KR20050068588A - 가려움증 완화 화장료 조성물 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 활성 성분으로서 테트란드린(tetrandrin) 또는 테트란드린-함유 추출물을 포함함을 특징으로 하는 가려움증 완화 화장료 조성물에 관한 것이다. 보다 자세하게는, 본 발명은 가려움의 주된 중재자인 물질 P(Substance P)-NK1수용체의 결합을 방해하거나(고) T 세포의 활성화를 억제하여 가려움증, 예를 들면 민감성 피부질환에 따른 가려움증이나, 두피 가려움증, 알러지에 의한 가려움증등을 억제 및/또는 완화시키고자 테트란드린(tetrandrin) 또는 테트란드린-함유 추출물을 활성 성분으로 포함하는 화장료 조성물에 관한 것이다.

Description

가려움증 완화 화장료 조성물{Anti-itching Cosmetic Composition}
본 발명은 가려움증 완화 화장료 조성물에 관한 것이다. 보다 자세하게는, 본 발명은 가려움의 주된 중재자인 물질 P(Substance P)-NK1수용체의 결합을 방해하거나(고) T 세포의 활성화를 억제하여 가려움증, 예를 들면 민감성 피부질환에 따른 가려움증이나, 두피 가려움증, 알러지에 의한 가려움증등을 억제 및/또는 완화시키고자 테트란드린(tetrandrin) 또는 테트란드린-함유 추출물을 활성 성분으로 포함하는 화장료 조성물에 관한 것이다.
가려움증이란 긁고 싶어하는 불쾌감을 유발하는 피부의 상태를 일컫는 것으로 가벼운 접촉, 온도변화, 스트레스 등의 자극이나 화학적, 물리적, 전기적인 자극으로도 유발할 수 있다. 또한, 아토피, 건선, 접촉성 피부염과 같은 피부질환자나 민감성 피부 보유자의 증상으로 동반된다. 민감성 피부 보유자란 피부 병변에 관한 어떠한 임상적 또는 조직학적 증상 없이 피부장애를 경험할 잠재력을 가진 사람들로써 화장용품이나 비누, 샴푸와 같은 세정제의 사용 후, 눈으로 드러나는 자극현상 이외에도, 감각적으로 가려움을 호소 또는 제품에 불평하곤 한다.
또한 아토피, 건선, 접촉성 피부염과 같이 외부 알러젠에 의해 발생하는 피부 질환 및 가려움은 신체내 특정 면역세포들(T 세포, 대식세포 등)을 활성화시키며 이로 인해 여러 싸이토카인(TNF-a, IL-2등) 및 가려움의 중재자인 히스타민의 분비를 유도하여 가려움이 일어나는 것으로 알려져 있다(Br J Haematol, 1996; Cancer Biother, 1995).
최근 들어 이러한 가려움에 대한 신경생리학적 접근 및 면역학적 연구가 활발히 진행되어 가려움은 C-섬유 말단의 유해 감수기를 통해 무수구심신경으로 전달되며, C-섬유 말단에서 분비되는 푸루리토젠(pruritogen)으로써 물질 P, CGRP등은 각각의 수용체와 결합하여 가려움을 촉발하는 것으로 알려지고 있다(Kuraish et al, J Pharmacol Exp Ther. 1998 , p270-275). 또한 이들 푸루리토젠들은 비만세포(mast cell)의 활성화를 이루어 가려움의 또 다른 중재자인 히스타민의 방출을 유도하는 증거가 있다(Morohashi et al, Arch Dermatol Res. 2000, p418 421).
또한 과민성 피부염의 경우, 가려움은 항 히스타민제에 의해서 억제되지 않지만 면역억제제인 사이클로스포린 A에 의해서 억제된다는 보고로 보아 가려움의 발생엔 자가면역이상도 관여한다고 볼 수 있다.
현재 가려움을 치료하기 위한 요법들은 국소 및 전신약제, 예를 들면 스테로이드, 항 히스타민제, 면역억제제등이 있으나, 경구투여로 인한 졸림, 면역력 저하 및 국소투여에 따른 피부에 대한 안전성 면에서나 피부용 조성물 배합시의 안정성 면에서 대부분 문제점을 안고 있어 그 사용이 제한되고 있는 실정으로(김창종, 병태심리학, 한림상사, 1988, p61-69) 인체에 부작용이 적으며 자극완화 효과가 있는 물질이 연구, 개발되고 있는 중이다(Yakhak Hoeji, Arch. Pharm Res 21, 1998, p406-410).
본 발명의 목적은 현재 가려움억제를 위해 사용되고 있는 스테로이드, 항 히스타민제들의 문제점을 극복하고, 인체 안전성이 우수하며 가려움증을 억제 또는 완화할 수 있는 테트란드린 또는 테트란드린-함유 추출물을 함유한 화장료 조성물을 제공하려는 것이다.
본 발명에 따른 가려움증 억제 및 완화를 위한 활성 성분으로 함유되는 테트란드린(Terandrine)은 하기 일반식 1로 표시된다.
[일반식 1]
테트란드린(Tetrandrine)은 새모래덩굴과의 낙엽 덩굴나무 분방기(Stephania tetrandria S. Moore) 또는 함바기(Stephania japonica Miers)의 뿌리 추출물의 알카로이드 종류의 한 성분이다. 테트란드린을 포함한 분방기나 함바기 추출물의 약리작용은 민간에서 아픔멎이 및 진경작용이 있는 것으로 알려져 있다(약초의 성분과 이용, 최옥자, 일월서각, 1999). 또한, 분방기 추출물은 대한민국특허공개번호 제10-1996-0000242호에서 인터루킨-6의 과잉생산을 억제하여 류마티스 관절염, 간경변, 건선 피부병, 다발성 골수종, 카디악 믹소마, 규페증 또는 에이즈와 같은 면역질환을 치료할 수 있는 것으로 개시되어 있다. 한편, 대한민국특허공개번호 제10-2002-0095616호에 따르면 새모래덩굴 추출물 또는 함바기 추출물이 가려움증 및 염증을 예방하는 효과가 있음이 개시되어 있다. 그러나, 이 특허 원에는 테트란드린과 가려움증 완화 효과의 연관성에 관하여 전혀 언급이 없다.
본 발명자들은 테트란드린 또는 테트란드린-함유 추출물의 가려움억제 효과를 알아보기 위해 SP-NK1결합 방해 시험, T 세포증식 억제력시험과 가려움 유발 동물 행동 모델 시험을 하였으며 그 결과 테트란드린 또는 테트란드린을 유효성분으로 포함하는 추출물이 가려움억제 효과가 매우 우수함을 알아내어 본 발명을 완성하게 되었다.
본 발명에서 활성 성분으로 사용되는 테트란드린 또는 테트라드린-함유 추출물은 본 발명에 따른 방법에 의해 얻을 수 있다. 자세하게는, 분방기 또는 함바기(Stephania japonica Miers)의 뿌리를 건조시키고, 건조된 뿌리를 잘게 분쇄한 후 메탄올로 환류 냉각기가 달린 추출기에서 50℃ 내지 100℃로 1 내지 5시간 가열 추출한다. 이 결과물을 여과포로 여과한 후 잔사를 같은 방법으로 1회 이상 더 추출한 후, 추출액을 합하여 감압 농축한 다음 동결건조 또는 분무 건조하여 건조 추출물을 얻는다. 상기 건조 추출물을 용매 분획을 통하여 핵산 및 클로로포름 분획을 제거하고, 얻은 분획을 수포화된 부탄올로 3회 분획하여 얻은 부탄올 분획을 실리카겔 컬럼크로마토그라피와 고속액체크로마토그라피(HPLC)로 정제한 다음, 재결정 방법을 이용하여 테트라드린을 수득한다. 상기 분말화 된 소재의 추출 용매로는 정제수, 메탄올, 에탄올, 프로판올, 부탄올, 에틸렌글리콜, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸렌글리콜, 에틸아세테이트, 아세톤으로 구성된 군에서 선택된 1종 또는 2종 이상의 혼합용매를 사용할 수 있다.
이러한 천연소재 추출물 및 유효 단일성분은 두피 세정 조성물, 저자극성 화장료료, UV등으로부터의 피부보호제, 전신세정제, 세안제, 비누 및 크림, 일회용 기저귀, 아토피성 유아 제품 등의 당업자에게 알려진 통상적인 조성물에 첨가 할 수 있으며 첨가량은 조성물 총 중량에 대하여 0.0001 ~ 10중량% 함유되는 것이 바람직하다. 10중량%를 초과하는 경우에는 조성물 제조시 안정성이 저하될 수 있으며, 0.0001%미만의 경우에는 그 작용이 약할 수 있다.
조성물을 제형하기 위해서는 화장료 기술 분야에서 통상적으로 사용되고 있거나 잘 알려져 있는 장치 및 방법 가운데 어느 것을 사용하여서도 무방하다.
이하 본 발명을 구체적으로 설명하기 위해 실시예를 들어 상세하게 설명하기로 한다. 그러나 본 발명에 따른 실시예들은 여러 가지 다른 형태로 변형될 수 있으며, 본 발명의 범위가 아래에서 상술하는 실시예 들에 한정되는 것으로 해석되어져서는 안된다.
[제조실시예 1]
분방기(Stephania tetrandria S. Moore) 추출물의 제조
먼저 건조된 분방기의 뿌리를 잘게 분쇄한 후, 4킬로그램(kg) 메탄올로 환류 냉각기가 달린 추출기에서 80?로 4시간 가열 추출하였다. 이에 따른 얻은 추출물을 여과포로 여과한 후 잔사를 같은 방법으로 1회 이상 더 추출한 후, 추출액을 합하여 감압 농축한 다음 동결건조 또는 분무 건조하여 건조 추출물 42그램(g)을 수득하였다.
[제조실시예 2]
테트란드린의 추출
상기 제조실시예 1에서 수득한 건조 추출물을 부탄올 분획을 통하여 핵산 및 클로로포름 분획을 제거하고, 얻은 분획을 수포화된 부탄올로 3회 분획하여 얻은 부탄올 분획 24g을 실리카겔 컬럼크로마토그라피와 고속액체크로마토그라피로 정제한 다음, 재결정 방법을 이용하여 얻은 테트라드린을 질량분석 및 핵자기공명 스펙트럼으로 그 구조를 확인하였다.
[실험실시예1]
물질 P-NK1 경쟁 결합 방해 시험
상기 제조실시예 1 및 2에 따라 각각 얻은 테트란드린-함유 분방기 추출물 또는 테트란드린을 물질 P의 수용체인 NK1이 많이 존재하는 인간세포U373-MG을 이용하여 물질 P와 경쟁적 결합정도를 알아보았다. 설명하면, U373-MG세포를 24웰 플래잇트에 접종 후 24시간 동안 배양하였다. 70~80% 자란 상태의 세포는 0.1%FBS/RPMI 1640으로 교체한 후, 3nM 3H-SP를 실시예1 내지 8과 같이 1내지 200ug/ml농도의 시험물질과 동시에 1시간 동안 처리하였다. 비교예로는 시험물질의 에탄올만 처리하였다. 그 후 PBS로 깨끗이 세척한 후 5% SDS/0.01N HCl을 이용하여 세포를 용해시키고, 액체섬광계수기(LSC)를 이용하여 용해액의 방사성 정도를 측정하였다. 이 측정값은 대조군에 대한 상대적인 물질 P 결합 억제율(%)로 계산하여 그 결과를 하기 표1에 나타냈다.
(N=3)
시 료 명 결합 억제율(%)
비교예 1(에탄올 용매) 0
실시예 1(분방기 추출물-최종농도 10ug/ml) 18
실시예 2(분방기 추출물-최종농도 50ug/ml) 29
실시예 3(분방기 추출물-최종농도 100ug/ml) 50
실시예 4(분방기 추출물-최종농도 200ug/ml) 80
실시예 5(테트란드린-최종농도 1ug/ml) 12
실시예 6(테트란드린-최종농도 5ug/ml) 34
실시예 7(테트란드린-최종농도 10ug/ml) 52
실시예 8(테트란드린-최종농도 50ug/ml) 86
표1을 참조하면, 테트란드린 또는 분방기 추출물은 비교예1과 비교할 때 농도 의존적으로 NK1 수용체에 대한 물질 P의 경쟁적 결합 저해력이 있음을 알 수 있다.
실험실시예 2
T 세포증식 억제력시험
상기 제조실시예 1 및 2에 따라 각각 얻은 테트란드린-함유 분방기 추출물 또는 테트란드린을 외부 알러젠등에 의해서 증식 되는 T세포에 대한 증식 억제력을 알아보았다.
설명하면, Balb/c 쥐의 비장에서 Ficoll-구배법을 이용하여 T 세포를 분리하였다. 분리한 T세포는 시험물질 1 내지 50ug/ml, Con A(1ug/ml)와 함께 96웰 플래잇트에서3일동안 배양하였으며, 배양 끝나기 16시간 전에 3H(1uCi/well)을 처리하였다. 비교예는 에탄올 용매 처리, 그리고 덱사메타손 0.1ug/ml 및 1ug/ml으로 처리 하였다. 3일 간 배양이 끝난 세포는 액체섬광계수기(LSC)를 이용하여 세포 용해액의 방사성 정도를 측정하였다. 이 측정값은 무 처리군에 대한 상대적인 테트란드린 또는 분방기 추출물의 T 세포 증식 억제률(%)로 계산하여 그 결과를 하기 표2에 나타냈다.
(N=3)
시 료 명 T 세포 증식 억제율(%)
비교예 2(에탄올 용매) 0
비교예 3(덱사메타손-최종농도 0.1ug/ml) 53
비교예 4(덱사메타손-최종농도 1ug/ml) 100
실시예 9(분방기 추출물-최종농도 10ug/ml) 22
실시예 10(분방기 추출물-최종농도 50ug/ml) 56
실시예 11(분방기 추출물-최종농도 100ug/ml) 100
실시예 12(분방기 추출물-최종농도 200ug/ml) 100
실시예 13(테트란드린-최종농도 1ug/ml) 35
실시예 14(테트란드린-최종농도 5ug/ml) 56
실시예 15(테트란드린-최종농도 10ug/ml) 89
실시예 16(테트란드린-최종농도 50ug/ml) 100
표2을 참조하면, 테트란드린 또는 분방기 추출물은 비교 대조군과 비교할 때 농도 의존적으로 T세포 증식 억제력이 있음을 알 수 있다.
제형실시예
실시예 17 - 20
이하에서는 테트라드린 또는 분방기 추출물을 샴푸, 크림, 에센스 등에 첨가하여 가려움완화 조성물을 제조하고 마우스를 대상으로 가려움 억제효과를 살펴본다.
표3에 기재된 조성비율로 혼합한 후. 이 혼합물의 온도가 60℃가 될 때까지 가온하여 균일하게 용해시킨 다음 40℃까지 냉각시켰다. 여기에 색소(청색 1호), 파라옥시안식향산에스텔, 향료 및 구연산을 투입하여 혼합한 후 실온으로 냉각하여 샴푸를 제조하였다.
비교예 5
테트란드린 또는 또는 분방기 추출물을 혼합하지 않은 것을 제외하고는 실시예 17 내지 20과 동일한 방법으로 샴푸를 제조하였다.
원료명(중량%) 실시예 17 실시예 18 실시예 19 실시예 20 비교예 5
라우릴황산나트륨 20.0 20.0 20.0 20.0 20.0
폴리옥시에틸렌 라우릴황산나트륨(30%) 20.0 20.0 20.0 20.0 20.0
야자유지방산 디에탄올아미드 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0
프로필렌글리콜 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0
분방기 추출물(%) 0.5 2 - - -
테트란드린(%) - - 0.1 1 -
아연피리티온 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
피록톤올아민 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
파라옥시안식향산에스텔 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2
색소(청색 1호) 적량 적량 적량 적량 적량
향료(조향향 SKP-3473 : Haesegawa) 적량 적량 적량 적량 적량
구연산 적량 적량 적량 적량 적량
정제수 To 100 To 100 To 100 To 100 To 100
실시예 21 - 24
표4에 기재된 조성비율로 혼합기에서 잘 유화시키고 탈기, 여과, 냉각하여 크림 조성물을 제조하였다. 그 이외의 첨가제인 방부제, 향료, 색소 등을 첨가한 후, 작은 크기의 유성성분이 존재하도록 수중유형(O/W)으로 제조하였다.
비교예 6
테트란드린 또는 분방기 추출물을 혼합하지 않은 것을 제외하고는 실시예21 내지 24와 동일한 방법으로 크림을 제조하였다.
원료명(중량%) 실시예 21 실시예 22 실시예 23 실시예 24 비교예 6
스테아린산 8.0 8.0 8.0 8.0 8.0
스테아릴알코올 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0
스테아린산부틸 6.0 6.0 6.0 6.0 6.0
프로필렌글리콜 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0
분방기 추출물 0.5 2 - - -
테트란드린 - - 0.1 1 -
모노스테아린산글리셀린 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0
수산화칼륨 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4
색소 적량 적량 적량 적량 적량
향료 적량 적량 적량 적량 적량
방부제 적량 적량 적량 적량 적량
정제수 To 100 To 100 To 100 To 100 To 100
실시예 25 - 28
표5에 기재된 조성비율로 에센스를 제조하였다.
비교예 7
테트란드린 또는 분방기 추출물을 혼합하지 않은 것을 제외하고는 실시예25 내지 28와 동일한 방법으로 에센스을 제조하였다.
원료명(중량%) 실시예 25 실시예 26 실시예 27 실시예 28 비교예 7
프로필렌글리콜 10.0 10.0 10.0 10.0 10.0
글리세린 10.0 10.0 10.0 10.0 10.0
히알루론산나트륨 수용액(1%) 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0
분방기 추출물 0.5 2 - - -
테트란드린 - - 0.1 1 -
에탄올 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0
폴리옥시에틸렌경화 피마자유 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0
향료 적량 적량 적량 적량 적량
정제수 To 100 To 100 To 100 To 100 To 100
실험실시예 3
가려움 유발 동물 행동 모델 시험
사토(Satoh)등의 상기원고에 기술된 방법은 본 발명에서 개발된 마우스 모델의 원형을 제시하였다.(Satoh et al, 1995, Eur J Pharmacol, p229 233)
간단히, 23g 내지 26g 중량의 10마리의 수컷 ICR 마우스로 된 군을 시험에 사용하였다. 이들을 23℃ 내지 25℃로의 온도 조절 하에 수용하였다. 음식물 및 물은 자유로이 먹을 수 있게 하였다.
가려움 유발 동물 행동 모델 시험을 위해서 테트란드린 또는 분방기 추출물을 실시예 17 내지 28와 같이 0.1 내지 2% 함유하여 처리하였다. 또한 비교예 5 내지 7과 같이 테트란드린 또는 분방기 추출물을 포함하지 않은 각각의 제형을 대조군으로 처리하였다.
긁기를 유발시키기 위하여, 사람에게 가려움 감각을 일으키는 것으로 알려진 Compound 48/80을 사용하였다. 이때 Compound 48/80은 멸균생리 식염수에 용해 시켰다.
먼저 마우스의 목 뒤에 용매 또는 시험물질 100ul을 도포하고 30분 후 Compound 48/80(2mg/ml: 100ug/site) 50ul를 목 뒤에 피내 주사 한다. 이 후 30분간 마우스의 움직임을 관찰하여, 뒷다리로 주사한 부위를 긁는 횟수를 헤아린다.
이 자료는 평균과 표준편차를 계산하여 분석하였으며, 평균값의 통계적 차이는 스튜던트 티-테스트(student t-test)를 사용해 결정하였다.
그 결과는 하기 표6 에 나타냈다.
시험물질 가려움 억제(%) 시험물질 가려움 억제(%)
실시예 17 23 실시예 21 21
실시예 18 55 실시예 22 59
실시예 19 33 실시예 23 38
실시예 20 63 실시예 24 68
실시예 25 20 비교예 5 0.2
실시예 26 47 비교예 6 0.1
실시예 27 42 비교예 7 0.1
실시예 28 60
상기 표6에 나타난 바와 같이 샴푸, 크림, 에센스 제형 내 테트란드린 또는 분방기 추출물의 함유량이 많아질수록 마우스에서 유발시킨 가려움의 억제율이 높아짐을 알 수 있다. 또한 상기 제형의 비교군들에서는 가려움의 억제력이 없어 테트라드린 또는 테트라드린-함유 분방기 추출물의 가려움 억제력을 알 수 있다.
이와 같이 본 발명에 따른 테트란드린 또는 테트라드린-함유 추출물을 함유하는 가려움 억제 완화용 조성물은 가려움 유발 인자인 물질P의 수용체에 대한 결합을 방해하고, 외부 알러젠에 의해 활성화 된 T세포의 증식을 억제시킴으로써 가려움 개선에 효과적이다. 또한 피부내에 어떤 부작용도 나타나지 않으므로 안전하게 사용될 수 있다.

Claims (7)

  1. 테트란드린을 활성 성분으로 함유하는 것을 특징으로 하는 가려움 억제 또는 완화 화장료 조성물.
  2. 제 1항에 있어서, 상기 테트란드린의 함량이 조성물 전체중량에 대하여 0.0001 내지 10 중량%인 것을 특징으로 하는 가려움 억제 또는 완화 화장료 조성물.
  3. 제 2항에 있어서, 상기 조성물은 두피 세정 조성물, 저자극성 화장료, 전신세정제, 세안제, 비누, 피부 보호제, 크림 및 아토피성 유아 제품의 군으로부터 선택된 어느 하나의 제형으로 이루어진 것을 특징으로 하는 가려움 억제 또는 완화 화장료 조성물.
  4. 제 1항에 있어서, 테트란드린이 분방기 또는 함바기의 뿌리를 건조시키고, 건조된 뿌리를 잘게 분쇄한 후, 메탄올로 환류 냉각기가 달린 추출기에서 50? 내지 100?로 1 내지 5시간 가열 추출한 다음, 이 결과물을 여과포로 여과한 후, 잔사를 같은 방법으로 1회 이상 더 추출한 후, 추출액을 합하여 감압 농축한 다음, 동결건조 또는 분무 건조하여 건조 추출물을 얻고, 상기 건조 추출물을 유기 용매 분획을 통하여 핵산 및 클로로포름 분획을 제거하고 얻은 분획을 수포화된 부탄올로 3회 분획하여 얻은 부탄올 분획을 실리카겔 컬럼크로마토그라피와 고속액체크로마토그라피(HPLC)로 정제한 다음, 재결정하여 수득된 것임을 특징으로 하는 가려움 억제 또는 완화 화장료 조성물.
  5. 분방기 또는 함바기의 뿌리를 건조시키고, 건조된 뿌리를 잘게 분쇄한 후 메탄올로 환류 냉각기가 달린 추출기에서 50℃ 내지 100℃로 1 내지 5시간 가열 추출한 다음, 이 결과물을 여과포로 여과한 후 잔사를 같은 방법으로 1회 이상 더 추출한 후, 추출액을 합하여 감압 농축한 다음 동결건조 또는 분무 건조하여 얻은 테트란드린-함유 추출물을 활성 성분으로 함유하는 것을 특징으로 하는 가려움 억제 또는 완화 화장료 조성물.
  6. 제 5항에 있어서, 상기 테트란드린-함유 추출물의 함량이 조성물 전체중량에 대하여 0.0001 내지 10 중량%인 것을 특징으로 하는 가려움 억제 또는 완화 화장료 조성물.
  7. 제 5항에 있어서, 상기 조성물이 두피 세정 조성물, 저자극성 화장료료, 전신세정제, 세안제, 비누, 피부 보호제, 크림 및 아토피성 유아 제품의 군으로부터 선택된 어느 하나의 제형으로 이루어진 것을 특징으로 하는 가려움 억제 또는 완화 화장료 조성물.
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