JP2012515001A - 粘土をインターレースした酵母組成物およびそれを利用する方法 - Google Patents
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Abstract
Description
本発明は、酵母細胞および/または酵母細胞成分を含む組成物、ならびにそれを生成および利用するための方法に関する。具体的には、本発明は、変化した細胞壁構造(例えば、細胞壁および/または変化したグルカン:マンナン比を含む細胞壁に統合された(例えば、インターレースされた)粘土および/または粘土成分)を含む新規の酵母、同酵母を生成する方法、同酵母を含むおよび/またはそれに由来する組成物、ならびに(例えば、細菌および毒素を隔離および/または吸収するために)同組成物を使用する方法を提供する。本発明の組成物および方法は、食餌(例えば、飼料との混合またはその他の方法で動物に与えられる)、治療、予防(例えば、敷き藁源および/または動物と接触する他の材料と混合する、飲食物の加工および製造中の使用、および液体ろ過中の使用)、ならびに研究適用を含む、様々な適用において用途を見出す。
真菌は、世界的に偏在し、最も一般的には微視的に小さいため、注目されない。マイコトキシンは、菌類によって分泌される二次代謝物である。マイコトキシンは、様々な農産物上で成長する、様々な菌種によって生成される毒性および/または発癌性の化合物である。マイコトキシンの例には、アフラトキシン、フモニシン、オクラトキシンA、デオキシニバレノール(「DON」または「ボミトキシン」として知られる)、パツリン、およびゼアラレノンが挙げられるが、これらに限定されない。マイコトキシンは、収穫前、収穫中、および収穫後に、穀物ならびに飼料中で生成される場合が多い。一部のマイコトキシンは致死的であり、一部は、特定できる疾患または健康問題をもたらし、一部は、マイコトキシンに特異的な症状をもたらすことなく免疫系を脆弱化させ、一部は、アレルゲンまたは刺激物として作用し、一部は、動物またはヒトに対する周知の影響はない。マイコトキシン汚染の最大の経済的影響を受けているのは、穀物および鶏肉生産者、ならびに食物および飼料生産者である。マイコトキシンは、植物生成物の真菌感染の結果として、食物連鎖に現れる場合があり、ヒトによって直接食べられるか、または家畜飼料を汚染することによって導入されるかのいずれかであり得る。マイコトキシンは、有機材料(例えば、敷き藁)ならびに水を汚染し、消化中の分解に強く耐えるため、食用製品(例えば、肉、卵、および乳製品)における食物連鎖内にとどまる。世界中で、マイコトキシンならびにそれらが動物およびヒトの健康に及ぼす負の影響から逃れることができる地域はない。飼料の世界貿易の発展によって、穀物の混合が、所定の食餌中にマイコトキシンの結合をもたらす機会、および異常で予想外のマイコトキシンが、その気候条件にかかわらず、所定の領域に存在する機会が増大する。
一部の実施形態において、本発明は、酵母細胞壁にインターレースした粘土または粘土成分を含む、酵母細胞壁を含む酵母細胞を提供する。一部の実施形態において、酵母細胞は、粘土を含む細胞培養培地中で培養される。一部の実施形態において、粘土は、ケイ酸塩群に属する鉱物粘土または合成粘土である。一部の実施形態において、粘土は、ゼオライト、ベントナイト、アルミノケイ酸塩、モントモリロナイト、スメクタイト、カオリナイト、有機粘土およびそれらの混合物から選択される。一部の実施形態において、粘土は、アルミノケイ酸塩粘土である。一部の実施形態において、細胞培養培地中の粘土の量は、約0.125%〜約4.0%である。一部の実施形態において、細胞培養培地中の粘土の量は、約0.125%〜4.0%である。一部の実施形態において、細胞培養培地中の粘土の量は、約0.5%〜約2.0%である。一部の実施形態において、細胞培養培地中の粘土の量は約0.5%〜2.0%である。一部の実施形態において、酵母は、サッカロミセス、カンジダ、クルイベロミセス、トルラスポラ、およびそれらの組み合わせから選択される。一部の実施形態において、酵母は、サッカロミセス・セレビシエである。
(図1)A)粘土および/または粘土成分を酵母細胞壁にインターレースした酵母細胞の図、およびB)(a)粘土の非存在下で培養された酵母細胞の酵母細胞壁と、(b)粘土の存在下で成長/培養された酵母細胞の酵母細胞壁との比較説明を示す。
本明細書で使用されるとき、用語「酵母」および「酵母細胞」は、菌類に分類される真核微生物を意味し、細胞壁、細胞膜、および細胞内成分を有する。酵母は、特定の分類学的または系統的グループを形成しない。現在、約1,500種が知られており、すべての酵母種の1%が説明されているに過ぎないと推定される。用語「酵母」は、サッカロミセス・セレビシエの同義語として取られる場合が多いが、酵母の系統的多様性は、子嚢菌門および担子菌門の両区分にそれらを配置することによって示される。出芽酵母(「真酵母」)は、ほぼサッカロミセス目に分類される。酵母の大部分の種は、出芽によって無性的に複製するが、一部は、二分裂によって複製する。酵母は、単一細胞であるが、一部は、偽菌糸(pseudohyphaeまたはfalse hyphae)として知られる、一連の結合出芽細胞の形成を通じて、多細胞になる。酵母サイズは、種に依存して著しく異なる場合があり、通常、直径3〜4μmと測定されるが、一部の酵母は40μmを超えて到達し得る。
本発明は、改変された(例えば、粘土および/または粘土成分が酵母細胞壁にインターレースされる、および/またはグルカン:マンナン比が変化した)細胞壁構造を含む、新規の酵母細胞、それを生成する方法、それを含むおよび/またはそれに由来する組成物、およびそれを使用する方法(例えば、細菌およびマイコトキシンを隔離する)を提供する。
以下の実施例は、本発明の所定の好適な実施形態および態様を論証およびさらに例証するために提供され、その範囲を限定するものとして見なされてはならない。
材料および方法
酵母培養。以下のプロトコルを各Bioflow発酵槽(BioFlow III、New Brunswick Scientific Co.,Inc.,Edison,New Jersey,U.S.A.)に使用して、サッカロミセス・セレビシエを成長させた(Fermin,Alltech Inc.,からの活性乾燥酵母(ADY)、バッチ#689、酵母数:2.38x1010細胞/グラム、生存能力:92.6%)。酵母接種材料は、28gの新鮮なADY Ferminを、予熱したボトル中の250mL滅菌脱イオン水に移すことによって調製した。次に、溶液を30℃で(水浴中)20分間インキュベートし、数回かき混ぜた。BioFlow培地は、66gの酵母抽出物、10gのペプトン、4gのデキストロース、4gの酵母窒素塩基、および1750mLの脱イオン水で構成された。対照バッチは、酵母を単独で成長させることによって生成し、反応器容積に対して追加で250mLの脱イオン水を要した。酵母およびベントナイトK10(Fluka)を含む3つのバッチは、8、16、および32gを反応器に添加することによって生成した。Bioflow反応器培地を30℃まで加温し、接種前に10分間、流速1L/分で空気を注入した。攪拌は、300rpmに設定し、全体成長中、培地を監視し、最小pH5.0で維持した。抗発泡剤を添加した(Antifoam AES,1:10、必要に応じて)。次に、第二リン酸アンモニウム(DAP)を無菌で注入した(10mL中4g、pH4.0)。以前に再懸濁した酵母を発酵槽に添加した。成長中、糖尿病試験紙(OneTouch,UltraMini,LifeScan,Inc.,Milpitas,California,U.S.A.)を用いて、グルコース量を試験し、グルコース量が0.8mg/mL以下に低下した場合は、補足のグルコースを添加した。攪拌は、2時間の培養ならびに気流(3時間かけて最大4L/分)で、漸進的に500rpmまで増加させた。補足のグルコース基質の半分が消費された場合、追加のベントナイト(250mL脱イオン水中8、16、32g)を反応器に添加して、それぞれ最終培地中の粘土の最終濃度を0.5%、1.0%、および2.0%とした。
粘土の非存在および存在下で培養される酵母細胞からガラスビーズおよびミニビードビーターを利用して単離される酵母細胞壁抽出物の特徴化
上述のように(実施例1を参照)ビードビーターおよびガラスビーズを使用する微量法を使用して、Tris−HCl緩衝液中、PMSFによりpH7.4で細胞を再懸濁した後、酵母細胞を分断した。次に、酵母細胞壁、および考慮されるそれぞれ個別のマイコトキシンの物理的pH条件下で、それらがマイコトキシンを吸着する能力(存在する総マイコトキシンと比較して、効率%として表される)を特徴化するため、酵母細胞壁溶解を分析した。全体吸着/結合活性を動力学的に評価した。最小5レベル〜最大10レベルのマイコトキシン濃度をなす試験試料を、0.25〜4g/Lの濃度で使用され、動物の体管におけるpHの消化条件を代表する固定値pH4の水性培地中に分散される、異なる酵母細胞壁調製物を用いて試験した。吸着評価は、蛍光およびダイオード−アレイ検出器に連結される(例えば、マイコトキシンおよび吸着/隔離されたマイコトキシンの量を検出する)、高性能液体クロマトグラフィを使用して計算した。
粘土の非存在および存在下で成長/培養された酵母細胞からのプロテアーゼ切断を利用して単離される酵母細胞壁抽出物の特徴化
酵母細胞は、実施例1に記載されるように、プロテアーゼで処理した。次に、酵母細胞壁、および考慮されるそれぞれ個別のマイコトキシンの物理的pH条件下で、それらがマイコトキシンを吸着する能力(存在する総マイコトキシンと比較して、効率%として表される)を特徴化するため、酵母細胞壁溶解を分析した。全体吸着活性を動力学的に評価した。最小5レベル〜最大10レベルのマイコトキシン濃度を成す試験試料を、0.25〜4g/Lの濃度で使用され、動物の体管における消化のpH条件を代表する固定値pH4の水性培地中に分散される、異なる酵母細胞壁調製物を用いて試験した。吸着評価は、蛍光およびダイオード−アレイ検出器に連結される(例えば、マイコトキシンおよび吸着/隔離されたマイコトキシンの量を検出する)、高性能液体クロマトグラフィを使用して計算した。
粘土の非存在および存在下で成長/培養された酵母細胞からの酵母細胞壁抽出物の電子顕微鏡撮像
いくつかの酵母試料を特徴化および観察するため、本発明の実施形態の開発中に、実験を行った(例えば、図2を参照)。試料は、0.85% NaCl溶液中の2.5%グルタルアルデヒド(GTA)における酵母の再水和溶液のろ過によって調製した。次に、直径13mm、細孔径0.1μmの0.85% NaClで事前に湿らせたナイロンヌクレオポアを通して、溶液をろ過し、次に、ペトリ皿に移し、GTA/カコジル酸塩(Cac)固定剤の滴で、室温で90分間被覆した。次に、フィルタを0.1M Na Cac、pH7.2で洗浄した。二次固定は、0.1M Na Cac pH7中100μLの2%四酸化オスミウムの入ったチューブに60分間、フィルタを入れることによって達成した。次に、試料を0.1M Na Cac pH7.2で洗浄し、脱イオン水で3回洗浄した。試料の脱水は、エタノール系(25%〜100%)によって達成した。次に、試料を凍結乾燥し、導電目的で炭素テープにより調製されたスタブ上に載置して、Au/P合金で被覆した。観察は、3.0keVでS−4300FESEM(Hitachi,Japan)により行った。酵母と粘土との間の任意の不特定相互作用を除去するため、Au/Pで被覆する前に、窒素高圧ガスを各載置試料に適用した。
粘土で培養された酵母細胞壁の生成の準工業的規模拡大
規模拡大した酵母培養。150Lの発酵槽(ML−4100、New Brunswick Scientific Co.,Inc.,Edison,New Jersey,U.S.A.)を使用して、出芽酵母(Sacchromyces cerevisiae)(Fermin,Alltech Inc.からの活性乾燥酵母(ADY)、バッチ#609、酵母数:2.38x1010細胞/グラム、生存率:92.6%)を成長させた。酵母接種材料は、0.84kgの新鮮なADY Ferminを、チューブの付いた加熱滅菌済みの(121℃で40分間)19L カルボイ(7.5Lの水を含有するBioShieldで被覆され、加熱滅菌後、培養器内で一晩、30℃で維持された)に移すことによって調製した。BioShieldで被覆された2つの19L Foodカルボイは、9Lの水、6kgのデキストロースおよび攪拌バーを添加することによって調整した。炭素源を混合および溶解した後、食物培地を加熱滅菌した(121℃で40分間)。250mLの脱イオン水、濃縮HClによってpH4.0〜4.1に調整した120gのリン酸ジアンモニウムを含む、1Lの滅菌キャップボトルを使用して、窒素溶液を調製した。食物窒素の2つの1L滅菌キャップボトルは、700mLの脱イオン水、濃縮HClによってpH4.0〜4.1に調整した192gのリン酸ジアンモニウムを添加することによって調製した。塩基溶液は、チューブ付の19Lカルボイ中で調製し、BioShieldで被覆して、13.5Lの水、1.5LのKOHを入れた。次に、チューブを蠕動ポンプに接続した。抗発泡剤(Antifoam AES、1:10)溶液を、チューブ付の19Lカルボイ中で調製し、BioShieldで被覆して、12Lの水、3Lの抗発泡剤(Antifoam AES、3kg)を入れて混合した。次に、チューブを蠕動ポンプに接続した。150Lの発酵槽培地は、1.98kgの琥珀、0.3kgのペプトン、0.12kgのデキストロース、0.12kgの酵母窒素ベース、0.516gのスメクタイト粘土(American Colloid Company,Arlighton Height,IL,USA)、および60Lの水で構成し、121℃で15psi、1時間攪拌した。培地を30℃に冷却し、この温度を培養中維持した。
糖の産業源を利用する粘土をインターレースした酵母細胞壁の生成
酵母培養物。サッカロミセス・セレビシエ細胞(Fermin,Alltech Inc.,からの活性乾燥酵母(ADY)、酵母数:2.38x1010細胞/グラム、生存率:92.6%)を、Biofow発酵槽(BioFlow III,New Brunswick Scientific Co.,Inc.,Edison,New Jersey,U.S.A.)中で成長させた。酵母接種材料は、29gの新鮮なADY Ferminを事前に加温した87mLの滅菌脱イオン水ボトルに移すことによって調製した。次に、溶液を30℃で(水浴中)20分間インキュベートし、数回かき混ぜた。BioFlow培地は、0.048gの低塩酸カルシウム、0.24gの硫酸マグネシウム、0.168gの硫酸亜鉛、0.24gの塩酸マグネシウム、2.4g(2.5mLの調製食物)サトウキビマスト、7.5スメクタイト粘土(最終培地中0.5%(American Colloid Company,Arlighton Height,IL,USA))および1440mLの脱イオン水で構成された。サトウキビマストは、水で希釈した糖蜜の総還元糖(TRS)溶液の30%である。マストの調製は、669gの糖蜜(62.8% TRS)および731mLの脱イオン水を用いて行った。窒素源は、163.5mLの脱イオン水中、54.5gの尿素で調製した。
フサリウムマイコトキシンに対するインビボ有効性
1日齢のハイブリッド七面鳥の雛(Hybrid Turkeys,Kitchener,ON,Canada)を、グェルフ大学Arkell家禽研究所において個別に計量し、翼に帯を付けて、ランダムにグループ分けした。雛を、5つの食餌のそれぞれにランダムに割り当てた。最初に、雛を32℃で維持し、温度を1週間当たり3℃ずつ徐々に低下させて、4週間目の最後には、温度21℃に到達させた。この温度は、実験期間中維持した。七面鳥の雛に、コーン、小麦、および大豆ミールベースの開始(0〜3週間)食餌、および対照穀物、対照+0.2%の粘土をインターレースした酵母細胞壁、汚染した穀物、および汚染した穀物+0.2%の粘土をインターレースした酵母細胞壁を配合した飼育(4〜6週間)食餌を与えた。対照食餌は、NRC(1994)に従って、最小栄養要件を満たすか、または超えるように配合した。マイコトキシン汚染された食餌は、開始段階および飼育段階中に、25〜10%および26〜5%の対照コーンおよび小麦を、それぞれ汚染されたコーンおよびフサリウムマイコトキシンで自然に汚染された小麦と置換することによって調製した。対照穀物と汚染された穀物との置換レベルは、開始段階および飼育段階中の約4mgのDON/kgのマイコトキシン惹起を達成するように計算した。対照コーンを0.2%の粘土をインターレースした酵母細胞壁(CIYCW)と置換することによって、ポリマーグルコマンナン吸着剤を補充した食餌を調製した。食餌および水は、不断で提供した。代表的な食餌試料は、直前分析およびマイコトキシン分析のために各段階の開始時に採取した。タンパク質、乾燥物質、および灰の食餌含有量は、公認分析化学者協会(1980)に従って決定した。食餌の配合および栄養素の含有量は、表1に提示される。実験手順は、グェルフ大学動物愛護委員会によって承認され、Canadian Council on Animal Careのガイドラインに従う。
Claims (50)
- 酵母細胞壁にインターレースした粘土または粘土成分を含む前記酵母細胞壁を含む、酵母細胞。
- 前記酵母細胞は、粘土を含む細胞培養培地中で培養される、請求項1に記載の酵母細胞。
- 前記粘土は、ケイ酸塩群に属する鉱物粘土または合成粘土である、請求項2に記載の酵母細胞。
- 前記粘土は、ゼオライト、ベントナイト、アルミノケイ酸塩、モンモリロナイト、スメクタイト、カオリナイト、有機粘土、およびそれらの混合物から成る群から選択される、請求項3に記載の酵母細胞。
- 粘土は、アルミノケイ酸塩粘土である、請求項4に記載の酵母細胞。
- 前記細胞培養培地中の粘土の量は、約0.125%〜4.0%である、請求項2に記載の酵母細胞。
- 前記細胞培養培地中の粘土の量は、約0.5%〜2.0%である、請求項6に記載の酵母細胞。
- 前記酵母は、サッカロミセス、カンジダ、クリベロミセス、トルラスポラ、およびそれらの組み合わせから成る群から選択される、請求項1に記載の酵母細胞。
- 前記酵母は、サッカロミセス・セレビシエである、請求項8に記載の酵母細胞。
- 粘土または粘土成分をインターレースした酵母細胞壁抽出物を含む、組成物。
- 前記粘土または粘土成分をインターレースした酵母細胞壁抽出物は、粘土を含む成長培地中で培養された酵母細胞に由来する、請求項10に記載の組成物。
- ガラスビーズおよびビードビーターを利用して、前記酵母細胞壁抽出物を調製する、請求項10に記載の組成物。
- 酵素処理を利用して、前記酵母細胞壁抽出物を調製する、請求項10に記載の組成物。
- 前記粘土または粘土成分をインターレースした酵母細胞壁抽出物は、飼料に添加される、請求項10に記載の組成物。
- 前記飼料は、完全混合飼料(TMR)、秣、ペレット、濃縮物、プレミックス、副産物、穀物、醸造かす、糖蜜、ファイバー、飼い葉、草、干草、穀粒、葉、穀粉、溶解物、および栄養補助剤から成る群から選択される、請求項14に記載の組成物。
- 前記粘土または粘土成分をインターレースした酵母細胞壁抽出物は、有機材料に添加される、請求項10に記載の組成物。
- 前記粘土または粘土成分をインターレースした酵母細胞壁抽出物は、水に添加される、請求項10に記載の組成物。
- 前記粘土または粘土成分をインターレースした酵母細胞壁抽出物を通じて液体がろ過される、請求項10に記載の組成物。
- 前記液体は、ジュース、水、ビール、またはワインである、請求項18に記載の組成物。
- 動物界の任意のメンバーに食餌として与えるために配合される、請求項10に記載の組成物。
- 前記メンバーは、鳥、ウシ、ブタ、ウマ、ヒツジ、およびヤギ、魚、貝、ラクダ、ネコ、イヌ、および齧歯類種から成る群から選択される、請求項20に記載の組成物。
- 前記粘土または粘土成分をインターレースした酵母細胞壁抽出物は、1つ以上の種類のマイコトキシンを隔離する、請求項10に記載の組成物。
- 前記マイコトキシンは、アフラトキシン、ゼアラレノン、トリコテセン、フモニシン、オクラトキシンから成る群から選択される、請求項22に記載の組成物。
- 前記マイコトキシンは、アセトキシシルペンジオール、アセチルデオキシニバレノール、アセチルニバレノール、アセチルネオソラニオール、すべてのアフラトキシンに拡大されるアセチルT−2トキシン、アフラトキシンB1、B2、G1およびG2、アフラトレム、アルテン酸アルテルナリオール、アウストジオール、アウストアミド、アウストシスチン、アベナセイン+1、ボーベリシン+2、ベンテノリド、ブレビアンアミド、ブテノリド、カロネクトリン、カエトグロボシン、シトリニン、シトレオビリジン、コクリオジノール、シトカラシンE、シクロピアゾン酸、脱アセチルカロネクトリン、脱アクチルネオソラニオール、脱オキシニバレノールジアセテート、脱オキシニバレノールモノアセテート、ジアセトキシシルペノール、デストラキシンB、すべての麦角毒素およびエンドファイトに拡大されるエンニアチン、フルクチゲニン+1、フマギリン、フモニシン、フモニシンB1およびB2およびB3、フサレノン−X、フサロクロマノン、フサル酸、フサリン、グリオトキシン、HT−2トキシン、イポメアニン、イスランジトキシン、ラテリチン+1、リコマラスミン+1、マルホルミン、マルトリジン、モニリホルミン、モノアセトキシシルペノール、ネオソラニオール、ニバレノール、すべてのオクラトキシンに拡大されるNT−1トキシン、NT−2トキシン、オオスポレイン、オキサル酸、パツリン、ペニシリン、ペニシル酸、ペニトレム、ロリジンE、ルブラトキシン、ルブロスキリン、ルブロスルフィン、ルグロシン、サンブシニン+1、サトラトキシンF、G、H、シルペントリオール、スラフラミン、無菌濃縮された改変酵母細胞壁抽出物トシスチン、T−1トキシン、T−2トキシン、すべてのトリコテセンに拡大されるトリアセトキシシルペンジオール、トリコデルミン、トリコテシン、トリコベリン、トリコベロール、トリプトキバレン、ベルカリン、ベルクロゲン、ビオプルプリン、ビオメレイン、ビリジトキシン、キサントシリン、ヤバナイシン+1、およびゼアラレノール、およびゼアラレノンから成る群から選択される、請求項22に記載の組成物。
- 粘土または粘土成分をインターレースした酵母細胞壁抽出物を含み、前記粘土または粘土成分をインターレースした酵母細胞壁抽出物は、マイコトキシンを隔離するために有効な量で存在する、動物飼料。
- 前記粘土または粘土成分をインターレースした酵母細胞壁抽出物は、前記飼料の約0.0125重量%〜約10重量%の量で存在する、請求項25に記載の動物飼料。
- 前記粘土または粘土成分をインターレースした酵母細胞壁抽出物は、前記飼料の約0.0125重量%〜約4.0重量%の量で存在する、請求項25に記載の動物飼料。
- 動物またはヒトに対するマイコトキシンの生物学的利用能を低減させるための方法であって、
a)
i)粘土または粘土成分をインターレースした酵母細胞壁抽出物を含む組成物と、
ii)動物またはヒトによって消費される材料と、
を準備することと、
b)前記粘土または粘土成分をインターレースした酵母細胞壁抽出物を、前記材料に組み込んで、粘土または粘土成分をインターレースした酵母細胞壁抽出物が組み込まれた材料を生成することと、
c)前記動物またはヒトに、前記粘土または粘土成分をインターレースした酵母細胞壁抽出物が組み込まれた材料を消費させることと、
を含む、方法。 - 前記材料は飼料である、請求項28に記載の方法。
- 粘土または粘土成分をインターレースした酵母細胞壁抽出物を含む前記組成物の約0.0125重量%〜約0.4重量%が、前記飼料に添加される、請求項29に記載の方法。
- 前記材料は敷き藁である、請求項28に記載の方法。
- 粘土または粘土成分をインターレースした酵母細胞壁抽出物を含む前記組成物の約0.0125重量%〜約99.0重量%が、前記敷き藁に添加される、請求項31に記載の方法。
- 前記材料は液体である、請求項28に記載の方法。
- 粘土または粘土成分をインターレースした酵母細胞壁抽出物を含む前記組成物の約0.0125重量%〜約99.0重量%が、前記液体に添加される、請求項33に記載の方法。
- 前記動物は、鳥、ウシ、ブタ、ウマ、ヒツジ、およびヤギ、魚、貝、ラクダ、ネコ、イヌ、および齧歯類種から成る群から選択される、請求項28に記載の方法。
- 粘土または粘土成分をインターレースした酵母細胞壁抽出物を含む前記組成物は、1つ以上の種類のマイコトキシンを隔離する、請求項28に記載の方法。
- 前記マイコトキシンは、アフラトキシン、ゼアラレノン、トリコテセン、フモニシン、オクラトキシン、およびそれらの組み合わせから成る群から選択される、請求項36に記載の方法。
- 追加の薬剤を、前記粘土または粘土成分をインターレースした酵母細胞壁抽出物が組み込まれた材料に組み込むことをさらに含み、前記薬剤は、エステラーゼ、エポキシダーゼ、酵母、および細菌株から成る群から選択される、請求項28に記載の方法。
- 産業用量の粘土または粘土成分をインターレースした酵母細胞壁抽出物を生成する方法であって、
a)
i)酵母開始培養物と、
ii)酵母細胞培養培地であって、前記酵母細胞培養培地は、酵母成長に必要な栄養素と、粘土または粘土成分とを含む、酵母細胞培養培地と、
を準備することと、
b)前記酵母開始培養物を前記酵母細胞培養培地に導入することと、
c)酵母成長を可能にするように構成された条件下で、前記酵母を産業用発酵槽中でインキュベートすることであって、前記酵母は、前記粘土または粘土成分を、成長中に前記酵母細胞壁に組み込むことと、
d)抗発泡剤を前記発酵槽に添加することと、
e)前記粘土または粘土をインターレースした酵母細胞壁を溶解することと、
f)前記粘土または粘土成分をインターレースした酵母細胞壁を他の酵母成分から分離することと、
を含む、方法。 - 前記酵母は、サッカロミセス、カンジダ、クリベロミセス、トルラスポラ、およびそれらの組み合わせから成る群から選択される、請求項39に記載の方法。
- 前記粘土は、ケイ酸塩群に属する鉱物粘土または合成粘土である、請求項39に記載の方法。
- 前記粘土は、ゼオライト、ベントナイト、アルミノケイ酸塩、モンモリロナイト、スメクタイト、カオリナイト、有機粘土、およびそれらの混合物から成る群から選択される、請求項40に記載の方法。
- 前記粘土は、アルミノケイ酸塩粘土である、請求項42に記載の方法。
- 前記細胞培養培地中の粘土の量は、約0.125%〜4.0%である、請求項39に記載の方法。
- 前記細胞培養培地中の粘土の量は、約0.5%〜2.0%である、請求項44に記載の方法。
- 前記産業用発酵槽は、1,000〜5,000,000リットルである、請求項39に記載の方法。
- 前記抗発泡剤を添加して、前記インキュベーション過程に対する前記粘土の影響を軽減する、請求項39に記載の方法。
- 前記抗発泡剤は、ノンシリコーン分子消泡剤、油性消泡剤、粉末消泡剤、水性消泡剤、シリコーン性消泡剤、ポリエチレングリコール性消泡剤、ポリプロピレングリコール性消泡剤、およびポリアクリル酸アルキルから成る群から選択される、請求項39に記載の方法。
- 前記抗発泡剤は、ノンシリコーン分子泡剤を含む、請求項39に記載の方法。
- 前記溶解は、ガラスビーズ、ビードビーター、および/または酵素処理を含む、請求項39に記載の方法。
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