CN108602881A

CN108602881A - 抗-因子d抗体制剂

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Publication number: CN108602881A
Application number: CN201680063293.5A
Authority: CN
Inventors: 克里斯托弗·佩特里; 本森·吉坎加; 吉鸿卫; 刘骏
Original assignee: F Hoffmann La Roche AG
Current assignee: F Hoffmann La Roche AG; Genentech Inc
Priority date: 2015-10-30
Filing date: 2016-10-27
Publication date: 2018-09-28
Also published as: MX2018005226A; BR112018008769A2; KR20180069906A; WO2017075259A1; US20170137535A1; IL258958A; AU2016344133A1; JP2018531980A; EP3368565A1; HK1257426A1; CA3003647A1

Abstract

本文公开了包含单克隆抗‑因子D抗体的药物制剂及其制备和用于治疗补体相关性眼病的用途。所述制剂包括抗‑因子D抗体(包括lampalizumab)的冻干前制剂、冻干制剂和重构的稳定液体制剂。

Description

抗-因子D抗体制剂

序列表

本申请包含已经以ASCII格式电子提交的序列表，并且该序列表通过引用整体结合于此。所述ASCII副本创建于2016年10月5日，名称为GNE-0419-WO_SL.txt并且大小为66,252字节。

发明领域

本发明涉及抗-因子D抗体制剂。特别地，本发明涉及抗-因子D抗体的冻干前(pre-lyophilized)制剂、冻干制剂和重构的稳定液体制剂，其适用于玻璃体内施用。

发明背景

年龄相关性黄斑变性(AMD)

补体系统在免疫复合物的清除和对传染剂、外部抗原、病毒感染的细胞和肿瘤细胞的免疫反应方面发挥中心作用。然而，补体也参与病理炎症和自体免疫病。因此，抑制过度的或不受控的补体级联激活可以为患有此种疾病和病症的患者提供临床益处。

补体系统包括三种不同的激活途径，其被指定为经典途径、结合甘露糖的凝集素途径和备选途径(V.M.Holers In Clinical Immunology：Principles and Practice，ed.R.R.Rich，Mosby Press；1996，363-391)。经典途径是钙/镁依赖性级联，其通常通过形成抗原-抗体复合物而激活。结合甘露糖的凝集素(MBL)途径通过MBL结合病原体上的糖类结构而引发，导致切割C2和C4以形成活性C2a、C2b、C4a和C4b的MBL蛋白酶(MASP)的活化。备选途径是镁依赖性级联，其通过C3在某些易感表面(例如酵母和细菌的细胞壁多糖，和某些生物聚合材料)上的沉积和活化而激活。补体途径的激活产生补体蛋白质的生物活性片段，例如C3a、C4a和C5a过敏毒素和C5b-9膜攻击复合物(MAC)，其介导涉及白细胞趋化性、巨噬细胞、嗜中性粒细胞、血小板、肥大细胞和内皮细胞的激活、血管通透性、细胞溶解和组织损伤的炎性活动。

因子D是对于备选补体途径的激活必要的高度特异性的丝氨酸蛋白酶。其切割与C3b结合的因子B，产生作为备选途径C3/C5转化酶的活性组分的C3b/Bb酶。因子D可以作为合适的抑制靶标，因为其在人中的血浆浓度非常低(1.8μg/ml)，并且已经证明其是激活备选补体途径的限速酶(P.H.Lesavre和H.J.Müller-Eberhard.(1978)J.Exp.Med.148：1498-1510；J.E.Volanakis等人(1985)New Eng.J.Med.312：395-401)。

已经证明，在动物模型中以及在离体研究中，补体激活的下调在治疗若干疾病适应证方面是有效的，所述疾病适应证例如是系统性红斑狼疮和肾小球肾炎、类风湿性关节炎、心肺转流术(cardiopulmonary bypass)和血液透析、器官移植中的超急性排斥、心肌梗塞、再灌注损伤和成人呼吸窘迫综合征。另外，其它炎性病症和自体免疫/免疫复合物疾病也与补体激活密切相关，所述疾病包括热损伤、严重哮喘、过敏性休克、肠炎、荨麻疹、血管性水肿、血管炎、多发性硬化、重症肌无力、膜性增生性肾小球肾炎和舍格伦综合征。

年龄相关性黄斑变性(AMD)是中央视网膜的进行性的慢性疾病，其对视觉敏锐性有显著后果。Lim等人(2012)Lancet 379：1728。在工业化国家中，该疾病的晚期形式是视力丧失的主要原因。对于≥40岁的高加索人群，早期AMD的患病率估计在6.8％而晚期AMD在1.5％。de Jong(2006)N.Engl.J.Med.355：1474。在80岁后，晚期AMD的患病率随年龄增长显著增加至11.8％。存在两种类型的AMD，非渗出性(干性)AMD和渗出性(湿性)AMD。更常见的干性形式AMD包括中央视网膜(黄斑)下的视网膜色素上皮(RPE)的萎缩和肥大性改变以及RPE上的沉积物(玻璃疣)。晚期干性AMD可以导致显著的视网膜损伤，包括地图状萎缩(GA)，以及不可逆的视力丧失。此外，患有干性AMD的患者可以进展至湿性形式，其中在视网膜下发展出被称为脉络膜新生血管膜(CNVM)的异常血管，渗液和渗血，并且最终导致视网膜中和视网膜下的致盲性盘状瘢痕。

靶向新血管形成(新血管形成)的药物已经是治疗湿性AMD的主要依靠。雷珠单抗(Ranibizumab)，一种抗-VEGFA抗体片段，已被证明可以高效地改善患有湿性AMD的患者的视力。最近的研究暗示了AMD与补体级联中的关键蛋白质之间的关联性，并且正在开发多种靶向特定补体组分的疗法用以治疗干性AMD。

用抗-因子D抗体治疗AMD

人源化抗-因子D抗体公开于例如美国专利号8,273,352中。通过结合因子D上的外部位点而有效抑制因子D及备选补体途径的人源化抗-因子D Fab片段(aFD.WT，lampalizumab；FCFD4514S)目前处于临床开发中以用于治疗与干性AMD相关的GA。Katschke等人(2012)J.Biol.Chem.287：12886。最近的II期临床试验显示每月玻璃体内注射lampalizumab有效地显示患有晚期干性AMD的患者中的GA病变的进展。正在进行两项III期临床试验(GX29176和GX29185)，其研究了患有继发于AMD的地图状萎缩(GA)的患者中lampalizumab玻璃体内注射的功效和安全性。

用于玻璃体内施用的制剂

用于治疗视网膜疾病的药物施用极具挑战性。眼睛的解剖特征对于任何外来物质存在多道屏障，包括血-视网膜屏障和血房水屏障(Duvvuri S等人，Expert Opin BiolTher.2003；3(1)：45-56)。这种血-眼屏障是保护眼睛免于感染的防御机制，但是也使得药物难于渗入，尤其是对于眼睛后段中的疾病。因此，相对于其它递送途径(诸如局部递送到眼睛)可实现的药物水平是有限的，并且通常需要高剂量施用以实现和维持药物的原位生物利用度(例如，眼部停留时间)以改善功效。通常，需要直接注射到玻璃体(玻璃体内输送途径)的侵入性药物输送策略以将药物递送到视网膜。

然而，玻璃体内注射途径呈现出几个独特的制剂挑战。眼睛是非常敏感的器官，并且与其它递送途径相比，玻璃体内注射可接受的赋形剂的集合是有限的。由于玻璃体内注射是侵入性途径，所以每次新注射总是存在小的但是显著的感染风险，因此存在使注射频率最小化的动力(Duvvury等人，参上；Urtti A.等人，Adv DrugDeliv Rev.2006；58(11)：1131-11351；GhateD等人，Expert Opin Drug Deliv.2006；3(2)：275-287)。

所有这些限制都带来了不易克服的挑战。必须解决如下问题：低给药体积(≤0.1mL)，用于玻璃体内注射的安全赋形剂的有限库，以及待递送药物的独特物理化学性质。另外，与玻璃体内施用相关的安全性考量约束了制剂的渗透压和pH，这与稳定性问题相结合使得用于玻璃体内使用的抗-因子D抗体的配制特别具有挑战性。例如，在Wang等人，JPharmaceutical Sci 2013；102(8)：2520-2537；Beckley等人，J Pharmaceutical Sci2013；102(3)：947-959；和Zhang等人，Analytical Biochemistry 2011；410：234-243中讨论了与单克隆抗体Fab片段有关的稳定性问题，包括Asp-Asp基序中天冬氨酸的异构化和外消旋化。

Lampalizumab目前处于III期临床试验中用于治疗地图状萎缩(GA)(干性AMD的晚期形式)。重构后，在pH 5.5，在40mM L-组氨酸/L-组氨酸盐酸盐(组氨酸氯化物，HisCl)、20mM氯化(NaCl)、180mM蔗糖和0.04％PS20中将I/II期lampalizumab药物产品(DP)配制为100mg/mL。在研发期间，观察到lampalizumab在I/II期DP制剂缓冲液中的溶解性对于进一步的临床开发并不令人满意。为了开发这样的抗-因子D制剂，所述制剂具有改善的溶解性同时维持合适的糖与蛋白质的比率以使固体状态下的可溶性聚集体形成和适合于玻璃体内施用的张度(tonicity)最小化，已经研究了可选的抗-因子D制剂。

发明概述

本发明至少部分基于抗-因子D抗体制剂的开发，所述制剂提供改善的抗-因子抗体的溶解性，同时保持抗体分子在储存期间的稳定性。

在一个方面，本发明涉及药物制剂，所述药物制剂包含治疗有效量的单克隆抗-因子D抗体、调节pH到5.0至5.4的缓冲剂、冻干保护剂和表面活性剂。

在一些实施方案中，制剂的pH为约5.3。

在一些实施方案中，制剂中冻干保护剂与抗体的比率为约60至100摩尔冻干保护剂∶1摩尔抗体，优选约80摩尔冻干保护剂∶1摩尔抗体。

在一些实施方案中，用于调节制剂的pH的缓冲剂是组氨酸缓冲剂，其可以例如以约5mM至约15mM的量存在，或者以约7mM至约13mM的量存在。

在一些实施方案中，制剂中存在的冻干保护剂包括一种或多种多元醇。

在一些实施方案中，多元醇中的至少一种是还原糖(诸如例如α，α-海藻糖)，或者非还原糖(诸如例如蔗糖)。

在一些实施方案中，多元醇中的至少一种是二糖。

在一些实施方案中，制剂中存在的表面活性剂包括一种或多种聚山梨醇酯，例如聚山梨醇酯20，和/或泊洛沙姆。

在一些实施方案中，制剂中存在的单克隆抗-因子D抗体包含：与HVR1-HC：GYTFTNYGMN(SEQ ID NO：3)；HVR2-HC：WINTYTGETTYADDFKG(SEQ ID NO：4)；HVR3-HC：EGGVNN(SEQ ID NO：5)的HVR序列具有至少98％或至少99％序列同一性的重链高变区(HVR-HC)，和/或与HVR1-LC：ITSTDIDDDMN(SEQ ID NO：8)；HVR2-LC：GGNTLRP(SEQ ID NO：9)；和HVR3-LC：LQSDSLPYT(SEQ ID NO：10)的HVR-LC序列具有至少98％或至少99％序列同一性的轻链高变区(HVR-LC)。

在一些实施方案中，单克隆抗-因子D抗体包含：HVR1-HC：GYTFTNYGMN(SEQ ID NO：3)；HVR2-HC：WINTYTGETTYADDFKG(SEQ ID NO：4)；HVR3-HC：EGGVNN(SEQ ID NO：5)的HVR-HC，和/或HVR1-LC：ITSTDIDDDMN(SEQ ID NO：8)；HVR2-LC：GGNTLRP(SEQ ID NO：9)；和HVR3-LC：LQSDSLPYT(SEQ ID NO：10)的HVR-LC。

在一些实施方案中，单克隆抗-因子D抗体包含：与SEQ ID NO：2的重链的可变区序列具有至少85％、或至少90％、或至少95％、或至少98％、或至少99％序列同一性的重链可变区序列，和/或与SEQ ID NO：7的轻链的可变区序列具有至少85％、或至少90％、或至少95％、或至少98％、或至少99％序列同一性的轻链可变区序列。

在一些实施方案中，单克隆抗-因子D抗体包含：SEQ ID NO：2的重链的可变区序列，和/或SEQ ID NO：7的轻链的可变区序列。

在一些实施方案中，单克隆抗-因子D抗体包含：包含SEQ ID NO：2的重链序列，和/或包含SEQ ID NO：7的轻链序列。

在一些实施方案中，单克隆抗-因子D抗体是IgG抗体，诸如IgG1抗体。

在一些实施方案中，单克隆抗-因子D抗体是抗体片段，诸如Fab片段。

在一些实施方案中，单克隆抗-因子D抗体是人源化的。

在一些实施方案中，单克隆抗-因子D抗体是lampalizumab。

本文中的药物制剂可以是例如用于眼内施用，包括玻璃体内施用。

在各种实施方案中，本文中的药物制剂可以是无菌的和/或在冷冻和解冻时稳定的。

在一些实施方案中，药物制剂是冻干前制剂。

在一些实施方案中，冻干前制剂在-20℃的储存温度稳定至少一年，或者至少两年。

在一些实施方案中，药物制剂是冻干的。

在一些实施方案中，冻干药物制剂在5℃的储存温度稳定至少一年，或者至少两年。

在另一个方面，本发明涉及重构的水性液体制剂，其由上文描述的或以其它方式公开的药物制剂中的任一种制备。

在又一个方面，本发明涉及冻干前或冻干药物制剂，所述药物制剂包含治疗有效量的单克隆抗-因子D抗体、调节pH到5.0至5.4的约5mM至约15mM的组氨酸缓冲剂、氯化钠、冻干保护剂和表面活性剂。

在一些实施方案中，冻干前或冻干药物制剂中存在的抗-因子D抗体包含：与HVR1-HC：GYTFTNYGMN(SEQ ID NO：3)；HVR2-HC：WINTYTGETTYADDFKG(SEQ ID NO：4)；HVR3-HC：EGGVNN(SEQ ID NO：5)的HVR序列具有至少98％或至少99％序列同一性的重链高变区(HVR-HC)，和/或与HVR1-LC：ITSTDIDDDMN(SEQ ID NO：8)；HVR2-LC：GGNTLRP(SEQ ID NO：9)；和HVR3-LC：LQSDSLPYT(SEQ ID NO：10)的HVR-LC序列具有至少98％或至少99％序列同一性的轻链高变区(HVR-LC)。

在一些实施方案中，单克隆抗-因子D抗体包含：HVR1-HC：GYTFTNYGMN (SEQ IDNO：3)；HVR2-HC：WINTYTGETTYADDFKG(SEQ ID NO：4)；HVR3-HC：EGGVNN(SEQ ID NO：5)的重链高变区(HVR-HC)，和/或HVR1-LC：ITSTDIDDDMN(SEQ ID NO：8)；HVR2-LC：GGNTLRP(SEQ IDNO：9)；和HVR3-LC：LQSDSLPYT(SEQ ID NO：10)的轻链高变区(HVR-LC)。

在一些实施方案中，单克隆抗-因子D抗体包含：与SEQ ID NO：2的重链具有至少85％、或至少90％、或至少95％、或至少98％、或至少99％序列同一性的重链可变区序列，和/或与SEQ ID NO：7的轻链具有至少85％、或至少90％、或至少95％、或至少98％、或至少99％序列同一性的轻链可变区序列。

单克隆抗-因子D抗体可以是例如IgG抗体，例如IgG1抗体。

在一些实施方案中，单克隆抗-因子D抗体是抗体片段，例如Fab片段。

在一些实施方案中，单克隆抗-因子D抗体是人源化的。

在一些实施方案中，本发明的冻干前或冻干药物制剂中存在的抗-因子D抗体是lampalizumab。

在一些实施方案中，冻干前或冻干药物制剂包含约25mg/mL的lampalizumab。

在一些实施方案中，在冻干前或冻干药物制剂中，冻干保护剂与抗体的比率是约60至100摩尔冻干保护剂∶1摩尔抗体。

在一些实施方案中，在冻干制剂中，冻干保护剂与抗体的比率是约80摩尔冻干保护剂∶1摩尔抗体。

在另一个方面，本发明涉及重构的水性液体制剂，其由上文描述的或以其它方式公开的冻干药物制剂制备。

在一些实施方案中，重构的制剂用于眼内施用，诸如例如用于玻璃体内施用。

在一些实施方案中，重构的制剂是无菌的。

在一些实施方案中，重构的制剂包含约100mg/mL的lampalizumab。

在另外的方面，本发明涉及重构的水性液体药物制剂，所述药物制剂包含治疗有效量的单克隆抗-因子D抗体、约20mM至约60mM的组氨酸氯化物、多元醇、氯化钠和表面活性剂。

在一些实施方案中，重构的水性液体制剂中存在的抗-因子D抗体包含：与HVR1-HC：GYTFTNYGMN(SEQ ID NO：3)；HVR2-HC：WINTYTGETTYADDFKG(SEQ ID NO：4)；HVR3-HC：EGGVNN(SEQ ID NO：5)的HVR序列具有至少98％或至少99％序列同一性的重链高变区(HVR-HC)，和/或与HVR1-LC：ITSTDIDDDMN(SEQ ID NO：8)；HVR2-LC：GGNTLRP(SEQ ID NO：9)；和HVR3-LC：LQSDSLPYT(SEQ ID NO：10)的HVR-LC序列具有至少98％或至少99％序列同一性的轻链高变区(HVR-LC)。

在一些实施方案中，重构的制剂包含单克隆抗-因子D抗体，其包含：HVR1-HC：GYTFTNYGMN(SEQ ID NO：3)；HVR2-HC：WINTYTGETTYADDFKG(SEQ ID NO：4)；HVR3-HC：EGGVNN(SEQ ID NO：5)的重链高变区(HVR-HC)，和/或HVR1-LC：ITSTDIDDDMN(SEQ ID NO：8)；HVR2-LC：GGNTLRP(SEQ ID NO：9)；和HVR3-LC：LQSDSLPYT(SEQ ID NO：10)的HVR-LC序列的轻链高变区(HVR-LC)。

在一些实施方案中，重构的制剂中存在的单克隆抗-因子D抗体包含：与SEQ IDNO：2的重链具有至少85％、或至少90％、或至少95％、或至少98％、或至少99％序列同一性的重链可变区序列，和/或与SEQ ID NO：7的轻链具有至少85％、或至少90％、或至少95％、或至少98％、或至少99％序列同一性的轻链可变区序列。

在一些实施方案中，重构的制剂中存在的单克隆抗-因子D抗体包含：包含SEQ IDNO：2的重链序列，和/或包含SEQ ID NO：7的轻链序列。

在一些实施方案中，重构的制剂中存在的单克隆抗-因子D抗体是IgG抗体，诸如IgG1抗体。

在一些实施方案中，重构的制剂中存在的单克隆抗-因子D抗体是抗体片段，诸如例如Fab片段。

在一些实施方案中，重构的制剂中存在的单克隆抗-因子D抗体是人源化的。

在一些实施方案中，重构的制剂中存在的抗-因子D抗体是lampalizumab。

在一些实施方案中，重构的制剂用于眼内施用，诸如例如玻璃体内施用。

在一些实施方案中，重构的制剂是无菌的。

在一些实施方案中，重构的制剂包含约100mg/mL lampalizumab。

在一些实施方案中，重构的制剂具有相当于约37至88mM氯化钠的离子强度，诸如相当于约63mM氯化钠的离子强度。

在另外的方面，本发明涉及包含单克隆抗-因子D抗体的冻干制剂，其中所述冻干制剂在重构时产生水性液体制剂，所述水性液体制剂包含治疗有效量的所述抗-因子D抗体、约20mM至约60mM的组氨酸氯化物、多元醇、氯化钠和表面活性剂。

在一些实施方案中，在冻干制剂中，多元醇与抗体的比率是约80摩尔多元醇：1摩尔抗体。

在一些实施方案中，冻干制剂中存在的抗-因子D抗体包含：与HVR1-HC：GYTFTNYGMN(SEQ ID NO：3)；HVR2-HC：WINTYTGETTYADDFKG(SEQ ID NO：4)；HVR3-HC：EGGVNN(SEQ IDNO：5)的HVR序列具有至少98％或至少99％序列同一性的重链高变区(HVR)，和/或与HVR1-LC：ITSTDIDDDMN(SEQ ID NO：8)；HVR2-LC：GGNTLRP(SEQ ID NO：9)；和HVR3-LC：LQSDSLPYT(SEQ ID NO：10)的HVR-LC序列具有至少98％或至少99％序列同一性的轻链高变区(HVR-LC)。

在一些实施方案中，冻干制剂中存在的抗-因子D抗体包含：HVR1-HC：GYTFTNYGMN(SEQ ID NO：3)；HVR2-HC：WINTYTGETTYADDFKG(SEQ ID NO：4)；HVR3-HC：EGGVNN(SEQ IDNO：5)的重链高变区(HVR-HC)，和/或HVR1-LC：ITSTDIDDDMN(SEQ ID NO：8)；HVR2-LC：GGNTLRP(SEQ ID NO：9)；和HVR3-LC：LQSDSLPYT(SEQ ID NO：10)的轻链高变区(HVR-LC)。

在一些实施方案中，冻干制剂中存在的单克隆抗-因子D抗体包含：与SEQ ID NO：2的重链具有至少85％、或至少90％、或至少95％、或至少98％、或至少99％序列同一性的重链可变区序列，和/或与SEQ ID NO：7的轻链具有至少85％、或至少90％、或至少95％、或至少98％、或至少99％序列同一性的轻链可变区序列。

在一些实施方案中，冻干制剂中存在的单克隆抗-因子D抗体包含：包含SEQ IDNO：2的重链序列，和/或包含SEQ ID NO：7的轻链序列。

在一些实施方案中，冻干制剂中存在的单克隆抗-因子D抗体是IgG抗体，诸如IgG1抗体。

在一些实施方案中，冻干制剂中存在的单克隆抗-因子D抗体是抗体片段，例如Fab片段。

在一些实施方案中，冻干制剂中存在的单克隆抗-因子D抗体是人源化的。

在一些实施方案中，冻干制剂中存在的抗-因子D抗体是lampalizumab。

在一些实施方案中，通过重构本文中的冻干制剂产生的水性液体制剂用于玻璃体内施用。

在一些实施方案中，冻干制剂是无菌的。

在一些实施方案中，冻干制剂包含约100mg/mL lampalizumab。

在一些实施方案中，冻干制剂在5℃的储存温度稳定至少一年，或者至少两年。

在一些实施方案中，通过重构冻干制剂产生的水性液体制剂具有相当于约37至88mM氯化钠的离子强度。

在一些实施方案中，通过重构冻干制剂产生的水性液体制剂具有相当于约63mM氯化钠的离子强度。

在另外的方面，本发明涉及用于玻璃体内注射的注射器，其包含上文描述的或以其它方式在本文中公开的重构的制剂中的任一种。

在另一个方面，本发明涉及制备药物制剂的方法，所述方法包括：

(a)制备先前描述的或以其它方式公开的制剂中的任一种；和

(b)评价制剂中单克隆抗-因子D抗体的物理稳定性、化学稳定性或生物活性。

在又一个方面，本发明涉及治疗补体相关性眼病的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用前述重构的制剂中的任一种。

在一些实施方案中，补体相关性眼病选自由以下各项组成的组：年龄相关性黄斑变性(AMD)、糖尿病性视网膜病、脉络膜新血管形成(CNV)、葡萄膜炎、糖尿病性黄斑水肿、病理性近视、希佩尔-林道病(von Hippel-Lindau disease)、眼的组织胞浆菌病、视网膜中央静脉阻塞(CRVO)、角膜新血管形成和视网膜新血管形成。

在一些实施方案中，AMD是干性AMD。

在一些实施方案中，干性AMD的特征在于地图状萎缩。

在一些实施方案中，制剂通过玻璃体内注射施用。

在不同的方面，本发明涉及本文中的重构的制剂中的任一种用于治疗补体相关性眼病的用途。

在一些实施方案中，AMD是干性AMD。

在一些实施方案中，干性AMD的特征在于地图状萎缩。

在一些实施方案中，制剂用于玻璃体内施用。

在所有实施方案中，本文中的制剂(包括冻干前制剂、冻干制剂、重构的制剂和液体制剂)可以包含抗-因子D抗体变体。

在一些实施方案中，本发明的制剂中存在的单克隆抗-因子D抗体包含与抗-因子D抗体变体AFD.vl-AFD.v15的重链和/或轻链CDR序列(参见图20)具有至少90％、或至少95％、或至少98％、或至少99％序列同一性的重链高变区(HVR-HC)。

在一些实施方案中，单克隆抗-因子D抗体包含抗-因子D抗体变体AFD.v1-AFD.v15的重链和/或轻链CDR序列(参见图20)。

在一些实施方案中，单克隆抗-因子D抗体包含与抗-因子D抗体变体AFD.v1-AFD.v15的轻链和/或重链的可变区序列(参见图21和22)具有至少85％、或至少90％、或至少95％、或至少98％、或至少99％序列同一性的重链可变区序列。

在一些实施方案中，单克隆抗-因子D抗体包含抗-因子D抗体变体AFD.v1-AFD.v15的轻链和/或重链可变区序列(参见图21和22)。

在一些实施方案中，Fab片段的重链的C-末端以序列CDKTHX(SEQ ID NO：52)结束，其中X是除T以外的任何氨基酸。本发明特别地包括这样的制剂：所述制剂包含上文描述的抗-因子D抗体和抗-因子D抗体变体(例如AFD.v1-AFD.v15)，其具有以下列氨基酸结束的Fab片段的重链的C-末端：“CDKTHT”(SEQ ID NO：11)、“CDKTHL”(SEQ ID NO：12)、“CDKTH”(SEQ ID NO：13)、“CDKT”(SEQ ID NO：14)、“CDK”(SEQ ID NO：15)或“CD”。C末端的截短能够消除针对Fab的AHA反应性，而不危害热稳定性或表达。在一些实施方案中，抗-因子D抗体或抗体变体(例如AFD.v1-AFD.v15)的Fab片段的重链的C-末端以氨基酸“CDKTHTC”(SEQ IDNO：16)、“CDKTHTCPPC”(SEQ ID NO：17)、“CDKTHTCPPS”(SEQ ID NO：18)、“CDKTHTSPPC”(SEQID NO：19)、“CDKTHTAPPC”(SEQ ID NO：20)、“CDKTHTSGGC”(SEQ ID NO：21)或“CYGPPC”(SEQID NO：22)结束。在一些这样的实施方案中，C-末端氨基酸中的游离半胱氨酸可以接受缀合至例如聚合物(诸如PEG)。在一些实施方案中，Fab片段包含选自SEQ ID NOs：30至51的重链恒定区。在一些实施方案中，Fab是IgG2或IgG4 Fab(参见例如SEQ ID NOs：43至50)(图19)。在一些实施方案中，Fab是包含SEQ ID NO：43(VERK；SEQ ID NO：23)的重链恒定区的IgG2Fab片段，或包含SEQ ID NO：44(VERKC；SEQ ID NO：24)的重链恒定区的IgG2 Fab-C片段。在一些实施方案中，Fab是包含选自SEQ ID NO：46(KYGPP；SEQ ID NO：26)、SEQ ID NO：50(KYGP；SEQ ID NO：27)、SEQ ID NO：47(KYG，SEQ ID NO：28)、SEQ ID NO：48(KY)和SEQ IDNO：49(K)的重链恒定区的IgG4片段，或包含SEQ ID NO：45(KYGPPC；SEQ ID NO：25)的重链恒定区的IgG4 Fab-C片段。

作为C末端处的截短和/或突变的替代方式，为了避免预先存在的抗铰链抗体(PE-AHA)应答，可以使用IgG2或IgG4 Fab片段，因为这些片段不显示PE-AHA应答。

在一些实施方案中，本发明制剂中存在的抗-因子D抗体变体是AFD.v8或AFD.v14。

附图简述

图1说明了因子D在备选补体途径中的作用。

图2显示了lampalizumab溶解性对碱性电荷变体水平的依赖性。在环境温度下，每种透析物含有在30mM HisCl和12mM NaCl(pH 5.6)中的115mg/mL的ampalizumab。两个盒都含有来自相同批次的lampalizumab，但是右盒(B)中的样品被滴定至pH 5.5并经受应激，直到其含有27％的碱性峰(通过IEC)。起始材料含有7％碱性峰(通过IEC)(A)。

图3说明了作为NaCl浓度和碱性电荷变体水平的函数的lampalizumab溶解性。在环境实验室温度下，每个小瓶含有在30mM HisCl(pH 5.6)中的115mg/mL的ampalizumab。显示了每个小瓶中以mM(0、6、12、14、16、18、20、22、24)的NaCl浓度。需要12mM的NaCl以确保起初lampalizumab的完全溶解(澄清溶液，无浊度)(A)，但是当存在较高水平的碱性电荷变体时，需要24mM的NaCl以确保lampalizumab的完全溶解(澄清溶液，无浊度)(B)。

图4显示了在30℃，作为时间的函数的药物原料大小变体(通过SEC)。

图5显示了在30℃，作为时间的函数的药物原料电荷变体(通过IEC)。

图6显示了在-20℃，作为时间的函数的药物原料大小变体(通过SEC)。

图7显示了在-20℃，作为时间的函数的药物原料电荷变体(通过IEC)。

图8显示了在40℃/75％RH，作为时间的函数的药物产品大小变体(通过SEC)。

图9显示了在40℃/75％RH，作为制剂中糖与蛋白质比率的函数的药物产品聚集率(通过SEC)。

图10是在40℃/75％RH储存0、2和4周后的药物产品制剂＃1SEC层析图的覆盖图。

图11显示了在40℃/75％RH，作为时间的函数的药物产品电荷变体(通过IEC)。

图12显示了在25℃/60％RH，作为时间的函数的药物产品大小变体(通过SEC)。

图13显示了在5℃，作为时间的函数的药物产品大小变体(通过SEC)。

图14显示了在5℃，作为时间的函数的药物产品电荷变体(通过IEC)。

图15显示了lampalizumab的重链的核苷酸序列(人源化抗-因子D Fab 238-1)(SEQ ID NO：1)。核苷酸序列编码lampalizumab的重链，起始密码子和终止密码子以粗体加下划线显示。对应于图18中第一个氨基酸的密码子是粗体且斜体的。

图16显示了lampalizumab的重链的氨基酸序列(人源化抗-因子D Fab 238-1)(SEQ ID NO：2)。HVR-HC序列是粗体且斜体的。可变区是未加下划线的区，而第一恒定结构域CH1是加下划线的。HVR-HC区显示为：HVR1-HC：GYTFTNYGMN(SEQ ID NO：3)；HVR2-HC：WINTYTGETTYADDFKG(SEQ ID NO：4)；HVR3-HC：EGGVNN(SEQ ID NO：5)。图16还公开了分别为SEQ ID NOS 54-57和30的FR1-FR4和CH1序列。

图17显示了lampalizumab的轻链的核苷酸序列(人源化抗-因子D Fab 238-1)(SEQ ID NO：6)。核苷酸序列编码lampalizumab的轻链，起始密码子和终止密码子以粗体加下划线显示。对应于图20中第一个氨基酸的密码子是粗体且斜体的。

图18显示了lampalizumab的轻链的氨基酸序列(人源化抗-因子D Fab 238-1)(SEQ ID NO：7)。氨基酸序列缺少N-末端信号序列。HVR-LC序列是粗体且斜体的。可变区是未加下划线的区，而第一恒定结构域CL1是加下划线的。框架(FR)区和HVR区显示为：HVR1-LC：ITSTDIDDDMN(SEQ ID NO：8)；HVR2-LC：GGNTLRP(SEQ ID NO：9)；HVR3-LC：LQSDSLPYT(SEQ ID NO：10)。图18还公开了分别为SEQ ID NOS 58-61和29的FR1-FR4和CH1序列。

图19显示了IgG1抗-因子D抗体Fab片段的Fab轻链恒定区序列(SEQID NO：29)，以及IgG1、IgG2和IgG4抗-因子D抗体的重链恒定区序列，包括具有C-末端截短的重链(SEQ IDNOs：30-51)。

图20显示了抗-因子D抗体变体AFD.v1-AFD.v15的轻链和重链CDR序列。按照出现的顺序，CDR L1序列分别公开为SEQ ID NOS 8、62-68、68-70、69、69、69、69、69和69。CDR L2序列“GGNTLRP”和“AASTLQS””分别公开为SEQ ID NOS 9和71。CDR L3序列“LQSDSLPYT”、“QKYNSAPYT”和“LQSESLPYT”分别公开为SEQ ID NOS 10、72和73。CDR H1序列“NYGMN”和“SYAMN”分别公开为SEQ ID NOS 74和75。CDR H2序列“WINTYTGETTYADDFKG”、“WINTNTGNPTYAQGFTG”、“WINTYTGETTYAEDFKG”和“WISTYTGETTYAEDFKG”分别公开为SEQ IDNOS 4、76、77和78。CDR H3序列“EGGVNN”、“EGYFDY”、“EGGVDN”、“EGGVQN”和“EGGVSN”分别公开为SEQ ID NOS 5、79、80、81和82。

图21显示了抗-因子D抗体变体AFD.v1-AFD.v15的轻链可变区序列与人框架和lampalizumab轻链可变区序列之间的比对(按照出现的顺序分别为SEQ ID NOS 83-94、92、92、92、92和94)。根据Kabat定义的CDR序列是加下划线的。

图22显示了抗-因子D抗体变体AFD.va-AFD.v15的重链可变区序列与人框架和lampalizumab重链可变区序列之间的比对(按照出现的顺序分别为SEQ ID NOS 95、96、95、95、95、95、95、97、97、97、97、97-101和101)。根据Kabat定义的CDR序列是加下划线的。

表1.筛选的药物原料制剂。

表2.储存于-20℃的药物原料制剂的稳定性数据。

表3.储存于5℃的药物原料制剂的稳定性数据。

表4.储存于30℃的药物原料制剂的稳定性数据。

表5A和5B.储存于5℃的药物产品制剂的稳定性数据。

表6A和6B.储存于25℃/65％RH的药物产品制剂的稳定性数据。

表7A和7B.储存于40℃/75％RH的药物产品制剂的稳定性数据。

表8.制剂1和7在选择时间点的ELISA结合数据。

表9.III期lampalizumab药物原料的稳定性数据。

表10A和10B.III期lampalizumab药物产品的稳定性数据。

发明详述

I.定义

在更详细地描述本发明之前，应当理解本发明不限于所描述的特定实施方案，因而当然可以改变。还应当理解本文中使用的术语仅用于描述特定实施方案的目的，并且不旨在是限制性的，因为本发明的范围将仅由所附权利要求进行限制。

在提供数值范围的情况中，应当理解，该范围的上限与下限之间相差下限十分之一(除非上下文另有清楚指明)的每一个居间值及所叙述范围中任何其它叙述的或居间的值涵盖在本发明内。这些较小范围的上限和下限可以独立地包括在本发明涵盖的更小的范围中，服从所叙述的范围中任何具体排除的极限。

除非另有定义，本文中使用的技术和科学术语具有与本发明所属的技术领域的普通技术人员通常理解的相同含义。Singleton等人，Dictionary of Microbiology andMolecular Biology(微生物学和分子生物学词典)第2版，J.Wiley&Sons(New York，NY1994)为本领域技术人员提供了本申请中使用的许多术语的一般指南。

本文中提及的所有出版物通过引用明确地结合于此以公开和描述关于所引述出版物的方法和/或材料。

术语“抗体”以最广意义使用，并且具体地涵盖全长单克隆抗体、多克隆抗体、多特异性抗体(例如，双特异性抗体)和抗体片段，只要它们显示所需的生物学活性(诸如抗原结合活性)即可。抗体(Ab)和免疫球蛋白(Ig)是具有相同结构特性的糖蛋白。抗体显示对特定靶标的结合特异性，而免疫球蛋白包括抗体和其它缺少靶标特异性的抗体样分子。天然抗体和免疫球蛋白通常是约150,000道尔顿的异源四聚体糖蛋白，由两条相同的轻(L)链和两条相同的重(H)链组成。每条重链在一端具有可变结构域(V_H)，之后是若干个恒定结构域。每条轻链在一端具有可变结构域(V_L)而在其另一端具有恒定结构域。如本文所使用的术语“抗体”清楚地涵盖保持抗原结合活性的抗体片段。

“抗体片段”是指不同于完整抗体的包含完整抗体的一部分的分子，所述部分结合与完整抗体结合的抗原。抗体片段的实例包括但不限于Fv、Fab、Fab’、Fab’-SH、Fab’-C、Fab-SH、Fab-C、Fab-C-SH、Fab’-C-SH F(ab’)2；双抗体(diabody)；线性抗体；单链抗体分子(例如scFv)；和由抗体片段形成的多特异性抗体。

“Fab-C”是指具有C-末端半胱氨酸的Fab，其可以是在残基位置出现的天然半胱氨酸(诸如来自铰链区的半胱氨酸)，或者可以是添加到C-末端的半胱氨酸(其不相当于天然半胱氨酸)。非限制性的示例性Fab-C重链恒定区包括SEQ ID NOs：32、44和45的序列。

“Fab-SH”是指具有游离硫醇基团的Fab。在一些实施方案中，游离硫醇基团位于Fab的C-末端的后10个氨基酸。Fab-C抗体通常也是Fab-SH抗体。另外的非限制性的示例性Fab-SH重链恒定区具有SEQ ID NO：34的氨基酸序列。通常，包含工程改造的半胱氨酸的Fab(即，其为THIOMAB的Fab)是Fab-SH。

如本文所使用的，“抗-因子D抗体”意指以这样的方式特异性结合因子D的抗体，从而抑制或基本上减少补体激活。在一些实施方案中，抗-因子D抗体是抗体片段(如上文所定义的)，诸如Fab片段。

术语“因子D”用在本文中指天然序列和变体因子D多肽。在一些实施方案中，术语“因子D”是指天然序列哺乳动物多肽，更优选天然序列人多肽。

术语“可变区”或“可变结构域”是指参与抗体结合至抗原的抗体重链或轻链的结构域。天然抗体的重链和轻链的可变结构域(分别是VH和VL)通常具有相似的结构，各结构域包含四个保守的框架区(FR)和三个高变区(HVR)。(参见，例如Kindt等人KubyImmunology，第6版，W.H.Freeman and Co.，第91页(2007))。单个VH结构域或VL结构域可以足以赋予抗原结合特异性。另外，结合特定抗原的抗体可以使用来自结合该抗原的抗体的VH或VL结构域进行分离以分别筛选互补VL结构域或VH结构域的文库。参见，例如Portolano等人，J.Immunol.150：880-887(1993)；Clarkson等人，Nature 352：624-628(1991)。

术语“可变”是指这样的事实，即在抗体之间可变结构域的某些部分在序列上差异很大并且被用于各特定抗体对其特定抗原的结合和特异性。然而，可变性在抗体的可变结构域上并不是均匀分布的。其集中于在轻链和重链可变结构域中的三个被称为高变区的区段。可变结构域的更高度保守的部分被称为框架区(FR)。天然重链和轻链的可变结构域各自包含四个FR，其大多采取β折叠构型，通过三个高变区连接，所述三个高变区形成环连接，并且在一些情况下形成β折叠结构的部分。每条链中的高变区通过FR非常接近地保持在一起，并与另一条链的高变区一起促成抗体的抗原结合位点的形成(参见Kabat等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest，第5版，Public Health Service，National Institutes of Health，Bethesda，Md.(1991))。恒定结构域不直接参与抗体与抗原的结合，但是展现出多种效应子功能，诸如在抗体依赖性细胞毒性(ADCC)中抗体的参与。

用木瓜蛋白酶消化抗体产生称作“Fab”片段的两个相同的抗原结合片段(各自具有单个抗原结合位点)和一个残余“Fc”片段，其名称反映了它易于结晶的能力。木瓜蛋白酶处理产生具有两个抗原结合位点并且仍然能够交联抗原的F(ab′)2片段。

Fab片段还含有轻链的恒定结构域和重链的第一恒定结构域(CH1)。Fab’片段与Fab片段的不同之处在于在重链CH1结构域的羧基末端添加了几个残基，包括来自抗体铰链区的一个或多个半胱氨酸。Fab’-SH是本文对Fab’的命名，其中恒定结构域的一个或多个半胱氨酸残基带有至少一个游离硫醇基团。F(ab′)2抗体片段最初是作为在它们之间具有铰链半胱氨酸的Fab’片段对而产生的。抗体片段的其它化学偶联也是已知的。

如本文所使用的，“Fab”是指这样的抗体：所述抗体包含重链恒定区，所述重链恒定区包含CH1结构域或CH1结构域的足够的部分以与轻链恒定区形成二硫键，但是不含有CH2结构域或CH3结构域。如本文所使用的，Fab可以包含铰链区的一个或多个氨基酸。因此，如本文所使用的，术语“Fab”涵盖Fab’抗体。Fab可以包含另外的非天然氨基酸，诸如C-末端半胱氨酸，在该情况下其可以称为Fab-C。如下讨论的，术语Fab-C还涵盖包含铰链区的天然氨基酸(包括C-末端处的天然半胱氨酸)的Fab。在一些实施方案中，Fab包含工程改造的半胱氨酸(即，Fab可以是THIOMAB)。

“Fv”是含有完整抗原识别和抗原结合位点的最小抗体片段。该区由一个重链可变结构域和一个轻链可变结构域以紧密的、非共价缔合的二聚体组成。在这种构型中，每个可变结构域的三个高变区相互作用从而限定在VH-VL二聚体的表面上的抗原结合位点。总而言之，六个高变区将抗原结合特异性赋予抗体。然而，即使单个可变结构域(或只包含对抗原具有特异性的三个高变区的Fv的一半)也具有识别和结合抗原的能力，虽然亲和性低于完整结合位点。

如本文所使用的，术语“高变区”或“HVR”是指抗体可变结构域中序列上高度可变和/或形成结构确定的环(“高变环”)的各区域。通常，天然的四链抗体包含六个HVR；三个在VH中(H1、H2、H3)和三个在VL中(L1、L2、L3)。HVR通常包含来自高变环和/或来自“互补决定区”(CDR)的氨基酸残基，后者具有最高序列可变性和/或参与抗原识别。据信HVR-H3在赋予抗体优良的特异性方面发挥独特的作用。参见，例如，Xu等人(2000)Immunity 13：37-45；Johnson和Wu(2003)in Methods in Molecular Biology 248：1-25(Lo编，Human Press，Totowa，N.J.)。“框架区”或“FR”残基是不同于如本文所限定的高变区残基的那些可变结构域残基。如本文所使用的，HVR区包含位于位置24-36(对于L1)、46-56(对于L2)、89-97(对于L3)、26-35B(对于H1)、47-65(对于H2)和93-102(对于H3)内的任意数目的残基。因此，HVR包括在前述位置中的残基：

A)24-34(L1)，50-52(L2)，91-96(L3)，26-32(H1)，53-55(H2)，和96-101(H3)(Chothia和Lesk，J.Mol.Biol.196：901-917(1987)；

B)L1的24-34，L2的50-56，L3的89-97，H1的31-35B，H2的50-65，和H3的95-102(Kabat等人，Sequences ofProteins of Inmunological Interest，第5版，Public HealthService，National Institutes of Health，Bethesda，MD(1991)。

C)30-36(L1)，46-55(L2)，89-96(L3)，30-35(H1)，47-58(H2)，93-100a-j(H3)(MacCallum等人J.Mol.Biol.262：732-745(1996)。

高变区可以包含以下“延长的高变区”：在VL中的24-36或24-34(L1)，46-56或50-56(L2)以及89-97(L3)，和在VH中的26-35B(H1)，50-65、47-65或49-65(H2)以及93-102、94-102或95-102(H3)。对于这些定义中的每个，可变结构域残基根据Kabat等人(见上)进行编号。

除了VH中的CDR1以外，CDR通常包含形成高变环的氨基酸残基。CDR还包含“特异性决定残基”或“SDR”，其是接触抗原的残基。SDR被包含在CDR的被称为简短CDR(abbreviated-CDR)或a-CDR的区域内。示例性a-CDR(a-CDR-L1、a-CDR-L2、a-CDR-L3、a-CDR-H1、a-CDR-H2和a-CDR-H3)出现于L1的氨基酸残基31-34处、L2的氨基酸残基50-55处、L3的氨基酸残基89-96处、H1的氨基酸残基31-35B处、H2的氨基酸残基50-58处和H3的氨基酸残基95-102处。(参见Almagro和Fransson，Front.Biosci.13：1619-1633(2008))。

参比抗体(也称为“起始抗体”或“亲本抗体”)的“抗体变体”或“修饰的抗体”是包含与参比/起始抗体的氨基酸序列不同的氨基酸序列的抗体，其中参比抗体的一个或多个氨基酸残基已被修饰。通常，抗体变体将与参比抗体具有至少80％序列同一性，优选地至少90％序列同一性，更优选地至少95％序列同一性，并且最优选地至少98％序列同一性。百分比序列同一性例如通过Fitch等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，80：1382-1386(1983)，Needleman等人，J.Mol.Biol.，48：443-453(1970)描述的算法版本，在将参比抗体的序列与候选抗体变体比对以提供最大同源性后确定。同一性或相似性在本文中被限定为，在对序列进行比对并且在需要的情况下引入间隙(gap)以实现最大百分比序列同一性后，候选变体序列中与亲本抗体残基相同(即相同的残基)或相似(即来自基于共有侧链性质的相同组的氨基酸残基，见下)的氨基酸残基的百分比。可以通过将适合的核苷酸改变引入到编码抗体的DNA或者通过肽合成来制备抗体的氨基酸序列变体。这种变体包括，例如，从目的抗体的氨基酸序列内的残基缺失，和/或向目的抗体的氨基酸序列内的残基插入，和/或目的抗体的氨基酸序列内的残基置换。可以产生缺失、插入和置换的任意组合以实现最终构建体，条件是所述最终构建体拥有所需特征。氨基酸变化也可以改变抗体的翻译后加工，诸如改变糖基化位点的数量或位置。用于产生抗体的抗体序列变体的方法类似于例如美国专利号5,534,615中描述的用于产生多肽的氨基酸序列变体的那些方法，所述专利通过引用清楚地结合于此。

如本文中所使用的，术语“单克隆抗体”是指从基本上同质的抗体的群体中获得的抗体，即，构成该群体的各个抗体是相同的，除了可以以微量存在的可能的天然存在的突变以外。单克隆抗体是高度特异性的，其针对单个抗原位点。此外，与通常包括针对不同决定簇(表位)的不同抗体的常规(多克隆)抗体制备物相反，每种单克隆抗体针对抗原上的单一决定簇。修饰语“单克隆”表示如从基本上同质的抗体群体获得的抗体的特征，并且不解释为需要通过任何特殊方法产生该抗体。例如，根据本发明待使用的单克隆抗体可以通过Kohler等人(1975)Nature 256：495首先描述的杂交瘤方法制备，或者可以通过重组DNA方法(参见例如美国专利号4,816,567)制备。“单克隆抗体”也可以使用例如Clackson等人(1991)Nature 352：624-628和Marks等人(1991)J.Mol.Biol.222：581-597中描述的技术从噬菌体抗体文库中分离。

本文中的单克隆抗体具体包括“嵌合”抗体(免疫球蛋白)，其中重链和/或轻链的一部分与来源于特定物种或属于特定抗体类别或亚类的抗体中的相应序列相同或同源，而链的其余部分与来源于另一种物种或属于另一种抗体类别或亚类的抗体中的相应序列相同或同源，以及这些抗体的片段，只要它们呈现所需生物活性即可(美国专利号4,816,567；以及Morrison等人(1984)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 81：6851-6855)。

“人源化”形式的非人(例如鼠)抗体是含有来源于非人免疫球蛋白的最小序列的嵌合抗体。对于最大的部分，人源化抗体是人免疫球蛋白(接受体抗体)，其中来自接受体高变区的残基被来自非人物种(诸如小鼠、大鼠、兔或非人灵长动物)的具有需要的特异性、亲和力和能力的高变区(供体抗体)的残基替代。在一些情形中，人免疫球蛋白的Fv框架区(FR)残基被相应的非人残基替代。此外，人源化抗体可以包含在接受体抗体中或在供体抗体中不存在的残基。进行这些修饰以进一步优化抗体性能。通常，人源化抗体将包含基本上全部的至少1个、并且典型2个可变结构域，其中全部或基本上全部的高变环与非人免疫球蛋白的那些对应，并且全部或基本上全部的FR区与人免疫球蛋白序列的那些对应。人源化抗体任选地还将包含免疫球蛋白恒定区(Fc)的至少一部分，典型地包含人免疫球蛋白恒定区的至少一部分。关于进一步的详情，参见Jones等人(1986)Nature 321：522-525；Riechmann等人(1988)Nature 332：323-329；和Presta(1992)Curr.Op.Struct.Biol.2：593-596。

如果包括抗体在内的蛋白质基本上保持完整的构象结构和生物学活性，则称其为“稳定的”。多种用于测量蛋白质稳定性的分析技术是本领域中可获得的并且综述于例如Peptide and Protein Drug Delivery，247-301，Vincent Lee Ed.，Marcel Dekker，Inc.，New York，N.Y.，Pubs.(1991)和Jones(1993)Adv.Drug Delivery Rev.10：29-90中。具有“改善的稳定性”的抗体变体是指与起始参比抗体相比更稳定的抗体变体。优选地，具有改善的稳定性的抗体变体是天然(野生型)抗体的变体，其中特定的氨基酸残基被改变以用于改善天然抗体的物理稳定性、和/或化学稳定性、和/或生物学活性、和/或降低其免疫原性。Walsh(2000)Nat.Biotech.18：831-3。

术语“异构化”通常是指这样一种化学过程，通过所述化学过程化学化合物被转化为其异构形式，即，具有相同的化学组成但是具有不同的结构或构型并且因此通常具有不同的物理和化学性质的形式。本文中具体使用的是天冬氨酸异构化，其是这样的过程，其中多肽的一个或多个天冬氨酸(D或Asp)残基被转化为异天冬氨酸(IsoAsp)和/或环状亚胺(Asu)残基。Geiger和Clarke(1987)J.Biol.Chem.262：785-94；Wakankar等人(2007)Biochem.46：1534-44。

术语“脱酰胺”通常是指这样的化学反应，其中酰胺官能团被从有机化合物除去。本文中具体使用的是天冬酰胺脱酰胺，其是这样的过程，其中多肽的一个或多个天冬酰胺(N或Asn)残基被转化为天冬氨酸(D或Asp)，即中性酰胺侧链被转化为整体具有酸性的残基。Xie和Schowen(1999)J.Pharm.Sci.88：8-13。

氨基酸残基“倾向”于某些鉴定的物理或化学过程(例如，异构化或脱酰胺)是指特定蛋白质分子内被鉴定为具有进行鉴定的过程(诸如异构化或脱酰胺)的倾向的那些残基。它们的倾向通常通过它们在蛋白质的一级和/或构象结构内的相对位置确定。例如，已经证明，Asp-XXX基序(其中XXX可以是Asp、Gly、His、Ser或Thr)中的第一个Asp由于其相邻残基的参与而倾向于Asp异构化，其中相同蛋白质内的一些其它Asp可能不具有这种倾向。用于在具体蛋白质分子内鉴定残基对某些过程的倾向性的测定是本领域中已知的。参见，例如，Cacia等人(1996)Biochem.35：1897-1903。

在本发明的抗-因子D抗体的语境中，“活性的”或“活性”或“生物活性”是对抗(部分或完全抑制)因子D的生物活性的能力。因子D拮抗剂的生物活性的一个实例是实现可测量的因子D相关疾病或病症(诸如例如补体相关性眼部病症)的状态(例如病理学)的改善的能力。可以在体外或体内测试中使用相关动物模型或人临床试验来确定活性，所述测试包括结合测定、备选途径溶血测定(例如测量备选途径补体活性或激活的抑制的测定)。

术语“补体相关性病症”以最广意义使用并且包括与过度或不受控的补体激活相关的病症。其包括心肺转流术期间的补体激活；由急性心肌梗塞、动脉瘤、卒中、出血性休克、挤压伤、多器官衰竭、低血容量性休克、肠缺血或其它引起缺血的事件之后的缺血-再灌注引起的补体激活。补体激活还已经被证明与炎症病症相关，所述炎症病症诸如严重烧伤、内毒素血症、脓毒性休克、成人呼吸窘迫综合征、血液透析；过敏性休克、严重哮喘、血管性水肿、克罗恩病(Crohn’s disease)、镰状细胞性贫血、链球菌感染后肾小球肾炎和胰腺炎。所述病况可以是不良药物反应、药物变态反应、IL-2诱导的血管渗漏综合征或放射摄影造影剂变态反应的结果。其还包括自身免疫疾病，诸如系统性红斑狼疮、重症肌无力、类风湿性关节炎、阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease)和多发性硬化。补体激活还与移植排斥相关。补体激活还与眼病相关，所述眼病诸如年龄相关性黄斑变性、糖尿病性视网膜病和其它缺血相关性视网膜病、脉络膜新血管形成(CNV)、葡萄膜炎、糖尿病性黄斑水肿、病理性近视、希佩尔-林道病、眼的组织胞浆菌病、视网膜中央静脉阻塞(CRVO)、角膜新血管形成和视网膜新血管形成。

术语“补体相关性眼病”或“补体相关性眼部病症”以最广意义使用并且包括病理学涉及补体(包括经典和备选途径，并且特别是补体的备选途径)的所有眼部病症。补体相关性眼部病症包括，但不限于，黄斑变性病(诸如所有阶段的年龄相关性黄斑变性(AMD)，包括干性和湿性(非渗出性和渗出性)形式)，脉络膜新血管形成(CNV)，葡萄膜炎，糖尿病性和其它缺血相关性视网膜病，以及其它眼内新生血管性疾病，诸如糖尿病性黄斑水肿、病理性近视、希佩尔-林道病、眼的组织胞浆菌病、视网膜中央静脉阻塞(CRVO)，角膜新血管形成和视网膜新血管形成。在一个实例中，补体相关性眼部病症包括年龄相关性黄斑变性(AMD)，包括非渗出性(例如中期干性AMD或地图状萎缩(GA))和渗出性(例如湿性AMD(脉络膜新血管形成(CNV))AMD，糖尿病性视网膜病(DR)，眼内炎和葡萄膜炎。在另外的实例中，非渗出性AMD可以包括硬玻璃疣、软玻璃疣、地图状萎缩和/或色素凝集的存在。在一个实例中，补体相关性眼部病症包括年龄相关性黄斑变性(AMD)，包括早期AMD(例如包括多个小的至一个或多个非渗出性的中等大小的玻璃疣)、中期AMD(例如包括大量的中等玻璃疣至一个或多个大玻璃疣)和晚期AMD(例如包括地图状萎缩或晚期湿性AMD(CNV)。(Ferris等人，AREDSReport No.18，；Sallo等人，Eye Res.，34(3)：238-40(2009)；Jager等人，NewEngl.J.Med.，359(1)：1735(2008))。在另外的实例中，中期干性AMD可以包括大的汇合的玻璃疣。在另外的实例中，地图状萎缩可以包括光感受器和/或视网膜色素上皮(RPE)损失。在另外的实例中，地图状萎缩的面积可以是小的或大的和/或可以是在黄斑区域中或在外围视网膜中。在一个实例中，补体相关性眼部病症是中期干性AMD。在一个实例中，补体相关性眼部病症是地图状萎缩。在一个实例中，补体相关性眼部病症是湿性AMD(脉络膜新血管形成(CNV))。

“地图状萎缩”，在本文中还称为“GA”，用在本文中是涉及与光感受器的损失相关的视网膜色素上皮(RPE)的变性的疾病。GA是干性AMD的晚期形式。

“GA面积”，用在本文中是指表示视网膜解剖学(例如，光感受器和视网膜色素上皮(RPE))丧失的离散面积。GA面积通过标准成像技术测量，诸如眼底自发荧光(FAF)和数码彩色眼底照相(CFP)。

“早期AMD”，用在本文中是以多个小的(＜63μιη)或＞1个中期玻璃疣(＞63μιη且＜125μιη)为特征的疾病。

“中期AMD”，用在本文中是以多个中期或＞1个大玻璃疣(＞125μιη)、通常伴有视网膜色素上皮的色素沉着过度或色素沉着不足为特征的疾病。

“晚期AMD”，用在本文中是以地图状萎缩(GA)或心血管(湿性)AMD为特征的疾病。

“治疗”是以阻止病症的病理学的发展或改变病症的病理学为目的而进行的干预。因此，“治疗”是指治疗性治疗和预防性或防预性的措施。需要治疗的那些包括已经患有病症的那些以及要预防病症的那些。在免疫相关疾病的治疗中，治疗剂可以直接改变免疫反应的组分的反应程度，或者通过其它治疗剂(例如抗生素、抗真菌剂、消炎剂、化疗剂等)使疾病对治疗更敏感。

疾病(诸如补体相关性病症)的“病理学”包括危及患者健康的所有现象。这包括，但不限于，异常或不受控的细胞生长(嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、单核细胞、淋巴细胞)、抗体产生、自身抗体产生、补体产生、干扰邻近细胞的正常功能、以异常水平释放细胞因子或其它分泌性产物、抑制或加重任何炎症反应或免疫反应、炎症细胞(嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、单核细胞、淋巴细胞)渗入到细胞空间中等。

如本文所使用的，术语“哺乳动物”是指被分类为哺乳动物的任何动物，包括但不限于人、高等灵长类、家养和农场动物，以及动物园动物、竞技动物或宠物，诸如马、猪、牛、狗、猫和雪貂等。在本发明的一些实施方案中，哺乳动物是人。

与一种或多种另外的治疗剂“组合”施用包括同时(并行)施用和以任何次序的连续施用。

“治疗有效量”是实现可测量的目标疾病或病症(诸如例如补体相关性眼部病症)的状态(例如病理学)的改善所需要的“因子D抗体”的量。

“药用”赋形剂(载体、添加剂)是可以合理地施用至受试者哺乳动物以提供有效剂量的所用活性成分的那些。

“稳定的”制剂是这样的制剂，其中在存储时，其中的蛋白质(例如抗-因子D抗体)基本上保留其物理稳定性和/或化学稳定性和/或生物活性。多种用于测量蛋白质稳定性的分析技术是本领域中可获得的并且综述于例如Peptide and Protein Drug Delivery，247-301，Vincent Lee Ed.，Marcel Dekker，Inc.，New York，N.Y.，Pubs(1991)和Jones，A.Adv.Drug Delivery Rev.10：29-90(1993)中。对于所选时间段，稳定性可以在所选温度测量。在一个实施方案中，制剂在室温或在40℃稳定至少1个月，和/或在2-8℃稳定至少1年并且优选稳定至少2年。在另一个实施方案中，冻干前制剂(本文中也称为“药物原料”或“DS”)在-20℃的储存温度稳定至少一年，或者稳定至少两年，或者稳定至少三年，或者稳定至少五年。在另外的实施方案中，冻干制剂在5℃的储存温度稳定至少一年，或者稳定至少两年，或者稳定至少三年，或者稳定至少四年，或者稳定至少五年。此外，制剂优选地在冷冻(冷冻至例如-70℃)和解冻所述制剂后是稳定的。

如果蛋白质(诸如抗-因子D抗体)在视觉检查颜色和/或澄清度时或者如通过UV光散射或通过尺寸排阻层析所测量的没有显示聚集、沉淀和/或变性的迹象，则该蛋白质在药物制剂中“保持其物理稳定性”。

如果给定时间下的化学稳定性使得蛋白质(例如抗-因子D抗体)被认为仍保持其如下定义的生物活性，则该蛋白质在药物制剂中“保持化学稳定性”。化学稳定性可以通过检测和定量蛋白质的化学改变形式来评价。化学改变可以涉及尺寸变化(例如剪切)，其例如可以使用尺寸排阻层析、SDS-PAGE和/或基质辅助激光解吸电离/飞行时间质谱(MALDI/TOF MS)来评价。其它类型的化学改变包括电荷改变(例如由于脱酰胺作用而发生)，其例如可以通过离子交换层析来评价。

如果抗体(例如抗-因子D抗体)在给定时间的生物活性处于药物制剂制备时展现的生物活性的约10％之内(在测定的误差内)(如抗原结合测定中所确定的)，则所述抗体在药物制剂中“保持其生物活性”。用于抗体的其它“生物活性”测定在下文中详细说明。

“等渗”意指目的制剂具有与人血基本上相同的渗透压。等渗制剂将通常具有约250至350mOsm/kg的渗透压。例如，可以使用蒸气压或冰冻式渗透压计来测量等渗性。

术语“冻干保护剂”是指保护蛋白质(例如抗体)免受由冻干产生的损伤的物质，诸如化学化合物或分子。优选地，冻干保护剂是多元醇。

“多元醇”是具有多个羟基的物质，并且包括糖(还原糖和非还原糖)、糖醇和糖酸。本文中优选的多元醇具有小于约600D的分子量(例如，在约120至约400D的范围内)。“还原糖”是含有可以还原金属离子或与蛋白质中的赖氨酸和其它氨基共价反应的半缩醛基的物质，并且“非还原糖”是不具有还原糖的这些性质的物质。还原糖的实例是果糖、甘露糖、麦芽糖、乳糖、阿拉伯糖、木糖、核糖、鼠李糖、半乳糖和葡萄糖。非还原糖包括蔗糖、海藻糖、山梨糖、松三糖和棉子糖。甘露醇、木糖醇、赤藓醇、苏糖醇、山梨醇和甘油是糖醇的实例。至于糖酸，这些包括L-葡糖酸盐及其金属盐。在希望制剂是冻融稳定的情况下，多元醇优选是在使得制剂中的抗体不稳定的冷冻温度(例如-20℃)不结晶的多元醇。多元醇(包括多元醇的混合物)可以用作本发明制剂中的冻干保护剂。非还原糖(诸如蔗糖和海藻糖)优选作为本文中抗-因子D抗体制剂中的冻干保护剂，其中蔗糖优选于海藻糖。

如本文所使用的，“缓冲剂”是指通过其酸-碱缀合物组分的作用抵抗pH变化的缓冲溶液。本发明的缓冲剂的pH在5.0至5.4的范围内；并且最优选具有约5.3的pH。将pH控制在此范围内的缓冲剂的实例包括组氨酸、乙酸盐(例如乙酸钠)、琥珀酸盐(例如琥珀酸钠)、葡糖酸盐、柠檬酸盐和其它有机酸缓冲剂。在需要冻融稳定的形成的情况下，缓冲剂优选不是磷酸盐。术语“缓冲剂”具体包括适合于在本文制剂中提供所需pH的两种以上缓冲剂的组合。

如本文所使用的，“表面活性剂”是指表面活性的试剂，通常是非离子表面活性剂。本发明的制剂包含一种或多种表面活性剂。因此，术语“表面活性剂”具体包括两种以上表面活性剂的混合物。合适的表面活性剂的实例包括：聚山梨醇酯(例如，聚山梨醇酯20和聚山梨醇酯80)；泊洛沙姆(例如，泊洛沙姆188)；Triton；十二烷基硫酸钠(SDS)；月桂基硫酸钠；辛基糖苷钠；月桂基-、肉豆蔻基-、亚油基-或硬脂基-磺基甜菜碱(sulfobetaine)；月桂基-、肉豆蔻基-、亚油基-或硬脂基-肌氨酸；亚油基-、肉豆蔻基-或鲸蜡基-甜菜碱；月桂酰胺丙基-、椰油酰胺丙基-、亚油酰胺丙基-、肉豆蔻酰胺丙基-、棕榈酰胺丙基-或异硬脂酰胺丙基-甜菜碱(例如月桂酰胺丙基)；肉豆蔻酰胺丙基-、棕榈酰胺丙基-或异硬脂酰胺丙基-二甲胺；甲基椰油酰基牛磺酸钠或甲基油烯基牛磺酸二钠；聚乙二醇、聚丙二醇、以及乙二醇和丙二醇的共聚物(例如Pluronics、PF68等)。在一些实施方案中，本文中的表面活性剂是聚山梨醇酯，例如聚山梨醇酯20或泊洛沙姆。

“防腐剂”是这样的化合物，例如，其可以包含在制剂中以基本上减少其中的细菌作用，由此促进产生多用途制剂。潜在的防腐剂的实例包括十八烷基二甲基苄基氯化铵、氯化六烃季铵、苯扎氯铵(其中烷基为长链化合物的烷基苄基二甲基氯化铵的混合物)和苄索氯铵(benzelthonium chloride)。其它类型的防腐剂包括芳族醇(诸如苯酚、丁醇和苯甲醇)、对羟基苯甲酸烷基酯(诸如对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯)、儿茶酚、间苯二酚、环己醇、3-戊醇和间甲酚。术语“防腐剂”具体包括两种以上防腐剂的混合物。本文中最优选的防腐剂是苯甲醇。

术语“长效递送”、“持续释放”和“受控释放”通常用于描述利用制剂、剂型、装置或其它类型的技术以实现治疗性药物的延长的或延展的释放或生物利用度的递送机制。其可以指向全身体循环或受试者或向受试者中的局部作用位点(包括但不限于细胞、组织、器官、关节、区域等)提供药物的延长的或延展的释放或生物利用度的技术。此外，这些术语可以指用于延长或延展药物从制剂或剂型的释放的技术，或者他们可以指用于延展或延长药物的生物利用度或药物动力学或对受试者的作用持续时间的技术，或者他们可以指用于延展或延长制剂引发的药物动力学效应的技术。“长效制剂”、“持续释放制剂”或“受控释放制剂”是用于提供长效递送的药物制剂、剂型或其它技术。在一个方面，受控释放用于改善药物的局部生物利用度，特别是在眼部递送的情况中，其用于改善眼部停留时间。“增加的眼部停留时间”是指递送后的时间段，在这期间递送的眼部药物在质量(保持活性)和数量(有效量)方面都保持有效。除了高剂量和受控释放以外或作为高剂量和受控释放的替代，药物可以被翻译后修饰(诸如经由PEG化)，以实现增加的体内半衰期。

II.发明详述

抗-因子D抗体制剂

本发明包括包含单克隆抗-因子D抗体的药物制剂及其制备和用于治疗补体相关性眼病的用途。

在一个方面，制剂中存在的抗-因子D抗体是人源化单克隆抗-因子D抗体。用于将非人抗体人源化的方法是本领域公知的。通常，人源化抗体具有从非人来源引入其中的一个或多个氨基酸残基。这些非人氨基酸残基通常被称为“进口”残基，其典型地取自“进口”可变结构域。人源化可以基本上遵循Winter及同事(Jones等人(1986)Nature 321：522-525；Riechmann等人(1988)Nature 332：323-327；Verhoeyen等人(1988)Science 239：1534-1536)的方法，通过用啮齿动物CDR或CDR序列置换人抗体的相应序列进行。因此，这种”人源化”抗体是嵌合抗体(美国专利号4,816,567)，其中基本上少于完整人可变结构域被来自非人物种的相应序列置换。实际上，人源化抗体典型地是这样的人抗体，其中一些CDR残基和可能的一些FR残基被来自啮齿动物抗体中的类似位点的残基置换。

在欲将抗体用于人治疗用途时，在一些情况下，用于制备人源化抗体的人可变结构域(轻链和重链两者)的选择可能对于降低抗原性和/或HAMA反应(人抗小鼠抗体)是重要的。减少或消除HAMA反应通常是临床开发合适的治疗剂的重要方面。参见，例如，Khaxzaeli等人(1988)J.Natl.Cancer Inst 80：937；Jaffers等人(1986)Transplantation 41：572；Shawler等人(1985)J.Immunol.135：1530；Sears等人(1984)J.Biol.Response Mod.3：138；Miller等人(1983)Blood 62：988；Hakimi等人(1991)J.Immunol.147：1352；Reichmann等人(1988)Nature 332：323；Junghans等人(1990)Cancer Res.50：1495。如本文所述，本发明提供被人源化从而减少或消除了HAMA反应的抗体。这些抗体的变体可以进一步使用本领域已知的常规方法获得，所述方法中的一些在下文中被进一步描述。根据所谓的“最佳-配合(best-fit)”方法，针对已知的人可变结构域序列的整个文库来筛选啮齿动物抗体的可变结构域的序列。鉴定与啮齿动物的V结构域序列最接近的人V结构域序列并且其中的人框架区(FR)被接受用于人源化抗体(Sims等人(1993)J.Immunol.151：2296；Chothia等人(1987)J.Mol.Biol.196：901)。另一种方法使用来源于所有特定轻链或重链亚组的人抗体的共有序列的特定框架区。相同的框架可以用于若干不同的人源化抗体(Carter等人(1992)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 89：4285；Presta等人(1993)J.Immunol.151：2623)。

例如，来自如本文描述的抗体的氨基酸序列可以充当用于框架和/或高变序列的多样化的起始(亲本)序列。选择的与起始高变序列相连的框架序列在本文中被称为受体人框架。虽然受体人框架可以来自或来源于人免疫球蛋白(其VL和/或VH区)，但是当这种框架被证明在人类患者中具有最小免疫原性或没有免疫原性时，受体人框架可以来自或来源于人共有框架序列。出于本文目的，“受体人框架”是这样的框架，其包含来源于人免疫球蛋白框架或来自人共有框架的VL或VH框架的氨基酸序列。“来源于”人免疫球蛋白框架或人共有框架的受体人框架可以包含其相同的氨基酸序列，或可以含有预先存在的氨基酸序列改变。当存在预先存在的氨基酸改变时，优选地存在不超过5个并且优选地4以下或3个以下预先存在的氨基酸改变。在一些实施方案中，VH受体人框架在序列上与VH人免疫球蛋白框架序列或人共有框架序列相同。在一些实施方案中，VL受体人框架在序列上与VL人免疫球蛋白框架序列或人共有框架序列相同。“人共有框架”是这样的框架，其代表在人免疫球蛋白VL或VH框架序列的选择中最常出现的氨基酸残基。通常，人免疫球蛋白VL或VH框架序列的选项来自可变结构域序列的亚组。通常，所述序列亚组是如在Kabat等人中的亚组。在一些实施方案中，对于VL，所述亚组是如在Kabat等人中的亚组κI。在一些实施方案中，对于VH，所述亚组是如在Kabat等人中的亚组III。

当受体来源于人免疫球蛋白时，可以在人框架序列的集合中任选地选择基于其与供体框架序列的同源性(通过将供体框架序列与不同人框架序列比对)选择的人框架序列，并且选择同源性最高的框架序列作为受体。受体人框架可以来自或来源于公众数据库中可获得的人抗体种系序列。

在一些实施方案中，本文中的人共有框架来自或来源于VH亚组VII和/或VLκ亚组I共有框架序列。

在一些实施方案中，用于产生抗-因子D抗体的人框架模板可以包含来自包含对于VH链的VI-4.1b+(VH7家族)和对于VL链的DPK4(VκI家族)和JK2的组合的模板的框架序列。

虽然受体可以在序列上与选择的人框架序列相同而不论其是来自人免疫球蛋白还是人共有框架，但是受体序列相对于所述人免疫球蛋白序列或人共有框架序列还可以包含预先存在的氨基酸置换。这些预先存在的置换优选地是最少的；通常是相对于所述人免疫球蛋白序列或共有框架序列的四个、三个、两个或一个氨基酸差异。

非人抗体的高变区残基被并入到VL和/或VH受体人框架中。例如，可以并入对应于Kabat CDR残基、Chothia高变环残基、Abm残基和/或接触残基的残基。任选地，并入如下的延长的高变区残基：24-36或24-34(L1)、46-56或50-56(L2)和89-97(L3)，26-35B(H1)，50-65、47-65或49-65(H2)和93-102、94-102或95-102(H3)。

本文中的抗体包括免疫球蛋白分子的所有类别和亚类，包括IgG1、IgG2、IgG3和IgG4；IgG1抗体是优选的。

在一些实施方案中，本文中的制剂中存在的抗-因子D抗体是人源化抗-因子D抗体的抗原结合片段，诸如例如Fab片段F(ab’)₂片段，优选Fab片段。

Fab抗体片段提供小尺寸、短血清半衰期和缺少效应子功能的优点，其有益于治疗性应用。因此，当需要不持续过去的剂量的瞬时系统活性时或当施用和活性局限于外周室(诸如眼睛)时，Fab分子是有利的。然而，已知几种蛋白酶切割IgG1抗体的铰链区中的抗体，这导致针对新表位的抗铰链抗体(AHA)。血清中预先存在的AHA可以充当替代Fc并重新引入缺乏抗体片段的Fc的性质，这是不合需要的。

Fab分子通常包含抗体的上游铰链的部分。这种抗体的上游铰链区充当Fab和Fc区之间的接头，但是在Fab分子中不具有结构或功能作用。Fab分子的重组表达提供了确定包含的上游铰链区长度的灵活性。已经发现上游铰链区中的C-末端截短和/或Fab片段的突变可以产生不具有可检测的预先存在的AHA的新表位，这提供了消除相关问题的实用途径。

抗-因子D抗体轻链和重链(包括具有C-末端截短的重链)的恒定区序列显示在图19中。

抗-因子D抗体Fab片段的轻链恒定区序列显示在图19中，其为SEQID NO：29。在一些实施方案中，Fab片段的重链的C-末端以序列CDKTHX(SEQ ID NO：52)结束，其中X是除T以外的任何氨基酸。本发明特别地包括包含抗-因子D抗体的制剂，所述抗-因子D抗体具有以下列氨基酸结束的Fab片段的重链的C-末端：“CDKTHT”(SEQ ID NO：11)、“CDKTHL”(SEQ IDNO：12)、“CDKTH”(SEQ ID NO：13)、“CDKT”(SEQ ID NO：14)、“CDK”(SEQ ID NO：15)或“CD”。C-末端处的截短和/或突变能够消除针对Fab的AHA反应性，而不危害热稳定性或表达。在一些实施方案中，Fab片段的重链的C-末端以氨基酸“CDKTHTC”(SEQ ID NO：16)、“CDKTHTCPPC”(SEQ ID NO：17)、“CDKTHTCPPS”(SEQ ID NO：18)、“CDKTHTSPPC”(SEQ ID NO：19)、“CDKTHTAPPC”(SEQ ID NO：20)、“CDKTHTSGGC”(SEQ ID NO：21)或“CYGPPC”(SEQ IDNO：22)结束。在一些这样的实施方案中，C-末端氨基酸中的游离半胱氨酸可以接受缀合至例如聚合物(诸如PEG)。在一些实施方案中，Fab片段包含选自SEQ ID NOs：30-42的IgG1重链恒定区(图19)。在一些实施方案中，Fab是IgG2或IgG4 Fab(参见例如SEQ ID NOs：37-43)(图19)。在一些实施方案中，Fab是包含SEQ ID NO：43(VERK；SEQ ID NO：23)的重链恒定区的IgG2 Fab片段，或包含SEQ ID NO：44(VERKC；SEQ ID NO：24)的重链恒定区的IgG2 Fab-C片段。在一些实施方案中，Fab是包含选自SEQ ID NO：46(KYGPP；SEQ ID NO：26)、SEQ IDNO：50(KYGP；SEQ ID NO：27)、SEQ ID NO：47(KYG，SEQ ID NO：28)、SEQ ID NO：48(KY)和SEQID NO：49(K)的重链恒定区的IgG4片段，或包含SEQ ID NO：45(KYGPPC；SEQ ID NO：25)的重链恒定区的IgG4 Fab-C片段。作为C末端处的截短和/或突变的替代方式，为了避免预先存在的抗铰链抗体(PE-AHA)应答，可以使用IgG1或IgG4 Fab片段，因为这些片段不显示PE-AHA应答。

抗体具有多种稳定性问题。由于其不弯曲性和对溶剂的可接近性，抗体的互补决定区(DCR)易受翻译后修饰的影响。已经报道了由CDR中的Trp氧化、Asn脱酰胺和Asp异构化引起的化学降解。

在一些实施方案中，本文中的抗-因子D抗体是易感于天冬酰胺(Asp)残基的异构化的人源化单克隆抗体，诸如在至少一个重链和/或轻链高变区(HVR)中包含Asp-Xaa基序的抗体，其中Xaa是Asp、Gly、His、Ser或Thr。

在一些实施方案中，本发明制剂中存在的单克隆抗-因子D抗体包含：与HVR1-HC：GYTFTNYGMN(SEQ ID NO：3)；HVR2-HC：WINTYTGETTYADDFKG(SEQ ID NO：4)；HVR3-HC：EGGVNN(SEQ IDNO：5)的HVR序列具有至少90％、或至少95％、或至少98％或至少99％序列同一性的重链高变区(HVR-HC)，和/或与HVR1-LC：ITSTDIDDDMN(SEQ ID NO：8)；HVR2-LC：GGNTLRP(SEQ ID NO：9)；和HVR3-LC：LQSDSLPYT(SEQ ID NO：10)的HVR-LC序列具有至少90％、或至少95％、或至少98％或至少99％序列同一性的轻链高变区(HVR-LC)。

在一些实施方案中，单克隆抗-因子D抗体包含：HVR1-HC：GYTFTNYGMN(SEQ ID NO：3)；HVR2-HC：WINTYTGETTYADDFKG(SEQ ID NO：4)；HVR3-HC：EGGVNN(SEQ ID NO：5)的HVR-HC，和/或HVR1-LC：ITSTDIDDDMN(SEQ ID NO：8)；HVR2-LC：GGNTLRP(SEQID NO：9)；和HVR3-LC：LQSDSLPYT(SEQ ID NO：10)的HVR-LC。

在一些实施方案中，本发明的制剂中存在的单克隆抗-因子D抗体包含与抗-因子D抗体变体AFD.v1-AFD.v15的重链和/或轻链CDR序列(参见图20)具有至少90％、或至少95％、或至少98％、或至少99％序列同一性的重链高变区(HVR-HC)。

在一些实施方案中，Fab片段的重链的C-末端以序列CDKTHX(SEQID NO：52)结束，其中X是除T以外的任何氨基酸。本发明特别地包括包含抗-因子D抗体变体(例如AFD.v1-AFD.v15)的制剂，所述抗-因子D抗体变体具有以下列氨基酸结束的Fab片段的重链的C-末端：“CDKTHT”(SEQ ID NO：11)、“CDKTHL”(SEQ ID NO：12)、“CDKTH”(SEQID NO：13)、“CDKT”(SEQ ID NO：14)、“CDK”(SEQ ID NO：15)或“CD”。如上所讨论的，C-末端处的截短和/或突变能够消除针对Fab的AHA反应性，而不危害热稳定性或表达。在一些实施方案中，抗-因子D抗体变体(例如AFD.v1-AFD.v15)的Fab片段的重链的C-末端以氨基酸“CDKTHTC”(SEQ ID NO：16)、“CDKTHTCPPC”(SEQ ID NO：17)、“CDKTHTCPPS”(SEQ ID NO：18)、“CDKTHTSPPC”(SEQ IDNO：19)、“CDKTHTAPPC”(SEQ ID NO：20)、“CDKTHTSGGC”(SEQ ID NO：21)或“CYGPPC”(SEQ IDNO：22)结束。在一些这样的实施方案中，C-末端氨基酸中的游离半胱氨酸可以接受缀合至例如聚合物(诸如PEG)。在一些实施方案中，Fab片段包含选自SEQ ID NOs：30至42的IgG1重链恒定区。在一些实施方案中，Fab是IgG2或IgG4 Fab(参见例如SEQ ID NOs：43至51)(图19)。因此，在一些实施方案中，Fab是包含SEQ ID NO：43(VERK；SEQ ID NO：23)的重链恒定区的IgG2 Fab片段，或包含SEQ ID NO：44(VERKC；SEQ ID NO：24)的重链恒定区的IgG2Fab-C片段。在一些实施方案中，Fab是包含选自SEQ ID NO：46(KYGPP，SEQ ID NO：26)、SEQID NO：50(KYGP，SEQ ID NO：27)、SEQ ID NO：47(KYG；SEQ ID NO：28)、SEQ ID NO：48(KY)和SEQ ID NO：49(K)的重链恒定区的IgG4片段，或包含SEQ ID NO：45(KYGPPC；SEQ ID NO：25)的重链恒定区的IgG4 Fab-C片段。

作为C末端处的截短和/或突变的替代方式，为了避免预先存在的抗铰链抗体(PE-AHA)应答，可以使用IgG1或IgG4 Fab片段，因为这些片段不显示PE-AHA应答。

在一些实施方案中，抗-因子D抗体是lampalizumab。

在一些实施方案中，抗体是抗-因子D抗体变体AFD.v8或AFD.v14。

包含在本发明制剂中的抗-因子D抗体(包括本文中的抗-因子D变体)也可以通过将抗体缀合至各种非蛋白质聚合物分子中的一种而进一步被共价修饰。抗体-聚合物缀合物可以使用任何合适的用聚合物衍生化抗体的技术来制备。应当理解，本发明不限于利用抗体或抗体片段与聚合物之间的任何特定类型的连接的缀合物。

在一个方面，本发明的缀合物包括这样的种类，其中聚合物共价连接至亲本抗体上的一个或多个特定位点，即聚合物连接靶向亲本抗体或抗体片段中的特定区域或一个或多个特定氨基酸残基。聚合物的位点特异性缀合最常见地是通过与亲本抗体或抗体片段中的半胱氨酸残基连接来实现的。在这样的实施方案中，偶联化学可以例如利用不在亲本抗体的二硫桥键中的半胱氨酸残基的游离巯基。聚合物可以用能够与亲本抗体上的一个或多个游离巯基或硫醇基团特异性反应的任何官能团(诸如马来酰亚胺、巯基、硫醇、三氟甲磺酸、对甲苯磺酸、氮杂环丙烷、exirane和5-吡啶基官能团)活化。可以使用适用于所选的偶联系统的化学的任何方案将聚合物偶联至亲本抗体，诸如美国专利号4,179,337；7,122,636以及Jevsevar等人(2010)Biotech.J.5：113-128中所描述的方案和系统。

在一些实施方案中，天然存在于亲本抗体中的一个或多个半胱氨酸残基被用作用于聚合物缀合的一个或多个连接位点。在一些实施方案中，将一个或多个半胱氨酸残基工程改造到亲本抗体中的所选择的一个或多个位点中以用于为聚合物提供一个或多个特定连接位点。

在一个方面，本发明涵盖包含抗体片段-聚合物缀合物的制剂，其中所述抗体片段是Fab，并且所述聚合物连接至通常将形成连接轻链和重链的链间二硫键的Fab片段的轻链或重链中的一个或多个半胱氨酸残基。

在另一个方面，本发明涵盖包含抗体片段-聚合物缀合物的制剂，其中所述抗体片段是Fab’(包括Fab-C)，并且聚合物连接靶向Fab’片段(包括Fab-C)的铰链区。在一些实施方案中，天然存在于抗体片段的铰链区中的一个或多个半胱氨酸残基被用于连接聚合物。在一些实施方案中，将一个或多个半胱氨酸残基工程改造到Fab’片段(包括Fab-C)的铰链区中以用于为聚合物提供一个或多个特定连接位点。先前已经描述了半胱氨酸工程改造的抗体(美国专利公开号2007/0092940和Junutula，J.R.等人，J.ImmunolMethods，Vol.332(1-2)，pp.41-52(2008)，全部通过引用整体结合于此)。在一些实施方案中，半胱氨酸工程改造的抗体可以是亲本抗体。这些可用于产生在特定位置(通常在恒定区，例如CL或CH1)具有游离半胱氨酸的抗体片段。经工程改造以含有半胱氨酸的亲本抗体可以称为“ThioMab”，并且由这种半胱氨酸工程改造的抗体制备的Fab片段(不论制备方法)可以称为“ThioMab”或“ThioFab”。如先前所描述的(参见例如美国专利公开号2007/0092940和Junutula，J.R.等人，J.Immunol Methods，Vol.332(1-2)，pp.41-52(2008))，对于具有替代的(“工程改造的”)半胱氨酸(Cys)残基的突变体，评价新引入的工程改造的半胱氨酸硫醇基团的反应性。硫醇反应性值是范围为0至1.0的相对数值项，并且可以对任何半胱氨酸改造的抗体进行测量。除具有反应性硫醇基团之外，应该选择ThioMab变异它们保持抗原结合能力。先前详细描述了半胱氨酸工程改造的抗体的设计、选择和制备(参见例如WO 201I/069104，其通过引用结合于此)。工程改造的半管氨酸优选被引入到重链或轻链的恒定结构域中。同样地，半胱氨酸工程改造的抗体将优选保持它们的野生型(亲本抗体对应物)的抗原结合能力，并且同样地能够与抗原特异性结合。在一些实施方案中，本发明的抗-因子D抗体变体Fab片段通过在C’-末端添加一个半胱氨酸进行修饰以用于为聚合物缀合物提供一个连接位点。在另一些实施方案中，本发明的抗-因子D抗体变体Fab片段通过在C’-末端添加四个另外的半胱氨酸Cys-Pro-Pro-Cys(SEQ ID NO：53)进行修饰以用于为聚合物缀合物提供两个连接位点。

一种常用的抗体缀合是PEG化，其中将一个或多个聚乙二醇(PEG)聚合物共价连接至抗体的恒定区。参见美国专利号4,179,337；7,122,636。具有不同大小(例如，约500D至约300,000D)和形状(例如，直链或支链)的PEG聚合物在本领域中是已知的且被广泛使用。可用于本发明的聚合物可以商业获得(例如，从Nippon Oil and Fats；NektarTherapeutics；Creaive PEGWorks获得)或使用常规化学程序从可商购的原料制备。PEG化改变抗体药物的物理和化学性质，并且可以导致改善的药物动力学表现，诸如改善的稳定性、降低的免疫原性、延长的循环寿命以及增加的停留时间。

如上所讨论的，最优选地，抗-因子D抗体是lampalizumab。

Lampalizumab是基于人IgG1同种型的人源化抗-因子D单克隆抗体的抗原结合片段(Fab)。Lampalizumab在大肠杆菌(E.coli)中生产并且由包含链间和链内二硫键的一个部分重链和一个轻链组成。Lampalizumab针对补体因子D。因子D是高度特异的胰凝乳蛋白酶样丝氨酸蛋白酶，其是备选补体途径的激活中的限速酶。因子D的底物是另一种备选途径丝氨酸蛋白酶，因子B。在被因子D切割后，因子B转变为具有蛋白水解活性的因子Bb并且引发备选补体途径。已经在玻璃疣中发现了增加的对备选补体途径的激活，玻璃疣是出现在玻璃膜(Bruch’s membrane)上的细胞毒性沉积物，其与年龄相关性黄斑变性(AMD)的发展相关。(Despriet DD等人，(2006).Complement factor H polymorphism，complementactivators，and risk of age-related macular degeneration(补体因子H多晶型、补体激活剂和年龄相关性黄斑变形的风险).JAMA 296(3)：301-9。备选途径补体激活在AMD中的作用已经进一步被遗传学支持，其显示了因子H(一种备选补体途径激活的负调节剂)中的突变与增大的发展AMD的风险高度相关。Lampalizumab活性对备选途径具有特异性，并且对经典途径激活不显示抑制作用。Lampalizumab抑制因子D介导的因子B的切割，阻止备选补体途径激活，并且由此抑制激活的补体组分的炎症和细胞毒性活性(Atkinson JP和FrankMM(2006).Bypassing Complement：Evolutionary Lessons and Future Implications.JClin Invest 116(5)：1215-18)。

WO2015/023596中描述了这样的药物组合物，所述药物组合物包含作为在意欲用于ITV施用的6-cc USP/Ph.1型玻璃小瓶中的无菌的、白色至灰白色的冻干粉末的lampalizumab药物产品(DP)。每个玻璃小瓶包含标称的40mg的lampalizumab。需要用无菌注射用水(SWFI)(USP/Ph.Eur.)重构药物产品。在重构后，将药物产品配制成在40mM L-组氨酸盐酸盐、20mM氯化钠、180mM蔗糖、0.04％(w/v)聚山梨醇酯20、pH 5.5中的100mg/mLlampalizumab。药物产品不含有防腐剂，并且仅适于单次使用。

在一个方面，本发明涉及改善的lampalizumab制剂，包括冻干前制剂、冻干制剂和重构的制剂。

本发明解决的一个问题是玻璃体的pH为约7.4，并且这必须与lampalizumab制剂的最高可接受的pH相平衡。实际上，lampalizumab在可接受的pH范围的较高端(约pH 5.8)具有有限的溶解性。通过增加离子强度或降低制剂的pH可以改善溶解性。然而，由于将酸性溶液注射到人玻璃体会引起安全性问题，因此pH必须保持在相对窄的范围内。通过增加制剂中的NaCl浓度而不降低pH也可以改善溶解性。然而，制剂中另外1mM的NaCl会除去约2mM蔗糖的以维持张度。先前的研究已经表明，当用低的糖与蛋白质比率进行配制时，冻干蛋白质的聚集率显著较高。(Cleland，JL等人(2001).A Specific Molar Ratio of Stabilizerto Protein is Required for Storage Stability of a Lyophilized MonoclonalAntibody.J Pharm Sci：90(3)：310-21)。因此，这种方法将导致糖的次优浓度，因为DP必须近似等渗以被认为对于玻璃体内施用是安全的。因此，为了维持合适的糖与蛋白质比率和溶解性并满足安全性要求，必须探索其它方法来维持DP稳定性，同时改善lampalizumab溶解性。

施用途径不仅限制了制剂的渗透压和pH，还限制了可以使用的赋形剂种类。例如，由于乙酸是挥发性的并且可以在冻干期间从制剂中除去，所以像组氨酸乙酸盐的组分不适用于本发明的制剂(其在重构之前进行冻干)。

本发明提供了适用于眼内(优选玻璃体内)施用的抗-因子D抗体的改善的药物制剂，其包含低于5.5的pH下的抗-因子D抗体，并且还适用于玻璃体内施用。优选地，pH为5.0、5.1、5.2、5.3或5.4。制剂可以包括在合适的pH下提供制剂的任何缓冲剂，优选地排除使用双重缓冲剂(诸如磷酸盐/柠檬酸盐缓冲剂)。示例性的合适的缓冲剂包括柠檬酸钠、琥珀酸钠和组氨酸缓冲剂。为了本发明的目的，组氨酸缓冲剂是优选的，其不仅可以提供所需的pH，而且还具有冻干保护特性。

在一些实施方案中，抗-因子D抗体制剂经历冻干并且在施用前重构。因此，本文的制剂优选包括一种或多种冻干保护剂。冻干保护剂包括如上定义的多元醇(糖)，诸如蔗糖或海藻糖；氨基酸，诸如谷氨酸一钠或组氨酸；甲胺，诸如甜菜碱；感胶离子盐，诸如硫酸镁；多元醇，诸如三元或更高级的糖醇，例如甘油(glycerin)、赤藓醇、甘油(glycerol)、阿糖醇、木糖醇、山梨醇和甘露醇；丙二醇；聚乙二醇；普朗尼克(Pluronics)；及其组合。优选的冻干保护剂是非还原性多元醇，诸如海藻糖或蔗糖，优选蔗糖。

本文中的制剂还可以包括一种或多种填充剂，即增加冻干混合物质量并有助于冻干饼的物理结构的化合物(例如，促进生成基本均匀的冻干饼，其保持开放孔结构)。示例性的填充剂包括甘露醇、甘氨酸、聚乙二醇和山梨醇。

本文中的制剂可以进一步包括一种或多种表面活性剂(例如聚山梨醇酯)，因为在本文中已经观察到这可以减少重构的蛋白质的聚集和/或减少重构的制剂中颗粒的形成。如有需要，可以将表面活性剂添加到冻干前制剂、冻干制剂和/或重构的制剂(但是优选冻干前制剂)中。

由于重构的制剂不旨在长期储存，所以本文的制剂中通常不需要存在防腐剂。然而，可以制备包含防腐剂的制剂。潜在的防腐剂的实例包括十八烷基二甲基苄基氯化铵、氯化六烃季铵、苯扎氯铵(其中烷基为长链化合物的烷基苄基二甲基氯化铵的混合物)和苄索氯铵。其它类型的防腐剂包括芳族醇(诸如苯酚、丁醇和苯甲醇)、对羟基苯甲酸烷基酯(诸如对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯)、儿茶酚、间苯二酚、环己醇、3-戊醇和间甲酚。本文中最优选的防腐剂是苯甲醇。

在一些实施方案中，本文中的制剂包含单克隆抗-因子D抗体、适用于调节pH在5.0-5.4的范围内的缓冲剂、多元醇和表面活性剂。优选地，pH为约5.3，缓冲剂是组氨酸缓冲剂，多元醇是蔗糖，并且表面活性剂是聚山梨醇酯。

在一些实施方案中，相同的成分存在于冻干前制剂、冻干制剂和重构的制剂中。

在一些实施方案中，冻干前制剂包含约25mg/mL抗-因子D抗体。

在一些实施方案中，重构的制剂包含约100mg/mL抗-因子D抗体。

抗-因子D抗体制剂的用途

本发明的制剂(包含识别因子D作为其靶标的抗体)可以用于治疗补体相关性眼部病症。补体相关性眼部病症包括，例如，黄斑变性病(诸如所有阶段的年龄相关性黄斑变性(AMD)，包括干性和湿性(非渗出性和渗出性)形式)，脉络膜新血管形成(CNV)，葡萄膜炎，糖尿病性和其它缺血相关性视网膜病，眼内炎，以及其它眼内新生血管性疾病，诸如糖尿病性黄斑水肿、病理性近视、希佩尔-林道病、眼的组织胞浆菌病、视网膜中央静脉阻塞(CRVO)，角膜新血管形成和视网膜新血管形成。

在一个实例中，补体相关性眼部病症包括年龄相关性黄斑变性(AMD)，包括非渗出性(湿性)和渗出性(干性或萎缩性)AMD，脉络膜新血管形成(CNV)，糖尿病性视网膜病(DR)，眼内炎和葡萄膜炎。

在另一个实例中，AMD是干性AMD，包括特征为地图状萎缩的晚期形式。

在一个实例中，补体相关性眼部病况是地图状萎缩。在一个实例中，补体相关性眼部病况是湿性AMD(脉络膜新血管形成(CNV))。

本文的抗-因子D抗体制剂通过眼内施用(优选玻璃体内注射)施用。典型剂量是约10mg/眼，每4或6周施用一次，或者每2-6周施用一次，或者每2周通过玻璃体内注射施用。

在一些实施方案中，本文的制剂用于治疗地图状萎缩(GA)，即年龄相关性黄斑变性(AMD)的晚期形式，其是可以导致失明的进行性病症。可以通过确定GA疾病进展速率的降低来评价功效，所述速率被定义为受影响的眼的GA病变面积相对于基线的平均变化，如通过已知技术诸如眼底自发荧光(FAF)(用于提供关于黄斑中GA病变的大小和类型的信息的成像技术)所测量的。次要功效终点着重于评价lampalizumab治疗对患者视觉功能的影响。

本发明的抗-因子D制剂可以与一种或多种另外的治疗剂组合使用。在某些实施方案中，另外的治疗剂是适用于治疗补体相关性眼病的治疗剂。在一些实施方案中，另外的治疗剂适用于治疗与眼内不需要的新血管形成相关的眼部病症，诸如例如湿性AMD。在一些实施方案中，另外的治疗剂是另一种补体定向的治疗剂，包括另一种因子D拮抗剂，诸如另一种抗-因子D抗体。

例如，本文的抗-因子D抗体制剂可以与有效量的VEGF拮抗剂(诸如抗-VEGF抗体)组合施用，任选地与另一种因子D拮抗剂(诸如另一种抗-因子D抗体)组合施用。抗-VEGF抗体在例如2015年2月26日公布的美国专利号6,884,879，WO98/45331；WO2005/012359；WO2005/044853；和WO98/45331中描述。在各种实施方案中，与本文的抗-因子D抗体制剂组合施用的抗-VEGF药物包括(贝伐单抗)和/或(雷珠单抗)，任选地与至少一种另外的因子D拮抗剂/抗体组合。

本文的抗-因子D抗体制剂还可以与有效量的HTRA1拮抗剂(诸如例如抗-HTRA1抗体)组合施用，其任选地与至少一种另外的因子D拮抗剂/抗体组合施用。抗-HTRA1抗体在例如WO 2013055998 A1中描述。

本文的抗-因子D抗体制剂还可以与有效量的血管生成素-2(Ang2)拮抗剂(诸如抗-Ang2抗体)组合施用，其任选地与至少一种另外的因子D拮抗剂/抗体组合施用。抗-Ang2抗体在例如US 20090304694 A1中描述。

本文的抗-因子D抗体制剂可以进一步与有效量的TIE2拮抗剂(诸如抗-TIE2抗体)组合施用，其任选地与至少一种另外的因子D拮抗剂/抗体组合施用。抗-TIE 2抗体在美国专利号6,376,653中描述。

适用于与本文抗-因子D抗体制剂组合施用的其它治疗剂是经典或备选补体途径的各种成员的拮抗剂(补体抑制剂)。因此，本文的制剂可以与C1、C2、C3、C4、C5、C6、C7、C8和C9补体组分中的一种或多种的拮抗剂组合施用。在一些实施方案中，本文的抗-因子D制剂与C2和/或C4和/或C5补体组分的拮抗剂(诸如抗-C2和/或抗-C4和/或抗-C5抗体)组合。这种抗体是本领域中已知的和/或是可商购的。抗-C5抗体eculizumab(Alexion，Cheshire，CT，USA)已被批准用于治疗阵发性夜间血红蛋白尿(Paroxysmal nocturnalhemoglobinuria)(PNH)和非典型溶血性尿毒症综合征(aHUS)。其它补体抑制剂在例如美国公开号20050036991A1中公开。因此，本文的抗-因子D抗体制剂可以与有效量的一种或多种补体抑制剂(包括但不限于抗-C2和抗-C5抗体)组合施用，任选地与至少一种另外的因子D拮抗剂/抗体组合施用。

抗-因子D抗体可以与两种以上所列出的治疗剂组合施用，并且通常与两种以上适用于治疗补体相关性眼病(包括与眼中不需要的新血管生成相关的眼部病症)的治疗剂组合施用。VEGF、HTRA1、Ang2和TIE2中的两种以上或者两种以上补体组分结合的双特异性和多特异性抗体特别地包含在可以与本发明抗-因子D制剂组合使用的治疗剂的组中，其任选地与另一种抗-因子D拮抗剂/抗体组合使用。

本文中的组合施用包括使用分开的制剂或单个药物制剂的共同施用，以及以任何顺序的连续施用，其中两种(或全部)活性剂同时发挥其生物学活性通常需要一段时间。

这些第二药物通常以相同的剂量并且以如前文所用的施用途径使用，或以迄今为止采用的剂量的约1％至99％使用。如果完全使用这种第二药物，则优选地，它们以比不存在抗-因子D抗体或其抗原结合片段的情况更低的量使用，尤其在用抗体初始给药后的后续给药中使用，以消除或减少其引起的副作用。

在第二药物以有效量与抗体暴露一起施用的情况中，其可以与任意暴露一起施用，例如仅与一次暴露或与多于一次暴露一起施用。在一些实施方案中，第二药物与初始暴露一起施用。在一些实施方案中，第二药物与初始暴露和第二次暴露一起施用。在一些实施方案中，第二药物与所有的暴露一起施用。

组合施用包括使用分开的制剂或单个药物制剂的共同施用(同时施用)，以及以任何顺序的连续施用，其中优选地两种(或全部)活性剂同时发挥其生物学活性需要一段时间。在一些实施方案中，在初始暴露后，减少或消除所述药剂的量，从而减少受试者对具有副作用的药剂的暴露，所述具有副作用的药剂诸如泼尼松和环磷酰胺，尤其是当所述药剂是皮质类固醇时。在一些实施方案中，第二药物的量没有减少或消除。

通过以下非限制性实施例举例说明本发明的进一步细节。以下实施例是以说明性而非限制性的方式提供的。除非另有说明，实施例中提到的市售试剂根据制造商的说明书使用。

在以下实施例中，术语药物原料(Drug Substance，DP)和药物产品(DrugProduct，DP)定义如下：

药物原料(Drug Substance，DS)：是指在填充和冻干前含有活性药物成分的冷冻或液态制剂。

药物产品(Drug Product，DP，冻干的)：是指在小瓶或其它容器中含有活性药物成分的冻干固态制剂。

药物产品(Drug Product，DP，重构的)：是指在将稀释剂添加到小瓶或其它容器后含有活性药物成分的液态制剂。

药物产品(Drug Product，DP，没有限定术语)：是指在小瓶或其它容器中含有活性药物成分的冻干固态制剂。

在以下实施例中，DP相对于DS是4X浓缩的。

实施例1

材料和方法

使用配备有Millipore 10kDa Pellicon XL 50超滤盒(Cat#PXC010C50)的Millipore Labscale^TMTFF系统，将用于以下实施例中的研究的所有药物原料(DS)和药物产品(DP)制剂透析到它们各自的渗滤缓冲液(不含糖或表面活性剂)中。通过用调节缓冲液进行稀释将糖和表面活性剂添加到每种制剂中。

A.NaCl浓度确定

进行溶解性研究以确定适当的NaCl水平以确保DP中强lampalizumab溶解性，所述DP具有5.0-5.5的可接受的DP pH范围、90-110mg/mL的蛋白质浓度范围以及40mM的HisCl浓度。首先将Lampalizumab彻底透析到pH 5.6的30mM HisCl中。Lampalizumab不完全溶于该溶液。然后将水、来自1M储备液的NaCl和pH 5.6的30mM HisCl与透明玻璃HPLC小瓶(ThermoScientific Cat#C4010-V1)中的透析的lampalizumab相组合，以产生具有115mg/mL的最终蛋白质浓度和高达40mM的不同NaCl浓度的样品。选择的条件提供了样品条件与最高可接受pH、最高可接受蛋白质浓度和最低预期HisCl浓度之间的差距(考虑到潜在的Donnan效应)。将样品保持在环境实验室温度以研究作为碱性电荷变体水平的函数的溶解依赖性。

B.制剂筛选

在由溶解性研究确定合适的目标pH和NaCl水平后，确定待筛选的一组制剂。制剂1和3是相同的，除了用作冷冻保护剂/冻干保护剂的糖的类型以外(分别为蔗糖和海藻糖)。筛选中包括制剂2和4以研究制剂1和制剂3的聚集率，其具有较低的糖浓度和高的蛋白质浓度，这导致劣等的糖与蛋白质比率。包括制剂5以研究从制剂中除去氯化钠的DP稳定性，并且增加组氨酸氯化物浓度以确保lampalizumab在DP中的溶解性等于制剂1。已知氯化钠降低冻干饼的崩解温度(collapse temperature)。因此包括制剂6以研究在冻干和储存期间较高的NaCl水平对冻干饼物理稳定性的影响。选择制剂1、3、5和6中的糖浓度，使得目标DP渗透压为约330mOsm/kg。包括制剂7作为研究对照。

将DS样品以1mL等分试样装入高压灭菌的2cc玻璃小瓶中，用13mm液体塞塞住，并且用13mm铝制翻转盖(flip-top cap)盖住。将DP样品以2mL等分试样装入高压灭菌的6cc玻璃小瓶中，并且在冻干前用20mm冻干塞部分地塞住。冻干后，将小瓶用20mm铝制翻转盖盖住。冻干后，所有DP制剂含有0.6-0.8％(w/w)水分。DP制剂用纯化水重构至最终体积为500μL，使得lampalizumab和所有赋形剂的浓度比冻干前的DS中的浓度高4倍。取决于制剂组成，每个样品的重构体积在440-452μL间变化。

C.测定

颜色、外观和澄清度

使用配备有白色荧光灯的光检测站，相对于纯化水目视评价样品外观。在重构之前和之后对DP的外观进行评价。

浊度

通过对340、345、350、355和360nm处的UV吸光度取平均值来评价浊度(前向散射)。使用Agilent Hp8453分光光度计(水作为空白)，在1cm路径长度的石英比色杯中简洁地分析样品。

pH

使用标准化为pH＝4.00和7.00溶液的Mettler-Toledo Seven Multi pH计测量溶液pH。

蛋白质浓度(通过UV扫描)(重量稀释)

使用HP8453UV分光光度计，通过UV扫描确定Lampalizumab浓度。使用lampalizumab DS制剂缓冲液，将样品重量稀释至约0.5mg/mL。在路径长度为1em的石英比色杯中测量吸光度。仪器用DS制剂缓冲液作为空白。根据下列等式，使用278nm处的吸光度(A₂₇₈)、320nm处的吸光度(A₃₂₀)、稀释因子(D)和1.39(mg/mL)^-1cm^-1的消光系数ε来计算蛋白质浓度：

根据以下等式计算稀释因子，其中m是质量：

D＝(1.05g/mL×m_{稀释的样品})/(1.01g/mL×m样品)

使用每个样品的重复稀释物和吸光度测量来确定蛋白质浓度。

分子大小分布(通过尺寸排阻层析(SEC-HPLC))

使用配备有280nm处的UV检测的Agilent 1200高压液相层析(HPLC)系统，通过在TosoHaas TSK G2000SWXL(7.8mm x 300mm)尺寸排阻柱上分离尺寸变体来确定lampalizumab样品的分子大小分布。将样品在流动相(0.2M磷酸钾，0.25M氯化钾，pH 6.2)中稀释至约2mg/mL的浓度，并且储存在2-8℃直至注射。在环境温度下使用0.7mL/min的流速对35μL的样品注射进行分析。注射Lampalizumab批次FCD508-1作为参比材料，并且DS制剂缓冲液用于试剂空白。相对于基线，将峰面积积分。使用重复样品注射物来确定分子大小分布。

电荷异质性(通过离子交换层析(IEC))

使用具有280nm处的UV检测的Agilent 1200高压液相层析(HPLC)系统，通过在Thermo Fisher ScientificSAX-10，4×250mm强阴离子交换柱上分离电荷变体来确定lampalizumab样品的电荷异质性。用pH 8.2的20mM 2-氨基-2-甲基-1，3-丙二醇(AMPD)将样品稀释至2mg/mL，并且使用NAP^TM 5柱将缓冲液交换到20mM AMPD，并且储存于2-8℃直到注射。在50分钟内，使用AMPD中的25mM至200mMNaCl(pH 8.2)的线性梯度，在40℃将50μL的样品注射物以0.8mL/min的流速在柱上分离。然后用在AMPD中的500mM NaCl(pH8.2)将柱洗涤10分钟。注射批次FCD508-1作为参比材料，并且DS制剂缓冲液用于试剂空白。

毛细管电泳-十二烷基硫酸钠(非还原性)(CE-SDS)

使用具有LIF检测的毛细管电泳(CE)Beckman PA800plus系统确定未还原的lampalizumab样品的纯度。通过在16分钟的运行时间内在31em毛细管(10cm到检测器)上施加15kV电压差来获得分离。毛细管温度保持在20℃。用十二烷基硫酸钠(SDS)使样品变性，并且将其用3-(2-呋喃甲酰基)喹诺酮-2-甲醛(FQ染料)进行荧光标记。注射Lampalizumab作为参比材料，并且DS制剂缓冲液用于试剂空白。相对于基线将峰面积积分，并且将峰面积的值除以迁移时间以得到校正的峰面积(CPA)。仅在选择的时间点通过NR CE-SDS监测制剂1样品以减少样品负荷。

结合(通过ELISA)

高结合聚苯乙烯微量滴定板的孔用因子D包被，洗涤，暴露于制剂缓冲液中不同浓度的lampalizumab，并洗涤。然后将平板暴露于山羊抗-F(ab’)₂-HRP抗体并洗涤。然后将SureBlue Reserve溶液添加到每个孔中并且在添加0.6N硫酸之前进行温育。然后在450nm(650nm参考吸光度)测量每个孔的光密度值，以确定每个孔中的lampalizumab浓度。

亚可见颗粒(通过掩光法)

将HIAC 9703颗粒计数器用于计数尺寸大于或等于2、5、10、25和50μm的亚可见颗粒的数量。每个样品总共进行四次0.4mL的注射。报告的颗粒计数表示最后三次运行的平均值(丢弃第一次运行)。

水分

如下进行容量卡尔费希尔(Karl Fischer)水分测定。将来自单个DP小瓶的饼压碎并放入15mL样品管中，并且使用填充有复合2容量卡尔费希尔试剂的Mitsubishi Model RV 2AJ-511TIX机器人滴定系统进行分析。在样品分析之前，将该仪器用脱水酒石酸钠标准化。

渗透压

使用Advanced Instruments 3300渗透压计，一式三份地通过冰点降低确定lampalizumab样品的渗透压。

实施例2

制剂研究

lampalizumab制剂含有以下成分：组氨酸盐酸盐一水合物、组氨酸游离碱、氯化钠、蔗糖、海藻糖二水合物和聚山梨醇酯20。筛选的药物原料(DS)制剂的清单列于表1中。

结果

A.稳定剂浓度确定

为了证实lampalizumab的溶解性是基本电荷变体水平的函数，将新鲜的和应激的lampalizumab同时透析到pH 5.6的30mM HisCl和12mMNaCl至终浓度为115mg/mL。通过以下方法产生应激的lampalizumab：用0.1N HCl将新鲜材料滴定至pH 5.5并将其在50℃温育18小时，然后将其在40℃温育18小时。这种所得样品含有27％基本电荷变体(通过IEC)。

图2显示在透析后，新鲜材料在环境温度完全可溶(澄清溶液，无浑浊)，但是应激材料并非如此(浑浊的白色溶液)。

图3显示了当含有11％碱性电荷变体的lampalizumab在pH 5.6的30mM HisCl中以115mg/mL配制时，需要12mM的NaCl以保持溶解性(澄清溶液，无浑浊)。然而，当样品在室温储存23天直到碱性电荷变体水平为23％时，需要24mM的NaCl以保持溶解性。在环境温度储存期间未观察到酸性电荷变体的变化。该NaCl浓度还允许足够低的亚可见颗粒水平，以通过掩光法来满足USP<789>标准。

B.制剂筛选

1.DS

表2、表3和表4中分别显示了在实时、加速和应激条件下储存在小瓶中的DS制剂的原始数据。在30℃(应激条件)储存长达四周的过程中，在DS制剂之间并未观察到尺寸变体或电荷变体形成速率的差异(分别为图4和图5)。假设零级动力学，对于制剂1-6，主峰损失的速率(通过IEC)在12.4-12.9％/周中变化。在30℃储存四周后，制剂7DS的效力从98％降低至87％结合(Q12713)。

在5℃(加速条件)储存长达八周的过程中，在DS制剂之间并未观察到尺寸变异或电荷变体形成速率的差异。在-20℃储存DS长达24周的过程中，在任何制剂中均未观察到尺寸变体(通过SEC)或电荷变体的水平的变化(分别为图6和图7)。在-20℃储存12周后，通过NR CE-SDS，在制剂1DS中未观察到尺寸变体水平的变化(数据未显示)。发现所有DS制剂含有在其目标值的8％以内的组氨酸浓度，如通过游离氨基酸分析所确定的。

2.DP

表5A和5B、6A和6B以及7A和7B中分别显示了在实时、加速和应激条件下储存的DP制剂的原始数据。如所预期的，在时间为零时制剂1、3、5和6的渗透压均为330±10mOsm/kg。图8显示了在40℃/75％RH(应激条件)储存DP长达四周的过程中尺寸变体的变化。制剂3和4中尺寸变体形成的增加分别大于制剂1和2。这表明在应激条件下，相比于海藻糖，蔗糖更好地限制了DP中的lampalizumab聚集。图9显示了在40℃/75％RH的聚集速率与DP中的糖与蛋白质比率呈负相关。图10显示了在时间为零时以及在40℃/75％RH储存两周和四周后的制剂1SEC层析的覆盖图。在应激条件下在DP中形成的主要尺寸变体是二聚体种类；在应激条件下长达四周时形成了最小的较高分子量种类。图11显示了在40℃/75％RH储存DP长达四周的过程中电荷变体水平的变化。在制剂之间并未观察到电荷变体形成速率的明显趋势。然而，相比于基于海藻糖的制剂，基于蔗糖的制剂似乎具有更低的电荷变体水平。

图12显示了在25℃/60％RH(加速条件)储存DP长达12周的过程中尺寸变体的变化。25℃/60％RH下的聚集速率与40℃/75％RH下的聚集速率具有良好的相关性，并且进一步表明在高温储存DP期间限制lampalizumab聚集的方面海藻糖次于蔗糖。在25℃/60％RH(加速条件)储存DP长达12周的过程中，在所有制剂之间并未观察到电荷变体形成速率的差异(数据未显示)。在5℃储存长达24周的过程中，在DP中并未观察到尺寸变体(通过SEC)或电荷变体水平的变化(分别为图13和图14)。在5℃储存12周后，通过NR CE-SDS，在制剂1DP中未观察到尺寸变体水平的变化(数据未显示)。

过论

A.NaCl浓度确定

图2显示了lampalizumab在给定溶液中的溶解性随着碱性电荷变体水平的增加而降低。因此，在确定确保lampalizumab溶解性所需的NaCl浓度时，控制碱性电荷变体水平是重要的。图3所示的溶解性研究支持在100±10mg/mL的蛋白质浓度、28±4mM的NaCl浓度和40±10mM的HisCl浓度下高达5.5的DP pH，以允许制造DS中的变化性并且确保含有高达22％碱性电荷变体的lampalizumab的强溶解性。

B.制剂筛选

在-20℃储存六个月、在5℃储存八周或在30℃储存四周后，在候选DS制剂之间并未检测到尺寸或电荷变体形成速率的差异。因此，制剂选择基于DP制剂稳定性的评价。

冻干保护剂筛选

基于DP制剂3和4分别相对于制剂1和2的聚集速率，似乎在加速和应激条件下使lampalizumab聚集最小化的方面海藻糖不如蔗糖有效(图8和12)。另外，含有海藻糖的DP制剂中的电荷变体水平在应激条件下比在含有蔗糖的等价制剂中的电荷变体水平更快地增加(图11)。因此，选择蔗糖作为lyoprotectant制剂的冻干保护剂种类。虽然相比于蛋白质/蔗糖系统，冻干的蛋白质/海藻糖系统在低含水量下具有更高的玻璃转变温度(Duddu等人(1997).The Relationship Between Protein Aggregation and Molecular MobilityBelow the Glass Transition Temperature of Lyophilized Formulations Containinga Monoclonal Antibody.Pharm Research 14(5)：596-600；Pikal MJ等人(2008).SolidState Chemistry of Proteins：II.The Correlation of Storage Stability ofFreeze-Dried Human Growth Hormone(hGH)with Structure and Dynamics in theGlassy Solid.J Pharm Sci：97(12)：5106-21)，但是先前已经显示了蔗糖是降低聚集和化学降解速率的优异冻干保护剂(Pikal等，同上)。Pikal等人表明化学降解和聚集速率可能与快速动态时间常数(如通过中子散射所测量的)相关，而不是与固体制剂的储存温度和玻璃转变温度之间的差异相关，并且与海藻糖相比，蔗糖对快速动力学显示出更高的抑制(Pikal等人，同上)。在时间为零时，所有DP制剂的水分含量在0.6至0.8％w/w之间，因此残余水分不太可能导致基于蔗糖和基于海藻糖的制剂之间降解速率的差异。

制剂选择

如所预期的，DP中的聚集速率在应激条件下与糖与蛋白质比率呈负相关(图9)。这表明理想的是使制剂中的蔗糖量最大化。在筛选出的六种制剂中，制剂1和5具有最高的蔗糖水平(不计入对照)。在研究的所有储存条件下，在制剂1和制剂5之并未观察到DS或DP稳定性的差异。然而，在制剂选择时，对于玻璃体内施用含有大于40mM的HisCl的溶液尚不存在已知的临床经验。制剂5含有64mM的HisCl，并且因此通过增加DP的缓冲能力而呈现另外的临床风险。因此，相对于其它制剂，在施用制剂5时，玻璃体的平衡pH将会更低。因此，制剂1比制剂5更优选，因为它具有较低的临床风险。另外，在含有15mM的NaCl的制剂6中并未观察到饼崩解或过度的不稳定性。这表明制剂1中的7mM的NaCl不可能导致任何冻干饼崩解或宏观物理不稳定性。

使用所选制剂配制的药物原料(冻干前)和药物产品(冻干)在推荐的储存条件下(对于药物原料为-20℃，并且对于药物制品为5℃)稳定长达两年，如表9以及10A和10B中列出的稳定性数据所证实的。

Claims

1.一种药物制剂，所述药物制剂包含治疗有效量的单克隆抗-因子D抗体、调节pH到5.0至5.4的缓冲剂、冻干保护剂和表面活性剂。

2.根据权利要求1所述的药物制剂，其中所述pH为约5.3。

3.根据权利要求1或权利要求2所述的药物制剂，其中所述冻干保护剂与抗体的比率是约60至100摩尔冻干保护剂∶1摩尔抗体。

4.根据权利要求3所述的药物制剂，其中所述冻干保护剂与抗体的比率是约80摩尔冻干保护剂∶1摩尔抗体。

5.根据权利要求1至4中任一项所述的药物制剂，其中所述缓冲剂是组氨酸缓冲剂。

6.根据权利要求5所述的药物制剂，其中所述组氨酸缓冲剂以约5mM至约15mM的量存在。

7.根据权利要求6所述的药物制剂，其中所述组氨酸缓冲剂以约7mM至约13mM的量存在。

8.根据权利要求1至7中任一项所述的药物制剂，其中所述冻干保护剂包含一种或多种多元醇。

9.根据权利要求8所述的药物制剂，其中所述多元醇中的至少一种是还原糖或非还原糖。

10.根据权利要求9所述的药物制剂，其中所述还原糖是α，α-海藻糖。

11.根据权利要求9所述的药物制剂，其中所述非还原糖是蔗糖。

12.根据权利要求8所述的药物制剂，其中所述多元醇中的至少一种是二糖。

13.根据权利要求1至10中任一项所述的药物制剂，其中所述表面活性剂包含一种或多种聚山梨醇酯和/或泊洛沙姆。

14.根据权利要求13所述的药物制剂，其中所述聚山梨醇酯是聚山梨醇酯20。

15.根据权利要求1至14中任一项所述的药物制剂，其中所述单克隆抗-因子D抗体包含：与HVR1-HC：GYTFTNYGMN(SEQ ID NO：3)；HVR2-HC：WINTYTGETTYADDFKG(SEQ ID NO：4)；HVR3-HC：EGGVNN(SEQ ID NO：5)的HVR序列具有至少98％或至少99％序列同一性的重链高变区(HVR-HC)，和/或与HVR1-LC：ITSTDIDDDMN(SEQ ID NO：8)；HVR2-LC：GGNTLRP(SEQ IDNO：9)；和HVR3-LC：LQSDSLPYT(SEQ ID NO：10)的HVR-LC序列具有至少98％或至少99％序列同一性的轻链高变区(HVR-LC)。

16.根据权利要求15所述的药物制剂，其中所述单克隆抗-因子D抗体包含：HVR1-HC：GYTFTNYGMN(SEQ ID NO：3)；HVR2-HC：WINTYTGETTYADDFKG(SEQ ID NO：4)；HVR3-HC：EGGVNN(SEQ ID NO：5)的HVR-HC，和/或HVR1-LC：ITSTDIDDDMN(SEQ ID NO：8)；HVR2-LC：GGNTLRP(SEQ ID NO：9)；和HVR3-LC：LQSDSLPYT(SEQ ID NO：10)的HVR-LC。

17.根据权利要求15或16所述的药物制剂，其中所述单克隆抗-因子D抗体包含：与SEQID NO：2的重链的可变区序列具有至少85％、或至少90％、或至少95％、或至少98％、或至少99％序列同一性的重链可变区序列，和/或与SEQ ID NO：7的轻链的可变区序列具有至少85％、或至少90％、或至少95％、或至少98％、或至少99％序列同一性的轻链可变区序列。

18.根据权利要求17所述的药物制剂，其中所述单克隆抗-因子D抗体包含：SEQ ID NO：2的重链的可变区序列，和/或SEQ ID NO：7的轻链的可变区序列。

19.根据权利要求18所述的药物制剂，其中所述单克隆抗-因子D抗体包含：包含SEQ IDNO：2的重链序列，和/或包含SEQ ID NO：7的轻链序列。

20.根据权利要求1至19中任一项所述的药物制剂，其中所述单克隆抗-因子D抗体是IgG抗体。

21.根据权利要求20所述的药物制剂，其中所述单克隆抗-因子D抗体是IgG1抗体。

22.根据权利要求1至21中任一项所述的药物制剂，其中所述单克隆抗-因子D抗体是抗体片段。

23.根据权利要求22所述的药物制剂，其中所述抗体片段是Fab片段。

24.根据权利要求1至23中任一项所述的药物制剂，其中所述单克隆抗-因子D抗体是人源化的。

25.根据权利要求1至24中任一项所述的药物制剂，其中所述单克隆抗-因子D抗体是lampalizumab。

26.根据权利要求1至25中任一项所述的药物制剂，其用于眼内施用。

27.根据权利要求26所述的药物制剂，其用于玻璃体内施用。

28.根据权利要求1至27中任一项所述的药物制剂，其是无菌的。

29.根据权利要求1至28中任一项所述的药物制剂，其在冷冻和解冻时是稳定的。

30.根据权利要求1至29中任一项所述的药物制剂，其是冻干前制剂。

31.根据权利要求20所述的药物制剂，其在-20℃储存温度下稳定至少一年。

32.根据权利要求31所述的药物制剂，其在-20℃储存温度下稳定至少两年。

33.根据权利要求1至29中任一项所述的药物制剂，其是冻干的。

34.根据权利要求33所述的药物制剂，其在5℃储存温度下稳定至少一年。

35.根据权利要求34所述的药物制剂，其在5℃储存温度下稳定至少两年。

36.一种重构的水性液体制剂，其由权利要求1至35中任一项所述的药物制剂制备。

37.根据权利要求36所述的重构的水性液体制剂，其通过重构权利要求33至35中任一项所述的冻干制剂而直接制备。

38.一种冻干前或冻干药物制剂，所述药物制剂包含治疗有效量的单克隆抗-因子D抗体、调节pH到5.0至5.4的约5mM至约15mM的组氨酸缓冲剂、氯化钠、冻干保护剂和表面活性剂。

39.根据权利要求38所述的冻干前或冻干药物制剂，其中所述抗-因子D抗体包含：与HVR1-HC：GYTFTNYGMN(SEQ ID NO：3)；HVR2-HC：WINTYTGETTYADDFKG(SEQ ID NO：4)；HVR3-HC：EGGVNN(SEQ ID NO：5)的HVR序列具有至少98％或至少99％序列同一性的重链高变区(HVR-HC)，和/或与HVR1-LC：ITSTDIDDDMN(SEQ ID NO：8)；HVR2-LC：GGNTLRP(SEQ ID NO：9)；和HVR3-LC：LQSDSLPYT(SEQ ID NO：10)的HVR-LC序列具有至少98％或至少99％序列同一性的轻链高变区(HVR-LC)。

40.根据权利要求39所述的冻干前或冻干药物制剂，其中所述单克隆抗-因子D抗体包含：HVR1-HC：GYTFTNYGMN(SEQ ID NO：3)；HVR2-HC：WINTYTGETTYADDFKG(SEQ ID NO：4)；HVR3-HC：EGGVNN(SEQ ID NO：5)的重链高变区(HVR-HC)，和/或HVR1-LC：ITSTDIDDDMN(SEQID NO：8)；HVR2-LC：GGNTLRP(SEQ ID NO：9)；和HVR3-LC：LQSDSLPYT(SEQ ID NO：10)的轻链高变区(HVR-LC)。

41.根据权利要求39所述的冻干前或冻干药物制剂，其中所述单克隆抗-因子D抗体包含：与SEQ ID NO：2的重链具有至少85％、或至少90％、或至少95％、或至少98％、或至少99％序列同一性的重链可变区序列，和/或与SEQ ID NO：7的轻链具有至少85％、或至少90％、或至少95％、或至少98％、或至少99％序列同一性的轻链可变区序列。

42.根据权利要求41所述的冻干前或冻干药物制剂，其中所述单克隆抗-因子D抗体包含：包含SEQ ID NO：2的重链序列，和/或包含SEQ ID NO：7的轻链序列。

43.根据权利要求38至42中任一项所述的冻干前或冻干药物制剂，其中所述单克隆抗-因子D抗体是IgG抗体。

44.根据权利要求43所述的冻干前或冻干药物制剂，其中所述单克隆抗-因子D抗体是IgG1抗体。

45.根据权利要求38至44中任一项所述的冻干前或冻干药物制剂，其中所述单克隆抗-因子D抗体是抗体片段。

46.根据权利要求45所述的冻干前或冻干药物制剂，其中所述抗体片段是Fab片段。

47.根据权利要求38至46中任一项所述的冻干前或冻干药物制剂，其中所述单克隆抗-因子D抗体是人源化的。

48.根据权利要求47所述的冻干前或冻干药物制剂，其中所述单克隆抗-因子D抗体是lampalizumab。

49.根据权利要求48所述的冻干前或冻干药物制剂，其包含约25mg/mL的lampalizumab。

50.根据权利要求1至49中任一项所述的冻干前或冻干药物制剂，其中在所述冻干制剂中，所述冻干保护剂与抗体的比率是约60至100摩尔冻干保护剂∶1摩尔抗体。

51.根据权利要求1至49中任一项所述的冻干前或冻干药物制剂，其中在所述冻干制剂中，蔗糖与抗体的比率是约80摩尔冻干保护剂∶1摩尔抗体。

52.一种重构的水性液体制剂，其由权利要求38至51中任一项所述的冻干药物制剂制备。

53.根据权利要求36、37或52所述的重构的制剂，其用于眼内施用。

54.根据权利要求53所述的重构的制剂，其用于玻璃体内施用。

55.根据权利要求52至54中任一项所述的重构的制剂，其是无菌的。

56.根据权利要求52至55中任一项所述的重构的制剂，其包含约100mg/mL的lampalizumab。

57.一种重构的水性液体药物制剂，所述药物制剂包含治疗有效量的单克隆抗-因子D抗体、约20mM至约60mM的组氨酸氯化物、多元醇、氯化钠和表面活性剂。

58.根据权利要求57所述的重构的制剂，其中所述抗-因子D抗体包含：与HVR1-HC：GYTFTNYGMN(SEQ ID NO：3)；HVR2-HC：WINTYTGETTYADDFKG(SEQ ID NO：4)；HVR3-HC：EGGVNN(SEQ ID NO：5)的HVR序列具有至少98％或至少99％序列同一性的重链高变区(HVR-HC)，和/或与HVR1-LC：ITSTDIDDDMN(SEQ ID NO：8)；HVR2-LC：GGNTLRP(SEQ ID NO：9)；和HVR3-LC：LQSDSLPYT(SEQ ID NO：10)的HVR-LC序列具有至少98％或至少99％序列同一性的轻链高变区(HVR-LC)。

59.根据权利要求58所述的重构的制剂，其中所述单克隆抗-因子D抗体包含：HVR1-HC：GYTFTNYGMN(SEQ ID NO：3)；HVR2-HC：WINTYTGETTYADDFKG(SEQ ID NO：4)；HVR3-HC：EGGVNN(SEQ ID NO：5)的重链高变区(HVR-HC)，和/或HVR1-LC：ITSTDIDDDMN(SEQ ID NO：8)；HVR2-LC：GGNTLRP(SEQ ID NO：9)；和HVR3-LC：LQSDSLPYT(SEQ ID NO：10)的HVR-LC序列的轻链高变区(HVR-LC)。

60.根据权利要求57所述的重构的制剂，其中所述单克隆抗-因子D抗体包含：与SEQ IDNO：2的重链具有至少85％、或至少90％、或至少95％、或至少98％、或至少99％序列同一性的重链可变区序列，和/或与SEQ ID NO：7的轻链具有至少85％、或至少90％、或至少95％、或至少98％、或至少99％序列同一性的轻链可变区序列。

61.根据权利要求60所述的重构的制剂，其中所述单克隆抗-因子D抗体包含：包含SEQID NO：2的重链序列，和/或包含SEQ ID NO：7的轻链序列。

62.根据权利要求57至61中任一项所述的重构的制剂，其中所述单克隆抗-因子D抗体是IgG抗体。

63.根据权利要求62所述的重构的制剂，其中所述单克隆抗-因子D抗体是IgG1抗体。

64.根据权利要求57至63中任一项所述的重构的制剂，其中所述单克隆抗-因子D抗体是抗体片段。

65.根据权利要求64所述的重构的制剂，其中所述抗体片段是Fab片段。

66.根据权利要求57至65中任一项所述的重构的制剂，其中所述单克隆抗-因子D抗体是人源化的。

67.根据权利要求66所述的重构的制剂，其中所述抗-因子D抗体是lampalizumab。

68.根据权利要求57至67中任一项所述的重构的制剂，其用于玻璃体施用。

69.根据权利要求57至68中任一项所述的重构的制剂，其是无菌的。

70.根据权利要求57至69中任一项所述的重构的制剂，其包含约100mg/mLlampalizumab。

71.根据权利要求57至70中任一项所述的重构的制剂，其具有相当于约37至88mM氯化钠的离子强度。

72.根据权利要求71所述的重构的制剂，其具有相当于约63mM氯化钠的离子强度。

73.一种包含单克隆抗-因子D抗体的冻干制剂，其中所述冻干制剂在重构时产生水性液体制剂，所述水性液体制剂包含治疗有效量的所述抗-因子D抗体、约20mM至约60mM的组氨酸氯化物、多元醇、氯化钠和表面活性剂。

74.根据权利要求73所述的冻干制剂，其中在所述冻干制剂中，所述多元醇与抗体的比率是约80摩尔多元醇∶1摩尔抗体。

75.根据权利要求74所述的药物制剂，其中在所述冻干制剂中，所述多元醇与抗体的比率是约80摩尔多元醇∶1摩尔抗体。

76.根据权利要求73至75所述的冻干制剂，其中所述抗-因子D抗体包含：与HVR1-HC：GYTFTNYGMN(SEQ ID NO：3)；HVR2-HC：WINTYTGETTYADDFKG(SEQ ID NO：4)；HVR3-HC：EGGVNN(SEQ ID NO：5)的HVR序列具有至少98％或至少99％序列同一性的重链高变区(HVR)，和/或与HVR1-LC：ITSTDIDDDMN(SEQ ID NO：8)；HVR2-LC：GGNTLRP(SEQ ID NO：9)；和HVR3-LC：LQSDSLPYT(SEQ ID NO：10)的HVR-LC序列具有至少98％或至少99％序列同一性的轻链高变区(HVR-LC)。

77.根据权利要求76所述的冻干制剂，其中所述单克隆抗-因子D抗体包含：HVR1-HC：GYTFTNYGMN(SEQ ID NO：3)；HVR2-HC：WINTYTGETTYADDFKG(SEQ ID NO：4)；HVR3-HC：EGGVNN(SEQ ID NO：5)的重链高变区(HVR-HC)，和/或HVR1-LC：ITSTDIDDDMN(SEQ ID NO：8)；HVR2-LC：GGNTLRP(SEQ ID NO：9)；和HVR3-LC：LQSDSLPYT(SEQ ID NO：10)的轻链高变区(HVR-LC)。

78.根据权利要求77所述的冻干制剂，其中所述单克隆抗-因子D抗体包含：与SEQ IDNO：2的重链具有至少85％、或至少90％、或至少95％、或至少98％、或至少99％序列同一性的重链可变区序列，和/或与SEQ ID NO：7的轻链具有至少85％、或至少90％、或至少95％、或至少98％、或至少99％序列同一性的轻链可变区序列。

79.根据权利要求78所述的冻干制剂，其中所述单克隆抗-因子D抗体包含：包含SEQ IDNO：2的重链序列，和/或包含SEQ ID NO：7的轻链序列。

80.根据权利要求73至79中任一项所述的冻干制剂，其中所述单克隆抗-因子D抗体是IgG抗体。

81.根据权利要求80所述的冻干制剂，其中所述单克隆抗-因子D抗体是IgG1抗体。

82.根据权利要求73至81中任一项所述的冻干制剂，其中所述单克隆抗-因子D抗体是抗体片段。

83.根据权利要求82所述的冻干制剂，其中所述抗体片段是Fab片段。

84.根据权利要求73至83中任一项所述的冻干制剂，其中所述单克隆抗-因子D抗体是人源化的。

85.根据权利要求84所述的冻干制剂，其中所述抗-因子D抗体是lampalizumab。

86.根据权利要求73至85中任一项所述的冻干制剂，其中通过重构产生的所述水性液体制剂用于玻璃体内施用。

87.根据权利要求73至86中任一项所述的冻干制剂，其是无菌的。

88.根据权利要求73至87中任一项所述的冻于制剂，其包含约100mg/mLlampalizumab。

89.根据权利要求73至88中任一项所述的冻干制剂，其中通过重构产生的所述水性液体制剂具有相当于约37至88mM氯化钠的离子强度。

90.根据权利要求89所述的冻干制剂，其中通过重构产生的所述水性液体制剂具有相当于约63mM氯化钠的离子强度。

91.根据权利要求73至90中任一项所述的冻干药物制剂，其在5℃储存温度下稳定至少一年。

92.根据权利要求91所述的冻干制剂，其在5℃储存温度下稳定至少两年。

93.一种用于玻璃体内注射的注射器，所述注射器包含权利要求36和52至72中任一项所述的重构的制剂，或者通过重构权利要求73至92中任一项所述的冻干制剂产生的水性液体制剂。

94.一种制备药物制剂的方法，所述方法包括：

(a)制备权利要求1至92中任一项所述的制剂；和

(b)评价所述制剂中所述单克隆抗-因子D抗体的物理稳定性、化学稳定性或生物活性。

95.一种治疗补体相关性眼病的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用权利要求36和52至72中任一项所述的重构的制剂，或者通过重构权利要求73至92中任一项所述的冻干制剂产生的水性液体制剂。

96.根据权利要求95所述的方法，其中所述补体相关性眼病选自由以下各项组成的组：年龄相关性黄斑变性(AMD)、糖尿病性视网膜病、脉络膜新血管形成(CNV)、葡萄膜炎、糖尿病性黄斑水肿、病理性近视、希佩尔-林道病、眼的组织胞浆菌病、视网膜中央静脉阻塞(CRVO)、角膜新血管形成和视网膜新血管形成。

97.根据权利要求96所述的方法，其中所述AMD是干性AMD。

98.根据权利要求97所述的方法，其中所述干性AMD的特征在于地图状萎缩。

99.根据权利要求95至98中任一项所述的方法，其中所述制剂通过玻璃体内注射施用。

100.权利要求36和52至72中任一项所述的重构的制剂或者通过重构权利要求73至92中任一项所述的冻干制剂产生的水性液体制剂用于治疗补体相关性眼病的用途。

101.根据权利要求100所述的用途，其中所述补体相关性眼病选自由以下各项组成的组：年龄相关性黄斑变性(AMD)、糖尿病性视网膜病、脉络膜新血管形成(CNV)、葡萄膜炎、糖尿病性黄斑水肿、病理性近视、希佩尔-林道病、眼的组织胞浆菌病、视网膜中央静脉阻塞(CRVO)、角膜新血管形成和视网膜新血管形成。

102.根据权利要求101所述的用途，其中所述AMD是干性AMD。

103.根据权利要求102所述的用途，其中所述干性AMD的特征在于地图状萎缩。

104.根据权利要求100至103中任一项所述的用途，其中所述制剂用于玻璃体内施用。