KR20080038127A

KR20080038127A - 아티초크 추출물, 이의 용도와 이를 포함하는 제제

Info

Publication number: KR20080038127A
Application number: KR1020087000935A
Authority: KR
Inventors: 에지오 봄바르델리; 가브리엘레 폰타나; 안드레아 지오리; 파올로 모라쪼니; 마씨모 론치; 사브리나 아르피니
Original assignee: 인데나 에스피아
Priority date: 2005-07-14
Filing date: 2006-06-16
Publication date: 2008-05-02
Also published as: NO20080198L; EP1906983A2; US20090285911A1; WO2007006391A3; RU2008101458A; CN101222931A; CA2614796A1; JP2009501708A; AU2006269035A1; WO2007006391A2; ITMI20051347A1

Abstract

본 발명은 수지상에서의 분류에 의해 얻을 수 있는 아티초크 추출물의 제조에 관한 것이다. 본 발명의 방법은 식물인 아티초크의 지상부(aerial parts)로부터 출발하여, 일정한 비율의 세 종류의 활성성분, 즉 디카페오일퀴닌산, 루테올린 및 시나로피크린 글리코사이드을 포함하는 추출물을 수득할 수 있게 한다. 시나로피크린은 정확한 양의 황산화된 아미노산 또는 적당한 티오산-유도체(thio-derivatives)의 첨가에 의해 안정화된다. 이러한 추출물은 저지혈성(hypolipemizing), 항소화불량성 및 혈관 항염증 활성을 갖는다. 상기 추출물은 주로 에노테라 비에니스(Enothera biennis) 오일에서 또는 혈관활성을 증진시키는 ω-3과 ω-6산이 풍부한 오일에서 제제화된다.

Description

아티초크 추출물, 이의 용도와 이를 포함하는 제제{Cynara scolymus extracts, the use thereof and formulations containing them}

본 발명은 수지상에서의 분류에 의해 얻을 수 있는 아티초크의 가시형 변종(thorny variety)의 추출물의 제제와 이의 제조방법에 관한 것이다.

본 발명의 제조방법은 아티초크의 가시형 변종의 지상부(aerial parts)로부터 출발하여, 일정한 비율의 세 종류의 활성성분, 즉 디카페오일퀴닌산(dicaffeoylquinic acid), 루테올린(luteolin) 및 시나로피크린 글리코사이드(cynaropicrin glycosides)를 포함하는 추출물을 수득할 수 있게 한다. 시나로피크린은 정확한 양의 황산화된 아미노산 또는 적당한 티오산-유도체(thio-derivatives)의 첨가에 의해 안정화된다. 이러한 추출물은 저지혈성(hypolipemizing), 항소화불량성 및 혈관 항염증 활성을 갖는다. 상기 추출물은 주로 혈관 활성을 증진시키는 ω-3과 ω-6산이 풍부한 오일에서 제제화된다.

아티초크의 수추출물 또는 물-알코올 추출물은 저콜레스테롤화, 담즙분비촉진성 및 항소화불량성을 갖는 것으로 문헌상 알려져 있다. 저콜레스테롤화는 수년 동안 알려져 있었고, 이는 두 종류의 물질과 관련이 있다; 합성에 의해 제조되고 70년대까지 치료에 사용된 디카페오일퀴닌산인 시나린과 간콜레스테롤의 합성반응에 대 인비트로 억제활성을 갖는 것으로 입증된 플라보노이드. 전반적인 활성은 아티초크의 추출물에 독특한 담즙분비촉진 작용과 관련되며, 이는 담즙산(bile acid)의 제거를 통해 콜레스테롤의 제거를 촉진한다.

아티초크의 활성성분은 식물 물질이 건조될 때 쉽게 분해되는 강력한 항산화제이다. 따라서 식물 바이오매스의 제조가 고함량의 활성성분을 갖는 추출물을 수득하기 위해 매우 중요하다.

시나로피크린은 항염증 활성과 낮은 저콜레스테롤화 작용을 갖는 테르펜이다. 모든 메틸렌-감마 락톤 고리 세스퀴테르펜(methylene-gamma lactonic ring sesquiterpenes)과 같이 시나로피크린은 안정하지 못하고, 이것이 추출물과 제제에서 이 화합물이 존재하기 어려운 이유 중의 하나이다. 반면에 추출물에서 이 화합물의 존재는 혈관 염증을 조절할 수 있는 항염증 작용을 갖는 생체이용가능한 물질(NFkB와 반응성 단백질 C)은 동맥경화증과 심장병의 예방과 치료에 특히 효능이 있기 때문에 매우 중요하다.

본 발명은 일정한 비율의 세 종류의 활성성분, 즉 디카페오일퀴닌산, 루테올린 및 시나로피크린 글리코사이드을 포함하는 아티초크의 가시형 변종, 바람직하게는 아티초크 변종 시피노소 사르도도(Cynara scolymus var. Spinoso sardo) 또는 아티초크 변종 테마( Cynara scolymus var. tema )의 신규한 추출물에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 상기 추출물의 제조방법에 관한 것이다.

놀랍게도 아티초크의 추출물의 추출단계 또는 뒤이은 정제 또는 농축을 위한 과정동안 황산화된 아미노산, 바람직하게는 시스테인의 첨가가 치료용 제제에서 안정하게 유지되는 고농도의 시나로피크린을 함유하는 최종 추출물을 생성한다는 것이 발견되었다. 실제로 황산화된 아미노산은 세스퀴테르펜을 안정화하고 흡수를 촉진시키는 부가물을 발생시킨다. 혈장에서 이러한 부가물은 단백질 설프히드릴기(sulfhydryl)와 교환반응을 하여 시나로피크린의 비활성(specific activity)을 회복시킨다.

본 발명의 추출물의 중요한 치료적 용도는 서방국가 인구의 9%에 영향을 미치고 있는 질병인 과민성 대장의 치료와 관련이 있다. NFkB, TNF-α 및 일부 인터루킨의 조절과 관계된 제안된 항염증 작용은 과민성 대장 증후군의 경감과 관련된 메카니즘 중의 하나일 수 있다.

또한 세스퀴테르펜-락톤은 장질환에 관여하는 중추신경계의 매개자들과 직접 또는 간접적으로 상호작용한다.

본 발명에 따르면, 황산화된 아미노산이 추출 및/또는 농축단계에서 안정제로 사용되지 않을 경우, 추출물은 황산화된 아미노산을 제제에 첨가하는 것에 의해 안정화될 수 있다.

추출물은 디카페오일퀴닌산 부분이 더 풍부한 두상화(capitula)를 포함한 식물의 지상부를 이용하여 제조되고; 잎들이 주로 플라보노이드와 모든 시나로피크린을 포함한다.

본 발명에 따르면, 전체 신선한 또는 탈수된 식물, 바람직하게는 신선한 식물이 20:80 내지 40:60의 범위의, 바람직하게는 30:70의 두상화 대 나머지 지상부의 고정된 비율에서 사용될 수 있다.

상기 언급된 바와 같이, 식물 바이오매스의 제조에서는 식물 물질이 건조될 때 활성성분의 감소를 피하기 위해 매우 중요하다.

본 발명에 따르면, 식물 물질은 식물 내에서 자연적으로 발생하는 많은 산화효소와 가수분해효소의 작용을 감소시키기 위해서 채취 이후 즉시 동결될 수 있다. 동결된 바이오매스는 -30℃에서 분쇄되고 활성성분의 추출뿐만 아니라 효소의 불활성화를 완벽하게 하기 위해 추출용 알코올 용매에 즉시 침지된다. 물-알코올 용액, 즉 바람직하게는 다양한 성분들 간에 최상의 비율을 제공하는 70% 용액이 모든 활성성분을 추출하기 위해 사용된다.

추출동안 시나로피크린의 화학량(stoichiometric amount)보다 10% 많은 함량의 시스테인이 용매에 첨가된다. 결과물인 물-알코올 추출물은 물 진공(water vacuum)하의 25℃ 내지 55℃의 범위의 저온에서, 바람직하게는 35℃에서 농축된다. 농축동안 통상적으로 식물 물질에 존재하는 클로로필과 일부 카로테노이드와 같은 난수용성(poorly water soluble) 불활성 물질은 침전되고 본 발명의 추출물에 의해 발휘되는 어떠한 활성도 보이지 않기 때문에 제거된다. 수용액은 여과되고, 용매와 원치 않은 물질은 제거되며, 결과물인 용액은 추출된 식물 물질의 부피에 해당하는 부피로 진공하에서 농축되며, 뒤이어 폴리스티렌 수지, 앰버라이트, 듀올라이트와 XADl180과 같은 흡착수지상에서 정제된다. 수지가 완전히 물로 세척되고, 원하는 추출물은 상기 수지가 소진될 때까지 90% 에탄올로 용출된다.

본 발명에 따른 결과물인 추출물은 선행기술의 추출물과 비교하여 신규한 조성을 갖는다; 이는 특히 5%보다 높은 시나로피크린 함량, 1:0.2 내지 1:0.8의 범위, 바람직하게는 1:0.6의 카페오일퀴닌산 대 시나로피크린의 비율 및 20% 내지 60%의 범위, 바람직하게는 50%의 루테올린 글리코사이드 대 시나로피크린의 비율을 갖는다.

본 발명의 추출물은 일련의 약물학적 실험에서 생물학적인 검사를 거췄다. 본 발명의 추출물은 에탄올-유도 고지방화 검사(ethanol-induced hyperlipidemia test)에서 콜레스테롤과 중성지방을 각각 40%와 35% 감소시켰고, 카라기닌 부종 검사(carrageenin oedema test)에서 75%에 달하는 부종의 투여량-의존적 감소(dose-dependent reduction)를 유도했다. 쥐에서의 담즙분비촉진 작용(choleretic)은 문헌상에 보고된 데이터를 확인해 주었다.

본 발명의 추출물은 정제, 당의정, 연질 및 경질 젤라틴캡슐, 셀룰로오스 캡슐과 같은 약학적 제제에 포함되기에 적합하다. 본 발명의 추출물은 바람직하게는 에노테라 비에니스(Enothera biennis)오일 또는 플락스(Linum usitatissimum, flax) 오일과 같이 ω-3과 ω-6 다중불포화산이 풍부한 오일에서 제제화된다.

사람에 대한 유효투여량은 치료 대상 질환의 심각성에 따라 일일 50mg 내지 1000mg의 범위이다.

상기 발명은 하기 실시예에서 보다 상세하게 기술된다.

실시예 1 - 아티초크 변종 시피노소 사르도도(Cynara scolymus var. Spinosa)의 추출물의 제조

전체 아티초크 식물(두상화, 줄기 및 잎) 4.12kg을 상기 식물 물질이 소진될 때까지 70℃에서 70% 에탄올로 여과기에서 추출시켰다. 약 50리터의 여과물을 수집하고 감압하에서 농축하여 에탄올을 제거했다. 결과적으로 수득된 수용성 농축물, 약 1.5kg을 원심분리하여 불용성 물질을 분리시켰다. 결과적으로 수득된 맑은 용액을 이전에 물로 활성화시킨(conditioned) XADl180수지(약 1400ml)을 포함하는 크로마토그래피 컬럼 상에 적재시켰다. 컬럼을 약 물 2.8l로 세척하고, 용출물을 제거하며, 정제된 추출물은 90%v/v 에탄올 3.5l의 용리에 의해 회수하였다.

물-알코올 용출물을 농축시키고, 시나로피크린 함량은 HPLC에 의하여 확인하고, 소량의 물에 용해된 L-시스테인을 첨가했다.(존재하는 시나로피크린의 화학량의 10% 초과량) 감소된 압력하의 50℃에서의 추가적인 농축과 건조로 정제된 건조추출물 49.4g을 수득하였다.(HPLC에 의해 확인된 카페오일퀴닌산 총량 15.1%, 플라보노이드 총량 3.15%, 시나로피크린 총량 7.64%).

실시예 2 - 아티초크 변종 테마(Cynara scolymus var. tema)의 추출물의 제조

전체 아티초크 식물(두상화, 줄기 및 잎) 4.12kg을 활성성분을 완전히 추출할 때까지 70℃에서 70% 에탄올로 여과기에서 추출하였다. 합쳐진 추출물의 시나로피크린 함량이 결정되면 L-시스테인이 화학량적으로 10% 초과된 분량으로 첨가된다. 상기 물-알코올 추출물은 30℃이하의 진공하에서 농축된다. 수용성 농축물을 4℃에서 밤새 방치하였고, 주로 클로로필과 카로티노이드로 구성된 고체잔류물을 외부로 제거했다. 상기 용액을 여과하고, 원치 않던 불용성 물질들의 완전한 제거 전까지 뒤이어 물로 세척되는 XAD1180수지에 흡수된다. 수지는 90% 에탄올로 세척되고 용출물은 10% w/w 잔류물에 농축되며, 이는 15.8% 카페오일퀴닌산, 4.2% 루테올린 글리코사이드와 8.6% 시나로피크린을 포함하는 추출물 40g을 수득하기 위해 분쇄하였다.

실시예 3 - 아티초크 변종(Cynara scolymus var. Spinoso sardo)의 추출물의 제조

전체 아티초크 식물(두상화, 줄기 및 잎) 4.12kg은 활성성분의 완전한 추출까지 35℃에서 70% 에탄올로 여과기에서 추출시켰다. 합쳐진 추출물을 5l로 농축시키고, 15시간동안 냉장고에 그대로 놔둔다. 그 결과 생긴 부유물을 원심분리시켰다. 맑은 용액을 XAD1180 수지상에서 흡수시켰고, 물로 세척되어 0.01%이하의 건조잔유물이 되었다. 수지를 90% 에탄올로 세척하고 용출물을 진공하의 40℃보다 낮은 온도에서 농축시켜 16.2% 카페오일퀴닌산, 4.02% 루테올린 글리코사이드와 8.01% 시나로피크린을 포함하는 추출물 40g을 수득하였다.

실시예 4 - 연질 젤라틴캡슐용 유현탁(oily suspension) 추출물의 제제

단위 조성

실시예 1의 추출물 200 mg

백밀납(White beeswax) 15 mg

대두 레시틴(Soy lecithin) 20 mg

대두유(Soy oil) 215 mg

실시예 5 - 연질 젤라틴캡슐용 유현탁(oily suspension) 추출물의 제제

단위 조성

실시예 2의 추출물 200 mg

대두 레시틴(Soy lecithin) 240 mg

백밀납(White beeswax) 6 mg

에노테라 비에니스(Enothera biennis)오일 215 mg

실시예 6 - 경질 젤라틴캡슐의 추출물의 제제

단위 조성

실시예 1의 추출물 200 mg

미정질 셀룰로오스 200 mg

락토오스 90 mg

이산화규소 5 mg

스테아린산마그네슘 5 mg

실시예 7 - 경질 젤라틴캡슐의 추출물의 제제

단위 조성

실시예 3의 추출물 200 mg

L-시스테인 100 mg

결정성 셀룰로오스 150 mg

락토오스 90 mg

이산화규소 5 mg

스테아린산마그네슘 5 mg

실시예 8 - 연질 젤라틴캡슐용 유현탁(oily suspension) 추출물의 제제

단위 조성

실시예 3의 추출물 200 mg

대두 레시틴(Soy lecithin) 240 mg

백밀납(White beeswax) 6 mg

플락스오일(flax oil) 215 mg

Claims

아티초크(Cynara scolymus)의 가시형(thorny) 변종의 추출물을 제조하는 방법으로서,

a) 알코올 또는 물-알코올 용매로 신선한 또는 탈수된 상기 식물 바이오매스를 추출하는 단계;

b) 물 진공하(water vacuum)에서 25℃ 내지 55℃의 범위, 바람직하게는 35℃의 저온에서 상기 a) 단계로부터의 상기의 물-알코올 추출물을 농축하는 단계;

c) 상기의 침전된 난불용성(poorly water-soluble) 불활성 물질을 여과하여 제거하는 단계;

d) 상기의 추출물을 흡착 수지 컬럼에서 정제하는 단계를 포함하는 것인 방법.
제1항에 있어서, 상기 a) 단계에서 -30℃에서 동결되고 분쇄된(ground) 식물 바이오매스가 사용되는 것인 방법
제1항 및 제2항에 있어서, 상기 식물 바이오매스가 20:80 내지 40:60의 범위의 두상화(capitula) 대 나머지 지상부(aerial parts)의 비율을 갖는 것인 방법.
제3항에 있어서, 상기 식물 바이오매스가 30:70의 두상화 대 나머지 지상부의 비율을 갖는 것인 방법.
제1항에 있어서, 상기 a) 단계의 추출이 물-알코올 용액으로 수행되는 것인 방법.
제5항에 있어서, 70%의 물-알코올 용액이 사용되는 것인 방법.
제5항에 있어서, 70%의 에탄올 용액이 사용되는 것인 방법.
제1항에 있어서, 상기 a) 단계의 추출이 10℃ 내지 80℃의 범위의 온도, 바람직하게는 25℃에서 수행되는 것인 방법.
제1항에 있어서, 상기 b) 단계에서 상기 용액이 추출된 식물 물질의 부피에 해당하는 부피로 진공하에서 농축되는 것인 방법.
제1항에 있어서, 상기 d) 단계에서, 폴리스티렌, 앰버라이트, 듀올라이트, XAD1l80수지로부터 선택된 수지상에서 크로마토그래피 분리가 수행되는 것인 방법.
제1항에 있어서, 상기 추출단계 a) 또는 뒤이은 정제 또는 농축단계 b)-d)에서, 황산화된 아미노산, 바람직하게는 시스테인이 첨가되는 것인 방법.
제11항에 있어서, 시스테인이 시나로피크린(cynaropicrin)의 화학량(stoichiometric amount)보다 10% 많은 양으로 첨가되는 것인 방법.
제1항 내지 제12항에 있어서, 아티초크 변종 시피노소 사르도도(Cynara scolymus var. Spinoso Sardo )가 사용되는 것인 방법.
제1항 내지 제12항에 있어서, 아티초크 변종 테마(Cynara scolymus var. tema)가 사용되는 것인 방법.
제1항 내지 제14항의 제조방법에 의해 얻을 수 있는 시나로피크린을 고함량 함유한 아티초크(Cynara scolymus ) 추출물.
제15항에 있어서, 5%보다 높은 시나로피크린 함량, 1:0.2 내지 1:0.8의 범위, 바람직하게는 1:0.6의 카페오일퀴닌산(caffeoylquinic acids)과 시나로피크린의 비율 및 20% 내지 60%의 범위, 바람직하게는 50%의 시나로피크린에 대한 루테올린 글리코사이드(luteolin glycosides)의 비율을 갖는 추출물.
제15항에 있어서, ω-3과 ω-6 다중불포화산이 풍부한 오일에서 제제화된 것인 추출물.
제17항에 있어서, 에노테라 비에니스(Enothera biennis) 오일로 제제화된 것인 추출물.
제15항에 있어서, 플락스 오일(flax oil)에서 제제화된 것인 추출물.
제15항 내지 제19항의 추출물을 포함하는 조성물.
제20항에 있어서, 정제, 당의정, 연질 젤라틴캡슐, 경질 젤라틴캡슐 및 셀룰로오스 캡슐의 제형인 조성물.
이상지질혈증(dyslipidemias), 동맥경화증 및 염증성 장질환(inflammatory bowel disorders)의 치료용 약제의 제조를 위한 제15항 내지 제19항의 상기 추출물의 용도.
제22항에 있어서, 과민성 대장 증후군의 치료를 위한 것인 상기 추출물의 용도.