KR20020015704A - 인테그린 α브이β6의 저해제 - Google Patents

인테그린 α브이β6의 저해제 Download PDF

Info

Publication number
KR20020015704A
KR20020015704A KR1020017016580A KR20017016580A KR20020015704A KR 20020015704 A KR20020015704 A KR 20020015704A KR 1020017016580 A KR1020017016580 A KR 1020017016580A KR 20017016580 A KR20017016580 A KR 20017016580A KR 20020015704 A KR20020015704 A KR 20020015704A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
asp
leu
arg
ser
thr
Prior art date
Application number
KR1020017016580A
Other languages
English (en)
Inventor
존크지크알프레트
디펜바흐베아테
그로트울리히
지친스키군테르
Original Assignee
플레믹 크리스티안
메르크 파텐트 게엠베하
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 플레믹 크리스티안, 메르크 파텐트 게엠베하 filed Critical 플레믹 크리스티안
Publication of KR20020015704A publication Critical patent/KR20020015704A/ko

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
    • C07K7/06—Linear peptides containing only normal peptide links having 5 to 11 amino acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/06—Antipsoriatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
    • A61P19/10—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease for osteoporosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/02—Linear peptides containing at least one abnormal peptide link
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides

Abstract

본 발명은 인테그린 αvβ6의 리간드로서 생물학적으로 활성인 하기 화학식 I의 신규한 펩타이드에 관한 것이다:
화학식 I
Ac-Arg-X1-Asp-X2-X3-X4-X5-X6-NH2
상기 식에서,
Ac는 아세틸이고;
X1은 Ser, Gly, Thr, Asp, Arg, Val, Tyr, His 또는 Ala이고;
X2는 Leu, Ile, Nle, Val 또는 Phe이고;
X3은 Asp, Glu, Lys, Phe, Aib, Nal, Gly, Ala, Bgl 또는 Phg이고;
X4는 Gly, Ala, Ser, β-Ala 또는 ω-Abu이고;
X5는 Leu, Ile, Nle, Val 또는 Phe이고;
X6은 Arg, Har, Lys, Leu, Orn, Phe, Ala, Tyr, Gly, Ser 또는 Asp이며;
상기 식중 아미노산은 또한 유도될 수도 있다. 아미노산 라디칼은 α-아미노기 및 α-카복실기에 의해 펩타이드 형태로 서로 결합된다. 상기 펩타이드의 염은 물론 광학적으로 활성인 아미노산 라디칼의 좌선성 형태 및 우선성 형태도 포함된다.Ac-Arg-Thr-Asp-Leu-Asp-Ser-Leu-Arg-NH2는 배제된다. 또한, 본 발명의 펩타이드는 αvβ6인테그린 수용체의 효과적인 저해제이므로, 다양한 질환 및 병리학적인 소견을 치료하는데 사용될 수 있다.

Description

인테그린 α브이β6의 저해제{INHIBITORS OF THE INTEGRIN αVβ6}
본 발명은, 특히 약제를 제조하기 위해 사용될 수 있는 유용한 특성을 갖는 신규한 화합물을 발견하는 목적에 바탕을 두고 있다.
본 발명에 따른 화합물 및 그의 염은 우수한 내성과 함께 매우 유용한 약리학적 특성을 갖고 있음이 밝혀졌다.
본 발명에 따른 펩타이드는 αvβ6인테그린 수용체의 효과적인 저해제이므로, 다양한 질환 및 병리학적인 소견을 치료하는데 사용될 수 있다.
인테그린 αvβ6의 기타 저해제는 독일 특허 제 DE 19858857 호 및 문헌[S. Kraft et al.,J. Biol. Chem.,274, 1979-1985, 1999]에 기재되어 있다. 본 발명에 따른 화합물은 상기 출원에 대하여 선택 발명인 것으로 고려된다.
인테그린은 유형 I의 이질 이량체 계열, 즉 수많은 세포-매트릭스 또는 세포-세포 유착 과정에 중요한 역할을 하는 경막 수용체에 속한다(문헌[Tuckwell et al.,Symp. Soc. Exp. Biol., 47, 1996] 참조). 이들은 대략 3개의 유형으로 나누어질 수 있다: 세포외 매트릭스에 대한 수용체인 β1인테그린, 백혈구상에서활성가능하고 염증 과정 동안에 "유발되는" β2인테그린, 및 상처-치유 및 기타 병리학적인 과정 동안에 세포 응답에 영향을 미치는 αv인테그린(문헌[Marshall and Hart,semin. Cancer. Biol.,7, 191, 1996] 참조).
인테그린 α5β1, αIIbβ3, α8β1, αvβ1, αvβ3, αvβ5, αvβ8및 αvβ6은 모두 천연 리간드(예를 들어, 피브로넥틴 또는 비트로넥틴)의 Arg-Gly-Asp(RGD) 펩타이드 서열에 결합한다. 가용성 RGD-함유 펩타이드는 상응하는 천연 리간드를 갖는 상기 인테그린 각각의 상호작용을 저해할 수 있다. αvβ6은 비교적 드문 인테그린(문헌[Busk et al.,J. Biol. Chem.,267(9), 5790, 1992] 참조)이고, 상피 조직의 복구 과정에서 상당한 범위까지 형성되며, 바람직하게는 천연 매트릭스 분자 피브로넥틴 및 테나신에 결합한다(문헌[Want et al.,Am. J. Respir. Cell Mol. Biol.,15(5), 664, 1996] 참조). αvβ6의 생리학 및 병리학적 작용은 아직 정확히 알려져 있지 않다. 그러나, 상기 인테그린은 생리학적 과정, 및 상피 세포가 관련된 장애(예를 들어, 염증, 상처-치유 과정 및 종양)에서 중요한 역할을 하는 것으로 추측된다. 그러므로, 상처-치유 과정 및 염증 이외에, 또한 기타 병리학적인 피부 증상(예를 들어, 건선증)이 상기 인테그린의 작용제 또는 길항제에 의해 영향을 받을 수도 있다는 추측에 의거하여, αvβ6은 상처 부위의 각질 형성 세포상에 발현된다(문헌[Haapasalmi et al.,J. Invest. Dermatol.106(1), 42, 1996] 참조). 또한, αvβ6은 기도 상피에서 작용하므로(문헌[Weinacker et al.,Am. J.Respir. Cell. Mol. Biol.,12(5), 547, 1995] 참조), 적절한 인테그린의 작용제/길항제가 기도 장애(예를 들어, 기관지염, 천식, 폐섬유증 및 기도 종양)에 성공적으로 사용될 수 있다. 최종적으로, 또한 αvβ6은 장관 상피에서 작용하므로, 적절한 인테그린 작용제/길항제가 위장/장관의 염증, 종양 및 상처를 치료하는데 사용될 수 있다.
혈관 인테그린과 세포외 매트릭스 단백질 사이의 상호작용에 따른 혈관 형성의 의존도는 문헌[P. C. Brooks, R. A. Clark and D. A. Cheresh,Science,264, 569-571, 1994]에 기재되어 있다.
그러므로, 본 발명의 목적은, 치료학 및 진단학적으로 조작하기에 어려운 앞서 알려진 천연 고분자량의 리간드 및 항체 이외에, 상기 치료 분야에 사용되고 또한 진단약 또는 시약으로서 사용될 수 있는, αvβ6, 바람직하게는 펩타이드에 대하여 효과적이고, 특이적이며, 선택적인 저분자량의 리간드를 발견하는 것이다.
본 발명에 따른 펩타이드 화합물 및 그의 염은 상기 수용체를 운반하는 세포에 가용성 분자로서 효과를 발휘하거나, 또는 표면에 결합할 경우에 αvβ6-매개된 세포 유착을 위한 인공 리간드임이 밝혀졌다. 무엇보다도, 이들은 αvβ6인테그린 저해제로서 작용하고, 이때 특히 수용체와 다른 리간드의 상호작용, 예를 들어 피브로넥틴의 결합을 저해한다. 이러한 작용은, 예를 들어 문헌[J. W. Smith et al.,J. Biol. Chem.,265, 12267-12271, 1990]에 기재되어 있는 방법에 의해 탐지될 수 있다.
또한, 상기 신규한 물질은 우수한 내성과 함께 매우 유용한 약리학적 특성을 갖고 있으므로 약제로서 이용될 수 있음이 밝혀졌다. 이에 대하여는 하기에 더욱 상술된다.
또한, 본 발명에 따른 펩타이드 화합물은, 종래 기술에 따른 적절한 표지물(예를 들어, 비오티닐 라디칼)을 갖출 경우, 상피 세포계에서 병리학적인 증상을 탐지하고 위치 추정하기 위한 진단약으로 생체 내에서 사용될 수 있다.
또한, 본 발명은 하나 이상의 다른 활성 화합물과의 조합물 및/또는 다른 활성 화합물과의 결합체(예를 들어, 세포독성 활성 화합물 및 X선 치료 또는 PET 진단을 위한 방사선 표지물과의 결합체), 표지 단백질(예를 들어, GFP 또는 항체)과의 융합 단백질 또는 치료 단백질(예를 들어, IL-2)을 포함한다.
일부 바람직한 화학식의 군은 하기 소군의 화학식 Ia 내지 If 및 이들의 염으로 표현될 수 있으며, 이들 소군은 화학식 I에 상응하며 더욱 상세히 나타내지 않은 라디칼은 화학식 I에 정의된 바와 같다:
X1이 Ser, Gly 또는 Thr인 Ia;
X1이 Ser, Gly 또는 Thr이고; X2가 Leu인 Ib;
X1이 Ser, Gly 또는 Thr이고; X2가 Leu이고; X3이 Asp 또는 D-Asp인 Ic;
X1이 Ser, Gly 또는 Thr이고; X2가 Leu이고; X3이 Asp 또는 D-Asp이고; X4가 Gly, Ala 또는 Ser인 Id;
X1이 Ser, Gly 또는 Thr이고; X2가 Leu이고; X3이 Asp 또는 D-Asp이고; X4가 Gly, Ala 또는 Ser이고; X5가 Leu인 Ie;
X1이 Ser, Gly 또는 Thr이고; X2가 Leu이고; X3이 Asp 또는 D-Asp이고; X4가 Gly, Ala 또는 Ser이고; X5가 Leu이고; X6이 Arg인 If.
본 발명은 하기 아미노산이 또한 유도될 수도 있고 아미노산 잔기가 α-아미노 및 α-카복실기에 의해 펩타이드 형태로 서로 결합되고, 광학적으로 활성인 아미노산의 D 형 및 L 형을 포함할 수 있으며, Ac-Arg-Thr-Asp-Leu-Asp-Ser-Leu-Arg-NH2를 제외한, 인테그린 αvβ6의 리간드로서 생물학적으로 활성인 하기 화학식 I의 신규한 펩타이드 및 그의 약학적으로 허용가능한 염에 관한 것이다:
Ac-Arg-X1-Asp-X2-X3-X4-X5-X6-NH2
상기 식에서,
Ac는 아세틸이고;
X1은 Ser, Gly, Thr, Asp, Arg, Val, Tyr, His 또는 Ala이고;
X2는 Leu, Ile, Nle, Val 또는 Phe이고;
X3은 Asp, Glu, Lys, Phe, Aib, Nal, Gly, Ala, Bgl 또는 Phg이고;
X4는 Gly, Ala, Ser, β-Ala 또는 ω-Abu이고;
X5는 Leu, Ile, Nle, Val 또는 Phe이고;
X6은 Arg, Har, Lys, Leu, Orn, Phe, Ala, Tyr, Gly, Ser 또는 Asp이다.
본 발명은 특히
Ac-Arg-Gly-Asp-Leu-D-Asp-Ser-Leu-Arg-NH2,
Ac-Arg-Gly-Asp-Leu-Asp-Ser-Leu-Arg-NH2,
Ac-Arg-Ser-Asp-Leu-Asp-Ser-Leu-Arg-NH2,
Ac-Arg-Asp-Asp-Leu-Asp-Ser-Leu-Arg-NH2,
Ac-Arg-Thr-Asp-Leu-Asp-Ser-Leu-Ala-NH2,
Ac-Arg-Thr-Asp-Leu-Asp-Ser-Leu-D-Arg-NH2,
Ac-Arg-Thr-Asp-Leu-D-Asp-Ser-Leu-Arg-NH2,
Ac-D-Arg-Thr-Asp-Leu-Asp-Ser-Leu-Arg-NH2,
Ac-Arg-Thr-Asp-Leu-D-Ala-Ser-Leu-Arg-NH2,
Ac-Arg-Thr-Asp-Leu-Aib-Ser-Leu-Arg-NH2,
Ac-Arg-Thr-Asp-Leu-D-Nal-Ser-Leu-Arg-NH2,
Ac-Arg-Thr-Asp-Leu-Gly-Ser-Leu-Arg-NH2,
Ac-Arg-Thr-Asp-Leu-Ala-Ser-Leu-Arg-NH2,
Ac-Arg-Thr-Asp-Nle-D-Asp-Ser-Leu-Arg-NH2,
Ac-Arg-Thr-Asp-Ile-D-Asp-Ser-Leu-Arg-NH2,
Ac-Arg-Thr-Asp-Leu-Asp-D-Ser-Leu-Arg-NH2,
Ac-Arg-Thr-Asp-Leu-Asp-Ala-Leu-Arg-NH2,
Ac-Arg-Thr-Asp-Leu-Asp-Gly-Leu-Arg-NH2,
Ac-Arg-Thr-Asp-Leu-Asp-Ser-Leu-Har-NH2,
Ac-Arg-Thr-Asp-Leu-Asp-Ser-Leu-Lys-NH2,
Ac-Arg-Thr-Asp-Leu-D-Asp-D-Ser-Leu-Arg-NH2,
Ac-Arg-Thr-Asp-Leu-D-Asp-Ser-Leu-Ala-NH2, 및
Ac-Arg-Thr-Asp-Leu-D-Asp-Gly-Leu-Arg-NH2로 구성된 군에서 선택된 펩타이드 화합물 및 그의 생리학적으로 허용가능한 염에 관한 것이다.
상기 및 하기 아미노산 잔기의 약어는 다음 아미노산 잔기의 라디칼을 나타낸다:
Abu: 4-아미노부티르산,
Aha: 6-아미노헥산산, 6-아미노카프로산,
Aib: α-아미노이소부티르산,
Ala: 알라닌,
Asn: 아스파라긴,
Asp: 아스파라긴산,
Arg: 아르기닌,
Bgl: C-알파-3차-부틸글라이신,
Cys: 시스테인,
Dab: 2,4-디아미노부티르산,
Dap: 2,3-디아미노프로피온산,
Gln: 글루타민,
Glp: 피로글루타민산,
Glu: 글루타민산
Gly: 글라이신,
Har: 호모아르기닌,
His: 히스티딘,
homo-Phe: 호모-페닐알라닌,
Ile: 이소류신,
Leu: 류신,
Lys: 라이신,
Met: 메티오닌,
Nal: 나프트-2-일알라닌,
Nle: 노르류신,
Orn: 오르니틴,
Phe: 페닐알라닌,
Phg: 페닐글라이신,
4-Hal-Phe: 4-할로페닐알라닌,
Pro: 프롤린,
Ser: 세린,
Thr: 트레오닌,
Trp: 트립토판,
Tyr: 타이로신,
Val: 발린.
또한, 다음은 하기 의미를 갖는다:
Ac: 아세틸,
BOC: 3차-부톡시카보닐,
BSA: 소 혈청 알부민,
CBZ 또는 Z: 벤질옥시카보닐,
DCCI: 디사이클로헥실카보디이미드,
DMF: 디메틸포름아미드,
EDCI: N-에틸-N,N'-(디메틸아미노프로필)-카보디이미드,
Et: 에틸,
FCA: 플루오레세인 카복실산,
FITC: 플루오레세인 이소티오시아네이트,
Fmoc: 9-플루오레닐메톡시카보닐,
FTH: 플루오레세인 티오우레아,
HOBt: 1-하이드록시벤조트리아졸,
Me: 메틸,
MBHA: 4-메틸벤즈하이드릴아민,
Mtr: 4-메톡시-2,3,6-트리메틸페닐설포닐,
HONSu: N-하이드록시숙신이미드,
OBut: 3차-부틸 에스테르,
Oct: 옥타노일,
OMe: 메틸 에스테르,
OEt: 에틸 에스테르,
Pbf: 2,2,4,6,7-펜타메틸디하이드로벤조푸란-5-설포닐,
Pmc: 2,2,5,7,8-펜타메틸크로만-6-설포닐,
POA: 페녹시아세틸,
Sal: 살리실로일,
TBS++: 2가 양이온의 트리스 완충된 식염수,
TBSA: TBS + BSA,
TBTU: 2-(1H-벤조트리아졸-1-일)-1,1,3-테트라메틸유로늄 테트라플루오로보레이트,
TFA: 트리플루오로아세트산,
Trt: 트리틸(트리페닐메틸).
상기 아미노산이 2개 이상의 에난티오머 형으로 나타날 수 있을 경우, 이러한 모든 형태 및 그의 혼합물(예를 들어, DL 형)은 상기 및 하기에 포함된다. 또한, 아미노산은 그 자체로 공지된 적절한 보호기를 제공받을 수 있다.
소위 전구체 유도체는 본 발명에 따른 화합물중에 포함되어, 예를 들어 알킬 또는 아실기, 당 또는 올리고펩타이드로 변형되고, 체내에서 급격히 분열되어 본 발명에 따른 활성 화합물을 생성하는 화합물이다. 또한, 이들은, 예를 들어 문헌[Int. J. Pharm.,115, 61-67, 1995]에 기재된 바와 같이 본 발명에 따른 화합물의 생물 분해성 중합체 유도체를 포함한다.
또한, 상기 아미노산 및 아미노산 잔기(예를 들어, NH 작용기 또는 C-말단 아미노 작용기)는 유도될 수도 있으며, 바람직하게는 N-메틸, N-에틸, N-프로필, N-벤질 또는 Cα-메틸 유도체이다. 추가적으로 바람직한 유도체로는 Asp 및 Glu, 특히 측쇄 카복실기의 메틸, 에틸, 프로필, 부틸, 3차-부틸, 네오펜틸 또는 벤질 에스테르 유도체가 있고, 또한 이외에 -NH-C(=NH)-NH2기에서 아세틸, 벤조일, 메톡시카보닐 또는 에톡시카보닐 라디칼로 치환될 수 있는 Arg 유도체가 있다.
본 발명에 따른 화합물에서, N-말단에 아세틸기를 갖는 화학식 I의 화합물 이외에, 또한 Ac가 또 다른 아실 작용기(예를 들어, 프로피오닐, 부티릴 또는 벤조일)로 치환된 상기 화합물이 포함된다.
또한, 본 발명에 따른 화합물중에 추가로 포함되는 유도체는 본 발명에 따른 실제 펩타이드, 및 펩타이드를 용이하게 검출할 수 있는 공지의 표지 화합물로 구성된다. 이들 유도체의 예로는 방사선 표지된 펩타이드, 비오틴화된 펩타이드 또는 형광-표지된 펩타이드가 있다.
형광성 염료 라디칼은 7-아세톡시-쿠마린-3-일, 플루오레세인-5-(및/또는 6-)일, 2',7'-디클로로플루오레세인-5-(및 6-)일, 디하이드로테트라메틸-로스아민-4-일, 테트라메틸로드아민-5-(및 6-)일, 4,4-디플루오로-5,7-디메틸-4-보라-3a,4a-디아자-s-인다센-3-에틸 또는 4,4-디플루오로-5,7-디페닐-4-보라-3a,4a-디아자-s-인다센-3-에틸이 바람직하다.
본 발명에 따른 화학식 I의 화합물을 제조하기 위한 시약으로서 사용할 수 있는 적합한 기능성화된 형광성 염료 라디칼은, 예를 들어 문헌[R. P. Haughland, Molecula Probes, Inc., Handbook of Fluorescent Probes and Research Chemicals, 5th Edition, 1992-1994]에 기재되어 있다.
일반적으로, 본 발명에 따른 펩타이드는 선형이지만, 또한 고리화될 수 있다. 본 발명은 상기 펩타이드뿐만 아니라, 본 발명에 따른 이들 화합물 이외에 본 발명에 따른 펩타이드의 주요한 약리학적 작용에 바람직하게 영향을 미칠 수 있는다른 약리학적 활성 화합물 또는 보조제도 또한 포함하는 혼합물 및 제제를 포함한다.
다른 방법으로, 또한 본 발명에 따른 화합물 및 이들 제제를 위한 출발 물질은 예를 들어, 표준 문헌[Houben-Weyl, Methoden der organischen Chemie(Methods of Organic Chemistry), Georg-Thieme Verlag, Stuttgart]에 기재되어 있는 바와 같이 그 자체로 공지되어 있거나 자주 사용된 방법에 의해서, 즉 공지되고 상기 반응에 적합한 반응 조건하에 제조된다. 또한, 그 자체로 공지된 이러한 변형된 경우에서 사용될 수도 있다.
바람직하게는, 본 발명에 따른 펩타이드는, 예를 들어 몬치크(Monczyk) 및 마이엔호퍼(Meienhofer)(문헌[Peptides, Proc. 8th Am. Pept. Symp., Eds. V. Hruby and D. H. Rich, Pierce Comp. III, 73-77, 1983] 또는 [Angew. Chem.,104, 375, 1992] 참조)에 의해서 또는 메리필드(Merrifield)(문헌[J. Am. Chem.Soc.,94, 3102, 1972] 참조)에 따라서 기재된 바와 같이, 고체 상 합성 후, 제거 및 정제함으로써 제조될 수 있다. 본 발명에 따른 펩타이드는 산에 불안정한 측면 보호기를 사용하여 Fmoc 방법으로 고체 상으로(수동 또는 자동화 합성 장치에서) 제조되어, RP-HPLC에 의해 정제될 수 있다. 피크(peak) 균질성은 RP-HPLC에 의해서, 물질 동일성은 FAB-MS에 의해서 측정될 수 있다.
다른 방법으로, 펩타이드는, 예를 들어 독일 데-65796 바트 조덴 소재의 노바바이오켐(Novabiochem)(문헌[1999 Catalog & Peptide Synthesis Handbook of Calbiochem-Novabiochem GmbH]), 수많은 표준 문헌 및 공개된 특허원에서 공지된바와 같이 아미노산 및 펩타이드 합성의 통상적인 방법에 의해 제조될 수 있다. 계단식 커플링 및 단편 농축이 사용될 수 있다. 다양한 N-말단, C-말단 및 측면 보호기가 사용될 수 있고, 바람직하게 선택되어 수직으로 분열된다. 커플링 단계는 다양한 농축제(예를 들어, 카보디이미드 및 카보디이미다졸), TBTU와 같은 유로늄 유형의 농축제, 혼합된 무수물 방법, 및 산 할로겐화물 또는 활성 에스테르 방법을 사용하여 수행될 수 있다. 활성화된 에스테르는, 예를 들어 HOBt 또는 N-하이드록시숙신이미드를 첨가함으로써 편의상 그 위치에서 형성된다. 또한, 측면 보호기를 갖는 선형 전구체 분자의 고리화는, 예를 들어 독일 특허 제 DE 43 10 643 호 또는 문헌[Houben-Weyl,l. c.,Vol. 15/II, 1-806, 1974]에 기재되어 있는 바와 같이 상기 농축 반응을 사용하여 수행될 수도 있다.
다양한 수지 및 앵커(anchor) 작용기는 고체 상 펩타이드 합성에서 이용될 수 있다. 수지는, 예를 들어 폴리스티렌계 또는 폴리아크릴아미드계일 수 있고, 왕(Wang), o-클로로트리틸과 같은 앵커 작용기는 펩타이드산 또는 아미노크산텐옥시 앵커, 예를 들어 펩타이드 아미드를 제조하기 위해 사용될 수 있다.
또한, 비오틴화된 또는 형광-표지된 펩타이드/단백질은 표준 방법(예를 들어, 문헌[E. A. Bayer and M. Wilchek, The Use of the Avidin Biotin Complex as a Tool in Molecular Biology, Methods of Biochemical Analysis Vol. 26] 및 [R. P. Haughland, Molecular Probes, Inc., Handbook of Fluorescent Probes and Research Chemicals, 6th Edition, 1996]; 또는 국제특허 공개공보 제 WO 97/14716 호)에 의해서 제조될 수 있다.
물론, 또한 본 발명에 따른 펩타이드는 가용매 분해 반응, 특히 가수 분해 반응에 의해, 또는 이들 기능성 유도체의 수소첨가 분해 반응에 의해 유리될 수도 있다. 가용매 분해 반응 또는 수소첨가 분해 반응에 대한 바람직한 출발 물질은 하나 이상의 유리 아미노 및/또는 하이드록실기 대신에 상응하는 보호된 아미노 및/또는 하이드록실기, 바람직하게는 N 원자에 결합된 H 원자 대신에 하이드록실 보호기를 갖거나 하이드록실기의 H 원자 대신에 하이드록실 보호기를 갖는 기를 포함한다. 자신의 -CO-OH 하이드록실 작용기를 보호기, 예를 들어 에스테르로 치환함으로써 보호될 수 있는 카복실산에 동일하게 적용된다.
표현 "아미노 보호기"는 일반적으로 공지되어 있고, 화학 반응으로부터 아미노기를 보호하는데(또는 봉쇄하는데) 적합하지만, 원하는 화학 반응이 분자내의 다른 위치에서 수행된 후 용이하게 제거될 수 있는 기에 관한 것이다. 표현 "하이드록실 보호기"도 마찬가지로 일반적으로 공지되어 있고, 화학 반응으로부터 하이드록실기를 보호하는데 적합하지만, 원하는 화학 반응이 분자내의 다른 위치에서 수행된 후 용이하게 제거될 수 있는 기에 관한 것이다. 이들 작용성 유도체로부터 화합물의 유리는 사용된 보호기에 따라, 예를 들어 강산, 편의상 TFA 또는 과염소산을 사용하거나, 기타 강한 무기 산(예: 염산 또는 황산), 강한 유기 카복실산(예: 트리클로로아세트산 또는 설폰산) 또는 설폰산(예: 벤젠- 또는 p-톨루엔설폰산)을 사용하여 일어난다. 수소첨가 분해 반응으로 제거가능한 보호기(예를 들어, CBZ 또는 벤질)은, 예를 들어 촉매(예를 들어, 편의상 탄소와 같은 지지체상의 팔라듐과 같은 귀금속 촉매)의 존재하에 수소로 처리함으로써 제거될 수 있다.
N-말단 및 측면-위치 아미노기에 대한 전형적인 보호기는 Z, BOC 또는 Fmoc이고; C-말단, 또는 Asp 또는 Glu 측쇄에 대한 전형적인 보호기는 O-1차-알킬(예를 들어, OMe 또는 OEt), O-3차-알킬(예를 들어, OBut) 또는 Obenzyl이다. 예를 들어, Z, BOC, NO2, Mtr, Pmc 또는 Pbf은 Arg의 구아니디노 작용기에 적합하다. 알콜성 작용기는 3차-알킬 라디칼 또는 트리틸기에 의해 보호될 수 있다.
기 BOC, OBut 및 Mtr은 바람직하게는, 예를 들어 디클로로메탄중의 TFA를 사용하거나 15 내지 30℃에서 디옥산중의 약 3 내지 5N HCl를 사용하여 제거될 수 있고, Fmoc 기는 15 내지 30℃에서 DMF중 디메틸아민, 디에틸아민 또는 피페리딘의 약 5 내지 50% 용액을 사용하여 제거될 수 있다.
트리틸기는, 예를 들어 아미노산 히스티딘, 아스파라긴, 글루타민 및 시스테인을 보호하기 위해 사용된다. 원하는 최종 생성물에 따라 TFA/10% 티오페놀을 사용하여 제거하고, TFA/아니솔(anisole) 또는 TFA/티오아니솔을 사용하여 상기 모든 아미노산으로부터 트리틸기를 제거할 때 His, Asn 및 Gln의 트리틸기만이 제거되는 반면에 Cys 측쇄는 여전히 존재한다.
수소첨가 분해 반응으로 제거가능한 보호기(예를 들어, CBZ 또는 벤질)은, 예를 들어 촉매(예를 들어, 편의상 탄소와 같은 지지체상의 팔라듐과 같은 귀금속 촉매)의 존재하에 수소로 처리함으로써 제거될 수 있다. 이러한 경우에 적합한 용매는 상기 정의된 바와 같고 특히, 예를 들어 알콜(예를 들어, 메탄올 또는 에탄올) 또는 아미드(예를 들어, DMF)이다. 일반적으로, 수소첨가 분해 반응은 약 1내지 200 bar의 압력하에 약 0 내지 100℃의 온도에서, 바람직하게는 약 1 내지 10 bar의 압력하에 20 내지 30℃의 온도에서 수행된다. CBZ 기의 수소첨가 분해 반응은, 예를 들어 메탄올중 5 내지 10% Pd/C 상에서 또는 메탄올/DMF중 Pd/C 상에서 포름산 암모늄(수소 대신에)을 사용하여 20 내지 30℃에서 용이하게 일어난다.
앞서 언급된 바와 같이, 본 발명에 따른 펩타이드는 그의 생리학적으로 허용가능한 염을 포함하고, 또한 표준 방법으로 제조될 수 있다. 그러므로, 본 발명에 따른 화합물의 염기는 산을 사용하여, 예를 들어 동량의 염기와 산을 에탄올과 같은 불활성 용매중에서 반응시킨 후 증발시킴으로써 연합된 산부가 염으로 전환될 수 있다. 상기 반응에 적합한 산은, 특히 생리학적으로 허용가능한 염을 생성하는 것이다. 그러므로, 무기산으로는, 예를 들어 황산, 질산, 할로겐화수소산(예를 들어, 염산 또는 브롬화수소산), 인산(예를 들어, o-인산), 설팜산, 또는 유기산, 특히 지방족, 지환족, 아르지방족(araliphatic), 방향족 또는 헤테로환상 단일 또는 다염기 카복실산, 설폰산 또는 황산, 예를 들어 포름산, 아세트산, 프로피온산, 피발산, 디에틸아세트산, 말론산, 숙신산, 피멜산, 푸마르산, 말레산, 락트산, 타르타르산, 말산, 시트르산, 글루콘산, 아스코르빈산, 니코틴산, 이소니코틴산, 메탄- 또는 에탄설폰산, 에탄디설폰산, 2-하이드록시에탄설폰산, 벤젠설폰산, p-톨루엔설폰산, 나프탈렌모노설폰산 또는 나프탈렌디설폰산, 및 라우릴황산이 사용될 수 있다. 생리학적으로 허용불가능한 산과의 염, 예를 들어 피크린산염은 본 발명에 따른 화합물을 단리하고/하거나 정제하기 위해 사용될 수 있다. 다른 한편, 본 발명에 따른 화합물의 산은 염기와 반응시킴으로써 그의 생리학적으로 허용가능한 금속 또는 암모늄염의 하나로 전환될 수 있다. 이러한 경우에 가능한 염은, 특히 나트륨, 칼륨, 마그네슘, 칼슘 및 암모늄염, 또한 치환된 암모늄염, 예를 들어 디메틸-, 디에틸- 또는 디이소프로필암모늄염, 모노에탄올-, 디에탄올- 또는 디이소프로필암모늄염, 사이클로헥실- 또는 디사이클로헥실암모늄염, 디벤질에틸렌디암모늄염, 또한, 예를 들어 아르기닌 또는 라이신과의 염이다.
본 발명에 따른 펩타이드 화합물은 앞서 언급된 바와 같이, 특히 상피 세포가 관련된 장애를 예방하고/하거나 치료하기 위해 인간 및 수의학에서 약학적 활성 화합물로서 사용될 수 있다. 특히 본원에서 강조되는 장애는 염증 또는 피부의 상처-치유 과정, 기도 기관 및 위장 및 장관 영역 장애, 예를 들어 뇌졸중, 협심증, 종양증, 골 용해성 질환(예를 들어, 골다공증), 병리학적 혈관 형성 질환(예를 들어, 염증), 폐섬유증, 안과 질환, 당뇨병성 망막증, 황반변성, 근시, 안구 히스토플라즈마증, 류마티스성 관절염, 골 관절염, 신생혈관 녹내장, 궤양성 대장염, 크론즈 병(Crohn's disease), 죽상 경화증, 건선증, 혈관성형술 후 재발협착증, 급성 신부전증, 신장염, 미생물성 감염증 및 다발성 경화증이다.
따라서, 본 발명은 약제, 진단약 또는 시약으로서 사용되는 상기 및 하기 정의되고 청구의 범위에 포함된 화학식의 펩타이드 화합물 및 그의 생리학적으로 허용가능한 염에 관한 것이다.
본 발명은, 특히 αVβ6인테그린 수용체의 발현에 간접 또는 직접적으로 기초한 장애, 특히 병리학적 혈관 형성 질환, 혈전증, 심근경색증, 관상동맥 심장 질환, 동맥경화증, 종양, 골다공증, 염증 및 감염증을 제어하고 상처-치유 과정에 영향을 미치는 저해제로서 적절한 약제에 관한 것이다.
또한, 본 발명은 하나 이상의 화학식 I의 약제, 및 경우에 따라 비히클(vehicle) 및/또는 부형제를 포함하는 적절한 약학적 제제에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 αvβ6인테그린 수용체의 발현에 간접 또는 직접적으로 기초한 장애, 특히 병리학적 혈관 형성 질환, 혈전증, 심근경색증, 관상동맥 심장 질환, 동맥경화증, 종양, 골다공증, 염증 및 감염증을 제어하고 상처-치유 과정에 영향을 미치는 약제를 제조하기 위한 청구의 범위 및 명세서에 따른 펩타이드 화합물 및/또는 그의 생리학적으로 허용가능한 염의 용도에 관한 것이다. 본 발명에 따른 약제 또는 이를 포함하는 약학적 제제는 인간 또는 수의학에서 사용될 수 있다. 가능한 비히클은 소화관내(예를 들어, 경구) 또는 비경구 투여, 또는 국부 적용 또는 흡입 분무제의 형태로 투여하기에 적합한 유기 또는 무기 물질이고 신규한 화합물과 반응하지 않으며, 예를 들어 물, 식물성유, 벤질 알콜, 알킬렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 글리세롤 트리아세테이트, 젤라틴, 탄수화물(예를 들어, 락토스 또는 전분), 스테아르산 마그네슘, 활석 및 바셀린이다. 특히, 정제, 환약, 피복정제, 캡슐, 분말, 과립, 시럽, 쥬스 또는 점적제는 경구적으로 투여되고, 좌제는 직장으로 투여되고, 용액, 바람직하게는 유성 또는 수성 용액, 또는 현탁액, 유화액 또는 삽입물은 비경구적으로 투여되며, 연고, 크림 또는 분말은 국부적으로 적용된다. 또한, 신규한 화합물은 동결 건조되고, 수득된 동결 건조물은, 예를 들어 주사 제제를 제조하기 위해 사용될 수 있다. 지정된 제제는 멸균되고/되거나 부형제(예를 들어, 윤활제, 방부제, 안정화제 및/또는 습윤제, 유화제, 삼투압 조정용 염, 완충액 물질, 착색제, 풍미제 및/또는 하나 이상의 추가 활성 물질(예를 들어, 하나 이상의 비타민))를 포함할 수 있다. 흡입 분무제로서 투여하기 위해, 추진제 또는 추진제 혼합물(예를 들어, CO2또는 플루오로-클로로하이드로카본)중에 용해된 형태이거나 현탁된 형태인 활성 화합물을 포함하는 분무제가 사용될 수 있다. 활성 화합물은 이러한 경우에 편의상, 하나 이상의 추가적인 생리학적으로 허용가능한 용매(예를 들어, 에탄올)가 존재하는 마이크로화된 형태로 사용될 수 있다. 흡입액은 통상적인 흡입기의 보조로 투여될 수 있다.
일반적으로, 본 발명에 따른 물질은 다른 공지된 시판용 펩타이드(예를 들어, 미국 특허 제 US-A-4 472 305 호에 기재)와 유사하게, 투여 단위 당 약 0.05 내지 500mg, 특히 0.5 내지 100mg으로 투여되는 것이 바람직할 수 있다. 1일 투여량은 체중 1kg 당 약 0.01 내지 20mg이 바람직하다. 그러나, 각각의 환자에 대한 특정 투여량은 모든 종류의 요인들, 예를 들어 사용된 특정 화합물의 효능, 나이, 체중, 전반적인 건강 상태, 성별, 식이, 투여 시간 및 경로, 배출률, 약학적 조합 및 치료될 특정 장애의 심각성에 따라 좌우된다. 비경구 투여가 바람직하다.
또한, 화학식 I의 신규한 화합물은 분석 생물학 및 분자 생물학에서 사용될 수 있다. 화학식 I의 신규한 화합물(이때, X는 -CONH, -COO, -NH-C(=S)-NH, -NH-C(=O)-NH, -SO2NH 또는 -NHCO 결합으로 결합된 형광성 염료 라디칼이다)은 FACS(형광 활성화된 세포 분별장치, Fluorescence Activated Cell Sorter) 기술 및 형광 현미경 검사법에서 진단 표지물로서 사용될 수 있다.
형광 현미경 검사법에서 표지된 화합물의 용도는, 예를 들어 문헌[Y. L. Wang and D. L. Taylor, Fluorescence Microscopy of Living Cells in Culture, Parts A+B, Academic Press, Inc., 1989]에 기재되어 있다.
또한, 본 발명에 따른 신규한 화합물은 순수한 형태의 인테그린 제제용 친화 크로마토그래피용 칼럼을 제조하기 위한 인테그린 리간드로서 사용될 수 있다. 아비딘계 지지 물질(예를 들어 세파로스)과 신규한 화합물의 착체는 그 자체로 공지된 방법(예들 들어, 문헌[E. A. Bayer and M. Wilchek, The Use of the Avidin-Biotin Complex ams a Tool in Molecular Biology, Methods of Biochemical Analysis Vol 26] 참조)에 의해서 제조될 수 있다. 본원에서 적합한 중합체 지지 물질은 바람직하게는 친수성 특성을 갖는 중합체 고체 상이며, 펩타이드 화학에서 그 자체로 알려져 있다. 예를 들어 교차 결합된 다당(예를 들어, 셀룰로스, 세파로스, 세파덱스(Sephadex, 등록상표), 아크릴아미드, 폴리에틸렌 글리콜계 중합체 또는 텐타켈 중합체(Tentakel polymers, 등록상표))이다.
최종적으로, 또한 본 발명은 본 발명에 따른 펩타이드 구조의 모티프(motif)를 갖는 펩타이드 영역을 암호화하는 재조합 DNA 서열을 포함한다.
이러한 유형의 DNA는 문헌[Ch. Andree et al.,Proc. Natl. Acad. Sci.,91, 12188-12192, 1994]에 기재되어 있는 바와 같이 입자에 의해 세포로 이동되거나 리포좀(문헌[A. I. Aronsohn and J. A. hughes,J. Drug Targeting,5, 163-169,1997] 참조)과 같은 다른 부형제에 의해 세포로 빠르게 이동될 수 있다.
따라서, 상기 유형의 DNA의 이동은 본 발명의 펩타이드 물질을 제조하기 위해 바큘로바이러스에 의해 효모에서 또는 포유류의 세포에서 이용될 수 있었다.
동물 또는 인체가 상기 유형의 재조합 DNA로 감염될 경우, 감염된 세포에 의해 형성된 본 발명에 따른 펩타이드 자체는 최종적으로 즉시 αvβ6인테그린 수용체, 예를 들어 종양 세포에 결합하여, 이를 봉쇄할 수 있다. 그러나, 또한 공지되고 통상적인 기술에 의해 제조될 수 있는 상응하는 재조합 DNA는, 예를 들어 바이러스 외피단백질을 암호화하는 부분을 포함하는 바이러스 DNA의 형태로 존재할 수 있다. 숙주 유기체를 이러한 유형의 재조합체, 바람직하게는 비병원성 바이러스로 감염시킴으로써, 인테그린 αvβ6을 발현하는 숙주 세포는 공격받는 것(약물 표적화)이 바람직할 수 있다.
적합한 바이러스로는, 예를 들어 포유류 세포에서 이종 유전자에 대한 벡터로서 이미 수많은 회수로 사용된 아데노바이러스 유형이 있다. 문헌[S. J. Watkins et al.,Gene Therapy 4, 1004-1012, 1997] 및 [J. Engelhardt et al., Hum.Gene Ther.,4, 759-769, 1993]에서 나타난 바와 같이 수많은 특성에 기인하여 이들을 유전자 치료에 대한 우수한 후보로 하였다. 문헌[A. Fasbender et al.,J. Clin. Invest.,102, 184-193, 1998]에서 발견될 수 있는 바와 같이, 바이러스 및 비바이러스 벡터에 의한 유전자 치료에서의 일반적인 문제는 유전자 이동의 제한된 효율이다. 상기 기재된 인테그린 αvβ6의 추가적인 리간드 서열을 사용하여아데노바이러스의 외피단백질, 예를 들어 낭포성 섬유증 경막 전도성 조절인자(CFTR, Cystic Fibrosis Transmembrane conductance Regulator) cDNA의 이동을 향상시킬 수 있다.
문헌[T. Tanaka et al.,Cancer Research,58, 3362-3369, 1998]에 기재된 바와 유사한 방법으로, 또한 안지오스타틴에 대한 DNA 대신에 본 발명의 서열에 대한 DNA는 레트로바이러스 또는 아데노바이러스 벡터에 의해서 세포 형질감염을 위해 이용될 수도 있다.
또한, 본 발명에 따른 펩타이드는 인간에게 유전자 치료의 적용을 위해 지질/DNA(펩타이드 없음)로 구성된 리포좀 착체와 함께 세포 배양물 형질감염을 위한 지질/펩타이드/DNA의 리포좀 착체내에서 사용될 수도 있다. 지질/DNA/펩타이드로부터 리포좀 착체를 제조하는 방법은, 예를 들어 문헌[Hart S. L. et al., Lipid-Mediated Enhancement of Transfection by a Non-Viral Integrin-Targeting Vector,Human Gene Therapy 9, 575-585, 1998]에 기재되어 있다. 지질/펩타이드/DNA의 리포좀 착체는, 예를 들어 원액[리포펙틴(DOTMA(N-[1-(2,3-디올레일옥시)프로필]-N,N,N-트리메틸-암모늄 클로라이드)와 DOPE(디올레일 포스파티딜-에탄올아민)의 등몰 혼합물) 1 ㎍/㎕, 플라스미드 DNA 10 ㎍/㎖ 및 펩타이드 100 ㎍/㎖]으로부터 제조될 수 있다. 이를 위해, DNA 및 펩타이드를 세포 배지중에 용해하였다. 리포좀 착체는 비중비(지질:DNA:펩타이드, 예를 들어 0.75:1:4)로 3 가지 성분을 혼합함으로써 제조된다. 인간에게 유전자 치료를 하기 위한 리포좀 DNA 착체는 이미 문헌[Caplen N, J. dt al., Liposome-mediated CFTR genetransfer to the nasal epithelium of patients with cystic fibrosis Nature Medicine 1, 39-46, 1995]에 기재되어 있다.
그러므로, 또한 본 발명은 αvβ6인테그린 수용체의 발현에 간접 또는 직접적으로 바탕을 둔 질환, 특히 병리학적 혈관 형성 질환, 혈전증, 심근경색증, 관상동맥 심장 질환, 동맥경화증, 종양, 골다공증, 염증 및 감염증을 제어하고 상처-치유 과정에 영향을 미치는 유전자-방출 시스템의 변형된 재조합 DNA, 특히 바이러스 DNA의 용도에 관한 것이다.
상기 및 하기에서, 모든 온도는 ℃로 지정된다.
HPLC 분석(체류 시간)은 다음의 계에서 수행되었다:
5㎛ 리크로스퍼(LichroSpher) 60 RP-Select B(250-4) 칼럼, 물/0.3% 트리플루오로아세트산중의 2-프로판올을 0 내지 80%의 50분동안 구배, 유속 1㎖/분, 및 검출 파장 215nm.
질량 분광 측정법(MS): EI(전자 충돌 이온화, electron impact ionization) M+
FAB(급속 원자 충격, fast atom bombardment) (M+H)+
실시예 1
본 발명에 따른 펩타이드의 제조 및 정제
원칙적으로, 제조 및 정제는 문헌[Haubner et al.,J. Am. Chem. Soc.,118,17703, 1996]에 따라서 시판중인 "연속 흐름" 펩타이드 합성 장치를 사용하여 산에 불안정한 수지상에 산에 불안정한 측쇄를 보호하는 Fmoc 방법에 의해서 수행되었다.
Ac-Arg-Gly-Asp-Leu-D-Asp-Ser-Leu-Arg-NH 2
TBTU 0.50g, 에틸디이소프로필아민 0.53㎖, 및 DMF 중의 Fmoc-아미노산을 사용하여 시판중인 합성 장치 및 전형적인 절차(밀리겐 9050 펩신시사이저(등록상표, Milligen 9050 Pepsynthesizer) 장치 및 안내서, 1987)로 각각의 경우에 30분동안 매번 이중 커플링 기술로 커플링 단계에 아미노크산테닐옥시폴리스티렌 수지(노바바이오켐, 0.37 mmol/g) 2g을 연속적으로 2회 검사하였다. 세척 단계를 DMF중에서 10분동안 수행하고, 분열 단계를 피페리딘/DMF(부피비 1:4)중에서 5분동안 수행하며, N-말단 아세틸화(캐핑(capping))를 아세트산무수물/피리미딘/DMF(부피비 2:3:15)로 15분동안 수행하였다. 아미노산 Fmoc-Arg(Pmc), Fmoc-Leu, Fmoc-Ser(But), Fmoc-D-Asp(OBut), Fmoc-Leu, Fmoc-Asp(OBut), Fmoc-Gly 및 최종으로 Fmoc-Arg(Pmc)을 순서대로 사용하였다. Fmoc-Arg(Pmc)-Gly-Asp(OBut)-Leu-D-Asp(OBut)-Ser(But)-Leu-Arg(Pmc)-아미노크산테닐옥시폴리스티렌 수지로부터 Fmoc 보호기를 제거한 후, 다시 아세틸화하였다. DMF 및 이소프로판올로 세척한 후, 진공하에 실온에서 건조시켜 Ac-Arg(Pmc)-Gly-Asp(OBut)-Leu-D-Asp(OBut)-Ser(But)-Leu-Arg(Pmc)-아미노크산테닐옥시폴리스티렌 수지를 수득하였다.
상기 펩티딜 수지를 트리플루오로아세트산/물/TIS(부피비 94:3:3) 20ml로 실온에서 2시간동안 처리하고, 여과하고, 진공하에 농축하고, 디에틸 에테르로 분쇄하여 Ac-Arg-Gly-Asp-Leu-D-Asp-Ser-Leu-Arg-NH2(코드 EMD 272974) 0.47g을 수득하였다.
리크로소르브(Lichrosorb) RP 18(250-25, 7㎛, Merck KGaA) RP-HPLC에 의해 유속 10 ㎖/분에서 1시간동안 2-프로판올 4 내지 24%의 구배를 사용한 0.3% TFA에서 생성물을 정제하여, UV 유량 통과 광도계(UV flow-through photometer)에 의해 215 내지 254nm에서 용출액을 평가하였다. 체류 시간이 15.5분이고 FAB가 973인 생성물 168mg을 수득하였다.
하기 생성물을 유사하게 수득하였다:
아미노산의 명명법은 문헌[Eur. J. Biochem.,138, 9-37, 1984]에 따른다.
소문자의 경우: D-아미노산
실시예 2
α v β 6 /피브로넥틴 수용체 결합 시험
본 발명에 따라 제조된 펩타이드는 용액에서 경쟁적으로 행동하는 피브로넥틴과 함께 고정화 αvβ6수용체에 결합하고, Q 값은 αvβ6에 시험되는 펩타이드 결합의 선택도를 측정함으로써 결정되었다. Q 값은 본원에서 시험 펩타이드와 표준의 IC50값 비율로부터 계산되었다. 사용된 표준은 선형 Ac-RTDLDSLR-NH2(코드 EMD 27193)(문헌[Pytela et al.,Science,231, 1559, 1986] 참조)이었다. 결합 시험은 다음과 같이 상세히 수행하였다:
마이크로타이터 플레이트(microtitre plate)에서 가용성 αvβ6수용체의 고정화는 TBS++에서 단백질 용액을 희석한 후 4℃에서 밤새 항온 처리함으로써 수행하였다(100㎕/요부(hollow)). 비특이적인 결합 부위를 TBS++중의 BSA 3% (중량/부피)(200㎕/요부)로 항온 처리(2시간, 37℃)함으로써 봉쇄하였다. 과잉 BSA를 TBSA++로 3회 세척함으로써 제거하였다. 펩타이드를 TBSA++중에서 연속적으로 희석하고(1:10), 비오틴화 피브로넥틴(2㎍/㎖)과 함께 고정화 인테그린(요부 당 펩타이드 50㎕ + 리간드 50㎕, 2시간, 37℃)으로 항온 처리하였다. 결합하지 않은 피브로넥틴 및 펩타이드를 TBSA++로 3회 세척함으로써 제거하였다. 알칼리 포스파타제-커플된 항-비오틴 항체(바이오래드(Biorad)제)(TBSA++중에서 1:20,000, 100㎕/요부)로 항온 처리(1시간, 37℃)함으로써 결합한 피브로넥틴을 검출하였다. TBSA++로 3회 세척한 후, 기질 용액(니트로페닐 포스페이트 5mg, 에탄올아민 1㎖ 및 H2O 4㎖; 100 ㎕/요부)으로 항온 처리(암실에서 10 내지 15분, 25℃)함으로써 비색 검출을 수행하였다. 효소 반응을 0.4M NaOH(100 ㎕/요부)를 첨가함으로써 정지시켰다. 색 강도를 ELISA 측정 장치로 405nm에서 측정하고 0 값으로 맞추었다. 수용체로 피복되지 않은 요부는 0 값으로 하였다. Ac-RTDLDSLR-NH2를 표준으로 사용하였다. 시험된 펩타이드의 IC50값을 그래프로부터 읽고, 이로써 본 발명에 따른 펩타이드의 Q 값을 표준 펩타이드의 IC50값과 함께 측정하였다.
Q 값: IC50시험 펩타이드/IC50표준
반복 실험의 수단으로 Q 값을 측정하였다.
기재된 시험의 결과를 하기 표 2a, 2b 및 2c에 요약하였다:
다음 실시예는 약학적 제제에 관한 것이다:
실시예 A: 주사제 바이알(vial)
Ac-RGDLdSLR-NH2100g과 인산화수소 이나트륨 5g의 용액을 2N 염산을 사용하여 재증류수 3ℓ중에서 pH 6.5로 조정하고, 멸균 여과하고, 주사제 바이알에 넣고 무균 조건하에 동결 건조하여 무균상태로 밀봉하였다. 각각의 주사제 바이알은 활성 화합물 5mg을 포함한다.
실시예 B: 좌제
Ac-RGDLdSLR-NH220g의 혼합물을 콩 레시틴 100g과 코코아 버터 1400g으로 용화하여 주형속으로 붓고 냉각하였다. 각각의 좌제에는 활성 화합물 20mg이 포함되어 있다.
실시예 C: 용액
재증류수 940ml중 Ac-RGDLdSLR-NH21g, NaH2PO4ㆍ2H2O 9.38g, Na2HPO4ㆍ12H2O 28.48g 및 염화 벤즈알코늄 0.1g으로부터 용액을 제조하였다. 이 혼합물을 pH 6.8로 조정하여 1ℓ로 맞추고 방사선 조사로 살균하였다. 이 용액을 점안제의 형태로 사용할 수 있다.
실시예 D: 연고
Ac-RGDLdSLR-NH2500mg을 바셀린 99.5g과 무균 조건하에 혼합하였다.
실시예 E: 정제
Ac-RGDLdSLR-NH21kg, 락토스 4kg, 감자 전분 1.2kg, 활석 0.2kg 및 스테아르산 마그네슘 0.1kg의 혼합물을 통상적인 방법으로 압착하여 각각 활성 화합물 10mg을 포함하는 정제를 수득하였다.
실시예 F: 피복정제
실시예 E와 유사한 방법으로, 정제를 압착한 후, 통상적인 방법에 의해 수크로스, 감자 전분, 활석, 트래거캔스 및 착색제의 피복물로 피복하였다.
실시예 G: 캡슐
각각의 캡슐이 활성 화합물 20mg을 함유하도록, Ac-RGDLdSLR-NH22kg을 통상적인 방법으로 경질 젤라틴 캡슐내에 충전하였다.
실시예 H: 앰풀(ampule)
재증류수 60ℓ중 Ac-RGDLdSLR-NH21kg의 용액을 살균 여과하고, 앰풀내로 충전하고, 무균 조건하에 동결 건조하여 무균 상태로 밀봉하였다. 각각의 앰풀에는 활성 화합물 10mg이 포함되어 있다.
실시예 I: 흡입 분무제
Ac-RGDLdSLR-NH214g을 NaCl 등장액 10ℓ중에 용해하고, 펌프 기작을 갖는 시판중인 분무제 용기내에 충전하였다. 상기 용액을 입 또는 코 속으로 분무할 수 있다. 분무제의 1회 분사(약 0.1ml)는 약 0.14mg의 투여량에 상응한다.

Claims (8)

  1. 식중 아미노산이 유도될 수도 있고, 아미노산 잔기가 α-아미노 및 α-카복실기에 의해 펩타이드 형태로 서로 결합되고, 광학적으로 활성인 아미노산 잔기의 D 및 L 형을 포함하며, Ac-Arg-Thr-Asp-Leu-Asp-Ser-Leu-Arg-NH2를 제외한 하기 화학식 I의 펩타이드 화합물 또는 그의 염:
    화학식 I
    Ac-Arg-X1-Asp-X2-X3-X4-X5-X6-NH2
    상기 식에서,
    Ac는 아세틸이고;
    X1은 Ser, Gly, Thr, Asp, Arg, Val, Tyr, His 또는 Ala이고;
    X2는 Leu, Ile, Nle, Val 또는 Phe이고;
    X3은 Asp, Glu, Lys, Phe, Aib, Nal, Gly, Ala, Bgl 또는 Phg이고;
    X4는 Gly, Ala, Ser, β-Ala 또는 ω-Abu이고;
    X5는 Leu, Ile, Nle, Val 또는 Phe이고;
    X6은 Arg, Har, Lys, Leu, Orn, Phe, Ala, Tyr, Gly, Ser 또는 Asp이다.
  2. 제 1 항에 있어서,
    Ac-Arg-Gly-Asp-Leu-D-Asp-Ser-Leu-Arg-NH2,
    Ac-Arg-Gly-Asp-Leu-Asp-Ser-Leu-Arg-NH2,
    Ac-Arg-Ser-Asp-Leu-Asp-Ser-Leu-Arg-NH2,
    Ac-Arg-Asp-Asp-Leu-Asp-Ser-Leu-Arg-NH2,
    Ac-Arg-Thr-Asp-Leu-Asp-Ser-Leu-Ala-NH2,
    Ac-Arg-Thr-Asp-Leu-Asp-Ser-Leu-D-Arg-NH2,
    Ac-Arg-Thr-Asp-Leu-D-Asp-Ser-Leu-Arg-NH2,
    Ac-D-Arg-Thr-Asp-Leu-Asp-Ser-Leu-Arg-NH2,
    Ac-Arg-Thr-Asp-Leu-D-Ala-Ser-Leu-Arg-NH2,
    Ac-Arg-Thr-Asp-Leu-Aib-Ser-Leu-Arg-NH2,
    Ac-Arg-Thr-Asp-Leu-D-Nal-Ser-Leu-Arg-NH2,
    Ac-Arg-Thr-Asp-Leu-Gly-Ser-Leu-Arg-NH2,
    Ac-Arg-Thr-Asp-Leu-Ala-Ser-Leu-Arg-NH2,
    Ac-Arg-Thr-Asp-Nle-D-Asp-Ser-Leu-Arg-NH2,
    Ac-Arg-Thr-Asp-Ile-D-Asp-Ser-Leu-Arg-NH2,
    Ac-Arg-Thr-Asp-Leu-Asp-D-Ser-Leu-Arg-NH2,
    Ac-Arg-Thr-Asp-Leu-Asp-Ala-Leu-Arg-NH2,
    Ac-Arg-Thr-Asp-Leu-Asp-Gly-Leu-Arg-NH2,
    Ac-Arg-Thr-Asp-Leu-Asp-Ser-Leu-Har-NH2,
    Ac-Arg-Thr-Asp-Leu-Asp-Ser-Leu-Lys-NH2,
    Ac-Arg-Thr-Asp-Leu-D-Asp-D-Ser-Leu-Arg-NH2,
    Ac-Arg-Thr-Asp-Leu-D-Asp-Ser-Leu-Ala-NH2, 및
    Ac-Arg-Thr-Asp-Leu-D-Asp-Gly-Leu-Arg-NH2로 구성된 군에서 선택된 펩타이드 화합물 또는 그의 생리학적으로 허용가능한 염.
  3. 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서,
    약제로서 사용되는 화학식 I의 펩타이드 화합물 또는 그의 생리학적으로 허용가능한 염.
  4. αvβ6인테그린 수용체의 발현 및 병리학적 작용에 기초한 장애를 제어하기 위한 저해제로서 사용되는 제 3 항에 따른 약제.
  5. 제 4 항에 있어서,
    혈전증, 심근경색증, 관상동맥 심장 질환, 동맥경화증, 종양, 골다공증, 섬유증, 염증, 감염증 및 건선증을 제어하고 상처-치유 과정에 영향을 미치기 위한 약제.
  6. 제 4 항 또는 제 5 항에 따른 하나 이상의 약제, 및 경우에 따라 비히클(vehicle) 및/또는 부형제, 및 경우에 따라 기타 활성 화합물을 포함하는 약학적 제제.
  7. αvβ6인테그린 수용체의 발현 및 병리학적 작용에 기초한 장애를 제어하는 약제를 제조하기 위한, 제 1 항 또는 제 2 항에 따른 펩타이드 화합물 및/또는 그의 생리학적으로 허용가능한 염의 용도.
  8. 제 7 항에 있어서,
    혈전증, 심근경색증, 관상동맥 심장 질환, 동맥경화증, 종양, 골다공증, 섬유증, 염증, 감염증 및 건선증을 제어하고 상처-치유 과정에 영향을 미치는 약제를 제조하기 위한 용도.
KR1020017016580A 1999-06-26 2000-06-13 인테그린 α브이β6의 저해제 KR20020015704A (ko)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DE19929410.0 1999-06-26
DE19929410A DE19929410A1 (de) 1999-06-26 1999-06-26 Inhibitoren des Integrins avß6
PCT/EP2000/005404 WO2001000660A1 (de) 1999-06-26 2000-06-13 INHIBITOREN DES INTEGRINS αv$(g)b¿6?

Publications (1)

Publication Number Publication Date
KR20020015704A true KR20020015704A (ko) 2002-02-28

Family

ID=7912712

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020017016580A KR20020015704A (ko) 1999-06-26 2000-06-13 인테그린 α브이β6의 저해제

Country Status (17)

Country Link
EP (1) EP1189930A1 (ko)
JP (1) JP2003503422A (ko)
KR (1) KR20020015704A (ko)
CN (1) CN1358195A (ko)
AR (1) AR024472A1 (ko)
AU (1) AU771099B2 (ko)
BR (1) BR0011954A (ko)
CA (1) CA2377224A1 (ko)
CZ (1) CZ20014484A3 (ko)
DE (1) DE19929410A1 (ko)
HU (1) HUP0201729A3 (ko)
MX (1) MXPA01013247A (ko)
NO (1) NO20016341L (ko)
PL (1) PL352374A1 (ko)
SK (1) SK18722001A3 (ko)
WO (1) WO2001000660A1 (ko)
ZA (1) ZA200200673B (ko)

Families Citing this family (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6972296B2 (en) 1999-05-07 2005-12-06 Encysive Pharmaceuticals Inc. Carboxylic acid derivatives that inhibit the binding of integrins to their receptors
CA2515127A1 (en) * 2003-02-06 2004-08-19 Alfred Jonczyk Peptidic sulfonamides
GB0520068D0 (en) 2005-10-03 2005-11-09 Cancer Res Technology av peptide ligand
AU2007348941B2 (en) 2006-08-03 2011-08-04 Medimmune Limited Antibodies directed to alphaVbeta6 and uses thereof
JOP20190084B1 (ar) * 2016-11-01 2023-09-17 Arrowhead Pharmaceuticals Inc ربائط إنتجرين ألفا- v بيتا-6 واستخداماتها
JP7445594B2 (ja) 2017-11-01 2024-03-07 アローヘッド ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド インテグリンリガンドおよびその使用

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA2103139A1 (en) * 1991-05-14 1992-11-15 George A. Heavner Peptide inhibitors of inflammation
ES2311131T3 (es) * 1997-08-08 2009-02-01 The Regents Of The University Of California Tratamiento de la fibrosis hepatico con anticuerpos contra la integrina alfa-v-beta6.
EP1140989A1 (de) * 1998-12-19 2001-10-10 MERCK PATENT GmbH Inhibitoren des integrins alpha(v) beta(6)

Also Published As

Publication number Publication date
JP2003503422A (ja) 2003-01-28
NO20016341D0 (no) 2001-12-21
HUP0201729A2 (en) 2002-08-28
HUP0201729A3 (en) 2005-01-28
CA2377224A1 (en) 2001-01-04
CZ20014484A3 (cs) 2002-04-17
CN1358195A (zh) 2002-07-10
AU6263000A (en) 2001-01-31
AR024472A1 (es) 2002-10-02
SK18722001A3 (sk) 2002-05-09
WO2001000660A1 (de) 2001-01-04
MXPA01013247A (es) 2002-07-02
ZA200200673B (en) 2003-04-24
BR0011954A (pt) 2002-05-07
EP1189930A1 (de) 2002-03-27
NO20016341L (no) 2002-02-25
PL352374A1 (en) 2003-08-25
AU771099B2 (en) 2004-03-11
DE19929410A1 (de) 2000-12-28

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US6001961A (en) Cyclic adhesion inhibitors
MXPA96004100A (en) Cyclic compounds, adhes inhibitors
AU772782B2 (en) Cyclic peptide derivatives as inhibitors of integrin alphavbeta6
BG65065B1 (bg) Пептидни антиангиогенни лекарствени средства
JP4115530B2 (ja) 環状接着阻害剤
CA2355874A1 (en) .alpha.v.beta.6 integrin inhibitors
JPH06321988A (ja) 新規直鎖状ペプチド
KR20020015704A (ko) 인테그린 α브이β6의 저해제
US5747457A (en) Linear adhesion inhibitors
JP4127325B2 (ja) ビオチン誘導体
AU770295B2 (en) AlphaVbetaB integrin inhibitors
MXPA01006229A (en) &agr;v

Legal Events

Date Code Title Description
WITN Application deemed withdrawn, e.g. because no request for examination was filed or no examination fee was paid