KR20070091611A

KR20070091611A - 트리펩티드 및 테트라펩티드 술폰

Info

Publication number: KR20070091611A
Application number: KR1020077012531A
Authority: KR
Inventors: 스티븐 알 쇼우; 나탈리아 아우레코에체아
Original assignee: 텔리크 인코포레이티드
Priority date: 2005-01-06
Filing date: 2006-01-05
Publication date: 2007-09-11
Also published as: EP1833978B1; IL183107A0; JP4903716B2; AR051890A1; ZA200704488B; CN101080418A; NZ555361A; CA2587284A1; ES2314891T3; HRP20090128T3; TWI317739B; EP1833842B1; ATE410520T1; MX2007008254A; TW200635948A; EA200701399A1; MX2007008255A; NZ555362A; EA200701398A1; AR051889A1

Abstract

트리펩티드 및 테트라펩티드 술폰, 그들을 함유하는 약학적 조성물, 그들의 약학적 용도, 및 그들의 제조. 상기 화합물은 종양세포에서 화학요법제의 세포독성효과 증대, 선택적으로는 종양세포에서 독성의 발휘, 골수에서의 GM 전구체의 생산 증가, 골수 세포의 분화 자극, 화학요법제의 골수 억제성 효과 완화 및 골수에서의 조혈의 조절에 유용하다.

트리펩티드, 테트라펩티드, 술폰, 종양세포

Description

트리펩티드 및 테트라펩티드 술폰{TRIPEPTIDE AND TETRAPEPTIDE SULFONES}

본 발명은 트리펩티드 및 테트라펩티드 술폰, 그들을 함유하는 약학 조성물, 그들의 약학적 용도, 및 그들의 제조에 관한 것이다.

미국 특허 번호 5599903; 5763570; 5767086; 5786336; 및 5955432; 유럽 특허 공개 번호 0　645　397; 및 PCT 국제 공개 번호 WO　95/08563 및 WO　96/40205는 하기의 화학식의 화합물을 포함하여 [WO 95/08563], 환원된 글루타티온 (L-γ-글루타밀-L-시스테이닐글리신) 의 유사체인 다양한 트리펩티드 및 테트라펩티드 및 그들의 C₁ _-10 알킬 또는 알케닐 또는 C₇ _-12 아르알킬 에스테르, 아미드, 및 혼합 에스테르/아미드를 개시하였다:

(식 중, Z 는 S, O, 또는 C;

n 은 1 내지 3;

Z 가 S 또는 O 이고 n 이 1인 경우, X 는 비치환 또는 할로, -NO, -NO₂, -NR₂, -OR, 또는 -SR(여기에서, R 은 H 또는 C₁ _-4 알킬)의 모노- 또는 디-치환된, 임의로 1 또는 2개의 비-인접 O, S, 또는 N 헤테로원자를 포함하는 C₁ _-20 히드로카르빌이고;

Z 가 S 이고 n 이 2인 경우, 하나의 X 는 상기 정의한 바와 같고, 다른 X 는C_1-4 알킬이며;

Z 가 C 이고 n 이 3일 경우, 하나의 X 는 상기 정의한 바와 같고, 다른 두개의 X 는 독립적으로 H 또는 C₁ _-4　알킬이고;

YCO 는 γ-glu, β-asp, glu, asp, γ-glu-gly, β-asp-gly, glu-gly, asp-gly 이고;

AA_c 는 펩티드 결합을 통해 상기 화합물의 나머지 부분과 연결된 아미노산이다).

상기 화합물은 글루타티온 S-전이효소 (GST) 동종효소를 특징짓는데 유용하고, 크로마토그래피 친화 리간드, 결합제, 및 효소 억제제로서 세포 및 조직의 GST 보체를 결정하는데 유용하며; 치료적으로, 종양세포에서 화학요법제의 세포독성효과 증대, 선택적으로는 종양세포에서 독성의 발휘, 골수에서의 과립구 대식구 (GM) 전구체의 생산 증가, 골수 세포의 분화 자극, 화학요법제의 골수 억제성 효과 완화 및 골수에서의 조혈의 조절을 위한 시약으로서의 용도를 포함하여, 다양한 용도를 갖는 것으로 기술된다.

상기 특허 및 공개 공보에서 TER 117로 알려지고, γ-Glu-Cys(Bz)-페닐Gly, γE-C(Bz)-φG, γE-C(Bz)-PG, γE-C(벤질)-φG, 및 벤질 PG로 다양하게 명명되는 TLK117은 상기 화합물 중 하나이다. TLK117 은 하기의 화학식을 갖는 화합물이고, L-γ-글루타밀-S-(페닐메틸)-L-시스테이닐-D-페닐글리신으로 명명될 수 있다:

.

TLK117 는 대략 400 nM의 IC₅₀ 로 GST P1-1 을 억제한다. TER119로서 상기 특허 및 공개 공보에서 알려진 TLK199 은 TLK117 의 디에틸 에스테르이고; 한편, TLK261 및 TLK262 은 각각 디메틸 및 디이소프로필 에스테르이다.

US 공개 출원 번호 2003/0100511 및 PCT 국제 공개 번호 WO　00/44366 은 하기 화학식을 갖는 화합물들의 디에스테르의 지질 제형 (리포솜 제형 포함) 을 개시한다:

(식 중,

각 에스테르는 1-25C;

YCO 는 γ-glu 또는 β-asp;

G* 는 페닐글리신;

Z 는 CH₂, O, 또는 S 이고;

X 는 6-8C 알킬, 벤질, 또는 나프틸,

또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염); 또는

하기 화학식을 갖는 화합물이다:

(식 중,

R₁ 및 R₂ 는 독립적으로, 선형 또는 분지형 알킬기 (1-25C), 시클로알킬기 (6-25C), 치환된 알킬기 (2-25C), 헤테로사이클 (6-20C), 에테르 또는 폴리에테르 (3-25C) 이거나, R₁-R₂ (2-20C)가 함께 상기 화학식과 매크로사이클을 형성함; 그리고

R₃ 는 6-8C 알킬, 벤질, 또는 나프틸,

또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염).

Townsend　등, Mol .　 Cancer 　 Ther ., 1(12), 1089-1095 (2002) 에서는 하기 화학식을 갖는 화합물:

,

즉, 캔포스파미드 (canfosfamide) 의 GST-매개 절단의 두 개의 산물 중 하나로서, "비닐 술폰" 을 개시하고 있고, 상기 캔포스파미드는 하기 화학식을 갖는 GST-활성 항암제이며, 이는 미국 특허 번호 5556942 및 PCT 국제 공개 번호 WO　95/09866 에 개시되어 있고 TER 286 으로 지칭된다.

많은 병태가, 골수가 3가지 주요 혈액 성분 (백혈구, 적혈구, 혈소판) 중 하나 이상을 불충분한 수준으로 생산하는 전-백혈병의 일종인 골수형성이상증후군 (MDS) 을 포함한, 골수의 고갈에 의해 특징지어진다. 골수억제, 즉 골수에서의 혈액 세포 수준 및 신생 혈액 세포 형성의 감소는 또한 많은 표준 화학요법 약제의 일반적인 독성 효과이다.

TLK199 는 시험관 내에서 HL-60 전골수구성 백혈병 세포의 분화를 유도하여, 생체 내 및 시험관 내에서 모두 세포독성제의 활성을 증대시키고, 정상 인간의 말초혈액에서 조혈 전구세포의 3 가지 계열 집락 형성 모두를 자극한다고 알려졌다. 전임상 시험에서, TLK199는 시스플라틴 또는 플루오로우라실로 처리되어 백혈구가 고갈된 동물뿐만 아니라 정상 동물에서도 백혈구 생산을 증대시킨다고 알려졌다. 유사한 효과가 MDS 를 치료하는데 새로운 접근법을 제공할 수 있다. TLK199 는 현재 MDS 치료를 위 제2상 임상시험에서 평가되고 있다. 2004년 및 2005년에 미국 혈액학 협회 회의에서 보고된 상기 시험의 중간 결과에서, TLK199은 좋은 내성이 있었으며, 다계열 혈액 개선을 일으킴을 보여주었다. 또한, 상기 결과는 화학요법-유도 혈구감소증 치료에서의 TLK199의 잠재적인 역할을 제시한다.

인간에서, 종양세포에서 화학요법제의 세포독성효과 증대, 선택적으로는 종양세포에서 독성의 발휘, 골수에서의 GM 전구체의 생산 증가, 골수 세포의 분화 자극, 화학요법제의 골수 억제성 효과 완화 및 골수에서의 조혈의 조절을 위해 사용할 수 있는, GST P1-1의 강력한 억제제를 개발하는 것이 요망된다.

제 1 측면에서, 본 발명은 하기 화학식을 갖는 화합물; 및 그의 C₁ _-10　알킬, 페닐-C₁ _-3　알킬, 또는 (C₅ _-6　헤테로아릴)-C₁ _-3　알킬 모노- 또는 디-에스테르; 및 하기 화합물의 염과 그들의 모노- 및 디-에스테르에 관한 것이다:

(식 중, X 는 L-γ-글루타밀 또는 L-γ-글루타밀글리실;

Y 는 H, 임의 치환된 알킬, 임의 치환된 헤테로알킬, 임의 치환된 아릴, 임의 치환된 아르알킬, 임의 치환된 헤테로아릴, 또는 임의 치환된 헤테로아르알킬이고;

Z 는 C₅ _-9　알킬, 임의 치환된 아릴, 임의 치환된 아르알킬, 임의 치환된 헤테로아릴, 또는 임의 치환된 헤테로아르알킬).

상기 화합물 (특히 산 형태)은 시험관 내 GST P1-1의 억제제, 전형적으로는 선택적 억제제이다. 디에스테르 형태에서, 상기 화합물은 시험관 내 HL-60 세포로부터의 GSTπ의 면역침전에서 효과적이고, 시험관 내 HL-60 세포에 대해 세포독성이 있다고 또한 알려졌다. 또한, 상기 화합물은 시험관 내 HL-60 세포의 분화를 증대시키는 활성이 있고, 생체 밖의 생쥐 골수 세포로부터 과립구/단핵구 집락 형성을 증대시킨다고 밝혀졌다. 따라서, 상기로부터 및 TLK117, TLK119, 및 관련 화합물의 구조적 유사성으로부터, 본원 발명의 화합물은 종양세포에서 화학요법제의 세포독성효과 증대, 선택적으로는 종양세포에서 독성의 발휘, 골수에서의 GM 전구체의 생산 증가, 골수 세포의 분화 자극, 화학요법제의 골수 억제성 효과 완화 및 골수에서의 조혈의 조절을 위해 치료적으로 인간에 작용할 수 있을 것이라 기대된다.

제 2 측면에서, 본 발명은 본 발명의 제 1 측면의 화합물, 및 임의로는 하나 이상의 부형제를 포함하는 약학적 조성물이다.

제 3 측면에서, 본 발명은, 특히 인간에 있어서, 본 발명의 제 1 측면의 화합물 또는 본 발명의 제 2 측면의 약학적 조성물을 투여함으로써, 종양세포에서 화학요법제의 세포독성효과 증대, 선택적으로는 종양세포에서 독성의 발휘, 골수에서의 GM 전구체의 생산 증가, 골수 세포의 분화 자극, 화학요법제의 골수 억제성 효과 완화 및 골수에서의 조혈의 조절 중 하나 이상의 치료방법, 및 종양세포에서 화학요법제의 세포독성효과 증대, 선택적으로는 종양세포에서 독성의 발휘, 골수에서의 GM 전구체의 생산 증가, 골수 세포의 분화 자극, 화학요법제의 골수 억제성 효과 완화 및 골수에서의 조혈의 조절 중 하나 이상을 위한 의약의 제조에 있어서의 본 발명의 제 1 측면의 화합물의 용도이다.

제 4 측면에서, 본 발명은 본 발명의 제 1 측면의 화합물의 제조 방법이다.

제 5 측면에서, 본 발명은 하기 화학식을 갖는 화합물; 및 그의 C₁ _-10　알킬, 페닐-C₁ _-3　알킬, 또는 (C₅ _-6　헤테로아릴)-C₁ _-3　알킬 모노- 또는 디-에스테르; 및 하기 화합물의 염과 그의 모노- 및 디-에스테르이다:

(식 중,

X 는 N-α-R¹-L-γ-글루타밀 또는 N-α-R¹-L-γ-글루타밀글리실 (여기에서, R¹ 은 아민-보호기) 이고;

Y 및 Z 는 본 발명의 제 1 측면의 화합물에서 정의된 바와 같다).

상기 화합물은 본 발명의 제 1 측면의 화합물의 제조에서 중간체로서 유용하다.

본 발명의 바람직한 구현예는 본원의 명세서 및 청구항 2 내지 20 및 상기 화합물의 약학적 조성물, 방법, 및 용도의 특징에 의해 특징지어진다.

본 발명의 수행 형태

정의

"알킬" 은 메틸, 에틸, 프로필, 1-프로페닐, 이소프로필, 부틸, 이소부틸, sec-부틸, tert-부틸, 펜틸, 헥실, 시클로펜틸, 시클로펜텐-1-일, 시클로프로필메틸, 시클로헥실, 및 시클로헥실메틸과 같이, 선형, 분지형, 또는 환형일 수 있는 포화 또는 불포화 (방향족 불포화는 아님) C₁-C₁₀, 바람직하게는 C₁ _-6, 탄화수소로부터, 탄소 원자에서 수소 원자 하나를 제거하여 유도한 1가 기를 의미한다. 포화 알킬 및 C₁-C₆ 알킬이 대표적이다. 본원에서 "알킬" 의 정의는 종래의 정의보다 더 넓으며, 보다 통상적으로 "시클로알킬", "시클로알킬알킬", "알케닐", 및 "알키닐" 이라 언급되는 기를 포함한다는 것에 주의한다.

"치환된 알킬" 은 3 개 이하의 할로겐 원자 및/또는 -CN, -NO₂, -OR,및 -NR₂ (여기에서, 각각의 R 은 독립적으로, H 또는 C₁ _-3 알킬)으로부터 선택된 치환기로 치환된 알킬이다. 따라서, 예를 들어, 치환된 알킬기에는 트리플루오로메틸 및 3-클로로프로필 같은 기가 포함된다. 바람직한 치환된 C₅ _-6 시클로알킬기는, 할로, 히드록시, 메틸, 트리플루오로메틸 및 메톡시, 특히 플루오로, 클로로, 또는 메틸로부터 선택된, 1 또는 2개, 특히 1개의 기로 치환된 시클로펜틸 및 시클로헥실이다.

"헤테로알킬" 은 1 또는 2 개의 메틸렌기가 O, S, SO₂, 또는 NR (여기에서, R 은 H, 또는 C₁ _-3 알킬) 로 치환된 "알킬" (상기 정의) 을 의미하며, 선형 기, 예컨대 3-옥사펜틸; 5 또는 6 개의 고리 원자를 함유하는 단환형 고리, 예컨대 2-테트라히드로푸라닐, 2-피롤리디닐, 3-피페리디닐, 2-피페라지닐, 4-디히드로피라닐, 및 3-모르폴리닐; 및 테트라히드로푸란-2-일메틸 및 피페리딘-3-일에틸과 같은 기를 포함한다. 바람직한 C₅ _-6 시클로헤테로알킬기는 고리의 메틸렌기 중 1개가 O, S, SO₂, NH, 또는 N-메틸로 치환된 시클로펜틸 또는 시클로헥실이고; 2- 및 3-테트라히드로푸라닐, 3- 및 4-테트라히드로피라닐, 4-테트라히드로티오피라닐 및 그의 S,S-디옥사이드, 및 2-, 3-, 및 4-피페리디닐을 포함한다. "치환된 헤테로알킬"은 치환된 알킬에 대해 전술한 방식으로 치환된 헤테로알킬이다.

"아릴" 은 6 내지 14 개의 고리 탄소 원자를 함유하는 방향족 탄화수소로부터, 탄소 원자에서 수소 원자 하나를 제거하여 유도한 1가 기를 의미하며, 단환형 (예를 들어, 페닐), 축합 다환형 (예를 들어, 나프틸), 또는 연결 다환형 (예를 들어, 비페닐릴) 일 수 있다.

"치환된 아릴"은 할로, -CN, -NO₂, -OH, 임의 할로-치환된 C₁ _-3 알킬 (예를 들면, 에틸, 트리플루오로메틸), 임의 할로-치환된 C₁ _-3 알킬옥시, 페녹시, (C₅ _-6　헤테로아릴)옥시, 포르밀, 카르복시, C₁ _-3　알콕시카르보닐, 및 -NR₂ (여기에서, 각각의 R 은 독립적으로 H 또는 C₁ _-3　알킬)로부터 선택된 3 이하의 치환기로 치환된 아릴을 의미한다.

"아르알킬" 은 아릴, 예컨대 벤질 및 페네틸로 치환된 알킬을 의미한다. "치환된 아르알킬" 은 아릴 및 알킬 중 하나 또는 모두가, 치환된 아릴 및 치환된 알킬에 대해서 전술한 방식으로 치환된 아르알킬을 의미한다.

"할로겐" 또는 "할로" 는 F, Cl, 또는 Br 을 의미한다.

"헤테로아릴" 은 1　내지 4 개의 고리 탄소 원자가 O, S, N, 또는 NR (여기에서, R 은 H 또는 C₁ _-3 알킬) 로 대체된, 5 내지 14 개의 고리 탄소 원자를 함유하는 방향족 탄화수소로부터 탄소 원자에서 수소 원자 한 개를 제거하여 유도한 1가 기를 의미하며, 5 또는 6 개의 고리 원자를 함유하는 단환형기 (예컨대, 푸라닐, 티에닐, 피롤릴, 옥사졸릴, 이미다졸릴, 피리디닐, 피라지닐, 피리다지닐, 및 피리미디닐); 축합 이환형 (예컨대, 벤즈이미다졸릴, 벤조트리아졸릴, 및 퀴놀릴); 또는 연결 이환형, 특히 4-(2-피리딜)페닐과 같은 (C₅ _-6 헤테로아릴)-페닐일 수 있다. 바람직한 C₅ _-6 헤테로아릴기는 2- 및 3-푸릴, 2- 및 3-티에닐, 및 2-,3-, 및 4-피리디닐이다. "치환된 헤테로아릴"은 치환된 아릴에 대해서 전술한 방식으로 치환된 헤테로아릴을 의미한다.

"헤테로아르알킬" 은 2-피롤릴메틸과 같은, 헤테로아릴로 치환된 알킬을 의미한다. "치환된 헤테로아르알킬" 은 치환된 알킬에 대해서 전술한 방식으로 치환된 헤테로아르알킬을 의미한다.

"염" 은 "본 발명의 화합물" 이라는 제목의 단락에서 설명한다.

"아민-보호기"는 본 발명의 제 1 측면의 화합물 또는 그의 중간체의 글루타밀 α-아민기를 상기 화합물의 합성 도중 보호할 수 있고, 이어서 본 발명의 제 1 측면의 화합물의 나머지에 영향을 미치지 않고 제거될 수 있는 기이다. 그러한 기는 일반적으로, 산분해로 쉽게 제거될 수 있는 tert-부톡시카르보닐 및 벤질옥시카르보닐이고; 벤질옥시카르보닐은 촉매적 수소화에 의해서도 일반적으로 제거될 수 있다. 아민-보호기는 유기 합성 분야 및 특히 펩티드 합성 분야에서 잘 알려져 있다. 그러한 적합한 기, 및 그의 제거 조건이 Synthesis of Peptides and Peptidomimetics, Workbench edition, M.　Goodman, ed., Georg Thieme Verlag, Stuttgart, Germany, 2004, 및 Protective groups in organic synthesis, 3　ed., T.W.　Greene and P.G.M.　Wuts, eds., John Wiley & Sons, Inc., New York, New York, U.S.A., 1999 과 같은 책들에 기재되어 있고, 당업자에게는 자명할 것이다.

"치료적 유효량" 은 치료 방법 중 하나에 의해, 치료 효과를 보이기 위해 포유동물, 특히 인간에게 투여하는 경우, 상기 치료의 목적인 병태에 대해 치료 효과를 내기에 충분한 양을 의미한다. 포유동물에서 상태의 "처치" 또는 "치료" 에는 다음 중 하나 이상이 포함된다:

(1) 병태의 발달을 억제, 예컨대, 그 발달을 정지.

(2) 병태를 완화, 예컨대, 퇴행을 야기, 또는 병태를 치료

(3) 병태의 재발 방지, 및

(4) 병태의 징후 완화.

본 발명의 화합물 및 그의 제조

본 발명의 제 1 측면의 화합물은 하기의 화학식을 갖는 화합물; 및 그의 C₁ _-10　알킬, 페닐-C₁ _-3　알킬, 또는 (C₅ _-6　헤테로아릴)-C₁ _-3　알킬 모노- 또는 디-에스테르; 및 하기 화합물의 염과 그들의 모노- 및 디-에스테르이다:

(식 중,

X 는 L-γ-글루타밀 또는 L-γ-글루타밀글리실; 및

Y 는 H, 임의 치환된 알킬, 임의 치환된 헤테로알킬, 임의 치환된 아릴, 임의 치환된 아르알킬, 임의 치환된 헤테로아릴, 또는 임의 치환된 헤테로아르알킬;

Z 는 임의 치환된 C₅ _-9　알킬, 임의 치환된 C₅ _-9헤테로알킬, 임의 치환된 아릴, 임의 치환된 아르알킬, 임의 치환된 헤테로아릴, 또는 임의 치환된 헤테로아르알킬).

본 발명의 제 1 측면의 바람직한 화합물은 하기 특징 중 하나 이상을 갖는 화합물을 포함한다.

1. X 는 L-γ-글루타밀;

2. Y 는 임의 치환된 C₅ _-6　시클로알킬, 임의 치환된 C₅ _-6　시클로헤테로알킬, 임의 치환된 페닐, 또는 임의 치환된 C₅ _-6　헤테로아릴; 특히 Y 는 시클로펜틸, 시클로헥실, 티에닐, 푸릴, 피리디닐, 또는 임의 치환된 페닐; 더욱 특별하게는, 1 또는 2 개의 플루오로, 클로로, 메틸, 히드록시, 메톡시, 또는 트리플루오로메틸기로 임의 치환된, 시클로헥실 또는 페닐; 예컨대, 비치환 페닐, 또는 치환기 중 하나가 4-위치에 있는 페닐, 특히 단지 하나의 치환기가 있는 페닐;

3. Z 는 C₅ _-9 알킬, 또는 1 내지 3 개의 할로, 시아노, 히드록시, 카르복시, 트리플루오로메틸, 또는 -R, -OR, -COOR, 또는 -NR₂ 기 (여기에서, R 은 C₁ _-3　알킬)로 각각 임의 치환된, 페닐, 1- 또는 2-나프틸, 2-, 3-, 또는 4-비페닐릴, 또는 2-, 3-, 또는 4-(C₅ _-6　헤테로아릴)페닐; 특히 플루오로, 클로로, 시아노, 히드록시, 메톡시, 메틸, 또는 트리플루오로메틸로 각각 임의 치환된, 페닐 또는 2-, 3-, 또는 4-비페닐릴, 또는 2-, 3-, 또는 4-(C₅ _-6　헤테로아릴)페닐;

4A. 상기 화합물은 이산; 또는

4B. 상기 화합물은 디에스테르, 특히 C₁ _-6 알킬 디에스테르, 더욱 특별하게 C_1-3 알킬 디에스테르.

일반적으로, 상기 특징을 많이 갖고 있는 화합물이 상기 특징을 적게 갖고 있는 화합물보다 바람직하다; 특히, 상기 특징 모두를 갖고 있지 않은 화합물에 상기 특징 중 하나를 추가하는 것은 그 특징을 갖지 않은 화합물에 비해 바람직한 화합물을 야기할 것이다.

본 발명의 화합물의 적합한 염 (비제한적인 목록으로서 Berge 등, J. Pharm . Sci., 66:1 (1971) 참고) 은, 무기 염기 (예컨대, 나트륨, 칼륨, 및 수산화 칼슘) 또는 유기 염기 (예컨대, 에탄올아민, 디에탄올아민, 트리에탄올아민, 에틸렌디아민, 트로메타민, N-메틸그루카민) 가 카르복실기와 반응할 때 형성되는 것들, 및 무기산 (예컨대, 염산, 브롬화수소산, 황산, 잘산, 및 클로로술폰산) 또는 유기산 (예컨대, 아세트산, 프로피온산, 옥살산, 말산, 말레산, 말론산, 푸마르산, 타르타르산, 및 메탄술폰산, 에탄술폰산, 벤젠술폰산, 치환된 벤젠술폰산 (예컨대, 클로로벤젠술폰산 및 톨루엔술폰산), 나프탈렌술폰산 및 치환된 나프탈렌술폰산, 나프탈렌디술폰산 및 치환된 나프탈렌디술폰산, 및 캄포르술폰산과 같은 알칸- 또는 아렌술폰산) 이 반응하여 상기 화합물의, 아민기의 산부가염을 형성하는 것들이다. 상기 염은 약학적으로 허용 가능한 산 및 염기로 형성되는 것이 바람직하다. 상기 화합물에 적합한 염은 특히, 염산염과 같은 무기산으로 형성된 산부가염이다.

본 발명의 방법에 의한, 본 발명의 제 1 측면의 화합물의 제조는 하기를 포함한다:

(a) 하기의 화학식을 갖는 화합물("술파이드 화합물") 또는 그의 C₁ _-10　알킬, 페닐-C₁ _-3　알킬, 또는 (C₅ _-6　헤테로아릴)-C₁ _-3　알킬 모노- 또는 디-에스테르를 산화시켜 본 발명의 제 1 또는 제 5 측면의 화합물을 얻는 단계:

(식 중,

X 는 L-γ-글루타밀 또는 L-γ-글루타밀글리실, 또는 N-α-R¹-L-γ-글루타밀 또는 N-α-R¹-L-γ-글루타밀글리실 (여기에서, R¹ 은 아민-보호기) 이고,

Y 및 Z 는 본 발명의 제 1 측면의 화합물의 정의와 같다);

(b) Y 가 N-α-R¹-L-γ-글루타밀 또는 N-α-R¹-L-γ-글루타밀글리실이라면, 본 발명의 제 5 측면의 화합물인 생성된 술폰을 탈보호하여, 본 발명의 제 1 측면의 화합물을 얻는 단계; 및 임의로는

(c) (a) 또는 (b) 단계에서 제조된 본 발명의 제 1 측면의 화합물이 이산이라면, 상기 화합물의 모노- 또는 디에스테르를 형성하는 단계; 또는

(d) (a) 또는 (b) 단계에서 제조된 화합물이 모노- 또는 디에스테르라면, 상기 화합물을 탈-에스테르화하여 상기 화합물의 이산을 제조하는 단계; 및

(e) (a) 내지 (d) 단계 중 어느 하나에서 제조되는 화합물의 염을 형성하는 단계.

(a) 단계에서, 황 원자는 산화되어 본 발명의 제 1 측면의 화합물 (글루타밀 아민기가 탈보호된 경우) 또는 본 발명의 제 5 측면의 화합물 (글루타밀 아민기가 R¹-보호된 경우) 을 제조한다.

전형적으로, 술파이드 화합물은 적합한 용매에 용해되고, 산화제가 첨가되어 반응 혼합물이 산화를 완료하는데 충분한 시간과 충분한 온도로 유지된다. 적합한 용매/산화제 조합은 C₂ _-3 알카노산/과산화수소/퍼옥시알카노산 조합 (예컨대, 아세트산/퍼옥시아세트산 및 아세트산/과산화수소/퍼옥시아세트산) 과 용매 및 산화제 모두로서 C₂ _-3 퍼옥시알카노산 또는 퍼옥시트리플루오로아세트산을 사용하는 것이다. 원한다면, 디메틸 술파이드와 같은 시약으로 과량의 산화제를 제거시킨 후, 본 발명의 제 1 측면 (또는 제 5 측면) 의 화합물은 단순히 농축에 의해 분리한다. 특히 적합한 용매/산화제 조합은, 에스테르 (예컨대, 이소프로필 아세테이트) 와 같은 비-극성 비양자성 용매에 용해된 술파이드 화합물과 함께, 산화가 2 상 시스템에서 일어나고, 산화제가 수용액에 있는 조합을 포함한다. 상기 2 상 산화에 적합한 산화제는 퍼보레이트 및 퍼술파이트 (예컨대, 암모늄, 나트륨 또는 칼륨 퍼술파이트) 와 같은 붕산염 및 퍼옥시 화합물을 포함하고, 특히 적합한 산화제는 OXONE^TM (2KHSO₅.KHSO₄.K₂SO₄) 과 같은 포타슘 모노퍼술페이트이다. 수상과 비-수상의 분리 후, 및 임의로 모든 산화제를 확실히 제거하기 위해 비-수상을 세척하고, 본 발명의 제 1 측면 (또는 제 5 측면) 의 화합물을 농축에 의해 비-수상에서 분리한다.

임의적인 (b) 단계에서, 본 발명의 제 5 측면의 화합물의 R¹-보호 아민기가 탈보호되어 본 발명의 제 1 측면의 화합물이 제조된다.

본 발명의 제 5 측면의 화합물은 분자의 나머지에 또한 영향을 미치지 않는, 아민-보호기의 제거에 적합한 임의의 방법에 의해 탈보호될 수 있다. 아민-보호기가 산분해적으로 제거될 수 있는 기일 경우, 강산 (예컨대, 임의로 디클로로메탄의 존재하에서, 트리플루오로아세트산) 을 사용하여 쉽게 탈보호할 수 있다. 아민-보호기가 촉매적으로 제거 가능한 아민-보호기일 경우, 일반적으로 촉매적으로 제거할 수 있다고 고려되는 벤질옥시카르보닐과 같은 기들이 산분해에 의해 또한 제거될 수 있다 하더라도, 촉매 환원 또는 이성화에 의해 쉽게 탈보호될 수 있다.

촉매 환원에서, 전형적으로, 상기 화합물은 특히 물의 존재하에서, C₁ _- ₄알칸올, 또는 극성 양자성 용매, 또는 비-극성 비양자성 용매 (예컨대, 물 존재하의 이소프로필 아세테이트) 에 용해되고, 환원 촉매, 전형적으로 팔라듐 촉매 (예컨대 팔라듐 블랙, 바륨 술페이트 상의 팔라듐, 및 카본 상의 팔라듐) 의 존재하에, 수소 또는 수소 공여자 (예컨대, 시클로헥센 또는 1,4-시클로섹사디엔) 을 접촉시킨다. 촉매 이성화에서, 전형적으로 이차 아민과 같은 친핵성 알릴기 제거제의 존재하에, 테트라키스(트리페닐포스핀)팔라듐(0) 과 같은 0가 팔라듐 복합체가 사용된다. 촉매의 제거 후, 본 발명의 제 1 측면의 화합물은 산부가염 (임의적인 (e)단계) 으로써 쉽게 분리된다.

임의적인 (c) 및 (d) 단계에서, 본 발명의 제 1 측면의 화합물은 에스테르화되거나 (이산 및 에스테르를 목적하는 경우), 탈-에스테르화된다 (에스테르 및 이산을 목적하는 경우). 상기 에스테르화 또는 탈-에스테르화는 전형적이고, 당업자에게 공지된 임의의 방법에 의해 수행될 수 있다; 특히, 쉬운 에스테르화 기술은 본 발명의 제 1 측면의 이산 화합물과 목적하는 에스테를 생산하는 알코올을 반응시키는 것을 포함하는데, 실온 내지 알코올의 끓는점의 온도에서, 클로로트리에틸실란과 같은 할로실란의 존재하에, 상기 알코올을 용매로서 사용한다.

임의적인 (e) 단계에서, 본 발명의 제 1 측면의 화합물의 염이 형성된다. 이것은 전형적으로 산부가염이 될 것이다 (상기 "염"의 정의 참고). 본 발명의 제 1 측면의 화합물이 형성된 직후, 상기 염은 쉽게 형성될 수 있고; 상기 염에 역-용매 (anti-solvent)가 될, 비양자성 용매 [예컨대, 탄화수소 또는 할로겐화 탄화수소 (예컨대, 디클로로메탄)] 와 같은 용매를 첨가하고, 이어서 염을 형성하기 위해 선택된 산을 특히 무수산 단독의 형태 또는 비양자성 용매 (예컨대, 염화 수소 가스) 에서 첨가함으로써 수행될 수도 있다. 또한, 염에 대한 역-용매 (예컨대, 디에틸 에테르, 메틸 tert-부틸 에테르, 및 테트라히드로푸란, 특히 메틸 tert-부틸 에테르와 같은 에테르) 가 필요하거나 원하는 경우 첨가될 수 있다.

상기 방법 ("술파이드 화합물") 을 위한 출발 물질은, 임의로는 모노- 또는 디-에스테르화되고, 임의로는 글루타밀 아민에서 보호되고, Z-CH₂-기로 알킬화된 시스테인 황을 갖는, 트리펩티드 및 테트라펩티드이다.

이러한 S-알킬화된 글루타티온 유사체는 당업자에게 공지된 전통적인 펩티드 합성 방법에 의해 제조될 수 있다.

적당하게 S-알킬화된 시스테인을 쉽게 구할 수 없는 경우, 펩티드 합성은 많은 표준 S-보호기 (예컨대, 트리페닐메틸) 를 이용하여 수행될 수 있고, 생성된 S-보호된 펩티드는 이후, 예컨대, 산분해에 의해 탈보호된다. 전형적으로, S-보호된 펩티드는, 임의로는 제거제의 존재하에서, 산분해적으로 제거 가능한 황-보호기는 충분히 제거할 수 있지만 임의의 아민-보호기는 제거할 수 없는 강도를 갖는 산에 용해된다. 상기 적합한 산은, 임의로는 디클로로메탄과 같은 공용매의 존재하에서, 트리플루오로아세트산, 및 트리플루오로메탄술폰산과 같은 기타 강산을 포함한다; 적합한 제거제는 아니솔 및 티오아니솔과 같은 방향족 에테르 및 술파이드, 크레졸과 같은 페놀, 및, 가장 효율적으로는, 트리알킬실란 (예컨대, 트리에틸실란 및 트리이소프로필실란) 및 실란 폴리머 (예컨대, 폴리(메틸히드로실록산) 를 포함하는 실란이 포함된다. S-탈보호된 펩티드는 역-용매 (예컨대, 탄화수소 또는 에테르와 같은 비양자성 비-극성 용매) 를 첨가함으로써 반응 혼합물로부터 분리될 수 있다.

그 후, S-탈보호된 펩티드의 티올레이트 음이온은 화학식 Z-CH₂-L (식 중, L은 할로겐 (염소 또는 브롬) 또는 임의 치환된 알칸- 또는 아렌술포네이트와 같은 이탈기) 을 갖는 화합물로 알킬화되어, 적당히 S-알킬화된 펩티드가 제조된다. 상기 반응은 부반응을 최소화하기 위해, 글루타밀 아민이 보호되었을 때 쉽게 수행되지만, 아민이 보호되지 않을 경우라도 수행될 수 있다.

전형적으로, S-탈보호된 펩티드는 적합한 용매 (예컨대, C₁ _-6 알칸올, 1,2-에탄디올 또는 1,3-프로판디올과 같은 디올, 2-메톡시에탄올, 1,2-디메톡시에탄, 또는 테트라히드로푸란과 같은 에테르 등) 에서 강염기 [예컨대, 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속 수화물, 카르보네이트, 비카르보네이트, 포스페이트, 또는 알콕사이드, 또는 암모늄 히드록사이드; 또는 테트라메틸구아니딘, DBU (1,8-디아자비시클로[5.4.0]운덱-7-엔) 와 같은 유기 아민 염기 등] 의 용액에 용해되어 티올레이트 음이온을 형성하고, Z-CH₂-L 화학식을 갖는 화합물이 첨가되어 (전형적으로 과량으로), 반응 혼합물을 적당한 온도 및 반응종결시까지의 시간 동안 유지한다. 용이한 반응 조건은 수중 20% 테트라히드로푸란 및 약 10 배 과량의 탄산수소나트륨을 사용하는 것이다.

술파이드 화합물은 다음과 같이 제조될 수도 있다:

(임의 보호된) 시스테인이 적당한 Z-CH₂-기로 알킬화되고, 트리펩티드 또는 테트라펩티드가 표준 펩티드 합성 방법, 즉 하기의 화학식을 갖는 아미노산과 먼저 커플링되고:

,

이후, (임의 보호된) L-γ-글루타민 또는 L-γ-글루타밀글리신과 커플링 되거나; (임의 보호된) L-γ-글루타민 또는 L-γ-글루타밀글리신과 커플링되고, 이후 하기의 화학식을 갖는 아미노산과 커플링되는 방법에 의해 형성된다:

.

D-페닐글리신, D-(4-클로로페닐)글리신, D-(4-히드록시페닐)글리신, D-(3-티에닐)글리신, 및 D-시클로헥실글리신과 같은 하기의 화학식을 갖는 다수의 아미노산은 상업적으로 분해된 형태로 사용 가능하고, 몇몇 경우에는 에스테르로서 사용가능하다:

.

다른 것들은 라세미 형태로 사용가능하나, 아미노산의 분해에 관해 알려진 임의의 방법에 의해 분해될 수 있다. 또한, 다른 것들은 아미노산 합성법으로 공지된 방법에 의해 제조될 수 있다.

술파이드 화합물은 출발 아미노산의 상태에 따라, 이산으로서 (비록 이것은 아민뿐만 아니라 글루타밀 α-카르복실의 중간체 보호를 포함할 수 있지만) 또는 모노- 또는 디에스테르로서 제조될 수 있다. 술파이드 화합물이 이산으로서 제조된다면, 술파이드가 술폰으로 산화되기 전에 모노- 또는 디-에스테르화 (전형적으로 아민-보호 동안)가 될 것이고, 에스테르화 조건은 본 발명의 제 1 측면의 화합물의 에스테르화에 사용될 수 있는 것들과 전형적으로 유사할 것이다.

당업자는, 당업계의 기술 및 본원 개시 (실시예 포함) 를 고려하면 본 발명의 제 1 측면 및 제 5 측면의 화합물의 제조에 아무런 어려움이 없을 것이다.

화합물의 용도 및 공정

본 발명의 제 1 측면의 화합물 (특히 산 형태)는 GST P1-1의 억제제, 전형적으로는 선택적 억제제이다. 또한, 상기 화합물은 시험관 내 HL-60 세포의 분화를 증대시키는 활성을 갖고, 생체 밖에서 마우스의 골수 세포로부터 과립구/단핵구 집락 형성을 증대시킴이 알려졌다. 따라서, 상기 화합물은 인간에 있어 하기와 같이 치료적으로 작용할 것으로 기대된다: 종양세포에서 화학요법제의 세포독성효과 증대 (다수의 종양 조직에서 증가된 GTP, 특히 GST P1-1 이 화학요법제에 대한 종양 세포의 내성과 연관되기 때문에; 그리하여 GST 억제제는 종양 세포가 화학요법제를 제거하는 능력을 감소시키다) , 선택적으로는 종양세포에서 독성의 발휘 (역시 GST 동종효소 억제 때문), 골수에서의 GM 전구체의 생산 증가, 골수 세포의 분화 자극, 화학요법제의 골수 억제성 효과 완화 및 골수에서의 조혈의 조절.

본 발명의 제 5 측면의 화합물 및 본 발명의 제 4 측면의 방법은 본 발명의 제 1 측면의 화합물을 제조하는데 유용하다.

본 발명의 제 2 측면은, 본 발명의 제 1 측면의 화합물을 포함하고, 임의로는 부형제, 예컨대 약학적으로 허용 가능한 부형제를 추가적으로 포함하는 약학적 조성물, 상기 화합물 또는 이들을 포함하는 약학적 조성물을, 전형적으로는 치료 유효량으로 투여하는 것을 포함하는 치료 방법, 및 상기 화합물의 암 치료용 용도 및 암 치료용 의약 제조를 위한 용도이다.

상기 화합물은, 치료를 받는 대상 및 상기 대상의 병태의 특성에 적합한 임의의 적절한 경로로 투여될 수 있다. 투여 경로는, 비제한적으로, 주사 투여 (예컨대, 정맥내 주사, 복강내 주사 및 피하 주사) 또는 국부 적용, 비강 스프레이, 좌약 등을 통한 점막관통 또는 경피 전달되거나, 구강 투여될 수 있다. 상기 화합물을 포함하는 약학적 조성물은 임의로는 리포솜 제형, 에멀젼, 점막을 가로질러 약물을 투여하기 위해 설계된 제형, 또는 경피 제형일 수 있다. 상기 투여 방법 각각에 대한 적합한 제형은, 예컨대 Remington : The Science and Practice of Pharmacy, 20　ed., A.　Gennaro, ed., Lippincott Williams & Wilkins, Philadelphia, Pennsylvania, U.S.A., 2003 에서 찾을 수 있다. 전형적인 조성물은 경구 또는 정맥내 주입을 위한 용액일 수 있고, 상기 화합물을 포함하며, 전형적으로는 하나 이상의 약학적으로 허용 가능한 부형제를 추가적으로 포함할 것이다. 전형적인 투여 형태는 정제, 정맥내 주입을 위한 용액, 정맥내 주입을 위한 용액으로서 재구성하기 위한 동결건조된 파우더, 및 리포솜 제형 및 정맥내 투여를 위한 리포솜 제형 및 동결건조된 리포솜 제형일 것이다.

본 발명의 제 1 측면의 화합물의 치료 유효량은 약 10 - 2000 mg/m² 신체 표면 넓이, 특히 50　-　1000　mg/m²이다. 투여는 2, 3, 또는 4주 마다 반복하여 투여하며, 1　내지　35　일 간격일 수 있다; 예컨대, 1 내지 5 주 간격, 특히 1, 2, 3, 또는 4 주 간격으로 약 250　-　1000　mg/m², 또는 며칠 동안 (예컨대 5 또는 7 일) 한번/하루 와 같은 것을 포함하여 더 자주일 수 있고, 또는 2, 3 또는 4 주마다 6 내지 72 시간의 기간 동안 일정하게 주입될 수 있다. 전형적인 요법은 3주마다 5일 동안 한번/하루 투여를 포함할 수 있다.

제조 및 실시예

다음의 실시예들은 본 발명의 방법에 의한 유용한 중간체의 제조 및 본 발명의 화합물의 합성 및 치료제로서의 본 발명의 제 1 측면의 화합물의 유용성을 보여준다.

제조 1 및 2 는 시스테인 또는 트리텝티드 및 테트라텝티드 ("술파이드 화합물") 의 시스테인의 S-알킬화를 위한 시약 제조를 기술한다. 편의상, 상기 시약은 벤질 브로마이드 (α-브로모톨루엔) 의 유도체로 명명된다.

제조 1: 4-(2-피리딜)벤질 브로마이드의 제조

4-(2-피리딜)톨루엔 2　mL (1.98　g, 11.7　mmol), N-브로모숙신이미드 (NBS) 2.5　g (14.0　mmol), 및 α, α'-아조비스(이소부티로니트릴) (AIBN) 23　mg (0.14　mmol) 을 35　mL 테트라클로로메탄에 현탁시키고, 24 시간 동안 환류시켰다. 생성물을 여과하였고, 회전 증발기를 이용하여 여과액에서 용매를 제거하였다. 동일 양의 클로로포름 및 물을 첨가하고 생성물을 추출하였다. 클로로포름층을 분리하여 건조시키고, 용매를 제거하였다. 끈적이는 황색 고체로서 4-(2- 피리딜)벤질 브로마이드 2　g 을 얻었다.

제조 2: 4-(2-메톡시페닐)벤질 브로마이드의 제조.

4-브로모톨루엔 171　mg (1　mmol), 2-메톡시페닐보론산 152　mg (1　mmol), 팔라듐 디아세테이트 1　mg (4　μmol), N-부틸암모늄 브로마이드 322　mg (1　mmol), 및 2　M 수용성 Na₂CO₃ 1.9　mL (3.8　mmol) 을 마이크로파 압력 바이알 (vial) 에 넣고 150　℃ 로 5　분 동안 가열하였다. 실온으로 냉각한 후, 생성물을 분별 깔때기에 붓고, 물 및 디에틸 에테르 각각 30　mL 를 첨가하였다. 추출 후에, 층을 분리하고 수성층을 다시 30　mL 디에틸 에테르로 세척하였다. 상기 에테르 추출물을 수집하고, MgSO₄로 건조하고, 용매를 진공하의 회전 증발기를 이용하여 제거하였다. NMR 분석을 통한 95% 순도인 고체 생성물로서 2-메톡시-4'-메틸비페닐 160　mg (81% 수율) 을 얻었다.

2-메톡시-4'-메틸비페닐 160　mg (0.81　mmol), NBS 158　mg (0.91　mmol), 및 AIBN 1　mg (0.006　mmol) 을 7　mL 테트라클로로메탄에 현탁시키고, 24 시간 동안 환류시켰다. 생성물을 여과하였고, 회전 증발기를 이용해 여과액에서 용매를 제거하였다. 동일 양의 클로로포름 및 물을 첨가하여 생성물을 추출하였다. 상기 에테르층을 분리하여 MgSO₄로 건조하고, 여과하고 용매를 제거하였다. 오일 (oil) 로서 4-(2-메톡시페닐)벤질 브로마이드 128　mg 을 얻었다.

상기 방법에 의해 2-시아노페닐브롬산으로부터 4'-(2-시아노페닐)벤질 브로마이드을 제조하였다.

임의 치환된 페닐 또는 임의 치환된 C₅ _-6 헤테로아릴로 치환된 기타 벤질 브로로마이드는 이러한 제조 방법에 의해 쉽게 제조될 수 있다.

제조 3은 S-알킬화 시스테인의 제조를 설명한다.

제조 3: N-α-(tert-부톡시카르보닐)-S-(4-비페닐릴메틸)-L-시스테인의 제조

N-α-(tert-부톡시카르보닐)-L-시스테인 1.0　g (4.52　mmol) 을 아르곤 버블링 (bubbling) 에 의해 기체를 제거시킨 9　mL 테트라히드로푸란 및 9　mL 1　M 수용성 NaOH 의 혼합물에 용해시켰다. 5　mL 테트라히드로푸란 중의 4-(브로모메틸)비페닐, 1.12　g (4.53　mmol) 용액을 첨가하고 아르곤 버블링하면서 실온에서 8 시간 동안 상기 용액을 교반하였다. 상기 THF 를 진공하의 회전 증발기로 제거하고 잔여물을 물로 희석하여 디메틸 에테르로 세척하였다. 수성층을 6　M 수용성 HCl 로 pH 3 으로 산성화시키고, 에틸 아세테이트로 3 회 추출하였다. 상기 수집된 유기 추출물을 물, 포화 수용성 NaHCO₃, 물, 및 식염수로 세척하고, 그 후 건조 및 농축하여 백색 고체로서 1.44　g 의 N-α-(tert-부톡시카르보닐)-S-(4-비페닐릴메틸)-L-시스테인 (82% 수율) 을 얻었다.

기타 (임의로는 보호된) S-알킬화 시스테인은 상기 제조 방법에 의해 쉽게 제조될 수 있다.

제조 4 내지 6 은 몇몇 "술파이드 화합물" 의 제조를 개시한다.

제조 4: L-γ-글루타밀-S-[(4-비페닐릴)메틸]-L-시스테이닐-D-페닐글리신의 제조.

330 mg 의 L-α-(벤질옥시카르보닐)-L-γ-글루타밀-L-시스테이닐-D-페닐글리신을 아세토니트릴/물 중의 아민-보호된 펩티드에 용해시키고, 약 10-배 과량의 탄산수소 나트륨을 첨가하고, 약간 과량의 4-(브로모메틸)비페닐을 첨가한 후, 질소 하에서 반응 완결시까지 유지하여, 염산염으로서, L-γ-글루타밀-S-[(4-비페닐릴)메틸]-L-시스테이닐-D-페닐글리신을 제조하였다. 상기 반응 혼합물을 물로 희석하고 디에틸 에테르로 세척하고, 수성상을 분리하여 염산으로 pH　2 내지 3 으로 산성화시킨 후, 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기상을 무수 MgSO₄로 건조시켜 여과하고, 부피를 감소시켜 L-α-(벤질옥시카르보닐)-L-γ-글루타밀-S-[(4-비페닐릴)메틸]-L-시스테이닐-D-페닐글리신을 얻었다. 아민-보호된 술파이드 화합물, 약 300　mg 을 한 방물의 물이 있는 95:5 트리플루오로아세트산 (TFA):디클로로메탄 2 mL 에 용해시키고 45 ℃ 에서 밤새 교반하고, 분취용 HPLC 에 의해 정제하여 L-γ-글루타밀-S-[(4-비페닐릴)메틸]-L-시스테이닐-D-페닐글리신을 얻었다. L-γ-글루타밀-S-[(4-비페닐릴)메틸]-L-시스테이닐-D-페닐글리신을 염산염으로서 분리하였다. 원한다면, 상기 아민-보호된 술파이드 화합물을 직접 산화 단계 (a) 로 보내, 본 발명의 제 5 측면의 화합물을 제조할 수도 있다.

L-γ-글루타밀-S-{[4-(2-피리딜)페닐)메틸}-L-시스테이닐-D-페닐글리신과 같은 화합물, 및 그들의 아민-보호된 유사체들은 유사한 방법에 의해 제조된다.

모노- 및 디에스테르인 술파이드 화합물을 포함하는 기타 술파이드 화합물은 유사한 방법에 의해 쉽게 제조될 수 있다.

제조 5: L-γ-글루타밀-S-[(4-비페닐릴)메틸]-L-시스테이닐-D-페닐글리신 디에틸 에스테르의 제조.

L-γ-글루타밀-S-[(4-비페닐릴)메틸]-L-시스테이닐-D-페닐글리신, 30 mg 을 에탄올 및 클로로트리메틸실란으로 에스테르화하여 염산염으로서, L-γ-글루타밀-S-[(4-비페닐릴)메틸]-L-시스테이닐-D-페닐글리신 디에틸 에스테르을 제조하였다. 상기 L-γ-글루타밀-S-[(4-비페닐릴)메틸]-L-시스테이닐-D-페닐글리신 디에틸 에스테르을 염산염으로서 분리하였다.

L-γ-글루타밀-S-{[4-(2-피리딜)페닐)메틸]-L-시스테이닐-D-페닐글리신 디에틸 에스테르와 같은 화합물은 유사한 방법에 의해 제조된다. 술파이드 화합물의 기타 에스테르, 특히 디에스테르는 유사한 방법에 의해 쉽게 제조될 수 있다.

제조 6: L-γ-글루타밀-S-[(4-비페닐릴)메틸]-L-시스테이닐-D-시클로헥실글리신의 제조.

D-시클로헥실글리신 500 mg (3.1 mmol) 을 15 mL 에탄올 중의 산에 현탁시키고, 클로로트리메틸실란 2.02 mL (5 당량) 을 첨가시켜, 상기 혼합물을 50 ℃ 에서 18 시간 동안 가열하여 D-시클로헥실글리신 에틸 에스테르를 제조하였다. 진공 하에서 휘발성 성분을 제거하고 잔여물을 에틸 아세테이트에 용해시키고, 수용성 NaHCO₃ 및 식염수로 2회 세척하고, MgSO₄로 건조시키고, 여과하고, 증발시켜 유상 고체로서 401　mg D-시클로헥실글리신 에틸 에스테르를 얻었다.

N-α-(tert -부톡시카르보닐)-S-(4-비페닐릴메틸)-L-시스테인 588　mg (1.9　mmol) 을 5　mL 디메틸포름아미드 (DMF) 에 용해시키고, O-벤조트리아졸-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트 (HBTU) 860　mg (1.2　당량), 및 디(이소프로필)에틸아민 990　μL (3　당량) 을 첨가하였다. 3 분 후, 4　mL DMF 에 용해시킨 D-시클로헥실글리신 에틸 에스테르 360　mg (1　당량) 을 첨가하고, 상기 혼합물을 실온에서 2 시간 동안 교반한 후, 조 N-α-(tert -부톡시카르보닐)-S-(4-비페닐릴메틸)-L-시스테이닐-D-시클로헥실글리신 에틸 에스테르를 분리하였다. 상기 디펩티드를 20% TFA/디클로로메탄 10　mL 에 용해시키고, 실온에서 2 시간 동안 교반한 후, 진공 하에서 휘발성 물질을 제거하여 조 생성물을 분리하였다. 상기 조 S-(4-비페닐릴메틸)-L-시스테이닐-D-시클로헥실글리신 트리플루오로아세테이트는 직접 다음 단계에 이용되거나, 추가적으로 처리될 수 있다.

N-α-(tert -부톡시카르보닐)-O-α-tert-부틸-L-γ-글루타민을 2　mL DMF 에 용해시키고, HBTU 174 mg (1.2 당량) 및 디(이소프로필)에틸아민 330　μL (5　당량) 을 첨가하였다. 5 분 후, 2　mL DMF 에 용해시킨 S-(4-비페닐릴메틸)-L-시스테이닐-D-시클로헥실글리신 트리플루오로아세테이트 200　mg (0.38　mmol) 을 첨가하고, 상기 혼합물을 실온에서 2 시간 동안 교반하였다. 상기 혼합물을 0.1 N 수용성 시트르산에 붓고, 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기층을 식염수로 4회 세척하고, MgSO₄로 건조시키고 휘발성 물질을 증발시켜 갈색 오일의 N-α-(tert -부톡시카르보닐)-O-α-tert-부틸-L-γ-글루타밀-S-(4-비페닐릴메틸)-L-시스테이닐-D-시클로헥실글리신을 얻었다. 상기 물질을 20% TFA/디클로로메탄 10　mL 에 용해 시키고, 실온에서 24 시간 동안 교반하였다. 진공 하에서 휘발성 물질을 제거하고 생성물을 역상 HPLC 으로 정제한 후, L-γ-글루타밀-S-(4-비페닐릴메틸)-L-시스테이닐-D-시클로헥실글리신을 염산염으로서 47 mg 분리하였다. 원한다면, 상기 보호된 술파이드 화합물은 또한 산화 단계 (a) 로 직접 보내질 수 있다.

유사한 방법에 의해 염산염으로서 L-γ-글루타밀-S-(4-비페닐릴메틸)-L-시스테이닐-D-(4-클로로페닐)글리신이 제조되었다.

합성 실시예 1. L-γ-글루타밀-3-[(페닐메틸)술포닐]-L-알라닐-D-페닐글리신, 1A 의 합성.

아세트산에 용해된 100　mg (0.2　mmol) L-γ-글루타밀-S-(페닐메틸)-L-시스테이닐-D-페닐글리신 염산염 (TLK117 염산염) 에 아세트산 중의 32% 퍼아세트산 용액 (0.95　mmol) 200　μL 을 첨가하였다. 상기 반응 혼합물을 실온에서 유지한 후, LCMS 에 의한 반응을 하였다. 반응 완결시에, 상기 반응 혼합물을 진공 하에서 농축시켜 고체로 만들고, 그 후 50% 아세토니트릴/물에 넣어 추출하고 (take up) 여과하고, 잔여물을 더 많은 아세토니트릴/물로 세척하였다. 여과물을 동결건조하고, 잔여물 및 여과물을 분취용 HPLC 로 정제하고, 생성물-함유 분획을 다시 동결건조하였다. 아세토니트릴/물에 용해 및 동결건조후, 메탄올/에테르로 분쇄하고 진공 하에서 건조하여 LC (ELSD 검출) 에 의해, 96% 순도를 가진 고체 생성물 L-γ-글루타밀-3-[(페닐메틸)술포닐]-L-알라닐-D-페닐글리신, 1A 을 얻었다. 양성자 NMR 스펙트럼 (DMSO-d ₆) 은 제안된 구조와 일치하였다. 2.3 내지 2.5- 배 과량의 퍼아세트산을 이용하고, 용매 비율 및 양을 약간 변화시켜, 더 큰 규모 (각각 0.4　mmol 및 11　mmol) 로 두 로트 (lot) 를 유사하게 제조하였다. 각 경우에서 동일한 생성물을 얻었다.

합성 실시예 2. L-γ-글루타밀-3-[(페닐메틸)술포닐]-L-알라닐-D-페닐글리신 디에틸 에스테르, 1B 의 합성.

3　mL 아세트산에 용해시킨 123　mg (0.22　mmol) 의 L-γ-글루타밀-S-(페닐메틸)-L-시스테이닐-D-페닐글리신 디에틸 에스테르 염산염에 아세트산 중의 32% 퍼아세트산 용액 (1.06 mmol) 225　μL 을 첨가하였다. 상기 반응 혼합물을 실온에서 유지시키고, 그 후 LCMS 에 의한 반응을 진행시켰다. 반응의 완결시에, 상기 반응 혼합물을 진공 하에서 농축시켜 고체로 만들고, 메탄올/디메틸 술폭사이드/물에 넣어 추출하고 (take up), 분취용 HPLC 로 정제한 후, 다시 상기 생성물-함유 분획을 동결건조하였다. 고체 생성물로서 L-γ-글루타밀-3-[(페닐메틸)술포닐]-L-알라닐-D-페닐글리신 디에틸 에스테르, 1B 를 얻었다. 양성자 NMR 스펙트럼 (DMSO-d ₆) 은 제안된 구조와 일치하였다.

합성 실시예 3. L-γ-글루타밀-3-[(페닐메틸)술포닐]-L-알라닐-D-페닐글리신 디이소프로필 에스테르, 1D 의 합성

6　mL 이소프로필 알코올에 현탁된 309 mg (0.61 mmol) 의 L-γ-글루타밀-S-(페닐메틸)-L-시스테이닐-D-페닐글리신에 767　μL 의 클로로트리메틸실란 (6.05　mmol) 을 첨가하였다. 상기 반응 혼합물을 실온의 질소 하에서 교반하 면, 백색 침전물이 점차 형성된다. 상기 혼합물을 50 ℃ 로 가열하고, 추가로 300　μL 의 클로로트리메틸실란을 첨가하여, 상기 반응 혼합물을 승온된 온도에서 유지시켰다. 몇 시간 후, 상기 반응은 85% 가 완료됨이 확인되고 (잔여물은 모노에스테르인 상태); 형성된 침전물을 여과하고, 이소프로판올로 세척하고, 건조시키고 (240　mg 수율), 메탄올에 용해시켜, 용매로서 0.01% 염산을 첨가한 95:5 의 물/아세토니트릴을 이용하여 분취용HPLC 로 정제하였다. 상기 디이이소프로필 에스테르 87　mg (0.16　mmol) 을 2　mL 아세트산에 용해시키고, 82　μL 퍼아세트산 용액 (2.5 당량) 을 이용하여 산화시켰다. 반응 완결시, 2　mL 메탄올을 첨가하고, 상기 생성물을 용매로서 0.01% 트리플루오로아세트산이 첨가된 95:5 의 물/아세토니트릴을 이용하여 분취용 HPLC 로 정제하고, 상기 생성물-함유 분획을 동결건조시켰다. HPLC로 측정된 98% 순도를 갖는 고체 생성물로서 L-γ-글루타밀-3-[(페닐메틸)술포닐]-L-알라닐-D-페닐글리신 디이소프로필 에스테르 염산염을 얻었다. 양성자 NMR 스펙트럼 (DMSO-d ₆) 은 제안된 구조와 일치하였다.

합성 실시예 4. L-γ-글루타밀-3-[페닐메틸)술포닐]-L-알라닐-D-페닐글리신 디메틸 에스테르, 1C 의 합성.

합성 실시예 3 의 방법을 이용하되, 에스테르화에서 이소프로판올 대신 메탄올을 이용하고, 디이소프로필 에스테르에서와 동일한 방법으로 디메틸 에스테르를 산화시키고, 정제를 위해 이용된 3 회의 용해/동결건조 사이클을 이용하여, 500　mg (0.98　mmol) 의 L-γ-글루타밀-S-(페닐메틸)-L-시스테이닐-D-페닐글리신 염산염으 로부터, 염산염으로서 L-γ-글루타밀-3-[(페닐메틸)술포닐]-L-알라닐-D-페닐글리신 디메틸 에스테르, 1C 을 제조하였다.

합성 실시예 5. L-γ-글루타밀-3-[(4-비페닐릴메틸)술포닐]-L-알라닐-D-페닐글리신, 11A 의 합성.

330 mg N-α-(벤질옥시카르보닐)-L-γ-글루타밀-L-시스테이닐-D-페닐글리신을 아세토니트릴/물 중에서 아민-보호된 펩티드를 녹이고, 약 10-배 과량의 탄산수소 나트륨을 첨가하고 약간 과량의 4-(브로모메틸)비페닐을 첨가한 후, 상기 반응을 질소 하에서 완결시까지 유지하는 3 단계를 통해 제조하였다. 상기 반응 혼합물을 물로 희석하고, 디에틸 에테르로 세척하고, 수상을 분리하고 염산으로 pH 2 내지 3 으로 산성화시킨 후, 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기상을 무수 마그네슘 술페이트로 건조시키고, 여과하고, 부피를 감소시켜 N-α-(벤질옥시카르보닐)-L-γ-글루타밀-3-[(4-비페닐릴메틸)술포닐]-L-알라닐-D-페닐글리신을 얻었다. 상기 아민-보호된 술파이드 약 300 mg 을 1 방울의 물이 첨가된 95:5 트리플루오로아세트산:디글로로메탄 2 mL 에 녹이고, 45 ℃ 에서 밤새 교반하고, 분취용 HPLC 에 의해 정제하여 L-γ-글루타밀-3-[(4-비페닐릴메틸)술포닐]-L-알라닐-D-페닐글리신을 얻었다. 상기 탈보호된 술파이드를 전술한 합성 실시예에서와 같은 방법으로 산화시켜 HPLC로 측정시 92% 의 순도를 갖는, 염산염으로서 L-γ-글루타밀-3-[(4-비페닐릴메틸)술포닐]-L-알라닐-D-페닐글리신 에스테르, 11A 을 얻었다.

합성 실시예 6. L-γ-글루타밀-3-[(2-비페닐릴메틸)술포닐]-L-알라닐-D-페닐글리신, 4A 의 합성.

500 mg N-α-(벤질옥시카르보닐)-L-γ-글루타밀-L-시스테이닐-D-페닐글리신을 합성 실시예 5의 방법을 이용하고, 보호된 펩티드를 위한 알킬화제로 2-(브로모메틸)-비페닐을 첨가하여, 3 단계를 통해, 염산염으로서 L-γ-글루타밀-3-[(2-비페닐릴메틸)술포닐]-L-알라닐-D-페닐글리신, 4A 를 제조하였다. HPLC 로 측정한 순도는 99% 였다.

합성 실시예 7. L-γ-글루타밀-3-[(2-비페닐릴메틸)술포닐]-L-알라닐-D-페닐글리신 디메틸 에스테르, 4B 의 합성.

143 mg L-γ-글루타밀-S-(-비페닐릴메틸)-L-시스테이닐-D-페닐글리신 히드로클로라이드 (실시예 6 에서의 중간체) 를 에탄올 및 클로로트리메틸실란으로 에스테르화하고, 합성 실시예 3 에서와 같이 디에틸 에스테르를 산화시켜, 염산염으로서 L-γ-글루타밀-3-[(2-비페닐릴메틸)술포닐]-L-알라닐-D-페닐글리신 디메틸 에스테르, 4B 를 제조하였다. HPLC 로 측정한 순도는 94% 이었다.

합성 실시예 8. L-γ-글루타밀-3-[(2-나프틸메틸)술포닐]-L-알라닐-D-페닐글리신, 3A 의 합성.

N-α-(벤질옥시카르보닐)-L-γ-글루타밀-L-시스테이닐-D-페닐글리신을 합성 실시예 5의 방법을 이용하고, 보호된 펩티드를 위한 알킬화제로 2-(브로모메틸)나프탈렌을 첨가하여, 3 단계를 통해 염산염으로서 L-γ-글루타밀-3-[(2-나프틸메틸)술포닐]-L-알라닐-D-페닐글리신, 3A 를 제조하였다. HPLC 로 측정한 순도는 92% 이었다.

염산염으로서 L-γ-글루타밀-3-[(5-니트로푸란-2일메틸)술포닐]-L-알라닐-D- 페닐글리신, 14A 를 유사한 방법으로 제조하였다. HPLC 로 측정한 순도는 99% 이었다.

본 발명의 제 1 측면의 대표적인 화합물을 하기의 표 1a 및 1b 에 나타내었다.

화합물 1A 내지 12A 의 디에틸 에스테르 1B 내지 12B 는 상기 논의된 방법 중 하나에 의해 제조되고; 질량 분석법에 의해 분석되어, 각 화합물은 그의 질량에 대응하는 질량 피크 (M/z) 를 갖고, 전형적으로 양이온화로 M+H, 음이온화로 M-H 를 가졌다. 이산 1A 의 디메틸 및 디이소프로필 에스테르 1C 및 1D 를 또한 제조하고, 질량 분석법으로 분석하여, 각 화합물이 양이온화된 M+H 질량 피크를 가짐을 나타내었다.

본 발명의 기타 화합물들은, 당업자에게 자명하고 본원에서 개시된 방법을 이용하여, 유사한 방법으로 제조될 수 있다.

시험관 내 시험 실시예 .

본 실시예들은 시험관 내 시험에서 예측되는 본 발명의 화합물 (및 비교측정 화합물 TLK117 및 TLK199 중 하나 또는 다른 것, 및 "비닐 술폰" 및 그의 디에틸 에스테르) 의 효과를 설명한다.

인간 GST　P1-1, A1-1, 및 M1-1 동종효소의 재조합체, 및 토끼 다클론 항-인체 GSTπ 항체를 EMD Biosciences, Inc., San Diego, California, U.S.A. 로부터 얻었다. 쥐 단클론 항-인체 GSTπ 항체를 Dakoctyomation, Inc., Carpinteria, California, U.S.A. 로 부터 얻었다. IRDye800 접합, 친화력 정제 염소 항-토끼 IgG 항체를 Rockland Immunochemicals, Inc., Gilbertsville, Pennsylvania, U.S.A. 로 부터 얻었다. 인간 암 세포주 HL-60 (전골수구성 백혈병) 을 the National Cancer Institute, Bethesda, Maryland, U.S.A. 로 부터 얻었다. RPMI 1640 배지 및 이스코브 (Iscove) 의 변형된 둘베코 (Modified Dulbecco) 배지 (IMDM) 를 Invitrogen, Inc., Carlsbad, California, U.S.A. 로 부터 얻었다. CellTiter-Glo™ 분석 키트를 Promega Corporation, Madison, Wisconsin, U.S.A. 로 부터 얻어, 제조자의 지시에 따라 사용하였다. 피코에리트린-접합 항-CD11b 항체 및 피코에리트린-접합 동형 조절 항체를 Biosciences, Inc., San Jose, California, U.S.A. 로 부터 얻었다. MethoCult™ M3234 메틸셀룰로스 배지 (소태아혈청, 소혈청알부민, rh 인슐린, h 트랜스페린, 2-메르캅토에탄올, 및 L-글루타민에 의해 영양보충되는 IMDM 중의 2.5% 메틸셀룰로스) 를 StemCell Technologies, Inc., Vancouver, Canada, 으로 부터 얻었고, 제조자의 지시에 따라 희석하였다 (1% 메틸셀루로스 농도로).

시험관 내 실시예 1. 글루타티온 S-전이효소 동종효소.

본 실시예는 본 발명의 화합물의 글루타티온 S-전이효소 동종효소 GST P1-1, A1-1, 및 M1-1 의 억제제로서의 시험관 내 효과를 설명한다. TLK199 (상기 분석에서 시험된 TLK117 의 디에틸 에스테르) 는 인간에서 골수자극 활성 및 동물 모델에서 화학상승작용 활성을 보여왔기 때문에, GST P1-1 의 억제는 본 발명의 제 3 측면의 치료 방법에서의 예측되는 효능으로 생각된다.

인간 GST　P1-1, A1-1, 및 M1-1 동종효소의 재조합체는 분석 버퍼 (수중의 100　mM KH₂PO₄/K₂HPO₄, 0.1　mM EDTA, pH　6.5) 에서 최종 농도 각각 0.02, 0.011, 및 0.0083　단위/mL 로 사용되었다 [1　단위는 20 ℃ 및 pH 6.5에서 분당 1　μmol 의 1-클로로-2,4-디니트로벤젠 (CDNB) 이 환원된 글루타티온 (GSH) 이 되도록 접합시키는 효소의 양이다]. GSH 는 수중의 100 mM 원액으로서 제조되었고, CDNB 는 에탄올 중의 100 mM 원액으로서 제조되었으며, 둘 다 적당한 농도 (측정되는 동종효소의 최종 농도가 2% 가 되도록) 로 분석 버퍼로 희석하였다. 시험 화합물 (이산, 화합물 1A 내지 12A 및 TLK117)을 디메틸 술폭사이드 (DMSO) 에 용해하고 분석에 적당한 농도 (예측된 IC₅₀ - 효소 활성의 50% 의 억제를 야기하는 농도 - 근처의 중간값의 범위에 걸친 8 개의 농도) 로 DMSO 로 희석하였다. 각 분석에 대하여, 상기 시험 화합물 및 GSH 를 상기 동종효소에 첨가하였다. 동종효소/화합물/GSH 용액에 CDNB 용액을 첨가한 직후, 340 nm 에서의 흡광도를 SpectraMax 플레이트 리더 (plate reader) (Molecular Devices, Inc., Sunnyvale, California, U.S.A.)로 5 분 동안 연속하여 기록하였다. 각 화합물의 GST 억제 활성을 시험 화합물의 다양한 농도에서 흡광도/시간 곡선의 기울기로부터 계산하였다. 모든 분석은 DMSO 조절되고, 최종 DMSO 농도가 2%로 유지된, 2중 웰 (well) 에서 수행되었다. 이러한 분석 결과는 하기 표 2 에 나타난다.

시험관 내 실시예 2. HL-60 세포에서의 세포독성. 본 실시예는 본 발명의 화합물의 HL-60 인간 백혈병 세포주에 대한 시험관 내 세포독성을 설명한다.

대수증식기의 세포를 10% 소태아혈청 (FBS) 및 1% L-글루타민으로 보충된 150 μL 의 RPMI 1640 배지 중의 96-웰 플레이트에서 1500 세포/웰로 시드하고, 37 ℃ 의 공기/5 % CO₂ 하에서 4 내지 5 시간 동안 배양하였다. 시험 화합물 (디에틸 에스테르, 화합물 1B 내지 12B 및 TLK199) 을 용해시키고 DMSO 에서 연속적으로 희석하였다 (예측된 CC₅₀ 근처의 중간점 범위에 걸친 8 개의 농도). 영양보충된 RPMI 1640 배지에서 추가적으로 1:50 희석 후, 50 μL 의 희석된 화합물을 첨가하여 최종 DMSO 농도 0.5 % 를 얻었다. 그 후 세포를 72 시간 (약 3 배가시간) 동안 배양하였다. 그 후 세포를 원심분리 (20 ℃ 에서 5 분 동안 1200 rpm ) 하여 수득하고, 100 μL 의 배양상청액을 제거하고 동일한 부피의 CellTiter-Glo 시약으로 대체하였다. 일정한 혼합과 함께 실온에서 10 분 동안 배양한 후, 발광분석기 (luminometer) 를 이용하여 상기 플레이트에서, 관찰된 발광에 대한 살아있는 세포의 수를 판독하였다. 모든 분석은 DMSO 용매를 조절하면서 3중 웰에서 수행하였다. CC₅₀ (50% 성장 억제를 유발하는 농도) 을 발광/농도 곡선으로부터 계산하였다. 이러한 분석 결과는 하기 표 2에 나타난다.

시험관 내 실시예 3. GSTπ 면역침전 분석. 본 실시예는 본 발명의 화합물의 GSTπ 면역침전을 유발하는 유리한 효과를 설명한다. TLK199 (상기 분석에서 시험된 TLK117 의 디에틸 에스테르) 는 인간에서 골수자극 활성 및 동물 모델에서 화학상승작용 활성을 보여왔기 때문에, 이러한 결과는 본 발명의 제 3 측면의 치료 방법에서의 예측되는 효능으로 생각된다.

HL-60 세포를 T75 플라스크에서 10% 소태아혈청, 1 mM 글루타민 및 20 μM 젠타마이신으로 보충된 20 mL 의 RPMI-1640 배지에서 6 × 10⁵　세포/mL 로 시드하고, 37 ℃ 의 5% CO₂ 대기에서 밤새 배양하였다. 상기 세포를 0.1% DMSO 또는 0.1% DMSO를 포함하는 배양 배지 속의 20 μM 의 시험 화합물 (디에틸 에스테르, 화합물 1B 내지 12B 및 TLK199) 로 2 시간 동안 처리하였다. 상기 처리 후, 상기 세포를 원심분리로 수집하고 포스페이트-버퍼 식염수로 두 번 세척하였다. 상기 세포 펠렛을 1 mL 용해 버퍼 [사용 전에 단백질분해효소억제제 및 인산분해효소억제제 (Roche Diagnostics, Indianapolis, Indiana, U.S.A.) 가 첨가되는, 50　mM Tris, pH　8.0, 120　mM NaCl, 0.5%　NP-40 계면활성제, 100　mM NaF] 에 재현탁시키고, 4 ℃ 에서 30 분 동안 온화하게 교반하면서 배양하였다. 상기 세포 용해질을 10 분 동안 13,000 rpm 으로 원심분리하여 제거하여, 세포 조직파편을 제거하였다. 면역침전을 위해, 2.1 ㎍ 의 쥐 단클론 항-인체 GSTπ 항체를 세포 용해질 1 mg/mL 총단백질 500 μL 에 첨가하였다. 4 ℃ 에서 밤새 배양 후, 30 μL 의 Protein A/G 아가로즈 비드 (bead) (Pierce, Rockford, IL) 를 상기 혼합물에 첨가하였고 4 ℃ 에서 1 시간 동안 배양하였다. 상기 비드를 원심분리로 수집하고, 용해제 버퍼로 3 회 세척하고, 10 μL 비-환원 리튬 도데실 술페이트 샘플 버퍼 (Invitrogen, Carlsbad, California, U.S.A.) 에서 재현탁시켰다. 상기 현탁된 샘플을 95 ℃에서 5 분 동안 가열하고, 4　내지　12% 겔상의 SDS-PAGE 에 두게하고, 이어서 토끼 다클론 항-인체 GSTπ 항체를 이용하여 웨스턴 블롯 분석 (Western blot analysis) 을 하고, 그 후, IRDye 800 접합된, 친화력 정제 염소 항-토끼 IgG 항체를 이용하여 분석한다. GSTπ 단백질 밴드를 시각화하여 밴드의 강도를 Odyssey 적외선 스캐너 (Li-Cor, Lincoln, Nebraska, U.S.A.) 에 의해 수량화하였다. 화합물 처리로부터 얻어진 밴드의 강도를 그의 대응하는 DMSO 조절과 비교하여 억제 백분률로 표시하였다. 상기 결과는 하기 표 2 에 나타난다.

본 발명의 이산 화합물은 GST P1-1 의 강력한 억제제이고, 또한 두 가지 다른 인간 GST 동종효소인 GST A1-1 및 GST M1-1 에 대해 일반적으로 GST P1-1 선택적이다. 상기 디에틸 에스테르 모두는 HL-60 세포에서는 우수한 세포독성을 나타내고, 다수가 면역침전 분석에서 측적된 바와 같이 GSTπ 의 상당한 억제를 나타낸다.

또한, 본 발명의 디에틸 에스테르 화합물의 몇몇은 HL-60 세포의 분화를 증대하는 능력에 대해 시험하였다. 이것은 본 발명의 화합물의 HL-60 인간 백혈병 세포주의 분화를 자극하는데 있어 시험관 내 유용한 효과를 설명한다. 상기 분석에서 분화를 자극하는 TLK199 이 인간에서 골수자극 활성을 보여왔기 때문에, 이러한 결과는 인간 골수자극에서의 예측되는 효능으로 생각된다. 대수증식기 세포 (1　× 10⁵ 세포/mL) 를 시험관 내 실시예 2에 사용된 2 mL 의 영양보충 RPMI 1640 배지 및 최종 DMSO 농도가 0.1% 인 상태로 DMSO 에 용해된 시험 화합물에서 37 ℃ , 공기/5% CO₂ 하에서 24 시간 동안 배양하였다. 상기 세포를 원심분리 (20 ℃ 에서 5 분 동안 1250 rpm) 에 의해 수득하고 2% FBS 를 함유하는 빙냉한 포스페이트-버퍼 식염수 (PBS) 2 mL로 세척하고, 10 μL 피코에리트린-접합 항-CD11b 항체 또는 10 μL 피코에리트린-접합 동형 조절 항체로 염색하였다. 얼음에서 30 분 동안 방치시킨 후, 상기 세포를 2% FBS 를 함유하는 빙냉한 PBS 2 mL 에 재현탁시켰다. 상기 세포를 원심분리 (20 ℃ 에서 5 분 동안 1250 rpm) 에 의해 수득하고 2% FBS 를 함유하는 빙냉한 PBS 0.4 mL 에 재현탁시켰다. CD11b의 특정 세포 표면의 발현, 즉 과립구 및 단핵구의 표지는 FACSCalibur 분석기 (BD Biosciences) 를 이용한 흐름 세포측정법에 의해 측정되었다. 모든 분석은 DMSO 조절 상태에서 3중으로 수행하였다. 분화의 정도는 DMSO 조절로부터의 다발성 신호에 의해 표현되었다. 시험된 화합물 중 몇몇은 HL-60 세포의 분화를 강화시켰다.

상기 결과 및 상기 화합물의 TLK199 와의 구조적 유사성으로 부터, 상기 화합물(특히 디에스테르로서) 은 하기와 같은 치료적 작용을 할 것으로 기대된다: 종양세포에서 화학요법제의 세포독성효과 증대, 선택적으로는 종양세포에서 독성의 발휘, 골수에서의 GM 전구체의 생산 증가, 골수 세포의 분화 자극, 화학요법제의 골수 억제성 효과 완화 및 골수에서의 조혈의 조절.

제형 실시예. 본 실시예는 본 발명의 화합물, 특히 디에스테르에 적합한 제형을 설명한다.

하기를 조합하고, 그 혼합물을 압축하여 정제로 만들거나 그 혼합물을 경질 젤라틴 캡슐에 채워 (예컨대, 상기 정제 또는 캡슐은 본원 화합물 250 mg 함유), 경구 투여용 고형 제형을 제조하였다:

화합물 25.0% w/w

마그네슘 스테아레이트 0.5% w/w

전분 2.0% w/w

히드록시프로필메틸셀룰로스 1.0% w/w

미정질 셀룰로스 71.5% w/w.

원한다면, 정제는 필름-형성제 (예컨대, 히드록시프로필메틸셀룰로스), 색소 (예컨대, 티타늄 디옥사이드), 및 가소제 (예컨대, 디에틸 프탈레이트) 의 현탁액을 적용하여 코팅될 수 있고, 용매를 증발시켜 상기 필름을 건조시킨다.

IV 투여용 제형을 상기 화합물 (예컨대, 약학적으로 허용 가능한 염으로서) 을 1% w/v 의 포스페이트-버퍼 식염수에 용해시키고; 상기 용액을 예컨대 무균 여과로서 멸균 소독하고, 예컨대, 본 발명의 화합물 250 mg 을 함유하는 무균 용기에 밀봉하여 제조한다.

선택적으로는, 상기 화합물 (예컨대 약학적으로 허용 가능한 염으로서) 을 적합한 버퍼, 예컨대 상기 언급한 포스페이트-버퍼 식염수의 포스페이트 버퍼에 용해시키고, 상기 용액을 멸균 소독하고 적합한 무균 바이알에 넣어, 상기 용액을 동결건조시켜 물을 제거하고, 바이알을 밀봉하여 동결건조된 제형을 제조한다. 동결건조된 제형은 멸균수를 첨가하여 재구성되고, 상기 재구성된 용액은 0.9% 염화 나트륨 정맥내투여 또는 5% 덱스트로스 정맥내투여와 같은 용액으로 투여하기 위하여 추가적으로 희석될 수 있다.

선택적으로는, 미국 공개 출원 번호 2003/0100511 (예컨대 실시예 4 및 5) 의 방법에 의해, 상기 공보의 화합물 9 대신 본 발명의 화합물을 이용하여, 리포솜 제형을 제조할 수 있고, 상기 공개에서 기재된 바와 같이 동결건조될 수도 있다.

치료 실시예. 본 실시예는 본 발명의 화합물을 사용한 적합한 치료 방법을 설명한다.

본 발명의 화합물은, 상기 제형 실시예에서 기재된 바와 같은 정맥내 제형으로, 골수형성이상증후군으로 고통받는 환자에게 30 분에 걸쳐 초기 용량 50 mg/m²로 정맥내 투여되고; 이 용량은 100　mg/m², 200　mg/m², 400　mg/m², 및 600　mg/m²로 증가된다. 상기 화합물은 매 3주마다 5일 동안 하루에 한 번 투여된다.

구체적인 구현예 및 실시예와 함께 본 발명을 설명하였지만, 당업자에게는, 그 기술 및 본 개시내용과 관련하여, 구체적으로 개시한 물질 및 방법의 균등 범위 또한 본 발명에 적용가능할 것임이 명백해질 것이며; 그러한 균등 범위를 하기 청구의 범위 내에 포함시키고자 한다.

Claims

하기의 화학식을 갖는 화합물; 또는 그의 C₁ _-10　알킬, 페닐-C₁ _-3　알킬, 또는 (C_5-6　헤테로아릴)-C₁ _-3　알킬 모노- 또는 디-에스테르; 또는 하기 화합물의 염 또는 그의 모노- 또는 디- 에스테르:

(식 중,

X 는 L-γ-글루타밀 또는 L-γ-글루타밀글리실;

Y 는 H, 임의 치환된 알킬, 임의 치환된 헤테로알킬, 임의 치환된 아릴, 임의 치환된 아르알킬, 임의 치환된 헤테로아릴, 또는 임의 치환된 헤테로아르알킬이고;

Z 는 C₅ _-9　알킬, 임의 치환된 아릴, 임의 치환된 아르알킬, 임의 치환된 헤테로아릴, 또는 임의 치환된 헤테로아르알킬).
제 1 항에 있어서, X 가 L-γ-글루타밀인 화합물.
제 1 항 또는 제 2 항에 있어서, Y 가 임의 치환된 C₅ _-6　시클로알킬, 임의 치환된 C₅ _-6　시클로헤테로알킬, 임의 치환된 페닐 또는 임의 치환된 C₅ _-6　헤테로아릴인 화합물.
제 3 항에 있어서, Y 가 시클로펜틸, 시클로헥실, 티에닐, 푸릴, 피리디닐, 또는 임의 치환된 페닐인 화합물.
제 4 항에 있어서, Y 가 시클로헥실인 화합물.
제 4 항에 있어서, Y 가 1 또는 2개의 플루오로, 클로로, 메틸, 히드록시, 메톡시, 또는 트리플루오로메틸기로 임의 치환된, 페닐인 화합물.
제 6 항에 있어서, 페닐이 비치환된 것인 화합물.
제 6 항에 있어서, 페닐이 치환되고 그 치환기 중 하나가 4-위치에 있는 화합물.
제 8 항에 있어서, 치환기가 단지 하나인 화합물.
제 1 항 내지 제 9 항 중 어느 하나의 항에 있어서, Z 가, C₅ _-9 알킬, 또는 1 내지 3개의 할로, 시아노, 히드록시, 카르복시, 트리플루오로메틸, 또는 -R, -OR, -COOR, 또는 -NR₂기 (여기에서, R 은 C₁ _-3　알킬) 로 각각 임의 치환된 페닐, 1- 또는 2-나프틸, 2-, 3-, 또는 4-비페닐릴, 또는 2-, 3-, 또는 4-(C₅ _-6헤테로아릴)페닐인 화합물.
제 10 항에 있어서, Z 가 플루오로, 클로로, 시아노, 히드록시, 메톡시, 메틸, 또는 트리플루오로메틸로 임의 치환된, 페닐인 화합물.
제 11 항에 있어서, Z 가 페닐인 화합물.
제 10 항에 있어서, Z 가 플루오로, 클로로, 시아노, 히드록시, 메톡시, 메틸, 또는 트리플루오로메틸로 각각 임의 치환된 2-, 3-, 또는 4-비페닐릴, 또는 2-, 3-, 또는 4-(C₅ _-6　헤테로아릴)페닐인 화합물.
제 13 항에 있어서, Z 가 2-, 3-, 또는 4-비페닐릴 또는 2-, 3-, 또는 4-(C₅ _-6　헤테로아릴)페닐인 화합물.
제 1 항 내지 제 14 항 중 어느 하나의 항에 있어서, 이산인 화합물.
제 1 항 내지 제 14 항 중 어느 하나의 항에 있어서, 디에스테르인 화합물
제 16 항에 있어서, C₁ _-6 알킬 디에스테르인 화합물.
제 17 항에 있어서, C₁ _-3 알킬 디에스테르인 화합물.
제 18 항에 있어서, 디에틸 에스테르인 화합물.
제 1 항에 있어서, 하기로부터 선택되는 화합물:

L-γ-글루타밀-3-[(페닐메틸)술포닐]-L-알라닐-D-페닐글리신,

L-γ-글루타밀-3-{[(4-클로로페닐)메틸]술포닐}-L-알라닐-D-페닐글리신,

L-γ-글루타밀-3-[(2-나프틸메틸)술포닐]-L-알라닐-D-페닐글리신,

L-γ-글루타밀-3-[(2-비페닐메틸)술포닐]-L-알라닐-D-페닐글리신,

L-γ-글루타밀-3-[(2'-시아노-4-비페닐릴)메틸]술포닐}-L-알라닐-D-페닐글리신,

L-γ-글루타밀-3-{[(8-퀴놀릴)메틸]술포닐}-L-알라닐-D-페닐글리신,

L-γ-글루타밀-3-{[4-(2-피리딜)페닐메틸]술포닐}-L-알라닐-D-페닐글리신,

L-γ-글루타밀-3-{[(1-이소퀴놀릴)메틸]술포닐}-L-알라닐-D-페닐글리신,

L-γ-글루타밀-3-{[(1-메틸벤조트리아졸-5-일)메틸]술포닐}-L-알라닐-D-페닐글리신,

L-γ-글루타밀-3-{[2-(1-나프틸)에틸]술포닐}-L-알라닐-D-페닐글리신,

L-γ-글루타밀-3-[(4-비페닐릴메틸)술포닐]-L-알라닐-D-페닐글리신,

L-γ-글루타밀-3-[(4-비페닐메틸)술포닐]-L-알라닐-D-시클로헥실글리신, 및

L-γ-글루타밀-3-[(4-비페닐메틸)술포닐]-L-알라닐-D-(4-클로로페닐)글리신,

및 그들의 디에틸 에스테르, 및 상기 화합물의 염 및 그들의 디에틸 에스테르.
제 1 항 내지 제 20 항 중 어느 한 항의 화합물을 함유하는 약학적 조성물.
제 21 항에 있어서, 부형제를 추가로 함유하는 약학적 조성물.
제 1 항 내지 제 20 항 중 어느 하나의 항의 화합물을, 하기 중 하나 이상을 위한 의약의 제조를 위한 용도: 종양세포에서 화학요법제의 세포독성효과 증대, 선택적으로는 종양세포에서 독성의 발휘, 골수에서의 GM 전구체의 생산 증가, 골수 세포의 분화 자극, 화학요법제의 골수 억제성 효과 완화 및 골수에서의 조혈의 조절.
제 1 항 내지 제 20 항 중 어느 하나의 화합물 또는 제 21 항 내지 제 22 항 중 어느 하나의 항의 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 하기 중 하나 이상의 치료 방법: 종양세포에서 화학요법제의 세포독성효과 증대, 선택적으로는 종양세포에서 독성의 발휘, 골수에서의 GM 전구체의 생산 증가, 골수 세포의 분화 자극, 화학요법제의 골수 억제성 효과 완화 및 골수에서의 조혈의 조절.
하기의 화학식을 갖는 화합물; 또는 그의 C₁ _-10　알킬, 페닐-C₁ _-3　알킬, 또는 (C_5-6　헤테로아릴)-C₁ _-3　알킬 모노- 또는 디-에스테르; 또는 하기 화합물의 염 또는 그의 모노- 또는 디-에스테르:

(식 중,

X 는 N-α-R¹-L-γ-글루타밀 또는 N-α-R¹-L-γ-글루타밀글리실 (여기에서, R¹ 은 아민-보호기) 이고;

Y 및 Z 는 제 1 항과 동일함).
하기를 포함하는 제 1 항의 화합물의 제조 방법:

(a) 하기의 화학식을 갖는 화합물 또는 그의 C₁ _-10　알킬, 페닐-C₁ _-3　알킬, 또는 (C₅ _-6　헤테로아릴)-C₁ _-3　알킬 모노- 또는 디-에스테르를 산화시키는 단계:

(식 중,

X 는 L-γ-글루타밀 또는 L-γ-글루타밀글리실, 또는 N-α-R¹-L-γ-글루타밀 또는 N-α-R¹-L-γ-글루타밀글리실 (여기에서, R¹ 은 아민-보호기) 이고;

Y 및 Z 는 제 1 항과 동일함);

(b) Y 가 N-α-R¹-L-γ-글루타밀 또는 N-α-R¹-L-γ-글루타밀글리실이라면, 생성되는 술폰을 탈보호하여 제 1 항의 화합물을 얻는 단계; 및 임의로는

(c) (a) 또는 (b) 단계에서 제조된 제 1 항의 화합물이 이산이라면, 상기 화합물의 모노- 또는 디에스테르를 형성하는 단계; 또는

(d) (a) 또는 (b) 단계에서 제조된 화합물이 모노- 또는 디에스테르라면, 상기 화합물을 탈-에스테르화하여 상기 화합물의 이산을 제조하는 단계; 및

(e) (a) 내지 (d) 단계 중 어느 하나에서 제조되는 화합물의 염을 형성하는 단계.
제 26 항에 있어서, R¹ 이 촉매적으로 제거 가능한 아민-보호기인 방법.