KR20080093087A - 신규 n―아세틸글루코사민―2―에피머라아제 및 이를 이용한 cmp―n―아세틸뉴라민산의 제조방법 - Google Patents
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Abstract
Description
효소의 종류 | 종균 배양 조건 | 본 배양 조건 | IPTG첨가 농도 (5L 배양) | 발현 유도 조건 |
시티딘 5'모노포스페이트 키나아제(CMK) | 37℃(암피실린) | 37℃, pH 7.0 | 1M IPTG 5㎖ | 37℃, 12시간 (OD600=3~5) |
세테이트 키나아제(ACK) | 37℃ (카나마이신) | 37℃, pH 7.0 | 1M IPTG 5㎖ | 37℃, 12시간 (OD600=3~5) |
CMP-N-아세틸뉴라민산 합성효소(NEU) | 37℃(암피실린) | 37℃, pH 7.0 | 1M IPTG 2㎖ | 20℃, 12시간 (OD600=3~5) |
N-아세틸뉴라민산 알도라아제(NAN) | 37℃(암피실린) | 37℃, pH 7.0 | 1M IPTG 5㎖ | 37℃, 12시간 (OD600=3~5) |
N-아세틸글루코사민-2-에피머라아제 | 37℃ (카나마이신) | 37℃, pH 7.0 | 1M IPTG 5㎖ | 37℃, 12시간 (OD600=3~5) |
Claims (6)
- (ⅰ) 시티딘 5' 모노포스페이트(cytidine 5' monophosphate, CMP), (ⅱ) 뉴클레오티드 트리-포스페이트(nucleotide tri-phosphate, NTP) 또는 ATP, (ⅲ) 아세틸 포스페이트(acetyl Pi), (ⅳ) N-아세틸-D-글루코사민 및 (ⅴ) 피루브산을 포함하는 반응 혼합물을 (a) N-아세틸글루코사민-2-에피머라아제(GlcNAc 2-epimerase), (b) N-아세틸뉴라민산 알도라제(NeuNAc aldolase), (c) 시티딘 5' 모노포스페이트 키나아제(cytidine 5' monophosphate kinase, CMP kinase), (d) 아세테이트 키나아제(acetate kinase) 및 (e) CMP-N-아세틸뉴라민산 합성효소(CMP-NeuNAc synthetase)의 존재하에 반응시키는 것을 특징으로 하는 CMP-N-아세틸뉴라민산(CMP-neuraminic acid)의 제조방법.
- 제1항에 있어서, 상기 뉴클레오티드 트리-포스페이트(NTP) 또는 ATP는 아세틸 포스페이트(acetyl Pi) 및 아세테이트 키나아제(acetate kinase)에 의해 재생되는 것을 특징으로 하는 방법.
- 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 뉴클레오티드 트리-포스페이트(NTP)는 시티딘 트리-포스페이트(cytidine tri-phosphate, CTP)인 것을 특징으로 하는 방법.
- 제1항에 있어서, 상기 N-아세틸글루코사민-2-에피머라아제는 서열번호 2의 아미노산 서열을 가지는 것임을 특징으로 하는 방법.
- 제1항에 있어서, 상기 N-아세틸글루코사민-2-에피머라아제, N-아세틸뉴라민산 알도라제, 시티딘 5' 모노포스페이트 키나아제, 아세테이트 키나아제 및 CMP-N-아세틸뉴라민산 합성효소는 담체에 고정화되어 있는 것임을 특징으로 하는 방법.
- 제1항에 있어서, 상기 N-아세틸글루코사민-2-에피머라아제, N-아세틸뉴라민산 알도라제, 시티딘 5' 모노포스페이트 키나아제, 아세테이트 키나아제 및 CMP-N-아세틸뉴라민산 합성효소는 각각 서열번호 1, 서열번호 5, 서열번호 8, 서열번호 11 및 서열번호 14의 염기서열에 의해 코딩되는 것임을 특징으로 하는 방법.
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