KR102433588B1 - 할로겐 치환 헤테로환 화합물의 염 - Google Patents

Abstract

강력한 LPA 수용체 길항 작용을 갖고, 의약으로서 유용한 신규의 α위치 할로겐 치환 티오펜 화합물의 염 제공. 일반식（I): [식 중 R은 수소 원자 또는 메톡시기; X는 할로겐 원자; A는 이하의 기: (AA)로 이루어지는 군으로부터 선택되는 기; M은 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속; n은 M이 알칼리 금속일 때는 1을, M이 알칼리 토금속일 때는 2를 나타낸다]로 표현되는 염.

Description

할로겐 치환 헤테로환 화합물의 염{SALT OF HALOGEN-SUBSTITUTED HETEROCYCLIC COMPOUND}

본 발명은 의약으로서 유용한 신규 α위치 할로겐 치환 티오펜 화합물의 염에 관한 것이다. 본 발명의 α위치 할로겐 치환 티오펜 화합물의 염은 리소포스파티드산(LPA) 수용체 길항 작용을 갖는 점에서, LPA에 의해 야기되는 질환의 예방 및/또는 치료에 유용하다.

리소포스파티드산(LPA)은 생체 내에 존재하는 생리 활성 인지질이다. LPA는 특이적인 G 단백 공액 수용체(LPA1, LPA2, LPA3, LPA4, LPA5, LPA6)에 결합하여 세포 내에 시그널을 전달하여, 세포의 증식, 분화, 생존, 유주(遊走), 접착, 침윤, 형태 형성을 조절하고 있다. 또한, LPA는 각종 장기에서 섬유화를 수반하는 질환에 관여하는 것으로 알려져 있다.

간장에 있어서, 간섬유화의 과정에서 중요한 역할을 나타내는 별 세포의 증식이나 수축, 근섬유아세포의 유주를 LPA가 촉진하는 것으로 보고되어 있다(비특허문헌 1, 2, 3을 참조).

신장에 있어서, 신장섬유증 동물 모델인 편측 요관 결찰 마우스에서 LPA의 산생이나 LPA1의 발현이 항진되어 있는 것, LPA1 결손 혹은 LPA 수용체 길항제 투여에 의해 신장섬유화가 억제되는 것으로 보고되어 있다(비특허문헌 4, 5를 참조).

폐에 있어서, 특발성 폐섬유증 환자의 폐포 세정액 내의 LPA 농도가 상승되어 있는 것, 폐섬유화의 과정에 중요한 역할을 갖는 섬유아세포에는 LPA1이 가장 많이 발현되어 있어, LPA가 섬유아세포를 유주시키는 것으로 보고되어 있다. 또한 폐섬유증 동물 모델인 블레오마이신 기관내 투여 마우스에서는 LPA1 결손 혹은 LPA 수용체 길항제 투여에 의해 섬유화가 억제되는 것으로 보고되어 있다(비특허문헌 6, 7을 참조).

피부에 있어서, 강피증 모델인 블레오마이신 피하 투여 마우스에서는 LPA1 결손 혹은 LPA 수용체 길항제 투여에 의해 피부섬유화가 억제되는 것으로 보고되어 있다(비특허문헌 8을 참조).

또한, LPA는 면역·염증성 질환에 관여하는 것도 알려져 있다. LPA는 인간 단구계 세포의 유주를 항진하는 것, T세포의 증식이나 침윤에 관여하는 것으로 보고되어 있다. 또한 류머티즘 환자의 활막 세포는 LPA 수용체를 발현하고 있어, LPA 자극에 의해 유주 혹은 IL-6, IL-8을 산생하는 것, 이들 작용은 LPA 수용체 길항제에 의해 저해되는 것으로 보고되어 있다(비특허문헌 9, 10, 11을 참조).

그 밖에도, LPA 및 LPA1이 신경성 동통의 발현에 관여하는 것(특허문헌 12를 참조), LPA가 적출 요도 표본 및 전립선 표본을 수축시켜 요도 내압을 상승시킴으로써 비뇨기계 질환에 관여하는 것(특허문헌 1을 참조), LPA가 암 세포의 침윤을 촉진하는 것, 난소암 세포의 증식을 촉진하는 것 또는 전립선암 세포의 증식을 촉진하는 것으로부터, 암 관련 질환에 관여하는 것(비특허문헌 13, 14, 15를 참조)으로 보고되어 있다.

이러한 점에서, LPA 수용체(특히 LPA1 수용체)를 길항하는 약제는 섬유화를 수반하는 질환, 면역·염증성 질환, 중추·말초신경계 질환, 비뇨기계 질환, 암 관련 질환 등의 예방 및/또는 치료에 유용한 것으로 생각된다.

한편, LPA 수용체 길항 작용을 갖는 화합물로서는, 특허문헌 2 내지 23, 비특허문헌 5, 7, 8 및 16에 ([1,1'-비페닐]-4-일)아세트산 유도체가, 또한 특허문헌 17에는 (2'-메톡시-[1,1'-비페닐]-4-일)아세트산 유도체가, 특허문헌 19에는 3-클로로이소티아졸 유도체가 개시되어 있지만, 본 발명 화합물의 개시는 없다.

WO2002/062389호 공보 WO2010/077882호 공보 WO2010/077883호 공보 WO2010/141761호 공보 WO2010/141768호 공보 WO2011/017350호 공보 WO2011/041461호 공보 WO2011/041462호 공보 WO2011/041694호 공보 WO2011/041729호 공보 WO2011/091167호 공보 WO2011/159632호 공보 WO2011/159633호 공보 WO2011/159635호 공보 WO2012/078593호 공보 WO2012/078805호 공보 WO2012/138648호 공보 WO2012/138797호 공보 WO2013/025733호 공보 WO2013/085824호 공보 WO2013/189862호 공보 WO2013/189864호 공보 WO2013/189865호 공보

Biochemical and Biophysical Research Communications, 248(1998) 436-440 Biochemical and Biophysical Research Communications, 277(2000) 72-78 Journal of Biomedical Science, 10(2003) 352-358 Journal of the American Society of Nephrology, 18(2007) 3110-3118 The Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics, 336(2011) 693-700 Nature Medicine, 14(2008) 45-54 British Journal of Pharmacology, 160(2010) 1699-1713 Arthritis & Rheumatism, 63(2011) 1405-1415 Journal of Biological Chemistry, 270(1995) 25549-25556 Biochimica et Biophysica Acta, 1582(2002) 168-174 Molecular Pharmacology, 73(2008) 587-600 Nature Medicine, 10(2004) 712-718 Biochemical and Biophysical Research Communications, 193(1993) 497-503 Biochemical Journal, 309(1995) 933-940 The Journal of Urology, 163(2000) 1027-1032 Journal of Medicinal Chemistry, 55(2012) 7920-7939

본 발명자들은, 섬유화를 수반하는 질환, 면역·염증성 질환, 중추·말초신경계 질환, 비뇨기계 질환, 암 관련 질환 등의 우수한 치료약 혹은 예방약의 개발을 목표로, 다양한 할로겐 치환 헤테로환 화합물의 염에 대하여 연구를 행하여, 특정한 구조를 갖는 신규의 α위치 할로겐 치환 티오펜 화합물의 염이 우수한 LPA 수용체 길항 작용을 가져, 의약(특히 섬유화를 수반하는 질환, 면역·염증성 질환, 중추·말초신경계 질환, 비뇨기계 질환, 암 관련 질환의 예방 및/또는 치료)으로서 유용한 것을 발견하고, 본 발명을 완성시켰다.

본 발명은 강력한 LPA 수용체 길항 작용을 가져, 특히 섬유화를 수반하는 질환, 면역·염증성 질환, 중추·말초신경계 질환, 비뇨기계 질환, 암 관련 질환의 치료 및/또는 예방약(바람직하게는 치료약)으로서 유용한 신규의 α위치 할로겐 치환 티오펜 화합물의 염을 제공하는 것이다.

본 발명은 이하를 제공한다.

(1) 일반식（I）:

(식 중

R은 수소 원자 또는 메톡시기를 나타내고,

X는 할로겐 원자를 나타내고,

A는 이하의 기:

로 이루어지는 군으로부터 선택되고,

M은 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속을 나타내고,

n은 M이 알칼리 금속일 때는 1을, M이 알칼리 토금속일 때는 2를 나타낸다)

로 표시되는, 염.

(2) 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속이 나트륨, 칼륨 또는 칼슘인 (1)에 기재된 염.

(3)

(R)-1-[4'-(5-클로로-3-{[(1-페닐에톡시)카르보닐]아미노}티오펜-2-일)-2'-메톡시-[1,1'-비페닐]-4-일]시클로프로판카르복실산의 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속의 염.

(4) 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속이 나트륨, 칼륨 또는 칼슘인 (3)에 기재된 염.

(5)

(R)-1-{4'-[5-클로로-3-({[1-(2,5-디플루오로페닐)에톡시]카르보닐}아미노)티오펜-2-일]-2'-메톡시-[1,1'-비페닐]-4-일}시클로프로판카르복실산의 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속의 염.

(6) 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속이 나트륨, 칼륨 또는 칼슘인 (5)에 기재된 염.

(7)

(R)-1-{4'-[3-({[1-(2-클로로페닐)에톡시]카르보닐}아미노)-5-플루오로티오펜-2-일]-2'-메톡시-[1,1'-비페닐]-4-일}시클로프로판카르복실산의 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속의 염.

(8) 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속이 나트륨, 칼륨 또는 칼슘인 (7)에 기재된 염.

(9)

(R)-1-{4'-[5-클로로-3-({[1-(티오펜-3-일)에톡시]카르보닐}아미노)티오펜-2-일]-[1,1'-비페닐]-4-일}시클로프로판카르복실산의 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속의 염.

(10) 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속이 나트륨, 칼륨 또는 칼슘인 (9)에 기재된 염.

(11)

(R)-1-{4'-[5-플루오로-3-({[1-(4-메틸티오펜-3-일)에톡시]카르보닐}아미노)티오펜-2-일]-[1,1'-비페닐]-4-일}시클로프로판카르복실산의 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속의 염.

(12) 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속이 나트륨, 칼륨 또는 칼슘인 (11)에 기재된 염.

(13) (1) 내지 (12) 중 어느 하나에 기재된 염을 유효 성분으로서 함유하는 LPA 수용체 길항제.

(14) (1) 내지 (12) 중 어느 하나에 기재된 염을 유효 성분으로서 함유하는 의약 조성물.

(15) 섬유화를 수반하는 질환, 면역·염증성 질환, 중추·말초신경계 질환, 비뇨기계 질환, 암 관련 질환의 치료 혹은 예방을 위한 (14)에 기재된 의약 조성물.

본 발명의 일반식（I)로 표시되는 화합물의 구체예로서는, 예를 들어 하기 표 1에 나타낸 바와 같은 화합물을 들 수 있다. 또한, 하기 표 1 중, OMe는 메톡시기를 나타내고, 「라세미」 및 「(R)-」은 하기의 일반식（I）중의 「*」을 붙인 탄소 원자의 입체 배치를 나타낸다:

본 발명의 일반식（I)로 표시되는 α위치 할로겐 치환 티오펜 화합물의 염은 강력한 LPA 수용체 길항 작용을 가짐으로써, 의약으로서, 섬유화를 수반하는 질환, 면역·염증성 질환, 중추·말초신경계 질환, 비뇨기계 질환, 암 관련 질환의 치료약 및/또는 예방약으로서 유용하다.

상기 일반식（I)로 표시되는 염에 있어서, 각 치환기의 바람직한 형태를 이하에 나타낸다.

X가 나타내는 「할로겐 원자」는, 예를 들어 불소 원자, 염소 원자, 브롬 원자 또는 요오드 원자이다.

X가 나타내는 「할로겐 원자」로서 바람직하게는, 불소 원자, 염소 원자 또는 브롬 원자이며, 보다 바람직하게는 불소 원자 또는 염소 원자이다.

M이 나타내는 「알칼리 금속」으로서는, 예를 들어 리튬, 나트륨, 칼륨, 루비듐 혹은 세슘 등을 들 수 있고, 바람직하게는 나트륨 또는 칼륨이다.

M이 나타내는 「알칼리 토금속」으로서는, 예를 들어 마그네슘, 칼슘, 스트론튬 혹은 바륨 등을 들 수 있고, 바람직하게는 칼슘이다.

본 발명의 일반식（I)로 표시되는 염에 광학 이성체, 기하 이성체 또는 회전 이성체가 존재하는 경우, 그들 이성체도 본 발명의 범위에 포함되고, 또한, 프로톤 호변 이성이 존재하는 경우에는, 그들 호변 이성체도 본 발명의 범위에 포함된다.

일반식（I）중, 기:

는, 바람직하게는 이하의 기이다:

본 발명의 일반식（I)로 표시되는 염은 수화물 또는 용매화물을 형성할 수 있고, 그의 각각 또는 그들의 혼합물은 본 발명에 포함된다.

본 발명의 식 (I)로 표시되는 염은, 구성하는 원자의 하나 또는 복수로 비천연의 비율의 원자 동위체를 포함하는 경우도 있다. 원자 동위체로서는, 예를 들어 중수소(²H), 트리튬(³H), 탄소-14(¹⁴C), 불소-18(¹⁸F), 황-35(³⁵S) 또는 요오드-125(¹²⁵I) 등을 들 수 있다. 이들 화합물은 치료 또는 예방제, 연구 시약, 예를 들어 분석 시약 및 진단제, 예를 들어 생체내(in vivo) 화상 진단제로서 유용하다. 본 발명의 식 (I)로 표시되는 염의 모든 동위체 변종은 방사성인지 여부에 관계 없이 본 발명에 포함된다.

본 발명 화합물의 일반적인 제조 방법을 이하에 나타낸다. 본 발명 화합물의 개개의 구체적인 제조 방법에 대해서는, 후술하는 실시예에서 상세하게 설명한다.

(식 중 R, X, A, M, n은 상기와 동일한 의미를 나타내고, M', ｎ'은 각각 M, n과 동일한 의미를 나타낸다. Z^-은 수산화물 이온, 할로겐화물 이온 또는 아세트산 이온 등의 음이온을 나타내고, R¹은 알킬기 등의 가수분해에 의해 탈보호되는 카르복실산의 보호기를 나타낸다)

상기한 공정 1 내지 3 중 어느 하나에 의해 본 발명인 일반식 (I)의 염을 합성할 수 있다.

하기의 공정 1 내지 18의 각 공정의 반응에 있어서 사용되는 용매는, 반응을 저해하지 않고, 출발 원료를 일부 용해하는 것이면 특별히 한정은 없으며, 예를 들어 헥산, 펜탄, 헵탄, 석유 에테르 또는 시클로헥산 등의 지방족 탄화수소류; 벤젠, 톨루엔, 크실렌 또는 에틸벤젠 등의 방향족 탄화수소류; 디클로로메탄, 클로로포름, 사염화탄소, 디클로로에탄, 클로로벤젠 또는 디클로로벤젠 등의 할로겐화탄화수소류; 디에틸에테르, 디이소프로필에테르, 테트라히드로푸란, 2-메틸테트라히드로푸란, 1,4-디옥산, 디메톡시에탄 또는 디에틸렌글리콜디메틸에테르 등의 에테르류; 아세톤, 메틸에틸케톤, 메틸이소부틸케톤 또는 시클로헥사논 등의 케톤류; 아세트산메틸, 아세트산에틸, 아세트산프로필, 아세트산이소프로필 또는 아세트산부틸 등의 에스테르류; 아세토니트릴, 프로피오니트릴, 부티로니트릴 또는 이소부티로니트릴 등의 니트릴류; 아세트산 또는 프로피온산 등의 카르복실산류; 메탄올, 에탄올, 1-프로판올, 2-프로판올, 1-부탄올, 2-부탄올, 2-메틸-1-프로판올, 2-메틸-2-프로판올 또는 1,2-프로판디올 등의 알코올류; 포름아미드, N,N-디메틸포름아미드, N,N-디메틸아세트아미드, 1-메틸-2-피롤리돈, 디메틸이미다졸론 또는 헥사메틸포스포로트리아미드 등의 아미드류; 디메틸술폭시드와 같은 술폭시드류; 술포란 등의 술폰류; 물; 또는 그들의 혼합 용매를 들 수 있다.

하기의 공정 1 내지 18의 각 공정의 반응에 있어서, 반응 온도는 용매, 출발 원료 또는 시약 등에 따라 상이하고, 반응 시간은 용매, 출발 원료, 시약 또는 반응 온도 등에 따라 상이하다.

공정 1: 화합물 (1)을, 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속의 수산화물을 사용하여 반응 용매 중 반응시킴으로써, 일반식（I)의 염을 합성할 수 있다.

반응 용매는, 바람직하게는 물 또는 물/유기 용매의 혼합 용매이며, 보다 바람직하게는 물, 아세토니트릴/물의 혼합 용매 또는 아세토니트릴/테트라히드로푸란/물의 혼합 용매이다.

공정 2: 화합물 (I')과 화합물 (2)를, 반응 용매 중 염 교환 반응시킴으로써, 일반식 (I)의 염을 합성할 수 있다.

반응 용매는, 바람직하게는 물 또는 물/유기 용매의 혼합 용매이며, 보다 바람직하게는 물 또는 아세토니트릴/물의 혼합 용매이다.

공정 3: 화합물 (3)을 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속의 수산화물을 사용하여 반응 용매 중 가수분해 반응시킴으로써, 일반식 (I)의 염을 합성할 수 있다.

반응 용매는, 바람직하게는 물 또는 물/유기 용매의 혼합 용매이며, 보다 바람직하게는 2-프로판올/물 또는 2-프로판올/테트라히드로푸란/물의 혼합 용매이다.

본 발명 화합물의 합성 중간체의 일반적인 제조 방법을 이하에 나타낸다. 본 발명 화합물의 합성 중간체의 개개의 구체적인 제조 방법에 대해서는, 후술하는 실시예에서 상세하게 설명한다.

또한, 이하의 합성 루트에 있어서의, R, X, A, M, M', n, ｎ', Z^-, R¹은 상기와 동일한 의미를 나타낸다. L, L^a 및 M은 커플링 반응에 필요한 치환기를 나타내고, 예를 들어 L 또는 L^a가 염소 원자, 브롬 원자, 요오드 원자 또는 트리플루오로메탄술포닐옥시기 등을 나타낼 때는, M은 보론산, 보론산에스테르, 트리알킬주석 등을 나타내고, L 또는 L^a가 보론산, 보론산에스테르, 트리알킬주석 등을 나타낼 때는, M은 염소 원자, 브롬 원자, 요오드 원자 또는 트리플루오로메탄술포닐옥시기 등을 나타낸다.

공정 4: 화합물 (4)에 대하여, 예를 들어 Tetrahedron, 64(2008) 9733-9737페이지 또는 Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters, 21(2011) 528-530페이지 등에 기재된 방법에 준하여, 반응 용매 중 할로겐화제를 사용하여 할로겐화함으로써 화합물 (5)를 합성할 수 있다.

반응 용매는, 바람직하게는 지방족 탄화수소류, 할로겐화탄화수소류, 에테르류, 니트릴류, 카르복실산류, 아미드류, 술폭시드류, 물 또는 그들의 혼합 용매이며, 보다 바람직하게는 N,N-디메틸포름아미드이다.

할로겐화제로서는, 요오드, N-요오도숙신이미드, 브롬, N-브로모숙신이미드, 1,2-디브로모에탄, 1,2-디브로모-1,1,2,2-테트라플루오로에탄, 염소, N-클로로숙신이미드, 크세논디플루오라이드, N-플루오로벤젠술폰이미드 또는 N-플루오로-N'-(클로로메틸)트리에틸렌디아민비스(테트라플루오로보레이트) 등을 들 수 있다.

또한, 화합물 (4)에 대하여, 예를 들어 Tetrahedron Letters, 51(2010) 4526-4529페이지 또는 Journal of Medicinal Chemistry, 54(2011) 2687-2700페이지 등에 기재된 방법에 준하여, 반응 용매 중 염기를 사용하여 음이온으로 한 후, 할로겐화제로 처리하여 화합물 (5)를 합성할 수 있다.

반응 용매는, 바람직하게는 지방족 탄화수소류, 방향족 탄화수소류, 할로겐화탄화수소류, 에테르류 또는 그들의 혼합 용매이며, 보다 바람직하게는 에테르류, 지방족 탄화수소류 또는 그들의 혼합 용매이다.

염기로서는, n-부틸리튬, sec-부틸리튬 또는 tert-부틸리튬 등의 알킬리튬류; 리튬디이소프로필아미드 또는 리튬2,2,6,6-테트라메틸피페리디드 등의 리튬 아미드류; 브롬화에틸마그네슘, 염화에틸마그네슘, 염화이소프로필마그네슘 및 염화페닐마그네슘 등의 그리냐르 시약류; 디이소프로필아미드염화마그네슘, 2,2,6,6-테트라메틸피페리딘염화마그네슘 등의 마그네슘아미드류; 리튬1,1,1,3,3,3-헥사메틸디실라잔, 칼륨1,1,1,3,3,3-헥사메틸디실라잔 등의 디실라잔 염기류를 들 수 있다.

할로겐화제로서는, 요오드, N-요오도숙신이미드, 브롬, N-브로모숙신이미드, 사브롬화탄소, 1,2-디브로모에탄, 1,2-디브로모-1,1,2,2-테트라플루오로에탄, 염소, N-클로로숙신이미드, 사염화탄소, 크세논디플루오라이드, N-플루오로벤젠술폰이미드 또는 N-플루오로-N'-(클로로메틸)트리에틸렌디아민비스(테트라플루오로보레이트) 등을 들 수 있다.

공정 5: 화합물 (6)과 화합물 (7)을, 예를 들어 Tetrahedron, 58(2002) 9633-9695페이지 등에 기재된 방법에 준하여, 반응 용매 중 커플링 촉매, 리간드 및/또는 염기 존재 하에서 반응시킴으로써, 화합물 (8)을 합성할 수 있다.

반응 용매는, 바람직하게는 지방족 탄화수소류, 방향족 탄화수소류, 에테르류, 케톤류, 에스테르류, 니트릴류, 알코올류, 아미드류, 술폭시드류, 술폰류, 물 또는 그들의 혼합 용매이며, 보다 바람직하게는 1,4-디옥산/물의 혼합 용매이다.

커플링 촉매로서는, 테트라키스(트리페닐포스핀)팔라듐(0), [1,1'-비스(디페닐포스피노)페로센]팔라듐(Ⅱ) 디클로라이드 염화메틸렌 부가물, 비스(트리페닐포스핀)팔라듐(Ⅱ) 디클로라이드, 트리스(디벤질리덴아세톤)디팔라듐(0) 또는 아세트산팔라듐(Ⅱ) 등의 팔라듐 촉매; 비스(트리페닐포스핀)니켈(Ⅱ) 디클로라이드 등의 니켈 촉매를 들 수 있다.

리간드로서는, 커플링 촉매 자체에 포함되는 경우도 있지만, 트리페닐포스핀, [1,1'-비스(디페닐포스피노)페로센], 디벤질리덴아세톤, 트리페닐아르신, 트리(o-톨릴)포스핀, 트리-tert-부틸포스핀 또는 트리시클로헥실포스핀 등을 들 수 있다.

염기로서는, 불화칼륨 또는 불화세슘 등의 불화물염; 탄산수소나트륨, 탄산나트륨, 탄산칼륨, 탄산세슘 또는 탄산탈륨 등의 탄산염; 수산화나트륨, 수산화칼륨, 수산화바륨 또는 수산화탈륨 등의 금속 수산화물; 인산칼륨 등의 인산염; 트리에틸아민 또는 디이소프로필에틸아민 등의 유기 염기를 들 수 있다. 바람직하게는 탄산나트륨이다.

공정 6: 화합물 (8)을, 예를 들어 Journal of the American Chemical Society, 129(2007), 4595-4605페이지 등에 기재된 방법에 준하여, 반응 용매 중 팔라듐 촉매, 리간드, 보론산 시약 및/또는 염기 존재 하에서 반응시킴으로써, 화합물 (9)를 합성할 수 있다. L은 염소 원자, 브롬 원자, 요오드 원자 또는 트리플루오로메탄술포닐옥시기 등을 나타내고, M은 보론산, 보론산에스테르 등을 나타낸다.

반응 용매는, 바람직하게는 지방족 탄화수소류, 방향족 탄화수소류, 에테르류, 케톤류, 에스테르류, 니트릴류, 알코올류, 아미드류, 술폭시드류, 술폰류, 물 또는 그들의 혼합 용매이며, 보다 바람직하게는 1,4-디옥산이다.

팔라듐 촉매로서는, 테트라키스(트리페닐포스핀)팔라듐(0), [1,1'-비스(디페닐포스피노)페로센]팔라듐(Ⅱ) 디클로라이드 염화메틸렌 부가물, 비스(트리페닐포스핀)팔라듐(Ⅱ) 디클로라이드, 트리스(디벤질리덴아세톤)디팔라듐(0) 또는 아세트산팔라듐(Ⅱ) 등을 들 수 있다. 바람직하게는 [1,1'-비스(디페닐포스피노)페로센]팔라듐(Ⅱ) 디클로라이드 염화메틸렌 부가물 또는 아세트산팔라듐(Ⅱ)이다.

리간드로서는, 커플링 촉매 자체에 포함되는 경우도 있지만, 트리페닐포스핀, [1,1'-비스(디페닐포스피노)페로센], 디벤질리덴아세톤, 트리페닐아르신, 트리(o-톨릴)포스핀, 트리-tert-부틸포스핀 또는 트리시클로헥실포스핀 등을 들 수 있다. 바람직하게는 트리시클로헥실포스핀이다.

보론산 시약으로서는, 4,4,4',4',5,5,5',5'-옥타메틸-2,2'-비(1,3,2-디옥사보롤란), 4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란 등을 들 수 있다.

염기로서는, 아세트산칼륨, 아세트산나트륨 등을 들 수 있다.

또한, L이 염소 원자, 브롬 원자 또는 요오드 원자를 나타내는 화합물 (8)에 대하여, 예를 들어 Angewandte Chemie-International Edition, 45(2006) 1404-1408페이지 등에 기재된 방법에 준하여, 반응 용매 중 염기를 사용하여 할로겐기 L을, 할로겐-금속 교환한 후, 보론산 시약으로 처리하여 화합물 (9)를 합성할 수 있다.

반응 용매는, 바람직하게는 지방족 탄화수소류, 방향족 탄화수소류, 할로겐화탄화수소류, 에테르류, 아미드류, 술폭시드류, 술폰류 또는 그들의 혼합 용매이며, 보다 바람직하게는 에테르류 또는 지방족 탄화수소류 또는 그들의 혼합 용매이다.

염기로서는, n-부틸리튬, sec-부틸리튬 또는 tert-부틸리튬 등의 알킬리튬류; 브롬화에틸마그네슘, 염화에틸마그네슘, 염화이소프로필마그네슘 및 염화페닐마그네슘 등의 그리냐르 시약류를 들 수 있다.

보론산 시약으로서는, 붕산트리메틸, 붕산트리이소프로필, 붕산트리헥사데실 또는 2-이소프로폭시-4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란 등을 들 수 있다.

공정 7 및 공정 8: 화합물 (5) 또는 화합물 (11)과 화합물 (9)를 각각 공정 5와 마찬가지로 하여 반응시킴으로써, 화합물 (10) 또는 화합물 (12)를 합성할 수 있다.

공정 9: 화합물 (12)에 대하여, 공정 4와 마찬가지로 하여, 화합물 (13)을 합성할 수 있다.

공정 10: 화합물 (13)에 대하여, 반응 용매 중 또는 무용매로 산을 작용시켜 탈보호를 행함으로써 화합물 (14)를 합성할 수 있다.

반응 용매는, 바람직하게는 지방족 탄화수소류, 방향족 탄화수소류, 할로겐화탄화수소류, 에테르류, 케톤류, 에스테르류, 니트릴류, 카르복실산류, 알코올류, 아미드류, 술폭시드류, 술폰류, 물 또는 그들의 혼합 용매이며, 보다 바람직하게는 염화메틸렌이다.

산으로서는, 염산, 황산 등의 무기산; 아세트산, 트리플루오로아세트산, 트리클로로아세트산 등의 유기산; 메탄술폰산, 벤젠술폰산 또는 p-톨루엔술폰산 등의 술폰산을 들 수 있으며, 바람직하게는 트리플루오로아세트산이다.

공정 11: 화합물 (10)에 대하여, 반응 용매 중 산 또는 염기 존재 하에서 가수분해 반응시킴으로써, 화합물 (15)를 합성할 수 있다.

반응 용매는, 바람직하게는 지방족 탄화수소류, 방향족 탄화수소류, 할로겐화탄화수소류, 에테르류, 케톤류, 니트릴류, 카르복실산류, 알코올류, 아미드류, 술폭시드류, 술폰류, 물 또는 그들의 혼합 용매이며, 보다 바람직하게는 에탄올/테트라히드로푸란/물 또는 2-프로판올/테트라히드로푸란/물의 혼합 용매이다.

산 또는 염기로서는, 염산, 황산 등의 무기산; 아세트산, 트리플루오로아세트산 등의 유기산; 메탄술폰산, 벤젠술폰산 또는 p-톨루엔술폰산 등의 술폰산; 수산화리튬, 수산화나트륨 또는 수산화칼륨 등의 알칼리 금속 수산화물; 탄산칼륨 또는 탄산나트륨 등의 알칼리 금속 탄산염을 들 수 있으며, 바람직하게는 염기, 보다 바람직하게는 수산화리튬 또는 수산화나트륨이다.

공정 12: 화합물 (15)에 대하여, 반응 용매 중 염기의 존재 또는 비존재 하, 첨가제의 존재 또는 비존재 하에서, 축합제를 사용하여 트리메틸실릴에탄올과 축합시킴으로써, 화합물 (16)을 합성할 수 있다.

반응 용매는, 바람직하게는 지방족 탄화수소류, 방향족 탄화수소류, 할로겐화탄화수소류, 에테르류, 케톤류, 에스테르류, 니트릴류, 아미드류, 술폭시드류, 술폰류 또는 그들의 혼합 용매이며, 보다 바람직하게는 N,N-디메틸포름아미드이다.

염기로서는, 탄산수소나트륨, 탄산나트륨, 탄산칼륨, 탄산세슘 또는 탄산탈륨 등의 탄산염; 피리딘, 2,6-루티딘 또는 4-피콜린 등의 피리딘류; 트리에틸아민 또는 디이소프로필에틸아민 등의 유기 염기를 들 수 있다. 바람직하게는 디이소프로필에틸아민이다.

축합제로서는, N,N'-디시클로헥실카르보디이미드, N,N'-디이소프로필카르보디이미드, 염산 1-에틸-3-(3-디메틸아미노프로필)카르보디이미드 또는 N-시클로헥실-N'-(2-모르폴리노에틸)카르보디이미드 메토-p-톨루엔술폰산염 등의 카르보디이미드계 축합제; N,N'-카르보닐디이미다졸 등의 이미다졸계 축합제; 4-(4,6-디메톡시-1,3,5-트리아진-2-일)-4-메틸모르폴리늄클로라이드 또는 트리플루오로메탄술폰산(4,6-디메톡시-1,3,5-트리아진-2-일)-(2-옥톡시-2-옥소에틸)디메틸암모늄 등의 트리아진계 축합제; 1H-벤조트리아졸-1-일옥시트리스(디메틸아미노)포스포늄 헥사플루오로인산염, 1H-벤조트리아졸-1-일옥시트리피롤리디노포스포늄 헥사플루오로인산염 또는 클로로트리피롤리디노포스포늄 헥사플루오로인산염 등의 포스포늄 축합제; ({[(1-시아노-2-에톡시-2-옥소에틸리덴)아미노]옥시}-4-모르폴리노메틸렌)디메틸암모늄 헥사플루오로인산염, O-(벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로인산염, O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로인산염, O-(N-숙신이미딜)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 테트라플루오로붕산염 또는 O-(3,4-디히드로-4-옥소-1,2,3-벤조트리아진-3-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 테트라플루오로붕산염 등의 우로늄 축합제를 들 수 있다. 바람직하게는 O-(벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로인산염이다.

첨가제로서는, 1-히드록시벤조트리아졸 또는 1-히드록시아자벤조트리아졸 등의 벤조트리아졸류; N,N-디메틸아미노피리딘 등의 피리딘류; 또는 그들의 병용을 들 수 있고, 바람직하게는 N,N-디메틸아미노피리딘이다.

공정 13: 화합물 (17)을, 예를 들어 Tetrahedron Letters, 47(2006) 5261-5264페이지 등에 기재된 방법에 준하여, 반응 용매 중 환원제로 환원하여, 화합물 (18)을 합성할 수 있다.

반응 용매는, 바람직하게는 지방족 탄화수소류, 방향족 탄화수소류, 할로겐화탄화수소류, 에테르류, 에스테르류, 니트릴류, 알코올류, 아미드류, 술폭시드류, 술폰류, 물 또는 그들의 혼합 용매이다.

환원제로서는, 수소화붕소리튬, 수소화붕소나트륨, 수소화붕소칼륨 또는 트리메톡시수소화붕소나트륨 등의 수소화붕소류; 수소화리튬알루미늄, 수소화나트륨알루미늄, 수소화디이소부틸알루미늄 또는 트리메톡시수소화리튬알루미늄 등의 수소화알루미늄류를 들 수 있다.

또한, 예를 들어 Journal of OrganicChemstry, 56(1991) 763-769페이지 등에 기재된 방법에 준하여, (R)- 또는 (S)-5,5-디페닐-2-메틸-3,4-프로파노-1,3,2-옥사자보롤리딘 등을 사용함으로써, 광학 활성의 화합물 (18)을 합성할 수 있다.

또한, 이들 방법에 의해 얻어진 화합물 (18)은, 효소 또는 광학 분할제를 사용하는 등의 공지의 방법 또는 그들의 조합에 의해 광학 순도를 상승시킬 수 있다.

공정 14 및 공정 15: 화합물 (10) 또는 화합물 (16)을, 예를 들어 Organic Synthesis, 66(1988) 132-137페이지 등에 기재된 방법에 준하여, 반응 용매 중 또는 무용매, 염기의 존재 또는 비존재 하에서 화합물 (18) 및 산화제를 사용하여, 각각 호프만 전위 반응을 시켜, 화합물 (3) 또는 화합물 (19)를 합성할 수 있다.

반응 용매는, 바람직하게는 지방족 탄화수소류, 방향족 탄화수소류, 할로겐화탄화수소류, 에테르류, 케톤류, 에스테르류, 니트릴류, 아미드류, 술폭시드류, 술폰류 또는 그들의 혼합 용매이며, 보다 바람직하게는 톨루엔이다.

염기로서는, 트리에틸아민 또는 디이소프로필에틸아민 등의 유기 아민류; 피리딘, 2,6-루티딘 또는 4-피콜린 등의 피리딘류를 들 수 있다. 바람직하게는 피리딘이다.

산화제로서는, [비스(아세톡시)요오도]벤젠, [비스(트리플루오로아세톡시)요오도]벤젠 또는 요오도실벤젠 등의 고원자가 요오드 화합물을 들 수 있고, 바람직하게는 [비스(트리플루오로아세톡시)요오도]벤젠이다.

공정 16: 화합물 (14)를, 예를 들어 Journal of the American Chemical Society, 94(1972) 6203-6205페이지 등에 기재된 방법에 준하여, 반응 용매 중 또는 무용매에서 화합물 (18), 디페닐포스포릴아지드 및 염기를 사용하여, 쿠르티우스 전위 반응을 시켜, 화합물 (3)을 합성할 수 있다.

반응 용매는, 바람직하게는 지방족 탄화수소류, 방향족 탄화수소류, 할로겐화탄화수소류, 에테르류, 케톤류, 에스테르류, 니트릴류, 아미드류, 술폭시드류, 술폰류, 물 또는 그들의 혼합 용매이며, 보다 바람직하게는 톨루엔이다.

염기로서는, 트리에틸아민 또는 디이소프로필에틸아민 등의 유기 아민류를 들 수 있으며, 바람직하게는 트리에틸아민이다.

공정 17: 화합물 (3)에 대하여, 공정 11과 마찬가지로 하여, 화합물 (1)을 합성할 수 있다.

공정 18: 화합물 (19)에 대하여, 반응 용매 중 탈보호 시약을 작용시킴으로써, 화합물 (1)을 합성할 수 있다.

반응 용매는, 바람직하게는 지방족 탄화수소류, 방향족 탄화수소류, 할로겐화탄화수소류, 에테르류, 케톤류, 에스테르류, 니트릴류, 카르복실산류, 알코올류, 아미드류, 술폭시드류, 술폰류, 물 또는 그들의 혼합 용매이며, 보다 바람직하게는 N,N-디메틸포름아미드이다.

탈보호 시약으로서는, 불화수소산; 불화칼륨 등의 무기 불화물염; 피리딘불화수소산염, 트리에틸아민불화수소산염 또는 1-헥사데칸불화수소산염 등의 유기 불화수소산염; 테트라에틸암모늄 플루오라이드 또는 테트라부틸암모늄 플루오라이드 등의 암모늄 플루오라이드류; 트리스(디메틸아미노)술포늄디플루오로트리메틸규산 등의 디플루오로트리메틸규산염류를 들 수 있다. 바람직하게는 테트라부틸암모늄 플루오라이드이다.

식 (I')의 화합물은, 식 (1)의 화합물을, M'^{ｎ '+}(OH^-)_ｎ'을 사용하여, 공정 1의 방법에 준하여 합성할 수 있다.

각 반응에 있어서 생성된 목적 화합물은, 통상법에 따라 반응 혼합액으로부터 얻을 수 있다. 예를 들어, 목적물 또는 그의 일부가 반응 혼합액 중에서 석출, 침전 또는 결정화되는 경우에는 반응 혼합액을 여과함으로써 목적물을 포함하는 고체를 얻을 수 있다. 목적물 또는 그의 일부가 반응 혼합액 중에 용해되어 있는 경우에는, 그대로 또는 여과에 의해 불용물을 제거한 후, 용매를 제거(예를 들어, 동결 건조)함으로써, 목적 화합물을 얻을 수 있다. 또한, 반응 혼합액을 적절히 중화하고, 불용물이 존재하는 경우에는 여과에 의해 제거한 후, 물과 혼화하지 않는 아세트산에틸 등의 유기 용매를 첨가하고, 수세 후, 목적 화합물을 포함하는 유기층을 분리하고, 무수 황산마그네슘 또는 무수 황산나트륨 등의 건조제로 건조한 후, 용매를 증류 제거함으로써 목적 화합물을 얻을 수 있다.

얻어진 목적 화합물은, 필요하면, 통상의 방법, 예를 들어 물, 유기 용매 또는 그들의 혼합 용매에서의 세정; 재결정; 재침전; 또는 통상 유기 화합물의 분리 정제에 관용되고 있는 방법(예를 들어, 실리카 겔, 알루미나 등의 담체를 사용한 흡착 칼럼 크로마토그래피법; 이온 교환 크로마토그래피법; 또는 실리카 겔 혹은 알킬화 실리카 겔에 의한 순상·역상 칼럼 크로마토그래피법(적합하게는, 고속 액체 크로마토그래피이다); 광학 활성의 분자를 고정화 또는 실리카 겔에 코팅한 충전재를 사용한 순상·역상 칼럼 크로마토그래피법(적합하게는, 고속 액체 크로마토그래피이다))을 적절히 조합, 분리, 정제할 수 있다.

본 발명의 일반식（I)로 표시되는 염을 의약으로서 사용하는 경우에는, 그 자체(원료 분말상 그대로)로 투여할 수 있고, 혹은 적절한 약리상 허용되는 부형제, 희석제 등과 혼합하여 제조되는, 정제, 캡슐제, 산제, 시럽제, 과립제, 세립제, 환약, 현탁제, 유제, 경피 흡수제, 좌약제, 연고제, 로션, 흡입제 또는 주사제 등의 형태로, 경구 또는 비경구(정맥내 투여, 근육내 투여, 복강내 투여, 경피 투여, 경기도 투여, 피내 투여 또는 피하 투여 등)로 투여할 수 있다.

이러한 제제는 부형제, 활택제, 결합제, 붕해제, 유화제, 안정제, 교미 교취제 또는 희석제 등의 첨가제를 사용하여, 주지의 방법으로 제조된다.

부형제는, 예를 들어 유기계 부형제 또는 무기계 부형제를 들 수 있다. 유기계 부형제는, 예를 들어 유당, 자당, 포도당, 만니톨 혹은 소르비톨 등의 당 유도체; 옥수수 전분, 감자 전분, α-전분 혹은 덱스트린 등의 전분 유도체; 결정 셀룰로오스 등의 셀룰로오스 유도체; 아라비아 고무; 덱스트란; 또는 풀루란 등을 들 수 있다. 무기계 부형제는, 예를 들어 경질 무수 규산; 또는 황산칼슘 등의 황산염 등을 들 수 있다.

활택제는, 예를 들어 스테아르산; 스테아르산칼슘 혹은 스테아르산마그네슘 등의 스테아르산 금속염; 탈크; 콜로이드 실리카; 비즈 왁스 혹은 경랍 등의 왁스류; 붕산; 아디프산; 황산나트륨 등의 황산염; 글리콜; 푸마르산; 벤조산나트륨; D,L-류신; 라우릴황산나트륨; 무수 규산 혹은 규산 수화물 등의 규산류; 또는 상기한 부형제에 있어서의 전분 유도체 등을 들 수 있다.

결합제는, 예를 들어 히드록시프로필셀룰로오스, 히드록시프로필메틸셀룰로오스, 폴리비닐피롤리돈, 매크로골 또는 상기한 부형제에서 나타낸 화합물 등을 들 수 있다.

붕해제는, 예를 들어 저치환도 히드록시프로필셀룰로오스, 카르복시메틸셀룰로오스, 카르복시메틸셀룰로오스칼슘 혹은 내부 가교 카르복시메틸셀룰로오스칼슘 등의 셀룰로오스 유도체; 가교 폴리비닐피롤리돈; 또는 카르복시메틸스타치 혹은 카르복시메틸스타치나트륨 등의 화학 수식된 전분 혹은 셀룰로오스 유도체를 들 수 있다.

유화제는, 예를 들어 벤토나이트 혹은 비이검 등의 콜로이드성 점토; 라우릴황산나트륨 등의 음이온 계면 활성제; 염화벤잘코늄 등의 양이온 계면 활성제; 또는 폴리옥시에틸렌알킬에테르, 폴리옥시에틸렌소르비탄 지방산 에스테르 혹은 자당 지방산 에스테르 등의 비이온 계면 활성제 등을 들 수 있다.

안정제는, 예를 들어 메틸파라벤 혹은 프로필파라벤 등의 파라히드록시벤조산에스테르류; 클로로부탄올, 벤질알코올 혹은 페닐에틸알코올 등의 알코올류; 염화벤잘코늄; 페놀 혹은 크레졸 등의 페놀류; 티메로살; 무수 아세트산; 또는 소르브산을 들 수 있다.

교미 교취제는, 예를 들어 사카린나트륨 혹은 아스파탐 등의 감미료; 시트르산, 말산 혹은 타르타르산 등의 산미료; 또는 멘톨, 레몬 엑기스 혹은 오렌지 엑기스 등의 향료 등을 들 수 있다.

희석제는, 통상 희석제로서 사용되는 화합물이며, 예를 들어 유당, 만니톨, 포도당, 자당, 황산칼슘, 히드록시프로필셀룰로오스, 미결정성 셀룰로오스, 물, 에탄올, 폴리에틸렌글리콜, 프로필렌글리콜, 글리세롤, 전분, 폴리비닐피롤리돈 또는 이들의 혼합물 등을 들 수 있다.

본 발명의 일반식（I)로 표시되는 염의 투여량은 환자의 증상, 연령, 체중 등의 조건에 따라 변화할 수 있지만, 경구 투여의 경우에는 각각 1회당 하한 0.001㎎/Kg(바람직하게는 0.01㎎/Kg), 상한 20㎎/Kg(바람직하게는 10㎎/Kg)을, 비경구 투여의 경우에는 각각 1회당 하한 0.0001㎎/Kg(바람직하게는 0.0005㎎/Kg), 상한 10㎎/Kg(바람직하게는 5㎎/Kg)을, 성인에 대하여 1일당 1 내지 6회, 증상에 따라 투여할 수 있다.

실시예

이하에 실시예(실시예 1 내지 15), 참고예(참고예 1 내지 32), 시험예(시험예 1 내지 8) 및 제제예(1 내지 3)를 나타내어 본 발명을 더욱 상세하게 설명하지만, 이들 예시는 본 발명을 보다 잘 이해하기 위한 것이며, 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.

실시예 및 참고예의 물성에 있어서의 Rf값은, 박층 크로마토그래피(머크제, TLC 플레이트 실리카 겔 60F₂₅₄(상품명))를 사용하여 측정한 값이며, 괄호 내의 기재는 전개 용매(용량비)를 나타낸다.

실리카 겔 칼럼 크로마토그래피에 있어서의 COOH 칼럼이란, 후지 실리시아 가가쿠제 크로마토렉스(Chromatorex)(등록 상표) Q-PACK COOH 실리카 겔 프리팩트 칼럼을 나타낸다.

초순수는 와코 쥰야쿠 고교제(214-01301)를 사용했다.

동위체의 존재에 의해 질량 스펙트럼의 값이 복수 관측되는 경우에는 m/z가 최소인 것만 기재했다. 질량 스펙트럼의 이온화 모드의 DUIS란, ESI와 APCI의 믹스 모드이다.

또한, 특기하지 않는 한 화학 구조식 중의 Me는 메틸기를 나타낸다.

(실시예 1)

(R)-1-[4'-(5-클로로-3-{[(1-페닐에톡시)카르보닐]아미노}티오펜-2-일)-2'-메톡시-[1,1'-비페닐]-4-일]시클로프로판카르복실산 나트륨(화합물 번호 I-2)

참고예 29와 마찬가지로 하여 합성한 (R)-1-[4'-(5-클로로-3-{[(1-페닐에톡시)카르보닐]아미노}티오펜-2-일)-2'-메톡시-[1,1'-비페닐]-4-일]시클로프로판카르복실산 1.10g(2.00mmol)의 아세토니트릴(80ml) 현탁 용액에, 빙욕 하에서 교반하면서, 1N 수산화나트륨 수용액 2.00ml(2.00mmol)를 첨가한 후, 초순수(6ml)를 첨가하고, 초음파 처리를 하여 균일 용액으로 한 후, 실온에서 3시간 교반했다. 반응 혼합액에 초순수를 소량 더 첨가하고, 동결 건조한 후, 감압 가열 건조함으로써, 표기 화합물 1.08g(1.89mmol, 수율 95％)을 백색 고체로서 얻었다.

질량 스펙트럼(ESI⁺, m/z):570 [M+1]⁺.

¹H-NMR 스펙트럼(400㎒, DMSO-d₆)δ:9.44(1H, brs), 7.43-7.22(10H, m), 7.21-7.14(2H, m), 7.08(1H, dd, J=7.8, 1.4㎐), 5.75(1H, q, J=6.1㎐), 3.73(3H, s), 1.56-1.38(3H, m), 1.16(2H, dd, J=5.6, 2.6㎐), 0.66(2H, dd, J=5.7, 2.7㎐).

(실시예 2)

(R)-1-[4'-(5-클로로-3-{[(1-페닐에톡시)카르보닐]아미노}티오펜-2-일)-2'-메톡시-[1,1'-비페닐]-4-일]시클로프로판카르복실산 칼륨(화합물 번호 I-4)

참고예 29와 마찬가지로 하여 합성한 (R)-1-[4'-(5-클로로-3-{[(1-페닐에톡시)카르보닐]아미노}티오펜-2-일)-2'-메톡시-[1,1'-비페닐]-4-일]시클로프로판카르복실산 275㎎(0.501mmol)의 아세토니트릴(20ml)-초순수(1.5ml) 현탁 용액에, 교반하면서, 1N 수산화칼륨 수용액 0.500ml(0.500mmol)를 첨가하고, 균일 용액으로 한 후, 초순수(6ml)를 첨가하고, 초음파 처리를 했다. 반응 혼합액을 실온에서 30분간 방치한 후, 초순수를 소량 더 첨가하고 동결 건조한 후, 감압 가열 건조함으로써, 표기 화합물 235㎎(0.401mmol, 수율 80％)을 백색 고체로서 얻었다.

질량 스펙트럼(ESI⁺, m/z):586 [M+1]⁺.

¹H-NMR 스펙트럼(400㎒, DMSO-d₆)δ:9.44(1H, brs), 7.43-7.14(12H, m), 7.08(1H, dd, J=7.8, 1.4㎐), 5.75(1H, q, J=6.2㎐), 3.73(3H, s), 1.54-1.39(3H, m), 1.11(2H, dd, J=5.8, 2.7㎐), 0.60(2H, dd, J=5.8, 2.6㎐).

(실시예 3)

(R)-1-[4'-(5-클로로-3-{[(1-페닐에톡시)카르보닐]아미노}티오펜-2-일)-2'-메톡시-[1,1'-비페닐]-4-일]시클로프로판카르복실산 1/2칼슘(화합물 번호 I-6)

실시예 1에서 얻어진 (R)-1-[4'-(5-클로로-3-{[(1-페닐에톡시)카르보닐]아미노}티오펜-2-일)-2'-메톡시-[1,1'-비페닐]-4-일]시클로프로판카르복실산 나트륨 101㎎(0.177mmol)의 초순수(25ml) 용액에, 0.5M 아세트산칼슘 수용액 0.180ml(0.090mmol)를 첨가한 후, 실온에서 2일간 교반했다. 얻어진 현탁 용액을 멤브레인 필터(밀리포아제)를 사용하여 여과하고, 초순수로 세정 후, 감압 가열 건조함으로써, 표기 화합물 40.4㎎(0.071mmol, 수율 40％)을 백색 고체로서 얻었다.

질량 스펙트럼(ESI⁺, m/z):1133 [2M+1]⁺.

¹H-NMR 스펙트럼(400㎒, DMSO-d₆)δ:9.42(1H, brs), 7.41-7.25(10H, m), 7.19-7.15(2H, m), 7.07(1H, dd, J=7.9, 1.3㎐), 5.75(1H, q, J=6.2㎐), 3.72(3H, s), 1.54-1.38(3H, m), 1.38-1.22(2H, m), 0.90-0.80(2H, m).

(실시예 4)

(R)-1-{4'-[5-클로로-3-({[1-(2,5-디플루오로페닐)에톡시]카르보닐}아미노)티오펜-2-일]-2'-메톡시-[1,1'-비페닐]-4-일}시클로프로판카르복실산 나트륨(화합물 번호 I-8)

참고예 32와 마찬가지로 하여 합성한 (R)-1-{4'-[5-클로로-3-({[1-(2,5-디플루오로페닐)에톡시]카르보닐}아미노)티오펜-2-일]-2'-메톡시-[1,1'-비페닐]-4-일}시클로프로판카르복실산 584㎎(1.00mmol)의 아세토니트릴(40ml)-초순수(3ml) 현탁 용액에, 빙욕 하에서 교반하면서, 1N 수산화나트륨 수용액 1.00ml(1.00mmol)를 첨가하고, 균일 용액으로 한 후, 동일 온도에서 30분간 교반했다. 반응 혼합액에 초순수를 소량 더 첨가하고 동결 건조한 후, 감압 가열 건조함으로써, 표기 화합물 534㎎(0.882mmol, 수율 88％)을 백색 고체로서 얻었다.

질량 스펙트럼(ESI⁺, m/z):606 [M+1]⁺.

¹H-NMR 스펙트럼(400㎒, DMSO-d₆)δ:9.56(1H, brs), 7.36-7.14(10H, m), 7.08(1H, dd, J=7.8, 1.4㎐), 5.91(1H, q, J=6.6㎐), 3.75(3H, s), 1.61-1.36(3H, m), 1.16(2H, dd, J=5.6, 2.8㎐), 0.66(2H, dd, J=5.6, 2.6㎐).

(실시예 5)

(R)-1-{4'-[5-클로로-3-({[1-(2,5-디플루오로페닐)에톡시]카르보닐}아미노)티오펜-2-일]-2'-메톡시-[1,1'-비페닐]-4-일}시클로프로판카르복실산 칼륨(화합물 번호 I-10)

참고예 32와 마찬가지로 하여 합성한 (R)-1-{4'-[5-클로로-3-({[1-(2,5-디플루오로페닐)에톡시]카르보닐}아미노)티오펜-2-일]-2'-메톡시-[1,1'-비페닐]-4-일}시클로프로판카르복실산 292㎎(0.500mmol)의 아세토니트릴(20ml)-초순수(1.5ml) 균일 용액에, 빙욕 하에서 교반하면서, 1N 수산화칼륨 수용액 0.500ml(0.500mmol)를 첨가하고, 동일 온도에서 1시간 교반했다. 반응 혼합액에 초순수를 소량 더 첨가하고 동결 건조한 후, 감압 가열 건조함으로써, 표기 화합물 276㎎(0.444mmol, 수율 89％)을 백색 고체로서 얻었다.

질량 스펙트럼(ESI⁺, m/z):622 [M+1]⁺.

¹H-NMR 스펙트럼(400㎒, DMSO-d₆)δ:9.56(1H, brs), 7.33-7.14(10H, m), 7.08(1H, dd, J=7.8, 1.1㎐), 5.91(1H, q, J=6.1㎐), 3.75(3H, s), 1.58-1.40(3H, m), 1.12(2H, dd, J=5.7, 2.7㎐), 0.61(2H, dd, J=5.6, 2.5㎐).

(실시예 6)

(R)-1-{4'-[5-클로로-3-({[1-(2,5-디플루오로페닐)에톡시]카르보닐}아미노)티오펜-2-일]-2'-메톡시-[1,1'-비페닐]-4-일}시클로프로판카르복실산 1/2칼슘(화합물 번호 I-12)

실시예 4에서 얻어진 (R)-1-{4'-[5-클로로-3-({[1-(2,5-디플루오로페닐)에톡시]카르보닐}아미노)티오펜-2-일]-2'-메톡시-[1,1'-비페닐]-4-일}시클로프로판카르복실산 나트륨 100㎎(0.165mmol)의 초순수(25ml) 균일 용액에, 0.5M 아세트산칼슘 수용액 0.170ml(0.085mmol)를 첨가한 후, 실온에서 2일간 교반했다. 얻어진 현탁 용액을 멤브레인 필터(밀리포아제)를 사용하여 여과하고, 초순수로 세정 후, 감압 가열 건조함으로써, 표기 화합물 47.8㎎(0.079mmol, 수율 48％)을 담황색 고체로서 얻었다.

질량 스펙트럼(ESI⁺, m/z):1205 [2M+1]⁺.

¹H-NMR 스펙트럼(400㎒, DMSO-d₆)δ:9.55(1H, brs), 7.38-7.14(10H, m), 7.07(1H, dd, J=7.8, 1.6㎐), 5.90(1H, q, J=6.4㎐), 3.75(3H, s), 1.60-1.40(3H, m), 1.40-1.20(2H, m), 0.91-0.78(2H, m).

(실시예 7)

(R)-1-{4'-[3-({[1-(2-클로로페닐)에톡시]카르보닐}아미노)-5-플루오로티오펜-2-일]-2'-메톡시-[1,1'-비페닐]-4-일}시클로프로판카르복실산 나트륨(화합물 번호 I-14)

참고예 31과 마찬가지로 하여 합성한 (R)-1-{4'-[3-({[1-(2-클로로페닐)에톡시]카르보닐}아미노)-5-플루오로티오펜-2-일]-2'-메톡시-[1,1'-비페닐]-4-일}시클로프로판카르복실산 1.13g(2.00mmol)의 아세토니트릴(80ml)-초순수(6ml) 현탁 용액에, 빙욕 하에서 교반하면서, 1N 수산화나트륨 수용액 2.00ml(2.00mmol)를 첨가하고, 초음파 처리를 하여 균일 용액으로 한 후, 동일 온도에서 3시간 방치했다. 반응 혼합액에 초순수를 소량 더 첨가하고 동결 건조한 후, 감압 가열 건조함으로써, 표기 화합물 1.15g(1.96mmol, 수율 98％)을 백색 고체로서 얻었다.

질량 스펙트럼(ESI⁺, m/z):588 [M+1]⁺.

¹H-NMR 스펙트럼(400㎒, DMSO-d₆)δ:9.55(1H, brs), 7.62-7.22(9H, m), 7.14-7.20(1H, m), 7.07(1H, dd, J=7.8, 1.2㎐), 6.84(1H, d, J=2.5㎐), 6.00(1H, q, J=5.6㎐), 3.76(3H, s), 1.59-1.35(3H, m), 1.16(2H, dd, J=5.7, 2.7㎐), 0.66(2H, dd, J=5.6, 2.6㎐).

(실시예 8)

(R)-1-{4'-[3-({[1-(2-클로로페닐)에톡시]카르보닐}아미노)-5-플루오로티오펜-2-일]-2'-메톡시-[1,1'-비페닐]-4-일}시클로프로판카르복실산 칼륨(화합물 번호 I-16)

참고예 31과 마찬가지로 하여 합성한 (R)-1-{4'-[3-({[1-(2-클로로페닐)에톡시]카르보닐}아미노)-5-플루오로티오펜-2-일]-2'-메톡시-[1,1'-비페닐]-4-일}시클로프로판카르복실산 284㎎(0.501mmol)의 아세토니트릴(20ml)-초순수(1.5ml) 현탁 용액에, 실온에서, 1N 수산화칼륨 수용액 0.500ml(0.500mmol)를 첨가한 후, 초음파 처리를 하여 균일 용액으로 하고, 실온에서 1시간 방치했다. 반응 혼합액에 초순수를 소량 더 첨가하고 동결 건조한 후, 감압 가열 건조함으로써, 표기 화합물 270㎎(0.447mmol, 수율 89％)을 백색 고체로서 얻었다.

질량 스펙트럼(ESI⁺, m/z):604 [M+1]⁺.

¹H-NMR 스펙트럼(400㎒, DMSO-d₆)δ:9.56(1H, brs), 7.60-7.21(9H, m), 7.19-7.14(1H, m), 7.07(1H, dd, J=7.9, 1.4㎐), 6.84(1H, d, J=2.4㎐), 6.00(1H, q, J=6.4㎐), 3.76(3H, s), 1.55-1.37(3H, m), 1.12(2H, dd, J=5.8, 2.7㎐), 0.61(2H, dd, J=5.8, 2.6㎐).

(실시예 9)

(R)-1-{4'-[3-({[1-(2-클로로페닐)에톡시]카르보닐}아미노)-5-플루오로티오펜-2-일]-2'-메톡시-[1,1'-비페닐]-4-일}시클로프로판카르복실산 1/2칼슘(화합물 번호 I-18)

참고예 31과 마찬가지로 하여 합성한 (R)-1-{4'-[3-({[1-(2-클로로페닐)에톡시]카르보닐}아미노)-5-플루오로티오펜-2-일]-2'-메톡시-[1,1'-비페닐]-4-일}시클로프로판카르복실산 282㎎(0.498mmol)의 아세토니트릴(20ml)-초순수(1.5ml) 현탁 용액에, 실온에서 교반하면서, 1N 수산화나트륨 수용액 0.500ml(0.500mmol)를 첨가한 후, 초음파 처리를 하여 균일 용액으로 했다. 계속해서, 반응 혼합액에 0.5M 아세트산칼슘 수용액 0.500ml(0.085mmol)를 첨가한 후, 실온에서 1시간 교반했다. 반응 혼합액으로부터 아세토니트릴을 증류 제거하고, 초순수를 첨가하고, 실온에서 18시간 교반했다. 얻어진 현탁 용액을 여과하고, 초순수로 세정 후, 감압 가열 건조함으로써, 표기 화합물 213㎎(0.365mmol, 수율 73％)을 백색 고체로서 얻었다.

질량 스펙트럼(ESI⁺, m/z):1169 [2M+1]⁺.

¹H-NMR 스펙트럼(400㎒, DMSO-d₆)δ:9.54(1H, brs), 7.58-7.25(9H, m), 7.17(1H, d, J=1.3㎐), 7.07(1H, dd, J=7.8, 1.1㎐), 6.84(1H, d, J=2.5㎐), 6.00(1H, q, J=6.5㎐), 3.75(3H, s), 1.57-1.38(3H, m), 1.38-1.18(2H, m), 0.90-0.79(2H, m).

(실시예 10)

(R)-1-{4'-[5-클로로-3-({[1-(티오펜-3-일)에톡시]카르보닐}아미노)티오펜-2-일]-[1,1'-비페닐]-4-일}시클로프로판카르복실산 나트륨(화합물 번호 I-20)

참고예 28과 마찬가지로 하여 합성한 (R)-1-{4'-[5-클로로-3-({[1-(티오펜-3-일)에톡시]카르보닐}아미노)티오펜-2-일]-[1,1'-비페닐]-4-일}시클로프로판카르복실산 1.05g(2.00mmol)의 아세토니트릴(80ml) 균일 용액에 실온에서 교반하면서, 1N 수산화나트륨 수용액 2.00ml(2.00mmol)를 첨가하고, 초음파 처리를 한 후, 동일 온도에서 4시간 교반했다. 얻어진 현탁 용액을 여과하고, 모액으로 세정 후, 감압 가열 건조함으로써, 표기 화합물 1.06g(1.94mmol, 수율 97％)을 백색 고체로서 얻었다.

질량 스펙트럼(ESI⁺, m/z):546 [M+1]⁺.

¹H-NMR 스펙트럼(400㎒, DMSO-d₆)δ:9.34(1H, brs), 7.70-7.65(2H, m), 7.57-7.40(6H, m), 7.35-7.30(2H, m), 7.23-7.16(1H, m), 7.16-7.08(1H, m), 5.82(1H, q, J=6.4㎐), 1.61-1.40(3H, m), 1.18(2H, dd, J=5.8, 2.8㎐), 0.68(2H, dd, J=5.7, 2.7㎐).

(실시예 11)

(R)-1-{4'-[5-클로로-3-({[1-(티오펜-3-일)에톡시]카르보닐}아미노)티오펜-2-일]-[1,1'-비페닐]-4-일}시클로프로판카르복실산 칼륨(화합물 번호 I-22)

참고예 28과 마찬가지로 하여 합성한 (R)-1-{4'-[5-클로로-3-({[1-(티오펜-3-일)에톡시]카르보닐}아미노)티오펜-2-일]-[1,1'-비페닐]-4-일}시클로프로판카르복실산 262㎎(0.500mmol)의 아세토니트릴(20ml) 균일 용액에 실온에서 교반하면서, 1N 수산화칼륨 수용액 0.500ml(0.500mmol)를 첨가하고, 초음파 처리를 한 후, 실온에서 3.5시간 교반했다. 얻어진 현탁 용액을 멤브레인 필터(밀리포아제)를 사용하여 여과하고, 모액으로 세정 후, 감압 가열 건조함으로써, 표기 화합물 220㎎(0.392mmol, 수율 78％)을 백색 고체로서 얻었다.

질량 스펙트럼(ESI⁺, m/z):562 [M+1]⁺.

¹H-NMR 스펙트럼(400㎒, DMSO-d₆)δ:9.34(1H, brs), 7.71-7.64(2H, m), 7.58-7.39(6H, m), 7.33-7.27(2H, m), 7.24-7.16(1H, m), 7.16-7.07(1H, m), 5.82(1H, q, J=6.5㎐), 1.61-1.41(3H, m), 1.13(2H, dd, J=5.8, 2.7㎐), 0.62(2H, dd, J=5.8, 2.7㎐).

(실시예 12)

(R)-1-{4'-[5-클로로-3-({[1-(티오펜-3-일)에톡시]카르보닐}아미노)티오펜-2-일]-[1,1'-비페닐]-4-일}시클로프로판카르복실산 1/2칼슘(화합물 번호 I-24)

실시예 10에서 얻어진 (R)-1-{4'-[5-클로로-3-({[1-(티오펜-3-일)에톡시]카르보닐}아미노)티오펜-2-일]-[1,1'-비페닐]-4-일}시클로프로판카르복실산 나트륨 104㎎(0.190mmol)의 초순수(20ml)-아세토니트릴(5ml) 균일 용액에, 0.5M 아세트산칼슘 수용액 0.190ml(0.095mmol)를 첨가하고, 실온에서 2일간 교반했다. 얻어진 현탁 용액을 멤브레인 필터(밀리포아제)를 사용하여 여과하고, 소량의 아세토니트릴과 초순수로 세정 후, 감압 가열 건조함으로써, 표기 화합물 47.8㎎(0.079mmol, 수율 48％)을 백색 고체로서 얻었다.

질량 스펙트럼(ESI⁺, m/z):1085 [2M+1]⁺.

¹H-NMR 스펙트럼(400㎒, DMSO-d₆)δ:9.32(1H, brs), 7.74-7.64(2H, m), 7.59-7.49(5H, m), 7.47-7.40(1H, m), 7.40-7.34(2H, m), 7.22-7.16(1H, m), 7.16-7.08(1H, m), 5.82(1H, q, J=6.4㎐), 1.62-1.40(3H, m), 1.40-1.20(2H, m), 0.90-0.78(2H, m).

(실시예 13)

(R)-1-{4'-[5-플루오로-3-({[1-(4-메틸티오펜-3-일)에톡시]카르보닐}아미노)티오펜-2-일]-[1,1'-비페닐]-4-일}시클로프로판카르복실산 나트륨(화합물 번호 I-26)

참고예 30과 마찬가지로 하여 합성한 (R)-1-{4'-[5-플루오로-3-({[1-(4-메틸티오펜-3-일)에톡시]카르보닐}아미노)티오펜-2-일]-[1,1'-비페닐]-4-일}시클로프로판카르복실산 1.04g(2.00mmol)의 아세토니트릴(80ml)-초순수(6ml) 현탁 용액에 빙욕 하에서 교반하면서, 1N 수산화나트륨 수용액 2.00ml(2.00mmol)를 첨가했다. 반응 혼합액에 아세토니트릴(80ml)과 테트라히드로푸란(50ml)을 더 첨가하고, 실온에서 30분간 실온 초음파 처리를 한 후, 동일 온도에서 25시간 교반했다. 얻어진 현탁 용액을 여과하고, 감압 가열 건조함으로써, 표기 화합물 760㎎(1.40mmol, 수율 70％)을 백색 고체로서 얻었다.

질량 스펙트럼(ESI⁺, m/z):544 [M+1]⁺.

¹H-NMR 스펙트럼(400㎒, DMSO-d₆)δ:9.33(1H, brs), 7.69-7.63(2H, m), 7.54-7.39(5H, m), 7.35-7.29(2H, m), 7.16(1H, d, J=1.9㎐), 6.83(1H, brs), 5.74(1H, q, J=6.5㎐), 2.17(3H, s), 1.59-1.43(3H, m), 1.18(2H, dd, J=5.8, 2.8㎐), 0.68(2H, dd, J=5.8, 2.8㎐).

(실시예 14)

(R)-1-{4'-[5-플루오로-3-({[1-(4-메틸티오펜-3-일)에톡시]카르보닐}아미노)티오펜-2-일]-[1,1'-비페닐]-4-일}시클로프로판카르복실산 칼륨(화합물 번호 I-28)

참고예 30과 마찬가지로 하여 합성한 (R)-1-{4'-[5-플루오로-3-({[1-(4-메틸티오펜-3-일)에톡시]카르보닐}아미노)티오펜-2-일]-[1,1'-비페닐]-4-일}시클로프로판카르복실산 260㎎(0.499mmol)의 아세토니트릴(20ml)-테트라히드로푸란(5ml) 균일 용액에 실온에서 교반하면서, 1N 수산화칼륨 수용액 0.500ml(0.500mmol)를 첨가하고, 초음파 처리를 한 후, 실온에서 2시간 교반했다. 얻어진 현탁 용액을 멤브레인 필터(밀리포아제)를 사용하여 여과하고, 소량의 아세토니트릴로 세정한 후, 감압 가열 건조함으로써, 표기 화합물 126㎎(0.226mmol, 수율 45％)을 백색 고체로서 얻었다.

질량 스펙트럼(ESI⁺, m/z):560 [M+1]⁺.

¹H-NMR 스펙트럼(400㎒, DMSO-d₆)δ:9.34(1H, brs), 7.69-7.63(2H, m), 7.56-7.41(5H, m), 7.34-7.27(2H, m), 7.16(1H, d, J=2.0㎐), 6.83(1H, brs), 5.74(1H, q, J=6.5㎐), 2.17(3H, brs), 1.57-1.45(3H, m), 1.14(2H, dd, J=5.9, 2.8㎐), 0.63(2H, dd, J=5.8, 2.6㎐).

(실시예 15)

(R)-1-{4'-[5-플루오로-3-({[1-(4-메틸티오펜-3-일)에톡시]카르보닐}아미노)티오펜-2-일]-[1,1'-비페닐]-4-일}시클로프로판카르복실산 1/2칼슘(화합물 번호 I-30)

실시예 13과 마찬가지로 하여 합성한 (R)-1-{4'-[5-플루오로-3-({[1-(4-메틸티오펜-3-일)에톡시]카르보닐}아미노)티오펜-2-일]-[1,1'-비페닐]-4-일}시클로프로판카르복실산 나트륨 103㎎(0.190mmol)의 초순수(25ml) 균일 용액에, 0.5M 아세트산칼슘 수용액 0.190ml(0.095mmol)를 첨가하고, 실온에서 2일간 교반했다. 얻어진 현탁 용액을 멤브레인 필터(밀리포아제)를 사용하여 여과하고, 초순수로 세정 후, 감압 가열 건조함으로써, 표기 화합물 27.7㎎(0.051mmol, 수율 27％)을 백색 고체로서 얻었다.

질량 스펙트럼(ESI⁺, m/z):1081 [2M+1]⁺.

¹H-NMR 스펙트럼(400㎒, DMSO-d₆)δ:9.32(1H, brs), 7.70-7.63(2H, m), 7.57-7.31(8H, m), 7.14(1H, d, J=1.9㎐), 6.82(1H, brs), 5.74(1H, q, J=6.5㎐), 2.17(3H, s), 1.61-1.41(3H, m), 1.41-1.20(2H, m), 0.91-0.78(2H, m).

[참고예]

(참고예 1)

2-브로모티오펜-3-카르복실산 tert-부틸에스테르

2-브로모티오펜-3-카르복실산(알드리치(Aldrich)제) 15g(72mmol), N,N-디메틸포름아미드 0.60ml(7.8mmol)의 염화메틸렌(70ml) 용액에, 질소 분위기 하에서, 실온에서 교반하면서 염화옥살릴 7.6ml(87mmol)를 적하하고, 동일 온도에서 15시간 교반했다. 반응 종료 후, 반응 혼합액을 감압 농축하고, 얻어진 잔사에 2-메틸-2-프로판올(70ml), N,N-디이소프로필에틸아민 65ml(372mmol) 및 N,N-디메틸아미노피리딘 0.90g(7.4mmol)을 순차 첨가하고, 질소 분위기 하에서, 80℃에서 2시간 가열 교반했다. 반응 종료 후, 반응 혼합액을 감압 농축하고, 잔사에 물을 첨가하고 톨루엔으로 추출했다. 유기층을 포화 식염수로 세정 후, 무수 황산마그네슘으로 건조하고, 감압 농축했다. 얻어진 잔사를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(용출 용매; 헥산:아세트산에틸=100:0 내지 90:10(V/V))에 적용하고, 목적물을 포함하는 획분을 감압 농축함으로써, 표기 화합물 12g(32mmol(순도 71중량％), 수율 45％)을 담황색 유상물로서 얻었다.

질량 스펙트럼(EI, m/z):262 [M]⁺.

¹H-NMR 스펙트럼(400㎒, CDCl₃)δ:7.32(1H, d, J=5.8㎐), 7.18(1H, d, J=5.8㎐), 1.59(9H, s).

또한, 표기 화합물은, 다음과 같이 해서도 합성했다.

2-브로모티오펜-3-카르복실산(알드리치제) 1.005g(4.85mmol)의 피리딘(9.6ml) 용액에, 아르곤 분위기 하에서, 빙냉 하에서 교반하면서 염화p-톨루엔술포닐 1.80g(9.70mmol)을 소량씩 분할 첨가하고, 계속해서, 2-메틸-2-프로판올 0.46ml(4.8mmol)를 첨가하고, 빙냉 하에서 2시간 교반했다. 또한 실온에서 1시간 교반한 후, 2-메틸-2-프로판올 0.47ml(5.0mmol)를 첨가하고, 실온에서 27시간 교반했다. 반응 종료 후, 반응 혼합액을 감압 농축하고, 아세트산에틸과 포화 탄산수소나트륨 수용액을 첨가하여 분액했다. 유기층을 포화 탄산수소나트륨 수용액으로 세정 후, 포화 식염수로 세정했다. 또한, 5중량％ 황산수소칼륨 수용액으로 세정하고, 다시 포화 식염수로 세정했다. 유기층을 무수 황산마그네슘으로 건조하고, 감압 농축했다. 얻어진 잔사를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(용출 용매; 헥산:아세트산에틸=99:1 내지 94:6(V/V))에 적용하고, 목적물을 포함하는 획분을 감압 농축함으로써, 표기 화합물 1.22g(4.64mmol, 수율 96％)을 담황색 유상물로서 얻었다.

¹H-NMR 스펙트럼(400㎒, DMSO-d₆)δ:7.63(1H, d, J=5.8㎐), 7.28(1H, d, J=5.8㎐), 1.53(9H, s).

(참고예 2)

2-브로모-5-클로로티오펜-3-카르복스아미드

2-브로모티오펜-3-카르복스아미드(WO10/036497호 공보에 준하여 합성했다) 4.48g(21.7mmol)의 N,N-디메틸포름아미드(50ml) 용액에, 아르곤 분위기 하에서, 교반하면서 N-클로로숙신이미드 8.70g(65.2mmol)을 첨가하고, 60℃에서 3시간 가열 교반했다. 반응 종료 후, 빙욕 하에서, 물 50ml와 아세트산에틸 100ml를 첨가한 후, 교반하면서 아황산수소나트륨 6.80g(65.3mmol)을 첨가했다. 실온에서 15분간 교반 후, 물을 첨가하여 분액했다. 얻어진 유기층을 포화 탄산수소나트륨 수용액 50ml로 2회 세정하고, 포화 식염수로 세정 후, 무수 황산마그네슘으로 건조하고, 감압 하에서 용매를 절반 정도 농축했다. 얻어진 현탁 용액에 헥산을 첨가하여 초음파 처리한 후, 고체를 여과 취출하고, 헥산으로 세정 후, 감압 가열 건조함으로써, 표기 화합물 3.64g(15.1mmol, 수율 70％)을 백색 고체로서 얻었다.

질량 스펙트럼(DUIS⁺, m/z):240 [M+1]⁺.

¹H-NMR 스펙트럼(400㎒, DMSO-d₆)δ:7.75(1H, brs), 7.58(1H, brs), 7.33(1H, s).

또한, 표기 화합물은, 다음과 같이 해서도 합성했다.

2-브로모티오펜-3-카르복실산(알드리치제) 1.0g(4.8mmol)의 N,N-디메틸포름아미드(16ml) 용액에, 질소 분위기 하에서, 교반하면서 N-클로로숙신이미드 0.90g(6.7mmol)을 실온에서 첨가하고, 80℃에서 1시간 가열 교반했다. 반응 종료 후, 반응 혼합액을 방냉하고 물을 첨가하고, 또한 2N 염산을 첨가하여 산성으로 하여 아세트산에틸로 추출했다. 얻어진 유기층을 아황산수소나트륨 수용액, 포화 식염수로 순차 세정하고, 무수 황산마그네슘으로 건조하고, 감압 농축했다. 얻어진 잔사의 염화메틸렌(15ml) 용액에, 질소 분위기 하에서, 0℃에서 교반하면서 염화옥살릴 0.80ml(9.1mmol)를 적하하고, 실온까지 승온하여 30분간 교반했다. 계속해서, 교반하면서, 실온에서 28중량％ 암모니아수 3.7ml(48mmol)를 적하하고, 실온에서 1시간 교반했다. 반응 종료 후, 반응 혼합액에 물을 첨가하고, 아세트산에틸로 추출했다. 유기층을 포화 식염수로 세정 후, 무수 황산마그네슘으로 건조하고, 감압 농축했다. 얻어진 잔사를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(용출 용매; 헥산:아세트산에틸=69:31 내지 48:52(V/V))에 적용하고, 목적물을 포함하는 획분을 감압 농축 후, 감압 가열 건조함으로써, 표기 화합물 0.62g(2.6mmol, 수율 53％)을 백색 고체로서 얻었다.

(참고예 3)

4-브로모-1-요오도-2-메톡시벤젠

4-브로모-2-메톡시아닐린(도꾜 가세이제) 2.0g(9.0mmol)의 아세트산(15ml)-농염산(1ml) 혼합 용액에, 빙냉 하에서 교반하면서 아질산나트륨 0.75g(11mmol)을 내온이 10℃를 초과하지 않도록 첨가한 후, 실온에서 30분간 교반했다. 계속해서, 요오드화칼륨 1.0g(30mmol)을 48중량％ 브롬화수소산 수용액(30ml)에 용해시킨 수용액에, 실온에서 교반하면서, 반응 혼합액을 적하하고, 동일 온도에서 1시간 교반했다. 반응 종료 후, 탄산나트륨 수용액과 염화메틸렌의 혼합액에 반응 혼합액을 조금씩 첨가하고, 수층의 염기성을 확인한 후, 분액했다. 얻어진 유기층을 10중량％ 아황산수소나트륨 수용액, 포화 탄산수소나트륨 수용액, 포화 식염수로 순차 세정하고, 무수 황산마그네슘으로 건조 후, 감압 농축했다. 얻어진 잔사를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(용출 용매; 헥산:아세트산에틸=100:0 내지 91:9(V/V))에 적용하고, 목적물을 포함하는 획분을 감압 농축함으로써, 표기 화합물 2.2g(7.2mmol, 수율 73％)을 주황색 고체로서 얻었다.

질량 스펙트럼(EI, m/z):312 [M]⁺.

¹H-NMR 스펙트럼(400㎒, CDCl₃)δ:7.61(1H, d, J=8.3㎐), 6.94(1H, d, J=2.1㎐), 6.87(1H, dd, J=8.2, 2.1㎐), 3.88(3H, s).

(참고예 4)

1-(4'-브로모-2'-메톡시-[1,1'-비페닐]-4-일)시클로프로판카르복실산 에틸에스테르

참고예 3과 마찬가지로 하여 합성한 4-브로모-1-요오도-2-메톡시벤젠 1.2g(3.8mmol), 1-[4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)페닐]시클로프로판카르복실산 에틸에스테르(WO12/078593호 공보에 기재된 방법에 준하여 합성했다) 1.1g(3.5mmol) 및 탄산나트륨 1.1g(10mmol)의 1,4-디옥산(15ml)-물(10ml) 용액을 탈기하고 질소 치환했다. 계속해서, [1,1'-비스(디페닐포스피노)페로센]팔라듐(Ⅱ) 디클로라이드 염화메틸렌 부가물 0.10g(0.12mmol)을 첨가하고, 질소 분위기 하에서, 80℃에서 1.5시간 가열 교반했다. 반응 종료 후, 반응 혼합액에 물을 첨가하고, 아세트산에틸로 추출했다. 유기층을 포화 식염수로 세정 후, 무수 황산마그네슘으로 건조하고, 감압 농축했다. 얻어진 잔사를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(용출 용매; 헥산:아세트산에틸=94:6 내지 75:25(V/V))에 적용하고, 목적물을 포함하는 획분을 감압 농축 후, 감압 가열 건조함으로써, 표기 화합물 0.72g(1.9mmol, 수율 55％)을 백색 고체로서 얻었다.

질량 스펙트럼(EI, m/z):374 [M]⁺.

¹H-NMR 스펙트럼(400㎒, CDCl₃)δ:7.45-7.41(2H, m), 7.39-7.35(2H, m), 7.19(1H, d, J=8.0㎐), 7.15(1H, dd, J=8.0, 1.8㎐), 7.10(1H, d, J=1.8㎐), 4.12(2H, q, J=7.1㎐), 3.81(3H, s), 1.61(2H, dd, J=7.0, 4.0㎐), 1.22(2H, dd, J=7.0, 4.0㎐), 1.19(3H, t, J=7.1㎐).

(참고예 5)

1-(4'-클로로-2'-메톡시-[1,1'-비페닐]-4-일)시클로프로판카르복실산 에틸에스테르

1-브로모-4-클로로-2-메톡시벤젠(도꾜 가세이제) 2.0g(9.0mmol), 1-[4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)페닐]시클로프로판카르복실산 에틸에스테르(WO12/078593호 공보에 기재된 방법에 준하여 합성했다) 2.6g(8.2mmol) 및 탄산나트륨 2.7g(25mmol)의 1,4-디옥산(20ml)-물(20ml) 용액을 탈기하고 질소 치환했다. 계속해서, [1,1'-비스(디페닐포스피노)페로센]팔라듐(Ⅱ) 디클로라이드 염화메틸렌 부가물 0.21g(0.25mmol)을 첨가하고, 질소 분위기 하에서, 80℃에서 2시간 가열 교반했다. 반응 종료 후, 반응 혼합액에 물을 첨가하고, 아세트산에틸로 추출했다. 유기층을 포화 식염수로 세정 후, 무수 황산마그네슘으로 건조하고, 감압 농축했다. 얻어진 잔사를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피에 적용하고, Rf=0.5(전개 용매; 헥산:아세트산에틸=90:10(V/V))의 획분을 감압 농축 후, 감압 가열 건조함으로써, 표기 화합물 2.46g(7.4mmol, 수율 90％)을 백색 고체로서 얻었다.

질량 스펙트럼(EI, m/z):330 [M]⁺.

¹H-NMR 스펙트럼(400㎒, CDCl₃)δ:7.45-7.41(2H, m), 7.39-7.35(2H, m), 7.25(1H, d, J=8.2㎐), 7.00(1H, dd, J=8.2, 2.0㎐), 6.96(1H, d, J=2.0㎐), 4.12(2H, q, J=7.1㎐), 3.81(3H, s), 1.61(2H, dd, J=6.9, 3.9㎐), 1.22(2H, dd, J=7.0, 4.0㎐), 1.19(3H, t, J=7.1㎐).

(참고예 6)

1-[2'-메톡시-4'-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-[1,1'-비페닐]-4-일]시클로프로판카르복실산 에틸에스테르

참고예 4와 마찬가지로 하여 합성한 1-(4'-브로모-2'-메톡시-[1,1'-비페닐]-4-일)시클로프로판카르복실산 에틸에스테르 0.72g(1.9mmol), 4,4,4',4',5,5,5',5'-옥타메틸-2,2'-비(1,3,2-디옥사보롤란) 0.60g(2.4mmol) 및 아세트산칼륨 0.30g(3.1mmol)의 1,4-디옥산(10ml) 용액을 탈기하고 질소 치환했다. 계속해서, [1,1'-비스(디페닐포스피노)페로센]팔라듐(Ⅱ) 디클로라이드 염화메틸렌 부가물 0.10g(0.12mmol)을 첨가하고, 질소 분위기 하에서, 가열 환류 조건에서 3시간 교반했다. 반응 종료 후, 반응 혼합액에 물을 첨가하고, 톨루엔으로 추출했다. 유기층을 포화 식염수로 세정 후, 무수 황산마그네슘으로 건조하고, 감압 농축했다. 얻어진 잔사를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(용출 용매; 헥산:아세트산에틸=92:8 내지 79:21(V/V))에 적용하고, 목적물을 포함하는 획분을 감압 농축 후, 감압 가열 건조함으로써, 표기 화합물 0.81g(1.9mmol, 수율 정량적)을 담황색 고체로서 얻었다.

질량 스펙트럼(EI, m/z):422 [M]⁺.

¹H-NMR 스펙트럼(400㎒, CDCl₃)δ:7.52-7.46(3H, m), 7.40-7.33(4H, m), 4.12(2H, q, J=7.1㎐), 3.86(3H, s), 1.60(2H, dd, J=6.9, 3.9㎐), 1.36(12H, s), 1.22(2H, dd, J=7.0, 4.0㎐), 1.19(3H, t, J=7.1㎐).

또한, 표기 화합물은, 다음과 같이 해서도 합성했다.

참고예 5와 마찬가지로 하여 합성한 1-(4'-클로로-2'-메톡시-[1,1'-비페닐]-4-일)시클로프로판카르복실산 에틸에스테르 2.46g(7.43mmol), 4,4,4',4',5,5,5',5'-옥타메틸-2,2'-비(1,3,2-디옥사보롤란) 2.43g(9.57mmol) 및 아세트산칼륨 1.1g(11mmol)의 1,4-디옥산(30ml) 용액을 탈기하고 질소 치환했다. 계속해서, [1,1'-비스(디페닐포스피노)페로센]팔라듐(Ⅱ) 디클로라이드 염화메틸렌 부가물 0.30g(0.37mmol) 및 트리시클로헥실포스핀 0.30g(1.1mmol)을 첨가하고, 질소 분위기 하에서, 가열 환류 조건에서 24시간 교반했다. 반응 혼합액에, [1,1'-비스(디페닐포스피노)페로센]팔라듐(Ⅱ) 디클로라이드 염화메틸렌 부가물 0.15g(0.18mmol) 및 트리시클로헥실포스핀 0.15g(0.54mmol)을 더 추가하고, 질소 분위기 하에서, 가열 환류 조건에서 5시간 교반했다. 반응 종료 후, 반응 혼합액을 실온까지 냉각하고, 톨루엔을 첨가하여 불용물을 여과했다. 여과액을 포화 탄산수소나트륨 수용액, 포화 식염수로 순차 세정하고, 무수 황산마그네슘으로 건조 후, 감압 농축했다. 얻어진 잔사를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(용출 용매; 헥산:아세트산에틸=92:8 내지 79:21(V/V))에 적용하고, 목적물을 포함하는 획분을 감압 농축하고, 잔사에 헥산을 첨가하고, 고체를 여과 취출하고, 헥산 세정 후, 감압 가열 건조함으로써, 표기 화합물 1.89g(4.5mmol, 수율 60％)을 백색 고체로서 얻었다.

(참고예 7)

1-[4'-(3-카르바모일-5-클로로티오펜-2-일)-[1,1'-비페닐]-4-일]시클로프로판카르복실산 에틸에스테르

참고예 2와 마찬가지로 하여 합성한 2-브로모-5-클로로티오펜-3-카르복스아미드 486㎎(2.02mmol), 1-[4'-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-[1,1'-비페닐]-4-일]시클로프로판카르복실산 에틸에스테르(WO12/078593호 공보에 기재된 방법에 준하여 합성했다) 877㎎(2.23mmol) 및 탄산나트륨 658㎎(6.21mmol)의 1,4-디옥산(15ml)-물(5ml) 용액을, 드라이아이스-아세톤 배스에서 동결 탈기를 행하고, 아르곤 치환했다. 또한, 테트라키스(트리페닐포스핀)팔라듐(0) 230㎎(0.199mmol)을 첨가하고, 90℃에서 3시간 가열 교반했다. 반응 종료 후, 반응 혼합액을 냉각하고, 아세트산에틸과 물을 첨가하여 분액했다. 유기층을 무수 황산마그네슘으로 건조하고, 감압 농축했다. 얻어진 잔사를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(용출 용매; 헥산:아세트산에틸=64:36 내지 43:57(V/V))에 적용하고, 목적물을 포함하는 획분을 감압 농축했다. 얻어진 잔사에 헥산-아세트산에틸(2:1(V/V))의 용액을 첨가하고, 석출된 고체를 여과 취출하고, 감압 가열 건조함으로써, 표기 화합물 705㎎(1.66mmol, 수율 82％)을 백색 고체로서 얻었다.

질량 스펙트럼(EI, m/z):425 [M]⁺.

¹H-NMR 스펙트럼(400㎒, CDCl₃)δ:7.69-7.65(2H, m), 7.58-7.53(4H, m), 7.46-7.42(2H, m), 7.33(1H, s), 5.44(2H, brs), 4.12(2H, q, J=7.1㎐), 1.65(2H, dd, J=7.0, 4.0㎐), 1.23(2H, dd, J=7.0, 4.0㎐), 1.19(3H, t, J=7.1㎐).

(참고예 8)

1-[4'-(3-카르바모일-5-클로로티오펜-2-일)-2'-메톡시-[1,1'-비페닐]-4-일]시클로프로판카르복실산 에틸에스테르

참고예 6과 마찬가지로 하여 합성한 1-[2'-메톡시-4'-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-[1,1'-비페닐]-4-일]시클로프로판카르복실산 에틸에스테르 2.0g(4.7mmol), 참고예 2와 마찬가지로 하여 합성한 2-브로모-5-클로로티오펜-3-카르복스아미드 1.25g(5.2mmol) 및 탄산나트륨 1.5g(14mmol)의 1,4-디옥산(30ml)-물(10ml) 용액을 탈기하고, 계속해서, 테트라키스(트리페닐포스핀)팔라듐(0) 0.30g(0.26mmol)을 첨가하고, 질소 분위기 하에서, 90℃에서 4.5시간 가열 교반했다. 반응 종료 후, 반응 혼합액을 방냉하고, 물을 첨가하고 아세트산에틸로 추출했다. 유기층을 포화 식염수로 세정 후, 무수 황산마그네슘으로 건조하고, 감압 농축했다. 얻어진 잔사에 아세트산에틸을 첨가하여 고체를 여과 취출하고, 소량의 아세트산에틸로 세정 후, 감압 가열 건조함으로써, 표기 화합물 1.53g(3.4mmol, 수율 71％)을 백색 고체로서 얻었다.

질량 스펙트럼(EI, m/z):455 [M]⁺.

¹H-NMR 스펙트럼(400㎒, DMSO-d₆)δ:7.73(1H, brs), 7.50(1H, brs), 7.48-7.43(2H, m), 7.39-7.33(3H, m), 7.32(1H, s), 7.25(1H, d, J=1.6㎐), 7.13(1H, dd, J=7.8, 1.6㎐), 4.05(2H, q, J=7.1㎐), 3.79(3H, s), 1.51(2H, dd, J=6.8, 4.0㎐), 1.23(2H, dd, J=7.0, 4.0㎐), 1.12(3H, t, J=7.1㎐).

(참고예 9)

2-{4'-[1-(에톡시카르보닐)시클로프로필]-[1,1'-비페닐]-4-일}티오펜-3-카르복실산 tert-부틸에스테르

1-[4'-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-[1,1'-비페닐]-4-일]시클로프로판카르복실산 에틸에스테르(WO12/078593호 공보에 기재된 방법에 준하여 합성했다) 0.80g(2.0mmol), 참고예 1과 마찬가지로 하여 합성한 2-브로모티오펜-3-카르복실산 tert-부틸에스테르 0.50g(1.9mmol) 및 탄산나트륨 0.61g(5.8mmol)의 1,4-디옥산(15ml)-물(5ml) 용액을 탈기하고, 계속해서, 테트라키스(트리페닐포스핀)팔라듐(0) 0.10g(0.089mmol)을 첨가하고, 질소 분위기 하에서, 90℃에서 14.5시간 가열 교반했다. 반응 종료 후, 반응 혼합액을 방냉하고, 물을 첨가하고 아세트산에틸로 추출했다. 유기층을 포화 식염수로 세정하고, 무수 황산마그네슘으로 건조하여 감압 농축했다. 얻어진 잔사를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피에 적용하고, Rf=0.41(전개 용매; 헥산:아세트산에틸=90:10(V/V))의 획분을 감압 농축 후, 감압 가열 건조함으로써, 표기 화합물 0.58g(1.3mmol, 수율 68％)을 백색 고체로서 얻었다.

질량 스펙트럼(EI, m/z):448 [M]⁺.

¹H-NMR 스펙트럼(400㎒, CDCl₃)δ:7.64-7.60(2H, m), 7.59-7.55(2H, m), 7.55-7.51(2H, m), 7.48(1H, d, J=5.4㎐), 7.45-7.41(2H, m), 7.23(1H, d, J=5.3㎐), 4.13(2H, q, J=7.1㎐), 1.64(2H, dd, J=6.9, 3.9㎐), 1.38(9H, s), 1.23(2H, dd, J=7.2, 4.1㎐), 1.20(3H, t, J=7.2㎐).

(참고예 10)

2-{4'-[1-(에톡시카르보닐)시클로프로필]-2-메톡시-[1,1'-비페닐]-4-일}티오펜-3-카르복실산 tert-부틸에스테르

참고예 6과 마찬가지로 하여 합성한 1-[2'-메톡시-4'-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-[1,1'-비페닐]-4-일]시클로프로판카르복실산 에틸에스테르 3.81g(9.02mmol) 및 참고예 1에서 합성한 2-브로모티오펜-3-카르복실산 tert-부틸에스테르 2.7g(7.3mmol(순도 71중량％))의 1,4-디옥산(23ml)-물(23ml) 용액에, 탄산나트륨 2.96g(27.9mmol)을 첨가하여 탈기했다. 계속해서, 테트라키스(트리페닐포스핀)팔라듐(0) 540㎎(0.467mmol)을 첨가하고, 질소 분위기 하에서, 90℃에서 7시간 가열 교반했다. 반응 종료 후, 반응 혼합액을 방냉하고, 물을 첨가하고 아세트산에틸로 추출했다. 유기층을 포화 식염수로 세정 후, 무수 황산마그네슘으로 건조하고, 감압 농축했다. 얻어진 잔사에 아세트산에틸을 첨가하여 발생한 불용물을 여과로 제거하고, 헥산-아세트산에틸(1:2(V/V)) 혼합 용액으로 세정 후, 모액과 세정액을 합쳐서 감압 농축했다. 계속해서, 아세트산에틸에 용해하고, 용액이 백탁될 때까지 헥산을 첨가하여 석출된 고체를 여과하고, 헥산으로 세정 후, 감압 가열 건조함으로써, 표기 화합물 3.09g(5.55mmol(순도 86중량％), 수율 61％)을 백색 고체로서 얻었다.

질량 스펙트럼(EI, m/z):478 [M]⁺.

¹H-NMR 스펙트럼(400㎒, CDCl₃)δ:7.53-7.48(2H, m), 7.47(1H, d, J=5.4㎐), 7.41-7.36(2H, m), 7.34(1H, d, J=7.8㎐), 7.23(1H, d, J=5.4㎐), 7.12(1H, dd, J=7.7, 1.6㎐), 7.07(1H, d, J=1.6㎐), 4.13(2H, q, J=7.1㎐), 3.83(3H, s), 1.62(2H, dd, J=6.8, 4.0㎐), 1.40(9H, s), 1.23(2H, dd, J=6.8, 3.8㎐), 1.20(3H, t, J=7.1㎐).

(참고예 11)

2-{4'-[1-(에톡시카르보닐)시클로프로필]-[1,1'-비페닐]-4-일}-5-플루오로티오펜-3-카르복실산 tert-부틸에스테르

참고예 9와 마찬가지로 하여 합성한 2-{4'-[1-(에톡시카르보닐)시클로프로필]-[1,1'-비페닐]-4-일}티오펜-3-카르복실산 tert-부틸에스테르 4.50g(10.0mmol)의 탈수 테트라히드로푸란(60ml) 용액에, 아르곤 분위기 하에서, 드라이아이스-아세톤 배스에서 -70℃ 이하로 냉각하면서, 1.09M 리튬디이소프로필아미드테트라히드로푸란-헥산 용액(간또 가가쿠제) 11ml(12.0mmol)를 5분간에 걸쳐 적하하고, 동일 온도에서 30분간 교반했다. 계속해서, -65℃ 이하로 냉각하면서, N-플루오로벤젠술폰이미드 4.75g(15.1mmol)의 테트라히드로푸란(15ml) 용액을 5분간에 걸쳐 적하하고, 동일 온도에서 30분간 교반했다. 계속해서, 서서히 승온하고, -45℃에서 포화 염화암모늄 수용액 40ml를 첨가하여 반응을 정지하고, 실온까지 승온하고, 아세트산에틸로 추출했다. 얻어진 유기층을 무수 황산마그네슘으로 건조하고, 감압 농축했다. 얻어진 잔사에 염화메틸렌을 첨가하고, 불용물을 여과한 후, 감압 농축하여 얻어진 잔사를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(용출 용매; 헥산:아세트산에틸=100:0 내지 79:21(V/V))에 적용하고, 목적물을 포함하는 획분을 감압 농축 후, 감압 가열 건조함으로써, 표기 화합물 2.23g(4.78mmol, 수율 48％)을 백색 고체로서 얻었다.

질량 스펙트럼(CI, m/z):467 [M+1]⁺.

¹H-NMR 스펙트럼(400㎒, DMSO-d₆)δ:7.78-7.72(2H, m), 7.68-7.63(2H, m), 7.56-7.50(2H, m), 7.46-7.41(2H, m), 7.03(1H, d, J=2.4㎐), 4.05(2H, q, J=7.1㎐), 1.52(2H, dd, J=6.9, 3.9㎐), 1.31(9H, s), 1.24(2H, dd, J=7.1, 4.1㎐), 1.12(3H, t, J=7.1㎐).

(참고예 12)

2-{4'-[1-(에톡시카르보닐)시클로프로필]-2-메톡시-[1,1'-비페닐]-4-일}-5-플루오로티오펜-3-카르복실산 tert-부틸에스테르

참고예 10에서 합성한 2-{4'-[1-(에톡시카르보닐)시클로프로필]-2-메톡시-[1,1'-비페닐]-4-일}티오펜-3-카르복실산 tert-부틸에스테르 2.88g(5.17mmol(순도 86중량％))의 테트라히드로푸란(37ml) 용액에, 아르곤 분위기 하에서, -78℃에서 교반하면서, 1.1M 리튬디이소프로필아미드/테트라히드로푸란 용액 6.56ml(7.22mmol)를 적하하고, 동일 온도에서 30분간 교반했다. 계속해서, N-플루오로벤젠술폰이미드 2.85g(9.04mmol)의 테트라히드로푸란(9.5ml) 용액을 적하하고, 동일 온도에서 30분간 교반했다. 반응 종료 후, 반응 혼합액에 포화 염화암모늄 수용액과 아세트산에틸을 첨가하고, 유기층을 분리했다. 유기층을 포화 식염수로 세정 후, 무수 황산마그네슘으로 건조하고, 감압 농축했다. 얻어진 잔사를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(용출 용매; 헥산:디클로로에탄=100:0 내지 30:70(V/V))에 적용하고, 목적물을 포함하는 획분을 감압 농축했다. 얻어진 잔사에 헥산을 첨가하여 가온 용해시킨 후, 초음파 처리를 행하고, 석출된 고체를 여과 취출하고, 헥산 세정 후, 감압 가열 건조함으로써, 표기 화합물 496㎎(1.00mmol, 수율 20％)을 백색 고체로서 얻었다.

질량 스펙트럼(DUIS⁺, m/z):497 [M+1]⁺.

¹H-NMR 스펙트럼(400㎒, CDCl₃)δ:7.52-7.46(2H, m), 7.41-7.36(2H, m), 7.33(1H, d, J=7.8㎐), 7.08(1H, dd, J=7.8, 1.6㎐), 7.03(1H, d, J=1.5㎐), 6.84(1H, d, J=2.3㎐), 4.13(2H, q, J=7.1㎐), 3.82(3H, s), 1.62(2H, dd, J=6.9, 3.9㎐), 1.37(9H, s), 1.23(2H, dd, J=6.5, 3.5㎐), 1.20(3H, t, J=7.2㎐).

(참고예 13)

2-{4'-[1-(에톡시카르보닐)시클로프로필]-[1,1'-비페닐]-4-일}-5-플루오로티오펜-3-카르복실산

참고예 11과 마찬가지로 하여 합성한 2-{4'-[1-(에톡시카르보닐)시클로프로필]-[1,1'-비페닐]-4-일}-5-플루오로티오펜-3-카르복실산 tert-부틸에스테르 2.18g(4.67mmol)의 염화메틸렌 20ml 용액에, 아르곤 분위기 하에서, 빙냉 하에서 교반하면서 트리플루오로아세트산 5.0ml(65mmol)를 첨가했다. 동일 온도에서 1시간 교반 후, 실온에서 2시간 더 교반했다. 반응 종료 후, 감압 농축한 후, 잔사를 디에틸에테르, 헥산으로 순차 세정 후, 감압 가열 건조함으로써, 표기 화합물 1.87g(4.56mmol, 수율 98％)을 백색 고체로서 얻었다.

질량 스펙트럼(CI, m/z):411 [M+1]⁺.

¹H-NMR 스펙트럼(400㎒, DMSO-d₆)δ:12.92(1H, s), 7.74-7.70(2H, m), 7.68-7.64(2H, m), 7.60-7.55(2H, m), 7.46-7.41(2H, m), 7.05(1H, d, J=2.4㎐), 4.05(2H, q, J=7.1㎐), 1.52(2H, dd, J=6.9, 3.9㎐), 1.24(2H, dd, J=7.0, 4.1㎐), 1.11(3H, t, J=7.1㎐).

(참고예 14)

2-{4'-[1-(에톡시카르보닐)시클로프로필]-2-메톡시-[1,1'-비페닐]-4-일}-5-플루오로티오펜-3-카르복실산

참고예 12와 마찬가지로 하여 합성한 2-{4'-[1-(에톡시카르보닐)시클로프로필]-2-메톡시-[1,1'-비페닐]-4-일}-5-플루오로티오펜-3-카르복실산 tert-부틸에스테르 491㎎(0.989mmol)의 염화메틸렌(4.4ml) 용액에, 아르곤 분위기 하에서, 실온에서 트리플루오로아세트산 1.1ml(14mmol)를 첨가하고, 실온에서 3시간 교반했다. 반응 종료 후, 반응 혼합액을 감압 농축하고, 염화메틸렌을 첨가하여 감압 농축했다. 얻어진 잔사에 헥산을 첨가하여 감압 농축 후, 감압 가열 건조함으로써, 표기 화합물 436㎎(0.99mmol, 수율 정량적)을 백색 고체로서 얻었다.

질량 스펙트럼(EI, m/z):440 [M]⁺.

¹H-NMR 스펙트럼(400㎒, CDCl₃)δ:7.53-7.48(2H, m), 7.40-7.37(2H, m), 7.34(1H, d, J=7.8㎐), 7.14(1H, d, J=1.6㎐), 7.13-7.10(1H, m), 6.94(1H, d, J=2.3㎐), 4.12(2H, q, J=7.1㎐), 3.82(3H, s), 1.62(2H, dd, J=6.9, 3.9㎐), 1.23(2H, dd, J=7.0, 4.0㎐), 1.20(3H, t, J=7.1㎐).

(참고예 15)

1-[4'-(3-카르바모일-5-클로로티오펜-2-일)-2'-메톡시-[1,1'-비페닐]-4-일]시클로프로판카르복실산

참고예 8과 마찬가지로 하여 합성한 1-[4'-(3-카르바모일-5-클로로티오펜-2-일)-2'-메톡시-[1,1'-비페닐]-4-일]시클로프로판카르복실산 에틸에스테르 1.00g(2.19mmol)의 에탄올(10ml)-테트라히드로푸란(10ml) 현탁 용액에, 실온에서 교반하면서, 1N 수산화나트륨 수용액 6.6ml(6.6mmol)를 첨가하고, 동일 온도에서 4일간 교반했다. 반응 종료 후, 반응 혼합액에 1N 염산 6.6ml(6.6mmol)를 첨가하여 중화하고, 물을 첨가하여 석출된 고체를 멤브레인 필터(밀리포아제)를 사용하여 여과하고, 물로 세정 후, 감압 가열 건조함으로써, 표기 화합물 884㎎(2.07mmol, 수율 94％)을 백색 고체로서 얻었다.

질량 스펙트럼(DUIS⁺, m/z):428 [M+1]⁺.

¹H-NMR 스펙트럼(400㎒, DMSO-d₆)δ:12.35(1H, brs), 7.75(1H, brs), 7.52(1H, brs), 7.45-7.41(2H, m), 7.38-7.35(2H, m), 7.33(1H, d, J=7.9㎐), 7.32(1H, s), 7.24(1H, d, J=1.8㎐), 7.13(1H, dd, J=7.8, 1.6㎐), 3.79(3H, s), 1.47(2H, dd, J=6.7, 3.8㎐), 1.18(2H, dd, J=6.9, 3.9㎐).

(참고예 16)

1-[4'-(3-카르바모일-5-클로로티오펜-2-일)-2'-메톡시-[1,1'-비페닐]-4-일]시클로프로판카르복실산 2-(트리메틸실릴)에틸에스테르

참고예 15에서 합성한 1-[4'-(3-카르바모일-5-클로로티오펜-2-일)-2'-메톡시-[1,1'-비페닐]-4-일]시클로프로판카르복실산 0.80g(1.9mmol)에 톨루엔을 첨가하여 공비탈수 처리를 한 후, 아르곤 분위기 하로 했다. 계속하여 N,N-디메틸포름아미드(10ml), N,N-디메틸아미노피리딘 23.0㎎(0.188mmol), 트리메틸실릴에탄올 0.42ml(2.8mmol) 및 N,N-디이소프로필에틸아민 0.98ml(5.6mmol)를 첨가했다. 계속해서, 빙욕 하에서 O-(벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로인산염 1.06g(2.81mmol)을 첨가하고, 실온에서 18시간 교반했다. 반응 혼합액에, N,N-디메틸아미노피리딘 64.6㎎(0.529mmol)을 더 추가하고, 동일 온도에서 1일 교반했다. 반응 종료 후, 반응 혼합액에 물과 아세트산에틸을 첨가하고, 아세트산에틸로 2회 추출했다. 유기층을 무수 황산마그네슘으로 건조하고, 감압 농축했다. 얻어진 잔사를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(용출 용매; 헥산:아세트산에틸=71:29 내지 50:50(V/V))에 적용하고, 목적물을 포함하는 획분을 감압 농축 후, 감압 가열 건조함으로써, 표기 화합물 889㎎(1.68mmol, 수율 90％)을 담황색 고체로서 얻었다.

질량 스펙트럼(DUIS⁺, m/z):528 [M+1]⁺.

¹H-NMR 스펙트럼(400㎒, DMSO-d₆)δ:7.75(1H, brs), 7.52(1H, brs), 7.46-7.42(2H, m), 7.38-7.34(2H, m), 7.33(1H, d, J=7.8㎐), 7.32(1H, s), 7.24(1H, d, J=1.6㎐), 7.13(1H, dd, J=7.8, 1.7㎐), 4.14-4.07(2H, m), 3.78(3H, s), 1.49(2H, dd, J=6.8, 3.8㎐), 1.22(2H, dd, J=7.0, 4.1㎐), 0.91-0.84(2H, m),-0.05(9H, s).

(참고예 17)

1-(4-메틸티오펜-3-일)에타논

3-브로모-4-메틸티오펜(도꾜 가세이제) 1.0g(5.3mmol)의 디에틸에테르(23ml) 용액에, 아르곤 분위기 하에서, -78℃에서 1.6M n-부틸리튬헥산 용액 4.0ml(6.4mmol)를 적하하고, 동일 온도에서 15분간 교반했다. 계속해서, -78℃에서 N-메톡시-N-메틸아세트아미드 0.70ml(6.9mmol)의 디에틸에테르(1ml) 용액을 적하하고, 동일 온도에서 15분간 교반한 후, 실온에서 23시간 교반했다. 반응 종료 후, 반응 혼합액에 포화 염화암모늄 수용액을 첨가하고 아세트산에틸로 추출했다. 얻어진 유기층을 물로 세정 후, 무수 황산마그네슘으로 건조하고, 감압 농축했다. 얻어진 잔사를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(용출 용매; 헥산:아세트산에틸=80:20(V/V))에 적용하고, 목적물을 포함하는 획분을 감압 농축함으로써, 표기 화합물 552㎎(3.94mmol, 수율 75％)을 담황색 유상물로서 얻었다.

질량 스펙트럼(CI, m/z):141 [M+1]⁺.

¹H-NMR 스펙트럼(400㎒, CDCl₃)δ:7.99(1H, d, J=3.1㎐), 6.91(1H, dq, J=3.1, 1.0㎐), 2.53(3H, s), 2.46(3H, d, J=1.0㎐).

(참고예 18)

(RS)-1-(2,5-디플루오로페닐)에탄올

1-(4-플루오로-2-메틸페닐)에타논(와코 쥰야쿠제 및 도꾜 가세이제를 합하여 사용) 39.0g(250mmol)의 에탄올(200ml) 용액에, 교반하면서 수소화붕소나트륨 10g(260mmol)을 첨가하고, 실온에서 30분간 교반했다. 반응 종료 후, 반응 혼합액을 감압 농축하고, 물을 첨가하고 아세트산에틸로 추출했다. 유기층을 포화 식염수로 세정 후, 무수 황산마그네슘으로 건조하고, 감압 농축했다. 얻어진 잔사를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(용출 용매; 헥산:아세트산에틸=90:10 내지 69:31(V/V))에 적용하고, 목적물을 포함하는 획분을 감압 농축함으로써, 표기 화합물 41.5g(243mmol, 수율 97％)을 무색 유상물로서 얻었다.

¹H-NMR 스펙트럼(400㎒, CDCl₃)δ:7.25-7.19(1H, m), 7.01-6.87(2H, m), 5.22-5.14(1H, m), 1.88(1H, d, J=4.3㎐), 1.50(3H, d, J=6.4㎐).

(참고예 19)

(R)-1-(티오펜-3-일)에탄올

Journal of Organic Chemistry, 72(2007) 1639-1644페이지 기재된 방법에 준하여, 분자체 4A 1/16(상품명, 와코 쥰야쿠 고교제)로 건조한 1-(티오펜-3-일)에타논(알드리치제) 2.023g(16.03mmol)의 테트라히드로푸란(100ml) 용액에, 아르곤 분위기 하에서, 실온에서 교반하면서 (S)-5,5-디페닐-2-메틸-3,4-프로파노-1,3,2-옥사자보롤리딘(알드리치제) 0.446g(1.61mmol)을 첨가했다. 계속해서, 드라이아이스-에탄올 배스에서 -30℃ 부근으로 조정하고, 교반하면서 0.9M 보란-테트라히드로푸란 착체(도꾜 가세이제) 19.0ml(17.1mmol)를 1시간에 걸쳐 적하하고, -30℃ 부근에서 1시간 교반했다. 반응 종료 후, 물 50ml를 첨가하고, 계속해서, 아세트산에틸 100ml와 1N 염산 5ml를 첨가하여 분액했다. 얻어진 유기층을 포화 식염수 50ml로 세정 후, 무수 황산마그네슘으로 건조하고, 감압 농축했다. 얻어진 잔사를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(용출 용매; 헥산:아세트산에틸=95:5 내지 74:26(V/V))에 적용하고, 목적물을 포함하는 획분을 감압 농축함으로써, 표기 화합물 1.81g(14.1mmol, 수율 88％, 광학 순도 82.9％ee)을 무색 유상물로서 얻었다.

광학 순도 분석 조건

칼럼: 키랄셀(CHIRALCEL) OJ-RH(상품명, 다이셀제)

사이즈: 0.46㎝I.D.×25㎝L.

이동상: 0.03용량％ 트리플루오로아세트산 수용액/아세토니트릴=75/25(V/V)

유속: 1.0mL/min.

온도: 40℃

파장: 254㎚

¹H-NMR 스펙트럼(400㎒, DMSO-d₆)δ:7.44(1H, dd, J=5.0, 3.0㎐), 7.25(1H, ddd, J=3.0, 1.2, 0.9㎐), 7.07(1H, dd, J=5.0, 1.2㎐), 5.11(1H, d, J=4.8㎐), 4.80-4.71(1H, m), 1.34(3H, d, J=6.4㎐).

또한, 표기 화합물은 이하와 같이 하여 광학 순도를 향상시킬 수 있다.

참고예 19와 마찬가지로 하여 합성한 (R)-1-(티오펜-3-일)에탄올 13.1g(102mmol, 광학 순도 69％ee), 아세트산비닐 15.0ml(163mmol)의 디이소프로필에테르(200ml) 용액에, 교반하면서 LipasePS AmanoSD(와코 쥰야쿠) 13g을 실온에서 첨가했다. 반응 혼합액을 45℃에서 6.5시간 교반한 후 여과하고, 여과액을 감압 농축했다. 얻어진 잔사를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(용출 용매; 헥산:아세트산에틸=80:20(V/V))에 적용하고, 목적물을 포함하는 획분을 감압 농축함으로써, 아세트산(R)-1-(티오펜-3-일)에틸에스테르 11.8g(67mmol, 수율 65％, 광학 순도>99％ee)을 담황색 유상물로서 얻었다.

광학 순도 분석 조건

칼럼: 키랄팩(CHIRALPAK) IA(상품명, 다이셀제)

사이즈: 0.46㎝I.D.×25㎝L.

이동상: 헥산:2-프로판올=99.5:0.5(V/V)

유속: 1.0mL/min.

온도: 40℃

파장: 254㎚

¹H-NMR 스펙트럼(400㎒, CDCl₃)δ:7.30(1H, dd, J=5.0, 2.9㎐), 7.25-7.22(1H, m), 7.09(1H, dd, J=5.0, 1.3㎐), 6.00(1H, q, J=6.6㎐), 2.07(3H, s), 1.56(3H, d, J=6.5㎐).

얻어진 아세트산(R)-1-(티오펜-3-일)에틸에스테르 11.8g(67.1mmol, 광학 순도>99％ee)의 에탄올(100ml)-물(10ml) 용액에, 질소 기류 하에서, 실온에서 교반하면서 수산화리튬 2.50g(104mmol)을 첨가하고, 동일 온도에서 1.5시간 교반했다. 반응 종료 후, 반응 혼합액을 감압 농축하여 에탄올을 증류 제거하고, 잔사에 물을 첨가하고 아세트산에틸로 추출했다. 얻어진 유기층을 포화 식염수로 세정, 무수 황산마그네슘으로 건조하여 감압 농축했다. 얻어진 잔사를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(용출 용매; 헥산:아세트산에틸=95:5 내지 74:26(V/V))에 적용하고, 목적물을 포함하는 획분을 감압 농축함으로써, 표기 화합물 8.1g(63mmol, 수율 95％, 광학 순도>99.0％ee)을 담황색 유상물로서 얻었다.

(참고예 20)

(R)-1-(4-메틸티오펜-3-일)에탄올

(S)-5,5-디페닐-2-메틸-3,4-프로파노-1,3,2-옥사자보롤리딘(알드리치제) 78㎎(0.28mmol)의 테트라히드로푸란(1.0ml) 용액에, 아르곤 분위기 하에서, -30℃ 내지 -27℃에서 0.9M 보란-테트라히드로푸란 착체 3.4ml(3.1mmol)를 적하하고, 동일 온도에서 30분간 교반했다. 계속해서, 참고예 17과 마찬가지로 하여 합성한 1-(4-메틸티오펜-3-일)에타논 406㎎(2.90mmol)의 테트라히드로푸란(20ml) 용액을, -30℃ 내지 -27℃에서 적하하고, 동일 온도에서 1시간 교반했다. 반응 종료 후, 반응 혼합액에 물, 1N 염산을 첨가하고 아세트산에틸로 추출했다. 얻어진 유기층을 포화 식염수로 세정 후, 무수 황산마그네슘으로 건조하고, 감압 농축했다. 얻어진 잔사를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(용출 용매; 헥산:아세트산에틸=95:5 내지 70:30(V/V))에 적용하고, 목적물을 포함하는 획분을 감압 농축함으로써, 표기 화합물 387㎎(2.72mmol, 수율 94％)을 무색 유상물로서 얻었다.

질량 스펙트럼(EI, m/z):142 [M]⁺.

¹H-NMR 스펙트럼(400㎒, CDCl₃)δ:7.23-7.21(1H, m), 6.92(1H, dq, J=3.1, 0.9㎐), 4.92(1H, qdd, J=6.4, 4.8, 0.8㎐), 2.27(3H, d, J=0.9㎐), 1.63(1H, d, J=4.6㎐), 1.53(3H, d, J=6.4㎐).

또한, 표기 화합물은 이하와 같이 하여 광학 순도를 향상시킬 수 있다.

참고예 20과 마찬가지로 하여 합성한 (R)-1-(4-메틸티오펜-3-일)에탄올 13.3g(94mmol, 광학 순도 90％ee), 아세트산비닐 16.3ml(163mmol)의 디이소프로필에테르(67ml) 용액에, 교반하면서 LipasePS AmanoSD(와코 쥰야쿠) 6.7g을 실온에서 첨가하고, 45℃에서 25시간 교반했다. 얻어진 반응 혼합액을 여과하고, 여과액을 감압 농축했다. 얻어진 잔사를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(용출 용매; 헥산:아세트산에틸=90:10(V/V))에 적용하고, 목적물을 포함하는 획분을 감압 농축함으로써, 아세트산(R)-1-(4-메틸티오펜-3-일)에틸에스테르 10.3g(56.0mmol, 수율 60％, 광학 순도>99％ee)을 담황색 유상물로서 얻었다.

광학 순도 분석 조건

칼럼: CHIRALPAK IA(상품명, 다이셀제)

사이즈: 0.46㎝I.D.×25㎝L.

이동상: 헥산:2-프로판올=99.5:0.5(V/V)

유속: 1.0mL/min.

온도: 40℃

파장: 254㎚

¹H-NMR 스펙트럼(400㎒, CDCl₃)δ:7.23(1H, d, J=3.3㎐), 6.94-6.90(1H, m), 5.94(1H, qd, J=6.5, 0.9㎐), 2.23(3H, d, J=1.0㎐), 2.07(3H, s), 1.55(3H, d, J=6.5㎐).

얻어진 아세트산(R)-1-(4-메틸티오펜-3-일)에틸에스테르 10.3g(56.0mmol)의 에탄올(50ml)-물(5ml) 용액에, 질소 기류 하에서, 실온에서 교반하면서 수산화리튬 2.0g(84mmol)을 첨가하고, 동일 온도에서 1.5시간 교반했다. 반응 종료 후, 반응 혼합액을 감압 농축하여 에탄올을 증류 제거하고, 잔사에 물을 첨가하고 아세트산에틸로 추출했다. 얻어진 유기층을 포화 식염수로 세정 후, 무수 황산마그네슘으로 건조하고, 감압 농축했다. 얻어진 잔사를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(용출 용매; 헥산:아세트산에틸=95:5 내지 70:30(V/V))에 적용하고, 목적물을 포함하는 획분을 감압 농축함으로써, 표기 화합물 7.8g(55mmol, 수율 98％, 광학 순도 99.5％ee)을 무색 유상물로서 얻었다.

광학 순도 분석 조건

칼럼: CHIRALPAK IA(상품명, 다이셀제)

사이즈: 0.46㎝I.D.×25㎝L.

이동상: A액:B액=95:1(V/V)

A액: 헥산:2-프로판올=99.5:0.5(V/V)

B액: 2-프로판올

유속: 1.0mL/min.

온도: 40℃

파장: 254㎚

(참고예 21)

아세트산(R)-1-(2,5-디플루오로페닐)에틸에스테르

참고예 18과 마찬가지로 하여 합성한 (RS)-1-(2,5-디플루오로페닐)에탄올 39.3g(249mmol), 아세트산비닐 45.0ml(450mmol)의 디이소프로필에테르(200ml) 용액에, 실온에서 교반하면서 LipasePS AmanoSD(와코 쥰야쿠) 33g을 추가하고, 45℃에서 46.5시간 교반했다. 얻어진 반응 혼합액을 여과하고, 여과액을 감압 농축했다. 얻어진 잔사를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(용출 용매; 헥산:아세트산에틸=90:10(V/V))에 적용하고, 목적물을 포함하는 획분을 감압 농축함으로써, 표기 화합물 20.1g(100mmol, 수율 40％, 광학 순도 97％ee)을 담황색 유상물로서 얻었다.

광학 순도 분석 조건

칼럼: CHIRALPAK IA(상품명, 다이셀제)

사이즈: 0.46㎝I.D.×25㎝L.

이동상: 헥산:2-프로판올=99.5:0.5(V/V)

유속: 1.0mL/min.

온도: 40℃

파장: 254㎚

¹H-NMR 스펙트럼(400㎒, CDCl₃)δ:7.11-7.05(1H, m), 7.03-6.90(2H, m), 6.09(1H, q, J=6.6㎐), 2.11(3H, s), 1.52(3H, d, J=6.5㎐).

(본 반응에 의해 얻어진 화합물(광학 순도 97％ee)을 참고예 22와 마찬가지의 방법을 사용하여 가수분해하고(광학 순도 92.2％ee), 다시 본 반응 조건에 적용함으로써 광학 순도를 향상시키는 조작을 행했다)

(R)-1-(2,5-디플루오로페닐)에탄올 15.8g(100mmol, 광학 순도 92.2％ee), 아세트산비닐 20.0ml(200mmol)의 디이소프로필에테르(70ml) 용액에, 실온에서 교반하면서 LipasePS AmanoSD(와코 쥰야쿠) 16g을 추가하고, 45℃에서 64.5시간 교반했다. 얻어진 반응 혼합액을 여과하고, 여과액을 감압 농축했다. 얻어진 잔사를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(용출 용매; 헥산:아세트산에틸=90:10(V/V))에 적용하고, 목적물을 포함하는 획분을 감압 농축함으로써, 표기 화합물 19.2g(96mmol, 수율 96％, 광학 순도 99.7％ee)을 담황색 유상물로서 얻었다.

(참고예 22)

(R)-1-(2,5-디플루오로페닐)에탄올

참고예 21에서 합성한 아세트산(R)-1-(2,5-디플루오로페닐)에틸에스테르 19.2g(96mmol, 광학 순도 99.7％ee)의 에탄올(100ml)-물(10ml) 용액에, 질소 기류 하에서, 실온에서 교반하면서 수산화리튬 3.5g(150mmol)을 첨가하고, 동일 온도에서 1.5시간 교반했다. 반응 종료 후, 반응 혼합액을 감압 농축하여 에탄올을 증류 제거하고, 잔사에 물을 첨가하고 아세트산에틸로 추출했다. 얻어진 유기층을 포화 식염수로 세정, 무수 황산마그네슘으로 건조하여 감압 농축했다. 얻어진 잔사를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(용출 용매; 헥산:아세트산에틸=90:10 내지 69:31(V/V))에 적용하고, 목적물을 포함하는 획분을 감압 농축함으로써, 표기 화합물 13.5g(85.6mmol, 수율 89％, 광학 순도 99.0％ee)을 담황색 유상물로서 얻었다.

광학 순도 분석 조건

칼럼: CHIRALPAK IA(상품명, 다이셀제)

사이즈: 0.46㎝I.D.×25㎝L.

이동상: A액:B액=99:1(V/V)

A액: 헥산:2-프로판올=99.5:0.5(V/V)

B액: 2-프로판올

유속: 1.0mL/min.

온도: 40℃

파장: 254㎚

¹H-NMR 스펙트럼(400㎒, CDCl₃)δ:7.25-7.19(1H, m), 7.01-6.87(2H, m), 5.22-5.14(1H, m), 1.88(1H, d, J=4.3㎐), 1.50(3H, d, J=6.4㎐).

(참고예 23)

(R)-1-{4'-[5-클로로-3-({[1-(티오펜-3-일)에톡시]카르보닐}아미노)티오펜-2-일]-[1,1'-비페닐]-4-일}시클로프로판카르복실산 에틸에스테르

참고예 7과 마찬가지로 하여 합성한 1-[4'-(3-카르바모일-5-클로로티오펜-2-일)-[1,1'-비페닐]-4-일]시클로프로판카르복실산 에틸에스테르 300㎎(0.704mmol) 및 피리딘 0.53ml(6.6mmol)의 톨루엔(6ml) 용액에, 아르곤 분위기 하에서, [비스(트리플루오로아세톡시)요오도]벤젠 340㎎(0.791mmol)을 첨가하고, 실온에서 30분간 교반했다. 계속해서, 아르곤 분위기 하에서, 실온에서, 참고예 19와 마찬가지로 하여 합성한 (R)-1-(티오펜-3-일)에탄올 105㎎(0.819mmol)을 첨가하고, 70℃에서 2시간 가열 교반했다. 반응 종료 후, 반응 혼합액에 아세트산에틸과 물을 첨가하여 유기층을 분리했다. 얻어진 유기층을 포화 식염수로 세정 후, 무수 황산마그네슘으로 건조하고, 감압 농축했다. 얻어진 잔사를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(용출 용매; 헥산:아세트산에틸=80:20 내지 30:70(V/V))에 적용하고, 목적물을 포함하는 획분을 감압 농축함으로써, 표기 화합물 306㎎(0.55mmol, 수율 79％)을 갈색 유상물로서 얻었다.

질량 스펙트럼(DUIS^-, m/z):550 [M-1]^-.

¹H-NMR 스펙트럼(400㎒, CDCl₃)δ:7.69-7.63(2H, m), 7.63-7.51(3H, m), 7.48-7.40(4H, m), 7.31(1H, dd, J=5.0, 2.9㎐), 7.28-7.26(1H, m), 7.11(1H, dd, J=5.0, 1.3㎐), 6.72(1H, s), 5.99(1H, q, J=6.6㎐), 4.13(2H, q, J=7.1㎐), 1.64(2H, dd, J=7.0, 4.0㎐), 1.62(3H, d, J=6.5㎐), 1.23(2H, dd, J=7.0, 4.0㎐), 1.19(3H, t, J=7.1㎐).

(참고예 24)

(R)-1-[4'-(5-클로로-3-{[(1-페닐에톡시)카르보닐]아미노}티오펜-2-일)-2'-메톡시-[1,1'-비페닐]-4-일]시클로프로판카르복실산 에틸에스테르

참고예 8과 마찬가지로 하여 합성한 1-[4'-(3-카르바모일-5-클로로티오펜-2-일)-2'-메톡시-[1,1'-비페닐]-4-일]시클로프로판카르복실산 에틸에스테르 2.0g(4.4mmol), (R)-1-페닐에탄올(도꾜 가세이제) 0.80g(6.6mmol) 및 피리딘 1.2ml(15mmol)의 톨루엔(20ml) 용액에, 질소 분위기 하에서, 실온에서 [비스(트리플루오로아세톡시)요오도]벤젠 2.4g(5.6mmol)을 첨가하고, 60℃에서 1.5시간 가열 교반했다. 반응 종료 후, 반응 혼합액을 감압 농축하고, 얻어진 잔사를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(용출 용매; 헥산:아세트산에틸=99:1 내지 80:20(V/V))에 적용하고, 목적물을 포함하는 획분을 감압 농축함으로써, 표기 화합물 1.46g(4.0mmol(순도 72중량％), 수율 42％)을 주황색 유상물로서 얻었다.

질량 스펙트럼(CI, m/z):575 [M]⁺.

¹H-NMR 스펙트럼(400㎒, DMSO-d₆)δ:9.39(1H, brs), 7.40-7.26(10H, m), 7.23-7.16(2H, m), 7.10(1H, dd, J=7.8, 1.6㎐), 5.75(1H, q, J=6.4㎐), 4.06(2H, q, J=7.1㎐), 3.73(3H, s), 1.56-1.41(5H, m), 1.23(2H, dd, J=7.0, 4.0㎐), 1.13(3H, t, J=7.0㎐).

(참고예 25)

(R)-1-{4'-[5-클로로-3-({[1-(2,5-디플루오로페닐)에톡시]카르보닐}아미노)티오펜-2-일]-2'-메톡시-[1,1'-비페닐]-4-일}시클로프로판카르복실산 2-(트리메틸실릴)에틸에스테르

참고예 16과 마찬가지로 하여 합성한 1-[4'-(3-카르바모일-5-클로로티오펜-2-일)-2'-메톡시-[1,1'-비페닐]-4-일]시클로프로판카르복실산 2-(트리메틸실릴)에틸에스테르 886㎎(1.68mmol) 및 피리딘 0.65ml(8.0mmol)의 톨루엔(10ml) 용액에, 아르곤 분위기 하에서, 실온에서 [비스(트리플루오로아세톡시)요오도]벤젠 874㎎(2.03mmol)을 첨가하고, 5분간 교반 후, (R)-1-(2,5-디플루오로페닐)에탄올(에나민제) 413㎎(2.61mmol)을 첨가하고, 배스 온도 70℃에서 1시간 가열 교반했다. 반응 종료 후, 반응 혼합액에 물과 아세트산에틸을 첨가하고, 아세트산에틸로 추출했다. 유기층을 무수 황산마그네슘으로 건조하고, 감압 농축했다. 얻어진 잔사를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(용출 용매; 헥산:아세트산에틸=99:1 내지 94:6(V/V))에 적용하고, 목적물을 포함하는 획분을 감압 농축함으로써, 표기 화합물 1.16g(1.46mmol(순도 86중량％), 수율 87％)을 갈색 유상물(반고체)로서 얻었다.

질량 스펙트럼(DUIS^-, m/z):682 [M-1]^-.

¹H-NMR 스펙트럼(400㎒, DMSO-d₆)δ:9.55(1H, brs), 7.45-7.40(2H, m), 7.39-7.17(8H, m), 7.10(1H, dd, J=7.9, 1.5㎐), 5.91(1H, q, J=6.3㎐), 4.14-4.07(2H, m), 3.76(3H, s), 1.55-1.42(3H, m), 1.49(2H, dd, J=6.8, 3.9㎐), 1.23(2H, dd, J=7.0, 4.0㎐), 0.91-0.84(2H, m),-0.05(9H, s).

(참고예 26)

(R)-1-{4'-[5-플루오로-3-({[1-(4-메틸티오펜-3-일)에톡시]카르보닐}아미노)티오펜-2-일]-[1,1'-비페닐]-4-일}시클로프로판카르복실산 에틸에스테르

참고예 13과 마찬가지로 하여 합성한 2-{4'-[1-(에톡시카르보닐)시클로프로필]-[1,1'-비페닐]-4-일}-5-플루오로티오펜-3-카르복실산 456㎎(1.11mmol)의 톨루엔(10ml) 용액에, 아르곤 분위기 하에서, 트리에틸아민 0.24ml(1.7mmol) 및 디페닐포스포릴아지드 0.29ml(1.4mmol)를 첨가하고, 실온에서 30분간 교반했다. 계속해서, 분자체 4A(분말)(상품명, 나카라이테스크제)(0.3g)로 건조시킨, 참고예 20과 마찬가지로 하여 합성한 (R)-1-(4-메틸티오펜-3-일)에탄올 190㎎(1.34mmol)의 톨루엔(1ml) 용액을 첨가하고, 70℃에서 2시간 가열 교반했다. 반응 종료 후, 반응 혼합액에 아세트산에틸과 포화 염화암모늄 수용액을 첨가하여 유기층을 분리했다. 얻어진 유기층을 포화 식염수로 세정 후, 무수 황산마그네슘으로 건조하고, 감압 농축했다. 얻어진 잔사를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(용출 용매; 헥산:아세트산에틸=80:20(V/V))에 적용하고, 목적물을 포함하는 획분을 감압 농축함으로써, 표기 화합물 570㎎(1.04mmol, 수율 93％)을 무색 유상물로서 얻었다.

질량 스펙트럼(DUIS^-, m/z):548 [M-1]^-.

¹H-NMR 스펙트럼(400㎒, DMSO-d₆)δ:9.31(1H, brs), 7.74-7.68(2H, m), 7.66-7.61(2H, m), 7.57-7.40(5H, m), 7.17-7.13(1H, m), 6.83(1H, brs), 5.74(1H, q, J=6.5㎐), 4.05(2H, q, J=7.2㎐), 2.17(3H, brs), 1.60-1.43(3H, m), 1.51(2H, dd, J=6.8, 4.0㎐), 1.23(2H, dd, J=7.1, 4.1㎐), 1.11(3H, t, J=7.1㎐).

(참고예 27)

(R)-1-{4'-[3-({[1-(2-클로로페닐)에톡시]카르보닐}아미노)-5-플루오로티오펜-2-일]-2'-메톡시-[1,1'-비페닐]-4-일}시클로프로판카르복실산 에틸에스테르

참고예 14와 마찬가지로 하여 합성한 2-{4'-[1-(에톡시카르보닐)시클로프로필]-2-메톡시-[1,1'-비페닐]-4-일}-5-플루오로티오펜-3-카르복실산 72㎎(0.16mmol)의 톨루엔(4.0ml) 용액에, 아르곤 분위기 하에서, 트리에틸아민 0.040ml(0.29mmol) 및 디페닐포스포릴아지드 0.045ml(0.21mmol)를 첨가하고, 실온에서 30분간 교반했다. 계속해서, (R)-1-(2-클로로페닐)에탄올(Shanghai AoBo Bio-pharm제) 35㎎(0.22mmol)을 첨가하고, 70℃에서 2시간 가열 교반했다. 반응 종료 후, 반응 혼합액에 아세트산에틸과 물을 첨가하여 유기층을 분리했다. 얻어진 유기층을 포화 식염수로 세정 후, 무수 황산마그네슘으로 건조하고, 감압 농축했다. 얻어진 잔사를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(용출 용매; 헥산:아세트산에틸=93:7 내지 72:28(V/V))에 적용하고, 목적물을 포함하는 획분을 감압 농축함으로써, 표기 화합물 84㎎(0.061mmol(순도 43중량％), 수율 37％)을 무색 유상물로서 얻었다.

질량 스펙트럼(EI, m/z):593 [M]⁺.

¹H-NMR 스펙트럼(400㎒, CDCl₃)δ:7.52-7.48(2H, m), 7.43-7.17(9H, m), 7.06(1H, dd, J=7.8, 1.6㎐), 6.97(1H, d, J=1.6㎐), 6.23(1H, q, J=6.7㎐), 4.13(2H, q, J=7.1㎐), 3.82(3H, s), 1.63(2H, dd, J=6.9, 3.9㎐), 1.57(3H, d, J=6.7㎐), 1.24(2H, dd, J=7.0, 4.0㎐), 1.20(3H, t, J=7.2㎐).

(참고예 28)

(R)-1-{4'-[5-클로로-3-({[1-(티오펜-3-일)에톡시]카르보닐}아미노)티오펜-2-일]-[1,1'-비페닐]-4-일}시클로프로판카르복실산

참고예 23과 마찬가지로 하여 합성한 (R)-1-{4'-[5-클로로-3-({[1-(티오펜-3-일)에톡시]카르보닐}아미노)티오펜-2-일]-[1,1'-비페닐]-4-일}시클로프로판카르복실산 에틸에스테르 304㎎(0.551mmol)의 2-프로판올(4ml) 용액에, 2N 수산화나트륨 수용액 2.0ml(4.0mmol)를 첨가하고, 실온에서 42.5시간 교반했다. 반응 종료 후, 반응 혼합액에 2N 염산을 첨가하여 산성으로 하여 아세트산에틸로 추출했다. 유기층을 물, 포화 식염수로 순차 세정 후, 무수 황산마그네슘으로 건조하고, 감압 농축했다. 얻어진 잔사를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(COOH 칼럼, 용출 용매; 헥산:아세트산에틸=70:30 내지 10:90(V/V))에 적용하고, 목적물을 포함하는 획분을 감압 농축했다. 얻어진 잔사에 헥산(10ml)과 아세트산에틸(3ml)을 첨가하여 석출된 백색 고체를 여과하고, 헥산-아세트산에틸(3:1(V/V)) 혼합 용액으로 세정했다. 모액과 세정액을 감압 농축함으로써, 표기 화합물 65㎎(0.55mmol, 수율 23％)을 백색 고체로서 얻었다.

질량 스펙트럼(DUIS^-, m/z):522 [M-1]^-.

¹H-NMR 스펙트럼(400㎒, DMSO-d₆)δ:12.37(1H, brs), 9.33(1H, brs), 7.74-7.68(2H, m), 7.65-7.60(2H, m), 7.58-7.50(3H, m), 7.48-7.37(3H, m), 7.25-7.07(2H, m), 5.82(1H, q, J=6.4㎐), 1.56-1.44(3H, m), 1.48(2H, dd, J=6.7, 3.8㎐), 1.19-1.16(2H, m).

(참고예 29)

(R)-1-[4'-(5-클로로-3-{[(1-페닐에톡시)카르보닐]아미노}티오펜-2-일)-2'-메톡시-[1,1'-비페닐]-4-일]시클로프로판카르복실산

참고예 24에서 합성한 (R)-1-[4'-(5-클로로-3-{[(1-페닐에톡시)카르보닐]아미노}티오펜-2-일)-2'-메톡시-[1,1'-비페닐]-4-일]시클로프로판카르복실산 에틸에스테르 1.46g(4.0mmol(순도 72중량％))의 2-프로판올(30ml) 용액에, 2N 수산화나트륨 수용액 8.0ml(16.0mmol)를 첨가하고, 실온에서 110시간 교반했다. 반응 종료 후, 반응 혼합액에 2N 염산을 첨가하여 산성으로 하여 염화메틸렌으로 추출했다. 유기층을 포화 식염수로 세정 후, 무수 황산마그네슘으로 건조하고, 감압 농축했다. 얻어진 잔사를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(용출 용매; 헥산:아세트산에틸=80:20 내지 0:100(V/V))에 적용하고, 목적물을 포함하는 획분을 감압 농축했다. 얻어진 잔사를 소량의 에탄올에 용해하고, 물을 첨가하여 고체를 석출시켜 여과 취출하고, 수세 후, 감압 가열 건조함으로써, 표기 화합물 588㎎(1.07mmol, 수율 58％)을 담홍색 고체로서 얻었다.

질량 스펙트럼(DUIS^-, m/z):546 [M-1]^-.

¹H-NMR 스펙트럼(400㎒, DMSO-d₆)δ:12.34(1H, brs), 9.40(1H, brs), 7.45-7.25(10H, m), 7.21-7.16(2H, m), 7.09(1H, dd, J=7.9, 1.6㎐), 5.75(1H, q, J=6.4㎐), 3.73(3H, s), 1.54-1.41(5H, m), 1.18-1.12(2H, m).

(참고예 30)

(R)-1-{4'-[5-플루오로-3-({[1-(4-메틸티오펜-3-일)에톡시]카르보닐}아미노)티오펜-2-일]-[1,1'-비페닐]-4-일}시클로프로판카르복실산

참고예 26과 마찬가지로 하여 합성한 (R)-1-{4'-[5-플루오로-3-({[1-(4-메틸티오펜-3-일)에톡시]카르보닐}아미노)티오펜-2-일]-[1,1'-비페닐]-4-일}시클로프로판카르복실산 에틸에스테르 565㎎(1.03mmol)의 2-프로판올(12ml) 용액에, 2N 수산화나트륨 수용액 4.0ml(8.0mmol)를 첨가하고, 실온에서 91시간 교반했다. 반응 종료 후, 반응 혼합액에 1N 염산을 첨가하여 산성으로 하여 염화메틸렌으로 추출했다. 유기층을 물, 포화 식염수로 순차 세정 후, 무수 황산마그네슘으로 건조하고, 감압 농축했다. 얻어진 잔사를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(용출 용매; 헥산:아세트산에틸=50:50(V/V))에 적용하고, 목적물을 포함하는 획분을 감압 농축했다. 계속해서, 헥산 6ml, 아세트산에틸 12ml를 첨가하고, 50℃에서 가온한 후, 냉각하여 석출된 고체를 여과하고, 헥산-아세트산에틸(50:50(V/V)) 혼합 용액으로 세정했다. 모액과 세정액을 감압 농축하고, 얻어진 잔사에 아세토니트릴 8ml, 물 4ml 및 테트라히드로푸란 3ml를 첨가하고, 동결 건조함으로써, 표기 화합물 193㎎(0.37mmol, 수율 36％)을 백색 고체로서 얻었다.

질량 스펙트럼(DUIS^-, m/z):520 [M-1]^-.

¹H-NMR 스펙트럼(400㎒, DMSO-d₆)δ:12.38(1H, brs), 9.33(1H, brs), 7.73-7.67(2H, m), 7.65-7.59(2H, m), 7.57-7.50(2H, m), 7.49-7.38(3H, m), 7.19-7.12(1H, m), 6.83(1H, brs), 5.74(1H, q, J=6.4㎐), 2.17(3H, brs), 1.59-1.44(3H, m), 1.48(2H, dd, J=6.7, 3.8㎐), 1.18(2H, dd, J=6.9, 3.9㎐).

(참고예 31)

(R)-1-{4'-[3-({[1-(2-클로로페닐)에톡시]카르보닐}아미노)-5-플루오로티오펜-2-일]-2'-메톡시-[1,1'-비페닐]-4-일}시클로프로판카르복실산

참고예 27에서 합성한 (R)-1-{4'-[3-({[1-(2-클로로페닐)에톡시]카르보닐}아미노)-5-플루오로티오펜-2-일]-2'-메톡시-[1,1'-비페닐]-4-일}시클로프로판카르복실산 에틸에스테르 80㎎(0.058mmol(순도 43중량％))의 2-프로판올(3.0ml) 용액에, 2N 수산화나트륨 수용액 1.5ml(3.0mmol)를 첨가하고, 실온에서 23시간 교반했다. 반응 종료 후, 반응 혼합액에 2N 염산을 첨가하여 산성으로 하여 염화메틸렌으로 추출했다. 얻어진 유기층을 물, 포화 식염수로 순차 세정 후, 무수 황산마그네슘으로 건조하고, 감압 농축했다. 얻어진 잔사를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(COOH 칼럼, 용출 용매; 헥산:아세트산에틸=80:20 내지 20:80(V/V))에 적용하고, 목적물을 포함하는 획분을 감압 농축함으로써, 표기 화합물 13㎎(0.023mmol, 수율 40％)을 백색 고체로서 얻었다.

질량 스펙트럼(DUIS^-, m/z):564 [M-1]^-.

¹H-NMR 스펙트럼(400㎒, DMSO-d₆)δ:12.35(1H, brs), 9.55(1H, brs), 7.60-7.28(9H, m), 7.18(1H, d, J=1.5㎐), 7.09(1H, dd, J=7.8, 1.4㎐), 6.84(1H, d, J=2.5㎐), 6.00(1H, q, J=6.1㎐), 3.77(3H, s), 1.55-1.39(5H, m), 1.21-1.10(2H, m).

(참고예 32)

(R)-1-{4'-[5-클로로-3-({[1-(2,5-디플루오로페닐)에톡시]카르보닐}아미노)티오펜-2-일]-2'-메톡시-[1,1'-비페닐]-4-일}시클로프로판카르복실산

참고예 25와 마찬가지로 하여 합성한 (R)-1-{4'-[5-클로로-3-({[1-(2,5-디플루오로페닐)에톡시]카르보닐}아미노)티오펜-2-일]-2'-메톡시-[1,1'-비페닐]-4-일}시클로프로판카르복실산 2-(트리메틸실릴)에틸에스테르 3.00g(4.38mmol)의 디메틸포름아미드(90ml) 용액에, 아르곤 분위기 하에서, 실온에서 1M 테트라부틸암모늄 플루오라이드테트라히드로푸란 용액 9.0ml(9.0mmol)를 첨가하고, 동일 온도에서 2시간 교반했다. 반응 종료 후, 반응 혼합액에 아세트산에틸과 물을 첨가하고, 0.5N 염산으로 pH를 3 부근으로 조정했다. 반응 혼합액을 분액 후, 얻어진 유기층을 물, 포화 식염수로 순차 세정하고, 무수 황산마그네슘으로 건조 후, 감압 농축했다. 얻어진 잔사에 2-프로판올(40ml)과 물(40ml)을 첨가하여 초음파 처리를 행하고, 석출된 고체를 여과, 수세함으로써, 표기 화합물의 조체 2.86g을 얻었다. 조체를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(용출 용매; 헥산:아세트산에틸=70:30 내지 10:90(V/V))에 적용하고, 목적물을 포함하는 획분을 감압 농축하고, 잔사에 헵탄을 첨가하여 석출된 고체를 여과함으로써, 표기 화합물 1.62g(2.77mmol, 수율 63％)을 백색 고체로서 얻었다.

질량 스펙트럼(DUIS^-, m/z):582 [M-1]^-.

¹H-NMR 스펙트럼(400㎒, DMSO-d₆)δ:12.35(1H, brs), 9.54(1H, brs), 7.44-7.39(2H, m), 7.39-7.19(7H, m), 7.18(1H, d, J=1.6㎐), 7.10(1H, dd, J=7.9, 1.6㎐), 5.91(1H, q, J=6.5㎐), 3.76(3H, s), 1.56-1.43(3H, m), 1.47(2H, dd, J=6.7, 3.7㎐), 1.18(2H, dd, J=6.8, 4.0㎐).

[시험예 1]

LPA1 수용체 GTPγS 결합 시험

인간 LPA1 수용체를 발현시킨 RH7777 세포의 막 획분(A324, 챈테스트(ChanTest)제) 5㎍을 반응 완충액(20mM HEPES, 100mM NaCl, 10mM MgCl₂, 10μM GDP, 5㎍ 사포닌, 0.2％ BSA, 0.1nM [³⁵S]GTPγS(NEG030X, 퍼킨 엘머(Perkin Elmer)제), pH 7.4)에 현탁한 후, 농도를 바꾸어 DMSO에 용해한 시험 화합물을 각각 첨가한다. 30℃에서 15분간 프리인큐베이트한 후, LPA(L7260, 시그마(Sigma)제, 최종 농도 100nM)를 첨가하여 30℃에서 30분간 인큐베이트한다. 셀 하비스터(M30, 브란델(Brandel)제)를 사용하여 막 획분을 유리 섬유 여과지(GF/B, 와트만(Whatman)제)에 회수하고, 10mM 인산 완충액(pH 7.4)으로 세정한다. 액체 신틸레이션 애널라이저(2900TR, 팩커드(Packard)제)를 사용하여 막 획분의 방사 활성을 측정하고, LPA1 수용체와 [³⁵S]GTPγS의 결합을 50％ 저해하는 시험 화합물 농도(IC₅₀)를, EXSAS(버전 7.6.0, 아암 시스텍스제)를 사용한 비선형 회귀 분석으로 구한다.

[시험예 2]

세포 유주 시험

세포 유주 시험은 Chemo-Tx(등록 상표)(116-8, 뉴로프로브(Neuroprobe)제)를 사용하여 행했다. A2058 인간 멜라노마 세포(유러피안 콜렉션 오브 셀 컬쳐스(European Collection of Cell Culture)으로부터 입수)를 무혈청 EMEM 배지에서 24시간 배양한 후, 0.1％ BSA를 포함하는 DMEM 배지에 재현탁하여, 세포 현탁액으로 했다. 농도를 바꾸어 DMSO에 용해한 시험 화합물을, 각각 세포 현탁액에 가하여 37℃에서 15분간 배양했다(최종 DMSO 농도 0.5％). 0.1％ BSA를 포함하는 DMEM 배지에 용해한 LPA(최종 농도 100nM)를 Chemo-Tx 96웰 플레이트에 가하여, 0.001％ 피브로넥틴(Fibronectin)으로 양면을 코팅한 Chemo-Tx 필터를 플레이트에 얹었다. 배양한 세포 현탁액(세포수 25000개)을 필터 상면에 가하고, 37℃에서 3시간 더 배양한 후, 필터 상면의 세포를 제거했다. 필터를 취출하여 건조시킨 후, DiffQuik 염색액(16920, 시스멕스(Sysmex)제)을 사용하여, 필터의 하면에 유주하는 세포를 염색했다. 필터의 흡광도(570㎚)를 측정하고, LPA의 세포 유주 활성을 50％ 저해하는 시험 화합물 농도(IC₅₀)를, EXSAS(버전 7.6.0, 아암 시스텍스제)를 사용한 비선형 회귀 분석으로 구했다.

본 시험에 있어서 본 발명의 화합물은 우수한 활성을 나타내고, 예를 들어 실시예 1 내지 15의 화합물 IC₅₀값은 200nM 이하이었다.

[시험예 3]

마우스 LPA 유발 히스타민 유리 시험

마우스 LPA 유발 히스타민 유리 시험은 스와니(Swaney) 등의 방법(The Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics, 336(2011) 693-700페이지)에 준하여 행했다. 시험 화합물은 0.5％ 메틸셀룰로오스 용액(133-14255, 와코 쥰야쿠 고교제)에 현탁하고, 웅성 CD1 마우스(체중 30 내지 40g, 니혼 찰스·리버사 공급)에 10mL/㎏의 용량으로 경구 투여했다. 투여 4시간 후에 0.1％ BSA를 포함하는 PBS에 용해한 LPA(857130P, 아반티(Avanti)제)를 꼬리정맥으로부터 투여(마우스당 300㎍)하였다. 곧 마우스를 이소플루란을 사용하여 마취하고, LPA 투여로부터 2분 후에 정맥으로부터 혈액을 채취했다. 혈액은 EDTA를 포함하는 시험관으로 옮기고, 4℃에서 2,000×g, 10분간 원심 분리하여 혈장을 얻었다.

혈장 중의 히스타민 농도는 EIA 키트(62HTMPEB, 시스비오 바이오어세이즈(Cisbio Bioassays)제)로 측정했다.

시험 화합물을 투여한 마우스의 혈장 중 히스타민 농도로부터, 0.5％ 메틸셀룰로오스 용액 투여군에 대한 억제율(％)을 개체마다 산출하고, 억제율 80％ 이상을 나타내는 개체의 비율을 유효율(％)로서 나타냈다.

본 시험에 있어서 본 발명의 화합물은 우수한 활성을 나타내고, 10㎎/㎏의 투여로, 예를 들어 실시예 1 내지 15의 화합물 유효율은 50％ 이상이었다.

[시험예 4]

블레오마이신 유발 폐섬유증 모델

마우스에 염산 블레오마이신(닛본 가야쿠제)을 투여하여 폐섬유증 모델을 제작했다. 시험 화합물은 블레오마이신 투여 개시일부터 매일 경구 투여했다. 블레오마이신 처치 후 3일 내지 42일째에 이소플루란 마취 하에서 폐포 세정액(BALF) 또는 폐를 채취했다. BALF는 800×g, 10분간 원심 분리하여, 상청을 얻었다. 상청은 DC 단백질 분석 키트(DC protein assay kit)(500-0114, 바이오래드(Biorad)제)를 사용하여 단백질량을 측정하고, 서콜 가용성 콜라겐 분석 키트(Sircol soluble collagen assay kit)(S111, 바이오컬러(Biocolor)제)를 사용하여 콜라겐량을 측정했다. 또한, 상청 중의 염증, 섬유화에 영향을 미치는 바이오마커를 ELISA법을 사용하여 측정했다. 폐는 습중량을 측정한 후, 조직 중의 히드록시프롤린량을 뵈스너(Woessner)의 방법(Archives of Biochemistry and Biophysics, 93(1961)440-447페이지)을 개변하여 측정했다. 폐의 일부는 10％ 중성 완충 포르말린으로 고정하고, 병리조직학적 변화를 관찰했다. 결과는, EXSAS(버전 7.6.0, 아암 시스텍스제)를 사용하여 통계학적 해석을 행했다.

[시험예 5]

편측 요관 결찰(UUO) 신장섬유증 모델

마우스를 이소플루란으로 마취한 후, 복부를 절개한다. 좌측 요관을 견사로 결찰하여, UUO 모델을 제작한다. 시험 화합물은 UUO 제작일부터 매일 경구 투여한다. UUO 제작 후, 8, 14 또는 21일째에 신장을 적출하여, 습중량을 측정한다. 신장의 일부로부터 RNA를 추출하고, 섬유화의 마커 유전자의 발현량을 정량 PCR법으로 측정한다. 또한, 신장 조직 중의 히드록시프롤린량 또는 콜라겐량을 측정한다. 결과는, EXSAS를 사용하여 통계학적 해석을 행한다.

[시험예 6]

사염화탄소(CCl₄) 유발 간섬유증 모델

마우스에, 희석한 CCl₄(035-01273, 와코 쥰야쿠 고교제)를 주 2회 투여하여 간섬유증 모델을 제작한다. 시험 화합물은 CCl₄ 투여 개시일부터 매일 경구 투여한다. CCl₄ 투여 개시 후 3일 내지 28일째에 이소플루란 마취 하에서 간장을 채취하고, 습중량을 측정한다. 간장의 일부로부터 RNA를 추출하여, 섬유화의 마커 유전자의 발현을 정량 PCR법으로 측정한다. 또한 간 조직 중의 히드록시프롤린량 또는 콜라겐량을 측정한다. 간장의 일부는 10％ 중성 완충 포르말린으로 고정하고, 병리조직학적 변화를 관찰한다. 결과는, EXSAS를 사용하여 통계학적 해석을 행한다.

[시험예 7]

래트 비알코올성 지방성 간염(NASH) 모델

래트에 메티오닌·콜린 결핍(MCD)식을 부하하여, NASH 모델을 제작한다. 래트에 통상식 혹은 MCD식을 20주일 자유 섭취시킨다. 시험 화합물은 MCD식 부하 개시일부터 매일 경구 투여한다. 20주일 사육 후, 이소플루란 마취 하에서 간장을 채취하여, 습중량을 측정한다. 간장의 일부로부터 RNA를 추출하여, 섬유화의 마커 유전자의 발현을 정량 PCR법으로 측정한다. 또한 간 조직 중의 히드록시프롤린량 또는 콜라겐량을 측정한다. 간장의 일부는 10％ 중성 완충 포르말린으로 고정하고, 병리조직학적 변화를 관찰한다. 결과는, EXSAS를 사용하여 통계학적 해석을 행한다.

[시험예 8]

마우스 비알코올성 지방성 간염(NASH) 모델

NASH 모델로서 STAM(등록 상표) 마우스(가부시키가이샤 스텔릭 재생의과학 연구소제)를 사용한다. STAM(등록 상표) 마우스는, 2일령의 수컷 마우스에 스트렙토조토신(시그마 알드리치제) 200㎍을 배부 피하에 1회 투여하고, 생후 4주령부터 고지방식(High Fat Diet 32, 닛본 크레어제)으로 사육함으로써 제작(Medical Molecular Morphology, 46(2013)141-152페이지)한다.

시험 화합물은 5 혹은 6주령부터 매일 경구 투여한다. 9 혹은 10주령 시에 마취 하에서 혈액 및 간장을 채취하고, 혈액은 생화학 검사를 실시한다. 간장은 습중량을 측정한 후, 일부로부터 RNA를 추출하여, 염증 및 섬유화의 마커 유전자의 발현을 정량 PCR법으로 측정한다. 또한 간 조직 중의 히드록시프롤린량 또는 콜라겐량을 측정한다. 간장의 일부로부터 파라핀 절편 혹은 동결 절편을 제작하여 병리조직학적 검사를 실시하여, NAFLD 활성 점수(Activity score), 섬유증 영역(Fibrosis area) 혹은 염증 영역(Inflammation area)을 측정한다. 결과는, EXSUS(버전 8.0, CAC 엑시케어제) 혹은 Prism 4(그래프패드 소프트웨어(GraphPad software)제)를 사용하여 통계학적 해석을 행한다.

[시험예 9]

마우스 비알코올성 지방성 간염(NASH) 모델

마우스를 콜린 결핍 0.1％ 메티오닌 함유 고지방식(A06071302, 리서치 다이어트제)으로 사육하여, NASH 모델을 제작(International Journal of Experimental Pathology, 94(2013)93-103페이지)한다.

시험 화합물은 CDAHFD 부하 개시일부터 매일 경구 투여한다. 8 내지 12주일 후, 이소플루란 마취 하에서 간장을 채취하여, 습중량을 측정한다. 간장의 일부로부터 RNA를 추출하여, 염증 및 섬유화의 마커 유전자의 발현을 정량 PCR법으로 측정한다. 또한 간 조직 중의 히드록시프롤린량 또는 콜라겐량을 측정한다. 간장의 일부는 10％ 중성 완충 포르말린으로 고정하고, 병리조직학적 변화를 관찰한다. 결과는, EXSUS(버전 8.0, CAC 엑시케어제)를 사용하여 통계학적 해석을 행한다.

[시험예 10]

원숭이 약물 동태 시험

시험 전날의 저녁부터 절식한 게잡이 원숭이에게, 일회용 카테터를 비강으로부터 위 내에 삽입하고, 주사통을 사용하여, 10㎎/2mL로 제조한 화합물 함유 0.5％ 메틸셀룰로오스 현탁액 또는 용액을 2ml/㎏의 투여량으로 단회 경구 투여했다. 투여 전, 투여 후 15, 30분, 1, 2, 4, 8, 12 및 24시간에, 대퇴정맥으로부터 주사통을 사용하여 채혈했다. 채취된 혈액에 EDTA-2K를 첨가하고, 원심 분리(4℃, 1710×g, 3000rpm, 15분간)하여 혈장을 얻었다. 얻어진 혈장에 아세토니트릴을 첨가하고, 단백 제거 전처리(혈장 50μL+아세토니트릴 200μL 혼화) 및 필터(PTFE, 0.2㎛) 여과 후, LC-MS/MS(AB SCIEX사 3200QTrap 및 시마즈 세이사쿠쇼 LC-20A 또는 LC-30A 시리즈)로 혈장 중의 화합물 농도를 측정했다. 얻어진 혈장 중 농도 추이로부터 포에닉스 위놀린(Phoenix WinNonlin)(CERTARA사)으로 AUC(혈중 농도 하 면적)를 산출했다.

상기 시험예 2 및 3의 결과로부터, 본 발명의 α위치 할로겐 치환 티오펜 화합물의 염은 LPA 수용체 길항 작용을 갖고, 특히 섬유화를 수반하는 질환, 면역·염증성 질환, 중추·말초신경계 질환, 비뇨기계 질환, 암 관련 질환의 치료 및/또는 예방약(바람직하게는 치료약)으로서 유용하다.

[제제예 1] 하드 캡슐제

표준 이분식 하드 젤라틴 캡슐에, 분말상의 실시예의 화합물의 염(100㎎), 락토오스(150㎎), 셀룰로오스(50㎎) 및 스테아르산마그네슘(6㎎)을 충전하여, 하드 캡슐을 제조하고, 세정한 후, 건조한다.

[제제예 2] 소프트 캡슐제

대두유, 올리브유와 같은 소화성 유상물 및 실시예의 화합물의 염의 혼합물을, 100㎎의 활성 성분을 함유하도록 젤라틴 중에 주입하여 소프트 캡슐을 제조하고, 세정한 후, 건조한다.

[제제예 3] 정제

실시예의 화합물의 염(100㎎), 콜로이드성 이산화규소(0.2㎎), 스테아르산마그네슘(0.2㎎), 미결정성 셀룰로오스(0.2㎎), 전분(0.2㎎) 및 락토오스(98.8㎎)를 사용하여, 제제학의 분야에서 주지의 방법에 따라 정제를 제조한다. 얻어진 정제에는, 필요에 따라 코팅을 실시할 수 있다.

본 발명의 일반식（I)로 표시되는 α위치 할로겐 치환 티오펜 화합물의 염은 강력한 LPA 수용체 길항 작용, 약효의 지속성, 용해성 등의 관점에서 우수한 성질을 갖고, 의약(섬유화를 수반하는 질환, 면역·염증성 질환, 중추·말초신경계 질환, 비뇨기계 질환, 암 관련 질환의 치료약 및/또는 예방약)으로서 유용하다.

Claims (15)

1. 일반식（I）:
   

   

   
   (식 중
   R은 수소 원자 또는 메톡시기를 나타내고,
   X는 할로겐 원자를 나타내고,
   A는 이하의 기:
   

   

   
   로 이루어지는 군으로부터 선택되고,
   M은 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속을 나타내고,
   n은 M이 알칼리 금속일 때는 1을, M이 알칼리 토금속일 때는 2를 나타낸다)
   로 표시되는, 염.
2. 제1항에 있어서, 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속이 나트륨, 칼륨 또는 칼슘인 염.
3. (R)-1-[4'-(5-클로로-3-{[(1-페닐에톡시)카르보닐]아미노}티오펜-2-일)-2'-메톡시-[1,1'-비페닐]-4-일]시클로프로판카르복실산의 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속의 염.
4. 제3항에 있어서, 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속이 나트륨, 칼륨 또는 칼슘인 염.
5. (R)-1-{4'-[5-클로로-3-({[1-(2,5-디플루오로페닐)에톡시]카르보닐}아미노)티오펜-2-일]-2'-메톡시-[1,1'-비페닐]-4-일}시클로프로판카르복실산의 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속의 염.
6. 제5항에 있어서, 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속이 나트륨, 칼륨 또는 칼슘인 염.
7. (R)-1-{4'-[3-({[1-(2-클로로페닐)에톡시]카르보닐}아미노)-5-플루오로티오펜-2-일]-2'-메톡시-[1,1'-비페닐]-4-일}시클로프로판카르복실산의 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속의 염.
8. 제7항에 있어서, 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속이 나트륨, 칼륨 또는 칼슘인 염.
9. (R)-1-{4'-[5-클로로-3-({[1-(티오펜-3-일)에톡시]카르보닐}아미노)티오펜-2-일]-[1,1'-비페닐]-4-일}시클로프로판카르복실산의 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속의 염.
10. 제9항에 있어서, 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속이 나트륨, 칼륨 또는 칼슘인 염.
11. (R)-1-{4'-[5-플루오로-3-({[1-(4-메틸티오펜-3-일)에톡시]카르보닐}아미노)티오펜-2-일]-[1,1'-비페닐]-4-일}시클로프로판카르복실산의 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속의 염.
12. 제11항에 있어서, 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속이 나트륨, 칼륨 또는 칼슘인 염.
13. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 기재된 염을 유효 성분으로서 함유하는, 폐섬유증, 신장섬유증 또는 간섬유증의 치료 혹은 예방을 위한 의약 조성물.
14. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 기재된 염을 유효 성분으로서 함유하는, 비알코올성 지방성 간염(NASH)의 치료 혹은 예방을 위한 의약 조성물.
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