KR101831876B1 - 이소세코타나파솔라이드를 유효성분으로 함유하는 아토피 피부염 개선용 화장료 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 화학식 [1]로 표시되는 이소세코타나파솔라이드(Isosecotanapartholide)를 유효성분으로 함유하는 아토피 피부염 개선용 화장료 조성물에 관한 것이다.
화학식 [1]

본 발명에 따르면, 본 발명의 천연물 유래 화합물 이소세코타나파솔라이드(Isosecotanapartholide)를 함유한 화장료 조성물의 경우 세포독성이 발견되지 않아 안전성이 우수하고, 아토피 피부염의 근본적 원인이 되는 면역 불균형에 의한 비정상적 신호전달의 최상위 단백질인 TSLP(thymic stromal lymphopoietin) 사이토카인 저해능이 우수하며 HaCaT 세포에서 MDC 및 TARC의 캐모카인 발현 저해능이 우수하므로, 아토피 피부를 개선 시킬 수 있다.

Description

이소세코타나파솔라이드를 유효성분으로 함유하는 아토피 피부염 개선용 화장료 조성물{Cosmetic composition for imporving atopic dermatitis comprising isosecotanapartholide}

본 발명은 아토피 피부염 개선용 화장료 조성물에 관한 것으로, 더욱 구체적으로 이소세코타나파솔라이드(Isosecotanapartholide)를 유효성분으로 함유하는 아토피 피부염 개선용 화장료 조성물에 관한 것이다.

아토피 피부염(Atopic dermatitis)은 만성적이며 재발성이 높은 염증성 피부질환이며, 피부의 부스럼, 습진, 간지러움, 염증 반응을 통해 쉽게 아토피를 진단할 수 있는 반면 이를 유발하는 병리학적, 유전학적 메커니즘은 아직까지 정확히 밝혀지지 않았다. 최근 2~30년 동안 아토피는 시골이나 개발도상국에 비해 특히 서구화된 나라에서 그 증가율이 크게 증가되고 있는데 이는 hygiene hypothesis(위생가설)에 의해 뒷받침되고 있다. 이 가설은 면역계의 성장을 위해서는 세균을 포함한 외부환경으로부터 자극이 필요하며 그렇지 못할 경우 면역계에 문제가 생겨 알레르기 등과 같은 질환이 발생한다는 것이다[Yazdanbakhsh,M., P.G. Kremsner, and R.van Ree, Allergy, Parasites, and the hypothesis Science, 296(5567): 490-494, 2002].

아토피는 민감성이 높은 특정 유전자, 환경, 피부 외벽의 손상 정도, 면역적인 요인 등이 영향을 미치는 복합적 면역 반응이다. 아토피의 주된 증상은 어린 아이들의 경우 얼굴 부분의 부스럼과 습진, 어른들의 경우 관절이 굽혀지는 부분의 습진을 들 수 있으며 무엇보다도 간지러움 증상이 심각하여 환자의 사회적 활동에 큰 지장을 초래하며 그에 따라 아토피 피부염은 환자에게 질병에 따른 육체적 고통 뿐만 아니라 심각한 수준의 정신적 고통을 더한다.

최근 연구결과에 따르면 아토피 피부염의 근본적 원인이 되는 면역 불균형은 다양한 생물학적 신호 전달의 결과물이고 이러한 비정상적 신호전달의 최상위 단백질이 바로 TSLP(thymic stromal lymphopoietin) 사이토카인임을 밝혀내었다. 알러젠(allergen)이 몸에 침투되면 TSLP 등의 물질이 수지상 세포를 자극하여 반응을 하게 되는데, 이 과정에서 아토피 피부염의 증상이 나타나는 것이다. 구체적으로, 아토피피부염에서 유전 및 여러 환경 요인에 의해 피부장벽이 손상되면 외부로부터 침투한 각종 알레르겐에 쉽게 노출되고, 각질형성세포에서는 IL-7과 유사한 사이토카인인 TSLP를 분비한다. TSLP는 알레르기 염증반응의 ‘master switch’라고도 불리는데 비만세포, 호염구, 호산구 등 피부 염증을 일으키는 중요한 세포에 영향을 주고, 선천면역 및 후천면역 반응 모두에 영향을 주며, Th2 면역반응을 유도하여 아토피피부염의 병인에 매우 중요한 요소로 인식되고 있다[Ziegler SF, Artis D. Sensing the outside world: TSLP regulates barrier immunity. Nat Immunol 2010;11:289-293]. 아토피피부염 환자의 피부와 혈액에서는 TSLP가 증가 되는데, 알레르겐에 의해 각질형성세포의 PAR-2 발현이 증가 되면 표피에서의 TSLP 분비가 증가되고 이로 인하여 Th2 염증반응이 우세하게 일어나서 아토피피부염의 임상양상으로 나타난다[Lee EB, Kim KW, Hong JY, Jee HM, Sohn MH, Kim KE. Increased serum thymic stromal lymphopoietin in children with atopic dermatitis. Pediatr Allergy Immunol 2010;21: e457-e460]. 한편으로는 TSLP 유전자에 돌연변이가 있을 경우에 TSLP 분비가 더 증가 되고 Th2 면역반응이 더 심하게 나타난다[Wu WH, Park CO, Oh SH, Kim HJ, Kwon YS, Bae BG, Noh JY, Lee KH. Thymic stromal lymphopoietin-activated invariant natural killer T cells trigger an innate allergic immune response in atopic dermatitis. J Allergy Clin Immunol 2010;126:290-299e4]. 또한 알레르기 행진에서 아토피피부염 환자가 천식이나 알레르기 비염으로 진행하는데 중요한 매개자로 TSLP가 거론되고 있어서 TSLP는 아토피피부염의 발생을 예방하는 타깃인 동시에 알레르기 행진으로의 진행을 막는 치료적 타깃으로 생각되고 있다[Zhang Z, Hener P, Frossard N, Kato S, Metzger D, Li M, Chambon P. Thymic stromal lymphopoietin overproduced by keratinocytes in mouse skin aggravates experimental asthma. Proc Natl Acad Sci U S A 2009;106:1536-1541].

한편 아토피성 피부염 환자에서 케모카인(chemokine)인 MDC(macrophage-derived chemokine)와 TARC(thymusand activationregulated chemokine)의 혈청 농도가 현저히 증가한다는 보고가 있고(Hijnen et. al., J. Allergy Clin. Immunol. 113(2) 334-340), 아토피성 피부염의 치료 물질로 사용되는 사이크로스포린 A나 코르티코스테로이드를 아토피성 피부염 환자에게 투여하였을 때는 MDC 및 TARC의 혈청 농도가 감소한다는 보고가 있으며(Y. Shimada et al., J. Dermatol. Sci., 34, 201-208, 2004), 또 시험관내 실험에서 HaCaT 세포에 INF-γ나 TNF-α를 처리하였을 때 MDC 및 TARC가 다량 발현되는데 이러한 발현을 억제할 수 있는 물질은 아토피성 피부염 치료제로 사용될 수 있음이 제시된바 있다(Horikawa et. al., Int. Immunol., 14(7) 767-773, 2002). 따라서 MDC나 TARC과 같은 캐모카인의 발현을 억제하는 물질 등은 아토피성 피부염 개선제로 활용될 수 있다.

아토피의 주된 특징 중 하나는 피부장벽(skin barrier)의 기능장애(dysfunction)와 경표피 수분손실(transepidermal water loss; TEWL) 로 인한 건조 증상이며, 주로 부스럼과 염증 반응을 동반한다는 것이다. 따라서 규칙적인 피부 연화로션이나 보습제 사용은 아토피 치료에 있어서 일반적으로 사용되고 있는 방법이다. 또 다른 방법으로 초기 증상의 아토피 치료에 있어 glucocorticosteroid는 가장 효과적이라 알려져 있으며, 널리 쓰이는 치료법이다. 이 방법은 항염증 작용(anti-inflammatory effect)이 있을 뿐만 아니라 S. aures(Staphylococcus aures)의 콜로니화(colonization)를 막아 2차적인 감염에 의한 아토피 증상이 심화되는 것을 방지하기도 한다. 국소적인 steroid 사용은 초기의 습진 증상을 치료하게 위해 단기간 사용되는 것이 좋으며, 피부 연화 로션 등과 함께 사용하면 그 효과가 훨씬 좋다.

그리고 피메크로리무스(pimecrolimus)와 타크로리무스(tacrolimus)는 면역조절 효과(immunomodulatory effect)가 있는 칼시뉴린 억제제(calcineurin inhibitor)로서 항염증 치료제로 널리 쓰이고 있다. 이는 steroid 성분이 없기 때문에 얼굴과 같은 민감한 부위에 효과적으로 쓰이고 있으나 단점이라면 일시적인 따가움 증상을 느낄 수 있다는 것이다.

또한 아토피 환자의 피부에는 S. aures가 많이 증식하고 있기 때문에 여기서 분비되는 슈퍼항원(superantigen)이 아토피의 증상을 더욱 심화시킨다. 따라서 국소적 항균성 연고(topical antimicrobial ointment)는 이 박테리아의 증식을 막아 아토피 증상을 완화시킨다. 이 방법은 steroid 제품과 함께 사용 시 2차적인 감염을 막을 수 있어 더 효과적이나 장기간 이 방법을 사용 시 저항성이 생기기 때문에 적당량을 단기간 사용하는 것이 좋다. 그리고 calcineurin dependent pathway를 막는 시클로스포린 A(cyclosporine A)가 IL-2, IFN-gamma 와 같은 pro-inflammatory cytokine의 발현을 감소시키는 역할을 하여 경구용으로 사용되고 있다. 효과적인 아토피 완치 능력이 있음에도 불구하고 신장에 독성을 가져다줄 수 있기 때문에 이 방법은 심각한 난치병 환자들에게만 사용되는 것이 적당하다.

또한 기존의 아토피 피부염 치료제는 칼시뉴린(calcineurin)을 억제하여, 사이토카인(cytokine) 발현을 줄이는 시클로스포린(cyclosporin)과 FK506 등이 개발되어 사용되고 있으나, 이들은 장기 사용 시 면역체계를 약화시켜 이차 감염증의 저항력을 떨어뜨리며, 피부 가려움 및 소양증을 완화시키는 steroid 계열의 외용 치료제들도 소아가 장기간 사용할 경우 면역력이 감소 되고 성장이 저해되는 등의 문제점이 있다.

아자티오프린(Azathioprine)은 퓨린 뉴클레오티드 합성(purine nucleotide synthesis)과 신진대사(metabolism)에 영향을 미쳐 피부 질환에 효과적인 대표적인 면역 억제제(immune suppressor)이다. 다른 방법으로는 항히스타민제(antihistamines), 코르티코스테로이드(corticosteroid)와 함께 사용하면 아주 효과적인 광선 치료법(phototherapy)이 있다. 이는 280-320㎚의 UVB, 340-400㎚인 UVA 파장을 전신에 쬐어 주는 방법으로 어른에게 있어서 아주 효과적이라는 보고가 많이 있으나 어린아이들의 경우는 아직 피부가 많이 약하기 때문에 사춘기 이후에만 사용이 가능하다.

이처럼 현재의 치료방법은 치료제가 일시적 병변의 완화와 부작용이 많은 치료제들이다. 따라서 이러한 부작용이 없으면서 효능이 우수한 치료제 개발이 요구되고 있다.

현재 많은 국내의 학교 및 바이오기업 연구진들에 의해 아토피 피부염을 개선하기 위한 개선제들이 연구 및 제품화되고 있음에도 불구하고 개발되는 제품의 대부분이 시장 진입 초기에 사라지는 현상이 반복되고 있다. 이러한 이유는 아토피 피부염이 유발되고 악화 되는 병리학적 기전에 대응되는 제품의 개발보다 막연히 피부의 보습효과를 강화하거나 피부에 저자극성 화장품이 아토피 개선제품으로 개발되고 있기 때문이다.

이에, 본 발명자들은 상기와 같은 점을 감안하여 부작용 및 피부 자극성 없이 아토피 피부를 개선할 수 있는 뛰어난 물질을 개발하기 위해 연구노력한 결과, 천연물 유래 화합물 이소세코타나파솔라이드(Isosecotanapartholide)를 함유한 화장료 조성물의 경우 세포독성이 발견되지 않아 안전성이 우수하고, 아토피 피부염의 근본적 원인이 되는 면역 불균형에 의한 비정상적 신호전달의 최상위 단백질인 TSLP(thymic stromal lymphopoietin) 사이토카인 저해능이 우수하며 HaCaT 세포에서 MDC 및 TARC의 캐모카인 발현을 억제하여 아토피 피부를 전반적으로 개선 시킬 수 있음을 확인하고 본 발명을 완성하게 되었다.

KR 10-1095401 B1 JP 5307369 B2

따라서, 본 발명의 주된 목적은 세포독성이 없고, 아토피 피부염의 근본적인 원인이 되는 면역 불균형에 의한 비정상적 신호전달의 최상위 단백질인 TSLP 사이토카인 저해능이 우수하고, MDA 및 TARC의 캐모카인 발현 억제능이 우수한 이소세코타나파솔라이드를 유효성분으로 함유하는 아토피 피부염 개선용 화장료 조성물을 제공하는 데 있다.

본 발명의 한 양태에 따르면, 본 발명은 하기 화학식 [1]로 표시되는 이소세코타나파솔라이드(Isosecotanapartholide)를 유효성분으로 함유하는 아토피 피부염 개선용 화장료 조성물을 제공한다.

화학식 [1]

본 발명에서 동정된 화합물 “이소세코타나파솔라이드”는 다양한 천연물에 함유되어 있다. 예컨대 더위지기(Artemisia iwayomogi) 또는 애엽(Artemisia princeps var. orientalis 'Pampan' Hara)에 함유될 수 있다. 상기 이소세코타나파솔라이드 화합물은 신규 미백제, 미백용화장료 조성물로 응용가능성이 개시된 적이 있다[JP 5307369]. 그러나 아직까지 본 발명에서 동정된 화합물 “이소세코나타파솔라이드”의 아토피 피부염 개선에 관한 연구는 진행되어 있지 않은 실정이다.

이에, 본 발명자들은 애엽으로부터 동정한 이소세코타나파솔라이드가 아토피 피부염 개선에 효과가 있다는 것을 확인하고, 본 발명을 완성하게 되었다.

본 발명에 있어서, 상기 이소세코타나파솔라이드(Isosecotanapartholide)는 전체 화장료 조성물 중 0.1 ~ 5000ppm(0.00001 ~ 0.5 중량%) 함유되어 있는 것을 특징으로 한다. 0.1ppm 미만으로 사용할 경우 극소량으로 유효성분으로 인한 아토피 개선 효과를 나타내기 어렵고, 5000ppm를 초과할 경우 본원발명의 이소세코타나파솔라이드는 천연물에서 정제하는 정제물이기 때문에 대량으로 얻는데 어려움이 있으므로 경제적인 측면에서 바람직하지 않다. 동시에 본 발명에서 실험된 세포독성실험의 최대 농도는 10ppm으로 자시 기준 실제 피부에 화장료 적용시 약 500배 즉, 5000ppm까지는 피부에 안전성이 있으므로, 본 발명의 이소세코타나파솔라이드(Isosecotanapartholide)는 전체 화장료 조성물 중 0.1 ~ 5000ppm 함유하는 것이 바람직하다.

본 발명에 있어서, 이소세코타나파솔라이드(Isosecotanapartholide)는 종래 당업계에 알려진 화학합성법으로 제조되거나 천연물에서 분리될 수 있으나, 바람직하게는 애엽(Artemisia princeps var. orientalis 'Pampan' Hara)으로부터 분리된 것임을 특징으로 한다.

본 발명에 있어서, 상기 이소세코타나파솔라이드(Isosecotanapartholide)는 TSLP(thymic stromal lymphopoietin) 저해능에 의해 아토피 피부염 개선효과를 갖는 것을 특징으로 한다.

본 발명의 실험예에 따르면, 본 발명의 이소세코타나파솔라이드의 경우, 인간 각질형성세포(HaCaT cell)에서 아토피 피부염의 근본적 원인이 되는 TSLP 저해능이 뛰어난 것을 확인하였다. 이러한 결과로 볼 때, 본 발명의 이소세코타나파솔라이드가 TSLP를 저해시킴으로써 아토피 피부염 개선 효과를 나타낼 수 있음을 알 수 있다(실험예 2 및 표 4 참조).

본 발명에 있어서, 상기 이소세코타나파솔라이드(Isosecotanapartholide)는 MDC(macrophage-derived chemokine) 캐모카인 발현 억제에 의해 아토피 피부염 개선효과를 갖는 것을 특징으로 한다.

본 발명에 있어서, 상기 이소세코타나파솔라이드(Isosecotanapartholide)는 TARC(thymusand activationregulated chemokine) 발현 억제에 의해 아토피 피부염 개선효과를 갖는 것을 특징으로한다.

본 발명의 실험예에 따르면, 본 발명의 이소세코타나파솔라이드의 경우, 아토피 피부염 환자의 혈청에서 농도가 증가하는 케모카인인 MDC 및 TARC를 저해하는 효과를 확인하였다. 이러한 결과로 볼 때, 본 발명의 이소세코타나파솔라이드가 케모카인인 MDC 및 TARC를 저해시킴으로써 아토피 피부염 개선 효과를 나타낼 수 있음을 알 수 있다(실험예 3, 도 5 및 6 참조).

본 발명에 있어서, 상기 화장료 조성물의 제형이 유연화장수, 영양화장수, 에센스, 영양로션, 영양크림, 아이크림, 마사지크림, 클렌징크림, 클렌징폼, 클렌징워터, 파우다 또는 팩인 것을 특징으로 한다.

이하, 본 발명을 보다 구체적으로 설명한다.

발명의 화합물 이소세코타나파솔라이드는 애엽의 전초를 분쇄하거나 절단한 것을 정제수를 포함한 물, 탄소수 1내지 4의 저급알코올 또는 이들의 혼합용매, 바람직하게는 물 및 에탄올 혼합용매, 보다 바람직하게는 30 내지 100% 에탄올에 가용한 추출물을 포함한다.

본 발명에서 정의되는 비극성 용매 가용 추출물은 헥산, 클로로포름 메틸렌 클로라이드, 에틸아세테이트, 글리세린, 프로필렌글리콜, 부틸렌글리콜 또는 에테르로부터 선택된 용매, 바람직하게는 에틸아세테이트가 좋다.

바람직한 추출 방법의 한 예로 애엽의 전초를 농도 0 ~ 95% 에탄올을 이용하여 실온 또는 60℃로 열을 가하여 3일 이상 추출 한 후 여과하여 얻어지는 여과액을 농축하여 용매를 제거하고 추출물을 얻은 후 그 중량의 약 2 내지 20배, 바람직하게는 약 2 내지 5배 부피의 물을 분산시킨 후 헥산, 클로로포름, 메틸렌클로라이드, 에틸아세테이트, 글리세린 또는 프로필렌글리콜, 바람직하게는 헥산, 클로로포름 또는 에틸아세테이트, 보다 바람직하게는 에틸아세테이트를 물의 0.1 내지 0.5배 정도의 부피를 가하여 1 내지 5회, 바람직하게는 2 내지 4회 분획하여 본 발명의 애엽 비극성용매 가용 추출물을 수득할 수 있다.

또한 본 발명의 동정된 화합물 이소세코타나파솔라이드는 하기와 같이 분리될 수 있다.

상기 수득 방법으로 얻어진 애엽의 비극성용매 가용 추출물을 탄소수 1 내지 4의 알코올 바람직하게는 메탄올에 녹이고 C18 컬럼에 흡착시킨 후 비극성 용매 바람직하게는 디클로로메탄 : 메탄올을 약 80:1 내지 1:1이 되도록 혼합하여 분획물을 얻어 실리카겔에 흡착시킨 다음, 실리카겔 칼럼 크로마토그래피를 2회 내지 5회 수행하여 활성분획을 분리하고, 최종적으로 고성능액체크로마토그래피를 이용하여 본 발명의 이소세코타나파솔라이드를 수득할 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물은 수용성 비타민, 유용성 비타민, 고분자 펩티드, 고분자 다당, 스핑고 지질 또는 해초 엑기스를 포함할 수 있다.

수용성 비타민으로서는 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 되지만, 바람직하게는 비타민 B1, 비타민 B2, 비타민 B6, 피리독신, 염산피리독신, 비타민 B12, 판토텐산, 니코틴산, 니코틴산아미드, 엽산, 비타민 C, 비타민 H 등을 들 수 있으며, 그들의 염(티아민염산염, 아스코르빈산나트륨염 등)이나 유도체(아스코르빈산-2-인산나트륨염, 아스코르빈산-2-인산마그네슘염 등)도 본 발명에서 사용할 수 있는 수용성 비타민에 포함된다.

수용성 비타민은 미생물 변환법, 미생물의 배양물로부터의 정제법, 효소법 또는 화학합성법 등의 통상의 방법에 의해 수득할 수 있다.

유용성 비타민으로서는 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 되지만, 바람직하게는 비타민 A, 카로틴, 비타민 D2, 비타민 D3, 비타민 E(d1-알파 토코페롤, d-알파 토코페롤, d-알파 토코페롤) 등을 들 수 있으며, 그들의 유도체(팔미틴산아스코르빈, 스테아르산아스코르빈, 디팔미틴산아스코르빈, 아세트산dl-알파 토코페롤, 니코틴산dl-알파 토코페롤비타민 E, DL-판토테닐알코올, D-판토테닐알코올, 판토테닐에틸에테르 등) 등도 본 발명에서 사용되는 유용성 비타민에 포함된다. 유용성 비타민은 미생물 변환법, 미생물의 배양물로부터의 정제법, 효소 또는 화학합성법 등의 통상의 방법에 의해 취득할 수 있다.

고분자 펩티드로서는 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 되지만, 바람직하게는 콜라겐, 가수분해 콜라겐, 젤라틴, 엘라스틴, 가수분해 엘라스틴, 케라틴 등을 들 수 있다. 고분자 펩티드는 미생물의 배양액으로 부터의 정제법, 효소법 또는 화학합성법 등의 통상의 방법에 의해 정제 취득할 수 있으며, 또는 통상 돼지나 소등의 진피, 누에의 견섬유 등의 천연물로부터 정제하여 사용할 수 있다.

고분자 다당으로서는 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 되지만, 바람직하게는 히드록시에틸셀룰로오스, 크산탄검, 히알루론산나트륨, 콘드로이틴 황산 또는 그 염(나트륨염 등) 등을 들 수 있다. 예를 들어, 콘드로이틴 황산 또는 그 염 등은 통상 포유동물이나 어류로부터 정제하여 사용할 수 있다.

스핑고 지질로서는 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 되지만, 바람직하게는 세라미드, 피토스핑고신, 스핑고당지질 등을 들 수 있다. 스핑고 지질은 통상 포유류, 어류, 패류, 효모 또는 식물 등으로부터 통상의 방법에 의해 정제하거나 화학 합성법에 의해 취득할 수 있다.

해초 엑기스로는 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 되지만, 바람직하게는 갈조 엑기스, 홍조 엑기스, 녹조 엑기스 등을 들 수 있으며, 또, 이들의 해초 엑기스로부터 정제된 칼라기난, 아르긴산, 아르긴산나트륨, 아르긴산칼륨 등도 본 발명에서 사용되는 해초 엑기스에 포함된다. 해초 엑기스는 해초로부터 통상의 방법에 의해 정제하여 취득할 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물에는 상기 수용성 비타민, 유용성 비타민, 고분자 펩티드, 고분자 다당, 스핑고 지질 및 해초 엑기스와 더불어 필요에 따라 통상 화장료에 배합되는 다른 성분이 배합될 수 있다.

이외에 첨가해도 되는 배합 성분으로서는 유지 성분, 보습제, 에몰리엔트제, 계면활성제, 유기 및 무기 안료, 유기 분체, 자외선 흡수제, 방부제, 살균제, 산화방지제, 식물 추출물, pH 조정제, 알코올, 색소, 향료, 혈행 촉진제, 냉감제, 제한제(制汗劑), 정제수 등을 들 수 있다.

유지 성분으로서는 에스테르계 유지, 탄화수소계 유지, 실리콘계 유지, 불소계 유지, 동물 유지, 식물 유지 등을 들 수 있다.

에스테르계 유지로서는 트리2-에틸헥산산글리세릴, 2-에틸헥산산세틸, 미리스틴산이소프로필, 미리스틴산부틸, 팔미틴산이소프로필, 스테아르산에틸, 팔미틴산옥틸, 이소스테아르산이소세틸, 스테아르산부틸, 리놀레산에틸, 리놀레산이소프로필, 올레인산에틸, 미리스틴산이소세틸, 미리스틴산이소스테아릴, 팔미틴산이소스테아릴, 미리스틴산옥틸도데실, 이소스테아르산이소세틸, 세바신산디에틸, 아디핀산디이소프로필, 네오펜탄산이소알킬, 트리(카프릴, 카프린산)글리세릴, 트리2-에틸헥산산트리메틸롤프로판, 트리이소스테아르산트리메틸롤프로판, 테트라 2-에틸헥산산펜타엘리슬리톨, 카프릴산세틸, 라우린산데실, 라우린산헥실, 미리스틴산데실미리스틴산미리스틸, 미리스틴산세틸, 스테아르산스테아릴, 올레인산데실, 리시노올레인산세틸, 라우린산이소스테아릴, 미리스틴산이소트리데실, 팔미틴산이소세틸, 스테아르산옥틸, 스테아르산이소세틸, 올레인산이소데실, 올레인산옥틸도데실, 리놀레산옥틸도데실, 이소스테아르산이소프로필, 2-에틸헥산산세토스테아릴, 2-에틸헥산산스테아릴, 이소스테아르산헥실, 디옥탄산에틸렌글리콜, 디올레인산에틸렌글리콜, 디카프린산프로필렌글리콜, 디(카프릴,카프린산)프로필렌글리콜, 디카프릴산프로필렌글리콜, 디카프린산네오펜틸글리콜, 디옥탄산네오펜틸글리콜, 트리카프릴산글리세릴, 트리운데실산글리세릴, 트리이소팔미틴산글리세릴, 트리이소스테아르산글리세릴, 네오펜탄산옥틸도데실, 옥탄산이소스테아릴, 이소노난산옥틸, 네오데칸산헥실데실, 네오데칸산옥틸도데실, 이소스테아르산이소세틸, 이소스테아르산이소스테아릴, 이소스테아르산옥틸데실, 폴리글리세린올레인산에스테르, 폴리글리세린이소스테아르산에스테르, 시트르산트리이소세틸, 시트르산트리이소알킬, 시트르산트리이소옥틸, 락트산라우릴, 락트산미리스틸, 락트산세틸, 락트산옥틸데실, 시트르산트리에틸, 시트르산아세틸트리에틸, 시트르산아세틸트리부틸, 시트르산트리옥틸, 말산디이소스테아릴, 히드록시스테아르산 2-에틸헥실, 숙신산디2-에틸헥실, 아디핀산디이소부틸, 세바신산디이소프로필, 세바신산디옥틸, 스테아르산콜레스테릴, 이소스테아르산콜레스테릴, 히드록시스테아르산콜레스테릴, 올레인산콜레스테릴, 올레인산디히드로콜레스테릴, 이소스테아르산피트스테릴, 올레인산피트스테릴, 12-스테알로일히드록시스테아르산이소세틸, 12-스테알로일히드록시스테아르산스테아릴, 12-스테알로일히드록시스테아르산이소스테아릴 등의 에스테르계 등을 들 수 있다.

탄화수소계 유지로서는 스쿠알렌, 유동 파라핀, 알파-올레핀올리고머, 이소파라핀, 세레신, 파라핀, 유동 이소파라핀, 폴리부덴, 마이크로크리스탈린왁스, 와셀린 등의 탄화수소계 유지 등을 들 수 있다. 실리콘계 유지로서는 폴리메틸실리콘, 메틸페닐실리콘, 메틸시클로폴리실록산, 옥타메틸폴리실록산, 데카메틸폴리실록산, 도데카메틸시클로실록산, 디메틸실록산ㆍ메틸세틸옥시실록산 공중합체, 디메틸실록산ㆍ메틸스테알록시실록산 공중합체, 알킬 변성 실리콘유, 아미노 변성 실리콘유 등을 들 수 있다.

불소계 유지로서는 퍼플루오로폴리에테르 등을 들 수 있다.

동물 또는 식물 유지로서는 아보카도유, 아르몬드유, 올리브유, 참깨유, 쌀겨유, 새플라워유, 대두유, 옥수수유, 유채유, 행인(杏仁)유, 팜핵유, 팜유, 피마자유, 해바라기유, 포도종자유, 면실유, 야자유, 쿠쿠이너트유, 소맥배아유, 쌀 배아유, 시아버터, 월견초유, 마커데이미아너트유, 메도홈유, 난황유, 우지(牛脂), 마유, 밍크유, 오렌지라피유, 호호바유, 캔데리러왁스, 카르나바왁스, 액상 라놀린, 경화피마자유 등의 동물 또는 식물 유지를 들 수 있다.

보습제로서는 수용성 저분자 보습제, 지용성 분자 보습제, 수용성 고분자, 지용성 고분자 등을 들 수 있다.

수용성 저분자 보습제로서는 세린, 글루타민, 솔비톨, 만니톨, 피롤리돈-카르복실산나트륨, 글리세린, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸렌글리콜, 에틸렌글리콜, 폴리에틸렌글리콜B(중합도 n = 2 이상), 폴리프로필렌글리콜(중합도n = 2 이상), 폴리글리세린B(중합도 n = 2 이상), 락트산, 락트산염 등을 들 수 있다.

지용성 저분자 보습제로서는 콜레스테롤, 콜레스테롤에스테르 등을 들 수 있다.

수용성 고분자로서는 카르복시비닐폴리머, 폴리아스파라긴산염, 트라가칸트, 크산탄검, 메틸셀룰로오스, 히드록시메틸셀룰로오스, 히드록시에틸셀룰로오스, 히드록시프로필셀룰로오스, 카르복시메틸셀룰로오스, 수용성 키틴, 키토산, 덱스트린 등을 들 수 있다.

지용성 고분자로서는 폴리비닐피롤리돈ㆍ에이코센 공중합체, 폴리비닐피롤리돈ㆍ헥사데센 공중합체, 니트로셀룰로오스, 덱스트린지방산에스테르, 고분자 실리콘 등을 들 수 있다.

에몰리엔트제로서는 장쇄아실글루타민산콜레스테릴에스테르, 히드록시스테아르산콜레스테릴, 12-히드록시스테아르산, 스테아르산, 로진산, 라놀린지방산콜레스테릴에스테르 등을 들 수 있다.

계면활성제로서는 비이온성 계면활성제, 음이온성 계면활성제, 양이온성 계면활성제, 양성 계면활성제 등을 들 수 있다.

비이온성 계면활성제로서는 자기 유화형 모노스테아르산글리세린, 프로필렌글리콜지방산에스테르, 글리세린지방산에스테르, 폴리글리세린지방산에스테르, 솔비탄지방산에스테르, POE (폴리옥시에틸렌)솔비탄지방산에스테르, POE 솔비트지방산에스테르, POE 글리세린지방산에스테르, POE 알킬에테르, POE 지방산에스테르, POE 경화피마자유, POE 피마자유, POEㆍPOP (폴리옥시에틸렌ㆍ폴리옥시프로필렌) 공중합체, POEㆍPOP 알킬에테르, 폴리에테르변성실리콘, 라우린산알카놀아미드, 알킬아민옥시드, 수소첨가대두인지질 등을 들 수 있다.

음이온성 계면활성제로서는 지방산비누, 알파-아실술폰산염, 알킬술폰산염, 알킬알릴술폰산염, 알킬나프탈렌술폰산염, 알킬황산염, POE 알킬에테르황산염, 알킬아미드황산염, 알킬인산염, POE 알킬인삼염, 알킬아미드인산염, 알킬로일알킬타우린염, N-아실아미노산염, POE 알킬에테르카르복실산염, 알킬술포숙신산염, 알킬술포아세트산나트륨, 아실화 가수분해 콜라겐펩티드염, 퍼플루오로알킬인산에스테르 등을 들 수 있다.

양이온성 계면활성제로서는 염화알킬트리메틸암모늄, 염화스테아릴트리메틸암모늄, 브롬화스테아릴트리메틸암모늄, 염화세토스테아릴트리메틸암모늄, 염화디스테아릴디메틸암모늄, 염화스테아릴디메틸벤질암모늄, 브롬화베헤닐트리메틸암모늄, 염화벤잘코늄, 스테아르산디에틸아미노에틸아미드, 스테아르산디메틸아미노프로필아미드, 라놀린 유도체 제 4급 암모늄염 등을 들 수 있다.

양성 계면활성제로서는 카르복시베타인형, 아미드베타인형, 술포베타인형, 히드록시술포베타인형, 아미드술포베타인형, 포스포베타인형, 아미노카르복실산염형, 이미다졸린 유도체형, 아미드아민형 등의 양성 계면활성제 등을 들 수 있다.

유기 및 무기 안료로서는 규산, 무수규산, 규산마그네슘, 탤크, 세리사이트, 마이카, 카올린, 벵갈라, 클레이, 벤토나이트, 티탄피막운모, 옥시염화비스무트, 산화지르코늄, 산화마그네슘, 산화아연, 산화티탄, 산화알루미늄, 황산칼슘, 황산바륨, 황산마그네슘, 탄산칼슘, 탄산마그네슘, 산화철, 군청, 산화크롬, 수산화크롬, 칼라민 및 이들의 복합체등의 무기 안료 ; 폴리아미드, 폴리에스테르, 폴리프로필렌, 폴리스티렌, 폴리우레탄, 비닐수지, 요소수지, 페놀수지, 불소수지, 규소수지, 아크릴수지, 멜라민수지, 에폭시수지, 폴리카보네이트수지, 디비닐벤젠ㆍ스티렌 공중합체, 실크파우더, 셀룰로오스, CI 피그먼트옐로우, CI 피그먼트오렌지 등의 유기 안료 및 이들의 무기 안료와 유기 안료의 복합 안료 등을 들 수 있다.

유기 분체로서는 스테아르산칼슘 등의 금속비누 ; 세틸린산아연나트륨, 라우릴린산아연, 라우릴린산칼슘 등의 알킬인산금속염 ; N-라우로일-베타-알라닌칼슘, N-라우로일-베타-알라닌아연, N-라우로일글리신칼슘 등의 아실아미노산 다가금속염 ; N-라우로일-타우린칼슘, N-팔미토일-타우린칼슘 등의 아미드술폰산 다가금속염 ; N-엡실론-라우로일-L-리진, N-엡실론-팔미토일리진, N-알파-파리토일올니틴, N-알파-라우로일아르기닌, N-알파-경화우지지방산아실아르기닌 등의 N-아실염기성아미노산 ; N-라우로일글리실글리신 등의 N-아실폴리펩티드 ; 알파-아미노카프릴산, 알파-아미노라우린산 등의 알파-아미노지방산 ; 폴리에틸렌, 폴리프로필렌, 나일론, 폴리메틸메타크릴레이트, 폴리스티렌, 디비닐벤젠ㆍ스티렌 공중합체, 사불화에틸렌 등을 들 수 있다.

자외선 흡수제로서는 파라아미노벤조산, 파라아미노벤조산에틸, 파라아미노벤조산아밀, 파라아미노벤조산옥틸, 살리실산에틸렌글리콜, 살리신산페닐, 살리신산옥틸, 살리신산벤질, 살리신산부틸페닐, 살리신산호모멘틸, 계피산벤질, 파라메톡시계피산-2-에톡시에틸, 파라메톡시계피산옥틸, 디파라메톡시계피산모노-2-에틸헥산글리세릴, 파라메톡시계피산이소프로필, 디이소프로필ㆍ디이소프로필계피산에스테르 혼합물, 우로카닌산, 우로카닌산에틸, 히드록시메톡시벤조페논, 히드록시메톡시벤조페논술폰산 및 그 염, 디히드록시메톡시벤조페논, 디히드록시메톡시벤조페논디술폰산나트륨, 디히드록시벤조페논, 테트라히드록시벤조페논, 4-tert-부틸-4'-메톡시디벤조일메탄, 2,4,6-트리아닐리노-p-(카르보-2'-에틸헥실-1'-옥시)-1,3,5-트리아진, 2-(2-히드록시-5-메틸페닐)벤조트리아졸 등을 들 수 있다.

살균제로서는 히노키티올, 트리클로산, 트리클로로히드록시디페닐에테르, 크로르헥시딘글루콘산염, 페녹시에탄올, 레조르신, 이소프로필메틸페놀, 아줄렌, 살리칠산, 진크필리티온, 염화벤잘코늄, 감광소 301 호, 모노니트로과이어콜나트륨, 운데시렌산 등을 들 수 있다.

산화 방지제로서는 부틸히드록시아니솔, 갈릭산프로필, 엘리소르빈산 등을 들 수 있다.

pH 조정제로서는 시트르산, 시트르산나트륨, 말산, 말산나트륨, 프말산, 프말산나트륨, 숙신산, 숙신산나트륨, 수산화나트륨, 인산일수소나트륨 등을 들 수 있다.

알코올로서는 세틸알코올 등의 고급 알코올을 들 수 있다.

본 발명의 화장료는 용액, 유화물, 점성형 혼합물 등의 형상을 취할 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물에 포함되는 성분은 유효성분으로서 상기 화합물 이외에 화장료 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함할 수 있으며, 예를 들면, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제 및 담체를 포함한다.

본 발명의 화장료 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어 유액, 크림, 화장수, 팩, 파운데이션, 로션, 미용액, 모발화장료 등을 들 수 있다.

구체적으로, 본 발명의 화장료 조성물은 스킨로션, 스킨 소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스쳐 로션, 영양로션, 마사지크림, 영양크림, 모이스처크림, 핸드크림, 파운데이션, 에센스, 영양에센스, 팩, 비누, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디로션 및 바디클린저의 제형을 포함한다.

본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물섬유, 식물섬유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.

본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액의 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용매화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.

본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 계면활성제 함유 클린징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 리놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 아토피 피부염 개선제 조성물은 그 유효성분 화합물 이소세코타나파솔라이드가 아토피성 피부염 개선 활성을 나타낼 수 있는 한 용도, 제형, 배합 목적 등에 따라 임의의 양(유효량)으로 포함할 수 있다. 이소세코타나파솔라이드가 0.1 ~ 5000 ppm인 조성물을 그대로 사용할 수 있으므로 본 발명의 아토피성 피부염 개선제 조성물은 이소세코타나파솔라이드가 0.1 내지 5000 ppm인 조성물 그대로 구성될 수도 있으며, 용해물을 사용할 경우, 통상적인 유효량은 조성물 전체 중량을 기준으로 할 때 바람직하게 1 내지 50 ppm 내에서 결정될 것이다. 여기서 "유효량"이란 아토피성 피부염의 예방, 개선, 치료, 또는 그 증상의 발현 지연을 유도할 수 있는 유효성분의 양을 말하며, 이러한 유효량은 당업자의 통상의 능력범위 내에서 본 발명의 아토피성 피부염 개선제 조성물의 용도, 제형, 배합 목적 등을 고려하여 실험적으로 결정될 수 있다.

이상 설명한 바와 같이, 본 발명의 천연물 유래 화합물 이소세코타나파솔라이드(Isosecotanapartholide)를 함유한 화장료 조성물의 경우 세포독성이 발견되지 않아 안전성이 우수하고, 아토피 피부염의 근본적 원인이 되는 면역 불균형에 의한 비정상적 신호전달의 최상위 단백질인 TSLP(thymic stromal lymphopoietin) 사이토카인 저해능이 우수하며 HaCaT 세포에서 MDC 및 TARC의 캐모카인 발현 저해능이 우수하므로, 아토피 피부를 개선 시킬 수 있다.

도 1은 애엽추출물의 고성능 액체 크로마토그래피 분석 결과를 나타내는 도면이다.
도 2는 이소세코타나파솔라이드 0.05% 용해액의 고성능 액체 크로마토그래피 분석 결과를 나타내는 도면이다.
도 3은 이소세코타나파솔라이드의 세포독성에 대한 결과를 나타내는 도면이다.
도 4는 이소세코타나파솔라이드의 TSLP 저해능에 대한 결과를 나타내는 도면이다.
도 5는 이소세코타나파솔라이드의 TARC 저해능에 대한 결과를 나타내는 도면이다.
도 6은 이소세코타나파솔라이드의 MDC-1 저해능에 대한 결과를 나타내는 도면이다.
도 7은 본원발명 제형예 3 및 비교제형예 3의 아토피 피부 개선 효과에 대한 결과를 나타내는 도면이다.

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하기로 한다. 이들 실시예는 단지 본 발명을 예시하기 위한 것이므로, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것으로 해석되지는 않는다.

실시예 1: 이소세코타나파솔라이드( Isosecotanapartholide )의 정제

애엽으로부터 다음과 같이 화합물 이소세코타나파솔라이드를 분리하였다.

먼저, 경동시장에서 구입한 애엽을 건조한 뒤 세절한 전초 5kg에 95%에탄올 50L를 가하여 실온에서 3일 이상 3회 반복 추출한 후 여과하여 얻은 여과액을 감압농축기(EYELA사, N-1000, 일본)로 감압 농축하여 조추출물을 제조한다. 제조된 조추출물 중 200g을 2L 증류수로 현탁 시킨 후 동량의 에틸아세테이트를 가하여 6회 반복 추출하고 분액깔때기에서 분획하여 에틸아세테이트 층을 회수한 뒤 에틸아세테이트 층을 감압 농축하여 애엽 에틸아세테이트 가용 추출물 70g을 수득하였다.

상기에서 수득된 애엽의 에틸아세테이트 가용 추출물을 메탄올용액에 용해시킨 후 디클로로메탄:메탄올=80:1인 혼합용액을 사용하여 칼럼(4.5×40cm)에 충진한 실리카겔(머크사, 상품명:9385)에 분획물을 흡착시키고 디클로로메탄:메탄올 (80:1→50:1→30:1→20:1→15:1→5:1→1:1)의 조건으로 실리카겔 칼럼 크로마토그래피를 시행하여 용출물을 크게 6개의 분획으로 나누었고 3번 용출물에서 하기 표 1에 기재된 조건의 고성능액체크로마토그래피를 이용하여 하기 물성치를 갖는 이소세코타나파솔라이드를 수득하였고, 하기 실험예에 사용하였다. 또한, 표 2에 기재된 조건으로 애엽추출물의 고성능액체크로마토그래피 분석 결과는 도 1에 나타내었다.

컬럼(Column)	심팍 프렙-ODS(Shim-Pak prep-ODS) 컬럼, 시마즈(Shimadzu)
컬럼온도(Clumn temperature)	30℃
유속(Flowrate)	15mL/min
측정기(Detector)	UV 220nm
주입부피(Injection Volume)	400㎕
이동상(Mobile phase)	15% 메탄올

컬럼(Column)	캅셀팍 C18 4.6 × 250㎜ 시세이도사
컬럼온도(Clumn temperature)	30℃
유속(Flowrate)	1.0mL/min
측정기(Detector)	UV 220nm
주입부피(Injection Volume)	20㎕
이동상(Mobile phase)	15% 메탄올

NMR 기기로 H¹-NMR은 바리안사(Varian, GEMINI, 400 MHz), C¹³-NMR은 바리안사(Varian, GEMINI, 100 MHz)로 분리된 화합물의 구조를 분석하였으며, DMSO(알드리치사)를 용매로 사용하였고, NMR 결과는 이미 발표된 자료와 일치함을 확인할 수 있었다[Hanna Ahn. et al., Arch Pharm Res Vol 26, No4, 301-305, 2003].

¹H-NMR(DMSO-d ₆ ,400MHz):δ1.70(1H,m,H-8),1.85(1H,m,H-8’),2.05(3H,s,H-14),2.08(1H,d,H-2),2.11(3H,s,H-15),2.45(2H,m,H-9),2.66(1H,dd,J=18.2,6.2Hz,H-2’),3.05(1H,m,H-7),4.55(1H,s,H-6),5.02(1H,d,J=5.6Hz,H-3),5.61(1H,brs,-OH),5.73(1H,d,J=2.5Hz,H-13),6.11(1H,d,J=2.9Hz,H-13’)

¹³C-NMR(DMSO-d ₆ ,100MHz):δ13.4(C-15),26.8(C-8),29.7(C-14),39.1(C-9),41.3(C-7),44.3(C-2),69.7(C-3),75.4(C-6),121.6(C-13),135.7(C-5),139.1(C-11),169.6(C-12),175.0(C-4),203.4(C-1),207.6(C-10)

참고예 1: 순도 분석

상기 실시예 1에서 수득한 이소세코타나파솔라이드의 순도를 알아보기 위해 상기 표 2에 기재된 조건의 고성능 액체 크로마토그래피(HPLC)를 이용하여 순도 분석을 하였고, 그 결과를 하기 표 3에 나타내었다.

실험물질	이소세코타나파솔라이드 함량(%)
실시예 1	99.9%

분석결과, 상기 표 3에 나타난 바와 같이 실시예 1의 정제물은 고성능 액체 크로마토그래피의 면적 대비 99.9%의 함량으로 정제가 되었음을 알 수 있었다.

실시예 2: 정제된 이소세코타나파솔라이드 0.05% 용해액 제조

상기 실시예 1에서 수득된 화합물 이소세코타나파솔라이드를 0.05 중량% 함유하도록 정제수와 부틸렌글리콜 혼합액(30 중량%)에 상온에서 1시간 교반하여 완전히 용해한 후 와트만(Whatman) #5 여과지로 여과하여 이소세코타나파솔라이드 0.05 중량% 용해액을 제조하였다. 또한, 이소세코타나파솔라이드 0.05% 용해액의 고성능 액체 크로마토 그래피(HPLC)의 분석결과는 도 2에 나타내었다.

실험예 1: 인간피부 각질형성세포주 HaCaT 세포에서의 세포 독성 실험

1-1. 인간피부 각질형성세포주 HaCaT 세포 배양

본 발명에서 분리한 화합물 이소세코타나파솔라이드가 피부에서 발생 되는 TSLP의 생산을 감소시키는지를 알아보기 위한 시험을 수행하기 위하여, 인간피부의 구성 세포주인 각질형성세포 HaCaT 세포주(CLC Cell line serveice, Germany)를 사용하였다. HaCaT 세포주는 10% fetal bovine serum (FBS; Gibco BRL, USA)과 항생제가 들어있는 DMEM 배양액 (Gibco BRL, USA)을 사용하여 배양하였다. 배양 용기는 75T-flask를 사용하였으며 5% CO₂가 공급되는 37℃ 배양기에서 배양하였다. 배양액은 3~4일마다 교환해 주며 세포가 과다하게 증식되었을 때는 계대배양 하였다. 실시예 1의 화합물처리 시험은 적정한 계대 수의 HaCaT 세포가 6 well plate에서 배양용기 면적의 80%이상 증식 시, 배양 배지 2㎖의 10% 비율인 상기 실시예 2에서 수득된 이소세코타나파솔라이드 0.05% 용해액 0.2㎖을 처리하였으며, 추가적으로 48시간 배양 후 MTT 분석, total RNA의 분리와 cDNA 합성을 수행하였다.

1-2. 인간 각질형성 세포주에 대한 세포 독성 시험

HaCaT keratinocyte를 96 well plates에 2×10⁴ cells/mL로 분주하여 37℃, 5% CO₂ 배양기에서 24시간 동안 부착시켰다. 농도별로 DMSO에 용해된 이소세코타나파솔라이드를 각각 24시간 노출시킨 후, 배양액을 제거하고 PBS 용액으로 2번 세척한 후 CCK-8 100㎕씩 첨가하였다. 세포 배양기에서 1-4 시간 동안 배양 후, 발색 정도를 측정하기 위해 Microplate reader에서 450㎚의 파장으로 흡광도를 측정하였으며, 각 실험은 독립적으로 3회 반복 실행하여 평균치와 표준편차를 구하였다. 그 결과, 도 3에서와 같이 이소세코타나파솔라이드는 1.25, 2.5, 5, 10㎍/㎖ 농도에서 독성이 발견되지 않아 비교적 안전한 화합물임을 알 수 있었다.

실험예 2: Real - time PCR 을 이용한 이소세코타나파솔라이드의 TSLP 저해능 시험

2-1. Total RNA 분리와 cDNA 합성

Real-time PCR에 사용될 cDNA는 실시예 2의 화합물 이소세코타나파솔라이드 용해액을 HaCaT 세포주에 처리 24시간 후 total RNA를 추출하여 합성하였다. 구체적으로, 60㎜ dish 당 Trizol(Invitrogen, Carlsbad, CA) 1㎖을 이용하여 total RNA를 추출하였다. Total RNA를 이용한 cDNA합성을 수행하기 위하여 전체 반응액 20㎕를 아래의 조성들로 구성하였다. 5X PrimeScript Buffer(Kit code RR037A, Lot A1201-1) 4㎕와 PrimeScript RT Enzyme Mix(Kit code RR037A, Lot A1201-1) 1㎕와 Oligo dT Primer(50㎕M)(Kit code RR037A, Lot A1201-1) 1㎕와 Random 6mers(100㎕M)(Kit code RR037A, Lot A1201-1) 4㎕를 혼합하여 tube에 넣은 후 얼음에 보관하였다. 이 tube에 total RNA를 10㎕씩 첨가하여 전체 반응액이 20㎕가 되게 한 다음, mild vortexing 3회로 충분히 섞은 후 다시 얼음에 보관하였다. 이것을 PCR machine을 사용하여 37℃에서 15분간 반응시킨 후 85℃에서 5초가 반응하고 4℃로 처리하였다. 처리가 끝난 cDNA는 하기 방식으로 real-time PCR 분석에 사용되었다.

2-2. TSLP 저해능 시험

TSLP (thymic stromal lymphopoietin)은 아토피 피부염의 원인으로 파악되는 type 2 helper T cell 매개성 면역 편향을 개시하는 최상위 사이토카인으로 분류된다.

상기 실시예 1의 화합물 이소세코타나파솔라이드의 0.05% DMSO 용해액이 인간 각질형성세포 HaCaT의 TSLP(thymic stromal lymphopoietin) 발현에 미치는 감소 효과를 확인하기 위하여, 상기 cDNA real-time(실시간) PCR을 이용한 Taqman 방법을 실행하였다.

비교물질로 항염효과로 잘 알려진 화합물인 퀘르세틴(sigma), 나린진(sigma), 헤스페리딘(sigma)를 같은 농도로 DMSO에 용해한 후 TSLP 사이토카인의 변화를 보았다. 실험은 1㎍/㎕농도의 cDNA 주형 1㎕에 상기 TSLP에 특이적인 Taqman Primer & Probe (HS00263639, AB Applied Biosystems, USA)와 Taqman Gene Expression Master Mix를 사용하여 반응을 수행하였다. 최종 반응 샘플들을 조제한 후, Applied Biosystems ABI 7500 Real-time PCR system(AB Applied Biosystems, USA)을 이용하여 측정하였다.

좀 더 상세히 설명하면, real-time PCR을 수행하기 위한 GAPDH와 TSLP(thymic stromal lymphopoietin) 분석용 반응액을 만들었다. GAPDH 분석을 위한 반응액은 GAPDH(Hs99999905, Lot 682967) 1㎕와 D.W 5㎕와 Master Mix(2X)(TaqMan Gene Expression Master Mix L/N 0810037, P/N 4369016) 10㎕와 cDNA 4㎕를 잘 혼합하여 만들었다. TSLP(thymic stromal lymphopoietin) 분석을 위한 반응액은 TSLP(Hs00263639) 1㎕와 D.W 5㎕와 Master Mix(2X)(TaqMan Gene Expression Master Mix L/N 0810037, P/N 4369016) 10㎕와 cDNA 4㎕를 잘 혼합하여 만들었다. 만들어진 상기 반응액을 real-time PCR 반응용 plate (optical 96-well Reaction Plate with Barcode, part No.4306737)에 넣었다. 동일한 plate에 표준곡선 제조에 사용할 HaCaT cDNA 2㎕와 Easy Dilution (Kit code RR037A, Lot A1201-1)로 X10, X100배 희석한 cDNA를 2㎕ 씩 첨가 한다. 상기에 제조된 cDNA 4㎕씩을 반응액에 넣고 real-time PCR Cycles로 반응시킨다. Real-time PCR 반응은 먼저 샘플들을 초기 변성을 위해 94℃, 10분 동안 반응시킨 후 전체 60 사이클을 증폭시켰다. 각 사이클에 관한 시간과 온도는 94℃ 에 10초, 60℃에 10초, 25℃에 30초로 이루어졌다. 표적 유전자에 관한 발현은 Ct(threshold cycle) 방법에 의한 내부 대조 유전자 GAPDH (Glyceraldehyde 3-phosphate dehydrogenase)의 보정 정량화를 통한 상대적인 값으로 비교되었다.

그 결과, 하기 표 4 및 도 4에 나타난 바와 같이, 무처리한 대조군에 비하여, 실시예 1의 화합물 이소세코타나파솔라이드 0.05% 용해액이 TSLP를 60% 이상 유의적으로 감소시키는 결과를 확인하였고 다른 화합물에 비해 확연히 크게 감소하는 것을 알 수 있었다.

번호	화합물	TSLP 감소율(%)
1	실시예 1 (이소세코타나파솔라이드)	67.16 ± 5.56
2	퀘르세틴	27.57 ± 1.49
3	나린진	26.08 ± 5.13
4	헤스페리딘	22.92 ± 3.18

실험예 3: TARC , MDC -1 케모카인 저해 실험

HaCaT keratinocyte를 60㎜ dish에 2×10⁵ cells/mL 분주한 후, 37℃, 5% CO₂ 배양기에서 24시간 동안 부착시켰다. 농도별로 DMSO에 용해된 이소세코타나파솔라이드를 1시간 동안 전 처리한 고, IFN-γ(10ng/mL)와 TNF-α(10ng/mL)를 처리한 후, 24시간 후 세포의 상층액을 수거하여 실험에 사용하였다. TARC, MDC-1의 chemokine은 eBioscience (CA, USA)에서 판매하는 ELISA kit를 사용하여 측정하였다. 간단히 설명하면, coating buffer로 희석한 capture Ab를 well당 100μL씩 넣고 4 ℃ 에서 overnight하였다. 1×assay diluent를 well당 200㎕씩 넣어 실온에서 1 시간 동안 방치한 후, 최고농도부터 단계 희석한 standard와 시료를 well당 100 ㎕씩 넣고 실온에서 2 시간 동안 반응시켰다. 계속해서 1×assay diluent로 희석한 detection Ab를 well당 100㎕씩 넣고 실온에서 1시간 동안 반응시킨 후 1×assay diluent로 희석한 avidin-HRP를 well당 100 ㎕씩 넣어 실온에서 30분 동안 반응시켰다. 마지막으로 substrate solution을 well당 100㎕씩 넣어 실온에서 15분간 방치한 후, stop solution을 well당 50㎕씩 넣어 반응을 정지시키고 450㎚에서 흡광도를 측정하였다. 그 결과, 도 5 및 도 6 과 같이 TARC, MDC-1의 케모카인은 이소세코타나파솔라이드 1.25, 2.5, 5, 10㎍/㎖ 농도에 따라 농도 의존적으로 감소하는 것을 알 수 있어 아토피 피부염 개선 효과가 탁월한 것을 알 수 있었다.

제형예 1: 화장수

상기 실시예 1에서 분리한 화합물 이소세코타나파솔라이드를 용해한 실시예 2의 용해액을 함유한 화장수(스킨로션)는 하기 표 5의 조성으로 다음과 같이 제조하였다. 정제수에 글리세린, 부틸렌 글리콜, 프로필렌 글리콜, 방부제를 순서대로 투입하고 교반하여 용해시켜 혼합액을 얻었다. 폴리옥시에칠렌 경화피마자유를 60℃ 정도 가열하여 용해시킨 다음 향료를 투입하여 용해한 후 상기 혼합액에 투입하였다. 마지막으로 실시예 2의 애엽으로부터 분리한 이소세코타나파솔라이드 용해액, 에탄올, 트리에탄올아민, 색소를 투입하여 충분히 교반한 뒤 숙성시켰다. 비교제형예 1의 경우 이소세코타나파솔라이드 용해액을 제외하고 정제수로 잔량을 투입하여 충분히 교반한 뒤 숙성시켰다.

번호	원료	제형예 1	비교제형예1
1	실시예 2	1.0	-
2	글리세린	3.0	3.0
3	부틸렌글리콜	2.0	2.0
4	프로필렌 글리콜	2.0	2.0
5	폴리옥시에칠렌 강화파마자유	1.0	1.0
6	에탄올	10.0	10.0
7	트리에탄올아민	0.1	0.1
8	방부제	미량	미량
9	색소	미량	미량
10	향료	미량	미량
11	정제수	to 100	to 100

제형예 2: 영양로션

상기 실시예 1에서 분리한 화합물 이소세코타나파솔라이드를 용해한 실시예 2의 용해액을 함유한 영양로션을 하기 표 6과 같은 조성으로 다음과 같이 제조하였다. 프로필렌글리콜, 카르복시폴리머, 방부제, 정제수를 혼합교반하면서 80 ~ 85℃ 사이로 가열하여 제조부에 투입한 후 유화기를 작용시키고 밀납, 폴리솔베이트 60, 솔비탄 세스퀴올레이트, 유동 파라핀, 소르비탄 스테아레이트, 친유형 모노스테아린산 글리세린, 스테아린산, 글리세릴스테아레이트/피이지-400 스테아레이트, 트리에탄올아민을 80 ~ 85℃사이로 가열 용해한 후 유화시켰다. 유화가 끝나면 교반기를 이용하여 교반하면서 50℃까지 냉각한 뒤 향료를 투입하고 45℃까지 냉각한 뒤 색소를 투입하고 35℃에 실시예 2의 애엽으로부터 분리한 이소세코타나파솔라이드 용해액을 투입하여 25℃까지 냉각한 뒤 숙성시켰다. 비교제형예 2의 경우 이소세코타나파솔라이드 용해액을 제외하고 정제수로 잔량을 투입하여 25℃까지 냉각한 뒤 숙성시켰다.

번호	원료	제형예 2	비교제형예 2
1	실시예 2	1.0	-
2	밀납	1.0	1.0
3	폴리솔베이트 60	1.5	1.5
4	솔비탄 세스퀴올레이트	0.5	0.5
5	유동 파라핀	10.0	10.0
6	소르비탄 스테아레이트	1.0	1.0
7	친유형 모노스테아린산 글리세린	0.5	0.5
8	스테아린산	1.5	1.5
9	글리세릴스테아레이트/피이지-400 스테아레이트	1.0	1.0
10	프로필렌글리콜	3.0	3.0
11	카르복시폴리머	0.1	0.1
12	트리에탄올 아민	0.2	0.2
13	방부제	미량	미량
14	색소	미량	미량
15	향료	미량	미량
16	정제수	to 100	to 100

제형예 3: 영양크림

상기 실시예 1에서 분리한 화합물 이소세코타나파솔라이드를 용해한 실시예 2의 용해액을 함유한 영양크림을 하기 표 7의 조성으로 다음과 같이 제조하였다. 카르복시비닐폴리머, 부틸렌글리콜, 글리세린, 정제수를 혼합 교반하면서 80 ~ 85℃ 사이로 가열하여 제조부에 투입한 후 유화기를 작용시키고 스테아린산, 세틸알콜, 글리세릴모노스테아레이트, 폴리옥시에틸렌소르비탄모노스테아레이트, 솔비탄세스퀴올레이트, 글리세릴모노스테아레이트/글리세릴스테아레이트/폴리옥시에틸렌스테아레이트, 왁스, 유동파라핀, 스쿠알란, 카프릴릭/카프릭트리글리세라이드를 80 ~ 85℃사이로 가열하여 용해한 후 트리에탄올아민을 투입 교반하여 제조부에 투입하고 유화시켰다. 유화가 끝나면 교반기를 이용하여 교반하면서 35℃까지 냉각하고 실시예 2의 애엽으로부터 분리한 이소세코타나파솔라이드 용해액를 투입하여 25℃까지 냉각한 뒤 숙성시켰다. 비교제형예 3의 경우 이소세코타나파솔라이드 용해액을 제외하고 정제수로 잔량을 투입하여 25℃까지 냉각한 뒤 숙성시켰다.

번호	원료	처형예 3	비교제형예 3
1	실시예 2	1.0	-
2	스테아린산	2.0	2.0
3	세틸알콜	2.0	2.0
4	글리세릴모노스테아레이트	2.0	2.0
5	폴리옥시에틸렌소르비탄모노스테아레이트	0.5	0.5
6	솔비탄세스퀴올레이트	0.5	0.5
7	글리세릴모노스테아레이트/글리세릴스테아레이트/폴리옥시에틸렌스테아레이트	1.0	1.0
8	왁스	1.0	1.0
9	유동파라핀	4.0	4.0
10	스쿠알란	4.0	4.0
11	카프릴릭/카프릭트리글리세라이드	4.0	4.0
12	카르복시비닐폴리머	0.3	0.3
13	부틸렌글리콜	5.0	5.0
14	글리세린	3.0	3.0
15	트리에탄올아민	0.5	0.5
16	정제수	to 100	to 100

제형예 4: 마사지크림

상기 실시예 1에서 분리한 화합물 이소세코타나파솔라이드를 용해한 실시예 2의 용해액을 함유한 마사지크림을 하기 표 8의 조성으로 다음과 같이 제조하였다. 카르복시비닐폴리머, 부틸렌글리콜, 글리세린, 방부제, 정제수를 혼합, 교반하면서 80 내지 85℃ 사이로 가열하여 제조부에 투입한 후 유화기를 작용시키고 밀납, 폴리솔베이트 60, 솔비탄세스퀴올레이트, 유동파리핀, 스쿠알란, 친유형 모노스테아린산 글리세린을 80 내지 55℃ 사이로 가열하여 투입한 뒤 유화한다. 유화가 끝나면 교반기를 이용하여 교반하면서 50℃까지 냉각한 후, 향료를 투입하고 45℃까지 냉각한 뒤 색소를 투입하고 35℃까지 냉각되면 상기 실시예 2의 애엽으로부터 분리한 이소세코타나파솔라이드 용해액을 투입한 후 25℃까지 냉각한 뒤 숙성시킨다. 비교제형예 4의 경우 이소세코타나파솔라이드 용해액을 제외한 것외에 제형예 4과 같은 방법으로 제조한다.

번호	원료	제형예 4	비교제형예 4
1	실시예 2	1.0	-
2	밀납	10.0	10.0
3	폴리솔베이트 60	1.5	1.5
4	솔비탄세스퀴올레이트	0.8	0.8
5	유동파라핀	40.0	40.0
6	스쿠알란	5.0	5.0
7	친유형 모노스테아린산 글리세린	1.0	1.0
8	카르복시 비닐 폴리머	0.2	0.2
9	부틸렌 글리콜	6.0	6.0
10	글리세린	6.0	6.0
11	트리에탄올아민	0.2	0.2
12	방부제	미량	미량
13	색소	미량	미량
14	향료	미량	미량
15	정제수	to 100	to 100

제형예 5: 에센스

상기 실시예 1에서 분리한 화합물 이소세코타나파솔라이드를 용해한 실시예 2의 용해액을 함유한 에센스를 하기 표 9의 조성으로 다음과 같이 제조하였다. 시토 스테롤, 폴리글리세릴 2-올레이트, 세라마이드, 스테아레스-4 및 콜레스테롤을 일정한 온도에서 균질화하여 비이온계 양친매성 지질이라 칭하였다. 상기 비이온계 양친매성 지질과 상기 실시예 1에서 분리한 화합물 이소세코타나파솔라이드 분말 ,디세틸포스페이트, 농글리세린 및 정제수를 혼합하고 일정한 온도에서 균질화하여 마이크로플루이다이져를 통과하고 이어 마카다미아 오일을 일정한 온도에서 서서히 첨가하여 균질화한 후 다시 마이크로플루이다이져에 재차 통과시켰다. 그리고 카르복시비닐폴리머, 산탄검, 방부제, 향료를 투입하여 분산시켜 안정화하고 숙성시켰다. 유화가 끝나면 교반기를 이용하여 교반하면서 50℃까지 냉각한 후, 향료를 투입하고 45℃까지 냉각한 뒤 색소를 투입하고 35℃까지 냉각되면 상기 실시예 2의 애엽으로부터 분리한 이소세코타나파솔라이드 용해액을 투입한 후 25℃까지 냉각한 뒤 숙성시킨다. 비교제형예 5의 경우 이소세코타나파솔라이드 용해액을 제외한 것외에 제형예 5과 같은 방법으로 제조한다.

번호	원료	제형예 5	비교제형예 5
1	실시예 2	1.0	-
2	시토스테롤	1.7	1.7
3	폴리글리세릴 2-올레이트	1.5	1.5
4	세라마이드	0.7	0.7
5	스테아레스-4	1.2	1.2
6	콜레스테롤	1.5	1.5
7	디세틸포스페이트	0.4	0.4
8	농글리세린	5.0	5.0
9	마카다미아 오일	15.0	15.0
10	카르복시비닐폴리머	0.2	0.2
11	산탄검	0.2	0.2
12	방부제	미량	미량
13	향료	미량	미량
14	정제수	to 100	to 100

제형예 6: 유화형 파운데이션

상기 실시예 1에서 분리한 화합물 이소세코타나파솔라이드를 용해한 실시예 2을 함유한 유화형 화운데이션을 하기 표 10의 조성으로 다음과 같이 제조하였다. 글리세린, 프로필렌글리콜, 부틸렌글리콜, 트리에탄올아민, 알루미늄마그네슘실리게이트, 안료, 방부제, 정제수를 혼합, 교반하면서 50내지 55℃ 사이로 가열하여 제조부에 투입한 후 유화기를 작용시키고 밀납, 사이크로메치콘, 유동파라핀, 스쿠알란, 스테아린산, 친유성 모노스테아린산 글리세린, 마카데미아 오일을 50 내지 55℃ 사이로 가열하여 투입한 뒤 유화한다. 유화가 끝나면 교반기를 이용하여 교반하면서 45℃까지 냉각한 뒤 향료를 투입하고, 35℃까지 냉각한 뒤 상기 실시예 2의 애엽으로부터 분리한 이소세코타나파솔라이드 용해액을 투입하고 25℃까지 냉각하여 숙성시킨다. 비교제형예 6의 경우 이소세코타나파솔라이드 용해액를 제외한 것외에 제형예 6과 같은 방법으로 제조한다.

번호	원료	제형예 6	비교제형예 6
1	실시예 2	1.0	-
2	밀납	2.0	2.0
3	사이크로메치콘	2.0	2.0
4	유동파라핀	5.0	5.0
5	스쿠알란	5.0	5.0
6	스테아린산	2.0	2.0
7	친유성 모노스테아린산 글리세린	3.0	3.0
8	마카데미아 오일	4.0	4.0
9	글리세린	4.0	4.0
10	프로필렌글리콜	3.0	3.0
11	부틸렌글리콜	3.0	3.0
12	트리에탄올아민	1.0	1.0
13	알루미늄마그네슘실리케이트	0.5	0.5
14	안료	12.0	12.0
15	방부제	미량	미량
16	향료	미량	미량
17	정제수	to 100	to 100

실험예 3: 아토피 피부 개선 효과 조사

상기 제형예 3의 화장료에 대한 아토피 피부 개선 효과의 임상평가를 측정하였다.

제형예 3 화장료의 아토피 피부의 개선 효과를 평가하기 위해, 아토피성 피부를 가지고 병원에 내원 하여 치료받는 소인 15명을 대상으로 다음과 같은 실험을 실시하였다. 시험 시료를 이중 맹검법(double-blinded test)에 의하여 각각 오른쪽과 왼쪽으로 나누어 전신에 도포하되, 가능한 한 시험시료의 효과에 영향을 미칠 수 있는 다른 보습제의 사용은 금지하였다. 시험 시료를 도포한 지 1, 2, 3, 4주 후의 효과를 스코래드 (SCORAD: SCORing Atopic Dermatitis) 측정법으로 식 1에 따라 계산하고 그 결과를 하기 표 11 에 나타냈다.

1) 판정기준

① 정도 기준(Extent criteria) : 면적 = 피손부위/100

② 강도 기준(intensity criteria)

- 홍반 (1/2/3)

- 부종 (1/2/3)

- 삼출 (1/2/3)

- 피부 벗겨짐 (1/2/3)

- 태선화 정도 (1/2/3)

- 건조 정도 (1/2/3)

③ 주관적 기준

- 가려움 (1~10)

- 불면증 (1~10)

[식 1]

분류	0주	1주	2주	3주	4주
제형예 3	72.5	48.2	35.1	21.5	14.3
	0%	33.5%	51.6%	70.3%	80.3%
비교제형예 3	72.5	62.3	55.8	49.2	47.8
	0%	14.1%	23.0%	32.1%	34.1%

상기 표 11을 통해 본 발명의 이소세코나타파솔라이드를 함유하는 처방예 3의 화장료가 비교제형예 3에 비해 아토피 피부 개선효과가 우수하다는 것을 알 수 있었다. 4주 후의 결과로 보아 80.3%의 개선 효과를 나타내고 있었으며, 이에 대한 아토피 피부의 개선율을 도식화하여 도 7에 나타내었다.

Claims (7)

1. 하기 화학식 [1]로 표시되는 이소세코타나파솔라이드(Isosecotanapartholide)를 유효성분으로 함유하는 아토피 피부염 개선용 화장료 조성물.
   화학식 [1]
   

   

   
   
2. 제 1항에 있어서, 상기 이소세코타나파솔라이드(Isosecotanapartholide)는 전체 화장료 조성물 중 0.1 ~ 5000ppm(0.00001 ~ 0.5 중량%) 함유되어 있는 것을 특징으로 하는 아토피 피부 개선용 화장료 조성물.
   
3. 제 1항에 있어서, 상기 이소세코타나파솔라이드(Isosecotanapartholide)는 애엽으로부터 분리된 것임을 특징으로 하는 아토피 피부 개선용 화장료 조성물.
   
4. 제 1항에 있어서, 상기 이소세코타나파솔라이드(Isosecotanapartholide)는 TSLP(thymic stromal lymphopoietin) 저해능에 의해 아토피 피부염 개선효과를 갖는 것을 특징으로 하는 아토피 피부염 개선용 화장료 조성물.
   
5. 제 1항에 있어서, 상기 이소세코타나파솔라이드(Isosecotanapartholide)는 MDC(macrophage-derived chemokine) 캐모카인 발현 억제에 의해 아토피 피부염 개선효과를 갖는 것을 특징으로 하는 아토피 피부염 개선용 화장료 조성물.
   
6. 제 1항에 있어서, 상기 이소세코타나파솔라이드(Isosecotanapartholide)는 TARC(thymusand activationregulated chemokine) 발현 억제에 의해 아토피 피부염 개선효과를 갖는 것을 특징으로 하는 아토피 피부염 개선용 화장료 조성물.
   
7. 제 1항에 있어서 상기 화장료 조성물의 제형이 유연화장수, 영양화장수, 에센스, 영양로션, 영양크림, 아이크림, 마사지크림, 클렌징크림, 클렌징폼, 클렌징워터, 파우다 또는 팩인 것을 특징으로 하는 아토피 피부 개선용 화장료 조성물.

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