KR20080109667A - 리파아제 측정용 건식 분석 요소 - Google Patents

리파아제 측정용 건식 분석 요소 Download PDF

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Abstract

(과제) 췌장 리파아제로의 선택성이 높은 췌장 리파아제 측정용 건식 분석 요소에 있어서, 다검체 상관을 향상시킨 췌장 리파아제 측정용 건식 분석 요소를 제공하는 것.
(해결수단) 탄소수 12~22의 장쇄 알킬 지방산의 디글리세리드 또는 트리글리세리드, 모노글리세리드 리파아제, 및 글리세린 측정 시약을 함유하는 적어도 1개 이상의 전개층 및/또는 시약층을 포함하는 체액 내의 췌장 리파아제 측정용 건식 분석 요소에 있어서, 상기 전개층 및/또는 시약층이 2종류 이상의 음이온 계면활성제를 함유하며, 또한 그 중 적어도 1종류가 알킬페닐술폰산염인 것을 특징으로 하는 체액 내의 췌장 리파아제 측정용 건식 분석 요소.
췌장 리파아제 측정용 건식 분석 요소.

Description

리파아제 측정용 건식 분석 요소 {DRY ANALYTICAL ELEMENT FOR LIPASE MEASUREMENT}
본 발명은 액체 시료, 특히 인간 및 동물의 혈청, 혈장 내의 리파아제 활성, 특히 췌장 리파아제 활성을 측정하기 위한 간편하고 정밀도 높은 건식 분석 요소에 관한 것이다. 본 발명의 건식 분석 요소는 특히 인간 및 개의 췌장 질환 진단에 유용하다.
췌장 질환의 진단에 유용한 췌장 리파아제 분석은 췌장 리파아제가 유수(油水) 계면에서 작용하기 때문에 수중에 기질이 미셀상으로 분산된 상태로 측정되는 경우가 많다. 계면활성제 등에 의해 가용화된 기질이나 알킬쇄 길이가 짧은 지방산 글리세리드에서는 리포프로테인 리파아제 등의 비췌장 리파아제나 에스테라아제가 반응하는 경우가 있기 때문이다. 따라서, 췌장 리파아제 건식 분석 요소를 개발할 때, 중요한 기술적 포인트는 췌장 리파아제에 특이적인 장쇄(長鎖) 지방산의 글리세리드 기질을 췌장 리파아제 특이적인 상태로 삽입하는 것이라고 생각된다.
리파아제를 분석하는 건식 분석 요소는 크게 2개로 분류되고, 첫 번째는 트리글리세리드를 기질로 하여 글리세린, 과산화수소를 거쳐 색소로 변환하는 방법을 이용하는 것이며, 처음 개시된 방법은 α위치인 에스테르 위치의 하나에 탄소수 8개 이상의 장쇄 알킬기를 갖고, 다른 두개의 에스테르는 단쇄(短鎖) 알킬기를 갖는 트리글리세리드를 기질로 이용하여 검체 내의 리파아제에 의해 생성된 수용성의 1,2디아세틸글리세리드를 아세티나제라는 에스테라아제에 의해 글리세린으로 변환하며, 글리세린을 색소로 변환하는 다층 건식 분석 요소이다(일본 특허 공개 소59-48098호 공보). 이 방법은 고정밀하고 간이한 리파아제 측정법이지만, 췌장 리파아제에 대한 선택성이 높지 않아 췌장 질환의 진단에는 주의가 필요하다고 보고되어 있다〔Clin. Chem., 37/3, 447-451 (1991)〕.
또한, 트리올레인과 같은 탄소수 14~20의 장쇄 지방산을 갖는 트리글리세리드를 기질로 이용한 트리글리세리드를 기질로 하여 모노글리세리드 리파아제, 글리세린 측정 시약을 함유하는 드라이 케미스트리용 췌장 리파아제 분석 시약(일본 특허 공개 평4-316500호 공보), 또한 이 방법을 응용하여 정밀도가 높은 다층 분석 요소를 제작하고, 또한 미립자를 삽입함으로써 리파아제의 반응성을 높이길 기대한 방법은 일본 특허 공개 2002-125699호 공보에 기재되어 있다. 이들 트리올레인을 이용하는 방법은 췌장 리파아제에 특이성은 높지만 지용성이 높은 기질을 삽입하기 때문에 아라비아 고무 등의 보호 콜로이드를 이용하여 초음파 처리에 의한 수계 유화 분산을 행하고 있고(일본 특허 공개 평4-316500호 공보의 실시예), 기질의 분산의 재현성이나 입도 분포의 균일성을 유지하는 것이 요구되어 제조가 어렵다고 생각된다.
예를 들면, 일본 특허 공개 평4-316500호 공보에서는 다음과 같이 기재되어 있다. "트리올레인과 같은 3개의 에스테르 위치 모두에 장쇄 지방산을 갖는 트리글리세리드는 유화되기 어려운 성질을 갖기 때문에 드라이 시약 제작시에 계면활성제나 보호 콜로이드의 존재하에서 트리올레인을 교반, 초음파 등의 물리적인 전단력에 의해 균일하게 유화 분산된 용액으로서 첨가해도 드라이 상태로 하면 분산매인 물이 없어지기 때문에 유화물은 응집, 합일되어 전개층 표면에 부착되고, 유수 계면의 표면적이 극단적으로 감소한다. 측정시에 이 드라이 시약에 리파아제를 함유하는 검체(액체)를 작용시켜도 물리적인 전단력이 없기 때문에 트리올레인은 응집, 합일된 채 원래의 분산 상태로는 돌아가지 않는다. 리파아제는 유수 계면이 반응 장소이기 때문에 유수 계면의 표면적의 감소가 반응 속도를 저하시키는 원인으로 생각된다."
두 번째는 색소 방출 기질인 1,2-O-디라우릴-rac-글리세로-3-글루타르산·레소루핀에스테르를 이용하는 건식 분석 요소이다(일본 특허 공개 평9-154598호 공보). 이 방법은 췌장 리파아제 특이성이 높고, 또한 글리세린 발색계가 필요하지 않기 때문에 바람직한 방법이다. 그러나, 건식 분석 요소에 삽입된 기질이 매우 분해되기 쉬워 저pH의 리파아제 기질 함유층과 고pH의 다른 시약층을 분리하는 시도를 하였지만 실용화에는 이르지 않고 있다. 또한, 여기에서 기질 용해에 바람직하다고 여겨지는 에테르계 용제는 환경 부하가 커 환경 고려 설계가 요구되는 오늘날에 있어서 제조 적성에 심각한 문제가 있다. 또한, 이 기질이 비교적 고가인 점도 실용화하기에 문제가 된다.
상기한 바와 같이 현재에 이르러도 상품화되어 있는 리파아제 분석용 건식 분석 요소는 췌장 리파아제 특이성이 높지 않은 일본 특허 공개 소59-48098호 공보에 기재된 제품뿐이며, 시장으로부터 췌장 질환 진단에 있어서 보다 신뢰성이 높은 건식 분석 요소가 요구되고 있다.
비특허문헌 : Clin. Chem., 37/3, 447-451 (1991)
특허문헌 1 : 일본 특허 공개 소59-48098호 공보
특허문헌 2 : 일본 특허 공개 평4-316500호 공보
특허문헌 3 : 일본 특허 공개 2002-125699호 공보
특허문헌 4 : 일본 특허 공개 평9-154598호 공보
본 발명의 목적은 췌장 리파아제로의 선택성이 높은 췌장 리파아제 분석 건식 분석 요소에 있어서, 다검체 상관을 향상시킨 췌장 리파아제 분석 건식 분석 요소를 제공하는 것이다.
본 발명자들은 상기 과제를 해결하기 위해 예의 연구를 행한 결과, 기질로서의 장쇄 지방산의 글리세리드(바람직하게는 트리글리세리드), 모노글리세리드 리파아제, 및 글리세린 측정 시약을 함유하는 건식 분석 요소에 있어서, 2종 이상의 음이온 계면활성제를 함유함으로써 다검체 상관을 향상시킨 췌장 리파아제 분석 건식 분석 요소를 제공할 수 있다는 것을 발견하여 본 발명을 완성하기에 이르렀다.
즉, 본 발명에 의하면, 탄소수 12~22의 장쇄 알킬 지방산의 디글리세리드 또는 트리글리세리드, 모노글리세리드 리파아제, 및 글리세린 측정 시약을 함유하는 적어도 1개 이상의 전개층 및/또는 시약층을 포함하는 체액 내의 췌장 리파아제 측정용 건식 분석 요소에 있어서, 상기 전개층 및/또는 시약층이 2종류 이상의 음이온 계면활성제를 함유하며, 또한 그 중 적어도 1종류가 알킬아릴술폰산염인 것을 특징으로 하는 체액 내의 췌장 리파아제 측정용 건식 분석 요소가 제공된다.
바람직하게는, 알킬아릴술폰산염은 알킬벤젠술폰산염이다.
바람직하게는, 알킬벤젠술폰산염은 알킬기의 사슬 길이가 탄소수 10~14인 알킬벤젠술폰산염이다.
바람직하게는, 알킬벤젠술폰산염은 직쇄 도데실벤젠술폰산나트륨염이다.
바람직하게는, 알킬아릴술폰산염의 첨가량은 0.1~10g/㎡이다.
바람직하게는, 트리글리세리드는 트리올레인이다.
바람직하게는, 모노글리세리드 리파아제는 디글리세리드 및 트리글리세리드에 실질적으로 작용하지 않는 모노글리세리드 리파아제이며, 더욱 바람직한 것은 바실루스·스테아로테르모필루스 H-165 유래의 모노글리세리드 리파아제이다.
바람직하게는, 글리세린 측정 시약은 글리세로키나아제와 글리세로인산 옥시다아제와 발색 시약으로 구성된다.
바람직하게는, 건식 분석 요소의 구성은 물 불투과성 지지체, 시약층 및 전개층으로 이루어진다.
바람직하게는, 전개층은 천 또는 다공질 막으로 이루어지는 것이다.
바람직하게는, 다공질 막은 폴리비닐술폰 또는 아세틸셀룰로오스로 이루어지는 다공질 막, 또는 미소 비드로 형성되는 다공질 막이다.
바람직하게는, 모노글리세리드 리파아제의 첨가량은 8000U/㎡~1000U/㎡이다.
바람직하게는, 본 발명의 건식 분석 요소는 저급 알코올 또는 아세톤에 용해된 디글리세리드 또는 트리글리세리드를 전개층 또는 시약층에 첨가하여 건조하는 공정을 포함하는 방법에 의해 제조된다.
바람직하게는, 디글리세리드 또는 트리글리세리드의 건조 방법은 온풍 건조이다.
바람직하게는, 디글리세리드 또는 트리글리세리드는 메탄올, 에탄올, 프로필알코올 또는 아세톤에 용해되어 있다.
본 발명의 다른 측면에 의하면, 상기한 본 발명의 건식 분석 요소에 체액을 적용하여 상기 체액 내의 췌장 리파아제를 측정하는 방법이 제공된다.
바람직하게는, 체액은 개 혈액이다.
(발명의 효과)
트리올레인을 기질로 하는 췌장 리파아제 측정용 건식 분석 요소를 제작함으로써 췌장 리파아제 특이적인 분석이 가능하게 되었지만, 다검체 상관의 상관계수는 향상되지 않았다. 원인을 해석한 결과, 검체에 의해 코리파아제에 의한 췌장 리파아제의 활성화가 불충분한 것이 원인이었다. 본 발명에서는, 직쇄 도데실벤젠술폰산나트륨 등의 음이온 계면활성제를 첨가함으로써 고가인 코리파아제의 첨가량을 늘리지 않고 검체의 췌장 리파아제를 활성화시킬 수 있다는 것을 발견했다. 그 결과, 본 발명의 췌장 리파아제 측정용 건식 분석 요소를 이용한 분석에서는 다검체 상관의 상관계수가 크게 향상되었다.
본 발명의 체액 내의 췌장 리파아제 측정용 건식 분석 요소는 탄소수 12~22의 장쇄 알킬 지방산의 디글리세리드 또는 트리글리세리드, 모노글리세리드 리파아제, 및 글리세린 측정 시약을 함유하는 적어도 1개 이상의 전개층 및/또는 시약층을 포함하는 체액 내의 췌장 리파아제 측정용 건식 분석 요소로서, 상기 전개층 및/또는 시약층이 2종류 이상의 음이온 계면활성제를 함유하며, 또한 그 중 적어도 1종류가 알킬페닐술폰산염인 것을 특징으로 한다.
건식 분석 요소를 이용한 분석에서는 검체를 희석하지 않고 분석하기 때문에 검체에 함유되는 여러 성분의 영향을 받기 쉽다. 본 발명자들은 희석 검체를 사용 하는 분석법에서는 문제가 되지 않았던 리파아제 활성화의 검체간 차가 건식 분석 요소를 이용하는 분석에서 발생하는 것을 처음 발견했다. 이 리파아제 활성화의 검체간 차에 관한 문제를 해결하기 위해서는 도데실벤젠술폰산나트륨 등의 알킬페닐술폰산염의 첨가가 유용하다는 것이 본 발명에 의해 발견되었다. 즉, 종래의 건식 분석 요소를 이용한 분석에 있어서는 일부 검체의 리파아제 반응 불량 때문에 다검체 상관이 불량했다. 이 문제를 해결하기 위해 본 발명에서는, 도데실벤젠술폰산나트륨 등의 알킬페닐술폰산염을 건식 분석 요소에 첨가함으로써 상관계수를 현저하게 향상시키는 것에 성공했다. 이 효과는 상관에서 음의 오차(negative error)를 생기게 했던 검체의 리파아제 활성이 회복되었기 때문이다.
본 발명의 건식 분석 요소는 2종류 이상의 음이온 계면활성제를 함유하며, 또한 그 중 적어도 1종류가 알킬아릴술폰산염이다.
본 발명에서 이용하는 음이온 계면활성제는, 예를 들면 친수기가 카르복실기, 술폰산기, 황산에스테르기, 인산염 등을 갖는 것을 들 수 있다. 본 발명에서 이용할 수 있는 바람직한 술폰산기를 갖는 음이온 계면활성제는 알킬벤젠술폰산염, 알킬나프탈렌술폰산염, 알킬황산염, 폴리옥시에틸렌알킬에테르황산액, α-올레핀술폰산염, N-아실메틸타우린염이다. 소수기의 탄소수가 12~20 정도가 바람직하다. 이들 중에서, 리파아제 활성을 저해하지 않고 건식 분석 요소에 첨가된 효소를 실활시키지 않는 것이 바람직하다.
이 중에서, 바람직하게는 알킬벤젠술폰산염으로서 알킬쇄의 탄소수 10~14가 더욱 바람직하다. 더욱 바람직한 것은, 세제의 주요 성분으로 되는 탄소수가 12인 직쇄 도데실벤젠술폰산염이다. 염은 나트륨염이 바람직하지만, 칼륨염, 리튬염도 사용할 수 있다. 알킬벤젠술폰산을 첨가한 후, 건식 분석 요소 내에서 염을 형성시켜도 된다.
카르복실기를 갖는 음이온 계면활성제는 리파아제 활성화 작용이 있는 담즙산염이 바람직하고, 디옥시콜산염, 콜산염, 타우로콜산염, 타우로디옥시콜산염, 디옥시타우로콜산염이 바람직하며, 특히 디옥시콜산나트륨, 타우로디옥시콜산나트륨이 바람직하다.
본 발명에 있어서의 음이온 계면활성제의 가장 바람직한 조합은 디옥시콜산나트륨, 타우로디옥시콜산나트륨과 직쇄 도데실벤젠술폰산염이다.
본 발명에 있어서의 알킬아릴술폰산염의 첨가량은 본 발명의 효과를 달성할 수 있는 한 특별히 한정되지 않지만, 바람직하게는 0.1~10g/㎡이고, 보다 바람직하게는 0.2~5g/㎡이며, 더욱 바람직하게는 0.5~5g/㎡이다.
본 발명에서 사용하는 글리세리드는 장쇄 알킬쇄의 지방산으로 이루어지는 디글리세리드 또는 트리글리세리드이다. 장쇄 알킬쇄는 포화여도 불포화여도 된다. 장쇄 알킬쇄의 지방산의 알킬쇄 길이는 췌장 리파아제에의 선택성으로부터 탄소수 12 이상 22 이하이면 되고, 바람직하게는 탄소수 16 이상 20 이하이다. 이하에 예를 나타낸다.
포화지방산의 예는 라우린산(C12 :0), 미리스트산(C14 :0), 팔미트산(C16 :0), 스테아린산(C18 :0), 아라킨산(C20 :0), 베헨산(C22:0)을 들 수 있다. 불포화지방산의 예는 팔 미트올레인산(C16 :1), 페트로셀린산(C11H23COOH), 올레인산(C18 :1), 리놀산(C18 :1), 리놀렌산(C18 :2), 엘레오스테아르산(C18 :3), 아라키돈산(C20 :4) 등을 들 수 있다. 바람직하게는, 올레인산, 리놀산의 글리세리드이다. 특히, 바람직한 글리세리드는 올레인산의 트리글리세리드인 트리올레인이다.
또한, 본 발명에서는 실질적으로 디글리세리드에 반응하지 않는 모노글리세리드 리파아제 및 종래부터 있는 신뢰성이 높은 글리세린 발색 시약을 이용한다. 층 구성은 적어도 1개 이상의 전개층 또는 시약층이 있으면 되고, 1층의 시험지여도 된다. 바람직하게는, 보다 측정 정밀도와 강도를 높이기 위해 지지체와 적어도 1층 이상의 시약층으로 이루어지는 다층 분석 요소를 이용한다. 기질은 에탄올 등의 유기용제에 트리올레인 등의 글리세리드를 용해하고 건식 분석용을 삽입하며, 바람직하게는 온풍 건조로 건조시킬 수 있다.
본 발명의 리파아제 측정용 건식 분석 요소의 지지체층을 구성하는 것으로서는 광 투과성이며 또한 물 불투과성인 지지체를 이용할 수 있다. 광 투과성·물 불투과성 지지체의 예로서는 폴리에틸렌테레프탈레이트, 비스페놀A의 폴리카보네이트, 폴리스티렌, 셀룰로오스에스테르(예, 셀룰로오스디아세테이트, 셀룰로오스트리아세테이트, 셀룰로오스아세테이트프로피오네이트 등) 등의 폴리머로 이루어지는 두께 약 50㎛~약 1㎜, 바람직하게는 약 80㎛~약 300㎛의 범위의 필름 또는 시트형상의 투명지지체를 들 수 있다.
지지체의 표면에는 필요에 따라 언더코팅층을 형성하여 지지체 상에 형성되 는 반응층과 지지체의 접착을 강고한 것으로 할 수 있다. 또한, 언더코팅층 대신에 지지체의 표면을 물리적 또는 화학적인 활성화 처리를 하여 접착력의 향상을 도모해도 된다.
지지체 상에는 (경우에 따라서는 언더코팅층 등의 다른 층을 통해) 반응층이 형성된다. 반응층은 분석물인 리파아제와 반응하여 광학적으로 검출 가능한 변화를 발생시키는 후술의 시약 조성물의 적어도 일부가 친수성 폴리머 바인더 내에 실질적으로 균등하게 분산되어 있는 흡수성이며 물 침투성인 층이다.
반응층의 바인더로서 이용할 수 있는 친수성 폴리머는 일반적으로는 물 흡수시의 팽윤률이 30℃에서 약 150%~약 2000%, 바람직하게는 약 250%~약 1500%의 범위의 천연 또는 합성 친수성 폴리머이다. 그와 같은 친수성 폴리머의 예로서는, 일본 특허 공개 소58-171864호 공보 및 일본 특허 공개 소60-108753호 공보 등에 개시되어 있는 젤라틴(예, 산처리 젤라틴, 탈이온 젤라틴 등), 젤라틴 유도체(예, 프탈화 젤라틴, 히드록시아크릴레이트그래프트젤라틴 등), 아가로오스, 풀루란, 풀루란 유도체, 폴리아크릴아미드, 폴리비닐알코올, 폴리비닐피롤리돈 등을 들 수 있다.
반응층은 가교제를 이용하여 적절히 가교 경화된 층으로 할 수 있다. 가교제의 예로서, 젤라틴에 대한 1,2-비스(비닐술포닐아세트아미드)에탄, 비스(비닐술포닐메틸)에테르 등의 공지의 비닐술폰계 가교제, 알데히드 등, 메탈릴알코올 코폴리머에 대한 알데히드, 2개의 글리시딜기 함유 에폭시 화합물 등이 있다.
반응층의 건조시의 두께는 약 1㎛~약 100㎛의 범위인 것이 바람직하고, 보다 바람직하게는 약 3㎛~약 30㎛의 범위이다. 또한 시약층은 실질적으로 투명한 것이 바람직하다.
본 발명에서는 다공성 전개층에 천으로 제작된 전개층을 이용하는 것이 바람직하지만, 폴리비닐술폰, 아세틸셀룰로오스로 이루어지는 다공질 막 또는 미소 비드로 형성되는 다공질 막, 유리섬유 여과지, 여과지 등 천 이외의 재질을 사용하는 것도 가능하다.
이 천으로 제작된 다공성 전개층으로서는 일본 특허 공개 소55-164356호 공보, 일본 특허 공개 소57-66359호 공보 등에 기재된 직물천 전개층(예:브로드, 포플린 등의 평직 직물 등), 일본 특허 공개 소60-222769호 공보 등에 기재된 편물천 전개층(예:트리콧 편직물, 더블 트리콧 편직물, 밀라니스 편직물 등), 일본 특허 공개 평1-172753호 공보에 기재된 알칼리 에칭액으로 에칭 처리한 직물천 또는 편물천으로 이루어지는 전개층 등이 있다. 바람직한 것은 편물천이며, 특히 트리콧 편물이 바람직하다. 천의 재질로서는 폴리에스테르, 면, 나일론, 비단, 비닐론, 레이온, 폴리아미드, 아크릴, 울, 폴리프로필렌, 마 등이 이용되고, 바람직한 것은 폴리에스테르이다. 전개층의 두께는 50~400㎛ 정도, 바람직하게는 200~300㎛ 정도가 적당하다. 천의 공극률은 20~90% 정도, 바람직하게는 40~85% 정도이다.
다공성 전개층에 이용되는 직물천, 편물천은 일본 특허 공개 소57-66359에 기재된 글로우 방전 처리 또는 코로나 방전 처리로 대표되는 물리적 활성화 처리를 천 생지의 적어도 한쪽 면에 실시하거나 또는 일본 특허 공개 소55-164356, 일본 특허 공개 소57-66359 등에 기재된 수세 탈지 처리, 계면활성제 함침 또는 친수성 폴리머 함침 등의 친수화 처리, 또는 이들의 처리 공정을 적절히 조합시켜 순차 실 시함으로써 천을 친수화하고, 하측(지지체에 가까운 측) 층과의 접착력을 증대시킬 수 있다.
전개 반응층으로서 다공성층을 이용하는 경우, 그 다공성 매체는 섬유질이어도 되고 비섬유질이어도 된다. 섬유질 재료로서는, 예를 들면 여과지, 부직포, 직물천(예를 들면 평직물천), 편직물천(예를 들면 트리콧 편물직물), 유리섬유 여과지 등을 이용할 수 있다. 비섬유질 재료로서는 일본 특허 공개 소49-53888 등에 기재된 초산 셀룰로오스 등으로 이루어지는 멤브레인 필터, 일본 특허 공개 소49-53888, 일본 특허 공개 소55-90859(대응 미국 특허 4,258,001), 일본 특허 공개 소58-70163(대응 미국 특허 4,486,537) 등에 기재된 무기물 또는 유기물 미립자로 이루어지는 연속 공극 함유 입자형상 구조물층 등의 어느 것이어도 된다. 일본 특허 공개 소61-4959(대응 유럽 공개 EP0166365A), 일본 특허 공개 소62-116258, 일본 특허 공개 소62-138756(대응 유럽 공개 EP0226465A), 일본 특허 공개 소62-138757(대응 유럽 공개 EP0226465A), 일본 특허 공개 소62-138758(대응 유럽 공개 EP0226465A) 등에 기재된 부분 접착된 복수의 다공성층의 적층물도 바람직하다.
전개층으로의 시약 첨가를 위해서는 전개층을 형성시킨 후 반응 시약을 도포 등의 수단에 의해 첨가해도 되고, 또한 예를 들면 종이, 천, 고분자로 이루어지는 다공질 막 등에 본 발명의 시약을 미리 함침 또는 도포한 후 지지체 상에 형성한 다른 물 침투성층 상에 일본 특허 공개 소55-164356호와 같은 방법으로 접착시키는 것도 유용한 방법이다.
다공성층은 공급되는 액체의 양에 거의 비례한 면적에 액체를 전개하는 이른 바 계량 작용을 갖는 전개층이어도 된다. 이 기능의 제어에는 계면활성제와 친수성 바인더의 사용이 유용하다.
본 발명의 건식 분석 요소에는 상기 이외의 층도 형성할 수 있다. 예를 들면, 광차폐층, 흡수층, 접착층 등이다.
본 발명에서 채용하고 있는 측정 반응계는 측정 대상인 리파아제에 의해 기질인 디글리세리드 또는 트리글리세리드가 분해되어 생성하는 모노글리세리드를 모노글리세리드 리파아제로 분해한다. 이 글리세롤을 글리세롤키나아제에 의해 L-α-글리세로인산으로 하고, L-α-글리세로인산을 L-α-글리세로인산 옥시다아제에 의해 디히드록시아세톤인산으로 바꿈과 아울러 과산화수소를 발생시키고, 이 과산화수소에 의해 퍼옥시다아제의 작용으로 발색 색소를 발색시키는 것이다.
본 발명의 건식 분석 요소에 삽입되는 시약계에는 모노글리세리드 리파아제를 첨가한다. 모노글리세리드 리파아제는 트리글리세리드 및 디글리세리드와 실질적으로 반응하지 않고, 장쇄 지방산의 모노글리세리드에 반응하는 것이 바람직하다. 특히 바람직한 것은 일본 특허 공개 소63-245672, 일본 특허 공개 평4-316500호 공보에 기재된 바실루스·스테아로테르모필루스 H-165 유래의 모노글리세리드 리파아제이다.
글리세롤키나아제는 글리세롤과 ATP를 반응시켜 L-α-글리세로인산(L-글리세롤-3-인산)과 ADP로 바꾸는 것이고, Mg2+, Mn2 + 등을 보효소로 하고 있다.
L-α-글리세로인산 옥시다아제(글리세롤-3-인산옥시다아제)는 L-글리세로인 산을 산화하여 디히드록시아세톤인산으로 바꿈과 아울러 과산화수소를 발생시키는 것이다.
이 과산화수소에 의해 퍼옥시다아제의 작용으로 발색시키는 발색계는 건식 분석 요소용으로서 여러가지로 개발되어 있고, 그 중에서 적절히 선택하여 사용할 수 있다. 그 대부분은 류코 색소이고, 대표적인 것은 o-톨루이딘이다.
본 발명의 건식 분석 요소에 삽입되는 시약계에는 또한 본 발명의 측정 대상은 주로 혈액에 함유되는 췌장 리파아제의 반응성을 높이기 위해 코리파아제를 첨가하는 것이 바람직하다. 코리파아제는 돼지 췌장 유래의 코리파아제가 바람직하다. 또한, 췌장 리파아제의 활성을 높이고 췌장 리파아제 이외의 리파아제 활성을 경감하기 위해 디옥시콜산이나 타우로콜산을 활성화제로서 첨가함으로써 에스테라아제, 간 리파아제, 리포프로테인 리파아제의 영향을 배제하고, 높은 특이성으로 췌장 리파아제를 측정할 수 있다.
상기 각 시약의 함유량으로서는 트리글리세리드가 0.1~15g/㎡ 정도, 바람직하게는 0.5~10g/㎡ 정도, 글리세롤키나아제가 0.5~100KU/㎡ 정도, 바람직하게는 1~10KU/㎡ 정도, L-α-글리세로인산 옥시다아제가 2~200KU/㎡ 정도, 바람직하게는 5~50KU/㎡ 정도, 퍼옥시다아제가 1~200KU/㎡ 정도, 바람직하게는 5~50KU/㎡ 정도, 모노글리세리드 리파아제가 2~100KU/㎡ 정도, 바람직하게는 3~30KU/㎡ 정도, 발색 색소가 0.05~2.00g/㎡ 정도, 바람직하게는 0.1~1.00g/㎡ 정도, 코리파아제가 0.010~0.400g/㎡(5~200KU/㎡) 정도, 디옥시콜산이 0.1~10g/㎡ 정도가 적당하다.
여기에서, 모노글리세리드 리파아제는 바람직하게는 8000U/㎡~1000U/㎡, 더 욱 바람직하게는 6000U/㎡~2000U/㎡, 가장 바람직하게는 4300U/㎡~2000U/㎡이다. 모노글리세리드 리파아제는 공역 효소이지만 과잉량을 첨가하는 것은 바람직하지 못하다. 디글리세리드를 기질로 사용하면 백그라운드가 높아지는 경우가 있다. 또한, 트리글리세리드를 기질로서 사용한 경우에도 모노글리세리드 리파아제량이 많아짐에 따라 혈액 중의 일부의 리포프로테인이 반응하여 측정 오차를 발생시키는 경우가 있기 때문이다.
이 시약 조성물은 모두를 반응층 또는 전개층에 함유시켜도 되고, 또한 양 층으로 배분하여 함유시켜도 되며, 일부를 다른 층에 함유시켜도 된다.
본 발명의 건식 분석 요소에는 그 밖의 시약도 첨가할 수 있다. 이와 같은 시약에는 완충제, 계면활성제 등이 있다.
본 발명의 건식 분석 요소에 함유시킬 수 있는 완충제의 예로서는, 탄산염, 붕산염, 인산염, 트리스염 및 굿(good) 완충제 등의 공지의 완충제를 들 수 있다. 이들의 완충제는 「단백질·효소의 기초 실험법」(카지오 타케이치 외, 난코도, 1981) 등의 공지 문헌을 참고로 하여 선택해 사용할 수 있다. 함유량은 일체형 다층 분석 요소로 통상 사용되고 있는 양과 같은 정도이면 되고, 약 100㎎/㎡~약 5.0g/㎡의 범위, 바람직하게는 약 500㎎/㎡~약 3.0g/㎡의 범위이다.
본 발명의 분석 요소의 전개층 또는 반응층에는 상기한 음이온 계면활성제 이외의 계면활성제, 예를 들면 비이온 계면활성제를 함유시킬 수도 있다. 친유기로서 알킬기, 알킬페닐기, 스티렌화페닐기, 벤질페닐기, 소르비탄알킬기 등, 친수기는 폴리옥시에틸렌기, 폴리글리세롤기, 폴리옥시에틸렌폴리프로필렌 중합체 등을 조합시킨 계면활성제를 이용하고, 폴리옥시에틸렌알킬에테르, 폴리옥시에틸렌 분기 알킬에테르, 폴리옥시알킬렌알킬에테르, 폴리옥시에틸렌알킬페닐에테르, 알킬페닐폴리글리세리드 등을 들 수 있다. 구체적으로는, 폴리옥시에틸렌트리데실에테르, 폴리옥시에틸렌 분기 데실에테르, 폴리옥시에틸렌p-옥틸페노닐에테르, 폴리옥시에틸렌p-옥틸페닐에테르, 폴리옥시에틸렌p-노닐페닐에테르, 폴리옥시에틸렌올레일에테르, 폴리옥시에틸렌소르비탄모노라우레이트, p-노닐페녹시폴리글리시돌, 옥틸글루코시드 등이 있다. 이들의 비이온 계면활성제 중에서는 폴리옥시에틸렌트리데실에테르, 폴리옥시에틸렌 분기 데실에테르, p-옥틸페녹시폴리에톡시에탄올, p-노닐페녹시폴리에톡시에탄올, p-노닐페녹시폴리글리시돌 등이 바람직하다. 비이온 계면활성제를 전개층에 함유시킴으로써 수성 액체 시료의 전개 작용(미터링 작용)이 보다 양호해진다. 비이온 계면활성제를 반응층에 함유시킴으로써 분석 조작시에 수성액체 시료 중의 물이 반응층에 실질적으로 균등하게 흡수되기 쉬워지고, 또한 전개층과의 액체 접촉이 신속하며 또한 실질적으로 균일하게 된다.
또한, 전개층에는 친수성 폴리머도 함유시킬 수 있다. 이 친수성 폴리머에는 전분, 셀룰로오스 및 셀룰로오스 유도체(메틸화 셀룰로오스, 히드록시에틸화 셀룰로오스, 히드록시프로필화 셀룰로오스 등), 아가로오스, 젤라틴(예, 산처리 젤라틴, 탈이온 젤라틴 등), 젤라틴 유도체(예, 프탈화 젤라틴, 히드록시아크릴레이트그래프트젤라틴 등), 아크릴아미드 중합체, 아크릴아미드와 각종 비닐성 모노머의 공중합체, 비닐피롤리돈 중합체, 비닐피롤리돈과 각종 비닐성 모노머의 공중합체, 아크릴레이트 중합체 및 아크릴레이트와 각종 비닐성 모노머의 공중합체 등을 들 수 있다. 상기 친수성 폴리머 중에서는 비닐피롤리돈 유도체와 셀룰로오스 유도체가 바람직하다.
본 발명의 건식 분석 요소의 바람직한 제조 방법을 기재한다. 지지체에 젤라틴 등의 바인더와 계면활성제를 첨가하고, 제막성을 향상시킨 수용액인 도포액을 도포하고 건조함으로써 시약층을 제작한다. 전개층은, 예를 들면 천이나 이미 형성된 다공질 막을 전개층 막으로서 이용하는 경우에는 시약층에 물을 부착시켜 일부 가용화시킨 뒤, 필요하면 가온하여 바인더를 더욱 연화시켜 전개층 막과 지지체 상의 시약층에 압착하고 건조한다.
종래, 트리올레인을 리파아제 분석액이나 건식 분석구에 첨가하는 방법으로서 사용되어 온 물로의 분산법은 계면활성제나 보호 콜로이드로 안정화되어 있다고는 해도 시약 첨가의 타이밍, 교반 효율, 액체 온도의 변동 등에 의해 글리세리드 입자 지름은 안정되지 않아 로트 내, 로트 간의 편차는 커 정밀도가 좋은 리파아제 건식 분석구를 제조하는 것은 어렵다. 또한, 이 분산이나 유화에는 고도하고 고가인 분산 장치가 필요하게 된다. 또한, 분산 입경이 작아지지 않는 한 입자의 침강이 발생한다. 이 침강은 균일한 분석구를 제작하기 위해서는 문제가 된다.
트리글리세리드나 디글리세리드를 계면활성제의 수용액으로서 가용화하여 건식 분석구에 첨가하는 방법은 췌장 리파아제 뿐만 아니라, 비췌장 리파아제나 에스테라아제의 이들 기질로의 반응성을 향상시키는 경우가 있고, 또한 계면활성제가 공역 효소를 실활시키는 경우가 있으므로 바람직하지 못하다.
그래서, 트리올레인 등의 글리세리드(리파아제 기질)를 저급 알코올 또는 아 세톤에 용해하고, 도포성을 향상시키기 위해 필요한 경우에는 폴리비닐피롤리돈 등의 바인더를 첨가하여 점도를 조정할 수 있다. 저속 알코올 또는 아세톤으로서는 탄소수 1~6의 저속 알코올계 용매 또는 아세톤이 바람직하고, 특히 메탄올, 에탄올, 프로필알코올, 아세톤이 바람직하며, 특히 에탄올이 바람직하다. 테트라하이드로푸란, 디옥산 등의 에테르계 용제의 사용은 바람직하지 못하다. 이 이유의 하나는 도포성을 향상시켜 건식 분석 요소에 첨가된 후에는 혈액 검체에서의 용해에 유용한 폴리비닐피롤리돈 등의 수용성 폴리머의 용해성이 양호하지 않기 때문이다. 클로로포름, 염화 메틸렌은 글리세리드의 용해성이 좋으므로 유용하지만, 최근 발암성 등의 환경 독성이 문제가 되고 있으므로 사용에는 주의가 필요하다.
상기 글리세리드와 용제의 양비(量比)는, 예를 들면 트리올레인을 에탄올에 용해하는 경우 트리올레인 1g에 대하여 에탄올은 50~300g이 바람직하다. 보다 바람직하게는 트리올레인 1g에 대하여 에탄올 100~200g이다. 트리올레인 농도가 높으면 에탄올에 용해되지 않기 때문에 균일한 트리올레인의 첨가가 어려워진다. 글리세리드의 용제액의 첨가 방법은 도포 또는 함침이 사용될 수 있다. 이들의 첨가 방법 중에서 도포기에 의해 도포해 건조하는 공정이 균일하고 효율이 높은 생산 방법을 제공한다. 이 공정에 있어서, 건조는 온풍 건조가 바람직하다. 건조풍은 온도 20~60℃가 바람직하고, 특히 25~40℃가 바람직하다. 이슬점은 0℃~10℃가 바람직하다. 풍량은 0.5~10m/초가 바람직하다. 건조 시간은 용제가 실질적으로 건조되면 되고, 한편 장시간의 건조로는 공역 효소가 실활되는 경우가 있으므로 1분~60분이 바람직하다. 복수의 건조 존을 이용하여 각각의 존에서 건조풍의 온도, 이슬점, 풍 속, 풍향, 시간을 제어하여 양호한 건조 조건을 설정할 수도 있다.
CaCl2는 어느 도포액에 첨가해도 되지만 디옥시콜산과 반응하여 응집물을 형성하는 경우도 있으므로, 또한 에탄올에 용해되므로 기질액에 용해하여 첨가하는 것이 바람직하다.
유기용제에 용해되지 않는 반응 시약은 별도 수용액으로서 도포에 의해 첨가한다. 도포적성, 혈액의 전개성을 향상시키기 위해 바인더 및 계면활성제를 첨가하면 좋다. pH 완충제, 리파아제 반응 촉진제인 코리파아제, 디옥시콜산은 이 액에 첨가하면 좋다. 마찬가지로 도포와 건조에 의해 전개층 내에 시약을 첨가한다.
반응 시약은 검체 내의 리파아제가 반응할 때 용해·확산됨으로써 반응에 적합한 시약 환경을 설정할 수 있으면 되므로, 각 시약은 제조에 있어서 기본적으로 어느 층에 첨가해도 된다.
시약의 첨가 방법은 균일한 시약량을 설정할 수 있으면 함침해도 되고, 또한 스프레이를 이용해도 된다. 각 층의 제작 순서는 균일하고 시약이 분해되지 않는 방법이면 된다. 경우에 따라서는 지지체를 사용하지 않고 유리섬유 여과지나 여과지와 같은 다공질 막을 사용하여 상기의 제조 방법으로 제작할 수도 있다. 이 경우에도 기질을 유기용제에 용해한 액은 온풍 건조로 건조하는 것이 바람직하다.
본 발명의 일체형 분석 요소는 한 변 약 10㎜~약 30㎜의 정방형 또는 거의 같은 사이즈의 원형 등의 소편으로 재단하여 일본 특허 공개 소57-63452호, 일본 특허 공개 소54-156079호, 일본 실용 공개 소56-142454호, 일본 실용 공개 소58- 32350호 및 일본 특허 공개 소58-501144호 각 공보 등에 개시된 슬라이드 프레임 등에 넣어 분석 슬라이드로서 이용하는 것이 제조, 포장, 수송, 보존 및 측정 조작 등의 모든 관점에서 바람직하다.
본 발명의 일체형 분석 요소는 상술의 모든 공보에 개시된 방법에 따라 약 5㎕~약 30㎕, 바람직하게는 약 8㎕~약 15㎕의 수성 액체 시료를 다공성 전개층에 점착 공급하고, 필요에 따라 약 20℃~약 45℃ 범위의 실질적으로 일정한 온도에서 인큐베이션 후에 광 투과성 지지체측으로부터 일체형 다층 분석 요소 내의 색 변화, 발색 등의 검출 가능한 변화를 반사 측광하여 비색법의 원리에 의해 액체 시료 내의 측정 대상 성분을 분석한다.
이하의 실시예에 의해 본 발명을 구체적으로 설명하지만, 본 발명은 실시예에 한정되는 것은 아니다.
(실시예)
실시예 1 : 직쇄 도데실벤젠술폰산나트륨을 함유하는 췌장 리파아제 분석 슬라이드의 제작
(1) 글리세린 발색 시약의 첨가 :
젤라틴 초벌이 되어 있는 두께 180㎛의 폴리에틸렌테레프탈레이트 무색 투명 평활 필름 상에 하기 조성의 시약을 도포, 건조시킨 후 계속하여 물을 균일 공급하여 습윤시키고, 그 위에 50데니어 상당의 폴리에틸렌테레프탈레이트 방적사를 36게이지 뜬 트리콧 편물천을 가볍게 압력을 가해 적층하고, 건조 온도 20℃에서 젤라틴을 굳힌 후 45℃에서 건조시켰다. 또한, pH 완충제(PIPES)를 함유하는 도포액은 1N-Na0H 수용액에서 pH6으로 조정한 것을 이용했다.
젤라틴 12g/㎡
PIPES(도진 카가쿠) 22g/㎡
염화 마그네슘(와코 쥰야쿠 코교) 0.52g/㎡
ATP-2 나트륨염(오리엔탈 효모) 1.4g/㎡
폴리옥시에틸렌트리데실에테르 HLB14.8(다이이치 코교 세이야쿠) 0.55g/㎡
폴리에틸렌알킬 분기 데실에테르 HLB15.9(다이이치 코교 세이야쿠) 0.059g/㎡
류코 색소 0.21g/㎡
고추냉이 퍼옥시다아제(토요보) 14KU/㎡
글리세롤키나아제(아사히 카세이) 3.8KU/㎡
L-α-글리세로인산 옥시다아제(아사히 카세이) 19KU/㎡
1,2-비스(비닐술포닐아세트아미드)에탄 3.3g/㎡
(2) 기질의 첨가 :
상기의 천 상에 하기 조성의 시약을 에탄올에 용해하고 도포하여 건조 온도 32℃, 이슬점 0℃의 바람으로 온풍 건조시켰다.
염화칼슘(와코 쥰야쿠) 0.18g/㎡
폴리비닐피롤리돈 K90 2.0g/㎡
트리올레인(98%, ICN-Biochemical) 1.1g/㎡
(3) 리파아제 반응 보조제의 첨가
또한, 하기 시약을 물에 용해하고 도포, 건조하여 췌장 리파아제 건식 분석 요소를 제작했다. 또한, pH 완충제(HEPES)를 함유하는 도포액은 1N-Na0H 수용액에서 pH 8.0으로 조정한 것을 이용했다.
HEPES(도진 카가쿠) 6.1g/㎡
직쇄 도데실벤젠술폰산나트륨(와코 쥰야쿠) 0.67g/㎡
디옥시콜산나트륨(와코 쥰아쿠) 4.6g/㎡
타우로디옥시콜산나트륨 1.5g/㎡
메토로스 2.1g/㎡
모노글리세리드 리파아제(아사히 카세이) 4300U/㎡
돼지 코리파아제(로슈) 0.05g/㎡
아스코르빈산옥시다아제(토요보) 8500U/㎡
비교예1 :
실시예1에 있어서, 직쇄 도데실벤젠술폰산나트륨을 함유하지 않는 것 이외에는 같은 방법으로 췌장 리파아제 분석 슬라이드를 제작했다.
측정 1 :
개 혈장 46검체를 이용해 각 10㎕를 실시예1 및 비교예1로 제작한 췌장 리파아제 분석 슬라이드에 점착하여 37℃에서 가온해 5분간 650㎚의 반사 농도의 변화를 조사했다. 시판되는 후지 드라이 켐(DRI-CHEM) 7000을 이용했다. 리파아제 활성으로의 변환은 후지 드라이켐 시스템에서 종래부터 행하고 있는 바와 같이, 반사 농도를 기질반응량(글리세린 농도)으로 변환하고, 색소 퇴색 보정을 행한 후 1분당 검체마다의 리파아제 활성을 산출했다. 기준법은 애널라이저는 히타치 7180을 사용하고, 시약은 로슈사 RGGR법에 의한 리파아제 분석 키트를 이용했다.
다검체 상관 데이터를 도 1 및 도 2에 나타낸다. 비교예의 상관계수가 R=0.930에 대하여 실시예1은 R=0.980로 향상되었다. 도 1 및 도 2의 검체 A, B를 이용하여 실시예3의 해석을 행하였다.
실시예2 : 도데실벤젠술폰산나트륨과 코리파아제 양의 영향
실시예1과 같은 제조법으로 도데실벤젠술폰산나트륨과 코리파아제 양을 변경한 분석 요소를 제작하여 46 개 검체에서의 다검체 상관을 조사했다. 결과를 표1에 나타낸다. 도데실벤젠술폰산나트륨을 첨가한 리파아제 분석 슬라이드는 도데실벤젠술폰산Na을 첨가하지 않은 타입과 비교하여 이들의 시약량이 표1에 기재된 범위 내에서 사용되는 경우, 상관계수가 크게 양호한 것이 재확인되었다.
Figure 112008042103811-PAT00001
실시예3 : 도데실벤젠술폰산Na 첨가에 의한 췌장 리파아제 반응 타임 코스의 측정
실시예1 및 2와 같은 제조법으로 도데실벤젠술폰산Na(도3 및 도4에서는 SDBS로 생략함)의 첨가량을 바꾼 췌장 리파아제 측정용 건식 분석 요소를 제작했다. 표2의 3-1은 비교예2로 한다.
Figure 112008042103811-PAT00002
측정 :
비교예1의 다검체 상관에서 양의 오차(positive error) 및 음의 오차를 부여한 2검체(A,B)를 골라 실시예3에서 제작한 췌장 리파아제 건식 분석 요소를 이용하여 측정하고, 그들의 반응 타임 코스를 비교했다. 검체 A, B는 상기의 실시예1 및 비교예1의 각 다검체 상관 데이터에 기재한 같은 것을 이용했다.
결과 :
결과를 도3(왼쪽 도면은 검체 A를 나타내고, 오른쪽 도면은 검체 B를 나타냄)에 나타낸다. 비교예1의 다검체 상관에서 음의 오차를 부여한 검체 B는 도데실벤젠술폰산나트륨을 첨가함으로써 리파아제의 반응성이 향상되는 것이 발견되었다. 한편, 약간 양의 오차를 부여한 검체 A는 도데실벤젠술폰산나트륨을 첨가해도 반응성의 변화는 적다. 이들의 결과로부터 도데실벤젠술폰산나트륨의 첨가는 반응성이 나빴던 검체의 활성만을 향상시킴으로써 다검체 상관을 개량한 것을 확인할 수 있었다.
도 1은 실시예 1의 건식 분석 요소를 이용한 분석 결과를 나타낸다.
도 2는 비교예 1의 건식 분석 요소를 이용한 분석 결과를 나타낸다.
도 3은 다검체 상관에서 양의 오차 및 음의 오차를 부여한 2검체(A, B)에 있어서 실시예3에서 제작한 췌장 리파아제 건식 분석 요소를 이용하여 측정하고, 그들의 반응 타임 코스를 비교한 결과를 나타낸다.

Claims (17)

  1. 탄소수 12~22의 장쇄 알킬 지방산의 디글리세리드 또는 트리글리세리드, 모노글리세리드 리파아제, 및 글리세린 측정 시약을 함유하는 1개 이상의 전개층 및/또는 시약층을 포함하는 체액 내의 췌장 리파아제 측정용 건식 분석 요소에 있어서: 상기 전개층 및/또는 시약층이 2종류 이상의 음이온 계면활성제를 함유하며 또한 그 중 1종류 이상이 알킬아릴술폰산염인 것을 특징으로 하는 체액 내의 췌장 리파아제 측정용 건식 분석 요소.
  2. 제 1 항에 있어서, 상기 알킬아릴술폰산염은 알킬벤젠술폰산염인 것을 특징으로 하는 건식 분석 요소.
  3. 제 2 항에 있어서, 상기 알킬벤젠술폰산염은 알킬기의 사슬 길이가 탄소수 10~14인 알킬벤젠술폰산염인 것을 특징으로 하는 건식 분석 요소.
  4. 제 3 항에 있어서, 상기 알킬벤젠술폰산염은 직쇄 도데실벤젠술폰산나트륨염인 것을 특징으로 하는 건식 분석 요소.
  5. 제 1 항 내지 제 4 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 알킬아릴술폰산염의 첨가량은 0.1~10g/㎡인 것을 특징으로 하는 건식 분석 요소.
  6. 제 1 항 내지 제 5 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 트리글리세리드는 트리올레인인 것을 특징으로 하는 건식 분석 요소.
  7. 제 1 항 내지 제 6 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 모노글리세리드 리파아제는 바실루스·스테아로테르모필루스 H-165 유래의 모노글리세리드 리파아제인 것을 특징으로 하는 건식 분석 요소.
  8. 제 1 항 내지 제 7 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 글리세린 측정 시약은 글리세로키나아제와 글리세로인산 옥시다아제와 발색 시약으로 구성되는 것을 특징으로 하는 건식 분석 요소.
  9. 제 1 항 내지 제 8 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 건식 분석 요소의 구성은 물 불투과성 지지체, 시약층 및 전개층으로 이루어지는 것을 특징으로 하는 건식 분석 요소.
  10. 제 1 항 내지 제 9 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 전개층은 천 또는 다공질 막으로 이루어지는 것을 특징으로 하는 건식 분석 요소.
  11. 제 1 항 내지 제 10 항 중 어느 한 항에 있어서, 다공질 막은 폴리비닐술폰 또는 아세틸셀룰로오스로 이루어지는 다공질 막, 또는 미소 비드로 형성하는 다공질 막인 것을 특징으로 하는 건식 분석 요소.
  12. 제 1 항 내지 제 11 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 모노글리세리드 리파아제의 첨가량은 8000U/㎡~1000U/㎡인 것을 특징으로 하는 건식 분석 요소.
  13. 제 1 항 내지 제 12 항 중 어느 한 항에 있어서, 저급 알코올 또는 아세톤에 용해된 디글리세리드 또는 트리글리세리드를 전개층 또는 시약층에 첨가하여 건조하는 공정을 포함하는 방법에 의해 제조되는 것을 특징으로 하는 건식 분석 요소.
  14. 제 13 항에 있어서, 상기 디글리세리드 또는 상기 트리글리세리드의 건조 방법은 온풍 건조인 것을 특징으로 하는 건식 분석 요소.
  15. 제 13 항 또는 제 14 항에 있어서, 상기 디글리세리드 또는 상기 트리글리세리드는 메탄올, 에탄올, 프로필알코올 또는 아세톤에 용해되어 있는 것을 특징으로 하는 건식 분석 요소.
  16. 제 1 항 내지 제 15 항 중 어느 한 항에 기재된 건식 분석 요소에 체액을 적용하는 것을 특징으로 하는 체액 내의 췌장 리파아제를 측정하는 방법.
  17. 제 16 항에 있어서, 상기 체액은 개 혈액인 것을 특징으로 하는 체액 내의 췌장 리파아제를 측정하는 방법.
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