KR20040096498A - 치료학적 방법 - Google Patents

치료학적 방법 Download PDF

Info

Publication number
KR20040096498A
KR20040096498A KR10-2004-7008211A KR20047008211A KR20040096498A KR 20040096498 A KR20040096498 A KR 20040096498A KR 20047008211 A KR20047008211 A KR 20047008211A KR 20040096498 A KR20040096498 A KR 20040096498A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
cancer
laminarin
diseases
water
viral
Prior art date
Application number
KR10-2004-7008211A
Other languages
English (en)
Inventor
쟝-클라우드 이벵
바크라브 베트비카
Original Assignee
라보라뚜아르 고에마르 에스.아.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 라보라뚜아르 고에마르 에스.아. filed Critical 라보라뚜아르 고에마르 에스.아.
Publication of KR20040096498A publication Critical patent/KR20040096498A/ko

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/715—Polysaccharides, i.e. having more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic linkages; Derivatives thereof, e.g. ethers, esters
    • A61K31/716—Glucans
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/02—Algae
    • A61K36/03—Phaeophycota or phaeophyta (brown algae), e.g. Fucus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/715—Polysaccharides, i.e. having more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic linkages; Derivatives thereof, e.g. ethers, esters
    • A61K31/737—Sulfated polysaccharides, e.g. chondroitin sulfate, dermatan sulfate
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/10—Antimycotics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Alternative & Traditional Medicine (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Medical Informatics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Transplantation (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Medicines Containing Plant Substances (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)

Abstract

본 발명은 종양 및 유방암, 폐암, 식도암, 위암, 장과 대장암을 포함하는 보다 일반적인 암을 치료하고, 바이러스성, 세균성 및 진균성 질병과 인간 및 항온동물의 면역자극 결핍 관련 질병을 치료하기 위해 유효량의 수용성 라미나린을 환자에게 투여하는 단계를 포함하는 치료방법에 관한 것이다.

Description

치료학적 방법{Therapeutical treatments}
본 발명자들의 발견은
- 본 발명에 개시한 바와 같이, 비교 실험에 의하면 일본에서 25년간 항암 치료의 보조제로 사용되어온 버섯으로 부터 추출된 다른 형태의 글루칸, 즉, 렌티난(lentinan)과 비교하여 특히 수용성 형태의 라미나린이 효율성 관점에서 탁월함을 나타내며, 그리고
- "항암 양성" 즉 종양에 대해 작용하는 것으로 여겨지는 렌티난, 커드란, 카이조필란(schizophyllan) 및 파키마란(pachymaran)(삼중 나선형)을 포함하는 글루칸 패밀리와 비교하여 라미나린 및 파키만(pachyman) 타입(단일 나선형)의 글루칸은 "항암 음성" 즉, 항암성을 갖지 않는 것으로 간주되었다(Chihara, National Cancer Center Research Institute, Tokyo, Japan, article under the title "Immunopharmacology of lentinan and glucans", published in EOS-Riv. Immonol. Immunopharmacol., 5:85, 1983)는 점에서 매우 중요하고 예상치 못한 발견이다.
본 발명의 또 다른 중요한 관점은 효과는 있으나, 물질의 고유한 독성과 결합된 문제가 있는, 사이토카인등의 면역 조절제를 사용하는 치료법인, 통상적인 치료법으로 종종 치료할 수 없었던 항생제-내성의, 원내감염(nosocomial infections) 발생 증가를 억제할 수 있는 치료방법을 가능하게 한다는 점이다.
본 발명은 치료방법에 관한 것이다. 좀 더 구체적으로, 해양 글루칸으로 알려진 라미나린, 구체적으로 수용성 라미나린(laminarin)의 면역촉진, 항암성 및 사이토카인 합성-유도 및 촉진 활성을 기초로한 치료방법에 관한 것으로, 상기 라미나린의 활성은 본 발명자들의 광범위한 연구와 조사를 통해 밝혀졌으며 이의 사용방법을 본 발명에 개시하고 청구하였다.
본 발명의 치료학적 방법은 암, 바이러스성, 세균성 및 진균성 질병과 환자, 즉 인간 및 항온동물의 면역자극 결핍과 관련된 질병을 치료하고자 목적하는 바이다.
라미나린은 갈조류로 부터 추출되어 해양 글루칸이라 불리며 분자량은 약 2500 내지 6000이다.
라미나린은 아세탈릭 β-(1,3) 결합으로 연결된 15 내지 35 글루코피라노스 단위의 주 선형 사슬로 이루어지며 분지(branch)된 비율이 낮은데, 특히 주요 β-D-글루코피라노스 단위의 제1 위치가 β-(1,6) 결합에 의해 연결되며, 상기 β-D-글루코피라노스 단위의 일부는 주 사슬에 연결되어있다
평균 중합도(degree of polymerisation)는 약 25이다.
주 사슬의 말단 단위는 글루코스 또는 만니톨로 이루어지며, 따라서 G 또는 M으로 각각 불리는 두 타입의 분자를 제공한다.
완전 가수분해는 글루코스 및 만니톨을 제공한다.
라미닌은 두가지 형태가 확인되었는데; 하나는 본 발명에서 바람직하게 사용되는 수용성 형태이며, 나머지 하나는 불용성인데, 후자는 분지가 드물거나 거의 없는 것으로 알려졌다.
상기 수용성 및 불용성 형태는 모두 라미나리아(laminaria) 종으로 부터 추출되었는데; 이들 종은 라미나리아 디지타타(laminaria digitata) 및 라미나리아 하이퍼보리아(laminaria hyperborea)이다.
수용성 라미나린은 무취 및 무미한 흰색 내지 베이지색 분말 형태로 생성되며; 상기 수용성 형태는 매우 흡습성이 강하며 수용성(최대 60g/ℓ)인 반면, 에탄올, 2-프로판올 및 아세톤에서는 실질적으로 불용성이다.
수용성 라미나린의 동정은 예를 들어 전류적정 검출기(amperometric detector)를 포함하는 디바이스를 사용하여 액상 크로마토그래피 방법으로 수행된다.
상기 절차는 다음을 사용하여 수행될 수 있다.
- 약 5㎛의 입자 크기를 갖는 비-다공성 중합 수지가 채워진, 길이가 250㎜이고 내부 직경이 4㎜인 음이온-교환 컬럼,
- 금 전극이 장착된 펄스 전류적정 검출기, 및
- 용액 A와 용액 B의 혼합물로 이루어진 이동상, 상기 용액 A는 초기에 30%이고 용액 B는 70%로 나타나며, 이후 4분 후에 A 등용매(isocratic)화되는데, 이는 상기 이동상이 A로만 이루어지게 됨을 의미한다.
상기 용액 A는 무입자의 물 950㎖에 41g의 소듐 아세테이트를 용해시키고46-48%의 NaOH 8.2㎖을 혼합하여 얻었다.
상기 용액 B는 무입자의 물 990㎖에 47%의 NaOH 8.2㎖이 혼합된 150mM NaOH 용액이다.
실험할 용액 50㎖을 주입하고 15분간 1㎖/분의 속도로 용리시켰다.
따라서 획득한 크로마토그램은 약 8분대에 최대 크기가 위치하는, 5, 8 및 12분사이를 포함하는 체류(retention) 가우스 피크(Gauss pic)를 포함한다.
이산화탄소 없는 물에 1g의 라미나린이 용해된 최종 10㎖ 수용액의 pH는 6.5 내지 7.5이다.
1g 수용성 라미나린의 연소 잔기는 5% 보다 높지 않다.
상기 수용성 라미나린의 전체 가수분해를 통해 얻은 산물의 푸코스(fucose) 함량을 적량하면서 액상 크로마토그래프를 통해 얻은 수용성 라미나린의 퓨칸(fucan) 함량은 5% 미만으로 나타났다.
언급한 바와 같이, 라미나린은 피오피시아(pheophyceae) 타입의 갈색 매크로파이트(macropytic) 해조류, 구체적으로는 퓨칼러스(fucales) 또는 라미나리아레스(laminariales)로 부터 추출되었다.
다양한 추출 방법을 사용할 수 있다.
예를 들어 블랙등의 Appl. Chem. 1951, 1, 505 내지 517페이지에 기술된 방법을 참고할 수 있다.
좀 더 일반적으로, 라미나린 이외의 다른 성분(벽 다당류, 염 등)을 연속적으로 제거할 수 있도록 제공되는 모든 추출 과정을 통해서 갈조류로 부터 획득될수 있다.
구체적으로, 상기 과정은 분쇄, 산 또는 염기성 매질로 침전, 한외여과법(ultrafiltration) 및 투석법을 포함하는 단계를 사용한다.
이후 획득한 산물은 선택된 조류에 따라 각각 다양한 비율로 존재하는 수용성 및 불용성 형태의 라미나린 혼합물로 이루어진다.
예를 들어, 라미나리아 디지타타 또는 라미나리아 사카리나는 99중량%의 수용성 형태를 포함하는 혼합물을 제공하는 반면, 라미나리아 하이퍼보리아는 80중량%의 불용성 형태를 포함하는 혼합물을 제공한다.
후자는 침전법을 통해 분리시킨다.
이하 실시예를 통해 수용성 라미나린의 추출 과정을 설명하나, 이에 제한된는 것은 아니다.
실시예 1
라미나리아 사카리나로 부터 수용성 라미나린의 추출
8월에 채취한 라미나리아 사카리나 타입의 신선한 조류 300g을 프랑스특허 제74 35162호에 기술된 과정을 통해 극저온파쇄(cryobursting)(-40℃)하였다.
획득한 산물은 50 내지 100㎛의 평균 입경과 10∼12%의 고체함량을 가졌다. 0.91양의 0.3% 황산을 상기 산물 300g에 점차 첨가하였다. 추출은 약 80℃ 온도의 수용조에서, 1시간 동안 교반하면서 수행하였다.
상기 작업을 두번 반복하였다.
중화반응을 수행한 후에 획득된 추출물에 약 1중량%의 폴리비닐피롤리돈을 처리하였다. 이는 90㎖ 부피의 추출물에 9g의 폴리비닐피롤리돈(PVP)를 넣어 수행되었다. 상기 PVP를 강화(thicken)시키기 위해 약 2시간동안 방치하였다. 상기 최종 용액을 약 0.9리터의 추출물에 첨가하였다. 상기 혼합물을 30분간 교반시키고 왓트만 GF/A필터로 진공 여과시켰다.
이후 상기 획득된 액체를 50.000달톤의 다공성을 갖는 "카보셉(Carbosep)" 타입의 탄소-세라믹 관형 막에서 접평면(tangential) 한외여과를 수행하였다. 작동중 여과 컬럼은 1바의 압력을 유지시켰다.
상기 여과액이 0.8리터의 부피 및 5.5의 pH를 갖도록 하였다. 상기 여과액을 4℃에서 하룻밤동안 유지시켰고; 침전된 불용성 형태의 라미나린을 여과법을 통해 제거하였고 이후 여과액을 500 또는 1000 달톤의 다공성을 갖는 SPECIRA 포어(pore) 타입의 셀루로스 에스테르 막으로 투석하였다. 상기 투석액을 감압동결건조하여 7g 건조 분말인 순수 수용성 라미나린을 얻었다.
상술한 연구 및 조사과정은 특히 수용성 라미나린에서 수행되었고, 본 발명자들은 세포독성에 대한 방어 반응에 대한 작용능을 결정하기 위한 실험을 더욱 수행하였다.
상기 관점에서, 본 발명자들은 우선 일반적인 방법으로 Balb/c 쥐의 비장으로 부터 분리한 비장 세포에서 실험관내 세포독성 분석을 수행하였다.
상기 테스트는 쥐의 NK(Natural Killer) 세포에 대한 수용성 라미나린의 세포독성 효과를 평가하고, 알려진 두개의 글루칸, 즉
1. 미국, 마그네틱 노스, 세인트 폴의 바이오폴리머 엔지니어링사로 부터 구입할 수 있는 효모-유래 글루칸인 BEI 및
2. 미국, 미저리, 세이트 루이스의 시그마사로 부터 구입한 상술한 렌티난으로, 식용 버섯인 렌티니우스 에도데스(Lentinius edodes)로 부터 분리한 1,3-β-D-글루칸인 렌티난과 상기 효과를 비교하기 위해 수행하였다.
상기 Balb/c 쥐로 부터 분리한 비장을 5중량%의 FCS(미국 라이프테크놀로지사의 소태아 혈청)가 보충된 미국, 라이프 테크놀로지사로 부터 구입한 RPMI 1640 배지를 함유하는 페트리 디쉬에 놓았다. 상기 비장을 작은 조각으로 자르고 PBS(Phosphate Buffered Saline)(미국, 매릴랜드 21793, 워커스빌, 빅스포드 로드 8830, 바이오윗테이커사로 부터 구매)를 함유하는 페트리 디쉬의 바닥에 잘게 자른 비장을 눌러서 현탁액을 만들었다. 이후 획득한 조직 단편을 5㎖ 실린지의 플런저를 사용하여 스테인레스틸 스크린에 조심스럽게 표본을 만들었다. 큰 파편 및 세포 덩어리는 10분간 얼음에서 열-불활성화된 FCS 3㎖로 세포 현탁액을 층을 만들어 제거하였다. 10초간 증류수에서 반응시켜서 적혈구를 제거하고 찬 PBS로 5번 세척한 후에, 비세포(splenocytes)를 얻고, 이를 PBS에 재현탁시켜서 세포수를 측정하였다.
과정은 다음과 같다.
트립판 블루(시그마사) 용액(0.4%w/v 수용액) 0.25㎖을 0.15㎖의 PBS 및 0.1㎖의 상술한 세포 현탁액(2.6×106세포/㎖ 포함)과 혼합하였다.
상기 혼합 용액을 상온에서 5분간 방치하였다.
상기 현탁액의 소량을 헤모사이토미터 챔버 또는 커버 글래스에 옮기고 현미경으로 세포수를 측정하였다.
죽은 세포는 파란색으로 염색되므로 쉽게 구별할 수 있다.
V%로 나타내는 세포 생육성을 하기 수학식 1을 사용하여 결정하였다.
95% 보다 높은 V%의 세포 현탁액만을 이후 실험에서 사용하였다.
상기 세포 현탁액의 세포독성 평가를 프로메가사(미국, 위스콘신, 매디슨)의 상품명 CYTOTOX96으로 판매되는 비방사능 세포독성 분석법을 사용하여 수행하였다.
상기 실험을 위해서, "작동 세포(effector cells)"로 불리는 비세포를 각각 수용성 라미나린, 렌티난 및 BEI 글루칸을 함유하는 현탁액과 30분간 혼합하여 미리 처리하였고; 상기 혼합물을 정상 불활성 NK 세포에 비교적 내성을 갖는 것으로 알려진 종양 세포계 YAC-1 현탁액과 함께 배양시켰다.
상기 분석의 특이성은 ET : 10:1, 50 : 1 및 100 : 로 표시한 세개의 다른 작동 세포/표적 세포 비율을 사용하여 확립하였다.
각 비율에 대해서, 세번 세포수를 측정하였고 실험은 3일간 3번 반복하였다.
대조구는 PBS에서만 배양한 작동 세포로 이루어진다.
좀 더 구체적으로, 상술한 비세포(작동 세포)의 세포 현탁액을 106세포/㎖로 희석하고 0.1㎖/웰 농도로 V-형태의 96-웰 마이크로 플레이트의 각 웰에 놓았다.
분말 형태의 라미나린, 렌티난 및 BEI 글루칸을 PBS에 용해시킨후 2㎍/㎖의 동일한 농도로 첨가하고 상기 플레이트를 37℃의 CO2배양기에서 30분간 배양하였다.
배양한 후, 상기 플레이트, 즉 웰에 함유된 배양 세포를 RPMI 1640 배지로 세번 세척하고 50㎕의 표적 세포계 YAC-1 현탁액을 상기 "작동 세포/표적 세포" 비율 또는 ET : 10:1, 50:1 및 100:1 대해서 각 웰에 첨가하였다.
각 비율에 대해서, 3개의 웰을 각각 사용하였고, 표적 세포의 수는 각각 104, 2×103및 1×103이다.
또한, 자발적 방출(spontaneous release) 대조구용 표적 세포, 최대 방출 대조구 및 작동 세포 방출 대조구용 표적 세포를 적절한 웰, 즉 각 사용 농도의 3개 웰에 도입하였다.
자발적 방출 대조구, 최대 방출 대조구 및 작동 세포 방출 대조구란 표현은 각각
- 자발적 LDH 방출 표적 세포
- 용출 용액 첨가 이후에만 표적 세포가 있는 웰에서 LDH 방출
- 자발적 LDH 방출 작동 세포(NK 세포)를 의미한다.
근본적으로, 표적 및 작동 세포 모두로 부터 자발적 방출 값을 획득하는 것이 필수적이며, 상기 값은 배경정보(background)로 사용된다. 최대 방출 대조구는 100%이다.
상기 플레이트를 250g에서 5분간 원심분리한 후, 상기 플레이트를 35℃의 CO2배양기에서 4시간 동안 배양하였다.
작동 또는 NK 세포의 세포독성 활성을 평가하기 위한 방법은 프로메가사의 제조사 설명서에 따라 수행하였다.
다시, 프로메가사의 제품명 CYTOTOX96으로 판매되는 비방사능 세포독성 분석 키트를 사용하였다.
상기 키트에 포함되어 있는 용출 용액 10㎕를 배양 종료 전 45분에 적절한 대조구 웰, 즉 최대 방출 대조구를 갖는 웰에 첨가하였다.
이후 단계는 상기 플레이트를 250×g에서 5분간 원심분리하고, 50㎕의 상층액을 평면-바닥 96-웰 마이크로플레이트로 옮겼다.
50㎕의 가공 기질(12㎖의 분석 완충용액을 기질 믹스 병에 첨가하여 가공 기질로 사용하였다)을 각 웰에 첨가하고; 상기 플레이트를 덮어서 상온에서 30분간 암반응시켰다.
상품명 STL ELISA인 Tecan U.S.사(미국, 리서치 트라이앵글 파크, 노스 캐롤라이나)에서 판매되는 키트로 이루어진 리더기를 사용하여 각 웰의 흡광도를 492㎚에서 측정하였다.
특이적인 세포-매개 세포독성을 키트에 포함된 제조사의 설명서에 개시된 하기 수학식 2를 사용하여 산출하였다.
상기 수학식 2에서,
- "OD492실험"은 작동 세포 존재하에서 용출된 표적세포를 492㎚에서 측정한 흡광도이고,
- "OD492자발적"은 자발적 방출로, 즉, 배지 단독으로 배양한 표적 세포 현탁액을 492㎚에서 측정한 흡광도이며,
- OD492최대"는 최대 방출로, 즉, 키트에서 제공된 용액으로 용출시킨 표적세포를 492㎚에서 측정한 흡광도이다.
라미나린, BEI, 렌티난 및 대조구에 대해서 상기 세개의 "작동세포/표적세포"비율에서 세번의 실험을 각각 수행하였다.
각각의 경우 세번 실험의 평균 값으로 사멸 세포의 평균 퍼센트를 결정하였다.
그 결과는 하기 표 1에 나타내었다.
사멸세포 %(기록값 및 표준편차)
자동세포/표적세포 비율(ET) ET = 10 : 1 ET = 50 : 1 ET = 100 : 1
렌티난 40.1 + 4.6 46.3 + 2.3 52.8 + 2.4
BEI 36.2 + 4.9 46.8 + 2.4 56.3 +2.6
라미나린 48.1 + 4.4 57.3 + 5.3 72.7 + 5.5
대조구 19.6 + 7.1 29.2 + 3.9 40.4 + 4.8
도 1에는 상기 결과를 그래프로 나타내었는데, 표 1에 나타낸 사멸 세포의 퍼센트는 Y축상에 나타내었고; X 축은 실험한 각각의 산물, 즉 수용성 라미나린, BEI, 렌티난 및 대조구에 대한 세개의 상술한 비율을 나타내었다.
이하 도 1의 실험으로 부터 유도된 결론을 설명하면 다음과 같다.
ET 값이 증가함에 따라서, 대조구(PBS로만 배양한 작동세포)는 표적 세포 사멸이 일정하게 증가됨을 나타내었다.
수용성 라미나린에 의해 유도된 사멸과 대조구, 즉 비자극성 NK 세포에 의해 유도된 사멸을 비교하면 P 0.05(각 도면은 ±5%로 제공됨을 의미함)에서 상당한 차이를 나타내었는데; 따라서, ET 10 :1에서, 수용성 라미나린 자극 NK 세포는 대조구 보다 245% 이상 세포독성을 갖고, ET 50 : 1에서, 대조구 보다 196% 이상의 세포독성을 나타내었으며, ET 100 : 1에서 180% 이상 대조구보다 세포독성을 나타내었다.
유사하게, 수용성 라미나린 자극 NK 세포 사멸을 렌티난-자극 NK 세포 사멸과 비교하면, 수용성 라미나린은 P 0.05수준에서 상당하게 더욱 활성을 나타내었는데: 렌티난보다 ET 10 : 1에서 133%, ET 50 : 1에서 123%, 및 ET 100 : 1에서 130% 이상 활성을 나타내었다.
BEI-자극 세포 사멸과의 비교는 수용성 라미나린이 P 0.05 수준에서 보다 활성이 있음을 보여주었는데 : ET 10 : 1에서는 132%, ET 50 : 1에서는 122%, 및 ET 100 : 1에서는 129%로 BEI보다 활성을 나타내었다.
결과적으로, 라미나린은 테스트한 세 글루칸 중 가장 높은 활성을 나타내었다.
상기 결과는 종양 세포의 증강된 사멸을 통한 자극에 반응하는 자연세포독성 세포(natural killer cell)에 대해 매우 강한 자극 효과를 갖음을 증명하는 것이다.
상기 결과는 시험관내 종양 성장에 대한 수용성 라미나린의 효과를 평가하고; 효모 유래 글루칸 BEI를 비교대상으로 사용한 추가적인 실험을 통해 확인되었다.
추가적인 실험에서, 쥐에 쥐 유방암 세포계 64Ptas를 접종하였다. 실험적 치료는 PBS에 희석된 두개의 다른 용량의 수용성 라미나린 및 BEI를 14일간 날마다 복강내 주사하여 수행하였으며; 상기 복용량은 각각 주사당 100 및 250㎍의 라미나린이다.
14일 치료 종료시에, 상기 쥐를 죽이고, 종양을 제거하여 무게를 측정하였다.
수용성 라미나린을 처리한 쥐의 경우, 종양의 무게는 대조구 처리한 종양 무게에 대해 28%를 나타내었고 BEI의 경우는 대조구 처리한 종양 무게에 대해 41%를 나타내었다.
상기 결과는 BEI에 의한 효과에 보다 탁월한 효과를 있을 뿐만 아니라 라미나린 처리한 쥐에서 암 성장이 상당히 저해되었음을 분명하게 증명하는 것이다.
상기 결과에 따라서, 본 발명의 목적은 라미나린, 바람직하게 상기 라미나린 및 약제학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 조성물에 포함된 수용성 라미나린을 종양 또는 암 또는 바이러스성 질병, 세균성 질병, 진균성 질병, 면역체계의 질병, 자가면역 질병 또는 인간 또는 항온동물의 면역자극 결핍과 관련된 질병을 겪고 있는 인간 또는 동물에게 투여하는 단계를 포함하는 치료방법으로 이루어지며, 상기 라미나린의 양은 상기 종양 또는 암 또는 질병을 치료하는데 유효한 양이다.
본 발명의 목적은 또한 종양 및 보다 일반적으로 유방암, 폐암, 식도암, 위암, 장 및 대장암의 치료, 및 바이러스성, 세균성 및 진균성 질병과 인간과 항온동물의 면역자극 결핍과 관련된 질병을 치료하기 위해서 유효량의 특히 수용성 라미나린을 환자에게 투여하는 단계를 포함하는 치료방법으로 이루어진다.
"유효량"은 대조구 또는 암세포 또는 바이러스 감염 세포를 바람직하지 못한 독성 증상없이 파괴시키는 것과 같이 예상되는 의학적 결과를 얻을 수 있는 라미나린의 농도 또는 양 또는 수준을 의미하며; 상기 유효량은 치료할 특별한 상태, 환자의 신체 상태 및 치료 기간 등의 요소에 따라 다양할 수 있다.
본 발명의 다른 목적은 종양 및 좀 더 일반적으로 유방암, 폐암, 식도암, 위암, 장 및 대장암을 포함하는 암 그룹, 및 바이러스성, 박테리아성 및 진균성 질병과 인간 및 항온동물의 면역자극 결핍과 관련된 질병 환자의 NK 세포를 자극하여 치료하는 방법으로 이루어지며, 상기 방법은 유효량의 특히 수용성 라미나린을 환자에게 투여하는 단계를 포함한다.
본 발명의 또 다른 목적은 종양 및 좀 더 일반적으로 유방암, 폐암, 식도암, 위암, 장 및 대장암을 포함하는 암 그룹, 및 바이러스성, 세균성, 및 진균성 질병과 인간 및 항온동물의 면역자극 결핍과 관련된 질병 환자의 NK 세포 자극을 통한 치료방법으로 이루어지며, 상기 방법은 라미나린, 바람직하게 상기 라미나린 및 약제학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 조성물에 포함된 수용성 라미나린을 환자에게 투여하는 단계를 포함하며, 상기 라미나린의 양은 상기 종양, 암 및 질병을 치료하는 데 유효한 양이다.
본 발명은 또한 TNF-알파, 즉, 각각 단핵구/대식세포(monocyte/macrophages)및 T 림프구(lymphocytes)로 부터 주로 분비되는 다면발현성(pleiotropic) 사이토카인인 종양괴사인자(tumor necrosis factor) 알파의 생성에 대한 라미나린의 효과를 확인하였다.
TNF-알파는 원래 종양이 있는 쥐에서 종양 괴사를 유도하는 바실러스 칼메트-구에린(Bacillus Calmette-Guerin)-처리한 쥐의 혈청에 존재하는 인자로 기술되었었다.
TNF-알파는 그람 음성 세균에 대한 자연면역의 주요한 매개체이며 염증반응과 감염충격의 결정적인 매개체이다.
또한, 특정 표적 세포 및 종양에 대한 세포독성 효과, 표적 세포에서 MHC "주 조직적합 복합체(major histocompatibility complex)" 클래스 I 및 II 분자의 유도, 다형핵 백혈구(polymorphonuclear leukocytes)의 활성화, 및 T와 B 림프구에 대한 상호자극 효과를 포함하는 다양한 활성을 갖는다.
TNF 수용체의 세포외 형태가 존재하고 생물학적 체액에서 나타나며, TNF 활성의 조절인자로 작용할 가능성이 있으며; TNF 활성은 TNF가 생물계에서 갖는 모든 생물학적 활성을 의미한다.
TNF-알파의 옛날 생분석법은 표적 세포에 대한 세포독성 효과에 기초하였다. 최근에는, 매우 특이적인 상업용 키트를 사용하여 보다 빠르고 신뢰성있게 TNF-알파 생산을 측정할 수 있다.
상기 결과 이후 TNF-생산을 자극하는 데 관심을 갖게 되었으며 본 발명자들은 놀랍게도 예상치 않게 라미나린 특히 수용성 라미나린을 처리하였을 때 상기와 같은 자극이 가능하며, TNF-알파의 작용을 통해 특히 암에 대한 개체의 자연 방어능력이 개선됨을 확인하였다.
결과적으로, 본 발명의 또 다른 목적은 종양 및 보다 일반적으로 유방암, 폐암, 식도암, 위암, 장 및 대장암을 포함하는 암 그룹, 및 바이러스성, 세균성 및 진균성 질병과 인간 및 항온동물의 면역자극 결핍과 관련된 질병을 TNF-알파의 생산 자극을 통해 치료하는 방법으로 이루어지며, 상기 방법은 유효량의 바람직하게는 수용성 라미나린을 환자에게 투여하는 단계를 포함한다.
상기 바람직한 수용성 라미나린은 상기 라미나린과 약제학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 조성물에 포함되며, 상기 라미나린의 양은 상기 종양, 암 또는 질병을 치료하는 데 유효한 량이다.
본 발명자들에 의해 수행된 실험과 관련하여, Balb/c 쥐에 PBS에 존재하는 250㎎의 라미나린 또는 렌티난(미국, 미저리, 세인트루이스, 시그마사로 부터 구입)을 복강내 주사하였다.
대조구 쥐는 PBS만을 처리하였다.
라미나린, 렌티난 및 PBS만을 주사한 이후, 다양한 시간 간격(각각 10, 30, 60 및 90분) 후에, 쥐를 죽이고 혈액을 에펜도르프 튜브에 회수하였다.
이후, 상기 회수한 혈액에서 혈청을 분리하여 모아서 -80℃에서 1주일간 보관하였다.
혈청 시료의 TNF-알파의 농도를 파밍젠사(Company Pharmingen)(미국, 캘리포니아, 샌디에고)의 상품명 OptEIA Mouse TNF-alpha(Mono/Mono)로 판매되는 키트를 사용하여 측정하였으며; 제조사의 설명서에 따라 수행하였다.
이에 따라서, 96-웰 플레이트의 웰을 코팅 완충용액(상기 키트에 제공됨)으로 희석한 0.1㎖/웰의 포획 항체(상기 키트에 제공됨)로 코팅하였는데: 상기 "포획 항체"는 웰 코팅용으로 사용된 1차 항체를 의미하고; 상기 항체는 용액으로 부터 테스트할 사이토카인을 포획하며; 상기 분석에서 상기 항체는 항-쥐-TNF-알파 단일클론 항체다.
상기 플레이트를 밀봉하고 4℃에서 밤새 배양하였다.
각각의 웰을 흡입을 통해 비우고 동일한 세척 완충용액 300㎕/웰 이상으로 3번 세척하였다.
기준(상기 키트에 또한 제공됨) 및 시료 혈청을 분석 희석액(키트에 또한 제공됨)에 희석시키고 적당한 웰에 피펫으로 옮겼으며(100㎕/웰); 용해속도를 고려하여 기준 시료(키트의 일부)를 설명서에 따라 다음과 같은 농도로 희석하였다:1000pg/㎖, 500pg/㎖, 250, 125, 62.5, 31.3 및 15.6pg/㎖.
상기 플레이트를 플라스틱 호일로 밀봉하고 60분간 상온에서 배양하였다. 각 웰을 흡입을 통해 비우고 300㎕/웰 이상의 동일한 세척 완충용액으로 세번 세척하였다.
기질 용액(키트에 또한 제공되) 100㎕/웰을 각 웰에 첨가하고 플레이트를 30분간 상온에서 암반응시켰는데; "기질 용액"은 과산화수소를 함유하는 기질 시약 A와 유기용매에 존재하는 3,3',5,5'-테트라메틸벤지딘을 함유하는 기질 시약 B를 혼합하여 형성시켰고; 상기 두 시약을 함께 혼합시, 상기 시약은 퍼옥시다제-표지된 접합물과 반응하여 파란색으로 나타났다.
키트에 제공된 반응을 멈추기 위한 정지 완충용액 50㎕/웰을 각 웰에 첨가하고 STL ELISA(테칸 유에스사, 리서치 트라이앵글 파트, 노스캐롤라이나)를 사용하여 570㎚에서 보정과 동시에 450㎚에서 흡광도를 측정하였다.
상술한 바와 같이 처리한 쥐의 혈액에 존재하는 pg/㎖ 단위의 TNF-알파 농도를 수용성 라미나린, 렌티난 및 대조구 주사후 10, 30, 60, 및 90분에 측정하였다.
그 결과는 하기 표 2에 나타내었다.
250㎍의 수용성 라미나린, 렌티난 또는 대조구를 처리한 쥐에서 TNF-알파의 농도,㎍/㎖ (기록값 및 표준편차)
주사 및 측정사이 기간(분) 10 30 60 90
수용성 라미나린 0 51.98 + 6.3 64.20 + 8.9 83.48 + 4.1
렌티난 0 31.03 + 5.1 27.55 + 3.7 25.99 + 6.2
대조구 0 1 0 2
도 2는 표 2의 결과를 나타낸 그래프로, 수용성 라미나린, 렌티난 또는 대조구의 작용을 분으로 나타낸 기간(t)에 따른 실험 쥐의 혈액에서 ㎍/㎖ 단위의 TNF-알파 농도 변화를 나타낸 그래프이다.
도 2에서 수용성 라미나린, 렌티난 및 대조구 존재하에서 TNF-알파의 변화는 각각 곡선 A, B, 및 C로 나타내었다.
표 2 및 도 2의 결과로 부터 유추할 수 있는 결론은 TNF-알파 분비 증가로 측정된, 대식세포 및 세포독성 T 림프구의 간접적인 활성화는 렌티난 대신 수용성 라미나린을 사용하였을 때 상당히 높다는 것이다.
상술한 두 종류의 실험으로 부터, 수용성 라미나린이 NK 세포의 활성화에 의해 특이적이고 TNF-알파 생성 자극에 의해서 비특이적으로 면역 반응에 대한 이중 효과가 있음을 알 수 있다.
결론적으로, 본 발명자들은 수용성 라미나린 치료법이 암 및 세균성, 바이러스성, 진균류 또는 통성병원 질병(opportunistic diseases)등의 감염 질병, 질병, 자가-면역 질병, 알레르기 질병, 및 자극이 필요한 포유류의 면역 체계에 존재하는 모든 질병을 포함하는 다른 질병을 포함하는 다양한 질병에 유망한 치료법으로 완성될 수 있음을 증명하였다.
상기 심사숙고된 치료법은 이하 기술할 약량학적 및 약제학적 형태를 포함한다.
복용량은 특히 투여 형태에 따라 다양하다.
정맥내 투여할 경우 수용성 라미나린의 용량은 일일 당 약 0.1 내지 10㎎이다.
복강내 투여할 경우는 5 내지 15일의 기간 동안 일일당 약 0.1 내지 50㎎/㎏의 용량이며; 상기 기간은 반복가능하다.
경구 투여일 경우, 상기 용량은 약 1 내지 100으로 다양하며 바람직하게는 약 10㎎/㎏으로, 장기간에 걸쳐서 가능하면 환자의 전체 수명동안 일주일에 두번 투여한다.
따라서, 본 발명의 목적은 바람직하게 수용성 라미나린을 일일 당 0.1 내지 10㎎의 양으로 정맥내 투여하여, 종양 및 보다 일반적으로 유방암, 폐암, 식도암, 위암, 장 및 대장암을 포함하는 암 그룹, 바이러스성, 세균성 및 진균성 질병과 인간 및 항온 동물의 면역자극 결핍과 관련된 질병을 치료하는 방법으로 이루어진다.
본 발명의 다른 목적은 바람직하게 수용성 라미나린을 5 내지 15일의 기간동안 0.1 내지 약 50㎎/㎏의 양으로 복강내 투여하여, 종양 및 보다 일반적으로 유방암, 폐암, 식도암, 위암, 장 및 대장암을 포함하는 암 그룹, 바이러스성, 세균성 및 진균성 질병과 인간 및 항온 동물의 면역자극 결핍과 관련된 질병을 치료하는 방법으로 이루어진다.
본 발명의 다른 목적은 바람직하게 수용성 라미나린을 장기간에 걸쳐서 바람직하게 일주일에 두번, 1 내지 100 및, 바람직하게는 약 10㎎/㎏의 양으로 경구 투여하여, 종양 및 보다 일반적으로 유방암, 폐암, 식도암, 위암, 장 및 대장암을 포함하는 암 그룹, 바이러스성, 세균성 및 진균성 질병과 인간 및 항온 동물의 면역자극 결핍과 관련된 질병을 치료하는 방법으로 이루어진다.
라미나린, 특히 수용성 형태는 안전한 것으로 간주된다.
이의 LD50은 높으며 랫트에 2000㎎/㎏보다 많은 양을 경구 투여하여 결정되었으며; 또한 특별한 조작이 요구되지 않는다.
본 발명에 따른 약학 제제는 유효량의 수용성 라미나린, 및 바람직하게, 약제학적으로 허용가능한 담체와 일반적으로 혼합되는 보강제를 포함한다.
상기 "보강제"는 라미나린의 효율성을 개선 또는 증가시키거나 면역 체계에서 면역-조절제로 작용하는 물질을 의미하며 라미나린과 혼합되어 사용된다.
상기 "약제학적으로 허용가능한 담체"는 약제학적으로 허용가능한 용매, 현탁제 또는 운반체를 포함하는 군으로 부터 선택되고, 투여, 및 표준 약제학적 수단에 따라 선택되며; "허용가능한"은 제제의 다른 성분과 융화되며 환자에게 해가 없는 담체를 의미한다.
보다 일반적으로, "약제학적으로 허용가능한 성분"은 독성, 염증, 및 알레르기 반응과 같은 부적당한 역 부작용이 존재하지 않거나 유도하지 말아야하며 타당한 위험편익비를 가져야만 한다.
본 발명과 관련된 사용에 적합한 경구 제제는 캡슐, 겔, 카세제, 기포 또는 비기포 분말, 타블렛, 및 미립을 포함하며; 이들은 용액, 수용액 또는 비수용성 액상 현탁액, 오일-인-워터(oil-in-water) 액상 이멀젼 또는 워터-인-오일 이멀젼으로 이루어진다.
라미나린을 투여하는 약제학적 형태는 또한 거환(bolus), 연질약 또는 페이스트로 존재할 수 있다.
일반적으로, 상기 제제는 활성 성분을 균일하게 혼합하여 제조되는데, 즉,특히 수용성 라미나린을 액상 담체 또는 미세분리된 고상 담체 또는 이들 둘과 함께 혼합하고, 필요하다면 산물을 성형시켜 제조될 수 있다.
적절한 고상 담체는 락토스, 수크로스, 젤라틴, 아가 및 벌크 분말을 포함한다.
적절한 액상 담체는 물, 약제학적으로 허용가능한 지질 및 오일, 알콜 또는 에스테르류를 포함하는 다른 유기 용매, 이멀젼, 시럽 또는 엘릭시르, 현탁액, 용액 및/또는 현탁액, 및 비-기포 미립자로 가공된(reconstituted) 용액 및 또는 현탁액과 기포 미립자로 가공된 기포제를 포함한다.
이들은 또한 보존제, 이멀젼화제, 현탁화제, 희석제, 감미제, 증점제(thickener), 및 융해제를 포함하며; 바람직한 액상 담체는 식용 오일, 예를 들어, 옥수수 또는 캐놀라 오일과 폴리에틸렌글리콜 또는 PEG이다.
경구 투여용의 치료학적 형태는 락토스, 전분, 수크로스, 글루코스, 메틸 셀룰로스, 마그네슘스테아레이트, 디칼슘포스페이트, 칼슘설페이트, 만니톨, 솔비톨, 사이클로덱스트린, 및 사이클로덱스트린 유도체를 포함하는 군으로 부터 선택된 비독성, 약제학적으로 허용가능한 불활성 담체를 포함한다.
본 발명에 따라 라미나린을 함유하는 캡슐 또는 타블렛은 바람직하게 삼키거나 씹기 쉬어야하며, 담체, 바인더, 윤활제, 희석제, 붕해제, 착색제, 풍미제, 흐름-유도제(flow-inducing agents)를 함유하며; 이들은 압축 또는 몰딩을 통해서, 선택적으로 하나 이상의 통상적인 추가 성분과 함께 제조될 수 있다.
상기 타블렛은 선택적으로 코팅되고 활성 성분의 느린 방출 또는 제어 방출을 제공하도록 제제화될 수 있다. 타블렛은 또한 선택적으로 장관 코팅되어 위보다는 창자의 일부에서 방출되도록 제공될 수 있다.
라미나린은 선택적으로 화학요법제, 또는 보강제와 결합되어 병용 치료법(combination therapy)을 제공할 수 있다.
병용 치료법은 순차적인데, 이는 치료가 하나의 약제로 수행되고 이후 제2 약제로 수행됨을 의미하거나; 또는 동시에 두 약제를 처리할 수 있다. 상기 순차적 치료법은 제2 치료 시작 전 제1 치료의 완료 이후 적당한 시간안에 수행된다. 동시에 두 약제를 동일한 일일 복용량 또는 다른 복용량으로 처리할 수 있다.
예를 들어:
- 레트로바이러스 감염의 경우, 병용 치료법은 수용성 라미나린을 AZT와 같은 뉴클레오사이드 유사물과 함께(역전사효소의 저해제와 함께), 또는 리토나비르(ritonavir)와 같은 프로테아제 저해제와 함께 처리하는 것으로 이루어질 수 있다.
- 암 질병의 경우, 병용 치료법은 수용성 라미나린을 토포테캄(topotecam), 안트라사이클린(antracycline)과 같은 국소이성화효소(topoisomerase) 저해제, 또는 사이타라빈(cytarabine), 플루오로우라실등의 항대사제와 함께 처리하는 것으로 이루어질 수 있다.
실시예 a
라미나린 함유 타블렛
다량의 타블렛을 통상적인 방법으로 제조하였으며 용량 단위는 타블렛 당100㎎의 활성 성분이다:
- 동결건조형태의 수용성 라미나린 ----------------- 100㎎
- 콜로이달 실리콘디옥사이드 ---------------------- 0.2㎎
- 마그네슘스테아레이트 --------------------------- 5㎎
- 마이크로크리스탈린 셀루로스 -------------------- 270㎎
- 전분 ------------------------------------------- 10㎎
- 만니톨 ----------------------------------------- 98.8㎎
미감을 증가시키고 및/또는 흡수를 지연시키기 위해 적절한 코팅을 사용하였다.
실시예 b
라미나린 함유 미립자
75g의 수용성 라미나린을 함유하는 1리터의 수용액을 10g의 덱스트린과 혼합하고, 얻은 혼합물을 식용 즉, 전분, 솔비톨, 카르복시-메틸-셀룰로스, 락토스, 만니톨, 구아검, 바닐린에 흡수병합하였다.
최종 분말을 1㎜의 그물을 사용하여 압출 그래뉼래이트로 압출성형시켰다.
상기 미립자를 12메쉬 체에 거르고 최종 미립자를 60℃ 건조기에서 밤새 건조시켜서 약 25중량%의 라미나린 및 약 3%의 습기를 함유하는 미립자를 제공하였다.
상기 미립자는 음용수 또는 이의 동등물의 첨가제로 사용된다.
예를 들어, 상기 미립자에 대해 성인 하루 6 내지 9 티스푼 및 유아는 하루2 또는 3 티 스푼의 약량학이 추천된다.
실시예 c
불용성 라미나린 함유 경구 투여용 약제 형태;
1-정제(lozenges)
- 불용성 라미나린 분말 -------------------- 5중량부
- 풍미담체 만니톨 ------------------------- 20중량부
- 전분 ------------------------------------ 25중량부
- 솔비톨 ---------------------------------- 30중량부
- 수크로스 -------------------------------- 20중량부
2-구강청결제(mouthwashes)
- 라미나린 --------------------------------- 1%
- 자일리톨 결정, 소듐 사이클라마테이트, 알콜, 소르브산, 민트향, 멘솔, 유지놀, 소듐파라하이드록시벤조에이트 및 정제수를 함유하는 액상 담체.
실시예 d
수용성 라미나린 함유 질 투여용 약제 형태;
1%의 수용성 라미나린의 질 크림:
- 수용성 라미나린 --------------------------- 1%
- 부형제 : 바셀린, 비이온 이멀젼 왁스, 액상 파라핀, 글라이신, 소듐하이드록사이드 농축용액 qsq pH = 4 내지 5, 소르브산, 정제수.
실시예 e
좌약 당 다음의 표시된 제제를 갖는 좌약으로 존재하는 수용성 라미나린 함유 직장 투여용 약제 형태:
- 수용성 분말 라미나린 ------------------------------------ 8㎎
- 레티놀 농축물 또는 오일 형태인 합성 비타민 A ------------ 1500UI
- 부형제 : 반합성 글리세라이드
실시예 f
코 스프레이같은 액상 형태로 투여될 수 있는 코 투여용 수용성 라미나린 함유 약제 형태
- 수용성 라미나린 ------------------------------- 1%
- 안식향산(benzoic acid) ------------------------ 200㎎
- 부형제 : 포타슘설페이트, 포타슘하이드록사이드, 벤즈알코늄클로라이드, 알콜, 로즈메리 에센스 오일, 정제수 qsq.
실시예 g
1㎖ 앰플 주사 용액과 같은 비경구 투여용 수용성 라미나린 함유 약제 형태
- 수용성 라미나린 ------------------------------- 2㎎
- 부형제 : 클로로하이드릭산 또는 소듐하이드록사이드 qsq pH : 5.0 내지 7.5, 주사용 USP 물.
실시예 h
- 5% 수용성 라미나린의 어더 겔(udder gel) 같은 수용성 라미나린 함유 가축용 제제:
- 수용성 라미나린 ------------------------------ 5%
- 살리실산 -------------------------------------- 1%
- 부형제 : 프로필렌 글리콜, 하이프로멜로스, 포타슘솔베이트, 정제수.

Claims (8)

  1. 종양 및 보다 일반적으로 유방암, 폐암, 식도암, 위암, 장과 대장암을 포함하는 보다 암 그룹을 치료하고, 바이러스성, 세균성 및 진균성 질병과 인간 및 항온동물의 면역자극 결핍 관련 질병을 치료하기 위해 유효량의 수용성 라미나린을 환자에게 투여하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 치료방법.
  2. 종양 및 보다 일반적으로 유방암, 폐암, 식도암, 위암, 장과 대장암을 포함하는 암 그룹, 및 바이러스성, 세균성 및 진균성 질병과 인간 및 항온 동물의 면역자극 결핍 관련 질병 환자를, NK 세포 자극을 통해서 치료하기 위해 유효량의 수용성 라미나린을 환자에게 투여하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 치료방법.
  3. 종양 및 보다 일반적으로 유방암, 폐암, 식도암, 위암, 장과 대장암을 포함하는 암 그룹, 및 바이러스성, 세균성 및 진균성 질병과 인간 및 항온 동물의 면역자극 결핍 관련 질병을 TNF-알파 생산을 자극하여 치료하기 위해 유효량의 수용성 라미나린을 환자에게 투여하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 치료방법.
  4. 종양 및 보다 일반적으로 유방암, 폐암, 식도암, 위암, 장과 대장암을 포함하는 암 그룹, 및 바이러스성, 세균성 및 진균성 질병과 인간 및 항온 동물의 면역자극 결핍 관련 질병을 치료하기 위해, 일일 0.1 내지 10㎎의 수용성 라미나린을정맥내 투여하는 것을 특징으로 하는 치료방법.
  5. 종양 및 보다 일반적으로 유방암, 폐암, 식도암, 위암, 장과 대장암을 포함하는 암 그룹, 및 바이러스성, 세균성 및 진균성 질병과 인간 및 항온 동물의 면역자극 결핍 관련 질병을 치료하기 위해, 5 내지 15일간 일일 0.1 내지 약 50㎎/㎏의 수용성 라미나린을 복강내 투여하는 것을 특징으로 하는 치료방법.
  6. 종양 및 보다 일반적으로 유방암, 폐암, 식도암, 위암, 장과 대장암을 포함하는 암 그룹, 및 바이러스성, 세균성 및 진균성 질병과 인간 및 항온 동물의 면역자극 결핍 관련 질병을 치료하기 위해, 장기간에 걸쳐서 일주일에 두번 1 내지 100, 바람직하게는 약 10㎎/㎏의 수용성 라미나린을 경구 투여하는 것을 특징으로 하는 치료방법.
  7. 종양 또는 암 또는 바이러스성 질병, 세균성 질병, 진균성 질병, 면역체계 질병, 자가면역 질병 또는 인간 또는 동물의 면역자극 결핍 관련 질병에 걸린 환자 또는 항온 동물에게 라미나린 및 약제학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 조성물에 포함된 수용성 라미나린을 투여하는 단계를 포함하며, 상기 라미나린의 양은 상기 종양 또는 암 또는 상기 질병을 치료하는 데 효과적인 것을 특징으로 하는 치료방법.
  8. 종양 및 보다 일반적으로 유방암, 폐암, 식도암, 위암, 장과 대장암을 포함하는 암 그룹, 및 바이러스성, 세균성 및 진균성 질병과 인간 및 항온 동물의 면역자극 결핍 관련 질병을 치료하기 위해, 각각 라미나린 및 화학치료제 또는 보강제를 유효량으로 투여하는 것을 특징으로 하는 병용 치료방법.
KR10-2004-7008211A 2001-11-30 2002-11-29 치료학적 방법 KR20040096498A (ko)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US09/999,202 2001-11-30
US09/999,202 US6660722B2 (en) 2001-11-30 2001-11-30 Therapeutical treatments
PCT/EP2002/013512 WO2003045414A2 (en) 2001-11-30 2002-11-29 Use of laminarin in the treatment of cancer as well as bacterial, viral and fungal infections

Publications (1)

Publication Number Publication Date
KR20040096498A true KR20040096498A (ko) 2004-11-16

Family

ID=25546011

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR10-2004-7008211A KR20040096498A (ko) 2001-11-30 2002-11-29 치료학적 방법

Country Status (11)

Country Link
US (1) US6660722B2 (ko)
EP (1) EP1448215B1 (ko)
JP (1) JP4633361B2 (ko)
KR (1) KR20040096498A (ko)
CN (1) CN100558369C (ko)
AT (1) ATE413183T1 (ko)
AU (1) AU2002352187A1 (ko)
CA (1) CA2468314C (ko)
DE (1) DE60229767D1 (ko)
RU (1) RU2004119854A (ko)
WO (1) WO2003045414A2 (ko)

Families Citing this family (20)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7671040B2 (en) * 2003-09-23 2010-03-02 Laboratoires Goemar S.A. Chemotherapeutic antineoplastic treatment
US7070778B2 (en) 2003-10-30 2006-07-04 Laboratoire Goemar Sa Therapeutical combination against cancer
US20050220846A1 (en) 2004-04-05 2005-10-06 Puntenney Steven B Use of beta-1,3 (4)-endoglucanohydrolase, beta-1,3 (4) glucan, diatomaceous earth, mineral clay and glucomannan to augment immune function
FR2885812B1 (fr) * 2005-05-18 2007-07-27 Goemar Lab Sa Medicament a base de laminarine ou d'oligolaminarines pour le traitement de la septicemie et du choc septique
ATE498323T1 (de) * 2005-05-18 2011-03-15 Goemar Lab Sa Laminarin-enthaltende lebensmittel
FR2885811B1 (fr) * 2005-05-18 2007-08-10 Goemar Lab Sa Medicament a base de laminarine ou d'oligolaminarines pour le traitement des hepatites virales
ATE442153T1 (de) * 2005-11-21 2009-09-15 Bioatlantis Ltd Zusammensetzungen für die verbesserung der darmgesundheit und der tierischen leistung enthaltend beta-glucans and alfa-fucans
FR2899815B1 (fr) * 2006-04-14 2008-07-11 Goemar Lab Sa Nouveaux medicaments pour les traitements contre les retrovirus
FR2909553B1 (fr) * 2006-12-08 2009-03-06 Bio Serae Lab Oligo-b(1-3)-glucanes a effet inhibiteur des reactions allergiques,et applications.
FR2910322B1 (fr) * 2006-12-22 2009-10-30 Mer Soc Par Actions Simplifiee Utilisation d'oligo-b-(1,3)-glucanes modifies pour le traite traitement de maladies du systeme immunitaire, oligo-b-(1,3) glucane-(1,3)-mannose, oligo-b-(1,3)-glucane-(1,3)-mannitol et leurs derives, ...
NL1036661C2 (en) * 2009-03-04 2010-09-07 Serrix B V Anti-fungal compounds & compositions.
ES2899499T3 (es) 2009-05-21 2022-03-11 Bioatlantis Ltd Mejora de la salud, la inmunidad y el rendimiento gastrointestinal mediante intervención alimentaria
JP5968643B2 (ja) * 2012-02-22 2016-08-10 日本メナード化粧品株式会社 メラノサイト分化誘導抑制剤
EP2975937A1 (en) 2013-03-20 2016-01-27 Bioatlantis Limited A non-nematicidal composition and use thereof
PT3110437T (pt) 2014-02-12 2018-01-16 Omnigen Res Llc Composição e método para promover a redução do stress térmico em animais
LT6145B (lt) 2014-04-14 2015-04-27 Uab "Biocentras" TERAPINĖ ß-GLIUKANŲ KOMPOZICIJA, MODULIUOJANTI ŽMOGAUS IMUNINĘ SISTEMĄ IR INICIJUOJANTI VĖŽINIŲ LĄSTELIŲ ARDYMĄ
CN105147732A (zh) * 2015-10-26 2015-12-16 北京百生康生物科技有限公司 鳄鱼血多糖在乳腺癌治疗中的应用
CN111544592B (zh) * 2020-03-13 2022-05-03 中山大学附属第一医院 模式识别受体Dectin-1抑制剂对受体移植物的免疫保护及诱导免疫耐受的应用
WO2023002252A1 (en) 2021-07-21 2023-01-26 Bioatlantis Limited Composition comprising beta-glucans and alpha-fucans for improving gut health and animal performance and methods of making the same
WO2023112454A1 (ja) * 2021-12-16 2023-06-22 学校法人東京理科大学 腸管腫瘍抑制剤、ｐｇｅ２産生抑制剤、及びｉｌ－２２ｂｐ産生促進剤

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH0742234B2 (ja) * 1989-02-10 1995-05-10 株式会社紀文食品 逆転写酵素阻害剤
IL108951A0 (en) * 1994-03-13 1994-06-24 Hadasit Med Res Service Pharmaceutical compositions containing polysulfated polysaccharides
JP2002012552A (ja) * 2000-04-27 2002-01-15 Okamoto Denki Kk 動物・ヒト用免疫賦活調整剤及び動物・ヒトの感染症や皮膚病、癌の予防・治療方法
FR2816213B1 (fr) * 2000-11-03 2005-04-22 Goemar Lab Sa Medicament anti-inflammatoire et cicatrisant

Also Published As

Publication number Publication date
CA2468314A1 (en) 2003-06-05
EP1448215A2 (en) 2004-08-25
CN100558369C (zh) 2009-11-11
AU2002352187A1 (en) 2003-06-10
ATE413183T1 (de) 2008-11-15
WO2003045414A2 (en) 2003-06-05
RU2004119854A (ru) 2005-03-27
JP4633361B2 (ja) 2011-02-16
US20030119780A1 (en) 2003-06-26
CA2468314C (en) 2010-10-19
CN1596118A (zh) 2005-03-16
AU2002352187A8 (en) 2003-06-10
US6660722B2 (en) 2003-12-09
EP1448215B1 (en) 2008-11-05
DE60229767D1 (de) 2008-12-18
WO2003045414A3 (en) 2003-10-16
JP2005510543A (ja) 2005-04-21

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR20040096498A (ko) 치료학적 방법
KR100831408B1 (ko) 미세조류로부터 얻은 유효 면역자극제
US7767655B2 (en) High Molecular weight polysaccharide fraction from Aloe vera with immunostimulatory activity
JP3020387B2 (ja) 抗ウイルス物質
FI88109B (fi) Foerfarande foer framstaellning av loesligt fosforylerat glukan
JP4010768B2 (ja) アンジェリカ・ギガス・ナカイから精製した新規のペクチン質多糖類とその精製方法およびその免疫刺激剤としての使用
KR20070093155A (ko) 미국산 인삼 분획물을 만드는 방법과 이를 함유하는생산물, 및 면역 조절제로서 미국산 인삼 분획물의 이용
EP1663258A2 (en) Pharmaceutical compositions and therapeutic treatment with oligo-beta- (1,3) - glucans
JPH0539305A (ja) アストラガルス・メンブラナセウスから抽出した免疫 変調性多糖類及びこれらを含有する薬剤組成物
JP4160532B2 (ja) 免疫を増強するための医薬組成物、およびポリア抽出物
JP2008120707A (ja) 免疫賦活物質ならびにそれを含む医薬組成物、食品、飼料、および化粧品
JP3051073B2 (ja) 抗腫瘍活性物質
FR2662942A1 (fr) Medicament immunostimulant a base de glycopeptidolipides polaires de mycobacterium chelonae.
JPH11228602A (ja) 免疫力強化剤及び免疫力強化食品
EP2905026B1 (en) Peyer's patch activator
KR100447624B1 (ko) 홍화로부터 분리한 대식세포 활성화 다당류 및 그제조방법 및 그 용도
KR101732714B1 (ko) 옥수수 및 옥수수 가공 부산물 유래 아라비노자일란을 포함하는 면역 증강용 조성물
JPH0379602A (ja) 免疫刺激・抗増殖作用を有する多糖類、その製造方法及びこの物質を含有した薬剤
US20230158105A1 (en) Compositions and uses of Oligo-chromopeptides and methods of making
KR100848211B1 (ko) 펠리누스린테우스 균사체에서 추출한 다당류 및 테아닌의 혼합 조성물
KR100772007B1 (ko) 마크로파지 활성화 또는 항암용 알로에 조성물
KR100338521B1 (ko) 대식세포 활성화능을 갖는 식용식물 추출물
JPH09176022A (ja) 腫瘍転移抑制剤
CN118103394A (zh) 寡色肽的组合物和用途以及制备方法
CA2142811C (en) Novel glucan preparation

Legal Events

Date Code Title Description
WITN Application deemed withdrawn, e.g. because no request for examination was filed or no examination fee was paid