KR102425785B1

KR102425785B1 - 인다졸 유도체의 염 및 이의 결정

Info

Publication number: KR102425785B1
Application number: KR1020197009419A
Authority: KR
Inventors: 게이코 오누마
Original assignee: 에자이 알앤드디 매니지먼트 가부시키가이샤
Priority date: 2016-11-28
Filing date: 2017-11-27
Publication date: 2022-07-28
Also published as: RU2747399C2; JP2018108981A; EP3544967A4; CN109790141A; US20190144419A1; IL266003A; RU2019112080A3; IL266003B; WO2018097273A1; CA3041986A1; AU2017363699A1; RU2019112080A; ES2954879T3; EP3544967A1; AU2017363699B2; KR20190084941A; CN109790141B; SG11201903795WA; JP6346368B1; EP3544967B1

Abstract

본 발명은 약제에서 원료 의약품으로 사용될 가능성을 보유하는, 화학식 I로 나타내는 (E)-N,N-디메틸-4-((2-((5-((Z)-4,4,4-트리플루오로-1-(3-플루오로-1H-인다졸-5-일)-2-페닐부트-1-엔-1-일)피리딘-2-일)옥시)에틸)아미노)부트-2-엔아미드 및 산의 염, 및 이의 결정을 제공한다.
[화학식 I]

Description

인다졸 유도체의 염 및 이의 결정

본 발명은 인다졸 유도체의 염 및 이의 결정에 관한 것이다.

유방암은 오늘날 여성에서 가장 일반적으로 진단되는 암이며, 매년 미국/세계적으로 각각 거의 200,000건/170만 건의 새로운 케이스가 진단된다. 유방 종양의 약 70%가 에스트로겐 수용체 알파(ERα)-상기 종양 하위세트에서 주요 발암인자-에 양성이므로, 1) 풀베스트란트가 일례인, 선택적 에스트로겐 수용체 하향조절인자(SERD), 2) 타목시펜이 일례인, 선택적 에스트로겐 수용체 조정인자(SERM) 및 3) 에스트로겐의 전신 수준을 감소시키는 아로마타제 억제제를 포함하는 몇몇 클래스의 치료법이 ERα 기능을 길항하기 위해 개발되었다. 이들 치료법은 임상에서 ERα+ 유방 종양의 발생 및 진행을 감소시키는 데 대부분 효과적이었다. 그러나, 이들 상이한 클래스의 화합물과 연관된 표적-상 책임이 존재한다. 예를 들어, 타목시펜은 자궁내막에서 신호전달 활성을 활성화하여 임상에서 자궁내막암의 위험을 증가시키는 것으로 나타났다(문헌[Fisher et al., (1994) J. Natl. Cancer Inst. Apr 6; 86 (7): 527-37]; 문헌[van Leeuwen et al., (1994) Lancet Feb 19; 343 (8895): 448-52]). 대조적으로, 풀베스트란트는 순수 길항제이므로, ERα 활성이 뼈 구축을 위해 중추적이어서 폐경-후 여성에서의 뼈 밀도 손실로 이어질 수 있다. 표적-상 부작용에 부가하여, 이들 클래스의 ERα 길항제에 대한 임상적 내성이 또한 출현하기 시작하고 있어서 차세대 화합물을 개발할 필요성을 강조한다.

몇몇 내성 기전이 다양한 내분비 치료법에 대한 시험관내 및 생체내 내성 모델을 사용하여 확인되었다. 이들에는 함께 ER-독립적 성장을 허용하기 위한, 증가된 ERα/HER2 "크로스톡(crosstalk)"(문헌[Shou et al., (2004) J. Natl. Cancer Inst. Jun 16; 96 (12): 926-35]), ERα 공동활성화인자/공동억제인자의 비정상 발현(문헌[Osborne et al., (2003) J. Natl. Cancer Inst. Mar 5; 95(5): 353-61]) 또는 ERα의 손실이 포함된다(문헌[Osborne CK, Schiff R (2011) Annu. Rev. Med. 62: 233-47]).

내성의 임상 관련 기전을 확인하고자 기대하며, 환자로부터 단리된 내분비-치료법 내성 전이의 유전학을 심도깊게 특징화하기 위해 최근에 큰 노력을 기울여왔다. 몇몇 독립 실험실에서는 최근에 일차 종양 대비 내성 종양에서 관찰되는 여러 유전적 병소를 공개하였다(문헌[Li et al., (2013) Cell Rep. Sep 26; 4(6): 1116-30]; 문헌[Robinson et al., (2013) Nat. Genet. Dec; 45 (12): 1446-51]; 문헌[Toy et al., (2013) Nat. Genet. 2013 Dec; 45(12):1439-45]). 이들 가운데 ESR1(ERα 단백질을 인코딩하는 유전자)의 리간드-결합 도메인에서 고반복성 돌연변이가 내분비 치료법에 나이브한 종양에 비해 내성 종양의 약 20%에서 유의미하게 농축된 것으로 나타나서(문헌[Jeselsohn et al., (2014) Clin. Cancer Res. Apr 1; 20 (7): 1757-67]; 문헌[Toy et al., (2013) Nat. Genet. 2013 Dec; 45 (12): 1439-45]; 문헌[Robinson et al., (2013) Nat. Genet. Dec; 45 (12): 1446-51]; 문헌[Merenbakh-Lamin et al., (2013) Cancer Res. Dec 1; 73 (23): 6856-64]; 문헌[Yu et al., (2014) Science Jul 11; 345 (6193): 216-20]; 문헌[Segal and Dowsett (2014), Clin. Cancer Res. Apr 1; 20 (7): 1724-6]), 이들 돌연변이가 임상적 내성을 기능적으로 유도할 가능성을 제시하였다. 치료법-내성 종양에서 관찰된 ESR1 돌연변이의 농축과는 대조적으로, 다른 암-관련 유전자에서의 돌연변이는 이러한 강력한 농축을 나타내지 못하여 내성 촉진에서 ERα 돌연변이의 중요성을 강력히 시사하였다(문헌[Jeselsohn et al., (2014) Clin. Cancer Res. Apr 1; 20 (7): 1757-67]).

ER+ 유방암 환자는 평균적으로 화학치료법 및 다양한 항-에스트로겐 치료법, 예컨대 타목시펜, 풀베스트란트 및 아로마타제 억제제를 포함하는 7개의 독립적 치료법으로 치료받는다. ERα에서의 활성화 돌연변이가 출현함에 따라, 최근의 게놈 프로필 분석은 ERα 경로가 여전히 내성 환경에서 중추적인 종양 성장의 유도제로 남아있음을 드러냈다. 따라서, 임상 환경에서 내성을 극복할 수 있는 보다 강력한 ER-지정 치료법을 개발하는 것이 중추적이다. 따라서, 야생형(WT) 및 ER α-돌연변이체 양성 종양 둘 다의 성장을 강력히 억제할 수 있는 신규한 화합물에 대한 필요성이 존재한다.

화학식 I로 나타내는 화합물, 즉, (E)-N,N-디메틸-4-((2-((5-((Z)-4,4,4-트리플루오로-1-(3-플루오로-1H-인다졸-5-일)-2-페닐부트-1-엔-1-일)피리딘-2-일)옥시)에틸)아미노)부트-2-엔아미드(이후 화합물(I)로 언급됨)는 야생형(WT) 및 ER α-돌연변이체 양성 종양 둘 다의 성장을 억제한다.

[화학식 I]

일반적으로, 약학 제품으로 사용되는 화합물, 이의 염, 및 이의 결정의 물리적 성질은 약물의 생체이용률, 활성 약학 성분의 순도, 조제물의 처방 등에 크게 영향을 끼친다. 따라서 본 발명의 목적은 약제에서 원료 의약품으로 사용될 가능성을 갖는 화합물(I)의 염 또는 이의 결정을 제공하는 것이다.

본 발명자들은 약제에서 원료 의약품으로 사용될 가능성을 갖는 화합물(I)의 염 또는 이의 결정을 발견함으로써, 본 발명을 완성하였다.

구체적으로, 본 발명은 하기 <1> 내지 <38>을 제공한다.

<1> 화학식 I로 나타내는 (E)-N,N-디메틸-4-((2-((5-((Z)-4,4,4-트리플루오로-1-(3-플루오로-1H-인다졸-5-일)-2-페닐부트-1-엔-1-일)피리딘-2-일)옥시)에틸)아미노)부트-2-엔아미드, 및 브롬화수소산, 말레산, 만델산 및 벤젠설폰산으로 구성되는 군으로부터 선택되는 산의 염.

[화학식 I]

<2> 분말 X-선 회절측정에서 6.1°, 11.8°, 16.8°, 18.1° 및 19.5°로 구성되는 군으로부터 선택되는 회절 각(2θ ± 0.2°)에서 하나 이상의 회절 피크를 갖는 것을 특징으로 하는, 화학식 I로 나타내는 (E)-N,N-디메틸-4-((2-((5-((Z)-4,4,4-트리플루오로-1-(3-플루오로-1H-인다졸-5-일)-2-페닐부트-1-엔-1-일)피리딘-2-일)옥시)에틸)아미노)부트-2-엔아미드의 하이드로클로라이드 염의 결정.

[화학식 I]

<3> 상기 <2>에 있어서, 분말 X-선 회절측정에서 18.1°의 회절 각(2θ ± 0.2°)에서 회절 피크를 갖는 것을 특징으로 하는 결정.

<4> 상기 <2>에 있어서, 분말 X-선 회절측정에서 6.1°, 11.8° 및 18.1°의 회절 각(2θ ± 0.2°)에서 회절 피크를 갖는 것을 특징으로 하는 결정.

<5> 고상 ¹³C NMR 스펙트럼에서 164.3 ppm, 162.2 ppm 및 111.9 ppm의 화학적 이동(± 0.5 ppm)에서 피크를 갖는 것을 특징으로 하는, 화학식 I로 나타내는 (E)-N,N-디메틸-4-((2-((5-((Z)-4,4,4-트리플루오로-1-(3-플루오로-1H-인다졸-5-일)-2-페닐부트-1-엔-1-일)피리딘-2-일)옥시)에틸)아미노)부트-2-엔아미드의 하이드로클로라이드 염의 결정.

[화학식 I]

<6> 도 1에 나타낸 분말 X-선 회절 패턴과 실질적으로 동일한 분말 X-선 회절 패턴을 갖는 것을 특징으로 하는, 화학식 I로 나타내는 (E)-N,N-디메틸-4-((2-((5-((Z)-4,4,4-트리플루오로-1-(3-플루오로-1H-인다졸-5-일)-2-페닐부트-1-엔-1-일)피리딘-2-일)옥시)에틸)아미노)부트-2-엔아미드의 하이드로클로라이드 염의 결정.

[화학식 I]

<7> 도 7에 나타낸 고상 ¹³C NMR 스펙트럼과 실질적으로 동일한 고상 ¹³C NMR 스펙트럼을 갖는 것을 특징으로 하는, 화학식 I로 나타내는 (E)-N,N-디메틸-4-((2-((5-((Z)-4,4,4-트리플루오로-1-(3-플루오로-1H-인다졸-5-일)-2-페닐부트-1-엔-1-일)피리딘-2-일)옥시)에틸)아미노)부트-2-엔아미드의 하이드로클로라이드 염의 결정.

[화학식 I]

<8> 분말 X-선 회절측정에서 6.2°, 11.7°, 18.7°, 20.4° 및 22.5°로 구성되는 군으로부터 선택되는 회절 각(2θ ± 0.2°)에서 하나 이상의 회절 피크를 갖는 것을 특징으로 하는, 화학식 I로 나타내는 (E)-N,N-디메틸-4-((2-((5-((Z)-4,4,4-트리플루오로-1-(3-플루오로-1H-인다졸-5-일)-2-페닐부트-1-엔-1-일)피리딘-2-일)옥시)에틸)아미노)부트-2-엔아미드의 하이드로브로마이드 염의 결정.

[화학식 I]

<9> 상기 <8>에 있어서, 분말 X-선 회절측정에서 18.7°의 회절 각(2θ ± 0.2°)에서 회절 피크를 갖는 것을 특징으로 하는 결정.

<10> 상기 <8>에 있어서, 분말 X-선 회절측정에서 6.2°, 18.7° 및 22.5°의 회절 각(2θ ± 0.2°)에서 회절 피크를 갖는 것을 특징으로 하는 결정.

<11> 고상 ¹³C NMR 스펙트럼에서 164.5 ppm, 162.2 ppm 및 111.7 ppm의 화학적 이동(± 0.5 ppm)에서 피크를 갖는 것을 특징으로 하는, 화학식 I로 나타내는 (E)-N,N-디메틸-4-((2-((5-((Z)-4,4,4-트리플루오로-1-(3-플루오로-1H-인다졸-5-일)-2-페닐부트-1-엔-1-일)피리딘-2-일)옥시)에틸)아미노)부트-2-엔아미드의 하이드로브로마이드 염의 결정.

[화학식 I]

<12> 도 2에 나타낸 분말 X-선 회절 패턴과 실질적으로 동일한 분말 X-선 회절 패턴을 갖는 것을 특징으로 하는, 화학식 I로 나타내는 (E)-N,N-디메틸-4-((2-((5-((Z)-4,4,4-트리플루오로-1-(3-플루오로-1H-인다졸-5-일)-2-페닐부트-1-엔-1-일)피리딘-2-일)옥시)에틸)아미노)부트-2-엔아미드의 하이드로브로마이드 염의 결정.

[화학식 I]

<13> 도 8에 나타낸 고상 ¹³C NMR 스펙트럼과 실질적으로 동일한 고상 ¹³C NMR 스펙트럼을 갖는 것을 특징으로 하는, 화학식 I로 나타내는 (E)-N,N-디메틸-4-((2-((5-((Z)-4,4,4-트리플루오로-1-(3-플루오로-1H-인다졸-5-일)-2-페닐부트-1-엔-1-일)피리딘-2-일)옥시)에틸)아미노)부트-2-엔아미드의 하이드로브로마이드 염의 결정.

[화학식 I]

<14> 분말 X-선 회절측정에서 16.7°, 17.9°, 21.2°, 22.9° 및 24.9°로 구성되는 군으로부터 선택되는 회절 각(2θ ± 0.2°)에서 하나 이상의 회절 피크를 갖는 것을 특징으로 하는, 화학식 I로 나타내는 (E)-N,N-디메틸-4-((2-((5-((Z)-4,4,4-트리플루오로-1-(3-플루오로-1H-인다졸-5-일)-2-페닐부트-1-엔-1-일)피리딘-2-일)옥시)에틸)아미노)부트-2-엔아미드의 말레에이트 염의 결정형 A.

[화학식 I]

<15> 상기 <14>에 있어서, 분말 X-선 회절측정에서 24.9°의 회절 각(2θ ± 0.2°)에서 회절 피크를 갖는 것을 특징으로 하는 결정.

<16> 상기 <14>에 있어서, 분말 X-선 회절측정에서 17.9°, 22.9° 및 24.9°의 회절 각(2θ ± 0.2°)에서 회절 피크를 갖는 것을 특징으로 하는 결정.

<17> 고상 ¹³C NMR 스펙트럼에서 169.6 ppm, 107.3 ppm 및 50.3 ppm의 화학적 이동(± 0.5 ppm)에서 피크를 갖는 것을 특징으로 하는, 화학식 I로 나타내는 (E)-N,N-디메틸-4-((2-((5-((Z)-4,4,4-트리플루오로-1-(3-플루오로-1H-인다졸-5-일)-2-페닐부트-1-엔-1-일)피리딘-2-일)옥시)에틸)아미노)부트-2-엔아미드의 말레에이트 염의 결정형 A.

[화학식 I]

<18> 도 3에 나타낸 분말 X-선 회절 패턴과 실질적으로 동일한 분말 X-선 회절 패턴을 갖는 것을 특징으로 하는, 화학식 I로 나타내는 (E)-N,N-디메틸-4-((2-((5-((Z)-4,4,4-트리플루오로-1-(3-플루오로-1H-인다졸-5-일)-2-페닐부트-1-엔-1-일)피리딘-2-일)옥시)에틸)아미노)부트-2-엔아미드의 말레에이트 염의 결정형 A.

[화학식 I]

<19> 도 9에 나타낸 고상 ¹³C NMR 스펙트럼과 실질적으로 동일한 고상 ¹³C NMR 스펙트럼을 갖는 것을 특징으로 하는, 화학식 I로 나타내는 (E)-N,N-디메틸-4-((2-((5-((Z)-4,4,4-트리플루오로-1-(3-플루오로-1H-인다졸-5-일)-2-페닐부트-1-엔-1-일)피리딘-2-일)옥시)에틸)아미노)부트-2-엔아미드의 말레에이트 염의 결정형 A.

[화학식 I]

<20> 분말 X-선 회절측정에서 14.8°, 20.2°, 22.3° 및 26.5°로 구성되는 군으로부터 선택되는 회절 각(2θ ± 0.2°)에서 하나 이상의 회절 피크를 갖는 것을 특징으로 하는, 화학식 I로 나타내는 (E)-N,N-디메틸-4-((2-((5-((Z)-4,4,4-트리플루오로-1-(3-플루오로-1H-인다졸-5-일)-2-페닐부트-1-엔-1-일)피리딘-2-일)옥시)에틸)아미노)부트-2-엔아미드의 말레에이트 염의 결정형 B.

[화학식 I]

<21> 상기 <20>에 있어서, 분말 X-선 회절측정에서 22.3°의 회절 각(2θ ± 0.2°)에서 회절 피크를 갖는 것을 특징으로 하는 결정.

<22> 상기 <20>에 있어서, 분말 X-선 회절측정에서 14.8°, 20.2° 및 22.3°의 회절 각(2θ ± 0.2°)에서 회절 피크를 갖는 것을 특징으로 하는 결정.

<23> 고상 ¹³C NMR 스펙트럼에서 171.4 ppm, 108.6 ppm 및 48.8 ppm의 화학적 이동(± 0.5 ppm)에서 피크를 갖는 것을 특징으로 하는, 화학식 I로 나타내는 (E)-N,N-디메틸-4-((2-((5-((Z)-4,4,4-트리플루오로-1-(3-플루오로-1H-인다졸-5-일)-2-페닐부트-1-엔-1-일)피리딘-2-일)옥시)에틸)아미노)부트-2-엔아미드의 말레에이트 염의 결정형 B.

[화학식 I]

<24> 도 4에 나타낸 분말 X-선 회절 패턴과 실질적으로 동일한 분말 X-선 회절 패턴을 갖는 것을 특징으로 하는, 화학식 I로 나타내는 (E)-N,N-디메틸-4-((2-((5-((Z)-4,4,4-트리플루오로-1-(3-플루오로-1H-인다졸-5-일)-2-페닐부트-1-엔-1-일)피리딘-2-일)옥시)에틸)아미노)부트-2-엔아미드의 말레에이트 염의 결정형 B.

[화학식 I]

<25> 도 10에 나타낸 고상 ¹³C NMR 스펙트럼과 실질적으로 동일한 고상 ¹³C NMR 스펙트럼을 갖는 것을 특징으로 하는, 화학식 I로 나타내는 (E)-N,N-디메틸-4-((2-((5-((Z)-4,4,4-트리플루오로-1-(3-플루오로-1H-인다졸-5-일)-2-페닐부트-1-엔-1-일)피리딘-2-일)옥시)에틸)아미노)부트-2-엔아미드의 말레에이트 염의 결정형 B.

[화학식 I]

<26> 분말 X-선 회절측정에서 5.1°, 8.8°, 10.3°, 16.9° 및 18.3°로 구성되는 군으로부터 선택되는 회절 각(2θ ± 0.2°)에서 하나 이상의 회절 피크를 갖는 것을 특징으로 하는, 화학식 I로 나타내는 (E)-N,N-디메틸-4-((2-((5-((Z)-4,4,4-트리플루오로-1-(3-플루오로-1H-인다졸-5-일)-2-페닐부트-1-엔-1-일)피리딘-2-일)옥시)에틸)아미노)부트-2-엔아미드의 L-만델레이트 염의 결정.

[화학식 I]

<27> 상기 <26>에 있어서, 분말 X-선 회절측정에서 18.3°의 회절 각(2θ ± 0.2°)에서 회절 피크를 갖는 것을 특징으로 하는 결정.

<28> 상기 <26>에 있어서, 분말 X-선 회절측정에서 5.1°, 10.3° 및 18.3°의 회절 각(2θ ± 0.2°)에서 회절 피크를 갖는 것을 특징으로 하는 결정.

<29> 고상 ¹³C NMR 스펙트럼에서 165.9 ppm, 160.7 ppm 및 110.5 ppm의 화학적 이동(± 0.5 ppm)에서 피크를 갖는 것을 특징으로 하는, 화학식 I로 나타내는 (E)-N,N-디메틸-4-((2-((5-((Z)-4,4,4-트리플루오로-1-(3-플루오로-1H-인다졸-5-일)-2-페닐부트-1-엔-1-일)피리딘-2-일)옥시)에틸)아미노)부트-2-엔아미드의 L-만델레이트 염의 결정.

[화학식 I]

<30> 도 5에 나타낸 분말 X-선 회절 패턴과 실질적으로 동일한 분말 X-선 회절 패턴을 갖는 것을 특징으로 하는, 화학식 I로 나타내는 (E)-N,N-디메틸-4-((2-((5-((Z)-4,4,4-트리플루오로-1-(3-플루오로-1H-인다졸-5-일)-2-페닐부트-1-엔-1-일)피리딘-2-일)옥시)에틸)아미노)부트-2-엔아미드의 L-만델레이트 염의 결정.

[화학식 I]

<31> 도 11에 나타낸 고상 ¹³C NMR 스펙트럼과 실질적으로 동일한 고상 ¹³C NMR 스펙트럼을 갖는 것을 특징으로 하는, 화학식 I로 나타내는 (E)-N,N-디메틸-4-((2-((5-((Z)-4,4,4-트리플루오로-1-(3-플루오로-1H-인다졸-5-일)-2-페닐부트-1-엔-1-일)피리딘-2-일)옥시)에틸)아미노)부트-2-엔아미드의 L-만델레이트 염의 결정.

[화학식 I]

<32> 분말 X-선 회절측정에서 5.2°, 9.5°, 10.5°, 21.4° 및 24.4°로 구성되는 군으로부터 선택되는 회절 각(2θ ± 0.2°)에서 하나 이상의 회절 피크를 갖는 것을 특징으로 하는, 화학식 I로 나타내는 (E)-N,N-디메틸-4-((2-((5-((Z)-4,4,4-트리플루오로-1-(3-플루오로-1H-인다졸-5-일)-2-페닐부트-1-엔-1-일)피리딘-2-일)옥시)에틸)아미노)부트-2-엔아미드의 벤젠설포네이트 염의 결정.

[화학식 I]

<33> 상기 <32>에 있어서, 분말 X-선 회절측정에서 9.5°의 회절 각(2θ ± 0.2°)에서 회절 피크를 갖는 것을 특징으로 하는 결정.

<34> 상기 <32>에 있어서, 분말 X-선 회절측정에서 5.2°, 9.5° 및 10.5°의 회절 각(2θ ± 0.2°)에서 회절 피크를 갖는 것을 특징으로 하는 결정.

<35> 고상 ¹³C NMR 스펙트럼에서 163.0 ppm, 147.2 ppm 및 145.0 ppm의 화학적 이동(± 0.5 ppm)에서 피크를 갖는 것을 특징으로 하는, 화학식 I로 나타내는 (E)-N,N-디메틸-4-((2-((5-((Z)-4,4,4-트리플루오로-1-(3-플루오로-1H-인다졸-5-일)-2-페닐부트-1-엔-1-일)피리딘-2-일)옥시)에틸)아미노)부트-2-엔아미드의 벤젠설포네이트 염의 결정.

[화학식 I]

<36> 도 6에 나타낸 분말 X-선 회절 패턴과 실질적으로 동일한 분말 X-선 회절 패턴을 갖는 것을 특징으로 하는, 화학식 I로 나타내는 (E)-N,N-디메틸-4-((2-((5-((Z)-4,4,4-트리플루오로-1-(3-플루오로-1H-인다졸-5-일)-2-페닐부트-1-엔-1-일)피리딘-2-일)옥시)에틸)아미노)부트-2-엔아미드의 벤젠설포네이트 염의 결정.

[화학식 I]

<37> 도 12에 나타낸 고상 ¹³C NMR 스펙트럼과 실질적으로 동일한 고상 ¹³C NMR 스펙트럼을 갖는 것을 특징으로 하는, 화학식 I로 나타내는 (E)-N,N-디메틸-4-((2-((5-((Z)-4,4,4-트리플루오로-1-(3-플루오로-1H-인다졸-5-일)-2-페닐부트-1-엔-1-일)피리딘-2-일)옥시)에틸)아미노)부트-2-엔아미드의 벤젠설포네이트 염의 결정.

[화학식 I]

<38> 상기 <1> 내지 <37> 중 어느 하나에 따른 염 또는 이의 결정을 포함하는 약학 조성물.

본 발명에 의해 제공되는 화합물(I)의 염 및 이의 결정은 후술되는 실시예에 나타낸 바와 같은 흡습성 및 약제에서 원료 의약품으로 사용될 가능성과 같은 성질을 보유한다.

[도 1] 도 1은 실시예 1에서 수득한 화합물(I) 하이드로클로라이드 염의 결정의 분말 X-선 회절 패턴을 나타낸다. 가로 축은 회절 각(2θ)을 나타내며 세로 축은 피크 세기를 나타낸다.
[도 2] 도 2는 실시예 2에서 수득한 화합물(I) 하이드로브로마이드 염의 결정의 분말 X-선 회절 패턴을 나타낸다. 가로 축은 회절 각(2θ)을 나타내며 세로 축은 피크 세기를 나타낸다.
[도 3] 도 3은 실시예 3에서 수득한 화합물(I) 말레에이트 염의 결정형 A의 분말 X-선 회절 패턴을 나타낸다. 가로 축은 회절 각(2θ)을 나타내며 세로 축은 피크 세기를 나타낸다.
[도 4] 도 4는 실시예 4에서 수득한 화합물(I) 말레에이트 염의 결정형 B의 분말 X-선 회절 패턴을 나타낸다. 가로 축은 회절 각(2θ)을 나타내며 세로 축은 피크 세기를 나타낸다.
[도 5] 도 5는 실시예 5에서 수득한 화합물(I) L-만델레이트 염의 결정의 분말 X-선 회절 패턴을 나타낸다. 가로 축은 회절 각(2θ)을 나타내며 세로 축은 피크 세기를 나타낸다.
[도 6] 도 6은 실시예 6에서 수득한 화합물(I) 벤젠설포네이트 염의 결정의 분말 X-선 회절 패턴을 나타낸다. 가로 축은 회절 각(2θ)을 나타내며 세로 축은 피크 세기를 나타낸다.
[도 7] 도 7은 실시예 1에서 수득한 화합물(I) 하이드로클로라이드 염의 결정의 고상 ¹³C NMR 스펙트럼을 나타낸다. 가로 축은 화학적 이동(ppm)을 나타내며 세로 축은 피크 세기를 나타낸다.
[도 8] 도 8은 실시예 2에서 수득한 화합물(I) 하이드로브로마이드 염의 결정의 고상 ¹³C NMR 스펙트럼을 나타낸다. 가로 축은 화학적 이동(ppm)을 나타내며 세로 축은 피크 세기를 나타낸다.
[도 9] 도 9는 실시예 3에서 수득한 화합물(I) 말레에이트 염의 결정형 A의 고상 ¹³C NMR 스펙트럼을 나타낸다. 가로 축은 화학적 이동(ppm)을 나타내며 세로 축은 피크 세기를 나타낸다.
[도 10] 도 10은 실시예 4에서 수득한 화합물(I) 말레에이트 염의 결정형 B의 고상 ¹³C NMR 스펙트럼을 나타낸다. 가로 축은 화학적 이동(ppm)을 나타내며 세로 축은 피크 세기를 나타낸다.
[도 11] 도 11은 실시예 5에서 수득한 화합물(I) L-만델레이트 염의 결정의 고상 ¹³C NMR 스펙트럼을 나타낸다. 가로 축은 화학적 이동(ppm)을 나타내며 세로 축은 피크 세기를 나타낸다.
[도 12] 도 12는 실시예 6에서 수득한 화합물(I) 벤젠설포네이트 염의 결정의 고상 ¹³C NMR 스펙트럼을 나타낸다. 가로 축은 화학적 이동(ppm)을 나타내며 세로 축은 피크 세기를 나타낸다.
[도 13] 도 13은 실시예 1에서 수득한 화합물(I) 하이드로클로라이드 염의 결정의 흡습성을 나타내는 그래프이다. 가로 축은 상대 습도를 나타내며 세로 축은 중량 변화를 나타낸다.
[도 14] 도 14는 실시예 2에서 수득한 화합물(I) 하이드로브로마이드 염의 결정의 흡습성을 나타내는 그래프이다. 가로 축은 상대 습도를 나타내며 세로 축은 중량 변화를 나타낸다.
[도 15] 도 15는 실시예 3에서 수득한 화합물(I) 말레에이트 염의 결정형 A의 흡습성을 나타내는 그래프이다. 가로 축은 상대 습도를 나타내며 세로 축은 중량 변화를 나타낸다.
[도 16] 도 16은 실시예 4에서 수득한 화합물(I) 말레에이트 염의 결정형 B의 흡습성을 나타내는 그래프이다. 가로 축은 상대 습도를 나타내며 세로 축은 중량 변화를 나타낸다.
[도 17] 도 17은 실시예 5에서 수득한 화합물(I) L-만델레이트 염의 결정의 흡습성을 나타내는 그래프이다. 가로 축은 상대 습도를 나타내며 세로 축은 중량 변화를 나타낸다.
[도 18] 도 18은 실시예 6에서 수득한 화합물(I) 벤젠설포네이트 염의 결정의 흡습성을 나타내는 그래프이다. 가로 축은 상대 습도를 나타내며 세로 축은 중량 변화를 나타낸다.
[도 19] 도 19는 임상 치료법 4-하이드록시타목시펜(4-OHT), 랄록시펜 및 풀베스트란트에 대한 야생형 및 돌연변이체 ER-보유 MCF7 세포주의 시험관내 증식 효과를 나타내며, 여기서 기존 임상 화합물에 대해 대조군 세포주 대비 돌연변이체-보유 세포주 에서 표현형 내성이 관찰되었고, 이에 의해 다양한 ERα^MUT를 과발현하도록 조작된 MCF7 세포는 다양한 내분비 치료법에 대한 부분적 내성을 나타냈다.
[도 20] 도 20은 MCF7 이종이식편 보유 암컷 Balb/c 누드 마우스에서 경구 화합물(I)의 항종양 및 체중 효과를 나타내는 그래프이다.
[도 21] 도 21은 PDX-Y537S 이종이식편 보유 무흉선 누드(Crl:NU(NCr)-Foxn1nu) 암컷 마우스에서 경구 화합물(I)의 항종양 및 체중 효과를 나타내는 그래프이다.
[도 22] 도 22는 동형접합성 Y537S 돌연변이를 보유하는 ER+ WHIM20 PDX 모델에서 화합물(I)의 항종양 및 체중 효과를 나타내는 그래프이다.

본 발명의 화합물(I)의 염, 이의 결정, 및 이의 제조 방법이 상세히 기재될 것이다.

본원에서 사용되는 "염"은 염기성 성분으로서 화합물(I) 및 화합물(I)에 대한 특정 수의 산 등가물로 이루어진 화학적 대상체를 나타낸다. 본원에서 용어 "화학식 I로 나타내는 (E)-N,N-디메틸-4-((2-((5-((Z)-4,4,4-트리플루오로-1-(3-플루오로-1H-인다졸-5-일)-2-페닐부트-1-엔-1-일)피리딘-2-일)옥시)에틸)아미노)부트-2-엔아미드, 및 브롬화수소산, 말레산, 만델산 및 벤젠설폰산으로 구성되는 군으로부터 선택되는 산의 염"은 "브롬화수소산, 말레산, 만델산 및 벤젠설폰산으로 구성되는 군으로부터 선택되는 산으로 형성되는 화학식 I로 나타내는 (E)-N,N-디메틸-4-((2-((5-((Z)-4,4,4-트리플루오로-1-(3-플루오로-1H-인다졸-5-일)-2-페닐부트-1-엔-1-일)피리딘-2-일)옥시)에틸)아미노)부트-2-엔아미드의 염"과 동일한 의미로 사용된다.

본원에서 사용되는 "염"의 예에는 유기 카복실산, 유기 설폰산 및 무기 산과의 염이 포함되며, 특히 약제학적으로 허용 가능한 염이 바람직하다.

유기 카복실산의 예에는 아세트산, 옥살산, 말레산, 만델산, 타르타르산, 푸마르산, 시트르산, 말론산, 숙신산 및 말산이 포함된다. 유기 카복실산의 바람직한 예에는 말레산, 만델산(바람직하게는 L-만델산), 타르타르산 및 말론산이 포함된다.

유기 설폰산의 예에는 메탄설폰산, 트리플루오로메탄설폰산, 에탄설폰산, 벤젠설폰산, p-톨루엔설폰산 및 캄포르설폰산이 포함된다. 유기 설폰산의 바람직한 예에는 메탄설폰산, 벤젠설폰산 및 p-톨루엔설폰산이 포함된다.

무기 산의 예에는 불화수소산, 염화수소산, 브롬화수소산, 요오드화수소산, 황산, 질산, 과염소산, 인산, 카본산 및 바이카본산이 포함된다. 무기 산의 바람직한 예에는 염화수소산, 브롬화수소산, 황산, 질산 및 인산이 포함된다.

화합물(I)의 염은 또한 용매화물일 수 있다. 본원에서 사용되는 화합물(I)의 염의 용매화물은 용매 분자와 함께 화합물(I)의 염으로 형성된 고체를 의미한다. 용매화물에서 용매의 예에는 케톤 용매, 예컨대 아세톤, 메틸 에틸 케톤 또는 사이클로헥산온; 에스테르 용매, 예컨대 에틸 아세테이트 또는 메틸 아세테이트; 에테르 용매, 예컨대 1,2-디메톡시에탄 또는 메틸-tert-부틸 에테르; 알코올 용매, 예컨대 메탄올, 에탄올, 1-프로판올 또는 이소프로판올; 극성 용매, 예컨대 N-메틸-2-피롤리돈, N,N-디메틸포름아미드 또는 디메틸 설폭시드; 및 물이 포함된다.

본원에서 사용되는 "결정"은 화합물(I)의 염의 결정을 나타낸다. 따라서, 화합물(I)의 하이드로클로라이드 염의 결정은, 예를 들어, 화합물(I) 및 염화수소산 간에 형성된 염의 결정을 의미한다.

본원에서 바람직한 결정의 예에는 하기 결정이 포함된다:

(a) 분말 X-선 회절측정에서 18.1°의 회절 각(2θ ± 0.2°)에서 회절 피크를 갖는, 화합물(I)의 하이드로클로라이드 염의 결정;

(b) 분말 X-선 회절측정에서 6.1°, 11.8° 및 18.1°의 회절 각(2θ ± 0.2°)에서 회절 피크를 갖는, 화합물(I)의 하이드로클로라이드 염의 결정;

(c) 분말 X-선 회절측정에서 6.1°, 11.8°, 16.8°, 18.1° 및 19.5°의 회절 각(2θ ± 0.2°)에서 회절 피크를 갖는, 화합물(I)의 하이드로클로라이드 염의 결정;

(d) 분말 X-선 회절측정에서 6.1°, 11.8°, 14.9°, 16.8°, 18.1°, 19.1°, 19.5°, 21.7°, 25.9° 및 27.4°의 회절 각(2θ ± 0.2°)에서 하나 이상의 회절 피크를 갖는, 화합물(I)의 하이드로클로라이드 염의 결정;

(e) 분말 X-선 회절측정에서 18.7°의 회절 각(2θ ± 0.2°)에서 회절 피크를 갖는, 화합물(I)의 하이드로브로마이드 염의 결정;

(f) 분말 X-선 회절측정에서 6.2°, 18.7° 및 22.5°의 회절 각(2θ ± 0.2°)에서 회절 피크를 갖는, 화합물(I)의 하이드로브로마이드 염의 결정;

(g) 분말 X-선 회절측정에서 6.2°, 11.7°, 18.7°, 20.4° 및 22.5°의 회절 각(2θ ± 0.2°)에서 회절 피크를 갖는, 화합물(I)의 하이드로브로마이드 염의 결정;

(h) 분말 X-선 회절측정에서 6.2°, 11.7°, 12.5°, 16.5°, 17.6°, 18.7°, 20.4°, 21.4°, 22.5° 및 27.1°의 회절 각(2θ ± 0.2°)에서 하나 이상의 회절 피크를 갖는, 화합물(I)의 하이드로브로마이드 염의 결정;

(i) 분말 X-선 회절측정에서 24.9°의 회절 각(2θ ± 0.2°)에서 회절 피크를 갖는, 화합물(I)의 말레에이트 염의 결정형 A;

(j) 분말 X-선 회절측정에서 17.9°, 22.9° 및 24.9°의 회절 각(2θ ± 0.2°)에서 회절 피크를 갖는, 화합물(I)의 말레에이트 염의 결정형 A;

(k) 분말 X-선 회절측정에서 16.7°, 17.9°, 21.2°, 22.9° 및 24.9°의 회절 각(2θ ± 0.2°)에서 회절 피크를 갖는, 화합물(I)의 말레에이트 염의 결정형 A;

(l) 분말 X-선 회절측정에서 4.9°, 9.8°, 16.1°, 16.7°, 17.9°, 19.4°, 21.2°, 22.9°, 24.9° 및 30.4°의 회절 각(2θ ± 0.2°)에서 하나 이상의 회절 피크를 갖는, 화합물(I)의 말레에이트 염의 결정형 A;

(m) 분말 X-선 회절측정에서 22.3°의 회절 각(2θ ± 0.2°)에서 회절 피크를 갖는, 화합물(I)의 말레에이트 염의 결정형 B;

(n) 분말 X-선 회절측정에서 14.8°, 20.2° 및 22.3°의 회절 각(2θ ± 0.2°)에서 회절 피크를 갖는, 화합물(I)의 말레에이트 염의 결정형 B;

(o) 분말 X-선 회절측정에서 14.8°, 20.2°, 22.3° 및 26.5°의 회절 각(2θ ± 0.2°)에서 회절 피크를 갖는, 화합물(I)의 말레에이트 염의 결정형 B;

(p) 분말 X-선 회절측정에서 14.8°, 15.8°, 17.1°, 17.5°, 20.2°, 20.9°, 22.3°, 24.6°, 26.5° 및 28.5°의 회절 각(2θ ± 0.2°)에서 하나 이상의 회절 피크를 갖는, 화합물(I)의 말레에이트 염의 결정형 B;

(q) 분말 X-선 회절측정에서 18.3°의 회절 각(2θ ± 0.2°)에서 회절 피크를 갖는, 화합물(I)의 L-만델레이트 염의 결정;

(r) 분말 X-선 회절측정에서 5.1°, 10.3° 및 18.3°의 회절 각(2θ ± 0.2°)에서 회절 피크를 갖는, 화합물(I)의 L-만델레이트 염의 결정;

(s) 분말 X-선 회절측정에서 5.1°, 8.8°, 10.3°, 16.9° 및 18.3°의 회절 각(2θ ± 0.2°)에서 회절 피크를 갖는, 화합물(I)의 L-만델레이트 염의 결정;

(t) 분말 X-선 회절측정에서 5.1°, 8.8°, 10.3°, 13.8°, 16.9°, 18.3°, 19.2°, 21.2°, 22.8° 및 24.6°의 회절 각(2θ ± 0.2°)에서 하나 이상의 회절 피크를 갖는, 화합물(I)의 L-만델레이트 염의 결정;

(u) 분말 X-선 회절측정에서 9.5°의 회절 각(2θ ± 0.2°)에서 회절 피크를 갖는, 화합물(I)의 벤젠설포네이트 염의 결정;

(v) 분말 X-선 회절측정에서 5.2°, 9.5° 및 10.5°의 회절 각(2θ ± 0.2°)에서 회절 피크를 갖는, 화합물(I)의 벤젠설포네이트 염의 결정;

(w) 분말 X-선 회절측정에서 5.2°, 9.5°, 10.5°, 21.4° 및 24.4°의 회절 각(2θ ± 0.2°)에서 회절 피크를 갖는, 화합물(I)의 벤젠설포네이트 염의 결정;

(x) 분말 X-선 회절측정에서 5.2°, 9.5°, 10.5°, 12.1°, 15.4°, 17.4°, 20.3°, 21.4°, 23.1° 및 24.4°의 회절 각(2θ ± 0.2°)에서 하나 이상의 회절 피크를 갖는, 화합물(I)의 벤젠설포네이트 염의 결정;

(aa) 고상 ¹³C NMR 스펙트럼에서 164.3 ppm, 162.2 ppm 및 111.9 ppm의 화학적 이동(± 0.5 ppm)에서 피크를 갖는, 화합물(I)의 하이드로클로라이드 염의 결정;

(bb) 고상 ¹³C NMR 스펙트럼에서 164.3 ppm, 162.2 ppm, 148.6 ppm, 138.9 ppm 및 111.9 ppm의 화학적 이동(± 0.5 ppm)에서 피크를 갖는, 화합물(I)의 하이드로클로라이드 염의 결정;

(cc) 고상 ¹³C NMR 스펙트럼에서 164.3 ppm, 162.2 ppm, 148.6 ppm, 138.9 ppm, 136.8 ppm, 134.0 ppm, 111.9 ppm, 61.5 ppm, 38.4 ppm 및 34.4 ppm의 화학적 이동(± 0.5 ppm)에서 피크를 갖는, 화합물(I)의 하이드로클로라이드 염의 결정;

(dd) 고상 ¹³C NMR 스펙트럼에서 164.5 ppm, 162.2 ppm 및 111.7 ppm의 화학적 이동(± 0.5 ppm)에서 피크를 갖는, 화합물(I)의 하이드로브로마이드 염의 결정;

(ee) 고상 ¹³C NMR 스펙트럼에서 164.5 ppm, 162.2 ppm, 148.6 ppm, 139.3 ppm 및 111.7 ppm의 화학적 이동(± 0.5 ppm)에서 피크를 갖는, 화합물(I)의 하이드로브로마이드 염의 결정;

(ff) 고상 ¹³C NMR 스펙트럼에서 164.5 ppm, 162.2 ppm, 148.6 ppm, 139.3 ppm, 135.8 ppm, 134.0 ppm, 111.7 ppm, 60.9 ppm, 39.0 ppm 및 34.5 ppm의 화학적 이동(± 0.5 ppm)에서 피크를 갖는, 화합물(I)의 하이드로브로마이드 염의 결정;

(gg) 고상 ¹³C NMR 스펙트럼에서 169.6 ppm, 107.3 ppm 및 50.3 ppm의 화학적 이동(± 0.5 ppm)에서 피크를 갖는, 화합물(I)의 말레에이트 염의 결정형 A;

(hh) 고상 ¹³C NMR 스펙트럼에서 169.6 ppm, 168.0 ppm, 107.3 ppm, 50.3 ppm 및 46.9 ppm의 화학적 이동(± 0.5 ppm)에서 피크를 갖는, 화합물(I)의 말레에이트 염의 결정형 A;

(ii) 고상 ¹³C NMR 스펙트럼에서 169.6 ppm, 168.0 ppm, 134.2 ppm, 117.1 ppm, 112.0 ppm, 107.3 ppm, 63.6 ppm, 50.3 ppm, 46.9 ppm 및 36.1 ppm의 화학적 이동(± 0.5 ppm)에서 피크를 갖는, 화합물(I)의 말레에이트 염의 결정형 A;

(jj) 고상 ¹³C NMR 스펙트럼에서 171.4 ppm, 108.6 ppm 및 48.8 ppm의 화학적 이동(± 0.5 ppm)에서 피크를 갖는, 화합물(I)의 말레에이트 염의 결정형 B;

(kk) 고상 ¹³C NMR 스펙트럼에서 171.4 ppm, 167.1 ppm, 108.6 ppm, 48.8 ppm 및 44.5 ppm의 화학적 이동(± 0.5 ppm)에서 피크를 갖는, 화합물(I)의 말레에이트 염의 결정형 B;

(ll) 고상 ¹³C NMR 스펙트럼에서 171.4 ppm, 167.1 ppm, 133.3 ppm, 117.8 ppm, 112.8 ppm, 108.6 ppm, 63.1 ppm, 48.8 ppm, 44.5 ppm 및 38.3 ppm의 화학적 이동(± 0.5 ppm)에서 피크를 갖는, 화합물(I)의 말레에이트 염의 결정형 B;

(mm) 고상 ¹³C NMR 스펙트럼에서 165.9 ppm, 160.7 ppm 및 110.5 ppm의 화학적 이동(± 0.5 ppm)에서 피크를 갖는, 화합물(I)의 L-만델레이트 염의 결정;

(nn) 고상 ¹³C NMR 스펙트럼에서 176.8 ppm, 165.9 ppm, 160.7 ppm, 147.7 ppm 및 110.5 ppm의 화학적 이동(± 0.5 ppm)에서 피크를 갖는, 화합물(I)의 L-만델레이트 염의 결정;

(oo) 고상 ¹³C NMR 스펙트럼에서 176.8 ppm, 165.9 ppm, 160.7 ppm, 147.7 ppm, 141.2 ppm, 110.5 ppm, 76.3 ppm, 48.6 ppm, 37.2 ppm 및 34.1 ppm의 화학적 이동(± 0.5 ppm)에서 피크를 갖는, 화합물(I)의 L-만델레이트 염의 결정;

(pp) 고상 ¹³C NMR 스펙트럼에서 163.0 ppm, 147.2 ppm 및 145.0 ppm의 화학적 이동(± 0.5 ppm)에서 피크를 갖는, 화합물(I)의 벤젠설포네이트 염의 결정;

(qq) 고상 ¹³C NMR 스펙트럼에서 163.0 ppm, 160.9 ppm, 147.2 ppm, 145.0 ppm 및 109.3 ppm의 화학적 이동(± 0.5 ppm)에서 피크를 갖는, 화합물(I)의 벤젠설포네이트 염의 결정; 및

(rr) 고상 ¹³C NMR 스펙트럼에서 163.0 ppm, 160.9 ppm, 147.2 ppm, 145.0 ppm, 140.2 ppm, 133.4 ppm, 109.3 ppm, 47.1 ppm, 37.3 ppm 및 34.8 ppm의 화학적 이동(± 0.5 ppm)에서 피크를 갖는, 화합물(I)의 벤젠설포네이트 염의 결정.

상술된 분말 X-선 회절측정에서의 피크는 각각 화합물(I)의 하이드로클로라이드 염의 결정, 화합물(I)의 하이드로브로마이드 염의 결정, 화합물(I)의 말레에이트 염의 결정형 A, 화합물(I)의 말레에이트 염의 결정형 B, 화합물(I)의 L-만델레이트 염의 결정, 및 화합물(I)의 벤젠설포네이트 염의 결정에 대해 특징적이다.

일반적으로, ± 0.2° 범위 내 회절 각(2θ)의 오차가 분말 X-선 회절측정에서 일어날 수 있고, 이에 따라 상술된 회절 각의 값은 대략 ± 0.2° 범위 내의 값을 포함하는 것으로 간주되어야 한다. 따라서, 본 발명에는 분말 X-선 회절측정에서와 정확히 동일한 회절 각에서 피크를 갖는 결정뿐만 아니라 회절 각의 대략 ± 0.2°의 오차 범위 내에서 피크를 갖는 결정이 포함된다. 따라서, 본원에서 사용되는 "18.1°의 회절 각(2θ ± 0.2°)에서 회절 피크를 갖는"은, 예를 들어, "17.9° 내지 18.3°의 회절 각(2θ)에서 회절 피크를 갖는"을 의미한다. 이는 다른 회절 각에도 동일하게 적용된다.

일반적으로, 분말 X-선 회절에서 피크 세기 및 회절 각(2θ)의 절반-값 폭은 측정 조건 및 분말 결정의 각 입자의 크기 분산 및 형태의 차이로 인해 각 측정마다 상이하며 결정 형태가 동일하더라도 항상 안정하지 않다. 따라서, 분말 X-선 회절 패턴을 비교하는 경우, 회절 각(2θ)이 동일하지만 피크 세기, 상대 피크 세기 및 절반-값 폭이 상이할 때, 이들 차이는 측정된 결정 형태가 서로 상이함을 시사하지 않는다. 따라서, 본 발명에 따른 염의 소정 결정의 특징적인 회절 피크에 대해 상기 언급된 차이를 갖는 분말 X-선 회절 패턴을 갖는 염의 결정은 결정이 본 발명에 따른 염의 결정과 동일한 결정형을 가짐을 의미한다.

본원에서 사용되는 "도 1에 나타낸 분말 X-선 회절 패턴과 실질적으로 동일한 분말 X-선 회절 패턴을 갖는"은 도 1에 나타낸 것과 정확히 동일한 분말 X-선 회절 패턴을 갖는 경우뿐만 아니라, 피크 세기, 상대 피크 세기 및 절반-값 폭이 상이한 경우, 또는 회절 각의 대략 ± 0.2°의 오차 범위 내에 특징적 피크를 갖는 경우를 포함함을 의미한다. 따라서, 이러한 분말 X-선 회절 패턴을 갖는 모든 결정은 결정이 본 발명에 따른 결정과 동일함을 의미한다.

상술된, 고상 ¹³C NMR 스펙트럼에서의 피크는 각각의 화합물(I)의 하이드로클로라이드 염의 결정, 화합물(I)의 하이드로브로마이드 염의 결정, 화합물(I)의 말레에이트 염의 결정형 A, 화합물(I)의 말레에이트 염의 결정형 B, 화합물(I)의 L-만델레이트 염의 결정, 및 화합물(I)의 벤젠설포네이트 염의 결정에 대해 특징적이다.

본원에서 사용되는 "164.3 ppm, 162.2 ppm 및 111.9 ppm의 화학적 이동에서 피크를 갖는"은 "고상 ¹³C NMR 분광측정이 통상적인 측정 조건 또는 본 명세서에서와 실질적으로 동일한 조건 하에 수행되는 경우, 164.3 ppm, 162.2 ppm 및 111.9 ppm의 화학적 이동에서의 피크와 각각 실질적으로 동등한 피크를 갖는"을 의미한다.

"~와 실질적으로 동등한 피크를 갖는"지 여부를 결정할 때, 일반적으로 ± 0.5 ppm 범위 내의 화학적 이동(ppm)에서의 오차가 고상 ¹³C NMR 스펙트럼에서 생길 수 있으므로, 상술된 화학적 이동 값은 대략 ± 0.5 ppm 범위 내의 값을 포함하는 것으로 간주되어야 한다. 따라서 본 발명에는, 고상 ¹³C NMR 스펙트럼에서와 정확히 동일한 화학적 이동을 갖는 결정뿐만 아니라 대략 ± 0.5 ppm의 오차 범위 내의 화학적 이동을 갖는 결정이 포함된다. 따라서, 본원에서 사용되는 "164.3 ppm의 화학적 이동에서 피크를 갖는"은, 예를 들어, "163.8 ppm 내지 164.8 ppm의 화학적 이동에서 피크를 갖는"을 의미한다. 이는 고상 ¹³C NMR 스펙트럼에서의 다른 화학적 이동에도 동일하게 적용된다.

본원에서 사용되는, "도 7에 나타낸 고상 ¹³C NMR 스펙트럼과 실질적으로 동일한 고상 ¹³C NMR 스펙트럼을 갖는"은 도 7에 나타낸 것과 정확히 동일한 고상 ¹³C NMR 스펙트럼을 갖는 경우뿐만 아니라 피크 세기가 상이한 경우, 또는 대략 ± 0.5 ppm의 오차 범위 내의 특징적 피크를 갖는 경우를 포함함을 의미한다. 따라서 이러한 고상 ¹³C NMR 스펙트럼을 갖는 모든 결정은 그 결정이 본 발명에 따른 결정과 동일함을 의미한다.

화합물(I)의 염 및 이의 결정의 제조 방법이 상세히 기재될 것이다.

(화합물(I)의 제조)

화합물(I)은 아래의 제조예 1에 구체적으로 기재된 바와 같이 합성화될 수 있다.

(화합물(I)의 염의 제조 방법)

화합물(I)의 염은 염을 제조하기 위한 통상적인 방법에 의해 수득될 수 있다. 구체적으로, 이는, 예를 들어, 용매 중 화합물(I)을, 필요하면 가열하며, 현탁시키거나 용해시킨 후, 수득된 현탁액 또는 용액에 산을 첨가하고, 실온에서 또는 얼음조 냉각하며 수 분 내지 수 일 동안 생성 현탁액 또는 용액을 교반하거나 방치하여 제조될 수 있다. 화합물(I)의 염은 제조 방법에 따라 결정 또는 무정형 물질로서 수득될 수 있다. 이들 방법에서 사용될 용매의 예에는 알코올 용매, 예컨대 에탄올, 1-프로판올 및 이소프로판올; 아세토니트릴; 케톤 용매, 예컨대 아세톤 및 2-부탄온; 에스테르 용매, 예컨대 에틸 아세테이트; 포화 탄화수소 용매, 예컨대 헥산 및 헵탄; 에테르 용매, 예컨대 t-부틸 메틸 에테르 또는 물이 포함된다. 이들 용매는 각각 단독으로 사용될 수도 있고, 또는 2개 이상이 혼합되어 사용될 수도 있다.

(화합물(I)의 염의 결정의 제조 방법)

화합물(I)의 염의 결정은 화합물(I)의 염을 제조하기 위한 상기 언급된 방법에 의해, 또는 용매 중 화합물(I)의 염을 열-용해시키고 이를 교반하며 냉각을 통해 결정화하여 제조될 수 있다.

결정화에서 사용될 화합물(I)의 염은 임의의 형태일 수 있다: 이는 용매화물, 수화물, 무수물, 무정형 물질, 결정형 물질(복수의 결정형 다형체로 구성되는 것들을 포함함) 또는 이의 조합일 수 있다.

결정화에서 사용될 용매의 예에는 알코올 용매, 예컨대 메탄올, 에탄올, 이소프로판올 및 1-프로판올; 아세토니트릴; 아미드 용매, 예컨대 N,N-디메틸포름아미드; 에스테르 용매, 예컨대 에틸 아세테이트; 포화 탄화수소 용매, 예컨대 헥산 및 헵탄; 케톤 용매, 예컨대 아세톤 및 2-부탄온; 에테르 용매, 예컨대 t-부틸 메틸 에테르 또는 물이 포함된다. 또한, 이들 용매는 각각 단독으로 사용될 수도 있고, 또는 2개 이상이 혼합되어 사용될 수도 있다.

하한치가 화합물(I)의 자유 형태 또는 이의 염이 가열에 의해 용해되거나 현탁액이 교반될 수 있는 양인 한, 그리고 상한치가 결정의 수율이 유의미하게 감소되지 않는 양인 한, 사용될 용매의 양은 적합하게 선택될 수 있다.

씨드 결정(예컨대, 요망되는 화합물(I)의 염의 결정)이 결정화 동안 첨가될 수도 있고 첨가되지 않을 수도 있다. 씨드 결정이 첨가되는 온도는 특별히 제한되지 않지만, 바람직하게는 0℃ 내지 80℃이다.

화합물(I)의 염이 가열에 의해 용해되는 경우 채택될 온도로서, 화합물(I)이 용해되는 온도는 용매에 따라 적합하게 선택될 수 있지만, 바람직하게는 재결정화 용매가 환류하기 시작하는 온도 내지 50℃, 보다 바람직하게는 65℃ 내지 55℃ 범위 내이다.

결정화 동안의 냉각은 급속 냉각의 경우 상이한 결정 형태(다형성)를 함유하는 물질을 제공할 수 있다. 따라서 결정의 품질, 결정립 크기 등에 대한 그 효과의 고려에 기반하여 냉각 속도를 적절히 조절하면서 냉각을 수행하는 것이 바람직할 수 있다. 예를 들어, 40℃/시간 내지 5℃/시간의 냉각 속도로의 냉각이 바람직하다. 예를 들어, 25℃/시간 내지 5℃/시간의 냉각 속도로의 냉각이 보다 바람직하다.

또한, 최종 결정화 온도는 결정의 수율, 품질 등을 위해 적합하게 선택될 수 있지만, 바람직하게는 30℃ 내지 -25℃이다.

표적 결정은 형성된 결정을 통상적인 여과 절차를 통해 단리하고, 필요한 경우 여과-제거된 결정을 용매로 세척하고, 이를 추가 건조하여 수득될 수 있다. 결정을 세척하기 위해 사용될 용매로서, 결정화에서와 동일한 용매가 사용될 수 있다. 또한, 이들 용매는 각각 단독으로 사용될 수도 있고, 또는 2개 이상이 혼합되어 사용될 수도 있다. 바람직하게는, 이는, 예를 들어, 아세톤, 2-부탄온, 에틸 아세테이트, t-부틸 메틸 에테르, 헥산 또는 헥산/2-부탄온의 혼합 용매이다.

여과 절차를 통해 단리된 결정은 이를 공기 중에 또는 질소 흐름 하에 방치하여, 또는 가열에 의해, 적절히 건조될 수 있다.

건조 시간으로서, 잔류 용매의 양이 사전 정의된 양보다 작아질 때까지의 시간은 제조량, 건조 장치, 건조 온도 등에 따라 적절히 선택될 수 있다. 또한, 건조는 기류 하에 또는 감압 하에 수행될 수 있다. 감압 정도는 제조량, 건조 장치, 건조 온도 등에 따라 적절히 선택될 수 있다. 수득된 결정은 건조 후 필요에 따라 공기 중에 방치될 수 있다.

본 발명의 약학 조성물은 화합물(I)의 염 또는 이의 결정과 약제학적으로 허용 가능한 첨가제를 혼합하여 제조될 수 있다. 본 발명의 약학 조성물은 공지된 방법, 예컨대 일본 약전 제17판의 일반 제조 규칙에 기재된 방법에 따라 제조될 수 있다.

본 발명의 약학 조성물은 투여량 형태에 따라 적절히 환자에게 투여될 수 있다.

화합물(I)의 염 또는 이의 결정이 야생형(WT) 및 ERα-돌연변이체 양성 종양 둘 다의 성장을 강력히 억제할 수 있으므로, 본 발명의 약학 조성물은 암 치료를 위한 치료제로서 유용성을 갖는다. 암의 예에는 유방암, 자궁 내막암, 난소 암종, 육종, 갑상샘 암종, 전립샘암, 폐 선암종, 및 간세포 암종이 포함된다. 암의 바람직한 예에는 유방암이 포함된다. 암의 보다 바람직한 예에는 ER-양성 유방암이 포함된다.

화합물(I)의 염 또는 이의 결정의 투여량은 증상의 정도, 연령, 성별, 체중, 투여량 형태, 염의 유형, 특정 질환 유형 등에 따라 변한다. 성인의 경우, 단회 용량 또는 분할 용량으로, 각 경우에서, 전형적으로 하루에 약 30 ㎍ 내지 10 g, 바람직하게는 100 ㎍ 내지 5 g, 및 보다 바람직하게는 100 ㎍ 내지 1 g이 경구 투여되거나, 하루에 약 30 ㎍ 내지 1 g, 바람직하게는 100 ㎍ 내지 500 ㎎, 및 보다 바람직하게는 100 ㎍ 내지 300 ㎎이 주사에 의해 투여된다.

실시예

이후, 본 발명이 제조예 및 실시예에서 상세히 기재될 것이다. 그러나, 본 발명이 이들 예에 의해 제한되는 것은 아니다.

하기 약어가 본원에서 사용될 수 있다:

ACN: 아세토니트릴

BOC: tert-부틸옥시카보닐

CAN: 세릭 암모늄 니트레이트

Conc.: 농축된

Cs₂CO₃: 세슘 카보네이트

DABCO: 1,4-디아자바이사이클로[2.2.2]옥탄

DCM: 디클로로메탄

DHP: 디하이드로피란

DIPEA: N,N-디이소프로필에틸아민, Hunig 염기

DMA: 디메틸아세트아미드

DMF: 디메틸포름아미드

DMSO: 디메틸설폭시드

DPEphos: (옥시디-2,1-페닐렌)비스(디페닐포스핀)

EDCI.HCl: N-(3-디메틸아미노프로필)-N-에틸카보디이미드 하이드로클로라이드

EtOH: 에탄올

EtOAc: 에틸 아세테이트

Et₃N: 트리에틸아민

Ex.: 실시예

h: 시간

HATU: 1-[비스(디메틸아미노)메틸렌]-1H-1,2,3-트리아졸로[4,5-b]피리디늄 3-옥시드 헥사플루오로포스페이트

HCl: 염화수소산

HMPA: 헥사메틸포스포르아미드

HPLC: 고성능 액체 크로마토그래피

H₂SO₄: 황산

IPA: 이소프로필 알코올

K₂CO₃: 칼륨 카보네이트

KOH: 칼륨 하이드록시드

LCMS: 액체 크로마토그래피 - 질량 분광측정

MeOH: 메탄올

Na₂CO₃: 나트륨 카보네이트

NBS: n-브로모숙신이미드

nBuLi: n-부틸리튬

NH₄Cl: 암모늄 클로라이드

NH₄OH: 암모늄 하이드록시드

NMR: 핵 자기 공명

on 또는 o.n.: 하룻밤 동안

Pd/C: 탄소 상 팔라듐(0)

Pd₂(dba)₃: 트리스(디벤질리덴아세톤)디팔라듐(0)

PPTS: 피리디늄 p-톨루엔설포네이트

PTSA: p-톨루엔설폰산

RT 또는 r.t.: 실온

TBAF: 테트라부틸암모늄 플루오라이드

TEA: 트리에틸아민

TFA: 트리플루오로아세트산

THF: 테트라하이드로푸란

TLC: 박막 크로마토그래피

Pt/C: 탄소 상 백금(0)

¹H NMR: 양성자 핵 자기 공명

커플링 상수는 헤르츠(Hz)로 기록된다. 분할 패턴의 약어는 다음과 같다:

s: 단일선, d: 이중선, t: 삼중선, q: 사중선, m: 다중선, bs: 넓은 단일선, br s: 넓은 단일선, dd: 이중 이중선, dt: 이중 삼중선, br d: 넓은 이중선, br t: 넓은 삼중선

분말 X-선 회절측정

하기 실시예에 기재되는 방법에 의해 수득된 결정의 분말 X-선 회절측정을 하기 측정 조건 하에 분석하였다.

측정 조건

장치: RINT TTR-III(Rigaku)

샘플 팬: 알루미늄

X-선: Cu K 알파

검출: 신틸레이션 카운터

튜브 전압: 50 kV

튜브 전류: 300 mA

슬릿: 개산 슬릿 0.5 ㎜(높이 제한 슬릿 2 ㎜), 산란 슬릿 개방, 수신 슬릿 개방

스캔 속도: 5°/분

단계 크기: 2θ = 0.02°

스캔 범위: 2θ = 3° 내지 35°

고상 ¹³C NMR 분광측정

하기 실시예에 기재되는 방법에 의해 수득된 결정의 고상 ¹³C NMR 스펙트럼을 하기 측정 조건 하에 측정하였다.

측정 조건

장치: AVANCE400MHz(Bruker)

측정 온도: 실온(22℃)

기준 물질: 글리신(외부 표준: 176.03 ppm)

측정 핵: ¹³C(100.6131 MHz)

일시물의 수: 2048(하이드로클로라이드 염의 결정, 하이드로브로마이드 염의 결정, 말레에이트 염의 결정형 B, L-만델레이트 염의 결정 및 벤젠설포네이트 염의 결정에 대해), 12288(말레에이트 염의 결정형 A에 대해)

펄스 반복 시간: 4초

접촉 시간: 1밀리초

회전 속도: 5000 Hz

펄스 모드: TOSS 측정

흡습성

하기 실시예에 기재되는 방법에 의해 수득된 결정을 샘플링 컵 내로 칭량한 후 샘플링 컵을 25℃에서 등온 챔버 내에 놓았다. 비중측정 증기 흡착 시스템을 사용하여 상대 습도(RH)를 0%에서 95%까지 조절하고, 각 단계에서 샘플의 중량 변화를 후술되는 조건 하에 측정하였다.

측정 조건

샘플 온도: 25℃

첫 번째 단계 RH: 0%

중지 단계 RH: 95%

단계 수: 39(0, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 90, 85, 80, 75, 70, 65, 60, 55, 50, 45, 40, 35, 30, 25, 20, 15, 10, 5, 0)

평형 기준: 1분에 0.002 wt%

최대 평형 시간: 360분

제조예 1

(E)-N,N-디메틸-4-((2-((5-((Z)-4,4,4-트리플루오로-1-(3-플루오로-1H-인다졸-5-일)-2-페닐부트-1-엔-1-일)피리딘-2-일)옥시)에틸)아미노)부트-2-엔아미드(화합물(I))의 제조

참조 제조예 1a

23℃에서 건조 디클로로메탄(50 ㎖) 중 5-브로모-1H-인다졸(23.5 mmol)의 교반 용액에 디하이드로 피란(9.9 g, 118 mmol)을 첨가한 후 피리디늄 p-톨루엔 설포네이트(0.6 g, 2.4 mmol)를 첨가하였다. 생성 혼합물을 16 h 동안 실온 23℃에서 교반하였다. TLC에 의한 완료 후, 반응 혼합물을 물(50 ㎖)로 켄칭하고 디클로로메탄으로 추출하였다(2 × 100 ㎖). 조합한 유기 추출물을 물, 염수로 세척하고, 나트륨 설페이트 상에서 건조하고, 농축하였다. 미정제 물질을 헥산 중 4% 내지 5% 에틸 아세테이트를 사용하여 230 내지 400 메쉬 실리카에 걸쳐 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 5-브로모-1-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-1H-인다졸(20 mmol, 86%)을 담황색 오일로 산출하였다.

참조 제조예 1b

상기 반응식에서,

R₁은 메틸, 에틸, 사이클로부틸, 사이클로프로필, 프로필, 이소프로필, -CH₂CF₃, -CH₂CH₂F, 및 -CH₂CH₂Cl로 구성되는 군으로부터 선택되며; R₂는 H 및 F로 구성되는 군으로부터 선택되고; n은 0 내지 1이고; n=1인 경우, R₃은 F이고; m은 0 내지 2이고; R₄는 동일하거나 상이하며 독립적으로 F, CF₃, Cl, 이소프로필, -OCH₃, -OCHF₂, -OCF₃, 에틸 및 메틸로 구성되는 군으로부터 선택되고; p는 0 내지 1이고; p = 1인 경우 R₅는 F이고; R₆ 및 R₇은 동일하거나 상이하며 독립적으로 메틸, 에틸, 프로필, -CH₂CH₂OH 및

(식 중, r은 1 또는 2임)로 구성되는 군으로부터 선택되거나; R₆ 및 R₇은 이들이 부착되는 N과 함께 4원 내지 6원 헤테로사이클릭 고리를 형성하고, 상기 헤테로사이클릭 고리에는 선택적으로 산소 원자가 포함되며, 상기 헤테로사이클릭 고리는 선택적으로 F, 또는 -CH₂F로 치환되고; R₈은 H 및 -CH₃으로 구성되는 군으로부터 선택된다.

DMF(5 ㎖) 중 (1)(1.24 mmol)의 교반 용액에 (E)-4-브로모-N,N-디메틸부트-2-엔아미드((2), 1.24 mmol) 및 DIPEA(0.321 g, 2.49 mmol)를 0℃에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 23℃에서 12 h 내지 48 h 동안 교반하고, 냉수(50 ㎖)로 희석하고, 디클로로메탄으로 추출하였다. 유기층을 물에 이어 염수로 세척하고, 무수 나트륨 설페이트 상에서 건조하고, 감압 하에 농축하여 (3)의 미정제 혼합물을 얻었다.

참조 제조예 1c

DMF(750 ㎖) 중 4-요오도페놀(227 mmol)의 교반 용액에 칼륨 카보네이트(188 g, 1.363 mol)를 첨가하고 23℃에서 30분 동안 교반하고, 상기 혼합물에 tert-부틸 (2-브로모에틸)카바메이트(71.27 g, 318 mmol)를 첨가하였다. 내용물을 12 h 동안 70℃에서 교반하였다. 반응의 완료 후, 반응 혼합물을 빙냉수 상으로 붓고, 분리된 고체를 여과하고 감압 하에 건조하여 요망되는 화합물 tert-부틸 (2-(4-요오도페녹시)-에틸)카바메이트(220 mmol, 97%)를 회백색 고체로 수득하였다.

제조예 1a

5-브로모-1-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-1H-인다졸의 합성

반응을 참조 제조예 1a에 따라 수행하였다. 미정제 물질을 헥산 중 4% 내지 5% 에틸 아세테이트를 사용하여 230 내지 400 메쉬 실리카에 걸쳐 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 제조예 1a의 표제 화합물(12.6 g, 86%)을 담황색 오일로 산출하였다.

제조예 1b

5-브로모-3-플루오로-1H-인다졸의 합성

100 ㎖의 아세토니트릴 중 5-브로모-1-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-1H-인다졸(10 g, 35.7 mmol, 제조예 1a에서 제조됨)의 교반 용액에 실온에서 아세트산(4 ㎖) 및 선택 플루오르(selectfluor, 25.2 g, 71.4 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 1 h 동안 환류시켰다. TLC에 의한 완료 후, 반응 혼합물을 물(100 ㎖)로 희석하고 에틸 아세테이트(200 ㎖)로 추출하였다. 조합한 유기 추출물을 물, 염수로 세척하고, 무수 나트륨 설페이트 상에서 건조하고 감압 하에 농축하였다. 미정제 산물을 n-헥산 중 1% 에틸 아세테이트를 사용하여 230 내지 400 메쉬 실리카 컬럼 크로마토그래피에 걸쳐 정제하여 5-브로모-3-플루오로-1H-인다졸(6 g, 78%)을 갈색 오일로 산출하였다.

제조예 1c

5-브로모-3-플루오로-1-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-1H-인다졸의 합성

반응을 참조 제조예 1a에 따라 수행하여 미정제 산물을 얻고, 이를 n-헥산 중 1% 에틸 아세테이트를 사용하여 230 내지 400 메쉬 실리카 컬럼 크로마토그래피에 걸쳐 정제하여 제조예 1c의 표제 화합물(5 g, 60%)을 갈색 오일로 산출하였다.

제조예 1d

3-플루오로-1-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-5-((트리메틸실릴)에티닐)-1H-인다졸의 합성

밀봉 튜브 내 35 ㎖의 THF:Et₃N(5:1) 중 5-브로모-3-플루오로-1-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-1H-인다졸(4.5 g, 15 mmol, 제조예 1c에서 제조됨)의 교반 용액에 실온에서 구리 요오다이드(0.288 g, 1.5 mmol)를 첨가하였다. 상기 혼합물을 3회 진공/N₂ 사이클로 탈기하고, 에티닐트리메틸실란(2.22 g, 22 mmol)에 이어 Pd(PPh₃)₂Cl₂(0.5 g, 0.7 mmol)를 첨가하였다. 압력 튜브를 밀봉하고 48 h 동안 80℃에서 가열하였다. TLC에 의한 완료 후, 반응 혼합물을 물(250 ㎖)로 희석하고 EtOAc로 추출하였다(2 × 100 ㎖). 조합한 유기 추출물을 물, 염수로 세척하고, 무수 나트륨 설페이트 상에서 건조하고 감압 하에 농축하였다. 미정제 산물을 n-헥산 중 5% EtOAc를 사용하여 콤비-플래시에 의해 정제하여 3-플루오로-1-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-5-((트리메틸실릴)에티닐)-1H-인다졸(3.2 g, 72%)을 산출하였다.

제조예 1e

5-에티닐-3-플루오로-1-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-1H-인다졸의 합성

메탄올 32 ㎖ 중 3-플루오로-1-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-5-((트리메틸실릴)에티닐)-1H-인다졸(3.2 g, 10 mmol)의 교반 용액에 칼륨 카보네이트(0.151 g, mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 16 h 동안 교반하였다. 반응의 완료 후, 반응 혼합물을 에틸 아세테이트로 희석하고, 유기층을 물에 이어 염수로 세척하였다. 유기층을 무수 Na₂SO₄ 상에서 건조하고 감압 하에 농축하여 제조예 1e의 표제 화합물(2.8 g, 미정제물)을 수득하였다.

제조예 1f

3-플루오로-1-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-5-(4,4,4-트리플루오로부트-1-인-1-일)-1H-인다졸의 합성

20 ㎖의 톨루엔 중 5-에티닐-3-플루오로-1-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-1H-인다졸(2.6 g, 10.6 mmol)의 교반 용액에 실온에서 1,1,1-트리플루오로-2-요오도에탄(4.47 g, 21.3 mmol)을 첨가하였다. 상기 혼합물을 3회 진공/N₂ 사이클로 탈기하고, Pd₂(dba)₃(0.487 g, 0.5 mmol)에 이어 DPEphos(1.14 g, 2.1 mmol) 및 DABCO(2.39 g, 21.3 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 24 h 동안 80℃에서 가열하였다. TLC에 의한 완료 후, 반응 혼합물을 물(250 ㎖)로 희석하고 EtOAc로 추출하였다(2 × 100 ㎖). 조합한 유기 추출물을 물, 염수로 세척하고, 무수 나트륨 설페이트 상에서 건조하고, 감압 하에 농축하였다. 미정제 산물을 n-헥산 중 5% EtOAc를 사용하여 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 3-플루오로-1-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-5-(4,4,4-트리플루오로부트-1-인-1-일)-1H-인다졸(1.6 g, 46%)을 산출하였다.

제조예 1g

(E)-4-브로모부트-2-엔산의 합성

벤젠(150 ㎖) 중 (E)-부트-2-엔산(10.0 g, 116.0 mmol)의 교반 용액에 23℃에서 N-브로모숙신아미드(31.4 g, 120.0 mmol)에 이어 벤조일 퍼옥시드(0.200 g, 1.4 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 4 h 동안 가열 환류시켜, 숙신아미드 결정을 침전시켰다. 결정을 여과 제거하고 여액을 농축하였다. 미정제물을 최소량의 헥산으로 재결정화하고 헥산으로 세척하여 (E)-4-브로모부트-2-엔산(6.97 g, 37%)을 흰색 고체로 산출하였다.

제조예 1h

(E)-4-브로모-N,N-디메틸부트-2-엔아미드의 합성

(E)-4-브로모부트-2-엔산(2 g, 12.2 mmol)을 디클로로메탄(20 ㎖) 중에 취하고 0℃에서 HATU(5.5 g, 14 mmol), 트리에틸 아민(2.56 ㎖, 18.4 mmol)을 첨가하고 RT에서 10분 동안 교반하였다. 상기 혼합물에 N,N-디메틸 아민(9.2 ㎖, 18 mmol)을 천천히 첨가하고 내용물을 2 h 동안 실온에서 교반하였다. 휘발물을 감압 하에 제거하고 잔류물을 물 및 에틸 아세테이트 간에 분획화하였다. 유기층을 물, 염수로 세척하고, 나트륨 설페이트 상에서 건조하고, 농축하였다. 미정제 물질을 n-헥산 중 20% 에틸 아세테이트를 사용하여 100 내지 200 실리카 겔에 걸쳐 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 (E)-4-브로모-N,N-디메틸부트-2-엔아미드(0.4 g, 17%)를 담록색 액체로 산출하였다.

제조예 1i

tert-부틸 (2-(4-요오도페녹시)에틸)카바메이트의 합성

반응을 참조 제조예 1c에 따라 수행하여 제조예 1i의 표제 화합물(80 g, 97%)을 회백색 고체로 수득하였다.

제조예 1j

2-(4-요오도페녹시)에탄-1-아민의 합성

에탄올(50 ㎖) 중 tert-부틸 (2-(4-요오도페녹시)에틸)카바메이트(25 g, 68.6 mmol, 제조예 1i)의 교반 용액에 0℃에서, 에테르 중 2 M HCl(250 ㎖)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 12 h 동안 교반하였다. 반응의 완료 후, 반응 혼합물을 포화 NaHCO₃로 염기성화하고, DCM 중 10% MeOH로 추출하였다. 유기층을 감압 하에 농축하고 미정제 물질을 추가 정제 없이 다음 단계에서 사용하였다(16 g, 88%).

제조예 1k

(E)-4-((2-(4-요오도페녹시)에틸)아미노)-N,N-디메틸부트-2-엔아미드의 합성

반응을 화합물 2에 대해 (E)-4-브로모-N,N-디메틸부트-2-엔아미드(제조예 1h)를 사용하여 참조 제조예 1b에 따라 수행하여 미정제 산물을 얻고, 이를 추가 정제 없이 다음 단계에서 사용하였다(18.8 g, 미정제물).

제조예 1l

tert-부틸 (E)-(4-(디메틸아미노)-4-옥소부트-2-엔-1-일)(2-(4-요오도페녹시)에틸)카바메이트의 합성

건조 디클로로메탄(150 ㎖) 중 (E)-4-((2-(4-요오도페녹시)에틸)아미노)-N,N-디메틸부트-2-엔아미드(18.8 g, 50.26 mmol)의 교반 용액에 0℃에서 DIPEA(6.4 g, 50.2 mmol)를 첨가하고, 0℃에서 15분 동안 교반하였다. 상기 반응 혼합물에, boc 무수물(13.1 g, 60.3 mmol)을 첨가하고, 생성 혼합물을 12 h 동안 실온에서 교반하였다. TLC에 의한 완료 후, 반응 혼합물을 0℃까지 냉각하고, 빙냉수(500 ㎖)로 켄칭하고, 디클로로메탄(500 ㎖)으로 추출하였다. 조합한 유기 추출물을 물에 이어 염수로 세척하고, 무수 나트륨 설페이트 상에서 건조하고, 감압 하에 농축하였다. 미정제 물질을 용출액으로 디클로로메탄 중 3% MeOH를 사용하여 230 내지 400 메쉬 실리카에 걸쳐 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 tert-부틸 (E)-(4-(디메틸아미노)-4-옥소부트-2-엔-1-일)(2-(4-요오도페녹시)에틸)카바메이트(9 g, 37.8%)를 산출하였다.

제조예 1m

tert-부틸 (2-((5-요오도피리딘-2-일)옥시)에틸)카바메이트의 합성

DMF(25 ㎖) 중 2-플루오로-5-요오도피리딘(5 g, 22.4 mmol)의 교반 용액에 나트륨 하이드라이드(0.7 g, 33.5 mmol)를 첨가하고 0℃에서 10분 동안 교반하고, 상기 혼합물에 tert-부틸 (2-하이드록시에틸)카바메이트(1.8 g, 11.2 mmol)를 첨가하였다. 내용물을 30분 동안 0℃에서 교반하였다. 반응의 완료 후, 반응 혼합물을 빙냉수 상으로 붓고, 에틸 아세테이트로 추출하였다. 조합한 유기층을 물에 이어 포화 NaCl 용액으로 세척하고, 무수 Na₂SO₄ 상에서 건조하고, 감압 하에 농축하였다. 미정제 물질을 용출액으로 n-헥산 중 15% EtOAc를 사용하여 230 내지 400 메쉬 실리카에 걸쳐 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 요망되는 화합물 tert-부틸 (2-((5-요오도피리딘-2-일)옥시)에틸)카바메이트(3.5 g, 43%)를 회백색 고체로 수득하였다.

제조예 1n

tert-부틸 (E)-(4-(디메틸아미노)-4-옥소부트-2-엔-1-일)(2-((5-요오도피리딘-2-일)옥시)에틸)카바메이트의 합성

tert-부틸 (2-((5-요오도피리딘-2-일)옥시)에틸)카바메이트로 tert-부틸 (2-(4-요오도페녹시)에틸)카바메이트를 대체하여, 반응을 제조예 1j 내지 1l에 기재된 바와 같은 접근에 따라 수행하여 표제 화합물(3.6 g, 47%)을 얻었다.

제조예 1o

tert-부틸 ((E)-4-(디메틸아미노)-4-옥소부트-2-엔-1-일)(2-((5-((Z)-4,4,4-트리플루오로-1-(3-플루오로-1-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-1H-인다졸-5-일)-2-페닐부트-1-엔-1-일)피리딘-2-일)옥시)에틸)카바메이트의 합성

2-메틸 THF(10 ㎖) 중 3-플루오로-1-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-5-(4,4,4-트리플루오로부트-1-인-1-일)-1H-인다졸(0.66 g, 2.02 mmol, 제조예 1d 내지 1f에서 개요된 바와 같이 제조됨)의 교반 용액에 질소 분위기 하에 비스(피나콜라토)디보론(0.566 g, 2.22 mmol), 테트라키스(트리페닐포스핀)백금(0)(0.025 g, 0.02 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 5 h 동안 85℃에서 교반하였다. 용액을 실온까지 냉각되도록 두고 tert-부틸 (E)-(4-(디메틸아미노)-4-옥소부트-2-엔-1-일)(2-((5-요오도피리딘-2-일)옥시)에틸)카바메이트(0.72 g, 1.51 mmol, 제조예 1n에서 개요된 바와 같이 제조됨), 비스(트리페닐포스핀)팔라듐(II) 디클로라이드(0.071 g, 0.1 mmol), 세슘 카보네이트(1.3 g, 4.04 mmol) 및 2-메틸 THF(10 ㎖)를 첨가하였다. 상기 혼합물을 질소로 탈기하고 물(0.12 ㎖)을 첨가하였다. 상기 혼합물을 16 h 동안 실온에서 교반하였다. 반응의 완료 후, 상기 반응 혼합물에 4 M KOH(2.78 ㎖, 11.13 mmol) 및 요오도벤젠(0.33 g, 1.61 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 7 h 동안 85℃에서 교반하였다. 반응의 완료 후, 반응 혼합물을 실온까지 냉각하고, 물로 희석하고, EtOAc로 추출하였다. 유기층을 무수 나트륨 설페이트 상에서 건조하고 감압 하에 농축하였다. 미정제 물질을 용출액으로 100% 에틸 아세테이트를 사용하여 콤비-플래시에 의해 정제하여 tert-부틸 ((E)-4-(디메틸아미노)-4-옥소부트-2-엔-1-일)(2-((5-((Z)-4,4,4-트리플루오로-1-(3-플루오로-1-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-1H-인다졸-5-일)-2-페닐부트-1-엔-1-일)피리딘-2-일)옥시)에틸)카바메이트(0.35 g, 23%)를 산출하였다.

제조예 1p

(E)-N,N-디메틸-4-((2-((5-((Z)-4,4,4-트리플루오로-1-(3-플루오로-1H-인다졸-5-일)-2-페닐부트-1-엔-1-일)피리딘-2-일)옥시)에틸)아미노)부트-2-엔아미드(화합물(I))의 합성

디클로로메탄(10 ㎖) 중 tert-부틸 ((E)-4-(디메틸아미노)-4-옥소부트-2-엔-1-일)(2-((5-((Z)-4,4,4-트리플루오로-1-(3-플루오로-1-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-1H-인다졸-5-일)-2-페닐부트-1-엔-1-일)피리딘-2-일)옥시)에틸)카바메이트(0.35 g, 0.46 mmol)의 교반 용액에 0℃에서 TFA(1 ㎖)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 16 h 동안 교반하였다. 반응의 완료 후, 반응 혼합물을 포화 NaHCO₃로 염기성화하고, 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기층을 감압 하에 농축하여 미정제 화합물을 산출하고, 이를 분취용 HPLC에 의해 정제하여 요망되는 화합물 (E)-N,N-디메틸-4-((2-((5-((Z)-4,4,4-트리플루오로-1-(3-플루오로-1H-인다졸-5-일)-2-페닐부트-1-엔-1-일)피리딘-2-일)옥시)에틸)아미노)부트-2-엔아미드(0.03 g, 11%)를 산출하였다.

화합물(I): ¹H NMR (400 MHz, Varian Mercury Plus, DMSO-d₆): δ 12.71 (s, 1H), 7.63 (s, 2H), 7.54 (m, 1H), 7.26-7.18 (m, 7H), 6.62-6.46 (m, 3H), 4.13 (t, J = 5.8 Hz, 2H), 3.51-3.43 (m, 2H), 3.34-3.28 (m, 2H), 2.98 (s, 3H), 2.83 (s, 3H), 2.75 (t, J = 5.8 Hz, 2H).

LCMS: 568.2 [M+H]⁺.

제조예 1q

(E)-N,N-디메틸-4-((2-((5-((Z)-4,4,4-트리플루오로-1-(3-플루오로-1H-인다졸-5-일)-2-페닐부트-1-엔-1-일)피리딘-2-일)옥시)에틸)아미노)부트-2-엔아미드 하이드로클로라이드(화합물(I)의 하이드로클로라이드 염)의 합성

에탄올(24 ㎖) 중 (E)-N,N-디메틸-4-((2-((5-((Z)-4,4,4-트리플루오로-1-(3-플루오로-1H-인다졸-5-일)-2-페닐부트-1-엔-1-일)피리딘-2-일)옥시)에틸)아미노)부트-2-엔아미드(4.1 g, 7.23 mmol)의 교반 용액에 0℃에서 디에틸 에테르(7.5 ㎖) 중 2 M HCl을 첨가하였다. 실온에서 30분 동안 교반 후 흰색 고체가 반응 혼합물에서 관찰되었다. 반응 혼합물을 35℃에서 진공 하에 농축하고, 수득한 고체를 45℃에서 진공 하에 디클로로메탄으로 공-증류하였다. 수득한 고체를 n-펜탄으로 세척하고 4 h 동안 50℃에서 진공 하에 건조하여 표제 화합물 (E)-N,N-디메틸-4-((2-((5-((Z)-4,4,4-트리플루오로-1-(3-플루오로-1H-인다졸-5-일)-2-페닐부트-1-엔-1-일)피리딘-2-일)옥시)에틸)아미노)부트-2-엔아미드 하이드로클로라이드(4.3 g, 98%)를 수득하였다.

¹H NMR (400 MHz, Varian Mercury Plus, DMSO-d₆): δ 12.74 (s, 1H), 9.26 (bs, 2H), 7.69-7.34 (m, 3H), 7.28-7.17 (m, 7H), 6.81 (d, J = 15.2 Hz, 1H), 6.62-6.53 (m, 2H), 4.37 (t, J = 4.4 Hz, 2H), 3.77-3.76 (m, 2H), 3.51-3.43 (m, 2H), 3.23 (bs, 2H), 3.03 (s, 3H), 2.86 (s, 3H).

LCMS: 568.3 [M+H]⁺.

실시예 1

(E)-N,N-디메틸-4-((2-((5-((Z)-4,4,4-트리플루오로-1-(3-플루오로-1H-인다졸-5-일)-2-페닐부트-1-엔-1-일)피리딘-2-일)옥시)에틸)아미노)부트-2-엔아미드 하이드로클로라이드의 결정의 제조

2-부탄온(5 ㎖) 중 (E)-N,N-디메틸-4-((2-((5-((Z)-4,4,4-트리플루오로-1-(3-플루오로-1H-인다졸-5-일)-2-페닐부트-1-엔-1-일)피리딘-2-일)옥시)에틸)아미노)부트-2-엔아미드(500.31 ㎎)의 용액에 2-부탄온(5 ㎖) 중 염화수소산 용액(75.6 ㎕, 1 eq)을 첨가하였다. 혼합물을 4일 동안 실온에서 교반하였다. 수득한 고체를 여과 제거하고, 2-부탄온으로 세척하고, 하룻밤 동안 건조하여 표제 결정(514 ㎎, 97%)을 얻었다. 분말 X-선 회절 패턴, 고상 ¹³C NMR 스펙트럼 및 실시예 1에서 수득한 결정에 대한 흡습성을 나타내는 그래프를 각각 도 1, 도 7 및 도 13에 나타낸다.

¹H NMR (600 MHz, Bruker AVANCE, DMSO-d₆): δ 12.71 (s, 1H), 9.02 (br s, 2H), 7.67 (d, J=1.9 Hz, 1H), 7.63 (s, 1H), 7.54 (dd, J=8.7, 1.5 Hz, 1H), 7.29 (dd, J=8.6, 2.4 Hz, 1H), 7.22-7.27 (m, 5H), 7.16-7.21 (m, 1H), 6.78 (d, J=15.2 Hz, 1H), 6.61 (d, J=9.0 Hz, 1H), 6.54 (dt, J=15.1, 6.5 Hz, 1H), 4.34 (t, J=5.0 Hz, 2H), 3.76 (br d, J=6.4 Hz, 2H), 3.45 (q, J=10.8 Hz, 2H), 3.23 (br t, J=4.3 Hz, 2H), 3.01 (s, 3H), 2.86 (s, 3H).

고상 ¹³C NMR 스펙트럼에서의 전형적인 피크 및 실시예 1에서 수득한 결정에 대한 분말 X-선 회절측정에서의 전형적인 회절 피크를 아래에 나타낸다.

¹³C NMR (100 MHz, 고상): δ 164.3, 162.2, 148.6, 138.9, 136.8, 134.0, 111.9, 61.5, 38.4, 34.4.

분말 X-선 회절 각(2θ ± 0.2°): 6.1°, 11.8°, 14.9°, 16.8°, 18.1°, 19.1°, 19.5°, 21.7°, 25.9°, 27.4°

실시예 2

(E)-N,N-디메틸-4-((2-((5-((Z)-4,4,4-트리플루오로-1-(3-플루오로-1H-인다졸-5-일)-2-페닐부트-1-엔-1-일)피리딘-2-일)옥시)에틸)아미노)부트-2-엔아미드 하이드로브로마이드의 결정의 제조

2-부탄온(5 ㎖) 중 (E)-N,N-디메틸-4-((2-((5-((Z)-4,4,4-트리플루오로-1-(3-플루오로-1H-인다졸-5-일)-2-페닐부트-1-엔-1-일)피리딘-2-일)옥시)에틸)아미노)부트-2-엔아미드(500.44 ㎎)의 용액에 2-부탄온(5 ㎖) 중 브롬화수소산 용액(100.3 ㎕, 1 eq)을 첨가하였다. 혼합물을 4일 동안 실온에서 교반하였다. 수득한 고체를 여과 제거하고, 2-부탄온으로 세척하고, 하룻밤 동안 건조하여 표제 결정(545 ㎎, 95%)을 얻었다. 분말 X-선 회절 패턴, 고상 ¹³C NMR 스펙트럼 및 실시예 2에서 수득한 결정에 대한 흡습성을 나타내는 그래프를 각각 도 2, 도 8 및 도 14에 나타낸다.

¹H NMR (600 MHz, Bruker AVANCE, DMSO-d₆): δ 12.69 (s, 1H), 8.83 (br s, 2H), 7.68 (d, J=2.5 Hz, 1H), 7.63 (s, 1H), 7.55 (dd, J=8.7, 1.6 Hz, 1H), 7.29 (dd, J=8.7, 2.5 Hz, 1H), 7.22-7.27 (m, 5H), 7.17-7.20 (m, 1H), 6.77 (d, J=15.1 Hz, 1H), 6.61 (d, J=8.5 Hz, 1H), 6.53 (dt, J=15.2, 6.6 Hz, 1H), 4.33 (br t, J=5.0 Hz, 2H), 3.77 (br d, J=6.4 Hz, 2H), 3.45 (q, J=10.8 Hz, 2H), 3.25 (br t, J=4.6 Hz, 2H), 3.01 (s, 3H), 2.86 (s, 3H).

고상 ¹³C NMR 스펙트럼에서의 전형적인 피크 및 실시예 2에서 수득한 결정에 대한 분말 X-선 회절측정에서의 전형적인 회절 피크를 아래에 나타낸다.

¹³C NMR (100 MHz, 고상): δ 164.5, 162.2, 148.6, 139.3, 135.8, 134.0, 111.7, 60.9, 39.0, 34.5.

분말 X-선 회절 각(2θ ± 0.2°): 6.2°, 11.7°, 12.5°, 16.5°, 17.6°, 18.7°, 20.4°, 21.4°, 22.5°, 27.1°.

실시예 3

(E)-N,N-디메틸-4-((2-((5-((Z)-4,4,4-트리플루오로-1-(3-플루오로-1H-인다졸-5-일)-2-페닐부트-1-엔-1-일)피리딘-2-일)옥시)에틸)아미노)부트-2-엔아미드 말레에이트의 결정형 A의 제조

2-부탄온(1 ㎖) 중 (E)-N,N-디메틸-4-((2-((5-((Z)-4,4,4-트리플루오로-1-(3-플루오로-1H-인다졸-5-일)-2-페닐부트-1-엔-1-일)피리딘-2-일)옥시)에틸)아미노)부트-2-엔아미드(100.25 ㎎)의 용액에 2-부탄온(2.05 ㎖) 중 말레산 용액(10 ㎎/㎖)을 첨가하였다. 이어서 헥산(2 ㎖)을 용액에 첨가하고, 혼합물을 4일 동안 실온에서 교반하였다. 수득한 고체를 여과 제거하고, 2-부탄온으로 세척하여 표제 결정(107 ㎎, 89%)을 얻었다. 분말 X-선 회절 패턴, 고상 ¹³C NMR 스펙트럼 및 실시예 3에서 수득한 결정에 대한 흡습성을 나타내는 그래프를 각각 도 3, 도 9 및 도 15에 나타낸다.

¹H NMR (600MHz, Bruker AVANCE, DMSO-d₆): δ 12.69 (s, 1H), 8.72 (br s, 1H), 7.68 (d, J=2.2 Hz, 1H), 7.63 (s, 1H), 7.55 (dd, J=8.6, 1.2 Hz, 1H), 7.29 (dd, J=8.6, 2.4 Hz, 1H), 7.22-7.27 (m, 5H), 7.16-7.21 (m, 1H), 6.76 (d, J=15.2 Hz, 1H), 6.60 (d, J=8.6 Hz, 1H), 6.53 (dt, J=15.1, 6.6 Hz, 1H), 6.01 (s, 2H), 4.30-4.36 (m, 2H), 3.76 (br d, J=6.4 Hz, 2H), 3.46 (q, J=10.7 Hz, 2H), 3.22-3.27 (m, 2H), 3.01 (s, 3H), 2.86 (s, 3H).

고상 ¹³C NMR 스펙트럼에서의 전형적인 피크 및 실시예 3에서 수득한 결정에 대한 분말 X-선 회절측정에서의 전형적인 회절 피크를 아래에 나타낸다.

¹³C NMR (100 MHz, 고상): δ 169.6, 168.0, 134.2, 117.1, 112.0, 107.3, 63.6, 50.3, 46.9, 36.1.

분말 X-선 회절 각(2θ ± 0.2°): 4.9°, 9.8°, 16.1°, 16.7°, 17.9°, 19.4°, 21.2°, 22.9°, 24.9°, 30.4°.

실시예 4

(E)-N,N-디메틸-4-((2-((5-((Z)-4,4,4-트리플루오로-1-(3-플루오로-1H-인다졸-5-일)-2-페닐부트-1-엔-1-일)피리딘-2-일)옥시)에틸)아미노)부트-2-엔아미드 말레에이트의 결정형 B의 제조

2-부탄온(6 ㎖) 중 (E)-N,N-디메틸-4-((2-((5-((Z)-4,4,4-트리플루오로-1-(3-플루오로-1H-인다졸-5-일)-2-페닐부트-1-엔-1-일)피리딘-2-일)옥시)에틸)아미노)부트-2-엔아미드(499.69 ㎎)의 용액에 2-부탄온(5 ㎖) 중 말레산 용액(102.06 ㎎, 1 eq)을 첨가하였다. 혼합물을 1일 동안 실온에서 교반하였다. 헥산(6 ㎖)을 혼합물에 첨가하고 3일 동안 실온에서 교반하였다. 수득한 고체를 여과 제거하고, 2-부탄온으로 세척하고, 하룻밤 동안 건조하여 표제 결정(507 ㎎, 84%)을 얻었다. 분말 X-선 회절 패턴, 고상 ¹³C NMR 스펙트럼 및 실시예 4에서 수득한 결정에 대한 흡습성을 나타내는 그래프를 각각 도 4, 도 10 및 도 16에 나타낸다.

¹H NMR (600 MHz, Bruker AVANCE, DMSO-d₆): δ 12.69 (s, 1H), 8.73 (br s, 2H), 7.68 (d, J=1.8 Hz, 1H), 7.63 (s, 1H), 7.54 (dd, J=8.7, 1.3 Hz, 1H), 7.29 (dd, J=8.7, 2.4 Hz, 1H), 7.22-7.27 (m, 5H), 7.16-7.20 (m, 1H), 6.76 (d, J=15.2 Hz, 1H), 6.60 (d, J=8.6 Hz, 1H), 6.53 (dt, J=15.2, 6.5 Hz, 1H), 6.01 (s, 2H), 4.30-4.35 (m, 2H), 3.76 (br d, J=6.3 Hz, 2H), 3.46 (q, J=10.8 Hz, 3H), 3.22-3.26 (m, 3H), 3.01 (s, 3H), 2.86 (s, 3H).

고상 ¹³C NMR 스펙트럼에서의 전형적인 피크 및 실시예 4에서 수득한 결정에 대한 분말 X-선 회절측정에서의 전형적인 회절 피크를 아래에 나타낸다.

¹³C NMR (100 MHz, 고상): δ 171.4, 167.1, 133.3, 117.8, 112.8, 108.6, 63.1, 48.8, 44.5, 38.3.

분말 X-선 회절 각(2θ ± 0.2°): 14.8°, 15.8°, 17.1°, 17.5°, 20.2°, 20.9°, 22.3°, 24.6°, 26.5°, 28.5°.

실시예 5

(E)-N,N-디메틸-4-((2-((5-((Z)-4,4,4-트리플루오로-1-(3-플루오로-1H-인다졸-5-일)-2-페닐부트-1-엔-1-일)피리딘-2-일)옥시)에틸)아미노)부트-2-엔아미드 L-만델레이트의 결정의 제조

2-부탄온(5 ㎖) 중 (E)-N,N-디메틸-4-((2-((5-((Z)-4,4,4-트리플루오로-1-(3-플루오로-1H-인다졸-5-일)-2-페닐부트-1-엔-1-일)피리딘-2-일)옥시)에틸)아미노)부트-2-엔아미드(375.57 ㎎)의 용액에 2-부탄온(5 ㎖) 중 L-만델산 용액(100.28 ㎎, 1 eq)을 첨가하였다. 혼합물을 1일 동안 실온에서 교반하였다. 2-부탄온(4 ㎖)을 혼합물에 첨가하고 3일 동안 실온에서 교반하였다. 수득한 고체를 여과 제거하고, 2-부탄온으로 세척하고, 하룻밤 동안 건조하여 표제 결정(412 ㎎, 86%)을 얻었다. 분말 X-선 회절 패턴, 고상 ¹³C NMR 스펙트럼 및 실시예 5에서 수득한 결정에 대한 흡습성을 나타내는 그래프를 각각 도 5, 도 11 및 도 17에 나타낸다.

¹H NMR (600 MHz, Bruker AVANCE, DMSO-d₆): δ 12.69 (br s, 1H), 7.64 (d, J=1.8 Hz, 1H), 7.62 (s, 1H), 7.53 (dd, J=8.7, 1.3 Hz, 1H), 7.38 (d, J=7.2 Hz, 2H), 7.29 (t, J=7.5 Hz, 2H), 7.21-7.27 (m, 7H), 7.15-7.20 (m, 1H), 6.56 (t, J=4.8 Hz, 1H), 6.54-6.55 (m, 1H), 6.52-6.54 (m, 1H), 4.85 (s, 1H), 4.17 (t, J=5.6 Hz, 2H), 3.46 (m, 2H), 3.40 (m, 2H), 2.97 (s, 3H), 2.86 (br t, J=5.6 Hz, 2H), 2.83 (s, 3H).

고상 ¹³C NMR 스펙트럼에서의 전형적인 피크 및 실시예 5에서 수득한 결정에 대한 분말 X-선 회절측정에서의 전형적인 회절 피크를 아래에 나타낸다.

¹³C NMR (100 MHz, 고상): δ 176.8, 165.9, 160.7, 147.7, 141.2, 110.5, 76.3, 48.6, 37.2, 34.1.

분말 X-선 회절 각(2θ ± 0.2°): 5.1°, 8.8°, 10.3°, 13.8°, 16.9°, 18.3°, 19.2°, 21.2°, 22.8°, 24.6°.

실시예 6

(E)-N,N-디메틸-4-((2-((5-((Z)-4,4,4-트리플루오로-1-(3-플루오로-1H-인다졸-5-일)-2-페닐부트-1-엔-1-일)피리딘-2-일)옥시)에틸)아미노)부트-2-엔아미드 벤젠설포네이트의 결정의 제조

에틸 아세테이트(3 ㎖) 중 (E)-N,N-디메틸-4-((2-((5-((Z)-4,4,4-트리플루오로-1-(3-플루오로-1H-인다졸-5-일)-2-페닐부트-1-엔-1-일)피리딘-2-일)옥시)에틸)아미노)부트-2-엔아미드(501.14 ㎎)의 용액에 에틸 아세테이트(1.6 ㎖) 중 벤젠설폰산 1수화물 용액(100 ㎎/㎖)을 첨가하였다. 이어서 에틸 아세테이트(5 ㎖)를 용액에 첨가하고, 혼합물을 3일 동안 45℃에서 교반하였다. 수득한 고체를 여과 제거하고 3일 동안 건조하여 표제 결정(572 ㎎, 87%)을 얻었다. 분말 X-선 회절 패턴, 고상 ¹³C NMR 스펙트럼 및 실시예 6에서 수득한 결정에 대한 흡습성을 나타내는 그래프를 각각 도 6, 도 12 및 도 18에 나타낸다.

¹H NMR (600 MHz, Bruker AVANCE, DMSO-d₆): δ 12.69 (s, 1H), 8.72 (br s, 1H), 7.68 (d, J=2.1 Hz, 1H), 7.63 (s, 1H), 7.59 (dd, J=7.8, 1.8 Hz, 2H), 7.55 (dd, J=8.7, 1.4 Hz, 1H), 7.23-7.31 (m, 9H), 7.17-7.20 (m, 1H), 6.77 (d, J=15.2 Hz, 1H), 6.61 (d, J=8.6 Hz, 1H), 6.54 (dt, J=15.2, 6.6 Hz, 1H), 4.33 (t, J=5.1 Hz, 2H), 3.77 (d, J=6.3 Hz, 2H), 3.46 (q, J=10.8 Hz, 2H), 3.24 (t, J=5.0 Hz, 2H), 3.01 (s, 3H), 2.86 (s, 3H)

고상 ¹³C NMR 스펙트럼에서의 전형적인 피크 및 실시예 6에서 수득한 결정에 대한 분말 X-선 회절측정에서의 전형적인 회절 피크를 아래에 나타낸다.

¹³C NMR (100 MHz, 고상): δ 163.0, 160.9, 147.2, 145.0, 140.2, 133.4, 109.3, 47.1, 37.3, 34.8.

분말 X-선 회절 각(2θ ± 0.2°): 5.2°, 9.5°, 10.5°, 12.1°, 15.4°, 17.4°, 20.3°, 21.4°, 23.1°, 24.4°.

용해도

실시예 6에서 수득한 과량의 결정을 시험관 내 0.1 몰/ℓ HCl 용액 내로 첨가하고, 1시간 동안 진탕하며 37℃에서 용해시켰다. 여액의 농도를 측정하여 고성능 액체 크로마토그래피(HPLC)를 사용하여 용해도를 결정하였다. 실시예 6에서 수득한 결정의 용해도는 2 ㎎/㎖이었다.

하기 평가예를 수행하여 화합물(I)의 약리 효과를 검사하였다.

(평가예 1) 시험관내 ERα^WT/MUT 활성을 억제하는 화합물

세포 배양

MCF7 BUS 세포(문헌[Coser, et al., (2003) PNAS 100 (24): 13994-13999])를 10% FBS, 4 mM L-글루타민 및 1x 비필수 아미노산이 보충된 둘베코 변형 이글 배지(Dulbecco's Modified Eagle Medium) 중에 유지하였다. Lenti-X 293T 세포(Clontech, Cat #632180)를 10% FBS가 보충된 둘베코 변형 이글 배지에서 일상적으로 배양하였다.

부위-지정 돌연변이화 및 세포주 조작

QuikChange II XL 부위-지정 돌연변이화 키트(Agilent Technologies, Cat #200523)를 사용하여 ERα 엑손 8 내에 Y537S, Y537C, Y537N 및 D538G 돌연변이를 생성하였다. 야생형 ESR1 cDNA(GeneCopoeia Inc., Cat# GC-A0322, accession no. NM 000125)를 주형으로 하기 돌연변이화 프라이머와 함께 사용하였다(여기서 밑줄 친 뉴클레오티드는 부위 돌연변이를 나타냄); Y537S: F-AAG AAC GTG GTG CCC CTC TCT GAC CTG CTG CTG GAG ATG (SEQ ID NO: 1), R-CAT CTC CAG CAG CAG GTC AGA GAG GGG CAC CAC GTT CTT (SEQ ID NO: 2); Y537N: F-AAG AAC GTG GTG CCC CTC AAT GAC CTG CTG CTG GAG ATG (SEQ ID NO: 3), R-CAT CTC CAG CAG CAG GTC ATT GAG GGG CAC CAC GTT CTT (SEQ ID NO: 4); Y537C: F-AAG AAC GTG GTG CCC CTC TGT GAC CTG CTG CTG GAG ATG (SEQ ID NO: 5), R-CAT CTC CAG CAG CAG GTC ACA GAG GGG CAC CAC GTT CTT (SEQ ID NO: 6); D538G: F-AAC GTG GTG CCC CTC TAT GGC CTG CTG CTG GAG ATG CTG (SEQ ID NO: 7), R-CAG CAT CTC CAG CAG CAG GCC ATA GAG GGG CAC CAC GTT (SEQ ID NO: 8). WT 및 돌연변이체 ESR1 cDNA를 지정 렌티바이러스 벡터 pLenti6.3/V5-Dest(Invitrogen, Cat #V533-06) 내로 클로닝하였다. 렌티바이러스를 제조하기 위해, DNA(WT 및 돌연변이체 ESR1)를 패키징 플라스미드와 함께 TransIT(Mirus, Cat #MIR 2700)를 사용하여 렌티-X 293T 세포 내로 공동-전달감염시켰다. 전달감염 48 h 후, 바이러스 함유 배지를 여과하고 하룻밤 동안 8 ㎍/㎖ 폴리브렌의 존재 하에 MCF7 세포에 첨가하였다. 감염 2일 후, 세포를 안정적 발현을 위해 2주 동안 10 ㎍/㎖ 블라스티시딘으로의 선택 하에 두었다.

시험관내 증식 검정

MCF7-WT 및 -Y537S 세포를 검은색-벽 96-웰 플레이트(검정 플레이트, Costar, Cat #3904)에 1500 세포/웰로 접종하였다. 병행하여, 세포를 또한 별도의 96-웰 플레이트(8 웰/세포주, 대조군 플레이트)에 접종하고, 그에 대해 CTG(CellTiter-Glo(등록 상표명) 발광 생활성 검정, Promega, Cat #G7572)를 다음 날 측정하였다(0일차 판독). 0일차 판독을 실험 종료 시 GI₅₀ 계산을 위해 사용하였다. 접종 다음 날, 화합물을 검정 플레이트에 첨가하였다. 간략하게, 총 10개 농도(9개의 희석액은 화합물을 함유하며 하나는 DMSO만을 함유함)에 대해 200x 최종 농도로 DMSO 중에 1:4 연속 희석액을 제조하였다. 연속 희석된 화합물을 배지 내로 피펫팅하여 10x 최종 농도로 화합물-배지 혼합물을 제조하였다. 10 ㎕의 화합물-배지 혼합물을 3 웰/농도로 MCF7-WT 및 -Y537S 세포에 첨가하였다(각 농도에 대해 3개씩). 3일차에, 배지/화합물을 제거하고, 상술된 바와 같이 신선 배지/화합물로 대체하였다. 6일차에, CTG를 측정하고, 대조군 플레이트로부터의 0일차 판독과 비교하여 GI₅₀을 평가하였다.

결과

도 19는 MCF7 세포에서 ERα^{Y537S/N/C, D538G}의 전위 발현이 최근 시판된 치료법 타목시펜(SERM), 랄록시펜(SERM) 및 풀베스트란트(SERD)에 대한 표현형 내성을 부여하였음을 나타낸다. 유사한 관찰이 또한 몇몇 독립 실험실에 의해 최근 공개되었다(Jeselsohn et al., (2014) Clin Cancer Res. Apr 1; 20 (7): 1757-67; Toy et al., (2013) Nat. Genet. 2013 Dec; 45(12):1439-45; Robinson et al., (2013) Nat. Genet. Dec; 45 (12): 1446-51; Merenbakh-Lamin et al., (2013) Cancer Res. Dec 1; 73(23): 6856-64; Yu et al., (2014) Science Jul 11; 345(6193): 216-20). ERα^MUT가 최근의 내분비 치료법에 대한 내성을 유도함을 확인하고, 대응하는 임상 화합물 4-하이드록시타목시펜에 비해 ERα^MUT-보유 MCF7 세포의 증식을 더 효과적으로 감소시킬 신규한 화합물을 동정하려고 노력하였다. WT 및 돌연변이체 생활성 검정을 스크리닝 도구로 사용하여, 4-하이드록시타목시펜에 비해 Y537S-보유 MCF7 세포주에 대해 더 강력한 화합물을 동정하였다. 화합물(I)에 대한 생활성 검정 스크리닝 결과는 다음과 같다: GI₅₀(WT): 0.34 nM; GI₅₀(Y537S): 4.26 nM.

(평가예 2) 생체내 이종이식편 방법

평가예 2에서, 화합물(I)에 대한 언급은 제조예 1q에서 수득한 화합물(I)의 하이드로클로라이드 염을 나타낸다.

MCF7 이종이식편 연구

ESR1 야생형 인간 ER+ 유방암 세포주 MCF7(ATCC)을 5% CO2 분위기에서 37℃에서 10% FBS가 보충된 DMEM 배지에서 배양하고 지수 성장기에서 유지하였다. 세포를 트립신 중 수집하고 5 × 10⁷ 세포/㎖의 최종 농도로 매트리겔 및 HBSS의 1:1 혼합물 중에 재현탁하였다. 세포의 0.2 ㎖ 당량을 6 내지 8주령 암컷 Balb/c 누드 마우스의 3번째 유방 지방층 내로 피하 주사하여, 1 × 10⁷ 세포/마우스를 제공하였다. 평균 종양 부피가 대략 155 ㎣에 도달하면, 92마리 동물을 치료 전에 무작위화하였다.

MCF7 이종이식편 모델에서의 항-종양 활성을 화합물(I)을 사용하여 검사하였다. 화합물(I)을 1 ㎎/㎏ 내지 30 ㎎/㎏ 범위의 용량으로 매일 경구 투여하였다. 각각의 치료를 0일차에 시작하였고 투여 일정을 17일 동안 계속하였다. 용량 투여 전 개별 마우스 체중으로부터 투여 부피를 계산하였다. 종양 부피를 1주 2회 측정하면서 체중을 매일 측정하였다. 종양 부피(TV)는 다음 공식에 기반하여 계산하였다:

TV = 길이 × 폭² × 0.5

길이: 종양의 최대 지름(㎜)

폭: 길이에 수직인 지름(㎜)

하기 공식에 따라 종양 성장 억제%(TGI)를 계산하였다:

[수학식 1]

식 중, X일은 종결점 측정이다.

Y537S 양성 PDx 이종이식편 연구

PDX-Y537S로 명명된, ESR1-Y537S 돌연변이된 인간 ER+ 유방암을 나타내는 환자-유래 이종이식편(PDX) 종양 모델을 면역손상된 마우스에서 피하 증식시켰다. 종양을 이식 60일 내에 절제하고 혼합 종양 단편으로 가공하였다. 고형 종양 조직에서 괴사 성분을 없애고, 70 ㎎ 단편으로 절단하고, 매트리겔과 혼합하고, 6주령 내지 12주령 암컷 무흉선 누드(Crl:NU(NCr)-Foxn1nu) 마우스의 우측 옆구리 내로 피하 이식하였다. 단편의 정확한 수 및 매트리겔의 부피는 케이스별 기준으로 결정하였다. 평균 종양 부피가 대략 200 ㎣에 도달하면, 동물을 치료 전에 무작위화하였다. 상기 연구에서 이용한 모든 일차 인간 종양은 생체내에서 대략 7회 계대를 거쳤다.

PDX-Y537S 모델에서의 항-종양 활성을 화합물(I)을 사용하여 검사하였다. 연구에서 에스트로겐은 보충하지 않았다. 화합물(I)을 3 ㎎/㎏ 내지 200 ㎎/㎏ 범위의 용량으로 매일 경구 투여하였다. 각각의 치료를 0일차에 시작하였고 투여 일정을 최대 35일 동안 계속하였다. 용량 투여 전 개별 마우스 체중으로부터 투여량을 계산하였다. 종양 부피를 1주 2회 측정하면서 체중을 매일 측정하였다. 종양 부피는 전술된 공식에 기반하여 계산하였다.

WHIM20 이종이식편 연구

ESR1-Y537S 돌연변이된 인간 ER+ 유방암을 나타내는 환자-유래 이종이식편(PDX) 종양 모델, WHIM20을 마우스에서 증식시켰다. 종양을 절제하고 혼합 종양 단편으로 가공하고 단편을 새로운 수신체 마우스 내로 피하로 재-이식하였다. 현재의 작업을 위해, 고형 종양 조직에서 괴사 성분을 없애고, 단편으로 절단하고, 매트리겔과 혼합하고, 6주령 내지 8주령 암컷 SCID-bg 마우스의 우측 옆구리 내로 피하 이식하였다. 단편의 정확한 수 및 매트리겔의 부피는 케이스별 기준으로 결정하였다. 평균 종양 부피가 대략 370 ㎣에 도달하면, 동물을 치료 전에 무작위화하였다. 상기 연구에서 이용한 모든 일차 인간 종양은 생체내에서 대략 4회 계대를 거쳤다.

WHIM20 환자 유래 이종이식편 모델에서의 항-종양 활성을 화합물(I)을 사용하여 검사하였다. WHIM20 연구에서 에스트로겐은 보충하지 않았다. 화합물(I)을 나타낸 용량으로 매일 경구 투여하였다. 각각의 치료를 0일차에 시작하였고 투여 일정을 나타낸 일수 동안 계속하였다. 용량 투여 전 개별 마우스 체중으로부터 투여량을 계산하였다. 종양 부피를 1주 2회 측정하면서 체중을 매일 측정하였다. 종양 부피는 전술된 공식에 기반하여 계산하였다.

통계 분석

데이터는 종양 부피에 대해 평균 ± SEM으로 그리고 체중에 대해 평균 ± SEM으로 표현된다. 비히클 처리군 및 화합물 처리군 간 연구 기간 동안 종양 부피의 차이를 투-웨이 분산 분석(ANOVA)에 이어 던네트(Dunnett) 다중 비교 사후 hoc 테스트에 의해 분석하였다. GraphPad Prism(등록 상표) 버전 5.04(GraphPad Software, La Jolla, CA)를 사용하여 통계 분석을 수행하였다.

결과(1)

도 20은 면역손상된 마우스에서 성장시킨 야생형 ER을 수반하는 MCF7 피하 이종이식편 모델에서 화합물(I)의 항종양 및 체중 효과를 나타낸다. 화합물(I)은 17일차에 성장을 억제하며 3 ㎎/㎏ QD, 10 ㎎/㎏ QD 및 30 ㎎/㎏ QD 처리로 용량 의존적 방식으로 이종이식편 성장을 억제하였다(각각 TGI 75%, 80% 및 85% 및 모든 용량에 있어서 p<0.0001). 1 ㎎/㎏ QD × 18의 화합물(I) 처리는 대조군 처리군과 통계적으로 유의미한 차이를 나타내지 않았다(TGI 36%, p>0.05). 모든 용량 및 요법은 유의미한 체중 손실 또는 임상 징후 없이 잘 관용되었다.

화합물(I)을 연구 기간 동안 1일 1회 경구 제공하였다. 데이터는 평균 ± SEM(종양 부피) 또는 평균 ± SEM(체중)을 나타낸다(처리군에 있어서 N = 6, 비히클 대조군에 있어서 N = 8). 17일차에 비히클 대조군 대비 * p<0.0001(투-웨이 ANOVA에 이어 던네트 다중 비교 테스트).

결과(2)

도 21은 이형접합성 Y537S 돌연변이를 보유하는 ER+ PDX-Y537S 모델에서의 반복 연구에서 화합물(I)의 항종양 및 체중 효과를 나타낸다. 화합물(I)은 28일차에 성장을 유의미하게 억제하며 3 ㎎/㎏ QD, 10 ㎎/㎏ QD, 30 ㎎/㎏ QD 및 100 ㎎/㎏ QD 처리로 용량 의존적 방식으로 이종이식편 성장을 억제하였다(각각 TGI 61%, 85%, 81% 및 84% 및 p<0.001, p<0.0001, p<0.0001 및 p<0.0001). 모든 용량은 유의미한 체중 손실 또는 임상 징후 없이 잘 관용되었다.

화합물(I)을 연구 기간 동안 1일 1회 경구 제공하였다. 데이터는 평균 ± SEM(종양 부피) 또는 평균 ± SEM(체중)으로 나타낸다(화합물(I)에 있어서 N = 6 및 비히클에 있어서 N = 8). 28일차에 비히클 대조군 대비 * p<0.001, ** p<0.0001(투-웨이 ANOVA에 이어 던네트 다중 비교 테스트).

결과(3)

도 22는 동형접합성 Y537S 돌연변이를 보유하는 ER+ WHIM20 PDX 모델에서 화합물(I)의 항종양 및 체중 효과를 나타낸다. 화합물(I)은 22일차에 성장을 유의미하게 억제하며 10 ㎎/㎏ QD, 30 ㎎/㎏ QD 및 100 ㎎/㎏ QD 처리로 용량 의존적 방식으로 이종이식편 성장을 억제하였다(각각 TGI 26%, 36%, 및 48% 및 p<0.05, p<0.01 및 p<0.0001). 상기 용량의 화합물(I)은 내부 동물 관리 및 사용 위원회 가이드라인에 따라 관용되었다.

화합물(I)을 연구 기간 동안 1일 1회 경구 제공하였다. 데이터는 평균 ± SEM(종양 부피) 또는 평균 ± SEM(체중)으로 나타낸다(모든 군에 있어서 N=8). 22일차에 비히클 대조군 대비 각각 * p<0.05, ** p<0.01 및 *** p<0.0001(투-웨이 ANOVA에 이어 던네트 다중 비교 테스트).

SEQUENCE LISTING <110> Eisai R&D Management Co., Ltd. <120> Salts of indazole derivative and crystals thereof <130> FP17-0370-00 <150> JP2016-229635 <151> 2016-11-28 <160> 8 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 39 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> mutagenesis primer <400> 1 aagaacgtgg tgcccctctc tgacctgctg ctggagatg 39 <210> 2 <211> 39 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> mutagenesis primer <400> 2 catctccagc agcaggtcag agaggggcac cacgttctt 39 <210> 3 <211> 39 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> mutagenesis primer <400> 3 aagaacgtgg tgcccctcaa tgacctgctg ctggagatg 39 <210> 4 <211> 39 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> mutagenesis primer <400> 4 catctccagc agcaggtcat tgaggggcac cacgttctt 39 <210> 5 <211> 39 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> mutagenesis primer <400> 5 aagaacgtgg tgcccctctg tgacctgctg ctggagatg 39 <210> 6 <211> 39 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> mutagenesis primer <400> 6 catctccagc agcaggtcac agaggggcac cacgttctt 39 <210> 7 <211> 39 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> mutagenesis primer <400> 7 aacgtggtgc ccctctatgg cctgctgctg gagatgctg 39 <210> 8 <211> 39 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> mutagenesis primer <400> 8 cagcatctcc agcagcaggc catagagggg caccacgtt 39

Claims

화학식 I로 나타내는 (E)-N,N-디메틸-4-((2-((5-((Z)-4,4,4-트리플루오로-1-(3-플루오로-1H-인다졸-5-일)-2-페닐부트-1-엔-1-일)피리딘-2-일)옥시)에틸)아미노)부트-2-엔아미드, 및 브롬화수소산, 말레산 및 만델산으로 구성되는 군으로부터 선택되는 산의 염.
[화학식 I]
분말 X-선 회절측정에서 6.1°, 11.8°, 16.8°, 18.1° 및 19.5°의 회절 각(2θ ± 0.2°)에서 회절 피크를 갖는 것을 특징으로 하는, 화학식 I로 나타내는 (E)-N,N-디메틸-4-((2-((5-((Z)-4,4,4-트리플루오로-1-(3-플루오로-1H-인다졸-5-일)-2-페닐부트-1-엔-1-일)피리딘-2-일)옥시)에틸)아미노)부트-2-엔아미드의 하이드로클로라이드 염의 결정.
[화학식 I]
제2항에 있어서, 고상 ¹³C NMR 스펙트럼에서 164.3 ppm, 162.2 ppm 및 111.9 ppm의 화학적 이동(± 0.5 ppm)에서 피크를 갖는 것을 특징으로 하는, 화학식 I로 나타내는 (E)-N,N-디메틸-4-((2-((5-((Z)-4,4,4-트리플루오로-1-(3-플루오로-1H-인다졸-5-일)-2-페닐부트-1-엔-1-일)피리딘-2-일)옥시)에틸)아미노)부트-2-엔아미드의 하이드로클로라이드 염의 결정.
[화학식 I]
하기에 나타낸 분말 X-선 회절 패턴과 동일한 분말 X-선 회절 패턴을 갖는 것을 특징으로 하는, 화학식 I로 나타내는 (E)-N,N-디메틸-4-((2-((5-((Z)-4,4,4-트리플루오로-1-(3-플루오로-1H-인다졸-5-일)-2-페닐부트-1-엔-1-일)피리딘-2-일)옥시)에틸)아미노)부트-2-엔아미드의 하이드로클로라이드 염의 결정.

[화학식 I]
제2항에 있어서, 하기에 나타낸 고상 ¹³C NMR 스펙트럼과 동일한 고상 ¹³C NMR 스펙트럼을 갖는 것을 특징으로 하는, 화학식 I로 나타내는 (E)-N,N-디메틸-4-((2-((5-((Z)-4,4,4-트리플루오로-1-(3-플루오로-1H-인다졸-5-일)-2-페닐부트-1-엔-1-일)피리딘-2-일)옥시)에틸)아미노)부트-2-엔아미드의 하이드로클로라이드 염의 결정.

[화학식 I]
분말 X-선 회절측정에서 6.2°, 11.7°, 18.7°, 20.4° 및 22.5°의 회절 각(2θ ± 0.2°)에서 회절 피크를 갖는 것을 특징으로 하는, 화학식 I로 나타내는 (E)-N,N-디메틸-4-((2-((5-((Z)-4,4,4-트리플루오로-1-(3-플루오로-1H-인다졸-5-일)-2-페닐부트-1-엔-1-일)피리딘-2-일)옥시)에틸)아미노)부트-2-엔아미드의 하이드로브로마이드 염의 결정.
[화학식 I]
제6항에 있어서, 고상 ¹³C NMR 스펙트럼에서 164.5 ppm, 162.2 ppm 및 111.7 ppm의 화학적 이동(± 0.5 ppm)에서 피크를 갖는 것을 특징으로 하는, 화학식 I로 나타내는 (E)-N,N-디메틸-4-((2-((5-((Z)-4,4,4-트리플루오로-1-(3-플루오로-1H-인다졸-5-일)-2-페닐부트-1-엔-1-일)피리딘-2-일)옥시)에틸)아미노)부트-2-엔아미드의 하이드로브로마이드 염의 결정.
[화학식 I]
하기에 나타낸 분말 X-선 회절 패턴과 동일한 분말 X-선 회절 패턴을 갖는 것을 특징으로 하는, 화학식 I로 나타내는 (E)-N,N-디메틸-4-((2-((5-((Z)-4,4,4-트리플루오로-1-(3-플루오로-1H-인다졸-5-일)-2-페닐부트-1-엔-1-일)피리딘-2-일)옥시)에틸)아미노)부트-2-엔아미드의 하이드로브로마이드 염의 결정.

[화학식 I]
제6항에 있어서, 하기에 나타낸 고상 ¹³C NMR 스펙트럼과 동일한 고상 ¹³C NMR 스펙트럼을 갖는 것을 특징으로 하는, 화학식 I로 나타내는 (E)-N,N-디메틸-4-((2-((5-((Z)-4,4,4-트리플루오로-1-(3-플루오로-1H-인다졸-5-일)-2-페닐부트-1-엔-1-일)피리딘-2-일)옥시)에틸)아미노)부트-2-엔아미드의 하이드로브로마이드 염의 결정.

[화학식 I]
분말 X-선 회절측정에서 16.7°, 17.9°, 21.2°, 22.9° 및 24.9°의 회절 각(2θ ± 0.2°)에서 회절 피크를 갖는 것을 특징으로 하는, 화학식 I로 나타내는 (E)-N,N-디메틸-4-((2-((5-((Z)-4,4,4-트리플루오로-1-(3-플루오로-1H-인다졸-5-일)-2-페닐부트-1-엔-1-일)피리딘-2-일)옥시)에틸)아미노)부트-2-엔아미드의 말레에이트 염의 결정형 A.
[화학식 I]
제10항에 있어서, 고상 ¹³C NMR 스펙트럼에서 169.6 ppm, 107.3 ppm 및 50.3 ppm의 화학적 이동(± 0.5 ppm)에서 피크를 갖는 것을 특징으로 하는, 화학식 I로 나타내는 (E)-N,N-디메틸-4-((2-((5-((Z)-4,4,4-트리플루오로-1-(3-플루오로-1H-인다졸-5-일)-2-페닐부트-1-엔-1-일)피리딘-2-일)옥시)에틸)아미노)부트-2-엔아미드의 말레에이트 염의 결정형 A.
[화학식 I]
하기에 나타낸 분말 X-선 회절 패턴과 동일한 분말 X-선 회절 패턴을 갖는 것을 특징으로 하는, 화학식 I로 나타내는 (E)-N,N-디메틸-4-((2-((5-((Z)-4,4,4-트리플루오로-1-(3-플루오로-1H-인다졸-5-일)-2-페닐부트-1-엔-1-일)피리딘-2-일)옥시)에틸)아미노)부트-2-엔아미드의 말레에이트 염의 결정형 A.

[화학식 I]
제10항에 있어서, 하기에 나타낸 고상 ¹³C NMR 스펙트럼과 동일한 고상 ¹³C NMR 스펙트럼을 갖는 것을 특징으로 하는, 화학식 I로 나타내는 (E)-N,N-디메틸-4-((2-((5-((Z)-4,4,4-트리플루오로-1-(3-플루오로-1H-인다졸-5-일)-2-페닐부트-1-엔-1-일)피리딘-2-일)옥시)에틸)아미노)부트-2-엔아미드의 말레에이트 염의 결정형 A.

[화학식 I]
분말 X-선 회절측정에서 14.8°, 20.2°, 22.3° 및 26.5°의 회절 각(2θ ± 0.2°)에서 회절 피크를 갖는 것을 특징으로 하는, 화학식 I로 나타내는 (E)-N,N-디메틸-4-((2-((5-((Z)-4,4,4-트리플루오로-1-(3-플루오로-1H-인다졸-5-일)-2-페닐부트-1-엔-1-일)피리딘-2-일)옥시)에틸)아미노)부트-2-엔아미드의 말레에이트 염의 결정형 B.
[화학식 I]
제14항에 있어서, 고상 ¹³C NMR 스펙트럼에서 171.4 ppm, 108.6 ppm 및 48.8 ppm의 화학적 이동(± 0.5 ppm)에서 피크를 갖는 것을 특징으로 하는, 화학식 I로 나타내는 (E)-N,N-디메틸-4-((2-((5-((Z)-4,4,4-트리플루오로-1-(3-플루오로-1H-인다졸-5-일)-2-페닐부트-1-엔-1-일)피리딘-2-일)옥시)에틸)아미노)부트-2-엔아미드의 말레에이트 염의 결정형 B.
[화학식 I]
하기에 나타낸 분말 X-선 회절 패턴과 동일한 분말 X-선 회절 패턴을 갖는 것을 특징으로 하는, 화학식 I로 나타내는 (E)-N,N-디메틸-4-((2-((5-((Z)-4,4,4-트리플루오로-1-(3-플루오로-1H-인다졸-5-일)-2-페닐부트-1-엔-1-일)피리딘-2-일)옥시)에틸)아미노)부트-2-엔아미드의 말레에이트 염의 결정형 B.

[화학식 I]
제14항에 있어서, 하기에 나타낸 고상 ¹³C NMR 스펙트럼과 동일한 고상 ¹³C NMR 스펙트럼을 갖는 것을 특징으로 하는, 화학식 I로 나타내는 (E)-N,N-디메틸-4-((2-((5-((Z)-4,4,4-트리플루오로-1-(3-플루오로-1H-인다졸-5-일)-2-페닐부트-1-엔-1-일)피리딘-2-일)옥시)에틸)아미노)부트-2-엔아미드의 말레에이트 염의 결정형 B.

[화학식 I]
분말 X-선 회절측정에서 5.1°, 8.8°, 10.3°, 16.9° 및 18.3°의 회절 각(2θ ± 0.2°)에서 회절 피크를 갖는 것을 특징으로 하는, 화학식 I로 나타내는 (E)-N,N-디메틸-4-((2-((5-((Z)-4,4,4-트리플루오로-1-(3-플루오로-1H-인다졸-5-일)-2-페닐부트-1-엔-1-일)피리딘-2-일)옥시)에틸)아미노)부트-2-엔아미드의 L-만델레이트 염의 결정.
[화학식 I]
제18항에 있어서, 고상 ¹³C NMR 스펙트럼에서 165.9 ppm, 160.7 ppm 및 110.5 ppm의 화학적 이동(± 0.5 ppm)에서 피크를 갖는 것을 특징으로 하는, 화학식 I로 나타내는 (E)-N,N-디메틸-4-((2-((5-((Z)-4,4,4-트리플루오로-1-(3-플루오로-1H-인다졸-5-일)-2-페닐부트-1-엔-1-일)피리딘-2-일)옥시)에틸)아미노)부트-2-엔아미드의 L-만델레이트 염의 결정.
[화학식 I]
하기에 나타낸 분말 X-선 회절 패턴과 동일한 분말 X-선 회절 패턴을 갖는 것을 특징으로 하는, 화학식 I로 나타내는 (E)-N,N-디메틸-4-((2-((5-((Z)-4,4,4-트리플루오로-1-(3-플루오로-1H-인다졸-5-일)-2-페닐부트-1-엔-1-일)피리딘-2-일)옥시)에틸)아미노)부트-2-엔아미드의 L-만델레이트 염의 결정.

[화학식 I]
제18항에 있어서, 하기에 나타낸 고상 ¹³C NMR 스펙트럼과 동일한 고상 ¹³C NMR 스펙트럼을 갖는 것을 특징으로 하는, 화학식 I로 나타내는 (E)-N,N-디메틸-4-((2-((5-((Z)-4,4,4-트리플루오로-1-(3-플루오로-1H-인다졸-5-일)-2-페닐부트-1-엔-1-일)피리딘-2-일)옥시)에틸)아미노)부트-2-엔아미드의 L-만델레이트 염의 결정.

[화학식 I]
제1항 내지 제21항 중 어느 한 항에 따른 염 또는 이의 결정을 포함하는, 유방암, 자궁 내막암, 난소 암종, 육종, 갑상샘 암종, 전립샘암, 폐 선암종 또는 간세포 암종의 치료를 위한 약학 조성물.
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