KR20000010670A - 식품 또는 음료 - Google Patents

Abstract

본 발명은 푸코이단 함유물에서 유도된 푸코이단을 함유, 첨가 및/또는 희석하여 이루어지는 식품 또는 음료, 푸코이단 함유물에서 유도된, 알긴류가 감소 또는 제거된 푸코이단을 함유하는 식품 또는 음료, 세포소멸 유발성을 갖는 푸코이단을 함유하는 세포소멸(apoptosis) 유발성 식품 또는 음료를 제공하는 것을 목적으로 한다.

Description

식품 또는 음료

푸코이단은 해조나 해삼 등에 함유되는 푸코오스 황산을 함유하는 다당이다. 종래 푸코이단에 착안하여, 적극적으로 식품, 음료에 사용하는 시도는 알려지지 않았다.

본 발명은 푸코이단을 구성 성분으로 하는, 생리적 효과가 뛰어난 식품 또는 음료에 관한 것이다.

도 1은 푸코이단-U 및 푸코이단-F의 침전 형성률을 나타내는 것이다.

도 2는 해조에서 유도된 추출물(0.2 ㎎/㎖)의 세포소멸 유발 작용을 나타내는 것이다.

도 3은 해조에서 유도된 추출물(0.5 ㎎/㎖)의 세포소멸 유발 작용을 나타내는 것이다.

도 4는 해조에서 유도된 추출물(1 ㎎/㎖)의 세포소멸 유발 작용을 나타내는 것이다.

도 5는 푸코이단-U, 푸코이단-F의 세포소멸 유발 작용을 나타내는 것이다.

이하, 본 발명을 구체적으로 설명한다.

푸코이단은 해조, 해삼 등으로 제조할 수 있고, 본 발명에서는 이들의 푸코이단을 사용할 수 있다. 본 발명에서는 특히 고 함량의 푸코이단을 함유하는 해조, 해삼의 푸코이단의 사용이 바람직하다.

본 발명의 푸코이단으로서는 순화된 것 및/또는 푸코이단 함유물이 있다.

푸코이단 함유물로서는 예컨대 푸코이단 함유 추출물이 있다.

푸코이단 함유 추출물로서는 푸코이단 함유물에서 유도된 원재료로부터의 추출물, 상기 추출물의 처리물이 포함되고, 고 함량의 푸코이단을 함유하는 추출물이 바람직하다.

푸코이단 함유 추출물, 예컨대 해조 추출물로서는 해조의 추출을 칼슘염 존재하에서 실시하여 얻은 추출물이 예시되고, 칼슘염으로서는 예컨대 염화칼슘을 사용할 수 있다.

또한 상기 해조 추출물로서는 해조의 추출을 알칼리성 용액을 사용하여 실시하고, 추출액에, 칼슘염을 첨가하여 얻은 가용성 물질이 예시되고, 알칼리성 용액으로서는 예컨대 탄산나트륨 용액을 사용할 수 있고, 칼슘염으로서는 예컨대 염화칼슘을 사용할 수 있다.

또한 상기 해조 추출물로서는 해조의 추출을 알칼리성 용액에서 실시하고, 추출액을 산성으로 한 후, 얻은 가용성 물질이 예시되고, 알칼리성 용액으로서는 예컨대 탄산나트륨 용액을 사용할 수 있다.

푸코이단 함유물에서 유도된 원재료로부터의 추출 온도, 시간으로는 40∼200℃, 1∼360 분의 범위에서 목적에 따라 선택하면 좋으나, 통상 50∼130℃, 10∼180 분의 범위에서 선택하여 실시하는 것이 좋다.

본 발명에 사용한 푸코이단의 일례로서는, 푸코이단 함유물에서 유도된 원재료부터의 물 추출물에 비하여, 푸코이단 함유율을 높일 수 있는 물질이 있고, 또한 실질적으로 알긴류 함유량이 감소, 또는 제거된 물질을 들 수 있다. 이 경우, 종래 식품과 음료에 영향을 부여하였던, 알긴류에서 유도된 고 점성, 산응고성, 다가 금속 이온에 의한 겔화 등의 성질을 가지지 않고, 음식품 고유의 물성에 영향을 미치지 않는 소재를 제공할 수 있다.

또한 특별히 해조 추출물의 활성탄 처리물은 또한 해조 냄새만이 선택적으로 제거되고, 해조 냄새를 필요로 하지 않는, 식품 또는 음료에 사용함에 있어서 특히 우수하다.

본 발명에 사용한 푸코이단은 식용 해조라든지 해삼, 즉 식용 푸코이단 함유물을 원료로서 대량에 공급할 수 있고, 그 안전성도 극히 높다.

본 발명의 식품 또는 음료란 특별히 한정되지 않으나, 예컨대 곡물 가공품[소맥분 가공품, 전분류 가공품, 프리믹스 가공품, 면류, 마카로니류, 빵류, 고물류, 메밀국수류, 후(일본식 글루텐 밀가루 빵), 비흔(중국식 녹두 스틱), 하루사메(일본식 녹두 스틱), 포장 떡 등], 유지 가공품(가소성 유지, 튀김유, 샐러드유, 마요네즈유, 드레싱 등), 대두 가공품(두부류, 된장, 청국장 등), 육류 가공품(햄, 베이컨, 프레스햄 소시지 등), 수산 제품(냉동 으깬 어묵, 어묵, 관모양 어묵, 반달 모양 생선살, 어육 튀김, 생선 완자, 하치 어묵, 어육햄, 소시지, 가츠오부시, 생선알 가공품, 수산 통조림, 어폐류 조림 등), 유제품(원유, 크림, 요구르트, 버터, 치즈, 연유, 분유, 아이스크림 등), 야채·과일 가공품(페이스트류, 잼류, 피클류, 과실 음료, 야채 음료, 믹스 음료 등), 과자류(초콜릿, 비스킷류, 과자 빵류, 케이크, 떡과자, 쌀과자 등), 알콜 음료(일본술, 중국술, 와인, 위스키, 소주, 보드카, 브랜디, 진, 럼주, 맥주, 청량 알콜 음료, 과실주, 리큐르 등), 기호 음료(녹차, 홍차, 우롱차, 커피, 청량 음료, 젖산 음료 등), 조미료(간장, 소스, 식초, 미림 등), 통조림·병조림·껍질 통조림[규메시(밥이 들어 있는 소고기 스튜), 가마솥밥, 팥찰밥, 카레, 그 외 각종 레토르트 식품), 반건조 또는 농축 식품(레버 페이스트, 그 외의 스프레드, 모밀·우동 국물, 농축 스프류), 건조 식품(즉석 면류, 즉석 카레, 인스턴트 커피, 분말 쥬스, 분말 스프, 즉석 된장국, 레토르트 식품, 레토르트 음료, 레토르트 스프 등), 냉동 식품(스끼야끼, 볶음밥, 장어 구이, 햄버거 스테이크, 챠오마이(중국식 찐만두), 교자, 각종 스틱, 후르츠 칵테일 등), 고형 식품, 액체 식품(스프 등), 향신료 등의 농산·임산 가공품, 축산 가공품, 수산 가공품 등을 들 수 있다.

본 발명의 식료품을 제조하는 방법은 특별히 한정은 없지만, 조리, 가공 및일반적으로 사용되고 있는 식품 또는 음료의 제조법에 의한 제조를 들 수 있고, 제조된 식품 또는 음료에 푸코이단이 함유되어 있으면 좋고, 또한 식품 또는 음료에 유효양의 세포소멸 유발성을 갖는 푸코이단을 함유시킴으로써 세포소멸 유발성의 식품 또는 음료를 제공할 수 있다.

조리 및 가공에 있어서는, 조리·가공전, 조리·가공시, 또한 조리·가공후에 푸코이단을 첨가하여도 좋고, 조리 및 가공품이라든지 그 재료를 푸코이단에 첨가하고, 푸코이단을 희석하여도 좋다. 식품 또는 음료의 제조에 있어서는, 임의의 공정에서 푸코이단을 첨가하여도 좋으며, 식품 또는 음료라든지 그 원료를 푸코이단에 첨가하고, 푸코이단을 희석하고, 식품 또는 음료에 함유시켜도 좋다. 또한, 첨가는 1회 또는 수회에 걸쳐서 실시하여도 좋다. 따라서, 간편하게 새로운 식품 또는 음료, 또는 유효량의 푸코이단을 함유하는 세포소멸 유발 작용을 갖는 세포소멸 유발성 식품 또는 음료를 제조할 수 있다. 어느쪽의 공정을 거친 경우도, 푸코이단을 함유, 첨가 및/또는 희석하여 이루어지는 식품 또는 음료, 또는 푸코이단을 함유, 첨가 및/또는 희석하여 이루어지고, 유효량의 푸코이단을 함유, 첨가 및/또는 희석하여 이루어지고, 유효량의 푸코이단을 함유하는 세포소멸 식품 또는 음료는 본 발명의 식품 또는 음료로 정의된다.

다음에, 푸코이단의 식품에 대한 첨가량을 모델 음료로 검토하였다.

검토예 1

음료의 모델 시험을 실시하기 위해서, pH 3.8의 0.01 M 젖산 완충액을 준비하고, 시판의 자당을 5 w/v%가 되도록 용해하여 자당 용액을 제조하였다. 실시예 1의 푸코이단 II를 사용하고, 푸코이단 함량 0(대조예), 0.1, 0.5, 1, 5, 10, 20, 30, 40, 50, 100, 150 및 200 ㎎ w/v%를 첨가하여 푸코이단이 포함된 자당을 음식이 혀에 닿는 느낌의 순한 정도, 매끄러운 정도 및 음식이 식도로 넘어갈 때의 느낌 및 맛의 균형에 관해서 식감면에서 관능 평가하였다. 패널 20명 중에서, 5단계 평가(5는 좋음, 1은 나쁨)으로 실시하고, 그 결과의 평균치를 하기 표 1에 나타내었다.

모델 음료의 관능 평가

푸코이단 첨가량(㎎ w/v%)	혀에 닿는 느낌	식도로 넘어가는 느낌	맛과의 균형	식감의 총합
	순한 정도				매끄러운 정도
0	1.2	1.4	1.6	1.5	1.4
0.1	1.6	1.7	1.7	1.6	1.6
0.5	2.0	1.9	1.8	1.7	1.8
1	2.1	2.2	2.0	1.9	2.0
5	2.5	2.6	2.7	2.8	2.6
10	3.5	3.6	3.4	3.8	3.6
20	4.0	4.2	4.1	4.5	4.2
30	4.5	4.7	4.3	4.5	4.5
40	4.6	4.7	4.3	4.6	4.6
50	4.7	4.7	4.5	4.8	4.7
100	4.3	4.6	4.6	4.8	4.6
150	4.0	3.9	3.2	3.8	3.7
200	3.8	3.6	3.1	3.6	3.5

표 1로부터, 관능 평가의 음식이 혀에 닿는 느낌, 식도로 넘어가는 느낌, 맛과의 균형의 면에서는 푸코이단 첨가, 즉 0.1 ㎎ w/v% 이상에서 효과가 인지되었다.

검토예 2

실시예 1의 푸코이단 II 30 ㎎ w/v% 첨가의 모델 음료에 해조에서 유도된 알긴산을 0(대조예), 5, 10, 20, 30, 40, 60, 80, 100, 150 및 200 ㎎ w/v% 첨가하여 푸코이단 및 알긴산의 존재비가 식감에 미치는 영향에 관하여 검토예 1과 동일하게 하여 관능 평가를 실시하고, 그 결과의 평균치를 하기 표 2에 나타내었다.

푸코이단 및 알긴산의 관능 평가의 영향

알긴산 첨가	푸코이단	푸코이단 비율*(%)	혀에 닿는 느낌	식도로 넘어가는 느낌	맛의 균형	식감의 총합
			순한 정도				매끄러운 정도
(㎎w/v%)
0	30	100	4.5	4.7	4.3	4.5	4.5
5	30	85	4.5	4.6	4.2	4.5	4.4
10	30	75	4.3	4.5	4.2	4.5	4.4
20	30	60	4.2	4.4	4.1	4.5	4.3
30	30	50	4.2	4.4	4.1	4.4	4.3
40	30	43	4.0	4.1	3.7	3.9	3.9
60	30	33	3.5	3.6	3.1	3.2	3.3
80	30	27	3.2	3.3	3.2	3.1	3.2
100	30	23	3.2	3.1	3.0	3.1	3.1
					약간 혀에 남음
150	30	17	2.9	2.8	2.5	3.0	2.8
					약간 혀에 남음
200	30	13	2.7	2.6	2.3	2.6	2.6
					약간 혀에 남음
*푸코이단/(알긴산+푸코이단)(%)

표 2로부터 모델 음료에서의 푸코이단을 단독으로 첨가한 경우가 식감에 미치는 관능 평가가 가장 높고, 알긴산 및 푸코이단의 중량의 합계치에 대한 푸코이단의 중량의 비(푸코이단 비율로 이후 약칭함)가 작아짐에 따라서, 식감의 평가가 저하되었다. 푸코이단 단독으로 10 ㎎w/v의 첨가 효과가 보여지는 것은 관능 평가치로 볼때는 푸코이단 비율 43 % 이상이었다. 또한, 푸코이단 단독으로 5 ㎎ w/v% 이상의 관능 평가치로부터는 푸코이단 비율 13 % 이상이지만, 약간 혀에 남는 식감을 느끼지 않지 않는 것은 27% 이상이었다.

본 발명의 푸코이단의 식품 또는 음료중의 함유량은 특별히 제한되지 않고, 그 관능과 생리 활성의 점으로부터 적당히 선택할 수 있지만, 예컨대 시스테인-황산법에 의한 방법으로, 식품 또는 음료 100 부당 푸코오스 환산 중량으로서 0.001 부 이상, 식품으로서의 관능 또는 음료로서의 식미, 세포소멸 유발 작용의 면 및 비용의 면에서는 바람직하게는 0.005∼10 부, 더욱 바람직하게는 0.01∼1.0 부이다. 또한, 본 명세서에 있어서 부는 중량부를 의미한다.

본 발명의 식품 또는 음료로서 본 발명의 푸코이단을 함유하면, 특별히 그 형상에 한정은 없고, 정제형, 과립형, 캡슐형, 겔형, 졸형 등의 형상의 경구적으로 섭취 가능한 형상물을 포함한다.

본 발명의 식품 또는 음료는 생리 활성을 갖는 푸코이단을 유효량 함유하고, 상기 푸코이단을 갖는 세포소멸 유발 작용 등에 의해서, 이들을 섭취함으로써 암 억제 효과 등을 갖는 건강 식품 또는 음료이고, 특히 위장 건강 유지에 유용한 식품 또는 음료이다.

본 발명에 있어서, 푸코이단이란 분자중에 푸코오스 황산을 함유하는 다당 및/또는 그 분해물로서, 특별히 한정은 없다. 또한 갈조 식물에서 유도된 푸코오스 함유 다당이 통상 푸코이단, 프코이딘, 푸칸으로 통칭되고, 몇개의 분자종이 있는 것이 알려져 있지만 본 발명의 푸코이단은 이들을 포함하는 것이다.

푸코이단의 분해 방법으로서는 산 처리 등의 화학적으로 분해하는 방법, 초음파처리 등 물리적으로 분해하는 방법, 효소적으로 분해하는 방법, 또는 미생물 분해 방법 등을 들 수 있고, 본 발명에 있어서는 분자중에 푸코오스 황산을 함유하고, 세포소멸 유발 작용을 갖는 푸코이단 분해물을 사용할 수 있다.

상기 푸코이단 분자종 중에는 푸코오스를 주성분으로 하는 1군과, 우롱산을 수% 함유하고 구성당으로 푸코오스 또는 마노오스를 대부분 함유하는 1군의 분자 종이 있다. 이하, 본 명세서에서는 우롱산을 실질적으로 함유하지 않은 쪽을 푸코이단으로 칭하고, 우롱산을 함유하는 푸코이단을 푸코이단-U로 칭하고, 양자의 혼합물을 단지 푸코이단으로 기재한다.

본 발명에서는 푸코이단-F와 푸코이단-U를 각각 단독으로 사용하여도 좋고, 또한 병용하여 사용하여도 좋다. 즉 순화된 푸코이단-F, 푸코이단-U를 구성 성분으로 하는 식품 또는 음료는 본 발명에 포함되는 것으로, 이들의 푸코이단, 특별히 푸코이단 U 함량이 증가된 식품 또는 음료는 건강 증진 효과가 강한 것으로 나타난다.

본 발명의 푸코이단 함유 천연물에서 유도된 추출물은 예컨대 실시예 4에 기재된 바와 같이 제조한, 하기 이화학적 성질을 갖는 푸코이단-U를 함유한다.

(1) 구성당: 우롱산을 함유한다.

(2) 플라보박테리움(Flavobacterium) sp. SA-0082(FERM BP-5402)가 생산하는 푸코이단 분해 효소에 의해 저분자화하고, 적어도 하기 화학식 I, II, III으로 표시될 수 있는 화합물로 선택되는 1종 이상의 화합물이 생성된다.

본 발명의 푸코이단 함유 천연물에서 유도된 추출물은 예컨대 실시예 5에 기재한 바와 같이 제조한, 하기 화학적 성질을 갖는 푸코이단을 함유한다.

(1) 구성당. : 우롱산을 실질적으로 함유하지 않는다.

(2) 플라보박테리움 sp. SA-0082(FERM BP-5402)가 생산하는 푸코이단 분해 효소에 의해 실질적으로 저분자화되지 않는다.

푸코이단을 푸코이단 분해성의 미생물, 예컨대 상기 푸코이단 분해 효소 생산성의 플라보박테리움 sp. SA-0082(FERM BP-5402)에 의해 처리하여 푸코이단의 미생물 분해물을 제조할 수 있다.

또한, 상기 푸코이단-U를 푸코이단 분해 효소, 예컨대 플라보박테리움 sp. SA-0082(FERM BP-5402)가 생산하는 푸코이단 분해 효소로 처리하여 푸코이단-U의 효소 분해물을 제조할 수 있다. 또한 이것들의 분해물로부터 각각의 분해물의 분자량 분획물을 제조할 수 있다. 이들의 푸코이단 분해물을 함유, 첨가 및/또는 희석하여이루어지는 식품 또는 음료도 본 발명의 식품 또는 음료이다.

본 발명의 식품 또는 음료가 함유하는 푸코이단의 일례의 해조에서 유도된 추출물을 제조할 때에는, 해조로서는 홍조류 예컨대 김, 우뭇가사리, 강리(江籬) 등, 녹조류 예컨대 파래, 갈조류 예컨대 감태, 대황, 큰실말, 녹미채, 미역, 가고메 다시마, 마 다시마등이 사용되고, 본 발명에서는 특히 고 함량의 푸코이단을 함유하는 조류가 적합하다.

본 발명에서 사용하는 해조는 예컨대 갈조류 등의 고 함량의 푸코이단을 함유하는 조류를 예컨대 그대로 건조, 분쇄하여 추출에 사용하여도 좋고, 또한 그 신선한 것을 세단하여 추출에 사용하여도 좋다.

추출은 푸코이단이 효율 좋게 추출되는 조건이면 어떠한 방법이어도 좋다.

또 해조 추출물의 제조에 있어서, 해조를 수세하는 공정, 해조를 알콜 또는함수 알콜 세정하는 공정을 포함하여도 좋고, 해조의 추출을 알콜 존재하에서 실시하여도 좋다.

본 발명에서는 예컨대 해조의 칼슘염 용액, 예컨대 염화칼슘 용액에 의한 추출 조작을 실시하고, 해조의 염화칼슘 추출액을 제조한다.

추출은 건조 해조 1 부에 대하여, 염화칼슘 용액 10∼1000 부로 실시하는 것이 바람직하고, 염화칼슘 농도는 25 mM 이상에서 실시하는 것이 바람직하다.

또한, 신선한 해조를 사용하는 경우는 신선한 해조 1 부에 대하여, 염화칼슘 용액 1∼100 부에서 실시하는 것이 바람직하고, 염화칼슘 농도는 25 mM 이상에서 실시하는 것이 바람직하다.

추출은 50∼130℃의 범위에서, 10∼180 분의 범위에서 실시하는 것이 바람직하다. 추출 조건으로서는, 추출액중에 알긴류가 감소된, 푸코인단을 높은 효율로 추출시키는 조건이면 좋다.

해조의 칼슘염 추출 종료후, 불용성 성분을 제거한다. 불용성 성분의 제거 방법으로서는, 원심 분리 방법, 여과 방법 등으로부터 선택되면 좋다. 불용성 성분 제거액 중의 칼슘염은 예컨대 한외 여과 방법, 이온 교환 방법 등으로 제거할 수 있다. 칼슘염의 제거액은 활성탄 처리, 이온 교환 처리등을 실시하여 더욱 해조 냄새를 선택적으로 제거할 수 있다.

본 발명에서는, 예컨대 해조의 알칼리성 용액, 예컨대 탄산나트륨 용액에 의한 추출 조작을 실시하고, 해조의 탄산나트륨 추출액을 제조한다. 다음에, 상기 추출액에 칼슘염, 예컨대 염화칼슘을 첨가하고, 생성되는 불용성분을 제거하고, 해조 유래 추출물의 가용성 획분을 제조한다.

추출은 해조 1부에 대하여 탄산 나트륨 용액 10∼600 중량부로 실시하는 것이 바람직하고, 탄산나트륨 농도는 0.1∼5%로 실시하는 것이 바람직하다.

또한, 신선한 해조를 사용하는 경우는 신선한 해조 1부에 대하여, 탄산나트륨 용액 1∼60부로 실시하는 것이 바람직하고, 탄산나트륨 농도는 0.1∼5%로 실시하는 것이 바람직하다.

추출은 50∼130℃의 범위에서 10∼180분간 행하는 것이 바람직하다. 추출 조건으로서는 추출액중의 푸코이단을 높은 효율로 추출시키는 조건이면 좋다. 또한, 본 명세서에 있어서, %는 중량%를 의미한다.

해조의 탄산나트륨 추출의 종료 후, 칼슘염, 예컨대 염화칼슘을 첨가하고, 생성되는 불용성 성분을 제거한다. 염화 칼슘의 첨가량으로서는 탄산나트륨 추출액에 대하여, 알긴류가 침전되지 않을 때까지의 양을 첨가하면 좋고, 추출액중의 알긴류를 높은 효율로 침전시키는 조건이면 좋다. 생성되는 불용성 성분의 제거 방법으로는 원심 분리 방법, 여과 방법 등으로부터 선택하면 된다. 불용성 성분 제거액중의 염류, 예컨대 탄산나트륨, 염화칼슘은, 예컨대 한외 여과법, 이온 교환 방법 등으로 제거할 수 있다. 염류 제거액은 활성 탄산 처리, 이온 처리 등을 실시하여 더욱 해조의 냄새를 선택적으로 제거할 수 있다.

본 발명에 있어서는, 예컨대, 해조의 알칼리성 용액, 예컨대, 탄산나트륨 용액에 의한 추출 조작을 실시하고, 해조의 탄산나트륨 추출액을 제조한다. 다음에 산, 예컨대 희석 황산을 사용하여 산성으로 하고, 생성된 불용성 성분을 제거하고, 해조에서 유도된 추출물의 가용성 물질을 제조한다.

해조의 탄산나트륨 용액에 의한 추출은 상기에 준하여 실시한다.

해조의 탄산나트륨 용액에 의한 추출의 종료후, 추출액에 산 용액, 예컨대 희석 황산 용액을 첨가하고, 생성된 불용성 성분을 제거한다. 희석 황산의 첨가량으로서는 탄산나트륨 추출액이 pH 1∼2.5가 될때까지 첨가하면 좋고, 추출액을 산성으로 하여 추출액중의 알긴류를 효율좋게 침전시키는 조건이면 좋다. 생성된 불용성 성분의 제거 방법으로서는, 원심 분리 방법, 여과 방법 등에서 선택하면 좋다. 불용성 성분의 제거액 중의 염류는 예컨대 한외 여과 방법, 이온 교환 방법 등으로 제거할 수 있다. 염류 제거액은 필요에 따라 중화 처리를 하여도 좋고, 산성 용액, 중화 용액 등의 활성탄 처리, 이온 교환 처리 등을 실시함으로써, 더욱 그 해조 냄새를 선택적으로 제거할 수 있다.

본 발명의 푸코이단은 액상이어도 좋고, 고형물이라도 좋다. 고형물을 제조하는 것에 있어서는 분무 건조법, 동결 건조법 등의 공지의 건조 방법으로부터 적당히 선택하면 좋다.

또한 일반적으로 푸코이단은 산이라든지 알칼리에 대하여 약하기 때문에, 산성 용액과 알칼리성 용액을 사용하는 경우 저분자화가 진행되기 쉽다. 가열 온도, 시간, pH 등을 조정함으로써, 임의의 분해물을 제조할 수 있고, 예컨대 겔 여과 처리, 분자량 분획 막 처리 등에 의해, 분해물의 평균 분자량, 분자량 분포 등을 조정할 수 있다. 또한 푸코이단의 분자량 및 당 조성은 푸코이단 원료의 수확기, 상기 원료의 건조 방법, 상기 원료의 보존 방법에 따라 다르고, 또한 푸코이단 추출시의 가열 조건, pH 조건 등에 의해 다르다. 예컨대 산에 의해 푸코이단은 가수분해되고, 알칼리 조건하에서는 우롱산의 β 탈리에 의해, 저분자화가 진행된다. 따라서 본 명세서에 기재한 푸코이단-U, 푸코이단-F의 경우에 있어서도 그 분자량, 분자량 분포는 이의 한 예에 지나지 않고, 푸코이단의 처리 조건에 의해, 그 분자량, 분자량 분포는 용이하게 변화될 수 있다. 예컨대, 약 알칼리성에서 100℃, 1 시간 가열하여 탈염일 때에, 포어사이즈 300의 분자체 막을 사용하면 분자량 분포 1000 내지 1만 정도의 푸코이단, 푸코이단-U, 푸코이단-F 등이 제조할 수 있다. 사용한 조건에 의해서 임의의 분자량, 분자량 분포의 푸코이단을 제조할 수 있어, 본 발명의 푸코이단으로서 사용할 수 있다.

본 발명의 푸코이단 및/또는 그 분해물을 암 세포의 배양액에 첨가하면, 첨가후 1 일 내지 수일에서 암 세포가 세포소멸을 일으킨다. 또한, 정상 세포에 대하여서는 독성을 나타내지 않는다. 특히, 식용 해조에서 유도된 푸코이단 및/또는 그분해물은 안전성이 높다.

이하, 실시예를 들어, 본 발명을 더욱 구체적으로 설명하지만, 본 발명은 이것들의 실시예에 조금도 한정되는 것이 아니다.

실시예 1

(1) 가고메 다시마를 충분히 건조시킨 후 건조물 20 ㎏을 자유 분쇄기(나라 기카이세이사쿠쇼 제품)에 의해 분쇄하였다.

수도물 900 ℓ에 염화칼슘 이수화물(니혼 소다 제조) 7.3 ㎏를 용해시키고, 이어서 가고메 다시마 분쇄물 20 ㎏를 혼합하였다. 액온 12℃에서 액온 90℃가 될 때까지 수증기를 가하여 40분간 승온시키고, 이어서 교반하에서 90∼95℃에 1시간 보온시키고 이어서 냉각하여 냉각물 1100 ℓ를 얻었다.

다음에 고체-액체 분리 장치(웨스트팔리어 세퍼레이터 제조 CNA형)을 사용하여 냉각물의 고체-액체 분리를 실시하고 약 900 ℓ의 고체-액체 분리 상청액을 제조하였다.

고체-액체 분리 상청액 360 ℓ를 카이젤 제조 FE10-FC-FUSO382(분획 분자량 3만)를 사용하고, 20 ℓ까지 농축시켰다. 이어서, 수돗물을 20 ℓ 첨가하고, 또 20 ℓ까지 농축하는 조작을 5 회 실시하고, 탈염 처리를 실시하고, 높은 함량의 푸코이단을 함유하는 해조에서 유도된 추출물 용액 25 ℓ를 제조하였다.

추출물 용액의 pH 는 약 6.5, 산도는 0. 06 ㎖, 당도는 0.8 Brix%, Ca 농도는 1200 ppm이었다.

상기 용액 1 ℓ를 동결 건조하고 건조물 13 g을 얻었다. 동결 건조물 중에, 푸코이단은 65 %, 푸코이단-U는 33 % 함유되어 있다.

푸코이단-U 함량은 실시예 4에서 제조한 푸코이단-U를 표준물질로 하여 HPLC로 측정하였다.

또한 푸코이단 함량은 실시예 5에서 제조한 푸코이단 표준 물질의 수용액(0.4 ㎖/㎖)을 표준액으로 하여, 이하에 나타낸 황산-시스테인법으로 산출하였다.

피검액 200 ㎕를 시험관에 담아서, 이것에 900 ㎕의 진한 황산:물=6:1 용액을 빙냉중에서 냉각하면서 첨가하고, 충분히 냉각한 후, 교반한다. 약 20℃에서 3분간 유지한 후, 끓는 물 수조에서 10 분간 가열한다. 가열후 얼음물 속에서 냉각하여 3 % 시스테인-염산 20 ㎕를 첨가하고, 교반한다(발색구). 또 대조예로서 물 20 ㎕을 첨가하고, 교반한다(공시험). 교반후 1시간 방치하여 400 ㎚, 460 ㎚의 흡광도를 각각 측정한다. 피검액 중의 푸코이단 함량은 하기 수학식 1로써 산출한다.

이 때, 수학식 1에 있어서, A₄₀₀은 400 ㎚의 흡광도, A₄₆₀은 460 ㎚의 흡광도이다.

또한, pH는 pH 미터로 측정하고, 산도는 시료 용액 10 ㎖를 pH 7.0으로 중화시키는데 필요한 0.1 N NaOH량(㎖)으로 표시하였다. 또한 당도는 브릭스 당도계로 측정하고, Ca 농도는 원자 흡광 분석법으로 측정하였다.

이어서 푸코이단 함유 해조에서 유도된 추출 용액에 2 % 활성탄(상표명 시라사기, 식품 첨가용)을 첨가하고 30 분간 처리후, 성긴 여과, 0.8 ㎛의 필터 처리를 실시하고, 필터 처리 여과액(푸코이단 Ⅰ)을 제조하였다. 다음에 그 여과액의 반량을 120℃에서 60 분간, 가압 가열 처리하고, 열 처리액(푸코이단 II)을 제조하였다.

필터-처리액을 동결 건조하고, 그 건조물 10 ㎎을 1% Na₂CO₃, 100 mM CaCl₂의10 ㎖에 각각 현탁시켰다. 양 용액에 있어서, 건조물은 완전히 용해되고 알긴류의 혼입은 인정되지 않았다.

(2) 가고메 다시마를 충분히 건조시킨 후, 건조물 20 ㎏을 분쇄기(호소카와 미크론 제조, 피츠밀)로 분쇄하였다.

수도물 400 ℓ에 염화칼슘 이수화물(니혼 소다 제조) 7.2 ㎏를 용해하고, 다음에 가고메 다시마 분쇄물을 20 ㎏을 혼합하였다. 교반하에서, 액온 28℃에서 액온 95℃가 될 때까지 수증기를 가하여 95 분간 승온시키고, 이어서 교반하에 95℃에 2 시간 보온하고, 이어서 냉각하여 냉각물 500 ℓ를 얻었다.

이어서 고체-액체 분리 장치(다나베 웰테크 제조)를 사용하여 냉각물의 고체-액체 분리를 실시하고 약 450 ℓ의 고체-액체 분리 상청액을 제조하였다.

고체-액체 분리 상청액을 다이셀의 FE10-FC-FUS0382 (분획 분자량 3만)을 사용하여 400 ℓ까지 농축시켰다. 이어서 무균 여과수를 통과 속도 40∼60 ℓ/h가 되도록 연속 첨가하고, 도전율 1.0 mS/㎠가 되도록 탈염 처리를 실시하고, 고 함량의 푸코이단을 함유하는 해조에서 유도된 추출물 용액 40 ℓ를 제조하였다.

이어서, 고 함량의 푸코이단을 함유하는 해조에서 유도된 추출 용액에 여과제조로서, 셀라이트 #545(셀라이트 제조) 0.4 ㎏ 및 실리카 #600-S(쥬오 실리카 제조) 0.4 ㎏을 첨가하고, 이어서 셀라이트 #545의 0.1 ㎏ 및 실리카 #600-S의 0.1 ㎏으로 프리코팅시킨 콤팩트 필터(6 인치 16단; 여과지:ADVANTEC #327)로 여과를 실시하였다.

얻은 액은 플레이트 히터(니치한 세이사쿠쇼 제조)에 의한 연속 순간 가열 처리(98℃, 60 초)를 실시한 후, 냉각하여 46 ℓ의 고 함량의 푸코이단을 함유하는 해조에서 유도된 추출물 용액(푸코이단 V)을 제조하였다.

상기 추출물 용액의 pH는 약 7, 산도는 0 ㎖, 당도는 1.2 Brix%, Ca 농도는 920 ppm, 고형분 1.2 %, 푸코이단 함량은 17 ㎎/㎖이었다. 또한 알긴산, 요오드는 검출되지 않았다.

알긴산 함량은 시판되는 알긴산을 표준 물질로 하여 HPLC로 측정하였다.

푸코이단 함량은 실시예 5에서 제조한 푸코이단 표준 물질의 수용액(O.4 ㎎/㎖)을 표준액으로 하여 황산-시스테인법으로 산출하였다.

또한 도전율은 도전율계로 측정하였다. 요오드는 브롬으로 분리시키고, 티오황산나트륨으로 적정하였다. 고형분은 원심 증발기(60℃, 18 시간) 처리후의 건조량으로부터 구하였다.

(3) 가고메 다시마를 충분히 건조시킨 후, 건조물 20 ㎏을 분쇄기(호소카와 미크론 제조, 피츠밀)에 의해 분쇄하였다.

수돗물 400 ℓ에 염화칼슘 2수화물(니혼 소다 제조) 7.3 ㎏를 용해하고, 이어서 가고메 다시마 분쇄물 20 ㎏을 혼합하였다. 교반하에서, 액온 28℃로부터 액온 95℃가 될때까지 수증기를 가하여 95 분간 승온시키고, 이어서 교반하에서 2 시간 보온하고, 이어서 냉각하고, 냉각물 500 ℓ를 얻었다.

이어서 고체-액체 분리 장치(다나베 웰테크 제조)를 사용하여 냉각물의 고체-액체 분리를 실시하고, 약 450 ℓ의 고체-액체 분리 상청액을 제조하였다.

고체-액체 분리 상청액을 다이셀 제품 FE10-FC-FUS0382(분획 분자량 3만)을 사용하여 40 ℓ까지 농축시켰다. 이어서 무균 여과수를 통과 속도 30 ℓ/h 가 되도록 연속 첨가하고, 도전율 1.0 mS/㎠가 될 때까지 탈염 처리를 실시하고, 고 함량의 푸코이단을 함유하는 해조에서 유도된 추출물 용액 34 ℓ를 제조하였다.

다음에 펙틴(포모신펙틴 LM-13CG, 허큘리즈 제조) 1.1 ㎏을 수도물 20 ℓ에 첨가하고, 액온 28℃에서 액온 120℃가 될 때까지 수증기를 가하여 35 분간 승온시키고, 이어서 교반하에서 120℃에서 5 시간 보온하고, 이어서 냉각하여 냉각물 28 ℓ를 제조하였다.

이어서 고 함량의 푸코이단을 함유하는 해조에서 유도된 추출 용액 34 ℓ와 펙틴의 가열 처리액 28 ℓ를 혼합하고, 무수 구연산(후소 가가쿠 제조)에 의해 pH를 3.5로 제조하였다. 다음에 여과 제조로서, 셀라이트 #545(셀라이트 제조) 0.9 ㎏ 및 실리카 #600-S(쥬오 실리카 제조) 0.8 ㎏을 첨가하고, 이어서 셀라이트 #545의 0.2 ㎏ 및 실리카 #600-S의 0.2 ㎏으로 프리코팅한 콤펙트 필터(6 인치 16 단, 여과지:ADVANTEC #327)로 여과를 실시하였다.

얻은 여과액에 정제수 18 ℓ를 첨가하고, 이어서 플레이트 히터(니치한 세이사쿠쇼 제조)에 의한 연속 순간 가열 처리(98℃, 60 초)를 실시한 후, 냉각하여 80 ℓ의 고 함량의 푸코이단을 함유하는 해조에서 유도된 추출물 용액(푸코이단 VI)를 제조하였다.

상기 추출물 용액의 pH는 약 3.5, 산도는 1.7 ㎖, 당도는 2.1 Brix%, Ca 농도는 710 ppm, 고형분 2.0 %, 푸코이단 함량은 13 ㎎/㎖, 푸코이단-U 함량은 6.6 ㎎/㎖ 이었다. 또한, 알긴산, 요오드는 검출되지 않았다.

상기 용액 1 ℓ를 동결 건조하여 건조물 20 g를 얻었다.

실시예 2

신선한 마 다시마를 분절하고, 얻은 분절물 200 g을 600 ㎖의 1 % 탄화 나트륨 수용액에 현탁하여 60℃에서 1 시간 처리한 후, 물을 첨가하여 1 ℓ로 만들었다. 이 용액을 원심 분리하여 상청을 모으고 물을 가하여 4 ℓ로 하였다.

이 용액에 500 mM의 염화칼슘을 이 이상 침전이 생기지 않을 때까지 첨가하고, 생성된 침전을 여과지로 제거하였다. 얻은 여과액을 농축한 후, 마이크로아실라이저로 탈염시키고, 탈염액 3.6 ℓ를 제조하였다. 그 반량을 동결 건조시키고 고 함량의 푸코이단을 함유하는 해조에서 유도된 추출물 분획 2.1 g(푸코이단 III)을 얻었다. 다음에 탈염액의 나머지의 반량을 2 % 활성탄 처리한 후, 120℃에서 60 분간 가압 가열 처리하여 열처리액(푸코이단 IV)을 제조하였다.

상기 동결 건조물 10 ㎎을 1 % Na₂CO₃, 100 mM CaCl₂10 ㎖에 각각 현탁시켰다. 양 용액에 있어서, 상기 분획은 완전히 용해되고 알긴류의 혼입은 확인되지 않았다.

실시예 3

실시예 1, 실시예 2에서 각각 제조한 고 함량의 푸코이단을 함유하는 해조에서 유도된 추출물의 세포소멸 유발 작용

56℃에서 30 분간 처리한 소 태아 혈청(JRH 바이오 사이언스)를 10 % 함유하는 RPM 11640 배지(기브코 제조)로 37℃에서 배양한 인간 전골수성 백혈병 세포 HL-60(ATCC CCL-240)을 ASF 104 배지(아지노모토 제조)로 5×10⁵개/9 ㎖ 가 되도록 현탁하였다. 이 현탁액 9.0 ㎖에 대하여 실시예 1, 실시예 2에서 각각 제조한 고 함량의 푸코이단을 함유하는 해조에서 유도된 추출물(푸코이단 I, 푸코이단 III)의 각각의 용액〔5 ㎎/㎖가 되도록 100 mM의 염화나트륨을 함유하는 50 mM HEPES 완충액(pH 7.2)에 용해시키고, 121℃에서 20 분 멸균시킨 것〕을 1 ㎖ 첨가하고, 37℃, 5 % 이산화탄소 존재하에서 18 시간 배양하였다. 배양한 각 세포를 원심 분리에 의해 상청으로 분리한다. 얻은 세포를 10 mM의 에틸렌디아민 테트라아세테이트 및 0.5 %의 나트륨 라우로일 사르코시네이트를 함유하는 50 mM의 트리스 염산 완충액(pH 7.8) 20 ㎕로써 현탁하고, 10 ㎎/㎖의 리보뉴클레아제 A:(시그마 제조)를 1 ㎕ 첨가하여 50℃에서 30분간 처리한 후, 10 ㎎/㎖의 단백분해효소 K를 1 ㎕ 첨가하여 50℃에서 1시간 처리하였다. 처리후의 세포를 샘플로 하여, 2 %의 아가로스 겔을 사용하여 100 V의 정전압하에서 전기영동을 실시한다. 이 겔을 브롬화 에티듐 용액에 30분간 담근 후, 트랜스일루미네이터를 사용하여 겔 중의 DNA의 상태를 확인한 바, 세포소멸에 특유의 DNA 가 확인되었다.

이 결과에 의해, HL-60 세포는 실시예 1, 실시예 2에서 각각 제조한 고 함량의 푸코이단을 함유하는 해조에서 유도된 추출물에서 세포소멸이 유발되는 것이 분명하다.

또한 실시예 1, 실시예 2에서 각각 제조한 고 함량의 푸코이단을 함유하는 해조에서 유도된 추출 용액(푸코이단 II, 푸코이단 IV)를 각각 5 ㎎/㎖가 되도록 생리 식염수에 용해하고, 121℃에서 20분 멸균 처리를 실시한 용액을 피검액으로서 사용하고, 상기 방법에 준하여 세포소멸 유발 작용을 측정하고, 각 피검액에 관해서 동일한 효과를 확인하였다.

다음에, 56℃에서 30 분간 처리한 소 태아 혈청(JRH 바이오사이언스)을 10 % 함유하는 RPMI 1640 배지(기브코 제조)로 37℃에서 배양한 인간 전골수성 백혈병 세포 HL-60을 ASF104 배지(아지노모토 제조)로 2.5×10⁵개/4.5 ㎖가 되도록 현탁하였다. 이 현탁액 4.5 ㎖에 실시예 1, 실시예 2에서 각각 제조한 고 함량의 푸코이단을 함유하는 해조에서 유도된 추출물(푸코이단 I, 푸코이단 III)[2 ㎎/㎖, 5 ㎎/㎖, 10 ㎎/㎖과 각각이 되도록 100 mM의 염화나트륨을 함유하는 50 mM HEPES 완충액(pH 7.2)에 용해시키고, 121℃에서 20 분 멸균시킨 것]을 각각 0.5 ㎖ 첨가하고, 37℃에서 5 % 이산화탄소 존재하에서 배양하였다. 배양 개시 24 시간 후 및 44 시간 후에 배양액을 0.5 ㎖ 샘플링하고, 배양중의 생세포수를 「조직 배양의 기술」(제2판) (아사쿠라 출판, 일본 조직 배양 학회편, 1990년 11월 1일 발간, 제26∼28 페이지) 기재의 방법에 따라서 계측하였다. 즉, 혈구 계산판상의 트립판 블루 염색에 의한 방법으로 계측하였다.

얻은 결과를 도 2∼도 4에 도시한다. 도 2는 각 푸코이단 0.2 ㎎/㎖ 존재하에서의 세포 증식을 나타내는 도면이고, 세로축은 배양액 1 ㎖당 생 세포수(×10⁴개/㎖, 이하 동일): 가로축은 배양 시간(시)을 나타낸다. 도 3은 각 푸코이단 0.5 ㎎/㎖ 존재하에서의 세포 증식을 나타내는 도면이고, 세로축은 배양액 1 ㎖당 생 세포수, 가로축은 배양 시간(시)을 나타낸다. 도 4는 각 푸코이단 1 ㎎/㎖ 존재하에서의 세포 증식을 나타내는 도면이고, 세로축은 배양액 1 ㎖당 생 세포수, 가로축은 배양 시간(시)을 나타낸다. 각 도면에 있어서 흰 삼각형 표시는 실시예 1에서 제조한 고 함량의 푸코이단을 함유하는 해조에서 유도된 추출물(푸코이단 I) 존재하에서의 각 시간에서의 생 세포수, 흰 사각형 표시는 실시예 2에서 제조한 고 함량의 푸코이단을 함유하는 해조에서 유도된 추출물(푸코이단 III) 존재하에서의 각 시간에서의 배양액 중의 생 세포수를 나타낸다. 또 대조예(시료 무첨가)의 배양액 중 생 세포수는 배양 24 시간 후에 1.5×10⁵개/㎖, 44 시간 후에 3.1×10⁵개/㎖이었다.

도 2∼도 4에 나타내는 바와 같이 고 함량의 푸코이단을 함유하는 해조에서 유도된 추출물은 배지중 농도가 적어도 200 ㎍/㎖이상이면, HL-60 세포를 2일 이내에 세포소멸에 의해 사멸시킬 수 있다.

또한 실시예 1, 실시예 2에서 각각 제조한 고 함량의 푸코이단을 함유하는 해조에서 유도된 추출물(푸코이단 II, 푸코이단 IV, 푸코이단 V, 푸코이단 VI)를 각각 2∼10 ㎎/㎖가 되도록 생리 식염수에 용해하고, 121℃에서 20 분 멸균 처리한 용액을 피검액으로서 사용하고 상기의 방법에 준하여 세포소멸 유발 작용을 측정하고 각 피검액에 관하여 동일한 효과를 확인하였다.

실시예 4

푸코이단-U의 제조

가고메 다시마를 충분히 건조시킨 후, 2 ㎏을 자유 분쇄기(나라 기카이 세이사쿠쇼 제조)에 의해 분쇄하고, 얻은 건조 분말을 9 ℓ의 80 % 에탄올에 현탁하여 80℃에서 2 시간 처리하였다. 처리후 여과지로 여과하여 잔류물을 얻었다. 이 잔류물에 대하여 상기 에탄올 세척, 여과 조작을 3회 반복하여 에탄올 세정 잔류물을 얻었다. 이 잔류물을 36 ℓ의 0.2M 아세트산칼슘 용액에 현탁한 후, 95℃에서 2시간 처리하고 여과하였다. 잔류물을 4 ℓ의 0.2 M 아세트산칼슘 용액으로 세척하고, 가고메 다시마의 푸코이단 추출액 36ℓ를 얻었다.

이 여과액을 배제 분자량 10만의 한외 여과막을 장착한 한외 여과기에 의해 2 ℓ로 농축하고, 다음에, 최종 농도가 1.5 M가 되도록 식염을 첨가하여 5 %의 염화세틸피리디늄을 이 이상 침전이 생기지 않을 때까지 첨가하였다. 생성된 침전을 원심 분리에 의해 제거하였다. 얻은 상청을 한외 여과에 의해 1 ℓ로 농축하고, 4 ℓ의 에탄올을 첨가하고, 생긴 침전을 원심 분리에 의해 모았다. 이 침전에 100 ㎖의 4 M 식염수를 첨가하고, 잘 교반한 후 에탄올을 80 %가 되도록 첨가하고, 교반후 원심 분리에 의해 침전을 얻었다. 이 침전을 80 % 에탄올 중에 현탁하여 원심 분리하는 조작을, 상청중의 260 ㎚의 흡광도가 없어질 때까지 반복하였다. 이 침전을 2 M의 식염수 2 ℓ에 용해하고, 불용물을 원심 분리에 의해 제거한 후, 50 ㎖의 DEAE-셀로파인 A-800(세이가가쿠 고교 제조)을 첨가하고, 교반한 후 더한 수지를 여과에 의해 제거하였다. 여과액을 2 M의 식염수로 평형화한 DEAE 셀로파인 A-800 칼럼에 넣고 비흡착분을 배제 분자량 10만 이하의 중공 섬유를 구비한 한외 여과 장치에서 한외 여과하고, 착색성 물질 및 식염을 완전히 제거한 후, 원심 분리 및 여과에 의해 불용성 물질을 제거하고, 동결 건조하여 푸코이단-U를 제조하였다. 동결 건조 푸코이단-U의 중량은 15 g이었다.

이 푸코이단-U 및 하기 실시예 5에서 제조한 푸코이단-F의 각 염화나트륨 농도에 있어서의 과잉량의 염화세틸피리디늄 존재하에서의 침전 형성성을 도 1에 나타낸다.

도 1의 세로축은 침전 형성률(%)을 나타내고, 가로축은 염화나트륨 농도(M)를 나타낸다. 도 1 중, 실선 및 흰 동그라미 표시는 본 발명의 푸코이단-U의 각 염화나트륨 농도에서의 침전 형성율을 나타내고, 도 1 중, 점선 및 흰 삼각형 표시는 푸코이단-F의 각 염화나트륨 농도(M)에서의 침전 형성율을 나타낸다.

침전 형성율의 측정은 용액 온도 3℃에서 아래와 같이 실시하였다.

푸코이단-U 및 푸코이단-F를 각각 2 %의 농도에서 물 및 4M의 염화나트륨에 용해하고, 이들을 여러가지 비율로 혼합함으로써 여러가지 농도의 염화나트륨에 용해시킨 푸코이단-U 및 푸코이단-F 용액을 각 125 ㎕씩 제조하였다. 다음에, 염화세틸 피리디늄을 2.5 %의 농도로 물 및 4 M의 염화나트륨에 용해하고, 그것들을 혼합하여 여러가지 농도의 염화나트륨에 용해시킨 1.25 %의 염화세틸피리디늄 용액을 제조하였다.

물에 용해되어 있는 2 %의 푸코이단-U 및 푸코이단-F를 1.25 %의 염화세틸피리디늄에 완전히 침전시키기 위해서는 용량에서 3.2 배 필요하였다. 그래서 각 농도의 염화나트륨에 용해시킨 2 %의 푸코이단-U 및 푸코이단-F의 각 125 ㎕ 대하여 각 농도의 염화나트륨에 용해시킨 염화세틸피리디늄 용액을 400 ㎕ 첨가한 후, 충분히 교반하고, 30 분 방치한 후 원심 분리하여 상청중의 당 함량을 페놀-황산법[분석 화학(Anaiytical Chemistry), 제28권, 제350 페이지(1956)]에 의해 측정하고, 각 염화나트륨 농도하에서의 각 푸코이단의 침전 형성률을 산출하였다.

얻은 푸코이단-U의 분자량을 세파크릴 S-500을 사용한 겔 여과법에 의해 구한 바, 약 19만을 중심으로 한 분자량 분포를 도시하였다.

다음에, 푸코이단-U의 성분을 분석하였다.

우선, 참고 문헌[Journa1 of Bio1ogical Chemistry, 제175권, 제595 페이지 (1948)의 기재에 따라 푸코오스량을 정량하였다.

다음에, 얻은 푸코이단-U의 건조 건조 제품을 1 N의 염산에 0.5%의 농도로 용해하고, 110℃에서 2 시간 처리하고, 구성 단당으로 가수분해하였다. 다음에, 글리코태그(GlycoTAG) 및 글리코태그 시약 키트(GlycoTAG Reagent Kits)(모두 다카라 슈조에서 제조)를 사용하여 가수분해하여 얻은 단당의 환원성 말단을 피리딜-(2)-아미노화(PA화)하고, HPLC에 의해 구성당의 비율을 조사하였다.

다음에, 참고 문헌[Ana1ytical Biochemistry, 제4권, 제330 페이지 (1962)]의 기재에 따라 우롱산량을 정량하였다.

다음에, 참고 문헌[Biochemical Journa1, 제84권, 제106 페이지 (1962)]의 기재에 따라서 황산 함량을 정량하였다.

이상의 결과, 푸코이단-U의 구성당은 푸코오스, 마노오스, 갈락토스, 글루코오스, 람노오스, 크실로오스, 우롱산이었다.

그 외의 중성당은 실질적으로 함유되어 있지 않다. 또한, 주요 성분인 푸코오스:만노오스:갈락토스:우롱산:황산기는 몰비로 약 10:7:4:5:20 이었다.

푸코이단-U의 구조는 이하와 같이 결정하였다.

푸코이단-U를 분해하는 능력을 갖는 분해 효소에 의한 푸코이단-U의 분해및 분해물의 정제.

정제한 푸코이단-U에 하기 엔도형 푸코이단 분해 요소를 작용시키고 분해물의 정제을 실시하였다.

즉, 1%의 푸코이단-U 용액 16 ㎖과, 50 mM의 인산 완충액(pH 8.0) 12 ㎖와 4 M의 염화나트륨 4 ㎖와 32 mU/㎖의 하기 엔도형 푸코이단 분해 효소 용액 8 ㎖을 혼합하고, 25℃에서 48 시간 반응시켰다. 반응의 진행과 함께 230 ㎚의 흡광도가 증가하는 것을 확인하고, 본 효소에 의하여 푸코이단-U가 분해되어 있는 것이 판명되었다.

이 반응액을 마이크로아실라이저-G3(아사히 가세이 제조)에 의하여 탈염시킨 후, DEAE-세파로스-FF에 의해 3개의 획분 (a), (b) 및 (c) 로 분리 정제하였다.

또한, 상기 엔도형 푸코이단 분해 효소는 이하의 방법에 의해 제조된다.

상기 엔도형 푸코이단 분해 효소의 생산에 사용하는 균주로서는, 상기 엔도형 푸코이단 분해 효소 생산 성능을 갖는 균주이면 어떠한 균주라도 좋으나, 구체로서는, 예컨대 플라보박테리움 sp. SA-0082주(FERM BP-5402)를 들 수 있다.

본 균주는 아오모리현의 해수중에서 새롭게 검색하여 얻은 균주로서, 이 균주는 플라보박테리움 sp.SA-0082로 표시되고, 통상산업성 공업기술원 생명 공학 공업 기술 연구소[일본 이바라키현 쯔꾸바시 히가시 1-1-3(우편번호 305)]에 1995년 3월 29일부터 FERM P-14872로서 기탁되고, 상기 통상산업성 공업 기술 연구소에 FERM BP-5402(국제 기탁으로의 이관 청구일:1996년 2월 15일)로서 기탁되어 있다.

본 균주의 배지에 가하는 영양원은 사용된 균주를 이용하고, 엔도형 푸코이단 분해 효소를 생산하는 것이면 되고, 탄소원으로서는 예컨대 푸코이단, 해조 분말, 알긴산, 푸코오스, 글루코오스, 만니톨, 글리세롤, 사카로스, 말토오스, 락토오스, 전분 등을 사용할 수 있고, 질소원으로서는, 효모 추출물, 펩톤, 가자미노산, 콘 스티프 리커, 육류 추출물, 탈지 대두, 황산암모늄, 염화암모늄 등이 적당하다. 그 외에 나트륨염, 인산염, 칼륨염, 마그네슘염, 아연염 등의 무기질 및 금속염류를 첨가하여도 좋다.

본 엔도형 푸코이단 분해 효소의 생산균을 배양함에 있어서, 생산량은 배양조건에 의해 변동되지만, 일반적으로 배양 온도는 15℃∼30℃, 배지의 pH는 5∼9가 좋고, 5∼72시간의 통기 교반 배양으로 엔도형 푸코이단 분해 효소의 생산량은 최고에 달한다. 배양 조건은 사용하는 균주, 배지 조성 등에 따라서 엔도형 푸코이단 분해 효소의 생산량이 최대가 되도록 설정하는 것은 당연한 것이다. 엔도형 푸코이단 분해 효소는 균체내에도 배양물 상청 중에도 존재한다.

상기 플라보박테리움 sp. SA-0082주를 적당한 배지로 배양하고, 그 균체를 모으고, 통상 사용되는 세포 파괴 수단, 예컨대, 초음파 처리 등으로 균체를 파쇄하면 무세포 추출액을 얻을 수 있다.

이어서, 이 추출액으로부터 통상 사용되는 정제 수단에 의해 정제 효소 제품을 얻을 수 있다. 예컨대, 염 석출, 이온 교환 컬럼 크로마토그래피, 소수성 결합 컬럼 크로마토그래피, 겔 여과 등에 의해 정제를 실시하고, 그 외에 푸코이단 분해 효소를 함유하지 않는 엔도형 푸코이단 분해 효소를 얻을 수 있다.

또한, 전술한 배양액으로부터 균체를 제거한 배양액 상청 중에도 효소(균체외 효소)가 대량으로 존재하므로, 균체내 효소와 동일한 정제 수단에 의해 정제할 수 있다.

엔도형 푸코이단 분해 효소의 정제예를 나타낸다.

플라보박테리움 sp. SA-0082(FERM BP-5402)를 글루코오스 0.25 %, 펩톤 1.0 %, 효모 추출물 0.05 %를 함유하는 인공 해수(쟈마린 래보러토리 제품) pH 7.5로 이루어진 배지 600 ㎖에 분주하여 살균한(120℃, 20 분) 2 ℓ의 삼각 플라스크에 접종하고, 24℃에서 24 시간 배양하여 종(seed) 배양액으로 하였다. 글루코오스 0.25 %, 펩톤 1.0 %, 효모 추출물 0.05 % 및 소포제(신에츠 가가쿠 고교 제품 KM 70) 0.01 %를 함유하는 인공 해수(쟈마린 래보러토리 제품) pH 7.5로 이루어지는 배지 20 ℓ를 30 ℓ 용량의 발효 용기에 넣어 120℃에서 20 분 살균하였다. 냉각 후, 상기 종 배양액 600 ㎖를 접종하고, 24℃에서 24 시간, 매분 10 ℓ의 통기량과 매분 125 회전의 교반 속도의 조건에서 배양하였다. 배양 종료 후, 배양액을 원심 분리하여 균체를 얻었다.

이 균체를 200 mM의 식염을 함유하는 20 mM의 아세트산-인산 완충액(pH 7.5)에 현탁하여 초음파 파쇄후, 원심 분리하여 균체 추출액을 얻었다. 이 균체 추출액 중의 본 발명의 엔도형 푸코이단 분해 효소의 활성을 측정한 바, 배지 1 ㎖ 중에 5 mU의 활성이 검출되었다.

본 추출액에 최종 농도가 90 % 포화가 되도록 황산암모늄을 첨가하고, 교반 용해 후 원심 분리하여 침전을 상기 균체 추출액과 같은 완충액에 현탁시키고, 50 mM의 식염을 함유하는 20 mM의 아세트산-인산 완충액(pH 7.5)으로 충분히 투석하였다. 투석에 의해 생긴 침전을 원심 분리에 의해 제거한 후, 미리 50 mM의 식염을 함유하는 20 mM의 아세트산-인산 완충액(pH 7.5)으로 평형화한 DEAE-세파로스 FF의 칼럼에 흡착시키고, 흡착물을 동일 완충액으로 충분히 세척한 후, 50 mM에서 600 mM의 식염 구배로 용출시켜 활성 획분을 모았다. 다음에 이 활성 획분에 최종 농도가 4 M이 되도록 식염을 가하고, 미리 4 M의 식염을 포함하는 20 mM의 인산 완충액(pH 8.O)으로 평형화시킨 페닐세파로스 CL-4B의 칼럼에 흡착시켜 흡착물을 동일 완충액으로 충분히 세정한 후, 4 M에서 1 M의 식염 구배로 용출시켜 활성 획분을 모았다. 다음에 이 활성 획분을 한외 여과기로 농축한 후, 미리 50 mM 식염을 함유하는 10 mM 인산 완충액으로 평형화한 세파크릴 S-300의 겔 여과를 실시하여 활성 획분을 모았다. 이 효소의 분자량을 세파크릴 S-300의 유지시간으로부터 구한 바, 약 46만이었다. 다음에 이 활성 획분에 25 mM의 식염을 함유하는 10 mM의 인산 완충액(pH 7)으로 투석하였다. 이 효소액을 미리 250 mM의 식염을 함유하는 10 mM의 인산 완충액(pH 7)으로 평형화한 모노(Mono) Q HR5/5의 칼럼에 흡착시키고, 흡착물을 동일 완충액으로 충분히 세정한 후, 250 mM에서 450 mM의 식염 구배로 용출시키고, 활성 획분을 모으고, 정제 효소를 얻었다. 이상의 정제 공정을 하기 표 3에 나타낸다.

공정	총 단백질 함량(㎎)	총 활성(mU)	비활성(mU/㎎)	수율(%)
균체 추출액	61,900	101,000	1.63	100
황산암모늄 침전	33,800	88,600	2.62	87.7
DEAE-세파로즈 FF	2,190	40,400	18.4	40.0
페닐 세파로즈 CL-4B	48.2	29,000	601	28.7
세파크릴 S-300	7.24	19,600	2,710	19.4
모노 Q	0.824	15,000	18,200	14.9

효소의 활성 측정은 하기와 같이 실시한다.

2.5 %의 가고메 다시마의 푸코이단 용액 50 ㎕, 10 ㎕의 효소, 60 ㎕의 667 mM 염화 나트륨을 함유하는 83 mM 인산 완충액 pH 7.5을 혼합하고, 37℃에서 3 시간 반응시킨 후, 반응액 105 ㎕와 물 2 ㎖를 혼합 교반하고, 그 230 ㎚에서의 흡광도(AT)를 측정한다. 대조예로서, 효소 대신에 효소를 용해시킨 완충액만을 사용하여 동일한 조건에 의해 반응시킨 것 및 푸코이단 용액 대신에 물만을 사용하여 반응시킨 것을 준비하고, 각각 동일하게 흡광도를 측정한다(AB1 및 AB2).

1 단위(U)의 효소는 상기 반응계에서 1분간에 1 μmol 마노오스와 우롱산 사이의 글리코시드 결합을 이탈적으로 절단하는 효소량으로 한다. 절단된 결합의 정량은 이탈 반응시에 생기는 불포화 우롱산의 밀리 몰 분자 흡광 계수를 5.5로 하여 계산한다. 또, 효소의 활성은 하기 수학식 2에 의해 구한다.

(AT-AB1-AB2)×2.105×120/(5.5×105×0.01×180)=U/㎖

2.105 : 흡광도를 측정하는 샘플의 액량(㎖)

120 : 효소 반응액의 액량(㎕)

5.5 : 불포화 우롱산의 230 ㎚에서의 밀리몰 흡광 계수(/mM )

105 : 희석에 사용된 반응액의 액량(㎕)

0.01 : 효소 액량(㎖)

180 : 반응 시간(분)

단백질의 정량은 효소액의 280 ㎚에서의 흡광도를 측정하여 실시한다. 그 때 1 ㎎/㎖의 단백질 용액의 흡광도를 1.0으로 계산한다.

또한 기질의 가고메 다시마에서 유도된 푸코이단은 다음과 같이 제조하였다.

건조 가고메 다시마를 자유 분쇄기 M-2형(나라 기카이 세이사쿠쇼 제조)에 의해 분쇄하고, 10 배량의 85 % 메탄올 중에서 70℃에서 2 시간 처리 후, 여과하여 잔류물을 l0 배량의 메탄올 중에서 70℃에서 2 시간 처리하고 여과한다. 잔류물에 20 배량의 물을 첨가하고, 100℃에서 3 시간 처리하여 여과에 의해 추출액을 얻는다. 추출액의 염 농도를 400 mM의 염화나트륨 용액과 동일한게 한 후, 염화세틸피리디늄을 이 이상 침전이 생기지 않을 때까지 첨가하여 원심 분리한다. 그 침전을 에탄올로 충분히 세정하고, 염화세틸피리디늄을 완전히 제거할 수 있으면, 한외 여과기(여과막의 배제 분자량 10만)(아미콘 제조)에 의하여 탈염 및 저분자 제거를 실시하고, 이 때에 생긴 침전을 원심 분리에 의해 제거한다. 이 상청액을 동결 건조하고 정제 가고메 다시마 푸코이단을 얻는다.

효소 반응 생성물의 구조 분석

상기 엔도형 푸코이단 분해 효소는 복합 다당중에 존재하는 D-마노오스와 D -글루크론산 사이의 α 1→4 결합을 탈리적으로 분해하는 효소이고, 푸코이단에 작용시키면 상기 화학식 I, II, III의 구조를 갖는 올리고당을 생성한다.

따라서, 상기의 DEAE-세파로스 FF에서 분리 정제한 3개의 획분 (a), (b) 및 (c)를 각각 일부만 글리코태그(GlycoTAG) 및 글리코태그 시약 키트(GlycoTAG Reagent Kits)(모두 다카라 슈조에서 제조)를 사용하여 환원성 말단을 피리딜(2)-아미노화(PA화)하고, 각 PA화 당(PA-a), (PA-b) 및 (PA-c)를 얻었다. (PA-a), (PA-b) 및 (PA-c)를 HPLC에 의해 분석하여 상기 화학식 I, II 및 III으로 표시되는 3종의 올리고당의 PA화물과의 상이성을 조사하였다.

또한, HPLC의 조건은 하기와 같다.

(가) 분지량 분획 칼럼을 사용한 HPLC 분석

장치 : L-6200형(히다치 세이사쿠쇼 제품).

칼럼 : SHODEX SB-803(4.6×250 mm )(쇼와 덴코 제조)

용리액 : 0.2 M 염화나트륨:디메틸설폭시드=9:1

검출 : 형광 검출기 F-1150(히다치 세이사쿠쇼 제품)로 여기 파장 320 ㎚, 형광 파장 400 ㎚에서 검출

유속 : 1 ㎖/분

칼럼 온도 : 50℃

(나) 역상 칼럼을 사용한 HPLC 분석

장치 : L-6200형(히다치 세이사쿠쇼 제품)

칼럼 : L-칼럼(4.6×250 mm)〔가가쿠 야쿠힌 겐사 교카이〕

용리액 : 50 mM 아세트산-트리에틸아민(pH 5.5)

검출 : 형광 검출기 F-1150(히다치 세이사쿠쇼 제품)로 여기 파장 320 ㎚, 형광 파장 400 ㎚에서 검출

유속 : 1 ㎖/분

칼럼 온도 : 40℃

상기 2종의 HPLC 분석의 결과, 푸코이단-U를 상기 엔도형 푸코이단 분해 효소로 분해하여 얻은 3종 올리고당과 상기 화학식 I, II, III으로서 표시되는 3종의 올리고당은 동일한 것이었다.

따라서 (a)는 환원 말단 잔기인 D-마노오스에 불포화 D-글루크론산과 황산기가 결합된 L-푸코오스가 결합된 구조를 가지며, (b)는 황산기가 결합된 환원 말단잔기인 D-마노오스에 불포화 D-글루크론산과 2개의 황산기가 결합된 L-푸코오스가 결합된 구조를 가지며, (c)는 환원 말단 잔기인 D-마노오스에 D-글루크론산과 황산기가 결합된 L-푸코오스가 결합되고, 그 D-글루크론산에 D-마노오스가 결합되고, 또한 D-마노오스에 불포화 D-글루크론산과 황산기가 결합된 L-푸코오스가 결합된 구조를 갖는다.

이상으로부터 얻은 푸코이단-U는 D-글루크론산과 D-마노오스가 교대로 결합한 구조를 가지고, 적어도 한개 이상의 D-마노오스에 L-푸코오스가 결합되어 있는 구조를 가진다.

또한, 하기 화학식 IV로 표시되는 부분 구조를 가진다(단, 식 중의 하나 이상의 알콜성 수산기는 황산 에스테르화되어 있고, 또한 n은 1 이상의 정수를 나타낸다).

이상, 이 푸코이단-U에 상기의 엔도형 푸코이단 분해 효소를 작용시키면 상기 화학식 I, II 및 III으로 표시되는 올리고당을 생성하였다.

이 푸코이단-U의 동결 건조물의 비선광도를 고속·고감도 선광계 SEPA-300이 (호리바 세이사쿠쇼 제품)에 의해 측정한 바, -53.6 도이었다.

실시예 5

(1) 푸코이단 표준 물질, 푸코이단-F, 푸코이단-U의 제조

가고메 다시마를 충분히 건조시킨 후, 2 ㎏를 자유 분쇄기(나라 기카이 세이사쿠쇼)에 의해 분쇄하고, 얻은 건조 분말을 9 ℓ의 80 % 에탄올에 현탁하여 80℃에서 2 시간 처리하였다. 처리후 여과지에 의하여 여과하여 잔류물을 얻었다. 이 잔류물에 대하여 상기 에탄올 세정, 여과 조작을 3회 반복하고 에탄올 세정 잔류물을 얻었다. 이 잔류물을 36 ℓ의 0.2 M 칼슘 용액에 현탁한 후, 95℃에서 2 시간 처리하고, 여과하였다. 잔류물을 4 ℓ의 0.2 M 아세트산칼슘 용액으로 세정하고, 가고메 다시마의 푸코이단 추출액 36 ℓ를 얻었다. 얻은 여과액에 5%의 염화세틸피리디늄을 그 이상 침전이 생기지 않을 때까지 첨가하여 원심 분리에 의해 침전을 모았다. 이 침전을 3 ℓ의 0.4 M 식염수에 현탁한 후 원심 분리하고 세척하였다. 이 세척 조작을 3 회 반복한 후 침전에 1 ℓ의 4 M 식염수를 첨가하여 잘 교반한 후 에탄올을 80 %가 되도록 첨가하고, 교반후 원심 분리에 의해 침전을 얻었다. 이 침전을 80 %의 에탄올중에 현탁하고 원심 분리하는 조작을, 상청중의 260 ㎚의 흡광도가 없어질 때까지 반복하였다. 이 침전을 2 M의 식염수 3 ℓ에 용해하고, 불용물을 원심 분리에 의해 제거한 후 100 ㎖의 DEAE의 셀룰로파인 A-800(세이가가쿠 고교 제조)을 첨가하고, 교반 후, 첨가한 수지를 여과에 의해 제거하였다. 여과액을 2 M의 식염수로 평형화한 DEAE-셀룰로파인 A-800 칼럼에 넣고 비흡착분을 배제 분자량 10만 이하의 중공 섬유를 구비 한외 여과 장치로 한외 여과하고, 착색성 물질 및 식염을 완전히 제거한 후, 원심 분리 및 여과에 의해 불용성 물질을 제거하고, 동결 건조하여 푸코이단 표준 물질을 제조하였다.

상기 동결 건조 푸코이단 표준 물질의 중량은 90 g이었다.

이 푸코이단 표준 물질의 동결 건조물을 7 g 평량하고, 0.2 M의 염화칼슘에 용해하였다. 다음에, 4000 ㎖의 DEAE-세파로스 FF의 칼럼을 0.2 M 염화칼슘으로 평형화시켰다. 0.2 M 염화칼슘에 용해된 푸코이단 표준 물질을 DEAE-세파로스 FF 칼럼에 넣고, 0.2 M의 염화칼슘으로 충분히 세정하고, 다음에 0∼4 M의 염화나트륨으로 용출시켰다. 용출 획분내 염화나트륨 농도가 O.05∼0.8 M인 획분을 모아 투석으로 탈염시킨 후 동결 건조하고, 실질적으로 푸코이단-F와 분리된 푸코이단-U를 2.1 g 얻었다.

또한 상기 용출 획분내 염화나트륨 농도가 0.9∼1.5 M인 획분을 모아 투석에의하여 탈염시킨 후 동결 건조하고, 실질적으로 푸코이단-U와 분리된 푸코이단-F 4.7 g 을 얻었다.

푸코이단-F의 분자량을 세파크릴 S-500 을 사용한 겔 여과법에 의해 구한 바, 약 19만을 중심으로 한 분자량 분포를 나타내었다.

푸코이단-F의 성분을 실시예 4에 기재한 방법에 준하여 분석하였다.

이 푸코이단-F의 구성당은 푸코오스, 갈락토오스이고, 그 몰비는 약 10:1이었다. 우롱산 및 그 외의 중성당은 실질적으로 함유되어 있지 않았다. 또한 푸코오스와 황산기의 몰 비는 약 1:2이었다.

1 %의 푸코이단-F 용액 16 ㎖, 50 mM의 인산 완충액(pH 8.0) 12 ㎖와 4 M의 염화나트륨 4 ㎖과 32 mU/㎖의 상기 엔도형 푸코이단 분해 효소 용액 8 ㎖를 혼합하고, 25℃에서 48 시간 반응시켰다. 반응에 의한 분해물의 생성은 확인되지 않고, 푸코이단-F의 저분자화도 확인되지 않았다.

다음에, 이 푸코이단-F의 동결 건조물의 비선속도를 고속·고감도 선광계SEPA-300(호리바 세이사쿠쇼 제품)에 의해 측정한 바, -135 도이었다.

(2) 푸코이단으로서 상기 실시예 1-(3) 기재의 푸코이단 VI의 동결 건조물을 사용하여 푸코이단 미생물 분해물을 하기와 같이 제조하였다.

상기 푸코이단 VI의 동결 건조물을 60 g 평량하고, 20 ℓ의 인공해수(쟈마린 래보러토리 제품)에 용해한 후 펩톤 100 g과 효모 추출물 2 g을 첨가하고, 30 ℓ의 발효 용기에 넣어 멸균시킨 후, 플라보박테리움 sp. SA-0082주(FERM BP-5402)를 식균하여 배양 온도 24℃, pH 7, 교반 125 rpm, 통기 10 ℓ/분의 조건하에서 2 시간 배양하였다. 배양액을 원심 분리하여 균체를 제거한 후, 배제 분자량 3만 이하의 중공 섬유를 구비한 한외 여과 장치로 한외 여과하고, 저분자성 물질을 완전 제거한 후, 원심 분리 및 여과에 의해 불용성 물질을 제거하고, 배제 분자량 3만 이하의 중공 섬유로 배제되지 않은 푸코이단 미생물 분해물의 동결 건조를 실시하였다. 동결 건조 푸코이단 미생물 분해물의 중량은 32 g이었다.

(3) 실시예 1-(3) 기재의 푸코이단 VI의 동결 건조물을 사용하여 실시예 5-(1) 기재의 방법에 따라 푸코이단-U를 제조하고, 푸코이단-U의 푸코이단/분해 효소 분해물을 하기와 같이 제조하였다.

상기 푸코이단 VI의 동결 건조물을 7 g 평량하고, 0.2 M의 염화칼슘에 용해하였다. 다음에 4000 ㎖의 DEAE-세파로스 FF의 칼럼을 0.2 M의 염화 칼슘으로 평형화하였다. 계속해서, 상기 푸코이단 용해물을 DEAE-세파로스 FF의 칼럼에 넣고, 0.2 M의 염화칼슘으로 충분히 세척하고, 다음에, 0.4 M의 염화나트륨 구배로 용출시켰다. 용출 획분내 염화나트륨 농도가 0.05∼0.8 M의 획분을 모아 투석에 의해 탈염시킨 후 동결 건조하여 푸코이단-U를 얻었다.

이와 같이 제조한 5 g의 푸코이단-U, 100 mM 의 트리스-염산 완충액(pH 8.0) 250 ㎖과 0.8 M의 염화나트륨 250 ㎖와 19 U/㎖ 플라보박테리움 sp. SA 0082주(FER M BP-5402)가 생산하는 엔도형 푸코이단 분해 효소 용액 0.15 ㎖을 혼합하고, 25℃에서 80 시간 반응시켰다.

반응액을 분자량 3000 이하의 중공 섬유를 구비한 한외 장치로 한외 여과하고, 저분자성 물질을 완전 제거한 후, 원심 분리 및 여과에 의해 불용성 물질을 제거하고, 배제 분자량 3000 이하의 중공 섬유로 배제되지 않은 푸코이단-U 효소 분해물을 모았다. 이 획분을 마이크로 아실라이저 G3에 의하여 탈염시킨 후 동결 건조하고, 푸코이단-U의 효소 분해물의 동결 건조물 2 g을 얻었다.

(4) 푸코이단-U, 푸코이단-F의 세포소멸 유발 작용

56℃에서 30 분간 처리한 소 태아 혈청(JRH 바이오사이언스)을 10 % 포함하는 RPMI 1640 배지(기브코 제조)로써 37℃에서 배양한 인간 전골수성 백혈병 세포 HL-60(ATCC CCL-240)을 ASF 104 배지(아지노모토 제조)로 5×10⁴개/900 ㎕가 되도록 현탁하고, 팔콘에서 시판하는 6개의 웰 평판의 각 웰에 4.5 ㎖씩 나누어 넣었다. 각각의 현탁액에 대하여, 실시예 5-(1)에서 제조한 푸코이단-F, 푸코이단-U를 10 ㎎/㎖가 되도록 120 mM의 염화나트륨을 포함하는 30 mM의 HEPES 완충액(pH 7)에 용해하고, 121℃에서 20 분간 오토클레이브 처리한 것을 100 ㎕ 첨가하고, 37℃에서 5 % 이산화탄소 존재하에서 배양하였다. 또한, 대조예로서 상기 완충액만을 동량 첨가하고 동일하게 배양하였다. 배양 개시 16시간 후와 40 시간 후의 생 세포수를 「조직 배양의 기술」(제2판)(아사쿠라 출판, 일본 조직 배양 학회편) 기재의 방법(제26∼28 페이지)에 따라서 계측하였다. 즉, 혈구 계판상의 트립판 블루 염색에 의한 방법으로 계측하였다.

얻은 결과를 도 5에 도시한다. 즉 도 5는 HL-60 세포의 배양액에 푸코이단-U 또는 푸코이단 F를 1 ㎎/㎖가 되도록 첨가할 때의 배양 시간과 배양액 중의 생 세포수의 계수를 나타내는 도면이고, 가로축은 배양 시간(시간), 세로축은 배양액중의 생 세포수를 나타낸다. 도 5 중의 배지에 첨가한 푸코오스 황산 함유 다당의 종류는 흰색 동그라미 표시가 푸코이단-U, 검정색 동그라미 표시가 푸코이단 F인 것을 나타낸다. 또한 대조예(시료 무첨가)의 배양액중의 생 세포수는 배양 16시간 후에 7×10⁴개/㎖, 40 시간 후에 1.4×10⁵개/㎖이었다.

이 결과 HL-60 세포는 푸코이단-F 및 푸코이단-U에 의해 세포소멸을 유발하여 세포 증식 속도가 억제되는 것이 판명되었다.

상기 실시예 5-(2), 실시예 5-(3)에서 각각 제조한 푸코이단 미생물 분해물, 푸코이단-U 효소 분해물을 각각 10 ㎎/㎖가 되도록 120 mM의 염화나트륨을 함유하는 30 mM HEPES 완충액(pH 7)에 용해하고, 121℃에서 20 분간 오토클레이브 처리하였지만 세포소멸 유발 작용을 상기에 준하여 측정하고, 도 5의 푸코이단-U와 동일한 결과를 얻었다.

실시예 6

녹차잎 10 g, 비타민 C 0.2 g 및 이온 교환수 1000 ㎖를 사용하고, 통상의 방법에 따라서 녹차를 제조하였다. 본 발명품 1은 실시예 1의 푸코이단 II를 사용하고, 제품 100 ㎖당 푸코이단 30 ㎎을 첨가하였다. 본 발명품 2로서는, 실시예 1의 푸코이단 II와 통상의 해조 열수에서 추출한 물질〔통상의 방법에 의해서, 가고메 다시마를 사용하고, 95℃에서 1 시간 열수 추출하고, 추출액을 활성탄 처리한 후, 더욱 동결 건조하였다(푸코이단 비율 50 %). 이후의 실시예에서 동일한 물질을 사용하였다〕와의 혼합물(푸코이단 비율 60 %)을 사용하고, 제품 100 ㎖당 푸코이단 30 ㎎에 상당하는 양을 첨가하였다. 대조예는 무첨가의 것으로 하였다. 음식이 혀에 닿는 느낌(맛), 맛의 균형, 맛의 깔끔함, 음식이 식도로 넘어가는 느낌에 관하여 패널 20 명으로 5 단계(5는 좋음, 1은 나쁨)의 관능 평가를 실시하고, 그 결과의 평균치를 하기 표 4에 나타내었다.

관능 평가

	본 발명품 1	본 발명품 2	대조예
혀에 닿는 느낌
순한 정도	4.5	3.2	2.1
매끄러운 정도	4.7	2.9	2.0
맛의 균형	4.2	2.7	2.0
맛의 깔끔함	4.0	2.5	2.0
식도로 넘어가는 느낌	4.5	3.1	2.3
식감의 총합	4.4	2.9	2.1

표 4로부터 본 발명품 1 및 2는 대조예에 비교하여 혀에 닿는 느낌이 좋아지고, 맛과의 균형이 좋아지고, 차의 향미가 돋보이고, 맛의 균형이 뛰어나다고 평가되었다.

실시예 7

영양 드링크를 하기 표 5a 내지 표 5b에 나타낸 배합에 따라서 통상의 방법으로 제조하였다.

배합표

과당 포도당 액당	150 g
정제 꿀	2 g
구아라나 추출물	1 g
고려 인삼 추출물	0.1 g
로얄 젤리	0.05 g
비타민 C	0.5 g

배합표

니코틴아미드	0.1 g
비타민 B1염산염	0.02 g
비타민 B6염산염	0.02 g
L-페닐알라닌	0.04 g
L-이소류신	0.01 g
시트르산	1.5 g
향료	2 g
탈이온수	나머지
총량	1000 ㎖

본 발명품 3은 실시예 4의 푸코이단-U를 사용하여 제품 100 ㎖ 당 푸코이단40 ㎎를 첨가하였다. 본 발명품 4로서는, 실시예 4의 푸코이단 U와 해조 열수 추출물과의 혼합물(푸코이단 비율 67%)을 사용하여 제품 100 ㎖당 푸코이단 40 ㎎에 상당하는 양을 첨가하였다. 대조예는 푸코이단 무첨가의 것을 준비하였다. 실시예 6과 동일하게 하여 관능 평가를 실시하였다. 그 결과를 하기 표 6에 나타내었다.

	본 발명품 3	본 발명품 4	대조예
혀에 닿는 느낌
순한 정도	3.0	2.5	1.8
매끄러운 정도	3.5	2.4	1.5
맛의 균형	3.6	3.2	3.0
맛의 깔끔함	3.8	3.0	2.8
식도로 넘어가는 느낌	3.7	3.4	3.0
식감의 총합	3.4	2.9	2.4

표 6으로부터, 본 발명품 3 및 4는 대조예에 비하여 음식이 혀에 닿는 느낌, 맛의 균형, 맛의 깔끔함, 음식이 식도로 넘어가는 느낌이 향상되고, 청량감이 풍부한 음료가 되었다.

실시예 8

농축형 푸코이단 드링크를 하기 표 7에 도시한 배합으로 통상의 방법에 따라 제조하였다.

배합표

맥아당 액당(㎏)	30.00
매화 가루(㎏)	0.50
1/5 투명 레몬 과즙(㎏)	2.00
펙틴(㎏)	3.00
무수 시트르산(㎏)	0.19
비타민 C(㎏)	0.20
향료(㎏)	1.20
탈이온수	나머지
총(ℓ)	1000
제품의 pH 3.1

본 발명품 5는 실시예 1-(2) 기재의 푸코이단 V를 사용하고, 제품 100 ㎖당 푸코이단 400 ㎎을 첨가하였다. 본 발명품 6은 푸코이단 V와 해조에서 유도된 열수 출물과의 혼합물(푸코이단 비율 80 %)을 사용하고, 제품 100 ㎖당 푸코이단 400 ㎎에 해당하는 양을 첨가하였다. 대조예로서는 농축형 드링크이므로 증점제인 듀런 껌 400 ㎎/100 ㎖을 첨가한 대조예 1 및 크산탄 껌 400 ㎎/100 ㎖을 첨가한 대조예 2를 준비하고, 실시예 6과 동일하게 하여 관능 검사를 실시하고, 하기 표 8에 그 결과를 나타내었다.

관능 평가

	본 발명품 5	본 발명품 6	대조예 1	대조예 2
혀에 닿는 느낌
순한 정도	4.0	3.7	3.5	3.4
매끄러운 정도	4.1	3.6	3.3	3.2
맛의 균형	4.0	3.8	3.2	3.1
맛의 깔끔함	3.5	3.3	3.1	3.3
식도로 넘어가는 느낌	3.7	3.6	3.2	3.3
식감의 총합	4.0	3.7	3.3	3.2

표 8로부터, 본 발명품 5 및 본 발명품 6은 대조예 1 및 2에 비하여, 음식이 혀에 닿는 느낌 및 맛의 균형이 뛰어나고, 농축형 드링크로서 맛이 숙성된 제품이 생성되었다. 또한, 실시예 1-(3) 기재의 푸코이단 VI 사용하고, 제품 100 ㎖당 푸코이단 400 ㎎를 첨가하고, 농축형 드링크를 제조하고 동일한 결과를 얻었다. 또한 실시예 5-(2), (3)에서 각각 제조한 분해물을 각각 사용하고, 제품 100 ㎖당 분해물 400 ㎎을 첨가하고, 농축형 드링크를 제작하여 동일한 결과를 얻었다.

실시예 9

알콜 함유 음료를 하기 표 9에 도시하는 배합으로 통상의 방법에 의해 제조하였다.

배합표

운슈 냉동 밀감 농축 과즙(Brix 도 45)	110 g
과립당	80 g
시트르산	2 g
시트르산나트륨	0.5 g
오렌지 에센스	2 g
5% (v/v) 알콜 수용액	나머지
합계	1000 ㎖
주: 배합 음료를 5℃로 냉각한 후, 소다 사이폰에 의해 탄산을 함유시킴

본 발명품 7은 실시예 1의 푸코이단 II을 사용하여 제품 100 ㎖당 푸코이단35 ㎎를 첨가하였다. 본 발명품 8로서는 실시예 1의 푸코이단 II와 해조 열수 추출물과의 혼합물(푸코이단 55 %)을 사용하고, 푸코이단 35 ㎎에 상당하는 양을 첨가하였다. 대조예는 푸코이단 무첨가의 것을 사용하였다. 관능 평가는 실시예 6과 동일하게 실시하고 그 결과를 하기 표 10에 도시하였다.

관능 평가

	본 발명품 7	본 발명품 8	대조예
혀에 닿는 느낌
순한 정도	4.2	3.3	2.7
매끄러운 정도	4.3	3.1	2.8
맛의 균형	4.0	3.5	2.5
맛의 깔끔함	3.9	3.0	2.7
식도로 넘어가는 느낌	3.5	2.7	2.1
식감의 총합	4.0	3.1	2.6

표 10에 도시하는 바와 같이, 본 발명품 7 및 8은 대조예와 비교하여 음식이 혀에 닿는 느낌, 맛의 균형, 맛의 깔끔함, 음식이 식도로 넘어가는 느낌이 개선되어 있는 것을 알 수 있다. 특히 본 발명품 7은 신맛이 부드럽게 되어 완숙 감귤과 같은 맛으로 완성되었다.

실시예 10

스포츠용 드링크로서 하기 표 11에 나타내는 배합으로 통상의 방법에 의해 제조하였다.

배합표

포도당	48 g
과당	7.8 g
시트르산	1.4 g
시트르산나트륨	1.0 g
정제염	0.3 g
락트산칼슘	0.1 g
염화마그네슘	0.1 g
비타민 C	0.2 g
비타민 B1 염산염	0.02 g
레몬 라임 향료	2 g
탈이온수	나머지
총량	1000 g

본 발명품 9는 실시예 4의 푸코이단-U를 사용하여 제품 100 g당 푸코이단 30 ㎎을 첨가하였다. 본 발명품 10으로서는, 실시예 4의 푸코이단 U와 해조에서 유도된 열수 추출물과의 혼합물(푸코이단 비율 75 %)을 사용하고, 푸코이단 30 ㎎에 상당하는 양을 첨가하였다. 대조예에는, 푸코이단 무첨가의 것을 준비하고, 실시예 6과 동일하게 하여 관능 평가하고, 하기 표 12에 그 결과를 나타내었다.

관능 평가

	본 발명품 9	본 발명품 10	대조예
혀에 닿는 느낌
순한 정도	4.5	3.8	2.5
매끄러운 정도	4.3	3.5	2.3
맛의 균형	3.9	3.5	3.2
맛의 깔끔함	3.7	3.2	2.9
식도로 넘어가는 느낌	4.0	3.5	2.8
식감의 총합	4.0	3.5	2.7

표 12로부터 본 발명품 9 및 10은 대조예에 비하여, 음식이 혀에 닿는 느낌, 음식이 식도로 넘어가는 느낌 및 맛의 균형이 뛰어나고, 각 성분간의 조화가 뛰어나고, 맛이 숙성된 효과가 현저한 제품이 생성되었다.

실시예 11

과실을 넣은 매실주를 만들기 위해서, 5 ℓ의 뚜껑이 부착된 병 용기에 75 w/w % 과당 포도당 액당 1440 g, 95 v/v% 원료용 알코올 670 ㎖, 급수 340 ㎖에 혼합한 후, 청 매실 1 ㎏을 넣는다.

본 발명품 11은 장입시에 실시예 2의 푸코이단 III를 사용하고, 제품 100 ㎖당 푸코이단 40 ㎎를 첨가하였다. 본 발명품 12로서는, 실시예 2의 푸코이단 III와 해조 열수 추출물과의 혼합물(푸코이단 비율 70%)을 사용하고, 제품 100 ㎖당 푸코이단 40 ㎎에 상당하는 양을 첨가하였다. 대조는 푸코이단 무첨가로 하였다.

각각의 병에 뚜껑을 덮은 후 온실에서 방치하고 때때로 교반하고, 2 개월간 청 매실을 담갔다. 다음에, 28 v/v% 알콜 수용액 1020 ㎖을 추가하여 혼합하고, 숙성을 2 개월간 더 지속하여 매실주를 얻었다.

숙성을 끝낸 각각의 매실주에 관해서 실시예 6과 동일하게 하여 관능 평가를 실시하고, 그 결과를 하기 표 13에 도시하였다.

관능 평가

	본 발명품 11	본 발명품 12	대조예
혀에 닿는 느낌
순한 정도	4.5	3.2	2.5
매끄러운 정도	4.2	3.3	2.6
맛의 균형	4.6	4.0	2.4
맛의 깔끔함	3.8	3.5	2.7
식도로 넘어가는 느낌	4.2	3.4	2.8
식감의 총합	4.3	3.5	2.6

표 13으로부터 본 발명품 11 및 12은 대조예에 비하여, 음식물이 혀에 닿는 촉감, 목으로 넘어가는 느낌이 뛰어나고, 장기 숙성에서 보여지는 것과 같은 숙성된 맛 및 맛의 균형의 효과가 보였다.

실시예 12

보통 우유의 균질 우유(수분 88.6 w/v%, 단백질 2.8 w/v%, 지방 3.5 w/v%, 유당 4.5 w/v%, 회분 0.8 w/v%)을 사용하고, 본 발명품 13은 실시예 1의 푸코이단 I을 사용하고, 제품 100 ㎖당 푸코이단 30 ㎎를 첨가하였다. 본 발명품 14로서는, 실시예 1의 푸코이단 I과 해조에서 유도된 열수물과의 혼합물(푸코이단 비율 80%)을 사용하고, 푸코이단 30 ㎎에 상당하는 양을 첨가하였다. 대조예는 무첨가의 것을 사용하였다. 관능 평가는 실시예 6과 같이 동일하게 실시하고, 그 결과를 하기 표 14에 도시하였다.

관능 평가

	본 발명품 11	본 발명품 12	대조예
혀에 닿는 느낌
순한 정도	3.6	3.0	2.1
매끄러운 정도	3.5	2.9	2.5
맛의 균형	4.0	3.6	3.0
맛의 깔끔함	4.2	2.8	2.4
식도로 넘어가는 느낌	3.9	3.3	2.1
식감의 총합	3.8	3.1	2.4

표 14로부터 본 발명품 13 및 14는 대조예에 비하여, 음식이 혀에 닿는 느낌, 맛의 균형이 개선되고, 우유가 혀에 엉겨 붙는 것 같은 식감, 즉 맛의 깔끔함 부족에 관하여 맛의 깔끔함이 개선되고, 우유를 마시기가 수월하게 되었다.

실시예 13

통상의 방법에 따라서 대두로부터 두유를 만들고, 응고제로 응고시켜 통상의 모판 두부를 제조하였다.

본 발명품 15는 두유중에 실시예 2의 푸코이단 IV를 사용하고, 제품 100 g당 푸코이단 40 ㎎을 첨가하였다. 본 발명 16에서는 실시예 2의 푸코이단 IV와 해조 열수 추출물과의 혼합물(푸코이단 비율 60 %)를 사용하고, 제품 100 g당 40 ㎎의 푸코이단에 상당하는 양을 첨가하였다. 대조예는 무첨가의 것을 사용하고, 관능 평가는 실시예 6과 동일하게 하여 실시하고, 그 결과를 하기 표 15에 나타내었다.

관능 평가

	본 발명품 15	본 발명품 16	대조예
혀에 닿는 느낌
순한 정도	4.0	3.2	2.8
매끄러운 정도	3.8	3.1	2.5
씹히는 느낌	3.6	3.2	2.8
식감의 총합	3.8	3.2	2.7

표 15로부터 본 발명품 15 및 16은 대조예에 비하여, 음식이 혀에 닿는 느낌이 개선되어 모판 두부이지만 연두부와 같은 식감이 생기게 하고, 종합한 식욕은 현저히 향상된다.

실시예 14

과자류로서, 초콜릿 크림, 캔디 및 오렌지 젤리를 하기와 같이 제조하였다.

초콜릿 크림은 난황 2개, 우유 125 ㎖, 소맥분 10 g, 설탕 30 g을 사용하여 가온하면서 반죽하여 제조하였다.

캔디는 사탕 1.2 ㎏과 물엿 0.8 ㎏을 용해기(110℃)에서 용해시킨 후, 쿠커로 120∼130℃까지 익히고, 수분 함량 2 % 이하로 하고, 젖산(50 중량% 용액) 16.3 g, 사과산 10.1 g, 탄산칼슘 5.0 g 및 적량의 향료를 첨가하여 제조하였다.

오렌지 젤리는 카라기난 9 g을 과립당 180 g과 혼합하고, 물 800 ㎖를 첨가하여 혼합하고, 가열 용해한다. 이것에, 온슈 감귤 농축 과즙 10 g, 구연산 2 g, 구연산 소다 1.5 g, 오렌지 아로마 2 g, 향료 1 g를 첨가하여 제조하였다.

본 발명품 17(초콜릿 크림), 18(캔디), 19(오렌지 젤리)는 각각 실시예 4의 푸코이단-U를 사용하여 제품 100 g당 푸코이단 20 ㎎을 첨가하였다. 본 발명품 20(초콜릿 크림), 21(캔디), 22(오렌지 젤리)로서는 실시예 4의 푸코이단-U와 해조 열수 추출물과의 혼합물(푸코이단 비율 60 %)을 사용하여 제품 100 g당 푸코이단 20 ㎎에 상당하는 양을 첨가하였다. 대조예는 무첨가의 것을 사용하였다. 관능 평가는 실시예 6과 동일하게 실시하고, 하기 표 16에 그 결과를 나타내었다.

표 16으로부터, 본 발명품 17, 18, 19 및 20, 21, 22는 각각의 대조예에 비하여 음식이 혀에 닿는 느낌의 매끄러움이 향상되고, 식감이 부드러워지고, 종합적 평가에서도 우수하였다.

실시예 15

반죽 제품으로서, 어육을 사용한 어묵 및 가축육을 사용한 소시지를 하기와 같이 제조하였다.

어묵은 생선 으깬 어육(SA급) 1 ㎏에 물 100 g, 식염 20 g을 첨가하고 15분간 혼합물을 분쇄/반죽한 것을 40 g씩 비닐 백에 채우고, 5℃에서 하룻밤 보존한 후, 상압에서 15 분간 쩌서 어묵 찜을 얻는다.

소세지는 돼지고기 2 ㎏, 돼지 지방 700 g을 5 ㎜ 단위로 살을 손질하여, 후추 7 g, 셀비어(sage) 3 g, 육두구 향료(mace) 1 g를 혼합하고, 커팅한 후, 지름 2 ㎝의 돼지 내장을 사용하여 케이싱 처리하였다. 이것을 15 분간 익혀서 소시지를 얻는다.

어묵에 분쇄/반죽하기 전 및 소시지에는 커팅 전에, 본 발명품 23(어묵) 및 24(소시지)는 실시예 1의 푸코이단 Ⅰ을 사용하고 제품 100 g당 푸코이단 50 ㎎을 첨가하였다. 본 발명품 25(어묵) 및 26(소시지)는 실시예 1의 푸코이단 I와 해조 열수 추출물과의 혼합물(푸코이단 비율 67%)을 사용하고, 제품 100 g당 푸코이단 50 ㎎에 상당하는 양을 첨가하였다. 대조예는 무첨가의 것을 사용하였다. 관능 평가는 실시예 6과 동일하게 실시하고, 그 결과를 하기 표 17에 나타내었다.

표 17로부터 본 발명품 23, 25(어묵) 및 본 발명품 24, 26(소시지)의 본 발명품은 각각의 대조예에 비하여, 음식이 혀에 닿는 느낌의 식감은 부드러워지고, 씹히는 느낌에도 탄력성이 향상하였다.

실시예 16

면류로서 라면을 하기와 같이 제조하였다. 즉, 4 ㎏의 라면 전용분(소다수 등을 함유하는 소맥분)에 젖산나트륨 25.4 g(50 w/w % 용액), 사과산 나트륨 9.4 g, 탄산칼슘 10 g을 첨가하고, 추가로 1.6 ℓ의 물을 첨가하고, 소보로형이 되도록 혼합하였다. 이것을 가정용 국수 제조기(산요 덴키 제조)로 국수를 제조하였다.

본 발명품 27은 실시예 1의 푸코이단 II를 사용하여, 제품 100 g당 푸코이단 40 ㎎를 첨가하였다. 본 발명품 28로서는, 실시예 1의 푸코이단 II와 해조 열수 추출물과의 혼합물(푸코이단 비율 60%)을 사용하여, 제품 100 g당 푸코이단 40 ㎎에 상당하는 양을 첨가하기 전에 첨가 혼합하였다. 대조예는 무첨가의 것을 사용하였다.

얻은 각각의 라면을 사용하여, 통상의 방법으로 조리하였다. 관능 평가는 실시예 6과 동일하게 실시하고, 그 결과를 하기 표 18에 나타내었다.

관능 평가

	본 발명품 27	본 발명품 28	대조예
혀에 닿는 느낌	3.8	3.2	2.5
씹히는 느낌	3.5	3.0	2.8
식감의 총합	3.6	3.1	2.6

표 18로부터 본 발명품 27 및 28은 대조예에 비하여, 음식이 혀에 닿는 느낌이 향상되고, 씹히는 느낌으로서도 탄성력이 있고, 씹히는 맛이 좋고, 종합적으로 높은 평가를 받았다.

실시예 17

빵류로서, 식빵 및 중국식 만주를 통상의 방법에 따라서 제조하였다.

식빵및 중국식 만주피의 배합과 제조 조건을 각각 하기 표 19a 내지 표 19b 및 하기 표 20에 나타내었다.

빵 배합 비율 및 제조 조건

스폰지 반죽 제조용 배합
소맥분	70 중량부
이스트	2
이스트 후드	0.1
물	40

최종 반죽 조작용 배합
소맥분	30 중량부
설탕	5
식염	2
쇼트닝	5
카제인	0.5
물	25
조제 조건
발효 시간	4시간(온도 27℃, 습도 75%)
배로(焙爐; proofing) 시간	40분(온도 38℃, 습도 85%)
굽는 시간	35분(온도 210℃)

중국식 만주피의 배합 비율 및 제조 조건

배합 비율
소맥분	100 중량부
설탕	15
식염	0.8
베이킹 파우더	1
라드	5
이스트	3.5
물	43.5
조제 조건
배로 시간	90분(온도 45℃, 습도 75%)
찌는 시간	15분

이들 식빵 및 중국식 만주피 100 g당, 본 발명품 29(식빵) 및 30(중국시 만주피)은 실시예 2의 푸코이단 IV를 사용하고, 푸코이단 35 ㎎을 첨가하였다. 본 발명품 31(식빵) 및 32(중국식 만주피)로서는, 실시예 2의 푸코이단 IV와 해조 열수 추출물과의 혼합물(푸코이단 비율 80 %)을 사용하고, 푸코이단 35 ㎎에 상당하는 양을 원료 배합시에 각각 첨가하였다. 각각의 대조는 무첨가의 것을 사용하였다.

얻은 식빵 및 중국식 만주피를 투명 플라스틱 랩으로 싸고, 5℃에서 24 시간방치하였다. 관능 평가는 방치 후의 식빵 및 중국식 만주피를 사용하여 실시예 6와 동일하게 실시하고, 그 결과를 하기 표 21에 나타내었다.

빵류를 저온에 방치하면, 축축함이 열화되어 바삭거리는 식감이 되지만, 표 21에서 나타내는 바와 같이, 본 발명품 29, 31 및 30, 32는 각각의 대조예에 비하여 방치후 음식이 혀에 닿는 느낌이라든지 씹히는 느낌의 식감이 뛰어나고, 음식이 혀에 닿는 느낌이라든지 씹히는 느낌의 식감에 있어서의 열화가 방지되고, 식감의 유지 작용의 효과가 높은 것을 알 수 있다.

실시예 18

통상의 방법에 의해 제조된 청주를 사용하여, 본 발명품 33은 실시예 4의 푸코이단-U를 사용하며, 제품 100 ㎖당 푸코이단 25 ㎎를 첨가하였다. 본 발명품 34로서는 실시예 4의 푸코이단-U와 해조 열수 추출물과의 혼합물(푸코이단 비율 70%)를 사용하여 제품 10 ㎖당 푸코이단 25 ㎎을 첨가하였다. 대조예는 무첨가의 것을 사용하였다.

관능 평가는 실시예 6과 동일하게 실시하였다. 평가 항목에 맛, 향기를 추가하고, 그 결과를 하기 표 22에 나타내었다.

관능 평가

	본 발명품 33	본 발명품 34	대조예
맛	3.1	3.0	3.0
향기	2.9	2.8	2.9
혀에 닿는 느낌
순한 정도	3.9	3.2	2.5
매끄러운 정도	4.2	3.5	2.8
맛의 균형	3.5	3.1	2.9
맛의 깔끔함	3.6	3.2	2.7
식도로 넘어가는 느낌	3.8	3.0	2.6
총합	3.7	3.1	2.8

표 22로부터 본 발명품 33 및 34는 대조예 비하여, 음식이 혀에 닿는 느낌, 특히 매끄러움에 있어서 뛰어나고, 맛의 깔끔함, 식도로 넘어가는 느낌이 향상되고, 기호품으로서의 식감이 개선되는 효과를 발견하였다.

실시예 19

통상의 방법에 의해 제조된 미림 및 발효 조미료를 사용하고, 본 발명품 35(미림) 및 37(발효 조미료)은 실시예 2의 푸코이단 III을 사용하고, 제품 100 ㎖당 푸코이단 30 ㎎을 첨가하였다. 본 발명품 36(미림) 및 38(발효 조미료)로서는, 실시예 2의 푸코이단 III과 해조 열수 추출물과의 혼합물(푸코이단 비율 67 %)을 사용하고, 제품 100 ㎖당 푸코이단 30 ㎎에 상당하는 양을 첨가하였다. 대조예는 무첨가의 것을 사용하였다.

관능 평가는 실시예 6과 동일하게 실시하였다. 평가 항목에 맛, 향기를 추가하고, 그 결과를 하기 표 23에 나타내었다.

관능 평가

	미림	발효 조미료
	본 발명품	대조예	본 발명품	대조예
	35		37		36	38
맛	2.9	2.8	2.8	2.7	2.6	2.7
향기	2.7	2.4	2.7	2.4	2.1	2.4
혀에 닿는 느낌
순한 정도	3.9	3.0	2.5	3.7	2.8	2.6
매끄러운 정도	4.1	3.2	2.7	3.8	2.9	2.4
맛의 균형	3.4	3.2	3.1	2.9	2.5	2.4
맛의 깔끔함	3.5	3.1	3.0	3.2	2.8	2.3
총합	3.4	3.0	2.8	3.1	2.6	2.5

표 23으로부터, 본 발명의 미림(35,37) 및 발효 조미료(36,38)는 각각의 대조예에 비하여, 음식이 혀에 닿는 느낌, 특히 매끄러움, 부드러움, 맛의 균형에 있어서 향상된 효과를 나타내고, 조미료로서 조리에 있어서의 식품 재료의 식감 개선과 연결된다.

실시예 20

뿌려먹는 식품으로서, 생선 가루 4.7 ㎏, 김 0.8 ㎏, 참깨 2.5 ㎏, 식염 1.0 ㎏, 글루타민산 소다 0.5 ㎏을 혼합하여 통상의 방법에 따라 과립화하여 제조하였다.

본 발명품 39는 실시예 4의 푸코이단-U를 사용하여 제품 100 g당 푸코이단 1000 ㎎을 첨가하였다. 본 발명품 40으로서는, 실시예 4의 푸코이단-U 해조 열수 추출물과의 혼합물(푸코이단 비율 60%)을 사용하고, 제품 100 g당 푸코이단 1000 ㎎에 상당하는 양을 첨가하였다. 대조예는 푸코이단 무첨가인 것으로 하였다. 이들 뿌려먹는 식품을 쌀밥에 뿌리고, 식감의 관능 평가를 실시예 6과 동일하게 실시하였다.

그 결과, 본 발명품 39 및 40은 대조예에 비하여, 입에 담았을 때, 쌀밥과 잘 어울리고, 음식이 혀에 닿는 느낌이 좋고, 껄끄러운 느낌이 없고, 종합적으로 뿌러먹는 식품의 품질을 향상시킬 수 있는 것을 알 수 있다.

발명이 해결하고자 하는 과제

본 발명의 목적은 푸코이단 함유의 재료를 제공하여, 상기 재료를 이용한 맛이 좋고 건강에 유용한 생리 작용을 갖는 식품 및 음료를 제공하는 것에 있다.

발명을 해결하기 위한 수단

본 발명을 개설하면, 본 발명의 제1 발명은 푸코이단 함유물에서 유도된 푸코이단을 함유하는 것을 특징으로 하는 식품 또는 음료에 관한 것이다.

또한 본 발명의 제2 발명은 푸코이단 함유물에서 유도된 알긴류가 감소 또는 제거된 푸코이단을 함유하는 것을 특징으로 하는 식품 또는 음료에 관한 것이다.

또한 본 발명의 제3 발명은 푸코이단 함유물에서 유도된 세포소멸(apoptosis) 유발성을 갖는 푸코이단을 유효량 함유하는 것을 특징으로 하는 세포소멸 유발성 식품 또는 음료에 관한 것이다.

다음에 본 발명의 제4 발명은 푸코이단 함유물에서 유도된, 알긴류가 감소 또는 제거된 세포소멸 유발성을 갖는 푸코이단을 유효량 함유하는 것을 특징으로 하는 세포소멸 유발성 식품 또는 음료에 관한 것이다.

또 본 명세서에 있어서는, 알긴산 및 그 염 또는 에스테르 또는 이것들의 분해물을 총칭하여 알긴류라고 한다.

본 발명의 식품 또는 음료는 생리 활성을 갖는 푸코이단 및/또는 그 분해물을 다량으로 함유하고, 푸코이단이 갖는 세포소멸 유발 작용에 의하여 이들을 섭취함으로써 발암 예방, 암 억제 효과 등을 갖는 건강 식품 또는 음료이고, 특히 위장 건강 유지에 유효한 기능성 해양 섬유가 첨가된 식품 또는 음료이다.

본 발명의 푸코이단, 특히 해조의 푸코이단은 식용의 해조 식물, 즉 식용 물질을 원료로서 염가에 대량으로 공급 가능하고, 또한 안전성이 높은 점에서도 우수하다. 또한, 본 발명에 의해 알긴산 함량이 감소 또는 제거된 푸코이단이 제공되고, 상기 푸코이단은 음식품의 본래의 물성을 손상하지 않고, 식감인 음식이 혀에 닿는 느낌, 맛의 깔끔함, 맛의 숙성 및 씹히는 느낌 등을 개선할 수 있고, 또한 식감면에서의 양호한 물성을 유지하는 효과가 있기 때문에, 음식품의 제조에 있어서 극히 유용하다.

Claims (24)

1. 푸코이단 함유물에서 유도된 푸코이단을 함유하는 것을 특징으로 하는 식품 또는음료.
2. 푸코이단 함유물에서 유도된, 알긴류가 감소 또는 제거된 푸코이단을 함유하는 것을 특징으로 하는 식품 또는 음료.
3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 푸코이단이 푸코이단 함유 추출물인 것을 특징으로 하는 식품 또는 음료.
4. 제3항에 있어서, 푸코이단 함유 추출물은 칼슘염 존재하에서 푸코이단 함유물을 추출하여 얻은 물질인 것을 특징으로 하는 식품 또는 음료.
5. 제4항에 있어서, 칼슘염이 염화칼슘인 것을 특징으로 하는 식품 또는 음료.
6. 제3항에 있어서, 푸코이단 함유 추출물은 알칼리성 용액을 사용하여 푸코이단 함유물로부터 추출한 후, 추출액에 칼슘염을 첨가하여 얻은 가용성 물질인 것을 특징으로 하는 식품 또는 음료.
7. 제6항에 있어서, 알칼리성 용액이 탄산나트륨 용액인 것을 특징으로 하는 식품 또는 음료.
8. 제6항에 있어서, 칼슘염이 염화칼슘인 것을 특징으로 하는 식품 또는 음료.
9. 제3항에 있어서, 푸코이단 함유 추출물은 알칼리성 용액을 사용하여 푸코이단 함유물로부터 추출한 후, 추출액을 산성화하여 얻은 가용성 물질인 것을 특징으로 하는 식품 또는 음료.
10. 제9항에 있어서, 알칼리성 용액이 탄산나트륨 용액인 것을 특징으로 하는 음료 또는 식품.
11. 푸코이단 함유물에서 유도된 세포소멸(apoptosis) 유발성을 갖는 푸코이단을 유효량 함유하는 것을 특징으로 하는 세포소멸 유발성 식품 또는 음료.
12. 푸코이단 함유물에서 유도된, 알긴류가 감소 또는 제거된 세포소멸 유발성을 갖는 푸코이단을 유효량 함유하는 것을 특징으로 하는 세포소멸 유발성 식품 또는 음료.
13. 제11항 또는 제12항에 있어서, 푸코이단이 푸코이단 함유 추출물인 것을 특징으로 하는 세포소멸 유발성 식품 또는 음료.
14. 제13항에 있어서, 푸코이단 함유 추출물은 칼슘염 존재하에서 푸코이단 함유물을 추출하여 얻은 물질인 것을 특징으로 하는 세포소멸 유발성 식품 또는 음료.
15. 제14항에 있어서, 칼슘염이 염화칼슘인 것을 특징으로 하는 세포소멸 유발성 식품 또는 음료.
16. 제13항에 있어서, 푸코이단 함유 추출물은 알칼리성 용액을 사용하여 푸코이단 함유물로부터 추출한 후, 추출액에 칼슘염을 첨가하여 얻은 가용성 물질인 것을 특징으로 하는 세포소멸 유발성 식품 또는 음료.
17. 제16항에 있어서, 알칼리성 용액이 탄산나트륨 용액인 것을 특징으로 하는 세포소멸 유발성 식품 또는 음료.
18. 제16항에 있어서, 칼슘염이 염화칼슘인 것을 특징으로 하는 세포소멸 유발성 식품 또는 음료.
19. 제13항에 있어서, 푸코이단 함유 추출물은 알칼리성 용액을 사용하여 푸코이단 함유물로부터 추출한 후, 추출액을 산성화하여 얻은 가용성 물질인 것을 특징으로 하는 세포소멸 유발성 식품 또는 음료.
20. 제19항에 있어서, 알칼리성 용액이 탄산나트륨 용액인 것을 특징으로 하는 세포소멸 유발성 식품 또는 음료.
21. 제1항 내지 제20항 중 어느 하나의 항에 있어서, 푸코이단이 해조의 푸코이단인 것을 특징으로 하는 식품 또는 음료.
22. 제1항 내지 제21항 중 어느 하나의 항에 있어서,

    (1) 구성당으로서 우롱산을 함유하며,

    (2) 플라보박테리움(F1avobacterium) sp. SA-0082(FERM BP-5402)이 생산하는 푸코이단 분해 효소에 의해 저분자화하고, 적어도 하기 화학식 I, II, III으로 표시되는 화합물로부터 선택되는 1종 이상의 화합물이 생성되는 이화학적 성질을 갖는 푸코이단-U 및/또는

    (1) 구성당으로서 우롱산을 실질적으로 함유하지 않으며,

    (2) 플라보박테리움 sp. SA-0082(FERM BP-5402)이 생산하는 푸코이단 분해 효소에 의해 실질적으로 저분자화되지 않는 이화학적 성질을 갖는 푸코이단-F인 것을 특징으로 하는 식품 또는 음료.

    화학식 I

    화학식 II

    화학식 III
23. 제1항,제2항, 제11항 또는 제12항 중 어느 하나의 항에 있어서, 푸코이단이 푸코이단 분해물인 것을 특징으로 하는 식품 또는 음료.
24. 제1항 내지 제23항 중 어느 하나의 항에 있어서, 푸코이단 함량이 푸코오스 환산 중량으로서 0.001 w/w % 이상인 것을 특징으로 하는 식품 또는 음료.