KR20010037770A - 황소 개구리 건강 보조 식품 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 Rana Catesbeiana가 영양이 다른 육류에 비해 떨어지지 않으면서도 열량과 지방이 일반적인 육류 가운데 가장 낮은 성질을 지니고 있다. 이 Rana Catesbeiana를 주성분으로 사용하여 여기에 각종 생약재료를 첨가하여 인체의 건강 증진을 목적으로 만들어진 제품입니다.
이 제품은 단백질이 풍부하면서도 지방의 함유량이 적으며 각종 필수 아미노산을 비록하여 Ca, K, P, Mg 등의 무기질이 풍부하며, 그 외 첨가되는 생약 성분들은 여러 가지 기능성 물질을 함유하고 있어, 다이어트, 피부미용, 고혈압, 당뇨, 허약체질, 산후처리, 남성의 양기부족, 식욕부진, 신장염, 폐병등에 효과가 있어서 기능성 식품으로서 손색이 없으면서도 식품으로서의 안전성도 갖추고 있다. 또한 丸으로 만들어 섭취가 용이한 것이 특징이다.
Description
황소 개구리 건강 보조 식품으로서 생약 재료로는 대두.율무.황소개구리 건조분 . 황소 개구리 쓸개 건생강 삽주뿌리 사상자 복분자 원지 사인 숙지황 등
1. 하마담의 성분 분석
1) 지방산 분석
가) 지방산 추출
① 시료 1g을 정확히 측량하여 CHCl310ml와 MeOH 20ml을 가하고 1분 동안 교반하였다.
② 10ml의 CHCl3를 더 가하여 30초동안 교반한다.
③ 10ml의 증류수를 넣고 30초 동안 교반하였다(고체상태의 하마담이 모두 용매에 녹아 액체상태로 존재)
④ Whatman No.1 여과지로 여과하고 여액에 10ml의 CHCl3를 가하여 씻어냈다.
⑤ 분액여두에 넣고 2시간 동안 분리시켰다.
⑥ 지방을 함유한 CHCl3(아래)층을 회수했다.
⑦ 회수한 CHCl3층을 회전 진공농축기로 40℃에서 농축시켰다.
⑧ 0.01% BHT(w/v)를 함유한 핵산 3ml에 녹였다.
나) Methyl ester preparation
① 추출된 시료에 0.3ml의 benzen을 가하고 BF3-Methanol(14%) 2ml를 가한 다음 test tube에 넣고 cap을 잘 막은 다음 parafilm으로 밀봉하여 100℃ 항온수조에서 30분 동안 가열하였다.
② 3ml의 핵산과 1ml의 H2O를 첨가하여 잘 혼합한 후 30분 동안 방치하여 층을 분리한다. 층을 분리되면 위층을 취하여 무수 Na2SO4로 탈수시켰다.
③ Methylation된 시료를 유리병에 담아 질소가스로 충진한 후 밀봉하여 분석할 때까지 -20℃에서 저장했다.
④ 저장된 시료를 GC로 분석하였다.
2) 담즙산 분석
① 시료 0.5g을 정확히 칭량하여 round flask에 넣고 Me-OH 100ml을 가하여 환류 추출했다. 항온 수조의 온도는 70℃로 하였고 기 추출을 3회 실시하였다.
② 추출액을 Whatman No.2 filter paper로 여과한 후 진공농축기로 40℃에서 농축하였다.
③ 시료중의 지방을 제거하기 위해 농축액을 round flask로 옮기고 석유 에테르 50ml를 가하여 환류추출을 하였다. 기 추출을 3회 실시하였다.
④ 에테르 층을 버리고 남은 엑기스에 2.5N NaOH 약 15ml을 첨가하고 121℃ Oil bath에서 4시간 가수분해하였다.
⑤ Whatman No.2 여과지로 여과한 후 묽은 염산을 이용해 pH를 1로 조절한 후 물로 포화시킨 ethyl acetate 50ml로 3회 추출하여 추출액을 진공 농축기로 완전히 농축하고 MeOH 5ml에 용해시켜 HPLC에 injection하였다.
＜HPLC 조건)
ㆍ column : μbondapak C18
ㆍ 이동상 : Acetonitril : H2O : Acetic acid = 500 : 495 : 5
ㆍ 유속 : 1.2ml/min
ㆍ injection volume : 20μl
ㆍ detector : RI 8X
제2세부 : 하마담(황소개구리 쓸개)이 소화기계에 미치는 영향
1. 재료 및 방법
체중이 300-400g 사이의 황소개구리 성체에서 담낭을 얻어 주사기를 이용하여 담즙액 (하마담)을 뽑아 60℃ 건조기에서 건조하여 시료로 사용하였다.
시료를 약침액의 원료로 쓰여지기 위해 메탄올 추출법을 사용하였다. 시료는 우황과 하마담을 각 비율대로 나누어 담았다. 각 시료를 용기에 담고 여기에 메탄을 50ml를 넣었다. 24시간 동안 2∼8℃에서 incubation시켜 침전물을 여별하고 상층부의 것을 채취한 후 고속원심분리기 (Centrikon T-42K, Kontron, Italy)에서 5,000 rpm으로 10분간 원심분리하여 침전된 잔사를 재차 여별했다. 또한 nuclepore filter paper (0.45 u)를 사용하여 여과하며 rotary evaporator (Buchi, Nethelands)를 사용하여 충분히 농축하여 시료내의 메탄올 성분이 증발되게 했다. 이를 동결 건조기 (Eyela, Japan)로 동결건조하여 시료로 사용하였다.
실험에서 사용한 쥐들은 모두 수컷을 이용하였으며 마취는 pentobarbital sodium (50mg/kg, i.p. injection)으로 초기마취를 유도한 후 실험대에 동물을 고정한 후 대퇴부 내측의 고정맥 (femoral vein)을 노출시켜 약물 주입용 cannula (PE-50)를 위치시켰으며 기도폐쇄를 방지하기 위해 기관절개를 시행한 후 카테터를 삽입하였다. 마취의 유지는 항속주입기인 syringe pump(WPI, USA)를 사용하여 마취제가 전 실험시간 동안 계속 주입되어 일정한 마취상태를 유지하도록 하였다.
위 운동을 측정하기 위하여 복강을 절개한 후 십이지장 부분을 절개하여 카테타 (12F, 삼원)를 넣었다. 카테타에 물을 주입하고 이를 압력변환기(blood pressure transducer, Harvard apparatus)에 연결하였으며 polygraph(Universal, Harvard apparatus)에 의하여 기록하였다.
제3세부과제 : 하마고(황소개구리 액기스)의 항암효과
1) 재료 및 방법
(1) 약재
황소개구리 10마리를 이용하여 전탕액을 만들었다. 그리고 연구분야 2항의 방법과 같은 동결건조의 방법을 이용하여 powder를 만들어 약제로 사용하였다.
(2) 동물
본 실험에 사용한 mouse는 대한실험동물에서 구입한 BALB/c계 22±1(g) 수컷을 온도 20±3(℃), 습도 55±5(%), light/dark 12(hr)의 사육조건에서 1주일 이상 적응시키면서 고형 pellet 사료와 물을 자유로이 섭취케 하였다.
(3) 세포주 및 세포 배양조건
자궁안세포주인 HeLa, 간암세포주인 Hep-G2, 유방암세포주인 MCF-7, 난소암세포주인 SK-OV3, 마우스 3T3 세포주는 DMEM 배지를, 급성백혈병 세포주인 L1210, 만성골수성백혈병세포주인 K562, 마우스 흉선 및 비장세포는 RPMI 1640 배지를 사용하였으며, 배지에는 10% FBS와 penicillin-streptomycin(100units/ml, 100㎍/μl)을 첨가하여 사용하였다. 계대배양은 1:10∼1:20 비율로 3일 간격으로 하였고, 세포 증식에 미치는 약재의 영향을 관찰하기 위한 실험은 계대배양 2일째의 세포를 사용하였다.
(4) MTT법에 의한 세포 증식률 변화
본 실험에 사용한 MTT법은 Mosmann이 개발하여 Kotnik등이 변형시킨 방법으로, 96-well plate의 각 well에 세포 부유액 100μl(2×105cells/ml)를 접종하여 37℃의 CO2incubator에서 24시간 배양한 후 농도별로 희석된 하마고(황소개구리 전탕액) 100μl를 넣고 37℃의 CO2incubator에서 48시간 배양하였다. 배양 종료 4시간 전에 5㎎/ml 농도로 DPBS-A에 희석된 MTT용액 20μl를 각 well에 첨가하고 배양 종료시까지 은박지로 빛을 차단하였다. 부착세포의 경우는 배양 종료시 배양액을 제거한 후 생성된 formazan crystal을 DMSO 100μl로 용출시킨 다음 발색된 well의 흡광도를 Microplate Reader를 이용하여 570nm에서 측정하였고, 부유세포의 경우는 배양 종료시 0.01N HCl에 용해시킨 10% SDS 100μl를 각 well에 첨가하고 자광상태에서 18시간 더 배양한 후 발색된 각 well의 흡광도를 Microplate-Reader로 570nm에서 측정하여 대조군의 흡광도와 비교하여 세포증식율을 백분율로 환산하였다.
(5) 마우스 흉선 및 비장세포의 분리
마우스의 흉선 및 비장세포 분리는 Wysocki 및 Mizel등의 방법을 이용하였다. Balb/c 마우스를 경추탈골하여 도살시킨 후 적출한 흉선 비장을 DPBS-A를 넣은 petri dish에서 잘게 분쇄하고 stainless mesh로 여과하여 2회 세척한 다음 10ml 주사기로 조심스럽게 세포부유액을 취하여 1500rpm에서 5분간 원심분리하였다. 얻어진 세포를 DPBS-A에 재부유시켜 3회 세척한 후 흉선 및 비장세포를 분리하였으며, 분리한 흉선 및 비장세포의 생존율 및 총 세포수를 hemocytometer를 이용하여 측정하였다.
(6) 흉선 및 비장세포의 증식율 변화
흉선 비장세포 부유액을 RRMI 1640 배지로 희석하고 96-well plate 1.0×106cells/ml 농도로 접종하여 흉선세포에는 Concanavalin A 5㎍/ml과, 비장세포에는 Lipopolysaccharide 5㎍/ml와 함께 하마고(황소개구리 전탕액)를 첨가한 후 37℃의 CO2incubator에서 48시간 배양한 다음 배양 종료 4시간 전에 MTT시약을 가하였다. 배양 종료시 0.01N HCl에 용해시킨 10% SDS 100μl를 각 well에 첨가하고 차광상태에서 18시간 더 배양한 후 발색된 각 well의 흡광도를 Microplate-Reader로 570nm에서 측정하여 대조군의 흡광도에 대한 실험군의 흡광도를 백분율로 환산하여 계산하였다.
(7) 마우스 복강 macrophage의 분리 및 nitric oxide 생성에 미치는 영향
3% thioglycollate 2ml를 복강에 투여한 다음 3일후에 마우스를 경추탈골하여 도살시킨 다음 복강에 cold PBS 10ml를 주입한 후 복강세포를 수집하였다. 수집한 세포를 4℃에서 1,50Orpm으로 5분간 원심분리하고 RPMI 1640배지로 2회 세척한 후 직경 120mm petri dish에 분주하여 CO2-incubator에서 배양시키고 4시간후에 부착되지 않은 세포를 제거한 다음 부착한 macrophage를 cell scraper로 분리하여 24 well plate에 well당 1×106 cells을 분주한 후 각 well에 농도별로 하마고(황소개구리 전탕액)와 함께 LPS 1㎍/ml와ㅓ γ-IFN 25units/ml를 첨가하지 않은 군과 첨가한 군으로 분류하여, 37℃ CO2-incubator에서 24시간 배양한 후 생성된 nitric oxide (NO)양을 Griess법으로 측정하였다.
배지 100μl와 Griess reagent(1% sulfanilamide+0.2% N-naphthylethylenediamine 2HCI+2.5% H3PO4) 100μl를 혼합하여 96 well plate에 넣고 570nm에서 microplate-reader로 흡광도를 측정하여 미리 작성한 NaNO2의 검량선에 의해 NO양을 측정하였다.
2. 결과 및 고찰
황소 개구리는 개구리목 개구리과에 속하는 양서류로서 식용으로 국.내외에서 사용되고 있는 개구리다.
최근에는 라나 카테스바아아나가 다른 영양이 육류에 비해 떨어지지 않으면서도 열량과 지방이 일반적인 육류 가운데 가장 낮아 식품으로서의 가치가 더욱 부각되고 있다.
이 라나 카테스바이아나를 주성분으로 사용하여 여기에 각종 생약재료를 첨가하여 인체의 건강을 증진시킬 목적으로 제품을 만들어 현재 상품화에 성공했다. 이 제품은 인체에 유해한 성분이 없고 필수아미노산, 칼슘, 무기질등이 풍부한 고단백ㆍ저칼로리 식품으로 환으로 만들어 섭취가 용이한 것이 특징이다.
최근에 문제시 되는 황소 개구리를 이용한 건강 식품이다.
라나 카테스바이아나(건조물) 30%
생약성분 : 대두 20%, 율무 20%, 건생강 5%, 삽주뿌리 4%, 사상자 4%, 복분자 2%, 원지 1%, 사인 1%, 숙지황 1%
라나 카테스바이아나는 단백질이 풍부하면소도 지방의 함유량이 적으며, 각종 필수 아니노산을 비롯하여 칼슘, 칼륨, 인, 마그네슘 등의 무기질이 풍부하며, 그외 첨가되는 생약성분들은 여러 가지 기능성 물질을 함유하고 있어, 건강보조식품은 기능성 식품으로 손색이 없다.
(1) 탄수화물
탄수화물은 대부분 에너지원으로 사용되며, 1g당 4cal의 열량을 발생하며, 사용하고 남은 것은 간, 근육에 저장되거나 피하지방이 되어 필요한 때 다시 에너지원으로 사용된다. 율무의 경우 그 탄수화물 함량이 50~78%로 높다.
(2) 단백질
단백질은 뼈, 근육, 피, 살이 되어 사람의 몸을 구성한다.
단백질이 소화되면 아미노산으로 분해되어 에너지워능로 사용되며, 1g당 4cal의 열량이 발생한다.
아미노산 중에는 몸에서 만들 수 없는 8가지 아미노산이 있는데 이것을 필수 아미노산이라고 하며 필수 아미노산을 반드시 음식물에서 섭취해야 한다.
현재, 라나 카테스바이아나에 함유되어 있는 조단백질의 함량은 66.81%로 나타나며, 여기서 확인되는 아미노산의 종류로는 Cystne, Methionine, Asparic acid, Threonne, Serine, Glutamic acid, Glycine, Alanine, Valine, ISO-Leucine, Leucine, Tyrosine, phenylalanine, Lysine, Histidine, Arginine, Proline 이 있다.
그리고, 대두에서 얻어지는 단백질은 최근 새로운 기능성 물질로서 여러 연구가 발표되고 있고, 상품화에도 성공했다.
(3) 지방
지방은 에너지원으로 대부분 사용되며, 1g당 9cal의 열량을 발생하며, 피하지방으로 저장된다.
라나 카테스바이아나에는 4.30%의 조지방이 함유되어 있어, 일반 육류와 비교해 볼 때 단백질 함량은 풍부한데 비해, 지방의 그 함량이 적다.
(4) 칼슘
칼슘은 뼈와 치아를 튼튼하게 하며, 알칼리의 평형유지, 신경, 근육, 관절기능 조절, 알레르기 체질개선, 정신안정작용, 심장근육수축, 모세혈관수축 작용을 한다. 라나 카테스바이아나에는 8.57%의 Ca이 함유되어있다.
(5) 칼륨
칼륨은 산, 알칼리의 체내 평형유지에 관여하며, 근육, 신장기능을 조절하고, 호르몬 분비를 촉진하고, 신경기능 정상화, 혈압을 내려주며, 뇌에 산소를 공급해주고 노폐물을 제거한다.
라나 카테스바이아나에는 4.06%의 K이 함유되어잇다.
(6) 인
인은 뼈, 치아를 만드며, 신경기능의 정상화에 관여한다.
라나 카테스바이아나에는 3%의 P이 함유되어있다.
(7) 마그네슘
마그네슘은 심장근육이완, 모세혈관이완, 정신신경을 안정시키며, 산, 알칼리의 평형을 유지시킨다.
라나 카테스바이아나에는 0.13%의 Mg이 함유되어있다.
(8) 제니스타인
콩에는 daidzein, genistein이라는 이소플라본이 함유되어 있는데, 이들 이소플라본은 식품에서는 유일하게 콩에만 존재하는 물질로서 체내에서 여러 가지 기능을 수행한다.
특히 제니스타인은 체내 여성 호르몬인 에스트로젠과 동일한 작용을 하기 때문에 phytoestrogen(식물성 에스트로젠)이라고 불리기도 한다.
주요 기능성은 항암 작용으로 특히 유방암, 전립선암의 예방에 밀접한 관련있는 것으로 알려지고 있다. 또한 체내에서 에스트로젠과 동일한 기능을 수행하기 때문에 골다공증을 예방할 수 있는 것이다. 다른 한 분야는 혈중 콜레스테롤 저하 작용을 들 수 있다.
콩에는 약 0.1% 내외 함유되어 있다.
(9) 사포닌
인삼의 대표적인 약리성분인 사포닌은 콩에도 성분의 차이는 있지만 풍부하게 함유되어 있다. 사포닌은 물과 친한 친수성기와 기름과 친한 소수성기를 모두 가지고 있는 양친성 분자이므로 비누처럼 유화작용을하여 거품을 형성할 수 있다.
주요 기능성으로는 콜레스테롤 저하작용, 면역증강작용 및 항암 작용이 보고되고 있다.
(10) 트립신인히비터
날콩에는 typsin inhibitor(트립신 저해제)가 함유되어 있는데, 이는 단백질을 분해하는 효소인 trypsin의 작용을 저해하는 장내 효소이다. 이 트립신 저해제 역시 일종의 단백질이기 때문에 가열처리를 하면 활성을 잃게 된다.
콩에는 쿠니츠형과 보우만-버크형의 두가지 트립신 저해제가 있는데 이중 후자가 항암작용을 하는 것으로 밝혀져 의약품으로의 개발이 시도되고 있다.
하바드대학의 케네디박사팀에서 이 저해제의 항암효과에 대해 특히 많은 연구를 수행하고 있는 데, 대장, 구강, 간, 식도에 유발된 암을 저해하거나 예방하는 것을 확인하였다.
(11) 올리고당
콩에 함유되어 있는 라피노스( rffinose), 스타키오스 (stachyose)라고하는 올리고당은 인체의 소화효소에 의해서는 분해되지 않기 때문에 소화되지 않고 대장까지 도달한다. 따라서 열량이 없는 저칼로리 감미료의 일종으로 감미도는 설탕의 절반 정도이나, 감미질이 뛰어나고 고급스럽다. 대장에까지 도달한 올리고당은 대장에 생육하는 인체에 유익한 균인 비피더스균의 영양분이 되어, 다른 유해한 균의 생육이 억제되고 대장이 튼튼하게 하는 역할을 한다.
(12) 피틴산
콩에는 얼마간의 피틴산도 함유하고 있는데, 피틴산은 일반적으로는 식물체의 인의 저장창고 역할을 한다. 이들은 양이온, 특히 2가의 양이온과 킬레이트 결합이라고 하는 독특한 결합을 하기 때문에 항암작용과 순환기 질환 예방의 생리활성 작용을 갖는 것으로 최근 밝혀지고 있다.
(13) 식이섬유
콩에 함유된 식이섬유의 종류로는 섬유소(cellulose), 반섬유소(hemicellulose), 펙틴(pectin)이 있다.
식이섬유는 최근에 이들의 기능이 알려지면서 제 6의 영양성분으로 인지될만큼 각광을 받고 있다. 이들은 대장에서 그 기능을 주로 발휘하는데, 체내에 흡수되지 않고 수분을 강하게 흡착하는 특성 때문에 대장의 생리에 영향을 주어 변비 치료와 같은 효과를 나타낸다. 또한 포도당의 흡수 속도를 조절함으로서 당뇨병에도 효과가 있으며, 담즙산과 결합하기 때문에 혈중 콜레스테롤을 저하시키는 작용도 한다.
(14) 식물성 스테롤
콩에 함유된 식물성 스테롤은 혈중 콜레스테롤을 저하시켜 심장병을 예방하는 작용을 한다. 이 작용은 대장에서 콜레스테롤의 대사물질인 담즙산과 같은 해로운 물질로부터 장을 보호함으로서 암 발생을 억제하는 것으로 추정된다.
(15) 코익세놀리드
유물의 씨에 함유되어 있는 코익세놀리드는 에를리히복수암에 대한 증식억제작용이 있다.
율무의 뿌리에서 얻은 코익솔은 아픔멎이 작용, 진정작용이 있으며, 작용세기는 코익솔 100㎎/㎏에 아미노필린 145mg%가 해당된다. 또한 코익솔은 혈당량을 저하시킨다.
자연 상태의 황소 개구리를 포획하여 그껍질과 내장을 제거하여 건조 시킨 상태로 나온 결과임
위 분석 결과에 서 볼수 있듯이 황소 개구리는 인체에 유해한 성분이 없고 필수 아미노산을 비롯하여 칼슘 무기질등이 풍부한 고단백 저지방의 식품으로서 다이어트.성인병 예방 식품 으로서의 가치가 크다.
ㆍ구성 : 라나 카테스바이아나, 대두, 율무, 건생강, 삽주뿌리, 사상자, 복분자, 원지, 사인, 숙지황
ㆍ작용 : 허약체질, 위장병, 빈혈, 노열
ㆍ다이어트, 피부미용 효과
ㆍ고혈압, 당뇨, 허약체질, 산후처리
ㆍ남성의 양기부족, 식욕부진, 식은 땀에 효과
ㆍ신장염, 수종병, 각기병, 식적에 효과
ㆍ폐병에 특효약으로 활용 (중국)
ㆍ남성의 스테미너 증진 효과
Claims (1)
- ㆍ황소 개구리 건강 보조 식품ㆍ자연 상태의 황소 개구리를 포획하여 껍질과 내장 제거후 건조시킨후 나온 결과 단계ㆍ황소 개구리 쓸개의 성분 분석 단계ㆍ황소 개구리 몸체의 성분 분석 단계ㆍ약재의 성분 분석 단계ㆍ황소 개구리 건강 보조 식품으로서의 효과 단계.
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