ES2907759T3

ES2907759T3 - Derivados de 6,7,8,9-tetrahidro-3h-pirazolo[4,3-f]isoquinolina útiles en el tratamiento del cáncer

Info

Publication number: ES2907759T3
Application number: ES19189010T
Authority: ES
Inventors: James Stewart Scott; Bernard Christophe Barlaam; Bin Yang; Thomas Andrew MOSS; Samantha Jayne HUGHES; Johannes Wilhelmus Maria Nissink; Daniel Hillebrand O'DONOVAN
Original assignee: AstraZeneca AB
Current assignee: AstraZeneca AB
Priority date: 2016-10-24
Filing date: 2017-10-13
Publication date: 2022-04-26
Anticipated expiration: 2037-10-13
Also published as: PL3433256T3; PT3640251T; CN109843888A; CO2019003950A2; WO2018077630A1; TWI735681B; MX2019004685A; EP3640251B1; DOP2019000104A; DK3433256T3; JP2019537570A; RS59445B1; IL266245A; ES2751902T3; DK3640251T3; SI3433256T1; CN109843888B; BR112019007393A2; CR20190204A; US10131663B2

Abstract

Un compuesto de Fórmula (ID): **(Ver fórmula)** en donde: Q es O o NH; R1 es CH2F o CHF2; R14 se selecciona del grupo que consiste en: **(Ver fórmula)** y**(Ver fórmula)** y el Anillo Y se selecciona del grupo que consiste en: **(Ver fórmula)** y**(Ver fórmula)** o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

Description

DESCRIPCIÓN

Derivados de 6,7,8,9-tetrahidro-3h-pirazolo[4,3-f]isoquinolina útiles en el tratamiento del cáncer

La especificación se refiere a ciertos compuestos de indazol y sus sales farmacéuticamente aceptables que subregulan el receptor de estrógenos y poseen actividad anticancerígena. La especificación también se refiere al uso de dichos compuestos de indazol y sus sales farmacéuticamente aceptables en métodos de tratamiento del cuerpo humano o animal, por ejemplo, en la prevención o el tratamiento del cáncer. La especificación también se refiere a procesos y compuestos intermedios implicados en la preparación de dichos compuestos de indazol y a composiciones farmacéuticas que los contienen.

El receptor de estrógeno alfa (ERa, ESR1, NR3A) y el receptor de estrógeno beta (ERp, ESR2, NR3b) son receptores de hormonas esteroides que son miembros de la gran familia de receptores nucleares. Estructurado de manera similar a todos los receptores nucleares, ERa se compone de seis dominios funcionales (denominados A-F) (Dahlman-Wright, et al., Pharmacol. Rev., 2006, 58: 773-781) y se clasifica como un factor de transcripción dependiente de ligando porque después de su asociación con el ligando específico, (la hormona esteroidea de sexo femenino 17b estradiol (E2)), el complejo se une a secuencias genómicas, llamadas Elementos del receptor de estrógeno (ERE) e interactúa con los co-reguladores para modular la transcripción de genes diana. El gen ERa se encuentra en 6q25.1 y codifica una proteína 595AA y se pueden producir múltiples isoformas debido a los sitios de inicio de traducción y empalme alternativos. Además del dominio de unión al ADN (Dominio C) y el dominio de unión al ligando (Dominio E), el receptor contiene un dominio N-terminal (A/B), un dominio de bisagra (D) que enlaza los dominios C y E y una extensión de C-terminal (dominio F). Mientras que los dominios C y E de ERa y ERp están bastante conservados (96% y 55% de identidad de aminoácidos respectivamente) la conservación de los dominios A/B, D y F es pobre (por debajo del 30% de identidad de aminoácidos). Ambos receptores están involucrados en la regulación y el desarrollo del tracto reproductivo femenino y, además, juegan un papel en el sistema nervioso central, el sistema cardiovascular y el metabolismo óseo. La acción genómica de los ER ocurre en el núcleo de la célula cuando el receptor se une a los ERE directamente (activación directa o ruta clásica) o indirectamente (activación indirecta o ruta no clásica). En ausencia de ligando, los ER están asociados con las proteínas de choque térmico, Hsp90 y Hsp70, y la maquinaria de chaperona asociada estabiliza el dominio de unión al ligando (LBD) haciéndolo accesible al ligando. ER en ligando se disocia de las proteínas de choque térmico que conducen a un cambio conformacional en el receptor que permite la dimerización, la unión al ADN, la interacción con los coactivadores o correpresores y la modulación de la expresión del gen diana. En la ruta no clásica, AP-1 y Sp-1 son secuencias de ADN reguladoras alternativas utilizadas por ambas isoformas del receptor para modular la expresión génica. En este ejemplo, ER no interactúa directamente con el ADN sino a través de asociaciones con otros factores de transcripción unidos al ADN, por ejemplo c-Jun o c-Fos (Kushner et al., Pure Applied Chemistry 2003, 75: 1757-1769). El mecanismo preciso por el cual ER afecta la transcripción génica es poco conocido, pero parece estar mediado por numerosos factores nucleares que son reclutados por el receptor unido al ADN. El reclutamiento de correguladores está mediado principalmente por dos superficies proteicas, AF2 y AF1, que se encuentran en el dominio E y el dominio A/B, respectivamente. AF1 está regulado por factores de crecimiento y su actividad depende del entorno celular y del promotor, mientras que AF2 depende completamente de la unión del ligando para la actividad. Aunque los dos dominios pueden actuar independientemente, la actividad transcripcional máxima de ER se logra a través de interacciones sinérgicas a través de los dos dominios (Tzukerman, et al., Mol. Endocrinology, 1994, 8: 21-30). Aunque los ER se consideran factores de transcripción, también pueden actuar a través de mecanismos no genómicos, como lo demuestran los rápidos efectos de ER en los tejidos después de la administración de E2 en una escala de tiempo que se considera demasiado rápida para una acción genómica. Todavía no está claro si los receptores responsables de las acciones rápidas del estrógeno son los mismos ER nucleares o los distintos receptores de esteroides acoplados a la proteína G (Warner, et al., Steroids 200671: 91-95) pero un número creciente de rutas inducidas por E2 ha sido identificado por ejemplo la ruta MAPK/ERK y activación de óxido nítrico sintasa endotelial y ruta PI3K/Akt. Además de las rutas dependientes del ligando, se ha demostrado que ERa tiene actividad independiente del ligando a través de AF-1, que se ha asociado con la estimulación de MAPK a través de la señalización del factor de crecimiento, por ejemplo insulina como factor de crecimiento 1 (IGF-1) y factor de crecimiento epidérmico (EGF). La actividad de AF-1 depende de la fosforilación de Ser118 y un ejemplo de conversación cruzada entre ER y la señalización del factor de crecimiento es la fosforilación de Ser 118 por MAPK en respuesta a factores de crecimiento tales como IGF-1 y EGF (Kato, et al., Science, 1995, 270: 1491-1494).

Se ha demostrado que una gran cantidad de compuestos estructuralmente distintos se unen a ER. Algunos compuestos, tales como el ligando endógeno E2, actúan como agonistas de los receptores, mientras que otros inhiben competitivamente la unión de E2 y actúan como antagonistas de los receptores. Estos compuestos se pueden dividir en 2 clases dependiendo de sus efectos funcionales. Los moduladores selectivos de los receptores de estrógenos (SERM), tales como el tamoxifeno, tienen la capacidad de actuar tanto como agonistas y como antagonistas de los receptores, dependiendo del contexto celular y del promotor, así como la isoforma de ER direccionada. Por ejemplo, el tamoxifeno actúa como un antagonista en las mamas, pero actúa como un agonista parcial en los huesos, el sistema cardiovascular y el útero. Todos los SERM parecen actuar como antagonistas de a F2 y derivan sus características agonistas parciales a través de AF1. Un segundo grupo, siendo un ejemplo fulvestrant, se clasifica como antagonistas completos y es capaz de bloquear la actividad del estrógeno mediante la inhibición completa de los dominios AF1 y AF2 a través de la inducción de un cambio de conformación único en el dominio de unión al ligando (LBD) en la unión del compuesto que resulta en la abrogación completa de la interacción entre la hélice 12 y el resto del LBD, bloqueando el reclutamiento de cofactores (Wakeling, et al., Cáncer Res., 1991, 51: 3867-3873; Pike, et al., Structure, 2001, 9: 145-153).

Los niveles intracelulares de ERa están subregulados en presencia de E2 a través de la ruta ubiquitina/proteosoma (Ub/26S). La poliubiquitinilación de ERa en ligando está catalizada por al menos tres enzimas; la ubiquitina activada por la enzima activadora de ubiquitina E1 se conjuga por E2 con residuos de lisina a través de un enlace isopeptídico por E3 ubiquitina ligasa y ERa poliubiquitinado se dirige entonces al proteosoma para su degradación. Aunque la regulación de la transcripción dependiente de ER y la degradación de ER mediada por proteosomas están enlazadas (Lonard, et al., Mol. Cell, 20005: 939-948), la transcripción en sí misma no es necesaria para la degradación de ERa y el ensamblaje del complejo de iniciación de la transcripción es suficiente para apuntar a ERa para la degradación proteosómica nuclear. Se cree que este proceso de degradación inducido por E2 es necesario por su capacidad de activar rápidamente la transcripción en respuesta a los requisitos de proliferación, diferenciación y metabolismo celular (Stenoien, et al., Mol. Cell Biol., 2001,21: 4404-4412). Fulvestrant también se clasifica como un subregulador selectivo del receptor de estrógenos (SERD), un subconjunto de antagonistas que también puede inducir una subregulación de ERa a través de la ruta proteosómica 26S. En contraste, un SERM tal como el tamoxifeno puede aumentar los niveles de ERa, aunque el efecto sobre la transcripción es similar al observado para un SERD.

Aproximadamente el 70% de los cánceres de mama expresan receptores de ER y/o progesterona, lo que implica la dependencia hormonal de estas células tumorales para el crecimiento. También se cree que otros cánceres tales como el de ovario y el de endometrio dependen de la señalización de ERa para el crecimiento. Las terapias para tales pacientes pueden inhibir la señalización de ER ya sea antagonizando la unión del ligando a ER, por ejemplo tamoxifeno, que se usa para tratar el cáncer de mama ER positivo temprano y avanzado, tanto en la configuración pre como postmenopáusico; ERa antagonista y subregulador por ejemplo fulvestrant que se usa para tratar el cáncer de mama en mujeres que ha progresado a pesar de la terapia con tamoxifeno o inhibidores de aromatasa; o el bloqueo de la síntesis de estrógenos, por ejemplo inhibidores de la aromatasa que se usan para tratar el cáncer de mama ER positivo temprano y avanzado. Aunque estas terapias han tenido un impacto enormemente positivo en el tratamiento del cáncer de mama, un número considerable de pacientes cuyos tumores expresan ER muestran resistencia de novo a las terapias existentes de ER o desarrollan resistencia a estas terapias con el tiempo. Se han descrito varios mecanismos distintos para explicar la resistencia a la terapia de tamoxifeno por primera vez, lo que implica principalmente el cambio de tamoxifeno que actúa como un antagonista a un agonista, ya sea a través de la menor afinidad de ciertos cofactores que se unen al complejo de tamoxifeno-ERa siendo compensados por la sobreexpresión de estos cofactores, o a través de la formación de sitios secundarios que facilitan la interacción del complejo tamoxifeno-ERa con cofactores que normalmente no se unen al complejo. Por lo tanto, podría surgir resistencia como resultado del crecimiento de células que expresan cofactores específicos que impulsan la actividad de tamoxifeno-ERa. También existe la posibilidad de que otras rutas de señalización del factor de crecimiento activen directamente el receptor ER o los coactivadores para impulsar la proliferación celular independientemente de la señalización del ligando.

Más recientemente, se han identificado mutaciones en ESR1 como un posible mecanismo de resistencia en muestras tumorales derivadas de pacientes con ER positivo metastásico y modelos de xenoinjerto derivados de pacientes (PDX) en frecuencias que varían de 17-25%. Estas mutaciones están predominantemente, pero no exclusivamente, en el dominio de unión a ligando que conduce a proteínas funcionales mutadas; ejemplos de los cambios de aminoácidos incluyen Ser463Pro, Val543Glu, Leu536Arg, Tyr537Ser, Tyr537Asn y Asp538Gly, con cambios en los aminoácidos 537 y 538 que constituyen la mayoría de los cambios descritos actualmente. Estas mutaciones no se han detectado previamente en los genomas de muestras primarias de mama caracterizadas en la base de datos Cancer Genome Atlas. De 390 muestras de cáncer de mama primario positivas para la expresión de ER, no se detectó una sola mutación en ESR1 (Cancer Genome Atlas Network, 2012 Nature 490: 61-70). Se cree que las mutaciones del dominio de unión al ligando se han desarrollado como una respuesta de resistencia a las terapias endocrinas del inhibidor de la aromatasa, ya que estos receptores mutantes muestran actividad transcripcional basal en ausencia de estradiol. La estructura cristalina de ER, mutada en los aminoácidos 537 y 538, mostró que ambos mutantes favorecían la conformación agonista de ER al cambiar la posición de la hélice 12 para permitir el reclutamiento del co-activador y, por lo tanto, imitar el ER de tipo silvestre activado por agonista. Los datos publicados han demostrado que las terapias endocrinas tales como el tamoxifeno y el fulvestrant aún pueden unirse al mutante ER e inhibir la activación transcripcional en cierta medida y que el fulvestrant es capaz de degradar Try537Ser, pero que se pueden necesitar dosis más altas para la inhibición total del receptor (Toy et al., Nat. Genetics 2013, 45: 1439-1445; Robinson et al., Nat. Genetics 2013, 45: 144601451; Li, S. et al. Cell Rep. 4, 1116-1130 (2013). Por lo tanto, es posible que ciertos los compuestos de la Fórmula (I) o sus sales farmacéuticamente aceptables (como se describe aquí más adelante) serán capaces de subregular y antagonizar el ER mutante, aunque no se sabe en esta etapa si las mutaciones de ESR1 están asociadas con un resultado clínico alterado.

El documento WO 2016/097072 divulga compuestos de tetrahidro-pirido[3,4-b]indol-1-ilo útiles como agentes de direccionamiento de ERa.

Independientemente de cual mecanismo de resistencia o combinación de mecanismos tenga lugar, muchos todavía dependen de las actividades dependientes de ER y la eliminación del receptor a través de un mecanismo SERD ofrece la mejor manera de eliminar el receptor ERa de la célula. Fulvestrant es actualmente el único SERD aprobado para uso clínico, sin embargo, a pesar de sus propiedades mecanicistas, las propiedades farmacológicas del medicamento han limitado su eficacia debido a la limitación actual de una dosis mensual de 500 mg que da como resultado una renovación menor del 50% del receptor en las muestras del paciente. comparadas con la subregulación completa del receptor observada en experimentos in vitro de líneas celulares de mama (Wardell, et al., Biochem. Pharm., 2011,82: 122-130). Por lo tanto, existe la necesidad de nuevos agentes de direccionamiento ER que tengan las propiedades farmacéuticas requeridas y el mecanismo SERD para proporcionar un beneficio mejorado en la configuración de resistencia temprana, metastásica y adquirida.

Se ha encontrado que los compuestos de la especificación poseen una potente actividad antitumoral, siendo útiles para inhibir la proliferación celular descontrolada que surge de la enfermedad maligna. Los compuestos de la especificación proporcionan un efecto antitumoral, como mínimo, actuando como los SERD. Por ejemplo, los compuestos de la especificación pueden exhibir actividad antitumoral a través de la capacidad de subregular el receptor de estrógenos en un número de diferentes líneas celulares de cáncer de mama, por ejemplo contra MCF-7, CAMA-1, BT474 y/o líneas celulares de cáncer de mama MDA-MB-134. Se puede esperar que tales compuestos sean más adecuados como agentes terapéuticos, particularmente para el tratamiento del cáncer.

Los compuestos de la especificación también pueden exhibir propiedades físicas ventajosas (por ejemplo, menor lipofilicidad, mayor solubilidad acuosa, mayor permeabilidad, menor unión a proteínas plasmáticas y/o mayor estabilidad química) y/o perfiles de toxicidad favorables (por ejemplo, una actividad disminuida en hERG), y/o perfiles metabólicos o farmacocinéticos favorables, en comparación con otros SERD conocidos. Por lo tanto, tales compuestos pueden ser especialmente adecuados como agentes terapéuticos, particularmente para el tratamiento del cáncer. De acuerdo con un aspecto de la especificación, se proporciona un compuesto de Fórmula (I):

en donde:

A es CR2 o N;

G es CR3 o N;

D es CR4 o N;

E es CR5 o N;

Q es O, NH o NMe;

R1 es CH2F, CHF2 o CF3;

R2 es H, F, Cl, Me, CN, OMe o OEt;

R3 es H o F;

R4 es H, F, CN o OMe;

R5 es H o F;

R6 es H, Me, CH2F, CHF2 o CF3;

R7 es H o Me;

R8 es alquilo Ci_3, CH2F, CHF2, CF3 o cicloalquilo C3-4;

R9 es Me, F o CH2F;

R10 es Me, F, CH2F, CHF2, CF3, CH2OMe o CH2OH;

R11 es H o F; o

R10 y R11 tomados junto con el átomo de carbono al que están unidos forman un anillo de ciclopropilo o un anillo de oxetano;

R12 se selecciona independientemente de F o Me;

R13 es H o F; y

a es 0, 1 o 2;

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

Esta especificación también describe composiciones farmacéuticas que comprenden un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en asociación con un excipiente farmacéuticamente aceptable. Esta especificación también describe un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para usar como medicamento.

Esta especificación también describe un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para uso en el tratamiento del cáncer.

Esta especificación también describe combinaciones de un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, con otro agente antitumoral, para uso en el tratamiento del cáncer.

Para un experto en la técnica serán evidentes aspectos adicionales de la especificación tras la lectura de esta especificación.

El grupo alquilo C1-3 puede ser ramificado o ramificado. Son ejemplos de grupos C1-3 adecuados metilo (Me), etilo (Et), n-propilo (n-Pr) o i-propilo (i-Pr).

En grupo cicloalquilo C3-4 es un anillo carbocíclico no sustituido, monocíclico, insaturado. Son ejemplos de grupos cicloalquilo C3-4 adecuados ciclopropilo y ciclobutilo.

En una realización se proporciona un compuesto de Fórmula (I) como se ha definido anteriormente.

En una realización se proporciona una sal farmacéuticamente aceptable de un compuesto de Fórmula (I).

En una realización A es CR2.

En una realización G es CR3.

En una realización A es CR2 y G es CR3.

En una realización A es CR2 y G es N.

En una realización A es N y G es CR3.

En una realización R2 es H, F, Cl, Me, CN o OMe.

En una realización R2 es H, F o OMe.

En una realización R2 es H o F.

En una realización R2 es H.

En una realización R2 es F.

En una realización A es CR2 y R2 es H, F o OMe.

En una realización G es CR3 y R3 es H, F o OMe.

En una realización A es CH y G es CH.

En una realización A es C-F y G es C-F.

En una realización A es C-F y G es CH.

En una realización A es C-OMe y G es CH.

En una realización A es C-OMe y G es C-F.

En una realización uno de A or G es CH y el otro de A o G es N.

En una realización D es CR4.

En una realización E es CR5.

En una realización tanto D como E son CH.

En una realización tanto D como E son N.

En una realización uno de D o E es CH y el otro de D o E es N.

En una realización uno de D o E es C-F y el otro de D o E es CH. En una realización uno de D o E es C-OMe y el otro de D o E es CH. En una realización

NH.

En una realización Q es O.

En una realización Q es NH.

En una realización Q es NMe.

En una realización R1 es CH2F o CHF2.

En una realización R1 es CH2F.

En una realización R1 es CHF2.

En una realización R1 es CF3.

En una realización R6 es H o Me.

En una realización R6 es H.

En una realización R6 es Me.

En una realización R7 es H.

En una realización R7 es Me.

En una realización R8 es alquilo C1-3, CHF2 o ciclopropilo.

En una realización R8 es alquilo C1-3 o CHF2.

En una realización R8 es alquilo C1-3.

En una realización R8 es metilo.

En una realización R8 es CHF2.

En una realización R9 es Me o F.

En una realización R9 es Me.

En una realización R9 es F.

En una realización R10 es Me, F, CH2F, CH2OMe o CH2OH.

En una realización R10 es Me, F, CH2OMe o CH2OH.

En una realización R10 es F, CH2OMe o CH2OH.

En una realización R10 es CH2OMe o CH2OH.

En una realización R10 es F.

En una realización R11 es F.

En una realización R11 es H.

En una realización R10 y R11 tomados junto con el átomo de carbono al que están unidos forman un anillo de ciclopropilo o un anillo de oxetano.

En una realización R10 y R11 tomados junto con el átomo de carbono al que están unidos forman un anillo de ciclopropilo.

En una realización R10y R11 tomaods juntos con el átomo de carbono al que están unidos forman un anillo de oxetano. En una realización R10 es CH2OMe o CH2OH y R11 es F.

En una realización R10 es CH2OMe o CH2OH y R9 es Me.

En una realización R10 es F y R9 es F.

En una realización R9 es Me o F y R2 es H, F, Cl, Me, CN o OMe.

En una realización R9 es Me y R11 es F.

En una realización R9 es F y R11 es Me.

En una realización R9 es F y R11 es F.

En una realización R9 es F y R10 y R11 tomados junto con el átomo de carbono al que están unidos forman un anillo de ciclopropilo o un anillo de oxetano.

En una realización R9 es F y R10 y R11 tomados junto con el átomo de carbono al que están unidos forman un anillo de ciclopropilo.

En una realización R9 es F y R10 y R11 tomados junto con el átomo de carbono al que están unidos forman un anillo de oxetano.

En una realización el grupo —CH2-C(R9)(R10)(R11) en el compuesto de Fórmula (I) se selecciona del grupo que consiste en:

^ > i< 7 oh

y f ■

En una realización R12 es Me.

En una realización R12 es F.

En una realización R13 es H.

En una realización R13 es F.

En una realización a es 0 o 1.

En una realización a es 0.

En una realización a es 1.

En una realización a es 2.

En una realización se proporciona un compuesto de Fórmula (IA):

Q es O, NH o NMe;

R1 es CH2F, CHF2 o CF3;

R6 es H o Me;

R7 es H o Me;

R8es Me, CHF2 o ciclopropilo;

R9 es Me o F;

R10 es Me, F, CH2F, CH2OMe o CH2OH;

R11 es H o F; o

R12 se selecciona independientemente de H o Me;

R13 es H o F;

a es 0, 1 o 2; y

Anillo Y

se selecciona del grupo que consiste en:

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

En una realización se proporciona un compuesto de Fórmula (IA), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde el Anillo Y se selecciona del grupo que consiste en:

y

y

En una realización se proporciona un compuesto de Fórmula (IA), como una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde el Anillo Y se selecciona del grupo que consiste en:

aceptable del mismo,

en donde Q es NH.

En una realización se proporciona un compuesto de Fórmula (IA), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde Q es O.

En una realización se proporciona un compuesto de Fórmula (IA), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde R1 es CH2F.

En una realización se proporciona un compuesto de Fórmula (IA), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde R1 es CHF2.

En una realización se proporciona un compuesto de Fórmula (IA), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde R6 es H.

En una realización se proporciona un compuesto de Fórmula (IA), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde R7 es H.

En una realización se proporciona un compuesto de Fórmula (IA), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde R8 es Me.

En una realización se proporciona un compuesto de Fórmula (IA), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde R10 es F, CH2OMe o CH2OH.

En una realización se proporciona un compuesto de Fórmula (IA), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde R9 es F y R10 y R11 tomados junto con el átomo de carbono al que están unidos forman un anillo de ciclopropilo o un anillo de oxetano. En una realización adicional R10 y R11 tomados junto con el átomo de carbono al que están unidos forman un anillo de ciclopropilo. En una realización adicional R10 y R11 tomados junto con el átomo de carbono al que están unidos forman un anillo de oxetano.

En una realización el grupo -CH2-C(R9)(R10)(R11) en el compuesto de Fórmula (IA) se selecciona del grupo que consiste en:

En una realización se proporciona un compuesto de Fórmula (IA), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde R13 is H.

En una realización se proporciona un compuesto de Fórmula (IA), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde a is 0.

En una realización se proporciona un compuesto de Fórmula (IB):

Q

es O, NH o NMe;

R1

es CH2F, CHF2 o CF3;

R6

es H o Me;

R7

es H o Me;

R8

es Me, CHF2 o ciclopropilo;

R14

se selecciona del grupo que consiste en:

y el Anillo Y se selecciona del grupo que consiste en:

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

En una realización se proporciona un compuesto de Fórmula (IB), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde el Anillo Y se selecciona del grupo que consiste en:

y

y

En una realización se proporciona un compuesto de Fórmula (IB), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde Q es NH.

En una realización se proporciona un compuesto de Fórmula (IB), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde Q es O.

En una realización se proporciona un compuesto de Fórmula (IB), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde R1 es CH2F.

En una realización se proporciona un compuesto de Fórmula (IB), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde R1 es CHF2.

En una realización se proporciona un compuesto de Fórmula (IB), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde R6 es H.

En una realización se proporciona un compuesto de Fórmula (IB), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde R7 es H.

En una realización se proporciona un compuesto de Fórmula (IB), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde R8 es Me.

En una realización el grupo R14 en el compuesto de Fórmula (IB) se selecciona del grupo que consiste en:

En un aspecto adicional de la especificación se proporciona el compuesto de Fórmula (IC):

A es CR2 o N;

G es CR3 o N;

D es CR4 o N;

E es CR5 o N;

Q es O, NH o NMe;

R1 es CH2F, CHF2 o CF3;

R2 es H, F, Cl, Me, CN, OMe o OEt;

R3 es H o F;

R4 es H, F, CN o OMe;

R5 es H o F;

R6 es H, Me, CH2F, CHF2 o CF3;

R7 es H o Me;

R8 es alquilo C1-3, CH2F, CHF2, CF3 o cicloalquilo C3-4;

R9 es Me, F o CH2F;

R10 es Me, F, CH2F, CHF2, CF3, CH2OMe o CH2OH;

R11 es H o F; o

R12 se selecciona independientemente de F o Me;

R13 es H o F; y

a es 0, 1 o 2;

o una sal farmacéuticamente aceptable de este.

En una realización se proporciona el compuesto de Fórmula (IC) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo en donde R2 es H, F, Cl, Me, CN o OMe y R9 es Me o F.

En una realización adicional se proporciona el compuesto de Fórmula (IC) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo en donde la estereoquímica en la posición 6 del anillo de pirazolo[4,3-f]isoquinolina es S.

En una realización adicional se proporciona el compuesto de Fórmula (IC) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo en donde la estereoquímica en la posición 6 del anillo de pirazolo[4,3-f]isoquinolina es R.

En una realización adicional se proporciona el compuesto de Fórmula (IC) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo en donde la estereoquímica en la posición o del anillo de pirazolo[4,3-f]isoquinolina es S.

En una realización adicional se proporciona el compuesto de Fórmula (IC) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo en donde la estereoquímica en la posición 8 del anillo de pirazolo[4,3-f]isoquinolina es R.

La invención proporciona un compuesto de Fórmula (ID):

Q es O o NH;

R1 es CH2F o CHF2;

R14 se selecciona del grupo que consiste en:

y el Anillo Y se selecciona del grupo que consiste en:

y

En una realización se proporciona un compuesto de Fórmula (ID), o una sal farmacéuticamente aceptable de este, en donde Q es NH.

En una realización se proporciona un compuesto de Fórmula (ID), o una sal farmacéuticamente aceptable de este, en donde Q es O.

En una realización se proporciona un compuesto de Fórmula (ID), o una sal farmacéuticamente aceptable de este, en donde R1 es CH2F.

En una realización se proporciona un compuesto de Fórmula (ID), o una sal farmacéuticamente aceptable de este, en donde Q es O y R1 es CH2F.

En una realización se proporciona un compuesto de Fórmula (ID), o una sal farmacéuticamente aceptable de este, en donde Q es NH y R1 es CH2F.

En una realización se proporciona un compuesto de Fórmula (ID), o una sal farmacéuticamente aceptable de este, en donde R14 se selecciona del grupo que consiste en:

En una realización se proporciona un compuesto de Fórmula (ID), o una sal farmacéuticamente aceptable de este, en donde Ring Y se selecciona del grupo que consiste en:

y

En una realización se proporciona un compuesto de Fórmula (I), en donde el compuesto se selecciona del grupo que consiste en:

N-(4-((6S,8R)-7-(2,2-difluoro-3-metoxipropil)-8-metil-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f|isoquinolin-6-il)-3-metoxifenil)-1-(3-fluoropropil)azetidin-3-amina;

6-((6S,8R)-7-(2,2-difluoro-3-metoxipropil)-8-metil-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f|isoquinolin-6-il)-N-(1-(3-fluoropropil)azetidin-3-il)piridin-3-amina;

6-((6S,8R)-7-((1-fluorociclopropil)metil)-8-metil-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f|isoquinolin-6-il)-N-(1-(3-fluoropropil)azetidin-3-il)piridin-3-amina;

N-(4-((6S,8R)-7-(2-fluoro-3-metoxi-2-metilpropil)-8-metil-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f|isoquinolin-6-il)-3-metoxifenil)-1-(3-fluoropropil)azetidin-3-amina;

3-((6S,8R)-6-(2,6-difluoro-4-((1-(3-fluoropropil)azetidin-3-il)amino)fenil)-8-metil-3,6,8,9-tetrahidro-7H-pirazolo[4,3-flisoquinolin-7-il)-2,2-difluoropropan-1-ol;

N-(4-((6S,8R)-7-((1-fluorociclopropil)metil)-8-metil-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-/]isoquinolin-6-il)-3-metoxifenil)-1-(3-fluoropropil)azetidin-3-amina;

(6S,8R)-7-((1-fluorociclopropil)metil)-6-(4-((1-(3-fluoropropil)azetidin-3-il)oxi)-2-metoxifenil)-8-metil-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-/]isoquinolina;

N-(3,5-difluoro-4-((6S,8R)-8-metil-7-(2,2,2-trifluoroetil)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-/]isoquinolin-6-il)fenil)-1-(3-fluoropropil)azetidin-3-amina; y

5- ((6S,8R)-7-((1-fluorociclopropil)metil)-8-metil-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-flisoquinolin-6-il)-N-(1-(3-fluoropropil)azetidin-3-il)-4-metoxipiridin-2-amina;

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

6- ((6S,8R)-7-(2,2-difluoro-3-metoxipropil)-8-metil-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f|isoquinolin-6-il)-N-(1-(3-fluoropropil)azetidin-3-il)piridin-3-amina;

6-((6S,8R)-7-((1-fluorociclopropil)metil)-8-metil-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)-N-(1-(3-fluoropropil)azetidin-3-il)piridin-3-amina;

N-(4-((6S,8R)-7-(2-fluoro-3-metoxi-2-metilpropil)-8-metil-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)-3-metoxifenil)-1-(3-fluoropropil)azetidin-3-amina;

3-((6S,8R)-6-(2,6-d¡fluoro-4-((1-(3-fluoroprop¡l)azet¡d¡n-3-¡l)am¡no)fen¡l)-8-met¡l-3,6,8,9-tetrah¡dro-7H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-7-il)-2,2-difluoropropan-1-ol;

W-(4-((6S,8R)-7-((1-fluoroddoprop¡l)met¡l)-8-met¡l-6,7,8,9-tetrah¡dro-3H-p¡razolo[4,3-/]¡soqu¡nol¡n-6-¡l)-3-metox¡fen¡l)-1-(3-fluoroprop¡l)azet¡d¡n-3-am¡na;

(6S,8R)-7-((1-fluoroddoprop¡l)met¡l)-6-(4-((1-(3-fluoroprop¡l)azet¡d¡n-3-¡l)ox¡)-2-metox¡fen¡l)-8-met¡l-6,7,8,9-tetrah¡dro-3H-p¡razolo[4,3-/]¡soqu¡nol¡na;

W-(3,5-d¡fluoro-4-((6S,8R)-8-met¡l-7-(2,2,2-tnfluoroet¡l)-6,7,8,9-tetrah¡dro-3H-p¡razolo[4,3-/]¡soqu¡nol¡n-6-¡l)fen¡l)-1-(3-fluoroprop¡l)azet¡d¡n-3-am¡na;

5-((6S,8R)-7-((1-fluoroddoprop¡l)met¡l)-8-met¡l-6,7,8,9-tetrah¡dro-3H-p¡razolo[4,3-f]¡soqu¡nol¡n-6-¡l)-A/-(1-(3-fluoroprop¡l)azet¡d¡n-3-¡l)-4-metox¡p¡r¡d¡n-2-am¡na;

W-(4-((6S,8R)-7-((3-(fluoromet¡l)oxetan-3-¡l)met¡l)-8-met¡l-6,7,8,9-tetrah¡dro-3H-p¡razolo[4,3-f]¡soqu¡nol¡n-6-¡l)-3-metox¡fen¡l)-1-(3-fluoroprop¡l)azet¡d¡n-3-am¡na;

W-(3,5-d¡fluoro-4-((6S,8R)-7-((1-fluoroc¡doprop¡l)met¡l)-8-met¡l-6,7,8,9-tetrah¡dro-3H-p¡razolo[4,3-f]¡soqu¡nol¡n-6-¡l)fen¡l)-1-(3-fluoroprop¡l)azet¡d¡n-3-am¡na;

(6S,8R)-7-(2-fluoro-3-metox¡-2-met¡lprop¡l)-6-(4-(1-(3-fluoroprop¡l)azet¡d¡n-3-¡lox¡)-2-metox¡fen¡l)-8-met¡l-6,7,8,9-tetrah¡dro-3H-p¡razolo[4,3-f]¡soqu¡nol¡na;

W-(4-((6S,8R)-7-(2-fluoro-3-metox¡-2-met¡lprop¡l)-8-met¡l-6,7,8,9-tetrah¡dro-3H-p¡razolo[4,3-f]¡soqu¡nol¡n-6-¡l)-3-metox¡fen¡l)-1-(3-fluoroprop¡l)azet¡d¡n-3-am¡na;

2,2-d¡fluoro-3-((6S,8R)-6-(5-((1-(3-fluoroprop¡l)azet¡d¡n-3-¡l)am¡no)p¡rid¡n-2-¡l)-8-met¡l-3,6,8,9-tetrah¡dro-7H-p¡razolo[4,3-f]¡soqu¡nol¡n-7-¡l)propan-1-ol;

W-(1-(3-fluoroprop¡l)azet¡d¡n-3-¡l)-6-((6S,8R)-8-met¡l-7-(2,2,2-tnfluoroet¡l)-6,7,8,9-tetrah¡dro-3H-p¡razolo[4,3-f]¡soqu¡nol¡n-6-¡l)p¡r¡d¡n-3-am¡na;

5- fluoro-6-((6S,8R)-7-((1-fluoroddoprop¡l)met¡l)-8-met¡l-6,7,8,9-tetrah¡dro-3H-p¡razolo[4,3-f]¡soqu¡nol¡n-6-¡l)-W-(1-(3-fluoroprop¡l)azet¡d¡n-3-¡l)p¡rid¡n-3-am¡na;

W-(4-((6S,8R)-7-(2,2-d¡fluoroprop¡l)-8-met¡l-6,7,8,9-tetrah¡dro-3H-p¡razolo[4,3-/]¡soqu¡nol¡n-6-¡l)-3-metox¡fen¡l)-1-(3-fluoroprop¡l)azet¡d¡n-3-am¡na;

W-(3-etox¡-4-((6S,8R)-7-((1-fluoroddoprop¡l)met¡l)-8-met¡l-6,7,8,9-tetrah¡dro-3H-p¡razolo[4,3-f]¡soqu¡nol¡n-6-¡l)fen¡l)-1-(3-fluoroprop¡l)azet¡d¡n-3-am¡na;

W-(4-((6S,8R)-7-(2,2-d¡fluoroet¡l)-8-met¡l-6,7,8,9-tetrah¡dro-3H-p¡razolo[4,3-/]¡soqu¡nol¡n-6-¡l)-3-metox¡fen¡l)-1-(3-fluoroprop¡l)azet¡d¡n-3-am¡na;

(6S,8R)-7-(2,2-d¡fluoroet¡l)-6-(4-((1-(3-fluoroprop¡l)azet¡d¡n-3-¡l)ox¡)-2-metox¡fen¡l)-8-met¡l-6,7,8,9-tetrah¡dro-3H-p¡razolo[4,3-/]¡soqu¡nol¡na;

3-((6S,8R)-6-(2,6-d¡fluoro-4-(1-(3-fluoroprop¡l)azet¡d¡n-3-¡lam¡no)fen¡l)-8-met¡l-8,9-d¡h¡dro-3H-p¡razolo[4,3-/]¡soqu¡nol¡n-7(6H)-¡l)-2-fluoro-2-met¡lpropan-1-ol;

6- ((6S,8R)-7-(2,2-d¡fluoroet¡l)-8-met¡l-6,7,8,9-tetrah¡dro-3H-p¡razolo[4,3-/]¡soqu¡nol¡n-6-¡l)-A/-(1-(3-fluoroprop¡l)azet¡d¡n-3-¡l)p¡r¡d¡n-3-am¡ns; y

(6S,8R)-7-(2,2-d¡fluoroet¡l)-6-(5-((1-(3-fluoroprop¡l)azet¡d¡n-3-¡l)ox¡)p¡rid¡n-2-¡l)-8-met¡l-6,7,8,9-tetrah¡dro-3H-p¡razolo[4,3-/]¡soqu¡nol¡na;

o una sal farmacéut¡camente aceptable de este.

1-(3-fluoroprop¡l)-A/-(4-((6R,8R)-8-met¡l-7-(2,2,2-tnfluoroet¡l)-6,7,8,9-tetrah¡dro-3H-p¡razolo[4,3-f]¡soqu¡nol¡n-6-¡l)fen¡l)azet¡d¡n-3-am¡na;

1- (3-fluoroprop¡l)-A/-(3-metox¡-4-((6S,8R)-8-met¡l-7-(2,2,2-tnfluoroet¡l)-6,7,8,9-tetrah¡dro-3H-p¡razolo[4,3-/]¡soqu¡nol¡n-6-¡l)fen¡l)azet¡d¡n-3-am¡na;

2- fluoro-A/-(1-(3-fluoroprop¡l)azet¡d¡n-3-¡l)-6-((6S,8R)-8-met¡l-7-(2,2,2-tnfluoroet¡l)-6,7,8,9-tetrah¡dro-3H-p¡razolo[4,3-/]¡soqu¡nol¡n-6-¡l)p¡r¡d¡n-3-am¡na;

5- fluoro-A/-(1-(3-fluoroprop¡l)azet¡d¡n-3-¡l)-6-((6S,8R)-8-met¡l-7-(2,2,2-tnfluoroet¡l)-6,7,8,9-tetrah¡dro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)piridin-3-amina;

2,2-d¡fluoro-3-((6S,8R)-6-(3-fluoro-5-((1-(3-fluoroprop¡l)azet¡d¡n-3-¡l)am¡no)p¡rid¡n-2-¡l)-8-met¡l-3,6,8,9-tetrah¡dro-7H-p¡razolo[4,3-f]¡soqu¡nol¡n-7-¡l)propan-1-ol;

6- ((6S,8R)-1-fluoro-8-met¡l-7-(2,2,2-tr¡fluoroet¡l)-6,7,9,8-tetrah¡dro-3H-p¡razolo[4,3-f]¡soqu¡n-6-¡l)-N-(3-fluoroprop¡l)azet¡d¡-3-¡l)p¡r¡d¡n-3-am¡na;

5-fluoro-6-((6S,8R)-1-fluoro-8-met¡l-7-(2,2,2-tnfluoroet¡l)-6,7,8,9-tetrah¡dro-3H-p¡razolo[4,3-f]¡soqumol¡n-6-¡l)-N-(1-(3-fluoroprop¡l)azet¡d¡n-3-¡l)p¡r¡d¡n-3-am¡na;

N-(1-(3-fluoroprop¡l)azet¡d¡n-3-¡l)-N-met¡l-6-((6S,8R)-8-met¡l-7-(2,2,2-tnfluoroet¡l)-6,7,8,9-tetrah¡dro-3H-p¡razolo[4,3-f]¡soqu¡nol¡n-6-¡l)p¡r¡d¡n-3-am¡na;

N-(1-(3-fluoroprop¡l)azet¡d¡n-3-¡l)-6-((6S,8R)-6-deuter¡o-8-met¡l-7-(2,2,2-tr¡fluoroet¡l)-6,7,8,9-tetrah¡dro-3H-p¡razolo[4,3-f]¡soqu¡nol¡n-6-¡l)p¡r¡d¡n-3-am¡na;

N-(1-(3-fluoroprop¡l)azet¡d¡n-3-¡l)-6-((6S,8R)-1-deuter¡o-8-met¡l-7-(2,2,2-tr¡fluoroet¡l)-6,7,8,9-tetrah¡dro-3H-p¡razolo[4,3-f]¡soqu¡nol¡n-6-¡l)p¡r¡d¡n-3-am¡na;

N-(1-(3-fluoroprop¡l)azet¡d¡n-3-¡l)-5-metox¡-6-((6S,8R)-8-met¡l-7-(2,2,2-tr¡fluoroet¡l)-6,7,8,9-tetrah¡dro-3H-p¡razolo[4,3-f]¡soqu¡nol¡n-6-¡l)p¡r¡d¡n-3-am¡na;

5- ((6S,8R)-1-fluoro-8-met¡l-7-(2,2,2-tr¡fluoroet¡l)-6,7,8,9-tetrah¡dro-3H-p¡razolo[4,3-f]¡soqu¡nol¡n-6-¡l)-N-(1-(3-fluoroprop¡l)azet¡d¡n-3-¡l)p¡raz¡n-2-am¡na;

2-fluoro-6-((6S,8R)-1-fluoro-8-met¡l-7-(2,2,2-tr¡fluoroet¡l)-6,7,8,9-tetrah¡dro-3H-p¡razolo[4,3-f]¡soqu¡nol¡n-6-¡l)-N-(1-(3-fluoroprop¡l)azet¡d¡n-3-¡l)p¡r¡d¡n-3-am¡na;

6- fluoro-N-(1-(3-fluoroprop¡l)azet¡d¡n-3-¡l)-5-((6S,8R)-8-met¡l-7-(2,2,2-tr¡fluoroet¡l)-6,7,8,9-tetrah¡dro-3H-p¡razolo[4,3-f]¡soqu¡nol¡n-6-¡l)p¡r¡d¡n-2-am¡na;

N-(2-fluoro-4-((6R,8R)-8-met¡l-7-(2,2,2-tr¡fluoroet¡l)-6,7,8,9-tetrah¡dro-3H-p¡razolo[4,3-f]¡soqu¡nol¡n-6-¡l)fen¡l)-1-(3-fluoroprop¡l)azet¡d¡n-3-am¡na;

N-(1-(3-fluoroprop¡l)azet¡d¡n-3-¡l)-5-((6S,8R)-8-met¡l-7-(2,2,2-tr¡fluoroet¡l)-6,7,8,9-tetrah¡dro-3H-p¡razolo[4,3-f]¡soqu¡nol¡n-6-¡l)p¡raz¡n-2-am¡na;

6-((6S,8R)-7-(2,2-d¡fluoroet¡l)-8-met¡l-6,7,8,9-tetrah¡dro-3H-p¡razolo[4,3-f]¡soqu¡nol¡n-6-¡l)-N-(1-(3-fluoroprop¡l)azet¡d¡n-3-¡l)-N-met¡lp¡r¡d¡n-3-am¡na;

6-((6S,8R)-7-(2,2-d¡fluoroet¡l)-6,8-d¡met¡l-6,7,8,9-tetrah¡dro-3H-p¡razolo[4,3-f]¡soqu¡nol¡n-6-¡l)-N-(1-(3-fluoroprop¡l)azet¡d¡n-3-¡l)p¡r¡d¡n-3-am¡na;

N-(4-((6S,8R)-7-(2,2-d¡fluoroet¡l)-6,8-d¡met¡l-6,7,8,9-tetrah¡dro-3H-p¡razolo[4,3-f]¡soqu¡nol¡n-6-¡l)-3-metox¡fen¡l)-1-(3-fluoroprop¡l)azet¡d¡n-3-am¡na;

6-((6S,8R)-7-(2,2-d¡fluoroet¡l)-8-met¡l-6,7,8,9-tetrah¡dro-3H-p¡razolo[4,3-f]¡soqu¡nol¡n-6-¡l)-5-fluoro-N-(1-(3-fluoroprop¡l)azet¡d¡n-3-¡l)p¡r¡d¡n-3-am¡na;

6-((6S,8R)-7-(2,2-d¡fluoroet¡l)-8-met¡l-6,7,8,9-tetrah¡dro-3H-p¡razolo[4,3-f]¡soqu¡nol¡n-6-¡l)-2-fluoro-N-(1-(3-fluoroprop¡l)azet¡d¡n-3-¡l)p¡r¡d¡n-3-am¡na;

N-(4-((6R,8R)-7-(2,2-d¡fluoroet¡l)-8-met¡l-6,7,8,9-tetrah¡dro-3H-p¡razolo[4,3-f]¡soqu¡nol¡n-6-¡l)fen¡l)-1-(3-fluoroprop¡l)azet¡d¡n-3-am¡na;

N-(4-((6S,8R)-7-(2,2-d¡fluoroet¡l)-8-met¡l-6,7,8,9-tetrah¡dro-3H-p¡razolo[4,3-f]¡soqu¡nol¡n-6-¡l)-3,5-d¡fluorofen¡l)-1-(3-fluoroprop¡l)azet¡d¡n-3-am¡na;

5- ((6S,8R)-7-(2,2-d¡fluoroet¡l)-8-met¡l-6,7,8,9-tetrah¡dro-3H-p¡razolo[4,3-f]¡soqu¡nol¡n-6-¡l)-N-(1-(3-fluoroprop¡l)azet¡d¡n-3-¡l)p¡raz¡n-2-am¡na;

6- ((6S,8S)-7-(2,2-d¡fluoroet¡l)-8-(d¡fluoromet¡l)-6,7,8,9-tetrah¡dro-3H-p¡razolo[4,3-f]¡soqu¡nol¡n-6-¡l)-N-(1-(3-fluoroprop¡l)azet¡d¡n-3-¡l)p¡r¡d¡n-3-am¡na;

N-(4-((6S,8R)-7-((1-fluoroc¡cloprop¡l)met¡l)-8-met¡l-6,7,8,9-tetrah¡dro-3H-p¡razolo[4,3-f]¡soqu¡nol¡n-6-¡l)-3-metox¡fen¡l)-1-(3-fluoroprop¡l)-N-met¡lazet¡d¡n-3-am¡na;

N-(2-fluoro-4-((6S,8R)-7-((1-fluorocidopropil)metil)-8-metil-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)-5-metoxifenil)-1-(3-fluoropropil)azetidin-3-amina;

5-((6S,8R)-7-((1-fluorocidopropil)metil)-8-metil-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)-N-(1-(3-fluoropropil)azetidin-3-il)piridin-2-amina;

5- ((6S,8R)-7-((1-fluorocidopropil)metil)-8-metil-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f}isoquinolin-6-il)-N-(1-(3-fluoropropil)azetidin-3-il)pirazin-2-amina;

N-(4-((6S,8R)-7-((1-fluorocidopropil)metil)-8-metil-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)-3-metoxifenil)-1-(3,3,3-trifluoropropil)azetidin-3-amina;

6- ((6S,8R)-7-((1-fluorocidopropil)metil)-8-metil-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)-N-(1-(3-fluoropropil)azetidin-3-il)-N-metilpiridin-3-amina;

2.2- difluoro-3-((6S,8R)-6-(5-((1-(3-fluoropropil)azetidin-3-il)oxi)piridin-2-il)-8-metil-3,6,8,9-tetrahidro-7H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-7-il)propan-1-ol;

2.2- difluoro-3-((6S,8R)-6-(3-fluoro-5-((1-(3-fluoropropil)azetidin-3-il)oxi)piridin-2-il)-8-metil-3,6,8,9-tetrahidro-7H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-7-il)propan-1-ol;

2.2- difluoro-3-((6S,8R)-6-(4-((1-(3-fluoropropil)azetidin-3-il)amino)-2-metoxifenil)-8-metil-3,6,8,9-tetrahidro-7H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-7-il)propan-1-ol;

2.2- difluoro-3-((6S,8R)-1-fluoro-6-(5-((1-(3-fluoropropil)azetidin-3-il)amino)piridin-2-il)-8-metil-3,6,8,9-tetrahidro-7H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-7-il)propan-1-ol;

2.2- difluoro-3-((6S,8R)-1-fluoro-6-(6-fluoro-5-((1-(3-fluoropropil)azetidin-3-il)amino)piridin-2-il)-8-metil-3,6,8,9-tetrahidro-7H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-7-il)propan-1-ol;

6-((6S,8R)-7-(2-fluoro-2-metilpropil)-8-metil-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)-N-(1-(3-fluoropropil)azetidin-3-il)piridin-3-amina;

N-(4-((6S,8R)-7-(2-fluoro-2-metilpropil)-8-metil-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)-3-metoxifeni)-1-(3-fluoropropil)azetidin-3-amina;

6-((6S,8R)-7-(2-fluoropropil)-8-metil-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)-N-(1-(3-fluoropropil)azetidin-3-il)piridin-3-amina;

1-(3-fluoropropil)-N-(4-((6S,8R)-7-(2-fluoropropil)-8-metil-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)-3-metoxifenil)azetidin-3-amina;

N-(1-(3-fluoropropil)azetidin-3-il)-6-((6S,8R)-7-isobutil-8-metil-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)piridin-3-amina;

6-((6S,8R)-7-(2,2-difluoropropil)-8-metil-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)-N-(1-(3-fluoropropil)azetidin-3-il)piridin-3-amina;

5-fluoro-N-(1-(3-fluoropropil)azetidin-3-il)-6-((6S,8R)-8-metil-7-(2,2,3-trifluoropropil)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)piridin-3-amina;

(S)-6-(8,8-dimetil-7-(2,2,2-trifluoroetil)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)-N-(1-(3-fluoropropil)azetidin-3-il)piridin-3-amina; y

(S)-6-(7-(2,2-difluoroetil)-8,8-dimetil-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)-N-(1-(3-fluoropropil)azetidin-3-il)piridin-3-amina

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

En una realización se proporciona un compuesto de Fórmula (I) que es A/-(1-(3-fluoropropil)azetidin-3-il)-6-(8-metil-7-(2,2,2-trifluoroetil)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)piridin-3-amina, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

En una realización se proporciona un compuesto de Fórmula (I) que se selecciona del grupo que consiste en: N-(1-(3-fluoroprop¡l)azet¡d¡n-3-¡l)-6-((6S,8R)-8-met¡l-7-(2,2,2-tr¡fluoroet¡l)-6,7,8,9-tetrah¡dro-3H-p¡razolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)piridin-3-amina; y

N-(1-(3-fluoroprop¡l)azet¡d¡n-3-¡l)-6-((6R,8R)-8-met¡l-7-(2,2,2-tr¡fluoroet¡l)-6,7,8,9-tetrah¡dro-3H-p¡razolo[4,3-f]¡soqu¡nol¡n-6-¡l)p¡r¡d¡n-3-am¡na;

o una sal farmacéut¡camente aceptable del m¡smo.

En una real¡zac¡ón se proporc¡ona un compuesto de Fórmula (I) que es N-(1-(3-fluoroprop¡l)azet¡d¡n-3-¡l)-6-((6S,8R)-8-met¡l-7-(2,2,2-tr¡fluoroet¡l)-6,7,8,9-tetrah¡dro-3H-p¡razolo[4,3-f]¡soqu¡nol¡n-6-¡l)p¡r¡d¡n-3-am¡na, o una sal farmacéut¡camente aceptable del m¡smo.

En una real¡zac¡ón se proporc¡ona un compuesto de Fórmula (I) que es N-(1-(3-fluoroprop¡l)azet¡d¡n-3-¡l)-6-((6R,8R)-8-met¡l-7-(2,2,2-tr¡fluoroet¡l)-6,7,8,9-tetrah¡dro-3H-p¡razolo[4,3-f]¡soqu¡nol¡n-6-¡l)p¡r¡d¡n-3-am¡n¡, o una sal farmacéut¡camente aceptable del m¡smo.

En una real¡zac¡ón se proporc¡ona un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéut¡camente aceptable del mismo, en donde el compuesto se selecc¡ona de cualqu¡era de los Ejemplos en la espec¡f¡cac¡ón. Una característ¡ca ad¡c¡onal es cualqu¡era de las real¡zac¡ones descr¡tas en la espec¡f¡cac¡ón con la cond¡c¡ón de que se renunc¡e ¡nd¡v¡dualmente a cualqu¡era de los Ejemplos específ¡cos. Una característ¡ca ad¡c¡onal es cualqu¡era de las real¡zac¡ones descr¡tas en la espec¡f¡cac¡ón con la cond¡c¡ón de que se renunc¡e ¡nd¡v¡dualmente a uno o más cualesqu¡era de los compuestos selecc¡onados de la l¡sta anter¡or de ejemplos de compuestos de la espec¡f¡cac¡ón.

Para ev¡tar dudas, cuando a es 1, el sust¡tuyente R12 puede ser sust¡tuyente en cualqu¡er carbono de la respect¡va cadena de et¡lo con la que se asoc¡a, y cuando a es 2, el sust¡tuyente R12 puede ser sust¡tuyente en un ún¡co carbono o en ambos carbonos de d¡cha cadena de et¡lo. Cuando a es 1 o 2, por lo tanto, son pos¡bles los s¡gu¡entes patrones de sust¡tuc¡ón, donde cada uno de cuales representa una real¡zac¡ón ad¡c¡onal:

En una real¡zac¡ón ad¡c¡onal, por lo tanto, a es 1 o 2 y R12 se une al resto del compuesto de Fórmula (I) como se muestra a cont¡nuac¡ón en (a):

En una real¡zac¡ón ad¡c¡onal, a es 1 o 2, R12 es met¡lo y R12 se une al resto del compuesto de Fórmula (I) como se muestra a cont¡nuac¡ón en (b):

Para evitar adidonalmente dudas, el uso de " /AvA> ” en |as fórmulas de esta espedficadón denota el punto de unión entre d¡ferentes grupos.

Los compuestos de Fórmula (I) t¡enen dos o más centros qu¡rales y se reconocerá que el compuesto de Fórmula (I) puede prepararse, a¡slarse y/o sum¡n¡strarse con o s¡n la presenc¡a, además, de uno o más de los otros pos¡bles ¡sómeros enant¡omér¡cos y/o d¡astereomér¡cos del compuesto de Fórmula (I) en cualqu¡er proporc¡ón relat¡va. La preparac¡ón de compuestos enant¡oenr¡quec¡dos/enant¡opuros y/o d¡astereoenr¡quec¡dos/d¡astereopuros se puede llevar a cabo med¡ante técn¡cas estándar de quím¡ca orgán¡ca que son b¡en conoc¡das en la técn¡ca, por ejemplo med¡ante síntes¡s a part¡r de materiales de part¡da enant¡oenr¡quec¡dos o enant¡opuros, el uso de un catal¡zador enant¡oenr¡quec¡do o enant¡opuro aprop¡ado durante la síntes¡s, y/o por resoluc¡ón de una mezcla racém¡ca o parc¡almente enr¡quec¡da de estereo¡sómeros, por ejemplo med¡ante cromatografía qu¡ral.

Para uso en un contexto farmacéutico, puede ser preferible proporcionar un compuesto de Fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo sin que estén presentes grandes cantidades de las otras formas estereoisoméricas.

Por consiguiente, en una realización, se proporciona una composición que comprende un compuesto de Fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, opcionalmente junto con una o más de las otras formas estereoisoméricas del compuesto de Fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde el compuesto de Fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo está presente dentro de la composición con un exceso diastereomérico (% de de) de > 90%.

En una realización adicional, el % de de en la composición mencionada anteriormente es > 95%.

En una realización adicional, el % de de en la composición mencionada anteriormente es > 98%.

En una realización adicional, el % de de en la composición mencionada anteriormente es > 99%.

En una realización adicional, se proporciona una composición que comprende un compuesto de Fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, opcionalmente junto con una o más de las otras formas estereoisoméricas del compuesto de Fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde el compuesto de Fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo está presente dentro de la composición con un exceso enantiomérico (% de ee) de > 90%.

En una realización adicional, el % de ee en la composición mencionada anteriormente es > 95%.

En una realización adicional, el % de ee en la composición mencionada anteriormente es > 98%.

En una realización adicional, el % de ee en la composición mencionada anteriormente es > 99%.

En una realización adicional, se proporciona una composición que comprende un compuesto de Fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, opcionalmente junto con una o más de las otras formas estereoisoméricas del compuesto de Fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde el compuesto de Fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo está presente dentro de la composición con un exceso enantiomérico (% de ee) de > 90% y un exceso diastereomérico (% de de) de > 90%.

En realizaciones adicionales de la composición mencionada anteriormente, el % de ee y el% de de pueden tomar cualquier combinación de valores como se enumeran a continuación:

El % de ee es <5% y el % de de es > 80%.

El % de ee es <5% y el % de de es > 90%.

El % de ee es <5% y el % de de es > 95%.

El % de ee es <5% y el % de de es > 98%.

El % de ee es > 95% y el % de de es > 95%.

El % de ee es > 98% y el % de de es > 98%.

El % de ee es > 99% y el % de de es > 99%.

En una realización adicional, se proporciona una composición farmacéutica que comprende un compuesto de Fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en asociación con un excipiente farmacéuticamente aceptable. En una realización, se proporciona una composición farmacéutica que comprende un compuesto de Fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en asociación con un excipiente farmacéuticamente aceptable, que opcionalmente comprende además una o más de las otras formas estereoisoméricas del compuesto de Fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde el compuesto de Fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo está presente dentro de la composición con un exceso enantiomérico (% de ee) de > 90%.

En una realización, se proporciona una composición farmacéutica que comprende un compuesto de Fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en asociación con un excipiente farmacéuticamente aceptable, que opcionalmente comprende además una o más de las otras formas estereoisoméricas del compuesto de Fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde el compuesto de Fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo está presente dentro de la composición con un exceso diastereomérico (% de de) de > 90%.

En una realización, se proporciona una composición farmacéutica que comprende un compuesto de Fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en asociación con un excipiente farmacéuticamente aceptable, que opcionalmente comprende además una o más de las otras formas estereoisoméricas del compuesto de Fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde el compuesto de Fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo está presente dentro de la composición con un exceso enantiomérico (% de ee) de > 90% y un exceso diastereomérico (% de de) de > 90 %

En realizaciones adicionales de la composición farmacéutica mencionada anteriormente, el % de ee y el % de de pueden tomar cualquier combinación de valores que se enumeran a continuación:

El % de ee es > 95% y el % de de es > 95%.

El % de ee es > 98% y el % de de es > 98%.

El % de ee es > 99% y el % de de es > 99%.

Los compuestos de Fórmula (I) y sus sales farmacéuticamente aceptables pueden prepararse, usarse o suministrarse en forma amorfa, forma cristalina o forma semicristalina y cualquier compuesto dado de Fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo puede ser capaz de formar más de una forma cristalina/polimórfica, que incluye formas hidratadas (por ejemplo, hemihidrato, monohidrato, dihidrato, trihidrato u otra estequiometría de hidrato) y/o solvatadas. Debe entenderse que la presente especificación abarca cualquiera y todas esas formas sólidas del compuesto de Fórmula (I) y sus sales farmacéuticamente aceptables.

En realizaciones adicionales, se proporciona un compuesto de Fórmula (I), que se puede obtener mediante los métodos descritos en la sección 'Ejemplos' aquí más adelante.

La presente especificación pretende incluir todos los isótopos de átomos que se encuentran en los presentes compuestos. Se entenderá que los isótopos incluyen aquellos átomos que tienen el mismo número atómico pero diferentes números de masa. Por ejemplo, los isótopos de hidrógeno incluyen tritio y deuterio. Los isótopos de carbono incluyen 13C y 14C. Los isótopos de nitrógeno incluyen 15N. En una realización particular, se proporciona un compuesto de Fórmula (I) en donde R6 es deuterio.

Una sal farmacéuticamente aceptable adecuada de un compuesto de Fórmula (I) es, por ejemplo, una sal de adición de ácido. Una sal farmacéuticamente aceptable adecuada de un compuesto de Fórmula (I) puede ser, por ejemplo, una sal de adición de ácido de un compuesto de Fórmula (I), por ejemplo una sal de adición de ácido con un ácido inorgánico u orgánico tal como acético ácido, ácido adípico, ácido bencenosulfónico, ácido benzoico, ácido cinámico, ácido cítrico, ácido D-L-láctico, ácido etano disulfónico, ácido etanosulfónico, ácido fumárico, ácido clorhídrico, ácido L-tartárico, ácido maleico, ácido málico, ácido malónico, ácido metanosulfónico, ácido napadisílico, ácido fosfórico, sacarina, ácido succínico, ácido sulfúrico, ácido p-toluenosulfónico, ácido toluenosulfónico o ácido trifluoroacético.

Una sal farmacéuticamente aceptable adicional adecuada de un compuesto de Fórmula (I) es, por ejemplo, una sal formada dentro del cuerpo humano o animal después de la administración de un compuesto de Fórmula (I) a dicho cuerpo humano o animal.

El compuesto de Fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo puede prepararse como una forma sólida de cocristal. Debe entenderse que un cocristal farmacéuticamente aceptable de un compuesto de Fórmula (I) o sales farmacéuticamente aceptables del mismo, forman un aspecto de la presente especificación.

Las formas sólidas específicas descritas en el presente documento proporcionan patrónes de difracción de rayos X en polvo sustancialmente iguales a los patrónes de difracción de rayos X en polvo que se muestran en las Figuras y tienen los diversos valores de 2-theta como se muestran en las Tablas incluidas aquí. Se entenderá que los valores de 2-theta de un patrón de difracción de rayos X en polvo pueden variar ligeramente de una máquina a otra o de una muestra a otra, por lo que los valores citados no deben interpretarse como absolutos.

Se sabe que puede obtenerse un patrón de difracción de rayos X en polvo que tiene uno o más errores de medición dependiendo de las condiciones de medición (tal como el equipo o la máquina utilizada). En particular, se sabe generalmente que las intensidades en un patrón de difracción de rayos X en polvo pueden fluctuar dependiendo de las condiciones de medición. Por lo tanto, debe entenderse que las formas sólidas de la presente especificación no se limitan a los cristales que proporcionan patrónes de difracción de rayos X en polvo que son idénticos al patrón de difracción de rayos X en polvo que se muestra en las Figuras, y cualquier cristal que proporcione patrónes de difracción de rayos X en polvo sustancialmente iguales a los mostrados en las Figuras caen dentro del alcance de la presente especificación. Una persona experta en la técnica de difracción de rayos X en polvo puede juzgar la identidad sustancial de los patrónes de difracción de rayos X en polvo.

Los expertos en la técnica de difracción de rayos X en polvo se darán cuenta de que la intensidad relativa de los picos puede verse afectada, por ejemplo, por granos de más de 30 |jm de tamaño y relaciones de aspecto no unitarias, que pueden afectar el análisis de muestras. El experto también se dará cuenta de que la posición de los reflejos puede verse afectada por la altura precisa a la que se encuentra la muestra en el difractómetro y la calibración a cero del difractómetro. La planaridad de la superficie de la muestra también puede tener un pequeño efecto. Por lo tanto, los datos del patrón de difracción presentados no deben tomarse como valores absolutos. (Jenkins, R & Snyder, R.L.

'Introduction to X-Ray Powder Diffractometry' John Wiley & Sons 1996; Bunn, C.W. (1948), Chemical Crystallography, Clarendon Press, London; Klug, H. P. & Alexander, L. E. (1974), X-Ray Diffraction Procedures).

Generalmente, un error de medición de un ángulo de difracción en un difractograma de rayos X en polvo es aproximadamente más o menos 0.2° 2-theta, y tal grado de error de medición debe tenerse en cuenta al considerar el patrón de difracción de rayos X en polvo en el Figuras y al leer los datos contenidos en las Tablas incluidas en este documento. Adicionalmente, debe entenderse que las intensidades pueden fluctuar dependiendo de las condiciones experimentales y la preparación de la muestra (orientación preferida).

En esta especificación, la forma del compuesto N-(1-(3-fluoropropil)azetidin-3-il)-6-((6S,8R)-8-metil-7-(2,2,2-trifluoroetil)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)piridin-3-amina (de aquí en adelante, el Compuesto X) se encontró inicialmente como un sólido amorfo. Subsecuentemente se han producido formas polimórficas cristalinas útiles del compuesto usando las condiciones descritas en la sección experimental.

Por lo tanto, en un aspecto adicional de la especificación se proporciona la Forma polimórfica A del Compuesto X.

Esta forma polimórfica puede caracterizarse porque proporciona al menos uno de los siguientes valores de 20 medidos usando radiación CuKa: 15.5, 18.6 y 24.6°.

La Forma polimórfica A del Compuesto X se caracteriza por proporcionar un patrón de difracción de rayos X en polvo, sustancialmente como se muestra en la Figura 1.

Diez picos de difracción de rayos X en polvo para esta forma polimórfica [Ángulo 2-theta (20), Intensidad (%)] son:

21.1 (100%), 20.8 (54.3%), 14.6 (41.9%), 18.6 (41.6%), 12.3 (38.9%), 15.5 (34.1%), 24.6 (31.3%), 15.8 (30.6%), 13.4 (23.2%) y 19.0° (21.7%).

De acuerdo con la presente especificación, se proporciona la Forma polimórfica A del Compuesto X, que tiene un patrón de difracción de rayos X en polvo con al menos un pico específico a aproximadamente 2-theta = 15.5°.

De acuerdo con la presente especificación, se proporciona la Forma polimórfica A del Compuesto X, que tiene un patrón de difracción de rayos X en polvo con al menos un pico específico a aproximadamente 2-theta = 18.6°.

De acuerdo con la presente especificación, se proporciona la Forma polimórfica A del Compuesto X, que tiene un patrón de difracción de rayos X en polvo con al menos un pico específico a aproximadamente 2-theta = 24.6°.

De acuerdo con la presente especificación, se proporciona la Forma polimórfica A del Compuesto X, que tiene un patrón de difracción de rayos X en polvo con al menos dos picos específicos a aproximadamente 2-theta = 15.5° y 18.6°.

De acuerdo con la presente especificación, se proporciona la Forma polimórfica A del Compuesto X, que tiene un patrón de difracción de rayos X en polvo con picos específicos a aproximadamente 2-theta = 21.1, 20.8, 14.6, 18.6, 12.3, 15.5, 24.6, 15.8, 13.4 y 19.0°.

De acuerdo con la presente especificación, se proporciona la Forma polimórfica A del Compuesto X que tiene un patrón de difracción de rayos X en polvo sustancialmente igual al patrón de difracción de rayos X en polvo que se muestra en la Figura 1.

De acuerdo con la presente especificación, se proporciona la Forma polimórfica A proporcionada del Compuesto X, que tiene un patrón de difracción de rayos X en polvo con al menos un pico específico en 2-theta = 15.5° más o menos 0.2° 2-theta.

De acuerdo con la presente especificación, se proporciona una Forma polimórfica A del Compuesto X, que tiene un patrón de difracción de rayos X en polvo con al menos un pico específico en 2-theta = 18.6° más o menos 0.2° 2-theta.

De acuerdo con la presente especificación, se proporciona la Forma polimórfica A del Compuesto X, que tiene un patrón de difracción de rayos X en polvo con al menos dos picos específicos en 2-theta = 15.5° y 18.6° en donde dichos valores pueden ser más o menos 0.2° 2-theta.

De acuerdo con la presente especificación, se proporciona una Forma polimórfica A del Compuesto X, que tiene un patrón de difracción de rayos X en polvo con picos específicos en 2-theta = 21.1, 20.8, 14.6, 18.6, 12.3, 15.5, 24.6, 15.8, 13.4 y 19.0° en donde dicho los valores pueden ser más o menos 0.2° 2-theta.

De acuerdo con la presente especificación, se proporciona la Forma polimórfica E del Compuesto X. Esta forma polimórfica puede caracterizarse porque proporciona al menos uno de los siguientes valores de 20 medidos usando radiación CuKa: 14.8, 16.2 y 17.9°.

La Forma polimórfica E del Compuesto X se caracteriza por proporcionar un patrón de difracción de rayos X en polvo, sustancialmente como se muestra en la Figura 8.

Diez picos de difracción de rayos X en polvo para esta forma polimórfica [Ángulo 2-theta (20), Intensidad (%)] son: 17.9 (100%), 14.8 (67.1%), 20.9 (60.1%), 23.1 (55.4%), 16.2 (49.3%), 20.0 (35.6%), 18.2 (32.9%), 12.3 (30.4%), 22.2 (19.0%) y 13.9° (18.9%).

De acuerdo con la presente especificación, se proporciona la Forma polimórfica E del Compuesto X, que tiene un patrón de difracción de rayos X en polvo con al menos un pico específico a aproximadamente 2-theta = 17.9°.

De acuerdo con la presente especificación, se proporciona la Forma E polimórfica del Compuesto X, que tiene un patrón de difracción de rayos X en polvo con al menos un pico específico a aproximadamente 2-theta = 14.8°.

De acuerdo con la presente especificación, se proporciona la Forma E polimórfica del Compuesto X, que tiene un patrón de difracción de rayos X en polvo con al menos un pico específico a aproximadamente 2-theta = 17.9°.

De acuerdo con la presente especificación, se proporciona la Forma E polimórfica del Compuesto X, que tiene un patrón de difracción de rayos X en polvo con al menos dos picos específicos a aproximadamente 2-theta = 17.9° y 14.8°.

De acuerdo con la presente especificación, se proporciona la Forma E polimórfica del Compuesto X, que tiene un patrón de difracción de rayos X en polvo con picos específicos a aproximadamente 2-theta = 17.9, 14.8, 20.9, 23.1, 16.2, 20.0, 18.2, 12.3, 22.2 y 13.9°.

De acuerdo con la presente especificación, se proporciona la Forma E polimórfica del Compuesto X que tiene un patrón de difracción de rayos X en polvo sustancialmente igual al patrón de difracción de rayos X en polvo que se muestra en la Figura 8.

De acuerdo con la presente especificación, se proporciona la Forma E polimórfica del Compuesto X, que tiene un patrón de difracción de rayos X en polvo con al menos un pico específico en 2-theta = 17.9° más o menos 0.2° 2-theta.

De acuerdo con la presente especificación, se proporciona una Forma E polimórfica del Compuesto X, que tiene un patrón de difracción de rayos X en polvo con al menos un pico específico en 2-theta = 14.8° más o menos 0.2° 2-theta.

De acuerdo con la presente especificación, se proporciona la Forma E polimórfica del Compuesto X, que tiene un patrón de difracción de rayos X en polvo con al menos dos picos específicos en 2-theta = 17.9° y 14.8° en donde dichos valores pueden ser más o menos 0.2° 2-theta.

De acuerdo con la presente especificación, se proporciona una Forma E polimórfica del Compuesto X, que tiene un patrón de difracción de rayos X en polvo con picos específicos en 2-theta = 17.9, 14.8, 20.9, 23.1, 16.2, 20.0, 18.2, 12.3, 22.2 y 13.9° en donde dicho los valores pueden ser más o menos 0.2° 2-theta.

Se debe entender que un profármaco farmacéuticamente aceptable adecuado de un compuesto de la Fórmula (I) también forma un aspecto de la presente especificación. En consecuencia, los compuestos de la especificación se pueden administrar en forma de un profármaco, que es un compuesto que se metaboliza en el cuerpo humano o animal para liberar un compuesto de la especificación. Se puede utilizar un profármaco para alterar las propiedades físicas y/o las propiedades farmacocinéticas un compuesto de la especificación. Se puede formar un profármaco cuando el compuesto de la especificación contiene un grupo o sustituyentes adecuado al cual se puede unir un grupo que modifica las propiedades. Los ejemplos de profármacos incluyen derivados de tipo éster o amida escindibles in vivo de los compuestos de Fórmula (I).

En consecuencia, un aspecto de la presente especificación incluye aquellos compuestos de Fórmula (I) como se han definido anteriormente en el presente documento de los que se puede disponer mediante síntesis orgánica y de los que se puede disponer dentro del cuerpo humano o animal mediante la escisión de un profármaco de los mismos. En consecuencia, la presente especificación incluye aquellos compuestos de la Fórmula (I) que se producen mediante medios de síntesis orgánica y también compuestos tales que se producen en el cuerpo humano o animal mediante el metabolismo de un compuesto precursor, es decir un compuesto de la Fórmula (I) puede ser un compuesto producido mediante síntesis o un compuesto producido por el metabolismo.

Un profármaco farmacéuticamente aceptable adecuado de un compuesto de la Fórmula (I) es uno que, basándose en el criterio médico razonable, se considera adecuado para la administración al cuerpo humano o animal sin actividades farmacológicas indeseables y sin una toxicidad excesiva.

Se han descrito diversas formas de un profármaco, por ejemplo, en los siguientes documentos:

a) Methods in Enzymology, Vol. 42, págs. 309-396, editatdo por K. Widder, et al. (Academic Press, 1985); b) Design of Pro-drugs, editado por H. Bundgaard, (Elsevier, 1985);

c) A Textbook of Drug Design and Development, editado por Krogsgaard-Larsen y H. Bundgaard, Capítulo 5 "Design and Application of Pro-drugs", de H. Bundgaard págs. 113-191 (1991);

d) H. Bundgaard, Advanced Drug Delivery Reviews, 8, 1-38 (1992);

e) H. Bundgaard, et al., Journal of Pharmaceutical Sciences, 77, 285 (1988);

f) N. Kakeya, et al., Chem. Pharm. Bull., 32, 692 (1984);

g) T. Higuchi y V. Stella, "Pro-Drugs as Novel Delivery Systems", A.C.S. Symposium Series, Volumen 14; y h) E. Roche (editor), "Bioreversible Carriers in Drug Design", Pergamon Press, 1987.

Los efectos in vivo de un compuesto de Fórmula (I) pueden ser ejercidos en parte por uno o más metabolitos que se forman dentro del cuerpo humano o animal después de la administración de un compuesto de Fórmula (I). Como se indicó anteriormente, los efectos in vivo de un compuesto de Fórmula (I) también pueden ejercerse mediante el metabolismo de un compuesto precursor (un profármaco).

Para evitar dudas, se entiende que cuando se califica en esta especificación un grupo con “definido anteriormente en el presente documento” o “definido en el presente documento” el grupo mencionado abarca la definición que se produce en primer lugar y más amplia, así como también todas y cada una de las definiciones alternativas para ese grupo.

Otro aspecto de la presente especificación proporciona un proceso para preparar un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. Las siguientes variantes de proceso representativas ilustran un proceso adecuado en el que, a menos que se indique otra cosa, A, D, E, G, Q y R1 a R12 tienen cualquiera de los significados definidos anteriormente. Los materiales de partida necesarios se pueden obtener mediante procedimientos estándar de química orgánica. La preparación de tales materiales de partida se describe junto con las siguientes variantes de proceso representativas y dentro de los Ejemplos adjuntos. Alternativamente, los materiales de partida necesarios se pueden obtener mediante procedimientos análogos a los ilustrados que están dentro de la experiencia normal de un químico orgánico.

Los compuestos de Fórmula (I) donde R13 es H pueden estar formados por, por ejemplo:

a) eterificación de un compuesto arilo o heteroarilo adecuado de Fórmula (II), donde L es, por ejemplo, un halógeno (tal como yodo), o un grupo trifluorometanosulfonilo (triflato), o un ácido o éster borónico, con un alcohol de Fórmula (III) utilizando un catalizador metálico adecuado (por ejemplo, Precatalizador de tercera Generación RockPhos) en un disolvente adecuado (tal como tolueno o DME) en presencia de una base adecuada (tal como carbonato de cesio) y una temperatura adecuada (tal como 90-120°C); eliminación del grupo protector (PG) en la Fórmula (II), tal como THP, utilizando condiciones ácidas (tales como HCl anhidro en 1,4-dioxano) a temperatura adecuada (tal como 10-30°C).

b) aminación de un compuesto arilo o heteroarilo adecuado de Fórmula (II), donde L es, por ejemplo, un halógeno (tal como yodo), o un grupo trifluorometilsulfoniloxi (triflato), con una amina de Fórmula (IV) usando un catalizador metálico adecuado (por ejemplo, BrettPhos o RuPhos, y Pd2(dba)3) en un disolvente adecuado (por ejemplo, 1,4-dioxano) en presencia de una base adecuada (por ejemplo, carbonato de cesio, tert-butóxido de sodio o LiHMDS) a un temperatura adecuada (tal como 90-130°C); eliminación del grupo protector (PG), tal como THP, usando condiciones ácidas (tal como HCl anhidro en 1,4-dioxano) a temperatura adecuada (tal como 10-30°C).

c) alquilación de un compuesto de fenol o hidroxilo heteroarilo adecuado de Fórmula (V) con un alcohol de Fórmula (111) mediante reacción de Mitsunobu usando reactivos apropiados (tales como trifenilfosfina y diisopropil (E)-diazeno-1,2-dicarboxilato) en un solvente adecuado (tal como THF); eliminación del grupo protector (PG), tal como Th P, en la Fórmula (VII), usando condiciones ácidas (tal como HCl anhidro en 1,4-dioxano) a temperatura adecuada (tal como 10-30°C).

d) alquilación de un compuesto adecuado de anilina o heteroarilamina o fenol o hidroxiloheteroarilo de Fórmula (VI) con un compuesto de Fórmula (VII) donde LG es un grupo saliente (tal como haluro o mesilato), usando bases suaves (por ejemplo DIPEA) en un disolvente adecuado (tal como DMF o MeCN); eliminación del grupo protector (PG), tal como THP, usando condiciones ácidas (tal como HCl anhidro en 1,4-dioxano) a temperatura adecuada (tal como 10-30°C).

e) Alquilación de aminas de Fórmula (VIII) con un grupo alquilante adecuado de Fórmula (IX) (en donde LG puede ser haluro, como bromuro, yoduro o cloruro, o puede ser algún otro grupo saliente adecuado, tal como mesilato) en un solvente (tal como DMF) en presencia de una base adecuada (tal como DIPEA) a una temperatura adecuada (tal como 10-30°C).

(VIII) (IX)

Los compuestos de fórmula (II) donde R6 no es igual a hidrógeno pueden prepararse, por ejemplo, a partir de compuestos de fórmula (X) por oxidación con un reactivo adecuado (por ejemplo bis(trifluoracetoxi)-yodobenceno) y tratamiento con un reactivo organometálico (por ejemplo bromuro de metilmagnesio cuando R6 es metil) en un disolvente adecuado (por ejemplo, THF) a baja temperatura (típicamente -80 a -60°C).

Los compuestos de fórmula (X) pueden prepararse, por ejemplo, mediante reacción de una anilina de fórmula (XI) con reactivos adecuados para efectuar la construcción de un indazol tal como nitrito inorgánico (tal como nitrito de sodio) en ácido orgánico (tal como ácido propiónico) a baja temperatura (típicamente -20 a 0°C) o alternativamente un anhídrido de ácido (tal como anhídrido acético) en presencia de una base adecuada (tal como el acetato de potasio) junto con nitrito orgánico (tal como nitrito de isopentilo) opcionalmente en la presencia de un éter corona (tal como 18-corona-6) en un solvente adecuado (tal como cloroformo) a una temperatura adecuada (tal como 70°C).

Los compuestos de fórmula (XI) pueden prepararse por reacción de un compuesto de fórmula (XII) con un compuesto de fórmula (XIII) bajo condiciones conocidas en la técnica como adecuadas para reacciones de Pictet-Spengler, tales como en presencia de ácido (tal como ácido acético) y en un disolvente adecuado (por ejemplo, tolueno o agua) y una temperatura adecuada (tal como 60-100°C).

Los compuestos de fórmula (XII) pueden prepararse mediante interconversiones de grupos funcionales conocidas en la técnica, por ejemplo, aminaciones de haluros de fórmula (XIV) a partir de haluros de arilo (tales como bromuro) usando una amina protegida (tal como difenilmetanimina) en presencia de un catalizador y ligando adecuados (tal como bis(dibencilidenacetona)paladio (0) y rac-2,2'-bis(difenilfosfino)-1,1'-binaftilo) en presencia de una base adecuada (tal como tert-butóxido de sodio) en un solvente adecuado (tal como tolueno) a una temperatura adecuada (tal como 80-100°C).

Los compuestos de fórmula (XIV) pueden prepararse mediante:

a) reacción de un compuesto de fórmula (XV) con un aldehído de fórmula (XVI), en un disolvente adecuado (por ejemplo, THF) en presencia de un agente reductor adecuado (tal como triacetoxiborohidruro de sodio) y a una temperatura adecuada (tal como 20-30°C);

b) (i) reacción de un compuesto de fórmula (XV) con un ácido de fórmula (XVII) bajo condiciones estándar de formación de enlaces amida (por ejemplo, en presencia de un reactivo de acoplamiento de amida (tal como HATU) y una base adecuada (tal como trietilamina) en un disolvente adecuado (tal como DMF), seguido de (ii) reducción del enlace amida resultante usando un agente reductor adecuado (tal como borano) en un disolvente adecuado (tal como THF) a una temperatura adecuada (tal como como 60-70°C);

c) reacción de un compuesto de fórmula (XV) con un compuesto de fórmula (XVIII), en donde LG es un grupo saliente adecuado (por ejemplo, un átomo de halógeno (tal como bromo o cloro) o triflato), en presencia de un base (tal como diisopropiletilamina) en un solvente adecuado (por ejemplo DCM o dioxano) y a una temperatura adecuada (tal como 20-85°C).

Los compuestos de fórmula (XV) pueden prepararse mediante un número de métodos conocidos en la técnica para la síntesis de aminas quirales notablemente;

a) Apertura de anillo de sulfamidatos de Fórmula (XIX) de acuerdo con el esquema que se muestra a continuación.

Etapa 1: alquilación, por ejemplo n-butil-litio/THF/-78°C a 0°C

Etapa 2: eliminación de grupos de protección, por ejemplo HCl anhidro en MeOH/DCM, t.a.

b) Alquilación por transferencia de fase en presencia de un catalizador quiral (tal como (bromuro de 1S, 2S, 4S, 5R)-2 -((R)-(aliloxi) (quinolin-4-il)metil)-1-(antracen-9-ilmetil)-5-vinilquinuclidin-1-ium) seguido de manipulación del grupo funcional.

Etapa 1: alquilación, por ejemplo Catalizador quiral, tolueno/KOH, 0°C

Etapa 2: Interconversión de grupo funcional.

Los compuestos de fórmula (XII) pueden prepararse directamente por:

a) reacción de un compuesto de fórmula (XX) con un aldehído de fórmula (XVI), en un disolvente adecuado (por ejemplo, THF) en presencia de un agente reductor adecuado (tal como triacetoxiborohidruro de sodio) y a una temperatura adecuada (tal como 20-30°C);

b) (i) reacción de un compuesto de fórmula (XX) con un ácido de fórmula (XVII) bajo condiciones estándar de formación de enlaces amida (por ejemplo, en presencia de un reactivo de acoplamiento de amida (tal como HATU) y una base adecuada (tal como trietilamina) en un disolvente adecuado (tal como DMF), seguido de (ii) reducción del enlace amida resultante usando un agente reductor adecuado (tal como borano) en un disolvente adecuado (tal como THF) a una temperatura adecuada (tal como como 60-70°C);

c) reacción de un compuesto de fórmula (XX) con un compuesto de fórmula (XIII), en donde LG es un grupo saliente adecuado (por ejemplo, un átomo de halógeno (tal como bromo o cloro) o triflato), en presencia de un base (tal como diisopropiletilamina) en un solvente adecuado (por ejemplo DCM o dioxano) y a una temperatura adecuada (tal como 20-85°C).

Los compuestos de Fórmula (XX) pueden prepararse a través de una secuencia de reacción a partir de una 3-bromo-2-metil-anilina protegida como se muestra a continuación.

Etapa 1: alquilación, por ejemplo n-butil-litio/THF/-78°C a t.a.

Etapa 2: eliminación de grupos de protección de aminas, por ejemplo HCl anhidro en MeOH/DCM, t.a.

Etapa 3: eliminación de grupos de protección de anilina, por ejemplo reflujo en hidroxilamina.

Los compuestos de Fórmula (V) se pueden preparar a través de una secuencia que implica la ciclización de Pictet-Spengler de un compuesto de Fórmula (XIII) que contiene éster de boro como se describió anteriormente para dar un compuesto de Fórmula (XXI). Un compuesto de Fórmula (XXI) puede oxidarse a un compuesto de Fórmula (V) usando un oxidante adecuado (tal como el peróxido de hidrógeno) en presencia de una base adecuada (tal como el hidróxido de sodio) en un disolvente adecuado (tal como THF).

Los compuestos de Fórmula (VI, Q es NH) pueden prepararse a través de una secuencia que implica la ciclización de Pictet-Spengler de un compuesto que contiene nitro de Fórmula (XIII) como se describió anteriormente para dar un compuesto de Fórmula (XXII). Un compuesto de Fórmula (XXII) puede reducirse a un compuesto de Fórmula (VI) usando condiciones adecuadas de reducción de nitro (tal como la hidrogenación) en presencia de un catalizador adecuado (tal como dióxido de platino) en un disolvente adecuado (tal como metanol).

Los compuestos de Fórmula (VIII), donde Q es O, pueden prepararse a partir de haluros de arilo de Fórmula (II) y 3-hidroxiazetidina-1-carboxilato de tert-butilo usando un catalizador metálico adecuado (tal como Precatalizador de 3a Generación RockPhos) en un solvente adecuado (tal como tolueno o DME) en presencia de una base adecuada (tal como carbonato de cesio) a una temperatura adecuada (tal como 90-120°C); El grupo protector Boc puede eliminarse posteriormente utilizando un ácido (tal como ácido trifluoroacético) en un disolvente adecuado (tal como DCM). Los compuestos de Fórmula (VIII) (Q es O) también pueden prepararse a partir de un compuesto de Fórmula (V) bajo condiciones conocidas en la técnica como adecuadas para reacciones de Mitsunobu usando reactivos apropiados (tales como trifenilfosfina y diisopropil (E)-diazeno-1,2-dicarboxilato) con 3-hidroxiazetidina-1-carboxilato de tert-butilo en un disolvente adecuado (tal como THF).

Los compuestos de Fórmula (VIII), donde Q es NH, pueden prepararse a partir de haluros de arilo de Fórmula (II) y 3-aminoazetidina-1-carboxilato de tert-butilo usando un catalizador metálico adecuado (por ejemplo, RuPhos o BrettPhos y Pd2(dba)3) en un disolvente adecuado (por ejemplo, 1,4-dioxano) en presencia de una base adecuada (por ejemplo, carbonato de cesio, tert-butóxido de sodio o LiHMDS) a una temperatura adecuada (tal como 90-130°C); El grupo protector Boc puede eliminarse posteriormente usando un ácido (tal como ácido trifluoroacético) en un disolvente adecuado (tal como DCM).

Los compuestos de Fórmula (III) pueden prepararse mediante:

a) Reacción de alquilación entre 3-hidroxiazetidina y compuestos de Fórmula (IX) donde LG, por ejemplo, un halógeno u otro grupo saliente (tal como grupo mesilo) en presencia de una base adecuada, tal como carbonato de cesio, en un disolvente adecuado, tal como acetonitrilo, a una temperatura adecuada, tal como 120°C, y en un recipiente adecuado, tal como un tubo sellado.

b) Reacción de aminación reductora entre 3-hidroxiazetidina y compuestos de aldehído o cetona de Fórmula (XXIII) en presencia de un reactivo reductor adecuado, tal como triacetoxiborohidruro de sodio, en un disolvente adecuado, tal como DCM, a una temperatura adecuada, tal como 10 -30°C.

(XXIII)

Los compuestos de fórmula (IV) pueden prepararse mediante:

a) (i) Reacción de alquilación entre el compuesto de Fórmula (XXIV), donde PG es un grupo protector, por ejemplo, Boc, y los compuestos de Fórmula (IX) donde LG es, por ejemplo, un halógeno u otro grupo saliente, tal como mesilato, en presencia de una base adecuada, tal como DIPEA, en un disolvente adecuado, tal como 1,4-dioxano, a una temperatura adecuada, tal como 10-30°C. (ii) Eliminación del grupo de protección bajo condiciones adecuadas, tales como condiciones ácidas para la eliminación de Boc.

b) (i) Reacción de aminación reductora entre compuestos de Fórmula (XXIV) y compuestos de aldehído o cetona de Fórmula (XXIII) en presencia de un reactivo reductor adecuado, como triacetoxiborohidruro de sodio, en un disolvente adecuado, tal como DCM, en un temperatura adecuada, tal como 10-30°C. (ii) Eliminación del grupo de protección bajo condiciones adecuadas, tales como condiciones ácidas para la eliminación de Boc.

Debe entenderse que también son posibles otras permutaciones de las etapas del proceso en las variantes del proceso descritas anteriormente.

También se apreciará que, en algunas de las reacciones mencionadas anteriormente, puede ser necesario o deseable proteger cualquier funcionalidad sensible en los compuestos. Los expertos en la técnica conocen los casos en que la protección es necesaria o deseable, y los métodos adecuados para la protección. Los grupos protectores convencionales pueden usarse de acuerdo con la práctica estándar (para ilustración, véase T. W. Green, Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley and Sons, 1991). Por lo tanto, si los reactivos incluyen grupos tales como amino, carboxi o hidroxi, puede ser deseable proteger el grupo en algunas de las reacciones mencionadas en este documento.

Un grupo protector adecuado para un grupo amino o alquilamino es, por ejemplo, un grupo acilo, por ejemplo un grupo alcanoilo tal como acetilo, un grupo alcoxicarbonilo, por ejemplo un grupo metoxicarbonilo, etoxicarbonilo o tbutoxicarbonilo, un grupo arilmetoxicarbonilo, por ejemplo benciloxicarbonilo, o un grupo aroilo, por ejemplo benzoilo. Las condiciones de desprotección para los grupos protectores anteriores varían necesariamente con la selección del grupo protector. Así, por ejemplo, un grupo acilo tal como un grupo alcanoilo o alcoxicarbonilo o un grupo aroilo puede eliminarse, por ejemplo, por hidrólisis con una base adecuada tal como un hidróxido de metal alcalino, por ejemplo hidróxido de litio o sodio. Alternativamente, un grupo alcoxicarbonilo tal como un grupo t-butoxicarbonilo puede eliminarse, por ejemplo, mediante tratamiento con un ácido adecuado tal como ácido clorhídrico, sulfúrico, fórmico, fosfórico o trifluoroacético, y un grupo arilmetoxicarbonilo tal como un grupo benciloxicarbonilo puede eliminarse, para por ejemplo, por hidrogenación sobre un catalizador tal como paladio sobre carbono, o por tratamiento con un ácido de Lewis, tal como tris(trifluoroacetato) de boro. Un grupo protector alternativo adecuado para un grupo amino primario es, por ejemplo, un grupo ftaloilo, que puede eliminarse mediante tratamiento con una alquilamina, por ejemplo dimetilaminopropilamina o hidrazina.

Un grupo protector adecuado para un grupo hidroxilo es, por ejemplo, un grupo acilo, por ejemplo un grupo alcanoilo tal como acetilo, un grupo aroilo, por ejemplo benzoilo, un grupo arilmetilo, por ejemplo bencilo, o un trialquilo o diarilalquilsilano, tal como TBDMS o TBDPS. Las condiciones de desprotección para los grupos protectores anteriores variarán necesariamente con la selección del grupo protector. Así, por ejemplo, un grupo acilo tal como un grupo alcanoilo o un grupo aroilo puede eliminarse, por ejemplo, por hidrólisis con una base adecuada tal como un hidróxido de metal alcalino, por ejemplo hidróxido de litio o sodio. Alternativamente, un grupo arilmetilo tal como un grupo bencilo puede eliminarse, por ejemplo, por hidrogenación sobre un catalizador tal como paladio sobre carbono.

Un grupo protector adecuado para un grupo carboxi es, por ejemplo, un grupo esterificante, por ejemplo un grupo metilo o etilo que se puede eliminar, por ejemplo, por hidrólisis con una base tal como hidróxido de sodio, o por ejemplo un grupo t-butilo que puede eliminarse, por ejemplo, mediante tratamiento con un ácido, tal como ácido trifluoroacético, o por ejemplo un grupo bencilo que puede eliminarse, por ejemplo, mediante hidrogenación sobre un catalizador tal como paladio sobre carbono.

Los grupos protectores pueden eliminarse en cualquier etapa conveniente de la síntesis usando técnicas convencionales bien conocidas en la técnica química.

Algunos de los intermedios definidos en este documento son nuevos y se proporcionan como características adicionales de la especificación.

En una realización, se proporciona un compuesto de Fórmula (XXV), o una sal del mismo:

en donde L es bromo, cloro, yodo o trifluorometanosulfonilo.

En una realización adicional, L es bromo.

Ensayos biológicos

Los siguientes ensayos se usaron para medir los efectos de los compuestos de la presente especificación.

Ensayo de unión a ERa

La capacidad de los compuestos para unirse al dominio de unión al receptor de estrógeno alfa ligando aislado (ER alfa - LBD (GST)) se evaluó en ensayos de competición utilizando un punto final de detección de transferencia de energía por resonancia en fluorescencia resuelta en el tiempo LanthaScreen™ (TR-FRET). Para el punto final de TR-FRET LanthaScreen, se usó un fluoróforo adecuado (Fluormone ES2, ThermoFisher, código de producto P2645) y dominio de unión al ligando alfa del receptor de estrógeno humano recombinante, los residuos 307-554 (expresados y purificados internamente) para medir la unión del compuesto. El principio del ensayo es que ER alfa -l Bd (GST) se agrega a un ligando fluorescente para formar un complejo receptor/fluoróforo. Se usa un anticuerpo anti-GST marcado con terbio (código de producto PV3551) para marcar indirectamente el receptor uniéndose a su etiqueta GST, y la unión competitiva se detecta por la capacidad del compuesto de prueba para desplazar el ligando fluorescente, lo que da como resultado una pérdida de señal de TR-FRET entre el anticuerpo Tb-anti-GST y el trazador. El ensayo se realizó de la siguiente manera con todas las adiciones de reactivos llevadas a cabo utilizando la estación de trabajo microfluídica Beckman Coulter BioRAPTR FRD:

1. Dispensar acústicamente 120 nL del compuesto de prueba en placas de ensayo negras de 384 pocillos de bajo volumen.

2. Preparar 1x ER alpha -LBD/Tb-antiGST Ab en el regulador de detección ES2 e incubar durante 15 minutos.

3. Dispensar 6 pL del reactivo Ab de 1x AR-LBD/Tb-anti-GST en cada pocilio de la placa de ensayo seguido de 6 pL de reactivo de fluoróforo en cada pocillo de la placa de ensayo.

4. Cubrir la placa de ensayo para proteger los reactivos de la luz y la evaporación, e incubar a temperatura ambiente durante 4 horas.

5. Excitar a 337 nm y medir la señal de emisión fluorescente de cada pocillo a 490 nm y 520 nm usando el BMG PheraSTAR.

Los compuestos se dosificaron directamente de una microplaca de fuente de compuesto que contiene un compuesto diluido en serie (4 pocillos que contienen 10 mM, 0.1 mM, 1 mM y 10 nM de compuesto final respectivamente) a una microplaca de ensayo usando el Labcyte Echo 550. El Echo 550 es un manipulador de líquidos que utiliza tecnología acústica para realizar transferencias directas de microplacas a microplacas de soluciones de compuestos DMSO y el sistema puede programarse para transferir múltiples volúmenes pequeños de nL de compuesto de los diferentes pocillos de la placa fuente para proporcionar la dilución en serie deseada del compuesto en el ensayo el cual es luego rellenado para normalizar la concentración de DMSO en todo el rango de dilución.

En total, se agregaron 120 nL de compuesto más DMSO a cada pocillo y los compuestos se probaron en un formato de respuesta de concentración de 12 puntos en un rango de concentración de compuesto final de 10, 2.917, 1.042, 0.2083, 0.1, 0.0292, 0.0104, 0.002083, 0.001, 0.0002917, 0.0001042 y 0.00001 pM respectivamente. Los datos de respuesta a la dosis de TR-FRET obtenidos con cada compuesto se exportaron a un paquete de software adecuado (tal como Origin o Genedata) para realizar el análisis de ajuste de curvas. La unión alfa ER competitiva se expresó como un valor IC50. Esto se determinó mediante el cálculo de la concentración de compuesto que se requería para dar una reducción del 50% en la unión del compuesto marcador a ER alfa-LBD.

Ensayo de subregulación de ER MCF-7

La capacidad de los compuestos para subregular los números del receptor de estrógenos (ER) se evaluó en un ensayo de inmunofluorescencia basada en células usando la línea celular de mama MCF-7 de carcinoma ductal humano. Las células MCF-7 se revivieron directamente de un criovial (aproximadamente 5 x 106 células) en medio de ensayo (medio de Eagle modificado de Dulbecco libre de fenol rojo (DMEM); Sigma D5921) que contenía L-glutamina 2 mM y 5% (v/v) de carbón vegetal/suero de ternera fetal tratado con dextrano. Las células se inyectaron una vez usando una aguja de calibre ancho estéril de 18G x 1.5 pulgadas (1.2 x 40 mm) y la densidad celular se midió usando un contador Coulter (Beckman). Las células se diluyeron adicionalmente en medio de ensayo a una densidad de 3.75 * 104 células por ml y se añadieron 40 pl por pocillo a placas de 384 pocillos de fondo transparente, negras, tratadas con cultivo de tejidos (Costar, No. 3712) usando un Thermo Scientific Matrix WellMate o Termo Multidrop. Después de la siembra celular, las placas se incubaron durante la noche a 37°C, 5% de CO2 (incubadora de carrusel Liconic). Los datos de prueba se generaron usando el reformateador compuesto LabCyte Echo™ modelo 555 que forma parte de una celda de trabajo automatizada (celda de trabajo integrada Echo 2). Se usaron soluciones madre compuestas (10 mM) de los compuestos de prueba para generar una placa de dosificación de compuesto de 384 pocillos (Labcyte P-05525-CV1). Se dispensaron 40 pL de cada una de las soluciones madre de compuesto 10 mM en el primer pocillo del cuadrante y luego se realizaron diluciones en serie 1:100 en DMSO usando una unidad de manejo de líquidos Hydra II (MATRIX UK) para dar 40 pL de compuesto diluido en los pocillos del cuadrante 2 (0.1 mM), 3 (1 pM) y 4 (0.01 pM), respectivamente. Se agregaron 40 pL de DMSO a los pocillos en la fila P de la placa fuente para permitir la normalización de DMSO en todo el rango de dosis. Para dosificar los pocillos de control, se agregaron 40 pL de DMSO a la fila O1 y se agregaron 40 pL de fulvestrant 100 pM en DMSO a la fila O3 en la placa fuente del compuesto.

El Echo utiliza tecnología acústica para realizar transferencias directas de microplacas a microplacas de soluciones de compuestos DMSO a las placas de ensayo. El sistema se puede programar para transferir volúmenes tan bajos como 2.5 nL en incrementos múltiples entre microplacas y, al hacerlo, genera una dilución en serie del compuesto en la placa de ensayo que luego se rellena para normalizar la concentración de DMSO en todo el rango de dilución. Los compuestos se dispensaron en las placas celulares con una placa fuente compuesta preparada como anteriormente, produciendo un rango de dosis duplicado de 12 pM a 3 pM de 12 puntos con diluciones de 3 veces y una dilución final de 10 veces usando la celda de trabajo Integrated Echo 2. Los pocillos de control de señal máxima se dosificaron con DMSO para dar una concentración final de 0.3%, y los pocillos de control de señal mínima se dosificaron con fulvestrant para dar una concentración final de 100 nM en consecuencia. Las placas se incubaron adicionalmente durante 18-22 horas a 37°C, 5% de CO2 y luego se fijaron mediante la adición de 20 pL de solución de formaldehído al 11.1% (v/v) (en solución salina regulada con fosfato (PBS)) dando una concentración final de formaldehído del 3.7% (v/v). Las células se fijaron a temperatura ambiente durante 20 minutos antes de lavarse dos veces con 250 pL de PBS/Proclin (PBS con un conservante Biocide) usando un lavaplatos BioTek, luego se agregaron 40 pL de PBS/Proclin a todos los pocillos y las placas se almacenaron a 4°C. El método de fijación descrito anteriormente se realizó en la celda de trabajo Integrated Echo 2. La inmunotinción se realizó usando una celda de trabajo automática AutoElisa. El PBS/Proclin se aspiró de todos los pocillos y las células se permeabilizaron con 40 pL de PBS que contenía Tween™ 20 al 0.5% (v/v) durante 1 hora a temperatura ambiente. Las placas se lavaron tres veces en 250 pL de PBS/Tween 20 al 0.05% (v/v) con Proclin (PBST con un conservante Biocide) y luego 20 pL de anticuerpo monoclonal de conejo ERa (SP1) (Thermofisher) 1:1000 en PBS/Tween™/3% (p/v). Se añadió albúmina de suero bovino. Las placas se incubaron durante la noche a 4°C (incubadora de carrusel Liconic) y luego se lavaron tres veces en 250 pL de PBS/Tween™ 20 al 0.05% (v/v) con Proclin (PBST). Las placas se incubaron luego con 20 pl/pocillo de una cabra anti-conejo IgG AlexaFluor 594 o anticuerpo AlexaFluor 488 anti-conejo de cabra (Molecular Probes) con Hoechst a 1:5000 en PBS/Tween™/3% (p/v) Albúmina de suero bovino durante 1 hora a temperatura ambiente. Luego se lavaron las placas tres veces en 250 pl de PBS/Tween™ 20 al 0.05% (v/v) con Proclin (PBST con un conservante Biocide). Se agregaron 20 pL de PBS a cada pocillo y las placas se cubrieron con un sello de placa negra y se almacenaron a 4°C antes de ser leídas. Las placas se leyeron usando un Cellomics Arrayscan que lee la fluorescencia de 594 nm (punto de tiempo de 24 h) o 488 nm (punto de tiempo de 5 h) para medir el nivel del receptor ERa en cada pocillo. La intensidad total media se normalizó para el número de células dando la intensidad total por célula. Los datos se exportaron a un paquete de software adecuado (tal como Origin) para realizar el análisis de ajuste de curvas. La subregulación del receptor ERa se expresó como un valor IC50 y se determinó mediante el cálculo de la concentración de compuesto que se requería para dar una reducción del 50% de la señal de intensidad total máxima promedio.

Se generaron los datos que se muestran en la Tabla A (los datos a continuación pueden ser el resultado de un solo experimento o un promedio de dos o más experimentos):

Tabla A

Ensayo de transferencia Western

La capacidad de los compuestos para subregular el receptor de estrógenos (ER) se evaluó mediante transferencia Western utilizando líneas celulares de cáncer de mama humano (MCF-7 y CAMA-1). Las células se sembraron en placas tratadas con cultivo de tejidos de 12 pocillos a 0,5x106/pocillo en RPMI libre de rojo fenol que contenía L-glutamina 2 mM y suero de ternera fetal tratado con carbón vegetal al 5% (v/v) (F6765, Sigma). Las células se incubaron con compuestos (100 nM) o control de vehículo (DMSO al 0.1%) durante 48 ha 37°C, 5% de CO2 antes de lavar una vez con PBS y someter a lisis con 80 pl de regulador de lisis (Tris/HCl 25 mM, EDTA 3 mM, EGTA 3 mM, NaF 50 mM, ortovanadato de sodio 2 mM, sacarosa 0.27 M, p-glicerofosfato 10 mM, pirofosfato de sodio 5 mM, TritonX-100 al 0.5%, pH 6.8) en hielo.

Las células se rasparon, se sometieron a sonicación y centrifugaron antes de realizar un ensayo de proteínas (kit de proteínas DC Bio-Rad, 500-0116) y hacer muestras a una concentración de proteínas de 1-2 mg/ml en un regulador de lisis que contiene regulador de Muestras 1xLDS (NP0007, Invitrogen) y 1x agente reductor de muestra NuPAGE (NP0009, Invitrogen). Las muestras se hirvieron durante 10 minutos a 95°C y luego se congelaron a -20°C hasta que estuvieron listas para uso.

Se cargaron 10-20 pg de proteína en geles Criterion de 26 pocillos (BioRad 345-0034). Los geles se hicieron funcionar a 125 V durante 1 hora y 25 minutos en regulador en funcionamiento (Tris Base Sigma 24 mM, glicina 192 mM, SDS 3.5 mM, en agua destilada). Los geles se transfirieron luego a 30 V durante 2 horas en regulador de transferencia (Tris 25 mM, glicina 192 mM, metanol al 20% (v/v), pH 8.3, compuesto en agua destilada) sobre membrana de nitrocelulosa. La mancha se tiñó con Ponceau S (P7170, Sigma) y se cortó de acuerdo con marcadores de peso molecular apropiados.

Las membranas se bloquearon durante 1 hora a temperatura ambiente en Marvel al 5% (p/v) en solución salina regulada con fosfato que contenía Tween™ 20 al 0.05% (PBS/Tween). Las transferencias se incubaron luego con anticuerpo monoclonal de conejo anti-ERa (SP1) (Thermofisher) diluido 1:1000 a 4°C durante la noche (con agitación suave) seguido de varios lavados con PBS/Tween. El anticuerpo secundario anti-HRP de conejo (7074, CST) diluido en dilución 1:2000 se incubó durante 2 ha temperatura ambiente (con agitación suave) seguido de varios lavados con PBS/Tween. Todos los anticuerpos se formaron en Marvel al 5% (p/v) en PBS/Tween.

Las inmunotransferencias se desarrollaron usando reactivos quimioluminiscentes Pierce WestDura (Thermo Scientific 34076) y se desarrollaron/cuantificaron en la caja G usando el software Syngene. La subregulación del receptor ERa se normalizó al control del vehículo (subregulación del 0%) y el control fulvestrant 100 nM (subregulación del 100%) se ejecuta dentro del mismo gel.

La Tabla B muestra los datos generados para los Ejemplos seleccionados (los datos a continuación pueden ser el resultado de un solo experimento o un promedio de dos o más experimentos):

Tabla B

Ensayo de hepatocitos humanos

La estabilidad metabólica de los compuestos en los hepatocitos humanos se evaluó utilizando el siguiente protocolo:

1. Preparar soluciones madre 10 mM de compuesto y compuestos de control en disolvente apropiado (DMSO). Colocar el medio de incubación (L-15Medium) en un baño de agua a 37°C y dejar que se caliente durante al menos 15 minutos antes de usarlo.

2. Agregar 80 pL de acetonitrilo a cada pocillo de la placa de pocillos profundos de 96 pocillos (placa de detenedor).

3. En una nueva placa de 96 pocillos, diluir los compuestos de prueba 10 mM y los compuestos de control a 100 pM combinando 198 pL de acetonitrilo y 2 pL de reserva 10 mM.

4. Retirar un vial de hepatocitos humanos criopreservados (menos de -150°C) (10 hepatocitos humanos de donante LiverPool™ obtenidos de Celsis IVT. Chicago, IL (producto no. S01205)) del almacenamiento, asegurándose de que los viales permanezcan a temperaturas criogénicas hasta que se produce el proceso de descongelación. Tan pronto como sea posible, descongelar las células colocando el vial en un baño de agua a 37°C y agitando suavemente los viales. Los viales deben permanecer en baño de agua hasta que todos los cristales de hielo se hayan disuelto y ya no sean visibles. Después de completar la descongelación, rociar el vial con etanol al 70%, transferir el vial a un gabinete de bioseguridad.

5. Abrir el vial y verter el contenido en el tubo cónico de 50 ml que contiene medio de descongelación. Colocar el tubo cónico de 50 ml en una centrífuga y girar a 100 g durante 10 minutos. Al finalizar el centrifugado, aspirar el medio de descongelación y resuspender los hepatocitos en suficiente medio de incubación para producir ~1.5 x 106 células/ml.

6. Usando Cellometer® Vision, hacer recuento de las células y determinar la densidad celular viable. Las células con baja viabilidad (<80% de viabilidad) no son aceptables para uso. Diluir las células con medio de incubación a una densidad celular de trabajo de 1.0 * 106 células viables/ml.

7. Transferir 247.5 pL de hepatocitos a cada pocillo de una placa de cultivo celular de 96 pocillos. Colocar la placa en el agitador de placas Eppendorf Thermomixer Comfort para permitir que los hepatocitos se calienten durante 10 minutos.

8. Agregar 2.5 pL de compuesto de prueba 100 pM o compuestos de control en un pozo de incubación que contenga células, mezclar para lograr una suspensión homogénea a los 0.5 minutos, que cuando se logre, definirá el punto de tiempo de 0.5 minutos. En el tiempo de 0,5 min, transferir 20 pL de la mezcla incubada a los pocillos en una "placa de inactivación" seguido de agitación en vórtex.

9. Incubar la placa a 37°C a 900 rpm en un agitador de placas Eppendorf Thermomixer Comfort. A los 5, 15, 30, 45, 60, 80, 100 y 120 min, mezclar el sistema de incubación y transfiera muestras de 20 pL de mezcla incubada en cada punto de tiempo a los pocillos en una "placa de enfriamiento" separada, seguido de agitación en vórtex.

10. Centrifugar las placas de enfriamiento durante 20 minutos a 4.000 rpm. Se agrupan 4 compuestos diferentes en un casete y se usan para análisis LC/MS/MS.

Todos los cálculos se llevan a cabo utilizando Microsoft Excel. Las áreas de pico se determinaron a partir de cromatogramas de iones extraídos. El aclaramiento intrínseco in vitro (Clint in vitro, en L/min/106 células) del compuesto original se determinó mediante análisis de regresión de la desaparición original de porcentaje de Ln vs. curva del tiempo. El aclaramiento intrínseco in vitro (Clint in vitro, en células L/min/106) se determinó a partir del valor de la pendiente utilizando la siguiente ecuación y se muestra en la Tabla C para ejemplos seleccionados:

Clint =kV/N

in vitro

V = volumen de incubación (0.25 ml);

N = número de hepatocitos por pocillo (0.25 * 106 células).

Tabla C

Propiedades físicas

logD

La lipofilicidad de un fármaco es una propiedad física importante que puede influir en muchas propiedades biológicas y metabólicas de un compuesto, por ejemplo, los perfiles de absorción, distribución, metabolismo, excreción y toxicidad de un compuesto. El coeficiente de distribución entre 1-octanol y regulador acuoso, LogDO/W, a pH 7.4, es la medida más comúnmente utilizada de la lipofilicidad de un compuesto. El método actual para medir LogDO/W se basa en la técnica del matraz de agitación tradicional, pero con la modificación de los compuestos de medición en mezclas de diez a la vez usando UPLC con espectrometría de masas cuantitativa (MS) como método para medir el octanol relativo y concentraciones acuosas La capacidad máxima es de 379 compuestos del proyecto (48 agrupaciones con 10 compuestos, incluidos tres compuestos de QC) por experimento. Se utilizan 2 muestras de control de calidad (QC), ciclobenzaprina con LogD moderada y Nicardipina alta LogD en todas las agrupaciones para garantizar una buena calidad. Se usa una muestra de QC adicional de cafeína, con bajo LogD, y se coloca al azar en todas las ejecuciones. El método ha sido validado completamente contra las metodologías anteriores del matraz de agitación.

Solubilidad

Con el fin de que un compuesto oral alcance el sitio de acción, y con el fin de que ocurra la absorción oral desde el intestino, ese compuesto debe estar en solución y, por lo tanto, los compuestos que poseen una alta solubilidad intrínseca pueden ser más adecuados para uso farmacéutico. La solubilidad termodinámica de un compuesto de investigación se mide bajo condiciones estándar. Es una metodología de matraz de agitación que utiliza soluciones DMSO 10 mM las cuales se suministran desde el almacén de líquidos de Compound Managements y es un método de alto rendimiento. Los compuestos secos se equilibran en un regulador de fosfato acuoso (pH 7.4) durante 24 horas a 25°C, la porción con el compuesto disuelto se separa luego de los restos. Las soluciones se analizan y cuantifican usando UPLC/MS/MS, las muestras de QC se incorporan en cada prueba para asegurar la calidad del ensayo.

Unión a proteínas plasmáticas humanas

La unión a proteínas plasmáticas humanas es un factor clave para controlar la cantidad de fármaco libre (no unido) disponible para unirse al objetivo y, por lo tanto, juega un papel importante en la eficacia observada de los fármacos in vivo. Por lo tanto, los compuestos que poseen una fracción libre alta (niveles bajos de unión a proteínas plasmáticas) pueden exhibir una eficacia mejorada en relación con un compuesto con potencia y niveles de exposición similares. El ensayo de diálisis de equilibrio automatizado en plasma humano utiliza el dispositivo RED (Diálisis de Equilibrio Rápido) y el manejo de muestras. El ensayo generalmente dura entre dos y tres días, incluido el suministro de resultados. Después de diálisis durante 18 horas, se preparan muestras de plasma y regulador para análisis por cromatografía líquida y espectrometría de masas. Generalmente, las muestras se analizan por separado y se cuantifican por LC/MSMS utilizando una curva de calibración de 7 puntos en plasma. Los compuestos se agrupan en agrupaciones de plasma de hasta 10 compuestos. Se usan tres compuestos de referencia en cada ejecución, Propranolol, Metoprolol y Warfarina. La warfarina se usa como control en cada grupo y el propranolol y el metoprolol se colocan aleatoriamente en cada ejecución. Se usa una macro Excel interna para la preparación de archivos para el robot y el espectrómetro de masas y también para los cálculos de fracción no unida (% de fu) en plasma.

La Tabla D muestra los datos para logD, solubilidad y unión a proteínas plasmáticas generadas para los Ejemplos seleccionados (los datos a continuación pueden ser el resultado de un solo experimento o un promedio de dos o más experimentos):

Tabla D

Ensayo de unión a hERG

Los canales de potasio hERG (gen humano relacionado con éter go go) son esenciales para la actividad eléctrica normal en el corazón. La arritmia puede ser inducida por un bloqueo de los canales hERG por un grupo diverso de fármacos. Este efecto colateral es una razón común para el fracaso del fármaco en los ensayos preclínicos de seguridad [Sanguinetti et al., Nature., 2006, 440, 463-469.] y, por lo tanto, la minimización de la actividad de bloqueo del canal hERG puede ser una propiedad deseable para los candidatos a fármacos.

El propósito del ensayo de unión a hERG es evaluar los efectos de los compuestos de prueba en el canal de potasio dependiente de voltaje codificado por el gen humano relacionado con éter go go (hERG) usando una línea celular CHO que se expresa constitutivamente en el sistema de pinza de parche automático Nanion Syncropatch 384PE. El ensayo se realizó de la siguiente manera con todos los reactivos utilizados a temperatura ambiente a menos que se indique otra cosa.

Las preparaciones de reactivos incluyen:

1. Solución interna "IC700" utilizada para perfundir la parte inferior del chip (en mM), KF 130, KCl 20, MgCl2 1, EGTA 10 y HEPES 10, (todos de Sigma-Aldrich; pH 7.2-7.3 usando KOH 10 M, 320 mOsm) y suplementado con 25 □ M escina.

2. Regulador externo y celular (en mM), NaCl 137, KCl 4, HEPES 10, D-glucosa 10, CaCl22, MgCl2 1 (pH 7,4, NaOH) 3. Regulador de "referencia" NMDG utilizado para establecer una línea base estable antes de la adición de los compuestos de prueba, NaCl 80, KCl 4, CaCl22, MgCl2 1, NMDG Cl 60, D-Glucosa monohidrato 5, HEPES 10 (pH 7,4 NaOH 298 mOsm)

4. Potenciador del sello utilizado para mejorar la calidad del sello de las células, NaCl 80, KCl 3, CaCl2 10, HEPES 10, MgCl2 1 (pH 7.4 NaOH)

Preparaciones celulares:

1. Si se usa cultivo celular; las células se incubarán a 30°C durante aproximadamente 4-6 días antes de ser utilizadas. El día del ensayo, levantar las células usando accutase y resuspender en 20 ml de regulador celular a una densidad de 0.8 a 1e6 células/ml.

2. Si se usan los crioviales listos para el ensayo; descongelar rápidamente dos crioviales a 37°C y pipetear lentamente en 23 ml de solución externa

3. Todas las preparaciones de células se incubarán durante 15 minutos en el hotel de células en agitación a 10°C antes de comenzar el ensayo.

Preparaciones compuestas:

Todos los compuestos se dispensaron acústicamente por cuadruplicado usando un Labcyte Echo. Se usa una solución madre de 10 mM para generar 6 placas fuente compuestas cada una a una concentración diferente para permitir la dosificación acumulativa en las células (0.03167 mM, seguido de 0.1 mM, luego 0.3167 mM, 1 mM, 3.167 mM, 10 mM,). Se agregan 90 pl de regulador de referencia a cada pocillo de las placas fuente que contienen 600 nl de compuesto para una concentración final de compuesto de 0.1 pM, 0.39 pM, 1.2 pM, 3.9 pM, 12.5 pM y 39.6 pM, respectivamente. Ensayo de hERG (todas las etapas de dispensación se realizan utilizando el manejo de líquidos configurado en el Nanion syncropatch)

1. Llenar chips de 4 agujeros de resistencia media de 384 pocillos con 40 pl de regulador externo y perfundir el regulador interno en la parte inferior de la placa.

2. Dispensar 20 pl de células en cada pocillo del chip seguido de 20 pl de potenciador de sellado.

3. Retirar 40 pl de reactivo de cada pocillo a la estación de lavado, dejando un volumen residual de 40 pl

4. Dispensar 40 pl de regulador de referencia con una etapa de eliminación de 40 pl después de 3 minutos, repetir esta etapa.

5. Dispensar 40 pl de la placa compuesta 1 (0.03167 mM), grabaciones en 'tiempo real' para una exposición de 3 minutos antes de eliminar 40 pl. Esta etapa se repite para otras 5 placas de compuestos subsecuentes en concentraciones crecientes para generar una curva de concentración-efecto acumulativa en cada pocillo del chip Syncropatch.

Las corrientes mediadas por hERG se obtuvieron usando un protocolo de etapa de voltaje que consiste en un voltaje continuo de mantenimiento de -80 mV, con una etapa de 500 ms a 60 mV seguido de una etapa de 500 ms a -40 mV cada 15 segundos. El software Nanion midió automáticamente la magnitud de la corriente hERG a partir de las trazas sustraídas de fugas tomando el pico de la corriente de "cola" hERG a -40 mV cada 15 segundos y tomando las últimas tres de estas respuestas para cada concentración para generar la curva de concentración-efecto.

El cálculo de los resultados se realiza utilizando el paquete APC dentro de Genedata. Para la normalización rutinaria de los datos de pozos con grupos de pozos de control de neutral e inhibidor como referencia, GeneData Assay Analyzer utiliza la siguiente ecuación para normalizar los valores de señal al rango de señal deseado:

N(x) = CR x - < cr > (SR - CR)

< sr > - < cr >

x es el valor de señal sin procesar medido de un pozo

<cr> es la mediana de los valores de señal medidos para los pocillos de Referencia Central (neutro) en una placa <sr> es la mediana de los valores de señal medidos para los pocillos de Referencia de Escala (inhibidor) en una placa CR es el valor normalizado medio deseado para la Referencia Central (neutral) SR es el valor normalizado medio deseado para la Referencia de Escala (inhibidor)

La Tabla E muestra los datos de unión a hERG para los Ejemplos seleccionados (los datos a continuación pueden ser el resultado de un solo experimento o un promedio de dos o más experimentos):

Tabla E

Permeabilidad

Con el fin de maximizar la absorción oral, un fármaco debe tener suficiente flujo transmembrana, así como evitar el eflujo de la glicoproteína P. El sistema más utilizado para predecir la absorción oral es mediante la determinación de la tasa de permeación de los compuestos a través de monocapas de una línea celular de adenocarcinoma de colon humano Caco-2.

Permeabilidad bidireccional humana Caco-2 A a B y B a A

Se usó un ensayo automatizado para determinar la permeabilidad bidireccional (eflujo y absorción) de compuestos en células Caco-2 llevadas a cabo durante 2 horas a pH 7.4. Las muestras se analizaron a través de LC/MS/MS para estimar los coeficientes de permeabilidad aparente (Papp) de los compuestos a través de monocapas de células Caco-2 y los resultados se citan en unidades de x10'6 cm/s.

La relación de eflujo (ER) se puede determinar utilizando la siguiente ecuación:

Donde Papp(B-A) indica el coeficiente de permeabilidad aparente en dirección basolateral a apical, y Papp(A-B) indica el coeficiente de permeabilidad aparente en dirección apical a basolateral.

Permeabilidad pasiva Caco-2 humana A a B Papp

Se usó un ensayo automatizado para determinar la permeabilidad pasiva de los compuestos en monocapas de células Caco-2 llevadas a cabo durante 2 horas con un pH apical de 6.5 y un pH basolateral de 7,4. El ensayo de inhibición de Caco-2 AB se lleva a cabo con inhibición química de los tres principales transportadores de eflujo ABCB1 (P-gp), ABCG2 (BCRP) y ABCC2 (MRP2) en células Caco-2. La incubación tanto apical como basolateral se lleva a cabo con un cóctel de inhibidores (quinidina 50 j M, sulfasalazina 20 j M y benzbromarona 100 j M). Las muestras se analizaron a través de LC/MS/MS para estimar los coeficientes de permeabilidad aparente (Papp) de los compuestos a través de monocapas de células Caco-2 y los resultados se citan en unidades de x10'6 cm/s.

La Tabla F muestra los datos de permeabilidad generados para los Ejemplos seleccionados (los datos a continuación pueden ser el resultado de un solo experimento o un promedio de dos o más experimentos):

Tabla F

Eficacia antitumoral de xenoinjerto MCF7 parental humano en ratón

Para determinar el efecto del Ejemplo 17 sobre el crecimiento de los xenoinjertos MCF7, se realizó el siguiente estudio. Las células MCF7 (ATCC) se cultivaron in vitro en fase exponencial antes del implante. En resumen, se implantaron subcutáneamente ratones machos SCID con un peso de 18 g o más (Envigo Reino Unido) en la parte posterior con pellas de estrógenos (0.5 mg, 21 días de liberación de Innovative Research de America) bajo anestesia recuperable. Un día después, se inocularon ratones subcutáneamente en el flanco izquierdo con 5 millones de células MCF7, preparadas como 0.1 ml de suspensión celular en 1:1 RPMI (Gibco, Life Technologies) y matrigel (Corning). Cuando los tumores alcanzaron ~250 mm3, los ratones se aleatorizaron en grupos de 9 ratones (12 ratones para el control del vehículo) y comenzaron a recibir tratamiento farmacológico. Los compuestos se prepararon en vehículo (40% de tetraetilenglicol (v/v), 7.5% de captisol (p/v) en agua para inyección) y se administraron por vía oral en un volumen de 10 ml/kg una vez al día durante 21 días a 0.5 mg/kg a 50 mg/kg. Los tumores se midieron dos veces por semana y el volumen del tumor se calculó utilizando la fórmula elíptica (pi/6 x ancho x ancho x largo). Los datos representan la geometría del volumen tumoral en relación con el volumen tumoral el día de la aleatorización. Las barras de error son el intervalo de confianza del 95% (Graphpad Prism). Este estudio demostró que dosis de 10 mg/kg y superiores dieron una regresión tumoral (Figura 12).

Eficacia antitumoral de xenoinjerto MCF7 mutante Y537S ESR1 humano en ratón

Para determinar el efecto del Ejemplo 17 sobre el crecimiento de los xenoinjertos derivados de células MCF7 modificadas genéticamente para expresar Y537S ESR1, se realizó el siguiente estudio. Las células Y537S ESR1 MCF7 fueron creadas por edición del genoma y expresan solo Y537S ESR1 (Ladd, et al., Oncotarget, 2016, 7: 54120 54136). En resumen, se inocularon subcutáneamente ratones SCID machos que pesaban 18 g o más (Envigo Reino Unido) en el costado izquierdo con 5 millones de células Y537S ESR1 MCF7, preparadas como 0.1 ml de suspensión celular en 1:1 RPMI (Gibco, Life Technologies) y matrigel (Corning). Cuando los tumores alcanzaron ~250 mm3, los ratones se aleatorizaron en grupos de 9 ratones (12 ratones para el control del vehículo) y comenzaron a recibir tratamiento farmacológico. Los compuestos se prepararon en vehículo (40% de tetraetilenglicol (v/v), 7.5% de Captisol (p/v) en agua para inyección) y se administraron por vía oral en un volumen de 10 ml/kg una vez al día durante 22 días a 0.5 mg/kg a 50 mg/kg. Los tumores se midieron dos veces por semana y el volumen del tumor se calculó utilizando la fórmula elíptica (pi/6 x ancho x ancho x largo). Los datos representan la geometría del volumen tumoral en relación con el volumen tumoral el día de la aleatorización. Las barras de error son el intervalo de confianza del 95% (Graphpad Prism). Este estudio demostró que dosis de 10 mg/kg y superiores dieron una regresión tumoral (Figura 13).

Eficacia antitumoral de xenoinjerto CTC174 derivada del paciente con cáncer de mama mutante ESR1 humano en ratones

Para determinar el efecto del Ejemplo 17 sobre el crecimiento del xenoinjerto CTC174 derivado de paciente mutante ESR1, se implantaron ratones NSG hembra con fragmentos de CTC174 en la almohadilla de grasa mamaria. CTC174 se derivaron de células tumorales circulantes aisladas de una paciente con cáncer de mama ER metastásico y se ha demostrado que portan una mutación D538G en ESR1 con una frecuencia alélica de 0.33 (Ladd, et al., Oncotarget, 2016, 7: 54120-54136). En resumen, se implantaron ratones NOD/SCID ovariectomizados (Cg-Prkdcscid Il2rgtm1Wjl/SzJ) (NSG) hembra (de 6 a 7 semanas de edad - The Jackson Laboratory) bajo anestesia recuperable con un fragmento de ~50 mm3 de un xenoinjerto CTC174 en la tercera almohadilla de grasa mamaria. Cuando los tumores alcanzaron ~200 mm3, los ratones se aleatorizaron en grupos de 10 ratones y comenzaron a recibir tratamiento farmacológico. Los compuestos se prepararon en vehículo (40% de tetraetilenglicol (v/v), 7.5% de captisol (p/v) en agua para inyección) y se administraron por vía oral en un volumen de 10 ml/kg una vez al día durante 32 días a 0.8 mg/kg a 40 mg/kg. Los tumores se midieron dos veces por semana y el volumen del tumor se calculó utilizando la fórmula elíptica (pi/6 x ancho x ancho x largo). Los datos representan la geometría del volumen tumoral en relación con el volumen tumoral el día de la aleatorización. Las barras de error son el intervalo de confianza del 95% (Graphpad Prism). Este estudio demostró que dosis de 10 mg/kg y superiores dieron una inhibición casi completa del crecimiento tumoral (Figura 14).

Eficacia de la combinación de fármacos antitumorales en xenoinjerto CTC174 derivado de un paciente con cáncer de mama humano con ESR1 mutante en ratones

Para determinar el efecto del Ejemplo 17 en el crecimiento del xenoinjerto CTC174 derivado de un paciente mutante para ESR1 en combinación con el inhibidor de CDK4/6 palbociclib o el inhibidor de mTORC1/2 vistusertib (AZD2014), se implantaron en ratones NSG hembra fragmentos de CTC174 en el cuerpo adiposo mamario. CTC174 se obtuvo de células tumorales circulantes aisladas de un paciente con cáncer de mama ER+ metastásico y se ha mostrado que portan una mutación D538G en ESR1 con una frecuencia alélica de 0.33 (Ladd, et al., Oncotarget, 2016, 7:54120-54136). Resumiendo, se implantó en ratones NOD/SCID (Cg-Prkdcscid Il2rgtm1Wjl/SzJ) hembra (6-7 semanas de edad - The Jackson Laboratory) con anestesia recuperable un fragmento de ~30 mm3 de un xenoinjerto CTC174 en el tercer cuerpo adiposo mamario. Cuando los tumores alcanzaron ~500 mm3 los ratones se aleatorizaron en grupos de 10 ratones y comenzaron a recibir el tratamiento farmacológico. Se preparó el Ej17 en vehículo (40% de tetraetilenglicol (v/v), 7.5% de captisol (p/v) en agua para inyección) y se administraron por vía oral en un volumen de 10 ml/kg una vez al día durante 23 días a 10 mg/kg. Palbociclib y vistusertib se prepararon en vehículo (1% de polisorbato 80). Palbociclib se administró por vía oral en un volumen de 10 ml/kg una vez al día durante 23 días a 50 mg/kg. Vistusertib se administró por vía oral en un volumen de 10 ml/kg dos veces al día en una programación con 2 días de administración, 5 días sin administración durante 23 días a 10 mg/kg. Al grupo tratado con vehículo se administraron 10 ml/kg de agua para inyección con 40% de tetraetilenglicol (v/v), 7.5% de captisol (p/v) por vía oral una vez al día durante 23 días. Los tumores se midieron dos veces por semana y el volumen del tumor se calculó utilizando la fórmula elíptica (pi/6 x ancho x ancho x largo). Los datos representan la media geométrica del volumen tumoral en relación con el volumen tumoral el día de la aleatorización. Las barras de error son el intervalo de confianza del 95% (Graphpad Prism). Este estudio demostró que el Ejemplo 17 combinado con palbociclib (Figura 15) o con vistusertib (a Zd 2014) (Figura 16) prorpocionó un efecto mayor que cualquiera de los agentes administrados solos.

De acuerdo con un aspecto adicional de la especificación, se proporciona una composición farmacéutica, que comprende un compuesto de la Fórmula (I), (IA), (IB), (IC) o (ID), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, como se ha definido aquí anteriormente en asociación con un excipiente farmacéuticamente aceptable.

Los excipientes farmacéuticamente aceptables adecuados para una formulación de tableta incluyen, por ejemplo, diluyentes inertes, agentes de granulación y de desintegración, agentes aglutinantes, agentes lubricantes, agentes conservantes y antioxidantes. Un excipiente farmacéuticamente aceptable adicional adecuado puede ser un agente quelante. Las formulaciones de tabletas pueden no estar recubiertas o recubiertas para modificar su desintegración y la subsecuente absorción del ingrediente activo dentro del tracto gastrointestinal, o para mejorar su estabilidad y/o apariencia, en cualquier caso, usando agentes de recubrimiento convencionales y procedimientos bien conocidos en la técnica.

Las composiciones para uso oral pueden estar en forma de cápsulas de gelatina dura en las que el ingrediente activo se mezcla con un diluyente sólido inerte, o como cápsulas de gelatina blanda en las que el ingrediente activo se mezcla con agua o un aceite.

Las suspensiones acuosas generalmente contienen el ingrediente activo en forma de polvo fino junto con uno o más agentes de suspensión, agentes dispersantes o humectantes. Las suspensiones acuosas también pueden contener uno o más conservantes, antioxidantes, agentes colorantes, agentes aromatizantes y/o agentes edulcorantes.

Las suspensiones oleosas pueden formularse suspendiendo el ingrediente activo en un aceite vegetal o en un aceite mineral. Las suspensiones oleosas también pueden contener un agente espesante. Se pueden agregar agentes edulcorantes tales como los establecidos anteriormente, y agentes saborizantes para proporcionar una preparación oral agradable al paladar. Estas composiciones pueden conservarse mediante la adición de un antioxidante.

Los polvos y gránulos dispersables adecuados para la preparación de una suspensión acuosa mediante la adición de agua generalmente contienen el ingrediente activo junto con un agente dispersante o humectante, un agente de suspensión y uno o más conservantes. También pueden estar presentes excipientes adicionales tales como agentes edulcorantes, aromatizantes y colorantes.

Las composiciones farmacéuticas de la especificación también pueden estar en forma de emulsiones de aceite en agua. La fase oleosa puede ser un aceite vegetal o un aceite mineral o una mezcla de cualquiera de estos. Las emulsiones también pueden contener agentes edulcorantes, aromatizantes y conservantes.

Los jarabes y elixires pueden formularse con agentes edulcorantes, y también pueden contener un agente demulcente, conservante, aromatizante y/o colorante.

Las composiciones farmacéuticas también pueden estar en forma de una suspensión acuosa u oleosa inyectable estéril, que puede formularse de acuerdo con procedimientos conocidos usando uno o más de los agentes dispersantes o humectantes y agentes de suspensión apropiados, que se han mencionado anteriormente. Una preparación inyectable estéril también puede ser una solución o suspensión inyectable estéril en un sistema diluyente o disolvente no tóxico parenteralmente aceptable.

Las composiciones para administración por inhalación pueden estar en forma de un aerosol presurizado convencional dispuesto para dispensar el ingrediente activo bien sea como un aerosol que contiene gotas sólidas o líquidas finamente divididas. Se pueden usar propelentes de aerosol convencionales tales como hidrocarburos fluorados volátiles o hidrocarburos y el dispositivo de aerosol está convenientemente dispuesto para dispensar una cantidad medida de ingrediente activo. Los inhaladores de polvo seco también pueden ser adecuados.

Para obtener información adicional sobre la formulación, consulte el Capítulo 25.2 en el Volumen 5 de Comprehensive Medicinal Chemistry (Corwin Hansch; Presidente del Comité Editorial), Pergamon Press 1990.

La cantidad de ingrediente activo que se combina con uno o más excipientes para producir una sola forma de dosificación variará necesariamente dependiendo del huésped tratado y la ruta particular de administración. Por ejemplo, la administración oral a humanos generalmente requerirá, por ejemplo, de 1 mg a 2 g de agente activo (DE manera más adecuada de 100 mg a 2 g, por ejemplo de 250 mg a 1.8 g, tal como de 500 mg a 1.8 g, particularmente de 500 mg a 1,5 g, convenientemente de 500 mg a 1 g) para administrar compuesto con una cantidad apropiada y conveniente de excipientes que puede variar de aproximadamente 3 a aproximadamente 98 por ciento en peso de la composición total. Se entenderá que, si se requiere una gran dosificación, se pueden requerir múltiples formas de dosificación, por ejemplo dos o más tabletas o cápsulas, con la dosis de ingrediente activo dividida convenientemente entre ellas. Típicamente, las formas de dosificación unitarias contendrán aproximadamente 10 mg a 0.5 g de un compuesto de esta especificación, aunque una forma de dosificación unitaria puede contener hasta 1 g. Convenientemente, una sola forma de dosificación sólida puede contener entre 1 y 300 mg de ingrediente activo.

El tamaño de la dosis para fines terapéuticos o profilácticos de los compuestos de la presente especificación variará naturalmente de acuerdo con la naturaleza y la gravedad del estado de la enfermedad, la edad y el sexo del animal o paciente y la ruta de administración, de acuerdo con principios de medicina bien conocidos.

Al usar compuestos de la presente especificación para fines terapéuticos o profilácticos, generalmente se administrará de modo que se reciba una dosis diaria en el rango, por ejemplo, de 1 mg/kg a 100 mg/kg de peso corporal, administrada si se requiere en dosis divididas. En general, se administrarán dosis más bajas cuando se emplee una ruta parenteral. Así, por ejemplo, para administración intravenosa, generalmente se usará una dosis en el rango, por ejemplo, de 1 mg/kg a 25 mg/kg de peso corporal. De manera similar, para la administración por inhalación, se usará una dosis en el rango, por ejemplo, de 1 mg/kg a 25 mg/kg de peso corporal. Sin embargo, se prefiere la administración oral, particularmente en forma de tabletas.

En un aspecto de la especificación, los compuestos de la presente especificación o las sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, se administran como tabletas que comprenden de 10 mg a 100 mg del compuesto de la especificación (o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos), en donde una o más tabletas se administran según sea necesario para lograr la dosis deseada.

Como se estableció anteriormente, se sabe que la señalización a través de ERa causa tumorogénesis por uno o más de los efectos de la proliferación mediadora de cáncer y otras células, mediando eventos angiogénicos y mediando la motilidad, migración e invasividad de las células cancerosas. Se ha encontrado que los compuestos de la presente especificación poseen una potente actividad antitumoral que se cree que se obtiene mediante el antagonismo y la subregulación de ERa que está involucrado en las etapas de transducción de señales que conducen a la proliferación y supervivencia de las células tumorales y la invasividad y la capacidad migratoria de las metástasis de las células tumorales.

Por consiguiente, los compuestos de la presente especificación pueden ser valiosos como agentes antitumorales, en particular como inhibidores selectivos de la proliferación, supervivencia, motilidad, diseminación e invasividad de células de cáncer de mamífero que conducen a la inhibición del crecimiento y supervivencia del tumor y a la inhibición de crecimiento tumoral metastásico. En particular, los compuestos de la presente especificación pueden ser valiosos como agentes antiproliferativos y antiinvasores en la contención y/o el tratamiento de la enfermedad tumoral sólida. En particular, los compuestos de la presente especificación pueden ser útiles en la prevención o el tratamiento de aquellos tumores que son sensibles a la inhibición de ERa y que están involucrados en las etapas de transducción de señales que conducen a la proliferación y supervivencia de las células tumorales y la capacidad migratoria e invasividad de las células tumorales en metástasis. Además, los compuestos de la presente especificación pueden ser útiles en la prevención o el tratamiento de aquellos tumores que están mediados solo o en parte por antagonismo y subregulación de ERa, es decir, los compuestos pueden usarse para producir un efecto inhibidor de ERa en un animal de sangre caliente que necesita tal tratamiento.

De acuerdo con un aspecto adicional de la especificación, se proporciona un compuesto de la Fórmula (I), (IA), (IB), (IC) o (ID), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, como se ha definido aquí anteriormente para uso como medicamento en un animal de sangre caliente tal como el hombre.

De acuerdo con un aspecto adicional de la especificación, se proporciona un compuesto de la Fórmula (I), (IA), (IB), (IC) o (ID), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, como se ha definido aquí anteriormente para uso en la producción de un efecto antiproliferativo en un animal de sangre caliente tal como el hombre.

De acuerdo con un aspecto adicional de la especificación, se proporciona un compuesto de la Fórmula (I), (IA), (IB), (IC) o (ID), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, como se definió anteriormente para uso en un animal de sangre caliente tal como el hombre como agente antiinvasivo en la contención y/o tratamiento de la enfermedad tumoral sólida.

De acuerdo con un aspecto adicional de la especificación, se proporciona el uso de un compuesto de Fórmula (I), (IA), (IB), (IC) o (ID), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, como se ha definido aquí anteriormente, para la producción de un efecto antiproliferativo en un animal de sangre caliente tal como el hombre.

De acuerdo con un aspecto adicional de la especificación, se proporciona el uso de un compuesto de Fórmula (I), (IA), (IB), (IC) o (ID), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, como se ha definido aquí anteriormente, en la fabricación de un medicamento para uso en la producción de un efecto antiproliferativo en un animal de sangre caliente tal como el hombre.

De acuerdo con un aspecto adicional de la especificación, se proporciona el uso de un compuesto de Fórmula (I), (IA), (IB) , (IC) o (ID), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, como se ha definido aquí anteriormente, en la fabricación de un medicamento para uso en un animal de sangre caliente tal como el hombre como un agente antiinvasivo en la contención y/o tratamiento de una enfermedad tumoral sólida.

De acuerdo con un aspecto adicional de la especificación se proporciona un método para la producción de un efecto antiproliferativo en un animal de sangre caliente, tal como el hombre, que necesita tal tratamiento que comprende administrar a dicho animal una cantidad eficaz de un compuesto de Fórmula (I), (IA), (IB), (IC) o (ID), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, como se ha definido aquí anteriormente.

De acuerdo con un aspecto adicional de la especificación se proporciona un método para producir un efecto antiinvasivo mediante la contención y/o tratamiento de una enfermedad tumoral sólida en un animal de sangre caliente, tal como el hombre, que necesita tal tratamiento que comprende administrar a dicho animal una cantidad eficaz de un compuesto de Fórmula (I), (IA), (IB), (IC) o (ID), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, como se ha definido aquí anteriormente.

De acuerdo con un aspecto adicional de la especificación, se proporciona un compuesto de la Fórmula (I), (IA), (IB), (IC) o (ID), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, como se ha definido aquí anteriormente, para uso en la prevención o el tratamiento del cáncer en un animal de sangre caliente tal como el hombre.

De acuerdo con un aspecto adicional de la especificación se proporciona el uso de un compuesto de Fórmula (I), (IA), (IB), (IC) o (ID), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, como se ha definido aquí anteriormente en la fabricación de un medicamento para uso en la prevención o tratamiento del cáncer en un animal de sangre caliente tal como el hombre.

De acuerdo con un aspecto adicional de la especificación se proporciona un método para la prevención o tratamiento del cáncer en un animal de sangre caliente, tal como el hombre, que necesita tal tratamiento que comprende administrar a dicho animal una cantidad eficaz de un compuesto de Fórmula (I), (IA), (IB), (IC) o (ID), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, como se ha definido aquí anteriormente.

De acuerdo con un aspecto adicional de la especificación, se proporciona un compuesto de la Fórmula (I), (IA), (IB), (IC) o (ID), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, como se ha definido aquí anteriormente para uso en la prevención o el tratamiento de la enfermedad tumoral sólida en un animal de sangre caliente tal como el hombre.

De acuredo con un aspecto adicional de la especificación, se proporciona el uso de un compuesto de Fórmula (I), (IA), (IB) , (IC) o (ID), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, como se ha definido aquí anteriormente, en la fabricación de un medicamento para uso en la prevención o tratamiento de una enfermedad tumoral sólida en un animal de sangre caliente tal como el hombre.

De acuerdo con un aspecto adicional de la especificación, se proporciona un método para la prevención o tratamiento de una enfermedad tumoral sólida en un animal de sangre caliente, tal como el hombre, que necesita tal tratamiento que comprende administrar a dicho animal una cantidad eficaz de un compuesto de Fórmula (I), (IA), (IB), (IC) o (ID), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, como se ha definido aquí anteriormente.

De acuerdo con un aspecto adicional de la especificación, se proporciona un compuesto de la Fórmula (I), (IA), (IB), (IC) o (ID), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, como se ha definido aquí anteriormente, para uso en la prevención o el tratamiento de aquellos tumores que son sensibles a la inhibición de ERa que está involucrado en las etapas de transducción de señales que conducen a la proliferación, supervivencia, invasividad y capacidad migratoria de las células tumorales.

De acuerdo con un aspecto adicional de la especificación, se proporciona el uso de un compuesto de Fórmula (I), (IA), (IB) , (IC) o (ID), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, como se ha definido aquí anteriormente, en la fabricación de un medicamento para uso en la prevención o tratamiento de aquellos tumores que son sensibles a la inhibición de ERa que están involucrados en las etapas de transducción de señales que conducen a la proliferación, supervivencia, invasividad y capacidad migratoria de las células tumorales.

De acuerdo con un aspecto adicional de la especificación, se proporciona un método para la prevención o tratamiento de aquellos tumores que son sensibles a la inhibición de ERa que están involucrados en las etapas de transducción de señales que conducen a la proliferación, supervivencia, invasividad y capacidad migratoria de las células tumorales que comprende administrar a dicho animal una cantidad eficaz de un compuesto de Fórmula (I), (IA), (IB), (IC) o (ID), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, como se ha descrito aquí anteriormente.

De acuerdo con un aspecto adicional de la especificación, se proporciona un compuesto de la Fórmula (I), (IA), (IB), (IC) o (ID), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, como se ha definido aquí anteriormente para uso en proporcionar un efecto inhibidor sobre ERa.

De acuerdo con un aspecto adicional de la especificación, se proporciona el uso de un compuesto de Fórmula (I), (IA), (IB) , (IC) o (ID), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, como se ha definido aquí anteriormente en la fabricación de un medicamento para uso en proporcionar un efecto inhibidor sobre ERa.

De acuerdo con un aspecto adicional de la especificación, también se proporciona un método para proporcionar un efecto inhibidor sobre ERa que comprende administrar una cantidad eficaz de un compuesto de Fórmula (I), (IA), (IB), (IC) o (ID), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, como se ha definido aquí anteriormente.

De acuerdo con un aspecto adicional de la especificación, se proporciona un compuesto de la Fórmula (I), (IA), (IB), (IC) o (ID), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, como se ha definido aquí anteriormente, para uso en proporcionar un efecto inhibidor selectivo sobre ERa.

De acuerdo con un aspecto adicional de la especificación, se proporciona el uso de un compuesto de Fórmua (I), (IA), (IB), (IC) o (ID), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, como se ha definido aquí anteriormente, en la producción de un medicamento para uso en proporcionar un efecto inhibidor selectivo sobre ERa.

De acuerdo con un aspecto adicional de la especificación, también se proporciona un método para proporcionar un efecto inhibidor selectivo sobre ERa que comprende administrar una cantidad eficaz de un compuesto de Fórmula (I), (IA), (IB), (IC) o (ID), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, como se ha definido aquí anteriormente.

Aquí se describen compuestos que pueden unirse al dominio de unión al ligando ERa y son degradadores selectivos del receptor de estrógenos. En ensayos bioquímicos y basados en células, se muestra que los compuestos de la presente especificación son potentes aglutinantes de receptores de estrógenos y reducen los niveles celulares de ERa y, por lo tanto, pueden ser útiles en el tratamiento de enfermedades o condiciones sensibles al estrógeno (incluidas enfermedades que han desarrollado resistencia a las terapias endocrinas), es decir, para uso en el tratamiento del cáncer de mama y los cánceres ginecológicos (incluidos de endometrio, de ovario y cervical) y los cánceres que expresan proteínas mutadas a ERa que pueden ser mutaciones de novo o que han surgido como resultado del tratamiento con una terapia endocrina previa tal como un inhibidor de aromatasa.

De acuerdo con un aspecto adicional de la especificación, se proporciona un compuesto de la Fórmula (I), (IA), (IB), (IC) o (ID), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, como se ha definido aquí anteriormente, para uso en el tratamiento de cánceres de mama o ginecológicos.

De acuerdo con un aspecto adicional de la especificación, se proporciona un compuesto de la Fórmula (I), (IA), (IB), (IC) o (ID), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, como se ha definido aquí anteriormente, para uso en el tratamiento del cáncer de mama, endometrio, ovario o cérvix.

De acuerdo con un aspecto adicional de la especificación, se proporciona un compuesto de la Fórmula (I), (IA), (IB), (IC) o (ID), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, como se ha definido aquí anteriormente, para uso en el tratamiento del cáncer de mama.

De acuerdo con un aspecto adicional de la especificación, se proporciona un compuesto de la Fórmula (I), (IA), (IB), (IC) o (ID), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, como se ha definido aquí anteriormente, para uso en el tratamiento del cáncer de mama, en el que el cáncer ha desarrollado resistencia a una o más de otras terapias endocrinas.

De acuerdo con un aspecto adicional de la especificación, se proporciona un método para tratar cánceres de mama o ginecológicos, que comprende administrar una cantidad eficaz de un compuesto de Fórmula (I), (IA), (IB), (IC) o (ID), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, como se ha definido aquí anteriormente.

De acuerdo con un aspecto adicional de la especificación, se proporciona un método para tratar cáncer de mama, endometrio, ovario o cérvix, que comprende administrar una cantidad eficaz de un compuesto de Fórmula (I), (IA), (IB), (IC) o (ID), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, como se ha definido aquí anteriormente.

De acuerdo con un aspecto adicional de la especificación, se proporciona un método para tratar cáncer de mama, que comprende administrar una cantidad eficaz de un compuesto de Fórmula (I), (IA), (IB), (IC) o (ID), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, como se ha definido aquí anteriormente.

De acuerdo un aspecto adicional de la especificación, se proporciona un método para tratar cáncer de mama, en donde el cáncer ha desarrollado resistencia a una o más de otras terapias endocrinas, que comprende administrar una cantidad eficaz de un compuesto de Fórmula (I), (IA), (IB), (IC) o (ID), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, como se ha definido aquí anteriormente.

De acuerdo con un aspecto adicional de la especificación, se proporciona el uso de un compuesto de Fórmula (I), (IA), (IB), (IC) o (ID), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, como se ha definido aquí anteriormente, en la fabricación de un medicamento para uso en el tratamiento de cánceres de mama o ginecológicos.

De acuerdo con un aspecto adicional de la especificación, se proporciona el uso de un compuesto de Fórmula (I), (IA), (IB), (IC) o (ID), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, como se ha definido aquí anteriormente, en la fabricación de un medicamento para uso en el tratamiento de cánceres de mama, endometrio, ovario o cérvix.

De acuerdo con un aspecto adicional de la especificación, se proporciona el uso de un compuesto de Fórmula (I), (IA), (IB), (IC) o (ID), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, como se ha definido aquí anteriormente, en la producción de un medicamento para uso en el tratamiento del cáncer de mama.

De acuerdo con un aspecto adicional de la especificación, se proporciona el uso de un compuesto de Fórmula (I), (IA), (IB) , (IC) o (ID), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, como se ha definido aquí anteriormente, en la fabricación de un medicamento para uso en el tratamiento del cáncer de mama, en donde el cáncer ha desarrollado resistencia a una o más de otras terapias endocrinas.

En una característica de la especificación, el cáncer a tratar es el cáncer de mama. En otro aspecto de esta característica, el cáncer de mama es el Receptor de Estrógeno ve (ER ve). En una realización de este aspecto, el compuesto de Fórmula (I), (IA), (IB), (IC) o (ID), se dosifica en combinación con otro agente anticancerígeno, tal como un agente antihormonal como se define en el presente documento.

De acuerdo con un aspecto adicional de la especificación, se proporciona un compuesto de la Fórmula (I), (IA), (IB), (IC) o (ID), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, como se ha definido aquí anteriormente, para uso en el tratamiento del cáncer de mama ER ve.

De acuerdo con un aspecto adicional de la especificación, se proporciona un método para tratar cáncer de mama ER+ve, que comprende administrar una cantidad eficaz de un compuesto de Fórmula (I), (IA), (IB), (IC) o (ID), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, como se ha definido aquí anteriormente.

De acuerdo con un aspecto adicional de la especificación, se proporciona el uso de un compuesto de Fórmula (I), (IA), (IB), (IC) o (ID), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, como se ha definido aquí anteriormente en la producción de un medicamento para uso en el tratamiento de cáncer de mama ER+ve.

Como se estableció anteriormente, los efectos in vivo de un compuesto de Fórmula (I), (IA), (IB), (IC) o (ID) pueden ser ejercidos en parte por uno o más metabolitos que se forman dentro del cuerpo humano o animal después de la administración de un compuesto de Fórmula (I), (IA), (IB), (IC) o (ID).

Por lo tanto, la presente especificación también contempla un método para inhibir ER-a en un paciente, que comprende administrar a un paciente una cantidad de un compuesto de Fórmula (I), (IA), (IB), (IC) o (ID), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, eficaz en la inhibición de ER-a en el paciente.

La presente especificación, por lo tanto, también contempla un método para inhibir ER-a en un paciente, que comprende administrar a un paciente una cantidad de un compuesto de Fórmula (I), (IA), (IB), (IC) o (ID), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, eficaz para inhibir ER-a en el paciente.

El tratamiento contra el cáncer definido en el presente documento puede aplicarse como una terapia única o puede implicar, además de los compuestos de la especificación, cirugía convencional o radioterapia o quimioterapia. Tal quimioterapia puede incluir una o más de las siguientes categorías de agentes antitumorales:

(i) otros fármacos antiproliferativos/antineoplásicos y combinaciones de los mismos, como se usan en oncología médica, tal como agentes alquilantes (por ejemplo cisplatino, oxaliplatino, carboplatino, ciclofosfamida, mostaza nitrogenada, melfalan, clorambucilo, busulfano, temozolamida y nitrosoureas); antimetabolitos (por ejemplo, gemcitabina y antifolatos tales como fluoropirimidinas como 5-fluorouracilo y tegafur, raltitrexed, metotrexato, arabinósido de citosina e hidroxiurea); antibióticos antitumorales (por ejemplo, antraciclinas como adriamicina, bleomicina, doxorrubicina, daunomicina, epirubicina, idarubicina, mitomicina-C, dactinomicina y mitramicina); agentes antimitóticos (por ejemplo alcaloides de la vinca como vincristina, vinblastina, vindesina y vinorelbina y taxoides como taxol y taxotere e inhibidores de la poloquinasa); e inhibidores de topoisomerasa (por ejemplo, epipodofilotoxinas como etopósido y tenipósido, amsacrina, topotecán y camptotecina);

(ii) agentes antihormonales tales como antioestrógenos (por ejemplo, tamoxifeno, fulvestrant, toremifeno, raloxifeno, droloxifeno y yodoxifeno), progestógenos (por ejemplo acetato de megestrol), inhibidores de la aromatasa (por ejemplo, anastrozol, letrozol, vorazol y exemestano);

(iii) inhibidores de la función del factor de crecimiento y sus rutas de señalización corriente abajo: se incluyen moduladores Ab de cualquier factor de crecimiento u objetivos del receptor del factor de crecimiento, revisados por Stern et al. Critical Reviews in Oncology/Hematology, 2005, 54, pp11 -29); también se incluyen inhibidores de moléculas pequeñas de tales dianas, por ejemplo, inhibidores de quinasas; ejemplos incluyen el anticuerpo anti-erbB2 trastuzumab [Herceptin™], el anticuerpo anti-EGFR panitumumab, el anticuerpo anti-EGFR cetuximab [Erbitux, C225] y los inhibidores de tirosina quinasa incluidos los inhibidores de la familia de receptores erbB, tal como los inhibidores de tirosina quinasa de la familia del receptor de factor de crecimiento epidérmico (EGFR/erbB1) tal como gefitinib o erlotinib, los inhibidores de tirosina quinasa erbB2 tal como lapatinib y los inhibidores mixtos de erb1/2 tal como afatanib; estrategias similares están disponibles para otras clases de factores de crecimiento y sus receptores, por ejemplo inhibidores de la familia de factores de crecimiento de hepatocitos o sus receptores, incluidos c-met y ron; inhibidores de la insulina y familia del factor de crecimiento de la insulina o sus receptores (IGFR, IR) inhibidores de la familia del factor de crecimiento derivado de plaquetas o sus receptores (PDGFR) e inhibidores de la señalización mediados por otros receptores de tirosina quinasas tales como c-kit, AnLK y CSF-1R; también se incluyen moduladores que direccionan proteínas de señalización en la ruta de señalización de PI3-quinasa, por ejemplo, inhibidores de isoformas de PI3-quinasa tales como PI3K-a/p/Y y ser/thr quinasas tales como AKT, mTOR (tal como AZD2014), PDK, SGK, PI4K o PIP5K; también se incluyen inhibidores de serina/treonina quinasas no mencionadas anteriormente, por ejemplo inhibidores de raf tales como vemurafenib, inhibidores de MEK tales como selumetinib (AZD6244), inhibidores de Abl tales como imatinib o nilotinib, inhibidores de Btk tales como ibrutinib, inhibidores de Syk tales como fostamatinib, inhibidores de la aurora quinasa (por ejemplo, AZD1152), inhibidores de otras ser/thr quinasas, tales como JAK, STAT e IRAK4, e inhibidores de la quinasa dependientes de ciclina, por ejemplo, inhibidores de CDK1, CDK7, CDK9 y CDK4/6 tal como palbociclib;

iv) moduladores de las rutas de señalización de daños en el ADN, por ejemplo, inhibidores de PARP (por ejemplo, Olaparib), inhibidores de ATR o inhibidores de ATM;

v) moduladores de las rutas apoptóticas y muerte celular tales como los moduladores de la familia Bcl (por ejemplo, ABT-263/Navitoclax, ABT-199);

(vi) agentes antiangiogénicos tales como los que inhiben los efectos del factor de crecimiento endotelial vascular, [por ejemplo, el anticuerpo del factor de crecimiento de células endoteliales vasculares antivascular bevacizumab (Avastin™) y, por ejemplo, un inhibidor de la tirosina quinasa del receptor VEGF tal como sorafenib, axitinib, pazopanib, sunitinib y vandetanib (y compuestos que funcionan mediante otros mecanismos (por ejemplo, linomida, inhibidores de la función de la integrina avp3 y angiostatina)];

(vii) agentes de daño vascular, tales como Combretastatina A4;

(viii) agentes antiinvasión, por ejemplo, inhibidores de la familia de c-Src quinasas como (dasatinib, J. Med. Chem., 2004, 47, 6658-6661) y bosutinib (SKI-606), e inhibidores de metaloproteinasas como marimastat, inhibidores de la función del receptor activador del plasminógeno de uroquinasa o de los anticuerpos contra la heparanasa];

(ix) metodologías de inmunoterapia, que incluyen, por ejemplo, metodologías ex vivo e in vivo para aumentar la inmunogenicidad de las células tumorales del paciente, tal como la transfección con citocinas tales como interleucina 2, interleucina 4 o factor estimulante de colonias de macrófagos de granulocitos, metodologías para disminuir la anergia de células T, metodologías que usan células inmunes transfectadas tales como células dendríticas transfectadas con citoquinas, metodologías que usan líneas celulares tumorales transfectadas con citoquinas y metodologías que usan anticuerpos antiidiotípicos. Ejemplos específicos incluyen anticuerpos monoclonales direccionados a PD-1 (por ejemplo, BMS-936558) o CTLA4 (por ejemplo, ipilimumab y tremelimumab);

(x) Terapias antisentido o basadas en ARNi, por ejemplo, aquellas dirigidas a los objetivos enumerados.

(xi) metodologías de terapia génica, que incluyen, por ejemplo, metodologías para reemplazar genes aberrantes tales como p53 aberrante o BRCA1 o BRCA2 aberrante, metodologías GDEPT (terapia de profármacos con enzimas dirigidas a genes) tales como las que usan citosina desaminasa, timidina quinasa o una enzima de nitroreductasa bacteriana y metodologías para aumentar la tolerancia del paciente a la quimioterapia o radioterapia, tal como la terapia génica de resistencia a múltiples fármacos.

Por consiguiente, en una realización, se proporciona un compuesto de Fórmula (I), (IA), (IB), (IC) o (ID), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y una sustancia antitumoral adicional para el tratamiento conjunto del cáncer.

De acuerdo con este aspecto de la especificación, se proporciona una combinación adecuada para uso en el tratamiento del cáncer que comprende un compuesto de Fórmula (I), (IA), (IB), (IC) o (ID), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo y otro agente antitumoral, en particular cualquiera de los anti agentes tumorales listados bajo (i)-(xi) arriba. En particular, el agente antitumoral mencionado en los puntos (i)-(xi) anteriores es el estándar de atención para el cáncer específico a tratar; la persona con experiencia en la técnica comprenderá el significado de "estándar de atención".

Por lo tanto, en un aspecto adicional de la especificación, se proporciona un compuesto de Fórmula (I), (IA), (IB), (IC) o (ID), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en combinación con otro agente antitumoral, en particular un agente antitumoral seleccionado de uno de los listados bajo (i)-(xi) aquí arriba.

En un aspecto adicional de la especificación, se proporciona un compuesto de la Fórmula (I), (IA), (IB), (IC) o (ID), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en combinación con otro agente antitumoral, en particular un agente antitumoral seleccionado de uno listado bajo (i) arriba.

En un aspecto adicional de la especificación, se proporciona un compuesto de la Fórmula (I), (IA), (IB), (IC) o (ID), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y cualquiera de los agentes antitumorales listados bajo (i) arriba.

En un aspecto adicional de la especificación, se proporciona una combinación adecuada para uso en el tratamiento del cáncer que comprende un compuesto de Fórmula (I), (IA), (IB), (IC) o (ID), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y un taxoide, tal como por ejemplo taxol o taxotere, convenientemente taxotere

En un aspecto adicional de la especificación, se proporciona un compuesto de la Fórmula (I), (IA), (IB), (IC) o (ID), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en combinación con otro agente antitumoral, en particular un agente antitumoral seleccionado de uno de los listados bajo (ii) aquí arriba.

En otro aspecto de la especificación, se proporciona una combinación adecuada para uso en el tratamiento del cáncer que comprende un compuesto de Fórmula (I), (IA), (IB), (IC) o (ID), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y cualquiera de los agentes antihormonales listados bajo (ii) arriba, por ejemplo, cualquiera de los antiestrógenos listados bajo (ii) arriba, o por ejemplo un inhibidor de aromatasa listado bajo (ii) arriba.

En un aspecto adicional de la especificación, se proporciona una combinación adecuada para uso en el tratamiento del cáncer que comprende un compuesto de Fórmula (I), (IA), (IB), (IC) o (ID), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y un inhibidor de mTOR, tal como AZD2014.

En un aspecto adicional de la especificación, se proporciona una combinación adecuada para uso en el tratamiento del cáncer que comprende un compuesto de Fórmula (I), (IA), (IB), (IC) o (ID), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y un inhibidor de PI3Ka, tal como el compuesto 1-( 4-(5-(5-amino-6-(5-tert-butil-1,3,4-oxadiazol-2-il)pirazin-2-il)-1-etil-1H-1,2,4- triazol-3-il)piperidin-1-il)-3-hidroxipropan-1-ona, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

En un aspecto adicional de la especificación, se proporciona una combinación adecuada para uso en el tratamiento del cáncer que comprende un compuesto de Fórmula (I), (IA), (IB), (IC) o (ID), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y un inhibidor de CDK4/6, tal como palbociclib.

En un aspecto, la combinación anterior de un compuesto de Fórmula (I), (IA), (IB), (IC) o (ID), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, con un agente antitumoral listado en (ii) anterior, o un inhibidor de mTOR (tal como AZD2014), o un inhibidor de PI3K-a (tal como el compuesto 1-(4-(5-(5-amino-6-(5-tert-butiM,3,4-oxadiazol-2-il)pirazin-2-il)-1- etil-1H-1,2,4-triazol-3-il)piperidin-1-il)-3-hidroxipropan-1-ona) o un inhibidor de CDK4/6 (tal como palbociclib), es adecuado para uso en el tratamiento de cánceres de mama o ginecológicos, tales como el cáncer de mama, de endometrio, de ovario o cérvix, en particular el cáncer de mama, tal como el cáncer de mama ER ve.

Aquí, cuando se usa el término "combinación", debe entenderse que esto se refiere a administración simultánea, separada o secuencial. En un aspecto de la especificación, "combinación" se refiere a la administración simultánea. En otro aspecto de la especificación, "combinación" se refiere a administración separada. En otro aspecto de la especificación, "combinación" se refiere a administración secuencial. Cuando la administración es secuencial o separada, el retraso en la administración del segundo componente no debe ser tal que pierda el efecto beneficioso de la combinación. Cuando una combinación de dos o más componentes se administra por separado o secuencialmente, se entenderá que el régimen de dosificación para cada componente puede ser diferente e independiente de los otros componentes. Convenientemente, los compuestos de la presente especificación se dosifican una vez al día.

De acuerdo con un aspecto adicional de la especificación, se proporciona una composición farmacéutica que comprende un compuesto de Fórmula (I), (IA), (IB), (IC) o (ID), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo en combinación con un agente antitumoral seleccionado de uno listado en (i)-(xi) aquí arriba, en asociación con un excipiente farmacéuticamente aceptable.

De acuerdo con un aspecto adicional de la especificación, se proporciona una composición farmacéutica que comprende un compuesto de Fórmula (I), (IA), (IB), (IC) o (ID), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo en combinación con cualquiera de los agentes antihormonales listados en (ii) arriba, por ejemplo cualquiera de los antiestrógenos listados bajo (ii) arriba, o por ejemplo un inhibidor de aromatasa listado en (ii) arriba en asociación con un excipiente farmacéuticamente aceptable.

En un aspecto adicional de la especificación, se proporciona una composición farmacéutica que comprende un compuesto de Fórmula (I), (IA), (IB), (IC) o (ID), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y un inhibidor de mTOR, tal como AZD2014, en asociación con un excipiente farmacéuticamente aceptable.

En un aspecto adicional de la especificación, se proporciona una composición farmacéutica que comprende un compuesto de Fórmula (I), (IA), (IB), (IC) o (ID), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y un inhibidor de PI3Ka, tal como el compuesto 1-(4-(5-(5 -amino-6-(5-tert-butil-1,3,4-oxadiazol-2-il)pirazin-2-il)-1-etil-lH-1,2,4-triazol-3-il)piperidin-1-il)-3-hidroxipropan-1-ona, en asociación con un excipiente farmacéuticamente aceptable.

En un aspecto adicional de la especificación, se proporciona una composición farmacéutica que comprende un compuesto de Fórmula (I), (IA), (IB), (IC) o (ID), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y un inhibidor de CDK4/6 (tal como palbociclib) en asociación con un excipiente farmacéuticamente aceptable.

De acuerdo con un aspecto adicional de la especificación, se proporciona una composición farmacéutica que comprende un compuesto de Fórmula (I), (IA), (IB), (IC) o (ID), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en combinación con un agente antitumoral seleccionado de uno listado en (i)-( xi) aquí arriba, en asociación con un excipiente farmacéuticamente aceptable para uso en el tratamiento del cáncer.

De acuerdo con un aspecto adicional de la especificación, se proporciona una composición farmacéutica que comprende un compuesto de Fórmula (I), (IA), (IB), (IC) o (ID), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en combinación con cualquiera de los agentes antihormonales listados bajo (ii) arriba, por ejemplo uno cualquiera de los antiestrógenos listados bajo (ii) arriba, o por ejemplo un inhibidor de aromatasa listado en (ii) arriba en asociación con un excipiente farmacéuticamente aceptable para uso en el tratamiento del cáncer.

En un aspecto adicional de la especificación, se proporciona una composición farmacéutica que comprende un compuesto de Fórmula (I), (IA), (IB), (IC) o (ID), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y un inhibidor de mTOR, tal como AZD2014, en asociación con un excipiente farmacéuticamente aceptable para uso en el tratamiento del cáncer.

En un aspecto adicional de la especificación, se proporciona una composición farmacéutica que comprende un compuesto de Fórmula (I), (IA), (IB), (IC) o (ID), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y un inhibidor de PI3Ka, tal como el compuesto 1-(4-(5-(5 -amino-6-(5-tert-butil-1,3,4-oxadiazol-2-il)pirazin-2-il)-1-etil-lH-1,2,4-triazol-3-il)piperidin-1-il)-3-hidroxipropan-1-ona, en asociación con un excipiente farmacéuticamente aceptable para uso en el tratamiento del cáncer.

En un aspecto adicional de la especificación, se proporciona una composición farmacéutica que comprende un compuesto de Fórmula (I), (IA), (IB), (IC) o (ID), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y un inhibidor de CDK4/6 (tal como palbociclib) en asociación con un excipiente farmacéuticamente aceptable para uso en el tratamiento del cáncer.

En un aspecto, las composiciones farmacéuticas anteriores de un compuesto de Fórmula (I), (IA), (IB), (IC) o (ID), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, con un agente antitumoral mencionado en (ii) arriba, o un inhibidor de mTOR (tal como AZD2014), o un PI3K -a inhibidor (tal como el compuesto 1-(4-(5-(5-amino-6-(5-tert-butil-1,3,4-oxadiazol-2-il)pirazin-2-il)-1-etil-1H-1,2,4-triazol-3-il)piperidin-1-il)-3-hidroxipropan-1-ona) o un inhibidor de CDK4/6 (tal como palbociclib), es adecuado para uso en tratamiento de cánceres de mama o ginecológicos, tales como el cáncer de mama, de endometrio, de ovario o cérvix, en particular el cáncer de mama, tal como el cáncer de mama ER ve.

De acuerdo con otra característica de la especificación, se proporciona el uso de un compuesto de Fórmula (I), (IA), (IB), (IC) o (ID), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo en combinación con un agente antitumoral seleccionado de uno listado en (i) - (xi) en el presente documento anteriormente, en la producción de un medicamento para uso en el tratamiento del cáncer en un animal de sangre caliente, tal como el hombre.

De acuerdo con un aspecto adicional de la especificación, se proporciona el uso de un compuesto de Fórmula (I), (IA), (IB), (IC) o (ID), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo en combinación con uno cualquiera de los agentes antihormonales listados en (ii) anteriormente, por ejemplo, uno cualquiera de los antiestrógenos listados en (ii) anteriormente o, por ejemplo, un inhibidor de la aromatasa listado en (ii) anteriormente en la producción de un medicamento para uso en el tratamiento del cáncer en un animal de sangre caliente, tal como el hombre.

En un aspecto adicional de la especificación, se proporciona el uso de un compuesto de Fórmula (I), (IA), (IB), (IC) o (ID), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en combinación con inhibidor de mTOR, tal como AZD2014, en la fabricación de un medicamento para uso en el tratamiento del cáncer en un animal de sangre caliente, tal como el hombre.

En un aspecto adicional de la especificación, se proporciona el uso de compuestos de Fórmula (I), (IA), (IB), (IC) o (ID), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en combinación con un inhibidor de PI3Ka, tal como el compuesto 1-(4-(5-(5-amino-6-(5-tert-butil-1,3,4-oxadiazol-2-il)pirazin-2-il)-1-etil-1H-1,2,4-triazol-3-il)piperidin-1-il)-3-hidroxipropan-1-ona, en la fabricación de un medicamento para uso en el tratamiento del cáncer en un animal de sangre caliente, tal como el hombre.

En un aspecto adicional de la especificación, se proporciona el uso de un compuesto de Fórmula (I), (IA), (IB), (IC) o (ID), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en combinación con un inhibidor de CDK4/6 (tal como palbociclib) en la fabricación de un medicamento para uso en el tratamiento del cáncer en un animal de sangre caliente, tal como el hombre.

En un aspecto los usos anteriores de un compuesto de Fórmula (I), (IA), (IB), (IC) o (ID), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en combinación con un agente antitumoral listado en (ii) anteriormente, o un inhibidor de mTOR (tal como AZD2014) o un inhibidor de PI3K-a (tal como el compuesto 1-(4-(5-(5-amino-6-(5-tert-butil-1,3,4-oxadiazol-2-il)pirazin-2-il)-1-etil-1H-1,2,4-triazol-3-il)piperidin-1-il)-3-hidroxypropan-1-ona) o un inhibidor de CDK4/6 (tal como palbociclib), es adecuado para uso en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de cánceres de mama o ginecológicos, tales como cáncer de mama, endometrio, ovario o cérvix, particularmente cáncer de mama, tal como cáncer de mama ER+ve.

Por lo tanto, en una característica adicional de la especificación, se proporciona un método de tratamiento del cáncer en un animal de sangre caliente, tal como el hombre, que necesita tal tratamiento que comprende administrar a dicho animal una cantidad eficaz de un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en combinación con un agente antitumoral seleccionado de uno listado en (i) - (xi) en el presente documento anteriormente.

De acuerdo con un aspecto adicional de la especificación, se proporciona un método de tratamiento del cáncer en un animal de sabe caliente, tal como el hombre, que necesita tal tratamiento que comprende administrar a dicho animal una cantidad eficaz de un compuesto de Fórmula (I), (IA), (IB), (IC) o (ID), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo en combinación con uno cualquiera de los agentes antihormonales listados en (ii) anteriormente, por ejemplo, uno cualquiera de los antiestrógenos listados en (ii) anteriormente o, por ejemplo, un inhibidor de la aromatasa enumerado en (ii) anteriormente.

En un aspecto adicional de la especificación, se proporciona un método de tratamiento del cáncer en un animal de sangre caliente, tal como el hombre, que necesita tal tratamiento que comprende administrar a dicho animal una cantidad eficaz de un compuesto de Fórmula (I), (IA), (IB), (IC) o (ID), o una sal farmacéuticamente del mismo, en combinación con un inhibidor de mTOR, tal como AZD2014.

En un aspecto adicional de la especificación, se proporciona un método de tratamiento del cáncer en un animal de sangre caliente, tal como el hombre, que necesita tal tratamiento que comprende administrar a dicho animal una cantidad eficaz de un compuesto de Fórmula (I), (IA), (IB), (IC) o (ID), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en combinación con un inhibidor de PI3Ka, tal como el compuesto 1-(4-(5-(5-amino-6-(5-tert-butil-1,3,4-oxadiazol-2-il)pirazin-2-il)-1-etil-1H-1,2,4-triazol-3-il)piperidin-1-il)-3-hidroxypropan-1-ona.

En un aspecto adicional de la especificación, se proporciona un método de tratamiento del cáncer en un animal de sangre caliente, tal como el hombre, que necesita tal tratamiento que comprende administrar a dicho animal una cantidad eficaz de un compuesto de Fórmula (I), (IA), (IB), (IC) o (ID), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en combinación con un inhibidor de CDK4/6 (tal como palbociclib).

En un aspecto las combinaciones, composiciones farmacéuticas, usos y métodos de tratamiento del cáncer anteriores son métodos para el tratamiento de cánceres de mama o ginecológicos, tales como cáncer de mama, endometrio, ovario o cérvix, particularmente cáncer de mama, tal como cáncer de mama ER+ve.

De acuerdo con un aspecto adicional de la presente especificación, se proporciona un kit que comprende un compuesto de Fórmula (I), (IA), (IB), (IC) o (ID), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo en combinación con un agente antitumoral seleccionado de uno de los listados bajo (i)-(xi) en el presente documento anteriormente.

De acuerdo con un aspecto adicional de la presente especificación, se proporciona un kit que comprende un compuesto de Fórmula (I), (IA), (IB), (IC) o (ID), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo en combinación con un agente antitumoral seleccionado de uno de los listados bajo (i) o (ii) en el presente documento anteriormente.

De acuerdo con un aspecto adicional de la presente especificación, se proporciona un kit que comprende:

a) un compuesto de Fórmula (I), (IA), (IB), (IC) o (ID), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo en una primera forma de dosificación unitaria;

b) un agente antitumoral seleccionado de uno enumerado en (i)-(xi) en el presente documento anteriormente en una segunda forma de dosificación unitaria; y

c) medios de contenedor para contener dichas primera y segunda formas de dosificación.

b) un agente antitumoral seleccionado de uno de los listados bajo (i)-(ii) en el presente documento anteriormente en una segunda forma de dosificación unitaria; y

a) un compuesto de Fórmula (I), (IA), (IB), (IC) o (ID), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en una primera forma de dosificación unitaria;

b) un agente antitumoral seleccionado de un agente antitumoral listado en (ii) arriba, un inhibidor de mTOR (tal como AZD2014), un inhibidor de PI3Ka, tal como el compuesto 1-(4-(5-(5- amino-6-(5-tert-butil-1,3,4-oxadiazol-2-il)pirazin-2-il)-1-etil-1H-1,2,4-triazol-3-il)piperidina- 1-il)-3-hidroxipropan-1-ona y un inhibidor de CDK4/6, tal como palbociclib, en una segunda forma de dosificación unitaria; y

La terapia combinada como se describió anteriormente puede agregarse además de la terapia de atención estándar que típicamente se lleva a cabo de acuerdo con su programa habitual de prescripción.

Aunque los compuestos de la Fórmula (I), (IA), (IB), (IC) o (ID) son principalmente valiosos como agentes terapéuticos para uso en animales de sangre caliente (incluido el hombre), también son útiles cuando se requiere inhibir ER-a. Por lo tanto, son útiles como estándares farmacológicos para uso en el desarrollo de nuevas pruebas biológicas y en la búsqueda de nuevos agentes farmacológicos.

Asistencia sanitaria personalizada

Otro aspecto de la presente especificación se basa en la identificación de un enlace entre el estado del gen que codifica ERa y la susceptibilidad potencial al tratamiento con un compuesto de Fórmula (I), (IA), (IB), (IC) o (ID). En particular, el estado del gen ERa puede indicar que un paciente tiene menos probabilidades de responder a la terapia hormonal existente (tal como los inhibidores de la aromatasa), en parte al menos porque se cree que algunas mutaciones de ERa surgen como mecanismos de resistencia a los tratamientos existentes. Una SERD, particularmente una SERD que puede administrarse por vía oral en dosis potencialmente más grandes sin inconvenientes excesivos, puede usarse ventajosamente para tratar a los pacientes con mutaciones de ERa quienes pueden ser resistentes a otras terapias. Por lo tanto, esto provee oportunidades, métodos y herramientas para seleccionar pacientes para el tratamiento con un compuesto de Fórmula (I), (IA), (IB), (IC) o (ID), particularmente pacientes con cáncer. La presente especificación se refiere a herramientas y métodos de selección de pacientes (incluida la medicina personalizada). La selección se basa en si las células tumorales que se van a tratar poseen el gen ERa de tipo silvestre o mutante. Por lo tanto, el estado del gen ERa podría usarse como un biomarcador para indicar que seleccionar el tratamiento con un SERD puede ser ventajoso. Para evitar dudas, se cree que los compuestos de Fórmula (I), (IA), (IB), (IC) o (ID), como se describe en el presente documento, son activos de manera similar contra los genes ERa de tipo silvestre y mutantes, al menos aquellas mutaciones en el gen ERa identificadas en la fecha de presentación de esta solicitud.

Existe una clara necesidad de biomarcadores que enriquezcan o seleccionen pacientes cuyos tumores responderán al tratamiento con un SERD, tal como un compuesto de Fórmula (I), (IA), (IB), (IC) o (ID). Los biomarcadores de selección de pacientes que identifican a los pacientes con mayor probabilidad de responder a un agente sobre otro son ideales en el tratamiento del cáncer, ya que reducen el tratamiento innecesario de pacientes con tumores que no responden a los posibles efectos secundarios de tales agentes.

Un biomarcador puede describirse como "una característica que se mide y evalúa objetivamente como un indicador de procesos biológicos normales, procesos patogénicos o respuestas farmacológicas a una intervención terapéutica". Un biomarcador es cualquier indicador identificable y medible asociado con una condición o enfermedad particular donde existe una correlación entre la presencia o nivel del biomarcador y algún aspecto de la condición o enfermedad (incluida la presencia de, el nivel o el nivel cambiante de, el tipo de, la etapa de, la susceptibilidad a la condición o enfermedad, o la capacidad de respuesta a un fármaco utilizado para tratar la condición o enfermedad). La correlación puede ser cualitativa, cuantitativa o tanto cualitativa como cuantitativa. Típicamente, un biomarcador es un compuesto, fragmento compuesto o grupo de compuestos. Tales compuestos pueden ser cualquier compuesto encontrado en o producido por un organismo, incluidas proteínas (y péptidos), ácidos nucleicos y otros compuestos.

Los biomarcadores pueden tener un poder predictivo y, como tal, pueden usarse para predecir o detectar la presencia, nivel, tipo o etapa de condiciones o enfermedades particulares (incluida la presencia o el nivel de microorganismos o toxinas particulares), la susceptibilidad (incluida la susceptibilidad genética) a condiciones o enfermedades particulares, o la respuesta a tratamientos particulares (incluidos los tratamientos farmacológicos). Se cree que los biomarcadores desempeñarán un papel cada vez más importante en el futuro del descubrimiento y desarrollo de fármacos, al mejorar la eficiencia de los programas de investigación y desarrollo. Los biomarcadores se pueden usar como agentes de diagnóstico, monitores de progresión de la enfermedad, monitores de tratamiento y predictores de resultados clínicos. Por ejemplo, diversos proyectos de investigación de biomarcadores intentan identificar marcadores de cánceres específicos y de enfermedades cardiovasculares e inmunológicas específicas. Se cree que el desarrollo de nuevos biomarcadores validados conducirá a reducciones significativas en los costes de desarrollo de medicamentos y atención médica y a mejoras significativas en el tratamiento de una amplia variedad de enfermedades y condiciones.

Con el fin de diseñar de manera óptima los ensayos clínicos y obtener la mayor información posible de estos ensayos, se puede requerir un biomarcador. El marcador puede medirse en tejidos sustitutos y tumorales. Idealmente, estos marcadores también se correlacionarán con la eficacia y, por lo tanto, podrían usarse en última instancia para la selección de pacientes.

Por lo tanto, el problema técnico que subyace a este aspecto de la presente especificación es la identificación de medios para estratificar a los pacientes para el tratamiento con un compuesto de Fórmula (I). El problema técnico se resuelve mediante la provisión de las realizaciones caracterizadas en las reivindicaciones y/o la descripción aquí.

Se cree que los tumores que contienen ERa de tipo silvestre son susceptibles de tratamiento con un compuesto de Fórmula (I), (IA), (IB), (IC) o (ID), por ejemplo, como tratamiento de primera línea. Los tumores también pueden responder al tratamiento con un compuesto de Fórmula (I), (IA), (IB), (IC) o (ID) como terapia de segunda línea, tercera línea o subsecuente y esto puede ser útil, en particular, cuando los tumores contienen ERa mutante y, por lo tanto, pueden ser resistentes a las terapias existentes tales como IAs. Puede ser necesaria una dosificación mayor de un compuesto de Fórmula (I), (IA), (IB), (IC) o (ID) en el entorno resistente que en los tumores de tipo silvestre).

La especificación proporciona un método para determinar la sensibilidad de las células a un compuesto de Fórmula (I), (IA), (IB), (IC) o (ID). El método comprende determinar el estado del gen ERa en dichas células. Una célula se define como sensible a un compuesto de Fórmula (I), (IA), (IB), (IC) o (ID) si inhibe el aumento en el número de células en un ensayo de crecimiento celular (ya sea mediante la inhibición de la proliferación celular y/o mediante el aumento de la muerte celular). Los métodos de la especificación son útiles para predecir cuales células tienen más probabilidades de responder a un compuesto de Fórmula (I), (IA), (IB), (IC) o (ID) mediante inhibición del crecimiento.

Una muestra "representativa del tumor" puede ser la muestra de tumor real aislada, o puede ser una muestra que ha sido procesada adicionalmente, por ejemplo una muestra de ácido nucleico amplificado por PCR de la muestra tumoral.

Definiciones:

En esta sección de Atención médica personalizada:

"Alelo" se refiere a una forma particular de un locus genético, que se distingue de otras formas por su secuencia particular de nucleótidos o aminoácidos.

Las "reacciones de amplificación" son reacciones de ácido nucleico que dan como resultado una amplificación específica de ácidos nucleicos diana sobre ácidos nucleicos no diana. La reacción en cadena de la polimerasa (PCR) es una reacción de amplificación bien conocida.

"Cáncer" se usa en el presente documento para referirse al crecimiento neoplásico que surge de la transformación celular a un fenotipo neoplásico. Tal transformación celular a menudo implica mutación genética.

"Gene" es un segmento de ADN que contiene toda la información para la biosíntesis regulada de un producto de ARN, incluido un promotor, exones, intrones y otros elementos de secuencia que pueden ubicarse dentro de las regiones flanqueantes 5' o 3' (no dentro de porciones transcritas del gen) que controlan la expresión.

El "estado del gen" se refiere a si el gen es de tipo silvestre o no (es decir, mutante).

"Etiqueta" se refiere a una composición capaz de producir una señal detectable indicativa de la presencia del polinucleótido diana en una muestra de ensayo. Los marcadores adecuados incluyen radioisótopos, cromóforos de nucleótidos, enzimas, sustratos, moléculas fluorescentes, unidades estructurales quimioluminiscentes, partículas magnéticas, unidades estructurales bioluminiscentes y similares. Como tal, una etiqueta es cualquier composición detectable por medios espectroscópicos, fotoquímicos, bioquímicos, inmunoquímicos, eléctricos, ópticos o químicos.

"Variación no sinónima" se refiere a una variación (varianza) en o que se superpone a la secuencia codificante de un gen que da como resultado la producción de una secuencia polipeptídica distinta (alterada). Estas variaciones pueden o no afectar la función de la proteína e incluyen variantes sin sentido (que resultan en la sustitución de un aminoácido por otro), variantes sin sentido (que dan como resultado un polipéptido truncado debido a la generación de un codón de parada prematuro) y variantes de inserción/deleción.

"Variación sinónima" se refiere a una variación (varianza) en la secuencia de codificación de un gen que no afecta la secuencia del polipéptido codificado. Estas variaciones pueden afectar la función de la proteína indirectamente (por ejemplo, alterando la expresión del gen), pero, en ausencia de evidencia de otra cosa, generalmente se supone que son inocuas.

"Ácido nucleico" se refiere a moléculas de ADN y ARN monocatenarias o bicatenarias que incluyen ácidos nucleicos naturales encontrados en la naturaleza y/o ácidos nucleicos artificiales modificados que tienen esqueletos o bases modificadas, como se conoce en la técnica.

"Cebador" se refiere a una secuencia de oligonucleótidos de ADN monocatenario capaz de actuar como un punto de inicio para la síntesis de un producto de extensión de cebador que es complementario a la cadena de ácido nucleico que se va a copiar. La longitud y la secuencia del cebador deben ser tales que puedan cebar la síntesis de los productos de extensión. Un cebador típico contiene al menos aproximadamente 7 nucleótidos de longitud de una secuencia sustancialmente complementaria a la secuencia diana, pero se prefieren cebadores algo más largos. Usualmente, los cebadores contienen aproximadamente 15-26 nucleótidos, pero también se pueden emplear cebadores más largos o más cortos.

El "sitio polimórfico" es una posición dentro de un locus en el que se encuentran al menos dos secuencias alternativas en una población.

"Polimorfismo" se refiere a la variación de secuencia observada en un individuo en un sitio polimórfico. Los polimorfismos incluyen sustituciones de nucleótidos, inserciones, deleciones y microsatélites y pueden, pero no necesariamente, dar lugar a diferencias detectables en la expresión génica o la función de la proteína. En ausencia de evidencia de un efecto sobre la expresión o la función de la proteína, generalmente se considera que los polimorfismos comunes, incluidas las variantes no sinónimas, se incluyen en la definición de secuencia de genes de tipo silvestre. NCBI mantiene un catálogo de polimorfismos humanos y anotaciones asociadas, que incluyen validación, frecuencias observadas y asociación de enfermedades (dbSNP: http://www.ncbi.nlm.nlh.gov/projects/SNP/). Téngase en cuenta que el término "polimorfismo" cuando se usa en el contexto de secuencias de genes no debe confundirse con el término "polimorfismo" cuando se usa en el contexto de la forma de estado sólido de un compuesto que es la naturaleza cristalina o amorfa de un compuesto. La persona experta comprenderá el significado pretendido por su contexto.

"Sonda" se refiere a oligonucleótidos específicos de secuencia monocatenarios que tienen una secuencia que es exactamente complementaria a la secuencia diana del alelo que se va a detectar.

La "Respuesta" se define mediante mediciones tomadas de acuerdo con los Criterios de Evaluación de la Respuesta en tumores sólidos (RECIST) que incluyen la clasificación de pacientes en dos grupos principales: aquellos que muestran una respuesta parcial o enfermedad estable y aquellos que muestran signos de enfermedad progresiva.

"Condiciones de hibridación rigurosas" se refiere a una incubación durante la noche a 42°C en una solución que comprende formamida al 50%, 5x SSC (NaCI 750 mM, citrato trisódico 75 mM), fosfato de sodio 50 mM (pH 7.6), solución 5x de Denhardt, 10% de sulfato de dextrano y 20 pg/ml de ADN de esperma de salmón cizallado desnaturalizado, seguido de lavado de los filtros en 0.1x SSC a aproximadamente 65°C.

La "supervivencia" abarca la supervivencia general del paciente y la supervivencia libre de progresión.

La "supervivencia general" (SG) se define como el tiempo desde el inicio de la administración del fármaco hasta la muerte por cualquier causa. La "supervivencia libre de progresión" (SLP) se define como el tiempo desde el inicio de la administración del fármaco hasta la primera aparición de enfermedad progresiva o muerte por cualquier causa.

De acuerdo con un aspecto adicional de la especificación, se proporciona un método para seleccionar un paciente para el tratamiento con un compuesto de Fórmula (I), (IA), (IB), (IC) o (ID), comprendiendo el método proporcionar una muestra que contiene células tumorales de un paciente; determinar si el gen ERa en la muestra que contiene células tumorales del paciente es de tipo silvestre o mutante; y seleccionar un paciente para el tratamiento con un compuesto de Fórmula (I), (IA), (IB), (IC) o (ID) basado en el mismo.

El método puede incluir o excluir la etapa real de aislamiento de la muestra del paciente. Por lo tanto, de acuerdo con un aspecto de la especificación, se proporciona un método para seleccionar un paciente para el tratamiento con un compuesto de Fórmula (I), (IA), (IB), (IC) o (ID), comprendiendo el método determinar si el gen ERa en una muestra que contiene células tumorales previamente aislado del paciente es de tipo silvestre o mutante; y seleccionar un paciente para el tratamiento con un compuesto de Fórmula (I), (IA), (IB), (IC) o (ID) basado en el mismo.

En una realización, el paciente se selecciona para el tratamiento con un compuesto de Fórmula (I) si el ADN de la célula tumoral tiene un gen ERa mutante. En otras realizaciones, un paciente cuyo ADN de células tumorales posee un gen ERa de tipo silvestre se selecciona para el tratamiento con un compuesto de Fórmula (I), (IA), (IB), (IC) o (ID).

Para el propósito de esta especificación, un estado genético de tipo silvestre está destinado a indicar la expresión normal o apropiada del gen y la función normal de la proteína codificada. En contraste, el estado mutante está destinado a indicar la expresión de una proteína con función alterada, consistente con los roles conocidos de los genes ERa mutantes en el cáncer (como se describe aquí). Cualquier número de alteraciones genéticas o epigenéticas, que incluyen, pero no se limitan a mutación, amplificación, deleción, reordenamiento genómico o cambios en el perfil de metilación, pueden dar como resultado un estado mutante. Sin embargo, si tales alteraciones no obstante dan como resultado una expresión apropiada de la proteína normal, o una variante funcionalmente equivalente, entonces el estado del gen se considera como tipo silvestre. Ejemplos de variantes que típicamente no darían como resultado un estado funcional de gen mutante incluyen variantes de codificación sinónimas y polimorfismos comunes (sinónimos o no sinónimos). Como se discute a continuación, el estado del gen puede evaluarse mediante un ensayo funcional, o puede inferirse de la naturaleza de las desviaciones detectadas de una secuencia de referencia.

En ciertas realizaciones, el estado de tipo silvestre o mutante del gen ERa está determinado por la presencia o ausencia de variaciones de ácido nucleico no sinónimo en los genes. Las variaciones no sinónimas observadas correspondientes a polimorfismos comunes conocidos sin efectos funcionales anotados no contribuyen a un estado genético de mutante.

Otras variaciones en el gen ERa que significan estado mutante incluyen variaciones en el sitio de empalme que disminuyen el reconocimiento de una unión intrón/exón durante el procesamiento de pre-ARNm a ARNm. Esto puede dar como resultado la omisión de exón o la inclusión de secuencias normalmente intrónicas en el ARNm empalmado (retención de intrones o utilización de uniones de empalme crípticas). Esto, a su vez, puede dar como resultado la producción de proteína aberrante con inserciones y/o deleciones en relación con la proteína normal. Por lo tanto, en otras realizaciones, el gen tiene un estado mutante si hay una variante que altera la secuencia de reconocimiento del sitio de empalme en una unión intrón/exón.

Para ESR1, las secuencias de referencia están disponibles para el gen (número de acceso GenBank: NG_008493), ARNm (número de acceso GenBank: NM_000125) y proteínas (número de acceso GenBank: NP_000116 o acceso Swiss-Prot: P03372). Una persona experta en la técnica podrá determinar el estado del gen ESR1, es decir, si un gen ESR1 particular es de tipo silvestre o mutante, basándose en la comparación de la secuencia de ADN o proteína con el tipo silvestre.

Será evidente que el gen y las secuencias de ARNm divulgadas para el gen ERa son secuencias representativas. En individuos normales hay dos copias de cada gen, una copia materna y paterna, la cual probablemente tendrá algunas diferencias de secuencia, además, dentro de una población existirán numerosas variantes alélicas de la secuencia del gen. Otras secuencias consideradas de tipo silvestre incluyen aquellas que poseen uno o más cambios sinónimos en la secuencia de ácidos nucleicos (que los cambios no alteran la secuencia de la proteína codificada), polimorfismos comunes no sinónimos (por ejemplo, polimorfismos de la línea germinal) que alteran la secuencia de la proteína pero no afectan la función de la proteína y los cambios de secuencia del sitio sin empalme intrónico.

Existen numerosas técnicas disponibles para el experto en la técnica para determinar el estado genético de ERa. El estado del gen se puede determinar mediante la determinación de la secuencia de ácidos nucleicos. Esto podría ser mediante secuenciación directa del gen de longitud completa o análisis de sitios específicos dentro del gen, por ejemplo sitios comúnmente mutados.

Muestras

La muestra del paciente para analizar el estado del gen puede ser cualquier muestra que contiene tejido tumoral o de células tumorales obtenida u obtenible del individuo. La muestra de prueba es convenientemente una muestra de sangre, hisopo bucal, biopsia u otro fluido corporal o tejido obtenido de un individuo. Ejemplos particulares incluyen: células tumorales circulantes, ADN circulante en el plasma o suero, células aisladas del fluido ascítico de pacientes con cáncer de ovario, esputo pulmonar para pacientes con tumores dentro del pulmón, una aspiración con aguja fina de un paciente con cáncer de mama, orina, sangre periférica, un raspado de células, un folículo piloso, una punción en la piel o una muestra bucal.

Se apreciará que la muestra de prueba puede ser igualmente una secuencia de ácidos nucleicos que corresponde a la secuencia en la muestra de prueba, es decir que toda o parte de la región en el ácido nucleico de muestra puede amplificarse en primer lugar usando cualquier técnica conveniente, por ejemplo reacción en cadena de la polimerasa (PCR), antes del análisis. El ácido nucleico puede ser ADN genómico o a Rn fraccionado o de células enteras. En realizaciones particulares, el ARN es ARN de células enteras y se usa directamente como plantilla para marcar un ADNc de primera cadena usando cebadores aleatorios o cebadores poli A. El ácido nucleico o la proteína en la muestra de prueba pueden extraerse de la muestra de acuerdo con metodologías estándar (véase Green & Sambrook, Eds., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, (2012, 4a edición, Vol. 1-3, ISBN 9781936113422), Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY)

Los métodos de diagnóstico de la especificación pueden llevarse a cabo utilizando una muestra tomada previamente del individuo o paciente. Tales muestras pueden conservarse por congelación o fijarse y embeberse en formalinaparafina u otros medios. Alternativamente, se puede obtener y usar una muestra que contiene células tumorales frescas.

Los métodos de la especificación se pueden aplicar usando células de cualquier tumor. Los tumores adecuados para el tratamiento con un compuesto de Fórmula (I) se han descrito anteriormente en el presente documento.

Métodos para la detección de ácidos nucleicos

La detección de ácidos nucleicos de ERa mutantes puede emplearse, en el contexto de la presente especificación, para seleccionar el tratamiento farmacológico. Dado que las mutaciones en estos genes ocurren a nivel de ADN, los métodos de la especificación pueden basarse en la detección de mutaciones o variaciones en el ADN genómico, así como en las transcripciones y las proteínas mismas. Puede ser deseable confirmar mutaciones en el ADN genómico mediante el análisis de transcriptos y/o polipéptidos, con el fin de garantizar que la mutación detectada se exprese realmente en el sujeto.

Será evidente para la persona con experiencia en la técnica que hay una gran cantidad de procedimientos analíticos que pueden usarse para detectar la presencia o ausencia de nucleótidos variantes en una o más posiciones en un gen. En general, la detección de la variación alélica requiere una técnica de discriminación de mutaciones, opcionalmente una reacción de amplificación (tal como una basada en la reacción en cadena de la polimerasa) y opcionalmente un sistema de generación de señal. Hay una multitud de técnicas de detección de mutaciones disponibles en la técnica y estas pueden usarse en combinación con un sistema de generación de señal, de las cuales hay numerosas disponibles en la técnica. Muchos métodos para la detección de la variación alélica están revisados por Nollau et al., Clin. Chem., 1997, 43, 1114-1120; Anderson SM. Expert Rev Mol Diagn., 2011, 11, 635-642; Meyerson M. et al., Nat Rev Genet., 2010, 11, 685-696; y en los libros de texto estándar, por ejemplo, "Laboratory Protocols for Mutation Detection", Ed. by U. Landegren, Oxford University Press, 1996 y "PCR", 2nd Edition by Newton & Graham, BIOS Scientific Publishers Limited, 1997.

Como se señaló anteriormente, determinar la presencia o ausencia de una variación particular o una pluralidad de variaciones en el gen ERa en un paciente con cáncer se puede realizar de varias maneras. Tales pruebas se realizan comúnmente usando ADN o ARN recolectado de muestras biológicas, por ejemplo, biopsias de tejidos, orina, heces, esputo, sangre, células, raspados de tejidos, aspirados de mama u otros materiales celulares, y se pueden realizar mediante una variedad de métodos que incluyen, pero no se limitan a, PCR, hibridación con sondas específicas de alelos, detección de mutaciones enzimáticas, escisión química de no coincidencias, espectrometría de masas o secuenciación de ADN, incluida la minisecuenciación.

Las técnicas de detección de mutaciones adecuadas incluyen el sistema de mutación refractaria de amplificación (ARMS™), la extensión lineal del sistema de mutación refractaria de amplificación (ALEX™), el sistema de cebado de oligonucleótidos competitivo (COPS), Taqman, balizas moleculares, polimorfismo de longitud de fragmento de restricción (RFLP) y PCR basado en el sitio de restricción y técnicas de transferencia de energía por resonancia en fluorescencia (FRET).

En realizaciones particulares, el método empleado para determinar los nucleótidos dentro de un gen biomarcador se selecciona de: amplificación específica de alelo (PCR específica de alelo), tal como sistema de mutación refractaria de amplificación (ARMS), secuenciación, ensayo de discriminación alélica, hibridación, Polimorfismos de longitud de fragmentos de restricción (RFLP) o ensayo de ligadura de oligonucleótidos (OLA).

En realizaciones particulares, la hibridación con sondas específicas de alelos puede realizarse mediante: (1) oligonucleótidos específicos de alelos unidos a una fase sólida (por ejemplo, membranas de vidrio, silicio, nailon) con la muestra marcada en solución, por ejemplo, como en muchas aplicaciones de chips de ADN; o (2) muestra unida (a menudo ADN clonado o ADN amplificado por PCR) y oligonucleótidos marcados en solución (bien sea alelos específicos o cortos para permitir la secuenciación por hibridación). Las pruebas de diagnóstico pueden incluir un panel de variaciones, a menudo sobre un soporte sólido, lo cual permite la determinación simultánea de más de una variación. Tales sondas de hibridación son bien conocidas en la técnica (véase, por ejemplo, Green & Sambrook, Eds., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, (2012, 4a edición, Vol. 1-3, ISBN 9781936113422), Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY) y puede abarcar dos o más sitios de variación.

Por lo tanto, en una realización, la detección de la presencia o ausencia de al menos una mutación proporciona el contacto del ácido nucleico de ERa que contiene un sitio de mutación putativo con al menos una sonda de ácido nucleico. La sonda hibrida preferentemente con una secuencia de ácidos nucleicos que incluye un sitio de variación y que contiene bases de nucleótidos complementarias en el sitio de variación bajo condiciones de hibridación selectiva. La hibridación se puede detectar con una etiqueta detectable usando etiquetas conocidas por un experto en la técnica. Tales etiquetas incluyen, pero no se limitan a, etiquetas radiactivas, fluorescentes, colorantes y enzimáticas.

En otra realización, la detección de la presencia o ausencia de al menos una mutación proporciona el contacto del ácido nucleico de ERa que contiene un sitio de mutación putativo con al menos un cebador de ácido nucleico. El cebador se hibrida preferentemente con una secuencia de ácidos nucleicos que incluye un sitio de variación y que contiene bases de nucleótidos complementarias en el sitio de variación bajo condiciones de hibridación selectiva.

Los oligonucleótidos utilizados como cebadores para la amplificación específica pueden llevar la base de nucleótidos complementaria a la mutación de interés en el centro de la molécula (de modo que la amplificación depende de la hibridación diferencial; véase, por ejemplo, Gibbs, et al., 1989. Nucl. Acids Res., 17, 2437-248) o en el extremo 3'-terminal de un cebador donde, bajo condiciones apropiadas, la falta de coincidencia puede prevenir o reducir la extensión de la polimerasa (véase, por ejemplo, Prossner, 1993, Tibtech, 11238).

En otra realización más, la detección de la presencia o ausencia de al menos una mutación comprende secuenciar al menos una secuencia de ácidos nucleicos y comparar la secuencia obtenida con la secuencia de ácidos nucleicos de tipo silvestre conocida.

Alternativamente, la presencia o ausencia de al menos una mutación comprende la determinación espectrométrica de masas de al menos una secuencia de ácidos nucleicos.

En una realización, la detección de la presencia o ausencia de al menos una variación de ácido nucleico comprende realizar una reacción en cadena de la polimerasa (PCR). La secuencia de ácidos nucleicos diana que contiene la variación hipotética se amplifica y se determina la secuencia de nucleótidos del ácido nucleico amplificado. La determinación de la secuencia de nucleótidos del ácido nucleico amplificado comprende secuenciar al menos un segmento de ácido nucleico. Alternativamente, los productos de amplificación pueden analizarse utilizando cualquier método capaz de separar los productos de amplificación de acuerdo con su tamaño, incluyendo electroforesis en gel automatizada y manual, y similares.

Las mutaciones en el ácido nucleico genómico se detectan ventajosamente mediante técnicas basadas en el cambio de movilidad en fragmentos de ácido nucleico amplificado. Por ejemplo, Chen et al., Anal Biochem 1996, 239, 61-9, describen la detección de mutaciones de base única mediante un ensayo competitivo de desplazamiento de movilidad. Además, los ensayos basados en la técnica de Marcelino et al., BioTechniques 1999, 26, 1134-1148 están disponibles comercialmente.

En un ejemplo particular, el análisis de heteroduplex capilar se puede usar para detectar la presencia de mutaciones basadas en el desplazamiento de movilidad de los ácidos nucleicos dúplex en los sistemas capilares como resultado de la presencia de no coincidencias.

La generación de ácidos nucleicos para el análisis a partir de muestras generalmente requiere la amplificación de ácidos nucleicos. Muchos métodos de amplificación se basan en una reacción en cadena enzimática (tal como una reacción en cadena de la polimerasa, una reacción en cadena de la ligasa o una replicación de secuencia autosostenida) o de la replicación de todo o parte del vector en el que se ha clonado. Preferentemente, la amplificación de acuerdo con la especificación es una amplificación exponencial, como se muestra, por ejemplo, por la reacción en cadena de la polimerasa.

Se han descrito muchos métodos de amplificación de señal y objetivo en la literatura, por ejemplo, revisiones generales de estos métodos en Landegren, U., et al., Science, 1988242, 229-237 y Lewis, R., Genetic Engineering News 1990, 10, 54-55. Estos métodos de amplificación pueden usarse en los métodos de nuestra especificación, e incluyen reacción en cadena de la polimerasa (PCR), PCR in situ, reacción de amplificación de ligasa (LAR), hibridación de ligasa, replicación de bacteriófagos Qp, sistema de amplificación basado en transcripción (TAS), amplificación genómica con secuenciación de transcripción (GAWTS), amplificación basada en secuencia de ácidos nucleicos (NASBA) e hibridación in situ. Los cebadores adecuados para uso en diversas técnicas de amplificación pueden prepararse de acuerdo con métodos conocidos en la técnica.

Reacción en cadena de la polimerasa (PCR) La PCR es un método de amplificación de ácido nucleico descrito, entre otros, en las patentes U.S. Nos. 4,683,195 y 4,683,202. La PCR consiste en ciclos repetidos de reacciones de extensión del cebador generadas por ADN polimerasa. El ADN objetivo se desnaturaliza por calor y se hibridan dos oligonucleótidos, que agrupan la secuencia objetivo en cadenas opuestas del ADN a amplificar. Estos oligonucleótidos se convierten en cebadores para usar con la ADN polimerasa. El ADN se copia por extensión de cebador para hacer una segunda copia de ambas cadenas. Al repetir el ciclo de desnaturalización por calor, hibridación y extensión del cebador, el ADN objetivo puede amplificarse un millón de veces o más en aproximadamente dos a cuatro horas. La PCR es una herramienta de biología molecular, que debe usarse junto con una técnica de detección para determinar los resultados de la amplificación. Una ventaja de la PCR es que aumenta la sensibilidad al amplificar la cantidad de ADN objetivo de 1 millón a mil millones de veces en aproximadamente 4 horas. La PCR se puede usar para amplificar cualquier ácido nucleico conocido en un contexto de diagnóstico (Mok et al., Gynaecologic Oncology, 1994, 52: 247 252,).

También se puede utilizar una técnica de amplificación específica de alelo, tal como el Sistema de mutación refractaria de amplificación (ARMS™) (Newton et al., Nucleic Acids Res., 1989, 17, 2503-2516) para detectar mutaciones de una sola base. Bajo las condiciones apropiadas de amplificación por PCR, una sola falta de coincidencia de bases ubicada en el extremo 3' del cebador es suficiente para la amplificación preferencial del alelo perfectamente emparejado (Newton et al., 1989, supra), lo que permite la discriminación de especies estrechamente relacionadas. La base de un sistema de amplificación que usa los cebadores descritos anteriormente es que los oligonucleótidos con un residuo 3' no coincidente no funcionarán como cebadores en la PCR bajo condiciones apropiadas. Este sistema de amplificación permite el genotipado únicamente mediante la inspección de las mezclas de reacción después de la electroforesis en gel de agarosa.

El análisis de los productos de amplificación se puede realizar utilizando cualquier método capaz de separar los productos de amplificación de acuerdo con su tamaño, incluyendo electroforesis en gel automatizada y manual, espectrometría de masas y similares.

Los métodos de aislamiento, amplificación y análisis de ácidos nucleicos son rutinarios para un experto en la técnica y se pueden encontrar ejemplos de protocolos, por ejemplo, Green & Sambrook, Eds., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, (2012, 4a edición, Vol. 1-3, ISBN 9781936113422), Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY) La fuente de protocolo particularmente útil para los métodos utilizados en la amplificación por PCR es PCR (Basics: From Background to Bench) by M. J. McPherson, S. G. Mailer, R. Beynon, C. Howe, Springer Verlag; 1st edition (octubre 15, 2000), ISBN: 0387916008.

La presente especificación también proporciona kits predictivos y de diagnóstico que comprenden cebadores degenerados para amplificar un ácido nucleico diana en el gen de ERa e instrucciones que comprenden; protocolo de amplificación y análisis de los resultados. Alternativamente, el kit también puede comprender reguladores, enzimas y recipientes para realizar la amplificación y el análisis de los productos de amplificación. El kit también puede ser un componente de un cribado o un kit de diagnóstico que comprende otras herramientas tales como microarreglos de ADN u otros soportes. Preferentemente, el kit también proporciona una o más plantillas de control, tales como ácidos nucleicos aislados de una muestra de tejido normal, y/o una serie de muestras que representan diferentes variaciones en los genes de referencia.

En una realización, el kit proporciona dos o más pares de cebadores, cada par capaz de amplificar una región diferente del gen de referencia (ERa) (cada región es un sitio de variación potencial), proporcionando así un kit para el análisis de la expresión de varias variaciones genéticas en una muestra biológica en una reacción o varias reacciones paralelas.

Los cebadores en los kits pueden marcarse, por ejemplo, marcados con fluorescencia, para facilitar la detección de los productos de amplificación y el análisis consiguiente de las variaciones de ácido nucleico. El kit también puede permitir detectar más de una variación en un análisis. Por lo tanto, un kit de combinación comprenderá cebadores capaces de amplificar diferentes segmentos del gen de referencia. Los cebadores pueden marcarse diferencialmente, por ejemplo, usando diferentes etiquetas fluorescentes, para diferenciar entre las variaciones.

En otro aspecto, la especificación proporciona un método de tratamiento de un paciente que padece cáncer que comprende: determinar el estatus mutante o de tipo silvestre del gen ERa en las células tumorales del paciente y si el gen ERa es mutante, administrar al paciente una cantidad eficaz de un compuesto de Fórmula (I), (IA), (IB), (IC) o (ID).

Como se usa en este documento, los términos "efectivo" y "efectividad" incluyen tanto la eficacia farmacológica como la seguridad fisiológica. La efectividad farmacológica se refiere a la capacidad del tratamiento para producir un efecto biológico deseado en el paciente. La seguridad fisiológica se refiere al nivel de toxicidad u otros efectos fisiológicos adversos a nivel celular, de órganos y/u organismos (a menudo denominados efectos secundarios) resultantes de la administración del tratamiento. "Menos efectivo" significa que el tratamiento da como resultado un nivel terapéuticamente más bajo de efectividad farmacológica y/o un nivel terapéuticamente mayor de efectos fisiológicos adversos.

De acuerdo con otro aspecto de la especificación, se proporciona el uso de un compuesto de Fórmula (I), (IA), (IB), (IC) o (ID), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo para tratar a un paciente con cáncer cuyas células tumorales se han identificado que poseen un gen ERa mutante.

De acuerdo con otro aspecto de la especificación, se proporciona un compuesto de Fórmula (I), (IA), (IB), (IC) o (ID), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo para tratar cánceres con células tumorales identificadas por alojar un gen ERa mutante.

De acuerdo con otro aspecto de la especificación, se proporciona un método para tratar cánceres con células tumorales identificadas por alojar un gen ERa mutante que comprende administrar una cantidad eficaz de un compuesto de Fórmula (I), (IA), (IB), (IC) o (ID), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

En más realizaciones adicionales, la especificación se refiere a una composición farmacéutica que comprende un compuesto de Fórmula (I), (IA), (IB), (IC) o (ID), para uso en la prevención y el tratamiento del cáncer con células tumorales identificadas como portadoras de un gen ERa mutante.

Para todos aspectos anteriores, formas mutantes de ERa determinadas/identificadas están en todas las posiciones a través del gen.

Para todos aspectos anteriores, usando tumores tales como el cáncer de mama como ejemplo, formas mutantes particulares de ERa determinadas/identificadas son aquellas en las posiciones Ser463Pro, Val543Glu, Leu536Arg, Tyr537Ser, Tyr537Asn y Asp538Gly.

Descripción de los dibujos

la Figura 1 muestra el patrón de difracción de rayos X en polvo para la Forma A de N-(1-(3-fluoropropil)azetidin-3-il)-6- ((6S,8R)-8-metil-7-(2,2,2-trifluoroetil)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)piridin-3-amina.

la Figura 2 muestra el Termograma DSC/TGA para la Forma A de N-(1-(3-fluoropropil)azetidin-3-il)-6-((6S,8R)-8-metil-7- (2,2,2-trifluoroetil)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)piridin-3-amina.

la Figura 3 muestra el patrón de difracción de rayos X en polvo para la Forma B de N-(1-(3-fluoropropil)azetidin-3-il)-6-((6S,8R)-8-metil-7-(2,2,2-trifluoroetil)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)piridin-3-amina.

la Figura 4 muestra el patrón de difracción de rayos X en polvo para la Forma C de N-(1-(3-fluoropropil)azetidin-3-il)-6- ((6S,8R)-8-metil-7-(2,2,2-trifluoroetil)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)piridin-3-amina.

la Figura 5 muestra el Termograma DSC/TGA para la Forma C de N-(1-(3-fluoropropil)azetidin-3-il)-6-((6S,8R)-8-metil-7- (2,2,2-trifluoroetil)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)piridin-3-amina.

la Figura 6 muestra el patrón de difracción de rayos X en polvo para la Forma D de N-(1-(3-fluoropropil)azetidin-3-il)-6- ((6S,8R)-8-metil-7-(2,2,2-trifluoroetil)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)piridin-3-amina.

la Figura 7 muestra el Termograma DSC/TGA para la Forma D de N-(1-(3-fluoropropil)azetidin-3-il)-6-((6S,8R)-8-metil-7- (2,2,2-trifluoroetil)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)piridin-3-amina.

la Figura 8 muestra el patrón de difracción de rayos X en polvo para la Forma E de N-(1-(3-fluoropropil)azetidin-3-il)-6- ((6S,8R)-8-metil-7-(2,2,2-trifluoroetil)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)piridin-3-amina.

la Figura 9 muestra el Termograma DSC/TGA para la Forma E de N-(1-(3-fluoropropil)azetidin-3-il)-6-((6S,8R)-8-metil-7- (2,2,2-trifluoroetil)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)piridin-3-amina.

la Figura 10 muestra el patrón de difracción de rayos X en polvo para la Forma F de N-(1-(3-fluoropropil)azetidin-3-il)-6-((6S,8R)-8-metil-7-(2,2,2-trifluoroetil)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)piridin-3-amina.

la Figura 11 muestra el patrón de difracción de rayos X en polvo para la Forma G de N-(1-(3-fluoropropil)azetidin-3-il)-6-((6S,8R)-8-metil-7-(2,2,2-trifluoroetil)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)piridin-3-amina.

la Figura 12 muestra los resultados de un estudio de eficacia antitumoral de xenoinjerto MCF7 parental humano en ratón con N-(1-(3-fluoropropil)azetidin-3-il)-6-((6S,8R)-8-metil-7-(2,2,2-trifluoroetil)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)piridin-3-amina.

la Figura 13 muestra los resultados de un estudio de eficacia antitumoral de xenoinjerto MCF7 mutante ESR1 Y537S humano en ratón con N-(1-(3-fluoropropil)azetidin-3-il)-6-((6S,8R)-8-metil-7-(2,2,2-trifluoroetil)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)piridin-3-amina.

la Figura 14 muestra los resultados de un estudio de eficacia antitumoral CTC174 de xenoinjerto derivado de paciente con cáncer de mama mutante humano ESR1 en ratones con N-(1-(3-fluoropropil)azetidin-3-il)-6-((6S,8R)-8-metil-7-(2,2,2-trifluoroetil)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)piridin-3-amina.

la Figura 15 muestra los resultados de un estudio de eficacia antitumoral contra el xenoinjerto CTC174 derivado de un paciente con cáncer de mama humano con ESR1 mutante en ratones con una combinación de N-(1-(3-fluoropropil)azetidin-3-il)-6-((6S,8R)-8-metil-7-(2,2,2-trifluoroetil)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)piridin-3-amina y palbociclib.

la Figura 16 muestra el resultado de un estudio de eficacia antitumoral contra xenoinjerto CTC174 derivado de un paciente con cáncer de mama humano con ESR1 mutante en ratones con una combinación de N-(1-(3-fluoropropil)azetidin-3-il)-6-((6S,8R)-8-metil-7-(2,2,2-trifluoroetil)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)piridin-3-amini y vistusertib (AZD2014).

Ejemplos

Los compuestos descritos en esta especificación se ilustran adicionalmente en los siguientes Ejemplos. Estos ejemplos se dan solo a modo de ilustración y no son limitantes. En general:

(i) las operaciones se llevaron a cabo a temperatura ambiente, es decir, en el rango de 17 a 25°C y bajo una atmósfera de un gas inerte tal como el nitrógeno a menos que se indique otra cosa;

(ii) las evaporaciones se llevaron a cabo mediante evaporación rotativa o utilizando equipo de Genevac o evaporador Biotage v10 in vacuo y los procedimientos de tratamiento se llevaron a cabo después de la eliminación de los sólidos residuales por filtración;

(iii) las purificaciones por cromatografía instantánea se realizaron en un Teledyne Isco CombiFlash® Rf automoatizado o Teledyne Isco CombiFlash® Companion® usando columnas de sílica RediSep Rf Gold™ preempaquetadas (20-40 |jm, partículas esféricas), cartuchos GraceResolv ™ (sílica Davisil®) o Cartuchos de siliciclo (40-63 jm ).

(iv) la cromatografía preparativa se realizó en un instrumento Gilson prep HPLC con recolección UV o mediante cromatografía de fluido supercrítico realizada en un instrumento Waters Prep 100 SFC-MS con recolección activada por MS y UV o un instrumento Thar MultiGram III SFC con recolección UV;

(v) la cromatografía preparativa quiral se realizó en un instrumento Gilson con recolección UV (inyector 233/recolector de fracciones, bombas 333 y 334, detector 155 UV) o un instrumento Varian Prep Star (2 x bombas SD1, detector 325 UV, recolector de fracciones 701) bomba funcionando con inyección Gilson 305;

(vi) los rendimientos, cuando están presentes, no son necesariamente los máximos alcanzables;

(vii) en general, las estructuras de los productos finales de la Fórmula I se confirmaron mediante espectroscopía de resonancia magnética nuclear (RMN); Los valores de desplazamiento químico de RMN se midieron en la escala delta [los espectros de resonancia magnética de protón se determinaron usando un instrumento Bruker Avance 500 (500 MHz) o Bruker Avance 400 (400 MHz)]; las mediciones se tomaron a temperatura ambiente a menos que se especifique otra cosa; Se han utilizado las siguientes abreviaturas: s, singlete; d, doblete; t, triplete; q, cuarteto; m, multiplete; dd, doblete de dobletes; ddd, doblete de doblete de doblete; dt, doblete de tripletes; bs, señal amplia

(viii) en general, los productos finales de la Fórmula I también se caracterizaron por espectroscopía de masas después de cromatografía líquida (LCMS o UPLC); La UPLC se llevó a cabo utilizando un Waters UPLC equipado con un espectrómetro de masas Waters SQ (temperatura de columna 40, UV = 220-300 nm, especificación de masa = ESI con conmutación positiva/negativa) a una tasa de flujo de 1 ml/min utilizando un sistema disolvente del 97% A 3% de B a 3% de A a 97% de B durante 1.50 minutos (tiempo de ejecución total con equilibrio de regreso a las condiciones de inicio, etc. 1.70 minutos), donde A = 0.1% de ácido fórmico en agua (para trabajo ácido) o 0.1% de amoníaco en agua (para trabajo base) B = acetonitrilo. Para el análisis ácido, la columna utilizada fue Waters Acquity HSS T3 1.8 jm 2.1 x50 mm, para el análisis base la columna utilizada fue Waters Acquity BEH 1.7 jm 2.1x50 mm; El LCMS se llevó a cabo utilizando un Waters Alliance HT (2795) equipado con un espectrómetro de masas Waters ZQ ESCi y una columna Phenomenex Gemini -NX (50x2.1 mm 5 jm ) a una tasa de flujo de 1.1 ml/min 95% A a 95% B sobre 4 min con una retención de 0.5 min. El modificador se mantiene a un constante 5% C (50:50 acetonitrilo: agua 0.1% ácido fórmico) o D (50:50 acetonitrilo: agua 0.1% hidróxido de amonio (0.88 SG) dependiendo de si es un método ácido o básico.

(ix) la purificación por intercambio iónico se realizó generalmente usando un cartuco SCX-2 (Biotage, sílica funcionalizada con ácido propilsulfónico. Fabricado usando un silano trifuncional. No protegidos en el extremo).

(x) la pureza intermedia se evaluó mediante cromatografía en capa fina, espectral de masas, HPLC (cromatografía líquida de alta resolución) y/o análisis de RMN;

(xi) se han utilizado las siguientes abreviaturas:-

AcOH ácido acético

aq. acusos

Boc tert-butoxicarbonilo

n-BuLi n-buti-litio

tBuOH tert-butanol

Brettphos 2-(diciclohexilfosfino)3,6-dimetoxi-2',4',6'-triisopropil-1,1'-bifenilo

CDCI3 deutero-cloroformo

CHCI3 cloroformo

Conc. concentrado

DCM diclorometano

DIPEA diisopropiletilamina

DMAP dimetilaminopiridina

DMSO dimetil sulfóxido

EtOH etanol

EtOAc acetato de etilo

HATU 3-óxido hexafluorofosfato de 1-[bis(dimetilamino)metilen]-1H-1,2,3-triazolo[4,5-b]piridinio

HCl ácido clorhídrico

HPLC cromatografía líquida de alto rendimiento

K2CO3 carbonato de potasio

MeOH metanol

MgSO4 sulfato de magnesio

NaH hidruro de sodio

NaHCO3 bicarbonato de sodio

Na2SO4 sulfato de sodio

Pd2(dba)3 tris(dibencilidenacetona)dipaladio (0)

Rac-BINAP (6)-2,2'-Bis(difenilfosfino)-1,1'-binaftaleno

ta/TA temperature ambiente

RockPhos precatalizador de 3a generación metanosulfonato de [(2-Di-tert-butilfosfino-3-metoxi-6-metil-2',4',6'-triisopropil-1,1'-bifenil)-2-(2-aminobifenil)]paladio (II)

Ruphos 2-Diciclohexilfosfino-2',6'-diisopropoxi-1,1'-bifenilo

sat. saturado

SFC cromatografía de fluidos supercríticos

sol. solución

TBAF fluoruro de tetra-n-butilamonio

TEA trietilamina

THF tetrahidrofurano

THP tetrahidropirano

TFA ácido trifluoroacético

Xantphos 4,5-bis(difenilfosfino)-9,9-dimetil xantano

Ejemplo 1

N-(4-((6S,8R)-7-(2,2-difluoro-3-metoxipropil)-8-metil-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)-3-metoxifenil)-1-(3-fluoropropil)azetidin-3-amina

Se añadió metanosulfato de [(2-Di-ciclohexilfosfino-3,6-dimetoxi-2’,4’,6’-triisopropil-1,1'-bifenil)-2-(2'-amino-1,1'-bifenil)]paladio (II) (BrettPhos Pd G3) (6,80 mg, 7,50 ^mol) a una suspensión de (6S,8R)-6-(4-bromo-2-metoxifenil)-7-(2,2-difluoro-3-metoxipropil)-8-metil-3-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina (85 mg, 0.15 mmol), 1-(3-fluoropropil)azetidin-3-amina (29.7 mg, 0.23 mmol) y tert-butóxido de sodio (28.8 mg, 0.30 mmol) en 1,4-dioxano desgasificado (1.5 mL) y la reacción se calentó hasta 90°C durante 3 horas. Después de enfriar, la reacción se diluyó con DCM y se lavó con agua. La fase acuosa se extrajo con DCM, luego las fases orgánicas combinadas se secaron y se evaporaron. El residuo crudo se disolvió en DCM (2 ml) y se añadió TFA (0.7 ml). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora, luego se diluyó con DCM y se basificó mediante la adición de solución saturada de NaHCO3. Las capas se separaron y la fase acuosa se extrajo con DCM. Las fases orgánicas combinadas se secaron y se evaporaron, luego el producto crudo se purificó por cromatografía instantánea sobre sílica, gradiente de elución de 0 a 20% de MeOH en EtOAc. Las fracciones puras se evaporaron hasta sequedad para proporcionar N-(4-((6S,8R)-7-(2,2-difluoro-3-metoxipropil)-8-metil-6,7,8,9-tetrahidro-3H- pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)-3-metoxifenil)-1-(3-fluoropropil)azetidin-3-amina (39.0 mg, 49%) como un sólido de color beige. 1H r Mn (500 MHz, CDCls, 27°C) 1.09 (3H, d), 1.83 (2H, ddd), 2.65 - 2.86 (4H, m), 2.96- 3.08 (1H, m), 3.11 (1H, dd), 3.22 (2H, d), 3.38 (3H, s), 3.51 - 3.63 (2H, m), 3.73 - 3.82 (1H, m), 3.82 (3H, s), 3.86 (2H, q), 4.15 -4.28 (1H, m), 4.43 (1H, t), 4.53 (1H, t), 5.37 (1H, s), 5.88 (1H, dd), 6.14 (1H, d), 6.46 (1H, d), 6.80 ( 1H, d), 7.13 (1H, d), 8.04 (1H, d). m/z: ES+ [M+H]+ 532. La (6S,8R)-6-(4-bromo-2-metoxifenil)-7-(2,2-difluoro-3-metoxipropil)-8-metil-3-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina se preparó como sigue:

Preparación de 2,2-difluoro-3-(tritiloxi)propan-1-ol

P h i-,.

U Ph

H O ^ ^ ^ O ^ P h

F F

Se disolvió 2,2-difluoropropano-1,3-diol (2.50 g, 22.3 mmol) en DCM (61,7 ml) y THF (15.4 ml). Se añadió DIPEA (3.93 ml, 22.3 mmol), seguido de (clorometanotriil)tribenzeno (6.22 g, 22.3 mmol) y finalmente DMAP (0.288 g, 2.23 mmol). La reacción se calentó hasta 40 °C durante 2 horas. Después de enfriar, la reacción se lavó con solución de HCl 1 N, luego se secó y se evaporó. El producto crudo se purificó por cromatografía instantánea sobre sílica, gradiente de elución de 0 a 25% de EtOAc en heptano. Las fracciones crudas se evaporaron hasta sequedad para proporcionar 2,2-difluoro-3- (tritiloxi) propan-1-ol (4.43 g, 56%) como un sólido incoloro. 1H RMN (500 MHz, c Dc I3) 3.42 (2H, t), 3.92 (2H, t), 7.23 - 7.3 (4H, m), 7.3 - 7.39 (6H, m), 7.39 - 7.49 (6H, m).

Preparación de ((2,2-difluoro-3-metoxipropoxi)metanotriil)tribenceno

Se añadió hidruro de sodio (0.562 g, 14.0 mmol) a una solución de 2,2-difluoro-3-(tritiloxi) propan-1-ol (4.15 g, 11.7 mmol) en THF (46 mL) y la reacción se agitó durante 1 hora, luego se añadió yodometano (0.802 ml, 12.9 mmol) en THF (5 ml). La reacción se agitó durante 1 hora más. La reacción se inactivó con agua y salmuera, luego se extrajo con EtOAc. La capa orgánica se secó y se evaporó para proporcionar ((2,2-difluoro-3-metoxipropoxi)metanetriil) tribenceno (4.18 g, 97%) como un aceite de color amarillo pálido. 1H RMN (500 MHz, CDCl3) 3.36 (2H, t), 3.40 (3H, s), 3.77 (2H, t), 7.15 - 7.28 (3H, m), 7.28 - 7.38 (6H, m), 7.39 - 7.47 (6H, m).

Preparación de 2,2-difluoro-3-metoxipropil trifluorometanosulfonato

Se añadió anhídrido trifluorometanosulfónico (1.918 ml, 11.40 mmol) a una solución de ((2,2-difluoro-3-metoxipropoxi) metanetriil) tribenceno (4.00 g, 10.9 mmol) en DCM (39.6 ml). La reacción se agitó durante 30 minutos, luego se añadió trietilsilano (1.934 ml, 11.94 mmol) y la reacción se agitó durante 30 minutos más. La reacción se evaporó y el triflato se usó directamente en la siguiente etapa.

Preparación de (R)-1-(3-bromo-2-metilfenil)propan-2-amina

Se añadió n-BuLi (26.1 ml, 41.8 mmol) gota a gota a una solución de 1,3-dibromo-2-metilbenceno (9.95 g, 39.8 mmol) en THF (100 ml) a -78°C. Después de agitar durante 30 minutos, se añadió en porciones 2,2-dióxido de 4-metil-1,2,3-oxatiazolidina-3-carboxilato de (R)-butilo (10.39 g, 43.8 mmol) en porciones y la reacción se agitó durante otros 30 minutos antes de dejar que se caliente a 0°C durante 30 minutos. Se añadió ácido cítrico 1 N y la mezcla se agitó durante 5 minutos antes de extraerse con EtOAc (x2). Las fases orgánicas combinadas se evaporaron. El residuo se agitó en HCl 4 M en dioxano (69.7 ml, 278.7 mmol) a temperatura ambiente durante 1 hora, luego se evaporaron los volátiles. El residuo se suspendió en éter dietílico y se extrajo con agua (x2). Las fases acuosas combinadas se basificaron mediante la adición de Na2CO32 N, luego se extrajeron con DCM (x3). Las fases orgánicas combinadas se secaron sobre MgSO4 y se concentraron para proporcionar (R)-1-(3-bromo-2-metilfenil) propan-2-amina (7.55 g, 83%) como un aceite de color amarillo. 1H RMN (400 MHz, CDCls, 27°C) 1.13 (3H, d), 1.43 (2H, s), 2.40 (3H, s), 2.61 (1H, dd), 2.77 (1H, dd), 3.14 (1H, dq), 6.97 (1H, t), 7.08 (1H, d), 7.43 (1H, d). m/z (ES+), [M+H]+ = 228.

Preparación de (R)-N-(1-(3-bromo-2-metilfenil)propan-2-il)-2,2-difluoro-3-metoxipropan-1-amina

_BrAAf f

Se añadió 2,2-difluoro-3-metoxipropil trifluorometanosulfonato (3.03 g, 11.73 mmol) (crudo de la etapa anterior) a una solución de (R)-1-(3-bromo-2-metilfenil) propan-2-amina (2.327 g, 10.2 mmol) y DiPEa (2.82 mL, 16.32 mmol) en 1,4-dioxano (34.3 mL) y la reacción se calentó hasta 80°C durante la noche. Después de enfriar, los volátiles se evaporaron, luego el residuo se disolvió en DCM y se lavó con salmuera. La fase orgánica se secó y se evaporó, luego el producto crudo se purificó por cromatografía instantánea sobre sílica, gradiente de elución de 0 a 100% de EtOAc en heptano. Las fracciones puras se evaporaron hasta sequedad para proporcionar (R)-N-(1-(3-bromo-2-metilfenil) propan-2-il)-2,2-difluoro-3-metoxipropan-1-amina (2.330 g, 68%) como un aceite de color amarillo pálido. 1H RMN (500 MHz, CDCls) 1.06 (3H, d), 2.40 (3H, s), 2.63 (1H, dd), 2.82 (1H, dd), 2.86- 2.94 (1H, m), 2.95 - 3.11 (2H, m), 3.38 (3H, s), 3.51 - 3.63 (2H, m), 6.94 - 7 (1H, m), 7.07 (1H, dd), 7.4 - 7.51 (1H, m). m/z: ES+ [M+H]+ 336.

Preparación de (R)-3-(2-((2,2-difluoro-3-metoxipropil)amino)propil)-2-metilanilina

Se agregaron Pd2(dba)3 (0.184 g, 0.20 mmol) y Rac-BINAP (0.250 g, 0.40 mmol) a una suspensión de (R)-N-(1-(3-bromo-2-metilfenil) propan-2-il)-2,2-difluoro-3-metoxipropan-1-amina (2.25 g, 6.69 mmol), benzofenona imina (1.334 g, 7.36 mmol) y tert-butóxido de sodio (0.965 g, 10.0 mmol) en tolueno desgasificado ( 28.5 ml) y la reacción se calentó hasta 90°C durante 3 horas. Después de enfriar, el tolueno se evaporó en gran medida, luego el residuo se disolvió en DCM y se lavó con agua. La fase acuosa se extrajo con DCM, luego los orgánicos se evaporaron a un volumen de ~50 ml. Se añadió solución de HCl 2 N (50 ml) y la mezcla bifásica se agitó vigorosamente durante 30 minutos. Las capas se separaron, luego la fase acuosa se extrajo con DCM. La fase orgánica se volvió a extraer con HCl 1N. Las fases acuosas combinadas se basificaron mediante la adición de K2CO3 sólido y luego se extrajeron con DCM (x3), y los extractos combinados de DCM se secaron y evaporaron para proporcionar (R)-3-(2-((2,2-difluoro-3-metoxipropilo))amino) propil)-2-metilanilina (1.780 g, 98%) como un aceite de color marrón claro. 1H RMN (500 MHz, CDCh) 1.06 (3H, d), 2.11 (3H, s), 2.59 (1H, dd), 2.75 (1H, dd), 2.86- 2.94 (1H, m), 2.94 - 3.12 (2H, m), 3.38 (3H, s), 3.53 - 3.63 (4H, m), 6.5 -6.68 (2H, m), 6.86- 7.01 (1H, m). m/z: ES+ [M+H]+ 273.

Preparación de (1 S,3R)-1-(4-bromo-2-metoxifenil)-2-(2,2-difluoro-3-metoxipropil)-3,5-dimetil-1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-6-amina

(R)-3-(2-((2,2-Difluoro-3-metoxipropil)amino)propil)-2-metilanilina (490 mg, 1.80 mmol) y 4-bromo-2-metoxibenzaldehído (813 mg, 3.78 mmol) se calentaron en ácido acético (8.8 ml) y agua (0.162 ml, 9.00 mmol) a 75°C durante la noche. Después de enfriar, el ácido acético se evaporó al vacío, luego el residuo se disolvió en EtOAc (20 ml) y se añadió solución de HCl 2 N (20 ml). La mezcla bifásica se agitó durante 30 minutos, luego se separaron las capas. La fase orgánica se extrajo con agua, luego la fase acuosa se basificó mediante la adición de solución de NaOH 2 N y se extrajo con DCM (x2). Las capas de DCM combinadas se secaron y se evaporaron, luego el producto crudo se purificó por cromatografía instantánea sobre sílica, gradiente de elución de EtOAc al 50% en heptano. Las fracciones puras se evaporaron hasta sequedad para proporcionar (1S, 3R)-1-(4-bromo-2-metoxifenil)-2-(2,2-difluoro-3-metoxipropil)-3,5-dimetil-1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-6-amina (384 mg, 46%) como un sólido de color beige. 1H RMN (500 MHz, CDCls, 27°C) 1.03 (3H, d), 2.07 (3H, s), 2.42 (1H, dd), 2.60 - 2.76 (2H, m), 2.99 (1H, ddd), 3.34 (1H, d), 3.36 (3H, s), 3.52 (2H, s), 3.54 - 3.66 (1H, m), 3.76 (1H, ddd), 3.87 (3H, s), 5.28 (1H, s), 6.47 (2H, s), 6.59 (1H, d), 6.88 (1H, dd), 7.01 (1H, d). m/z: ES+[M+H]+469.

Preparación de (6S,8R)-6-(4-bromo-2-metoxifenil)-7-(2,2-difluoro-3-metoxipropil)-8-metil-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina

Se añadió nitrito de sodio (59.8 mg, 0.87 mmol) en agua (0.2 mL) a una solución enfriada de (1S,3R)-1-(4-bromo-2-metoxifenil)-2-(2,2-difluoro-3 -metoxipropil)-3,5-dimetil-1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-6-amina (370 mg, 0.79 mmol) en ácido propiónico (2628 ^L)/agua (526 ^L) a -10°C. La reacción se agitó durante 1 hora, luego se añadió EtOAc helado (20 ml). La reacción se interrumpió mediante la adición de solución de NaHCO3 saturado frío y se agitó durante 15 minutos, antes de dejar que se calentara hasta temperatura ambiente. Las capas se separaron y la fase acuosa se extrajo con EtOAc. Las fases orgánicas combinadas se secaron y se evaporaron, luego el producto crudo se purificó por cromatografía instantánea sobre sílica, gradiente de elución de 0 a 50% de EtOAc en heptano. Las fracciones puras se evaporaron hasta sequedad para proporcionar (6S,8R)-6-(4-bromo-2-metoxifenil)-7-(2,2-difluoro-3-metoxipropil)-8-metil-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina (252 mg, 67%) como un sólido de color beige. 1H RMN (500 MHz, CDCls, 27°C) 1.10 (3H, d), 2.72 (1H, td), 2.85 (1H, dd), 3.08 (1H, ddd), 3.16 (1H, dd), 3.36 (3H, s), 3.48 - 3.66 (2H, m), 3.65 - 3.81 (1H, m), 3.90 (3H, s), 5.44 (1H, s), 6.59 (1H, d), 6.77 (1H, d), 6.89 (1H, dd), 7.05 (1H, d), 7.19 (1H, dd), 8.07 (1H, d). m/z: ES+ [M+H]+ 480.

Preparación de (6S,8R)-6-(4-bromo-2-metoxifenil)-7-(2,2-difluoro-3-metoxipropil)-8-metil-3-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina

Se añadió 3,4-dihidro-2H-pirano (0.064 ml, 0.70 mmol) a una solución de (6S,8R)-6-(4-bromo-2-metoxifenil)-7-(2,2-difluoro-3 -metoxipropil)-8-metil-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina (240 mg, 0.50 mmol) e hidrato de ácido p-toluenosulfónico (9.51 mg, 0.05 mmol) en DCM (2.5 ml) y la reacción se calentó hasta 40°C durante 1 hora. Después de enfriar, la reacción se diluyó con DCM y se lavó con solución saturada de NaHCO3. La fase orgánica se secó y se evaporó. El residuo crudo se pasó a través de un tapón de sílica gel (EtOAc/heptano, 1:1 como eluyente) y el filtrado se evaporó para proporcionar (6S,8R)-6-(4-bromo-2-metoxifenil)-7-(2,2-difluoro-3-metoxipropil)-8-metil-3-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina (262 mg, 93%) como un sólido de color amarillo pálido como una relación 5:1 de regioisómeros THP (cada regioisómero THP es una mezcla diastereosiomérica). m/z: ES+ [M+H]+ 564.

Preparación de tert-butil (1-(3-fluoropropil)azetidin-3-il)carbamato

Carbonato de potasio (1.605 g, 11.61 mmol), tert-butil azetidin-3-ilcarbamato (1.0 g, 5.81 mmol) y 1-fluoro-3-yodopropano (1.146 g, 6.10 mmol) fueron suspendidos en acetonitrilo (11.61 mL) y sellados en un tubo de microondas. La reacción se calentó hasta 95°C durante 15 minutos en el reactor de microondas. La reacción se enfrió hasta temperatura ambiente, se diluyó con EtOAc (100 ml) y se extrajo de NaHCO3 saturado (50 ml). La fase orgánica se secó sobre MgSO4, se filtró y se evaporó para proporcionar (1-(3-fluoropropil)azetidin-3-il)carbamato de tert-butilo (1.248 g, 93%) como un sólido de color amarillo. 1H RMN (500 MHz, CDCh, 22°C) 1.44 (9H, s), 1.68 - 1.80 (2H, m), 2.56 (2H, t), 2.88 (2H, s), 3.66 (2H, t), 4.31 (1H, d), 4.43 (1H, t), 4.53 (1H, t), 4.90 (1H, s).

Preparación de 1-(3-fluoropropil)azetidin-3-amina

Se añadió TFA (2.69 ml) a una solución de (1-(3-fluoropropil)azetidin-3-il)carbamato de tert-butilo (1.248 g, 5.37 mmol) en DCM (8.06 ml) y la reacción se agitó a temperatura ambiente. durante 1 hora. Los volátiles se evaporaron y purificaron por cromatografía de intercambio iónico, usando una columna SCX. El producto deseado se eluyó de la columna usando NH3 1 M/MeOH y las fracciones puras se evaporaron hasta sequedad para proporcionar 1-(3-fluoropropil)azetidin-3-amina (0.697 g, 98%) como un aceite incoloro. 1H RMN (500 m Hz , CDCh, 27°C) 1.66- 1.83 (2H, m), 1.96 (3H, s), 2.54 (2H, t), 2.67 (2H, td), 3.58 - 3.70 (2H, m), 4.43 (1H, t), 4.52 (1H, t).

Ejemplo 2

6-((6S,8R)-7-(2,2-difluoro-3-metoxipropil)-8-metil-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)-N-(1-(3-fluoropropil)azetidin-3-il)piridin-3-amina

Se agregaron Metanosulfonato de [(2-Di-ciclohexilfosfino-3,6-dimetoxi-2’,4’,6’-triisopropil-1,1'-bifenil)-2-(2'-amino-1,1'-bifenil)]paladio (II) (BrettPhos Pd g 3) (6.83 mg, 8.00 ^mol) y tert-butóxido de sodio (48.0 mg, 0.50 mmol) a una solución desgasificada de (6S,8R)-6-(5-bromopiridina-2-il)-7-(2,2-difluoro-3-metoxipropil)-8-metil-3-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina (107 mg, 0.20 mmol) y 1-(3-fluoropropil)azetidin-3-amina (52.9 mg, 0.40 mmol) en 1,4-dioxano (1.6 ml) y la reacción se calentó hasta 90°C.°C durante 5 horas. Después de enfriar, la reacción se diluyó con DCM y se lavó con agua. La fase orgánica se evaporó, luego se disolvió en DCM (2 ml), antes de agregar TFA (1 ml). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora, luego se diluyó con d Cm y se lavó con solución saturada de NaHCO3. Las capas se separaron y la fase acuosa se extrajo con DCM. Las fases orgánicas combinadas se secaron y se evaporaron, luego el producto crudo se purificó por cromatografía instantánea sobre sílica, gradiente de elución de 0 a 20% de MeOH en EtOAc. Las fracciones puras se evaporaron hasta sequedad para proporcionar 6-((6S,8R)-7-(2,2-difluoro-3-metoxipropil)-8-metil-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)-N-(1-(3-fluoropropil)azetidin-3-il)piridin-3-amina (83 mg, 83%) como un sólido de color beige. 1H RMN (500 MHz, CDCl3) 1.12 (3H, d), 1.79 (2H, ddd), 2.71 (2H, t), 2.75 - 2.90 (2H, m), 3.06- 3.23 (3H, m), 3.39 (3H, s), 3.51 - 3.66 (2H, m), 3.66- 3.76 (1H, m), 3.76-3.84 (2H, m), 4.14 (1H, s), 4.44 (2H, t), 4.53 (1H, t), 5.06 (1H, s), 6.80 (1H, dd), 6.88 (1H, d), 7.13 (2H, dd), 7.84 (1H, d), 7.99 (1H, d). m/z: ES+ [M+H]+503.

La (6S,8R)-6-(5-bromopiridin-2-il)-7-(2,2-difluoro-3-metoxipropil)-8-metil-3-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina se preparó como sigue:

Preparación de (1S,3R)-1-(5-bromopiridin-2-il)-2-(2,2-difluoro-3-metoxipropil)-3,5-dimetil-1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-6-amina

Se añadió 5-bromopicolinaldehído (1172 mg, 6.30 mmol) a una solución de (R)-3-(2-((2,2-difluoro-3-metoxipropil)amino)propil)-2-metilanilina (817 mg, 3.00 mmol) en ácido acético (14.7 mL) y agua (270 ^L, 15.0 mmol) y la reacción se calentó hasta 80°C durante 2 horas. Después de enfriar, los volátiles se evaporaron bajo vacío. El residuo se disolvió en DCM y se lavó con solución saturada de NaHCO3. La fase orgánica se evaporó a un volumen de ~20 ml y se añadió solución de HCl 2 N (20 ml). La mezcla bifásica se agitó durante 15 minutos, luego se separó. La fase orgánica se extrajo con agua, luego la fase acuosa se volvió a extraer con DCM. La fase acuosa se basificó luego mediante la adición de K2CO3 sólido, luego se extrajo con DCM. Los extractos orgánicos se secaron y se evaporaron. El producto crudo se purificó por cromatografía instantánea sobre sílica, gradiente de elución de 0 a 50% de EtOAc en heptano. Las fracciones puras se evaporaron hasta sequedad para proporcionar (1S,3R)-1-(5-bromopiridin-2-il)-2-(2,2-difluoro-3-metoxipropil)-3,5-dimetil-1,2, 3,4-tetrahidroisoquinolin-6-amina (810 mg, 61%) como un sólido de color beige. 1H RMN (500 MHz, CDCl3) 1.07 (3H, d), 2.05 (3H, s), 2.49 (1H, d), 2.75 (2H, dd), 3.04 -3.17 (1H, m), 3.30 - 3.36 (1H, m), 3.37 (3H, s), 3.58 - 3.74 (2H, m), 4.96 (1H, s), 6.51 (1H, d), 6.60 (1H, d), 7.22 (1H, d), 7.68 ( 1H, dd), 8.55 (1H, dd). m/z: ES+ [M+H]+ 440.

Preparación de (6S,8R)-6-(5-bromopiridin-2-il)-7-(2,2-difluoro-3-metoxipropil)-8-metil-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina

Se añadió nitrito de sodio (133 mg, 1.93 mmol) en agua (0.5 ml) a una solución enfriada de (1S,3R)-1-(5-bromopiridin-2-il)-2-(2,2-difluoro-3-metoxipropil)-3,5-dimetil-1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-6-amina (771 mg, 1.75 mmol) en ácido propiónico (5833 ^L)/agua (1167 ^L) a -15°C. La reacción se agitó durante 30 minutos, luego se añadió EtOAc (50 ml), que se había enfriado en hielo seco. La reacción se interrumpió mediante la adición de Na2CO32 N hasta que cesó el burbujeo, luego se separaron las capas. La capa acuosa se extrajo con EtOAc, luego la fase orgánica se secó y se evaporó. El producto crudo se purificó por cromatografía instantánea sobre sílica, gradiente de elución de 0 a 50% de EtOAc en heptano. Las fracciones puras se evaporaron hasta sequedad para proporcionar (6S,8R)-6-(5-bromopiridin-2-il)-7-(2,2-difluoro-3-metoxipropil)-8-metil-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina (460 mg, 58%) como un sólido de color amarillo pálido. 1H RMN (500 MHz, CDCl3) 1.14 (3H, d), 2.81 (1H, dd), 2.88 (1H, dd), 3.10 - 3.26 (2H, m), 3.38 (3H, s), 3.46- 3.55 (1H, m), 3.58 - 3.76 (2H, m), 5.13 (1H, s), 6.94 (1H, d), 7.23 (1H, dd), 7.29 (1H, d), 7.72 (1H, dd), 8.05 ( 1H, d), 8.57 (1H, dd). m/z: ES+ [M+H]+ 451.

Preparación de (6S,8R)-6-(5-bromopiridin-2-il)-7-(2,2-difluoro-3-metoxipropil)-8-metil-3-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina

Se añadió 3,4-dihidro-2H-pirano (0.114 ml, 1.25 mmol) a una solución de (6S,8R)-6-(5-bromopiridin-2-il)-7-(2,2-difluoro-3-metoxipropil)-8-metil-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina (450 mg, 1.00 mmol) e hidrato de PTSA (37.9 mg, 0.20 mmol) en DCM (5 mL) y la reacción se calentó hasta 45°C durante 3 horas. Después de enfriar, la reacción se diluyó con DCM y se lavó con solución saturada de NaHCO3. La fase orgánica se secó y se evaporó, luego el producto crudo se pasó a través de un tapón de sílica (1:1 EtOAc/heptano). El filtrado se evaporó para proporcionar (6S,8R)-6-(5-bromopiridin-2-il)-7-(2,2-difluoro-3-metoxipropil)-8-metil-3-(tetrahidro-2H-piran -2-il)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazo¡o[4,3-f]isoquinolina (510 mg, 9%) como un sólido de color naranja (relación ~6.5:1 de regioisómeros THP). m/z: ES+ [M+H]+ 535.

Ejemplo 3

6-((6S,8R)-7-((1-fluorociclopropil)metil)-8-metil-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)-N-(1-(3-fluoropropil)azetidin-3-il)piridin-3-amina

Se agregaron metanosulfonato de [(2-Di-ciclohexilfosfino-3,6-dimetoxi-2’,4’,6’-triisopropil-1,1'-bifenil)-2-(2'-amino-1,1'-bifenil)]paladio (II) se (BrettPhos Pd G3) (12.11 mg, 0.01 mmol) y tert-butóxido de sodio (85 mg, 0.89 mmol) a una solución desgasificada de (6S,8R)-6-(5-bromopiridina-2-il)-7-((1-fluorociclopropil)metil)-8-metil-3-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina (177 mg, 0.35 mmol) y 1-(3-fluoropropil)azetidin-3-amina (94 mg, 0.71 mmol) en 1,4-dioxano (2835 ^L) y la reacción se calentó hasta 90°C durante 5 horas. Después de enfriar, la reacción se diluyó con DCM y se lavó con agua. La fase orgánica se evaporó, luego se disolvió en DCM (2 ml), antes de agregar TFA (1 ml). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora, luego se diluyó con d Cm y se lavó con solución saturada de NaHCO3. Las capas se separaron y la fase acuosa se extrajo con DCM. Las fases orgánicas combinadas se secaron y se evaporaron para dar el producto crudo. El producto crudo se purificó por LCMS preparativa (columna Waters SunFire, sílica de 5 ^, 19 mm de diámetro, 100 mm de longitud), usando mezclas de agua decrecientemente polares (que contenían 1% de NH3) y MeCN como eluyentes. Las fracciones que contenían los compuestos deseados se evaporaron hasta sequedad para dar 6-((6S,8R)-7-((1-fluorociclopropil)metil)-8-metil-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)-N-(1-(3-fluoropropil)azetidin-3-il)piridin-3-amina (17.0 mg, 10%) como un sólido de color beige. 1H RMN (500 MHz, CDCl3, 27°C) 0.36- 0.46 (1H, m), 0.49 - 0.59 (1H, m), 0.88 - 1.07 (2H, m), 1.09 (3H, d), 1.69 - 1.75 ( 1H, m), 1.75 - 1.81 (1H, m), 2.59 (2H, t), 2.70 (1H, dd), 2.86- 2.96 (3H, m), 3.01 -3.11 (1H, m), 3.37- 3.44 ( 1H, m), 3.72 (2H, q), 3.78 - 3.88 (1H, m), 3.95 (1H, d), 4.04 - 4.13 (1H, m), 4.44 (1H, t), 4.53 (1H, t), 4.95 (1H, s), 6.75 (1H, dd), 6.91 (1H, d), 7.12 - 7.17 (2H, m), 7.86 (1H, d), 8.05 (1H, d), 10.04 (1H, s) m/z: ES+ [M+H]+ 467.

La (6S,8R)-6-(5-bromopiridin-2-il)-7-((1-fluorociclopropil)metil)-8-metil-3-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina se preparó como sigue:

Preparación de 1-(3-bromo-2-metilfenil)-2,5-dimetil-1H-pirrol

Una mezcla de 3-bromo-2-metilanilina (40 g, 215 mmol), hexano-2,5-diona (25.3 mL, 215 mmol) y monohidrato de ácido p-toluenosulfónico (0.409 g, 2.15 mmol) en tolueno (300 mL) se calentó a condiciones de reflujo durante 2 horas en un matraz equipado con un condensador y una trampa Dean-Stark. La mezcla se enfrió luego hasta temperatura ambiente y se lavó secuencialmente con bicarbonato de sodio acuoso saturado, HCl acuoso (1 N) y cloruro de sodio acuoso saturado. La capa orgánica se secó sobre sulfato de sodio, se filtró y se concentró bajo presión reducida para dar 1-(3-bromo-2-metilfenil)-2,5-dimetil-1H-pirrol crudo (57.9 g, 102%) como un aceite de color amarillo pálido. 1H RMN (300 MHz, DMSO-d6, 27°C) 1.8 (6H, s), 1.9 (3H, s), 5.8 (2H, s), 7.2 - 7.4 (2H, m), 7.7 (1H, dd). m/z: ES+ [M+H]+ 264.

Preparación de tert-butil (R)-(1-(3-(2,5-dimetil-1 H-pirrol-1-il)-2-metilfenil)propan-2-il)carbamato

Se añadió n-butil litio en hexano (2.5 M; 89 ml, 221 mmol) durante 15 minutos a una solución de 1-(3-bromo-2-metilfenil)-2,5-dimetil-1H-pirrolo crudo (55.7 g, 211 mmol) en THF (400 ml) a -78°C. Después de 30 minutos, se añadió 2,2-dióxido de (R)-4-metil-1,2,3-oxatiazolidina-3-carboxilato de tert-butil (50 g, 211 mmol). La mezcla resultante se agitó a -78°C durante 15 minutos y se dejó calentar a temperatura ambiente durante 2 horas. Se añadió ácido cítrico acuoso (1 N; 250 ml) y se continuó agitando durante 30 minutos. La mezcla se extrajo con hexanos y las capas orgánicas combinadas se lavaron con carbonato de sodio acuoso saturado, se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se concentraron bajo presión reducida. El sólido de color marrón resultante, (R)-(1-(3-(2,5-dimetil-1H-pirrol-1-il)-2-metilfenil) propan-2-il) carbamato de tert-butilo crudo se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional. m/z: ES+ [M+H]+ 343.

Preparación de (R)-1-(3-(2,5-dimetil-1H-pirrol-1-il)-2-metilfenil)propan-2-amina

Se añadió ácido clorhídrico en dioxano (4 M; 100 ml, 400 mmol) a una suspensión de (R)-(1-(3-(2,5-dimetil-1H-pirrol-1-il)- 2-metilfenil) propan-2-il) carbamato tert-butilo crudo en MeOH (200 ml) y DCM (50 ml). La solución de color rojo resultante se agitó a temperatura ambiente durante 4 horas y luego se concentró bajo presión reducida. El sólido de color marrón resultante se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional. m/z: ES+ [M+H]+ 243.

Preparación de (R)-3-(2-aminopropil)-2-metilanilina

Una mezcla de diclorhidrato de (R)-1-(3-(2,5-dimetil-1H-pirrol-1-il)-2-metilfenil)propan-2-amina cruda, hidroxilamina acuosa (50% en peso; 107 ml, 1.74 moles) e hidrocloruro de hidroxilamina (97 g, 1.39 moles) en etanol (400 ml) se calentó hasta condiciones de reflujo. Después de 18 horas, la reacción se enfrió hasta 0°C, se basificó con hidróxido de sodio acuoso (50% en peso; 153 g, 1.92 mol) y se extrajo con DCM. La capa orgánica se secó sobre sulfato de sodio, se filtró y se concentró bajo presión reducida. El residuo resultante se purificó por SFC (columna DEAP de cromatografía de Princeton, 100 mm de longitud, 30 mm de diámetro, 5 ^m, temperatura de columna de 40°C, presión de columna de 100 bares, tasa de flujo de 100 mg/ml), eluyendo con metanol al 25% que contiene 0.2 % NH4OH en CO2, para proporcionar (R)-3-(2-aminopropil)-2-metilanilina (24 g, 84%) como un sólido ámbar claro. 1H RMN (500 MHz, DMSO, 27°C) 1.05 (3H, d), 1.99 (3H, s), 2.55 (1H, dd), 2.93 (1H, dd), 3.11 - 3.25 (1H, m), 4.77 (2H, s), 6.35 (1H, dd), 6.52 (1H, dd), 6.81 (1H, t). Protones de alquil NH2 no observados. m/z: ES+ [M+H]+ 165.

Preparación de (R)-N-(1-(3-amino-2-metilfenil)propan-2-il)-1-fluorociclopropano-1-carboxamida

Se disolvió (R)-3-(2-aminopropil)-2-metilanilina (1.70 g, 10.4 mmol) en DMF (29.9 ml) y se trató con ácido 1-fluorociclopropano-1-carboxílico (1.00 g, 9.61 mmol), hAt U (4.02 g, 10.6 mmol) y TEA (2.68 ml, 19.22 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 3 horas y luego se inactivó con agua y se extrajo con EtOAc. La capa orgánica se lavó con cloruro de sodio acuoso saturado, se secó sobre sulfato de sodio y se filtró. El filtrado se concentró bajo presión reducida, y el residuo resultante se secó al vacío durante una noche para eliminar el DMF residual. El residuo se adsorbió luego sobre sílica y se purificó mediante cromatografía de sílica en columna instantánea, gradiente de elución de 0 a 80% de acetato de etilo en hexanos para proporcionar (R)-N-(1-(3-amino-2-metilfenil) propan-2-il)-1-fluorociclopropano-1-carboxamida (1.47 g, 61.1%) como un sólido de color amarillo claro. 1H RMN (300 MHz, DMSO-da, 27°C) 1.01 - 1.28 (7H, m), 2.02 (3H, s), 2.54 - 2.62 (1H, m), 2.83 (1H, dd), 3.89 - 4.16 ( 1H, m), 4.68 (2H, s), 6.38 (1H, d), 6.49 (1H, d), 6.78 (1H, t), 8.14 (1H, d) m/z: ES+ [M+H]+251.

Preparación de (R)-3-(2-(((1-fluorociclopropil)metil)amino)propil)-2-metilanilina

Se añadió complejo de borano tetrahidrofurano en THF (1 M; 35.2 ml, 35.2 mmol) a una solución de (R)-N-(1-(3-amino-2-metilfenil) propan-2-il)-1-fluorociclopropano-1-carboxamida (1.47 g, 5.87 mmol) en THF (13.7 ml) a temperatura ambiente bajo nitrógeno. La reacción se calentó luego a 65°C durante 6 h. La reacción se enfrió hasta 0°C y se inactivó cuidadosamente con MeOH (desprendimiento de gas). La solución se concentró bajo presión reducida y se almacenó en el congelador durante 18 horas. El residuo se disolvió en MeOH (6 ml) y se calentó hasta 65°C durante 3 h. La solución se enfrió hasta temperatura ambiente y luego se concentró bajo presión reducida. El residuo obtenido se purificó mediante cromatografía instantánea sobre sílica, gradiente de elución de 0 a 16% de metanol en DCM, para proporcionar (R)-3-(2-(((1-fluorociclopropil)metil)amino)propil)-2-metilanilina (1.14 g, 82%) como aceite incoloro. 1H RMN (300 MHz, DMSO-d6, 27°C) 0.54 - 0.70 (2H, m), 0.79 - 1.02 (5H, m), 1.64 (1H, br. S.), 1.99 (3H, s), 2.36 (1H, dd), 2.69 - 2.97 (4H, m), 4.68 (2H, s), 6.36 (1H, d), 6.49 (1H, d), 6.79 (1H, t). m/z: ES+ [M+H]+ 237.

Preparación de (1S,3R)-1-(5-bromopiridin-2-il)-2-((1-fluorociclopropil)metil)-3,5-dimetil-1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-6-amina

Se añadió 5-bromopicolinaldehído (507 mg, 2.72 mmol) a una solución agitada de (R)-3-(2-(((1-fluorociclopropil)metil)amino)propil)-2-metilanilina (322 mg, 1.36 mmol) en ácido acético (7028 ^L) y agua (143 ^L). La mezcla resultante se calentó hasta 90°C y se agitó a esta temperatura durante 5 horas. La mezcla se concentró y se disolvió en EtOAC (50 ml) y NaHCO3 saturado (25 ml). La capa acuosa se extrajo con EtOAc (2 x 50 ml). Las fases orgánicas combinadas se concentraron bajo presión reducida. El residuo se disolvió en DCM (20 ml) y Hcl 1 M (20 ml). La mezcla se agitó vigorosamente durante 30 minutos. Las capas se separaron y la capa acuosa se lavó con DCM (20 ml). La capa acuosa se basificó hasta > pH 10 con NaOH sólido. La solución se extrajo con DCM (3 x 25 ml). Las fases orgánicas combinadas se secaron (cartucho separador de fases) y se concentraron para dar el producto crudo. El producto crudo se purificó por cromatografía instantánea sobre sílica, gradiente de elución de 0 a 60% de EtOAc en heptano. Las fracciones puras se evaporaron hasta sequedad para proporcionar (1S,3R)-1-(5-bromopiridin-2-il)-2-((1-fluorociclopropil)metil)-3,5-dimetil-1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-6-amina (217 mg, 39%) como una goma de color amarillo. 1H RMN (500 MHz, CDCls, 27°C) 0.33 -0.47 (1H, m), 0.49 -0.6 (1H, m), 0.89 -1.01 (2H, m), 1.04 (3H, d), 2.06 (3H, s), 2.55 - 2.64 (2H, m), 2.92 - 3.04 (2H, m), 3.51 (2H, s), 3.65 - 3.72 (1H, m), 4.88 (1H, s), 6.45 (1H, d), 6.58 (1H, d), 7.31 (1H, dd), 7.66 (1H, dd), 8.54 (1H, dd). m/z: ES+ [M+H]+ 404.

Preparación de (6S,8R)-6-(5-bromopiridin-2-il)-7-((1-fluorociclopropil)metil)-8-metil-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina

(1S,3R)-1-(5-bromopiridin-2-il)-2-((1-fluorociclopropil)metil)-3,5-dimetil-1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-6-amina (295 mg, 0.73 mmol) en ácido propiónico (8291 ^L) se enfrió hasta -20°C. Se añadió nitrito de sodio (50.3 mg, 0.73 mmol) en agua (829 ^L) gota a gota durante 2-3 minutos. La mezcla de reacción se agitó a -20°C durante 45 minutos. La mezcla de reacción se diluyó con EtOAc helado (30 ml). La mezcla de reacción se vertió en NaHCO3 saturado (40 ml). La mezcla se agitó vigorosamente durante 5 minutos. Las capas se separaron y la capa orgánica se lavó con NaHCO3 saturado (2 x 30 ml). Las capas acuosas combinadas se volvieron a extraer con EtOAc (2 x 30 ml). Las fases orgánicas combinadas se secaron (Na2SO4) y se concentraron para dar el producto crudo como un aceite de color marrón. El material crudo se purificó por cromatografía instantánea en columna de sílica eluyendo con 0-45% de EtOAc en heptano para proporcionar (6S,8R)-6-(5-bromopiridin-2-il)-7-((1-fluorociclopropil)metil)- 8-metil-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina (107 mg, 35%) como un sólido de color naranja. 1H Rm N (500 MHz, CDCl3, 27°C) 0.35 -0.44 (1H, m), 0.51 - 0.63 (1H, m), 0.92 - 1.07 (2H, m), 1.09 (2H, d), 2.69 (1H, dd), 2.96 (1H, dd), 3.01 -3.10 (1H, m), 3.33 - 3.49 (2H, m), 3.78 - 3.89 (1H, m), 5.03 (1H, s), 6.95 (1H, d), 7.19 (1H, d), 7.34 - 7.39 (1H, m), 7.68 (1H, dd), 8.07 (1H, d), 8.58 (1H, dd). m/z: ES+ [M+H]+415 y 417.

Preparación de (6S,8R)-6-(5-bromopiridin-2-il)-7-((1-fluorociclopropil)metil)-8-metil-3-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina

Se añadió 3,4-dihidro-2H-pirano (0.029 ml, 0.32 mmol) a una solución de (6S,8R)-6-(5-bromopiridin-2-il)-7-((1-fluorociclopropil)metil)-8-metil-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina (107 mg, 0.26 mmol) e hidrato de ácido 4-metilbencenosulfónico (9.80 mg, 0.05 mmol) en DCM (2 mL) y la reacción se calentó hasta 45°C durante 3 horas. Se añadieron además 3,4-dihidro-2H-pirano (0.235 ml, 2.58 mmol) y ácido 4-metilbencenosulfónico hidratado (49.0 mg, 0.26 mmol) y la mezcla se calentó hasta 45°C durante 16 horas. La reacción se diluyó con DCM y se lavó con solución saturada de NaHCO3. La fase orgánica se secó y se evaporó, luego el producto crudo se pasó a través de un tapón de sílica (EtOAc/heptano 1:1). El filtrado se evaporó para proporcionar (6S,8R)-6-(5-bromopiridin-2-il)-7-((1-fluorociclopropil)metil)-8-metil-3-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina como un aceite de color marrón que se usó sin purificación adicional. m/z: ES+ [M+H]+ 499.

Ejemplo 4

N-(4-((6S,8R)-7-(2-fluoro-3-metoxi-2-metilpropil)-8-metil-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)-3-metoxifenil)-1-(3-fluoropropil)azetidin-3-amina (mezcla diastereoisomérica)

1-(3-Fluoropropil)azetidin-3-amina (50 mg, 0.37 mmol), una mezcla de (6S,8R)-6-(4-bromo-2-metoxifenil)-7-(2-fluoro-3-metoxi-2-metilpropil)-8-metil-3-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina y (6S,8R)-6-(4-bromo-2-metoxifenil)-7-(2-fluoro-3-metoxi-2-metilpropil)-8-metil-2-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-6,7,8,9-tetrahidro-2H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina (140 mg, 0.25 mmol), carbonato de cesio (163 mg, 0.50 mmol) y metanosulfonato de [(2-diciclohexilfosfino-3,6- dimetoxi-2’,4’,6’-triisopropil-1,1'-bifenil)-2-(2'-amino-1,1'-bifenil)] paladio (II) (BrettPhos Pd G3) (23 mg, 0.02 mmol) se suspendieron en 1,4-dioxano (2 ml) y se sellaron en un tubo de microondas. La reacción se calentó hasta 100°C durante 4 horas bajo irradiación de microondas. La mezcla de reacción se diluyó con DCM (25 ml) y se lavó con agua (25 ml). La capa orgánica se evaporó. El residuo se disolvió en DCM (3 ml) y TFA (1 ml). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora y luego se sometió a partición entre d Cm y NaOH 2 M (20 ml cada uno). La fase orgánica se evaporó y el producto crudo se purificó por HPLC preparativa (columna OBD CSH C18 de Waters, sílica de 5^, 30 mm de diámetro, 100 mm de longitud), usando mezclas de agua decrecientemente polares (que contenían NH3 al 1%) y MeCN como eluyentes para proporcionar N-(4-((6S,8R)-7-(2-fluoro-3-metoxi-2-metilpropil)-8-metil-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3- f]isoquinolin-6-il)-3-metoxifenil)-1-(3-fluoropropil)azetidin-3-amina (26.0 mg, 20%) como una goma como una mezcla de diastereoisómeros. 1H RMN (500 MHz, DMsO-d6, 27°C) 0.94 -0.99 (3H, m), 1.16-1.24 (3H, m), 1.64 (2H, dq), 2.39 -2.47 (3H, m), 2.70 ( 2H, t), 2.74 -2.84 (2H, m), 3.03 -3.21 (2H, m), 3.24 (3H, d), 3.48 (2H, dd), 3.58 - 3.64 (2H, m), 3.79 (3H, d), 3.88 - 3.94 (1H, m), 4.44 (2H, dt), 5.17 (1H, d), 5.88 (1H, td), 5.97 (1H, dd), 6.16 (1H, d), 6.32 -6.38 (1H, m), 6.63 (1H, t), 7.16 (1H, dd), 8.02 (1H, s), 12.91 (1H, s). 19F RMN (471 MHz, DMSO-d6, 27°C)-218.19, -149.21, -148.22. m/z: ES+ [M+H]+ 528.

La mezcla de (6S,8R)-6-(4-bromo-2-metoxifenil)-7-(2-fluoro-3-metoxi-2-metilpropil)-8-metil-3-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina y (6S,8R)-6-(4-bromo-2-metoxifenil)-7-(2-fluoro-3-metoxi-2-metilpropil)-8-metil-2-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-6,7,8,9-tetrahidro-2H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina se prepararon como sigue;

Preparación de una mezcla diastereoisomérica de N-((R)-1-(3-bromo-2-metilfenil)propan-2-il)-2-fluoro-3-metoxi-2-metilpropan-1-amina

Se añadió anhídrido trifluorometanosulfónico (2.148 ml, 12.79 mmol) a ((2-fluoro-3-metoxi-2-metilpropoxi) metanotriil) tribenceno (4.44 g, 12.18 mmol) disuelto en diclorometano (50 ml) y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente. temperatura por 30 minutos. Luego se añadió trietilsilano (2.140 ml, 13.40 mmol) y la mezcla se agitó durante 30 minutos más. La reacción se concentró para proporcionar trifluorometanosulfonato racémico 2-fluoro-3-metoxi-2-metilpropílico crudo que se usó directamente en la siguiente etapa sin purificación adicional.

Se añadió DIPEA (5.36 ml, 30.68 mmol) a (R)-1-(3-bromo-2-metilfenil) propan-2-amina (2.80 g, 12.3 mmol) y 2-fluoro-3-metoxi-2-metilpropilo trifluorometanosulfonato (3.12 g, 12.3 mmol) en 1,4-dioxano (60 ml) a temperatura ambiente bajo nitrógeno[exotérmico]. La mezcla resultante se agitó a 85°C durante 24 horas. La mezcla de reacción se dejó enfriar y la mezcla de reacción se evaporó. El producto crudo se purificó por cromatografía instantánea sobre sílica, gradiente de elución de 0 a 60% de EtOAc en heptano para proporcionar N-((R)-1-(3-bromo-2-metilfenil) propan-2-il)-2-fluoro- 3-metoxi-2-metilpropan-1-amina (2.480 g, 73%) como un aceite como una mezcla de diastereoisómeros. 1H RMN (500 MHz, CDCls, 27°C) 1.02 - 1.07 (3H, m), 1.31 (1.5H, d), 1.32 (1.5H, d), 2.41 (3H, s), 2.57- 2.66 (1H, m), 2.68 - 2.90 (4H, m), 3.34 (1.5H, d), 3.35 (1.5H, d), 3.38 - 3.46 (2H, m), 6.96 (1H, t), 7.07 (1H, d), 7.42 (1H, d). NH no visto.

19F RMN (471 MHz, CDCls, 27°C)-157.94, -157.53. m/z: ES+ [M+H]+ 332/334.

Preparación de una mezcla diastereoisomérica de 3-((R)-2-((2-fluoro-3-metoxi-2-metilpropil)amino)propil)-2-metilanilina

Se agregaron tris(dibencilideneacetona)dipalladio (0) (0.205 g, 0.22 mmol) y (±)-2,2'-bis(difenilfosfino)-1,1'-binaftaleno (0.279 g, 0.45 mmol) a una suspensión de un mezcla diastereoisomérica de N-((R)-1-(3-bromo-2-metilfenil) propan-2-il)-2-fluoro-3-metoxi-2-metilpropan-1-amina (2.48 g, 7.46 mmol), benzofenona imina (1.487 g, 8.21 mmol) y tertbutóxido de sodio (1.076 g, 11.20 mmol) en tolueno desgasificado (30 mL) y la reacción se calentó hasta 90°C durante 3 horas. Después de enfriar, se evaporó el tolueno. El residuo se disolvió en DCM (250 ml) y se lavó con agua (250 ml). La fase acuosa se extrajo con DCM (100 ml) y las fases orgánicas combinadas se concentraron a aproximadamente 50 ml. Se añadió solución de HCl 2 M (50 ml) y la mezcla bifásica se agitó vigorosamente durante 30 minutos. Las capas se separaron y la fase acuosa se extrajo con DCM. La fase acuosa se basificó con NaOH acuoso 2 M. Esto se extrajo con DCM (2 x 250 ml) y los extractos de DCM combinados se evaporaron para dar 3-((R)-2-((2-fluoro-3-metoxi-2-metilpropil)amino)propil)-2-metilanilina (2.00 g, 100%) como un aceite tal como mezcla de diastereoisómeros. 1H RMN (500 MHz, CDCh, 27°C) 1.04 (3H, d), 1.31 (1.5H, d), 1.32 (1.5H, d), 2.11 (3H, s), 2.53 -2.60 (1H, m), 2.70 - 2.89 (4H, m), 3.35 (2H, d), 3.36 (1.5H, d), 3.43 (1.5H, dd), 3.58 (2H, s), 6.57 (1H, d), 6.61 (1H, d), 6.94 (1H, t), 7.58 (1H, s). 19F RMN (471 MHz, CDCl3, 27°C)-157.61, -157.30. m/z: ES+[M+H]+269.

Preparación de una mezcla diastereoisomérica de (1S,3R)-1-(4-bromo-2-metoxifenil)-2-(2-fluoro-3-metoxi-2-metilpropil)-3,5-dimetil-1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-6-amina

Una mezcla diastereoisomérica de 3-((2R)-2-((2-Fluoro-3-metoxi-2-metilpropil)amino)propil)-2-metilanilina (2.00 g, 7.45 mmol) y 4-bromo-2-metoxibenzaldehído (3.37 g, 15.6 mmol) se calentaron en ácido acético (30 ml) y agua (0.671 ml, 37.3 mmol) hasta 70°C durante la noche. Después de enfriar, el ácido acético se evaporó. El residuo se disolvió en EtOAc (40 ml) y se añadió solución de HCl 2 N (40 ml). La mezcla bifásica se agitó durante 30 minutos, luego se separaron las capas. La fase orgánica se extrajo con agua, luego las fases acuosas combinadas se basificaron mediante la adición de solución de NaOH 2 N y se extrajeron con DCM (2 x 200 ml). Las capas de DCM combinadas se evaporaron y el producto crudo se purificó por cromatografía instantánea sobre sílica, gradiente de elución de 0 a 50% de EtOAc en heptano para proporcionar primero (1S,3R)-1-(4-bromo-2-metoxifenil)-2-( 2-fluoro-3-metoxi-2-metilpropil)-3,5-dimetil-1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-6-amina (0.354 g, 10%) como un diastereoisómero único. 1H RMN (500 MHz, DMSO-d6, 27°C) 0.91 (3H, d), 1.22 (3H, d), 1.94 (3H, s), 2.26-2.40 (2H, m), 2.65 -2.78 (2H, m), 3.16-3.25 (4H, m), 3.42 (1H, dd), 3.85 (3H, s), 4.61 (2H, s), 5.10 (1H, s), 6.24 (1H, d), 6.37 (1H, d), 6.61 (1H, d), 6.95 (1H, dd), 7.15 (1H, d). Un protón parcialmente oscurecido por el agua. 19F RMN (471 MHz, DMSO-d6, 27°C)-M9.65. m/z: ES+ [M+H]+ 465/467. Seguido de fracciones que contienen una mezcla de diastereoisómeros de (1S,3R)-1-(4-bromo-2-metoxifenil)-2-(-2-fluoro-3-metoxi-2-metilpropil)-3,5-dimetil-1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-6-amina (1.700 g, 49%) 19F RMN (471 MHz, DMSO-d6, 27°C)- 149.65, -148.78. m/z: ES+ [M+H]+ 465/467. Seguido de fracciones que contienen el segundo diastereoisómero de (1S,3R)-1-(4-bromo-2-metoxifenil)-2-(2-fluoro-3-metoxi-2-metilpropil)-3,5-dimetil-1, 2,3,4-tetrahidroisoquinolin-6-amina (0.274 g, 8%) como un solo diastereoisómero. 1H RMN (500 m Hz , DMSO-d6, 27°C) 0.91 (3H, d), 1.16 (3H, d), 1.93 (3H, s), 2.26- 2.4 (2H, m), 2.63 - 2.74 (2H, m), 3.23 (3H, s), 3.35 (1H, dd), 3.47 (1H, dd), 3.85 (3H, s), 4.60 (2H, s), 5.09 (1H, s), 6.24 (1H, d), 6.37 (1H, d), 6.61 (1H, d), 6.93 (1H, dd), 7.15 (1H, d). Un protón oscurecido por el agua. 19F RMN (471 MHz, DMSO-d6, 27°C)-148.78. m/z: Es [M+H]+ 465/467. Todo como gomas.

Preparación de una mezcla diastereoisomérica de (6S,8R)-6-(4-bromo-2-metoxifenil)-7-(-2-fluoro-3-metoxi-2-metilpropil)-8-metil-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina

Se añadió una solución de nitrito de sodio (0.277 g, 4.02 mmol) en agua (1.0 mL) a una solución de una mezcla diastereoisomérica de (1S,3R)-1-(4-bromo-2-metoxifenil)-2-(2-fluoro-3-metoxi-2-metilpropil)-3,5-dimetil-1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-6-amina (1.70 g, 3.65 mmol) en ácido propiónico (15 ml) a -10°C. La reacción se agitó durante 1 hora, luego se añadió EtOAc helado (20 ml). La reacción se inactivó mediante la adición de solución acuosa de NaHCO3 (30 ml) y se agitó durante 15 minutos, antes de dejar que se calentara hasta temperatura ambiente. La fase orgánica se lavó con solución acuosa de NaHCO3 (30 ml) y salmuera (20 ml), se secó (Na2SO4), se filtró y se evaporó. El producto crudo se purificó por cromatografía instantánea sobre sílica, gradiente de elución de 0 a 50% de EtOAc en heptano para proporcionar (6S,8R)-6-(4-bromo-2-metoxifenil)-7-(2-fluoro-3-metoxi- 2-metilpropil)-8-metil-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina (0.950 g, 55%) como un sólido de color marrón tal como una mezcla de diastereoisómeros. 1H RMN (500 MHz, DMSO-d6, 27°C) 0.95 - 0.97 (3H, m), 1.14 - 1.23 (3H, m), 2.31 - 2.40 (1H, m), 2.78 - 2.88 (2H, m), 3.11 - 3.21 (2.5H, s), 3.23 (1.5H, s), 3.32 - 3.38 (1H, m), 3.40 - 3.52 (2H, m), 3.88 (1.5H, s), 3.89 (1.5H, s), 5.28 (1H, s), 6.59 -6.69 (2H, m), 6.92 -6.96 (1H, m), 7.16-7.22 (2H, m), 8.05 (1H, s), 12.96 (1H, s). 19F RMN (471 MHz, DMSO-d6, 27°C)-149.65, -148.68. m/z: ES+ [M+H]+ 476/478.

Preparación de una mezcla de (6S,8R)-6-(4-bromo-2-metoxifenil)-7-(2-fluoro-3-metoxi-2-metilpropil)-8-metil-3-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina y (6S,8R)-6-(4-bromo-2-metoxifenil)-7-(2-fluoro-3-metoxi-2-metilpropil)-8-metil-2-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-6,7,8,9-tetrahidro-2H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina

Se añadió hidrato de ácido 4-metilbencenosulfónico (0.038 g, 0.20 mmol) a una solución de una mezcla diastereoisomérica de (6S,8R)-6-(4-bromo-2-metoxifenil)-7-(2-fluoro-3-metoxi-2-metilpropil)-8-metil-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina (0.950 g, 1.99 mmol) y 3,4-dihidro-2H-pirano (0.546 ml, 5.98 mmol) en DCM (30 ml) y la mezcla se calentó hasta 40°C durante la noche. Se añadieron además 3,4-dihidro-2H-pirano (0.546 ml, 5.98 mmol) y hidrato de ácido de 4-metilbencenosulfónico (0.038 g, 0.20 mmol). El calentamiento continuó durante 7 horas. Se añadieron porciones adicionales de 3,4-dihidro-2H-pirano (0.546 ml, 5.98 mmol) e hidrato de ácido 4-metilbencenosulfónico (0.038 g, 0.20 mmol) y la reacción se calentó durante la noche. La mezcla de reacción se diluyó con DCM (50 ml) y se lavó con NaHCO3 acuoso saturado (50 ml). La fase orgánica se evaporó hasta obtener un aceite de color marrón oscuro y el producto crudo se purificó por cromatografía instantánea sobre sílica, gradiente de elución de EtOAc al 35% en heptano para proporcionar una mezcla de (6S,8R)-6-(4-bromo-2- metoxifenil)-7-(2-fluoro-3-metoxi-2-metilpropil)-8-metil-3-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina y (6S,8R)-6-(4-bromo-2-metoxifenil)-7-(2-fluoro-3-metoxi-2-metilpropil)-8-metil-2-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-6,7,8,9-tetrahidro-2H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina (0.960 g, 86%) como una espuma, tal como una mezcla de diastereoisómeros. 19F RMN (471 MHz, DMSO-d6, 27°C)-149.79, -149.74, -149.69, -149.65, -148.77, -148.73, -148.69, -148.66. m/z: ES+ [M+H]+ 560/562.

Ejemplo 5

3-((6S,8R)-6-(2,6-difluoro-4-((1-(3-fluoropropil)azetidin-3-il)amino)fenil)-8-metil-3,6,8,9-tetrahidro-7H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-7-il)-2,2-difluoropropan-1-ol

Se añadió TBAF en THF (1 M; 160 ^L, 0.16 mmol) a una solución de N-(4-((6S,8R)-7-(3-((tert-butildifenilsilil)oxi)-2,2-difluoropropil)-8-metil-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)-3,5-difluorofenil)-1-(3-fluoropropil)azetidin-3 -amina (80 mg, 0.10 mmol) en THF (0.5 ml) a temperatura ambiente. Después de 4 horas, la reacción se concentró bajo presión reducida, y el residuo resultante se purificó por cromatografía instantánea sobre sílica, gradiente de elución de 30 a 90% (MeOH al 10% en DCM que contenía NH4OH al 1%) en DCM. Las fracciones del producto se concentraron bajo presión reducida, y el residuo resultante se repurificó usando las mismas condiciones. Las fracciones del producto se concentraron nuevamente bajo presión reducida, y el residuo resultante se purificó por HPLC preparativa (columna Waters XBridge Prep C18 o Bd , sílica de 5 ^, 19 mm de diámetro, 100 mm de longitud) usando mezclas de agua decrecientemente polares (que contienen hidróxido de amonio al 0.2%) y MeCN como eluyentes (40 a 70% durante 7 min) para proporcionar 3-((6S,8R)-6-(2,6-difluoro-4-((1-(3-fluoropropil)azetidin-3-ilo)amino)fenil)-8-metil-3,6,8,9-tetrahidro-7H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-7-il)-2,2-difluoropropan-1-ol (17 mg, 31 %) como sólido blanco. 1H RMN (500 MHz, DMSO-d6, 27°C) 1.02 (3H, d), 1.59 - 1.69 (2H, m), 2.44 (2H, t), 2.56- 2.67 (1H, m), 2.72 (2H, t), 2.88 (1H, dd), 3.02 - 3.13 (1H, m), 3.17 (1H, dd), 3.49 - 3.56 (1H, m), 3.57- 3.69 (3H, m), 3.91 (1H, tdt), 4.44 (2H, dt), 5.08 (1H, s), 5.25 (1H, br. S), 6.07 (2H, d), 6.64 (1H, d), 6.69 (1H, d), 7.20 (1H, d), 8.04 (1H, s), 12.95 (1H, br. S). Un H no observado. m/z: ES+ [M+H]+ 524.

La N-(4-((6S,8R)-7-(3-((tert-butildifenilsilil)oxi)-2,2-difluoropropil)-8-metil-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)-3,5-difluorofenil)-1-(3-fluoropropil)azetidin-3-amina se preparó como sigue:

Preparación de 3-((tert-butildifenilsilil)oxi)-2,2-difluoropropan-1 -ol

Se añadió NaH en aceite mineral (60% en peso; 343 mg, 8.58 mmol) en una porción a una solución agitada de 2,2-difluoropropano-1,3-diol (874 mg, 7.80 mmol) en THF (32 ml) a 0°C. La reacción se dejó calentar hasta temperatura ambiente y se agitó a temperatura ambiente durante 2 h. La mezcla de reacción se enfrió nuevamente a 0°C, y se añadió gota a gota tert-butildifenilclorosilano (2.0 ml, 7.8 mmoles) mediante una jeringa. La mezcla de reacción se dejó calentar hasta temperatura ambiente durante 1 hora y luego se inactivó con agua y se extrajo con EtOAc. La capa orgánica se secó con Na2SO4, se filtró y el filtrado se concentró bajo presión reducida. El residuo resultante se purificó por cromatografía instantánea sobre sílica, eluyendo con acetato de etilo isocrático al 5% en hexanos, para proporcionar 3-((tert-butildifenilsilil)oxi)-2,2-difluoropropan-1-ol (1.94, 71%) como aceite incoloro 1H RMN (300 MHz, CLOROFORMO-d, 27°C) 5 ppm 1.03 - 1.14 (9H, s), 3.87- 3.93 (4H, m), 7.37- 7.44 (6H, m), 7.64 - 7.66 (4H, m) Preparación de 3-((tert-butildifenilsilil)oxi)-2,2-difluoropropil trifluorometanosulfonato

Una solución de 3-((tert-butildifenilsilil)oxi)-2,2-difluoropropan-1-ol (1.94 g, 5.55 mmol) y 2,6-dimetilpiridina (1.94 ml, 16.6 mmol) en DCM (18 ml) se enfrió hasta -10°C (baño de sal/hielo). Se añadió anhídrido trifluorometanosulfónico (1.88 ml, 11.1 mmol) lentamente gota a gota durante 10 minutos. La reacción se mantuvo bajo estas condiciones durante 2 horas. La reacción se lavó luego con agua, HCl acuoso (1 N; 100 ml) y bicarbonato de sodio acuoso saturado. La capa orgánica se secó sobre MgSO4, se filtró y se concentró bajo presión reducida para proporcionar 3-((tert-butildifenilsilil)oxi)-2,2-difluoropropil trifluorometanosulfonato (2.68 g, 100%) como un aceite de color rojo. 1H RMN (300 MHz, CLOROFORMO-d, 27°C) 1.03 -1.14 (9H, s), 3.90 (2H, t), 4.76 (2H, t), 7.39 - 7.56 (6H, m), 7.59 - 7.75 (4H, m).

Preparación de 3-((tert-butildifenilsilil)oxi)-2,2-difluoropropil trifluorometanosulfonato

Se añadió 3-((tert-butildifenilsilil)oxi)-2,2-difluoropropil trifluorometanosulfonato (1.92 g, 3.98 mmol) a una solución de (R)-3-(2-aminopropil)-2-metilanilina (0.784 g, 4.77 mmol) y DIPEA (1.031 ml, 5.97 mmol) en 1,4-dioxano (15 ml). La reacción se calentó a 85°C durante 18 horas. Después de enfriar, la reacción se diluyó con DCM y se lavó con agua. La capa acuosa se extrajo con DCM, y las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de magnesio, se filtraron y se concentraron bajo presión reducida. El residuo resultante se purificó por cromatografía instantánea sobre sílica, gradiente de elución de 0 a 4% de amoniaco metanólico en DCM. Las fracciones puras se concentraron hasta sequedad para proporcionar (R)-3-(2-((3-((tert-butildifenilsilil)oxi)-2,2-difluoropropil)amino)propil)-2-metilanilina (1.97 g, 100%) como un aceite de color amarillo. 1H RMN (300 MHz, METANOL-d4, 27°C) 5 ppm 0.97-1.12 (12H, m), 2.10 (3H, s), 2.53 - 2.63 (1H, m), 2.74 - 2.84 (1H, m), 2.86- 2.99 (1H, m), 3.00 - 3.19 (2H, m), 3.80 (2H, td), 6.53 (1H, d), 6.63 (1H, d), 6.86 (1H, t), 7.38 - 7.50 ( 6H, m), 7.64 - 7.72 (4H, m). m/z: ES+ [M+H]+ 497.

Preparación (1S,3R)-1 -(4-bromo-2,6-difluorofenil)-2-(3-((tert-butildifenilsilil) oxi)-2,2-difluoropropil)-3,5-dimetil-1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-6-amina

Se añadió 4-bromo-2,6-difluorobenzaldehído (1.55 g, 7.02 mmol) a una solución de (R)-3-(2-((3-((tertbutildifenilsilil)oxi)-2,2-difluoropropilo)amino)propil)-2-metilanilina (1.74 g, 3.51 mmol) en ácido acético (17 mL) y agua (0.32 mL, 18 mmol), y la reacción se calentó a 80°C durante la noche. La reacción se concentró bajo presión reducida, y el residuo se sometió a partición entre EtOAc y NaHCO3 acuoso saturado. La capa orgánica se concentró bajo presión reducida y se purificó por cromatografía instantánea sobre sílica, gradiente de elución de acetato de etilo del 20 al 80% en hexanos, para proporcionar (1S,3R)-1-(4-bromo-2,6-difluorofenil)-2-(3-((tert-butildifenilsilil)oxi)-2,2-difluoropropil)-3,5-dimetil-1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-6-amina (1.33 g, 54.5%) como un sólido. 1H RMN (300 MHz, CLOROFORMO-d, 27°C) 5 ppm 1.04 - 1.11 (12H, m), 2.25 - 2.38 (3H, m), 2.53 - 2.65 (1H, m), 2.73 (1H, q), 2.86- 3.03 (1H, m), 3.15 - 3.38 (1H, m), 3.52 - 3.71 (2H, m), 3.85 - 4.01 (1H, m), 5.31 (1H, d), 6.58 -6.64 (1H, m), 6.67-6.73 (1H, m), 6.88 -6.95 (2H, m), 7.18 - 7.24 (2H, m), 7.37- 7.50 (6H, m), 7.60 - 7.70 (4H, m). m/z: ES+ [M+H]+ 699.

Preparación de (6S,8R)-6-(4-bromo-2,6-difluorofenil)-7-(3-((tert-butildifenilsilil) oxi)-2,2-difluoropropil)-8-metil-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina

Se añadió nitrito de sodio (0.130 g, 1.89 mmol) en agua (0.900 mL) gota a gota a una solución de (1S,3R)-1-(4-bromo-2,6-difluorofenil)-2-(3-((tert-butildifenilsilil)oxi)-2,2-difluoropropil)-3,5-dimetil-1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-6-amina (1.32 g, 1.89 mmol) en ácido propiónico (9 ml) a -8°C (baño de sal/hielo) y se agitó bajo estas condiciones durante 20 minutos. La reacción se diluyó con acetato de etilo (20 ml, preenfriado a -10°C) y se inactivó con una adición lenta de NaHCO3 acuoso saturado (30 ml, preenfriado a -10°C) durante 15 minutos a 0°C. La mezcla se dejó calentar hasta temperatura ambiente y se mantuvo en estas condiciones durante 18 horas. La capa orgánica se separó y la capa acuosa se extrajo con EtOAc. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con NaHCO3 acuoso saturado y agua, se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se concentraron bajo presión reducida. El residuo resultante se purificó por cromatografía instantánea sobre sílica, gradiente de elución de 15 a 50% de acetato de etilo en hexanos, para proporcionar (6S,8R)-6-(4-bromo-2,6-difluorofenil)-7-(3-((tert-butildifenilsilil)oxi)-2,2-difluoropropil)-8-metil-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina (0.520 g, 38.8%) como un sólido de color marrón claro. 1H RMN (300 MHz, CLOROFORMO-d, 27°C) 5 ppm 1.07 (9H, s), 1.12 (3H, d), 2.72 - 2.92 (2H, m), 3.21 - 3.39 (2H, m), 3.51 - 3.66 (1H, m), 3.67- 3.79 (1H, m), 3.86- 4.00 (1H, m), 5.37 (1H, s), 6.81 (1H, d), 6.87-6.98 (2H, m), 7.25 - 7.29 (1H, m), 7.35 -7.50 (6H, m), 7.59 - 7.70 (4H, m), 8.14 (1H, s). NH Indol no observado. m/z: ES+ [M+H]+710.

Preparación de (6S,8R)-6-(4-bromo-2,6-difluorofenil)-7-(3-((tert-butildifenilsilil) oxi)-2,2-difluoropropil)-8-metil-3-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina

Se añadió 3,4-dihidro-2H-pirano (95 ^L, 1.04 mmol) a una solución de (6S,8R)-6-(4-bromo-2,6-difluorofenil)-7-(3-((tertbutildifenilsilil)oxi)-2,2-difluoropropil)-8-metil-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina (492 mg, 0.69 mmol) y monohidrato de ácido para-toluenosulfónico (13 mg, 0.07 mmol) en DCM (3.5 ml), y la reacción se calentó bajo condiciones de reflujo durante 6 horas. Después de enfriar, la reacción se lavó con NaHCO3 acuoso saturado, se secó sobre Na2SO4, se filtró y se concentró bajo presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía instantánea sobre sílica, gradiente de elución de acetato de etilo del 10 al 30% en hexanos, para proporcionar (6S,8R)-6-(4-bromo-2,6-difluorofenil)-7-(3-((tert-butildifenilsilil)oxi)-2,2-difluoropropil)-8-metil-3-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina (474 mg, 86%) como un sólido gomoso de color marrón claro. 1H RMN (300 MHz, CLOROFORMO-d, 27°C) 1.06 (9H, s), 1.19 - 1.25 (3H, m), 1.74 - 1.84 (3H, m), 2.09 - 2.20 (2H, m), 2.49 -2.67 (1H, m), 2.84 - 2.96 (2H, m), 3.27- 3.45 (2H, m), 3.61 - 3.87 (3H, m), 4.04 (2H, d), 5.52 (1H, s), 5.66- 5.72 (1H, m), 6.78 (1H, d), 6.94 (2H, d), 7.32 (1 H, d), 7.36- 7.50 (6H, m), 7.60 - 7.68 (4H, m), 8.04 (1 H, s).

Preparación de tert-butil 3-((4-((6S,8R)-7-(3-((tert-butildifenilsilil)oxi)-2,2-difluoropropil)-8-metil-3-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)-3,5-difluorofenil)amino)azetidin-1-carboxilato

Una mezcla desgasificada de (6S,8R)-6-(4-bromo-2,6-difluorofenil)-7-(3-((tert-butildifenilsilil)oxi)-2,2-difluoropropil)-8-metil-3-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina (0.474 g, 0.600 mmol), 3-aminoazetidina-1-carboxilato de tert-butilo (0.15 g, 0.89 mmol), Xantphos (0.069 g, 0.12 mmol), Pd2(dba)3 (0.06 g, 0.06 mmol) y carbonato de cesio (0.389 g, 1.19 mmol) en dioxano (3 mL) a 115°C durante 4 horas. Luego, la reacción se concentró bajo presión reducida, y el residuo resultante se adsorbió sobre sílica gel y se purificó por cromatografía instantánea sobre sílica, gradiente de elución 5 a 50% de acetato de etilo en hexanos, para proporcionar 3-((4-((6S, 8R)-7-(3-((tert-butildifenilsilil)oxi)-2,2-difluoropropil)-8-metil-3-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)-3,5-difluorofenil)amino)azetidin-1-carboxilato de tert-butilo (0.377 g, 71.3%) como un sólido. 1H RMN (300 MHz, CLOROFORMO-d, 27°C) 1.06 (9H, s), 1.12 (3H, d), 1.46 (9H, s), 1.65 - 1.84 (3H, m), 2.07 2.23 (2H, m), 2.58 (1H, d), 2.75 - 2.91 (2H, m), 3.16- 3.34 (2H, m), 3.52 - 3.78 (5H, m), 3.91 - 4.07 (3H, m), 4.19 - 4.29 ( 2H, m), 5.23 - 5.34 (1H, m), 5.67 (1H, dd), 5.81 (2H, d), 6.81 (1H, d), 7.25 - 7.29 (1H, m), 7.35 - 7.48 (6H, m), 7.65 (4H, ddd), 8.02 (1 H, s). Nh de anilina no observada. m/z: ES+ [M+H]+ 886.

Preparación de N-(4-((6S,8R)-7-(3-((tert-butildifenilsilil)oxi)-2,2-difluoropropil)-8-metil-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)-3,5-difluorofenil)azetidin-3-amina

Se añadió lentamente TFA (328 ^L, 4.25 mmol) a una solución de 3-((4-((6S,8R)-7-(3-((tert-butildifenilsilil)oxi)-2,2-difluoropropil)-8-metil-3-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)-3,5-difluorofenil)amino)azetidina-1-carboxilato de tert-butilo (377 mg, 0.43 mmol) en DCM (2 ml) a 0°C. La reacción se dejó calentar hasta temperatura ambiente y se agitó en estas condiciones durante 1 hora. La reacción se concentró luego bajo presión reducida, y el residuo resultante se sometió a partición entre acetato de etilo y NaHCO3 acuoso saturado. La capa orgánica se secó sobre MgSO4, se filtró y se concentró bajo presión reducida. El residuo resultante se purificó por cromatografía instantánea sobre sílica, gradiente de elución de 30 a 70% (metanol al 10% en DCM que contenía hidróxido de amonio al 1%) en DCM para proporcionar N-(4-((6S,8R)-7-(3-( (tert-butildifenilsilil)oxi)-2,2-difluoropropil)-8-metil-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)-3,5- difluorofenil)azetidin-3-amina (166 mg, 55.6%) como un sólido pálido. 1H RMN (300 MHz, CLOROFORMO-d, 27°C) 0.96- 1.20 (12H, m), 2.62 - 3.03 (2H, m), 3.10 -3.42 (2H, m), 3.42 -3.63 (3H, m), 3.63 -3.80 (2H, m), 3.81 -4.08 (3H, m), 4.15 -4.28 (1H, m), 4.38 (1H, d), 5.23 (1H, s), 5.83 (2H, m), 6.80 ( 1H, m), 7.15 (1H, d), 7.32 - 7.53 (6H, m), 7.61 - 7.81 (4H, m), 8.06 (1H, s). Indazol NH no observado. m/z: ES+ [M+H]+ 702.

Preparación de N-(4-((6S,8R)-7-(3-((tert-butildifenilsilil)oxi)-2,2-difluoropropil)-8-metil-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)-3,5-difluorofenil)-1-(3-fluoropropil)azetidin-3-amina

Se añadió 1-fluoro-3-yodopropano (40 mg, 0.21 mmol) a una solución de N-(4-((6S,8R)-7-(3-((tert-butildifenilsilil)oxi)-,2-difluoropropil)-8-metil-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)-3,5-difluorofenil)azetidin-3-amina (144 mg, 0.21 mmol) y DIPEA (107 ^L, 0.62 mmol) en d Mf (1 mL) a temperatura ambiente. La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 3 horas y luego se diluyó con EtOAc (40 ml) y se lavó con cloruro de sodio acuoso saturado (3 x 20 ml). Las capas orgánicas se secaron sobre MgSO4, se filtraron y se concentraron bajo presión reducida. El residuo resultante se purificó por cromatografía instantánea sobre sílica, gradiente de elución de 15 a 30% (10% de metanol en DCM que contenía 1% de hidróxido de amonio) en DCM, para proporcionar N-(4-((6S,8R)-7-(3-((tert-butildifenilsilil)oxi)-2,2-difluoropropil)-8-metil-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)-3,5 -difluorofenil)-1-(3-fluoropropil)azetidin-3-amina (87 mg, 56%) como un sólido de color amarillo. m/z: ES+ [M+H]+ 762.

Ejemplo 6

N-(4-((6S,8R)-7-((1-fluorociclopropil)metil)-8-metil-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)-3-metoxifenil)--(3-fluoropropil)azetidin-3-amina

Se añadió 1-fluoro-3-yodopropano (40.9 ^L, 0.39 mmol) a una solución de N-(4-((6S,8R)-7-((1-fluorociclopropil)metil)-8-metil-6,7, 8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)-3-metoxifenil)azetidin-3-amina (169 mg, 0.39 mmol) y DIPEA (203 ^L, 1.16 mmol) en NMP (1.7 ml) a temperatura ambiente. Después de 18 horas, la reacción se concentró bajo presión reducida. El residuo resultante se purificó mediante cromatografía instantánea en fase reversa (C18), eluyendo con mezclas de agua decrecientemente polares (que contenían hidróxido de amonio al 0.2%) y MeCN como eluyentes. Las fracciones del producto se combinaron y se liofilizaron para proporcionar N-(4-((6S,8R)-7-((1-fluorociclopropil)metil)-8-metil-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)-3-metoxifenil)-1-(3-fluoropropil)azetidin-3-amina (75 mg, 39%) como residuo claro. 1H r Mn (500 MHz, DMSO-d6, 27°C) 0.39 - 0.46 (1H, m), 0.47- 0.54 (1H, m), 0.77- 0.85 (2H, m), 0.91 (3H, d), 1.51 - 1.64 (2H, m), 2.38 (2H, t), 2.54 (1H, dd), 2.63 (2H, q), 2.75 - 2.90 (2H, m), 3.14 (1H, dd), 3.52 - 3.64 (3H, m), 3.73 (3H, s), 3.79 - 3.88 (1H, m), 4.38 (2H, dt), 5.10 (1H, s), 5.82 - 5.87 (1H, m), 5.91 (1H, d), 6.09 (1H, d), 6.49 (1H, d), 6.57 (1H, d), 7.07 (1H, d), 7.94 (1H, s), 12.83 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 496.

La N-(4-((6S,8R)-7-((1-fluorociclopropil)metil)-8-metil-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)-3-metoxifenil)azetidin-3-amina se preparó como sigue.

Preparación de (1S,3R)-1-(4-bromo-2-metoxifenil)-2-((1-fluorociclopropil)metil)-3,5-dimetil-1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-6-amina

(R)-3-(2-(((1-fluorociclopropil)metil)amino)propil)-2-metilanilina (451 mg, 1.91 mmol) y 4-bromo-2-metoxibenzaldehído (410 mg, 1.91 mmol) en una mezcla de agua (172 mg, 9.54 mmol) y ácido acético (7.5 ml) se calentaron hasta 80°C durante 6 horas. La reacción se concentró bajo presión reducida, y el residuo resultante se trató con HCl acuoso (1 N; 18 ml). La mezcla se agitó a 80°C durante 18 horas. La reacción se enfrió luego y se añadió NaHCO3 acuoso saturado. La mezcla se extrajo con DCM, y la capa orgánica se concentró bajo presión reducida. El residuo resultante se purificó por cromatografía instantánea sobre sílica, gradiente de elución de 5 a 35% de acetato de etilo en hexanos, para proporcionar (1S,3R)-1-(4-bromo-2-metoxifenil)-2-((1-fluorociclopropil)metil)-3,5-dimetil-1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-6-amina (591 mg, 71.5%) como una película gomosa. 1H RMN (300 MHz, DMSO-d6, 27°C) 0.42 - 0.61 (2H, m), 0.81 -0.91 (2H, m), 0.93 (3H, d), 1.93 (3H, s), 2.43 - 2.48 ( 2H, m), 2.72 - 2.89 (2H, m), 3.48 - 3.57 (1H, m), 3.87 (3H, s), 4.57 (2H, s), 5.12 (1H, s), 6.24 (1H, d), 6.35 (1H, d), 6.82 (1H, d), 6.96 (1H, d), 7.16 (1 H, d). m/z: ES+ [M+H]+ 433.

Preparación de (6S,8R)-6-(4-bromo-2-metoxifenil)-7-((1-fluorociclopropil)metil)-8-metil-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina

Se añadió ácido acético (0.392 ml, 6.84 mmol) a (1S,3R)-1-(4-bromo-2-metoxifenil)-2-((1-fluorociclopropil)metil)-3,5-dimetil-1,2, 3,4-tetrahidroisoquinolin-6-amina (0.593 g, 1.37 mmol) en CHCl3 (5 ml), y la solución resultante se enfrió hasta 0°C. Se añadió nitrito de isopentilo (0.321 g, 2.74 mmol) en CHCl3 (1 ml) a la reacción gota a gota, y la reacción se agitó a 0°C durante otras 2 horas. Luego se añadió lentamente NaHCO3 acuoso saturado (1 g en 20 ml de agua). La reacción se agitó a 0°C durante 10 minutos, y luego las capas se separaron. La capa orgánica se purificó mediante cromatografía en columna instantánea, elución en gradiente de acetato de etilo del 5 al 35% en hexanos, para proporcionar (6S,8R)-6-(4-bromo-2-metoxifenil)-7-((1-fluorociclopropil)metil)-8-metil-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina (0.299 g, 49.2%) como un sólido de color marrón claro. 1H r Mn (300 MHz, DMSO-d6, 27°C) 5 ppm 0.39 - 0.65 (2H, m), 0.77- 0.96 (2H, m), 1.00 (3H, d), 2.52 - 2.63 (1H, m), 2.87- 3.03 (2H, m), 3.21 - 3.28 (1H, m), 3.71 (1 H, d), 3.92 (3H, s), 5.31 (1H, s), 6.65 (1H, d), 6.86-6.92 (1H, m), 6.97 (1H, m), 7.18 (1H, d), 7.23 (1H, d), 8.05 (1H, s), 12.94 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 444.

Preparación de (6S,8R)-6-(4-bromo-2-metoxifenil)-7-((1-fluorociclopropil) metil)-8-metil-3-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina

Se añadió 3,4-dihidro-2H-pirano (176 ^L, 1.93 mmol) a una solución de (6S,8R)-6-(4-bromo-2-metoxifenil)-7-((1-fluorocidopropil)metil)-8-metil-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina (286 mg, 0.64 mmol) y monohidrato de ácido para-toluenosulfónico (12 mg, 0.060 mmol) en DCM (2.5 ml). La reacción se sometió a condiciones de microondas (100°C, 300 W) durante 6 horas. Al enfriar, la reacción se lavó con NaHCO3 acuoso saturado, se secó sobre Na2SO4, se filtró y se concentró bajo presión reducida. El residuo resultante se purificó por cromatografía instantánea sobre sílica, gradiente de elución de acetato de etilo del 10 al 30% en hexanos, para proporcionar (6S,8R)-6-(4-bromo-2-metoxifenil)-7-((1-fluorociclopropil)metil)-8-metil-3-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina (299 mg, 88%) como sólido de color marrón claro gomoso. m/z: ES+ [M+H]+ 528.

Preparación de tert-butil 3-((4-((6S,8R)-7-((1-fluorociclopropil)metil)-8-metil-3-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)-3-metoxifenil)amino)azetidin-1-carboxilato

(6S,8R)-6-(4-bromo-2-metoxifenil)-7-((1-fluorociclopropil)metil)-8-metil-3-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina (278 mg, 0.53 mmol), 3-aminoazetidin-1-carboxilato de tert-butilo (136 mg, 0.79 mmol), carbonato de cesio (343 mg, 1.05 mmol), y el precatalizador de tercera generación de BrettPhos (24 mg, 0.030 mmol) en dioxano (2.5 ml) se sometieron a condiciones de microondas (100°C, 300 W) durante 6 horas. Luego, la reacción se concentró bajo presión reducida, y el residuo resultante se adsorbió sobre sílica gel antes de la purificación mediante cromatografía de sílica instantánea, grado de elución de 20 a 60% de acetato de etilo en hexanos, para proporcionar 3-((4-((6S, 8R)-7-((1-fluorociclopropil)metil)-8-metil-3-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)-3-metoxifenil)amino)azetidina-1-carboxilato de tert-butilo (296 mg, 91%). m/z: ES+ [M+H]+ 620.

Preparación de N-(4-((6S,8R)-7-((1-fluorociclopropil)metil)-8-metil-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)-3-metoxifenil)azetidin-3-amina

Se añadió gota a gota HCl en dioxano (4 M; 1.2 ml, 4.78 mmol) a una solución de 3-((4-((6S,8R)-7-((1-fluorociclopropil)metil)-8-metil-3-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)-3-metoxifenil)amino)azetidina- 1-carboxilato de tert-butilo (296 mg, 0.48 mmol) en MeOH (3.5 ml). Después de agitar a temperatura ambiente durante la noche, la reacción se concentró bajo presión reducida, y el residuo resultante se disolvió en MeOH (2 ml). Esta solución se cargó luego en un cartucho de intercambio iónico SCX-2 que había sido tratado previamente con metanol. El cartucho se lavó con metanol y luego con amoníaco 7 N en metanol. Las fracciones del producto se concentraron bajo presión reducida para proporcionar N-(4-((6S,8R)-7-((1-fluorociclopropil)metil)-8-metil-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)-3-metoxifenil)azetidin-3-amina (181 mg, 87%) como un sólido pálido. m/z: ES+ [M+H]+ 436.

Ejemplo 7

(6S,8R)-7-((1-fluorociclopropil)metil)-6-(4-((1-(3-fluoropropil)azetidin-3-il)oxi)-2-metoxifenil)-8-metil-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina

Se añadió 1-fluoro-3-yodopropano (5.79 ^L, 0.05 mmol) a una solución de sal de ácido trifluoroacético de (6S,8R)-6-(4-(azetidin-3-iloxi)-2-metoxifenil)-7-((1-fluorociclopropil)metil)-8-metil-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina (0.030 g, 0.050 mmol) y DIPEA (0.029 ml, 0.16 mmol) en NMp (0.52 ml) a temperatura ambiente. Después de 3 horas, la reacción se diluyó con EtOAc (40 ml) y se lavó con cloruro de sodio acuoso saturado (3 x 20 ml). La capa orgánica se secó sobre MgSo4, se filtró y se concentró bajo presión reducida. El residuo resultante se purificó por cromatografía instantánea sobre sílica, gradiente de elución de 15 a 30% (MeOH en DCM que contiene hidróxido de amonio al 1%) en DCM para proporcionar (6S,8R)-7-((1-fluorociclopropil)metil)-6-( 4-((1-(3-fluoropropil)azetidin-3-il)oxi)-2-metoxifenil)-8-metil-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina (5 mg, 18%) como un sólido blanco. 1H RMN (500 MHz, metanol-d4, 26°C) 0.45 - 0.56 (2H, m), 0.85 - 1.03 (2H, m), 1.12 (3H, d), 1.67-1.81 (2H, m), 2.50 - 2.62 (1H, m), 2.61 - 2.68 (2H, m), 2.92 (1H, dd), 3.08 - 3.21 (3H, m), 3.25 - 3.28 (1H, m), 3.70 - 3.84 (3H, m), 3.86- 3.91 (3H, m), 4.45 (2H, dt), 4.73 -4.82 (1H, m), 5.49 (1H, br. S), 6.19 (1H, d), 6.50 (1H, br. S.), 6.72 (1H, d), 6.79 (1H, d), 7.18 (1H, d), 8.05 (1H, s). Indazol NH no observado. m/z: ES+ [M+H]+497.

La sal de ácido trifuloroacético de N-(4-((6S,8R)-7-((1-fluorociclopropil)metil)-8-metil-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)-3-metoxifenil)azetidin-3-amina se preparó como sigue:

Preparación de (6S,8R)-7-((1 -fluorociclopropil)metil)-6-(2-metoxi-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenil)-8-metil-3-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina

Una mezcla de (6S,8R)-6-(4-bromo-2-metoxifenil)-7-((1-fluorociclopropil)metil)-8-metil-3-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina (369 mg, 0.70 mmol; preparado de acuerdo con el Ejemplo 6), bis(pinacolato) diboron (266 mg, 1.05 mmol), [1, 1'-bis(difenilfosfino) ferroceno] dicloropaladio (II) (51 mg, 0.070 mmol) y acetato de potasio (233 mg, 2.37 mmol) en dioxano (3.50 mL) se desgasificó y purgó con nitrógeno. La mezcla de reacción se calentó luego hasta 80°C. Después de agitar en estas condiciones durante 18 horas, la mezcla de reacción se enfrió hasta temperatura ambiente, se filtró a través de una almohadilla de Celite® y se lavó con EtOAc (100 ml).

El filtrado se lavó con agua (100 ml), la capa acuosa se extrajo con EtOAc (2 x 70 ml) y las capas orgánicas combinadas se lavaron con agua (3 x 70 ml) y cloruro de sodio acuoso saturado (50 ml) siendo secadas antes sobre MgSO4, se filtra y se concentran bajo presión reducida. El residuo resultante se purificó por cromatografía instantánea sobre sílica, gradiente de elución de 0 a 25% de acetato de etilo en hexano a (6s,8R)-7-((1-fluorociclopropil)metil)-6-(2-metoxi-4-(4, 4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il) fenil)-8-metil-3-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-6,7,8,9-tetrahidro -3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina (186 mg, 46.3%) como un sólido de color amarillo. m/z: ES+ [M+H]+ 576.

Preparación de 4-((6S,8R)-7-((1-fluorociclopropil)metil)-8-metil-3-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)-3-metoxifenol

Se añadió peróxido de hidrógeno acuoso (33%; 75 pl, 0.74 mmol) gota a gota a una solución agitada de (6S,8R)-7-((1-fluorociclopropil)metil)-6-(2-metoxi-4-(4, 4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il) fenil)-8-metil-3-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-6,7,8,9-tetrahidro -3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina (186 mg, 0.32 mmol) e hidróxido de sodio acuoso (1 M; 350 pL, 0.32 mmol) en THF (2.5 ml) a 5°C bajo aire. La mezcla resultante se agitó a 5°C durante 5 minutos. La reacción se diluyó luego con agua (50 ml) y DCM (100 ml). Las capas se separaron y la capa acuosa se extrajo con DCM (2 x 50 ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se concentraron bajo presión reducida. El residuo resultante se purificó por cromatografía instantánea sobre sílica, gradiente de elución de 20 a 50% de acetato de etilo en hexanos, para proporcionar 4-((6S,8R)-7-((1-fluorociclopropil)metil)-8-metil-3-( tetrahidro-2H-piran-2-il)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)-3-metoxifenol (94 mg, 62.5%) como un sólido de color amarillo. m/z: ES+ [M+H]+ 466.

Preparación de tert-butil 3-(4-((6S,8R)-7-((1 -fluorociclopropil)metil)-8-metil-3-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)-3-metoxifenoxi)azetidin-1-carboxilato

Se añadió (E)-diazeno-1,2-dicarboxilato de dietilo (88 mg, 0.20 mmol) a una solución de 4-((6S,8R)-7-((1-fluorociclopropil)metil)-8-metil-3-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)-3-metoxifenol (94 mg, 0.20 mmol), 3-hidroxiazetidina-1-carboxilato de tert-butilo (35 mg, 0.20 mmol), trifenilfosfina (53 mg, 0.20 mmol) y tolueno (2.03 ml). La reacción se calentó luego hasta 110°C. Después de 15 horas, la reacción se enfrió, se concentró bajo presión reducida y se purificó por cromatografía instantánea sobre sílica, gradiente de elución de 0 a 30% de acetato de etilo en hexanos, para proporcionar 3-(4-((6S,8R)-7-((1-fluorociclopropil)metil)-8-metil-3-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)-3-metoxifenoxi)azetidina-1-carboxilato de tert-butilo (95 mg, 75%). m/z: ES+ [M+H]+ 621.

Preparación de sal de ácido acético de tert-butil 3-(4-((6S,8R)-7-((1-fluorociclopropil)metil)-8-metil-3-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)-3-metoxifenoxi)azetidin-1-carboxilato

Se añadió gota a gota HCl en dioxano (4N; 383 pL, 1.53 mmol) a una solución de 3-(4-((6S,8R)-7-((1-fluorociclopropil)metil)-8-metil-3-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f|isoquinolin-6-il)-3-metoxifenoxi)azetidina-1-carboxilato de tert-butilo ( 95 mg, 0.15 mmol) en MeOH (1 ml), y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 18 horas. La reacción se concentró bajo presión reducida, y el residuo resultante se purificó por cromatografía instantánea en fase reversa, usando mezclas de agua decrecientemente polares (que contenían 0.01% de TFA) y MeCN como eluyentes (20 a 80%) para proporcionar (6S,8R)-6-(4-(azetidin-3-iloxi)-2-metoxifenil)-7-((1-fluorociclopropil)metil)-8-metil-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4.3 -f]isoquinolina (30 mg, 36%) como una sal de TFA. 1H RMN (300 MHz, METANOL-d4, 27°C) 0.86- 1.09 (2H, m), 1.26- 1.52 (3H, m), 1.59 (3H, d), 3.22 -3.31 (1H, m), 3.36- 3.47 (1H, m), 3.66 (1 H, dd), 4.03 (3H, s), 4.07- 4.27 (4H, m), 4.52 - 4.62 (2H, m), 5.14 - 5.27 (1H, m), 6.33 (1H, dd), 6.57-6.63 (1H, m), 6.68 (1H, d), 6.75 (1 H, s), 6.93 (1H, d), 7.50 (1H, d), 8.23 (1H, s). Indazol NH y adición H no observados. m/z: ES+ [M+H]+ 437.

Ejemplo 8

N-(3,5-difluoro-4-((6S,8R)-8-metil-7-(2,2,2-trifluoroetil)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)fenil)-1-(3-fluoropropil)azetidin-3-amina

Se agregaron 1-fluoro-3-yodopropano (5.4 pl, 0.050 mmol) y diisopropiletilamina (0.013 mL, 0.070 mmol) a una solución agitada de N-(3,5-difluoro-4-((6S,8R)-8-metil-7-(2,2,2-trifluoroetil)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il) fenil)azetidin-3-amina (22 mg, 0.050 mmol) en Nm P (0.4 mL) a temperatura ambiente. Después de 16 horas, la reacción cruda se purificó directamente por HPLC preparativa en fase reversa (columna Waters XBridge C18, 19 mm de diámetro, 100 mm de longitud, 5 pm de sílica), gradiente de elución de 40 a 70% de MeCN en agua que contiene hidróxido de amonio al 0.2% como modificador. Las fracciones del producto se concentraron hasta sequedad para proporcionar N-(3,5-difluoro-4-((6S,8R)-8-metil-7-(2,2,2-trifluoroetil)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il) fenil)-1-(3-fluoropropil)azetidin-3-amina (9 mg, 36%) como un sólido de color amarillo pálido. 1H RMN (500 MHz, CD2Cl2, 27°C) 1.11 (3H, d), 1.69 - 1.78 (3H, m), 2.51 - 2.59 (2H, m), 2.81 - 2.94 (3H, m), 2.95 - 3.03 ( 1H, m), 3.16- 3.30 (1H, m), 3.59 - 3.70 (3H, m), 3.94 - 4.05 (1H, m), 4.41 (1H, t), 4.45 (1H, d), 4.51 (1H, t), 5.27 (1H, s), 6.02 (2H, d), 6.83 (1H, d), 7.21 (1H, d), 8.03 (1H, s), 10.47 (1H, br. s). m/z: ES+ [M+H]+512.

La N-(3,5-difluoro-4-((6S,8R)-8-metil-7-(2,2,2-trifluoroetil)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[3-f]isoquinolin-6-il) fenil)azetidin-3-amina se preparó como sigue;

Preparación de trifluorometanosulfonato de 2,2,2-trifluoroetilo

Se añadió anhídrido trifluorometanosulfónico (3.14 ml, 18.6 mmol) gota a gota mediante una jeringa durante 5 minutos a una solución agitada de 2,2,2-trifluoroetano-1-ol (1.23 ml, 16.9 mmol) y 2,6-dimetilpiridina (2.36 ml, 20.3 mmol) en DCM (50 ml) a -10°C. Después de 2 horas, la reacción se lavó sucesivamente con HCl acuoso (1 N; 2 x 30 ml) y NaHCO3 acuoso saturado (20 ml). La capa orgánica se secó luego sobre MgSO4, se filtró y se concentró bajo presión reducida para dar trifluorometanosulfonato de 2,2,2-trifluoroetilo (0.92 g, 23%) como un aceite de color rojo. 1H RMN (300 MHz, CDCls, 27°C) 4.69 (2H, q).

Preparación de (R)-2-metil-3-(2-((2,2,2-trifluoroetil)amino)propil)anilina

Se añadió trifluorometanosulfonato de 2,2,2-trifluoroetilo (1.3 g, 2.8 mmol) a una solución agitada de (R)-3-(2-aminopropil)-2-metilanilina (0.460 g, 2.80 mmol; preparado de acuerdo con el Ejemplo 3) y diisopropiletilamina (0.636 ml, 3.64 mmol) en 1,4-dioxano (10 ml). La reacción se calentó a 65°C durante 15 horas y luego se enfrió y se concentró bajo presión reducida. El residuo resultante se disolvió en EtOAc (50 ml) y se lavó con una mezcla de NaHCO3 acuoso saturado y cloruro de sodio acuoso saturado. La capa acuosa se extrajo con EtOAc (20 ml), y las capas orgánicas combinadas se secaron sobre MgSO4, se filtraron y se concentraron bajo presión reducida. El residuo resultante se disolvió en MeOH, se adsorbió sobre tierra de diatomeas bajo presión reducida y se purificó por cromatografía instantánea sobre sílica, gradiente de elución de 1 a 6% de MeOH en DCM. Las fracciones del producto se concentraron hasta sequedad para proporcionar (R)-2-metil-3-(2-((2,2,2-trifluoroetil)amino)propil) anilina (0.30 g, 44%) como una goma de color naranja pálido. 1H RMN (300 MHz, CDCls, 27°C) 1.07 (3H, d), 2.09 (3H, s), 2.63 (1H, dd), 2.76 (1H, dd), 2.92 - 3.05 (1H, m), 3.15 (2H, q), 6.58 (2H, d), 6.85 - 7.00 (1H, m). Señales para tres NHs no observadas. m/z: ES+ [M+H]+ 247.

Preparación de (1S,3R)-1-(4-bromo-2,6-difluorofenil)-3,5-dimetil-2-(2,2,2-trifluoroetil)-1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-6-amina

(R)-2-metil-3-(2-((2,2,2-trifluoroetil)amino)propil)anilina (303 mg, 1.23 mmol) y 4-bromo-2,6-difluorobenzaldehído (544 mg, 2.46 mmol) se calentaron en una mezcla de ácido acético (5 ml) y agua (0.111 ml) a 90°C durante 2 horas. La reacción se dejó enfriar lentamente a temperatura ambiente y se agitó durante la noche. Luego, la reacción se concentró bajo presión reducida, y el residuo resultante se disolvió en EtOAc (30 ml) y se lavó con NaHCO3 acuoso saturado (2 x 20 ml). Las capas acuosas combinadas se extrajeron con EtOAc (2 x 20 ml), y las capas orgánicas combinadas se lavaron con cloruro de sodio acuoso saturado y se concentraron a un volumen mínimo (~20 ml). Se añadió HCl acuoso (1 N; 20 ml) y la mezcla bifásica se agitó vigorosamente durante 2 horas. Las capas se separaron y la capa acuosa se extrajo con EtOAc (20 ml). La capa acuosa se basificó mediante la adición de carbonato de sodio sólido (hasta pH ~8 tal como se midió usando una tira de pH) y luego se extrajo con DCM (3 x 20 ml). Los extractos de DCM combinados se secaron sobre MgSO4, se filtraron y se concentraron bajo presión reducida para proporcionar 40 mg de producto crudo. Mientras tanto, los extractos de EtOAc combinados se lavaron con cloruro de sodio acuoso saturado y se concentraron hasta sequedad. El residuo resultante se disolvió en THF (10 ml) y se agitó con tosilhidrazida unida a poliestireno (1.03 g, 2.76 mmol) durante 14 horas. La mezcla se filtró y la resina se lavó sucesivamente con THF (10 ml) y MeOH (3 x 10 ml). El filtrado se combinó con 40 mg ca. obtenidos previamente de producto crudo y concentrado bajo presión reducida. Este residuo final se purificó por cromatografía instantánea sobre sílica, gradiente de elución de 0 a 30% de EtOAc en hexanos. Las fracciones del producto se concentraron hasta sequedad para proporcionar (1S,3R)-1-(4-bromo-2,6-difluorofenil)-3,5-dimetil-2-(2,2,2-trifluoroetil)-1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-6-amina (230 mg, 41%) como un sólido de color amarillo pálido. 1H Rm N (300 MHz, Cd C|3, 27°C) 1.04 (3H, d), 2.42 (3H, s), 2.58 (1H, dd), 2.74 - 2.87 (1H, m), 3.02 - 3.28 (2H, m), 3.46- 3.59 (1H, m), 5.27 (1H, s), 6.66 (1H, d), 7.02 (2H, d), 7.32 (1H, d), 9.95 - 10.73 (2H, br. S). m/z: ES+ [M+H]+449.

Preparación de (6S,8R)-6-(4-bromo-2,6-difluorofenil)-8-metil-7-(2,2,2-trifluoroetil)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina

Se añadió gota a gota una solución de nitrito de sodio (35 mg, 0.51 mmol) en agua (0.20 ml) durante 1 minuto a una solución agitada de (1S,3R)-1-(4-bromo-2,6-difluorofenil)-3,5-dimetil-2-(2,2,2-trifluoroetil)-1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-6-amina (230 mg, 0.51 mmol) en ácido propiónico (2 ml) a aproximadamente -20°C (baño de hielo-NaCl). Después de 15 minutos, la reacción se diluyó con EtOAc helado (15 ml). La mezcla bifásica se agitó vigorosamente bajo estas condiciones y se neutralizó mediante la adición lenta de Na2CO3 sólido (hasta que se midió de manera básica utilizando una tira de pH). El baño de enfriamiento se retiró. Las fases se separaron y la capa orgánica se lavó con NaHCO3 acuoso saturado (2 x 15 ml), cloruro de sodio acuoso saturado (15 ml), se secó sobre MgSO4, se filtró y se concentró bajo presión reducida. El residuo resultante se purificó por cromatografía instantánea sobre sílica, gradiente de elución de EtOAc del 5 al 35% en hexanos. Las fracciones del producto se concentraron hasta sequedad para proporcionar (6S,8R)-6-(4-bromo-2,6-difluorofenil)-8-metil-7-(2,2,2-trifluoroetil)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina (104 mg, 45%) como una película de color naranja pálido. 1H RMN (300 MHz, CDCl3, 27°C) 1.15 (3H, d), 2.89 - 3.04 (2H, m), 3.20 - 3.36 (1H, m), 3.50 (1H, dd), 3.61 - 3.75 (1H, m), 5.41 (1H, s), 6.80 (1H, d), 7.01 - 7.11 (2H, m), 7.23 (1H, d), 8.10 (1H, s), 10.24 (1H, br. s). m/z: ES+ [M+H]+ 460.

Preparación de (6S,8R)-6-(4-bromo-2,6-difluorofenil)-8-metil-3-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-7-(2,2,2-trifluoroetil)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina

Se añadieron 3,4-dihidro-2H-pirano (0.103 ml, 1.13 mmol) y monohidrato de ácido p-toluenosulfónico (2 mg, 0.01 mmol) a una solución agitada de (6S,8R)-6-(4-bromo-2, 6-difluorofenil)-8-metil-7-(2,2,2-trifluoroetil)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina (104 mg, 0.23 mmol) en DCM (1.5 ml). La reacción se mantuvo bajo condiciones de reflujo durante 1 hora. Después de enfriar, la reacción se diluyó con DCM, se lavó con NaHCO3 acuoso saturado, se secó sobre MgSO4, se filtró y se concentró bajo presión reducida. El residuo resultante se purificó por cromatografía instantánea sobre sílica, gradiente de elución de 0 a 30% de EtOAc en hexanos. Las fracciones del producto se concentraron hasta sequedad para proporcionar (6S,8R)-6-(4-bromo-2,6-difluorofenil)-8-metil-3-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-7-(2 2,2-trifluoroetil)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina (117 mg, 95%) como un sólido de color amarillo pálido. m/z: ES+ [M+H]+ 544.

Preparación de tert-butil 3-((3,5-difluoro-4-((6S,8R)-8-metil-3-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-7-(2,2,2-trifluoroetil)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)fenil)amino)azetidin-1-carboxilato

Se cargó un vial con una barra de agitación, (6S,8R)-6-(4-bromo-2,6-difluorofenil)-8-metil-3-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-7-( 2,2,2-trifluoroetil)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina (55 mg, 0.10 mmol), 3-aminoazetidina-1-carboxilato de tert-butilo (26 mg, 0.15 mmol), Pd2dba3 (9 mg, 0.01 mmol), Xantphos (12 mg, 0.02 mmol) y carbonato de cesio (99 mg, 0.30 mmol). El vial se selló y se evacuó/rellenó con nitrógeno (3x) antes de la adición de 1,4-dioxano desgasificado (1 ml) mediante una jeringa. La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 2 minutos y luego se colocó en un bloque calefactor que había sido precalentado hasta 90°C. Después de 22 horas, la mezcla se dejó enfriar hasta temperatura ambiente y luego se diluyó con EtOAc. La mezcla se filtró a través de tierra de diatomeas y el filtrado se concentró bajo presión reducida. El residuo resultante se purificó por cromatografía instantánea sobre sílica, gradiente de elución de 0 a 45% de EtOAc en hexanos. Las fracciones del producto se concentraron hasta sequedad para proporcionar 3-((3,5-difluoro-4-((6S,8R)-8-metil-3-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-7-(2,2,2-trifluoroetil)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il) fenil)amino)azetidina-1-carboxilato de tert-butilo (46 mg, 72 %) como un sólido de color amarillo pálido. 1H RMN (300 MHz, CDCls, 27°C) 1.08 (3H, d), 1.42 (9H, s), 1.55 - 1.81 (4H, m), 1.97- 2.23 (2H, m), 2.45 - 2.63 (1H, m), 2.80 - 3.02 (2H, m), 3.09 - 3.27 (1H, m), 3.34 - 3.47 (1H, m), 3.53 - 3.65 (1H, m), 3.66- 3.75 (3H, m), 3.92 - 4.02 (1H, m), 4.19 - 4.32 (3H, m), 5.25 (1H, s), 5.58 - 5.67 (1H, m), 5.93 (2H, dd), 6.81 (1H, d), 7.22 - 7.27 ( 1H, m), 7.98 (1H, s). Superposición parcial del multiplete a 7.22 a 7.27 ppm con cloroformo. m/z: ES+ [M+H]+ 636.

Preparación de N-(3,5-difluoro-4-((6S,8R)-8-metil-7-(2,2,2-trifluoroetil)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)fenil)azetidin-3-amina

El 3-((3,5-difluoro-4-((6S,8R)-8-metil-3-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-7-(2,2,2-trifluoroetil)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il) fenil)amino)azetidina-1-carboxilato de tert-butilo (46 mg, 0.08 mmol) se disolvió en ácido fórmico (0.50 ml, 13 mmol), y la solución agitada se calentó hasta 30°C. Después de 27 horas, la reacción se concentró bajo presión reducida. El residuo resultante se disolvió en 5% de IPA/DCM y se neutralizó con NaHCO3 acuoso saturado. Las fases se separaron y la capa acuosa se extrajo con 5% de IPA/DCM (2 x 4 ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre MgSO4, se filtraron y se concentraron bajo presión reducida para proporcionar N-(3,5-difluoro-4-((6S,8R)-8-metil-7-(2,2,2- trifluoroetil)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il) fenil)azetidin-3-amina (38 mg, 111%) contaminada con una pequeña cantidad de material de partida desprotegido como una película de color amarillo pálido. m/z: ES+ [M+H]+ 452.

Ejemplo 9

5-((6S,8R)-7-((1-fluorociclopropil)metil)-8-metil-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)-N-(1-(3-fluoropropil)azetidin-3-il)-4-metoxipiridin-2-amina

DMF (1 mL) y DIPEA (0.022 ml, 0.13 mmol) se agregaron secuencialmente a un matraz cargado con N-(azetidin-3-il)-5-((6S,8R)-7-((1-fluorociclopropil)metil)-8-metil-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)-4-metoxipiridin-2-amina (22 mg, 0.050 mmol). Luego se añadió 1-fluoro-3-yodopropano (9 mg, 0.05 mmol) en DMF (0.1 mL). Después de 2 horas, la reacción se diluyó con cloruro de sodio acuoso saturado, y la mezcla se extrajo en EtOAC (3x). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con agua y se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se concentraron bajo presión reducida. La película cruda resultante se purificó por cromatografía instantánea sobre sílica, gradiente de elución de 2 a 10% de MeOH en DCM, para dar 5-((6S,8R)-7-((1-fluorociclopropil)metil)-8-metil-6,7, 8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)-N-(1-(3-fluoropropil)azetidin-3-il)-4-metoxipiridin-2-amina (9.0 mg, 36%) como una película seca. 1H RMN (500 MHz, CLOROFORMO-d, 27°C) 5 ppm 0.46- 0.66 (2H, m), 0.85 - 1.05 (2H, m), 1.09 (3H, d), 1.64 - 1.78 (2H, m), 2.50 - 2.61 (3H, m), 2.83 (1H, dd), 2.87- 2.96 (2H, m), 3.04 - 3.21 (2H, m), 3.56- 3.69 (2H, m), 3.70 - 3.76 (1H, m), 3.85 (3H, s), 4.30 - 4.37 (1H, m), 4.45 (2H, dt), 4.93 (1H, br d), 5.32 (1H, s), 5.82 (1H, s), 6.76 (1H, d), 7.00 (1H, d), 7.32 (1H, s), 7.99 (1H, s), 11.00 (1H, br s). m/z: ES+ [M+H]+ 497

La N-(azetidin-3-il)-5-((6S,8R)-7-((1-fluorociclopropil)metil)-8-metil-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)-4-metoxipiridin-2-amina se preparó como se describe más adelante

Preparación de (1S,3R)-1-(6-bromo-4-metoxipiridin-3-il)-2-((1-fluorociclopropil)metil)-3,5-dimetil-1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-6-amina

Se añadió 6-bromo-4-metoxinicotinaldehído (1.46 g, 6.77 mmol) a una solución de (R)-3-(2-(((1-fluorociclopropil)metil)amino)propil)-2-metilanilina (0.800 g, 3.39 mmol) en AcOH (27 ml) y agua (0.305 g, 16.9 mmol), y la reacción se calentó a 85°C durante 18 horas. Después de enfriar, la reacción se concentró bajo presión reducida, y el residuo resultante se diluyó con acetato de etilo y se basificó con hidrogenocarbonato de sodio acuoso saturado. La capa orgánica se combinó con HCl acuoso (1 N), y la mezcla bifásica se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos. La capa orgánica se lavó con HCl acuoso (1 N), luego las capas acuosas combinadas se extrajeron con acetato de etilo. La capa acuosa se basificó luego mediante la adición de K2CO3 sólido y se extrajo con acetato de etilo (2x). Los extractos combinados de acetato de etilo de la capa acuosa basificada se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se concentraron bajo presión reducida. El residuo resultante se purificó por gradiente de elución de cromatografía instantánea sobre sílica 10 a 100% de acetato de etilo en hexanos para proporcionar (1S,3R)-1-(6-bromo-4-metoxipiridin-3-il)-2-((1 -fluorociclopropil)metil)-3,5-dimetil-1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-6-amina (0.450 g, 30.6%) como una goma. 1H RMN (400 MHz, DMSO-da, 27°C) 5 ppm 0.47- 0.64 (2 H, m), 0.87- 0.98 (5 H, m), 1.95 (3 H, s), 2.42 - 2.48 (1H, m), 2.79 (1H, dd), 2.87- 2.99 (1H, m), 3.41 - 3.50 (H, m), 3.92 - 3.97 (3H, m), 4.66 (2H, s), 5.11 (1H, s), 6.30 (1H, d), 6.39 (1H, d), 7.26 (1H, s), 7.64 (1H, s). Un hidrógeno oscurecido por DMSO. m/z: ES+ [M+H]+ 434.

Preparación de (6S,8R)-6-(6-bromo-4-metoxipiridin-3-il)-7-((1 -fluorociclopropil) metil)-8-metil-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina

Se añadió gota a gota una solución de nitrito de sodio (0.045 g, 0.65 mmol) en agua (0.75 ml) a una solución de (1S,3R)-1-(6-bromo-4-metoxipiridin-3-il)-2-((1-fluorociclopropil)metil)-3,5-dimetil-1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-6-amina (0.270 g, 0.62 mmol) en ácido propiónico (3.0 mL) a -15°C (baño de sal/hielo), y la reacción se agitó bajo estas condiciones durante 1 hora. Se añadió EtOAc helado (10 ml) seguido de NaHCo3 acuoso saturado (15 ml) en porciones. Las capas se separaron y la capa orgánica se lavó con NaHCO3 acuoso saturado (2X). Las capas acuosas combinadas (pH = 8) se extrajeron con EtOAc, y luego todas las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se concentraron bajo presión reducida. El residuo resultante se purificó por cromatografía instantánea sobre sílica, gradiente de elución de 20 a 60% de acetato de etilo en hexanos para dar (6S,8R)-6-(6-bromo-4-metoxipiridin-3-il)-7-((1-fluorociclopropil)metil)-8-metil-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina (0.11 g, 41%) como una goma. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6, 27°C) 0.47- 0.64 (2H, m), 0.87- 0.97 (2H, m), 0.97-1.01 (3H, m), 2.51 - 2.63 (1H, m), 2.89 (1H, dd), 2.94 - 3.06 (1H, m), 3.23 (1H, br dd), 3.54 - 3.67 (1H, m), 3.97 (3H, s), 5.28 (1H, s), 6.68 (1H, d), 7.21 (1H, d), 7.30 (1H, s), 7.68 (1H, s), 8.06 (1H, s), 12.98 (1 H, br s). m/z: ES+ [M+H]+445.

Preparación de (6S,8R)-6-(6-bromo-4-metoxi-3-piridil)-7-[(1-fluorociclopropil) metil]-8-metil-3-[(2R)-tetrahidropiran-2-il]-8,9-dihidro-6H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina y (6S,8R)-6-(6-bromo-4-metoxipiridin-3-il)-7-((1-fluorociclopropil)metil)-8-metil-2-(tetrahidro-2H-piran-2-i¡)-6,7,8,9-tetrahidro-2H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina

Se añadió DCM (4 ml) a un matraz cargado con (6S,8R)-6-(6-bromo-4-metoxipiridin-3-il)-7-((1-fluorociclopropil)metil)-8-metil-6, 7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina (150 mg, 0.34 mmol) e hidrato de ácido 4-metilbencenosulfónico (71 mg, 0.37 mmol). Se añadió 3,4-dihidro-2H-pirano (43 mg, 0.51 mmol) a la reacción agitada, y la reacción se agitó a TA durante la noche. La reacción se lavó con hidrogenocarboante de sodio acuoso saturado, y la capa orgánica se secó sobre sulfato de sodio, se filtró y se concentró bajo presión reducida para dar goma de color marrón cruda. Esto se purificó por cromatografía instantánea, gradiente de elución de EtOAc del 5 al 40% en hexanos para dar una mezcla de (6S,8R)-6-(6-bromo-4-metoxi-3-piridil)-7-[(1 -fluorociclopropil)metil] -8-metil-3-[(2R)-tetrahidropiran-2-il] -8,9-dihidro-6H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina y (6S,8R)-6-(6-bromo-4-metoxipiridin-3-il)-7-((1-fluorociclopropil)metil)-8-metil-2-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-6,7,8,9-tetrahidro-2H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina (151 mg, 85%) como una goma. 1H RMN (400 MHz, CLOROFORMO-d, 27°C) 0.45 -0.61 (2H, m), 0.96- 1.06 (2H, m), 1.09 (3H, d), 1.46-1.91 (3H, m), 2.03 -2.20 (2H, m), 2.47-2.63 (2H, m), 2.88 (1H, ddd), 3.14 (1H, dd), 3.20 -3.31 (1 H, m), 3.64 - 3.79 (2H, m), 3.96 (3H, d), 3.98 - 4.06 (1H, m), 5.40 (1H, d), 5.64 - 5.71 (1H, m), 6.78 (1H, d), 6.99 (1H, d), 7.25 -7.33 (1H, m), 7.76 (1H, d), 8.02 (1H, d).

Preparación de tert-butil 3-((5-((6S,8R)-7-((1-fluorociclopropil)metil)-8-metil-3-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)-4-metoxipiridin-2-il)amino)azetidin-1-carboxilato y tert-butil 3-(5-((6S,8R)-7-((1-fluorociclopropil)metil)-8-metil-2-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-6,7,8,9-tetrahidro-2H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)-4-metoxipiridin-2-ilamino)azetidin-1-carboxilato

Se añadió dioxano (2.7 ml) a un matraz cargado con una mezcla de (6S,8R)-6-(6-bromo-4-metoxipiridin-3-il)-7-((1-fluorociclopropil)metil)-8-metil-3-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina y (6S,8R)-6-(6-bromo-4-metoxipiridin-3-il)-7-((1-fluorociclopropil)metil)-8-metil-2-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-6,7,8,9-tetrahidro-2H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina (140 mg, 0.26 mmol), carbonato de cesio (172 mg, 0.53 mmol) y 3-aminoazetidina-1-carboxilato de tert-butilo (68 mg, 0.40 mmol), y el matraz de reacción se evacuó y se volvió a llenar con nitrógeno (3x). Se añadió el precatalizador de tercera generación BrettPhos (24 mg, 0.030 mmol), y el matraz se evacuó nuevamente y se volvió a llenar con nitrógeno (3x). La reacción se calentó a 110°C durante 4 horas. La reacción se enfrió hasta temperatura ambiente, se filtró y se concentró bajo presión reducida. El um resultante se purificó por cromatografía instantánea sobre sílica, gradiente de elución de 30 a 100% de acetato de etilo en hexanos para dar una mezcla de 3-((5-((6S,8R)-7-((1-fluorociclopropil)metil)-8-metil-3-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)-4-metoxipiridin-2-il)amino)azetidina-1-carboxilato de tert-butilo y 3-(5-((6S,8R)-7-((1-fluorociclopropil)metil)-8-metil-2-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-6,7,8,9-tetrahidro-2H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)-4-metoxipiridin-2-ilamino)azetidina-1-carboxilato de tert-butilo (53 mg, 32%) como una película seca. 1H RMN (400 MHz, CLOROFORMO-d, 27°C) 0.50 - 0.68 (2H, m), 0.96- 1.09 (2H, m), 1.12 (3H, d), 1.42 - 1.47 (9H, m), 1.60 - 1.88 (3H, m), 2.07- 2.21 (2H, m), 2.50 - 2.67 (2H, m), 2.85 (1H, ddd), 3.10 - 3.23 (2H, m), 3.63 - 3.79 (4H, m), 3.87- 3.91 (3H, m), 3.99 - 4.07 (1H, m), 4.24 - 4.33 (2H, m), 4.42 - 4.52 (1H, m), 5.36 (1H, d), 5.64 - 5.73 (1H, m), 5.83 (1H, d), 6.85 (1H, d), 7.26- 7.32 (2H, m), 7.40 (1H, d), 8.00 - 8.03 (1H, m). m/z: ES+ [M+H]+ 621.

Preparación de N-(azetidin-3-il)-5-((6S,8R)-7-((1-fluorociclopropil)metil)-8-metil-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)-4-metoxipiridin-2-amina

Se añadió metanol (0.5 ml) a un matraz cargado con 3-((5-((6S,8R)-7-((1-fluorociclopropil)metil)-8-metil-3-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)-4-metoxipiridin-2-il)amino)azetidina-1-carboxilato de tert-butilo ( 0.047 g, 0.080 mmol). Se añadió HCl en dioxano (4 M; 0.5 ml, 2 mmol) y la agitación continuó durante 2 horas. Luego, la reacción se concentró bajo presión reducida, y el residuo resultante se purificó usando un cartucho SCX-2, eluyendo con amoniaco 3N en metanol, para dar N-(azetidin-3-il)-5-((6S,8R)-7-((1-fluorociclopropil)metil)-8-metil-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)-4-metoxipiridin-2-amina cruda (25 mg, 76%) como una goma. El producto se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional. m/z: ES+ [M+H]+ 437.

Ejemplo 10

N-(4-((6S,8R)-7-((3-(fluorometil)oxetan-3-il)metil)-8-metil-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)-3-metoxifenil)-1-(3-fluoropropil)azetidin-3-amina

Se añadió 1-(3-fluoropropil)azetidin-3-amina (47.3 mg, 0.36 mmol) en 1,4-dioxano (1.4 mL) a un vial de microondas sellado que contiene (6S,8R)-6-(4-bromo- 2-metoxifenil)-7-((3-(fluorometil) oxetan-3-il)metil)-8-metil-3-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-6,7,8,9-tetrahidro -3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina (100 mg, 0.18 mmol), tert-butóxido de sodio (34.4 mg, 0.36 mmol) y metanosulfonato de [(2-di-ciclohexilfosfino-3,6-dimetoxi-2’,4’,6’-triisopropil-1,1-bifenil)-2-(2-amino-1,1-bifenil)]paladio (II) (BrettPhos Pd G3) (8.10 mg, 8.95 ^mol). El vial se desgasificó con nitrógeno burbujeante durante 10 minutos, luego se calentó hasta 90°C durante 1 hora. Después de enfriar, la reacción se diluyó con EtOAc y se lavó con agua. La fase acuosa se extrajo con EtOAc, luego las fases orgánicas combinadas se evaporaron. El residuo crudo se disolvió en DCM (2 ml) y se añadió TFA (1 ml). La mezcla se agitó durante 1 hora, luego se evaporó. El residuo se disolvió en DCM y se lavó con solución acuosa saturada de NaHCO3. La capa acuosa se extrajo con DCM, luego las fases orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4 y se evaporaron. El producto crudo se purificó por HPLC preparativa (columna Waters XBridge Prep C18 OBD, sílica 5 ^, 19 mm de diámetro, 100 mm de longitud), usando mezclas de agua decrecientemente polares (que contenían 0.1% de NH3) y MeCN como eluyentes. Las fracciones que contenían el compuesto deseado se evaporaron hasta sequedad para proporcionar N-(4-((6S,8R)-7-((3-(fluorometil)oxetan-3-il)metil)-8-metil-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)-3-metoxifenil)-1-(3-fluoropropil)azetidin-3-amina (59.0 mg, 63%) como un sólido de color beige. 1H RMN (500 MHz, CDCl3, 27°C) 1.07 (3H, d), 1.68 - 1.87 (2H, m), 2.62 (2H, t), 2.75 (1H, d), 2.83 (1H, dd), 2.87-2.96 (3H, m), 3.10 (1H, dd), 3.27 (1H, dt), 3.74 (2H, q), 3.84 (3H, s), 4.04 -4.14 (2H, m), 4.43 (4H, td), 4.53 (1H, t), 4.58 (1H, d), 4.78 (2H, td), 5.11 (1H, s), 5.90 (1H, dd), 6.12 (1H, d), 6.48 (1H, d), 6.80 (1H, d), 7.15 (1H, d), 8.05 (1H, d); m/z: ES+ [M+H]+ 526.

La N-(4-((6S,8R)-7-((3-(fluorometil)oxetan-3-il)metil)-8-metil-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)-3-metoxifenil)-1-(3-fluoropropil)azetidin-3-amina se preparó como sigue:

Preparación de (3-(fluorometil)oxetan-3-il)metanol

,F

^{^}H<y r

Se añadió fluoruro de cesio (5.03 g, 33.14 mmol) a un matraz que contenía (3-(bromometil) oxetan-3-il) metanol (2.00 g, 11.05 mmol) en etilenglicol (6 ml) y la reacción se calentó hasta 150°C durante 2 horas. Después de enfriar, la reacción se diluyó con EtOAc (30 ml) y agua (30 ml). La fase acuosa se extrajo con éter dietílico (3 x 30 ml) y acetato de etilo (3 x 30 ml). Las fases orgánicas combinadas se secaron sobre MgSO4, se filtraron y se evaporaron, luego el producto crudo se purificó por cromatografía instantánea sobre sílica, gradiente de elución de 0 a 100% de EtOAc en heptano. Las fracciones que contenían el producto se evaporaron hasta sequedad para proporcionar (3-(fluorometil) oxetan-3-il) metanol (0.734 g, 55%) como un líquido incoloro. 1H RMN (500 MHz, CDCls, 27°C) 3.92 (2H, s), 4.52 (4H, t), 4.59 -4.89 (2H, m).

Preparación de trifluorometanosulfonato de (3-(fluorometil)oxetan-3-il)metilo

Se añadió anhídrido trifluorometanosulfónico (1.47 ml, 8.74 mmol), seguido de 2,6-dimetilpiridina (1.12 ml, 9.57 mmol) a una solución de (3-(fluorometil)oxetan-3-il) metanol (1.00 g, 8.32 mmol) en DCM (30.7 ml) y la reacción se agitó a 0°C durante 1 hora. La reacción se lavó con agua y solución de ácido cítrico 1N, luego se secó sobre Na2SO4, se filtró y se evaporó para proporcionar (3-(fluorometil) oxetan-3-il)metil trifluorometanosulfonato (1.98 g, 94%) como un aceite de color rojo, que fue utilizado directamente sin purificación adicional. 1H RMN (500 MHz, CDCl3, 27°C) 4.40 - 4.75 (8H, m).

Preparación de (R)-3-(2-(((3-(fluorometil)oxetan-3-il)metil)amino)propil)-2-metilanilina

Se añadió trifluorometanosulfonato (3-(fluorometil) oxetan-3-il)metil de metilo (1.92 g, 7.61 mmol) a una solución de (R)-3-(2-aminopropil)-2-metilanilina (1.00 g, 6.09 mmol) y DIPEA (1.58 ml, 9.13 mmol) en 1,4-dioxano (18.7 ml) y la reacción se calentó hasta 70°C durante 5 horas. Después de enfriar, la reacción se diluyó con EtOAc y se lavó con agua. La fase acuosa se extrajo con EtOAc, luego las fases orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se evaporaron. El producto crudo se purificó por cromatografía instantánea sobre sílica, gradiente de elución de 0 a 10% de MeOH en EtOAc. Las fracciones puras se evaporaron hasta sequedad para proporcionar (R)-3-(2-((((3-(fluorometil) oxetan-3-il)metil)amino)propil)-2-metilanilina (0.673 g, 42%) como goma de color amarillo pálido. 1H RMn (500 MHz, CDCls, 27°C) 1.11 (3H, d), 2.04 (3H, s), 2.59 - 2.71 (1H, m), 2.76- 3.10 (4H, m), 4.34 - 4.52 (4H, m), 4.53 -4.68 (2H, m), 6.58 (1H, d), 6.60 (1H, d), 6.95 (1H, t). m/z: ES+ [M+H]+ 267.

Preparación de (1S,3R)-1-(4-bromo-2-metoxifenil)-2-((3-(fluorometil)oxetan-3-il)metil)-3,5-dimetil-1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-6-amina

Se añadió 4-bromo-2-metoxibenzaldehído (645 mg, 3.00 mmol) a una solución de (R)-3-(2-(((3-(fluorometil) oxetan-3-il)metil)amino)propil)- 2-metilanilina (400 mg, 1.5 mmol) en ácido acético (7.4 ml) y agua (135 pl, 7.50 mmol). La reacción se calentó hasta 80°C durante 4 horas. Después de enfriar, el ácido acético se evaporó, luego el residuo se disolvió en DCM y se lavó con NaHCO3 acuoso saturado. La capa orgánica se secó sobre Na2SO4, se filtró y se evaporó. El residuo se disolvió en metanol (5 ml), luego se añadieron hidrocloruro de hidroxilamina (313 mg, 4.50 mmol) y acetato de potasio (588 mg, 6.00 mmol) y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos. Los volátiles se evaporaron, luego el residuo se disolvió en DCM y agua. Las capas se separaron, luego la fase acuosa se extrajo con DCM. Las fases orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se evaporaron, luego el producto crudo se purificó por cromatografía instantánea sobre sílica, gradiente de elución de 0 a 50% de EtOAc en heptano. Las fracciones que contenían el producto se evaporaron hasta sequedad para proporcionar (1S,3R)-1-(4-bromo-2-metoxifenil)-2-((3-(fluorometil) oxetan-3-il)metil)-3,5-dimetil -1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-6-amina (302 mg, 43%) como un sólido de color beige. 1H RMN (500 MHz, CDCh, 27°C) 1.01 (3H, d), 2.07 (3H, s), 2.45 (1H, dd), 2.61 -2.73 (1H, m), 2.86 (1H, d), 3.01 - 3.14 (1H, m), 3.54 (2H, s), 3.87 (3H, s), 4.41 - 4.48 (2H, m), 4.51 (1H, d), 4.53 - 4.60 (2H, m), 4.67 (1H, d), 4.73 - 4.81 (1H, m), 5.00 (1H, s), 6.47 (1H, s), 6.47 (1H, s), 6.61 (1H, d), 6.88 (1H, dd), 7.01 ( 1H, d). m/z: ES+ [M+H]+ 463.

Preparación de (6S,8R)-6-(4-bromo-2-metoxifenil)-7-((3-(fluorometil)oxetan-3-il)metil)-8-metil-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina

Se añadió nitrito de sodio (39.1 mg, 0.57 mmol) en agua (0.5 ml) a una solución enfriada de (1S,3R)-1-(4-bromo-2-metoxifenil)-2-((3-(fluorometil) oxetano -3-il)metil)-3,5-dimetil-1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-6-amina (250 mg, 0.54 mmol) en ácido propiónico (2.2 ml) a -15° C (baño de hielo seco/acetona). Después de agitar durante 30 minutos, se añadió tolueno helado (15 ml) y la reacción se agitó a 0°C durante 15 minutos y luego se calentó hasta temperatura ambiente durante 1 hora. Se añadió agua (15 ml) y las capas se separaron. La capa acuosa se extrajo con EtOAc (2 x 15 ml), luego las fases orgánicas combinadas se lavaron con cloruro de sodio acuoso saturado, se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se evaporaron. El producto crudo se purificó por cromatografía instantánea sobre sílica, gradiente de elución de 0 a 50% de EtoAc en heptano. El producto que contenía fracciones se evaporó hasta sequedad para proporcionar (6S,8R)-6-(4-bromo-2-metoxifenil)-7-((3-(fluorometil) oxetan-3-il)metil)-8-metil-6, 7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina (188 mg, 74%) como un sólido de color beige. 1H RMN (500 MHz, CDCh, 27°C) 1.07 (3H, d), 2.70 (1H, d), 2.87 (1H, dd), 2.97 (1H, d), 3.11 - 3.18 (1H, m), 3.18 -3.27 (1H, m), 3.90 (3H, s), 4.42 - 4.52 (3H, m), 4.59 (1H, d), 4.63 - 4.87 (2H, m), 5.19 (1H, s), 6.63 (1H, d), 6.76 (1H, d), 6.88 (1H, dd), 7.05 (1H, d), 7.19 (1H, d), 8.09 (1H, d). m/z: ES+ [M+H]+ 474.

Preparación de (6S,8R)-6-(4-bromo-2-metoxifenil)-7-((3-(fluorometil)oxetan-3-il)metil)-8-metil-3-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina

Se añadió 3,4-dihidro-2H-pirano (67.3 pl, 0.74 mmol) a una solución de (6S,8R)-6-(4-bromo-2-metoxifenil)-7-((3-(fluorometil)oxetan-3-il)metil)-8-metil-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina (175 mg, 0.37 mmol) e hidrato de ácido 4-metilbencenosulfónico (14.0 mg, 0.07 mmol) en d Cm (3.6 ml) y la reacción se agitó a 40°C durante 2 horas. Después de enfriar, la reacción se diluyó con DCM y se lavó con NaHcO3 acuoso saturado, se secó sobre Na2SO4, se filtró y se evaporó. El residuo se pasó a través de un tapón de sílica, eluyendo con EtOAc/heptano (1:1). El filtrado se evaporó para proporcionar (6S,8R)-6-(4-bromo-2-metoxifenil)-7-((3-(fluorometil) oxetan-3-il)metil)-8-metil-3-(tetrahidro -2H-piran-2-il)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina (196 mg, 95%) como un sólido de color beige, que se utilizó directamente en la siguiente etapa. m/z: ES+ [M+H]+ 558.

Ejemplo 11

N-(3,5-difluoro-4-((6S,8R)-7-((1-fluorociclopropil)metil)-8-metil-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)fenil)-1-(3-fluoropropil)azetidin-3-amina

Se añadió HCl 4 N en dioxano (0.25 ml, 0.99 mmol) a una solución de N-(3,5-difluoro-4-((6S,8R)-7-((1-fluorociclopropil)metil)-8-metil-3-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)fenil)-1 (3-fluoropropilo)azetidin-3-amina (58 mg, 0.10 mmol) en metanol (0.30 ml) y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas. Los volátiles se evaporaron y el residuo se suspendió en NaHCO3 acuoso saturado (30 ml) y se extrajo con DCM (x2). La fase orgánica se secó sobre MgSO4, se filtró y se evaporó. El residuo crudo se purificó por cromatografía sobre sílica gel y se eluyó usando un gradiente de 0 a 10% de NH3/MeOH 1 M en DCM. El producto que contenía fracciones se evaporó hasta sequedad para proporcionar N-(3,5-difluoro-4-((6S,8R)-7-((1-fluorociclopropil)metil)-8-metil-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)fenil)-1-(3-fluoropropil)azetidin-3-amina (45.4 mg, 91%) como un sólido blanco. 1H RMN (500 MHz, CDCl3, 27°C) 0.47 (2H, dtd), 0.95 (2H, dt), 1.08 (3H, d), 1.68 - 1.85 (2H, m), 2.59 (2H, s), 2.69 (1H, dd), 2.91 (3H, dq), 3.14 (1H, dd), 3.43 (1H, dd), 3.69 (2H, q), 3.81 (1H, dd), 4.01 (1H, q), 4.28 ( 1H, d), 4.43 (1H, t), 4.53 (1H, t), 5.19 (1H, s), 5.96 (2H, d), 6.82 (1H, d), 7.15 (1H, d), 8.06 (1H, d), 10.36 (1H, s). m/z (ES+), [M+H]+ = 502.

La N-(3,5-difluoro-4-((6S,8R)-7-((1-fluorociclopropil)metil)-8-metil-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)fenil)-1-(3-fluoropropil)azetidin-3-amina se preparó como sigue:

Preparación de (1S,3R)-1-(4-bromo-2,6-difluorofenil)-2-((1-fluorociclopropil)metil)-3,5-dimetil-1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-6-amina

(R)-3-(2-(((1-fluorociclopropil)metil)amino)propil)-2-metilanilina (0.35 g, 1.48 mmol) y 4-bromo-2,6-difluorobenzaldehído (0.33 g, 1.48 mmol) en una mezcla de H2O (0.13 ml, 7.40 mmol) y ácido acético (5.79 ml) se calentaron a 80°C durante 7 horas. El disolvente se evaporó y el residuo se trató con HCl (1 N, 10 ml) y se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. A la reacción se le añadió Na2CO3 sólido hasta que el pH de la reacción fue > 8. La mezcla se diluyó con H2O (40 ml) y se extrajo dos veces con EtOAc (2x50 ml). La fase orgánica se secó sobre MgSO4, se filtró, se concentró y se purificó por cromatografía sobre sílica (EtOAc del 10 al 70% en heptanos) para proporcionar (1S,3R)-1-(4-bromo-2,6-difluorofenil)-2-((1-fluorociclopropil)metil)-3,5-dimetil-1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-6-amina (0.285 g, 44%) como una goma de color amarillo pálido. 1H RMN (500 MHz, CDCl3, 27°C) 0.44 (2H, dq), 0.91 - 0.95 (1H, m), 0.95 - 0.99 (1H, m), 1.02 (3H, d), 2.06 (3H, s), 2.50 - 2.65 (2H, m), 3.00 - 3.15 (2H, m), 3.50 (2H, s), 3.69 (1H, d), 5.17 (1H, s), 6.42 (2H, s), 6.97 (1H, d), 6.99 (1H, d). m/z (ES+), [M+H]+ = 439.

Preparación de (6S,8R)-6-(4-bromo-2,6-difluorofenil)-7-((1-fluorociclopropil)metil)-8-metil-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina

(1S,3R)-1-(4-Bromo-2,6-difluorofenil)-2-((1-fluorociclopropil)metil)-3,5-dimetil-1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-6-amina (0.280 g, 0.64 mmol) en ácido propiónico (2.66 ml) se enfrió hasta -17°C (baño de hielo seco/acetona). Se añadió nitrito de sodio (0.044 g, 0.64 mmol) en agua (0.53 ml) gota a gota y la mezcla de reacción se agitó a -17°C durante 30 minutos. La mezcla de reacción se diluyó con tolueno helado (15 ml) y se agitó a 4°C durante 15 minutos. La mezcla se agitó y calentó a temperatura ambiente durante 45 minutos. La mezcla de reacción se lavó con agua (2 x 15 ml), las fases acuosas combinadas se lavaron con EtOAc (2 x 10 ml), las fases orgánicas combinadas se lavaron con cloruro de sodio acuoso saturado (1 x 20 ml), se secaron (MgSO4), se filtraron y el filtrado se evaporó hasta obtener un aceite de color marrón-naranja. El material crudo se purificó por cromatografía instantánea sobre sílica, gradiente de elución de EtOAc al 0-40% en heptano para proporcionar (6S,8R)-6-(4-bromo-2,6-difluorofenil)-7-((1-fluorociclopropil)metil)-8-metil-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina (0.216 g, 75%) como un sólido blanquecino. 1H RMN (500 MHz, CDCl3, 27°C) 0.46 (2H, dddd), 0.91 - 1.04 (2H, m), 1.07 (3H, d), 2.66 (1H, dd), 2.95 (1H, dd), 3.15 (1H, dd), 3.46 (1H, dd), 3.83 (1H, dd), 5.32 (1H, s), 6.76 (1H, d), 7.00 (2H, d), 7.18 (1H, d), 8.09 ( 1H, d), 10.52 (1H, s). m/z (ES+), [M+H]+= 450.

Preparación de (6S,8R)-6-(4-bromo-2,6-difluorofenil)-7-((1-fluorociclopropil)metil)-8-metil-3-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina y (6S,8R)-6-(4-bromo-2,6-difluorofenil)-7-((1-fluorociclopropil)metil)-8-metil-2-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina

Se cargó un vial de microondas con (6S,8R)-6-(4-bromo-2,6-difluorofenil)-7-((1-fluorociclopropil)metil)-8-metil-6,7,8,9-tetrahidro -3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina (216 mg, 0.48 mmol), hidrato de ácido 4-metilbencenosulfónico (9.1 mg, 0.05 mmol), 3,4-dihidro-2H-pirano (0.07 ml, 0.72 mmol) y DCM (2 ml). La mezcla se calentó en un microondas a 80°C durante 20 minutos. Se añadió un adicional (0.035 ml, 0.36 mmol) de 3,4-dihidro-2H-pirano y la reacción se calentó hasta 85°C durante 15 minutos más. La reacción se diluyó con d Cm y se lavó con NaHCO3 acuoso saturado, luego la capa orgánica se secó sobre Na2SO4, se filtró y se concentró. El producto crudo se purificó por cromatografía instantánea sobre sílica, gradiente de elución de 0 a 50% de EtOAc en heptano. El producto que contenía fracciones se evaporó hasta sequedad para proporcionar dos productos regioisoméricos protegidos con THP (6S,8R)-6-(4-bromo-2,6-difluorofenil)-7-((1-fluorociclopropil)metil)-8-metil-3-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina y (6S,8R)-6-(4-bromo-2, 6-difluorofenil)-7-((1-fluorociclopropil)metil)-8-metil-2-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina (237 mg, 92%) como una goma de color amarillo pálido (se proporcionan datos para el isómero principal). 1H RMN (500 MHz, CDCl3, 27°C) 0.35 - 0.55 (2H, m), 0.96 (2H, ddd), 1.05 (3H, dd), 1.58 - 1.84 (3H, m), 1.97- 2.32 (3H, m), 2.64 (1H, dd), 2.77 (1H, dd), 3.14 (1H, ddd), 3.29 - 3.54 (1H, m), 3.62 - 3.91 (2H, m), 3.96- 4.25 (1H, m), 5.26 (1H, d), 5.65 (1H, ddd), 6.64 (1H, d), 7.00 (2H, d), 7.26- 7.45 (1H, m), 8.13 (1H, dd). m/z (ES+), [M+H]+ = 534.

Preparación de N-(3,5-difluoro-4-((6S,8R)-7-((1-fluorociclopropil)metil)-8-metil-2-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)fenil)-1-(3-fluoropropil)azetidin-3-amina

Se añadió metanosulfonato de [(2-Di-ciclohexilfosfino-3,6-dimetoxi-2’,4’,6’-triisopropil-1,1'-bifenil)-2-(2'-amino-1,1'-bifenil)]paladio (II) (BrettPhos Pd g 3) (5.0 mg, 5.54 ^mol) a una suspensión de (6S,8R)-6-(4-bromo-2,6-difluorofenil)-7-((1-fluorociclopropil)metil)-8-metil-3-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina y (6S,8R)-6-(4-bromo-2,6-difluorofenil)-7-((1-fluorociclopropil)metil)-8-metil-2-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina (37 mg, 0.07 mmol), 1-(3-fluoropropil)azetidin-3-amina (22.9 mg, 0.17 mmol) y tert-butóxido de sodio (13.3 mg, 0.14 mmol) en 1,4-dioxano desgasificado (0.58 ml) y la reacción se calentó hasta 95°C durante 1.5 horas en el microondas. La mezcla de reacción se diluyó con EtOAc, se filtró a través de Celite y se evaporó hasta sequedad. El producto crudo se purificó por cromatografía instantánea sobre sílica, gradiente de elución de 0 a 10% de NH3/MeOH al 1% en DCM. Las fracciones puras se evaporaron hasta sequedad para proporcionar N-(3,5-difluoro-4-((6S,8R)-7-((1-fluorociclopropil)metil)-8-metil-2-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il) fenil)-1-(3-fluoropropil)azetidin-3-amina (18.0 mg, 44%) como una película seca incolora.

1H RMN (500 MHz, CDCl3, 27°C) 0.38 - 0.54 (2H, m), 0.94 (2H, ddd), 1.06 (3H, dd), 1.67- 1.82 (4H, m), 2.04 - 2.25 (4H, m), 2.59 (2H, t), 2.63 - 2.77 (2H, m), 2.89 (2H, dd), 3.14 (1H, s), 3.29 - 3.37 (1H, m), 3.70 (2H, q), 3.75 - 3.81 (2H, m), 4.00 (1H, q), 4.12 - 4.17 (1H, m), 4.22 (1H, d), 4.43 (1H, t), 4.52 (1H, t), 5.10 (1H, s), 5.55 - 5.74 (1H, m), 5.96 (2H, d), 6.71 (1H, d), 7.28 - 7.44 (1H, m), 8.10 (1H, dd). m/z (ES+), [M+H]+ = 586.

Ejemplos 12 y 13

Preparación de diastereoisómeros individuales de (6S,8R)-7-(2-fluoro-3-metoxi-2-metilpropil)-6-(4-(1-(3-fluoropropil)azetidin-3-iloxi)-2-metoxifenil)-8-metil-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina

Se añadieron DMF (0.66 ml) seguido de DIPEA (23.9 pl, 0.14 mmol) a un matraz cargado con (6S,8R)-6-(4-(azetidin-3-iloxi)-2-metoxifenil)-7-(2-fluoro-3-metoxi-2-metilpropil)-8-metil-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina (32 mg, 0.07 mmol). En la reacción agitada se inyectó gota a gota 1-fluoro-3-yodopropano (13.5 mg, 0.07 mmol) y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante la noche. La reacción se evaporó hasta sequedad y el residuo se purificó por cromatografía instantánea sobre sílica, gradiente de elución de 0 a 10% de NH3/MeOH al 1% en DCM. Las fracciones que contenían el producto se evaporaron hasta sequedad para proporcionar el producto como una mezcla diastereoisomérica. Los diastereoisómeros se separaron mediante SFC preparativa quiral (columna Phenomonex Lux C4, sílica de 5 p, 30 mm de diámetro, 250 mm de longitud), usando MeOH al 40% isocrático decreciente NH3 al 0.1% en CO2 como eluyente para proporcionar el primer isómero eluyente (8.0 mg, 22%) y el segundo isómero eluyente (8.0 mg, 22%) como películas secas de color amarillo pálido.

Isómero 1:1H RMN (500 MHz, CDCfe, 27°C) 1.06 (3H, d), 1.28 (3H, d), 1.72 - 1.83 (2H, m), 2.47 (1H, dd), 2.63 (2H, t), 2.8 -2.95 (2H, m), 3.03 -3.11 (2H, m), 3.19 (2H, s), 3.33 (3H, s), 3.56 (1H, dd), 3.67 (1H, d), 3.79 (2H, q), 3.86 (3H, s), 4.44 (1H, t), 4.53 (1H, t), 4.74 (1H, t), 5.32 (1H, s), 6.10 (1H, dd), 6.41 (1H, d), 6.69 (1H, d), 6.76 (1H, d), 7.13 (1H, d), 8.05 (1H, d), 10.20 (1H, s). m/z (ES+), [M+H]+ = 529;

Isómero 2: 1H RMN (500 MHz, CDCfe, 27°C) 1.06 (3H, d), 1.25 (3H, d), 1.70 - 1.82 (2H, m), 2.45 - 2.56 (1H, m), 2.63 (2H, t), 2.78 - 2.91 (2H, m), 3.02 - 3.11 (2H, m), 3.18 (1H, d), 3.36 (3H, s), 3.42 (1H, dd), 3.47- 3.55 (1H, m), 3.62 (1H, d), 3.74 - 3.82 (2H, m), 3.86 (3H, s), 4.43 (1H, t), 4.53 (1H, t), 4.73 (1H, t), 5.36 (1H, s), 6.08 (1H, dd), 6.41 (1H, d), 6.67 (1H, d), 6.79 (1H, d), 7.15 (1H, d), 8.06 (1H, d), 10.20 (1H, s). m/z (ES+), [M+H]+ = 529.

La (6S,8R)-6-(4-(azetidin-3-iloxi)-2-metoxifenil)-7-(2-fluoro-3-metoxi-2-metilpropil)-8-metil-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina se preparó como sigue:

Preparación de una mezcla diastereoisomérica de (6S,8R)-6-(4-(azetidin-3-iloxi)-2-metoxifenil)-7-(2-fluoro-3-metoxi-2-metilpropil)-8-metil-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina

3-hidroxiazetidina-1-carboxilato de tert-butilo (102 mg, 0.59 mmol), (6S,8R)-6-(4-bromo-2-metoxifenil)-7-(2-fluoro-3-metoxi-2-metilpropil)-8-metil-3-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina (110 mg, 0.20 mmol), 3-hidroxiazetidina-1-carboxilato de tert-butilo (102 mg, 0.59 mmol), Pd RockPhos de 3a generación (16.6 mg, 0.02 mmol) y carbonato de cesio (128 mg, 0.39 mmol) se suspendieron en tolueno (1.26 mL) y se sellaron en un tubo de microondas La reacción se calentó hasta 95°C durante 20 horas. La mezcla de reacción se diluyó con EtOAc (25 ml) y se filtró a través de Celite. El producto crudo se purificó por cromatografía instantánea sobre sílica, gradiente de elución de 0 a 100% de EtOAc en heptano. Las fracciones que contenían el producto impuro se evaporaron hasta sequedad y se disolvieron en DCM (1.3 ml) a las que se añadió gota a gota TFA (378 pl, 4.91 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas, luego los volátiles se eliminaron al vacío. El residuo se lavó con NaHCO3 acuoso saturado (30 ml) y se extrajo con DCM (2x 30 ml). La fase orgánica combinada se secó sobre MgSO4, se filtró y se evaporó. El producto crudo se purificó por cromatografía instantánea sobre sílica, gradiente de elución de 0 a 40% de NH3/MeOH al 1% en DCM. Las fracciones puras se evaporaron hasta sequedad para proporcionar (6S,8R)-6-(4-(azetidin-3-iloxi)-2-metoxifenil)-7-(2-fluoro-3-metoxi-2-metilpropil)-8-metil-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina (35.0 mg, 38%) como un sólido blanco. 1H RMN (500 MHz, CDQ3, 27°C) 1.06 (3H, dd), 1.24 - 1.35 (3H, m), 2.49 (1H, dt), 2.76- 2.96 (2H, m), 3.08 - 3.27 (2H, m), 3.34 (3H, d), 3.41 (1H, s), 3.53 - 3.69 (2H, m), 3.69 - 3.93 (7H, m), 4.81 - 5.08 (1H, m), 5.34 (1H, d), 6.02 -6.12 (1H, m), 6.40 (1H, t), 6.68 (1H, s), 6.77 (1H, dd), 7.13 (1H, d), 8.05 (1H, t). m/z (ES+), [M+H]+ = 469.

Ejemplos 14 y 15

Preparación de diastereoisómeros individuales de N-(4-((6S,8R)-7-(2-fluoro-3-metoxi-2-metilpropil)-8-metil-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)-3-metoxifenil)-1-(3-fluoropropil)azetidin-3-amina

1-(3-Fluoropropil)azetidin-3-amina (175 mg, 1.32 mmol), (6S,8R)-6-(4-bromo-2-metoxifenil)-7-(2-fluoro-3-metoxi-2-metilpropil)-8-metil-3-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina (370 mg, 0.66 mmol) y tert-butóxido de sodio (127 mg, 1.32 mmol) se suspendieron en 1,4-dioxano (8 ml). La mezcla se desgasificó y se agregó metanosulfonato de [(2-di-ciclohexilfosfino-3,6-dimetoxi-2’,4’,6’-triisopropil-1,T-bifenil)-2-(2'-amino-1,T-bifenil)]paladio (II) (Brett Phos G3) (60 mg, 0.07 mmol). La reacción se calentó hasta 100°C durante 3 horas. La mezcla de reacción se diluyó con DCM (100 ml) y se lavó con agua (100 ml). La capa orgánica se evaporó. Este proceso se repitió usando 114 mg (0.3 mmol) del bromuro de arilo. Los productos crudos combinados de estas reacciones se suspendieron en ácido clorhídrico (2 M, 5 ml) y se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas. La mezcla de reacción se diluyó con agua (10 ml) y se lavó con EtOAc (10 ml). La fase acuosa se basificó con hidróxido de sodio acuoso 2 M y se extrajo con DCM (2 x 15 ml). Las fases orgánicas combinadas se evaporaron y el producto crudo se purificó por cromatografía instantánea sobre sílica, gradiente de elución de 0 a 20% de MeOH en DCM. Las fracciones se evaporaron hasta sequedad para proporcionar el producto crudo como una mezcla de diastereoisómeros que se separaron mediante SFC preparativa quiral (columna Phenomonex Lux C4, sílica de 5 ^, diámetro de 30 mm, longitud de 250 mm), usando MeOH al 40% isocratico decreciente NH3 al 0.1%. en CO2 como eluyente para proporcionar el primer isómero de elución (42 mg, 19%) y el segundo isómero de elución (29 mg, 13%)

Isómero 1:1H RMN (500 MHz, DMSO, 27°C) 0.96 (3H, d), 1.20 (3H, d), 2.36- 2.44 (1H, m), 2.65 - 2.85 (3H, m), 2.92 (4H, q), 3.05 - 3.22 (3H, m), 3.23 (3H, s), 3.24 - 3.27 (2H, m), 3.46- 3.59 (2H, m), 3.78 (3H, s), 4.49 (2H, dd), 5.16 (1H, s), 5.35 (1H, t), 5.95 (1H, dd), 6.23 (1H, d), 6.36 (1H, d), 6.63 (1H, d), 7.16 (1H, d), 8.02 (1H, s), 12.90 (1H, s); 19F RMN (471 MHz, DMSO, 27°C)-219.77, -149.11, m/z: ES+ [M+H]+ 528.

Isómero 2: 1H RMN (500 MHz, DMSO, 27°C) 0.97 (3H, d), 1.19 (3H, d), 2.68 -2.81 (3H, m), 2.88 -2.95 (3H, m), 3.05 - 3.11 (1H, m), 3.21 - 3.28 (5H, m), 3.32 - 3.39 (1H, m), 3.43 - 3.56 (2H, m), 3.79 (3H, s), 4.49 (2H, dd), 5.17 (1H, s), 5.34 (1H, t), 5.93 (1H, dd), 6.23 (1H, d), 6.35 (1H, d), 6.64 (1H, d), 7.16 (1H, d), 8.02 (1H, s), 12.90 (1H, s); 19F RMN (471 MHz, DMSO, 27°C)-219.76, -148.20; m/z: ES+ [M+H]+ 528.

Ejemplo 16

Preparación de 2,2-difluoro-3-((6S,8R)-6-(5-((1-(3-fluoropropil)azetidin-3-il)amino)piridin-2-il)-8-metil-3,6,8,9-tetrahidro-7H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-7-il)propan-1-ol

Se añadió ácido clorhídrico (2.0 M, 0.5 ml) a 2,2-difluoro-3-((6S,8R)-6-(5-((1-(3-fluoropropil)azetidin-3-il)amino)piridina -2-il)-8-metil-3-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-3,6,8,9-tetrahidro-7H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-7-il) propan-1-ol (0.132 g, 0.23 mmol) y la solución se agitó a temperatura ambiente durante 3 horas. La mezcla de reacción se purificó por cromatografía de intercambio iónico, usando una columna SCX. El producto deseado se eluyó de la columna usando NH3 1M/MeOH para proporcionar 2,2-difluoro-3-((6S,8R)-6-(5-((1-(3-fluoropropil)azetidin-3-il)amino)piridin-2-il)-8-metil-3,6,8,9-tetrahidro-7H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-7-il) propan-1-ol (0.084 g, 75%) como un sólido blanco. 1H RMN (500 MHz, DMSO, 27°C) 1.04 (3H, d), 1.20 - 1.28 (2H, m) 1.59 - 1.71 (2H, m), 2.60 - 2.70 (1H, m), 2.73 - 2.84 (3H, m), 2.99 (1H, dd), 3.08 -3.18 (1H, m), 3.41 (1H, d), 3.61 - 3.72 (4H, m), 3.93 (1H, d), 4.44 (2H, dt), 4.94 (1H, s), 5.42 (1H, t), 6.21 (1H, d), 6.78 -6.82 (2H, m), 6.90 (1H, d), 7.21 (1H, d), 7.74 (1H, d), 8.03 (1H, s), 12.94 (1H, s); 19F RMN (471 MHz, DMSO, 27°C)-218.24, -108.31; m/z: ES+ [M+H]+489.

El 2,2-difluoro-3-((6S,8R)-6-(5-((1-(3-fluoropropil)azetidin-3-il)amino)piridin-2-il)-8-metil-3-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-3,6,8,9-tetrahidro-7H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-7-il)propan-1-ol se preparó como sigue:

Preparación de (1S,3R)-1-(5-bromopiridin-2-il)-2-(3-((tert-butildifenilsilil)oxi)-2,2-difluoropropil)-3,5-dimetil-1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-6-amina

(R)-3-(2-((3-((Tert-butildifenilsilil)oxi)-2,2-difluoropropil)amino)propil)-2-metilanilina (1.20 g, 2.42 mmol) y 5-bromopicolinaldehído (0.944 g, 5.07 mmol) se calentaron en ácido acético (12 ml) y agua (0.22 ml, 12.08 mmol) a 70°C durante 30 minutos. La mezcla de reacción se evaporó y el residuo se volvió a disolver en etanol (10 ml). Se agregaron acetato de potasio (0.594 g, 6.05 mmol) e hidrocloruro de hidroxilamina (0.252 g, 3.63 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos, luego se evaporó y el residuo se sometió a partición entre DCM (30 ml) y bicarbonato de sodio acuoso saturado (30 ml). La fase orgánica se evaporó y el producto crudo se purificó por cromatografía instantánea sobre sílica, gradiente de elución de 0 a 50% de EtOAc en heptano para proporcionar (1S,3R)-1-(5-bromopiridin-2-il)-2-(3-((tert-butildifenilsilil)oxi)-2,2-difluoropropil)-3,5-dimetil-1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-6-amina (1.090 g, 68%) como una goma incolora. 1H RMN (500 MHz, Dm So , 27°C) 0.96 (9h , s), 0.98 (3H, d), 1.94 (3H, s), 2.40 (1H, dd), 2.57 (1H, dd), 2.66- 2.78 (1H, m), 3.11 - 3.22 (2H, m), 3.84 - 3.93 (1H, m), 3.95 - 4.05 (1H, m), 4.69 (2H, s), 4.91 (1H, s), 6.39 (1H, d), 6.42 (1H, d), 6.99 (1H, d), 7.39 - 7.48 (6H, m), 7.59 (4H, ddd), 7.80 (1H, dd), 8.51 (1H, dd); 19F RMN (471 MHz, DMSO, 27°C)-109.84 (d), -108.39 (d); m/z: ES+ [M+H]+ 664/666.

Preparación de (6S,8R)-6-(5-bromopiridin-2-il)-7-(3-((tert-butildifenilsilil)oxi)-2,2-difluoropropil)-8-metil-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina

Se añadió nitrito de sodio (119 mg, 1.72 mmol) en agua (1.0 ml) a una solución enfriada con hielo de (1S,3R)-1-(5-bromopiridin-2-il)-2-(3-((tert-butildifenilsilil)oxi)-2,2-difluoropropil)-3,5-dimetil-1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-6-amina (1.09 g, 1.64 mmol) e hidrato de ácido para-toluenosulfónico (0.94 g, 4.92 mmol) en acetonitrilo (6 ml). La reacción se agitó durante 15 minutos y luego se calentó hasta temperatura ambiente durante 45 minutos. Después de enfriar nuevamente hasta 4°C, se añadió acetato de tetrabutilamonio (2.54 g, 8.20 mmol) en MeCN helado (40 ml) y la reacción se agitó durante 15 minutos antes de calentar a temperatura ambiente durante 30 minutos más, EtOAc (120 ml) se añadió seguido de NaOH 2 M (100 ml). La fase orgánica se lavó con cloruro de sodio acuoso saturado, se secó (Na2SO4) y se evaporó. El producto crudo se purificó por cromatografía instantánea sobre sílica, gradiente de elución de 0 a 50% de EtOAc en heptano para proporcionar (6s,8R)-6-(5-bromopiridin-2-il)-7-(3-((tert-butildifenilsililo)oxi)-2,2-difluoropropil)-8-metil-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina (0.330 g, 30%) como una espuma de color marrón claro. 1H RMN (500 MHz, DMSO, 27°C) 0.97 (9H, s), 1.06 (3H, d), 2.75 - 2.91 (2H, m), 2.99 - 3.06 (1H, m), 3.34 - 3.41 (2H, m), 3.88 - 4.01 (2H, m), 5.12 (1H, s), 6.83 (1H, d), 7.12 (1H, d), 7.26 (1H, d), 7.39 - 7.45 (4H, m), 7.46 7.50 (2H, m), 7.56- 7.62 (4H, m), 7.85 (1H, dd), 8.07- 8.09 (1H, m), 8.54 (1H, dd), 13.02 (1H, s); 19F RMN (471 MHz, DMSO, 27°C)-110.01 (d), -108.72 (d); m/z: ES+ [M+H]+675/677.

Preparación de una mezcla diastereoisomérica de (6S,8R)-6-(5-bromopiridin-2-il)-7-(3-((tert-butildifenilsilil)oxi)-2,2-difluoropropil)-8-metil-3-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina

A una solución de (6S,8R)-6-(5-bromopiridin-2-il)-7-(3-((tert-butildifenilsilil)oxi)-2,2-difluoropropil)-8-metil-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina (0.330 g, 0.49 mmol) y 3,4-dihidro-2H-pirano (0.13 ml, 1.47 mmol) en DCM (5 ml) se agregó hidrato de ácido para toluenosulfónico (93 mg, 0.49 mmol) y la reacción se calentó a 40°C durante 1 hora. La mezcla de reacción se diluyó con DCM (20 ml) y se lavó con bicarbarbonato de sodio acuoso saturado (20 ml). La fase orgánica se evaporó hasta un aceite de color marrón oscuro y el producto crudo se purificó por cromatografía instantánea sobre sílica, gradiente de elución de 0 a 50% de EtOAc en heptano para proporcionar (6S,8R)-6-(5-bromopiridin-2-il)- 7-(3-((tert-butildifenilsilil)oxi)-2,2-difluoropropil)-8-metil-3-((S)-tetrahidro-2H-piran-2-il)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina (0.330 g, 89%) como una goma. 19F RMN (471 MHz, DMSO, 27°C)-110.03 (d), -108.83 (d), -108.79 (d); m/z: ES+ [M+H]+ 759/761.

Preparación de una mezcla diastereoisomérica de 6-((6S,8R)-7-(3-((tert-butildifenilsilil)oxi)-2,2-difluoropropil)-8-metil-3-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)-N-(1-(3-fluoropropil)azetidin-3-il)piridin-3-amina

1-(3-Fluoropropil)azetidin-3-amina (0.115 g, 0.87 mmol), (6S,8R)-6-(5-bromopiridin-2-il)-7-(3-((tert-butildifenilsilil)oxi)-2,2-difluoropropil)-8-metil-3-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina (0.330 g, 0.43 mmol), diciclohexilo (2’,4’,6’-triisopropil-3,6-dimetoxi- [1.1 '-bifenil] -2-il) fosfano (0.023 g, 0.04 mmol) y tert-butóxido de sodio (0.125 g, 1.30 mmol) se suspendieron en 1,4-dioxano (4 ml). La mezcla se desgasificó y se agregó metanosulfonato de [(2-di-ciclohexilfosfino-3,6-dimetoxi-2’,4’,6’- triisopropil-1,1'-bifenil)-2-(2'-amino-1,1'-bifenil)]paladio (II) (BrettPhos G3) (0.039 g, 0.04 mmol). La reacción se calentó hasta 100°C durante 3 horas. La mezcla de reacción se diluyó con DCM (50 ml) y se lavó con agua (50 ml). La capa orgánica se evaporó y el producto crudo se purificó por cromatografía instantánea sobre sílica, gradiente de elución de 0 a 20% de MeOH en DCM para proporcionar 6-((6S,8R)-7-(3-(((tert-butildifenilsilil)oxi)- 2,2-difluoropropil)-8-metil-3-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)-N-(1-(3-fluoropropil)azetidin-3-il)piridin-3-amina (0.264 g, 75%) como una goma de color amarillo como una mezcla de diastereoisómeros. 19F RMN (471 MHz, DMSO, 27°C)-218.19, -110.13, -109.44, -108.6 107.8; m/z: ES+ [M+H]+811.

Preparación de una mezcla diastereoisomérica de 2,2-difluoro-3-((6S,8R)-6-(5-((1-(3-fluoropropil)azetidin-3-il)amino)piridin-2-il)-8-metil-3,6,8,9-tetrahidro-7H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-7-il)propan-1-ol

Se agregó fluoruro de tetrabutilamonio (1.0 M en THF, 0.5 mL, 0.50 mmol) a la solución de 6-((6S,8R)-7-(3-((tertbutildifenilsilil)oxi)-2,2-difluoropropil)-8-metil-3-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)-N-(1-( 3-fluoropropil)azetidin-3-il)piridin-3-amina (0.264 g, 0.33 mmol) en t Hf (2 mL). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 4 horas y la mezcla de reacción se evaporó y el residuo se sometió a partición entre DCM (20 ml) y agua (20 ml). La fase orgánica se evaporó y el producto crudo se purificó por cromatografía instantánea en sílica, gradiente de elución de 0 a 20% de MeOH en DCM para proporcionar 2,2-difluoro-3-((6S,8R)-6-(5-((1-(3-fluoropropil)azetidin-3-il)amino)piridin-2-il)-8-metil-3-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-3,6,8,9-tetrahidro-7H -pirazolo[4,3-f]isoquinolin-7-il) propan-1-ol (0.132 g, 71%) como una película seca incolora como una mezcla de diastereoisómeros. 19F RMN (471 MHz, DMSO, 27°C)-218.19, -108.42, -108.39; m/z: ES+ [M+H]+ 573.

Ejemplo 17

Preparación de N-(1-(3-fluoropropil)azetidin-3-il)-6-((6S,8R)-8-metil-7-(2,2,2-trifluoroetil)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)piridin-3-amina

1-(3-Fluoropropil)azetidin-3-amina (50 mg, 0.38 mmol), (6S,8R)-6-(5-bromopiridin-2-il)-8-metil-3-(tetrahidro-2H-piran -2-il)-7-(2,2,2-trifluoroetil)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina (0.100 g, 0.20 mmol), carbonato de cesio ( 128 mg, 0.39 mmol) y metanosulfonato de [(2-di-ciclohexilfosfino-3,6-dimetoxi-2’,4’,6’-triisopropil-1,1'-bifenil)-2-(2'-amino-1, 1'-bifenil)]paladio (II) (Brett Phos G3) (23 mg, 0.02 mmol) se suspendieron en 1,4-dioxano (2 ml) y se sellaron en un tubo de microondas. La reacción se calentó hasta 100°C durante 4 horas bajo irradiación de microondas. La mezcla de reacción se diluyó con DCM (20 ml) y se lavó con agua (20 ml). La capa orgánica se evaporó y el producto crudo se disolvió en DCM (3 ml) y TFA (0.3 ml). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora, luego la mezcla de reacción se sometió a partición entre DCM (20 ml) y NaOH 2 M (20 ml). La fase orgánica se evaporó y el producto crudo se purificó por cromatografía instantánea sobre sílica, gradiente de elución de 0 a 20% de MeOH en DCM. Las fracciones que contenían el producto se evaporaron hasta sequedad para proporcionar N-(1-(3-fluoropropil)azetidin-3-il)-6-((6S,8R)-8-metil-7-(2,2,2-trifluoroetil)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)piridin-3-amina (9.0 mg, 10%) como una película seca incolora. 1H Rm N (500 MHz, CDCl3, 27°C) 1.14 (3H, d), 1.70 - 1.82 (2H, m), 2.62 (2H, t), 2.85 (1H, dd), 2.93 - 3.06 (3H, m), 3.20 - 3.31 (2H, m), 3.59 (1H, td), 3.73 (2H, dt), 4.10 (2H, dd), 4.48 (2H, dt), 5.03 (1H, s), 6.80 (1H, dd)), 6.89 (1H, d), 7.15 (1H, d), 7.21 (1H, d), 7.84 (1H, dd), 8.01 (1H, d); 19F RMN (471 MHz, DMSO, 27°C)-224.69, -75.55; m/z: ES+ [M+H]+ 477.

La (6S,8R)-6-(5-bromopiridin-2-il)-8-metil-3-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-7-(2,2,2-trifluoroetil)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina se preparó como sigue.

Preparación de (1S,3R)-1-(5-bromopiridin-2-il)-3,5-dimetil-2-(2,2,2-trifluoroetil)-1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-6-amina

Se calentaron (R)-2-Metil-3-(2-((2,2,2-trifluoroetil)amino)propil) anilina (0.290 g, 1.18 mmol) y 5-bromopicolinaldehído (0.460 g, 2.47 mmol) en acético ácido (6 ml) y agua (0.1 ml) a 70°C durante 30 minutos. La mezcla de reacción se evaporó y el residuo se disolvió en etanol (10 ml). Se agregaron acetato de potasio (0.290 g, 2.95 mmol) e hidrocloruro de hidroxilamina (0.123 g, 1.77 mmol) y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos. La mezcla de reacción se evaporó y el residuo se sometió a partición entre DCM (30 ml) y bicarbonato de sodio acuoso saturado (30 ml). La fase orgánica se evaporó y el producto crudo se purificó por cromatografía instantánea sobre sílica, gradiente de elución de 0 a 50% de EtoAc en heptano para proporcionar (1S,3R)-1-(5-bromopiridin-2-il)-3,5-dimetil -2-(2,2,2-trifluoroetil)-1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-6-amina (0.264 g, 54%) como una película seca incolora. 1H RMN (500 MHz, DMSO, 27°C) 1.03 (3H, d), 1.94 (3H, s), 2.45 (1H, dd), 2.67 (1H, dd), 2.90 (1H, dd), 3.22 - 3.29 (1H, m), 3.49 (1H, dd), 4.69 (2H, s), 4.85 (1H, s), 6.40 -6.46 (2H, m), 7.21 (1H, d), 7.95 (1H, dd), 8.56 (1 H, dd); 19F RMN (471 MHz, DMSO, 27°C)-69.83; m/z: ES+ [M+H]+414/416.

Preparación de (6S,8R)-6-(5-bromopiridin-2-il)-8-metil-3-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-7-(2,2,2-trifluoroetil)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina

Se añadió nitrito de sodio (0.048 g, 0.70 mmol) en agua (0.2 ml) a una solución enfriada de (1S,3R)-1-(5-bromopiridin-2-il)-3,5-dimetil-2-(2, 2,2-trifluoroetN)-1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-6-amina (0.264 g, 0.64 mmol) en ácido propiónico (2.5 mL) a -10°C. La reacción se agitó durante 1 h, luego se añadió EtOAc helado (10 ml). La reacción se inactivó mediante la adición de bicarbonato de sodio saturado acuoso (15 ml) y se agitó durante 15 minutos antes de dejar que se calentara hasta temperatura ambiente. La fase orgánica se secó (Na2SO4) y se evaporó para dar (6S,8R)-6-(5-bromopiridin-2-il)-8-metil-7-(2,2,2-trifluoroetil)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina crudo (0.272 g, 0.64 mmol) como una goma de color marrón. El material se disolvió en DCM (10 ml) y se añadió hidrato de ácido paratoluenosulfónico (0.012 g, 0.06 mmol) y la mezcla se calentó hasta 40°C durante 2 horas. La mezcla de reacción se diluyó con DCM (20 ml) y se lavó con NaOH acuoso (2 M, 30 ml). La fase orgánica se evaporó hasta obtener un aceite de color marrón oscuro y el producto crudo se purificó por cromatografía instantánea sobre sílica, gradiente de elución de 0 a 40% de EtOAc en heptano para proporcionar (6S,8R)-6-(5-bromopiridin-2-il)- 8-metil-3-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-7-(2,2,2-trifluoroetil)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina (0.142 g, 44%). m/z: ES+ [M+H]+ 509/511.

Ruta alternativa # 1 al Ejemplo 17:

Preparación de N-[1-(3-fluoropropil)azetidin-3-il]-6-[(6S,8R)-8-metil-7-(2,2,2-trifluoroetil)-3,6,8,9-tetrahidropirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il]piridin-3-amina

Se añadió ácido trifluoroacético (1.30 l, 17.04 mol) a una solución agitada de (1-(3-fluoropropil)azetidin-3-il) carbamato de tert-butilo (0.50 kg, 2.04 mol) en dCm (1.50 l) a 0°C durante 0.5 horas. La mezcla se dejó calentar hasta 20°C y se agitó a 20°C durante 2.5 horas. La mezcla se calentó hasta 30°C y se continuó agitando durante 1 hora. La mezcla se concentró bajo presión reducida y el residuo se concentró bajo presión reducida a partir de tolueno (3 x 3.00 l). El residuo resultante se disolvió en 1,4-dioxano (3.00 L) y se trató con solución de 2-metilbutan-2-olato de sodio al 30% en Me-THF (5.50 L, 13.63 mol) durante 45 minutos, asegurando que la temperatura no excediera 29°C. Una solución de 90% p/p de (6S,8R)-6-(5-bromopiridin-2-il)-8-metil-7-(2,2,2-trifluoroetil)-6,7,8,9- tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina (0.81 kg, 1.70 mol) en 1,4-dioxano (1.50 l) y BrettPhos Pd G3 (0.077 kg, 0.085 mol) se agregaron y la atmósfera se reemplazó con nitrógeno. utilizando ciclos de vacío y nitrógeno (3 x). La mezcla se calentó hasta 55°C y se agitó a 55°C durante 2.5 horas. La mezcla se enfrió hasta 21°C y se añadió una solución de NaHCO3 al 8% en agua (7.16 l, 6.82 mol), seguido de acetato de isopropilo (4.50 l). La mezcla se agitó durante 2-3 minutos y las capas se separaron. La capa orgánica se lavó con una solución de NaHCO3 al 8% en agua (7.16 l, 6.82 mol), agitando la mezcla durante 5 minutos y luego las capas se separaron. Las capas acuosas combinadas se extrajeron con acetato de isopropilo (4.50 l). Las capas orgánicas combinadas se trataron con Silicycle (SiliaMetS-Thiol, 400 g, 1.26 mmol/g, 6 eq vs. Pd) y la mezcla se agitó durante 16 horas. Los sólidos se eliminaron por filtración a través de Celite, lavando la torta del filtro con acetato de isopropilo. El filtrado se concentró bajo presión reducida (temperatura del baño 40°C). El residuo se disolvió en acetato de isopropilo (5.00 l) y se trató con Silicycle adicional (SiliaMetS-Thiol, 250 g, 1.26 mmol/g, 3.7 eq vs. Pd). La mezcla resultante se agitó a 21°C durante 16 horas. Los sólidos se eliminaron por filtración a través de Celite, lavando la torta del filtro con acetato de isopropilo (2.50 l). El filtrado se concentró bajo presión reducida (temperatura del baño 40°C) para dar una espuma de color marrón. El producto crudo se purificó mediante SFC preparativa (columna Lux C4, 50 mm de diámetro, 250 mm de longitud), usando una elución en gradiente de una fase móvil de EtOH/DEA 100/0.5 en CO2, 140 bar a una tasa de flujo de 400 ml/minuto a 40°C) para dar una espuma sólida de color marrón claro. Se añadió EtOAc (2.00 l) y la solución se concentró bajo presión reducida. Se añadieron EtOAc (1.90 l) y heptano (1.90 l) y la mezcla se sembró a 25°C. La mezcla se mantuvo a 25°C durante 1 hora. Se añadió heptano (6.50 l) durante 2 horas a la mezcla en agitación. La mezcla resultante se agitó a 22°C durante 18 horas. El sólido resultante se recolectó por filtración, lavando la torta de filtración con EtOAc/heptano 1: 5 (2,50 l). El sólido se aspiró en seco bajo una manta de nitrógeno durante 30 minutos, luego se secó al vacío a 40°C durante 9 días para dar N-(1-(3-fluoropropil)azetidin-3-il)-6-((6S,8R)-8-metil-7-(2,2,2-trifluoroetil)-6,7,8,9-tetrahidro-3H pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)piridin-3-amina ( 626 g, 77%) como un sólido blanquecino. 1H RMN (600 MHz, DMSO-d6, 27°C) 1.07 (3H d) 1.63 (2H, dquin), 2.45 (2H, t), 2.72 (2H, br t), 2.83 (1H, br dd), 2.91 - 3.00 (1H, m), 3.06 (1H, br dd) 3.42 - 3.55 (2H, m), 3.58-3.65 (2H, m), 3.92 (1H, dquin) 4.43 (2H, dt) 4.92 (1H, s), 6.22 (1H, d), 6.79 (1H, d) 6.82 (1H, dd), 6.96 (1H, d), 7.21 (1H, d), 7.73 (1H, d), 8.04 (1H, s), 12,96 (1 H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 477.

Se describen a continuación procedimientos utilizados para preparar los materiales de partida (1-(3-fluoropropil)azetidin-3-il)carbamato de tert-butilo y (6S,8R)-6-(5-bromopiridin-2-il)-8-metil-7-(2,2,2-trifluoroetil)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina.

Preparación de tert-butil (1-(3-fluoropropil)azetidin-3-il)carbamato

La reacción se realizó por duplicado y se combinó para la manipulación: se añadió 1-fluoro-3-yodo-propano (189 g, 1.00 mol) a una mezcla agitada de tert-butil N-(azetidin-3-il) carbamato; clorhidrato (200 g, 0.96 mol) y K2CO3 (331 g, 2.40 mol) en THF (1.40 L) y agua (0.50 mol) a 20°C. La mezcla de reacción se calentó hasta 70°C y se agitó a 70°C durante 1.5 horas. Las dos mezclas de reacción se combinaron y se añadieron a agua (2.5 l) y EtOAc (2.0 l). La mezcla se agitó a 21°C durante 3 minutos. Las capas se separaron y la capa orgánica se lavó con agua (2 x 2.0 l) y solución saturada de cloruro de amonio (2.0 l). La capa orgánica se concentró bajo presión reducida para dar el producto crudo. Se añadió tolueno (400 ml) y la mezcla se calentó hasta 60°C. Se añadió heptano (1.6 l) y la mezcla se dejó enfriar hasta 21°C y se agitó durante 15 minutos. El sólido se recogió por filtración y se secó para dar tert-butil (1-(3-fluoropropil)azetidin-3-il) carbamato (230 g, 52%) como un sólido blanco. 1H RMN (500 MHz, CDCl3, 27°C) 1.44 (9H, s), 1.68 - 1.80 (2H, m), 2.56 (2H, t), 2.87 (2H, s), 3.66 (2H, t), 4.29 (1H, s), 4.43 (1H, t), 4.52 (1H, t), 4.86 (1H, s).

Preparación de 4-bromo-1-tetrahidropiran-2-il-indazol

A una suspensión de 4-bromo-1H-indazol (1.50 kg, 7.60 mol) y 3,4-dihidro-2H-pirano (0.96 kg, 11.40 mol) en DCM (2.40 l) se añadió hidrato de ácido 4-metilbencenosulfónico (11.60 g, 0.06 mol) a 20°C bajo nitrógeno. La suspensión resultante se agitó a entre 20°C y 29°C (pequeña exotermia) durante 110 minutos. La solución resultante se lavó con NaHCO3 acuoso saturado (2.00 l) y la capa orgánica se evaporó bajo presión reducida. Se añadió heptano caliente (70°C) (2.50 l) y la mezcla se evaporó bajo presión reducida para dar un sólido cristalino. La purificación por recristalización en heptano caliente (70°C) (7.00 l) se llevó a cabo permitiendo que la solución se enfriara lentamente hasta 34°C. El sólido resultante se recogió por filtración y se lavó con heptano frío para dar 4-bromo-1-tetrahidropiran-2-il-indazol (1.87 kg, 87%) como un sólido cristalino. 1H RMN (300 MHz, DMSO-d6, 27°C) 1.54 - 1.66 (2H, m), 1.67 1.85 (1H, m), 1.94 - 2.09 (2H, m), 2.31 - 2.45 (1H, m), 3.70 - 3.81 (1H, m), 3.83 - 3.97 (1H, m), 5.88 (1H, dd), 7.32 -7.39 (1H, m), 7.40 - 7.44 (1H, m), 7.79 (1H, dt), 8.09 (1H, d) m/z: ES-[MH] - 282.

Preparación de tert-butil N-[(1R)-1-metil-2-(1-tetrahidropiran-2-ilindazol-4-il)etil]carbamato

Una solución de 4-bromo-1-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-1H-indazol (0.70 Kg, 2.49 mol) en THF (3.50 L) se enfrió gradualmente en incrementos de 10°C a -70°C. Se añadió butil-litio 2.5 M en hexanos (1.10 l, 2.74 mol) durante 70 minutos, manteniendo la temperatura interna por debajo de -60°C. La mezcla resultante se agitó a -72°C durante 1 hora. Se añadió hexil-litio 2.3 M en hexanos (0.054 l, 0.12 mol), seguido de una solución de 2,2-dióxido de (R)-4-metil-1,2,3-oxatiazolidina-3-carboxilato de tert-butilo (652 g, 2.74 mol) en THF (2.80 L) durante 2 horas, asegurando que la temperatura interna no supere los -58°C. La mezcla resultante se agitó a -60°C durante 16 horas. La mezcla se calentó lentamente hasta -10°C durante 1.5 horas. Se añadió agua (2.10 l) cuidadosamente. Las capas se separaron y la capa orgánica se lavó con salmuera saturada (1.40 l) y la capa orgánica se concentró bajo presión reducida para dar un aceite. Se añadió IPA (1.50 l) y la mezcla se concentró bajo presión reducida para dar tert-butil ((2R)-1-(1-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-1H-indazol-4-il) propan-2-il) carbamato (1.27 kg, > 100%) como un aceite de color marrón. Esto fue asumido sin purificación adicional. 1H RMN (500 MHz, CDCl3, 27°C) 1.08 (3H, dd), 1.43 (9H, s), 1.63 - 1.69 (1H, m), 1.73 - 1.82 (2H, m), 2.07 (1H, dd), 2.17 (1H, dd), 2.53 - 2.64 (1H, m), 2.95 (1H, s), 3.21 (1H, dt), 3.70 - 3.80 (1H, m), 3.97- 4.12 (2H, m), 4.33 - 4.49 (1H, m), 5.71 (1H, ddd), 6.96 (1H, dd), 7.31 (1H, ddd), 7.46 (1H, d), 8.13 (1H, s). m/z: ES+ [M ] 359

Preparación de dihidrodoruro de (2R)-1-(1H-indazol-4-il)propan-2-amina

Se añadió HCl 12 M (1.00 l, 12.0 mol) durante 20 minutos a una solución agitada de ((2R)-1-(1-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-1H-indazol-4 -il) propan-2-il) carbamato de tert-butilo (1.27 Kg, 1.76 mol) en IPA (1.50 L), manteniendo la temperatura interna por debajo de 30°C. La mezcla resultante se calentó hasta 40°C y se agitó a 40°C durante 16 horas. La temperatura se aumentó hasta 55°C y se añadió una porción adicional de HCl 12 M (0.20 l, 2.40 mol) y se continuó la agitación durante 7 horas. Se añadió MTBE (2.50 l) y la mezcla se dejó agitar a 25°C durante 16 horas. El sólido resultante se recogió por filtración y la torta del filtro se lavó con 10% de IPA en MTBE (2.00 l). El sólido resultante se secó bajo presión reducida a 40°C durante 72 horas para dar diclorhidrato de (2R)-1-(1H-indazol-4-il) propan-2-amina; (0.39 Kg, 89%) como un sólido blancuzco.

1H RMN (500 MHz, DMSO, 27°C) 1.12 (3H, d), 2.96 (1H, dd), 3.39 (1H, dd), 3.45 - 3.55 (1H, m), 6.94 (1H, d), 7.28 (1H, dd), 7.43 (1H, d), 8.23 (3H, s), 8.28 (1H, d). m/z: ES+ [M ] 175.

Preparación de (2R)-1-(1H-indazol-4-il)-N-(2,2,2-trifluoroetil)propan-2-amina

Se añadió una solución de trifluorometanosulfonato de 2,2,2-trifluoroetilo (0.73 kg, 2.94 mol) en MeCN (2.00 l) a una mezcla agitada de diclorhidrato de (R)-1-(1H-indazol-4-il) propan-2- amina (0.77 Kg, 2.94 mol) y K2CO3 (1.26 Kg, 9.13 mol) en MeCN (8.00 L) a 25°C bajo nitrógeno. La mezcla resultante se calentó hasta 60°C y se agitó a 60°C durante 18 horas. Se añadió MeCN (5.00 l) y los sólidos se eliminaron por filtración. El filtrado se concentró bajo presión reducida y el sólido resultante se disolvió en EtOAc (10.00 l), se lavó con agua (4.0 l) y cloruro de sodio acuoso saturado diluido (4.8 l). La capa orgánica se concentró bajo presión reducida para dar (2R)-1-(1H-indazol-4-il)-N-(2,2,2-trifluoroetil) propan-2-amina (0.73 kg, 96%). 1H RMN (500 MHz, CDCls, 27°C) 1.12 (3H, d), 2.96 (1H, dd), 3.08 (1H, dd), 3.14 - 3.33 (3H, m), 6.98 (1H, d), 7.32 (1H, dd), 7.37- 7.41 (1H, m), 8.13 (1H, d), 10.86 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 257.

Preparación de (6S,8R)-6-(5-bromo-2-piridil)-8-metil-7-(2,2,2-trifluoroetil)-3,6,8,9-tetrahidropirazolo[4,3-f]isoquinolina

Se añadió lentamente ácido trifluoroacético (0.66 l, 8.66 mol) a una mezcla agitada de 5-bromopicolinaldehído (0.55 kg, 2.89 mol) y (R)-1-(1H-indazol-4-il)-N-(2.2, 2-trifluoroetil) propan-2-amina (0.83 kg, 2.89 mol) en tolueno (7.30 l) a 21°C. La solución resultante se calentó hasta 80°C y se agitó a 80°C durante 18 horas. La temperatura se aumentó hasta 90°C y el calentamiento continuó durante 4 horas. La mezcla se dejó enfriar hasta 80°C y se añadió una porción adicional de 5 - bromopicolinaldehído (0.015 kg, 0.081 mol) y la solución se agitó a 80°C durante 16 horas. La mezcla se dejó enfriar hasta 21°C y se añadió NaHCO3 acuoso saturado (6.60 l) durante 20 minutos. Se añadió EtOAc (5.00 l) y las capas se separaron. La capa orgánica se lavó con NaHCo3 acuoso saturado (3.30 l) y se concentró bajo presión reducida. Se añadió etanol y la mezcla se concentró bajo presión reducida para dar el producto crudo como un sólido crujiente. El isómero cis se eliminó mediante SFC preparativa (columna SuperSep 1™ (llena con CelluCoat™ 10 ^m), 50 mm de diámetro, 250 mm de longitud), eluyendo con EtOH al 28% en CO2, fase móvil de 140 bar a una tasa de flujo de 450 ml/minuto a 30°C) para dar (6S,8R)-6-(5-bromo-2-piridil)-8-metil-7-(2,2,2-trifluoroetil)-3,6,8,9-tetrahidropirazolo[4,3-f]isoquinolina (0.94 kg, 77%) como un sólido de color amarillo pálido. 1H RMN (500 MHz, CDCl3, 27°C) 1.16 (3H, d), 2.89 (1H, dd), 2.99 (1H, dq), 3.25 - 3.34 (2H, m), 3.55 (1H, td), 5.10 (1H, s), 6.93 (1H, d), 7.22 (1H, d), 7.40 (1H, d), 7.75 (1H, dd), 8.05 (1H, d), 8.56 (1H, dd), 10.24 ( 1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 427.

Ruta alternativa # 2 al Ejemplo 17:

Se añadió 1-(3-fluoropropil)azetidin-3-amina (6.31 g, 37.98 mmol) a una solución de (6S,8R)-6-(5-bromopiridin-2-il)-8-metil-7-(2,2,2-trifluoroetil)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina (15.47 g, 34.92 mmol) en 1,4-dioxano (175 ml). La solución resultante se desgasificó bajo vacío durante 5 minutos, luego se volvió a llenar con nitrógeno (x2). Se añadió tert-butóxido de sodio (13.43 g, 139.69 mmol), seguido de precatalizador de tercera generación BrettPhos (0.95 g, 1.05 mmol). La mezcla resultante se calentó hasta 55°C durante 18 horas. La mezcla se vertió en EtOAc y agua. Se añadió salmuera saturada y las capas se separaron. La capa orgánica se lavó con cloruro de sodio acuoso saturado (x3), y las capas acuosas combinadas se extrajeron con EtOAc. Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron bajo presión reducida. El residuo resultante se purificó por cromatografía instantánea sobre sílica, gradiente de elución de 0 a 50% de metanol en acetato de etilo. Las fracciones que contenían el producto deseado se combinaron, se concentraron bajo presión reducida y luego se repurificaron por cromatografía instantánea sobre sílica, gradiente de elución de EtOAc al 40% en hexanos, para proporcionar un sólido de color rojonaranja. Este sólido se disolvió en MeOH al 10% en DCM, se filtró, lavando la torta del filtro con DCM. Los filtrados combinados se concentraron bajo presión reducida para dar N-(1-(3-fluoropropil)azetidin-3-il)-6-((6S,8R)-8-metil-7-(2,2,2-trifluoroetil)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)piridin-3-amina (15.28 g, 92%) como un sólido de espuma color naranja claro. Los isómeros trans y cis se separaron mediante SFC preparativa (columna (S,S) Whelk-O1, 30 mm de diámetro, 250 mm de longitud), eluyendo con 30% (NH4OH al 0.2% en MeOH) en CO2, fase móvil de 100 bar a una tasa de flujo de 20 ml/minuto a 40°C). Las fracciones que contenían el isómero trans se concentraron bajo presión reducida. El residuo resultante se purificó adicionalmente mediante cromatografía instantánea sobre sílica, gradiente de elución de 0 a 30% de MeOH en EtOAc. Las fracciones que contenían el producto deseado se concentraron bajo presión reducida, luego se concentraron a partir de MeCN (x 2) para dar N-(1-(3-fluoropropil)azetidin-3-il)-6-((6S,8R)-8-metil-7-(2,2,2-trifluoroetil)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)piridin-3-amina (10.76 g, 74%) como una espuma/sólido de color amarillo pálido. 1H RMN (600 m Hz , DMSO-d6, 27°C) 1.07 (3H d) 1.63 (2H, dquin), 2.45 (2H, t), 2.72 (2H, br t), 2.83 (1H, br dd), 2.91 - 3.00 (1H, m), 3.06 (1H, br dd) 3.42 - 3.55 (2H, m), 3.58-3.65 (2H, m), 3.92 (1H, dquin) 4.43 (2H, dt) 4.92 (1H, s), 6.22 (1H, d), 6.79 (1H, d) 6.82 (1H, dd), 6.96 (1H, d), 7.21 (1H, d), 7.73 (1H, d), 8.04 (1H, s), 12.96 (1 H, s). m/z: ES+ (M H) 477.

Las fracciones del SFC que contenía el isómero cis se concentraron bajo presión reducida y el residuo resultante se purificó adicionalmente por cromatografía instantánea sobre sílica, gradiente de elución de 0 a 30% de MeOH en EtOAc. Las fracciones que contenían el producto deseado se concentraron bajo presión reducida, y el residuo resultante se filtró para proporcionar N-(1-(3-fluoropropil)azetidin-3-il)-6-((6R, 8R)-8-metil-7-(2,2,2-trifluoroetil)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)piridin-3-amina (1.13 g, 8%) como una espuma de color amarillo claro sólido. 1H RMN (300 MHz, DMSO-d6, 27°C) 1.28 (3H, d), 1.55 - 1.75 (2H, m), 2.42 -2.49 (2H, m), 2.76 (2H, br t), 2.80 - 2.92 (1H, m), 3.07- 3.18 (1H, m), 3.18 - 3.28 (1H, m), 3.38 - 3.54 (2H, m), 3.59 - 3.70 (2H, m), 3.95 (1H, sxt), 4.45 (2H, dt), 5.11 (1H, s), 6.21 (1H, d), 6.72 (1H, d), 6.82 (1H, dd), 7.02 (1H, d), 7.19 (1H, d), 7.78 ( 1H, d), 8.06 (1H, s), 12.94 (1H, s). m/z: ES+ (M H) 477.

Los procedimientos utilizados para preparar el material de partida (6S,8R)-6-(5-bromopiridin-2-il)-8-metil-7-(2,2,2-trifluoroetil)-6,7,8,9-tetrahidro -3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina se describe a continuación.

Preparación de 2,2,2-trifluoro-N-[(1 R)-2-(1H-indazol-4-il)-1-metil-etil]acetamida

Se añadió TEA (26.0 mL, 186.5 mmol) mediante una jeringa a una suspensión agitada de diclorhidrato de (R)-1-(1H-indazol-4-il) propan-2-amina (15.29 g, 61.61 mmol) y 2,2,2-trifluoroacetato de etilo (8.09 ml, 67.8 mmol) en MeOH (150 ml) a temperatura ambiente. La solución resultante se agitó a temperatura ambiente durante 18 horas y luego se concentró bajo presión reducida. El sólido resultante se disolvió luego en DCM (40 ml) y el clorhidrato de trietilamina residual se precipitó mediante la adición de Et2O (300 ml). La suspensión se agitó durante 5 minutos, luego se filtró y el filtrado se concentró bajo presión reducida para dar un sólido. El sólido se disolvió en EtOAc y cloruro de sodio acuoso saturado. Las capas se separaron y la capa orgánica se lavó con cloruro de sodio acuoso saturado, se secó sobre MgSO4, se filtró y se concentró para proporcionar el (R)-N-(1-(1H-indazol-4-il) propan-2-il)-2,2,2-trifluoroacetamida (16.51 g, 99%) como un sólido blanquecino. 1H RMN (300 MHz, DMSO-d6, 27°C) 1.19 (3H, d), 3.03 (1H, dd), 3.13 (1H, dd), 4.13 -4.30 (1H, m), 6.89 (1H, d), 7.25 (1H, dd), 7.38 (1H, d), 8.18 (1H, t), 9.35 (1H, br d), 13.01 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+272.

Preparación de (2R)-1-(1H-indazol-4-il)-N-(2,2,2-trifluoroetil)propan-2-amina

El complejo 1M Borane THF en THF (365 ml, 365.0 mmol) se agregó rápidamente gota a gota a través de una cánula a una solución agitada de (R)-N-(1-(1H-indazol-4-il) propan-2-il)-2, 2,2-trifluoroacetamida (16.5 g, 60.8 mmol) en THF (100 ml) a temperatura ambiente (desprendimiento de gas; se observó una pequeña exotermia durante el transcurso de la adición). La reacción se calentó luego a 60°C durante 15.5 horas y luego se dejó enfriar hasta temperatura ambiente. La reacción se colocó en un baño de agua a temperatura ambiente y se añadió lentamente gota a gota MeOH (80 ml). La mezcla de reacción se concentró bajo presión reducida, y el residuo resultante se disolvió en MeOH (80 ml) y se concentró bajo presión reducida. El residuo resultante se disolvió en MeOH (250 ml) y se colocó en un baño de agua a temperatura ambiente. Se añadió una suspensión de paladio al 10% sobre carbono (6.47 g, 6.08 mmol) en MeOH (90 ml), enjuagando el matraz con MeOH (10 ml) (se observó cierta evolución de gas). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante aproximadamente 3 minutos, luego se calentó hasta 65°C durante 2 horas. Después de enfriar hasta temperatura ambiente, la mezcla se filtró a través de Celite y se concentró bajo presión reducida. El residuo de color amarillo pálido se disolvió en DCM y se filtró y el filtrado se concentró bajo presión reducida. El residuo resultante se purificó por cromatografía instantánea sobre sílica, gradiente de elución de EtOAc del 10 al 60% en hexanos. Las fracciones que contenían el producto deseado se concentraron bajo presión reducida para proporcionar (R)-1-(1H-indazol-4-il)-N-(2,2,2-trifluoroetil) propan-2-amina (14.21 g, 86%) como un aceite de color amarillo pálido. 1H RMN (300 MHz, DMSO-d6, 27°C) 0.91 (3H, d), 2.17-2.30 (1H, m), 2.71 (1H, dd), 2.98 -3.17 (2H, m), 3.22 - 3.38 ( 2H, m), 6.89 (1H, d), 7.24 (1H, dd), 7.35 (1H, d), 8.12 (1H, t), 12.97 (1H, br s). m/z: ES+ [M+H]+ 258.

Se añadió 5-bromopicolinaldehído (9.80 g, 52.7 mmol) a una solución agitada de (R)-1-(1H-indazol-4-il)-N-(2,2,2-trifluoroetil) propan-2-amina ( 14.05 g, 51.66 mmol) en tolueno (246 mL) bajo nitrógeno. Luego se añadió ácido trifluoroacético (12.30 ml) y la reacción se calentó hasta 90°C durante 4.5 horas. La mezcla se dejó enfriar hasta temperatura ambiente y se añadió EtOAc (200 ml). La mezcla se enfrió hasta 5°C y la mezcla se basificó mediante la adición lenta de NaHcO3 acuoso saturado. Las capas resultantes se separaron y la capa acuosa se extrajo con EtOAc (2 x 80 ml). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con NaHCO3 acuoso saturado, cloruro de sodio acuoso saturado, se secaron sobre MgSO4, se filtraron y se concentraron bajo presión reducida. El residuo resultante se purificó por cromatografía instantánea sobre sílica, gradiente de elución de 5 a 60% de EtOAc en hexanos. Las fracciones que contenían el producto deseado se concentraron bajo presión reducida, luego se secaron al vacío a 50°C durante 3 horas para proporcionar (6S,8R)-6-(5-bromopiridin-2-il)-8-metil-7-(22,2-trifluoroetil)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina (19.29 g, 88%) como un sólido de color naranja pálido. El análisis de 1H RMN reveló 10: 1 isómeros trans/cis. 1H RMN (300 MHz, DMSO-d6, 27°C) 1.10 (3H, d), 2.83 -2.94 (1H, m), 2.95 -3.14 (2H, m), 3.34 - 3.47 (1H, m), 3.49 - 3.72 (1H, m), 5.10 (1H, s), 6.88 (1H, d), 7.25 (1H, d), 7.33 (1H, d), 7.99 (1H, dd), 8.06 (1H, d), 8.56 (1H, d), 13.00 (1H, s) m/z: ES+ [M+H]+ 425.

Rutas alternativas a intermedios utilizados en la síntesis del Ejemplo 17:

Preparación de N-[(1 R)-2-(3-amino-2-metil-fenil)-1-metil-etil]-2,2,2-trifluoroacetamida

Una solución de (R)-3-(2-aminopropil)-2-metilanilina (0.51 g, 3.13 mmol), DIPEA (0.55 mL, 3.13 mmol) y 2,2,2-trifluoroacetato de etilo (0.47 mL, 3.91 mmol) en MeOH (9.5 ml) se agitó a temperatura ambiente bajo nitrógeno durante 16 horas. La reacción de la mezcla se concentró bajo presión reducida. Se agregaron DCM y agua y las capas se separaron. La capa acuosa se extrajo con DCM (3 x 50 ml), y las capas orgánicas combinadas se secaron (Na2SO4) y se filtraron. El producto crudo se purificó por cromatografía instantánea sobre sílica, gradiente de elución de 0 a 100% de EtOAc en hexano. Las fracciones puras se evaporaron hasta sequedad para proporcionar N-[(1R)-2-(3-amino-2-metil-fenil)-1-metil-etil] -2,2,2-trifluoro-acetamida (680 mg, 83 %). 1H RMN (300 MHz, DMSO-d6, 27°C) 1.06 1.14 (m, 3 H), 2.01 (s, 3 H), 2.54 - 2.71 (m, 1 H), 2.72 - 2.84 (m, 1 H), 4.04 - 4.12 (m, 1 H), 4.60 - 4.77 (m, 2 H), 6.24 -6.37 (m, 1 H), 6.43 -6.52 (m, 1 H), 6.72 -6.84 (m, 1 H), 9.19 - 9.32 (m, 1 H). m/z: ES+ [M+H]+ 261.

Preparación de 2-metil-3-[(2R)-2-(2,2,2-trifluoroetilamino)propil]anilina

Se añadió borano 1.0 M en THF(19.4 ml, 19.37 mmol) a una solución agitada de (R)-N-(1-(3-amino-2-metilfenil) propan-2-il)-2,2, 2-trifluoroacetamida (840 mg, 3.23 mmol) en THF (10 ml). La mezcla de reacción se calentó a 65°C bajo nitrógeno durante 6 horas. La mezcla se dejó enfriar hasta temperatura ambiente y se añadió MeOH cuidadosamente. La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos y luego se concentró bajo presión reducida. El residuo resultante se disolvió en MeOH y se calentó hasta 65°C durante 6 horas. La mezcla se dejó enfriar hasta temperatura ambiente y luego se concentró bajo presión reducida para dar el producto crudo que se purificó por cromatografía instantánea sobre sílica, gradiente de elución de 0 a 100% de EtOAc en hexano. Las fracciones que contenían el producto se evaporaron hasta sequedad para proporcionar 2-metil-3-[(2R)-2-(2,2,2-trifluoroetilamino)propil] anilina (665 mg, 84%). 1H RMN (300 MHz, DMSO-d6, 27°C) 0.89 (s, 3 H), 1.98 (s, 3 H), 2.08 -2.22 (m, 1 H), 2.25 - 2.42 (m, 1 H), 2.69 - 2.87 (m, 2 H), 3.15 - 3.29 (m, 2 H), 4.61 - 4.75 (m, 2 H), 6.30 -6.40 (m, 1 H), 6.43 -6.54 (m, 1 H), 6.71 -6,83 (m, 1 H). m/z: ES+ [M+H]+ 247.

Preparación de (2R)-1-(3-bromo-2-metil-fenil)-N-(2,2,2-trifluoroetil)propan-2-amina

Se añadió DIPEA (2.99 ml, 17.10 mmol) a (R)-1-(3-bromo-2-metilfenil) propan-2-amina (1.30 g, 5.70 mmol) y trifluorometanosulfonato de 2,2,2-trifluoroetilo (0.23 M en DCM, 29.7 ml, 6.84 mmol) en 1,4-dioxano (25 ml) a temperatura ambiente bajo nitrógeno. La mezcla resultante se agitó a 85°C durante 16 horas. La mezcla de reacción se concentró bajo presión reducida y el producto crudo se purificó por cromatografía instantánea sobre sílica, gradiente de elución de 0 a 50% de EtOAc en heptano. Las fracciones que contenían el producto se concentraron bajo presión reducida para proporcionar (R)-1-(3-bromo-2-metilfenil)-N-(2,2,2-trifluoroetil) propan-2-amina (0.56 g, 32%) como un aceite. 1H RMN (500 MHz, DMSO, 27°C) 0.91 (3H, d), 2.26 (1H, q), 2.34 (3H, s), 2.78 - 2.86 (1H, m), 2.89 (1H, dd), 3.19 - 3.28 (2H, m), 7.01 - 7.06 (1H, m), 7.15 (1H, dd), 7.43 (1H, dd). m/z: ES+ [M+H]+ 310/312.

Preparación de 2-metil-3-[(2R)-2-(2,2,2-trifluoroetilamino)propil]anilina

Se agregaron tris(dibencilideneacetona)dipalladio (0) (0.050 g, 0.05 mmol) y (±)-2,2'-Bis(difenilfosfino)-1,1'-binaftaleno (0.067 g, 0.11 mmol) a una suspensión de (R)-1-(3-bromo-2-metilfenil)-N-(2,2,2-trifluoroetil) propan-2-amina (0.56 g, 1.81 mmol), benzofenona imina (0.33 mL, 1.99 mmol) y tert-butóxido de sodio (0.26 g, 2.71 mmol) en tolueno desgasificado (7 mL) y la reacción se calentó hasta 90°C durante 16 horas. Después de enfriar hasta temperatura ambiente, la mezcla se concentró bajo presión reducida. El residuo se disolvió en DCM (50 ml) y se lavó con agua (50 ml). El acuoso se extrajo con DCM (25 ml) y los compuestos orgánicos combinados se concentraron a ~ 25 ml. Se añadió solución de HCl 2 M (50 ml) y la mezcla bifásica se agitó vigorosamente durante 30 minutos. Las capas se separaron y la capa acuosa se lavó con DCM. La fase acuosa se basificó mediante la adición de NaOH acuoso 2 M. La mezcla resultante se extrajo con DCM (2 x 100 ml) y los extractos orgánicos combinados se concentraron bajo presión reducida para dar (R)-2-metil-3-(2-((2,2,2-trifluoroetil)amino)propil) anilina (0.31 g, 70%) como un aceite. 1H RMN (500 MHz, DMSO, 27°C) 0.90 (3H, d), 1.98 (3H, s), 2.12 -2.18 (1H, m), 2.30 -2.36 (1H, m), 2.74 -2.82 (2H, m), 3.17- 3.29 (2H, m), 4.69 (2H, s), 6.35 (1H, dd), 6.48 (1H, dd), 6.78 (1H, t). ES+ [M+H]+ 247.

Preparación de (1 S,3R)-1-(5-bromo-2-piridil)-3,5-dimetil-2-(2,2,2-trifluoroetil)-3,4-dihidro-1H-isoquinolin-6-amina

Se añadió sal de iterbio (111) de ácido trifluorometanosulfónico (0.17 g, 0.27 mmol) a una solución agitada de (R)-2-metil-3-(2-((2,2,2-trifluoroetil)amino)propil)anilina (1.35 g, 5.49 mmol), 5-bromopicolinaldehído (1.02 g, 5.49 mmol) y agua (0.49 ml, 27.43 mmol) en MeCN (21.5 ml). La solución resultante se agitó a 80°C durante 1 hora. La mezcla se concentró bajo presión reducida y el residuo se cargó en seco sobre sílica gel y se purificó por cromatografía instantánea sobre sílica, gradiente de elución de EtOAc del 10 al 30% en hexano. Las fracciones que contenían el producto deseado se concentraron hasta sequedad para proporcionar (1S,3R)-1-(5-bromopiridin-2-il)-3,5-dimetil-2-(2,2,2-trifluoroetil)-1,2, 3,4-tetrahidroisoquinolin-6-amina (2.22 g, 98%) como una goma amarillenta. 1H Rm N (300 MHz, DMSO-da, 27°C) 0.88 (3H, d), 1.91 (3H, s), 2.37- 2.46 (1H, m), 2.60 - 2.76 (1H, m), 2.76- 3.00 ( 1H, m), 3.15 - 3.28 (1H, m), 3.34 -3.63 (1H, m), 4.65 (2H, s), 4.85 (1H, s), 6.19 -6.52 (2H, m), 7.10 -7.31 ( 1H, m), 7.97 (1H, dd), 8.62 (1H, d). m/z: ES+ [M+H]+414.

(1S,3R)-1-(5-bromopiridin-2-il)-3,5-dimetil-2-(2,2,2-trifluoroetil)-1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-6-amina ( 2.21 g, 5.33 mmol) en ácido propiónico (14.0 ml) se enfrió hasta -20°C. Se añadió gota a gota una solución de nitrito de sodio (0.40 g, 5.86 mmol) en agua (2.8 ml) durante 5 minutos, manteniendo la temperatura del baño entre -20°C y -15°C. La mezcla resultante se agitó a -20°C durante 45 minutos. Se vertió tolueno (80 ml), enfriado hasta -15°C, en la reacción, y la reacción se agitó durante 15 minutos. Se añadió lentamente una solución de carbonato de sodio (12.0 g, 113 mmol) en agua (125 ml) y la mezcla se dejó calentar a temperatura ambiente. Se añadió EtOAc (100 ml) y las capas se separaron. La capa acuosa se extrajo con CHCl3/IPA (3:1) (100 ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre MgSO4, se filtraron y se concentraron bajo presión reducida para dar el producto crudo que se purificó por cromatografía instantánea sobre sílica, gradiente de elución de EtOAc del 15 al 50% en hexano. El producto que contenía fracciones se evaporó hasta sequedad para proporcionar (6S,8R)-6-(5-bromopiridin-2-il)-8-metil-7-(2,2,2-trifluoroetil)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina (1.63 g, 72%) como un sólido de color marrón. 1H RMN (300 MHz, DMSO-d6, 27°C) 1.10 (3H, d), 2.83 - 2.96 (1H, m), 2.96- 3.14 (2H, m), 3.35 - 3.48 (1H, m), 3.49 - 3.73 (1H, m), 5.11 (1H, s), 6.87 (1H, d), 7.27 (1H, d), 7.35 (1H, d), 7.99 (1H, dd), 8.09 (1H, s), 8.53 - 8.63 (1H, m), 12.96 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 425.

Preparación de tert-butil (1-(3-fluoropropil)azetidin-3-il)carbamato

Una suspensión de tert-butil azetidin-3-ilcarbamato (10.00 g, 58.06 mmol), 1-fluoro-3-yodopropano (11.13 g, 59.22 mmol) y carbonato de potasio (16.05 g, 116.13 mmol) en MeCN (200 mL) se agitó a temperatura ambiente durante 2 días. Los sólidos se eliminaron por filtración y el filtrado se concentró bajo presión reducida. El residuo se trató con agua y se extrajo con DCM. Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron bajo presión reducida para dar (1-(3-fluoropropil)azetidin-3-il) carbamato de tert-butilo (13.40 g, 99%) como un sólido de color amarillo pálido. 1HRMN (300 MHz, CDCls, 27°C) 1.45 (9H, s), 1.61 -1.92 (2H, m), 2.51 - 2.67 (2H, m), 2.85 (2H, br s), 3.57- 3.72 (2H, m), 4.30 (1H, br d), 4.36- 4.63 (2H, m), 4.89 (1H, br d).

Preparación alternativa de tert-butil (1-(3-fluoropropil)azetidin-3-il)carbamato

Se añadió anhídrido trifluorometanosulfónico (2.31 ml, 13.75 mmol), seguido de 2,6-dimetilpiridina (1.74 ml, 15.00 mmol) a una solución de 3-fluoropropan-1-ol (0.94 ml, 12.5 mmol) en DCM (47 ml) a 0°C y la reacción se agitó a 0°C durante 1 hora. La mezcla de reacción se lavó con HCl 1N, luego la capa orgánica se secó y se evaporó cuidadosamente. El residuo se añadió luego a un matraz separado que contenía una suspensión de azetidin-3-ilcarbamato de tert-butilo (1.94 g, 11.25 mmol) y DIPEA (3.24 ml, 18.75 mmol) en dioxano/DCM (1:1, 40 mL) y la reacción se agitó a temperatura ambiente (exotérmica en adición de triflato). La mezcla de reacción se diluyó con DCM y se lavó con solución de NH4Cl. La capa orgánica se secó y se evaporó bajo presión reducida para dar el producto crudo. El producto crudo se purificó por cromatografía instantánea sobre sílica, gradiente de elución de 0 a 10% de NH3/MeOH al 1% en Dc M. Las fracciones puras se evaporaron hasta sequedad para proporcionar (1-(3-fluoropropil)azetidin-3-il)carbamato de tert-butilo (2.82 g, 97%) como un aceite de malva 1HRMN como anteriormente.

Preparación de 1-(3-fluoropropil)azetidin-3-amina

Se añadió ácido trifluroacético (39.8 mL, 517 mmol) gota a gota durante 30 minutos a una solución de tert-butil (1-(3-fluoropropil)azetidin-3-il)carbamato (20.0 g, 86 mmol) en DCM (67.8 mL) que se había sumergido en un baño de agua. Después de 18 horas, la reacción se concentró bajo presión reducida hasta obtener un aceite de color naranja. Este aceite se disolvió en metanol al 10% en DCM (125 ml) y se añadió carbonato de potasio (71.4 g, 517 mmol) con agitación vigorosa. Después de 15 minutos, se añadieron otros 30 g de carbonato de potasio. La agitación se volvió lenta y se añadió Celite (~ 15 g). La agitación continuó durante otros 15 minutos, y la mezcla se filtró con metanol al 10% en lavado con DCM. El filtrado se concentró bajo presión reducida en un evaporador rotativo (presión: 100 mbar, temperatura del baño de agua: 30°C), y el aceite de color naranja resultante se purificó por cromatografía instantánea sobre sílica (detección A = 210 nm), gradiente de elución de 0 a 15 % (Amoniaco 2 M en metanol) en DCM para proporcionar 1-(3-fluoropropil)azetidin-3-amina (12.8 g) contaminada con 28% en peso de metanol basado en la integración de RMN como un aceite de color amarillo. Este material podría usarse directamente, almacenarse en el congelador para uso posterior, o purificarse adicionalmente por destilación al vacío según el siguiente ejemplo: se destiló 1-(3-fluoropropil)azetidin-3-amina (14.8 g) como un aceite de color amarillo claro utilizando un aparato de destilación de corto recorrido con enfriamiento de agua con camisa bajo condiciones de vacío (bomba de vacío). El matraz que contenía la amina se sumergió en un baño de aceite, y la temperatura del baño se aumentó gradualmente hasta 140°C durante un período de 30 minutos. La destilación se produjo con una temperatura de baño de 110-135°C y una temperatura de carga aproximada de 70°C para proporcionar 1-(3-fluoropropil)azetidin-3-amina (12.4 g, 84%) como un aceite transparente e incoloro. Este aceite se almacenó en el congelador antes de su uso. 1H RMN (300 MHz, DMSO-d6, 27°C) 1.52 - 1.70 (2H, m), 1.75 (2H, br s), 2.38 (2H, t), 2.43 - 2.48 (2H, m), 3.27- 3.39 (1H, m), 3.42 -3.48 (2H, m), 4.43 (2H, dt). m/z: ES+ [M+H]+ 133.

Ejemplo 17A: Preparación de N-(1-(3-fluoropropil)azetidin-3-il)-6-((6S,8R)-8-metil-7-(2,2,2-trifluoroetil)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)piridin-3-amina Forma A (forma anhídra)

Método 1

Se disolvieron 4.0 mg de N-(1-(3-fluoropropil)azetidin-3-il)-6-((6S,8R)-8-metil-7-(2,2,2-trifluoroetil)-6,78,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)piridin-3-amina amorfa en 100 ul de EtOAc para formar una solución transparente. Se añadieron lentamente a la solución aproximadamente 200 ul de heptano, se formó una suspensión turbia. La suspensión se agitó a la temperatura ambiente durante 3 días. Se obtuvo material cristalino de la Forma A.

Método 2

Se suspendieron 1.60 g de N-(1-(3-fluoropropil)azetidin-3-il)-6-((6S,8R)-8-metil-7-(2,2,2-trifluoroetil)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)piridin-3-amina amorfa en 15 ml de mezcla de acetona/H2O (10: 1). Se formó una suspensión, y luego se formó un gel. Se agregaron 10 mg de semilla Forma A de N-(1-(3-fluoropropil)azetidin-3-il)-6-((6S,8R)-8-metil-7-(2,2,2-trifluoroetil)-6,7,8, 9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)piridin-3-amina después de 2 horas, y la suspensión se agitó a la temperatura ambiente durante 1 día después de lo cual el gel se convirtió en tortas sólidas. Las tortas sólidos en la pared y el fondo se eliminaron manualmente en la solución, y se obtuvo una suspensión homogénea después de agitar durante 1 hora. El sólido se recogió por filtración y se lavó con 5.0 ml de acetona/H2O (1:10) dos veces, seguido con H2O varias veces. Se obtuvieron 1.45 g de polvo blanco (rendimiento del 90%) como Forma A después de secar al vacío durante 4 horas.

Método 3

501 mg de material amorfo de N-(1-(3-fluoropropil)azetidin-3-il)-6-((6S,8R)-8-metil-7-(2,2,2-trifluoroetil)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)piridin-3-amina se disolvieron en 1.0 ml de EtOAc para formar una solución de color marrón. A la solución, se añadieron 1.0 ml de heptano lentamente. Al final de la adición, el sólido comenzó a formarse pero luego se disolvió. Se agregaron 2-5 mg de N-(1-(3-fluoropropil)azetidin-3-il)-6-((6S,8R)-8-metil-7-(2,2,2-trifluoroetil)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)piridin-3-amina-Forma A a la solución de color marrón claro, después de lo cual el sólido comenzó a precipitar. La suspensión se agitó a temperatura ambiente durante 1 día. El sólido se recogió por filtración y se secó al aire. Se obtuvieron 345 mg de polvo blanquecino (rendimiento: ~ 69%) como Forma A.

La forma A del método 2 se analizó mediante XRPD y los resultados se tabulan a continuación (Tabla 1) y se muestran en la Figura 1.

Tabla 1. Picos de XRD para La Forma A

La forma A fue analizada mediante técnicas térmicas. El análisis DSC indicó que la Forma A tiene un punto de fusión con un inicio a 132°C y un pico a 137°C. TGA indicó que la Forma A exhibe una pérdida de masa de aproximadamente 0.2% al calentar de aproximadamente 25°C a aproximadamente 100°C. Un termograma representativo DSC/TGA de la Forma A se muestra en la Figura 2.

Ejemplo 17B: Preparación de N-(1-(3-fluoropropil)azetidin-3-il)-6-((6S,8R)-8-metil-7-(2,2,2-trifluoroetil)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)piridin-3-amina Forma B (solvato de TBME)

100 mg de N-(1-(3-fluoropropil)azetidin-3-il)-6-((6S,8R)-8-metil-7-(2,2,2-trifluoroetil)-6,7,8, 9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)piridin-3-amina (material amorfo) se disolvió parcialmente en 1.0 ml de TBME. La suspensión se agitó bajo condiciones ambientales, después de lo cual precipitó más sólido en la suspensión. La suspensión se agitó durante 2 horas. N-(1-(3-fluoropropil)azetidin-3-il)-6-((6s,8R)-8-metil-7-(2,2,2-trifluoroetil)-6,7,8,9-La tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)piridin-3-amina-Forma B se identificó cuando la suspensión se montó directamente en el soporte de la muestra para la caracterización XRPD. La Forma B se convirtió en la Forma C después de que el sólido se filtró y se secó bajo condiciones ambientales.

La Forma B fue analizado por XRPD y los resultados se tabulan a continuación (Tabla 2) y se muestran en la Figura 3.

Tabla 2. Picos de XRD para la Forma B

Ejemplo 17C: Preparación de N-(1-(3-fluoropropil)azetidin-3-il)-6-((6S,8R)-8-metil-7-(2,2,2-trifluoroetil)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)piridin-3-amina Forma C (solvato de TBME)

200 mg de material amorfo de N-(1-(3-fluoropropil)azetidin-3-il)-6-((6S,8R)-8-metil-7-(2,2,2-trifluoroetil)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)piridin-3-amina estaba casi disuelto en 1 ml de TBME. La suspensión se agitó bajo condiciones ambientales, después de lo cual precipitó más sólido después de 10 minutos. La suspensión se agitó durante 2 horas y luego se evaporó bajo condiciones ambientales. La Forma C se obtuvo después de secar el sólido resultante bajo condiciones ambientales.

La Forma C fue analizado por XRPD y los resultados se tabulan a continuación (Tabla 3) y se muestran en la Figura 4.

Tabla 3. Picos de XRD para la Forma C

La forma C se analizó mediante técnicas térmicas. El análisis DSC indicó que la Forma C tiene un evento endotérmico de desolvatación con un inicio a 75°C y un pico a 84°C. TGA indicó que la Forma C exhibe una pérdida de masa de aproximadamente 7.1% al calentar de aproximadamente 25°C a aproximadamente 150°C. En la Figura 5 se muestra un termograma representativo DSC/TGA de la Forma C.

Ejemplo 17D: Preparación de N-(1-(3-fluoropropil)azetidin-3-il)-6-((6S,8R)-8-metil-7-(2,2,2-trifluoroetil)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)piridin-3-amina Forma D (solvato de CPME)

150 mg de material amorfo de N-(1-(3-fluoropropil)azetidin-3-il)-6-((6S,8R)-8-metil-7-(2,2,2-trifluoroetil)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)piridin-3-amina se agitó en 2.0 ml de CPME (ciclopentilmetiléter). Después de agitar durante 1 día, el sólido se aisló por filtración y se secó al aire. Se obtuvieron ~ 50 mg de polvo blanco de la Forma D.

La forma D fue analizada por XRPD y los resultados se tabulan a continuación (Tabla 4) y se muestran en la Figura 6.

Tabla 4. Picos de DRX para la Forma D

La forma D se analizó mediante técnicas térmicas. El análisis DSC indicó que la Forma D tiene un evento endotérmico de desolvatación con un inicio a 76°C y un pico a 81°C, seguido de otro evento endotérmico con un inicio a 128°C y un pico a 133°C. TGA indicó que la Forma D exhibe una pérdida de masa de aproximadamente 6.8% al calentar de aproximadamente 25°C a aproximadamente 150°C. Un termograma representativo DSC/TGA de la Forma D se muestra en la Figura 7.

Ejemplo 17E: Preparación de N-(1-(3-fluoropropil)azetidin-3-il)-6-((6S,8R)-8-metil-7-(2,2,2-trifluoroetil)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)piridin-3-amina Forma E (forma anhídra)

Método 1

Se agregaron 100 mg de N-(1-(3-fluoropropil)azetidin-3-il)-6-((6S,8R)-8-metil-7-(2,2,2-trifluoroetil)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)piridin-3-amina en 2.0 ml de heptano para formar una suspensión. Se añadieron 0.40 ml de EtOAc. Después de agitar durante 2 horas, se añadieron 0.10 ml adicionales de EtOAc a la suspensión y la suspensión se agitó bajo condiciones ambientales durante 18 horas, después de lo cual se identificó una nueva forma cristalina, la Forma E, mediante XRPD. Se obtuvieron 75 mg de un sólido blanco de la Forma E después de que el sólido se aisló y se secó bajo condiciones ambientales (rendimiento: 75%).

Método 2

Se disolvieron 1.002 g de N-(1-(3-fluoropropil)azetidin-3-il)-6-((6S,8R)-8-metil-7-(2,2,2-trifluoroetil)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)piridin-3-amina amorfa en 5.0 ml de EtOAc para obtener una solución marrón ligera clara. Se añadieron 5.0 ml de heptano y la solución permaneció transparente. Se agregaron 10 mg de semillas de N-(1-(3-fluoropropil)azetidin-3-il)-6-((6S,8R)-8-metil-7-(2,2,2-trifluoroetil)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)piridin-3-amina-Forma E, y la suspensión se agitó a temperatura ambiente. El sólido comenzó a precipitar bajo condiciones ambientales, y se formó una torta húmeda después de 1 hora. Se añadieron lentamente a la suspensión 5.0 ml de EtOAc y la suspensión resultante se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. Se agregaron otros 10 ml de heptano, más sólido comenzó a precipitar. Después de agitar bajo condiciones ambientales durante 2 horas, la suspensión se calentó hasta 60°C y se agitó a 60°C durante 2 horas. La suspensión se enfrió hasta temperatura ambiente y se agitó durante 18 horas. El sólido blanquecino de la Forma E se aisló por filtración y se lavó con disolvente mixto EtOAc/heptano 1:4 durante 3 veces. Se recolectaron 0.875 g de polvo blanco pálido después de secar al aire (rendimiento: 87%).

La forma E del método 1 se analizó mediante XRPD y los resultados se tabulan a continuación (Tabla 5) y se muestran en la Figura 8.

Tabla 5. Picos de DRX para la Forma E

La forma E fue analizada mediante técnicas térmicas. El análisis DSC indicó que la Forma E tiene un punto de fusión con un inicio a 126°C y un pico a 133°C. TGA indicó que la Forma E exhibe una pérdida de masa de aproximadamente 0.8% al calentar de aproximadamente 25°C a aproximadamente 100°C. En la Figura 9 se muestra un termograma representativo DSC/TGA de la Forma E.

Ejemplo 17F: Preparación de N-(1-(3-fluoropropil)azetidin-3-il)-6-((6S,8R)-8-metil-7-(2,2,2-trifluoroetil)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)piridin-3-amina Forma F (solvato de heptano)

Se disolvieron 20 mg de N-(1-(3-fluoropropil)azetidin-3-il)-6-((6S,8R)-8-metil-7-(2,2,2-trifluoroetil)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)piridin-3-amina amorfa en 200 ul de acetona. Se añadieron lentamente 1.0 ml de heptano a la solución. La solución comenzó a volverse turbia y luego se formó una suspensión. La suspensión se agitó a temperatura ambiente después de agregar 1.0 ml de heptano. Se observaron partículas en forma de aguja en la suspensión. La suspensión se calentó hasta 60°C y se agitó durante 2 horas y luego se enfrió hasta temperatura ambiente. Se formaron partículas de aguja.

La suspensión de la Forma F resultante se analizó mediante XRPD y los resultados se muestran en la Figura 10. La cristalinidad de la Forma F disminuyó durante la caracterización de XRPD, y la segunda ejecución de la XRPD indicó que se obtuvo un material amorfo después de secar en el soporte de muestra.

Ejemplo 17F: Preparación de N-(1-(3-fluoropropil)azetidin-3-il)-6-((6S,8R)-8-metil-7-(2,2,2-trifluoroetil)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)piridin-3-amina Forma G (solvato de metilpentanona)

Se suspendieron 100 mg de N-(1-(3-fluoropropil)azetidin-3-il)-6-((6S,8R)-8-metil-7-(2,2,2-trifluoroetil)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)piridin-3-amina amorfa en 200 ul de metilpentanona y se agregaron 2-5 mg de N-(1-(3-fluoropropil)azetidin-3-il)-6-((6S,8R)-8-metil-7-(2,2,2-trifluoroetil)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)piridin-3-amina-Forma A, después de lo cual se formó una torta después de agitar bajo condiciones ambientales durante 10 minutos. Se añadieron 200 ul de metilpentanona y se formó una suspensión. La suspensión se agitó a la temperatura ambiente durante 18 horas. La XRPD mostró que se formó una forma cristalina, N-(1-(3-fluoropropil)azetidin-3-il)-6-((6S,8R)-8-metil-7-(2,2,2-trifluoroetil)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)piridin-3-amina-Forma G. La forma G se convirtió en material parcialmente amorfo después del aislamiento y secado bajo condiciones ambientales.

La forma G fue analizada por XRPD y los resultados se tabulan a continuación (Tabla 6) y se muestran en la Figura 10.

Tabla 6. Picos de XRD para la Forma G

Ejemplo 18

5-fluoro-6-((6S,8R)-7-((1-fluorocidopropil)metil)-8-metil-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)-N-(1-(3-fluoropropil)azetidin-3-il)piridin-3-amina

Se agregó metanosulfonato de [(2-Di-ciclohexilfosfino-3,6-dimetoxi-2’,4’,6’-triisopropil-1,1'-bifenil)-2-(2'-amino-1,1'-bifenil)]paladio (II) (Brett Phos G3) (48.6 mg, 0.05 mmol) a la solución desgasificada de 1-(3-fluoropropil)azetidin-3-amina (95 mg, 0.72 mmol), (6S,8R)-6-(5-bromo-3-fluoropiridin-2-il)-7-((1-fluorociclopropil)metil)-8-metil-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina (155 mg, 0.36 mmol) y tert-butóxido de sodio (206 mg, 2.15 mmol) en 1,4-dioxano (3 ml) bajo nitrógeno. La solución resultante se agitó a 90°C durante 2 horas. La mezcla de reacción se diluyó con EtOAc (50 ml) y se lavó secuencialmente con agua (50 ml) y cloruro de sodio acuoso saturado (50 ml). La capa orgánica se secó con MgSO4, se filtró y se evaporó para proporcionar un producto crudo que se purificó por Hp Lc preparativa (columna OBD Waters XBridge Prep C18, sílica 5 ^, 50 mm de diámetro, 100 mm de longitud), usando mezclas de agua decrecientemente polares (que contienen 0.1 % de NH3) y MeCN como eluyentes. Las fracciones que contenían el compuesto deseado se evaporaron hasta sequedad para proporcionar 5-fluoro-6-((6S,8R)-7-((1-fluorociclopropil)metil)-8-metil-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)-N-(1-(3-fluoropropil)azetidin-3-il)piridin-3-amina (39.0 mg, 22%) como un sólido blanco. 1H RMN (500 MHz, CDCls, 27°C) 0.48 - 0.61 (2H, m), 0.92 -1.09 (2H, m), 1.13 (3H, d), 1.68 - 1.83 (2H, m), 2.56-2.62 ( 2H, m), 2.67 (1H, dd), 2.86 (1H, dd), 2.90 -2.95 (2H, m), 3.17 (1H, dd), 3.27 (1H, dd), 3.70 (2H, q), 3.87 (1H, td), 4.04 (1H, q), 4.21 (1H, d), 4.43 (1H, t), 4.53 (1H, t), 5.39 (1H, s), 6.50 (1H, dd), 6.79 ( 1H, d), 7.12 (1H, d), 7.68 (1H, d), 8.03 (1H, s); m/z: ES+ [M+H]+485.

La 5-fluoro-6-((6S,8R)-7-((1-fluorociclopropil)metil)-8-metil-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)-N-(1-(3-fluoropropil)azetidin-3-il)piridin-3-amina se preparó como sigue:

Preparación de 1-(5-bromo-3-fluoropiridin-2-il)-N-((1S,3R)-1-(5-bromo-3-fluoropiridin-2-il)-2-((1-fluorociclopropil)metil)-3,5-dimetil-1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-6-il)metanimina

Se añadió 5-bromo-3-fluoropicolinaldehído (1.09 g, 5.33 mmol) a (R)-3-(2-(((1-fluorociclopropil)metil)amino)propil)-2-metilanilina (630 mg, 2.67 mmol) y agua (0.240 ml, 13.33 mmol) en ácido acético (12 ml). La solución resultante se agitó a 70°C durante 2 horas. La mezcla de reacción se concentró y se diluyó con EtOAc (50 ml) y se lavó secuencialmente con NaHCO3 acuoso saturado (50 ml). La capa orgánica se secó con MgSO4, se filtró y se evaporó para proporcionar 1 -(5-bromo-3-fluoropiridin-2-il)-N-((1S,3R)-1-(5-bromo-3-fluoropiridin-2 -il)-2-((1-fluorociclopropil)metil)-3,5-dimetil-1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-6-il)metanimina como producto crudo (1.53 g, 2.51 mmol). m/z: ES+ [M+H]+ 607.

Preparación de (1S,3R)-1-(5-bromo-3-fluoropiridin-2-il)-2-((1-fluorociclopropil)metil)-3,5-dimetil-1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-6-amina

Se añadió hidrocloruro de hidroxilamina (0.174 g, 2.51 mmol) a 1-(5-bromo-3-fluoropiridin-2-il)-N-((1S,3R)-1-(5-bromo-3-fluoropiridin-2-il)-2-((1-fluorocidopropil)metil)-3,5-dimetil-1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-6-il)metanimina (i .53 g, 2.51 mmol) y acetato de potasio (0.62 g, 6.27 mmol) en MeOH (12 ml). La solución resultante se agitó a 20°C durante 5 horas. La mezcla de reacción se concentró y se diluyó con DCM (75 ml) y se lavó secuencialmente con NaOH (2 M, 75 ml) y cloruro de sodio acuoso saturado (50 ml). La capa orgánica se secó con MgSO4, se filtró y se evaporó para proporcionar un producto crudo que se purificó por cromatografía instantánea sobre sílica, gradiente de elución de 0 a 20% de EtOAc en heptano. El producto que contenía fracciones se evaporó hasta sequedad para proporcionar (1S,3R)-1-(5-bromo-3-fluoropiridin-2-il)-2-((1-fluorociclopropil)metil)-3,5-dimetil-1, 2,3,4-tetrahidroisoquinolin-6-amina (0.672 g, 63%) como una goma incolora. 1H RMN (500 MHz, CDCh, 27°C) 0.45 - 0.61 (2H, m), 0.92 - 1.06 (2H, m), 1.07 (3H, d), 2.07 (3H, s), 2.51 (1H, dd), 2.59 (1H, dd), 2.85 (1H, dd), 3.13 (1H, dd), 3.52 (2H, s), 3.64 - 3.75 (1H, m), 5.35 (1H, s), 6.48 (2H, s), 7.52 (1H, dd), 8.36 (1H, dd); m/z: ES+ [M+H]+ 422/424.

Preparación de (6S,8R)-6-(5-bromo-3-fluoropiridin-2-il)-7-((1-fluorociclopropil)metil)-8-metil-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina

(1S,3R)-1-(5-Bromo-3-fluoropiridin-2-il)-2-((1-fluorociclopropil)metil)-3,5-dimetil-1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-6-amina (0.672 g, 1.59 mmol) en ácido propiónico (6.63 ml) se enfrió hasta -17°C (hielo seco/acetona). Se añadió nitrito de sodio (0.110 g, 1.59 mmol) en agua (1.33 ml) gota a gota y la mezcla de reacción se agitó a -17°C durante 30 minutos. La mezcla de reacción se diluyó con tolueno helado (30 ml), se agitó a 0°C durante 15 minutos y luego a temperatura ambiente durante 45 minutos. La mezcla de reacción se lavó con agua (2 x 25 ml), las fases acuosas combinadas se lavaron con EtOAc (25 ml), las fases orgánicas combinadas se lavaron con cloruro de sodio acuoso saturado (50 ml), se secaron (MgSO4), se filtraron y el filtrado se evaporó hasta obtener un aceite de color naranja-marrón. El material crudo se purificó por cromatografía instantánea sobre sílica, gradiente de elución de EtOAc al 0-50% en heptano para proporcionar (6S,8R)-6-(5-bromo-3-fluoropiridin-2-il)-7-((1-fluorociclopropil)metil)-8-metil-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina (0.310 g, 45%) como un sólido de color naranja. 1H RMN (500 MHz, CDCl3, 27°C) 0.50 -0.59 (2H, m), 1.03 (2H, dd), 1.13 (3H, d), 2.72 (1H, dd), 2.91 (1H, dd), 3.16 (1H, dd), 3.27 (1H, dd), 3.77- 3.90 (1H, m), 5.50 (1H, s), 6.80 (1H, d), 7.20 (1H, dd), 7.56 (1H, dd), 8.07 (1H, d), 8.36 (1H, dd); m/z: ES+ [M+H]+ 433.

Ejemplo 19

Preparación de N-(4-((6S,8R)-7-(2,2-difluoropropil)-8-metil-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)-3-metoxifenil)-1-(3-fluoropropil)azetidin-3-amina

DMF (2 ml) y DIPEA (0.074 ml, 0.42 mmol) se agregaron secuencialmente a un matraz cargado con N-(4-((6S,8R)-7-(2,2-difluoropropil)-8-metil-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)-3-metoxifenil)azetidin-3-amina (75 mg, 0.17 mmol). Luego se añadió 1-fluoro-3-yodopropano (31.9 mg, 0.17 mmol) en DMF (0.1 ml), y se continuó agitando durante 2 horas. La reacción se detuvo, se diluyó con cloruro de sodio acuoso saturado y el compuesto se extrajo en EtOAC (x3). Los extractos combinados se lavaron con agua y se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se concentraron bajo presión reducida para proporcionar una película. Este material se purificó por cromatografía instantánea sobre sílica, eluyendo con 2 a 10% (metanol que contiene 1% de hidróxido de amonio) en DCM para proporcionar N-(4-((6S,8R)-7-(2,2-difluoropropil)-8 -metil-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)-3-metoxifenil)-1-(3-fluoropropil)azetidin-3-amina (43 mg, 51%). 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6, 27°C) 1.00 (3H, d), 1.45 -1.70 (5H, m), 2.44 (2H, t), 2.55 -2.66 (1H, m), 2.66- 2.72 ( 2H, m), 2.79 (1H, dd), 2.87- 3.01 (1H, m), 3.10 (1H, br dd), 3.38 - 3.53 (1H, m), 3.56- 3.67 (2H, m), 3.77 (3H, s), 3.85 - 3.97 (1H, m), 4.43 (2H, dt), 5.21 (1H, s), 5.88 (1H, dd), 6.00 (1H, d), 6.16 (1H, d), 6.35 ( 1H, d), 6.64 (1H, d), 7.17 (1H, d), 8.02 (1H, s), 12.92 (1H, d). m/z: (ES+), [M+H]+ = 502.

El material de partida N-(4-((6S,8R)-7-(2,2-difluoropropil)-8-metil-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)-3-metoxifenil)azetidin-3-amina fue preparado de acuerdo con los siguientes procedimientos.

Preparación de 2,2-difluoropropil trifluorometanosulfonato

Se añadió anhídrido trifluorometanosulfónico (3.29 ml, 19.5 mmol) gota a gota a una solución de 2,2-difluoropropan-1 -ol (1.7 g, 18 mmol) en DCM (40 ml) a -10°C (baño de sal/hielo). Luego se añadió 2,6-dimetilpiridina (2.5 ml, 21 mmol) y la reacción se agitó durante 1 hora en estas condiciones. La reacción se lavó luego con agua (x2), y la capa orgánica se secó sobre Na2SO4, se filtró y se concentró bajo presión reducida (vacío ~ 200 mbars) para proporcionar trifluorometanosulfonato de 2,2-difluoropropilo (2.1 g, 52%) como un aceite de color rojo. 1H RMN (400 MHz, CLOROFORMO-d, 27°C) 4.48 (2 H, t), 1.73 (3 H, t).

Preparación de (R)-3-(2-((2,2-difluoropropil)amino)propil)-2-metilanilina

Se añadió trifluorometanosulfonato de 2,2-difluoropropilo (1.68 g, 7.37 mmol) a una solución agitada de (R)-3-(2-aminopropil)-2-metilanilina (1.1 g, 6.7 mmol) y DIPEA (1.52 ml, 8.71 mmol) en 1,4-dioxano (20 ml). La reacción se calentó hasta 65°C durante 3 horas antes de enfriarse hasta temperatura ambiente y luego se concentró bajo presión reducida. El residuo resultante se disolvió en EtOAc (30 ml) y se lavó con NaHCO3 acuoso saturado. La capa acuosa se extrajo con EtOAc (20 ml) y las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron bajo presión reducida. El aceite de color rojo resultante se purificó por cromatografía instantánea sobre sílica, gradiente de elución de acetato de etilo del 30 al 90% en hexanos, para proporcionar (R)-3-(2-((2,2-difluoropropil)amino)propil)-2-metilanilina ( 1.02 g, 63%) como una goma. 1H RMN (500 MHz, DMSO-d6, 27°C) 0.90 (3H, d), 1.55 (3H, t), 1.75 (1H, br s), 1.97 (3H, s), 2.29 -2.38 (1H, m), 2.69 -2.76 (2H, m), 2.86 (2H, brt), 4.69 (2H, s), 6.34 (1H, d), 6.47 (1H, d), 6.77 (1H, t). m/z: (ES+), [M+H]+ = 439.

Preparación de (1S,3R)-1-(4-bromo-2-metoxifenil)-2-(2,2-difluoropropil)-3,5-dimetil-1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-6-amina

Se añadió 4-bromo-2-metoxibenzaldehído (1.07 g, 4.95 mmol) a una solución de (R)-3-(2-((2,2-difluoropropil)amino)propil)-2-metilanilina (0.600 g, 2.48 mmol) en AcOH (12 ml) y agua (0.223 g, 12.4 mmol), y la reacción se calentó hasta 80°C durante 18 horas. Después de enfriar, los volátiles se concentraron bajo presión reducida, y el residuo resultante se disolvió en EtOAc. La solución se neutralizó mediante lavado con NaHCO3 acuoso saturado. La capa orgánica se combinó con HCl acuoso (1 N), y la mezcla bifásica se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos. Las capas se separaron entonces, y la capa orgánica se lavó con HCl acuoso (1 N). Las capas acuosas combinadas se extrajeron con EtOAc y luego se basificaron mediante la adición de K2CO3 sólido. La capa orgánica se extrajo luego con EtOAc (x2), y las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se concentraron bajo presión reducida. El residuo resultante se purificó por cromatografía instantánea sobre sílica, gradiente de elución de acetato de etilo del 10 al 60% en hexanos, para proporcionar (1S,3R)-1-(4-bromo-2-metoxifenil)-2-(2,2-difluoropropilo)-3,5-dimetil-1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-6-amina (0.576 g, 53%) como una goma.

1H RMN (400 MHz, DMSO-d6, 27°C) 0.95 (3H, d), 1.54 (3H, t), 1.93 (3H, s), 2.27- 2.43 (2H, m), 2.57- 2.74 (1H, m), 2.76- 2.98 (1H, m), 3.19 - 3.26 (1H, m), 3.84 (3H, s), 4.63 (2H, s), 5.12 (1H, s), 6.26 (1H, d), 6.38 (1H, d), 6.58 (1H, d), 6.94 (1H, dd), 7.16 (1H, d). m/z: (ES+), [M+H]+ = 439.

También se aisló N-((1S,3R)-1-(4-bromo-2-metoxifenil)-2-(2,2-difluoropropil)-3,5-dimetil-1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-6-il)acetamida (0.081 g, 7%) como una goma.

Preparación de (6S,8R)-6-(4-bromo-2-metoxifenil)-7-(2,2-difluoropropil)-8-metil-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina

Se añadió nitrito de sodio (0.049 g, 0.72 mmol) como una solución en agua (0.750 ml) gota a gota a una solución enfriada de (1S,3R)-1-(4-bromo-2-metoxifenil)-2-(2.2 -difluoropropil)-3,5-dimetil-1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-6-amina (0.30 g, 0.68 mmol) en ácido propiónico (2.5 ml) a -15°C, y la reacción se agitó durante 1 hora bajo estas condiciones. Se añadió EtOAc helado (10 ml) seguido de NaHCO3 acuoso saturado (10 ml) en porciones. Las capas se separaron y la capa orgánica se lavó con NaHCO3 acuoso saturado. Las capas acuosas combinadas se extrajeron con EtOAc, y todas las capas orgánicas se combinaron, se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron bajo presión reducida. El residuo resultante se purificó por cromatografía instantánea sobre sílica, gradiente de elución de 20 a 70% de acetato de etilo en hexanos, para proporcionar (6S,8R)-6-(4-bromo-2-metoxifenil)-7-(2,2-difluoropropil)-8-metil-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina (0.23 g, 75%) como una goma. 1H RMN (500 MHz, DMSO-d6, 27°C) 1.01 (3H, d), 1.53 (3H, t), 2.84 (1H, dd), 2.96- 3.09 (1H, m), 3.14 (1H, br dd), 3.36- 3.48 (1H, m), 3.89 (3H, s), 5.32 (1H, s), 6.64 (2H, app t), 6.94 (1H, dd), 7.16- 7.27 (2H, m), 8.06 (1H, s), 12.99 (1H, br s). 1H oscurecido por DMSO. m/z: (ES+), [M+H]+ = 450.

Preparación de (6S,8R)-6-(4-bromo-2-metoxifenil)-7-(2,2-difluoropropil)-8-metil-3-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina y (6S,8R)-6-(4-bromo-2-metoxifenil)-7-(2,2-difluoropropil)-8-metil-2-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-6,7,8,9-tetrahidro-2H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina

Se añadió DCM (7 ml) a un matraz cargado con (6S,8R)-6-(4-bromo-2-metoxifenil)-7-(2,2-difluoropropil)-8-metil-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina (0.3 g, 0.67 mmol) e hidrato de ácido 4-metilbencenosulfónico (0.025 g, 0.13 mmol). Se añadió 3,4-dihidro-2H-pirano (0.084 g, 1.0 mmol) y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 18 horas. La reacción se lavó con hidrogenocarbonato de sodio acuoso saturado, y la capa orgánica se secó sobre Na2SO4, se filtró y se concentró bajo presión reducida. El residuo resultante se purificó por cromatografía instantánea, eluyendo con 5 a 40% de acetato de etilo en hexanos, para proporcionar (6S,8R)-6-(4-bromo-2-metoxifenil)-7-(2,2-difluoropropil)-8-metil-3-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina (175 mg, 49%) como una goma. 1H RMN (400 MHz, CLOROFORMO-d, 27°C) 0.99 - 1.13 (3H, br s), 1.48 - 1.88 (6H, m), 2.01 - 2.08 (1H, m), 2.08 - 2.18 (1H, m), 2.48 - 2.70 (2H, m), 2.82 (1H, dt), 2.88 - 3.04 (1H, m), 3.20 (1H, br d), 3.55 - 3.67 (1H, m), 3.63 - 3.73 (1H, m), 3.88 (3H, s), 3.94 - 3.98 (1H, m), 5.42 (1H, br s), 5.63 (1H, dt), 6.64 (1H, dd), 6.73 (1H, dd), 6.86 (1H, dd), 7.03 (1H, t), 7.25 - 7.29 (1H, m), 7.98 (1H, d). m/z: (ES+), [M+H]+ = 534.

También se aisló (6S,8R)-6-(4-bromo-2-metoxifenil)-7-(2,2-difluoropropil)-8-metil-2-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-6,7,8,9-tetrahidro-2H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina (68 mg, 19%) como una goma. 1H RMN (400MHz, CHLOROFORM-d, 27°C) 1.02 - 1.07 (3H, m), 1.42 - 1.53 (3H, m), 1.59 - 1.81 (3H, m), 2.03 - 2.09 (1H, m), 2.18 -2.25 (2H, m), 2.59 (1H, qd), 2.69 (1H, dd), 2.86- 2.98 (1H, m), 3.02 - 3.14 (1H, m), 3.46- 3.57 (1H, m), 3.72 - 3.82 (1H, m), 3.87- 3.90 (3H, m), 4.11 - 4.16 (1H, m), 5.31 (1H, s), 5.61 - 5.68 (1H, m), 6.60 (1H, dd), 6.72 (1H, dd), 6.88 (1H, dt), 7.01 - 7.05 (1H, m), 7.36 (1H, d), 8.09 (1H, s). m/z : (ES+), [M+H]+ = 534.

P re p a ra c ió n d e te r t-b u ti l 3 -( (4 -( (6 S ,8 R ) -7 -(2 ,2 -d if lu o ro p ro p i l) -8 -m e t i l- 3 -( te t ra h id ro -2 H -p ira n -2 - i l) -6 ,7 ,8 ,9 - te tra h id ro -3 H -p ira z o lo [4 ,3 - f ] is o q u in o lin -6 - i l ) -3 -m e to x ife n i l)a m in o )a z e t id in -1 -c a rb o x ila to

Se añadió dioxano (3.5 ml) a un matraz cargado con Cs2CO3 (213 mg, 0.65 mmol), 3-aminoazetidina-1-carboxilato de tert-butilo (85 mg, 0.49 mmol) y (6S,8R)-6-(4-bromo-2-metoxifenil)-7-(2,2-difluoropropil)-8-metil-3-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina (175 mg, 0.33 mmol). El matraz de reacción se evacuó y se volvió a llenar con nitrógeno (x3). Se añadió el precatalizador de tercera generación BrettPhos (30 mg, 0.03 mmol), y el matraz se evacuó nuevamente y se volvió a llenar con nitrógeno (x3). La reacción se calentó hasta 100°C durante 4 horas. La reacción se enfrió hasta temperatura ambiente, se filtró y se concentró bajo presión reducida. La goma cruda resultante se purificó por cromatografía instantánea sobre sílica, eluyendo con acetato de etilo del 15 al 70% en hexanos, para proporcionar 3-((4-((6S,8R)-7-(2,2-difluoropropil)- 8-metil-3-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)-3-metoxifenil)amino)azetidina-1-carboxilato de tert-butilo (152 mg, 74%) como una película. 1H RMN (400 MHz, CLOROFORMO-d, 27°C) 1.05 (3H, d), 1.42 (9 H, s), 1.44 - 1.57 (3H, m), 1.57- 1.63 (1H, m), 1.66- 1.77 (2H, m), 2.04 - 2.08 (1H, m), 2.09 - 2.18 (1H, m), 2.47- 2.69 (2H, m), 2.79 (1H, dt), 2.84 - 2.99 (1H, m), 3.16 (1H, br dd), 3.48 - 3.61 (1H, m), 3.69 (3H, dt), 3.83 (3H, s), 3.94 - 4.04 (2H, m), 4.15 (1H, br s), 4.20 - 4.29 (2H, m), 5.32 (1H, s), 5.63 (1H, dt), 5.86 (1H, dd), 6.07 (1H, t), 6.55 (1H, dd), 6.78 (1H, dd), 7.20 - 7.23 (1H, m), 7.98 (1H, d). m/z: (ES+), [M+H]+ = 626.

Preparación de N-(4-((6S,8R)-7-(2,2-difluoropropil)-8-metil-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)-3-metoxifenil)azetidin-3-amina

Se añadieron metanol (1 ml) y luego HCl en dioxano (4 M; 1 ml, 4 mmol) secuencialmente a un matraz cargado con 3-((4-((6S,8R)-7-(2,2-difluoropropil)-8-metil-3-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)-3 -metoxifenil)amino)azetidina-1-carboxilato de tert-butilo (140 mg, 0.22 mmol). Después de 2 horas, la reacción se concentró bajo presión reducida y el residuo resultante se purificó usando un cartucho SCX-2 que había sido tratado previamente con metanol. El compuesto se eluyó primero con metanol y luego con amoníaco en metanol (3N). Las fracciones del producto se concentraron bajo presión reducida para proporcionar N-(4-((6S,8R)-7-(2,2-difluoropropil)-8-metil-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)-3-metoxifenil)azetidin-3-amina (91 mg, 92%) como una goma. El producto se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6, 27°C) 1.00 (3H, d), 1.52 (3H, t), 2.55 - 2.59 (1H, m), 2.78 (1H, dd), 2.85 - 2.99 (1H, m), 3.09 (1H, dd), 3.39 - 3.50 (1H, m), 3.55 -3.66 (2H, m), 3.77 (3H, s), 4.03 - 4.14 (1H, m), 5.21 (1H, s), 5.85 (1H, dd), 6.05 (1H, br d), 6.14 (1H, d), 6.34 (1H, d), 6.63 (1H, d), 7.17 (1H, d), 8.02 (1H, s), 12.93 (1H, br s). 3H no observado. m/z: (ES+), [M+H]+= 442.

Ejemplo 20

P re p a ra c ió n d e N -(3 -e to x i-4 -( (6 S ,8 R ) -7 -( (1 - f lu o ro c ic lo p ro p il)m e t i l) -8 -m e t i l- 6 ,7 ,8 ,9 - te tra h id ro -3 H -p ira z o lo [4 ,3 -f ] is o q u in o lin -6 - i l) fe n il) -1 -(3 - f lu o ro p ro p i l)a z e t id in -3 -a m in a

DMF (2 ml) y DIPEA (0.050 ml, 0.28 mmol) se agregaron secuencialmente a un matraz cargado con N-(3-etoxi-4-((6S,8R)-7-((1-fluorocidopropil)metil)-8-metil-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)fenil)azetidin-3-amina (0.051 g, 0.11 mmol). Se añadió 1-fluoro-3-yodopropano (0.021 g, 0.11 mmol) como una solución en DMF (0.2 ml), y después de 2 horas, la reacción se diluyó con hidrogenocarbonato de sodio acuoso saturado. La mezcla se extrajo con acetato de etilo (x3), y las capas orgánicas combinadas se lavaron con agua, se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se concentraron bajo presión reducida. El residuo resultante se purificó por cromatografía instantánea sobre sílica, gradiente de elución de 2 a 10% (metanol que contiene 1% de hidróxido de amonio) en DCM. Las fracciones del producto se combinaron, se concentraron bajo presión reducida, y el residuo resultante se purificó por cromatografía instantánea sobre sílica usando las condiciones anteriores para proporcionar N-(3-etoxi-4-((6S,8R)-7-((1-fluorociclopropilo)metil)-8-metil-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)fenil)-1-(3-fluoropropil)azetidin-3-amina (0.023 g, 40%). 1H RMN (CLOROFORMO-d, 27°C) 0.50 (2H, br d), 0.88 - 1.05 (2H, m), 1.12 (3H, br d), 1.45 (3H, t), 1.75 - 1.87 (2H, m), 2.59 - 2.73 (3H, m), 2.87- 3.04 (3H, m), 3.04 -3.15 (1H, m), 3.41 (1H, br dd), 3.73 - 3.90 (3H, m), 3.93 -4.18 ( 4H, m), 4.52 (2H, dt), 5.37 (1H, br s), 5.99 (1H, dd), 6.13 (1H, br d), 6.80 -6.89 (2H, m), 7.14 (1H, d), 8.06- 8.08 (1H, m), 10.02 (1H, br s). m/z: (ES+), [M+H]+ = 510.

Los procedimientos usados para preparar N-(3-etoxi-4-((6S,8R)-7-((1-fluorociclopropil)metil)-8-metil-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)fenil)azetidin-3-amina se describen a continuación.

Preparación de (1S,3R)-1-(4-bromo-2-etoxifenil)-2-((1-fluorociclopropil)metil)-3,5-dimetil-1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-6-amina

Se añadió 4-bromo-2-etoxibenzaldehído (0.775 g, 3.39 mmol) a una solución de (R)-3-(2-(((1-fluorociclopropil)metil)amino)propil)-2-metilanilina (0.400 g, 1.69 mmol) en AcOH (9 ml) y agua (0.152 g, 8.46 mmol). La reacción se calentó a 80°C durante 18 horas. Después de enfriar, la reacción se concentró bajo presión reducida, y luego el residuo se disolvió en EtOAc y se lavó con NaHCO3 acuoso saturado. Las capas se separaron y la fase orgánica se combinó con ácido clorhídrico acuoso (1 N). Después de agitar la mezcla bifásica durante 30 minutos, las capas se separaron. La capa orgánica se lavó con HCl acuoso (1 N), y las capas acuosas combinadas se extrajeron con EtOAc (x2). Las capas acuosas combinadas se basificaron luego mediante la adición de K2CO3 sólido y se extrajeron con EtOAc (x2). Los extractos orgánicos se combinaron, se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se concentraron bajo presión reducida. El residuo resultante se purificó por cromatografía instantánea sobre sílica, gradiente de elución de acetato de etilo del 10 al 60% en hexanos para proporcionar (1S,3R)-1-(4-bromo-2-etoxifenil)-2-((1-fluorociclopropil)metil)-3,5-dimetil-1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-6-amina (0.48 g, 63%) como un sólido. 1H RMN (400MHz, DMSO-d6, 27°C) 0.40 - 0.59 (2H, m), 0.83 - 0.93 (2H, m), 0.94 (3H, d), 1.35 (3H, t), 1.93 - 1.96 (3H, m), 2.45 - 2.53 (2H, m), 2.80 - 2.93 (2H, m), 3.57 (1H, br d), 4.14 (2H, q), 4.58 (2H, s), 5.15 (1H, s), 6.26 (1H, d), 6.35 (1H, d), 6.86 (1H, d), 6.95 (1H, dd), 7.15 (1H, d). m/z: (ES+), [M+H]+ = 447.

Preparación de (6S,8R)-6-(4-bromo-2-etoxifenil)-7-((1-fluorociclopropil)metil)-8-metil-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina

Se añadió nitrito de sodio (0.039 g, 0.56 mmol) como una solución en agua (0.750 ml) gota a gota a una solución enfriada de (1S,3R)-1-(4-bromo-2-etoxifenil)-2-((1-fluorocidopropil)metil)-3,5-dimetil-1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-6-amina (0.240 g, 0.54 mmol) en ácido propiónico (3.0 mL) a -15°C, y la reacción se mantuvo bajo estas condiciones durante 1 hora. Luego se añadió EtOAc helado (10 ml), seguido de NaHCO3 acuoso saturado (15 ml) en porciones. Una vez que se completó la adición y cesó la evolución de gas, las capas se separaron. La capa orgánica se lavó con NaHCO3 acuoso saturado (x2), y las capas acuosas combinadas se extrajeron con EtOAc (x2). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se concentraron bajo presión reducida. El residuo resultante se purificó por cromatografía instantánea, gradiente de elución de acetato de etilo del 20 al 60% en hexanos, para proporcionar (6S,8R)-6-(4-bromo-2-etoxifenil)-7-((1-fluorociclopropil)metil)-8-metil-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina (0.145 g, 59%) como una goma. 1H RMN (500MHz, DMSO-da, 27°C) 0.45 (1H, br s), 0.57 (1H, br s), 0.83 - 0.98 (2H, m), 1.00 (3H, d), 1.37 (3H, t), 2.54 - 2.63 (1H, m), 2.87- 3.00 (2H, m), 3.27- 3.32 (1H, m), 3.74 (1H, brd), 4.13 -4.23 (2H, m), 5.32 (1H, s), 6.67 (1H, d), 6.94 (1H, s), 6.96-6.99 (1H, m), 7.19 (1H, d), 7.22 (1H, d), 8.06 (1H, s), 12.96 (1H, s). m/z: (ES+), [M+H]+ = 458.

Preparación de (6S,8R)-6-(4-bromo-2-etoxifenil)-7-((1-fluorociclopropil)metil)-8-metil-3-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina

Se añadieron DCM (3 ml) y 3,4-dihidro-2H-pirano (35.8 mg, 0.43 mmol) a un matraz cargado con (6S,8R)-6-(4-bromo-2-etoxifenil)-7-( (1-fluorociclopropil)metil)-8-metil-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina (130 mg, 0.28 mmol) e hidrato de ácido 4-metilbencenosulfónico (10.79 mg, 0.06 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 18 horas. La reacción se lavó con hidrogenocarbonato de sodio acuoso saturado y la capa orgánica se secó sobre sulfato de sodio, se filtró y se concentró bajo presión reducida. La goma de color marrón resultante se purificó por cromatografía instantánea sobre sílica, gradiente de elución de acetato de etilo del 5 al 40% en hexanos, para proporcionar (6S,8R)-6-(4-bromo-2-etoxifenil)-7-((1-fluorociclopropil)metil)-8-metil-3-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina (147 mg, 96%) como una película seca. 1H RMN (500MHz, CLOROFORMO-d, 27°C) 0.42 -0.51 (2H, m), 0.94 - 1.03 (2H, m), 1.07-1.12 (3H, m), 1.49 (3H, t), 1.61 - 1.68 (1H, m), 1.73 - 1.79 (2H, m), 2.02 -2.10 (1H, m), 2.12 -2.20 (1H, m), 2.53 -2.63 (2H, m), 2.93 (1H, dt), 3.10 (1H, ddd), 3.38 - 3.46 (1H, m), 3.65 - 3.77 (1H, m), 3.83 - 3.92 (1H, m), 4.00 - 4.07 (1H, m), 4.12 - 4.19 (2H, m), 5.43 (1H, s), 5.66 (1H, ddd), 6.81 (1H, d), 6.89 -6.93 (1H, m), 6.95 - 7.00 (1H, m), 7.03 - 7.06 (1H, m), 7.25 (1H, dd), 8.03 (1H, s). m/z: (ES+), [M+H]+ = 542.

Preparación de tert-butil 3-((3-etoxi-4-((6S,8R)-7-((1-fluorociclopropil)metil)-8-metil-3-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)fenil)amino)azetidin-1-carboxilato

Se añadió dioxano (2.7 ml) a un matraz cargado con (6S,8R)-6-(4-bromo-2-etoxifenil)-7-((1-fluorociclopropil)metil)-8-metil-3-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina (140 mg, 0.26 mmol), Cs2CO3 (168 mg, 0.52 mmol) y 3-aminoazetidina-1-carboxilato de tert-butilo (67 mg, 0.39 mmol). El matraz de reacción se evacuó y se llenó con N2 (x3). Se añadió el precatalizador de tercera generación BrettPhos (23 mg, 0.030 mmol) y el matraz se evacuó y se llenó con nitrógeno (x3). La reacción se calentó a 90°C durante 1 hora y luego a 90°C durante 44 horas. La reacción se enfrió hasta temperatura ambiente, se filtró y se concentró bajo presión reducida. La goma resultante se purificó por cromatografía instantánea, gradiente de elución de 30 a 100% de acetato de etilo en hexanos, para proporcionar 3-((3-etoxi-4-((6S,8R)-7-((1-fluorocidopropN)metN)-8-metil-3-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il) fenil)amino)azetidin-1-carboxilato de tert-butilo (86 mg, 53%) como una goma. 1H RMN (500MHz, CLOROFORMO-d, 27°C) 0.39 - 0.49 (2H, m), 0.87- 0.95 (2H, m), 1.06 (3H, d), 1.38 - 1.45 (12H, m), 1.57- 1.62 (1H, m), 1.68 - 1.74 (2H, m), 1.98 - 2.06 (1H, m), 2.07- 2.15 (1H, m), 2.49 - 2.63 (2H, m), 2.85 (1H, dt), 3.05 (1H, br t), 3.29 - 3.35 (1H, m), 3.63 - 3.73 (3H, m), 3.75 - 3.83 (1H, m), 3.92 (1H, br d), 3.99 (1H, br d), 4.05 (2H, q), 4.14 (1H, br dd), 4.18 - 4.26 (2H, m), 5.33 (1H, s), 5.58 - 5.63 (1H, m), 5.90 (1H, br d), 6.02 -6,06 (1H, m), 6.76 (1H, dd), 6.80 (1H, d), 7.19 (1H, d), 7.97 (1H, s). m/z: (ES+), [M+H]+ = 634.

Preparación de N-(3-etoxi-4-((6S,8R)-7-((1-fluorociclopropil)metil)-8-metil-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)fenil)azetidin-3-amina

Se añadió metanol (0.5 ml) a un matraz cargado con 3-((3-etoxi-4-((6S,8R)-7-((1-fluorociclopropil)metil)-8-metil-3-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)fenil)amino)azetidina-1-carboxilato de tert-butilo (0.080 g, 0.13 mmol). Se añadió ácido clorhídrico en dioxano (4 M; 0.5 ml, 2 mmol) y se continuó agitando durante 2 horas. Luego, la reacción se concentró bajo presión reducida, y el residuo resultante se purificó usando un cartucho SCX-2 que había sido tratado previamente con metanol, eluyendo primero con metanol y luego con amoníaco en metanol (3N), para proporcionar N-(3 -etoxi-4-((6S,8R)-7-((1-fluorociclopropil)metil)-8-metil-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)fenil)azetidin-3-amina (0.057 g, 99%) como un sólido. 1H RMN (500MHz, CLOROFORMO-d, 27°C) 0.44 - 0.55 (2H, m), 0.90 - 1.00 (2H, m), 1.12 (3H, d), 1.45 (3H, t), 2.61 - 2.71 (1H, m), 2.92 (1H, br dd), 3.10 (1H, br dd), 3.40 (1H, br dd), 3.51 -3.58 (2H, m), 3.83 -3.90 (1H, m), 3.91 -4.02 ( 2H, m), 4.03 -4.16 (3H, m), 4.36 (1H, sxt), 5.38 (1H, s), 5.98 (1H, dd), 6.12 (1H, br d), 6.77-6.89 (2H, m), 7.13 (1H, d), 8.07 (1H, s), 10.09 (1H, br s). Una H no observada y probablemente oscurecida por el pico de agua. m/z: (ES+), [M+H]+ = 450.

Ejemplo 21

Preparación de N-(4-((6S,8R)-7-(2,2-difluoroetil)-8-metil-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)-3-metoxifenil)-1-(3-fluoropropil)azetidin-3-amina

Se añadió gota a gota ácido clorhídrico en dioxano (4 M; 1.23 ml, 5.2 mmol) a una solución agitada de 3-(4-((6S,8R)-7-(2,2-difluoroetil)-8-metil-2-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-6,7,8,9-tetrahidro-2H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)-3-metoxifenilamino)azetidina-1-carboxilato de tert-butilo (316 mg, 0.52 mmol) en MeOH (5 ml). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 18 horas. La reacción se concentró bajo presión reducida, y el residuo resultante se disolvió en MeOH. Se añadió un exceso de resina macroporosa de carbonato de tetraalquilamonio (Aldrich; malla 18 50; carga de 2.5-3.5 mmol/g de N), y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 5 minutos. La mezcla se filtró y el filtrado se secó sobre sulfato de sodio, se filtró y se concentró bajo presión reducida para proporcionar N-(4-((6S,8R)-7-(2,2-difluoroetil)-8-metil-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)-3-metoxifenil)azetidin-3-amina cruda como una goma (220 mg). Este material se usó directamente en la siguiente etapa sin purificación adicional. m/z: (ES+), [M+H]+ = 428.

Una mezcla de N-(4-((6S,8R)-7-(2,2-difluoroetil)-8-metil-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina -6-il)-3-metoxifenil)azetidin-3-amina (220 mg, 0.51 mmol), 1-fluoro-3-yodopropano (106 mg, 0.57 mmol) y DIPEA (0.270 mL, 1.54 mmol) en DMF ( 5 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 18 horas. La reacción se diluyó con DCM y se lavó con cloruro de amonio acuoso saturado. La capa acuosa se extrajo con DCM, y las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se concentraron bajo presión reducida. El residuo resultante se purificó por HPLC preparativa (columna Xbridge C18, 19 mm x 150 mm; 5 ^m; tasa de flujo: 20 ml/min), eluyendo con acetonitrilo del 40 al 80% en agua que contenía hidróxido de amonio al 0.2%. Las fracciones del producto se concentraron bajo presión reducida, y el residuo resultante se purificó mediante SFC preparativa (columna de 2-etilpiridina, 19 mm x 150 mm, 5 ^m; tasa de flujo: 75 ml/min; temperatura de la columna: 40°C; presión de salida: 100 bar), eluyendo con metanol al 15% que contiene hidróxido de amonio al 0.2% en dióxido de carbono, para proporcionar N-(4-((6S,8R)-7-(2,2-difluoroetil)-8-metil-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)-3-metoxifenil)-1-(3-fluoropropil)azetidin-3-amina (82 mg, 33% en dos etapas) como un sólido blanco. 1H RMN (300MHz, DMSo-d6, 27°C) 1.03 (3H, d), 1.55 - 1.74 (2H, m), 2.41 -2.47 (2H, m), 2.53 -2.83 (4H, m), 2.86- 3.04 (1H, m), 3.10 (1H, br dd), 3.32 -3.43 (1H, m), 3.58 - 3.66 (2H, m), 3.82 (3H, s), 3.86- 3.98 (1H, m), 4.45 ( 2H, dt), 5.21 (1H, s), 5.89 (1H, t), 5.90 (1H, dd), 6.01 (1H, d), 6.19 (1H, d), 6.35 (1H, d), 6.67 (1H, d), 7.19 (1H, d), 8.03 (1H, s), 12.92 - 12.96 (1H, m). m/z: ES+ [M+H]+ 488.

El material de partida 3-((4-((6S,8R)-7-(2,2-difluoroetil)-8-metil-2-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)-3-metoxifenil)amino)azetidin-1-carboxilato de tert-butilo fue preparado de acuerdo con los siguientes procedimientos.

Preparación de (6S,8R)-6-(4-bromo-2-metoxifenil)-7-(2,2-difluoroetil)-8-metil-3-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina y (6S,8R)-6-(4-bromo-2-metoxifenil)-7-(2,2-difluoroetil)-8-metil-2-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-6,7,8,9-tetrahidro-2H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina

Se cargó un vial de microondas con (6S,8R)-6-(4-bromo-2-metoxifenil)-7-(2,2-difluoroetil)-8-metil-6,7,8,9-tetrahidro-3H- pirazolo[4,3-f]isoquinolina (986 mg, 2.26 mmol), hidrato de ácido 4-metilbencenosulfónico (43 mg, 0.23 mmol), 3,4-dihidro-2H-pirano (0.31 mL, 3.4 mmol) y DCM. La reacción se calentó a 80°C bajo condiciones de microondas (300 W) durante 20 minutos. La reacción se enfrió y se diluyó con DCM antes de lavarse con hidrogenocarbonato de sodio acuoso saturado. Las capas se separaron y la capa orgánica se secó sobre sulfato de sodio, se filtró y se concentró bajo presión reducida. El residuo resultante se purificó por cromatografía instantánea sobre sílica, gradiente de elución de 0 a 70% de EtOAc en hexanos, para proporcionar elución más rápida (6S,8R)-6-(4-bromo-2-metoxifenil)-7-(2,2-difluoroetil)-8-metil-3-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina (457 mg, 39%) como un sólido de color naranja 1H RMN (300MHz, CLOROFORMO-d, 27°C) 1.04 - 1.22 (3H, m), 1.59 - 1.86 (3H, m), 2.04 - 2.23 (2H, m), 2.53 - 3.31 (5H, m), 3.40 - 3.57 (1H, m), 3.68 - 3.79 (1H, m), 3.97 (3H, s), 4.00 - 4.09 (1H, m), 5.41 (1H, br s), 5.69 (1H, br s), 5.66- 5.73 (1H, m), 6.67 (1H, dd), 6.80 (1H, dd), 6.92 (1H, dd), 7.06- 7.12 (1H, m), 7.29 -7.37 (1H, m), 8.03 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 612. También se aisló eluyendo más lentamente (6S,8R)-6-(4-bromo-2-metoxifenil)-7-(2,2-difluoroetil)-8-metil-2-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-6,7,8,9-tetrahidro-2H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina (627 mg, 57%) como un polvo de color beige. 1H RMN (300MHz, CLOROFORMO-d, 27°C) 1.12 (3H, br d), 1.64 - 1.87 (3H, m), 2.03 - 2.17 (1H, m), 2.18 - 2.29 (2H, m), 2.61 - 2.83 (2H, m), 2.89 - 3.15 (2H, m), 3.43 (1H, br s), 3.75 - 3.86 (1H, m), 3.95 (3H, s), 4.13 - 4.20 (1H, m), 5.32 (1H, s), 5.79 (1H, br t), 5.66- 5.73 (1H, m), 6.63 -6.77 (2H, m), 6.93 (1H, d), 7.09 (1H, d), 7.43 (1H, d), 8.14 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+612.

P re p a ra c ió n d e te r t -b u t i l 3 -(4 -( (6 S ,8 R ) -7 -(2 ,2 -d if lu o ro e t i l) -8 -m e t i l- 2 -( te t ra h id ro -2 H -p ira n -2 - i l) -6 ,7 ,8 ,9 - te tra h id ro -2 H -p ir a z o lo [4 ,3 - f ] is o q u in o lin -6 - il ) -3 -m e to x ife n i la m in o )a z e t id in -1 -c a rb o x ila to

Se cargó un vial de microondas con (6S,8R)-6-(4-bromo-2-metoxifenil)-7-(2,2-difluoroetil)-8-metil-2-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-6,7,8,9-tetrahidro-2H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina (310 mg, 0.60 mmol), 3-aminoazetidina-1-carboxilato de tert-butilo (154 mg, 0.89 mmol), Cs2CO3 (388 mg, 1.19 mmol), y precatalizador de tercera generación BrettPhos (54.0 mg, 0.06 mmol). El vial se desgasificó y se llenó con nitrógeno (x2). El vial se desgasificó nuevamente y se volvió a llenar con 1,4-dioxano (6 ml) y nitrógeno. El vial se desgasificó nuevamente y se volvió a llenar con nitrógeno. La mezcla se calentó bajo condiciones de microondas (300 W, 110°C) durante 3.5 horas. La reacción se diluyó con DCM y se lavó con hidrogenocarboante de sodio acuoso saturado. La capa orgánica se secó sobre sulfato de sodio, se filtró y se concentró bajo presión reducida. El residuo resultante se purificó por cromatografía instantánea sobre sílica, gradiente de elución de EtOAc del 20 al 60% en hexanos, para proporcionar 3-(4-((6S,8R)-7-(2,2-difluoroetil)-8-metil-2-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-6,7,8,9-tetrahidro-2H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)-3-metoxifenilamino)azetidina-1-carboxilato de tert-butilo (322 mg, 88%) como un sólido blanquecino. 1H RMN (300MHz, CLOROFORMO-d, 27°C) 1.08 (3H, br d), 1.39 - 1.43 (9H, m), 1.58 -1.81 (3H, m), 2.06 (1H, br dd), 2.13 - 2.25 (2H, m), 2.58 - 2.71 (1H, m), 2.82 - 3.11 (2H, m), 3.34 - 3.50 (1H, m), 3.66- 3.81 (3H, m), 3.86 (3H, s), 3.90 - 4.01 (1H, m), 4.08 - 4.20 (3H, m), 4.19 -4.29 (2H, m), 5.22 (1H, s), 5.76 (1H, t), 5.64 (1H, t), 5.88 (1H, br d), 6.09 (1H, d), 6.59 (1H, br t), 6.67 (1H, d), 7.37 (1H, br d), 8.08 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 612.

Ejemplo 22

Preparación de (6S,8R)-7-(2,2-difluoroetil)-6-(4-((1-(3-fluoropropil)azetidin-3-il)oxi)-2-metoxifenil)-8-metil-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina

Se añadió HCl en dioxano (4 M; 1.02 ml, 4.08 mmol) gota a gota a una solución agitada de 3-(4-((6S,8R)-7-(2,2-difluoroetil)-8-metil-3-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)-3-metoxifenoxi)azetidina-1-carboxilato de tert-butilo (250 mg, 0.41 mmol) en MeOH (4 ml). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 18 horas. La reacción se concentró luego bajo presión reducida, y el residuo resultante se disolvió con MeOH. Se añadió un exceso de resina macroporosa de carbonato de tetraalquilamonio (Aldrich; malla 18-50; carga de 2.5-3.5 mmol/g N), y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 5 minutos antes de secarse sobre sulfato de sodio, filtrarse y concentrarse bajo presión reducida. para proporcionar (6S,8R)-6-(4-(azetidin-3-iloxi)-2-metoxifenil)-7-(2,2-difluoroetil)-8-metil-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina cruda (179 mg), que se usó directamente en la siguiente etapa sin purificación adicional. m/z: ES+ [M+H]+ 429.

Una mezcla de (6S,8R)-6-(4-(azetidin-3-iloxi)-2-metoxifenil)-7-(2,2-difluoroetil)-8-metil-6,7,8,9- tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina (178 mg, 0.42 mmol), 1-fluoro-3-yodopropano (94 mg, 0.50 mmol) y DIPEA (0.218 ml, 1.25 mmol) en DMF (4 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 18 horas. La reacción se diluyó luego con DCM y se lavó con cloruro de amonio acuoso saturado. Las capas se separaron y la capa acuosa se extrajo con DCM. Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se concentraron bajo presión reducida. El residuo resultante se purificó mediante SFC preparativa (columna de 2-etilpiridina; 19 mm x 150 mm; 5 ^m; tasa de flujo: 75 ml/min; temperatura de columna: 40°C; presión de salida: 100 bar), eluyendo con 15% (metanol que contiene 0.2% de hidróxido de amonio) en dióxido de carbono para proporcionar (6S,8R)-7-(2,2-difluoroetil)-6-(4-((1-(3-fluoropropil)azetidin-3-il)oxi)- 2-metoxifenil)-8-metil-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina (70 mg, 35% en dos etapas) como un sólido blanco. 1H RMN (300MHz, DMSO-d6, 27°C) 1.02 (3H, d), 1.61 - 1.84 (2H, m), 2.55 - 2.84 (3H, m), 2.90 - 3.13 (2H, m), 3.18 - 3.43 (4H, m), 3.87 (3H, s), 3.89 - 4.00 (2H, m), 4.45 (2H, dt), 4.81 (1H, quin), 5.28 (1H, s), 5.74 -6.16 (1H, m), 6.19 (1H, dd), 6.49 -6.54 (2H, m), 6.66 (1H, d), 7.21 (1H, d), 8.04 (1H, s), 12.98 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 489.

Los procedimientos usados para preparar el material de partida tert-butil 3-(4-((6S,8R)-7-(2,2-difluoroetil)-8-metil-3-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)-3-metoxifenoxi)azetidin-1-carboxilato se describen a continuación.

Preparación de tert-butil 3-(4-((6S,8R)-7-(2,2-difluoroetil)-8-metil-3-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)-3-metoxifenoxi)azetidin-1-carboxilato

Se cargó un vial de microondas con (6S,8R)-6-(4-bromo-2-metoxifenil)-7-(2,2-difluoroetil)-8-metil-3-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina (259 mg, 0.50 mmol), 3-hidroxiazetidina-1-carboxilato de tert-butilo (259 mg, 1.49 mmol), carbonato de cesio (324 mg, 1.00 mmol), y Precatalizador de 3a generación RockPhos (42 mg, 0.050 mmol). El vial se evacuó y se volvió a llenar con nitrógeno (x2). Luego se evacuó el vial y se volvió a llenar con tolueno (3 ml). El vial se evacuó y se volvió a llenar con nitrógeno. La mezcla se calentó a 110°C durante 4 horas. La reacción se diluyó con DCM y se lavó con hidrogenocarbonato de sodio acuoso saturado. La capa orgánica se secó sobre sulfato de sodio, se filtró y se concentró bajo presión reducida. El residuo resultante se purificó por cromatografía instantánea sobre sílica, gradiente de elución de 0 a 60% de EtOAc en hexanos para proporcionar 3-(4-((6S,8R)-7-(2,2-difluoroetil)-8-metil-3-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)-3-metoxifenoxi)azetidina-1-carboxilato tert-butilo (220 mg, 72%) como un sólido de espuma blanca. 1H r Mn (400MHz, DMSO-d6, 100°C) 1.03 - 1.09 (3H, m), 1.40 (9H, s), 1.56- 1.64 (2H, m), 1.67- 1.84 (1H, m), 1.93 -2.01 (1H, m), 2.02 -2.12 (1H, m), 2.34 - 2.46 (1H, m), 2.59 - 2.74 (1H, m), 2.84 (1H, dt), 2.93 - 3.06 (1H, m), 3.13 - 3.23 (1H, m), 3.40 -3.50 (1H, m), 3.65 - 3.74 (1H, m), 3.76- 3.84 (2H, m), 3.84 - 3.91 (4H, m), 4.21 - 4.28 (2H, m), 4.97 (1H, tt), 5.33 (1H, s), 5.67-6.00 (1H, m), 5.74 (1H, dd), 6.23 (1H, ddd), 6.54 (1H, d), 6.66 (1H, t), 6.73 (1H, d), 7.35 (1H, d), 8.04 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+613.

Ejemplos 23 y 24

Preparación de diastereoisómeros individuales de 3-((6S,8R)-6-(2,6-difluoro-4-(1-(3-fluoropropil)azetidin-3-ilamino)fenil)-8-metil-8,9-dihidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-7(6H)-il)-2-fluoro-2-metilpropan-1-ol

Se añadió fluoruro de tetrabutilamonio en THF (1 M; 0.114 mL, 0.11 mmol) gota a gota mediante una jeringa a una solución agitada de N-(4-((6S,8R)-7-(3-((tert-butildifenilsilil)oxi)-2-fluoro-2-metilpropil)-8-metil-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)-3,5-difluorofenil)-1-( 3-fluoropropil)azetidin-3-amina (82 mg, 0.08 mmol) en THF (0.75 mL). Después de 2.5 horas, se añadió fluoruro de tetrabutilamonio adicional en THF (1 M; 0.08 ml, 0.08 mmol) y la reacción se agitó durante 18 horas más. La reacción se diluyó con DCM y se lavó sucesivamente con NaHCO3 acuoso saturado y cloruro de sodio acuoso saturado, se secó sobre MgSO4, se filtró y se concentró bajo presión reducida. El residuo resultante se purificó por cromatografía instantánea sobre sílica, gradiente de elución de 0.5 a 10% de MeOH en DCM. Las fracciones del producto se concentraron bajo presión reducida y el residuo resultante se purificó adicionalmente por HPLC preparativa (columna Waters XBridge Prep C18 OBD, sílica de 5 ^m, 19 mm de diámetro, 150 mm de longitud), usando un gradiente de elución de acetonitrilo del 45 al 85% en (agua que contiene 0.2% de NH4OH). Las fracciones del producto se concentraron bajo presión reducida para proporcionar el primer isómero eluyente 1 (2.7 mg, 7%) y el segundo isómero eluyente (2.1 mg, 5%) de 3-((6S,8R)-6-(2,6-difluoro-4-(1-(3-fluoropropil)azetidin-3-ilamino) fenil)-8-metil-8,9-dihidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-7 (6H)-il)-2 -fluoro-2-metilpropan-1 -ol como películas de color amarillo pálido.

Isómero 1:1H RMN (500 MHz, CDsCb, 27°C) 1.13 (3H, d), 1.17 (3H, d), 1.66- 1.78 (3H, m), 2.54 (2H, t), 2.69 (1H, dd), 2.81 - 2.94 (3H, m), 3.00 (1H, dd), 3.31 (1H, dd), 3.51 - 3.59 (1H, m), 3.60 - 3.71 (4H, m), 3.95 - 4.03 (1H, m), 4.38 (1H, br s), 4.46 (2H, dt), 5.26 (1H, s), 6.01 (2H, br d), 6.84 (1H, d), 7.21 (1H, d), 8.03 (1H, s), 10.19 (1H, br s). m/z: ES+ [M+H]+ 520.

Isómero 2: 1H RMN (500 MHz, CD2Ch, 27°C) 1.05 (3H, d), 1.09 (3H, d), 1.65 - 1.80 (2H, m), 2.54 (2H, t), 2.62 (1H, dd), 2.83 - 2.88 (2H, m), 2.91 - 3.00 (1H, m), 3.13 - 3.24 (1H, m), 3.33 - 3.46 (2H, m), 3.48 - 3.58 (1H, m), 3.66 (2H, q), 3.96- 4.04 (2H, m), 4.40 (1H, dt), 4.41 - 4.53 (2H, m), 4.64 (1H, br d), 5.03 (1H, s), 6.06 (2H, br d), 6.76 (1H, d), 7.19 (1H, d), 8.03 (1H, s), 10.19 (1H, br s). m/z: ES+ [M+H]+ 520.

Los procedimientos usados para preparar el material de partida N-(4-((6S,8R)-7-(3-((tert-butildifenilsilil)oxi)-2-fluoro-2-metilpropil)-8-metil-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)-3,5-difluorofenil)-1-(3-fluoropropil)azetidin-3-amina se describen a continuación.

Preparación de dimetil 2-fluoro-2-metil-propanodioato

Se añadió hidruro de sodio (dispersión al 60% en aceite mineral; 2.93 g, 73.3 mmol) a una solución de 2-fluoromalonato de dimetilo (10.0 g, 66.6 mmol) en THF (218 ml) con agitación vigorosa. Después de 30 minutos, se añadió yodometano (4.56 ml, 73.3 mmol). La reacción se agitó durante 3 horas más. La reacción se inactivó con agua y luego se extrajo con EtOAc (4 x 100 ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron bajo presión reducida para proporcionar 2-fluoro-2-metilpropanodioato de dimetilo (8.4 g, 77%) como un aceite de color naranja. 1H RMN (300 MHz, DMSO-d6, 27°C) 1.72 (3H, d), 3.77 (6H, s).

Preparación de 2-fluoro-2-metilpropano-1,3-diol

H O ^ ^ ^ O H

Se añadió hidruro de litio y aluminio (4.50 g, 112.6 mmol) en porciones a una solución agitada de 2-fluoro-2-metilpropanodioato de dimetilo (8.40 g, 51.2 mmol) en THF (205 ml) a 0°C. La reacción se calentó hasta temperatura ambiente y se agitó en estas condiciones durante 1 hora. La mezcla de reacción se enfrió luego hasta 0°C y se inactivó cuidadosamente mediante la adición secuencial gota a gota de agua (5.85 ml), NaOH acuoso al 15% en peso (5.85 ml) y agua (18 ml). La suspensión gelatinosa resultante se agitó rápidamente durante 1 hora. El precipitado se eliminó por filtración, y el filtrado se concentró bajo presión reducida. El residuo resultante se disolvió en una mezcla de CHCl3/IPA (3: 1), se secó sobre Na2SO4, se filtró y se concentró bajo presión reducida para proporcionar 2-fluoro-2-metilpropano-1,3-diol (3.28 g, 46%) como un aceite de color naranja. Este aceite se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional. 1H RMN (300 MHz, DMSO-d6, 27°C) 1.18 (3H, d), 3.42 (4H, dd), 4.80 (2H, t).

Preparación de 3-((tert-butildifenilsilil)oxi)-2-fluoro-2-metilpropan-1-ol

Se añadió hidruro de sodio (dispersión al 60% en aceite mineral; 1.1 g, 27.5 mmol) a una solución agitada de 2-fluoro-2-metilpropano-1,3-diol (2.7 g, 25 mmol) en THF (93 ml) a 0°C y la reacción se agitó durante 1 hora. Se añadió tertbutilclorodifenilsilano (6.5 ml, 25 mmol) y la reacción se agitó durante 1 hora adicional. La reacción se inactivó con agua, las capas se separaron y la capa acuosa se extrajo con EtOAc (2 x 100 ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se adsorbieron sobre sílica gel bajo presión reducida. La purificación por cromatografía instantánea sobre sílica, gradiente de elución de 0 a 50% de EtOAc en hexanos, proporcionó 3-((tertbutildifenilsilil)oxi)-2-fluoro-2-metilpropan-1-ol (4.4 g, 51%) como una goma transparente. 1H Rm N (300 MHz, d Ms Od6, 27°C) 1.00 (9H, s), 1.27 (3H, d), 3.48 (1H, dd), 3.53 (1H, dd), 3.66 (1H, d), 3.73 (1H, br s), 4.93 (1H, t), 7.40 - 7.48 (6H, m), 7.59 - 7.66 (4H, m). m/z: ES+ [M+H]+ 347.

Preparación de trifluorometanosulfonato de 3-((tert-butildifenilsilil)oxi)-2-fluoro-2-metilpropilo

Se añadió anhídrido trifluorometanosulfónico (1.3 ml, 7.6 mmol) gota a gota a una solución agitada de 3-((tertbutildifenilsilil)oxi)-2-fluoro-2-metilpropan-1-ol (2.2 g, 6.35 mmol) y 2,6-dimetilpiridina (1.28 ml, 7.6 mmol) en Dc M (22 ml) a -10°C (baño de sal/hielo). La reacción se mantuvo bajo estas condiciones durante 1.5 horas. La reacción se diluyó luego con DCM (100 ml) y se lavó sucesivamente con HCl acuoso (1 N), NaHCO3 acuoso saturado y NaCl acuoso saturado. La capa orgánica se secó sobre Na2SO4, se filtró y se concentró bajo presión reducida para proporcionar trifluorometanosulfonato de 3-((tert-butildifenilsilil)oxi)-2-fluoro-2-metilpropil (3.2 g) como un aceite de color rojo. Este aceite se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional.

Preparación de una mezcla diastereoisomérica de 3-((2R)-2-((3-((tert-butildifenilsilil)oxi)-2-fluoro-2-metilpropil)amino)propil)-2-metilanilina

Se añadió trifluorometanosulfonato de 3-((tert-butildifenilsilil)oxi)-2-fluoro-2-metilpropilo (3.04 g, 6.35 mmol) a una solución de (R)-3-(2-aminopropil)-2-metilanilina (1.04 g, 6.35 mmol) y diisopropiletilamina (1.65 ml, 9.53 mmol) en 1,4-dioxano (24 ml). La reacción se calentó a 85°C durante 18 horas. Después de enfriar, la reacción se diluyó con DCM (250 ml) y se lavó con agua. La capa acuosa se extrajo con DCM (2 x 100 ml), y las fases orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron bajo presión reducida. El residuo resultante se purificó por cromatografía instantánea sobre sílica, gradiente de elución de 0 a 25% de MeOH en DCM. Las fracciones del producto se concentraron bajo presión reducida para proporcionar 3-((2R)-2-((3-((tert-butildifenilsilil)oxi)-2-fluoro-2-metilpropil)amino)propil)-2-metilanilina (2.10 g, 95%) como una goma. 1H r Mn (300 MHz, DMSO-d6, 27°C) 0.90 (3H, dd), 1.01 (9H, d), 1.29 (3H, dd), 1.41 (1H, br s), 1.97 (3H, d), 2.29 - 2.43 (1H, m), 2.65 - 2.91 (4H, m), 3.62 - 3.82 (2H, m), 4.67 (2H, s), 6.28 -6.36 (1H, m), 6.47 (1H, dd), 6.69 -6.81 (1H, m), 7.40 - 7.52 (6H, m), 7.61 - 7.69 (4H, m). m/z: ES+ [M+H]+ 494.

Preparación de una mezcla diastereoisomérica de (1S,3R)-1-(4-bromo-2,6-difluorofenil)-2-(3-((tert-butildifenilsilil)oxi)-2-fluoro-2-metilpropil)-3,5-dimetil-1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-6-amina

Se añadió 4-bromo-2,6-difluorobenzaldehído (628 mg, 2.84 mmol) a una solución agitada de 3-((2R)-2-((3-((tertbutildifenilsilil)oxi)-2-fluoro-2 -metilpropil)amino)propil)-2-metilanilina (700 mg, 1.42 mmol) y agua (0.128 ml, 7.10 mmol) en una mezcla de ácido acético (10 ml) y tolueno (4 ml). La reacción se calentó a 90°C durante 18 horas antes de calentarse bajo condiciones de reflujo durante otras 4 horas. La reacción se dejó enfriar y se concentró bajo presión reducida. El residuo resultante se disolvió en DCM y se lavó con NaHCO3 acuoso saturado. La fase acuosa se extrajo con DCM (20 ml) y las capas orgánicas combinadas se concentraron bajo presión reducida. El residuo se disolvió en una mezcla de MeOH/DCM (5: 1, 18 ml) y luego se añadieron hidrocloruro de hidroxilamina (148 mg, 2.13 mmol) y acetato de sodio (233 mg, 2.84 mmol). La mezcla se agitó a 35°C durante 5 minutos y luego se concentró bajo presión reducida. El residuo resultante se disolvió en EtOAc y se lavó secuencialmente con NaHCO3 acuoso saturado y NaCl acuoso saturado antes de secarse sobre MgSO4, se filtró y concentró bajo presión reducida. El residuo resultante se purificó por cromatografía instantánea sobre sílica, gradiente de elución de 0 a 35% de EtOAc en hexanos para proporcionar (1S,3R)-1-(4-bromo-2,6-difluorofenil)-2-(3-((tert- butildifenilsilil)oxi)-2-fluoro-2-metilpropil)-3,5-dimetil-1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-6-amina (339 mg, 34%) como una película de color amarillo pálido. 1H RMN (500 MHz, CDCl3, 27°C) 1.05 (9H, d), 1.19 (3H, dd), 2.08 (3H, s), 2.35 (1H, dd), 2.47- 2.67 (2H, m), 2.84 - 3.01 (1H, m), 3.02 3.14 (1H, m), 3.22 (1H, dd), 3.40 - 3.63 (3H, m), 3.66- 3.79 (1H, m), 3.92 (1H, dd), 5.15 (1H, d), 6.38 -6.47 (2H, m), 6.83 (1H, d), 6.93 - 7.00 (1H, m), 7.38 - 7.49 (6H, m), 7.59 - 7.71 (4H, m), 8.69 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 695.

Preparación de una mezcla diastereoisomérica de (6S,8R)-6-(4-bromo-2,6-difluorofenil)-7-(3-((tert-butildifenilsilil)oxi)-2-fluoro-2-metilpropil)-8-metil-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina

Se añadió nitrito de sodio (33.6 mg, 0.49 mmol) como una solución en agua (0.400 ml) gota a gota a una solución enfriada de (1S,3R)-1-(4-bromo-2,6-difluorofenil)-2-(3-((tert-butildifenilsilil)oxi)-2-fluoro-2-metilpropil)-3,5-dimetil-1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-6-amina (339 mg, 0.49 mmol) en ácido propiónico (4 mL) a -20°C, y la reacción se agitó durante 30 minutos bajo estas condiciones. Se añadió EtOAc helado (20 ml) seguido de la adición en porciones de NaHCO3 acuoso saturado (5 ml). La mezcla bifásica se agitó vigorosamente y se neutralizó mediante la adición lenta de Na2CO3 sólido. Las fases se separaron y las capas orgánicas se lavaron con NaHCO3 acuoso saturado (2 x 30 ml) y NaCl acuoso saturado (30 ml) antes de secarse sobre MgSO4, filtrarse y concentrarse bajo presión reducida. El residuo resultante se purificó por cromatografía instantánea sobre sílica, gradiente de elución de 0 a 40% de EtOAc en hexanos, para proporcionar (6S,8R)-6-(4-bromo-2,6-difluorofenil)-7-(3-((tert -butildifenilsilil)oxi)-2-fluoro-2-metilpropil)-8-metil-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina (206 mg, 60%) como sólido de color amarillo pálido. 1H RMN (500 MHz, CDCl3, 27°C) 0.98 (4.5H, s), 1.00 (1.5H, d), 1.02 (1.5H, d), 1.04 (4.5H, s), 1.15 (1.5H, d), 1.23 (1.5H, d), 2.30 - 2.47 (0.5H, m), 2.60 (0.5H, dd), 2.81 (0.5H, dd), 2.89 (0.5H, dd), 3.02 (0.5H, dd), 3.06- 3.21 (1H, m), 3.22 - 3.33 (0.5H, m), 3.37- 3.51 (1H, m), 3.51 - 3.60 (0.5H, m), 3.61 - 3.72 (0.5H, m), 3.73 - 3.83 (0.5H, m), 3.89 (0.5H, dd), 5.22 (0.5H, s), 5.27 (0.5H, s), 6.70 (1H, dd), 6.81 (1H, br d), 6.91 - 7.00 (1H, m), 7.14 (1H, t), 7.33 - 7.47 (6H, m), 7.55 - 7.67 (4H, m), 8.07 (1H, br d). Indazol NH no observado. m/z: ES+ [M+H]+ 706.

Preparación de una mezcla diastereoisomérica de (6S,8R)-6-(4-bromo-2,6-difluorofenil)-7-(3-((tert-butildifenilsilil)oxi)-2-fluoro-2-metilpropil)-8-metil-3-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina

Se añadieron 3,4-dihidro-2H-pirano (0.129 ml, 1.41 mmol) y monohidrato de ácido para-toluenosulfónico (2.7 mg, 0.01 mmol) a una solución agitada de (6S,8R)-6-(4-bromo-2, 6-difluorofenil)-7-(3-((tert-butildifenilsilil)oxi)-2-fluoro-2-metilpropil)-8-metil-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3 -f]isoquinolina (200 mg, 0.28 mmol) en DCM (2 ml). La reacción se calentó a 45°C durante 21 horas. La reacción se dejó enfriar y luego se diluyó con DCM, se lavó con NaHCO3 acuoso saturado, se secó sobre MgSO4, se filtró y se concentró bajo presión reducida. El residuo resultante se purificó por cromatografía instantánea sobre sílica, gradiente de elución de EtOAc del 5 al 30% en hexanos, para proporcionar (6S,8R)-6-(4-bromo-2,6-difluorofenil)-7-(3-((tert-butildifenilsilil)oxi)-2-fluoro-2-metilpropil)-8-metil-3-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina (176 mg, 79%) como una película incolora. m/z: ES+ [M+H]+ 790.

Preparación de una mezcla diastereoisomérica de tert-butil 3-((4-((6S,8R)-7-(3-((tert-butildifenilsilil)oxi)-2-fluoro-2-metilpropil)-8-metil-3-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)-3,5-difluorofenil)amino)azetidin-1-carboxilato

Se cargó un vial con una barra agitadora, (6S,8R)-6-(4-bromo-2,6-difluorofenil)-7-(3-((tert-butildifenilsilil)oxi)-2-fluoro-2- metilpropil)-8-metil-3-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina (126 mg, 0.16 mmol), 3- aminoazetidina-1-carboxilato de tert-butilo (41 mg, 0.24 mmol), Pd2dba3 (9.3 mg, 0.01 mmol), 4,5-bis(difenilfosfino)-9,9-dimetilxanteno (Xantphos) (16 mg, 0.02 mmol) y carbonato de cesio (156 mg, 0.48 mmol). El vial se selló, se evacuó y se rellenó con nitrógeno (3x) antes de la adición de 1,4-dioxano (1 ml) mediante una jeringa. La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 2 minutos y luego se calentó a 90°C durante 16 horas. La mezcla se dejó enfriar y luego se diluyó con EtOAc, se filtró a través de tierra de diatomeas y se concentró bajo presión reducida. El residuo resultante se purificó por cromatografía instantánea sobre sílica, gradiente de elución de 0 a 40% de EtOAc en hexanos, para proporcionar 3-((4-((6S,8R)-7-(3-((tert-butildifenilsilil)oxi)-2-fluoro-2-metilpropil)-8-metil-3-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina -6-il)-3,5-difluorofenil)amino)azetidina-1-carboxilato de tert-butilo (95 mg, 68%) como un sólido de color amarillo pálido. m/z: ES+ [M+H]+ 883.

Preparación de una mezcla diastereoisomérica de N-(4-((6S,8R)-7-(3-((tert-butildifenilsilil)oxi)-2-fluoro-2-metilpropil)-8-metil-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)-3,5-difluorofenil)azetidin-3-amina

Se añadió ácido fórmico (0.5 ml, 13.04 mmol) a 3-((4-((6S,8R)-7-(3-((tert-butildifenilsilil)oxi)-2-fluoro-2-metilpropil)-8-metil-3-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)-3,5- difluorofenil)amino)azetidina-1-carboxilato de tert-butilo (53 mg, 0.06 mmol) y la solución resultante se agitó a temperatura ambiente durante 18 horas. La reacción se concentró bajo presión reducida, y el residuo resultante se disolvió en THF (0.5 ml) y se trató con NaOH acuoso (5N; 0.081 ml, 2.40 mmol). La mezcla se agitó a 30°C durante 20 horas y luego se mantuvo a 40°C durante 4 horas. Se añadió NaOH acuoso adicional (5N; 0.081 ml, 2.40 mmol), y la reacción se agitó a 40°C durante 46 horas antes de calentarse a 55°C durante 5 horas. La mezcla de reacción se dejó enfriar hasta temperatura ambiente. Mientras tanto, en un vial separado, se añadió HCl en dioxano (4N; 0.38 ml, 1.5 mmol) a una solución agitada de 3-((4-((6S,8R)-7-(3-((tert-butildifenilsilil)oxi)-2-fluoro-2-metilpropil)-8-metil-3-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)-3,5-difluorofenil)amino)azetidina-1-carboxilato de tert-butilo (89 mg, 0.10 mmol) en MeOH (0.5 ml). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 5 horas y luego se concentró bajo presión reducida. El residuo resultante se combinó con la reacción previa (como una mezcla en NaOH acuoso (5 N) y THF). La nueva mezcla se diluyó con DCM (5 ml), las fases se separaron y la fase acuosa se extrajo con DCM (2 x 5 ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre MgSO4, se filtraron y se concentraron bajo presión reducida para proporcionar N-(4-((6S,8R)-7-(3-((tert-butildifenilsilil)oxi)-2-fluoro-2-metilpropil)-8-metil-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)-3,5-difluorofenil)azetidin-3-amina (177 mg) como sólido de color amarillo pálido, que se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional. m/z: ES+ [M+H]+ 698.

Preparación de una mezcla diastereoisomérica de N-(4-((6S,8R)-7-(3-((tert-butildifenilsilil)oxi)-2-fluoro-2-metilpropil)-8-metil-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)-3,5-difluorofenil)-1-(3-fluoropropil)azetidin-3-amina

Se añadió 1-fluoro-3-yodopropano (0.026 ml, 0.16 mmol) a una solución agitada de N-(4-((6S,8R)-7-(3-(((tertbutildifenilsilil)oxi)-2-fluoro-2-metilpropil)-8-metil-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)-3,5-difluorofenil)azetidin-3-amina (115 mg, 0.16 mmol) y diisopropiletilamina (0.058 ml, 0.33 mmol) en NMP (0.75 ml). La reacción se agitó durante 16 horas a temperatura ambiente antes de diluirse con EtOAc y se lavó con NaHCO3 acuoso saturado. Las capas se separaron y la capa acuosa se extrajo con EtOAc. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con NaCl acuoso saturado (2 x 5 ml), se secaron sobre MgSO4, se filtraron y se concentraron bajo presión reducida. El residuo resultante se purificó por cromatografía instantánea sobre sílica, gradiente de elución de 1 a 20% de MeOH en DCM para proporcionar N-(4-((6S,8R)-7-(3-((tert-butildifenilsilil)oxi)-2-fluoro -2-metilpropil)-8-metil-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)-3,5-difluorofenil)-1-(3-fluoropropil)azetidin-3-amina (82 mg, 66%) como una película de color amarillo pálido. m/z: ES+ [M+H]+ 758.

Ejemplo 25

Preparación de 6-((6S,8R)-7-(2,2-difluoroetil)-8-metil-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)-N-(1-(3-fluoropropil)azetidin-3-il)piridin-3-amina

Se añadió HCl en dioxano (4N; 0.86 ml, 3.4 mmol) gota a gota a una solución de 3-((6-((6S,8R)-7-(2,2-difluoroetil)-8-metil-3-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)piridin-3-il)amino)azetidina-1-carboxilato de tert-butilo (0.20 g, 0.34 mmol) en MeOH (2.5 ml), y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas. La reacción se concentró bajo presión reducida para proporcionar N-(azetidin-3-il)-6-((6S,8R)-7-(2,2-difluoroetil)-8-metil-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)piridin-3-amina hidrocloruro (200 mg) como un sólido. m/z: (ES+), [M+H]+ 399.

DMF (0.5 mL) y 1-fluoro-3-yodopropano (0.036 mL, 0.34 mmol) se agregaron secuencialmente a temperatura ambiente. Luego se añadió gota a gota exceso de diisopropiletilamina (1.2 ml, 6.80 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 18 horas y luego se concentró bajo presión reducida. El residuo resultante se purificó por cromatografía instantánea C18 en fase reversa, gradiente de elución de acetonitrilo del 20 al 75% en (agua que contenía NH4OH al 0.2%), para proporcionar 6-((6S,8R)-7-(2,2-difluoroetil)-8 -metil-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)-N-(1-(3-fluoropropil)azetidin-3-il)piridin-3- amina (45 mg, 29%) como un sólido. 1H Rm N (500 Mh z , DMSO-da, 27°C) 1.04 (3H, d), 1.60 - 1.75 (2H, m), 2.51 -2.70 (3H, m), 2.79 -2.96 (3H, m), 3.03 ( 1H, dd), 3.13 (1H, br dd), 3.41 - 3.53 (1H, m), 3.74 (2H, br s), 3.98 (1H, br d), 4.45 (2H, dt), 4.86 (1H, s), 5.83 (1H, tt), 6.26 (1H, d), 6.74 (1H, d), 6.81 (1H, dd), 6.96 (1H, d), 7.18 (1H, d), 7.76 (1H, d), 8.04 (1H, s), 12.95 (1H, s). m/z: (ES+), [M+H]+459.

Los procedimientos usados para preparar el material de partida tert-butil 3-((6-((6S,8R)-7-(2,2-difluoroetil)-8-metil-3-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)piridin-3-il)amino)azetidin-1-carboxilato se describen a continuación.

Preparación de (1S,3R)-1-(5-bromopiridin-2-il)-2-(2,2-difluoroetil)-3,5-dimetil-1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-6-amina

Se añadió 5-bromopicolinaldehído (2.74 g, 14.7 mmol) a una solución de (R)-3-(2-((2,2-difluoroetil)amino)propil)-2-metilanilina (1.6 g, 7.0 mmol) en acético ácido (34.4 ml) y agua (0.631 ml, 35.0 mmol). La reacción se calentó a 80°C durante 3 horas y luego se concentró bajo presión reducida. El residuo resultante se disolvió en MeOH (40 ml) y se añadieron acetato de sodio (1.15 g, 14.0 mmol) y clorhidrato de hidroxilamina (0.730 g, 10.5 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 3 horas y luego se concentró bajo presión reducida. El residuo se disolvió en agua, se neutralizó con NaHCO3 acuoso saturado y luego se extrajo con EtOAc. Las capas orgánicas combinadas se concentraron bajo presión reducida, y el residuo resultante se purificó por cromatografía instantánea sobre sílica, gradiente de elución de 0 a 90% de EtOAc en hexanos. Las fracciones del producto se concentraron bajo presión reducida, y el residuo resultante se purificó adicionalmente por cromatografía instantánea sobre sílica, gradiente de elución de 0 a 90% de EtOAc en hexanos, para proporcionar (1S,3R)-1-(5-bromopiridin-2-il)- 2-(2,2-difluoroetil)-3,5-dimetil-1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-6-amina (1.40 g, 49%) como una goma. 1H Rm N (300 MHz, DMSO-d6, 27°C) 0.99 (3H, d), 1.93 (3H, s), 2.38 -2.47 (1H, m), 2.51 -2.62 (1H, m), 2.72 (1H, dd), 2.92 - 3.14 (1H, m), 3.23 - 3.29 (1H, m), 4.65 (2H, s), 4.79 (1H, s), 5.98 (1H, tt), 6.39 (2H, s), 7.22 (1H, d), 7.91 (1H, dd), 8.55 (1H, d). m/z: ES+ [M+H]+ 396.

Preparación de (6S,8R)-6-(5-bromopiridin-2-il)-7-(2,2-difluoroetil)-8-metil-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina

Se añadió ácido acético (541 mg, 9.01 mmol) a una solución agitada de (1S,3R)-1-(5-bromopiridin-2-il)-2-(2,2-difluoroetil)-3,5-dimetil- 1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-6-amina (714 mg, 1.80 mmol) en CHCh (8 ml). La reacción se enfrió hasta 0°C y se añadió gota a gota una solución de nitrito de isopentilo (422 mg, 3.60 mmol) en CHCI3 (1 ml). La reacción se agitó a 0°C durante 2 horas y luego se inactivó mediante la adición lenta de una solución de NaHCO3 (1.5 g, 18 mmol) en agua (20 ml). Las fases se separaron y la capa orgánica se concentró bajo presión reducida. El residuo resultante se purificó por cromatografía instantánea sobre sílica, gradiente de elución de EtOAc del 5 al 35% en hexanos, para proporcionar (6S,8R)-6-(5-bromopiridin-2-il)-7-(2,2-difluoroetil)-8-metil-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina (438 mg, 60%) como un sólido de color marrón claro. 1H Rm N (300 MHz, CDCl3, 27°C) 1.13 (3H, d), 2.68 - 2.85 (1H, m), 2.91 (1H, dd), 2.98 - 3.17 (1H, m), 3.34 (1H, dd), 3.47- 3.63 (1H, m), 5.05 (1H, s), 5.63 (1H, tt), 6.87 (1H, d), 7.19 (1H, d), 7.28 (1H, d), 7.71 (1H, dd), 8.04 (1H, d), 8.57 (1H, dd). Indazol NH no observado. m/z: ES+ [M+H]+ 405.

Preparación de (6S,8R)-6-(5-bromopiridin-2-il)-7-(2,2-difluoroetil)-8-metil-3-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina

Se añadió 3,4-dihidro-2H-pirano (0.294 ml, 3.23 mmol) a una solución de (6S,8R)-6-(5-bromopiridin-2-il)-7-(2,2-difluoroetil)-8-metil-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina (438 mg, 1.08 mmol) y monohidrato de ácido paratoluenosulfónico (21 mg, 0.11 mmol) en DCM (4 mL) La reacción se calentó a 100°C durante 6 horas bajo condiciones de microondas (300 W). Luego se dejó enfriar la reacción y luego se lavó con NaHCO3 acuoso saturado, se secó sobre Na2SO4, se filtró y se concentró bajo presión reducida. El residuo resultante se purificó por cromatografía instantánea sobre sílica, gradiente de elución de EtOAc del 10 al 30% en hexanos, para proporcionar (6S,8R)-6-(5-bromopiridin-2-il)-7-(2,2-difluoroetil)-8-metil-3-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina (441 mg, 83%) como un sólido gomoso de color marrón claro m/z: ES+ [M+H]+ 491.

Preparación de tert-butil 3-((6-((6S,8R)-7-(2,2-difluoroetil)-8-metil-3-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)piridin-3-il)amino)azetidin-1-carboxilato

Se cargó un vial con una barra agitadora, (6S,8R)-6-(5-bromopiridin-2-il)-7-(2,2-difluoroetil)-8-metil-3-(tetrahidro-2H-piran- 2-il)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina (0.22 g, 0.44 mmol), 3-aminoazetidina-1-carboxilato de tertbutilo (0.151 g, 0.88 mmol), carbonato de cesio (0.29 g, 0.88 mmol) y precatalizador de tercera generación BrettPhos (0.040 g, 0.040 mmol). El vial se selló, se evacuó y se llenó con nitrógeno. Se añadió 1,4-dioxano (4 ml), y el vial se evacuó nuevamente y se volvió a llenar con nitrógeno. La reacción se agitó a 110°C durante 13 horas y luego se concentró bajo presión reducida. El residuo resultante se purificó por cromatografía instantánea sobre sílica, gradiente de elución de EtOAc del 10 al 30% en hexanos, para proporcionar 3-((6-((6S,8R)-7-(2,2-difluoroetil)-8- metil-3-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)piridin-3-il)amino)azetidina-1-carboxilato de tert-butilo (0.20 g, 78%) como un sólido de color beige. 1H RMN (300 MHz, CD3OD, 27°C) 1.10 (3H, dd), 1.43 (9H, s), 1.56- 1.72 (2H, m), 1.72 - 1.87 (1H, m), 1.92 - 1.99 (1H, m), 2.03 - 2.17 (1H, m), 2.38 - 2.53 (1H, m), 2.62 - 2.82 (1H, m), 2.88 - 3.14 (2H, m), 3.33 - 3.44 (1H, m), 3.49 - 3.60 (1H, m), 3.67- 3.83 (3H, m), 3.92 - 4.02 (1H, m), 4.17 4.33 (3H, m), 4.91 (1H, s), 5.34 - 5.57 (1H, m), 5.69 - 5.77 (1H, m), 6.79 (1H, d), 6.89 (1H, dd), 7.05 (1H, dd), 7.34 (1H, d), 7.78 - 7.81 (1H, m), 8.07 (1H, s), anilina NH, no observada. m/z: ES+ [M+H]+ 583.

Ejemplo 26

Preparación de (6S,8R)-7-(2,2-difluoroetil)-6-(5-((1-(3-fluoropropil)azetidin-3-il)oxi)piridin-2-il)-8-metil-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina

Se añadió HCl en dioxano (4N; 0.97 ml, 3.9 mmol) gota a gota a una solución de 3-((6-((6S,8R)-7-(2,2-difluoroetil)-8-metil-3-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)piridin-3-il)oxi)azetidina-1-carboxilato de tert-butilo (0.227 g, 0.39 mmol) en MeOH (3 mL), y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 18 horas. La reacción se concentró bajo presión reducida para proporcionar clorhidrato de (6S,8R)-6-(5-(azetidin-3-iloxi)piridin-2-il)-7-(2,2-difluoroetil)-8-metil-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina (0.235 g; número de equivalentes de HCl no determinado) como un sólido, que se usó sin purificación adicional. m/z: (ES+), [M+H]+ 400.

Se añadió 1-fluoro-3-yodopropano (0.041 ml, 0.34 mmol) a una solución agitada de clorhidrato de (6S,8R)-6-(5-(azetidin-3-iloxi)piridin-2-il)-7-(2,2-difluoroetil)-8-metil-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina (235 mg) en DMF (0.6 ml) a temperatura ambiente. Se añadió gota a gota exceso de diisopropiletilamina (1.36 ml, 7.80 mmol). La reacción se agitó durante 18 horas a temperatura ambiente y luego se concentró bajo presión reducida. El residuo resultante se purificó por cromatografía instantánea C18 en fase reversa, gradiente de elución de acetonitrilo al 20 al 75% (agua que contenía NH4OH al 0.2%). Las fracciones del producto se combinaron y liofilizaron para proporcionar (6S,8R)-7-(2,2-difluoroetil)-6-(5-((1-(3-fluoropropil)azetidin-3-il)oxi)piridin-2-il)-8-metil-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina (53 mg, 30%) como un sólido. 1H RMN (500 MHz, DMSO-d6, 27°C) 1.05 (3H, d), 1.60 -1.77 (2H, m), 2.54 - 2.70 (3H, m), 2.85 (1H, dd), 2.97- 3.22 ( 4H, m), 3.39 - 3.50 (1H, m), 3.87 (2H, br s), 4.45 (2H, dt), 4.80 - 4.92 (1H, m), 5.00 (1H, s), 5.93 (1H, tt), 6.78 (1H, d), 7.19 - 7.26 (3H, m), 8.05 (1H, s), 8.06 (1H, d), 12.97 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 460.

Los procedimientos usados para preparar el material de partida tert-butil 3-((6-((6S,8R)-7-(2,2-difluoroetil)-8-metil-3-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)piridin-3-il)oxi)azetidin-1-carboxilato se describen a continuación.

Preparación de tert-butil 3-((6-((6S,8R)-7-(2,2-difluoroetil)-8-metil-3-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)piridin-3-il)oxi)azetidin-1 -carboxilato

3-hidroxiazetidina-1-carboxilato de tert-butilo (227 mg, 1.31 mmol), (6S,8R)-6-(5-bromopiridin-2-il)-7-(2,2-difluoroetil)-8-metil- 3-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina (215 mg, 0.44 mmol), precalentador de tercera generación RockPhos (37.1 mg, 0.04 mmol) y carbonato de cesio (285 mg, 0.88 mmol) se suspendieron en tolueno (4 ml) en un vial de microondas sellado. La reacción se calentó a 110°C durante 1 hora bajo condiciones de microondas (300 W). La reacción se concentró bajo presión reducida, y el residuo resultante se purificó por cromatografía instantánea sobre sílica, gradiente de elución de EtOAc del 20 al 60% en hexanos, para proporcionar 3-((6-((6S,8R)-7-(2,2-difluoroetil)-8-metil-3-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)piridin-3-il)oxi)azetidina-1-carboxilato de tert-butilo (227 mg, 89%) como un sólido. 1H RMN (300 MHz, CD3OD, 27°C) 1.11 (3H, dd), 1.41 - 1.43 (9H, m), 1.61 - 1.66 (1H, m), 1.66- 1.86 (2H, m), 2.04 - 2.17 ( 1H, m), 2.36- 2.54 (1H, m), 2.59 - 2.79 (1H, m), 2.89 - 3.02 (1H, m), 3.03 - 3.17 (1H, m), 3.31 - 3.43 (1H, m), 3.48 - 3.60 (1H, m), 3.70 (2H, dd), 3.88 - 3.95 (2H, m), 4.09 - 4.13 (1H, m), 4.27- 4.39 (2H, m), 4.99 - 5.08 (2H, m), 5.64 (1H, tt), 5.73 (1H, dt), 6.81 (1H, dd), 7.20 (1H, dd), 7.27 (1H, dd), 7.36 (1H, d), 8.04 - 8.10 (2H, metro). m/z: ES+ [M+H]+ 584.

Ejemplo 27

1-(3-Fluoropropil)-N-(4-((6R,8R)-8-metN-7-(2,2,2-trifluoroetN)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinoNn-6-il)fenil)azetidin-3-amina

Se añadieron tert-butóxido de sodio (2.118 g, 22.06 mmol) y BrettPhos G3 (0.166 g, 0.18 mmol) a una solución desgasificada de 1-(3-fluoropropil)azetidin-3-amina (0.632 g, 4.78 mmol) y (6R, 8R)-6-(4-bromofenil)-8-metil-7-(2,2,2-trifluoroetil)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina ( 1.56 g, 3.68 mmol) en 1,4-dioxano (18.4 ml) y la reacción se calentó hasta 90°C y se agitó durante la noche. Después de enfriar, la reacción se diluyó con EtOAc (20 ml) y agua (20 ml), y las capas se separaron. El acuoso se extrajo con EtOAc (20 ml), luego las fases orgánicas combinadas se secaron y se evaporaron. La purificación se realizó por HPLC (columna Waters CSH C18 OBD, sílica de 5^, 30 mm de diámetro, 100 mm de longitud), usando mezclas de agua decrecientemente polares (que contenían 0.1% de NH3 y MeCN como eluyentes) para dar una goma. Esto se recogió en metanol (5 ml), luego se añadió agua (95 ml) y la mezcla se suspendió durante la noche a temperatura ambiente. El sólido resultante se recogió por filtración, se lavó con metanol al 5% en agua y se secó en un horno de vacío a 50°C durante la noche para dar 1-(3-fluoropropil)-N-(4-((6R,8R)-8- metil-7-(2,2,2-trifluoroetil)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il) fenil)azetidin-3-amina (0.935 g, 54%) como un sólido incoloro. 1H RMN (500 MHz, CDCls, 27°C) 1.13 (3H, d), 1.68 - 1.83 (2H, m), 2.59 (2H, t), 2.77 (1H, dd), 2.86 (2H, t), 2.89 - 2.99 (1H, m), 3.04 (1H, dd), 3.15 - 3.26 (1H, m), 3.37- 3.48 (1H, m), 3.71 - 3.76 (2H, m), 3.93 (1H, d), 4.10 (1H, q), 4.43 (1H, t), 4.53 (1H, t), 4.99 (1H, s), 6.41 -6.46 (2H, m), 6.97 (1H, d), 7.00 (2H, d), 7.26 (1H, s), 8.06 (1H, d), 10.10 (1H, s); m/z: ES+ [M+H]+476.

La (6R,8R)-6-(4-bromofenil)-8-metil-7-(2,2,2-trifluoroetil)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina utilizado como material de partida se sintetizó de la siguiente manera:

(6R,8R)-6-(4-bromofenil)-8-metil-7-(2,2,2-trifluoroetil)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina

Se añadió ácido trifluoroacético (1.85 ml) a una solución de (R)-1-(1H-indazol-4-il)-N-(2,2,2-trifluoroetil) propan-2-amina (2.0 g, 7.77 mmol) y 4-bromobenzaldehído (7.19 g, 38.9 mmol) en tolueno (37 ml) y la mezcla resultante se agitó a 90°C durante 30 horas. La reacción se dejó enfriar y se sometió a partición entre DCM (100 ml) y bicarbonato de sodio acuoso saturado (50 ml). Las capas se separaron y la capa orgánica se concentró al vacío. La purificación se realizó mediante cromatografía en columna de sílica gel eluyendo con acetato de etilo al 0-50% en heptano para dar (6R, 8R)-6-(4-bromofenil)-8-metil-7-(2,2,2-trifluoroetil)-6, 7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina (1.560 g, 47%) como una espuma, y como una relación 6:1 de isómeros. 1H RMN (500 m Hz , CDCl3, 27°C) 1.14 (3H, d), 2.80 (1H, dd), 2.94 (1H, dd), 3.05 (1H, dd), 3.25 (1H, dd), 3.33 (1H, ddd), 5.04 (1H, s), 6.95 (1H, d), 7.08 - 7.12 (2H, m), 7.28 - 7.33 (1H, m), 7.37- 7.40 (2H, m), 8.08 (1H, d), 10.12 (1H, s); m/z: ES- [M-H] -422.

Ejemplo 28

Preparación de 1-(3-fluoropropil)-N-(3-metoxi-4-((6S,8R)-8-metil-7-(2,2,2-trifluoroetil)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)fenil)azetidin-3-amina

El precatalizador de tercera generación BrettPhos (10 mg, 0.01 mmol) y tert-butóxido de sodio (0.127 g, 1.32 mmol) se agregaron en una porción a una solución desgasificada de 1-(3-fluoropropil)azetidin-3-amina (0.033 g, 0.25 mmol) y (6S,8R)-6-(4-bromo-2-metoxifenil)-8-metil-7-(2,2,2-trifluoroetil)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina (0.l0 g, 0.22 mmol) en 1,4-dioxano (1.10 ml). La mezcla de color naranja se sumergió luego en un baño de aceite que se había precalentado a 50°C. Después de 5 minutos, la reacción se enfrió hasta temperatura ambiente. En un matraz separado, se añadieron tert-butóxido de sodio (1.81 g, 18.8 mmol) y precatalizador de tercera generación BrettPhos (0.17 g, 0.19 mmol) en una porción a una solución desgasificada de (6S,8R)-6-(4-bromo -2-metoxifenil)-8-metil-7-(2,2,2-trifluoroetil)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina (1.71 g, 3.76 mmol) y 1-(3-fluoropropil)azetidin-3-amina (0.597 g, 4.52 mmol) en 1,4-dioxano (18.8 mL). La mezcla de color naranja claro se sumergió en un baño de aceite que se había precalentado a 50°C. Después de 5 minutos, la reacción se enfrió hasta temperatura ambiente. Una vez enfriadas, ambas reacciones se combinaron, se diluyeron con acetato de etilo y se lavaron secuencialmente con agua (x2) y cloruro de sodio acuoso saturado. La capa orgánica se secó sobre sulfato de sodio, se filtró y se concentró bajo presión reducida. El aceite de color naranja resultante se purificó por cromatografía instantánea sobre sílica, gradiente de elución de 0 a 10% de metanol en DCM, para proporcionar 1-(3-fluoropropil)-N-(3-metoxi-4-((6S,8R)-8-metil-7-(2,2,2-trifluoroetil)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il) fenil)azetidin-3-amina (1.84 g, 92%) como un sólido y una mezcla trans:cis ~84: 16 con base en el perfil de HPLC UV. Este material se resolvió usando SFC preparativa (columna: Chiralpak AD, 21.2 x 250 mm, 5 ^m; 75 mL/min), eluyendo con 20% (metanol que contiene 0.2% NH4OH) en CO2, para proporcionar 1-(3-fluoropropil)-N-(3-metoxi-4-((6S,8R)-8-metil-7-(2,2,2-trifluoroetil)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3 -f]isoquinolin-6-il) fenil)azetidin-3-amina (1.01 g) como un sólido de color naranja claro y un segundo pico de elución. Este material se purificó adicionalmente por cromatografía instantánea sobre sílica, gradiente de elución de 0 a 30% de metanol en acetato de etilo, para proporcionar 1-(3-fluoropropil)-N-(3-metoxi-4-((6S,8R)-8-metil-7-(2,2,2-trifluoroetil)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il) fenil)azetidin-3-amina (0.954 g) como un sólido blanco Este material se purificó por última vez mediante HPLC preparativa (columna: Xbridge C18, 30 x 100 mm, 5 ^m, 40 ml/min), eluyendo con acetonotrilo del 40 al 70% (agua que contiene NH4OH al 0.2%). Las fracciones del producto se combinaron, se lavaron con acetato de etilo (x3), y las capas orgánicas combinadas se lavaron con cloruro de sodio acuoso saturado, se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se concentraron bajo presión reducida para proporcionar 1-(3-fluoropropil)-N-(3-metoxi-4-((6S,8R)-8-metil-7-(2,2,2-trifluoroetil)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il) fenil)azetidin-3-amina (551 mg, 27%) como un sólido de espuma blanquecina. 1H RMN (500 MHz, DMSO-d6, 27°C) 1.04 (3H, d), 1.63 (2H, dtt), 2.44 (2H, t), 2.70 (2H, dd), 2.81 (1H, dd), 2.84 - 2.94 (1H, m), 3.09 (1H, dd), 3.34 (1H, br s), 3.44 (1H, dqd), 3.61 (2H, dd), 3.77 (3H, s), 3.90 (1H, m), 4.43 (2H, dt), 5.28 (1H, s), 5.87 (1H, dd), 6.02 (1H, d), 6.16 (1H, d), 6.32 (1H, d), 6.65 (1H, d), 7.18 (1H, d), 8.02 (1H, s), 12.95 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 506.

Los procedimientos usados para preparar el material de partida (6S,8R)-6-(4-bromo-2-metoxifenil)-8-metil-7-(2,2,2-trifluoroetil)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina se describen a continuación.

Preparación de (R)-N-(1-(3-amino-2-metilfenil)propan-2-il)-2,2,2-trifluoroacetamida

Se añadió 2,2,2-trifluoroacetato de etilo (3.75 ml, 31.5 mmol) a una solución de color rojo ámbar oscuro de (R)-3-(2-aminopropil)-2-metilanilina (5.17 g, 31.5 mmol) y trietilamina ( 4.83 ml, 34.6 mmol) en MeOH (70.1 ml). Después de 15 minutos, la reacción se concentró hasta obtener un aceite color ámbar oscuro. El aceite se disolvió en acetato de etilo, se lavó con agua y la capa acuosa se extrajo con acetato de etilo (x2). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se concentraron bajo presión reducida. El aceite resultante se purificó por cromatografía instantánea sobre sílica, gradiente de elución de 0 a 40% de acetato de etilo en hexanos, para proporcionar (R)-N-(1-(3-amino-2-metilfenil) propan-2-il)-2, 2,2-trifluoroacetamida (6.47 g, 79%) como un aceite de color amarillo-naranja que cristalizó en un sólido de color naranja claro al reposar. 1H RMN (300MHz, DMSO-d6, 27°C) 1.11 (3H, d), 2.01 (3H, s), 2.63 (1H, dd), 2.78 (1H, dd), 3.93 - 4.05 (1H, m), 4.71 (2H, s), 6.36 (1H, dd), 6.49 (1H, dd), 6.78 (1H, t), 9.25 (1H, br d). m/z: ES+ [M+H]+ 261.

Preparación de (R)-2-metil-3-(2-((2,2,2-trifluoroetil)amino)propil)anilina

Se añadió complejo de borano tetrahidrofurano en THF (1 M; 149 ml, 149 mmol) mediante una jeringa (6 x 25 ml) a una solución de (R)-N-(1-(3-amino-2-metilfenil) propan-2-il)-2,2,2-trifluoroacetamida (6.47 g, 24.9 mmol) en tetrahidrofurano (81 ml) a 0°C. Se retiró el baño de hielo y, al calentarse, se observó desprendimiento de gas. Una vez que no se observó más desprendimiento de gas (~20 minutos), la reacción se calentó hasta 65°C. Después de 4 horas, la reacción se enfrió y se mantuvo a temperatura ambiente durante 18 horas. La reacción se enfrió luego hasta 0°C y se inactivó mediante la adición gota a gota de metanol (22 ml). La reacción se calentó hasta temperatura ambiente y, después de que cesó el desprendimiento de gas, la reacción se calentó a 65°C. Después de 14 horas, la reacción se enfrió hasta temperatura ambiente y se agitó bajo estas condiciones durante 3.5 días antes de concentrarse bajo presión reducida. El aceite resultante se purificó por cromatografía instantánea sobre sílica, gradiente de elución de 0 a 70% de acetato de etilo en hexanos, para proporcionar (R)-2-metil-3-(2-((2,2,2-trifluoroetil)amino)propil) anilina (5.62 g, 92%) como un aceite de color amarillo claro. 1H Rm N (300 MHz, DMSo-d6, 27°C) 0.90 (3H, d), 1.98 (3H, s), 2.09 - 2.20 (1H, m), 2.25 - 2.40 (1H, m), 2.72 - 2.84 ( 2H, m), 3.17- 3.29 (2H, m), 4.69 (2H, s), 6.36 (1H, dd), 6.49 (1H, dd), 6.78 (1H, t). m/z: ES+ [M+H]+ 247

Preparación de (1S,3R)-1-(4-Bromo-2-metoxifenil)-3,5-dimetil-2-(2,2,2-trifluoroetil)-1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-6-amina

Se añadieron 4-bromo-2-metoxibenzaldehído (1.83 g, 8.53 mmol) y (R)-2-metil-3-(2-((2,2,2-trifluoroetil)amino)propil)anilina (2.00 g, 8.12 mmol) a una solución de agua (0.7 ml, 41 mmol) y ácido acético (40 ml). La solución de color amarillo claro resultante se sumergió en un baño de aceite que se había precalentado hasta 65°C y se mantuvo bajo estas condiciones durante 18 horas. La solución resultante de color ámbar oscuro se concentró bajo presión reducida (baño de agua: 55°C). El residuo resultante se diluyó con acetato de etilo y se lavó con hidrogenocarbonato de sodio acuoso saturado hasta que se confirmó que la capa acuosa tenía un pH = 8 usando una tira de pH. La capa orgánica se secó sobre sulfato de sodio, se filtró y se concentró bajo presión reducida. El residuo resultante se disolvió en metanol (20 ml) y clorhidrato de hidroxilamina (0.152 g, 2.19 mmol) y se añadió un exceso de carbonato de potasio. Después de 5 minutos, la mezcla se diluyó con acetato de etilo, se filtró y el filtrado se concentró bajo presión reducida. El residuo resultante se purificó por cromatografía instantánea sobre sílica, gradiente de elución de 0 a 50% de acetato de etilo en hexanos, para proporcionar (1S,3R)-1-(4-bromo-2-metoxifenil)-3,5-dimetil-2-( 2,2,2-trifluoroetil)-1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-6-amina como un aceite ámbar oscuro en una relación trans: cis 83:17 con base en la integración de RMN. El aceite se volvió a concentrar a partir de DCM y se secó al vacío hasta producir un sólido de espuma de color ámbar claro (2.55 g, 71%). Una pequeña cantidad de este material (150 mg) se resolvió usando SFC preparativa (columna: (S,S) Whelk-O1, 21.2 x 250 mm, 5 ^m; 75 ml/min), eluyendo con 15% (metanol que contiene 0.2% NH4o H) en CO2, para proporcionar una elución más lenta (1S,3R)-1-(4-bromo-2-metoxifenil)-3,5-dimetil-2-(2,2,2-trifluoroetil)-1,2,3, 4-tetrahidroisoquinolin-6-amina (101 mg) y elución más rápida (1R, 3R)-1-(4-bromo-2-metoxifenil)-3,5-dimetil-2-(2,2,2-trifluoroetil)-1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-6-amina (18 mg) como sólidos de espuma de color amarillo tenue.

(1S,3R): 1H RMN (300 MHz, DMSO-d6, 27°C) 1.00 (3H, d), 1.95 (3H, s), 2.43 (1H, dd), 2.64 -2.85 (2H, m), 3.19 -3.43 (2H, m), 3.86 (3H, s), 4.67 (2H, s), 5.18 (1H, s), 6.29 (1H, d), 6.41 (1H, d), 6.60 (1H, d), 6.96 (1H, dd), 7.18 (1H, d). m/z: ES+ [M+H]+ 443.

(1 R,3R): 1H RMN (300 MHz, DMSO-d6, 27°C) 1.19 (3H, d), 1.94 (3H, s), 2.53 - 2.60 (1H, m), 2.78 (1H, br dd), 2.98 -3.12 (1H, br m), 3.16- 3.36 (2H, m), 3.84 (3H, s), 4.61 (2H, s), 5.31 (1H, s), 6.20 (1H, d), 6.33 (1H, d), 7.03 - 7.13 (2H, m), 7.19 (1H, d). m/z: ES+ [M+H]+ 443.

Preparación de (6S,8R)-6-(4-bromo-2-metoxifenil)-8-metil-7-(2,2,2-trifluoroetil)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina

Se añadió gota a gota una solución de nitrito de sodio (0.413 g, 5.98 mmol) en agua (3.83 ml) durante 5 minutos a una solución agitada de (1S,3R)-1-(4-bromo-2-metoxifenil)-3,5 -dimetil-2-(2,2,2-trifluoroetil)-1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-6-amina (2.55 g, 5.75 mmol; 83:17 trans: cis) en ácido propiónico (19.2 mL) mantenido a -15°C usando un baño de enfriamiento que consiste en hielo, cloruro de sodio sólido y cloruro de sodio acuoso saturado. Después de 20 minutos, la reacción se diluyó con tolueno (100 ml) que se había enfriado previamente a -70°C. La mezcla de color amarillo claro resultante se agitó vigorosamente y, después de 5 minutos, se retiró el baño de enfriamiento. Al alcanzar la temperatura ambiente, la mezcla de reacción de color rojo se mantuvo bajo estas condiciones durante 1.5 horas y luego se lavó con agua (x2). Las capas acuosas combinadas se extrajeron con acetato de etilo. Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se concentraron bajo presión reducida hasta aproximadamente el 20% del volumen inicial. Esta mezcla se diluyó con EtOAc (20 ml) y se lavó con bicarbonato de sodio acuoso saturado. Luego se añadió carbonato de potasio sólido hasta que cesó la evolución de gas y la mezcla se probó como básica utilizando una tira de pH. Las capas se separaron y la capa orgánica se secó sobre sulfato de sodio, se filtró y se concentró bajo presión reducida. El aceite resultante se purificó por cromatografía instantánea sobre sílica, gradiente de elución de 0 a 70% de acetato de etilo en hexanos, para proporcionar (6S,8R)-6-(4-bromo-2-metoxifenil)-8-metil-7-(2, 2,2-trifluoroetil)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina (1.96 g, 75%) como un sólido de espuma de color naranja claro y una mezcla trans:cis ~9: 1 con base en la integración de RMN. 1H RMN (300 MHz, DMSO-da, 27°C) 1.06 (3H, d), 2.80 -2.98 (2H, m), 3.15 (1H, br dd), 3.33 - 3.53 (2H, m), 3.90 (3H, s), 5.40 (1H, s), 6.63 (1H, d), 6.67 (1H, d), 6.96 (1H, dd), 7.20 - 7.27 (2H, m), 8.08 (1H, s), 13.00 ( 1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 454.

Ejemplo 29

Preparación de 2-fluoro-N-(1-(3-fluoropropil)azetidin-3-il)-6-((6S,8R)-8-metil-7-(2,2,2-trifluoroetil)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)piridin-3-amina

Se añadieron tert-butóxido de sodio (1.08 g, 11.3 mmol) y precatalizador de tercera generación BrettPhos (0.16 g, 0.18 mmol) a una solución desgasificada de (6S,8R)-6-(5-bromo-6-fluoropiridin-2-il)-8-metil-7-(2,2,2-trifluoroetil)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina (2.00 g, 4.51 mmol) y 1-( 3-fluoropropil)azetidin-3-amina (0.90 g, 5.41 mmol) en 1,4-dioxano (22.6 ml) a temperatura ambiente. La mezcla de color rojo-naranja se sumergió en un baño de aceite precalentado a 44°C. Después de 22 minutos, la mezcla de color naranja se retiró del calor y se vertió en acetato de etilo y cloruro de sodio acuoso saturado y las capas se separaron. La capa acuosa se extrajo con acetato de etilo, y las capas orgánicas combinadas se lavaron con cloruro de sodio acuoso saturado, se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se concentraron bajo presión reducida. El residuo resultante se purificó por cromatografía instantánea sobre sílica, gradiente de elución de 0 a 30% de metanol en acetato de etilo, para proporcionar 2-fluoro-N-(1-(3-fluoropropil)azetidin-3-il)-6-((6S,8R)-8-metil-7-(2,2,2-trifluoroetil)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)piridin-3-amina (1.58 g) como un sólido de espuma amarillo claro y una mezcla trans: cis aproximada 84:16 basada en la integración de RMN. Este material se resolvió mediante SFC preparativa (columna: Lux Cellulose-4, 21.2 x 250 mm, 5 ^m; 70 mL/min), eluyendo con 35% (metanol que contiene 0.2% NH4OH) en CO2, para proporcionar un sólido de espuma de color naranja claro. Este sólido se repurificó por cromatografía de sílica instantánea, gradiente de elución de 0 a 30% de metanol en acetato de etilo. Las fracciones del producto se concentraron bajo presión reducida. El residuo resultante se recogió en acetonitrilo, se filtró y se concentró bajo presión reducida para proporcionar 2-fluoro-N-(1-(3-fluoropropil)azetidin-3-il)-6-((6S,8R)-8-metil-7-(2,2,2-trifluoroetil)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)piridin-3-amina (1.03 g, 46 %) como un sólido de espuma de color amarillo claro. 1H RMN (600 MHz, DMSO-d6, 27°C) 1.10 (3H, d), 1.64 (2H, dtt), 2.48 (2H, t), 2.83 (1H, dd), 2.86 (2H, br d), 2.97 (1H, br dq), 3.02 (1H, dd), 3.45 (1H, dqd), 3.54 (1H, dq), 3.63 (2H, br s), 3.96 (1H, dquin), 4.44 (2H, dt), 4.91 (1H, s), 6.13 (1H, br d), 6.87 (1H, d), 6.92 -7.01 (2H, m), 7.25 (1H, d), 8.06 (1H, s), 13.00 (1H, s) m/z: ES+[M+H]+495.

Los procedimientos usados para preparar el material de partida (6S,8R)-6-(5-bromo-6-fluoropiridin-2-il)-8-metil-7-(2,2,2-trifluoroetil)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina se describen a continuación.

Preparación de tert-butil (R)-(1-(1H-indazol-4-il)propan-2-il)carbamato

Se añadió n-butil-litio en hexano (2.5 M; 96 ml, 241 mmol) a una solución de 4-bromo-1H-indazol (24.8 g, 126 mmol) en THF (200 ml) a -78°C durante 20 minutos, y la mezcla se agitó a -78°C durante 7 horas. Se añadió 2,2-dióxido de (R)-4-metil-1,2,3-oxatiazolidina-3-carboxilato de tert-butilo (26 g, 110 mmol), y la mezcla resultante se agitó a -78°C durante 15 minutos. El baño de enfriamiento se retiró y la mezcla se agitó en estas condiciones durante 18 horas. Se añadió ácido cítrico acuoso (1 N; 130 ml) y se continuó agitando durante 30 minutos. La mezcla se extrajo con hexanos y la capa orgánica se lavó con carbonato de sodio acuoso saturado, se secó sobre sulfato de sodio, se filtró y se concentró bajo presión reducida. El residuo resultante se purificó por cromatografía instantánea sobre sílica, eluyendo con 0 a 60% de EtOAc en hexanos, para dar (R)-(1-(1H-indazol-4-il) propan-2-il) carbamato de tert-butilo (17.3 g, 57%) como un sólido blanco. 1H RMN (300 MHz, DMSO-d6, 27°C) 1.02 (3H, br d), 1.34 (9H, s), 2.82 (1H, br dd), 3.09 (1H, br dd), 3.82 (1H, dt), 6.82 (1H, br d), 6.88 (1H, d), 7.24 (1H, dd), 7.35 (1H, br d), 8.18 (1H, s), 12.97 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 276.

Preparación de dihidrocloruro de (R)-1-(1H-indazol-4-il)propan-2-amina

Se añadió dioxano HCl (4 M, 100 ml, 400 mmol) a una suspensión de tert-butil (R)-(1-(1H-indazol-4-il) propan-2-il) carbamato (17.3 g, 62.7 mmol) en DCM (200 ml) a temperatura ambiente durante 10 minutos. La suspensión resultante se agitó durante la noche y luego se concentró bajo presión reducida para proporcionar (R)-1 -(1H-indazol-4-il) propan-2-amina (15.9 g, 102%) como un sólido blanco. 1H RMN (300 MHz, DMSO-d6, 27°C) 1.14 (3H, d), 2.97 (1H, dd), 3.40 (1H, dd), 3.45 - 3.62 (1H, m), 6.96 (1H, d), 7.29 (1H, dd), 7.45 (1H, d), 7.97- 8.27 (3H, br s), 8.29 (1H, d). m/z: ES+ [M+H]+ 176.

Preparación de (R)-1 -(1 H-indazol-4-il)-N-(2,2,2-trifluoroetil)propan-2-amina

Se añadió carbonato de potasio (4.75 g, 34.3 mmol) a una suspensión agitada de sal de diclorhidrato de (R)-1-(1H-indazol-4-il) propan-2-amina (2.13 g, 8.58 mmol) en acetonitrilo (25 ml) luego se añadió gota a gota trifluorometanosulfonato de 2,2,2-trifluoroetilo (2.191 g, 9.44 mmol) en DCM (12.6 ml). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1.5 días. Luego se añadió trifluorometanosulfonato de 2,2,2-trifluoroetilo adicional (398 mg) en DCM (0.3 ml). La reacción se calentó hasta 60°C y después de 3 horas, la reacción se enfrió hasta temperatura ambiente y se añadió una porción adicional de trifluorometanosulfonato de 2,2,2-trifluoroetilo (398 mg) como una solución en DCM (0.3 ml). Después de 18 horas, la reacción se concentró bajo presión reducida a volumen reducido y luego se diluyó con DCM. La mezcla se lavó con agua y la capa orgánica se secó sobre sulfato de sodio, se filtró y se concentró bajo presión reducida. El residuo resultante se purificó por cromatografía instantánea sobre sílica, gradiente de elución de 0 a 60% de acetato de etilo en hexanos, para proporcionar (R)-1-(1H-indazol-4-il)-N-(2,2,2-trifluoroetil) propan-2-amina (2.06 g, 93%) como una goma. m/z: e S+ [M+H]+ 257.

Preparación de (6S,8R)-6-(5-bromo-6-fluoropiridin-2-il)-8-metil-7-(2,2,2-trifluoroetil)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina

Se añadió ácido trifluoroacético (1.7 ml) a una solución de (R)-1-(1H-indazol-4-il)-N-(2,2,2-trifluoroetil) propan-2-amina (1.83 g, 7.11 mmol) y 5-bromo-6-fluoropicolinaldehído (1.45 g, 7.11 mmol) en tolueno (33.8 ml). La reacción se calentó a 90°C durante 24 horas y luego se concentró hasta volumen reducido. La mezcla se diluyó luego con diclorometano y se basificó con hidrogenocarbonato de sodio acuoso saturado. La capa orgánica se secó sobre sulfato de sodio, se filtró y se concentró bajo presión reducida. El residuo resultante se purificó por cromatografía instantánea sobre sílica, gradiente de elución de 0 a 50% de acetato de etilo en hexanos, para proporcionar (6S,8R)-6-(5-bromo-6-fluoropiridin-2-il)-8-metil-7-(2,2,2-trifluoroetil)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina (2.01 g, 64%) como un sólido blanco.

1H RMN (300MHz, DMSO-da, 27°C) 1.11 (3H, d), 2.89 (1H, br dd), 2.94 - 3.09 (2H, m), 3.31 - 3.42 (1H, m), 3.52 - 3.71 ( 1H, m), 5.07 (1H, s), 6.96 (1H, d), 7.24 - 7.36 (2H, m), 8.06 (1H, d), 8.23 (1H, dd), 13.02 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 443.

Ejemplo 30

5-fluoro-N-(1-(3-fluoropropil)azetidin-3-il)-6-((6S,8R)-8-metil-7-(2,2,2-trifluoroetil)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)piridin-3-amina

Se suspendieron 1-(3-Fluoropropil)azetidin-3-amina (435 mg, 3.29 mmol), (6S,8R)-6-(5-bromo-3-fluoropiridin-2-il)-8-metil-7-(2 2,2-trifluoroetil)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina (730 mg, 1.65 mmol) y tert-butóxido de sodio (950 mg, 9.88 mmol) en 1,4-dioxano (18.3 ml). La mezcla se desgasificó y se añadió precatalizador Brettphos 3G (149 mg, 0.16 mmol). La reacción se calentó hasta 80°C durante 1 hora. La mezcla de reacción se enfrió hasta temperatura ambiente y se diluyó con acetato de etilo (10 ml) y se lavó con agua (10 ml). La capa orgánica se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y se concentró al vacío. El producto crudo se purificó mediante LCMS preparativa (columna Waters XSelect CSH C18, sílica 5 ^, 50 mm de diámetro, 100 mm de longitud), usando mezclas de agua decrecientemente polares (que contenían 1% de NH3) y MeCN como eluyentes. La muestra se disolvió en MeOH y se separó por SFC usando las siguientes condiciones cromatográficas: Columna: Phenomonex Lux C 1 ,30 x 250 mm, 5 micras, Fase móvil: 30% MeOH 0.1% NH3/70% scCO2 para proporcionar 5-fluoro- N-(1-(3-fluoropropil)azetidin-3-il)-6-((6S,8R)-8-metil-7-(2,2,2-trifluoroetil)-6,7,8,9- tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)piridin-3-amina (396 mg, 49%) como un sólido de color amarillo. 1H RMN (500 MHz, CDCls, 27°C) 1.15 (3H, d), 1.69 - 1.81 (2H, m), 2.60 (2H, t), 2.77 (1H, dd), 2.92 - 3.03 (3H, m), 3.14 - 3.31 (2H, m), 3.65 - 3.79 (3H, m), 4.04 (1H, q), 4.43 (2H, t), 4.53 (1H, t), 5.35 (1H, s), 6.54 (1H, dd), 6.76 (1H, d), 7.00 (1H, d), 7.66 (1H, d), 7.93 (1H, d), 11.06 (1H, s); m/z: ES+[M+H]+ 495.

La (6S,8R)-6-(5-bromo-3-fluoropiridin-2-il)-8-metil-7-(2,2,2-trifluoroetil)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina utilizado como material de partida se sintetizó de la siguiente manera:

(6S,8R)-6-(5-bromo-3-fluoropiridin-2-il)-8-metil-7-(2,2,2-trifluoroetil)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina

Se añadió ácido trifluoroacético (2.13 ml) a una solución de (R)-1-(1H-indazol-4-il)-N-(2,2,2-trifluoroetil) propan-2-amina (1.15 g, 4.47 mmol) y 5-bromo-3-fluoropicolinaldehído (912 mg, 4.47 mmol) en tolueno (42.6 ml) y la mezcla resultante se agitó a 100°C durante 30 minutos. La reacción se evaporó y el residuo se sometió a partición entre DCM (20 ml) y NaOH 2 M (20 ml). Las capas se separaron y la fase orgánica se concentró bajo presión reducida. El producto crudo se purificó por cromatografía instantánea sobre sílica, gradiente de elución de 0 a 40% de EtOAc en heptano. El producto que contenía fracciones se evaporó hasta sequedad para proporcionar (6S,8R)-6-(5-bromo-3-fluoropiridin-2-il)-8-metil-7-(2,2,2-trifluoroetil)-6,7, 8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina (1.15 g, 58%) como un sólido de color amarillo. 1H RMN (500 MHz, CDCls, 27°C) 1.16 (3H, d), 2.86 (1H, dd), 3.01 (1H, dq), 3.19 - 3.35 (2H, m), 3.68 -3.78 (1H, m), 5.42 (1H, s), 6.80 (1H, d), 7.20 (1H, d), 7.59 (1H, dd), 8.05 (1H, d), 8.27- 8.5 (1H, m). m/z: ES+ [M+H]+ 443.

Ejemplo 31

2,2-Difluoro-3-((6S,8R)-6-(3-fluoro-5-((1-(3-fluoropropil)azetidin-3-il)amino)piridin-2-il)-8-metil-3,6,8,9-tetrahidro-7H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-7-il)propan-1-ol

Se agregó fluoruro de tetrabutilamonio (1.0 M en THF, 0.65 mL, 0.65 mmol) a una solución de 6-((6S,8R)-7-(3-((tertbutildifenilsilil)oxi)-2,2-difluoropropil)-8-metil-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)-5-fluoro-N-(1-(3-fluoropropil)azetidin-3-il)piridin-3-amina (320 mg, 0.43 mmol) en THF (2.66 ml) a temperatura ambiente y se agitó durante 64 horas. La mezcla de reacción se evaporó y luego se disolvió en DMSO y el producto crudo se purificó por fase inversa instantánea (Puriflash, 220 g, C18, columna de 30 m), usando mezclas de agua decrecientemente polares (que contenían 1% de NH3) y MeCN como eluyentes. Las fracciones que contenían el compuesto deseado se evaporaron hasta sequedad para proporcionar un producto crudo (143 mg). El producto crudo se purificó por cromatografía instantánea sobre sílica, gradiente de elución de 0 a 20% de MeOH en EtOAc. El producto que contenía fracciones se evaporó hasta sequedad para proporcionar 2,2-difluoro-3-((6S,8R)-6-(3-fluoro-5-((1-(3-fluoropropil)azetidin-3-il)amino)piridin-2-il)-8-metil-3,6,8,9-tetrahidro-7H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-7-il)propan-1-ol (118 mg, 54%) como una mezcla de isómeros. El material se repurificó mediante HPLC preparativa (columna Waters XSelect CSH C18, sílica de 5 m, 30 mm de diámetro, 100 mm de longitud), usando mezclas de agua decrecientemente polares (que contenían ácido fórmico al 0.1%) y MeCN como eluyentes. Las fracciones que contenían el compuesto deseado se combinaron y purificaron por cromatografía de intercambio iónico, usando una columna SCX-2. El producto deseado se eluyó de la columna usando NH3 1M/MeOH y las fracciones que contenían el producto se evaporaron hasta sequedad para proporcionar 2,2-difluoro-3-((6S,8R)-6-(3-fluoro-5-((1-(3-fluoropropil)azetidin-3-il)amino)piridin-2-il)-8-metil-3,6,8,9-tetrahidro-7H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-7-il) propan-1-ol (62.1 mg, 29%) como un sólido incoloro. 1H RMN (500 MHz, DMSO, 27°C) 1.03 (3H, dd), 1.64 (2H, dq), 2.44 (2H, t), 2.60 - 2.66 (1H, m), 2.79 (3H, dd), 2.97 (1H, dd), 3.04 - 3.15 (1H, m), 3.50 - 3.73 (5H, m), 3.89 - 3.97 (1H, m), 4.39 (1H, t), 4.48 (1H, t), 5.21 (1H, s), 5.26 (1H, t), 6.58 (1H, d), 6.65 -6.71 (2H, m), 7.19 (1H, d), 7.55 (1H, dd), 8.03 (1H, s), 12.94 ( 1H, s); m/z: ES+ [M+H]+ 507.

La 6-((6S,8R)-7-(3-((tert-butildifenilsilil)oxi)-2,2-difluoropropil)-8-metil-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)-5-fluoro-N-(1-(3-fluoropropil)azetidin-3-il)piridin-3-amina utilizada como material de partida se sintetizó de la siguiente manera:

(R)-N-(1-(1H-indazol-4-il)propan-2-il)-3-((tert-butildifenilsilil)oxi)-2,2-difluoropropan-1-amina

Se añadió 3-((tert-butildifenilsilil)oxi)-2,2-difluoropropil trifluorometanosulfonato (2.59 g, 5.36 mmol) a una solución de (R)-1-(1H-indazol-4-il) propan-2-amina (0.94 g, 5.36 mmoles) y DIPEA (1.39 ml, 8.05 mmoles) en 1,4-dioxano (38.9 ml) y la reacción se agitó a 50°C durante 18 horas. La mezcla de reacción se evaporó, luego el residuo se diluyó con EtOAc y se lavó con agua y la capa acuosa se extrajo adicionalmente con EtOAc. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera saturada, se secaron sobre sulfato de magnesio, se filtraron y se evaporaron hasta sequedad. El producto crudo se purificó por cromatografía instantánea sobre sílica, gradiente de elución de 0 a 50% de EtOAc en heptano. Las fracciones puras se evaporaron hasta sequedad para proporcionar (R)-N-(1-(1H-indazol-4-il)propan-2-il)-3-((tert-butildifenilsilil)oxi)-2,2-difluoropropan-1 -amina (1.515 g, 52%) como una goma incolora. 1H RMN (500 Mh z , DMSO, 27°C) 0.92 (3H, d), 0.97 (9H, s), 1.78 -1.86 (1H, m), 2.73 (1H, dd), 2.98 - 3.14 (4H, m), 3.83 (2H, td), 6.85 (1H, d), 7.20 (1H, dd), 7.34 (1H, d), 7.41 - 7.50 (6H, m), 7.58 - 7.64 (4H, m), 8.08 (1H, s), 12.98 (1H, s); m/z: ES+ [M+H]+ 508.

(6S,8R)-6-(5-bromo-3-fluoropiridin-2-il)-7-(3-((tert-butildifenilsilil)oxi)-2,2-difluoropropil)-8-metil-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina

Se añadió ácido trifluoroacético (319 ^L) a una solución de (R)-N-(1-(1H-indazol-4-il) propan-2-il)-3-((tertbutildifenilsilil)oxi)-2, 2-difluoropropan-1-amina (681 mg, 1.34 mmol) y 5-bromo-3-fluoropicolinaldehído (287 mg, 1.41 mmol) en tolueno (6.39 ml) y la mezcla resultante se agitó a 110°C durante 1 hora. La reacción se dejó enfriar hasta temperatura ambiente, se evaporó hasta sequedad y se disolvió en DMSO. El producto crudo se purificó por cromatografía inbstantánea en fase reversa (columna de 100 g de Redisep Rf C18), usando mezclas decrecientemente polares de agua (que contenía ácido fórmico al 0.1%) y MeCN (60 - 100%) como eluyentes. Las fracciones que contenían el compuesto deseado se combinaron y se aislaron por cromatografía de intercambio iónico, usando una columna SCX-2. El producto deseado se eluyó de la columna usando NH3 1 M/MeOH y las fracciones puras se evaporaron hasta sequedad para proporcionar (6S,8R)-6-(5-bromo-3-fluoropiridin-2-il)-7-(3-( (tertbutildifenilsilil)oxi)-2,2-difluoropropil)-8-metil-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina (763 mg, 82%) como un sólido blancuzco. 1H RMN (500 MHz, DMSO, 27°C) 0.99 (9H, s), 1.04 (3H, d), 2.74 -2.89 (2H, m), 2.97-3.04 (1H, m), 3.31 (1H, s), 3.54 - 3.62 (1H, m), 3.78 (1H, q), 3.92 - 4.02 (1H, m), 5.36 (1H, s), 6.72 (1H, d), 7.23 (1H, d), 7.41 - 7.49 (6H, m), 7.57- 7.61 (4H, m), 8.04 (1H, dd), 8.09 (1H, s), 8.38 (1H, d), 13.01 (1H, s); m/z: ES+ [M+H]+ 693.

6-((6S,8R)-7-(3-((tert-butildifenilsilil)oxi)-2,2-difluoropropil)-8-metil-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)-5-fluoro-N-(1-(3-fluoropropil)azetidin-3-il)piridin-3-amina

1-(3-Fluoropropil)azetidin-3-amina (114 mg, 0.86 mmol), (6S,8R)-6-(5-bromo-3-fluoropiridin-2-il)-7-(3-((tert -butildifenilsilil)oxi)-2,2-difluoropropil)-8-metil-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina (300 mg, 0.43 mmol) y tert-butóxido de sodio (249 mg, 2.59 mmol) se suspendieron en 1,4-dioxano desgasificado (4.81 ml). Se añadió precatalizador Brettphos 3G (39.2 mg, 0.04 mmol) y la mezcla se evacuó y se purgó con nitrógeno (x2) y la reacción se calentó hasta 80°C durante 45 minutos. La mezcla de reacción se dejó enfriar hasta temperatura ambiente y se diluyó con EtOAc y se lavó con agua. La capa acuosa se extrajo adicionalmente con EtOAc y las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera saturada, se secaron sobre sulfato de magnesio, se filtraron y se evaporaron hasta sequedad y se usaron directamente sin purificación adicional. m/z: ES+ [M+H]+ 745.

Ejemplo 32

6-((6S,8R)-1-fluoro-8-metil-7-(2,2,2-trifluoroetil)-6,7,9,8-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquin-6-il)-N-(3-fluoropropil)azetidi-3-il)piridin-3-amina

Se añadieron tert-butóxido de sodio (116 mg, 1.20 mmol) y BrettPhos G3 (9.09 mg, 10.04 ^mol) a una solución desgasificada de (6S,8R)-6-(5-bromopiridin-2-il)-1-fluoro- 8-metil-7-(2,2,2-trifluoroetil)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina (89 mg, 0.20 mmol) y 1-(3- fluoropropil)azetidin-3-amina (39.8 mg, 0.30 mmol) en 1,4-dioxano (1.00 mL) y la reacción se calentó hasta 90°C y se agitó durante 6 horas. Después de enfriar, la reacción se diluyó con EtOAc y agua, y las capas se separaron. La capa acuosa se extrajo con EtOAc, luego las fases orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de sodio y se evaporaron. La purificación se realizó mediante HPLC (columna Waters CSH C18 OBD, 5 ^ de sílica, 30 mm de diámetro, 100 mm de longitud), usando mezclas de agua decrecientemente polares (que contenían 0.1% de NH3 y MeCN como eluyentes) para dar el producto (42.0 mg, 42%) como una película. 1H RMN (500 MHz, CDCls, 27°C) 1.13 (3H, d), 1.69 - 1.84 (2H, m), 2.61 (2H, td), 2.76 (1H, dd), 2.94 (3H, ddd), 3.16- 3.28 (2H, m), 3.45 - 3.54 (1H, m), 3.67- 3.76 (2H, m), 4.09 (1H, dt), 4.24 (1H, d), 4.43 (1H, td), 4.53 (1H, td), 5.02 (1H, s), 6.76 (1H, dd), 6.81 (1H, d), 6.89 (1H, dd), 7.39 (1H, d), 7.81 (1H, d), 11.10 (1H, s); m/z: ES+ [M+H]+ 495.

La (6S,8R)-6-(5-bromopiridin-2-il)-1-fluoro-8-metil-7-(2,2,2-trifluoroetil)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina utilizada como material de partida se sintetizó de la siguiente manera:

4-Bromo-3-fluoro-1H-indazol

Se agregó Selectfluor (49.40 g, 139.6 mmol) a una solución de 4-bromo-1H-indazol (25.0 g, 127 mmol) en DMF (254 mL) y la reacción se calentó hasta 70°C durante la noche. Después de enfriar, la mezcla de reacción se vertió en agua. El sólido precipitado se filtró y se secó, luego el producto crudo se purificó por cromatografía instantánea sobre sílica, gradiente de elución de 0 a 30% de EtOAc en heptano. Las fracciones que contenían el producto se evaporaron hasta sequedad para proporcionar 4-bromo-3-fluoro-1H-indazol (4.20 g, 15%) como un sólido de color amarillo pálido.

1H RMN (500 MHz, CDCls, 27°C) 7.24 - 7.28 (1H, m), 7.32 - 7.36 (2H, m), 9.20 (1H, s); m/z: ES-[M-H] - 213.

Tert-butil (R)-(1-(3-fluoro-1H-indazol-4-il)propan-2-il)carbamato

Se añadió n-butil-litio (1.6 M, 51.9 ml, 83.01 mmol) a 4-bromo-3-fluoro-1H-indazol (8.50 g, 39.5 mmol) en THF (124 ml) a -78°C y la reacción se agitó durante 15 minutos, se calentó hasta -50°C durante 15 minutos, luego se volvió a enfriar hasta -78°C. Se añadió 2,2-dióxido de (R)-4-metil-1,2,3-oxatiazolidina-3-carboxilato de tert-butilo (10.32 g, 43.48 mmol) en THF (20 ml) y la reacción se agitó durante 15 minutos antes de dejar que se caliente hasta -10°C durante 30 minutos. Se añadió ácido cítrico IN (200 ml) y la mezcla se agitó durante 15 minutos, antes de extraerse con EtOAc (x2). Las fases orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de magnesio y se evaporaron. El producto crudo se purificó por cromatografía instantánea sobre sílica, gradiente de elución de 0 a 40% de EtOAc en heptano. El producto que contenía las fracciones se evaporó hasta sequedad para proporcionar (R)-(1-(3-fluoro-1H-indazol-4-il) propan-2-il) carbamato de tert-butilo (5.93 g, 51%) como un sólido incoloro. 1H RMN (500 m Hz , CDCh, 27°C) 1.17 (3H, d), 1.35 (9H, s), 3.09 (2H, d), 4.00 - 4.09 (1H, m), 4.41 - 4.49 (1H, m), 6.97 (1H, d), 7.22 (1H, dd), 7.33 (1H, dd), 9.36 (1H, s); m/z: ES-[M-H] - 292.

(R)-1 -(3-Fluoro-1H-indazol-4-il)propan-2-amina

Se añadió ácido clorhídrico 4N en dioxano (23.86 ml, 95.45 mmol) a tert-butil (R)-(1-(3-fluoro-1H-indazol-4-il) propan-2-il) carbamato (5.60 g, 19.1 mmol) en MeOH (23.9 ml) y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas. La mezcla cruda se concentró, luego se suspendió en EtOAc (100 ml) y se lavó con bicarbonato de sodio acuoso saturado (50 ml). La capa acuosa se extrajo con EtOAc (x5), luego las fases orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de sodio y se evaporaron para proporcionar (R)-1-(3-fluoro-1H-indazol-4-il) propan-2-amina (3.10 g, 84%) como un aceite de color amarillo, que se solidificó al reposar. 1H RMN (500 MHz, CDCl3, 27°C) 1.19 (3H, d), 2.86 (1H, dd), 3.09 (1H, dd), 3.33 (1H, dddd), 6.96 (1H, d), 7.22 (1H, dd), 7.33 (1H, dd), 9.93 (1H, s); m/z: ES+ [M+H]+ 194.

(R)-1-(3-Fluoro-1H-indazol-4-il)-N-(2,2,2-trifluoroetil)propan-2-amina

Se añadió solución de trifluorometanosulfonato de 2,2,2-trifluoroetilo 0.1 M en DCM (25.9 ml, 2.59 mmol) a (R)-1-(3-fluoro-1H-indazol-4-il) propan-2-amina (0.4 g, 2.07 mmol) y DIPEA (0.541 ml, 3.11 mmol) en 1,4-dioxano (20 ml) y la mezcla resultante se agitó a 75°C durante la noche. La reacción se concentró al vacío y se sometió a partición entre acetato de etilo (25 ml) y bicarbonato de sodio acuoso saturado (25 ml). Las capas se separaron y la capa acuosa se extrajo con acetato de etilo (25 ml). Las fases orgánicas combinadas se lavaron con cloruro de sodio acuoso saturado (25 ml), se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se concentraron al vacío. La goma resultante se recogió en metanol y se aplicó a un cartucho SCX-2 previamente humedecido (metanol). El cartucho se lavó con metanol y se eluyó con amoniaco 1 M en metanol. El eluyente se concentró al vacío para dar (R)-1-(3-fluoro-1H-indazol-4-il)-N-(2,2,2-trifluoroetil) propan-2-amina (0.455 g, 80%) como una goma de color marrón. 1H RMN (500 MHz, CDCl3, 27°C) 1.11 (3H, d), 2.92 (1H, dd), 3.07- 3.22 (4H, m), 6.96 (1H, d), 7.25 (1H, dd), 7.34 (1H, dd), 9.50 (1H, s); m/z: ES+ [M+H]+ 276.

(6S,8R)-6-(5-bromopiridin-2-il)-1-fluoro-8-metil-7-(2,2,2-trifluoroetil)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina

Se añadió ácido trifluroacético (87 ^L) a una solución de (R)-1-(3-fluoro-1H-indazol-4-il)-N-(2,2,2-trifluoroetil) propan-2-amina (100 mg, 0.36 mmol) y 5-bromopicolinaldehído (67.6 mg, 0.36 mmol) en tolueno (0.87 ml) y la mezcla resultante se agitó a 90°C durante 1 hora. La reacción se dejó enfriar hasta temperatura ambiente y se sometió a partición entre DCM (5 ml) y bicarbonato de sodio acuoso saturado (5 ml). Las capas se separaron y la capa orgánica se concentró al vacío. La purificación se realizó mediante cromatografía en columna de sílica gel eluyendo con acetato de etilo al 0-50% en heptano para dar (6S,8R)-6-(5-bromopiridin-2-il)-1-fluoro-8-metil-7-(2, 2,2-trifluoroetil)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina (89 mg, 55%) como un sólido blanco. 1H RMN (500 m Hz , CDCl3, 27°C) 1.16 (3H, d), 2.92 - 3.00 (2H, m), 3.25 - 3.36 (2H, m), 3.46- 3.52 (1H, m), 5.07 (1H, s), 6.98 (1H, d), 7.09 (1H, dd), 7.43 (1H, d), 7.77 (1H, dd), 8.55 (1H, dd), 9.09 (1H, s); m/z: ES+ [M+H]+ 443.

Ejemplo 33

5-Fluoro-6-((6S,8R)-1-fluoro-8-metil-7-(2,2,2-trifluoroetil)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)-N-(1-(3-fluoropropil)azetidin-3-il)piridin-3-amina

Se añadieron tert-butóxido de sodio (3.12 g, 32.52 mmol) y BrettPhos G3 (0.245 g, 0.27 mmol) a una solución desgasificada de (6S,8R)-6-(5-bromo-3-fluoropiridin-2-il)-1-fluoro-8-metil-7-(2,2,2-trifluoroetil)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina (2.50 g, 5.42 mmol) y 1-(3-fluoropropil)azetidin-3-amina (1.075 g, 8.13 mmol) en 1,4-dioxano (27.1 mL) y la reacción se calentó hasta 60°C y se agitó durante 2 horas. Después de enfriar, la reacción se diluyó con EtOAc y agua, y las capas se separaron. La capa acuosa se extrajo con EtOAc, luego las fases orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de sodio y se evaporaron. La purificación se realizó primero mediante cromatografía en columna de sílica gel eluyendo con 0-100% (metanol al 10% en acetato de etil) en heptano, luego con Interchim en fase reversa (NH3 al 0.1% y MeCN como eluyentes) para dar el producto como una mezcla de isómeros. Los productos fueron separados por SFC; la muestra se disolvió en MeOH y se separó usando las siguientes condiciones de SFC: Columna: Phenomonex C4, 30 x 250 mm, 5 micras, fase móvil: 25% MeOH 0.1% NH3, tasa de flujo: 100 ml/min, BPR 120 bar, temperatura de columna: 40°C para dar 5-fluoro-6-((6S,8R)-1-fluoro-8-metil-7-(2,2,2-trifluoroetil)-6,7,8,9-tetrahidro -3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)-N-(1-(3-fluoropropil)azetidin-3-il)piridin-3-amina (1.780 g, 64%) como una espuma. 1H RMN (500 MHz, CDCl3, 27°C) 1.15 (3H, d), 1.67-1.81 (2H, m), 2.59 (2H, t), 2.81 - 3.03 (4H, m), 3.17- 3.34 (2H, m), 3.70 (3H, q), 4.01 - 4.08 (1H, m), 4.20 (1H, d), 4.43 (1H, t), 4.53 (1H, t), 5.32 (1H, s), 6.54 (1H, dd), 6.81 (1H, d), 6.95 (1H, d), 7.64 - 7.68 (1H, m), 9.46 (1H, s); m/z: ES+[M+H]+513.

La (6S,8R)-6-(5-bromo-3-fluoropiridin-2-il)-1-fluoro-8-metil-7-(2,2,2-trifluoroetil)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina utilizada como material de partida se sintetizó de la siguiente manera:

(6S,8R)-6-(5-bromo-3-fluoropiridin-2-il)-1-fluoro-8-metil-7-(2,2,2-trifluoroetil)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina

Se añadió ácido trifluoroacético (2.16 ml) a una solución de (R)-1-(3-fluoro-1H-indazol-4-il)-N-(2,2,2-trifluoroetil) propan-2-amina (2.50 g, 9.08 mmol) y 5-bromo-3-fluoropicolinaldehído (1.85 g, 9.08 mmol) en tolueno (43.3 ml) y la mezcla resultante se agitó a 90°C durante 90 minutos. La reacción se dejó enfriar y se sometió a partición entre DCM (50 ml) y bicarbonato de sodio acuoso saturado (50 ml). Las capas se separaron y la capa orgánica se concentró al vacío. La purificación se realizó mediante cromatografía en columna de sílica gel eluyendo con acetato de etilo al 0-50% en heptano para dar (6S,8R)-6-(5-bromo-3-fluoropiridin-2-il)-1-fluoro-8-metil-7-(2,2,2-trifluoroetil)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolina (2.90 g, 69%) como un sólido blanco. 1H RMN (500 MHz, CDCh, 27°C) 1.15 (3H, d), 2.88 - 3.04 (2H, m), 3.24 - 3.35 (2H, m), 3.63 - 3.71 (1H, m), 5.39 (1H, s), 6.83 (1H, d), 7.08 (1H, dd), 7.60 (1H, dd), 8.36 (1H, dd), 9.13 (1H, s); m/z: ES+[M+H]+461.

Los ejemplos 34 a 73 (tabla a continuación) se prepararon usando métodos sintéticos análogos a los descritos anteriormente.

Claims

REIVINDICACIONES

1. Un compuesto de Fórmula (ID):

Q es O o NH;

R1 es CH2F o CHF2;

R14 se selecciona del grupo que consiste en:

y el Anillo Y se selecciona del grupo que consiste en:

2. Un compuesto de Fórmula (ID) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, como se reivindica en la reivindicación 1, en donde Q es NH.

3. Un compuesto de Fórmula (ID) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, como se reivindica en la reivindicación 1, en donde Q es O.

4. Un compuesto de Fórmula (ID) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, como se reivindica en una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en R1 es CH2F.

5. Un compuesto de Fórmula (ID) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, como se reivindica en una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde R14 se selecciona del grupo que consiste en:

6. Un compuesto de Fórmula (ID) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, como se reivindica en una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde el Anillo Y se selecciona del grupo que consiste en:

reivindicación 1, en donde el compuesto se selecciona del grupo que consiste en:

6-((6S,8R)-7-((1-fluoroddopropil)metil)-8-metil-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f|isoquinolin-6-il)-N-(1-(3-fluoropropil)azetidin-3-il)piridin-3-amina;

3-((6S,8R)-6-(2,6-difluoro-4-((1-(3-fluoropropil)azetidin-3-il)amino)fenil)-8-metil-3,6,8,9-tetrahidro-7H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-7-il)-2,2-difluoropropan-1-ol;

N-(4-((6S,8^)-7-((1-fluorocidopropil)metil)-8-metil-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-/]isoquinolin-6-il)-3-metoxifenil)-1-(3-fluoropropil)azetidin-3-amina;

(6S,8R)-7-((1-fluoroddopropil)metil)-6-(4-((1-(3-fluoropropil)azetidin-3-il)oxi)-2-metoxifenil)-8-metil-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-/|isoquinolina;

N-(3,5-difluoro-4-((6S,8^)-8-metil-7-(2,2,2-trifluoroetil)-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-/]isoquinolin-6-il)fenil)-1-(3-fluoropropil)azetidin-3-amina;

5-((6S,8R)-7-((1-fluoroddopropil)metil)-8-metil-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f|isoquinolin-6-il)-N-(1-(3-fluoropropil)azetidin-3-il)-4-metoxipiridin-2-amina;

N-(4-((6S,8R)-7-((3-(fluorometil)oxetan-3-il)metil)-8-metil-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f|isoquinolin-6-il)-3-metoxifenil)-1-(3-fluoropropil)azetidin-3-amina;

N-(3,5-difluoro-4-((6S,8R)-7-((1-fluoroddopropil)metil)-8-metil-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f]isoquinolin-6-il)fenil)-1-(3-fluoropropil)azetidin-3-amina;

(6S,8R)-7-(2-fluoro-3-metoxi-2-metilpropil)-6-(4-(1-(3-fluoropropil)azetidin-3-iloxi)-2-metoxifenil)-8-metil-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f|¡soqu¡nol¡na;

2,2-difluoro-3-((6S,8R)-6-(5-((1-(3-fluoropropil)azetidin-3-il)amino)piridin-2-il)-8-metil-3,6,8,9-tetrahidro-7H-pirazolo[4,3-f|isoquinolin-7-il)propan-1 -ol;

5- fluoro-6-((6S,8R)-7-((1-fluoroddopropil)metil)-8-metil-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f|isoquinolin-6-il)-N-(1-(3-fluoropropil)azetidin-3-il)piridin-3-amina;

N-(3-etoxi-4-((6S,8R)-7-((1-fluoroddopropil)metil)-8-metil-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-f|isoquinolin-6-il)fenil)-1-(3-fluoropropil)azetidin-3-amina;

N-(4-((6S,8R)-7-(2,2-difluoroetil)-8-metil-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-/]isoquinolin-6-il)-3-metoxifenil)-1-(3-fluoropropil)azetidin-3-amina;

(6S,8R)-7-(2,2-difluoroetil)-6-(4-((1-(3-fluoropropil)azetidin-3-il)oxi)-2-metoxifenil)-8-metil-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-/|isoquinolina;

3-((6S,8R)-6-(2,6-difluoro-4-(1-(3-fluoropropil)azetidin-3-ilamino)fenil)-8-metil-8,9-dihidro-3H-pirazolo[4,3-/lisoqu ino lin^^^-il^ -fluoro^-m etilp ropan-l-o l;

6- ((6S,8R)-7-(2,2-difluoroetil)-8-metil-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-/]isoqmnolin-6-il)-N-(1-(3-fluoropropil)azetidin-3-il)piridin-3-amina;

(6S,8R)-7-(2,2-difluoroetil)-6-(5-((1-(3-fluoropropil)azetidin-3-il)oxi)piridin-2-il)-8-metil-6,7,8,9-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-/|isoquinolina;

1-(3-fluoroprop¡l)-A/-(4-((6R,8R)-8-met¡l-7-(2,2,2-tr¡fluoroet¡l)-6,7,8,9-tetrah¡dro-3H-p¡razolo[4,3-f]¡soqu¡nol¡n-6-il)fenil)azetidin-3-amina;

1-(3-fluoroprop¡l)-A/-(3-metox¡-4-((6S,8R)-8-met¡l-7-(2,2,2-tr¡fluoroet¡l)-6,7,8,9-tetrah¡dro-3H-p¡razolo[4,3-f]¡soqu¡nol¡n-6-¡l)fen¡l)azet¡d¡n-3-am¡na;

5- fluoro-A/-(1-(3-fluoroprop¡l)azet¡d¡n-3-¡l)-6-((6S,8R)-8-met¡l-7-(2,2,2-tr¡fluoroet¡l)-6,7,8,9-tetrah¡dro-3H-p¡razolo[4,3-f]¡soqu¡nol¡n-6-¡l)p¡r¡d¡n-3-am¡na;

2.2- d¡fluoro-3-((6S,8R)-6-(3-fluoro-5-((1-(3-fluoroprop¡l)azet¡d¡n-3-¡l)am¡no)p¡r¡d¡n-2-¡l)-8-met¡l-3,6,8,9-tetrah¡dro-7H-p¡razolo[4,3-f]¡soqu¡nol¡n-7-¡l)propan-1-ol;

6- ((6S,8R)-7-(2,2-d¡fluoroet¡l)-8-met¡l-6,

7,8,9-tetrah¡dro-3H-p¡razolo[4,3-f]¡soqu¡nol¡n-6-¡l)-5-fluoro-N-(1-(3-fluoroprop¡l)azet¡d¡n-3-¡l)p¡r¡d¡n-3-am¡na;

2.2- d¡fluoro-3-((6S,8R)-6-(5-((1-(3-fluoroprop¡l)azet¡d¡n-3-¡l)ox¡)p¡r¡d¡n-2-¡l)-8-met¡l-3,6,8,9-tetrah¡dro-7H-p¡razolo[4,3-f]¡soqu¡nol¡n-7-¡l)propan-1-ol;

2.2- d¡fluoro-3-((6S,8R)-6-(3-fluoro-5-((1-(3-fluoroprop¡l)azet¡d¡n-3-¡l)ox¡)p¡r¡d¡n-2-¡l)-8-met¡l-3,6,8,9-tetrah¡dro-7H-p¡razolo[4,3-f]¡soqu¡nol¡n-7-¡l)propan-1-ol; y

2.2- d¡fluoro-3-((6S,8R)-6-(4-((1-(3-fluoroprop¡l)azet¡d¡n-3-¡l)am¡no)-2-metox¡fen¡l)-8-met¡l-3,6,8,9-tetrah¡dro-7H-p¡razolo[4,3-f]¡soqu¡nol¡n-7-¡l)propan-1-ol.

8. Un compuesto o una sal farmacéut¡camente aceptable del m¡smo, selecc¡onado de:

6-((6S, 8R)-1-fluoro-8-met¡l-7-(2,2,2-tr¡fluoroet¡l)-6,7,9,8-tetrah¡dro-3H-p¡razolo[4,3-f]¡soqu¡n-6-¡l)-N-(3-fluoroprop¡l)azet¡d¡-3-¡l)p¡r¡d¡n-3-am¡na;

N-(1-(3-fluoroprop¡l)azet¡d¡n-3-¡l)-5-metox¡-6-((6S,8R)-8-met¡l-7-(2,2,2-tr¡fluoroet¡l)-6,7,8,9-tetrah¡dro-3H-p¡razolo[4,3-f]¡soqu¡nol¡n-6-¡l)p¡r¡d¡n-3-am¡na; y

5-((6S,8R)-1-fluoro-8-met¡l-7-(2,2,2-tr¡fluoroet¡l)-6,7,8,9-tetrah¡dro-3H-p¡razolo[4,3-f]¡soqu¡nol¡n-6-¡l)-N-(1-(3-fluoroprop¡l)azet¡d¡n-3-¡l)p¡raz¡n-2-am¡na.

9. Un compuesto, o una sal farmacéut¡camente aceptable del m¡smo, como se re¡v¡nd¡ca en una cualqu¡era de las re¡v¡nd¡cac¡ones de 1 a 8, para uso como un med¡camento.

10. Un compuesto, o una sal farmacéut¡camente aceptable del m¡smo, como se re¡v¡nd¡ca en una cualqu¡era de las re¡v¡nd¡cac¡ones de 1 a 8, para uso en la prevenc¡ón o tratam¡ento del cáncer en un an¡mal de sangre cal¡entetal como el hombre.

11. Un compuesto para uso como se re¡v¡nd¡ca en la re¡v¡nd¡cac¡ón 10, en donde el cáncer es cáncer de mama o g¡necológ¡co.

12. Una comb¡nac¡ón para uso en el tratam¡ento del cáncer que comprende un compuesto, o una sal farmacéut¡camente aceptable del mismo, como se re¡v¡nd¡ca en una cualqu¡era de las re¡v¡nd¡cac¡ones de 1 a 8 y un ¡nh¡b¡dor de CDK4/6.

13. Una comb¡nac¡ón para uso como se re¡v¡nd¡ca la re¡v¡nd¡cac¡ón 12, en donde el ¡nh¡b¡dor de CDK4/6 es palboc¡cl¡b.

14. Una comb¡nac¡ón para uso como se re¡v¡nd¡ca en la re¡v¡nd¡cac¡ón 12 o la re¡v¡nd¡cac¡ón 13, en donde el cáncer es un cáncer de mama o g¡necológ¡co.

15. Una compos¡c¡ón farmacéut¡ca que comprende un compuesto, o una sal farmacéut¡camente del m¡smo, como se re¡v¡nd¡ca en una cualqu¡era de las re¡v¡nd¡cac¡ones de 1 a 8, y un exc¡p¡ente farmacéut¡camente aceptable.