KR20010049880A

KR20010049880A - 피부착색 치료 방법

Info

Publication number: KR20010049880A
Application number: KR1020000042946A
Authority: KR
Inventors: 미리 세이버그; 스탠리에스. 샤피로
Original assignee: 미쉘 지. 멘지니; 죤슨 앤드 죤슨 컨써머 캄파니스 인코포레이티드
Priority date: 1999-07-27
Filing date: 2000-07-26
Publication date: 2001-06-15
Also published as: CN1283507A; BR0003184A; ATE371475T1; JP2001081011A; DE60036169T2; CA2314569A1; AU779448B2; KR100778086B1; HK1032543A1; US20020065300A1; TWI292715B; DE60036169D1; MXPA00007388A; EP1077063A3; CN1163261C; ES2292406T3; EP1077063A2; EP1077063B1; JP4808304B2; AU4881900A

Abstract

본 발명은, 피부 착색에서 변화를 일으키는 방법과 조성물에 관한 것이다. 보다 구체적으로, 본 발명은, 멜라닌 생성에 영향을 미칠 수 있고, 탈색제 또는 PAR-2 경로를 이용해서 피부를 어둡게 하는 약품으로 사용될 수 있는 화합물에 관한 것이다.

Description

피부착색 치료 방법{METHODS FOR TREATING SKIN PIGMENTATION}

본 발명은 미국특허출원 일련번호 09/110,409(Attorney Docket No. JBP 430)의 부분계속출원(continuation-in-part)으로서 여기서 참고로 병합된다.

본 발명은 피부착색 및/또는 피부탈색을 일으키기 위한 방법 및 조성물에 관한 것이다. 더 상세하게는, 본 발명은 멜라닌 생성(melanogenesis)에 영향을 주고 탈색제 또는 피부를 어둡게 하는 약품으로서 사용될 수 있는 화합물에 관한 것이다.

피부착색은 오랫동안 인간에게 관심의 대상이었다. 특히, 일반적으로 노화 반점(age spots), 주근깨, 피부노화에서 발견되는 것과 같은 과도한 착색(hyperpigmentation)을 제거할 수 있는 능력은 균일한 얼굴빛을 원하는 사람들에게 관심의 대상이다. 세상의 어떤 지역에서는 일반적인 인체 백화(body whitening)는 바람직하다. 또한 치료하기에 바람직한 과도착색이나 색소부족 질병도 있다. 그와 똑같이, 태양방사에 기인한 광손상(photodamage)을 일으키지 않고 태양에 그슬린 모습을 만드는 능력은 많은 사람에게 중요하다. 탈색 뿐 아니라 피부를 어둡게 하기 위해 제안된 많은 방법이 있다. 예를 들면 코직산(kojic acid), 하이드로퀴논(hydroquinone), 레티노이드(retinoids) 및 다른 화학적 화합물이 탈색을 위해 사용되어 왔다. 디하이드록시아세톤(Dihydroxyacetone) 및 유사한 화학적 화합물은 태양에 노출됨 없이 피부를 태양에 그슬린 듯이 하기 위한 능력을 위해 이용되어져 왔다.

다수의 이러한 이전의 해결책들은 만족스럽지 않은 것으로 알려졌다. 그러한 이전의 조성물이 도포된 피부영역사이에 분명한 경계선이 종종 있다. 그러므로 원하는 결과를 달성하기 위해 모든 이들 화합물의 정확한 도포가 필요하다. 다수의 이들 화합물들은 피부에 상당히 자극적인 것이고, 그 결과 사용하기에 부적합하다는 것이 알려져 있다.

멜라닌 생성의 화학적 및 효소적 기초에 대한 지식이 다수 문서화되어 있다. 멜라노사이트(melanocyte)는 배아신경 크레스트(embryonal neural crest)로부터 분비한 입자인 멜라닌을 생산하는 멜라노좀을 생산하기 위해 피부로 이동한다. 멜라닌 생성은 멜라노좀 내에서 일어나고 상기 멜라닌은 후에 멜라노사이트 덴드라이트(dendrites)를 통해 케라티노사이트에 분포된다. 멜라닌 생성에서 핵심적 효소는 티로시나제(tyrosinase)인데, 이것은 티로신을 생고분자 멜라닌으로 전환시키는 반응 케스케이드를 일으킨다. 두 개의 티로시나제-관련 단백질(TRP's)은 TRP-1과 TRP-2로 알려져 있다. 이들 단백질은 티로시나제와 약 40%의 동족관계(homology)를 공유하고 멜라닌 생성에 있어서 조절 역할 뿐만 아니라 촉매 활성을 가진다. TRP-1은 멜라노사이트에 있는 가장 풍부한 글리코프로테인이다.

멜라닌 생성의 화학적 및 효소적 기초가 문서로 잘 정리되어 있음에도 불구하고 세포수준에서의 이것의 조절은 단지 부분적으로만 이해되고 있다. 티로시나제와 TRP 들은 구조적이고 생물학적인 특성을 라이소조말(lysosomal)-결합 막 단백질(LAMP) 유전자 패밀리(gene family)와 공유하고, 그러므로 그들이 멜라노좀 막을 표적으로 하는 것이 그들의 활성을 일으킨다. 이들 단백질의 사이토플라즈믹 말단에서의 포스포릴레이션/ 디포스포릴레이션 반응은 멜라닌 생성의 조절에 포함될 수 있다. 단백질 키나제 C(PKC)패밀리의 베타 동형성(beta isoform)은 티로시나아제 활성을 통해 인간 멜라닌 생성을 조절하는 것으로 보여진다. 티로시나아제, TRP-1 및 TRP-2의 유전자 발현은 통합되어진다(coordinated). 세개의 모든 효소는 인간의 표피에서 발현된다. 케라티노사이트와 같이 배양된 멜라노사이트에서 이들의 전사(transcript)는 각각 45:45:10의 비율로 발현된다. 혼자 배양된 멜라노사이트에서는 단지 TRP-1전사만이 존재하는데, 이것은 케라티노사이트-유도 신호가 이들 유전자의 통합 발현에서 관련되는 것을 나타낸다. 케라티노사이트-멜라노사이트 상호작용의 조절과 케라티노사이트로의 멜라노좀 전이의 메카니즘은 지금까지 알려져 있지 않다.

프로티제 활성 수용체-2(PAR-2)는 7개의 전이막 G-단백질 커플된 수용체이며, 이것은 관련은 있지만, 그것의 서열에 있어 순서에서 트롬빈 수용체들(TR, 또한 PAR-1 및 PAR-3로 이름 붙여진)과 명백히 구별되는 것이다. 양쪽 수용체들은 세포 외영역(extracellular domain)에서 아르기닌-세린 분열에 의해 단백질 가수분해적으로 활성화되어진다. 그런 다음 상기 새로이 생성된 N-말단들(N-termini)은 매어둔 리간드(tethered ligands)로서 이들 수용체들을 활성화시킨다. 양 수용체는 트립신에 의해 활성화될 수 있지만, TR만은 트롬빈에 의해 활성화된다. PAR-2만은 매스트 셀 트립타제에 의해 활성화된다. 양 수용체들은 또한 수용체 분열과 독립적인 그들의 새로운 N-말단들에 대응하는 펩타이드에 의해 활성화되어진다. 쥐의 PAR-2활성 펩타이드인 SLIGRL은 인간 수용체의 활성화에 동일한 성능을 나타낸다. TR의 기능은 잘 문서화되어 있지만 PAR-2의 생물학은 아직 완전히 밝혀지지 않았다. 케라티노사이트 성장 및 분화억제에서 PAR-2활성에 대한 역할이 최근에 설명되었다(Derian et al., "Differential Regulation of Human Kerotinocyte Growth and Differentiation by a Novel Family of Protease-actvate Receptors", Cell Growth ＆ Differentiation, 제8권, 페이지 743-749, 1997년 7월).

본 발명과 관련하여 우리는 포유동물의 피부에 국부적으로 도포하는 PAR-2 경로에 영향을 주는 화합물을 포함하는 포유동물 피부 착색에 변화를 일으키기 위한 방법을 발견했다. 본 발명에 따른 조성물들은 착색을 증가시키기 위해, 트립신으로서, 트립타제로서, 세린 프로테아제로서 또는 PAR-2 활성물질로서 작용하는 하나 이상의 화합물(들)을 포함한다. 대안적으로 상기의 조성물들은 착색을 감소시키기 위해, 또는 탈색을 위해 세린 프로테아제 억제제, 트립신 억제제, 트롬빈 억제제, 트립타제 억제제로서, PAR-2 경로 억제제로서 또는 PAR-2 길항물질로서 작용하는 하나 이상의 화합물(들)을 포함한다.

여기서 사용된 "포유동물(mammal)"은 웹스터 의학 데스크 사전 407(1986)에서 정의된, "포유류(Mammalia)" 강(class)을 포함하는 보다 고도의 척추동물의 임의 구성원을 의미하고, 인간으로 제한되는 것은 아니다. 여기서 사용된 "수용체(receptor)"는 세포내(intracellular) 및 세포외(extracellular) 수용체를 포함하고, 신호를 받고 변환시킬 수 있는 분자들을 의미한다. 용어 PAR-2는 프로테아제-활성 수용체-2를 나타낸다. 상기 프로테아제-활성 수용체-2(이하, "PAR-2")는 케라티노사이트 및 섬유아세포를 포함하는 다수의 조직에서 발현되는 세린-프로테아제 활성 수용체이다. 상기 트롬빈 수용체(또한 PAR-1으로 불리고, 이후에는 "TR")는 케라티노사이트를 포함하는 다수의 조직에서 발현되어지는 세린-프로테아제 활성 수용체이다. 피부에서 PAR-2와 TR의 생물학적인 역할은 완전히 밝혀진 것은 아니다. 그러나, 우리는 PAR-2의 경로를 통한 케라티노사이트와 멜라노사이트의 상호작용이 멜라닌 생성에 영향을 미친다는 것을 발견하였다. 우리는 트롬빈 억제제 및/또는 트립타제 억제제 및/또는 트립신 억제제 및 PAR-2 길항물질들이 피부에 자극없이 탈색제로서 사용될 수 있다는 것을 발견하였다. PAR-2 활성물질과 트립신과 트립타제와 같은 세린 프로테아제는 피부를 어둡게 하는 약품으로 사용될 수 있다. 더 나아가 PAR-2는 희게하거나 어둡게 하는 제제를 위한 타겟으로 유용할 수 있다.

게다가 우리는 보우만-버크(Bowman-Birk)타입 억제제인 BBI가 또한 활성 탈색제로서 사용될 수 있다는 것을 발견하였다. 미국 특허출원계속번호 09/110,409에서 탈색제로서 제안된 콩-유도 추출물과 혼합물은 STI와 BBI 둘다를 포함한다. 우리는 이제 BBI 단독으로 피부탈색에 효과적이라는 것을 발견했다. BBI는 STI와 같은 범위의 농도로 특허출원에 개시되어 있는 모든 제제와 조성물에서 사용될 수 있을 것이다.

제 1도는 아프리카계-미국인(African-American) 공여자의 멜라노사이트를 포함하는 표피의 동등물(epidermal equivalents)을 도시하는 도면. BBI 처리는 착색 없이 동등물의 상부 관찰(top view)에 의해 증명된 바와 같이 이들 동동물에서 색소 침착(pigment deposition)을 줄인다.

제 2도는 아프리카계-미국인 공여자의 멜라노사이트를 포함하는 표피의 동등물을 도시하는 도면. BBI 처리는 이들 동등물의 조직학적 단면의 폰타나-메이슨(Fontana-Mason)염색에 의해 증명된 바와 같이, 이들 동동물에서 색소 침착(pigment deposition)을 감소시킨다.

제 3도는 아프리카계-미국인 공여자의 멜라노사이트를 포함하는 표피의 동등물을 도시하는 도면. BBI 농도를 증가시키면서 한 처리는 이들 동등물의 조직학적 단면의 폰타나-메이슨(Fontana-Mason)염색에 의해 증명된 바와 같이, 투약의존성(dose-dependent fashion)으로 이들 동동물에서 색소 침착(pigment deposition)을 감소시킨다.

제 4도는 BBI 처리 후의 색소 침착의 억제 퍼센트를 정량화한 그래프

제 5도는 BBI와 STI로 처리된 돼지 피부로부터 얻어진 조직학적 단면을 착색한 F＆M을 도시하는 도면. 돼지 피부에서의 멜라닌 침착은 BBI 또는 STI처리 후에 현저하게 감소된다.

제 6도는 제5도에서 설명된 것과 같은 피부 단편에서 색소 침착의 컴퓨터화된 이미지 분석 그래프. 본 그래프는 BBI 또는 STI 처리 후의 돼지 피부에서의 색소 침착의 억제 퍼센트를 정량화 한다.

우리는 트립신, 트립타제 및 PAR-2 활성물질이 착색을 증가시키기 위해 사용될 수 있고, 트립신 억제제, 및/또는 트립타제 억제제, 및/또는 트롬빈 억제제 및 PAR-2 길항물질이 포유동물의 피부에서 착색을 감소시키는 작용을 한다는 것을 발견하였다. 우리의 견해로는 여기에서 참조로 병합되는 미국특허번호 5,523,308에 설명되어 있는 트롬빈 및/또는 트립신 및/또는 트립타제 억제제로 작용하는 일부 화합물이 본 발명의 방법에서 유용할 것이다. 이들 일부 화합물은 또한 코스탄조 등(Costanzo, et al), "S₁자리를 규명하는 유능한 트롬빈 억제제: 헤테로사이클-활성 카르보닐 그룹에 기초한 트리펩타이드 전이 상태 유사물, J. Med. Chem, 1996년, 제 39권 페이지 3039-3043 ( Costanzo, et al, " Potent Thrombin Inhibitors That Probo the S₁Subsite: Tripeptide Transition State Analogues Based on a Heterocycle-Activated Carbonyl Group", J. Med. Chem, 1996, Vol. 39, PP. 3039-3043) 에 설명되어 있고 다음의 구조식을 가지고 있다.

여기서 A는,

C_1-8알킬, 카르복시 C_1-4알킬, C_1-4알콕시카르보닐C_1-4알킬, 페닐C_1-4알킬, 치환된 페닐C_1-4알킬(여기서 상기 페닐 치환체는 C_1-4알킬, 퍼플루오로C_1-4알킬, C_1-4알콕시, 하이드록시, 할로, 아미도, 니트로, 아미노, C_1-4알킬아미노, C_1-4디알킬아미노, 카르복시 또는 C_1-4알콕시카르보닐에서 하나 이상이 독립적으로 선택된다), 포르밀, C_1-4알콕시카르보닐, C_1-2알킬카르보닐, 페닐C_1-4알콕시카르보닐, C_3-7사이클로알킬카르보닐, 페닐카르보닐, 치환된 페닐카르보닐(여기서 상기 페닐 치환체는 C_1-4알킬, 퍼플루오로C_1-4알킬, C_1-4알콕시, 하이드록시, 할로, 아미도, 니트로, 아미노, C_1-4알킬아미노, C_1-4디알킬아미노, 카르복시 또는 C_1-4알콕시카르보닐에서 하나 이상이 독립적으로 선택된다), C_1-4알킬술포닐, C_1-4알콕시술포닐, 퍼플루오로 C_1-4알킬-술포닐, 페닐술포닐, 치환된 페닐술포닐(여기서 페닐 치환체는 C_1-4알킬, 퍼플루오로C_1-4알킬, C_1-4알콕시, 하이드록시, 할로, 아미도, 니트로, 아미노, C_1-4알킬아미노, C_1-4디알킬아미노, 카르복시 또는 C_1-4알콕시카르보닐에서 하나 이상이 독립적으로 선택된다), 10-캄포술포닐, 페닐C_1-4알킬술포닐, 치환된 페닐C_1-4알킬술포닐, C_1-4알킬술피닐, 퍼플루오로C_1-4알킬술피닐, 페닐술피닐, 치환된 페닐술피닐(여기서 상기 페닐 치환체는 C_1-4알킬, 퍼플루오로C_1-4알킬, C_1-4알콕시, 하이드록시, 할로, 아미도, 니트로, 아미노, C_1-4알킬아미노, C_1-4디알킬아미노, 카르복시 또는 C_1-4알콕시카르보닐에서 하나 이상이 독립적으로 선택된다), 페닐C_1-4알킬술피닐, 치환된 페닐C_1-4알킬술피닐, 1-나프틸술포닐, 2-나프틸술포닐 또는 치환된 나프틸술포닐(여기서 상기 나프틸 치환체는 C_1-4알킬, 퍼플루오로C_1-4알킬, C_1-4알콕시, 하이드록시, 할로, 아미도, 니트로, 아미노, 카르복시 또는 C_1-4알콕시카르보닐에서 하나 이상이 독립적으로 선택된다), 1-나프틸술피닐, 2-나프틸술피닐 또는 치환된 나프틸술피닐(여기서 상기 나프틸 치환체는 C_1-4알킬, 퍼플루오로C_1-4알킬, C_1-4알콕시, 하이드록시, 할로, 아미도, 니트로, 아미노, C_1-4알킬아미노, C_1-4디알킬아미노, 카르복시 또는 C_1-4알콕시카르보닐에서 하나 이상이 독립적으로 선택된다)로 구성된 그룹에서 선택되고;

상기 식Ⅰ에 도시된 질소에 그것의 카르복시 말단으로서 연결되는 D 또는 L아미노산은 고 알라닌, 아스파라긴, 2-아제티딘카르복실산, 글리신, N-C_1-8알킬글리신, 프롤린, 1-아미노-1-사이클로C_3-8알킬카르복실산, 티아졸리딘-4-카르복실산, 5,5-디메틸티아졸리딘-4-카르복실산, 옥사돌리딘-4- 카르복실산, 피페콜린산,발린, 메티오닌, 시스테인, 세린, 트레오닌, 노르루이신, 루이신, 터셔리-루이신(tert-leucine), 이소루이신, 페닐알라닌, 1-나프탈라닌, 2-나프탈라민, 2-티에닐알라인, 3-티에닐알라닌,〔1,2,3,4〕-테트라하이드로이소퀴놀린-1-카르복실산및 1,2,3,4〕-테트라하이드로이소퀴놀린-2-카르복실산으로 구성된 그룹으로부터 선택되는데,

여기서 상기 아미노산의 아미노 말단은 C_1-4알킬, 테트라졸-5일-C_1-2알킬, 카르복실C_1-4알킬, C_1-4알콕시카르보닐C_1-4알킬, 페닐C_1-4알킬, 치환된 페닐C_1-4알킬(여기서 상기 페닐 치환체는 C_1-4알킬, 퍼플루오로C_1-4알킬, C_1-4알콕시, 하이드록시, 할로, 아미도, 니트로, 아미노, C_1-4알킬아미노, C_1-4디알킬아미노, 카르복시 또는 C_1-4알콕시카르보닐에서 하나 이상이 독립적으로 선택된다), 1-1-디페닐C_1-4알킬, 3-페닐-2-하이드록시프로피오닐, 2,2-디페닐-1-하이드록시에틸카르보닐, 〔1,2,3,4〕-테트라하이드로이소퀴놀린-1-카르보닐, 〔1,2,3,4〕-테트라하이드로이소퀴놀린-3, 카르보닐, 1-메틸아미노-1-사이클로헥산카르보닐, 1-하이드록시-1-사이클로헥산카르보닐, 1-하이드록시-1-페닐아세틸, 1-사이클로헥실-1-하이드록시아세틸, 3-페닐-2-하이드록시프로피오닐, 3,3-디페닐-2-하이드록시프로피오닐, 3-사이클로헥실-2-하이드록시프로필, 포르밀,

C_1-4알콕시카르보닐, C_1-12알킬카르보닐, 퍼플루오로C_1-4알킬, C_1-4알킬카르보닐, 페닐C_1-4알킬카르보닐, 치환된 페닐C_1-4알킬카르보닐(여기서 상기 페닐 치환체는 C_1-4알킬, 퍼플루오로C_1-4알킬, C_1-4알콕시, 하이드록시, 할로, 아미도, 니트로, 아미노, C_1-4알킬아미노, C_1-4디알킬아미노, 카르복시 또는 C_1-4알콕시카르보닐에서 하나 이상이 독립적으로 선택된다) 1,1-디페닐C_1-4알킬카르보닐, 치환된 1,1-디페닐C_1-4알킬카르보닐(여기서 상기 페닐 치환체는 C_1-4알킬, 퍼플루오로C_1-4알킬, C_1-4알콕시, 하이드록시, 할로, 아미도, 니트로, 아미노, C_1-4알킬아미노, C_1-4디알킬아미노, 카르복시 또는 C_1-4알콕시카르보닐에서 하나 이상이 독립적으로 선택된다), 퍼플루오로C_1-4알킬술포닐, C_1-4알킬술포닐, C_1-4알콕시술포닐, 페닐술포닐, 치환된 페닐술포닐(여기서 상기 페닐 치환체는 C1알킬, 퍼플루오로C_1-4알킬아미노, C_1-4디알킬아미노, 카르복시 또는 C_1-4알콕시카르보닐에서 하나 이상이 독립적으로 선택된다), 10-캄포술포닐, 페닐 C_1-4알킬술포닐, 치환된 페닐 C_1-4알킬술포닐, 퍼플루오로C_1-4알킬술피닐, C_-14알킬술피닐, 페닐술피닐, 치환된 페닐술피닐(여기서 상기 페닐 치환체는 C_1-4알킬, 퍼플루오로C_1-4알킬, C_1-4알콕시, 하이드록시, 할로, 아미도, 니트로, 아미노, C_1-4알킬아미노, C_1-4디알킬아미노, 카르복시 또는 C_1-4알콕시카르보닐에서 하나 이상이 독립적으로 선택된다), 1-나프틸술포닐, 2-나프틸술포닐, 치환된 나프틸술포닐(여기서 상기 나프틸 치환체는 C_1-4알킬, 퍼플루오로C_1-4알킬, C_1-4알콕시, 하이드록시, 할로, 아미도, 니트로, 아미노, C_1-4알킬아미노, C_1-4디알킬아미노, 카르복시 또는 C_1-4알콕시카르보닐에서 하나 이상이 독립적으로 선택된다), 1-나프틸술피닐, 2-나프틸술피닐 및 치환된 나프틸술피닐(여기서 상기 나프틸 치환체는 C_1-4알킬, 퍼플루오로C_1-4알킬, C_1-4알콕시, 하이드록시, 할로, 아미도, 니트로, 아미노, C_1-4알킬아미노, C_1-4디알킬아미노, 카르복시 또는 C_1-4알콕시카르보닐에서 하나 이상이 독립적으로 선택된다)로 구성되는 그룹으로부터 선택된 멤버:

또는 두 개의 아미노산으로 구성된 폴리 펩티드로서 연결되고,

1차 아미노산은 D 또는 L 아미노 산으로, 식Ⅰ에 도시된 질소에 그것의 카르복시 말단을 통해 결합되고, 글리신, N-C_1-8알킬글리신, 알라닌, 2-아제티딘카르복실산, 프롤린, 티아졸리딘-4-카르복실산, 5,5-디메틸티아졸리딘-4-카르복실산, 옥사졸리딘-4-카르복실산, 1-아미노-1-사이클로C_3-8알킬카르복실산, 3-하이드록시프롤린, 4-하이드록시프롤린, 3-(C_1-4알콕시)프로폴린, 4(C_1-4알콕시)프롤린, 3,4-디하이드로프릴린, 2,2-디메틸-1-4-티아졸리딘 카르복실산, 2,2-디메틸-4-옥사돌리딘 카르복실산, 피페콜린산, 발린, 메티오닌, 시스테인, 아스파라긴, 세린, 쓰레오닌, 루이신, 터셔리-루이신, 이소루이신, 페닐알라닌, 1-나프탈라닌, 2-나프탈라닌, 2-티에닐알라닌, 3-티에닐알닌, 〔1,2,3,4〕-테트라하이드로이소퀴놀린-2-카르복실산, 아스파라틴산-4-C_1-4알킬에스테르 및 글루타민산5-C_1-4알킬 에스테르로 구성된 그룹에서 선택되고,

2차 D 또는 L 아미노산은, 상기 1차 아미노산의 아미노 말단에 결합하고, 페닐알라닌, 4-벤조일페닐알라닌, 4-카르복시페닐알라닌, 4-(카르복시 C_1-2알킬)페닐알라닌, 치환된 페닐알라닌(여기서 상기 페닐 치환체는 C_1-4알킬, 퍼플루오로C_1-4알킬, C_1-4알콕시, 하이드록시, 할로, 아미도, 니트로, 아미노, C_1-4알킬아미노, C_1-4디알킬아미노, 카르복시 또는 C_1-4알콕시카르보닐에서 하나 이상이 독립적으로 선택된다), 3-벤조티에닐알라닌, 4-바이페닐알라닌, 호모페닐알라닌, 옥타하이드로인돌-2-카르복실산, 2-피리딜알라닌, 3-피리딜알라닌, 4-티아졸일알라닌, 2-티에닐알라닌, 3-(3-벤조티에닐)알라닌, 3-티에닐알라닌, 트립토판, 티로신, 아스파라긴, 3-트리-C_1-4알킬실릴알라닌, 사이클로헥실글리신, 디페닐글리신, 페닐글리신, 메티오닌 술폭사이드, 메티오닌 술폰, 2,2-디사이클로헥실알라닌, 2-(1-나프틸알라닌), 2-(2-나프틸알라닌), 페닐 치환된 페닐알라닌(여기서 상기 페닐 치환체는 C_1-4알킬, 퍼플루오로C_1-4알킬, C_1-4알콕시, 하이드록시, 할로, 아미도, 니트로, 아미노, C_1-4알킬아미노, C_1-4디알킬아미노, 카르복시 또는 C_1-4알콕시카르보닐에서 하나 이상이 독립적으로 선택된다), 아스파라산, 아스파라산-4C_1-4알킬, 퍼플루오로_1-4알킬, C_1-4알콕시, 하이드록시, 할로, 아미도, 니트로, 아미노, C_1-4알킬아미노, C_1-4디알킬아미노, 카르복시 또는 C_1-4알콕시카르보닐), 아스파라산, 아스파라산-4-C_1-4알킬 에스테르 글루타믹산, 글루타믹산-5-C_1-4알킬 에스테르, 사이클로C_3-8알킬알라닌, 치환된 사이클로 C_3-8알킬알라닌(여기서 상기 원 치환체는 카르복시, C_1-4알킬카르복시, C_1-4알콕시카르보닐 또는 아미노카르보닐이다), 2,2-디페닐알라닌과 그들의 모든 아미노산 유도체의 모든 알파-C_1-5알킬로 구성된 그룹으로부터 선택되며,

여기서 상기 상기 2차 아미노 산의 아마노 말단은 치환되지 않거나 포르밀, C_1-12알킬, 테트라졸-5-일C_1-2알킬, 카르복시C_1-8알킬, 카르보알콕시C_1-4알킬, 페닐C_1-4알킬, 치환된 페닐C_1-4알킬(여기서 상기 페닐 치환체는 C_1-4알킬, 퍼플루오로C_1-4알킬, C_1-4알콕시, 하이드록시, 할로, 아미도, 니트로, 아미노, C_1-4알킬아미노, C_1-4디알킬아미노, 카르복시 또는 C_1-4알콕시카르보닐에서 하나 이상이 독립적으로 선택된다), 1,1-디페닐C_1-4알킬, C_1-6알콕시카르보닐, 페닐C_1-6알콕시카르보닐, C_1-2알킬카르보닐, 퍼플루오로C_1-4알킬C_1-4알킬카르보닐, 페닐C_1-4알킬카르보닐, 치환된 페닐C_1-4알킬카르보닐(여기서 상기 페닐 치환체는 C_1-4알킬, 퍼플루오로C_1-4알킬, C_1-4알콕시, 하이드록시, 할로, 아미도, 니트로, 아미노, C_1-4알킬아미노, C_1-4디알킬아미노, 카르복시 또는 C_1-4알콕시카르보닐에서 하나 이상이 독립적으로 선택된다), 1,1-디페닐C_1-4알킬, 퍼플루오로C_1-4알킬, C_1-4알콕시카르보닐), 10-캄포술포닐, 페닐C_1-4알킬술포닐, 치환된 페닐C_1-4알킬술포닐, C_1-4알킬술피닐, 퍼플루오로C_1-4알킬술피닐, 페닐술피닐, 치환된 페닐술피닐(여기서 상기 페닐 치환체는 C_1-4알킬, 퍼플루오로C_1-4알킬, C_1-4알콕시, 하이드록시, 할로, 아미도, 니트로, 아미노, C_1-4알킬아미노, C_1-4디알킬아미노, 카르복시 또는 C_1-4알콕시카르보닐에서 하나 이상이 독립적으로 선택된다), 페닐C_1-4알킬술피닐, 치환된 페닐C_1-4알킬술피닐 1-나프틸술포닐, 2-나프틸술포닐, 치환된 나프틸술포닐(여기서 상기 나프틸 치환체는 C_1-4알킬, 퍼플루오로C_1-4알킬, C_1-4알콕시, 하이드록시, 할로, 아미도, 니트로, 아미노, C_1-4알킬아미노, C_1-4디알킬아미노, 카르복시 또는 C_1-4알콕시카르보닐에서 하나 이상이 독립적으로 선택된다), 1-나프틸-술피닐, 2-나프틸술피닐과 치환된 나프틸-술피닐(여기서 상기 나프틸 치환체는 C_1-4알킬, 퍼플루오로C_1-4알킬, C_1-4알콕시, 하이드록시, 할로, 아미도, 니트로, 아미노, C_1-4알킬아미노, C_1-4디알킬아미노, 카르복시 또는 C_1-4알콕시카르보닐에서 하나 이상이 독립적으로 선택된다)로 구성된 그룹중 하나의 멤버와 치환된다; R₁은 수소와 알킬로 구성된 그룹에서 선택되며;, R₂는 아미노C_2-5알킬, 구아니디노C_2-5알킬, C_1-4알킬구아니디노C_2-5알킬, 디C_1-4알킬구아니디노C_2-5알킬, 아미디노C_2-5알킬, C_1-4알키라미디노C_2-5알킬, 디C_1-4알키-라미니도C_2-5알킬, C_1-3알콕시C_2-5알킬, 페닐, 치환된 페닐(여기서 상기 치환체는 아미노, 아미디노, 구아니디노, C_1-4알킬아미노, C_1-4디알킬아미노, 할로겐, 퍼플루오로C_1-4알킬, C_1-4알킬, C_1-3알콕시 또는 니트로에서 하나 이상이 독립적으로 선택된다), 벤질, 페닐 치환된 벤질(여기서 상기 치환체는 아미노, 아미디노, 구아니디노, C_1-4알킬아미노, C_1-4디알킬아미노, 할로겐, 퍼플루오로C_1-4알킬, C_1-4알킬, C_1-3알콕시 또는 니트로에서 하나 이상이 독립적으로 선택된다), 하이드록시C_2-5알킬, C_1-5알킬아미노C_2-5알킬, C_1-5디알킬아미노C_2-5알킬, 4-아미노사이클로핵실C_0-2알킬과 C_1-5알킬;

p는 0 또는 1;

B는

여기서 n은 0-3, R₃은 수소 또는 C_1-5알킬이고 B의 카르보닐 일부가 E에 결합된다; E는 옥사졸린-2-일, 옥사졸-2-일, 티아졸-2-일, 티아졸-5-일, 티아졸-4-일, 티아졸린-2-일, 이미다졸-2-일, 4-옥소-2-퀴녹살린-2-일, 2-피리딜, 3-피리딜 벤조[b]티오펜-2-일, 트리아졸-4-일, 트리아졸-6-일, 피라졸-2-일, 4,5,6,7-테트라하이드로벤조티아졸-2-일, 나프토[2,1-d]티아졸-2-일, 나프토[1-2-d]티아졸-2-일, 퀴녹살린-2-일, 이소퀴놀린-1-일, 이소퀴놀린-3-일, 벤조[b]퓨란-2-일, [피라진-2-일, 퀴나졸린-2-일, 이소티아졸-5-일, 이소티아졸-3-일, 퓨린-8-일 및 C_1-4내지 C₁₄알킬, 퍼플루오로 C_1-4알킬, C_1-4알콕시, 하이드록시, 할로, 아미노, 니트로, 아미노, C_1-4알킬아미노, C_1-4디알킬아미노, 카르복시, C_1-4알콕시카르보닐, 하이드록시 또는 페닐 C_1-4알킬아미노카르보닐로부터 선택된 치환체로 치환된 헤테로고리로 구성된 그룹으로부터 선택되는 헤테로고리이고,

또는 약학적으로 수용가능한 이들의 염이다.

우리의 의견에서 보다 구체적으로는, d-페닐알라닌-프롤린-아르기닌 모티프(d-phenylalanine-proline-arginine motif)를 함유하는 상기 식의 일부 화합물들은 PAR-2 경로를 억제하고 탈색(depigmentation)을 일으키는데 효과적이어야 한다. 트롬빈과 트립신 억제제로 작용하고 포유류 피부를 탈색시키는 특히 바람직한 한 가지 구체적인 화합물은 (S)-N-메틸-D-페닐알라닐-N-[4-{(아미노이미노메틸)아미노}-1-(2-벤조티아졸일카르보닐)부틸]-L-프롤린아미드(케미컬 앱스트랙트명)(이하 "화합물 I"로 명명)이다. 화합물 I의 유사체 또는 이와 유사하게 작용하고 미국 특허번호 제 5,523,308호에서 개시된 다른 화합물들은 본 발명의 방법 및 조성물에서 작용할 수 있다.

세린 프로테아제 억제제, 특히 콩 트립신 억제제(STI)와 같이 트립신을 억제하는 다른 화합물은 또한 본 발명의 방법에서 유용할 것이다. 콩, 리마콩과 검은콩 추출물, 및 제한되지는 않지만 두유, 콩 페이스트, 미소(miso)와 동종물질과 같이 콩으로 제조된 다른 천연 제품들은, 또한 이러한 메카니즘에 의해 착색을 감소시키도록 작용한다.

세린 프로테아제 억제제의 부가적인 소스(source)는 다음의 식물과(plant family): 가지과(Solanaceae)[예를 들어, 감자, 토마토, 토마틸라(tomatilla), 및 동종물질], 벼과(Gramineae)(예를 들어, 쌀, 메밀, 사탕수수, 밀, 보리, 귀리 및 동종물질), 박과(Cucurbitaceae)(예를 들어, 오이, 호박, 호리병박, 수세미 및 동종물질), 및 바람직하게는 콩과(Leguminosae)(예를 들어, 콩, 완두콩, 렌즈콩, 땅콩, 및 동종물질)에 속하는 종(species)으로부터 추출될 수 있다.

다음의 이론에 의해 제한되고자 하는 것은 아니지만, 케라티노사이트 PAR-2 또는 이것의 활성 프로테아제와 직간접적으로 상호작용함으로써 피부의 착색에 영향을 미칠 수 있는 화합물들이 작용하고, 이것에 의해 직간접적으로 멜라닌 생성(melanogenesis)에 영향을 미칠 수 있음을 이론화했다. 가능한 한, 본 발명의 화합물들은 피부의 멜라노사이트(melanocyte)에 의해 멜라노솜(melanosome)을 운반하거나 또는 케라티노사이트에 의해 멜라노솜을 받아들이는 신호를 착색이 증가하는 경우에는 유발하고, 착색이 감소하는 경우에는 감소시킨다.

최근, 콩과 식물에서 얻어진 단백질의 다른 그룹인 바우만-버크 억제제("BBI")가 또한 탈색제(depigmenting aent)라는 것을 확인했다.

STI는 우선적으로 트립신 억제 작용을 하는 21 KD의 단백질 이지만, 콩에서 얻어진 BBI는 키모트립신과 트립신을 억제하는 더 작은 8KD의 단백질이다. STI와 달리, BBI는 쿠니즈-타입 영역(Kunitz-type domain)을 갖지 않고, 이것은 세린 프로테아제와 상호작용이 다름을 나타낸다. BBI는 많은 생체내 생체외 모델에서 발암현상(carcinogenesis)을 억제하는 능력이 있는 것으로 알려져 있다. 몇몇 동물 발암 모델에서, BBI는 강한 항염증 효과가 있음이 밝혀졌다. BBI는 열-변성(heat-denaturation)에 STI보다 내성이 있다. BBI를 검토하기 위해서는 케네디 AR, 화학 방부제: 1998년 6월 프로테아제 억제제, Pharmacol Ther 78: 3, 167 - 209를 참조하라.

본 발명의 조성물과 방법에서 작용하는 화합물은, 당업자에게 공지된 어떠한 수단에 의해서도 국소적으로 전달될 수 있다. 국소적으로 작용하는 약학용 또는 화장용 약품의 전달 파라미터가 필요하다면, 본 발명의 국소적으로 작용하는 조성물은 국소 활성제가 피부에 투과될 수 있도록 하는 전달 시스템으로 작용할 수 있는, 약학용 또는 화장용으로 수용가능한 운반체를 더 포함하는 것이 바람직하다.

본 발명의 일부 조성물, 특히 트립신과 STI 같은 단백질을 국소적으로 전달하기 위한 한 가지 수용가능한 운반체는 리포솜을 포함할 수 있다. 리포솜은 비이온성이고, a) 글리세롤 디라우레이트(약 5% 내지 약 70 중량%의 양이 바람직), b) 콜레스테롤에서 발견되는 스테로이드 백본(steroid backbone)을 갖는 화합물(약 5% 내지 약 45 중량%의 양이 바람직), c) 약 12개 내지 약 18개의 탄소 원자를 갖는 하나 이상의 지방산 에스테르(전체적으로 약 5% 내지 약 70 중량%의 양이 바람직)를 포함하는 것이 보다 바람직한데, 여기서 리포솜의 구성 화합물들은 약 37.5: 12.5: 33.3: 16.7의 비가 바람직하다. 글리세롤 디라우레이트/ 콜레스테롤/ 폴리옥시에틸렌-10-스테아릴 에테르/ 폴리옥시에틸렌-9-라우릴 에테르로 구성된 리포솜(GDL 리포솜)이 가장 바람직하다. 리포솜은 조성물 전체 부피를 기준으로 약 10mg/mL 내지 약 100mg/mL의 양으로 존재하는 것이 바람직하고, 보다 바람직하게는 약 20mg/mL 내지 약 50mg/mL의 양으로 존재한다. 약 37.5: 12.5: 33.3: 16.7의 비가 가장 바람직하다. 종래 기술에서 일반적으로 사용되는 다른 방법들이 또한가능하기는 하지만, 적당한 리포솜은 실시예 1에서 개시된 프로토콜(protocol)에 따라 제조되는 것이 바람직하다.

상술된 조성물은 적당한 용기에서 원하는 성분들을 결합하고, 참조에 의해 완전히 병합되는 니에미엑 등의 "펩티드 약물을 모지 단위(pilosebacious unit)에 국소 전달시 비이온성 리포솜 조성물의 영향: 햄스터 귀 모델을 이용한 생체내 연구," 12 Pharm. Res. 1184 - 88 (1995년)("니에미엑")에서 개시되는 것과 같이, 비이온성 리포솜 제조를 위한 기술에 잘 공지되어 있는 종래의 어떠한 높은 전단 혼합 수단에서 대기 조건으로 상기 성분들을 혼합함으로써 제조될 수 있다. 본 발명의 조성물에서 이러한 리포솜이 있으면, 본 발명의 일부 조성물의 탈색 능력을 강화시킬 수 있음이 밝혀졌다.

다른 바람직한 제제는, 예를 들어 콩과 식물 또는 다른 적당한 식물에서 직접 얻어지는 두유 또는 다른 액체 제제를 함유할 수 있다. 예를 들어 이러한 제제는 대부분의 두유, 상기 두유의 물리적인 안정도를 유지시키는 에멀션화제(emulsifier), 및 선택적으로 킬레이팅제, 방부제, 에몰리언트(emollient), 습윤제(humectant) 및/또는 씨크너(thickener) 또는 겔화제(gelling agent)를 포함할 수 있다.

당업자에게 공지된 수중유 에멀션(oil-in-water emulsion), 유중수 에멀션(water-in-oil emulsion), 용매에 기초한 제제와 수성 겔이 또한 본 발명의 조성물을 전달하기 위한 운반체로 사용될 수 있다.

일반적으로 제제화(formulated)될 활성 화합물의 소스는 화합물의 구체적인 제형에 따를 것이다. 작은 유기 분자와 펩티딜 조각(peptidyl fragment)은 화학적으로 합성되고 약학적/화장용 용도에 적합한 순수한 제형으로 제공될 수 있다. 천연 추출 생성물은 공지된 기술에 따라 정제될 수 있다. 화합물의 제조합형 소스(recombinant source)는 또한 일반적인 당업자에게 가능하다.

다른 실시예에서, 국소 작용하는 약학 또는 화장용 조성물은 보습제(moisturizer), 화장용 보조제(cosmetic adjuvant), 항산화제, 표백제, 티로시나제 억제제 및 다른 공지된 탈색제, 계면활성제, 거품제(foaming agent), 컨디셔너(conditioner), 습윤제(humectant), 방향제(fragrance), 점성제(viscosifier), 완충제, 방부제, 태양광선 차단제(sunscreen) 및 그 유사물과 같은 다른 성분들과 선택적으로 혼합될 수 있다. 본 발명의 조성물은, 예를 들어 트레티노인, 레티놀, 트레티노인 및/또는 레티놀의 에스테르와 동종물질을 포함하는 레티노이드(즉, 레티노이드 수용체 족의 어떠한 성분과도 결합하는 화합물) 활성량을 또한 포함할 수 있다.

국소 작용하는 약학 또는 화장용 조성물은 포유 동물 피부의 착색을 변화시키는데 영향을 미치는 유효량으로 도포되어야 한다. 여기서 사용되는 "유효량"이라는 것은 착색의 변화가 요구되는 피부 표면 영역을 덮을 만큼 충분한 양을 의미할 것이다. 바람직하게 조성물은 착색 변화가 요구될 때, 피부 표면 평방 cm를 기준으로 약 2μl/cm²내지 200μl/cm²의 국소 활성제가 존재하도록 피부 표면에 자유롭게 도포된다. 화합물 I 또는 이것의 유사체와 같은 트롬빈 및 트립신 억제제를 사용할 때, 제제가 합성으로 얻어지거나 또는 천연적으로 얻어지는 것에 관계없이 이러한 활성 화합물은 본 조성물의 중량/부피 당 약 0.0001% 내지 15%의 양으로 존재해야만 한다. 보다 특별하게, 조성물의 약 0.0005% 내지 약 5%의 양으로 존재해야 한다. 가장 바람직하게, 조성물의 약 0.001 내지 약 1%의 양으로 존재해야 한다. 물론, 이러한 범위는 상기 성분들에 대해 제안되는 것이다. 낮은 범위 부분은, 높은 치료 지수(high therapeutic indices)를 갖지만 본 발명의 방법에서 효율적이기 위해 상당히 큰 농도 또는 투여량을 필요로 하지 않는 PAR-2 경로 작용물질(agonist)/길항물질(antagonist) 및/또는 억제제에 효능이 있고자 한 것이다.

식물 또는 식물에서 채취한 소스(botanical source)에서 직접 제조된 액체 유도체(liquid derivatives)와 천연 추출물은, 약 1 내지 약 99%의 농도(w/v)로 본 발명의 조성물에서 사용될 수 있다. STI와 같은 천연 추출물과 자연적으로 얻어진 프로테아제 억제제의 부분(fraction)은, 본 조성물의 약 0.01% 내지 약 20%, 보다 바람직하게 약 1% 내지 약 10%의 상이하게 바람직한 범위를 가질 수 있다. 물론, 본 발명의 활성제의 혼합물은 동일한 제제, 또는 다른 제제의 일련의 응용으로 결합되고 같이 사용될 수 있다.

PAR-2 활성물질 및/또는 억제제와 트립신 및/또는 트롬빈 및/또는 트립타제 및/또는 이것의 억제제와 같은 국소 활성제가 동물의 피부에 국소적으로 도포되면, 착색에서 상당한 변화가 있다는 것을 예상치 못하게 발견했다. 바람직하게, 탈색제(뿐만 아니라 본 발명의 다른 착색에 영향을 미치는 약품)는 상대적으로 높은 농도와 투여량(화합물 I 및 관련 화합물과 같이 높은 치료 지수를 갖는 화합물에 대해 약 0.005% 내지 약 1%, 액체 유도체와 식물에서 채취한 물질의 추출물에 대해 약 20% 내지 약 99%, STI 또는 이것의 혼합물과 같은 천연 추출물 및 자연적으로 얻어진 프로테아제 억제제 부분에 대해 약 1% 내지 약 20%)으로 하루에 한 번 내지 두 번 일정 기간 동안 피부가 착색의 변화를 분명히 나타낼 때까지 포유 동물의 피부에 도포된다. 이것은 약 4주 내지 약 10주 또는 그 이상이 될 수 있다. 이 후에, 일단 착색의 변화가 있으면, 활성 성분의 더 낮은 농도와 투여량(화합물 I 및 관련 화합물과 같이 높은 치료 지수를 갖는 화합물에 대해 약 0.00001% 내지 약 0.005%, 액체 유도체와 식물에서 채취한 물질의 추출물에 대해 약 10% 내지 약 90%, STI 또는 이것의 혼합물과 같은 천연 추출물 및 자연적으로 얻어진 프로테아제 억제제 부분에 대해 약 0.01% 내지 약 5%)은 덜 빈번하게, 예를 들어 하루에 한 번 내지 일주일에 약 2번 도포될 수 있다. 본 발명의 활성제의 효과는 가역적이고, 따라서 이러한 효과를 유지하기 위해서는 계속적인 도포 또는 투여가 이루어져야 한다. 여기서 예시적으로 개시된 본 발명은, 특정하게 개시된 구성성분, 성분, 또는 단계가 없이도 적절하게 행해질 수 있다.

여기서 예시적으로 개시된 본 발명은, 특정하게 개시된 구성성분, 성분, 또는 단계가 없이도 적절하게 행해질 수 있다. 여러 실시예들은 본 발명의 특징과 이것을 실행하는 방법을 추가적으로 예시하기 위해 하기에 개시되었지만, 본 발명의 방법과 조성물의 범위를 제한하기 위한 것은 아니다.

실시예 1: BBI의 착색에 대한 영향

착색에서 BBI의 가능한 역할을 연구하기 위해, 멜라노사이트를 함유하는 생체외 표피 동등물 시스템(epidermal equivalent system)이 사용되었다. 이 연구에서 사용되는 표피 동등물 시스템은 멜라노덤 멜-300 시스템으로, 메사추세스 애쉬랜드의 매트텍사에서 구입가능하다. 이 시스템은 보통의 사람에게서 얻어진 표피 케라티노사이트와 함께 아프리카계 미국인(african-american)의 포피(foreskin)에서 얻어진 인간의 정상적인 멜라노사이트를 포함한다. 이러한 세포는 배양되어서 다중층으로 매우 분화된 인간 표피 모델을 형성한다. 다음의 실시예에서, 동등물(equivalent)은 3일간 BBI(0.1%)로 처리되고, 샘플은 처리후 4일째 얻어졌다. 얻어진 동등물은 우선 염색하지 않고 색이 비교되고, 다음에 폰타나-메이슨(F＆M) 염색으로 조직 검사를 하는데, 이 염색은 당업자에게 공지되어 있다. F＆M 염색은 은색 염색 기술로, 높은 은 질산염(silver nitrate) 환원 작용을 갖는 멜라닌을 분명하고 깨끗하게 나타낸다. 염색된 부분의 이미지는 또한 이미지 분석으로 얻어졌다. 동등물 당 적어도 3개 부분, 실험 당 3개의 동등물이 분석되었다. 이미지를 얻기 위해 게이트웨이 2000 P5-100 컴퓨터(메릴랜드 실버 스프링의 미디어 사이버네틱스) 상에서 엠파이어 이미지 데이터베이스 1.1이 사용되었다. 이미지 분석을 위해 이미지 프로 플러스 버전 3.0이 사용되었다. 측정된 파라미터는 멜라노사이트내 은 침착(silver deposition)의 표면적과 각 픽셀(pixel)의 밀도 발광(density luminosity)이였다. "착색 인자"는, 은 침착의 표면적을 전체 표피 표면적으로 나눈 것으로 정의되었다. 하나의 값(100%)이 처리되지 않은 대조구로 지정되고, 처리 그룹 값은 이들의 관련 대조구로 표준화되었다.

도 1에 도시되는 바와 같이, 처리되지 않은 멜-300 동등물은 염색하지 않으면 뚜렷하게 어둡다. BBI 처리된 동등물은 이러한 대조구보다 밝은데, 이것은 시각적으로 착색을 감소시키는 BBI의 특성을 나타낸다. 도 2는 F＆M 염색에 이은 이러한 동등물의 조직 부분을 나타낸다. 이 도면에서, 검은 영역은 멜라노사이트와 케라티노사이트 모두에서 멜라닌 침착을 나타낸다. 도 2에 도시되는 바와 같이, BBI 처리는 멜라노사이트와 처리된 동등물의 케라티노사이트 모두에서 감소된 멜라닌 침착을 유발한다. 이미지 분석에 의하면, BBI 처리된 동등물은 대조구에 비해 50.6%만의 멜라닌 침착을 갖는다.

실시예 2: BBI 탈색 효과의 투여량-반응성

실시예 1에서 설명된 것과 같이 멜라노사이트를 함유하는 표피 동등물은, 0.001% 내지 0.1%로 증가하는 BBI 농도로 처리되었다. 실시예 1에서 설명된 동일한 실험 방법에 이어, BBI 탈색 효과는 투여량-반응성인 것으로 밝혀졌다. 도 3은 처리된 동등물의 F＆M 염색된 부분을 나타내는 것으로, 투여량-반응성과 0.001% 정도로 낮은 BBI의 탈색 효과를 증명한다. 도 4에 도시된 컴퓨터에 의한 이미지 분석은, 이러한 효과를 정량하고 이것의 투여량-반응성 특징을 추가로 증명한다.

실시예 3: BBI 탈색 효과의 생체내 증명

유카탄 돼지의 거무스름한 피부 미세 조각(A dark skin Yucatan microswine)은 20/mg/ml 리포솜과 함께 PBS에서 1%의 BBI 또는 STI로 처리되었다. 참조에 의해 완전히 병합되는 니에미엑 등의 "펩티드 약물을 모지 단위(pilosebacious unit)에 국소 전달시 비이온성 리포솜 조성물의 영향: 햄스터 귀 모델을 이용한 생체내 연구," 12 Pharm. Res. 1184 - 88 (1995년)("니에미엑")에서 개시되는 것과 같은 비이온성 리포솜 제조는, 상기 기술에 잘 공지되어 있고, JBP-430에 기술되어 있다. 본 발명의 조성물에서 이러한 리포솜이 있으면, 본 발명 일부 조성물의 탈색 능력을 강화시킬 수 있음이 밝혀졌다. GDL 리포솜은 다음의 변화를 제외하고는 니에미엑 등에서 개시된 것과 같이 제조되었다: 37.5: 12.5: 33.3: 16.7의 비로 존재하는 글리세롤 디라우레이트(에멀신트 GDL, ISP 반 다이크)/ 콜레스테롤(크로다)/ 폴리옥시에틸렌-10-스테아릴 에테르(브리즈 76, ICI)/ 폴리옥시에틸렌-9-라우릴에테르가 함유되는 비이온성 리포솜 제제. 헤페스(Hepes) 완충액(0.05M, pH 7.4)(메릴랜드, 게이써버그의 깁코-BRL)은 리포솜의 제조시 수상(aqueous phase)으로 사용되었다.

BBI, STI 및 리포솜 운반체 제조물은, 8주 동안 1주일에 5일을 하루에 2번 돼지 옆구리의 2부분에 각각 도포되었다. 8주 처리후에, BBI 또는 STI의 도포는 눈에 보이는 경감 효과를 나타내었다. 처리 및 처리되지 않은 부분으로부터 F＆M 염색된 피부 영역을 조직 분석한 것은 이러한 관찰을 확인시켜 주었다. 도 5는 처리된 돼지의 F＆M 염색된 피부 영역을 도시하는 것으로, BBI 또는 STI로 처리된 자리에서 착색 침착의 상당한 감소가 있음을 증명한다. 도 6에 도시된 컴퓨터에 의한 이미지 분석은 이러한 효과를 정량하고, BBI의 탈색 효과를 추가로 증명한다.

본 발명의 본질을 설명하기 위해 기술되고 예시된 여러 가지 상세한 변화, 구성 성분, 단계, 및 상기 구성 성분과 단계의 배열들은, 다음의 청구항에서 기술되는 바와 같이 본 발명의 원리와 범위를 벗어나지 않으면서 당업자에 의해 실행될 수 있다는 것이 당업자에 의해 이해될 것이다.

Claims

보우만-버크 억제제(Bowman-Birk Inhibitor) 또는 이것을 함유하는 천연 추출물의 착색에 변화를 일으키는 유효량(a pigmentation-changing effective amount)을 포유동물에게 투여하는 것을 포함하는, 포유 동물의 피부 착색(mammalian skin pigmentation)에 변화를 일으키는 방법.
보우만-버크 억제제 또는 이것을 함유하는 천연 추출물의 착색을 경감시키는 유효량(a pigmentation-lightening effective amount)을 포유동물에게 투여하는 것을 포함하는, 포유 동물의 피부 착색을 탈색시키는 방법.
제 2항에 있어서, 상기 보우만-버크 억제제는 콩과(Leguminosae), 가지과(Solanaceae), 벼과(Gramineae), 및 박과(Cucurbitaceae)중 하나 이상에서 얻어지는, 포유 동물의 피부 착색을 탈색시키는 방법.
제 3항에 있어서, 상기 화합물은 콩과 식물(legumes)에서 얻어지는, 포유 동물의 피부 착색을 탈색시키는 방법.
제 4항에 있어서, 상기 화합물은 변성되지 않은 콩 추출물(undenatured soybean extract)에서 얻어지는, 포유 동물의 피부 착색을 탈색시키는 방법.
제 5항에 있어서, 상기 화합물은 변성되지 않은 콩 추출물의 일부분(fraction)에서 얻어지는, 포유 동물의 피부 착색을 탈색시키는 방법.
보우만-버크 억제제 또는 이것을 함유하는 천연 추출물의 착색에 변화를 일으키는 유효량을 포함하는, 포유 동물의 피부 착색 변화에 영향을 미치는 조성물.
보우만-버크 억제제 또는 이것을 함유하는 천연 추출물의 착색을 경감시키는 유효량을 포유동물에게 투여하는 것을 포함하는, 포유 동물의 피부 착색을 탈색시키는 조성물.
제 8항에 있어서, 상기 보우만-버크 억제제는 콩과, 가지과, 벼과, 및 박과중 하나 이상에서 얻어지는, 포유 동물의 피부 착색을 탈색시키는 조성물.
제 9항에 있어서, 상기 화합물은 변성되지 않은 콩 추출물에서 얻어지는, 포유 동물의 피부 착색을 탈색시키는 조성물.