KR20110102914A - 점토 혼입된 효모 조성물 및 이의 사용방법 - Google Patents

점토 혼입된 효모 조성물 및 이의 사용방법 Download PDF

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Abstract

본 발명은 효모 세포 및/또는 효소 세포 성분을 포함하는 조성물 및 이를 제조하고 사용하는 방법에 관한 것이다. 특히, 본 발명은 변화된 세포벽 구조[예: 세포벽(들) 및/또는 변화된 글루칸/만난 비를 포함하는 세포벽(들) 내로 통합된(예: 혼입된) 점토 및/또는 점토 성분(들)]를 포함하는 신규한 효모, 이의 제조방법, 이를 포함하고/하거나 이로부터 유도된 조성물, 및 이를 (예: 박테리아 및 톡신의 포획 및/또는 흡수에) 사용하는 방법을 제공한다. 본 발명의 조성물 및 방법은 연구 분야 뿐만 아니라 식이(예: 사료와의 혼합 또는 동물에 대한 급식), 치료적, 예방적(예: 상부재(床敷材) 공급원 및/또는 동물과 접촉되는 다른 물질과의 혼합, 식품 및 음료의 가공과 제조 동안의 사용 및 액체의 여과 동안의 사용) 분야를 포함하는 다양한 분야에 사용된다.

Description

점토 혼입된 효모 조성물 및 이의 사용방법 {Clay Interlaced Yeast compositions and methods of utilizing the same}
본 발명은, 전체 내용이 본원에서 참조로서 인용되는, 2009년 1월 14일자로 출원된 미국 가특허원 제61/144,620호를 우선권으로 주장한다.
발명의 분야
본 발명은 효모 세포 및/또는 효소 세포 성분을 포함하는 조성물 및 이를 제조하고 사용하는 방법에 관한 것이다. 특히, 본 발명은 변화된 세포벽 구조[예: 세포벽(들) 및/또는 변화된 글루칸/만난 비를 포함하는 세포벽(들) 내로 통합된(예: 혼입된) 점토 및/또는 점토 성분(들)]를 포함하는 신규한 효모, 이의 제조방법, 이를 포함하고/하거나 이로부터 유도된 조성물, 및 이를 (예: 박테리아 및 톡신의 포획 및/또는 흡수에) 사용하는 방법을 제공한다. 본 발명의 조성물 및 방법은 연구 분야 뿐만 아니라 식이(예: 사료와의 혼합 또는 동물에 대한 급식), 치료적, 예방적(예: 상부재(床敷材) 공급원 및/또는 동물과 접촉되는 다른 물질과의 혼합, 식품 및 음료의 가공과 제조 동안의 사용 및 액체의 여과 동안의 사용) 분야를 포함하는 다양한 분야에 사용된다.
발명의 배경
진균은 세계적으로 편재하고 있고, 이들은 대부분 통상 미세하게 작기 때문에 눈에 띄지 않는다. 마이코톡신은 진균에 의해 분비된 2차 대사산물이다. 마이코톡신은 다양한 농업 산물 상에서 성장하는 다수의 진균 종에 의해 생성된 독성 및/또는 발암성 화합물이다. 마이코톡신의 예에는, 이로써 한정되는 것은 아니지만, 아플라톡신, 푸모니신스, 오크라톡신 A, 데옥시니발레놀(a.k.a. "DON" 또는 "보미톡신"), 파툴린 및 제아르알레논이 포함된다. 마이오톡신은 수확 전에, 수확 동안 및 수확 후에 사료 뿐만 아니라 곡물 내에서 종종 생성된다. 몇몇 마이코톡신은 치명적이고, 몇몇은 확인불가능한 질환 및 건강 문제를 유발하며, 몇몇은 당해 마이코톡신에 특이적인 징후의 생성 없이 면역계를 약화시키고, 몇몇은 알레르겐 또는 자극원으로서 작용하고, 몇몇은 동물 또는 사람에 대한 비공지된 효과를 갖는다. 마이코톡신 오염의 가장 큰 경제적 효과는 식품 및 급식 생산업자 뿐만 아니라 작물 및 가축 생산업자가 느끼고 있다. 마이코톡신은 식물 생성물의 진균 감염의 결과로서 먹이 사슬에서 나타날 수 있고, 사람이 직접 먹거나 가축 사료(들)의 오염에 의해 도입될 수 있다. 마이코톡신은 물 뿐만 아니라 유기 물질(예: 상부재)을 오염시키고, 소화 동안 분해에 대해 매우 내성이 있으며, 따라서 이들은 식용 생성물(예: 육류, 계란 및 낙농 제품)에서 먹이 사슬에 잔류한다. 전 세계의 어떤 지역도 마이코톡신 및 동물 및 사람 건강에 대한 이들의 부작용을 벗어나지 못한다. 사료의 국제 무역의 발전은 곡류 블렌드가 마이코톡신과의 조합물을 소정 식이로 제공하고 독특한 및 뜻밖의 마이코톡신이 이의 기후 조건과 무관하게 소정 영역에 존재할 기회를 증가시킨다.
마이코톡신 발생을 피하기 위해 사용되는 전략은 마이코톡신 생성을 가능하게 하는 요소를 조절하고, 곰팡이 성장을 조절하고, 적절한 샘플링, 검출 및 정량화 방법을 통한 식품 및 급식의 품질 조절을 실시하는 것을 수반한다.
마이코톡신의 부작용을 감소시키기 위해, 이들의 흡수 특성에 대해 공지된, 점토, 벤토나이트 및 알루미노실리케이트 등의 무기 물질이 역사적으로 사료에 첨가되어 왔다. 사료 첨가물들은 대량으로 동물의 위장관에서 몇몇 마이코톡신을 포획하고 이들의 부작용을 최소화시킨다. 그러나, 첨가물은 동물에게 중요한 다수의 유익한 영양소(예: 비타민, 무기질 및 아미노산)의 흡수를 방해하여 식이의 영양 밀도를 감소시킨다. 더욱이, 사료 첨가물, 특히 동물 급식에서 사료 첨가물은 매우 유해한 환경 효과를 갖는다.
산, 염기(예: 암모니아, 가성 소다), 산화제(예: 과산화수소, 오존), 환원제(예: 비설파이트), 염소화제 및 포름알데히드 등의 화학제는 오염된 급식 중의 마이코톡신, 특히 아플라톡신의 분해에 사용되어 왔다[참조:예들들어 Hagler 1991; Phillips et al 1994; Lemke et al 2001]. 그러나, 이들 기술은 효율적이지 않고, 고가이며, 현저한 양의 화학적 폐기물을 생성하고, 종종 일반적으로 불안전하다.
락트산 박테리아의 특정 균주, 즉 프로피오니박테리아 및 비피도박테리아는 마이코톡신에 결합하고[참조:예를들어 Ahokas et al 1998; El-Nemazi et al 1998; Yoon et al 1999] 동물 체내에서 이들의 생체이용율을 제한하는 세포벽 구조를 갖는다. 그러나, 이들 생물학적 과정(biological process)은 일반적으로 느리고, 독성 대사산물을 생성하고, 비효율적이다.
발명의 요약
몇몇 양태에서, 본 발명은 효모 세포벽 내로 혼입된 점토 또는 점토 성분을 포함하는 효모 세포벽을 포함하는 효모 세포를 제공한다. 몇몇 양태에서, 효모 세포는 점토를 포함하는 세포 배양 배지에서 배양된다. 몇몇 양태에서, 점토는 실리케이트 그룹에 속하는 광물 점토 또는 합성 점토이다. 몇몇 양태에서, 점토는 제올라이트, 벤토나이트, 알루미노실리케이트, 몬트모릴로나이트, 스멕타이트, 카올리나이트, 유기점토 및 이들의 혼합물로부터 선택된다. 몇몇 양태에서, 점토는 알루미노실리케이트 점토이다. 몇몇 양태에서, 세포 배양 배지 중의 점토의 양은 약 0.125% 내지 4.0%이다. 몇몇 양태에서, 세포 배양 배지 중의 점토의 양은 0.125% 내지 4.0%이다. 몇몇 양태에서, 세포 배양 배지 중의 점토의 양은 약 0.5% 내지 2.0%이다. 몇몇 양태에서, 효모는 사카로마이세스(Saccharomyces), 칸디다(Candida), 클루이베로마이세스(Kluyveromyces), 토룰라스포라(Torulaspora) 및 이들의 조합으로부터 선택된다. 몇몇 양태에서, 효모는 사카로마이세스 세레비지애(Saccharomyces cerevisiae)이다.
몇몇 양태에서, 본 발명은 점토 또는 점토 성분 혼입된 효모 세포벽 추출물을 포함하는 조성물을 제공한다. 몇몇 양태에서, 점토 또는 점토 성분 혼입된 효모 세포벽 추출물(clay component interlaced yeast cell wall extract)은 점토를 포함하는 성장 배지에서 배양된 효모 세포로부터 유래된다. 몇몇 양태에서, 효모 세포벽 추출물의 제조에는 유리 비드 및 비드 비터(bead beater)가 사용된다. 몇몇 양태에서, 효모 세포벽 추출물의 제조에는 효소적 처리가 사용된다. 몇몇 양태에서, 점토 또는 점토 성분 혼입된 효모 세포벽 추출물은 사료에 첨가된다. 몇몇 양태에서, 사료는 완전 혼합 사료(Total Mixed Ration; TMR), 사료, 펠렛, 농축물, 프리믹스, 부산물, 곡물, 증류기 곡물, 당밀, 섬유, 마초, 목초, 건초, 낟알, 잎, 곡류, 용해물 및 보충물로부터 선택된다. 몇몇 양태에서, 점토 또는 점토 성분 혼입된 효모 세포벽 추출물은 유기 물질에 첨가된다. 몇몇 양태에서, 점토 또는 점토 성분 혼입된 효모 세포벽 추출물은 물에 첨가된다. 몇몇 양태에서, 액체는 점토 또는 점토 성분 혼입된 효모 세포벽 추출물을 통해 여과된다. 몇몇 양태에서, 액체는 쥬스, 물, 맥주 또는 와인이다. 몇몇 양태에서, 당해 조성물은 동물계의 임의 구성원에게 급식하기 위해 제형화된다. 몇몇 양태에서, 동물계의 구성원은 조류, 소, 돼지, 말, 양 및 염소, 어류, 조개, 낙타, 고양이, 개 및 설치류 종으로부터 선택된다. 몇몇 양태에서, 점토 또는 점토 성분 혼입된 효모 세포벽 추출물은 하나 이상의 마이코톡신을 포획한다. 몇몇 양태에서, 마이코톡신은 아플라톡신, 제아르알레논, 트리코테센스, 푸모니신스 및 오크라톡신으로부터 선택된다. 몇몇 양태에서, 마이코톡신은 아세톡시시르펜디올, 아세틸데옥시니발렌올, 아세틸니발렌올, 아세틸네오솔라니올, 아세틸 T-2 톡신, 전체 확장된 아플라톡신, 아플라톡신 B1, B2, G1 및 G2, 아플라트렘, 알테누산, 알테르나리올, 오스트디올, 오스트아미드, 오스토시스틴, 아베나세인 +1, 베오베리신 +2, 벤테놀라이드, 브레비안아미드, 부테놀라이드, 칼로넥트린, 카에토글로보신, 시트리닌, 시트레오비리딘, 코클리오딘올, 사이토칼라신 E, 사이클로피아존산, 데아세틸칼로넥트린, 데아세틸네오솔라니올, 데옥시니발렌올 디아세테이트, 데옥시니발렌올 모노아세테이트, 디아세톡시시르펜올, 데스트룩신 B, 엔니아틴스, 전체 확장된 맥각 톡신 및 내생균, 프럭티게닌 +1, 푸마길린, 푸모니신스, 푸모니신스 B1 및 B2 및 B3, 푸사레논-X, 푸사로크로마논, 푸사르산, 푸사린, 글리오톡신, HT-2 톡신, 이포메아닌, 아일랜드디톡신, 라테리틴 +1, 리코마라스민 +1, 말포르민, 말토리진, 모닐리포르민, 모노아세톡시시르페놀, 네오솔라니올, 니발레놀, NT-1 톡신, NT-2 톡신, 전체 확장된 오크라톡신, 웁스포레인, 옥살산, 파툴린, 페니실린산, 페니트렘, 로리딘 E, 루브라톡신, 루브로스키린, 루브로설핀, 루굴로신, 삼부시닌 +1, 사트라톡신스, F, G, H, 시르펜트리올, 슬라프라민, 스테리 농축된 변형된 효모 세포벽 엑스트라액토시스틴, T-1 톡신, T-2 톡신, 트리아세톡시시르펜디올 전체 확장된 트리코테센스, 트리코데르민, 트리코테신, 트리코베린스, 트리코베롤스, 트립토퀴발렌, 베루카린, 베루쿨로겐, 비오푸르푸린, 비오멜레인, 비리디톡신, 크산토실린, 야바니신 +1, 제아르알레놀 및 제아르알레논으로부터 선택된다.
몇몇 양태에서, 본 발명은 마이코톡신의 포획에 효과적인 양으로 존재하는 점토 또는 점토 성분 혼입된 효모 세포벽 추출물을 포함하는 조성물을 제공한다. 예를 들면, 몇몇 양태에서, 점토 또는 점토 성분 혼입된 효모 세포벽 추출물은 사료의 약 0.0125중량% 내지 약 10중량%의 양으로 존재한다. 몇몇 양태에서, 점토 또는 점토 성분 혼입된 효모 세포벽 추출물은 사료의 약 0.0125중량% 내지 약 4.0중량%의 양으로 존재한다. 본 발명은 사료 형태로 한정되는 것은 아니다.
몇몇 양태에서, 본 발명은,
a) 점토 또는 점토 성분 혼입된 효모 세포벽 추출물을 포함하는 조성물(i) 및 동물 또는 사람에 의해 소비된 물질(ii)을 제공하는 단계;
b) 점토 또는 점토 성분 혼입된 효모 세포벽 추출물을 상기 물질 내로 도입하여 점토 또는 점토 성분 혼입된 효모 세포벽 추출물 도입 물질을 생성하는 단계 및
c) 동물 또는 사람이 상기 점토 또는 점토 성분 혼입된 효모 세포벽 추출물 도입 물질을 소비하게 하는 단계를 포함하는, 동물 또는 사람에 대한 마이코톡신의 생체이용성을 감소시키는 방법을 제공한다. 몇몇 양태에서, 상기 물질은 사료이다. 몇몇 양태에서, 점토 또는 점토 성분 혼입된 효모 세포벽 추출물을 포함하는 조성물 약 0.0125중량% 내지 약 0.4중량%가 사료에 첨가된다. 몇몇 양태에서, 상기 물질은 상부재이다. 몇몇 양태에서, 점토 또는 점토 성분 혼입된 효모 세포벽 추출물을 포함하는 조성물 약 0.0125중량% 내지 약 99.0중량%가 상부재(bedding)에 첨가된다. 몇몇 양태에서, 상기 물질은 액체이다. 몇몇 양태에서, 점토 또는 점토 성분 혼입된 효모 세포벽 추출물을 포함하는 조성물 약 0.0125중량% 내지 약 99.0중량%가 액체에 첨가된다. 몇몇 양태에서, 동물은 조류, 소, 돼지, 말, 양 및 염소, 어류, 조개, 낙타, 고양이, 개 및 설치류 종으로부터 선택된다. 몇몇 양태에서, 점토 또는 점토 성분 혼입된 효모 세포벽 추출물을 포함하는 조성물은 1종 이상의 마이코톡신 유형을 포획한다. 몇몇 양태에서, 마이코톡신은 아플라톡신, 제아르알레논, 트리코테센스, 푸모니신스, 오크라톡신 및 이들의 조합이다. 몇몇 양태에서, 본 발명은 에스테라제, 에폭시다제, 효모 및/또는 박테리아 균주로부터 선택된 추가의 제제를 상기 점토 또는 점토 성분 혼입된 효소 세포벽 추출물 도입 물질 내로 도입하는 단계를 추가로 포함한다.
몇몇 양태에서, 본 발명은
a) 효모 출발 배양물(i) 및 효모 성장용 필수 영양소 및 점토 또는 점토 성분을 포함하는 효모 세포 배양 배지(ii)를 제공하는 단계;
b) 상기 효모 출발 배양물을 효모 세포 배양 배지 내로 도입하는 단계;
c) 상기 효모를 효모가 성장하도록 설정된 조건하에 산업적 규모의 발효조에서 배양하는 단계이며, 여기서, 효모는 성장 동안 상기 점토 또는 점토 성분을 효모 세포벽 내로 도입함;
d) 항기포제(anti-forming agent)를 상기 발효조에 첨가하는 단계;
e) 점토 또는 점토 성분 혼입된 효모 세포벽을 용해시키는 단계; 및
f) 상기 점토 또는 점토 성분 혼입된 효모 세포벽을 다른 효모 성분으로부터 분리하는 단계를 포함하는, 상업적 규모 양의 점토 또는 점토 성분 혼입된 효모 세포벽 추출물을 생산하는 방법을 제공한다. 몇몇 양태에서, 효모는 사카로마이세스(Saccharomyces), 칸디다(Candida), 클루이베로마이세스(Kluyveromyces), 토룰라스포라(Torulaspora) 및 이들의 조합으로부터 선택된다. 몇몇 양태에서, 점토는 실리케이트 그룹에 속하는 광물 점토 또는 합성 점토이다. 몇몇 양태에서, 점토는 제올라이트, 벤토나이트, 알루미노실리케이트, 몬트모릴로나이트, 스멕타이트, 카올리나이트, 유기점토 및 이들의 혼합물로부터 선택된다. 몇몇 양태에서, 점토는 알루미노실리케이트 점토이다. 몇몇 양태에서, 세포 배양 배지 중의 점토의 양은 약 0.125% 내지 약 4.0%이다. 몇몇 양태에서, 세포 배양 배지 중의 점토의 양은 약 0.5% 내지 약 2.0%이다. 몇몇 양태에서, 세포 배양 배지 중의 점토의 양은 약 0.125% 내지 약 4.0%이다. 몇몇 양태에서, 세포 배양 배지 중의 점토의 양은 약 0.5% 내지 약 2.0%이다. 몇몇 양태에서, 산업적 규모의 발효조는 1천 내지 5백만 리터이다. 몇몇 양태에서, 항기포제는 배양 공정에 대한 상기 점토의 효과를 완화시키기 위해 첨가된다. 몇몇 양태에서, 항기포제는 비실리콘 분자 소포제, 오일계 소포제, 분말 소포제, 수계 소포제, 실리콘계 소포제, 폴리에틸렌 글리콜계 소포제, 폴리프로필렌 글리콜계 소포제 및 알킬 폴리아크릴레이트로부터 선택된다. 몇몇 양태에서, 항기포제는 비실리콘 분자 소포제이다. 몇몇 양태에서, 용해(lusing)는 유리 비드, 비드 비터(bead beater) 및/또는 효소적 처리를 포함한다.
도면의 설명
도 1은 A) 효모 세포벽 내로 혼입된 점토 및/또는 점토 성분의 도시, 및 B) 점토의 부재하에 배양한 효모 세포의 효모 세포벽(a) 및 점토의 존재하에 성장 및/또는 배양한 효모 세포의 효모 세포벽(a)의 비교 도시를 나타낸다.
도 2는 (A) 벤토나이트 점토(Fluka); (B) 점토의 부재하에 배양한 효모 세포 및 효모 세포벽의 글루칸 부분의 확대; (C1) 벤토나이트의 라멜라 구조에 포획된 몇몇 효모 세포의 집성체 형성의 상세와 함께 2% 벤토나이트의 존재하에 배양한 효모 세포; (C2) 효모 세포벽 구조 내에 직접 점토의 함유에 대한 상세와 함께 2% 벤토나이트 점토의 존재하에 배양한 효모 세포의 주사 전자 현미경사진을 나타낸다.
도 3은 점토의 부재(효모 세포벽 "YCW" 단독)하에 배양한 효모 세포, 0.5% 점토(YCW + 5%)의 존재하에 배양한 효모 세포, 1% 점토(YCW + 1.0%)의 존재하에 배양한 효모 세포 및 2.0% 점토의 존재하에 배양한 효모 세포로부터 유리 비드 및 미니비드 비터를 사용하여 제조한 효모 세포벽 추출물의 특성을 제공한다. 또한, 각각의 샘플에 대한 마이코톡신 제아르알라논의 흡수 비율을 제공한다.
도 4는 점토의 부재(YCW 단독)하에 배양한 효모 세포, 1% 점토(YCW + 1.0%)의 존재하에 배양한 효모 세포 및 2.0% 점토의 존재하에 배양한 효모 세포로부터 프로테아제 절단을 사용하여 제조한 효모 세포벽 추출물의 특성을 제공한다.
도 5는 효모 세포의 해부학적 구조를 나타낸다.
도 6은 반-산업적 규모로 제조한 CIYCW의 2개 배치의 조성물을 나타낸다.
도 7은, 스멕타이트 점토의 존재 및 부재하에 효소 가수분해와 함께 추출하거나 추출하지 않고서, 효모 세포벽에 의해 반산업적 규모로 수득한 포획 효능 결과를 나타낸다. AFB1 및 ZEA에 대한 포획 생성물의 함유 수준은 4.0의 일정 pH에서 유지된 반응 배지에서 각각 0.1 및 0.4%이다. 분석은 90분 동안 37℃에서 궤도 교반하에 수행하고, 결합된 톡신의 양은 형광 검출기가 구비된 HPLC를 사용하여 평가했다.
도 8은 스멕타이드 점토의 존재하에 효소 가수분해와 함께 추출된 효모 세포벽으로 수득한 포획 효능 결과를 나타낸다. AFB1 및 ZEA에 대한 포획 생성물의 함유 수준은 4.0의 일정 pH에서 유지된 반응 배지에서 각각 0.1 및 0.4%이다. 분석은 90분 동안 37℃에서 궤도 교반하에 수행하고, 결합된 톡신의 양은 형광 검출기가 구비된 HPLC를 사용하여 평가했다.
도 9는, 점토 MBB02의 존재 또는 부재하에 효소 가수분해로 추출하거나 추출하지 않고서 성장시킨 3개 균주로부터 유도한 상이한 효모 세포벽으로 수득한 흡수 결과를 나타낸다. AFB1 및 ZEA에 대한 포획 생성물의 함유 수준은 4.0의 일정 pH에서 유지된 반응 배지에서 각각 0.1 및 0.4%이다. 분석은 90분 동안 37℃에서 궤도 교반하에 수행하고, 결합된 톡신의 양은 형광 검출기가 구비된 HPLC를 사용하여 평가했다.
정의
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "효모" 및 "효모 세포"는 세포벽, 세포막 및 세포내 성분을 갖는, 균류계(kingdom Fungi)로 분류된 진핵 미생물을 지칭한다. 효모는 종 분류학적 또는 계통발생학적 그룹을 형성하지 않는다. 현재 약 1,500 종이 공지되어 있고, 모든 효모 종의 1%만이 기재되어 있는 것으로 평가된다. 용어 "효모"는 종종 에스. 세레비지애(S. cerevisiae)에 대한 동의어로서 간주되지만, 효모의 계통발생학적 다양성은 분류 자낭균문(Ascomycota) 및 담자균문(Basidiomycota)에서 이들의 위치가 나타난다. 분아형 효모("진정 효모")는 목 사카로마이세탈스로 분류된다. 대부분의 효모 종은 분아에 의해 무성 생식하지만, 일부는 이분법에 의해 생식한다. 효모는 단세포이지만, 일부종은 가성균사 또는 거짓 균사로서 공지된 연결 분아 세포 사의 형성을 통해 다세포로 된다. 효모 크기는 종에 따라 크게 달라질 수 있고, 통상 직경 3 내지 4㎛로 측정될 수 있지만, 몇몇 효모는 40㎛이상에 이를 수 있다.
본원에 사용된 바와 같이, "YCW"로서도 지칭되는 용어 "효모 세포벽"은 원형질막 및 효모의 세포내 성분을 둘러싸고 있는 효모 유기체의 세포벽을 지칭한다. 효모 세포벽은 효모 세포벽의 외부 층(주로 만난) 및 내부 층(주로 글루칸 및 키틴) 둘 다를 포함한다. 세포벽의 기능은 구조를 제공하고 효모 내부(이의 대사 활성 중심)을 보호하는 것이다. 신호 및 인지 경로는 효모 세포벽에서 발생한다. 효모 세포벽의 조성은 균주마다 및 효모의 성장 조건에 따라 상이하다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "효모 세포벽 추출물"은 포획 또는 "용해"되고(예를 들면, 포획 및 용해 단계 동안) 효모 세포의 가용성 세포내 성분으로부터 분리된 효모의 효모 세포벽을 지칭한다.
용어 "분리된"은, 효모 세포벽과 관련하여 사용되는 경우, "분리된 효모 세포벽" 또는 "분리된 점토 통합된 효모 세포벽" 또는 "변화된 글루칸:만난 구조를 포함하는 분리된 효모 세포벽"에서와 같이, 이의 천연 공급원에서 본래 결합되어 있는 하나 이상의 성분으로부터 동정되어 분리된 효모 세포 또는 이의 성분을 지칭한다. 따라서, 분리된 효모 세포벽은 자체로 천연에서 발견되는 것(예를 들면, 효모의 세포내 성분으로부터 분리되는 것)과 상이한 형태 또는 상태로 존재한다. 대조적으로, 비분리된 효모 세포벽은 천연에 존재하는 상태로 발견된 효모 세포벽 또는 이의 성분이다. 몇몇 양태에서, 분리된 효모 세포벽은 효모 세포벽 추출물을 기재하기 위해 사용된다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "정제된" 또는 "정제하기 위해"는 샘플로부터 성분들의 제거를 지칭한다. 예를 들면, 효모 세포벽 또는 효모 세포벽 추출물은 비효모 세포벽 성분들(예: 원형질 막 및/또는 효모 세포내 성분)의 제거에 의해 정제되고, 이들은 또한 효모 세포벽이 아닌 오염물 또는 기타 제제의 제거에 의해 정제된다. 비효모 세포벽 성분 및/또는 비효모 세포벽 오염물의 제거는 샘플 중의 효모 세포벽 또는 이의 성분의 비율을 증가시킨다. 또 다른 예에서, 효모 세포벽 내로 통합된/혼입된 점토 또는 점토 성분을 포함하는 효모 세포벽은 비효모 세포벽 성분(예: 원형질 막 및/또는 효모 세포내 성분)의 제거에 의해 정제되고, 이에 의해 세포벽 내로 통합된/혼입된 점토 또는 점토 성분들을 포함하는 효모 세포벽의 비율이 샘플에서 증가된다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "농축된 효모 세포벽 추출물"은 하나 이상의 공정(예: 건조(예: 건조 및 농축 단계 동안))에 의해 농축된 효모 세포벽 추출물을 지칭한다. 또 다른 양태에서, 농축된 효모 세포벽 추출물은 비효모 세포벽 성분의 제거에 의해 정제된 효모 세포벽 제제 또는 효모 세포벽 추출 제제이다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "변형된 효모"(modified yeast) 및 "변화된 효모"(altered yeast)는 효모의 조성, 구조 및/또는 기능을 변화[예를 들면, 효모 세포벽(예를 들면, 변화된 글루칸:만난 비 및/또는 비점토 또는 비점토 성분 통합된/혼입된 효모 세포벽을 갖지 않는 효모 세포벽과 상이하게 기능하는 효모 세포벽 내로 통합된/혼입된 변화된 글루칸:만난 비 및/또는 점토/점토 성분을 포함하는 효모 세포벽)의 조성, 구조 및/또는 기능을 변화]시키는 방식으로 배양된 효모를 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "변형된 효모 세포벽"은 변형된 또는 변화된 효모의 효모 세포벽을 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "변형된 효모 세포벽 추출물"은 변형되거나 변화된 효모의 효모 세포벽 추출물을 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같이, 본원에 사용된 용어 "농축된 변형된 효모 세포벽 추출물"은, 예를 들면, 미국 특허 제6,045,834호에서 변형되거나 변화된 효모로부터 유도된 농축 효모 세포벽 추출물을 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "점토 혼입된 효모", "점토 통합된 효모", "점토 성분 혼입된 효모", "점토 성분 통합된 효모"는 효모 세포벽 내로 도입되거나 혼입된 점토 또는 점토 성분을 갖는 점토 또는 점토 성분의 존재하에 성장 또는 배양한 효모를 지칭한다. 점토 또는 점토 성분 혼입된 효모는 변형된 효모의 특정한 형태이다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "혼입된"(interlaced)은 "점토 혼입된 효모 세포벽 추출물", "점토 성분 혼입된 효모 세포벽 추출물" 등에서와 같이 효모 세포벽 내로의 점토 또는 점토 성분의 통합을 지칭한다. 이러한 메카니즘은 본 발명의 실시에 필수적이지 않고 본 발명은 임의의 특정 작용 메카니즘으로 한정되지 않지만, 몇몇 양태에서, 효모 세포벽 내로 점토 또는 점토 성분의 혼입이 효모 성장 중에 일어난다[예를 들면, 이의 무성 생식 사이클(분아) 후(예를 들면, 딸세포가 성장하고 이의 효모 세포벽 네트워크를 형성함에 따라, 점토 또는 점토 성분은 효모 세포 내로 통합된다)]. 한 가지 예에서, 글루칸 및/또는 키틴 쇄의 신장은 분아 동안 점토 또는 점토 성분의 통합에 수반된 통합 부위(들)를 제공하고, 이는 이의 세포벽 내로 통합된 점토 또는 점토 성분을 포함하는 딸세포를 제공한다. 또 다른 예에서, 거대분자 점토 구조는 이의 라멜라 네트워크에서 효모 세포(들)를 포획하고, 여기서 효모 세포는 분아를 통해 진행하여 점토 또는 점토 성분을 효모 세포벽 내로 추가로 통합한다. 효모 세포벽 통합된/혼입된 점토 및/또는 점토 성분(들)은 세포벽 추출 후에 효모 세포벽에 통합된/혼입된 상태로 존재한다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "점토 혼입된 효모 세포벽", "점토 성분 통합된 효모 세포벽", "점토 성분 혼입된 효모 세포벽" 및 "점토 통합된 효모 세포벽"은 효모 세포벽 내로 도입되거나 혼입된 점토 또는 점토 성분을 갖는 점토의 존재하에 성장 또는 배양한 효모의 효모 세포벽을 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "점토 혼입된 효모 세포벽 추출물", "점토 성분 혼입된 효모 세포벽 추출물", "점토 통합된 효모 세포벽 추출물" 및 "점토 성분 통합된 효모 세포벽 추출물"은 효모 세포벽 내로 도입되거나 혼입된 점토 또는 점토 성분을 갖는 효모의 효모 세포벽 추출물을 지칭하고, 여기서 세포벽 추출물이 제조되는 효모는 점토의 존재하에 성장되거나 배양된다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "농축 혼입된 효모 세포벽 추출물" 및 "농축 통합된 효모 세포벽 추출물"은 효모 세포벽 내로 도입되거나 혼입된 점토 또는 점토 성분들을 갖는 점토의 존재하에 성장되거나 배양된 효모의 농축된 효모 세포벽 추출물을 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "생체내"(in vivo)는 생물학적 유기체 내에서 발생하는, 살아있는 유기체 내에서 수행된 연구 및/또는 실험을 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "시험관내"(in vitro)는 살아있는 유기체 외부의 인공 환경, 및 유기체 내에서 통상 일어날 수 있지만 인공 환경하에 일어나도록 만든 생물학적 공정 또는 반응물을 지칭한다. 시험관내 환경은, 이로써 한정되는 것은 아니지만, 시험관 및 세포 배양물로 이루어질 수 있다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "고성능 액체 크로마토그래피" 및 용어 "HPLC"는 화합물을 분리하기 위한 액체 크로마토그래피 형태를 지칭한다. 본 화합물은 용액에 용해된다. 화합물은 샘플 혼합물의 플러그를 컬럼 상에 주입함으로써 분리된다. HPLC 장치는 이동상 저장기, 펌프, 주입기, 분리 컬럼 및 검출기를 포함한다. 컬럼 유출물 내의 분석물의 존재는 굴절률 변화, 설정 파장에서의 UV-VIS 흡수, 적합한 파장에서의 여기 후의 형광 또는 전기화학적 반응을 정량적으로 검출함으로써 기록된다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "주사 전자 현미경사진" 및 용어 "SEM"은 라스터 주사 패턴으로 전자의 고에너지 빔에 의해 주사함으로써 샘플 표면을 영상화하는 전자 현미경사진 형태를 지칭한다. 전자는, 샘플 표면 지형도, 조성 및 전기 전도성 등의 기타 특성에 대한 정보를 함유하는 시그날을 생성하는 샘플을 구성하는 원자와 상호작용한다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "고정제"(fixation agent)는 물질을 이의 현재 형태로 "고정", 안정화 또는 달리는 보존하여 물질이 열화 또는 달리는 변화되는 것을 방지하기 위해 물질을 서로 고정시킬 수 있는 화학물질을 지칭한다. 종종, 고정제는 샘플을 제조하기 위해 주사 전자 현미경(SEM)에서 사용된다. 1차 고정제: 본원에 사용된 바와 같이, 용어 "1차 고정제"는 물질의 "고정"에 사용된 1차 고정제를 지칭한다. 2차 고정제: 본원에 사용된 바와 같이, 용어 "2차 고정제"는 물질을 "고정"시키기 위해 사용된 2차 고정제를 지칭한다. 3차 고정제: 본원에 사용된 바와 같이, 용어 "3차 고정제"는 물질을 "고정"시키기 위해 사용된 3차 고정제를 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "분석물"은 원자, 분자, 원자 및/또는 분자 그룹, 물질 또는 화학적 구성분을 지칭한다. 분석물은 자체로 측정될 수 없고, 오히려 분석물의 양태 또는 특성(물리적, 화학적, 생물학적 등)은 HPLC 등의 분석학적 공정을 사용하여 측정할 수 있다. 예를 들면, "배좌"(분석물-성분)를 자체로 측정할 수는 없지만, 배좌(chair)의 높이, 폭 등을 측정할 수 있다. 마찬가지로, 마이코톡신을 측정할 수는 없지만, 이의 농도와 관련되는 마이코톡신 형광을 측정할 수 있다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "시그날"(signal)은 반응이 발생했음을 나타내는 임의의 검출가능한 공정(예: 항원에 대한 항체의 결합)과 관련하여 일반적으로 사용된다. 시그날은 정량적 뿐만 아니라 정성적으로 평가될 수 있다. "시그날" 유형의 예는, 이로써 한정되는 것은 아니지만, 방사선활성 시그날, 형광계 시그날 또는 색도계 생성물/시약 시그날을 포함한다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "생체이용율"(bioavailability)은 유기체에 이용가능하거나 전신 순환에 도달하는 분자 또는 성분의 분획을 지칭한다. 분자 또는 성분이 정맥내 투여되는 경우, 이의 생체이용율은 100%이다. 그러나, 분자 또는 성분이 기타 경로(예: 경구)에 의해 투여되는 경우, 이의 생체이용율은 감소된다(불완전한 흡수 및 퍼스트-패스 대사에 기인함).
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "흡수하는"(absorb)은 어느 물질이 또 다른 물질을 "흡입"(take in) 또는 "흡취"(suck up)하는 공정을 지칭한다. 예를 들면, "흡수"는 물질을 세포 내로 흡수 또는 동화하거나 확산 또는 삼투압을 통해 조직 및 기관을 횡단하는 과정을 지칭한다(예: 소화 시스템에 의한 영양소의 흡수 또는 혈류 내로의 약물 흡수).
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "흡수"는 어느 물질이 고체 또는 액체에 의해 포획되고/되거나 이의 표면 상에 축적되는 경우(포획성 및/또는 흡수성)에 발생하는 과정을 지칭한다[예를 들면, 이에 의해 분자 또는 원자의 필름을 형성함(흡착질)].
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "포획하다" 및/또는 용어 "포획"(sequestration)은 서로 접촉하는 2종 이상의 실체의 물리적 연합(예: 연합 또는 협착)을 지칭한다. 연합의 예시적 형태는, 이로써 한정되는 것은 아니지만, 수소 결합, 배위 및 이온쌍 형성을 포함한다. 포획 상호작용은 각 실체의 입체화학 및 기하에 따라 다양한 수의 화학적 상호작용(예: 화학적 결합)을 수반할 수 있다(예: 포획의 특이성을 추가로 규정함). 2종 이상의 실체가 포획되는 경우, 이들은 화학적 결합에 의해 포획될 수 있지만, 또한 하전 또는 기타 형태의 상호작용을 통해 연합될 수 있다).
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "포획제" 및/또는 "포획화제"는 포획을 유도하거나 이와 관련되고/되거나 제2 실체와의 복합체를 형성할 수 있는 실체를 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "흡수"는 흡착(adsortion) 및 흡수(absorption) 둘 다를 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "유효량"은 유리하거나 목적하는 결과를 수행하는데 효과적인 조성물(예를 들면, 본 발명의 효모 세포, 효모 세포벽 또는 변형된 효모 세포벽을 포함함)의 양을 지칭한다. 유효량은 1회 이상의 투여, 적용 또는 용량으로 또 다른 물질과 함께 투여되고/되거나 배합될 수 있고, 특정한 제형 또는 투여 경로로 한정하고자 하는 것은 아니다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "소화"(digest)는 식품, 사료 또는 기타 유기 화합물을 흡수가능한 형태로 전환시켜 열 및 수분 또는 화학적 작용에 의해 연화, 분해 또는 파괴하는 것을 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같이, "소화계"는 소화가 발생할 수 있거나 발생하는 시스템(위장 시스템 포함)을 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "사료"(feedstuff)는 동물에 의해 소비되고 에너지 및/또는 영양소가 동물의 식이에 기여하는 물질(들)을 지칭한다. 사료의 예에는, 이로써 한정되는 것은 아니지만, 완전 혼합 사료(Total Mixed Ration; TMR), 사료, 펠렛, 농축물, 프리믹스(premix), 부산물(coproducts), 곡물, 증류기 곡물, 당밀, 섬유, 마초, 목초, 건초, 낟알, 잎, 곡류, 용해물 및 보충물을 포함한다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "동물"은 동물계의 것들을 지칭한다. 이는, 이로써 한정되는 것은 아니지만, 가축류, 농장 동물, 가축, 애완 동물, 해양 및 민물 동물 및 야생 동물을 포함한다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "투여" 및 용어 "투여하는"은 약물, 프로드럭 또는 기타 제제를 포함하는 물질 또는 치료학적 치료를 피검체(예: 피검체 또는 생체내, 시험관내 또는 생체외 세포, 조직 및 기관)에게 제공하는 작용을 지칭한다. 예시적인 투여 경로는 안구(안과), 구강(경구), 피부(국소 또는 경피), 코(비내), 폐(흡입), 경구 점막(구강), 귀, 직장, 질내, 주사(예: 정맥내, 피하, 종양내, 복막내 등) 등에 의한 것일 수 있다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "동시 투여" 및 용어 "동시 투여하는"은 적어도 2종의 제제 또는 치료제를 피검체 및/또는 재료(예: 사료)에 투여하는 것을 지칭한다. 2종 이상의 제제 또는 치료제의 동시 투여는 동시에 일어날 수 있거나, 제1 제제/치료를 제2 제제/치료 전에 투여할 수 있다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "치료"는 질환(예: 진균중독증) 징후의 개선 및/또는 역전을 지칭한다. 용어 "치료"는 치료학적 치료 및 보호적 또는 예방학적 수단 둘 다를 지칭한다. 예를 들면, 본 발명의 조성물 및 방법에 의한 치료가 유리할 수 있는 피검체는 질환 및/또는 장애가 예방되어야 하는 것들(본 발명의 예방적 치료를 사용하여) 뿐만 아니라 질환 및/또는 장애(예: 진균중독증)를 이미 갖는 것들을 포함한다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "질환 위험"은 특정한 질환에 걸리기 쉬운 피검체를 지칭한다. 이러한 소질은 유전적(예: 당해 질환을 경험하는 특정한 유전적 경향, 예를 들면, 유전적 질환)일 수 있거나, 기타 요인(예: 연령, 환경적 조건, 환경에 존재하는 유해 화합물에 대한 노출 등)에 기인할 수 있다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "질환", 용어 "감염" 및 용어 "병리학적 상태 또는 반응"은 정상 기능의 수행을 차단하거나 변형시키는 살아있는 동물 또는 이의 기관 또는 조직의 정상 상태의 손상과 관련되고 환경상 요인(예: 진균중독증을 포함하여 영양 부족, 산업적 위험 또는 기후), 특정한 감염제(예: 벌레, 박테리아 또는 바이러스), 유기체의 고유 결함(예: 다양한 유전적 이상) 또는 이들 및 기타 요인의 조합에 대한 반응일 수 있는 상태, 징후 및/또는 증상을 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "진균중독증"(mycotoxicosis)은 마이코톡신이 사람 또는 동물 신체의 내성 장벽을 통과하는 상태를 지칭한다. 마이코톡신은 감염 또는 질환으로 간주될 수 있고, 발병된 것에 대해 유해한 효과를 가질 수 있다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "마이코톡신"은 다양한 진균 종에 의해 생성된 독성 및/또는 발암성 화합물(들)을 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "질환을 앓고 있는"은 특정한 질병을 경험하고 있고 임의의 특정한 징후 또는 증상 또는 질환으로 한정되지 않는 피검체(예: 동물 또는 사람 피검체)를 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "독성"은 독소/독성제의 접촉 또는 투여 전에 동일한 세포 또는 조직과 비교하여 피검체, 세포 또는 조직에 대한 임의의 해로운, 유독한, 유해한 효과 또는 기타 부작용을 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같이, 본원에 사용된 용어 "산"(acid)은 양성자(들)를 제공하고/하거나 전자(들)를 수용할 수 있는 임의의 화학적 화합물을 지칭한다. 산에는, 이로써 한정되는 것은 아니지만, 염산, 브롬화수소산, 황산, 질산, 과염소산, 푸마르산, 말레산, 인산, 글리콜산, 락트산, 살리실산, 석신산, 톨루엔-p-설폰산, 타르타르산, 아세트산, 시트르산, 메탄설폰산, 에탄설폰산, 포름산, 벤조산, 말론산, 설폰산, 나프탈렌-2-설폰산, 벤젠설폰산 등이 포함된다. 기타 산, 예를 들면, 옥살산도, 이들 자체는 약제학적으로 허용되지 않지만, 본 발명의 화합물 및 이들의 약제학적으로 허용되는 산 부가염을 수득하기 위한 중간체로서 유용한 염의 제조에 사용될 수 있다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "염기"(base)는 양성자(들)을 수용하고/하거나 전자(들) 또는 하이드록사이드 이온을 공여할 수 있는 임의의 화학적 화합물을 지칭한다. 염기에는, 이로써 한정되는 것은 아니지만, 알칼리 금속(예: 나트륨) 하이드록사이드, 알칼리 토금속(예: 마그네슘) 하이드록사이드, 암모니아, 및 화학식 NW4 +의 화합물(여기서, W는 C1 -4 알킬이다) 등이 포함된다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "염"(salt)은 무기 또는 유기 산 및 염기로부터 유도될 수 있는 화합물을 지칭한다. 염의 예에는, 이로써 한정되는 것은 아니지만, 아세테이트, 아디페이트, 알기네이트, 아스파르테이트, 벤조에이트, 벤젠설포네이트, 비설페이트, 부티레이트, 시트레이트, 캄포레이트, 캄포르설포네이트, 사이클로펜탄프로피오네이트, 디글루코네이트, 도데실설페이트, 에탄설포네이트, 푸마레이트, 플루코헵타노에이트, 글리세로포스페이트, 헤미설페이트, 헵타노에이트, 헥사노에이트, 클로라이드, 브로마이드, 요오다이드, 2-하이드록시에탄설포네이트, 락테이트, 말레에이트, 메탄설포네이트, 2-나프탈렌설포네이트, 니코티네이트, 옥살레이트, 팔모에이트, 펙티네이트, 퍼설페이트, 페닐프로피오네이트, 피크레이트, 피발레이트, 프로피오네이트, 석시네이트, 타르트레이트, 티오시아네이트, 토실레이트, 운데카노에이트 등이 포함된다. 염의 다른 예는 적합한 양이온, 예를 들면, Na+, NH4 + 및 NW4 +(여기서, W는 C1-4 알킬 그룹이다) 등과 혼합된 본 발명의 화합물의 음이온이 포함된다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "약제학적 조성물"은, 당해 조성물을 시험관내, 생체내 또는 생체외의 진단학적 또는 치료학적 사용에 특히 적합하게 하는, 불활성 또는 활성 담체와 활성제(예: 본 발명의 살아있는 효모 세포, 효모 세포벽 또는 변형된 효모 세포벽)의 배합물을 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "약제학적으로 허용되는" 및 용어 "약리학적으로 허용되는"은 공지된 유리한 반응보다 공지된 부작용을 실질적으로 보다 많이 생성하지 않는 조성물을 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "항기포제"(antifoaming agent)는 포말의 형성을 방지하기 위해 사용되거나 이미 형성된 포말을 파괴하기 위해 첨가된 첨가제를 지칭한다. "소포제" 또는 "탈포제"로서도 공지된 "항기포제"는 폭기 또는 진탕 때문에 발효조에서 용액 또는 매질 또는 에멀젼 또는 브로쓰(broth)의 표면 장력을 감소시켜 포말의 형성을 억제하거나 변형시키는 첨가제를 지칭한다. 통상 사용된 제제는 불용성 오일, 디메틸 폴리실록산 및 기타 실리콘, 특정한 알콜, 예를 들면, 스테아릴데칸올, 옥탈 데칸올, 설포네이트, 스테아레이트 및 글리콜이다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "세포"는 생명의 기능상 독립적 단위(단세포 유기체, 예를 들면, 효모의 경우와 같이)로서 또는 전체로서 유기체의 원인에 대해 특정한 기능을 수행하도록 특화되어 있는 다세포 유기체(예: 식물 및 동물) 중의 아단위로서 존재할 수 있는 자발적 자가복제 단위를 지칭한다. 여기에는 2종의 독특한 유형의 세포: 즉 원핵생물 세포 및 진핵생물 세포가 있다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "진핵생물"은 세포가 막 내에 둘러싸인 복잡한 구조로 조직된 유기체를 지칭한다. "진핵생물"은 "원핵생물"과 구별가능하다. 용어 "원핵생물"은 세포 핵 또는 기타 막 결합된 세포기관이 결여된 유기체를 지칭한다. 용어 "진핵생물"은 진핵생물의 전형적인 특징, 예를 들면, 핵 막에 의해 결합된 진성 핵의 존재, 염색체의 존재, 막 결합된 세포기관의 존재 및 진핵생물 유기체에서 통상 관찰되는 기타 특징을 나타내는 유기체 모두를 지칭한다. 따라서, 당해 용어는, 이로써 한정되는 것은 아니지만, 진균, 원생동물 및 동물과 같은 유기체를 포함한다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "세포 배양"은 세포의 임의의 시험관내 배양을 지칭한다. 당해 용어 내에는 연속 세포주(예: 불멸 표현형), 원시 세포 배양물, 형질전환된 세포주, 유한 세포주(예: 비형질전환 세포) 및 시험관내에서 유지된 임의의 기타 세포 모집단이 포함된다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "세포 재생"(cell reproduction)은 3개 기본 단계를 갖는 세포 성장 과정을 지칭한다. 세포 재생의 1차 단계는 "부모 세포의 DNA"의 복제를 수반한다. 2차 단계는 복제된 DNA의 동일 크기의 2개 염색체 그룹으로의 분리이다. 3차 단계는 통상 세포질분열로 불리우는 완전 세포의 물리적 분화이다. 세포 재생은 기타 유기체보다 진핵생물에서 보다 복잡하다. 박테리아 세포 등의 비-진핵생물 세포는 이분법에 의해 재생하고, 당해 과정은 DNA 복제, 염색체 분리 및 세포질분열을 포함한다. 진핵생물 세포 재생은 유사분열 또는 감수분열로 불리우는 보다 복잡한 과정을 수반한다. 유사분열 및 감수분열은 종종 2개의 "핵 분열" 과정으로 불리운다. 이분법은 유사분열을 수반하는 진핵생물 세포 생식과 유사하다. 둘 다는 부모 세포와 동일한 수의 염색체를 갖는 2개의 딸세포의 생성을 유도한다. 감수분열은 배수 유기체의 특별한 세포 재생 과정에 사용된다. 이는 DNA의 정상 세포 양의 절반을 갖는 4개의 특별한 "딸세포"(배우자)를 생성한다. 이어서, 웅성 및 자성 배우자가 조합하여 접합자, 즉 정상 양의 염색체를 다시 갖는 세포를 생성한다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "효모 생식"은 무성 및 유성 생식 사이클을 갖는 효모의 재생 사이클을 지칭하지만, 효모에서 영양 성장의 가장 통상적인 방식은 "부모 세포" 상에 형성되는 "딸세포"를 갖는 "분아" 또는 "분열"에 의한 무성 생식이다. 무모 세포의 핵은 딸 핵으로 분할하고, 딸 세포로 이동한다. 분아는 "무모 세포"로부터 분리하여 새로운 세포를 형성할 때까지 계속 성장한다. 높은 스트레스 조건하에 반수체 세포는 일반적으로 사멸하지만, 동일한 조건하에서 이배체 세포는 포자를 형성하여 유성 생식(감수분열)을 개시하고 다양한 반수체 포자를 생성할 수 있으며, 이는 짝짓기(접합) 시작하여 이배체를 개질시킨다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "분아"는 "딸세포" 중의 하나가 다른 것으로부터 보다 작은 돌출물로서 발달하는 진균(예: 효모) 및 원생동물에서의 세포 분화 형태를 지칭한다. 통상적으로 분아 세포의 위치는 "부모 세포" 내의 극성에 의해 규정된다. 몇몇 원생동물에서 분아된 딸은 다른 딸의 세포질 내에 존재할 것이다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "딸세포"는 부모 세포의 분화시에 형성된 2종 이상의 세포 중의 하나를 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "부모 세포" 및 용어 "모 세포"는 세포 분화에 의해 딸세포를 생성하는 세포를 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "접종"은 미생물 또는 미생물(예: 효모, 진균, 박테리아 등)의 현탁액을 배양 배지 내로 도입하는 작용을 지칭한다. 접종은 성장 또는 생식하는 것을 도입하는 작용 또는 과정이다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "접종물" 및 용어 "사전-접종물"(pre-inoculum)은 접종에 사용된 세포, 예를 들면, 배양 개시를 위해 첨가된 세포를 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "성장 과정"은 문구 "세포 성장"이 "세포 생식에 의한 세포 수의 증가"의 개념을 약칭하는 효모 세포에 적용된 살아있는 세포의 재생을 지칭한다. 세포 재생 중에 하나의 세포("부모 세포" 또는 "모 세포")는 분화하여 "딸세포"를 생성한다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "효모 배양" 및 용어 "효모 성장"은 효모를 거주시키고/시키거나 전파하는 작용을 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "원심분리"는 축에 수직인 힘을 적용하는 고정 축 주위로 물체를 회전시키는 회전 로터에 의해 생성된 원심분리력을 사용하는 크기 또는 밀도에 의한 분자의 분리를 지칭한다. 원심분리는 침강 원리를 사용하여 수행하며, 여기서 구심성 가속을 사용하여 상이한 밀도 층으로 다소 크거나 작은 밀도의 물질을 균일하게 분포시킨다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "농도"는 소정 공간당 물질의 양을 지칭한다. 농도는 통상 용적 단위당 물질량으로 표시된다. 용액을 희석시키기 위해서는, 보다 많은 용매를 첨가하거나 용질의 양을 감소시켜야 한다(예를 들면, 선택적 증발, 분무 건조, 동결 건조, 예를 들면, 농축된 효모 세포벽 추출물 또는 농축 변형된 효모 세포벽 추출물). 대조적으로, 용액을 농축시키기 위해서는, 용질을 보다 많이 용해시키거나 용매의 양을 감소시켜야 한다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "층"은 당해 물질의 밀도 특성과 관련하여 원심분리에 의한 분리 후에 수득한 상부 부분 또는 구획을 형성하는 물질의 층으로 구성된 통상의 수평 침전물을 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "수거"(harvest)는 생성된 물질을 수집하거나 함께 모으는 작용을 지칭한다(예: 효모 생성 중에 생산된 물질을 함께 모음).
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "점토"는 광물 점토, 합성, 유기점토 및 이들의 임의의 혼합물(들)을 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "광물 점토"는 다양한 범위의 함수량(이는 물이 극성 흡착에 의해 구조체 내에 포획된 결과일 수 있다)을 통해 가소성을 나타내고 건조 및/또는 불을 가할 때에 경화될 수 있는 주로 미분된 광물(실리케이트)로 구성된 천연 발생 또는 합성 물질을 지칭한다. 실리케이트의 예는, 이로써 한정되는 것은 아니지만, 층상 실리케이트, 벤토나이트, 제올라이트, 알루미노실리케이트, 몬트모릴로나이트, 스멕타이트, 카올리나이트를 포함한다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "유기점토" 및 용어 "개질된 점토"는 천연 발생 점토 광물로부터 유도된, 유기적으로 개질된 층상 실리케이트를 지칭한다. 본래의 층내 양이온을 유기양이온(통상 4급 알킬암모늄 이온) 또는 폴리사카라이드로 교환함으로써, 공유 결합된 유기 잔기로 이루어진 화학적 개질 표면이 생성된다. 라멜라 구조는 부모 층상 실리케이트와 유사하게 잔류한다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "건조"는 물질 내의 액체를 감소시키거나 제거하는 분무 건조, 동결 건조, 공기 건조, 진공 건조 또는 임의의 기타 종류의 공정을 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "분무 건조"는 고온 기체를 사용하여 액체를 증발시킴으로써 물질 내의 액체를 감소시키거나 제거하는 물질 함유 액체를 건조시키는 통상 사용되는 방법을 지칭한다. 바꾸어 말하면, 본 물질은 가열된 건조 공기 드래프트 내로 스프레이 또는 분무하는 방식으로 건조된다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "동결 건조"(freeze-drying) 및 용어 "동결건조(lyophilization)" 및 용어 "동결탈수(cryodesiccation)"는 승화에 의해 냉동 상태에서 물질로부터 용매의 제거를 지칭한다. 이는 건조될 물질을 공융점 이하로 동결시킨 다음, 승화 잠열을 제공함으로써 달성된다. 열 투입의 정확한 조절은 생성물 역용융 없이 동결 상태로부터의 건조를 가능하게 한다. 실제 적용에 있어서, 당해 공정은 감압 조건하에 촉진되고 정밀하게 조절된다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "무수 자유 유동 분말"은 자유 유동하는 무수 분말을 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "연마"는 충돌, 전단 또는 마멸에 의한 입자 크기의 감소를 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "세척"은 제제의 불순물 또는 바람직하지 않은 가용성 성분의 제거 또는 세정(예: 임의 형태의 용질(예: 증류수, 완충제 또는 용매)를 사용하여)을 의미한다(예를 들면, 효모 세포벽 추출물은 샘플로부터 비효모 세포벽을 제거하기 위해 세척될 수 있다).
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "효소"는 아미노산의 특징적 서열을 갖는 단백질 또는 단백질 기재 분자를 지칭하며, 아미노산은 중첩하여, 독특한 분자 특성을 제공하고, 특정한 세트의 반응물(기질로서 불리움)을 특정한 생성물로 전환시키는 특정한 화학적 반응물에 대한 촉매 또는 화학물질로서 작용하는 특정한 3차원 구조를 생성한다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "펩티드", 용어 "폴리펩티드" 및 용어 "단백질"은 공유 "펩티드 결합"에 의해 연결된 아미노산의 1차 서열을 지칭한다. 일반적으로, 펩티드는 소수의 아미노산, 통상 2 내지 50개 아미노산으로 구성되고, 단백질보다 짧다. 용어 "폴리펩티드"는 펩티드 및 단백질을 포함한다. 펩티드, 폴리펩티드 또는 단백질은 합성, 재조합체 또는 천연 발생의 것일 수 있다. 합성 펩티드는 시험관내에서의 인공적 합성에 의해 생성된다(예를 들면, 생체내에서 생성되지 않음).
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "프로테아제"는 펩티드 또는 아미노산으로의 단백질의 가수분해적 분해를 촉매하는 엔도펩티다제 및 엑소펩티다제를 포함하는 임의의 다양한 효소를 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "용해(lysis)"는 세포내 성분을 방출시키는 효모 세포 막 및 효모 세포벽의 붕괴 또는 파괴를 지칭한다. 본원에 사용된 바와 같이, "용해"는 물리적/기계적, 효소적(자기분해 및 가수분해 포함) 또는 삼투압 메카니즘("알콜 충돌" 및 가수분해 포함)의 결과로서 발생한다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "자가분해(autolysis)"는 자가 생성된 효소에 의한 부분 또는 전체 세포 또는 조직의 파괴를 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "가수분해"는 물의 첨가에 의해 화합물이 단편으로 분리되는 과정을 지칭한다[예를 들면, 중합체를 보다 간단한 단위(예를 들면, 전분을 글루코즈로)로 분쇄하기 위해 사용됨].
본원에 사용된 바와 같이, "알콜 충돌"은 배지의 삼투압과 배지에서 성장하는 세포(예: 효모 세포)내 삼투압의 차이를 생성하기 위해 성장 배지에 알콜(예: 에탄올)을 첨가하여 생성한 삼투압 응력을 지칭한다. 알콜 충돌은 배지에서 성장한 세포(예: 효모 세포)의 용해를 유도한다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "삼투압"은 낮은 용질 농도의 용액(높은 물 전위)으로부터 높은 용질 농도를 갖는 용액(낮은 물 전위)으로 용질 농도 구배 이상까지 반투과성 막을 통한 용매(예: 물)의 확산을 지칭한다. 이는 상이한 농도의 2개 용액을 분리하는 반투과성 막(용매는 투과시키지만, 용질은 투과시키지 않음)을 통해 용매가 에너지 투입 없이 이동하는 물리적 공정이다. 용매의 총 이동은 최저 농축(저장성) 용액으로부터 보다 농축된(고장성) 용액까지이며, 이는 농도의 차이를 감소시키는 경향이 있다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "삼투압 응력" 및 용어 "삼투압 충돌"은, 세포 막을 통한 물의 이동에 있어서 신속한 변화를 유발하는, 세포 주변의 용질 농도에 있어서의 급속한 변화를 지칭한다. 고농도 염의 조건하에서, 상청액 물 중의 기질 또는 임의의 용질은 삼투압을 통해 세포외부로 방출된다. 이는 또한 세포를 "충돌"시키는 세포 내로 기질 및 보조인자의 전이를 억제한다. 또는, 저농도의 용질에서, 물은 대량으로 세포에 도입되어, 팽윤을 유발하고 파열하거나 아폽토시스를 유도한다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "샘플"은 생물학적 및 환경학적 샘플 뿐만 아니라 임의의 공급원으로부터 수득한 시료 또는 배양물을 포함하는 다양한 측면에서 사용된다. 생물학적 샘플은 동물(사람 포함)로부터 수득할 수 있고, 유체, 고체, 조직 및 기체를 포함한다. 생물학적 샘플은 혈액 산물, 예를 들면, 혈장, 혈청 등을 포함한다. 환경학적 샘플은 환경학적 물질, 예를 들면, 표면 물질, 토양, 물, 결정 및 산업적 샘플을 포함한다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "복합체"는 2종 이상의 분리된 실체 사이의 결합에 의해 형성된 실체를 지칭한다(예를 들면, 당해 실체가 동일하거나 상이한 2종 이상의 실체(예를 들면, 동일하거나 상이한 화학적 종류) 사이의 결합). 당해 결합은 공유 결합이거나 비공유 결합일 수 있다[예를 들면, 반데르 발스, 전기영동, 전하 상호작용, 소수성 상호작용, 쌍극자 상호작용 및/또는 수소 결합력(예를 들면, 우레탄 결합, 아미드 결합, 에스테르 결합 및 이들의 조합)].
발명의 상세한 설명
본 발명은 변형된 세포벽 구조(예를 들면, 점토 및/또는 점토 성분이 효모 세포벽 내로 혼입되고/되거나 글루칸:만난 비율이 변화됨)를 포함하는 신규한 효모 세포, 이를 제조하는 방법, 이를 포함하고/하거나 이로부터 유도된 조성물, 및 이를 사용하는 방법(예: 박테리아 및 마이코톡신을 포획하기 위해)을 제공한다.
몇몇 양태에서, 본 발명은 효모 세포벽 내로 혼입된 (예를 들면, 점토의 존재하에 효모 세포의 배양에 기인하여) 점토 및/또는 점토 성분(들)을 포함하는 효모 세포벽 추출물(예: 분리된, 정제된, 변형된 및/또는 농축된 세포벽 추출물) 및/또는 변화된 글루칸:만난 구조를 포함하는 효모 세포벽 추출물을 제공한다. 몇몇 양태에서, 효모 세포벽 내로 혼입된 점토 및/또는 점토 성분을 포함하는 점토 혼입된 효모 세포벽 추출물 및/또는 변화된 글루칸:만난 구조를 포함하는 효모 세포벽 추출물은 사료, 유기 물질(예: 상부재) 및/또는 물과 혼합되거나 이에 첨가되어, 마이코톡신(예: 동물의 위장관에서 또는 여과 동안)을 포획하고 마이코톡신의 부작용을 제거하거나 감소시킨다. 따라서, 몇몇 양태에서, 본 발명은 마이코톡신에 대한 효모 세포벽 기재 물질의 흡수/포획 특성을 현저히 개선시키는 방법을 제공한다[예를 들면, 동물의 소화관에서 다양한 마이코톡신을 현저히 흡수하고/하거나 포획하고/하거나 이의 생체이용성을 제한한다(예를 들면, 점토 단독, 효모 세포벽 추출물 단독, 무수 블렌드에 기초하여 점토가 차후에 첨가되는 효모 세포벽 추출물의 배합물을 사용하는 경우에 흡수되지 않고/않거나 포획되지 않음; 및/또는 점토계 생성물의 상부에 폴리사카라이드의 화학적 그래프팅].
몇몇 양태에서, 본 발명은 하나 이상의 점토의 존재하에 성장된 효모 세포의 신규한 제조방법을 제공한다. 몇몇 양태에서, 점토 혼입된 효모 세포벽은 하나 이상의 점토의 존재하에 성장시킨 점토 혼입된 효모 세포로부터 추출된다. 몇몇 양태에서, 점토 혼입된 효모 세포벽 추출물은 정제되고/되거나 농축된다. 본원에 기재된 바와 같이, 본 발명은 임의의 특정한 효모 세포 균주 또는 임의의 특정한 점토로 한정되지 않는다. 몇몇 양태에서, 점토 공급원은 표준 상업 등급의 점토 공급원(예를 들면, 마이코톡신에 대해 시험관내, 생체내 및/또는 생체외 특성을 나타내도록 선택된 점토 공급원, 또는 마이코톡신에 대한 시험관내, 생체내 및/또는 생체외 특성을 나타내지 않기 때문에 선택된 점토 공급원)이다. 본 발명의 조성물 및 방법은 다양한 피검체에서 마이코톡신의 흡수 및/또는 포획에 사용될 수 있다. 실제로, 본 발명은 본원에 기재된 조성물 및 방법으로부터 잇점을 갖는 피검체의 종류에 의해 한정되지 않는다. 본 발명은 모든 동물에게 유익할 수 있지만, 예시적인 피검체는, 이로써 한정되는 것은 아니지만, 사람, 조류, 소, 돼지, 말, 양, 염소, 고양이, 낙타, 설치류 종 뿐만 아니라 어류 및 조개 피검체를 포함한다. 몇몇 양태에서, 유기 물질(예: 상부재(床敷材) 및 사료 포함) 및/또는 물과 혼합되고/되거나 피검체에 직접 공급되는 경우, 본 발명의 조성물은 피검체에 의한 미이코톡신의 흡수 또는 흡착을 감소시키고, 이에 의해 감소된 기능, 건강을 완화시키고/시키거나 피검체에서 마이코톡신 관련 질환 및 병리학적 반응의 발병을 감소시킨다.
몇몇 양태에서, 본 발명은 효모 세포벽 내로 혼입된 점토 및/또는 점토 성분(들)을 포함하고/하거나 변화된 글루칸:만난 구조를 포함하는 효모 세포를 제조하고/하거나 생성하는 방법을 제공한다. 예를 들면, 몇몇 양태에서, 본 발명은 점토의 존재하에 생성되고/되거나 배양된 효모 세포를 제공하고, 여기서 효모 세포벽은 점토의 부재하에 생성/배양된 효모 세포의 글루칸:만난 비보다 큰(예를 들면, 2.5% 초과, 5% 초과, 10% 초과, 15% 초과, 20% 초과, 25% 초과, 30% 초과, 40% 초과, 50% 초과 또는 그 이상) 글루칸:만난 비를 포함한다(예를들어 실시예 2참조). 몇몇 양태에서, 본 발명은 점토의 존재하에 생성되고/되거나 배양된 살아있는 효모 세포로부터 수득된 (예를 들면, 분리, 정제 및/또는 농축된) 효모 세포벽 추출물을 제공하고, 여기서 효모 세포벽은 점토의 부재하에 생성/배양된 효모 세포의 글루칸:만난 비보다 큰(예를 들면, 2.5% 초과, 5% 초과, 10% 초과, 15% 초과, 20% 초과, 25% 초과, 30% 초과, 40% 초과, 50% 초과 또는 그 이상) 글루칸:만난 비를 포함한다(예를들어 실시예 2 참조).
따라서, 본 발명은 점토의 존재하에 배양된 효모로부터의 신규한 점토 혼입된 효모 세포벽 추출물, 및 이를 생성하는 방법을 제공한다. 몇몇 양태에서, 효모 세포를 생성하는 방법은 하나 이상의 점토의 존재하에, 이로써 한정되는 것은 아니지만, 사카로마이세스(Saccharomyces), 칸디다(Candida), 클루이베로사이세스(Kluyveromyces) 및 토룰라스포라(Torulaspora) 종을 포함하는 효모 세포를 배양하여 효모 세포벽을 변화시키거나 변형시킴을 포함한다[마이코톡신을 흡수 및/또는 포획하는 효모 세포의 능력을 증강시키기 위해(예를 들면, 점토 및/또는 점토 성분(들)이 혼입되고/되거나 변화된 글루칸:만난 구조를 포함하는 효모 세포벽에 기인함)]. 몇몇 양태에서, 본 발명은 효모 세포 배양 배지에 하나 이상의 점토계 물질, 이로써 한정되는 것은 아니지만, 실리케이트[예: 텍토실리케이트(예: 제올라이트, 석영, 펠드스파); 층상 실리케이트(예: 카올리나이트, 할로이사이트, 딕타이트, 나크리트, 크리소타일, 안티고라이트, 리자르다이트, 탈크), 납석, 스멕타이트(예: 몬트모릴로나이트, 베이델라이트, 몬트로나이트; 버미큘라이트, 미카산티고라이트, 무스코바이트, 일라이트, 펜가이트, 바이오타이트); 해포석, 팔리고스카이트, 아타펄자이트 그룹], 및/또는 수소화 알루미늄 실리케이트(예: 몬트모릴로나이트, 벤토나이트)의 블렌드를 제공한다(도 1A 및 1B 및 도 2 참조). 몇몇 양태에서, 효모 세포 배양 배지 내로 블렌딩된 하나 이상의 점토는 전체 성장 배지의 약 0.075%, 0.1%, 0.125%, 0.25%, 0.5%, 1%, 2%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 12%, 15% 또는 그 이상의 농도로 존재한다. 몇몇 양태에서, 효모 세포 배양 배지 내로 블렌딩된 하나 이상의 점토의 양은 효모 세포가 성장하는 반응기의 최종 함량의 2%를 초과하지 않는다. 몇몇 양태에서, 효모 세포 배양 배지에 첨가된 점토의 양은 효모 세포 배양 배지의 팽윤을 유도하지 않도록 선택된다(예를 들면, 약 2.0% 이하). 몇몇 양태에서, 효모 세포 배양 배지에 첨가된 점토의 양은, 비혼입된 동물 급식에 급식 첨가제로서의 사용에 대해 형식 승인을 갖는 점토의 양을 포함하는 효모로부터 수거한 효모 세포벽 추출물을 생성하도록 선택된다(전체 공급량에서 2%를 초과하지 않음). 몇몇 양태에서, 식품 등급 소포제 또는 탈포제가 세포 배양 배지에 첨가된다[예를 들면, 이로써 한정되는 것은 아니지만, 비실리콘 분자 탈포제, 오일계 탈포제(예: 광유, 식물성 오일, 화이트 오일 또는 발포 매질에 불용성인 기타 오일) 또는 실리콘 화합물계 탈포제(예: 오일 또는 수계 에멀젼으로서 전달됨)를 포함함]. 몇몇 양태에서, 왁스(예: 에틸렌 비스 스테아르아미드(EBS), 파라핀 왁스, 에스테르 왁스 또는 지방 알콜 왁스) 및/또는 소수성 실리카를 첨가하여 발포 매질에서의 유화 및 확산을 향상시킨다.
본 발명의 양태의 개발중에 수행된 실험은 하나 이상의 점토의 존재하에 효모 세포의 성장에 중요한 다수의 인자를 확인했다. 예를 들면, 몇몇 양태에서, 점토 지지체 물질과 물의 관계(w/v)(예: g/cc에 상응함)를 3% 이하[예를 들면, 고체 또는 반고체 상태(예: 점토 물질의 흡수성 및 체류성에 기인하여)에 도달하는 것을 방지하기 위해]로 유지하는 것이 중요하다. 따라서, 수팽윤성 수화 알루미늄 실리케이트의 흡수성은 본 발명의 배양 배지 제형에서 점토 지지체 물질 대 물의 비율에 대한 한정 인자이다. 몇몇 양태에서, 사용된 배양 배지 및 병은 멸균시키고, 미생물에 의한 접종은 표준 공정에 따라 수행한다. 예를 들면, 몇몇 양태에서, 예비 접종물은 멸균 탈이온수의 병에서 활성 무수 효모로 제조하고, 소정 기간(예: 20분) 동안 약 25-30℃(예: 28℃)에서 배양한다. 몇몇 양태에서, 예비-접종은 무균으로 수행한다(예: 약 30℃의 온도에서). 몇몇 양태에서, pH 및 글루코즈 수준을 모니터링하고, 유지시킨다. 몇몇 양태에서, 배양물의 진탕은 성장 동안 서서히 증가시킨다(예: 100 내지 500rpm). 몇몇 양태에서, 하나 이상의 점토를 성장 동안 배양물에 무균 첨가한다(예: 배양 영양소의 절반 미만, 대략 절반 또는 절반 이상이 소비되는 경우).
몇몇 양태에서, 효모 세포 배양 배지 내로 블렌딩된 점토의 양이 (예: 사용된 점토 또는 점토들의 종류에 따르는 양) 증가함에 따라, 점토 물질의 팽윤 특성은 효모 세포 성장을 억제시킨다.
몇몇 양태에서, 점토 블렌딩된 효모 세포 배양 배지에서의 효모 성장은 성장 효모를 자극하는 조건을 제공한다. 본 발명은 임의의 특정한 작용 메카니즘에 한정되지 않고 작용 메카니즘의 이해가 본 발명의 실시에 반드시 필요한 것은 아니지만, 몇몇 양태에서, 점토 블렌딩된 세포 배양 배지에 의해 효모에 적용되는 스트레스는 효모가 보다 많은 글루칸을 생성하게 하여 글루칸:만난의 비를 증가시킨다.
몇몇 양태에서, 본 발명은 하나 이상의 점토의 존재하에 배양된 효모 세포가 점토 및/또는 점토 성분을 효모 세포벽 내로 혼입시킬 뿐만 아니라 변화된 세포벽 조성을 나타내는 것을 제공한다(예: 글루칸:만난의 변화된 비율, 전체 단백질 함량 및/또는 잔류물 양). 예를 들면, 본 발명은 점토의 부재하에 배양된 효모 세포의 글루칸:만난 비보다 큰(예: 2.5% 초과, 5% 초과, 10% 초과, 15%, 20% 초과, 25% 초과, 30% 초과, 40% 초과, 50% 초과 또는 그 이상) 글루칸:만난 비를 포함하는 효모 세포를 제공한다(예를들어 실시예 2 참조). 본 발명은 또한 점토의 부재하에 배양된 효모 세포 및/또는 효모 세포벽 추출물의 전체 단백질 함량과 비교하여 증가된 단백질 함량(예: 100%, 200%, 300%, 400%, 500% 이상의 단백질 함량 증가)을 제공한다(예를들어 실시예 2 참조).
몇몇 양태에서, 본 발명은, 통상의 조성물보다 우수한 마이코톡신 포획 특성을 제공하는, 효모 세포벽 내로 혼입된 점토 및/또는 점토 성분(들)을 포함하고/하거나 변화된 글루칸:만난 비의 구조체를 포함하는 효모 세포벽 추출물을 제공한다. 본 발명은 하나 이상의 점토의 존재하에 배양된 효모로부터 효모 세포벽 추출물을 생성하는 특정한 방법으로 한정되지 않는다. 실제로, 다양한 공정을 사용하여 효모 세포벽 추출물을 생성할 수 있고, 여기에는, 이로써 한정되는 것은 아니지만, 유리 비드 및 비드 비터의 사용, 효소적(예: 프로테아제(예: 파파인)) 처리, 기계적 용해, 자가용해 및 가수분해 및 당해 기술분야에 공지된 기타 방법[참조: Peppler, H. J. 1979. Production of yeasts and yeast products. Page 157 in: Microbial Technology & Microbial Processes, Vol.1 (2d Ed.), Academic Press]이 포함된다. 용해 및 추출 후, 점토 및/또는 점토 성분 혼입된/통합된 효모 세포벽을 세척하여 세포내 성분을 제거하고 추출물을 정제한다. 수득된 추출물은, 이로써 한정되는 것은 아니지만, 동결 건조 및/또는 분무 건조(예: 흡습성 수불용성 분말)를 포함하는 당해 기술분야에 통상적인 다수의 임의의 방법으로 건조시킬 수 있다.
따라서, 본 발명은, 몇몇 양태에서, 효모 세포벽 내로 직접 혼입된 점토 및/또는 점토 성분을 포함하는 효모 세포벽 추출물을 제공한다. 몇몇 양태에서, 효모 세포벽 내로 직접 혼입된 점토 및/또는 점토 성분을 포함하는 본 발명의 효모 세포벽 추출물을 포함하는 조성물은 효모 세포벽 추출물의 일부로서 약 0.5% 미만의 점토, 0.5-1%, 1-2%, 2-5%, 5-10%, 10-15%, 15-20%, 20-30%, 30-40%, 40-50%, 50-60%, 60-70%, 70% 이상의 점토 및/또는 점토 성분을 포함한다(중량/중량% 기준). 몇몇 양태에서, 배양 배지 중의 점토의 양 증가는 효모 세포벽 추출물의 점토 및/또는 점토 성분 함량의 양을 증가시킨다.
몇몇 양태에서, 효모 세포 내로 도입되지 않은 효모 세포 성장 배지에 첨가된 점토를 수집하고, 후속의 효모 세포 성장 공정에 사용한다(예: 도입되지 않은 점토 물질은 재순환됨). 예를 들면, 점토 물질의 재순환은 효모와 비교하여 점토의 침전 특성에 의해 촉진된다. 실제로, 본 발명의 양태의 개발중에 수행된 실험은 2개의 회수가능한 층, 즉 (i) 점토 물질을 단독으로 함유하는 하부 층(99%) 및 (ii) 효모 내로 도입된 점토 분획을 함유하는 상부 층을 생성했다. 따라서, 메카니즘이 본 발명의 실시에 반드시 필요한 것은 아니고 본 발명이 임의의 특정 메카니즘에 한정되지 않지만, 몇몇 양태에서, 본 발명은 효모 세포벽 내에 및/또는 효모 세포벽 상에 점토 입자의 직접 함유를 제공한다[예: 이는 효모 세포벽 추출물 제조 공정 후까지 생존한다(예: 효모 세포벽의 글루칸 중합체 사슬 내로 점토 또는 점토 성분의 직접 혼입에 의해)]. 다른 양태에서, 점토 분획은 배양 및 분아시 효모 세포를 딸 세포와 함께 포획하고, 효모 세포는 당해 효모가 용해되고 이의 세포내 성분이 세척에 의해 제거되기 전에 거대 구조를 포함하는 점토 속에 포획된다.
몇몇 양태에서, 효모 세포 또는 효모 세포벽 성분[예: 본원에 기재된 바와 같이 생성되고 분리된 효모 세포벽 추출물(예: 효모 세포벽 내로 혼입된 점토 또는 점토 성분을 포함하고/하거나 변화된 글루칸 및/또는 만난 구조를 포함함)]은, 이로써 한정되는 것은 아니지만, 효소(예: 에스테라제, 에폭시다제), 박테리아, 효모 또는 효모 성분, 점토 등을 포함하는 하나 이상의 제제와 (예: 급식과의 혼합, 펠렛화 급식 내로의 도입 및/또는 동물에 공급 전에) 배합한다.
몇몇 양태에서, 본 발명은 변화된 효모 세포벽 구조(예: 효모 세포벽 내로 혼입된 점토 및/또는 점토 성분 및/또는 변화된 글루칸 및/또는 만난 구조를 포함하는 세포벽)를 포함하는 효모 세포, 이를 포함하는 조성물, 및/또는 마이코톡신을 감소, 제거 및/또는 배제하기 위한 조성물 및/또는 방법[예: 본원에 기재된 물리적, 혼합, 화학적, 미생물학적 방법(예: 박테리아 및 톡신을 흡수 및/또는 포획하기 위해)에 사용하기 위해 본원에 기재된 하나 이상의 방법 및/또는 물질과 함께 사용되는, 이로부터 유도된 조성물을 제공한다. 예를 들면, 몇몇 양태에서, 효모 세포 또는 효모 세포벽 성분[예를 들면, 본원에 기재된 바와 같이 생성된 효모 세포벽 추출물(예: 효모 세포벽 내로 혼입된 점토 또는 점토 성분(들)을 포함하고/하거나 변화된 글루칸 및/또는 만난 구조를 포함함)]은 마이코톡신을 포획하기 위해 본원에 기재된 하나 이상의 물리적, 혼합, 화학적 또는 미생물학적 방법과 함께 사용된다.
본 발명은 포획된 마이크로톡신의 종류에 한정되지 않는다. 실제로, 본 발명의 조성물(예: 점토 혼입된 효모 세포벽 추출물)을 사용하여 다양한 마이코톡신을 흡수 및/또는 포획할 수 있고, 이러한 마이코톡신에는, 이로써 한정되는 것은 아니지만, 아세톡시시르펜디올, 아세틸데옥시니발렌올, 아세틸니발렌올, 아세틸네오솔라니올, 아세틸 T-2 톡신, 아플라톡신 B1, B2, G1 및 G2 를 포함하는 모든 아플라톡신, 아플라트렘, 알테누산, 알테르나리올, 오스트디올, 오스트아미드, 오스토시스틴, 아베나세인 +1, 베오베리신 +2, 벤테놀라이드, 브레비안아미드, 부테놀라이드, 칼로넥트린, 카에토글로보신, 시트리닌, 시트레오비리딘, 코클리오딘올, 사이토칼라신 E, 사이클로피아존산, 데아세틸칼로넥트린, 데아세틸네오솔라니올, 데옥시니발렌올 디아세테이트, 데옥시니발렌올 모노아세테이트, 디아세톡시시르펜올, 데스트룩신 B, 엔니아틴스, 맥각 톡신 및 내생균 모두를 포함하는 톡신, 프럭티게닌 +1, 푸마길린, 푸모니신스, 푸모니신스 B1 및 B2 및 B3, 푸사레논-X, 푸사로크로마논, 푸사르산, 푸사린, 글리오톡신, HT-2 톡신, 이포메아닌, 아일랜드디톡신, 라테리틴 +1, 리코마라스민 +1, 말포르민, 말토리진, 모닐리포르민, 모노아세톡시시르페놀, 네오솔라니올, 니발레놀, NT-1 톡신, NT-2 톡신, 모든 오크라톡신을 포함하는 톡신, 웁스포레인, 옥살산, 파툴린, 페니실린산, 페니트렘, 로리딘 E, 루브라톡신, 루브로스키린, 루브로설핀, 루굴로신, 삼부시닌 +1, 사트라톡신스, F, G, H, 시르펜트리올, 슬라프라민, 스테리 농축된 변형된 효모 세포벽 엑스트라액토시스틴, T-1 톡신, T-2 톡신, 트리아세톡시시르펜디올을 포함하는 모든 트리코테센스, 트리코데르민, 트리코테신, 트리코베린스, 트리코베롤스, 트립토퀴발렌, 베루카린, 베루쿨로겐, 비오푸르푸린, 비오멜레인, 비리디톡신, 크산토실린, 야바니신 +1 및 제아르알레놀, 제아르알라논, 제아르알레논 및 아과 및/또는 이의 유도체가 포함된다. 몇몇 양태에서, 본 발명의 조성물 및 방법을 사용하여 아플라톡신, 제아르알레논, 오크라톡신, 트리코테센, 푸모니신, 파툴린 및/또는 엔도파이트 관련된 맥각 및 가능하게는 상기 마이코톡신의 접합체 및 대사산물을 흡수 및/또는 포획한다. 본 발명의 개발중에 수행된 실험은 종래 또는 통상의 방법과 비교하여 본 발명을 사용한 잇점을 증명한다. 예를 들면, 본원에 기재된 바와 같이, (1) 점토를 단독으로 포함하는 조성물, (2) 효모 세포벽 추출물을 단독으로 포함하는 조성물 뿐만 아니라 (3) 점토가 첨가된 효모 세포벽 추출물을 포함하는 조성물을 사용한 결점은 이러한 조성물 및 이를 사용한 방법이 마이코톡신의 부작용을 감소시키는 본 발명보다 덜 효과적인 수단이고 보다 많은 단점을 갖는다는 것이다. 그러나, 본 발명의 점토 혼입된 효모 세포벽 추출물(예를 들면, 효모 세포벽 내로 혼입된 점토 및/또는 점토 성분을 포함하고/하거나 변화된 글루칸 및/또는 만난 구조를 포함함)은 다양한 마이코톡신을 포획하는 예상치 못한 능력을 나타내고 또한 통상의 조성물과 비교하여 마이코톡신을 흡수하는 현저히 향상된 능력을 나타낸다(예를 들면, 점토(들)를 단독으로 포함하는 조성물, 효모 세포벽 추출물을 단독으로 포함하는 조성물 뿐만 아니라 점토(들)가 첨가된 효모 세포벽 추출물을 포함하는 조성물, 실시예 2 내지 3 참조). 따라서, 본 발명은 통상적인 조성물 및 방법에서 발견되지 않은 다양한 마이코톡신과 관련하여 예상치 못한 우수한 포획 및/또는 흡수 특성을 나타낸다. 따라서, 본 발명은 동물 및 사람의 소화관에서 마이코톡신을 포획하는 효과적인 방법을 제공하기 위해 점토 혼입된 효모 세포벽 기재의 물질 및 이의 제조 및 사용 방법을 제공하고(예를 들면, 사료, 기타 유기 물질 및/또는 물에 존재하는 마이코톡신의 흡수를 통해), 또한 유용한 영양소의 보다 낮거나 없는 흡수 및 환경에 대한 보다 적거나 없는 부작용을 제공한다.
몇몇 양태에서, 본 발명의 바람직한 물리적 형태는 사료, 기타 유기 물질(예: 상부재(床敷材)) 내로의 직접 함유 또는 동물에 대한 직접 보충물로서 적합한 무수 자유 유동 분말이다.
본 발명의 조성물은 임의의 유기 물질(예: 상부재(床敷材), 동물용 사료, 사람용 식량) 및/또는 물[예: 동물 및/또는 사람 소비에 사용된 물, 환경 용수(예: 연못, 호수, 저수지, 수조 등)]에 첨가되어 당해 물질로부터 마이코톡신을 제거할 수 있다. 동물 사료에 직접 혼입되는 경우, 본 발명의 조성물은 사료의 약 0.0125중량% 내지 약 0.4중량% 범위의 양으로 첨가된다. 기타 유기 물질(예: 동물 상부재(床敷材)) 내로 혼입되는 경우, 본 발명의 조성물은 약 0.0125% 내지 약 99.9% 범위의 양으로 첨가된다. 액체(예: 물(예: 여과용)) 내로 혼입되는 경우, 본 발명의 조성물은 약 0.0125% 내지 약 100% 범위의 양으로 첨가된다. 몇몇 양태에서, 본 발명의 조성물은 사료의 약 0.025중량% 내지 약 0.2중량%의 양으로 사료에 첨가된다. 이와는 달리, 본 발명의 조성물은 보충물로서 (예를 들면, 1일당 동물당 약 2.5 내지 약 20g 범위의 양으로)동물에게 직접 공급된다. 당해 기술분야의 통상의 지식을 가진 자는 공급되는 양이 동물 종류, 크기, 본 발명의 조성물이 첨가되는 사료의 종류, 상부재료(bedding material), 물 공급원 등에 따라 달라짐을 즉각 인지한다.
본 발명의 조성물은 임의의 동물 및 사람에게 공급될 수 있다. 사료와 혼합되거나 급식 보충물로서 사용되는 경우, 본 발명의 조성물은 마이코톡신 생체이용율, 동물에 의한 마이코톡신의 흡수 또는 흡착을 감소시키고, 기능 및/또는 건강을 향상시키며 발병 빈도를 감소시킨다. 몇몇 양태에서, 본 발명의 조성물이 동물 및 사람이 접촉하는 유기 물질(예: 상부재(床敷材))에 첨가되는 경우, 본 발명의 조성물은 마이코톡신 생체이용율을 감소시키고(예: 동물에 의한 마이코톡신의 흡수 및/또는 흡착을 감소시킴), 이에 의해 기능 및 건강을 향상시키고 발병 빈도를 감소시킨다. 몇몇 양태에서, 본 발명의 조성물은 동물 또는 사람에 의한 사용이 의도되는 물에 첨가되고(예: 소비 또는 기타 목적), 이에 의해 마이코톡신 생체이용율을 감소시키고(예: 동물 또는 사람 피검체에 의한 마이코톡신의 흡수 및/또는 흡착을 감소시킴) 기능 및 건강을 향상시키며 발병 빈도를 감소시킨다(예를 들면, 본 발명의 조성물은 마이코톡신의 생체이용율, 흡수 또는 흡착을 감소시킨다). 몇몇 양태에서, 본 발명의 조성물은 사람 소비용으로 사용된 물(예: 쥬스, 와인, 물병, 커피, 차, 우유 또는 기타 유형의 소비 액체의 제조에 사용된 물)에 첨가된다. 몇몇 양태에서, 본 발명의 조성물은 환경 용수(예: 연못, 호수, 저수지, 강, 냇가, 용수로, 어류 또는 기타 형태의 수생 종을 수용하기 위해 사용된 탱크)에 첨가된다. 따라서, 몇몇 양태에서, 본 발명의 조성물(예: 세포벽 내로 통합된 점토 또는 점토 성분을 포함하는 효모 세포벽 추출물)은 액체[예: 소비성 액체(예: 식용 제품, 음료에 사용된 물)]의 여과에 사용된다. 예를 들면, 몇몇 양태에서, 본 발명의 조성물은 필터로서 또는 필터에 사용되고, 여기서 액체[예: 소비성 액체(예: 오렌지 쥬스, 사과 쥬스, 푸룬 쥬스, 포도 쥬스, 크랜버리 쥬스 또는 기타 형태의 쥬스, 맥주, 와인, 증류액 등)]는 본 발명의 조성물을 포함하는 필터를 통해 처리되고, 이때 조성물은 액체로부터 하나 이상의 유형의 마이코톡신을 제거한다.
실시예 1 내지 4에 기재된 바와 같이, 점토의 존재하에 효모의 배양은 마이코톡신의 효모 세포벽 흡수의 현저한 증가를 제공한다[예를 들면, 효모가 점토와 함께 배양되지 않은 경우에 6.917%로부터, 1.0% 또는 2.0%의 점토가 각각 내부 효모 세포벽 층의 글루칸의 특정한 추출 없이 배지에 포함되는 경우에 73.553% 및 79.337%에 도달(실시예 2 참조)]. 더욱이, 글루칸:만난의 비는 점토의 첨가에 의해 1.066으로부터 1.366으로 증가한다. 만난의 감소에도 불구하고, 세포벽의 단백질 농도는 증가한다. 또한, 잔류물 분획(예: 추출 공정 동안 효모 세포벽에 존재하는 글루칸, 만난, 단백질, 점토, N-아세틸글루코사민 및/또는 키틴의 소실을 나타냄)은 점토의 존재 및 표면적을 증가시켰다. 소정 메카니즘이 본 발명의 실시에 반드시 필요한 것은 아니고 본 발명이 임의의 특정한 작용 메카니즘에 한정되는 것은 아니지만, 몇몇 양태에서, 이러한 증가는 성장 환경 및 조건의 변화에 기인하여 효모의 보상 메카니즘에 수반된 키틴 분획의 증강에 기인한다. 더욱이, 본 발명의 조성물[변화된 효모 세포로부터의 효모 세포벽 추출물 포함(예: 효모 세포벽 내로 혼입된 점토 및/또는 점토 성분을 포함하는 효모 세포 및/또는 변화된 글루칸 및/또는 만난 구조를 포함하는 세포벽)]은 마이코톡신[예: 제아르알레논(예: 점토가 무수 블렌드 기준으로 이후에 첨가된 효모 세포벽 추출물의 배합물을 포함하는 통상의 조성물에서 단지 44.7% 효능과 비교하여 79.33% 효능을 나타냄, 실시예 1 내지 4 참조)]을 흡수 및/또는 포획하는 현저하고 예상치 못한 능력을 제공한다.
프로테아제 절단을 사용하여 점토 혼입된 효모 세포의 점토 혼입된 효모 세포벽을 추출하기 위한 또 다른 방법의 사용이 연구되었다(실시예 3 참조). 점토 혼입된 효모 세포벽의 내층(글루칸)의 특정한 추출은 마이코톡신(예: 제아르알레논)에 대한 점토 혼입된 효모 세포벽의 포획 및 흡수 특성의 증가를 제공했다. 더욱이, 점토를 1.0% 및 2.0% 포함하는 세포 배양 배지에서 효모 세포를 배양하는 것은 마이코톡신(예: 제아르알레논)에 대한 점토 혼입된 효모 세포벽의 포획 및 흡수를 현저히 증강시켰다. 예를 들면, 점토가 무수 블렌드 기준으로 이후에 첨가된 효모 세포벽 추출물의 배합물을 포함하는 종래의 조성물은, 본 발명의 조성물로 수득한 마이코톡신의 포획에 대한 85.89% 효율과 비교하여, 마이코톡신의 포획에 대해 44.7% 효율로 계산되었고, 아플라톡신 B1 흡수는 2.65에서 53.70%로 를 증가했다(실시예 3 참조).
몇몇 양태에서, 본 발명은 점토 혼입된 효모 세포벽을 포함하는 효모 세포의 제조방법을 제공한다. 몇몇 양태에서, 점토 혼입된 효모 세포벽을 포함하는 효모 세포는 다양한 규모(예: 시험 규모, 배치 규모, 파일롯 규모, 예비-생산 규모, 생산 규모, 상업적 규모, 산업적 규모)로 생성된다. 몇몇 양태에서, 효모는 발효조에서 성장시킨다. 발효조는 본 발명에 사용하기 위한 목적하는 규모(예: 시험 규모, 파일롯 규모, 산업적 규모 등)의 효모를 생성하기 위해 임의의 적합한 크기(예: 5 리터.. 10리터.. 25리터.. 50리터.. 100리터.. 500리터.. 1K리터.. 5K리터.. 10K리터.. 50K리터.. 100K리터.. 500K리터.. 1백만리터 등)일 수 있다. 몇몇 양태에서, 효모 성장용 배지는 본 발명에 따라 효모를 성장시키는 임의의 적합한 조성물일 수 있다. 적합한 영양소는 탄소, 질소, 인, 마그네슘, 황, 칼륨 및 미량 원소의 공급원이다. 몇몇 양태에서, 영양소는 소정 범위(중량%): 탄소 공급원 0.01 - 20% (예: 0.05 - 10%), 질소 공급원 0.001 - 10% (예: 0.001 - 3%), 인 공급원 0.001 - 5% (예: 0.01 - 0.5%), 마그네슘 공급원 0.001 - 0.2% (예: 0.001 - 0.2%), 황 공급원 0.01 - 0.25% (예: 0.01 - 0.25%), 칼륨 공급원 0.001 - 05% (예: 0.01 - 0.25%), 유기 질소 공급원 0.001 - 5% (예: 0.01 - 5%)내의 농도(공급원 화합물의 중량%)로 배양물에 첨가되고, 미량 원소는 과량으로 첨가된다. 몇몇 양태에서, 효모 배양 배지는 물, 탄소 공급원(예: 당, 글루코즈, 덱스트로즈, 사탕수수, 당밀 등), 적합한 질소 공급원(예: 암모니아, 우레아 등), 아미노산 공급원(예: 펩톤 등), 염(예: 염화나트륨, 차아염화칼슘, 염화마그네슘, 황산마그네슘, 황산아연 등) 및 점토 또는 점토 성분의 공급원(예: 제올라이트, 벤토나이트, 알루미노실리케이트, 몬트모릴로나이트, 스멕타이트, 카올리나이트, 유기점토, 이들의 혼합물 등)을 포함한다. 몇몇 양태에서, 효모 배양 배지 성분은 효모 세포 성장에 적합한 임의의 양으로 존재할 수 있다(실시예 5 참조). 몇몇 양태에서, 효모 배양 배지 중의 점토의 존재는 표준 효모 성장 프로토콜과 비교하여 예상치 못한 복잡성을 나타낸다. 몇몇 양태에서, 배양 배지 중의 점토의 존재는 발효조 내에 특히 대량의 발포를 생성한다. 몇몇 양태에서, 본 발명은 세포 배양 배지에서 소포제[예: 비실리콘 분자 소포제, 오일계 소포제(예: 광물 오일, 식물 오일, 화이트 오일 등), 분말 소포제(예: 실리카), 수계 소포제, 실리콘계 소포제, 폴리에틸렌 글리콜 폴리프로필렌 글리콜 공중합체, 알킬 폴리아크릴레이트 등]를 제공한다. 몇몇 양태에서, 소포제는 본 발명의 규모의 증가에 요구된다. 몇몇 양태에서, 소포제의 사용은 본 발명의 조성물의 생성을 대규모화하는 향상된 능력과 관련된다.
실시예
다음 실시예는 본 발명의 특정한 바람직한 양태 및 태양을 증명하고 추가로 설명하기 위해 제공되며, 본 발명의 범위를 한정하는 것으로 간주되어서는 안된다.
실시예 1
재료 및 방법
효모 배양. 다음 프로토콜을 각각의 바이오플로우(Bioflow) 발효조(BioFlow III, New Brunswick Scientific Co., Inc., Edison, New Jersey, U.S.A.)에 사용하여 효모 사카로마이세스 세레비지애(Sacchromyces cerevisiae)(페르민 알테크 인코포레이티드(Fermin, Alltech Inc.)사의 활성 무수 효모(ADY), Batch #689, 효모 계수: 2.38x1010 세포/g, 생존능: 92.6%)를 성장시켰다. 효모 접종물은 신선한 ADY 페르민 28g을 250ml 멸균 탈이온수의 예비 가온 병에 옮겨 제조했다. 이어서, 용액은 20분 동안 30℃(수욕에서)에서 항온처리하고, 수회 와동시켰다. 바이오플로우 배지는 66g의 효모 추출물, 10g의 펩톤, 4g의 덱스트로즈, 4g의 효모 질소 염기 및 1750mL의 탈이온수로 구성되었다. 대조군 배치는 효모를 단독으로 성장시켜 제조하고, 이는 반응기 용적에 대해 250mL의 탈이온수가 추가로 필요했다. 효모 및 벤토나이트 K10(Fluka)를 함유하는 3개 배치는 반응기에 8, 16 및 32g을 첨가하여 제조했다. 바이오플로우 반응기 배지를 30℃로 가온시키고, 공기를 접종 전 10분 동안 1L/분 유동으로 주입했다. 진탕은 300rpm으로 설정하고, 배지를 모니터링하고, 전체 성장 동안 최소 pH 5.0에서 유지했다. 소포제를 첨가했다(소포제 AES, 1:10, 필요에 따라). 이어서, 인산암모늄 이염기성(DAP)를 무균적으로 주입했다(pH 4.0에서 10mL 중의 4g). 미리 재현탁시킨 효모를 발효조에 첨가했다. 글루코즈 수준은 당뇨성 스트립(OneTouch, UltraMini, LifeScan, Inc., Milpitas, California, U.S.A.)으로 성장시키는 동안 시험하고, 보충 글루코즈는 글루코즈 수준이 0.8mg/mL 이하로 저하될 때에 첨가했다. 교반은 공기 유동(3시간에 걸쳐 4L/분 이하) 뿐만 아니라 2시간의 항온처리에 걸쳐 500rpm으로 점차 증가시켰다. 보충 글루코즈 기질의 절반이 소모되는 경우, 추가의 벤토나이트를 최종 배지에서 각각 0.5%, 1.0% 및 2.0%의 점토 농도를 위해 반응기에 첨가했다(250mL 탈이온수 중의 8, 16, 32g).
효모 배양물은 모든 당이 이용된 경우에 수거했다. 바이오플로우의 내용물을 멸균 병에 수집하고, 20분 동안 4000g으로 원심분리했다. 상청액을 제거하고, 펠렛을 H2O 중의 0.125% NaCl로 세척했다. 펠렛은 원심분리 후에 독특한 2층 형성에 의해 2개 분획으로 분리되었다: (i) 점토 함유 층 및 (ii) 효모 및 점토 함유 층. 이어서, 효모는 0.125% NaCl 용액으로 3회 세척했다.
점토 혼입된 효모 세포벽 추출 방법. 상기한 바와 같이 제조한 효모로부터 효모 세포벽 분획의 분리에 2개의 별개 방법을 사용했다.
첫번째 방법에서는, 유리 비드 및 미니비드 비터(Bead-Beater, Model #1107900, Biospec Products, Inc., Hamilton Beach/Proctor-Silex, Inc., Southern Pines, North Carolina, U.S.A.)를 사용하는 "마이크로-방법"을 사용했다. 펠렛을 페닐메틸설포노플루오라이트(PMSF(pH 7.4))와 함께 2용적의 10mM 트리스-Cl에 재현탁시키고, 1분 간격의 휴식과 함께 30초 동안 최종 용적 5mL에 유리 비드(50:50, 효모 슬러리:비드)로 와동시켰다. 와동은 10회 반복하거나 세포의 95%가 분쇄될 때까지 반복했다. 비드를 재수집하고, 세척했다. 분획을 모으고, 20분 동안 4000g에서 원심분리했다. 이어서, 펠렛을 수집하고, 동결 건조시키고, 연마했다.
두번째 방법에서는, 효모 펠렛을 13 내지 15%의 무수 물질 농도까지 멸균 탈이온수로 재현탁시켰다. 효모 슬러리를 60℃에서 교반시켰다. pH는 효모를 0.3mL/L로 첨가하기 전에 10% NaOH를 사용하여 8.0으로 조정했다. 온도 및 교반 조건은 8시간에 걸쳐 유지했다. pH를 모니터링하고, 처음 2시간 동안 15분마다(10% NaOH를 사용하여) 모니터링한 다음, pH를 모니터링하고, 다음 6시간 동안 매시간 조정했다. 슬러리를 멸균 원심분리 병에 옮기고, 4000g에서 20분 동안 원심분리했다. 상청액을 버리고, 펠렛을 3용적의 차가운 멸균수로 세척한 다음, 20분 동안 4000g에서 다시 원심분리했다. 세척 단계를 2회 반복한 다음, 펠렛을 동결시키고, 동결 건조시키고, 연마했다.
실시예 2
점토의 부재 및 존재하에 배양한 효모 세포로부터 유리 비드 및 미니비드 비터를 사용하여 분리한 효모 세포벽 추출물의 특성화
효모 세포는 기재된(실시예 1 참조) 비드-비터 및 유리 비드를 사용한 마이크로-방법을 사용하여 PMSF(pH 7.4)와 함께 트리스-HCl에서 세포를 재현탁시킨 후에 분쇄했다. 이어서, 효모 세포벽 용해물을 분석하여 세포벽 및 마이코톡신의 흡수능을 각 개개 마이코톡신의 고려된 생리학적 pH 조건하에 특성화했다(존재하는 전체 마이코톡신과 비교된 효능(%)로서 표시됨). 전체 흡수/결합 활성은 역학적으로 평가했다. 최소 5수준, 10수준 이하의 마이코톡신 농축물을 포함하는 시험 샘플은, 동물 관에서 pH의 소화 조건을 나타내는 pH 4의 고정 값으로 수성 매질에 분산된 0.25 내지 4g/L의 농도로 사용된 상이한 효모 세포벽 제제로 시험했다. 흡수 평가는 (예: 마이코톡신 및 흡수/포획된 마이코톡신의 양을 검출하기 위해) 형광계측 및 다이오드-어레이 검출기에 결합된 고성능 액체 크로마토그래피로 계산했다.
데이타는 도 3에 도시되어 있다. 점토의 존재하에 배양된 효모 세포(점토 혼입된 효모 세포)로부터 수득한 효모 세포벽은 제아르알레논을 포획 및 흡수하는 현저한 예상치 못한 능력을 나타낸다(예를 들면, 점토의 부재하에 배양된 효모 세포로부터 추출한 효모 세포벽의 6.91%와 비교하여, 2% 점토의 존재하에 배양한 효모 세포로부터 추출한 효모 세포벽의 경우에 79.33% 효능을 나타냄). 2% 점토의 존재하에 배양한 효모 세포로부터 추출한 효모 세포벽 조성물에서의 79.33% 효율은, 점토가 무수 블렌드 기준으로 이후에 첨가된 효모 세포벽 추출물의 배합물을 포함하는 종래의 조성물의 경우에 이미 보고된 44.7%의 효율보다 현저히 높았다. AFB1 및 ZEA에 대한 포획제 생성물의 함유 수준은 4.0의 일정 pH에서 유지된 반응 매질에서 각각 0.1 및 0.4%이었다. 당해 분석은 90분 동안 37℃에서 궤도 교반하에 수행했고, 결합된 톡신의 양은 형광 검출기가 구비된 HPLC를 사용하여 평가했다.
추가로, 점토의 존재하에 성장/배양된 효모는 세포벽 성분/구조의 현저한 변화를 나타냈다. 예를 들면, 점토의 양이 증가함에 따라, 만난:글루칸의 비는 증가한다(예를 들면, 점토가 0, 0.5%, 1.0%로부터 2.0%로 증가함에 따라, 만난:글루칸 비는 각각 1.01로부터 1.2, 1.35 및 1.45로 증가한다). 단백질의 총 양은 세포 배양 배지에 첨가된 점토의 양 증가에 따라 증가했다.
실시예 3
점토의 부재 및 존재하에 성장된/배양된 효모 세포로부터 프로테아제 절단을 사용하여 분리된 효모 세포벽 추출물의 특성화
효모 세포를 실시예 1에 기술된 바와 같이 프로테아제로 처리했다. 이어서, 효모 세포벽 용해물을 분석하여 효모 세포벽 및 고려된 각각의 개별적 마이코톡신에 대한 생리학적 pH 조건하에 마이코톡신을 흡수하는 이들의 능력(존재하는 전체 마이코톡신에 대한 효능의 백분률로서 표현됨)을 특성화했다. 총 흡수 활성은 역학적으로 평가했다. 시험 샘플은 동물 관에서 pH의 소화 조건의 대표인 pH4의 고정값을 갖는 수성 배지에 분산된 0.25 내지 4g/L의 농도로 사용된 상이한 효모 세포벽으로 시험된 최소 5 수준, 10 수준 이하의 마이코톡신 농도를 포함한다. 흡수 평가는 (예: 마이코톡신 및 흡수된/포획된 마이코톡신의 양을 검출하기 위해) 형광계측 및 다이오드-어레이 검출기에 결합된 고성능 액체 크로마토그래피를 사용하여 계산했다.
데이타는 도 4에 나타낸다. 점토의 존재하에 배양된 효모 세포로부터 수득된 점토 혼입된 효모 세포벽 추출물은 제아르알레논 및 아플로톡신 B1을 포획하고/하거나 흡수시키는 현저한 예기치 않은 능력을 나타냈다. 예를 들어, 2.0% 점토의 존재하에 성장한 효모로부터 수득된 효모 세포벽 추출물은 제아르알레논에 대해 85.89% 효능을 나타내는 반면, 점토 부재하에 배양된 효모로부터 수득된 효모 세포벽 추출물은 단지 69% 흡수 효율을 나타낸다. 2.0% 점토의 존재하에 성장된 효모로부터 수득된 점토 혼입된 효모 세포벽 추출물은 아플라톡신 B1에 대해 53.7% 효능을 나타내는 반면, 점토 부재하에 배양된 효모로부터 수득된 효모 세포벽 추출물은 단지 2.65% 흡수 효율을 나타낸다. 추가로, 점토 존재하에 성장된/배양된 점토 혼입된 효모는 세포벽 성분/구조에서 현저한 변화를 나타냈다. AFB1 및 ZEA에 대한 포획제 생성물의 포함 수준은 일정한 pH 4.0에서 유지된 반응 배지 중에 각각 0.1 및 0.4%였다. 분석은 37℃에서 90분 동안 궤도 교반하에 수행했고, 결합된 톡신의 양은 형광 검출기가 장착된 HPLC를 사용하여 평가했다.
다른 효모 공급원과 함께 실시예 1의 방법을 사용하여 점토 혼입된 효모 세포벽 물질의 조성물에 대한 성장 배지에 1.0%로 첨가된 스멕타이트 점토(American Colloid Company, Arlighton Height, IL, USA)의 영향을 평가했다. 사카로마이세스 세레비지애(Saccharomyces cerevisiae )에 속하는 3개의 효모 형태, ADY 페르민(Fermin)(08-032/460-89), 레바판(Levapan)으로부터의 베이커 효모(Batch # 7169281, Levapan S.A., Bogota, Columbia) 및 DCL로부터의 활성 무수 효모(lot #1390, DCL Yeast Ltd., Alloa, Great Britain)를 조사했다.
가수분해 전에, ADY 페르민(Fermin), 레바판(Levapan), DCL CIYCW에 대해 효모 세포벽에 존재하는 (및 전체 세포를 참조하여 표현된) 19.9, 17.0 및 10.3%의 글루칸; 10.6, 10.4 및 8.4%의 만난; 및 1.5, 1.4, 0.9%의 키틴(N-아세틸-글루코사민)의 수준으로 점토 혼입된 효모 세포벽 사이의 변화를 관찰했다.
생성된 물질의 포획 효능은 또한 선택된 효모 세포 형태(참도: 도 9)에 따라 차이를 나타냈다. 효능에 대해 관찰된 변화는 또한 고려된 마이코톡신의 형태에 관련되었다.
실시예 4
점토의 부재 및 존재하에 성장된/배양된 효모 세포로부터의 효모 세포벽 추출물의 전자 현미경 이미징
본 발명의 양태의 개발중에 실험을 수행하여 다수의 효모 샘플을 특성화하고 관찰했다(참조: 도 2). 0.85% NaCl 용액 중의 2.5% 글루타르알데히드(GTA)에 재수화된 효모 용액을 여과하여 샘플을 제조했다. 이어서, 용액을 0.85% NaCl로 예비습윤된 직경 13mm, 세공 크기 0.1㎛의 나일론 뉴클리어포어를 통해 여과했다. 이어서, 필터를 페트리 접시로 옮기고, 실온에서 90분 동안 GTA/카코딜레이트(Cac) 고정제의 액적으로 피복했다. 이어서, 필터를 0.1M Na　Cac pH　7.2로 세정했다. 2차 고정은 필터를 60분 동안 0.1M Na Cac pH　7.2 중의 100㎕의 2% 사산화오스뮴과 함께 튜브에 위치시켜 달성했다. 이어서, 샘플을 0.1M Na Cac pH　7.2로 및 탈이온수로 3회 세정했다. 샘플의 탈수는 에탄올 계열(25% 내지 100%)로 달성했다. 이어서, 샘플을 동결 건조시키고, 전도성 목적으로 탄소 테이프로 제조된 스텁 위에 장착하고, Au/P 합금으로 피복했다. S-4300 FESEM(Hitachi, Japan) 상에서 3.0keV에서 관찰했다. 효모와 점토 사이의 임의의 불특정 상호작용을 제거하기 위해, 질소 고압축 기체 스트림을 Au/P로 피복하기 전에 각각 장착된 샘플에 적용했다.
실시예 5
점토로 배양된 효모 세포벽 제조의 준공업적 대규모화
대규모 효모 배양. 150L 발효조(ML-4100, New Brunswick Scientific Co., Inc., Edison, New Jersey, U.S.A.)를 사용하여 효모 사카로마이세스 세레비지애(Sacchromyces cerevisiae)(활성 무수 효모(ADY), 제조원: Fermin, Alltech Inc., Batch #609, 효모 계수: 2.38x1010 세포/g, 생존능: 92.6%)를 성장시켰다. 효모 접종물은 0.84kg의 새로운 ADY Fermin을 예비-오토클레이브(40분 동안 121℃) 튜빙을 갖는 19L 카보이(carboy)에 옮겨 제조하고, 7.5L의 물을 함유하는 BioShield로 피복하고, 이를 30℃에서 배양기 중에서 밤새 오토클레이브 후 유지시켰다. BioShield로 피복된 2개의 19L 음식 카보이는 9L의 물, 6kg의 덱스트로스 및 교반 바를 첨가하여 제조했다. 탄소 공급원의 혼합 및 용해 후, 식품 배지를 오토클레이브했다(40분 동안 121℃). 질소 용액은 250ml의 탈이온수, 진한 HCl로 pH 4.0-4.1로 조정된 120g의 인산이암모늄을 함유하는 1L 멸균 캡핑된 병을 사용하여 제조했다. 식용 질소의 2개의 1L 멸균 캡핑된 병은 700mL의 탈이온수, 진한 HCl로 pH 4.0-4.1로 조정된 192g의 인산이암모늄을 첨가하여 제조했다. 염기 용액은 BioShield로 피복되고, 13.5L의 물, 1.5L의 KOH를 함유하는 튜빙을 갖는 19L 카보이에서 제조했다. 이어서, 튜빙을 연동 펌프에 연결했다. 항기포제(Antifoam AES, 1:10) 용액은 BioShield로 피복하고, 12L의 물, 3L의 항기포제(Antifoam AES, 3kg)를 함유하는, 튜빙을 갖는 19L 카보이에서 제조하고, 혼합했다. 이어서, 튜빙을 연동 펌프에 연결시켰다. 150L 발효조 배지는 1.98kg의 호박, 0.3kg의 펩톤, 0.12kg의 덱스트로스, 0.12kg의 효모 질소 염기, 0.516g의 스멕타이트 점토(American Colloid Company, Arlighton Height, IL, USA) 및 1시간 동안 교반하여 121℃, 15psi로 된 60L의 물로 이루어졌다. 배지를 30℃로 냉각시키고, 이 온도를 전파를 통해 유지시켰다.
전파는 접종 전 및 전체 발효 중에 완만한 교반(70% 전력) 및 공기 주입(5psi)으로 30℃에서 유지된 150L 발효조에서 수행했다. 7.5L의 물 중의 0.84kg의 ADY를 함유하는 접종물을 150L 발효조에서 접종 전에 20-30분 동안 교반했다. 하나의 식용 질소 병을 혼합하에 각 식품 카보이(feed carboy)에 첨가했다. 질소 용액을 150L 발효조 속에서 펌핑하고, 접종 전 최소 10분 동안 혼합했다. 소포제 카보이를 부착하고, 항기포제를 필요한 150L 발효조에서 튜빙을 통해 펌핑했다. 발포체 프로브를 발효조 내부에 놓고 발포를 모니터링하고 항기포제로 정확하게 보충하도록 했다. 염기 용액을 부착시키고, 필요한 150L 발효조에서 튜빙을 통해 펌핑했다. 150L 발효조 배지의 pH의 진화를 모니터링하고, 전체 성장 중에 최소 pH　5.0에서 유지시켰다. 접종은 접종물 카보이를 포트에 부착시키고, 내용물을 150L 발효조에서 펌핑하여 수행했다. 발효조에서 접종물의 혼합을 1차 샘플링 전에 20-30분 동안 수행했다. 발포체를 전파, 공기 조정 및 시간당 교반을 통해 모니터링했다. pH를 내부 및 외부 모니터링하고, 필요에 따라 조정하여 pH를 5.0 이상으로 유지시켰다. 글루코스 수준을 당뇨병 스트립(OneTouch, UltraMini, LifeScan, Inc., Milpitas, California, U.S.A.)으로 성장 동안 시험하고, 글루코스 수준이 0.8mg/mL 이하로 강하되면, 식품 용액에서 서서히 펌핑하거나 경시적으로 속도를 점차적으로 증가시켜 보충 글루코스를 첨가했다. 당 수준이 0.8mg/mL 이상으로 상승하면, 공급 속도를 서서히 늦추거나 필요에 따라 중단했다.
모든 당이 사용되었을 경우, 효모 배양물을 채취했다. 150L 발효조의 내용물을 멸균 병 속에서 수집하고, 4000g에서 20분 동안 원심분리했다. 상청액을 제거하고, 세척된 효모의 무수 물질 퍼센트를 측정했다. 이어서, 물질을 150L 발효조로 다시 옮기고, 물을 첨가하여 슬러리를 9-11%로부터 13-15% 무수 물질 농도가 되되록 했다. 항상 교반을 유지했다.
효소 가수분해를 통해 점토 혼입된 효모 세포벽 추출.
13-15%의 무수 물질 효모 슬러리를 60℃에서 교반했다. 효소를 0.3mL/L로 첨가하기 전에 10% NaOH를 사용하여 pH를 8.0으로 조정했다. 온도 및 교반 조건을 8시간 동안 유지시켰다. pH를 최초 2시간 동안 15분 마다(10% NaOH 사용) 모니터링하고, 조정한 다음, 다음 6시간 동안 1시간 마다 pH를 모니터링하고 조정했다. 슬러리를 멸균 원심분리 병으로 옮기고, 4000g에서 20분 동안 원심분리했다. 상청액을 버리고, 펠렛을 3용적의 차가운 멸균수로 세척한 다음, 4000g에서 20분 동안 다시 원심분리했다. 세척 단계를 2회 반복한 후, 펠렛을 냉동시키고, 동결 건조시키고, 분쇄했다. 분무 건조 단계 동안 온도의 증가는 분무 건조기에서 생성물의 약간 높은 수율과 낮은 축적을 유도한다.
점토 재료의 포함은 임의의 점토 재료를 함유하지 않는 효모 세포벽 추출물 중의 5% 농도와 비교하여 점토 혼입된 효모 세포벽에 대해 약 20% 값에 도달하는 샘플의 회분 농도에서의 변화에 따를 수 있다(참조: 도 6). 150L 발효조에서와 비교하여 바이오플로우 발효조에서 이미 제조된 ADY Fermin 효모 세포주 사이의 조성물과 관련하여 현저한 차이가 대규모 생산에서 글루칸 및 만난 조성물의 감소 뿐만 아니라 섭동제(perturbing agent)에 대한 효모 세포벽에 의한 반응을 설명하고, 세포벽 시그날링 경로를 포함하는 효모 세포벽의 키틴 함량의 증가(1.5% 내지 3%)로 밝혀졌다.
준공업적 규모 CIYCW 생성물을 마이코톡신의 포획 효능(참조: 도 7)에 대해 평가했고, 결과는 CIYCW의 마이코톡신 흡수 증가를 확인한다.
실시예 6
당의 공업적 공급원을 사용하는 점토 혼입된 효모 세포벽의 제조
효모 배양물.
사카로마이세스 세레비지애(Sacchromyces cerevisiae)(활성 무수 효모(ADY); 제조원: Fermin, Alltech Inc., 효모 계수: 2.38x1010 세포/g, 생존능: 92.6%)를 바이오플로우(Bioflow) 발효조(BioFlow III, New Brunswick Scientific Co., Inc., Edison, New Jersey, U.S.A.)에서 성장시켰다. 효모 접종물은 29g의 새로운 ADY 페르민을 87ml의 멸균 탈이온수의 예비-가온된 병에 옮겨 제조했다. 이어서, 용액을 30℃(수욕에서)에서 20분 동안 배양하고, 수 시간 동안 와동시켰다. 바이오플로우 배지는 0.048g 차아염화칼슘, 0.24g 황산마그네슘, 0.168g 황산아연, 0.24g 염화마그네슘, 2.4g(제조된 식품 2.5ml) 사탕수수 곰팡이, 7.5 스멕타이트 점토(최종 배지 중 0.5%, (American Colloid Company, Arlighton Height, IL, USA)) 및 1440mL의 탈이온수로 이루어졌다. 사탕수수 곰팡이는 물로 희석된 당밀의 총 환원당(TRS) 용액의 30%이다. 곰팡이 제제는 669g의 당밀(62.8% TRS) 및 731mL의 탈이온수로 제조되었다. 질소 공급원은 163.5mL의 탈이온수 중의 54.5g의 우레아로 제조했다.
바이오플로우 반응기 배지를 30℃ 에서 가온시키고, 공기를 접종 전 10분 동안 1L/분 유속으로 주입했다. 교반을 300rpm으로 설정하고, 배지를 모니터링하고 85% 인산을 사용하여 전체 성장 동안 최소 pH 5.0에서 유지시켰다. 항기포제를 첨가했다(Antifoam AES, 1:10, 필요에 따라). 사전에 재현탁된 효모를 발효조에 첨가했다. 글루코스 수준을 당뇨병 스트라이프(OneTouch, UltraMini, LifeScan, Inc., Milpitas, California, U.S.A.)와 함께 성장하는 동안 시험하고, 글루코스 수준이 0.8mg/mL 이하로 저하될 경우, 보충 식품(사탕수수 곰팡이로부터)을 첨가했다. 교반은 2시간 배양 뿐만 아니라 공기 유동(3시간 동안 4L/분 이하)에서 500rpm으로 점차적으로 증가시켰다. 반응기에서 점토의 최종 농도는 최종 배지에서 0.5%였다.
발효조에 첨가되는 당밀의 양은 당을 사용하는 효모의 효능에 좌우되고, 400 내지 600g으로 구성되었다. 당밀의 과다공급은 발효를 통해 임의의 효모 바이오매스를 생성하지 못하는 생산 문제를 발생시켰다. 더 이상의 성장이 관찰되지 않을 경우, 효모 배양물을 채집했다. 바이오플로우의 내용물을 멸균 병에서 수집하고, 4000g에서 20분 동안 원심분리했다. 상청액을 제거하고, 펠렛을 H2O 중의 0.125% NaCl로 세척했다. 당밀을 사용하여 효모의 전파를 수행할 경우에는 어떤 개별적 단편도 발견되지 않았다. 이어서, 효모를 0.125% NaCl 용액으로 3회 세척했다.
점토 혼입된 효모 세포벽 추출 방법.
효모 펠렛을 멸균수와 함께 13 내지 15% 농도의 무수 물질에 재현탁시켰다. 효모 슬러리를 60℃에서 교반시켰다. 효소 0.3mL/L를 첨가하기 전에 10% NaOH를 사용하여 pH를 8.0으로 조정했다. 온도 및 교반 조건을 8시간 동안 유지시켰다. pH를 최초 2시간 동안 15분 마다(10% NaOH 사용) 모니터링하고, 조정한 후, 다음 6시간 동안 1시간 마다 pH를 모니터링하고 조정했다. 슬러리를 멸균 원심분리 병으로 옮기고, 4000g에서 20분 동안 원심분리했다. 상청액을 버리고, 펠렛을 3용적의 차가운 멸균수로 세척한 다음, 4000g에서 20분 동안 다시 원심분리했다. 세척 단계를 2회 반복한 후, 펠렛을 냉동시키고, 동결 건조시키고, 분쇄했다.
생성된 물질의 포획 효능은 또한 효모의 전파에 사용된 탄소 공급원에 따라 차이를 나타냈다(도 8 참조). 효능에 대하여 관찰된 변화는 또한 고려된 마이코톡신의 유형과 관련된다. 당해 물질의 조성은 또한 단독의 탄소 공급원으로서 덱스트로즈를 사용하여 미리 생성된 물질의 조성과 상이했다. 효모 세포벽에 존재하는 13.4%의 글루칸, 17.8%의 만난 및 2.7%의 키틴(N-아세틸-글루코사민) 수준(전체 세포를 기준으로 하여 표시됨)이 발견되었다.
실시예 7
푸사리움 마이코톡신에 대한 생체내 효능
1일령 하이브리드 칠면조 새끼(Hybrid Turkeys, Kitchener, ON, Canada)를 개별적으로 칭량하고, 날개를 표시하고, 구엘프 대학의 아켈(Arkell) 가금 연구소에서 그룹으로 랜덤으로 분포시켰다. 가금을 각각 5개 식이를 위해 램덤으로 지정했다. 가금은 초기에 32℃에서 유지시키고, 온도를 1주당 3℃씩 점차 감소시켜 4주 말기에 21℃의 온도에 도달하게 했다. 이 온도를 실험 동안 유지시켰다. 칠면조 가금에게, 대조군 곡물, 대조군 + 0.2% 점토 혼입된 효모 세포벽, 오염된 곡물, 및 오염된 곡물 + 0.2% 점토 혼입된 효모 세포벽으로 제형화된 옥수수, 밀 및 대두 식사 기재의 개시기(0 내지 3주) 및 성장기(4 내지 6주) 식이를 공급했다. 대조군 식이는 NRC(1994)에 따라 칠면조의 최소 영양 요구에 부합하거나 이를 초과하도록 제형화했다. 마이코톡시-오염된 식이는 25 및 10% 및 26 및 5%의 대조군 옥수수 및 밀을 각각 개시기 상 및 성장기 상 동안 오염된 옥수수 및 푸사리움 마이코톡신에 의해 자연적으로 오염된 밀로 치환시킴으로써 제조했다. 대조군 곡물을 오염된 곡물로 치환하는 수준은 개시기 및 성장기 상 동안 약 4mg DON/kg 식이의 마이코톡신 도전을 달성하기 위해 계산했다. 고분자성 글루코만난 흡수제 보충된 식이는 식이 중의 대조군 옥수수를 0.2% 점토 혼입된 효모 세포벽(CIYCW)로 치환시켜 제조했다. 급식 및 물은 자유롭게 제공했다. 대표적인 급식 샘플은 근접 및 마이코톡신 분석을 위해 각 상의 개시점에서 채취했다. 단백질, 무수 물질 및 회분의 식이 함량은 공식 분석 화학회(Association of Official Analytical Chemists)(1980)에 따라 측정했다. 식이 제형 및 영양 함량은 표 1에 제시되어 있다. 실험 공정은 캐나다 동물 관리 회의(Canadian Council on Animal Care)의 가이드라인에 따라 구엘프 동물 관리 위원회(Guelph Animal Care Committee)에 의해 승인되었다.
Figure pct00001
Figure pct00002
DON, 15-아세틸-DON, ZEN, 푸모니신 및 오크라톡신 A의 식이 농도는 표 2에 제시한다. 기타 마이코톡신은 니발레놀 0.12mg/kg, 3-아세틸-DON 0.05mg/kg, 네오솔라니올 0.07mg/kg, 디아세톡시시르페놀 및 T-2 톡신 0.06 및 HT-2 톡신 0.04mg/kg 및 아플라톡신 0.001mg/kg인 방법 검출 한계 이하였다. DON, 15-아세틸-DON, ZEN, 푸모니신 및 오크라톡신 A의 검출 한계는 각각 0.06, 0.05, 0.025, 0.05 및 0.0003mg/kg이었다.
Figure pct00003
오염된 곡물의 급식은 체중 증가, 급식 소비 및 개시기 상의 말기에 급식 활용의 효능에 현저히 영향을 미치지 않았다(표 3). 급식 오염된 식이는 성장기 상 말기에 대조군과 비교하여 체중 증가를 현저히 증가시키고, 급식 효능을 향상시켰다. 성장기 상 동안 급식 섭식에 대한 식이의 효과는 없었다. 성장기 상의 말기에, 오염된 식이에 점토 혼입된 효모 세포벽의 보충은 대조군에 비해 체중 증가, 급식 소비를 증가시키고, 급식 활용의 효능을 향상시켰다. 6주 실험 기간 동안 체중 증가 및 급식 효능은 오염된 식이 및 점토 혼입된 효모 세포벽으로 보충된 오염된 식이가 공급된 새들에게서 현저히 높았다.
Figure pct00004
오염된 곡물의 급식은 6주에 호산구 수 계수를 증가시켰다(P<0.05)(표 4). 점토 혼입된 효모 세포벽으로 오염된 식이를 보충하면 이를 예방했다. 점토 혼입된 효모 세포벽의 대조군 식이에의 보충은 보충되지 않은 대조군에 비해 적혈구 용적률(hematocrit)을 상당히 증가시켰다. 대조군과 비교하여 3주에서 오염된 식이가 공급된 새에게서 글루코스의 농도 및 γ-글루타밀 트랜스퍼라제의 활성이 현저히 감소되었다(표 5). 점토 혼입된 효모 세포벽의 보충은 이를 예방했다. 오염된 식이에의 점토 혼입된 효모 세포벽 보충은 3주 및 6주에서 대조군에 비해 요산의 농도를 현저히 증가시켰다. 대조군에 비해 오염된 식이 + 점토 혼입된 효모 세포벽이 공급된 새에서는 3주에서 락테이트 데하이드로게나제의 활성이 현저히 감소되었다.
Figure pct00005
Figure pct00006
Figure pct00007
Figure pct00008
Figure pct00009
Figure pct00010
Figure pct00011
Figure pct00012
오염된 곡물의 급식은 대조군에 비해 6주에서 락테이트 데하이드로게나제의 활성을 현저히 감소시켰다(표 5). 점토 혼입된 효모 세포벽의 보충은 이를 예방했다. 오염된 식이 및 점토 혼입된 효모 세포벽 식이가 공급된 새에서는 칼슘 및 인의 농도가 현저히 증가했다. 6주에서 동일 식이는 또한 대조군에 비해 γ-글루타밀 트랜스퍼라제의 활성을 현저히 감소시켰다. 총 단백질 및 글로불린 농도의 현저한 증가, 및 콜레스테롤 수준의 감소는, 점토 혼입된 효모 세포벽으로 보충될 경우, 오염된 식이가 공급된 새에게서 관찰되었다.
칠면조에 대한 푸사리움(Fusarium) 마이코톡신으로 자연적으로 오염된 곡물의 급식은 체중 증가 및 급식 효능에 대하여 호르메틱 반응(hormetic response)을 유도했다. 급식성 푸사리움(Fusarium) 마이코톡신은 대조군에 비해 6주에서 증가된 호산구 수 계수 및 감소된 락테이트 데하이드로게나제 활성 및 3주에서 감소된 글루코스 농도 및 감마-글루타밀 트렌스퍼라제 활성을 포함하는 혈액 파라미터에 대한 일부 효과를 유도했다. 점토 혼입된 효모 세포벽의 급식은 이들 효과를 모두 에방했다. 점토 혼입된 효모 세포벽의 급식은 보충되지 않은 오염된 곡물의 급식에 비해 성장의 수치적 증가(P>0.05)를 유도했다.
상기 명세서에서 언급된 모든 공보 및 특허 문헌은 본원에 참조로 인용된다. 본 발명의 기술된 조성물 및 방법의 각종 변형 및 변동은 본 발명의 범위 및 취지로부터 벗어나지 않고 당해 분야의 숙련가에게 자명할 것이다. 본 발명이 특정의 바람직한 양태와 관련하여 기술되었지만, 특허청구된 본 발명은 이러한 특정 양태로 과도하게 제한되어서는 안된다는 것을 이해해야 한다. 실제로, 관련 분야의 숙련가에게 명백한 본 발명의 수행하기 위한 기술된 방식의 각종 변형은 본 발명의 범위 내인 것으로 의도된다.

Claims (50)

  1. 효모 세포벽 내로 혼입된 점토 또는 점토 성분을 포함하는 효모 세포벽을 포함하는 효모 세포.
  2. 제1항에 있어서, 상기 효모 세포가 점토를 포함하는 세포 배양 배지에서 배양되는 효모 세포.
  3. 제2항에 있어서, 상기 점토가 실리케이트 그룹에 속하는 광물 점토 또는 합성 점토인 효모 세포.
  4. 제3항에 있어서, 상기 점토가 제올라이트, 벤토나이트, 알루미노실리케이트, 몬트모릴로나이트, 스멕타이트, 카올리나이트, 유기점토 및 이들의 혼합물로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 효모 세포.
  5. 제4항에 있어서, 상기 점토가 알루미노실리케이트 점토인 효모 세포.
  6. 제2항에 있어서, 세포 배양 배지 중의 점토의 양이 약 0.125% 내지 4.0%인 효모 세포.
  7. 제6항에 있어서, 세포 배양 배지 중의 점토의 양이 약 0.5% 내지 2.0%인 효모 세포.
  8. 제1항에 있어서, 상기 효모가 사카로마이세스(Saccharomyces), 칸디다(Candida), 클루이베로마이세스(Kluyveromyces), 토룰라스포라(Torulaspora) 및 이들의 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 효모 세포.
  9. 제8항에 있어서, 효모가 사카로마이세스 세레비지애(Saccharomyces cerevisiae)인 효모 세포.
  10. 점토 또는 점토 성분 혼입된 효모 세포벽 추출물을 포함하는 조성물.
  11. 제10항에 있어서, 점토 또는 점토 성분 혼입된 효모 세포벽 추출물이 점토를 포함하는 성장 배지에서 배양된 효모 세포로부터 유래하는 조성물.
  12. 제10항에 있어서, 효모 세포벽 추출물의 제조에 유리 비드 및 비드 비터(bead beater)가 사용되는 조성물.
  13. 제10항에 있어서, 효모 세포벽 추출물의 제조에 효소적 처리가 사용되는 조성물.
  14. 제10항에 있어서, 점토 또는 점토 성분 혼입된 효모 세포벽 추출물이 사료에 첨가되는 조성물.
  15. 제14항에 있어서, 상기 사료가 완전 혼합 사료(Total Mixed Ration; TMR), 사료, 펠렛, 농축물, 프리믹스, 부산물(coproduct), 곡물, 증류기 곡물, 당밀, 섬유, 마초, 목초, 건초, 낟알, 잎, 곡류, 용해물 및 보충물로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 조성물.
  16. 제10항에 있어서, 상기 점토 또는 점토 성분 혼입된 효모 세포벽 추출물이 유기 물질에 첨가되는 조성물.
  17. 제10항에 있어서, 상기 점토 또는 점토 성분 혼입된 효모 세포벽 추출물이 물에 첨가되는 조성물.
  18. 제10항에 있어서, 점토 또는 점토 성분 혼입된 효모 세포벽 추출물을 통해 액체가 여과되는 조성물.
  19. 제18항에 있어서, 상기 액체가 쥬스, 물, 맥주 또는 와인인 조성물.
  20. 제10항에 있어서, 동물계의 임의 구성원에게 급식하기 위해 제형화된 조성물.
  21. 제20항에 있어서, 상기 구성원이 조류, 소, 돼지, 말, 양 및 염소, 어류, 조개, 낙타, 고양이, 개 및 설치류 종으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 조성물.
  22. 제10항에 있어서, 상기 점토 또는 점토 성분 혼입된 효모 세포벽 추출물이 하나 이상의 마이코톡신을 포획시키는 조성물.
  23. 제22항에 있어서, 마이코톡신이 아플라톡신, 제아르알레논, 트리코테센스, 푸모니신스 및 오크라톡신으로 이루이진 그룹으로부터 선택되는 조성물.
  24. 제22항에 있어서, 마이코톡신이 아세톡시시르펜디올, 아세틸데옥시니발렌올, 아세틸니발렌올, 아세틸네오솔라니올, 아세틸 T-2 톡신, 아플라톡신 B1, B2, G1 및 G2를 포함하는 모든 아플라톡신, 아플라트렘, 알테누산, 알테르나리올, 오스트디올, 오스트아미드, 오스토시스틴, 아베나세인 +1, 베오베리신 +2, 벤테놀라이드, 브레비안아미드, 부테놀라이드, 칼로넥트린, 카에토글로보신, 시트리닌, 시트레오비리딘, 코클리오딘올, 사이토칼라신 E, 사이클로피아존산, 데아세틸칼로넥트린, 데아세틸네오솔라니올, 데옥시니발렌올 디아세테이트, 데옥시니발렌올 모노아세테이트, 디아세톡시시르펜올, 데스트룩신 B, 엔니아틴스, 맥각 톡신 및 내생균 모두를 포함하는 톡신, 프럭티게닌 +1, 푸마길린, 무로니신스, 푸모니신스 B1 및 B2 및 B3, 푸사레논-X, 푸사로크로마논, 푸사르산, 푸사린, 글리오톡신, HT-2 톡신, 이포메아닌, 아일랜드디톡신, 라테리틴 +1, 리코마라스민 +1, 말포르민, 말토리진, 모닐리포르민, 모노아세톡시시르페놀, 네오솔라니올, 니발레놀, NT-1 톡신, NT-2 톡신, 모든 오크라톡신을 포함하는 톡신, 웁스포레인, 옥살산, 파툴린, 페니실린산, 페니트렘, 로리딘 E, 루브라톡신, 루브로스키린, 루브로설핀, 루굴로신, 삼부시닌 +1, 사트라톡신스, F, G, H, 시르펜트리올, 슬라프라민, 스테리 농축된 변형된 효모 세포벽 엑스트라액토시스틴, T-1 톡신, T-2 톡신, 트리아세톡시시르펜디올을 포함하는 모든 트리코테센스, 트리코데르민, 트리코테신, 트리코베린스, 트리코베롤스, 트립토퀴발렌, 베루카린, 베루쿨로겐, 비오푸르푸린, 비오멜레인, 비리디톡신, 크산토실린, 야바니신 +1, 제아르알레놀 및 제아르알레논으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 조성물.
  25. 점토 또는 점토 성분 혼입된 효모 세포벽 추출물을 포함하는 동물 사료로서, 상기 점토 또는 점토성분이 혼입된 효모세포벽 추출물이 동물사료.
  26. 제25항에 있어서, 상기 점토 또는 점토 성분 혼입된 효모 세포벽 추출물이 급식의 약 0.0125중량% 내지 약 10중량%의 양으로 존재하는 동물 사료.
  27. 제25항에 있어서, 상기 점토 또는 점토 성분 혼입된 효모 세포벽 추출물이 급식의 약 0.0125중량% 내지 약 4.0중량%의 양으로 존재하는 동물 사료.
  28. a) 점토 또는 점토 성분 혼입된 효모 세포벽 추출물을 포함하는 조성물(i) 및 동물 또는 사람에 의해 소비된 물질(ii)을 제공하는 단계;
    b) 점토 또는 점토 성분 혼입된 효모 세포벽 추출물을 상기 물질 내로 도입하여 점토 또는 점토 성분 혼입된 효모 세포벽 추출물 도입 물질을 생성하는 단계 및
    c) 동물 또는 사람이 상기 점토 또는 점토 성분 혼입된 효모 세포벽 추출물 도입 물질을 소비하게 하는 단계를 포함하는, 동물 또는 사람에 대한 마이코톡신의 생체이용율을 감소시키는 방법.
  29. 제28항에 있어서, 상기 물질이 사료인 방법.
  30. 제29항에 있어서, 점토 또는 점토 성분 혼입된 효모 세포벽 추출물을 포함하는 조성물 약 0.0125중량% 내지 약 0.4중량%가 사료에 첨가되는 방법.
  31. 제28항에 있어서, 상기 물질이 상부재(床敷材, bedding)인 방법.
  32. 제31항에 있어서, 점토 또는 점토 성분 혼입된 효모 세포벽 추출물을 포함하는 조성물 약 0.0125중량% 내지 약 99.0중량%가 상부재에 첨가되는 방법.
  33. 제28항에 있어서, 상기 물질이 액체인 방법.
  34. 제33항에 있어서, 점토 또는 점토 성분 혼입된 효모 세포벽 추출물을 포함하는 조성물 약 0.0125중량% 내지 약 99.0중량%가 액체에 첨가되는 방법.
  35. 제28항에 있어서, 동물이 조류, 소, 돼지, 말, 양 및 염소, 어류, 조개, 낙타, 고양이, 개 및 설치류 종으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 방법.
  36. 제28항에 있어서, 점토 또는 점토 성분 혼입된 효모 세포벽 추출물을 포함하는 조성물이 1종 이상의 마이코톡신을 포획시키는 방법.
  37. 제36항에 있어서, 마이코톡신이 아플라톡신, 제아르알레논, 트리코테센스, 푸모니신스, 오크라톡신 및 이들의 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 방법.
  38. 제28항에 있어서, 에스테라제, 에폭시다제, 효모 및 박테리아 균주로 이루어진 그룹으로부터 선택된 추가의 제제를 상기 점토 또는 점토 성분 혼입된 효소 세포벽 추출물 도입 물질 내로 도입하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
  39. a) 효모 출발 배양물(i) 및 효모 성장용 필수 영양소 및 점토 또는 점토 성분을 포함하는 효모 세포 배양 배지(ii)를 제공하는 단계;
    b) 상기 효모 출발 배양물을 효모 세포 배양 배지 내로 도입하는 단계;
    c) 상기 효모를 효모가 성장하도록 설정된 조건하에 공업적 규모의 발효조에서 배양하는 단계이며, 여기서, 상기 효모는 성장 동안 상기 점토 또는 점토 성분을 효모 세포벽 내로 도입함;
    d) 항기포제를 상기 발효조에 첨가하는 단계;
    e) 점토 또는 점토 성분 혼입된 효모 세포벽을 용해시키는 단계; 및
    f) 상기 점토 또는 점토 성분 혼입된 효모 세포벽을 다른 효모 성분으로부터 분리하는 단계를 포함하는, 상업적 규모 양의 점토 또는 점토 성분 혼입된 효모 세포벽 추출물을 생성하는 방법.
  40. 제39항에 있어서, 효모가 사카로마이세스(Saccharomyces), 칸디다(Candida), 클루이베로마이세스(Kluyveromyces), 토룰라스포라(Torulaspora) 및 이들의 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 방법.
  41. 제39항에 있어서, 점토가 실리케이트 그룹에 속하는 광물 점토 또는 합성 점토인 방법.
  42. 제40항에 있어서, 점토가 제올라이트, 벤토나이트, 알루미노실리케이트, 몬트모릴로나이트, 스멕타이트, 카올리나이트, 유기점토 및 이들의 혼합물로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 방법.
  43. 제42항에 있어서, 점토가 알루미노실리케이트 점토인 방법.
  44. 제39항에 있어서, 세포 배양 배지 중의 점토의 양이 약 0.125% 내지 4.0%인 방법.
  45. 제44항에 있어서, 세포 배양 배지 중의 점토의 양이 약 0.5% 내지 2.0%인 방법.
  46. 제39항에 있어서, 공업적 규모의 발효조가 1천 내지 5백만 리터인 방법.
  47. 제39항에 있어서, 항기포제를 첨가하여 배양 공정에 대한 상기 점토의 효과를 완화시키는 방법.
  48. 제39항에 있어서, 항기포제가 비실리콘 분자 소포제, 오일계 소포제, 분말 소포제, 수계 소포제, 실리콘계 소포제, 폴리에틸렌 글리콜계 소포제, 폴리프로필렌 글리콜계 소포제 및 알킬 폴리아크릴레이트로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 방법.
  49. 제39항에 있어서, 항기포제가 비실리콘 분자 소포제를 포함하는 방법.
  50. 제39항에 있어서, 용해가 유리 비드, 비드 비터(bead beater) 및/또는 효소적 처리를 포함하는 방법.
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Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2013141451A1 (ko) * 2012-03-20 2013-09-26 한국에너지기술연구원 나노클레이를 이용한 오일 함유 미생물 수확 및 바이오 오일 제조 방법
KR20210050926A (ko) * 2019-10-29 2021-05-10 경상국립대학교산학협력단 할로이사이트 표면처리를 통해 균사 생장이 억제된 균류 펠릿 구조체 및 그 제조방법

Families Citing this family (23)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
BR112015007549B1 (pt) 2012-10-02 2022-04-05 Oil-Dri Corporation Of America Produto de argila e seus usos
CN104004615B (zh) * 2013-02-21 2016-04-06 安琪酵母股份有限公司 毒素吸附剂在葡萄酒发酵中的应用
MD849Z (ro) * 2014-04-29 2015-07-31 Лариса КАЙСЫН Procedeu de creştere a tineretului suin
CN112715963A (zh) * 2014-05-09 2021-04-30 海凯尔保健食品私人有限公司 减轻不良反应的消化补充剂
CN107557402B (zh) * 2014-12-04 2019-04-26 武汉轻工大学 一种寄生曲霉的afg2产毒发酵方法
CN104498557B (zh) * 2014-12-04 2018-01-05 武汉轻工大学 一种afg1的产毒培养基及寄生曲霉的afg1产毒发酵方法
FR3034101B1 (fr) 2015-03-24 2019-07-12 Lesaffre Et Compagnie Extrait de levure et son utilisation pour le collage de mouts et de boissons
CN104799132A (zh) * 2015-04-30 2015-07-29 邹忠义 一种t-2毒素的酵母菌发酵去除方法
US20170095508A1 (en) * 2015-09-15 2017-04-06 Nutriquest, Llc Antimicrobial clay compositions and methods of using
EP3368498A4 (en) * 2015-10-27 2019-06-12 Cytozyme Animal Nutrition, Inc. ANIMAL NUTRITIONAL COMPOSITIONS AND RELATED METHODS
US10674746B2 (en) 2015-10-27 2020-06-09 Cytozyme Animal Nutrition, Inc. Animal nutrition compositions and related methods
CN105349465B (zh) * 2015-11-30 2018-09-07 广东海洋大学 一种潮间带微小杆菌及其应用
CN106011129B (zh) * 2016-07-27 2018-08-17 郑州点石生物技术有限公司 微生物核酸萃取方法
EP3430913B1 (en) 2017-07-20 2020-12-02 Tolsa, S.A. Composition for binding mycotoxins and its use
CN108893416B (zh) * 2018-06-01 2021-11-26 河南广安生物科技股份有限公司 一种降解呕吐毒素的酵母菌及其应用
US11738045B2 (en) 2019-05-31 2023-08-29 Elanco Us Inc. Therapeutic clay compositions and methods of using
CN110498805B (zh) * 2019-08-09 2021-04-06 中国科学院南海海洋研究所 双呋喃并呫吨酮和双呋喃并蒽醌类化合物及其制备方法和应用
EP3791954A1 (en) * 2019-09-11 2021-03-17 Clariant Produkte (Deutschland) GmbH Method for purification of liquid compositions containing at least one sphingolipid
CN110577867A (zh) * 2019-09-19 2019-12-17 甘肃枣乡酒业有限公司 一种凹凸棒窖泥及其制作方法
US20230136323A1 (en) * 2020-03-19 2023-05-04 Kunimine Industries Co., Ltd. Spheroid formation promoter
BR102020005474A2 (pt) * 2020-03-19 2021-09-08 Samaia Neto Alberto Fibras vegetais particuladas por processo de extrusão para obtenção de suplementos nutricionais de segurança alimentar para animais de produção e/ou domésticos
FR3134312A1 (fr) * 2022-04-08 2023-10-13 Lesaffre Et Compagnie Extrait de Parois Cellulaires de Levure Saccharomyces Cerevisiae Riche en -Glucanes dans la Prévention des Effets Toxiques de la Mycotoxine Déoxynivalénol (DON)
CN116850267B (zh) * 2023-07-13 2024-03-15 山东宝来利来生物工程股份有限公司 一种酵母细胞壁-抗菌肽a3复合制剂及其制备方法与应用

Family Cites Families (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US634221A (en) * 1898-11-25 1899-10-03 Jonathan Weston Richards Globe-holder.
AT504U1 (de) * 1994-10-19 1995-12-27 Erber Erich Kg Futtermittelzusatz und verwendung desselben zur inaktivierung von mykotoxinen in futtermitteln bzw. im verdauungstrakt von tieren sowie verfahren zur herstellung eines futtermittels
DK1079696T3 (da) * 1998-04-17 2007-07-02 Alltech Inc Sammensætninger til fjernelse af mycotoxiner fra foder
AU774212B2 (en) * 1999-05-03 2004-06-17 Alltech, Inc. Novel compositions and methods for reduction of effects of endophyte-infected forages
US20030007982A1 (en) * 2001-04-27 2003-01-09 Peter Surai Novel method for improving antioxidant status of animals consuming feeds contaminated with mycotoxins
CN1146326C (zh) * 2002-03-18 2004-04-21 浙江大学 吸附饲料中霉菌毒素的纳米饲料添加剂的制备方法
US7740861B2 (en) * 2004-06-16 2010-06-22 University Of Massachusetts Drug delivery product and methods
DE602005027915D1 (de) * 2005-08-10 2011-06-16 Omnigen Res Llc VERWENDUNG VON - ß-1,3 (4)-ENDOGLUCANOHYDROLASE, ß-1,3 (4) GLUCAN, KIESELGUR, MINERALTON UND GLUCOMANNAN ZUR STEIGERUNG DER IMMUNFUNKTION
RU2327472C1 (ru) * 2006-12-20 2008-06-27 Государственное научное учреждение РАСХН, Краснодарский научно-исследовательский ветеринарный институт Средство для профилактики и лечения токсикозов сельскохозяйственных животных и птицы

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2013141451A1 (ko) * 2012-03-20 2013-09-26 한국에너지기술연구원 나노클레이를 이용한 오일 함유 미생물 수확 및 바이오 오일 제조 방법
KR20210050926A (ko) * 2019-10-29 2021-05-10 경상국립대학교산학협력단 할로이사이트 표면처리를 통해 균사 생장이 억제된 균류 펠릿 구조체 및 그 제조방법

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