KR20060127857A - 혈장 콜레시스토키닌(ｃｃｋ) 농도 조절 및 통증 치료를위한 비-췌장 프로테아제 - Google Patents

혈장 콜레시스토키닌(ｃｃｋ) 농도 조절 및 통증 치료를위한 비-췌장 프로테아제 Download PDF

Info

Publication number
KR20060127857A
KR20060127857A KR1020067010531A KR20067010531A KR20060127857A KR 20060127857 A KR20060127857 A KR 20060127857A KR 1020067010531 A KR1020067010531 A KR 1020067010531A KR 20067010531 A KR20067010531 A KR 20067010531A KR 20060127857 A KR20060127857 A KR 20060127857A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
protease
mammal
pancreatic
cck
concentration
Prior art date
Application number
KR1020067010531A
Other languages
English (en)
Inventor
알렉세이 엘 마골린
바미 씨 쉐노이
마가렛 맥그래쓰
Original Assignee
알투스 파마슈티컬스 인코포레이티드
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 알투스 파마슈티컬스 인코포레이티드 filed Critical 알투스 파마슈티컬스 인코포레이티드
Publication of KR20060127857A publication Critical patent/KR20060127857A/ko

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
    • A61K38/46—Hydrolases (3)
    • A61K38/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
    • A61K38/46—Hydrolases (3)
    • A61K38/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
    • A61K38/482—Serine endopeptidases (3.4.21)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/1703—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
    • A61K38/1709—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
    • A61K38/46—Hydrolases (3)
    • A61K38/465—Hydrolases (3) acting on ester bonds (3.1), e.g. lipases, ribonucleases
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
    • A61K38/46—Hydrolases (3)
    • A61K38/47—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2), e.g. cellulases, lactases
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
    • A61K38/46—Hydrolases (3)
    • A61K38/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
    • A61K38/482—Serine endopeptidases (3.4.21)
    • A61K38/4826—Trypsin (3.4.21.4) Chymotrypsin (3.4.21.1)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/14—Prodigestives, e.g. acids, enzymes, appetite stimulants, antidyspeptics, tonics, antiflatulents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/18—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for pancreatic disorders, e.g. pancreatic enzymes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00

Abstract

본 발명은 포유동물 혈장 내의 콜레시스토키닌(CCK) 농도를 감소시키거나 또는 기초 수준을 유지하기 위한 방법에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 포유동물의 통증을 치료하기 위한 방법, 특히 더 포유동물의 복통을 치료하기 위한 방법을 제공한다. 이 방법은 포유동물에게 비-췌장 프로테아제 또는 비-췌장 프로테아제를 포함하는 조성물을 투여하는 것을 포함한다. 본 발명의 방법은 특히 급성 또는 만성 췌장염 및 관련 병태를 앓고 있는 포유동물의 복통을 치료하는 데 유용하다.

Description

혈장 콜레시스토키닌(ＣＣＫ) 농도 조절 및 통증 치료를 위한 비-췌장 프로테아제{NON-PANCREATIC PROTEASES FOR CONTROLLING PLASMA CHOLECYSTOKININ(CCK) CONCENTRATION AND FOR TREATING PAIN}
관련 출원에 대한 상호 참조
본 출원은 35 U.S.C. 제119(e)조 하에서 미국 가특허 출원 제60/515,552호(2003년 10월 29일 출원), 및 제60/527,490호(2003년 12월 5일)의 이익을 청구하며, 이는 본원에서 참조 인용하였다.
본 발명은 포유동물 내에서 혈장 콜레시스토키닌(CCK)을 유지하기 위한 방법에 관한 것이다. 추가적으로, 본 발명은 포유동물의 통증을 치료하기 위한 방법, 및 특히 더 포유동물의 복통을 치료하기 위한 방법을 제공한다. 본 발명의 방법은 포유동물에게 비-췌장 프로테아제 또는 이들을 포함하는 조성물을 투여하는 것을 포함한다. 이들 방법은 특히 급성 또는 만성 췌장염을 앓고 있는 포유동물의 복통 치료용으로 유용하다.
소화는 섭취된 음식물이 비타민류, 미량 원소를 포함하는 쉽게 흡수되는 영양성분으로 잘게 쪼개지는 생리적인 과정이다. 섭취에 이어, 음식물은 위장(GI)의 다양한 세그먼트를 통과하고, 소화는 우선 소화 효소에 의해 수행된다. 이 과정을 위한 필수적인 소화 효소의 3 군은 (단백질 소화를 위한) 프로테아제, (지방 소화를 위한) 리파제 및 (탄수화물 소화를 위한) 아밀라제를 포함한다.
음식물 소화 및 영양 흡수는 소장에서 일어난다. 거기에서, 섭취된 음식물은 신속한 흡수를 위해 소화 효소에 의해 잘게 부수어 진다. 대부분의 소화 효소는 췌장에 의해 분비되어 체관을 통해 소장에 도착한다.
1970년대 초, 쥐의 소장 상부에 위치한 트립신 저해제가 췌장 효소 분비를 자극한다는 관측은 트립신 및 키모트립신이 췌장에 의한 소화 효소 분비를 조절하기 위해 중요하다는 이해를 유도하였다(G.M. Green and R.L. Lyman, Proc. Soc. Exp. Biol, Med. 140, 6-12(1972)). 또한 유사하게, 소장 상부로부터 담즙 및 췌액을 제거 또는 전환하는 것이 췌장 효소 분비를 자극하는 것으로 관측되었다. 이들 자료는 하기의 네거티브 피드백 메커니즘을 암시한다: 췌장 효소 분비의 자극은 소장강 내의 트립신 활성 수준에 의해 조절된다.
췌장 기능저하의 경우, 췌장은 보통의 소화 과정을 지원하기 위한 소화 효소의 충분한 양을 생성 및/또는 분비하지 못한다. 이러한 기능상실은 전형적으로 소화장애를 초래하며, 이것은 차례로 흡수 장애를 초래한다. 췌장 기능저하는 췌장염(급성 및 만성 모두의 형태), 및 낭포성 섬유증(cystic fibrosis), 및 일부의 경우 수술 후 GI 수술과 같은 질환에서 나타난다.
만성 및 급성 췌장염은 췌장 외분비 기능의 비가역적 손실 및 섬유증이 특징인 질환이다. 질환은 또한 기관 자체의 자동소화를 유발하는 췌장 내의 소화 효소 의 방출 및 활성화를 특징으로 한다. 몇몇 환자들은 부갑상선의 수술 제거로 치료되지만, 만성 췌장염은 대부분 세계적으로 치료할 수 없는 질환이다(S. Sidhu and R.K. Tandon, Postgrad. Med. J. 72, 327-333(1996)). 미국에서만 이러한 질환의 발생률이 매년 100,000 명 이상이다(Digestive Disease Statistics, NIDDK, 2003).
지금까지, 췌장 기능저하를 위한 치료는 우선 경구 투여되는 리파제, 프로테아제 및 아밀라제 성분을 함유하는 돼지 췌장 효소 추출물 제제에 기초한다. 이러한 효소 제제는 전형적으로 지방변증(steatorrhea)(지방 소화장애/흡수장애로 인한 지방의 배설)의 치료를 위한 높은 농도의 리파제를 포함하며; 반면 높은 프로테아제 농도는 일반적으로 질소 변증(azotorrhea)(단백질 소화장애/흡수장애로 인한 단백질의 배설)에 보다 효과적인 것으로 생각된다. 여러 가지 이유로, 이러한 췌장 추출물은 복통의 치료를 위해 제한된 성공을 보인다. 프로테아제는 단지 비교적 작은 비율의 이러한 추출물 및 이 분율 내에서, 여전히 소량인 트립신을 구성한다.
췌장 기능저하 환자의 통증을 초래하는 메커니즘은 잘 이해되지 않은 채로 있다(J. Mossner, Acute and Chronic Pacncreatis 79, 861(1999); N.J. Greenberger, Pancreas Update 28, 689(1999)).
복통을 포함하는 기저 통증의 한 제안된 메커니즘은 십이지장 및 장신경계의 점막 상피 세포에 의해 방출되며 영양분의 소화를 조절하는 펩티드인 콜레시스토키닌(이 후 "CCK")의 유도와 관련이 있다. CCK의 증가는 췌장으로부터 파괴 효소의 방출을 자극한다는 것을 보여준다. 상피 세포로부터 CCK의 방출은 특정 내분비 세포 표면 수용체와 상호 작용하는 두 개의 다른 펩티드인 모니터 펩티드 및 장 CCK 방출 인자(CCK-RF)의 분비에 의해 조절된다(R.A. Liddle, American Physiological Society, G319-G327(1995)). 이들 펩티드 모두를 붕괴할 수 있는 관강내(intraluminal) 트립신은 CCK의 방출을 저해하여, 결과적으로 췌장 효소 분비를 저해한다. 반대 효과는 트립신 저해제 및 음식물이 트립신-결합 기질로써 제공될 경우 성취된다. 그 결과, CCK의 지속적인 증가는 췌장 효소 생성의 연속 자극을 유발하며, 이것은 차례로 통증을 유발할 수 있다. 이러한 메커니즘을 근거로 하여, 만성 췌장 및 그와 관련된 통증에 대해 제안된 치료는 여러 길이의 폴리펩티드 및 중간 사슬 트리글리세라이드를 함유하는 에멀션을 사용하여 CCK 농도를 조절하고자 하는 것이다(PCT 특허 출원 제 WO 98/36734호).
통증 감소가 돼지 췌장 효소 치환 치료로 보고되어 있지만, 일반적으로 통증을 치료하는 프로테아제의 역할은 불명확한 것으로 남아있다. 예를 들어, 한 연구는 아밀라제 또는 리파제가 아닌 췌장 프로테아제, 트립신 및 키모트립신과의 십이지장내 관류가 만성 췌장염을 앓고 있는 환자의 췌장 외 분비를 억제한다는 것을 설명한다(J. Slaff et al., Gastroenterology 87, 44-52(1984)). 다른 연구들은 이러한 췌장 프로테아제가 통증 감소의 주요 인자가 아니지만 이들은 그 대신 말기에 리파제 및 아밀라제 성분과 상승적으로 작용한다고 보고한다(G. Isaksson and I. Ihse. Dig. Dis. Sci. 28, 97-102. (1983); J. Slaff et al. Gastroenterology 87, 44-52(1983)). 반대로, 다른 연구는 췌장 프로테아제에 또는 추출물 치료에 따르는 통증의 개선은 없는 것으로 보고한다(H. Halgreen et al. Scand. J. Gastroenterol. 21, 104-108(1986); J. Mossner et at., Digestion 53, 54- 66(1992)). 몇몇 예에서, 다량의 효소로 치료된 환자는 복부 경련이 일어나기 쉽다(P.G. Lankisch, Digestion 37, 47-55(1987)).
췌장에서의 복통을 포함하는 통증의 치료를 위한 췌장 프로테아제의 역할을 서술하려는 노력에도 불구하고, 추가의 치료 요법에 대하여 여전히 그 필요성이 존재한다. 본 발명은 이러한 필요성을 다룬다.
발명의 개요
본 발명은 포유동물의 혈장 콜레시스토키닌(CCK) 농도의 기초 농도를 유지하거나 혈장 CCK 농도를 감소시키기 위한 방법에 관한 것이다. 본 발명은 또한 포유동물에게 비-췌장 프로테아제 또는 그의 조성물을 투여하여 포유동물의 통증, 구체적으로 복통을 치료하는 방법을 제공한다. 본 발명에 따라, 결정형, 반결정형 또는 무정형의 비-췌장 프로테아제, 또는 그의 조성물은 만성 또는 급성 췌장염 또는 이와 관련된 질환을 앓고 있는 포유동물을 치료하기 위한 방법에서 유리하게 사용될 수 있다. 본 발명의 바람직한 구체예에서, 비-췌장 프로테아제는 프로테아제 결정형이다.
본 발명의 다른 목적은 본원에 개시된 관점에 의하여 당업자에 의해 이해될 것이다.
도 1은 광학 현미경에 의해 영상화된 것으로서, 10 mM 탄산나트륨(pH 9.5)의 존재 하에 성장하는 세아프로제 결정을 예시한다. 실시예 1 참조.
도 2는 다양한 외인성 효소 보충물을 함유하는 식이에 대해, CCK 방사 면역 측정법("RIA")에 의해 측정된 쥐의 혈장 내 CCK 농도를 예시한다. 실시예 3 참조.
도 3은 외인성 세아프로제 결정 보충물을 함유하는 식이에 대해, CCK 방사면역측정법("RIA")에 의해 측정된 쥐의 혈장 내 CCK 농도를 예시한다. 실시예 4 참조.
도 4는 다양한 외인성 효소 보충물을 함유하는 식이에 대해, CCK 방사면역측정법("RIA")에 의해 측정된 쥐의 혈장 내 CCK 농도를 예시한다. 실시예 5 참조.
도 5는 외인성 세아프로제 결정 보충물을 함유하는 식이에 대해, CCK 방사면역측정법("RIA")에 의해 측정된 쥐의 혈장 내 CCK 농도를 도해한다. 실시예 6 참조.
본 발명은 비-췌장 프로테아제가 포유동물 혈장 내에서 CCK 농도의 기초 농도를 유지하거나 또는 CCK 농도를 감소시키기 위해 사용될 수 있음을 발견한 것에 관한 것이다. 결정형, 반결정형, 액체형 및 무정형을 포함하는 모든 형태의 비-췌장 프로테아제는 특히 혈장내의 CCK 농도를 조절하고, 차례로 통증을 감소시키기 위해 유용하다. 구체적인 프로테아제, 예컨대 세아프로제, 세라펩타제(또는 세라티오펩티다제), 프로나제 또는 프로나제 성분, 또는 이들의 혼합물이 특히 이러한 목적을 위해 유용하다.
정의
여기에서 별도로 정의하지 않는다면, 본 발명과 연관되어 사용된 과학 및 기술 용어는 당업자에 의해 통상적으로 이해되는 것을 의미한다. 또한, 문맥에 의해 별도로 필요시 되지 않는다면, 단수 용어는 복수를 포함하고 복수 용어는 단수를 포함한다.
별도의 지시가 없다면 하기 용어는 하기 의미를 갖는 것으로 이해되어야 한다:
용어 "콜레시스토키닌"("CCK")는 포유동물의 상부 장(upper intestine)에서 분비 세포 및 신경 섬유로부터 방출되는 통합, 조절 펩티드를 의미한다. 이러한 펩티드 또는 호르몬은 단백질 및 지방의 섭취시 혈액으로 분비된다. CCK의 생리학적 작용이 이것으로 제한되는 것은 아니지만, 췌장 분비 및 쓸개 수축(gallbladder contraction)의 자극, 위 배출의 조절, 및 포만감의 유발을 포함한다. 따라서, CCK는 높게 배위된 방식으로 영양분의 소화를 조절하기 위해 제공된다. 뇌는 주로 CCK의 COOH-말단 선형 옥타펩티드(CCK-8)를 생성하고 진행하는 반면, 장(gut)은 CCK-58, -33, 및 -22와 같은 더 큰 형태의 펩티드를 형성한다. 조직 및 혈액 내에서 CCK는 4-83 아미노산 크기 범위이지만, 작은 형태(예컨대 CCK-8)는 뇌(신경 전달 물질로써) 및 말초 시스템(호르몬으로서) 모두에서 더 큰 형태의 생물학적 활성을 나타낸다. CCK는 다양한 행동 상태 및 질환에서 조절 역할을 수행하는 신경펩티드로써 주로 발견된다.
용어 "섭식 펩티드(feeding peptide)"는 일반적으로 중추 신경계("CNS")뿐 아니라 말초계를 통해 섭식 조절 및 음식물 흡수에 영향을 주는 통합 펩티드의 한 부류를 의미한다. 여기에서 사용된 바와 같이, 섭식 펩티드는 말초에서 보다 제한적이거나, 또는 적은 수의 잘 보고된 통합적인 기능을 갖는 보다 일반적인 부류의 조절 펩티드와 구분될 수 있다. CCK는 또한 당업계에서 섭식 펩티드로써 언급된다.
용어 "음식물"은 포유동물에 의해 섭취되거나 비구강 수단에 의해 포유동물에 전달되어 에너지를 생성할 수 있는 모든 물질을 포함한다. 여기에서 사용된 바와 같이, 음식물은 예를 들어, 고체 또는 액체 형태를 포함하며, 예를 들어 영양 공급원을 포함하는 모든 형태의 물질을 포함한다.
용어 "모니터 펩티드"는 또한 췌장 분비 트립신 저해제("PSTI")로서 언급되며, 장 상피 세포의 성장을 자극하고 포유류의 소장으로 췌장 효소의 분비를 유발한다. 모니터 펩티드는 통상 단백질 흡수에 대한 반응에서 활성화되며 장으로부터 CCK의 분비 및 방출을 유도한다. 또한 이것은 당업계에서 통상 "트립신-민감성 CCK-방출 펩티드"로도 언급된다(S. Tsuzuki et al., Eur. J. Biochem. 199, 245-252(1991); R. Yamanishi et al., Biochem. J. 291, 57-63(1993)).
용어 "장 CCK-방출 인자"는 부분적으로 특징화되어 있으며 단백질 및 지방의 섭취에 이어 CCK 분비의 자극 역할을 하는 것으로 간주되는 장 기시점의 인자를 의미한다. 아직 밝혀지지 않은 메커니즘을 통해, 상기 및 다른 CCK 방출 인자(즉, 모니터 펩티드)는 CCK분비의 조절을 위한 포지티브 및 네커티브-피드백 메커니즘을 제공하는 것으로 간주된다.
용어 "포유동물"은 인간 또는 동물을 의미한다. 예를 들어, 동물은 인간이 아닌 영장류, 설치동물, 갯과의 동물, 돼지, 고양이, 소, 말 및 염소일 수 있다. 본 발명의 바람직한 구체예에서, 포유동물은 인간이다.
용어 "소화 장애"는 이들의 흡수 가능한 성분(모노-, 디-, 또는 올리고사카라이드, 아미노산, 올리고펩티드, 지방산 및 모노글리세리드)으로의 영양분(예컨대 탄수화물, 단백질, 지방)의 분해(breakdown)가 손상된 것을 의미한다.
용어 "흡수 장애"는 소장 또는 대장으로부터 비타민 및 미량 원소를 포함하는 소화된 영양분의 흡수가 손상된 것을 의미한다. 이것은 장 내층 또는 특히 소화 이상으로 인한 결함이 있는 점막 흡수에 기인할 수 있다. 장 흡수 장애는 많은 영양소에 대해 일어날 수 있거나, 또는 칼슘, 마그네슘, 철, 및 비타민과 같은 미량 영양소뿐 아니라 특정의 다량 영양소, 즉 탄수화물, 지방 또는 단백질에 대하여도 일어날 수 있다. 흡수 장애는 심각한 상태에 기인할 수 있으며, 이들 중 몇몇은 예를 들어, 유당 불내증(lactose intolerance), 셀리악병, 크론병 및 췌장 기능저하, 박테리아 과잉증식, 단장 증후군(short bowel syndrome), 아밀로이드증(amyloidosis), 단장 게실염(short bowel diverticulae), 경피증, 열대성 스프루우(tropical sprue), 헬리코박터 파일로리 감염, 방사선 요법, 화학 요법, 흉관 폐쇄증(thoracic duct obstruction), 예컨대, 장 림프관 확장증, 호산구 장염, 림프종, 비만 세포증(mastocytosis), 단백 상실성 장병증(protein-losing enteropathy) 및 메네트리에 병(menetrier's disease)을 포함한다.
용어 "만성 췌장염"은 췌장 조직의 자동 소화가 그 자신의 효소에 의해 일어나 되풀이하는 과정을 의미한다. 이 질환에서, 일반적으로 영양소 소화를 용이하게 하는 췌장 효소는 그 안에서 활성화되고 췌장관 또는 선포 세포로부터 조직 괴사를 유발하는 췌장으로 새어 나오거나 누출된다. 만성적으로, 이러한 작용은 기관의 장기간에 걸친 형태 및 기능을 손실시킬 수 있다. 가장 빈번한 형태의 성인 만성 췌장 중의 두 가지는 알코올 유도성 췌장염 및 특발성 췌장염이다. 어린이들에게는, 만성 췌장염이 낭포성 섬유증으로 종종 유발된다.
"급성 췌장염"은 췌장 주위의 조직 또는 원격 기관계, 또는 양자를 포함할 수 있는 췌장의 급성 염증 과정이다. 이는 단독 공격(isolated attack)으로 일어날 수 있거나, 또는 별도로 공격 사이에 정상 조직에 대하여 반대로 반복될 수 있다. 정의에 의해, 급성 췌장염은 가역적이다; 이것은 연속 감염, 비가역 구조 변화 및 외분비성 및 내분비성 췌장 기능의 영구 손상의 부재에 의하여 만성 췌장염과 구분된다. 급성 췌장염은 또한 경증(mild) 및 중증(severe) 형태로 분류된다. 경증 급성 췌장염은 극소 장기 부전증 및 평온한 회복과 관련된다. 중증 급성 췌장염은 췌장 괴사와 관련되며 장기 부전 및/또는 국부적인 합병증을 초래할 수 있다. 급성 췌장염의 국부적인 합병증은 저류액(fluid collections), 가성 낭종 형성(pseudocyst formation), 고름집, 췌장 괴사, 출혈, 정맥 혈전증(venous thrombosis), 및 가성동맥류 형성(pseudoaneurysm formation)을 포함한다.
용어 "통증"은 실제 또는 잠재적인 조직 손상과 연관된 감각적 경험이다. 통증의 신체 감각은 이산 원인으로부터 야기되고 관련된 질환의 증상을 구성하거나, 또는 통증 자체는 주요 문제, 예컨대 신경병증성 통증을 구성하는 증후군일 수 있다. 본 발명의 한 구체예에서, 통증은 임의의 자가면역 또는 염증 반응 또는 질환에 의해 야기되거나 수반되지 않는다. 본 발명의 또 다른 구체예에서, 용어 "복"통 ("abdominal" pain)은 부인과적 기능 또는 질환으로 인한 여성 골반 통증은 포함하지 않는다. 본 발명의 다른 구체예에서, 용어 "복"통은 만성 자궁주위조직염을 포함하는 여성 만성 골반 통증 증후군을 포함하지는 않는다.
용어 "프로테아제"는 프로테이나제, 단백질 분해 효소 또는 펩티다제를 의미하며, 이것은 단백질 내에서 내부 아미드 펩티드 결합의 분열을 촉진한다. 구체적으로, 프로테아제는 한 아미노산의 카르복실기와 또다른 아미노산의 아미노기 사이의 아미드 결합을 절단하여 단백질의 성분 아미노산으로 단백질 전환을 촉진한다. 프로테아제는 일반적으로 이들의 촉매 형태, 예를 들어 아스파르트산 펩티다제, 시스테인(티올)펩티다제, 메탈로펩티다제, 세린 펩티다제, 트레오닌 펩티다제, 알칼리성 또는 세미-알칼리성 프로테아제, 중성, 및 알려지지 않은 촉매 메커니즘의 펩티다제에 의해 확인된다(http://merops.sanger.ac.uk 참조). 본 발명의 바람직한 구체예에 따라, 본 발명의 방법에서 유용한 프로테아제는 비-췌장 프로테아제이다. 용어 "비-췌장 프로테아제(non-pancreatic proteases)"는 (1) 인간 또는 동물 췌장 조직 또는 추출물로부터 정제되지 않으며, (2) 트립신을 포함하지 않고, 임의로 (3) 트립신 또는 키모트립신이 인간 또는 동물 췌장 조직 또는 추출물로부터 정제되거나 또는 미생물 또는 단세포 숙주내에서 제조되는 지에 상관 없이 키모트립신을 포함하지 않는 프로테아제를 의미한다. 본 발명의 바람직한 구체예에 따라, 비-췌장 프로테아제는 미생물 또는 단세포 숙주 내에서 생성된다. 이러한 단세포 숙주는 박테리아, 효모, 진균류, 식물, 곤충 또는 배양액 내의 포유동물 세포 중의 하나에서 선택될 수 있다.
본 발명의 바람직한 구체예에 따라, 비-췌장 프로테아제는 아스페르길루스 멜레우스(Aspergillus melleus)에 의해 생성된다. 대안으로, 본 발명에서 유용한 비-췌장 프로테아제는 통상의 펩티드 합성 기술에 의해 합성될 수 있다.
"세아프로제"("SAP")는 아스페르길루스 멜레우스에 의해 생성된 균일한 결정형 세미-알칼리성 단백질 분해 효소를 의미하며 아마노 엔자임사 일본(Amano Enzyme Inc. Japan)으로부터 시판된다. SAP는 액체 또는 고체 발효 방법에 의해 제조될 수 있다. 세아프로제는 또한 세아프로제-S, 아스페르길루스 알칼리성 프로테이나제; 아스페르길로펩티다제 B; API 21; 아스페르길로펩신 B; 아스페르길로펩신 F; 아스페르길루스 칸디두스(Aspergillus candidus) 알칼리성 프로테이나제; 아스페르길루스 플라부스(Aspergillus flavus) 알칼리성 프로테이나제; 아스페르길루스 멜레우스(Aspergillus melleus) 세미-알칼리성 프로테이나제; 아스페르길루스 오리자에(Aspergillus oryzae) 알칼리성 프로테이나제; 아스페르길루스 파라시티쿠스 (Aspergillus parasiticus) 알칼리성 프로테이나제; 아스페르길루스 세린 프로테이나제; 아스페르길루스 사이도위(Aspergillus sydowi) 알칼리성 프로테이나제; 아스페르길루스 소야(Aspergillus soya) 알칼리성 프로테아나제; 아스페르길루스 멜레우스(Aspergillus melleus) 알칼리성 프로테이나제; 아스페르길루스 술푸레우스(Aspergillus sulphureus) 알칼리성 프로테이나제; 프로자임; P 5380; 카이오리나제; 세미-알칼리성 프로테아제; 수미자임 MP; 프로자임 10; 오노프로스; 오노프로스 SA; 프로테아제 P; 프로멜라스, 알칼리성 프로테이나제(페니실린 시트리눔(Penicillin citrinum)); 알칼리성 프로테이나제(아스페르길루스 에스피(Aspergillus sp.); 알레르젠 Asp fl 1(아스페르길루스 플라부스(Aspergillus flavus)); 알레르젠 Asp fl 13(아스페르길루스 플라부스(Aspergillus flavus)); 알레르젠 Asp f 13(아스페르길루스 푸미가투스(Aspergillus fumigatus); 알레르젠 펜 c2(페니실리움 시트리눔(Penicillium citrinum)); 아스페르길로펩티다제 B; PepD; prtA 및 SUB2(마이크로스포룸 카니스(Microsporum canis))를 의미한다. 세아프로제는 대략 30 kD의 분자량을 가지며 pH 5.0 내지 9.0 범위 내에서 안정하다. 이 밖에, 세아프로제는 효소 분해(enzymatic cleavage)에 포함되는 프로테아제이며, 더 구체적으로 단백질 사슬의 P1 위치 내의 Phe 잔기를 함유하는 기질을 우선적으로 분해한다. 본 발명의 한 구체예에 따라, 1종 이상의 형태 또는 타입의 세아프로제가 사용될 수 있다. 대안으로, 세아프로제는 세아프로제 이외의 1종 이상의 비-췌장 프로테아제와 조합하여 사용될 수 있다.
용어 "리파제"는 글리세롤 및 단순 지방산으로의 지질의 가수분해(즉, 물을 첨가하여 화합물의 히드록실기 및 수소 원자를 단편으로 분리하는 것)를 촉진하는 효소를 의미한다. 이 효소 반응은 일반적으로 칼슘 이온(Ca2+)이 필요하다. 췌장에 의해 분비된 리파제는 소장의 상부 루프에서 지방(트리슬리세리드)의 소화를 위해 매우 중요하다. 리파제는 예컨대 동물 원으로부터 유도되거나 또는 미생물 또는 단세포 원으로부터 제조된다.
용어 "아밀라제"는 췌장 및 또한 모든 포유동물은 아니지만 인간의 타액선에서 생성되는 효소를 의미한다. 인간 타액 아밀라제는 프리알린으로서 알려져 있다. 아밀라제는 소장에서 두 성분의 전분(아밀로스 및 아밀로-펙틴)을 단순당으로 전환하는 것을 촉진함으로서 탄수화물, 예를 들어 폴리사카라이드의 소화에 관여하는 주요 소화 효소이다. 더 구체적으로, 아밀라제는 전분, 글리코겐, 및 덱스트린을 글루코스, 말토스, 및 한계 덱스트린으로 가수분해한다. 임상적으로 혈액 아밀라제 농도는 급성 및 때때로 만성 췌장염의 상태에서 종종 상승된다. 예컨대, 아밀라제는 동물 원으로부터 유도될 수 있거나 또는 미생물 또는 단세포 원으로부터 제조될 수 있다.
용어 "프로테아제", "아밀라제" 및 "리파제"는 세가지 주요 부류의 소화 효소로써 당업계에 다소 보편적으로 알려져 있지만, 이들 각각의 부류와 부합하며 뚜렷하게 특수화된 기능을 이행하는 많은 종류의 효소가 있다. 예를 들어, 췌장 기능을 돕는 단백질 분해 효소는 엔도펩티다제(트립신, 키모트립신, 엘라스타제 및 칼리크레인) 및 엑소펩티다제(카르복시펩티다제 A 및 카르복시펩티다제 B)(E. Lebenthal et al., Pancreas 9, 1-12(1994))를 포함한다. 프로테아제의 다른 예는 바실로라이신, 브로멜라인, 피신, 오리진, 파파인, 펩신, 프로나제, 프로테이나제 K, 프로테이나제 S, 세아프로제, 세라펩티다제, 서브틸리신, 테르몰리신, 트롬빈, 및 기타 유사한 효소를 포함한다. 본 발명과 관련하여 사용될 수 있는 비-췌장 프로테아제의 요약이 하기 표 1에 예시된다.
[표 1]
프로테아제 종류
메탈로프로테아제 세라티아 마르세스센스
세라티아 프로테아제(E.C.3.4.24.40)(세랄라이신) 세라티아 에스피(균주 E-15)
메탈로프로테아제 p1 예르시니아 룩케리
메탈로프로테이나제(EC 3.4.24.-) 얼위니아 크리산테미
프로테아제 A 얼위니아 크리산테미
메탈로프로테아제 펙토박테리움 카로토보룸 서브에스피. 카로토보룸
유기 용매-내성 프로테아제 슈도모나스 아에루기노사
알칼리성 메탈로프로테이나제 슈도모나스 아에루기노사 PA01
메탈로프로테아제 슈도모나스 플루오레센스
세랄라이신 슈도모나스 에스피. 'TAC II 18'
알칼리성 프로테아제 슈도모나스 플루오레센스
APrA 슈도모나스 브라시카세아룸
알칼리성 메탈로프로테이나제 포토르하브두스 루미네센스
메탈로프로테아제 프로테우스 미라빌리스
메탈로프로테아제 예르시니아 슈도투베르쿨로시스 IP 32953
메탈로프로테아제 예르시니아 페스티스 CO92
알칼리성 메탈로프로테이나제 카울로박터 크레스센투스 CB15
RB140 루에게리아 에스피. PR1b
프로테아제 유사 단백질 아조스피릴룸 브라실렌스
b116027 브래디리조비움 자포니쿰 USDA 110
프로테아제 시노르히조비움 멜리로티 1021
리조비오신 RzcA 리조비움 레구미노사룸 비브이. 트리폴리이
프로테아제 아조토박터 비넬란디이
프로테아제 슈도모나스 푸티다 KT2440
마트리라이신 무스 무스쿨루스
프로테아제 노스톡 에스피. PCC 7120
알칼리성 프로테아제 아스페르길루스 푸미가투스
알칼리성 프로테아제 아스테르길루스 에스피. MK245
알칼리성 프로테아제 아스페르길루스 에스피. MK285
오리진(EC 3.4.21.63) 아스페르길루스 오리자에
알칼리성 프로테아제 아스페르길루스 비리디누탄스
알레르젠 Asp fl 1 아스페르길루스 플라부스
프로테아제 아스페르길루스 니게르
알칼리성 프로테이나제 트리쵸데르마 하마툼
세포외 세린 프로테아제; Tvsp1 하이포크레아 비렌스
알칼리성 프로테이나제(EC 3.4.21.-) 아크레모니움 크리소게눔
프로테아제 기베렐라 제아에 PH-1
서브틸라제 오피오스토마 피세아에
서브틸리신 유사 프로테아제 베르티실리움 다리아에
서브틸리신 유사 프로테이나제 Mp1 마그나포르테 포아에
프로테아제 마그나포르테 그리세아 70-15
서브틸리신 유사 세린 프로테아제 PR1A 메타리지움 아니소플리아에 바르. 아니소플리아에
세린 프로테아제 톨릴포클라디움 인플라툼
서브틸리신 유사 프로테아제 PR1D 메타르히지움 아니소플리아에 바르. 아크리둠
서브틸리신 유사 프로테아제 SUB2 아르트로데르마 벤하미아에
세린 프로테아제 파에실로마이세스 리락시누스
프로테아제 뉴로스포라 크라스사
서브틸리신 유사 프로테아제 파에오스파에리아 노도룸
서브틸리신 유사 프로테아제 2 미크로스포룸 카니스
서브틸리신 유사 프로테아제 SUB2 트리쵸피톤 루브룸
프로테아제 렙토스파에리아 마쿨란스
알칼리성 세린 프로테아제 ver112 레카니실리움 프살리오타에
알칼리성 세린 프로테아제 베르티실리움 클라마이도스포리움 바르. 클라마이도스포리움
큐티클-분해(cuticle-degrading)프로테아제 코르다이셉스 브론그니아르티이
프로테아제 뉴로스포라 크라스사
알칼리성 세린 프로테아제 페니실리움 크리소게눔
세린 프로테이나제 아가리쿠스 비스포루스
서브틸라제 타입 프로테이나제 isp6 쉬조사카로마이세스 폼베
큐티클-분해 프로테아제 바스시아신 I 베아루베리아 바스시아나
서브틸라제 오피오스토마 필리페룸
바쿠오라르 세린 프로테아제 페니실리움 옥살리쿰
Pen c 1; 알칼리성 세린 프로테아제 페니실리움 시트리눔
서브틸리신 유사 프로테아제 SUB3 트리쵸피톤 루브룸
본 발명의 방법에서 프로테아제, 및 임의의 다른 유용한 효소는 재조합 DNA 기술에 의해 생성된 것을 포함하는 미생물, 박테리아, 진균류, 식물 또는 동물 기원으로부터 유도될 수 있다. 대안으로, 이들은 통상의 펩티드 합성 기술에 의해 제조될 수 있다. 바람직한 구체예에 따라, 본 발명의 방법에서 유용한 프로테아제는 비-췌장 프로테아제이다. 본 발명의 바람직한 구체예에서, 비-췌장 프로테아제는 세아프로제, 세라펩타제, 프로나제, 프로나제 성분 또는 이들의 혼합물이다. 프로나제의 예로는 프로테이나제 A, 프로테이나제 B, 메탈로엔도펩티다제 및 메탈로프로테이나제를 포함한다. 지금까지의 바람직한 비-췌장 프로테아제의 특징 및 이들의 용도는 하기 표 1a 에 열거된다.
[표 1a]
세아프로제 (SAP) 세라펩타제 프로나제
단백질 서열 282 아미노산 470 아미노산 프로나제는 엔도- 및 엑소- 프로테이나제의 혼합물이다. 이것은 거의 모든 펩티드 결합을 절단한다. 프로테이나제 A-297 아미노산 프로테이나제 B-299 아미노산 중성 메탈로프로테이나제-미콜라이신 메탈로엔도펩티다제-334 아미노산
분자량 28.5 kD 50.5 kD 프로테이나제 A-29.7 kD
PI 5.84 4.61 프로테이나제 A-9.04
안정성 pH 5-9.0 산성 pH에 의해 불활성화된 메탈로프로테인 Zn 프로나제는 칼슘 이온을 필요로한다. 이것은 1% SDS 및 1% 트리톤 X에서 활성을 유지한다. 혼합물의 일부 성분은 요소 및 구안디니움 HCl에 대하여 매우 안정하지만 완전한 소화가 일어나지 않을 것이다.
결정 구조 입수가능 입수가능 프로테이나제 A, 프노테이나제 B 및 메탈로엔도펩티다제가 입수가능하다
숙주 아스페르길루스 멜레우스 세르라티아 마르세스센스 스트렙토마이세스 그리세우스
기질 특이성 비 특이성 비특이성 비특이성
최적 pH pH 8 pH 9-10 pH 7.5; 7-8. 혼합물의 다른 성분은 다른 최적조건을 가질것이다
지시 항 염증 작용 거담제 -항염증제 -심장 질환 -항박테리아 감염 -창상치유를 앞당김 -유방울혈 -방광염, 부고환염, 치관주위염 부기(swelling)의 경감, 가래 뱉기가 어려움
세아프로제 (SAP) 세라펩타제 프로나제
-기관지염에서 불충분한 가래 뱉음
제조자 /판매자 아마노 엔자임사, 일본(여기에서 사용된 SAP는 고체 발효 공정에 의해 제조되었다) 가르퓨어 래보러토리즈 피브이티. 사(GHARPURE LABORATORIES PVT. LTD) 다께다 케미칼 인더스트리사 EMD 케미컬사 가켄 제약회사(Kaken Pharmaceutical Co.,), 일본
본 발명의 방법에서 사용하기 위한 비-췌장 프로테아제 또는 비-췌장 프로테아제를 포함하는 조성물의 투약 형태(dosage form)는 액상물, 고형물, 현탁액 또는 분산액의 형태일 수 있다. 비-췌장 프로테아제 또는 비-췌장 프로테아제를 포함하는 조성물에 대한 투여 경로는 임의의 통상의 투여 경로 일 수 있으며, 경구 경로, 장 경로, 경피 경로 또는 비경구 경로를 포함한다. 최종적으로 비-췌장 프로테아제 또는 비-췌장 프로테아제를 포함하는 조성물은 슬러리, 정제, 표면에 분할선이 있는 정제(scored tablet), 용피 정제, 캐플릿, 캡슐제 또는 당의정으로서 투여될 수 있다.
여기에서 사용된, 비-췌장 프로테아제의 치료적 유효량은 1회 투약량 당 프로테아제 활성의 약 5,000 내지 약 1,000,000 미국 약전서(USP) 유니트이다. 바람직한 구체예에서, 비-췌장 프로테아제의 치료적 유효량은 1회 투약량 당 프로테아제 활성의 약 5,000 내지 약 750,000 USP 유니트이다. 여전히 또 다른 바람직한 구체예에서, 비-췌장 프로테아제의 치료적 유효량은 1회 투약량 당 프로테아제 활성의 약 5,000 내지 약 500,000 USP 유니트이다. 더 바람직한 구체예에서, 비-췌장 프로테아제의 치료적 유효량은 1회 투약량 당 프로테아제 활성의 약 5,000 내지 약 250,000 USP 유니트이다. 이들 활성 유니트 범위 모두에 대하여 프로테아제의 1 USP 유니트는 "프로테아제 활성의 검정(Assay of Protease Activity)"(U.S. Pharmacopeia/National Formulary, USP 26/NF21, 2003 pg 1389-1391)에서 정의된다. 치료 방법이 치료적 유효량의 비-췌장 프로테아제를 포함하는 조성물을 사용하는 경우, 이것의 양은 상술한 제제의 1회 투약량 당 프로테아제의 활성 유니트 중의 하나를 제공하는 것이다.
대안으로, 본 발명에 따라 비-췌장 프로테아제 또는 비-췌장 프로테아제를 포함하는 조성물은 1회 식사 당 약 20 ㎎ 내지 약 500 ㎎의 활성 프로테아제 농도를 갖는 형태로 포유동물에게 투여한다. 또 다른 구체예에서, 비-췌장 프로테아제 또는 비-췌장 프로테아제를 포함하는 조성물은 1회 식사 당 약 50 ㎎ 내지 약 500 ㎎의 활성 프로테아제 농도를 갖는 형태로 포유동물에게 투여한다. 대안 구체예에서, 비-췌장 프로테아제 또는 비-췌장 프로테아제를 포함하는 조성물은 1회 식사 당 약 50 ㎎ 내지 약 250 ㎎의 활성 프로테아제 농도를 갖는 형태로 포유동물에게 투여한다. 활성은 상기 정의된 바와 같이 측정된다.
대안 구체예에서, 비-췌장 프로테아제 또는 비-췌장 프로테아제를 포함하는 조성물은 1회 식사 당 전체 활성 프로테아제 투약량이 포유동물 체중 1 ㎏ 당 약 1 ㎎ 내지 약 10 ㎎, 바람직하게는 포유동물 체중 1 ㎏ 당 약 1 ㎎ 내지 약 3 ㎎, 또는 바람직하게는 포유동물 체중 1 ㎏ 당 약 1 ㎎ 내지 약 2 ㎎이 되도록 포유동물에게 투여된다.
본 발명에 따른 비-췌장 프로테아제는 결정형, 반결정형 또는 무정형일 수 있다. 여기에서 사용된 바와 같은, 용어 "무정형"은 무정형 고체, 및 액체를 포함한다. 비-췌장 프로테아제는 결정화되어 고체 상태에서 완전하게 결정형 물질을 형성할 수 있거나 또는 무정형(완전하게 비결정형)으로 존재할 수 있거나 또는 고체 상태에서 반결정형(결정형 및 무정형 영역을 가짐)으로 결정화할 수 있다. 예를 들어, 결정은 격자 구조, 특징적인 형상 및 광학 성질, 예컨대 굴절률을 포함하는 특성을 나타낸다. 결정은 삼차원에서 주기적으로 반복하는 패턴 내에 배열된 원자로 이루어진다. 반면, 무정형 고체는 결정 고체 상태의 분자 격자 구조 특징을 갖지 않는다. 비-췌장 프로테아제 결정은 가교 또는 비가교 형태일 수 있다. 이밖에, 이러한 비-췌장 프로테아제의 무정형은 또한 가교 또는 비가교 형태일 수 있다.
용어 "기초 수준" 또는 "기초 농도"는 밤새 금식한 후 특정 환자 또는 포유동물의 혈장 내의 CCK의 수준 또는 농도를 의미한다. 일단 음식이 섭취되면, 혈장내의 CCK 농도는 상기 기초 수준 위로 증가하며, 이것은 차례로 췌장을 자극하여 효소 및 중탄산염을 포함하는 췌액을 분비한다.
여기에서 사용된 바와 같은, 용어 "최대 혈장 농도(Cmax)"는 음식물 공급 후 측정된 최고 혈장 농도를 의미한다. Cmax의 값은 최고 혈장 농도로부터 기초 농도를 감산하여 얻는다.
본 발명의 한 구체예에 따라 사용되는 경우, 용어 "감소하는" 또는 "감소"는 음식물 공급 후 포유동물의 Cmax의 백분율 감소를 의미한다. 이러한 감소는 (b) 음식물 공급 후 비-췌장 프로테아제의 존재 하의 Cmax에 대해 (a) 음식물 공급 후 비-췌장 프로테아제의 부재 하의 포유동물의 Cmax를 비교하여 측정한다. Cmax의 백분율 감소가 100%이면, 비-췌장 프로테아제는 기초 농도에서 CCK 농도를 "유지"한다. 100% 초과의 백분율 감소라면, 비-췌장 프로테아제는 기초 수준 미만으로 CCK 농도를 감소시킨다. 본 발명의 다른 구체예에 따라, "감소하는" 또는 "감소"는 특정 포유동물에서 음식물 공급 부재시의 기초 농도에 대한 상대적인 CCK 농도의 감소를 의미한다. 예를 들어, 음식물의 부재시 투여된 비-췌장 프로테아제는 CCK 농도를 기초 수준 미만으로 감소할 수 있다. 이것은 예를 들어 위장관 질환, 흡수 장애 증후군, 급성 및 만성 염증 및 신경성 식욕부진증(anorexia nervosa)과 같은 식사 장애의 치료로 바람직할 수 있다. 본 발명의 추가 구체예에서, 용어 "감소하는" 또는 "감소"는 비-췌장 프로테아제의 투여 전에 금식 없이 임의의 시간에 측정된 특정 포유동물의 CCK 농도의 감소를 의미한다.
본 발명의 방법에서 유용한 비-췌장 프로테아제는 부형제와 함께 조합될 수 있다. 본 발명에 따라, "부형제"는 약제학적 조성물에 사용된 충전제의 조합 또는 충전제로써 작용한다. 이러한 범주에서 바람직한 부형제는 하기의 염을 포함한다: 1) 글리신, 아르기닌, 아스파르트산, 글루탐산, 리신, 아스파라긴, 글루타민, 프롤린과 같은 아미노산; 2) 탄수화물, 예를 들어, 글루코스, 푸룩토스, 갈락토스, 만노스, 아라비노스, 자일로스, 리보스와 같은 모노사카라이드; 3) 락토스, 트레할로스, 말토스, 슈크로스와 같은 디사카라이드; 4) 말토덱스트린, 덱스트란, 전분, 글리코겐과 같은 폴리사카라이드; 5) 만니톨, 자일리톨, 락티톨, 소르비톨과 같은 알디톨; 6) 글루쿠론산, 갈락투론산; 7) 메틸 시클로덱스트린, 히드록시프로필-β-시클로덱스트린 등과 같은 시클로덱스트린; 8) 염화 나트륨, 염화 칼륨, 염화 마그네슘, 나트륨 및 칼륨의 인산염, 붕산, 탄산 암모늄 및 인산 암모늄과 같은 무기 분자; 9) 아세테이트, 시트레이트, 아스코르베이트, 락테이트와 같은 유기 분자; 10)아카시아, 디에탄올아민, 글리세릴 모노스테아레이트, 레시틴, 모노에탄올아민, 올레산, 올레일알코올, 폴록사머, 폴리소르베이트, 소듐 라우릴 설페이트, 스테아르산, 소르비탄 모노라우레이트, 소르비탄 모노스테아레이트, 및 기타 소르비탄 유도체, 폴리옥실 유도체, 왁스, 폴리옥시에틸렌 유도체와 같은 유화 또는 가용화/안정화제; 및 11) 한천, 알긴산 및 그의 염, 구아고무, 펙틴, 폴리비닐 알코올, 폴리에틸렌 옥시드, 셀룰로스 및 그의 유도체 프로필렌 카르보네이트, 폴리에틸렌 글리콜, 헥실렌 글리콜, 틸옥사폴과 같은 점도 증강제이다. 부형제의 추가의 바람직한 군은 슈크로스, 트레할로스, 락토스, 소르비톨, 락티톨, 이노시톨, 나트륨 및 칼륨염 예컨대 아세테이트, 포스페이트, 시트레이트, 보레이트, 글리신, 아르기닌, 폴리에틸렌 옥시드, 폴리비닐 알코올, 폴리에틸렌 글리콜, 헥실렌 글리콜, 메톡시 폴리에틸렌 글리콜, 젤라틴, 히드록시프로필-β-시클로덱스트린, 폴리리신, 폴리아르기닌을 포함한다.
본 발명의 한 구체예에서, 부형제는 하기로 이루어진 군으로부터 선택된다: 염, 알코올, 탄수화물, 단백질, 지질, 계면활성제, 중합체 및 폴리아미노산. 또 다른 구체예에서, 부형제는 하기로 이루어진 군으로부터 선택된다: 프로타민, 폴리비닐알코올, 시클로덱스트린, 덱스트란, 폴리아미노산, 예컨대 폴리아르기닌, 폴리리신 및 폴리글루타메이트, 폴리에틸렌글리콜 및 덴드리머, 중합체 예컨대 폴리카르보필 및 알기네이트.
본 발명에 따라, 비-췌장 프로테아제는 또한 1종 이상의 다른 치료제와 조합될 수 있다. 치료제의 예로는 예를 들어, 바람직하게는 단세포 또는 미생물 숙주에서 제조되거나 또는 통상의 펩티드 합성 기술에 의해 생성된 효소, 예컨대 아밀라제 및/또는 리파제를 포함한다.
본 발명에 따라, 비-췌장 프로테아제는 결정형 또는 비결정형이냐에 상관 없이, 이들의 구조에 안정성을 부여하기 위해 가교될 수 있다. 유용한 가교제는 이것으로 한정되는 것은 아니지만, 하기 표 2에 나타낸 바와 같은 다작용가 가교제를 포함한다. 가교 절차는 통상의 가교 기술에 따라 수행될 수 있다.
[표 2]
가교제
가교제 부류 가교제
동종작용가 디티오비스(숙신이미딜프로피오네이트)(DSP); 3,3'-디티오비스(설포숙신이미딜-프로프리오네이트)(DTSSP); 디메틸 3,3'-디티오비스프로피온이미데이트·HCl(DTBP); 비스말레이미도헥산(BMH); 비스[설포숙신이미딜]수베레이트(BS); 1,5-디플루오로-2,4-디니트로벤젠(DFDNB); 디메틸수베르이미데이트·2HCl(DMS); 디숙신이미딜 글루타레이트(DSG); 디설포숙신이미딜 타르타레이트 (설포-DST); 에틸렌 글리콜비스[설포-숙신이미딜숙시네이트](설포-EGS); 비스-(β-[4-아지도살리실아미도]에틸)디술피드(BASED); 1,4-디-(3'-[2'-피리딜디티오]프로피온아미도)부탄(DPDPB) 및 (비스[2-(설포숙신이미도옥시카르보닐옥시)에틸]설폰(설포-BSOCOES)
이종작용가 N-숙신이미딜-3-(2-피리딜디티오)프로피오네이트(SPDP); 숙신이미딜-6-(3-[2-피리딜디티올]프로피오네이트)헥사노에이트(LC-SPDP); 설포숙신이미딜-6-(3-[2-피리딜디티오]프로피오네이트)헥사노에이트(설포-LC-SPDP); N-(4-[p-아지도살리실아미도]부틸]-3'-(2'-피리딜디티오)프로피온아미드(APDP); N-숙신이미딜(4-아지도페닐)1,3'-디티오프로피오네이트(SADP); 설포숙신이미딜(4-아지도페닐)1,3'-디티오프로피오네이트(설포-SADP); 설포숙신이미딜-2-(7-아지도-4-메틸코우마린-3-아세트아미드)에틸-1,3'-디티오프로피오네이트(SAED); 설포숙신이미딜-2-(m-아지도-o-니트로벤즈아미도)에틸-1,3'-디티오프로피오네이트(SAND); 설포숙신이미딜-2-(p-아지도살리실아미도)에틸-1,3'-디티오프로피오네이트(SASD); 숙신이미딜-4-(p-말레이미도페닐)부티라트(설포- SMPB); 4-숙신이미딜옥시카르보닐-메틸-α-(2-피리딜티오)톨루엔(SMPT)설포숙신이미딜-6-(α-메틸-α-(2-피리딜티오)톨루아미도)헥사노에이트(설포-LC-SMPT); N-히드록시설포-숙신이미딜-4-아지도벤조에이트(설포-HSAB); N-(γ-말레이미도-부티릴옥시]숙신이미드 에스테르(GMBS); 및 NHS-PEG-비닐설폰(NHS-PEG-VS)
0 차 1-에틸-3-[3-디메틸아미노프로필]카르보디이미드히드로클로라이드(EDC) 및 설포-NHS
디알데히드 글루타르알데히드, 숙신알데히드, 옥탄디알데히드 및 글리옥살
기타 할로-트리아진, 할로피리미딘, 지방족 또는 방향족 모노- 또는 디카르복실산의 무수물, 지방족 또는 방향족 모노- 또는 디카르복실산의 할라이드, N-메틸올 화합물, 디이소시아네이트, 디이소티오시아네이트 및 아지리딘류
포유동물의 혈장에서 기초 CCK 농도의 유지 또는 CCK 농도의 감소 방법
CCK는 포유동물의 펩티드에 풍부하고 광범위하게 분포되어 있기 때문에 본 발명에 따른 비-췌장 프로테아제 또는 그의 조성물을 사용하여 CCK의 농도를 유지하여 많은 질환 또는 장애가 유리하게 치료될 수 있다. CCK에 의해 매개될 수 있거나 매개되는 질환은 이것으로 한정되는 것은 아니지만 췌장염(급성 또는 만성), 단백질 흡수 장애(질소 변증(azotorrhea)), 지질 흡수장애(지방 변증(steatorrhea)), 위장관 장애, 담낭질환(gall bladder disease), 뇌졸증("CVA"), 위식도 질환(gastroesophageal disease), 소화성 궤양, 가스트린종(gastronomas), 소화관 운동질환(intestinal motility disorders), 오디괄약근 기능장애(sphincter of oddi dysfunction), 담석증(cholelithiasis), 총담관 결석증(choledocholithiasis), 담도 산통(biliary colic), 상행성 담관염(ascending cholangitis), 식사 질환, 비만, 약물 중독(CCK는 선조체내에 많이 존재하며 CCK 및 도파민 시스템의 동시 분포는 동기 상태에서 정신 자극제 감작 및 약물의 습관성 성질의 보상으로 내인성 CCK를 연결한다), (S. Leibowitz and B.G. Hoebel. In: The Handbook of Obesity, Bray et al., Eds. Marcel Dekker Inc. (2001)), 공황/불안 관련 질환 (S. Rotzinger and FJ. P. Vaccarino. J. Psychiatry Neurosci. 28, 171-181 (2003); Zwanzger et al. Neuropsychopharmacol. 25, 699-703(2001)), 기분 장애(mood disorders), 정신 분열증(schizophrenia), 파킨슨씨 질환, 우울증, 주위력/기억력(모든 도파민 연관 상태의 검토에 대하여, F. Noble et al., Pharmacological Reviews, 51, 745-781(1999) 참조), 당뇨병(diabetes mellitus), 위, 공장관(jejunal tubes)등과 같은 공급관의 막힘, 암(CCK-B 수용체는 90% 초과의 전이 수질 갑상선의 경우뿐 아니라 높은 백분율의 소세포 폐암, 간질성 난소, 및 위장관 선암, 신경내분비 종양(neuroendocrine tumors), 및 악성 교종(malignant glioma)을 포함하는 잠재적으로 다양한 기타 종양으로 존재한다)을 비롯한 소화성 궤양, 위 및 십이지장 궤양 및 다양한 말초 신경 장애(L. Manni et al., Br. J. Pharmacol. 129, 744-750 (2000) 참조)를 포함한다(일반적으로, L. Manni et al., Br. J. Pharmacol. 129, 744-750(2000); M. Behe and Tm Behr, Biopolymers 66, 399-418(2002)).
본 발명의 한 구체예에 따라, 비-췌장 프로테아제는 음식물 공급 후 포유동물의 혈장내에서 CCK의 농도를 조절하기 위해 사용될 수 있다. 한 실시 형태에서, 본 발명은 치료적 유효량의 비-췌장 프로테아제 또는 비-췌장 프로테아제를 포함하는 조성물을 포유동물에게 투여하는 것을 포함하는 CCK-관련 질환의 치료 방법을 제공한다. 대안 구체예에서, 본 발명은 치료적 유효량의 비-췌장 프로테아제 또는 비-췌장 프로테아제를 포함하는 조성물을 포유동물에게 투여하는 것을 포함하는 포유동물에서의 혈장 CCK 농도를 유지하거나 또는 감소시키는 방법을 제공한다.
혈장 내의 CCK의 기초 농도는 전형적으로 하룻 밤 금식 후 혈장내 CCK의 농도로써 정의된다. 일단 식사 또는 음식물 공급이 섭취되었다면, 혈장내의 CCK 농도는 상기 기초 농도보다 위로 증가하며 췌장 자극 및 효소 및 중탄산염을 포함하는 췌장액의 분비를 초래한다. 본 발명의 한 구체예는 음식물 공급 후 연장된 기간에 걸쳐 포유동물의 혈장 콜레시스토키닌(CCK) 농도를 유지 또는 감소하는 것에 관한 것이다.
유사하게, 본 발명은 포유동물에서 CCK의 최대 혈장 농도(Cmax)를 상당히 감소하는 방법을 제공한다. 한 구체예에서, 본 발명은 치료적 유효량의 비-췌장 프로테아제 또는 치료적 유효량의 비-췌장 프로테아제를 포함하는 조성물을 음식물과 함께 상기 포유동물에게 투여하는 단계를 포함하는 포유동물의 음식물 공급 후 콜레시스토키닌(CCK)의 최대 혈장 농도(Cmax)의 감소 방법에 관한 것으로서, 상기 감소는 (a) 음식물 공급 후 상기 프로테아제의 부재시 상기 Cmax 와 (b) 음식물 공급 후 상기 프로테아제의 존재시 상기 Cmax 를 비교하여 측정하며, 상기 감소는 하기로 이루어진 군으로부터 선택된다: (ⅰ) 약 10% 이상 내지 약 25% 감소, (ⅱ) 약 25% 이상 내지 약 50% 감소, (ⅲ) 약 50% 이상 내지 약 75% 감소, 및 (ⅳ) 약 75% 이상 내지 약 100% 감소. 대안으로, 감소는 약 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 또는 100% 이상 감소일 수 있다. 바람직한 구체예에서, 비-췌장 프로테아제는 세아프로제, 세라펩타제, 프로나제, 프로나제 성분, 또는 이들의 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택된다. 여전히 또 다른 바람직한 구체예에서, 프로테아제는 세아프로제이다.
대안 구체예에서, 본 발명의 방법은 치료적 유효량의 비-췌장 프로테아제 또는 비-췌장 프로테아제를 포함하는 조성물을 상기 포유동물에게 투여하여 포유동물의 CCK-관련 질환을 치료하는 것에 관한 것으로서, 상기 프로테아제 투여 후 상기 포유동물의 혈장 콜레시스토키닌(CCK) 농도는 상기 프로테아제 투여 전 상기 포유동물의 혈장 콜레시스토키닌(CCK) 농도보다 더 낮은 농도 또는 동일한 농도이며 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 기간 동안 더 낮은 농도 또는 동일한 농도로 남아있다: (a) 투여 후 0 내지 약 4 시간; (b) 투여 후 0 내지 약 8 시간; 및 (c) 투여 후 0 내지 약 12 시간. 대안으로, 그 시간 단위는 투여 후 4, 6, 8, 10 또는 12 시간에서 선택될 수 있다.
또 다른 구체예에서, 본 발명의 방법은 치료적 유효량의 비-췌장 프로테아제 또는 치료적 유효량의 비-췌장 프로테아제를 포함하는 조성물을 상기 포유동물에게 투여하는 단계를 포함하는 상기 포유동물내의 혈장 콜레세스토키닌(CCK) 농도의 감소에 관한 것이다.
포유동물의 통증 치료 방법
본 발명은 또한 비-췌장 프로테아제 또는 비-췌장 프로테아제를 포함하는 조성물을 사용한 포유동물의 통증 치료 방법을 제공한다. 이러한 통증 치료의 이점은 활성 프로테아제 제제가 많은 다른 통증 감소 제제에서와 같이 중독성이 아니라는 것이다. 또 다른 이점은 비-췌장 프로테아제가 췌장관으로 내시경용 스텐트의 배치 및 음식물의 정맥 투여와 같은 통증, 예를 들어 만성 췌장염과 연관된 통증의 치료를 위한 몇몇 통상적인 방법으로 이용할 수 없는 경로인 비관혈적으로 투여될 수 있다.
본 발명의 방법은 췌장 기능저하와 연관된 통증, 예를 들어 급성 췌장염, 만성 췌장염, 낭포성 섬유증 및 수술 후 위장 수술과 연관된 통증을 앓는 환자를 치료하기 위해 사용될 수 있다. 췌장염으로 진단된 개인을 치료하기 위한 이러한 치료 방법은 예를 들어, 복통을 앓는 개인을 선택하고, 개인의 CCK 농도 측정의 결정을 근거로 한 개인에 대한 비-췌장 프로테아제를 투여하는 개인의 혈장 CCK 농도의 측정을 근거로 하여 개인의 치료에 대한 프로테아제 투여의 효능을 결정하고 통증 증상의 개선을 모니터하는 것을 포함한다.
또 다른 양상에서, 본 발명은 치료적 유효량의 비-췌장 프로테아제 또는 비-췌장 프로테아제를 포함하는 조성물을 포유동물에게 투여하는 것을 포함하는 통증의 치료 방법을 제공한다.
포유동물의 복통 치료 방법
상술한 바와 같이, 음식물은 트립신 결합 기질로써 관강내 트립신에 작용할 수 있다. 이것은 차례로 CCK의 방출을 촉진하는 모니터 펩티드 및 장 CCK-RK 분해로부터 트립신을 방지한다. CCK의 증가는 후속하여 통증을 유발한다.
본 발명의 한 구체예에 따라, 포유동물에게 비-췌장 프로테아제의 투여는 음식물 섭취 이 후의 혈장내의 CCK의 기초 농도를 유지하거나 또는 혈장 내의 CCK 농도를 감소시킨다. 그 결과, 본 발명의 방법은 이것으로 한정되는 것은 아니지만 췌장염(급성 또는 만성), 단백질 흡수 장애(질소 변증), 지질 흡수 장애(지방 변증), 당뇨병, 궤양 질환, 및 이들의 조합, 담도 산통, 담관염, 상행성 담관염, 담석증, 마약 중독, 오디 괄약근 기능 장애, 위 배출의 지연(delayed gastric emptying) 및 화학 요법 손상을 포함하는 다양한 위장관 질환 및 장애와 연관된 복통의 치료에 유용하다. 본 발명의 방법은 또한 CCK 길항작용(antagonism), 배고픔의 감소 및 식욕 부진(anorexia)의 치료에 유용하다.
더 특히, 본 발명은 치료적 유효량의 비-췌장 프로테아제 또는 비-췌장 프로테아제를 포함하는 조성물을 상기 포유동물에게 투여하는 것을 포함하는 포유동물의 복통 치료 방법을 제공한다.
상술한 바와 같이, 혈장내 CCK의 기초 농도는 전형적으로 밤새 금식한 후의 특정 환자 또는 포유동물의 혈장내의 CCK의 농도로써 정의된다. 식사 또는 음식물 공급이 섭취되거나 또는 취하여지면, 혈장 내의 CCK 농도는 기초 농도 위로 증가하며, 이것은 췌장 자극 및 효소 및 중탄산염을 포함하는 췌장액의 분비를 초래한다. 본 발명의 한 구체예는 음식물 공급 후 연장된 기간에 걸쳐 포유동물의 혈장 콜레시스토키닌(CCK) 농도를 유지하는 것에 관한 것이다.
한 구체예에서, 본 발명의 방법은 치료적 유효량의 비-췌장 프로테아제 또는 치료적 유효량의 비-췌장 프로테아제를 포함하는 조성물을 상기 포유동물에게 투여하는 단계를 포함하는 포유동물의 복통 치료에 관한 것으로서, 상기 프로테아제 투여 후 상기 포유동물의 혈장 콜레시스토키닌(CCK) 농도가 상기 프로테아제 투여 전 상기 포유동물의 혈장 콜레시스토키닌(CCK) 농도보다 더 낮은 농도 또는 동일한 농도이며, (a) 상기 프로테아제 투여 후 0 내지 약 4 시간; (b) 상기 프로테아제 투여 후 0 내지 약 8 시간; 및 (c) 상기 프로테아제 투여 후 0 내지 약 12 시간으로 이루어진 군으로부터 선택된 기간 동안 더 낮은 농도 또는 동일한 농도로 남는다. 대안으로, 그 시간 단위는 4, 6, 8, 10 또는 12 시간 투여 후로부터 선택될 수 있다.
본 발명은 또한 포유동물의 CCK의 최대 혈장 농도(Cmax)를 상당히 감소하기 위한 방법을 제공한다. 여기에서 사용된 바와 같은, 문구 "최대 혈장 농도(Cmax)"는 음식물 공급 후 측정된 최고 혈장 농도를 의미한다. 따라서, 본 발명의 한 구체예는 치료적 유효량의 비-췌장 프로테아제 또는 비-췌장 프로테아제를 포함하는 조성물을 상기 포유동물에게 투여하는 것을 포함하는 포유동물의 복통 치료 방법에 관한 것으로서, 여기에서 투여는 상기 투여 후 상기 포유동물 내의 혈장 콜레시스토키닌(CCK) 농도의 감소를 초래한다.
본 발명에 따른 방법 모두는 비-췌장 프로테아제 또는 비-췌장 프로테아제를 포함하는 조성물을 음식물과 함께 또는 음식물 없이 포유동물에게 투여하여 수행될 수 있다. 여기에서, 본 발명의 다른 방법뿐 아니라, 음식물과 함께 비-췌장 프로테아제 또는 비-췌장 프로테아제를 포함하는 조성물의 투여는 1회 식사 당 1회 또는 2회 또는 3회, 식사 시작 또는 식사 동안 또는 대안으로 식후에 각각의 식사에서 음식물과 동시에 또는 후속하여 비-췌장 프로테아제의 투여를 포함한다. 본 발명의 다른 구체예는 치료적 유효량의 비-췌장 프로테아제 또는 비-췌장 프로테아제를 포함하는 조성물을 상기 포유동물에서 음식물과 함께 또는 음식물 없이 투여하는 것을 포함하는 포유동물의 복통 치료 방법에 관한 것으로, 음식물 공급 동안 상기 프로테아제 없이 상기 포유동물의 CCK의 Cmax와 비교하면 상기 프로테아제는 상기 포유동물의 CCK의 최대 혈장 농도(Cmax)를 감소시킨다.
본 발명의 다른 구체예에서, 본 발명은 치료적 유효량의 비-췌장 프로테아제 또는 치료적 유효량의 비-췌장 프로테아제를 포함하는 조성물을 상기 포유동물에게 투여하는 단계를 포함하는 포유동물의 복통 치료 방법에 관한 것으로서, 여기에서 상기 프로테아제는 상기 포유동물의 콜레시스토키닌(CCK)의 최대 혈장 농도(Cmax)의 감소를 야기하며, 상기 감소는 (a) 음식물 공급 후 상기 프로테아제의 부재시 상기 Cmax와 (b) 음식물 공급 후 상기 프로테아제의 존재시 상기 Cmax를 비교하여 측정하며, 상기 감소는 (ⅰ) 약 10% 이상 내지 약 25% 감소; (ⅱ) 약 25% 이상 내지 약 50% 감소; (ⅲ) 약 50% 이상 내지 약 75% 감소; 및 (ⅳ) 약 75% 이상 내지 약 100% 감소로 이루어진 군으로부터 선택된다. 이러한 감소는 또한 적어도 약 10% 내지 약 100% 감소될 수 있다. 대안으로, 감소는 적어도 약 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 또는 100% 감소이다.
포유동물의 식욕 부진의 치료 방법
음식물의 섭취에 이어, 상승된 CCK 농도는 포만감을 만든다. 감소된 CCK 혈장 농도를 유지함으로써, 본 발명에 따른 방법은 식욕 부진의 치료에 사용될 수 있다. 유사하게, 본 발명에 따른 방법은 영양 실조를 치료하는 데 사용될 수 있다. 한 구체예에서, 본 발명은 치료적 유효량의 비-췌장 프로테아제 또는 치료적 유효량의 비-췌장 프로테아제를 포함하는 조성물을 상기 포유동물에게 투여하는 것을 포함하는 포유동물의 식욕부진(anorexia)의 치료 방법을 제공한다.
비-췌장 프로테아제의 투약 형태
본 발명에 따른 임의의 방법은 산-억제제를 함유하는 비장용피의, 비-췌장 프로테아제 정제를 사용하여 수행될 수 있다.
한 구체예에서, 본 발명의 방법은 통증, 바람직하게는 췌장 기능저하, 및 식욕 부진과 관련이 있는 복통의 치료를 위해 산-억제제를 함유하지 않는 비장용피의 비-췌장 프로테아제 정제의 용도에 관한 것이다. 또 다른 구체예에서, 본 발명의 방법은 음식물 공급 전 측정된 기초 농도로 음식물 공급 후 콜레시스토키닌(CCK) 농도의 감소를 위한 산-억제제를 함유하지 않는 비장용피의 비-췌장 프로테아제 정제의 사용에 관한 것이다.
본 발명에 따른 한 구체예에서, 비-췌장 프로테아제 정제는 1회 식사 당 정제 1정 내지 6정의 정제, 바람직하게는 1정 내지 2정의 정제, 가장 바람직하게는 1정의 정제 투약량으로 포유동물에게 투여하며, 여기에서 정제는 약 20 ㎎ 내지 약 500 ㎎의 활성 프로테아제 농도를 함유한다. 또 다른 구체예에서, 본 발명에 따른 비-췌장 프로테아제 정제는 1회 식사 당 정제 1정 내지 6정의 정제, 바람직하게는정제 1정 내지 2정의 정제, 가장 바람직하게는 1정의 정제 투약량으로 포유동물에게 투여하며, 여기에서 정제는 약 50 ㎎ 내지 약 500 ㎎의 활성 프로테아제 농도를 함유한다. 대안으로, 비-췌장 프로테아제 정제는 1회 식사 당 정제 1정 내지 6정의 정제, 바람직하게는 1정 내지 2정의 정제, 가장 바람직하게는 1정의 정제 투약량으로 포유동물에게 투여하며, 여기에서 정제는 약 50 ㎎ 내지 약 250 ㎎의 활성 프로테아제 농도를 함유한다.
대안으로, 비-췌장 활성 프로테아제는 포유동물 1 ㎏ 당 약 1 ㎎ 내지 10 ㎎, 바람직하게는 포유동물 1 ㎏ 당 약 1 ㎎ 내지 3 ㎎ 또는 포유동물 1 ㎏ 당 약 1 ㎎ 내지 2 ㎎으로 1회 식사 당 활성 프로테아제 투약량을 제공하는 1종 이상의 정제가 포유동물에게 투여된다. 본 발명을 더 잘 이해시키기 위하여 하기 실시예가 설명된다. 이들 예는 설명만의 목적을 위한 것이며, 이것으로 본 발명의 범주를 제한하려고 하는 것은 아니다.
이하의 물질이 하기의 실시예에서 사용되었다.
물질
아스페르길루스 멜레우스(Aspergillus melleus)로부터 유도된 시판되는 원료 세아프로제(SAP) 분말(CAS#9074-07-01)은 아마노 엔자임 사, 일본(나고야, 일본)으로부터 수득되었다. SAP은 액체 또는 고체 발효 공정에 의해 제조되었다. 본 발명의 실시예에서 사용된 SAP 분말은 고체 발효에 의해 제조되었다. 탄산나트륨, 중탄산나트륨, 아세트산나트륨, 제1인산나트륨, 제2인산나트륨 및 인산 칼륨은 시그마 케미칼사(세인트 루이스, 미주리주)로부터 입수되었다. 메탄올, 트리플루오로아세트산 및 아세토니트릴은 피셔 사이엔티픽사(피츠버그, 펜실베이니아주)에서 입수되었고 글루타르알데히드는 알드리치(밀워키, 위스콘신주)에서 입수되었다. 주사용수(WFI) 또는 미국 파마코페이아(USP) 정제수는 모두 완충액 및 프로테아제 용액용으로 사용되었다. WFI 및 USP 수 표준의 비교는 http://www.purehts.com/USP.htm 에서 찾을 수 있다. 실험실 먹이 규정식(laboratory chow diet)은 할란 테클라드(Harlan Teklad)로부터 입수되었다. 스프래그-돌리 쥐(Sprague-Dawley rats)는 챨스 리버 레보러토리스(레일리, 노스캐롤라이나 주)로부터 입수하였다. 케타민 및 실라진은 헨리 샤인(Henry Schein)으로부터 입수하였다. 카세인(목록 번호. C-5890), 트립신(목록 번호. C-7309) 및 대두 트립신 저해제(SBTI, 목록 번호 T-9003)은 시그마 케미칼사(세인트 루이스, 미주리주)로부터 입수하였다. 크레온®-20(솔베이 파마시우티컬스, 하노버, 독일) 및 비오카제®-8(악스칸 스칸디팜사, 버밍험, 알라바마주)는 지역 약국에서 구입하였다. CCK-방출 펩티드, LCRF1-35(A.W. Spannagel, et al., Regulatory Peptides 73, 161-164(1998): A.W. Spannagel, et al., Proc. Natl. Acad. Sci. 93, 4415-4420(1996))은 펩스칸(PepScan), 네덜란드에서 입수하였으며, 세라티오펩티다제는 스페셜티 엔자임즈(Specialty Enzymes) 및 바이오케미칼 사, 치노, 캘리포니아주(목록 번호. B-031875, CAS 9031-94-1)로부터 입수하였다. 스트렙토마이세스 그리세우스(Streptomyces griseus)로부터의 프로나제는 바이오케미카/플루카 케미칼사, 밀워키, 위스콘신주(목록 번호 81748)로부터 구입하였다. 엔슈어(Ensure)®, 바닐라 향의 고 단백질(24%)은 지역 약국으로부터 구입하였다. 미세결정성 셀룰로오스103은 FMC 인터내셔널 씨. 아일렌드로부터 입수하였다. 코스포비돈 XL은 ISP 테크놀로지스사, 웨인, 뉴저지주에서 입수하였다. 콜(Col.) 이산화실리콘은 데구사, 파시파니, 뉴저지주로부터 입수하였다. 탈크는 루제낙 아메리카사, 인글리우드, 콜로라도주에서 입수하였다. 마그네슘 스테아레이트 NO-BOV 는 말린크로드트 베이커사(Mallinckrodt Baker Inc.), 필립스버그, 뉴저지주에서 입수하였다. 무수 엔컴프레스(Anhydrous Encompress)는 펜웨스트 파마시우티컬즈(Penwest Pharmaceuticals), 시더 래피즈, 아이오와주에서 입수하였다.
CCK-방출 펩티드의 시험관내 가수분해를 위한 효소 제작 조건
세아프로제(pH 6.0). 용량 플라스크를 사용하여, 10 ㎎의 세아프로제를 인산 나트륨 완충액(25 mM, pH 6.0)에 10 ㎖의 최종 부피로 용해하여 1 ㎎/㎖ (1400 U/㎖)의 최종 농도를 갖는 용액을 수득하였다. 다음, 인산나트륨 완충액(25 mM, pH 6.0)을 용량 플라스크내의 1 ㎎/㎖(1400 U) 용액 1 ㎖ 에 첨가하여 100 ㎖의 최종 부피 및 0.01 ㎎/㎖(14 U/㎖)의 최종 농도를 수득하였다. 인산 나트륨 완충액(25 mM, pH 6.0)은 그 후 용량 플라스크내의 0.01 ㎎/㎖(14 U/㎖) 용액 1.07 ㎖에 첨가하여 10 ㎖의 최종 부피 및 1.5 U/㎖의 최종 농도를 수득하였다. 마지막으로 인산 나트륨 완충액(25 mM, pH 6.0) 중의 CCK 방출 펩티드, LCRF1-35의 1 ㎎/㎖ 용액 225 ㎕를 25 ㎕의 1.5 U/㎖ 세아프로제(0.15 U 최종)와 혼합하고 37℃에서 여러 시간 간격으로 배양하였다.
세아프로제(pH 4.5). 용량 플라스크를 사용하여, 10 ㎎의 세아프로제를 아세트산 나트륨(25 mM, pH 4.5)에 10 ㎖의 최종 부피로 용해하여 1 ㎎/㎖ (1400 U/㎖)의 최종 농도를 갖는 용액을 수득하였다. 다음, 아세트산나트륨 완충액(25 mM, pH 4.5)을 용량 플라스크내의 1 ㎎/㎖(1400 U/㎖) 용액 1 ㎖ 에 첨가하여 100 ㎖의 최종 부피 및 0.01 ㎎/㎖(14 U/㎖)의 최종 농도를 수득하였다. 아세트산 나트륨 완충액(25 mM, pH 4.5)은 그 후 용량 플라스크내의 0.01 ㎎/㎖(14 U/㎖) 용액 2.5 ㎖에 첨가하여 10 ㎖의 최종 부피 및 3.5 U/㎖의 최종 농도를 수득하였다. 마지막으로 아세트산 나트륨 (25 mM, pH 4.5) 중의 CCK 방출 펩티드, LCRF1-35의 1 ㎎/㎖ 용액 225 ㎕를 25 ㎕의 3.5 U/㎖ 세아프로제(0.35 U 최종)와 혼합하고 37℃에서 여러 시간 간격으로 배양하였다.
세라티오펩티다제(pH 6.0). 용량 플라스크를 사용하여, 10 ㎎의 세라티오펩티다제를 인산 나트륨 완충액(25 mM, pH 6.0)에 10 ㎖의 최종 부피로 용해하여 1 ㎎/㎖ (1250 U/㎖)의 최종 농도를 갖는 용액을 수득하였다. 다음, 인산나트륨 완충액(25 mM, pH 6.0)을 용량 플라스크내의 1 ㎎/㎖(1250 U/㎖) 용액 1 ㎖ 에 첨가하 여 100 ㎖의 최종 부피 및 0.01 ㎎/㎖(12.5 U/㎖)의 최종 농도를 수득하였다. 인산 나트륨 완충액(25 mM, pH 6.0)은 그 후 용량 플라스크내의 0.01 ㎎/㎖(12.5 U/㎖) 용액 1.2 ㎖에 첨가하여 10 ㎖의 최종 부피 및 1.5 U/㎖의 최종 농도를 수득하였다. 마지막으로 인산 나트륨 완충액(25 mM, pH 6.0) 중의 CCK 방출 펩티드, LCRF1-35의 1 ㎎/㎖ 용액 225 ㎕를 25 ㎕의 1.5 U/㎖ 세라티오펩티다제(0.15 U 최종)와 혼합하고 37℃에서 여러 시간 간격으로 배양하였다.
세라티오펩티다제(pH 4.5). 용량 플라스크를 사용하여, 10 ㎎의 세라티오펩티다제를 아세트산 나트륨 완충액(25 mM, pH 4.5)에 10 ㎖의 최종 부피로 용해하여 1 ㎎/㎖ (1250 U/㎖)의 최종 농도를 갖는 용액을 수득하였다. 다음, 아세트산 나트륨 완충액(25 mM, pH 4.5)을 용량 플라스크내의 1 ㎎/㎖(1400 U/㎖) 용액 1 ㎖ 에 첨가하여 100 ㎖의 최종 부피 및 0.01 ㎎/㎖(12.5 U/㎖)의 최종 농도를 수득하였다. 아세트산 나트륨 완충액(25 mM, pH 4.5)은 그 후 용량 플라스크내의 0.01 ㎎/㎖(12.5 U/㎖) 용액 2.8 ㎖에 첨가하여 10 ㎖의 최종 부피 및 3.5 U/㎖의 최종 농도를 수득하였다. 마지막으로 아세트산 나트륨 완충액(25 mM, pH 4.5) 중의 CCK 방출 펩티드, LCRF1-35의 1 ㎎/㎖ 용액 225 ㎕를 25 ㎕의 3.5 U/㎖ 세라티오펩티다제(0.35 U 최종)와 혼합하고 37℃에서 여러 시간 간격으로 배양하였다.
프로나제(pH 6.0). 용량 플라스크를 사용하여, 10 ㎎의 프로나제를 인산 나트륨 완충액(25 mM, pH 6.0)에 10 ㎖의 최종 부피로 용해하여 1 ㎎/㎖ (1000 U/㎖)의 최종 농도를 갖는 용액을 수득하였다. 다음, 인산나트륨 완충액(25 mM, pH 6.0) 을 용량 플라스크내의 1 ㎎/㎖(1000 U/㎖) 용액 1 ㎖ 에 첨가하여 100 ㎖의 최종 부피 및 0.01 ㎎/㎖(10 U/㎖)의 최종 농도를 수득하였다. 인산 나트륨 완충액(25 mM, pH 6.0)은 그 후 용량 플라스크내의 0.01 ㎎/㎖(10 U/㎖) 용액 1.5 ㎖에 첨가하여 10 ㎖의 최종 부피 및 1.5 U/㎖의 최종 농도를 수득하였다. 마지막으로 인산 나트륨 완충액(25 mM, pH 6.0) 중의 CCK 방출 펩티드, LCRF1-35의 1 ㎎/㎖ 용액 225 ㎕를 25 ㎕의 1.5 U/㎖ 프로나제(0.15 U 최종)와 혼합하고 37℃에서 여러 시간 간격으로 배양하였다.
프로나제(pH 4.5). 용량 플라스크를 사용하여, 10 ㎎의 프로나제를 아세트산 나트륨 완충액(25 mM, pH 4.5)에 10 ㎖의 최종 부피로 용해하여 1 ㎎/㎖ (1000 U/㎖)의 최종 농도를 갖는 용액을 수득하였다. 다음, 아세트산나트륨 완충액(25 mM, pH 4.5)을 용량 플라스크내의 1 ㎎/㎖(1000 U/㎖) 용액 1 ㎖ 에 첨가하여 100 ㎖의 최종 부피 및 0.01 ㎎/㎖(10 U/㎖)의 최종 농도를 수득하였다. 아세트산 나트륨 완충액(25 mM, pH 4.5)은 그 후 용량 플라스크내의 0.01 ㎎/㎖(10 U/㎖) 용액 3.5 ㎖에 첨가하여 10 ㎖의 최종 부피 및 3.5 U/㎖의 최종 농도를 수득하였다. 마지막으로 아세트산 나트륨 완충액(25 mM, pH 4.5) 중의 CCK 방출 펩티드, LCRF1-35의 1 ㎎/㎖ 용액 225 ㎕를 25 ㎕의 3.5 U/㎖ 프로나제(0.35 U 최종)와 혼합하고 37℃에서 여러 시간 간격으로 배양하였다.
비오카제-8(pH 6.0). 용량 플라스크를 사용하여, 10 ㎎의 비오카제-8을 인산 나트륨 완충액(25 mM, pH 6.0)에 10 ㎖의 최종 부피로 용해하여 1 ㎎/㎖ (120 U/ ㎖)의 최종 농도를 갖는 용액을 수득하였다. 다음, 인산나트륨 완충액(25 mM, pH 6.0)을 용량 플라스크내의 1 ㎎/㎖(120 U/㎖) 용액 0.125 ㎖ 에 첨가하여 10 ㎖의 최종 부피 및 1.5 U/㎖의 최종 농도를 수득하였다. 마지막으로 인산 나트륨 완충액(25 mM, pH 6.0) 중의 CCK 방출 펩티드, LCRF1-35의 1 ㎎/㎖ 용액 225 ㎕를 25 ㎕의 1.5 U/㎖ 비오카제-8(0.15 U 최종)와 혼합하고 37℃에서 여러 시간 간격으로 배양하였다.
비오카제-8(pH 4.5). 용량 플라스크를 사용하여, 10 ㎎의 비오카제-8을 아세트산 나트륨 완충액(25 mM, pH 4.5)에 10 ㎖의 최종 부피로 용해하여 1 ㎎/㎖ (120 U/㎖)의 최종 농도를 갖는 용액을 수득하였다. 다음, 아세트산나트륨 완충액(25 mM, pH 4.5)을 용량 플라스크내의 1 ㎎/㎖(120 U/㎖) 용액 0.292 ㎖ 에 첨가하여 10 ㎖의 최종 부피 및 3.5 U/㎖의 최종 농도를 수득하였다. 마지막으로 아세트산 나트륨 완충액(25 mM, pH 4.5) 중의 CCK 방출 펩티드, LCRF1-35의 1 ㎎/㎖ 용액 225 ㎕를 25 ㎕의 3.5 U/㎖ 비오카제-8(0.35 U 최종)와 혼합하고 37℃에서 여러 시간 간격으로 배양하였다.
트립신(pH 6.0). 용량 플라스크를 사용하여, 10 ㎎의 트립신를 인산 나트륨 완충액(25 mM, pH 6.0)에 10 ㎖의 최종 부피로 용해하여 1 ㎎/㎖ (1130 U/㎖)의 최종 농도를 갖는 용액을 수득하였다. 다음, 인산나트륨 완충액(25 mM, pH 6.0)을 용량 플라스크내의 1 ㎎/㎖(1130 U/㎖) 용액 0.442 ㎖ 에 첨가하여 10 ㎖의 최종 부피 및 50 U/㎖의 최종 농도를 수득하였다. 마지막으로 인산 나트륨 완충액(25 mM, pH 6.0) 중의 CCK 방출 펩티드, LCRF1-35의 1 ㎎/㎖ 용액 225 ㎕를 25 ㎕의 50 U/㎖트립신(5 U 최종)과 혼합하고 37℃에서 여러 시간 간격으로 배양하였다.
트립신(pH 4.5). 용량 플라스크를 사용하여, 10 ㎎의 트립신을 아세트산 나트륨 완충액(25 mM, pH 4.5)에 10 ㎖의 최종 부피로 용해하여 1 ㎎/㎖ (1130 U/㎖)의 최종 농도를 갖는 용액을 수득하였다. 다음, 아세트산나트륨 완충액(25 mM, pH 4.5)을 용량 플라스크내의 1 ㎎/㎖(1130 U/㎖) 용액 0.442 ㎖ 에 첨가하여 10 ㎖의 최종 부피 및 50 U/㎖의 최종 농도를 수득하였다. 마지막으로 아세트산 나트륨 완충액(25 mM, pH 4.5) 중의 CCK 방출 펩티드, LCRF1-35의 1 ㎎/㎖ 용액 225 ㎕를 25 ㎕의 50 U/㎖트립신(5 U 최종)과 혼합하고 37℃에서 여러 시간 간격으로 배양하였다.
분석 기술 및 검정
UV-VIS 흡수 및 광학 현미경. UV-VIS 스펙트럼사진기는 벡크만(Beckman) DU 7400 스펙트로포토미터, 벡크만 쿨터사(Beckman Coulter Inc., 풀러톤, 캘리포니아주)에서 입수하였다. 광학 현미경 사진은 올림포스 BX-51 현미경을 사용하여 밝은 장 영상(bright field imaging)으로 수득되며 40x 내지 400x 의 배율하에, 미디어 사이버네틱스(Media Cybernetics) L.P., 실버 스프링스, 매릴랜드주의 이미지-프로 소프트웨어를 사용한 소니 DXC-970MD 3CCD 컬러 디지털 비디오 카메라를 사용하여 포획되었다.
역상 HPLC. CCK-방출 펩티드의 소화된/가수분해된 펩티드는 크로마토그래피 피이크의 자동 통합 및 분석을 위한 컴퓨터 인터페이스 및 소프트웨어(애질런트 켐스테이션(Agilent Cehmstation) 소프트웨어)를 갖춘 애질런트 1100 HPLC 시스템으로 분리하였다. 스펠코(Supelco)로부터의 디스커버리 C18 역상 컬럼(100 X 2.1 mm, 3㎛)은 소화된 펩티드를 분리하기 위해 사용되었다. 펩티드의 선형 기울기 용리(214 nm 및 280 nm에서 모니터)는 물 중의 0.1% 트리플루오로아세트산(TFA)(용매 A) 및 아세토니트릴 중의 0.08% TFA(용매 B)로 이루어진 용매 시스템을 사용하여 30℃에서 0.25 ㎖/분의 유속으로 성취되었다. 구배 용리는 하기와 같다: 0-3분 0% 완충액 B), 3-38분(0-70% 완충액 B), 38-40분 (70% 완충액 B) 및 40-40.5분(70-0% 완충액 B).
CCK 정제. Sep-Pak Vac 3cc(500 ㎎) 카트리지를 추출 매니폴드에 삽입하고 100% 메탄올 15 ㎖로 조절하였다 컬럼은 H2O 중의 0.1% 트리플루오로아세트산(TFA) 15 ㎖로 평형을 유지하고 표식된 원뿔형 원심분리관은 추출 매니폴드로 삽입시켜 카트리지로부터 적재/세척 용리액을 수집하였다. 혈장 샘플은 CCK의 분해를 방지하기 위해, 쥐로부터 수집한 후 즉시 적재하였다. 오염물은 H2O 내의 TFA로 컬럼으로부터 세척되었다. 추출 매니폴드내의 표식된 원뿔형 원심분리관은 각각의 Sep-Pak 카트리지로부터 CCK 함유 용리액을 수집하였고 CCK는 아세토니트릴 중의 TFA로 컬럼으로부터 서서히 용리(유속 <1 ㎖/분)되었다. 일단 용리가 완결되면, 관을 막고 드라이 아이스상에서 동결시켰다. 내용물은 24-48 시간 동안 동결 건조기를 사용하여 동결건조하고 사용할 때 까지 -80℃에서 저장하였다.
실시예 1
세아프로제의 결정화. 원 세아프로제 분말(100 g, 대략 70% 순도)을 1000 ㎖의 10 mM 탄산 나트륨, pH 9.50에 용해시켰다. 수득한 세아프로제 용액은 그 후 0.22㎛ 필터(Nalgene)를 통해 통과시켜 후드내에서 살균 여과하였다. 용액은 4℃에서 자기 교반기로 밤새 교반하였다. 다음 날, 수득한 결정은 20분간 2,000 rpm(GH 3.8 진동 버킷 회전기가 있는 베크만 원심분리기 모델 GS-6R)에서 원심분리하여 용액으로부터 분리하고 상청액은 후속하여 제거하였다. 결정은 다시 최소 부피(80 ㎖)의 10 mM 탄산나트륨, pH 9.50으로 세척하고 20분간 3,000 rpm에서 다시 원심분리하였다. 세척 상청액은 그 후 제거하고 결정은 총 부피 1.2 L(10 mM 탄산나트륨, pH 9.5), Abs280=34 ㎎/㎖에서 재현탁시켜 유백색의 용액을 형성하였다. 다시 용해된 결정은 추가의 재 결정화를 위해 4℃에서 2-3일 동안 방치하였다. 정제된 세아프로제 결정의 최종 수율은 44%이었다(도 1 참조).
실시예 2
세아프로제의 결정의 가교. 가교는 글루타르알데히드(1%의 최종농도)를 사용하여 수행되었다. 상기에서 제조된 바의 20 ㎖의 세아프로제 결정(10 mM 탄산나트륨 중 20 ㎎/㎖, pH 9.5)을 텀블링하면서 4℃에서 24시간 동안 25% 글루타르알데히드 용액 800 ㎕로 처리하였다. 가교된 결정 용액은 살균 조건하에 20-25 ㎎/㎖최종 농도로 농축하였다. 24시간 후, 결정은 원심분리하고 10 mM 트리스 완충액, pH 7.0으로 세척(5X) 하였다.
실시예 3
쥐에서의 다양한 외인성 효소 보충이 있는 규정식에 대한 혈장 CCK 반응. 통상적으로 그룹 숙박시키고 자유롭게 물 및 실험실 먹이(laboratory chow)에 접근하도록 한 각기 대략 350 g 체중의 쥐를 임의로 8 처리 그룹으로 나누고 5 코호트(cohort)로 더 나누었으며 각 코호트는 3 마리의 쥐를 갖는다. 모든 쥐는 밤새(20-22 시간) 금식시키고 다음날 아침(오전 7-9시 사이)에 입 위장관(orogastric tube)에 부착된 공급 바늘을 통해 위로 5 ㎖의 액체를 수술 후(PO) 경구 투여하였다. 5 ㎖ 분취량을 그룹 1-8에 대하여 하기에 나타낸 성분으로부터 제조하였다. 예를 들어, 그룹 1, 부형제에 대한 처리는 5 ㎖의 물을 포함하며, 그룹 2, 카세인 대조군은 5 ㎖의 최종 부피가 수득되도록 물 중에 900 ㎎ 카세인을 포함하며, 그룹 3, 카세인 + 세아프로제 결정은 물 중에 900 ㎎ 카세인 + 144 ㎎(201,600 USP 유니트)의 세아프로제 결정을 포함하며, 그룹 4, 카세인 + 트립신은 물 중에 900 ㎎ 카세인 + 1000 ㎎(1,250,000 USP 유니트)의 트립신을 포함하며, 그룹 5, 카세인 + 가교 세아프로제 결정은 물 중에 900 ㎎ 카세인 + 294 ㎎(201,600 USP 유니트)의 가교 세아프로제 결정을 포함하며, 그룹 6, 카세인 + 대두 트립신 저해제는 물 중에 900 ㎎ 카세인 + 2 ㎎의 대두 트립신 저해제를 포함하며, 그룹 7, 카세인 + 크레온®-20은 물 중에 900 ㎎ 카세인 + 1000 ㎎(201,038 USP 유니트)의 크레온®-20을 포함하며, 그룹 8 카세인 + 비오카제®-8은 물 중에 900 ㎎ 카세인 + 1000 ㎎(104,500 USP 유니트)의 비오카제®-8을 포함한다. 쥐는 그 후 마취제로써 1 ㎖의 케타민:자 일레진(10 ㎖ 케타민(100 ㎎)및 1 ㎖ 자일레진(100 ㎎)의 혼합물)을 복강내(ip) 과잉투여하고, 흉강을 개방하며, 혈액은 우심실의 심장 천자를 통해 뽑아냈다. 혈장 샘플은 각기 10 cc 주사기(16 게이지)를 사용하여 각각의 쥐로부터 수득되었으며 하기 5 시점(표 3 참조):예비 처리(금식), 7.5, 15, 30, 및 90분 시험 후 제제 투여에서 관류하는 동안 헤파린이 가해진 혈액관으로 수집되었다. 혈장 샘플은 원심분리(10분, 4℃에서 3000 rpm)로 분리하고 저온관으로 기울여 따랐다. CCK는 그 후 상술한 바와 같이 Sep-Pak 카트리지를 사용한 혈장으로부터 정제되었다. CCK 농도는 CCK-8 설페이트(가스트린-17에 대하여 < 0.5% 교차반응) 및 트레이서(유로-다이아그노스티카(Euro-Diagnostica)의 CCK RIA 키트)로써 I125 에 대하여 높아진 고 특이적 항혈청을 사용하여 길항적 방사 면역 측정법(radioimmunoassay(RIA))으로 측정하였다. 다양한 규정식 액체의 입 위장 공급에 이어 규정 시간을 넘은 혈장내 CCK 농도의 변화를 표 3 및 도 2에 나타낸다. 시험 제제내의 세아프로제로 처리된 두 그룹에서 가장 낮은 수준(즉, 가장 큰 억제율)의 CCK가 일어났다.
[표 3]
혈장내 CCK 농도
시간 (분) 대조군 부형제 (물) 카세인 카세인 + 세아프로제 결정 카세인 + 트립신 카세인 + 세아프로제 가교 결정 카세인 + SETI 카세인 + 크레온® 카세인 + 비오카제®
혈장내 CCK의 농도(pM)
0 0.18 0.17 0.26 0.20* 0.47 0.62 0.55 0.55* 0.64 0.73 0.42 0.60* 0.72 0.69 0.57 0.66* 0.66 0.58 0.71 0.65* 0.89 0.42 0.45 0.59* 0.72 0.88 0.53 0.71* 0.53 0.56 0.44 0.51*
7.5 0.77 0.84 0.87 0.83* 8.84 7.61 7.13 7.86* 0 0 0 0* 1.06 1.22 0.89 1.06* 0 0 0 0* 9.55 8.76 10.1 9.47* 5.20 5.71 4.55 5.15* 1.88 1.67 1.55 1.70*
15 0.12 0.23 0.32 0.22* 6.6 5.44 6.32 6.12* 0 0 0 0* 0.47 0.39 0.33 0.40* 0 0 0 0* 6.56 9.43 7.97 7.99* 4.33 3.87 4.62 4.27* 0.89 0.76 1.02 0.89*
30 0.11 0.21 0.00 0.11* 3.88 3.23 4.17 3.76* 0 0 0 0* 0.35 0.44 0.37 0.39* 0 0 0 0* 6.10 7.88 6.74 6.96* 3.94 3.13 3.88 3.65* 0.77 0.68 0.71 0.72*
90 0.00 0.00 0.19 0.06* 1.22 1.75 0.98 1.32* 0 0 0 0* 0.31 0.34 0.32 0.32* 0 0 0 0* 2.16 1.57 1.33 1.69* 2.31 2.11 1.78 2.07* 0.68 0.55 0.63 0.62*
* 코호트 당 각기 세마리의 쥐에 대해 보고된 CCK 농도의 평균값. 이 연구에서 쥐는 임의로 8 처리 그룹으로 나누었으며 각각의 코호트에 세마리 쥐가 있는 5 코호트로 더 나누었다.
실시예 4
쥐에서의 다양한 외인성 효소 보충이 있는 규정식에 대한 혈장 CCK 반응. 통상적으로 그룹 숙박시키고 자유롭게 물 및 실험실 먹이에 접근하도록 한 각기 대략 350 g 체중의 쥐를 임의로 6 처리 그룹으로 나누고 6 코호트(cohort)로 더 나누었으며 각 코호트는 3 마리의 쥐를 갖는다. 모든 쥐는 밤새(20-22 시간) 금식시키고 다음날 아침(오전 7-9시 사이)에 입 위장관에 부착된 공급 바늘을 통해 위로 5 ㎖를 경구 투여(PO)하였다. 5 ㎖ 분취량을 그룹 1-6에 대하여 하기에 나타낸 성분으로부터 제조하였다. 예를 들어, 그룹 1, 부형제에 대한 처리는 5 ㎖의 물을 포함하며, 그룹 2, 엔슈어®대조군은 5 ㎖의 엔슈어®를 포함하고, 그룹 3은 5 ㎖의 최종 부피가 수득되도록 엔슈어®내에 세아프로제 결정 143 ㎎ 또는 200,000 USP 유니트를 포함하며, 그룹 4는 5 ㎖의 최종 부피가 수득되도록 엔슈어®내에 세아프로제 결정 57 ㎎ 또는 80,000 USP 유니트를 포함하며, 그룹 5는 5 ㎖의 최종 부피가 수득되도록 엔슈어®내에 세아프로제 결정 14 ㎎ 또는 20,000 USP 유니트를 포함하며, 및 그룹 6은 5 ㎖의 최종 부피가 수득되도록 엔슈어®내에 세아프로제 결정 3.6 ㎎ 또는 5,000 USP 유니트를 포함한다. 쥐는 그 후 1 ㎖의 케타민:자일레진(실시예 3에서와 같이)으로 과잉투여(ip)하고, 몸통 혈액(trunk blood)은 하기 6 시점(표 4 참조):예비 처리(금식), 7.5, 15, 30, 60, 및 90분 시험 후 제제 투여에서 관류하는 동안 헤파린 코팅으로 수집되었다. 혈장 샘플은 10 cc 주사기(16 게이지)를 사용하여 각각의 쥐로부터 수집하였으며 헤파린이 가해진 혈액관에서 수집하였다. 혈장 샘플은 원심분리(10분, 4℃에서 3000 rpm)으로 분리하고 저온관으로 기울여 따랐다. 혈장 샘플은 그 후 상술한 바와 같이 Sep-Pak 카트리지로 진행되었다. CCK 농도는 CCK-8 설페이트(가스트린-17에 대하여 <0.5% 교차반응) 및 트레이서(유로- 다이아그노스티카의 CCK RIA 키트)로써 I125 에 대하여 높아진 고 특이적 항혈청을 사용하여 경쟁적 RIA로 측정하였다. 다양한 규정식 액체의 입 위장 공급에 이어 규정 시간을 넘은 혈장내 CCK 농도의 변화를 표 4 및 도 3에 나타낸다. 시험 제제에서 더 높은 투약량의 세아프로제 결정으로 처리된 그룹들에서 더 낮은 수준(즉, 더 큰 억제율)의 CCK가 명백했다.
[표 4]
혈장내 CCK 농도
시간 (분) 대조군 부형제(물) 엔슈어® 엔슈어®+ 세아프로제 200,000 U 엔슈어®+세아프로제 80,000 U 엔슈어®+ 세아프로제 20,000 U 엔슈어®+ 세아프로제 5,000 U
혈장내 CCK의 농도(pM)
0 0.342 0.366 0.439 0.382* 0.000 0.030 0.270 0.098* 0.362 0.151 0.100 0.204* 0.362 0.151 0.100 0.204* 0.362 0.151 0.100 0.204* 0.362 0.151 0.100 0.204*
7.5 0.274 0.418 0.288 0.327* 16.920 20.510 20.200 19.211* 0.149 0.141 0.000 0.096* 0.322 0.341 0.128 0.264* 0.937 0.837 0.913 0.896* 7.014 6.630 7.176 6.940*
15 0.238 0.398 0.274 0.303* 6.900 9.420 11.430 9.247* 0.083 0.023 0.000 0.035* 0.129 0.157 0.146 0.144* 0.466 0.429 0.556 0.484* 4.042 3.104 2.149 3.098*
30 0.240 0.425 0.335 0.333* 2.532 4.704 3.463 3.567* 0.069 0.070 0.064 0.068* 0.172 0.161 0.249 0.194* 0.378 0.323 0.353 0.351* 0.612 0.604 0.639 0.618*
60 0.201 0.219 0.290 0.237* 1.578 1.996 2.624 2.066* 0.013 0.000 0.000 0.004* 0.018 0.032 0.026 0.025* 0.280 0.145 0.131 0.185* 0.344 0.208 0.186 0.246*
90 0.208 0.146 0.250 0.201* 0.795 0.734 0.613 0.714* 0.000 0.000 0.000 0.000* 0.000 0.000 0.000 0.000* 0.026 0.000 0.032 0.019* 0.056 0.289 0.043 0.129*
* 코호트 당 각기 세마리의 쥐에 대해 보고된 CCK농도의 평균값. 이 연구에서 쥐는 임의로 6 처리 그룹으로 나누었으며 각각의 코호트에 세마리 쥐가 있는 6 코호트로 더 나누었다.
실시예 5
쥐에서의 다양한 외인성 효소 보충이 있는 규정식에 대한 혈장 CCK 반응. 통상적으로 그룹 숙박시키고 자유롭게 물 및 실험실 먹이에 접근하도록 한 각기 대략 350 g 체중의 쥐를 임의로 6 처리 그룹으로 나누고 6 코호트(cohorts)로 더 나누었으며 각 코호트는 3 마리의 쥐를 갖는다. 모든 쥐는 밤새(20-22 시간) 금식시키고 다음날 아침(오전 7-9시 사이)에 입 위장관에 부착된 공급 바늘을 통해 위로 5 ㎖의 액체를 경구 투여 (PO) 하였다. 5 ㎖ 분취량을 그룹 1-6에 대하여 하기에 나타낸 성분으로부터 제조하였다. 예를 들어, 그룹 1, 부형제는 5 ㎖의 물을 포함하며, 그룹 2, 엔슈어®대조군은 5 ㎖의 엔슈어®를 포함하고, 그룹 3은 5 ㎖의 최종 부피가 수득되도록 엔슈어®내에 세아프로제 결정 3.6 ㎎ 또는 5,000 USP 유니트를 포함하며, 그룹 4는 5 ㎖의 최종 부피가 수득되도록 엔슈어®내에 가교 세아프로제 결정(Seaprose-CLEC) 21 ㎎ 또는 5,000 USP 유니트를 포함하며, 그룹 5는 5 ㎖의 최종 부피가 수득되도록 엔슈어®내에 트립신 2 ㎎ 또는 5,000 USP 유니트를 포함하며, 및 그룹 6은 5 ㎖의 최종 부피가 수득되도록 엔슈어내에 상업적으로 입수가능한 비오카제®-8 72.3 ㎎ 또는 5,000 USP 유니트를 포함한다. 쥐는 그 후 1 ㎖의 케 타민:자일레진(실시예 3에서와 같이)으로 과잉투여(ip)하고, 몸통(심장) 혈액은 하기 6 시점(표 5 참조):예비 처리(금식), 7.5, 15, 30, 60, 및 90분 시험 후 제제 투여에서 헤파린 코팅 관으로 수집되었다. 혈장 샘플은 그 후 10 cc 주사기(16 게이지)를 사용하여 각각의 쥐로부터 수집하였으며 헤파린이 가해진 혈액관에서 수집하였다. 혈장 샘플은 원심분리(10분, 4℃에서 3000 rpm)로 분리하고 저온관으로 기울여 따랐다. 혈장 샘플은 그 후 상술한 바와 같이 Sep-Pak 카트리지로 진행되었다. CCK 농도는 CCK-8 설페이트(가스트린-17에 대하여 <0.5% 교차반응) 및 트레이서(유로-다이아그노스티카의 CCK RIA 키트)로써 I125 에 대하여 높아진 고 특이적 항혈청을 사용하여 경쟁적 RIA로 측정하였다. 다양한 규정식 액체의 입 위장 공급에 이어 규정 시간을 넘은 혈장내 CCK 농도(pmol/L)의 변화를 표 5 및 도 4에 나타낸다. 다른 제제와 비교할 때 시험 제제에서 세아프로제 결정으로 처리된 그룹들에서 더 낮은 수준(즉, 더 큰 억제율)의 CCK가 명백했다. 예를 들어, Cmax 의 백분율 감소는 하기와 같이 산출되었다: 0%(엔슈어®), 93.92%(엔슈어®+세아프로제 결정), 85.56%(엔슈어®+세아프로제-CLEC), 80.25%(엔슈어®+트립신), 및 35.08%(엔슈어®+비오카제®-8).
[표 5]
혈장내 CCK 농도
시간 (분) 대조군 부형제(물) 엔슈어® 엔슈어® + 세아프로제 결정 5,000 U 엔슈어® + 세아프로제-CLEC 5,000 U 엔슈어® + 트립신 5,000 U 엔슈어® + 비오카제® 5,000 U
혈장내 CCK의 농도(pM)
0 1.52 1.48 1.15 1.39* 0.40 0.46 0.43 0.43* 0.43 0.27 0.30 0.34* 0.54 0.26 0.61 0.47* 0.50 0.58 0.49 0.53* 0.94 0.69 0.41 0.68*
7.5 1.69 5.76 2.66 3.37* 30.35 31.96 23.91 28.74* 5.37 5.22 4.15 4.91* 5.77 6.11 9.22 7.03* 6.70 7.38 11.06 8.38* 18.68 13.89 26.95 19.84*
15 1.71 2.57 2.19 2.16* 13.21 9.66 8.84 10.57* 2.55 2.06 2.88 2.50* 4.20 5.36 2.73 4.09* 4.01 6.58 6.70 5.76* 9.80 5.17 3.38 6.11*
30 1.29 1.37 1.44 1.36* 3.57 4.56 3.07 3.73* 2.00 1.43 1.16 1.53* 1.88 3.92 1.34 2.38* 3.19 5.17 2.26 3.54* 2.43 1.81 2.37 2.21*
60 1.15 1.57 0.69 1.13* 2.00 3.62 2.32 2.65* 0.60 0.92 0.33 0.62* 1.13 0.67 0.82 0.87* 1.75 1.03 1.99 1.59* 1.38 0.93 2.22 1.51*
90 0.33 0.64 1.50 0.49* 2.10 0.66 1.90 1.55* 0.32 0.68 0.58 0.53* 0.51 0.92 0.78 0.74* 1.10 1.47 1.07 1.21* 1.13 1.06 0.37 0.85*
* 코호트 당 각기 세마리의 쥐에 대해 보고된 CCK농도의 평균값. 이 연구에서 쥐는 임의로 6 처리 그룹으로 나누었으며 각각의 코호트에 세마리 쥐가 있는 6 코호트로 더 나누었다.
실시예 6
쥐에서의 외인성 효소 보충의 반복 투여가 있는 규정식에 대한 혈장 CCK 반응. 통상적으로 그룹 숙박시키고 자유롭게 물 및 실험실 먹이에 접근하도록 한 각 기 대략 350 g 체중의 쥐를 임의로 4 처리 그룹으로 나누고 6 코호트로 더 나누었으며 각 코호트는 5 마리의 쥐를 갖는다. 모든 쥐에게 표준 먹이 규정식을 연속 3 일간 자유롭게 공급하였다. 이에 더하여, 그룹 4 쥐는 이러한 연속 3일에 걸쳐 위관 영양에 의해 5 ㎖의 엔슈어® 함유 20,000 USP 유니트 세아프로제를 공급하였다 (처리된 쥐). 모든 쥐는 밤새(20-22 시간) 금식시키고 4일째 오전 7-9시 사이에 입 위장관을 통해 위로 점적주사함으로서 5 ㎖의 액체 제제를 공급하였다. 5 ㎖ 분취량을 그룹 1-4에 대하여 하기에 나타낸 성분으로부터 제조하였다. 예를 들어, 그룹 1, 부형제는 5 ㎖의 물을 포함하며, 그룹 2, 엔슈어®대조군은 5 ㎖의 엔슈어®를 포함하고, 그룹 3은 5 ㎖의 최종 부피가 수득되도록 엔슈어®내에 세아프로제 결정 14 ㎎ 또는 20,000 USP 유니트를 포함하며, 그룹 4는 5 ㎖의 최종 부피가 수득되도록 엔슈어®내에 세아프로제 결정 14 ㎎ 또는 20,000 USP 유니트를 포함한다(표 6 참조). 쥐는 그 후 1 ㎖의 케타민:자일레진(실시예 3에서와 같이)으로 과잉투여(ip)하고, 몸통(심장) 혈액은 하기 6 시점(표 6 참조):예비 처리[금식], 7.5, 15, 30, 60, 및 90분 시험 후 제제 투여에서 헤파린 코팅 관으로 수집되었다. 혈장 샘플은 그 후 10 cc 주사기(16 게이지)를 사용하여 각각의 쥐로부터 수집하였으며 헤파린이 가해진 혈액관에서 수집하였다. 혈장 샘플은 원심분리(10분, 4℃에서 3000 rpm)로 분리하고 저온관으로 기울여 따랐다. 혈장 샘플은 그 후 상술한 바와 같이 Sep-Pak 카트리지로 진행되었다. CCK 농도는 CCK-8 설페이트(가스트린-17에 대하여 <0.5% 교차반응) 및 트레이서(유로-다이아그노스티카의 CCK RIA 키트)로써 I125 에 대하여 높아진 고 특이적 항혈청을 사용하여 경쟁적 RIA로 측정하였다. 다양한 규정식 액체의 입 위장 공급에 이어 규정 시간을 넘은 혈장내 CCK 농도의 변화를 표 6 및 도 5에 나타낸다. 그룹 3 및 4 모두는 CCK 농도를 상당히 억제하는 것으로 나타났으며, 따라서, 세아프로제로의 쥐의 앞선 노출은 CCK의 억제 수준을 변화시키지 않는 다는 것을 나타낸다. 예를 들어, Cmax의 백분율 감소는 하기와 같이 산출되었다: 0%(엔슈어®), 95.83%(엔슈어®+세아프로제 결정, 즉시), 및 97.69%(엔슈어®+세아프로제 결정, 반복).
[표 6]
혈장내 CCK 농도
시간 (분) 대조군 부형제(물) 엔슈어 엔슈어 + 세아프로제 20,000 U 엔슈어 + 세아프로제 20,000 U (처리된 쥐)≠
혈장내 CCK의 농도(pM)
0 0.00 0.82 0.34 0.00 0.15 0.26* 0.05 0.00 0.37 0.00 0.42 0.17* 0.00 0.04 0.00 0.33 0.50 0.17* 0.22 0.00 0.00 0.00 0.00 0.04*
7.5 0.52 0.86 0.43 0.00 0.00 0.36* 26.78 26.27 26.84 29.34 34.87 28.80* 1.25 2.47 0.94 1.56 1.53 1.55* 1.08 0.92 1.16 0.83 1.11 1.02*
15 0.08 0.50 0.07 0.50 0.66 0.36* 12.24 12.70 15.39 7.97 5.19 10.70* 0.71 0.05 0.03 0.00 0.07 0.17* 0.22 0.32 0.29 0.47 0.39 0.34*
30 0.08 0.00 0.28 0.00 0.27 0.13* 3.57 1.30 4.33 2.12 1.51 2.57* 0.00 0.22 0.27 0.00 0.03 0.10* 0.05 0.07 0.00 0.52 0.06 0.14*
60 0.11 0.06 0.46 0.00 0.17 0.16* 0.33 0.04 0.30 0.21 0.28 0.23* 0.04 0.09 0.24 0.12 0.11 0.12* 0.00 0.06 0.30 0.16 0.14 0.13*
90 0.04 0.18 0.11 0.00 0.39 0.14* 0.14 0.00 0.20 0.00 0.10 0.09* 0.11 0.00 0.12 0.13 0.09 0.09* 0.06 0.16 0.29 0.18 0.00 0.14*
* 코호트 당 각기 세마리의 쥐에 대해 보고된 CCK농도의 평균값. 이 연구에서 쥐는 임의로 4 처리 그룹으로 나누었으며 각각의 코호트에 세마리 쥐가 있는 6 코호트로 더 나누었다.
≠ 정상 규정식에 더하여 그룹 4의 쥐는 최종 처리 전에 3 일 동안 엔슈어 및 세아프로제(20K)를 받아들였다.
실시예 7
pH 6.0에서 다양한 프로테아제를 사용한 CCK-방출 펩티드의 시험관내 가수분해. CCK-방출 펩티드(1 ㎎/㎖)를 pH 6.0의 25 mM 인산나트륨 완충액에서 현탁시키고 수욕내 37℃에서 0.15 유니트(USP 유니트)의 세아프로제(SAP)로 배양하였다(효소 제작에 대한 상기 조건 참조). 다른 시간 간격(0, 1, 2 및 4 시간)에서, 10 ㎕의 샘플을 애질런트 1100 역상 HPLC 시스템으로 주입하고 소화된 펩티드는 구배 용리를 사용한 C18 역상 컬럼상에서 분리하였다. 소화되지 않은 CCK-방출 펩티드는 22.8분에서 용리되었다. 프로테아제 소화 후 잔존하는 소화되지 않은 CCK-방출 펩티드의 양은 22.8분에서 피이크 아래의 영역으로부터 계산되었으며 결과는 표 7에 나타낸다. 유사한 CCK 가수분해 검정이 프로테아제 유사 세라티오펩티다제, 프로나제, 트립신 또는 비오카제®-8을 사용하여 수행되었으며 결과는 표 7에 나타낸다.
[표 7]
pH 6.0에서 CCK-방출 펩티드의 가수분해
프로테아제 프로테아제로 가수분해 후 잔존하는 CCK-방출 펩티드의 백분율
시간(hr)
유니트 중량(㎍) 0 1 2 4
세아프로제 0.15 0.100 100 71 46 17
세라티오펩티다제 0.15 0.120 100 74 51 23
프로나제 0.15 0.150 100 53 33 13
트립신 5.00 4.40 100 85 73 58
비오카제® 0.15 1.25 100 81 65 42
pH 6.0에서, 진균/박테리아 프로테아제는 비오카제® 또는 트립신보다 더 활성이며, 이들 양자는 췌장 기원이며 트립신 또는 비오카제®보다 더 빨리 CCK-방출 펩티드를 가수분해하였다. 진균/박테리아 효소는 비오카제® 또는 트립신 보다 더 높은 특이적 활성을 가지기 때문에, 비오카제® 또는 트립신 보다 CCK-방출 펩티드를 가수분해하기 위한 중량 기준 당 더 소량의 이러한 효소가 필요시된다.
실시예 8
pH 4.5에서 다양한 프로테아제를 사용한 CCK-방출 펩티드의 시험관내 가수분해. CCK-방출 펩티드(1 ㎎/㎖)를 pH 4.5의 25 mM 아세트산나트륨 완충액에서 현탁시키고 수욕내 37℃에서 0.35 유니트(USP 유니트)의 세아프로제(SAP)로 배양하였다(효소 제작에 대한 상기 조건 참조). 다른 시간 간격(0, 1, 2 및 4 시간)에서, 10 ㎕의 샘플을 애질런트 1100 역상 HPLC 시스템으로 주입하고 소화된 펩티드는 구배 용리를 사용한 C18 역상 컬럼상에서 분리하였다. 소화되지 않은 CCK-방출 펩티드는 20.6분에서 용리되었다. 프로테아제 소화 후 잔존하는 소화되지 않은 CCK-방출 펩티드의 양은 20.6분에서 피이크 아래의 영역으로부터 계산되었으며 결과는 표 8에 나타낸다. 유사한 CCK 가수분해 실험이 프로테아제 유사 세라티오펩티다제, 프로나제, 트립신 또는 비오카제®-8을 사용하여 수행되었으며 결과는 표 8에 나타낸다. pH 4.5에서, 진균 프로테아제는 비오카제® 또는 트립신보다 더 활성이며, 이것 은 췌장 기원이며 트립신 또는 비오카제®보다 더 빨리 CCK-방출 펩티드를 가수분해하였다. 진균 효소는 비오카제® 또는 트립신보다 더 높은 특이적 활성을 가지기 때문에 CCK-방출 펩티드를 가수분해하기 위한 중량 기준 당 더 소량이 필요시된다.
[표 8]
pH 4.5에서 CCK-방출 펩티드의 가수분해
프로테아제 프로테아제로 가수분해 후 잔존하는 CCK 펩티드의 백분율
시간(hr)
유니트 중량(㎍) 0 1 2 4
세아프로제 0.35 0.223 100 81 71 60
세라티오펩티다제 0.35 0.228 100 88 77 66
프로나제 0.35 0.350 100 93 89 84
트립신 5.00 4.40 100 90 81 63
비오카제® 0.35 2.92 100 94 88 82
실시예 9
압축 상태에서의 프로테아제 효소 활성의 측정 및 통증 치료용 압축 프로테아제 정제의 사용 가능성. 인간의 췌장 통증 치료시, 1회 식사 당 1회 투약량 당 프로테아제의 양은 각 개인의 통증의 심각도에 따라 변할 것이다. 지금까지, 췌장 통증을 위한 현행의 치료는 하루에 4회, 1회 식사 당 4 내지 7 캡슐제를 투여하는 것을 포함하며; 캡슐제는 전형적으로 리파제, 프로테아제 및 아밀라제, 예를 들어 비오카제®-16 혼합물을 함유하는 돼지 기재 췌장 효소 추출물을 포함한다. 비오카제® 16 효소 캡슐제 섭생에서, 예를 들어, 약 2 내지 3.5 g의 총 췌장 효소가 각각의 식사 동안 투여되어야 한다.
외인성 췌장 프로테아제는 십이지장에서의 원하는 활성을 갖기 위해 장용성 코팅이 없이 투여되어야 한다(V. Singh et al., Gastroenterology Reports 5, 110-116, (2003)). 그러나 장용피가 부재하는 외인성 췌장 프로테아제는 프로테아제가 원하는 활성을 가지면서 12 지장 내에 도달하는 것이 확실하도록 하기 위하여 전형적으로 프로톤 펌프 저해제 또는 H2 수용체 길항제와 같은 산-억제제(acid-suppressing agent)와 함께 투여된다(Ibid, 113). 이러한 목적을 위해 사용된 프로톤 펌프 저해제는 예를 들어 오메프라졸(Losec), 에소메프라졸(Nexium), 란소프라졸(Zoton), 판토프라졸(Protium), 라베프라졸 소듐(Pariet)을 포함하며 H2 수용체 길항제는 예를 들어 시메티딘(Tagamet, Dyspamet), 파모티딘(Pepcid), 니자티딘(Axid), 라니티딘(Zantac), 라니티딘 비스무트 시트레이트(Pylorid)를 포함한다.
본 발명의 방법의 이점 중의 하나는 비-췌장 프로테아제가 장용피 또는 산-억제제의 첨가에 대한 필요 없이 포유동물에게 고체 형태로써 투여될 수 있다는 것이다. 그 이유는 진균 프로테아제와 같은 미생물 유도 프로테아제가 췌장 효소보다 위산에 대하여 더 안정하기 때문에, 산-억제제에 대한 필요가 최소거나 존재하지 않는다.
소화장애의 조절을 위해 사용된 통상의 프로테아제는 전형적으로 캡슐 형태로 투여되는데, 그 이유는 일반적으로 단백질이 정제 압축 동안 안정하지 않은 것으로 여겨지기 때문이다. 본 발명은 장용피 없이 및 산-억제제 없이 활성이 남아있는 압축 정제 형태의 비-췌장 프로테아제를 제공한다.
본 발명에 따른 방법의 치료를 위한 프로테아제의 압축 정제의 가능성 및 활 성을 시험하기 위하여, 하기 시험을 수행하였다. 표 9에 나타낸 세 개의 제제는 냉장 저장으로부터 세아프로제(아스페르길루스 멜레우스, 결정성 SAP)를 제거하고 2시간 미만 동안 실온으로 가온하도록 하여 제조하였다. 플라세보 블렌드는 주어진 제제에 대한 모든 부형제를 폴리에틸렌 백에서 합하고 건조 블렌딩하여 제조하였다. 예를 들어, 200 ㎎의 정제는 140 ㎎의 플라세보 블렌드 및 60 ㎎의 세아프로제(81,600 USP 유니트)를 측정하고 혼합하며, 이러한 블렌드를 단일 펀치 장치의 다이 캐비티로 옮기고 블렌드에 압축을 가하여 정제를 형성함으로서 제조하였다. 부형제가 없는 세아프로제(순수 형태)는 세아프로제 100 ㎎의 무게를 재고, 이것을 단일 펀치 장치의 다이 캐비티로 옮기고 정제 형태로 압축하여 제조하였다. 60 ㎎ 양의 세아프로제는 사용된 압축 도구(단일 펀치 정제 압축기, 모델 MTCM-I, 글로브파마사(Globepharma, Inc.))에 의해 압축될 양으로는 너무 작다는 것을 알아내었다.
[표 9]
세아프로제 정제의 제조
성분 정제 A wt/유니트 또는 ㎎/정제 정제 B wt/유니트 또는 ㎎/정제 정제 C wt/유니트 또는 ㎎/정제
세아프로제(SAP) 60.00 60.00 100.00
미세결정성 셀룰로스103 114.00 - -
무수 엠컴프레스(Emcompress) 114.00 114.00 -
크로스포비돈 XL 20.00 20.00 -
콜. 이산화규소 3.00 3.00 -
탈크 2.00 2.00 -
마그네슘 스테아레이트 NO-BOV 1.00 1.00 -
전체 200.00 200.00 100.00
압축력(PSI) 1000 1000 1000
정제 경도(KP) 17.3 7.1 8.3
[표 10]
압축 정제의 활성의 요약
정제 A 정제 B 정제 C
활성%)*
분말(압축 전) 103.6±2.0 110.5±3.9 110.2±4.6
정제(압축 후) 83.3±1.5 90.3±2.8 85.8±1.4
* 프로테아제 활성은 여기에서 언급된 USP 프로테아제 검정을 사용하여 측정하였다. 초기 프로테아제 활성은 1439 USP 유니트/㎎ 이었다. 정제 A, B 및 C 의 조성은 표 9에 기술되었다.
상술한 본 발명은 명확한 이해를 위해 상세한 설명 및 실시예를 통해 어느 정도 상세하게 기술되었지만, 본 발명의 기술의 견지에서 당업자라면 첨부된 특허청구범위를 포함하여 본 발명에서 개시된 사상 또는 범주에서 벗어나지 않고 특정한 변화 및 변경을 할 수 있다는 것은 너무나 명백할 것이다.

Claims (30)

  1. 치료적 유효량의 비-췌장 프로테아제 또는 치료적 유효량의 비-췌장 프로테아제를 포함하는 조성물을 포유동물에게 투여하는 것을 포함하는, 포유동물의 복통을 치료하는 방법.
  2. 치료적 유효량의 비-췌장 프로테아제 또는 치료적 유효량의 비-췌장 프로테아제를 포함하는 조성물을 음식물과 함께 포유동물에게 투여하는 단계를 포함하는, 포유동물에서 음식물의 공급 후 콜레시스토키닌(CCK)의 최대 혈장 농도(Cmax)를 감소시키는 방법으로서, 상기 감소는 (a) 음식물 공급 후 상기 프로테아제의 부재 하의 상기 Cmax와 (b) 음식물 공급 후 상기 프로테아제의 존재 하의 상기 Cmax를 비교하여 측정하며, 상기 감소는 하기 (ⅰ) 내지 (ⅳ)로 이루어지는 군으로부터 선택되는 것인 방법:
    (ⅰ) 약 10% 이상 내지 약 25% 감소;
    (ⅱ) 약 25% 이상 내지 약 50% 감소;
    (ⅲ) 약 50% 이상 내지 약 75% 감소; 및
    (ⅳ) 약 75% 이상 내지 약 100% 감소.
  3. 치료적 유효량의 비-췌장 프로테아제 또는 치료적 유효량의 비-췌장 프로테 아제를 포함하는 조성물을 포유동물에게 투여하는 단계를 포함하는, 포유동물의 CCK-관련 질환을 치료하는 방법으로서, 상기 프로테아제 투여 후 상기 포유동물의 혈장 콜레시스토키닌(CCK) 농도는 상기 프로테아제 투여 전 상기 포유동물의 혈장 콜레시스토키닌(CCK) 농도보다 더 낮은 농도 또는 동일한 농도이며, 하기 (a) 내지 (c)로 이루어지는 군으로부터 선택된 기간 동안 더 낮은 농도 또는 동일한 농도로 유지되는 것인 방법:
    (a) 상기 프로테아제 투여 후 0 내지 약 4 시간;
    (b) 상기 프로테아제 투여 후 0 내지 약 8 시간; 및
    (c) 상기 프로테아제 투여 후 0 내지 약 12 시간.
  4. 치료적 유효량의 비-췌장 프로테아제 또는 치료적 유효량의 비-췌장 프로테아제를 포함하는 조성물을 포유동물에게 투여하는 단계를 포함하는, 포유동물의 복통을 치료하는 방법으로서, 상기 프로테아제 투여 후 상기 포유동물의 혈장 콜레시스토키닌(CCK) 농도는 상기 프로테아제 투여 전 상기 포유동물의 혈장 콜레시스토키닌(CCK) 농도보다 더 낮은 농도 또는 동일한 농도이며, 하기 (a) 내지 (c)로 이루어지는 군으로부터 선택된 기간 동안 더 낮은 농도 또는 동일한 농도로 유지되는 것인 방법:
    (a) 상기 프로테아제 투여 후 0 내지 약 4 시간;
    (b) 상기 프로테아제 투여 후 0 내지 약 8 시간; 및
    (c) 상기 프로테아제 투여 후 0 내지 약 12 시간.
  5. 치료적 유효량의 비-췌장 프로테아제 또는 치료적 유효량의 비-췌장 프로테아제를 포함하는 조성물을 포유동물에게 투여하는 단계를 포함하는, 포유동물의 복통을 치료하는 방법으로서, 상기 프로테아제는 상기 포유동물의 콜레시스토키닌(CCK)의 최대 혈장 농도(Cmax)를 감소시키고, 상기 감소는 (a) 음식물 공급 후 상기 프로테아제의 부재 하의 상기 Cmax와 (b) 음식물 공급 후 상기 프로테아제의 존재 하의 상기 Cmax를 비교하여 측정하며, 상기 감소는 하기 (ⅰ) 내지 (ⅳ)로 이루어지는 군으로부터 선택되는 것인 방법:
    (ⅰ) 약 10% 이상 내지 약 25% 감소;
    (ⅱ) 약 25% 이상 내지 약 50% 감소;
    (ⅲ) 약 50% 이상 내지 약 75% 감소; 및
    (ⅳ) 약 75% 이상 내지 약 100% 감소.
  6. 치료적 유효량의 비-췌장 프로테아제 또는 치료적 유효량의 비-췌장 프로테아제를 포함하는 조성물을 포유동물에게 투여하는 단계를 포함하는, 포유동물의 복통을 치료하는 방법으로서, 상기 프로테아제는 상기 포유동물의 혈장 콜레시스토키닌(CCK) 농도를 감소시키는 것인 방법.
  7. 치료적 유효량의 비-췌장 프로테아제 또는 치료적 유효량의 비-췌장 프로테 아제를 포함하는 조성물을 음식물과 함께 포유동물에게 투여하는 것을 포함하는, 포유동물의 복통을 치료하는 방법으로서, 상기 프로테아제는 음식물 공급 동안 상기 프로테아제가 존재하지 않는 상기 포유동물의 CCK의 Cmax와 비교했을 때 상기 포유동물의 CCK의 최대 혈장 농도(Cmax)를 감소시키는 것인 방법.
  8. 치료적 유효량의 비-췌장 프로테아제 또는 치료적 유효량의 비-췌장 프로테아제를 포함하는 조성물을 포유동물에게 투여하는 것을 포함하는, 포유동물의 식욕부진(anorexia)을 치료하는 방법.
  9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 비-췌장 프로테아제는 아스파르트산 펩티다제, 티올 펩티다제, 메탈로펩티다제, 세린 펩티다제, 트레오닌 펩티다제, 알칼리성 펩티다제, 세미-알칼리(semi-alkaline)성 펩티다제, 중성 프로테아제 및 이들의 혼합물로 이루어지는 군으로부터 선택된 것인 방법.
  10. 제9항에 있어서, 상기 비-췌장 프로테아제는 세아프로제, 세라펩타제, 프로나제, 프로나제 성분 또는 이들의 혼합물인 것인 방법.
  11. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 비-췌장 프로테아제는 결정형, 반결정형 또는 무정형인 것인 방법.
  12. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물이 부형제 또는 담체를 더 포함하는 것인 방법.
  13. 제12항에 있어서, 상기 부형제는 염, 알코올, 탄수화물, 단백질, 지질, 계면활성제, 중합체 및 폴리아미노산으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 것인 방법.
  14. 제9항에 있어서, 상기 조성물은 리파제 및 아밀라제로 이루어지는 군으로부터 선택된 1종 이상의 효소를 더 포함하는 것인 방법.
  15. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 포유동물은 인간인 것인 방법.
  16. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 비-췌장 프로테아제의 상기 치료적 유효량은 1회 투약량 당 약 5,000 내지 약 1,000,000 USP 유니트인 것인 방법.
  17. 제16항에 있어서, 상기 비-췌장 프로테아제의 상기 치료적 유효량은 1회 투약량 당 약 5,000 내지 약 750,000 USP 유니트인 것인 방법.
  18. 제17항에 있어서, 상기 비-췌장 프로테아제의 상기 치료적 유효량은 1회 투약량 당 약 5,000 내지 약 500,000 USP 유니트인 것인 방법.
  19. 제18항에 있어서, 상기 비-췌장 프로테아제의 상기 치료적 유효량은 1회 투약량 당 약 5,000 내지 약 250,000 USP 유니트인 것인 방법.
  20. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 비-췌장 프로테아제는 다작용가 가교제, 동종이작용가 가교제, 이종이작용가 가교제, 0차 가교제, 디알데히드 가교제, 할로-트리아진 가교제, 할로피리미딘 가교제, 무수물 가교제, 할라이드 가교제, N-메틸올 화합물, 디이소시아네이트 가교제, 디이소티오시아네이트 가교제 및 아지리딘 가교제로 이루어지는 군으로부터 선택된 가교제로 가교하는 것인 방법.
  21. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 비-췌장 프로테아제는 액상물, 고형물, 현탁액 또는 분산액으로서 상기 포유동물에게 투여하는 것인 방법.
  22. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 프로테아제는 경구 경로, 장 경로, 또는 비경구 경로로 상기 포유동물에게 투여하는 것인 방법.
  23. 제22항에 있어서, 상기 프로테아제는 산-억제제의 동시-투여 없이 경구 경로 로 상기 포유동물에게 투여하는 것인 방법.
  24. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 비-췌장 프로테아제는 슬러리, 정제, 캐플릿, 캡슐제 또는 당의정으로서 포유동물에게 투여하는 것인 방법.
  25. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 비-췌장 프로테아제는 비장용피 정제로서 상기 포유동물에게 투여하는 것인 방법.
  26. 제24항에 있어서, 상기 비-췌장 프로테아제는 1회 식사 당 정제 1정 내지 6정의 투약량으로 포유동물에게 투여하며, 상기 정제는 하기 (a) 내지 (c)로 이루어지는 군으로부터 선택된 활성 프로테아제 농도를 포함하는 것인 방법:
    (a) 약 20 ㎎ 내지 약 500 ㎎;
    (b) 약 50 ㎎ 내지 약 500 ㎎; 및
    (a) 약 50 ㎎ 내지 약 250 ㎎.
  27. 제24항에 있어서, 상기 비-췌장 활성 프로테아제는 1회 식사 당 하기 (a) 내지 (c)로 이루어지는 군으로부터 선택된 활성 프로테아제 투약량을 제공하는 1정 이상의 정제로서 포유동물에게 투여하는 것인 방법:
    (a) 포유동물 1 ㎏ 당 약 1 ㎎ 내지 10 ㎎;
    (b) 포유동물 1 ㎏ 당 약 1 ㎎ 내지 3 ㎎; 및
    (c) 포유동물 1 ㎏ 당 약 1 ㎎ 내지 2 ㎎.
  28. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 비-췌장 프로테아제는 결정형인 것인 방법.
  29. 제27항에 있어서, 상기 비-췌장 프로테아제는 세아프로제인 것인 방법.
  30. 제1항에 있어서, 상기 복통은 췌장 기능저하, 급성 췌장염, 만성 췌장염, 낭포성 섬유증 또는 수술후 위장 수술과 관련되는 것인 방법.
KR1020067010531A 2003-10-29 2004-10-29 혈장 콜레시스토키닌(ｃｃｋ) 농도 조절 및 통증 치료를위한 비-췌장 프로테아제 KR20060127857A (ko)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US51555203P 2003-10-29 2003-10-29
US60/515,552 2003-10-29
US52749003P 2003-12-05 2003-12-05
US60/527,490 2003-12-05

Publications (1)

Publication Number Publication Date
KR20060127857A true KR20060127857A (ko) 2006-12-13

Family

ID=34556008

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020067010531A KR20060127857A (ko) 2003-10-29 2004-10-29 혈장 콜레시스토키닌(ｃｃｋ) 농도 조절 및 통증 치료를위한 비-췌장 프로테아제

Country Status (9)

Country Link
US (2) US7459155B2 (ko)
EP (1) EP1682168B1 (ko)
JP (1) JP2007509982A (ko)
KR (1) KR20060127857A (ko)
AU (1) AU2004285558A1 (ko)
CA (1) CA2544156C (ko)
ES (1) ES2421538T3 (ko)
IL (1) IL175210A (ko)
WO (1) WO2005042012A1 (ko)

Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US9976171B2 (en) 2011-08-08 2018-05-22 Allergan Pharmaceuticals International Limited Method for dissolution testing of solid compositions containing digestive enzymes
US10184121B2 (en) 2013-06-28 2019-01-22 Allergan Pharmaceuticals International Limited Methods for removing viral contaminants from pancreatic extracts
US10206882B2 (en) 2007-02-20 2019-02-19 Allergan Pharmaceuticals International Limited Stable digestive enzyme compositions
US10993996B2 (en) 2013-08-09 2021-05-04 Allergan Pharmaceuticals International Limited Digestive enzyme composition suitable for enteral administration
US11364205B2 (en) 2010-10-01 2022-06-21 Societe Des Produits Nestle S.A. Stable low digestive enzyme content formulation

Families Citing this family (16)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
IT1319655B1 (it) 2000-11-15 2003-10-23 Eurand Int Microsfere di enzimi pancreatici con elevata stabilita' e relativometodo di preparazione.
DE102006008613A1 (de) 2006-02-24 2007-08-30 Dade Behring Marburg Gmbh Stabilisierte Zubereitungen von Serin-Endopeptidasen, deren Herstellung und Verwendung
US20090175842A1 (en) * 2006-07-11 2009-07-09 Chandrakant Laxminarayan Rathi Dietary anti-bacterial compositions
US10087493B2 (en) 2008-03-07 2018-10-02 Aptalis Pharma Canada Ulc Method for detecting infectious parvovirus in pharmaceutical preparations
US8784884B2 (en) * 2009-09-17 2014-07-22 Stephen Perrett Pancreatic enzyme compositions and methods for treating pancreatitis and pancreatic insufficiency
NZ602958A (en) 2010-03-30 2014-07-25 Pfenex Inc High level expression of recombinant toxin proteins
WO2012155027A1 (en) 2011-05-12 2012-11-15 Healthpoint, Ltd. Wound debridement compositions containing seaprose and methods of wound treatment using same
US20130156884A1 (en) * 2011-12-19 2013-06-20 Triarco Industries Protease enzymes for increased protein digestion rate and absorption and methods of using the same
US9962430B2 (en) 2012-02-15 2018-05-08 Chirhoclin, Inc. Methods for treating pain associated with chronic pancreatitis
WO2013170128A1 (en) * 2012-05-11 2013-11-14 Smith & Nephew, Inc. Use of seaprose to remove bacterial biofilm
US11406718B2 (en) 2012-05-29 2022-08-09 Chirhoclin, Inc. Methods of detecting pancreobiliary ductal leaks
EP3048904A2 (en) * 2013-09-25 2016-08-03 Pronutria Biosciences, Inc. Compositions and formulations for treatment of gastrointestinal tract malabsorption diseases and inflammatory conditions and methods of production and use thereof
CA3031866A1 (en) 2016-07-27 2018-02-01 Smith & Nephew, Inc. Use of thermolysin to reduce or eliminate bacterial biofilms from surfaces
WO2018140707A1 (en) 2017-01-30 2018-08-02 Smith & Nephew, Inc. Synergistic combination of thermolysin and an antibacterial agent to reduce eliminate bacterial biofilms from surfaces
US11744878B2 (en) 2020-08-19 2023-09-05 Chirhoclin, Inc. Methods for treatment of COVID-19 syndrome
IL309255A (en) 2021-07-12 2024-02-01 Zidkiyahu Simenhaus Preparations containing proteins, biologically active containing microparticle carriers from cellulose

Family Cites Families (21)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR2129947A1 (en) 1971-03-23 1972-11-03 Amano Pharma Co Ltd Anti-inflammatory protease prepn - from aspergillus
JPS5692217A (en) * 1979-12-26 1981-07-25 Kowa Co Easily absorbable enzyme preparation
JPS5826822A (ja) * 1981-08-10 1983-02-17 Kaken Pharmaceut Co Ltd 慢性腎炎治療剤
JPS608225A (ja) * 1983-06-29 1985-01-17 Kowa Co 腸管吸収医薬組成物
JPS62215533A (ja) * 1986-03-17 1987-09-22 Shigemi Fujisaki 膠原病又は関節リウマチの予防治療剤
JPS61293927A (ja) * 1986-06-18 1986-12-24 Kaken Pharmaceut Co Ltd 肝臓疾患予防治療剤
JPH01132533A (ja) * 1987-11-18 1989-05-25 Toa Yakuhin Kogyo Kk 動物用薬剤
JPH01238538A (ja) * 1988-03-18 1989-09-22 Toa Yakuhin Kogyo Kk 健胃消化剤
JPH02292226A (ja) 1989-05-08 1990-12-03 Shigemi Fujisaki 障害された神経細胞賦活予防治療剤
US5514373A (en) * 1992-05-22 1996-05-07 Harris, Jr.; Roosevelt D. Topical preparation
US5628981A (en) * 1994-12-30 1997-05-13 Nano Systems L.L.C. Formulations of oral gastrointestinal diagnostic x-ray contrast agents and oral gastrointestinal therapeutic agents
WO1998036734A1 (en) 1997-02-21 1998-08-27 Beth Israel Deaconess Medical Center Inc. A novel nutritional therapy which minimizes plasma cholecystokinin (cck) levels
JPH1149699A (ja) 1997-08-01 1999-02-23 Masao Igarashi 女性慢性下腹疼痛症候群治療剤
US6413512B1 (en) * 1998-02-13 2002-07-02 National Enzyme Company Composition and method for treating disease by increasing activated α2 macroglobulin in the blood and extravascular tissue
US6638906B1 (en) * 1999-12-13 2003-10-28 Nobex Corporation Amphiphilic polymers and polypeptide conjugates comprising same
US20010046493A1 (en) * 2000-02-24 2001-11-29 Alex Margolin Lipase-containing composition and methods of use thereof
PL204599B1 (pl) * 2000-11-02 2010-01-29 Cilian Ag Enzymy uzyskane z orzęsków i ich zastosowanie
AR032392A1 (es) * 2001-01-19 2003-11-05 Solvay Pharm Gmbh Mezcla de enzimas, preparado farmaceutico y utilizacion de dicho preparado.
US20030026794A1 (en) * 2001-07-31 2003-02-06 Howard Fein Selective enzyme treatment of skin conditions
US6713096B2 (en) * 2002-01-04 2004-03-30 Melaleuca, Inc. Dietary supplements and methods for treating pain and inflammation
US20040038874A1 (en) * 2002-08-22 2004-02-26 Osemwota Omoigui Method of treatment of persistent pain

Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US10206882B2 (en) 2007-02-20 2019-02-19 Allergan Pharmaceuticals International Limited Stable digestive enzyme compositions
US11364205B2 (en) 2010-10-01 2022-06-21 Societe Des Produits Nestle S.A. Stable low digestive enzyme content formulation
US9976171B2 (en) 2011-08-08 2018-05-22 Allergan Pharmaceuticals International Limited Method for dissolution testing of solid compositions containing digestive enzymes
US10184121B2 (en) 2013-06-28 2019-01-22 Allergan Pharmaceuticals International Limited Methods for removing viral contaminants from pancreatic extracts
US10993996B2 (en) 2013-08-09 2021-05-04 Allergan Pharmaceuticals International Limited Digestive enzyme composition suitable for enteral administration

Also Published As

Publication number Publication date
IL175210A0 (en) 2006-09-05
EP1682168B1 (en) 2013-05-01
US7459155B2 (en) 2008-12-02
US20090081184A1 (en) 2009-03-26
JP2007509982A (ja) 2007-04-19
AU2004285558A1 (en) 2005-05-12
WO2005042012A1 (en) 2005-05-12
CA2544156A1 (en) 2005-05-12
IL175210A (en) 2014-02-27
CA2544156C (en) 2012-07-10
US20050158299A1 (en) 2005-07-21
EP1682168A1 (en) 2006-07-26
ES2421538T3 (es) 2013-09-03

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR20060127857A (ko) 혈장 콜레시스토키닌(ｃｃｋ) 농도 조절 및 통증 치료를위한 비-췌장 프로테아제
JP4908420B2 (ja) 膵機能不全を治療するための、リパーゼ、プロテアーゼおよびアミラーゼを含有する組成物
JP5217050B2 (ja) リパーゼ含有組成物およびこれらの使用方法
US20100196344A1 (en) Compositions and methods for treating pancreatic insufficiency
JP2008500055A (ja) 医薬用途のための酵素
JP2007534752A (ja) 治療用酵素製剤およびその使用方法
WO2007053619A2 (en) A composition with a fungal (yeast) lipase and method for treating lipid malabsorption in cystic fibrous as well as people suffering from pancreatic lipase insufficiency
US20130171109A1 (en) Rothia species gluten-degrading enzymes and uses thereof
WO2011044365A1 (en) Rothia species glutamine endopeptidases and use thereof
US6413512B1 (en) Composition and method for treating disease by increasing activated α2 macroglobulin in the blood and extravascular tissue
US11124785B2 (en) Rothia subtilisins, S8A family proteases, as therapeutic enzymes for application in gluten intolerance disorders
US20030095961A1 (en) Composition and method for treating disease by increasing activated alpha2 macroglobulin in the blood and extravascular tissue
EP0387945A1 (en) A composition for the treatment of exocrine insufficiency of the pancreas, and the use of said composition
JP2015131805A (ja) プロテアーゼ阻害のためのシリカ
Murphree II et al. Systemic Enzyme Support: An Overview
JPH11189544A (ja) 消化酵素含有医薬品

Legal Events

Date Code Title Description
N231 Notification of change of applicant
WITN Application deemed withdrawn, e.g. because no request for examination was filed or no examination fee was paid