KR20070042405A - 항염증 활성을 갖는 쑥으로부터 분리한 수용성 분획물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 항염증 활성을 갖는 쑥 물추출물로부터 분리한 분자량이 10-1000Da인 수용성 분획물 및 이들을 유효성분으로 함유하는 염증성 질환의 예방 및 치료용 조성물에 관한 것으로서, 상세하게는 본 발명의 쑥 조추출물로부터 분리한 수용성 분획물들은 분자량이 10-1000Da 이하로 환원당 또는 당이 결합된 화합물 또는 자외선을 흡수하는 물질을 함유하고 있다. 본 발명의 물질은 LPS(lipopolysaccharide) 처리된 마우스의 뇌 성상세포에서 뿐만 아니라 대식세포에서의 NO 생산을 현저히 감소시키며, LPS 처리로 증가되는 iNOS의 유전자 발현을 처리하기 전의 수준으로 줄여 주어 NO 합성을 억제할 뿐만 아니라, 염증반응을 매개하는 IL-6와 MIP-1β의 유전자 발현도 현저하게 낮추는 효과를 가지고 있어 이는 소염제로 사용되는 덱사메타손 (dexamethasone)과 유사한 효과를 가진다.

따라서, 본 발명의 분획물들은 염증성 질환의 예방 및 치료용 조성물로 유용하게 이용될 수 있다.

쑥, 수용성, 항염증 활성, 염증성 질환, 산화질소(NO)

Description

항염증 활성을 갖는 쑥으로부터 분리한 수용성 분획물{The water-soluble fractions from Artemisia species having anti-inflammatory effect}

도 1은 인진쑥, 물쑥 및 애엽으로부터 각각의 수용성 분획물인 AIP1, ASP1 및 AVF3을 추출 및 정제하는 과정을 나타내는 모식도이며,

도 2는 각 수용성 분획물은 AIP1, ASP1 및 AVF3을 세파덱스 G-50 컬럼 크로마토그래피를 이용하여 정제한 결과로서, 페놀-황산 분석 및 260nm 에서의 UV 흡광도 측정의 결과를 나타내는 도이며,

도 3은 LPS에 의해 유도된 마우스의 뇌 성상세포 일차 배양에서 NO 생산에 대한 AIP1, ASP1 및 AVF3의 저해효과를 나타내는 도이며,

도 4는 LPS에 의해 유도된 마우스의 대식세포 RAW 264.7 세포 배양에서 NO 생산에 대한 AIP1, ASP1 및 AVF3의 저해효과를 나타내는 도이며,

도 5a 및 도 5b는 마우스의 성상세포 일차배양에서 AIP1의 iNOS, IL-6, MIP-1β 전사 억제를 나타내는 도로서, β-액틴, iNOS, IL-6, MIP-1β mRNAs의 RT-PCR의 결과(도 5a), 상기 유전자의 실시간 PCR의 결과(도 5b)를 나타내는 도이며,

도 6a 및 도 6b는 마우스의 대식세포 RAW 264.7 세포에서 AIP1의 iNOS, IL-6, MIP-1β 전사 억제를 나타내는 도로서, β-액틴, iNOS, IL-6, MIP-1β mRNAs의 RT-PCR의 결과(도 6a), 상기 유전자의 실시간 PCR의 결과(도 6b)를 나타내는 도이 다.

본 발명은 항염증 활성을 갖는 쑥 물추출물로부터 분리한 분자량이 10-1000Da인 수용성 분획물 및 이들을 유효성분으로 함유하는 염증성 질환의 예방 및 치료용 조성물에 관한 것이다.

백혈구(mononuclear cells) 및 대식세포(macrophages)는 비특정 항원의 제거에 있어서 중요한 식세포들(phagocytic cell)로서 항원의 제시를 포함한 특정 면역에 있어서 다양한 역할을 수행하고 있다. 뇌의 성상세포(astrocytes)를 포함한 조직 대식세포(tissue macrophages)는 RES(reticuloendothelial system)라 불리우는 네트워크를 형성하고, 질환의 상태를 포함한 다양한 면역 반응에 있어서 중요하다(Roitt I, Brostodd J and Male D, Immunology., 3rd ed., Mosby, 1993).

염증(inflammation)은 병원체의 침입 또는 손상된 조직 제거를 개시하기 위해 상처부위에 대해 나타나는 지역적인 반응이다. 염증의 긍정적인 역할에도 불구하고 인간질병을 위한 가장 일반적인 발병 메커니즘의 하나가 되었다. 활성화된 백혈구(monocytes) 및 대식세포에 의한 산화질소(NO)의 생성이 강력한 염증 반응을 개시하고, 세균 병원체에 대한 초기 면역 반응에서 가장 중요한 부분이 된다.(Bogdan C., Nitric oxide and the immune response. Nat. Immunol ., 2, pp907-916, 2001)

염증반응의 결과로서, iNOS(inducible nitric oxide synthase)에 의해 생성된 NO의 상기 생리학적인 농도(Supraphysiological concentrations)가 다양한 염증 질환의 병리생물학에 있어서 역할을 하고 있다고 믿어지고 있다(Clancy R.M. et al., The role of nitric oxide in inflammation and immunity. Arthritis. Rheum., 41, pp1141-1151, 1998). 염증반응의 유도물질들중에서 LPS(lipopolysaccharide)는 백혈구와 같은 면역세포와 상호작용을 하며, 단핵세포의 식세포들에 있어서 iNOS 이소형태의 활성화에 의한 NO 농도의 증대에 의한 염증 반응에 있어서 중요한 역할을 하고 있다(MacMicking J. et al., Nitric oxide and macrophage function, Annu . Rev. Immunol ., 15, pp323-350, 1997). LPS는 그램 음성 세균의 outer membrane에서 엔도톡신(endotoxin)이며, TLR4(toll-like receptor 4)에의 결합은 IL-6(interleukin-6) 및 케모카인(chemokines) 등을 위한 많은 사이토카인 유전자의 활성화를 이끄는 신호전달을 개시하고, 이는 그 부분의 염증을 유도한다.(Fitzgerald K.A. et al., LPS-TLR4 signaling to IRF-3/7 and NF-kappaB involves the toll adapters TRAM and TRIF. J. Exp . Med ., 198, pp1043-1055, 2003)

NO의 생산 및 성상세포에 의한 염증 사이토카인들을 통한 염증 진행은 중추신경계에서 염증의 유도 및 지속에 있어서 중추적인 역할을 하고(Gasque P. et al., Identification of an astrocyte cell population from human brain that expresses perforin, a cytotoxic protein implicated in immune defense. J. Exp . Med., 187, pp451-460, 1998; Otto V.I. et al., The production of macrophage inflammatory protein-2 induced by soluble intercellular adhesion molecule-1 in mouse astrocytes is mediated by src tyrosine kinases and p42/44 mitogen-activated protein kinase. J. Neurochem ., 80, pp824-834, 2002), 그것은 다발성 경화증(MS, multiple sclerosis, Nygardas P.T. et al., Chemokine expression by central nervous system resident cells and infiltrating neutrophils during experimental autoimmune encephalomyelitis in the BALB/c mouse. Mol . Immunol ., 38, pp921-929, 2002), 알츠하이머 병(AD, Alzheimer's disease, Morimoto K. et al., Acute neuroinflammation exacerbates excitotoxicity in rat hippocampus in vivo. Exp . Neurol ., 177, pp95-104, 2002), 및 뇌허혈 (Stanimirovic D and Satoh K., Inflammatory mediators of cerebral endothelium: A role in ischemic brain inflammation. Brain Pathology, 10, pp113-126, 2000) 등을 포함하는 다양한 신경염증 질환의 발전에 중요한 역할을 한다.

MS의 모델인 EAE(experimental autoimmune encephalomyelitis)에 있어서, NO의 과도한 생산은 질환 발병에 영향을 미친다(Jolivalt C.G. et al., A novel nitric oxide scavenger in combination with cyclosporine A ameliorates experimental autoimmune encephalomyelitis progression in mice. J. Neuroimmunol ., 138, pp56-64, 2003). 또한 MS 환자들에게 있어 NO의 지속적이며 높은 농도가 미엘린(myelin) 및 희돌기교세포(oligodendroglia)에 유독한 손상을 유발시키고(Acar G. et al., Nitric oxide as an activity marker in multiple sclerosis., J. Neurol., 250, pp588-592, 2003), 글루코코르티코이드 (glucocorticoids) 및 성장인자-b의 변환에 의한 NO 합성 저해가 MS 치료에 도움이 된다(Lieb K. et al., Inhibition of LPS-induced iNOS and NO synthesis in primary rat microglial cells. Neurochem . Int ., 42, pp131-137, 2003).

NO는 혈중산소가 감소된 상태에서 뉴런의 사멸을 유도할 수 있으며, 그 결과로 인한 뇌 염증은 뇌졸증(stroke), 신경의 퇴행성(neurodegeneration) 및 뇌의 노화와 같은 하이폭시아와 연관된 병리에 있어 중요하다(Mander P. et al., Nitric oxide from inflammatory-activated glia synergizes with hypoxia to induce neuronal death. J. Neurosci . Res., 79, pp208-215, 2005).

성상세포(astrocyes)는 AD 환자의 뇌에서 모든 아밀로이드 플라크(amyloid plaques)와 실질적으로 강하게 연관되어 있으며(Abraham CR, Reactive astrocytes and alpha1-antichymotrypsin in Alzheimer's disease. Neurobiol. Aging., 22, pp931-936, 2001), 성상세포에 의한 성장인자-b1의 만성적인 변환가 트랜스제닉 마우스에서 AD 유사 미세혈관의 퇴행을 촉진한다(Wyss-Coray T. et al., Chronic overproduction of transforming growth factor-beta1 by astrocytes promotes Alzheimer's disease-like microvascular degeneration in transgenic mice. Am. J. Pathol ., 156, pp139-150, 2000). 그러므로 뇌 성상세포의 처치는 뇌 염증을 위한 신규한 치료적 접근이 된다(Hosoi T. et al., The mechanisms of immune-to-brain communication in inflammation as a drug target. Current Drug Targets Inflammation & Allergy 1, pp257-262, 2002).

산화질소(NO, nitric oxide)는 혈관 상태(vascular tone) 조절에 관여하는 내생적으로 생산되는 가스분자로서 처음으로 동정되었고(Furchgott RF and Zawadzki JV, The obligatory role of endothelial cells in the relaxation of arterial smooth muscle by acetylcholine., Nature, 288, pp373-376, 1980; Ignarro LJ et al., Endothelium-derived relaxing factor produced and released from artery and vein is nitric oxide., Proc . Natl . Acad . Sci . USA 84, pp 9265-9269, 1987), 또한 신경 자극 전달(Bredt DS and Snyder SH, Nitric oxide, a novel neuronal messenger., Neuron, 8, p3-11, 1982) 및 항균 면역(Kilbourn RG et al., Reversal of endotoxin-mediated shock by NGmethyl-L-arginine, an inhibitor of nitric oxide synthesis., Biochem Biophys . Res. Commun ., 172, pp 1132-1138, 1991)과 같은 신경계 및 면역계에서 생리적으로 중요한 기능을 담당하고 있다.

NO의 생리적인 활성은 세포 사이클을 조절함으로서 세포의 생존 또는 죽음을 조절하는 능력에 있으며(Ishida A et al., Induction of the cyclin-dependent kinase inhibitor p21Sdi1/Cip1/Waf1 by nitric oxide-generating vasodilator in vascular smooth muscle cells., J. Biol. Chem., 272, pp10050-10057, 1997; Kibbe MR et al., Inducible nitric oxide synthase (iNOS) expression upregulates p21 and inhibits vascular smooth muscle cell proliferation through p42/44 mitogen- activated protein kinase activation and independent of p53 and cyclic guanosine monophosphate., J. Vasc . Surg ., 31, pp1214-1228, 2000) 이는 생산되는 NO의 양에 의존한다(Kucera T., The double-edged role of nitric oxide in apoptosis signaling: focused on liver., J. Appil Biomed ., 2, pp87-93, 2004). NO는 3가지 형태의 NOS(nitric oxide synthase) 효소에 의해 생산된다. nNOS(neuronal nitric oxide synthase) 및 eNOS(endothelial nitric oxide synthase)는 본질적으로 발현되고 실로 작은 양의 NO를 생산하는데 관여하며(Billiar TR, Nitric oxide: Novel biology with clinical relevance., Ann. Surg., 221, pp339-349, 1995), 이는 세포보호적(cytoprotective)이다.

iNOS(inducible nitric oxide synthase)는 엔도톡신의 처리와 같은 확실한 자극에 의해 유도되어 지는데, 이는 사이토톡식 페록시니트라이트(cytotoxic peroxynitrite, ONOO-) 형성에 의해(Maxwell SR and Lip GY, Free radicals and antioxidants in cardiovascular disease., Br. J. Clin . Pharmacol ., 44, pp307-317, 1997) 세포 죽음을 유발(Nicotera P et al., Nitric oxide: inducer or suppressor of apoptosis? Trends Pharmacol. Sci ., 18, pp189-190, 1997)하는 NO 생산의 많은 양을 차지한다(Geller DA et al., Cytokines, endotoxin, and glucocorticoids regulate the expression of inducible nitric oxide synthase in hepatocytes., Proc . Natl . Acad . Sci . USA, 90, pp522-526, 1993).

NO는 또한 간염, 위염 및 류머티스 관절염을 포함하는 많은 염증 질환의 병태생리학적 과정에 영향을 준다. 백혈구 및 대식세포와 같은 증가된 염증 세포의 iNOS에 의한 NO 생산은 다양한 염증 질환의 주요한 원인이 된다.

적은 양의 NO는 많은 수의 염증세포들의 세포자살을 조절하는 보편적 조건에 서 생산되고 이들은 염증 반응의 성공적인 결과를 이끈다(Taylor EL et al., GEA 3162 decomposes to co-generate nitric oxide and superoxide and induces apoptosis in human neutrophils via a peroxynitrite-dependent mechanism. Br. J. Pharmacol ., 143, pp179-185, 2004).

만성적인 또는 과도한 염증 반응에 의해 발생한 NO의 많은 양은 염증 질환의 발병에서 역할을 한다. 간 손상이 내독소혈증(endotoxemia), 간염(hepatitis), 출혈성 쇼크(hemorrhagic shock) 및 허혈성 재관류(ischemic reperfusion)를 포함한 다양한 손상으로부터 유래되어지는 동안, iNOS 발현 및 NO 생산은 방어 메카니즘으로서 손상을 조절하기 위해 증가되고, 이로 인해 간염의 발전 및 좀더 심각한 간 질환이 유발된다(Li J and Billiar TR, Nitric Oxide IV. Determinants of nitric oxide protection and toxicity in liver. Am. J. Physiol ., 276, ppG1069-G1073, 1999).

대식세포에 의한 NO 생산은 또한 알콜성 간 질환(alcoholic liver disease)과 관련이 있는 것으로 알려져 있다.(Hunt NC and Goldin RD, Nitric oxide production by monocytes in alcoholic liver disease. J. Hepatol ., 14, pp146 150, 1992)

또한 iNOS의 활성증가 및 NO의 축적은 헬리코박터 파일로리 연관 위 질환의 발명을 초래한다(Rieder G et al., Up-regulation of inducible nitric oxide synthase in Helicobacter pylori-associated gastritis may represent an increased risk factor to develop gastric carcinoma of the intestinal type. Int. J. Med . Microbiol ., 293, p403-412, 2003). 헬리코박터 파일로리균은 만성 위염을 유발하며, 또한 세균 감염에 의한 높은 수준은 NO 생산이 점막의 손상 및 DNA의 돌연변이 유발로 인하여 궤양(peptic ulcer) 및 위암(gastric carcinoma)의 발전에 중요한 역할을 하고 있다.(Akiko S. et al., Nitric Oxide in the Gastric Lumen in Yoshikawa T (ed): Oxidative Stress and Digestive Diseases. Basel . Karger., pp136-146, 2001; Rieder G. et al., Up-regulation of inducible nitric oxide synthase in Helicobacter pylori-associated gastritis may represent an increased risk factor to develop gastric carcinoma of the intestinal type. Int. J. Med . Microbiol ., 293, pp403-412, 2003).

NO는 또한 류머티즘 관절염(rheumatoid arthritis)(Ma Y. and Pope R.M., The role of macrophages in rheumatoid arthritis. Curr . Pharm . Design 11, pp 569-580, 2005), 아테롬성 동맥경화증(atherosclerosis)(Libby P. et al., Inflammation and atherosclerosis. Circulation. 105, pp1135-1143, 2002) 및 자기 면역 질환(autoimmune diseases)(Bo L. et al., Induction of nitric oxide synthase in demyelinating regions of multiple sclerosis brains. Ann. Neurol . 36, pp778-786, 1994; Brosnan C.F. et al., Cytokine localization in multiple sclerosis lesions: correlation with adhesion molecule expression and reactive nitrogen species. Neurology. 45, ppS16-21, 1996)과 같은 다른 염증 진행의 발병 및 경과에 연관되어 있다고 널리 알려져 있다.

이는 대식세포 또는 관련 염증 세포들에 있어서 NO 생산의 약리학적 촉진이 상기 염증 질환의 치료를 위한 중요한 치료적 목표가 될수 있음을 의미한다(Gilroy D.W. et al., Inflammatory resolution: new opportunities for drug discovery. Nat. Rev. Drug. Discov . 3, pp401-416, 2004).

쑥(Artemisia sp.)은 국화과(Compositae)의 일종으로서, 한국에서 쉽게 발견할 수 있는 다년생 식물로서, 한방에서는 쑥잎을 지혈·진통·강장제로서 냉(冷)에 의한 자궁출혈·생리불순·생리통 등의 치료에 사용한다. 또한 민간에서는 날잎을 베인 상처나·타박상, 복통·백선(白癬) 등에 외용하거나 내복하기도 한다. 여름철에 쑥으로 불을 피워 모기를 쫓는 데 쓰며 말린 쑥은 뜸을 뜨는 데 쓰거나 부싯깃으로도 사용된다.

쑥 중에서 인진쑥(Artemisia iwayomogi) 및 물쑥( Artemisia selengesis)의 수용성 분획들은 면역조절 및 항암활성을 나타내고(Koo K.A. et al., Antitumor and immunomodulating activities of the polysaccharide fractions from Artemisia selengensis and Artemisia iwayomogi. Arch. Pharm . Res., 17, pp371-374, 1994), 인진쑥은 in vitro 에서 흉선세포(thymocytes)에서의 항세포자살 활성을 나타냈다(Hwang J.S. et al., AIP1, a Water-soluble fraction from Artemisia iwayomogi, suppresses thymocyte apoptosis in vitro and down-regulates the expression of Fas gene. Biol . Pharm . Bull., 28, pp921-924, 2005)

애엽(Artemisia Folium)은 아르테미스 불가리스(Artemisia vulgaris), 아르테미스 아르기(Artemisia argyi), 아르테미스 아시아티카(Artemisia asiatica) 또 는 아르테미스 프린셉스(Artemisia princeps)의 건조된 잎으로, 다양한 여성질환의 예방 및 치료를 위해 전통적으로 사용되어 왔다.

그러나 상기 문헌 어디에도 쑥의 물 추출물로부터 분리한 수용성 분획물들의 항염증 활성에 대한 교시 또는 개시는 없다.

이에 따라 본 발명자들은 쑥의 물 추출물로부터 분리한 수가용성 분획물이 마우스의 뇌 성상세포 및 마우스의 대식세포에서의 NO 생산 및 세포로부터 염증성 사이토카인의 발현을 억제함을 확인함으로서 본 발명을 완성하였다.

본 발명의 목적은 항염증 활성을 갖는 쑥의 물 추출물로부터 분리한 10-1000Da의 분자량을 갖는 수용성 분획물 및 이들을 유효성분으로 함유하는 염증성 질환의 예방 및 치료용 조성물을 제공하는 것이다.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 항염증 활성을 갖는 쑥의 물 추출물로부터 세파덱스 G-50 컬럼 크로마토그래피를 이용하여 분리한 10-1000Da의 분자량을 가진 수용성 분획물을 제공한다.

상기 수용성 분획물은 환원당 또는 당이 결합된 화합물 또는 260nm의 자외선을 흡수하는 물질을 의미한다.

상기 쑥은 인진쑥(Artemisia iwayomogi), 물쑥(Artemisia selengesis), 아르테미스 불가리스(Artemisia vulgaris), 아르테미스 아르기(Artemisia argyi), 아르테미스 아시아티카(Artemisia asiatica) 또는 아르테미스 프린셉스(Artemisia princeps)을 의미한다.

또한 본 발명은 상기 쑥의 물 추출물로부터 분리한 10-1000Da의 분자량을 가진 수용성 분획물을 유효성분으로 함유하는 염증성 질환의 예방 및 치료용 조성물을 제공한다.

상기 염증성 질환은 신경성 질환을 특징으로 하는 염증성 질환으로서 다발성 경화증(Multiple Sclerosis), 알츠하이머성 치매(Alzheimer’s disease), 파킨슨 병(Parkinson’s disease), 뇌허혈(brain ischemia와 trauma) 또는 뇌졸중 (Stroke)을 포함한다.

또한, 상기 염증성 질환은 산화질소(NO) 매개 염증 및 염증반응에 의해 발생하는 간염, 간경화, 헬리코박터 파일로리 균에 의한 위염, 위궤양 및 위암, 고혈압, 동맥경화, 당뇨병 또는 관절염을 포함한다.

이하, 본 발명을 상세히 설명한다.

본 발명의 쑥 물추출물로부터 분리된 수용성 분획물은 하기와 같이 수득될 수 있다.

본 발명의 쑥, 바람직하게는 인진쑥, 물쑥 및 애엽을 각각 적절히 세절하고 세척하여 건조한 쑥 건조중량의 약 1 내지 15배, 바람직하게는 약 10 내지 15배 부피의 물, 메탄올, 에탄올과 같은 저급 알콜 또는 이들의 혼합용매, 바람직하게는 물에서 50 내지 130℃, 바람직하게는 90 내지 125℃의 추출 온도에서 약 0.5시간 내지 2일, 바람직하게는 1시간 내지 1일 동안 열수 추출, 냉침 추출, 환류 냉각 추 출 또는 초음파 추출 등의 추출방법으로 1회 내지 5회, 바람직하게는 2회 내지 3회 반복하여 수득한 후, 증발기에서 농축한 후, 세파엑스 G 50 컬럼크로마토그래피를 이용함으로서 인진쑥으로부터 AIP1, 물쑥으로부터 ASP1, 애엽으로부터 AVF3 수가용성 분획을 수득할 수 있다.

상기에서 수득한 분획들을 페놀 황산 분석법 및 UV 흡광도를 측정한 결과, 본 발명의 분획물들은 분자량이 10-1000Da인 물질이며, 주로 환원당 또는 당이 결합된 화합물 또는 260nm의 자외선을 흡수하는 물질이다.

본 발명은 상기 방법으로 수득된 쑥 물추출물로부터 분리한 분자량 10-1000Da의 분자량을 가진 수용성 분획물을 유효성분으로 함유하는 염증성 질환의 예방 및 치료용 조성물을 제공한다.

상기 본 발명의 분획물들의 염증성 질환의 예방 및 치료제로서의 효능을 알아보기 위해, 본 발명에서는 LPS로 유도된 쥐의 뇌 성상세포 및 대식세포 라인인 RAW 264.7 세포에 본 발명의 분획물들을 처리하였을 경우 NO 생산이 현저히 감소됨을 확인하였으며, 또한 iNOS 발현 및 NO 생산을 억제하고, IL-6 및 MIP-1β 발현을 억제시킴으로서 LPS 유도 염증반응을 차단함을 확인하였다.

상기 염증성 질환은 신경성 질환을 특징으로 하는 염증성 질환으로서 다발성 경화증(Multiple Sclerosis), 알츠하이머성 치매(Alzheimer’s disease), 파킨슨 병(Parkinson’s disease), 뇌허혈(brain ischemia와 trauma) 또는 뇌졸중 (Stroke)을 포함한다.

또한, 상기 염증 질환은 산화질소(NO) 매개 염증 및 염증반응에 의해 발생하 는 간염, 간경화, 헬리코박터 파일로리 균에 의한 위염, 위궤양 및 위암, 고혈압, 동맥경화, 당뇨병 또는 관절염을 포함한다.

또한, 쑥은 오랫동안 생약 및 식용으로 사용되어 오던 약재로서 이들로부터 추출된 본 발명의 추출물들 역시 독성 및 부작용 등의 문제가 없다.

본 발명의 염증성 질환의 예방 및 치료용 조성물은 조성물 총 중량에 대하여 상기 추출물 또는 화합물을 0.1 내지 50 중량%로 포함한다.

본 발명의 분획물을 포함하는 약학조성물은 약학적 조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더 포함할 수 있다.

본 발명의 분획물의 약학적 투여 형태는 이들의 약학적 허용가능한 염의 형태로도 사용될 수 있고, 또한 단독으로 또는 타 약학적 활성 화합물과 결합뿐만 아니라 적당한 집합으로 사용될 수 있다.

본 발명에 따른 분획물을 포함하는 약학조성물은, 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다. 분획물을 포함하는 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 상기 추출물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트(calcium carbonate), 수크로스(sucrose) 또는 락토오스 (lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.

본 발명의 분획물의 바람직한 투여량은 환자의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물형태, 투여경로 및 기간에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 그러나, 바람직한 효과를 위해서, 본 발명의 분획물은 1일 0.0001 내지 100mg/kg으로, 바람직하게는 0.001 내지 10mg/kg으로 투여하는 것이 좋다. 투여는 하루에 한번 투여할 수도 있고, 수회 나누어 투여할 수도 있다. 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위을 한정하는 것은 아니다.

본 발명의 분획물은 쥐, 생쥐, 가축, 인간 등의 포유동물에 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여의 모든 방식은 예상될 수 있는데, 예를 들면, 경구, 직장 또는 정맥, 근육, 피하, 자궁내 경막 또는 뇌혈관내 (intracerebroventricular) 주사에 의해 투여될 수 있다.

이하 본 발명을 하기의 실시예 및 실험예에 의하여 더욱 상세히 설명한다. 다만, 하기의 실시예 및 실험예는 본 발명의 예시일 뿐, 본 발명의 권리범위가 이에 의하여 한정되지는 않는다.

참조예 1. 시약 및 실험 동물의 준비

1-1. 시약

DMEM(Dulbecco's modified Eagle's medium), HBSS(Hank’s balanced salt solution), 트립신, N-(1-나프틸)-이네디아민-디하이드로클로라이드(N-(1-naphthyl)-enediamine dihydrochloride), 술포닐아미드(sulfanilamide), 덱사메타손(dexamethasone), LPS(lipopolysaccharide), DMSO(dimethylsulfoxide), MTT(3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide)는 시그마 화학회사(St. Louis, MO)에서 구입하였다.

또한, FBS(fetal bovine serum)은 Gibco(Grand Island, NY, USA)에서 구입하였고, Taq 폴리머라아제는 Koschem(Sungnam, Korea)에서 구입하였다. RNAgent Total RNA Isolation System, 올리고-dT 프라이머 및 RNasin은 Promega(Madison, WI, USA)로부터 입수하였고, Omniscript Reverse Transcriptase 및 SYBR Green master mix는 Qiagen(Hilden, Germany)와 Promega로부터 입수하였다.

1-2. 실험동물의 준비

임신한 스프라우그-도우리(SD)계 마우스는 효창 사이언스(대구, 한국)로 부터 구입하고, PCR을 위한 프라이머 및 real time PCR은 Bionic Co.(서울, 한국)에서 합성하였다.

실시예 1. AIP1 , ASP1 및 AVF3 분획물의 정제

서울 경동시장으로부터 구입한 인진쑥(Artemisia iwayomogi), 물쑥( Artemisia selengesis) 및 애엽(Artemisia Folium)의 건조된 잎을 121℃에서 3시간 동안 고압 하에서 열수추출하여 수득한 조추출물을 증발기에서 농축하였다.

상기 조추출물은 농축한 후, 증류수를 이용하여 세파덱스 G-50 사이즈 배제 크로마토그래피를 사용하여 분획하였다. 상기 분획물은 환원당 또는 UV 흡수 화합물을 가진 분획을 동정하기 위하여 변형된 페놀 황산 분석방법 및 UV 흡광도를 측정하였다(도 1 참고).

상기 정제된 분획들에는 페놀 황산 분석과 자외선 260nm 분석에서 동일한 지역에서 최대치를 보였다. 이들 최대치를 보이는 분획을 모아 저분자량의 수용성 분획을 수득하였으며, 인진쑥으로부터 분리된 것은 AIP1로, 물쑥으로부터 분리된 것은 ASP1로, 애엽으로부터 분리된 것은 AVF3으로 각각 명명하였다.

상기 분획들을 세파덱스 G-50과 고성능 액체크로마토그래피(High performance liquid chromatography, 이하 HPLC) 사이즈 배제 크로마토그래피로 확인한 결과 그 분자량이 10-1000Da이하 물질로, 주로 환원당 또는 당이 결합된 화합물 또는 260nm의 자외선을 흡수하는 물질로 추정되었다.(도 2 참고)

실험예 1. LPS 처리된 마우스 뇌의 성상세포에 있어서 NO 방출에 대한 AIP1 , ASP1 및 AVF3 의 효과

본 발명의 분획들 AIP1, ASP1 및 AVF3의 항염증 활성을 측정하기 위하여, LPS로 마우스의 뇌 성상세포를 자극함으로서 유도한 in vitro 염증모델을 채택하였다. in vitro에서 성상세포에 LPS의 처리는 NO 및 전구염증성 사이토카인의 분비를 촉진하고 뇌 염증 반응과 유사한 염증 캐스캐이드가 개시되기 때문에, 이는 AD, MS 및 다른 신경 염증 질환과 같은 뇌 염증을 조절하는 물질을 동정하기 위한 좋은 모델이 되기때문이다.(Abraham CR., Reactive astrocytes and alpha1-antichymotrypsin in Alzheimer's disease. Neurobiol . Aging., 22, pp931-936, 2001; Bakhiet M. et al., Constitutive and inflammatory induction of alpha and beta chemokines in human first trimester forebrain astrocytes and neurons. Eur. J. Immunol ., 30, pp1911-1918, 2000)

3-1. 마우스 뇌 성상세포의 일차 배양

뇌 성상세포의 일차 배양을 위해 맥컬티 등의 방법을 응용하여 태어난지 2-3일된 SD 마우스의 뇌로부터 성상세포를 분리하여 준비하였다(McCarthy KD and de Vellis J., Preparation of separate astroglial and oligodendroglial cell cultures from rat cerebral tissue. J. Cell Biol ., 85, pp890-902, 1980). 뇌의 대뇌피질(cortical tissue)을 분리하고 HBSS에서 얼음을 넣어 두었다. 수막(meninges)이 제거된 후 피질세포들은 효소적 및 기계적 분열에 의해 분리되고, 성상세포 현탁액을 준비하기 위해 거즈로 여과하였다.

상기 세포들은 10% FBS, 2mM 글루타민, 100IU/㎖ 페니실린 및 100㎎/㎖ 스트렙토마이신이 첨가된 DMEM에서 5×10⁵ cells/㎖의 밀도로 씨딩하였다.

3-2. LPS 처리된 마우스 뇌의 성상세포에 있어서 NO 방출에 대한 AIP1 , ASP1 및 AVF3 의 효과

상기 실험예 1-1에서 준비한 성상세포는 48 웰 플레이트에 1×10⁵ cells/㎖의 밀도로 계대배양하였다. 성상세포는 1 시간 동안 0.5mg/㎖ AIP1, ASP1 또는 AVF3을 전처리한 후 0.1㎍/㎖ LPS를 18시간 동안 처리하여 배양하였다.

배양 상등액에 존재하는 니트라이트의 축적은 생산된 NO의 양을 측정하기 위하여 그리스 시약[0.1% N-(1-naphthyl)enediamine dihydrochloride and 1% sulfanilamide in 5% phosphoric acid]을 이용하여 측정하였다(Green LC et al., Analysis of nitrate, nitrite, and [15N] nitrate in biological fluids. Ana. Biochem., 126, pp131-138, 1982).

각 배양 상등액의 100㎕를 동일 부피의 그리스 시약과 혼합하여 550nm에서의 흡광도를 측정하였다. 니트라이트 표준 곡선을 이용하여, 각 샘플의 니트라이트의 농도를 추정하였다. 또한 상기 처리가 배양액 내의 세포의 생존에 영향을 미치는지 여부를 확인하기 위하여 배양액내에서 살아있는 세포의 양 또한 MTT 환원법을 이용하여 측정하였다.

상기 실험 수행의 결과, 도 3에서 보는 바와 같이 LPS 처리된 컬쳐내에서의 니트리트의 양은 약 7.5μM로서, 부형제를 처리한 대조구(약 1.5μM)에 비하여 현저하게 증가됨을 확인할 수 있었다.

양성 대조군으로서 소염제로 사용되는 덱사메타손 0.1mM을 처리한 경우에는 니트리트의 농도가 약 1.2μM 이며, LPS 처리된 성상세포 배양에 본 발명의 AIP1, ASP1 및 AVF3의 처리한 경우에는 니트리트의 농도가 각각 약 1.5μM, 1.7μM, 2.3μM 로서 덱사메타손 처리하였을 경우의 효과만큼이나 NO 생산을 현저히 감소시킴을 확인할 수 있었다.

본 발명의 분획들은 성상세포의 생존력에 영향을 미치지 않으면서 최저 0.01㎎/㎖에서 최고 0.5㎎/㎖의 농도에서 NO 생산을 저해하였는바(data not shown), 덱사메타손과 비교할 수 있을 정도로 뇌 성상세포에 대한 항염증 활성을 보여주는 결과이다.

실험예 2. LPS 처리된 마우스의 대식세포에서 NO 방출에 대한 AIP1 , ASP1 및 AVF3 의 효과

상기 실시예 1에서 수득한 쑥 물추출물로부터 분리한 수용성 분획물들(AIP1, ASP1 및 AVF3)의 항염증 활성을 관찰하기 위하여, 생쥐의 대식세포 라인인 RAW 264.7 세포들에 LPS(lipopolysaccharide) 유도에 의한 NO 생산을 사용한 in vitro 모델을 사용하였다(Kopydlowski K.M. et al., Regulation of macrophage chemokine expression by lipopolysaccharide in vitro and in vivo. J. Immunol . 163, pp1537-1544, 1999). in vitro에서 LPS를 처리한 대식세포들은 NO 및 전구 염증 사이토카인(proinflammatory cytokines)의 분비를 촉진하고 in vivo 염증반응과 유사한 염증 캐스캐이드가 개시가 되기때문에, 이는 염증 조절 물질을 동정하기 위한 좋은 모델이 될 수 있기 때문이다.

마우스의 대식세포 RAW 264.7 세포들(American Type Culture Collection, Manassa, VA)은 10% FBS, 2mM 글루타민, 100IU/㎖ 페니실린 및 100㎎/㎖ 스트렙토마이신이 보충된 DMEM에서 배양하였다.

상기 세포들을 1×10⁶ cells/㎖로 평판배양하여 하룻밤 동안 놓아두었다. 대식세포의 배양은 그 후 상기 실시예 1에서 수득한 0.5㎎/㎖의 AIP1, ASP1 및 AVF3으로 전처리하고, 그 후 18시간 동안 1㎍/㎖의 LPS로 처리하였다. 음성 대조군으로 부형제로 전처리, 양성 대조군으로 1μM 덱사메타손으로 전처리하였다.

생산된 NO의 양을 측정하기 위하여 컬쳐의 상등액 내에 니트리트의 축적을 그리스 시약[0.1% N-(1-naphthyl)enediamine dihydrochloride and 1% sulfanilamide in 5% phosphoric acid]을 이용하여 측정하였다(Green L.C. et al., Analysis of nitrate, nitrite, and [15N] nitrate in biological fluids. Ana. Biochem. 126, pp131-138, 1982).

각 컬쳐 상등액의 100㎕를 동일부피의 그리스 시약과 혼합한 후 550nm에서의 흡광도를 측정하였다. 니트리트 표준 곡선을 이용하여 각 샘플의 니트리트 농도를 산출하였다. 각 컬쳐의 살아있는 세포의 양은 상기 처리들이 컬쳐내의 세포의 생존력에 영향을 미치는 여부를 확인하기 위하여 MTT 환원법을 이용하여 측정하였다.

상기 실험 수행의 결과, 도 4에서 보는 바와 같이 LPS 처리 컬쳐에서의 니트리트의 양은 약 8.0μM로서, 부형제를 처리한 음성 대조군의 니트리트의 양(약 2.0μM)에 비하여 약 4배가 증가되어 현저하게 증가되었음을 확인할 수 있었다.

양성 대조군으로 덱사메타손을 처리한 경우에는 니트리트의 양이 약 3.3μM 정도로서 LPS 처리에 의한 니트리트의 생산은 소염제로 널리 알려진 덱사메타손 1mM에 의해 저해되었음을 확인할 수 있었다.

LPS 처리된 대식세포 컬쳐에 본 발명의 AIP1, ASP1 및 AVF3의 처리한 경우는 모두 니트리트의 양이 각각 약 0.3μM, 0.9μM, 0.1μM 정도로 소염제로 널리 사용되는 덱사메타손을 처리한 경우보다 현저히 NO의 생산을 저해함을 확인할 수 있었다.

본 발명의 분획들은 성상세포의 생존력에 영향을 미치지 않으면서 최저 0.01㎎/㎖에서 최고 0.5mg/ml의 농도에서 NO 생산을 저해하였는바(data not shown), 덱사메타손과 비교할 수 있을 정도로 쥐의 대식세포에 대한 항염증 활성을 보여주는 결과이다.

실험예 3. LPS 처리된 마우스 뇌의 성상세포에 의한 iNOS , IL-6의 유도 및 MIP -1β 전사 억제에 미치는 영향

본 발명의 분획물 성상세포의 일차배양에서 NO 생산을 조절함으로서 LPS에 의해 유도된 염증반응을 조절하는지 확인하기 위하여, LPS 유도 염증 반응에 있어서 중요한 IL-6, MIP-1β 및 iNOS 유전자의 발현수준을 RT-PCR 및 실시간 PCR 분석을 이용하여 시험하였다(Boztug K. et al., Leukocyte infiltration, but not neurodegeneration, in the CNS of transgenic mice with astrocyte production of the CXC chemokine ligand 10. J. Immunol., 169, pp1505-1551, 2002; McManus CM et al., Cytokine induction of MIP-1α and MIP-1β in human fetal microglia. J. Immunol., 160, pp1449-1455, 1998; Nagai A. et al., Generation and characterization of immortalized human microglial cell lines: expression of cytokines and chemokines. Neurobiol . Dis ., 8, pp1057-1568, 2001).

성상세포 배지에 부형제, LPS 단독, LPS 및 AIP1 또는 LPS 및 덱사메타손을 처리하고, 전체 RNAs를 AIP1, 부형제(vehicl) 및 덱사메타손을 처리한 뇌 성상세포 배양액으로부터 RNAgents Total RNA Isolation System (Promega)을 사용하여 제조사의 지시에 따라 분리하여 준비하고 이를 cDNAs로 전환하였다. Omniscript Reverse Transcriptase (Qiagen) 및 oligo-dT primer를 이용하여 cDNAs를 준비하고, 상기 cDNAs는 TaKaRa PCR Thermal Cycler Dice TP600 (Takara BIO Inc., Otsu, Shiga, Japan)을 사용하여 iNOS, IL-6, MIP-1β(macrophage inflammatory protein-1β) 및 β-액틴에 특이적인 프라이머 세트를 이용하여 증폭하였다.

그 후 iNOS, IL-6, MIP-1β 및 β-actin 유전자의 발현수준을 시험하기 위하여 PCR 및 실시간 PCR을 수행하였다.

β-액틴 유전자를 위한 프라이머 세트는 150bp의 프래그먼트를 생산하기 위하여 5′-GCACCACACCTTCTACAATGAG-3′ 및 5′-AAATAGCACAGCCTGGATAGCAAC-3′를 사용하였다.

iNOS를 위해서, 376pb의 PCR 산물을 만들기 위해 센스 프라이머로 5′-AGAGAGATCCGGTTCACA-3′, 안티센스 프라이머로 5′-CACAGAACTGAGGGTACA-3′를 사용하였다.

MIP-1β 프라이머 세트는 279bp를 생산하는 5′-ATGAAGCTCTGCGTGTCTGC-3′ 과 5′-TCAGTTCAACTCCAAGTCACTCAT-3′를 사용하였다.

IL-6 유전자를 위해, 247bp의 PCR 산물을 만들어내는 센스 프라이머 5′-TGCACTTGCAGAAAACAATC-3′와 안티센트 프라이머 5′-TGGTCTTGGTCCTTAGCC-3′를 사용하였다.

PCR 반응은 다음과 같은 증폭조건아래에서 Taq 폴리머라아제를 사용하여 수행하였다. β-액틴, MIP-1β의 경우에는 95℃에서 1분 동안 변성, 55℃에서 1분 동안의 어닐링(annealing), 72℃에서 1분 동안의 신장을 30 사이클 수행, iNOS의 경우에는 95℃에서 45초 동안 변성, 51℃에서 45초 동안의 어닐링(annealing), 72℃에서 45초 동안의 신장을 35 사이클 수행, IL-6 경우에는 95℃에서 40초 동안 변성, 56℃에서 45초 동안의 어닐링(annealing), 72℃에서 2분 동안의 신장을 35 사이클을 수행하였다. 증폭된 DNA 산물은 1.2% 아가로스 겔에서 분리하였다.

상기 유전자들의 발현 수준을 SYBR Green 및 ABI PRISM 7300 Real Time PCR System (Applied Biosystems, Foster, CA, USA)을 이용하여 real-time PCR을 이용하여 cDNAs의 증폭으로 정량적으로 측정하였다. 95℃에서 10분 동안 전처리의 조건하에서 증폭을 한 후, 95℃에서 15초 동안 변성, 60℃ 에서 1 분동안 어닐링 및 신장을 40 사이클을 수행하였고, 관련 유전자 발현 수준을 비교 C_T 법을 이용하여 측정하였다. 모든 반응은 최소 두번 수행하였다.

상기 실험 수행의 결과, 도 5a에서 보는 바와 같이, iNOS, IL-6, MIP-1β 및 β-actin의 발현은 LPS의 처리에 의해 현저히 증가되었고, 이는 덱사메타손을 처리한 경우에서 보았듯이 AIP1의 처리에 의해 기본적인 수준으로 현저하게 감소됨을 확인할 수 있었다.

실시간 PCR을 이용한 유전자들의 발현의 좀더 정량적인 측정은 LPS의 처리가 iNOS 및 IL-6 유전자의 경우에는 10배 이상, MIP-1β의 경우에는 최소 3배이상 발현이 증가됨을 보여주었다. 그러나 덱사메타손의 처리는 부형제를 처리한 대조군의 수준으로 유전자 발현의 수준이 낮아졌음을 확인할 수 있었다(도 5b 참고).

본 발명의 AIP1 처리 또한 유전자 발현이 부형제 처리군 및 덱사메타손 처리군의 수준으로 떨어졌고, 이는 AIP1 분획이 iNOS 발현을 억제함으로서 NO 생산을 저해하고, IL-6 및 MIP-1β 발현을 감소시킴으로서 LPS 유도 염증 반응을 차단하는 것을 의미한다.

실험예 4. LPS 처리된 마우스의 대식세포에 의한 iNOS 의 유도 및 IL-6 및 MIP-1β 전사에 미치는 효과

본 발명의 분획물들이 대식세포 RAW 264.7 세포들에서 NO 생산을 조절함으로서 LPS로 유도된 염증 반응을 조절하는지 확인하기 위하여, RT-PCR 및 실시간 PCR을 이용하여 LPS로 유도된 염증 반응에서의 중요한 IL-6, MIP-1β 및 iNOS 유전자의 발현수준을 측정하였다.

대식세포 컬쳐를 부형제, 1㎍/㎖ LPS 단독, LPS 및 0.5㎎/㎖ AIP1, LPS 및 1μM 덱사메타손을 처리하고 하기와 같은 방법을 수행하여 전체 RNAs 및 cDNAs를 준비하였다.

전체 RNAs는 AIP1, 부형제 및 덱사메타손을 처리한 대식세포 컬쳐로부터 RANgents Total RNA Isolation System(Progrema)을 사용하여 제조사의 지시에 따라 분리하였다. Omniscript Reverse Transcriptase (Qiagen) 및 oligo-dT primer를 이용하여 cDNAs를 준비하고, 상기 cDNAs는 TaKaRa PCR Thermal Cycler Dice TP600 (Takara BIO Inc., Otsu, Shiga, Japan)을 사용하여 상기 실험예 3에서 사용한 프라이머와 동일한 iNOS, IL-6, MIP-1β(macrophage inflammatory protein-1β) 및 β-액틴에 특이적인 프라이머 세트를 이용하여 증폭하였다.

상기 전체 RNAs를 cDNAs로 전환한 후 iNOS, IL-6, MIP-1β 및 β-액틴의 발현수준을 측정하기 위하여 상기 실험예 3에서 수행한 방법과 동일한 방법으로 PCR 및 실시간 PCR을 수행하였다.

상기 실험 수행의 결과, 도 6a 및 도 6b에서 보는 바와 같이, iNOS, IL-6 및 MIP-1β 유전자의 발현은 부형제를 처리한 대조군에 비하여 LPS 처리에 의해 현저히 증가되었음을 확인할 수 있었다. 한편 유전자들의 증가된 발현은 덱사메타손 처리에서와 같이 본 발명의 AIP1 처리에 의해 현저하게 감소되었음을 확인할 수 있었다.

유전자 발현의 좀더 정량적인 측정을 위해 실시간 PCR을 수행하였는바, LPS 처리는 부형제를 처리한 대조군에 비하여 iNOS 및 IL-6 유전자의 전사를 10배 증가시켰고, MIP-1β는 최소 3배 이상 증가시킴을 확인할 수 있었다(도 6b 참고).

그러나 덱사메타손 처리로 유전자의 발현 수준은 부형제를 처리한 대조군의 수준으로 낮아졌으며, AIP1 처리 또한 덱사메타손을 처리한 경우처럼 부형제를 처리한대조군의 수준으로 유전자 발현 수준을 낮추었음을 확인할 수 있었다. 이는 AIP1이 iNOS 발현 및 NO 생산을 억제하고, IL-6 및 MIP-1β 발현을 억제시킴으로서 LPS 유도 염증반응을 차단함을 의미한다.

본 발명은 항염증 활성을 갖는 쑥 물추출물로부터 분리한 분자량이 10-1000Da인 수용성 분획물 및 이들을 유효성분으로 함유하는 염증성 질환의 예방 및 치료용 조성물에 관한 것이다.

본 발명의 쑥 물추출물로부터 분리한 수용성 분획물들은 환원당 또는 당이 결합된 화합물로서 자외선을 흡수하는 물질을 함유하고 있다. 본 발명의 물질은 LPS(lipopolysaccharide) 처리된 마우스의 뇌 성상세포에서 뿐만 아니라 대식세포에서의 NO 생산을 현저히 감소시키며, LPS 처리로 증가되는 iNOS의 유전자 발현을 처리하기 전의 수준으로 줄여 주어 NO 합성을 억제할 뿐만 아니라, 염증반응을 매개하는 IL-6와 MIP-1β의 유전자 발현도 현저하게 낮추는 효과를 가지고 있어 이는 소염제로 사용되는 덱사메타손 (dexamethasone)과 유사한 효과를 가진다.

따라서, 본 발명의 분획물들은 신경성 질환을 특징으로 하는 염증성 질환으로서, 다발성 경화증(Multiple Sclerosis), 알츠하이머성 치매(Alzheimer’s disease), 파킨슨 병(Parkinson’s disease), 뇌허혈(brain ischemia와 trauma), 뇌졸중 (Stroke) 또는 산화질소(NO) 매개 염증 및 염증반응에 의해 발생하는 간염, 간경화, 헬리코박터 파일로리 균에 의한 위염, 위궤양 및 위암, 고혈압, 동맥경화, 당뇨병, 관절염을 포함하는 염증성 질환의 예방 및 치료용 조성물로서 유용하게 이용될 수 있다.

Claims (6)

1. 항염증 활성을 갖는 쑥의 물 추출물로부터 세파덱스 G-50 컬럼 크로마토그래피를 이용하여 분리한 10-1000Da의 분자량을 가진 수용성 분획물.
2. 제 1항에 있어서, 상기 수용성 분획물은 환원당 또는 당이 결합된 화합물 또는 260nm의 자외선을 흡수하는 물질임을 특징으로 하는 수용성 분획물.
3. 제 1항에 있어서, 상기 쑥은 인진쑥(Artemisia iwayomogi), 물쑥(Artemisia selengesis), 아르테미스 불가리스(Artemisia vulgaris), 아르테미스 아르기(Artemisia argyi), 아르테미스 아시아티카(Artemisia asiatica) 또는 아르테미스 프린셉스(Artemisia princeps) 임을 특징으로 하는 수용성 분획물.
4. 제 1항의 쑥의 물 추출물로부터 분리한 10-1000Da의 분자량을 가지는 수용성 분획물을 유효성분으로 함유하는 염증성 질환의 예방 및 치료용 조성물.
5. 제 4항에 있어서, 상기 염증성 질환은 신경성 질환을 특징으로 하는 염증성 질환으로서, 다발성 경화증(Multiple Sclerosis), 알츠하이머성 치매(Alzheimer’s disease), 파킨슨 병(Parkinson’s disease), 뇌허혈(brain ischemia와 trauma) 또는 뇌졸중(Stroke)임을 특징으로 하는 염증성 질환의 예방 및 치료용 조성물.
6. 제 4항에 있어서, 상기 염증성 질환은 산화질소(NO) 매개 염증 및 염증반응에 의해 발생하는 간염, 간경화, 헬리코박터 파일로리 균에 의한 위염, 위궤양 및 위암, 고혈압, 동맥경화, 당뇨병 또는 관절염임을 특징으로 하는 염증성 질환의 예방 및 치료용 조성물.

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