MXPA05002081A - Extractos mejorados de psidium huajava, metodos para su obtencion y su uso para el tratamiento de padecimientos gastrointestinales. - Google Patents

Abstract

La invencion se relaciona con la obtencion de fitomedicamentos que contienen extractos estandarizados provenientes de la planta de guayaba (Psidium guajava L), particularmente de sus hojas (Psidii guajavae folium), utiles para el tratamiento de diversos padecimientos gastrointestinales relacionados con disfunciones del sistema nervioso asociado a la funcion gastrointestinal. Las propiedades anti-microbianas, anti-motilicas, espasmoliticas, anti-inflamatorias, anti-oxidantes y anti-secretoras de los fitomedicamentos de la invencion evaluados clinicamente, asi como su nula toxicidad, permiten su utilizacion en la clinica para el tratamiento de trastornos de la funcion gastrointestinal.

Description

Extractos mejorados de Psidium guajava, métodos para su obtención y su uso para el tratamiento de padecimientos gastrointestinales.

Campo de la invención. La presente invención se relaciona con la obtención de extractos de plantas de uso medicinal, específicamente a la obtención de extractos estandarizados de guayaba {Psidium guajava L.) y más particularmente a extractos estandarizados de las hojas de guayaba (Psidil guajavae folium) con la finalidad de obtener fitofármacos útiles para el tratamiento de padecimientos gastrointestinales.

Antecedentes de la invención. En los países en desarrollo, la diarrea aguda es la principal causa de muerte en niños pequeños. En todo el mundo, se han registrado más de 5 millones de muertes anuales en la población de niños menores a un año de edad durante la década de los años 80 . A pesar de que la terapia de rehidratación oral es el tratamiento más ampliamente recomendado para la mayoría de los casos de diarrea, éste trata principalmente la deshidratación2, por lo que en múltiples casos es necesario administrar drogas espasmol íticas que puedan usarse en combinación con ésta terapia. Sin embargo, éste tipo de drogas presentan efectos secundarios indeseables importantes cuando se utilizan en el tratamiento de la diarrea aguda3.

La búsqueda de nuevos productos medicinales con propiedades antidiarréicas es un tema de gran importancia en la farmacología contemporánea. No obstante el difundido uso que por décadas han tenido compuestos como la atropina, el caolín o la pectina, una cuidadosa evaluación de sus efectos sobre la función intestinal ha demostrado que su eficacia es muy relativa en el tratamiento de la diarrea4. Con el descubrimiento de los opiáceos y sus derivados sintéticos como el difenoxilato y la loperamida, se abrió un nuevo capítulo en la terapéutica de éste padecimiento. Sin embargo, debido a que estos productos pueden producir efectos tóxicos (por ejemplo sobre el sistema nervioso central de niños con diferentes grados de maduración en su barrera hematoencefálica5,6), la búsqueda de otros medicamentos para combatir la diarrea sigue siendo una tarea de importancia, quedando de manifiesto que la especificidad antidiarréica es el requisito que deben cumplir los nuevos productos3.

Para lograr lo anterior y evitar estos efectos adversos, una de las opciones es la obtención de productos derivados de especies de plantas utilizadas en la medicina tradicional para curar o tratar la diarrea aguda7.

Acorde a la medicina tradicional mexicana, cuando se administran oralmente infusiones obtenidas de Psidii guajavae folium a personas que cursan con diarrea, en estas se disminuye o elimina la incomodidad, el dolor abdominal y reduce significativamente la frecuencia de evacuaciones intestinales8,9.

El uso medicinal de la infusión acuosa preparada con hojas del árbol para aliviar desórdenes gastrointestinales es práctica común en México, originalmente a partir de la medicina azteca. Las propiedades terapéuticas de las hojas del árbol son descritas en detalle en gran cantidad de fuentes históricas sobre hierbas mexicanas durante los últimos 500 años. La planta es siempre referida al tratamiento de disenterías, alivio de cólicos, distensión abdominal y cura de la diarrea. La medicina tradicional mexicana recomienda el uso de las infusiones de hojas de guayaba para su administración oral, tres veces al día como un remedio efectivo para tratar la diarrea aguda, colitis, flatulencia y dolor gástrico10. De acuerdo con la información etnomédica disponible, no se han observado efectos secundarios en los pacientes por el uso de este remedio popular y los curanderos tradicionales consideran que es eficiente y seguro11.

El guayabo o árbol de la guayaba (Psidium guajava L., de la familia de las Mirtáceas) es originario de México, y sus hojas son usadas con fines medicinales desde épocas muy remotas dentro de la llamada medicina tradicional o popular. Su presencia es constante en todas las fuentes históricas sobre herbolaria indígena. Entre los antiguos mexicanos esta planta recibió el nombre náhuatl de xalxócotl que hace referencia al fruto que es "de cascara dura y ácida (xócotl) y arenoso {xalll)" dado su abundante contenido en pequeñas semillas, que parecen arenillas; la voz guayaba es de origen caribe y aunque no se conoce su etimología, es la que prevaleció después del descubrimiento de América para referirse al fruto de éste árbol que es muy estimado por sus frutos de aroma y agradable sabor acidulado.

Actualmente, la planta se distribuye en toda la franja tropical del mundo teniendo uso medicinal en lugares tan apartados de su origen como son China, India, Filipinas y África Media. En México y en otros países latino-americanos, el principal uso medicinal que se hace de sus hojas es como un remedio tradicional para combatir la diarrea. Se utilizan en forma de tisana o infusión que administrada por vía oral alivia el cólico intestinal y reduce los episodios de diarrea aguda.

El estudio científico de esta planta se inició en el siglo XX cuando se realizaron las primeras investigaciones, tanto en México, como en otros países. En México, se realizaron extensos estudios etnobotánicos entre 1985 y 1989 mediante una encuesta nacional etnobotánica en la que se constató que la hoja de guayabo era el recurso principal de la medicina tradicional, para aliviar padecimientos que cursan con diarrea. Esta información señala la elaboración de una tizana mediante la colocación de 1 a 2 gramos de hojas de guayaba secas o frescas en 250-300 ml_ de agua a temperatura de ebullición durante 5-8 min. La infusión obtenida se cuela, se endulza con azúcar o miel y se administra por la vía oral 3 a 4 veces al día durante dos o tres días. De acuerdo con la medicina tradicional, el remedio es eficaz para reducir los episodios de diarrea, siendo bien aceptado por los pacientes ya que carece de toxicidad o efectos indeseables7,12 En el ámbito científico, los efectos curativos observados de los extractos de Psidium guajava L. han sido estudiados en productos obtenidos a partir de la planta, dentro de los que se pueden mencionar los siguientes: a) Efecto anti-microbiano. La primera publicación formal de los estudios científicos de las propiedades de los extractos de hojas de guayaba la realizó Colliere, quien observó que el extracto acuoso inhibía el crecimiento de Staphylococcus aureus y de otros microorganismos patógenos cultivados in vitro . Mas tarde, El-Khadem y Mohamed14 observaron lo mismo con un extracto metanólico de la hoja y del cual aislaron e identificaron como posibles responsables de esta propiedad a dos derivados glucosilados del flavonoide quercetina, siendo denominados: aviculatina (quercetin-3-O-gentobiósido) y guajaverina (quercetin-3-?-a-L-arabinósido). Estudios posteriores comprobaron que los flavonoides presentes en la hoja son capaces de inhibir también el crecimiento in vitro de Escheríchia coli, Pseudomonas aeruginosa y Candida albicans, entre otros microorganismos15,16.

Se conoce que la propiedad anti-microbiana de los extractos de hoja del guayabo se debe a los efectos antibióticos de una mezcla de algunos de estos flavonoides (efecto sinérgico) en comparación a la de cada uno de ellos por separado. Se sabe que en la hoja del guayabo existen dos grupos de flavonoides: a) Los derivados de la quercetina (guajaverina, isoquercetina, hiperina, quercitrina, aviculatina), y b) Los derivados de la morina, (morin-3-O-alpha-L-lixopiranósido y morin-3-O-alpha-L- arabopiranósido).

La mezcla de quercetina, quercitrina y morina posee una potente actividad inhibitoria del crecimiento de los cultivos de los microorganismos mencionados y también inhibe el desarrollo de Salmonella enteritidis y Bacillus cereus; en éste último caso, el efecto es potenciado mediante la adición de otro flavonoide, la rutina17'18. Los extractos de Psidii guajavae folium que contienen mezclas de estos flavonoides son eficaces contra la flora patógena intestinal responsable de la mayor parte de los trastornos comunes de tipo gastrointestinal de origen infeccioso 9,20. b) Efecto anti-motílico intestinal. La explicación del efecto que el extracto de hoja de guayabo tiene sobre la motilidad intestinal es el resultado de estudios iniciados hace 20 años. En Malasia, donde las hojas del guayabo tiene el mismo uso popular como recurso anti-diarreico que en México, Lutterodt21 describió que el extracto metanólico inhibía la secreción gastrointestinal de acetilcolina en el intestino aislado del cobayo, mecanismo que propuso para explicar el efecto anti-diarreico. Se postuló que la quercetina, siendo el principal flavonoide detectado en el extracto, podría ser la responsable del efecto. Sin embargo, Fanning y colaboradores22 ya habían reportado que la quercetina, obtenida de otras plantas, inhibía las contracciones inducidas en el íleo aislado de cobayo. Por otro lado Macander23 y Capasso24 también concluyeron que la quercetina y algunos otros flavonoides inhibían la contracción muscular del íleon del cobayo in vitro.

En estudios previos realizados por los solicitantes25 a partir del estudio de los componentes de los extractos tanto acuoso como metanólico de Psidii guajavae folium usando un modelo experimental de perfusión ¡ntra-luminal del íleon de cobayo in vitro, se demostró que la fracción rica en flavonoides era la responsable de los efectos antiespasmódico e inhibidor del peristaltismo intestinal. En otro estudio, Meli26 describió que la quercetina administrada intra-peritonealmente (50mg/Kg) a los ratones de laboratorio inhibía el tránsito intestinal de manera semejante al verapamil, un medicamento bloqueador de los canales del Ca2+.

Estudios previos realizados por los solicitantes mostraron que en el extracto metanólico de la hoja y en la infusión de uso popular, existen cinco flavonoides glucosilados derivados de la quercetina (quercetin-3-O-a-L-arabinósido, quercetin-3-0-p-glucósido, quercetin-3-?-ß-D-galactósido, quercet¡n-3-0- -L-ramnósido y quercetin-3-0-gentiobiósido) que al ingresar en el tracto digestivo se hidrolizan, liberándose la aglicona denominada quercetina, que es el principio activo anti-motílico y anti-espasmódico del extracto27. También se describió el mecanismo de acción de la quercetina, mostrando que actúa localmente como antagonista del Ca2+ inhibiendo la incorporación del ión en la fibra lisa muscular intestinal, lo que se traduce en una disminución temporal del peristaltismo. Este mecanismo explica también la acción espasmolítica intestinal de esta sustancia que bloquea el flujo de los iones de Ca2+ en la fibra muscular intestinal previamente contraída con diversos agentes28,29. Gálvez30 reportó los mismos resultados al investigar el efecto de la quercetina sobre la contracción intestinal utilizando otros modelos experimentales y corroborando que la sustancia actúa como un antagonista selectivo del Ca2+. Posteriormente, Hammad y Abadía31 definieron que la potencia espasmolítica de los flavonoides del tipo de las pentahidroxiflavonas (como es el caso de la quercetina), depende de la presencia en la molécula de grupos oxihidrilo en las posiciones C-3 y C-5 y de su ausencia en la posición C-2', lo que en el caso de los productos de hoja de guayaba convierte a la quercetina en el principio espasmolítico con mas actividad, seguido en potencia por otro flavonoide también presente en la hoja, la morina que como se ha dicho, siendo un potente antimicrobiano, también presenta cierta actividad espasmolítica intestinal. Lutterodt32 describió que el extracto acuoso de Psidii guajavae folium (administrado por la vía oral) reducía el síndrome diarreico agudo provocado con Microlax® en las ratas de laboratorio y que, además del efecto antimotílico, asociado a la quercetina, existía una acción intestinal anti-secretora, que explica la reabsorción de agua que se produce en los animales tratados con extracto de hojas de guayaba. Poco después, Martín33 reportó que la quercetina también tenía efecto sobre la secreción gástrica reduciendo la gastritis y la formación de úlceras gastroduodenales en los animales de experimentación. Ocete34 describió la acción anti-inflamatoria, efecto atribuible al flavonoide morina, estudiada en la colitis aguda inducida en la rata. c) Efecto antioxidante. La quercetina ha pasado a formar parte de los flavonoides de origen natural con alto potencial farmacológico en los procesos patológicos relacionados con el estrés oxidativo de las células. La actividad antioxidante de la quercetina ha sido ampliamente difundida y está directamente relacionada con la presencia en la molécula de los grupos oxihidrilo en los anillos A y B, con un doble enlace en la posición 2-3 y el oxidrilo en la posición 335. Los estudios en diversos modelos in vitro, señalan que este compuesto posee propiedades antioxidantes y de captador de radicales libres, inhibe la peroxidación lipídica y la oxidación en la membrana mitocondrial36,37'38,39. En estudios con animales se ha reportado que la quercetina en concentraciones altas, (250 mg/Kg de peso) administrada por la vía oral, se absorbe al torrente sanguíneo en donde se transforma en quercetin-3-O-beta-D-glucurónido, compuesto que actúa como antioxidante de las lipoproteínas de baja densidad plasmáticas40,41. d) Toxicidad. Se han realizado estudios toxicologicos preclínicos con los extractos de Psidii guajavae folium, determinándose la dosis letal media (LD50) en ratones suizos (OFI) y la toxicología alternativa (clases tóxicas agudas) en ratas Wistar. También se ha realizado la evaluación genotóxica de los extractos en un sistema in vitro de ensayo de inducción de segregación somática a corto plazo en el hongo Aspergillus nidulans y un ensayo in vivo en la prueba de inducción de micronúcleos en médula ósea de ratón. Los resultados toxicológicos no muestran muertes en ninguno de los dos modelos experimentales en el rango de la dosis empleada, que fue de hasta 2000 mg/Kg de peso corporal. Los resultados histológicos no presentan daños atribuibles a toxicidad del material vegetal probado. En el estudio con Aspergillus los resultados demuestran la ausencia de efecto genotoxico de los extractos así como en el sistema de inducción de micronúcleos en médula ósea de ratón. Estos estudios concluyen que los extractos de hojas de guayabo carecen de efecto tóxico y que son seguros para su utilización en la medicina42,43.

Debido a lo anterior, y basándose en la literatura biomédica publicada que soporta las propiedades antidiarréicas de la guayaba, algunos productos herbales han sido desarrollados y comercializados para su administración oral en el tratamiento de desórdenes gastrointestinales44.

En éste sentido, Robinson describe la obtención de extractos acetónicos a partir de los frutos del guayabo para el tratamiento de cáncer en animales y humanos45. Los extractos se obtienen mezclando azúcar con el fruto y sometiendo la mezcla a ebullición para posteriormente adicionar acetona y dejar reposar durante 12 horas; posteriormente la mezcla resultante es filtrada y calentada al vacío para concentrarla y eliminar la acetona. El extracto obtenido es administrado por vía oral en volúmenes de 30 mi tres veces al día, administrando un promedio de 1000 a 3000 mi del extracto dependiendo del tipo de afección cancerosa a tratar en el paciente. A pesar de que el documento muestra datos de la efectividad del extracto en animales, éste no muestra estudios clínicos hechos en pacientes para evaluar su efectividad terapéutica y su toxicidad.

Por otro lado, Kiyoshima describe la obtención de extractos de Psidii guajavae folium para el tratamiento de infecciones virales, tales como influenza46. Los extractos son obtenidos con disolventes orgánicos hidrofílicos tales como alcoholes en un proceso de extracción por autoclave, caracterizando el extracto por la presencia de una fracción de peso molecular de 12,000. El extracto es administrado como tal en dosis de 15 mg por dosis sólida de manera muy frecuente. A pesar de que el extracto tiene efecto en retardar la infección con el virus, el documento no muestra que el extracto administrado contiene cantidades determinadas y estandarizadas de los principios activos contenidos en el mismo.

Ishihara describe la obtención de extractos etanólicos a partir de Psidii guajavae folium como inhibidor en la producción de peroxilípidos y como agente antioxidante. Sin embargo, el proceso de obtención somete a la materia prima a etapas de extracción con altas presiones (1.5 a 5 atmósferas) y a calentamiento47. El extracto descrito no tiene aplicación terapéutica efectiva por sí solo, ya que se utiliza en combinación con extractos de semillas de uva y piñas de pino para observar su efecto. Así mismo no se reportan cantidades determinadas de los principios activos del extracto obtenido.

Extractos más simples han sido obtenidos a partir de Psidii guajavae folium para utilizarse como bebidas o tés48, sin embargo, no se reporta alguna aplicación terapéutica de tales extractos.

Sin embargo, y a pesar de los esfuerzos anteriormente realizados para la obtención de fitofármacos derivados de Psidium guajava L, estos productos no son considerados drogas oficiales debido a que aún no han sido evaluados clínicamente en pacientes y no contienen cantidades estandarizadas de sus principios activos.

Por lo anterior, es importante desarrollar drogas con multiplicidad de efectos convenientes para el tratamiento de la enfermedad diarreica aguda que puedan usarse en combinación con la terapia de rehidratación, con una evaluación clínica, que no presenten efectos tóxicos o secundarios indeseables para el paciente y que puedan administrarse de manera segura y controlada.

Objetivos de la invención. Es uno de los objetivos de la presente invención proporcionar extractos estandarizados de Psidium guajava L. para el tratamiento de trastornos gastrointestinales.

Es otro de los objetivos de la presente invención proporcionar extractos estandarizados de Psidii guajavae folium para el tratamiento de trastornos gastrointestinales.

Otro de los objetivos de la presente invención, es el proporcionar extractos estandarizados de Psidium guajava L. que no sean tóxicos para el paciente y que permitan aliviar los diferentes síntomas que presentan las enfermedades gastrointestinales.

Otro de los objetivos de la presente invención, es el proporcionar extractos estandarizados de Psidium guajava L. mediante la normalización de su concentración de flavonoides para el tratamiento de trastornos gastrointestinales.

Es otro de los objetivos de la presente invención, el proporcionar extractos estandarizados de Psidium guajava L. para la obtención de fitomedicamentos que puedan ser administrados de manera controlada en diversos regímenes terapéuticos.

Otro de los objetivos de la presente invención, es el proporcionar fitomedicamentos para el tratamiento de desórdenes gastrointestinales conteniendo extractos estandarizados de Psidium guajava L. como agente terapéutico.

Es otro de los objetivos de la presente invención, el proporcionar fitomedicamentos conteniendo extractos estandarizados de Psidium guajava L. en diversas presentaciones farmacéuticas para su administración controlada en pacientes.

Otro de los objetivos de la presente invención, es el proporcionar métodos eficientes y de bajo costo para la obtención de extractos estandarizados de Psidium guajava L. que conserven su actividad terapéutica.

Otro de los objetivos de la presente invención, es el proporcionar métodos eficientes que permitan estandarizar la concentración de principios activos de extractos de Psidium guajava L mediante la normalización de su concentración de flavonoides.

Otro de los objetivos de la presente invención, es el proporcionar un método de tratamiento efectivo para el síndrome de intestino irritable utilizando extractos estandarizados de Psidium guajava L como agente terapéutico.

Otro de los objetivos de la presente invención, es el proporcionar un método de tratamiento efectivo para controlar y aliviar los síntomas del síndrome de colon irritable, el síndrome diarreico agudo, la gastritis y la colitis nerviosa utilizando extractos estandarizados de Psidium guajava L. como agente terapéutico.

Breve descripción de las figuras: Figura 1. Se muestran las estructuras químicas de los flavonoides derivados de quercetina. Figura 2. Se muestra una gráfica donde se observa la concentración de quercetina encontrada en hojas de plantas de Psidium guajava L. localizadas en diversas partes de México y en diferentes estaciones del año. Se observan plantas de los Estados de Michoacán (1), Querétaro (2), de México (3) y Aguascalientes (4) durante el Invierno (A), Primavera (B), Verano (C) y Otoño (D). Las barras mostradas con asterisco muestran los promedios más altos resultantes después de un análisis estadísticos ANOVA de 2 vías. Figura 3. Se muestra una gráfica que ilustra las diferencias entre grupos con síndrome diarreico agudo bajo ensayo clínico, con respecto a la intensidad de dolor abdominal o cólico utilizando el fitomedicamento de la invención. Se observa el grupo tratado con el fitomedicamento al inicio del estudio (Inicio), al primer día (1 día), segundo día (2 día) y tercer día (3 día), comparado con el grupo control con placebo (C).

Descripción detallada de la invención. Las propiedades antimicrobiana, inhibidora de la motilidad intestinal, espasmolítica, anti-inflamatoria y anti-secretora de los flavonoides presentes en Psidii guajavae folium fundamentan la utilización de ésta droga vegetal para el desarrollo de fitofármacos para el tratamiento de los trastornos de la hipermotilidad intestinal. Los estados agudos de diarrea, dolores cólicos e inflamación intestinal son frecuentes en la sociedad urbana en todos los países y, que si bien, son médicamente considerados "síndromes autolimitantes" atribuidos a la ingesta de comida de mala calidad, al estrés en la vida actual y a los excesos en el comer y beber, representan un problema de salud para el cual no se cuenta con suficientes medicamentos seguros y sin efectos colaterales.

De acuerdo con la reglamentación internacional establecida para ' el desarrollo de fitofármacos por la Organización Mundial de la Salud49, de entre los numerosos requisitos que debe cumplir un medicamento de éste tipo, destacan: • La fundamentación científica del uso tradicional de la planta con los estudios farmacológicos y químicos que avalen sus propiedades medicinales, • La estandarización y control de la droga vegetal derivada de la planta medicinal para su comercialización, y • La estandarización química de los principios activos en el medicamento propuesto que permita su dosificación para su ensayo en la clínica.

En la presente solicitud se presenta un fitofármaco a base de extractos estandarizados obtenidos de Psidii guajavae folium (hojas de guayaba) que reúne estudios de tipo toxicológico y de estandarización establecidos para los fitofármacos, basados en estudios clínicos en pacientes. El fitofármaco de la presente invención es un medicamento seguro, ya que no presenta toxicidad, por lo que puede ser administrado a pacientes con diversos padecimientos intestinales, como por ejemplo síndrome de colon irritable, síndrome diarreico agudo, gastritis y colitis nerviosa, así como síndrome diarreico agudo.

El fitofármaco de la invención, es muy útil para el tratamiento de las disfunciones más comunes del aparato gastrointestinal, dentro de las cuales se encuentra la diarrea. La combinación de efectos que producen sus flavonoides, es una característica ventajosa con respecto de otros medicamentos, ya que únicamente con la aplicación del fitofármaco, pueden tratarse disfunciones gastrointestinales que provocan diarrea, cólico e inflamación abdominal que requieren un manejo sintomatológico y sin necesidad de aplicar diversos medicamentos para el tratamiento de cada uno de estos síntomas clínicos.

Por otra parte, el fitofármaco descrito en éste documento, representa un producto de origen natural diseñado como coadyuvante en el tratamiento de las afecciones intestinales autolimitantes más comunes, el cual ofrece beneficios importantes por su efecto terapéutico completo y por la ausencia de efectos adversos en los pacientes. Así mismo su administración y dosificación controlada, y su eficiente efecto terapéutico en los pacientes con afecciones intestinales, permite utilizarlo en tratamientos médicos convencionales.

Hasta antes de la presente invención, no existían extractos de Psidium guajava L, particularmente de Psidii guajavae folium que contuvieran cantidades determinadas y estandarizadas de los principios activos responsables del efecto terapéutico propio del extracto. Esta característica propia del extracto de la invención permite su utilización para la obtención frecuente y controlada de composiciones farmacéuticas que lo contengan, permitiendo controlar con ello la cantidad de principios activos que se encuentren en dichas composiciones. En consecuencia, es posible obtener fitomedicamentos con dosis predeterminadas y conocidas que puedan ser administrados por diferentes vías al paciente en volúmenes adecuados. Así mismo, con la administración de éstos fitomedicamentos, se cuenta con la certeza de que el paciente recibe cantidades controladas y constantes del fitomedicamento para diferentes regímenes de tratamiento, según el padecimiento gastrointestinal que se esté tratando. Aunado a lo anterior, éste fitomedicamento permite al médico tratante diseñar tratamientos controlados a los pacientes que sufren trastornos gastrointestinales, ya que es posible la administración de dosis controladas del medicamento y dar seguimiento adecuado al tratamiento.

Así mismo, el extracto estandarizado de la invención permite combinarse con facilidad con múltiples compuestos útiles para la fabricación de diversas formas farmacéuticas convencionales, ya sea en polvo o líquido dependiendo de las necesidades de administración y régimen terapéutico. El extracto conserva sus propiedades farmacológicas, independientemente del proceso al que sea sometido para la obtención de formas farmacéuticas convenientes, lo que permite una gran versatilidad en su manejo.

El extracto contiene cantidades preestablecidas de sus principios activos (flavonoides glucosilados) estandarizadas como equivalentes de quercetina, utilizando para ello la determinación cuantitativa de la molécula de quercetina en el extracto, por ejemplo mediante cromatografía de líquidos de alta eficiencia (HPLC). Debido a que el efecto terapéutico observado de los extractos de Psidium guajava L. es debido a la presencia de diversos glucósidos flavonoides27 que tienen en común la molécula de quercetina (ver figura 1), el extracto de la invención posee cantidades precisas de estos glucósidos flavonoides que en su conjunto ejercen la acción terapéutica, medida como concentración de quercetina total en el extracto. Para efectos de la invención, el extracto descrito aquí posee una concentración de 4 a 6 mg de principios activos, medida como concentración de quercetina total, por cada gramo de extracto total obtenido, medido principalmente como extracto seco. Los principios activos contenidos en el extracto de la invención corresponden a los glucoflavonoides que se encuentran normalmente en Psidii guajavae folium (ver figura 1), tales como guajaverina (Quercetin-3-O-a-L-arabinosa), isoquercitrina (Quercetin-3-0- -D-glucosa), hiperina (Quercetin-3-0-p-D-galactosa), quercitrina (Quercetin-3-0-p-L-ramnosa) y aviculatina (Quercetin-3-O-gentobiósido), así como a los derivados de la morina, morin-3-O-a-L-lixopiranósido y morin-3-O-a-L-arabopiranósido. En relación con la quercetina, esta molécula ha sido utilizada como ingrediente para la obtención de múltiples composiciones antioxidantes50'51, suplementos alimenticios52,74, nutricionales53, o bien para la obtención de derivados con actividad terapéutica determinada54. Múltiples aplicaciones terapéuticas de la quercetina y sus derivados han sido reportadas para el tratamiento de osteoporosis55, alergias54, daño neurona] y enfermedades relacionadas con el receptor 5HT1A (Alzeheimer, por ejemplo)56 y artritis reumatoide57.

A pesar de que la molécula de quercetina como tal, es la molécula que posee una mayor actividad anti-espasmódica ¡n vitro en comparación con los flavonoides contenidos en el extracto27, la baja absorción que presenta este compuesto es una limitante importante para su administración por sí solo, sumado a su baja solubilidad en soluciones acuosas bajo condiciones fisiológicas. En este sentido, la quercetina solo se absorbe en 1% de las dosis administradas del compuesto por vía oral; así mismo la captación celular efectiva del compuesto requiere el uso de disolventes miscibles en agua, tales como el dimetilsulfóxido54.

Para el caso del extracto de la Invención, los glucósidos flavonoides presentes en éste se hidroiizan en el tracto digestivo liberándose su aglicona, la molécula de quercetina que es el principio biológicamente activo27. Así mismo, los flavonoides contenidos en el extracto (quercetin-3-0- -glucósido, por ejemplo) facilitan notablemente la absorción de la quercetina en la pared del intestino delgado58, permitiendo la consecuente acción farmacológica observada del extracto. Las altas concentraciones de diversos glucósidos flavonoides derivados de quercetina contenidos en el extracto (principalmente quercetin-3-?-ß-D-glucósido y quercetin-3-0-3-D-galactósido, ver tabla 1), permiten que los principios activos lleguen a su sitio de acción (tracto intestinal), ejerciendo su actividad farmacológica de manera local después de su administración.

Como puede observarse en la tabla 1 , la proporción de cada uno de los glucósidos flavonoides presentes en el extracto de la invención se conserva con respecto a las proporciones detectadas en la materia prima a partir de la cual se obtiene el extracto. Esto demuestra que con los métodos de obtención del extracto descritos en la presente solicitud, pueden obtenerse extractos sin variación significativa en la proporción de sus principios activos a partir del material vegetal elegido de la planta, con lo cual el efecto terapéutico originalmente observado en productos derivados de Psi ii guajavae folium se conserva en el extracto aquí descrito. Con ello, es factible obtener múltiples composiciones farmacéuticas en diferentes presentaciones a partir de los extractos concentrados de la invención.

Una composición farmacéutica utilizando el extracto de la invención como agente terapéutico, se puede preparar de acuerdo con cualesquiera de los métodos y procedimientos convencionales. En la preparación de la composición, el ingrediente activo se mezcla o se diluye con un portador, o se incluye preferiblemente dentro de un portador, que puede estar en forma de cápsula, bolsa o de otro envase. Cuando el portador sirve como diluyente, puede ser un material sólido, semisólido o líquido que actúa como un vehículo, un excipiente o medio para el ingrediente activo. Así, las composiciones pueden estar en forma de tableta, pildora, polvo, bolsa, elixir, suspensión, emulsión, solución, jarabe, aerosol, cápsula suave y dura de gelatina, solución inyectable estéril, polvo empaquetado estéril y similares.

Los ejemplos farmacéuticos de portadores, de excipientes y de diluyentes convenientes son lactosa, dextrosa, sacarosa, sorbitol, manitol, almidones, goma de acacia, alginatos, gelatina, fosfato de calcio, silicato de calcio, celulosa, metil celulosa, celulosa microcristalina, polivinilpirrolidona, agua, benzoatos hidroximetílicos, benzoatos hidroxipropílicos, talco, estearato de magnesio y aceite mineral. La composición puede incluir, además, rellenadores, agentes anti-aglutinantes, agentes saborizantes, agentes lubricantes, agentes humectantes, emulsificantes, preservativos y similares. Las composiciones farmacéuticas de la invención se pueden formular para proporcionar liberación rápida, sostenida o retrasada de los ingredientes activos después de su administración a un mamífero empleando cualesquiera de los procedimientos y/o métodos bien conocidos en el arte.

La composición farmacéutica de la presente invención contiene una cantidad de 1 a 5 mg de flavonoides glucosilados medida como concentración de quercetina total, por cada 400 a 500 mg de composición, pero preferiblemente de 1 a 4 mg de dichos flavonoides. En cuanto a las diversas presentaciones farmacéuticas que pueden ser obtenidas utilizando el extracto, la concentración de los principios activos puede variar dentro de los rangos mencionados dependiendo de la presentación farmacéutica de que se trate.

Al igual que para el extracto de la invención, las composiciones farmacéuticas que lo contienen son estables al almacenaje a temperatura ambiente por lo menos durante un periodo de 4 meses, conservando su concentración de principios activos y efecto terapéutico. Esto permite eliminar los altos riesgos de contaminación que presentan los extractos acuosos de Psidium guajava L. ó Psidii guajavae folium comúnmente obtenidos de manera tradicional.

La composición de la invención puede ser administrada a través de la vía oral. Una dosis del extracto equivalente a 0.01 a 0.05 mg de glucósidos flavonoides por Kg de peso corporal es adecuada para administrarse en pacientes humanos, sin embargo se prefiere una dosis del extracto equivalente a 0.01 a 0.02 mg de glucósidos flavonoides por Kg de peso corporal; dichas dosis pueden administrarse una sola vez o diariamente en dosis divididas hasta la completa desaparición de los síntomas clínicos. La cantidad exacta de la composición que se administrará al paciente puede variar según su edad, sexo, peso corporal, severidad de la enfermedad y la formulación que vaya a ser administrada.

A pesar de que se han reportado en la literatura varios tipos de extractos obtenidos a partir de diversas partes de Psidium guajava L. así como su aplicación en terapia44,45,46,47, ninguno de ellos constituyen extractos con concentraciones controladas de principios activos conocidos (extractos estandarizados), con lo cual no es posible administrarlos a pacientes de manera constante y controlada. Así mismo esto impide determinar de manera certera en la clínica, la cantidad terapéuticamente efectiva de los extractos a aplicarse en pacientes con relación a los principios activos, con lo cual no es posible diseñar tratamientos terapéuticos efectivos que utilicen dichos extractos y dar un seguimiento adecuado del tratamiento. Por otra parte los extractos que se obtienen se administran al paciente en volúmenes considerables y de manera muy frecuente (varias veces al día), con lo cual no es posible mantener un régimen de administración confiable y de aplicación general para todo tipo de pacientes. La administración frecuente de estos extractos, implica una baja concentración de principios activos en el mismo, con lo cual es complicado con su administración el mantener los niveles terapéuticos adecuados de flavonoides en los pacientes que reciben el tratamiento.

El extracto de la invención es útil para aliviar los síntomas asociados a diversos padecimientos gastrointestinales relacionados con disfunciones del sistema nervioso entérico asociado a la función gastrointestinal, como por ejemplo los síndromes de intestino irritable, de colon irritable y el diarreico agudo, así como la gastritis y la colitis nerviosa.

En el caso del síndrome de intestino irritable (IBS, por sus siglas en inglés), las manifestaciones clínicas de este padecimiento, se deben a un estado disfuncional del sistema nervioso intestinal (entérico) producido por diversos factores, observándose: • Un intenso cólico intestinal, resultado de la contracción sostenida de la musculatura lisa intestinal, • Episodios de diarrea con estados de consecuente deshidratación temporal, debidos a la hiperactividad del peristaltismo intestinal y la pérdida de líquidos por mala absorción y secreción activa, e • Inflamación intestinal que acompaña a una moderada infección provocada por la flora propia (endógena) del intestino constituida habitualmente por E. coli, Staphylococcus aureus y otros microorganismos.

Debido a que el extracto de la invención carece de toxicidad, tiene efecto primordialmente local sobre el tejido intestinal y su acción terapéutica conjunta cuatro efectos benéficos y complementarios entre sí, pueden utilizarse fitofármacos conteniendo el extracto como un agente terapéutico conveniente para el tratamiento de las enfermedades gastrointestinales anteriormente mencionadas. En el caso por ejemplo, del síndrome diarreico agudo, el extracto es muy útil ya que: • Posee un efecto espasmolítico, con lo cual es eliminado el cólico intestinal, • Tiene efecto anti-secretor, lo que permite la reabsorción de líquidos, evitando la deshidratación, • Tiene acción antioxidante, con lo cual desinflama el tejido intestinal, y · Tiene acción antimicrobiana sobre la flora oportunista y patógena intestinal.

En consecuencia, con la administración del extracto estandarizado de la invención las disfunciones descritas pueden ser tratadas de manera conveniente, sin necesidad de administrar múltiples medicamentos para aliviar cada uno de los síntomas y se puede administrar en volúmenes bajos logrando el efecto terapéutico deseado. El efecto de regulación neuroentérica que proporciona el fitomedicamento de la presente invención, permite el tratamiento de las enfermedades mencionadas de manera -muy eficiente y completa.

La eficiencia del fitomedicamento de la presente invención como agente terapéutico, fue evaluada en grupos de pacientes humanos con síndrome diarreico agudo. La administración oral a los pacientes bajo tratamiento de 400 a 500 mg del fitomedicamento de la invención cada 8 horas y durante tres días (conteniendo una concentración total de flavonoides de 1 mg/500mg del fitomedicamento, estimada como quercetina total), dió como resultado diferencias significativas respecto al grupo control desde el primer día de tratamiento, en el número de episodios de diarrea y en la intensidad del cólico y del dolor abdominal (ver figura 3). La evolución clínica del grupo tratado con el fitomedicamento de la invención fue mucho más rápida y eficaz, fue bien tolerado por todos los pacientes y no produjo efectos colaterales de ningún tipo.59 En un estudio realizado por Wei 60 sobre la utilidad en la clínica de los extractos de Psidü guajavae folium en el tratamiento de la enteritis rotaviral en niños, se observó una recuperación de los pacientes tratados más rápida (87%) en comparación con el grupo control (58%) y una conversión negativa del antígeno del rotavirus humano (HRV). Sin embargo, los extractos utilizados no estaban estandarizados, por lo que no se puede determinar el régimen de dosificación más adecuado de los mismos para continuar con el tratamiento.

A diferencia de lo anterior, los estudios clínicos realizados con el extracto estandarizado de la invención permiten determinar con certeza las dosis adecuadas a administrarse a pacientes con trastornos gastrointestinales, permitiendo diseñar regímenes terapéuticos adecuados. Así mismo, los pacientes tratados fueron únicamente niños con afecciones intestinales virales específicas, mientras que los estudios clínicos del extracto de la invención se realizaron en pacientes de diferentes edades con síndrome diarreico agudo. Los resultados obtenidos del estudio clínico con el extracto de la invención, indican que éste puede aplicarse como fitomedicamento para el tratamiento de enfermedades intestinales bajo regímenes de dosificación precisos y controlados.

En el caso de los niños pequeños, los síntomas de la enfermedad diarreica aguda no son tomados en consideración durante el tratamiento de la enfermedad, debido a la imposibilidad que tienen estos pacientes para describirlos. En estos casos, los procedimientos médicos e indicaciones principales que se realizan para su tratamiento están dirigidos para evitar el riesgo de deshidratación. En el caso de los pacientes adultos, la estrategia de tratamiento es la opuesta en la práctica médica; en este caso, el incremento en las evacuaciones diarreicas pasa a ser un síntoma secundario a tratar, debido a que la inflamación abdominal y el cólico son la principal afección a eliminar en el tiempo más corto posible, para lo cual se utilizan analgésicos, espasmolíticos y antiinflamatorios.

El fitomedicamento de la invención puede ser utilizado de manera segura y eficaz para aliviar los síntomas asociados a la enfermedad diarreica aguda, tales como dolor abdominal y cólico.

Hasta antes de la presente invención, no existía un fitomedicamento semejante que proporcionara los efectos terapéuticos antes mencionados en un mismo producto. Por ejemplo, el tratamiento del síndrome de colon irritable se realiza de manera convencional con la administración de varios medicamentos cuya acción es parcial, administrándose un antidiarreico, un antiinflamatorio, antagonistas de Ca+, etc.

El extracto de la invención posee en común con los productos que habitualmente se utilizan para aliviar la diarrea (Loperamida por ejemplo, y otros), un efecto como antagonista de iones calcio, pero se diferencia de éstos por carecer de toxicidad y por poseer un efecto anti-inflamatorio, antimicrobiano y antisecretor, propiedades que en conjunto permiten su eficacia y seguridad terapéutica.

A pesar de que se han utilizado extractos acuosos estandarizados de otras plantas (Indigofera arrecía) para aliviar úlcera péptica en dosis de 2.5 a 5 mg/Kg de peso corporal, mostrando efectos de inhibición del tránsito intestinal y disminuyendo el volumen y acidez de las secreciones gástricas básales61, estos extractos no exhiben el conjunto de efectos que muestran los extractos de P. guajava L. de la invención.

En cuanto al método de obtención del extracto de la invención, este permite la obtención de extractos hidroalcohólicos de Psidii guajavae folium útiles como recurso antidiarreico, dada la confirmación de las propiedades antimicrobianas, espasmolíticas, anti-motílicas, anti-secretoras y anti-inflamatorias de los flavonoides contenidos en ella, así como los resultados arrojados por el extracto en pruebas clínicas hechas en pacientes.

De manera general, el extracto de la presente invención se prepara a partir de hojas seleccionadas secas y molidas de Psidium guajava L. con una concentración mínima de flavonoides (estimada como quercetina total) en el material vegetal no menor de 5 a 8 mg por gramo de material vegetal. El producto obtenido es puesto en contacto con etanol por un periodo de 24 a 48 hrs. a una temperatura de 30 a 50°C; el extracto obtenido se filtra, se concentra por destilación del disolvente, se mezcla con excipientes convenientes y es secado mediante un proceso de aspersión. Este extracto es estandarizado en su contenido de flavonoides glucosilados derivados de quercetina, cuantificados como equivalentes del flavonoide quercetina a una concentración de 4 a 6 mg por gramo de extracto total, mediante la adición de cantidades convenientes de excipientes para obtener finalmente un pulverizado mediante secado por aspersión. El pulverizado es mezclado con excipientes farmaceúticamente aceptables para posteriormente obtener las presentaciones farmacéuticas más convenientes, conteniendo concentraciones determinadas de los principios activos, ya sea por volumen o peso.

En una de las modalidades preferidas de la invención, la mezcla del pulverizado con el excipiente se comprime para obtener tabletas con un peso de 400 a 500 mg con una concentración de 1 a 4 mg de flavonoides glucosilados por tableta. Las tabletas obtenidas se administran por vía oral para el tratamiento de desórdenes gastrointestinales.

El proceso de la invención permite obtener extractos de Psidium guajava L con concentraciones tan adecuadas de flavonoides, que posteriormente es posible estandarizar la concentración de estos en el extracto con la finalidad de que puedan administrarse dosis efectivas con el efecto terapéutico adecuado a pacientes bajo tratamiento.

Al igual que para la presente invención, diversos procedimientos generales de obtención de extractos de diversas plantas han sido reportados. Ejemplos de éstos son aquellos que involucran la difusión de las sustancias bioactivas a extraer de la planta en fases de extracción líquido/vapor bajo condiciones controladas de temperatura y presión62, o bien utilizando la extracción supercrítica de fluidos mediante solventes fluorocarbonados y posterior separación por cromatografía63 .

Sohn64 describe la obtención de un derivado de quercetina (quercetina 3-?-ß-?-glucurónido) a partir de la planta Rumex aquaticus y su aplicación para el tratamiento de gastritis y esofagitis reflujante. Para su obtención se obtienen inicialmente extractos crudos de hojas de la planta mediante la mezcla de hojas secas con alcoholes de 1 a 5 carbonos a una temperatura de 40 a 60°C durante un periodo de 1 a 24 hrs., para posteriormente centrifugarse, filtrarse y concentrarse mediante presión reducida. El extracto obtenido es refrigerado hasta su utilización. Posteriormente el extracto crudo es mezclado con un disolvente no polar para remover grasas y sujeto a cromatografía con alcoholes de 1 a 5 carbonos para obtener el derivado de quercetina con un proceso de cristalización. Con dicho proceso pueden obtenerse 2.1 g del compuesto por cada 4 Kg de hojas y de manera general se describe que es factible administrar de 0.1 a 500 mg/Kg de peso por día del compuesto, sin precisar las dosis adecuadas a administrarse para pacientes humanos. Dicho documento solo muestra el efecto del compuesto aislado y caracterizado únicamente en ratas y solo se demuestran los efectos farmacológicos en tejidos extraídos de los animales sacrificados. Así mismo, mediante el método descrito no se obtienen extractos completos de la planta.

Feng65 describe la obtención de extractos de la planta Loranthus que posee quercetina y avicularina para la obtención de composiciones con efectos antihistamínicos para el tratamiento de alergias y reacciones de hipersensibilldad. El proceso de obtención del extracto involucra la mezcla de diversas partes de la planta con un determinado tamaño de partícula con etanol al 95% y un posterior calentamiento a 80°C, filtración de la solución resultante y tratamiento del filtrado con calor mediante vapor hasta la obtención de una pasta cremosa que finalmente es secada por métodos convencionales. El polvo obtenido es reconstituido con agua y la solución es purificada mediante cromatografía utilizando resinas específicas hasta la obtención de una pasta cremosa que es finalmente secada para la obtención de polvo. Sin embargo, en dicho documento no se muestran los efectos terapéuticos en pacientes humanos, ni la obtención de composiciones terapéuticas para ser aplicadas como tales en la terapia de estas enfermedades. Así mismo, el método de obtención es complicado y de rendimientos regulares (150g de extracto por cada 5Kg de planta).

Extractos enriquecidos en flavonoides a partir de polen de Typhae han sido obtenidos mediante la mezcla del material biológico con agua y posterior extracción de impurezas con un disolvente de baja polaridad (éter, alcanos, esteres) para finalmente adicionar un disolvente polar (butanol, isopropanol o cloroformo). El extracto posee quercetina, kaempferol e ¡sorhamnetina, así como algunos derivados de estas moléculas y se menciona que el extracto es útil para el tratamiento de enfermedades que inducen una pobre circulación de la sangre66. Sin embargo, los extractos obtenidos no contienen cantidades determinadas de los principios activos y el método de obtención no permite obtener extractos homogéneos.

Stander67 reporta la obtención de extractos de Barosma betuliona para el tratamiento de condiciones hipertensivas o inflamatorias. El extracto posee quercetina, rutina difenoles y diosmina, obtenido mediante la obtención de fracciones obtenidas por destilación a partir de aceite de la planta. A pesar de la efectividad mostrada, los volúmenes administrados a los pacientes son altos (250 mi por dosis).

Se han obtenido extractos acuosos de la planta Brickellia californica ricos en flavonoides dentro de los que se incluye la quercetina68. Los extractos son obtenidos a partir de la combinación de hojas y tallos de la planta, los cuales se mezclan con agua calentando hasta ebullición. El extracto obtenido es rico en luteolina y se administra como tal a pacientes con diabetes, observándose reducción en sus niveles de glucosa en sangre semanas después; sin embargo no se reportan concentraciones determinadas de los principios activos, y los efectos son tardíos debido a la baja dosis administrada del extracto. .

Extractos acuosos y etanólicos de la planta Achyrocüne satureoides ("Marcela") se han reportado como útiles para el tratamiento de enfermedades neurodegenerativas debido a la presencia de compuestos semejantes a quercetina69. Los extractos son obtenidos a partir de inflorescencias maceradas de la planta mediante adición de etanol; posteriormente el solvente es filtrado y evaporado bajo presión reducida y extraído el remanente con éter de petróleo. Posteriormente la solución es extraída con acetato de etilo y n-butanol. A pesar de que los efectos antioxidantes del extracto son comprobados en modelos animales, no se muestran pruebas clínicas en pacientes humanos que permitan discernir las cantidades adecuadas a utilizarse del extracto; así mismo el proceso de obtención del extracto es complicado.

Extractos obtenidos de Fructus crataegus con cantidades representativas de bioflavonoides, incluida la quercetina, han mostrado actividad farmacológica en el tratamiento de enfermedades cardiovasculares relacionadas con altos niveles plasmáticos de lípidos70. La obtención de los extractos es mediante la adición de agua o etanol a frutos secos a temperaturas entre 25 a 70°C durante un tiempo máximo de 10 horas; posteriormente la mezcla es filtrada y concentrada para obtener el extracto. Sin embargo, el proceso descrito en el documento no muestra un análisis previo de la concentración de flavonoides en la materia prima para obtener extractos de la planta. Así mismo tampoco se muestran pruebas en pacientes humanos y las dosis adecuadas para proporcionar un tratamiento en contra de la enfermedad.

Se ha reportado la obtención de composiciones enriquecidas en flavonoides tales como quercetina e isoquercitrina mediante la conversión enzimática de soluciones de rutina utilizando naringinasa con efectos terapéuticos para el tratamiento de padecimientos que involucran actividades enzimáticas patológicas71, como estrés oxidativo, colesterol y triglicéridos elevados entre otras. Sin embargo, no se reporta actividad terapéutica de los extractos obtenidos para padecimientos intestinales y no se describe la obtención de composiciones farmacéuticas con dosis estandarizadas de principios activos.

También se han usado combinaciones de diferentes extractos de plantas que contienen cantidades mínimas de quercetina para su aplicación en terapia de padecimientos renales, incontinencia y cáncer72.

Extractos de Hammamelis que contienen quercetina como parte de los flavonoides presentes se han obtenido, utilizando extracción con alcoholes de 1 a 4 carbonos, agua, propilenglicol y acetona en diferentes proporciones para utilizarse en aplicaciones cosméticas73.

Extractos polifenólicos derivados de manzana que contienen quercetina han sido obtenidos para su aplicación como antioxidantes y posterior adición en alimentos. Los extractos hidroalcohólicos son obtenidos a una temperatura de entre 20 a 100°C y con un contenido de alcohol del 0 al 90%. Sin embargo, no se muestran resultados en pacientes humanos y el uso de los extractos se limita a su incorporación en suplementos alimenticios74.

A pesar de que extractos de diversas plantas conteniendo quercetina (incluyendo Psidium o Psidium guajava L.) o bien principios activos con actividad farmacológica comprobada pueden ser obtenidos con las metodologías anteriormente descritas, los procedimientos de obtención son bastante complicados y no se obtienen extractos con concentraciones determinadas de los principios activos de interés para obtener fitomedicamentos que puedan aplicarse de manera directa en la clínica.

Las concentraciones de flavonoides obtenidas en el extracto con el método de la invención, son tan adecuadas que puede ajustarse su concentración manipulando las proporciones de volumen y peso, tanto en la obtención de los extractos concentrados, como en las composiciones farmacéuticas obtenidas.

Como una manera de ¡lustrar la presente invención, se presentan los siguientes ejemplos, sin que ello limite el alcance de la misma.

Ejemplo 1. Obtención y selección del material vegetal. Se recolectaron e inspeccionaron hojas del árbol de Psidium guajava L. mediante la metodología y criterios descritos por Rivera-Arce75 con la finalidad de obtener hojas de la planta con caracteres morfológicos determinados y que permitiesen identificarlas de manera precisa. Las hojas seleccionadas conforme a lo descrito por Rivera-Arce75, presentaron caracteres morfológicos típicos que identifican botánicamente a las hojas de Psidium guajava L., así como los caracteres anatómicos típicos siguientes: • Células de la epidermis adaxial poligonales isodiamétricas de contorno rectilíneo. Epidermis abaxial constituida por células de forma variada y de contorno algo ondulado, • Estomas anisocíticos y anomocíticos en la epidermis abaxial, · Tricomas o pelos simples unicelulares largos y curvos, • Vena primaria masiva de recorrido derecho, • Mesófilo unilateral con 6 capas de parénquima en empalizada, • Hipodermis desarrollada junto a la epidermis adaxial constituida por 2 a 3 capas de células, • Cavidades esquizolisígenas. Por otro lado, se realizó una determinación de los principios activos medida como concentración de quercetina en hojas secas de plantas de Psidium guajava L. localizadas en diversas partes de México y en diferentes estaciones del año. Como puede observarse en la figura 2, las plantas localizadas en los Estados de México y Aguascalientes presentaron una concentración mínima de 8 mg de quercetina por cada gramo de hoja seca y las estaciones del año en donde se observó una mayor concentración fueron Invierno y Primavera. Según como se describió anteriormente, el material vegetal (hojas) de Psidium guajava L. que reunió las características morfológicas y anatómicas típicas de la planta así como un contenido mínimo de 8 mg de principios activos por gramo de hoja seca, fueron seleccionadas. La cuantificación de los principios activos se llevó a cabo mediante el método mencionado en el ejemplo 6.

Ejemplo 2. Obtención del extracto. Las hojas secas seleccionadas del ejemplo 1 (6 Kg) se molieron y se tamizaron por malla 40. El material obtenido se extrajo en un reactor de acero inoxidable con una mezcla de etanol-agua (80/20 vol/vol) a una temperatura de 50°C durante 24 horas, para posteriormente recuperar el solvente mediante filtración. El filtrado se concentró por destilación y se recuperó el concentrado; el disolvente destilado se utilizó para una segunda extracción usando las mismas condiciones. Los concentrados obtenidos de las extracciones anteriores se mezclaron y se pesó el extracto total obtenido, efectuando el análisis de concentración de principios activos mediante el método mencionado en el ejemplo 7. Los extractos concentrados conteniendo una concentración de principios activos no menor a 10 mg/g de extracto concentrado, fueron seleccionados para la obtención del extracto seco pulverizado.

Ejemplo 3. Preparación del extracto seco pulverizado. El extracto concentrado obtenido en el ejemplo 2 fue diluido con etanol-agua (80-20 vol/vol) hasta un volumen suficiente para mezclarse con maltodextrina mediante agitación mecánica y calentamiento, para posteriormente someterse a secado por aspersión. La cantidad de excipiente que se agregó a la mezcla fue en una cantidad suficiente para que el pulverizado contenga de 4 a 6 mg de principios activos por gramo de pulverizado final. La concentración final de los principios activos en el pulverizado se efectúo mediante el método mencionado en el ejemplo 8. Los principios activos contenidos en el extracto obtenido corresponden a glucoflavonoides (guajaverina, isoquercitrina, hiperina, quercitrina y aviculatina).

Ejemplo 4. Fabricación de tabletas con carboximetilcelulosa. El extracto seco pulverizado obtenido en el ejemplo 3 se mezcló con carboximetilcelulosa (20% peso /peso) y estearato de magnesio (0.2% peso /peso), sometiendo la mezcla obtenida a compresión para obtener tabletas con un peso aproximado de 350-400 mg con una concentración mínima de 1 mg de principios activos por tableta. La concentración final de los principios activos en las tabletas fue determinada mediante el método mencionado en el ejemplo 8.

Ejemplo 5. Fabricación de tabletas con maltosa. El extracto seco pulverizado obtenido en el ejemplo 3 se mezcló con cantidades apropiadas de maltosa y estearato de magnesio, sometiendo la mezcla obtenida a compresión para obtener tabletas con un peso aproximado de 350-400 mg con una concentración mínima de 2 mg de principios activos por tableta. La concentración final de los principios activos en las tabletas fue determinada mediante el método mencionado en el ejemplo 8.

Ejemplo 6. Cuantificación de los principios activos en la hoja. Se pulverizaron 10 g de hoja de P. guajava en un mortero. Se pesó en una balanza analítica g del pulverizado obtenido y se colocó en un cartucho de papel Whatman #1 para someterlo a extracción exhaustiva con metanol en un equipo Soxhlet, hasta que el disolvente del reflujo aparezca sin coloración. Se evaporó el metanol y sé resuspendió el residuo en 20 mL de HCI 0.5N en MeOH, calentándose la mezcla a reflujo por 30 min. La mezcla se aforó a 25 mL con metanol, y se transfirió 1 mL a un matraz aforado de 10 mL para llevarlo a volumen con metanol. De la mezcla resultante se tomó una alícuota y se filtró por membrana de 0.45 µp\. Un volumen de 10//L de la solución resultante se utilizó para su análisis mediante cromatografía, según como se describe en el ejemplo 10.

Ejemplo 7. Cuantificación de principios activos en el extracto concentrado. Se pesaron 0.5 g del extracto concentrado y se disolvieron en 20 mL de HCI 0.5N en MeOH, calentándose la mezcla a reflujo por 30 min. La mezcla se aforó a 25 mL con metanol, y se transfirió 1 mL a un matraz aforado de 10 mL para llevarlo a volumen con metanol. De la mezcla resultante se tomó una alícuota y se filtró por membrana de 0.45 Un volumen de 10 yL de la solución resultante se utilizó para su análisis mediante cromatografía, según como se describe en el ejemplo 10.

Ejemplo 8. Cuantificación de principios activos en el pulverizado seco. Se pesó 1 g del pulverizado y se suspendió en 20 mL de HCI 0.5N en MeOH, calentándose la mezcla a reflujo por 30 min. La mezcla se filtró por papel Whatman #1 y se lavó el papel filtro con metanol. El filtrado se aforó a 25 mL con metanol, y se transfirió 1 mL a un matraz aforado de 10 mL para llevarlo a volumen con metanol. De la mezcla resultante se tomó una alícuota y se filtró por membrana de 0.45 //m. Un volumen de 10¿/L de la solución resultante se utilizó para su análisis mediante cromatografía, según como se describe en el ejemplo 10.

Ejemplo 9. Cuantificación en tabletas. Se molieron diez tabletas en un mortero. Se pesó 1 g del polvo obtenido y sé resuspendió en 20 mL de HCI 0.5N en MeOH, calentándose la mezcla a reflujo por 30 min. La mezcla se filtró por papel Whatman #1 y se lavó el papel filtro con metanol. El filtrado se aforó a 25 mL con metanol, y se transfirió 1 mL a un matraz aforado de 10 mL para llevarlo a volumen con metanol. De la mezcla resultante se tomó una alícuota y se filtró por membrana de 0.45 µp\. Un volumen de 10//L de la solución resultante se utilizó para su análisis mediante cromatografía, según como se describe en el ejemplo 10.

Ejemplo 10. Análisis cromatográfico. La concentración de principios activos en hoja, extracto concentrado, pulverizado seco y tabletas se cuantificó como concentración equivalente de quercetina, ya que los principios activos son un conjunto de flavonoides derivados de este compuesto. Se pesaron aproximadamente el equivalente a 0.025 g de quercetina estándar, se disolvió en metanol y se aforó a 50 mL (conc. 0.00050g/mL). A partir de ésta solución se obtuvieron diluciones seriadas con metanol con las concentraciones de 50 //g/ml, 25 yí/g/ml, 12.5 ji/g/ml y 6.25 yt/g/ml. las cuales se inyectaron por triplicado a un cromatografo de líquidos para su análisis. Se calculó el promedio de las áreas obtenidas y con ese valor se trazó la curva de regresión lineal. La elución de las muestras bajo análisis se realizó por gradiente lineal con H3P04 0 mM en agua y acetonitrilo a través de una columna Kromasil C-18 (5//m diámetro de partícula) (MetaChem Technologies, Inc., Torrance CA, USA) a una temperatura de la columna de 35°C. Para la detección se utilizó un detector de luz UV a una longitud de onda de 254nm.

Ejemplo 11. Identificación de los principios activos en el extracto. Los principios activos del extracto obtenido según el ejemplo 2 y de la materia prima utilizada para su obtención según el ejemplo 1 , fueron determinados mediante cromatografía de alta presión y se identificaron las moléculas y su cantidad conforme a la velocidad de elución de cada una de ellas. Las fracciones obtenidas fueron analizadas para la separación subsecuente de los compuestos individuales, utilizando técnicas de elución y bandeo sobre papel Whatman76. Cada uno de los productos fueron purificados mediante columnas de Sephadex LH-2077.

Las estructuras de los compuestos purificados fueron determinadas mediante métodos estándar, utilizando hidrólisis ácida con HCI a 100°C durante 60 min, hidrólisis enzimática con ß-glucosidasa y ß-galactosidasa usando buffer de acetatos (pH 5), oxidación con peróxido de hidrógeno, espectroscopia de UV, 1H-NMR, 13C-NMR, espectroscopia de masas y mediante su comparación con muestras control. Las agliconas obtenidas por hidrólisis de los compuestos aislados fueron identificadas mediante co-cromatografía con muestras control usando cromatografía en papel, espectro UV, H-NMR y 13C-NMR. Los azúcares liberados por hidrólisis fueron identificados por cromatografía en papel utilizando métodos estándar78'79. Los resultados de ésta determinación se muestran en la tabla 1.

Tabla 1 Contenido de flavonoides en el extracto de la invención y su concentración en la hoja de Psidium guajava Ejemplo 12. Evaluación clínica del fitofármaco. Se realizó un estudio clínico controlado, aleatorizado y doble ciego, en un grupo de pacientes con enfermedad diarreica aguda. Se incluyeron pacientes de ambos sexos, entre 20 y 59 años con enfermedad diarreica aguda que se definió como un cuadro clínico caracterizado por al menos tres evacuaciones en las últimas 24 hrs. disminuidas de consistencia con relación al patrón normal de evacuaciones. Los pacientes del grupo experimental (n=50) recibieron 400 mg del fitofármaco en presentación de cápsulas que se administró por vía oral, una dosis cada 8 horas durante 3 días. El grupo control (n=50) recibió placebo con el mismo tipo de presentación farmacéutica y en el mismo esquema de tratamiento. La terapia de rehidratación oral se aplicó en todos los pacientes de ambos grupos de acuerdo a los procedimientos convencionales recomendados por la OMS para el manejo de la enfermedad diarreica aguda (OMS, 1990). Las variables a determinar fueron: número de evacuaciones y su consistencia al día; presencia de moco en las heces; grado de dolor abdominal (en un rango de 0 a 10 unidades); número de espasmos en 24 horas; presencia de fiebre y episodios de vómito.

Los episodios diarreicos, motivo de la solicitud de consulta médica, fueron moderados (la mediana de evacuaciones en las últimas 24 hrs. fue de 6, en su mayoría líquidas); más del 80% de todos los pacientes presentaron dolor abdominal de intensidad entre moderada y severa y los síntomas adicionales que se reportaron con mayor frecuencia fueron distensión abdominal y vómito (ver tabla 2).

Tabla 2 Condiciones clínicas de los pacientes Grupo con Grupo tratamiento % control % n=50 n=50 Días con diarrea Mediana 1 1 Intervalo 1-4 1-4 No. evacuaciones en las 24 hrs. previas Mediana 6 6 Intervalo 3-14 3-15 Consistencia Líquida 31 62 27 54 Semi-líquida 19 38 23 46 Dolor abdominal 44 88 42 84 Intensidad del dolor abdominal (escala 0-10) Moderado (3-5) 20 40 13 26 Severo (6-10) 21 48 29 58 Mediana 6 6.5 Intervalo 3-10 3-10 Síntomas adicionales al día 1 Distensión abdominal 40 80 32 64 Moco en la evacuación 2 4 7 14 Fiebre 7 14 6 12 Vómito 21 42 25 50 La evolución de los síntomas en los pacientes una vez establecido el tratamiento (Tabla 3), se analizó por cada día de seguimiento. El grupo que recibió tratamiento con el fitofármaco de la invención mostró diferencias significativas respecto al grupo control en el número de episodios de diarrea y dolor abdominal a partir del primer día de tratamiento 5 (ver tabla 3 y figura 3). La evolución clínica del grupo tratado con el fitofármaco fue mejor y más rápida en comparación con el grupo control (ver figura 3, columnas C) y el producto utilizado fue bien tolerado y no produjo efectos colaterales.

Tabla 3 0 Evolución durante el tratamiento Grupo con tratamiento Grupo control n=50 n=50 No. No. Mediana Intervalo Mediana Intervalo pacientes pacientes 5 Número de evacuaciones Día 1 50 5 1-15 50 4 1-14 Día 2 40 3 1-8 39 3 1-7 Día 3 32 2 1-6 36 2 1-5 Total de evacuaciones 50 8 2-21 50 8 2-17 Consistencia (líquida o semi-líquida) Día 1 45 4 1-11 46 4 1-11 Día 2 29 3 1-8 23 2 1-6 Día 3 10 1 1-7 8 2 1-3 Dolor abdominal (número de episodios) Día 1 30 3 28 28 3 1-15 Día 2** 10 1 10 10 2.5 1-4 Día 3** 3 2 6 6 3 2-5 p = 0.02 Q Estos resultados muestran que el fitofármaco de la invención alivia rápida y eficazmente el cólico intestinal, síntoma característico del síndrome diarreico agudo. Los resultados obtenidos en el estudio clínico utilizando el fitofármaco de la invención, permiten inferir mediante el análisis de todas y cada una de las variables que, habiéndose utilizado una sola dosis (400mg cada 8 horas durante 3 días) los efectos obtenidos resultaron ser ampliamente satisfactorios.

Referencias. 1. Merson HH. The global problem of acute diarrhoeal diseases and the WHO diarrhoeal Diseases Programme. En Takeda Y. Miwatani L. Eds. Bacterial diarrhoeal diseases; new perspectives in clinical microbiology. Boston: Martinus Nijhoff Publishers. 1985:1. 2. Martínez, M, et. al. Epidemiology of acute diarrhoea in rural medical care system in México (IMSS-COPLAMAR). Arch. Invest. Med. (Mex). 1989; 20(1 ):69, 3. Awouters, F., et. al. Pharmacology of antidiarrhoeal drugs. Annu Rev. Pharmacol. Toxicol. 1983. 23:279. 4. Merson, M.H. Proper treatment of diarrhoea; role of the pharmacist. Inter. Pharm. Jour. 1 (2): 52-56. 1987. 5. Jiménez rentería, E., et. al. Análisis de cincuenta casos de intoxicación por lomotil en niños. Bol. Med. Hosp.. Infant. Méx. 34: 519-526. 1977. 6. Penfold, D., et. al. Overdose from lomotil and diphenoxylate. Br. Med. Jour. 2: 1401- 1402, 1977. 7. Lozoya X, Aguilar A, Camacho JR. Encuesta sobre el uso actual de plantas en la medicina tradicional mexicana. Revista medica IMSS 988; 25: 283-29 . 8. Arnason JJ., et. al. Maya medicinal plants of San José Succotz, Belize. J. Ethnopharmacol. 1980; 2:345. 9. Lozoya, Xavier, et. al. Plantas medicinales usadas por la medicina tradicional para el tratamiento de padecimientos gastrointestinales infecciosos. Rev. Med IMSS. 1989; 27:305. 0. Aguilar, A., et. al. Flora medicinal indígena de México. Treinta y cinco monografías del Atlas de las plantas de la medicina tradicional mexicana. INI. México, 2:45.1994 11. Aguilar, A., et. al. Plantas medicinales del herbario IMSS. Cuadros básicos por aparatos y sistemas del cuerpo humano. IMSS. México 28. 1996. 12. Osuna L, Lozoya X. Plantas medicinales usadas por la medicina tradicional para el tratamiento de padecimientos gastrointestinales infecciosos. Revista Médica IMSS 1989; 27: 305-311. 13. Colliere WA. The antibiotic actions of plants, specially the higher plants, results with Indonesian plants. Chronic of Nature 1949; 105: 8-19. 14. El-Kadem H, Mohammed YS. Constituents of the leaves of Psidium guajava. Part II. Quercetin, avicularin and guaujaverin. J. Chem. Soc. 1958; 3320-3324. 15. Malcom SA, Sofowora EA. Antimicrobial activity of selected Nigerian folk remedies and their constituent plants. Lloydia 1969; 32: 512- 515. 16. Cáceres A, Fletes L, Aguilar L, Ramírez O, Figueroa L, Taracena AM, Samoya B. Plants used ¡n Guatemala for the treatment of gastrointestinal disorders. 3. Confirmation of activity against enterobacteria of 16 plant extracts. Journal of Ethnopharmacology 1993; 38: 31 -38. 17. Arima H, Ashida H, Danno G. Rutin-enhanced antibacterial activities of flavonoids against Bacillus cereus and Salmonella enteritidis. Biosc. Biotechnol Biochem 2002; 66:1009-1014. 18. Arima H, Danno G. Isolation of antimicrobial compounds from guava (psidium guajava L.) and their structural elucidation. Biosci Biotechnol Biochem 2002; 66: 1727-1730. 19. Gnan S, Demello M. Inhibition of Staphylococcus aureus by aqueous Goiaba extracts. Journal of Ethnopharmacology 1999; 68: 103-108. 20. Vieira RH, Rodríguez DP, Goncalves FA, Menezes FG, Aragao JS, Sousa OV. Microbicidal effect of medicinal plants extracts (Psidium guajava Linn. And Carica papaya Linn.) upon bacteria isolated from fish muscle and known to induce diarrhea in children. Rev Inst Med Trop Sao Paulo 2001 ; 43: 145-148. 21 . Lutterodt GD. Inhibition of gastrointestinal reléase of acetylcholine by quercetine as a possible mode of action of Psidium guajava leaf extracts in the treatment of acute diarrhoeal disease. Journal of Ethnopharmacology 1989; 25: 235-247. 22. Fanning MJ, Macander P et al. Quercetin inhibits anaphylactic contraction of guinea pig ileum smooth muscle. International Archives of Allergy and lmmunology 1983; 71 : 371-373. 23. Macander PJ. flavonoids affect acetylcholine, prostaglandin E and antigen-mediated smooth muscle contraction. Progr. Clin. Biol. Res. 1986; 213: 489-492. 24. Capasso F, Pinto A, Mascólo N, Autore G., Franco, FP. Effect of flavonoids on PGE2 and LTD4 induced contractions on the guinea pig isolated ileum. Pharm. Res. Commun 1988; 20: 201 -202.

Lozoya X, Becerril G, Martínez M. Intraluminal perfusión model of in vitro guinea pig ¡leum as a model of study of the antidiarrheic properties of the guava Psidium guajava. Archives of Medical Research 1990; 21 : 155-162. Meli R, Autore G, Di Cario G, Capasso F. Inhibitory activity of quercetin on intestinal transit in mice. Phytotherapy Research 990; 4: 201 -202. Lozoya X, Meckes M, Aboud-Zaid M, Tortoriello J, Nozolillo C, Arnason JT. Quercetin glycosides in Psidium guajava L. Leaves and determination of a spasmolytic principie. Archives of Medical Research 1994; 25:11-15. Morales MA, Tortoriello J, Meckes M., Paz D, Lozoya X. Calcium antagonist effect of quercetin and its relation with the spasmolytic properties of Psidium guajava L.

Archives of Medical Research 1994; 25, 17-21 . Morales MA, Lozoya X. Calcium-antagonist effect of quercetin on aortic smooth muscle. Planta Medica 1994; 60: 313-317. Galvez J Duarte J, Sánchez, F. Inhibitory effects of quercetin on guinea pig ileum contractions. Phytotherapy Research 1996; 10: 66-69. Hammad HM, Abdalla SS. Pharmacological effects of selected flavonoids on rat isolated ¡leum: structure-activity relationship. Gen Pharmacol 1997; 28: 767-771. Lutterodt GD. Inhibition of Microlax induced experimental diarrhea with narcotic-like extracts of Psidium guajava leaf in rats. Journal of Ethnopharmacology 1992; 17: 51 -157. Martín MJ, Motilva V, Alarcón de la Lastra C. Quercetin and naringenin; effects on ulcer formation and gastric secretion in rats. Phytotherapy Research 1993; 7: 150-153. Ocete MA, Gales J, Crespo ME, Cruz T, González M, Torres MI., Zarzuelo A. Effects of morin on an experimental model of acute colitis in rat. Pharmacology 1998; 57: 261-270. Ratty AK, Das NP. Effects of flavonoids on nonenzymatic lipid peroxidation: structur-activity relationship. Biochem Med Metab Biol 1988; 39: 69-79. Poliukhovich GS, Vasileva LP, Maslova GT, Boboriki TL, Speranskii, SD. Efficacy of various antioxidants in experimental ischemia and myocardial infarct in the rat. Vopr Med Khim 1991 ; 37: 54-56. 37. Santos AC, Uyemura SA, López JL, Bazon J, Mingatto F, Curtí C. Effect of naturally occuring flavonoids on lipid peroxidation and membrane permeability transition in mitochondria. Free Radical Biology & Medicine 1998; 24: 1455-1461. 38. Aherne SA, O'Brien NM. Protection by flavonoids Myricetin, Quercetin and Rutin against HO peroxide-induce DNA damage in Caco-2 and help G2 cells. Nutrition and cáncer 999; 34: 160-166. 39. Nakagawa K, Kaawagoe M, Yoshimura M, Arata H, Minamikawa T, Nakamura M., Matsumoto A. Differential effects of flavonoid quercetin on oxidative damages induced by hydrophilic and lipophil'ic radical generators in hepatic lysosomal fractions. Journal of Health Science 2000; 46: 509-512. 40. Ignatowicz E, Kostrzewa A, Budzianowski J, Zielinska M. The flavonoids, quercetin and isorhamnetin 3-O-acyl-glucosides diminish neutrophil oxidative metabolism and lipid peroxidation. Acta Biochimica Polonica 2001 ; 48: 83-190. 41 . Moon JH, Tsushida T, Nakahara K, Terao J . Identification of quercetin 3-O-beta-D- glucuronide as an antioxidant metabolite in rat plasma after oral administration of quercetin. Free radicáis Biology medicine 2001 ; 30: 1274-1285 42. Martínez, MJ., López M., Betancourt J., Barceló H., Montes ME., Regó R. Estudio toxicológico preclínico de Psidium guajava L.(Guayaba). Rev Cubana Plant Med 2001- 2)56-61. 43. Betacncourt J., Ramos A., Vizoso A., Martínez MJ., López M. Ausencia de actividad genotóxica del extracto fluido de Psidium guajava L (Guayaba) evaluada en un sistema de ensayo de Aspergíllus nidulans. Rev Cubana Plant Med 2000:5(2):38-40. 44. Rodríguez, L.E., et. al. Estudio farmacognóstico y valoración del extracto fluido obtenido de las hojas de Psidium guajava (guayaba). Revista cubana de Plantas medicinales. 2, 26-29. 1997. 45. Robinson Reuben, Judah. Medicinal substance. Solicitud de patente EP 0154530. 1985. 46. Kiyoshima, Jiyunko, et. al. Medicine for prophylaxis and treatment of virus infection. Solicitud de patente JP2000273048. 2000. 47. Ishihara, Takeo, et. al. Peroxylipid production inhibitor, its production and utilization thereof. Solicitud de patente JP1 1075770. 1999. 48. Kudo, Tatsuyuki, et. al. Drink from Psidium guajava leaf. Solicitud de patente JP2000023647. 2000. 49. OMS. Guidelines for the assessment of hierbal medicines. Programme on traditional medicines, World Health Organization, Geneva, 1999. 50. Lines. Thomas Christian, et. al.. Antioxidative compositions. Solicitud de patente US 2004/0101595. 2004. 51.. Merck Patent GmbH. Composition comprising a mixture of bioflavonols. Solicitud de patente EP1319405. 2003. 52. Buchholz, Herwing, et. al. Composition comprising a mixture of bioflavonols. Solicitud de patente PCT/EP99/07865. 2000. 53. Roufs, James B, et. al. Phytonutrient nutritional supplement. Solicitud de patente US 2004/0131656. 2004. 54. Birdshall, Timothy C. Quercetin chalcone and methods related thereto. USPat 5977184. 1999. 55. Kim, Chung-Sook, et. al. Therapeutic agent or osteoporosis comprising an active ¡ngredient of quercetin derivatives. Solicitud de patente US 2004/0162247. 2004. 56. Zhao, Yimin, et. al. Quercetin derivatives an their medical usages. Solicitud de patente US 2004/0132671 . 2004. 57. Gorsek, Wayne F. Compositions for the treatment and prevention of osteoarthritis, rheumatoid arthritis and improved joint functions. Solicitud de patente US 2004/0121024. 2004. 58. Manach, C, et. al. Quercetin 3-O-beta-glucoside is better absorbed than other quercetin flavonoids. Free Rad. Research 33(5):667-676. 2001. 59. Lozoya X, Reyes H, Chávez MA, Martínez MC, Soto Y, Doubova S. Intestinal anti- spasmodic effect of a phytodrug of Psidium guajava folia ¡n the treatment of acute diarrhea. Journal of Ethnopharmacology 2002;83:19-24. 60. Wei L, Li Z, Chen B. Clinical study on treatment of infantile rotaviral enteritis with Psidum guajava. Zhongguo Zhong Xi Yi Jie He Za Zhi 2000; 20: 893-895. 61. Wambebe, Charles, et. al. Phytodrug for management of peptic ulcer and methods of preparing and using same. USPat 6083509. 2000. 62. Huffstutler, Miles, et. al. Polyphase fluid-extraction process, resulting producís and methods of use. USPat 5466455. 1995. 63. Martín, Michael Z., et. al. Pharmaceutical preparation of bioactive substances extracted from natural sources. USPat 6746695. 2004. 64. Sohn, Uy-Dong, et. al. Process for preparing quercetin 3-0-3-D-glucuronide (QGC) isolated from Rumex aquaticus. Solicitud de patente PCT/KR03/01038. 2003. 65. Feng, Wu Wen. Antihistamine composition. Solicitud de patente US2004/0081710. 2004. 66. Zhou, Tongshui. An extract of a typhae pollen and its manufacture and use. Solicitud de patente PCT/CN2003/000577. 2004. 67. Stander, Michael D. Use of buchu extracts for hypertension. Solicitud de patente PCT/ZA01/00136. 2002. 68. Kirchanski, Stefan J. Compositions and methods for the treatment of diabetes. Solicitud de patente PCT/US00/08957. 2000. 69. Heizen, Horacio, et. al. Utilization of Achyrocline satureoides ("Marcela") extracts and liposomal preparations of natural and semi-synthetic flavonoids for the prevention and treatment of the consequences of stroke and neurodegenerative diseases. Solicitud de patente US 2003/0055103. 2003. 70. Liao, Benedict Schue, et. al. Lipid metabolism and Fructus crataegus. Solicitud de patente US 2004/0132816. 2004. 71. Chang, Peter R. Extraction, purification and conversión of flavonoids from plant biomass. Solicitud de patente PCT/CA2003/001453. 2004. 72. Chou, Wen Hsien. Compositions and methods for prostate and kidney health and disorders, an herbal preparation. Solicitud de patente US 2003/0134000. 2003. 73. Fabre, Bernard, et. al. Extraits de feuilles d'Hamamélis, leur preparation et leurs applications. Solicitud de patente EP 0496649. 1992. 74. Sophie, Ho.lm, et. al. Extraits concentres de mares a activite antioxidante. Solicitud de patente FR 2826008. 2002. 75. Rivera-Arce, Erika, Gattuso Martha, Lozoya Xavier. Anatomical identity parameters of the crude drug Psidii guajavae folium. Pharmaceutical Biology 41 (7): 516-521. 2003. 76. Markham KR. Techniques of flavonoid identification. London: Academic Press, p. 125. 1982. 77. Harbone JB, et. al. The flavonoids. Berlín: Springer Verlag, p. 425. 1975. 78. Agrawal PK. Carbon-13 NMR of flavonoids. Amsterdam: Elsevier. P. 158. 1989.

Mabry TJ., et. al. The systematic identification of flavonoids. Berlín: Springer Verlag. P. 259. 1970.

Claims (1)

1. Reivindicaciones. I . Un extracto estandarizado de Psidium guajava L, caracterizado porque contiene una concentración de glucósidos flavonoides de 4 a 6 mg por gramo de extracto, medida como concentración de quercetina total. 2. El extracto de la reivindicación 1 , caracterizado porque los glucósidos flavonoides se seleccionan del grupo que comprende glucósidos derivados de quercetina y glucósidos derivados de morina. 3. El extracto de la reivindicación 2, caracterizado porque los glucósidos derivados de quercetina se seleccionan del grupo que comprende quercetin-3-O-a-L-arabinósido, quercetin-3-0- -glucósido, quercetin-3-0-p-D-galactósido, quercetin-3-0^-L- ramnósido y quercetin-3-O-gentiobiósido. 4. El extracto de la reivindicación 2, caracterizado porque los glucósidos derivados de morina se seleccionan del grupo que comprende morin-3-O-alpha-L-lixopiranósido y morin-3-O-alpha-L-arabopiranósido. 5. El extracto de la reivindicación 1 a 4, caracterizado porque el extracto esta en forma de pulverizado. 6. El extracto de la reivindicación 1 a 5, caracterizado porque el extracto contiene adicionalmente un excipiente farmacéuticamente aceptable. 7. El extracto de la reivindicación 6, caracterizado porque el excipiente es maltodextrina. 8. El extracto de la reivindicación 1 a 4, caracterizado porque el extracto esta en forma líquida. 9. El extracto de la reivindicación 1 a 8, caracterizado porque es estable al menos 4 meses a temperatura ambiente. 10. Una composición farmacéutica para el tratamiento de enfermedades gastrointestinales en mamíferos, caracterizada porque comprende una cantidad terapéuticamente efectiva del extracto de la reivindicación 1 a 9 en un vehículo farmacéuticamente aceptable. I I . La composición farmacéutica de la reivindicación 10, caracterizada porque se encuentra en una presentación farmacéutica seleccionada del grupo que comprende tabletas, cápsulas ó grageas 12. La composición farmacéutica de la reivindicación 1 1 , caracterizada porque se encuentra en forma de tableta. 13. La composición farmacéutica de ia reivindicación 1 1 , caracterizada porque se encuentra en forma de cápsula. 14. La composición farmacéutica de la reivindicación 1 1 , caracterizada porque se encuentra en forma de gragea. 15. La composición farmacéutica de la reivindicación 10 a 14, caracterizada porque contiene una concentración de 1 a 4 mg de glucósidos flavonoides medida como concentración de quercetina total, por cada 400 a 500 mg de la composición. 16. Un método para la obtención del extracto de la reivindicación 1 a 9, caracterizado porque comprende los pasos de: a) Seleccionar hojas de Psidium guajava L. previamente secas con un contenido mínimo de 8 mg de glucósidos flavonoides, medido como concentración de quercetina total, por cada gramo de hoja, b) Moler las hojas seleccionadas en el paso a) y tamizar el polvo por malla 40, c) · Extraer el polvo del paso b) adicionando una mezcla de alcohol de 1 a 4 carbonos y agua, en una proporción 50:50 a 80:20 vol/vol e incubar la mezcla a una temperatura de 30 a 50°C durante un periodo de 24 a 48 hrs. d) Filtrar la mezcla obtenida, concentrar el filtrado por destilación y recuperar el disolvente para extraer nuevamente el polvo conforme al paso c), e) Mezclar los extractos concentrados y seleccionar aquellos con un contenido mínimo de 10 mg de glucósidos flavonoides, medido como concentración de quercetina total, por cada gramo de extracto concentrado, y f) Adicionar una cantidad suficiente de excipiente farmacéuticamente aceptable al extracto concentrado del paso e) hasta obtener una concentración de glucósidos flavonoides, medido como concentración de quercetina total, de 4 a 6 mg por gramo de extracto. 17. El método de la reivindicación 16, caracterizado porque en el paso c) el polvo se extrae con una mezcla de etanol-agua en una proporción 80:20 vol/vol a una temperatura de 50°C y durante un periodo de 48 hrs. 18. El método de la reivindicación 17, caracterizado porque la concentración de glucósidos flavonoides se determina mediante cromatografía de líquidos de alta eficiencia. 19. El método de la reivindicación 18, caracterizado porque el excipiente farmacéuticamente aceptable es maltodextrina. 20. El método de la reivindicación 16 a 19, caracterizado porque adicionalmente la mezcla obtenida en el paso f) es sometida a deshidratación. 21. El método de la reivindicación 20, caracterizado porque la deshidratación se realiza mediante aspersión. 22. El uso del extracto de la reivindicación 1 a 9, para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de enfermedades gastrointestinales en mamíferos. 23. El uso de la reivindicación 22, caracterizado porque se administra una dosis del extracto equivalente a 0.01 a 0.05 mg de glucósidos flavonoides por Kg de peso corporal. 24. El uso de la reivindicación 23, caracterizado porque se administra una dosis del extracto equivalente a 0.01 a 0.02 mg de glucósidos flavonoides por Kg de peso corporal. 25. El uso de la reivindicación 22 a 24, caracterizado porque el extracto se administra por vía oral. 26. El uso de la reivindicación 25, caracterizado porque el extracto se administra en una sola dosis. 27. El uso de la reivindicación 26, caracterizado porque el extracto se administra en diversas dosis y de una a tres veces al día durante 3 a 5 días. 28. El uso de la reivindicación 21 a 25, caracterizado porque el extracto se administra hasta la completa desaparición de los síntomas clínicos. 29. El uso de un extracto de Psidium guajava L. para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de enfermedades gastrointestinales en mamíferos causadas por disfunciones del sistema nervioso asociado a la función gastrointestinal. 30. El uso de la reivindicación 29, caracterizado porque las enfermedades gastrointestinales se seleccionan del grupo que comprende síndrome de intestino irritable, síndrome de colon irritable, síndrome diarreico agudo, gastritis nerviosa y colitis nerviosa. 31. El uso de la reivindicación 30, caracterizado porque la enfermedad gastrointestinal es síndrome de intestino irritable. 32. El uso de la reivindicación 30, caracterizado porque la enfermedad gastrointestinal es síndrome diarreico agudo. 33. El uso de la reivindicación 29 a 32, caracterizado porque se administra una dosis del extracto equivalente a 0.01 a 0.05 mg de glucósidos flavonoides por Kg de peso corporal. 34. El uso de la reivindicación 33, caracterizado porque se administra una dosis del extracto equivalente a 0.01 a 0.02 mg de glucósidos flavonoides por Kg de peso corporal. 35. El uso de la reivindicación 29 a 34, caracterizado porque el extracto se administra por vía oral. 36. El uso de la reivindicación 35, caracterizado porque el extracto se administra en una sola dosis. 37. El uso de la reivindicación 36, caracterizado porque el extracto se administra en diversas dosis y de una a tres veces al día durante 3 a 5 días. 38. El uso de la reivindicación 29 a 35, caracterizado porque el extracto se administra hasta la completa desaparición de los síntomas clínicos. 39. Un método para estandarizar la concentración de principios activos en extractos de Psidium guajava L, caracterizado porque comprende determinar en el extracto la concentración de glucósidos flavonoides, medida como concentración de quercetina total. 40. El método de la reivindicación 39, caracterizado porque comprende los pasos de: a) Determinar en el material vegetal a ser utilizado para la obtención del extracto, la concentración de glucósidos flavonoides, medida como concentración de quercetina total y b) Determinar en el extracto la concentración de glucósidos flavonoides, medida como concentración de quercetina total. 41 . El método de la reivindicación 40, caracterizado porque en el material vegetal la concentración mínima de glucósidos flavonoides, medida como concentración de quercetina total, es de 8 mg por cada gramo de material vegetal. 42. El método de la reivindicación 41 , caracterizado porque el material vegetal son hojas. 43. El método de la reivindicación 40, caracterizado porque en el extracto obtenido la concentración mínima de glucósidos flavonoides, medida como concentración de quercetina total, es de 10 mg por cada gramo de extracto.