KR20020048942A

KR20020048942A - 폴리옥시에틸렌 알킬 에테르 또는 에스테르 및 하나이상의 비이온성 계면활성제를 포함하는 애쥬번트

Info

Publication number: KR20020048942A
Application number: KR1020027003856A
Authority: KR
Inventors: 마틴 프리에드; 필리페 헤르만드; 베로니크 헨데릭스
Original assignee: 장 스테판느; 스미스클라인 비이참 바이오로지칼즈 에스.에이.
Priority date: 1999-09-24
Filing date: 2000-09-22
Publication date: 2002-06-24
Also published as: EP1214053A1; IL148671A0; NZ517901A; PL355232A1; NO20021432D0; HK1046861A1; AU766635B2; AU7522600A; BR0014285A; NO20021432L; HUP0203817A2; CN1399539A; TR200200777T2; MXPA02003068A; WO2001021152A1; HUP0203817A3; CO5200838A1; AR025749A1; CZ20021045A3; JP2003509452A

Abstract

본 발명은 하나 이상의 추가의 계면활성제와 혼합된 폴리옥시에틸렌 알킬 에테르 또는 에스테르 계면활성제를 포함하는 신규의 애쥬번트 시스템에 관한 것이다. 바람직하게는, 상기 추가의 비이온성 계면활성제가 옥토시놀 (트리톤^TM시리즈)이다. 본 발명은 신규의 애쥬번트, 이것을 포함하는 백신, 이것을 제조하는 방법 및 이것의 백신 제형을 제공한다. 또한, 질병의 예방 또는 치료를 위한 본 발명의 애쥬번트 또는 백신의 용도를 제공한다.

Description

폴리옥시에틸렌 알킬 에테르 또는 에스테르 및 하나 이상의 비이온성 계면활성제를 포함하는 애쥬번트 {ADJUVANT COMPRISING A POLYOXYETHYLENE ALKYL ETHER OR ESTER AND AT LEAST ONE NONIONIC SURFACTANT}

일부 비이온성 계면활성제의 의학적 용도는 보고되었다. 예컨데, 외비강을 통한 인슐린 흡입의 증강을 위한 폴리에틸렌 에테르 및 에스테르의 비내 투여가 보고되었다 (참고문헌: Hirai et al., 1981, International Journal of Pharmaceutics, 9:165-172; Hirai et al., 1981, International Journal of Pharmaceutics, 9: 173-184).

폴리옥시에틸렌 알킬 에테르는 오일 에멀젼 성분 또는 아크릴산 중합체 애쥬번트로서 보고되었다 (JP 05 201877; US 3,919,411).

다른 비이온성 계면활성제가 백신 제형으로 이용되었다. 예컨데, 폴리에틸렌 소르비탄 모노에스테르와 함께 폴리옥시에틸렌 피마자유 또는 카프릴/카프린산 글리세리드 및 항원의 혼합물을 포함하는 백신 제조물이 점막으로의 국소 투여후에 전신적인 면역 반응을 유발할 수 있다 (참고문헌: WO 94/17827). 상기 특허 출원은 비이온성 계면활성제 트윈(TWEEN)20^TM(폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노에스테르) 및 Imwitor742^TM(카프릴/카프린 산 글리세리드의 혼합물) 또는 트윈20^TM및 폴리옥시에틸렌 피마자유의 혼합물이 비내 면역화에 수반되는 전신 면역 반응을 증강시킬수 있음을 기술한다. 또한, 비내로 투여된 항원에 대한 면역 반응의 증강에 대한 이러한 제형의 효능이 문헌(Gizurarson et al., 1996, Vaccin Research, 5, 69-75; Aggerbeck et al., 1997, Vaccin, 15, 307-316; Tebby et al., Viral Immunol 1999; 12(1): 41-5)에 상세히 기술되어 있다 .

또한, 비이온성 계면활성제는 비이온성 계면활성 소포 (일반적으로 NISV로 알려짐, 미국특허 제 5,679,355호)를 형성하는 방법으로 제조된다. 이러한 비이온성 계면활성제의 제형은, 종종 콜레스테롤의 존재하에, 안쪽의 수용액상 또는 이중막 그 자체내에 항원을 가두는 지질이중막 소포를 형성한다.

국제특허출원 WO 96/36352 (미국특허 제 5,653,987호)은 주로 경구를 통한 인슐린 전달을 위한, 2 이상의 흡착 활성제 및 물을 포함하는 액상-약제를 기술하고, 여기서 각 흡착 활성제의 양은 전체 제형의 1 내지 10%의 농도로 존재한다.

계면활성제는 일반적으로 전신적 투여를 위한 오일 에멀젼 애쥬번트의 제형으로 사용되고 오일 소적 (droplet)을 안정화하는 기능을 한다. 예컨데, 폴리옥시 소르비탄 에스테르 (트윈^TM) 및 소르비탄 지방산 에스테르 (SPAN^TM)는 수용액상의 오일 에멀젼을 안정화하는데 사용된다 (참고문헌: EP 0 399 843 B, WO 95/17210).

본 발명은 하나 이상의 추가의 비이온성 계면활성제와 혼합된 폴리에틸렌 알킬 에테르 또는 에스테르 계면활성제를 포함하는 신규의 애쥬번트 시스템에 관한 것이다. 바람직하게는, 상기 추가의 비이온성 계면활성제가 옥토시놀 (Octoxynol)이다. 본 발명은 상기 신규의 애쥬번트, 이를 포함하는 백신 및 백신으로의 조제 (manufacture) 및 제형 (formulation) 방법을 제공한다. 또한, 질병의 예방 또는 치료를 위한 본 발명의 애쥬번트 또는 백신의 용도를 제공한다. 또한, 본 발명의 애쥬번트 및 백신을 사용하여 숙주내에서 면역 반응을 증강시키는 방법을 제공한다. 애쥬번트는 특히 점막 애쥬번트로서 유용하고 또한 전신적으로도 효과적이다.

통증을 수반하는 주사의 요구 및 '주사 바늘 공포'로 인한 환자의 치료순응도에 대한 관련된 부정적인 효과를 무시하는 것을 별도로 하고, 점막면역화은, 항원의 점막투여가 많은 병원균의 감염 경로인 점막 표면에서 보호작용을 유발하여 보다 더 큰 효능을 가진다는 것이 포유동물에서 증명되었기 때문에 매력적이다. 또한, 비내 면역화와 같은 점막 백신화는, 비점막뿐만 아니라 생식기 점막과 같은 원거리의 점막부분에서도 점막 면역을 유발하는 것으로 보고되었다 (참고문헌:Mestecky, 1987, Journal of Clinical Immunology, 7:265-276; McGhee and Kiyono, Infectious Agents and Disease, 1993, 2:55-73). 당 기술분야의 많은 연구에도 불구하고, 인간에 사용되기에, 적절한 안전하고 효과적인 점막 애쥬번트는 밝혀야 할 과제로 남아 있다. 본 발명은 이러한 문제점에 대한 해결책을 제공한다.

본 출원은 하나 이상의 추가의 비이온성 계면활성제와 혼합된 폴리옥시에틸렌 알킬 에테르 또는 에스테르가 백신을 위한 강력한 애쥬번트로 작용한다는 놀라운 발견을 제시한다. 유리하게는, 이러한 혼합물을 전신적으로 투여할 수 있고,또한 백신 혼합물을 점막으로 투여하는 경우에도 전신 면역 반응을 야기할 수 있는 효력이 있다. 본 발명의 백신의 점막 투여에 의해 유발되는 면역 반응은 최소한 기존 백신의 전신적 투여후에 관찰되는 면역반응만큼 높다.

본 발명은 용이하게 제조되고 하나 이상의 폴리옥시에틸렌 알킬 에테르 또는 에스테르 및 하나 이상의 추가의 비이온성 계면활성제를 포함하는 안전하고 효능있는 애쥬번트를 제공한다. 본 발명에서 사용되는 계면활성제는 수용액중에 존재하고, 소포 또는 미셀 (micelle)과 같은 미립자 구조의 현탁액을 형성한다. 바람직하게는, 계면활성제는 수용액의 형태이거나 미셀의 형태이다.

본 발명의 백신 및 애쥬번트로 제조될 수 있는 폴리옥시에틸렌 에테르 또는 에스테르는 화학식 (I)의 분자를 포함한다:

HO(CH₂CH₂O)_n-A-R

(상기 식에서, n은 1 내지 50이고, A는 결합 또는 -C(O)이고, R은 C_1-50알킬 또는 페닐C_1-50알킬임).

따라서, 본 발명의 하나의 구체예는 화학식 (I)의 폴리옥시에틸렌 알킬 에테르를 포함하는 백신 제형으로 구성되고, 여기서 n은 1 내지 50이며, 바람직하게는 4 내지 24, 보다 더 바람직하게는 6 내지 12, 가장 바람직하게는 9이고; R 성분는 C_1-50, 바람직하게는 C₄-C₂₀알킬, 가장 바람직하게는 C₁₂알킬이다. 폴리옥시에틸렌 에테르의 농도는 0.1-20%, 바람직하게는 0.1-10%, 가장 바람직하게는 0.1-1% 범위내이다. 적절한 폴리옥시에틸렌 에테르는 하기의 그룹에서 선택된다: 폴리옥시에틸렌-9-라우릴 에테르, 폴리옥시에틸렌-9-스테아릴 에테르, 폴리옥시에틸렌-8-스테아릴 에테르, 폴리옥시에틸렌-4-라우릴 에테르, 폴리옥시에틸렌-35-라우릴 에테르, 및 폴리옥시에틸렌-23-라우릴 에테르.

가장 바람직하게는, 상기 폴리옥시에틸렌 알킬 에테르는 폴리옥시에틸렌-9-라우릴 에테르 (라우레스 9)이다. 폴리옥시에틸렌 라우릴 에테르의 다른 용어 또는 명칭은 CAS 등록부에서 찾을 수 있다. 폴리옥시에틸렌-9-라우릴 에테르의 CAS 등록번호는 9002-92-0이다. 폴리옥시에틸렌 라우릴 에테르와 같은 폴리옥시에틸렌 에테르는 멀크 인덱스 (Merk Index) (12^thed: entry 7717, Merk & Co. Inc., Whitehouse Station, N.J., USA; ISBN 0911910-12-3)에 기술되어 있고, 여기서 치료용도는 하기를 포함하는 것으로 기재되어 있다: 국소마취, 항소양약 (항가려움제) 및 경화제 활성. 한 클라스로서, 폴리옥시에틸렌 에테르 또는 에스테르는 비이온성 계면활성제이다. 라우레스 9는 에틸렌 옥사이드와 도데실 알콜을 반응시켜 형성되고, 평균 9개의 에틸렌 옥사이드 유닛을 가진다. 화학식 (I)의 계면활성제의 하나의 이러한 혼합물이 사용되는 경우에, 에틸렌 옥사이드 유닛의 평균수=n은 혼합물내의 계면활성제 모두에 존재하도록 본 발명과 관련하여 의도되었다.

계면활성제의 알킬 사슬 길이에 대한 폴리옥시에틸렌 부분의 길이의 비 (예: n:알킬체인 길이의 비)는 수용액상에서 이들 계면활성제 (detergent) 클라스의 용해도에 영향을 미친다. 따라서, 본 발명의 애쥬번트는 수용액상에 존재하거나 또는 미셀 또는 소포와 같은 세립자 구조를 형성할 수 있다. 용액으로서, 본 발명의애쥬번트는 안전하고, 예컨데 0.22㎛ 막을 통해 투과시켜 용이하게 멸균가능하며 투여하기 용이하고, 균일한 세립자 구조의 형성과 관련된 GMPs 및 QC 문제없이 간단한 방식으로 제조될 수 있다. 라우레스 9와 같은 일부 폴리옥시에틸렌 에테르는 비소포성 용액을 형성할 수 있다. 그러나, 폴리옥시에틸렌-8 팔미토일 에테르 (C₁₈E₈)는 소포를 형성할 수 있다. 따라서, 본 발명의 애쥬번트를 형성하기 위해서, 하나 이상의 추가의 비이온성 계면활성제와 혼합한 폴리옥시에틸렌-8 팔미토일 에테르 소포를 사용하는 것은 특히 고려된다.

바람직하게는, 본 발명의 애쥬번트 혼합물에 존재하는 폴리옥시에틸렌 알킬 에테르 성분은 용혈활성을 가진다. 폴리옥시에틸렌 알킬 에테르의 용혈 활성은 하기의 분석법에 의하여 시험관내에서 측정될 수 있고, 적혈구의 용해를 유발하지 못하는 계면활성제의 최고 농도로서 제시된다.

1. 기니아 피그의 신선한 혈액을 데스크-탑 (desk-top) 원심분리기에서 인산염완충식염수 (PBS)로 3회 세척한다. 원래의 부피로 재현탁한 후에 혈액을 PBS로 10배 희석시킨다.

2. 상기 혈액 현탁액의 50㎕를 2배 희석한 계면활성제를 포함한 PBS 800㎕에 첨가한다.

3. 8시간 후에 용혈현상을 육안으로 또는 상등액의 흡광도를 측정하여 확인한다. 570nm에서 빛을 흡수하는 붉은 상등액의 존재는 용혈현상이 존재함을 나타낸다.

4. 결과는 용혈이 더 이상 일어나지 않는 최초 계면활성제 희석 농도로서 나타낸다.

이러한 생물학적 분석법 고유의 실험적 변수내에서, 본 발명의 폴리옥시에틸렌 알킬 에테르 또는 화학식 (I)의 계면활성제는 바람직하게는 약 0.5 내지 0.0001%, 보다 더 바람직하게는 0.05 내지 0.0001%, 훨씬 더 바람직하게는 0.005 내지 0.0001% 및 가장 바람직하게는 0.003 내지 0.0004%의 용혈 활성을 보인다. 이상적으로는, 상기 폴리옥시에틸렌 에테르 또는 에스테르는 폴리옥시에틸렌-9 라우릴 에테르 또는 폴리옥시에틸렌-8 스테아릴 에테르의 용혈활성과 비슷한 정도의 용혈활성 (예: 10배 차이 이내)을 갖는다.

적절한 표면 활성을 가진 임의의 계면활성제인 하나 이상의 추가의 비이온성 계면활성제를 폴리옥시에틸렌 알킬 에테르에 첨가한다. 적절한 계면활성제는 "계면활성제 시스템" (Attwood and Florence, 1983, Campman and Hall)에 기술되어 있다.

바람직한 비이온성 계면활성제는 예컨데 옥토시놀 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같이 화학식 (I)에 속하는 것이 아니다. 특히 바람직한 옥토시놀은 트리톤 (Triton) X-45, t-옥틸페녹시 폴리에톡시에탄올 (트리톤 X-100), 트리톤 X-102, 트리톤 X-114, 트리톤 X-165, 트리톤 X-205, 트리톤 X-305, 트리톤 N-57, 트리톤 N-101, 트리톤 N-128을 포함한다. 트리톤 X-100이 특히 바람직하다. t-옥틸페녹시폴리에톡시에탄올 (트리톤 X100^TM)을 포함하는 옥토시놀 시리즈 (series)는 멀크 인덱스 엔트리 (Merck Index Entry) 6858에 기술되어 있다 (1162쪽, 12^thedition, Merck & Co. Inc., Whitehouse Station, N.J., USA; ISBN 0911910-12-3).

다른 바람직한 비이온성 계면활성제는 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르이다. 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노올리에이트 (트윈80^TM)을 포함하는 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르는 멀크 인덱스 엔트리 7742에 기술되어 있다 (1308쪽, 12^thedition, Merck & Co. Inc., Whitehouse Station, N.J., USA; ISBN 0911910-12-3). 옥토시놀 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르는 Sigma에서 구입할 수 있다. 바람직한 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르는 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노올리에이트 (트윈80^TM)이다.

본 발명의 가장 바람직한 애쥬번트는 t-옥틸페녹시폴리에톡시에탄올 (트리톤 X100^TM)와 같은, 폴리옥시에틸렌 알킬 에테르 및 옥토시놀을 포함한다. 선택적으로, 상기 혼합물은 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노올리에이트 (트윈80^TM)과 같은 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르를 추가로 포함한다. 가장 바람직하게는, 상기 폴리옥시에틸렌 알킬 에테르는 폴리옥시에틸렌-9-라우릴 에테르이고, 상기 옥토시놀은 t-옥틸페녹시폴리에톡시에탄올 (트리톤 X100^TM)이다. 이들 제형에 담즙산염 또는 콜린산유도체와 같은 비이온성 계면활성제를 첨가할 수 있다.

따라서 애쥬번트 제조물은 선택적으로 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르를포함하고 선택적으로 담즙산염 또는 콜린산 유도체를 포함하며, 폴리옥시에틸렌 알킬 에테르 또는 에스테르 (화학식 I), 옥토시놀을 포함한다. 본 제형의 바람직한 구체예는 폴리옥시에틸렌-9 라우릴 에테르, t-옥틸페녹시폴리에톡시에탄올 (TRITON X100^TM), 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노올리에이트 및 소듐 디옥시콜린산염의 혼합물을 포함한다.

본 발명의 애쥬번트의, 폴리옥시에틸렌-9 라우릴 에테르와 같은 폴리옥시에틸렌 알킬 에테르 또는 에스테르의 농도는 통상 0.001 내지 20%, 바람직하게는 0.001 내지 10%, 보다 더 바람직하게는 0.001 내지 1% 및 가장 바람직하게는 0.001 내지 0.8% 또는 약 0.5% (w/v)의 범위내이다. 이것에 폴리옥시에틸렌 에테르 또는 에스테르가 아닌 추가의 비이온성 계면활성제를 첨가한다. 추가의 비이온성 계면활성제 또는 이들 각각은 통상 최종 백신 제조물에 0.001 내지 20%, 보다 더 바람직하게는 0.01 내지 10% 및 가장 바람직하게는 약 2% (w/v)의 농도이하로 존재한다. 두 가지의 상기 추가의 비이온성 계면활성제가 존재하는 경우에, 이들은 바람직하게는 각각 약 2%의 농도로, 통상적으로는 각각 약 0.6%의 농도로 존재한다. 셋 또는 그 이상의 추가의 비이온성 계면활성제가 존재하는 경우, 이들은 일반적으로 각각 약 1%의 농도이하로 존재하고, 통상적으로는 각각 약 0.2% 또는 0.1%의 소량으로 존재한다. 임의의 계면활성제 혼합물은 본 발명에 따른 백신제형에 존재한다. 상기에서 논의된 비이온성 계면활성제의 최종 백신 조성물중에서의 바람직한 농도는 하기와 같다: 트리톤 X-100^TM과 같은 옥틸- 또는 노닐페녹시 폴리옥시에탄올또는 트리톤 시리즈의 그 밖의 계면활성제: 0.001 내지 20%, 바람직하게는 0.001 내지 10%, 보다 더 바람직하게는 0.001 내지 1% 및 가장 바람직하게는 0.005 내지 0.1% (w/v); 트윈80^TM과 같은 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르가 존재하는 경우, 0.001 내지 1%, 가장 바람직하게는 약 0.1% (w/v).

폴리옥시에틸렌 에테르 또는 에스테르 및 하나 이상의 추가의 비이온성 계면활성제를 포함하는 본 발명의 백신 또는 애쥬번트의 계면활성제의 전체 농도는, 통상 0.001 내지 40%, 바람직하게는 0.001 내지 20%, 보다 더 바람직하게는 0.001 내지 10%, 훨씬 더 바람직하게는 0.001 내지 1%, 가장 바람직하게는 0.001 내지 0.7% (w/v)의 범위이다.

본 발명의 백신 제조물는 경구/부칼(bucal)/장/질/직장 또는 비를 통한 경로와 같은 점막 경로를 통하여 상기 백신을 투여하는 것에 의하여, 질병에 감염되기 쉬운 또는 질병에 걸린 포유동물을 예방하거나 치료하는데 사용된다. 이러한 투여는 소적 (droplet), 스프레이 또는 건조 파우더 형태로 가능하다. 또한, 분무되거나 또는 에어로졸화된 백신 제형은 본 발명의 일부를 구성한다. 또한, 경구 투여를 위한 위 저항성 캡슐제 및 과립, 장 또는 질내 투여를 위한 좌약 같은 장내 제형도 본 발명의 부분을 구성한다. 또한, 본 발명은 피부 (경피 또는 경피성 전달)에 적용된 항원의 면역원성을 증강시키는데 사용된다. 또한, 본 발명의 애쥬번트는 예컨데, 근내 투여 또는 경피성 투여와 같이 비경구적으로 전달된다. 바람직하게는, 비내 백신화에 사용되는 경우, 본 발명의 백신은 바람직하게는 용혈현상을보인다.

투여경로에 따라, 다양한 투여장치가 사용된다. 예컨데, 비내 투여를 위해서는 시판되고 있는 Accuspray^TM(Becton Dickinson)와 같은 스프레이 장치가 사용될 수 있다.

비내 사용을 위한 바람직한 스프레이 장치는, 장치의 성능이 사용자에 의해 적용되는 압력에 따라 다르지 않은 것이다. 이들 장치는 압력한계장치 (pressure threshold device)로 공지되어 있다. 액체는 압력한계에 도달한 경우에만 노즐로부터 분사된다. 이들 장치를 이용하여 보다 쉽게 균일한 소적 크기의 스프레이를 획득할 수 있게 한다. 본 발명의 사용을 위한 압력한계장치는 당 기술분야에서 공지되어 있고, 예컨데, 문헌 (WO91/13281 및 EP 311 863 B)에 기술되어 있다. 이러한 장치는 파이퍼 게엠베하 (Pfeiffer GmbH)가 상업적으로 시판하고 있다.

바람직한 비내 장치는 소적을 1 내지 200㎛의 범위, 바람직하게는 10 내지 120㎛의 범위로 만들어 낸다 (물을 용액으로 하여 사용됨). 10㎛미만은 흡입의 위험이 위험이 있으므로 10㎛미만의 소적을 약 5% 이하로 가지도록 하는 것이 바람직하다. 120㎛이상의 소적은 더 작은 소적만큼 잘 분사되지 않으므로 120㎛를 넘는 소적을 약 5% 이상 가지지 않도록 하는 것이 바람직하다.

2-투여량 전달 (bi-dose delivery)는 본 발명에 따른 백신의 사용을 위한 비내 전달 장치의 또 하나의 바람직한 특징이다. 2-투여량 장치는 각 외비강 (nostril)에 투여하기 위한 하나의 서브-투여량 (sub-dose), 1회 백신 투여량의 2서브-투여량을 포함한다.

본 발명의 또 다른 면은, 본원에서 기술된 바와 같이 본 발명에 따른 백신 제형물을 포함하는 비내 투여 장치를 포함하는 키트(kit)를 제공한다.

특정 백신 제형에 있어, 다른 백신 성분이 제형중에 포함될 수 있다. 또한, 본 발명의 애쥬번트는 담즙산엽 또는 콜린산 유도체를 포함한다. 바람직하게는 콜린산 유도체는 이들의 염, 보다 더 바람직하게는 이들의 나트륨염이다. 담즙산염 또는 이들의 유도체의 예는 콜린산 그 자체, 디옥시콜린산, 타우로디옥시콜린산염, 체노디옥시콜린산, 리소콜린산 우르소디옥시콜린산, 히오디옥시콜린산 및 상기 언급한 담즙산염의 글리코-, 타우로-, 아미도프로필-1-, 프로판설포닉-, 아미도프로필-2-히드록시-1-프로판설포닉 유도체 또는 N,N-비스(3DG글루코노아미도프로필)디옥시콜아미드와 같은 유도체를 포함한다. 특히 바람직한 예는 최종 백신 투여량으로 존재하는 소듐디옥시콜린산염 (NaDOC)이다.

바람직하게는, 본 발명의 애쥬번트는 비소포형태의 수용액 형태 또는 현탁액인 경우 유리하다. 이러한 제조물는 쉽게 반복하여 제조할 수 있어야 하며 또한 쉽게 멸균할 수 있어야 하고 (450nm 또는 220nm 공극막에 의한 정기적 여과), 애쥬번트의 복잡한 물리적 구조의 손상없이 스프레이 형태로 비점막으로 쉽게 투여할 수 있어야 한다. 트리톤-X 100^TM과 혼합된 폴리옥시에틸렌-9 라우릴 에테르는 수용액을 형성한다 (작은 미셀도 존재할 수 있음).

본 발명의 한 면은, 항원 및 본 발명의 애쥬번트를 혼합하고 상기 혼합물을숙주에 투여하는 것을 포함하여, 숙주에서 면역 반응을 유발하거나 증강시키는 방법을 제공한다. 바람직하게는 상기 숙주로의 투여경로는 점막 표면을 통해서이고 보다 더 바람직하게는 비내 점막을 통해서이다. 혼합물을 비점막을 통해 투여될 때, 혼합물은 바람직하게는 스프레이로 투여된다. 면역 반응을 유발하는 바람직한 방법에서, 전신 면역반응이 본 발명의 백신의 비내 투여에 의해 유발된다. 면역반응을 증강시키는 방법은 백신의 초회감작 투여 또는 재차 투여이고, 백신은 인플루엔자 항원 또는 항원제조물을 포함하는 것이 바람직하다. 이러한 방법으로 비점막을 통한 투여를 위한 바람직한 애쥬번트는, 폴리옥시에틸렌-9 라우릴 에테르 및 t-옥틸페녹시폴리에톡시에탄올 (트리톤 X100^TM)의 바람직한 혼합물과 같은 폴리옥시에틸렌 알킬 에테르 및 옥토시놀의 혼합물이며, 선택적으로 상기 애쥬번트 혼합물은 모노올리에이트, 트윈80^TM과 같은 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르 및/또는 담즙산염 또는 소듐 디옥시콜린산염과 같은 콜린산 유도체를 추가로 포함한다.

본 발명의 조성물이 다양한 기원으로부터 유래된 항원을 포함하는 백신 제형화에 사용되어질 것으로 예상된다. 예컨데, 항원은 인간, 박테리아 또는 바이러스 핵산, 병원체로부터 유래된 항원 또는 항원성 제조물, 종양으로부터 유래된 항원 또는 항원성 제조물, GnRH 및 IgE 펩티드를 포함하는 숙주-유래된 항원, 재조합생성된 단백질 또는 펩티드 및 키메라 융합 단백질을 포함한다.

바람직하게는, 본 발명의 백신 제형은 인간 병원체에 대해 면역 반응을 일으킬 수 있는 항원 또는 항원성 조성물을 함유하며, 이러한 항원 또는 항원성 조성물은, HIV-1(예를 들어, tat, nef, gp120 또는 gp160), gD 또는 이의 유도체 또는 HSV1 또는 HSV2로부터의 ICP27과 같은 즉시형 초기 단백질과 같은 인간 헤르페스 바이러스, 사이토메갈로바이러스[(특히 인간)(예를 들어, gB 또는 이의 유도체)], 로타바이러스(살아있는 약독된 바이러스를 포함함), 엡스타인 바르 바이러스(예를 들어, gp350 또는 이의 유도체), 수두 대상포진 바이러스(예를 들어, gpI, II 및 IE63), 또는 B형 간염 바이러스(예를 들어, B형 간염 표면 항원 또는 이의 유도체), A형 간염 바이러스, C형 간염 바이러스 및 E형 간염 바이러스와 같은 간염 바이러스로부터 유래되거나, 호흡기 신시티움 바이러스(예를 들어, F 및 G 단백질 또는 이들의 유도체), 파라인플루엔자 바이러스, 홍역 바이러스, 유행성이하선염 바이러스, 인간 유두종 바이러스(예를 들어, HPV6, 11, 16, 18, ..), 플라비바이러스(예를 들어, 황열 바이러스, 뎅기 바이러스, 진드기 매개 뇌염 바이러스, 일본 뇌염 바이러스) 또는 인플루엔자 바이러스[알 또는 MDCK 세포, 또는 Vero 세포에서 증식된 전체의 살아있거나 비활성화된 바이러스, 분할 인플루엔자 바이러스 , 또는 베로 세포 또는 전체 독감 비로솜(참고문헌: R. Gluck, Vaccine, 1992, 10, 915-920) 또는 HA, NP, NA 또는 M 단백질과 같은 이의 정제 단백질 또는 재조합 단백질, 또는 이들의 조합물)와 같은 파라믹소바이러스와 같은 그 밖의 바이러스 병원체로부터 유래되거나, 나이세리아 고노리아(Neisseria gonorrhea) 및 나이세리아 메닌지티디스(Neisseria meningitidis) [예를 들어, 캡슐형 다당류 및 이의 컨쥬게이트, 트랜스페린-결합 단백질, 락토페린 결합 단백질, PilC, 어드히신(adhesin)]를 포함하는 나이세리아 종; 스트렙토코커스 피오제네스(Streptococcus pyogenes)(예를 들어, M 단백질 또는 이의 단편, C5A 프로테아제, 리포테이코산), 스트렙토코커스 아갈락티애(Streptococcus agalactiae), 스트렙토코커스 뮤탄스(Streptococcus mutans); 헤모필루스 두크레이(Haemophilus ducreyi); 브란하멜라 카타랄리스(Branhamella catarrhalis)로도 알려져있는 모락셀라 카타랄리스(Moraxella catarrhalis) (예를 들어, 고분자량 및 저분자량 어드히신 및 인바진(invasin))를 포함하는 모락셀라 종; 보르데텔라 퍼투시스(Bordetella pertussis) (예를 들어, 퍼택틴, 퍼투시스 독소 또는 이들의 유도체, 사상 혈구응집소, 아데닐레이트 사이클라제, 핌브린(fimbrin)), 보르데텔라 파라퍼투시스(Bordetella parapertussis) 및 보르데텔라 브론키셉티카(Bordetella bronchiseptica)를 포함하는 보르데텔라 종; 미코박테리움 투버쿨로시스(Mycobacterium tuberculosis) (예를 들어, ESAT6, 항원 85A, 85B 또는 85C), 미코박테리움 보비스(Mycobacterium bovis), 미코박테리움 레프래(Mycobacterium leprae), 미코박테리움 아비움(Mycobacterium avium), 미코박테리움 파라투버쿨로시스(Mycobacterium paratuberculosis), 미코박테리움 스메그마티스(Mycobacterium smegmatis) 를 포함하는 미코박테리움 종; 레지오넬라 뉴모필라(Legionella pneumophila)를 포함하는 레지오넬라 종; 장관독성 대장균(E. coli)(예를 들어, 콜로니형성 인자, 열 불안정성 독소 또는 이의 유도체, 열안정성 독소 또는 이의 유도체), 장관출혈성 대장균, 장관병원성 대장균(예를 들어, 시가 독소 유사 독소 또는 이의 유도체)를 포함하는 대장균 종; 비브리오 콜레라(Vibrio cholera)(예를 들어, 콜레라 독소 또는 이의 유도체)를 포함하는 비브리오 종; 시겔라 소네이(Shigella sonnei), 시겔라 디센테리애(Shigella dysenteriae), 시겔라 플렉스네리(Shigella flexnerii)를 포함하는 시겔라 종; 예르시니아 엔테로콜리티카(Yersinia enterocolitica)(예를 들어, Yop 단백질), 예르시니아 페스티스(Yersinia pestis), 예르시니아 슈도투버쿨로시스(Yersinia pseudotuberculosis)를 포함하는 예르시니아 종; 캄필로박터 제주니(Campylobacter jejuni)(예를 들어, 독소, 어드히신 및 인바신) 및 캄필로박터 콜라이(Campylobacter coli)를 포함하는 캄필로박터 종; 살모넬라 티피(Salmonella typhi), 살모넬라 파라티피(Salmonella paratyphi), 살모넬라 콜레라에수이스(Salmonella choleraesuis), 살모넬라 엔테리티디스(Salmonella enteritidis)를 포함하는 살모넬라 종; 리스테리아 모노사이토제네스(Listeria monocytogenes)를 포함하는 리스테리아 종; 헬리코박터 파이로리(Helicobacter pylori)(예를 들어, 우레아제, 카탈라제, 바쿠오레이팅(vacuolating) 독소)를 포함하는 헬리코박터 종; 슈도모나스 애루기노사(Pseudomonas aeruginosa)를 포함하는 슈도모나스 종; 스태필로코커스 아우레우스(Staphylococcus aureus), 스태필로코커스 에피더미디스(Staphylococcus epidermidis)를 포함하는 스태필로코커스 종; 엔테로코커스 패칼리스(Enterococcus faecalis), 엔테로코커스 패시움(Enterococcus faecium)을 포함하는 엔테로코커스 종; 클로스트리디움 테타니(Clostridium tetani)(예를 들어, 파상풍 독소 및 이의 유도체), 클로스트리디움 보툴리눔(Clostridium botulinum)(예를 들어, 보툴리눔 독소 및 이의 유도체), 클로스트리디움 디피실(Clostridium difficile)(예를 들어, 클로스트리디움 독소 A또는 B 및 이들의 유도체)를 포함하는 클로스트리디움 종; 바실루스 안트라시스(Bacillus anthracis)(예를 들어, 보툴리눔 독소 및 이의 유도체)를 포함하는 바실루스 종; 코리네박테리움 디프테리애(Corynebacterium diphtheriae)(예를 들어, 디프테리아 독소 및 이의 유도체)를 포함하는 코리네박테리움 종; 보렐리아 버그도르페리(Borrelia burgdorferi)(예를 들어, OspA, OspC, DbpA, DbpB), 보렐리아 가리니(Borrelia garinii)(예를 들어, OspA, OspC, DbpA, DbpB), 보렐리아 아프젤리(Borrelia afzelii)(예를 들어, OspA, OspC, DbpA, DbpB), 보렐리아 안데르소니(Borrelia andersonii)(예를 들어, OspA, OspC, DbpA, DbpB), 보렐리아 험시(Borrelia hermsii)를 포함하는 보렐리아 종; 에를리히아 이퀴(Ehrlichia equi) 및 인간 과립구성 에를리히아의 작용제를 포함하는 에를리히아 종; 리케치아 리케치(Richettsia richettsii)를 포함하는 리케치아 종; 클라미디아 트라코마티스(Chlamydia trachomatis)(예를 들어, MOMP, 헤파린-결합 단백질), 클라미디아 뉴모니애(Chlamydia pneumoniae)(예를 들어, MOMP, 헤파린-결합 단백질), 클라미디아 시타시(Chlamydia psittaci)를 포함하는 클라미디아 종; 렙토스피라 인터로간스(Leptospira interrogans)를 포함하는 렙토스피라 종; 트레포네마 팔리둠(Treponema pallidum)(예를 들어, 희소성 외막 단백질), 트레포네마 덴티콜라(Treponema denticola), 트레포네마 하이오디센테리애(Treponema hyodysenteriae)를 포함하는 트레포네마 종과 같은 세균성 병원체로부터 유래되거나; 플라스모디움 팔시파룸(Plasmodium falciparum)을 포함하는 플라스모디움 종; 톡소플라스마 곤디(Toxoplasma gondii)(예를 들어,SAG2, SAG3, Tg34)를 포함하는톡소플라스마 종; 엔타모에바 히스톨리티카(Entamoeba histolytica)를 포함하는 엔타모에바 종; 바베시아 미크로티(Babesia microti)를 포함하는 바베시아 종; 트리파노소마 크루지(Trypanosoma cruzi)를 포함하는 트리파노소마 종; 기아르디아 람블리아(Giardia lamblia)를 포함하는 기아르디아 종; 레쉬마니아 메이저(Leshmania major)를 포함하는 레쉬마니아 종; 뉴모시스티스 카리니(Pneumocystis carinii)를 포함하는 뉴모시스티스 종; 트리코모나스 바지날리스(Trichomonas vaginalis)를 포함하는 트리코모나스 종; 스키조스토마 만소니(Schisostoma mansoni)를 포함하는 스키조스토마 종과 같은 기생체로부터 유래되거나, 칸디다 알비칸스(Candida albicans)를 포함하는 칸디다 종; 크립토코커스 네오포만스(Cryptococcus neoformans)를 포함하는 크립토코커스 종과 같은 효모로부터 유래된다.

바람직한 박테리아 백신은 스트렙토코커스 뉴모니아 (S. pneumonia) (예컨데, 캡슐다당질 및 이들의 컨쥬게이트, PsaA, PspA, 스트렙토라이신, 콜린-결합 단백질) 및 단백질 항원 뉴모라이신 (참고 문헌: Biochem Biophys Acta, 1989, 67, 1007; Rubins et al., Microbial Pathogenesis, 25, 337-342)를 포함하는 스트렙토코커스 종 (Streptococcus spp.)으로부터 유도된 항원 및 이들의 독성이 제거된 돌연변이 유도체 (참고 문헌: WO 90/06951; WO 99/03884)를 포함한다. 그 밖의 바람직한 박테리아 백신은 헤모필러스 인프루엔자 타입 B (예컨데, PRP 및 이들의 컨쥬게이트), OMP26과 같은 난-타입퍼블 (non-typable) 헤모필러스 인플루엔자, 고분자량 아드헤진, P5, P6, 단백질 D 및 지방단백질 D, 및 핌브린(fimbrin) 및 핌브린 유래된 펩티드 (참고 문헌: 미국특허 제 5,843,464호)를 포함하는 헤모필러스 종으로부터 유래된 항원 또는 이들의 복합 복제 이형 또는 융합단백질을 포함한다. 그 밖의 바람직한 박테리아성 백신은 모레셀라 카타르할리스 (Morexella Catarrhalis) [이들의 외막소포 및 OMP106 (참고 문헌: WO97/41731)를 포함] 및 네이세리아 멘지티디스 B (Neisseria mengitidis B) [이들의 외막소포 및 NspA (참고문헌: WO 96/29412)를 포함]로부터 유래된 항원을 포함한다.

B형 간염 바이러스 (Hepatitis B) 표면 항원의 유도체는 당 기술분야에서 널리 공지되어 있고, 특히 유럽특허출원 EP-A-414 374, EP-A-0304578 및 EP 198-474에 기술된 이들 PreS1, PreS2 S 항원을 포함한다. 하나의 바람직한 면에서, 특히 CHO세포에서 발현되는 경우, 본 발명의 백신제형은 HIV-1 항원, gp120을 포함한다. 다른 구체예에서, 본 발명의 백신 제형은 상기에서 정의된 gD2t를 포함한다.

본 발명의 바람직한 구체예에서, 청구된 애쥬번트를 포함하는 백신은 성기사마귀의 원인이 되는 인간 파필로마 바이러스로부터 유래된 항원 (Human Papilloma Virus, HPV)(HPV6 또는 HPV11 등) 및 자궁경부암의 원인이 되는 HPV 으로부터 유래된 항원 (HPV16, HPV18 등)을 포함한다.

성기 사마귀 예방 또는 치료백신의 특히 바람직한 형태는 L1 입자 또는 캡소미어, 및 HPV 6 및 HPV 11,단백질 E6, E7, L1 및 L2 로부터 선택된 하나 이상의 항원을 포함하는 융합단백질을 포함한다.

융합 단백질의 가장 바람직한 형태는 WO 96/26277에서 공지된 L2E7 및 GB 9717953.5 (PCT/EP98/05285)에서 공지된 단백질D(1/3)-E7이다.

바람직한 HPV 자궁감염 또는 암, 예방 또는 치료 백신 조성물은 HPV 16 또는HPV 18항원을 포함한다. 예컨데, L1 또는 L2 항원 단량체, 또는 L1 또는 L2 항원은 유사 바이러스 입자 (VLP)로서 함께 제시되거나 L1 단독 단백질은 VLP로 또는 캡소미어 구조로 단독으로 제시된다. 바이러스 유사 입자 및 캡소미어와 같은 항원은 공지되어 있다. 예를 들어, WO94/00152, WO94/20137, WO94/05792 및 WO93/02184에서 볼 수 있다.

추가의 초기 단백질은 단독으로 또는 바람직하게는 예컨데 E7,E2 또는 E5 와 같은 융합단백질로서 포함된다; 특히 이의 바람직한 구체예는 L1E7 융합단백질을 포함하는 VLP를 포함한다 (참고문헌: WO 96/11272).

특히 바람직한 HPV 16항원은 HPV 16의 단백질 D 운반체와 융합하여 단백질 D-E6, E7 융합체를 형성하는 초기 단백질 E6 또는 E7 또는 이의 혼합물, 또는 E6, E7과 L2의 혼합물을 포함한다 (참고문헌: WO96/26277).

선택적으로 HPV 16 또는 18 초기 단백질 E6 및 E7은 단 분자로, 바람직하게는 단백질 D-E6/E7 융합체로 제시된다. 이러한 백신은 바람직하게는 단백질 D-E6 또는 단백질 D-E7 융합단백질 또는 단백질 D E6/E7 융합단백질의 형태로, 선택적으로 HPV 18의 E6 또는 E7 단백질 중 어느 하나 또는 둘다를 포함한다.

본 발명의 백신은 추가적으로 다른 HPV 균주 바람직하게는 HPV 6, 11, 31, 33 또는 45 균주의 항원을 포함한다.

또한, 본 발명의 백신은 말라리아의 원인이 되는 기생충으로부터 유래된 항원을 포함한다. 예컨데, 바람직한 플라스모디아 팔시파룸 (Plasmodia falciparum)의 항원은 RTS, S 및 TRAP을 포함한다. RTS는 실질적으로 B형 간염 바이러스의preS2부분의 4개의 아미노산을 통해 B형 간염 바이러스의 표면 (S) 단백질로 연결된 플라스모디아 팔시파룸의 포자소체막 (CS) 단백질의 모든 C-말단 부분을 포함하는 하이브리드 단백질이다. 이러한 전체 구조는 UK 특허출원 9124390.7을 기초로 우선권주장하여 공개된 국제특허출원 PCT/EP92/02591에서 공지되었다. 효모에서 발현되는 경우, RTS는 지질단백질 입자로 생산되고, HBV의 S 항원과 함께 발현되는 경우, RTS,S로 공지된 혼합 입자를 생산한다. TRAP 항원은 WO 90/01496으로 공개된 국제특허출원 PCT/GB89/00895에 기술되어 있다. 본 발명의 바람직한 구체예는 항원 시료가 RTS, S 및 TRAP 항원의 혼합물을 포함하는 말라리아 백신이다. 다단계 말라리아 백신의 구성요소로서의 후보가 되는 그 밖의 플라스모디아 항원은 플라스모디아 파시파룸 MSP1, AMA1, MSP3, EBA, GLURP, RAP1, RAP2, 시퀘스트린, PfEMP1, Pf332, LSA1, LSA3, STARP, SALSA, PfEXP1, Pfs25, Pfs28, PFS27/25, Pfs16, Pfs48/45, Pfs230 및 플라스모디아종의 이들의 유사체이다.

또한, 제형은 항종양 항원을 포함하고 암의 면역치료에 유용하다. 예컨데, 애쥬번트는 전립선암, 유방암, 직장결장암, 폐암, 췌장암, 신장암 또는 흑색종을 위한 항원과 같은 종양 거부 항원을 위해 효용을 가진다. 전형적인 항원은 흑색종 치료를 위한 MAGE 1 및 MAGE 3 또는 그 밖의 MAGE 항원, PRAME, BAGE 또는 GAGE를 포함한다 (참고 문헌: Robbins and Kawakami, 1996, Current Opinion in Immunology 8, pp 628-636; Van den Eynde et al., International Journal of Clinical & Laboratory Research (submitted 1997); Crreale et al., (1997), Journal of the National Cancer Institute 89, p293). 실제로 이들 항원은 흑색종, 폐 암종, 육종 (sarcoma) 및 방광암종과 같은 넓은 범위의 종양 타입에서 발현된다. 그 밖의 종양 특이적 항원이 본 발명의 애쥬번트와 사용하기에 적합하나, 전립선 특이적 항원 (PSA) 또는 Her-2/neu, KSA (GA733), MUC-1 및 암종배아성 항원 (CEA)에 한정되지 않는다. 따라서, 본 발명의 한 면은 본 발명에 따른 애쥬번트 조성물 및 종양 거부 항원을 포함하는 백신을 제공한다.

추가적으로 상기 항원은, 여러 암의 치료 또는 면역학적 거세시에, 호르몬 (참고문헌: GnRH, WO 95/20600)을 분비하는 성선자극호르몬의 총 길이, 10 아미노산으로 이루어진 짧은 펩티드와 같은 자기 펩티드 호르몬이다.

본 발명의 혼합물은 볼레리아 종으로부터 유래된 항원을 포함하는 백신의 제형화에 사용될 것으로 예상된다. 예컨데, 항원은 핵산, 기생충 유래된 항원 또는 항원성 기생충, 재조합기술에 의해 생산된 단백질 또는 펩티드, 및 키메라 융합 단백질을 포함할 수 있다. 특히, 항원은 OspA이다. OspA는 'Lipo-OspA'라고 명명된 숙주세포 (대장균)의 지질화된 형태의 완전한 성숙 단백질 또는 비-지질화된 유도체이다. 이러한 비-지질화된 유도체는 인플루엔자 바이러스의 비-구조 단백질 (NS1)의 처음 81개의 N-말단 아미노산을 가지는 비지질화된 NS1-OspA 융합단백질 및 완전한 OspA 단백질을 포함하고 다른 MDP-OspA는 3개의 추가의 N-말단 아미노산을 가지는 OspA의 비-지질화된 형태이다.

본 발명의 백신은 알레르기의 예방 또는 치료를 위하여 사용될 수 있다. 이러한 백신은 알레르겐 특이적 항원 (예컨데, Der p1) 및 알레르겐 비특이적 항원 [예컨데, 인간 IgE로부터 유래된 펩티드, 스탠워드 데카텝티드(stanworthdecapeptide)를 포함하나 이에 한정되지 않음 (참고 문헌: EP 0 477 231 B1)]을 포함한다.

본 발명의 가장 바람직한 백신 및 면역 반응을 유발하는 방법은 인플루엔자 바이러스 항원을 포함한다. 비활성 인플루엔자 바이러스 제조물은 기존에 공지된 발육란 방법으로 유도되거나 바이러스를 증식시키는 조직 배양을 사용하는 임의의 새로운 방법으로 유도될 수 있다. 바이러스를 증식시키는 적절한 세포기질은 예컨데 MDCK 또는 MDCK 클론 세포와 같은 개의 신장세포, MDCK 유사 세포, 베로(Vero) 세포를 포함하는 AGMK 세포와 같은 원숭이 신장세포 또는 백신용도의 인플루엔자 바이러스의 생산에 적절한 그 밖의 세포타입을 포함한다. 적절한 세포기질은 인간 세포, 예컨데, MRC-5 세포를 포함한다. 적절한 세포 기질은 예컨데, 닭 배아 섬유모세포와 같은 1차세포 또한 포함하나 이에 제한되지 않는다. 인플루엔자 바이러스 항원 제조물은 임의의 여러 상업적 방법, 예컨데 특허번호 DD 300 833에 기술된 분할플루 공정 (split flu process)으로 생산가능하다. 상업적으로 시판중인 분할 인프루엔자는 본 발명의 바람직한 백신을 구성하는 본 발명의 애쥬번트와 혼합된 플루아릭스 (Fluarix)와 같은, 스미스클라인 비이참에 의해 판매되는 Fluarix^TM을 포함한다.

바람직하게는, 본 발명에 따른 인플루엔자 백신은 둘 이상의 인플루엔자 균주를 포함하는 다가의 인플루엔자 백신이다. 가장 바람직하게는, 세 개의 균주를 포함하는 3가의 백신이다. 기존에 공지된 인플루엔자 백신은 일반적으로 두개의 A균주 및 하나의 B균주의, 세 균주의 인플루엔자를 포함한다. 그러나, 예컨데 보편적인 상황에서 유용한 1가 백신도 본 발명에서 배제되지 않는다. 1가의 보편적인 플루 백신은 대부분 확실하게 하나의 A 균주의 인플루엔자 항원을 함유할 것이다.

따라서, 바람직한 백신 제형은 난 (eggs) 또는 조직 배양 인플루엔자 항원을, 바람직하게는 분할 일플루엔자 항원, 폴리옥시에틸렌 알킬 에테르 및 하나 이상의 추가의 비이온성 계면활성제를 포함하고, 선택적으로 담즙산염 또는 콜린산 유도체를 포함한다. 본 백신의 바람직한 구체예는 분할 인플루엔자 바이러스 항원, 폴리옥시에틸렌-9 라우릴 에테르 및 트리톤-X 100^TM을 포함한다. 또한, 선택적으로 본 가장 바람직한 백신은 트윈80^TM및/또는 소듐 디옥시콜린산염과 같은 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르를 포함한다.

각 백신 투여량의 단백질의 양은 일반적인 백신투여환자에서 나타나는 심각한 역작용의 부작용없이 면역보호반응을 유발할 수 있는 양으로 선택한다. 이러한 양은 특이 면역원이 적용되는지 또는 어떻게 제시되는지에 따라 다를 것이다. 일반적으로, 각 투여량은 1 내지 1000㎍, 바람직하게는 1 내지 500㎍, 보다 더 바람직하게는 1 내지 100㎍, 가장 바람직하게는 1 내지 50㎍의 단백질을 포함한다. 개개의 백신의 최적의 양은 피험체의 고유의 면역 반응을 관찰하는 것을 포함하여 표준 조사에 의해 확인될 것이다. 최초 백신접종후에, 피험체에 적절한 간격으로 한 차례 또는 몇 차례의 추가접종을 할 수 있다.

본 발명의 바람직한 면에서, 폴리옥시에틸렌 알킬 에테르의 애쥬번트 효과는비이온성 계면활성제의 추가에 의해 상승작용하여 증강된다. 이러한 점에서, 상승작용은 각각의 개별성분이 하나만 사용되는 경우 나타나는 면역 반응의 합보다 혼합된 애쥬번트의 면역반응의 정도가 더 큰 것으로 관찰된다. 또한, 선택적으로 상승작용은, 하나 또는 각각의 성분이 단독으로 사용되는 경우 상당한 또는 검출가능한 면역 반응을 보이지 않을지라도, 소량의 폴리옥시에틸렌 에테르 및 추가의 비이온성 계면활성제는 상당한 면역 반응을 나타내는 경우에 관찰된다.

본 발명의 한 면은 폴리옥시에틸렌 알킬 에테르 또는 에스테르 및 하나 이상의 추가의 비이온성 계면활성제를 포함하는 애쥬번트 및 백신 제형이고 여기서 백신내에 존재하는 항원은 비이온성 계면활성제 소포내에 가둬지지 않는다.

또한, 본 발명의 백신은 경구를 통하여 투여될 수 있다. 또한 이러한 경우에 약제학적으로 허용가능한 부형제는 염기성 완충액 또는 장용 캡슐 또는 미세과립을 포함한다. 또한, 본 발명의 백신은 질을 통해서도 투여된다. 이러한 경우에, 약제학적으로 허용가능한 부형제는 에멀젼제, CARBOPOL^?과 같은 중합체 및 질 크림 및 좌약 같은 기타 안정화제를 포함한다. 또한 본 발명의 백신은 직장을 통해서 투여된다. 이러한 경우에 부형제는 직장의 좌약을 형성하기 위한 당기술분야에서 공지된 왁스 또는 중합체를 포함한다.

본 발명의 제형은 예방 및 치료 목적을 위해 사용될 수 있다. 따라서, 본 발명은 감염에 의한 질병 또는 암에 걸리기 쉬운 또는 이들에 걸린 포유동물을 치료하는 방법을 제공한다. 본 발명의 또 다른 면은 약물로 사용되기 위한 본원에서 기술된 바와 같이 애쥬번트 및 백신을 제공한다. 백신 제조물는 문헌 (Voller et al., University Park Press, Baltimore, Maryland, U.S.A.)에서 1978년에 발행된 'New Trend and Development in Vaccins'에 일반적으로 기술되어 있다.

본 발명의 하나의 구체예는, 화학식 (I)의 폴리옥시에틸렌 알킬 에테르 또는 에스테르 및 옥토시놀과 같은 비이온성 계면활성제를 애쥬번트의 제조에 사용하는 것과 관련된다. 또한, 본 발명은 화학식 (I)의 폴리옥시에틸렌 알킬 에테르 또는 에스테르, 옥토시놀 및 항원을 백신 제형의 제조에 사용하는 것에 관한 것이다. 또한, 선택적으로 기술된 바와 같이 제조된 상기 애쥬번트 및 백신은 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르를 포함한다. 본 발명의 모든 이러한 면에서, 바람직한 폴리옥시에틸렌 알킬 에테르는 폴리옥시에틸렌-9 라우릴 에테르이고, 바람직한 옥토시놀은 t-옥틸페녹시 폴리에톡시에탄올 (트리톤 X-100^TM)이다.

또한, 본 발명의 선택적인 관련 구체예에서 본 발명의 애쥬번트는 콜레라 독소 및 이의 B 서브유닛, 대장균의 열불안정성 내독소 LT, 이의 B 서브유닛 LTB 및 mLT와 같은 이들의 독성이 제거된 형태를 포함하는 그 밖의 애쥬번트, 모노포스포릴 지질 A 및 이의 비독성유도체 3-O-탈아실화된 모노폴스포릴 지질 A (3D-MPL, UK 특허번호 GB 2,220,211에 기술됨), 면역학적 활성 사포닌 부분 등, 남아프리카 나무 퀼라자 사포나리아 모리나 (Quillaja Saponaria Molina)의 수피로부터 유도된 퀼 (Quil) A 및 이의 유도체 (예컨데 QS21, 미국 특허 제 5,057.540호) 및 올리고핵산 애쥬번트 시스템 CpG (참고 문헌: WO 96/02555에 기술됨), 특히^5'TCG TCG TTTTGT CGT TTT GTC GTT^3'(SEQ ID NO.1)와 혼합될 수 있다.

이러한 구체예에서, 폴리옥시에틸렌 알킬 에테르 (예컨데 폴리옥시에틸렌-9 라우릴 에테르)의 애쥬번트 혼합물, 추가의 비이온성 계면활성제 [예컨데, t-옥틸페녹시 폴리에톡시에탄올 (트리톤 X-100^TM)] 및 3-O-탈아실화 모노포스포릴 지질 A (3D-MPL)이 특히 바람직하다. 또한, 이러한 바람직한 구체예는 선택적으로 트윈80^TM과 같은 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르 및/또는 소듐 디옥시콜린산염과 같은 담즙산염 또는 콜린산 유도체를 포함한다. 이러한 애쥬번트를 포함하는 백신 및 인플루엔자 항원, 특히 분할 인플루엔자 항원이 특히 바람직하다.

본 발명은 하기의 실시예에 의해 상세히 설명하나 이에 한정되는 것은 아니다.

실시예 1: 혈청내에서 항체(Ab) 반응을 측정하기 위해 사용되는 방법

원숭이에서의 인플루엔자-특이적 혈청 Ig Ab의 측정을 위한 ELISA:

막시소프 넌크 면역플레이트 (Maxisorp Nunc immunoplate)를 PBS에 희석시킨 β-프로피오락톤 (BPL) 불활성화된 인플루엔자 바이러스 ('SSD GmBH manufacturer, Dresden, Germany'에서 구입)의 1㎍/㎖ HA의 50㎕/웰로 4℃에서 밤새 코팅시켰다. 플레이트의 빈 곳은 포화 완충액 [1% BSA를 함유한 PBS, 0.1% 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노라우레이트 (트윈 20)]을 이용하여 37℃에서 1시간동안 블로킹(blocking)시켰다. 다음, 표준 곡선으로서 첨가한 (혈청은 ELISA unit/㎖로 표현되는 중간역가를 가지며 A열에 놓음) 표준 혈청의 일련의 두배계열희석 용액 (포화 완충액으로, 웰당 50㎕) 및 혈청 시료 (1/100 희석율로 시작하고 B열 내지 H에 놓음)를 37℃에서 1시간 30분동안 인큐베이팅시켰다. 다음, 플레이트를 세척 완충액 [PBS, 0.1% 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노라우레이트(트윈 20)]으로 세척했다 (3회). 다음, 포화 완충액으로 1/3000 희석한 비오티닐화된 염소 항-인간 Ig (Amersham)를 37℃에서 1시간 30분동안 인큐베이팅시켰다 (50㎕/웰). 3회 세척 및 후속하여 스트렙타비딘-당근과산화효소 컨쥬게이트 (Amersham)를 첨가한 후, 플레이트를 5회 세척하고, 50㎕/웰의 레벨레이션(revelation) 완충액 [OPDA 0.4㎎/㎖ (Sigma) 및 50mM pH 4.5 시트레이트 완충액 중의 H₂O₂0.03%]으로 실온에서 20분동안 인큐베이팅시켰다. 2N H₂SO₄의 50㎕/웰을 첨가하여 레벨레이션을 중단했다. 바이오래드 3550 이뮤노리더 (Biorad 3550 immunoreader)를 사용하여 492 및 630nm에서 흡광도를 측정했다. 항체 역가를 소프트막스프로(SoftMaxPro) 소프트웨어를 사용하여 4 매개변수 수학적 방법으로 계산했다.

원숭이의 Flu-특이적 혈청 Ab의 혈구응집 억제 (HAI) 활성:

영장류 혈청에 존재하는 혈구응집의 비특이적 억제제를 제거하기 위해, 이것을 (25㎕)를 비브리오 콜레라 (V. cholerae) 뉴라미니다제의 ㎖ 당 효소 유닛 (Boerhinger Mannheim)을 파괴하는 400 수용체를 함유하는 칼슘 클로루레/보레이트/소듐 보레이트 혼합 용액 100㎕로 37℃에서 밤새 인큐베이팅시켰다.

2.5% 소듐 시트레이트 75㎕ 를 첨가한 후, 혈청을 56℃에서 30분 동안 가열시켰다. 1/10배로 최종 희석된 혈청을 얻기 위해 PBS 용액 50㎕를 가했다. 다음, 처리된 혈청 25㎕를 96 웰 그레이너 플레이트 (96 웰 Greiner plates)에서 PBS 25㎕로 희석했다 (1/10배로 시작하여 두배계열희석). BPL 불활성화된 전체 바이러스를 실온에서 30분동안 교반하며 4 혈구응집단위의 농도(적혈구의 응집을 유발하는 최저 농도보다 4배 낮은 희석농도)로 첨가했다. 다음, 닭 적혈구를 실온에서 1시간동안 가했다 (25㎕ /웰). 미지막으로 플레이트를 판독하기 전에 밤새 4℃로 보관했다. HAI 역가는 바이러스-유도된 혈구응집을 억제하는 최저 혈청 희석농도의 역수에 해당한다.

마우스에서 테타누스 톡소이드 (TT) 특이적 혈청 IgG의 측정을 위한 ELISA:

막시소프 넌크 면역플레이트를 PBS로 희석한 1㎕/㎖ 항원 (Berhing으로부터 입수한 TT)의 50㎕/웰 (플레이트의 B 내지 H열) 또는 5 ㎕/㎖의 PBS중의 정제된 염소 항-마우스 Ig (Boerhinger) 50㎕ (A열)로 4℃에서 밤새 코팅했다. 플레이트의 빈 곳은 포화 완충액[1% BSA를 함유한 PBS, 0.1%폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노라우레이트 (트윈 20), 및 4% 노르말 보바인 혈청 (NBS)]을 사용하여 블로킹했다 (1시간, 37℃). 다음, 표준곡선으로서 첨가된 IgG 이소타입 (isotype) 혼합물 (Sigma로부터 구입한 마우스 단클론성 항체 IgG1, IgG2a 및 IgG2b의 혼합물, 200ng/㎖로 시작하고 A열에 놓음)의 두배계열희석액 (포화 완충액으로, 웰 당 50㎕) 및 혈청 시료 (1/100 희석률로 시작하고 B 내지 H 열에 놓음)을 37℃에서 1시간 30분동안 인큐베이팅시켰다. 다음, 플레이트를 세척 완충액 [PBS, 0.1% 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노라오레이트 (트윈 20)]로 3회 세척했다. 다음, 포화 완충액으로 1/5000배 희석한 비오티닐화된 염소 항-마우스 IgG (Amersham)을 37℃에서 1시간 30분동안 인큐베이팅시켰다 (50㎕/웰). 3회 세척 및 후속하여 스트렙타비딘-당근과산화효소 복합체 (Amersham)의 첨가 후, 플레이트를 5회 세척하고, 레벨레이션 완충액 [OPDA 0.4 ㎎/㎖ (Sigma) 및 pH 4.5 시트레이트 완충액 50mM중의 H₂O₂0.03%] 50㎕/웰로 실온에서 20분간 인큐베이팅시켰다. 50㎕/웰 H₂SO₄2N을 첨가하여 레벨레이션을 중단했다. 바이오래드 3550 이뮤노리더를 사용하여 492nm 및 630nm에서 흡광도를 읽었다. 항체 역가를 소프트막스프로 소프트웨어를 사용하여 4 매개변수 수학적 방법으로 계산했다.

실시예 2. 초회감작된 레서스 (Rhesus) 원숭이의 비내 인플루엔자 백신의 면역원성에 대한 트윈80 및 트리톤X100의 혼합물 및 라우레스 9의 효능

레서스 원숭이에 대해, 100㎕ PBS에 함유된 β-프로피오락톤-불활성화된 A/Beijing/262/95 및 B/Harbin/7/94 인플루엔자 바이러스 균주 당 25㎍ HA를 마취하에서 각 외비강에 스프레이 장치로 투여하여 초회감작시켰다. 28일 후, 원숭이 (4 내지 5 마리/그룹)를 마취하에 A:폴리옥시에틸렌-9-라우릴 에테르 0.5% (L9) 중의 또는 B: 폴리옥시에틸렌-9-라우릴 에테르 0.5% + 트윈80 (0.11%)+트리톤-X-100 (0.074%) 중의 BLP-불활성화된 A/Beijing/262/95 및 B/Harbin/7/94 인플루엔자 바이러스 균주/ HA 30㎍을 함유하는 용액 200㎕ (외비강당 100㎕를 스프레이 장치로 전달)을 비내로 추가 투여하거나, C: A 및 B 중의 같은 균주를 함유하는 인플루엔자 백신 균주/HA 15㎍을 근내로 주사하여 추가 투여했다.

바이러스 항원을 공급자 (SSD GmBH, Dresden, Germany)에 의해 보관용 세포주로부터 난 (egg)속에서 증식시켰다. HAI 및 Ig Ab 반응을 실시예 1에서 기술한 바와 같이 혈청에서 측정했다. 결과는 추가투여시 Ab의 4배 증가를 경험한 동물의 비율로 나타냈다.

0.5% 폴리옥시에틸렌-9-라우릴 에테르를 사용한 수행은 이러한 제재가 항-인플루엔자 전신 면역 반응의 유도에 효력이 있음을 입증했다. 그러나, 표 1에서 나타낸 바와 같이, 애쥬번트성 (adjuvanticity)의 이러한 레벨은 추가의 비이온성 계면활성제의 첨가로 상당히 개선되었다. 따라서, 폴리옥시에틸렌-9-라우릴 에티르에 트윈80 및 트리톤-X-100이 첨가되는 경우에, 이러한 제형는 기존의 주사제 인플루엔자 백신만큼 효과적으로 사전-확립된 전신적 Ig Ab 반응을 증가시킬수 있다.

또한, 혈구응집억제 (HAI) 반응을 측정하였다. 최상의 비내 제형은 또 다시트윈80 및 트리톤X100이 첨가된 폴리에틸렌-9-라우릴 에테르였다. 이러한 제형은 기존의 주사 백신과 같은 정도로 면역성이 있었다.

표 1. 원숭이에서의 혈청 Ig 반응

Ig ELISA 항체	4배 Ab 증가 혈청전환 (%)
그룹	A/Beijing/262/95	B/Harbin/7/94
A	0	0
B	100	100
C	75	75

표 2. 원숭이에서의 혈청 HAI 역가

HAI 항체	4배 Ab 증가 혈청전환(%)
그룹	A/Beijing/262/95	B/harbin/7/94
A	0	0
B	20	0
C	25	0

실시예 3. 건강한 성인 피험자에서 트윈80 및 트리톤X100가 첨가된 라우레스 9로 제조된 비내 분할 인플루엔자 백신의 면역원성과 인가된 기존의 주사 백신 (Fluarix ^TM )의 면역원성의 비교

라우레스 9 + 트윈80 및 트리톤X100 (A)으로 제조된 난-파생된 분할 인플루엔자 항원의 비내제형을 평가하였고 Fluarix^TM/α-Rix^?(B)와 비교하였다. 제형은 1998/1999 시즌의 WHO 추천 균주로부터 준비된 세 개의 불활성화된 분할 비리온 항원을 포함하였다. 백신의 투여를 위해 사용된 장치는 벡톤 디킨슨 (Becton Dickinson)의 아큐스프레이(Accuspay)^TM비내 주사기였다. 이 장치는 기존의 주사기와 유사한 원리로 작동하나, 대등한 압력이 막대 피스톤에 미치는 경우에 스프레이를 발생하게 하는 나선관을 포함하는 특별한 팁을 가진다. 제형의 100㎕을 각 외비강에 분무하였다.

제형의 조성

비내제형 (A)는 하기 불활성화된 분할 비리온 및 인산염완충식염수 pH 7.4±0.1, 트윈80 0.1%, 트리톤X100 0.015%, 데옥시콜산소듐 0.0045% 및 35㎍/㎖ 이하의 티오메르살 (thiomersal)을 포함했다:

1. 30㎕ HA A/beijing/262/95 (H1N1)

2. 30㎕ HA A/Sydney/5/97 (H3N2)

3. 30㎕ HA B/Harbin/7/94

1회 투여량의 부피는 200㎕ (각 외비강 당 100㎕ 서브-투여량)였다.

제형 (A)를 0.5%의 최종농도 (w/v)를 얻기 위하여 라우레스 9를 보조제 처리했다.

비교측정기 Fluarix^TM/α-Rix^?(B)는, 500㎕의 투여량으로 근내로 투여되는 스미스 클라인 비이참 바이오로직칼즈의 시판용 불활성화된 3가의 분할 인플루엔자 백신이다.

면역원성 연구

공개되고, 조회되고 임의 추출된 연구로, 종래의 비경구용 백신 (예컨데, Fluarix^TM)과 비교하여 트윈80 및 트리톤-X-100이 첨가된 비내 분할 인플루엔자 백신의 면역원성을 평가하였다. 20명의 건강한 성인 피험체 (18 내지 40세)에 대해 Fluarix^TM를 1회 투여량으로 투여하고, 10명의 피험체에게는 비내 인플루엔자 백신을 1회 투여량 (두번의 서브-투여, 외비강당 1회)으로 투여했다.

국소적 및 일반적 증상을 유발하는데 8일이 소요되었고 두 백신 모두 안전성 및 반응원성(reactogenicity)과 관련하여 내성이 있었다. 백신 접종과 관련된 심각한 역반응은 보고되지 않았다.

백신의 면역원성은 혈청전환율 (각 백신 균주에 대해서 0일째과 비교하여 21일째의 혈청 HI 역가가 최소한 4배 이상 증가된 예방접종자의 비율로서 정의됨),변환인자 (각 백신균주에 대해 0일째과 비교하여 21일째에 혈청 HI 기하평균가 (GMT)의 2배 증가값으로 정의됨) 및 혈청보호율 (seroprotection) [보호를 필요로 한다고 일반적으로 여겨지는 (각 백신주에 대한) 백신 접종후에 40 이상의 혈청 HI 역가를 가지는 백신 접종자의 비율로 정의됨]을 결정하는 혈청 혈구응집 억제 (HI)역가를 평가함에 의해 시험했다. 또한, 점막의 IgA 항체 반응을 효소면역측정법 (ELISA)에 의해 시험했다.

Fluarix^TM또는 비내 제형물의 1회 투여후 21일 후의HI 혈청(반응)양성, 혈청전환 및 혈청보호율을 표 3에 나타내었다.

표 3. 1회 투여 후 21일경과 후의 HI혈청(양성)반응, 혈청전한 및 혈청보호율

균주	그룹	시간	N	혈청(반응)양성n %	혈청보호n %	혈청전환n %
A/Beijing	비내 백신 및라우레스 9	0 일21일	2020	5 25.019 95.0	1 5.010 50.0	15 75.0
A/Beijing	Fluarix^TM	0 일21일	1919	4 21.119 100.0	3 15.818 94.7	19 100.0
A/Sydney	비내 백신 및라우레스 9	0일21일	2020	16 80.020 100.0	4 20.019 95.0	15 75.0
A/Sydney	Fluarix^TM	0 일21일	1919	14 73.719 100.0	1 5.318 94.7	16 84.2
B/Harbin	비내 백신 및라우레스 9	0 일21일	2020	18 90.020 100.0	11 55.019 95.0	12 60.0
B/Harbin	Fluarix^TM	0 일21일	1919	17 89.519 100.0	11 57.919 100.0	15 78.9

혈청(반응)양성 (n,%): 역가≥10인 피험자의 수 및 비율

혈청보호 (n,%): 역가≥40인 피험자의 수 및 비율

혈청전환 (n,%): 0일로부터 21일까지 역가가 최소한 4배 증가한 피험자의 수 및 비율

21일과 0일사이에 특이적/전체 점막 IgA 항체비율이 2배 또는 4배 증가하는 피험자의 비율을 표 4에 나타내었다 (1회 투여).

표 4. 21일 및 0일사이의 특이적/전체 IgG 비율이 2배 또는 4배 증가한 피험자의 비율

균주	그룹	N	2배 증가(%)	4배 증가(%)
A/Beijing	라우레스-9Fluarix^TM	2019	50.052.6	20.026.3
A/Sydney	라우레스-9Fluarix^TM	2019	55.047.4	25.05.3
B/Harbin	라우레스-9Fluarix^TM	2019	15.026.3	10.05.3

요약

상기에서 표에 제시한 면역원성 결과는, 비내제형이 1회 투여 후 21일 경과한 후에 기존의 비경구용 백신 (Fluarix^TM) 과 비슷한 수준의 혈청(반응)양성, 혈청전환 및 혈청보호를 보임을 나타냈다. 비내제형은 일반적으로 기존의 비경구용 백신 (Fluarix^TM)보다 더 우수한, 1회투여 후의 점막 IgG 반응을 보였다.

실시예 4. 초회 감작된 마우스에서의 비내 파상풍 톡소이드의 면역원성에 대한 트리톤X100이 첨가된 라우레스-9의 효능

본 실시예에서, 본 발명자들은 파상풍 톡소이드(TT)-특이적 혈청 항체에 대한, 소량 및 서브-최적투여량의 라우레스-9에 트리톤X100을 첨가한 것의 효능을 평가하였다. 암컷 balb/c 마우스를 시판중인 DTPa 백신 (디프테리아, 파상풍, 무세포성 백일해 백신: INFANRIX^TM스미스클라인 비이참, 벨기에)의 인간 투여량의 20% (2×50㎕ )를 근내로 투여하여 초회 감작시켰다.

한 달 후에, 마우스에, A: PBS; B:0.5% 폴리옥시에틸렌-9 라우릴 에테르; C: 0.1% 폴리옥시에틸렌-9 라우릴 에테르; D:0.1% 폴리옥시에틸렌-9 라우릴 에테르+0.02% 트리톤X100 중의 5㎍ TT를 비내로 (마취상태하에, 각 외비강마다 5㎕) 추가 투여하거나, E: DTPa 백신 (2×50㎕ )을 근내 주사하여 추가 투여했다. 추가투여후 2주후에 혈청을 TT-특이적 IgG로 분석하였다.

도 1에서 나타낸 바와 같이, 라우레스-9 저투여량 (0.1%)은 0.5% 투여량에 비해 TT에 대한 추가 투여 반응을 증가시키는데 효과적이지 않았다. 그러나 이 제형의 애쥬번트성은 트리톤X100 (p<0.0001)을 보충함에 의해 상당히 개선될 수 있었다. 유도된 항체반응은 시판중인 DTPa 백신에 의해 유도된 것과 비슷했다.

Claims

(a) 하기의 화학식 (I)의 폴리옥시에틸렌 알킬 에테르 또는 에스테르 및 (b) 하나 이상의 추가의 비이온성 계면활성제를 포함하는 애쥬번트 조성물:

HO(CH₂CH₂O)_n-A-R

(상기 식에서 n은 1 내지 50이며, A는 결합 또는 -C(O)-이고, R은 C_1-50알킬 또는 페닐 C_1-50알킬이다).
제 1항에 있어서, 추가의 비이온성 계면활성제가 옥토시놀 (Octoxynol)임을 특징으로 하는 애쥬번트 조성물.
제 2항에 있어서, 옥토시놀이 t-옥틸페녹시폴리에톡시에탄올 (트리톤 X100^TM)임을 특징으로 하는 애쥬번트 조성물.
제 1항 내지 제 3항 중 어느 한 항에 있어서, 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르 또는 콜린산의 하나 또는 둘 모두 또는 이들의 유도체를 추가로 포함함을 특징으로 하는 애쥬번트 조성물.
제 1항 내지 제 4항 중 어느 한 항에 있어서, 화학식 (I)의 폴리옥시에틸렌알킬 에테르 또는 에스테르가 용혈성임을 특징으로 하는 애쥬번트 조성물.
제 5항에 있어서, 폴리옥시에틸렌 알킬 에테르 또는 에스테르의 용혈 활성도가, 기니아 피그 혈액 용혈 분석법으로 측정하여 0.05 내지 0.0001%의 범위내임을 특징으로 하는 애쥬번트 조성물.
제 5항 또는 제 6항에 있어서, 화학식 (I)의 폴리옥시에틸렌 알킬 에테르 또는 에스테르의 용혈 활성이, 기니아 피그 혈액 용혈 분석법으로 측정하는 경우, 폴리옥시에틸렌-9 라우릴 에테르 또는 폴리옥시에틸렌-8 스테아릴 에테르의 용혈 활성과 비교하여 10배미만의 차이를 가짐을 특징으로 하는 애쥬번트.
제 1항 내지 제 7항 중 어느 한 항에 있어서, n이 4 내지 24임을 특징으로 하는, 화학식 (I)의 폴리옥시에틸렌 알킬 에테르 또는 에스테르를 포함하는 애쥬번트 조성물.
제 8항에 있어서, n이 9임을 특징으로 하는 애쥬번트 조성물.
제 1항 내지 제 7항 중 어느 한 항에 있어서, R이 C_8-20알킬 또는 페닐 C_8-20알킬임을 특징으로 하는 애쥬번트 조성물.
제 10항에 있어서, R이 C₁₂알킬임을 특징으로 하는 애쥬번트 조성물.
제 1항 내지 제 11항 중 어느 한 항에 있어서, A가 결합이고 이에 의해 에테르를 형성함을 특징으로 하는, 화학식 (I)의 폴리옥시에틸렌 알킬 에테르 또는 에스테르를 포함함을 특징으로 하는 애쥬번트 조성물.
제 1항 내지 제 12항 중 어느 한 항에 있어서, A가 -C(O)-이고 이에 의해 에스테르를 형성함을 특징으로 하는, 화학식 (I)의 폴리옥시에틸렌 알킬 에테르 또는 에스테르를 포함하는 애쥬번트 조성물.
제 1항 내지 제 13항 중 어느 한 항에 있어서, 화학식 (I)의 폴리옥시에틸렌 에테르 또는 에스테르가, 폴리옥시에틸렌-9-라우릴 에테르, 폴리옥시에틸렌-9-라우릴 에스테르, 폴리옥시에틸렌-9-스테아릴 에테르, 폴리옥시에틸렌-8-스테아릴 에테르 폴리옥시에틸렌-4-라우릴 에테르, 폴리옥시에틸렌-35-라우릴 에테르 및 폴리옥시에틸렌-23-라우릴 에테르를 포함하는 군으로부터 선택됨을 특징으로 하는 애쥬번트 조성물.
폴리옥시에틸렌-9 라우릴 에테르 및 t-옥틸페녹시폴리에톡시에탄올(트리톤X100^TM)을 포함하는 애쥬번트 혼합물.
제 1항 내지 제 15항 중 어느 한 항에 있어서, 계면활성제의 총 농도가 0.001 내지 10%임을 특징으로 하는 애쥬번트 조성물.
제 16항에 있어서, 계면활성제의 총 농도가 0.001 내지 1%임을 특징으로 하는 애쥬번트 조성물.
제 17항에 있어서, 계면활성제의 총 농도가 0.001 내지 0.7% 범위내임을 특징으로 하는 애쥬번트 조성물.
제 1항 내지 제 17항 중 어느 한 항의 애쥬번트를 하나 이상의 추가의 면역자극제와 혼합하여 포함하는 애쥬번트 혼합물.
제 19항에 있어서, 하나 이상의 추가의 면역자극제가 LT, CT, 3D-MPL, CpG 및 QS21를 포함하는 군으로부터 선택됨을 특징으로 하는 애쥬번트 혼합물.
제 20항에 있어서, CpG 애쥬번트가 TCC ATG ACG TTC CTG ACG TT (SEQ ID NO.1)임을 특징으로 하는 애쥬번트 조성물.
폴리옥시에틸렌-9 라우릴 에테르, t-옥틸페녹시폴리에톡시에탄올 (트리톤 X100^TM) 및 3D-MPL을 포함하는 애쥬번트 혼합물.
제 1항 내지 제 22항 중 어느 한 항의 애쥬번트 및 추가로 항원을 포함하는 백신.
제 23항에 있어서, 항원이 인간 면역결핍 바이러스, 수두대상포진 바이러스, 헤르페스 심플렉스 바이러스 타입 1, 헤르페스 심플렉스 바이러스 타입 2, 인간 사이토메갈로바이러스, 뎅기 바이러스, A, B, C, 또는 E형 간염 바이러스, 호흡기 신시티움 바이러스, 인간 유두종 바이러스. 인플루엔자 바이러스, Hib, 수막염 바이러스, 살모넬라, 네이세리아, 볼레리아, 클라미디아, 보르데텔라, 스트렙토고커스, 미코플라스마, 미코박테리아, 헤모필러스, 플라스모디움 또는 톡소플라스마, 스탠워스 데카펩티드; 또는 종양 관련 항원 (TMA), MAGE, BAGE, GAGE, MUC-1 Her-2 neu, LnRH, CEA, PSA, KSA, 또는 PRAME를 포함하는 군으로부터 선택된 항원임을 특징으로 하는 백신.
제 24항에 있어서, 항원이 인플루엔자 바이러스 유래의 항원 또는 항원성 제조물임을 특징으로 하는 백신.
폴리옥시에틸렌-9 라우릴 에테르, t-옥틸페녹시폴리에톡시에탄올 (트리톤 X100^TM) 및 인플루엔자 바이러스 항원을 포함하는 백신 조성물.
제 23항 내지 제 26항 중 어느 한 항에 있어서, 백신이 에어로졸 또는 스프레이의 형태임을 특징으로 하는 백신.
제 23항 내지 제 27항 중 어느 한 항에 있어서, 약물로서 사용됨을 특징으로 하는 백신.
제 1항 내지 제 22항 중 어느 한 항의 애쥬번트 조성물의 환자의 점막 또는 피부에 적용하는 약제 제조용 용도.
폴리옥시에틸렌-9 라우릴 에테르 및 t-옥틸페녹시폴리에톡시에탄올 (트리톤X100^TM)의 혼합물의 환자의 점막 또는 피부에 적용하는 백신 제조용 용도.
제 23항 내지 제 27항 중 어느 한 항의 백신을 충전시킨 스프레이장치, 보다 구체적으로 2-투여량 스프레이장치.
제 23항 내지 제 27항 중 어느 한 항에 따른 백신 조성물의 바이러스, 박테리아, 기생충 감염, 알레르기 또는 암의 치료를 위한 백신제조용 용도.
제 23항 내지 제 27항 중 어느 한 항에 따른 백신 혼합물의 안전하고 유효한 양의 투여하는 것을 포함하여, 병원균 감염, 암, 또는 알레르기에 걸리거나 또는 걸리기 쉬운 포유동물을 치료하는 방법.
제 23항 내지 제 27항 중 어느 한 항에 따른 백신 혼합물의 안전하고 유효한 양을 점막투여하는 것을 포함하여, 병원균 감염, 또는 암, 또는 알레르기에 걸리거나 또는 걸리기 쉬운 포유동물을 치료하는 방법.
제 23항 내지 제 27항 중 어느 한 항에 따른 백신 혼합물의 안전하고 유효한 양을 비내 투여하는 것을 포함하여, 병원균 감염, 또는 암, 또는 알레르기에 걸리거나 또는 걸리기 쉬운 포유동물을 치료하는 방법.
(a) 제 1항 내지 제 22항 중 어느 한 항의 애쥬번트 조성물, (b) 약제학적으로 허용가능한 부형제, 및 (c) 항원 또는 항원성 조성물을 혼합하는 것을 포함하여, 제 23항 내지 제 27항 중 어느 한 항에 따른 백신 조성물을 제조하는 방법.