KR20090030385A - 살모넬라 엔테리티디스 감염 박테리오파지로부터 선별된살모넬라 특이적 사멸능을 갖는 신규한 박테리오파지 - Google Patents

살모넬라 엔테리티디스 감염 박테리오파지로부터 선별된살모넬라 특이적 사멸능을 갖는 신규한 박테리오파지 Download PDF

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Abstract

본 발명은 살모넬라 엔테리티디스(Salmonella enteritidis) 감염 박테리오파지(Bacteriophage)로부터 선별된 살모넬라 특이적 사멸능을 갖는 신규한 박테리오파지에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 인간을 포함한 동물성 질환의 주된 원인균인 살모넬라(Salmonella)를 특이적으로 사멸시킬 수 있는 능력을 갖는 서열번호 1 내지 서열번호 25의 부분 유전자 서열로 표시되는 유전체를 갖는 것을 특징으로 하는 박테리오파지, 및 상기 박테리오파지를 유효성분으로 포함하는 살모넬라에 의해 유발되는 질환의 예방과 치료용의 약학적 조성물 및 사료첨가제에 관한 것이다.
살모넬라, 박테리오파지, 예방, 치료, 약학적 조성물, 사료첨가제

Description

살모넬라 엔테리티디스 감염 박테리오파지로부터 선별된 살모넬라 특이적 사멸능을 갖는 신규한 박테리오파지{Novel Bacteriophage Having Killing Activity Specific to Salmonella selected from Infectious Bacteriophages of Salmonella enteritidis}
본 발명은 살모넬라 특이적 사멸능을 갖는 신규한 박테리오파지, 이를 유효성분으로 포함하는 살모넬라 감염성 질환의 예방과 치료 목적의 약학적 조성물 및 사료첨가제에 관한 것이다.
박테리오파지는 세균을 감염시키는 바이러스의 일종으로 보통 파지라고 줄여서 부르기도 한다. 박테리오파지는 핵산으로 이루어진 유전물질 중심부를 단백질 외피가 싸고 있는 단순한 구조의 유기체이며 핵산은 단일 사슬이거나 이중 사슬인 DNA 또는 RNA로 되어있다. 박테리오파지는 생존에 숙주가 반드시 필요하며 모든 세균에는 특정 박테리오파지가 존재한다고 알려져 있다. 박테리오파지는 숙주에 침투하여 복제 과정을 끝낸 다음, 숙주인 세균의 세포벽을 분해하기 위해 필요한 일군의 효소를 발현시킨다. 이들 효소는 세포벽의 경직성(rigidity) 및 기계적 강 도(mechanical strength)를 담당하는 세포벽의 펩티도글리칸(peptidoglycan) 층을 공격하여 세포벽을 파괴한다.
박테리오파지는 1915년 영국의 세균학자 Twort가 포도상구균(Micrococcus) 집락이 어떤 것에 의해 투명하게 녹는 현상에 대한 연구에서 발견되었다. 또한, 1917년에는 프랑스
Figure 112007068103953-PAT00001
의 세균학자 d'Herelle이 이질환자 변의 여과액 중에 적리균(Shigella disentriae)
Figure 112007068103953-PAT00002
을 녹이는 작용을 가진 것이 있다는 것을 발견하고 이에 대한 연구를 통해 독립적으로 박테리오파지를 발견하였으며, 세균을 잡아먹는다는 뜻에서 박테리오파지라고 명명하였다. 이후 이질균, 장티푸스균, 콜레라균 등 여러 병원균에 대한 박테리오파지가 계속적으로 발견되었다. 그러나 1950년 Flemming에 의해 페니실린이 발견된 이후, 항생제 사용의 보급화로 인해 일부 동유럽 국가에 한정되어서만 박테리오파지에 대한 연구가 계속되었으며 그 밖의 지역에서는 다소 시들하였다. 그러나 2000년 이후에 항생제의 오남용으로 인해 다재 내성(Multidrug-resistant)을 지닌 병원성 세균의 출현빈도가 높아지고 기존 항생제의 많은 문제점들이 부각되면서 기존 항생제의 대체 물질로의 개발 가능성 때문에 박테리오파지에 대한 연구가 선진국들을 중심으로 많은 관심을 받으며 다시 활발하게 진행되고 있다.
비록 항생제(또는 항균제)가 세균 감염에 의한 감염성 질환의 치료에 있어 여전히 주된 방법으로 널리 사용되고 있는 실정이지만, 1980년대 이후 과도한 항생제의 사용으로 더욱 많은 항생제 내성 균주가 발생하고 있으며, 1986년 최후의 항생제로 불리는 반코마이신(Vancomycin)에 내성을 지닌 황색포도상구균 및 다재 내 성을 가진 균주가 다수 발견됨으로써 의학계에 큰 충격을 주었다. 반코마이신에 내성을 보이는 반코마이신 내성 장구균(Vancomycin Resistant Enterococci; VRE)은 1986년 프랑스에서 처음 보고 되었고 1988년 미국에서 분리된 이래, 치료가 곤란한 병원감염(nosocomial infections)의 원인균으로서 그 분리 빈도가 해마다 증가하고 있으며 최근에는 유럽, 미국 이외에도 싱가포르, 일본, 오스트레일리아, 한국 등 전 세계적으로 증가하는 추세이다. 국내에서는 1992년에 VRE가 처음으로 분리되었다.
따라서 기존 항생제에 내성을 갖는 세균에 의한 질환까지도 치료할 수 있어 국민 건강 증진에 기여할 수 있고 의약 기술을 선도할 수 있는 새로운 항생 물질의 개발이 시급한 상황이다. 다시 말해, 내성세균의 출현에 대한 심각성뿐만 아니라 최근 사회적으로 큰 문제가 되고 있는 항생제 오남용에 의한 문제 및 항생제 잔류 문제에 대한 새로운 해결책으로 기존 항생제를 대체할 수 있는 물질의 개발 등 대안 마련이 매우 절실한 형편이다. 물론 이러한 대안 마련의 해결책은 기존 항생제와는 근본적으로 다른 방법에 의한 새로운 개념의 항생 물질의 개발을 통해서 일 것이다.
살모넬라는 형태학적이나 생리학적으로 대장균과 유사하지만 의학상의 편의를 위해 K. Kauffmann 등의 제창에 의해 독립된 속(genus)으로 되었다. 살모넬라는 1885년 Salmon과 Smith가 돈콜레라로 죽은 돼지에서 살모넬라 코레라에수이스(Salmonella choleraesuis)를 최초로 분리 보고한 이래, 장염과 위장염 환자 및 각종 질병을 가진 동물로부터 분리되었다. 또한 닭을 비롯한 소, 돼지, 염소, 개, 고양이 등의 건강한 동물과 환경물에서도 분리되었다. 살모넬라속 균은 2,000여종 이상의 혈청형이 현재까지 보고된 실정이며 동물에 따른 숙주 특이성이 있는 균종과 숙주 특이성이 없는 균종으로 크게 구분 지을 수 있다. 살모넬라는 그람음성 간균으로 포자는 형성하지 않는다. 살모넬라는 모두가 다양한 동물에서 기생균으로 발견되고 있다. 살모넬라 감염증은 몇 가지 형태로 발생하지만 일반적으로 장염 형태가 가장 일반적이다. 살모넬라는 식중독의 주요 원인균이다. 살모넬라 식중독은 국내에서도 매우 빈번하게 발생하고 있으며 단체 급식의 증가로 그 심각성이 계속 커지고 있다. 2000년도 식중독 환자의 원인균을 조사한 보고에 의하면, 2,500여 건 이상이 살모넬라에 의한 식중독으로 조사되었는데, 이는 포도상구균(약 1,000여건), 비브리오(약 200여건) 등 다른 식중독 원인균에 비교하여서도 월등히 높은 비율을 차지하고 있는 것이다. 살모넬라에 감염되면 거친 피부, 식욕결핍, 결막염, 침울, 엷은 변, 비장 증대, 사망 등의 증상을 보인다. 또 살모넬라는 사람이 음식으로 섭취하는 닭 등의 가금류 및 가축의 장내에 존재함으로 쉽게 사람에게 전달될 수 있다. 미국의 경우 식중독에 의해 발생하는 경제 피해 규모가 20-40억 불로 집계되고 있어 식중독 발생 예방은 경제적으로 매우 중요하다고 할 수 있다.
현재 국내에서 사용되는 항균제의 대부분은 원료 형태 또는 완제품 형태로 외국으로부터 수입되고 있어 해외 의존도가 매우 높을 뿐만 아니라 특히 동물 항생제 분야에서는 기존에 사용되던 값싼 항균제들에 대한 내성문제와 인체에 중요한 신규 항균제의 동물사용 제한으로 인하여 이에 대한 대안 마련이 매우 시급한 상황이다.
이에, 본 발명자들은 살모넬라를 선택적으로 사멸시킬 수 있는 박테리오파지를 자연에서 분리하고, 이 분리된 박테리오파지를 타 박테리오파지와 구별하여 특정 지을 수 있는 유전체(genome)의 유전자 서열을 제공하고, 더 나아가 살모넬라에 대한 특이적 사멸능을 갖는 분리된 박테리오파지를 이용하여 살모넬라 증식을 효과적으로 예방할 수 있는 방법을 제공하고, 최종적으로 분리된 박테리오파지를 살모넬라에 의해 유발되는 질환의 예방 및 치료 목적으로 이용함으로써 본 발명을 완성하였다.
따라서 본 발명의 목적은 인간을 포함한 동물의 감염성 질환의 주된 원인균인 살모넬라를 특이적으로 사멸시킬 수 있는 능력을 가진 신규 박테리오파지를 제공하는 것이다.
또한, 본 발명의 목적은 살모넬라에 의해 유발되는 질환의 예방 또는 치료용으로서 상기 박테리오파지를 유효성분으로 포함하는 약학적 조성물을 제공하는 것이다.
또한, 본 발명의 다른 목적은 상기 박테리오파지를 유효성분으로 포함하는 항생제를 제공하는 것이다.
또한, 본 발명의 또 다른 목적은 상기 박테리오파지를 유효성분으로 포함하는 소독제를 제공하는 것이다.
또한, 본 발명의 다른 목적은 상기 박테리오파지를 유효성분으로 포함하는 사료첨가제를 제공하는 것이다.
또한, 본 발명의 다른 목적은 상기 박테리오파지를 유효성분으로 포함하는 음용수를 제공하는 것이다.
본 발명은 살모넬라 엔테리티디스(Salmonella enteritidis) 특이적 사멸능을 갖는 신규한 박테리오파지를 제공한다.
본 발명의 박테리오파지는 서열번호 1내지 서열번호 25의 부분서열로 특정되어지는 염기 서열로 표시되는 유전체를 가진다.
국내 식품매개질환 발생 병원체중 가장 흔한 식중독 원인균이 살모넬라균이 다. 그 중, 살모넬라 엔테리티디스가 가장 심각하다. 국내에서 분리되는 살모넬라는 약 100여종의 혈청형이 보고되고 있으나 그 중, 약 80% 이상이 살모넬라 엔테리티디스, 살모넬라 티피(Salmonella typhi), 그리고, 살모넬라 티피무륨(Salmonella typhimurium)이며, 최근 최고의 분리율을 보이는 것이 살모넬라 엔테리티디스이다. 살모넬라균에 의한 식중독은 매년 증가하고 있는 추세이며, 또한 살모넬라 엔테리티디스는 인수공통 감염균으로 가축 사료 등의 항균제 남용으로 내성균이 출현하여 현재 문제가 되고 있다.
본 발명자들은 이러한 살모넬라 엔테리티디스를 선택적으로 사멸시키기 위해 예의 노력한 결과, 살모넬라 엔테리티디스를 특이적으로 사멸시킬 수 있는 신규한 박테리오파지를 선별하였고 이를 SEP-1로 명명하였다. 이렇게 선별된 박테리오파지를 2007년 8월 21일자로 한국생명공학연구원 생물자원센터 (기탁번호 KCTC 11173BP)에 기탁하였다.
이에 더하여 본 발명자들은 이러한 살모넬라 엔테리티디스를 선택적으로 사멸시킬 수 있는 SEP-1 박테리오파지가 다른 살모넬라도 효과적으로 사멸시킬 수 있음을 확인하였다. 본 발명의 실시예 6에 따르면, 본 발명의 SEP-1 박테리오파지는 살모넬라 엔테리티디스 이외에도 살모넬라 갈리나룸(Salmonella gallinarum), 살모넬라 풀오룸(Salmonella pullorum) 및 살모넬라 티피무륨(Salmonella typhimuriun)에 대해서도 사멸능이 있음을 알 수 있다.
본 발명은 선별된 SEP-1 박테리오파지를 타 박테리오파지와 구별 지을 수 있도록 유전체의 부분 유전자 서열을 제공한다(서열번호 1내지 서열번호 25).
본 명세서에서 사용된 "유전자"라는 용어는 DNA(gDNA 및 cDNA) 그리고 RNA 분자를 포괄적으로 포함하는 의미를 가지며, 유전자에서 기본 구성단위인 뉴클레오타이드는 자연의 뉴클레오타이드 뿐만 아니라, 당 또는 염기 부위가 변형된 유사체(analogue)도 포함한다(Chemical Reviews 90:543-584, 1990).
또한, 본 발명은 살모넬라 엔테리티디스를 포함한 살모넬라의 증식을 효과적으로 억제할 수 있는 SEP-1 박테리오파지를 유효성분으로 포함하는 약학적 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 살모넬라 엔테리티디스를 포함한 살모넬라에 의해 유발되는 질환의 예방 또는 치료용으로서 SEP-1 박테리오파지를 유효성분으로 포함하는 약학적 조성물을 제공한다.
본 발명의 약학적 조성물에 포함되는 박테리오파지는 상술한 바와 같이, 살모넬라 엔테리티디스를 포함한 살모넬라를 특이적으로 사멸시키므로, 살모넬라 엔테리티디스를 포함한 살모넬라에 의해 유발되는 다양한 질환의 치료에 효과를 나타낸다.
따라서 본 발명의 약학적 조성물은 살모넬라 엔테리티디스에 의해 유발되는 대표 질환인 장염에 대한 치료 및 살모넬라에 의해 유발되는 살모넬라증(salmonellosis)에 대한 치료에 이용될 수 있다. 따라서 살모넬라증의 하나이 기는 하지만 특별히 지칭하여 식중독, 급성 균혈증, 가금티프스의 치료에도 이용될 수 있다.
본 명세서에서 사용된 '치료'라는 용어는 (ⅰ) 살모넬라에 의해 유발된 질환의 예방; (ⅱ) 살모넬라에 의해 유발된 질환의 억제; 및 (ⅲ) 살모넬라에 의해 유발된 질환의 경감을 의미한다.
본 발명의 약학적 조성물에 포함되는 약제학적으로 허용되는 담체는 제제시에 통상적으로 이용되는 것으로서, 락토스, 덱스트로스, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 전분, 아카시아 고무, 인산 칼슘, 알기네이트, 젤라틴, 규산 칼슘, 미세결정성 셀룰로스, 폴리비닐피롤리돈, 셀룰로스, 물, 시럽, 메틸 셀룰로스, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 활석, 스테아르산 마그네슘 및 미네랄 오일 등을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 본 발명의 약제학적 조성물은 상기 성분들 이외에 윤활제, 습윤제, 감미제, 향미제, 유화제, 현탁제, 보존제 등을 추가로 포함할 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물은 질환 부위에의 도포 또는 분무하는 방법으로 이용할 수 있으며, 그 밖에 경구 투여 또는 비경구 투여를 통해 투여할 수도 있으며, 비경구 투여의 경우 정맥 내 투여, 복강 내 투여, 근육 내 투여, 피하 투여 또는 국부 투여를 이용하여 투여할 수도 있다.
본 발명의 약학적 조성물의 적합한 도포, 분무 및 투여량은 제제화 방법, 투 여 방식, 대상이 되는 동물 및 환자의 연령, 체중, 성, 질병 증상의 정도, 음식, 투여 시간, 투여 경로, 배설 속도 및 반응 감응성과 같은 요인들에 의해 다양하며, 보통으로 숙련된 의사나 수의사는 소망하는 치료에 효과적인 투여량을 용이하게 결정 및 처방할 수 있다. 일반적으로, 본 발명의 약학적 조성물은 1 × 103 내지 1 × 1012 pfu/㎖의 박테리오파지를 포함하며, 바람직하게는 1 × 106 내지 1 × 1010 pfu/㎖의 박테리오파지를 포함한다.
본 발명의 약학적 조성물은 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자가 용이하게 실시할 수 있는 방법에 따라, 약학적으로 허용되는 담체 및/또는 부형제를 이용하여 제제화 됨으로써 단위 용량 형태로 제조되거나 또는 다용량 용기 내에 내입시켜 제조될 수도 있다. 이때 제형은 오일 또는 수성 매질 중의 용액, 현탁액 또는 유화액 형태이거나 엑스제, 분말제, 과립제, 정제 또는 캅셀제 형태일 수도 있으며, 분산제 또는 안정화제를 추가적으로 포함할 수도 있다.
본 발명의 또 다른 양태에 따르면, 본 발명은 SEP-1 박테리오파지를 유효성분으로 포함하는 항생제를 제공한다.
본 명세서에 있어서, '항생제’라는 용어는 방부제, 살균제 및 항균제를 총칭한다.
본 발명의 항생제는 일차적으로 살모넬라 식중독에 대한 예방 및 치료제로 활용될 수 있다. 살모넬라 식중독은 살모넬라속 균에 오염된 식품을 먹는 것에 의 해서 일어나는데, 특히 살모넬라 엔테리티디스는 1980년대 후반부터 주미 각국에서 유행하고, 우리나라에서도 1989년 이래 급격히 증가하여 다발 경향이 지속되고 있다. 발증에는 대량의 균이 필요하다고 알려져 왔지만, 최근에는 소량의 균에만 감염되어도 발증한다는 사실이 밝혀진 바 있다. 또한 최근에는 내성균의 등장이 큰 문제이다. 실제로 국내에서 분리되는 살모넬라 엔테리티디스는 항균제 다제 내성 빈도가 다른 살모넬라 혈청형에 비하여 높으며, 퀴놀론계 항생제에 대한 저항성도 점차 높아가고 있는 실정이다. 살모넬라 엔테리티디스의 다제 내성율이 1995년 2% 정도에서 2000년에는 약 8%가 다제 내성을 보였다는 통계가 있다. 또한 이의 감염에 대한 치료제로 흔히 사용되는 항생제인 프루오로퀴놀론(fluoroquinolone)에 대한 내성 보고가 계속적으로 나오고 있는 실정이다. 기존의 항생제 요법에서의 사용 가능한 항생제는 다약제 내성 살모넬라의 출현으로 그 사용이 제한적이 되었으며 관리가 결여된 광범위한 항생제 처방은 살모넬라 이외의 정상균에도 영향을 주는 문제점이 있다. 따라서 무분별한 항균약제의 남용을 최대한 자제하는 것은 물론이거니와 내성 획득 균에 대한 대안으로 신규 항생제의 개발이 매우 필요하다고 할 수 있다.
또한, 본 발명의 항생제는 살모넬라에 의해 유발되는 살모넬라증(salmonellosis)에 대한 예방 및 치료에 이용될 수 있다. 본 명세서에서 살모넬라증이란 살모넬라 감염에 의해 발열, 두통, 설사, 구토 등을 수반하는 증상을 총칭한다. 즉, 살모넬라균 속의 세균에 의하여 일어나는 질병을 총칭하며 살모넬라증은 장티푸스와 같은 증세를 나타내는 패혈증형과 식중독인 급성위장염형으로 대별 된다.
본 발명의 SEP-1 박테리오파지는 기존 항생제에 비하여 살모넬라 엔테리티디스를 포함한 살모넬라에 대한 특이성이 매우 높다는 장점을 갖고 있다. 이는 유용한 균은 죽이지 않고 병원균인 살모넬라만을 선택적으로 죽일 수 있으므로 부작용이 없는 항생제로서 매우 가치가 있다고 할 수 있다.
또한, 본 발명의 박테리오파지를 항생 물질로 이용하게 되면 기존의 항생제를 이용하는 것과는 달리 병원균의 내성 내지 저항성(resistance)을 유도하지 않는다는 중요한 장점을 갖기 때문에 기존의 항생물질에 비하여 제품수명주기(life cycling)가 긴 신규 항생제로서 이용될 수 있다. 대부분의 항생 물질들은 내성 증가에 직면함에 따라 갈수록 사용범위가 줄어들 수밖에 없는데 반해, 본 발명의 SEP-1 박테리오파지를 유효성분으로 포함하는 항생제는 내성 문제를 근본적으로 해결할 수 있기에 그 만큼 항생제로서의 제품수명주기가 길어질 것으로 기대된다. 따라서 병원성 세균인 살모넬라를 특이적으로 사멸시키는 본 발명의 SEP-1 박테리오파지를 유효성분으로 포함하는 항생제는 항균 효과, 살균 효과 및 방부 효과가 뛰어난 항생제로 유용하게 사용될 수 있다. 본 명세서에서 사용된 '항생제’라는 용어는 방부제, 살균제 및 항균제를 총칭한다.
또한, 본 발명의 또 다른 양태에 따르면, 본 발명은 상기 SEP-1 박테리오파지를 유효성분으로 포함하는 소독제를 제공한다.
SEP-1 박테리오파지를 유효성분으로 포함하는 소독제는 식중독 예방 등 식품 위생에 그 활용가치가 높다. 즉, 식품산업에서 살모넬라 오염 방지용 소독제 및 식품첨가제로 활용될 수 있으며 또한 축산업 분야에서 살모넬라 청정 축산물 생산에 활용될 수 있다. 또 생활하수처리장에서 방류수 내 살모넬라 제거를 위한 살포에도 활용될 수 있으며 조리 장소 및 조리 설비의 소독제로도 유용하게 사용될 수 있다.
축산물은 대부분 구입과 동시에 별도의 세척이나 소독과정 없이 식탁에 오른다. 그만큼 생산과 유통과정에서 안전성과 위생성 확보가 중요하다는 얘기다.
이러한 점을 고려한다면, 살모넬라 특이적 사멸능을 갖는 본 발명의 SEP-1 박테리오파지를 유효성분으로 포함하는 소독제는 다양한 용도로서 유용하게 사용될 수 있다.
또한, 본 발명은 상기 SEP-1 박테리오파지를 유효성분으로 포함하는 살모넬라 청정 축산물 생산을 위한 사료첨가제 및 음용수를 제공한다.
우리나라의 가축들은 ‘과잉진료’에 시달린다. 사람보다 가축에 들어가는 항생제가 더 많다. 축산,수산업에서 사용되는 사료 첨가용 항생제 사용량은 전체 항생제 판매량의 54%를 차지한다. OECD 국가 중 단연 최고다. 또한 전체 56%에 달하는 항생제가 ‘예방 목적’으로 사용된다는 점이 더 심각하다. 예방 목적 항생제 투여는 내성균 발생 가능성을 높이기 때문이다. 가축에 잔류하는 항생제는 사람에게 전달될 수 있다는 점이 또한 문제다. 항생제가 육류를 통해 인체에 흡수되면 항생제 내성을 유발해 질병의 확산을 부를 수도 있다. 사료에 섞여 먹이는 항생제의 종류가 많은 것 또한 문제다. 많은 종류의 항생제를 사용하면 다제 내성균 발생 확 률이 높아지기 때문이다. 그렇기에 질병이 나돌기 쉬운 계절에 항생제를 사료에 섞어 공급하는 이른바 ‘클리닝 서비스’는 심각한 내성 문제를 일으킬 수 있다. 이 에 따라 좀더 자연친화적이면서도 기존의 항생제의 사용에서 발생한 문제를 해결해 줄 수 있는 새로운 사료첨가제용 항생물질이 필요한 것이다.
본 발명의 사료첨가제는 건조 또는 액체 상태의 제제 형태일 수 있으며, 하나 또는 그 이상의 효소제제를 첨가할 수도 있다. 첨가되는 효소제제는 건조 또는 액체 상태 모두 가능하며 효소제제로는 리파제(lipase)와 같은 지방 분해효소, 파이틱애시드(phytic acid)를 분해하여 인산염과 이노시톨인산염을 만드는 파이타제(phytase), 녹말과 글리코겐(glycogen) 등에 포함되어 있는 알파-1,4-글리코시드 결합(α-1,4-glycoside bond)을 가수분해하는 효소인 아밀라제(amylase), 유기인산에스테르를 가수분해하는 효소인 포스파타제(phosphatase), 셀룰로스(cellulose)를 분해하는 카르복시메틸셀룰라제(carboxymethylcellulase), 자일로스(xylose)를 분해하는 자일라나제(xylanase), 말토오스(maltose)를 두 분자의 글루코스(glucose)로 가수분해하는 말타제(maltase), 및 사카로스(saccharose)를 가수분해하여 글루코스-프룩토스(glucose-fructose) 혼합물을 만드는 전환효소(invertase) 등과 같은 당 생성 효소로 구성된 군으로부터 선택되어 사용될 수 있다.
또한, 본 발명에서의 SEP-1 박테리오파지를 포함하는 사료첨가제에는 비병원성의 다른 미생물이 추가로 첨가될 수 있다. 첨가될 수 있는 미생물로는 단백질 분해 효소, 지질 분해효소 및 당 전환 효소를 생산할 수 있는 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis)와 같은 고초균, 소의 위와 같은 혐기적 조건에서 생리적 활 성 및 유기물 분해능이 있는 락토바실러스 균주(Lactobacillus sp.), 가축의 체중을 증가시키며 우유의 산유량을 늘리고 사료의 소화 흡수율을 높이는 효과를 보여주는 아스퍼질러스 오리자에(Aspergillus oryzae)와 같은 사상균(J Animal Sci 43: 910-926, 1976) 및 사카로미세스 세레비지에(Saccharomyces cerevisiae)와 같은 효모(J Anim Sci 56: 735-739, 1983)로 구성된 군으로부터 선택될 수 있다.
또한 각종 곡물 및 대두 단백을 비롯한 땅콩, 완두콩, 사탕무우, 펄프, 곡물 부산물, 동물 내장 가루 및 어분 가루 등과 같은 사료원료는 가공되지 않거나 또는 가공된 것을 사용할 수 있다.
특히, 양계산업의 육계농장에서 음용수에 혼합하여 도계 전 집중 공급함으로써 장내 살모넬라를 감소시킬 수도 있다. 또한 평소 음용수로 공급하여 살모넬라 청정 축산물 생산을 도모할 수 있다.
본 발명은 병원성 세균인 살모넬라 엔테리티디스를 포함한 살모넬라를 특이적으로 사멸시키는 능력을 갖는 신규한 박테리오파지를 제공한다. 본 발명의 박테리오파지는 살모넬라가 주원인이 되는 감염성 질환의 예방 및 치료제, 살모넬라 청정 축산물 생산용 사료첨가제 및 음용수, 항생제, 항균제, 방부제, 및 다양한 소독제 등으로 광범위하게 사용될 수 있다. 특히, SEP-1 박테리오파지를 유효성분으로 포함하는 조성물은 식중독 예방에 그 활용가치가 높다. 즉, 식품산업에서 살모넬라 오염 방지용 첨가제 및 조리시설 소독제로 활용될 수 있으며 또한 생활하수처리장 에서 방류수 내 살모넬라 제거를 위한 살포에도 활용될 수 있다.
이하, 실시예에 의거하여 본 발명을 보다 구체적으로 설명하지만, 이들 실시예는 본 발명의 예시일 뿐이며 본 발명의 범위가 이들 실시예에 한정되는 것은 아니다.
실시예 1: 살모넬라 엔테리티디스를 특이적으로 사멸시킬 수 있는 박테리오파지의 분리
본 발명의 대상 세균인 살모넬라 엔테리티디스는 본 발명자들에 의해 미리 분리 동정(identification)된 것을 이용하였다.
박테리오파지는 자연계에 널리 존재하는데, 특히 세균이 존재하는 곳에 공생하는 경우가 많다. 본 발명자들은 살모넬라 엔테리티디스에 특이적으로 감염하는 박테리오파지를 분리하기 위해 기본적으로 살모넬라 엔테리티디스가 존재할 것으로 예상되는 곳을 기반으로 시료를 채집하였다. 이 시료를 살모넬라 엔테리티디스와 함께 배양한 후 이 배양액을 원심분리하여 상등액을 얻었다. 이렇게 얻어진 상등액을 여과한 다음, 배양된 살모넬라 엔테리티디스를 박테리오파지 분리를 위한 미끼로 함께 다시 배양하여 살모넬라 엔테리티디스의 사멸 여부를 확인하였다. 사멸 여부 확인은 최종적으로 용균반 분석(plaque assay)을 통해 판별하였다.
이를 상세히 설명하면, 살모넬라 엔테리티디스를 선택적으로 사멸시킬 수 있 는 박테리오파지를 분리하기 위하여 박테리오파지가 존재할 것이라 예상되는 서울 및 기타 지역의 생활하천으로부터 237개의 시료를 수집하여 살모넬라 엔테리티디스와 함께 37℃에서 3-4시간동안 진탕배양 후, 8,000 rpm에서 20분간 원심분리하여 상등액을 회수하였다. 이 회수된 상등액을 0.45 ㎛의 필터를 이용하여 여과를 해준 후, 이렇게 얻어진 여과액을 이용한 용균반 분석을 통해 살모넬라 엔테리티디스에 특이적인 박테리오파지를 검출하였다. 이 때 사용한 방법의 모식도가 도 1에 개시되어 있고 박테리오파지 검출에 이용한 용균반 분석 결과가 도 2에 제시되어 있다. 이 분리된 박테리오파지를 SEP-1으로 명명한 뒤, 2007년 8월 21일자로 한국생명공학연구원 생물자원센터(기탁번호 KCTC 11173BP)에 기탁하였다.
실시예 2: 분리된 살모넬라 엔테리티디스에 특이적인 박테리오파지 유전체의 유전자 서열 분석
얻어진 SEP-1 박테리오파지의 유전자 서열분석을 실시하였다. 이를 위해 SEP-1 박테리오파지의 유전체를 통상의 방법으로 추출하였고 이를 유전자 서열 분석에 이용하였다. 구체적으로, 먼저 1 ℓ 플라스크에 TSB(Tryptic Soy Broth) 배지(카제인 다이제스트, 17 g/ℓ; 소이빈 다이제스트, 3 g/ℓ; 덱스트로스, 2.5 g/ℓ; NaCl, 5 g/ℓ; 디포타슘 포스페이트, 2.5 g/ℓ) 200 ㎖에 600 nm에서 흡광도가 1인 살모넬라 엔테리티디스 부유액 50 ㎖ 및 1× 108 pfu/㎖ 수준으로 여과한 박테리오파지 용액 1 ㎖을 첨가하여 37℃에서 3-4시간 진탕배양 하였다. 배양 후, 살 모넬라 엔테리티디스가 용균되었는지 여부를 확인한 다음, 용균이 일어났을 때 이 배양액을 0.45 ㎛의 필터로 여과해 주었다. 그 다음으로 이 여과한 배양액에 남아 있을 살모넬라 엔테리티디스의 DNA와 RNA를 제거하기 위해, 이 여과한 배양액 10 ㎖에 DNase I과 RNase A를 각각 200 U씩 첨가한 다음 37℃에서 30분간 방치하였다. 30분 방치 후 DNase I과 RNase A의 활성을 제거하기 위해, 0.5 M 에틸렌디아민테트라아세트산(ethylenediaminetetraacetic acid; EDTA) 500 ㎕를 첨가한 후 다시 10분간 정치시켰다. 그 다음 단계로 박테리오파지 외벽을 와해시키기 위해 proteinase K (20 ㎎/㎖) 100 ㎕와 10% 도데실 황산 나트륨염(sodium dodecyl sulfate; SDS) 500 ㎕를 첨가한 다음 65℃에서 1시간 동안 반응시켰다. 1 시간 반응 후, 이 반응액에 25:24:1의 구성비를 갖는 페놀(phenol) : 클로로포름(chloroform) : 이소아밀알코올(isoamylalcohol)의 혼합액 10 ㎖를 첨가해 준 후 잘 섞어 주었다. 그리고는 이것을 18,000 rpm에서 원심분리하여 층이 분리되게 한 다음 분리된 층 중에서 위층을 취하고 여기에 2부피비의 차가운 100% 알코올을 가하여 순수한 유전체만을 추출하였다. 추출한 박테리오파지의 유전체가 DNA인지, RNA 인지를 확인하기 위해, DNaseⅠ (10 U/㎕) 및 RNase A (10 ㎍/㎕)를 각각 첨가해 준 다음 37℃에서 1시간동안 처리하였고, 이와 더불어 DNA일 경우에 단일가닥 DNA인지, 이중가닥 DNA인지 구분하기 위해 녹두(Mung Bean) 뉴클레아제(45 U/㎕)를 첨가해 준 다음 상온에서 15분간 처리 하였다. 이렇게 처리한 시료들을 0.8% 아가로즈(agarose) 젤을 이용한 전기영동을 실시하여 각 효소에 의한 절단 양상을 조사하였다. 그 결과, 얻어진 유전체는 DNaseⅠ에만 민감하였고 DNase I에 민감한 것 은 유전체가 DNA임을 의미하고, 녹두 뉴클레아제에 민감하지 않은 것은 유전체가 DNA 이중가닥 형태임을 의미한다. 이 결과로부터 얻어진 박테리오파지의 유전체가 DNA형이면서 이중가닥임을 확인할 수 있었다.
위와 같이 분리된 박테리오파지의 유전체는 게놈 DNA(genomic DNA; gDNA)이다. 이 gDNA의 유전자 서열을 분석하기 위해 먼저 다양한 제한효소(restriction enzyme)로 처리하여 제한효소 처리에 따른 절단 양상을 일차적으로 파악하였고, 제한효소 Hpa II로 처리하는 경우가 gDNA의 라이브러리(library) 구축에 가장 적합하다고 판단되어 Hpa II로 처리하여 준비된 유전자 단편(fragment)을 이용한 gDNA 라이브러리를 통상의 방법에 따라 구축하였다. gDNA 라이브러리 구축에 사용된 방법이 도 3에 모식적으로 제시되어 있다.
이를 상세히 설명하면, 먼저 통상의 방법대로 SEP-1 박테리오파지의 gDNA를 Hpa II로 처리하여 유전자 단편을 얻었고, 또한 추후 유전자 단편을 삽입할 때 사용할 벡터 부분의 준비를 위하여 pBluescript II SK(+) 파지미드 벡터(phagemid vector)(Stratagene사)를 Cla I로 처리하여 선형(linear)의 벡터 단편을 준비하였다. 이렇게 준비된 유전자 단편들과 벡터 단편을 T4 리가아제(ligase)를 이용해 통상의 방법대로 서로 결합시켰다. 이렇게 하여 준비된 SEP-1 박테리오파지의 유전자 단편이 도입된 재조합 벡터를 전기천공법(electroporation)이라는 전기적 형질전환 방법(electro-transformation)을 통해 대장균의 한 종인 Top10F' 종 (Invitrogen사)에 도입시켰다. 이렇게 하여 형질전환된 형질전환체를 엑스-갈(X-Gal; 5-bromo-4-chloro-3-indolyl-beta-D-galactopyranoside) 및 이소프로필 베타- 디-1-티오갈락토피라노시드(isopropyl β-D-1-thiogalactopyranoside; IPTG)가 첨가된 암피실린(ampicillin) 함유 아가 평판배지 상에서 통상의 청백 콜로니 선별법(Blue-White colony selection)을 통해 선별하였다. 선별된 단일 콜로니(colony)를 암피실린이 포함된 배양배지에 접종한 후 하룻밤동안 진탕배양 하였고, 이 배양 세포로부터 플라스미드(plasmid) 정제 키트(iNtRON사)를 이용하여 플라스미드를 추출하였다. 이 추출된 플라스미드는 0.8% 아가로즈 젤을 이용한 전기영동을 통하여 그 크기를 확인함으로써 재조합된 플라스미드를 선별하였다.
이렇게 선별된 플라스미드를 포함한 클론들을 다시 배양하여 배양 세포로부터 플라스미드를 상기 방법과 같이 다시 추출하였고, 이 추출된 플라스미드를 이용한 염기 서열 분석은 통상의 염기 서열 분석에서 널리 이용되는 프라이머(primer)인 M13 정방향(forward) 프라이머와 M13 역방향(reverse) 프라이머를 이용해 수행하였다. 각 프라이머의 서열은 다음과 같다.
Primer Sequence
M13 정방향 프라이머 GTCGTGACTGGGAAAACCCTGGCG
M13 역방향 프라이머 TCCTGTGTGAAATTGTTATCCGCT
이렇게 확보된 SEP-1 박테리오파지 유전체의 부분 유전자 서열이 서열번호 1 내지 서열번호 25로 제시되어 있다.
실시예 3: 확보된 SEP -1 박테리오파지 유전자 서열과 기존에 알려진 박테리오파지의 유전자 서열과의 비교
확보된 박테리오파지의 염기 서열을 기반으로 Web상의 BLAST (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST/)를 이용하여 기존 알려진 박테리오파지 유전자와의 상동성을 조사해 보았다. BLAST 조사 결과, 분석된 박테리오파지의 염기 서열은 박테리오파지 KS7(bacteriophage KS7), 살모넬라 파지 SETP3(Salmonella phage SETP3) 및 박테리오파지 MB78(bacteriophage MB78)과 부분적으로 상동성을 가지는 것으로 확인되었다. 확보된 SEP-1 박테리오파지 유전체의 부분 서열을 박테리오파지 KS7 유전체의 서열(GenBank Accession No. AY730274) 및 살모넬라 파지 SETP3 유전체의 서열(GenBank Accession No. EF177456)과 비교하여 이들 간의 상동성을 자세히 조사해 보았다. 또 박테리오파지 MB78 유전체와의 상동성 조사는 박테리오파지 MB78의 전체 유전체의 서열이 아직 밝혀져 있지 않기 때문에 박테리오파지 MB78의 부분적으로 밝혀진 서열(GenBank Accession No. AY040866; AJ277754; AJ249347; Y19203; Y19202; AJ245858; AJ245537; Y18133; X87092; AF156970; AF349435; X86562)을 이용하여 상동성을 자세히 비교해 보았다.
부분 서열 박테리오파지 KS7 비교 살모넬라 파지 SETP3 비교 박테리오파지 MB78 비교
Query coverage (%) Identity (%) Query coverage (%) Identity (%) Query coverage (%) Identity (%)
서열번호 1
서열번호 2 - - - - - -
서열번호 3 20 100 - - - -
서열번호 4 - - - - - -
서열번호 5 - - - - - -
서열번호 6 56 100 56 96 - -
서열번호 7 53 100 51 90 51 88
서열번호 8 - - - - - -
서열번호 9 - - - - - -
서열번호 10 - - - - - -
서열번호 11 - - - - - -
서열번호 12 - - - - - -
서열번호 13 - - - - - -
서열번호 14 - - - - - -
서열번호 15 - - - - - -
서열번호 16 42 100 38 90 38 90
서열번호 17 100 99 99 94 - -
서열번호 18 100 100 99 93 99 92
서열번호 19 - - - - - -
서열번호 20 - - - - - -
서열번호 21 - - - - - -
서열번호 22 67 100 67 80 67 80
서열번호 23 99 99 - - - -
서열번호 24 - - - - - -
서열번호 25 100 100 89 85 86 84
이 결과로부터 SEP-1 박테리오파지의 부분서열 중 많은 것이 박테리오파지 KS7, 살모넬라 파지 SETP3 및 박테리오파지 MB78과 다름을 알 수 있었다. 이로부터 SEP-1 박테리오파지의 유전체가 박테리오파지 KS7, 살모넬라 파지 SETP3 및 박테리오파지 MB78과 특징적으로 다름을 알 수 있다. 따라서 SEP-1 박테리오파지는 신규한 박테리오파지라 할 수 있다. 추가 분석으로 확보된 SEP-1 박테리오파지 유전체의 부분 유전자 서열이 실제 유전체상에서 어떤 배열을 갖는지를 개략적으로 알기 위해 상동성을 가지는 박테리오파지 KS7 유전체의 유전자 서열을 바탕으로 NCBI Blast와 Vector NTI ContigExpress 프로그램을 이용하여 염기 서열의 콘티그 지도(Contig map)를 작성하였다. 그 결과는 도 4와 같다.
실시예 4: 얻어진 SEP-1 박테리오파지를 이용한 살모넬라 엔테리티디스의 감염 예방에 대한 적용예
9 ㎖의 영양배지(Nutrient broth: 소고기 추출물 3 g/ℓ, 펩톤 5 g/ℓ) 하나에는 약 1× 108 pfu/㎖ 수준의 SEP-1 박테리오파지액 100 ㎕를 넣어주고 대조실험의 같은 조성의 배지에는 박테리오파지액을 넣어주지 않은 시료를 각각 준비하였다. 여기에 최종적으로 600 nm에서 흡광도가 0.5 정도가 되도록 살모넬라 엔테리티디스 배양액을 넣어준 다음 살모넬라 엔테리티디스의 배양 상태를 관찰해 보았다. 표 3의 결과에서 보는 바와 같이, 박테리오파지액을 첨가해 주지 않은 배지에서는 60분 후 600 nm에서의 흡광도가 1.2 정도가 될 정도로 살모넬라 엔테리티디스가 매우 잘 성장하는 반면에 박테리오파지액을 첨가해 준 영양배지에서는 10분경과 후 600 nm에서의 흡광도가 0.1 정도 수준으로, 60분 후에는 0.05 수준으로 감소하는 것을 관찰할 수 있었다.
살모넬라 엔테리티디스 사멸 능력(OD600 흡광도 값)
구분 배양 0시간 배양후 10분 배양후 60분
대조군(무처리) 0.5 0.65 1.2
실험군 (박테리오파지액 첨가) 0.5 0.1 0.05
이 결과로부터 본 발명의 SEP-1 박테리오파지가 살모넬라 엔테리티디스의 성장을 저해할 뿐만 아니라 사멸까지 시키는 능력이 있어 살모넬라 엔테리티디스의 감염을 막는데 매우 효과적임을 알 수 있었다.
실시예 5: 살모넬라 엔테리티디스에 특이적인 SEP-1 박테리오파지를 이용하여 살모넬라 엔테리티디스 감염에 의해 유발되는 질환을 치료한 적용예
먼저 1× 107 cfu의 살모넬라 엔테리티디스를 2일령 병아리에게 먹여 인위적으로 감염상태를 만들었다. 그 다음 SEP-1 박테리오파지를 사료 1 g당 1× 109 pfu가 되도록 섞어서 사료로 급이하였다. 급이 후부터 시간별로 분변 및 맹장 내용물에서의 살모넬라 엔테리티디스 수를 측정하였다. 본 실시예에서는 타 오염 세균에 의한 간섭을 막기 위해 암피실린(ampicillin)과 테트라사이클린(tetracyclin)에 내성이 있는 살모넬라 엔테리티디스 균주를 선택하여 사용했다. 사용한 살모넬라 엔테리티디스 균주가 암피실린과 테트라사이클린에 내성을 갖고 있기 때문에, 병아리에게 먹일 살모넬라 엔테리티디스의 배양 시 배양액에 암피실린과 테트라사이클린이 포함되게 할 수 있었고 이로 인하여 대장균 등의 타 오염 세균에 의한 오염을 최소화할 수 있었다. 실험 결과, SEP-1 박테리오파지를 포함한 사료를 급여한 경우, 분변에서 대조군 대비 1000배 이상의 살모넬라 엔테리티디스를 줄여 줄 수 있었으며, 맹장 내용물에 있어서도 200배 이상 살모넬라 엔테리티디스의 오염을 줄일 수 있었다.
이 결과로부터 본 발명의 SEP-1 박테리오파지가 살모넬라 엔테리티디스를 원인으로 하는 감염질환의 치료에도 매우 효과적이라는 것을 확인할 수 있었다.
실시예 6: 타 살모넬라에 대한 SEP-1 박테리오파지의 사멸 효과 조사
본 발명자들은 본 발명의 SEP-1 박테리오파지(기탁번호 KCTC 11173BP)의 용균 활성을 타 살모넬라를 대상으로 하여 조사해 보았다. 대상 살모넬라는 본 발명자들의 살모넬라 엔테리티디스 분리 시 함께 분리되어 동정되어 보관되어 있던 것으로 하였고, 조사에는 살모넬라 엔테리티디스 7종 외에 살모넬라 갈리나룸(Salmonella gallinarum) 9종, 살모넬라 풀오룸(Salmonella pullorum) 9종, 및 살모넬라 티피무륨(Salmonella typhimuriun) 7종이 사용되었다. 그 결과는 다음과 같다.
대상 살모넬라 대상 살모넬라 수 조사결과
용균 활성이 확인된 살모넬라 수 용균 활성이 확인되지 않은 살모넬라 수
살모넬라 엔테리티디스 7 7 0
살모넬라 갈리나룸 9 8 1
살모넬라 풀오룸 9 6 3
살모넬라 티피무륨 7 6 1
이 결과에서 알 수 있듯이 SEP-1 박테리오파지가 타 살모넬라에도 사멸능이 있었다. 이로부터 본 발명의 SEP-1 박테리오파지가 살모넬라 엔테리티디스 외의 다른 살모넬라에 의한 살모넬라증의 예방 및 치료에 효과적으로 활용될 수 있음을 알 수 있다.
이상으로 본 발명의 특정한 부분을 상세히 기술하였는바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 이러한 구체적인 기술은 단지 바람직한 구현예일 뿐이며, 이에 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백하다. 따라서 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항과 그의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.
도 1은 살모넬라 엔테리티디스를 특이적으로 사멸시킬 수 있는 박테리오파지의 분리법을 모식적으로 나타낸 그림이다.
도 2는 용균반 분석에 의해 살모넬라 엔테리티디스에 특이적인 박테리오파지를 검출한 평판접시 사진이다.
도 3은 SEP-1 박테리오파지의 유전체 라이브러리의 구축을 위하여 사용한 방법을 순서대로 보여주는 모식도이다.
도 4는 확보된 SEP-1 박테리오파지 유전체의 부분 유전자 서열의 콘티그 지도이다.
<110> iNtRON Biotechnology, Inc. <120> Novel Bacteriophage Having Killing Activity Specific to Salmonella selected from Infectious Bacteriophages of Salmonella enteritidis <160> 25 <170> KopatentIn 1.71 <210> 1 <211> 78 <212> DNA <213> SEP-1 Bacteriophage partial gene <400> 1 gacacactca cggaagaagt accatgggtt ttccgcacac tccgtaacaa tcatcgcttt 60 ttgttcgagt gttaaatc 78 <210> 2 <211> 319 <212> DNA <213> SEP-1 Bacteriophage partial gene <400> 2 ggtcctgtca ttggaaagtc gccctgtaca atcggcagcc ccataacctt ttcagtgccc 60 tttaccgcca cgatgcgata ttgatacgtt ttatacgctt cggtggtctt gtcctcgtac 120 gtcgttgtgt tacctggtag tgttacaata ggttcccccg gcgtagcagt ttgttctcga 180 tgtgggtcga catcaaccca accatccaac gccatggtgc ttttaacttc caggcatcgt 240 gtggttctga gataggtgag atggttgcac gaccaccgaa cggaatatgg gtggaaccca 300 atttcgcgcg atagtcacc 319 <210> 3 <211> 434 <212> DNA <213> SEP-1 Bacteriophage partial gene <400> 3 gccatctgtt cgttcagttg ctggtcttct accggactga ccacaatctc agacggcatc 60 ctgtacgaag taccgtatct ggatggtgcg ggagatgtgt acttcgatct gcaaccggat 120 gctgttcccc gcacacgccc ccttttatac cacatccctg gtggtcaaga gtggcggcaa 180 gaaattaaca ttaggtgatg attacgtcat cacccatgcg tacgttacgg gcatggcccg 240 cactggtcat gtttgtcacg gcggcgtgtg gattaccaac ccgaaatacc agagtggctt 300 tacactcgat taccatgcaa ttggtatcgg cgaagccact gcagaaatga tcgccgcaga 360 acgagaagcg aataaagatc gctatcccgt agactgccaa tgggataacg tcattgggga 420 tttatatttc ccac 434 <210> 4 <211> 252 <212> DNA <213> SEP-1 Bacteriophage partial gene <400> 4 gcttaactaa cgacgcccac aatgaccatt atctgattaa cccagaaggg gtgctatcta 60 ataaccggat gattttgcag tttcacgtac agtcggggaa gactggcgtg gtaatcagaa 120 gcgccatgag cgaatgtggc gacggaaggt tacctcagca tcgcgacgtt ttcaacgtcg 180 ttgctgatta aagacacggt tccgatagag aactggtctt cacctctggc ggtatgcgcc 240 gctaagcttt ac 252 <210> 5 <211> 185 <212> DNA <213> SEP-1 Bacteriophage partial gene <400> 5 gctatcgact acgggatatt cctcacggta cacggtgccc cagtgacggt gttgaagatg 60 ctgtctatca ttcacaccgg ataacgcgtg atgaacgaga agtagtcatt ccaaatatcg 120 taacctgaca aatagaggag ttccgctaag ctcagtccgc ggacaagctt acggtcacgt 180 ccttc 185 <210> 6 <211> 353 <212> DNA <213> SEP-1 Bacteriophage partial gene <400> 6 gctgcggcac gtgaagttgt ccacggtgct catccggtaa ctgttttagt cgtaacgaaa 60 tctgtgctga ggtacaatca gtaagcctcg gtcctcttat tgttgagaat ggatgggcga 120 agaggcctct ctcaattaat tttatagcct ttacagcgag gattagataa tggcgttaca 180 accatataaa ggcgcgatga ccgcgcaatt ttacgtactt gagacaacac cggcaatact 240 ctcaacgatt tcaaaatcga catcattgaa accgttggca gccagggcgc gcttaaggtc 300 gtcaatctcc tgtttgttat ccagggtgac ggtaaagcgc actttcgtgt ttt 353 <210> 7 <211> 412 <212> DNA <213> SEP-1 Bacteriophage partial gene <400> 7 gcacagattc tgccgccgca gaacgataac agtgtactgc caatcgccga caagtattca 60 ctgcgtgcga gcgaagcagt tgaagtgatt aacgatcgtc gctttacatt gtcagtgacc 120 agcggtatca gtgaaccggt aacttgtgta agacctattc aatcctcaca tggttgaaag 180 gtaaatgcgg aaacccggtt acttttgcac tttaagagga ttattaaatg ttaacagcaa 240 acggccaggg ttctggcgta aaaaccaagc accgcgaatg gctgcactac gcgccgaaat 300 ggcagaaggt gcgccatgcg cttgctggag acctggttgg ctacttacgc aacgtcggcc 360 ttaatgaacc agataaagca tacggcgaag cgcgtcaggc agaatacgag gc 412 <210> 8 <211> 40 <212> DNA <213> SEP-1 Bacteriophage partial gene <400> 8 gtaagggccg tgaccatcga caaattgtcg ttcggtaacc 40 <210> 9 <211> 139 <212> DNA <213> SEP-1 Bacteriophage partial gene <400> 9 gagtacaccg ttggcctgcg tgcctgtctg cgtcactccg ttatctcttc ggatgaaggg 60 atgtcgaata acgtgaacga agtgttcccg atgatgcaag tcggtccgta tatcactttc 120 aactcgtaca ttccgttcc 139 <210> 10 <211> 131 <212> DNA <213> SEP-1 Bacteriophage partial gene <400> 10 gtaaataaac tctctgagtt gttgccgttt ctgaatgcga aatacggctt gtctttagtt 60 gccgatgata tcgttgacca gtcagtaaaa gatttgggag aaagctggtt aatcgatgtg 120 actattaagc c 131 <210> 11 <211> 349 <212> DNA <213> SEP-1 Bacteriophage partial gene <400> 11 gtcggtccaa tcgattcggt tactgcccaa caatctgcat tctttgcggc tatgaataac 60 acgtccagtc agtggtacaa ccgtccacct taccctgagt cgccgtcgtg gagtaactac 120 ggtaccacta caatacgctc cattgcggta cttgaactcg ttctgcctta 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ttctaccgaa tatcttatcg 60 gattggcatt cgaagactgt tacaacagtt tcctggacag tatccatgca cttgtggaga 120 atgctgtgaa agccgccaaa cacccgttta atcgttatgc gacgattaaa ctggaaccac 180 acataacccg tcgtgggcag gtgcaatctc tggagttaca aattggagaa gacatcagat 240 tcatccacta ccgccaatgc ttcccaaaca aacgatatcg tccgtctggt actgatcgat 300 cacattgcct cgacggcata cgtcaggata ttgaatgacc ccagcgacat catgttcagc 360 atgtatgatg ttaacacggg gttgaagcat atcattctct gtatgctcga atacatgatt 420 ccgacattta cagaacacgg tgcgtgggac acagaaacag tctcactgat tgttaggtgt 480 tatcgtccca gaagtcattc gcgggaaatc cacaccatcg cgtcacacgt tcatcggcta 540 tctg 544 <210> 14 <211> 570 <212> DNA <213> SEP-1 Bacteriophage partial gene <400> 14 gcacgccagt tgtttcttgt acaacagaat acgcagttca gtcgctttcg cggcttccac 60 gcactcgtca taacgatcca tttgccattc tgcaatattc agacgcacgc ggtagacgat 120 cgacagcggg aacgggacgg aggacatacc cagcgggtca gtggtgttcg aaccgaactg 180 ctgaaccaat tggctatatg tctcttcgtc aaacaccgct tcgggtatct cagcgtagtc 240 tgctttcagt ttggtaatgg gggttgccag gacgcgcacc 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gagatgacca ttatttggtt ctgaagttac gtgatggcgg agtccaaagt gttcgtgttg 60 tccctggcgc acatgaccga caagtaatta tgacgtctgt gccgcaagaa gccatttaca 120 ctggtaatag cgctttgaaa actgaatttt cattcggcaa cgaagcaagg cataatgctc 180 agatgattct tgtttctacg gtagaccctg gcgatgacag aacagtcaaa ataac 235 <210> 19 <211> 585 <212> DNA <213> SEP-1 Bacteriophage partial gene <400> 19 gttataaaac tttatcaccc caacatcaaa catcttgttg taatgcggta aatcacgata 60 accgaagttt tagtgtacct acaccgatgc gttgaagctc gatagagata gctacgtcta 120 tggttaccat tcacagtcac ccttatccgc cgatcagtta aatccgctgt attcgtcaat 180 ggtgccgtct ttgatgtaca cgcccgggga catcggggca ctgacatcga ctttatcaag 240 atccacgatc cgtttggctg cattagagta gaagttaatc cactgctgtt tattcgcagc 300 ctttagcgtg agaatgatat tggtaacagt gtagacggtg ttgatatcca cgtcaccgtt 360 tatcacatct agcgtttggc tgccgtacca gataagactt gtctgtttcg cctggaacgt 420 gatgcgcgca gcattgtttg tccaagtgat gggcaggtct tcaaagtcgt cggttaaaaa 480 ggtaatccct agtagagtgt ctaaatgtgg caacagttcg tggatggacg cacaagtggg 540 aatggcatcc 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aagtggtaat agtcagaata ttgctccgca acccatatag ccatatgtag 1980 acatgcgtat gttgccgcgt ttttccctct aaccacacgc cacgcgcttt ctatccctaa 2040 ttcctcacag cacacacgcg cgaacgacct ggcttgctcg gtagataaca gctgcgatag 2100 gtttttcaca cccatcccat tttcttcacg ccacttattc atctgcttca ctaataccg 2159

Claims (10)

  1. 살모넬라 엔테리티디스(Salmonella enteritidis)를 포함한 살모넬라속균에 대한 특이적 사멸능을 갖는 박테리오파지(Bacteriophage).
  2. 제1항에 있어서, 상기 살모넬라속균은 살모넬라 엔테리티디스, 살모넬라 갈리나룸(Salmonella gallinarum), 살모넬라 풀오룸(Salmonella pullorum) 또는 살모넬라 티피무륨(Salmonella typhimuriun)인 것을 특징으로 하는 박테리오파지.
  3. 제1항에 있어서, 상기 박테리오파지는 기탁번호 KCTC 11173BP의 박테리오파지인 것을 특징으로 하는 박테리오파지.
  4. 제1항에 있어서, 상기 박테리오파지는 서열번호 1 내지 서열번호 25의 부분 유전자 서열로 표시되는 유전체를 갖는 것을 특징으로 하는 박테리오파지.
  5. 제1항 내지 제3항 중 한 항의 박테리오파지를 유효성분으로 포함하는, 살모넬라 엔테리티디스를 포함한 살모넬라속균 유발성 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  6. 제5항에 있어서, 상기 살모넬라 엔테리티디스를 포함한 살모넬라속균 유발성 질환은 식중독, 장염, 살모넬라증, 가금티푸스 또는 급성 균혈증(Bacteremia)인 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.
  7. 제1항 내지 제3항 중 한 항의 박테리오파지를 유효성분으로 포함하는 항생제.
  8. 제1항 내지 제3항 중 한 항의 박테리오파지를 유효성분으로 포함하는 소독제.
  9. 제1항 내지 제3항 중 한 항의 박테리오파지를 포함하는 사료첨가제.
  10. 제1항 내지 제3항 중 한 항의 박테리오파지를 포함하는 음용수.
KR1020070095643A 2007-09-20 2007-09-20 살모넬라 엔테리티디스 감염 박테리오파지로부터 선별된살모넬라 특이적 사멸능을 갖는 신규한 박테리오파지 KR100941891B1 (ko)

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