EA020684B1 - Средство для обезвреживания микотоксинов на основе биомассы мицелиальных грибов и его применение - Google Patents

Abstract

Предлагается средство для обезвреживания микотоксинов, загрязняющих пищу, корма и вызывающих инфекции растений микробными паразитами, и способы его применения. Средство обеспечивает связывание микотоксинов новым адсорбентом, состоящим частично или полностью из биомассы мицелиальных грибов или ее отдельных компонентов; эти материалы могут быть перед использованием дополнительно обработаны кислотным, щелочным или ферментативным гидролизом. Средство вносится в сухом или измельченном виде в количестве 0,02-0,5% от рациона. Указанное средство в виде порошка, пасты или суспензии может быть использовано и для обезвреживания микотоксинов путем их адсорбции при инвазии растений паразитическими грибами и для предотвращения такой инвазии. Полученное таким образом средство (сорбент) способно связывать широкий ряд микотоксинов, включая трудносвязываемые (охратоксин, Т-2, вомитоксин, ниваленол). Новый сорбент может использоваться как кормовая добавка, функциональная добавка к пище и как сельскохозяйственный фунгистатик/фунгицид.

Description

Настоящее изобретение решает проблему обезвреживания микотоксинов, содержащихся в кормах, пище и на участках грибной инвазии растений, путем связывания их новым сорбентом. Сорбент содержит органические полимеры, присутствующие в биомассе непатогенных микроскопических грибов. В результате микотоксины безопасно выводятся из пищеварительного тракта сельскохозяйственных и домашних животных или людей без отрицательного воздействия на животноводческие показатели или человеческое здоровье. Предлагаемая композиция также полезна при внесении в почву или нанесении на семена, рассаду и растения, чтобы уменьшить или предотвратить инвазию растений паразитическими грибами.

Предшествующий уровень техники

Биотехнологические решения для связывания и обезвреживания микотоксинов в пище, кормах и растениеводстве включают использование клеточной стенки дрожжей (патент США 6045834 и патентная заявка США 61/144620), специально подобранных бактерий (РСТ/АШ998/000063, патентная заявка США 60/953301) и растительной биомассы (патент США 8496984).

Культуры мицелиальных грибов известны как производители разлагающих микотоксины ферментов, таких как гидролазы и оксидазы (ЕР 08152315.1), а также иммуномодулирующих фрагментов клеточной стенки (патент США 7514085). Мицелиальные грибы также используются как пробиотики вытеснения паразитических и производящих микотоксины грибов (РСТ/В2006/052592, патентные заявки США 11/033352, 11/848866 и 61/081497).

Однако о сродстве биомассы мицелиальных грибов и ее фрагментов к микотоксинам и потенциальному использованию первых в качестве микотоксинсвязывающего компонента в пище, кормах и растениеводстве не сообщалось.

Сущность изобретения

Основной целью настоящего изобретения является разработка способа адсорбции и, как следствие, обезвреживания микотоксинов, содержащихся в кормах для животных и пище человека и способствующих инфицированию сельскохозяйственных растений грибковыми паразитами. Способ предусматривает использование нового средства - микотоксинсвязывающего компонента, основанного на биомассе мицелиальных грибов. Биомасса либо получается как многотоннажный отход ряда процессов промышленной ферментации (таких, как микробиологическое производство лимонной кислоты, антибиотиков, ферментов, витаминов и пигментов), либо из промышленных производств, где грибковая биомасса является частью остатка после биоконверсии (например, ферментативной конверсии биомассы в биотопливо с прямым использованием ферментов в виде культуральной жидкости), либо это грибница и остаток субстрата после выращивания плодовых тел грибов в сельскохозяйственной культуре. Альтернативно, биомасса мицелиальных грибов, функционально обогащенная биомасса или ее компоненты, ответственные за связывание микотоксинов, могут быть произведены в ходе целенаправленной ферментации.

В обоих случаях сродство и емкость получаемого сорбента микотоксинов, основанного на биомассе мицелиальных грибов, могут быть далее улучшены путем скрининга продуцентов с выбором оптимального вида и штамма, методами генной инженерией грибов, модификацией условий ферментации и постферментации, физической и физико-химической обработкой грибной биомассы.

Предметом настоящего изобретения является средство, включающее полученную ферментацией биомассу мицелиальных грибов, с помощью которого можно обезвредить широкий набор микотоксинов, особенно микотоксины, типичные для северного климата (охратоксин, Т-2, вомитоксин, ниваленол), в настоящее время плохо обезвреживаемые существующими сорбентами, в дополнение к микотоксинам, типичным для южных широт (афлатоксины, фумонизин, зеараленон), для которых уже существуют эффективные сорбенты.

Изобретение предлагает способ обеззараживания микотоксинов, согласно которому заявленное средство, способное к связыванию путем адсорбции микотоксинов в кормах сельскохозяйственных или домашних животных, скармливается любому сельскохозяйственному или домашнему животному. При введении в корм или скармливании в качестве добавки предлагаемое средство со значительно увеличенным сродством и широкой специфичностью к различным типам микотоксинов снижает всасывание микотоксинов в кишечнике, таким образом, улучшая жизненные показатели и здоровье животных и уменьшая частоту и тяжесть микотоксикозов.

Изобретение также относится к применению заявленного средства в качестве пищевой добавки для связывания микотоксинов, когда предлагаемое средство добавляется к любой человеческой пище, в т.ч. сухой, порошкообразной, формованной, пастообразной, гелевидной или жидкой, либо же используется как функциональная пищевая добавка в форме порошка, таблеток, пасты или суспензии, с добавлением или без других ингредиентов. Заявленные средства, с их значительно повышенным сродством и широкой специфичностью к разным типам микотоксинов, при введении в пищу человека или употреблении в качестве добавки препятствуют кишечному всасыванию микотоксинов, таким образом, улучшая самочувствие и здоровье людей.

Изобретение также предлагает использование заявленного средства для связывания микотоксинов в растениеводстве: при инвазии растений паразитическими грибами и для предотвращения такой инвазии.

- 1 020684

При этом указанное средство может иметь форму порошка, пасты или суспензии и может использоваться для обработки почвы, семян, рассады и наземной части растений. В частности, оно может быть добавлено к почве, нанесено на семена, рассаду, растения и культуры, чтобы обеспечить устойчивость к микозам сельскохозяйственных культур и лесных насаждений.

Подробное описание изобретения

Заявленное изобретение основано на открытии, что биомасса, полученная из мицелиальных грибов, может обеспечивать связывание микотоксинов, включая микотоксины северного происхождения, которые, как известно, трудны для связывания существующими сорбентами. Таким образом, изобретение обеспечивает способ и средство для связывания микотоксинов в кормах, пище и во время начала микоза растений. Способ использует выращенную биомассу мицелиальных грибов, с добавлением, по необходимости, общеизвестных из практики микотоксин-сорбирующих компонентов.

Биомасса грибов может быть получена в результате широкомасштабных промышленных ферментаций, таких как производство ферментов, пептидов, вторичных метаболитов, фармацевтических препаратов, нутрацевтиков, кислот, в т.ч. жирных кислот, жиров и их производных, полиоз, ароматических веществ, витаминов, пигментов и т.д. Альтернативно, требуемая биомасса может быть получена в ходе специализированной ферментации, направленной на биосинтез микотоксинсвязывающих компонентов как основных продуктов.

Наиболее предпочтительны широкомасштабные ферментации, при которых биомасса мицелиальных грибов является отходом производства, такого как лимонно-кислое брожение, биосинтез глюкоамилазы, грибной пектиназы, грибной протеазы, пептидазы и альфа-амилазы, ферментация грибов родов ТпсНобсгта. АкрегдШик, Βΐιίζοριικ. РетсШшт, Нитюо1а и СЬтукокрогшт/МусеНорйХЬога для производства целлюлазы, бета-глюканазы и ксиланазы, антибиотиков, витаминов и пигментов (каротин, астоксантин, витамин А), омега-ненасыщенных жирных кислот, а также ферментации, где генетически модифицированные микромицеты используются для биосинтеза белков, пептидов и вторичных метаболитов.

Предпочтительной целенаправленной ферментацией является культивирование микромицетов родов АкрегдШик, МЮорик, Тпсйобетта, РетсШшт, Асгетотит, МоиШа, СЬ^окрогшт/МусеНорйШога, СЬаеХоттт, СеоХпсйит, Мисог, Ыеигокрога и Рикагшт тусготусеХек и ВатШотусоХа (базидиомицетов), предпочтительно тех, которые удалось перевести в глубинное выращивание.

При осуществлении целенаправленной ферментации для выращивания биомассы мицелиальных грибов (в противоположность использованию отходов биомассы грибов из сторонних производств) микотоксинсвязывающие свойства биомассы могут быть дополнительно улучшены. В преимущественном воплощении изобретения могут быть приняты меры для максимизации биосинтеза хитина и белковгидрофобинов.

Биосинтез хитина и хитозана повышается путем создания наилучших условий для роста биомассы с избытком кислорода, азота и углеродистых питательных веществ и с большим гидродинамическим сдвигом перемешивания в глубинной ферментации. В дополнение, вид и штамм микромицета могут быть отобраны по повышенной продукции ферментов, конвертирующих хитин в хитозан. При поверхностной ферментации принимаются меры для повышения биосинтеза хитина и хитозана путем включения в твердый субстрат биотина, никотиновой кислоты, крахмала, других источников доступного сахара; мочевины и сульфата аммония как источника азота.

Биосинтез гидрофобинов может быть увеличен путем подвергания микроорганиза стрессу, например переносом из глубинной ферментации на поверхностное культивирование на 6-12 ч, голоданием по углероду или азоту, облучением синим или естественным светом.

При предпочтительной реализации изобретения грибную биомассу получают в результате глубинной ферментации АкрегдШик тдег, продуцента глюкоамилазы или лимонной кислоты. В другом предпочтительном варианте биомассу получают в результате глубинной ферментации ТпсНобегта 1оид1ЬгасШаХит (=Т.гееке1) или РетаШт ГитсШокит или Сйтукокрогшт 1искпо\уепке (=Мусе1юрйХйога ХйетторЬЛа), выращиваемых для производства целлюлазы, бета-глюканазы или ксиланазы. Еще в одном воплощении изобретения биомассу получают в результате глубинной ферментации аспергиллов, триходерм, пенициллов или МусеНорйХйога, которые были подвергнуты генетической модифицикации, чтобы синтезировать и секретировать полипептидные продукты, такие как ферменты целлюлаза, фитаза или оксидоредуктаза, или вторичные метаболиты.

После ферментации биомассу, часто вместе со вспомогательным носителем для фильтрования, выделяют из культуральной жидкости вакуумной фильтрацией без добавления антимикробных средств (Ргохе1), высушивают в кипящем слое или на ленточной или распылительной сушилке, и перемалывают до частиц размером <50 мкм на молотковой мельнице, и, дополнительно, микронизируют до <10 мкм на орбитальной мельнице.

В более предпочтительном воплощении изобретения грибная биомасса, полученная в ходе одной из ферментаций, описанных выше, отделяется от фильтрата культуральной жидкости на вакуумном барабанном фильтре и подвергается дополнительной тепловой обработке при 50-70°С в течение 1-60 мин во влажном состоянии. Как вариант, до прогрева биомасса со вспомогательным носителем для фильтрования выкладывается в виде тонкого 8-сантиметрового слоя на гладком твердом полу, например бетонном,

- 2 020684 подогретом в ходе стерилизации паром с поверхности до 30°С, и подвергается аэрированию и сильному освещению искусственным светом или естественным светом с периодическим переворачиванием слоя лопатой или механически в течение 6-12 ч. Как возможное дополнение, сверху слоя распылается раствор мочевины, чтобы обеспечить азотное питание. Альтернативно, распыляется раствор сахара, чтобы обеспечить углеводное питание. В дополнение, биомасса может быть смешана перед поверхностной инкубацией в тонком слое с твердым субстратом, либо инертным (таким, как цеолит), либо поддерживающим дальнейший рост, таким как пшеничные, рисовые отруби, оболочки зерна пшеницы, другие отходы помола, кофейные выжимки, подсолнечный жмых, свекловичный жом, сечка и т.п. Субстрат может быть в дополнение снабжен источником углерода, таким как глюкоза, лактоза или крахмал, и источником азота, таким как сульфат аммония или мочевина. Если слой субстрата перегревается из-за быстрого сгорания источника углерода, его подачу уменьшают, а слой охлаждают до 30°С путем распыления воды и обеспечением тангенциального потока прохладного (15-30°С) воздуха с низкой (40-60%) влажностью. Кроме того, бетонированный пол может быть оборудован сеткой подземных водяных труб, обеспечивающих нагрев и охлаждение путем циркуляции теплоносителя. Ферментацию лучше останавливать, не дожидаясь спорообразования. Обычно после 6-12 ч инкубации в вышеописанных условиях грибной биомассе позволяют немного подсохнуть на месте, а затем собирают ее вручную или механически, как вариант подвергают механической, физико-химической или ферментативной обработке и высушивают в кипящем слое. Высушенный материал мелется и микронизируется, как описано выше.

В другом предпочтительном воплощении изобретения биомасса выращивается в целевом процессе с использованием недорогой среды и условий, максимизирующих накопление биомассы, и, как вариант, условий, максимизирующих биосинтез хитина и гидрофобинов. Ферментация может быть обычного поверхностного типа, известного в практике. Альтернативно, в наиболее предпочтительном воплощении, биомасса сначала максимально наращивается во время стадии глубинной ферментации с максимальным аэрированием на богатой питательными веществами среде, как вариант, снабженной биотином и никотиновой кислотой. Глубинная ферментация затем сопровождается короткой твердофазной ферментацией продолжительности, достаточной, чтобы максимизировать биосинтез компонентов биомассы, ответственных за связывание микотоксинов, таких как хитин, хитозан и гидрофобины. В частности, после 2-4 дней глубинной ферментации, когда накопление биомассы выходит на плато, биомассу отделяют, используя методы, описанные выше, или другие, известные в практике, и выкладывают во влажном состоянии для твердофазной инкубации, как описано выше. Поддерживаются те же условия в отношении температуры, охлаждения, питательных веществ, освещения и влажности. Из-за короткого периода твердофазной ферментации и превалирования целевой биомассы предложенный способ имеет преимущество перед обычными ферментативными твердофазными методами в связи с меньшим риском микробного заражения. Таким образом, стадия твердофазной ферментации может быть проведена в упрощенных полустерильных условиях. После 6-12 ч инкубации в этих условиях грибная биомасса немного подсушивается на месте, собирается вручную или механически и, как вариант, подвергается механической, физикохимической или ферментативной обработке и высушивается в кипящем слое. Высушенный материал измельчается или микронизируется, как описано выше.

В другом воплощении изобретения связующая способность микотоксина грибковой биомассы увеличивается путем дополнительной физической обработки, такой как микронизация и/или укрепление пористой структуры, либо же путем химической обработки, такой как создание дополнительных анионообменных групп или дополнительных центров гидрофобности.

Примеры физической обработки включают тепловой шок во влажном состоянии, освещение и введение упрочняющих структуру агентов.

Защита поверхности и пористой структуры изготовленного адсорбента может быть обеспечена путем создания искусственного неплавкого слоя на поверхности и внутри пор методами, известными в практике, такими как внесение искусственного слоя минерального осадка, произведенного импрегнацией адсорбента одним растворимым составом и затем воздействием на него другим растворимым составом, с образованием на месте нерастворимого продукта реакции.

Примеры химической постобработки биомассы мицелиальных грибов включают автолиз, химический и ферментативный частичный гидролиз, обработку органическими растворителями, кислый и щелочной гидролиз. Из перечисленных наиболее предпочтительны обработки щелочью, протеазой, хитиназой и целлюлазой.

Как заключительный этап обработки, биомасса мицелиальных грибов высушивается на ленточной сушилке с последующим сухим помолом или на распылительной сушилке, как вариант, с дополнительной последующей микронизацией.

В предпочтительном воплощении настоящего изобретения полученный микотоксинсвязывающий компонент из биомассы мицелиальных грибов обеспечивает расширение диапазона связываемых микотоксинов, включая трудносорбируемые токсины, типичные для северного климата (охратоксин, Т-2, вомитоксин, ниваленол). В микотоксинсвязывающую композицию могут быть включены в количестве 1090% также другие компоненты, которые обеспечат сродство к легкосвязывающимся токсинам, типичным для южных широт (афлатоксины, фумонизин, зеараленон). Другие компоненты могут быть выбраны из

- 3 020684 обычных связующих агентов, известных в практике, таких как: природные глины, искусственные глины, органические полимеры, компоненты клеточной стенки дрожжей и т.д.

В преимущественном воплощении настоящего изобретения микотоксинсвязывающее средство включает 10-90% компонента, основанного на биомассе мицелиальных грибов, и 90-10% обычного микотоксинсвязывающего агента. Предпочтительно средство включает 25-50% грибного компонента и 7550% обычного компонента. Наиболее предпочтительное средство включает 30-40% грибного компонента и 70-60% обычного компонента. Предпочтительная физическая форма заявленного средства изобретения сухой, легкосыпучий порошок или микрогранулированный порошок, подходящий как для прямого введения в пищу и корма, так и в качестве добавки к полному смешанному рациону.

Средства, предлагаемые в настоящем изобретении, могут быть добавлены к любым коммерческим кормам для скота, птицы и домашних животных, включая, помимо прочего, премиксы, концентраты и пеллетированные концентраты. Средство, предлагаемое в настоящем изобретении, может быть включено непосредственно в коммерческие насыпные и гранулированные корма или скармливаться дополнительно к приготовленным кормам. При включении непосредственно в корма заявленное средство может быть добавлено к таким кормам в количестве 0,2-5 кг на тонну корма. В предпочтительном варианте изобретения средство включается в корма в количестве 0,5-2 кг на тонну корма. В наиболее предпочтительном варианте средство включается в корма в количестве 1-2 кг на тонну корма. Средство, предлагаемое в настоящем изобретении, может скармливаться любому животному, включая, помимо прочего, птицу, коров, свиней, лошадей, овец, коз, собак, кошек и объекты аквакультуры.

Альтернативно, средство, раскрытое в настоящем изобретении, может быть непосредственно скормлено животным как добавка в количестве 2,0-20 г на голову в сутки. Особенно предпочтительное воплощение включает скармливание средства животным в количестве 5-15 г на голову в сутки, в зависимости от вида животных, размера животного и типа корма.

Средство может быть добавлено к любой человеческой пище, сухой, порошковой, формованной, пастообразной, гелеобразной или жидкой, или использоваться как функциональная питательная добавка в форме порошка, таблеток, пасты или суспензии, с добавлением или без других ингредиентов. При введении в пищу или использовании как добавки композиции с их увеличенной микотоксинсвязывающей способностью и расширенным диапазоном микотоксинов значительно снижают всасывание микотоксинов в кишечнике человека, таким образом, улучшая самочувствие и здоровье.

Ключевые микотоксинсвязывающие компоненты биомассы мицелиальных грибов - хитин, хитозан, гидрофобины - с трудом перевариваются в кишечнике животных и людей и поэтому способны выполнить свою функцию связывающего вещества вплоть до момента, когда связанные микотоксины будут безопасно экскретированы из организма.

Способ, описанный в настоящем изобретении, подразумевает связывание и удаление микотоксинов, содержащихся в пище и кормах, включая, помимо прочего, афлатоксин, зеараленон, вомиктоксин, фумонизины, токсин Т2 и охратоксин, таким образом, повышая безопасность и питательную ценность пищи и кормов и обеспечивая здоровье и работоспособность. Составы, описанные в изобретении, достаточно эффективны для более полного связывания охратоксина, Т-2, вомитоксина, ниваленола по сравнению со связыванием, обеспечиваемым современным поколением сорбентов. В дополнение, связываются афлатоксины, зеараленон и фумонизины, в отношении которых существующие сорбенты также недостаточно эффективны.

Композиция может быть добавлена к сельскохозяйственной почве, семенам и рассаде, чтобы обеспечить растениям устойчивость к микозам.

Примеры

Пример 1.

Микотоксинсвязывающая способность кандидата в сорбенты измерялась после добавки 1 мкг микотоксина к 1 г сорбента, суспендированного в 5 мл 0,1 М буфера необходимого рН. Несвязанный микотоксин определялся количественно в супернатанте после удаления осадка центрифугированием (15000 д в течение 10 мин). Для определения микотоксина использовался метод ТЬС.

Биомасса ТпсНойсгта 1опд1ЬгасЫа1ит (=Т.гсс5С1) была получена глубинной ферментацией штаммапродуцента целлюлазы в качалочных колбах в четырех повторностях при 26°С на стандартной питательной среде с декстрозой. После 5 дней ферментации биомасса была отделена центрифугированием, промыта солевым раствором и высушена. Высушенная биомасса была смолота до частиц размером, не превышающим 50 мкм, на молотковой мельнице. Материал был испытан как кандидат на сорбент микотоксинов. Эффективность связывания токсина Т-2, начального и остаточного (после десорбции, с использованием смывки буфером), представлена в табл. 1.

- 4 020684

Таблица 1

Эффективность связывания Т-2 токсина ίη νίίτο биомассой мицелиального гриба ТпсНодегша гссзст приготовленной в четырех различных версиях

Белок	Адсорбции Т-2 микотоксина, %	Десорбция Т-2 микотоксин а, %	Истинная адсорбция, %
рН 7	рН2	рН 8	рН 2
5,18	70,7	77,0	10,1	66,9
8,22	77,0	77,0	4,1	72,8
10,33	70,7	70,7	10,9	59,8
16,80	52,0	61,4	5,9	55,4

Пример 2.

Мицелиальный гриб Рикагшт затЪисшит Риске1 УКМР-842 выращивался в 10-литровом ферментере, содержащем 7 л питательной среды следующего состава (г/л): сахароза - 18; меласса - 10; азотнокислый аммоний - 3; КН₂РО₄ - 2.

Ферментация проводилась при начальном рН 5,6, 26°С и перемешивании с частотой 400 об/мин, обеспечивающем аэрацию в объемах 1 л/л/мин. После 48 ч культивирования биомасса была отделена центрифугированием и высушена путем лиофильной сушки.

Высушенная биомасса была тонко измельчена на орбитальной мельнице до размера частиц 3-5 мкм. Полученный тонкий порошок был испытан согласно ίη-νίΐτο протоколу сорбции микотоксинов с использованием ВЭЖХ/МС/МС. Условия включали адсорбцию трех микотоксинов, типичных для североамериканских и европейских условий, - вомитоксина, охратоксина и зеараленона - из водного раствора, рН 6,5 (0,1 М Ыа-фосфатный буфер), в 37°С в течение 60 мин 0,5% суспензией кандидата в сорбенты. Концентрация каждого микотоксина в смеси была выбрана равной 1,0 мг/л (в сумме - 3,0 мг/л).

Содержание микотоксинов в модельной водной смеси измерялось методом ВЭЖХ/МС/МС на колонке С-8, элюируемой градиентом формиатного буфера^ацетонитрил. В этих условиях ВЭЖХ микотоксины элюируются с колонки в следующей последовательности: вомитоксин - охратоксин - зеараленон. Эффективность начального связывания трех токсинов кандидатами в сорбенты представлена в табл. 2.

Таблица 2

Ιη-νίΐτο эффективность адсорбции 3 микотоксинов тонкоизмельченной биомассой мицелиального гриба Рикагшт затЪисшит Риске1 УКМР-842

Кандидат в сорбенты, 5 г/л, рН 6,5, 37*С, 60 мин	% сорбции микотоксина из смеси 3 токсинов, 1 мг/мл каждого
Вомитоксик	Охратоксин	Зеэраленон
Микофмкс Плюс (Биомин, Австрия)	4,8	0,1	42,Э
Микосорб (Оллтех, Ирландия)	55,3	16,1	62,7
Клеточная стенка дрожжей	46,7	7,0	57,6
Биомасса Ризапит, микронизированная до 5 мкм	54,8	7,7	80,2

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

Claims (5)

1. Средство для обезвреживания путем адсорбции микотоксинов в пище, кормах и при инвазии растений паразитическими грибами, содержащее 10-100% полученной ферментацией биомассы мицелиальных грибов.

2. Средство для обезвреживания путем адсорбции микотоксинов в пище, кормах и при инвазии растений паразитическими грибами, содержащее 10-100% полученной ферментацией биомассы мицелиальных грибов, причем указанная биомасса дополнительно обработана кислотным, щелочным или ферментативным гидролизом и/или в сухом виде измельчена до размеров частиц 3-40 мкм.

3. Способ обезвреживания путем адсорбции микотоксинов в кормах для сельскохозяйственных или домашних животных, принадлежащих к типам позвоночных и беспозвоночных, заключающийся в том,

- 5 020684 что в рацион животных вводят тонкоизмельченное средство по любому из пп. 1 и 2 формулы в количестве 0,02-0,5% от рациона.

4. Применение средства по любому из пп.1 и 2 формулы в качестве пищевой добавки в пище человека для обезвреживания микотоксинов путем адсорбции, причем указанная добавка может иметь форму порошка, гранул, пасты или суспензии.

5. Применение средства по любому из пп.1 и 2 формулы для обезвреживания микотоксинов путем адсорбции при инвазии растений паразитическими грибами и для предотвращения такой инвазии, причем указанное средство может иметь форму порошка, гранул, пасты или суспензии и может использоваться для обработки почвы, семян, рассады и наземной части растений.