KR20070067235A - 폐경기 이후 여성의 질 건조증과 성기능 장애의 예방 및치료를 위한 성스테로이드 전구체 단독 또는 선택적인에스트로겐 수용체 조절자 및/또는 에스트로겐 및/또는타입 5 ｃＧＭＰ 포스포디에스테라제 억제제와의 배합물상태의 성스테로이드 전구체 - Google Patents

폐경기 이후 여성의 질 건조증과 성기능 장애의 예방 및치료를 위한 성스테로이드 전구체 단독 또는 선택적인에스트로겐 수용체 조절자 및/또는 에스트로겐 및/또는타입 5 ｃＧＭＰ 포스포디에스테라제 억제제와의 배합물상태의 성스테로이드 전구체 Download PDF

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Abstract

성스테로이드 전구체의 투여를 포함하여, 인간을 포함한 민감한 온혈 동물의 성기능 장애와 낮은 성적 욕구 및 행위를 이끄는 질 기능 장애, 특히 질 건조증 및 성교 통증의 발병 가능성을 처치 또는 경감시키는 신규한 방법들. 에스트로겐 또는 선택적인 에스트로겐 수용체 조절자, 특히 랄록시펜, 아르족시펜, 타목시펜, 드롤록시펜, 토레미펜, 요오독시펜, GW5638, TSE-424, ERA-923 및 라소폭시펜, 더 상세하게는 다음 화학식 (Ⅰ)을 갖는 화합물이 상기 일부 질환들의 진전을 방해 및/또는 의학적 치료를 위하여 기재되어 있다. 본 발명의 유용한 활성 성분의 운반을 위한 약학 조성물 및 키트도 역시 기재되어 있다.
Figure 112007037265790-PCT00023

Description

폐경기 이후 여성의 질 건조증과 성기능 장애의 예방 및 치료를 위한 성스테로이드 전구체 단독 또는 선택적인 에스트로겐 수용체 조절자 및/또는 에스트로겐 및/또는 타입 5 ｃＧＭＰ 포스포디에스테라제 억제제와의 배합물 상태의 성스테로이드 전구체 {SEX STEROID PRECURSORS ALONE OR IN COMBINATION WITH A SELECTIVE ESTROGEN RECEPTOR MODULATOR AND/OR WITH ESTROGENS AND/OR A TYPE 5 CGMP PHOSPHODIESTERASE INHIBITOR FOR THE PREVENTION AND TREATMENT OF VAGINAL DRYNESS AND SEXUAL DYSFUNCTION IN POSTMENOPAUSAL WOMEN}
본 발명은 인간을 포함하는 민감한 온혈 동물에 있어, 성스테로이드 전구체만을 이용하거나 신규한 병용 치료법으로서 성스테로이드 전구체를 이용하여, 질의 고유판층 또는 질 근육층에 영향을 미치는 문제들의 획득 가능성을 처치 또는 경감시키는 방법에 관한 것이다. 특히, 상기 배합은 선택적인 에스트로겐 수용체 조절자 (SERM)를 투여하는 것과 환자들의 성스테로이드 전구체 수치를 증가시키는 것을 포함하는데, 이때 상기 전구체는 디히드로에피안드로스테론 (DHEA), 디히드로에피안드로스테론 황산염 (DHEA-S), 안드로스트-5-엔-3β,17β-디올 (5-diol)로 이루어진 군으로부터 선택된다. 에스트로겐은 안면 홍조를 비롯한 기타의 폐경기 증상에 있어 일부 SERMs의 실질적인 영향을 줄이기 위하여 투여될 수 있다. 타입 5 cGMP 포스포디에스테라제 억제제는 또한 성적 활동을 증가시키기 위하여 투여될 수 있 다. 본 발명은 또한 전술한 배합의 실행을 위한 약학 조성물 및 키트에 관한 것이다.
US 5,843, 932에는 난소가 절제된 쥐의 등쪽 피부 (dorsal skin) 2 ㎠ 부분에 50% 에탄올과 50% 프로필렌 글리콜 용액을 매일 2회 30 mg 용량으로 DHEA를 투여하는 1, 3 또는 6개월간의 치료로 인한 질 수축 효과가 기록되어 있다. DHEA로 처치한 쥐에 대한 조직병리학적 실험에서 질상피 증식과 점액분비기 및 질점막 수축의 전도가 나타났다.
쥐를 대상으로 실시된 실험에서, DHEA를 1, 3 및 6개월간 등쪽 피부에 도포하였을 때, 2개의 다른 층, 즉 고유판층과 근육층이 아닌 오직 질상피층에만 영향을 미친다는 것이 조사되었다 (Sour Ia 외, 1998, J. Steroid Biochem MoI Biol., 66(3): 137-149). 그 후 DHEA를 질에서 일정한 간격을 두고 있는 피부 부위에 도포하여, 그 작용을 위하여 전신 흡수를 요하는 때보다, 직접 도포할 때 질상피에 미치는 효과가 약 10배 더 효과적이라는 것이 관찰되었다.
폐경기 이후 여성의 피부에 10% DHEA 크림을 12개월간 도포하였을 때의 DHEA의 영향에 대한 선행된 연구에서, 오직 DHEA의 에스트로겐 활성만이 측정되었다 (Labrie 외, 1997, J. Clin. Endocrinol. Metab., 82: 3498-3505). 이것은 "Vaginal cytology was examined as specific parameter of the estrogenic action of DHEA" (page 3500)에 나타나 있다. 이것은 측정방법, 즉 표면상에 존재하여 쉽게 제거되는 상피 세포에 제한되는 질 도포 방법 때문이다.
본 발명은 질의 3개의 층, 즉 근육층, 고유판층 및 상피층에 DHEA 및 기타 성분의 영향을 3개 평면에서 새로운 이점으로 기술하고 있다. 고유판과 근육에서의 DHEA의 이로운 영향은 비아그라 및 기타 화합물 또는 프로스타글란딘 E1과 같은 타입 5 cGMP 포스포디에스테라제의 억제제의 긍정적인 작용을 위하여 가장 중요한 것으로 여겨진다.
질 건조증은 50~60세의 폐경기 이후 여성의 약 50%, 70세 이상 여성의 약 72%에게 영향을 미친다 (Rossin-Amar, 2000, Gynecol Obstet Fertil, 28(3): 245-249). 이 여성들 중 약 80%가 비뇨생식기 장애, 특히 질염 및 성교 통증을 경험한다 (Pandit and Ouslander, 1997, Am J Med Sci, 314(4): 228- 31). 이러한 문제들은 성스테로이드의 감소와 최소한 부분적으로라도 관련있는 것으로 믿어지므로, 적절한 국소 호르몬 대체 치료법이 폐경기에 고려되어야 한다. 최근에, 폐경기 이후 여성들에게 난소 에스트로겐의 감소뿐만 아니라 또한 디히드로에피안드로스테론 (DHEA)의 안드로겐과 에스트로겐으로의 말초 인트라크라인 (intracrine) 변형으로 생기는 안드로겐의 급격한 감소가 나타난다는 것이 인식되었다 (Labrie 외, 1991, MoI Cell Endocrinol, '78: C113-C118; Labrie 외, 1995, Ann NY Acad Sd, 774: 16-28; Labrie 외, 2003, End Rev, 24(2): 152-182). 사실, 혈청 DHEA와 DHEA-S는 30세부터 40세까지 급격하게 감소한다 (Labrie 외, 2003, End Rev, 24(2): 152-182; Orentreich 외, 1984, J CKn Endocrinol Metab, 59: 551-555; Labrie 외, 1997, J Clin Endocrinol Metab, 82: 2396-2402). 일련의 연구들이 DHEA와 DHEA-S의 낮은 수치가 나이와 관계된 사망률 및 질병들과 관계있다는 것을 제시한다 (Labrie 외, 1997, J. Clin. Endocrinol. Metab., 82: 3498-3505; Helzlsouer 외, 1992, Cancer Res, 52(1): 1-4; Szathmari 외, 1994, Osteoporos Int, 4(2): 84-88; Thoman and Weigle, 1989, Adv Immununol, 46: 221-261; Barrett-Connor 외, 1999, J Reprod Med, 44(12): 1012-1020; Barrett-Connor 외, 1999, J Am Geriatr Soc, 47(6): 685-691).
질 건조증을 비롯한 기타 폐경기 증상들을 경감시키기 위한 효율적인 접근은 호르몬 대체 치료법 (HRT)을 이용하는 것이다 (Greendale and Judd, 1993, J Am Geriatr Soc, 41(4): 426-436; Studd 외, 1980, Pasetto, Paleotti and Ambrus Eds, MT Press, Lancaster, p: 127-139). 그러나 최근의 치료학적 연구들은 심장혈관 사례들에서 에스트로겐과 프로게스틴의 배합이 잠재적으로 부정적 영향과 함께 유방암의 발병을 증가시킨다는 것을 제시하였다 (Colditz 외, 1995, N Engl J Med, 332: 1589- 1593; Ross 외, 2000, J Natl Cancer Inst, 92(4): 328-332; Rossouw 외, 2002, JAMA, 288(3): 321-333). 반면에, 비록 에스트로겐 성분을 이용하는 것이 위에서 언급된 잠재적인 복잡한 문제들 때문에 제한될지라도, 배합된 에스트로겐-안드로겐 대체 치료법 (Rosenberg 외, 1997, J Reprod Med, 42(7): 394-404; Burd 외, 2001, Curr Women Health Rep,l(3):202-205)의 잠재성에 대한 관심은 증가하고 있다. 최근 특히 폐경기 이후 여성에 있어서 인간 성스테로이드 생리학에 대한 이해 (Labrie 외, 1991, MoI Cell Endocrinol, 78: C113-C118; Labrie 외, 2003, End Rev, 24(2): 152-182)가 발전한 것에 기초하여, DHEA의 이용은 폐경기 이후 여성에게 있어, 전신에 영향을 미치지 않고 인트라크라인 메카니즘에 의하여 특정 조직에서 합성되는 적절한 수치의 안드로겐 및 에스트로겐을 제공하는 것을 가능하게 한다 (Labrie 외, 1997, J. Clin. Endocrinol. Metab., 82: 3498-3505: 16-28; Labrie 외, 2003, End Rev, 24(2): 152-182; Labrie, 2001, Ref Gyn Obstet, 8: 317-322; Lasco 외, 2002, 145: 457-461). 질의 기능 중 안드로겐 민감 성분들의 복원이 또한 타입 5 cGMP 포스포디에스테라제 또는 프로스타글란딘 E1의 억제제들의 작용을 도와야만 한다.
선택적인 에스트로겐 수용체 조절자 (SERM)인 아콜비펜 (Acolbifene)(EM-652)은 본래 유방암의 예방 및 치료를 위하여 개발된 벤조피란 유도체이다 (Gauthier 외, 1997, J Med Chem, 40: 2117-2122). 아콜비펜은 알려진 화합물 중에 ER에 대한 친화력이 가장 높은 화합물이고 (Gauthier 외, 1997, J Med Chem, 40: 2117-2122; Labrie 외, 1999, J Steroid Biochem MoI Biol, 69 (1-6): 51-84; Tremblay 외, 1997, MoI. Endocrinol., 11: 353-365), ERα와 ERβ에 대하여 활성이 있다 (Tremblay 외, 1998, Endocrinology, 139: 111-118). 이 화합물은 적어도 쥐에 있어서, 혈청 콜레스테롤 및 트리글리세리드를 감소시키고 뼈 손실을 예방하면서, 유선과 자궁 내막에 있는 순수하고 높은 잠재적 항에스트로겐 활성을 보인다 (Labrie 외, 1999, J Steroid Biochem MoI Biol, 69 (1-6): 51-84). 더욱이, DHEA의 투여는 누드마우스 내의 인간 유방암 성장에 있어서 순수한 항에스트로겐 아콜비펜으로 인한 부가적인 억제 효과를 방해하지 않을 뿐만 아니라 그러한 효과를 발휘한다는 것이 입증되었다 (Dauvois 외, 1991, Cancer Res, 51: 3131-3135; Luo 외, 1997, Endocrinology, 138: 4435- 4444). DHEA와 아콜비펜의 병용 치료가 유방 암에 있어 유용한 화학적 예방 (chemopreventive) 및 치료적 접근으로서 제안되어왔다 (Labrie, 2001, Ref Gynecol Obstet, 8: 317-322). 사실 누드마우스에 이종이식된 인간 유방암의 성장에 있어서 DHEA의 억제 효과는 그것의 호르몬 대체 치료법으로서의 이용을 지지한다 (Dauvois 외, 1991, Cancer Res, 51: 3131-3135; Couillard 외, 1998, J Natl Cancer Inst, 90: 772-778).
WO 99/63974에는 성스테로이드 전구체와 배합된 선택적인 에스트로겐 수용체 조절자의 의학적 이용이 기술되어 있다.
발명의 요약
본 발명의 목적은 바람직하지 않은 부작용을 최소화하면서, 성적 욕구와 활동의 감소를 수반할 수 있는 질 관련 문제들, 더 구체적으로 질 건조증, 성교 통증 및 성기능 장애를 치료하는 효과적인 방법을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 상기 문제들의 발생 위험을 경감시키는 방법을 제공하는 것이다.
한가지 구체예로, 본 발명은 상기 치료나 상기 스테로이드 전구체를 필요로 하는 개체나 환자의 디히드로에피안드로스테론 (DHEA), 디히드로에피안드로스테론 황산염 (DHEA-S) 및 안드로스트-5-엔-3β,17β-디올 (5-diol)로 이루어진 군으로부터 선택되는 성스테로이드 전구체 수치를 증가시키는 것을 포함하고, 더 나아가 상기 환자에게 병용 치료의 일부로서 선택적인 에스트로겐 수용체 조절자 (SERM)의 치료학적으로 유효한 양을 투여하는 것을 포함하는, 질 건조증 발생 위험을 처치 또는 경감시키는 방법에 관한 것이다.
또 다른 구체예로, 본 발명은 안면 홍조를 비롯한 기타 폐경기 증상에 있어 SERMs의 영향을 줄이기 위하여 에스트로겐을 더 투여하는 것을 포함한다.
또 다른 구체예로, 본 발명은 성적 활동을 증가시키기 위하여 타입 5 cGMP 포스포디에스테라제 억제제 또는 프로스타글란딘 E1을 더 투여하는 것을 포함한다.
본원에서 사용될 때, 선택적인 에스트로겐 수용체 조절자 (SERM)는 유방 조직 내에서 직접 또는 이것의 활성 대사 산물을 통하여 에스트로겐 수용체 길항제 (항에스트로겐)으로서 작용하면서 (예컨대 혈청 콜레스테롤을 감소시킴으로써), 뼈 조직 및 혈청 콜레스테롤 수치에 대해서는 여전히 에스트로겐 효과 또는 에스트로겐과 유사 효과를 제공하는 화합물이다. 생체 내에서 또는 인간 또는 쥐 유방 조직에 있어서, 에스트로겐 수용체 길항제로서 작용하는 (특히 그 화합물들이 인간 유방암 세포에서 항에스트로겐으로서 작용하는 경우) 비스테로이드성 화합물들은 SERM으로서 작용할 가능성이 있다. 거꾸로 말하면, 스테로이드성 항에스트로겐들은 이들이 혈청 콜레스테롤에 어떤 이로운 영향도 나타내는 경향이 없으므로, SERMs으로서 작용하는 경향은 없다. 우리가 시험하여 SERMs으로 밝혀진 비스테로이드성 항에스트로겐에는 EM-800, EM-01538, 랄록시펜 (Raloxifene), 타목시펜 (Tamoxifen), 드롤록시펜 (Droloxifene), 토레미펜 (Toremifene), 요오독시펜(Idoxifene), TSE-424, ERA-923, 라속시펜 (Lasoxifene, CP 336156), 아르족시펜 (Arzoxifene, LY 353 381) 및 GW-5638이 포함된다. 우리는 스테로이드성 항에스트로겐 ICI 182,780을 시험하였는데, SERM으로 작용하지 않는다는 것을 알아내었다. 본 발명에 따른 SERMs는 이들 화합물이 항에스트로겐으로서 사용될 때, 본 발명이 속하는 기술분야에 알려진 용량과 같은 용량으로 투여될 수 있다.
이론에 구속됨이 없이, 이 중 상당 수가 바람직하게는 1~2개의 탄소 원자들에 의하여 연결된 2개의 방향족 고리가 있는 다수의 SERMs는 수용체에 의하여 가장 잘 인식되는 분자의 앞 부분 덕분에 에스트로겐 수용체와 상호작용할 것으로 기대된다. 선호되는 SERMs는 다른 조직에 대한 뚜렷한 길항 특성 없이, 유방 조직에 선택적인 길항 특성의 원인이 될 수 있는 측쇄를 갖는다. 따라서, 상기 SERMs는 놀랍고 바람직하게도, 뼈 안에서 및 혈액 인자들 (이때 지질 및/또는 콜레스테롤의 농도는 유리하게 영향을 받는다.)에 있어서는 에스트로겐으로서 작용 (또는 에스트로겐과 같은 활성을 제공함으로써)을 하면서, 유방에서는 항에스트로겐으로서 작용을 할 수 있다. 콜레스테롤 및/또는 지질에 대한 유리한 영향은 잠재적으로는 부적당한 수치의 콜레스테롤 및/또는 지질에 의하여 역으로 영향을 받는 것으로 알려진 아테롬성 동맥경화에 대하여 유리한 영향으로 해석한다.
또 다른 구체예로, 본 발명은 방법, 약학 조성물 및 키트를 포함하는데, 이때 상기 선택적인 에스트로겐 수용체 조절자는
a) 1~2 개의 매개 탄소 원자에 의하여 일정한 간격을 두고 있는 2개의 방향족 고리로서, 이들 2개의 방향족 고리는 모두 수산기 또는 생체 내에서 수산기로 전환되는 기로 치환 또는 미치환되고,
b) 방향족 고리와 3차 아민 작용기 또는 이들의 염을 가지는 측쇄
인 것이 특징인 분자식을 갖는다. 측쇄는 바람직하게는 다음으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
Figure 112007037265790-PCT00001
또한, 2개의 방향족 고리가 모두 페닐이고 측쇄는 메틴, 메틸렌, -CO, -O- 및 -S-, 방향족 고리 및 3차 아민 작용기 또는 그것의 염으로 이루어진 군으로부터 선택되는 부분을 갖는 것이 선호된다.
또 다른 구체예로, 상기 선택적인 에스트로겐 수용체 조절자는 벤조티오펜 유도체, 트리페닐에틸렌 유도체, 인돌 유도체, 벤조피란 유도체, 5,6,7,8-테트라히드로나프탈렌 및 센트크로만 유도체로 이루어진 군으로부터 선택된다.
하나의 구체예로, 상기 선택적인 에스트로겐 수용체 조절자는 다음 화학식의 벤조티오펜 유도체 화합물인 것이 선호된다.
Figure 112007037265790-PCT00002
상기 식 중, R1 및 R2는 각각 수소, 수산기 및 생체 내에서 수산기로 전환되는 부분으로 이루어진 군으로부터 선택되고;
R3 및 R4는 각각 C1~C4 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되거나, R3, R4 및 이들이 결합된 질소는 피롤리디노, 디메틸-1-피롤리디노, 메틸-1-피롤리디닐, 피페리디노, 헥사메틸렌이미노 및 모르폴리노로 이루어진 군으로부터 선택되는 임의의 구조이며;
A는 -CO-, -CHOH 및 -CH2-로 이루어진 군으로부터 선택되고;
B는 페닐렌, 피리딜리덴 및 시클로 C4H2N2-이다.
특히, 상기 선택적인 에스트로겐 수용체 조절자는 랄록시펜, (LY 353381) 및 LY335563으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
또 다른 구체예로, 상기 선택적인 에스트로겐 수용체 조절자는 다음 화학식의 트리페닐에틸렌 유도체 화합물인 것이 선호된다.
Figure 112007037265790-PCT00003
상기 식 중, D는 -OCH2CH2N(R3)R4 (R3 및 R4는 각각 C1~C4 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되거나, R3, R4와 이들이 결합된 질소는 함께 피롤리디노, 디메틸-1-피롤리디노, 메틸-1-피롤리디닐, 피페리디노, 헥사메틸렌이미노 및 모르폴리노로 이루어진 군으로부터 선택되는 고리 구조를 이룸) 또는 -CH=CH-COOH 이고;
E 및 K는 각각 수소 또는 수산기이며;
J는 수소 또는 할로겐이다.
특히, 선택적인 에스트로겐 수용체 조절자는 타목시펜, OH-타목시펜, 드롤록시펜, 토레미펜, 요오독시펜 및 GW 5638이다.
또 다른 구체예로, 상기 선택적인 에스트로겐 수용체 조절자는 다음 화학식의 인돌 유도체 화합물인 것이 선호된다.
Figure 112007037265790-PCT00004
상기 식 중, D는 -OCH2CH2N(R7)R8, -CH=CH-CON(R7)R8, -CC-(CH2)n-N(R7)R8 (R7 및 R8은 각각 C1~C6 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되거나, R7, R8와 이들이 결합된 질소는 함께 피롤리디노, 디메틸-1-피롤리디노, 메틸-1-피롤리디닐, 피페리디노, 헥사메틸렌이미노, 모르폴리노 및 고리로 이루어진 군으로부터 선택되는 고리 구조를 이룸)로 이루어진 군으로부터 선택되고;
X는 수소 및 C1~C6 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되며;
R1, R2, R3, R4, R5 및 R6은 각각 수소, 수산기, C1~C6 알킬 및 생체 내에서 수산기로 전환되는 부분으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
특히, 상기 선택적인 에스트로겐 수용체 조절자는 TSE-424 및 ERA-923이다.
또 다른 구체예로, 상기 선택적인 에스트로겐 수용체 조절자는 다음 화학식으로 나타내는 것이 선호된다.
Figure 112007037265790-PCT00005
상기 식 중, R1 및 R2는 각각 수소, 수산기 및 생체 내에서 수산기로 전환되는 부분으로 이루어진 군으로부터 선택되고;
R5 및 R6은 각각 수소 또는 C1~C6 알킬이며;
D는 -OCH2CH2N(R3)R4 (R3 및 R4는 각각 C1~C4 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되거나, R3, R4와 이들이 결합된 질소는 함께 피롤리디노, 디메틸-1-피롤리디노, 메틸-1-피롤리디닐, 피페리디노, 헥사메틸렌이미노 및 모르폴리노로 이루어진 군으로부터 선택되는 고리 구조를 이룸)이고;
X는 -O- 및 -CH2-로 이루어진 군으로부터 선택된다.
특히 상기 화합물은 (-)-시스-(5R,6S)-6-페닐-5-[4-(2-피롤리딘-1-일에톡시)페닐]-5,6,7,8-테트라히드로나프탈렌-2-올, D-(-)-타르트레이트염 (라소폭시펜) 및 (3,4-일)에톡시)페닐]-7-메톡시크로만)으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
또 다른 구체예로, 상기 에스트로겐 수용체 조절자는 다음 화학식으로 나타내는 것이 선호된다.
Figure 112007037265790-PCT00006
상기 식 중, R1 및 R2는 각각 수소, 수산기 및 생체 내에서 수산기로 전환되는 부분으로 이루어진 군으로부터 선택되고;
Z는 2가의 폐쇄 부분 (bivalent closing moiety) 특히, Z는 -0-, -NH-, -S- 및 -CH2-로 이루어진 군으로부터 선택되며;
R100은 B 고리로부터 L을 4~10개의 매개 원자만큼의 간격이 되게 하는 2가 부분이고;
L은 -SO-, -CON-, -N< 및 SON<으로 이루어진 군으로부터 선택되는 2가 또는 3가의 극성 부분이며;
G1은 수소, C1~C5 탄화수소 또는 G2 및 L과 연합하여 5~7원 헤테로 고리를 형성하는 2가 부분 및 이들의 할로 또는 불포화 유도체로 이루어진 군으로부터 선택되고;
G2는 존재하지 않거나 또는 수소, C1~C5 탄화수소 또는 G2 및 L과 연합하여 5~7원 헤테로 고리를 형성하는 2가 부분 및 이들의 할로 또는 불포화 유도체로 이루어진 군으로부터 선택되며;
G3은 수소, 메틸 및 에틸로 이루어진 군으로부터 선택된다.
더 상세하게는, 다음 화학식의 벤조피란 유도체가 선호된다.
Figure 112007037265790-PCT00007
상기 식 중, D는 -OCH2CH2N(R3)R4 (R3 및 R4는 각각 C1~C4 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되거나, R3, R4와 이들이 결합된 질소는 함께 피롤리디노, 디메틸-1-피롤리디노, 메틸-1-피롤리디닐, 피페리디노, 헥사메틸렌이미노 및 모르폴리노로 이루어진 군으로부터 선택되는 고리 구조를 이룸)이고;
R1 및 R2는 각각 수소, 수산기 및 생체 내에서 수산기로 전환되는 부분으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
또한 벤조피란 유도체는 2번 탄소에서 절대 S 배열을 갖는 광학 활성 화합물 또는 이들의 약학적으로 허용되는 염인 것이 선호되는데, 상기 화합물은 다음 화학식을 가진다.
Figure 112007037265790-PCT00008
상기 식 중, R1 및 R2는 각각 수소, 수산기 및 생체 내에서 수산기로 전환되는 부분으로 이루어진 군으로부터 선택되고;
R3은 포화, 불포화 또는 치환된 피롤리디닐, 포화, 불포화 또는 치환된 피페리디노, 포화, 불포화 또는 치환된 피페리디닐, 포화, 불포화 또는 치환된 모르폴리노, 질소 함유 고리 부분, 질소 함유 폴리고리 부분 및 NRaRb (Ra 및 Rb는 각각 수소, 직쇄 또는 분기쇄 C1~C6 알킬, 직쇄 또는 분기쇄 C2~C6 알케닐 및 직쇄 또는 분기쇄 C2~C6 알키닐임)로 이루어진 군으로부터 선택되는 종이다.
하나의 구체예로, 상기 벤조피란 유도체는 아세트산, 아디프산, 벤젠술폰산, 벤조산, 캄포르술폰산, 시트르산, 푸마르산, 히드로요오드산, 히드로브롬산, 히드로클로르산, 히드로클로로티아지드산, 히드록시나프토산, 락트산, 말레산, 메탄술폰산, 메틸술푸르산, 1,5-나프탈렌디술폰산, 니트르산, 팔미트산, 피발산, 포스포르산, 프로피온산, 숙신산, 술푸르산, 타르타르산, 테레프탈산, p-톨루엔술폰산 및 발레르산으로 이루어진 군으로부터 선택되는 산의 염이다.
선호되는 선택적인 에스트로겐 수용체 조절자들은 아콜비펜,
Figure 112007037265790-PCT00009
랄록시펜, 아르족시펜, 타목시펜, 드롤록시펜, 토레미펜, 요오독시펜, GW 5638, TSE-424, ERA-923 및 라소폭시펜이다.
발명의 상세한 설명
폐경기에 난소에서의 에스트로겐 분비가 중단된 후에, 실질적으로 모든 안드로겐과 에스트로겐이 부신에 의하여 만들어진 디히드로에피안드로스테론 (DHEA)으로부터 인트라크라인 메카니즘에 의하여 말초 목표 조직에서 합성된다. 사실, 난소 에스트로겐의 부재로 인한 혈청 DHEA의 점차적인 감소는 질 건조증, 염증, 성교 통증 및 폐경기와 관련된 성기능 장애에서 중요한 작용을 할 가능성이 있다. 기타 다른 유리한 효과들 중에서 질 건조증을 완화할 수 있는 잠재적인 신규 호르몬 대체 치료법의 특정한 에스트로겐 및/또는 안드로겐 효과들을 평가하기 위하여, 우리는 난소 절제 (OVX) 후 및 OVX 동물에게 DHEA, 복합 에스트로겐 (프레마린) 및 선택적인 에스트로겐 수용체 조절자인 아콜비펜을 단독 투여 또는 조합 투여하고 8달 후에, 쥐 질의 형태를 조사하였다. 프레마린으로 처치된 발정기에 있는 거세되지 않은 동물 및 OVX 쥐에 있어서, 전형적인 질 에스트로겐 패턴은 각질화된 비늘 모양의 층으로 배열된 상피이다. OVX는 염증성 변화와 관련된 통상적인 수축의 원인이 되는 반면, 아콜비펜은 염증의 발생과 질상피에서의 점액 세포의 크기와 수를 증가시켰다. 이용된 투여량에서, 프레마린은 OVX 유도 상피 수축을 완벽하게 뒤집었고 반면에 DHEA는 수축을 부분적으로 뒤집었다. 사실, DHEA로 처치한 OVX 동물들의 질상피는 안드로겐 효과의 전형인 3~5의 술잔 세포 및 원주형의 점액 세포층으로 과형성되었다. DHEA에 프레마린의 부가로 거세되지 않은 동물에서보다 상피가 더 두꺼워 졌다. 더욱이 고유판에서의 콜라겐 섬유의 조밀성은 DHEA에 의하여 증가하였다. 반대로 아콜비펜 단독 처치는 고유판 두께를 증가시키는 경향을 보였고, DHEA와 결합했을 때 본래의 값에 도달하였다.
OVX 후에, 질 근육층이 46%까지 감소하였고, 41% 및 100%이던 효과는 각각 DHEA 및 프레마린에 의하여 뒤바뀌었다. 반대로 OVX 이후 전체 질벽 두께에서의 50% 감소는 DHEA와 프레마린에 의하여 각각 42% 및 93%로 뒤바뀐 반면, DHEA와 아콜비펜의 조합은 전체 질벽 두께를 거세되지 않은 동물군과 현저하게 다르지 않은 값으로 역전시켰다.
면역 조직 화학은 모든 DHEA 처치 군들에 있는 강한 안드로겐 수용체 (AR) 표지를 나타내었다. 반대로 에스트로겐 수용체 알파 (ERα)와 프로게스테론 수용체 (PR) 표지는 아콜비펜 처치 군들 중 어디에서도 탐지되지 않았다.
결론적으로 DHEA로 처치 또는 DHEA와 아콜비펜의 조합으로의 처치는 상피 점액 분비기 및 AR 상향 조절에 의하여 드러난 것처럼, 지배적인 안드로겐 효과를 통하여 다양한 질벽층에서 관찰된 OVX 유도 수축 변화를 부분적으로 또는 완전히 막는다. 본 자료는 또한 질벽의 3개 층에 있는 DHEA의 특히 흥미로운 영향들, 즉 높은 점액성 상피, 고유판에서의 콜라겐 섬유의 조밀도의 증가 및 근육 두께의 증가를 나타낸다. 따라서 DHEA는 질 점막층에 안드로겐 및 에스트로겐 효과를 나타내어 더 생리학적인 대체 치료법을 제공한다. 조사된 화합물 각각이 질의 기능에 잠재적으로 이익이 되는 효과를 갖는 반면, DHEA 단독 또는 그 조합은 질 건조증을 최적으로 경감시킬 수 있고 통괄 질 생리학을 복구시킬 수 있으며 폐경기와 관련 있는 성기능 장애를 치료하는 것을 도울 수 있다. DHEA와 기타 화합물은 전신 또는 국소적으로 투여될 수 있다.
본 발명의 선택적인 에스트로겐 수용체 조절자는
a) 1~2개의 매개 탄소 원자에 의하여 일정한 간격을 두고 있는 2개의 방향족 고리로서, 이들 2개의 방향족 고리는 모두 수산기 또는 생체 내에서 수산기로 전환되는 기에 의하여 치환 또는 미치환되고,
b) 방향족 고리와 3차 아민 작용기 또는 이들의 염을 가지는 측쇄
인 것이 특징인 분자식을 갖는다.
본 발명의 선호되는 SERM 중 하나는 PCT/CA96/00097 (WO 96/26201)에 기록되어 있는 EM-800이다. EM-800의 분자 구조는 다음과 같다.
Figure 112007037265790-PCT00010
본 발명의 선호되는 SERM 중 또 다른 하나는 US 6,710,059에 기록되어 있는 아콜비펜 (EM-1538, 또한 소위 EM-652.HCl)이다. B1은 강력한 항에스트로겐 EM-652의 염화 수소염이다. EM-800과 비교할 때, EM-1538은 합성하기에 더 안전하고 더 간단하며 더 쉬운 염이다. EM-800 또는 EM-1538을 투여할 때, 생체 내에서 동일한 활성 화합물이 유발된다고 여겨진다.
Figure 112007037265790-PCT00011
선호되는 SERM 중 또 다른 하나는 라속시펜 (CP-336,156; (-)-시스-(5R,6S)-6-페닐-5-[4-(2-피롤리딘-1-일에톡시)페닐]-5,6,7,8-테트라히드로나프탈렌-2-올, D-(-)-타르트레이트 염) (Pfizer Inc.,USA에서 구입 가능)이다.
기타 본 발명의 선호되는 SERM은 타목시펜 ((Z)-2-[4-(1,2-디페닐-1-부테닐)]-N,N-디메틸에탄아민) (Zeneca, UK에서 구입 가능), 토레미펜 (Orion-Farmos Pharmaceutica, Finland, 또는 Schering-Plough에서 구입 가능), 드롤록시펜 및 랄록시펜 (Eli Lilly 및 Co., USA ), (LY 335563) 및 LY 353381 (Eli Lilly 및 Co., USA), 오스페미펜 (FC 1271) (Orion-Farmos Pharmaceutica,, Finland에서 구입 가능), 요오독시펜 (SrnithKline Beecham, USA), 레보르멜록시펜 (3,4-트랜스-2,2-디메틸-3-페닐-4-[4-(2-(2-(피롤리딘-1-일)에톡시)페닐]-7-메톡시크로만) (Novo Nor disk, A/ S, Denmark) (Shalmi 외. WO 97/25034, WO 97/25035, WO 97/25037, WO 97/25038 ; 및 Korsgaard 외. WO 97/25036에 기술되어 있다), GW- 5638 (Willson 외, 1997, Endocrinol, 138(9): 3901-3911에 기술되어 있다), Aventis (France)에 의하여 개발된 SERM 3339 및 인돌 유도체 (Miller 외. EP 0802183A1에 기술되어 있다) 및 TSE-424 및 Wyeth Ayers (USA)에 의하여 개발되고 JPl0036347에 기술되어 있는 ERA-923 (미국 가내 수공업 회사) 및 WO 97/32837에 기술되어 있는 비스테로이드성 에스트로겐 유도체를 포함한다.
제조자가 추천하는대로, 효능상 요구에 따라 이용된 임의의 SERM을 이용할 수 있다. 적절한 투여량은 당해 분야에 알려져 있다. 시판되는 어떠한 다른 비스테로이드성 항에스트로겐도 본 발명에 따라 이용할 수 있다. SERM과 유사한 활성을 갖는 임의의 화합물, 예컨대 랄록시펜을 이용할 수 있다.
본 발명에 따라 1일 체중 kg당 0.01 내지 10mg (바람직하게는 0.05 내지 1.0mg/kg) 범위의 SERM 투여량, 1일 5mg, 특히 1일 10mg을, 경구 투여시 평균 체중의 사람에게 바람직하도록 2회 분량으로 동일하게 나누어 투여하거나, 1일 체중 kg당 0.003 내지 3.0mg (바람직하게는 0.015 내지 0.3mg/ml) 범위의 SERM 투여량, 1일 1.5mg, 특히 1일 3.0mg을, 비경구 투여시 (즉, 근육내, 피하내 또는 경피성 투여) 평균 체중의 사람에게 바람직하도록 2회 분량으로 동일하게 나누어 투여한다. SERM은 후술하는 약리적으로 허용되는 희석제 또는 담체와 함께 투여되는 것이 바람직하다.
선호되는 타입 5 cGMP 포스포디에스테라제 억제제는 Pfizer (USA)에 의하여 "비아그라"라는 상표명으로 판매되는 실데나필 (Sildenafil), Eli Lilly (USA)에 의하여 "시알리스 (Cialis)"라는 상표명으로 시판되는 타달라필 (Tadalafil) 및 Bayer (Germany)에 의하여 "레비트라 (Levitra)"라는 상표명으로 시판되는 바르데나필 (vardenafil)이 있다. 또한 현재 개발 중인 선호되는 타입 5 cGMP 포스포디에스테라제 억제제는 Dong-A Pharm Tech (South Korean)의 DA-8159, Merck (Germany)의 EMR-62203, Tanabe Seiyaku (Japan)의 TA- 1790, Schering-Plough (U.S.A.)의 SCH-446132 및 Pfizer (U.S.A.)의 UK-371800이 있다.
하나의 선호되는 프로스타글란딘은 NexMed (USA)에 의하여 "알프록스 TD (Alprox-TD)"라는 상표명으로 시판되는 알프로스타딜 (alprostadil)이 있다.
여기서 추천하는 모든 복용량에 대하여, 해당 임상 학자가 개개 환자의 반응을 모니터링하고 그에 따라 복용량을 조절해야 한다.
도 1은 외부 입구 (ostium; 구멍)(단편 1)부터 경상부(頸狀部) 단계 (자궁 질부)(단편 7)까지 쥐의 질을 세로축에 교차하여 7개 단편으로 구분한 것을 나타낸다.
도 2는 쥐로 구성된 9개의 군에 있는 단편 5의 질상피 조직을 나타낸다. (J)에 있는 막대는 40 ㎛이다.
(A) 대표적인 에스트로겐의 효과로, 발정기에 있는 사이클링 쥐들의 비늘 모양의 층으로 배열된 상피는 4개의 주요 층, 즉 1개 세포층인 배아층 (b), 6~7개 세포층인 가시층 (s) 및 평평한 각질화된 층으로 단단히 싸여 있는 각질층 (c)로 감싸져 있는 5~6개 층인 과립층 (g)으로 이루어져 있다.
(B) 에스트로겐의 임신 직전기 영향 하에 있는 발정 전기의 사이클링 쥐들은 점액 분비기를 설명하는데 이용된다. 2~7의 대부분의 단편에서, 1개의 기저 세포층 (b)는 5~6 세포층인 가시층 (s) 및 3~4의 점액 세포층으로 이루어진 점액 분비층 (m)으로 감싸져 있다.
(C) OVX 군에서, 기저 세포층 (b)는 수축성 입방형 세포층 (a)로 감싸져 있다.
(D) 매일 경구 용량 (2.5 mg/kg)의 아콜비펜으로 처치된 OVX 쥐들의 질상피는 수축을 보이나, 외부의 낮은 원주형 점액 세포층 (m)이 기저 세포층 (b)를 감싸고 있다.
(E) OVX 쥐들의 질상피를 매일 경구 용량 (0.5 mg/kg)의 프레마린 (Premarin)으로 처치하였다. 발정기 때 발견되는 것에 상당한 에스트로겐 패턴이 OVX 유도 수축을 대신하였다.
(F) 프레마린과 아콜비펜으로 처치된 OVX 동물에서는, 더 큰 점액 세포가 보일지라도, 아콜비펜으로 처치된 동물들에서의 형태와 유사한 형태를 가진 수축이 지배적이었다.
(G) OVX 동물들의 등쪽 피부 2 X 2 cm 영역을 매일 한번 DHEA로 도포 처치한 후에, 3~5 점액 세포층 (m)으로 이루어진 비대 상피가 기저층 (b)를 감싸고 있는 것이 보였다. 몇 개의 함입들 (화살표)이 이 상피의 특징이다.
(H) DHEA와 아콜비펜으로 처치된 동물들의 질상피의 대부분의 영역에서. 점액 세포층 (m)이 기저 세포층 (b) 위에 놓여져 있는데 반하여, 일부 영역에서는 많은 점액 세포층이 기저 세포층을 감싸고 있다. 몇 개의 함입들 (화살표)이 이 상피의 특징이다.
(I) DHEA와 프레마린 처치로, 3마리 동물에 있어서 3~5 점액 세포층 (m)으로 감싸져 있는 3~7 세포층 두께의 비늘 모양의 층으로 배열된 상피 (s)로 이루어진 혼합 상피가 되었다. 2마리 동물에서는 비늘 모양의 층으로 배열된 상피 영역들이 지배적이었다 (삽입도). 삽입 도에서의 막대는 30 ㎛이다.
(J) DHEA, 프레마린 및 아콜비펜이 한데 섞였을 때, 상피는 DHEA와 아콜비펜이 한데 섞인 것과 유사하였다.
도 3은 OVX 동물들의 질점막층을 나타내는데, (A)는 상피내 미세농양 (M)을 가진 병소(病巢)에 백혈구 침투가 특징인 심각한 염증성 변화들을, (B)는 상피의 완전한 사라짐으로 가시화되는 궤양 형성 (U)과 감소한 상피 두께가 특징인 병소 진무름 (E)를 나타낸다.
도 4에서는 질상피 표면 단편 1 (외부 입구)에서의 아콜비펜의 에스트로겐과 동일한 효과를 설명하기 위하여, 관련 군들을 비교하였다. 발정기에 있는 거세되지 않은 쥐들 (A) 및 프레마린 처치 동물들 (D)에서, 상피는 10~15 층 두께이고 각질화되었다. OVX군 (B)에서, 상피 두께는 4~6 층으로 감소하고 통상적으로 각질화되지 않으나 (과립층의 부재를 참고), 반면 아콜비펜 처치 동물들 (C)에서, 두께는 9~11 층으로 회복되고 각질화된다.
도 5는 OVX 동물을 DHEA, 프레마린 및 아콜비펜을 단독 또는 조합하여 36주간 처치한 후, 쥐 질 단편의 5번째 평면에서 3개의 다른 질 구획의 두께, 즉 a) 상피, b) 고유판, c) 근육 및 d) 총 두께를 나타낸다. 발정기 및 발정 전기에 있는 거세되지 않은 동물들을 대조군으로서 부가하였다. 같은 문자의 군들은 통계학적으 로 p<0.05의 차이도 없다.
도 6은 단편 5에서 설명된 고유판의 콜라겐 섬유의 조밀도를 낮음 (A), 중간 (B) 또는 높음(C)으로 나타낸다.
도 7은 다른 군들에 있는 상대적인 근육 두께를 강조하여 쥐 질 단편의 5번째 평면의 3개의 질 구획, 즉 (E) 상피, (L) 고유판 및 (M) 근육의 축소 사진을 나타낸다. 막대로 3개의 질벽 층을 분리한 것은 다른 군들 간의 두께 분포를 가장 잘 평가하기 위한 것이다. A) 거세되지 않은 군, B) OVX, C) 아콜비펜으로 처치된 OVX, D) 프레마린으로 처치된 OVX, E) 프레마린 + 아콜비펜으로 처치된 OVX, F) DHEA로 처치된 OVX, G) DHEA + 아콜비펜으로 처치된 OVX, H) DHEA + 프레마린으로 처치된 OVX 및 I) DHEA + 프레마린 + 아콜비펜으로 처치된 OVX이다.
도 8은 OVX 후 및 OVX 동물들을 36주간 아콜비펜, 프레마린 및 DHEA를 단독 또는 조합으로 처치한 후 측정한 질 질량을 나타낸다. 거세되지 않은 동물군을 대조군으로 부가하였다.
도 9는 다른 군들의 5번째 질 단편 평면의 상피 (E), 고유판 (L) 및 근육 (M)에 있는 AR, ERα 및 PR의 면역 조직 화학적 부위를 나타낸다. 막대들은 3개의 질 구획 사이의 분리를 나타낸다.
도 10과 11은 쥐에 있어, 다른 SERMs 사이의 비교, 즉 질상피 형태를 나타낸다.
도 12는 이들의 본래 해부학상 위치에 따른 순서로 8개의 질 단편 (윗 열 전체와 오른쪽 아래 코너 부분)과 4개의 자궁 단편 (자궁 목의 1 단편과 2개의 자궁 뿔(뿔 당 2개 부분)의 3개 단편)의 위치를 표시하는 현미경 슬라이드 사진을 나타낸다. 단편 8은 자궁 경상부의 시작부에 인접한 측면 질 접힘 (lateral vaginal folds)을 포함한다.
도 13은 거세되지 않은 쥐에서의 효과를 나타내는데, 발정기에 (왼쪽 칼럼) 단편 4의 질상피는 12~18 층 두께이고, 단편 6에서는 12~15 층 두께이고: 발정 후기에 (오른쪽 칼럼), 단편 4의 질상피는 6~10 세포층이고, 단편 6에서는 5~7 층이라는 것을 나타낸다.
도 14는 난소가 절제된 자연 그대로의 쥐에서의 효과를 나타내는데, 단편 4에서 질은 비늘 모양의 층으로 배열된 2~6 상피 세포층에 의하여 구획된다. 단편 6에서는 평평한 2~3 세포층과 함께 완전한 수축이 관찰된다. 작은 원통형의 점액 세포들의 일부 초점들이 드물게 질 전체를 통하여 관찰될 수 있다.
도 15는 위약 효과/ 좌약을 나타낸다. OVX 자연 그대로의 군과 비교할 때, 단편 4는 4~8 세포층을 나타내면서, 위약 군의 비늘 모양의 층으로 배열된 질상피는 약간 두껍다. 단편 6에서는, OVX 자연 그대로의 군과 같은 형태가 2~3 상피 세포층과 함께 관찰되었다. OVX 자연 그대로의 동물과 비교할 때, 약간 더 많은 작은 원통형의 점액 세포의 초점들이 질을 통하여 발견될 수 있다.
도 16은 DHEA 0.33 mg/ 좌약의 효과를 나타낸다. 단편 4에서, 질상피는 3~7 세포층을 가진 비늘 모양의 층으로 배열되어 있다. 질 내층의 약 20~60%는 비 점액성 영역과 함께 1개 이상의 비늘 모양의 층으로 배열된 상피층을 감싸는 15~50%의 비대 점액세포의 순환으로 잘 정렬된 점액 세포로 구성된다. 단편 6에서 상피 두께 는 OVX 자연 그대로의 동물들에서 발견된 두께 가까이, 즉 원통형의 점액 세포로 감싸진 2~5 세포층으로 감소한다. 점액 세포의 발생에 있어 다양한 변이가 관찰되었는데, 이들 세포는 비 점액성 영역과 교대로 5~75%의 질 표면을 덮고 있다.
도 17은 DHEA 0.66 mg/ 좌약의 효과를 나타낸다. 비늘 모양의 층으로 배열된 상피는 3~6 세포층 두께이다. 질 내층의 약 5~20%는 1개 이상의 비늘 모양의 층으로 배열된 상피층을 감싸는 10~75%의 비대 점액 세포의 순환으로 잘 정렬된 점액 세포로 구성된다. 비 점액성 영역 또한 존재한다. 단편 6에서, 상피 두께는 감소하고, 잘 정렬된 점액 세포들 위에 놓여 있는 2~4의 비늘 모양의 층으로 배열된 상피 세포층으로 이루어져 있다. 점액성 영역은 비 점액성 영역과 교대로 20~80%의 질 표면을 변화시킨다.
도 18은 DHEA 1 mg/ 좌약의 효과를 나타낸다. 단편 4에서, 비늘 모양의 층으로 배열된 상피는 3~9 세포층을 나타낸다. 3~4 비늘 모양의 세포층을 감싸고 있는 비대 점액 세포들은 질 표면의 50~70%를 덮고 있다. 반면에 잘 정렬된 점액 세포들은 5~30%의 질 표면을 구획한다. 비 점액성 영역은 점액 세포들 사이에 산재해 있다. 단편 6에서 상피 두께는 또한 감소하고, 2~4 세포층으로 이루어져 있다. 1~3 비늘 모양 세포층을 감싸는 비대 점액 세포들은 질 표면의 약 30~100%를 덮고 있는 반면, 잘 정렬된 점액 세포들은 0~79%를 덮고 있다. 산재하지 않은 비 점액성 영역들이 또한 관찰된다.
도 19는 OVX 쥐의 질 내로 DHEA (좌약)을 14일 투여 처치하였을 때의 체중에서의 효과에 대한 그래프이다. 위약 군과 비교할 때, DHEA를 0.33 mg 및 0.66 mg 주입한 군들의 체중이 약간 감소한 반면, 1 mg 군에서 감소는 더 현저했다.
도 20은 OVX 쥐들에게 0.33 mg, 0.66 mg 또는 1 mg의 질 내 투여 후 DHEA의 혈청 농도에 대한 그래프이다. DHEA를 각각 0.33 mg, 0.66 mg 또는 1 mg로 투여하였을 때, DHEA 투여 7시간 후 곡선 (AUC) 값 아래 영역은 32 ±4 ng.h/ml, 50 ±7 ng.h/ml 및 131 ±23 ng.h/ml 이었다.
실시예 1
물질 및 방법
동물 및 처치
실험 시작시 무게가 대략 220~270 g인 10~12 주령 암컷 Sprague-Dawley 쥐 (Crl:CD®(SD)Br VAF/PlusTM) (Charles River Laboratory, St-Constant, Canada)를 이용하였다. 동물들을 실험 시작 전 최소 1주 동안 환경 조건 (온도: 22 ± 3 ℃; 습도: 50 ± 20%; 12시간 간격의 빛과 어둠 주기로 07:15에 빛을 줌)에 순응시켰다. 동물들을 개별적으로 집에 가두고 물과 설치류의 먹이 (Lab Diet 5002, Ralston Purina, St-Louis, MO)에 자유롭게 접근 가능하도록 하였다. 실험은 동물 간호에 관한 캐나다 협의 (Canadian Council on Animal Care; CCAC) 및 실험 동물 간호의 평가와 인가를 위한 협회 (Association for Assessment and Accreditation of Laboratory Animal Care; AAALAC)에서 승인된 동물 편의에 있어 실험 동물의 간호 및 이용 (Care and Use of Experimental Animals)을 위한 CCAC 가이드에 따라 행해졌다.
전체 126 마리의 암컷 쥐들을 임의로 14 마리씩 다음과 같이 9개의 군으로 분배하였다: 1) 거세되지 않은 군; 2) 난소 절제 군 (OVX); 3) OVX +아콜비펜 (2.5 mg/kg); 4) OVX + 프레마린 (0.5 mg/kg); 5) OVX + 프레마린 + 아콜비펜; 6) OVX + DHEA (80 mg/kg); 7) OVX + DHEA + 아콜비펜; 8) OVX + DHEA + 프레마린; 9) OVX + DHEA + 아콜비펜 + 프레마린. 실험 첫날 모든 군 (1군을 제외)의 동물들을 이소플루란에 의한 마취하에 양방향으로 난소절제 (OVX)하였다. 프레마린과 아콜비펜을 0.4% 메틸셀룰로즈 현탁액으로 경구 급식 (0.5 ml/rat)에 의하여 투여하였고, 반면 DHEA 50% 에탄올 50% 프로필렌 글리콜 용액 (0.5 ml/rat)을 원칙적으로 등쪽 피부 2 X 2 cm 깎인 부분에 도포하였다. 프레마린 투여량 선택은 OVX에 의한 자궁 수축을 뒤바꾸는데 필요한 최소한의 1 투여량과 일치한다. 반면 아콜비펜은 프레마린 처치 OVX 동물에게 투여한 후, OVX와 유사한 자궁 수축을 일으키는데 필요한 1회 투여량으로 투여되었다. 이용된 DHEA의 1회 양은 70~100 nmol/L의 DHEA 혈액 수치를 주었다. 처치는 연구 2번째 날에 시작되었고 화합물들은 36주간 매일 1번 투여되었다. 거세되지 않은 군 및 OVX 통제 군들의 동물들은 혼자 운반체를 받았다.
마지막 투여하고 24시간 후, 밤새 금식한 동물들을 이소플루란 마취하에 복부 대동맥 채혈 (군당 9마리)하거나 10% 중성 완충 포르말린으로 심장내 관류 (군당 5마리)하였다. 비관류 동물들의 질을 채취하여 무게를 측정하는 반면, 관류 동물로부터 채취한 질은 배부분을 검은색 잉크로 표시하고 하기와 같이 처치하였다.
조직학적 절차
각각 관류된 동물들의 전체 질을 10% 중성 완충 포르말린으로 고정하였다. 각각의 질을 이 후, 도 1에서 설명한 것과 같이 7개의 동일한 교차 단편으로 나누고, 관례대로 진행하여 동일한 파라핀 블록에 함께 끼워 넣었다. 파라핀 블록 내에서, 7개의 원통형 질 단편들은 이들의 본래 해부학상 위치에 상응하는 순서대로 위치시키고, 블록 표면에 수직으로 향하게 하여 단편을 교차 단편으로 자를 수 있게 하였다. 각 동물에 있어서, 형태학적 시험을 위하여 4 ㎛ 두께로 파라핀 단편을 자르고 헤마톡실린 에오신으로 염색하였다.
조직 형태 계측 ( Histomorphometry )
다른 질층의 측정을 중간 지역과 자궁질부 (portio vaginalis uteri) (단편 7) 사이의 대략 중간 정도에 있는 5번째 단편 (도 1)에서 수행하였다. 이 5번째 단편은 대표적인 상피 표면 및 민무늬근의 충분한 두께를 나타내는 것으로 발견되었다. 이미지들은 DC-330 3CCD 컬러 카메라 (Dage-MTI, Michigan City, IN, USA)에 의하여 포착되었고, Image-Pro Plus 3.0 소프트웨어 (Media Cybernetics, Silver Spring, MD, USA)를 이용하여 정량화되었다.
X 5 대물렌즈 (Leica Microsystems, Willowdale, Ont., Canada)를 이용하여, 층당 3~4 두께 측정이 상피 및 근육 및 3개 질층 합의 대표 영역으로부터 얻어졌다. 전체 질의 두께, 상피 두께 및 근육 두께가 또한 측정되었다. 고유판의 두께는 전체 질 두께에서 상피와 근육 두께를 감산하여 얻었다.
면역 세포 화학
Zymed SP 키트를 이용하여 면역검색법을 수행하였다 (San Francisco, CA). 파라핀 영역 (4 ㎛)을 톨루엔으로 탈파라핀화 (deparaffinize)하고 에탄올로 재수화하였다. 내인성의 과산화효소 활성은 3% 과산화수소 메탄올 용액으로 30분간 전항온처치(前恒溫處理)하여 제거하였다. 시트레이트 완충 (Tacha and Chen, 1994)을 이용한 마이크로웨이브 복구 기술이 적용되었다. 슬라이드를 식힌 후, 비특이적 결합을 20분 동안 10% 염소 혈청을 이용하여 차단하였다. 그 후 영역들을 실온에서 1.5 시간 항체 ERα (AB-I, Calbiochem, California), AR (N-20, Santa Cruz Biotechnology, California) 또는 PR (Ab-4, NeoMarkers, California)을 각각 1:200, 1:250 및 1:250으로 함께 배양하였다. PBS 완충으로 세정한 후에, 영역들을 비오테닐레이트된 항 토끼 2차 항체로 10분간 배양하고 난 후, 스트렙타비딘 (streptavidin) 과산화효소로 다시 10분간 배양하였다. 디아미노벤지딘을 현미경으로 비오틴/ 스트렙타비딘 과산화효소 복합체를 관찰가능하도록 하기 위하여 색원체로 이용하였다. 역염색을 30초간 Gill의 헤마톡실린을 이용하여 수행하였다. 통제를 위하여, 항체를 기르기 위하여 이용된 과량의 펩티드로 면역흡수 또는 비 면역 토끼 IgG와 치환이 이루어졌다. 면역염색 핵의 수와 강도에 대한 반정량 평가가 표 2에 나타난 것과 같이 이루어졌다.
[표 1] 7개의 쥐의 질 단편에 있는 상피, 고유판 및 근육의 조직학적 평가
Figure 112007037265790-PCT00012
E= 상피 형태: KS (각질화된 층으로 배열된 비늘 모양), LHM (지나치게 발달한 큰 점액 세포들), SCM (정렬된 원주형 또는 입방형의 작은 점액 세포들), MSM (점액 세포들로 감싸진 혼합층으로 배열된 비늘 모양), A (수축: 작은 입방형 세포들).
주어진 단편을 위한 2개의 다른 축약은 2개의 다른 패턴을 나타내고 첫 번째가 지배적이다.
1L= 고유판 두께: T (두꺼움), MT (보통 두께), t (얇음); 2콜라겐 섬유의 조밀함: H (높음), M (보통), L (낮음);
M= 근육 두께: T (두꺼움), MT (보통 두께), t (얇음), s (매우 얇음)
[표 2] 쥐 질의 5번째 단편의 상피, 고유판 및 근육에 있는 AR, ERα 및 PR을 위한 면역염색 핵의 수와 강도의 반정량 평가
Figure 112007037265790-PCT00013
--안드로겐 수용체 (AR), 에스트로겐 수용체 알파 (ERα), 프로게스테론 수용체 (PR), 상피 (E), 고유판 (L), 근육 (M).
--숫자는 표지된 핵의 반정량 평가를 나타낸다: 0= 없음, 1= 낮음, 2= 보통, 3= 높음
--표지 강도는 낮음: +, 보통: ++, 높음: +++로 나타낸다.
통계적 분석
자료는 질층 두께 측정을 위하여 군당 5마리 또는 질질량 측정을 위하여 군당 8~9 마리의 ±SEM으로 제시된다. 통계적 유의성은 Duncan-Kramer의 다양한 범위의 시험 (Kramer, 1956, Biometrics, 12: 307-310)에 따라 측정되었다.
결과
쥐 질의 다른 층의 형태 및 두께
쥐 질벽의 3개층, 즉 상피, 고유판 및 근육을 정확하고 상세하게 조사하기 위하여, 세로축을 따라 얻어진 7개 단편들 (도 1)을 먼저 조사하였다. 중요한 형태적 차이가 군들 사이에서 관찰된 반면, 통상적으로 그 차이들은 동일한 군의 모든 동물들에게서 동일하고 단편 2, 3, 4, 5, 6 및 7은 유사한 상피 형태를 보였다. 관찰된 극소수의 예외는 뒤에서 언급할 것이다. 따라서 단편 5는 질상피에의 다양한 처치의 효과를 설명하기 위하여 이용되었다.
OVX 군에서, 난소 자극의 부재는 약간의 작은 점액 세포 영역의 존재를 갖는 모든 단편들 (표 1 및 도 2C)이 특징인 질상피의 수축을 유발시켰다. 가장 중요하게, 초점이 많은 질내 미세 종양 (상피 내에 덩어리로 된 백혈구의 작은 영역들)이 있는 온화한 것부터 심각한 정도까지의 염증이 자주 발견되었다. 이들 변화는 자주 초점 붕괴 (상피층이 부분적으로 사라지는 영역)와 궤양 (상피층의 완전한 사라짐) 을 동반하였다 (도 3).
아콜비펜으로 처치한 OVX 동물에 있어서, 단편 1에서 그것이 OVX 동물에게 프레마린을 처치했을 때나 발정기에 있을 때 동물에게서 발견되는 10~15 층과 비교되는 9~11 세포층을 포함하고 있는 것 외에는 거세되지 않은 군과 유사한 각질화된 층으로 배열된 비늘 모양의 상피가 관찰되었다 (도 4). 따라서 단편 1에서 아콜비펜으로 처치한 동물의 상피 두께는 4~6 세포층만을 포함하는 OVX 쥐의 상피 두께보다 더 두꺼웠다. 다른 단편들에서 (표 1), 기저층은 낮은 원주형 점액 세포들의 층으로 뒤덮였고 (도 2D), 그것은 OVX 동물에서보다 더 발달하였다. 온화한 것부터 심각한 정도까지의 염증 변화가 모든 OVX 동물에게서 일반적으로 발견되는 반면, OVX + 아콜비펜 군에 있어서, 5마리 중 오직 3마리만 미량의 염증 징후를 보였다.
모든 군의 단편 1에서는 수축이 지배적인 특징인 (도 4) OVX 군의 동물들을 제외하고는 상당히 각질화된 비늘 모양의 상피가 관찰되었다. 더욱이 OVX + DHEA 및 OVX + DHEA + 아콜비펜 군들에 있어서, 점액 세포들은 종종 단편 1의 지배적인 층으로 배열된 비늘 모양의 상피 (도면 없음)를 동반하였다.
DHEA로 처치한 OVX 동물들의 질상피의 7개 단편들은 안드로겐 효과의 전형적인 특징인 팽창된 세포질 액포를 가진 커다란 다층 원주형 점액 세포로 이루어져 있었다 (표 1, 도 2G). 일부 큰 함입들이 DHEA 처치 후 상피의 특징이었다. 점액 세포의 크기와 층의 수가 감소하는 것을 제외하고는 유사한 상피 형태가 OVX + DHEA + 아콜비펜 군의 모든 단편에서 발견되었다 (표 1, 도 2H). DHEA + 프레마린 처치 동물에 있어서, 점액 세포층으로 덮인 다른 비율의 비늘 모양 상피로 이루어 진 "혼합" 타입의 두꺼운 층으로 배열된 상피가 에스트로겐과 안드로겐 효과를 함께 드러내면서, 2~5번째 단편에서 관찰되었다. 이 군에서, 3마리 동물들은 위에서 언급된 단편들 이외에 점액 분비기를 나타낸 반면, 다른 2마리 동물에서는 모든 단편에서 층으로 배열된 비늘 모양의 상피가 관찰되었다 (표 1). 프레마린을 DHEA 및 아콜비펜과 섞었을 때, 상피는 DHEA + 아콜비펜 군의 그것과 유사하다. 따라서 아콜비펜에 의한 에스트로겐에 의한 비늘 모양 세포 증식의 봉쇄를 나타낸다 (표 1, 도 2J).
OVX 동물에게 DHEA 투여는 질상피 두께를 38 ± 4 ㎛까지 증가시켰다. 반면 DHEA에 아콜비펜의 부가는 37 ± 5 ㎛로 유지되는 상피 두께를 변화시키지 못했다. 프레마린과 DHEA를 OVX 동물에게 함께 투여하였을 때, 84 ± 6 ㎛의 두꺼운 두께가 관찰되었고, 그 값은 프레마린을 단독 투여한 동물군의 그것과 유의성 있는 차이가 아니었다. 결국, 프레마린, DHEA 및 아콜비펜의 조합은 상피 두께를 32 ± 3 ㎛로 만들었고 이는 DHEA를 단독으로 또는 아콜비펜과 혼합하여 투여한 군의 두께와 유사한 값이었다.
고유판
질의 콜라겐 섬유의 조밀도는 상피 중앙에 가까운 쪽 영역에서 관찰할 때, 낮음, 보통, 높음으로 분류되었다 (도 6). <<낮음>> 및 <<보통의 조밀도>>는 각각 느슨하거나 덜 느슨하게 함께 엉긴 성긴 콜라겐 섬유의 존재와 관련있다. 반면 <<조밀도 높음>>은 부드럽게 잘 짜여진 외관을 나타내면서 단단하게 쌓인 좋은 콜라겐 섬유를 묘사하는데 이용된 용어였다. 모든 동물에 있어서 콜라겐의 양에 비례 하여 상대적으로 극소수의 섬유세포가 있는데 이들은 주로 평평하고 쭈글쭈글하게 보였다.
각 동물에 대한 조심스런 시험은 통상적으로 단편 1의 콜라겐 섬유의 조밀도가 보통정도 (발정기의 쥐 또는 프레마린 처치 OVX 동물에서는 낮거나 OVX 쥐 또는 DHEA 처치 OVX 쥐에서 높은 것을 제외)인 반면, 단편 2 및 3의 조밀도는 단편 7에 이르러 일정 수준을 유지하는 안정수준에 도달하기 위하여 증가한다는 것을 드러낸다. 따라서, 발정기에 있는 거세되지 않은 쥐의 질 세로축을 따라, 콜라겐 섬유의 조밀도는 단편 1~3에서 낮고, 단편 4~7에서 보통이었다. 수축은 종종 OVX 및 OVX +아콜비펜 군의 콜라겐 섬유 조밀도의 증가와 관련되었다 (표 1). 프레마린 처치 OVX 동물에서, 단편 1의 조밀도는 낮고, 단편 2와 3에서는 보통인 반면, 다른 단편의 콜라겐 섬유의 조밀도는 점차 증가하여 단편 6과 7에서 높아졌다.
질을 따라 고유판 두께의 가시광 현미경 시험은 두께가 단편 1에서는 보통이 고 단편 2~4에서는 더 얇다는 것을 드러내었다. 단편 5~7에서 두께는 단편 1과 유사한 수준까지 급진적으로 증가하였다. 단편 5에서 측정된 고유판 두께에 상응하는 평균값 (도 5B)은 OVX가 아콜비펜에 의한 비 유의적 감소 (60 ± 8 ㎛)와 함께 고유판 두께에 유의적인 감소 (거세되지 않은 군에서 135 ± 28 ㎛에 대하여 76 ± 2 ㎛)를 유발한다는 것을 의미한다. 프레마린 또는 프레마린 + 아콜비펜을 OVX 동물에게 투여한 후 관찰된 증가는 거세되지 않은 군의 그것보다 아래에서 유지되었다 (135 ± 28 ㎛에 대하여 각각 100 ± 9 ㎛ 및 90 ± 3 ㎛). DHEA의 투여는 고유판 두께의 통계학상 비 유의적인 증가 (96 ± 20 ㎛)를 유발하고, 아콜비펜의 부가는 두께를 더 증가시켜 (136 ± 17 ㎛), 거세되지 않은 동물의 두께에 도달하게 한다. 프레마린 + DHEA로 OVX 동물의 처치는 DHEA만을 단독 처치했을 때와 비교할 때, 유의성 있게 그 두께를 증가시켰다 (144 ± 14 ㎛). 결국, 프레마린 + DHEA + 아콜비펜으로 처치된 동물들은 비록 그 차이가 통계학적으로 유의성 있는 것이 아닐지라도, DHEA만을 단독 처치한 군의 두께와 유사하고, 프레마린 + DHEA 군의 두께보다 낮은 두께 (99 ± 9 ㎛)를 나타내었다.
DHEA는 근육 두께에서 보통의 증가 (50 ± 2 ㎛)를 유발하였는데 이는 아콜비펜의 부가로 약간 감소하였다 (41 ± 3 ㎛). 결국, 프레마린과 DHEA의 혼합 처치는 DHEA만을 단독 처치한 동물과 비교할 때, 현저한 두께 증가 (62 ± 3 ㎛)를 유발하였다. 아콜비펜을 프레마린과 DHEA에 부가하였을 때, 근육 두께는 DHEA와 아콜비펜에 상응하는 값으로까지 감소하였다 (46 ± 5 ㎛).
질벽의 전체 두께를 측정할 때 (도 5D), 외막을 구성하는 연결 조직의 외부 얇은 층은 포함되지 않았다. OVX는 현저한 (51%) 질벽 수축 (거세되지 않은 동물에서의 262 ± 39 ㎛에 대하여 128 ± 3 ㎛)을 유발하였고, OVX에 아콜비펜의 부가는 어떠한 영향도 미치지 않았다 (108 ± 8 ㎛) (도 7A, B 및 C). 프레마린 처치로 거세되지 않은 동물에 있어 전체 두께와 유사한 값 (253 ± 10 ㎛)을 유지하는 반면, 프레마린에 아콜비펜의 부가는 프레마린의 효과를 역전시켰다 (150 ± 4 ㎛) (각각 도 7D 및 E). DHEA 처치에 의하여 얻어진 질 전체 두께 (184 ± 21 ㎛)는 프레마린 단독 처치 군의 두께보다 약 25% 더 낮은 것이었다 (도 7F). 반면에 DHEA에 아콜비펜의 부가는 유의성 있는 두께 증가를 유발하지 않았고 (213± 20 ㎛), 이는 거세 되지 않은 군과 유의성 있는 차이를 보이지 않았다 (도 7G). 결국 OVX 동물에 프레마린과 DHEA를 함께 투여하는 것은 거세되지 않은 동물의 두께와 유사한 값으로 두께 (290 ± 13 ㎛)를 현저하게 증가시켰다 (도 7H). DHEA와 프레마린에 아콜비펜의 부가는 DHEA 단독 투여와 유의성 있는 차이가 아닌 값 (176 ± 11 ㎛)으로 효과를 역전시켰다 (도 7I).
질 질량
처치 8달 후, 다른 군들 사이에 관찰된 질 질량의 차이는 (도 8) 통상적으로 상기 형태 관찰을 따른다. 실제로 OVX 후 질 질량은 거세되지 않은 군 (205 ± 11 mg)과 비교할 때 약 50% (101 ± 5 mg)까지 감소한 반면, 아콜비펜으로 단독 처치한 OVX 동물은 질 질량에 어떠한 영향도 없었다. 반면에 프레마린 투여는 거세되지 않은 동물들의 값에 아직 도달하지 못한 질 질량 증가 (170 ± 9 mg)를 유발하였으나, 프레마린에 아콜비펜의 부가는 OVX 동물들과 유사한 값 (96 ± 4 mg)까지 에스트로겐에 의한 질량 획득을 역전시켰다. 반대로 OVX 동물에 DHEA를 투여하였을 때 질 질량은 프레마린 처치 군과 유사한 값 (171 ± 12 mg)까지 증가하였고, 아콜비펜과 DHEA의 조합은 질량의 감소를 유발하고 (135 ± 9 mg), 이는 OVX 군의 질량보다 위에서 유지되었다. 결국 OVX 동물에 프레마린과 DHEA를 함께 투여한 것은 OVX + DHEA 및 OVX + 프레마린 군과 유사한 값에 이르는 질 질량 획득 (179 ± 10 mg)을 유발하였다. 이 조합에 아콜비펜의 부가는 어떠한 유의성 있는 효과를 나타내지 않았다 (194 ± 12 mg).
OVX 동물에 DHEA의 처치는 후자의 군에서 상피 표면층에 있는 더 작은 수의 표지된 핵이란 예외와 함께, DHEA + 아콜비펜 및 DHEA + 프레마린의 조합이 이용될 때 발견되는 것과 같은 패턴으로, 3개의 질 층에 있는 많은 핵의 AR 또는 강한 표지를 유발하였다. DHEA, 프레마린 및 아콜비펜의 조합은 또한 3개 질벽 층에 있는 대다수의 핵의 강한 스테이닝 (staining)을 초래하였다.
토의
성기능 장애가 있는 비뇨생식기 수축으로도 지칭되는 질 건조증 또는 질 수축은 폐경기 이후 여성에 있어 통상적인 문제이다 (Notelovitz, 2000, Menopause, 7(3): 140- 142). 가장 일반적인 증상은 건조, 화끈거림, 가려움, 자극 및 성교 통증이다. 따라서 성욕과 삶의 질이 저하된다 (Berman 외, 1999, Curr Opin Urol, 9(6): 563-568). 에스트로겐 부족과 관련이 있다고 알려져 있으므로, 에스트로겐 대체 치료법 (ERT) 및 HRT가 치료법으로 선택된다. 그러나 여성 성스테로이드 생리학의 새로운 정보는 안드로겐의 역할이 중요하다는 것을 강하게 시사하고 있기 때문에 현재의 연구는 HRT 또는 ERT의 대안으로서의 쥐의 질 형태 및 성스테로이드 수용체 발현에 대한 전체 호르몬 효과, 즉 DHEA 단독 또는 순수한 항에스트로겐 아콜비펜과의 조합, 및 프레마린과의 조합의 효과를 비교한다. DHEA는 먼저 간을 통과하는 것을 막기 위하여 경피적으로 투여되었다 (Labrie 외, 1996, Endocrinol, 150: S107- S118).
결국 우리의 결과들은 OVX 동물과 비교할 때, 프레마린 처치로 인하여 유의성 있는 질 질량 증가를 보였는데, 그 값은 DHEA 처치군에서 관찰된 것과 유사하였다. 비록 설치류에서 질과 자궁 질량의 증가가 통상적으로 에스트로겐성 측정에 이 용될지라도, 이들 기관은 또한 다른 화합물 중에 있는 프로게스테론과 테스토스테론에 반응할 수 있다는 것을 철회하는 것이 타당하다 (Emmens and Martin, 1964, Dorfman Ed, Ed Academic Press NY: 1).
잠재적인 3개 조합에서, 말의 에스트로겐 프레마린은 혈관 운동성 증상을 완화시키기 위한 뇌에서의 작용을 목표로 한다. 사실, 원하지 않는 에스트로겐의 주변 효과를 중성화하기 위하여, 순수 선택적인 항에스트로겐 아콜비펜과 에스트로겐을 함께 투여하는 것의 이익은 Labrie 외에 잘 기술되어 있다 (Labrie 외, 2003, Endocrinol, 144 (11): 4700-4706). 최근의 연구에서, 아콜비펜을 OVX 동물에 투여하였을 때, SERM에 의한 가장 전형적인 형태적 특성은 기저 세포층을 감싸고 있는 잘 정렬된 작은 점액 세포의 표면층의 모습으로, 프레마린 + 아콜비펜 군에서 약간 더 두드러지고, SERM을 DHEA에 부가하였을 때를 포함, 아콜비펜으로 처치한 군 모두에서 우세하게 유지되는 패턴이었다. 항에스트로겐으로 처치한 질상피 점액 분비기가 미성숙 (Anderson and Kang, 1975, Am J anat, 144(2): 197-207) 또는 성숙 쥐 (Yoshida 외, 1998, Cancer Lett, 134(1): 43-51)에서 기록되었다. 이 형태적 패턴이 프로게스테론에 의한 점액 분비기 (Anderson and Kang, 1975, Am J anat, 144(2): 197-207)와 비교될지라도, 항에스트로겐이 상피 점액 분비기를 유도하는 분자 메카니즘은 알려지지 않은 채로 유지되고 있다.
DHEA의 많은 이로운 효과가 폐경기 이후 여성에 있어 기록되어 왔다 (Labrie 외, 1997, J. Clin. Endocrinol. Metab., 82: 3498-3505; Labrie 외, 1991, MoI Cell Endocrinol, 78: C113-C118). DHEA에 대하여 어떤 특이적 수용체가 특정되지 않을지라도, DHEA 처치가 인트라크라인 메카니즘을 통하여 안드로겐성 및/또는 에스트로겐성 작용을 하는 활성 성스테로이드로의 인트라크라인 전환을 반영한 후에, 형태적인 변화가 쥐 질에서 관찰되었다 (Labrie 외, 1991, MoI Cell Endocrinol, 78: C113-C118). 이들 변화는 OVX 동물과 비교할 때, 강한 상피 점액분비기, 조밀도가 높은 섬세하고 정교하게 짜여진 고유판의 콜라겐 섬유 및 적당한 근육 두께 증가를 포함한다. 첫 번째 2개의 형태 변화는 전형적인 안드로겐성 효과이나 세 번째는 에스트로겐성 작용을 나타내며, 이는 근육층에서의 프로게스테론 수용체 발현에 있어 부수적인 증가에 의하여 지지된다.
DHEA가 주변 조직에서 안드로겐 및/또는 에스트로겐으로 변형되기 때문에, OVX 동물에 DHEA 처치 후, 현재의 연구에서 관찰된 두꺼운 점액성의 다층화된 상피는 쥐 질에 있어서의 점액분비기의 우세한 안드로겐성 효과를 제시하는데, 이 효과는 상피 부분에서 잠재적으로 함께 존재하는 최소한의 에스트로겐성 효과를 숨길 수 있다. 이전의 연구에서도 쥐 질에서 동일한 점액분비기 효과가 나타났다 (Sourla 외, 1998, J Steroid Biochem. MoI. Biol., 66(3): 137- 149). 그 이전의 연구에서는 DHEA의 질내 도포로 등쪽 피부에 DHEA를 도포하였을 때 활성이 나타난 양보다 10배 더 낮은 투여량으로 유의성 있는 효과를 보였다.
본 데이터는 쥐의 질에서 DHEA의 중요한 안드로겐성 작용과 비교적 중요하지 않은 에스트로겐성 작용이 함께 존재함을 나타낸다. 더욱이, 본 결과들은 항안드로겐 플루타미드 (Flutamide) (FLU)의 피하에 있는 양에 더하여 DHEA를 우리의 연구에서 이용된 것과 동일한 곳에 국부 도포한 OVX 동물의 질상피 관찰에 의하여 지지 된다 (비공개 결과). 실제로, DHEA의 안드로겐성 성분에 의하여 생산된 점액분비기의 안드로겐성 효과는 FLU에 의하여 완벽하게 전환되고, 비늘 모양의 층으로 배열된 상피와 전형적인 에스트로겐성 효과를 초래하였다 (데이터는 보여지지 않음). 만일 DHEA가 쥐의 질에서 배타적인 안드로겐성 효과 (점액분비기)를 낸다면, 이 효과는 FLU에 의하여 전환되고 그 후 OVX 동물의 그것과 유사한 수축 상피가 관찰될 것이다. 성소가 제거된 수컷 및 암컷 쥐에 대한 이전의 연구들은 DHEA로 처치가 조사중인 목표 조직에 의존하여, 전립선, 정낭 및 자궁에서의 자극형 안드로겐성 및/또는 에스트로겐성 효과를 유발한다는 것을 명백하게 입증하였다 (Labrie 외, 1988, Endocrinol, 123: 1412-1417).
반면, DHEA + 아콜비펜의 조합은 상피 점액분비기 존재의 감소를 보이고, 따라서 잘 정렬된 점액 세포층의 교대 -아콜비펜 효과- 및 다층화된 비대한 점액 세포의 함입을 나타내는데, 이는 DHEA의 안드로겐성 효과에 상응한다. 따라서 후자가 소공 평면에서 가장 잘 보이도록, DHEA의 주요 안드로겐성 상대물이 유지되고, 아콜비펜의 작은 에스트로겐성 효과가 부가되는 동안, 아콜비펜은 DHEA의 부분적인 에스트로겐성 효과를 방해한다. DHEA에 아콜비펜의 부가 후, 관찰된 질 질량 감소는 프레마린에 아콜비펜의 부가 후 얻어진 것보다 더 작다. 따라서 항에스트로겐에 의하여 바뀐 DHEA의 더 작은 에스트로겐성 성분을 묘사하나, 주요 안드로겐성 성분은 영향을 미치지 않는다. 게다가 DHEA + 아콜비펜 군에 있어 각각 OVX와 거세되지 않은 동물들의 그것을 비교할 때, 고유판 두께와 콜라겐 섬유의 조밀도의 증가는 DHEA의 에스트로겐 성분이 아콜비펜에 의하여 막혔기 때문에, 콜라겐 조밀도와 두 께의 증가에 대한 안드로겐의 잠재적인 역할을 제시한다.
다른 연구들은 쥐의 유선 (Sourla 외, 1998, Endocrinol, 139: 753-764), 피지선 (Sourla 외, 2000, J Endocrinol, 166(2): 455- 462) 및 골 광밀도 (Martel 외, 1998, J Endocrinol, 157: 433-442)에서의 DHEA의 작용이 거의 배타적으로 안드로겐성이라는 것을 입증하였다. 그럼에도 불구하고, 쥐의 질에서 DHEA의 에스트로겐 작용의 존재는 이미 질 개방 도입과 이 화합물로 처치된 미성숙한 쥐에 있어 조숙한 배란을 통하여 입증되었다. 반면 에스트로겐으로 방향족화할 수 없는 안드로겐인 DHT는 그러한 효과를 내지 않았다 (Knudsen and Mahesh, 1975, Endocrinol, 97(2): 458-468). 안드로겐을 방향족화하는 쥐 질 조직의 용량, 특히 테스토 (Testo)는 이 기관에 있는 DHEA의 에스트로겐성 효과의 주요 부분에 있어서 중요한 것 같다 (Lephart 외, 1989, Biol Reprod, 40(2): 259-267). 안드로스트-5-엔-3β, 17β-디올(5-디올), 에스트로겐 수용체에 결합하는 것으로 알려진 DHEA 대사 산물 (Shao 외, 1950, J Biol Chem, 250: 3095-3100; Poortman 외, 1975, J CUn Endocrinol Metab, 40(3): 373-379; Van Doom 외, 1981, Endocrinol, 108: 1587- 1594; Adams 외, 1981, Cancer Res, 41: 4720-4726)은 또한 에스트로겐 효과에 기여할 수 있다 (Poulin and Labrie, 1986, Cancer Res, 46: 4933-4937). DHEA와 항에스트로겐 아콜비펜의 제안된 조합은 따라서 5-디올의 바람직하지 않은 자극성 효과를 막을 것이다. 다른 한편으로 아콜비펜은 뼈 손실을 막음으로써 부가적인 이익을 보여줄 것이다 (Martel 외, 2000, J Steroid Biochem MoI Biol, 74 (1-2): 45-56).
최상의 지식에서, 이전의 어떤 연구도 고유판의 콜라겐 섬유의 형태 및 조밀도에의 DHEA의 자극성 있는 영향과 더 작은 정도로 근육에의 DHEA의 자극성 있는 영향을 나타내지 않았다. DHEA에 의한 안드로겐과 에스트로겐의 그러한 작용은 폐경기 이후 여성의 질 기능에 유리한 효과를 가질 수 있고, 질의 평탄한 근육 이완의 촉진을 매개하는 안드로겐 또는 에스트로겐에 의한 내피 산화 질소 합성 효소 (eNOS)를 통하여, 실데나필 또는 타달라필과 같은 타입 5 포스포디에스테라제의 억제 작용을 필요로 하는 기질을 제공하여야 한다 (Munarriz 외, 2003, J Urol, 170 (2 Pt 2): S40-S44, Discussion S44-S45 참조). 사실, 아콜비펜은 인간과 쥐 내피세포에 있어서 eNOS를 유도하는 것으로 알려져 있다 (Simoncini 외, 2002, Endocrinol, 143(6): 2052-2061).
DHEA 처치를 포함하는 모든 군에서 얻어진 결과들은 AR 발현이 3개 조직칸에서 유사한 방식으로 쥐 질에서 DHEA의 인트라크라인 변형으로부터 유래된 안드로겐에 의하여 상향 조정된다.
안드로겐에 의한 쥐 질 AR의 강한 조절과 수반되어 관찰되는 유리한 형태 변화는 폐경기 여성에 있어 DHEA에 의한 안드로겐의 감소된 혈청 수치가 질 건강의 약화 및 이 세대의 군에서 관찰되는 성욕과 성적 즐거움의 감소에 기여한다는 것을 제안한다. 감소된 혈청 전체 테스토, 자유 테스토 및 DHEA-S는 성적 즐거움의 감소를 상담하는 여성에게서 발견되었다 (Guay and Jacobson, 2002, J Sex Marital Ther, 28 Suppl 1: 129-142).
본 연구에서, 우리는 OVX 암컷 쥐를 DHEA 또는 DHEA와 아콜비펜, DHEA와 아 콜비펜 및 프레마린의 조합으로 치료하는 것이 AR을 경유한 우세한 안드로겐성 효과를 통하여 질에서 발견되는 OVX에 의한 수축 변화를 역전시켰다는 것을 보여주었는데, 이것은 고유판의 콜라겐 섬유의 조밀도의 증가 및 강한 상피 점액분비기에 의하여 반영되었다. DHEA 단독 처치 역시 근육 두께를 완만하게 증가시켰다. 이러한 데이터는 주변의 표적 조직에서 DHEA 및 DHEA-S로부터 국소적으로 합성된 성스테로이드의 중요성을 강조한다. 이들 유리한 효과에 부가하여, 아콜비펜은 가능하면 소공 평면의 보호하는 각질화 비늘 모양 상피의 에스트로겐 유사 도입 및 내부 평면의 점액분비기의 항에스트로겐성 효과를 통하여, 염증 발생을 감소시켰다.
종종 성교 통증 및 성적 즐거움의 감소와 관련된 질 건조증의 문제를 해결하기 위한 다양한 시도가 있었다. 예를 들어, 국소 질 에스트로겐 제조가 문제를 경감시키기 위하여 처방되었으나, 자궁 내막이 저항받지 않는 에스트로겐에 의하여 자극될 수 있다 (Mattson 외, 1989, Maturitas, 11: 217-222). 자궁 절제를 한 폐경기 이후 여성에 있어서, ERT는 여전히 이용되나, 유방암 발병 위험이 높다는 것이 잘 알려져 있다. 더욱이 ERT는 성 호르몬 결합 글로불린을 증가시킴으로써 혈청 안드로겐 수치를 감소시키는데, 이것은 관계된 난소 및 부신 안드로겐 결핍을 유도할 수 있고, 이에 따라 동시 발생하는 생리적인 안드로겐 대체를 위한 부가적인 설명을 만들 수 있다 (Casson 외, 1997, Obstet Gynecol, 90(6): 995-998).
실시예 2
방법
동물 및 처치
난소 절제 당시 215~265 g인 10~12 주령된 암컷 Sprague-Dawley 쥐들 (CrLCD(SD)Br) (Charles River Laboratory, St-Constant, Canada)을 이용하였다. 동물들을 환경적으로 통제 (온도: 22 ± 3 ℃, 습도: 50 ± 20%, 12시간 낮-12시간 밤 주기, 07:15h에 빛)된 방에서 개별적으로 가두었다. 동물들이 물과 확인된 설치류 먹이에 자유롭게 접근 가능하도록 하였다 (Lab Diet 5002 (pellet), Ralston Purina, St-Louis, MO). 실험은 동물 간호에 관한 캐나다 협의 (Canadian Council on Animal Care; CCAC) 및 실험 동물 간호의 평가와 인가를 위한 협회 (Association for Assessment and Accreditation of Laboratory Animal Care; AAALAC)에서 승인된 동물 편의에 있어 실험 동물의 간호 및 이용 (Care and Use of Experimental Animals)을 위한 CCAC 가이드에 따라 행해졌다.
다른 실험들: 20일간 실험 2개와 8달간 실험 2개를 수행하였다. 각각의 첫 번째 2개의 실험에서, 상기 동물들을 임의로 다음과 같이 13 또는 14마리씩 3개 군으로 분배하였다: 1) 거세되지 않은 군; 2) 난소 절제된 (OVX) 군; 3) OVX + 랄록시펜 (0.5 mg/kg), 또는 3) OVX + LY 363381 (0.5 mg/kg). 1개의 8달간 실험에서, 상기 동물들을 다음과 같이 임의로 7~8마리씩 5개 군으로 분배하였다: 1) 거세되지 않은 군; 2) 난소 절제된 (OVX) 군; 3) OVX + 아콜비펜 (0.5 mg/kg); 4) OVX + ERA-923 (0.5 mg/kg); 5) OVX + TSE-424 (0.5 mg/kg). 다른 1개의 8달간 실험에서, 상기 동물들을 임의로 다음과 같이 10~11마리씩 3개 군으로 분배하였다: 1) 거세되지 않은 군; 2) 난소 절제된 (OVX) 군; 3) OVX + 라소폭시펜 (0.5 mg/kg). 실험 첫날, 적절한 군의 동물들을 이소플루란 마취하에 양방향으로 난소절제하였다 (OVX). 그리고 나서 시험된 화합물을 1일 1회, 1~20일간 또는 1~32주간 0.4% 메틸셀룰로오즈 현탁액으로 경구 급식에 의하여 투여하였다.
마지막 투여하고 24시간 후, 상기 동물들을 이소플루란 마취하에 채혈하였다. 질을 모아 절제 즉시 10% 중성 완충 포르말린 용액에 담갔다. 그리고 나서 질을 7 교차 단편 (아콜비펜, ERA-923 및 TSE-424를위한)으로 자르거나 오직 중간 교차 단편 시료 (랄록시펜, 라소폭시펜 또는 LY 363381)로 잘랐다. 그 후 단편들을 관례대로 진행하여 파라핀 블록에 꽂아두었다. 적당한 때에, 모든 단편들을 이들의 본래 해부학상 위치에 따른 순서대로 파라핀 블록에 위치시켰고 그 블록의 표면에 수직으로 위치시킨 후, 단편들을 교차로 잘랐다. 각각의 동물들에 대하여, 4 ㎛ 두께의 파라핀 부분을 자르고, 형태 시험을 위하여 헤마톡실린 에오신으로 염색하였다.
도 10 및 도 11은 다른 SERMs 사이의 비교를 보여준다: 200X 배율의 OVX 쥐의 질상피 형태. 그림 A~D는 첫 번째 질 단편 (구멍)의 상피 형태를 보여준다. A에서, OVX 동물의 상피가 얇고 (4~6 세포층), 수축되어 있으며 눈에 보이는 알갱이 층을 보이지 않는 반면, B, C 및 D에서 동일한 상피는 3 SERMs에서 더 두껍고 (8~11 세포층) 다층으로된 알갱이 부분이 나타난다. E~K에서, 질 중앙에 위치한 단편들을 설명한다. OVX 동물에서, E에서 질상피는 얇고 수축되어 (2~3 세포층) 있는 반면, 기저 세포층을 감싸고 있는 1개 (아콜비펜, ERA-923 및 TSE-424) 또는 많은 (랄록시펜, 라소폭시펜 또는 LY 363381)점액 세포층의 존재로 인하여, 그 두께는 모든 처치 군 (F~ K)에서 증가하였다.
실시예 3
물질 및 방법
실험 시작시 무게가 대략 250~275 g인 10~12 주령 암컷 Sprague-Dawley 쥐들 (Crl:CD®(SD)Br VAF/PlusTM) (Charles River Laboratory, St-Constant, Canada)을 이용하였다. 동물들을 실험 시작 전 최소 1주 동안 환경 조건 (온도: 22 ± 3 ℃; 습도: 50 ± 20%; 12시간 간격의 빛과 어둠 주기로 07:15에 빛을 줌)에 순응시켰다. 동물들을 개별적으로 가두고 물과 설치류의 먹이 (Lab Diet 5002, Ralston Purina, St-Louis, MO)에 자유롭게 접근 가능하도록 하였다. 실험은 동물 간호에 관한 캐나다 협의 (Canadian Council on Animal Care; CCAC) 및 실험 동물 간호의 평가와 인가를 위한 협회 (Association for Assessment and Accreditation of Laboratory Animal Care; AAALAC)에서 승인된 동물 편의에 있어 실험 동물의 간호 및 이용 (Care and Use of Experimental Animals)을 위한 CCAC 가이드에 따라 행해졌다.
전체 25마리의 암컷 쥐들을 임의로 다음과 같이 5개 군으로 분배하였다: 1) 난소 절제된 자연 그대로의 군 (OVX) 3마리; 2) OVX + 위약 좌약 4마리; 3) OVX + 0.33 mg DHEA 좌약 6마리; 4) OVX + 0.66 mg DHEA 좌약 6마리; 5) OVX + 1.00 mg DHEA 좌약 6마리. 실험 첫날, 모든 군의 동물들을 이소플루란에 의한 마취하에 양방향으로 난소 절제하였다 (OVX). 1개 좌약의 질 내 삽입을 실험 5일째 시작하여 실험 18일까지 총 14일 동안 1일 1회 계속 삽입하였다. 좌약을 질 입구에 살며시 위치시키고, 각각의 동물에게 사용 전 70% 알코올로 소독하고 건조한 작고 부드러운 유리 막대를 사용하여 질 내 약 2~3 mm로 정교하게 밀어 넣었다.
마지막 투여하고 24시간 후, 상기 동물들을 이소플루란 마취하에 채혈하였다. 요도를 포함한 질과 자궁을 채취하여 하기와 같이 처치하였다. 이후 분석을 위하여, 서혜부 유선 2조각과 등쪽 피부 약 2 X 2 cm의 사각형 조각을 샘플로 채취하고, 후자는 카턴 조각에 넣고 조심스럽게 평평하게 폈다.
좌약의 제조
DHEA 좌약들을 Whitepsol H-15 베이스 (Medisca, Montreal, Canada)를 이용하여 제조하였다. Fattibase, Wecobee, 카카오 기름, 테오브로마 기름 (theobroma oil) 또는 기타 Whitepsol 베이스들의 조합과 같은 임의의 기타 지방 친화성 베이스를 또한 이용하였다. 최종 부피 50 ㎕ ± 3 ㎕의 좌약당 0.33 mg 또는 0.66 mg 또는 1.00 mg의 최종 농도를 얻기 위하여 적당한 양의 DHEA를 측정하였다. 필요로 하는 최종 부피를 얻기 위하여 무게를 달기 위한 좌약 베이스 알갱이의 적절한 양을 이전에 측정된 좌약 베이스의 밀도에 기초하여 계산하였는데, 이는 50 ㎕ 당 47.5 mg이었다. 좌약 베이스를 작은 비이커에 넣고 약 3분 30초간 강도 50%의 마이크로웨이브에서 녹인 후, 가열판으로 옮기어 좌약 베이스를 50 ± 3 ℃로 유지하기 위하여 가장 낮은 강도에서 조절하였다. DHEA 미분화된 분말을 베이스에 한꺼번에 부가하여 3분간 전체 덩어리가 가라앉아 젖도록 한 후, 끝이 둥근 유리 막대로 세심하고 천천히 으깨어 용해시켰다. 마지막으로 용해된 DHEA가 있는 베이스 (위약은 DHEA 없이 베이스만 있음)를 미리 가열된 피펫 끝을 가진 1000 ㎕ Gilson 피펫을 이용하여 일련의 50 ㎕ 틀을 포함하는 튜브형 틀에 쏟아 부었다. 이들 틀은 작은 원심분리기 튜브로부터 만들어지고, 이들 각각을 이미 50 ㎕ 물로 측정하여 물 표면에 그려진 선 부분을 잘랐다. 실온으로 냉각하고 30분 후에, 다시 30분간 4 ℃에 두었다. 마지막으로 과량의 베이스를 안전 면도날로 정리하고 좌약을 틀로부터 제거하여 이용할 때까지 4 ℃의 밀폐된 유리병에 저장하였다. 이들을 동물에 투여하기 전에 실온으로 되도록 하였다.
조직학적 절차
상기 기관들을 절제 후 즉시 10% 중성 완충 포르말린에 담갔다. 질과 자궁 각각을 8개의 동등한 교차 단편 및 경상부로부터 2개 및 2개의 근접 및 중심에서 먼 뿔 각각으로부터 2개를 포함하여 4개의 교차 단편으로 나누었다. 그리고나서 단편들을 관례대로 진행하여 동일한 파라핀 블록에 모두 함께 꽂았다. 파라핀 블록 내에서 모든 단편들을 이들의 본래 해부학상 위치에 상응하는 순서대로 위치시키고, 블록 표면에 수직으로 위치시킨 후, 단편들을 교차 단편을 교차 단편으로 잘랐다. 각각의 동물에서, 4 ㎛ 두께 파라핀 부분을 자르고 형태적 시험을 위하여 헤마톡실린 에오신으로 염색하였다.
결과
상피의 형태
모든 질 단편의 시험 후에, 단편 4와 6이 처치 간 비교에 있어 대표라는 것이 밝혀졌다. 단편 4는 외피의 특성을 보이지 않는 소공에 가장 가깝고, 대개 대조 동물의 질점막 외부 영역에서 발견되는 미약한 것부터 온화한 정도까지의 염증 변 화에 의하여 영향을 받지 않거나 아주 작은 정도의 영향을 받았다. 단편 6은 더 안쪽의 질점막을 나타내며, 오직 1개 단편에 의하여 자궁 경상부로부터 분리되어 있다. 일반적으로 질 복부 쪽은 등 쪽과 비교할 때, 더 두껍고 점액성의 상피이다.
거세되지 않은 군
도 13에서 보듯이, 주로 에스트로겐 영향 하에 있는 발정기 때에는, 질상피는 두껍고 각질화되어있다. 단편 4에서는 12~18 세포층이고 단편 6에서는 12~15 세포층으로 나타난다. 경상부에서 보여지는 두꺼운 비늘 모양의 층으로 배열된 상피와 반대로, 알갱이로 된 층들은 내부 질상피에서 명백하지 않다. 호르몬의 영향이 최소인 발정 후기에 있어서, 질상피는 얇다. 단편 4에서는 6~10 세포층을 단편 6에서는 5~7 세포층을 나타낸다.
난소 절제된 자연 그대로의 군
도 14에서 보듯이, 단편 4에서 질은 2~6 세포층의 비늘 모양의 층으로 배열된 상피에 의하여 선이 그어져 있다. 이 단편의 두께는 동물마다 꽤 다양하다. 단편 6에서, 2~3의 평평한 세포층과 함께 완벽한 수축이 관찰된다. 작은 원통형의 점액 세포들의 일부 초점을 이 동물들의 질 전체를 통하여 드물게 볼 수 있다. 이 군의 3마리 동물들 중에서, 2마리는 외부의 3개 단편에서 가벼운 염증 변화를 나타내었다.
위약
도 15에서 보듯이, OVX 자연 그대로의 군과 비교할 때, 단편 4가 4~8 세포층 을 나타내며, 위약 군의 비늘 모양의 층으로 배열된 질상피가 약간 더 두껍다. 그러나 단편 6에서는 2~3 세포층으로 OVX 자연 그대로의 군에서 발견된 것과 동일한 형태가 관찰되었다. OVX 자연 그대로의 동물에서처럼, OVX 자연 그대로의 동물과 비교할 때, 작은 원통형 점액 세포의 초점이 질을 통하여 조금 더 많이 발견될 수 있다. 이 군의 4마리 동물 중에서, 3마리가 외부의 3개 단편에서 가벼운 염증 변화를 나타내었다.
DHEA 0.33 mg / 좌약
도 16에서 보듯이, 일반적으로 낮은 투여량에서, DHEA의 형태적 효과는 잘 정렬된 원통형 점액 세포들로 특징되는 반면, 높은 투여량에서는 점액 세포가 확장되고 (영양 과다), 액포가 생기며 퇴적한다. 이 군에 있어서, DHEA의 효과는 단편 2에서 약하게 식별 가능하고 단편 3~4에서 점차 증가하는데, 여기에서 잘 정렬되고 비대한 점액 세포가 교대한다. DHEA의 효과는 단편 5와 6에서 서서히 감소하여 오직 잘 정렬된 점액 세포만을 관찰할 수 있다. 상기 효과는 단편 7에서는 매우 미미하고 단편 8 (경상부의 시작을 포함한다)의 측면 질 접힘에서 사라진다. 따라서 단편 4에서 질상피는 3~7 세포층의 비늘 모양 층으로 배열되어 있다. 질 내용물의 약 20~60 %는 15~50% 비대한 점액 세포, 그 위를 덮는 1개 이상의 비늘 모양의 층으로 배열된 상피층, 비 점액성 영역이 교대하는 가진 잘 정렬된 점액 세포들로 구성된다. 단편 6에서 상피 두께는 거의 OVX 자연 그대로의 동물에서 발견된 두께까지 감소한다. 이것은 잘 정렬된 점액 세포층으로 덮인 2~5개의 비늘 모양의 세포층으로 배열된 상피로 구성된다. 점액 세포의 발생에 있어 큰 변화가 관찰되었는데, 이들 세포는 비 점액 부분과 교대하는 5~75%의 질 표면을 덮고 있다. 6마리의 처치된 동물 중에서 4마리는 질 전체에 고르지 않게 분포한 가벼운 염증을 나타내었다.
DHEA 0.66 mg / 좌약
도 17에서 보듯이, 이 군에서 DHEA의 효과는 단편 2에서 식별할 수 있고, 대부분의 비대 점액 세포들이 관찰된 단편 3, 4 및 5에서 유의성 있게 증가한다. 비대 점액 세포의 수는 단편 6과 7에서 감소하는데, 여기에서 대부분의 세포는 잘 정렬된 점액 세포이다. 따라서 단편 4에서, 비늘 모양의 층으로 배열된 상피는 3~6 세포층 두께이다. 질 내용물의 약 5~20%는 10~75%의 비대한 점액 세포와 교체하는, 1개 이상의 비늘 모양의 층으로 배열된 상피층을 감싸고 있는 잘 정렬된 점액 세포로 구성된다. 비 점액성 상피 부분 또한 존재한다. 단편 6에서 상기 상피 두께는 감소하고, 잘 정렬된 점액 세포층에 의하여 올려진 2~4 세포층의 비늘 모양의 층으로 배열된 상피로 구성된다. 점액 부분의 양은 비 점액 부분과 교대하여 질 표면의 20~80%로 다양하다. 6마리의 처치된 동물 중에서 2마리가 3개 외부 단편에서 가벼운 염증을 나타내었다.
DHEA 1.00 mg / 좌약
도 18에서 보듯이, 이 군에서 DHEA의 효과는 또한 단편 2에서 식별 가능하나, 대부분의 비대 점액 세포가 관찰되는 단편 3, 4 및 5에서 유의성 있게 증가하고, 대부분의 잘 정렬된 점액 세포들이 관찰되는 단편 6, 7 및 8에서 매우 천천히 감소한다. 따라서, 단편 4에서, 비늘 모양의 층으로 배열된 상피가 3~9 세포층을 나타낸다. 3~4 비늘 모양 세포층을 감싸고 있는 비대 점액 세포들이 질 표면의 50~70%를 뒤덮고 있다. 반면에 잘 정렬된 점액 세포들은 질 표면의 5~30%를 뒤덮고 있다. 비 점액성 부분이 점액 세포 사이에 산재해 있다. 단편 6에서, 상피 두께는 또한 감소하고 2~4 세포층으로 구성되어 있다. 1~3 비늘 모양 세포층을 감싸고 있는 비대 점액 세포들이 질 표면의 약 30~100%를 덮고 있다. 반면 잘 정렬된 점액 세포들은 0~70%를 덮고 있다. 극소수의 산재해 있는 비 점액 부분이 관찰되었다. 6마리의 처치된 동물들 중에서 4마리가 4개의 외부 단편에서 가벼운 염증을 나타내었다.
결론
1. 질내 처치를 위하여 이용된 운반체는 선호되는 특성이 있다:
a. 측정된 틀에서 쉽게 제조;
b. 미분화된 분말 DHEA를 완벽하게 용해시키는 뛰어난 능력으로 표준 투여량을 보장;
c. 질점막의 형태적 개조 및 비 유의적 조직 반응: 상피 두께의 경미한 증가가 첫 번째 3~4 단편에서 관찰되었는데, 아마도 좌약의 삽입에 동반하는 조작에 기인함.
2. DHEA는 최소한의 투여량으로 질상피 형태에 영향을 미쳤다 (0.33 mg / 좌약). 상기 영향은 3번째~5번째 단편에서 최대이고 서서히 감소하여 7번째 단편 평면에서 사라진다.
3. DHEA 0.66 mg 을 좌약 투여하였을 때, 상기 영향은 또한 3번째 단편에서 나타나 6번째 단편에서 꽤 강하게 유지된다.
4. DHEA 1.00 mg 을 좌약 투여하였을 때, 상기 영향은 단편 2~3에서부터 자궁 경상부 주변의 깊은 질 접힘에 이르기까지 강하게 나타난다.
약학 조성물 실시예들
아래에 설명하는 것과 같이, 비 제한적인 실시예로서, 선호되는 활성 SERM 아콜비펜, 선호되는 활성 성스테로이드 DHEA 전구체, 선호되는 에스트로겐 17β-에스트라디올 또는 프레마린, 선호되는 타입 5 cGMP 포스포디에스테라제 억제제 실데나필 또는 타달라필을 이용한 몇몇 약학 조성물이 있다. 활성 성분의 농도는 여기에서 논의된 것과 같이 넓은 범위에서 다양해질 수 있다. 포함될 수 있는 기타 다른 성분의 종류와 양은 당해 기술 분야에서 잘 알려져 있다.
실시예 A
알약
성분 질량 % (전체 조성물의 질량에 대한)
DHEA 15.0
젤라틴 5.0
락토오스 63.5
녹말 16.5
실시예 B
젤라틴 캡슐
성분 질량 % (전체 조성물의 질량에 대한)
DHEA 15.0
락토오스 하이드로오스 70.0
녹말 4.8
미결정셀룰로오스(Cellulose microcrystalline) 9.8
스테아린산 마그네슘 0.4
실시예 C
알약
성분 질량 % (전체 조성물의 질량에 대한)
아콜비펜 5.0
DHEA 15.0
젤라틴 5.0
락토오스 58.5
녹말 16.5
실시예 D
젤라틴 캡슐
성분 질량 % (전체 조성물의 질량에 대한)
아콜비펜 5.0
DHEA 15.0
락토오스 하이드로오스 65.0
녹말 4.8
미결정성 셀룰로오스 9.8
스테아린산 마그네슘 0.4
실시예 E
알약
성분 질량 % (전체 조성물의 질량에 대한)
아콜비펜 5.0
DHEA 15.0
프레마린 0.5
젤라틴 5.0
락토오스 63.0
녹말 16.5
실시예 F
젤라틴 캡슐
성분 질량 % (전체 조성물의 질량에 대한)
아콜비펜 5.0
DHEA 15.0
프레마린 0.5
락토오스 하이드로오스 64.5
녹말 4.8
미결정성 셀룰로오스 9.8
스테아린산 마그네슘 0.4
실시예 G
알약
성분 질량 % (전체 조성물의 질량에 대한)
실데나필 15.0
DHEA 15.0
젤라틴 5.0
락토오스 48.5
녹말 16.5
실시예 H
젤라틴 캡슐
성분 질량 % (전체 조성물의 질량에 대한)
실데나필 15.0
아콜비펜 5.0
DHEA 15.0
락토오스 하이드로오스 50.0
녹말 4.8
미결정성 셀룰로오스 9.8
스테아린산 마그네슘 0.4
실시예 I
알약
성분 질량 % (전체 조성물의 질량에 대한)
아콜비펜 5.0
DHEA 15.0
실데나필 15.0
젤라틴 5.0
락토오스 43.5
녹말 16.5
실시예 J
젤라틴 캡슐
성분 질량 % (전체 조성물의 질량에 대한)
아콜비펜 5.0
DHEA 15.0
실데나필 15.0
락토오스 하이드로오스, 50.0
녹말 4.8
미결정성 셀룰로오스 9.8
스테아린산 마그네슘 0.4
실시예 K
질 크림
성분 질량 % (전체 조성물의 질량에 대한)
DHEA 1.0
아콜비펜 0.2
유화 왁스 (Emulsifying Wax), NF 18.0
경광유(light mineral oil), NF 12.0
벤질 알코올 1.0
에탄올 95% USP 33.8
정제된 물, USP 34.0
실시예 L
질 좌약
성분 질량 % (전체 조성물의 질량에 대한)
DHEA 0.66~2.0
Whitepsol H-15 베이스 98~99.34
DHEA 좌약들은 Whitepsol H-15 베이스 (Medisca, Montreal, Canada)를 이용하여 제조되었다. Fattibase, Wecobee, 카카오 기름, 테오브로마 기름 또는 Whitepsol 베이스의 조합과 같은 지방 친화성 베이스가 이용될 수 있다.
키트 실시예
아래에 설명하는 것과 같이, 비 제한적인 실시예로서, 선호되는 활성 SERM 아콜비펜, 선호되는 활성 성스테로이드 DHEA 전구체, 선호되는 에스트로겐 17β-에스트라디올 또는 컨쥬게이트 에스트로겐, 선호되는 타입 5 cGMP 포스포디에스테라제 억제제 실데나필 또는 타달라필을 이용한 몇몇 키트들이 있다. 활성 성분의 농도는 여기에서 논의된 것과 같이 넓은 범위에서 다양해질 수 있다. 포함될 수 있는 기타 다른 성분의 종류와 양은 당해 기술 분야에서 잘 알려져 있다.
실시예 A
SERM, 에스트로겐류 및 타입 5 cGMP 포스포디에스테라제 억제제가 경구 투여되는 반면, 성스테로이드 전구체는 국소적으로 또는 경피적으로 투여된다.
경구 투여용 SERM 조성물 (캡슐)
성분 질량 % (전체 조성물의 질량에 대한)
아콜비펜 5.0
락토오스 하이드로오스 80.0
녹말 4.8
미결정성 셀룰로오스 9.8
스테아린산 마그네슘 0.4
경구 투여용 SERM + 에스트로겐류 조성물 (캡슐)
성분 질량 % (전체 조성물의 질량에 대한)
아콜비펜 5.0
프레마린 0.5
락토오스 하이드로오스 79.5
녹말 4.8
미결정성 셀룰로오스 9.8
스테아린산 마그네슘 0.4
경구 투여용 SERM + 에스트로겐류 + 타입 5 cGMP 포스포디에스테라제 억제제 조성물 (캡슐)
성분 질량 % (전체 조성물의 질량에 대한)
아콜비펜 5.0
프레마린 0.5
실데나필 15.0
락토오스 하이드로오스 64.5
녹말 4.8
미결정성 셀룰로오스 9.8
스테아린산 마그네슘 0.4
국소 투여용 성스테로이드 전구체 조성물 (겔)
성분 질량 % (전체 조성물의 질량에 대한)
DHEA 2.0
카프릴산트리클리세라이드 (Caprylic/Capric Triglyceride)(Neobee M-5) 5.0
헥실렌 글리콜 15.0
트랜스큐톨(transcutol)(디에틸렌 글리콜 모노메틸 에테르) 5.0
벤질 알코올 2.0
시클로메티콘 (Dow corning 345) 5.0
에탄올 (순수) 64.0
히드록시프로필셀룰로오스 (1500 cps)(KLUCEL) 2.0
실시예 B
SERM과 성스테로이드 전구체를 경구 투여한다.
경구투여용 비 스테로이드 항에스트로겐 조성물 (캡슐)
성분 질량 % (전체 조성물의 질량에 대한)
아콜비펜 5.0
락토오스 하이드로오스 80.0
녹말 4.8
미결정성 셀룰로오스 9.8
스테아린산 마그네슘 0.4
경구 투여용 성스테로이드 전구체 조성물 (젤라틴 캡슐)
성분 질량 % (전체 조성물의 질량에 대한)
DHEA 15.0
락토오스 하이드로오스 70.0
녹말 4.8
미결정성 셀룰로오스 9.8
스테아린산 마그네슘 0.4
기타 SERMs (토레미펜, 오스페미펜, 랄록시펜, , 라소폭시펜, TSE-424, ERA-923, EM-800, SERM 3339, GW-5638)는 위의 제형에 따라 아콜비펜으로 대체할 수 있다. 또한 기타 성스테로이드 억제제들은 DHEA로 대체할 수 있고, 기타 에스트로겐류는 프레마린으로 대체될 수 있으며, 타입 5 cGMP 포스포디에스테라제 억제제는 실데나필 또는 타달라필로 대체될 수 있거나 프로스타글란딘 E1에 의하여 대체될 수 있다. 1개 이상의 SERM 또는 1개 이상의 전구체 또는 에스트로겐류 또는 타입 5 cGMP 포스포디에스테라제 억제제는 조합 질량 퍼센티지가 바람직하게는 위의 실시예에서 주어진 1개 전구체 또는 1개 SERM에 대한 질량 퍼센티지인 경우에 포함될 수 있다.
본 발명은 선호되는 구체예와 실시예의 측면에서 기술되었으나 이에 한정되는 것은 아니다. 당해 기술 분야에서 통사의 지식을 가진 자는 쉽게 오직 청구항에 의하여 제한된 본 발명의 범위와 넓은 적용가능성을 인식할 것이다.

Claims (43)

  1. 폐경기 이후 여성의 고유판층 및/또는 질 근육층에 영향을 미치는 문제점들의 획득 가능성을 처치 또는 경감시키는 방법에 있어서, 치료를 요하는 환자에게 디히드로에피안드로스테론, 디히드로에피안드로스테론 황산염, 안드로스트-5-엔-3β,17β-디올 및 4-안드로스텐-3,17-디온으로 이루어진 군으로부터 선택되는 성스테로이드 전구체를 투여하는 것을 포함하는, 폐경기 이후 여성의 고유판층 및/또는 질 근육층에 영향을 미치는 문제점들의 획득 가능성을 처치 또는 경감시키는 방법.
  2. 제1항에 있어서, 배합 요법의 일부로서 상기 환자에게 치료학적으로 유효한 양의 선택적인 에스트로겐 수용체 조절자를 투여하는 단계를 더 포함하는 것인 방법.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 배합 요법의 일부로서 상기 환자에게 치료학적으로 유효한 양의 에스트로겐을 투여하는 단계를 더 포함하는 것인 방법.
  4. 폐경기 이후 여성의 질 염증 발병 가능성을 처치 또는 경감시키는 방법에 있어서, 환자에게 치료학적으로 유효한 양의 선택적인 수용체 조절자를 투여하는 것을 포함하는, 폐경기 이후 여성의 질 염증 발병 가능성을 처치 또는 경감시키는 방 법.
  5. 폐경기 이후 여성의 질상피에 있는 점액 세포의 크기와 수를 증가시키는 방법에 있어서, 환자에게 치료학적으로 유효한 양의 선택적인 에스트로겐 수용체 조절자를 투여하는 것을 포함하는, 폐경기 이후 여성의 질상피에 있는 점액 세포의 크기와 수를 증가시키는 방법.
  6. 제1, 2 또는 3항에 있어서, 상기 질 질환은 질 건조증, 성교 통증 및 성기능 장애로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 방법.
  7. 폐경기 이후 여성의 질벽에 있는 콜라겐 섬유의 밀도를 증가시키는 방법에 있어서, 치료를 요하는 환자에게 디히드로에피안드로스테론, 디히드로에피안드로스테론 황산염, 안드로스트-5-엔-3β,17β-디올 및 4-안드로스텐-3,17-디온으로 이루어진 군으로부터 선택되는 성스테로이드 전구체를 투여하는 것을 포함하는, 폐경기 이후 여성의 질벽에 있는 콜라겐 섬유의 밀도를 증가시키는 방법.
  8. 폐경기 이후 여성의 질벽 근육 두께를 증가시키는 방법에 있어서, 치료를 요하는 환자에게 디히드로에피안드로스테론, 디히드로에피안드로스테론 황산염, 안드로스트-5-엔-3β,17β-디올 및 4-안드로스텐-3,17-디온으로 이루어진 군으로부터 선택되는 성스테로이드 전구체를 투여하는 것을 포함하는, 폐경기 이후 여성의 질 벽 근육 두께를 증가시키는 방법.
  9. 폐경기 이후 여성의 성기능 장애의 획득 가능성을 처치 또는 경감시키는 방법에 있어서, 치료를 요하는 상기 환자에게 치료학적으로 유효한 양의 선택적인 에스트로겐 수용체 조절자를 투여하고, 상기 환자에게 배합 요법의 일부로서 치료학적으로 유효한 양의 타입 5 cGMP 포스포디에스테라제 억제제 또는 프로스타글란딘을 투여하는 단계를 더 포함하는, 폐경기 이후 여성의 성기능 장애의 획득 가능성을 처치 또는 경감시키는 방법.
  10. 제9항에 있어서, 상기 환자에게 디히드로에피안드로스테론, 디히드로에피안드로스테론 황산염, 안드로스트-5-엔-3β,17β-디올 및 4-안드로스텐-3,17-디온으로 이루어진 군으로부터 선택되는 성스테로이드 전구체의 치료학적으로 유효한 양을 투여하는 단계를 더 포함하는 것인 방법.
  11. 제1, 2, 3, 7 및 8항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 성스테로이드 전구체는 디히드로에피안드로스테론인 것인 방법.
  12. 제1, 2, 3, 7 및 8항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 성스테로이드 전구체는 디히드로에피안드로스테론 황산염인 것인 방법.
  13. 제1, 2, 3, 7 및 8항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 성스테로이드 전구체는 안드로스트-5-엔-3β,17β-디올인 것인 방법.
  14. 제9항에 있어서, 상기 타입 5 cGMP 포스포디에스테라제 억제제는 실데나필 (l-[[3-(4,7-디히드로-l-메틸-7-옥소-3-프로필-lH 피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-일)-4-에톡시페닐]술포닐]-4-메틸피페라진), 타다라필(6R,12aR)-6-(l,3-벤조디옥솔-5-일)-2, 3, 6, 7, 12, 12a-헥사히드로-2-메틸피라지노[l',2': 1,6]피리도[3,4- b]인돌-l,4-디온, DA-8159, EMR-62203, TA-1790, UK-371800 및 SCH-446132로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 방법.
  15. 제9항에 있어서, 상기 프로스타글란딘은 프로스타글란딘 E1(알프로스타딜; (11α,13E,15S)-11,15-디히드록시-9-옥소프로스트-13-엔-1-오익 산)인 것인 방법.
  16. a) 약학상 허용되는 부형제, 희석액 또는 담체와 b) 디히드로에피안드로스테론, 디히드로에피안드로스테론 황산염 및 안드로스트-5-엔-3β,17β-디올로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상의 성스테로이드 전구체의 치료학적으로 유효한 양을 포함하는 질 도포용 약학 조성물.
  17. a) 약학상 허용되는 부형제, 희석액 또는 담체와 b) 치료학적으로 유효한 양의 1종 이상의 선택적인 에스트로겐 수용체 조절자와 c) 치료학적으로 유효한 양의 타입 5 cGMP 포스포디에스테라제 억제제를 포함하는 약학 조성물.
  18. a) 약학상 허용되는 부형제, 희석액 또는 담체와 b) 치료학적으로 유효한 양의 1개 이상의 선택적인 에스트로겐 수용체 조절자와 c) 치료학적으로 유효한 양의 타입 5 cGMP 포스포디에스테라제 억제제와 d) 디히드로에피안드로스테론, 디히드로에피안드로스테론 황산염 및 안드로스트-5-엔-3β,17β-디올로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상의 치료학적으로 유효한 양의 성스테로이드 전구체를 포함하는 약학 조성물.
  19. 프로스타글란딘 E1, 실데나필 및 타다라필로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상의 타입 5 cGMP 포스포디에스테라제 억제제를 함유하는 첫 번째 용기를 포함하고, 치료학적으로 유효한 양의 1종 이상의 선택적인 에스트로겐 수용체 조절자를 함유하는 두 번째 용기를 더 포함하는 키트.
  20. 디히드로에피안드로스테론, 디히드로에피안드로스테론 황산염 및 안드로스트-5-엔-3β,17β-디올로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상의 치료학적으로 유효한 양의 성스테로이드 전구체를 함유하는 첫 번째 용기를 포함하고, 치료학적으로 유효한 양의 1종 이상의 선택적인 에스트로겐 수용체 조절자를 함유하는 두 번째 용기를 더 포함하고, 치료학적으로 유효한 양의 1종 이상의 타입 5 cGMP 포스포디에스테라제 억제제 또는 프로스타글란딘 E1을 함유하는 세 번째 용기를 포함하는 키트.
  21. 제2 내지 5, 9, 17 내지 20, 42 및 43항에 있어서, 상기 선택적인 에스트로겐 수용체 조절자는 a) 1~2 개의 매개 탄소 원자에 의하여 일정한 간격을 두고 있는 2개의 방향족 고리로서, 이들 2개의 방향족 고리는 모두 수산기 또는 생체 내에서 수산기로 전환되는 기에 의하여 치환 또는 미치환되고, b) 방향족 고리와 3차 아민 작용기 또는 이들의 염을 가지는 측쇄인 것이 특징인 분자식을 갖는 것인 방법, 약학 조성물 또는 키트.
  22. 제21항에 있어서, 상기 측쇄는 다음 화학식으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 방법, 약학 조성물 또는 키트.
    Figure 112007037265790-PCT00014
  23. 제21항에 있어서, 상기 2개의 방향족 고리는 모두 페닐이고, 상기 측쇄는 메틴, 메틸렌, -CO, -O- 및 -S-, 방향족 고리 및 3차 아민 작용기 또는 이들의 염으로 이루어진 군으로부터 선택되는 부분을 갖는 것인 방법, 약학 조성물 또는 키트.
  24. 제21항에 있어서, 상기 선택되는 에스트로겐 수용체 조절자는 벤조티오펜 유도체, 트리페닐에틸렌 유도체, 인돌 유도체, 벤조피란 유도체, 5, 6, 7, 8-테트라히드로나프탈렌 및 센트크로만 (centchroman) 유도체로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 방법, 약학 조성물 또는 키트.
  25. 제21항에 있어서, 상기 선택적인 에스트로겐 수용체 조절자는 다음 화학식의 벤조티오펜 유도체 화합물인 것인 방법, 약학상 조성물 또는 키트.
    Figure 112007037265790-PCT00015
    상기 식 중 R1 및 R2는 각각 수소, 수산기 및 생체 내에서 수산기로 전환되는 부분으로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    R3 및 R4는 각각 C1~C4 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되거나, R3, R4와 이들이 결합된 질소는 함께 피롤리디노, 디메틸-1-피롤리디노, 메틸-1-피롤리디닐, 피페리디노, 헥사메틸렌이미노 및 모르폴리노로 이루어진 군으로부터 선택되는 임의의 구조를 이루며;
    A는 -CO-, -CHOH 및 -CH2-로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    B는 페닐렌, 피리딜리덴 및 시클로 C4H2N2-로 이루어진 군으로부터 선택된다.
  26. 제25항에 있어서, 상기 선택적인 에스트로겐 수용체 조절자는 랄록시펜, (LY353381) 및 LY 335563으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 방법, 약학 조성물 또는 키트.
  27. 제21항에 있어서, 상기 선택적인 에스트로겐 수용체 조절자는 다음 화학식의 트리페닐에틸렌 유도체 화합물인 것인 방법, 약학 조성물 또는 키트.
    Figure 112007037265790-PCT00016
    상기 식 중, D는 -OCH2CH2N(R3)R4 (R3 및 R4는 각각 C1~C4 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되거나, R3, R4와 이들이 결합된 질소는 함께 피롤리디노, 디메틸-1-피롤리디노, 메틸-1-피롤리디닐, 피페리디노, 헥사메틸렌이미노 및 모르폴리노로 이루어진 군으로부터 선택되는 고리 구조를 이룸) 또는 -CH=CH-COOH 이고;
    E 및 K는 각각 수소 또는 수산기이며;
    J는 수소 또는 할로겐이다.
  28. 제27항에서, 상기 선택적인 에스트로겐 수용체 조절자는 타목시펜, OH-타목시펜, 드롤록시펜, 토레미펜, 요오독시펜 및 GW 5638인 것인 방법, 약학 조성물 또는 키트.
  29. 제21항에서, 상기 선택적인 에스트로겐 수용체 조절자는 다음 화학식의 인돌 유도체 화합물인 것인 방법, 약학 조성물 또는 키트.
    Figure 112007037265790-PCT00017
    상기 식 중, D는 -OCH2CH2N(R7)R8, -CH=CH-CON(R7)R8, -CC-(CH2)n-N(R7)R8 (R7 및 R8은 각각 C1~C6 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되거나, R7, R8와 이들이 결합된 질소는 함께 피롤리디노, 디메틸-1-피롤리디노, 메틸-1-피롤리디닐, 피페리디노, 헥사메틸렌이미노, 모르폴리노 및 고리로 이루어진 군으로부터 선택되는 고리 구조를 이룸)로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    X는 수소 및 C1~C6 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되며;
    R1, R2, R3, R4, R5 및 R6은 각각 수소, 수산기, C1~C6 알킬 및 생체 내에서 수 산기로 전환되는 부분으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
  30. 제29항에 있어서, 상기 선택적인 에스트로겐 수용체 조절자는 TSE-424 및 ERA-923인 것인 방법, 약학 조성물 또는 키트.
  31. 제21항에 있어서, 상기 선택적인 에스트로겐 수용체 조절자는 다음 화학식으로 나타내는 것인 방법, 약학 조성물 또는 키트.
    Figure 112007037265790-PCT00018
    상기 식 중, R1 및 R2는 각각 수소, 수산기 및 생체 내에서 수산기로 전환되는 부분으로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    R5 및 R6은 각각 수소 또는 C1~C6 알킬이며;
    D는 -OCH2CH2N(R3)R4 (R3 및 R4는 각각 C1~C4 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되거나, R3, R4와 이들이 결합된 질소는 함께 피롤리디노, 디메틸-1-피롤리디노, 메틸-1-피롤리디닐, 피페리디노, 헥사메틸렌이미노 및 모르폴리노로 이루어진 군으로부터 선택되는 고리 구조를 이룸)이고;
    X는 -O- 및 -CH2-로 이루어진 군으로부터 선택된다.
  32. 제31항에 있어서, 상기 화합물은 (-)-시스-(5R,6S)-6-페닐-5-[4-(2-피롤리딘-1-일에톡시)페닐]-5,6,7,8-테트라히드로나프탈렌-2-올, D-(-)-타르트레이트염 (라소폭시펜) 및 (3,4-일)에톡시)페닐]-7-메톡시크로만)으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 방법, 약학 조성물 또는 키트.
  33. 제21항에 있어서, 상기 선택적인 에스트로겐 수용체 조절자는 다음 화학식으로 나타내는 것인 방법, 약학 조성물 또는 키트.
    Figure 112007037265790-PCT00019
    상기 식 중, R1 및 R2는 각각 수소, 수산기 및 생체 내에서 수산기로 전환되는 부분으로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    Z는 2가의 폐쇄 부분이며;
    R100은 B 고리로부터 L을 4~10개의 매개 원자만큼의 간격이 되게 하는 2가 부분이고;
    L은 -SO-, -CON-, -N< 및 SON<으로 이루어진 군으로부터 선택되는 2가 또는 3가의 극성 부분이며;
    G1은 수소, C1~C5 탄화수소 또는 G2 및 L과 연합하여 5~7원 헤테로 고리를 형성하는 2가 부분 및 이들의 할로 또는 불포화 유도체로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    G2는 존재하지 않거나 또는 수소, C1~C5 탄화수소 또는 G2 및 L과 연합하여 5~7원 헤테로 고리를 형성하는 2가 부분 및 이들의 할로 또는 불포화 유도체로 이루어진 군으로부터 선택되며;
    G3은 수소, 메틸 및 에틸로 이루어진 군으로부터 선택된다.
  34. 제33항에 있어서, Z는 -O-, -NH-, -S- 및 -CH2-로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 방법, 약학 조성물 또는 키트.
  35. 제33항에 있어서, 상기 화합물은 다음 화학식의 벤조피란 유도체인 것인 방법, 약학 조성물 또는 키트.
    Figure 112007037265790-PCT00020
    상기 식 중, D는 -OCH2CH2N(R3)R4 (R3 및 R4는 각각 C1~C4 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되거나, R3, R4와 이들이 결합된 질소는 함께 피롤리디노, 디메틸-1-피롤리디노, 메틸-1-피롤리디닐, 피페리디노, 헥사메틸렌이미노 및 모르폴리노로 이루어진 군으로부터 선택되는 고리 구조를 이룸)이고;
    R1 및 R2는 각각 수소, 수산기 및 생체 내에서 수산기로 전환되는 부분으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
  36. 제35항에 있어서, 상기 벤조피란 유도체는 2번 탄소에서 절대 S 배열을 갖는 광학 활성 화합물 또는 이들의 약학적으로 허용되는 염으로, 상기 화합물은 다음의 분자 구조를 가지는 것인 방법, 약학 조성물 또는 키트.
    Figure 112007037265790-PCT00021
    상기 식 중, R1 및 R2는 각각 수소, 수산기 및 생체 내에서 수산기로 전환되는 부분으로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    R3은 포화, 불포화 또는 치환된 피롤리디닐, 포화, 불포화 또는 치환된 피페리디노, 포화, 불포화 또는 치환된 피페리디닐, 포화, 불포화 또는 치환된 모르폴 리노, 질소 함유 고리 부분, 질소 함유 폴리고리 부분 및 NRaRb (Ra 및 Rb는 각각 수소, 직쇄 또는 분기쇄 C1~C6 알킬, 직쇄 또는 분기쇄 C2~C6 알케닐 및 직쇄 또는 분기쇄 C2~C6 알키닐임)로 이루어진 군으로부터 선택되는 종이다.
  37. 제36항에 있어서, 상기 화합물 또는 염은 실질적으로 (2R)-이성질체가 없는 것인 방법, 약학 조성물 또는 키트.
  38. 제35항에 있어서, 상기 벤조피란 유도체는 아세트산, 아디프산, 벤젠술폰산, 벤조산, 캄포르술폰산, 시트르산, 푸마르산, 히드로요오드산, 히드로브롬산, 히드로클로르산, 히드로클로로티아지드산, 히드록시나프토산, 락트산, 말레산, 메탄술폰산, 메틸술푸르산, 1,5-나프탈렌디술폰산, 니트르산, 팔미트산, 피발산, 포스포르산, 프로피온산, 숙신산, 술푸르산, 타르타르산, 테레프탈산, p-톨루엔술폰산 및 발레르산으로 이루어진 군으로부터 선택되는 산의 염인 것인 방법, 약학 조성물 또는 키트.
  39. 제2 내지 5, 9, 17 내지 20, 42 및 43항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 선택적인 에스트로겐 수용체 조절자는 아콜비펜 (Acolbifene)인 것인 방법, 약학 조성물 또는 키트.
    Figure 112007037265790-PCT00022
  40. 제2 내지 5, 9, 17 내지 20, 42 및 43항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 선택적인 에스트로겐 수용체 조절자는 랄록시펜, 아르족시펜, 타목시펜, 드롤록시펜, 토레미펜, 요오독시펜, GW 5638, TSE-424, ERA-923 및 라소폭시펜으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 방법, 약학 조성물 또는 키트.
  41. 제1항에 있어서, 상기 성스테로이드 전구체는 질내 투여되는 것인 방법.
  42. 제16항에 있어서, 치료학적으로 유효한 양의 1개 이상의 선택적인 에스트로겐 수용체 조절자를 더 포함하는 것인 약학 조성물.
  43. 제42항에 있어서, 치료학적으로 유효한 양의 1개 이상의 에스트로겐을 더 포함하는 것인 약학 조성물.
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