CN108883177A - 含有PEG化抗人NGF抗体Fab’片段的药物组合物 - Google Patents

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Abstract

本发明提供抑制了分解物、多聚体、酸性侧类似物、碱性侧类似物、不溶性异物的生成的、含有稳定的PEG化抗人NGF抗体Fab'片段而成的药物组合物。所述药物组合物的pH为4～5.5，可以根据需要还含有制药学上可接受的缓冲剂、等渗调节剂和表面活性剂。

Description

含有PEG化抗人NGF抗体Fab’片段的药物组合物
技术领域
本发明涉及含有键合有聚乙二醇的抗人NGF抗体Fab’片段而成的稳定的药物组合物。
背景技术
神经生长因子(nerve growth factor；NGF)是被统称为神经营养因子(neurotrophic factor)的体液因子之一，在生物体内在神经元的发生、分化、功能维持中承担着重要的作用。
本申请人曾公布，键合有聚乙二醇(以下称为PEG)的(以下也有时简称为“PEG化”)抗人NGF抗体Fab’片段对于人NGF参与发病的各种疾病的预防或治疗(例如，伴随变形性关节病的关节痛(OA疼痛)、伴随风湿的关节痛、癌症性疼痛、神经源性疼痛、慢性腰痛、术后疼痛、带状疱疹后神经痛、痛性糖尿病性神经障碍、骨折痛、膀胱痛综合征等的疼痛、间质性膀胱炎、急性胰腺炎、慢性胰腺炎、子宫内膜症等)是有用的(专利文献1)。
另一方面，近年来，开发出包含各种抗体等蛋白质的药品，并实际提供给医疗现场。这些药品大多数通过静脉内给药、皮下给药等来进行投药，因此，以液体制剂或冷冻干燥制剂等非经口药物组合物的形态提供给医疗现场。特别是对于非经口药物组合物而言，由于以直接向体内给药为前提，因此期望为稳定的药品制剂。
即，对于含有抗体等蛋白质的溶液而言，期望抑制不溶性异物的形成等，另外，从有效性的观点出发，期望抑制分解物、多聚体、类似物等的形成。
因此，含有PEG化抗人NGF抗体Fab’片段而成的稳定的药物组合物的开发存在进一步改善的余地。
需要说明的是，虽然已知涉及含有抗人NGF抗体或人NGF的稳定的药物组合物的发明(专利文献2、3和4)，但并不涉及PEG化抗人NGF抗体Fab’片段。
现有技术文献
专利文献
专利文献1：国际公开第2013/022083号
专利文献2：国际公开第2010/032220号
专利文献3：国际公开第95/05845号
专利文献4：国际公开第2011/116090号
发明内容
发明所要解决的问题
本发明的目的在于提供含有PEG化抗人NGF抗体Fab’片段而成的稳定的药物组合物。
详细而言，本发明的目的在于提供一种稳定的药物组合物，其含有PEG化抗人NGF抗体Fab’片段，且抑制了例如因热、温度条件等而增加的分解物、多聚体、酸性侧类似物、碱性侧类似物的生成。另外，本发明的另一目的在于提供一种稳定的药物组合物，其含有PEG化抗人NGF抗体Fab’片段，且抑制了例如因冻融、物理性振动等而增加的不溶性异物的生成。
用于解决问题的方法
本发明人发现，将溶液的pH调节到特定的范围，将PEG化抗人NGF抗体Fab’片段制剂化，由此，可以制备稳定的药物组合物(后述实施例1)，另外发现，通过添加特定的等渗调节剂(后述实施例2)、添加表面活性剂(后述实施例3)等，可以提供进一步稳定的药物组合物，从而完成了本发明。
即，本发明涉及：
[1]一种药物组合物，其是含有PEG化抗人NGF抗体Fab’片段、pH为4～5.5的稳定的药物组合物，
该抗人NGF抗体Fab’片段选自：
(1)包含由序列号1所示的氨基酸序列构成的重链片段和由序列号3所示的氨基酸序列构成的轻链的抗人NGF抗体Fab’片段、以及
(2)作为通过(1)的抗人NGF抗体Fab’片段的翻译后修饰产生的Fab’片段的抗人NGF抗体Fab’片段，
所述PEG化是指，使键合有硫醇反应基团的PEG衍生物的硫醇反应基团共价键合于该抗人NGF抗体Fab’片段的铰链区半胱氨酸的硫醇基上。
[2]根据[1]的药物组合物，其中，还含有制药学上可接受的缓冲剂、制药学上可接受的等渗调节剂和制药学上可接受的表面活性剂。
[3]根据[1]或[2]的药物组合物，其pH为4.5～5.5。
[4]根据[1]～[3]中任一项的药物组合物，其中，制药学上可接受的缓冲剂为选自由柠檬酸、乙酸和组氨酸以及它们的制药学上可接受的盐组成的组中的1种或2种以上。
[5]根据[1]～[4]中任一项的药物组合物，其中，制药学上可接受的缓冲剂为柠檬酸或其制药学上可接受的盐。
[6]根据[1]～[5]中任一项的药物组合物，其中，制药学上可接受的缓冲剂的浓度为1～200mmol/L。
[7]根据[1]～[6]中任一项的药物组合物，其中，药物组合物为液体制剂或冷冻干燥制剂。
[8]根据[1]～[7]中任一项的药物组合物，其中，药物组合物为液体制剂。
[9]根据[1]～[8]中任一项的药物组合物，其中，制药学上可接受的等渗调节剂为选自由精氨酸、D-山梨糖醇、D-甘露醇、海藻糖、蔗糖、木糖醇、赤藓糖醇、苏糖醇、肌醇、卫矛醇、阿拉伯糖醇、益寿糖、乳糖醇和麦芽糖醇组成的组中的1种或2种以上。
[10]根据[1]～[9]中任一项的药物组合物，其中，制药学上可接受的等渗调节剂的浓度为1～500mmol/L。
[11]根据[1]～[10]中任一项的药物组合物，其中，制药学上可接受的表面活性剂为聚山梨酯或泊洛沙姆中的至少一者。
[12]根据[1]～[11]中任一项的药物组合物，其中，制药学上可接受的表面活性剂为聚山梨酯80。
[13]根据[1]～[12]中任一项的药物组合物，其中，制药学上可接受的表面活性剂的浓度为0.001～1％(w/v)。
[14]根据[1]～[13]中任一项的药物组合物，其中，PEG化抗人NGF抗体Fab’片段的浓度为0.1～200mg/mL。
[15]根据[1]的药物组合物，其中，作为PEG化抗人NGF抗体Fab’片段，含有使键合有硫醇反应基团的PEG衍生物的硫醇反应基团共价键合于包含由序列号1所示的氨基酸序列构成的重链片段和由序列号3所示的氨基酸序列构成的轻链的抗人NGF抗体Fab’片段的铰链区半胱氨酸的硫醇基上而PEG化后的抗人NGF抗体Fab’片段。
[16]根据[1]的药物组合物，其中，作为PEG化抗人NGF抗体Fab’片段，含有使键合有硫醇反应基团的PEG衍生物的硫醇反应基团共价键合于作为通过包含由序列号1所示的氨基酸序列构成的重链片段和由序列号3所示的氨基酸序列构成的轻链的抗人NGF抗体Fab’片段的翻译后修饰产生的Fab’片段的抗人NGF抗体Fab’片段的铰链区半胱氨酸的硫醇基上而PEG化后的抗人NGF抗体Fab’片段。
[17]根据[1]或[16]的药物组合物，其中，抗人NGF抗体Fab’片段的翻译后修饰为重链可变区N末端的焦谷氨酸化。
[18]一种将PEG化抗人NGF抗体Fab’片段稳定化的方法，其特征在于，将pH调节至4～5.5，该抗人NGF抗体Fab’片段选自：
(1)包含由序列号1所示的氨基酸序列构成的重链片段和由序列号3所示的氨基酸序列构成的轻链的抗人NGF抗体Fab’片段、以及
(2)作为通过(1)的抗人NGF抗体Fab’片段的翻译后修饰产生的Fab’片段的抗人NGF抗体Fab’片段，
所述PEG化是指，使键合有硫醇反应基团的PEG衍生物的硫醇反应基团共价键合于该抗人NGF抗体Fab’片段的铰链区半胱氨酸的硫醇基上。
[19]根据[18]的方法，其中，使用制药学上可接受的缓冲剂、制药学上可接受的等渗调节剂和制药学上可接受的表面活性剂。
发明效果
根据本发明，能够提供含有PEG化抗人NGF抗体Fab’片段而成的稳定的药物组合物，详细而言，能够提供抑制了分解物、多聚体、酸性侧类似物、碱性侧类似物、不溶性异物的生成的、含有PEG化抗人NGF抗体Fab’片段而成的稳定的药物组合物。
附图说明
图1是对于包含等渗调节剂(D-甘露醇)和表面活性剂(聚山梨酯80)的pH4.0～6.0的范围的配方(试样No.D-1～D-7)示出在25℃或40℃保存2周的条件下的分解物的增加量(％)的图。●表示使用20mmol/L柠檬酸作为缓冲剂的样品的结果；■表示使用20mmol/L组氨酸作为缓冲剂的样品的结果。
图2是对于包含等渗调节剂(D-甘露醇)和表面活性剂(聚山梨酯80)的pH4.0～6.0的范围的配方(试样No.D-1～D-7)示出在25℃或40℃保存2周的条件下的酸性侧类似物的增加量(％)的图。●表示使用20mmol/L柠檬酸作为缓冲剂的样品的结果；■表示使用20mmol/L组氨酸作为缓冲剂的样品的结果。
图3是对于包含等渗调节剂(D-甘露醇或D-山梨糖醇)和表面活性剂(聚山梨酯80)、且利用柠檬酸调节到规定pH(4.6、4.9、5.2)后的配方示出在5℃、25℃、40℃下保存后的多聚体量(％)的图。
图4是对于包含等渗调节剂(D-甘露醇或D-山梨糖醇)和表面活性剂(聚山梨酯80)、且利用柠檬酸调节到规定pH(4.6、4.9、5.2)后的配方示出在5℃、25℃、40℃下保存后的分解物量(％)的图。
图5是对于包含等渗调节剂(D-甘露醇或D-山梨糖醇)和表面活性剂(聚山梨酯80)、且利用柠檬酸调节到规定pH(4.6、4.9、5.2)后的配方示出在5℃、25℃、40℃下保存后的酸性侧类似物量(％)的图。
具体实施方式
本说明书中，“稳定”例如是指，对于热、光、温度、湿度、振荡和/或冻融呈现稳定。例如是指，将药物组合物在规定条件下保存后，上述药物组合物中含有的多聚体、分解物、酸性侧类似物或碱性侧类似物的量或者它们的总量为某特定量以下。另外，作为某种方式，是指将药物组合物在规定条件下保存后，通过目视观察不到不溶性异物。
上述“多聚体”是指PEG化抗人NGF抗体Fab’片段聚集而生成的复合体。作为测定多聚体的方法，没有特别限制，例如包括尺寸排阻色谱法(SE-HPLC法)、凝胶电泳法、毛细管电泳法、微流体成像法等，作为某种方式，为SE-HPLC法。SE-HPLC法中，利用自动分析法测定检测到的峰的面积，除以包括主峰在内的全部峰面积的总和，由此以百分率(％)的形式计算。需要说明的是，主峰是指活性主体的峰。将保留时间比SE-HPLC的主峰短的峰合并作为多聚体。作为利用SE-HPLC法测定的多聚体的量，作为某种方式为10％以下，作为另一方式为5％以下。
上述“分解物”是指PEG化抗人NGF抗体Fab’片段的一部分脱离而生成的片段体。作为测定分解物的方法，没有特别限制，例如包括SE-HPLC法、凝胶电泳法、毛细管电泳法等，作为某种方式，为SE-HPLC法。利用SE-HPLC法的分解物的测定方法与上述的利用SE-HPLC法的多聚体的测定同样地进行。需要说明的是，将保留时间比SE-HPLC的主峰长的峰合并作为分解物。作为利用SE-HPLC法测定的分解物的量，作为某种方式10％以下，作为另一方式为5％以下。
另外，关于分解物的量的增加量(在特定的条件下保存特定的期间后的分解物量与试验(保存)开始时的分解物量之差)，例如为2.5％以下，作为某种方式为2.0％以下，作为某种方式，在25℃保存2周、1个月(4周)或在40℃保存2周后的分解物的量的增加量例如为2.5％以下，作为某种方式为2.0％以下，作为另一方式，在40℃保存2周后的分解物的量的增加量为2.5％以下，作为其他方式，在40℃保存2周后的分解物的量的增加量为2.0％以下。
上述“酸性侧类似物”是指，在利用阳离子交换色谱法或成像毛细管等电点电泳法的分析中被作为先于主成分洗脱出来的峰观察到的类似物。作为测定酸性侧类似物的方法，没有特别限制，例如包括阳离子交换色谱法(IE-HPLC法)、凝胶电泳法、毛细管电泳法、成像毛细管等电点电泳法(icIEF法)等，作为某种方式，为IE-HPLC法或icIEF法。IE-HPLC法和icIEF法与上述的SE-HPLC法同样地计算峰的百分率(％)。作为利用IE-HPLC法和/或icIEF法测定的酸性侧类似物的量，作为某种方式为50％以下，作为另一方式为35％以下，作为其他方式为25％以下。
另外，关于酸性侧类似物的量的增加量(在特定的条件下保存特定的期间后的酸性侧类似物量与试验(保存)开始时的酸性侧类似物量之差)，例如为15％以下，作为某种方式为10％以下。更具体而言，在25℃保存2周、1个月(4周)或在40℃保存2周后的酸性侧类似物的量的增加量例如为15％以下，作为某种方式为10％以下。
上述“碱性侧类似物”是指，在利用IE-HPLC法或icIEF法的分析中被作为晚于主成分洗脱出来的峰观察到的类似物。作为测定碱性侧类似物的方法，没有特别限制，例如包括IE-HPLC法、凝胶电泳法、毛细管电泳法、icIEF法等，作为某种方式，为IE-HPLC法或icIEF法。IE-HPLC法和icIEF法与上述的SE-HPLC法同样地计算峰的百分率(％)。作为利用icIEF法测定的碱性侧类似物的量，作为某种方式为50％以下，作为另一方式为25％以下，作为其他方式为20％以下。
上述“不溶性异物”是指，PEG化抗人NGF抗体Fab’片段、药品添加剂等聚集而生成的不溶性的复合体。不溶性异物例如可以通过第十六次修订日本药典中记载的注射剂的不溶性异物检查法、或基于其通过目视进行确认。
“稳定的药物组合物”是指，在冷蔵温度(2～8℃)下在至少1个月(4周)、优选3个月、更优选6个月、进一步优选1年、更优选2年，多聚体、分解物、酸性侧类似物或碱性侧类似物的量或它们的总量为上述的某特定量以下的药物组合物；或者在室温(22～28℃)下在至少2周、优选1个月、进一步优选3个月、更优选6个月、适合为1年，多聚体、分解物、酸性侧类似物或碱性侧类似物的量或它们的总量为上述的某特定量以下的药物组合物；或者在加速条件(37～43℃)下在至少2周、优选1个月(4周)，多聚体、分解物、酸性侧类似物或碱性侧类似物的量或它们的总量为上述的某特定量以下的药物组合物。
抗体存在IgG、IgM、IgA、IgD和IgE这5个类。抗体分子的基本结构在各类中是共通的，由分子量5万～7万的重链和分子量2万～3万的轻链构成。重链通常由包含约440个氨基酸的多肽链构成，每个类具有特征性结构，与IgG、IgM、IgA、IgD、IgE相对应地被称为Igγ、Igμ、Igα、Igδ、Igε。另外，IgG存在IgG1、IgG2、IgG3、IgG4的亚类，与各自对应的重链被称为Igγ1、Igγ2、Igγ3、Igγ4。轻链通常由包含约220个氨基酸的多肽链构成，已知L型和K型这2种，各自被称为Igλ、Igκ。抗体分子的基本结构的多肽构成是各自相同的2条重链和2条轻链通过二硫键(S-S键)和非共价键进行键合，分子量为15万～19万。2种轻链能够与任意重链成对。各个抗体分子通常由2条相同轻链和2条相同重链形成。
链内S-S键在重链中存在四个(在μ、ε链中存在五个)，在轻链中存在两个，每100～110个氨基酸残基形成一个环，该空间结构在各环之间是类似的，被称为结构单元或结构域。即使是来自同种动物的相同类(亚类)的标品，在重链、轻链中均位于氨基末端(N末端)的结构域的氨基酸序列也不恒定，被称为可变区，各结构域分别被称为重链可变区(VH)及轻链可变区(VL)。比可变区更靠羧基末端(C末端)侧的氨基酸序列在各类或亚类中大致恒定，被称为恒定区，各结构域分别表示为CH1、CH2、CH3或CL。
抗体的抗原结合部位由重链可变区及轻链可变区构成，结合特异性取决于该部位的氨基酸序列。另一方面，与补体或各种细胞的结合这样的生物学活性反映各类Ig的恒定区的结构差别。已知轻链和重链的可变区的可变性大致局限于在任一个链上均存在的3个小的超变区，将这些区域称为互补决定区(CDR；从N末端侧起分别为CDR1、CDR2、CDR3)。可变区的剩余部分被称为框架区(FR)，相对恒定。
抗体的位于重链恒定区的CH1结构域与CH2结构域之间的区域被称为铰链区，该区域包含多个脯氨酸残基，包含连接2条重链的多个链间S-S键。例如，在人的IgG1、IgG2、IgG3和IgG4的各铰链区中，包含构成重链间的S-S键的分别为2个、4个、11个和2个的半胱氨酸残基。铰链区为对于木瓜蛋白酶或胃蛋白酶等蛋白水解酶具有高敏感性的区域。当用木瓜蛋白酶消化抗体时，重链会在比铰链区的重链间S-S键更靠近N末端侧的位置处被切断，分解为2个Fab片段和1个Fc片段。Fab片段由轻链、以及包含重链可变区(VH)、CH1结构域和铰链区的一部分的重链片段构成。当用胃蛋白酶消化抗体时，重链会在比铰链区的重链间S-S键更靠近C末端侧的位置处被切断，生成F(ab’)2片段。F(ab’)2片段为两个Fab’片段利用铰链区中的重链间S-S键进行键合而成的二聚体结构的片段。Fab’片段由轻链、以及包含重链可变区(VH)、CH1结构域和铰链区的一部分的重链片段构成，在该铰链区的部分中包含构成重链间S-S键的半胱氨酸残基。Fab片段、F(ab’)2片段以及Fab’片段均包含可变区，具有抗原结合活性。
在使抗体在细胞中表达的情况下，已知抗体在翻译后受到修饰。作为翻译后修饰的例子，可举出：重链C末端的赖氨酸的基于羧肽酶的切断、重链及轻链N末端的谷氨酰胺或谷氨酸的基于焦谷氨酸化向焦谷氨酸进行的修饰等，在各种抗体中，已知重链C末端的赖氨酸缺失、重链N末端的谷氨酰胺的大部分受到向焦谷氨酸的修饰(Journal ofPharmaceutical Sciences,2008,Vol.97,p.2426)。另外，本领域所公知的是，这种翻译后修饰不会对抗体的活性造成影响(Analytical Biochemistry,2006,Vol.348,p.24-39)。
本发明的药物组合物中，作为PEG化抗人NGF抗体Fab’片段，含有PEG化后的以下的(1)的抗人NGF抗体Fab’片段、和/或PEG化后的以下的(2)的抗人NGF抗体Fab’片段：
(1)使键合有硫醇反应基团的PEG衍生物的硫醇反应基团共价键合于包含由序列号1的氨基酸编号1至121的氨基酸序列构成的重链可变区和由序列号3的氨基酸编号1至113的氨基酸序列构成的轻链可变区的抗人NGF抗体Fab’片段的铰链区半胱氨酸的硫醇基上而PEG化后的抗人NGF抗体Fab’片段；
(2)使键合有硫醇反应基团的PEG衍生物的硫醇反应基团共价键合于作为通过(1)的抗人NGF抗体Fab’片段的翻译后修饰产生的Fab’片段的抗人NGF抗体Fab’片段的铰链区半胱氨酸的硫醇基上而PEG化后的抗人NGF抗体Fab’片段。
(国际公开第2013/022083号)
在一个实施方式中，上述(2)的抗人NGF抗体Fab’片段的翻译后修饰为重链可变区N末端的焦谷氨酸化。在一个实施方式中，上述(2)的抗人NGF抗体Fab’片段为使键合有硫醇反应基团的PEG衍生物的硫醇反应基团共价键合于包含由序列号1的氨基酸编号1的谷氨酰胺被修饰为焦谷氨酸的氨基酸编号1至121的氨基酸序列构成的重链可变区和由序列号3的氨基酸编号1至113的氨基酸序列构成的轻链可变区的抗人NGF抗体Fab’片段的铰链区半胱氨酸的硫醇基上而PEG化后的抗人NGF抗体Fab’片段。
作为本发明中使用的PEG化抗人NGF抗体Fab’片段的恒定区，可以选择任意亚类的恒定区(例如，作为重链恒定区的Igγ1、Igγ2、Igγ3或Igγ4的恒定区、作为轻链恒定区的Igλ或Igκ的恒定区)。优选本发明中使用的PEG化抗人NGF抗体Fab’片段包含作为人Igγ1恒定区的重链恒定区作为重链恒定区。优选本发明中使用的PEG化抗人NGF抗体Fab’片段包含作为人Igκ恒定区的轻链恒定区作为轻链恒定区。优选本发明中使用的PEG化抗人NGF抗体Fab’片段包含作为人Igγ1恒定区的重链恒定区和作为人Igκ恒定区的轻链恒定区。
在一个实施方式中，本发明的药物组合物中，作为PEG化抗人NGF抗体Fab’片段，含有以下的(3)和/或(4)的PEG化抗人NGF抗体Fab’片段：
(3)使键合有硫醇反应基团的PEG衍生物的硫醇反应基团共价键合于包含由序列号1所示的氨基酸序列构成的重链片段和由序列号3所示的氨基酸序列构成的轻链的抗人NGF抗体Fab’片段的铰链区半胱氨酸的硫醇基上而PEG化后的抗人NGF抗体Fab’片段；
(4)使键合有硫醇反应基团的PEG衍生物的硫醇反应基团共价键合于作为通过包含由序列号1所示的氨基酸序列构成的重链片段和由序列号3所示的氨基酸序列构成的轻链的抗人NGF抗体Fab’片段的翻译后修饰产生的Fab’片段的抗人NGF抗体Fab’片段的铰链区半胱氨酸的硫醇基上而PEG化后的抗人NGF抗体Fab’片段。
在一个实施方式中，上述(4)的抗人NGF抗体Fab’片段的翻译后修饰为重链可变区N末端的焦谷氨酸化。在一个实施方式中，上述(4)的PEG化抗人NGF抗体Fab’片段为使键合有硫醇反应基团的PEG衍生物的硫醇反应基团共价键合于包含由序列号1的氨基酸编号1的谷氨酰胺被修饰为焦谷氨酸的序列号1所示的氨基酸序列构成的重链片段和由序列号3所示的氨基酸序列构成的轻链的抗人NGF抗体Fab’片段的铰链区半胱氨酸的硫醇基上而PEG化后的抗人NGF抗体Fab’片段。
在一个实施方式中，本发明的药物组合物中，作为PEG化抗人NGF抗体Fab’片段，含有PEG化后的以下的(1)的抗人NGF抗体Fab’片段和PEG化后的以下的(2)的抗人NGF抗体Fab’片段：
(1)使键合有硫醇反应基团的PEG衍生物的硫醇反应基团共价键合于包含由序列号1的氨基酸编号1至121的氨基酸序列构成的重链可变区和由序列号3的氨基酸编号1至113的氨基酸序列构成的轻链可变区的抗人NGF抗体Fab’片段的铰链区半胱氨酸的硫醇基上而PEG化后的抗人NGF抗体Fab’片段；
(2)使键合有硫醇反应基团的PEG衍生物的硫醇反应基团共价键合于作为通过(1)的抗人NGF抗体Fab’片段的翻译后修饰产生的Fab’片段的抗人NGF抗体Fab’片段的铰链区半胱氨酸的硫醇基上而PEG化后的抗人NGF抗体Fab’片段。
在一个实施方式中，本发明的药物组合物中，作为PEG化抗人NGF抗体Fab’片段，含有以下的(3)和(4)的PEG化抗人NGF抗体Fab’片段：
(3)使键合有硫醇反应基团的PEG衍生物的硫醇反应基团共价键合于包含由序列号1所示的氨基酸序列构成的重链片段和由序列号3所示的氨基酸序列构成的轻链的抗人NGF抗体Fab’片段的铰链区半胱氨酸的硫醇基上而PEG化后的抗人NGF抗体Fab’片段；
(4)使键合有硫醇反应基团的PEG衍生物的硫醇反应基团共价键合于作为通过包含由序列号1所示的氨基酸序列构成的重链片段和由序列号3所示的氨基酸序列构成的轻链的抗人NGF抗体Fab’片段的翻译后修饰产生的Fab’片段的抗人NGF抗体Fab’片段的铰链区半胱氨酸的硫醇基上而PEG化后的抗人NGF抗体Fab’片段。
本发明中也包括一种药物组合物，其中，作为PEG化抗人NGF抗体Fab’片段，含有使键合有硫醇反应基团的PEG衍生物的硫醇反应基团共价键合于具有以下的特征的抗人NGF抗体Fab’片段的铰链区半胱氨酸的硫醇基上而PEG化后的抗人NGF抗体Fab’片段：
一种抗人NGF抗体Fab’片段，其包含：含有由序列号1的31至35的氨基酸序列构成的CDR1、由序列号1的50至65的氨基酸序列构成的CDR2和由序列号1的98至110的氨基酸序列构成的CDR3的重链可变区、以及含有由序列号3的24至39的氨基酸序列构成的CDR1、由序列号3的55至61的氨基酸序列构成的CDR2和由序列号3的94至102的氨基酸序列构成的CDR3的轻链可变区。
本发明中也包括一种药物组合物，其中，作为PEG化抗人NGF抗体Fab’片段，含有使键合有硫醇反应基团的PEG衍生物的硫醇反应基团共价键合于能够通过培养从以下的(a)和(b)中选择的宿主细胞而生产的该抗人NGF抗体Fab’片段的铰链区半胱氨酸的硫醇基上而PEG化后的抗人NGF抗体Fab’片段：
(a)利用含有包含编码重链片段的碱基序列的多核苷酸和包含编码轻链的碱基序列的多核苷酸的表达载体转化后的宿主细胞，所述重链片段包含由序列号1的氨基酸编号1至121的氨基酸序列构成的重链可变区，所述轻链包含由序列号3的氨基酸编号1至113的氨基酸序列构成的轻链可变区；
(b)利用含有包含编码重链片段的碱基序列的多核苷酸的表达载体和含有包含编码轻链的碱基序列的多核苷酸的表达载体转化后的宿主细胞，所述重链片段包含由序列号1的氨基酸编号1至121的氨基酸序列构成的重链可变区，所述轻链包含由序列号3的氨基酸编号1至113的氨基酸序列构成的轻链可变区。
本发明中也包括一种药物组合物，其中，作为PEG化抗人NGF抗体Fab’片段，含有使键合有硫醇反应基团的PEG衍生物的硫醇反应基团共价键合于能够通过培养从以下的(a)和(b)中选择的宿主细胞而生产的该抗人NGF抗体Fab’片段的铰链区半胱氨酸的硫醇基上而PEG化后的抗人NGF抗体Fab’片段：
(a)利用含有包含编码重链片段的碱基序列的多核苷酸和包含编码轻链的碱基序列的多核苷酸的表达载体转化后的宿主细胞，所述重链片段由序列号1所示的氨基酸序列构成，所述轻链由序列号3所示的氨基酸序列构成；
(b)利用含有包含编码重链片段的碱基序列的多核苷酸的表达载体和含有包含编码轻链的碱基序列的多核苷酸的表达载体转化后的宿主细胞，所述重链片段由序列号1所示的氨基酸序列构成，所述轻链由序列号3所示的氨基酸序列构成。
本发明中，Fab’片段是由轻链、以及包含重链可变区(VH)、CH1结构域和铰链区的一部分的重链的片段构成的、一价抗体的片段，该铰链区的部分含有除了构成重链-轻链间的S-S键的半胱氨酸残基以外的至少1个半胱氨酸残基(本说明书中，也称作“铰链区半胱氨酸”)。铰链区半胱氨酸能够作为利用PEG的修饰位点使用。Fab’片段中的铰链区半胱氨酸的数目可以根据所使用的抗体的类而在1个～几个之间不同，可以由本领域技术人员容易地进行调整。例如，在制作人的IgG1类(通常在铰链区中具有2个铰链区半胱氨酸)的Fab’片段的情况下，在重链的铰链区中，通过在最初的铰链区半胱氨酸的编码位点与第二个铰链区半胱氨酸的编码位点之间插入终止子，由此能够制作在铰链区中具有1个铰链区半胱氨酸的Fab’片段，通过在第二个铰链区半胱氨酸的编码位点之后插入终止子，由此能够制作在铰链区中具有2个铰链区半胱氨酸的Fab’片段。
本发明中使用的PEG化抗人NGF抗体Fab’片段可以通过使键合有硫醇反应基团的PEG衍生物的硫醇反应基团共价键合于该抗人NGF抗体Fab’片段的铰链区半胱氨酸的硫醇基上而PEG化来制作。PEG与Fab’片段的键合可以使用本领域中公知的方法来实施(例如，欧洲专利第0948544号说明书)。本发明中，可以使用直链或支链的、任意平均分子量的PEG或其衍生物，本领域技术人员可以根据使用目的容易地选择。为了使PEG与铰链区半胱氨酸的键合变得容易，可以使用PEG的衍生物。例如，可以使用经由连接子键合有马来酰亚胺这样的硫醇反应基团的PEG衍生物，使铰链区半胱氨酸的硫醇基与马来酰亚胺基共价键合。一般而言，PEG的平均分子量为约500～约50000Da，优选为约5000～约40000Da，更优选为约10000～约40000Da的范围。
关于本发明中使用的PEG化抗人NGF抗体Fab’片段，可以基于本说明书中公开的抗人NGF抗体Fab’片段的序列信息，使用本领域中公知的方法由本领域技术人员容易地制作。作为本发明中使用的PEG化抗人NGF抗体Fab’片段的制作方法，可举出国际公开第2013/022083号中公开的方法。
作为一单位药物组合物(制剂)中的PEG化抗人NGF抗体Fab’片段的量，以Fab’-PEG换算计，例如可举出0.1～200mg，作为某种方式可举出0.1～40mg，作为另一方式可举出20～40mg，作为其他方式可举出60～150mg，此外，作为其他方式可举出40～120mg。需要说明的是，上述的各下限和各上限可以根据需要任意组合。
在药物组合物为固体状态(例如，冷冻干燥制剂、喷雾干燥制剂等)的情况下，作为PEG化抗人NGF抗体Fab’片段的量，以Fab’-PEG换算计，例如可举出0.1～200mg，作为某种方式可举出0.1～40mg，作为另一方式可举出20～40mg，作为其他方式可举出60～150mg，此外，作为其他方式可举出40～120mg。需要说明的是，上述的各下限和各上限可以根据需要任意组合。
在用时溶解时，作为PEG化抗人NGF抗体Fab’片段的浓度，以用时溶解后的Fab’-PEG换算计，例如可举出0.1～200mg/mL，作为某种方式可举出0.1～40mg/mL，作为另一方式可举出20～40mg/mL，作为其他方式可举出60～150mg/mL，此外，作为其他方式可举出40～120mg/mL。需要说明的是，上述的各下限和各上限可以根据需要任意组合。
在药物组合物为液体状态(溶液)的情况下，作为PEG化抗人NGF抗体Fab’片段的浓度，以Fab’-PEG换算计，例如可举出0.1～200mg/mL，作为某种方式可举出0.1～40mg/mL，作为另一方式可举出20～40mg/mL，作为其他方式可举出60～150mg/mL，此外，作为其他方式可举出40～120mg/mL。需要说明的是，上述的各下限和各上限可以根据需要任意组合。
作为用量，例如，以Fab’-PEG换算计，例如包含0.1～200mg，作为某种方式包含0.1～40mg，作为另一方式包含20～40mg，作为其他方式包含60～150mg，此外，作为其他方式包含40～120mg。需要说明的是，上述的各下限和各上限可以根据需要任意组合。
作为适应症，包括：人NGF参与病态形成的各种疾病的预防和/或治疗，例如，伴随变形性关节病的关节痛(OA疼痛)、伴随风湿的关节痛、癌症性疼痛、神经源性疼痛、慢性腰痛、术后疼痛、带状疱疹后神经痛、痛性糖尿病性神经障碍、骨折痛、膀胱痛综合征等的疼痛、间质性膀胱炎、急性胰腺炎、慢性胰腺炎、子宫内膜症等。
作为本发明中使用的“制药学上可接受的缓冲剂”，只要是制药学上可接受、且在溶液状态下在期望的pH范围内具有缓冲能力的缓冲剂，则没有特别限制。
具体地为在下述pH范围内具有缓冲能力的缓冲剂。例如为4～5.5，作为某种方式为4.0～5.5，作为另一方式为4.5～5.5，作为其他方式为4.6～5.2。需要说明的是，上述的各下限和各上限可以根据需要任意组合。另外，关于pH，在药物组合物为液体制剂的情况下，设为该液体制剂的pH，在药物组合物为冷冻干燥制剂或喷雾干燥制剂的情况下，设为将该制剂再溶解于水中时的该溶解液的pH。
作为缓冲剂成分，例如包括柠檬酸、乙酸或组氨酸、或者它们的制药学上可接受的盐等。作为另一方式，包括柠檬酸、乙酸、或它们的制药学上可接受的盐等。作为其他方式，包括柠檬酸酐和/或柠檬酸三钠二水合物。
这些缓冲剂成分可以适宜地适量使用1种或2种以上。需要说明的是，为了将pH调节到期望的pH范围内，可以适宜加入盐酸、氢氧化钠等。
缓冲剂的浓度只要是能够将pH调节到期望的pH范围内的量，则没有特别限制。关于缓冲剂的浓度，在被注射用水溶解而为溶液状态(液体制剂)的情况下，例如为1～200mmol/L，作为另一方式为1～100mmol/L，作为其他方式为5～100mmol/L，此外，作为其他方式为1～50mmol/L。需要说明的是，上述的各下限和各上限可以根据需要任意组合。
关于缓冲剂的量，在药物组合物为冷冻干燥制剂或喷雾干燥制剂的情况下，是指使该制剂再溶解于水中时的该溶解液中的缓冲剂达到上述浓度的量。
作为本发明中使用的“制药学上可接受的等渗调节剂”，只要是制药学上可接受、具有等渗作用、且不对PEG化抗人NGF抗体Fab’片段的稳定性造成影响、或具有稳定化作用的等渗调节剂，则没有特别限制。
具体而言，例如可举出盐类、氨基酸类、糖或糖醇类。
作为盐类，例如可举出氯化钠、氯化钙、氯化镁、硫酸钠、硫酸钙等。作为某种方式为氯化钠。
作为氨基酸类，例如可举出精氨酸(L-精氨酸)或其制药学上可接受的盐(例如，盐酸盐)、甘氨酸、赖氨酸、鸟氨酸等。作为某种方式，为精氨酸、甘氨酸，作为另一方式为精氨酸。
作为糖或糖醇类，例如可举出D-山梨糖醇、D-甘露醇、海藻糖、蔗糖、木糖醇、赤藓糖醇、苏糖醇、肌醇、卫矛醇、阿拉伯糖醇、益寿糖、乳糖醇、麦芽糖醇等。作为某种方式，为D-山梨糖醇、D-甘露醇，作为另一方式为D-山梨糖醇。
作为等渗调节剂，作为某种方式，为精氨酸或其制药学上可接受的盐、D-山梨糖醇、D-甘露醇、海藻糖、蔗糖、木糖醇、赤藓糖醇、肌醇、阿拉伯糖醇、益寿糖、乳糖醇、麦芽糖醇，作为另一方式，为L-精氨酸盐酸盐、D-山梨糖醇。
这些等渗调节剂可以适宜选择使用1种或2种以上。
需要说明的是，盐类、氨基酸类、糖或糖醇可以在对于PEG化抗人抗体Fab’片段的稳定性不造成影响、或使其稳定化的范围内含有在药物组合物中。
关于等渗调节剂的浓度，只要是具有等渗作用、且不对PEG化抗人NGF抗体Fab’片段的稳定性造成影响的浓度，则没有特别限制。
作为被注射用水溶解而为溶液状态(液剂)的情况下的浓度，例如为1～500mmol/L，作为某种方式为1～400mmol/L，作为另一方式为1～300mmol/L，作为其他方式为50～500mmol/L，此外作为其他方式为100～300mmol/L，此外作为另一方式为200～300mmol/L，另外作为另一方式为100～200mmol/L。需要说明的是，上述的各下限和各上限可以根据需要任意组合。
关于等渗调节剂的量，在药物组合物为冷冻干燥制剂或喷雾干燥制剂的情况下，是指使该制剂再溶解于水中时的该溶解液中的等渗调节剂达到上述的浓度的量。
作为本发明中使用的“制药学上可接受的表面活性剂”，只要是制药学上可接受、且具有表面活性作用和PEG化抗人NGF抗体Fab’片段的稳定化作用的表面活性剂，则没有特别限制。
具体而言，例如包含：非离子性表面活性剂，例如，单辛酸脱水山梨糖醇酯、单月桂酸脱水山梨糖醇酯、单棕榈酸脱水山梨糖醇酯等脱水山梨糖醇脂肪酸酯；单辛酸甘油酯、单肉豆蔻酸甘油酯、单硬脂酸甘油酯等甘油脂肪酸酯；单硬脂酸十甘油酯、二硬脂酸十甘油酯、单亚油酸十甘油酯等多甘油脂肪酸酯；单月桂酸聚氧乙烯脱水山梨糖醇酯、单油酸聚氧乙烯脱水山梨糖醇酯、单硬脂酸聚氧乙烯脱水山梨糖醇酯、单棕榈酸聚氧乙烯脱水山梨糖醇酯、三油酸聚氧乙烯脱水山梨糖醇酯、三硬脂酸聚氧乙烯脱水山梨糖醇酯等聚氧乙烯脱水山梨糖醇脂肪酸酯；四硬脂酸聚氧乙烯山梨糖醇酯、四油酸聚氧乙烯山梨糖醇酯等聚氧乙烯山梨糖醇脂肪酸酯；单硬脂酸聚氧乙烯甘油酯等聚氧乙烯甘油脂肪酸酯；二硬脂酸聚乙二醇酯等聚乙二醇脂肪酸酯；聚氧乙烯月桂基醚等聚氧乙烯烷基醚；聚氧乙烯聚氧丙烯二醇醚、聚氧乙烯聚氧丙烯丙基醚、聚氧乙烯聚氧丙烯鲸蜡基醚等聚氧乙烯聚氧丙烯烷基醚；聚氧乙烯壬基苯基醚等聚氧乙烯烷基苯基醚；聚氧乙烯蓖麻油、聚氧乙烯氢化蓖麻油等聚氧乙烯硬化蓖麻油；聚氧乙烯山梨糖醇蜜蜡等聚氧乙烯蜜蜡衍生物；聚氧乙烯羊毛脂等聚氧乙烯羊毛脂衍生物；聚氧乙烯脂肪酸酰胺，例如聚氧乙烯十八烷酰胺等具有6～18的HLB的表面活性剂；阴离子性表面活性剂，例如，鲸蜡基硫酸钠、月桂基硫酸钠、油基硫酸钠等具有C10～C18烷基的烷基硫酸盐；聚氧乙烯月桂基硫酸钠等被添加的环氧乙烷单元的平均摩尔数为2～4、且烷基的碳原子数为10～18的聚氧乙烯烷基醚硫酸盐；磺基琥珀酸月桂基钠等具有C8～C18烷基的磺基琥珀酸烷基盐；卵磷脂、甘油磷脂等天然表面活性剂；鞘磷脂等鞘氨醇磷脂；或C12～C18脂肪酸的蔗糖酯。
这些表面活性剂可以适宜选择使用1种或2种以上。
作为某种方式，为聚氧乙烯脱水山梨糖醇脂肪酸酯、聚氧乙烯聚氧丙烯烷基醚，作为另一方式为聚山梨酯或普卢兰尼克型表面活性剂，作为其他方式为聚山梨酯20、21、40、60、65、80、81、85或普卢兰尼克型表面活性剂，此外作为其他方式为聚山梨酯20、80或泊洛沙姆(泊洛沙姆188)，作为另一方式为聚山梨酯80。
需要说明的是，表面活性剂在具有抑制不溶性异物等的形成的作用、且使PEG化抗人NGF抗体Fab’片段稳定化的范围内含有在药物组合物中。
关于表面活性剂的浓度，只要是具有表面活性作用和PEG化抗人NGF抗体Fab’片段的稳定化作用的浓度，则没有特别限制。
在被注射用水溶解而为溶液状态(液体制剂)的情况下，为0.001～1％(w/v)，作为某种方式为0.01～0.5％(w/v)，作为另一方式为0.01～0.03％(w/v)。需要说明的是，上述的各下限和各上限可以根据需要任意组合。
关于表面活性剂的量，在药物组合物为冷冻干燥制剂或喷雾干燥制剂的情况下，是指使该制剂再溶解于水中时的该溶解液中的表面活性剂达到上述的浓度的量。
本发明的药物组合物可以将溶液填充于容器中从而以液体制剂的形式提供，另外，可以利用冷冻干燥法、喷雾干燥法将溶液以冷冻干燥制剂或喷雾干燥制剂等非经口药物组合物的形式提供。优选为液体制剂。
本发明的药物组合物中，特别优选为包含柠檬酸、精氨酸和聚山梨酯的液体制剂、或者包含柠檬酸、D-山梨糖醇和聚山梨酯的液体制剂。
本发明的药物组合物可以根据需要适宜添加助悬剂、助溶剂、保存剂、防吸附剂、含硫还原剂、抗氧化剂等药品添加剂。
作为助悬剂，例如可举出甲基纤维素、羟乙基纤维素、阿拉伯胶、黄蓍胶末、羧甲基纤维素钠、聚氧乙烯脱水山梨糖醇单月桂酸酯等。
作为助溶剂，例如可举出聚氧乙烯硬化蓖麻油、烟酰胺、聚氧乙烯脱水山梨糖醇单月桂酸酯、聚乙二醇(macrogol)、蓖麻油脂肪酸乙酯等。
作为保存剂，例如可举出对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、山梨酸、苯酚、甲酚、氯甲酚等。
作为防吸附剂，例如可举出人血清白蛋白、卵磷脂、葡聚糖、环氧乙烷-环氧丙烷共聚物、羟丙基纤维素、甲基纤维素、聚氧乙烯硬化蓖麻油、聚乙二醇等。
作为含硫还原剂，例如可举出N-乙酰基半胱氨酸、N-乙酰基高半胱氨酸、硫辛酸、硫代二甘醇、硫代乙醇胺、硫代甘油、硫代山梨糖醇、硫代乙醇酸及其盐、硫代硫酸钠、谷胱甘肽、碳原子数1～7的硫代链烷酸等具有巯基的试剂等。
作为抗氧化剂，例如可举出蛋氨酸、异抗坏血酸、二丁基羟基甲苯、丁基羟基苯甲醚、α-生育酚、乙酸生育酚、L-抗坏血酸及其盐、L-抗坏血酸棕榈酸酯、L-抗坏血酸硬脂酸酯、亚硫酸氢钠、亚硫酸钠、没食子酸三戊酯、没食子酸丙酯或乙二胺四乙酸二钠(EDTA)、焦磷酸钠、偏磷酸钠等螯合剂。
各种药品添加剂可以在能够实现本发明的期望效果的量的范围内适宜地适量使用。
关于本发明的药物组合物的制造方法，根据自身公知的制造方法，可以包括含有PEG化抗人NGF抗体Fab’片段、且将pH调节到4～5.5的方法，可以根据需要还含有制药学上可接受的缓冲剂、制药学上可接受的等渗调节剂和制药学上可接受的表面活性剂。
用于填充本发明的药物组合物的容器可以根据使用目的进行选择。例如包括管形瓶(バイアル)、安瓿瓶、注射器这样的规定容量的形状的容器、瓶这样的大容量的形状的容器。作为某种方式，包括注射器(包括一次性注射器)。在该注射器中预先填充溶液，从而以预填充注射器溶液制剂的形式提供，由此，在医疗现场，不需要溶解操作等操作，能够迅速地应对。
关于容器的材质，可举出玻璃、塑料等。另外，作为容器内的表面处理，可以实施二氧化硅涂布处理、硅酮涂布处理、硫处理、各种低碱处理等。
本发明包括一种将PEG化抗人NGF抗体Fab’片段稳定化的方法，其特征在于，将pH调节为4～5.5。本发明的稳定化方法中，可以根据需要还使用制药学上可接受的缓冲剂、制药学上可接受的等渗调节剂和制药学上可接受的表面活性剂。
关于本发明的稳定化方法中使用的“PEG化抗人NGF抗体Fab’片段”、“制药学上可接受的缓冲剂”、“制药学上可接受的等渗调节剂”和“制药学上可接受的表面活性剂”，可以直接应用本发明的药物组合物中的该说明。另外，关于这些各成分的配合量、配合方法等，可以直接应用本发明的药物组合物中的该说明。
本发明的稳定化方法中，在制造PEG化抗人NGF抗体Fab’片段时，通过将pH调节到4～5.5，并且通过根据需要还使用制药学上可接受的缓冲剂、制药学上可接受的等渗调节剂和制药学上可接受的表面活性剂，由此，可以抑制分解物、多聚体、酸性侧类似物、碱性侧类似物、不溶性异物的生成。
实施例
以下，通过参考例、实施例进一步详细地说明本发明，但本发明不受这些例子的限定解释。
实施例中使用的PEG化抗人NGF抗体Fab’片段利用国际公开第2013/022083号的实施例19中记载的制法或基于其的方法得到。
《参考例：PEG化抗人NGF抗体Fab’片段的制作》
将编码本实施例中使用的抗人NGF抗体Fab’片段的重链片段的多核苷酸的碱基序列示于序列号2，将被其编码的氨基酸序列示于序列号1，将编码该Fab’片段的轻链的多核苷酸的碱基序列示于序列号4，将被其编码的氨基酸序列示于序列号3。该抗人NGF抗体Fab’片段的重链可变区中的CDR1、CDR2、CDR3分别由序列号1的31至35、50至65、98至110的氨基酸序列构成。该抗人NGF抗体Fab’片段的轻链可变区中的CDR1、CDR2、CDR3由序列号3的24至39、55至61、94至102的氨基酸序列构成。
按照国际公开第2013/022083号，构建插入有该抗人NGF抗体Fab’片段的重链片段和轻链这两个基因的GS载体(Lonza公司)。通过转染CHOK1SV细胞(Lonza公司)，取得Fab’片段的稳定表达株，表达Fab’片段。使用亲和色谱和阴离子交换色谱来纯化培養上清，得到Fab’片段。此外，步骤中包括病毒的灭活步骤和病毒除去膜步骤。接着，将所得到的抗人NGF抗体Fab’片段用还原剂进行还原，使其与PEG马来酰亚胺(制品名：SUNBRIGHT GL2-400MA，日油株式会社制)键合。然后，使用阳离子交换色谱进行纯化，制作PEG化抗人NGF抗体Fab’片段。需要说明的是，对纯化后的Fab’片段的氨基酸修饰进行了分析，结果，在其大部分中产生了重链可变区N末端的焦谷氨酸化。
《实施例1：基于最适pH选定的稳定化效果》
以使PEG化抗人NGF抗体Fab’片段浓度以Fab’换算计达到10mg/mL(以Fab’-PEG换算计为约20mg/mL)的方式，用表1所示的缓冲液(浓度均为20mmol/L)进行稀释，将稀释制备后的配方液(试样No.A-1～A-8)用0.22μm过滤器过滤灭菌后，以每瓶1.3mL填充到玻璃管形瓶(3mL容量)中，用橡胶塞塞住后，实施卷边封口，在倒置状态下在25℃保存1个月。
需要说明的是，为了达到规定的pH，根据需要在制备缓冲液时添加盐酸和/或氢氧化钠作为pH调节剂。
另外，使用紫外/可见分光光度计Nanodrop 2000c(Thermo Scientific,MA,U.S.A)测定Fab’换算浓度和Fab’-PEG换算浓度。将2μL的样品施涂到样品台上，测定280nm下的吸光度。使用所得到的280nm吸光度和吸光系数1.48mL/mg/cm(Fab’换算浓度的情况)或0.79mL/mg/cm(Fab’-PEG换算浓度的情况)算出蛋白浓度。
将基于SE-HPLC法、IE-HPLC法的评价结果表示于表1中。
SE-HPLC测定中，在HPLC系统中连接TSKgel(注册商标)G3000SWXL柱(东曹制)，在具有10mmol/L磷酸/500mmol/L氯化钠pH7.0的组成的溶液中添加乙腈使其达到10％，从而得到流动相，使所得到的组成的流动相以0.5mL/分钟的流量流动。样品的注入量是以Fab’换算计为50μg(以Fab’-PEG换算计为约100μg)。柱温设定为30℃，样品温度设定为5℃，检测在UV280nm下实施。
通过自动分析法对SE-HPLC测定中检测到的峰的面积进行测定，并除以包含主峰在内的全部峰面积的总和，以百分率(％)进行计算。此外，主峰是指活性主体的峰。
将保留时间比SE-HPLC的主峰短的峰合并作为多聚体，将保留时间比SE-HPLC的主峰长的峰合并作为分解物。
IE-HPLC测定中，在HPLC系统中连接Propac WCX-10柱(Dionex制)，并进行测定。在流动相A线连接20mmol/L的2-吗啉基乙烷磺酸(MES)/pH6.0的流动相、在流动相B线连接20mmol/L的MES/500mmol/L氯化钠/pH6.0的流动相，以1mL/分钟的流速进行流动。样品用流动相A稀释到Fab’换算浓度为1mg/mL，注入10μL。梯度程序是：将流动相B以0％保持2分钟后，用50分钟使流动相B的比例线性增加到5％。接着，使流动相B的比例线性增加到100％，进行清洗后，使流动相B的比例线性减少到0％，保持约10分钟，进行平衡化直至下一个样品的注入。分析时间为约70分钟，检测在UV280nm下实施。柱温设定为40℃，样品温度设定为5℃。
峰的百分率通过与SE-HPLC同样的方法来计算。
将上述试验中的IE-HPLC的12分钟附近的峰设为酸性侧类似物。
结果，pH7附近的A-5中观察到多聚体、分解物、酸性侧类似物的增加。
由本结果表明，通过在pH4～6附近将PEG化抗人NGF抗体Fab’片段制剂化，可以抑制多聚体、分解物和酸性侧类似物的生成。
[表1]
《实施例2：基于等渗调节剂的选择的稳定化效果》
在PEG化抗人NGF抗体Fab’片段浓度以Fab’换算计为20mg/mL(以Fab’-PEG换算计为约40mg/mL)、20mmol/L柠檬酸(pH5.5)的缓冲液的配方中，以达到等渗的浓度加入6种药品添加剂(L-精氨酸盐酸盐、氯化钠、甘氨酸、D-山梨糖醇、蔗糖和D-甘露醇)，评价所得到的配方(试样No.B-1～B-7)中的PEG化抗人NGF抗体Fab’片段的稳定性(多聚体量、分解物量、多分散度)。将制备为各配方组成的样品用0.22μm过滤器过滤灭菌后，以每瓶0.3mL填充到玻璃管形瓶(3mL容量)中，用橡胶塞塞住后，实施卷边封口，在正置状态下在40℃保存4周。将结果示于表2中。
需要说明的是，为了达到规定的pH，根据需要在制备缓冲液时添加盐酸和/或氢氧化钠作为pH调节剂。
利用SE-HPLC法，与实施例1同样地分析多聚体量、分解物量。
多分散度的测定中，使用DynaPro Platereader(Wyatt制)，通过动态光散射(DLS)法进行测定。
对于添加氯化钠的配方而言，在40℃保存4周后的多聚体量和分解物量与无添加配方相比，观察到增加的倾向。
对于添加L-精氨酸盐酸盐的配方和添加甘氨酸的配方而言，与无添加配方相比，在40℃保存4周后观察到分解物量的增加。对于添加D-山梨糖醇、D-甘露醇的配方而言，在40℃保存4周后的多聚体量和分解物量、多分散度与无添加配方同等。
需要说明的是，对于与无添加的配方相比存在分解物量增加的配方，在考虑多聚体量、酸性侧类似物量、碱性侧类似物量等的变动等的情况下综合地判断稳定性。
[表2]
Multimodal：表示无法测定
《实施例3：基于表面活性剂添加的稳定化效果》
在PEG化抗人NGF抗体Fab’片段浓度以Fab’换算计为20mg/mL(以Fab’-PEG换算计为约40mg/mL)、20mmol/L柠檬酸(pH5.5)配方中，以3个浓度水平(0.01、0.02、0.05％(w/v))添加作为表面活性剂的聚山梨酯80而得到样品(试样No.C-1～C-4)，对于所得到的样品(试样No.C-1～C-4)，评价针对冻融应激的物理稳定性。将样品制备为各配方组成，用0.22μm过滤器过滤灭菌后，以每瓶0.3mL填充到玻璃管形瓶(3mL容量)中，用橡胶塞塞住后，进行卷边封口。
冻融应激试验中，将样品在正置状态下保存于-80℃的冷冻库内而使其冷冻后，将样品从冷冻库取出，在5℃的冷藏库内在正置状态下进行保存，使其融解。将该冻融循环重复3次。
需要说明的是，为了达到规定的pH，根据需要在制备缓冲液时添加盐酸和/或氢氧化钠作为pH调节剂。
将基于目视的外观评价结果示于表3中。
外观评价中，在未添加聚山梨酯80的配方中观察到冻融应激所致的大量不溶性异物的产生，但在添加有聚山梨酯80的配方中，在任一浓度下均未观察到不溶性异物。
[表3]
《实施例4：包含等渗调节剂、表面活性剂的配方的基于最适pH选定的稳定化效果1》
对于以Fab’换算计为20mg/mL(以Fab’-PEG换算计为约40mg/mL)的浓度包含PEG化抗人NGF抗体Fab’片段、以20mmol/L柠檬酸或组氨酸作为缓冲剂、并添加有240mmol/L的D-甘露醇、0.02％(w/v)聚山梨酯80的配方(试样No.D-1～D-7)，在pH4.0～6.0的范围制备样品，通过SE-HPLC法、IE-HPLC法、DLS法评价在正置状态下在25℃和40℃保存时的稳定性。将样品制备为各配方组成后，用0.22μm过滤器过滤灭菌，以每瓶0.3mL填充到玻璃管形瓶(3mL容量)中，用橡胶塞塞住后，进行卷边封口。
需要说明的是，为了达到规定的pH，根据需要在制备缓冲液时添加盐酸和/或氢氧化钠作为pH调节剂。
SE-HPLC法和IE-HPLC法与实施例1同样地进行测定，DLS法与实施例2同样地进行测定。
将结果示于图1、图2和表4中。
关于分解物，在pH 5.0时，与初始品相比，增加量为最小。另外，关于酸性侧类似物，在任一保存条件下，均观察到pH越高则来自初始品的增加量越大的倾向。
根据表4的DLS测定结果，在40℃保存2周的保存品中观察到如下倾向：pH越低则平均粒径和多分散度的值越大，越容易形成凝集体。
[表4]
Multimodal：表示无法测定
《实施例5：包含等渗调节剂、表面活性剂的配方的基于最适pH选定的稳定化效果2》
对于在使用柠檬酸(浓度均为20mmol/L)制备成pH4.6、pH4.9和pH5.2的配方液中加入有240mmol/L的D-甘露醇和0.02％(w/v)聚山梨酯80的配方、和添加有240mmol/L的D-山梨糖醇代替240mmol/L的D-甘露醇的配方(pH4.9)，评价在正置状态下在5℃、25℃、40℃下保存的保存稳定性。此外，PEG化抗人NGF抗体Fab’片段的浓度以Fab’换算计为20mg/mL(以Fab’-PEG换算计为约40mg/mL)。将样品制备为各配方组成后，用0.22μm过滤器过滤灭菌，以每瓶0.3mL填充到玻璃管形瓶(3mL容量)中，用橡胶塞塞住后，进行卷边封口。
需要说明的是，为了达到规定的pH，根据需要在制备缓冲液时添加盐酸和/或氢氧化钠作为pH调节剂。
通过SE-HPLC法测定多聚体和分解物，通过IE-HPLC法测定酸性侧类似物。SE-HPLC法和IE-HPLC法与实施例1同样地实施。
将结果示于图3～图5中。
可以确认，在pH4.6～5.2的范围内，D-甘露醇配方和D-山梨糖醇配方均是稳定的。
《实施例6：包含等渗调节剂、表面活性剂的配方的基于缓冲剂选定的稳定化效果》
对于表5所示的2个配方(试样No.E-1和E-2)，评价在正置状态下在各条件(5℃、25℃、40℃)下保存4周后的稳定性。将样品制备为各配方组成后，用0.22μm过滤器过滤灭菌，以每瓶1.3mL填充到玻璃管形瓶(3mL容量)中，用橡胶塞塞住后，进行卷边封口。
需要说明的是，为了达到规定的pH，根据需要在制备缓冲液时添加盐酸和/或氢氧化钠作为pH调节剂。
通过SE-HPLC法测定多聚体和分解物，通过IE-HPLC法测定酸性侧类似物。SE-HPLC法和IE-HPLC法与实施例1同样地实施。
将结果示于表6中。
E-1和E-2均是稳定的。
[表5]
[表6]
《实施例7：包含缓冲剂、等渗调节剂、表面活性剂的配方的稳定性评价》
在使用20mmol/L柠檬酸制备成pH4.9的配方溶液中，添加PEG化抗人NGF抗体Fab’片段使其浓度以Fab’-PEG换算计为40mg/mL(以Fab’换算计为约20mg/mL)、添加D-山梨糖醇使其浓度为240mmol/L、添加聚山梨酯80使其浓度为0.02％(w/v)，得到表7所示的配方，在对该配方施加冻融或振荡或光应激后、以及在正置状态下在各条件(-20℃、5℃、25℃)下保存3个月后评价稳定性。此外，柠檬酸和柠檬酸三钠二水合物合计以柠檬酸计为20mmol/L，以使pH为4.9的比率添加。关于盐酸或氢氧化钠，根据需要在制备缓冲液时以使pH为4.6～5.2的方式添加。将制备成的样品用0.22μm过滤器过滤灭菌后，在3mL管形瓶中填充1.2mL，用橡胶塞塞住后，实施卷边封口，在各条件下进行保存。
关于冻融试验，与实施例3同样地进行。
关于振荡稳定性试验，将样品以横置状态设置于振荡机(RECIPRO SHAKER SR-1；TAITEC制)上，在室温下以150rpm的速度振荡48小时来进行。
关于光稳定性试验，将样品以横置状态进行保存，使用D65灯照射48小时1000lux的光来进行。
外观通过目视观察测定，pH通过pH计测定，多聚体和分解物通过SE-HPLC法测定，酸性侧类似物通过IE-HPLC法测定，平均粒径和多分散度通过DLS法测定。目视观察在室内光下实施，pH使用利用校正用标准液实施校正后的pH计来实施，SE-HPLC法和IE-HPLC法与实施例1同样地实施，另外，DLS法与实施例2同样地实施。
将结果示于表8和表9中，即使在保存后也是稳定的。
[表7]
[表8]
[表9]
《实施例8：高浓度制剂的基于最适pH选定的稳定化效果》
以使PEG化抗人NGF抗体Fab’片段浓度以Fab’-PEG换算计为100mg/mL(以Fab’换算计为约50mg/mL)的方式，使用自旋柱实施缓冲液交换、浓缩以达到表10所示的组成，以达到0.02w/v％的方式添加聚山梨酯80，然后用0.22μm过滤器进行过滤。将滤液以每瓶0.25mL或1.15mL填充到3mL玻璃管形瓶中，用橡胶塞塞住后，实施卷边封口，评价25℃、40℃下的PEG化抗人NGF抗体Fab’片段的保存稳定性(多聚体量、分解物量、酸性侧类似物量)。
需要说明的是，为了达到规定的pH，根据需要在制备缓冲液时添加氢氧化钠作为pH调节剂。
通过SE-HPLC法测定多聚体和分解物，通过icIEF法测定酸性侧类似物。
SE-HPLC测定中，在HPLC系统中连接TSKgel(注册商标)G3000SWXL柱(东曹制)，在具有20mmol/L磷酸/400mmol/L氯化钠pH7.0的组成的溶液中添加乙腈使其达到17.5％，从而得到流动相，使所得到的流动相以0.5mL/分钟的流量流动。样品的注入量是以Fab’-PEG换算计为50μg。柱温设定为30℃，样品温度设定为5℃，检测在UV280nm下实施。
icIEF测定中，在iCE3系统中连接cIEF Cartridge FC-Coated(Protein Simple制)，进行测定。将由约0.2％甲基纤维素、约2.7％Pharmalyte3-10、约1.6％Pharmalyte8-10.5、约1.1％CHAPS、约0.5％pI标记物5.85、约0.5％pI标记物9.46构成的样品基质120μL与用超纯水将PEG化抗人NGF抗体Fab’片段浓度稀释到10mg/mL的样品5μL混合，得到测定试样。预聚焦(Prefocusing)以1500V实施1分钟，聚焦(Focusing)以3000V实施16分钟，检测在UV280nm下实施。
表11示出多聚体量测定结果，表12示出分解物测定结果，另外表13示出酸性侧类似物测定结果。在高浓度制剂中也观察到pH越高则多聚体、分解物、酸性侧类似物量越增加的倾向。
[表10]
[表11]
单位：％
[表12]
单位：％
[表13]
单位：％
《实施例9：高浓度制剂的包含缓冲剂、等渗调节剂、表面活性剂的配方的稳定性评价研究》
与实施例8同样地，在使用20mmol/L柠檬酸制备为表14的pH的配方溶液中，添加PEG化抗人NGF抗体Fab’片段使其浓度以Fab’-PEG换算计为100mg/mL(以Fab’换算计为约50mg/mL)、添加D-山梨糖醇使其浓度为240mmol/L、添加L-精氨酸盐酸盐使其浓度为140mmol/L、添加聚山梨酯80使其浓度为0.02％(w/v)，得到表14所示的配方，对于该配方，在正置状态下在各条件(5℃、25℃)下保存1个月或3个月后评价稳定性。将所制备的样品用0.22μm过滤器过滤灭菌后，在3mL管形瓶中填充0.8mL，用橡胶塞塞住后，实施卷边封口，在各条件下进行保存。
通过SE-HPLC法测定多聚体和分解物，通过icIEF法测定酸性侧类似物和碱性侧类似物。SE-HPLC法和icIEF法与实施例8同样地实施。
将结果示于表15中，包含柠檬酸、精氨酸和聚山梨酯的高浓度制剂、或包含柠檬酸、D-山梨糖醇和聚山梨酯的高浓度制剂即使在保存后也是稳定的。
[表14]
[表15]
产业上的可利用性
根据本发明，能够提供含有PEG化抗人NGF抗体Fab’片段而成的稳定的药物组合物，详细而言，能够提供抑制了分解物、多聚体、酸性侧类似物、碱性侧类似物、不溶性异物的生成的、含有PEG化抗人NGF抗体Fab’片段而成的稳定的药物组合物。
以上，按照特定方式对本发明进行了说明，但对于本领域技术人员而言显而易见的变法、改良包含在本发明的范围内。
序列表自由文本
序列号1的序列为抗人NGF抗体Fab’片段的重链片段的氨基酸序列，序列号2的序列为抗人NGF抗体Fab’片段的重链片段基因的碱基序列，序列号3的序列为抗人NGF抗体Fab’片段的轻链的氨基酸序列，序列号4的序列为抗人NGF抗体Fab’片段的轻链基因的碱基序列。
序列表
<110> 安斯泰来制药株式会社（Astellas Pharma Inc.）
<120> 含有PEG化抗人NGF抗体Fab’片段的药物组合物（Pharmaceutical compositioncontaining PEGylated Fab' fragment of anti-human NGF antibody）
<130> A17003-004
<150> JP 2016-061353
<151> 2016-03-25
<160> 4
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 232
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> H-chain fragment of anti-human NGF antibody Fab' fragment
<400> 1
Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Ser Gly Tyr
20 25 30
Tyr Trp Ser Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Glu Ile Asp His Ser Gly Ser Thr Asn Asn Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Gly Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu
65 70 75 80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ser
85 90 95
Arg Asp Gly Gly Pro Glu Ser Gly Met Gly Ala Phe Asp Ile Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
115 120 125
Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala
130 135 140
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
145 150 155 160
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
165 170 175
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
180 185 190
Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His
195 200 205
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys
210 215 220
Asp Lys Thr His Thr Cys Ala Ala
225 230
<210> 2
<211> 699
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> H-chain fragment gene of anti-human NGF antibody Fab' fragment
<400> 2
caggtgcagc tacagcagtg gggcgcagga ctgttgaagc cttcggagac cctgtccctc 60
acctgcgctg tctatggtgg gtccttcagt ggttactact ggagctgggt ccgccagccc 120
ccagggaagg ggctggagtg gattggggaa atcgaccata gtggaagcac caacaacaac 180
ccgtccctca agagtcgagt caccatatca gtaggcacgt ccaagaacca gttctccctg 240
aagctgagct ctgtgaccgc cgcggacacg gctgtgtatt actgttcgag agatgggggc 300
cccgaatcgg ggatgggggc ttttgatatc tggggccaag ggacaatggt caccgtctcc 360
tcagcctcca ccaagggccc atcggtcttc cccctggcac cctcctccaa gagcacctct 420
gggggcacag cggccctggg ctgcctggtc aaggactact tccccgaacc ggtgacggtg 480
tcgtggaact caggcgccct gaccagcggc gtgcacacct tcccggctgt cctacagtcc 540
tcaggactct actcccttag tagcgtggtg accgtgccct ccagcagctt gggcacccag 600
acctacatct gcaacgtgaa tcacaagccc agcaacacca aggtggacaa gaaagttgag 660
cccaaatctt gtgacaaaac tcacacatgc gcagcctga 699
<210> 3
<211> 219
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> L-chain of anti-human NGF antibody Fab' fragment
<400> 3
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser
20 25 30
Asn Gly Phe Asn Tyr Leu Gly Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Ala
85 90 95
Leu Gln Thr Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
115 120 125
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
130 135 140
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
145 150 155 160
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
165 170 175
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
180 185 190
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
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Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 4
<211> 660
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> L-chain gene of anti-human NGF antibody Fab' fragment
<400> 4
gatattgtga tgactcagtc tccactctcc ctgcccgtca cccctggaga gccggcctcc 60
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tccggggtcc ctgacaggtt cagtggcagt ggatcaggca cagattttac tctgaaaatc 240
agcagagtgg aggctgagga tgttggggtt tattactgca tgcaagctct acaaactccg 300
tacacttttg gccaggggac caagctggag atcaaacgga ctgtggctgc accatctgtc 360
ttcatcttcc cgccatctga tgagcagttg aaatctggaa ctgcctctgt tgtgtgcctg 420
ctgaataact tctatcccag agaggccaaa gtacagtgga aggtggataa cgccctccaa 480
tcgggtaact cccaggagag tgtcacagag caggacagca aggacagcac ctacagcctc 540
agcagcaccc tgacgctgag caaagcagac tacgagaaac acaaagtcta cgcctgcgaa 600
gtcacccatc agggcctgag ctcgcccgtc acaaagagct tcaacagggg agagtgttag 660

Claims (19)

1.一种药物组合物，其是含有PEG化抗人NGF抗体Fab’片段、pH为4～5.5的稳定的药物组合物，其中，
该抗人NGF抗体Fab’片段选自：
(1)包含由序列号1所示的氨基酸序列构成的重链片段和由序列号3所示的氨基酸序列构成的轻链的抗人NGF抗体Fab’片段、以及
(2)作为通过(1)的抗人NGF抗体Fab’片段的翻译后修饰产生的Fab’片段的抗人NGF抗体Fab’片段，
所述PEG化是指，使键合有硫醇反应基团的PEG衍生物的硫醇反应基团共价键合于该抗人NGF抗体Fab’片段的铰链区半胱氨酸的硫醇基上。
2.根据权利要求1所述的药物组合物，其中，还含有制药学上可接受的缓冲剂、制药学上可接受的等渗调节剂和制药学上可接受的表面活性剂。
3.根据权利要求1或2所述的药物组合物，其pH为4.5～5.5。
4.根据权利要求1～3中任一项所述的药物组合物，其中，制药学上可接受的缓冲剂为选自由柠檬酸、乙酸和组氨酸以及它们的制药学上可接受的盐组成的组中的1种或2种以上。
5.根据权利要求1～4中任一项所述的药物组合物，其中，制药学上可接受的缓冲剂为柠檬酸或其制药学上可接受的盐。
6.根据权利要求1～5中任一项所述的药物组合物，其中，制药学上可接受的缓冲剂的浓度为1～200mmol/L。
7.根据权利要求1～6中任一项所述的药物组合物，其中，药物组合物为液体制剂或冷冻干燥制剂。
8.根据权利要求1～7中任一项所述的药物组合物，其中，药物组合物为液体制剂。
9.根据权利要求1～8中任一项所述的药物组合物，其中，制药学上可接受的等渗调节剂为选自由精氨酸、D-山梨糖醇、D-甘露醇、海藻糖、蔗糖、木糖醇、赤藓糖醇、苏糖醇、肌醇、卫矛醇、阿拉伯糖醇、益寿糖、乳糖醇和麦芽糖醇组成的组中的1种或2种以上。
10.根据权利要求1～9中任一项所述的药物组合物，其中，制药学上可接受的等渗调节剂的浓度为1～500mmol/L。
11.根据权利要求1～10中任一项所述的药物组合物，其中，制药学上可接受的表面活性剂为聚山梨酯或泊洛沙姆中的至少一者。
12.根据权利要求1～11中任一项所述的药物组合物，其中，制药学上可接受的表面活性剂为聚山梨酯80。
13.根据权利要求1～12中任一项所述的药物组合物，其中，制药学上可接受的表面活性剂的浓度为0.001～1％(w/v)。
14.根据权利要求1～13中任一项所述的药物组合物，其中，PEG化抗人NGF抗体Fab’片段的浓度为0.1～200mg/mL。
15.根据权利要求1所述的药物组合物，其中，作为PEG化抗人NGF抗体Fab’片段，含有使键合有硫醇反应基团的PEG衍生物的硫醇反应基团共价键合于包含由序列号1所示的氨基酸序列构成的重链片段和由序列号3所示的氨基酸序列构成的轻链的抗人NGF抗体Fab’片段的铰链区半胱氨酸的硫醇基上而PEG化后的抗人NGF抗体Fab’片段。
16.根据权利要求1所述的药物组合物，其中，作为PEG化抗人NGF抗体Fab’片段，含有使键合有硫醇反应基团的PEG衍生物的硫醇反应基团共价键合于作为通过包含由序列号1所示的氨基酸序列构成的重链片段和由序列号3所示的氨基酸序列构成的轻链的抗人NGF抗体Fab’片段的翻译后修饰产生的Fab’片段的抗人NGF抗体Fab’片段的铰链区半胱氨酸的硫醇基上而PEG化后的抗人NGF抗体Fab’片段。
17.根据权利要求1或16所述的药物组合物，其中，抗人NGF抗体Fab’片段的翻译后修饰为重链可变区N末端的焦谷氨酸化。
18.一种将PEG化抗人NGF抗体Fab’片段稳定化的方法，其特征在于，将pH调节至4～5.5，
该抗人NGF抗体Fab’片段选自：
(1)包含由序列号1所示的氨基酸序列构成的重链片段和由序列号3所示的氨基酸序列构成的轻链的抗人NGF抗体Fab’片段、以及
(2)作为通过(1)的抗人NGF抗体Fab’片段的翻译后修饰产生的Fab’片段的抗人NGF抗体Fab’片段，
所述PEG化是指，使键合有硫醇反应基团的PEG衍生物的硫醇反应基团共价键合于该抗人NGF抗体Fab’片段的铰链区半胱氨酸的硫醇基上。
19.根据权利要求18所述的方法，其中，使用制药学上可接受的缓冲剂、制药学上可接受的等渗调节剂和制药学上可接受的表面活性剂。
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Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB201718888D0 (en) * 2017-11-15 2017-12-27 Ucb Biopharma Sprl Method
EP3865154A4 (en) * 2018-10-10 2022-11-09 Astellas Pharma Inc. PHARMACEUTICAL COMPOSITION CONTAINING ANTIBODY FAB FRAGMENT COMPLEX AT LABELED ANTI-HUMAN SITE

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2005049078A2 (en) * 2003-11-18 2005-06-02 Zlb Behring Ag Immunoglobulin preparations having increased stability
WO2008079290A2 (en) * 2006-12-21 2008-07-03 Amgen Inc Stable buffered formulations containing polypeptides
CN102892430A (zh) * 2010-03-17 2013-01-23 雅培研究有限公司 抗神经生长因子（ngf）抗体组合物
CN103748222A (zh) * 2011-08-11 2014-04-23 安斯泰来制药株式会社 新型抗人ngf抗体

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6277828B1 (en) 1993-08-20 2001-08-21 Syntex (U.S.A.) Inc. Pharmaceutical formulations of nerve growth factor
GB9625640D0 (en) 1996-12-10 1997-01-29 Celltech Therapeutics Ltd Biological products
US20070184050A1 (en) * 2003-12-25 2007-08-09 Kirin Beer Kabushiki Kaisha Stable water-based medicinal preparation containing antibody
AU2009294214B2 (en) 2008-09-19 2014-04-24 Pfizer Inc. Stable liquid antibody formulation
JP6135161B2 (ja) * 2013-02-08 2017-05-31 アステラス製薬株式会社 新規抗ヒトｎｇｆ抗体

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2005049078A2 (en) * 2003-11-18 2005-06-02 Zlb Behring Ag Immunoglobulin preparations having increased stability
WO2008079290A2 (en) * 2006-12-21 2008-07-03 Amgen Inc Stable buffered formulations containing polypeptides
CN102892430A (zh) * 2010-03-17 2013-01-23 雅培研究有限公司 抗神经生长因子（ngf）抗体组合物
CN103748222A (zh) * 2011-08-11 2014-04-23 安斯泰来制药株式会社 新型抗人ngf抗体

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