KR20060088129A

KR20060088129A - 면역 활성을 향상시키는 정제 형태의 우유 조성물 및 그제조 방법

Info

Publication number: KR20060088129A
Application number: KR1020067009452A
Authority: KR
Inventors: 임상동; 도정룡; 김기성; 박주환
Original assignee: 한국식품연구원; 박주환
Priority date: 2004-12-29
Filing date: 2005-12-29
Publication date: 2006-08-03
Also published as: KR100651703B1; WO2006071085A1; KR100649692B1; WO2006137634A1; KR20060061280A; WO2006137635A1; KR100649690B1; WO2006137636A1; KR20060061281A; KR100649691B1; KR20060061279A

Abstract

본 발명은 가시오갈피 추출물, 더덕 추출물, 양송이 버섯 추출물 및 맛타리 버섯 추출물을 함유하며, 면역 활성을 향상시키는 정제형 기능성 우유 조성물 및 그 제조 방법에 관한 것이다.

Description

면역 활성을 향상시키는 정제 형태의 우유 조성물 및 그 제조 방법{TABLET MILK COMPOSITION HAVING IMMUNO-MODULATING ACTIVITY AND PREPARATION METHOD THEREOF}

본 발명은 관능적인 특성이 우수하여 기호성이 좋고, 면역 활성을 향상시키는 천연 소재 함유 정제(tablet) 형태의 기능성 우유 조성물 및 그 제조 방법에 관한 것이다.

생활수준의 향상에 따라 건강과 장수에 대한 관심이 높아지고 있다. 그러나, 피로, 스트레스, 잘못된 식습관 등으로 인하여 면역력이 저하됨으로써, 암과 같은 성인병이 새로운 사회 문제로 대두되고 있다.

서양식 식생활에 따라 다양한 서양 음식이 국내에도 점차 증가하고 있으며, 이 중에서도 특히 어린이 건강 및 발육을 중요시하는 추세에 따라 우유, 치즈, 요구르트와 같은 유제품 소비량이 점차 증가하고 있다.

우유 제품 소비량의 증가 추세에 맞춰 국내 낙농 관련 산업 역시 확대되고 있으나, 무역 자유화에 따라 외국으로부터 값싼 유제품의 수입 역시 증가하여, 국내 유제품의 국제 경쟁력이 상실되어 분유 재고량이 증가되고 있다. 이와 같은 여건에서 분유를 주 원료로 한 기능성 유제품을 개발하여 국내 원유 소비량을 증가시 킴으로써, 낙농가 및 우유 가공업체를 보호할 필요성이 있다.

지금까지 우유 제품은 우유, 가공유 등과 같은 액상 제품 또는 치즈와 같은 고형 제품이 주류를 이루고 있으나, 냉장 보관 및 냉장 유통이 요구됨에 따라 손쉽게 먹기가 불편하였다. 최근, 소비자가 쉽고 편리하게 먹을 수 있는 편의 식품에 대한 선호가 증가하고 있고, 또한 장기간 여행 또는 등산용 식사 대용품, 군비 상식, 아침에 식사를 거르는 사람이나 수험생을 위한 영양 보충식 또는 간식 등과 같이, 다양한 부류의 계층에게 필요성이 부각되고 있다.

또한, 기능성과 기호성이 있는 천연 식품을 선호하는 요즘의 소비자 추세에 따라, 기능성 및 기호성이 증진된 다양한 소비층을 겨냥한 제품이 요구되고 있다. 따라서, 우유를 어린이뿐만 아니라 성인에게도 적합한 정제 형태로 제공할 필요성이 크게 증가하고 있다. 그러나, 세포의 면역 활성을 향상시키는 천연 소재를 이용한 정제 형태의 우유는 아직 연구 또는 소개된 적이 없다.

기술적 과제

본 발명의 목적은 관능적인 특성이 우수하여 기호성이 좋고, 면역 활성을 향상시키는 능력이 있으며, 저장성이 우수하여 상온 보관이 가능한, 천연 소재 함유 정제형 기능성 우유 조성물 및 그 제조 방법을 제공하는 것이다.

기술적 해결방법

위와 같은 본 발명의 목적은 탈지분유에 세포의 면역 활성을 향상시키는 능력을 나타내는 가시오갈피 추출물, 더덕 추출물, 양송이 버섯 추출물 및 맛타리 버섯 추출물이 첨가된 정제 형태의 기능성 우유 조성물 및 그 제조 방법을 제공함으로써 달성된다.

따라서, 본 발명에 따른 정제형 우유 조성물은 세포의 면역 활성을 향상시키는 성분으로서 가시오갈피 추출물, 더덕 추출물, 양송이 버섯 추출물 및 맛타리 버섯 추출물을 함유하는 것을 특징으로 한다.

본 발명에 따른 정제형 우유 조성물은 상기 양송이 버섯 추출 분말 대신에 양송이 버섯 분말을, 맛타리 버섯 추출 분말 대신에 맛타리 버섯 분말을 포함할 수도 있다.

본 발명에 따른 정제형 우유 조성물은 면역 활성을 향상시키는 위와 같은 성분 이외에도, 다른 천연 소재로서 초유 분말, 영지 버섯 추출 분말, 상황 버섯 추출 분말, 인삼 분말, 락토페린, 글루타민 펩타이드, 유당, 결정 올리고당 및 이들의 조합으로 구성된 군에서 선택되는 1종 이상의 성분을 추가로 포함할 수 있다.

초유 분말에는 면역 성분인 면역 글로블린이 약 20％ 함유되어 있으며, 이 성분은 유해 물질을 방어하며, 체내로 침입한 세균이나 바이러스에 대항하여 몸을 보호하는 역할을 한다.

영지 버섯은 인체의 면역 능력을 강화시켜 성인병 예방과 피로 회복에 탁월한 효능이 있는 것으로 알려지고 있다.

상황 버섯의 메시마(meshima)와 같은 다당체는 항암 및 면역요법제 등으로 사용되고 있다. 상황버섯의 열수 추출물은 소화기 계통의 암 저지 효과가 있는 것으로 발표되었으며, 간암 등 환자 수술 후 화학요법과 병용하는 경우에 면역기능 항진이 있는 것으로 발표된 바 있다.

인삼은 만병통치약으로 불릴 만큼 많은 효능을 가지고 있는 것으로 알려져 있는데, 그 중 대표적인 것은 강장 작용, 항스트레스 및 항피로(抗疲

) 효과, 숙취 효과, 빈혈 회복, 조혈 효과 및 방사선 장애 방어 효과, 고혈압의 예방 및 치료 효능, 항암 효과 및 면역 기능 효과, 당뇨병 치료 효과, 강정(强精)작용, 노화 방지 등의 효과를 들 수 있다.

락토페린은 자연 상태에서는 젖소의 초유와 사람의 초유에만 들어 있는 강력한 항바이러스, 항균성 물질이다. 이것은 철분이 결합된 단백질로서, 철분을 화합하고 유리하는 중요한 기능을 한다. 구체적으로는, 흡수된 철분과 결합함으로써 세균 번식에 필요한 철분 공급을 차단하여 세균 번식을 억제하고, 결합된 철분은 체내 모든 세포에 산소를 공급함에 있어서 촉매 작용을 한다. 질병 감염, 악성 종양, 에이즈, 암 등의 예방 작용을 하는 것으로 알려져 있다.

글루타민 펩타이드는 소맥 단백 가수 분해물로서, 병원균의 침입에 대한 보호 역할을 하는 신체의 초기 방어체인 장관 내 상피 세포를 증강시키는 작용을 함으로써, 면역 효과를 나타내는 것으로 알려져 있다.

유당은 글루코스와 갈락토스로 구성된 이당류로서 단맛이 설탕의 1/5 수준으로 정제 제조 시에 결착제 역할을 한다.

올리고당은 섭취 시 장내 소화 효소에 의하여 분해되지 않고 대장까지 도달하여 대장 내에 서식하는 비피더스균을 비롯한 유용한 장내 세균에 의하여 이용되며, 유해 세균 또는 병원성 세균의 증식을 억제하는 기능을 가진다.

표 1에서 볼 수 있는 바와 같이, 가시오갈피 추출 분말은 면역 활성을 향상시키는 것으로 확인되었다. 본 발명에 있어서, 가시오갈피 추출물은 식품에 첨가가 허용될 수 있는 형태인 한, 열수를 이용하거나 또는 유기 용매를 이용하여 추출된 어떠한 형태의 추출물이어도 무방하다.

바람직하게는 가시오갈피 추출물은 다음과 같은 방법으로 얻어진다. 가시오갈피 줄기를 세절하고, 5 내지 10배의 물을 가한 다음, 90 내지 100℃ 정도에서 바람직하게는 2시간 이상, 보다 바람직하게는 2 내지 3시간 가열하여 추출한다. 얻어진 추출물을 여과지를 이용하여 여과하고, 배합 탱크 내에서 가시오갈피 추출물:덱스트린을 고형분 대비 60％:40％의 중량비로 하여 60℃에서 잘 혼합한 다음, 입구(in let) 온도 200 내지 230℃, 출구(out let) 온도 110 내지 130℃에서 분무 건조한다. 가시오갈피 추출 분말의 첨가량은 정제형 우유 조성물의 총 중량에 대하여 3 내지 7 중량％의 양으로 첨가하는 것이 좋으나, 이에 한정되지는 않는다.

더덕은 간의 활동을 도와 쉽게 피로를 느끼는 사람에게 좋고, 위를 튼튼하게 하여 소화 기능을 촉진시키는 것으로 알려져 있다. 예로부터 더덕은 건위제일 뿐만 아니라, 강장 식품으로도 유명하며, 폐와 비장, 신장을 튼튼하게 해주는 식품으로 알려져 왔다. 본 발명에서는 정제형 우유에 이와 같은 기능을 갖는 더덕 추출 분말을 첨가함으로써, 면역 활성을 증진시키는 것과 동시에, 피로 회복제로서의 기능 역시 제공할 수 있다. 더덕 추출 분말은 1 내지 3 중량％로 첨가될 수 있으나, 반드시 이에 한정되지는 않는다.

그러나, 가시오갈피 추출 분말과 더덕 추출 분말의 첨가량이 지나치게 많은 경우에는 면역 활성 등의 기능은 크게 향상시킬 수 있지만, 이들 성분의 맛과 향이 강한 것에 기인하여 정제형 우유에 대한 기호성이 나빠지는 문제가 있을 수 있다. 반대로, 이들 성분의 첨가량이 지나치게 적은 경우에는 원하는 기능이 얻어지지 않을 수 있다. 따라서, 위에 한정된 가시오갈피 추출 분말 및 더덕 추출 분말의 함량 범위는 기능성과 기호성 양쪽 모두를 동시에 충족시킬 수 있는 바람직한 범위에 해당한다.

양송이 버섯은 항암 작용과 항균 효과가 뛰어난 것으로 알려져 있으며, 특히 렌티나신이라는 성분이 함유되어 있어 항 혈전 작용을 하기도 한다. 맛타리 버섯은 20여 종의 느타리버섯 중에서 맛이 우수한 품종을 선발 육종한 후 미루나무 톱밥에 영양원을 첨가하여 첫 수확한 버섯만을 출하하는 것으로서, 다이어트 효과가 뛰어난 것으로 알려져 있다.

본 발명에 따른 면역 활성이 향상된 정제형 우유는 양송이 버섯 추출 분말(또는 양송이 버섯 분말)과 맛타리 버섯 추출 분말(또는 맛타리 버섯 분말)을 정제형 우유 조성물의 총 중량에 대하여 각각 1.0 내지 3.0 중량％의 양으로 함유한다.

본 발명에 따른 면역 활성이 향상된 정제형 우유에 첨가되는, 면역 활성을 향상시키는 성분은 다음과 같은 방법으로 선발되었다.

1. 면역 활성 소재의 선발

아래의 표 1은 소재별 매크로파아지 세포주에 의한 반응성 질소종 분비능을 보여주는 것이다. 표 1에서 볼 수 있는 바와 같이, 16종의 천연 소재 중에서 가시오갈피 열수 추출물이 91.93

로서 가장 많은 질소종 분비능을 나타내었다.

표 1

아래의 표 2는 소재별 매크로파아지 세포주에 의한 인터루킨-1α 분비능을 보여주는 것이다. 표 2에서 볼 수 있는 바와 같이, 16종의 천연 소재 중에서 양송이 버섯 열수 추출물이 203.13 pg/ml로서 가장 많은 인터루킨-1α 분비능을 나타내었다.

표 2

아래의 표 3은 선발된 천연 소재 추출물의 첨가 농도에 따른 추출물의 면역능을 시험한 결과를 보여주는 것이다. 표 3에서 볼 수 있는 바와 같이, 열수 추출물 1000 ㎍/㎖을 첨가한 경우에 면역능이 가장 높았다.

표 3

2. 면역 활성 소재의 전처리

가시오갈피 줄기를 잘게 썬 다음 1:5의 중량비로 물을 가하고, 100℃에서 2시간 동안 가열 추출하여 얻은 액체를 여과지를 통과시켜 여과하고, 배합 탱크 내에서 가시오갈피 추출물:덱스트린을 고형분 대비 60％:40％의 중량비로 하여, 60℃에서 잘 혼합한 다음, 입구 온도 200 내지 230℃, 출구 온도 110 내지 130℃에서, 분무 건조기로 건조시켰다.

더덕, 영지 버섯, 상황 버섯, 양송이 버섯 및 맛타리 버섯을 각각 잘게 썬 다음, 가시오갈피의 경우와 동일한 방법으로 추출하고, 덱스트린과 혼합하여, 추출 분말을 제조하였다.

또한, 양송이 버섯과 맛타리 버섯을 분말 상태로 첨가하는 경우에는 각각 잘게 썬 다음, 건조기로 50 내지 60℃에서 24시간 동안 건조시키고, 분쇄기에서 분말화하였다. 맛타리 버섯은 추가로 볼밀로 12시간 동안 분쇄하여 분말화하였다.

3. 재료의 배합

본 발명에 따른 정제형 우유 조성물은, 상기 우유 조성물의 총 중량에 대하여, 탈지분유 50 내지 70 중량％, 가시오갈피 추출 분말 3.0 내지 7.0 중량％, 더덕 추출 분말 1.0 내지 3.0 중량％, 양송이 버섯 추출 분말 (또는 양송이 버섯 분말) 1.0 내지 3.0 중량％, 맛타리 버섯 추출 분말 (또는 맛타리 버섯 분말) 1.0 내지 3.0 중량％를 함유한다.

추가 성분으로서, 초유 분말, 영지 버섯 추출 분말, 상황 버섯 추출 분말, 인삼 분말, 락토페린, 글루타민 펩타이드, 유당, 결정 올리고당 및 이들의 조합으로 구성된 군에서 선택되는 1종 이상의 성분을 함유하는 경우에, 그 함량은 초유 분말 0 내지 10 중량％, 영지 버섯 추출 분말 0.5 내지 2.0 중량％, 상황 버섯 추출 분말 0.5 내지 2.0 중량％, 인삼 분말 3.0 내지 7.0 중량％, 락토페린 0.2 내지 1.0 중량％, 글루타민 펩타이드 5.0 내지 15.0 중량％, 유당 1.0 내지 5.0 중량％, 결정 올리고당 1.0 내지 3.0 중량％일 수 있다.

4. 혼합

본 발명에 따른 정제형 우유 조성물을 제조함에 있어서는, 부원료인 초유 분말, 가시오갈피 추출 분말, 더덕 추출 분말, 양송이 버섯 추출 분말 (또는 양송이 버섯 분말), 맛타리 버섯 추출 분말 (또는 맛타리 버섯 분말), 영지 버섯 추출 분말, 상황 버섯 추출 분말, 인삼 분말, 락토페린, 글루타민 펩타이드, 유당 및 결정 올리고당 등을 먼저 혼합한 다음, 여기에 탈지분유를 첨가하여 혼합한다.

5. 숙성

위와 같은 방법으로 혼합한 원료를 5 내지 25℃에서 2 내지 15시간 동안 숙성시켜 원료의 수분 평형이 이루어지도록 한다.

6. 정제(tablet) 제조

상기 혼합한 원료로 정제 제조기를 이용하여 0.15 내지 2g의 정제 형태로 제조한다.

7. 코팅

정제수(purified water)와 발효 주정을 1.5:8.5의 부피비로 혼합한 용매에 하이드록시프로필메틸셀룰로오스(hydroxy propyl methyl cellulose, HPMC)를 3％의 농도로 용해시킨 용액을 분무하여, 위에 설명한 방법으로 제조된 정제를 코팅한다. 이와 같은 코팅은 정제에 함유되는 성분이 공기와 직접 접촉하는 것을 방지함으로써 저장성을 향상시키기 위한 것이다. 따라서, 본 발명에 따른 정제 형태의 기능성 우유 조성물은 상온 보관이 가능하다.

8. 포장

수분 투과도가 낮은 포장 용기, 예를 들면, PVDC 재질의 용기를 사용하여 일정량 포장한다.

유리한 효과

본 발명에 따라, 관능적인 특성이 우수하여 기호성이 좋고, 면역 활성을 향상시키는 능력이 있으며, 저장성이 우수하여 상온 보관이 가능한, 천연 소재 함유 정제형 기능성 우유 조성물 및 그 제조 방법이 제공되었다.

표 4 및 5에서 볼 수 있는 바와 같이, 본 발명에 따른 정제형 우유 조성물은 관능 특성이 우수하여 기호성이 좋고, 세포의 면역 활성을 향상시키는 것으로 확인되었다.

또한, 본 발명의 정제형 기능성 우유 조성물은 표면이 하이드록시프로필메틸셀룰로오스로 코팅되어 있으므로, 저장성이 우수하여 상온 보관이 가능하다.

도 1은 본 발명에 따른 면역 활성 향상 능력이 있는 정제 형태의 우유 조성물을 제조하기 위한 공정도이다.

도 2는 매크로파아지 세포주에 의한 interleukin-1α 분비능을 ELISA로 측정하기 위한 절차를 보여주는 것이다.

발명의 실시를 위한 형태

이하에서는 본 발명을 실시예 및 시험예를 통하여 더욱 상세히 설명한다. 그러나 이들 실시예는 본 발명의 예에 불과할 뿐, 본 발명의 범위가 이에 한정되는 것은 아니다.

실시예 1

최종적으로 얻어지는 정제형 우유 조성물의 총 중량을 기준으로, 초유 분말 5.0 중량％, 가시오갈피 추출 분말 3.0 중량％, 더덕 추출 분말 1.5 중량％, 양송이 버섯 추출 분말 1.5 중량％, 맛타리 버섯 추출 분말 1.5 중량％, 영지 버섯 추출 분말 1.0 중량％, 상황 버섯 추출 분말 1.0 중량％, 인삼 분말 5.0 중량％, 락토페린 0.5 중량％, 글루타민 펩타이드 10.0 중량％, 유당 3.0 중량％, 결정 올리고당 2.0 중량％를 15℃에서 30분 동안 호바트 믹서기로 혼합하였다. 이 혼합물에 탈지분유 65％를 첨가한 다음, 모든 원료를 균일하게 혼합하였다. 그 다음, 이 혼합물을 10℃에서 3시간 동안 숙성시키고, 정제기를 이용하여 정제 형태로 제조하였다. 얻어지는 정제를 Hydroxy propyl methyl cellulosc(HPMC) 3％ 용액으로 코팅하여 정제형 우유 제품을 제조하였다.

실시예 2

탈지분유 63 중량％, 초유 분말 5.0 중량％, 가시오갈피 추출 분말 5.0 중량％, 더덕 추출 분말 1.5 중량％, 양송이 버섯 추출 분말 1.5 중량％, 맛타리 버섯 추출 분말 1.5 중량％, 영지 버섯 추출 분말 1.0 중량％, 상황 버섯 추출 분말 1.0 중량％, 인삼 분말 5.0 중량％, 락토페린 0.5 중량％, 글루타민 펩타이드 10.0 중량％, 유당 3.0 중량％ 및 결정 올리고당 2.0 중량％ 사용한 것을 제외하고는, 실시예 1에서와 동일한 방법으로 정제형 우유 제품을 제조하였다.

실시예 3

탈지분유 61 중량％, 초유 분말 5.0 중량％, 가시오갈피 추출 분말 7.0 중량％, 더덕 추출 분말 1.5 중량％, 양송이 버섯 추출 분말 1.5 중량％, 맛타리 버섯 추출 분말 1.5 중량％, 영지 버섯 추출 분말 1.0 중량％, 상황 버섯 추출 분말 1.0 중량％, 인삼 분말 5.0 중량％, 락토페린 0.5 중량％, 글루타민 펩타이드 10.0 중량％, 유당 3.0 중량％ 및 결정 을리고당 2.0 중량％ 사용한 것을 제외하고는, 실시예 1에서와 동일한 방법으로 정제형 우유 제품을 제조하였다.

실시예 4

탈지분유 63 중량％, 초유 분말 5.0 중량％, 가시오갈피 추출 분말 5.0 중량％, 더덕 추출 분말 1.5 중량％, 양송이 버섯 분말 1.5 중량％, 맛타리 버섯 분말 1.5 중량％, 영지 버섯 추출 분말 1.0 중량％, 상황 버섯 추출 분말 1.0 중량％, 인삼 분말 5.0 중량％, 락토페린 0.5 중량％, 글루타민 펩타이드 10.0 중량％, 유당 3.0 중량％ 및 결정 올리고당 2.0 중량％ 사용한 것을 제외하고는, 실시예 1에 서와 동일한 방법으로 정제형 우유 제품을 제조하였다.

시험예 1: 관능검사

우유 관련 분야에서 2년 이상 근무한 13명의 인원을 관능검사 요원으로 선택하여, 상기 실시예 1 내지 4에서 제조한 정제형 우유의 색상, 맛, 조직감 및 종합적 기호도 등의 관능검사를 9점 평점법으로 실시하여, 그 결과를 아래의 표 4에 나타내었다.

표 4

시험예 2: 면역 활성 검사

이하에서 설명하는 절차에 따라, 실시예 1 내지 4에서 제조한 정제형 우유의 in vitro 면역 활성 (반응성 질소종 분비능, Interleukin-1α(IL-1α) 분비능 및 Tumor necrosis factor(TNF) 분비능)을 검사하였다.

(1) 세포 배양

세포 배양을 위한 배지로는 DMEM(Dulbecco's modified Eagle's medium, with or without phenol red, Gibco)을 사용하였다. 배양 플라스크, 피펫, microplate (96-well) 등은 멸균된 제품을 사용하였으며, 배양병 등을 포함하는 기구들은 autoclave에서 121℃, 15 1b에서 15분간 가압 멸균한 후 사용하였다. 배지는 3차 증류수에 용해시킨 후 sterilized filter(0.22 ㎛ pore size)로 여과하여 멸균하고, 10％ fetal bovine serum과 1％ streptomycin-penicilline을 첨가하여 사용하였다. 세포 세척 및 계대 배양 시에 온도를 37℃로 유지하였다.

세포가 배양 플라스크 바닥에 confluent하게 자랐을 때 부착된 세포를 분리하여 사용하였다. DMEM이 담긴 배양 플라스크 내에서 각각 37℃, 5％ CO₂의 조건을 유지하면서 CO₂ incubator에서 세포를 배양하였다. Anchorage-dependent한 세포의 경우, 배지를 제거하고 trysin-EDTA(0.05％ trypsin, 0.53mM EDTA·4Na)로 37℃에서 5분간 처리하였다. 이들 세포를 분리한 후, 1000rpm에서 5분간 원심분리한 다음 상징액을 제거하고, 다시 배지를 넣어 원심분리하는 과정을 3번 반복하였다. 이렇게 얻어진 세포를 배지에 분산시킨 후 일정한 세포수로 맞추어 사용하였다. 세포에 freezing용 배지를 첨가하여 -70℃ liquid nitrogen tank에 보관하였다가, 사용 직전에 세포를 해동시켜 배양하였다.

(2) 반응성 질소종 분비능 검사

96-well plate에 시료 및 균주 RAW264.7(2

10⁵)을 넣은 다음, CO₂ incubator에서 37℃로 유지하면서 48시간 동안 배양하였다. 배양액 중의 nitrite 농도는 microplate assay를 이용하여 측정하였다. 먼저 48시간 동안 배양한 다음, 상징액 50 ㎕ aliquots를 취하고, 여기에 같은 부피의 Griess 시약 (1％ sulfanilamide/0.1％ naphthylethylene diaminc dihydrochloride in 2.5％ H₃PO₄)을 가한 다음, 실온에서 10분간 반응시켰다. Nitrite의 표준물질로서 sodium nitrite를 사용하여 ELISA reader(Molecular Device, USA)로 540nm에서 흡광도를 측정하여 표준 곡선을 얻고, 이 곡선을 이용하여 실시예 1 내지 4에서 제조한 조성물에 기인하여 세포로부터 분비된 반응성 질소종의 함량을 결정하였다.

3) Interleukin-1α 분비능

반응성 질소종 분비능 측정 시와 동일한 절차에 따라 RAW264.7(2

10⁵/well)과 시료를 96-well plate에 넣고, CO₂ incubator에서 37℃로 유지하면서 48시간 동안 배양하였다. 상징액을 취해 거식 세포가 분비하는 Interleukin-1α(IL-1α)을 도 2에 제시한 절차에 따라 enzyme-linked immunosorbent assay(ELISA)를 이용하여 측정하였다. 구체적으로는, anti-mIL-1α 단일 클론 항체가 코팅된 microtiter plate에 대한 항체의 비특이적인 반응을 방지하지 위하여 blocking 시약을 가한 다음, 세척용 완충액으로 3회 세척하였다. 세척한 plate에 biotinylated anti-mIL-1α을 50 ㎕씩 넣고, 표준 IL-1α 또는 배양한 시료액을 50 ㎕씩 well에 주입한 다음, 25℃에서 2시간 배양하였다. 배양한 plate를 세척용 완충액으로 다시 3회 세척하고, streptavidin-conjugated horse reddish peroxidase 100 ㎕씩 가한 다음, 25℃에서 반응시킨 후 세척용 완충액으로 3회 세척하였다. 여기에 기질(3,3',5,5'-tetramethyl benzidine)을 100 ㎕ 첨가하여 25℃에서 30분간 발색 반응시킨 후 1N sulfuric acid를 100 ㎕씩 가하여 반응을 중단시켰다. 이것을 ELISA reader(Molecular device, USA)를 이용하여 450 nm에서 흡광도를 측정하여 표준 곡선을 얻고, 이 곡선을 이용하여 실시 예 1 내지 4에서 제조한 조성물에 기인하여 세포로부터 분비된 IL-1α 함량을 결정하였다.

(4) Tumor necrosis factor 분비능

시료가 거식 세포의 tumor necrosis factor(TNF) 생성능을 증진시키는지를 확인하기 위하여 IL-1α 분비능 측정에서와 동일한 절차를 수행하고, ELISA를 이용하여 TNF 분비능을 분석하였다. 구체적으로는, microtiter plate의 well에 표준 TNF 또는 배양한 시료액 및 biotinylated anti-mTNF을 50 ㎕씩 주입하고, 25℃에서 2시간 동안 배양하였다. 배양한 plate를 세척용 완충액으로 5회 세척하고, HRP-conjugated anti-mTNF을 100 ㎕씩 가한 다음, 25℃에서 30분 배양하였다. 세척용 완충액으로 5회 세척하였다. 여기에 기질(3,3',5,5'-tetramethyl benzidine)을 100 ㎕ 첨가하고, 25℃에서 30분 동안 발색 반응시킨 다음, 1N sulfuric acid를 100 ㎕씩 가하여 반응을 중단시켰다. ELISA reader를 이용하여 450 nm에서 흡광도를 측정하여 표준 곡선을 얻고, 이 곡선을 이용하여 실시예 1 내지 4에서 제조한 조성물에 기인하여 세포로부터 분비된 TNF 함량을 계산하였다.

하기 표 5는 위와 같은 절차에 따라 결정된, 실시예 1 내지 4에서 제조한 정제 형태의 우유 조성물의 면역 활성을 보여주는 것이다.

표 5

Claims

조성물의 총 중량에 대하여, 탈지분유 50 내지 70 중량％, 가시오갈피 추출 분말 3.0 내지 7.0 중량％, 더덕 추출 분말 1.0 내지 3.0 중량％, 양송이 버섯 추출 분말 또는 양송이 버섯 분말 1.0 내지 3.0 중량％ 및 맛타리 버섯 추출 분말 또는 맛타리 버섯 분말 1.0 내지 3.0 중량％를 함유하며, 표면에 하이드록시프로필메틸셀룰로오스 코팅을 갖는, 면역 활성을 향상시키는 정제 형태의 우유 조성물.
제1항에 있어서, 조성물의 총 중량에 대하여, 초유 분말 0 내지 10.0 중량％, 영지 버섯 추출 분말 0.5 내지 2.0 중량％, 상황 버섯 추출 분말 0.5 내지 2.0 중량％, 인삼 분말 3.0 내지 7.0 중량％, 락토페린 0.2 내지 1.0 중량％, 글루타민 펩타이드 5.0 내지 15.0 중량％, 유당 1.0 내지 5.0 중량％, 결정 올리고당 1.0 내지 3.0 중량％를 추가로 함유하는 것인, 정제 형태의 우유 조성물.
(1)가시오갈피 추출 분말, 더덕 추출 분말, 양송이 버섯 추출 분말 또는 양송이 버섯 분말 및 맛타리 버섯 추출 분말 또는 맛타리 버섯 분말에, 초유 분말, 영지 버섯 추출 분말, 상황 버섯 추출 분말, 인삼 분말, 락토페린, 글루타민 펩타이드, 유당, 결정 올리고당 및 이들의 혼합물로 구성되는 군에서 선택되는 1종 이상의 성분을 첨가하거나 또는 첨가하지 않고, 10 내지 20℃에서 20 내지 60분 동안 호바트 믹서기로 혼합하는 단계,

(2) 상기 단계 (1)에서 얻어지는 혼합물에 조성물의 총 중량에 대하여 탈지분유 50 내지 70 중량％를 첨가하여 균일하게 혼합하는 단계,

(3) 상기 단계 (2)에서 얻어지는 혼합물을 5 내지 15℃에서 2 내지 5시간 동안 숙성시키는 단계,

(4) 상기 단계 (3)에서 얻어지는 숙성 혼합물을 정제 형태로 제조하는 단계 및

(5) 상기 단계 (5)에서 얻어지는 정제를 하이드록시프로필메틸셀룰로오스 3％ 용액으로 코팅하는 단계를 포함하는,

제1항 또는 제2항에 따른 정제 형태의 우유 조성물의 제조 방법.