KR20040072463A - 혈액-응고 장애의 개선된 치료를 위한 약제학적 제제 - Google Patents

혈액-응고 장애의 개선된 치료를 위한 약제학적 제제 Download PDF

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Abstract

본 발명은 인자 VIII의 혈장 반감기를 증가시키는 하나 또는 수개의 인자 VIII 유래된 펩타이드를 함유하는 혈액-응고 장애의 개선된 치료를 위한 약제학적 제제에 관한 것이다. 추가로, 이러한 펩타이드, 이들의 DNA-서열, 알부민 융합 단백질로서의 이들의 재조합 발현 및 이러한 DNA-서열을 함유하는 벡터 뿐만 아니라 이러한 재조합 발현 벡터에 대한 숙주 세포 및 유전자 치료를 위한 전달 벡터에서의 이러한 DNA-서열의 용도가 기재되어 있다.

Description

혈액-응고 장애의 개선된 치료를 위한 약제학적 제제{Pharmaceutical preparation for the improved treatment of blood-clotting disorders}
본 발명은 인자 VIII의 혈장 반감기를 증가시키는 하나 또는 수개의 인자 VIII 유래된 펩타이드를 함유하는 혈액-응고 장애의 개선된 치료를 위한 약제학적 제제에 관한 것이다. 추가로, 이러한 펩타이드, 이들의 DNA-서열, 알부민 융합 단백질로서의 이들의 재조합 발현 및 이러한 DNA-서열을 함유하는 벡터 뿐만 아니라 이러한 재조합 발현 벡터에 대한 숙주 세포 및 유전자 치료를 위한 전달 벡터에서의 이러한 DNA-서열의 용도가 기재되어 있다.
전형적 혈우병 또는 A형 혈우병은 가장 흔한 유전적 출혈 질환이다. A형 혈우병의 임상적 소견은 비정상적인 출혈 경향으로, 인자 VIII 농축물을 사용한 치료를 도입하기 전, 중증 혈우병인 사람에 대한 평균 수명은 20년 이하였다. 혈장으로부터의 인자 VIII 농축물의 사용으로 혈우병 환자에 대한 상태는 상당히 개선되었다. 평균 수명은 광범위하게 증가하였고, 그들 대부분에게 어느정도 정상적인 삶을 살 수 있는 가능성을 제공하였다. 그러나, 혈장 유도된 농축물 및 이들의 용도에는 특정 문제점들이 있었고, 이중 가장 심각한 것은 바이러스의 전염이었다.지금까지 바이러스 원인의 AIDS, B형 간염 및 비-A, 비-B형 간염이 인구에 심각한 영향을 미쳤다. 상이한 바이러스 불활성화 방법 및 신규한 고도로 정제된 인자 VIII 농축물이 최근에 개발되었지만, 부주의한 오염을 배제할 수 없다. 또한, 인자 VIII 농축물은 사람 혈장 원료의 제한된 공급으로 인하여 상당히 비싸다.
재조합 물질로부터 유도된 인자 VIII 생성물이 A형 혈우병에 대한 치료에 있어서 혈장 유도된 인자 VIII 농축물의 사용과 관련된 광범위한 문제점들을 해결할 수 있을 것 같다. 그러나, 재조합 인자 VIII의 개발은 몇몇 난점, 예를 들어 충분하게 고수율로 생산 수준을 달성하는 문제, 특히 완전한 길이의 분자에 관련된 문제점에 봉착하였다.
프로테아제 억제제의 존재하에 제조된 신선 혈장에서, 인자 VIII은 280kDa의 분자량을 갖고, 각각 200kDa 및 80kDa의 2개의 폴리펩타이드 쇄로 이루어져 있는 것으로 나타났다. 이들 쇄는 금속 이온 브릿지에 의해 서로 연결되어 있다. 다소 단백질분해적으로 분해된 형태의 인자 VIII 분자가 시판되는 농축물로부터 정제된 인자 VIII 물질에서 활성 단편으로서 발견될 수 있다. 260kDa 이하 내지 170kDa의 분자량을 갖는 인자 VIII의 단편화된 형태는 180kDa 이하 내지 90kDa의 범위의 분자량인 하나의 중쇄로 이루어져 있고, 여기서 모든 변이체는 하나의 80kDa의 경쇄와 함께 동일한 아미노 말단을 갖는다. 중쇄의 아미노-말단 영역은 인자 VIII cDNA의 뉴클레오타이드 서열 데이타로부터 연역될 수 있는 일본쇄 인자 VIII 폴리펩타이드의 말단 영역과 동일하다.
하나의 90kDa 쇄와 하나의 80kDa 쇄로 이루어진, 분자량 170kDa의 인자 VIII의 최소 활성 형태는 보다 큰 분자량 형태와 같은 범위로 트롬빈으로 활성화될 수 있고, 따라서 불활성화된 형태를 나타낸다. 또한, 혈우병인 개에서 시험된 바와 같이 생체내에서 완전한 생물학적 활성을 갖는 것으로 나타났다. 따라서, 170kDa 형태의 지혈 효과는 고분자량 형태의 인자 VIII과 동일하다.
FVIII은 A1- 내지 A3 도메인 사이에 2가 금속 이온 비공유 결합을 통하여 연결된 중쇄(도메인 A1-A2-B) 및 경쇄(A3-C1-C2)의 이종이량체로서 혈장내로 분비된다. 혈장에서, FVIII은 폰 빌레브란트 인자와 결합함으로써 안정화된다.
트롬빈에 의한 단백질분해적 활성화의 경우, FVIII은 2개의 중쇄 단편(A1, 50kDa 단편, 및 A2, 43kDa 단편) 및 경쇄(A3-C1-C2, 73kDa 단편)의 이종이량체로 활성화된다. 따라서, FVIII의 활성 형태(FVIIIa)는 트롬빈-절단된 A3-C1-C2 경쇄와 2가 금속 이온 결합을 통하여 연결된 A1-아단위 및 A1 도메인과 연결된 유리 A2 아단위로 이루어져 있다. 이종이량체로부터 상기 유리 A2 아단위의 해리가 트롬빈 활성화후 FVIIIa 불활성화에서의 속도 제한 단계인 것으로 간주된다.
비-활성화된 FVIII은 혈장에서 약 14시간의 반감기를 갖는다. 먼저 FVIII은 세포 표면상에서 헤파란 설페이트 프로테오글리칸과 결합한 다음 LRP(저밀도 지단백질 수용체 관련 단백질)와 결합한 후, 주로 간세포에 의해 흡수되고 대사된다[참고문헌: Ananyeva et al., TCM, Vol. 11, No. 6(2001) 251-257]. FVIII내 LRP와의 접촉 부위는 A2_위치(잔기 484 내지 509; 서열번호 5)[참고문헌: Saenko et al., J. Biol. Chem. 274(1999), 37, 685-692] 및 C2 도메인[참고문헌: Lenting et al(1999) J. Biol. Chem., 274; 23, 734-739]에 위치되어 있다. RAP(수용체 관련단백질)에 의해 LRP를 차단시키는 것은 FVIII 수준을 증가시키는 것으로 나타났다[참고문헌: Schwarz et al (2000) Blood 95: 1.703-1.708]. FVIII 혈장 반감기를 증가시키기 위해 RAP를 사용하여 LRP를 차단시키거나(WO 제00/27425호), FVIII 반감기를 증가시키기 위해 LRP와 결합하는 것을 예방하기 위해 FVIII 서열을 변화시키는 것이 제안되었다(WO 제00/28021호 및 WO 제00/71714호).
14시간의 혈장 반감기로 인해, FVIII는 1주일에 약 3회 예방적 치료를 하는 혈우병 환자에게 정맥내로 투여되어야 한다. 따라서, 보다 적은 빈도로 투여되어야 하는 FVIII 제제를 야기할 수 있는, 증강된 혈장 반감기를 갖는 FVIII를 생산하는 것이 상당히 바람직할 것이다. 본 발명은 상기 수용체에 결합하는 FVIII의 단편 또는 사람 혈청 알부민에 융합된 이들 단편에 의해 FVIII 대사에 관여하는 수용체를 차단함으로써 이 문제에 대한 해법을 제공한다.
따라서, 본 발명의 목적은 혈액 응고 장애의 치료를 개선시키기 위한 약제학적 제제이고, 이는 헤파란 설페이트 프로테오글리칸(HSPG) 및/또는 사람 인자 VIII 서열의 저밀도 지단백질 수용체 관련 단백질(LRP)에 대한 하나 또는 수개의 결합 부위를 포함하는 펩타이드를 함유한다. 이러한 펩타이드는 증강된 혈장 반감기를 갖는 보다 큰 혈장 단백질, 바람직하게는 알부민과 융합하거나, 알부민에 화학적으로 결합함으로써 안정화될 수 있다.
헤파란 설페이트 프로테오글리칸(HSPG) 및/또는 사람 인자 VIII 서열의 저밀도 지단백질 수용체 관련 단백질(LRP)에 대한 하나 또는 수개의 결합 부위를 포함하는 펩타이드 또는 알부민 융합 단백질 이외에, 상기 약제학적 제제는 야생형 인자 VIII 또는 인자 VIII의 응고 활성 돌연변이체를 함유할 수 있다. 대안으로, FVIII은 별도로 투여된다.
이러한 융합 단백질 또는 펩타이드는 혈장에서 인자 VIII의 분해를 감소시키고, 결과적으로 HSPG 및/또는 LRG와 경쟁적으로 결합하는 이들의 능력 때문에 혈장에서 인자 VIII의 반감기는 증가한다. 상기 인자 VIII-결합 화합물의 혈장 농도의 감소는 인자 VIII의 분해를 감소시킨다.
약제학적 제제의 성분으로서 본 발명에 따라 사용된 알부민 융합 단백질 또는 펩타이드는 사람 인자 VIII 서열의 A2-아단위의 아미노산 558 내지 565 및/또는 484 내지 509를 포함하고, 첨부된 서열 목록의 서열번호 1 내지 6의 아미노산 서열에 상응한다.
치료적 단백질을 사람 혈청 알부민과 융합시키는 것은 혈장 반감기를 증가시키는 수단인 것으로 나타났다(WO 제01/77137호). 그러나, 알부민 융합에서 FVIII로부터 LRP 결합 단편(잔기 484 내지 509)이 LRP와 여전히 결합할 수 있는 구조로 존재하는지는 명확하지 않다.
LRP에 대한 FVIII의 결합은 아마도 먼저 잔기 558 내지 565(서열번호 6)를 통하여 헤파란 설페이트 프로테오글리칸(HSPG)과 결합한 다음에만 LRP와 결합하는,2단계 과정이므로[참고문헌: Ananyeva et al., TCM, Vol. 11, No. 6(2001) 251-257], LRP 결합 부위(서열번호 1)만을 나타내는 융합 단백질은 LRP 및 HSPG 결합 부위(서열번호 2) 모두를 함유하는 융합 단백질과 비교되었다.
트롬빈에 의한 FVIII 활성화의 경우, 융합 단백질의 절단이 가능하도록 트롬빈 절단 부위를 융합 단백질의 두번째 셋트(서열번호 3 및 4)에서 알부민과 FVIII 단편 부분 사이에 삽입하였다.
추가로, 본 발명은 본원에 기재된 임의의 DNA-서열을 함유하는 재조합 발현 벡터 뿐만 아니라 상기 임의의 재조합 발현 벡터로 형질전환되는 숙주 세포 및 사람 유전자 치료를 위한 전달 벡터에서 상기 DNA-서열의 용도를 포함한다.
하기 실시예에서 본 발명을 추가로 상세히 나타낸다.
실시예
LRP 결합 부위의 클로닝
LRP 결합 부위 및 플랭킹 아미노산(아미노산 479 내지 517, 문헌(참고문헌: Ananyeva et al., TCM, Vol. 11, No. 6(2001) 251-257)과 같은 명명법)을 프라이머 We10035'GTGGGATCCGGTGGTGGAATCACTGATGTCCGTCC3'(=서열번호 7) 및 We10595'CACAAGCTTATTATACAGTCACTGTCCATTTATATTTG3'(=서열번호 8)(클로닝에 사용된 제한 부위가 밑줄그어져 있다)를 사용하여, FVIII cDNA 함유-플라스미드상에서 증폭시킨 후, 후속적으로 BamH1 및 HindIII로 제한 분해하고, 정제한 후 BamH1/HindIII 절단된 pLITMUS29내로 연결하여, pLITMUS29(New England Biolabs)내로 클로닝시켰다. 수득한 플라스미드를 pCN175로 명칭하였다.
LRP/HSPG 결합 부위의 클로닝
LRP 및 HSPG 결합 부위 및 플랭킹 아미노산(아미노산 479 내지 575, 문헌(참고문헌: Ananyeva et al., TCM, Vol. 11, No. 6 (2001) 251-257)과 같은 명명법)은 프라이머 We10035'GTGGGATCCGGTGGTGGAATCACTCATGTCCG TCC3'(=서열번호 7) 및 We10045'CACAAGCTTATTACAGGATGACATTCCTCTTGTC3'(=서열번호 9)(클로닝에 사용된 제한 부위가 밑줄그어져 있다)를 사용하여 FVIII cDNA 함유-플라스미드상에서 증폭시킨 후, 후속적으로 BamH1 및 HindIII로 제한 분해하고, 정제한 후 BamH1/HindIII 절단된 pLITMUS29내로 연결하여 pLITMUS29(New England Biolabs)내로 클로닝시켰다. 수득한 플라스미드를 pGH157이라 명칭하였다.
클론 분리 및 서열 확인 후, 예비 겔로부터 BamH1/HindIII 분해 및 정제후 분리된 LRP 및 LRP/HSPG 단편을 C-말단 알부민 융합을 위해 발현 벡터내로 삽입하였다.
효모 발현 벡터내로의 클로닝
적절한 전사 터미네이터 서열 뿐만 아니라 사람 알부민 암호화 서열을 제공하는 효모 PRB1 프로모터 및 효모 ADH1 터미네이터를 함유하는, 문헌[참고문헌: Sleep, D., et al. (1991) Bio/Technology 9, 183-187]에 기재된 플라스미드 pDB2243을 사용하였다. 먼저, 플라스미드 pDB2243을 BamHI로 완전하게 분해하여리세싱된 말단을 T4 DNA 폴리머라제 및 dNTPs로 평활 말단화하고, 마지막으로 다시 연결하여 플라스미드 pDB2566을 생성하였다. 두번째, 글리신-세린-링커[(GGs)4GG]를 알부민 서열의 C-말단에 삽입하였다. 이를 위해 pDB2566을 Bsu36I 및 HindIII로 분해하고, (GGS)4GG 링커와 BamH1 클로닝 위치를 포함하는 2개의 링커 올리고뉴클레오타이드(GSL+, TTAGGCTTAGGTGGTTCTGGTGGTTCCGGTGGTTCTGGTGGATCCGGTGGA3'(=서열번호 10). GSL-,5'AGCTTCCACCGGATCCACCAGAACCACCGGAACCACCAGAACCACCTAAGCC3'(=서열번호 11)를 삽입하였다. 수득한 플라스미드를 pDB2566GS로 명칭하였다.
LRP 및 LRP/HSPG BamH1/HindIII DNA 단편을 상기 기재된 플라스미드로부터 분리하고, 플라스미드 pDB2566GS와 연결하였고, 이를 부분적으로 HindIII로 분해한 다음, BamHI로 완전하게 분해하였다. 수득한 플라스미드 pCN176은 LRP을 함유하였고, 플라스미드 pGH159는 LRP/HSPG 단편을 함유하였다.
적절한 효모 벡터 서열은 일반적으로 문헌[참고문헌: EP-A-286 424 및 Sleep, D., et al. (1991) Bio/Technology 9, 183-187]에 기재된 "분해" 플라스미드 pSAC35에 의해 제공되었다. Notl 알부민-(GGS)4GG-LRP 발현 카셋트를 플라스미드 pCN176으로부터 분리하여 정제하고 Notl 분해된 pSAC35내로 연결하였고, 이를 송아지 창자 포스파타제로 처리하여 2개의 플라스미드; LEU2와 동일한 발현 배위로 Notl 발현 카셋트를 함유하는 첫번째 pCN177과, LEU2에 상반된 배위로 Notl 발현 카셋트를 함유하는 두번째 플라스미드를 생성하였다.
Notl 알부민-(GGS)4GG.LRP/HSPG 발현 카셋트를 플라스미드 pGH159로부터 분리하여 정제하고 Notl 분해된 pSAC35내로 연결하였고, 이를 송아지 창자 포스파타제로 처리하여 2개의 플라스미드; LEU2와 동일한 발현 배위로 Notl 발현 카셋트를 함유하는 첫번째 pGH165와, LEU2에 상반된 배위로 Notl 발현 카셋트를 함유하는 두번째 플라스미드를 생성하였다.
트롬빈 절단 위치의 도입
플라스미드 pCN176과 pGH159의 각각의 BamH1 위치내에 링커를 삽입함으로써, 트롬빈 절단 위치(TCS)를 알부민과 LRP/HSPG 및 LRP 위치 사이에 각각 도입하였다. 이를 위해서, 플라스미드 pCN176 및 pGH159를 BamH1로 선형화하고, 탈인산화후 5'-인산화된 올리고뉴클레오타이드5'GATCTCTAGTTCCACGTG3'(=서열번호 12) 및5'GATCCACGTGGAACTAGA3'(=서열번호 13)로 이루어진 하이브리드화된 링커와 함께 연결하였다. 정배위(하기 서열번호 14 및 15 참조)로 링커를 갖는 수득된 플라스미드를, LRP를 함유하는 pCN167, 및 LRP/HSPG 단편을 함유하는 pGH168로 명칭하였다.
적절한 효모 벡터 서열을 상기 기재된 바와 같이 플라스미드 pSAC35에 의해제공하였다. Notl 알부민-(GGS)4-TCS-LRP 발현 카셋트를 플라스미드 pCN167로부터 분리하여 정제하고 송아지 창자 포스파타제로 처리한 Notl 분해된 pSAC35내로 연결하며, 2개의 플라스미드; LEU2와 동일한 발현 배위로 Notl 발현 카셋트를 함유하여 알부민 융합 단백질의 발현에 사용되는 첫번째 pCN169와, LEU2에 상반된 배위로 Notl 발현 카셋트를 함유하는 두번째 플라스미드를 생성하였다.
Notl 알부민-(GGS)4-TCS-LRP/HSPG 발현 카셋트를 플라스미드 pGH168로부터 분리하여 정제하고 송아지 창자 포스파타제로 처리한 Notl 분해된 pSAC35내로 연결하여 2개의 플라스미드; LEU2와 동일한 발현 배위로 Notl 발현 카셋트를 함유하여 발현에 사용되는 첫번째 pGH171과, LEU2에 상반된 배위로 Notl 발현 카셋트를 함유하는 두번째 플라스미드를 생성하였다.
효모의 형질전환
WO 제95/23857호, WO 제95/33833호 및 WO 제94/04687호에 기재된 효모 균주를 류신-영양성으로 형질전환시켰다. 형질전환체를 완충화된 최소 배지상에 가하고, 추가의 분석을 위해 충분히 증식될 때까지 30℃에서 배양하였다.
알부민 융합 단백질의 발현 및 정제
rHA 융합물을 진탕 플라스크 배양에서 발현시키고, 발현 수준을 모니터하였다. 알부민 융합 단백질을 양이온 교환 및 겔 투과 크로마토그래피로 정제하였다. 이어서 정제된 물질을 농축시켜 PBS에 대하여 투석여과하였다.
약력학적/약물동력학적 연구
배합된 약력학적/약물동력학적 연구의 1차 목적은 혈장과는 상이한 구획내로의 흡수 및 분해를 차단함으로써 매개된, FVIII의 반감기 증가에 대한 증거를 제공하는 것이다.
이 목적은 AFP X(여기서, X는 상기 기재된 임의의 LRP/HSPG 알부민 융합 단백질을 나타낸다)에 의한 FVIII의 약력학적/약물동력학적 변수의 조절을 평가함으로써 이루어질 것이다. FVIII의 내인성 수준은 선택된 종점을 무효화할 수 있으므로, 상기 연구는 FVIII ko 마우스에서 수행할 것이다. 마우스당 추정할 수 있는 오직 하나의 샘플만이 수집될 수 있는 것처럼, 상기 연구는 2개 부분으로 나뉘어진다. 첫번째 부분은 AFP X의 적절한 용량 수준을 야기할 것이고, 두번째 부분은 선택된 용량 수준에 의한 분비 프로필의 조절에 대해 세밀히 조사될 것이다.
1차 목적:
꼬리 절단 출혈 모델에서 혈장 수준을 측정하고 지혈을 측정함으로써, FVIII 대 LRP 알부민-융합-단백질 X로 동시-주입된 FVIII의 반감기 및 생체이용률을 평가하기 위함. 출혈 시간 평가는 항원 수준과 비교하여 FVIII 수준의 보다 더 정확한 반영을 제공할 것이다.
2차 목적:
FVIII 대 LRP 융합-단백질 X로 동시-주입된 FVIII의 부가의 약물동력학적 변수를 잠재적으로 평가하기 위함.
연구 계획안
처리 그룹-일정한 시간지점
번호 처리 용량/스케쥴/경로 n(m/f)
1 FVIII 50U/kg / 단일 주사 / i.v. 5m + 5f
2 AFP X 10mg/kg / 단일 주사 / i.v. 5m + 5f
3 FVIII +AFP X 50U/kg / 단일 주사 / i.v. +10mg/kg / 단일 주사 / i.v. 5m + 5f
4 FVIII +AFP X 50U/kg / 단일 주사 / i.v. +100mg/kg / 단일 주사 / i.v. 5m + 5f
5 FVIII +AFP X 50U/kg / 단일 주사 / i.v. +500mg/kg / 단일 주사 / i.v. 5m + 5f
처리 그룹-일정 용량
번호 처리 용량/스케쥴/경로 샘플링시간지점 n(m/f)
1 FVIII 50U/kg / 단일 주사 / i.v. 5시 5m + 5f
2 AFP X ×mg/kg / 단일 주사 / i.v. 5시 5m + 5f
3 FVIII +AFP X 50U/kg / 단일 주사 / i.v. +×mg/kg / 단일 주사 / i.v. 5시 5m + 5f
4 FVIII 50U/kg / 단일 주사 / i.v. 1일 5m + 5f
5 AFP X ×mg/kg / 단일 주사 / i.v. 1일 5m + 5f
6 FVIII +AFP X 50U/kg / 단일 주사 / i.v. +×mg/kg / 단일 주사 / i.v. 1일 5m + 5f
물질 및 방법
시험 품목의 투여(1.-2.):
시험 품목 1 : AFP X
제조사 : Aventis Behring GmbH, Lab Thomas Weimer
뱃치 번호 : tbd
적용 용적 : tbd
단일 용량/경로 : 10, 100 또는 500mg/kg, 정맥내(i.v.)
빈도 : 1 x (t = 0)
시험 품목 2 : Helixate 또는 적절한 기타 FVIII 농축물
제조사 : Aventis Behring GmbH
뱃치 번호 : tbd
적용 용적 : tbd
단일 용량/경로 : 50U/kg, 정맥내
빈도 : 1 x (t = 0)
실험 동물
종/계통 : C57BI6 마우스, FVIII-ko
성별/연령 : 55 숫컷 / 55 암컷
총수 : 110
공급원 : Charles River, Kisslegg
동물 모델:
그룹당 5마리의 숫컷 및 암컷 FVIII ko 마우스에게 0일 3개의 투여량 수준(10, 100 또는 500mg/kg)으로 단일 정맥내 주사에 의해 FVIII 단독 또는 AFP X와 배합하여 제공할 것이다.
혈액 샘플을 적절한 시간지점에서 각각의 항원 또는 활성 수준을 측정하기 위해 채혈하였다.
연구 변수:
샘플의 빈도에 따라 달라지는 약물동력학적(PK) 변수:
반감기, 최종 혈장 샘플까지의 혈장 농도 시간 곡선하의 면적(AUC0-and), 최대 농도(Cmax), 최대 농도까지의 시간(tmax).
약력학적 종점:
꼬리 절단 출혈 시간, 컷오프값 10분에서의 혈액 손실. 출혈 시간은 마취하여 측정할 것이다.
통계 방법:
각각의 혈장 수준의 분석
정맥 주사후, FVIII 및 잠재적 AFP X의 혈장 농도-시간 프로필을 적절하게는 비-선형 회귀 방법으로 동물당 분석할 것이다. 지수 모델은 최소제곱법에 의해 기준선-조절된 데이타에 대하여 맞출 수 있다.
AUC는 최종 측정된 값(AUC0-end)까지의 선형 사다리꼴 법칙을 사용하여 계산할 수 있다.
요약 및 비교 분석
각각의 PK 결과는 처리(최소, 중간, 최대, 평균, 표준 편차)당 묘사적으로 요약되고, 다음 변수에 있어서 수행된 이원변량분석에 의한 완성될 것이다: 반감기 제거, AUC 및 Cmax(모두 로그-형전환됨). 처리 그룹은 고정된 인자일 수 있다. 처리 그룹 사이에 적절한 대조가 평가되어야 한다.
서열 설명
서열번호 1은 사람 알부민과 융합된 LRP 결합 부위를 나타낸다. 1-24, 효모에서 분비 동안 제거되는 리더 서열; 25-609, 사람 알부민; 610-623, GGS 링커; 624-662, LRP 결합 부위(629-654) 및 부가의 FVIII 유도된 플랭킹 서열(624-628; 655-662).
서열번호 2는 사람 알부민과 융합된 LRP/HSPG 결합 부위를 나타낸다. 1-24, 효모에서 분비 동안 제거되는 리더 서열; 25-609, 사람 알부민; 610-623, GGS 링커; 624-720, FVIII내 LRP 및 HSPG 결합 부위; LRP 결합 부위(629-654), HSPG 결합 부위(703-710).
서열번호 3은 부가의 트롬빈 절단 부위를 포함하여, 사람 알부민과 융합된 LRP 결합 부위를 나타낸다. 1-24, 효모에서 분비 동안 제거되는 리더 서열; 25-609, 사람 알부민; 610-623, GGS 링커; 622-668, LRP 결합 부위(635-660) 및 부가의 FVIII 유도된 플랭킹 서열(630-634; 661-668); 625/626, 트롬빈 절단 부위.
서열번호 4는 부가의 트롬빈 절단 부위를 포함하여, 사람 알부민과 융합된 LRP/HSPG 결합 부위를 나타낸다. 1-24, 효모에서 분비 동안 제거되는 리더 서열; 25-609, 사람 알부민; 610-621, GGS 링커; 630-726, FVIII내 LRP 및 HSPG 결합 부위; LRP 결합 부위(635-660), HSPG 결합 부위(709-716); 625/626, 트롬빈 절단 부위.
서열번호 5는 인자 VIII A2 도메인내 LRP와의 접촉 부위, 아미노산 잔기 484-509를 나타낸다.
서열번호 6은 인자 VIII A2 도메인내 HSPG 결합 부위, 아미노산 잔기 558-565를 나타낸다.
서열번호 7 내지 9는 LRP 및 LRP/HSPG 결합 부위를 암호화하는데 사용된 합성 올리고뉴클레오타이드를 나타낸다.
서열번호 10 및 11은 효모 벡터 pDB2243의 변형에 사용된 합성 올리고뉴클레오타이드를 나타낸다.
서열번호 12 및 13은 트롬빈 절단 부위의 도입에 사용된 합성 올리고뉴클레오타이드를 나타낸다.
서열번호 14 및 15는 삽입된 GGS 링커로 알부민 및 LRP 결합 부위의 접합 및 플라스미드 pCN167 및 pGH168내 트롬빈 절단 부위를 나타낸다.
헤파란 설페이트 프로테오글리칸(HSPG) 및/또는 사람 인자 VIII 서열의 저밀도 지단백질 수용체 관련 단백질(LRP)에 대한 하나 또는 수개의 결합 부위를 포함하는 펩타이드는 증강된 혈장 반감기를 갖는 보다 큰 혈장 단백질, 바람직하게는 알부민과 융합하거나, 화학적으로 결합함으로써 안정화되어 혈액 응고 장애의 치료를 개선시킬 수 있다.
<110> Aventis Behring GmbH <120> Pharmaceutical Preparation for the Improved Treatment of Blood-Clotting Disorders <130> 2003/M002J <150> EP 03002598.5 <151> 2003-02-07 <150> EP 03004900.1 <151> 2003-03-06 <160> 15 <210> 1 <211> 662 <212> PRT <213> OrganismName : Homo sapiens <400> PreSequenceString : MKWVSFISLL FLFSSAYSRS LDKRDAHKSE VAHRFKDLGE ENFKALVLIA FAQYLQQCPF 60 EDHVKLVNEV TEFAKTCVAD ESAENCDKSL HTLFGDKLCT VATLRETYGE MADCCAKQEP 120 ERNECFLQHK DDNPNLPRLV RPEVDVMCTA FHDNEETFLK KYLYEIARRH PYFYAPELLF 180 FAKRYKAAFT ECCQAADKAA CLLPKLDELR DEGKASSAKQ RLKCASLQKF GERAFKAWAV 240 ARLSQRFPKA EFAEVSKLVT DLTKVHTECC HGDLLECADD RADLAKYICE NQDSISSKLK 300 ECCEKPLLEK SHCIAEVEND EMPADLPSLA ADFVESKDVC KNYAEAKDVF LGMFLYEYAR 360 RHPDYSVVLL LRLAKTYETT LEKCCAAADP HECYAKVFDE FKPLVEEPQN LIKQNCELFE 420 QLGEYKFQNA LLVRYTKKVP QVSTPTLVEV SRNLGKVGSK CCKHPEAKRM PCAEDYLSVV 480 LNQLCVLHEK TPVSDRVTKC CTESLVNRRP CFSALEVDET YVPKEFNAET FTFHADICTL 540 SEKERQIKKQ TALVELVKHK PKATKEQLKA VMDDFAAFVE KCCKADDKET CFAEEGKKLV 600 AASQAALGLG GSGGSGGSGG SGGGITDVRP LYSRRLPKGV KHLKDFPILP GEIFKYKWTV 660 TV 662 <210> 2 <211> 720 <212> PRT <213> OrganismName : Homo sapiens <400> PreSequenceString : MKWVSFISLL FLFSSAYSRS LDKRDAHKSE VAHRFKDLGE ENFKALVLIA FAQYLQQCPF 60 EDHVKLVNEV TEFAKTCVAD ESAENCDKSL HTLFGDKLCT VATLRETYGE MADCCAKQEP 120 ERNECFLQHK DDNPNLPRLV RPEVDVMCTA FHDNEETFLK KYLYEIARRH PYFYAPELLF 180 FAKRYKAAFT ECCQAADKAA CLLPKLDELR DEGKASSAKQ RLKCASLQKF GERAFKAWAV 240 ARLSQRFPKA EFAEVSKLVT DLTKVHTECC HGDLLECADD RADLAKYICE NQDSISSKLK 300 ECCEKPLLEK SHCIAEVEND EMPADLPSLA ADFVESKDVC KNYAEAKDVF LGMFLYEYAR 360 RHPDYSVVLL LRLAKTYETT LEKCCAAADP HECYAKVFDE FKPLVEEPQN LIKQNCELFE 420 QLGEYKFQNA LLVRYTKKVP QVSTPTLVEV SRNLGKVGSK CCKHPEAKRM PCAEDYLSVV 480 LNQLCVLHEK TPVSDRVTKC CTESLVNRRP CFSALEVDET YVPKEFNAET FTFHADICTL 540 SEKERQIKKQ TALVELVKHK PKATKEQLKA VMDDFAAFVE KCCKADDKET CFAEEGKKLV 600 AASQAALGLG GSGGSGGSGG SGGGITDVRP LYSRRLPKGV KHLKDFPILP GEIFKYKWTV 660 TVEDGPTKSD PRCLTRYYSS FVNMERDLAS GLIGPLLICY KESVDQRGNQ 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LDKRDAHKSE VAHRFKDLGE ENFKALVLIA FAQYLQQCPF 60 EDHVKLVNEV TEFAKTCVAD ESAENCDKSL HTLFGDKLCT VATLRETYGE MADCCAKQEP 120 ERNECFLQHK DDNPNLPRLV RPEVDVMCTA FHDNEETFLK KYLYEIARRH PYFYAPELLF 180 FAKRYKAAFT ECCQAADKAA CLLPKLDELR DEGKASSAKQ RLKCASLQKF GERAFKAWAV 240 ARLSQRFPKA EFAEVSKLVT DLTKVHTECC HGDLLECADD RADLAKYICE NQDSISSKLK 300 ECCEKPLLEK SHCIAEVEND EMPADLPSLA ADFVESKDVC KNYAEAKDVF LGMFLYEYAR 360 RHPDYSVVLL LRLAKTYETT LEKCCAAADP HECYAKVFDE FKPLVEEPQN LIKQNCELFE 420 QLGEYKFQNA LLVRYTKKVP QVSTPTLVEV SRNLGKVGSK CCKHPEAKRM PCAEDYLSVV 480 LNQLCVLHEK TPVSDRVTKC CTESLVNRRP CFSALEVDET YVPKEFNAET FTFHADICTL 540 SEKERQIKKQ TALVELVKHK PKATKEQLKA VMDDFAAFVE KCCKADDKET CFAEEGKKLV 600 AASQAALGLG GSGGSGGSGG SLVPRGSGGG ITDVRPLYSR RLPKGVKHLK DFPILPGEIF 660 KYKWTVTVED GPTKSDPRCL TRYYSSFVNM ERDLASGLIG PLLICYKESV DQRGNQIMSD 720 KRNVIL 726 <210> 5 <211> 26 <212> PRT <213> OrganismName : Homo sapiens <400> PreSequenceString : RPLYSRRLPK GVKHLKDFPI LPGEIF 26 <210> 6 <211> 8 <212> PRT <213> OrganismName : Homo sapiens <400> PreSequenceString : SVDQRGNQ 8 <210> 7 <211> 35 <212> DNA <213> OrganismName : Homo sapiens <400> PreSequenceString : gtgggatccg gtggtggaat cactgatgtc cgtcc 35 <210> 8 <211> 38 <212> DNA <213> OrganismName : Homo sapiens <400> PreSequenceString : cacaagctta ttatacagtc actgtccatt tatatttg 38 <210> 9 <211> 34 <212> DNA <213> OrganismName : Homo sapiens <400> PreSequenceString : cacaagctta ttacaggatg acattcctct tgtc 34 <210> 10 <211> 51 <212> DNA <213> OrganismName : Homo sapiens <400> PreSequenceString : ttaggcttag gtggttctgg tggttccggt ggttctggtg gatccggtgg a 51 <210> 11 <211> 52 <212> DNA <213> OrganismName : Homo sapiens <400> PreSequenceString : agcttccacc ggatccacca gaaccaccgg aaccaccaga accacctaag cc 52 <210> 12 <211> 18 <212> DNA <213> OrganismName : Homo sapiens <400> PreSequenceString : gatctctagt tccacgtg 18 <210> 13 <211> 18 <212> DNA <213> OrganismName : Homo sapiens <400> PreSequenceString : gatccacgtg gaactaga 18 <210> 14 <211> 117 <212> DNA <213> OrganismName : Homo sapiens <400> PreSequenceString : gccttaggct taggtggttc tggtggttcc ggtggttctg gtggatctct agttccacgt 60 ggatccggtg gtggaatcac tgatgtccgt cctttgtatt caaggagatt accaaaa 117 <210> 15 <211> 39 <212> PRT <213> OrganismName : Homo sapiens <400> PreSequenceString : ALGLGGSGGS GGSGGSLVPR GSGGGITDVR PLYSRRLPK 39

Claims (12)

  1. 헤파란 설페이트 프로테오글리칸(HSPG) 및/또는 사람 인자 VIII 서열의 저밀도 지단백 수용체 관련 단백질(LRP)에 대한 하나 또는 수개의 결합 부위를 포함하는 펩타이드를 함유하는 것을 특징으로 하는, 혈액-응고 장애의 치료를 개선시키는 약제학적 제제.
  2. 제1항에 있어서, 헤파란 설페이트 프로테오글리칸(HSPG) 및/또는 사람 인자 VIII 서열의 저밀도 지단백 수용체 관련 단백질(LRP)에 대한 하나 또는 수개의 결합 부위를 포함하는 펩타이드 이외에 야생형 인자 VIII 또는 인자 VIII의 응고 활성 돌연변이체를 함유하는 것을 특징으로 하는 약제학적 제제.
  3. 헤파란 설페이트 프로테오글리칸(HSPG) 및/또는 사람 인자 VIII 서열의 저밀도 지단백 수용체 관련 단백질(LRP)에 대한 하나 또는 수개의 결합 부위를 함유하는 것을 특징으로 하는 펩타이드.
  4. 제3항에 있어서, 사람 인자 VIII 서열의 A2-아단위의 아미노산 558 내지 565 및/또는 484 내지 509를 함유하는 것을 특징으로 하는 펩타이드.
  5. 헤파란 설페이트 프로테오글리칸(HSPG) 및/또는 사람 인자 VIII 서열의 저밀도 지단백 수용체 관련 단백질(LRP)에 대한 하나 또는 수개의 결합 부위를 함유하는 것을 특징으로 하는 알부민 융합 단백질.
  6. 제5항에 있어서, 사람 인자 VIII 서열의 A2-아단위의 아미노산 558 내지 565 및/또는 484 내지 509를 함유하는 것을 특징으로 하는 알부민 융합 단백질.
  7. 제5항 또는 제6항에 있어서, 알부민 서열과 사람 인자 VIII 서열 사이에 트롬빈 절단 부위를 함유하는 것을 특징으로 하는 알부민 융합 단백질.
  8. 제5항 내지 제7항 중의 어느 한 항에 있어서, 첨부된 서열 목록의 서열번호 1, 서열번호 2, 서열번호 3 또는 서열번호 4의 아미노산 서열을 함유하는 것을 특징으로 하는 알부민 융합 단백질.
  9. 제3항 내지 제8항 중의 어느 한 항에 따른 임의의 아미노산 서열을 암호화하는 DNA 서열.
  10. 제9항에 따른 임의의 DNA 서열을 함유하는 재조합 발현 벡터.
  11. 제10항에 따르는 재조합 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포.
  12. 사람 유전자 치료를 위한 전달 벡터에서 제9항에 따른 임의의 DNA 서열의 용도.
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20140090703A (ko) * 2008-06-24 2014-07-17 체에스엘 베링 게엠베하 연장된 생체내 반감기를 갖는 인자 ｖｉｉｉ, 폰 빌레브란트 인자 또는 이들의 복합체

Families Citing this family (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP1816201A1 (en) 2006-02-06 2007-08-08 CSL Behring GmbH Modified coagulation factor VIIa with extended half-life
EP2007885B1 (en) * 2006-04-11 2010-07-21 CSL Behring GmbH Method of increasing the in vivo recovery of therapeutic polypeptides
ES2889920T3 (es) * 2006-06-14 2022-01-14 Csl Behring Gmbh Proteínas de fusión escindibles proteolíticamente con alta actividad específica molar
EP1867660A1 (en) * 2006-06-14 2007-12-19 CSL Behring GmbH Proteolytically cleavable fusion protein comprising a blood coagulation factor
AU2013202566C1 (en) * 2006-06-14 2018-07-12 Csl Behring Gmbh Proteolytically cleavable fusion protein comprising a blood coagulation factor
US7939632B2 (en) 2006-06-14 2011-05-10 Csl Behring Gmbh Proteolytically cleavable fusion proteins with high molar specific activity
JP5448839B2 (ja) * 2006-12-22 2014-03-19 ツェー・エス・エル・ベーリング・ゲー・エム・ベー・ハー インビボで長い半減期を有する修飾された凝固因子
EP1935430A1 (en) * 2006-12-22 2008-06-25 CSL Behring GmbH Modified coagulation factors with prolonged in vivo half-life
BR112012013502A2 (pt) 2009-12-06 2017-01-10 Biogen Idec Hemophilia Inc "polipeptídeos quiméricos e híbridos de fator viii-fc, e métodos de uso dos mesmos".
US20200131225A1 (en) * 2017-04-20 2020-04-30 Novo Nordisk A/S Methods of purification of albumin fusion proteins

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4970300A (en) * 1985-02-01 1990-11-13 New York University Modified factor VIII
WO2000071714A2 (en) * 1999-05-24 2000-11-30 The American National Red Cross Methods of reducing factor viii clearance and compositions therefor
EP1351986A2 (en) * 2001-01-12 2003-10-15 The American National Red Cross Methods and compositions for reducing heparan sulfate proteoglycan-mediated clearance of factor viii

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20140090703A (ko) * 2008-06-24 2014-07-17 체에스엘 베링 게엠베하 연장된 생체내 반감기를 갖는 인자 ｖｉｉｉ, 폰 빌레브란트 인자 또는 이들의 복합체

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