KR20060130744A

KR20060130744A - 피라졸로［３，４―ｂ］피리딘 화합물 및 이의 ｐｄｅ４억제제로서의 용도

Info

Publication number: KR20060130744A
Application number: KR1020067021438A
Authority: KR
Inventors: 시그프라이드 벤자민 크리스틴세니브; 캐롤린 메리 쿡; 크리스토퍼 데이비드 에들린; 마틴 레드패쓰 존슨; 폴 스펜서 존스; 미카 크리스티앙 린드발; 아민 피아렐리 사야니; 나이미샤 트리베디; 라이오넬 트로테
Original assignee: 글락소 그룹 리미티드
Priority date: 2004-03-16
Filing date: 2005-03-15
Publication date: 2006-12-19
Also published as: AR048175A1; AU2005223351A1; NO20064450L; TW200602051A; JP2007529464A; CA2559629A1; PE20060078A1; US20080275078A1; RU2378274C2; IL178011A0; RU2006132684A; BRPI0508843A; EP1740590A1; US20070280971A1; MA28531B1; EP1735314A1; US7709497B2; WO2005090354A1; WO2005090352A1; JP2007529486A

Abstract

본 발명은, 화학식(I)의 화합물인 4-{[1-(아미노카르보닐)-4-피페리디닐]아미노}-N-[(3,4-디메틸페닐)메틸]-1-에틸-1H-피라졸로[3,4-b]피리딘-5-카르복스아미드, 또는 이의 염을 제공한다. 본 발명은 또한, 포유동물에서, 예를 들어, 염증성 및/또는 알레르기성 질환, 인지 장애 또는 우울증을 치료 및/또는 예방하는 데 있어서의, 포스포디에스테라제 타입 IV(PDE4)의 억제제로서의 상기 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염의 용도를 제공한다. 특히, 본 발명은, 예를 들어 사람과 같은 포유동물로의 외부 국소 적용에 의해, 포유동물에서의 아토피 피부염을 치료 및/또는 예방하는 데 있어서의 상기 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염의 용도를 제공한다. 특히, 외부 국소 투여에 적합한 상기 화합물 또는 염을 함유하는 약제 조성물이 또한 제공된다.

Description

피라졸로［３，４―Ｂ］피리딘 화합물 및 이의 ＰＤＥ４ 억제제로서의 용도 {PYRAZOLO[3,4-B]PYRIDINE COMPOUND, AND ITS USE AS A PDE4 INHIBITOR}

본 발명은 피라졸로[3,4-b]피리딘 화합물 또는 이의 염, 이의 제조 방법, 이러한 제조 방법에 사용될 수 있는 중간체, 및 이러한 화합물 또는 염을 함유하는 약제 조성물에 관한 것이다. 또한, 본 발명은, 예를 들어 포스포디에스테라제 타입 IV(PDE4)의 억제제로서 및/또는 만성 폐쇄성 폐질환(COPD), 천식, 류마티스 관절염, 알레르기성 비염, 건선 또는 아토피 피부염과 같은 염증성 및/또는 알레르기성 질환의 치료 및/또는 예방을 위한, 요법에서의 피라졸로[3,4-b]피리딘 화합물 또는 염의 용도에 관한 것이다. 본 발명은 특히, 사람과 같은 포유동물에서의 아토피 피부염의 치료 및/또는 예방에서 상기 화합물 또는 염의 외부 국소 용도, 예를 들어 피부 국소 용도에 관한 것이다.

미국 특허 제 3,979,399호, 미국 특허 제 3,840,546호, 및 미국 특허 제 3,966,746 호(E.R.Squibb & Sons)는 피라졸로[3,4-b]피리딘-5-카르복스아미드의 4-아미노 유도체를 기술하고 있으며, 여기에서 4-아미노기 NR₃R₄는 R₃ 및 R₄가 각각 수소, 저급 알킬(예를 들어, 부틸), 페닐 등일 수 있는 비고리형 아미노기일 수 있으 며; 다르게는 NR₃R₄는 피롤리디노, 피페리디노 및 피페라지노와 같은 3 내지 6원 헤테로시클릭기일 수 있다. 이들 화합물은 정신안정제, 진통제 및 혈압강하제로서 유용한 중추신경계 진정제로서 개시되어 있다.

미국 특허 제 3,925,388호, 미국 특허 제 3,856,799호, 미국 특허 제 3,833,594호 및 미국 특허 제 3,755,340호(E.R.Squibb & Sons)는 피라졸로[3,4-b]피리딘-5-카르복실산 및 에스테르의 4-아미노 유도체를 기술하고 있다. 4-아미노기 NR₃R₄는 R₃ 및 R₄가 각각 수소, 저급 알킬(예를 들어, 부틸), 페닐 등일 수 있는 비고리형 아미노기일 수 있으며; 다르게는, NR₃R₄는 피롤리디노, 피페리디노, 피라졸릴, 피리미디닐, 피리다지닐 또는 피페라지닐과 같은 부가적인 질소가 존재하는 5 내지 6원 헤테로시클릭기일 수 있다. 이들 화합물은 정신안정제 또는 정온제(tranquiliser)로서 유용한 중추신경계 진정제인 것으로 언급되어 있다. 이들 화합물은 아데노신-3',5'-시클릭 모노포스페이트의 세포내 농도를 증가시키는 것으로, 그리고 천식의 증상을 완화시키는 것으로 언급되어 있다.

문헌(H. Hoehn et al., J. Heterocycl . Chem ., 1972, 9(2), 235-253)은 4-히드록시, 4-클로로, 4-알콕시, 4-히드라지노, 및 4-아미노 치환기를 갖는 일련의 1H-피라졸로[3,4-b]피리딘-5-카르복실산 유도체를 개시하고 있다. 에틸 4-(n-부틸아미노)-1-에틸-1H-피라졸로[3,4-b]피리딘-5-카르복실레이트가 또한 이 문헌 내에 개시되어 있는 데, 이 화합물은 카타졸레이트이다.

화합물 트라카졸레이트, 에틸 4-(n-부틸아미노)-1-에틸-6-메틸-1H-피라졸로 [3,4-b]피리딘-5-카르복실레이트는 항불안제로서 공지되어 있다 [참조: J. B. Patel et al., Eur . J. Pharmacol ., 1982, 78, 323]. 다른 1-치환된 4-(NH₂ 또는 NH-알킬)-1H-피라졸로[3,4-b]-피리딘-5-카르복실산 에스테르 및 아미드는 잠재적인 항불안제로서 문헌(참조: T. M. Bare et al., J. Med . Chem ., 1989, 32, 2561-2573)에 개시되어 있다.

캐나다 특허 제 1003419호, 중국 특허 제 553 799호 및 문헌(T. Denzel, Archiv der Pharmazie , 1974, 307(3), 177-186)은 1 위치에서 치환되지 않은 4,5-이치환된 1H-피라졸로[3,4-b]피리딘을 개시하고 있다.

2002년 1월 23일자 공개된 일본 특허 공개 번호 JP-2002-20386-A(Ono Yakuhin Kogyo KK)는 하기 화학식의 피라졸로피리딘 화합물을 개시하고 있다:

상기 식에서,

R¹ 은 1) -OR⁶ 기, 2) -SR⁷ 기, 3) C₂ _-8 알키닐기, 4) 니트로기, 5) 시아노기, 6) 히드록시기 또는 C₁ _-8 알콕시기에 의해 치환된 C₁ _-8 알킬기, 7) 페닐기, 8) -C(O)R⁸기, 9) -SO₂NR⁹R¹⁰ 기, 10) -NR¹¹S0₂R¹² 기, 11) -NR¹³C(O)R¹⁴기 또는 12) -CH=NR¹⁵ 기를 나타낸다. R⁶ 및 R⁷은 i) 수소 원자, ii) C₁ _-8 알킬기, iii) C₁ _-8 알콕시기에 의해 치환된 C₁ _-8 알킬기, iv) 트리할로메틸기, v) C₃ _-7 시클로알킬기, vi) 페닐기에 의해 치환된 C₁ _-8 알킬기 또는 vii) 1 내지 4개의 질소 원자, 1 내지 3개의 산소 원자 및/또는 1 내지 3개의 황 원자를 함유하는 3 내지 15원 모노-, 디- 또는 트리시클릭 헤테로 고리를 나타낸다. R²는 1) 수소 원자 또는 2) C₁ _-8 알콕시기를 나타낸다. R³는 1) 수소 원자 또는 2) C₁ _-8 알킬기를 나타낸다. R⁴ 는 1) 수소 원자, 2) C₁ _-8 알킬기, 3) C₃ _-7 시클로알킬기, 4) C₃ _-7 시클로알킬기에 의해 치환된 C₁ _-8 알킬기, 5) 1 내지 3개의 할로겐 원자에 의해 치환될 수 있는 페닐기 또는 6) 1 내지 4개의 질소 원자, 1 내지 3개의 산소 원자 및/또는 1 내지 3개의 황 원자를 함유하는 3 내지 15원 모노-, 디- 또는 트리시클릭 헤테로 고리를 나타낸다. R⁵는 1) 수소 원자, 2) C_1-8 알킬기, 3) C₃ _-7 시클로알킬기, 4) C₃ _-7 시클로알킬기에 의해 치환된 C₁ _-8 알킬기 또는 5) 1-3개의 치환기로 치환될 수 있는 페닐기를 나타낸다. R³ 에서는, 수소 원자가 바람직하다. R⁴ 에서는, 메틸, 에틸, 시클로프로필, 시클로부틸 또는 시클로펜틸이 바람직하다. JP-2002-20386-A호의 화합물은 PDE4 억제 활성 을 가지며, 염증성 질환 및 그 밖의 많은 질환의 예방 및/또는 치료에 유용한 것으로 언급되어 있다.

JP-2002-20386-A호의 것과 유사하거나 동일한 5-C(O)NH₂ 치환기를 지닌 1,3-디메틸-4-(아릴아미노)-피라졸로[3,4-b]피리딘은, 문헌(참조: H. Ochiai et al., Bioorg. Med . Chem . Lett ., 5th January 2004 issue, vol. 14(1), pp. 29-32; 이는 2003년 12월 4일 자 또는 이날 전에 저널 "articles in press"의 웹 버전으로부터입수가능함)에서 오노 파마슈티컬 코포레이션(Ono Pharmaceutical Co.)으로부터의 연구자에 의해 경구적으로 활성인 PDE4 억제제로서 개시되었다. 경구적으로 활성인 PDE4 억제제로서의 이들 화합물 및 유사 화합물에 대한 전문은 문헌(참조: H. Ochiai et al., Bioorg . Med . Chem., 2004, 12(15), 4089-4100(2004년 6월 20일에 온라인 상에서 입수가능한 것으로 언급되어 있음), 및 H. Ochiai et al., Chem. Pharm. Bull., 2004, 52(9), 1098-1104(2004년 6월 15일부로 온라인 상에서 공개된 것으로 언급되어 있음)으로부터 확인된다.

EP 0 076 035 A1(ICI Americas)는 불안 및 긴장 상태의 완화를 위한 정온제 또는 정신안정제로서 유용한 중추신경계 진정제로서 피라졸로[3,4-b]피리딘 유도체를 개시하고 있다.

문헌(참조: J.W. Daly et al., Med . Chem . Res., 1994, 4, 293-306 및 D. Shi et al., Drug Development Research, 1997, 42, 41-56)은 에틸 4-시클로펜틸아미노-1-메틸-1H-피라졸로[3,4-b]피리딘-5-카르복실레이트를 포함하는 일련의 4-( 아미노) 치환된 1H-피라졸로[3,4-b]피리딘-5-카르복실산 유도체, 및 A₁- 및 A_2A-아데노신 수용체에서의 이들의 친화성 및 길항제 활성을 개시하고 있으며, 후자는 GABA_A-수용체 채널의 여러 결합 부위에서의 이들의 친화성을 개시하고 있다. 문헌(S. Schenone et al., Bioorg . Med . Chem . Lett ., 2001, 11, 2529-2531, 및 F. Bondavalli et al., J Med . Chem ., 2002, vol. 45(Issue 22, 2002년 10월 24일, 주장하는 바에 따르면 2002년 9월 24일자로 공개됨) pp. 4875-4887)은 A₁-아데노신 수용체 리간드로서 일련의 4-아미노-1-(2-클로로-2-페닐에틸)-1H-피라졸로[3,4-b]피리딘-5-카르복실산 에틸 에스테르를 기술하고 있다.

WO 02/060900 A2호에는 알레르기, 염증 또는 자가면역 질환 또는 질병의 치료를 위한 MCP-1 길항제로서, -C(O)-NR⁴-C(O)-NR⁵R⁶ 기를 5-치환기로서 가지며 1-, 3-, 4-, 및/또는 6 위치에서 치환되거나 치환되지 않는, 이속사졸로[5,4-b]피리딘 및 1H-피라졸로[3,4-b]피리딘(즉, 피라졸로[5,4-b]피리딘)를 포함하는, -C(O)-NR⁴-C(O)-NR⁵R⁶ 치환기를 갖는 일련의 비시클릭 헤테로시클릭 화합물이 기술되어 있다. -C(O)-NR⁴-C(O)-NR⁵R⁶ 치환기 대신에 -C(O)NH₂ 치환기를 갖는 비시클릭 헤테로시클릭 화합물은 WO 02/060900호에서 -C(O)-NR⁴-C(O)-NR⁵R⁶ 치환된 화합물의 합성시 중간체로서 기술되어 있다. 또한, 유사한 MCP-1 길항제에 대해서는 WO 02/081463 A1호를 참조하길 바란다.

WO 00/15222호(Bristol-Myers Suqibb)에는 특히, 고리 시스템의 5 위치에 특히 C(O)-X₁기를 가지며 4 위치에 E₁ 기를 갖는 피라졸로[3,4-b]피리딘이 개시되어 있다. 특히, X₁은 예를 들어 -OR₉, -N(R₉)(R₁₀) 또는 -N(R₅)(-A₂-R₂)일 수 있고, E₁은 예를 들어 -NH-A₁-시클로알킬, -NH-A₁-치환된 시클로알킬 또는 -NH-A₁-헤테로시클로일 수 있으며; 여기에서 A₁은 탄소수 1 내지 10개의 알킬렌 또는 치환된 알킬렌 가교이며, A₂는 예를 들어 직접 결합, 또는 탄소수 1 내지 10개의 알킬렌 또는 치환된 알킬렌 가교일 수 있다. 이들 화합물은 cGMP 포스포디에스테라제, 특히 PDE 타입 V의 억제제로서, 그리고 발기기능 장애와 같은 다양한 cGMP-관련된 증상의 치료에 유용한 것으로 개시되어 있다. 피라졸로[3,4-b]피리딘 고리 시스템의 4 위치에서 -NH-에 직접 결합된 시클로알킬 또는 헤테로시클로 기를 갖고/갖거나 PDE4 억제 활성을 갖는 화합물은 WO 00/15222호에는 개시되어 있는 것으로 보이지 않는다.

문헌(G. Yu. et. al., J. Med Chem ., 2001, 44, 1025-1027)에는 선택적인 PDE5 억제제로서의 일부 4-[(3-클로로-4-메톡시벤질)아미노]-피라졸로피리딘-5-카르복스아미드가 개시되어 있다.

2004년 9월 21일 및 그 이전에 온라인 상에서 공개된 것으로 여겨지는 문헌(H. de Mello, A. Echevarria, et al., J. Med . Chem ., 2004, 47(22), 5427-5432)에는 잠재적인 항-리슈만편모충 약물로서의 3-메틸 또는 3-페닐 4-아닐리노-1H-피라졸로[3,4-b]피리딘 5-카르복실산 에스테르가 개시되어 있다.

2003년 12월 19일자로 글락소 그룹 리미티드의 출원인 명으로 출원되고, 2004년 7월 8일자로 WO 2004/056823 A1호로 공개된 공동 계류중인 특허 출원 PCT/EP2003/014867호는, 피라졸로[3,4-b]피리딘의 5 위치에 Het 기 및 4-NR³R^3a 기(R^3a는 바람직하게는 H이다)를 갖는 피라졸로[3,4-b]피리딘 화합물 또는 이의 염이 개시되어 있고 청구되어 있는데, 여기에서 Het는 일반적으로 5원의 임의적으로 치환된 헤테로아릴 기이다. PCT/EP2003/014867호(WO 2004/056823 A1호)에는 또한 PDE4 억제제로서 그리고 특히 COPD, 천식 또는 알레르기성 비염의 치료 및/또는 예방을 위한 이들 화합물의 용도가 개시되어 있다.

2003년 9월 12일자로 글락소 그룹 리미티드의 출원인 명으로 출원되고, 2004년 3월 25일자로 WO 2004/024728 A2호로 공개된 공동 계류중인 특허 출원 PCT/EP03/11814호에는, 하기 화학식(I)에 따른, 4-NHR³ 기 및 5-C(O)-X 기를 갖는 피라졸로[3,4-b]피리딘 화합물 또는 이의 염이 개시되어 있다:

상기 식에서,

R¹은 C₁ _- ₄알킬, C₁ _- ₃플루오로알킬, -CH₂CH₂OH 또는 -CH₂CH₂CO₂C₁ _- ₂알킬이고;

R²는 수소 원자 (H), 메틸 또는 C₁플루오로알킬이고;

R³는 치환되거나 치환되지 않은 C₃ _- ₈시클로알킬, 또는 치환되거나 치환되지 않은 모노-불포화된 C₅ _- ₇시클로알케닐 또는 하기 화학식(aa), (bb) 또는 (cc)의 치환되거나 치환되지 않은 헤테로시클릭 기이거나,

(여기에서, n¹ 및 n²는 독립적으로 1 또는 2이고, Y는 0, S, SO₂, 또는 NR¹⁰이며, R¹⁰은 수소 원자 (H), C₁ _- ₄알킬, C₁ _- ₂플루오로알킬, CH₂C(O)NH₂, C(O)NH₂, C(O)-C_1-2알킬, C(O)-C₁플루오로알킬 또는 -C(O)-CH₂O-C₁ _- ₂알킬이다);

R³는 하기 화학식(dd):

의 비시클릭기이거나,

하기 화학식(ee):

의 비시클릭기이고;

X는 NR⁴R⁵ 또는OR^5a이다.

PCT/EP03/11814호(WO 2004/024728 A2호)에서, R⁴는 수소 원자 (H); C_1-6알킬; C₁ _- ₃플루오로알킬; 또는 하나의 치환기 R¹¹에 의해 치환된 C₂ _- ₆알킬이다.

PCT/EP03/11814호(WO 2004/024728 A2호)에서, R⁵는 수소 원자 (H); C_1-8알킬; C₁ _- ₈플루오로알킬; C₁ _- ₂알킬 기에 의해 치환되거나 치환되지 않은 C₃ _- ₈시클로알킬; -(CH₂)_n ⁴-부분 또는 C₃ _- ₈시클로알킬 부분에서 C₁ _- ₂알킬 기에 의해 치환되거나 치환되지 않은 -(CH₂)_n ⁴-C₃ _- ₈시클로알킬(여기에서, n⁴ 는 1, 2 또는 3이다); 하나 또는 두개의 독립된 치환기 R¹¹에 의해 치환된 C₂ _- ₆알킬; -(CH₂)_n ¹¹-C(O)R¹⁶; -(CH₂)_n ¹²-C(O)NR¹²R¹³; -CHR¹⁹-C(O)NR¹²R¹³; -(CH₂)_n ¹²-C(O)OR¹⁶; -(CH₂)_n ¹²-C(O)OH; -CHR¹⁹-C(O)OR¹⁶; -CHR¹⁹-C(O)OH; -(CH₂)_n ¹²-SO₂-NR¹²R¹³; -(CH₂)_n ¹²-SO₂R¹⁶; 또는 -(CH₂)_n ¹²-CN; -(CH₂)_n ¹³-Het; 또는 치환되거나 치환되지 않은 페닐일 수 있다.

다르게는, PCT/EP03/11814호(WO 2004/024728 A2호)에서, R⁵는 하기 화학식(x), (y), (y1) 또는 (z)을 가질 수 있으며,

화학식(x)에서, n은 0, 1 또는 2이고, 화학식(y) 및 (y1)에서, m은 1 또는 2이고, 화학식(z)에서, r은 0, 1 또는 2이며; 화학식(x) 및 (y) 및 (y1)에서, 하나 또는 두개의 A, B, D, E 및 F가 독립적으로 질소 또는 질소-산화물(N⁺-O^-)이거나 모두가 질소 또는 질소-산화물(N⁺-O^-)이 아니고, 단 A, B, D, E 및 F 중 단 하나는 질소-산화물이고, 나머지 A, B, D, E 및 F는 독립적으로 CH 또는 CR⁶이고; 화학식(x)에서 n이 0인 경우, A, B, D, E 및 F의 하나 또는 두개는 독립적으로 질소 또는 질소-산화물(N⁺-O^-)이고, A, B, D, E 및 F중 단 하나는 질소-산화물이다.

PCT/EP03/11814호(WO 2004/024728 A2호)에서, 각각의 R⁶는, 존재하는 임의의 다른 R⁶ 와는 독립적으로 할로겐 원자; C_1-6알킬; C₁ _- ₄플루오로알킬 ; C₁ _- ₄알콕시; C₁ _- ₂플루오로알콕시; C₃ _- ₆시클로알킬옥시; -C(O)R^16a; -C(O)OR³⁰; -S(0)₂-R^16a; R^16a-S(0)₂-NR^15a-; R⁷R⁸N-S(O)₂-; C₁ _- ₂알킬-C(O)-R^15aN-S(O)₂-; C₁ _- ₄알킬-S(O)-; Ph-S(O)-; R⁷R⁸N-CO-; -NR¹⁵ ^_C(O)R¹⁶; R⁷R⁸N; OH; C₁ _- ₄알콕시메틸; C₁ _- ₄알콕시에틸; C₁ _- ₂알킬- S(O)₂-CH₂-; R⁷R⁸N-S(O)₂-CH₂-; C₁ _- ₂알킬-S(O)₂-NR^15a-CH₂-; -CH₂-OH; -CH₂CH₂-OH; -CH₂-NR⁷R⁸; -CH₂-CH₂-NR⁷R⁸; -CH₂-C(O)OR³⁰; -CH₂-C(O)-NR⁷R⁸; -CH₂-NR^15a-C(O)-C₁ _- ₃알킬; -(CH₂)_n ¹⁴-Het¹(여기에서, n¹⁴는 0 또는 1이다); 시아노(CN); Ar^5b; 또는 페닐, 피리디닐 또는 피리미디닐(이들은 독립적으로 하나 또는 두개의 플루오로, 클로로, C₁ _- ₂알킬, C₁플루오로알킬, C₁ _- ₂알콕시 또는 C₁플루오로알콕시에 의해 치환되거나 치환되지 않는다)이거나; 두개의 인접하는 R⁶은 함께 -O-(CMe₂)-O- 또는 -0-(CH₂)_n ¹⁴-0-(여기에서, n¹⁴은 1 또는 2이다)일 수 있다.

PCT/EP03/11814호(WO 2004/024728 A2호)에 개시된 화학식(I)의 피라졸로[3,4-b]피리딘 화합물 및 이의 염은, 포스포디에스테라제 타입 IV(PDE4)의 억제제로서, 그리고 포유동물, 예컨대, 사람에서의 다양한 질환/상태, 특히, 염증성 및/또는 알레르기성 질환, 예를 들어, 천식, 만성 폐쇄성 폐질환(COPD)(예를 들어, 만성 기관지염 및/또는 공기증), 아토피 피부염, 두드러기, 알레르기성 비염, 알레르기성 결막염, 봄철 결막염, 호산구 육아종, 건선, 류머티스 관절염, 패혈쇼크, 궤양결장염, 크론 병, 심근 및 뇌의 재관류 손상, 만성 사구체신염, 내독소 쇼크, 성인 호흡곤란증후군, 다발성경화증, 인지 장애(예를 들어, 신경학적 질환에서), 우울증, 또는 통증의 치료 및/또는 예방에 유용한 것으로 개시되어 있다. PCT/EP03/11814호(WO 2004/024728 A2호)에는 또한, 화학식(I)의 화합물 및/또는 이들의 약제 조성물이 경구, 비경구, 흡입(폐에 대해 국소적으로), 또는 경비 투여에 의해 투여될 수 있다. 그러나, 외부 국소 투여에 의한 피라졸로[3,4-b]피리딘 화합물의 사용은 개시된 바 없다.

또한, PCT/EP03/11814호(WO 2004/024728 A2호)에는 4 위치에서 NHR³ 기 [여기에서, R³은 화학식(aa), (bb) 또는 (cc)의 치환되거나 치환되지 않은 헤테로시클릭 기이며, Y는 NR¹⁰(여기에서, R¹⁰은 C(O)NH₂이다)이다]를 갖는 임의의 특이적인 피라졸로[3,4-b]피리딘 화합물을 개시하고 있지 않다.

문헌(참조: Expert Opin . Ther . Patents, 2005(January edition), 15(1), 111-114)에서 WO 2004/024728호가 검토되었으며, WO 2004/056823호가 언급되었다.

본 발명

본 발명자들은, 현재의 측정법으로 신규한 피라졸로[3,4-b]피리딘 화합물이, 전혈(WB) 검정에서 PDE4를 억제하며 PDE3 또는 PDE5 효소를 억제시키는 것보다 훨씬 더 강력하게 PDE4B 효소를 억제시키는 것으로 추정되는, 포스포디에스테라제 타입 IV(PDE4) 효소 서브타입 B(PDE4B) 및 D(PDE4D)의 효력있는 억제제임을 새로이 발견하였다. 예비 시험으로부터, 이들 화합물은 아토피 피부염의 치료 및/또는 예방에서 외부 국소 투여에 의해 사용될 수 있는 것으로 추정된다: (유리 염기로서의) 본 화합물은, 아토피 피부염에서 일어나는 염증성 피부 병변과 일반적으로 유사한 것으로 여겨지는 염증성 피부 병변을 유발시킨 돼지 모델에서 염증을 감소시키는 것으로 추정된다.

따라서, 본 발명은 4-{[1-(아미노카르보닐)-4-피페리디닐]아미노}-N-[(3,4-디메틸페닐)메틸]-1-에틸-1H-피라졸로[3,4-b]피리딘-5-카르복스아미드 또는 이의 염, 특히 약제학적으로 허용되는 염을 제공한다.

본 발명의 화합물 또는 염은 하기 화학식(I)의 화합물 또는 이의 염, 특히 약제학적으로 허용되는 염이다:

이러한 화학식(I)의 화합물 또는 이의 염은 하기 화학식(IA)의 화합물 또는 이의 염(특히, 약제학적으로 허용되는 염)이다:

상기 식에서,

R¹은 에틸이고;

R²는 수소 원자 (H)이고;

R³은 고리 탄소 상에서 치환되지 않는 하기 화학식(bb)의 N-아미노카르보닐-피페리디닐 기이며:

;

R⁴는 수소 원자 (H)이고;

R⁵는 (3,4-디메틸페닐)메틸이다.

화합물 4-{[1-(아미노카르보닐)-4-피페리디닐]아미노}-N-[(3,4-디메틸페닐)메틸]-1-에틸-1H-피라졸로[3,4-b]피리딘-5-카르복스아미드는 다르게는 4-{[1-(아미노카르보닐)-4-피페리디닐]아미노}-5-{[(3,4-디메틸페닐)메틸]아미노카르보닐}-1-에틸-1H-피라졸로[3,4-b]피리딘으로 명명될 수 있다.

현재의 바람직한 구체예에서, 화학식(I)의 화합물 또는 이의 염은 화학식(I)의 화합물을 포함한다(예를 들어, 이 화학식(I)의 화합물을 필수적으로 포함하거나, 이 화학식(I)의 화합물 자체이다). 말하자면, 화학식(I)의 화합물 또는 이의 염은 "유리 염" 형태를 포함한다(예를 들어, "유리 염기" 형태를 필수적으로 포함하거나, 이 "유리 염기" 형태 자체이다).

따라서, 현재의 바람직한 구체예에서, 본 발명은 4-{[1-(아미노카르보닐)-4-피페리디닐]아미노}-N-[(3,4-디메틸페닐)메틸]-1-에틸-1H-피라졸로[3,4-b]피리딘-5-카르복스아미드를 제공한다. 이것은 "유리 염기" 형태이다.

약물에서의 이들의 잠재적인 용도로 인하여, 화학식(I)의 화합물의 염은 약제학적으로 허용가능한 것이 바람직하다. 약제학적으로 허용가능한 염은 적합하게는 산 부가염을 포함할 수 있다(예를 들어, 산 부가염을 필수적으로 포함하거나 산 부가염 자체이다).

일반적으로 약제학적으로 허용되는 산 부가염은, 화학식(I)의 화합물과, 적합한 산(예를 들어, 무기 또는 유기 산), 예를 들어 pKa가 2 이하인 약제학적으로 허용되는 산(예를 들어, 무기 또는 유기 산), 예컨대 pKa가 1.5 이하인 약제학적으로 허용되는 산의 조합물에 의해 형성될 수 있다. 예를 들어, 일반적으로 약제학적으로 허용되는 산 부가염은, 화학식(I)의 화합물과, 브롬화수소산, 염산, 황산, 질산, 인산, p-톨루엔설폰산, 벤젠설폰산, 메탄설폰산, 에탄설폰산, 또는 나프탈렌 설폰산(예컨대 2-나프탈렌설폰산)의 조합물에 의해 형성될 수 있다. 예를 들어, 약제학적으로 허용되는 산 부가염은 (일반적으로) 적합한 용매, 예컨대 유기 용매 또는 혼합된 수성/유기 용매 중에서 형성되어 염이 제공되며, 이 염은 예를 들어 결정화 및 여과 (예를 들어, 대규모인 경우) 또는 증발 (예를 들어, 소규모인 경우)에 의해 일반적으로 분리된다.

예를 들어, 일반적으로 화학식(I)의 화합물의 약제학적으로 허용되는 산 부가염은 브롬화수소염, 염산염, 황산염, 질산염, 인산염, p-톨루엔설폰산염, 벤젠설폰산염, 메탄설폰산염, 에탄설폰산염, 또는 나프탈렌설폰산염(예를 들어, 2-나프탈렌설폰산염)을 포함할 수 있다(예를 들어, 이들을 필수적으로 포함하거나 이들 자체일 수 있다). 상기한 염은 특히 화학식(I)의 화합물의 염산 염(예를 들어, 염화일수소 염)을 포함할 수 있다(예를 들어, 이들을 필수적으로 포함하거나 이들 자체일 수 있다).

따라서, 일 구체예에서, 본 발명은 화학식(I)의 화합물의 염산 염(예를 들어, 염화일수소 염)을 제공한다. 즉, 이러한 구체예에서, 본 발명은 4-{[1-(아미노카르보닐)-4-피페리디닐]아미노}-N-[(3,4-디메틸페닐)메틸]-1-에틸-1H-피라졸로[3,4-b]피리딘-5-카르복스아미드 히드로클로라이드(예를 들어, 염화일수소)를 제공한다.

그 밖의 비-약제학적으로 허용되는 염은, 예를 들어 본 발명의 화합물의 분리에 사용될 수도 있으며, 이는 본 발명의 범주에 포함된다.

본 발명의 범위 내에는 모든 가능한 화학양론적이며 비-화학양론적인 형태의 화학식(I)의 화합물의 염이 포함된다.

또한, 본 발명의 범위 내에는 모든 형태의 본 발명의 화합물 및/또는 염, 예컨대 용매화물, 수화물 및/또는 착물이 포함된다.

본 발명에 포함되는 특정 염은 이성질체로서 존재할 수도 있거나 존재하지 않을 수도 있다. 본 발명의 범위 내에는 라세미체, 거울상 이성질체 및 이들의 혼합물을 포함하는 그러한 모든 이성질체가 포함된다.

화학식(I)의 화합물 또는 이의 염에 포함되는 특정 그룹은 하나 이상의 호변이성질체 형태로 존재할 수도 있다. 본 발명의 범위 내에는, 혼합물을 포함하여 그러한 모든 호변이성질체 형태가 포함된다.

본 발명의 화합물 또는 염은 분리된 형태 및/또는 고형질 형태로 존재할 수 있다. 본 발명의 하나의 임의적인 구체예에 따르면, 본 발명의 화합물 또는 염은 결정질 형태로 존재한다(예를 들어, 본 발명의 화합물 또는 염의 적어도 90% 몰농도가 결정질 형태로 존재함).

화학식(I)의 화합물의 분자량은 대략 449 내지 450이다. 본원에서, 분자량은 임의의 부가염, 용매(예를 들어, 물) 분자 등에 의해 기여되는 임의의 분자량을 배제하는 미용매화된 "유리 염기" 화합물의 분자량을 의미한다.

합성 공정 루트

하기 공정은, 일반적으로 앞서 정의된 바와 같은 화학식(IA)의 화합물인 화학식(I)의 화합물을 제조하는데 사용될 수 있다. 명세서 전체를 통해 R¹은 에틸이고, R²는 H이고, R³은 상기 정의된 바와 같다.

공정 A

화학식(IA)의 화합물인 화학식(I)의 화합물을 형성하기 위해, 화학식(II)의 카르복실산을 화학식(III)의 활성화된 화합물로 전환시킨 후에, 이 활성화된 화합물을 화학식 NHR⁴R⁵의 아민과 반응시킬 수 있다:

상기 식에서, X¹은 아민에 의해 치환가능한 이탈기이다.

예를 들어, 활성화된 화합물(화학식(III)의 화합물)은 산 염화물일 수 있다. 이것은 예를 들어, 클로로포름과 같은 유기 용매 중에서 또는 용매를 사용하지 않고 염화티오닐과 반응시킴으로써, 카르복실산(II)으로부터 형성될 수 있다. 다르게는, 활성화된 화합물(화학식(III)의 화합물)은 이탈기 X¹이

이고, X²가 CH 또는 N인 활성화된 에스테르일 수 있다.

후자의 화학식(III)의 활성화된 화합물은 하기 공정 중 어느 하나에 의해 카르복실산(II)으로부터 형성될 수 있다:

(a) 카르복실산과, EDC(1-에틸-3-3'-디메틸아미노프로필)카르보디이미드와 같은 카르보디이미드, 또는 이의 염, 예를 들어 염산 염을 반응시킨 후에, 바람직하게는 생성되는 생성물을 1-히드록시벤조트리아졸(HOBT)과 반응시키는 공정으로서, 상기 (a) 공정은, 대개 용매(예를 들어, 무수성), 예컨대 디메틸 포름아미드(DMF) 또는 아세토니트릴의 존재하에서, 및/또는 대개 염기, 예를 들어 3차 유기 아민 염기, 예컨대 디이소프로필에틸아민(ⁱPr₂NEt = DIPEA)의 존재하에서 및/또는 대개 실온(예를 들어, 약 20 내지 약 25℃)에서 및/또는 예를 들어 무수 조건 하에서 수행되는 공정; 또는

(b) 2-(1H-벤조트리아졸-1-일)-1,1,3,3-테트라메틸우로늄 테트라플루오로보레이트(TBTU) 또는 O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트(HATU)와, 염기, 예를 들어 3차 또는 유기 아민 염기, 예컨대 디이소프로필에틸아민(ⁱPr₂NEt = DIPEA)의 존재하에서, 및 대개 용매, 예컨대 디메틸 포름아미드(DMF) 또는 아세토니트릴의 존재하에서 및/또는 예를 들어 무수 조건하에서 및/또는 대개 실온(예를 들어, 약 20 내지 약 25℃)에서 반응시키는 공정.

화학식(II)의 화합물은 R⁷이 알킬, 예컨대 C₁ _-4 알킬, 예를 들어 메틸 또는 에틸인 화학식(IV)의 에스테르를 가수분해시킴으로써 제조될 수 있다. 이러한 과정은, 예를 들어 화학식(IV)의 에스테르를 하기한 것 중 어느 하나의 물질과 반응시키는 것을 포함할 수 있다:

(a) 용매, 예를 들어 수성 용매(예를 들어, 물과 수혼화성 유기 용매의 혼합물을 포함하는 수성 용매), 예컨대 수성 에탄올 또는 수성 디옥산 중에서, 염기, 예를 들어 알칼리 금속 수산화물, 예컨대 수산화나트륨, 수산화칼륨 또는 수산화리튬; 또는

(b) 용매, 예를 들어 수성 디옥산과 같은 수성 용매 중에서 염산과 같은 산:

일 양태에서 본 발명은 또한 화학식(II)의 화합물을 제공하며, 또 다른 양태에서 본 발명은 본원에서 정의된 바와 같은 화학식(IV)의 화합물을 제공한다.

화학식(IV)의 화합물은, 화학식(IVa)의 화합물 또는 이의 염(예를 들어, 이의 염산 염)을, 화학식(IVa)의 화합물에서의(4-피페리디닐)아미노 기를 [(1-아미노카르보닐)-4-피페리디닐]아미노 기로 전환시킬 수 있는 요소 형성 시약과 반응시킴으로써 제조될 수 있다:

요소 형성 시약은 벤질 이소시아네이트(이것은 후에 디벤질화, 예를 들어 환원성 디벤질화된다)일 수 있거나, 바람직하게는 요소-형성 시약은 트리(C₁ _-4 알킬)실릴 이소시아네이트, 예컨대 트리(C_1-2 알킬)실릴 이소시아네이트, 바람직하게는 트리메틸실릴 이소시아네이트이다. 화학식(IVa)의 화합물 또는 이의 염의 화학식(IV)의 화합물로의 반응은, 염기, 예컨대 N,N-디이소프로필에틸아민(ⁱPr₂NEt = DIPEA)의 존재하에서, 화학식(IVa)의 화합물 또는 이의 염의 몰수와 비교하여 1 몰 당량 초과로 수행될 수 있다. 이러한 반응은 임의적으로 환류에서 가열시키거나 실온에서 수행된다.

화학식(IVa)의 화합물 또는 이의 염의 화학식(IV)의 화합물로의 반응은 유기 용매 중에서 수행될 수 있으며, 상기 용매로 수성-유기 용매 시스템 또는 혼합물은 바람직하지 않다. 유기 용매는 임의적으로 테트라히드로푸란(THF)일 수 있다. 그러나, THF가 우선은 약 4g 정도의 규모에서는 만족스럽게 작용하는 것으로 보일지라도 (참조: 중간체 4, R⁷ = 에틸, (IVa)의 HCl 염), 반응이 예를 들어 약 33.5g 이하로 규모가 확장되는 경우에는 수율이 감소될 수 있을 것으로 추정된다(참조: 중간체 4A의 전반, R⁷ = 에틸, (IVa)의 HCl 염). THF 중에서의 화학식(IVa)의 화합물의 HCl 염의 용해도는 제한될 것이다. 따라서, 화합물(IVa) 또는 이의 염의 화합물(IV)로의 반응은, 화학식(IVa)의 화합물 또는 이의 염 (어느 것이 사용되든지 간에)을 THF보다 사실상 훨씬 더 많은 정도로 용해시킬 수 있는 유기 용매를 포함하는 (예를 들어, 상기 유기 용매를 필수적으로 포함하거나 상기 유기 용매 자체인) 가용성 유기 용매 중에서 수행된다. 예를 들어, 가용성 유기 용매는 디클로로메탄(예를 들어, 실온 또는 환류 온도에서) 또는 (아마도) 클로로포름일 수 있다. 디클로로메탄은 R⁷ = 에틸이고 화합물(IVa)의 HCl 염을 이용하는 경우에 대해 약 33.5g 정도의 규모에 대해 만족스럽게 작용하는 것으로 보인다 [참조: 중간체 4A의 후반 및 중간체 4B]. 반응에서, 화합물(IVa) 또는 이의 염은 유기 용매 중에 적어도 부분적으로 현탁되기 보다는 사실상 완전히 용해되는 것이 바람직하다.

화합물(IVa) 또는 이의 염은 질소 보호기를 탈보호시킴으로써, 프롯(Prot)이(3차-부틸옥시)카르보닐(Boc)과 같은 질소 보호기인 화합물(IVb)로부터 제조될 수 있다. Boc의 제거는 적당한 산성 조건, 예컨대 1,4-디옥산 중의 염산(예를 들어, 4M)에 의해 수행될 수 있다:

R⁷이 에틸이고 Prot이 Boc인 화합물(IVb)은, 예를 들어 본원에서의 중간체 2 또는 2A에 기술된 바와 같은 방법에 따라, 화학식(V)의 화합물(하기 도시되어 있음, R⁷ = 에틸)과 1,1-디메틸에틸 4-아미노-1-피페리딘카르복실레이트(입수처: 예를 들어, AstaTech, Philadelphia, USA)의 반응에 의해 제조될 수 있다. 이 반응은 염기, 예컨대 트리에틸아민 또는 N,N-디이소프로필에틸아민(DIPEA)의 존재하에서, 및/또는 유기 용매, 예컨대 아세토니트릴 중에서 임의적으로 수행된다. 이 반응은, 예를 들어 약 60 내지 100℃(예를 들어, 약 80 내지 90℃)로, 예를 들어 약 16 내지 18 시간 동안의 가열을 필요로 할 수도 있다:

R⁷이 에틸인 화학식(V)의 화합물의 일 제조예에 대해서는, 예를 들어 본원에서의 중간체 1, 및/또는 문헌(참조: G. Yu et al., J. Med Chem ., 2001, 44, 1025-1027)에 기재된 반응 도식 1 및 화합물 12를 참조하길 바란다. 따라서, 화학식(V)의 화합물은, 화학식(VI)의 화합물과, 예를 들어 디에틸 에톡시메틸렌 말로네이트(여기에서 R⁷ = 에틸)를 가열과 함께 반응시킨 다음, 다시 가열시키면서 옥시염화 인과 반응시킴으로써 제조될 수 있다(예를 들어, 하기되는 중간체 1 참조):

공정 A의 하나의 대안적인 임의적인 구체예에 따르면, R⁷이 알킬, 예컨대 C₁ _-4 알킬, 예를 들어 메틸 또는 에틸인 화학식(IV)의 화합물은, 예를 들어 문헌(참조: Yu et al., J. Med Chem ., 2001, 44, 1025-1027)의 반응 도식 1에 기재된 바와 같은 하나의 방법에 따라, 화학식(V)의 화합물과 화학식 R³NH₂의 아민과의 반응에 의해 임의적으로 제조된다. 이 반응은 염기, 예컨대 트리에틸아민 또는 N,N-디이소프로필에틸아민의 존재하에서, 및/또는 유기 용매, 예컨대 에탄올, 디옥산 또는 아세토니트릴 중에서 임의적으로 수행된다. 반응은, 예를 들어 약 60 내지 100℃로, 예를 들어 약 80 내지 90℃로의 가열을 필요로 할 수도 있다:

공정 A의 다른 대안적인 구체예에서, 화학식(V)의 화합물에서의 4-클로로 치환기는 브롬 또는 요오드 원자, 또는 화학식 R³NH₂의 아민에 의해 치환가능한 적당한 이탈기로 대체될 수 있다. 이탈기는, 예를 들어 알콕시기 -OR₃₅, 예컨대 -OC₁ _-4 알킬(특히 -OEt) 또는 기 -O-S(O)₂-R³⁷일 수 있으며, 여기에서 R³⁷은 C₁ _-8 알킬(예를 들어, C₁ _-4 알킬 또는 C₁ _-2 알킬, 예컨대 메틸이다), C₁ _-6 플루오로알킬(예를 들어, C₁ _-4 플루오로알킬 또는 C₁ _-2 플루오로알킬, 예컨대 CF₃ 또는 C₄F₉), 또는 페닐이며, 여기에서 페닐은 독립적으로 C₁ _-2 알킬, 할로겐 또는 C₁ _-2 알콕시(예컨대 페닐 또는 4-메틸-페닐) 중 하나 또는 두개에 의해 치환되거나 치환되지 않는다. 상기 반응은 용매를 사용하거나 사용하지 않고 수행될 수 있으며, 가열을 필요로 할 수도 있다.

공정 B

화학식(IA)의 화합물인 화학식(I)의 화합물은, 화학식(VII)의 화합물과 화학식 R³NH₂ 또는 이의 염(예를 들어 HCl 염)을 반응시킴으로써 제조될 수 있다. 이 반응은 바람직하게는 염기, 예컨대 3차 유기 아민 염기, 예컨대 트리에틸아민 또는 N,N-디이소프로필에틸아민(DIPEA)의 존재하에서, 및/또는 유기 용매, 예컨대 에탄올, 테트라히드로푸란(THF), 디옥산 또는 아세토니트릴 중에서 수행되는 것이 바람직하다. 이 반응은, 예를 들어 약 60 내지 100℃ 또는 약 80 내지 90℃로, 예를 들어 8 내지 72시간, 또는 12 내지 48시간, 또는 24 내지 48시간 동안의 가열을 필요로 할 수도 있다(예를 들어, 본원에서의 실시예 1A 참조):

화학식 R³NH₂의 아민의 HCl 염(4-아미노-1-피페리딘카르복스아미드 히드로클로라이드)의 제조에 대한 일예에 대해서는 본원에서의 중간체 9 및 10을 참고하길 바란다.

화학식(VII)의 화합물은 2 단계 공정(예를 들어, 문헌(Bare et al., J. Med. Chem., 1989, 32, 2561-2573) 참조)으로 제조될 수 있다. 이러한 방법에는, 먼저, 바람직하게는 사실상 무수 조건(예를 들어, 질소 또는 아르곤 대기) 하에서 클로로포름 또는 THF와 같은 유기 용매 중에서, 또는 순수 용액으로서, 화학식(VIII)의 화합물과 염화티오닐(또는 카르복실산으로부터 산 염화물을 형성시키기에 적합한 또 다른 제제)을 반응시키는 것을 포함한다. 이 반응은 (예를 들어, 환류로의) 가열을 필요로 할 수도 있다. 이렇게 형성된 산 염화물 중간체는 분리되거나 분리되지 않을 수 있다. 제 2 단계 공정에는 생성되는 산 염화물 중간체와 화학식 R⁴R⁵NH의 아민을 유기 용매, 예컨대 THF 또는 클로로포름 중에서 반응시키는 것이 포함되며, 여기에는 또한 염기, 예컨대 트리에틸아민 또는 디이소프로필에틸아민(DIPEA)를 사용하는 것이 포함될 수 있다. 이에 대해서는 예를 들어, 본원에서의 중간체 7 및 9를 참고하길 바란다:

화학식(VIII)의 화합물은, 문헌(Yu et al., J. Med Chem ., 2001, 44, 1025-1027)에 기술된 방법에 따라, 화학식(V)의 에스테르를 가수분해시킴으로써 제조될 수 있다. 이 과정에는 바람직하게는 염기, 예컨대 수산화나트륨 또는 수산화칼륨을 용매, 예를 들어 수성 에탄올 또는 수성 디옥산과 같은 수성 용매 중에서 반응시키는 것이 포함된다:

공정 B의 대안적인 구체예에서, 화학식(VII)의 화합물에서의 4-클로로 치환기가 브롬 또는 요오드 원자로 대체될 수 있다.

공정 C

화학식(I)의 화합물이 화학식(IA)의 화합물과 동일한 화합물은, 다르게는 화학식(X)의 화합물 또는 이의 염(예를 들어, 이의 염산 염)을, 화학식(X)의 화합물에서의 (4-피페리디닐)아미노 기를 [(1-아미노카르보닐)-4-피페리디닐]아미노 기로 전환시킬 수 있는 요소 형성 시약과 반응시킴으로써 제조될 수 있다:

요소-형성 시약은 임의적으로 벤질 이소시아네이트(후에 이것은 디벤질화, 예를 들어 환원성 디벤질화됨) 또는 트리(C_1-4 알킬)실릴 이소시아네이트, 예컨대 트리(C_1-2 알킬)실릴 이소시아네이트, 바람직하게는 트리메틸실릴 이소시아네이트이다.

임의적으로, 화학식(X)의 화합물 또는 이의 염의, 화학식(I)=(IA)의 화합물로의 반응은, 3차 유기 아민 염기, 예컨대 트리에틸아민 또는 N,N-디이소프로필에틸아민(ⁱPr₂NEt = DIPEA)의 존재하에서, 예를 들어 화학식(X)의 화합물 또는 이의 염의 몰수와 비교하여 1 몰 당량 초과의 염기로 수행될 수 있다. 상기 반응은 임의적으로 실온 또는 용매 환류 온도에서 수행된다. 임의적으로, 화학식(X)의 화합물 또는 이의 염의, 화학식(I)=(IA)의 화합물로의 반응은, 유기 용매, 예를 들어 수성-유기 용매 시스템 또는 혼합물은 아닌, 예를 들어 디클로로메탄(예를 들어, 환류에서) 또는 클로로포름과 같은 유기 용매 중에서 수행된다.

화학식(X)의 화합물 또는 이의 염은 질소 보호기를 탈보호시킴으로써, Prot이 (3차-부틸옥시)카르보닐(Boc)과 같은 질소 보호기인 화학식(XI)의 화합물로부터 임의적으로 제조될 수 있다. Boc의 제거는 적당한 산성 조건, 예컨대 1,4-디옥산 중의 염산(예를 들어, 4M)에 의해 수행될 수 있다:

Prot이 (3차-부틸옥시)카르보닐(Boc)인 화학식(XI)의 화합물은, 화학식(VII)의 화합물과 1,1-디메틸에틸 4-아미노-1-피페리딘카르복실레이트를 반응시킴으로써 임의적으로 제조된다. 상기 반응은 DIPEA의 존재하에서, 및/또는 아세토니트릴 용매 및/또는 약 60 내지 100℃(예를 들어, 약 80 내지 90℃)로, 예를 들어 약 16 내지 18시간 동안 가열시키는 가운데 임의적으로 수행된다:

다르게는, 화학식(XI)의 화합물은 상응하는 5-에스테르인 상기한 화학식(IVb)의 화합물로부터, 예를 들어 상응하는 5-카르복실산을 경유하여 임의적으로 제조된다.

따라서, 본 발명은 또한, 하기 화학식(IA)의 화합물인 화학식(I)의 화합물, 또는 이의 염을 제조하는 방법으로서,

(a) 하기 화학식(II)의 화합물을 하기 화학식(III)의 활성화된 화합물로 전환시키고, 후속하여 활성화된 화학식(III)의 화합물과 화학식 R⁴R⁵NH의 아민을 반응시키는 단계;

(b) 하기 화학식(VIIA)의 화합물을 화학식 R³NH₂의 아민 또는 이의 염과 반응시키는 단계; 또는

(c) 하기 화학식(X)의 화합물 또는 이의 염(예를 들어, 이의 염산 염)과, 화학식(X)의 화합물에서의 (4-피페리디닐)아미노 기를 [(1-아미노카르보닐)-4-피페리디닐]아미노 기로 전환시킬 수 있는 요소 형성 시약과 반응시키는 단계를 포함하며,

상기 (a), (b) 또는 (c)의 단계에서, 화학식(I)의 화합물을 이의 염, 예를 들어 약제학적으로 허용되는 염으로 임의적으로 전환시키는 방법을 제공한다:

;

;

;

상기 식에서,

R¹, R², R³, R⁴ 및 R⁵는 본원에서 정의된 바와 같고,

X¹은 아민에 의해 치환가능한 이탈기이며,

Hal은 염소, 브롬 또는 요오드 원자(예컨대 브롬 원자, 또는 바람직하게는 염소 원자)이다.

본 발명은 또한 (g) 화학식(I)의 화합물 또는 이의 염을 목적하는 약제학적으로 허용되는 염으로 전환시키는 것을 포함하여, 화학식(I)의 화합물의 약제학적으로 허용되는 염을 제조하는 방법을 제공한다.

본 발명은 또한, 본원에서 정의된 방법에 의해 제조된 화학식(I)의 화합물 또는 이의 염을 제공한다.

상기 합성 공정에 사용가능한 화합물에 있어서, "알킬"기 또는 알킬 부분은 선형 또는 분지형일 수 있다. 채택될 수있는 알킬기, 예를 들어, C₁ _-8 알킬 또는 C₁ _-6 알킬 또는 C₁ _-4 알킬 또는 C₁ _-3 알킬 또는 C₁ _-2알킬기에는, 메틸, 에틸, n-프로필, n-부틸, n-펜틸 또는 n-헥실 또는 이들의 임의의 분지된 이성질체, 예컨대 이소프로필, t-부틸, 2차-부틸, 이소부틸, 3-메틸부탄-2-일, 2-에틸부탄-1-일 등과 같은 C₁ _-6 알킬 또는 C₁ _-4 알킬 또는 C₁ _-3 알킬 또는 C₁ _-2 알킬이 포함된다.

"알콕시", "알킬렌" 및 알킬로부터 유래한 이와 유사한 용어에 대해서도 상응하는 의미가 의도된다. 예를 들어, C₁ _-6 알콕시 또는 C₁ _-4 알콕시 또는 C₁ _-2 알콕시와 같은 "알콕시"에는 메톡시, 에톡시, 프로필옥시 및 상기 기재된 알킬의 옥시 유도체가 포함된다. C₁ _-4 알킬설포닐과 같은 "알킬설포닐"에는 메틸설포닐(메탄설포닐), 에탄설포닐 및 상기 기재된 알킬로부터 유래한 것들이 포함된다. C₁ _-4 알킬설포닐옥시와 같은 "알킬설포닐옥시"에는 메탄설포닐옥시(메틸설포닐옥시), 에탄설포닐옥시 등이 포함된다.

"플루오로알킬"에는 하나, 둘, 셋, 넷, 다섯 이상의 불소 치환기, 예를 들어 C_1-4 플루오로알킬 또는 C₁ _-3 플루오로알킬 또는 C₁ _-2 플루오로알킬, 예컨대 모노플루오로메틸, 디플루오로메틸, 트리플루오로메틸, 펜타플루오로에틸, 2,2,2-트리플루오로에틸(CF₃CH₂-), 2,2-디플루오로에틸(CHF₂CH₂-), 2-플루오로에틸(CH₂FCH₂-) 등이 포함된다. "플루오로알콕시"에는 C₁ _-4 플루오로알콕시 또는 C₁ _-2 플루오로알콕시, 예컨대 트리플루오로메톡시, 펜타플루오로에톡시, 모노플루오로메톡시, 디플루오로메톡시 등이 포함된다. C₁ _-4 플루오로알킬설포닐과 같은 "플루오로알킬설포닐"에는 트리플루오로메탄설포닐, 펜타플루오로에틸설포닐 등이 포함된다.

화합물 중에 존재하는 할로겐 원자("할로")는 불소, 염소, 브롬 또는 요오드 원자("플루오로", "클로로", "브로모" 또는 "요오드"), 특히 클로로, 브로모 또는 요오드를 의미한다.

원자 또는 부분 A가 원자 또는 부분 B에 "결합"되거나 "부착"됨을 나타내는 경우에는, 이는 원자/부분 A가 대개 하나 또는 둘의 공유 결합에 의해 원자/부분 B에 직접 결합됨을 의미하고, 상기 원자/부분 A는 하나 이상의 중간 원자/부분 (예를 들어, A-C-B는 배제함)을 통해 B에 간접적으로 부착되는 A는 배제한다; 이는 또 다른 의미가 의도하는 것이 문맥으로부터 명백하지 않은 경우에 해당되는 것이다.

의약 용도

본 발명은 또한 포유동물, 예컨대, 사람에서의 활성 치료 물질로 사용하기 위한 화학식(I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 제공한다. 본 발명의 화합물 또는 염은 본원에 기재된 어떠한 질환/상태의 치료 및/또는 예방에 사용(예, 사람과 같은 포유동물에서의 염증성 및/또는 알레르기성 질환의 치료 및/또는 예방에 사용; 또는 예를 들어, 사람과 같은 포유동물에서 인지 장애 또는 우울증의 치료 및/또는 예방에 사용); 및/또는 포스포디에스테라제 4(PDE4) 억제제로서 사용될 수 있다. "치료법"은 치료 및/또는 예방을 포함할 수 있다.

본 발명의 화합물 또는 염은, 예를 들어 사람과 같은 포유동물에서, 염증성 및/또는 알레르기성 피부 질환, 예컨대 아토피 피부염 또는 건선의 치료 및/또는 예방에 사용될 수 있다.

또한, 본 발명은, 예를 들어, 포유동물, 예컨대, 사람에서 본원에 기술된 어떠한 질환/상태의 치료 및/또는 예방을 위한, 예를 들어 포유동물, 예컨대, 사람에서 염증성/알레르기성 질환의 치료 및/또는 예방을 위한, 또는 예를 들어 포유동물에서 인지 장애 또는 우울증의 치료 및/또는 예방을 위한 약물(예, 약제 조성물)을 제조하는데 있어서의, 화학식(I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염의 용도를 제공한다.

또한, 본 발명은 본원에서 정의된 치료학적 유효량의 화학식(I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 포유동물(예, 사람)에게 투여함을 포함하여, 이를 필요로 하는 포유동물(예, 사람)에서, 본원에 기재된 어떠한 질환/상태를 치료 및/또는 예방하는 방법, 예를 들어, 이를 필요로 하는 포유동물(예, 사람)에서 염증성 및/또는 알레르기성 질환, 인지 장애 또는 우울증을 치료 및/또는 예방하는 방법을 제공한다.

포스포디에스테라제 4 억제제는 포유동물, 예컨대, 사람에서의 다양한 질환/상태, 특히, 염증성 및/또는 알레르기성 질환, 예를 들어, 천식, 만성 폐쇄성 폐질환(COPD)(예를 들어, 만성 기관지염 및/또는 공기증), 아토피 피부염, 두드러기, 알레르기성 비염, 알레르기성 결막염, 봄철 결막염, 호산구 육아종, 건선, 류머티스 관절염, 패혈쇼크, 궤양성 결장염, 크론 병, 심근 및 뇌의 재관류 손상, 만성 사구체신염, 내독소 쇼크, 성인 호흡곤란 증후군, 다발성경화증, 인지 장애(예, 신경학적 질환, 예컨대, 알츠하이머 병에서), 우울증, 또는 통증(예, 염증성 통증)의 치료 및/또는 예방에 유용한 것으로 사료된다. 궤양성 결장염 및/또는 크론 병은 총체적으로 염증성 장 질환이라 종종 지칭된다.

치료 및/또는 예방에서, 염증성 및/또는 알레르기성 질환은 바람직하게는 포유동물(예, 사람)에서의 만성 폐쇄성 폐질환(CODP), 천식, 류머티스 관절염, 알레르기성 비염, 건선 또는 아토피 피부염이다. 가장 바람직하게는, 치료 및/또는 예방은 포유동물(예, 사람)에서의 COPD, 건선 또는 아토피 피부염의 치료 및/또는 예방이다.

가장 바람직하게는, 포유동물, 예컨대 사람 또는 돼지, 바람직하게는 사람, 특히 21살 이하, 예를 들어 18살 이하의 사람에서 아토피 피부염을 치료 및/또는 예방하는 것이다. 포유동물에서의 아토피 피부염의 치료 및/또는 예방에 있어서, 화학식(I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 포유동물에게 외부 국소 투여(예를 들어, 피부, 예컨대 아토피 피부염에 걸린 피부에 국소 투여)하는 것이 바람직하게 이용된다. 아토피 피부염의 치료 및/또는 예방에 있어서, 흡입 투여는 일반적으로 적합하지 않다.

"아토피 피부염"은 하기한 2개의 일반적인 세부 부류를 포함하는 것으로 제안되었다: (1) 환경적인 알레르기 유발원에 대한 자극하에서 일반적으로 일어나고/나거나, 일반적으로 상승된 혈청 IgE 수준이 동반되는 "알레르기성(외부적)" 유형의 아토피 피부염; 및 (2) 자극이 거의 없거나 검출되지 않고/않거나 정상적이거나 낮은 혈청 IgE 수준을 지니는 "비-알레르기성(내부적)" 유형의 아토피 피부염 [참조: N. Novak et al., J. Allergy Clin . Immunol ., 2003, 112, 252-262; and T. C. Roos et al., Drugs, 2004, 64(23), 2639-2666, 예를 들어 2640-2641 페이지 참조]. 따라서, 화학식(I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염은, 포유동물(예를 들어, 사람 또는 돼지, 바람직하게는 사람)에서, 알레르기성(외부적) 아토피 피부염 및/또는 비-알레르기성(내부적) 아토피 피부염을 치료 및/또는 예방하기 위해 사용될 수 있다.

"외부 국소" 투여는 바람직하게는 눈을 배제하는 외부 신체 일부(즉, 예를 들어 폐 또는 입은 배제하나 입술은 포함함)에 국소 투여하는 것을 의미한다.

"외부 국소" 투여는 바람직하게는 피부, 예를 들어 사람과 같은 포유동물의 팔, 손, 다리, 발, 머리(예를 들어, 안면), 목 및/또는 몸통의 피부에 국소 투여하는 것이 바람직하다. 외부 국소 투여는 예를 들어, 아토피 피부염이 걸리거나 이에 민감한 포유동물의 피부의 상기 부분에 대해 이루어질 수 있다.

아토피 피부염에 PED4 억제제를 이용하는 것에 대해서는, 예를 들어 하기 문헌을 참조하길 바란다:

상기 문헌은 PDE4 억제제 CP80,633(0.5% 연고, 1일 2회 국소 도포)로 처리한 아토피 피부염 환자에서 염증 요인의 감소를 보고하고 있다;

;

상기 문헌은, 시팜필린(0.15%) 크림이, 아토피 피부염 환자의 치료에서, 비히클보다는 현저히 더 효과적이나, 히드로코르티손 17-부티레이트(0.1%) 크림보다는 현저히 덜 효과적임을 보고하고 있다;

;

및 이들 문헌의 참조문헌들.

알레르기성 타입의 피부염에 대한 마우스 모델에서 PDE4 억제제 SB 207499(실로밀라스트) 및 AWD 12-281의 사용에 대해서는, 하기 문헌을 참조하길 바란다:

PDE4 억제제는 COPD의 치료에 효과적인 것으로 사료된다 [참조: S.L. Wolda, Emerging Drugs, 2000, 5(3), 309-319; Z. Huang et al., Current Opinion in Chemical Biology, 2001, 5: 432-438; H.J.Dyke et al., Expert Opinion on Investigational Drugs, January 2002, 11(1), 1-13; C.Burnouf et al., Current Pharmaceutical Design, 2002, 8(14), 1255-1296; A.M.Doherty, Current Opinion Chem. Biol ., 1999, 3(4), 466-473; A.M. Vignola, Respiratory Medicine, 2004, 98, 495-503; D. Spina, Drugs, 2003, 63(23), 2575-2594; 및 이들이 참조 문헌; 및 G. Krishina et al., Expert Opinion on Investigational Drugs, 2004, 13(3), 255-267(특히 259 내지 261 페이지 및 102 내지 111번 및 201번 참고문헌 참조)].

15mg 일일 2회의 경구 투여된 PDE4 억제제 실로밀라스트(아리플로(Ariflo)^TM)는 COPD 환자에서 1초량(forced expiratory volume in 1s(FEV₁))을 증가시키는 것으로 보이며 (참조: C.H. Compton et al., The Lancet, 2001, vol. 358, 265-270), COPD 환자에서 항염증 효과를 갖는 것으로 추정된다 [참조: E. Gamble et al., Am. J. Respir . Crit . Care Med ., 2003, 168, 976-982]. 실로밀라스트에 대해서도 또한 하기 문헌을 참조하길 바란다:

PDE4 억제제 로플루밀라스트(roflumilast)는 COPD 환자에서 FEV₁을 약간 증가시키는 것으로 보인다 [참조: B. J. Lipworth, The Lancet, 2005, 365, 167-175, 및 이의 49 내지 50번 참조문헌].

COPD는 종종 만성 기관지염 및/또는 공기증에 기인된 기도 폐쇄의 존재로 특정된다[참조: S.L. Wolda, Emerging Drugs, 2000, 5(3), 309-319].

PDE4 억제제는 천식의 치료에 효과적인 것으로 사료된다 [참조: M.A.Giembycz, Drugs, Feb. 2000, 59(2), 193-212; Z. Huang et al., Current Opinion in Chemical Biology, 2001, 5: 432-438; H.J.Dyke et al., Expert Opinion on Investigational Drugs, January 2002, 11(1), 1-13; C.Burnouf et al., Current Pharmaceutical Design, 2002, 8(14), 1255-1296; A.M.Doherty, Current Opinion Chem . Biol ., 1999, 3(4), 466-473; P.J. Barnes, Nature Reviews - Drug Delivery, October 2004, 831-844; 및 이들의 참조문헌].

PDE4 억제제는 알레르기성 비염의 치료에 효과적인 것으로 사료된다 [참조: B.M. Schmidt et al., J Allergy & Clinical Immunology, 108(4), 2001, 530-536].

PDE4 억제제는 류마티스 관절염 및 다발성경화증의 치료에 효과적인 것으로 사료된다[참조: H.J.Dyke et al., Expert Opinion on Investigational Drugs, January 2002, 11(1), 1-13; C.Burnouf et al., Current Pharmaceutical Design, 2002, 8(14), 1255-1296; and A.M.Doherty, Current Opinion Chem . Biol ., 1999, 3(4), 466-473; 및 이들의 참조문헌].

PDE4 억제제는 진통성을 지녀서 통증의 치료에 유용한 것으로 제안되고 있다 [참조: A.Kumar et al., Indian J. Exp . Biol ., 2000, 38(1), 26-30].

본 발명에서, 치료 및/또는 예방은 인지 장애, 예를 들어, 신경학적 질환, 예컨대, 알츠하이머 병에서의 인지 장애의 치료 및/또는 예방일 수 있다. 예를 들어, 치료 및/또는 예방은, 예를 들어, 신경학적 질환에서의 인지력 증진을 포함할 수 있다 [참조: H.T.Zhang et al. in: Psychopharmacology, June 2000, 150(3), 311-316 and Neuropsychopharmacology , 2000, 23(2), 198-204; and T. Egawa et al., Japanese J. Pharmacol ., 1997, 75(3), 275-81].

PDE4 억제제, 예컨대, 롤리프람(rolipram)은 항우울성을 지니는 것으로 제안되었다 [참조: J. Zhu et al., CNS Drug Reviews, 2001, 7(4), 387-398; O'Donnell, Expert Opinion on Investigational Drugs, 2000, 9(3), 621-625; and H.T. Zhang et al., Neuropsychopharmacology , October 2002, 27(4), 587-595; J.M. O'Donnell and H.-T. Zhang, Trends Pharmacol . Sci., March 2004, 25(3), 158-163; and T.E. Renau, Curr . Opinion Invest. Drugs, 2004, 5(1), 34-39].

PDE4 억제제는 염증성 장 질환(예를 들어, 궤양성 결장염 및/또는 크론 병)의 치료에 대해서도 제안되었다 [참조: K.H. Banner and M.A. Trevethick, Trends Pharmacol. Sci., August 2004, 25(8), 430-436].

약제 조성물, 투여 경로 및 투여량

의약으로의 사용을 위해서, 본 발명의 화합물 또는 염은 약제 조성물로서 적합하게 투여된다.

따라서, 하나의 추가의 양태에서, 본 발명은 화학식(I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염, 및 하나 이상의 약제학적으로 허용되는 담체 및/또는 부형제를 포함하는 약제 조성물을 제공한다.

약제 조성물은 본원에 기재된 어떠한 상태, 특히 포유동물, 예컨대 사람에서의 아토피 피부염을 치료 및/또는 예방하는 데 사용될 수 있다.

본 발명은 또한 본원에 기재된 화학식(I)의 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염과, 하나 이상의 약제학적으로 허용되는 담체 및/또는 부형제를 혼합시키는 것을 포함하여, 화학식(I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염, 및 하나 이상의 약제학적으로 허용되는 담체 및/또는 부형제를 포함하는 약제 조성물을 제조하는 방법을 제공한다.

본 발명은 또한 상기 방법에 의해 제조된 약제 조성물을 제공한다.

화학식(I)의 화합물 및/또는 약제 조성물은, 예를 들어, 외부 국소(예, 피부 국소), 비경구(예, 정맥내, 피하, 또는 근육내), 흡입투여 또는 비내 투여에 의해 투여될 수 있다.

따라서, 약제 조성물은 외부 국소(예, 피부 국소), 비경구(예, 정맥내, 피하, 또는 근육내), 흡입투여 또는 비내 투여에 대해 적합할 수 있다. 약제 조성물은 바람직하게는 포유동물, 예컨대 사람에게로의 흡입 투여에 대해 적합하며, 더욱 바람직하게는 외부 국소(예, 피부 국소) 투여에 대해 적합하다. 흡입 투여는, 예를 들어, 에어로졸 또는 건조 분말 조성물에 의한 폐로의 국소 투여를 포함한다.

화학식(I)의 화합물 또는 이의 염이 경구적으로 투여될 수 있을 지라도, 경구 투여는 현재 바람직한 투여 경로로서 여겨지지 않고 있다. 왜냐하면, 이 데이터에 구속되는 것은 아니지만, 예비 시험으로부터, 화학식(I)의 화합물("유리 염기" 형태의 것)을, 대략적으로 제형화하여 [10% DMSO 및 90% PEG 200/물(70:30 PEG200: 물의 비율)] 체중 kg 당 상기 화합물 약 1mg의 투여 량에서 랫트로 경구 투여한 후에, 낮은 전신 노출이 나타나는 것으로 보이기 때문이다.

약제 조성물은 임의적으로 단위 투여형일 수 있다. 단위 투여형은, 예를 들어 (a) 건조 분말 흡입가능한 약제 조성물을 함유하는 파열되거나 박리 개방가능한 투여 용기(예를 들어, 다수개의 이러한 용기의 내부에는 적당한 흡입 용기가 배치되어 있음); (b) 예를 들어, 적당한 담체, 예컨대 수성 담체 중에 본 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염의 용액 또는 현탁액을 포함하거나, 예를 들어 동결건조된 비경구 약제 조성물(바이알 또는 샘플은 임의적으로 취입-충전-밀봉 공정을 이용하여 제조될 수 있다)을 함유하는 비경구 투여를 위한 바이알, 앰풀 또는 충전된 주사기; 또는 (c) (덜 바람직한) 경구 투여, 예를 들어 사람으로의 경구 투여를 위한 정제 또는 캡슐일 수 있다.

다르게는, 이러한 약제 조성물은 사용자에 의해 요망되는 다양한 양의 조성물, 예컨대 펴바를 수 있거나 분무가능한 외부 국소 조성물, 예컨대 크림, 연고,젤 또는 액체를 투여하는데 적합한 형태일 수 있다.

외부 국소 투여에 적합한 약제 조성물

본 발명의 약제 조성물은 바람직하게는, 포유동물, 예컨대 사람으로의 외부 국소(예를 들어, 피부 국소) 투여에 적합하다(예를 들어 이를 위해 구성된다). 보다 바람직하게는, 외부 국소 투여에 적합한 본 발명의 약제 조성물은 포유동물, 예컨대 사람에게서 아토피 피부염의 치료 및/또는 예방을 위한 것이다.

"외부 국소 투여"는 상기한 "의약 용도" 섹션에서 상기 정의되어 있다. 외부 국소 투여는 예를 들어, 특히 아토피 피부염을 앓고 있거나 이에 민감한 포유동물(예, 사람)에서, 질환 또는 상태, 예를 들어 아토피 피부염에 걸리거나 이에 민감한 피부의 그러한 부분에 대해 이루어질 수 있다.

외부 국소용 약제 조성물, 예를 들어 피부 국소용 약제 조성물은, 예를 들어 연고, 크림(일반적으로는 수중유형 또는 유중수형 약제 조성물, 일반적으로는 에멀젼), 수성 젤, 또는 마이크로에멀젼일 수 있다. 다르게는, 상기 약제 조성물은 DMSO 함유 용액, 예컨대 DMSO/아세톤 용액 또는 DMSO/수 용액(DMSO = 디메틸 설폭사이드)일 수 있으며; DMSO 함유 용액은 실험적인 동물 시험에 대해 사용될 수 있으나, 사람에게서 사용하는 것은 일반적으로 바람직하지 않다.

외부 국소 약제 조성물, 예를 들어 연고 또는 수중유형 또는 유중수형 조성물에서, 화학식(I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염은 적합하게는 조성물의 중량에 대해 0.05 내지 10%, 바람직하게는 0.1 내지 5%, 더욱 바람직하게는 0.1 내지 3%, 더욱더 바람직하게는 0.2 내지 3%(예를 들어, 약 0.5% 또는 약 2.5%), 가장 바람직하게는 0.2 내지 1.5%(예를 들어, 약 0.5%)로 존재한다(w/w).

하나의 임의적인 구체예에서, 화학식(I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염은 임의적으로, 예를 들어 마이크론화에 의해 수득되거나 수득가능한 입도 감소된 형태일 수 있다. 이것은 예를 들어 외부 국소(예를 들어, 피부 국소) 투여에 적합한(예를 들어, 이를 구성된) 약제 조성물에 사용될 수 있다. 보다 상세한 내용에 대해서는 하기된 흡입가능한 약제 조성물 섹션 내의 입도 감소에 관한 부 섹션을 참고하길 바란다.

수 용해도: 예비 스크린은 (대략적으로) 하기 과정에 의해 화합물의 수 용해도를 개략적으로 추정하기 위한 것이다: (i) DMSO 중의 본 발명의 화합물의 10mM 용액을 형성하는 단계; (ii) 약 19 부피부의 pH 7.4의 수성 인산염 완충된 식염수(PBS) 완충액과, 1 부피부의 약 10mM DMSO 용액을 혼합시킴으로써, DMSO 용액의 일부를 희석시키는 단계; (iii) 상기 혼합물을 원심 분리를 이용하여 여과시키는 단계; 및 (iv) 여과물 내에 용해된 화합물의 농도를 측정하는 단계. 일부 DMSO(약 5부피%)가 이러한 용해도 스크린 "여과물" 내에 존재한다 하더라도, 이러한 예비 스크린으로부터의 결과(약 60 ㎍의 화합물(I)/㎖)는, 화학식(I)의 화합물(유리 염기 형태의)이 대략 실온에서 대체적으로 중간 정도의 수 용해도를 가짐을 일반적으로 제안하는 것으로 판단된다.

친지질성: 화학식(I)의 화합물(유리 염기로서의)은 대략 2.5의 clogP(옥탄올/물 분배 계수(P)의 계산된 로그)를 갖는 것으로 사료되며, 이로부터 중간 정도의 친지질성이 제안된다. 화학식(I)의 화합물(유리 염기로서의)은 pH = 7.4에서 대략 3.4의 측정된 logD(D = 분배 계수, 여기서 log D는 일반적으로 이온화에 대해 보정된 log P이다)를 갖는 것으로 여겨지며, 이로부터 알맞은/중간 정도의 친지질성이 다시 제안된다.

가용화제 및/또는 피부-침투-증강제: 외부 국소 약제 조성물, 예를 들어 연고 또는 수중유형 크림 또는 유중수형 크림은 바람직하게는, 화학식(I)의 화합물 또는 이의 염의 가용화제 및/또는 피부 침투 증강제로서 작용하는 제제를 포함한다. 피부 침투 증강제 및/또는 가용화제는 예를 들어, 프로필렌 글리콜, 디에틸렌 글리콜 모노에틸 에테르(예를 들어, TRANSCUTOL^TM) 및/또는 카프릴로카프로일 매크로골글리세리드(예를 들어, LABRASOL^TM), 바람직하게는 프로필렌 글리콜일 수 있다. 가용화제 및/또는 피부 침투 증강제는 적합하게는 DMSO를 포함하지 않는다. 가용화제 및/또는 피부 침투 증강제는 바람직하게는 가용화제 및 피부 침투 증강제 양자를 포함하고/하거나, 이들은 조성물의 중량에 대해 적합하게는 0.5 내지 50%, 바람직하게는 5 내지 50%, 더욱 바람직하게는 7 내지 30%, 더욱더 바람직하게는 7 내지 25%, 가장 바람직하게는 약 10 내지 약 20%(예를 들어, 약 10% 또는 약 20%)로 존재한다.

피부 침투 증강제는 피부를 통해 화학식(I)의 화합물 또는 이의 염("활성 제" 또는 "약물")을 전달하기 위한 것이다. 약물의 가용화 또한 돕는다. 가용화제 및/또는 피부 침투 증강제는 이상적으로는 (a) 안전하고/하거나 내약력이 있어야 하고(tolerable), (b) 효과적인 피부 침투 증강제로서 작용할 수 있도록 가능한한 낮은 피부 자극 가능성을 지녀야 하며, (c) 약제학적 활성 성분과 상용성이어야 한다. 상기 제제는 바람직하게는 가용화제 및 피부 침투 증강제 양자로서 작용함을 주지하길 바란다.

계면활성제: 외부 국소 약제 조성물, 예를 들어 연고 또는 수중유형 크림 또는 유중수형 크림은, 예를 들어 2개 이상의 상을 갖는 조성물을 에멀젼화시키기 위해, 바람직하게는 계면활성제(예를 들어, 에멀젼으로서)를 포함한다. 총 계면활성제 함량은, 예를 들어, 조성물의 중량(w/w)에 대해 0.3 내지 20%, 예를 들어 0.5 내지 15% 또는 0.5 내지 12% 또는 0.5 내지 10% 또는 1 내지 12%, 또는 3 내지 10% (w/w)일 수 있다. 상기 계면활성제는 예를 들어, 하기한 성분 중 하나 이상을 포함할 수 있다: 폴리옥실릴 C₁₂ _-22 알킬 에테르(예를 들어, 폴리옥실 C₁₄ _-20알킬 에테르, 예컨대 폴리옥시 세틸 에테르 또는 폴리옥실 스테아릴 에테르)(예를 들어, 0.5 내지 10% w/w, 예를 들어 2.5 내지 10% w/w, 예컨대 약 5 내지 약 8% w/w로 존재함), 글리세롤 모노스테아레이트(예를 들어, 아라셀(Arlacel) 165^TM)(예를 들어, 0.5 내지 10% w/w, 예를 들어 약 2% w/w로 존재함), 소르비탄 모노스테아레이트(예를 들어, 스판(Span) 60^TM)(예를 들어, 0.05 내지 10% w/w, 예를 들어 약 1% w/w로 존재함), 세틸 알코올 및/또는 스테아릴 알코올(예를 들어, 여기에서 존재하는 임의의 세틸 알코올 및 임의의 스테아릴 알코올의 총 량은 0.1 내지 15% w/w, 예를 들어 1 내지 10% w/w, 예컨대 약 2 내지 약 5% w/w), 및 나트륨 도데실 설페이트(SDS)(예를 들어, 0.3 내지 2% w/w, 예컨대 약 1% w/w로 존재함). 폴리옥실 스테아릴 에테르(스테아레쓰)는 예를 들어, 폴리옥실 2 스테아릴 에테르(스테아레쓰 2) 또는 폴리옥실 21 스테아릴 에테르(스테아레쓰 21)일 수 있다.

DMSO -함유 용액: 하나의 가능한 외부 국소 약제 조성물은 DMSO 함유 용매, 예컨대 DMSO/아세톤 또는 DMSO/물 중에서 약 0.5 내지 약 2.5% w/w로 존재하는 화학식(I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염의 용액; 예를 들어, DMSO/아세톤(1:1) 중에 약 0.5 내지 약 2.5% w/w로 존재하는 화학식(I)의 화합물 또는 이의 염의 용액이다. 종종 피부 침투성을 높일 수 있는 DMSO-함유 용액은 종종 동물에서의 사용을 위한 양호한 실험적 전임상 제형이나, 이들의 피부 자극성으로 인해 일반적으로 사람, 예컨대 환자, 예를 들어 아토피 피부염 환자에게서 사용하기에 덜 적합해진다.

연고 및 크림(및 오일 상): 외부 국소 약제 조성물은 연고 또는 수중유형 크림 또는 유중수형 크림일 수 있다. 연고 또는 크림은 전형적으로 오일 상(오일성 연고 베이스)을 함유한다. 오일 상(연고 베이스)은 전형적으로 오일 및/또는 지방을 포함하며, 이것은 바람직하게는 피부에 도포하기에 적절한 점도를 갖는다.

바람직하게는, 백색의 연질 파라핀(백색 페트롤라텀) 및/또는 광유(예컨대 액상 파라핀)을 포함하거나 이 자체인 오일이 사용될 수 있다. (광유는 또한 가용화제 및/또는 연화제로서 사용될 수 있다.) 백색의 연질 파라핀(백색 페트롤라텀)은 다양한 등급의 것, 예를 들어 펜레코 리젠트(Penreco Regent) 화이트 등급, 펜레코 스노우 화이트 등급, 또는 펜레코 울티마 화이트 등급(이들 모두 펜레코 제품임)일 수 있으며, 특히 높은 융점의 백색의 연질 파라핀(예를 들어, 펜레코 울티마 화이트 등급)일 수 있다. 미세결정성 왁스 또는 밀랍 또는 밀랍 대체물이 오일 상 내에서의 오일/지방으로서 사용될 수 있다.

다르게는 또는 부가적으로, 하나 이상의 지방과 유사한 직쇄 또는 측쇄의 모노- 또는 디-알킬 에스테르, 예컨대 이소프로필 미리스테이트, 이소프로필 팔미테이트, 디이소프로필 아디페이트, 이소세틸 스테아레이트, 이소스테아릴 이소스테아레이트, 도데실 올레이트, 부틸 스테아레이트, 2-에틸헥실 팔미테이트, 코코넛 지방산의 프로필렌 글리콜 디에스테르, 또는 2-에틸 헥산산과, 세틸 또는 스테아릴 알코올의 배합물의 혼합된 에스테르(예를 들어, 크로다몰(Crodamol) CAP로서 공지되어 있음)가 오일 상(이들의 일부는 또한 가용화제 및/또는 계면활성제임) 중에서 사용될 수 있다. 이들은 요구되는 특성에 따라 단독으로 또는 배합되어 사용될 수 있다.

오일 상(오일성 연고 베이스)은 연고 내에서는, 예를 들어 25 내지 85% w/w(예를 들어, 50 내지 80% w/w), 유중수형 크림(예를 들어, 에멀젼)에서는 25 내지 85% w/w(예를 들어, 35 내지 70% w/w), 또는 유중수형 크림(예를 들어, 에멀젼)에서는 8 내지 55% w/w(예를 들어, 10 내지 45% w/w)로 존재할 수 있다.

예시적 연고: 예시적인 외부-국소 약제 조성물은 하기 성분을 포함하는 연고이다:

- 0.1 내지 5% w/w(예를 들어, 0.1 내지 3% w/w 또는 0.2 내지 1.5% w/w)로 존재하는 화학식(I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염;

- 25 내지 99% w/w 또는 25 내지 85% w/w 또는 50 내지 80% w/w로 존재하는 오일 상(오일성 연고 베이스)(예를 들어, 상기 오일 상은 25 내지 75% w/w 또는 45 내지 75% w/w로 존재하는 백색 페트롤라텀을 포함하며, 임의적으로 또한 2.5 내지 15% w/w, 예컨대 4 내지 12% w/w로 존재하는 광유(예를 들어, 가용화제 및 연화제로서의)를 포함할 수 있다);

- 총 0.5 내지 10% w/w 또는 3 내지 10% w/w로 존재하는 하나 이상의 계면활성제(예를 들어, 폴리옥실릴 스테아릴 에테르); 및

- 총 0.5 내지 50% w/w, 예컨대 5 내지 50% w/w 또는 7 내지 30% w/w로 존재하는 피부 침투 증강제로서 작용하는(바람직하게는 가용화제 및 피부 침투 증강제 양자로서 작용하고/작용하거나, 바람직하게는 프로필렌 글리콜과 같은 친수성인) 하나 이상의 제제; 및

- 예를 들어, 총 0.001 내지 2% w/w, 예컨대 0.02 내지 2% w/w로 존재하는, 임의적으로 사용되는 하나 이상의 항산화제(예를 들어, 부틸화된 히드록시아니솔); 및

- 예를 들어, 총 0.01 내지 4% w/w, 예컨대 0.05 내지 1% w/w로 존재하는, 임의적으로 사용되는 하나 이상의 보존제(예를 들어, 0.05 내지 2% w/w로 존재하는 메틸파라벤 및/또는 0.01 내지 2% w/w로 존재하는 프로필렌파라벤).

오일 상 및 침투 증강제를 포함하는 상기 예시적 조성물은 임의적으로는 균질한 단일 상일 수 있다. 그러나, 상기 예시적인 연고 조성물의 일 구체예에서, 예를 들어 프로필렌 글리콜 또는 또 다른 친수성 가용화제 및 침투 증강제를 사용하는 경우에, 오일 상(오일성 연고 베이스), 및 친수성 가용화제 및 침투 증강제를 함유하는 친수성 상(예를 들어, 프로필렌-글리콜-함유 상)은 에멀젼화되어 연고 에멀젼을 형성하였다.

2개의 상을 갖는 연고 조성물은 임의적으로 에멀젼 공정을 이용하여 제조될 수 있으며, 이로써 친수성 상(예를 들어, 프로필렌-글리콜 함유 상) 및 오일 상은 먼저 개별 용기에서 제조된다. 친수성 상은 임의적으로 침투 증강제, 예컨대 프로필렌 글리콜, 및 임의적으로 일부 또는 전부의 화학식(I)의 화합물 또는 이의 염을 함유할 수 있다. 상기한 오일 상은 임의적으로 계면활성제를 함유할 수 있다. 두 상의 온도는 고온, 예컨대 약 55 내지 90℃, 또는 바람직하게는 70 초과 내지 90℃에서 유지되며, 오일 상의 온도는 오일 상을 용융시키기에 충분히 높다(예를 들어, 70 초과 내지 90℃). 고온인 하나의 상을 또 다른 상에, 에멀젼화가 일어나도록 예를 들어 고전단 믹서를 사용하여 혼합하면서 첨가시키고, 바람직하게는 온도는 70℃ 초과, 예컨대 70℃ 초과 내지 90℃를 유지시킨다. 생성되는 연고 에멀젼을, 예를 들어 약 15 내지 35℃, 예컨대 약 18 내지 30℃로 냉각시키면서, 예를 들어 저속에서 연속하여 교반하는 것이 바람직하다. 이후, 연고 에멀젼은 임의적으로 제조 용기로부터 분배되어 1차 포장, 예를 들어 튜브 또는 샤셰로 충전될 수 있다.

임의적으로, 연고는 오일성 연고 베이스 대신에 또는 이와 함께, 예를 들어 25 내지 98% w/w, 예컨대 50 내지 95% w/w로 존재하는 폴리에틸렌 글리콜 베이스를 포함할 수 있다.

크림: 외부 국소용 약제 조성물은 크림, 예를 들어 유중수형 크림 또는 수중유형 크림일 수 있다. 크림은 때때로 연고보다 더 유동적일 수 있으며, 때때로는 더욱 많은 양의 수분을 제공할 수 있고, 따라서 원칙적으로는 특정 경우에 아토피 피부염을 앓는 환자에게 개선되고/되거나 양호한 효능을 제공할 수 있게 한다.

유중수형 크림: 이들은 대개 연고에 비해 증가된 수분 함량을 갖는다. 바람직하게는, 유중수형 크림은 유중수형 크림 에멀젼이다. 즉, 바람직하게는, 유중수형 크림 중의 오일 상 및 수성 상이 에멀젼화되어 유중수형 크림 에멀젼을 형성하였다.

예시적 외부-국소용 약제 조성물은 하기 성분을 포함하는 유중수형 크림(예를 들어, 크림 에멀젼)이다:

- 25 내지 85% w/w 또는 35 내지 70% w/w로 존재하는 오일 상(오일성 연고 베이스)(예를 들어, 상기 오일 상은 25 내지 75% w/w 또는 30 내지 65% w/w로 존재하는 백색 페트롤라텀을 포함하며, 임의적으로 또한 2.5 내지 15% w/w, 예컨대 4 내지 12% w/w로 존재하는 광유(예를 들어, 가용화제 및 연화제로서의)를 포함한다);

- 2 내지 30% w/w, 예를 들어 5 내지 25% 또는 10 내지 22% w/w로 존재하는 물;

- 총 0.5 내지 12% w/w, 예컨대 3 내지 10% w/w로 존재하는 하나 이상의 계면활성제(예를 들어, 폴리옥실릴 스테아릴 에테르); 및

- 예를 들어, 총 0.01 내지 4% w/w, 예컨대 0.05 내지 1% w/w로 존재하는, 임의적으로 사용되는 하나 이상의 보존제(예를 들어, 0.05 내지 2% w/w로 존재하는 메틸파라벤 및/또는 0.01 내지 2% w/w로 존재하는 프로필파라벤).

수중유형 크림: 이들은 대개 연고 및 유중수형 크림에 비해 증가된 수분 함량을 갖는다. 바람직하게는, 수중유형 크림은 수중유형 크림 에멀젼이다. 즉, 바람직하게는, 수중유형 크림 중에서, 오일 상 및 수성 상이 에멀젼화되어 수중유형 크림 에멀젼이 형성되었다.

바람직한 수중유형 크림은 고-차단성(high occulsion) 크림이며, 이것을 피부에 국소 투여한 후에, 피부 및/또는 크림으로부터의 수분 손실이 피부의 충분히 높은 커버력에 의해 및/또는 도포 부위에 충분한 배리어를 제공함으로써 감소되거나 제한된다.

바람직하게는, 수중유형 크림은 하나 이상의 연화제(수화제), 예컨대 실리콘(예를 들어, 디메티콘 360 또는 디메티콘 20), 고점도 왁스, 예컨대 미세결정성 왁스, 및/또는 광유를 함유한다. 충분히 높은 수분 함량, 예를 들어 15 내지 60% w/w, 20 내지 50% w/w, 또는 25 내지 40% w/w가 바람직하다.

예시적 외부-국소용 약제 조성물은 하기 성분을 포함하는 수중유형 크림(예를 들어, 크림 에멀젼)이다:

- 5 내지 60% w/w 또는 바람직하게는 20 내지 60% w/w 또는 30 내지 60% w/w 또는 더욱 바람직하게는 30 내지 55% w/w로 존재하며, 연화제로서 작용할 수 있는 하나 이상의 성분을 함유하는 오일 상(오일성 연고 베이스);

- 12 내지 75% w/w 또는 15 내지 75% w/w, 또는 15 내지 60% w/w, 바람직하게는 15 내지 50% w/w 또는 20 내지 40% w/w로 존재하는 물;

- 총 0.5 내지 12% w/w, 예컨대 3 내지 10% w/w로 존재하는 하나 이상의 계면활성제; 및

- 총 0.5 내지 50% w/w, 바람직하게는 5 내지 50% w/w 또는 7 내지 25% w/w로 존재하는 피부 침투 증강제로서 작용하는(바람직하게는 가용화제 및 피부 침투 증강제 양자로서 작용하고/작용하거나, 바람직하게는 프로필렌 글리콜과 같은 친수성인) 하나 이상의 제제; 및

- 예를 들어, 0.5 내지 20% w/w, 예컨대 3 내지 12% w/w로 존재하는, 임의적으로 사용되는 하나 이상의 가용화제(예를 들어, 이소프로필 미리스테이트); 및

- 예를 들어, 총 0.05 내지 5% w/w로 존재하는, 임의적으로 사용되는 하나 이상의 완충제(예를 들어, 시트르산 및/또는 이염기산 인산 나트륨).

상기한 예시적 수중유형 크림 조성물에서, 오일 상은 바람직하게는 15 내지 50% w/w 또는 20 내지 45% w/w로 존재하는 광유(예를 들어, 연화제 및 가용화제로서)를 포함하고/하거나, 5 내지 25% w/w, 예컨대 8 내지 15% w/w로 존재하는 고점도 왁스, 예컨대 미세결정성 왁스(예를 들어, 연화제로서)를 포함하고/하거나, 0.5 내지 20% w/w, 예컨대 0.5 내지 10% w/w 또는 1 내지 5% w/w로 존재하는 실리콘(예컨대 디메티콘, 예를 들어 디메티콘 360 또는 디메티콘 20, 예를 들어 연화제로서)을 포함한다.

상기한 예시적인 수중유형 크림 조성물에서, 하나 이상의 계면활성제는 바람직하게는 하기 성분을 포함한다: 0.5 내지 10% w/w로 존재하는 글리세롤 모노스테아레이트, 및/또는 0.05 내지 10% w/w로 존재하는 소르비탄 모노스테아레이트, 및/또는 총 0.1 내지 15% w/w 또는 1 내지 10% w/w로 존재하는 [세틸 알코올 및/또는 스테아릴 알코올].

크림 에멀젼, 예를 들어 유중수형 또는 수중유형 크림 에멀젼은 수성 상이 제조되는, 예를 들어 에멀젼화 전에 제조되는 공정에 의해 제조될 수 있다. 수성 상은 일반적으로 물 및 가용화제 및/또는 피부 침투 증강제, 예컨대 프로필렌 글리콜을 함유하며, 임의적으로 화학식(I)의 화합물 또는 이의 염의 일부 또는 전부를 함유하고/하거나, 임의적으로 계면활성제를 함유한다. 예를 들어, 백색 페트롤라텀 및/또는 광유를 함유하고/하거나, 임의적으로 계면활성제를 함유하는 오일 상은 개별 용기로 제조될 수 있다. 두 상의 온도는 고온, 예컨대 약 55 내지 90℃, 또는 바람직하게는 70 초과 내지 90℃에서 유지되며, 오일 상의 온도는 오일 상을 용융시키기에 충분히 높다(예를 들어, 70 초과 내지 90℃). 고온인 하나의 상을 또 다른 상에, 에멀젼화가 일어나도록 예를 들어 고전단 믹서를 사용하여 혼합하면서 첨가시키고, 바람직하게는 온도는 70℃ 초과, 예컨대 70℃ 초과 내지 90℃를 유지시킨다. 생성되는 에멀젼을, 예를 들어 약 15 내지 35℃, 예컨대 약 18 내지 30℃로 냉각시키면서, 예를 들어 저속에서 연속하여 교반하는 것이 바람직하다. 이후, 크림 에멀젼은 임의적으로 제조 용기로부터 분배되어 1차 포장, 예를 들어 튜브 또는 샤셰로 충전될 수 있다.

전형적으로, 외부 국소 투여에 적합한 본 발명의 약제 조성물은 일일 1회, 일일 2회 또는 일일 3회 이상으로 외부 신체 부분(들), 예를 들어 병발된(diseased) 피부, 예를 들어 아토피 피부염이 병발된 피부 부위에서와 같은 피부 상에 투여될 수 있다.

흡입가능한 및 비내투여가능한 약제 조성물, 및 입도 감소

비내 또는 흡입 투여에 적합한(예를 들어, 이를 위해 구성된) 조성물은 통상적으로 에어로졸, 적하제, 겔, 또는 건조 분말로서 제형될 수 있다.

예를 들어, 흡입 투여를 위한 에어로졸 제형은 약제학적으로 허용되는 수성 또는 비수성 용매중의 활성 물질의 용액 또는 미세 현탁액을 포함할 수 있다. 에어로졸 제형은 밀봉된 용기에 멸균 형태로 단일 또는 다수용량형으로 존재할 수 있으며, 카트리지 또는 리필의 형태로 분무 장치 또는 흡입기와 함께 사용될 수 있다. 또한, 밀봉된 용기는 일단 용기 내용물이 배출되면 폐기하도록 되어 있는, 단일의 분배 장치, 예컨대, 계량 밸브(계량된 용량 흡입기)가 장착된 단일 용량 비내 흡입기 또는 에어로졸 분배기일 수 있다.

용량형이 에어로졸 분배기를 포함하는 경우, 이는 바람직하게는 압축된 공기, 이산화탄소, 유기 추진제, 예컨대, 클로로플루오로카본(CFC) 또는 더욱 바람직하게는 히드로플루오로카본(HFC)과 같은 압력하의 적합한 추진제를 함유한다. 적합한 CFC 추진제에는 디클로로디플루오로메탄, 트리클로로플루오로메탄 및 디클로로테트라플루오로에탄을 포함한다. 적합한 HFC 추진제에는 1,1,1,2,3,3,3-헵타플루오로프로판 및 1,1,1,2-테트라플루오로에탄이 포함된다. 에어로졸 용량형은 또한 펌프 분무기의 형태를 취할 수 있다.

입도 감소: 흡입 투여에 적합한(예를 들어, 이를 위해 구성된) 약제 조성물에 있어서, 화학식(I)의 화합물 또는 이의 염은 입도 감소된 형태가 바람직하다. 이러한 입도 감소된 형태는 예를 들어, 마이크론화에 의해서 얻거나 얻을 수 있다. 마이크론화는 일반적으로 화합물/염에, 종종 사이클론 부품을 포함하는 고속 환형 또는 나선형/와류형 에어스트림 중의 충돌 및 마찰력을 가함을 포함한다. 입도-감소된(예를 들어, 마이크론화된) 화합물 또는 염의 바람직한 입도는 약 0.5 내지 약 10 마이크론, 예를 들어, 약 1 내지 약 7 마이크론(예를 들어, 레이저 회절을 이용하여 측정)의 D50값에 의해 정의된다. 예를 들어, 화학식(I)의 화합물 또는 염은, 예를 들어, 레이저 회절을 이용하여 측정하는 경우, 약 0.3 내지 약 3 마이크론(예, 약 0.5 내지 약 2 마이크론, 또는 약 1 마이크론)의 D10, 및/또는 약 0.5 내지 약 10 마이크론 또는 약 1 내지 약 7 마이크론(예를 들어, 약 2 내지 5 마이크론 또는 약 2 내지 약 4 마이크론)의 D50, 및/또는 약 1 내지 약 30 마이크론 또는 약 2 내지 약 20 마이크론, 또는 약 3 내지 약 15 마이크론(예, 약 5 내지 15 마이크론 또는 약 5 내지 10 마이크론)의 D90에 의해 정의되는 입도를 갖는 것이 바람직하다.

입도 측정에 있어서, D90, D50 및 D10은 각각 물질의 90%, 50% 및 10%가 특정된 마이크론 크기 미만임을 의미한다. D50은 중위 입도이다. DV90, DV50 및 DV10은 각각 물질의 90 부피%, 50 부피% 및 10 부피%가 특정된 마이크론 크기 미만임을 의미한다. DM90, DM50 및 DM10은 각각 물질의 90중량%, 50중량% 및 10중량%가 특정된 마이크론 크기 미만임을 의미한다.

입도의 레이저 회절 측정은 건식 방법(레이저 빔을 가로지르는 기류중의 화합물/염의 현탁액) 또는 습식 방법[레이저 빔을 가로지르는 액체 분산 매질, 예컨대, 이소옥탄 또는 (예, 화합물이 이소옥탄에 가용성인 경우) 물중의 0.1% 트윈 80(Tween 80)중의 현탁액]을 이용할 수 있다. 레이저 회절에 있어서, 입도는 바람직하게는 프라운호퍼 계산법(Fraunhofer calculation)으로 계산되고/거나; 바람직하게는 말번 마스터사이저 또는 심파텍 장치(Malvern Mastersizer or Sympatec apparatus)가 측정에 사용된다. 예를 들어, 레이저 회절에 의한 입도 측정 및/또는 분석은 하기한 것 모두 또는 이들 중 임의의 것 (바람직하게는 모두)을 이용할 수 있다: 말번 마스터사이저 롱베드 버전, 수중의 0.1% 트윈 80의 분산 매질, 약 1500 rpm의 교반 속도, 최종 분산 및 분석 전의 약 3분의 음파처리, 300 RF(Reverse Fourier) 렌즈, 및/또는 말번 소프트웨어를 이용한 프라운호퍼 계산.

마이크론화의 소규모의 비제한적인 실시예에 대해서는 하기되는 마이크론화에 대한 실시예를 참조하길 바란다.

건조 분말 흡입 가능한 조성물: 흡입 투여에 적합한 (예를 들어, 이를 위해 구성된) 약제 조성물에 있어서, 약제 조성물은 예를 들어 건조 분말 흡입 가능한 조성물일 수 있다. 이러한 조성물은 분말 염기, 예컨대, 락토오스 또는 전분, 화학식(I)의 화합물 또는 이의 염(바람직하게는 입도-감소된 형태, 예를 들어, 마이크론화된 형태), 및 임의적으로 성능 개질제, 예컨대, L-류신, 만니톨, 트레할로스, 마그네슘 스테아레이트 및/또는 셀로바이오스 옥타아세테이트(예를 들어, 셀로바이오스 옥타아세테이트의 알파-D-이성질체, 예를 들어 알드리치 사로부터 시판되는 것)를 포함할 수 있다. 셀로바이오스 옥타아세테이트 및 저장 안정성에 대해서는 WO 03/088943호를 참고하길 바란다.

바람직하게는, 건조 분말 흡입 가능한 조성물은 락토오스와 화학식(I)의 화합물 또는 이의 염의 건조 분말 블렌드를 포함한다. 락토오스는 바람직하게는 락토오스 수화물, 예를 들어, 락토오스 일수화물이고/이거나, 바람직하게는 흡입 등급 및/또는 화인-등급(fine-grade) 락토오스이다. 바람직하게는, 락토오스의 입도는 90% 이상(중량 또는 부피)의 락토오스 입자가 직경 1000 마이크론(마이크로미터) 미만(예, 10 내지 1000 마이크론, 예를 들어, 30 내지 1000 마이크론) 및/또는 50% 이상의 락토오스 입자가 직경 500 마이크론 미만(예를 들어, 10 내지 500 마이크론)에 의해 규정된다. 더욱 바람직하게는, 락토오스의 입도는 90% 이상의 락토오스 입자가 직경 300 마이크론 미만(예, 10 내지 300 마이크론, 예를 들어, 50 내지 300 마이크론) 및/또는 50% 이상의 락토오스 입자가 직경 100 마이크론 미만에 의해 규정된다. 임의적으로, 락토오스의 입도는 90% 이상의 락토오스 입자가 직경 100 내지 200 마이크론 미만 및/또는 50% 이상의 락토오스 입자가 직경 40 내지 70 마이크론 미만에 의해 규정된다. 약 3 내지 약 30%(예, 약 10%)(중량 또는 부피)의 입자가 직경 50 마이크론 미만 또는 20 마이크론 미만인 것이 적합하다. 예를 들어, 이로 한정되는 것은 아니지만, 적합한 흡입-등급 락토오스는 E9334 락토오스(10% 화인)[입수처: Borculo Domo Ingredients, Hazenplein 25, 8017 JD Zwolle, Netherlands].

건조 분말 흡입 가능한 조성물에서, 화학식(I)의 화합물 또는 이의 염은 예를 들어 조성물 중량의 약 0.1% 내지 약 70%(예, 약 1% 내지 약 50%, 예를 들어, 약 5% 내지 약 40%, 예를 들어, 약 20 내지 약 30%)로 존재할 수 있다.

건조 분말 흡입 가능한 조성물의 예시적인 비제한적 실시예는 하기한 조성물 실시예에 제공되어 있다.

건조 분말 흡입 장치: 임의적으로, 특히, 건조 분말 흡입 가능한 조성물에 있어서, 흡입 투여를 위한 약제 조성물은 적합한 흡입 장치 내에 스트립 또는 리본으로 세로로 장착된 다수의 밀봉된 용량 용기(예, 건조 분말 조성물을 함유) 내로 혼입될 수 있다. 용기는 필요시에 파열 가능하거나 박리 개방 가능하고, 예를 들어 건조분말 조성물의 용량은 장치, 예컨대, 글락소스미스클라인(GlaxoSmithKline)에 의해서 시판되는 DISKUS ^TM 장치를 통해서 흡입에 의해 투여될 수 있다. DISKUS ^TM흡입 장치는 일반적으로 사실상 GB 2,242,134 A 호에 기재되어 있다. 그러한 장치에서, 분말 형태의 약제 조성물을 위한 하나 이상의 용기(하나 이상의 용기는 바람직하게는 스트립 또는 리본으로 세로로 장착된 다수의 밀봉된 용량 용기이다)는 서로 간에 박리 가능하게 고정된 두 부재 사이에 형성되고; 상기 장치는 하나 이상의 용기에 대한 개방 스테이션을 형성하는 수단; 용기를 개방하도록 개방 스테이션에서 떨어져 있는 부재의 박리를 위한 수단; 및 개방된 용기와 연통되며, 사용자가 개방된 용기로부터 분말 형태로 약제 조성물을 흡입할 수 있는 출구를 포함한다.

경구 또는 비경구 투여를 위한 약제 조성물

비경구(예를 들어, 정맥내, 피하, 또는 근육내) 투여에 적합한 (예를 들어, 이를 위해 구성된) 약제 조성물은 멸균성의 비경구적으로 허용되는 수성 담체(예, 멸균수) 또는 비경구적으로 허용되는 오일중의 본 화합물 또는 약제학적으로 허용되는 염의 용액 또는 현탁액을 포함할 수 있다. 다르게는, 상기 용액은 동결건조될 수 있다. 비경구 투여에 대해 적합한 (예를 들어, 이를 위해 구성된) 동결건조된 약제 조성물은 사용시에, 임의적으로, 투여 직전에 적합한 용매, 예를 들어 멸균수 또는 멸균성의 비경구적으로 허용되는 수성 용액으로 재구성될 수 있다.

상기한 바와 같이 경구 투여는 바람직하지 않다. 그러나, 경구 투여에 적합한 약제 조성물은 액체 또는 고체일 수 있다; 예를 들어 이것은 시럽, 현탁액 또는 에멀젼, 정제, 캡슐 또는 로젠지일 수 있다.

액체 제형은 임의적으로, 약제학적으로 허용되는 액체 담체(들), 예를 들어 물, 에탄올 또는 글리세린과 같은 수성 용매, 또는 폴리에틸렌 글리콜 또는 오일과 같은 비수성 용매 중의 본 화합물 또는 약제학적으로 허용되는 염의 현탁액 또는 용액으로 구성될 수 있다. 또한 상기 제형은 현탁제, 보존제, 향미제 및/또는 착색제를 함유할 수 있다.

바람직하지는 않지만 정제로서의 경구 투여용 약제 조성물은, 정제 제형을 제조하기에 적합한 하나 이상의 약제학적으로 허용되는 담체 및/또는 부형제를 포함할 수 있다. 담체는 예를 들어 락토오스, 셀룰로오스(예를 들어, 미세결정성 셀룰로오스) 또는 만니톨이거나 또는 이를 포함할 수 있다. 또한 정제는 하나 이상의 약제학적으로 허용되는 부형제, 예를 들어 히드록시프로필메틸셀룰로오스 또는 포비돈(폴리비닐피롤리돈)과 같은 결합제, 윤활제, 예컨대 마그네슘 스테아레이트와 같은 알칼리 토금속 스테아레이트, 및/또는 나트륨 전분 글리콜레이트, 크로스카르멜로오스 나트륨 또는 크로스포비돈(가교된 폴리비닐피롤리돈)과 같은 정제 붕해제를 또한 함유하거나 대신에 함유할 수 있다. 정제로서의 약제 조성물은 (i) 본원에 정의된 화학식(I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을, 하나 이상의 약제학적으로 허용되는 담체 및/또는 부형제와 혼합시키는 단계, (ii) 생성된 혼합물(이는 일반적으로 분말 형태임)을 정제로 압축시키는 단계, 및 (iii) 임의적으로 정제를 정제 필름-코팅 재료로 코팅시키는 단계를 포함하는 방법에 의해 제조될 수 있다.

바람직하지 않은 캡슐로서의 경구 투여용 약제 조성물은 캡슐화 공정을 사용하여 제조될 수 있다. 예를 들어, 활성 성분을 함유하는 펠릿 또는 분말은 적합한 약제학적으로 허용되는 적합한 담체를 사용하여 제조한 다음, 경질 젤라틴 캡슐에 충전시킬 수 있다. 다르게는, 분산액 또는 현탁액은 임의의 적합한 약제학적으로 허용되는 담체, 예를 들어 수성 검 또는 오일을 사용하여 제조한 다음, 이 분산액 또는 현탁액을 연질 젤라틴 캡슐에 충전시킬 수 있다.

투여 계획

외부 국소 투여에 적합한 (예를 들어, 이를 위해 구성된) 약제 조성물, 예를 들어 연고 또는 수중유형 또는 유중수형 조성물에서, 화학식(I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염은 조성물의 중량에 대해 0.05 내지 10%, 바람직하게는 0.1 내지 5%, 더욱 바람직하게는 0.1 내지 3%, 더욱더 바람직하게는 0.2 내지 3%(예를 들어, 약 0.5% 또는 약 2.5%), 가장 바람직하게는 0.2 내지 1.5%(예를 들어, 약 0.5%)로 존재할 수 있다. 전형적으로, 외부 국소용 약제 조성물은 일일 1회, 일일 2회, 또는 일일 3회 이상으로 외부 신체 부분(들), 예를 들어 병발된 피부 부위와 같은 피부에 투여될 수 있다. 투여 량은 일반적으로, 예컨대 실질적으로 병발된 피부 부위를 커버하는 정도이다.

약제 조성물에서, 경구 및 비경구 투여를 위한 하나 또는 각각의 용량 단위는 유리 염기로서 계산하여, 예를 들어 0.01 내지 3000mg, 예를 들어 0.5 내지 1000mg의 화학식(I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 함유할 수 있다. 비내 또는 흡입 투여를 위한 하나 또는 각각의 용량 단위는 유리 염기로서 계산하여 예를 들어 0.001 내지 50mg, 더욱 바람직하게는 0.01 내지 5mg의 화학식(I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 함유할 수 있다.

비경구 또는 경구 조성물로 사용되는 경우에, 본 발명의 약제학적으로 허용되는 화합물 또는 이의 염은 임의적으로, 유리 염기로서 계산하여 일일 0.001mg 내지 50mg/체중 kg(mg/kg/일), 예를 들어 0.01 내지 20 mg/kg/일 또는 0.03 내지 10 mg/kg/일 또는 0.1 내지 2 mg/kg/일의 화학식(I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염의 일일 경구 또는 비경구 용량으로 포유동물(예, 사람)에게 투여될 수 있다.

흡입 또는 비내 조성물로 사용되는 경우에, 본 발명의 약제학적으로 허용되는 화합물 또는 염은 임의적으로, 유리 염기로서 계산하여 0.0001 내지 5mg/kg/일 또는 0.0001 내지 1mg/kg/일, 예를 들어, 0.001 내지 1 mg/kg/일 또는 0.001 내지 0.3 mg/kg/일 또는 0.001 내지 0.1 mg/kg/일 또는 0.005 내지 0.3 mg/kg/일의 화학식(I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염의 일일 비내 또는 흡입 용량으로 포유동물(예, 사람)에게 투여될 수 있다.

본 발명의 약제학적으로 허용되는 화합물 또는 염은 임의적으로, 유리 염기로서 계산하여, 예를 들어, 일일 0.01mg 내지 3000mg 또는 0.5 내지 1000mg, 예를 들어, 2 내지 500mg의 경구 또는 비경구 용량; 또는 일일 0.001 내지 300mg 또는 0.001 내지 50 mg 또는 0.01 내지 30 mg 또는 0.01 내지 5 mg 또는 0.02 내지 2 mg의 비내 또는 흡입 용량의 일일 용량(성인 환자의 경우)으로 사람에게 투여될 수 있다.

조합물

본 발명에 따른 화합물, 염, 및/또는 약제 조성물은 또한 다른 치료학적 활성제, 예를 들어, β₂아드레노리셉터 효능제, 항히스타민제, 항알레르기제, 항염증 제, 항감염제 또는 면역억제제와 함께 사용될 수 있다.

따라서, 추가 양태에서, 본 발명은 화학식(I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 다른 치료학적 활성제, 예를 들어, β₂ 아드레노리셉터 효능제, 항히스타민제, 항알레르기제 또는 항염증제, 항감염제 또는 면역억제제와 함께 포함하는 조합물을 제공한다.

바람직하게는, β₂ 아드레노리셉터 효능제는 살메테롤(예, 라세미체 또는 단일의 거울상이성질체, 예컨대, R-거울상이성질체), 살부타몰, 포르모테롤, 살메파몰, 페노테롤, 또는 테르부탈린, 또는 이의 염(예, 이의 약제학적으로 허용되는 염), 예를 들어, 살메테롤의 시나포에이트 염, 살부타몰의 설페이트 염 또는 유리염기, 또는 포르모테롤의 푸마레이트 염이다. 장시간 작용하는 β₂ 아드레노리셉터 효능제가 바람직하며, 특히, 살메테롤 또는 포르모테롤과 같이 12 내지 24 시간 동안 치료 효과를 나타내는 효능제가 바람직하다. 바람직하게는 β₂ 아드레노리셉터 효능제는 흡입 투여되며, 예를 들어, 일일 1회 및/또는 동시에 흡입 투여되고; 더욱 바람직하게는 β₂ 아드레노리셉터 효능제는, 예를 들어, 본원에 기재된 바와 같이 입도-감소된 형태이다. 바람직하게는, β₂ 아드레노리셉터 효능제 조합물은 COPD 또는 천식의 치료 및/또는 예방에 유용하다. 살메테롤 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염, 예를 들어, 살메테롤 시노포에이트는 바람직하게는 일일 2회 25 내지 50㎍(유리 염기로서 측정)의 흡입 용량으로 사람에게 투여된다. 바람직한 장시간 작용성의 β₂ 아드레노리셉터 효능제에는 WO 02/066422 A호, WO 03/024439호, WO 02/070490호 및 WO 02/076933호에 기재된 것들이 포함된다.

바람직한 장시간 작용성의 β₂ 아드레노리셉터 효능제에는 화학식(XX)의 화합물 또는 이의 염 또는 용매화물이 포함된다(WO 02/066422호에 기재됨):

상기 화학식(XX)에서,

m^X 은 2 내지 8의 정수이며;

n^X 은 3 내지 11의 정수이고,

단, m^X + n^X 은 5 내지 19이며,

R^11X는 -XSO₂NR^16XR^17X이며, 여기서, X는 -(CH₂)_p ^X- 또는 C₂ _- ₆알케닐렌이고;

R^16X 및 R^17X는 독립적으로 수소, C₁ _-6 알킬, C₃ _-7시클로알킬, C(O)NR^18XR^19X,페닐 및 페닐(C₁ _- ₄알킬)-로부터 선택되거나,

R^16X 및 R^17X는 이들이 결합되어 있는 질소와 함께 5-, 6-, 또는 7-원 질소 함유 고리를 형성하고, R^16X 및 R^17X는 각각 할로, C₁ _-6 알킬, C₁ _-6할로알킬, C_1-6알콕시, 히드록시-치환된 C₁ _- ₆알콕시, -CO₂R^18X, -SO₂NR^18XR^19X, -CONR^18XR^19X,-NR^18XC(O)R^19X, 또는 5-, 6- 또는 7-원 헤테로시클릭 고리로부터 선택된 하나 또는 두 개의 기로 치환되거나 치환되지 않으며;

R^18X 및 R^19X는 독립적으로 수소, C₁ _-6알킬, C₃ _-6시클로알킬, 페닐, 및 페닐(C_1-4알킬)-로부터 선택되며;

p^X는 0 내지 6의 정수, 바람직하게는 0 내지 4의 정수이고;

R^12X 및 R^13X는 독립적으로 수소, C₁ _-6 알킬, C₁ _- ₆알콕시, 할로, 페닐, 및 C_1-6할로알킬로부터 선택되며;

R^14X 및 R¹⁵는 독립적으로 수소 및 C₁ _- ₄알킬로부터 선택되고, 단, R^14X 및 R^15X중의 탄소 원자의 총수는 4개 이하이다.

WO 02/066422호에 기재되어 있는 바람직한 β₂아드레노리셉터 효능제는 하기 화합물을 포함한다:

3-(4-{[6-({(2R)-2-히드록시-2-[4-히드록시-3-(히드록시메틸)-페닐]에틸}아미노)헥실]옥시}부틸)벤젠설폰아미드 및

3-(3-{[7-({(2R)-2-히드록시-2-[4-히드록시-3-히드록시메틸)페닐]에틸}-아미노)헵틸]옥시}프로필)벤젠설폰아미드.

WO 03/024439호에 기재된 바람직한 β₂아드레노리셉터 효능제는 4-{(1R)-2-[(6-{2-[(2,6-디클로로벤질)옥시]에톡시}헥실)아미노]-1-히드록시에틸}-2-(히드록시메틸)페놀이다.

화학식(I)의 화합물 또는 이의 염과 조합 사용가능한 항히스타민제는, 예를 들어 경구 투여용(예, 조합된 정제와 같은 조합된 조성물로서)이며, 이는 알레르기성 비염을 치료 및/또는 예방에 유용할 수 있다. 항히스타민제의 예에는 메타피릴렌, 또는 H1 길항제, 예컨대, 세티리진, 로라타딘(예, 클라리틴™: Clarityn ™), 데스로라타딘(예, 클라리넥스™: Clarinex™) 또는 펙소페나딘(fexofenadine)(예, 알레그라™: Allegra™)이 포함된다.

추가 양태에서, 본 발명은 화학식(I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염과 항콜린성 화합물, 예를 들어, 무스카린성(M) 수용체 길항제, 특히, M1, M2, M1/M2, 또는 M3 수용체 길항제, 더욱 바람직하게는 M3 수용체 길항제, 더욱더 바람직하게는 M1 및/또는 M2 수용체에 대해서 M3 수용체를 선택적으로 길항(예, 10배 이상 강하게 길항)하는 M3 수용체 길항제를 포함하는 조합물을 제공한다. 항콜린성 화합물/무스카린(M) 수용체 길항제와 PDE4 억제제의 조합물은, 예를 들어, WO 03/011274 A2호 및 WO 02/069945 A2호 / US 2002/0193393 A1호 및 US 2002/052312 A1호를 참조할 수 있으며, 이들 특허문헌의 일부 또는 모두는 화학식(I)의 화합물 또는 염과 함께 사용될 수 있는 항콜린성 화합물/무스카린(M) 수용체 길항제의 예, 및/또는 적합한 약제 조성물을 개시하고 있다. 예를 들어, 무스카린 수용체 길항제는 이프라트로피움염(예, 이프라트로피움 브로마이드), 옥시트로피움염(예, 옥시트로피움 브로마이드), 더욱 바람직하게는 티오트로피움염(예, 티오트로피움 브로마이드)이거나 이를 포함할 수 있다. 티오트로피움에 대해서는 EP 418 716 A1호를 참조할 수 있다.

항콜린성 화합물 또는 무스카린(M) 수용체 길항제, 예를 들어, M3 수용체 길항제는 바람직하게는 흡입 투여용이며, 더욱 바람직하게는 본원에 기재된 바와 같이 입도-감소된 형태이다. 더욱 바람직하게는 무스카린(M) 수용체 길항제와, 화학식(I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 둘 모두는 흡입 투여용이다. 바람직하게는 항콜린성 화합물 또는 무스카린 수용체 길항제 및 화학식(I)의 화합물 또는 염은 동시 투여된다. 무스카린 수용체 길항제 조합물은 바람직하게는 COPD의 치료 및/또는 예방에 유용하다.

기타 가능한 조합물은, 예를 들어, 화학식(I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염과 다른 항염증제, 예컨대, 항염증성 코르티코스테로이드; 또는 비스테로이드성 항염증약(NSAID), 예컨대, 류코트리엔 길항제(예, 몬테루카스트), iNOS 억제제, 트립타제 억제제, 엘라스타제 억제제, 베타-2 인테그린 길항제, 아데노신 2a 효능제 또는 5-리폭소게나제 억제제; 또는 항감염 제제(예, 항생제 또는 항바이러스제)를 포함한다. iNOS 억제제는 바람직하게는 경구 투여된다. 적합한 iNOS 억제제(유도 가능한 질산 합성효소 억제제)에는 WO 93/13055호, WO 98/30537호, WO 02/50021호, WO 95/34534호 및 WO 99/62875호에 기재된 억제제가 포함된다.

특히 외부 국소 투여(예, 아토피 피부염에 대한)를 위한 예시적인 조합물에는, 예를 들어 화학식(I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염과 함께 면역억제제, 예를 들어 칼시뉴린 억제제, 예컨대 피메크롤리뮤스 또는 태크로리뮤스를 포함하는 조합물이 포함된다. 이러한 면역억제제는 특히 외부 국소적으로 투여가능한 면역억제제, 예컨대 피메크롤리뮤스(예를 들어, 국소 조성물, 예컨대 크림, 및/또는 예를 들어 엘리델(Elidel)^TM에서 1% w/w 농도의 피메크릴리뮤스) 또는 태크롤리뮤스(예를 들어, 국소 조성물, 예컨대 연고, 및/또는 예를 들어 프로토픽(Protopic)^TM에서 약 0.03 내지 약 0.1% w/w 농도의 태크롤리뮤스)일 수 있다. 외부 국소적으로 투여가능한 면역억제제는 본 발명의 화합물 또는 이의 염과는 개별적으로 외부 국소용 조성물로 투여되거나 투여될 수 있거나, 이는 조합된 외부 국소 투여가능한 조성물 중에 화학식(I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염과 함께 함유될 수 있다.

예를 들어, 아토피 피부염에 대한 외부 국소 투여에 있어서, 본 발명의 화합물 또는 염과 항감염제의 조합물은 외부 국소적으로 투여가능한 항균제, 예컨대 뮤피리신 또는 이의 염(예를 들어, 칼슘 염), 또는 외부 국소적으로 투여가능한 플루로뮤틸린 항균제를 포함할 수 있다. 다르게는 또는 부가적으로, 외부 국소 투여를 위해, 외부 국소 투여가능한 항진균제, 예컨대 클로르트리마졸, 클로트리마졸 또는 케토코나졸이 사용될 수 있다.

예를 들어, 아토피 피부염에 대한 외부 국소 투여를 위해서는, 항-가려움 화합물과의 조합물이 임의적으로 사용될 수 있다.

화학식(I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염과 항염증성 코르티코스테로이드(이는 예를 들어 천식, COPD, 알레르기성 비염 또는 아토피 피부염의 치료 및/또는 예방에 사용될 수 있음)를 포함하는 조합물에서, 항염증성 코르티코스테로이드는 예를 들어 플루티카손 프로피오네이트(참조예, US 특허 제4,335,121호), 베클로메타손 17-프로피오네이트 에스테르, 베클로메타손 17,21-디프로피오네이트 에스테르, 덱사메타손 또는 이의 에스테르, 모메타손 또는 이의 에스테르(예를 들어, 모메타손 푸로에이트), 시클레소니드, 부데소니드, 플루니솔리드, 또는 WO 02/12266 A1(예, 청구항 제 1항 내지 청구항 제 22항 중 어느 한 항에 청구됨)에 기술된 화합물, 또는 이들 중 어떠한 화합물의 약제학적으로 허용되는 염일 수 있다. 항염증성 코르티코스테로이드가 WO 02/12266 A1호에 기재된 화합물이면, 실시예 1{6α,9α-디플루오로-17α-[(2-푸라닐카르보닐)옥시]-11β-히드록시-16α-메틸-3-옥소-안드로스타-1,4-디엔-17β-카르보티오산 S-플루오로메틸 에스테르} 또는 실시예 41{6α,9α-디플루오로-11β-히드록시-16α-메틸-17α-[(4-메틸-1,3-티아졸-5-카르보닐)옥시]-3-옥소-안드로스타-1,4-디엔-17β-카르보티오산 S-플루오로메틸 에스테르}, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염이 바람직하다. 항염증성 코르티코스테로이드는 외부 국소, 비내 또는 흡입 투여될 수 있다. 플루티카손 프로피오네이트가 바람직하며, 이는 사람에게 (a) 일일 1회로 250㎍의 용량 또는 (b) 일일 2회로 50 내지 250㎍ 용량으로 흡입 투여되는 것이 바람직하다.

또한 본 발명은 화학식(I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염과 β₂-아드레노리셉터 효능제 및, 예를 들어, WO 03/030939 A1호에 기재된 항염증성 코르티코스테로이드를 포함하는 조합물을 제공한다. 바람직하게는 이러한 조합물은 천식, COPD 또는 알레르기성 비염의 치료 및/또는 예방에 유용하다. β₂-아드레노리셉터 효능제 및/또는 항염증성 코르티코스테로이드는 상기된 바와 같고/같거나, WO 03/030939 A1호에 기재된 바와 같을 수 있다. 가장 바람직하게는, 이러한 "삼중" 조합물에서, β₂-아드레노리셉터 효능제는 살메테롤 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염(예, 살메테롤 시나포에이트)이고, 항염증성 코르티코스테로이드는 플루티카손 프로피오네이트이다.

상기 언급된 조합물은 약제 조성물의 형태로 사용하도록 존재할 수 있으며, 따라서, 상기된 바와 같은 조합물을 하나 이상의 약제학적으로 허용되는 담체 및/또는 부형제와 함께 포함하는 약제 조성물이 본 발명의 추가 양태를 나타낸다.

그러한 조합물의 개별 화합물은 개별적으로 또는 조합된 약제 조성물(들)로 연속적으로 또는 동시에 투여될 수 있다.

일 구체예에서, 본원에 기재된 조합물은 동시에 흡입 투여될 수 있으며, 조합 흡입 장치에서 처리된다. 그러한 조합 흡입 장치는 본 발명의 또 다른 양태를 구성한다. 그러한 조합 흡입 장치는 동시에 흡입 투여하기 위한 조합된 약제 조성물(예, 건조 분말 조성물)을 포함할 수 있으며, 그러한 조성물은 조합물의 모든 개별 화합물을 포함하고, 그러한 조성물은 흡입 장치 내부의 스트립 또는 리본에 세로로 장착된 다수의 밀봉된 용량 용기내로 혼입되며, 상기 용기는 필요시에 파열 가능하거나 박리 개방가능하며; 예를 들어, 그러한 흡입 장치는 실질적으로는 GB 2,242,134 A호(DISKUS™) 및/또는 상기 기재된 바와 같은 장치일 수 있다. 다르게는, 조합물 흡입 장치는 조합물의 개별 화합물이 동시에 투여되게 할 수 있지만, 2003년 1월 22일자 PCT/EP03/00598호에 기재(청구범위, 예를 들어, 청구항 1에 기재됨)된 바와 같이, 별도의 약제 조성물로 별도로 저장(삼중 조합물의 경우 완전히 또는 부분적으로 별도로 저장)된다.

본 발명은 또한 본원에 기재된 조합물을 제조하는 방법으로서,

(a) 연속적으로 또는 동시에 조합물의 개개의 화합물을 투여하기 위한 별도의 약제 조성물을 제조하거나,

(b) 조합물의 개개의 화합물을 동시에 투여하기 위한 조합된 약제 조성물을 제조하는 것을 포함하며,

약제 조성물이 하나 이상의 약제학적으로 허용되는 담체 및/또는 부형제와 함께 조합물을 포함하는, 조합물의 제조 방법을 제공한다.

본 발명은 또한 본원에 기재된 방법에 의해서 제조된, 본원에 기재된 조합물을 제공한다.

생물학적 시험 방법

PDE 3, PDE 4B, PDE 4D, PDE 5, PDE 6 1차 검정 방법

본 발명의 화합물 또는 이의 염의 활성은 하기 기재된 검정 방법으로 측정할 수 있다. 화학식(I)의 화합물은 (PDE3 및 PDE5와 비교하여) 선택적인 PDE4 억제제인 것으로 추정되며, 즉, 이들 화합물은, 이들 화합물이 PDE3을 억제하는 것보다 더 강력하게 그리고 이들 화합물이 PDE5를 억제하는 것보다 더 강력하게, PDE4B 및/또는 PDE4D를 억제한다.

가능한 PDE 효소원 및 참고문헌

사람 재조합 PDE4B, 특히 이의 2B 스플라이스 변이체(HSPDE4B2B)는 WO 94/20079 및 엠.엠. 맥라우린(M.M. McLaughlin) 등의 문헌 ["A low Km, rolipram-sensitive, cAMP-specific phosphodiesterase from human brain: cloning and expression of cDNA, biochemical characterisation of recombinant protein, and tissue distribution of mRNA", J. Biol . Chem ., 1993, 268, 6470-6476]에 기재되어 있다. 예를 들어, WO 94/20079호의 실시예 1에는, 예를 들어 150μM CuSO₄를 첨가한 후에, 사람 재조합 PDE4B가 PDE-결핍 효모 사카로마이시스 세레비시애 균주 GL62에서 발현됨이 기재되어 있고, 효모 세포 용해물의 100,000 x g 상층액 분획이 PDE4B 효소의 수확에 사용됨이 기재되어 있다.

사람 재조합 PDE4D(HSPDE4D3A)는 피. 에이. 백커(P.A. Baecker) 등의 문헌 ["Isolation of a cDNA encoding a human rolipram-sensitive cyclic AMP phosphodiesterase(PDE IV_D)", Gene, 1994, 138, 253-256.]에 기재되어 있다.

사람 재조합 PDE5는 케이. 로우니(K. Loughney) 등의 문헌 ["Isolation and characterisation of cDNAs encoding PDE5A, a human cGMP-binding, cGMP-specific 3',5'-cyclic nucleotide phosphodiesterase", Gene, 1998, 216, 139-147]에 기재되어 있다.

PDE3는 에이치. 코스테(H. Coste) 및 피. 그론딘(P. Grondin)의 문헌 ["Characterisation of a novel potent and specific inhibitor of type V phosphodiesterase", Biochem . Pharmacol ., 1995, 50, 1577-1585]에 의해 기재된 바와 같이 소과동물의 대동맥으로부터 정제될 수 있다.

PDE6은 피. 카티(P. Catty) 및 피. 디테레(P. Deterre) 등의 문헌 ["Activation and solubilization of the retinal cGMP-specific phosphodiesterase by limited proteolysis", Eur . J. Biochem ., 1991, 199, 263-269; A. Tar et al. "Purification of bovine retinal cGMP phosphodiesterase", Methods in Enzymology , 1994, 238, 3-12] 및/또는 디. 스리바스타바(D. Srivastava) 등의 문헌 ["Effects of magnesium on cyclic GMP hydrolysis by the bovine retinal rod cyclic GMP phosphodiesterase", Biochem . J., 1995, 308, 653-658]에 기재된 바와 같이 소과동물의 망막으로부터 정제될 수 있다.

PDE 3, PDE 4B, PDE 4D, PDE 5 또는 PDE 6 활성의 억제: 방사성 신틸레이션 근접 검정법(SPA)

PDE4B 또는 4D(사람 재조합체), PDE3(소과동물 대동맥으로부터 유래), PDE5(사람 재조합체) 또는 PDE6(소과동물 망막으로부터 유래)에서 촉매 활성을 억제하는 화합물의 능력을 임의로 96-웰 포맷으로 신틸레이션 근접 검정법(SPA)에 의해 측정하였다.

시험 화합물(DMSO 중의 용액으로서, 바람직하게는 약 2 마이크로리터(㎕) 부피의 DMSO 용액)을 50mM 트리스-HCl 완충액 pH 7.5, 8.3mM MgCl₂, 1.7mM EGTA, 0.05% (w/v) 소혈청 알부민 중의 PDE 효소를 지닌 왈락 이소플레이트(Wallac Isoplate)(code 1450-514) 중에서 주위 온도(실온, 예를 들어 19 내지 23℃)에서 10 내지 30분(일반적으로 30분)간 사전 인큐베이션시켰다. 효소 농도를 인큐베이션 동안 하기 규정된 기질의 단지 20% 가수분해가 화합물이 없는 대조 웰에서 일어나도록 조정하였다. PDE3, PDE4B 및 PDE4D 검정의 경우, [5',8-³H]아데노신 3',5'-시클릭 포스페이트(Amersham Pharmacia Biotech, code TRK.559; 또는 Amersham Biosciences UK Ltd, Pollards Wood, Chalfont St Giles, Buckinghamshire HP8 4SP, UK)를 첨가하여 웰 당 0.05uCi 및 약 10nM의 최종 농도를 수득하였다. PDE5 및 PDE6 검정의 경우, [8,³H]구아노신 3',5'-시클릭 포스페이트(Amersham Pharmacia Biotech, code TRK.392)를 첨가하여 웰 당 0.05uCi 및 약 36nM 최종 농도를 수득하였다. 바람직하게는 약 100㎕ 부피의 검정 혼합물을 함유하는 플레이트를 오비탈 진탕기상에서 5분간 혼합시키고, 주위 온도에서 1시간 동안 인큐베이션시켰다. 포스포디에스테라제 SPA 비드(Amersham Pharmacia Biotech, code RPNQ 0150)를 첨가하여 (웰 당 약 1mg) 검정을 종결시켰다. 플레이트를 밀봉하고, 진탕시키고, 주위 온도에서 35분 내지 1 시간(바람직하게는 35분) 동안 정치시켜서 비드를 침강시켰다. 결합된 방사성 생성물을 왈락 트리룩스(WALLAC TRILUX) 1450 마이크로베타 신틸레이션 카운터를 사용하여 측정하였다. 억제 곡선의 경우, 각각의 화합물의 10가지 농도(예, 1.5nM 내지 30uM)를 검정하였다. 곡선을 액티비티베이스(ActivityBase) 및 XLfit(ID Business Solutions Limited, 2 Ocean Court, Surrey Research Park, Guildford, Surrey GU2 7QB, United Kingdom)를 사용하여 분석하였다. 결과를 pIC₅₀ 값으로서 표현하였다.

상기 방사성 SPA 검정의 대안으로, PDE4B 또는 PDE4D 억제가 하기 형광 편광(FP) 검정으로 측정될 수 있다.

PDE4B 또는 PDE4D 활성의 억제: 형광 편광( FP ) 검정법

PDE4B(사람 재조합체) 또는 PDE4D(사람 재조합체)에서 촉매 활성을 억제하는 화합물의 능력은 임의적으로, 384-웰 포맷으로 IMAP 형광 편광(FP) 검정법(IMAP Explorer kit; 입수처: Molecular Devices Corporation, Sunnydale, CA, USA; Molecular Devices code: R8602)에 의해 측정할 수 있다.

IMAP FP 검정법은 균질하고 비방사성인 검정 포맷으로 PDE 활성을 측정할 수 있다. FP 검정법은 플루오레세인 표지된(F1) 시클릭 아데노신 모노-포스페이트(Fl-cAMP)가 비시클릭 Fl-AMP 형태로 가수분해되는 경우에 생성되는 F1-AMP의 포스페이트 기와 결합하는, 나노입자(매우 작은 비드)에 코팅된 고정된 3가 금속 양이온의 능력을 사용한다. F1-cAMP는 사실상 결합하지 않는다. F1-AMP 생성물이 비드(고정된 3가 양이온으로 코팅됨)에 결합하면, 결합된 F1-AMP의 회전을 느리게 하고, 평행광 대 수직광의 형광 편광 비율을 증가시킨다. PDE의 억제는 이러한 시그널 증가를 감소/억제시킨다.

시험 화합물(적은 부피, 예를 들어 DMSO 중의 약 0.5 내지 1㎕, 바람직하게는 약 0.5㎕의 용액)을 10mM 트리스-HCl 완충액 pH 7.2, 10mM MgCl₂, 0.1%(w/v) 소혈청 알부민 및 0.05% NaN₃ 중의 PDE 효소를 지닌 흑색의 384-웰 마이크로타이터 플레이트(공급원: NUNC, code 262260)에서 주위 온도(실온, 예를 들어 19 내지 23℃)에서 10 내지 30분간 사전 인큐베이션시켰다. 효소 수준을, 반응이 인큐베이션 전체에 걸쳐 선형적으로 일어나도록 실험에 의해 설정하였다. 플루오레세인 아데노신 3',5'-시클릭 포스페이트(Molecular Devices Corporation, Molecular Devices code: R7091)를 첨가하여 약 40nM 최종 농도(최종 검정 부피는 일반적으로 약 20 내지 40㎕이고, 바람직하게는 약 20㎕임)를 수득하였다. 플레이트를 오비탈 진탕기상에서 10초간 혼합시키고, 주위 온도에서 40분간 인큐베이션시켰다. IMAP 결합 시약(상기 기재된 바와 같음, Molecular Devices Corporation, Molecular Devices code: R7207)을 첨가하여 (키트 원액의 결합 완충액 중의 1:400 희석액 60㎕) 검정을 종결시켰다. 플레이트를 주위 온도에서 1시간 동안 정치시켰다. 평행광 대 수직광의 형광 편광(FP) 비율을 애널리스트(Analyst^TM) 플레이트 판독기(Molecular Devices Corporation)를 사용하여 측정하였다. 억제 곡선에 대해, 각각의 화합물의 10가지 농도(예, 1.5nM 내지 30uM)를 검정하였다. 곡선을 액티비티베이스 및 XLfit(ID Business Solutions Limited, 2 Ocean Court, Surrey Research Park, Guildford, Surrey GU2 7QB, United Kindgom)를 사용하여 분석하였다. 결과를 pIC₅₀ 값으로서 표현하였다.

FP 검정에서, 시약을 일반적으로 멀티드롭(Multidrop^TM)(입수처: Thermo Labsystems Oy, Ratastie 2, PO Box 100, Vantaa 01620, Finland)을 사용하여 분배시켰다.

주어진 PDE4 억제제에 대해, SPA 및 FP 검정을 이용하여 측정된 PDE4B(또는 PDE4D) 억제값은 약간 상이할 수 있다. 그러나, 100개의 시험 화합물(반드시 본 발명의 화합물이어야 하는 것은 아님)의 회귀 분석에 있어서, SPA 및 FP 검정을 이용하여 측정된 pIC₅₀ 억제값은 일반적으로 각각의 PDE4B 및 PDE4D에 대해 약 0.5 log 단위내에서 일치하는 것으로 밝혀졌다 [선형 회귀 계수는 PDE4B에 대해 0.966이고 PDE4D에 대해 0.971임; David R.Mobbs 등의 문헌(참조: "Comparison of the IMAP Fluorescence Polarisation Assay with the Scintillation Proximity Assay for Phosphodiesterase Activity", poster presented at 2003 Molecular Devices UK & Europe User Meeting, 2nd October 2003, Down Hall, Harlow, Essex, United Kingdom].

현재의 측정치만을 기초로 그리고 상기한 검정 방법 또는 이와 유사한 검정 방법을 이용하여, 실시예 1 및/또는 실시예 1A(즉, 화학식(I)의 화합물)에 대해 수득된 생물학적 데이터(일반적으로 2회 이상의 판독치의 평균으로서의 PDE4B 및 PDE4D 억제 활성)가 하기되어 있다. (각각 독립적으로) SPA 검정 또는 이와 유사한 검정, 또는 적절하게 변형된 형광 편광(FP) 검정을 이용하여 수득된 PDE3 및 PDE5 억제 활성이 하기되어 있다. SPA 및 FP 검정 각각에 있어서, 측정치의 절대적 정확성은 불가능하며, 주어진 판독값은 수행되어 평균내어진 판독 횟수에 따라 약 ±0.5의 log 단위까지만 일반적으로 정확하다:

실시예(=화학식(I)의 화합물)에 대해 수행된 검정	PDE pIC₅₀ 데이터 (±약 0 내지 5)(n = 시험 횟수)
PDE4B pIC₅₀ (FP 검정, 평균값)	9.17 (± 약 0.5)(n = 2)
PDE4D pIC₅₀ (FP 검정, 평균값)	9.26 (± 약 0.5)(n = 2)
PDE3 pIC₅₀	5.04 (± 약 0.5)(n = 1)
PDE5 pIC₅₀	6.31 (± 약 0.5)(n = 1)

구토: 몇몇 공지된 PDE4 억제제는, 예를 들어 전신 노출 후에 구토 및/또는 욕지기를 크거나 작은 정도로 일으킬 수 있다(참조: Z. Huang et al., Current Opinion in Chemical Biology, 2001, 5: 432-438, 특히 페이지 433-434 및 본원에 인용된 참고문헌을 참조). 따라서, 본 발명의 화합물 또는 염이, 예를 들어 외부 국소, 경구 또는 비경구 (예를 들어, 외부 국소) 투여 후에 단지 제한적이거나 처리가능한 구토 부작용을 유발하는 것이 바람직하지만, 이것은 필수적인 것은 아니다. 구토 부작용은 예를 들어 페렛(ferret)에 투여되는 경우에 본 발명의 화합물 또는 염의 구토유발 잠재성에 의해 측정될 수 있으며; 예를 들어 본 화합물 또는 염의 경구 또는 비경구 투여 후의 페렛에서의 보밋팅(vomiting), 구역질 및/또는 몸부림(writhing)의 개시까지의 시간, 정도, 빈도 및/또는 지속시간을 측정할 수 있다. 예를 들어, 페렛에서의 항염증 효과, 구토 부작용 및 치료 지수(TI)에 대한 하나의 임의적인 측정 방법에 대해서는 하기되는 생체내 검정 4를 참조하길 바란다. [참조: A. Robichaud et al., "Emesis induced by inhibitors of [PDE IV] in the ferret", Neuropharmacology , 1999, 38, 289-297, erratum Neuropharmacology , 2001, 40, 465-465]. 그러나, 임의적으로, 랫트에서의 경구 투여 후에 구토 부작용 및 치료 지수(TI)는 본 발명의 화합물 또는 염의 투여 후에 랫트의 이식증 섭식 거동을 모니터링함으로써 편리하게 측정될 수 있다(하기되는 생체내 검정 2 참조).

그 밖의 부작용: 몇몇 공지된 PDE4 억제제는 두통 및 다른 중추 신경계(CNS-) 매개된 부작용 및/또는 위장(GI)관 장애와 같은 그 밖의 부작용을 유발할 수 있다. 따라서, 본 발명의 화합물 또는 이의 염이 상기 부작용 범주 중 하나 이상에서 단지 제한적이거나 처리가능한 부작용을 일으키는 것이 바람직하지만 이는 필수적인 것은 아니다.

기타 임의적인 시험관내 검정법:

사람 전혈에서의 TNF -α 생성 억제

이는 예를 들어, 잠재적으로 경구 투여가능한 PED4 억제제에 대한 임의적인 보충 시험이다. 또한, 본 검정으로 단백질 결합에 의한 손실 후의 PDE4 억제제의 효과가 측정되기 때문에, 이는 또한, 화합물의 단백질 결합 손실이 피부를 통한 이동 중에 일어날 수 있음에 따라 외부적으로 국소 투여가능한 PDE4 억제제에 관련될 수 있다.

시험 화합물은, 직접적으로 10mM 원액으로부터 또는 DMSO 중의 보다 묽은 용액으로부터의, DMSO 중의 약 10mM 원액으로서 그리고 8개의 연속적인 3배 희석물을 지닌 DMSO 중에서 제조된 희석물 시리즈로서 제조하였다. 이 화합물은 바이오메크 에프엑스(Biomek Fx) 액체 취급 로봇을 이용하여 검정 플레이트에 첨가하였다.

정상적인 지원자로부터 취한 헤파린첨가 혈액을 약 0.5 또는 1.0㎕의 적절하게 희석된 시험 화합물 용액을 함유하는 마이크로타이터 플레이트 웰로 분배하였다(약 100㎕). 약 37℃에서 약 1시간 동안 인큐베이션시킨 후에, (1% L-글루타민 및 1% 페니실린/스트렙토마이신을 함유하는) RPMI 1640 중의 5% CO₂, 약 25㎕ LPS(리포폴리사카라이드) 용액(에스. 티포사)를 첨가하였다(약 50ng/㎖ 최종). 샘플을 약 37℃, 5% CO₂에서 약 20시간 동안 인큐베이션시키고, 약 100㎕의 생리식염수(0.138% NaCl)을 첨가하고, 희석된 혈장을 약 1300g에서 약 10분간 원심분리시킨 후에 플레이트메이트 또는 바이오멕 에프엑스 액체 취급 로봇을 이용하여 수거하였다. 혈장 TNFα 함량은 IGEN 기법(하기됨)을 이용하는 전기화학발광 검정에 의해, 또는 효소 결합된 면역흡착 검정(ELISA)(하기됨)에 의해 측정하였다.

결과: 상기한 검정법 또는 이와 유사한 검정법을 이용한 화학식(I)의 화합물에 대한 사람 전혈에서의 TNF-α 생성 억제율: pIC50 = 8.13 (n = 6).

사람 PBMC( 말초 혈액 단핵 세포) 검정에서 TNF -α 생성 억제

이것은, 예를 들어, 잠재적으로 흡입 투여가능한 PDE4 억제제에 대한 임의적 보충 시험이다.

시험 화합물은, 직접적으로 10mM 원액으로부터 또는 DMSO 중의 보다 묽은 용액으로부터의, DMSO 중의 약 10mM 원액으로서 그리고 8개의 연속적인 3배 희석물을 지닌 DMSO 중에서 제조된 희석물 시리즈로서 제조하였다. 화합물을 바이오멕 에프엑스 액체 취급 로봇을 이용하여 검정 플레이트에 첨가하였다.

PBMC 세포(말초 혈액 단핵 세포)를 약 30분 간 약 1000g에서 히스토팩(histopaque) 상에서의 원심분리에 의해 정상 지원자로부터의 헤파린첨가된 사람 혈액으로부터 제조하였다. 이들 세포를 계면으로부터 수거하고, 이것을 원심분리(약 1300g, 약 10분)에 의해 세척하고, 1 × 10⁶ 세포/㎖에서 검정 완충액(10% 우태아 혈청, 1% L-글루타민 및 1% 페니실린/스트렙토마이신을 함유하는 RPMI 1640) 중에 재현탁시켰다. 약 50㎕의 세포를, 약 0.5 또는 약 1.0㎕의 적절하게 희석된 화합물 용액을 함유하는 마이크로타이터 웰에 첨가하였다. 약 75㎕의 PPS(약 1ng/㎖ 최종)를 첨가하고, 샘플을 37℃, 5% CO₂에서 20시간 동안 인큐베이션시켰다. 상등액을 제거하고, TNF의 농도를 IGEN 기법을 이용하는 전기화학발광 검정에 의해, 또는 ELISA(하기됨)에 의해 측정하였다.

결과: 상기한 검정법 또는 이와 유사한 검정법을 이용한 화학식(I)의 화합물에 대한 PBMC에서의 TNF-α 생성 억제율: pIC50 = 8.74 (n = 9).

TNF -α IGEN 검정법

전혈 또는 PBMC 검정 플레이트로부터의 약 50㎕ 상등액을 96웰 폴리프로필렌 플레이트로 이동시켰다. 각각의 플레이트는 또한 TNF-α 표준 곡선(약 0 내지 30000 pg/㎖: R + D 시스템, 210-TA)을 함유하고 있었다. 약 50㎕의 스트렙타비딘/비오티닐화된 항 TNF-α 항체 혼합물, 약 25㎕의 루테늄 태그된(tagged) 항-TNF-α 모노클로날, 및 0.1% 우태아 혈청 알부민을 함유하는 약 100㎕의 PBS를 각각의 웰에 첨가하고, 플레이트를 밀봉시키고, 약 2시간 동안 진탕시키고 나서, IGEN 장치 상에서 판독하였다.

TNF -α ELISA 검정법

사람 TNF-α는, 제조업자의 지시에 따라 그리고 파밍젠(Pharmingen) TNF-α(cat No. 555212)를 이용하여 제작된 TNF-α 보정 곡선을 지닌 상업적인 검정 키트(AMS Biotechnology, 211-90-164-40)를 이용하여 검정할 수 있다.

생체내에서의 생물학적 검정:

상기한 시험관내 효소적 PDE4B 억제 검정 또는 일반적으로 이아 유사한 검정은 생물학적 활성의 1차 시험인 것으로 간주되어야 한다. 그러나, 임의적이며 활성, 효능 또는 부작용의 본질적 척도가 아니며 반드시 수행되어야 하는 것은 아닌, 일부의 추가적인 생체내 생물학적 시험이 하기되어 있다.

생체내 검정 A:

아토피 피부염의 돼지 모델에서 국소적으로 도포된 화합물의 활성: 돼지에서 디니트로플루오로벤젠(DNFB)-유발된 지연된 유형의 과민(DTH) 반응에 대한 피부 국소 투여에 의해 적용된 화합물의 효과

일반적인 시험 설계:

접촉성 과민에 대한 돼지 DTH(지연된 유형의 과민) 모델은, 사람에서의 아토피 피부염의 병리를 모방하도록 돼지 피부에서의 Th2-매개된 염증 반응을 이용한다. 이 모델은 거세된 수컷 요크셔 돼지에서 급성의 DTH(지연된 유형의 과민) 반응에 대한, 피부에 국소적으로 도포된 화합물의 잠재적인 항-염증 효과를 측정하기 위한 것이다.

일반적으로 검정에서, 돼지(사육된 요크셔 돼지, 자극 시에 15 내지 18kg의 거세된 수컷)를 먼저 DMSO: 아세톤: 올리브유 (약 1:5:3)(총 400 마이크로리터 용액 중의 약 40mg DNFB) 중에 용해된 약 10% (w/v)의 디니트로플루오로벤젠(DNFB)의 귀(외부) 및 샅고랑(groin)(내부)으로의 국소 적용에 의해 자극하였다. 그런 다음, 돼지를, 돼지의 제모한 등 위의 무작위 부위에 약 0.6% (w/v) DNFB(약 90 ㎍/부위; 이 부위들은 마킹용 펜으로 그려진 격자에 의해 확인되며 계수된다)를 도포하고 12일 후에 접종시켰다.

접종한 날에, 접종 전 약 2시간째에 그리고 접종 후 약 6시간(DMSO/아세톤 용액/현탁액에 대해서는 약물로의 노출을 최대로 함), 또는 접종 후 약 30분 및 접종 후 약 6시간째에 처리를 수행하였다(국소 연고 또는 크림에 대해서는, 보다 임상적으로 관련된 처리 프로토콜을 나타냄).

접종 후 1일(약 24시간) 째에, 그리고 임의적으로 접종 후 약 48 시간째에 다시, 시험 부위를, 반응 부위의 가장 넓은 지점에서의 직경을 측정하고 홍반 강도 및 홍반 정도 각각에 대해 0 내지 4의 점수를 매김으로써, 홍반의 강도 및 정도를 시각적으로 평가하였다. 경화도(팽윤의 척도)에 대해서도 또한 0 내지 4의 점수를 매겼다. 홍반 강도, 홍반 정도 및 경화도에 대한 점수는 하기 기준에 따라 매겨진다: 홍반 강도: 0 = 정상, 1 = 최소, 거의 확인되지 않음, 2 = 약함, 3 = 적당함, 4 = 심함; 홍반 정도(상승되지 않음): 0 = 부종 없음, 1 = 핀 머리 크기 정도의 반점, 2 = 렌즈콩 크기의 반점, 3 = 유착된 반점, 4 = 전체 부위로 확산됨. 경화도(촉지가능함): 0 = 정상, 1 = 핀 헤드 크기의 혹, 2 = 렌즈콩 크기의 혹, 3 = 유착된 단단한 혹, 4 = 딱딱한 병소가 확산됨. 약 24시간에서 합계된 시각 점수에는 홍반 강도, 홍반 정도 및 경화도에 대한 개별 점수가 포함된다; 각 부위에 대해 합계된 최대 점수는 12일 것이다. 합계된 높은 점수는 일반적으로 높은 염증 반응을 나타낼 수 있다. 시각 점수에는 일부 오차가 있었다.

격자 상의 인접한 대조(플라시보) 부위와 처리 부위 사이에 합계된 점수 차를 계산하였다. 이후, 이러한 차이값을 또한 대조(플라시보) 부위에 대해 합계된 점수와 비교한 억제율을 계산하는 데 사용하였다. 차이 값이 더욱 음의 값일수록, 계산된 억제율은 더 커졌다. 평균 합계된 점수의 억제율(평균 합계된 점수와 비교한 억제율)을 계산할 수 있다.

접종 후 약 24시간 째에, 처리 부위의 병소 영역을 또한 임의적으로 시각적으로 평가할 수 있다.

특이적인 시험 설계 및 결과:

거세된 수컷 요크셔 돼지에서의 급성 DTH 반응에 대한, 피부에 국소적으로 도포된 화학식(I)의 화합물("유리 염기" 형태)의 항-염증 효과를, 또 다른 PED4 억제제 시팜플린(BRL-61063) 및 국소적 면역조절제 피메크롤리뮤스의 항-염증 효과와 비교하였다.

상기 검정에서, 화학식(I)의 화합물은, (A) DNFB 접종전 약 2시간 째에 그리고 DNFB 접종 후 약 6시간 째에 약 10% DMSO/90% 아세톤(약, 50 마이크로리터 또는 약 1.5mg/부위)의 용액 중의 약 2.5% (w/v) 농도; 또는 (B) DNFB 접종 후 약 30분째에 및 DNFB 접종 후 약 6시간째에 프로필렌 글리콜(PG)^*(약 25mg의 제형/부위)를 함유하는 연고에서 약 0.5% (w/v) 농도에서 국소적으로 투여된다(^* 화학식(I)의 화합물과 함께 사용되거나 이와 사용가능한 PG 연고는 일반적으로 특히 대략적으로 하기 성분을 [%(w/w)로] 함유한다: 약 69 내지 70%의 백색 페트롤라텀, 약 5% 광유, 약 5%의 폴리옥실 스테아릴 에테르(예를 들어, 볼포 S2) 및 약 20%의 프로필렌 글리콜. 이에 대해서는, 예를 들어 적합한 연고 제형에 대해 하기되는 조성물 실시예 C1을 참고하길 바란다).

PG 연고 중에서 약 0.5% (w/v)로 투여된 화학식(I)의 화합물은 플라시보 PG 연고에 비해 합계된 평균 점수를 약 13 내지 14%까지 억제하였다(ANOVA에 의해 p ＜ 0.05). DMSO/아세톤 용액 중에서 약 2.5% (w/v)로 투여된 화학식(I)의 화합물은 비히클 단독에 비해 합계된 평균 점수를 약 21% 감소시켰다 (ANOVA에 의해 p ＜ 0.05). 비교로서, DMSO/아세톤 중에서 약 2.5% (w/v)로 투여된 시팜플린 및 연고 중에서 약 0.25% (w/v)로 투여된 시팜플린은 각각 합계된 점수를 약 8% 및 약 6 내지 7%까지 감소(통계적으로 현저하지 않은 효과)시키는 반면, 1% (w/w) 크림 제형으로 도포된 피메크롤리뮤스는 합계된 점수를 약 29%까지 억제시켰다(ANOVA에 의해 p ＜ 0.05).

또한, 화학식(I)의 화합물을 피부 투여하면, DMSO/아세톤 또는 PG 연고로 첨가하는 경우에 병변 영역을 감소시키는 것으로 추정된다(이 결과에는 일부 오차가 포함된다).

이들 결과로부터, 화학식(I)의 화합물을 적당한 제형으로 피부에 국소적으로 도포하는 경우에 급성 돼지 DTH(지연된 유형의 과민증) 모델에서 화학식(I)의 화합물("유리 염기" 형태)의 잠재적인 항-염증 활성이 입증되는 것으로 보인다.

생체내 검정 1. 랫트에서의 LPS 유발된 폐 호중구증가증: 경구 투여된 PDE4 억제제의 효과

폐 호중구의 유입은 만성 기관지염 및/또는 페기종을 수반할 수 있는 만성 폐쇄성 폐질환(COPD)과 같은 폐질환 군에 대해 중요한 성분인 것으로 밝혀졌다 [참조: G.F. Filley, Chest. 2000; 117(5); 251s-260s]. 이러한 호중구증가증 모델의 목적은 COPD의 호중구 염증 성분(들)을 모델링하는 에어로졸화된 리포폴리사카라이드(LPS)의 흡입에 의해 유발된 호중구증가증에 대한 경구 투여된 PDE4 억제제의 생체내에서의 잠재적 항염증 효과를 실험하는 데에 있다. 학술적 배경에 대해서는 하기 문헌 섹션을 참조하라.

약 300 내지 400 그램인 수컷 루이스 랫트(Charles River, Raleigh, NC, USA)를 (a) 물 중의 약 0.5% 메틸셀룰로오스(입수처: Sigma-Aldrich, St Louis, MO, USA)에 현탁시킨 시험 화합물 또는 (b) 비히클 단독을 약 10ml/kg의 용량 부피로 경구 투여하여 전처리하였다. 일반적으로, 용량 반응 곡선은 PDE4 억제제를 2.0, 0.4, 0.08, 0.016 및 0.0032 mg/kg의 대략적인 용량으로 사용하여 생성시킬 수 있다. 전처리 후 약 30분째에, 랫트를 약 100㎍/ml LPS 용액을 함유하는 분무기로부터 생성시킨 에어로졸화된 LPS(트리클로로아세트산 추출에 의해 제조된 혈청형 이. 콜라이 026:B6; 입수처: Sigma-Aldrich, St Louis, MO, USA)에 노출시켰다. 랫트를 분 당 약 4L의 속도로 20분간 LPS 에어로졸에 노출시켰다. LPS 노출은 내부 치수가 대략 45cm 길이 x 24cm 폭 x 20cm 높이인 폐쇄 챔버내에서 수행하였다. 분무기 및 노출 챔버는 인증된 퓸 후드(fume hood)에 수용하였다. LPS 노출 후 약 4시간째에, 랫트를 펜토바르비탈을 약 90mg/kg로 복강내에 과다투여함으로써 안락사시켰다. 기관지폐포 세척(BAL)을 14 게이지 블런트 니들을 통해, 노출된 기관내로 수행하였다. 5회의 5ml 세척을 수행하여 전체 25ml의 BAL 유체를 수거하였다. 전체 세포 카운트 및 백혈구 감별(differential)을 BAL 유체에 대해 수행하여 폐내로의 백혈구 유입량을 계산하였다. 각각의 용량에서의 호중구 억제율(비히클을 참조하여)을 계산하고, 통상적으로 프리즘 그래프-패드(Prism Graph-Pad)를 사용하여 가변 기울기의 S자형 용량 반응 곡선을 생성시켰다. 용량 반응 곡선을 사용하여 LPS 유발된 호중구증가증의 PDE4 억제제에 의한 억제에 대한 ED50 값(체중 kg 당 mg으로 표현됨)을 계산하였다.

대안적 방법: 절차의 보다 간단한 대안적인 구체예에서, 10mg/kg, 또는 더욱 일반적으로는 1.0 mg/kg 또는 0.3 mg/kg의 PDE4 억제제(또는 비히클)의 단일 경구 용량을 랫트에게 투여하고, 호중구 억제율을 계산하고, 그러한 특정 용량에 대해 기록하였다.

문헌:

[Filley G.F. Comparison of the structural and inflammatory features of COPD and asthma. Chest. 2000; 117(5) 251s-260s].

[Howell RE, Jenkins LP, Fielding LE, and Grimes D. Inhibition of antigen-induced pulmonary eosinophilia and neutrophilia by selective inhibitors of phosphodiesterase types 3 and 4 in brown Norway rats. Pulmonary Pharmacology. 1995; 8: 83-89].

[Spond J, Chapman R, Fine J, Jones H, Kreutner W, Kung TT, Minnicozzi M. Comparison of PDE 4 inhibitors, Rolipram and SB 207499(Ariflo^TM), in a rat model of pulmonary neutrophilia. Pulmonary Pharmacology and Therapeutics. 2001; 14: 157-164].

[Underwood DC, Osborn RR, Bochnowicz S, Webb EF, Rieman DJ, Lee JC, Romanic AM, Adams JL, Hay DWP, and Griswold DE. SB 239063, a p38 MAPK inhibitor, reduces neutrophilia, inflammatory cytokines, MMP-9, and fibrosis in lung. Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol . 2000; 279: L895-L902].

생체내 검정 2. 구토의 랫트 이식증 모델

배경: 선택적 PDE4 억제제는 다수의 면역 세포(예를 들어, 림프구, 단핵구)의 cAMP의 세포내 수준을 증가시킴으로써 다양한 시험관내 및 생체내 모델에서 염증을 억제하는 것으로 밝혀졌다. 그러나, 다수의 종에서의 몇몇 PDE4 억제제의 부작용은 구토이다. 다수의 랫트 염증 모델이 잘 특성화되어 있으므로, PDE4 억제제의 유익한 항염증 효과를 보이기 위해 이들을 절차(상기 생체내 검정 1 참조)에 사용할 수 있다. 그러나, 랫트는 구토 반응을 나타내지 않아서(이들은 보밋 반사를 나타내지 않음), PDE4 억제제의 유익한 항염증 효과 및 구토 사이의 관계는 랫트에서 직접적으로 연구하기 어려웠다.

그러나, 1991년에, 다케다(Takeda) 등(하기 문헌 섹션 참조)은 이식증 섭식 반응이 랫트에서의 구토와 유사함을 입증하였다. 이식증 섭식(pica feeding)은 랫트가 독소를 흡수하는 것을 보조할 수 있는 비영양 물질, 예를 들어 토양 또는 특히 점토(예를 들어, 카올린)를 섭취하는 랫트에서의 질환에 대한 거동 반응이다. 이식증 섭식은 이동 및 화학물질(특히 사람에서 구토성인 화학물질)에 의해 유발될 수 있고, 사람에서 구토를 억제하는 약물에 의해 약리학적으로 억제될 수 있다. 랫트 이식증 모델, 생체내 검정 2는 (별개의 세트의) 랫트(예를 들어 상기 생체내 검정 1)에서의 생체내 항염증 검정과 유사하게 약리학적으로 관련된 용량에서 PDE4 억제에 대한 랫트의 이식증 반응의 수준을 측정할 수 있다.

동일한 종에서의 항염증 및 이식증 검정은 함께 본 발명의 화합물/염의 랫트에서의 "치료 지수"(TI)에 대한 데이터를 제공할 수 있다. 랫트 TI은, 예를 들어 a) 검정 2로부터의 잠재적으로 구토성인 이식증 반응 ED50 용량 대 b) 랫트 항염증 ED50 용량(예를 들어, 생체내 검정 1에서의 랫트 호중구증가증-억제에 의해 측정됨)의 비로서 계산될 수 있으며, 보다 큰 TI 비는 가능하게는 다수의 항염증 용량에서 보다 낮은 구토를 나타낸다. 이는 항염증 효과를 지니는 본 발명의 화합물 또는 염의 비구토성 또는 저구토성의 약제학적 용량을 선택할 수 있게 해준다. 그러나, 저구토성 PDE4 억제 화합물이 본 발명에 필수적이지 않다는 것이 인식된다.

절차: 실험 1일째, 랫트를 베딩(bedding) 또는 "인리치먼트(enrichment)"없이 우리에 개별적으로 가두었다. 랫트를 와이어 스크린에 의해 우리 바닥으로부터 떨어뜨려 놓았다. 표준 랫트 먹이 및 점토 펠레트를 함유한 미리 칭량한 먹이 컵을 우리에 넣었다. 점토 펠레트(입수처: Languna Clay Co, City of Industry, CA, USA)는 먹이 펠레트와 동일한 크기 및 형태였다. 랫트를 점토에 72시간 동안 적응시키고, 이 동안 우리로부터의 컵 및 음식 및 점토 부스러기를 0.1 그램 근사치까지 측정할 수 있는 전자 저울로 매일 칭량하였다. 72 시간의 적응 기간의 종료까지, 랫트는 일반적으로 점토 펠레트에 흥미를 나타내지 않았다.

72시간의 종료시에, 랫트를 깨끗한 우리에 넣고, 먹이 컵을 칭량하였다. 점토를 여전히 규칙적으로 소비하는 랫트는 실험으로부터 제외시켰다. 다크 사이클(dark cycle)(동물이 활동적이고 먹이를 섭취해야 하는 시간) 바로 직전에, 동물을 처리군으로 분할하고, 본 발명의 화합물/염의 용량(다양한 처리군에 대해 다양한 용량) 또는 비히클 단독으로 약 2ml/kg의 용량 부피로 경구 투여하였다. 이러한 경구 투여에서, 본 화합물/염은 예를 들어, 물 중의 약 0.5% 메틸셀룰로오스(입수처: Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA)중의 현탁액 형태일 수 있다. 먹이 및 점토 컵 및 우리 부스러기를 다음날 칭량하고, 각각의 개별 동물에 의해 그날밤 소비된 전체 점토 및 먹이를 계산하였다.

용량 반응을 먼저 데이터를 퀀탈(quantal) 반응으로 전환시킴으로써 계산하였는데, 여기서 동물은 이식증 반응에 대해 양성 또는 음성이었다. 랫트는 이의 대조군의 평균에 비해 0.3 그램 이상의 점토를 소비하는 경우 "이식증 양성"이었다. D50은 스태티스티카(Statistica) 소프트웨어 통계 패키지에 의해 수행되는 로지스틱 회귀를 사용하여 일반적으로 계산되었다. 그 후, 체중 kg 당 mg의 이식증 반응 ED50 값을 계산할 수 있다.

이식증 반응 ED50 값은 랫트에 경구 투여된 동일한 화합물에 대한 호중구증가증 억제 ED50 값(상기 생체내 검정 1에 의해 측정될 수 있음)과 비교될 수 있으며, 이로써 랫트에서의 치료 지수(TI)가 다음과 같이 계산될 수 있다:

랫트 치료 지수(TI)(50/50) = 이식증 반응 ED50 값

랫트 호중구증가증 억제 ED50 값

일반적으로, 이렇게 계산된 치료 지수(TI)는 종종 페렛(ferret)에서 계산된 TI(D20/D50)(하기 생체내 검정 4 참조)와 상이하며, 예를 들어 종종 이보다 실질적으로 높을 수 있다.

다르게는, 예를 들어 보다 단순한 시험에 있어서, 생체내 검정 2(피카)는 단지 단일 경구 용량의 시험 화합물(예를 들어, 경구적으로 10 mg/kg)만을 사용할 수 있다.

문헌 :

[Beavo JA, Contini, M., Heaslip, R.J. Multiple cyclic nucleotide phosphodiesterases. Mol Pharmacol . 1994; 46:399-405].

[Spond J, Chapman R, Fine J, Jones H, Kreutner W, Kung TT, Minnicozzi M. Comparison of PDE 4 inhibitors, Rolipram and SB 207499(Ariflo^TM), in a rat model of pulmonary neutrophilia. Pulmonary Pharmacology and Therapeudtics . 2001; 14:157-164].

[Takeda N, Hasegawa S, Morita M, and Matsunaga T. Pica in rats is analogous to emesis: an animal model in emesis research. Pharmacology, Biochemistry and Behavior. 1991; 45:817-821].

[Takeda N, Hasegawa S, Morita M, Horii A, Uno A, Yamatodani A and

Matsunaga T. Neuropharmacological mechanisms of emesis. I . Effects of antiemetic drugs on motion- and apomorphine-induced pica in rats. Meth Find Exp Clin Pharmacol . 1995; 17(9) 589-596].

[Takeda N, Hasegawa S, Morita M, Horii A, Uno A, Yamatodani A and Matsunaga T. Neuropharmacological mechanisms of emesis. II . Effects of antiemetic drugs on cisplatin-induced pica in rats. Meth Find Exp Clin Pharmacol. 1995; 17(9) 647-652].

생체내 검정 3. 랫트에서의 LPS 유발된 폐 호중구증가증: 기관내 투여된 PDE4 억제제의 효과

본 검정은 폐에서의 염증의 동물 모델, 특히 리포폴리사카라이드(LPS)에 의해 유발된 호중구증가증이며, 기관내(i.t.) 투여된 PDE4 억제제에 의한 이러한 호중구증가증의 추정적 억제(항염증 효과)의 연구를 가능하게 한다. PDE4 억제제는 바람직하게는 건조 분말 또는 습윤 현탁액 형태로 존재한다. i.t. 투여는 흡입 투여의 한 가지 모델이며, 폐로의 국소적 전달을 가능하게 한다.

동물: 챨스 리버(Charles River, Raleigh, NC, USA 또는 Charles River, United Kingdom) 랫트에 의해 공급받은 수컷 CD(Sprague Dawley Derived)를 우리 당 5마리의 랫트의 군으로 가두고, 베딩/네스팅(nesting) 물질을 정기적으로 교환해주며 전달 후 적어도 5일 동안 적응시키고, 임의적으로 제공되는 SDS 식이 R1 펠레트화 먹이를 공급하고, 매일 교환되는 저온살균된 동물 등급 음용수를 공급하였다.

건조 분말 투여를 위한 장치: 투여 니들 및 시린지 사이의 1회용 3-웨이 탭(3-way tap). 기관내 투여 장치(3-웨이 멸균 탭, Vycon Ref 876.00; 또는 펜 센츄리 건조 분말 취입기, DP-4)을 칭량한 후, 약물 블렌드 또는 흡입 등급 락토오스(비히클 대조군)을 탭에 첨가하고, 탭을 폐쇄하여 약물의 손실을 방지하고, 탭을 재칭량하여 탭내의 약물의 중량을 측정하였다. 투여 후, 탭을 다시 칭량하여 탭에 남아있는 약물의 중량을 측정하였다. 루어 허브(luer hub)를 지닌 19-게이지 152mm(6인치) 길이의 시그마(Sigma) Z21934-7 시린지 니들인 니들을 약 132mm(5.2 인치)로 공업적으로 절단하고, 말단을 블런트화시켜서 랫트의 기관 손상을 방지하고, 니들을 약물 전달 전 및 후에 칭량하여, 투여 후 약물이 니들에 보유되어 있지 않음을 확인하였다.

습윤 현탁액 투여를 위한 장치: 이것은 상기와 유사하지만, 전방 말단이 니들 축에 대해 약간 비스듬한 블런트 투여 니들을 사용하였으며, 가요성 플라스틱 포어텍스(portex) 캐뉼러가 니들에 삽입되어 있었다.

약물 및 재료: 리포폴리사카라이드(LPS)(혈청형:0127:B8)를 인산염 완충 식염수(PBS)에 용해시켰다. PDE4 억제제를, 예를 들어 본원에 기재된 마이크론화 실시예에 따라 입도 감소된(예를 들어, 마이크론화) 형태로 사용하였다.

약물의 건조 분말 투여를 위해, 약물 및 흡입 등급 락토오스를 포함하는 본원에 기재된 건조 분말 제형 실시예를 임의적으로 사용할 수 있다. 사용될 수 있는 하나의 적합한 흡입 등급 락토오스는 10% 미세입자(말번 입도에 의해 측정하여 15um (마이크론) 이하의 입도를 갖는 물질 10%)를 지녔다.

약물(수성)의 습윤 현탁액을, 필요한 부피의 비히클을 약물에 첨가함으로써 제조할 수 있으며; 사용된 비히클은, 예를 들어 식염수 단독, 또는 식염수/트윈(예를 들어, 0.2% 트윈 80)의 혼합물일 수 있다. 습윤 현탁액을 일반적으로 사용 전에 약 10분간 음파처리하였다.

PDE 4 억제제의 제조 및 이의 투여: 랫트를, 동물을 밀폐된 퍼스펙스(Perspex) 챔버에 넣고, 이들을 이소플로우란(4.5%), 산화질소(분 당 3리터) 및 산소(분 당 1리터)의 기체 혼합물에 노출시킴으로써 마취시켰다. 일단 마취되면, 동물을 스테인레스 스틸 i.t. 투여 지지 테이블상에 위치시켰다. 이들을 약 35°각도로 바로 눕혔다. 광을 인후의 외측에 대해 비스듬히 조절하여 기관이 조명되도록 하였다. 구강을 열고, 상 기도의 개구부를 가시화하였다. 절차는 PDE4 억제제의 습윤 현탁액 및 건조 분말 투여에 대해 다음과 같이 달라진다:

습윤 현탁액의 투여: 포어텍스 캐뉼러를 랫트 기관내로 조심스럽게 삽입된 블런트 금속 투여 니들을 통해 도입시켰다. 동물에게, 각각의 상이한 약물군에 대해 사용된 새로운 내부 캐뉼러를 사용하여 투여 니들을 통해 비히클 또는 PDE4 억제제를 기관내 투여하였다. 제형을 투여 니들에 부착된 시린지를 사용하여 기관내로 서서히 (약 10초) 투여하였다.

건조 분말의 투여: 기관내 투여 장치(예를 들어, 3-웨이 멸균성 탭 장치, Vycon 876.00; 또는 펜 센츄리 건조 분말 취입기, DP-4) 및 니들을 1차 갈림부의 약 1cm 위에 위치하도록 설정된 소정의 지점까지 랫트 기관내로 삽입하였다. 또 다른 오퍼레이터는 특정된 위치에서 니들을 유지하며, 전체 약물량을 탭으로부터 배출시키고자 시린지를 누름(이상적으로는 동물이 숨을 들이쉼과 동시에)으로써 2 x 4ml의 공기를 (3-웨이 탭 장치를 사용하여) 3-웨이 탭을 통해 전달하였다(다르게는, 2 x 3ml의 공기를 펜 센츄리 건조 분말 취입 장치를 이용하여 전달하였다). 투여 후, 니들 및 탭 또는 장치를 기도로부터 제거하고, 탭을 폐쇄하여 임의의 잔류 약물이 탭으로부터 배출되는 것을 방지하였다.

습윤 현탁액 또는 건조 분말을 투여한 후, 동물을 테이블로부터 분리하고, 이들이 마취의 효과로부터 회복될 때까지 일정하게 관찰하였다. 동물을 보존 우리에 복귀시키고, 먹이 및 물에 자유롭게 접근하게 한 후; 이들을 관찰하고, 임의의 특이한 거동 변화를 기록하였다.

LPS 로의 노출: 비히클 대조군 또는 PDE4 억제제를 i.t. 투여한 지 약 2시간 후에, 랫트를 밀폐된 퍼스펙스 용기내로 넣고, LPS의 에어로졸(분무기 농도 약 150㎍/ml)에 15분간 노출시켰다. LPS의 에어로졸을 분무기(DeVilbiss, USA)에 의해 생성시키고, 이를 퍼스펙스 노출 챔버로 향하게 하였다. 15분의 LPS 노출 기간 후, 동물을 보존 우리로 복귀시키고, 먹이 및 물에 자유롭게 접근하게 하였다.

[대안적인 구체예에 있어서, 랫트는 i.t. 투여한 지 2시간이 안되어서(예를 들어, 약 30분 째에) LPS에 노출될 수 있다. 또 다른 대안적인 구체예에 있어서, 랫트는 PDE4 억제제가 장기간의 작용 지속시간을 지니는 지를 시험하기 위해 비히클 또는 PDE4 억제제에 의한 i.t. 투여 후에 2시간 초과(예를 들어, 약 4시간 내지 약 24시간)로 LPS에 노출될 수 있다(이는 필수적인 것은 아니다).]

기관지폐포 세척: LPS 노출시킨 후 약 4시간째에, 동물을 나트륨 펜토바르비톤을 과량투여(i.p.)하여 치사시켰다. 기관에 폴리프로필렌 튜브로 캐뉼러삽입하고, 폐를 3 x 5ml의 헤파린처리된 (25 유닛/ml) 인산염 완충 식염수(PBS)로 세척하였다.

호중구 세포 카운트: 기관지폐포 세척(BAL) 샘플을 약 1300rpm에서 약 7분간 원심분리하였다. 상층액을 제거하고, 생성된 세포 펠레트를 약 1ml PBS 중에 재현탁시켰다. 재현탁 유체의 세포 슬라이드를, 약 100㎕의 재현탁된 BAL 유체를 시토스핀 홀더내에 넣음으로써 준비한 다음, 약 5000 rpm에서 약 5분간 스피닝하였다. 슬라이드를 공기 건조시킨 후, 레이쉬만스(Leishmans) 염색으로 염색시켜서 (20분), 차별적 세포 카운팅을 가능하게 하였다. 또한, 전체 세포를 재현탁액으로부터 카운팅하였다. 이들 두 개의 카운트로부터, BAL 중의 전체 호중구의 수를 측정하였다. 호중구의 PDE4-억제제 유발된 억제의 측정을 위해, 비히클로 처리된 랫트 및 PDE4 억제제로 처리된 랫트에서의 호중구 카운트의 비교를 수행한다.

투여 단계에서 사용된 PDE4 억제제의 용량을 변화시킴으로써(예를 들어, 체중 kg 당 PDE4 억제제 0.2 또는 0.1mg에서 예를 들어 0.01mg/kg의 PDE4 억제제로), 용량 반응 곡선을 생성시킬 수 있다.

생체내 검정 4. 의식있는 페렛에서의 경구 투여된 PDE 4 억제제의 치료 지수의 평가

1.1 재료

하기 재료를 본 실험에 사용하였다:

PDE4 억제제는 고정 부피(약 1ml)의 아세톤에 용해시킨 후 크레모포르를 약 20%의 최종 부피까지 첨가함으로써 경구(p.o.) 투여용으로 준비하였다. 아세톤을 질소 가스의 흐름을 용액상으로 향하게 함으로써 증발시켰다. 일단 아세톤이 제거되면, 용액을 증류수를 사용하여 최종 부피가 되게 하였다. LPS를 인산염 완충 식염수중에 용해시켰다.

1.2 동물

수컷 페렛(Mustela Pulorius Furo, 체중 1 내지 2kg)을 이동시키고, 7일 이상 동안 적응시켰다. 식이는 주당 3회 제공되는 위스커스(Whiskers^TM) 고양이 먹이와 함께 임의적으로 제공되는 SDS 식이 C 펠레트화 먹이를 포함하였다. 동물은 매일 교환되는 저온살균된 동물 등급 음용수를 공급받았다.

1.3 실험 프로토콜(들)

1.3.1 PDE4 억제제의 투여

PDE4 억제제를 약 1mg/kg의 용량 부피를 사용하여 경구(p.o.) 투여하였다. 페렛을 밤새 금식시켰지만, 물에 대해서는 자유롭게 접근하게 하였다. 동물에게 인후의 후부를 지나서 식도로 이어지는 약 15cm 투여 니들을 사용하여 비히클 또는 PDE4 억제제를 경구 투여하였다. 투여 후, 동물을 퍼스펙스 문이 장착된 보존 우리에 복귀시켜서 관찰하고, 물에 대해 자유롭게 접근하게 하였다. 동물을 일정하게 관찰하고, 임의의 구토 에피소드(구역질 및 보밋팅) 또는 거동 변화를 기록하였다. 동물을 p.o. 투여 후에 약 60 내지 90분째에 먹이에 접근하게 하였다.

1.3.2 LPS 로의 노출

화합물 또는 비히클 대조군의 경구 투여 후 약 30분째에, 페렛을 폐쇄된 퍼스펙스 용기내로 넣고, LPS의 에어로졸(약 30㎍/ml)에 약 10분간 노출시켰다. LPS의 에어로졸을 분무기(DeVilbiss, USA)에 의해 생성시키고, 이를 퍼스펙스 노출 챔버내로 향하게 하였다. 10분의 노출 기간 후, 동물을 보존 우리로 복귀시키고, 물에 대해 자유롭게 접근하게 하고, 나중에 먹이에 자유롭게 접근하게 하였다. 동물의 일반적 관찰을 경구 투여 후 2.5시간 이상의 기간 동안 지속하였다. 모든 구토 에피소드 및 거동 변화를 기록하였다.

1.3.3 기관지폐포 세척 및 세포 카운트

LPS 노출 후 6시간째에, 동물을 나트륨 펜토바르비톤을 과량으로 복강내 투여함으로써 치사시켰다. 그 후, 기관을 폴리프로필렌 튜브로 캐뉼러삽입하고, 폐를 약 20ml의 헤파린처리된(10 단위/ml) 인산염 완충 식염수(PBS)로 2회 세척하였다. 기관지폐포 세척(BAL) 샘플을 약 1300rpm에서 약 7분간 원심분리하였다. 상등액을 분리하고, 생성된 세포 펠레트를 약 1ml PBS에 재현탁시켰다. 재현탁된 유체의 세포 도말본을 준비하고, 레쉬만스 염색으로 염색하여 차별적 세포 카운팅을 가능하게 하였다. 남아있는 재현탁된 샘플을 사용하여 전체 세포 카운트를 수행하였다. 이로부터, BAL 샘플 중의 전체 호중구 개수를 측정하였다.

1.3.4 약물동력학적 판독

하기 파라미터를 기록하였다:

a) 50% 억제(D50)를 제공하는 PDE4 억제제의 용량을 측정하기 위한 LPS 유발된 폐 호중구증가증의 억제 %

b) 구토 에피소드 - 20% 구토 발생률(D20)을 제공하는 PDE4 억제제의 용량을 측정하기 위해 보밋팅 및 구역질의 횟수를 카운팅하였다.

c) 그 후, 이러한 검정을 이용한 치료 지수(TI)를 하기 방정식을 사용하여 각각의 PDE4 억제제에 대해 계산하였다:

폐렛 치료 지수(TI)(D20/D50) = D20 페렛에서의 구토 발생률

D50 페렛에서의 호중구증가증 억제율

이러한 생체내 검정 4를 이용하여 계산된 페렛 치료 지수(TI)(D20/D50)는 랫트 경구 염증 및 이식증 섭식 검정 1+2를 사용하여 계산된 랫트 TI(50/50)과 종종 실질적으로 상이하며, 예를 들어 종종 이보다 실질적으로 더 낮았다.

특허 및 특허 공보를 포함하지만 이들에 제한되지 않는 본 명세서에 인용된 모든 간행물은 각각의 개별적 간행물이 그 전체내용이 본원에 참조로 인용된 것으로 상세하고 개별적으로 나타나 있는 바와 같이 본원에 참조로 포함되어 있다.

본 발명의 다양한 양태를 하기 실시예를 참조로 하여 기재하고자 한다. 이들 실시예는 본 발명을 단지 예시하는 것이며, 본 발명의 범위를 제한하고자 하는 것이 아니다. 이러한 실시예에서, 용어 "중간체"는 "실시예 화합물(들)의 합성에 사용하기 위한 중간 화합물의 합성을 나타낸다. "실시예 화합물들"은 일반적으로 본 발명의 예시적인 화합물 또는 염, 예를 들어, 화학식(I)의 화합물 또는 이의 염이다. "조성물 실시예"는 본 발명의 약제학적 조성물에 대한 비제한적인 예이다.

본원에서 사용된 약어:

DCM 디클로로메탄

DIPEA 디이소프로필에틸 아민(ⁱPr₂NEt)

DMF 디메틸 포름아미드

DMSO 디메틸 설폭시드

EDC 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카르보디이미드 히드로클로라이드

EtOAc 에틸 아세테이트

EtOH 에탄올

h 시간

HATU O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트

HCl 염화수소 또는 염산

HOBT 히드록시벤조트리아졸=1-히드록시벤조트리아졸

M 몰농도 또는 리터당 몰

MeCN 아세토니트릴

MeOH 메탄올

NaHCO₃ 중탄산나트륨

NaOH 수산화나트륨

Na₂S0₄ 황산나트륨

KOH 수산화칼륨

THF 테트라히드로푸란

HPLC 고압 액체 크로마토그래피

SPE 고체상 추출

NMR 핵자기공명(여기서: s=단일선, d=이중선, t=삼중선, q= 사중선, dd= 이중선의 이중, m=다중선, br=광역, H=양성자의 수)

LCMS 액체크로마토그래피/질량분광분석

TLC 박막 크로마토그래피

h 시간

T_RET 체류시간(일반적으로 LCMS로부터)

실온 (주변온도): 이러한 온도는 일반적으로 약 20 내지 약 25℃의 범위이다.

일반적인 실험에 대한 상세사항

본원에서 일반적으로 이용된 기계적 방법

LCMS(액체 크로마토그래피/ 질량분광분석 )

양이온 전기분무 모드에서 작동하는 워터스 ZQ 질량분광기(Waters ZQ mass spectrometer), 질량 범위 100-1000amu

UV 파장: 215-330nM

컬럼: 3.3cm x 4.6mm ID, 3㎛ ABZ+PLUS

유속: 3ml/min

주입 용적: 5㎕

용매 A: 95% 아세토니트릴 + 0.05% 포름산

용매 B: 0.1% 포름산 + 10mM 암모늄 아세테리트

구배: 0% A/0.7min, 0-100% A/3.5min, 100%A/1.1min, 100-0% A/0.2min

동일한 형태의 컬럼 및 동일한 유속, 주입 용적, 용매 및 구배가 이용되는 경우에도 샘플이 상이한 워터스 기계상에서 측정되는 경우에는 본원에서 기재된 체 류시간(T_RET)이 약간 다를 수 있다(+/- 0.1min)는 것을 주지해야 한다.

LCMS(액체 크로마토그래피/ 질량분광분석 )

(중간체 2A, 3A, 4A 및 5A, 및 실시예 1B에 대해서만)

양이온 전기분무 모드에서 작동하는 아질런트 1100 질량 분광분석기(Agilent 1100 mass spectrometer), 질량 범위 100-700amu

UV 파장: 214-254nM

컬럼: 2.1cm x 50mm ID, 5㎛ 조르박스(Zorbax)

유속: 1ml/min

주입 용적: 1㎕

용매 A: 물 + 0.02% 트리플루오로아세트산

용매 B: 아세토니트릴 + 0.018% 트리플루오로아세트산

구배: 10-80% A/3.0min, 80% A/1.2min, 80-10% A/1.Omin

질량 지향적인 자동제조 HPLC

제조 컬럼: 수펠코실 ABZ플러스(Supelcosil ABZplus)(10cm x 2.12cm)(일반적으로 10cm x 2.12cm x 5㎛).

UV 파장: 200-320nM

유속: 20ml/min

주입 용적: 1ml; 또는 더욱 바람직하게는 0.5 ml

용매 A: 0.1% 포름산

용매 B: 95% 아세토니트릴 + 5% 포름산; 또는 더욱 바람직하게는 99.95% 아세토니트릴 + 0.05% 포름산

구배: 100% A/1min, 100-80% A/9min, 80-1% A/3.5min, 1% A/1.4min, 1- 100% A/0.1min

자동제조 길슨 역상 HPLC(Gilson reverse-phase HPLC)(실시예 1B에 대해서)

제조 컬럼: YMC ODS-A(50mm x 50mm)

UV 파장:215-254nM

유속:70ml/min

주입 용적:3ml

용매 A: 물

용매 B: 아세토니트릴

구배: 35-95%B/5min

크로마토그래피 정제를 위한 키랄 컬럼

키랄파크 AS 컬럼(ChiralPak AS columns)을 키랄 테크놀로지즈 유럽 살(Chiral Technologies Europe Sarl, Illkirch, France (전화:+33(0) 388795200 ;(cte@chiral.fr ; www.chiral.fr))로부터 얻을 수 있다.

중간체 및 실시예 화합물

본원에 상세히 기재되지 않은 시약은 일반적으로 화학약품 공급자들, 예를 들어, 유명한 공급자, 예컨대, 시그마-알드리치(Sigma-Aldrich) 사로부터 구매할 수 있다. 중간체 및 실시예에서 언급된 출발물질중 일부에 대한 공급자의 주소 및 /또는 상세사항은 다음과 같다:

- 알드리치 (카탈로그 명칭), 시그마-알드리치 컴퍼니 엘티디.(Sigma-Aldrich Company Ltd.)(Dorset, United Kingdom, 전화: +44 1202 733114 ; 팩스: +44 1202 715460; ukcustsv@eurnotes.sial.com); 또는

- 알드리치 (카탈로그 명칭), 시그마-알드리치 코프.(Sigma-Aldrich Corp.)(P.O. Box 14508, St. Louis, MO 63178-9916, USA ; 전화: 314-771-5765; fax: 314-771-5757; custserv@sial.com); 또는

- 알드리치 (카탈로그 명칭), 시그마-알드리치 케미에 게엠베하(Sigma-Aldrich Chemie GmbH), (Munich, Germany; 전화: +49 89 6513 0; Fax: +49 89 6513 1169; deorders@eurnotes.sial.com).

- 아스타테크, 인크.(AstaTech, Inc.)(8301 Torresdale Ave., 19C, Philadelphia, PA 19136, USA)

- 플루카 케미에 아게(Fluka Chemie AG)(Industriestrasse 25, P.O. Box 260, CH-9471 Buchs, Switzerland)

- 랜카스터 신서시스 엘티디.(Lancaster Synthesis Ltd.)(Newgate, White Lund, Morecambe, Lancashire LA3 3DY, United Kingdom)

- 트랜스 월드 케미컬스, 인크.(Trans World Chemicals, Inc.)(14674 Southlawn Lane, Rockville, MD 20850, USA).

중간체에 대한 표

중간체 번호	명칭
1	에틸 4-클로로-1-에틸-1H-피라졸로[3,4-b]피리딘-5-카르복실레이트
2,2A	에틸 4-[(1-{[(1,1-디메틸에틸)옥시]카르보닐}-4-피페리디닐)아미노]-1-에틸-1H-피라졸로[3,4-b]피리딘-5-카르복실레이트
3,3A	에틸 1-에틸-4-(4-피페리디닐아미노)-1H-피라졸로[3,4-b]피리딘-5-카르복실레이트 히드로클로라이드
4,4A,4B	에틸 4-{[1-(아미노카르보닐)-4-피페리디닐]아미노}-1-에틸-1H-피라졸로[3,4-b]피페리딘-5-카르복실레이트
5,5A	4-{[1-(아미노카르보닐)-4-피페리디닐]아미노}-1-에틸-1H-피라졸로[3,4-b]피리딘-5-카르복실산
6	4-클로로-1-에틸-1H-피라졸로[3,4-b]피리딘-5-카르복실산
7	4-클로로-1-에틸-1H-피라졸로[3,4-b]피리딘-5-카르보닐 클로라이드
8	4-클로로-N-[(3,4-디메틸페닐)메틸]-1-에틸-1H-피라졸로[3,4-b]피리딘-5-카르복스아미드
9	1,1-디메틸에틸[1-(아미노카르보닐)-4-피페리디닐]카르바메이트
10	4-아미노-1-피페리딘카르복스아미드 히드로클로라이드

중간체 1: 에틸 4- 클로로 -1-에틸-1H- 피라졸로[3,4-b]피리딘 -5- 카르복실레이트

5-아미노-1-에틸 피라졸(806g)(예를 들어, 알드리치로부터 구입)과 디에틸에톡시메틸렌말로네이트(1621ml)(예를 들어, 알드리치로부터 구입)의 혼합물을 160℃에서 질소하에 딘-스타크 장치(Dean-Stark apparatus)가 구비된 5 리터 플라스크에서 1.5시간 동안 교반하고 가열하였다. 반응 혼합물에서 증류되어 나오는 에탄올(320ml)를 딘-스타크 장치에 수거하였다. 반응 혼합물을 160℃에서 질소하에 추가로 6 시간 동안 교반하고 가열하여, 실온으로 냉각시키고, 두 배치(batch)로 분할하였다(1200ml + 1000ml: "배치 1" 및 "배치 2"). 첫 번째 (1200ml) 배치("배치 1")를 두 개의 대체로 동일한 양의 분획으로 분할하였다. 옥시염화 인(1.85ℓ)을 각각의 분획에 첨가하였다. 반응 혼합물을 이어서 두 개의 5ℓ 플라스크에서 13 시간 동안 환류 가열하였다. 과량의 옥시염화 인을 두 플라스크로부터 감압하에 증류시켰다. 잔류물을 실온으로 냉각시키고, 두 플라스크의 함유물을 한 분획(10kg)의 분쇄된 얼음상으로 서서히 부었다. 혼합물을 15분 동안 교반하고, 이어서 디에틸 에테르(3 x 2.5ℓ)로 추출하였다. 합한 유기물을 물(2ℓ) 및 염수(2 x 2ℓ)로 세척하고, Na₂SO₄로 건조시켰다. 용매를 증발시켜 미정제 중간체 1을 갈색 오일(865g)로서 수득하고, 냉각에 의해서 즉시 고형화시켰다. 동일한 과정으로 3.1ℓ의 옥시염화 인을 이용하여 추가의 710g의 미정제 중간체 1을 고형물로서 "배치 2"로부터 제조하였다; 즉 전체 1575g의 미정제 중간체 1을 고형물로서 분리하였다. 이러한 고형물(430g)을 교반하면서 50℃로 가열함으로써 헥산(4.3ℓ, 즉, 10배 용적)에 용해시켰다. 활성탄(64.5g)을 첨가하였다. 혼합물을 50℃에서 1.0시간 동안 교반하고, 이어서 셀라이트 베드(cellite bed)를 통해서 여과하였다. 셀라이트 베드를 헥산(2 x 430ml)으로 세척하였다. 합한 여액 및 세척액을 약 950ml로 농축시키고, 10 내지 15℃에서 밤새 정치시켰다. 생성된 현탁액을 여과하였다. 잔류 고형물을 냉각된 헥산(3 x 215ml 슬러리 세척, 및 2 x 400ml 치환 세척)으로 세척하고, 건조시켜 중간체 1(280g)을 담황색 고형물로서 수득하였다. 합한 모액(mother liquor) 및 세척액을 약 300ml로 농축시키고, 이어서 냉각시키고 10 내지 15℃에서 밤새 정치시켜 추가의 30g의 중간체 1을 수득하였다. LCMS에서는 MH⁺=254; T_RET=3.09분이었다.

중간체 2 : 에틸 4-[(1-{[(1,1-디메틸에틸) 옥시 ]카르보닐}-4- 피페리디닐 )아미노]-1-에틸-1H- 피라졸로[3,4-b]피리딘 -5- 카르복실레이트

MeCN(15ml)중의 중간체 1(0.5g, 2mmol), 1,1-디메틸에틸 4-아미노-1-피페리딘카르복실레이트(0.59g, 2.9mmol)(예를 들어, 아스타테크로부터 구입) 및 DIPEA(0.87ml, 5mmol, 2.5 당량)의 용액을 18시간 동안 환류 가열하였다. 반응 혼합물을 냉각시켰다. 용매를 감압하에 제거하고, 잔류물을 DCM(50ml)와 포화된 NaHCO₃ 용액(40ml) 사이에 분배시켰다. 유기 분획을 소수성 프릿(frit)을 통해서 수거하고 감압하에 농축시켰다. 잔류물을 용리제로서 시클로헥산 중의 0% 내지 100% EtOAc의 구배를 이용하는 100g 실리카 카트리지를 통과시킴으로써 정제하고, 생성물을 함유하는 분획을 감압 하에 농축시켜 중간체 2를 고형물(0.74g)로서 수득하였다. LCMS에서는 MH⁺=418; T_RET=3.43분이었다.

추가의 임의적 합성: MeCN(50ml) 및 DIPEA(8.6ml)(임의로 약 1.5 내지 2ml EtOH) 중의 중간체 1(2.3g) 및 1,1-디메틸에틸 4-아미노-1-피페리딘카르복실레이트(2g)의 용액을, 예를 들어, 85℃ 또는 90℃에서 16시간 동안 가열하였다. 용매를 감압하에 제거하고, 잔류물을 DCM(예, 약 65ml)과 물(예, 약 30ml) 사이에 분배시 켰다. 유기 분획을 소수성 프릿을 통해서 수거하고 용매를 감압하에 제거하여 중간체 2를 수득하였다.

중간체 3 : 에틸 1-에틸-4-(4- 피페리디닐아미노 )-1H- 피라졸로[3,4-b]피리딘 -5-카르복실레이트 히드로클로라이드

중간체 2(4.1g)를 1,4-디옥산(30ml) 중의 4.0M 염화수소로 처리하고, 반응 혼합물을 22℃에서 1시간 동안 교반하였다. 용매를 제거하여 중간체 3을 백색 고형물(4.0g)로서 수득하였다. LCMS에서는 MH⁺=318; T_RET=2.1분이었다.

중간체 4 : 에틸 4-{[1-( 아미노카르보닐 )-4- 피페리디닐 ]아미노}-1-에틸-1H- 피라졸로[3,4-b]피페리딘 -5- 카르복실레이트

THF(100ml)중의 중간체 3(4g)의 현탁액을 DIPEA(2.6ml)로 처리한 다음, 트리 메틸실릴 이소시아네이트(1.99ml, 1.7g)로 처리하고, 용액을 22℃에서 2시간 동안 교반하였다. 휘발성 용매를 감압하에 제거하고, 잔류물을 DCM(예, 50ml)과 물(예, 25ml) 사이에 분배시켰다. 유기 및 수성층을 분리하였다. 수성 상을 DCM(예, 50ml)로 추출하였다. 유기층을 합하고, 소수성 프릿을 통과시킴으로써 물로부터 분리하고, 감압하에 농축시켜 중간체 4를 고형물(4g)로서 수득하였다. LCMS에서는 MH⁺=361; T_RET=2.45분이었다.

중간체 5 : 4-{[1-( 아미노카르보닐 )-4- 피페리디닐 ]아미노}-1-에틸-1H- 피라졸로[3,4-b]피리딘 -5- 카르복실산

EtOH(50ml)중의 중간체 4(4g)의 용액을 물(20ml)중의 NaOH(1.77g)의 용액으로 처리하고, 반응 혼합물을 60℃에서 5 시간 동안 가열하였다. 용매를 제거하고 잔류물을 물(약 8ml)중에 용해시키고, pH를 3(2M HCl)로 조정하고 생성된 침전물을 여과하여 수거하고, 60℃에서 진공하에 건조시켰다. LCMS에서는 피페리딘 우레아가 피페리딘으로 부분적으로 가수분해되었음을 나타냈다. 따라서, 반응물로부터의 침전물을 EtOH(100ml)에 용해시키고, 용액을 트리메틸실릴 이소시아네이트(3ml)와 DIPEA(10ml)로 처리하고, 실온에서 밤새 교반하였다. 용매를 제거하고, 물을 잔류 물에 첨가하였으며, pH를 3(2M HCl)로 조정하고, 혼합물을 0℃로 30분 동안 냉각시키고, 생성된 침전물을 여과하여 수거하고, 건조시켜 중간체 5를 백색 고형물(2.66g)로서 수득하였다. LCMS에서는 MH⁺=333; T_RET=2.0분이었다.

중간체 6 : 4- 클로로 -1-에틸-1H- 피라졸로[3,4-b]피리딘 -5- 카르복실산

1,4-디옥산(100ml)중의 중간체 1(20.0g 78.8mmol)의 용액을 물(30ml)중의 KOH(18g의 펠릿)의 용액으로 처리하고, 반응 혼합물을 실온에서 24 시간 동안 교반하였다. 용매를 증발시키고, 잔류물을 pH3으로 산성화시켰다(2M 염산). 생성된 백색 침전물을 여과하여 수거하고, 진공하에 밤새 건조시켜 중간체 6을 백색 고형물(16.9g)로서 수득하였다. LCMS에서는 MH⁺=226; T_RET=2.61분이었다.

중간체 7 : 4- 클로로 -1-에틸-1H- 피라졸로[3,4-b]피리딘 -5-카르보닐 클로라이드

염화티오닐(SOCl₂, 100ml)중의 중간체 6(17.8g 78.8mmol)의 용액을 질소하에 3.5 시간 동안 환류 가열하였다. 용액을 실온으로 밤새 냉각시켰다. 염화티오닐 을 진공하에 제거하고, 어떠한 잔류 염화티오닐을 톨루엔(약 30ml)과의 공비 증류에 의해서 진공하에 제거하고, 이러한 과정을 반복하여 염화티오닐을 제거하여 중간체 7을 베이지색 고형물(16.86g)로서 수득하였다. LCMS(MeOH중에서, 따라서, 메틸 에스테르)에서는 MH⁺=240(메틸 에스테르에 대한 MH⁺); T_RET=2.88분이었다.

중간체 8 : 4- 클로로 -N-[(3,4- 디메틸페닐 ) 메틸 ]-1-에틸-1H- 피라졸로[3,4-b]피리딘 -5- 카르복스아미드

THF(60ml)중의 중간체 7(6g) 및 DIPEA(3.17g)의 용액을 20분 동안 교반하였다. 생성된 용액의 1/3 분취액을 3,4-디메틸-벤질아민(1.11g)(예, 트랜스 월드 케미컬스로부터 구입)에 첨가하였다. 반응 혼합물을 질소하에 실온에서 24 시간 동안 교반하고, THF(20ml)를 생성물을 용해를 보조하도록 첨가하였다. 용매를 진공하에 제거하고, 잔류물을 DCM(50ml)과 5% 시트르산 용액(50ml) 사이에 분배시켰다. 유기층을 소수성 프릿을 사용하여 분리하고, 0.5M NaHCO₃ 용액(50ml)로 세척하고, 건조(Na₂SO₄)시키고, 여과하고, 진공하에 농축시켜 중간체 8을 백색 분말(2.39g)로서 수득하였다. LCMS에서는 MH⁺=343; T_RET=3.34분이었다.

중간체 9 : 1,1-디메틸에틸[1-( 아미노카르보닐 )-4- 피페리디닐 ]카르바메이트

DCM(10ml)중의 1,1-디메틸에틸 4-피페리디닐카르바메이트(0.35g)(예, 아스타테크로부터 구입)의 용액을 트리메틸실릴 이소시아네이트(1.1ml, 0.86g)로 처리하였다. 반응 혼합물을 실온에서 8 시간 동안 교반하고, 이어서 주말동안 실온에서 정치시켰다. 혼합물을 DCM(10ml)으로 희석시키고, NaHCO₃ 포화용액(20ml)으로 세척하였다. 유기상을 분리하고 소수성 프릿을 통해서 수거하였다. 수성 상을 DCM으로 추출하였다. 유기물을 합하고, 건조한 상태로 증발시켜 중간체 9를 백색 포말(0.29g)로서 수득하였다. ¹H NMR (CDCl₃중에서 400MHz, 27℃, δ ppm) 4.45 (br. s, 3H), 3.90 (d, 2H), 3.65 (br. m, 1H), 2.9-3.0 (dt, 2H), 1.95-2.0 (br. dd, 2H), 1.45 (s, 9H), 1.3-1.4 (dq, 2H).

중간체 10 : 4-아미노-1- 피페리딘카르복스아미드 히드로클로라이드

중간체 9(0.29g)를 1,4-디옥산(5ml)중의 4M 염화수소 용액으로 처리하고, 실온에서 4 시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 건조 상태로 증발시키고 DCM과 동시 증발시켜 백색 포말을 수득하였다. 이러한 포말을 디에틸 에테르 및 소량(몇 방울)의 MeOH로 분쇄하고, 생성되는 백색 고형물을 여과해 내고, 흡인에 의해서 건조시켜 중간체 10을 백색 고형물(0.27g 불순물 존재)로서 수득하였다. ¹H NMR (d₆-DMSO중에서 400MHz, 27℃, δ ppm) 8.1(br.s, 2H), 3.95(d,2H), 3.15(m,1H), 2.7(dt,2H), 1.85(dd,2H), 1.35(m,2H); 불순물 존재.

중간체 2A : 에틸 4-[(1-{[(1,1-디메틸에틸) 옥시 ]카르보닐}-4- 피페리디닐 )아미노]-1-에틸-1H- 피라졸로[3,4-b]피리딘 -5- 카르복실레이트

MeCN(565ml)중의 중간체 1(25g)의 용액을 고형의 1,1-디메틸에틸 4-아미노-1-피페리딘카르복실레이트(21.7g) 및 DIPEA(93.4ml, 69.3g)으로 처리하였다. 반응 혼합물을 90℃에서 16시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 냉각시킨 후에, 용매를 감압하에 제거하고, 잔류물을 DCM(1100ml)과 물(800ml) 사이에 분배시켰다. 유기 분획을 건조(MgSO₄)시키고, 여과하고, 용매를 감압하에 제거하였다. 잔류물에 플래시 컬럼 크로마토그래피(3:1의 헥산/EtOAc)를 실시하여, 중간체 2A를 황색 고형물(39.54g)로서 수득하였다. LCMS에서는 MH⁺=418; T_RET=3.13분이었다.

¹H NMR(400MHz, 클로로포름-d) δ ppm 9.44 (d, J=7.83Hz, 1 H), 8.89(s, 1H), 7.94(s, 1 H), 4.49 (q, J=7.33Hz, 2H), 4.35(q, J=7.16Hz, 2H), 3.95-4.11(m, 3H), 3.18(t,J=10.86Hz, 2H), 2.10-2.20(br d, 2H), 1.62-1.73(m, 2H), 1.47-1.53(m, 12H), 1.41 (t, J=7.07 Hz, 3H).

중간체 3A : 에틸 1-에틸-4-(4- 피페리디닐아미노 )-1H- 피라졸로[3,4-b]피리딘 -5-카르복실레이트 히드로클로라이드

중간체 2A(39.54g)을 1,4-디옥산(300ml)중의 4M HCl로 처리하고 반응 혼합물을 실온에서 1 시간 동안 교반하였다. 용매를 제거하고, 잔류물을 진공에 밤새 두어 중간체 3A를 백색 고형물(34.21g, 약간의 디옥산이 여전히 존재; 디옥산을 배제한 NMR로부터의 이론적인 양은 33.5g)로서 수득하였다. LCMS에서는 MH⁺=318; T_RET=1.90분이었다.

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ ppm 9.33 (d, J=8.08 Hz, 1 H), 9.21 (br s, 1 H), 9.10 (br s, 1 H), 8.74 (s, 1 H), 8.44 (s, 1 H), 4.43 (q, J=7.20 Hz, 2 H), 4.32 (q, J=7.09Hz, 2H), 3.20-3.35(m, 4H), 2.23 (D, J=11.62Hz, 2H), 1.76-1.87(m, 2H), 1.38(q,J=7.20Hz,3 H), 1.34(q, J=7.09 Hz, 3H).

중간체 4A : 에틸-4-{[(1-( 아미노카르보닐 )-4- 피페리디닐 ]아미노}-1-에틸-1H- 피라졸로[3,4-b]피리딘 -5- 카르복실레이트

THF(880ml)중의 중간체 3A(디옥산을 배제한 이론적인 양 33.5g)의 현탁액을 트리메틸실릴 이소시아네이트(17.5ml, 14.9g)로 처리한 다음, DIPEA(22.6ml, 16.8g)로 처리하고, 용액을 실온에서 5 시간 동안 교반하였다. LCMS에서는 단지 소량의 생성물만이 형성됨을 나타내어, 추가의 DIPEA(22.6ml)를 첨가하고, 혼합물을 추가로 24시간 동안 교반하였다. THF를 감압하에 제거하였다. 잔류물을 DCM(1000ml)에 용해/희석시키고, 염수(200ml)로 세척하고, 건조(MgSO₄)시키고, 감압하에 증발시켜 잔류물을 수득하였으며, 이는 LCMS로부터 소량의 생성물을 함유함을 나타냈다.

잔류물을 DCM(1000ml)에 용해시키고, 트리메틸실릴 이소시아네이트(17.5ml)로 처리한 다음, DIPEA(22.6ml)로 처리하고, 용액을 실온에서 48시간 동안 교반하였다. 트리메틸실릴 이소시아네이트(17.5ml, 14.9g)에 이어서 DIPEA(22.6ml, 16.8g)을 다시 첨가하고, 용액을 실온에서 추가로 48시간 동안 교반하였다. 휘발성 용매를 감압하에 제거하고 잔류물을 DCM(600ml)에 용해시키고, 염수(2 x200ml)로 세척하였다. 유기층을 건조(MgSO₄)시키고, 여과하고 감압하에 농축시켰다. 고 형 잔류물을 미분될 때까지 디에틸 에테르(1000ml)중에서 2 시간 동안 교반하고, 여과에 의해서 수거하여 중간체 4A를 밝은 황색 고형물(24.56g)로서 수득하였다. LCMS에서는 MH⁺=361; T_RET=2.19분이었다. 융점=126-127℃.

¹H NMR(400MHz, 클로로포름-d) δ ppm 9.48 (d, J=7.83Hz, 1H), 8.90(s, 1H), 7.95(s, 1H), 4.65(s, 2H), 4.50 (q, J=7.24Hz, 2H), 4.35 (q, J=7.12Hz, 2H), 4.1-4.2(m, 1H), 3.87-3.93(m, 2H), 3.26 (ddd, J=13.58, 10.17, 3.03Hz, 2H), 2.16-2.23(m, 2H), 1.70-1.80(m, 2H), 1.51(t, J=7.24Hz, 3H), 1.41 (t, J=7.12Hz, 3H).

중간체 4B : 에틸 4-{[1-( 아미노카르보닐 )-4- 피페리디닐 ]아미노}-1-에틸-1H- 피라졸로[3,4-b]피리딘 -5- 카르복실레이트

DCM(300ml)중의 에틸 1-에틸-4-(4-피페리디닐아미노)-1H-피라졸로[3,4-b]피리딘-5-카르복실레이트 히드로클로라이트(13g, 36.77mmol)(예, 중간체 3)의 현탁액을 트리메틸실릴 이소시아네이트(5g)로 처리한 다음, DIPEA(10ml)로 처리하고, 22℃에서 3 시간 동안 교반하였다. 혼합물을 물로 희석시키고, 유기층을 소수성 프릿에 통과시킴으로써 수성층으로부터 분리하고, 용매를 유기층으로부터 제거하여 중간체 4B(10g)을 수득하였다. LCMS에서는 MH⁺=361; T_RET=2.6분이었다.

중간체 5A : 4-{[1-( 아미노카르보닐 )-4- 피페리디닐 ]아미노}-1-에틸-1H- 피라졸로[3,4-b]피리딘 -5- 카르복실산

EtOH(360ml)와 물(120ml)중의 중간체 4A(24.26g)의 용액을 수산화리튬 일수화물(11g)으로 처리하고, 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. EtOH를 감압하에 제거하였다. 1N HCl 수용액(300ml)을 잔류물에 첨가하고, 생성되는 침전물을 빙욕에서 1 시간 동안 냉각시키고, 여과하여 수거하고, 냉수로 세척하여, 진공 건조기에서 밤새 건조시키고, 이어서 진공 오븐에서 감압하에 60℃에서 밤새 건조시켜 중간체 5A를 백색 고형물(22.4g)로서 수득하였다. LCMS에서는 MH⁺=333; T_RET=1.23분이었다. 융점=204-206℃.

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ ppm 9.50 (d, J=8.08 Hz, 1 H), 8.69 (s, 1 H), 8.25 (s, 1 H), 6.04 (br s, 2H), 4.37 (q, J=7.20Hz, 2H), 4.14-4.24 (m, 1H), 3.80 (d, J=13.64Hz, 2 H), 3.15 (t, J=10.86Hz, 2H), 1.96-2.03(m, 2H), 1.39-1.47(m, 2H), 1.37 (t, J=7.20Hz, 3H).

실시예

실시예 1: 4-{[1-( 아미노카르보닐 )-4- 피페리디닐 ]아미노}-N-[(3,4- 디메틸페닐 ) 메틸 ]-1-에틸-1H- 피라졸로[3,4-b]피리딘 -5- 카르복스아미드

무수 DMF(약 1ml일 수 있음)중의 중간체 5(100mg, 0.3mmol)의 용액을 EDC(63mg, 0.33mmol), HOBT(45mg, 0.33mmol) 및 DIPEA(0.13ml, 0.75mmol)로 처리하였다. 10분 후에, 3,4-디메틸-벤질아민(47㎕, 0.33mmol)(예, 트랜스 월드 케미컬스 인크.로부터 구입 가능)을 첨가하고, 생성되는 용액을 실온에서 밤새 정치시켰다. DMF를 증발시켜 제거하고, 잔류물을 DCM과 NaHCO₃ 포화 수용액 사이에 분배시켰다. 유기층을 소수성 프릿을 통해서 수거하고, 진공에서 건조한 상태로 농축시켰다. 용리제로서 먼저 EtOAc 및 시클로헥산(EtOAc의 농도를 증가시키면서)의 구배에 이어서 EtOAc와 메탄올의 단계 구배를 이용하는 20g 실리카 SPE 카트리지에 잔류물을 통과시킴으로써 이를 정제하였다. 생성물은 4:1의 EtOAc:MeOH를 함유하는 분획에서 용리되었다. 용매를 진공에서 제거하여 백색 고형물(101mg)을 수득하였다. NMR에서 EtOAc와 DCM의 존재를 나타내어, 고형물을 진공하에 40℃에서 건조시켜 실시예 1의 화합물(80mg)을 수득하였다. LCMS에서는 MH⁺=450; T_RET=2.80분이었 다.

¹H NMR (d₆-DMSO중에서 400MHz, 27℃, δ ppm) 9.9 (d, 1H), 8.93 (t, 1H), 8.61 (s, 1H), 8.19 (s, 1H), 약 7.08 (s, 1H), 7.07 (d, 1H), 7.02 (d, 1H), 5.98 (s, 2H), 4.33-4.39 (m, 4H), 4.08-4.18 (br m, 1H), 3.75(dt, 2H), 3.13(td, 3H), 2.19 (s, 3H), 2.18(s, 3H), 1.92 - 2.00(m, 2H), 1.33-1.42(m,5H). 및 일부의 그 밖의 피크: 가능하게는 용매.

유사한 또 다른 방법으로, DMF(1ml)중의 중간체 5(0.066mmol)의 용액을 EDC(0.066mmol), HOBT(0.066mmol) 및 DIPEA(0.151mmol)로 처리한 다음, 3,4-디메틸벤질아민(0.066mmol)으로 처리하였다. 반응 혼합물을 22℃에서 16시간 동안 정치시켰다. DMF를 증발시키고, 잔류물을 DCM(5ml)과 NaHCO₃ 포화 수용액(2ml) 사이에 분배시켰다. 유기층을 소수성 프릿을 통해서 수거하고, 증발시켰다. 잔류물을 질량 지향된 자동제조 HPLC에 의해서 정제하여 표제 화합물을 수득하였다.

실시예 1A : 4-{[1-( 아미노카르보닐 )-4- 피페리디닐 ]아미노}-N-[(3,4- 디메틸페닐 ) 메틸 ]-1-에틸-1H- 피라졸로[3,4-b]피리딘 -5- 카르복스아미드

MeCN(2ml)중의 중간체 8(27mg, 0.08mmol), 중간체 10(16mg, 0.088mmol) 및 DIPEA (35㎕, 0.2mmol)의 혼합물을 18시간 동안 환류 가열하였다. 추가의 중간체 10(0.5mol 당량, 약 0.04mmol, 약 7mg)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 추가로 24 시간 동안 환류 가열하고, 실온으로 냉각시켜, 용매를 진공에서 제거하였다. 잔류물을 DCM과 물 사이에 분배시켰다. 유기상을 소수성 프릿을 통해서 수거하고, 건조 상태로 증발시켰다. LCMS에서는 동일한 분자량의 두 생성물이 존재함이 나타났다.

따라서, 잔류물을 질량 지향된 자동제조 HPLC에 의해서 정제하여 표제 화합물을 실시예 1A(4.4mg)로서 수득하였다. LCMS에서는 MH⁺=450; T_RET=2.79분이었다.

실시예 1A와 동일한 분자량을 지니는 다른 바람직하지 않은 생성물을 또한 질량 지향된 자동제조 HPLC(0.6mg)로부터 분리하였으며, 본 화합물의 경우에, LCMS에서는 MH⁺=450; T_RET=2.69분이었다.

실시예 1B : 4-{[1-( 아미노카르보닐 )-4- 피페리디닐 ]아미노}-5-{[(3,4- 디메틸페닐 ) 메틸 ] 아미노카르보닐 }-1-에틸-1H- 피라졸로[3,4-b]피리딘

DMF(300ml)중의 중간체 5A(21.6g)의 용액을 3,4-디메틸 벤질아민(9.71ml, 9.23g), HOBT(9.66g) 및 DIPEA(25ml, 18.5g)로 처리한 다음, EDC(14.1g)로 처리하 였다. 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. DMF를 감압하에 40℃에서 증발시키고, 잔류물을 EtOAc(300ml)와 물(200ml) 사이에 분배시켰다. 유기층을 분리하고, 수성 상을 EtOAc(2 x 100ml)로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 염수(200ml)로 세척하고, 건조(MgSO₄)시켜, 여과하고, 감압하에 증발시켰다.

잔류물을 용리 용매로서 95:5의 DCM/MeOH를 사용하는 실리카겔(1500ml) 상의 플래시 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다. 가장 순수한 분획을 수거하고 감압하에 건조시켰다. 잔류물을 EtOAc(500ml)에 용해시키고, 1N NaOH 용액(100ml)로 세척하고, 건조(MgSO₄)시키고, 여과하여, 증발시키고, 잔류물을 진공 오븐 중에서 60℃에서 밤새 건조시켜, 표제 화합물을 담황색 고형물(12.5g)로서 수득하였다.

플래시 컬럼 크로마토그래피로부터의 나머지 분획을 수거하고, 자동제조 HPLC(길슨 역상 HPLC, 용매 A 물, 용매 B 아세토니트릴, 이에 대한 상세사항은 상기 참조)로 정제하였다. 생성물을 함유하는 물-아세토니트릴 분획(UV 검출)을 합하고, 아세토니트릴 용매를 감압 하에 제거하였다. 나머지 물을 잔류물로부터 따라내고, 잔류물을 건조한 상태로 증발시켰다. 고형물을 수거하고, 에테르로 세척하여 표제 화합물을 담황색 고형물(6g)로서 수득하였다.

생성물의 두 배치를 합하고, MeOH에 용해시키고, 감압하에 증발시켜 표제 화합물 실시예 1B를 담황색 고형물로서 수득하였다.

LCMS에서는 MH⁺=450; T_RET=2.45분이었다. 융점=152 내지 154℃.

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆) δ ppm 10.01 (D, J=7.83Hz, 1H), 8.97 (t, J=5.81Hz, 1H), 8.63(s, 1H), 8.21(s, 1H), 7.02-7.10(m, 3H), 6.01(br s, 2H), 4.34-4.42(m, 4H), 4.10-4.20(m, 1H), 3.71-3.81(m, 2H), 3.14 (t, J=10.74Hz, 2H), 2.20(s,3H), 2.18(s, 3H), 1.92-2.02(m, 2H), 1.35-1.45(m, 5H). 및 에테르에 기인한 그 밖의 피크.

실시예 2 : 4-{[1-( 아미노카르보닐 )-4- 피페리디닐 ]아미노}-5-{[(3,4- 디메틸페닐 )메틸]아미노카르보닐}-1-에틸-1H-피라졸로[3,4-b]피리딘 히드로클로라이드

MeOH(0.5ml)중의 실시예 1B의 화합물(15mg)의 용액을 에테르(10ml)중의 1N 염화수소의 용액으로 처리하였다. 혼합물을 증발시켜 표제 화합물을 백색 고형물(16mg)로서 수득하였다. 융점=217-218℃(분해)

¹H NMR(400MHz, DMSO-d₆) δ ppm 10.84(s, 1H), 9.48(s, 1H), 8.77(s, 1H), 8.46(s, 1H), 7.05-7.14(m, 3H), 약 6.0-6.6(br s,2H), 4.53 (q, J=7.12Hz, 2H), 4.40(d, J=5.56Hz, 2H), 4.27(brs, 1H), 3.76(d, J=13.64Hz, 2H), 3.13-3.23 (t, J=10.95Hz, 2H), 2.21(s,3H), 2.19(s, 3H), 1.94-2.03(m, 2H), 1.44-1.53(m, 2H), 1.40 (t, J=7.17Hz, 3H).

약제 조성물 실시예 및 마이크론 화 실시예

외부 국소 투여에 적합한 약제 조성물의 실시예

조성물 실시예 C1 , C1A 및 C1B (연고)

외부 국소 투여에 적합한 연고인 예시적인 약제 조성물은 다음과 같다:

성분(+바람직한 상세사항*)	작용	실시예 C1: 성분 농도(%w/w)	또 다른 실시예 C1A: 성분 농도(%w/w)	또 다른 실시예 C1B: 농도 범위(%w/w)
화학식(I)의 화합물("약물")(유리 염기로서)	활성제 PDE4 억제제	0.5	0.5	0.1 내지 3% (예, 0.2 내지 1.5%)
백색 페트롤라텀(White Petrolatum)(백색의 연질 파라핀)(예, USP)	왁스/연고 베이스	69.65	69.16	25 내지 75% (예, 45 내지 75%)
광유(예, USP 또는 BP)	가용화제/연화제	4.975	5	2.5 내지 15% (예, 4 내지 12%)
폴리옥실 스테아릴 에테르(예, 볼포 S-2™: Volpo S-2™)	계면활성제	4.975	5	0.5 내지 10% (예, 3 내지 10%)
폴리에틸렌 글리콜(예. USP)	가용화제/투과 증진제	19.90	20	0.5 내지 50% (예, 5 내지 50% 또는 7 내지 30%)
부틸화된 히드록시아니솔(예, NF 또는 BP)	항산화제	0	0.20	0% 또는 0.001 내지 2% (예, 0.02 내지 2%)
메틸파라벤(예, NF)	보존제	0	0.11	0% 또는 0.05 내지 2%
프로필파라벤(예, NF)	보존제	0	0.03	0% 또는 0.01 내지 2%
전체		100	100

* NF=국내 지침; USP: US 약전; BP: 영국 약전

조성물 실시예 C1은 하기 방법으로 제조될 수 있다:

백색 페트롤라텀(백색 연질 파라핀)(140g), 광유(10g), 및 폴리옥실 스테아릴 에테르 (예, 볼포 S-2™)(10g)를 함께 혼합하고, 모든 성분이 용해될 때까지 고온의 수욕을 이용하여 용융시켜 오일 상을 형성시켰다. 오일 상을 약 65 내지 70℃로 가열하였다. 프로필렌 글리콜(40g)을 고온의 수욕을 이용하여 약 65 내지 70 ℃의 온도로 가열하고, 이어서 완만한 균일화 교반 조건(폴리트론 라지 샤프트: Polytron large shaft)하에서 오일 상에 서서히 첨가하였다. 균일화를 증가시키고, 혼합물을 10분 동안 균일화시켰다. 생성된 포뮬레이션(formulation)을 이어서 냉각을 촉진시키기 위해서 냉수욕을 사용하여 실온으로 냉각시켜 연고 제형(약 200g)을 수득하였다.

바이알 내의 약 5g의 연고 제형을 고온의 수욕중에서 연고가 약 40 내지 45℃의 온도에 달할 때까지 서서히 가열하였다. 화학식(I)의 화합물("약물", 유리염기 형태, 25.3mg)을 바이알에 서서히 첨가하고, 생성되는 혼합물을 미세균질기에서 약 10분 동안 균일화시켜 약물을 함유하는 연고(조성물 실시예 C1)를 수득하였다. 약물은 전형적으로 연고중에 적어도 부분적으로 현탁되어 있다.

조성물 실시예 C1A(및/또는 또 다른 조성물 실시예 C1B)는 하기 방법으로 제조될 수 있다:

연고 제형은 먼저 프로필렌 글리콜 상을 제조함으로써 제조된다. 프로필렌 글리콜 및 적절한 양의 약물을 혼합하여 초기 용액을 제조하면서 낮은 전단의 프로펠러 믹서로 교반하였다. 항산화제 및 보존제가 또한 프로필렌 글리콜 용액에 포함되었다. 프로필렌 글리콜 용액의 온도는 약 55 내지 65℃에서 유지되었다. 동시에, 오일 상의 모든 성분(백색 페트롤라텀, 폴리옥실 스테아릴 에테르 및 광유)을 별도의 용기에 가하고 약 75 내지 85℃로 가열하여 성분들을 용융시키고 혼합하였다.

프로필렌 글리콜 상을 이어서 오일 상에 가하면서 온도를 70℃ 초과(예를 들 어, 70 내지 90℃, 예, 약 75 내지 85℃)로 유지시키고 높은 전단 균일화기로 최소 15분 동안(예, 15 내지 60분 또는 15 내지 30분) 혼합하였다. 에멀젼화 과정이 통상의 국소용 제조 장치, 예컨대, 리 케틀(Lee Kettle) 또는 말트-마트(Malt-Mat)에서 수행될 수 있으며, 이러한 장치는 용기의 측면으로부터 물질을 긁어 모으면서 상이 에멀젼화 되게 한다.

15분 이상의 에멀젼화 후에, 생성물을 약 30℃로 냉각하여 연고 에멀젼을 형성(반고형화)시켰다. 이러한 냉각시간 동안, 균일화기 속도는 감소되며, 완만한 진탕이 이용된다. 생성물이 냉각되고 연고가 생성(조성물 실시예 C1A 또는 C1B)된 후에, 이를 제조 용기로부터 보관 용기로 분배시킨다. 이어서 이를 필요에 따라 튜브, 새쉬(sachet) 또는 그 밖의 적합한 포장 기구에 포장할 수 있다.

조성물 실시예 C2 및 C2A ( 유중수 크림 에멀젼)

유중수형 크림 에멀젼인 예시적인 외부 국소용 약제 조성물은 다음과 같다:

성분 (+ 바람직한 상세하상: NF=국내 지침; USP=US 약전, 등)	작용	실시예 C2: 성분 농도 (%w/w)	또 다른 실시예 C2A: 농도 범위 (%w/w)
화학식(I)의 화합물(유리 염기로서)("약물")	활성	0.5	0.1 내지 3% (예, 0.2 내지 1.5%)
백색 페트롤라텀(예, USP)	왁스/연고 베이스	41.34	25 내지 75% (예, 30 내지 65%)
광유(예, USP 또는 BP)	안정화제/연화제	10	2.5 내지 15% (예, 4 내지 12%)
폴리옥실 스테아릴 에테르	계면활성제	8	0.5 내지 12% (예, 3 내지 10%)
프로필렌 글리콜 USP	가용화제/증진제	20	0.5 내지 50% (예, 5 내지 50%)
부틸화된 히드록시아니솔(예, NF 또는 BP)	항산화제	0.02	0.001 내지 2% (예, 0.02 내지 2%)
메틸파라벤(예, NF)	보존제	0.11	0.05 내지 2%
프로필파라벤(예, NF)	보존제	0.03	0.01 내지 2%
정제수(예, USP)	비히클	적당량(20%)	2 내지 30% (예, 5 내지 25%)
전체		100

조성물 실시예 C2(및/또는 또 다른 구체 실시예 C2A)는, 예를 들어, 조성물 실시예 C1에 대해서 기재된 바와 유사한 과정으로 제조될 수 있다.

예를 들어, 과정의 한 구체예에서, 물 및 프로필렌 글리콜이 함께 혼합(임의로 계면활성제, 항산화제 및 보존제와 함께, 및 임의로 약물과 함께)되어 수성 상을 형성시킬 수 있다. 백색 페트롤라텀과 광유를 함유하는 오일 상은 별도의 용기에서 제조된다. 수성 상과 오일 상 둘 모두의 온도는 고온, 예컨대, 약 55 내지 90℃, 바람직하게는 약 70 초과 내지 90℃에서 유지되며, 오일 상의 온도는 오일 상을 용융시키기에 충분히 높으며, 고온이 유지되면서 한 상이 다른 상에 첨가되고 에멀젼화가 수행되도록 고전단 믹서를 사용하여 혼합하며, 바람직하게는 70℃ 초과, 예컨대, 70 초과 내지 90℃의 온도를 유지시킨다. 최종 에멀젼을, 예를 들어, 약 18 내지 35℃, 예컨대, 약 30℃로 냉각시키면서, 진탕을 저속으로 계속 수행한다. 연고를 이어서 제조 용기로부터 분배시키며 일차 포장, 예를 들어, 튜브 또는 사셰 내로 충전시킬 수 있다.

조성물 실시예 C3 및 C3A(수중유형 크림 에멀젼 )

수중유형 크림 에멀젼이며 고-차단성 조성물로 의도되는 예시적인 외부 국소 약제 조성물은 다음과 같다:

성분 (+임의의 상세사항)	작용	실시예 C3: 성분 농도 (%w/w)	또 다른 실시예 C3A: 농도범위(%w/w)
화학식(I)의 화합물(유리 염기로서)("약물")	활성	0.5	0.1 내지 3% (예, 0.2 내지 1.5%)
광유(예, USP)	가용화제/연화제	32.5	15 내지 50% (예, 20 내지 45%)
디메티콘(실리콘 플루이드 360)(예, NF)	연화제	2.5	0.5 내지 20% (예, 1 내지 5%)
이소프로필 미리스테이트 (예, NF)	가용화제	7.5	0.5 내지 20% (예, 3 내지 12%)
글리세롤 모노스테아레이트(예, 아르라셀 165™: Arlacel 165™)	계면활성제	2	0.5 내지 10%
소르비탄 모노스테아레이트(예, 스팬 60™: Span 60™)	계면활성제	1	0.05 내지 10%
세토스테아릴 알코올(예, NF)	계면활성제	2	0.1 내지 15% (예, 1 내지 10%)
미세결정상 왁스(Ross)(예, NF)	연화제/베이스	10	5 내지 25% (예, 8 내지 15%)
프로필렌 글리콜(예, USP	가용화제/증진제	10	0.5 내지 50% (예, 7 내지 25%)
시트르산, 수성 과립(예, USP)	완충제	0.05	0.05 내지 5%
인산나트륨, 이염기성(예, USP)	완충제	0.06	0.05 내지 5%
이미두레아(게르말 115™: Germall 115™)(예, NF)	보존제	0.20	0.05 내지 2%
정제수(예, USP)	비히클	32	15 내지 60% (예, 20 내지 50%)

조성물 실시예 C3(및/또는 또 다른 구체 실시예 C3A)는, 예를 들어, 상기 조성물 실시예 C2에 기재된 과정과 일반적으로 유사한 과정을 이용하여 제조할 수 있다.

조성물 실시예 C4 (크림 에멀젼)

성분	성분의 농도(%w/w)	성분의 임의 중량(g)
오일 상
광유	29.86	29.90
스테아레스 2(Steareth 2)	2	2.05
세토스테아릴 알코올	2	2.01
아르라셀 165™ (글리세롤 모노스테아레이트)	2	2.10
미세결정상 왁스	10	10.12
이소프로필 미리스테이트(IPM)	7.5	7.87
디메티콘	2.5	2.65
수성 상
프로필렌 글리콜	22	22.09
정제수	22	22.34
메틸파라벤	0.11	0.1142
프로필파라벤	0.03	0.0354

(임의의 배치(batch) 크기: 약 100g)

과정

약물이 없는 크림 베이스: 오일 상의 합한 성분을 고온의 수욕에서 약 60 내지 70℃로 용융시켰다. 수성 상의 합한 성분을 또한 고온의 수욕에서 약 60 내지 70℃의 온도로 가열하였다. 수성 상을 이어서 낮은 균일화 조건하에 오일 상에 서서히 가하고, 이어서 수욕중의 완만한 가열하에 약 10분 동안 보다 고속으로 균일화시켰다. 가열을 중지하고, 제형을 스파툴라(spatula)로 수동으로 교반하면서 실온에 도달할 때까지 냉각시켜서, 크림 에멀젼을 수득하였다.

약물을 함유하는 크림: 상기된 과정의 변형예로서, 수성 상을 약 60 내지 70℃의 온도로 가열한 후에 및 오일 상에 첨가하기 전에, 화학식(I)의 화합물을 0.1% 내지 3% w/w 또는 0.2% 내지 1.5% w/w(예, 0.5%w/w)로 미리 제조한 고온의 수성 상에 첨가하였다. 이어서, 수성 상을 완만한 균일화 조건하에 오일 상에 서서히 가하고, 수욕중의 완만한 가열하에 약 10분 동안 보다 높은 속도로 균일화시켰다. 가열을 중지하고, 제형을 교반(예를 들어, 스파툴라로 수동으로)하면서 약 18 내지 35℃ 또는 약 18 내지 30℃(예, 30℃ 또는 실온)에 도달할 때까지 냉각시켜서, 크림 에멀젼(조성물 실시예 C4)을 수득하였다.

조성물 실시예 C5 , C6 , C7 , C8 , C9 , C10 , 및 C11 (연고 조성물)

예시적인 연고는 다음과 같을 수 있다:

실시예 C5 성분	성분 %w/w	임의 성분 중량(g)	실시예 C6 성분	성분 %w/w	임의 성분 중량(g)
오일 상
백색 페트롤라텀	60	60.8	백색 페트롤라텀	65	67.87
광유	5	5.04	광유	5	5.12
스테아레스-2	5	5.09	스테아레스-2	5	5.04
밀랍 대용물	10	10.02	밀랍 대용물	5	5.05
친수성 상			친수성 상
프로필렌 글리콜	20	20.32	프로필렌 글리콜	20	20.35

임의의 배치 크기: 약 100g 임의의 배치 크기: 약 100g

실시예 C7 성분	성분 %w/w	임의 성분 중량(g)	실시예 C8 성분	성분 %w/w	임의 성분 중량(g)
오일 상
백색 페트롤라텀	60	60.45	백색 페트롤라텀	60	60.22
광유	10	10.04	광유	10	10.11
스테아레스-2	5	5.03	세토스테아릴 알코올	5	5.08
밀랍 대용물	5	5.07	밀랍 대용물	5	5.09
친수성 상			친수성 상
프로필렌 글리콜	20	20.28	프로필렌 글리콜	20	20.29

임의의 배치 크기: 약 100g 임의의 배치 크기: 약 100g

실시예 C9 성분	성분 %w/w	임의 성분 중량(g)	실시예 C10 성분	성분 %w/w	임의 성분 중량(g)
오일 상
백색 페트롤라텀	55	55.70	백색 페트롤라텀	63	63.23
광유	15	15.11	광유	10	10.09
세토스테아릴 알코올	5	5.02	스테아레스-2	5	5.03
밀랍 대용물	5	5.07	밀랍 대용물	2	2.03
친수성 상			친수성 상
프로필렌 글리콜	20	20.08	프로필렌 글리콜	20	20.18

임의의 배치 크기: 약 100g 임의의 배치 크기: 약 100g

실시예 C11 성분	성분 %w/w	임의 성분 중량(g)
오일 상
백색 페트롤라텀	58	58.50
광유	15	15.12
세토스테아릴 알코올	5	5.01
밀랍 대용물	2	2.00
친수성 상
프로필렌 글리콜	20	20.29

임의의 배치 크기: 약 100g

조성물 실시예 C5 , C6 , C7 , C8 , C9 , C10 및 C11 (연고 베이스)의 제조: 오일 상을 고온의 수욕에서 약 60 내지 70℃의 온도로 융용시켰다. 친수성(프로필렌 글리콜) 상을 또한 고온의 수욕에서 약 60 내지 70℃의 온도로 가열하였다. 친수성 상을 완만한 균일화 조건하에 오일 상에 서서히 가하고, 이어서 수욕중의 완만한 가열하에 약 10분 동안 보다 고속으로 균일화시켰다. 가열을 중지하고, 제형을 스파툴라로 수동으로 교반하면서 실온에 도달될 때까지 냉각시켜서 연고를 수득하였다.

조성물 실시예 C5 , C6 , C7 , C8 , C9 , C10 및 C11 (약물 함유 연고)의 제조: 상기 과정의 변형예로서, 친수성(프로필렌 글리콜) 상을 약 60 내지 70℃의 온도로 가열한 후에, 및 오일 상에 첨가하기 전에, 화학식(I)의 화합물을 미리 제조된 고온의 친수성 상에 0.1% 내지 3% w/w 또는 0.2% 내지 1.5% w/w(예, 0.5%w/w)로 첨가하였다. 이어서, 친수성 상을 완만한 균일화 조건하에 오일 상에 서서히 가하고, 이어서 수욕중의 완만한 가열하에 약 10분 동안 보다 고속으로 균일화시켰다. 가열을 중지하고, 제형을 교반(예, 스파툴라로 수동으로)하면서 약 15 내지 35℃ 또는 약 18 내지 30℃(예, 약 30℃ 또는 실온)으로 냉각시켜서 연고를 수득하였다(조 성물 실시예 C5 , C6 , C7 , C8 , C9 , C10 및 C11).

마이크론화 실시예

ㆍ목적: 제트파마 MC1 마이크론화기(Jetpharma MC1 micronizer)를 사용하여 예를 들어 약 600 내지 1000mg의 화학식(I)의 화합물을 마이크론화하기 위해서,

ㆍ모 재료(마이크론화되지 않은 재료) 및 마이크론화된 재료를 레이저 회절에 의한 결정 크기 및 PXRD에 의한 결정도에 대해서 분석하였다.

실험 및 재료

실험/재료	설명 및 명세사항
제타파마 MC1 마이크론화기 (Jetapharma MC1 Micronizer)	질소 공급: 275psi 튜빙이 장착된 에어탱크
분석용 밸런스	사토리우스 아날리티컬 (Sartorius Analytical)
탑 로더 밸런스(Top loader balance)	메틀러 PM400(Mettler PM400)
디지탈 캘리퍼(Digital Caliper)	VWR 전자 캘리퍼
마이크론화되는 재료	화학식(I)의 화합물

제트파마 MC1 마이크론화기는 기체 흐름 중의 마이크론화된 화학식 (I)의 화합물 또는 염의 현탁액 도입용 관상 화합물 유입구 (예컨대, 수평에 대해 약 30°기울어짐), 기체 도입을 위한 별도의 기체 유입구, 기체 출구용 기체 배출구, 및 마이크론화된 재료를 수거하기 위한 수거 용기(마이크론화기 용기)를 지니는 수평 디스크형 밀링 하우징을 포함한다. 밀링 하우징은 (a) 가압된 기체를 수용하며 (예컨대, 공기 또는 질소) 기체 유입구에 기체상 연결된 외부 환상 챔버, 및 (b) 투입 화합물/염을 마이크론화하는 외부 챔버내에 이와 동축으로 배치된 디스크형 내부 밀링 챔버의 두 개의 챔버를 지니고, 두 챔버는 환상 벽에 의해 분리된다. 환상 벽 (고리 R)은 내부 및 외부 챔버에 연결되고 환상 벽 주위에 원주로-이격된 다수의 좁은-뚫린 홀을 지닌다. 홀은 (어느 정도 방사상 내지 접선상으로 유도된) 각을 이루게 내부 챔버내로 개방되고, 사용시 외부 챔버에서 내부 챔버로 및 내부 챔버 주위에서(사이클론) 내부로의-나선 경로(와류)로 가압 기체를 고속으로 유도하는 노즐로서 작용한다. 화합물 유입구는 환상 벽/고리 R내에서 이에 근접하게 내부 챔버로 접선상으로 유도된 노즐을 통해 내부 챔버에 기체상 연통된다. 내부 밀링 챔버의 중심 축에서 상부 및 하부 넓은-직경 출구 통기구멍은 (a) 공기 배출구를 지니지 않는 수거 용기 (하부 출구), 및 (b) 기체 배출구 (상부 출구)에 연결된다. 관상 화합물 유입구 내부에서 이에 동축으로 세로로 이동가능한 기체 도입용 벤츄리 유입구 (V)가 정위된다. 또한 화합물 유입구는 투입 재료용의 상향으로-유도된 재료 유입구 포트에 연결된 분기부를 지닌다.

사용시, 벤츄리 유입구(V)의 좁은 헤드는 바람직하게 재료 유입구 포트의 아래에서 약간 전방으로 정위되어서, 벤츄리가 가압된 기체 (예컨대, 공기 또는 질소)를 전달할 때, 공급 재료는 화합물 유입구를 통해 기체스트림으로 흡입되고 이를 아음속 빠르기에서 접선상으로 내부 밀링 챔버내로 가속시킨다. 밀링 챔버 내부에서, 재료는 밀링 챔버의 고리(R)(환형 벽) 주위의 홀/노즐 시스템에 의해서 초음속으로 추가로 가속된다. 노즐은 약간 각을 이루고 있어서, 재료의 가속 패턴은 내부로 유도되는 와류 또는 사이클론의 형태가 된다. 밀링 챔버 내부의 재료는 신속하게 순환하며, 그러한 과정 동안 입자 충돌이 발생되어, 큰 입자가 작은 입자로 분쇄된다. 와류에서의 "원심분리성" 가속은 일반적으로 낮은 출구, 낮은 압력 및 낮은 속도를 통해서 큰 입자를 내부 챔버의 주변에 유지되게 하고, 작은 입자가 밀링 챔버를 빠져나갈 때까지 점진적으로 이들을 중심에 가깝게 이동시킨다. 밀링 챔버를 빠져나가는 입자는 공기보다 무겁고 낮은 출구를 통해서 수거 용기(마이크론화기 용기)내로 하향 정착되고, 배출 가스는 (마이크론화된 재료의 소량의 소형 입자와 함께) 상승하고 저압 및 저속으로 대기중으로 빠져나간다.

과정:

마이크론화기는 조립된다. 벤츄리 유입구의 좁은 헤드가 재료 유입구 포트의 아래에 약간 전방으로 위치하며 정확하게 삽입되게 하기 위해서 마이크로-캘리퍼로 측정된다. 고리(R) 및 벤츄리(V) 압력은 마이크론화기 상의 압력 게이지 상의 밸브를 조절함으로써 실험 디자인(이하 실험 섹션이라 칭함)으로 특정화된 밸브에 따라서 조절된다. 설정은 압력 게이지의 판독에서의 어떠한 변동이 있는지를 관찰함으로써 누출을 체크한다.

벤츄리(V) 압력은, 예를 들어, 재료 유입구 포트로부터 외부로 재료의 역류를 방지하도록 고리(R) 압력 보다 적어도 2 바(bar) 높게 유지된다.

밸런스 성능은 칼리브레이션 중량으로 체크된다. 특정의 모체 물질이 스파툴라를 사용함으로써 마이크론화기의 도입 용기 내로 공급된다. 도입 용기와 재료가 칭량된다. 장치 압력은 마이크론화 공정 동안 모니터링된다.

마이크론화 공정이 완결되면, 질소 공급이 차단되고, 마이크론화된 재료가 마이크론화기 용기에 정착되게 한다. 마이크론화기 용기(수거 용기) 및 사이클론(회수 용기 위)중의 마이크론화된 분말을 미리 칭량 및 라벨된 수거 바이알 내로 함께 수거한다. 마이크론화된 재료의 양을 기록한다. 차이에 의해서 도입 재료의 양을 계산하기 위해서 도입 용기를 재칭량한다. 마이크론화기를 분리하고, 마이크 론화기 내부 표면상의 잔류 PDE4 화합물을 70/30 이소프로필 알코올/물로 세정하고 플라스크에 수거한다. 마이크론화기를 이어서 랜서 워싱 기계(Lancer washing machine)로 완전히 세정하고, 다음 공정을 수행하기 전에 건조시킨다.

임의의 실험 파라미터

모체(비마이크론화된) 물질(과정 1): 화학식(I)의 화합물

밸런스(들):사토리우스 분석

재료 벤츄리 의도된 공급 실질적인

공정 도입량 /고리(R) 공급 재료에 공급

번호 (g) 압력(바) 속도 요구되는 속도

시간 (g/분)

(분+초)

1 약 0.9g V=8 내지 10바 180 내지 200 공정 미수행

R=5.5 내지 6바 mg/분

상기 임의의 파라미터는 당업자의 지식범위 내에서 달라질 수 있다.

% 수율=[용기로부터의 재료 + 사이클론으로부터의 재료)/재료 도입량] x l00

공정 1은 가능한 파라메터 및 조건을 포함하며 수행되지 않았다.

흡입 조성물 실시예 : 건조 분말 제형 실시예 -건조 분말 락토오즈 블렌드 제조

화학식 (I)의 화합물 또는 이의 염의 크기 감소된, 예를 들어, 마이크론화된 형태를 이용하여(예를 들어, 상기 마이크론화 실시예에서 제조됨), 건조 분말 블렌 드를, 3/4 속도(약 2000 내지 2500rpm)의 마이크로-디스멤브레이터 볼-밀(Mikro-dismembrator ball-mill)(그러나, 볼 베어링 없이) 중의 테플론™(Teflon™)(폴리테트라플루오로에텐) 포트에서, 소정량의 화합물/염(예, 10mg, 1%w/w)과 10% 화인 함유하는 흡입 등급 락토오스(예, 990mg, 99% w/w)를 약 4 시간 동안 각각의 블렌드 농도에서 혼합시킴으로써 제조하였다. 마이크로-디스멤브레이터(입수처: B. Braun Biotech International, Schwarzenberger Weg 73-79, D-34212 Melsungen, Germany; www.bbraunbiotech.com)는 테플론 ™ 포트가 부착되어 있는 상향 돌출 및 측방 진동 아암이 있는 베이스 부를 포함하고 있었다. 아암의 진동에 의해 블렌딩이 이루어진다.

그 밖의 블렌드: 10% w/w 화합물/염(50mg) + 90% w/w 락토오스(450mg, 10% 화인 등급을 함유하는 흡입 등급 락토오스).

1% w/w 블렌드의 일련의 희석물, 예를 들어, 0.1% 및 0.3% w/w 블렌드를 제조할 수 있다.

Claims

4-{[1-(아미노카르보닐)-4-피페리디닐]아미노}-N-[(3,4-디메틸페닐)메틸]-1-에틸-1H-피라졸로[3,4-b]피리딘-5-카르복스아미드 또는 이의 염.
4-{[1-(아미노카르보닐)-4-피페리디닐]아미노}-N-[(3,4-디메틸페닐)메틸]-1-에틸-1H-피라졸로[3,4-b]피리딘-5-카르복스아미드 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
4-{[1-(아미노카르보닐)-4-피페리디닐]아미노}-N-[(3,4-디메틸페닐)메틸]-1-에틸-1H-피라졸로[3,4-b]피리딘-5-카르복스아미드.
제 2항에 있어서, 약제학적으로 허용되는 염이 약제학적으로 허용되는 산 부가염을 포함하는 화합물 또는 염.
제 2항에 있어서, 약제학적으로 허용되는 염이 약제학적으로 허용되는 산 부가염인 화합물 또는 염.
제 4항 또는 제 5항에 있어서, 약제학적으로 허용되는 산 부가염이 4-{[1-(아미노카르보닐)-4-피페리디닐]아미노}-N-[(3,4-디메틸페닐)메틸]-1-에틸-1H-피라 졸로[3,4-b]피리딘-5-카르복스아미드와, pKa가 1.5 이하인 약제학적으로 허용되는 산의 조합물에 의해 형성된 화합물 또는 염.
제 4항 또는 제 5항에 있어서, 4-{[1-(아미노카르보닐)-4-피페리디닐]아미노}-N-[(3,4-디메틸페닐)메틸]-1-에틸-1H-피라졸로[3,4-b]피리딘-5-카르복스아미드의 약제학적으로 허용되는 산 부가염이, 이의 브롬화수소염, 염산염, 황산염, 질산염, 인산염, p-톨루엔설폰산염, 벤젠설폰산염, 메탄설폰산염, 에탄설폰산염, 또는 나프탈렌설폰산염을 포함하는 화합물 또는 염.
4-{[1-(아미노카르보닐)-4-피페리디닐]아미노}-N-[(3,4-디메틸페닐)메틸]-1-에틸-1H-피라졸로[3,4-b]피리딘-5-카르복스아미드 히드로클로라이드.
하기 화학식(IA)의 화합물 또는 이의 염을 제조하는 방법으로서,

(a) 하기 화학식(II)의 화합물을 하기 화학식(III)의 활성화된 화합물로 전환시키고 나서, 후속하여 화학식(III)의 활성화된 화합물을 화학식 R⁴R⁵NH의 아민과 반응시키는 단계; 또는

(b) 하기 화학식(VIIA)의 화합물을 화학식 R³NH₂의 아민 또는 이의 염과 반응시키는 단계; 또는

(c) 하기 화학식(X)의 화합물 또는 이의 염을, 화학식(X)의 화합물에서의 (4-피페리디닐)아미노 기를 [(1-아미노카르보닐)-4-피페리디닐]아미노 기로 전환시킬 수 있는 요소 형성 시약과 반응시키는 단계를 포함하며;

상기 (a), (b) 또는 (c) 단계에서, 화학식(I)의 화합물을 이의 염으로 전환시키거나 전환시키지 않거나; 또는

(g) 화학식(I)의 화합물의 약제학적으로 허용되는 염을 제조하는 방법에서, 화학식(I)의 화합물 또는 이의 염을 목적하는 약제학적으로 허용되는 염으로 전환시키는 방법:

;

상기 식에서,

R¹은 에틸이고;

R²는 수소 원자 (H)이고;

R³은 고리 탄소 상에서 치환되지 않는 하기 화학식(bb)의 N-아미노카르보닐-피페리디닐 기이며:

;

R⁴는 수소 원자 (H)이고;

R⁵는 (3,4-디메틸페닐)메틸이고;

X¹은 아민에 의해 치환가능한 이탈기이며;

Hal은 염소, 브롬 또는 요오드 원자이다.
제 9항에 있어서, 화학식(III)의 활성화된 화합물이 산 염화물이거나, 또는 화학식(III)의 활성화된 화합물이, 이탈기 X¹이
이고 X²가 CH 또는 N인 활성화된 에스테르인 방법.
제 9항 또는 제 10항에 있어서, 화학식(VIIA)에서, Hal이 브롬 원자 또는 염소 원자인 방법.
제 9항 내지 제 11항 중 어느 한 항에 있어서, (c) 단계에서 요소 형성 시약이 트리메틸실릴 이소시아네이트인 방법.
사람을 포함하는 포유동물에서 활성 치료 물질로 사용하기 위한, 4-{[1-(아미노카르보닐)-4-피페리디닐]아미노}-N-[(3,4-디메틸페닐)메틸]-1-에틸-1H-피라졸로[3,4-b]피리딘-5-카르복스아미드 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
사람을 포함하는 포유동물에서 염증성 및/또는 알레르기성 질환 또는 인지 장애 또는 우울증의 치료 및/또는 예방에 사용하기 위한, 제 13항에 따른 화합물 또는 염.
사람에서 아토피 피부염의 치료 및/또는 예방에 사용하기 위한, 제 13항에 따른 화합물 또는 염.
사람에서의 아토피 피부염의 치료 및/또는 예방에서 외부 국소 투여에 의해 사용하기 위한, 제 13항에 따른 화합물 또는 염.
사람을 포함하는 포유동물에서 염증성 및/또는 알레르기성 질환, 인지 장애 또는 우울증의 치료 및/또는 예방을 위한 약물의 제조에 사용되는, 4-{[1-(아미노카르보닐)-4-피페리디닐]아미노}-N-[(3,4-디메틸페닐)메틸]-1-에틸-1H-피라졸로[3,4-b]피리딘-5-카르복스아미드 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염의 용도.
제 17항에 있어서, 약물이 사람을 포함하는 포유동물에서 만성 폐쇄성 폐질환(COPD), 천식, 류마티스 관절염, 알레르기 비염, 건선 또는 아토피 피부염의 치료 및/또는 예방을 위한 것인 용도.
제 17항에 있어서, 약물이 포유동물에서 아토피 피부염의 치료 및/또는 예방을 위한 것인 용도.
제 19항에 있어서, 포유동물이 사람인 용도.
제 19항 또는 제 20항에 있어서, 약물이 포유동물에게로의 외부 국소 투여를 위한 것인 용도.
치료적 유효량의 4-{[1-(아미노카르보닐)-4-피페리디닐]아미노}-N-[(3,4-디메틸페닐)메틸]-1-에틸-1H-피라졸로[3,4-b]피리딘-5-카르복스아미드 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 포유동물에게 투여하는 것을 포함하여, 이를 필요로 하는, 사람을 포함하는 포유동물에게서 염증성 및/또는 알레르기성 질환, 인지 장애 또는 우울증을 치료 및/또는 예방하는 방법.
치료적 유효량의 4-{[1-(아미노카르보닐)-4-피페리디닐]아미노}-N-[(3,4-디메틸페닐)메틸]-1-에틸-1H-피라졸로[3,4-b]피리딘-5-카르복스아미드 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 포유동물에게 투여하는 것을 포함하여, 이를 필요로 하는 포유동물에게서 아토피 피부염을 치료 및/또는 예방하는 방법.
치료적 유효량의 4-{[1-(아미노카르보닐)-4-피페리디닐]아미노}-N-[(3,4-디메틸페닐)메틸]-1-에틸-1H-피라졸로[3,4-b]피리딘-5-카르복스아미드 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 사람에게 투여하는 것을 포함하여, 이를 필요로 하는 사람에게서 아토피 피부염을 치료 및/또는 예방하는 방법.
제 23항 또는 제 24항에 있어서, 화합물 또는 염을 포유동물 (예를 들어, 사람)에게 외부 국소 투여하는 것을 포함하는 방법.
4-{[1-(아미노카르보닐)-4-피페리디닐]아미노}-N-[(3,4-디메틸페닐)메틸]-1-에틸-1H-피라졸로[3,4-b]피리딘-5-카르복스아미드 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염, 및 하나 이상의 약제학적으로 허용되는 담체 및/또는 부형제를 포함하는 약제 조성물.
제 26항에 있어서, 사람에게로의 외부 국소 투여에 적합한 약제 조성물.
제 27항에 있어서, 4-{[1-(아미노카르보닐)-4-피페리디닐]아미노}-N-[(3,4-디메틸페닐)메틸]-1-에틸-1H-피라졸로[3,4-b]피리딘-5-카르복스아미드 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염이 조성물의 중량에 대해 0.1 내지 3중량% (w/w)로 존재하는 약제 조성물.
제 27항에 있어서,

- 0.1 내지 3% w/w로 존재하는, 4-{[1-(아미노카르보닐)-4-피페리디닐]아미노}-N-[(3,4-디메틸페닐)메틸]-1-에틸-1H-피라졸로[3,4-b]피리딘-5-카르복스아미드 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염;

- 25 내지 99% w/w로 존재하는 오일 상(오일성 연고 베이스);

- 총 0.5 내지 10% w/w로 존재하는 하나 이상의 계면활성제; 및

- 총 0.5 내지 50% w/w로 존재하는, 피부 침투 증강제로서 작용하는 하나 이상의 제제를 포함하는 연고인 약제 조성물.
제 29항에 있어서,

- 0.2 내지 1.5% w/w로 존재하는, 4-{[1-(아미노카르보닐)-4-피페리디닐]아미노}-N-[(3,4-디메틸페닐)메틸]-1-에틸-1H-피라졸로[3,4-b]피리딘-5-카르복스아미드 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염;

- 50 내지 80% w/w로 존재하며, 45 내지 75% w/w로 존재하는 백색 페트롤라텀(petrolatum)을 포함하고, 또한 2.5 내지 15% w/w로 존재하는 광유를 포함하는 오일 상(오일성 연고 베이스);

- 총 3 내지 10% w/w로 존재하는 하나 이상의 계면활성제; 및

- 총 5 내지 50% w/w로 존재하는, 가용화제 및 피부 침투 증강제 양자로서 작용하는 하나 이상의 친수성 제제를 포함하는 연고인 약제 조성물로서,

이 연고 조성물에서, 오일 상(오일성 연고 베이스) 및 친수성의 가용화제/침투 증강제 상이 에멀젼화되어 연고 에멀젼을 형성하는 약제 조성물.
제 27항에 있어서,

- 0.1 내지 3% w/w로 존재하는, 4-{[1-(아미노카르보닐)-4-피페리디닐]아미 노}-N-[(3,4-디메틸페닐)메틸]-1-에틸-1H-피라졸로[3,4-b]피리딘-5-카르복스아미드 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염;

- 25 내지 85% w/w로 존재하는 오일 상(오일성 연고 베이스);

- 2 내지 30% w/w로 존재하는 물;

- 총 0.5 내지 12% w/w로 존재하는 하나 이상의 계면활성제; 및

- 총 0.5 내지 50% w/w로 존재하는 피부 침투 증강제로서 작용하는 하나 이상의 제제를 포함하는 유중수형 크림인 약제 조성물.
제 31항에 있어서,

- 0.2 내지 1.5% w/w로 존재하는, 4-{[1-(아미노카르보닐)-4-피페리디닐]아미노}-N-[(3,4-디메틸페닐)메틸]-1-에틸-1H-피라졸로[3,4-b]피리딘-5-카르복스아미드 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염;

- 35 내지 70% w/w로 존재하며, 30 내지 65% w/w로 존재하는 백색 페트롤라텀을 포함하고, 또한 2.5 내지 15% w/w로 존재하는 광유를 포함하는 오일 상(오일성 연고 베이스);

- 5 내지 25% w/w로 존재하는 물;

- 총 3 내지 10% w/w로 존재하는 하나 이상의 계면활성제; 및

- 총 5 내지 50% w/w로 존재하는, 가용화제 및 피부 침투 증강제 양자로서 작용하는 하나 이상의 친수성 제제를 포함하는 유중수형 크림 에멀젼인 약제 조성물.
제 27항에 있어서,

- 0.1 내지 3% w/w로 존재하는, 4-{[1-(아미노카르보닐)-4-피페리디닐]아미노}-N-[(3,4-디메틸페닐)메틸]-1-에틸-1H-피라졸로[3,4-b]피리딘-5-카르복스아미드 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염;

- 20 내지 60% w/w로 존재하며, 연화제로 작용할 수 있는 하나 이상의 성분을 함유하는 오일 상(오일성 연고 베이스);

- 15 내지 75% w/w로 존재하는 물;

- 총 0.5 내지 12% w/w로 존재하는 하나 이상의 계면활성제; 및

- 총 0.5 내지 50% w/w로 존재하는, 피부 침투 증강제로서 작용하는 하나 이상의 제제를 포함하는 수중유형 크림인 약제 조성물.
제 33항에 있어서,

- 0.2 내지 1.5% w/w로 존재하는, 4-{[1-(아미노카르보닐)-4-피페리디닐]아미노}-N-[(3,4-디메틸페닐)메틸]-1-에틸-1H-피라졸로[3,4-b]피리딘-5-카르복스아미드 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염;

- 30 내지 55% w/w로 존재하며, 연화제로 작용할 수 있는 하나 이상의 성분을 함유하는 오일 상(오일성 연고 베이스);

- 15 내지 50% w/w로 존재하는 물;

- 총 3 내지 10% w/w로 존재하는 하나 이상의 계면활성제; 및

- 총 5 내지 50% w/w로 존재하는, 가용화제 및 피부 침투 증강제 양자로서 작용하는 하나 이상의 친수성 제제를 포함하는 수중유형 크림 에멀젼인 약제 조성물로서,

오일 상이, 20 내지 45% w/w로 존재하는 광유를 포함하고/하거나, 5 내지 25% w/w로 존재하는 미세결정성 왁스를 포함하고/하거나, 0.5 내지 10% w/w로 존재하는 디메티콘을 포함하는 실리콘을 포함하는 약제 조성물.