG110의 항원 결합 단편 약 10, 20 또는 50mg을 함유한다. 특정 바람직한 양태로서, 조성물은 약 2 내지 3 mg의 히스티딘을 함유한다. 특정 바람직한 양태로서, 상기 조성물은 0.1 mg의 폴리소르베이트 80을 함유한다.

특정한 양태로서, 본 발명의 약제학적 조성물은 액체 형태로 재구성하기 위해 적합한 동결건조 형태로 제공된다. 재구성된 액체의 각 mL에 대해, 동결건조 조성물은 (a) 약 1 내지 10, 5 내지 15, 10 내지 20, 10 내지 30, 20 내지 50 또는 20 내지 75 mg의 항-NGF 항체 또는 이의 항원 결합 단편, (b) 약 1 내지 20, 1 내지 10, 1 내지 5 또는 2 내지 4 mg의 히스티딘, (c) 약 0.1 내지 0.2 mg의 폴리소르베이트 80 및 (d) 약 20 내지 80, 30 내지 80 또는 40 내지 80 mg의 폴리올을 포함하거나, 이들로 구성되거나, 이들로 필수적으로 구성된다. 특정 바람직한 양태로서, 조성물은 약 10, 20 또는 50 mg의 PG100 또는 PG110의 항원 결합 단편을 함유한다. 특정 바람직한 양태로서, 조성물은 약 2 내지 3 mg의 히스티딘을 함유한다. 특정 바람직한 양태로서, 조성물은 0.1 mg의 폴리소르베이트 80을 함유한다. 특정 바람직한 양태로서, 조성물은 10, 20, 30 또는 40 mg의 만니톨 또는 소르비톨을 함유한다. 특정 바람직한 양태로서, 조성물은 추가로 약 10 내지 40 mg의 당, 바람직하게는 수크로즈 또는 트레할로즈를 함유한다.

특정 양태로서, 본 발명의 약제학적 조성물은 액체 형태로 재구성하기 위해 적합한 동결건조 형태로 제공된다. 재구성된 액체의 각 mL에 대해, 동결건조 조성물은 (a) 약 1 내지 10, 5 내지 15, 10 내지 20, 10 내지 30, 20 내지 50 또는 20 내지 75 mg의 항-NGF 항체 또는 이의 항원 결합 단편, (b) 약 1 내지 20, 1 내지 10, 1 내지 5 또는 2 내지 4 mg의 히스티딘, (c) 약 0.1 내지 0.2 mg의 폴리소르베이트 80 및 (d) 약 20 내지 80, 30 내지 80 또는 40 내지 80 mg/mL의 당을 포함하거나, 이들로 구성되거나, 이들로 필수적으로 구성된다. 특정 바람직한 양태로서, 조성물은 약 10, 20 또는 50 mg의 PG100 또는 PG110의 항원 결합 단편을 함유한다. 특정 바람직한 양태로서, 조성물은 약 2 내지 3 mg의 히스티딘을 함유한다. 특정 바람직한 양태로서, 조성물은 0.1 mg의 폴리소르베이트 80을 함유한다. 특정 바람직한 양태로서, 조성물은 약 20, 40, 70 또는 80 mg의 당, 바람직하게는 수크로즈 또는 트레할로즈를 함유한다.

본 발명의 조성물은 또한 치료하고자 하는 특정 증세를 위해 필요에 따라 한 가지 이상의 다른 치료제, 바람직하게는 조성물의 항체에 유해한 영향을 미치지 않는 상보적인 활성을 갖는 치료제와 배합될 수 있다. 이와 같은 치료제는 의도하는 목적에 효과적인 양으로 배합되어 존재하는 것이 적합하다.

생체내 투여를 위해 사용될 조성물은 멸균이어야 한다. 이것은 조성물의 제조 이전 또는 이후에 멸균 여과막을 통한 여과에 의해 쉽게 달성된다.

상기된 바와 같이, 본 발명의 조성물(예를 들어, 동결건조에 적합한 액체 및 동결건조 조성물)은 유리한 안정성 및 저장 특성을 갖는다. 액체 조성물의 안정성은 저장 형태에 의해 좌우되지 않으며 이로써 한정되는 것은 아니지만 동결, 동결건조, 분무건조된 조성물 또는 활성 성분이 현탁된 조성물을 포함한다. 안정성은 선택된 기간 동안에 선택된 온도에서 측정될 수 있다. 본 발명의 한 가지 관점에서, 액체 조성물중의 단백질은 액체 형태에서 적어도 약 3개월, 적어도 약 4개월, 적어도 약 5개월, 적어도 약 6개월, 적어도 약 12개월, 적어도 약 18개월 이상 안정하다. 상기된 기간의 중간 범위 또한 본 발명의 일부이며, 예를 들어 약 9개월 등이다. 또한, 상한값 및/또는 하한값으로서 모든 상기된 값들의 조합을 사용한 값의 범위가 포함된다.

바람직하게는, 조성물은 실온 또는 약 30℃ 또는 40℃에서 적어도 약 1개월동안 안정하고/하거나 약 2 내지 8℃에서 적어도 약 1년간 안정하거나, 더 바람직하게는 약 2 내지 8℃에서 적어도 약 2년간 안정하다. 또한, 조성물은 바람직하게는 조성물의 동결(예를 들어, -80℃까지) 및 해동 후(이하, "동결/해동 주기"라고 한다) 안정하다. 한 가지 양태로서, 조성물은 1, 2, 3 또는 그 이상의 동결-해동 주기 후에 안정하다.

액체 조성물중의 단백질의 안정성은 또한 예를 들어 UV 광산란 또는 크기별 배제 크로마토그래피에 의해 측정한 결과로서, 조성물중의 단백질의 단량체, 응집체 또는 단편 또는 이의 조합의 비율로서 정의될 수 있다. 본 발명의 한 가지 관점에서, 안정한 액체 조성물은, 단백질이 약 10% 미만, 바람직하게는 약 5% 미만, 더 바람직하게는 약 2% 미만으로 조성물중의 응집체로서 존재하는, 조성물이다.

한 가지 양태로서, 액체 조성물의 물리적 안정성은 교반 스트레스 검사 후, 예를 들어 24시간 또는 48시간 교반 스트레스 검사 후에 조성물의 탁도를 측정함으로써 결정한다. 예를 들어, 교반 스트레스 검사는 적절한 용량의 액체 조성물을 자석 교반기(예를 들어, 다점 HP, 550 rpm)가 장착된 비이커에 넣고, 임의의 적절한 시간(예를 들어, T0-T48 시간)에 분취량을 제거한 후, 분취량에 대해 목적하는 적절한 검사를 수행함으로써 수행될 수 있다. 교반하지 않고 동일한 조건하에 있는 조성물의 시료를 대조군으로 사용한다. 탁도 측정은 Hach(독일)의 실험실용 탁도 측정시스템을 사용하여 수행할 수 있으며, 혼탁 유닛(NTU)으로 기록한다.

또한 본 발명의 조성물은 유리한 내성 특성을 갖는다. 내성은 통증진단척도 (VAS)를 사용하여 대상자-지각된 주사부위 통증의 평가를 기초로 평가한다. VAS는 예를 들어, 0부터 극한량의 통증에 연속값에 이르는 범위에서 통증을 측정하는 측정 기기이다. 조작을 위해 VAS는 약 100 mm 길이의 수평선에 숫자 및/또는 단어 부호(예를 들어, 0 또는 10 또는 '무통' 또는 '극한통증')가 적혀있으며, 임의로 극한치사이에 추가적으로 단어 또는 숫자 부호(예를 들어, 미약, 중간 및 극심 또는 1 내지 9)가 있다[예를 들어, 참조(Lee et al. (2000) Acad. Emerg. Med. 7:550)].

측정가능한 내성에 대한 추가의 표기는 예를 들어 드레이즈 척도(Draize scale)(출혈, 점상출혈, 홍반, 부종, 소양증) 및 멍을 포함한다.

III. 항-NGF 항체

본 발명의 약제학적 조성물에 사용될 수 있는 항-NGF 항체는 예를 들어 국제 특허 출원 공보 제WO/2010/128398호, 국제 특허 출원 공보 제WO 2001/78698호, 국제 특허 출원 공보 제WO 2001/64247호, 국제 특허 출원 공보 제WO 2002/096458호, 국제 특허 출원 공보 제WO 2004/032870호, 국제 특허 출원 공보 제WO 2004/058184호, 국제 특허 출원 공보 제WO 2005/061540호, 국제 특허 출원 공보 제 WO 2005/019266호, 국제 특허 출원 공보 제 WO 2006/077441호, 국제 특허 출원 공보 제 WO 2006/131951호, 국제 특허 출원 공보 제 WO 2006/110883호, 국제 특허 출원 공보 제 WO 2009/023540호, 미국특허 공보 제7,449,616호; 미국특허 출원공보 제US20050074821호, 미국특허 출원공보 제US20080033157호, 미국특허 출원공보 제US20080182978호 또는 미국특허 출원공보 제US20090041717호에 기재되어 있으며, 이들 각각의 전문, 특히 항-NGF 항체와 관련된 내용은 본 명세서에 참고로 인용된다.

한 가지 양태로서, 약제학적 조성물에 사용될 항-NGF 항체는 생체내에서 관찰되는 긴 최종 소실 반감기에 의해 증명되는 바와 같이 향상된 생체내 안정성을 갖고 있다는 특징이 있다. 비록 기전에 한정하려는 의도는 없지만, 항체의 연장된 최종 소실 반감기는 항체 분포 체적이 증가해서라기 보다는 항체의 감소된 청소율에 기인한다고 판단된다. 바람직하게는, 본 발명의 약제학적 조성물에 사용되는 항체는 돌연변이를 포함하는 인간 IgG4 불변영역을 포함한다. 바람직한 돌연변이는 힌지 영역 돌연변이이다. 바람직하게는, 힌지 영역 돌연변이는 서열번호 9의 아미노산 위치 108에 존재하는 세린의 돌연변이를 포함한다(서열번호 9는 야생형 인간 IgG4 불변영역의 아미노산 서열을 보여준다). 더 바람직하게는, 힌지 영역 돌연변이는 서열번호 9의 아미노산 위치 108에 존재하는 세린이 프롤린으로 돌연변이되는 것을 포함한다. 바람직한 양태로서, 인간 IgG4 불변영역은 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함한다.

한 가지 양태로서, 본 발명의 약제학적 조성물에 사용되는 항-NGF 항체는 예상치 않게 긴 최종 소실 반감기를 나타내며, 예를 들어 붉은털 원숭이에서 최종 소실 반감기는 적어도 15일이고 전형적으로는 약 15 내지 약 22일의 범위(또는 15 내지 22일의 범위) 또는 약 15일 내지 약 28일의 범위(또는 15 내지 28일의 범위) 또는 약 21일 내지 약 28일의 범위(또는 21 내지 28일의 범위)이다. 이와 같이 안정화된 항-NGF 항체는 또한 랫트에서 적어도 8일, 전형적으로는 약 8 내지 약 9일의 범위(또는 8 내지 9일의 범위)로 최종 소실 반감기를 나타낸다.

한 가지 양태로서, 본 발명의 약제학적 조성물에 사용하기 위한 바람직한 항-NGF 항체 PG110은 붉은털 원숭이에서 적어도 15일, 및 전형적으로는 이보다 더 긴 평균 최종 소실 반감기를 나타낸다. 예를 들어, 한 붉은털 원숭이 연구에서, 약 15 내지 약 22일 범위의 평균 최종 소실 반감기가 관찰되었다. 다른 붉은털 원숭이 연구에서는 약 21일 내지 약 28일 범위의 평균 최종 소실 반감기가 관찰되었다. 또한, PG110은 랫트에서 약 8 내지 약 9일의 평균 최종 소실 반감기를 나타낸다.

또한, 인간의 경우 IgG의 최종 소실 반감기는 원숭이에 비해 약 2배인 것으로 본 분야에 알려져 있듯이, PG110과 같은 본 발명의 항-NGF 항체는 인간에서 적어도 10-30일 또는 적어도 10일 또는 적어도 15일 또는 적어도 20일 또는 적어도 25일, 또는 더 바람직하게는 적어도 30일 또는 적어도 40일 또는 약 10일 내지 약 40일 범위(또는 10 내지 40일의 범위) 또는 약 15일 내지 약 30일 범위(또는 15 내지 30일의 범위)의 최종 소실 반감기를 가질 것이다. 추가로 또는 대안으로서, 항체는 인간에서 적어도 30일 또는 적어도 35일 또는 적어도 40일 또는 적어도 4 내지 6주 범위(또는 4 내지 6주의 범위) 또는 적어도 4 내지 7주 범위(또는 4 내지 7주의 범위) 또는 적어도 4 내지 8주 범위(또는 4 내지 8주의 범위)의 평균 약리학적 반감기를 나타낼 수 있다. 실시예 8에 추가로 기재된 바와 같이, 본 발명의 항-NGF 항체는 인간에서 상기된 범위의 평균 약리학적 반감기를 갖는 것으로 나타났다.

붉은털 원숭이에서 PG110에 대한 최종 소실 반감기는 붉은털 원숭이에서 다른 IgG4 항체에 대해 본 분야에서 보고된 반감기보다 상당히 더 길다. 예를 들어, 붉은털 원숭이에서 약 40 내지 90 시간(약 1.6 내지 3.8일)의 반감기가 CDP571(IgG4 항-TNF 항체)에 대해 보고되었다(참조: Stephens, S. et al. (1995) Immunol. 85:668-674). 유사하게, 붉은털 원숭이에서 약 3일의 반감기가 나탈리주맙(IgG4 항-인테그린 항체)에 대해 보고되었다(참조: Refusal CHMP Assessment Report for Natalizumab, European Medicines Agency, London, 15 November 2007, Doc. Ref. EMEA/CHMP/8203/2008).

한 가지 양태로서, 본 발명의 약제학적 조성물은, 바람직한 힌지 영역 돌연변이가 서열번호 9의 위치 108에서 세린이 프롤린으로 돌연변이된 것인, 항-NGF 항체를 포함한다. 이 돌연변이는 이전에 본 분야에서 공개되었고(참조: Angal, S. et al. (1993) Mol . Immunol. 30:105-108) IgG4 분자의 이질성, 특히 단일 중쇄와 단일 경쇄를 함유한 반항체(half antibody)의 형성을 피하는 것으로 보고되었다. 따라서, 서열번호 9의 위치 108에서 프롤린외에 다른 아미노산의 치환 또한 본 발명에 속하며 이러한 치환은 IgG4 분자의 이질성(예를 들어, 반항체의 형성)을 제거하는데 Ser이 Pro로 돌연변이된 것과 동일한 효과를 달성한다. IgG4 분자의 이질성을 제거하기 위한 위치 108의 돌연변이의 능력은 상기된 문헌(참조: Angal et al. (1993))에 기재된 바와 같이 평가할 수 있다.

서열번호 9의 위치 108에서의 변형외에 또는 대안으로서, FcRN-IgG 상호작용의 친화성을 향상시켜 변형된 IgG에 대해 연장된 반감기를 유도하는 다른 IgG 힌지 영역 돌연변이들이 기재되었다. 이와 같은 추가적인 또는 대안적인 변형의 예는 다음에 상응하는 하나 이상의 IgG 불변영역 잔기에서의 돌연변이를 포함한다: Thr250, Met252, Ser254, Thr256, Thr307, Glu308, Met428, His433 및/또는 Asn434 [또한, 문헌(참조: Shields, R.L. et al. (2001) J. Biol. Chem. 276:6591-6604; Petkova, S.B. et al. (2006) Int. Immunol. 18:1759-1769; Hinton, P.R. et al. (2004) J. Biol. Chem. 279:6213-6216; Kamei, D.T. et al. (2005) Biotechnol. Bioeng. 92:748-760; Vaccaro, C. et al. (2005) Nature Biotechnol. 23:1283-1288; Hinton, P.R. et al. (2006) J. Immunol. 176:346-356)에 기재되어 있음].

또한, 힌지 영역 돌연변이의 대안으로서, IgG4 불변영역의 다른 안정화 변형이 기재되었다. 예를 들어, 다른 양태로서, 인간 IgG4 불변영역의 돌연변이는 IgG4 CH3 영역의 IgG1 CH3 영역으로의 치환, IgG4 CH2 및 CH3 영역의 IgG1 CH2 및 CH3 영역으로의 치환 또는 IgG4 불변영역의 위치 409(Kabat 번호지정방식에 따름)에 존재하는 아르기닌의 라이신으로의 치환을 포함한다(미국특허 출원공보 제20080063635호에 기재됨). 또 다른 양태로서, 인간 IgG4 불변영역의 돌연변이는 Arg409, Phe405 또는 Lys370(Kabat 번호지정방식에 따른)의 치환, 예를 들어 Arg409의 Lys, Ala, Thr, Met 또는 Leu로의 치환 또는 Phe405의 Ala, Val, Gly 또는 Leu로의 치환을 포함한다(국제 특허 출원 공보 제WO2008/145142호에 기재됨).

목적하는 돌연변이를 표준 재조합 DNA 기술, 예를 들어 인간 IgG4 불변영역을 암호화하는 핵산의 위치지정돌연변이유도 또는 PCR-매개된 돌연변이유도를 사용하여 인간 IgG4 불변영역 도메인내로 도입할 수 있다. 또한, 항체 중쇄 가변영역을 암호화하는 DNA는, 가변 영역 및 불변영역이 작동적으로 연결되어 불변영역이 돌연변이된 인간 IgG4 불변영역인 전장(full-length) 면역글로불린 중쇄를 암호화하는 벡터를 형성하도록 하는, 돌연변이된 인간 IgG4 불변영역을 암호화하는 발현 벡터내로 도입할 수 있다. 그런 후 표준 조재합 단백질 발현 방법을 사용하여, 발현 벡터를 사용하여 전장 면역글로불린 중쇄를 발현시킬 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 항-NGF 항체는 실시예1에 상세히 기재된 바와 같이 작제할 수 있다.

항체의 최종 소실 반감기는 본 분야에 공지된 표준 방법을 사용하여 결정할 수 있다. 예를 들어, 대상자(예를 들어, 붉은털 원숭이, 스프라그-다울리 랫트)에게 항체를 투여한 후 혈액 시료는 투여 후 여러 경과 시점에서 획득하고 혈액 시료로부터의 혈청중의 항체의 농도를 항체 농도를 결정하는 본 분야의 공지 기술(예를 들어, ELISA 검사)을 사용하여 결정할 수 있다. 항체의 최종 반감기의 계산은 공지된 약동학적 방법, 예를 들어 약동학적 변수를 계산하기 위해 설계된 컴퓨터 시스템 및 소프트웨어(이의 비한정적 예는 WinNonlin 소프트웨어가 설치된 SNBL USA Pharmacokinetics Analysis System을 들 수 있다)를 사용하여 달성할 수 있다.

한 가지 양태로서, 본 발명의 약제학적 조성물은 PG110 항체의 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 포함하는 항-NGF 항체 또는 이의 항원-결합 부분을 함유한다. PG110의 중쇄 가변영역은 서열번호 1에 나타나고, PG110의 경쇄 가변영역은 서열번호 2에 나타난다. 따라서, 한 가지 양태로서, 본 발명의 항-NGF 항체는 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함한 중쇄 가변영역을 포함한다. 다른 양태로서, 본 발명의 항-NGF 항체는 서열번호 2의 아미노산 서열을 포함한 경쇄 가변영역을 포함한다. 또 다른 양태로서, 본 발명의 항-NGF 항체는 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함한 중쇄 가변영역과 서열번호 2의 아미노산 서열을 포함한 경쇄 가변영역을 포함한다.

PG110 중쇄(가변 및 불변 영역)의 전장 아미노산 서열은 서열번호 13에 나타난다. 이 중쇄는 리더 또는 시그널 서열을 포함하는 전구 중쇄(예를 들어, 서열번호 12에 해당하는 아미노산 서열)로부터 제조할 수 있다. 서열번호 12의 전구 중쇄는 서열번호 11로 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다.

PG110 경쇄(가변 및 불변 영역)의 완전한 아미노산 서열은 서열번호 16에 해당한다. 이 경쇄는 리더 또는 시그널 서열을 포함하는 전구체 경쇄(예를 들어, 서열번호 15에 나타나는 아미노산 서열)로부터 제조할 수 있다. 서열번호 15의 전구체 경쇄는 서열번호 14로 나타나는 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다.

따라서, 다른 양태로서, 본 발명의 약제학적 조성물에 사용하기 위한 항-NGF 항체는 서열번호 13의 아미노산 서열을 포함한 중쇄를 포함하며, 이 항체는 붉은털 원숭이에서 적어도 15일의 혈청 반감기를 갖는다. 다른 양태로서, 붉은털 원숭이에서의 혈청 반감기는 약 15일 내지 약 22일 범위(또는 15 내지 22일의 범위)일 수 있다. 다른 양태로서, 랫트에서의 혈청 반감기는 적어도 8일 또는 약 8일 내지 약 9일 범위(또는 8 내지 9일의 범위)일 수 있다. 또 다른 양태로서, 인간에서의 혈청 반감기는 적어도 10 내지 30일 또는 적어도 10일 또는 적어도 15일 또는 적어도 20일 또는 적어도 25일 또는 적어도 30일 또는 적어도 40일 또는 약 10일 내지 약 40일 범위(또는 10 내지 40일의 범위) 또는 약 15 내지 약 30일 범위(또는 15 내지 30일의 범위)일 수 있다. 추가로 또는 대안으로서, 항체는 인간에서 적어도 30일 또는 적어도 35일 또는 적어도 40일 또는 적어도 4 내지 6 주 범위(또는 4 내지 6주의 범위) 또는 적어도 4 내지 7 주 범위(또는 4 내지 7주의 범위) 또는 적어도 4 내지 8 주 범위(또는 4 내지 8주의 범위)의 평균 약동학적 반감기를 나타낼 수 있다. 바람직하게는, 중쇄는 서열번호 11의 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 바람직하게는, 상기 항체의 경쇄는 서열번호 16의 아미노산 서열을 포함한다. 바람직하게는, 상기 경쇄는 서열번호 14의 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다.

또 다른 양태로서, 본 발명의 약제학적 조성물에 사용하기 위한 항-NGF 항체는 서열번호 13의 아미노산 서열을 포함한 중쇄와 서열번호 16의 아미노산 서열을 포함한 경쇄를 포함한다.

또한 다른 양태로서, 본 발명의 약제학적 조성물에 사용하기 위한 항-NGF 항체는 서열번호 11의 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 중쇄와 서열번호 14의 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 경쇄를 포함한다.

PG110의 결합 특이성이 가변 도메인의 상보성 결정 영역(CDR)에 의해 제공되는 상태에서, 다른 양태로서, 본 발명의 약제학적 조성물에 사용하기 위한 항-NGF항체는 PG110의 중쇄, PG110의 경쇄 또는 둘 다의 CDR을 포함한다. PG110의 중쇄 CDR 1, 2 및 3은 각각 서열번호 3, 4, 및 5에 나타난다. PG110의 경쇄 CDR 1, 2 및 3은 각각 서열번호 6, 7 및 8에 나타난다. 따라서, 한 가지 양태로서, 본 발명의 항-NGF 항체는 각각 서열번호 3, 4 및 5의 아미노산 서열을 갖는 CDR 1, 2 및 3을 포함한 중쇄 가변영역을 포함한다. 다른 양태로서, 본 발명의 약제학적 조성물에 사용하기 위한 항-NGF 항체는 서열번호 6, 7 및 8의 아미노산 서열을 각각 갖는 CDR 1, 2 및 3을 포함한 경쇄 가변영역을 포함한다. 또 다른 양태로서, 본 발명의 약제학적 조성물에 사용하기 위한 항-NGF 항체는 서열번호 3, 4, 및 5의 아미노산 서열을 각각 갖는 CDR 1, 2 및 3을 포함한 중쇄 가변영역을 포함하고 서열번호 6, 7 및 8의 아미노산 서열을 각각 갖는 CDR 1, 2 및 3을 포함한 경쇄 가변영역을 포함한다.

또 다른 양태로서, 본 발명의 약제학적 조성물에 사용하기 위한 항-NGF 항체는 PG110의 중쇄 및/또는 경쇄 가변영역에 상동성인 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변영역을 포함할 수 있고 상기 항체는 PG110에 의해 나타나는 개량된 생체내 안정성을 유지한다. 예를 들어, 항-NGF 항체의 중쇄 가변영역은 서열번호 1의 아미노산 서열에 적어도 90% 상동성, 더 바람직하게는 적어도 95% 상동성, 더 바람직하게는 적어도 97% 상동성 및 훨씬 더 바람직하게는 적어도 99% 상동성인 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 항-NGF 항체의 경쇄 가변영역은 서열번호 2의 아미노산 서열에 적어도 90% 상동성, 더 바람직하게는 적어도 95% 상동성, 더 바람직하게는 적어도 97% 상동성, 및 훨씬 더 바람직하게는 적어도 99% 상동성인 아미노산 서열을 포함할 수 있다.

본 명세서에 사용된 두 아미노산 서열들 사이의 상동성 비율(%)은 두 서열들 사이의 동일성 비율(%)과 동등하다. 두 서열들간의 동일성 비율(%)은 상기 서열들에서 공유되는 동일한 위치 개수의 함수(즉 상동성(%) = 동일한 위치 수/총 위치 수 x 100)로서 갭의 개수와 각 갭의 길이를 감안하여 두 서열들의 최적 배열을 위해 도입될 필요가 있다. 두 서열들 사이의 서열 비교 및 동일성 비율의 측정은 수학적 알고리즘을 사용하여 달성할 수 있다. 예를 들어, E. Meyers 및 W. Miller의 알고리즘을 사용하여 두 아미노산 서열들간의 동일성 비율을 측정할 수 있으며(참조: Comput. Appl. Biosci., 4:11-17 (1988)), 상기 알고리즘은 PAM120 중량 잔기 표, 갭 길이 페널티 12 및 갭 페널티 4를 사용하여 ALIGN 프로그램(버젼 2.0)에 적용되었다. 또한, 두 아미노산 서열들간의 동일성 비율은 Needleman 및 Wunsch(참조: J. Mol. Biol. 48:444-453 (1970)) 알고리즘을 사용하여 측정할 수 있으며, 상기 알고리즘은 Blossum 62 매트릭스 또는 PAM250 매트릭스 및 16, 14, 12, 10, 8, 6 또는 4의 갭 중량 및 1, 2, 3, 4, 5 또는 6의 길이 중량을 사용하여 GCG 소프트웨어 패키지(http://www.gcg.com에서 입수가능함)의 GAP 프로그램에 적용되었다.

또 다른 양태로서, 본 발명의 약제학적 조성물에 사용하기 위한 항-NGF 항체는 PG110의 중쇄 및/또는 경쇄 가변영역의 아미노산 서열을 포함한 중쇄 및 경쇄 가변영역을 포함할 수 있으나, 하나 이상의 보조 치환이 서열(들)내로 도입되는 한편, 상기 항체는 PG110에 의해 나타나는 개량된 생체내 안정성을 보유한다. 예를 들어, 항-NGF 항체의 중쇄 가변영역은 서열번호 1과 비교하여 1, 2, 3, 4 또는 5개의 보존 아미노산 치환을 제외하고 서열번호 1의 아미노산 서열과 동일한 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 항-NGF 항체의 경쇄 가변영역은 서열번호 2와 비교하여 1, 2, 3, 4 또는 5개의 보존 아미노산 치환을 제외하고 서열번호 2의 아미노산 서열과 동일한 아미노산 서열을 포함할 수 있다.

본 명세서에 사용된 용어 "보존 아미노산 치환"은 해당 아미노산 서열을 함유하는 항체의 결합 또는 안정성 특징에 유의적으로 영향을 미치지 않거나 변형시키지 않는 아미노산 변형을 가리킨다. 이와 같은 보존 변형은 아미노산 치환, 부가 및 결실을 포함한다. 변형은 본 분야에 알려진 표준 기술, 예를 들어 부위지정돌연변이유도 및 PCR-매개된 돌연변이유도에 의해 본 교시내용의 항체내로 도입될 수 있다. 보존 아미노산 치환은 아미노산 잔기가 유사한 측쇄를 갖는 아미노산 잔기로 대체된 것이다. 유사한 측쇄를 갖는 아미노산 잔기의 계열은 본 분야에 공지되어 있다. 이들 계열은 염기성 측쇄를 갖는 아미노산(예를 들어, 라이신, 아르기닌, 히스티딘), 산성 측쇄를 갖는 아미노산(예를 들어, 아스파르트산, 글루탐산), 비전하 극성 측쇄를 갖는 아미노산(예를 들어, 글리신, 아스파라긴, 글루타민, 세린, 트레오닌, 티로신, 시스테인, 트립토판), 비극성 측쇄를 갖는 아미노산(예를 들어, 알라닌, 발린, 류신, 이소류신, 프롤린, 페닐알라닌, 메티오닌), 베타-분지된 측쇄를 갖는 아미노산(예를 들어, 트레오닌, 발린, 이소류신) 및 방향족 측쇄를 갖는 아미노산(예를 들어, 티로신, 페닐알라닌, 트립토판, 히스티딘)을 포함한다. 따라서, PG110의 가변영역내에서 하나 이상의 아미노산 잔기가 동일한 측쇄 계열로부터 다른 아미노산 잔기로 치환될 수 있으며 변형된 항체는 본 명세서에 기술된 기능 검사를 사용하여 보유하고 있는 기능에 대해 검사할 수 있다.

또 다른 양태로서, 본 발명의 약제학적 조성물에 사용하기 위한 항-NGF 항체는 PG110 항체로서 NGF상의 동일한 에피토프와 결합하거나 PG110과 NGF에 결합하는 것에 대해 교차 경쟁하는 항원-결합 영역(즉, 가변영역)을 포함한다. 따라서, 한 가지 양태로서, 본 발명의 항-NGF 항체는, 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변영역과 서열번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변영역을 포함한 항체와 NGF로의 결합에 대해 경쟁한다.

이러한 교차 경쟁 항체는 표준 NGF 결합 검사에서 PG110과 교차 경쟁하는 이의 능력을 기초로 동정할 수 있다. 예를 들어, 표준 ELISA 검사가 사용될 수 있는데, 이 경우 재조합 NGF 단백질(예를 들어, 인간 NGF-β)가 평판상에 고정되고, 항체중 하나가 형광 표지되며, 표지된 항체의 결합을 경쟁 소실시키는 비표지 항체의 능력이 평가된다. 추가로 또는 대안적으로, BIAcore 분석법을 사용하여 교차 경쟁하는 항체의 능력을 평가할 수 있다. 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함한 중쇄 가변영역과 서열번호 2의 아미노산 서열을 포함한 경쇄 가변영역을 포함한 항체와 NGF로의 결합에 대해 경쟁하는 항체의 능력을 시험하기 위해 사용할 수 있는 적합한 결합 검사가 이전에 공지되어 있다(예를 들어, 국제 특허 출원 공보 제WO/2010/128398호).

또 다른 양태로서, 본 발명의 조성물에 유용한 항-NGF 항체는 PG110 항체의 하나 이상의 작용 특성을 나타낸다. 예를 들면, 본 발명의 항-NGF 항체는 다음의 작용 특성 중 하나 이상을 나타낼 수 있다:

- 인간 NGF와 결합하지만 인간 뇌-유도되는 신경 영양 인자(BDNF), 인간 뉴트로핀 3(NT-3) 또는 인간 뉴트로핀 4(NT-4)와 결합하지 않는 작용 특성;

- 인간 또는 랫트 NGF와 100 pM 이하의 K_D로 결합하는 작용 특성;

- TrkA 또는 p75^NTR에 대한 NGF의 결합을 억제하는 작용 특성;

- TF-1 세포의 NGF-의존성 증식을 억제하는 작용 특성;

- NGF-의존성 병아리 척주근신경절 생존을 억제하는 작용 특성;

- NGF-의존성 PC12 세포 신경돌기 돌출을 억제하는 작용 특성.

이들 작용 특성은 본 분야에 공지된 시험관내 검사 및 예를 들어 국제 특허 출원 공보 제WO/2010/128398호에 기술된 시험관내 검사를 사용하여 평가할 수 있다. 인간 NGF에 항체의 특이적 결합과 관련하여, 본 명세서에서 사용된 "뇌-유도된 신경 영양 인자(BDNF), 인간 뉴트로핀 3(NT-3) 또는 인간 뉴트로핀 4(NT-4)와 결합하지 않는"은 표준 결합 검사(예를 들어, ELISA 또는 실시예에 기재된 바와 같은 다른 적합한 시험관내 검사)에서 BDNF, NT-3 또는 NT-4와 항체의 관찰된 결합의 양이 결합의 배경 수준(예를 들어, 대조 항체에 대해)과 비슷하다는 것, 예를 들어 배경 수준에 비해 2배 이하 또는 인간 NGF와의 결합과 비교하여 BDNF, NT-3 또는 NT-4와 5% 미만 결합(인간 NGF와의 결합 수준을 100% 결합으로 설정)을 의미한다.

또 다른 양태로서, 본 발명의 약제학적 조성물에 사용하기 위한 항-신경 성장 인자(NGF) 항체는 인간 IgG4 불변영역을 포함하며, 여기서 인간 IgG4 불변영역은 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하고(또는 인간 IgG4 불변영역은 서열번호 9의 아미노산 위치 108에서 세린의 돌연변이, 바람직하게는 위치 108에서 세린의 프롤린으로의 돌연변이를 포함한다) 상기 항체는 인간 또는 랫트 NGF와 100 pM 이하의 K_D (또는 대안적으로, K_D가 300 pM 이하, 200 pM 이하, 150 pM 이하, 75 pM 이하 또는 50 pM 이하)로 결합하고, TrkA 또는 p75^NTR의 NGF로의 결합을 250 pM 이하의 IC₅₀(또는 대안으로서, IC₅₀ 500 pM 이하, 400 pM 이하, 300 pM 이하 또는 200 pM 이하)으로 억제하며, TF-1 세포의 NGF-의존성 증식을 50 ng/ml 이하의 IC₅₀(또는 대안으로서, IC₅₀ 150 ng/ml 이하, 100 ng/ml 이하, 75 ng/ml 이하 또는 40 ng/ml 이하)으로 억제한다. 바람직하게는, 항체는 인간에서 적어도 10 내지 30일 또는 적어도 10일 또는 적어도 15일 또는 적어도 20일 또는 적어도 25일 또는 적어도 30일 또는 약 10일 내지 약 40일의 범위(또는 10 내지 40일의 범위) 또는 약 15일 내지 약 30일의 범위(또는 15 내지 30일 범위)의 평균 최종 소실 반감기를 갖는다. 추가로 또는 대안적으로, 항체는 인간에서 적어도 30일 또는 적어도 35일 또는 적어도 40일 또는 적어도 4 내지 6 주 범위(또는 4 내지 6 주 범위) 또는 적어도 4 내지 7 주 범위(또는 4 내지 7 주 범위) 또는 적어도 4 내지 8 주 범위(또는 4 내지 8 주 범위)의 평균 약동학적 반감기를 나타낼 수 있다. 추가로 또는 대안적으로, 항체는 붉은털 원숭이에서 적어도 15일 및 전형적으로는 약 15 내지 약 22일 범위(또는 15 내지 22일의 범위) 또는 약 15일 내지 약 28일 범위(또는 15 내지 28일의 범위) 또는 약 21 내지 약 28일 범위(예를 들어, 또는 21 내지 28일의 범위)의 평균 최종 소실 반감기를 나타낼 수 있다. 추가로 또는 대안적으로, 항체는 랫트에서 적어도 8일, 전형적으로는 약 8 내지 약 9일 범위(또는 8 내지 9일의 범위)에서 최종 소실 반감기를 나타낼 수 있다. 항체는 또한, 인간 NGF와 결합하지만 인간 뇌-유도된 신경 영양 인자(BDNF), 인간 뉴트로핀 3(NT-3) 또는 인간 뉴트로핀 4(NT-4)와 결합하지 않는 특성; NGF-의존성 병아리 척주근신경절 생존을 억제하는 특성; 및/또는 NGF-의존성 PC12 세포 신경돌기 돌출을 억제하는 특성과 같은 하나 이상의 추가적인 작용 특성을 나타낼 수 있다. 바람직하게는, 항체는 대상자에게 항-NGF 항체를 일회 용량으로 투여한 후 적어도 약 1주 내지 약 12주의 기간 동안 통증을 완화시킨다. 바람직하게는 항체는 각각 서열번호 3, 4 및 5의 아미노산 서열을 갖는 CDR 1, 2 및 3을 포함한 중쇄 가변 영역을 포함하거나 항체는 각각 서열번호 6, 7 및 8의 아미노산 서열을 각각 갖는 CDR 1, 2 및 3을 포함한 경쇄 가변 영역을 포함하거나, 항체는 각각 서열번호 3, 4 및 5의 아미노산 서열을 갖는 CDR 1, 2 및 3을 포함한 중쇄 가변 영역 및 각각 서열번호 6, 7 및 8의 아미노산 서열을 갖는 CDR 1, 2 및 3을 포함한 경쇄 가변영역을 포함한다. 바람직하게는 항체는 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함한 중쇄 가변 영역을 포함하거나 항체는 서열번호 2의 아미노산 서열을 포함한 경쇄 가변영역을 포함하거나, 항체는 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함한 중쇄 가변영역 및 서열번호 2의 아미노산 서열을 포함한 경쇄 가변 영역을 포함하거나, 항체는, 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함한 중쇄 가변영역과 서열번호 2의 아미노산 서열을 포함한 경쇄 가변영역을 포함한 항체와 NGF로의 결합에 대해 경쟁한다.

또 다른 양태로서, 본 발명의 약제학적 조성물에 사용하기 위한 항-NGF 항체는 대상자에게 투여될 때 반동 효과를 나타내지 않는다(예를 들어, 항체는 반동 효과가 대상자에게서 발생하지 않도록 하는 투여량 및 횟수로 투여된다). 항-NGF 항체가 단회 또는 반복 투여 후에 초기 효능기간 후 대상자에서 감소된 효능을 나타내는 반동 효과가 다른 항-NGF 항체의 동물 모델 및 임상 연구 둘 다에서 보고되었다. 예를 들어, "반동 현상"이라고 하는 그와 같은 영향은 랫트의 만성 협착 손상(CCI) 모델에서 항-랫트 NGF 항체에 대해 보고되었다(참조: Ro, L-S. et al. (1999) Pain 79:265-274). 추가로, 항-NGF 항체 타네주맙(또한, RN624, E3, CAS 등록번호 880266-57-9로도 알려짐)을 사용한 임상 통증 연구에서 초기 마취 기간 후에 촉각 민감성 및 저림증과 같은 증가된 부작용 기간이 관찰된 것으로 보고되었다(참조: Hefti, Franz F.의 프리젠테이션, Rinat Neuroscience, LSUHSC, Shreveport, Louisiana, September 26, 2006). 비록 기전으로 한정고자 하는 것은 아니지만, 본 명세서에 기재된 항-NGF 항체의 연장된 최종 소실 반감기가 이들 항체가 반동 효과를 나타내지 않도록 해 주는 것으로 판단된다. 따라서, 본 발명의 조성물에 사용된 항-NGF 항체의 다른 이점은 선행 기술의 다른 항-NGF 항체와 비교하여 생체내의 더 지속적이고 연장된 활성을 포함한다. 이와 같은 항-NGF항체의 연장된 최종 소실 반감기에서, 보다 적은 투여량이 사용될 수 있으며(다른 항-NGF 항체에 비하여) 그러한 항체를 함유한 조성물은 필요한 경우 보다 더 빈번한 간격으로 사용될 수 있고 이에 따라 대상자에게 반동 효과를 회피할 수 있는 투여량 및 시기 치료법을 선택할 수 있다.

또 다른 양태로서, 본 발명의 약제학적 조성물에 사용하기 위한 항-NGF 항체는 대상자에게 장기간 동안 통증을 완화시킬 수 있으며, 예를 들어, 대상자에게 항-NGF 항체의 일회 용량을 투여한 후 항체는 적어도 약 1주 내지 약 12주(또는 1주 내지 12주 동안)의 기간 동안 통증을 완화시킬 수 있다. 한 가지 양태로서, 대상자에게 항-NGF 항체의 일회 용량을 투여한 후 항체는 적어도 약 1주(또는 적어도 1주)의 기간 동안 통증을 완화시킨다. 다른 양태로서, 대상자에게 항-NGF 항체의 일회 용량을 투여한 후 항체는 적어도 약 2주(또는 적어도 2주)의 기간 동안 통증을 완화시킨다. 또 다른 양태로서, 대상자에게 항-NGF 항체의 일회 용량을 투여한 후 항체는 적어도 약 4주(또는 적어도 4주)의 기간 동안 통증을 완화시킨다. 또 다른 양태로서, 대상자에게 항-NGF 항체의 일회 용량을 투여한 후 항체는 적어도 약 8주 (또는 적어도 8주)의 기간 동안 통증을 완화시킨다. 또 다른 양태로서, 대상자에게 항-NGF 항체의 일회 용량을 투여한 후 항체는 적어도 약 12주(또는 적어도 12주)의 기간 동안 통증을 완화시킨다. 또 다른 양태로서, 대상자에게 항-NGF 항체의 일회 용량을 투여한 후 항체는 적어도 약 4주 내지 약 12주(또는 4주 내지 12주 동안)의 기간 동안 통증을 완화시킨다. 또 다른 양태로서, 대상자에게 항-NGF 항체의 일회 용량을 투여한 후 항체는 적어도 약 8주 내지 약 12주(또는 8주 내지 12주 동안)의 기간 동안 통증을 완화시킨다.

대상자에서 통증을 완화시키는 항체의 능력은 본 분야에 설정된 검사를 사용하여 평가할 수 있다. 항-NGF 항체에 의한 통증 완화의 기간을 평가하는데 적합한 동물 모델은 예를 들어 국제 특허 출원 공보 제WO 2006/131951호 및 미국특허 출원공보 제20080182987호에 기재되어 있다. 이와 같은 동물 모델의 비제한적 예는 궁둥신경의 만성 협착에 의해 유발된 신경병증 통증 모델, 후족의 절개를 동반한 수술후 통증 모델, 완전 프로인츠 보조제(CFA)-유도된 관절염을 동반한 류마티스성 관절염 통증 모델 및 문헌(참조: Halvorson, K.G. et al. (2005) Cancer Res. 65:9426-9435 and Sevcik, M.A. et al. (2005) Pain 115:128-141)에 기재된 것과 같은 암 통증 모델을 포함한다. 또한, 통증 완화는 인간을 대상으로 임상 평가할 수 있고 통증 완화의 기간은 항-NGF 항체로 치료받고 있는 인간 대상자(들)에 의해 보고된 통증 수준을 기초로 결정할 수 있다.

또 다른 양태로서, 본 발명의 약제학적 조성물에 사용하기 위한 항-NGF 항체는 단클론 항체를 유도하기 위한 것으로 본 분야에 공지된 표준 방법에 의해 제조되는 항-NGF 항체의 중쇄 가변영역 및/또는 경쇄 가변영역을 포함할 수 있으며, 예를 들어, 비인간 단클론 항체(이후에 항체가 인간화될 수 있음)를 생성하는 것으로서 문헌(참조: Kohler and Milstein (1975) Nature 256: 495)에 기재된 표준 체세포 하이브리드화 기술뿐만 아니라 파아지 디스플레이 라이브러리 기술 또는 인간 면역글로불린 유전자를 발현하는 트랜스제닉 동물을 사용하는 방법을 들 수 있다. 항체를 선택하는 파아지 디스플레이 라이브러리 기술은 예를 들어 문헌(참조: McCafferty et al., Nature, 348:552-554 (1990), Clarkson et al., Nature, 352:624-628 (1991), Marks et al., J. Mol . Biol., 222:581-597 (1991) 및 Hoet et al (2005) Nature Biotechnology 23, 344-348); Ladner 등의 미국특허 공보 제5,223,409호, 제5,403,484호 및 제5,571,698호; Dower 등의 미국특허 공보 제5,427,908호 및 제5,580,717호; McCafferty 등의 미국특허 공보 제5,969,108호 및 제6,172,197호; 및 Griffiths 등의 미국특허 공보 제5,885,793호, 제6,521,404호, 제6,544,731호, 제6,555,313호, 제6,582,915호 및 제6,593,081호에 기재되어 있다. 인간 면역글로불린 유전자를 발현하는 트랜스제닉 동물을 사용하여 항체를 유도하는 방법은 예를 들어 문헌(참조: Lonberg, et al. (1994) Nature 368(6474): 856-859; Lonberg, N. and Huszar, D. (1995) Intern. Rev. Immunol. 13: 65-93, Harding, F. and Lonberg, N. (1995) Ann . N.Y. Acad . Sci. 764:536-546); Lonberg 및 Kay의 미국특허 공보 제5,545,806호, 제5,569,825호, 제5,625,126호, 제5,633,425호, 제5,789,650호, 제5,877,397호, 제5,661,016호, 제5,814,318호, 제5,874,299호 및 제5,770,429호; Surani 등의 미국특허 공보 제5,545,807호; Lonberg 및 Kay의 국제 특허 출원 공보 제WO 92/03918호, 제WO 93/12227호, 제WO 94/25585호, 제WO 97/13852호, 제WO 98/24884호 및 제WO 99/45962호; Ishida 등의 국제 특허 출원 공보 제WO 02/43478호; 및 Kucherlapati 등의 미국특허 공보 제5,939,598호, 제6,075,181호, 제6,114,598호, 제6, 150,584호 및 제6,162,963호에 기재되어 있다.

여러 가지 양태로서, 본 발명의 조성물에 사용하기 위한 항-NGF 항체는 키메라 항체, 인간화 항체 또는 인간 항체일 수 있다. 또한, 항체는 잠재적 T 세포 에피토프가 제거된 것일 수 있다. 잠재적 T 세포 에피토프를 제거하여 항체 잠재적 면역원성을 감소시키는 방법은 본 분야에 공지되어 있다(예를 들어, 참조: Carr 등의 미국특허 출원공보 제20030153043호).

본 발명의 항체 또는 항체의 부분은 유도체화되거나 다른 기능성 분자(예를 들어, 다른 펩타이드 또는 단백질)에 결합될 수 있다. 따라서, 본 발명의 약제학적 조성물에 사용하기 위한 항체 또는 항체의 부분은 본 명세서에 기재된 PG110 항체의 유도체화 및 다른 변형된 형태를 포함한다. 예를 들어, 본 발명의 항체 또는 항체의 부분은, 예를 들어 다른 항체(예를 들어, 이특이성 항체 또는 디아바디), 탐지제, 세포독성제, 약제 및/또는 다른 분자(예를 들어, 스트렙타비딘 코어 영역 또는 폴리히스티딘 태그)와 항체 또는 항체 부분의 결합을 매개할 수 있는 단백질 또는 펩타이드와 같은, 하나 이상의 다른 분자 독립체에(화학적 결합, 유전자 융합, 비공유 결합 등에 의해) 기능적으로 연결될 수 있다.

유도체화된 항체의 한 가지 유형은 두 개이상의 항체를 가교시킴으로써(동일한 유형 또는 상이한 유형의 항체로, 예를 들어 이특이성 항체를 형성) 생성한다. 적합한 크로스링커(crosslinker)는 이종이작용성(heterobifunctional)으로 적절한 스페이서에 의해 분리된 2개의 명백한 반응기들을 갖는 것(예를 들어, m-말레이미도벤조일-N-하이드록시석신이미드 에스테르)이거나 단독이작용성(homobifunctional)인 것(예를 들어, 디석신이미딜 수베레이트)을 포함한다. 이러한 링커는 일리노이주 락포드 소재의 피어스 케미칼 컴퍼니(Pierce Chemical Company)로부터 입수가능하다.

본 발명의 항체 또는 항체 부분을 유도체화할 수 있는 유용한 탐지제는 형광 화합물을 포함한다. 형광 탐지제의 예는 플루오레세인, 플루오레세인 이소티오시아네이트, 로다민, 5-디메틸아민-1-나프탈렌설포닐 클로라이드, 파이코에리트린 등을 포함한다. 또한 항체는 탐지용 효소, 예를 들어 알카리성 포스파타제, 서양고추냉이 퍼옥시다제, 글루코즈 옥시다제 등으로 유도체화될 수 있다. 항체가 탐지용 효소로 유도체화된 경우, 추가의 시약을 첨가함으로써 효소가 이를 사용하여 탐지가능한 반응 생성물을 생성하게 함으로써 항체가 검출된다. 예를 들어, 탐지제 서양고추냉이 퍼옥시다제가 존재하는 경우, 과산화수소와 디아미노벤지딘의 첨가는 발색 반응 생성물을 유도하고 이것이 검출될 수 있다. 또한, 항체는 비오틴으로 유도체화될 수 있고 아비딘 또는 스트렙타비딘 결합의 간접적인 측정을 통해 검출할 수 있다.

IV. 항체 제조

본 발명의 약제학적 조성물에 사용하기 위한 항-NGF 항체는, 항-NGF 항체를 암호화하는 핵산 분자를 사용하여 제조할 수 있다. 핵산은 완전한 세포, 세포 용해물 또는 부분 정제된 형태 또는 실제로 순수한 형태로 존재할 수 있다. 핵산은 알카리성/SDS 처리, CsCl 밴딩, 컬럼 크로마토그래피, 아가로즈 겔 전기영동 및 기타 본 분야에 잘 알려진 방법을 포함한 표준 기술에 의해, 예를 들어 다른 세포성 핵산 또는 단백질과 같은 다른 세포성 성분 또는 다른 오염물로부터 정제된 경우 "분리된" 또는 "실질적으로 순수하게 된" 것이라 한다(참조: F. Ausubel, et al ., ed. (1987) Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing and Wiley Interscience, New York). 본 교시내용의 핵산은 예를 들어 DNA 또는 RNA일 수 있고 인트론 서열을 함유하거나 함유하지 않을 수 있다. 바람직한 양태로서, 핵산은 cDNA 분자이다. 본 교시내용의 핵산은 표준 분자생물학 기술을 사용하여 수득할 수 있다.

한 가지 양태로서, 본 발명의 약제학적 조성물에 사용하기 위한 항-NGF 항체는 서열번호 11의 뉴클레오타이드 서열을 포함한 핵산 분자에 의해 암호화된다. 다른 양태로서, 본 발명의 약제학적 조성물에 사용하기 위한 항-NGF 항체는 서열번호 14의 뉴클레오타이드 서열을 포함한 핵산 분자에 의해 암호화된다.

일단 V_H 및 V_L 분절을 암호화하는 DNA 단편이 수득되면, 이들 DNA 단편은 표준 재조합 DNA 기술에 의해 추가로 조작하여 예를 들어 가변영역이 불변영역에 작동적으로 연결되도록 가변영역 유전자를 전장 항체 쇄 유전자로 변환시킬 수 있다(예를 들어, 참조: 실시예 1). 본 명세서에 사용된 용어 "작동적으로 연결된"은 두 개의 DNA 단편에 의해 암호화된 아미노산 서열이 한 프레임내에 있도록 두개의 DNA 단편이 결합되는 것을 의미한다.

본 발명의 약제학적 조성물에 사용하기 위한 항체는 본 분야에 공지된 방법을 사용하여 숙주 세포에서 제조할 수 있다(예를 들어, Morrison, S. (1985) Science 229:1202). 예를 들어, 항체를 발현하기 위해, 유전자가 전사 및 해독 제어 서열에 작동적으로 연결되도록 중쇄 및 경쇄를 암호화하는 DNA를 발현 벡터내로 삽입시킬 수 있다. 이와 관련하여, 용어 "작동적으로 연결된"은 벡터내의 전사 및 해독 제어 서열이 항체 유전자의 전사 및 해독을 조절하는 의도된 기능을 수행하도록 항체 유전자가 벡터내로 결합되는 것을 의미한다. 발현 벡터 및 발현 제어 서열은 사용된 발현 숙주 세포와 양립할 수 있는 것을 선택한다. 항체 경쇄 유전자 및 항체 중쇄 유전자는 별개의 벡터내로 삽입될 수 있거나, 보다 더 전형적으로는 두 유전자 모두 동일한 발현 벡터내로 삽입된다. 항체 유전자는 표준 방법(예를 들어, 항체 유전자 단편 및 벡터상의 상보성 제한 부위의 연결 또는 제한 부위가 없는 경우 평활말단 연결)에 의해 발현 벡터내로 삽입한다. 추가로, 재조합 발현 벡터는 숙주 세포로부터 항체 쇄의 분비를 촉진하는 시그널 펩타이드를 암호화할 수 있다. 항체 쇄 유전자는 시그널 펩타이드가 항체 쇄 유전자의 아미노 말단에 프레임내 연결되도록 벡터내로 클로닝될 수 있다. 시그널 펩타이드는 면역글로불린 시그널 펩타이드 또는 이종 시그널 펩타이드(즉, 비-면역글로불린 단백질로부터의 시그널 펩타이드)일 수 있다.

항체 쇄 유전자이외에 재조합 발현 벡터는 전형적으로 숙주 세포에서 항체 쇄 유전자의 발현을 제어하는 조절 서열을 갖는다. 용어 "조절 서열"은 항체 쇄 유전자의 전사 또는 해독을 제어하는 프로모터, 인핸서 및 기타 발현 제어 요소(예를 들어, 폴리아데닐화 시그널)를 포함한다. 이와 같은 조절 서열은 예를 들어 Goeddel[참조: Gene Expression Technology. Methods in Enzymology 185, Academic Press, San Diego, CA (1990)]에 기재되어 있다. 본 분야의 전문가는 조절 서열의 선택을 포함한 발현 벡터의 설계가 형질전환될 숙주 세포의 선택, 목적하는 단백질의 발현 수준 등과 같은 요소들에 의해 좌우될 수 있음을 알 것이다. 포유동물 숙주 세포 발현을 위해 바람직한 조절 서열은 포유동물 세포에서 고 수준의 단백질 발현을 지시하는 바이러스 요소, 예를 들어 사이토메갈로바이러스(CMV), 시미안 바이러스 40(SV40), 아데노바이러스(예를 들어, 아데노바이러스 메이져 후기 프로모터 (AdMLP)) 및 폴리오마로부터 유도된 프로모터 및/또는 인핸서를 포함한다. 다른 방법으로서, 비바이러스성 조절 서열이 사용될 수 있으며, 유비퀴틴 프로모터 또는 β-글로빈 프로모터를 예로 들 수 있다. 또한, 상이한 공급원들로부터의 서열들로 구성된 조절 요소, 예를 들면 SV40 초기 프로모터로부터의 서열과 인간 T 세포 백혈병 바이러스 1형의 긴 말단 반복으로부터의 서열을 함유하는 SRα 프로모터 시스템이 사용될 수 있다(참조: Takebe, Y. et al . (1988) Mol . Cell . Biol. 8:466-472).

항체 쇄 유전자 및 조절 서열이외에, 재조합 발현 벡터는 숙주 세포에서 벡터의 복제를 조절하는 서열(예를 들어, 복제원) 및 선택 마커 유전자와 같은 추가의 서열을 가질 수 있다. 선택 마커 유전자는 벡터가 도입된 숙주 세포의 선택을 촉진한다(예를 들어, 참조: Axel 등의 미국특허 공보 제4,399,216호, 제4,634,665호 및 제5,179,017호). 예를 들어, 전형적으로 선택 마커 유전자는 벡터가 도입된 숙주 세포에 약물(예를 들어, G418, 하이그로마이신 또는 메토트렉세이트)에 대한 내성을 제공한다. 바람직한 선택 마커 유전자는 디하이드로폴레이트 리덕타제 (DHFR) 유전자(메토트렉세이트 선택/증폭으로 dhfr- 숙주 세포에서 사용하기 위한 것) 및 네오 유전자(G418 선택용)를 포함한다.

경쇄 및 중쇄의 발현을 위해 중쇄 및 경쇄를 암호화하는 발현 벡터(들)를 표준 기술에 의해 숙주 세포내로 형질감염시킨다. 용어 "형질감염"의 다양한 형태는 원핵 또는 진핵 숙주 세포내로 외래성 DNA의 도입을 위해 흔히 사용되는 아주 다양한 기술들을 포함하며, 예로는 전기천공법, 칼슘-인산염 침전법, DEAE-덱스트란 형질감염 등을 들 수 있다. 비록 원핵 또는 진핵 숙주 세포에서 항체를 발현하는 것이 이론상 가능하지만, 진핵 세포, 특히 포유동물 세포가 원핵 세포에 비해 적절히 폴딩되고 면역학적으로 활성적인 항체를 어셈블링하고 분비하기 때문에 그러한 진핵 세포 및 가장 바람직하게는 포유동물 숙주 세포에서 항체를 발현시키는 것이 가장 바람직하다. 항체 유전자의 원핵 발현은 고 수율의 활성 항체를 생성하는데 비효율적인 것으로 보고되었다(참조: Boss, M. A. and Wood, C. R. (1985) Immunology Today 6: 12-13).

본 교시내용의 재조합 항체를 발현하는데 바람직한 포유동물 숙주 세포는 챠이니즈 햄스터 난소(CHO 세포)[문헌(참조: R. J. Kaufman and P. A. Sharp (1982) J. Mol . Biol. 159:601-621)에 기재된 바와 같은 DHFR 선택 마커와 함께 사용되는 것으로 문헌(참조: Urlaub and Chasin, (1980) Proc . Natl . Acad . Sci . USA 77:4216-4220)에 기술된 dhfr- CHO 세포를 포함], NSO 골수종 세포, COS 세포 및 SP2 세포를 포함한다. 다른 바람직한 발현 시스템은 Wilson의 국제 특허 출원 공보 제WO 87/04462호, Bebbington의 국제 특허 출원 공보 제WO 89/01036호 및 Bebbington의 유럽 특허 공보 제EP 338,841호에 기재된 GS 유전자 발현 시스템이다. 항체 유전자를 암호화하는 재조합 발현 벡터가 포유동물 숙주 세포내로 도입된 경우, 숙주 세포에서 항체의 발현 또는 더 바람직하게는 숙주 세포가 성장하는 배양 배지내로 항체의 분비를 허용하기에 충분한 시간 동안 숙주 세포를 배양함으로써 항체를 생성한다. 표준 단백질 정제 방법을 사용하여 배양 배지로부터 항체를 회수할 수 있다.

한 가지 양태로서, 본 발명의 약제학적 조성물에 사용하기 위한 항-NGF 항체는 항체 중쇄를 암호화하는 서열번호 11의 뉴클레오타이드 서열 및 항체 경쇄를 암호화하는 서열번호 14의 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 발현 벡터를 사용하여 생성한다. 바람직한 발현 벡터는 GS(글루타민 합성효소) 유전자를 포함한다. 다른 바람직한 양태로서, 본 발명의 바람직한 숙주 세포는 CHO(챠이니즈 햄스터 난소) 세포이다.

또 다른 바람직한 양태로서, 본 발명의 약제학적 조성물에 사용하기 위한 항-NGF 항체는 서열번호 11에 의해 암호화된 중쇄와 서열번호 14에 의해 암호화된 경쇄를 포함한 항-NGF 항체가 발현되도록 항체 중쇄를 암호화하는 서열번호 11의 뉴클레오타이드 서열 및 항체 경쇄를 암호화하는 서열번호 14의 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 발현 벡터를 포함한 숙주 세포를 배양함으로써 생성한다.

V. 투여 방법

본 발명의 약제학적 조성물은 본 분야에 공지된 다양한 방법에 의해 투여될 수 있다. 본 분야의 전문가에 의해 인지되는 바와 같이, 투여 경로 및/또는 방식은 목적하는 결과에 따라 다양할 것이다. 일반적으로, 본 발명의 약제학적 조성물은 정맥내, 관절내, 피하, 근육내, 비경구, 종양내, 비내, 수포내, 활액내, 경구, 점막, 설하, 척수 또는 경피 투여 또는 체강(예를 들어, 복강, 흉막강, 비동)내로의 점적주사에 적합하다. 특정한 바람직한 양태로서, 본 발명의 약제학적 조성물은 정맥내, 피하(예를 들어, 주사 펜을 통해) 또는 관절내 투여에 적합하다.

본 발명의 약제학적 조성물은 단독 투여되거나 병용 치료요법, 즉 다른 제제와 병용하여 투여될 수 있다. 예를 들어, 병용 치료요법은 적어도 하나 이상의 추가 약제와 함께 본 발명의 조성물을 포함할 수 있다. 예를 들어, 적어도 하나 이상의 추가 약제는 별개로 투여될 수 있거나 또한 조성물내로 혼입될 수도 있다. 바람직한 양태로서, 항-NGF 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하는 본 발명의 약제학적 조성물은, NSAID, 진통제(오피오이드 진통제 및 비정형 진통제를 포함), 국소용 마취제, 신경차단제, 페놀 차단제, 치료용 항체, 스테로이드, 항경련제, 우울증 치료제, 국부용 캡사이신 및 항바이러스제로 이루어진 그룹에서 선택되는 제2 약제와 병용하여 투여된다. 통증 완화에 사용하기 위한 제2 약제의 특히 바람직한 부류는 오피오이드 진통제이다. 추가적으로 또는 대안적으로, 제2 치료법이 예를 들어 통증의 완화에 본 발명의 항체의 사용과 함께 조합될 수 있다. 이러한 제2 치료법의 예는 방사선치료요법(예를 들어, 암 통증의 경우), 수술(예를 들어, 삼차신경 신경통을 위한 가세리안 신경절 및 삼차신경절 박피술(바늘)), 최면 및 침술을 포함한다.

NSAIDS의 예는 아스피린을 포함한 아세틸화 살리실레이트; 살사레이트, 디플루니살을 포함한 비아세틸화 살리실레이트; 에토돌락, 디클로페낙, 인도메타신, 케토롤락, 나부메톤을 포함한 아세트산; 페노프로펜, 플루비프로펜, 이부프로펜, 케토프로펜, 나프록센, 나프록센 나트륨, 옥사프로진을 포함한 프로피온산; 메클로페나메이트, 메페남산을 포함하는 페나메이트; 페닐부타존, 피록시캄; 셀레콕십, 에토리콕십, 발데콕십, 로페콕십, 루미라콕십을 포함한 COX-2 억제제를 포함한다. 진통제의 예는 파라세타몰(아세타미노펜), 트라마돌, 타펜타돌, 캡사이신(국부용), 오피오이드 진통제 및 비정형 진통제를 포함한다. 오피오이드 진통제의 예는 몰핀, 코데인, 테베인, 하이드로몰폰, 하이드로코돈, 옥시코돈, 옥시몰폰, 데소몰핀, 디아세틸몰핀, 니코몰핀, 디프로파노일몰핀, 벤질몰핀, 에틸몰핀, 펜타닐, 페티딘, 메타돈, 트라마돌 및 프로폭시펜을 포함한다. 비정형 진통제의 예는 트리사이클릭 우울증 치료제, 카바제핀, 가바펜틴, 프리가발린, 둘록세틴 및 카페인을 포함한다. 스테로이드의 예는 관절내 코르티코스테로이드(IAC) 및 프레드니손을 포함한다. 치료용 항체의 예는 항-TNF 항체(예를 들어, Remicade? 및 Humira?) 및 항CD20 항체(예를 들어, Rituxan? 및 Arzerra^TM)를 포함한다. 항바이러스제의 예는 아실클로비르 및 오셀타미비르 포스페이트(Tamiflu?)를 포함한다.

바람직한 양태로서, 병용 치료요법은 본 발명의 항-NGF 항체 약제학적 조성물과 적어도 하나 이상의 TrkA 억제제(예를 들어, TrkA 활성을 길항시키는 화합물)를 함께 포함할 수 있다. TrkA 억제제는 예를 들어 TrkA 수용체와 세포외 상호작용함으로써 또는 TrkA 신호전달 기전과 세포내 상호작용함으로써(예를 들어, TrkA 키나제 활성의 억제) 작용할 수 있다. 세포외 TrkA 억제제의 비제한적 예는 항-TrkA 항체(예를 들어, 미국특허 출원공보 제20090208490호 및 미국특허 출원공보 제20090300780호에 기재된 인간화 항-TrkA 항체) 및 TrkA를 길항시키는 NGF 펩타이드 모사체(예를 들어, Debeir, T. et al . (1999) Proc . Natl . Acad . Sci . USA 96:4067-4072에 기재된 것)를 포함한다. 세포내 TrkA 억제제의 비제한적 예는 TrkA 기능을 길항시키는 세포-침투성 펩타이드(예를 들어, Hirose, M. et al. (2008) J. Pharmacol . Sci. 106:107-113; Ueda, K. et al . (2010) J. Pharmacol . Sci., March 30, 2010 발행에 기재된 것) 및 TrkA 키나제 억제제와 같은 소분자 억제제(예를 들어, Wood, E.R. et al. (2004) Bioorg . Med . Chem . Lett . 14:953-957; Tripathy, R. et al . (2008) Bioorg . Med . Chem . Lett. 18:3551-3555에 기재된 것)를 포함한다. TrkA 억제제의 다른 비제한적 예는 ARRY-470 및 ARRY-872(Array Biopharma)를 포함한다.

다른 바람직한 양태로서, 병용 치료요법은 본 발명의 항-NGF 항체 조성물을 적어도 하나 이상의 프로테인 키나제 C(PKC) 억제제(예를 들어, PKC 활성을 길항시키는 화합물)와 함께 포함할 수 있다.

본 발명의 약제학적 조성물의 멸균 주사제형은 상기된 성분(예를 들어, 완충제, 부형제 등)중 하나 또는 배합물과 함께 활성 화합물을 혼합하고, 필요한 경우 마이크로여과의 멸균을 수행하여 제조할 수 있다. 일반적으로, 분산액은 활성 화합물을 염기성 분산 매질과 상기된 것중에서 필요한 다른 성분을 함유하는 멸균 비히클내로 혼입시킴으로써 제조한다. 멸균주사용액의 제조를 위한 멸균 산제의 경우에, 바람직한 제조 방법은 사전에 이의 멸균 여과된 용액으로부터 임의의 추가적인 목적하는 성분과 함께 활성 성분의 분말을 생성하는 진공 건조법 및 동결 건조법(동결건조)이다.

제형은 편의상 단위용량형으로 제공될 수 있으며, 제약 분야에 공지된 임의의 방법으로 제조할 수 있다. 본 발명에 사용된 단위용량형은 치료 대상자를 위해 단위 용량으로 맞춰진 물리적으로 독립적인 단위를 가리키며, 각 단위는 목적하는 치료적 효과를 발생하기 위해 계산된 활성 화합물의 예정량을 함유한다.

본 발명의 약제학적 조성물중에 활성 성분의 실제 용량 수준은 환자에게 독성을 나타내지 않으면서 특정 환자, 조성물 및 투여 방식에 따라 목적하는 치료적 반응을 달성하는데 효과적인 활성 성분의 양을 획득할 수 있도록 다양할 수 있다. 선택된 용량 수준은 사용된 본 발명의 특정 조성물 또는 이의 에스테르, 염 또는 아미드의 활성, 투여 경로, 투여 시기, 사용된 특정 화합물의 배출율, 치료 기간, 사용된 특정 조성물과 병용된 다른 약물, 화합물 및/또는 물질, 치료 대상 환자의 연령, 성별, 체중, 상태, 종합적인 건강 및 이전 의료 전력 및 의학 분야에서 잘 알려진 기타 요인을 포함한 다양한 약동학적 요소에 의해 좌우될 것이다. 본 분야에 통상의 기술을 갖고 있는 의사 또는 수의사는 필요한 약제학적 조성물의 유효량을 용이하게 결정하고 처방할 수 있다. 예를 들어 의사나 수의사는 약제학적 조성물에 사용된 본 발명의 화합물의 용량을 목적하는 치료적 효과를 달성하기 위해 필요한 용량보다 낮은 수준으로 시작하고 목적하는 효과가 달성될 때까지 투여량을 점차 증가시킬 수 있다. 일반적으로, 본 발명의 조성물의 적절한 일일용량은 치료적 효과를 제공하는데 효과적인 최저 용량인 화합물의 양일 것이다. 이와같은 유효량은 일반적으로 상기된 요소에 의해 좌우될 것이다.

한 가지 양태로서, 본 발명의 조성물의 유효량은 NGF 활성이 유해하게 작용한 장애를 앓고 있는 대상자에게 NGF활성을 억제하는 양이다. 한 가지 양태로서, 조성물은 항체의 주사 당 100 mg의 유효량을 제공한다. 다른 양태로서, 조성물은 항체가 약 0.1 내지 약 100 mg의 범위에 해당하는 유효량을 제공한다. 필요한 경우, 약제학적 조성물의 효과적인 일일용량은 임의로 단위용량형으로서 하루에 적절한 시간차를 두고 2회, 3회, 4회, 5회, 6회 또는 그 이상으로 별도로 용량을 분할하여 투여할 수 있다.

본 발명의 한 가지 양태로서, 조성물중의 항체 투여량은 약 5 내지 약 150 mg이다. 다른 양태로서, 조성물중의 항체 투여량은 약 25 mg 내지 약 100 mg이다. 또 다른 양태로서, 조성물중의 항체 투여량은 약 40 mg 내지 약 80 mg이다. 또 다른 양태로서, 조성물중의 항체 투여량은 약 50 mg 내지 약 100 mg이다. 또 다른 양태로서, 조성물중의 항체 투여량은 약 0.1 mg 내지 약 100 mg, 약 0.5 내지 75 mg, 약 1.0 내지 60 mg, 약 5 내지 40 mg, 약 10 내지 30 mg 또는 약 10 내지 20 mg이다. 조성물은 10 mg 이상의 많은 항체 투여량에 특히 적합하다. 본 발명의 특정 양태로서, 조성물은 약 10 mg 또는 약 20 mg 용량의 항체를 제공한다. 다른 양태로서, 조성물은 약 80 mg 또는 약 100 mg 용량의 항체를 제공한다.

본 발명의 한 가지 양태로서, 조성물중의 항체 투여량은 약 0.1 내지 약 150 mg, 1 내지 약 150 mg, 약 5 내지 약 145 mg, 약 10 내지 약 140 mg, 약 15 내지 약 135 mg, 약 20 내지 약 130 mg, 약 25 내지 약 125 mg, 약 30 내지 약 120 mg, 약 35 mg 내지 약 115 mg, 약 40 내지 약 110 mg, 약 45 내지 약 105 mg, 약 50 내지 약 100 mg, 약 55 내지 약 95 mg, 약 60 내지 약 90 mg, 약 65 내지 약 85 mg, 약 70 내지 약 80 mg 또는 약 75 mg이다. 한 가지 양태로서, 항체의 투여량은 10 mg이다. 한 가지 양태로서, 항체의 투여량은 20 mg이다. 상기된 투여량의 중간 범위(예를 들어, 약 2 내지 약 149 mg) 또한 본 발명의 일부이다. 예를 들어 상한값 및/또는 하한값으로서 상기된 값중의 임의의 값의 조합을 사용한 값의 범위가 포함된다.

특정 투여 경로를 위해 적절한 전달 장치가 사용을 위해 선택될 수 있다. 예를 들어, 피하 또는 근육내 투여의 경우, 주사펜(예를 들어, 자가투여할 수 있는 것)이 사용될 수 있다. 이와 같은 주사펜(또한 주사기라고도 한다)은 본 분야에 잘 알려져 있으며 국제 특허 출원 공보 제WO 2008/005315호에 기재된 것과 같은 항체의 액체 용량을 함유한 것을 포함한다. 또한, 피하 투여의 경우, 피하 임플란트가 사용될 수 있다. 추가로, 경피 전달이 국부 피부 패치(예를 들어, 접착 패치)의 사용에 의해 달성될 수 있다. 또한 경피 전달은 무수 분말의 주사에 의해 달성될 수도 있다(예를 들어, Glide Pharma로부터 시판되는 주사기). 또한, 폐로의 전달시(예를 들어, 천식 또는 난치성 기침의 치료시), 예를 들어 흡인기 또는 분무기 및 에어로졸화제를 함유한 조성물에 의해 폐내 투여가 사용될 수 있다(예를 들어, 참조: 미국특허 공보 제6,019,968호, 제5,985,320호, 제5,985,309호, 제5,934,272호, 제5,874,064호, 제5,855,913호, 제5,290,540호 및 제4,880,078호; 국제 특허 출원 공보 제WO 92/19244호, 제WO 97/32572호, 제WO 97/44013호, 제WO 98/31346호 및 제WO 99/66903호).

바람직한 양태로서, 본 발명의 치료용 조성물은 미국특허 공보 제5,399,163호, 제5,383,851호, 제5,312,335호, 제5,064,413호, 제4,941,880호, 제4,790,824호 또는 제4,596,556호에 기재된 장치와 같은 무바늘 피하주사장치로 투여할 수 있다. 본 발명에 유용한 것으로 널리 알려진 임플란트 및 모듈의 예는, 미국특허 공보 제4,487,603호에 기재된 것으로서 조절된 속도로 약제를 분배하는 임플란트용 마이크로-주입 펌프; 미국특허 공보 제4,486,194호에 기재된 것으로 피부를 통해 약제를 투여하는 치료용 장치; 미국특허 공보 제4,447,233호에 기재된 것으로 정확한 주입 속도로 약제를 전달하는 약제 주입 펌프; 미국특허 공보 제4,447,224호에 기재된 것으로 연속 약물 전달을 위한 가변 유동 임플란트 주입기기; 미국특허 공보 제4,439,196호에 기재된 것으로 다수 챔버 컴파트먼트를 가진 삽투압성 약물 전달 시스템; 및 미국특허 공보 제4,475,196호에 기재된 것으로 삼투압성 약물 전달 시스템을 포함한다. 많은 다른 이러한 임플란트, 전달 시스템 및 모듈이 본 분야의 전문가에게 알려져 있다.

특정 양태로서, 본 발명의 약제학적 조성물은 생체내에서의 적절한 분배가 보장되도록 추가로 제형될 수 있다. 예를 들어, 혈뇌장벽(BBB)은 많은 고친수성 화합물을 배척한다. 본 발명의 치료용 화합물이 BBB를 통과한다는 것을 보장하기 위해(필요한 경우), 이들 화합물을 예를 들어 리포좀내에 제형할 수 있다. 리포좀의 제조 방법은 예를 들어 미국특허 공보 제4,522,811호, 제5,374,548호 및 제5,399,331호에 기재되어 있다. 리포좀은 특정 세포 또는 기관내로 선택적으로 수송됨으로써 표적 약물 전달을 향상시키는 하나 이상의 모이어티(moiety)를 포함할 수 있다(예를 들어, 참조: V.V. Ranade (1989) J. Clin. Pharmacol. 29:685). 표적 모이어티의 예는, 폴레이트 또는 비오틴(예를 들어, 참조: Low 등의 미국특허 공보 제5,416,016호); 만노사이드(참조: Umezawa et al ., (1988) Biochem . Biophys. Res . Commun. 153:1038); 항체(참조: P.G. Bloeman et al . (1995) FEBS Lett. 357:140; M. Owais et al . (1995) Antimicrob . Agents Chemother. 39:180); 계면활성제 단백질 A 수용체(참조: Briscoe et al. (1995) Am. J. Physiol. 1233:134)-이의 상이한 종은 본 발명의 제형뿐만 아니라 발명 분자의 성분을 포함할 수 있다; p120(참조: Schreier et al . (1994) J. Biol . Chem. 269:9090)을 포함하고 또한 문헌(참조: K. Keinanen; M.L. Laukkanen (1994) FEBS Lett. 346:123; J.J. Killion; I.J. Fidler (1994) Immunomethods 4:273)을 참조할 수 있다.

투여량 용법은 최적의 목적하는 반응(예를 들어, 치료적 반응)을 제공하기 위해 조정된다. 예를 들어, 단회 투약(single bolus)으로 투여할 수 있거나, 경과 시간에 걸쳐 수회 분할된 용량을 투여할 수 있거나, 용량은 치료적 상황의 긴급성에 따라 표기된 바와 같이 비례적으로 증감시킬 수 있다. 전형적인 일회 용량(아래에 기재된 바와 같이 용량 일정에 따라 투여될 수 있다)은 0.1 μg/kg 내지 1 μg/kg 내지 3 μg/kg 내지 30 μg/kg 내지 300 μg/kg 내지 3000 μg/kg(3 mg/kg) 내지 30 mg/kg 내지 100 mg/kg 이상중의 약 임의의 범위일 수 있고 본 명세서에 기재된 요인에 의해 좌우된다. 예를 들어, 항-NGF 항체는 약 1 μg/kg, 약 10 μg/kg, 약 20 μg/kg, 약 50 μg/kg, 약 100 μg/kg, 약 200 μg/kg, 약 300 μg/kg, 약 400 μg/kg 약 500 μg/kg, 약 1 mg/kg, 약 2 mg/kg 또는 약 3 mg/kg으로 투여될 수 있다. 바람직한 양태로서, 항-NGF항체는 약 3 μg/kg 내지 약 3000 μg/kg 범위의 용량으로 투여된다. 다른 바람직한 양태로서, 항-NGF 항체는 100 μg/kg 용량으로 투여된다. 또 다른 바람직한 양태로서, 항-NGF 항체는 200 μg/kg 용량으로 투여된다. 또 다른 바람직한 양태로서, 항-NGF 항체는 300 μg/kg 용량으로 투여된다. 또 다른 바람직한 양태로서, 항-NGF 항체는 400 μg/kg 용량으로 투여된다.

상태에 따라 수일, 수주 또는 수개월 또는 그 이상의 기간에 걸쳐 반복된 투여시, 치료는 목적하는 증상 억제가 일어나거나 충분한 치료적 수준(예를 들어, 통증 감소)이 달성될 때까지 지속된다. 용량 용법의 예는 항-NGF 항체를 약 3 μg/kg 내지 500 μg/kg 범위의 일차 용량을 투여한 후 약 3 μg/kg 내지 500 μg/kg의 매월 지속 용량으로 투여하는 것을 포함한다. 다른 양태로서, 약 200 μg/kg의 용량이 매월 1회 투여된다. 또 다른 양태로서, 약 400 μg/kg의 용량이 매 2개월 1회 투여된다. 그러나, 의사가 달성코자 희망하는 약동학적 소멸의 양상에 따라 다른 투여량 용법이 유용할 수 있다. 예를 들어, 일부 양태로서, 주 1회 내지 4회의 투여가 고려된다. 그러나, 항-NGF 항체에 의한 통증 완화가 장기간 지속되기 때문에 투여 횟수를 줄여 사용할 수 있다. 일부 양태로서, 항-NGF 항체는 주 1회, 2주에 1회, 3주에 1회, 4주에 1회, 5주에 1회, 6주에 1회, 7주에 1회, 8주에 1회, 9주에 1회, 10주에 1회, 15주에 1회, 20주에 1회, 25주에 1회, 26주에 1회 또는 그 이상으로 투여된다. 일부 양태로서, 항-NGF 항체는 월 1회, 2개월에 1회, 3개월에 1회, 4개월에 1회, 5개월에 1회, 6개월에 1회 또는 그 이상 투여된다.

바람직한 양태로서, 항-NGF 항체는 PG110 항체 또는 이의 항원 결합 단편이고 0.1 mg/kg 내지 0.2 mg/kg, 바람직하게는 0.15 mg/kg 범위의 용량으로 12주마다 1회 정맥내(예를 들어, 인간에게) 투여된다. 다른 바람직한 양태로서, 항-NGF항체는 0.2 mg/kg 내지 0.4 mg/kg, 바람직하게는 0.3 mg/kg 범위의 용량으로 12주마다 1회 피하(예를 들어, 인간에게) 투여된다. 또 다른 양태로서, PG110 또는 이의 단편은 0.1 mg/kg 내지 3 mg/kg 범위, 또는 0.1 mg/kg 내지 30 mg/kg 범위, 또는 0.1 mg/kg 내지 20 mg/kg 범위 또는 0.1 mg/kg 내지 10 mg/kg 범위 또는 1 mg/kg 내지 30 mg/kg 범위 또는 1 mg/kg 내지 20 mg/kg 범위 또는 1 mg/kg 내지 10 mg/kg 범위의 용량으로 투여된다.

투여의 용이성 및 투여량의 균일성을 위해 단위 용량형으로 비경구 조성물을 제형하는 것이 특히 유리하다. 본 발명에서 사용되는 단위 용량형은 치료 받는 대상자에게 단위 투여량으로 맞춘 물리적으로 독립적인 단위를 가리킨다. 각 단위는 필요한 약제학적 담체와 혼합되어 목적하는 치료적 효과를 제공하는 것으로 계산된 예정량의 활성 화합물을 함유한다. 본 발명의 단위 용량형에 대한 명세서는 (a) 활성 화합물의 고유 특징 및 달성하고자 하는 특정 치료적 효과 및 (b) 개인의 민감성 치료를 위해 상기 활성 화합물을 배합하는 기술의 고유의 한계에 의해 지정되거나 직접적으로 좌우된다. 예를 들어, 단위 용량형의 비제한적 예는 0.2 mg(약 70 kg의 환자에서 3 μg/kg의 용량에 해당), 2 mg(약 70 kg의 환자에서 30 μg/kg의 용량에 해당) 및 7 mg(약 70 kg의 환자에서 100 μg/kg의 용량에 해당)을 포함한다.

V. 용법

본 발명은 한 가지 양태로서 NGF활성의 유해로 인한 장애를 앓고 있는 대상자에게 NGF 활성을 억제하기 위해 사용되는 것으로 보존기간이 연장된 안정한 고농도 조성물을 제공한다. 본 발명의 방법은 일반적으로 대상자에게서 NGF 활성이 감소 또는 억제되도록 본 발명의 조성물을 대상자에게 투여하는 것을 포함한다. 바람직하게는, NGF는 인간 NGF이고 대상자는 인간이다. 다른 방법으로서, 대상자는 본 발명의 항체와 교차반응하는 NGF를 발현하는 포유동물일 수 있다. 또한, 대상자는 예를 들어 hNGF의 투여에 의해 또는 hNGF 트랜스유전자의 발현에 의해 hNGF가 도입된 포유동물일 수 있다. 또한, 본 발명의 조성물은 항체가 교차반응하는 NGF를 발현하는 비인간 포유동물(예를 들어, 영장류, 돼지 또는 마우스)에게 수의학적 목적상 또는 인간 질환의 동물 모델로서 투여될 수 있다. 후자와 관련하여 그러한 동물 모델은 본 발명의 항체의 치료적 효능을 평가(예를 들어, 투여량 및 투여시간과정의 시험)하기 위해 유용할 수 있다.

본 발명의 조성물은 치료적 또는 예방학적 목적으로 인간 대상에게 투여할 수 있다. 따라서, 다른 관점으로서, 본 발명은 본 발명의 약제학적 조성물을 대상자에게 투여하는 것을 포함하는, 대상자에게서 NGF-연관된 질환 또는 상태를 치료(예를 들어, 약화 또는 억제)하는 방법을 제공한다. 바람직하게는, 항-NGF 항체가 통증(예를 들어, 통증의 발생 또는 지속이 적어도 부분적으로 NGF에 의해 매개되는 질환 또는 상태와 연관된 통증)을 약화 또는 완화시키기 위해 사용된다. NGF-매개된 질환 또는 상태의 비제한적 예는 염증성 통증, 외과적 수술후 통증, 시술후 통증(치통 포함), 신경병증성 통증, 말초신경병증, 당뇨성신경병증, 골절 통증, 통풍성 관절 통증, 대상포진후 신경통, 암 통증, 골관절염 또는 류마티스성 관절염 통증, 좌골신경통, 겸상적혈구병증과 연관된 통증, 두통(예를 들어, 편두통, 긴장성두통, 군발두통), 월경통, 자궁내막증, 자궁근종, 근골격 통증, 만성 요통, 섬유근육통, 염좌, 내장통, 난포낭종, 전립선염, 만성골반통증후군, 방광염, 간질성 방광염, 통증 방광 증후군 및/또는 방광통증증후군, 만성 비세균성 전립선염과 연관된 통증, 절개통증, 편두통, 삼차신경병증, 화상 및/또는 상처에 의한 통증, 외상과 연관된 통증, 근골격계 질환과 연관된 통증, 강직성 척추염, 관절주변병증, 골 전이에 의한 통증, HIV에 의한 통증, 피부홍통증 또는 췌장염 또는 신장결석에 의해 유발된 통증, 악성 흑색종, 쇼그렌증후군, 천식(예를 들어, 중증 기도 과민반응성을 수반한 비조절성 천식), 난치성 기침, 다발성경화증, 만성알코올중독, 발작, 시상통증증후군, 독소에 의한 통증, 화학치료요법에 의한 통증, 섬유근육통, 염증성장장애, 과민성대장증후군, 염증성 눈 장애, 염증성 또는 불안정 방광장애, 건선, 염증성분에 의한 피부질환, 화상, 심장염, 피부염, 근염, 신경염, 교원성혈관질환, 만성염증질환, 염증성 통증 및 연관된 통각과민증 또는 이질통, 신경병증통, 및 연관된 통각과민증 및 이질통, 당뇨성 신경병증통, 작열통, 교감신경의존성통증, 구심로차단증후군, 상피조직손상 또는 이상, 호흡기, 비뇨생식기, 위장 또는 혈관 영역에서의 내장운동성의 장애, 알러지 피부반응, 소양증, 백반증, 전위장관장애(general gastrointestinal disorder), 대장염, 위궤양, 십이지장궤양, 혈관운동신경 또는 알러지성 비염, 기관지장애, 소화불량, 식도역류, 췌장염 및 장기통을 포함한다.

또한, NGF는 전립선암, 갑상선암, 폐암, 프로락틴종 및 흑색종과 같은 암의 증식에 연관이 있다. 따라서, 다른 양태로서, 본 발명의 약제학적 조성물을 사용하여 치료될 수 있는 NGF-연관된 질환 또는 상태는 암, 바람직하게는 전립선암, 갑상선암, 폐암, 프로락틴종 또는 흑색종이다. 따라서, 다른 양태로서, 본 발명은 또한 대상자에게 본 발명의 약제학적 조성물을 투여하는 것을 포함하여, 대상자의 암, 바람직하게는 전립선암, 갑상선암, 폐암, 프로락틴종 또는 흑색종을 치료하는 방법을 제공한다.

또 다른 양태로서, NGF-연관된 질환 또는 상태는 HIV/AIDS일 수 있다. 본 발명의 항-NGF 항체를 사용한 NGF의 차단은 HIV 감염된 마크로파아지를 차단할 수 있음으로써 HIV/AIDS를 치료할 수 있다. 따라서, 다른 양태로서, 본 발명은 또한 대상자에게 본 발명의 약제학적 조성물을 투여하는 것을 포함하여 대상자의 HIV/AIDS를 치료하는 방법을 제공한다.

본 발명의 방법에 따라 치료하기에 특히 바람직한 질환 및 상태는 염증성 통증(특히, 골관절염 또는 류마티스성 관절염 통증), 근골격계 통증(특히 만성 요통), 암 통증, 신경병증 통증(특히 당뇨성 신경병증 통증), 골전이에 의한 통증, 간질성 방광염/통증 방광 증후군, 만성 비세균성 전립선염과 연관된 통증, 자궁내막증 및/또는 자궁근종에 의한 통증 및 수술후통증을 포함한다.

자궁내막증 및/또는 자궁근종과 연관된 통증 및/또는 기타 증상은 월경곤란증; 만성 비월경, 골반 통증; 성교통증; 배변곤란증; 월경과다증; 하부복통 또는 요통; 불임 및 난임; 배뇨통; 복부팽창 및 배뇨 통증; 구역, 구토 및/또는 이질을 포함할 수 있다. 증상은 또한 예를 들어 객혈, 기흉 또는 혈흉으로서의 흉곽 자궁내막증후군 증세 및 호흡곤란 및 폐종괴로서의 폐 평활근종 증세를 포함하여 복막강 외부에 위치한 자궁내막증 병소 또는 유섬유종과 연관된 증상을 포함할 수 있다.

특히 바람직한 양태로서, 본 발명의 약제학적 조성물은 통증을 치료하는데 사용된다. 바람직하게는, 치료 대상 통증의 유형은 골관절염 통증, 만성 요통, 당뇨성 신경병증 통증, 암 통증 및 자궁내막증 및/또는 자궁근종 통증으로 이루어진 그룹에서 선택된다. 따라서, 바람직한 양태로서, 본 발명은 본 발명의 약제학적 조성물을 대상자에게 투여하여 대상자의 통증을 치료하는 것을 포함하는, 대상자의 통증을 치료하는 방법을 제공한다. 바람직하게는, 통증은 골관절염 통증, 만성 요통, 당뇨성 신경병증 통증, 암 통증 및 자궁내막증 및/또는 자궁근종 통증으로 이루어진 그룹에서 선택된다. 따라서, 한 가지 양태로서, 본 발명은 본 발명의 약제학적 조성물을 대상자에게 투여하여 대상자의 골관절염 통증을 치료하는 것을 포함하는, 대상자의 골관절염 통증을 치료하는 방법을 제공한다. 다른 양태로서, 본 발명은 본 발명의 약제학적 조성물을 대상자에게 투여하여 대상자의 만성 요통을 치료하는 것을 포함하는, 대상자의 만성 요통을 치료하는 방법을 제공한다. 또 다른 양태로서, 본 발명은 본 발명의 약제학적 조성물을 대상자에게 투여하여 대상자의 당뇨성 신경병증 통증을 치료하는 것을 포함하는, 대상자의 당뇨성 신경병증 통증을 치료하는 방법을 제공한다. 또 다른 양태로서, 본 발명은 본 발명의 약제학적 조성물을 대상자에게 투여하여 대상자의 암 통증을 치료하는 것을 포함하는, 대상자의 암 통증을 치료하는 방법을 제공한다. 또 다른 양태로서, 본 발명은 본 발명의 약제학적 조성물을 대상자에게 투여하여 대상자의 자궁내막증 및/또는 자궁근종 통증을 치료하는 것을 포함하는, 대상자의 자궁내막증 및/또는 자궁근종 통증을 치료하는 방법을 제공한다.

바람직한 양태로서, 본 발명의 약제학적 조성물은 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 인간 IgG4 불변영역을 포함하는 항-NGF 항체를 포함하며, 상기 항체를 투여받은 환자에게 통증을 장기간 완화시킨다. 예를 들어, 한 가지 양태로서, 항체는 대상자에게 일회 용량의 항-NGF 항체를 투여한 후 통증을 적어도 약 1주 내지 약 12주의 기간 동안(또는 적어도 1주 내지 12주 동안) 완화시킨다. 다른 양태로서, 항체는 대상자에게 일회 용량의 항-NGF 항체를 투여한 후 통증을 적어도 약 1주의 기간 동안(또는 적어도 1주 동안) 완화시킨다. 다른 양태로서, 항체는 대상자에게 일회 용량의 항-NGF 항체를 투여한 후 통증을 적어도 약 2주의 기간 동안(또는 적어도 2주 동안) 완화시킨다. 다른 양태로서, 항체는 대상자에게 일회 용량의 항-NGF 항체를 투여한 후 통증을 적어도 약 4주의 기간 동안 (또는 적어도 4주 동안) 완화시킨다. 다른 양태로서, 항체는 대상자에게 일회 용량의 항-NGF 항체를 투여한 후 통증을 적어도 약 8주의 기간 동안(또는 적어도 8주 동안) 완화시킨다. 다른 양태로서, 항체는 대상자에게 일회 용량의 항-NGF 항체를 투여한 후 통증을 적어도 약 12주의 기간 동안(또는 적어도 12주 동안) 완화시킨다. 하나의 양태로서, 항체는 대상자에게 일회 용량의 항-NGF 항체를 투여한 후 통증을 적어도 약 4주 내지 약 12주의 기간 동안(또는 4주 내지 12주 동안) 완화시킨다. 하나의 양태로서, 항체는 대상자에게 일회 용량의 항-NGF 항체를 투여한 후 통증을 적어도 약 8주 내지 약 12주의 기간 동안(또는 8주 내지 12주 동안) 완화시킨다.

다른 양태로서, 본 발명의 약제학적 조성물은 제2 약제 또는 제2 치료 용법과 함께 투여된다. 항체 및 제2 약제 또는 항체 또는 제2 치료 용법은 동시에 투여되거나 수행될 수 있거나, 다른 방법으로서, 항체가 일차로 투여된 후 제2 약제 또는 제2 용법이 투여 또는 수행되거나, 제2 약제 또는 용법이 먼저 투여 또는 수행된 후 항체가 투여될 수 있다. 적절한 제2 약제 및 제2 치료 용법의 비제한적 예는 상기 약제학적 조성물 단락에 설명되어 있다. 본 발명의 항체와 병용하기에 특히 바람직한 제2 약제는 오피오이드 진통제이다. 본 발명의 항체와 병용하기에 바람직한 다른 제2 약제는 TrkA 억제제(예를 들어, 약제학적 조성물 단락에 상세히 설명된 세포외 TrkA 억제제 또는 세포내 TrkA 억제제) 및 프로테인 키나제 C (PKC) 억제제이다.

또 다른 관점으로서, 본 발명은 돌연변이(바람직하게는 힌지 영역 돌연변이)를 포함하는 인간 IgG4 불변영역을 포함하고 붉은털 원숭이에서 적어도 15일의 최종 소실 반감기를 갖는 항-NGF 항체를 포함하는 본 발명의 약제학적 조성물을 대상자에게 투여하는 것을 포함하는, 대상자에게서 반동 효과를 유발하지 않으면서 대상자의 신경 성장 인자(NGF)-연관된 질환 또는 상태를 약화 또는 억제하는 방법을 제공한다. 다른 양태로서, 상기 항체는 붉은털 원숭이에서 약 15일 내지 약 22일 범위 (또는 15 내지 22일의 범위) 또는 약 15일 내지 약 28일 범위(또는 15 내지 28일의 범위) 또는 약 21일 내지 약 28일 범위(또는 21 내지 28일의 범위)의 최종 소실 반감기를 갖는다. 다른 양태로서, 상기 항체는 랫트에서 적어도 8일의 최종 소실 반감기를 갖는다. 또 다른 양태로서, 상기 항체는 인간에서 적어도 10 내지 30일(또는 적어도 10일, 적어도 15일, 적어도 20일, 적어도 25일, 적어도 30일, 적어도 40일 또는 약 10일 내지 약 40일 범위 또는 10 내지 40일의 범위 또는 약 15 내지 약 30일 범위 또는 15 내지 30일의 범위)의 평균 최종 소실 반감기를 갖는다. 바람직한 돌연변이는 앞서 상세히 설명된 것을 포함한다. 바람직한 항체는 앞서 상세히 설명된 서열의 항-NGF 항체 및/또는 작용 특성을 갖는 항-NGF 항체를 포함한다.

VI. 제품

본 발명의 약제학적 액상 조성물을 포함하는 자기주사기펜, 미리충전된 주사기 또는 무바늘 투여장치가 또한 본 발명의 범위에 포함된다. 한 가지 양태로서, 본 발명은 100 mg/mL의 항-인간 NGF 항체 또는 이의 항원-결합 부분을 포함하는 조성물의 용량을 포함하는 전달 장치를 제공하며, 예를 들어 자기주사기펜 또는 미리충전된 주사기는 약 1 mg, 2 mg, 3 mg, 4 mg, 5 mg, 6 mg, 7 mg, 8 mg, 9 mg, 10 mg, 11 mg, 12 mg, 13 mg, 14 mg, 15 mg, 16 mg, 17 mg, 18 mg, 19 mg, 20 mg, 21 mg, 22 mg, 23 mg, 24 mg, 25 mg, 26 mg, 27 mg, 28 mg, 29 mg, 30 mg, 31 mg, 32 mg, 33 mg, 34 mg, 35 mg, 36 mg, 37 mg, 38 mg, 39 mg, 40 mg, 41 mg, 42 mg, 43 mg, 44 mg, 45 mg, 46 mg, 47 mg, 48 mg, 49 mg, 50 mg, 51 mg, 52 mg, 53 mg, 54 mg, 55 mg, 56 mg, 57 mg, 58 mg, 59 mg, 60 mg, 61 mg, 62 mg, 63 mg, 64 mg, 65 mg, 66 mg, 67 mg, 68 mg, 69 mg, 70 mg, 71 mg, 72 mg, 73 mg, 74 mg, 75 mg, 76 mg, 77 mg, 78 mg, 79 mg, 80 mg, 81 mg, 82 mg, 83 mg, 84 mg, 85 mg, 86 mg, 87 mg, 88 mg, 89 mg, 90 mg, 91 mg, 92 mg, 93 mg, 94 mg, 95 mg, 96 mg, 97 mg, 98 mg, 99 mg, 100 mg, 101 mg, 102 mg, 103 mg, 104 mg 또는 105 mg용량의 조성물을 포함한다.

또한, 본 발명의 약제학적 조성물을 액체 또는 동결건조 형태로 포함하는 키트가 본 발명의 범위에 포함되며, 키트는 임의로 NGF-연관된 질환 또는 상태를 치료하는데 사용하는 지침서를 포함한다. 키트는 이의 내용물에 대한 용도를 표시한 라벨을 포함할 수 있다. 용어 라벨은 키트상에 기록된 임의의 표기 또는 마케팅 문구이거나 키트에 별도로 첨부된 것일 수 있다.

예를 들어, 본 발명은 또한 키트 또는 제품내에 패키징된 본 발명의 약제학적 조성물을 제공한다. 본 발명의 키트 또는 제품은 대상자에게서 NGF 연관된 질환 또는 상태의 예방, 치료 및/또는 진단을 포함하여 치료에 유용한 재료를 함유한다. 바람직한 양태로서, NGF 연관된 질환 또는 상태는 염증성 통증(특히 골관절염 또는 류마티스성 관절염 통증), 근골격계 통증(특히 만성 요통), 신경병증 통증(특히 당뇨성 신경병증 통증), 암 통증(특히 골 전이에 의한 통증), 자궁내막증 및/또는 자궁근종과 연관된 통증 및 수술후 통증이다. 키트 또는 제품은 용기 및 이 용기상에 또는 결합 상태로 본 명세서에 기재된 NGF 연관된 질환 또는 상태의 치료를 위한 항-NGF 항체(예를 들어, PG110)의 용도에 관한 정보를 제공하는 라벨 또는 삽입지 또는 프린트물을 포함한다.

키트 또는 제품은 NGF 연관된 질환 또는 상태의 치료를 위해 본 발명의 약제학적 조성물을 투여하기 위한 구성품을 포함한 패키징된 완제품을 가리킨다. 키트는 바람직하게는 키트의 구성품을 담은 박스 또는 용기를 포함하며 또한 약제학적 조성물의 투여를 위한 프로토콜 및/또는 "삽입지"를 포함할 수 있다. 박스 또는 용기는 바람직하게는 플라스틱, 폴리에틸렌, 폴리프로필렌, 에틸렌 또는 프로필렌 용기에 함유된 본 발명의 구성품을 보유한다. 예를 들어 본 발명의 약제학적 조성물을 위해 적절한 용기는 예를 들어 병, 바이알, 주사기, 펜 등을 포함한다.

용어 "삽입지"는 치료용 제품의 상품 패키지에 관례상 포함되는 지시서를 가리키며, 치료용 제품의 사용과 관련한 지침, 용법, 투여량, 투여, 사용 금지 사유 및/또는 경고문의 정보를 함유한다. 한 가지 양태로서, 본 발명의 삽입지는 본 발명의 약제학적 조성물을 치료를 위해 투여받을 대상자(예를 들어, 구매자)를 포함한 독자에게 본 발명의 약제학적 조성물이 본 명세서에 기재된 바와 같은 NGF 연관된 질환 또는 상태의 치료를 위해 명시되어 있음을 고지한다. 한 가지 양태로서, 삽입지는 통증의 완화를 포함하여 본 발명의 약제학적 조성물의 특정한 치료학적 유익을 설명한다. 다른 양태로서, 삽입지는 본 발명의 약제학적 조성물중의 항-NGF의 투여량에 대한 설명을 포함할 수 있다. 다른 양태로서, 삽입지는 본 발명의 약제학적 조성물의 투여 경로 및 횟수에 대한 설명을 포함할 수 있다. 다른 양태로서, 삽입지는 본 발명의 약제학적 조성물을 받을 대상자에게 안전성과 효능 목적 둘 다를 위한 병용 사용에 관한 정보를 제공할 수도 있다. 예를 들어, 특정 양태로서 키트는 추가의 치료제를 포함한 제2 약제학적 조성물을 추가로 포함하고, 두 제제들 모두의 투여는 NGF-연관된 질환 또는 상태의 치료를 위한 것으로 이에 대한 지침서와 함께 패키징되거나 함께 홍보된다. 본 발명의 키트를 사용하여 치료하기에 특히 바람직한 질환 및 상태는 염증성 통증(특히 골관절염 또는 류마티스성 관절염 통증), 근골격계 통증(특히 만성 요통), 신경병증 통증(특히 당뇨성 신경병증), 암 통증 및 골 전이에 의한 통증, 자궁내막증 및/또는 자궁근종과 연관된 통증 및 수술후 통증을 포함한다.

본 발명의 다른 양태들이 아래 실시예에 기재되며 이들 실시예는 한정하는 것으로 해석해서는 안된다. 본 명세서에 기재된 서열목록, 도면 및 모든 참고문헌, 특허 및 공개된 특허원의 내용은 본 명세서에 참고로 인용된다.

실시예

하기 실시예는 PG110의 적절한 제형을 개발하기 위해 용액 pH, 동결-해동, PG110 단백질 농도 및 여러 가지 완충제 및 부형제가 PG110의 물리화학적 안정성에 미치는 영향을 검사하기 위해 실시한 실험을 상세히 보여준다.

용액중의 PG110의 안정성을 평가하고 모니터링하기 위해 수행한 실험에서 아래의 분석 방법이 사용되었다.

일반적인 방법

PG110 제형을 일반적인 품질 매개변수(예를 들어, pH), 물리적 안정성의 매개변수(예를 들어, 투명도, 색상, 입자오염 및 순도) 및 화학적 안정성, 탈아미드화, 산화, 일반적인 화학적 안정성 및 크기별 배제 크로마토그래피(SEC)의 매개변수에 대해 시험하였다. 시험 예는 가시적 입자오염 시험, 육안으로 보이지 않는 입자에 대한 광차폐입자계수시험(light obscuration particle count test) 및 크기별 배제 HPLC 및 이미지 모세관 등전점전기영동과 같은 순도 시험을 포함한다.

입자오염(예를 들어, 육안으로 보이는 입자)는 육안 검사로 측정하였다. 육안으로 보이지 않는 입자는 미국약전(USP)에 따른 광차단(light blockage) 방법으로 모니터링하였다. 또한, 제형의 물리화학적 안정성은 단편 및 응집체의 검출이 가능한 SEC로 평가하였다. 화학적 안정성을 모니터링하기 위해, 크기별 배제 고압 액상 크로마토그래피(SE-HPLC)(제형의 시료에서 단편 및 가수분해를 검출하기 위해) 및 icIEF(이미지 모세관 등전점 포커싱(image capillary isoelectric focusing))를 수행했다.

icIEF 방법

icIEF 분석은 PrinCE 오토샘플러가 장착된 iCE280 이미징 cIEF 시스템 (Covergent Biosciences)을 사용하여 수행하였다. 하기 표 1은 icIEF 분석을 위해 사용된 시약 및 재료의 목록이다.

iCE280 기기는 제조사 지침서에 따라 가동하였다. 개개의 바이알에 새로운 양극액과 음극액을 채웠고, 폐기물 바이알은 MilliQ HPLC 수로 채웠으며, UV 램프를 켰다.

pI 5.12와 pI 9.22 마커 둘 다 MilliQ HPLC 수로 10배 희석하고 잘 혼합하여 pI 마커를 제조하였다.

PG110 시험 시료를 MilliQ HPLC 수로 1 mg/mL로 희석하고, 항체 희석액을 아래 표의 성분과 혼합한 다음, 간단히 와동시켜 PG110 분석시료를 제조하였다. 이어서, 시료를 오토샘플러 튜브에 안착된 유리인서트(glass insert)에 넣고 5분간 탈기한 후 PrinCE 오토샘플러에 넣었다.

크기별 배제 HPLC 방법

크기별 배제 HPLC를 사용하여 PG110 용액의 순도를 측정하였다. 검사는 아래에 요약한 바와 같이 수행하였다.

TSK 겔 가드(카달로그 번호 제08543호, 6.0 mm x 4.0 cm, 7 ㎛)를 TSK 겔 G3000SW (카달로그 번호 제08541호, 7.8 mm x 30 cm, 5 ㎛)와 병행하여 70 bar의 컬럼압력상한치로 가동하였다. 이동상은 100 mM Na₂HPO₄/200 mM Na₂SO₄, pH7.0으로 구성되었다. 이 완충제는 49.68 g의 무수 인산수소이나트륨과 99.44 g의 무수 황산나트륨을 약 3300 mL Milli-Q 수에 용해시키고 1 M 인산으로 pH를 7.0으로 조정하며 Milli-Q 수로 완충제 용량을 3500 mL로 증량하고 용액을 막 필터로 여과하여 제조하였다.

실험 매개변수는 다음과 같았다:

- 0.3 ml/분 유속

- 20 μL 주사량(20 ㎍ 시료와 상응함)

- 실온 컬럼

- 2 내지 8℃ 오토샘플러 온도

- 50분 가동시간

- 등용매 구배.

214 nm 파장(>0.1분 피크너비 및 8 nm 밴드너비) 및 360 nm 대조 파장(100 nm 밴드너비)를 사용하여 다이오드 어레이 검출기로 검출을 수행하였다.

시험 시료는 중복 주사하였다. 시료중의 PG110 항체 피크 면적을 모든 214 nm 흡수 성분의 총 면적(완충제-연관된 피크는 제외)과 비교하여 순도를 측정하였다. 상기 방법을 사용하여 완전한 PG110으로부터 중합체량 응집체와 항체 단편을 분리하였다.

광차폐

광차폐검사를 수행하여 항체 용액의 불용성 입자 함량을 측정하였다. 광차폐 측정 장비(입자 계수기, 모델 주사기, Klotz (Bad Liebenzell, Germany, 시리즈 S20037))에 라미나 에어 후드(Thermo Electron Corp., Asheville, NC, 모델번호 ULT2586-9-A40)를 장착하여 측정동안에 외래 입자 오염을 최소화하였다. 광차폐 분석은 다음과 같이 수행하였다. 3.5 mL 시료를 라미나 기류 조건하에 5 mL 환저 튜브에 넣었다. 측정은 먼저 0.8 mL 세정 후 n=3 모드 (1회 측정당 0.8 mL)로 제조사의 지침서에 따라 수행하였다.

시차주사열량법 (DSC)

DSC 분석 이전에, 슬라이드-에이-라이저 카세트를 사용하여 적절한 완충 시스템에 단백질을 투석하였다. 이 완충 시스템(10 mM 포스페이트, 10 mM 시트레이트)은 또한 DSC 측정을 위한 대조/블랭크로 사용한다. 항체는 1 내지 2 mg/mL로 분석한다. Capillary Cell(Microcal) DSC 장비를 갖춘 자동 VP-DSC를 사용한다. 25℃ 내지 95℃ 온도 범위에 걸쳐 1℃/분 스캔 속도로 적용하여 분자의 풀림을 연구한다. 다른 측정 매개변수는 다음과 같다: 피팅기간 : 16초; 프리스캔 웨이트(wait) : 10분; 피드백 모드 : NONE.

육안검사

단백질 시료의 육안 검사는 시료 용기안의 단백질 용액을 주의깊게 육안으로 관찰하여 수행하였다. 전형적으로는, 가시적인 미세물, 흐릿함, 유백광 또는 단백질 침전 및 가시적 입자 및 응집체를 더 용이하게 판별하기 위해 시료를 백색 및 암색/블랙 배경에서 관찰한다. 육안 검사에 용이한 시료 용기는 다양할 수 있으며, 반투명 및 등명한 Falcon 튜브, 유리 바이알, 저용량 바이알/튜브 및 슬라이드-에이-라이져 카세트와 같은 용기를 포함할 수 있다.

실시예 1: 반복된 동결/해동 연구(-80℃/30℃) 동안에 PG110 제형의 안정성에 미치는 용액 pH 의 영향

10 mM 시트레이트/10 mM 포스페이트 완충제중의 1 mg/mL의 단백질 농도에서 ABT110 항체의 동결해동 경위를 단백질 용액을 pH 4, pH 5, pH 6, pH 7 및 pH 8의 동결상태와 액체상태간에 4회 주기로 반복함으로써 평가하였다. 동결은 온도를 -80℃로 맞춘 냉동기를 사용하여 수행하였고 해동은 온도를 30℃로 맞춘 수욕을 사용하여 수행하였다. 매 동결/해동(F/T) 주기 후 시료를 꺼내 SEC로 분석하였다. 이 실험을 위해 각 PG110 용액 약 20 mL를 30 mL의 PETG 저장소에 넣었다. 표 3은 SEC시 시험 간격 및 수행한 동결/해동 주기의 횟수에 대해 개요를 제공한다. 표 4는 동결/해동 과정이 이들 pH 수준에서 제형화된 시료에 남아 있는 PG110 단량체의 양 및 시료에 형성된 단편 및 응집체의 양을 보여준다.

이들 결과는 PG110 단량체의 양이 반복된 동결/해동(F/T) 과정 동안 약간 감소하였으나 작은 정도에 불과하고 95% 이상의 완전한 단량체가 용액중에 안정하게 남아있음을 보여준다.

광차폐 실험을 수행하여 매 동결/해동 단계 동안에 형성된 육안으로 식별이 안되는 입자의 수를 측정하였다. 표 5는 수행한 광차폐 및 동결/해동 주기 횟수에 대한 시험 간격의 개요를 제공한다. 표 6 및 7은 동결/해동 과정이 각각 1 마이크로미터/mL 이상 및 10 마이크로미터 이상인 크기의 입자 수에 미치는 영향을 보여준다.

실시예 2: 가속 저장 동안에 PG110 제형의 물리화학적 안정성에 미치는 용액 pH의 영향

단백질 액체 및 동결건조 제형의 가속/장기간 저장 동안에 단백질 안정성에 영향을 미치는 중요한 요소는 제형의 pH 및 저장 온도이다. 이들 요소의 영향을 평가하기 위해 제형전 및 제형 프로젝트 단계 동안에 승온에서 단백질을 단기간 저장에 노출시켜 저온(예를 들어, 2 내지 8℃)에서의 장기간 저장시의 제형 실행가능성을 신속하게 파악하였다.

용액중의 PG110 항체(2 mg/mL, 10 mM 시트레이트/10 mM 포스페이트 완충제)의 저장 안정성을 조절된 온도 조건에서 연장된 기간 동안 여러 온도에서 평가하였다. 정해 놓은 저장 기간 후 시료를 회수하여 저장 시간 및 저장 온도가 PG110 안정성에 미치는 영향을 평가하였다.

이와 같은 pH 스크리닝 연구에서, PG110은 10 mM 포스페이트, 10 mM 시트레이트중의 2 mg/mL로서 pH 3, pH 4, pH 5, pH 6, pH 7 및 pH 8로 제형하였다.

시료를 멸균 바이알(각각 약 500 μL)에 채우고 40℃ 및 50℃에서 조절 조건 (암실의 온도 챔버내)하에 저장하였다. 예정된 시점에서 제조한 용액의 시료를 표 8에 기재된 시료 회수 일정에 따라 분석을 위해 수거하였다. 숫자는 저장/회수한 바이알의 수를 가리킨다. 생성된 데이터는 표 9 및 표 10에 제공된다.

가속 안정성의 상기된 시료에 대한 이미지 모세관 등전점 포커싱에 대한 데이터가 또한 평가되었다. icIEF는 분자의 화학적 안정성에 대한 정보를 제공한다. 표 11 및 12는 시료 회수 일정 및 데이터를 각각 보여준다.

이들 데이터는 약 pH 5 내지 7의 용액 pH 범위가 증가된 온도에서 최상의 PG110 안정성을 유지함을 증명한다. 40℃ 및 50℃에서 1주 저장 후 단량체 수준은 pH 6으로 제형화된 시료에서 최고로 나타났다.

pH 5 내지 7의 범위를 벗어나서 2 mg/mL의 PG110은 안정성이 상실한 것으로 명백히 드러났으며, 한편으로 응집체 및 단편의 수준이 증가하였다. 단편 수준은 약 6의 pH로 제형화된 시료에서 분해가 최소로 나타났다. 또한 icIEF 데이터는 약 6의 pH가 PG110의 안정성을 최상으로 유지한 것을 보여준다. 이들 데이터는 약 5.5 내지 6.5의 pH가 이 실험에서 적용된 특정 스트레스 조건에서 최상의 PG110 단백질 안정성을 유지해 준다는 것을 증명한다.

실시예 3: 30 mg / mL 조건에서 반복된 동결/해동(-80℃/30℃) 동안에 PG110 제형의 안정성에 미치는 제형의 영향

상이한 제형들에서 30 mg/mL의 단백질 농도로 ABT110 항체의 동결/해동(F/T) 경위를 pH 5.5에서 동결 상태와 액체 상태의 약물 물질 주기를 3회까지 반복함으로써 평가하였다. 평가된 제형은 다음과 같다:

(1) 10 mM 아세테이트 +125 mM 염화나트륨 pH 5.5

(2) 15 mM 히스티딘 pH 5.5

(3) 15 mM 히스티딘과 0.01% 트윈 80 pH 5.5

동결은 온도 조절된 -80℃ 냉동기를 사용하여 수행하였고 해동은 30℃ 온도 조절된 수욕을 사용하여 수행하였다. 매 동결/해동 주기 후 시료를 회수하고 SEC 및 육안 검사로 분석하였다. 약 1 mL의 PG110 용액을 이 실험을 위한 저장소에 넣었다. 표 13은 SEC 및 수행된 해동/동결 주기의 횟수에 대한 시험 간격의 개요를 제공한다. 표 14는 이들 pH 수준으로 제형화된 시료에 남은 PG110의 단량체 양 및 이에 형성된 단편 및 응집체의 양에 미치는 동결/해동 과정의 영향을 보여준다.

여러 제형의 육안 검사는 히스티딘 및 트윈 80(폴리소르베이트 80) 함유 제형이 3회 F/T 주기 후조차 최소의 입자 형성을 나타냈다. 이 결과는 히스티딘과 트윈 80 모두가 PG110 안정성을 유지시키는데 아주 적절한 부형제임을 가리킨다. 다른 두 제형들은 육안으로 보이는 훨씬 더 많은 수의 입자(용기당 20 내지 30개의 가시적 입자)를 나타냈다.

실시예 4: 1 mg / mL 조건에서 미세열량계연구(내재적 안정성) 동안에 PG110 제형의 안정성에 미치는 제형 매개변수의 영향

상이한 제형들에서 1 mg/mL의 단백질 농도로 ABT110 항체의 열역학 안정성(내재적 안정성)을 미세열량계를 사용하여 평가하였다. 가열은 1℃/분의 스캔 속도로 수행하였다. 결과는 표 15에 요약되어 있다.

이들 데이터는 PG110의 내재적 안정성이 제형 매개변수(예를 들어, 제형 pH 및 부형제)에 의해 영향을 받는다는 것을 보여준다.

실시예 5: 100 mg/mL 조건에서 반복된 동결/해동 연구(-80℃/30℃) 동안에 PG110 제형의 안정성에 미치는 농도의 영향

100 mg/mL의 단백질 농도에서 ABT110 항체의 동결/해동(F/T) 경위를 pH 6에서 동결 상태와 액체 상태의 주기로 단백질 용액을 4회 반복시킴으로써 평가하였다. 이전 데이터는 히스티딘이 PG110의 안정화에 적절한 완충제/부형제임으로 가리킴으로써 PG110 단백질 안정성에 미치는 히스티딘의 안정화 영향을 100 mg/mL 단백질 농도에서 시험하였다.

동결은 온도 조절된 -80℃ 냉동기를 사용하여 수행하였고 해동은 30℃ 온도 조절된 수욕을 사용하여 수행하였다. 매 동결/해동 주기 후 시료를 회수하고 SEC 및 육안 검사로 분석하였다. 표 16은 SEC 및 수행된 동결/해동 주기의 횟수에 대한 시험 간격의 개요를 제공한다. 표 17은 이들 pH 수준으로 제형화된 시료에 남은 PG110의 단량체 양 및 이에 형성된 단편 및 응집체의 양에 미치는 동결/해동 과정의 영향을 보여준다.

데이터는 단량체, 응집체 및 단편 수준이 f/t 실험을 통해 실질적으로 변하지 않았기 때문에 100 mg/mL에서 PG110 제형이 반복된 f/t 과정 동안에 물리적 불안정성을 나타내지 않았음을 보여준다. 이 결과는 f/t 과정동안에 히스티딘이 PG110 안정성을 유지하는데 아주 적절한 부형제임을 증명한다.

실시예 6: 육안 검사에 의해 결정된 것으로서 투석 후 PG110 제형내 입자의 탁도 및 형태에 미치는 완충제 및 부형제의 영향

PG110의 이전 실험은 이 단백질이 pH 5.5에서 10 mM 아세테이트, 125 mM NaCl 용액에 저장되었을 때 육안으로 심각한 입자 형성과 침전 현상을 볼 수 있어 물리적 불안정성을 나타내는 경향을 보여왔다. 본 실험은 가시적 입자 형성이 단백질 자체의 고유 성질에 의한 것인지 또는 제형이 물리적 안정성을 유지하고 입자 형성 민감성이 감소된 것인지 동정될 수 있는지를 확인하기 위해 설계되었다.

상기 입자들은 육안으로 관찰할 수 있기 때문에, 상이한 부형제들로 제형된 PG110 용액의 세심한 육안 검사는 제형 조건들이 입자 형성을 가속시키거나 방지할 수 있는지를 결정하는 아주 유용한 방법이다.

이를 수행하기 위해 표 18에 수록된 부형제를 함유하고 1 mg/ml 농도의 PG110 용액을 투석으로 제조하였다.

1 mg/ml 초과의 PG110 용액을 10,000 MWCO의 슬라이드-에이-라이져 카세트에 넣고 1 L의 표적 완충제/부형제 매질에 대해 1시간 동안 투석하였다. 이후, 투석 매질을 새로운 매질로 교체하고 투석을 밤새 계속하였다. 투석 후 용액의 농도를 UV280으로 측정하였다. 만일 농도가 너무 높은 경우 용액을 상응하는 완충제로 표적 농도로 희석하였다. 만일 농도가 너무 낮은 경우엔 용액을 아미콘 울트라 원심분리 튜브로 표적 농도로 농축시켰다. 이어서, 용액의 pH를 점검하였다. 만일 pH가 6 ± 0.1내에 있지 않은 경우 0.1 M NaOH 또는 0.1 M HCl로 표적의 pH를 조정하였다. pH 6의 조건은 화학적 및 물리적 안정성을 위해 최적의 pH에 가까운 것으로 결정된 이전 실험을 기초로 선택한 것이었다. 이후, 용액을 0.20 ㎛ 필터를 통해 투명한 PETG 용기에 넣었다. 또한 증류수를 동일한 필터를 통과시켜 PETG 용기에 넣고 대조군으로 사용하였다.

이 절차 이후, PETG 바이알내 PG110 용액을 입자에 대해 육안 검사하였다. 병은 소프트한 형광빛 및 검정 배경에 두었다. 또한 병을 부드럽게 진탕시켜 입자들이 유동하도록 하여 육안 검사가 보다 더 용이하도록 하였다. 이어서, 병을 4℃에 밤새 저장하였다. 다음 날 병을 저장소에서 회수하여 위와 같이 검사하였다.

여과 후 즉시 이루어진 검사에서는 모든 시료에서 가시적인 입자가 나타나지 않았다. 그러나, 4℃에서 밤새 저장한 후에 이루어진 육안 검사는 완충제/부형제중 많은 것에서 입자 형성이 관찰되었다. 이러한 발견은 표 19에 요약되어 있다.

위 데이터는 트윈 80이 가시적 입자의 형성을 방지한다는 것을 증명하며 그의 용도를 정당화한다. pH 6에서 완충능을 갖는 해당 부형제(시트레이트, 포스페이트, 석시네이트, 히스티딘), 데이터는 히스티딘이 가시적 입자 형성을 방지하는데 가장 좋다는 것을 증명한다.

실시예 7: 반복된 동결/해동 주기(-80℃/30℃) 동안에 PG110 제형의 안정성에 미치는 완충제 및 제형 부형제의 영향

이 실시예는 반복된 동결(-80℃ 온도 조절된 냉동기)와 해동(30℃ 온도 조절된 순환 수욕) 과정에서 2 mg/mL 및 pH 6의 PG110 용액 제형에 대한 여러 완충제 및 부형제의 안정화 잠재성을 평가하기 위해 수행된 실험의 데이터를 기재한다 (pH 6의 조건은 화학적 및 물리적 안정성을 위해 최적의 pH 근처에 있다고 측정된 이전의 실험을 기초로 선택된 것이다). 시험된 완충제 및 부형제는 표 20에 수록되어 있다.

시료를 T0, T1(1회 동결/해동 단계 후), T2 및 T3에서 회수했다. 1회 동결-해동 과정 단계는 적어도 4시간 동안 -80℃에 시료 저장에 이어서 30℃ 순환 수욕에서 시료의 해동을 포함한다. 동결-해동 시료를 분석하기 위해 5 mL 환저 튜브에 3.5 mL 항체 제형을 충전하고(0.2 ㎛ 여과된 WFI로 세정한 5 mL 피펫 팁을 사용) 광차폐 측정을 실시하였다. 또한, 0.1 mL의 각 시료를 SEC 분석을 위해 회수하였고, 0.2 mL의 시료를 회수하여 -80℃에 저장하였다(시료를 임의로 추가적인 분석 특성확인을 위해 보존하였다).

PG110의 동결/해동 과정 동안에 크기가 ≥ 1 ㎛ 및 ≥ 10 ㎛인 비가시적 입자의 형성에 미치는 완충제 및 부형제의 영향이 표 22 및 표 23에 각각 기재되어 있다. SEC 데이터는 표 24, 25 및 26에 기재되어 있다.

포스페이트, 시트레이트, 소르비톨, 만니톨 및 수크로즈를 함유한 제형과 같은 일부 제형에서, ≥ 1 ㎛/mL의 입자 수가 일차 동결-해동 주기 후에 증가하였을뿐 이차 주기 후 감소하였다. 히스티딘, 아르기닌 또는 단순히 물만 함유한 제형과 같은 다른 제형의 경우는 ≥ 1 ㎛/mL의 입자 수가 매 동결-해동 주기 후마다 증가하였다. ≥ 10 ㎛/mL인 입자는 포스페이트, 시트레이트, 석시네이트, 히스티딘, 아르기닌 및 단순히 물을 함유한 제형에서 매 동결-해동 주기후마다 증가하였다. 소르비톨, 만니톨 또는 수크로즈를 함유한 제형의 경우 ≥ 10 ㎛/mL의 입자는 일차 동결/해동 주기 후에 증가하였으나, 이후 주기에서는 감소하였다. 일회 동결-해동 주기 후 소르비톨 또는 만니톨을 함유한 제형은 ≥ 1 ㎛/mL(적어도 > ~200,000)의 입자 수 및 또한 ≥ 10 ㎛/mL(평균 ~25000)의 입자 수가 최고로 나타났다. 그러나, 3차 동결-해동 주기 후에는 모든 제형에서 ≥ 1 ㎛/mL의 입자가 mL 당 100,000 미만으로 나타났다.

폴리소르베이트 80은 PG110의 동결/해동 과정 동안에 비가시적 입자의 형성을 방지함에 따라 PG110 안정성의 유지에 양성 효과를 나타내는 것으로 밝혀졌다. 이것은 폴리소르베이트 80이 빙수 계면에서 항체의 변성을 방지하는 능력에 기인한다. 만니톨, 소르비톨 및 수크로즈를 포함한 당/당 알코올은 초기 동결-해동 주기 후에 비가시적 입자 형성을 유도하는 것으로 밝혀졌다. 이러한 관찰 결과는 만니톨 및 소르비톨을 함유하는 제형에서 단량체의 뚜렷한 감소(%) 및 이에 상응하는 응집체의 증가(%)를 보여주는 SEC 데이터에 의해 지지된다. (모든 다른 부형제의 경우 SEC 데이터는 안정성면에서 다르지 않다.)

실시예 8: 가속 안정성 시험 동안에 PG110 제형의 물리화학적 안정성에 미치는 완충제 및 부형제의 영향

이전의 실시예들은 pH 및 저장 온도를 포함하여 장기간 저장 동안에 PG110 제형의 안정성에 영향을 미치는 요소를 논의하였다. 이러한 외적인 요소이외에, 제형 성분 자체가 저장 동안에 단백질 약물 물질 안정성에 미치는 영향에 대해 평가되어야 한다. 이를 수행하기 위해, 저온(대부분의 경우에 2 내지 8℃)에서의 장기간 저장시의 제형화 용이성을 신속하게 파악하기 위해, 단백질 약물 물질을 예비제형화 및 제형화 프로젝트 단계들 동안에 승온에서 단기간 저장에 노출시켰다.

용액중의 PG110 항체의 저장 안정성을 상이한 완충제 및 부형제에서 pH 6의 조절된 온도 조건하에 연장된 기간 동안 여러 온도에서 평가하였다. pH 6의 조건은 화학적 및 물리적 안정성을 위해 최적의 pH에 가까운 것으로 측정된 이전 실험을 기초로 선정한 것이다. 예정된 저장 기간 후 시료를 회수하고 SEC 및 iCIEF에 의해 PG110 안정성에 미치는 저장 시간 및 저장 온도의 영향을 평가하였다.

이 연구에서 PG110은 표 27에 나열된 여러 완충제 및 부형제 중에 2 mg/mL로 제형화되었다.

이어서, 시료를 여러 온도의 조절된 조건(온도 챔버에서 및 광이 없는 조건)에 저장하였다. 예정된 시점에서, 제조된 용액의 시료를 SEC 및 iCIEF에 대한 각각의 표 28 및 29에 제공된 시료 회수 일정에 따라 분석을 위해 회수하였다. 숫자는 각 완충액 또는 부형제 조건에서 저장/회수된 바이알의 수를 가리킨다. 데이터는 표 30, 31 및 32에 기재되어 있다.

PG110 안정성은 저장 온도의 증가와 함께 감소하였고 이는 모든 단백질에게 예상되는 경위이다. 그러나, 지금까지 수집된 데이터는 포스페이트, 아르기닌 또는 글리세롤을 사용한 PG110의 제형이 잠재적 변성을 유발할 수 있음을 가리킨다. 글리세롤로 7일 동안 50℃에서 저장 후 SEC를 통해 어떠한 단백질도 검출되지 않았으며, 이 결과는 모든 PG110이 물리적 불안정성과 불용성 응집체 형성을 겪었고 이에 따라 SEC/UV 검출을 회피하였음을 가리킨다.

실시예 9: -80℃에 저장된 PG110 제형의 안정에 미치는 완충액 및 제형 부형제의 영향

이전 실시예로부터의 발견은 15 mM 히스티딘과 0.01% 트윈 80의 제형이 약물 물질의 액체 제형에서 가시적 입자 형성을 방지하는데 최적이다라는 결론을 제공하였다(실시예 6). 트윈 80 또한 실시예 7에서 상세히 제시된 바와 같이 동결-해동 스트레스에 의해 유도된 비가시적 입자의 형성을 방지하였다. 가속 안정성 시험(실시예 8) 또한 두 부형제가 허용되지 않는 수준의 응집 또는 단편화를 일으키지 않았음을 제시하였다.

이 가운데 다음의 문제는 부형제가 -80℃에 저장된 경우 약물 물질의 불안정성을 일으키는지의 여부이다. 이 시험을 위해 원래 제형(10 mM 아세테이트, 125 mM NaCl)중에 1 mg/mL 및 10 mg/mL로 PG110을 함유한 150 μl 용액, 15 mM 히스티딘 pH 6 및 15 mM 히스티딘 pH 6 + 0.01% 트윈 80을 준비하고 -80℃에서 냉동바이알에 저장하였다. 5일째 각 시료의 바이알을 저장소에서 회수하고 SEC에 의해 생리화학적 분해를 정량하였다. 10일째에 각 시료의 남은 바이알을 회수하고 동일한 방법으로 분석하였다. 표 34, 35 및 36은 이들 실험의 결과를 보여준다.

데이터는 히스티딘 또는 히스티딘+트윈 80을 함유한 제형의 경우 단량체 비율(%)이 0 내지 5일째에 증가하고 이 수준을 적어도 10일까지 유지한다는 것을 보여준다. 대조적으로, 10 mM 아세테이트 및 125 mM NaCl중에 10 mg/ml의 PG110은 0 내지 5일 내지 10일째까지 단량체 비율(%)이 일정하게 감소하고 이에 상응하여 응집체 비율(%)은 증가한다는 것을 보여준다. 총론적으로, 데이터는 히스티딘+트윈 80 제형이 -80℃에 저장될 때 약물 물질을 불안정하게 하지 않음을 제시한다.

또한 육안 검사 데이터는 히스티딘 함유 제형(100 mg/mL에서 조차)은 4 F/T 주기후 조차 가시적 입자 형성을 함유하지 않았음을 보여주었으며, 이 결과는 히스티딘이 PG110 안정성을 유지하는데 매우 적절한 부형제임을 제시한다.

실시예 10: 여러 농도의 여러 제형에서 PG110 의 안정성에 미치는 동결-해동, 교반 및 가속 안정성 시험의 영향

PG110 안정성에 미치는 부형제의 영향을 여러 스트레스 실험에서 평가하였다:

1) 반복된 동결-해동 과정(-80℃/30℃ 수욕);

2) 기체-액체 계면을 확장하여 물리적 불안정성과 PG110 분해를 유도하기 위한 효과적인 교반 스트레스를 가하도록 교반시킴(6R 유리 바이알, 주변온도, 약 9 mm 테프론 피복 교반 바, 550 rpm, 48시간 까지의 교반);

3) 가속 안정성 시험: 여러 시료를 실시간 투입하고 2 내지 5℃, 25℃/60%relH 및 40℃/60%relH에서의 가속 안정성 및 천연 PG110 단량체의 함량에 미치는 단백질 농도 및 안정화 부형제의 영향을 SEC/UV로 모니터링하였다.

아래의 PG110 제형 및 제형 조성물이 시험되었다:

제형 1: 52 mg/mL PG110, pH 6.0;

2.33 mg/mL 히스티딘;

5.0 mg/mL 수크로즈;

20.0 mg/mL 만니톨; 및

0.10 mg/mL 폴리소르베이트 80.

제형 2: 52 mg/mL PG110, pH 6.0;

2.33 mg/mL 히스티딘

46 mg/mL 수크로즈; 및

0.10 mg/mL 폴리소르베이트 80.

제형 3: 52 mg/mL PG110, pH 6.0;

2.33 mg/mL 히스티딘;

46 mg/mL 트레할로즈; 및

0.10 mg/mL 폴리소르베이트 80.

제형 4: 20 mg/mL PG110, pH 6.0;

2.33 mg/mL 히스티딘;

5.0 mg/mL 수크로즈;

20.0 mg/mL 만니톨; 및

0.10 mg/mL 폴리소르베이트 80.

제형 5: 20 mg/mL PG110, pH 6.0;

2.33 mg/mL 히스티딘;

46 mg/mL 수크로즈; 및

0.10 mg/mL 폴리소르베이트 80.

제형 6: 20 mg/mL PG110, pH 6.0;

2.33 mg/mL 히스티딘;

46 mg/mL 트레할로즈; 및

0.10 mg/mL 폴리소르베이트 80.

52 mg/mL 및 20 mg/mL의 단백질 농도에서 ABT110 항체의 동결해동 안정성은 각각 2 및 4 f/t 주기 후 다음과 같다:

상기 데이터는 수크로즈, 트레할로즈 및 만니톨이 반복된 f/t 스트레스 동안에 PG110의 물리적 안정성을 유지하는데 아주 적합함을 증명한다. 스트레스 실험을 통해 천연 PG110 단량체 함량에 대해 실질적으로 분해가 검출되지 않았다.

52 mg/mL 및 20 mg/mL의 단백질 농도에서 ABT110 항체의 교반 스트레스 안정성은 각각 교반 24 및 48 시간 후 다음과 같다:

상기 데이터는 수크로즈, 트레할로즈 및 만니톨이 집중적인 교반 스트레스 동안에 PG110의 물리적 안정성을 유지하는데 아주 적합함을 증명한다. 스트레스 실험을 통해 천연 PG110 단량체 함량에 대해 실질적으로 분해가 검출되지 않았다.

52 mg/mL 및 20 mg/mL의 단백질 농도에서 ABT110 항체의 가속 분해 역학은 5℃에서 14일 후 및 50℃에서 14일 후에 다음과 같다:

상기 데이터는 수크로즈, 트레할로즈 및 만니톨이 장기간 저장 동안에 PG110의 물리적 안정성을 유지하는데 아주 적합함을 증명한다. 50℃에 14일 동안 노출시켰을때 조차 천연 단량체의 80% 이상이 모든 시험한 시료에 존재하였다.

실시예 11: 여러 조건하의 저장된 PG110 동결건조 분말의 장기간 안정성

PG110의 동결건조 및 저장 동안에 수크로즈 및 만니톨의 안정화제로서의 적합성을 추가로 연구하였다. 주사 용액을 위한 PG110 동결건조 분말의 두 제형들을 장기간 저장 조건(2 내지 8℃), 25℃/60% RH의 가속 저장 조건 및 40℃/75% RH 및 50℃의 스트레스 조건하에 두었다. 예를 들어, 표 40에 제시된 바와 같이, 표준 방법에 따라 제조된 130 L 규모의 약물 물질로부터 실험실-규모 약물 생성물 배치를 제조하고 동결건조시켰다.

시험을 위해 제형의 시료를 실온에서 멸균증류수에 현탁시켰다.

제형 1:

20 mg/mL PG110, pH 5.5

2.33 mg/mL 히스티딘

70 mg/mL 수크로즈

0.1 mg/mL 폴리소르베이트 80

제형 2:

20 mg/mL PG110, pH 5.5

2.33 mg/mL 히스티딘

10 mg/mL 수크로즈

30 mg/mL 만니톨

0.1 mg/mL 폴리소르베이트 80

약물 물질의 정성, 생물학적 활성 및 순도에 관한 시험 방법을 여러 시점에서 수행하여 각 배치에서 PG110의 안정성 프로필을 평가하였다. 사용된 분석 방법은 다음을 포함한다:

● 외관(육안)

● 입자 (육안)

● 비가시적 입자(광차단)

● pH

● 이미지화된 모세관 등전점 포커싱(icIEF)

● SDS PAGE(환원 및 비환원)

● 크기별 배제 HPLC

● 생성물 특이적 항원 결합 검사

● 생성물 특이적 기능 생검사

염료 침투 방법을 사용하여 용기 밀폐 완전성 시험을 수행하였으며, 이 방법에서 약물 생성물 바이알을 메틸렌 블루 용액중에 진공 노출시킨 다음 블루 발색을 육안 검사하였다. 표준 방법에 따라 USP당 물 함량을 측정하였다. 배치 1 및 배치 2의 시료에서 획득한 안정성 데이터는 표 41 내지 48에 제시되어 있다.

2 내지 8℃의 저장 조건에서 저장된 제형 1 및 2의 시료뿐만 아니라 25℃ 및 40℃에서 6개월 동안 저장된 시료에 대한 모든 데이터는 타당성 기준을 충족하며 이들 온도에서 안정성 매개변수 시험중 어디에서도 유의적인 변화가 관찰되지 않았다. 더 극단적인 스트레스 조건(50℃)에서 1개월 동안의 저장은 icIEF에서만 밝혀진 것으로 순도 감소가 나타났다.

6개월에 걸친 40℃에서의 제형 1과 2의 비교 결과, 수크로즈 단독으로 제형된 PG110 항체가 수크로즈와 만니톨의 배합으로 제형된 항체보다 더 높은 수준의 안정성을 나타내는 것을 증명했다(도 1). 추가로, 놀랍게도, 당 및/또는 폴리올 : 단백질의 몰비(molar ratio)를 1400 초과(예를 들어, 제형 1의 경우 단백질 : 당 = 1:1515; 제형 2의 경우 단백질 : 당+폴리올 비 = 1436)로 함유하는 이들 제형에 비가시적 및 가시적 입자의 형성이, 시간이 지나도, 40℃에서의 가속 안정성 연구에서 조차 변화하지 않는 것으로 관찰되었다.

참조 인용

본 발명은 단백질 제형의 분야에서 익히 공지된 본 발명의 전체 기술들을 참조로서 인용한다. 상기 기술들은 하기 문헌들에 기재된 기술들을 포함하나, 이에 제한되지 않는다:

균등론

본 발명은 이의 정신 및 필수적인 특징을 벗어나지 않으면서 다른 구체적 형태로 구현될 수 있다. 따라서, 상기 양태들은 모든 관점에서 본 명세서에 기재된 본 발명을 예시적으로 설명하는 것이지 한정하는 것으로 해석해서는 안된다. 본 발명의 범위는 상기된 설명 및 모든 변형으로 제시되는 것이 아니라 첨부된 특허청구범위로 제시된다.

서열목록의 요약

SEQUENCE LISTING <110> ABBOTT RESEARCH BV <120> ANTI-NERVE GROWTH FACTOR (NGF) ANTIBODY COMPOSITIONS <130> PNJ-026PC <150> 61/314984 <151> 2010-03-17 <160> 16 <170> KopatentIn 1.71 <210> 1 <211> 122 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 1 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Leu Thr Asn Asn 20 25 30 Asn Val Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Gly Gly Val Trp Ala Gly Gly Ala Thr Asp Tyr Asn Ser Ala Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Ala Tyr Leu 65 70 75 80 Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Asp Gly Gly Tyr Ser Ser Ser Thr Leu Tyr Ala Met Asp Ala Trp 100 105 110 Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 2 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of 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Claims

약제학적 조성물로서,
(a) 항-신경 성장 인자(NGF) 항체 또는 이의 항원 결합 단편;
(b) 약 5 내지 약 60 mM 농도의 히스티딘 완충제; 및
(c) 약 0.01% 내지 약 0.1% 농도의 폴리소르베이트 80을 포함하고;
상기 조성물의 pH가 약 5.0 내지 약 6.0인, 약제학적 조성물.
제1항에 있어서, 상기 조성물이 약 10 내지 약 30 mM 히스티딘을 포함하는, 약제학적 조성물.
제1항에 있어서, pH가 약 5.5인, 약제학적 조성물.
제1항에 있어서, 상기 조성물이 약 0.01% 내지 약 0.02% 폴리소르베이트 80을 포함하는, 약제학적 조성물
제1항에 있어서, 상기 조성물이 추가로 약 1 내지 약 100 mg/mL의 폴리올을 포함하는, 약제학적 조성물.
제5항에 있어서, 폴리올이 소르비톨 및 만니톨로 이루어진 그룹에서 선택되는, 약제학적 조성물.
제6항에 있어서, 폴리올이 만니톨인, 약제학적 조성물.
제7항에 있어서, 상기 조성물이 약 10 내지 약 30 mg/mL 만니톨을 포함하는, 약제학적 조성물.
제1항에 있어서, 상기 조성물이 추가로 약 10 내지 약 100 mg/mL의 당을 포함하는, 약제학적 조성물.
제9항에 있어서, 당이 수크로즈인, 약제학적 조성물.
제10항에 있어서, 상기 조성물이 약 10 내지 약 70 mg/mL 수크로즈를 포함하는, 약제학적 조성물.
제1항에 있어서, 상기 조성물이 폴리올 또는 당을 포함하지 않는, 약제학적 조성물.
제1항에 있어서, 상기 조성물이 메티오닌을 포함하지 않는, 약제학적 조성물.
제1항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원-결합 부분의 농도가 약 1 내지 약 240 mg/mL인, 약제학적 조성물.
제1항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원-결합 부분의 농도가 약 20 내지 약 120 mg/mL인, 약제학적 조성물.
제1항 내지 제11항 및 제13항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, (a) 항-NGF 항체 또는 이의 항원-결합 부분 대 (b) 폴리올, 당 또는 이의 배합물의 몰비(molar ratio)가 1:1400 초과인, 약제학적 조성물.
제1항에 있어서,
상기 조성물이, (a) 약 20 mg/mL의 항체 또는 이의 항원-결합 부분;
(b) 약 15 mM 히스티딘; 및
(c) 약 0.01% 폴리소르베이트 80을 포함하고;
상기 제형의 pH가 약 5.5인, 약제학적 조성물.
제1항에 있어서,
상기 조성물이, (a) 약 60 mg/mL의 항체 또는 이의 항원-결합 부분;
(b) 약 30 mM 히스티딘; 및
(c) 약 0.02% 폴리소르베이트 80을 포함하고;
상기 제형의 pH가 약 5.5인, 약제학적 조성물.
제1항에 있어서, 동결건조에 적합한, 약제학적 조성물.
(a) 약 1 내지 약 120 mg의 항-NGF 항체 또는 이의 항원-결합 단편;
(b) 약 1 내지 약 10 mg의 히스티딘; 및
(c) 약 0.1 내지 약 0.4 mg의 폴리소르베이트 80을 포함하는,
동결건조된 약제학적 조성물.
제20항에 있어서, (a) 약 60 mg의 항-NGF 항체 또는 이의 항원-결합 단편;
(b) 약 4.7 mg의 히스티딘; 및
(c) 약 0.2 mg의 폴리소르베이트 80을 포함하는, 동결건조된 약제학적 조성물.
제20항에 있어서, (a) 약 20 mg의 항-NGF 항체 또는 이의 항원-결합 단편;
(b) 약 2.3 mg의 히스티딘; 및
(c) 약 0.1 mg의 폴리소르베이트 80을 포함하는, 동결건조된 약제학적 조성물.
제20항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, 추가로 약 1 내지 약 100 mg의 폴리올을 포함하는, 동결건조된 약제학적 조성물.
제23항에 있어서, 폴리올이 약 10 내지 약 50 mg 만니톨인, 동결건조된 약제학적 조성물.
제20항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서, 추가로 약 1 내지 약 100 mg의 당을 포함하는, 동결건조된 약제학적 조성물.
제25항에 있어서, 당이 약 1 내지 100 mg 수크로즈인, 동결건조된 약제학적 조성물.
제1항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항-NGF 항체 또는 이의 항원-결합 부분이 인간 NGF와 결합하는, 약제학적 조성물.
제1항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항-NGF 항체 또는 이의 항원-결합 부분이 인간 IgG4 불변영역을 포함하는, 약제학적 조성물.
제1항 내지 제28항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항-NGF 항체 또는 이의 항원-결합 부분이 힌지 영역 돌연변이를 포함하는, 약제학적 조성물.
제29항에 있어서, 상기 힌지 영역 돌연변이가, 서열번호 9의 아미노산 위치 108에 존재하는 세린의 돌연변이를 포함하는, 약제학적 조성물.
제29항에 있어서, 서열번호 9의 아미노산 위치 108에 존재하는 세린이 프롤린으로 돌연변이된, 약제학적 조성물.
제29항에 있어서, 상기 인간 IgG4 불변영역이 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하는, 약제학적 조성물.
제1항 내지 제32항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원-결합 부분이,
a) 인간 NGF와 결합하지만 인간 뇌-유도되는 신경영양인자(BDNF), 인간 뉴로트로핀 3(neurotrophin-3:NT-3) 또는 인간 뉴로트로핀 4(NT-4)와 결합하지 않는 작용 특성;
b) 인간 또는 랫트 NGF와 100 pM 이하의 K_D로 결합하는 작용 특성;
c) TrkA 또는 p75^NTR에 대한 NGF의 결합을 억제하는 작용 특성;
d) TF-1 세포의 NGF-의존성 증식을 억제하는 작용 특성;
e) NGF-의존성 병아리 배근신경절 생존을 억제하는 작용 특성; 및
f) NGF-의존성 PC12 세포 신경돌기 돌출을 억제하는 작용 특성 중 하나 이상의 작용 특성을 갖는, 약제학적 조성물.
제1항 내지 제33항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원-결합 부분이 대상자에게 투여되었을 때 반동 효과(rebound effect)를 나타내지 않는, 약제학적 조성물.
제1항 내지 제34항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원-결합 부분이 서열번호 3, 4 및 5의 아미노산 서열을 각각 갖는 CDR 1, 2 및 3을 포함하는 중쇄 가변영역을 포함하는, 약제학적 조성물.
제1항 내지 제35항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원-결합 부분이 서열번호 6, 7 및 8의 아미노산 서열을 각각 갖는 CDR 1, 2 및 3을 포함하는 경쇄 가변영역을 포함하는, 약제학적 조성물.
제1항 내지 제36항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원-결합 부분이 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변영역을 포함하는, 약제학적 조성물.
제1항 내지 제37항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원-결합 부분이 서열번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변영역을 포함하는, 약제학적 조성물.
제1항 내지 제38항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원-결합 부분이, NGF와의 결합을 위해 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변영역 및 서열번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변영역을 포함하는 항체와 경쟁하는, 약제학적 조성물.
제1항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원-결합 부분이 서열번호 13의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는, 약제학적 조성물.
제1항 내지 제26항 및 제40항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원-결합 부분이 서열번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는, 약제학적 조성물.
약제학적 조성물로서,
(a) (i) 서열번호 3, 4 및 5의 아미노산 서열을 각각 갖는 CDR 1, 2 및 3을 포함하는 중쇄 가변영역, (ii) 서열번호 6, 7 및 8의 아미노산 서열을 각각 갖는 CDR 1, 2 및 3을 포함하는 경쇄 가변영역 및 (iii) 서열번호 10의 아미노산 서열을 갖는 인간 IgG4 불변영역을 포함하는 항-신경 성장 인자(NGF) 항체 또는 이의 항원 결합 단편(상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 농도는 약 10 내지 약 50 mg/mL이다);
(b) 약 10 내지 약 30 mM 히스티딘 농도를 갖는 히스티딘 완충제; 및
(c) 약 0.01% 내지 약 0.02% 농도의 폴리소르베이트 80을 포함하고,
상기 조성물의 pH가 약 5.0 내지 약 6.0인,
약제학적 조성물.
약제학적 조성물로서,
(a) (i) 서열번호 1의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변영역, (ii) 서열번호 2의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역 및 (iii) 서열번호 9의 위치 108에서 힌지 영역 돌연변이를 포함하는 인간 IgG4 불변영역을 포함하는 항-신경 성장 인자(NGF) 항체 또는 이의 항원 결합 단편(상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 농도는 약 10 내지 약 50 mg/mL이다);
(b) 약 10 내지 약 30 mM 히스티딘 농도를 갖는 히스티딘 완충제; 및
(c) 약 0.01% 내지 약 0.02% 농도의 폴리소르베이트 80을 포함하고;
상기 조성물의 pH가 약 5.0 내지 약 6.0인,
약제학적 조성물.
약제학적 조성물로서,
(a) (i) 서열번호 13의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 및 서열번호 16의 아미노산 서열을 갖는 경쇄를 포함하는 인간 IgG4 불변영역을 포함한 항-신경 성장 인자(NGF) 항체 또는 이의 항원 결합 단편(상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 농도는 약 10 내지 약 50 mg/mL이다);
(b) 약 10 내지 약 30 mM 히스티딘 농도를 갖는 히스티딘 완충제; 및
(c) 약 0.01% 내지 약 0.02% 농도의 폴리소르베이트 80을 포함하고;
상기 조성물의 pH가 약 5.0 내지 약 6.0인,
약제학적 조성물.
제42항 내지 제44항 중 어느 한 항에 있어서, 추가로 약 10 내지 약 50 mg/mL 만니톨을 포함하는, 약제학적 조성물.
제42항 내지 제45항 중 어느 한 항에 있어서, 추가로 약 5 내지 약 70 mg/mL 수크로즈를 포함하는, 약제학적 조성물.
제42항 내지 제44항 중 어느 한 항에 있어서,
(a) 약 10 내지 30 mg/mL의 항체 또는 이의 항원-결합 단편;
(b) 약 15 mM 히스티딘 완충제; 및
(c) 약 0.01% 폴리소르베이트 80으로 필수적으로 구성되고,
상기 조성물의 pH가 약 5.5인, 약제학적 조성물.
제45항에 있어서,
(a) 약 10 내지 30 mg/mL의 항체 또는 이의 항원-결합 단편;
(b) 약 15 mM 히스티딘 완충제;
(c) 약 0.01% 폴리소르베이트 80; 및
(d) 약 10 내지 30 mg/mL 만니톨로 필수적으로 구성되고,
상기 조성물의 pH가 약 5.5인, 약제학적 조성물.
제46항에 있어서,
(a) 약 10 내지 30 mg/mL의 항체 또는 이의 항원-결합 단편;
(b) 약 15 mM 히스티딘 완충제;
(c) 약 0.01% 폴리소르베이트 80; 및
(d) 약 40 내지 70 mg/mL 수크로즈로 필수적으로 구성되고,
상기 조성물의 pH가 약 5.5인, 약제학적 조성물.
제46항에 있어서,
(a) 약 10 내지 30 mg/mL의 항체 또는 이의 항원-결합 단편;
(b) 약 15 mM 히스티딘 완충제;
(c) 약 0.01% 폴리소르베이트 80;
(d) 약 10 내지 30 mg/mL 만니톨; 및
(e) 약 5 내지 10 mg/mL 수크로즈로 필수적으로 구성되고,
상기 조성물의 pH가 약 5.5인, 약제학적 조성물.
제42항 내지 제50항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편 대 폴리올 및/또는 당의 비율이 1:1400 초과인, 약제학적 조성물.
제42항 내지 제51항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약제학적 조성물이 동결건조되는, 약제학적 조성물.
제1항 내지 제52항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분이 단클론 항체, 인간 항체, 인간화 항체, 키메라 항체, CDR-이식 항체, Fab, Fab', F(ab')2, Fv, 디설파이드 연결된 Fv, scFv, 단일 도메인 항체, 디아바디 (diabody), 다중특이성(multispecific) 항체, 이중특이성(dual specific) 항체 및 이특이성(bispecific) 항체로 이루어진 그룹에서 선택되는, 약제학적 조성물.
제1항 내지 제53항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원-결합 부분이 항체 PG110인, 약제학적 조성물.
제1항 내지 제54항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제형이 적어도 약 3개월 동안 액체 형태로서 안정한, 약제학적 조성물.
제1항 내지 제55항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제형이 적어도 약 12개월 동안 액체 형태로서 안정한, 약제학적 조성물.
제1항 내지 제56항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제형이 적어도 3개월 동안 동결 또는 동결건조 형태로서 안정한, 약제학적 조성물.
제57항에 있어서, 상기 제형이 적어도 6개월 동안 동결 또는 동결건조 형태로서 안정한, 약제학적 조성물.
제57항에 있어서, 상기 제형이 적어도 12개월 동안 동결 또는 동결건조 형태로서 안정한, 약제학적 조성물.
[청구항 59]
제55항 또는 제56항에 있어서, 상기 제형이 2 내지 8℃에 저장되는, 약제학적 조성물.
제57항 또는 제58항에 있어서, 상기 제형이 -80℃에서 동결 저장되는, 약제학적 조성물.
제57항 또는 제58항에 있어서, 상기 제형이 2 내지 8℃에서 동결건조 형태로 저장되는, 약제학적 조성물.
제57항 또는 제58항에 있어서, 상기 제형이 실온에서 동결건조 형태로 저장되는, 약제학적 조성물.
제55항 내지 제63항 중 어느 한 항에 있어서, 약 10% 미만의 항체 응집이 있는, 약제학적 조성물.
제55항 내지 제63항 중 어느 한 항에 있어서, 약 3% 미만의 항체 응집이 있는, 약제학적 조성물.
제1항 내지 제64항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제형이 정맥내, 피하 및/또는 근육내 투여에 적합한, 약제학적 조성물.
제1항 내지 제65항 중 어느 한 항에 따른 약제학적 조성물을 포함하는 장치.
제66항에 있어서, 상기 장치가 주사기, 펜, 임플란트, 무바늘 주사 장치, 흡인 장치 및 패치로 이루어진 그룹에서 선택되는, 장치.
제1항 내지 제67항 중 어느 한 항에 따른 약제학적 조성물 또는 장치를 포함하는 제품(article).
NGF 매개된 질환 또는 상태를 치료하기 위한, 제1항 내지 제65항 중 어느 한 항에 따른 약제학적 조성물의, 또는 제66항 또는 제67항의 장치의 용도.
제69항에 있어서, NGF 매개된 질환 또는 상태가 통증인, 용도.
제70항에 있어서, 상기 통증이 골관절염 통증, 만성 요통, 당뇨성 신경병증 통증, 암 통증, 골 전이에 의한 통증, 간질성 방광염, 통증 방광 증후군, 만성 비세균성 전립선염과 연관된 통증, 자궁내막증과 연관된 통증, 자궁근종과 연관된 통증 및 수술후 통증으로 이루어진 그룹에서 선택되는, 용도.
제69항 내지 제71항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약제학적 조성물이 0.1 mg/kg 내지 10 mg/kg 범위의 용량으로의 항-NGF 항체 또는 이의 항원 결합 부분의 투여에 적합한, 용도.
제69항 내지 제72항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약제학적 조성물이 정맥내, 피하 또는 관절내로 투여하기에 적합한, 용도.
제69항 내지 제74항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약제학적 조성물이 제2 약제와 함께 투여하기에 적합한, 용도.
제74항에 있어서, 상기 제2 약제가 NSAID, 오피오이드 진통제 및 비정형 진통제를 포함한 진통제, 국소용 마취제, 신경차단제, 페놀 차단제, 치료용 항체, 스테로이드, 항경련제, 우울증 치료제, 국부용 캡사이신 및 항바이러스제, TrkA 억제제 및 PKC 억제제로 이루어진 그룹에서 선택되는, 용도.