KR102178692B1 - 암의 치료에서 유용한 6,7,8,9-테트라하이드로-3h-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린 유도체 - Google Patents
암의 치료에서 유용한 6,7,8,9-테트라하이드로-3h-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린 유도체 Download PDFInfo
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Abstract
본 명세서는 화학식 (I)의 화합물 및 이의 약제학적으로 허용 가능한 염, 이의 제조에 사용된 공정 및 중간체, 이를 함유하는 약제학적 조성물 및 세포 증식성 장애의 치료에서의 이의 용도에 관한 것이다:
[화학식 I]
.
[화학식 I]
Description
본 명세서는 에스트로겐 수용체를 선택적으로 하향조절하고 항암 활성을 보유하는 소정의 인다졸 화합물 및 이의 약제학적으로 허용 가능한 염에 관한 것이다. 본 명세서는 또한 인간 또는 동물 신체의 치료의 방법에서의, 예를 들어 암의 예방 또는 치료에서의 상기 인다졸 화합물 및 이의 약제학적으로 허용 가능한 염의 용도에 관한 것이다. 본 명세서는 또한 상기 인다졸 화합물의 제조에 관여된 공정 및 중간체 화합물 및 이를 함유하는 약제학적 조성물에 관한 것이다.
에스트로겐 수용체 알파(ERα, ESR1, NR3A) 및 에스트로겐 수용체 베타(ERβ, ESR2, NR3b)는 많은 핵 수용체 패밀리의 구성원인 스테로이드 호르몬 수용체이다. 모든 핵 수용체와 유사하게 구조화된, ERα는 6개의 기능적 도메인(A 내지 F라 칭함)으로 이루어지고(Dahlman-Wright, et al., Pharmacol. Rev., 2006, 58:773-781), 특이적 리간드(암컷 성 스테로이드 호르몬 17b 에스트라디올(E2))와 ERα의 회합 후, 복합체가 에스트로겐 수용체 요소(Estrogen Receptor Element: ERE)라 칭하는 게놈 서열에 결합하고 표적 유전자의 전사를 조절하는 동시조절제와 상호작용하므로, 리간드 의존적 전사 인자로 분류된다. ERα 유전자는 6q25.1 상에 위치하고, 595AA 단백질을 인코딩하고, 다수의 동형단백질은 대안적인 스플라이싱 및 번역 시작 부위로 인해 생성될 수 있다. DNA 결합 도메인(도메인 C) 및 리간드 결합 도메인(도메인 E) 이외에, 수용체는 N 말단 (A/B) 도메인, C 및 E 도메인을 연결하는 힌지 (D) 도메인 및 C 말단 연장(F 도메인)을 함유한다. ERα 및 ERβ의 C 및 E 도메인이 꽤 보존되지만(각각 96% 및 55%의 아미노산 동일성), A/B, D 및 F 도메인의 보존은 불량하다(30% 미만의 아미노산 동일성). 수용체 둘 모두는 암컷 생식기관의 조절 및 발생에 관여하고, 게다가 중추 신경계, 심혈관계 및 골 대사에서 역할을 한다. 수용체가 직접적으로(직접적인 활성화 또는 전통적인 경로) 또는 간접적으로(간접적인 활성화 또는 비전통적인 경로) ERE에 결합할 때, 세포의 핵에서 ER의 게놈 작용이 발생한다. 리간드의 부재 하에, ER은 Hsp90 및 Hsp70인 열 충격 단백질과 연관되고, 연관된 샤페론 기계는 리간드 결합 도메인(ligand binding domain: LBD)을 안정화시켜서, 이것이 리간드에 접근 가능하게 한다. 리간드화된 ER은 열 충격 단백질로부터 해리하여, 이합체화, DNA 결합, 동시활성자 또는 동시억제자와의 상호작용 및 표적 유전자 발현의 조절을 허용하는 수용체에서의 배좌 변화를 발생시킨다. 비전통적인 경로에서, AP-1 및 Sp-1은 유전자 발현을 조절하기 위해 수용체의 동형단백질 둘 모두에 의해 사용된 대안적인 조절 DNA 서열이다. 이 예에서, ER은 DNA와 직접적으로 상호작용하지 않지만, 다른 DNA 결합된 전사 인자, 예를 들어 c-Jun 또는 c-Fos와의 회합을 통해 상호작용한다(Kushner et al., Pure Applied Chemistry 2003, 75:1757-1769). ER이 유전자 전사에 영향을 미치는 정확한 기전은 불량하게 이해되지만, DNA 결합된 수용체에 의해 동원된 다수의 핵 인자에 의해 매개되는 것으로 보인다. 동시조절제의 동원은 각각 E-도메인 및 A/B 도메인에 위치한 AF2 및 AF1인 2개의 단백질 표면에 의해 주로 매개된다. AF1은 성장 인자에 의해 조절되고, 이의 활성은 세포 및 프로모터 환경에 의존하는 한편, AF2는 활성에 대한 리간드 결합에 완전히 의존한다. 2개의 도메인이 독립적으로 작용할 수 있지만, 최대 ER 전사 활성은 2개의 도메인을 통한 상승적 상호작용을 통해 달성된다(Tzukerman, et al., Mol. Endocrinology, 1994, 8:21-30). ER이 전사 인자로 생각되지만, 이것은 게놈 작용에 너무 빠르다고 생각되는 기간에 E2 투여 이후 조직에서의 신속한 ER 효과에 의해 입증된 바와 같이 비게놈 기전을 통해 또한 작용할 수 있다. 에스트로겐의 신속한 작용을 책임지는 수용체가 동일한 핵 ER 또는 별개의 G 단백질 커플링된 스테로이드 수용체인지 여전히 명확하지 않지만(Warner, et al., Steroids 2006 71:91-95), 증가하는 수의 E2 유도된 경로, 예를 들어 MAPK/ERK 경로 및 내피 산화질소 합성효소의 활성화 및 PI3K/Akt 경로가 확인되었다. 리간드 의존적 경로 이외에, ERα는 인슐린 유사 성장 인자 1(insulin like growth factor 1: IGF-1) 및 표피 성장 인자(epidermal growth factor: EGF)와 같은 성장 인자 신호전달을 통해 MAPK의 자극과 연관된 AF-1을 통한 리간드 독립적인 활성을 갖는 것으로 나타났다. AF-1의 활성은 Ser118의 인산화에 의존적이고, ER과 성장 인자 신호전달 사이의 혼선의 예는 성장 인자, 예컨대 IGF-1 및 EGF에 반응하여 MAPK에 의한 Ser 118의 인산화이다(Kato, et al., Science, 1995, 270:1491-1494).
다수의 구조적으로 뚜렷한 화합물은 ER에 결합하는 것으로 밝혀졌다. 몇몇 화합물, 예컨대 내인성 리간드 E2는 수용체 효현제로서 작용하는 한편, 다른 것은 E2 결합을 경쟁적으로 저해하고, 수용체 길항제로서 작용한다. 이들 화합물은 이의 기능적 효과에 따라 2 클래스로 분할될 수 있다. 선택적 에스트로겐 수용체 조절제(SERM), 예컨대 타목시펜은 표적화된 ER 동형단백질뿐만 아니라 세포 및 프로모터 배경에 따라 수용체 효현제 및 길항제 둘 모두로서 작용하는 능력을 갖는다. 예를 들어, 타목시펜은 유방에서 길항제로서 작용하지만, 골, 심혈관계 및 자궁에서 부분 효현제로서 작용한다. 모든 SERM은 AF2 길항제로서 작용하는 것으로 보이고, AF1을 통해 이의 부분 효현제 특징을 끌어낸다. 풀베스트란트가 예인 제2 군은 완전 길항제로서 분류되고, 나선 12와 LBD의 나머지 사이의 상호작용의 완전한 폐기를 발생시키는 화합물 결합에 대한 리간드 결합 도메인(LBD)에서의 고유한 배좌 변화의 유도를 통해 AF1 및 AF2 도메인의 완전한 저해를 통해 에스트로겐 활성을 차단하여, 보인자 동원을 차단할 수 있다(Wakeling, et al., Cancer Res., 1991, 51:3867-3873; Pike, et al., Structure, 2001, 9:145-153).
ERα의 세포내 수준은 유비퀴틴/프로테오솜(Ub/26S) 경로를 통해 E2의 존재 하에 하향조절된다. 리간드화된 ERα의 폴리유비퀴틴화는 적어도 3개의 효소에 의해 촉매화되고; 유비퀴틴 활성화 효소 E1 활성화된 유비퀴틴은 E3 유비퀴틴 리가제에 의해 이소펩타이드 결합을 통해 리신 잔기와 E2에 의해 접합되고, 이후 폴리유비퀴틴화된 ERα는 분해를 위해 프로테오솜으로 지향된다. ER 의존적 전사 조절 및 ER의 프로테오솜 매개된 분해가 연결되지만(Lonard, et al., Mol. Cell, 2000 5:939-948), 전사 자체는 ERα 분해에 필요하지 않고, 전사 개시 복합체의 어셈블리는 핵 프로테오솜 분해를 위해 ERα를 표적화하기에 충분하다. 이 E2 유도된 분해 과정은 세포 증식, 분화 및 대사에 대한 요건에 반응하여 전사를 신속히 활성화하는 이의 능력에 필요한 것으로 생각된다(Stenoien, et al., Mol. Cell Biol., 2001, 21:4404-4412). 풀베스트란트는 26S 프로테오솜 경로를 통해 ERα의 신속한 하향조절을 또한 유도할 수 있는 길항제의 하위집단인 선택적 에스트로겐 수용체 하향조절제(selective estrogen receptor down-regulator: SERD)로서 또한 분류된다. 반대로, SERM, 예컨대 타목시펜은 ERα 수준을 증가시킬 수 있지만, 전사에 대한 효과는 SERD에 대해 보인 것과 유사하다.
유방암의 대략 70%는 ER 및/또는 프로게스테론 수용체를 발현하여, 성장에 대한 이 종양 세포의 호르몬 의존성을 암시한다. 다른 암, 예컨대 난소암 및 자궁내막암은 또한 성장에 대한 ERα 신호전달에 의존적인 것으로 생각된다. 이러한 환자에 대한 치료는 ER에 대한 리간드 결합의 길항, 예를 들어 폐경 전 및 폐경 후 환경 둘 모두에서 초기의 및 진행된 ER 양성 유방암을 치료하기 위해 사용된 타목시펜; ERα의 길항 및 하향조절, 예를 들어 타목시펜 또는 아로마타제 저해제에 의한 치료에도 불구하고 진행된 여성에서의 유방암을 치료하기 위해 사용된 풀베스트란트; 또는 에스트로겐 합성의 차단, 예를 들어 초기의 및 진행된 ER 양성 유방암을 치료하기 위해 사용된 아로마타제 저해제에 의해 ER 신호전달을 저해할 수 있다. 이 치료가 유방암 치료에 대단히 긍정적인 영향을 미쳤지만, 종양이 ER을 발현하는 환자의 상당수는 기존의 ER 치료에 대한 신생 내성을 나타내거나, 시간이 지나면서 이 치료에 대한 내성을 발생시킨다. 이 보인자의 과발현에 의해 상쇄되는 타목시펜-ERα 복합체에 결합하는 소정의 보인자의 더 낮은 친화도를 통해, 또는 복합체에 보통 결합하지 않는 보인자와의 타목시펜-ERα 복합체의 상호작용을 촉진하는 제2 부위의 형성을 통해, 길항제로서 작용하는 타목시펜으로부터 효현제로의 전환을 주로 수반하는, 제1선 타목시펜 치료에 대한 내성을 설명하기 위해 몇몇 명확한 기전이 기재되어 있다. 따라서 내성은 타목시펜-ERα 활성을 추진시키는 특이적 보인자를 발현하는 세포의 생육의 결과로서 생길 수 있다. 다른 성장 인자 신호전달 경로가 리간드 신호전달에 독립적으로 세포 증식을 추진시키는 ER 수용체 또는 동시활성자를 직접적으로 활성화하는 가능성이 또한 존재한다.
더 최근에, ESR1에서의 돌연변이는 17% 내지 25%로 변하는 빈도로 전이성 ER 양성 환자 유래된 종양 샘플 및 환자 유래된 이종이식(patient-derived xenograft: PDX) 모델에서 가능한 내성 기전으로서 확인되었다. 이 돌연변이는 돌연변이된 기능성 단백질을 생성시키는 리간드 결합 도메인에서 배타적은 아니지만 우세하고 아미노산 변화의 예는 Ser463Pro, Val543Glu, Leu536Arg, Tyr537Ser, Tyr537Asn 및 Asp538Gly를 포함하며, 537번 및 538번 아미노산에서의 변화는 현재 기재된 대부분의 변화를 구성한다. 이 돌연변이는 Cancer Genome Atlas 데이터베이스에서 특징화된 1차 유방 샘플로부터의 게놈에서 이전에 검출되지 않았다. ER 발현에 양성인 390개의 1차 유방암 샘플 중에서, ESR1에서 단일 돌연변이가 검출되지 않았다(Cancer Genome Atlas Network, 2012 Nature 490: 61-70). 이 돌연변이체 수용체가 에스트라디올의 부재 하에 기본 전사 활성을 보여주므로, 리간드 결합 도메인 돌연변이는 아로마타제 저해제 내분비 치료에 대한 내성 반응으로서 발생하는 것으로 생각된다. 537번 및 538번 아미노산에서 돌연변이된 ER의 결정 구조는 돌연변이체 둘 모두가 동시작용자 동원을 허용하도록 나선 12의 위치를 이동시키고 이로써 효현제 활성화된 야생형 ER을 모방함으로써 ER의 효현제 배좌를 선호한다는 것을 보여주었다. 공개된 데이터는 내분비 치료, 예컨대 타목시펜 및 풀베스트란트가 여전히 ER 돌연변이체에 결합하고 어느 정도로 전사 활성화를 저해할 수 있고, 풀베스트란트가 Try537Ser을 분해할 수 있지만, 완전한 수용체 저해를 위해 더 많은 용량이 필요할 수 있다는 것을 보여주었다(Toy et al., Nat. Genetics 2013, 45: 1439-1445; Robinson et al., Nat. Genetics 2013, 45: 144601451; Li, S. et al. Cell Rep. 4, 1116-1130 (2013)). 따라서, (이하 기재된 바와 같은) 소정의 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염이 돌연변이체 ER을 하향조절하고 길항할 수 있다는 것이 실현 가능하지만, 이 단계에서 ESR1 돌연변이가 변경된 임상 결과와 연관되는지는 공지되어 있지 않다.
어떤 내성 기전 또는 기전의 조합이 발생하는지와 무관하게, 여럿은 ER 의존적 활성에 여전히 의존하고, SERD 기전을 통한 수용체의 제거는 세포로부터 ERα 수용체를 제거하는 최고의 방식을 제공한다. 풀베스트란트는 현재 임상 용도로 승인된 유일한 SERD이지만, 이의 기계론적 특성에도 불구하고, 약물의 약물학적 특성은 시험관내 유방 세포주 실험에서 보인 수용체의 완전한 하향조절과 비교하여 환자 샘플에서 수용체의 50% 미만의 턴오버(turnover)를 발생시키는 500 ㎎의 매월 용량의 현재 제한으로 인해 이의 효율을 제한하였다(Wardell, et al., Biochem. Pharm., 2011, 82:122-130). 그러므로, 초기의, 전이성 및 획득된 내성 환경에서 증대된 이익을 제공하도록 필요한 약제학적 특성 및 SERD 기전을 갖는 새로운 ER 표적화 제제에 대한 필요성이 존재한다.
본 명세서의 화합물은 악성 질병으로부터 생긴 비제어된 세포 증식을 저해하는 데 유용한 강력한 항종양 활성을 보유하는 것으로 발견되었다. 본 명세서의 화합물은, 최소로, SERD로서 작용함으로써 항종양 효과를 제공한다. 예를 들어, 본 명세서의 화합물은 예를 들어 MCF-7, CAMA-1, BT474 및/또는 MDA-MB-134 유방암 세포주에 대해 다수의 상이한 유방암 세포주에서 에스트로겐 수용체를 하향조절하는 능력을 통해 항종양 활성을 나타낼 수 있다. 이러한 화합물은 특히 암의 치료를 위한 치료제로서 더 적합한 것으로 예상될 수 있다.
본 명세서의 화합물은 또한 다른 공지된 SERD와 비교하여 유리한 물성(예를 들어, 더 낮은 친유성, 더 높은 수성 용해도, 더 높은 투과도, 더 낮은 혈장 단백질 결합 및/또는 더 높은 화학 안정성), 및/또는 긍정적인 독성 프로필(예를 들어, hERG에서의 감소된 활성), 및/또는 긍정적인 대사 또는 약물동력학적 프로필을 나타낼 수 있다. 따라서 이러한 화합물은 특히 암의 치료를 위한 치료제로서 특히 적합할 수 있다.
본 명세서의 일 양태에 따르면, 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염이 제공된다:
[화학식 I]
(식 중,
A는 CR2 또는 N이고;
G는 CR3 또는 N이고;
D는 CR4 또는 N이고;
E는 CR5 또는 N이고;
Q는 O, NH 또는 NMe이고;
R1은 CH2F, CHF2 또는 CF3이고;
R2는 H, F, Cl, Me, CN, OMe 또는 OEt이고;
R3은 H 또는 F이고;
R4는 H, F, CN 또는 OMe이고;
R5는 H 또는 F이고;
R6은 H, Me, CH2F, CHF2 또는 CF3이고;
R7은 H 또는 Me이고;
R8은 C1-3 알킬, CH2F, CHF2, CF3 또는 C3-4 사이클로알킬이고;
R9는 Me, F 또는 CH2F이고;
R10은 Me, F, CH2F, CHF2, CF3, CH2OMe 또는 CH2OH이고;
R11은 H 또는 F이거나;
R10 및 R11은, 이들이 부착된 탄소 원자와 함께 취해져, 사이클로프로필 고리 또는 옥세탄 고리를 형성하고;
R12는 F 또는 Me로부터 독립적으로 선택되고;
R13은 H 또는 F이고;
a는 0, 1 또는 2이다).
본 명세서는 또한 약제학적으로 허용 가능한 부형제와 회합된 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 포함하는 약제학적 조성물을 기재한다.
본 명세서는 또한 약제로서 사용하기 위한 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 기재한다.
본 명세서는 또한 암의 치료에서 사용하기 위한 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 기재한다.
본 명세서는 또한 암의 치료에서 사용하기 위한 다른 항종양제와의 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염의 배합을 기재한다.
본 명세서의 추가의 양태는 본 명세서를 읽는 것으로부터 당업자에게 명확할 것이다.
C1-3 알킬 기는 분지 또는 비분지될 수 있다. 적합한 C1-3 알킬 기의 예는 메틸(Me), 에틸(Et), n-프로필(n-Pr) 또는 i-프로필(i-Pr)이다.
C3-4 사이클로알킬 기는 비치환된, 단환식, 불포화 카보사이클릭 고리이다. 적합한 C3-4 사이클로알킬 기의 예는 사이클로프로필 및 사이클로부틸이다.
일 구현예에서, 상기 정의된 바와 같은 화학식 (I)의 화합물이 제공된다.
일 구현예에서, 화학식 (I)의 화합물의 약제학적으로 허용 가능한 염이 제공된다.
일 구현예에서, A는 CR2이다.
일 구현예에서, G는 CR3이다.
일 구현예에서, A는 CR2이고, G는 CR3이다.
일 구현예에서, A는 CR2이고, G는 N이다.
일 구현예에서, A는 N이고, G는 CR3이다.
일 구현예에서, R2는 H, F, Cl, Me, CN 또는 OMe이다.
일 구현예에서, R2는 H, F 또는 OMe이다.
일 구현예에서, R2는 H 또는 F이다.
일 구현예에서, R2는 H이다.
일 구현예에서, R2는 F이다.
일 구현예에서, A는 CR2이고, R2는 H, F 또는 OMe이다.
일 구현예에서, G는 CR3이고, R3은 H, F 또는 OMe이다.
일 구현예에서, A는 CH이고, G는 CH이다.
일 구현예에서, A는 C-F이고, G는 C-F이다.
일 구현예에서, A는 C-F이고, G는 CH이다.
일 구현예에서, A는 C-OMe이고, G는 CH이다.
일 구현예에서, A는 C-OMe이고, G는 C-F이다.
일 구현예에서, A 또는 G 중 하나는 CH이고, A 또는 G 중 다른 하나는 N이다.
일 구현예에서, D는 CR4이다.
일 구현예에서, E는 CR5이다.
일 구현예에서, D 및 E 둘 모두는 CH이다.
일 구현예에서, D 및 E 둘 모두는 N이다.
일 구현예에서, D 또는 E 중 하나는 CH이고, D 또는 E 중 다른 하나는 N이다.
일 구현예에서, D 또는 E 중 하나는 C-F이고, D 또는 E 중 다른 하나는 CH이다.
일 구현예에서, D 또는 E 중 하나는 C-OMe이고, D 또는 E 중 다른 하나는 CH이다.
일 구현예에서, Q는 O 또는 NH이다.
일 구현예에서, Q는 O이다.
일 구현예에서, Q는 NH이다.
일 구현예에서, Q는 NMe이다.
일 구현예에서, R1은 CH2F 또는 CHF2이다.
일 구현예에서, R1은 CH2F이다.
일 구현예에서, R1은 CHF2이다.
일 구현예에서, R1은 CF3이다.
일 구현예에서, R6은 H 또는 Me이다.
일 구현예에서, R6은 H이다.
일 구현예에서, R6은 Me이다.
일 구현예에서, R7은 H이다.
일 구현예에서, R7은 Me이다.
일 구현예에서, R8은 C1-3 알킬, CHF2 또는 사이클로프로필이다.
일 구현예에서, R8은 C1-3 알킬 또는 CHF2이다.
일 구현예에서, R8은 C1-3 알킬이다.
일 구현예에서, R8은 메틸이다.
일 구현예에서, R8은 CHF2이다.
일 구현예에서, R9는 Me 또는 F이다.
일 구현예에서, R9는 Me이다.
일 구현예에서, R9는 F이다.
일 구현예에서, R10은 Me, F, CH2F, CH2OMe 또는 CH2OH이다.
일 구현예에서, R10은 Me, F, CH2OMe 또는 CH2OH이다.
일 구현예에서, R10은 F, CH2OMe 또는 CH2OH이다.
일 구현예에서, R10은 CH2OMe 또는 CH2OH이다.
일 구현예에서, R10은 F이다.
일 구현예에서, R11은 F이다.
일 구현예에서, R11은 H이다.
일 구현예에서, R10 및 R11은, 이들이 부착된 탄소 원자와 함께 취해져, 사이클로프로필 고리 또는 옥세탄 고리를 형성한다.
일 구현예에서, R10 및 R11은, 이들이 부착된 탄소 원자와 함께 취해져, 사이클로프로필 고리를 형성한다.
일 구현예에서, R10 및 R11은, 이들이 부착된 탄소 원자와 함께 취해져, 옥세탄 고리를 형성한다.
일 구현예에서, R10은 CH2OMe 또는 CH2OH이고, R11은 F이다.
일 구현예에서, R10은 CH2OMe 또는 CH2OH이고, R9는 Me이다.
일 구현예에서, R10은 F이고, R9는 F이다.
일 구현예에서, R9는 Me 또는 F이고, R2는 H, F, Cl, Me, CN 또는 OMe이다.
일 구현예에서, R9는 Me이고, R11은 F이다.
일 구현예에서, R9는 F이고, R11은 Me이다.
일 구현예에서, R9는 F이고 R11은 F이다.
일 구현예에서, R9는 F이고, R10 및 R11은, 이들이 부착된 탄소 원자와 함께 취해져, 사이클로프로필 고리 또는 옥세탄 고리를 형성한다.
일 구현예에서, R9는 F이고, R10 및 R11은, 이들이 부착된 탄소 원자와 함께 취해져, 사이클로프로필 고리를 형성한다.
일 구현예에서, R9는 F이고, R10 및 R11은, 이들이 부착된 탄소 원자와 함께 취해져, 옥세탄 고리를 형성한다.
일 구현예에서, 화학식 (I)의 화합물 내의 기 -CH2-C(R9)(R10)(R11)은 하기로 이루어진 군으로부터 선택된다:
일 구현예에서, 화학식 (I)의 화합물 내의 기 -CH2-C(R9)(R10)(R11)은 하기로 이루어진 군으로부터 선택된다:
일 구현예에서, 화학식 (I)의 화합물 내의 기 -CH2-C(R9)(R10)(R11)은 하기로 이루어진 군으로부터 선택된다:
일 구현예에서, 화학식 (I)의 화합물 내의 기 -CH2-C(R9)(R10)(R11)은 하기로 이루어진 군으로부터 선택된다:
일 구현예에서, 화학식 (I)의 화합물 내의 기 -CH2-C(R9)(R10)(R11)은 하기로 이루어진 군으로부터 선택된다:
일 구현예에서, 화학식 (I)의 화합물 내의 기 -CH2-C(R9)(R10)(R11)은 하기로 이루어진 군으로부터 선택된다:
일 구현예에서, R12는 Me이다.
일 구현예에서, R12는 F이다.
일 구현예에서, R13은 H이다.
일 구현예에서, R13은 F이다.
일 구현예에서, a는 0 또는 1이다.
일 구현예에서, a는 0이다.
일 구현예에서, a는 1이다.
일 구현예에서, a는 2이다.
일 구현예에서, 화학식 (IA)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염이 제공된다:
[화학식 IA]
식 중,
Q는 O, NH 또는 NMe이고;
R1은 CH2F, CHF2 또는 CF3이고;
R6은 H 또는 Me이고;
R7은 H 또는 Me이고;
R8은 Me, CHF2 또는 사이클로프로필이고;
R9는 Me 또는 F이고;
R10은 Me, F, CH2F, CH2OMe 또는 CH2OH이고;
R11은 H 또는 F이거나;
R10 및 R11은, 이들이 부착된 탄소 원자와 함께 취해져, 사이클로프로필 고리 또는 옥세탄 고리를 형성하고;
R12는 H 또는 Me로부터 독립적으로 선택되고;
R13은 H 또는 F이고;
a는 0, 1 또는 2이고;
고리 Y는 하기로 이루어진 군으로부터 선택된다:
일 구현예에서, 고리 Y가 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 화학식 (IA)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염이 제공된다:
일 구현예에서, 고리 Y가 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 화학식 (IA)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염이 제공된다:
일 구현예에서, 고리 Y가 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 화학식 (IA)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염이 제공된다:
일 구현예에서, 고리 Y가 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 화학식 (IA)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염이 제공된다:
일 구현예에서, 고리 Y가 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 화학식 (IA)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염이 제공된다:
일 구현예에서, Q가 NH인, 화학식 (IA)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염이 제공된다.
일 구현예에서, Q가 O인, 화학식 (IA)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염이 제공된다.
일 구현예에서, R1이 CH2F인, 화학식 (IA)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염이 제공된다.
일 구현예에서, R1이 CHF2인, 화학식 (IA)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염이 제공된다.
일 구현예에서, R6이 H인, 화학식 (IA)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염이 제공된다.
일 구현예에서, R7이 H인, 화학식 (IA)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염이 제공된다.
일 구현예에서, R8이 Me인, 화학식 (IA)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염이 제공된다.
일 구현예에서, R10이 F, CH2OMe 또는 CH2OH인, 화학식 (IA)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염이 제공된다.
일 구현예에서, R9가 F이고, R10 및 R11이, 이들이 부착된 탄소 원자와 함께 취해져, 사이클로프로필 고리 또는 옥세탄 고리를 형성하는, 화학식 (IA)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염이 제공된다. 추가의 구현예에서, R10 및 R11은, 이들이 부착된 탄소 원자와 함께 취해져, 사이클로프로필 고리를 형성한다. 추가의 구현예에서, R10 및 R11은, 이들이 부착된 탄소 원자와 함께 취해져, 옥세탄 고리를 형성한다.
일 구현예에서, R8이 Me인, 화학식 (IA)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염이 제공된다.
일 구현예에서, 화학식 (IA)의 화합물 내의 기 -CH2-C(R9)(R10)(R11)은 하기로 이루어진 군으로부터 선택된다:
일 구현예에서, 화학식 (IA)의 화합물 내의 기 -CH2-C(R9)(R10)(R11)은 하기로 이루어진 군으로부터 선택된다:
일 구현예에서, 화학식 (IA)의 화합물 내의 기 -CH2-C(R9)(R10)(R11)은 하기로 이루어진 군으로부터 선택된다:
일 구현예에서, 화학식 (IA)의 화합물 내의 기 -CH2-C(R9)(R10)(R11)은 하기로 이루어진 군으로부터 선택된다:
일 구현예에서, R13이 H인, 화학식 (IA)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염이 제공된다.
일 구현예에서, a가 0인, 화학식 (IA)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염이 제공된다.
일 구현예에서, 화학식 (IB)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염이 제공된다:
[화학식 IB]
식 중,
Q는 O, NH 또는 NMe이고;
R1은 CH2F, CHF2 또는 CF3이고;
R6은 H 또는 Me이고;
R7은 H 또는 Me이고;
R8은 Me, CHF2 또는 사이클로프로필이고;
R14는 하기로 이루어진 군으로부터 선택되고:
고리 Y는 하기로 이루어진 군으로부터 선택된다:
일 구현예에서, 고리 Y가 하기로 이루어진 군으로부터 선택된, 화학식 (IB)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염이 제공된다:
일 구현예에서, 고리 Y가 하기로 이루어진 군으로부터 선택된, 화학식 (IB)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염이 제공된다:
일 구현예에서, 고리 Y가 하기로 이루어진 군으로부터 선택된, 화학식 (IB)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염이 제공된다:
일 구현예에서, 고리 Y가 하기로 이루어진 군으로부터 선택된, 화학식 (IB)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염이 제공된다:
일 구현예에서, 고리 Y가 하기로 이루어진 군으로부터 선택된, 화학식 (IB)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염이 제공된다:
일 구현예에서, Q가 NH인, 화학식 (IB)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염이 제공된다.
일 구현예에서, Q가 O인, 화학식 (IB)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염이 제공된다.
일 구현예에서, R1이 CH2F인, 화학식 (IB)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염이 제공된다.
일 구현예에서, R1이 CHF2인, 화학식 (IB)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염이 제공된다.
일 구현예에서, R6이 H인, 화학식 (IB)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염이 제공된다.
일 구현예에서, R7이 H인, 화학식 (IB)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염이 제공된다.
일 구현예에서, R8이 Me인, 화학식 (IB)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염이 제공된다.
일 구현예에서, 화학식 (IB)의 화합물 내의 기 R14는 하기로 이루어진 군으로부터 선택된다:
일 구현예에서, 화학식 (IB)의 화합물 내의 기 R14는 하기로 이루어진 군으로부터 선택된다:
일 구현예에서, 화학식 (IB)의 화합물 내의 기 R14는 하기로 이루어진 군으로부터 선택된다:
본 명세서의 추가의 양태에서, 화학식 (IC)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염이 제공된다:
[화학식 IC]
식 중,
A는 CR2 또는 N이고;
G는 CR3 또는 N이고;
D는 CR4 또는 N이고;
E는 CR5 또는 N이고;
Q는 O, NH 또는 NMe이고;
R1은 CH2F, CHF2 또는 CF3이고;
R2는 H, F, Cl, Me, CN, OMe 또는 OEt이고;
R3은 H 또는 F이고;
R4는 H, F, CN 또는 OMe이고;
R5는 H 또는 F이고;
R6은 H, Me, CH2F, CHF2 또는 CF3이고;
R7은 H 또는 Me이고;
R8은 C1-3 알킬, CH2F, CHF2, CF3 또는 C3-4 사이클로알킬이고;
R9는 Me, F 또는 CH2F이고;
R10은 Me, F, CH2F, CHF2, CF3, CH2OMe 또는 CH2OH이고;
R11은 H 또는 F이거나;
R10 및 R11은, 이들이 부착된 탄소 원자와 함께 취해져, 사이클로프로필 고리 또는 옥세탄 고리를 형성하고;
R12는 F 또는 Me로부터 독립적으로 선택되고;
R13은 H 또는 F이고;
a는 0, 1 또는 2이다.
일 구현예에서, R2가 H, F, Cl, Me, CN 또는 OMe이고, R9가 Me 또는 F인, 화학식 (IC)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염이 제공된다.
추가의 구현예에서, 피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린 고리의 6번 위치에서의 입체화학이 S인, 화학식 (IC)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염이 제공된다.
추가의 구현예에서, 피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린 고리의 6번 위치에서의 입체화학이 R인, 화학식 (IC)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염이 제공된다.
추가의 구현예에서, 피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린 고리의 8번 위치에서의 입체화학이 S인, 화학식 (IC)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염이 제공된다.
추가의 구현예에서, 피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린 고리의 8번 위치에서의 입체화학이 R인, 화학식 (IC)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염이 제공된다.
일 구현예에서, 화학식 (ID)의 화합물이 제공된다:
[화학식 ID]
식 중,
Q는 O 또는 NH이고;
R1은 CH2F 또는 CHF2이고;
R14는 하기로 이루어진 군으로부터 선택되고:
고리 Y는 하기로 이루어진 군으로부터 선택된다:
일 구현예에서, Q가 NH인, 화학식 (ID)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염이 제공된다.
일 구현예에서, Q가 O인, 화학식 (ID)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염이 제공된다.
일 구현예에서, R1이 CH2F인, 화학식 (ID)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염이 제공된다.
일 구현예에서, Q가 O이고, R1이 CH2F인, 화학식 (ID)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염이 제공된다.
일 구현예에서, Q가 NH이고, R1이 CH2F인, 화학식 (ID)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염이 제공된다.
일 구현예에서, R14가 하기로 이루어진 군으로부터 선택된, 화학식 (ID)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염이 제공된다:
일 구현예에서, 고리 Y가 하기로 이루어진 군으로부터 선택된, 화학식 (ID)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염이 제공된다:
일 구현예에서, 화합물이 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 화학식 (I)의 화합물이 제공된다:
N-(4-((6S,8R)-7-(2,2-디플루오로-3-메톡시프로필)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)-3-메톡시페닐)-1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-아민;
6-((6S,8R)-7-(2,2-디플루오로-3-메톡시프로필)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)-N-(1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일)피리딘-3-아민;
6-((6S,8R)-7-((1-플루오로사이클로프로필)메틸)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)-N-(1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일)피리딘-3-아민;
N-(4-((6S,8R)-7-(2-플루오로-3-메톡시-2-메틸프로필)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)-3-메톡시페닐)-1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-아민;
3-((6S,8R)-6-(2,6-디플루오로-4-((1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일)아미노)페닐)-8-메틸-3,6,8,9-테트라하이드로-7H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-7-일)-2,2-디플루오로프로판-1-올;
N-(4-((6S,8R)-7-((1-플루오로사이클로프로필)메틸)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)-3-메톡시페닐)-1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-아민;
(6S,8R)-7-((1-플루오로사이클로프로필)메틸)-6-(4-((1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일)옥시)-2-메톡시페닐)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린;
N-(3,5-디플루오로-4-((6S,8R)-8-메틸-7-(2,2,2-트리플루오로에틸)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)페닐)-1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-아민; 및
5-((6S,8R)-7-((1-플루오로사이클로프로필)메틸)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)-N-(1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일)-4-메톡시피리딘-2-아민;
또는 이들의 약제학적으로 허용 가능한 염.
일 구현예에서, 화합물이 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 화학식 (I)의 화합물이 제공된다:
N-(4-((6S,8R)-7-(2,2-디플루오로-3-메톡시프로필)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)-3-메톡시페닐)-1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-아민;
6-((6S,8R)-7-(2,2-디플루오로-3-메톡시프로필)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)-N-(1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일)피리딘-3-아민;
6-((6S,8R)-7-((1-플루오로사이클로프로필)메틸)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)-N-(1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일)피리딘-3-아민;
N-(4-((6S,8R)-7-(2-플루오로-3-메톡시-2-메틸프로필)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)-3-메톡시페닐)-1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-아민;
3-((6S,8R)-6-(2,6-디플루오로-4-((1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일)아미노)페닐)-8-메틸-3,6,8,9-테트라하이드로-7H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-7-일)-2,2-디플루오로프로판-1-올;
N-(4-((6S,8R)-7-((1-플루오로사이클로프로필)메틸)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)-3-메톡시페닐)-1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-아민;
(6S,8R)-7-((1-플루오로사이클로프로필)메틸)-6-(4-((1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일)옥시)-2-메톡시페닐)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린;
N-(3,5-디플루오로-4-((6S,8R)-8-메틸-7-(2,2,2-트리플루오로에틸)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)페닐)-1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-아민;
5-((6S,8R)-7-((1-플루오로사이클로프로필)메틸)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)-N-(1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일)-4-메톡시피리딘-2-아민;
N-(4-((6S,8R)-7-((3-(플루오로메틸)옥세탄-3-일)메틸)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)-3-메톡시페닐)-1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-아민;
N-(3,5-디플루오로-4-((6S,8R)-7-((1-플루오로사이클로프로필)메틸)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)페닐)-1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-아민;
(6S,8R)-7-(2-플루오로-3-메톡시-2-메틸프로필)-6-(4-(1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일옥시)-2-메톡시페닐)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린;
N-(4-((6S,8R)-7-(2-플루오로-3-메톡시-2-메틸프로필)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)-3-메톡시페닐)-1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-아민;
2,2-디플루오로-3-((6S,8R)-6-(5-((1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일)아미노)피리딘-2-일)-8-메틸-3,6,8,9-테트라하이드로-7H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-7-일)프로판-1-올;
N-(1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일)-6-((6S,8R)-8-메틸-7-(2,2,2-트리플루오로에틸)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)피리딘-3-아민;
5-플루오로-6-((6S,8R)-7-((1-플루오로사이클로프로필)메틸)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)-N-(1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일)피리딘-3-아민;
N-(4-((6S,8R)-7-(2,2-디플루오로프로필)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)-3-메톡시페닐)-1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-아민;
N-(3-에톡시-4-((6S,8R)-7-((1-플루오로사이클로프로필)메틸)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)페닐)-1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-아민;
N-(4-((6S,8R)-7-(2,2-디플루오로에틸)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)-3-메톡시페닐)-1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-아민;
(6S,8R)-7-(2,2-디플루오로에틸)-6-(4-((1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일)옥시)-2-메톡시페닐)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린;
3-((6S,8R)-6-(2,6-디플루오로-4-(1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일아미노)페닐)-8-메틸-8,9-디하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-7(6H)-일)-2-플루오로-2-메틸프로판-1-올;
6-((6S,8R)-7-(2,2-디플루오로에틸)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)-N-(1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일)피리딘-3-아민; 및
(6S,8R)-7-(2,2-디플루오로에틸)-6-(5-((1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일)옥시)피리딘-2-일)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린;
또는 이들의 약제학적으로 허용 가능한 염.
일 구현예에서, 화합물이 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 화학식 (I)의 화합물이 제공된다:
1-(3-플루오로프로필)-N-(4-((6R,8R)-8-메틸-7-(2,2,2-트리플루오로에틸)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)페닐)아제티딘-3-아민;
1-(3-플루오로프로필)-N-(3-메톡시-4-((6S,8R)-8-메틸-7-(2,2,2-트리플루오로에틸)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)페닐)아제티딘-3-아민;
2-플루오로-N-(1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일)-6-((6S,8R)-8-메틸-7-(2,2,2-트리플루오로에틸)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)피리딘-3-아민;
5-플루오로-N-(1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일)-6-((6S,8R)-8-메틸-7-(2,2,2-트리플루오로에틸)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)피리딘-3-아민;
2,2-디플루오로-3-((6S,8R)-6-(3-플루오로-5-((1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일)아미노)피리딘-2-일)-8-메틸-3,6,8,9-테트라하이드로-7H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-7-일)프로판-1-올;
6-((6S, 8R)-1-플루오로-8-메틸-7-(2,2,2-트리플루오로에틸)-6,7,9,8-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀸-6-일)-N-(3-플루오로프로필)아제티디-3-일)피리딘-3-아민;
5-플루오로-6-((6S,8R)-1-플루오로-8-메틸-7-(2,2,2-트리플루오로에틸)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)-N-(1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일)피리딘-3-아민;
N-(1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일)-N-메틸-6-((6S,8R)-8-메틸-7-(2,2,2-트리플루오로에틸)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)피리딘-3-아민;
N-(1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일)-6-((6S,8R)-6-듀테리오-8-메틸-7-(2,2,2-트리플루오로에틸)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)피리딘-3-아민;
N-(1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일)-6-((6S,8R)-1-듀테리오-8-메틸-7-(2,2,2-트리플루오로에틸)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)피리딘-3-아민;
N-(1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일)-5-메톡시-6-((6S,8R)-8-메틸-7-(2,2,2-트리플루오로에틸)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)피리딘-3-아민;
5-((6S,8R)-1-플루오로-8-메틸-7-(2,2,2-트리플루오로에틸)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)-N-(1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일)피라진-2-아민;
2-플루오로-6-((6S,8R)-1-플루오로-8-메틸-7-(2,2,2-트리플루오로에틸)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)-N-(1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일)피리딘-3-아민;
6-플루오로-N-(1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일)-5-((6S,8R)-8-메틸-7-(2,2,2-트리플루오로에틸)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)피리딘-2-아민;
N-(2-플루오로-4-((6R,8R)-8-메틸-7-(2,2,2-트리플루오로에틸)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)페닐)-1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-아민;
N-(1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일)-5-((6S,8R)-8-메틸-7-(2,2,2-트리플루오로에틸)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)피라진-2-아민;
6-((6S,8R)-7-(2,2-디플루오로에틸)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)-N-(1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일)-N-메틸피리딘-3-아민;
6-((6S,8R)-7-(2,2-디플루오로에틸)-6,8-디메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)-N-(1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일)피리딘-3-아민;
N-(4-((6S,8R)-7-(2,2-디플루오로에틸)-6,8-디메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)-3-메톡시페닐)-1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-아민;
6-((6S,8R)-7-(2,2-디플루오로에틸)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)-5-플루오로-N-(1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일)피리딘-3-아민;
6-((6S,8R)-7-(2,2-디플루오로에틸)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)-2-플루오로-N-(1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일)피리딘-3-아민;
N-(4-((6R,8R)-7-(2,2-디플루오로에틸)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)페닐)-1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-아민;
N-(4-((6S,8R)-7-(2,2-디플루오로에틸)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)-3,5-디플루오로페닐)-1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-아민;
5-((6S,8R)-7-(2,2-디플루오로에틸)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)-N-(1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일)피라진-2-아민;
6-((6S,8S)-7-(2,2-디플루오로에틸)-8-(디플루오로메틸)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)-N-(1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일)피리딘-3-아민;
N-(4-((6S,8R)-7-((1-플루오로사이클로프로필)메틸)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)-3-메톡시페닐)-1-(3-플루오로프로필)-N-메틸아제티딘-3-아민;
N-(2-플루오로-4-((6S,8R)-7-((1-플루오로사이클로프로필)메틸)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)-5-메톡시페닐)-1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-아민;
5-((6S,8R)-7-((1-플루오로사이클로프로필)메틸)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)-N-(1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일)피리딘-2-아민;
5-((6S,8R)-7-((1-플루오로사이클로프로필)메틸)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)-N-(1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일)피라진-2-아민;
N-(4-((6S,8R)-7-((1-플루오로사이클로프로필)메틸)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)-3-메톡시페닐)-1-(3,3,3-트리플루오로프로필)아제티딘-3-아민;
6-((6S,8R)-7-((1-플루오로사이클로프로필)메틸)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)-N-(1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일)-N-메틸피리딘-3-아민;
2,2-디플루오로-3-((6S,8R)-6-(5-((1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일)옥시)피리딘-2-일)-8-메틸-3,6,8,9-테트라하이드로-7H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-7-일)프로판-1-올;
2,2-디플루오로-3-((6S,8R)-6-(3-플루오로-5-((1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일)옥시)피리딘-2-일)-8-메틸-3,6,8,9-테트라하이드로-7H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-7-일)프로판-1-올;
2,2-디플루오로-3-((6S,8R)-6-(4-((1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일)아미노)-2-메톡시페닐)-8-메틸-3,6,8,9-테트라하이드로-7H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-7-일)프로판-1-올;
2,2-디플루오로-3-((6S,8R)-1-플루오로-6-(5-((1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일)아미노)피리딘-2-일)-8-메틸-3,6,8,9-테트라하이드로-7H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-7-일)프로판-1-올;
2,2-디플루오로-3-((6S,8R)-1-플루오로-6-(6-플루오로-5-((1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일)아미노)피리딘-2-일)-8-메틸-3,6,8,9-테트라하이드로-7H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-7-일)프로판-1-올;
6-((6S,8R)-7-(2-플루오로-2-메틸프로필)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)-N-(1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일)피리딘-3-아민;
N-(4-((6S,8R)-7-(2-플루오로-2-메틸프로필)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)-3-메톡시페닐)-1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-아민;
6-((6S,8R)-7-(2-플루오로프로필)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)-N-(1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일)피리딘-3-아민;
6-((6S,8R)-7-(2-플루오로프로필)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)-N-(1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일)피리딘-3-아민;
1-(3-플루오로프로필)-N-(4-((6S,8R)-7-(2-플루오로프로필)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)-3-메톡시페닐)아제티딘-3-아민;
1-(3-플루오로프로필)-N-(4-((6S,8R)-7-(2-플루오로프로필)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)-3-메톡시페닐)아제티딘-3-아민;
N-(1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일)-6-((6S,8R)-7-이소부틸-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)피리딘-3-아민;
6-((6S,8R)-7-(2,2-디플루오로프로필)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)-N-(1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일)피리딘-3-아민;
5-플루오로-N-(1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일)-6-((6S,8R)-8-메틸-7-(2,2,3-트리플루오로프로필)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)피리딘-3-아민;
(S)-6-(8,8-디메틸-7-(2,2,2-트리플루오로에틸)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)-N-(1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일)피리딘-3-아민; 및
(S)-6-(7-(2,2-디플루오로에틸)-8,8-디메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)-N-(1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일)피리딘-3-아민;
또는 이들의 약제학적으로 허용 가능한 염.
일 구현예에서, N-(1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일)-6-(8-메틸-7-(2,2,2-트리플루오로에틸)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)피리딘-3-아민인 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염이 제공된다.
일 구현예에서, 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 화학식 (I)의 화합물이 제공된다:
N-(1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일)-6-((6S,8R)-8-메틸-7-(2,2,2-트리플루오로에틸)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)피리딘-3-아민; 및
N-(1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일)-6-((6R,8R)-8-메틸-7-(2,2,2-트리플루오로에틸)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)피리딘-3-아민;
또는 이들의 약제학적으로 허용 가능한 염.
일 구현예에서, N-(1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일)-6-((6S,8R)-8-메틸-7-(2,2,2-트리플루오로에틸)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)피리딘-3-아민인 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염이 제공된다.
일 구현예에서, N-(1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일)-6-((6R,8R)-8-메틸-7-(2,2,2-트리플루오로에틸)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)피리딘-3-아민인 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염이 제공된다.
일 구현예에서, 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염이 제공되고, 화합물은 본 명세서에서의 임의의 실시예로부터 선택된다. 추가의 특징은 임의의 구체적인 실시예가 개별적으로 부인된다는 조건 하에 본 명세서에 기재된 임의의 구현예이다. 추가의 특징은 본 명세서의 화합물의 예의 상기 목록으로부터 선택된 임의의 하나 이상의 화합물이 개별적으로 부인된다는 조건 하에 본 명세서에 기재된 임의의 구현예이다.
혼선을 피하기 위해, a가 1일 때, R12 치환기는 이것이 연관된 각각의 에틸 사슬의 어느 한 탄소 상에 치환될 수 있고, a가 2일 때, R12 치환기는 상기 에틸 사슬의 단일 탄소 또는 탄소 둘 모두에서 치환될 수 있다. 따라서, a가 1 또는 2일 때, 하기 치환 패턴은 가능하고, 이의 각각은 추가의 구현예를 나타낸다:
따라서 추가의 구현예에서, a는 1 또는 2이고, R12는 하기 (a)에 도시된 바와 같은 화학식 (I)의 화합물의 나머지에 부착된다:
[화학식 a]
추가의 구현예에서, a는 1 또는 2이고, R12는 메틸이고, R12는 하기 (b)에 도시된 바와 같은 화학식 (I)의 화합물의 나머지에 부착된다:
[화학식 b]
추가로 혼선을 피하기 위해, 본 명세서의 화학식 내의 "
"의 사용은 상이한 기 사이의 연결 지점을 나타낸다.
화학식 (I)의 화합물은 2개 이상의 키랄 중심을 갖고, 화학식 (I)의 화합물은 또한 임의의 상대 비율로 화학식 (I)의 화합물의 하나 이상의 다른 가능한 거울상이성질체성 및/또는 부분입체이성질체성 이성질체의 존재 또는 부재 하에 제조, 단리 및/또는 공급될 수 있는 것으로 인식될 것이다. 거울상농후화/거울상순수 및/또는 부분입체농후화/부분입체순수 화합물의 제조는 당해 분야에 널리 공지된 유기 화학의 표준 기법에 의해, 예를 들어 거울상농후화 또는 거울상순수 출발 재료로부터의 합성, 합성 동안 적절한 거울상농후화 또는 거울상순수 촉매의 사용에 의해, 및/또는 입체이성질체의 라세미 또는 부분 농후화된 혼합물의 분할에 의해, 예를 들어 키랄 크로마토그래피를 통해 수행될 수 있다.
약제학적 맥락에서 사용하기 위해, 다량의 다른 입체이성질체 형태가 존재하지 않으면서, 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 제공하는 것이 바람직할 수 있다.
따라서, 일 구현예에서, 선택적으로 화학식 (I)의 화합물의 하나 이상의 다른 입체이성질체 형태 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염과 함께, 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 포함하는 조성물이 제공되고, 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염은 90% 이상의 부분입체이성질체 초과(%de)로 조성물 내에 존재한다.
추가의 구현예에서, 상기 언급된 조성물 내의 %de는 95% 이상이다.
추가의 구현예에서, 상기 언급된 조성물 내의 %de는 98% 이상이다.
추가의 구현예에서, 상기 언급된 조성물 내의 %de는 99% 이상이다.
추가의 구현예에서, 선택적으로 화학식 (I)의 화합물의 하나 이상의 다른 입체이성질체 형태 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염과 함께, 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 포함하는 조성물이 제공되고, 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염은 90% 이상의 거울상이성질체 초과(%ee)로 조성물 내에 존재한다.
추가의 구현예에서, 상기 언급된 조성물 내의 %ee는 95% 이상이다.
추가의 구현예에서, 상기 언급된 조성물 내의 %ee는 98% 이상이다.
추가의 구현예에서, 상기 언급된 조성물 내의 %ee는 99% 이상이다.
추가의 구현예에서, 선택적으로 화학식 (I)의 화합물의 하나 이상의 다른 입체이성질체 형태 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염과 함께, 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 포함하는 조성물이 제공되고, 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염은 90% 이상의 거울상이성질체 초과(%ee) 및 90% 이상의 부분입체이성질체 초과(%de)로 조성물 내에 존재한다.
상기 언급된 조성물의 추가의 구현예에서, %ee 및 %de는 하기에 기재된 바와 같은 값의 임의의 조합을 취할 수 있다:
추가의 구현예에서, 약제학적으로 허용 가능한 부형제와 회합된, 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 포함하는 약제학적 조성물이 제공된다.
일 구현예에서, 약제학적으로 허용 가능한 부형제와 회합된, 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 포함하고, 선택적으로 화학식 (I)의 화합물의 하나 이상의 다른 입체이성질체 형태 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 추가로 포함하는 약제학적 조성물이 제공되고, 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염은 90% 이상의 거울상이성질체 초과(%ee)로 조성물 내에 존재한다.
추가의 구현예에서, 상기 언급된 조성물 내의 %ee는 95% 이상이다.
추가의 구현예에서, 상기 언급된 조성물 내의 %ee는 98% 이상이다.
추가의 구현예에서, 상기 언급된 조성물 내의 %ee는 99% 이상이다.
일 구현예에서, 약제학적으로 허용 가능한 부형제와 회합된, 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 포함하고, 선택적으로 화학식 (I)의 화합물의 하나 이상의 다른 입체이성질체 형태 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 추가로 포함하는 약제학적 조성물이 제공되고, 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염은 90% 이상의 부분입체이성질체 초과(%de)로 조성물 내에 존재한다.
추가의 구현예에서, 상기 언급된 조성물 내의 %de는 95% 이상이다.
추가의 구현예에서, 상기 언급된 조성물 내의 %de는 98% 이상이다.
추가의 구현예에서, 상기 언급된 조성물 내의 %de는 99% 이상이다.
일 구현예에서, 약제학적으로 허용 가능한 부형제와 회합된, 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 포함하고, 선택적으로 화학식 (I)의 화합물의 하나 이상의 다른 입체이성질체 형태 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 추가로 포함하는 약제학적 조성물이 제공되고, 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염은 90% 이상의 거울상이성질체 초과(%ee) 및 90% 이상의 부분입체이성질체 초과(%de)로 조성물 내에 존재한다.
상기 언급된 약제학적 조성물의 추가의 구현예에서, %ee 및 %de는 하기에 기재된 바와 같은 값의 임의의 조합을 취할 수 있다:
화학식 (I)의 화합물 및 이의 약제학적으로 허용 가능한 염은 무정형 형태, 결정질 형태 또는 반결정질 형태로 제조되거나 사용되거나 공급될 수 있고, 임의의 주어진 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염은 수화된 형태(예를 들어, 반수화물, 일수화물, 이수화물, 삼수화물 또는 수화물의 다른 화학량론) 및/또는 용매화된 형태를 포함하는 하나 초과의 결정질/다형 형태로 형성될 수 있다. 본 명세서는 화학식 (I)의 화합물의 임의의 및 모든 이러한 고체 형태 및 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 포함하는 것으로 이해될 것이다.
추가의 구현예에서, 하기 '실시예' 부문에 기재된 방법에 의해 수득될 수 있는 화학식 (I)의 화합물이 제공된다.
본 명세서는 본 화합물에서 생기는 원자의 모든 동위원소를 포함하는 것으로 의도된다. 동위원소는 동일한 원자수, 그러나 상이한 질량수를 갖는 원자를 포함하는 것으로 이해될 것이다. 예를 들어, 수소의 동위원소는 삼중수소 및 중수소를 포함한다. 탄소의 동위원소는 13C 및 14C를 포함한다. 질소의 동위원소는 15N을 포함한다. 특정한 구현예에서, 화학식 (I)의 화합물(식 중, R6은 중수소임)이 제공된다.
화학식 (I)의 화합물의 적합한 약제학적으로 허용 가능한 염은 예를 들어 산 부가 염이다. 화학식 (I)의 화합물의 적합한 약제학적으로 허용 가능한 염은 예를 들어 화학식 (I)의 화합물의 산 부가 염, 예를 들어 무기 또는 유기 산, 예컨대 아세트산, 아디프산, 벤젠 설폰산, 벤조산, 신남산, 시트르산, D,L-락트산, 에탄 디설폰산, 에탄 설폰산, 푸마르산, 염산, L-타르타르산, 말레산, 말산, 말론산, 메탄 설폰산, 나파디실산, 인산, 사카린, 숙신산, 황산, p-톨루엔설폰산, 톨루엔 설폰산 또는 트리플루오로아세트산과의 산 부가 염일 수 있다.
화학식 (I)의 화합물의 추가의 적합한 약제학적으로 허용 가능한 염은 예를 들어 상기 인간 또는 동물 신체에 대한 화학식 (I)의 화합물의 투여 후 인간 또는 동물 신체 내에 형성된 염이다.
화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염은 공결정 고체 형태로서 제조될 수 있다. 화학식 (I)의 화합물의 약제학적으로 허용 가능한 공결정 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염이 본 명세서의 양태를 형성하는 것으로 이해될 것이다.
본원에 기재된 특정한 고체 형태는 도면에 도시된 X선 분말 회절 패턴과 실질적으로 동일한 X선 분말 회절 패턴을 제공하고, 본원에 포함된 표에서 나타낸 바와 같이 다양한 2θ 값을 갖는다. X선 분말 회절 패턴의 2θ 값이 기계마다 또는 샘플마다 약간 변할 수 있고, 그래서 예로 든 값이 절대치로서 해석되어서는 안되는 것으로 이해될 것이다.
측정 조건(예컨대, 사용된 설비 또는 기계)에 따라 하나 이상의 측정 오차를 갖는 X선 분말 회절 패턴이 수득될 수 있는 것으로 공지되어 있다. 특히, X선 분말 회절 패턴에서의 강도가 측정 조건에 따라 변동할 수 있다는 것이 일반적으로 공지되어 있다. 따라서, 본 명세서의 고체 형태가 도면에 도시된 X선 분말 회절 패턴과 동일한 X선 분말 회절 패턴을 제공하는 결정으로 제한되지 않는 것으로 이해되어야 하고, 도면에 도시된 것과 실질적으로 동일한 X선 분말 회절 패턴을 제공하는 임의의 결정은 본 명세서의 범위 내에 해당한다. X선 분말 회절의 당업자는 X선 분말 회절 패턴의 실질적인 동일성을 판단할 수 있다.
X선 분말 회절의 당업자는 피크의 상대 강도가 샘플의 분석에 영향을 미칠 수 있는 예를 들어 30 ㎛ 크기 초과의 그레인 및 비단일적 종횡비에 의해 영향을 받을 수 있다는 것을 인식할 것이다. 당업자는 또한 반사의 위치가 샘플이 회절계에서 위치한 정확한 높이 및 회절계의 0 보정에 의해 영향을 받을 수 있다는 것을 인식할 것이다. 샘플의 표면 평탄함은 또한 작은 효과를 가질 수 있다. 그러므로, 제시된 회절 패턴 데이터는 절대 값으로서 취해져서는 안된다. (Jenkins, R & Snyder, R.L. 'Introduction to X-Ray Powder Diffractometry' John Wiley & Sons 1996; Bunn, C.W. (1948), Chemical Crystallography, Clarendon Press, London; Klug, H. P. & Alexander, L. E. (1974), X-Ray Diffraction Procedures).
일반적으로, X선 분말 회절도에서의 회절 각의 측정 오차는 대략 플러스 또는 마이너스 0.2° 2θ이고, 이러한 측정 오차의 정도는 도면에서 X선 분말 회절 패턴을 고려할 때 및 본원에 포함된 표에 함유된 데이터를 읽을 때 고려되어야 한다. 더욱이, 강도는 실험 조건 및 샘플 제조(바람직한 배향)에 따라 변동한다고 이해되어야 한다.
본 명세서에서, 화합물 N-(1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일)-6-((6S,8R)-8-메틸-7-(2,2,2-트리플루오로에틸)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)피리딘-3-아민(이하 화합물 X)의 형태는 초기에 무정형 고체인 것으로 밝혀졌다. 화합물의 유용한 결정질 다형 형태는 후속하여 실험 부문에 기재된 조건을 이용하여 제조된다.
따라서, 본 명세서의 추가의 양태에서, 화합물 X의 다형 A 형태가 제공된다. 이와같은 다형 형태는 15.5, 18.6 및 24.6°의 CuKa 방사선을 사용하여 측정된 하기 2θ 값 중 적어도 하나를 제공한다는 점에서 특징화될 수 있다.
화합물 X의 다형 A 형태는, 실질적으로 도 1에 도시된 바와 같은, X선 분말 회절 패턴을 제공한다는 점에서 특징화된다.
이 다형 형태에 대한 10개의 X선 분말 회절 피크[각도 2-쎄타(2θ), 강도(%)]는 21.1(100%), 20.8(54.3%), 14.6(41.9%), 18.6(41.6%), 12.3(38.9%), 15.5(34.1%), 24.6(31.3%), 15.8(30.6%), 13.4(23.2%) 및 19.0°(21.7%)이다.
본 명세서에 따르면, 약 2θ = 15.5°에서의 적어도 하나의 특정 피크를 갖는 X선 분말 회절 패턴을 갖는, 화합물 X의 다형 A 형태가 제공된다.
본 명세서에 따르면, 약 2θ = 18.6°에서의 적어도 하나의 특정 피크를 갖는 X선 분말 회절 패턴을 갖는, 화합물 X의 다형 A 형태가 제공된다.
본 명세서에 따르면, 약 2θ = 24.6°에서의 적어도 하나의 특정 피크를 갖는 X선 분말 회절 패턴을 갖는, 화합물 X의 다형 A 형태가 제공된다.
본 명세서에 따르면, 약 2θ = 15.5° 및 18.6°에서의 적어도 2개의 특정 피크를 갖는 X선 분말 회절 패턴을 갖는, 화합물 X의 다형 A 형태가 제공된다.
본 명세서에 따르면, 약 2θ = 21.1, 20.8, 14.6, 18.6, 12.3, 15.5, 24.6, 15.8, 13.4 및 19.0°에서의 특정 피크를 갖는 X선 분말 회절 패턴을 갖는, 화합물 X의 다형 A 형태가 제공된다.
본 명세서에 따르면, 도 1에 도시된 X선 분말 회절 패턴과 실질적으로 동일한 X선 분말 회절 패턴을 갖는 화합물 X의 다형 A 형태가 제공된다.
본 명세서에 따르면, 2θ = 15.5° 플러스 또는 마이너스 0.2° 2θ에서의 적어도 하나의 특정 피크를 갖는 X선 분말 회절 패턴을 갖는, 화합물 X의 다형 A 형태가 제공된다.
본 명세서에 따르면, 2θ = 18.6° 플러스 또는 마이너스 0.2° 2θ에서의 적어도 하나의 특정 피크를 갖는 X선 분말 회절 패턴을 갖는, 화합물 X의 다형 A 형태가 제공된다.
본 명세서에 따르면, 2θ = 15.5° 및 18.6°에서의 적어도 2개의 특정 피크를 갖는 X선 분말 회절 패턴을 갖는, 화합물 X의 다형 A 형태가 제공되고, 상기 값은 플러스 또는 마이너스 0.2° 2θ일 수 있다.
본 명세서에 따르면, 2θ = 21.1, 20.8, 14.6, 18.6, 12.3, 15.5, 24.6, 15.8, 13.4 및 19.0°에서의 특정 피크를 갖는 X선 분말 회절 패턴을 갖는, 화합물 X의 다형 A 형태가 제공되고, 상기 값은 플러스 또는 마이너스 0.2° 2θ일 수 있다.
본 명세서의 추가의 양태에서, 화합물 X의 다형 E 형태가 제공된다. 이와같은 다형 형태는 14.8, 16.2 및 17.9°의 CuKa 방사선을 사용하여 측정된 하기 2θ 값 중 적어도 하나를 제공한다는 점에서 특징화될질 수 있다.
화합물 X의 다형 E 형태는, 실질적으로 도 8에 도시된 바와 같은, X선 분말 회절 패턴을 제공한다는 점에서 특징화된다.
이 다형 형태에 대한 10개의 X선 분말 회절 피크[각도 2-쎄타(2θ), 강도(%)]는 17.9(100%), 14.8(67.1%), 20.9(60.1%), 23.1(55.4%), 16.2(49.3%), 20.0(35.6%), 18.2(32.9%), 12.3(30.4%), 22.2(19.0%) 및 13.9°(18.9%)이다.
본 명세서에 따르면, 약 2θ = 17.9°에서의 적어도 하나의 특정 피크를 갖는 X선 분말 회절 패턴을 갖는 화합물 X의 다형 E 형태가 제공된다.
본 명세서에 따르면, 약 2θ = 14.8°에서의 적어도 하나의 특정 피크를 갖는 X선 분말 회절 패턴을 갖는 화합물 X의 다형 E 형태가 제공된다.
본 명세서에 따르면, 약 2θ = 17.9°에서의 적어도 하나의 특정 피크를 갖는 X선 분말 회절 패턴을 갖는 화합물 X의 다형 E 형태가 제공된다.
본 명세서에 따르면, 약 2θ = 17.9° 및 14.8°에서의 적어도 2개의 특정 피크를 갖는 X선 분말 회절 패턴을 갖는 화합물 X의 다형 E 형태가 제공된다.
본 명세서에 따르면, 약 2θ = 17.9, 14.8, 20.9, 23.1, 16.2, 20.0, 18.2, 12.3, 22.2 및 13.9°에서의 특정 피크를 갖는 X선 분말 회절 패턴을 갖는 화합물 X의 다형 E 형태가 제공된다.
본 명세서에 따르면, 도 8에 도시된 X선 분말 회절 패턴과 실질적으로 동일한 X선 분말 회절 패턴을 갖는 화합물 X의 다형 E 형태가 제공된다.
본 명세서에 따르면, 2θ = 17.9° 플러스 또는 마이너스 0.2° 2θ에서의 적어도 하나의 특정 피크를 갖는 X선 분말 회절 패턴을 갖는 화합물 X의 다형 E 형태가 제공된다.
본 명세서에 따르면, 2θ = 14.8° 플러스 또는 마이너스 0.2° 2θ에서의 적어도 하나의 특정 피크를 갖는 X선 분말 회절 패턴을 갖는 화합물 X의 다형 E 형태가 제공된다.
본 명세서에 따르면, 2θ = 17.9° 및 14.8°에서의 적어도 2개의 특정 피크를 갖는 X선 분말 회절 패턴을 갖는 화합물 X의 다형 E 형태가 제공되고, 상기 값은 플러스 또는 마이너스 0.2° 2θ일 수 있다.
본 명세서에 따르면, 2θ = 17.9, 14.8, 20.9, 23.1, 16.2, 20.0, 18.2, 12.3, 22.2 및 13.9°에서의 특정 피크를 갖는 X선 분말 회절 패턴을 갖는 화합물 X의 다형 E 형태가 제공되고, 상기 값은 플러스 또는 마이너스 0.2° 2θ일 수 있다.
화학식 (I)의 화합물의 적합한 약제학적으로 허용 가능한 프로-드러그가 또한 본 명세서의 양태를 형성하는 것으로 이해될 것이다. 따라서, 본 명세서의 화합물은 본 명세서의 화합물을 방출하도록 인간 또는 동물 신체에서 분해되는 화합물인 프로-드러그의 형태로 투여될 수 있다. 프로-드러그는 본 명세서의 화합물의 물성 및/또는 약물동력학적 특성을 변경하도록 사용될 수 있다. 프로-드러그는 본 명세서의 화합물이 특성 변형 기가 부착될 수 있는 적합한 기 또는 치환기를 함유할 때 형성될 수 있다. 프로-드러그의 예는 화학식 (I)의 화합물의 생체내 절단 가능한 에스터 또는 아미드 유도체를 포함한다.
따라서, 본 명세서의 일 양태는 유기 합성에 의해 이용 가능할 때 및 이의 프로-드러그의 절단에 의해 인간 또는 동물 신체 내에 이용 가능해질 때 이하 정의된 바와 같은 화학식 (I)의 화합물을 포함한다. 따라서, 본 명세서는 유기 합성 수단에 의해 제조된 화학식 (I)의 화합물 및 또한 전구체 화합물의 대사에 의해 인간 또는 동물 신체에서 제조된 이러한 화합물을 포함하고, 즉 화학식 (I)의 화합물은 합성으로 제조된 화합물 또는 대사로 제조된 화합물일 수 있다.
화학식 (I)의 화합물의 적합한 약제학적으로 허용 가능한 프로-드러그는 원치 않는 약물학적 활성 없이 및 과도한 독성 없이 인간 또는 동물 신체에 투여하기에 적합한 것으로 합리적인 의학적 판단에 기초한 것이다.
프로-드러그의 다양한 형태는 예를 들어 하기 문헌에서 기재되어 있다:
a) Methods in Enzymology, Vol. 42, p. 309-396, edited by K. Widder, et al. (Academic Press, 1985);
b) Design of Pro-drugs, edited by H. Bundgaard, (Elsevier, 1985);
c) A Textbook of Drug Design and Development, edited by Krogsgaard-Larsen and H. Bundgaard, Chapter 5 "Design and Application of Pro-drugs", by H. Bundgaard p. 113-191 (1991);
d) H. Bundgaard, Advanced Drug Delivery Reviews, 8, 1-38 (1992);
e) H. Bundgaard, et al., Journal of Pharmaceutical Sciences, 77, 285 (1988);
f) N. Kakeya, et al., Chem. Pharm. Bull., 32, 692 (1984);
g) T. Higuchi and V. Stella, "Pro-Drugs as Novel Delivery Systems", A.C.S. Symposium Series, Volume 14; 및
h) E. Roche (editor), "Bioreversible Carriers in Drug Design", Pergamon Press, 1987.
화학식 (I)의 화합물의 생체내 효과는 부분적으로 화학식 (I)의 화합물의 투여 후에 인간 또는 동물 신체 내에 형성된 1종 이상의 대사물질에 의해 발휘될 수 있다. 상기에 기재된 바와 같이, 화학식 (I)의 화합물의 생체내 효과는 또한 전구체 화합물(프로-드러그)의 대사에 의해 발휘될 수 있다.
혼선을 피하기 위해, 본 명세서에서 군이 '상기 정의된' 또는 '본원에 정의된'으로 수식되는 경우, 상기 군은 제1 발생 및 가장 넓은 정의뿐만 아니라 그 군에 대한 각각의 및 모든 대안적인 정의를 포함하는 것으로 이해될 것이다.
본 명세서의 다른 양태는 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 제조하는 공정을 제공한다. 적합한 공정은 하기 대표적인 공정 변형(식 중, 달리 기재되지 않는 한, A, D, E, G, Q 및 R1 내지 R12는 상기에 정의된 임의의 의미를 가짐)에 의해 예시된다. 필요한 출발 재료는 유기 화학의 표준 절차에 의해 수득될 수 있다. 이러한 출발 재료의 제조는 하기 대표적인 공정 변형과 함께 및 수반한 실시예 내에 기재되어 있다. 대안적으로, 필요한 출발 재료는 유기 화학자의 보통의 기술 내에 있는 예시된 것과 유사한 절차에 의해 수득 가능하다.
화학식 (I)의 화합물(식 중, R13은 H임)은 예를 들어 하기에 의해 제조될 수 있다:
a) 적합한 염기(예컨대, 탄산 세슘) 및 적합한 온도(예컨대, 90 내지 120℃)의 존재 하에 적합한 용매(예컨대, 톨루엔 또는 DME) 중 적합한 금속 촉매(예를 들어, RockPhos 제3세대 전촉매)를 사용한 화학식 (III)의 알코올에 의한 적합한 화학식 (II)의 아릴 또는 헤테로아릴 화합물(식 중, L은 예를 들어 할로겐(예컨대, 요오드), 또는 트리플루오로메탄설포닐(트리플레이트) 기, 또는 붕산 또는 에스터임)의 에테르화; 적합한 온도(예컨대, 10 내지 30℃)에서 산 조건(예컨대, 1,4-디옥산 중 무수 HCl)을 사용한 화학식 (II)에서의 보호기(PG), 예컨대 THP의 제거.
b) 적합한 온도(예컨대, 90 내지 130℃)에서 적합한 염기(예를 들어, 탄산세슘, 나트륨 tert-부톡사이드 또는 LiHMDS)의 존재 하에 적합한 용매(예를 들어, 1,4-디옥산) 중 적합한 금속 촉매(예를 들어, BrettPhos 또는 RuPhos 및 Pd2(dba)3)를 사용한 화학식 (IV)의 아민에 의한 적합한 화학식 (II)의 아릴 또는 헤테로아릴 화합물(식 중, L은 예를 들어 할로겐(예컨대, 요오드), 또는 트리플루오로메틸설포닐옥시(트리플레이트) 기임)의 아미노화; 적합한 온도(예컨대, 10 내지 30℃)에서 산 조건(예컨대, 1,4-디옥산 중 무수 HCl)을 사용한 보호기(PG), 예컨대 THP의 제거.
c) 적합한 용매(예컨대, THF) 중 적절한 시약(예컨대, 트리페닐포스핀 및 디이소프로필 (E)-디아젠-1,2-디카복실레이트)을 사용한 미츠노부(Mitsunobu) 반응을 통한 화학식 (III)의 알코올에 의한 적합한 화학식 (V)의 페놀 또는 하이드록실 헤테로아릴 화합물의 알킬화; 적합한 온도(예컨대, 10 내지 30℃)에서 산 조건(예컨대, 1,4-디옥산 중 무수 HCl)을 사용한 화학식 (VII)에서의 보호기(PG), 예컨대 THP의 제거.
d) 적합한 용매(예컨대, DMF 또는 MeCN) 중 약염기(예를 들어, DIPEA)를 사용한 화학식 (VII)의 화합물(식 중, LG는 이탈기(예컨대, 할라이드 또는 메실레이트)임)에 의한 적합한 화학식 (VI)의 아닐린 또는 헤테로아릴 아민 또는 페놀 또는 하이드록실 헤테로아릴 화합물의 알킬화; 적합한 온도(예컨대, 10 내지 30℃)에서 산 조건(예컨대, 1,4-디옥산 중 무수 HCl)을 사용한 보호기(PG), 예컨대 THP의 제거.
e) 적합한 온도(예컨대, 10 내지 30℃)에서 적합한 염기(예컨대, DIPEA)의 존재 하에 적합한 용매(예컨대, DMF) 중 적합한 화학식 (IX)의 알킬화 기(식 중, LG는 할라이드, 예컨대 브로마이드, 요오다이드 또는 클로라이드일 수 있거나, 몇몇 다른 적합한 이탈기, 예컨대 메실레이트일 수 있음)에 의한 화학식 (VIII)의 아민의 알킬화.
화학식 (II)의 화합물(식 중, R6은 수소와 동일하지 않음)은 적합한 시약(예를 들어, 비스(트리플루오르아세톡시)-요오도벤젠)에 의한 산화 및 저온(전형적으로 -80 내지 -60℃)에서 적합한 용매(예를 들어, THF) 중 유기 금속 시약(예를 들어, R6이 메틸일 때 메틸 마그네슘 브로마이드)에 의한 처리에 의해 예를 들어 화학식 (X)의 화합물로부터 제조될 수 있다.
화학식 (X)의 화합물은 저온(전형적으로 -20 내지 0℃)에서 유기 산(예컨대, 프로피온산) 중 인다졸, 예컨대 무기 아질산염(예컨대, 아질산나트륨) 또는 대안적으로 적합한 온도(예컨대, 70℃)에서 선택적으로 적합한 용매(예컨대, 클로로폼) 중 크라운 에테르(예컨대, 18-크라운-6)의 존재 하에 유기 아질산염(예컨대, 이소펜틸 아질산염)과 함께 적합한 염기(예컨대, 아세트산칼륨)의 존재 하에 산 무수물(예컨대, 아세트산 무수물)의 구성을 실행하도록 예를 들어 적합한 시약에 의한 화학식 (XI)의 아닐린의 반응에 의해 제조될 수 있다.
화학식 (XI)의 화합물은 Pictet-Spengler 반응에 적합한 것으로 당해 분야에 공지된 조건 하에, 예컨대 산(예컨대, 아세트산)의 존재 하에 및 적합한 용매(예를 들어, 톨루엔 또는 물) 및 적합한 온도(예컨대, 60 내지 100℃) 중에 화학식 (XII)의 화합물과 화학식 (XIII)의 화합물의 반응에 의해 제조될 수 있다.
화학식 (XII)의 화합물은 적합한 온도(예컨대, 80 내지 100℃)에서 적합한 용매(예컨대, 톨루엔) 중 적합한 염기(예컨대, 나트륨 tert-부톡사이드)의 존재 하에 적합한 촉매 및 리간드(예컨대, 비스(디벤질리덴아세톤)팔라듐(0) 및 rac-2,2'-비스(디페닐포스피노)-1,1'-비나프틸)의 존재 하에 보호된 아민(예컨대, 디페닐메탄이민)을 사용한 당해 분야에 공지된 작용기 상호전환, 예를 들어 아릴 할라이드(예컨대, 브로마이드)로부터의 화학식 (XIV)의 할라이드의 아미노화에 의해 제조될 수 있다.
화학식 (XIV)의 화합물은 하기에 의해 제조될 수 있다:
a) 적합한 환원제(예컨대, 나트륨 트리아세톡시보로하이드라이드)의 존재 하에 및 적합한 온도(예컨대, 20 내지 30℃)에서 적합한 용매(예를 들어, THF) 중 화학식 (XV)의 화합물과 화학식 (XVI)의 알데하이드의 반응;
b) (i) 표준 아미드 결합 형성 조건 하에(예를 들어, 적합한 용매(예컨대, DMF) 중 아미드 커플링 시약(예컨대, HATU) 및 적합한 염기(예컨대, 트리에틸아민)의 존재 하에) 화학식 (XV)의 화합물과 화학식 (XVII)의 산의 반응, 이어서 (ii) 적합한 온도(예컨대, 60 내지 70℃)에서 적합한 용매(예컨대, THF) 중 적합한 환원제(예컨대, 보란)를 사용한 생성된 아미드 결합의 환원;
c) 적합한 용매(예를 들어, DCM 또는 디옥산) 중 적합한 염기(예컨대, 디이소프로필에틸아민)의 존재 하에 및 적합한 온도(예컨대, 20 내지 85℃)에서 화학식 (XV)의 화합물과 화학식 (XVIII)의 화합물(식 중, LG는 적합한 이탈기(예를 들어, 할로겐 원자(예컨대, 브로모 또는 클로로) 또는 트리플레이트)임)의 반응.
화학식 (XV)의 화합물은 특히 키랄 아민의 합성에 대해 당해 분야에 공지된 다수의 방법에 의해 제조될 수 있다;
a) 하기 도시된 반응식에 따른 화학식 (XIX)의 설파미데이트의 개환.
단계 1: 알킬화, 예를 들어 n-부틸리튬/THF/-78℃ 내지 0℃
단계 2: 보호기의 제거, 예를 들어 MeOH/DCM 중 무수 HCl, rt.
b) 키랄 촉매(예컨대, (1S,2S,4S,5R)-2-((R)-(알릴옥시)(퀴놀린-4-일)메틸)-1-(안트라센-9-일메틸)-5-비닐퀴누클리딘-1-이움 브로마이드)의 존재 하에 상 이동 알킬화, 이어서 작용기 조작.
단계 1: 알킬화, 예를 들어 키랄 촉매, 톨루엔/KOH, 0℃
단계 2: 작용기 상호전환.
화학식 (XII)의 화합물은 직접적으로 하기에 의해 제조될 수 있다:
a) 적합한 환원제(예컨대, 나트륨 트리아세톡시보로하이드라이드)의 존재 하에 및 적합한 온도(예컨대, 20 내지 30℃)에서 적합한 용매(예를 들어, THF) 중 화학식 (XX)의 화합물과 화학식 (XVI)의 알데하이드의 반응;
b) (i) 표준 아미드 결합 형성 조건 하에(예를 들어, 적합한 용매(예컨대, DMF) 중 아미드 커플링 시약(예컨대, HATU) 및 적합한 염기(예컨대, 트리에틸아민)의 존재 하에) 화학식 (XX)의 화합물과 화학식 (XVII)의 산의 반응, 이어서 (ii) 적합한 온도(예컨대, 60 내지 70℃)에서 적합한 용매(예컨대, THF) 중 적합한 환원제(예컨대, 보란)를 사용한 생성된 아미드 결합의 환원;
c) 적합한 용매(예를 들어, DCM 또는 디옥산) 중에 및 적합한 온도(예컨대, 20 내지 85℃)에서 적합한 염기(예컨대, 디이소프로필에틸아민)의 존재 하에 화학식 (XX)의 화합물과 화학식 (XIII)의 화합물(식 중, LG는 적합한 이탈기(예를 들어, 할로겐 원자(예컨대, 브로모 또는 클로로) 또는 트리플레이트)임)의 반응.
화학식 (XX)의 화합물은 하기 도시된 바와 같은 보호된 3-브로모-2-메틸-아닐린으로부터 시작하여 반응 순서를 통해 제조될 수 있다.
단계 1: 알킬화, 예를 들어 n-부틸리튬/THF/-78℃ 내지 rt.
단계 2: 아민 보호기의 제거, 예를 들어 MeOH/DCM 중 무수 HCl, rt.
단계 3: 아닐린 보호기의 제거, 예를 들어 하이드록실아민 중 환류.
화학식 (V)의 화합물은 상기에 기재된 바와 같은 화학식 (XIII)의 보로네이트 에스터 함유 화합물의 Pictet-Spengler 고리화를 수반하는 순서를 통해 제조되어 화학식 (XXI)의 화합물을 수득할 수 있다. 화학식 (XXI)의 화합물은 적합한 용매(예컨대, THF) 중 적합한 염기(예컨대, 수산화나트륨)의 존재 하에 적합한 산화제(예컨대, 과산화수소)를 사용하여 화학식 (V)의 화합물로 산화될 수 있다.
화학식 (VI)의 화합물(Q는 NH임)은 상기에 기재된 바와 같은 화학식 (XIII)의 니트로 함유 화합물의 Pictet-Spengler 고리화를 수반하는 순서를 통해 제조되어 화학식 (XXII)의 화합물을 수득할 수 있다. 화학식 (XXII)의 화합물은 적합한 용매(예컨대, 메탄올) 중 적합한 촉매(예컨대, 이산화백금)의 존재 하에 적합한 니트로 환원 조건(예컨대, 수소화)을 이용하여 화학식 (VI)의 화합물로 환원될 수 있다.
화학식 (VIII)의 화합물(식 중, Q는 O임)은 적합한 온도(예컨대, 90 내지 120℃)에서 적합한 염기(예컨대, 탄산 세슘)의 존재 하에 적합한 용매(예컨대, 톨루엔 또는 DME) 중 적합한 금속 촉매(예컨대, RockPhos 제3세대 전촉매)를 사용하여 화학식 (II)의 아릴 할라이드 및 tert-부틸 3-하이드록시아제티딘-1-카복실레이트로부터 제조될 수 있고; Boc 보호기는 후속하여 적합한 용매(예컨대, DCM) 중 산(예컨대, 트리플루오로아세트산)을 사용하여 제거될 수 있다. 화학식 (VIII)의 화합물(Q는 O임)은 또한 적합한 용매(예컨대, THF) 중 tert-부틸 3-하이드록시아제티딘-1-카복실레이트에 의해 적절한 시약(예컨대, 트리페닐포스핀 및 디이소프로필 (E)-디아젠-1,2-디카복실레이트)을 사용하여 미츠노부 반응에 대해 적합한 것으로 당해 분야에 공지된 조건 하에 화학식 (V)의 화합물로부터 제조될 수 있다.
화학식 (VIII)의 화합물(식 중, Q는 NH임)은 적합한 온도(예컨대, 90 내지 130℃)에서 적합한 염기(예를 들어, 탄산 세슘, 나트륨 tert-부톡사이드 또는 LiHMDS)의 존재 하에 적합한 용매(예를 들어, 1,4-디옥산) 중 적합한 금속 촉매(예를 들어, 예를 들어 RuPhos 또는 BrettPhos 및 Pd2(dba)3)를 사용하여 화학식 (II)의 아릴 할라이드 및 tert-부틸 3-아미노아제티딘-1-카복실레이트로부터 제조될 수 있고; Boc 보호기는 후속하여 적합한 용매(예컨대, DCM) 중 산(예컨대, 트리플루오로아세트산)을 사용하여 제거될 수 있다.
화학식 (III)의 화합물은 하기에 의해 제조될 수 있다:
a) 적합한 온도, 예컨대 120℃에서, 및 적합한 용기, 예컨대 밀봉 관에서 적합한 용매, 예컨대 아세토니트릴 중 적합한 염기, 예컨대 탄산 세슘의 존재 하에 3-하이드록시아제티딘과 화학식 (IX)의 화합물(식 중, LG는 예를 들어 할로겐 또는 다른 이탈기(예컨대, 메실 기)임) 사이의 알킬화 반응.
b) 적합한 온도, 예컨대 10 내지 30℃에서 적합한 용매, 예컨대 DCM 중 적합한 환원 시약, 예컨대 나트륨 트리아세톡시보로하이드라이드의 존재 하에 3-하이드록시아제티딘과 화학식 (XXIII)의 알데하이드 또는 케톤 화합물 사이의 환원성 아미노화 반응.
화학식 (IV)의 화합물은 하기에 의해 제조될 수 있다:
a) (i) 적합한 온도, 예컨대 10 내지 30℃에서 적합한 용매, 예컨대 1,4-디옥산 중 적합한 염기, 예컨대 DIPEA의 존재 하에 화학식 (XXIV)의 화합물(식 중, PG는 보호기, 예를 들어 Boc임)과 화학식 (IX)의 화합물(식 중, LG는 예를 들어 할로겐 또는 다른 이탈기, 예컨대 메실레이트임) 사이의 알킬화 반응. (ii) 적합한 조건, 예컨대 Boc의 제거를 위한 산성 조건 하에서 보호기의 제거.
b) (i) 적합한 온도, 예컨대 10 내지 30℃에서 적합한 용매, 예컨대 DCM 중 적합한 환원 시약, 예컨대 나트륨 트리아세톡시보로하이드라이드의 존재 하에 화학식 (XXIV)의 화합물과 화학식 (XXIII)의 알데하이드 또는 케톤 화합물 사이의 환원성 아미노화 반응. (ii) 적합한 조건, 예컨대 Boc의 제거를 위한 산성 조건 하에서 보호기의 제거.
상기에 기재된 공정 변형에서 공정 단계의 다른 순열이 또한 가능한 것으로 이해될 것이다.
상기 언급된 반응의 몇몇에서, 화합물 내의 임의의 민감한 작용기를 보호하는 것이 필요하거나 바람직할 수 있다는 것으로 또한 이해될 것이다. 보호가 필요하거나 바람직한 경우, 및 보호에 적합한 방법은 당업자에게 공지되어 있다. 종래의 보호기는 표준 실행에 따라 사용될 수 있다(예시를 위해, 문헌[T. W. Green, Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley and Sons, 1991]을 참조한다). 따라서, 반응물질이 아미노, 카복시 또는 하이드록시와 같은 기를 포함하는 경우, 본원에 언급된 반응의 몇몇에서 기를 보호하는 것이 바람직할 수 있다.
아미노 또는 알킬아미노 기에 적합한 보호기는 예를 들어 아실 기, 예를 들어 알카노일 기, 예컨대 아세틸, 알콕시카보닐 기, 예를 들어 메톡시카보닐, 에톡시카보닐 또는 t-부톡시카보닐 기, 아릴메톡시카보닐 기, 예를 들어 벤질옥시카보닐 또는 아로일 기, 예를 들어 벤조일이다. 상기 보호기에 대한 탈보호 조건은 필연적으로 보호기의 선택에 따라 변한다. 따라서, 예를 들어, 아실 기, 예컨대 알카노일 또는 알콕시카보닐 기 또는 아로일 기는 예를 들어 적합한 염기, 예컨대 알칼리 금속 수산화물, 예를 들어 수산화리튬 또는 수산화나트륨에 의한 가수분해에 의해 제거될 수 있다. 대안적으로, 알콕시카보닐 기, 예컨대 t-부톡시카보닐 기는 예를 들어 염산, 황산, 포름산, 인산 또는 트리플루오로아세트산으로서 적합한 산에 의한 처리에 의해 제거될 수 있고, 아릴메톡시카보닐 기, 예컨대 벤질옥시카보닐 기는 예를 들어 촉매, 예컨대 탄소 상 팔라듐에 대한 수소화에 의해, 또는 루이스산, 예컨대 붕소 트리스(트리플루오로아세테이트)에 의한 처리에 의해 제거될 수 있다. 1차 아미노 기에 적합한 대안적인 보호기는 예를 들어 알킬아민, 예를 들어 디메틸아미노프로필아민 또는 하이드라진에 의한 처리에 의해 제거될 수 있는 프탈로일 기이다.
하이드록시 기에 적합한 보호기는 예를 들어 아실 기, 예를 들어 알카노일 기, 예컨대 아세틸, 아로일 기, 예를 들어 벤조일, 아릴메틸 기, 예를 들어 벤질, 또는 트리알킬 또는 디아릴알킬 실란, 예컨대 TBDMS 또는 TBDPS이다. 상기 보호기에 대한 탈보호 조건은 필연적으로 보호기의 선택에 따라 변할 것이다. 따라서, 예를 들어, 아실 기, 예컨대 알카노일 또는 아로일 기는 예를 들어 적합한 염기, 예컨대 알칼리 금속 수산화물, 예를 들어 수산화리튬 또는 수산화나트륨에 의한 가수분해에 의해 제거될 수 있다. 대안적으로, 아릴메틸 기, 예컨대 벤질 기는 예를 들어 촉매, 예컨대 탄소 상 팔라듐에 대한 수소화에 의해 제거될 수 있다.
카복시 기에 적합한 보호기는 예를 들어 에스터화 기, 예를 들어 염기, 예컨대 수산화나트륨에 의한 가수분해에 의해 제거될 수 있는 예를 들어 메틸 또는 에틸 기, 또는 예를 들어, 산, 예컨대 트리플루오로아세트산에 의한 처리에 의해 제거될 수 있는 예를 들어 t-부틸 기, 또는 예를 들어, 촉매, 예컨대 탄소 상 팔라듐에 대한 수소화에 의해 제거될 수 있는 예를 들어 벤질 기이다.
보호기는 화학 분야에 널리 공지된 종래의 기법을 이용하여 합성에서의 임의의 편리한 단계에서 제거될 수 있다.
본원에 정의된 소정의 중간체는 신규하고, 이들은 본 명세서의 추가의 특징으로서 제공된다.
일 구현예에서, 화학식 (XXV)의 화합물 또는 이의 염이 제공된다:
[화학식 XXV]
식 중, L은 브로모, 클로로, 요오도 또는 트리플루오로메탄설포닐이다.
추가의 구현예에서, L은 브로모이다.
생물학적 검정
하기 검정은 본 명세서의 화합물의 효과를 측정하기 위해 이용되었다.
ERα 결합 검정
단리된 에스트로겐 수용체 알파 리간드 결합 도메인(ER 알파-LBD(GST))에 결합하는 화합물의 능력은 LanthaScreen™ 시간 분해 형광 공명 에너지 이동(TR-FRET) 검출 종점을 이용하여 경쟁 검정에서 평가되었다. LanthaScreen TR-FRET 종점에 대해, 적합한 형광단(Fluormone ES2, ThermoFisher, 제품 코드 P2645) 및 재조합 인간 에스트로겐 수용체 알파 리간드 결합 도메인, 307번 내지 554번 잔기(내부적으로 발현 및 정제됨)를 사용하여 화합물 결합을 측정하였다. 검정 원칙은 ER 알파-LBD(GST)가 형광성 리간드에 첨가되어 수용체/형광단 복합체를 형성한다는 것이다. 터븀 표지된 항-GST 항체(제품 코드 PV3551)를 사용하여 이의 GST 태그에 결합함으로써 수용체를 간접적으로 표지하고, 경쟁적 결합은 Tb-항-GST 항체와 트레이서 사이의 TR-FRET 신호의 손실을 발생시키는 형광성 리간드를 대체하는 시험 화합물의 능력에 의해 검출된다. 검정은 Beckman Coulter BioRAPTR FRD 미소유체 워크스테이션을 사용하여 수행된 모든 시약 첨가로 다음과 같이 수행되었다:
1. 120 nl의 시험 화합물을 검정색의 저용적 384웰 검정 플레이트로 음향 분배한다.
2. ES2 스크리닝 완충제 중 1x ER 알파-LBD/Tb-항-GST Ab를 준비하고, 15분 동안 항온처리한다.
3. 6 ㎕의 1x AR-LBD/Tb-항-GST Ab 시약을 검정 플레이트의 각각의 웰에 분배한 후, 6 ㎕의 형광단 시약을 검정 플레이트의 각각의 웰에 분배한다.
4. 검정 플레이트를 커버하여, 광 및 증발로부터 시약을 보호하고, 실온에서 4시간 동안 항온처리한다.
5. 337 ㎚에서 여기시키고, BMG PheraSTAR을 사용하여 490 ㎚ 및 520 ㎚에서 각각의 웰의 형광성 방출 신호를 측정한다.
화합물을 연속 희석된 화합물을 함유하는 화합물 소스 마이크로플레이트(각각 10 mM, 0.1 mM, 1 mM 및 10 nM의 최종 화합물을 함유하는 4개의 웰)로부터 직접적으로 Labcyte Echo 550을 사용하여 검정 마이크로플레이트로 투여하였다. Echo 550은 DMSO 화합물 용액의 직접적인 마이크로플레이트 대 마이크로플레이트 이동을 수행하기 위한 음향 기술을 이용하는 액체 처리기이고, 시스템은 검정에서의 화합물의 원하는 연속 희석액을 제공하기 위해 상이한 소스 플레이트 웰로부터 화합물의 다수의 작은 nl의 용적을 이동시키도록 프로그래밍될 수 있고, 이후 이 희석액은 희석 범위에 걸쳐 DMSO 농도를 정규화하도록 역충전된다.
전체 120 nl의 화합물과 DMSO를 각각의 웰에 첨가하고, 화합물을 각각 10, 2.917, 1.042, 0.2083, 0.1, 0.0292, 0.0104, 0.002083, 0.001, 0.0002917, 0.0001042 및 0.00001 μM의 최종 화합물 농도 범위에 걸쳐 12점 농도 반응 포맷에서 시험하였다. 각각의 화합물에 의해 수득된 TR-FRET 용량 반응 데이터를 적합한 소프트웨어 패키지(예컨대, Origin 또는 Genedata)로 내보내어 곡선 맞춤 분석을 수행하였다. 경쟁적 ER 알파 결합은 IC50 값으로 표시되었다. 이것은 ER 알파-LBD에 결합하는 트레이서 화합물을 50% 감소시키는 데 필요한 화합물의 농도의 계산에 의해 결정되었다.
MCF-7 ER 하향조절 검정
에스트로겐 수용체(ER) 수를 하향조절하는 화합물의 능력을 MCF-7 인간 관암종 유방 세포주를 사용하여 세포 기반 면역형광 검정에서 평가하였다. MCF-7 세포는 2 mM L-글루타민 및 5%(v/v) 차콜/덱스트란 처리된 소 태아 혈청을 함유하는 검정 배지(페놀 레드 비함유 둘베코 변형 이글 배지(DMEM); Sigma D5921)에서 저온바이알(대략 5 x 106개의 세포)로부터 직접적으로 회복되었다. 무균 18G x 1.5 인치(1.2 x 40 ㎜)의 넓은 게이지 침을 사용하여 세포를 1회 주사기에 넣고, Coulter Counter(Beckman)를 사용하여 세포 밀도를 측정하였다. 세포를 1 ㎖ 당 3.75 x 104개의 세포의 밀도로 검정 배지에서 추가로 희석하고, Thermo Scientific Matrix WellMate 또는 Thermo Multidrop를 사용하여 웰 당 40 ㎕를 투명한 바닥의 검정색 조직 배양 처리된 384웰 플레이트(Costar, 3712호)에 첨가하였다. 세포 시딩 후, 플레이트를 37℃, 5% CO2(Liconic 캐러셀 항온처리기)에서 밤새 항온처리하였다. 자동화 워크셀(Integrated Echo 2 워크셀)의 일부인 LabCyte Echo™ 모델 555 화합물 리포매터를 사용하여 시험 데이터를 생성하였다. 시험 화합물의 화합물 스톡 용액(10 mM)을 사용하여 384웰 화합물 투여 플레이트(Labcyte P-05525-CV1)를 생성하였다. 40 ㎕의 각각의 10 mM 화합물 스톡 용액을 제1 사분면 웰에 분배하고, 이후 Hydra II(MATRIX UK) 액체 처리 유닛을 사용하여 DMSO 중 1:100 단계별 연속 희석을 수행하여 각각 사분면 웰 2(0.1 mM), 3(1 μM) 및 4(0.01 μM)로 40 ㎕의 희석된 화합물을 생성시켰다. 40 ㎕의 DMSO를 용량 범위에 걸쳐 DMSO 정규화에 허용된 소스 플레이트 상의 P 열에서 웰에 첨가하였다. 대조군 웰을 투여하기 위해, 40 ㎕의 DMSO를 O1 열에 첨가하고, DMSO 중 40 ㎕의 100 μM 풀베스트란트를 화합물 소스 플레이트 상의 O3 열에 첨가하였다.
Echo는 검정 플레이트로 DMSO 화합물 용액의 직접적인 마이크로플레이트 대 마이크로플레이트 이동을 수행하기 위한 음향 기술을 이용한다. 시스템은 마이크로플레이트 사이에 다수의 증분으로 2.5 nl만큼 낮은 용적을 이동시키도록 프로그래밍될 수 있고, 이렇게 함으로써 검정 플레이트에서 화합물의 연속 희석액을 생성하고, 이후 이 희석액은 희석 범위에 걸쳐 DMSO 농도를 정규화하도록 역충전된다. 화합물을 상기와 같이 제조된 화합물 소스 플레이트에 의해 세포 플레이트에 분배하여, Integrated Echo 2 워크셀을 사용하여 3배 희석 및 하나의 최종 10배 희석으로 12점 중복 3 μM 내지 3 pM 용량 범위를 생성하였다. 최대 신호 대조군 웰을 DMSO에 의해 투여하여 0.3%의 최종 농도를 생성하고, 최소 신호 대조군 웰을 풀베스트란트에 의해 투여하여 따라서 100 nM의 최종 농도를 생성하였다. 플레이트를 추가로 37℃, 5% CO2에서 18 내지 22시간 동안 항온처리하고, 이후 (인산염 완충 식염수(PBS) 중) 20 ㎕의 11.1%(v/v) 포름알데하이드 용액의 첨가에 의해 고정하여 3.7%(v/v)의 최종 포름알데하이드 농도를 생성하였다. 세포를 실온에서 20분 동안 고정한 후, BioTek 플레이트와셔를 사용하여 250 ㎕의 PBS/Proclin(Biocide 보존제를 갖는 PBS)에 의해 2회 세척하고, 이후 40 ㎕의 PBS/Proclin을 모든 웰에 첨가하고, 플레이트를 4℃에서 보관하였다. 상기에 기재된 고정 방법을 Integrated Echo 2 워크셀에서 수행하였다. 자동화 AutoElisa 워크셀을 사용하여 면역염색을 수행하였다. PBS/Proclin을 모든 웰로부터 흡인시키고, 세포를 0.5% Tween™ 20(v/v)을 함유하는 40 ㎕의 PBS에 의해 실온에서 1시간 동안 투과시켰다. 플레이트를 250 ㎕의 PBS/0.05%(v/v) Tween 20과 Proclin(Biocide 보존제를 갖는 PBST)으로 3회 세척하고, 이후 PBS/Tween™/3%(w/v) 소 혈청 알부민 중 20 ㎕의 ERα(SP1) 토끼 단일클론 항체(Thermofisher) 1:1000을 첨가하였다. 플레이트를 4℃에서 밤새 항온처리하고(Liconic 캐러셀 항온처리기), 이후 250 ㎕의 PBS/0.05%(v/v) Tween™ 20과 Proclin(PBST)으로 3회 세척하였다. 이후, 플레이트를 실온에서 1시간 동안 PBS/Tween™/3%(w/v) 소 혈청 알부민 중 1:5000에서 20 ㎕/웰의 염소 항-토끼 IgG AlexaFluor 594 또는 염소 항-토끼 AlexaFluor 488 항체(Molecular Probes)와 Hoechst로 항온처리하였다. 이후, 플레이트를 250 ㎕의 PBS/0.05%(v/v) Tween™ 20과 Proclin(Biocide 보존제를 갖는 PBST)으로 3회 세척하였다. 20 ㎕의 PBS를 각각의 웰에 첨가하고, 플레이트를 검정색 플레이트 시일로 커버하고, 4℃에서 보관한 후, 판독하였다. 플레이트를 594 ㎚(24시간 시점) 또는 488 ㎚(5시간 시점) 형광을 판독하는 Cellomics Arrayscan을 사용하여 판독하여 각각의 웰에서 ERα 수용체 수준을 측정하였다. 평균 전체 강도는 세포 수에 대해 정규화되어 세포마다 전체 강도를 생성시켰다. 데이터를 적합한 소프트웨어 패키지(예컨대, Origin)로 내보내어 곡선 맞춤 분석을 수행하였다. ERα 수용체의 하향조절은 IC50 값으로 표시되었고, 평균 최대 전체 강도 신호의 50% 감소를 생성시키는 데 필요한 화합물의 농도의 계산에 의해 결정되었다.
표 A에 기재된 데이터를 생성하였다(하기 데이터는 단일 실험 또는 2개 이상의 실험의 평균으로부터의 결과일 수 있다):
웨스턴 블로팅 검정
인간 유방암 세포주(MCF-7 및 CAMA-1)를 사용하여 웨스턴 블로팅에 의해 에스트로겐 수용체(ER)를 하향조절하는 화합물의 능력을 평가하였다. 세포를 2 mM L-글루타민 및 5%(v/v) 차콜 처리된 소 태아 혈청(F6765, Sigma)을 함유하는 페놀 레드 비함유 RPMI 중 0.5 x 106/웰로 12웰 조직 배양 처리된 플레이트에 플레이팅하였다. 세포를 37℃, 5% CO2에서 48시간 동안 화합물(100 nM) 또는 비히클 대조군(0.1% DMSO)과 항온처리한 후, PBS로 한번 세척하고, 얼음에서 80 ㎕의 용해 완충제(25 mM Tris/HCl, 3 mM EDTA, 3 mM EGTA, 50 mM NaF, 2 mM 나트륨 오르토바나데이트, 0.27 M 수크로스, 10 mM β-글리세로포스페이트, 5 mM 나트륨 피로포스페이트, 0.5% TritonX-100, pH 6.8)로 용해시켰다.
세포를 긁어내고, 음파처리하고, 원심분리한 후, 단백질 검정(DC Bio-Rad Protein 키트, 500-0116)을 수행하고, 1xLDS 샘플 완충제(NP0007, Invitrogen) 및 1xNuPAGE 샘플 환원제(NP0009, Invitrogen)를 함유하는 용해 완충제 중 1 내지 2 ㎎/㎖의 단백질 농도로 샘플을 제조하였다. 샘플을 95℃에서 10분 동안 비등시키고, 이후 사용에 준비될 때까지 -20℃에서 동결시켰다.
10 내지 20 ㎍의 단백질을 26웰 Criterion 겔(BioRad 345-0034)에 로딩하였다. 겔을 러닝 완충제(24 mM Tris 염기 Sigma, 192 mM 글리신, 3.5 mM SDS, 증류수로 제조됨) 중에 125 V에서 1시간 25분 동안 흘렸다. 이후, 겔을 니트로셀룰로스 막으로 이동 완충제(25 mM Tris, 192 mM 글리신, 20%(v/v) 메탄올, pH 8.3, 증류수로 제조됨) 중에 30 V에서 2시간 동안 옮겼다. 블롯을 Ponceau S(P7170, Sigma)로 염색하고, 적절한 분자량 마커에 따라 절단하였다.
막을 0.05% Tween™ 20을 함유하는 인산염 완충 식염수(PBS/Tween) 중 5% Marvel(w/v)로 실온에서 1시간 동안 차단하였다. 이후, 블롯을 (부드럽게 진탕하면서) 4℃에서 밤새 1:1000으로 희석된 항-ERα(SP1) 토끼 단일클론 항체(Thermofisher)와 함께 항온처리한 후, PBS/Tween으로 수회 세척하였다. 1:2000 희석액으로 희석된 2차 항-토끼 HRP 항체를 (부드럽게 진탕하면서) 실온에서 2시간 동안 항온처리한 후, PBS/Tween으로 수회 세척하였다. 모든 항체를 PBS/Tween 중 5% Marvel(w/v)로 제조하였다.
면역블롯을 Pierce WestDura 화학발광 시약(Thermo Scientific 34076)을 사용하여 전개시키고, Syngene 소프트웨어를 사용하여 G-박스에서 전개/정량화하였다. ERα 수용체의 하향조절을 동일한 겔 내에 흐르는 비히클 대조군(0% 하향조절) 및 100 nM 풀베스트란트 대조군(100% 하향조절)으로 정규화하였다.
표 B는 선택된 실시예에 대해 생성된 데이터를 보여준다(하기 데이터는 단일 실험 또는 2개 이상의 실험의 평균으로부터의 결과일 수 있다):
인간 간세포 검정
인간 간세포에서의 화합물의 대사 안정성을 하기 프로토콜을 이용하여 평가하였다:
1. 적절한 용매(DMSO) 중에 화합물의 10 mM 스톡 용액 및 대조군 화합물을 준비한다. 37℃ 수조에 항온처리 배지(L-15 배지)를 배치하고, 사용 전 적어도 15분 동안 가온되게 한다.
2. 80 ㎕의 아세토니트릴을 96웰 딥 웰 플레이트(켄칭 플레이트)의 각각의 웰에 첨가한다.
3. 새로운 96웰 플레이트에서, 198 ㎕의 아세토니트릴 및 2 ㎕의 10 mM 스톡을 배합함으로써 10 mM 시험 화합물 및 대조군 화합물을 100 μM로 희석한다.
4. 저장 용기로부터 저온보존된(-150℃ 미만) 인간 간세포(Celsis IVT. (일리노이주 시카고)(제품 번호 S01205)로부터 수득된 LiverPool™ 10 Donor Human 간세포)의 바이알을 제거하고, 바이알을 해동 공정이 뒤따를 때까지 극저온의 온도에서 유지하도록 보장한다. 가능한 한 빨리, 바이알을 37℃ 수조에 배치하고 바이알을 부드럽게 진탕시킴으로써 세포를 해동한다. 바이알은 모든 얼음 결정이 용해되고 더 이상 보이지 않을 때까지 수조 중에 남아 있어야 한다. 해동을 완료한 후, 바이알을 70% 에탄올로 분무하고, 바이알을 생물안전성 캐비닛으로 옮긴다.
5. 바이알을 열고, 해동 배지를 함유하는 50 ㎖의 원뿔 관에 내용물을 붓는다. 50 ㎖의 원뿔 관을 원심분리기에 배치하고, 100 g에서 10분 동안 스피닝한다. 스피닝의 완료 시, 해동 배지를 흡인시키고, 충분한 항온처리 배지에서 간세포를 재현탁시켜 약 1.5 x 106개의 세포/㎖를 산출한다.
6. Cellometer® Vision을 사용하여, 세포를 계수하고, 생존가능 세포 밀도를 결정한다. 낮은 생존능력(80% 미만의 생존능력)을 갖는 세포는 사용하기에 적합하지 않다. 항온처리 배지에 의해 세포를 1.0 x 106개의 생존가능 세포/㎖의 워킹 세포 밀도로 희석한다.
7. 247.5 ㎕의 간세포를 96웰 세포 배양 플레이트의 각각의 웰로 옮긴다. Eppendorf Thermomixer Comfort 플레이트 진탕기에 플레이트를 배치하여 간세포가 10분 동안 가온되게 한다.
8. 2.5 ㎕의 100 μM 시험 화합물 또는 대조군 화합물을 세포를 함유하는 항온처리 웰에 첨가하고, 0.5분에 균일한 현탁액을 달성하도록 혼합하고, 달성될 때 0.5분 시점을 정의할 것이다. 0.5분 시간에, 20 ㎕의 항온처리된 혼합물을 "Quenching 플레이트"에서의 웰로 옮긴 후, 와류시킨다.
9. Eppendorf Thermomixer Comfort 플레이트 진탕기에서 900 rpm으로 37℃에서 플레이트를 항온처리한다. 5분, 15분, 30분, 45분, 60분, 80분, 100분 및 120분에, 항온처리 시스템을 혼합하고, 각각의 시점에서 20 ㎕의 항온처리된 혼합물의 샘플을 별개의 "Quenching 플레이트"에서의 웰로 옮긴 후, 와류시킨다.
10. 켄칭 플레이트를 4,000 rpm으로 20분 동안 원심분리한다. 4개의 상이한 화합물을 1개의 카세트에 혼주하고, LC/MS/MS 분석에 사용한다.
Microsoft Excel을 이용하여 모든 계산을 수행하였다. 추출된 이온 크로마토그램으로부터 피크 면적을 결정하였다. 모 화합물의 시험관내 고유 청소율(시험관내 Clint, ℓ/분/106개의 세포의 단위)은 시간에 대한 Ln 모 소실 백분율 곡선의 회귀 분석에 의해 결정되었다. 시험관내 고유 청소율(시험관내 Clint, ℓ/분/106개의 세포의 단위)은 하기 식을 이용하여 기울기 값으로부터 결정되었고, 선택된 실시예에 대해 표 C에 기재되어 있다:
시험관내 Clint = kV/N
V = 항온처리 용적(0.25 ㎖);
N = 웰 당 간세포의 수(0.25 x 106개의 세포).
물성
logD
약물의 친유성은 화합물의 많은 생물학적 및 대사 특성, 예를 들어 화합물의 흡수, 분포, 대사, 배설 및 독성 프로필에 영향을 미칠 수 있는 중요한 물성이다. pH 7.4에서 LogDO/W인 1-옥탄올과 수성 완충제 사이의 분포 계수는 화합물의 친유성을 측정하는 데 가장 일반적으로 사용된다. 현재 LogDO/W의 측정을 위한 방법은, 상대 옥탄올 및 수성 농도를 측정하기 위한 방법으로서 정량적 질량 분광법(MS)에 의해 UPLC를 사용하여 한 번에 10개의 혼합물에서 화합물을 측정하는 것의 변형을 제외하고, 전통적인 진탕 플라스크 기법에 기초한다. 최대 역량은 실험마다 379개의 프로젝트 화합물(3개의 QC 화합물을 포함하여 10개의 화합물을 갖는 48개의 풀)이다. 보통의 LogD를 갖는 사이클로벤자프린 및 높은 LogD를 갖는 니카르디핀의 2개의 품질 관리(QC) 샘플을 모든 풀에서 사용하여 우수한 품질을 보장한다. 낮은 LogD를 갖는 추가적인 QC 샘플 카페인을 사용하고, 모든 실행에서 무작위로 배치한다. 상기 방법은 이전의 진탕 플라스크 방법론에 대해 철저히 검증되었다.
용해도
경구 화합물이 작용 부위에 도달하고, 장으로부터의 경구 흡수가 발생하기 위해서, 그 화합물은 용액 중에 있어야 하고, 따라서 높은 고유 용해도를 보유하는 화합물은 약제학적 용도에 더 적합할 수 있다. 조사 화합물의 열역학 용해도는 표준 조건 하에서 측정된다. 이것은 Compound Managements 액체 저장으로부터 공급된 10 mM DMSO 용액을 사용하는 진탕 플라스크 접근법이고, 고처리량 방법이다. 건조된 화합물은 25℃에서 24시간 동안 수성 인산염 완충제(pH 7.4) 중에 평형화되고, 이후 용해된 화합물을 갖는 부분은 잔류물로부터 분리된다. UPLC/MS/MS를 사용하여 용액을 분석하고 정량화하고, QC-샘플을 각각의 검정-실행에 도입하여 검정의 품질을 보장한다.
인간 혈장 단백질 결합
인간 혈장 단백질 결합은 표적에 결합할 수 있는 유리(비결합) 약물의 양을 조절하는 데 중요한 인자이고, 그러므로 생체내 관찰된 약물의 효율에 중요한 역할을 한다. 따라서, 높은 유리 분획(혈장 단백질 결합의 낮은 수준)을 보유하는 화합물은 유사한 효력 및 노출 수준을 갖는 화합물에 비해 증대된 효율을 나타낼 수 있다. 인간 혈장에서의 자동화 평형 투석 검정은 RED(신속 평형 투석: Rapid Equilibrium Dialysis) 장치 및 샘플 처리를 이용한다. 검정은 일반적으로 결과의 전달을 포함하여 2일 내지 3일에 걸쳐 실행된다. 18시간 동안 투석 후, 액체 크로마토그래피 및 질량 분광법에 의한 분석을 위해 혈장 및 완충제 샘플을 준비한다. 샘플을 일반적으로 단독실험으로 시험하고, 혈장에서의 7점 보정 곡선을 이용함으로써 LC/MSMS에 의해 정량화한다. 화합물을 혈장 풀에서 10개 이하의 화합물로 함께 혼주한다. 프로프라놀롤, 메토프롤롤 및 와파린의 3개의 기준 화합물을 각각의 실행에서 사용한다. 와파린을 각각의 풀에서 대조군으로서 사용하고, 프로프라놀롤 및 메토프롤롤을 각각의 실행에서 무작위로 배치한다. 인하우스 Excel 매크로는 질량 분광기 및 로봇에 대한 파일의 준비를 위해 이용되고, 혈장에서 비결합된 분획(fu%)의 계산에 또한 사용된다.
표 D는 선택된 실시예에 대해 생성된 logD, 용해도 및 혈장 단백질 결합에 대한 데이터를 보여준다(하기 데이터는 단일 실험 또는 2개 이상의 실험의 평균으로부터의 결과일 수 있다):
hERG 결합 검정
hERG(인간 에테르 고 고 관련 유전자: human ether go go-related gene) 칼륨 채널은 심장의 정상적인 전기 활성에 필수적이다. 부정맥은 다양한 약물의 군에 의해 hERG 채널의 봉쇄에 의해 유도될 수 있다. 이 부작용은 전임상 안전성 시행에서 약물 실패에 대한 흔한 원인이고[Sanguinetti et al., Nature., 2006, 440, 463-469], 따라서 hERG 채널 차단 활성의 최소화는 약물 후보에 대한 바람직한 특성일 수 있다.
hERG 결합 검정의 목적은 Nanion Syncropatch 384PE 자동화 패치 클램프 시스템에서 구성적으로 발현하는 CHO 세포주를 사용하여 인간 에테르 고 고 관련 유전자(hERG)에 의해 인코딩된 전압 의존적 칼륨 채널에 대한 시험 화합물의 효과를 평가하는 것이다.
검정을, 달리 기재하지 않는 한, 실온에서 사용된 모든 시약에 대해 하기와 같이 수행하였다.
시약 조제는 하기를 포함한다:
1. 칩의 하면을 관류시키도록 사용되고, 25 □M 에스신이 보충된, 내부 "IC700" 용액(mM 단위), KF 130, KCl 20, MgCl2 1, EGTA 10 및 HEPES 10(모두 Sigma-Aldrich; 10 M KOH를 사용하여 pH 7.2 내지 7.3, 320 mOsm).
2. 외부 및 세포 완충제(mM 단위), NaCl 137, KCl 4, HEPES 10, D-글루코스 10, CaCl2 2, MgCl2 1(pH 7.4, NaOH)
3. 시험 화합물의 첨가 전에 안정한 기준치를 확립하기 위해 사용된 NMDG "기준" 완충제, NaCl 80, KCl 4, CaCl2 2, MgCl2 1, NMDG Cl 60, D-글루코스 1수화물 5, HEPES 10(pH 7.4 NaOH 298 mOsm)
4. 세포의 시일 품질을 개선하기 위해 사용된 시일 인핸서, NaCl 80, KCl 3, CaCl2 10, HEPES 10, MgCl2 1(pH 7.4 NaOH)
세포 조제:
1. 세포 배양을 사용하는 경우; 사용되기 전 대략 4일 내지 6일 동안 30℃에서 세포를 항온처리한다. 검정 일에 아큐타제(accutase)를 사용하여 세포를 리프팅하고 0.8 내지 1e6개의 세포/㎖의 밀도로 20 ㎖의 세포 완충제를 재현탁시킨다.
2. 검정 준비된 저온바이알을 사용하는 경우; 2개의 저온바이알을 37℃에서 신속히 해동하고, 23 ㎖의 외부 용액에 천천히 피펫팅한다.
3. 모든 세포 조제를 검정을 시작하기 전에 10℃로 설정된 진탕 세포 호텔에서 15분 동안 항온처리한다.
화합물 조제:
Labcyte Echo를 사용하여 모든 화합물을 4중의 음파로 분배하였다. 10 mM 스톡 용액을 사용하여 각각 상이한 농도에서 6개의 화합물 소스 플레이트를 생성하여 세포에 누적 투여을 허용한다(0.03167 mM, 이어서 0.1 mM, 이후 0.3167 mM, 1 mM, 3.167 mM, 10 mM). 90 ㎕의 기준 완충제를 각각 0.1 μM, 0.39 μM, 1.2 μM, 3.9 μM, 12.5 μM 및 39.6 μM의 최종 화합물 농도에 대해 600 nl의 화합물을 함유하는 소스 플레이트의 각각의 웰에 첨가한다.
hERG 검정(모든 분배 단계는 Nanion syncropatch에 설정된 액체 처리를 이용하여 수행된다)
1. 40 ㎕의 외부 완충제로 384웰 배지 내성 4 홀 칩을 충전하고, 플레이트의 하면으로 내부 완충제를 관류시킨다.
2. 칩의 각각의 웰에 20 ㎕의 세포, 이어서 20 ㎕의 시일 인핸서를 분배한다.
3. 각각의 웰로부터 세척 스테이션으로 40 ㎕의 시약을 제거하고, 40 ㎕의 잔류 용적을 남긴다.
4. 3분 후 40 ㎕의 제거 단계에 의해 40 ㎕의 기준 완충제를 분배하고, 이 단계를 반복한다.
5. 40 ㎕의 화합물 플레이트 1(0.03167 mM)을 분배하고, 40 ㎕의 제거 전에 3분 노출 동안 '실시간' 기록한다. 이 단계를 증가하는 농도에서 5개의 추가의 후속하는 화합물 플레이트에 대해 반복하여 Syncropatch 칩의 각각의 웰에 누적 농도-효과 곡선을 생성한다.
hERG 매개된 전류는, 15초마다 60 mV로의 500 ms 단, 이어서 -40 mV로의 500 ms 단에 의해, -80 mV의 연속 유지 전압으로 이루어진 전압 단 프로토콜을 이용하여 유발되었다. hERG 전류 규모는, 농도-효과 곡선을 생성하도록 15초마다 -40 mV에서 hERG "꼬리" 전류의 피크를 취하고 각각의 농도에 대해 이들 반응의 마지막 3개를 취함으로써 Nanion 소프트웨어에 의해 누설 공제된 트레이스로부터 자동으로 측정되었다.
GeneData 내의 APC 패키지를 사용하여 결과의 계산을 수행한다. 참조로서 중립 및 저해제 대조군 웰 군에 의한 웰 데이터의 일상적인 정규화를 위해, GeneData 검정 분석기는 원하는 신호 범위로 신호 값을 정규화하도록 하기 식을 이용한다:
x는 측정된 웰의 원 신호 값이다
<cr>은 플레이트에서 중앙 참조(중립) 웰에 대한 측정된 신호 값의 중앙치이다
<sr>은 플레이트에서 스케일 참조(저해제) 웰에 대한 측정된 신호 값의 중앙치이다
CR은 중앙 참조(중립)에 대한 원하는 중앙치 정규화된 값이다
SR은 스케일 참조(저해제)에 대한 원하는 중앙치 정규화된 값이다
표 E는 선택된 실시예에 대한 hERG 결합 데이터를 보여준다(하기 데이터는 단일 실험 또는 2개 이상의 실험의 평균으로부터의 결과일 수 있다):
투과도
경구 흡수를 최대화하기 위해, 약물은 충분한 막관통 플럭스를 가질 뿐만 아니라, P-당단백질에 의한 유출을 피해야 한다. 경구 흡수를 예측하는 가장 널리 사용된 시스템은 인간 결장 선암 세포주 Caco-2의 단층을 통한 화합물의 투과 비율의 결정에 의한다.
A에서 B 및 B에서 A로의 인간 Caco-2 이방향성 투과도
자동화 검정을 pH 7.4에서 2시간에 걸쳐 수행된 Caco-2 세포에서의 화합물의 이방향성 투과도(유출 및 흡수)를 결정하도록 이용하였다. 샘플을 Caco-2 세포 단층에 걸친 화합물의 겉보기 투과도 계수(Papp)를 추정하도록 LC/MS/MS를 통해 분석하였고, 결과는 x10-6 ㎝/s의 단위로 표기된다.
유출 비율(efflux ratio: ER)은 하기 식을 이용하여 결정될 수 있다:
ER = Papp(B-A) / Papp(A-B)
식 중, Papp(B-A)는 기저측면에서 정단면 방향으로의 겉보기 투과도 계수를 나타내고, Papp(A-B)는 정단면에서 기저측면 방향으로의 겉보기 투과도 계수를 나타 낸다.
A에서 B Papp로의 인간 Caco-2 수동 투과도
자동화 검정을 사용하여 6.5의 정단면 pH 및 7.4의 기저측면 pH에서 2시간에 걸쳐 수행된 Caco-2 세포 단층에서의 화합물의 수동 투과도를 결정하였다. Caco-2 AB 저해 검정은 Caco-2 세포에서 ABCB1(P-gp), ABCG2(BCRP) 및 ABCC2(MRP2)의 3개의 주요 유출 수송체의 화학 저해에 의해 수행된다. 정단면 및 기저측면 둘 모두의 항온처리는 저해제의 칵테일(50 μM 퀴니딘, 20 μM 설파살라진 및 100 μM 벤즈브로마론)에 의해 수행된다. 샘플을 LC/MS/MS를 통해 분석하여 Caco-2 세포 단층에 걸친 화합물의 겉보기 투과도 계수(Papp)를 추정하였고, 결과는 x10-6 ㎝/s의 단위로 표기된다.
표 F는 선택된 실시예에 대해 생성된 투과도에 대한 데이터를 보여준다(하기 데이터는 단일 실험 또는 2개 이상의 실험의 평균으로부터의 결과일 수 있다):
마우스에서의 인간 모 MCF7 이종이식 항종양 효율
MCF7 이종이식편의 성장에 대한 실시예 17의 효과를 결정하기 위해, 하기 연구를 수행하였다. MCF7 세포(ATCC)를 이식 전 지수기에서 시험관내에 성장시켰다. 간단히, 체중이 18 g 이상인 수컷 SCID 마우스(Envigo UK)를 회복 가능한 마취제 하에 에스트로겐 펠릿(0.5 ㎎, Innovative Research of America로부터 21일 릴리즈(release))으로 등에 피하 이식하였다. 1일 후, 마우스를 1:1 RPMI(Gibco, Life Technologies) 및 마트리겔(Corning)에서 0.1 ㎖의 세포 현탁액으로서 제조된 500만 개의 MCF7 세포로 왼쪽 옆구리에 피하 접종하였다. 종양이 약 250 ㎣에 도달했을 때, 마우스를 9마리의 마우스(비히클 대조군에 대해 12마리의 마우스)의 군으로 무작위화하고, 약물 치료를 받기 시작하였다. 화합물을 비히클(주사용수 중의 40% 테트라에틸렌 글리콜(v/v), 7.5% 캡티솔(w/v)) 중에서 제조하고, 0.5 ㎎/㎏ 내지 50 ㎎/㎏에서 21일 동안 1일 1회 10 ㎖/㎏의 용적으로 경구 투여하였. 종양을 1주 2회 측정하고, 종양 용적을 타원형 식 (π/6 x 폭 x 폭 x 길이)을 이용하여 계산하였다. 데이터는 무작위화의 일자에 종양 용적과 관련된 종양 용적의 기하평균을 나타낸다. 오차 막대는 95% 신뢰도 간격(Graphpad Prism)이다. 이 연구는 10 ㎎/㎏ 이상의 용량이 종양 퇴행을 생성시킨다는 것을 나타낸다(도 12).
마우스에서의 인간 Y537S ESR1 돌연변이체 MCF7 이종이식 항종양 효율
Y537S ESR1을 발현하도록 유전자 조작된 MCF7 세포로부터 유래된 이종이식편의 성장에 대한 실시예 17의 효과를 결정하기 위해, 하기 연구를 수행하였다. Y537S ESR1 MCF7 세포는 게놈 편집에 의해 생성되었고, Y537S ESR1만을 발현한다(Ladd, et al., Oncotarget, 2016, 7:54120-54136). 간단히, 체중이 18 g 이상인 수컷 SCID 마우스(Envigo UK)를 1:1 RPMI(Gibco, Life Technologies) 및 마트리겔(Corning)에서 0.1 ㎖의 세포 현탁액으로서 제조된 500만 개의 Y537S ESR1 MCF7 세포로 왼쪽 옆구리에 피하 접종하였다. 종양이 약 250 ㎣에 도달했을 때, 마우스를 9마리의 마우스(비히클 대조군에 대해 12마리의 마우스)의 군으로 무작위화하고, 약물 치료를 받기 시작하였다. 화합물을 비히클(주사용수 중의 40% 테트라에틸렌 글리콜(v/v), 7.5% 캡티솔(w/v)) 중에서 제조하고, 0.5 ㎎/㎏ 내지 50 ㎎/㎏에서 22일 동안 1일 1회 10 ㎖/㎏의 용적으로 경구 투여하였다. 종양을 1주 2회 측정하고, 종양 용적을 타원형 식 (π/6 x 폭 x 폭 x 길이)을 이용하여 계산하였다. 데이터는 무작위화의 일자에 종양 용적과 관련된 종양 용적의 기하평균을 나타낸다. 오차 막대는 95% 신뢰도 간격(Graphpad Prism)이다. 이 연구는 10 ㎎/㎏ 이상의 용량이 종양 퇴행을 생성시킨다는 것을 나타낸다(도 13).
마우스에서의 인간 ESR1 돌연변이체 유방암 환자 유래된 이종이식 CTC174 항종양 효율
ESR1 돌연변이체 환자 유래된 이종이식 CTC174의 성장에 대한 실시예 17의 효과를 결정하기 위해, 암컷 NSG 마우스에게 유방 지방체에서 CTC174의 단편을 이식하였다. CTC174는 전이성 ER+ 유방암을 갖는 환자로부터 단리된 순환 종양 세포로부터 유래되고, 0.33 대립유전자 빈도로 ESR1에서 D538G 돌연변이를 보유하는 것으로 나타났다(Ladd, et al., Oncotarget, 2016, 7:54120-54136). 간단히, 암컷 난소 절제된 NOD/SCID(Cg-Prkdcscid Il2rgtm1Wjl/SzJ)(NSG) 마우스(6 내지 7주령 - The Jackson Laboratory)에게 제3 유방 지방체에서 CTC174 이종이식편의 약 50㎣ 단편을 회복 가능한 마취제 하에 이식하였다. 종양이 약 200 ㎣에 도달했을 때, 마우스를 10마리의 마우스의 군으로 무작위화하고, 약물 치료를 받기 시작하였다. 화합물을 비히클(주사용수 중의 40% 테트라에틸렌 글리콜(v/v), 7.5% 캡티솔(w/v)) 중에서 제조하고, 0.8 ㎎/㎏ 내지 40 ㎎/㎏에서 32일 동안 1일 1회 10 ㎖/㎏의 용적으로 경구 투여하였다. 종양을 1주 2회 측정하고, 종양 용적을 타원형 식 (π/6 x 폭 x 폭 x 길이)을 이용하여 계산하였다. 데이터는 무작위화의 일자에 종양 용적과 관련된 종양 용적의 기하평균을 나타낸다. 오차 막대는 95% 신뢰도 간격(Graphpad Prism)이다. 이 연구는 10 ㎎/㎏ 이상의 용량이 거의 완전한 종양 성장 저해를 생성시킨다는 것을 나타낸다(도 14).
마우스에서의 인간 ESR1 돌연변이체 유방암 환자 유래된 이종이식 CTC174 항종양 약물 조합 효율
ESR1 돌연변이체 환자 유래된 이종이식 CTC174의 성장에 대한, CDK4/6 저해제 팔보시클립 또는 mTORC1/2 저해제 비스투세르팁(AZD2014)과 조합된, 실시예 17의 효과를 결정하기 위해, 암컷 NSG 마우스에게 유방 지방체에서 CTC174의 단편을 이식하였다. CTC174는 전이성 ER+ 유방암을 갖는 환자로부터 단리된 순환 종양 세포로부터 유래되고, 0.33 대립유전자 빈도로 ESR1에서 D538G 돌연변이를 보유하는 것으로 나타났다(Ladd, et al., Oncotarget, 2016, 7:54120-54136). 간단히, 암컷 NOD/SCID(Cg-Prkdcscid Il2rgtm1Wjl/SzJ)(NSG) 마우스(6 내지 7주령 - The Jackson Laboratory)에게 제3 유방 지방체에서 CTC174 이종이식편의 약 30㎣ 단편을 회복 가능한 마취제 하에 이식하였다. 종양이 약 500 ㎣에 도달했을 때, 마우스를 10마리의 마우스의 군으로 무작위화하고, 약물 치료를 받기 시작하였다. 실시예 17을 비히클(주사용수 중의 40% 테트라에틸렌 글리콜(v/v), 7.5% 캡티솔(w/v)) 중에서 제조하고, 10 ㎎/㎏에서 23일 동안 1일 1회 10 ㎖/㎏의 용적으로 경구 투여하였다. 팔보시클립 및 비스투세르팁을 비히클(1% 폴리소르베이트 80) 중에서 제조하였다. 팔보시클립을 50 ㎎/㎏에서 23일 동안 1일 1회 10 ㎖/㎏의 용적으로 경구 투여하였다. 비스투세르팁을 10 ㎎/㎏에서 23일 동안 2일 투약, 5일 휴약 스케줄로 1일 2회 10 ㎖/㎏의 용적으로 경구 투여하였다. 비히클 치료된 군에 23일 동안 1일 1회 경구로 주사용수 중의 10 ㎖/㎏의 40% 테트라에틸렌 글리콜(v/v), 7.5% 캡티솔(w/v)이 투약되었다. 종양을 1주 2회 측정하고, 종양 용적을 타원형 식 (π/6 x 폭 x 폭 x 길이)을 이용하여 계산하였다. 데이터는 무작위화의 일자에 종양 용적과 관련된 종양 용적의 기하평균을 나타낸다. 오차 막대는 95% 신뢰도 간격(Graphpad Prism)이다. 이 연구는 팔보시클립(도 15) 또는 비스투세르팁(AZD2014)(도 16)과 조합된 실시예 17이 단독으로 투약된 어느 한 제제보다 더 높은 효과를 생성시킨다는 것을 나타낸다.
본 명세서의 추가의 양태에 따르면, 약제학적으로 허용 가능한 부형제와 회합된, 상기에 정의된 바와 같은 화학식 (I), (IA), (IB), (IC) 또는 (ID)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 포함하는 약제학적 조성물이 제공된다.
정제 제형에 적합한 약제학적으로 허용 가능한 부형제는 예를 들어 불활성 희석제, 과립화제 및 붕괴제, 결합제, 활택제, 보존제 및 항산화제를 포함한다. 추가로 적합한 약제학적으로 허용 가능한 부형제는 킬레이트화제일 수 있다. 정제 제형은 위장관 내의 이의 붕괴 및 활성 성분의 후속 흡수를 변형시키기 위해, 또는 어느 경우든 종래의 코팅제 및 당해 분야에 널리 공지된 절차를 이용하여 이의 안정성 및/또는 외관을 개선하기 위해 코팅되거나 비코팅될 수 있다.
경구 사용을 위한 조성물은 대안적으로 활성 성분이 불활성 고체 희석제와 혼합된 경질 젤라틴 캡슐의 형태로 또는 활성 성분이 물 또는 오일과 혼합된 연질 젤라틴 캡슐로서 있을 수 있다.
수성 현탁액은 일반적으로 1종 이상의 현탁제, 분산제 또는 습윤제와 함께 미세 분말 형태로 활성 성분을 함유한다. 수성 현탁액은 또한 1종 이상의 보존제, 항산화제, 착색제, 향료, 및/또는 감미료를 함유할 수 있다.
유성 현탁액은 식물성 오일 또는 광유 중에 활성 성분을 현탁시킴으로써 제형화될 수 있다. 유성 현탁액은 또한 증점제를 함유할 수 있다. 상기에 기재된 바와 같은 감미료 및 향료는 맛 좋은 경구 제제를 제공하도록 첨가될 수 있다. 이 조성물은 항산화제의 첨가에 의해 보존될 수 있다.
물의 첨가에 의해 수성 현탁액의 제조에 적합한 분산성 분말 및 과립은 일반적으로 분산제 또는 습윤제, 현탁제 및 1종 이상의 보존제와 함께 활성 성분을 함유한다. 추가적인 부형제, 예컨대 감미료, 향료 및 착색제가 또한 존재할 수 있다.
본 명세서의 약제학적 조성물은 또한 수중유 에멀션의 형태일 수 있다. 유성 상은 식물성 오일 또는 광유 또는 임의의 이들의 혼합물일 수 있다. 에멀션은 또한 감미료, 향료 및 보존제를 함유할 수 있다.
시럽 및 엘릭시르제는 감미료에 의해 제형화될 수 있고, 또한 완화제, 보존제, 향료 및/또는 착색제를 함유할 수 있다.
약제학적 조성물은 또한 상기 언급된 1종 이상의 적절한 분산제 또는 습윤제 및 현탁제를 사용하여 공지된 절차에 따라 제형화될 수 있는 무균 주사용 수성 또는 유성 현탁액의 형태일 수 있다. 무균 주사용 제제는 또한 비독성의 비경구로 허용 가능한 희석제 또는 용매 시스템에서 무균 주사용 용액 또는 현탁액일 수 있다.
흡입에 의한 투여용 조성물은 미분된 고체를 함유하는 에어로졸 또는 액체 액적으로서 활성 성분을 분배하도록 배열된 종래의 가압 에어로졸의 형태일 수 있다. 종래의 에어로졸 추진제, 예컨대 휘발성 불화 탄화수소 또는 탄화수소를 사용할 수 있고, 에어로졸 장치는 편리하게 계량된 분량의 활성 성분을 분배하도록 배열된다. 건조 분말 흡입제가 또한 적합할 수 있다.
제형에 대한 추가 정보를 위해, 독자는 문헌[Volume 5 of Comprehensive Medicinal Chemistry (Corwin Hansch; Chairman of Editorial Board), Pergamon Press 1990]에서 25.2장을 조회한다.
단일 투여형을 제조하기 위해 1종 이상의 부형제와 배합되는 활성 성분의 양은 반드시 치료되는 숙주 및 특정한 투여 경로에 따라 변할 것이다. 예를 들어, 인간에 대한 경구 투여는 일반적으로, 전체 조성물의 약 3 내지 약 98 중량%로 변할 수 있는 부형제의 적절하고 편리한 양과 배합되어 투여되는, 예를 들어 활성제의 1 ㎎ 내지 2 g(더 적합하게는 100 ㎎ 내지 2 g, 예를 들어 250 ㎎ 내지 1.8 g, 예컨대 500 ㎎ 내지 1.8 g, 특히 500 ㎎ 내지 1.5 g, 편리하게는 500 ㎎ 내지 1 g)을 필요로 할 것이다. 많은 투여량이 필요한 경우, 다중 투여형, 예를 들어 2개 이상의 정제 또는 캡슐이 필요할 수 있고, 활성 성분의 용량은 편리하게 이들 사이에 분할될 수 있는 것으로 이해될 것이다. 전형적으로, 단위 투여형은 본 명세서의 화합물의 약 10 ㎎ 내지 0.5 g을 함유할 것이지만, 단위 투여형은 1 g 이하를 함유할 수 있다. 편리하게는, 단일 고체 투여형은 1 내지 300 ㎎의 활성 성분을 함유할 수 있다.
본 명세서의 화합물의 치료학적 또는 예방학적 목적을 위한 용량의 크기는 자연적으로 널리 공지된 의약의 원칙에 따라 질병 상태의 성질 및 중증도, 동물 또는 환자의 연령 및 성별, 및 투여 경로에 따라 변할 것이다.
치료학적 또는 예방학적 목적을 위해 본 명세서의 화합물을 사용하는 데 있어서, 분할된 용량으로 필요한 경우를 고려하여 예를 들어 1 ㎎/㎏ 내지 100 ㎎/㎏ 체중의 범위의 1일 용량을 수용하도록 이것은 일반적으로 투여될 것이다. 일반적으로, 비경구 경로가 사용될 때 더 낮은 용량이 투여될 것이다. 따라서, 예를 들어 정맥내 투여를 위해, 예를 들어 1 ㎎/㎏ 내지 25 ㎎/㎏ 체중의 범위의 용량이 일반적으로 사용될 것이다. 유사하게, 흡입에 의한 투여를 위해, 예를 들어 1 ㎎/㎏ 내지 25 ㎎/㎏ 체중의 범위의 용량이 사용될 것이다. 그러나, 특히 정제 형태의 경구 투여가 바람직하다.
본 명세서의 일 양태에서, 본 명세서의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염은 10 ㎎ 내지 100 ㎎의 본 명세서의 화합물(또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염)을 포함하는 정제로서 투여되고, 하나 이상의 정제는 원하는 용량을 달성하도록 필요에 따라 투여된다.
상기에 기재된 바대로, ERα를 통한 신호전달이 암 및 다른 세포의 증식의 매개, 혈관형성 사건의 매개, 및 암 세포의 이동도, 이동 및 침윤성을 매개하는 하나 이상의 효과에 의해 종양생성을 발생시키는 것으로 공지되어 있다. 본 발명자들은 본 명세서의 화합물이 종양 세포의 증식 및 생존, 및 종양 세포를 전이시키는 침윤성 및 이동 능력을 발생시키는 신호 전달 단계에 관여된 ERα의 길항작용 및 하향조절에 의해 수득된다고 믿어지는 강력한 항종양 활성을 보유한다는 것을 발견하였다.
따라서, 본 명세서의 화합물은 항종양제로서, 특히 종양 성장 및 생존의 저해 및 전이성 종양 성장의 저해를 발생시키는 포유류 암 세포의 증식, 생존, 이동도, 파종 및 침윤성의 선택적 저해제로서 가치가 있을 수 있다. 특히, 본 명세서의 화합물은 고형 종양 질병의 방지 및/또는 치료에서 항증식제 및 항침윤제로서 가치가 있을 수 있다. 특히, 본 명세서의 화합물은 종양 세포의 증식 및 생존, 및 종양 세포를 전이시키는 이동 능력 및 침윤성을 발생시키는 신호 전달 단계에 관여되고 ERα의 저해에 민감한 종양의 예방 또는 치료에서 유용할 수 있다. 추가로, 본 명세서의 화합물은 단독으로 또는 부분적으로 ERα의 길항작용 및 하향조절에 의해 매개된 종양의 예방 또는 치료에서 유용할 수 있고, 즉 본 화합물은 이러한 치료를 필요로 하는 온혈 동물에서 ERα 저해 효과를 생성시키는 데 사용될 수 있다.
본 명세서의 추가의 양태에 따르면, 온혈 동물, 예컨대 사람에서의 약제로서 사용하기 위한, 상기에 정의된 바와 같은 화학식 (I), (IA), (IB), (IC) 또는 (ID)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염이 제공된다.
본 명세서의 추가의 양태에 따르면, 온혈 동물, 예컨대 사람에서의 항증식성 효과의 생성에서 사용하기 위한, 상기에 정의된 바와 같은 화학식 (I), (IA), (IB), (IC) 또는 (ID)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염이 제공된다.
본 명세서의 추가의 양태에 따르면, 고형 종양 질병의 방지 및/또는 치료에서 항침윤제로서의 온혈 동물, 예컨대 사람에서 사용하기 위한, 상기에 정의된 바와 같은 화학식 (I), (IA), (IB), (IC) 또는 (ID)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염이 제공된다.
본 명세서의 추가의 양태에 따르면, 온혈 동물, 예컨대 사람에서의 항증식성 효과의 생성을 위한, 상기에 정의된 바와 같은 화학식 (I), (IA), (IB), (IC) 또는 (ID)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염의 용도가 제공된다.
본 명세서의 추가의 양태에 따르면, 온혈 동물, 예컨대 사람에서의 항증식성 효과의 생성에서 사용하기 위한 약제의 제조에서의, 상기에 정의된 바와 같은 화학식 (I), (IA), (IB), (IC) 또는 (ID)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염의 용도가 제공된다.
본 명세서의 추가의 양태에 따르면, 고형 종양 질병의 방지 및/또는 치료에서 항침윤제로서의 온혈 동물, 예컨대 사람에서 사용하기 위한 약제의 제조에서의, 상기에 정의된 바와 같은 화학식 (I), (IA), (IB), (IC) 또는 (ID)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염의 용도가 제공된다.
본 명세서의 추가의 양태에 따르면, 유효량의 상기에 정의된 바와 같은 화학식 (I), (IA), (IB), (IC) 또는 (ID)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 상기 동물에 투여하는 단계를 포함하는, 항증식성 효과의 생성의 치료를 필요로 하는 온혈 동물, 예컨대 사람에서 항증식성 효과를 생성하는 방법이 제공된다.
본 명세서의 추가의 양태에 따르면, 유효량의 상기에 정의된 바와 같은 화학식 (I), (IA), (IB), (IC) 또는 (ID)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 상기 동물에게 투여하는 단계를 포함하는, 항침윤성 효과의 생성의 치료를 필요로 하는 온혈 동물, 예컨대 사람에서 고형 종양 질병의 방지 및/또는 치료에 의해 항침윤성 효과를 생성하는 방법이 제공된다.
본 명세서의 추가의 양태에 따르면, 온혈 동물, 예컨대 사람에서 암의 예방 또는 치료에서 사용하기 위한, 상기에 정의된 바와 같은 화학식 (I), (IA), (IB), (IC) 또는 (ID)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염이 제공된다.
본 명세서의 추가의 양태에 따르면, 온혈 동물, 예컨대 사람에서 암의 예방 또는 치료에서 사용하기 위한 약제의 제조에서의, 상기에 정의된 바와 같은 화학식 (I), (IA), (IB), (IC) 또는 (ID)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염의 용도가 제공된다.
본 명세서의 추가의 양태에 따르면, 유효량의 상기에 정의된 바와 같은 화학식 (I), (IA), (IB), (IC) 또는 (ID)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 상기 동물에게 투여하는 단계를 포함하는, 암의 예방 또는 치료를 필요로 하는 온혈 동물, 예컨대 사람에서 암의 예방 또는 치료를 위한 방법이 제공된다.
본 명세서의 추가의 양태에 따르면, 온혈 동물, 예컨대 사람에서 고형 종양 질병의 예방 또는 치료에서 사용하기 위한, 상기에 정의된 바와 같은 화학식 (I), (IA), (IB), (IC) 또는 (ID)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염이 제공된다.
본 명세서의 추가의 양태에 따르면, 온혈 동물, 예컨대 사람에서 고형 종양 질병의 예방 또는 치료에서 사용하기 위한 약제의 제조에서의, 상기에 정의된 바와 같은 화학식 (I), (IA), (IB), (IC) 또는 (ID)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염의 용도가 제공된다.
본 명세서의 추가의 양태에 따르면, 유효량의 상기에 정의된 바와 같은 화학식 (I), (IA), (IB), (IC) 또는 (ID)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 상기 동물에게 투여하는 단계를 포함하는, 고형 종양 질병의 예방 또는 치료를 필요로 하는 온혈 동물, 예컨대 사람에서 고형 종양 질병의 예방 또는 치료를 위한 방법이 제공된다.
본 명세서의 추가의 양태에 따르면, 종양 세포의 증식, 생존, 침윤성 및 이동 능력을 발생시키는 신호 전달 단계에 관여된 ERα의 저해에 민감한 종양의 예방 또는 치료에서 사용하기 위한, 상기에 정의된 바와 같은 화학식 (I), (IA), (IB), (IC) 또는 (ID)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염이 제공된다.
본 명세서의 추가의 양태에 따르면, 종양 세포의 증식, 생존, 침윤성 및 이동 능력을 발생시키는 신호 전달 단계에 관여된 ERα의 저해에 민감한 종양의 예방 또는 치료에서 사용하기 위한 약제의 제조에서의, 상기에 정의된 바와 같은 화학식 (I), (IA), (IB), (IC) 또는 (ID)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염의 용도가 제공된다.
본 명세서의 추가의 양태에 따르면, 유효량의 상기에 정의된 바와 같은 화학식 (I), (IA), (IB), (IC) 또는 (ID)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 상기 동물에게 투여하는 단계를 포함하는, 종양 세포의 증식, 생존, 침윤성 및 이동 능력을 발생시키는 신호 전달 단계에 관여된 ERα의 저해에 민감한 종양의 예방 또는 치료를 위한 방법이 제공된다.
본 명세서의 추가의 양태에 따르면, ERα에 대한 저해 효과를 제공하는 데 사용하기 위한, 상기에 정의된 바와 같은 화학식 (I), (IA), (IB), (IC) 또는 (ID)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염이 제공된다.
본 명세서의 추가의 양태에 따르면, ERα에 대한 저해 효과를 제공하는 데 사용하기 위한 약제의 제조에서의, 상기에 정의된 바와 같은 화학식 (I), (IA), (IB), (IC) 또는 (ID)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염의 용도가 제공된다.
본 명세서의 추가의 양태에 따르면, 유효량의 상기에 정의된 바와 같은 화학식 (I), (IA), (IB), (IC) 또는 (ID)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 투여하는 단계를 포함하는, ERα에 대한 저해 효과를 제공하는 방법이 또한 제공된다.
본 명세서의 추가의 양태에 따르면, ERα에 대한 선택적 저해 효과를 제공하는 데 사용하기 위한, 상기에 정의된 바와 같은 화학식 (I), (IA), (IB), (IC) 또는 (ID)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염이 제공된다.
본 명세서의 추가의 양태에 따르면, ERα에 대한 선택적 저해 효과를 제공하는 데 사용하기 위한 약제의 제조에서의, 상기에 정의된 바와 같은 화학식 (I), (IA), (IB), (IC) 또는 (ID)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염의 용도가 제공된다.
본 명세서의 추가의 양태에 따르면, 유효량의 상기에 정의된 바와 같은 화학식 (I), (IA), (IB), (IC) 또는 (ID)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 투여하는 단계를 포함하는, ERα에 대한 선택적 저해 효과를 제공하는 방법이 또한 제공된다.
ERα 리간드 결합 도메인에 결합할 수 있고 선택적 에스트로겐 수용체 분해물질인 화합물이 본원에 기재된다. 생화학 및 세포 기반 검정에서, 본 명세서의 화합물은 강력한 에스트로겐 수용체 결합제이고, ERα의 세포 수준을 감소시키는 것으로 밝혀졌고, 따라서 에스트로겐 민감성 질병 또는 질환(내분비 치료제에 내성을 발생시키는 질병 포함)의 치료에서, 즉 유방의 암 및 부인암(자궁내막, 난소 및 자궁경부 포함), 및 신생 돌연변이일 수 있거나, 이전의 내분비 치료제, 예컨대 아로마타제 저해제에 의한 치료의 결과로서 생긴 ERα 돌연변이된 단백질을 발현하는 암의 치료에서 사용하기 위해 유용할 수 있다.
본 명세서의 추가의 양태에 따르면, 유방암 또는 부인암의 치료에서 사용하기 위한, 상기에 정의된 바와 같은 화학식 (I), (IA), (IB), (IC) 또는 (ID)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염이 제공된다.
본 명세서의 추가의 양태에 따르면, 유방, 자궁내막, 난소 또는 자궁경부의 암의 치료에서 사용하기 위한, 상기에 정의된 바와 같은 화학식 (I), (IA), (IB), (IC) 또는 (ID)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염이 제공된다.
본 명세서의 추가의 양태에 따르면, 유방암의 치료에서 사용하기 위한, 상기에 정의된 바와 같은 화학식 (I), (IA), (IB), (IC) 또는 (ID)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염이 제공된다.
본 명세서의 추가의 양태에 따르면, 하나 이상의 다른 내분비 치료제에 내성을 발생시키는, 유방암의 치료에서 사용하기 위한, 상기에 정의된 바와 같은 화학식 (I), (IA), (IB), (IC) 또는 (ID)의 화합물 혹은 이의 약제학적으로 허용 가능한 염이 제공된다.
본 명세서의 추가의 양태에 따르면, 유효량의 상기에 정의된 바와 같은 화학식 (I), (IA), (IB), (IC) 또는 (ID)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 투여하는 단계를 포함하는, 유방암 또는 부인암을 치료하는 방법이 제공된다.
본 명세서의 추가의 양태에 따르면, 유효량의 상기에 정의된 바와 같은 화학식 (I), (IA), (IB), (IC) 또는 (ID)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 투여하는 단계를 포함하는, 유방, 자궁내막, 난소 또는 자궁경부의 암을 치료하는 방법이 제공된다.
본 명세서의 추가의 양태에 따르면, 유효량의 상기에 정의된 바와 같은 화학식 (I), (IA), (IB), (IC) 또는 (ID)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 투여하는 단계를 포함하는, 유방암을 치료하는 방법이 제공된다.
본 명세서의 추가의 양태에 따르면, 유효량의 상기에 정의된 바와 같은 화학식 (I), (IA), (IB), (IC) 또는 (ID)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 투여하는 단계를 포함하는, 하나 이상의 다른 내분비 치료제에 내성을 발생시키는, 유방암을 치료하는 방법이 제공된다.
본 명세서의 추가의 양태에 따르면, 유방암 또는 부인암의 치료에서 사용하기 위한 약제의 제조에서의, 상기에 정의된 바와 같은 화학식 (I), (IA), (IB), (IC) 또는 (ID)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염의 용도가 제공된다.
본 명세서의 추가의 양태에 따르면, 유방, 자궁내막, 난소 또는 자궁경부의 암의 치료에서 사용하기 위한 약제의 제조에서의, 상기에 정의된 바와 같은 화학식 (I), (IA), (IB), (IC) 또는 (ID)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염의 용도가 제공된다.
본 명세서의 추가의 양태에 따르면, 유방암의 치료에서 사용하기 위한 약제의 제조에서의, 상기에 정의된 바와 같은 화학식 (I), (IA), (IB), (IC) 또는 (ID)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염의 용도가 제공된다.
본 명세서의 추가의 양태에 따르면, 하나 이상의 다른 내분비 치료제에 내성을 발생시키는, 유방암의 치료에서 사용하기 위한 약제의 제조에서의, 상기에 정의된 바와 같은 화학식 (I), (IA), (IB), (IC) 또는 (ID)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염의 용도가 제공된다.
본 명세서의 일 특징에서, 치료하고자 하는 암은 유방암이다. 이 특징의 추가의 양태에서, 유방암은 에스트로겐 수용체 양성(ER+ve)이다. 본 양태의 일 구현예에서, 화학식 (I), (IA), (IB), (IC) 또는 (ID)의 화합물은 다른 항암제, 예컨대 본원에 정의된 바와 같은 항호르몬제와 조합되어 투여된다.
본 명세서의 추가의 양태에 따르면, ER+ve 유방암의 치료에서 사용하기 위한, 상기에 정의된 바와 같은 화학식 (I), (IA), (IB), (IC) 또는 (ID)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염이 제공된다.
본 명세서의 추가의 양태에 따르면, 유효량의 상기에 정의된 바와 같은 화학식 (I), (IA), (IB), (IC) 또는 (ID)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 투여하는 단계를 포함하는, ER+ve 유방암을 치료하는 방법이 제공된다.
본 명세서의 추가의 양태에 따르면, ER+ve 유방암의 치료에서 사용하기 위한 약제의 제조에서의, 상기에 정의된 바와 같은, 화학식 (I), (IA), (IB), (IC) 또는 (ID)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염의 용도가 제공된다.
상기에 기재된 바와 같이, 화학식 (I), (IA), (IB), (IC) 또는 (ID)의 화합물의 생체내 효과는 화학식 (I), (IA), (IB), (IC) 또는 (ID)의 화합물의 투여 후 인간 또는 동물 신체 내에 형성된 1종 이상의 대사물질에 의해 부분적으로 발휘될 수 있다.
따라서 본 명세서는 또한 환자에서 ER-α를 저해하는 데 효과적인 화학식 (I), (IA), (IB), (IC) 또는 (ID)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염의 양을 환자에게 투여하는 단계를 포함하는, 환자에서 ER-α를 저해하는 방법을 고려한다.
따라서 본 명세서는 또한 환자에서 ER-α를 저해하는 데 효과적인 화학식 (I), (IA), (IB), (IC) 또는 (ID)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염의 양을 환자에게 투여하는 단계를 포함하는, 환자에서 ERα를 저해하는 방법을 고려한다.
본원에 정의된 항암 치료는 단일 치료로서 적용될 수 있거나, 본 명세서의 화합물 이외에, 종래의 수술 또는 방사선요법 또는 화학요법을 수반할 수 있다. 이러한 화학요법은 항종양제의 하기 카테고리 중 하나 이상을 포함할 수 있다:
(i) 의학 종양학에서 사용되는 바와 같은, 다른 항증식성/항신생물성 약물 및 이들의 조합, 예컨대 알킬화제(예를 들어, 시스플라틴, 옥살리플라틴, 카보플라틴, 사이클로포스파미드, 질소 머스터드, 멜팔란, 클로르람부실, 부술판, 테모졸라미드 및 니트로소우레아); 항대사물질(예를 들어, 겜시타빈 및 항엽산, 예컨대 플루오로피리미딘, 예컨대 5-플루오로우라실 및 테가푸르, 랄티트렉세드, 메토트렉세이트, 사이토신 아라비노사이드 및 하이드록시우레아); 항종양성 항생제(예를 들어, 안트라사이클린, 예컨대 아드리아마이신, 블레오마이신, 독소루비신, 다우노마이신, 에피루비신, 이다루비신, 미토마이신-C, 닥티노마이신 및 미트라마이신); 항유사분열제(예를 들어, 빈카 알칼로이드, 예컨대 빈크리스틴, 빈블라스틴, 빈데신 및 비노렐빈 및 탁소이드, 예컨대 탁솔 및 탁소테르 및 폴로키나제 저해제); 및 토포아이소머라제 저해제(예를 들어, 에피포도필로톡신, 예컨대 에토포사이드 및 테니포사이드, 암사크린, 토포테칸 및 캄프토테신);
(ii) 항호르몬제, 예컨대 항에스트로겐(예를 들어, 타목시펜, 풀베스트란트, 토레미펜, 랄록시펜, 드롤록시펜 및 요오독시펜), 프로게스토겐(예를 들어, 메게스트롤 아세테이트), 아로마타제 저해제(예를 들어, 아나스트로졸, 레트로졸, 보라졸 및 엑스메스탄);
(iii) 성장 인자 기능 및 이의 하류 신호전달 경로의 저해제: 문헌[Stern et al. Critical Reviews in Oncology/Haematology, 2005, 54, pp11-29]에 의해 검토된, 임의의 성장 인자 또는 성장 인자 수용체 표적의 Ab 조절제가 포함되고; 또한 이러한 표적의 소분자 저해제, 예를 들어 키나제 저해제가 포함되고 - 예는 항-erbB2 항체 트라스투주맙[Herceptin™], 항-EGFR 항체 파니투무맙, 항-EGFR 항체 세툭시맙[Erbitux, C225] 및 티로신 키나제 저해제, 예를 들어 erbB 수용체 패밀리의 저해제, 예컨대 표피 성장 인자 패밀리 수용체(EGFR/erbB1) 티로신 키나제 저해제, 예컨대 게피티닙 또는 에를로티닙, erbB2 티로신 키나제 저해제, 예컨대 라파티닙, 및 혼합된 erb1/2 저해제, 예컨대 아파타닙을 포함하고; 유사한 전력은 성장 인자 및 이의 수용체의 다른 종류, 예를 들어 간세포 성장 인자 패밀리 또는 이의 수용체, 예를 들어 c-met 및 ron의 저해제; 인슐린 및 인슐린 성장 인자 패밀리 또는 이의 수용체(IGFR, IR)의 저해제, 혈소판 유래된 성장 인자 패밀리 또는 이의 수용체(PDGFR)의 저해제 및 다른 수용체 티로신 키나제, 예컨대 c-kit, AnLK 및 CSF-1R에 의해 매개된 신호전달의 저해제에 대해 이용 가능하고; 또한 PI3-키나제 신호전달 경로에서 신호전달 단백질을 표적화하는 조절제, 예를 들어 PI3-키나제 동형단백질, 예컨대 PI3K-α/β/γ 및 ser/thr 키나제, 예컨대 AKT, mTOR(예컨대, AZD2014), PDK, SGK, PI4K 또는 PIP5K의 저해제가 포함되고; 또한 상기에 기재되지 않는 세린/트레오닌 키나제의 저해제, 예를 들어 raf 저해제, 예컨대 베무라페닙, MEK 저해제, 예컨대 셀루메티닙(AZD6244), Abl 저해제, 예컨대 이마티닙 또는 닐로티닙, Btk 저해제, 예컨대 이브루티닙, Syk 저해제, 예컨대 포스타마티닙, 오로라 키나제 저해제(예를 들어, AZD1152), 다른 ser/thr 키나제, 예컨대 JAK, STAT 및 IRAK4의 저해제 및 사이클린 의존적 키나제 저해제, 예를 들어 CDK1, CDK7, CDK9 및 CDK4/6의 저해제, 예컨대 팔보시클립이 포함된다;
(iv) DNA 손상 신호전달 경로의 조절제, 예를 들어 PARP 저해제(예를 들어, 올라파립), ATR 저해제 또는 ATM 저해제;
(v) 아폽토시스 및 세포사 경로의 조절제, 예컨대 Bcl 패밀리 조절제(예를 들어, ABT-263/나비토클락스, ABT-199);
(vi) 신생혈관억제제, 예컨대 혈관 내피 성장 인자의 효과를 저해하는 것[예를 들어, 항혈관 내피 세포 성장 인자 항체 베바시주맙(Avastin™) 및 예를 들어, VEGF 수용체 티로신 키나제 저해제, 예컨대 소라페닙, 악시티닙, 파조파닙, 수니티닙 및 반데타닙(및 다른 기전에 의해 작용하는 화합물(예를 들어, 리노마이드, 인테그린 αvβ3 기능의 저해제 및 안지오스타틴)];
(vii) 혈관 손상 제제, 예컨대 콤브레타스타틴 A4;
(viii) 항침윤제, 예를 들어 c-Src 키나제 패밀리 저해제, 예컨대 다사티닙(J. Med. Chem., 2004, 47, 6658-6661) 및 보수티닙(SKI-606), 및 금속단백분해효소 저해제, 예컨대 마리마스타트, 유로키나제 플라스미노젠 활성화 수용체 기능의 저해제 또는 헤파라나제에 대한 항체];
(ix) 면역요법 접근법, 예를 들어 환자 종양 세포의 면역원성을 증가시키기 위한 생체외 및 생체내 접근법, 예컨대 사이토킨, 예컨대 인터류킨 2, 인터류킨 4 또는 과립구-대식구 집락 자극 인자에 의한 형질주입, T 세포 무반응 상태를 감소시키기 위한 접근법, 형질주입된 면역 세포, 예컨대 사이토킨 형질주입된 수지상 세포를 사용한 접근법, 사이토킨 형질주입된 종양 세포주를 사용한 접근법 및 항유전자형 항체를 사용한 접근법. 구체적인 예는 PD-1(예를 들어, BMS-936558) 또는 CTLA4(예를 들어, 이필리무맙 및 트레멜리무맙)를 표적화하는 단일클론 항체를 포함한다;
(x) 안티센스 또는 RNAi 기반 치료, 예를 들어 기재된 표적에 지향된 것.
(xi) 유전자 치료 접근법, 예를 들어 비정상 유전자, 예컨대 비정상 p53 또는 비정상 BRCA1 또는 BRCA2를 대체하기 위한 접근법, GDEPT(유전자 지향된 효소 프로-드러그 치료) 접근법, 예컨대 사이토신 탈아미노효소, 티미딘 키나제 또는 박테리아 니트로리덕타제 효소를 사용한 것 및 화학요법 또는 방사선요법에 대한 환자 내용성을 증가시키기 위한 접근법, 예컨대 다중 약물 내성 유전자 치료.
따라서, 일 구현예에서, 암의 합동 치료를 위한 화학식 (I), (IA), (IB), (IC) 또는 (ID)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염, 및 추가적인 항종양 물질이 제공된다.
본 명세서의 본 양태에 따르면, 화학식 (I), (IA), (IB), (IC) 또는 (ID)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염 및 다른 항종양제, 특히 상기 (i) 내지 (xi) 하에 기재된 항종양제 중 임의의 하나를 포함하는 암의 치료에서 사용하기에 적합한 조합이 제공된다. 특히, 상기 (i) 내지 (xi) 하에 기재된 항종양제는 치료하고자 하는 특정한 암에 대한 관리 표준이고; 당업자는 "관리 표준"의 의미를 이해할 것이다.
따라서, 본 명세서의 추가의 양태에서, 다른 항종양제, 특히 상기 본원에서 (i) 내지 (xi) 하에 기재된 것으로부터 선택된 항종양제와 조합된, 화학식 (I), (IA), (IB), (IC) 또는 (ID)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염이 제공된다.
본 명세서의 추가의 양태에서, 다른 항종양제, 특히 상기 (i) 하에 기재된 것으로부터 선택된 항종양제와 조합된, 화학식 (I), (IA), (IB), (IC) 또는 (ID)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염이 제공된다.
본 명세서의 추가의 양태에서, 화학식 (I), (IA), (IB), (IC) 또는 (ID)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염, 및 상기 (i) 하에 기재된 항종양제 중 임의의 하나가 제공된다.
본 명세서의 추가의 양태에서, 화학식 (I), (IA), (IB), (IC) 또는 (ID)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염, 및 예를 들어 탁솔 또는 탁소테르와 같은 탁소이드, 편리하게는 탁소테르를 포함하는 암의 치료에서 사용하기에 적합한 조합이 제공된다.
본 명세서의 추가의 양태에서, 다른 항종양제, 특히 상기 본원에서 (ii) 하에 기재된 것으로부터 선택된 항종양제와 조합된, 화학식 (I), (IA), (IB), (IC) 또는 (ID)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염이 제공된다.
본 명세서의 추가의 양태에서, 화학식 (I), (IA), (IB), (IC) 또는 (ID)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염, 및 상기 (ii) 하에 기재된 항호르몬제 중 임의의 하나, 예를 들어 상기 (ii)에 기재된 항에스트로겐, 또는 예를 들어 상기 (ii)에 기재된 아로마타제 저해제 중 임의의 하나를 포함하는 암의 치료에서 사용하기에 적합한 조합이 제공된다.
본 명세서의 추가의 양태에서, 화학식 (I), (IA), (IB), (IC) 또는 (ID)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염, 및 mTOR 저해제, 예컨대 AZD2014를 포함하는 암의 치료에서 사용하기에 적합한 조합이 제공된다.
본 명세서의 추가의 양태에서, 화학식 (I), (IA), (IB), (IC) 또는 (ID)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염, 및 PI3Kα-저해제, 예컨대 화합물 1-(4-(5-(5-아미노-6-(5-tert-부틸-1,3,4-옥사디아졸-2-일)피라진-2-일)-1-에틸-1H-1,2,4-트리아졸-3-일)피페리딘-1-일)-3-하이드록시프로판-1-온, 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 포함하는 암의 치료에서 사용하기에 적합한 조합이 제공된다.
본 명세서의 추가의 양태에서, 화학식 (I), (IA), (IB), (IC) 또는 (ID)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염, 및 CDK4/6 저해제, 예컨대 팔보시클립을 포함하는 암의 치료에서 사용하기에 적합한 조합이 제공된다.
일 양태에서, 화학식 (I), (IA), (IB), (IC) 또는 (ID)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염과 상기 (ii)에 기재된 항종양제, 또는 mTOR 저해제(예컨대, AZD2014), 또는 PI3K-α 저해제(예컨대, 화합물 1-(4-(5-(5-아미노-6-(5-tert-부틸-1,3,4-옥사디아졸-2-일)피라진-2-일)-1-에틸-1H-1,2,4-트리아졸-3-일)피페리딘-1-일)-3-하이드록시프로판-1-온) 또는 CDK4/6 저해제(예컨대, 팔보시클립)의 상기 조합은 유방암 또는 부인암, 예컨대 유방, 자궁내막, 난소 또는 자궁경부의 암, 특히 유방암, 예컨대 ER+ve 유방암의 치료에서 사용하기에 적합하다.
본원에서, 용어 "조합"이 사용되는 경우, 이것이 동시, 별개의 또는 순차적인 투여를 의미하는 것으로 이해될것이다. 본 명세서의 일 양태에서, "조합"은 동시 투여를 의미한다. 본 명세서의 다른 양태에서, "조합"은 별개의 투여를 의미한다. 본 명세서의 추가의 양태에서, "조합"은 순차적인 투여를 의미한다. 투여가 순차적인 또는 별개인 경우, 제2 성분의 투여의 지연은 조합의 유리한 효과를 손실하도록 있지 않아야 한다. 2종 이상의 성분의 조합이 별개로 또는 순차적으로 투여되는 경우, 각각의 성분에 대한 투여량 섭생이 다른 성분과 다르고 이에 독립적일 수 있는 것으로 이해될 것이다. 편리하게는, 본 명세서의 화합물은 매일 1회 투여된다.
본 명세서의 추가의 양태에 따르면, 약제학적으로 허용 가능한 부형제와 회합된, 상기 본원에서 (i) 내지 (xi) 하에 기재된 것으로부터 선택된 항종양제와 조합된, 화학식 (I), (IA), (IB), (IC) 또는 (ID)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 포함하는 약제학적 조성물이 제공된다.
본 명세서의 추가의 양태에 따르면, 약제학적으로 허용 가능한 부형제와 회합된, 상기 (ii) 하에 기재된 항호르몬제 중 임의의 하나, 예를 들어 상기 (ii)에 기재된 항에스트로겐, 또는 예를 들어 상기 (ii)에 기재된 아로마타제 저해제 중 임의의 하나와 조합된, 화학식 (I), (IA), (IB), (IC) 또는 (ID)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 포함하는 약제학적 조성물이 제공된다.
본 명세서의 추가의 양태에서, 약제학적으로 허용 가능한 부형제와 회합된, 화학식 (I), (IA), (IB), (IC) 또는 (ID)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염, 및 mTOR 저해제, 예컨대 AZD2014를 포함하는 약제학적 조성물이 제공된다.
본 명세서의 추가의 양태에서, 약제학적으로 허용 가능한 부형제와 회합된, 화학식 (I), (IA), (IB), (IC) 또는 (ID)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염, 및 PI3Kα-저해제, 예컨대 화합물 1-(4-(5-(5-아미노-6-(5-tert-부틸-1,3,4-옥사디아졸-2-일)피라진-2-일)-1-에틸-1H-1,2,4-트리아졸-3-일)피페리딘-1-일)-3-하이드록시프로판-1-온을 포함하는 약제학적 조성물이 제공된다.
본 명세서의 추가의 양태에서, 약제학적으로 허용 가능한 부형제와 회합된, 화학식 (I), (IA), (IB), (IC) 또는 (ID)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염, 및 CDK4/6 저해제(예컨대, 팔보시클립)를 포함하는 약제학적 조성물이 제공된다.
본 명세서의 추가의 양태에 따르면, 암을 치료하는 데 사용하기 위한, 약제학적으로 허용 가능한 부형제와 회합된, 상기 본원에서 (i) 내지 (xi) 하에 기재된 것으로부터 선택된 항종양제와 조합된, 화학식 (I), (IA), (IB), (IC) 또는 (ID)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 포함하는 약제학적 조성물이 제공된다.
본 명세서의 추가의 양태에 따르면, 암을 치료하는 데 사용하기 위한, 약제학적으로 허용 가능한 부형제와 회합된, 상기 (ii) 하에 기재된 항호르몬제 중 임의의 하나, 예를 들어 상기 (ii)에 기재된 항에스트로겐, 또는 예를 들어 상기 (ii)에 기재된 아로마타제 저해제 중 임의의 하나와 조합된, 화학식 (I), (IA), (IB), (IC) 또는 (ID)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 포함하는 약제학적 조성물이 제공된다.
본 명세서의 추가의 양태에서, 암을 치료하는 데 사용하기 위한, 약제학적으로 허용 가능한 부형제와 회합된, 화학식 (I), (IA), (IB), (IC) 또는 (ID)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염, 및 mTOR 저해제, 예컨대 AZD2014를 포함하는 약제학적 조성물이 제공된다.
본 명세서의 추가의 양태에서, 암을 치료하는 데 사용하기 위한, 약제학적으로 허용 가능한 부형제와 회합된, 화학식 (I), (IA), (IB), (IC) 또는 (ID)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염, 및 PI3Kα-저해제, 예컨대 화합물 1-(4-(5-(5-아미노-6-(5-tert-부틸-1,3,4-옥사디아졸-2-일)피라진-2-일)-1-에틸-1H-1,2,4-트리아졸-3-일)피페리딘-1-일)-3-하이드록시프로판-1-온을 포함하는 약제학적 조성물이 제공된다.
본 명세서의 추가의 양태에서, 암을 치료하는 데 사용하기 위한, 약제학적으로 허용 가능한 부형제와 회합된, 화학식 (I), (IA), (IB), (IC) 또는 (ID)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염, 및 CDK4/6 저해제(예컨대, 팔보시클립)를 포함하는 약제학적 조성물이 제공된다.
일 양태에서, 상기 (ii)에 기재된 항종양제, 또는 mTOR 저해제(예컨대, AZD2014), 또는 PI3K-α 저해제(예컨대, 화합물 1-(4-(5-(5-아미노-6-(5-tert-부틸-1,3,4-옥사디아졸-2-일)피라진-2-일)-1-에틸-1H-1,2,4-트리아졸-3-일)피페리딘-1-일)-3-하이드록시프로판-1-온) 또는 CDK4/6 저해제(예컨대, 팔보시클립)와 화학식 (I), (IA), (IB), (IC) 또는 (ID)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염의 상기 약제학적 조성물은 유방암 또는 부인암, 예컨대 유방, 자궁내막, 난소 또는 자궁경부의 암, 특히 유방암, 예컨대 ER+ve 유방암의 치료에서 사용하기에 적합하다.
본 명세서의 또 다른 특징에 따르면, 온혈 동물, 예컨대 사람에서 암의 치료에서 사용하기 위한 약제의 제조에서의, 상기 본원에서 (i) 내지 (xi) 하에 기재된 것으로부터 선택된 항종양제와 조합된, 화학식 (I), (IA), (IB), (IC) 또는 (ID)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염의 용도가 제공된다.
본 명세서의 추가의 양태에 따르면, 온혈 동물, 예컨대 사람에서 암의 치료에서 사용하기 위한 약제의 제조에서의, 상기 (ii) 하에 기재된 항호르몬제 중 임의의 하나, 예를 들어 상기 (ii)에 기재된 항에스트로겐, 또는 예를 들어 상기 (ii)에 기재된 아로마타제 저해제 중 임의의 하나와 조합된, 화학식 (I), (IA), (IB), (IC) 또는 (ID)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염의 용도가 제공된다.
본 명세서의 추가의 양태에서, 온혈 동물, 예컨대 사람에서 암의 치료에서 사용하기 위한 약제의 제조에서의, mTOR 저해제, 예컨대 AZD2014와 조합된, 화학식 (I), (IA), (IB), (IC) 또는 (ID)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염의 용도가 제공된다.
본 명세서의 추가의 양태에서, 온혈 동물, 예컨대 사람에서 암의 치료에서 사용하기 위한 약제의 제조에서의, PI3Kα-저해제, 예컨대 화합물 1-(4-(5-(5-아미노-6-(5-tert-부틸-1,3,4-옥사디아졸-2-일)피라진-2-일)-1-에틸-1H-1,2,4-트리아졸-3-일)피페리딘-1-일)-3-하이드록시프로판-1-온과 조합된, 화학식 (I), (IA), (IB), (IC) 또는 (ID)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염의 용도가 제공된다.
본 명세서의 추가의 양태에서, 온혈 동물, 예컨대 사람에서 암의 치료에서 사용하기 위한 약제의 제조에서의, CDK4/6 저해제(예컨대, 팔보시클립)와 조합된, 화학식 (I), (IA), (IB), (IC) 또는 (ID)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염의 용도가 제공된다.
일 양태에서, 상기 (ii)에 기재된 항종양제, 또는 mTOR 저해제(예컨대, AZD2014), 또는 PI3K-α 저해제(예컨대, 화합물 1-(4-(5-(5-아미노-6-(5-tert-부틸-1,3,4-옥사디아졸-2-일)피라진-2-일)-1-에틸-1H-1,2,4-트리아졸-3-일)피페리딘-1-일)-3-하이드록시프로판-1-온) 또는 CDK4/6 저해제(예컨대, 팔보시클립)와 조합된, 화학식 (I), (IA), (IB), (IC) 또는 (ID)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염의 상기 용도는 유방암 또는 부인암, 예컨대 유방, 자궁내막, 난소 또는 자궁경부의 암, 특히 유방암, 예컨대 ER+ve 유방암의 치료를 위한 약제의 제조에서 사용하기에 적합하다.
따라서, 본 명세서의 추가 특징에서, 상기 본원에서 (i) 내지 (xi) 하에 기재된 것으로부터 선택된 항종양제와 조합된, 유효량의 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 상기 동물에게 투여하는 단계를 포함하는, 암의 치료를 필요로 하는 온혈 동물, 예컨대 사람에서 암을 치료하는 방법이 제공된다.
본 명세서의 추가의 양태에 따르면, 상기 (ii) 하에 기재된 항호르몬제 중 임의의 하나, 예를 들어 상기 (ii)에 기재된 항에스트로겐, 또는 예를 들어 상기 (ii)에 기재된 아로마타제 저해제 중 임의의 하나와 조합된, 유효량의 화학식 (I), (IA), (IB), (IC) 또는 (ID)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 상기 동물에게 투여하는 단계를 포함하는, 암의 치료를 필요로 하는 온혈 동물, 예컨대 사람에서 암을 치료하는 방법이 제공된다.
본 명세서의 추가의 양태에서, mTOR 저해제, 예컨대 AZD2014와 조합된, 유효량의 화학식 (I), (IA), (IB), (IC) 또는 (ID)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 상기 동물에게 투여하는 단계를 포함하는, 암의 치료를 필요로 하는 온혈 동물, 예컨대 사람에서 암을 치료하는 방법이 제공된다.
본 명세서의 추가의 양태에서, PI3Kα-저해제, 예컨대 화합물 1-(4-(5-(5-아미노-6-(5-tert-부틸-1,3,4-옥사디아졸-2-일)피라진-2-일)-1-에틸-1H-1,2,4-트리아졸-3-일)피페리딘-1-일)-3-하이드록시프로판-1-온과 조합된, 유효량의 화학식 (I), (IA), (IB), (IC) 또는 (ID)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 상기 동물에게 투여하는 단계를 포함하는, 암의 치료를 필요로 하는 온혈 동물, 예컨대 사람에서 암을 치료하는 방법이 제공된다.
본 명세서의 추가의 양태에서, CDK4/6 저해제(예컨대, 팔보시클립)와 조합된, 유효량의 화학식 (I), (IA), (IB), (IC) 또는 (ID)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 상기 동물에게 투여하는 단계를 포함하는, 암의 치료를 필요로 하는 온혈 동물, 예컨대 사람에서 암을 치료하는 방법이 제공된다.
일 양태에서, 상기 조합, 약제학적 조성물, 용도 및 암을 치료하는 방법은 유방암 또는 부인암, 예컨대 유방, 자궁내막, 난소 또는 자궁경부의 암, 특히 유방암, 예컨대 ER+ve 유방암의 치료를 위한 방법이다.
본 명세서의 추가의 양태에 따르면, 상기 본원에서 (i) 내지 (xi) 하에 기재된 것으로부터 선택된 항종양제와 조합된, 화학식 (I), (IA), (IB), (IC) 또는 (ID)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 포함하는 키트가 제공된다.
본 명세서의 추가의 양태에 따르면, 상기 본원에서 (i) 또는 (ii) 하에 기재된 것으로부터 선택된 항종양제와 조합된, 화학식 (I), (IA), (IB), (IC) 또는 (ID)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 포함하는 키트가 제공된다.
본 명세서의 추가의 양태에 따르면, 하기를 포함하는 키트가 제공된다:
a) 제1 단위 투여형의, 화학식 (I), (IA), (IB), (IC) 또는 (ID)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염;
b) 제2 단위 투여형의, 상기 본원에서 (i) 내지 (xi) 하에 기재된 것으로부터 선택된 항종양제; 및
c) 상기 제1 투여형 및 제2 투여형을 함유하기 위한 컨테이너 수단.
본 명세서의 추가의 양태에 따르면, 하기를 포함하는 키트가 제공된다:
a) 제1 단위 투여형의, 화학식 (I), (IA), (IB), (IC) 또는 (ID)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염;
b) 제2 단위 투여형의, 상기 본원에서 (i) 내지 (ii) 하에 기재된 것으로부터 선택된 항종양제; 및
c) 상기 제1 투여형 및 제2 투여형을 함유하기 위한 컨테이너 수단.
본 명세서의 추가의 양태에 따르면, 하기를 포함하는 키트가 제공된다:
a) 제1 단위 투여형의, 화학식 (I), (IA), (IB), (IC) 또는 (ID)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염;
b) 제2 단위 투여형의, 상기 (ii)에 기재된 항종양제로부터 선택된 항종양제, mTOR 저해제(예컨대, AZD2014), PI3Kα-저해제, 예컨대 화합물 1-(4-(5-(5-아미노-6-(5-tert-부틸-1,3,4-옥사디아졸-2-일)피라진-2-일)-1-에틸-1H-1,2,4-트리아졸-3-일)피페리딘-1-일)-3-하이드록시프로판-1-온, 및 CDK4/6 저해제, 예컨대 팔보시클립; 및
c) 상기 제1 투여형 및 제2 투여형을 함유하기 위한 컨테이너 수단.
상기에 기재된 바와 같은 조합 치료는 이의 보통의 처방 스케줄에 따라 전형적으로 수행된 관리 표준 치료 이외에 추가될 수 있다.
화학식 (I), (IA), (IB), (IC) 또는 (ID)의 화합물이 주로 온혈 동물(사람 포함)에서 사용하기 위한 치료제로서 가치가 있지만, 이들은 또한 ERα를 저해할 필요가 있을 때마다 유용하다. 따라서, 이들은 새로운 생물학적 시험의 개발에서 및 새로운 약물학적 제제의 조사에서 사용하기 위한 약물학적 표준품으로서 유용하다.
맞춤 건강관리
본 명세서의 다른 양태는 ERα를 인코딩하는 유전자의 상태와 화학식 (I), (IA), (IB), (IC) 또는 (ID)의 화합물에 의한 치료에 대한 잠재적인 감수성 사이의 연결을 확인하는 것에 기초한다. 특히, 부분적으로 적어도 몇몇 ERα 돌연변이가 기존의 치료에 대한 내성 기전으로 생긴다고 생각되므로, ERα 유전자 상태는 환자가 기존의 호르몬 치료제(예컨대, 아로마타제 저해제)에 덜 반응할 가능성이 있다는 것을 나타낼 수 있다. 이후 SERD, 특히 과도한 불편 없이 잠재적으로 더 큰 용량으로 경구 투여될 수 있는 SERD는 다른 치료제에 내성일 수 있는 ERα 돌연변이를 갖는 환자를 치료하는 데 유리하게 사용될 수 있다. 따라서 이것은 화학식 (I), (IA), (IB), (IC) 또는 (ID)의 화합물에 의한 치료를 위한 환자, 특히 암 환자를 선택하기 위한 기회, 방법 및 도구를 제공한다. 본 명세서는 환자 선택 도구 및 방법(맞춤 약제 포함)에 관한 것이다. 선택은 치료하고자 하는 종양 세포가 야생형 또는 돌연변이체 ERα 유전자를 보유하는지 여부에 기초한다. 따라서 ERα 유전자 상태는 SERD에 의한 치료의 선택이 유리할 수 있다는 것을 나타내기 위한 바이오마커로서 사용될 수 있다. 혼선을 피하기 위해, 본원에 기재된 바와 같은 화학식 (I), (IA), (IB), (IC) 또는 (ID)의 화합물은 야생형 및 돌연변이체 ERα 유전자, 적어도 본 출원의 출원일에 확인된 ERα 유전자에서의 돌연변이에 대해 유사하게 활성인 것으로 생각된다.
종양이 SERD, 예컨대 화학식 (I), (IA), (IB), (IC) 또는 (ID)의 화합물에 의한 치료에 반응하는 환자에 대해 농후화하거나 이 환자를 선택하는 바이오마커가 분명히 필요하다. 다른 제제에 비해 하나의 제제에 가장 반응할 가능성이 있는 환자를 확인하는 환자 선택 바이오마커는 이러한 제제의 가능한 부작용에 대해 비반응 종양을 갖는 환자의 불필요한 치료를 감소시키므로 암의 치료에서 이상적이다.
바이오마커는 "일반 생물 과정, 병원성 과정 또는 치료학적 중재에 대한 약리학적 반응의 표시자로서 객관적으로 측정되고 평가되는 특징"으로 기재될 수 있다. 바이오마커는 바이오마커의 존재 또는 수준과 질환 또는 질병의 몇몇 양태(질환 또는 질병의 존재, 이의 수준 또는 수준의 변화, 이의 유형, 이의 병기, 이에 대한 감수성, 또는 질환 또는 질병을 치료하기 위해 사용된 약물의 반응성을 포함) 사이의 상관관계가 있는 특정한 질환 또는 질병과 연관된 임의의 확인 가능하고 측정 가능한 표시자이다. 상관관계는 정성적, 정량적, 또는 정성적 및 정량적 둘 모두일 수 있다. 전형적으로, 바이오마커는 화합물, 화합물 단편 또는 화합물의 군이다. 이러한 화합물은 단백질(및 펩타이드), 핵산 및 다른 화합물을 포함하는 유기체에서 발견되거나 이에 의해 생성된 임의의 화합물일 수 있다.
바이오마커는 예측력을 가질 수 있고, 그러므로 특정한 질환 또는 질병의 존재, 수준, 유형 또는 병기(특정한 미생물 또는 독소의 존재 또는 수준을 포함), 특정한 질환 또는 질병에 대한 감수성(유전자 감수성을 포함), 또는 특정한 치료(약물 치료를 포함)에 대한 반응을 예측하거나 검출하도록 사용될 수 있다. 바이오마커가 연구 및 개발 프로그램의 효율성을 개선함으로써 약물 발견 및 개발의 미래에 점점 더 중요한 역할을 할 것이라고 생각된다. 바이오마커는 진단학적 제제, 질병 진행의 모니터, 치료의 모니터 및 임상 결과의 예측자로서 사용될 수 있다. 예를 들어, 다양한 바이오마커 연구 프로젝트는 특정한 암 및 특정한 심혈관 및 면역학적 질병의 마커를 확인하려고 시도하고 있다. 새로운 검증된 바이오마커의 개발이 건강관리 및 약물 개발 비용의 상당한 감소 및 광범위한 질병 및 질환에 대한 치료의 상당한 개선 둘 모두를 발생시킬 것이라고 생각된다.
임상 실험을 최적으로 설계하고 이 실험으로부터 대부분의 정보를 얻기 위해, 바이오마커가 필요할 수 있다. 마커는 대용물 및 종양 조직에서 측정 가능할 수 있다. 이상적으로, 이들 마커는 또한 효율과 상관될 것이고, 이에 따라 궁극적으로 환자 선택에 사용될 수 있다.
따라서, 본 명세서의 본 양태에 기초하는 기술적 문제점은 화학식 (I)의 화합물에 의한 치료를 위한 환자의 계층화를 위한 수단의 확인이다. 기술적 문제점은 본원에서 청구항 및/또는 명세서에서 특징화된 구현예의 제공에 의해 해결된다.
야생형 ERα를 함유하는 종양은 예를 들어 제1선 치료로서 화학식 (I), (IA), (IB), (IC) 또는 (ID)의 화합물로 치료하기 쉬운 것으로 여겨진다. 종양은 또한 제2선, 제3선 또는 후속하는 치료로서 화학식 (I), (IA), (IB), (IC) 또는 (ID)의 화합물에 의한 치료에 반응할 수 있고, 이것은 특히 종양이 돌연변이체 ERα를 함유하는 경우 유용할 수 있고, 이에 따라 기존의 치료제, 예컨대 AI에 내성일 수 있다. 화학식 (I), (IA), (IB), (IC) 또는 (ID)의 화합물의 더 높은 투여량은 야생형 종양에서보다 내성 환경에서 필요할 수 있다.
본 명세서는 화학식 (I), (IA), (IB), (IC) 또는 (ID)의 화합물에 대한 세포의 감수성을 결정하는 방법을 제공한다. 상기 방법은 상기 세포에서 ERα 유전자의 상태를 결정하는 단계를 포함한다. 세포는 화학식 (I), (IA), (IB), (IC) 또는 (ID)의 화합물이 (세포 증식의 저해를 통해 및/또는 증가된 세포사를 통해) 세포 성장 검정에서 세포 수의 증가를 저해하는 경우 화합물에 대한 감수성이라고 정의된다. 본 명세서의 방법은 어떤 세포가 성장 저해에 의해 화학식 (I), (IA), (IB), (IC) 또는 (ID)의 화합물에 더 반응할 가능성이 있는지를 예측하는 데 유용하다.
"종양을 대표하는" 샘플은 단리된 실제 종양 샘플일 수 있거나, 추가로 가공된 샘플, 예를 들어 종양 샘플로부터의 PCR 증폭된 핵산의 샘플일 수 있다.
정의:
이 맞춤 건강관리 부문에서:
"대립유전자"는 이의 특정한 뉴클레오타이드 또는 아미노산 서열에 의해 다른 형태와 구별되는 특정한 형태의 유전자 좌위를 의미한다.
"증폭 반응"은 비표적 핵산에 대한 표적 핵산의 특정한 증폭을 발생시키는 핵산 반응이다. 중합효소 연쇄 반응(PCR)은 널리 공지된 증폭 반응이다.
"암"은 신생물 표현형으로의 세포 형질전환으로부터 생긴 신생물 성장을 의미하도록 본원에서 사용된다. 이러한 세포 형질전환은 대개 유전적 돌연변이를 수반한다.
"유전자"는 RNA 산물의 조절된 생합성에 대한 정보를 모두 함유하는 DNA의 절편, 예를 들어 프로모터, 엑손, 인트론 및 (유전자의 전사된 부분 내에 있지 않은) 발현을 제어하는 5' 또는 3' 플랭킹 구역 내에 위치할 수 있는 다른 서열 요소이다.
"유전자 상태"는 유전자가 야생형인지 아닌지(즉, 돌연변이체) 여부를 의미한다.
"라벨"은 검정 샘플에서 표적 폴리뉴클레오타이드의 존재를 나타내는 검출 가능한 신호를 생성시킬 수 있는 조성물을 의미한다. 적합한 라벨은 방사성 동위원소, 뉴클레오타이드 발색단, 효소, 기질, 형광성 분자, 화학발광 모이어티, 자기 입자, 생물발광 모이어티 등을 포함한다. 그러므로, 라벨은 분광학적, 광화학적, 생화학적, 면역화학적, 전기적, 광학적 또는 화학적 수단에 의해 검출 가능한 임의의 조성물이다.
"비동의 변이"는 명확한 (변경된) 폴리펩타이드 서열의 제조를 발생시키는 유전자의 코딩 서열에서 또는 이를 중첩시키는 변이(분산)를 의미한다. 이 변이는 단백질 기능에 영향을 미치거나 미치지 않을 수 있고, 미스센스 변이체(한 아미노산의 다른 아미노산으로의 치환을 발생시킴), 난센스 변이체(조기 종결 코돈의 생성으로 인한 절두된 폴리펩타이드를 발생시킴) 및 삽입/결실 변이체를 포함한다.
"동의 변이"는 인코딩된 폴리펩타이드의 서열에 영향을 미치지 않는 유전자의 코딩 서열에서의 변이(분산)를 의미한다. 이 변이는 (예를 들어, 유전자의 발현을 변형시킴으로써) 간접적으로 단백질 기능에 영향을 미칠 수 있지만, 반대에 대한 증거의 부재에서, 일반적으로 무해한 것으로 추정된다.
"핵산"은 당해 분야에 공지된 바와 같이 자연에서 발견된 천연 핵산 및/또는 변형된 골격 또는 염기를 갖는 변형된 인공 핵산을 포함하는 단일 가닥 또는 이중 가닥의 DNA 및 RNA 분자를 의미한다.
"프라이머"는 카피되어야 하는 핵산 가닥에 상보성인 프라이머 연장 산물의 합성을 위한 개시 지점으로서 작용할 수 있는 단일 가닥 DNA 올리고뉴클레오타이드 서열이다. 프라이머의 길이 및 서열은 이것이 연장 산물의 합성을 프라이밍할 수 있게 되어야 한다. 통상적인 프라이머는 표적 서열에 실질적으로 상보성인 서열의 적어도 약 7개의 뉴클레오타이드 길이를 함유하지만, 다소 더 긴 프라이머가 바람직하다. 보통, 프라이머는 약 15개 내지 26개의 뉴클레오타이드를 함유하지만, 더 길거나 더 짧은 프라이머를 또한 사용할 수 있다.
"다형 부위"는 적어도 2개의 대안적인 서열이 집단에서 발견되는 유전자 좌위 내에서의 위치이다.
"다형현상"은 다형 부위의 개체에서 관찰된 서열 변이를 의미한다. 다형현상은 뉴클레오타이드 치환, 삽입, 결실 및 미소부수체를 포함하고, 유전자 발현 또는 단백질 기능에서의 검출 가능한 차이를 반드시는 아니지만 발생시킬 수 있다. 발현 또는 단백질 기능에 대한 효과의 증거 부재에서, 비동의 변이체를 포함하는 공통 다형현상은 일반적으로 야생형 유전자 서열의 정의에 포함되는 것으로 간주된다. 인간 다형현상의 카탈로그 및 연관된 주석화, 예를 들어 검증, 관찰된 빈도 및 질병 연관은 NCBI(dbSNP: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/projects/SNP/)에 의해 유지된다. 유전자 서열의 맥락에서 사용될 때의 용어 "다형현상"이 화합물의 결정질 또는 무정형 성질인 화합물의 고체 상태 형태의 맥락에서 사용될 때의 용어 "다형현상"과 혼동되어서는 안 된다는 것에 주목한다. 당업자는 이의 맥락에 의해 의도된 의미를 이해할 것이다.
"프로브"는 검출될 대립유전자의 표적 서열에 정확히 상보성인 서열을 갖는 단일 가닥의 서열 특이적 올리고뉴클레오타이드를 의미한다.
"반응"은 부분 반응 또는 안정한 질병을 보인 환자 및 진행성 질병의 징후를 보인 환자의 2개의 주요 군으로의 환자의 분류를 수반하는 고형 종양의 반응 평가 기준(Response Evaluation Criteria in Solid Tumour: RECIST)에 따라 취해진 측정에 의해 정의된다.
"엄격한 혼성화 조건"은 50% 포름아미드, 5x SSC(750 mM NaCI, 75 mM 시트르산삼나트륨), 50 mM 인산나트륨(pH 7.6), 5x 덴하르트 용액, 10% 황산 덱스트란 및 20 pg/mI의 변성 전단된 연어 정자 DNA를 포함하는 용액 중에 42℃에서의 밤샘 항온처리, 이어서 약 65℃에서의 0.1x SSC 중의 필터의 세척을 의미한다.
"생존"은 환자의 전체 생존 및 무진행 생존을 포함한다.
"전체 생존"(overall survival: OS)은 약물 투여의 개시로부터 임의의 원인으로 사망까지의 시간으로 정의된다. "무진행 생존"(progression-free survival: PFS)은 약물 투여의 개시로부터 진행성 질병의 최초 출현 또는 임의의 원인으로 사망까지의 시간으로 정의된다.
본 명세서의 일 양태에 따르면, 화학식 (I), (IA), (IB), (IC) 또는 (ID)의 화합물에 의한 치료를 위해 환자를 선택하는 방법이 제공되고, 상기 방법은 환자로부터의 종양 세포 함유 샘플을 제공하는 단계; 환자의 종양 세포 함유 샘플에서 ERα 유전자가 야생형 또는 돌연변이체인지 여부를 결정하는 단계; 및 여기에 기초한 화학식 (I), (IA), (IB), (IC) 또는 (ID)의 화합물에 의한 치료에 대해 환자를 선택하는 단계를 포함한다.
상기 방법은 실제 환자 샘플 단리 단계를 포함하거나 배제할 수 있다. 따라서, 본 명세서의 일 양태에 따르면, 화학식 (I), (IA), (IB), (IC) 또는 (ID)의 화합물에 의한 치료를 위해 환자를 선택하는 방법이 제공되고, 상기 방법은 환자로부터 이전에 단리된 종양 세포 함유 샘플에서 ERα 유전자가 야생형 또는 돌연변이체인지 여부를 결정하는 단계; 및 여기에 기초한 화학식 (I), (IA), (IB), (IC) 또는 (ID)의 화합물에 의한 치료에 대해 환자를 선택하는 단계를 포함한다.
일 구현예에서, 환자는 종양 세포 DNA가 돌연변이체 ERα 유전자를 갖는 경우 화학식 (I)의 화합물에 의한 치료에 대해 선택된다. 다른 구현예에서, 종양 세포 DNA가 야생형 ERα 유전자를 보유하는 환자는 화학식 (I), (IA), (IB), (IC) 또는 (ID)의 화합물에 의한 치료에 대해 선택된다.
본 명세서의 목적을 위해, 야생형의 유전자 상태는 유전자의 정상 또는 적절한 발현 및 인코딩된 단백질의 정상 기능을 나타내는 것으로 여겨진다. 반대로, 돌연변이체 상태는 (본원에 기재된 바와 같은) 암에서 돌연변이체 ERα 유전자의 공지된 역할과 일치하는 변경된 기능을 갖는 단백질의 발현을 나타내는 것으로 여겨진다. 돌연변이, 증폭, 결실, 게놈 재배열 또는 메틸화 프로필의 변화(이들로 제한되지는 않음)를 포함하는 임의의 수의 유전적 또는 후성적 변경은 돌연변이체 상태를 발생시킬 수 있다. 그러나, 이러한 변경이 그럼에도 불구하고 정상 단백질, 또는 기능적으로 동등한 변이체의 적절한 발현을 발생시키는 경우, 유전자 상태는 야생형으로 간주된다. 전형적으로 기능적 돌연변이체 유전자 상태를 발생시키지 않는 변이체의 예는 동의 코딩 변이체 및 공통 다형현상(동의 또는 비동의)을 포함한다. 하기에 논의된 바와 같이, 유전자 상태는 기능적 검정에 의해 평가될 수 있거나, 이것은 기준 서열로부터의 검출된 편차의 성질로 인해 추론될 수 있다.
소정의 구현예에서, ERα 유전자의 야생형 또는 돌연변이체 상태는 유전자에서의 비동의 핵산 변이의 존재 또는 부재에 의해 결정된다. 주석화된 기능적 효과를 갖지 않는 공지된 공통 다형현상에 상응하는 관찰된 비동의 변이는 돌연변이체의 유전자 상태에 기인하지 않는다.
돌연변이체 상태를 나타내는 ERα 유전자에서의 다른 변이는 mRNA로의 프리-mRNA의 가공 동안 인트론/엑손 연접의 인식을 감소시키는 스플라이스 부위 변이를 포함한다. 이것은 엑손 제거 또는 스플라이싱된 mRNA에서의 보통 인트론성인 서열의 포함(인트론 보유 또는 암호 스플라이스 연접의 이용)을 발생시킬 수 있다. 이것은 결국 정상 단백질에 비해 삽입 및/또는 결실을 갖는 비정상 단백질의 제조를 초래할 수 있다. 따라서, 다른 구현예에서, 인트론/엑손 연접에서 스플라이스 부위 인식 서열을 변경하는 변이체가 있는 경우, 유전자는 돌연변이체 상태를 갖는다.
ESR1에 대해, 기준 서열은 유전자(GenBank 수탁 번호: NG_008493), mRNA(GenBank 수탁 번호: NM_000125) 및 단백질(GenBank 수탁 번호: NP_000116 또는 Swiss-Prot 수탁: P03372)에 이용 가능하다. 당업자는 ESR1 유전자 상태, 즉 야생형과의 DNA 또는 단백질 서열의 비교에 기초하여 특정한 ESR1 유전자가 야생형 또는 돌연변이체인지 여부를 결정할 수 있을 것이다.
ERα 유전자에 대해 개시된 유전자 및 mRNA 서열이 대표적인 서열이라는 것이 명확할 것이다. 정상 개체에서, 약간의 서열 차이를 가질 가능성이 있는, 모계 및 부계 카피인 각각의 유전자의 2개의 카피가 있고, 게다가 집단 내에 유전자 서열의 수많은 대립형질 변이체가 존재할 것이다. 야생형으로 간주되는 다른 서열은 핵산 서열에 대한 하나 이상의 동의 변화(이 변화는 인코딩된 단백질 서열을 변경하지 않음), 단백질 서열을 변경하지만, 단백질 기능에 영향을 미치지 않는 비동의 공통 다형현상(예를 들어, 생식선 다형현상) 및 인트론성 비-스플라이스-부위 서열 변화를 보유하는 것을 포함한다.
ERα의 유전자 상태를 결정하기 위해 당업자에게 이용 가능한 다수의 기법이 있다. 유전자 상태는 핵산 서열의 결정에 의해 결정될 수 있다. 이것은 전장 유전자의 직접적인 서열분석 또는 유전자 내의 특정한 부위, 예를 들어 일반적으로 돌연변이된 부위의 분석을 통해서 이루어질 수 있다.
샘플
유전자 상태에 대해 시험하고자 하는 환자의 샘플은 개체로부터 수득되거나 수득될 수 있는 임의의 종양 조직 또는 종양-세포 함유 샘플일 수 있다. 시험 샘플은 편리하게 혈액, 입 면봉, 생검, 또는 개체로부터 수득된 다른 체액 또는 조직의 샘플이다. 특정한 예는 순환 종양 세포, 혈장 또는 혈청 내의 순환 DNA, 난소암 환자의 복수액으로부터 단리된 세포, 폐 내 종양을 갖는 환자에 대한 폐 객담, 유방암 환자로부터의 미세 침 흡인물, 뇨, 말초 혈액, 세포 부스러기, 모낭, 피부 펀치 또는 구강 샘플을 포함한다.
시험 샘플은 동등하게 시험 샘플 내의 서열에 상응하는 핵산 서열일 수 있고, 즉 샘플 핵산 내의 영역의 전부 또는 일부가 먼저 분석 전에 임의의 편리한 기법, 예를 들어 중합효소 연쇄 반응(PCR)을 이용하여 증폭될 수 있는 것으로 이해될 것이다. 핵산은 게놈 DNA 또는 분획화된 또는 전체 세포 RNA일 수 있다. 특정한 구현예에서, RNA는 전체 세포 RNA이고, 랜덤 프라이머 또는 폴리 A 프라이머를 사용하여 제1 가닥 cDNA를 라벨링하기 위한 주형으로서 직접적으로 사용된다. 시험 샘플 내의 핵산 또는 단백질은 표준 방법론에 따라 샘플로부터 추출될 수 있다(문헌[Green & Sambrook, Eds.,Molecular Cloning: A Laboratory Manual, (2012, 4th edition, Vol. 1-3, ISBN 9781936113422), Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y.]을 참조한다).
본 명세서의 진단학적 방법은 개체 또는 환자로부터 이전에 취한 샘플을 사용하여 수행될 수 있다. 이러한 샘플은 동결에 의해 보존되거나 고정되고, 포르말린-파라핀 또는 다른 매질 중에 포매될 수 있다. 대안적으로, 새로운 종양 세포 함유 샘플을 수득하고 사용할 수 있다.
본 명세서의 방법은 임의의 종양으로부터의 세포를 사용하여 적용될 수 있다. 화학식 (I)의 화합물에 의한 치료에 적합한 종양은 상기에 기재되어 있다.
핵산의 검출을 위한 방법
돌연변이체 ERα 핵산의 검출은, 본 명세서의 맥락에서, 약물 치료를 선택하도록 이용될 수 있다. 이 유전자에서의 돌연변이가 DNA 수준에서 발생하므로, 본 명세서의 방법은 게놈 DNA에서의 돌연변이 또는 변이, 및 전사체 및 단백질 자체의 검출에 기초할 수 있다. 검출된 돌연변이가 실제로 대상체에서 발현되는 것을 보장하도록 전사체 및/또는 폴리펩타이드의 분석에 의해 게놈 DNA에서의 돌연변이를 확인하는 것이 바람직할 수 있다.
유전자의 하나 이상의 위치에서 변이체 뉴클레오타이드의 존재 또는 부재를 검출하도록 사용될 수 있는 다수의 분석 절차가 있다는 것은 당업자에게 명확할 것이다. 일반적으로, 대립형질 변이의 검출은 돌연변이 구별 기법, 선택적으로 증폭 반응(예컨대, 중합효소 연쇄 반응에 기초한 것) 및 선택적으로 신호 생성 시스템을 필요로 한다. 당해 분야에서 이용 가능한 다수의 돌연변이 검출 기법이 있고, 이들은 신호 생성 시스템과 조합하여 사용될 수 있고, 이들 중 다수가 당해 분야에서 이용 가능하다. 대립형질 변이의 검출을 위한 많은 방법은 문헌[Nollau et al., Clin. Chem., 1997, 43, 1114-1120; Anderson SM. Expert Rev Mol Diagn., 2011, 11, 635-642; Meyerson M. et al., Nat Rev Genet., 2010, 11, 685-696]; 및 표준 교과서, 예를 들어 문헌["Laboratory Protocols for Mutation Detection", Ed. by U. Landegren, Oxford University Press, 1996 및 "PCR", 2nd Edition by Newton & Graham, BIOS Scientific Publishers Limited, 1997]에서 검토되어 있다.
상기에 기재된 바와 같이, 암을 갖는 환자에서 ERα 유전자에서의 특정한 변이 또는 복수의 변이들의 존재 또는 부재를 결정하는 것은 다양한 방식으로 수행될 수 있다. 이러한 시험은 생물학적 샘플, 예를 들어 조직 생검, 뇨, 대변, 객담, 혈액, 세포, 조직 부스러기, 유방 흡인물 또는 다른 세포 재료로부터 수집된 DNA 또는 RNA를 사용하여 일반적으로 수행되고, PCR, 대립유전자 특이적 프로브에 의한 혼성화, 효소 돌연변이 검출, 미스매치의 화학 절단, 질량 분광법 또는 미니서열분석을 포함하는 DNA 서열분석(이들로 제한되지는 않음)을 포함하는 다양한 방법에 의해 수행될 수 있다.
적합한 돌연변이 검출 기법은 증폭 내화성 돌연변이 시스템(ARMS™), 증폭 내화성 돌연변이 시스템 선형 연장(ALEX™), 경쟁적 올리고뉴클레오타이드 프라이밍 시스템(COPS), 텍맨(Taqman), 분자 비콘(Molecular Beacon), 제한 단편 길이 다형현상(RFLP) 및 제한 부위 기반 PCR 및 형광 공명 에너지 이동(FRET) 기법을 포함한다.
특정한 구현예에서, 바이오마커 유전자 내의 뉴클레오타이드(들)를 결정하기 위해 이용되는 방법은 대립유전자 특이적 증폭(대립유전자 특이적 PCR) - 예컨대 증폭 내화성 돌연변이 시스템(ARMS), 서열분석, 대립형질 구별 검정, 혼성화, 제한 단편 길이 다형현상(RFLP) 또는 올리고뉴클레오타이드 결찰 검정(OLA)으로부터 선택된다.
특정한 구현예에서, 대립유전자 특이적 프로브에 의한 혼성화는 (1) 예를 들어 많은 DNA 칩 분야에서처럼 용액 중에 표지된 샘플에 의해 고상(예를 들어, 유리, 실리콘, 나일론 막)에 결합된 대립유전자 특이적 올리고뉴클레오타이드; 또는 (2) 용액 중에 결합된 샘플(대개 클로닝된 DNA 또는 PCR 증폭된 DNA) 및 표지된 올리고뉴클레오타이드(혼성화에 의한 서열분석을 허용하도록 특이적 또는 짧은 대립유전자)에 의해 수행될 수 있다. 진단학적 시험은 대개 고체 지지체 상의 일련의 분산을 수반할 수 있고, 이는 하나 초과의 분산의 동시 결정을 가능하게 한다. 이러한 혼성화 프로브는 당해 분야에 널리 공지되어 있고(예를 들어, 문헌[Green & Sambrook, Eds., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, (2012, 4th edition, Vol. 1-3, ISBN 9781936113422), Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y.] 참조), 2개 이상의 분산 부위에 걸칠 수 있다.
따라서, 일 구현예에서, 적어도 하나의 돌연변이의 존재 또는 부재의 검출은 추정상 돌연변이 부위를 함유하는 ERα 핵산을 적어도 하나의 핵산 프로브와 접촉시키는 것을 제공한다. 프로브는 분산 부위를 포함하고 선택적 혼성화 조건 하에 분산 부위에서 상보성 뉴클레오타이드 염기를 함유하는 핵산 서열과 우선적으로 혼성화한다. 혼성화는 당업자에게 공지된 라벨을 사용하여 검출 가능한 라벨로 검출될 수 있다. 이러한 라벨은 방사성, 형광성, 염료 및 효소 라벨을 포함하지만, 이들로 제한되지는 않는다.
다른 구현예에서, 적어도 하나의 돌연변이의 존재 또는 부재의 검출은 추정상 돌연변이 부위를 함유하는 ERα 핵산을 적어도 하나의 핵산 프라이머와 접촉시키는 것을 제공한다. 프라이머는 분산 부위를 포함하고 선택적 혼성화 조건 하에 분산 부위에서 상보성 뉴클레오타이드 염기를 함유하는 핵산 서열과 우선적으로 혼성화한다.
특이적 증폭을 위해 프라이머로서 사용되는 올리고뉴클레오타이드는 분자의 중앙에서(그래서 증폭은 차등 혼성화에 의존함; 예를 들어, 문헌[Gibbs, et al., 1989. Nucl. Acids Res., 17, 2437-248] 참조) 또는 적절한 조건 하에서 미스매치가 중합효소 연장을 방지하거나 감소시킬 수 있는 하나의 프라이머의 극 3'-말단에서(예를 들어, 문헌[Prossner, 1993, Tibtech, 11 238] 참조) 관심 있는 돌연변이에 대한 상보성 뉴클레오타이드 염기를 보유할 수 있다.
또 다른 구현예에서, 적어도 하나의 돌연변이의 존재 또는 부재의 검출은 적어도 하나의 핵산 서열의 서열분석 및 수득된 서열과 공지된 야생형 핵산 서열의 비교를 포함한다.
대안적으로, 적어도 하나의 돌연변이의 존재 또는 부재는 적어도 하나의 핵산 서열의 질량 분광적 결정을 포함한다.
일 구현예에서, 적어도 하나의 핵산 분산의 존재 또는 부재의 검출은 중합효소 연쇄 반응(PCR)을 수행하는 것을 포함한다. 가상 분산을 함유하는 표적 핵산 서열은 증폭되고, 증폭된 핵산의 뉴클레오타이드 서열은 결정된다. 증폭된 핵산의 뉴클레오타이드 서열을 결정하는 것은 적어도 하나의 핵산 분절을 서열분석하는 것을 포함한다. 대안적으로, 증폭 산물은, 자동화 및 수동 겔 전기영동 등을 포함하여, 이의 크기에 따라 증폭 산물을 분리시킬 수 있는 임의의 방법을 이용하여 분석될 수 있다.
게놈 핵산에서의 돌연변이는 증폭된 핵산 단편에서 이동도 시프트에 기초한 기법에 의해 유리하게 검출된다. 예를 들어, 문헌[Chen et al., Anal Biochem 1996, 239, 61-9]은 경쟁적 이동도 시프트 검정에 의해 단일 염기 돌연변이의 검출을 기재한다. 게다가, 문헌[Marcelino et al., BioTechniques 1999, 26, 1134-1148]의 기법에 기초한 검정은 상업적으로 이용 가능하다.
특정한 실시예에서, 모세관 헤테로듀플렉스 분석은 미스매치의 존재의 결과로서 모세관 시스템에서 듀플렉스 핵산의 이동도 시프트에 기초하여 돌연변이의 존재를 검출하도록 사용될 수 있다.
샘플로부터의 분석을 위한 핵산의 생성은 일반적으로 핵산 증폭을 필요로 한다. 많은 증폭 방법은 효소 연쇄 반응(예컨대, 중합효소 연쇄 반응, 리가아제 연쇄 반응, 또는 자기 지속 서열복제) 또는 이것이 클로닝된 벡터의 전부 또는 일부의 복제에 의존한다. 바람직하게는, 본 명세서에 따른 증폭은 예를 들어 중합효소 연쇄 반응에 의해 나타난 바와 같은 지수 증폭이다.
많은 표적 및 신호 증폭 방법은 문헌, 예를 들어 [Landegren, U., et al., Science, 1988 242, 229-237 및 Lewis, R., Genetic Engineering News 1990, 10, 54-55]에서 이들 방법의 일반적인 검토에 기재되어 있다. 이들 증폭 방법은 본 명세서의 방법에서 사용될 수 있고, 중합효소 연쇄 반응(PCR), 원위치 PCR, 리가아제 증폭 반응(LAR), 리가아제 혼성화, Qβ 박테리오파지 복제효소, 전사 기반 증폭 시스템(TAS), 전사체 서열분석에 의한 게놈 증폭(GAWTS), 핵산 서열 기반 증폭(NASBA) 및 원위치 혼성화를 포함한다. 다양한 증폭 기법에서 사용하기에 적합한 프라이머는 당해 분야에 공지된 방법에 따라 제조될 수 있다.
중합효소 연쇄 반응(PCR) PCR은 특히 미국 특허 제4,683,195호 및 제4,683,202호에 기재된 핵산 증폭 방법이다. PCR은 DNA 중합효소 생성된 프라이머 연장 반응의 반복된 사이클로 이루어진다. 표적 DNA는 열 변성되고, 증폭시키고자 하는 DNA의 반대의 가닥 상에 표적 서열을 브라킷하는 2개의 올리고뉴클레오타이드는 혼성화된다. 이 올리고뉴클레오타이드는 DNA 중합효소와 함께 사용하기 위한 프라이머가 된다. DNA는 가닥 둘 모두의 제2 카피를 만들도록 프라이머 연장에 의해 카피된다. 열 변성, 프라이머 혼성화 및 연장의 사이클을 반복함으로써, 표적 DNA는 약 2 내지 4시간에 100만 배 이상 증폭될 수 있다. PCR은 분자 생물학 도구 이고, 이는 증폭 결과를 결정하기 위해 검출 기법과 함께 사용되어야 한다. PCR의 이점은 이것이 대략 4시간에 100만 내지 10억 배로 표적 DNA의 양을 증폭시킴으로써 민감도를 증가시킨다는 것이다. PCR은 진단학적 맥락에서 임의의 공지된 핵산을 증폭시키도록 사용될 수 있다(Mok et al., Gynaecologic Oncology, 1994, 52: 247-252).
대립유전자 특이적 증폭 기법, 예컨대 증폭 내화성 돌연변이 시스템(ARMS™)(Newton et al., Nucleic Acids Res., 1989, 17, 2503-2516)은 또한 단일 염기 돌연변이를 검출하도록 사용될 수 있다. 적절한 PCR 증폭 조건 하에서, 프라이머의 3'-말단에 위치한 단일 염기 미스매치는 완벽하게 일치된 대립유전자의 우선적 증폭에 충분하여(상기 문헌[Newton et al., 1989]), 밀접하게 관련된 종의 구별을 허용한다. 상기에 기재된 프라이머를 사용한 증폭 시스템의 기초는 미스매치된 3'-잔기를 갖는 올리고뉴클레오타이드가 적절한 조건 하에서 PCR에서의 프라이머로서 작용하지 않을 것이라는 점이다. 이 증폭 시스템은 아가로스 겔 전기영동 후 오직 반응 혼합물의 검사에 의해 유전자형 분석을 허용한다.
증폭 산물의 분석은, 자동화 및 수동 겔 전기영동, 질량 분광법 등을 포함하여, 이의 크기에 따라 증폭 산물을 분리시킬 수 있는 임의의 방법을 이용하여 수행될 수 있다.
핵산 단리, 증폭 및 분석의 방법은 당업자에 일상적이고, 프로토콜의 예는 예를 들어 문헌[Green & Sambrook, Eds., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, (2012, 4th edition, Vol. 1-3, ISBN 9781936113422), Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y.)]에서 확인할 수 있다. PCR 증폭에 이용되는 방법에 대한 특히 유용한 프로토콜 소스는 문헌[M. J. McPherson, S. G. Mailer, R. Beynon, C. Howe, Springer Verlag; 1st edition (October 15, 2000), ISBN: 0387916008]에 의한 PCR이다(Basics: From Background to Bench).
본 명세서는 또한 ERα 유전자에서 표적 핵산을 증폭시키는 축퇴성 프라이머 및 증폭 프로토콜 및 결과의 분석을 포함하는 설명서를 포함하는 예측적인 및 진단학적 키트를 제공한다. 키트는 대안적으로 또한 완충제, 효소, 및 증폭 산물의 증폭 및 분석을 수행하기 위한 용기를 포함할 수 있다. 키트는 또한 스크리닝의 성분, 또는 다른 도구, 예컨대 DNA 마이크로어레이, 또는 다른 지지체를 포함하는 진단학적 키트일 수 있다. 바람직하게는, 키트는 또한 하나 이상의 대조군 주형, 예컨대 정상 조직 샘플, 및/또는 기준 유전자에서의 상이한 분산을 나타내는 일련의 샘플로부터 단리된 핵산을 제공한다.
일 구현예에서, 키트는 2개 이상의 프라이머 쌍을 제공하고, 각각의 쌍은 기준 (ERα) 유전자의 상이한 영역을 증폭시킬 수 있어서(가능한 분산의 부위인 각각의 영역), 하나의 반응 또는 몇몇 병렬 반응에서 생물학적 샘플에서의 몇몇 유전자 분산의 발현 분석을 위한 키트를 제공한다.
키트에서의 프라이머는 증폭 산물의 검출 및 핵산 분산의 결과로 생긴 분석을 용이하게 하도록 표지, 예를 들어 형광성으로 표지될 수 있다. 키트는 또한 하나 초과의 분산이 하나의 분석에서 검출되도록 허용할 수 있다. 따라서 조합 키트는 기준 유전자의 상이한 분절을 증폭시킬 수 있는 프라이머를 포함할 것이다. 프라이머는 분산 사이를 구별하도록 예를 들어 상이한 형광성 라벨을 사용하여 구별되게 표지될 수 있다.
다른 양태에서, 본 명세서는 환자의 종양 세포에서 ERα 유전자의 돌연변이체 또는 야생형 상태를 결정하는 단계 및 ERα 유전자가 돌연변이체인 경우, 유효량의 화학식 (I), (IA), (IB), (IC) 또는 (ID)의 화합물을 환자에게 투여하는 단계를 포함하는, 암을 앓고 있는 환자를 치료하는 방법을 제공한다.
본원에 사용된 바와 같은, 용어 "효과적인" 및 "유효성"은 약물학적 유효성 및 생리학적 안전성 둘 모두를 포함한다. 약물학적 유효성은 환자에게 원하는 생물학적 효과를 발생시키는 치료의 능력을 의미한다. 생리학적 안전성은 치료의 투여로부터 생긴 세포, 장기 및/또는 유기체 수준에서의 독성, 또는 다른 불리한 생리학적 효과(대개 부작용이라 칭함)의 수준을 의미한다. "덜 효과적인"은 치료가 치료학적으로 상당히 더 낮은 수준의 약물학적 유효성 및/또는 치료학적으로 더 높은 수준의 불리한 생리학적 효과를 초래하는 것을 의미한다.
본 명세서의 다른 양태에 따르면, 종양 세포가 돌연변이체 ERα 유전자를 보유하는 것으로서 확인된 암 환자를 치료하기 위한, 화학식 (I), (IA), (IB), (IC) 또는 (ID)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염의 용도가 제공된다.
본 명세서의 다른 양태에 따르면, 돌연변이체 ERα 유전자를 보유하는 것으로서 확인된 종양 세포를 갖는 암을 치료하기 위한, 화학식 (I), (IA), (IB), (IC) 또는 (ID)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염이 제공된다.
본 명세서의 다른 양태에 따르면, 유효량의 화학식 (I), (IA), (IB), (IC) 또는 (ID)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 투여하는 단계를 포함하는, 돌연변이체 ERα 유전자를 보유하는 것으로서 확인된 종양 세포를 갖는 암을 치료하는 방법이 제공된다.
다른 추가의 구현예에서, 본 명세서는 돌연변이체 ERα 유전자를 보유하는 것으로서 확인된 종양 세포를 갖는 암의 예방 및 치료에서 사용하기 위한, 화학식 (I), (IA), (IB), (IC) 또는 (ID)의 화합물을 포함하는 약제학적 조성물에 관한 것이다.
상기 모든 양태에 대해, 결정된/확인된 ERα의 돌연변이체 형태는 유전자에 걸쳐 모든 위치에 있다.
상기 모든 양태에 대해, 예로서 종양, 예컨대 유방암을 사용하여, 결정된/확인된 ERα의 특정한 돌연변이체 형태는 위치 Ser463Pro, Val543Glu, Leu536Arg, Tyr537Ser, Tyr537Asn 및 Asp538Gly에서의 것이다.
도면의 설명
도 1은 N-(1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일)-6-((6S,8R)-8-메틸-7-(2,2,2-트리플루오로에틸)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)피리딘-3-아민의 A 형태에 대한 X선 분말 회절 패턴을 보여준다.
도 2는 N-(1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일)-6-((6S,8R)-8-메틸-7-(2,2,2-트리플루오로에틸)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)피리딘-3-아민의 A 형태에 대한 DSC/TGA 온도기록도를 보여준다.
도 3은 N-(1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일)-6-((6S,8R)-8-메틸-7-(2,2,2-트리플루오로에틸)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)피리딘-3-아민의 B 형태에 대한 X선 분말 회절 패턴을 보여준다.
도 4는 N-(1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일)-6-((6S,8R)-8-메틸-7-(2,2,2-트리플루오로에틸)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)피리딘-3-아민의 C 형태에 대한 X선 분말 회절 패턴을 보여준다.
도 5는 N-(1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일)-6-((6S,8R)-8-메틸-7-(2,2,2-트리플루오로에틸)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)피리딘-3-아민의 C 형태에 대한 DSC/TGA 온도기록도를 보여준다.
도 6은 N-(1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일)-6-((6S,8R)-8-메틸-7-(2,2,2-트리플루오로에틸)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)피리딘-3-아민의 D 형태에 대한 X선 분말 회절 패턴을 보여준다.
도 7은 N-(1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일)-6-((6S,8R)-8-메틸-7-(2,2,2-트리플루오로에틸)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)피리딘-3-아민의 D 형태에 대한 DSC/TGA 온도기록도를 보여준다.
도 8은 N-(1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일)-6-((6S,8R)-8-메틸-7-(2,2,2-트리플루오로에틸)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)피리딘-3-아민의 E 형태에 대한 X선 분말 회절 패턴을 보여준다.
도 9는 N-(1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일)-6-((6S,8R)-8-메틸-7-(2,2,2-트리플루오로에틸)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)피리딘-3-아민의 E 형태에 대한 DSC/TGA 온도기록도를 보여준다.
도 10은 N-(1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일)-6-((6S,8R)-8-메틸-7-(2,2,2-트리플루오로에틸)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)피리딘-3-아민의 F 형태에 대한 X선 분말 회절 패턴을 보여준다.
도 11은 N-(1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일)-6-((6S,8R)-8-메틸-7-(2,2,2-트리플루오로에틸)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)피리딘-3-아민의 G 형태에 대한 X선 분말 회절 패턴을 보여준다.
도 12는 N-(1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일)-6-((6S,8R)-8-메틸-7-(2,2,2-트리플루오로에틸)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)피리딘-3-아민에 의한 마우스에서의 인간 모 MCF7 이종이식 항종양 효율 연구의 결과를 보여준다.
도 13은 N-(1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일)-6-((6S,8R)-8-메틸-7-(2,2,2-트리플루오로에틸)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)피리딘-3-아민에 의한 마우스에서의 인간 Y537S ESR1 돌연변이체 MCF7 이종이식 항종양 효율 연구의 결과를 보여준다.
도 14는 N-(1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일)-6-((6S,8R)-8-메틸-7-(2,2,2-트리플루오로에틸)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)피리딘-3-아민에 의한 마우스에서의 인간 ESR1 돌연변이체 유방암 환자 유래된 이종이식 CTC174 항종양 효율 연구의 결과를 보여준다.
도 15는 N-(1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일)-6-((6S,8R)-8-메틸-7-(2,2,2-트리플루오로에틸)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)피리딘-3-아민 및 팔보시클립의 조합에 의한 마우스에서의 인간 ESR1 돌연변이체 유방암 환자 유래된 이종이식 CTC174 항종양 효율 연구의 결과를 보여준다.
도 16은 N-(1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일)-6-((6S,8R)-8-메틸-7-(2,2,2-트리플루오로에틸)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)피리딘-3-아민 및 비스투세르팁(AZD2014)의 조합에 의한 마우스에서의 인간 ESR1 돌연변이체 유방암 환자 유래된 이종이식 CTC174 항종양 효율 연구의 결과를 보여준다.
실시예
본 명세서에 기재된 화합물은 하기 실시예에 추가로 예시되어 있다. 이 실시예는 오직 예시의 방식으로만 주어지고, 비제한적이다. 일반적으로,
(i) 달리 기재되지 않는 한, 조작은 상온, 즉 17 내지 25℃의 범위에서 및 불활성 가스, 예컨대 질소의 분위기 하에서 수행되었다.
(ii) 진공에서 회전 증발에 의해 또는 Genevac 설비 또는 Biotage v10 증발장치를 사용하여 증발을 수행하고, 여과에 의해 잔류 고체의 제거 후 후처리 절차를 수행하였다.
(iii) 예비 충전된 RediSep Rf Gold™ 실리카 칼럼(20 내지 40 ㎛, 구형 입자), GraceResolv™ 카트리지(Davisil® 실리카) 또는 Silicycle 카트리지(40 내지 63 ㎛)를 사용하여 자동화 Teledyne Isco CombiFlash® Rf 또는 Teledyne Isco CombiFlash® Companion®에서 플래시 크로마토그래피 정제를 수행하였다.
(iv) UV 수집을 갖는 Gilson prep HPLC 장치에서 또는 MS- 및 UV-트리거 수집을 갖는 Waters Prep 100 SFC-MS 장치 또는 UV 수집을 갖는 Thar MultiGram III SFC 장치에서 수행된 초임계 유체 크로마토그래피를 통해 분취용 크로마토그래피를 수행하였다.
(v) UV 수집을 갖는 Gilson 장치(233 주입장치/분획 수집장치, 333 및 334 펌프, 155 UV 검출장치) 또는 Gilson 305 주입에 의해 흐르는 Varian Prep Star 장치(2 x SD1 펌프, 325 UV 검출장치, 701 분획 수집장치) 펌프에서 키랄 분취용 크로마토그래피를 수행하였다.
(vi) 수율은, 존재하는 경우, 반드시 최대 획득 가능량은 아니다.
(vii) 일반적으로, 화학식 I의 최종 생성물의 구조는 핵 자기 공명(NMR) 분광학에 의해 확인되었다; NMR 화학 시프트 값은 델타 스케일에서 측정되었다[양성자 자기 공명 스펙트럼은 Bruker Avance 500(500 MHz) 또는 Bruker Avance 400(400 MHz) 장치를 사용하여 결정되었다]; 측정은, 달리 기재되지 않는 한, 상온에서 수행되었다; 하기 약어를 사용하였다: s, 일중항; d, 이중항; t, 삼중항; q, 사중항; m, 다중항; dd, 이중항의 이중항; ddd, 이중항의 이중항의 이중항; dt, 삼중항의 이중항; bs, 넓은 신호.
(viii) 일반적으로, 화학식 I의 최종 생성물은 액체 크로마토그래피(LCMS 또는 UPLC) 후 질량 분광법에 의해 또한 규명되었다; 1.50분에 걸쳐 97%의 A + 3%의 B 내지 3%의 A 내지 97%의 B의 용매 시스템(여기서, A = (산 작업에 대해) 물 중의 0.1% 포름산 또는 (염기 작업에 대해) 물 중의 0.1% 암모니아, B = 아세토니트릴)을 이용하여 1 ㎖/분의 유속으로 Waters SQ 질량 분광기가 장착된 Waters UPLC(칼럼 온도 40, UV = 220 내지 300 ㎚, 질량 분광법 = 양/음의 전환을 갖는 ESI)를 사용하여 UPLC를 수행하였다(다시 시작 조건으로의 평형 등에 의한 전체 런타임 1.70분). 산 분석을 위해 사용된 칼럼은 Waters Acquity HSS T3 1.8 ㎛ 2.1 x 50 ㎜이고, 염기 분석을 위해 사용된 칼럼은 Waters Acquity BEH 1.7 ㎛ 2.1 x 50 ㎜이었다; 0.5분 중단으로 4분에 걸쳐 1.1 ㎖/분 95%의 A 내지 95%의 B의 유속으로 Waters ZQ ESCi 질량 분광기 및 Phenomenex Gemini-NX(50 x 2.1 ㎜, 5 ㎛) 칼럼이 장착된 Waters Alliance HT(2795)를 사용하여 LCMS를 수행하였다. 변형제는 이것이 산성 또는 염기성 방법인지 여부에 따라 일정한 5%의 C(50:50의 아세토니트릴:물 0.1% 포름산) 또는 D(50:50의 아세토니트릴:물 0.1% 수산화암모늄(0.88 SG)에서 유지된다.
(ix) SCX-2(Biotage, 프로필설폰산 작용기화된 실리카. 삼작용성 실란을 사용하여 제조됨. 말단 비캡핑됨) 카트리지를 사용하여 이온 교환 정제를 일반적으로 수행하였다.
(x) 박막 크로마토그래피, 질량 스펙트럼, HPLC(고성능 액체 크로마토그래피) 및/또는 NMR 분석에 의해 중간체 순도를 평가하였다.
(xi) 하기 약어를 사용한다:
실시예 1
N
-(4-((6
S
,8
R
)-7-(2,2-디플루오로-3-메톡시프로필)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3
H
-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)-3-메톡시페닐)-1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-아민
[(2-디-사이클로헥실포스피노-3,6-디메톡시-2',4',6'-트리이소프로필-1,1'-비페닐)-2-(2'-아미노-1,1'-비페닐)]팔라듐(II) 메탄설포네이트(BrettPhos Pd G3)(6.80 ㎎, 7.50 μ㏖)를 탈기된 1,4-디옥산(1.5 ㎖) 중 (6S,8R)-6-(4-브로모-2-메톡시페닐)-7-(2,2-디플루오로-3-메톡시프로필)-8-메틸-3-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린(85 ㎎, 0.15 m㏖), 1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-아민(29.7 ㎎, 0.23 m㏖) 및 나트륨 tert-부톡사이드(28.8 ㎎, 0.30 m㏖)의 현탁액에 첨가하고, 반응물을 3시간 동안 90℃까지 가열하였다. 냉각 후, 반응물을 DCM으로 희석하고, 물로 세척하였다. 수성물을 DCM으로 추출하고, 이후 합한 유기물을 건조시키고 증발시켰다. 미정제 잔류물을 DCM(2 ㎖) 중에 용해시키고, TFA(0.7 ㎖)를 첨가하였다. 반응물을 실온에서 1시간 동안 교반하고, 이후 이것을 DCM으로 희석하고, 포화 NaHCO3 용액의 첨가에 의해 염기성화시켰다. 층을 분리시키고, 수성물을 DCM으로 추출하였다. 합한 유기물을 건조시키고 증발시킨 후, 미정제 생성물을 플래시 실리카 크로마토그래피(용리 구배 EtOAc 중 0% 내지 20% MeOH)로 정제하였다. 순수한 분획을 증발 건조시켜 베이지색의 고체로서 N-(4-((6S,8R)-7-(2,2-디플루오로-3-메톡시프로필)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)-3-메톡시페닐)-1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-아민(39.0 ㎎, 49%)을 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, CDCl3, 27℃) 1.09 (3H, d), 1.83 (2H, ddd), 2.65 - 2.86 (4H, m), 2.96 - 3.08 (1H, m), 3.11 (1H, dd), 3.22 (2H, d), 3.38 (3H, s), 3.51 - 3.63 (2H, m), 3.73 - 3.82 (1H, m), 3.82 (3H, s), 3.86 (2H, q), 4.15 - 4.28 (1H, m), 4.43 (1H, t), 4.53 (1H, t), 5.37 (1H, s), 5.88 (1H, dd), 6.14 (1H, d), 6.46 (1H, d), 6.80 (1H, d), 7.13 (1H, d), 8.04 (1H, d). m/z: ES+ [M+H]+ 532.
(6S,8R)-6-(4-브로모-2-메톡시페닐)-7-(2,2-디플루오로-3-메톡시프로필)-8-메틸-3-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린을 하기와 같이 제조하였다:
2,2-디플루오로-3-(트리틸옥시)프로판-1-올의 제법
2,2-디플루오로프로판-1,3-디올(2.50 g, 22.3 m㏖)을 DCM(61.7 ㎖) 및 THF(15.4 ㎖) 중에 용해시켰다. DIPEA(3.93 ㎖, 22.3 m㏖), 이어서 (클로로메탄트리일)트리벤젠(6.22 g, 22.3 m㏖) 및 마지막으로 DMAP(0.288 g, 2.23 m㏖)를 첨가하였다. 반응물을 2시간 동안 40℃까지 가열하였다. 냉각 후, 반응물을 1 N HCl 용액으로 세척하고, 이후 건조시키고 증발시켰다. 미정제 생성물을 플래시 실리카 크로마토그래피(용리 구배 헵탄 중 0% 내지 25% EtOAc)로 정제하였다. 순수한 분획을 증발 건조시켜 무색의 고체로서 2,2-디플루오로-3-(트리틸옥시)프로판-1-올(4.43 g, 56%)을 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, CDCl3) 3.42 (2H, t), 3.92 (2H, t), 7.23 - 7.3 (4H, m), 7.3 - 7.39 (6H, m), 7.39 - 7.49 (6H, m).
((2,2-디플루오로-3-메톡시프로폭시)메탄트리일)트리벤젠의 제법
수소화나트륨(0.562 g, 14.0 m㏖)을 THF(46 ㎖) 중 2,2-디플루오로-3-(트리틸옥시)프로판-1-올(4.15 g, 11.7 m㏖)의 용액에 첨가하고, 반응물을 1시간 동안 교반하고, 이후 요오도메탄(0.802 ㎖, 12.9 m㏖)을 THF(5 ㎖) 중에 첨가하였다. 반응물을 추가로 1시간 동안 교반하였다. 반응물을 물 및 염수로 켄칭시키고, 이후 EtOAc로 추출하였다. 유기 층을 건조시키고 증발시켜 담황색의 오일로서 ((2,2-디플루오로-3-메톡시프로폭시)메탄트리일)트리벤젠(4.18 g, 97%)을 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, CDCl3) 3.36 (2H, t), 3.40 (3H, s), 3.77 (2H, t), 7.15 - 7.28 (3H, m), 7.28 - 7.38 (6H, m), 7.39 - 7.47 (6H, m).
2,2-디플루오로-3-메톡시프로필 트리플루오로메탄설포네이트의 제법
트리플루오로메탄설폰산 무수물(1.918 ㎖, 11.40 m㏖)을 DCM(39.6 ㎖) 중 ((2,2-디플루오로-3-메톡시프로폭시)메탄트리일)트리벤젠(4.00 g, 10.9 m㏖)의 용액에 첨가하였다. 반응물을 30분 동안 교반하고, 이후 트리에틸실란(1.934 ㎖, 11.94 m㏖)을 첨가하고, 반응물을 추가로 30분 동안 교반하였다. 반응물을 증발시키고, 트리플레이트를 다음 단계에서 바로 사용하였다.
(
R
)-1-(3-브로모-2-메틸페닐)프로판-2-아민의 제법
n-BuLi(26.1 ㎖, 41.8 m㏖)를 -78℃에서 THF(100 ㎖) 중 1,3-디브로모-2-메틸벤젠(9.95 g, 39.8 m㏖)의 용액에 적가하였다. 30분 동안 교반한 후, (R)-tert-부틸 4-메틸-1,2,3-옥사티아졸리딘-3-카복실레이트 2,2-디옥사이드(10.39 g, 43.8 m㏖)를 부분으로 첨가하고, 반응물을 추가로 30분 동안 교반한 후, 30분에 걸쳐 0℃까지 가온되게 하였다. 1 N 시트르산을 첨가하고, 혼합물을 5분 동안 교반한 후, 이것을 EtOAc(x2)로 추출하였다. 합한 유기 상을 증발시켰다. 잔류물을 실온에서 1시간 동안 디옥산 중 4 M HCl(69.7 ㎖, 278.7 m㏖) 중에서 교반하고, 이후 휘발물을 증발시켰다. 잔류물을 디에틸 에테르 중에 현탁시키고, 물(x2)로 추출하였다. 합한 수성 상을 2 N Na2CO3의 첨가에 의해 염기성화시키고, 이후 DCM(x3)으로 추출하였다. 합한 유기 상을 MgSO4 위에서 건조시키고 농축시켜 황색의 오일로서 (R)-1-(3-브로모-2-메틸페닐)프로판-2-아민(7.55 g, 83%)을 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3, 27℃) 1.13 (3H, d), 1.43 (2H, s), 2.40 (3H, s), 2.61 (1H, dd), 2.77 (1H, dd), 3.14 (1H, dq), 6.97 (1H, t), 7.08 (1H, d), 7.43 (1H, d). m/z (ES+), [M+H]+ = 228.
(
R
)-
N
-(1-(3-브로모-2-메틸페닐)프로판-2-일)-2,2-디플루오로-3-메톡시프로판-1-아민의 제법
2,2-디플루오로-3-메톡시프로필 트리플루오로메탄설포네이트(3.03 g, 11.73 m㏖)(이전 단계로부터 미정제)를 1,4-디옥산(34.3 ㎖) 중 (R)-1-(3-브로모-2-메틸페닐)프로판-2-아민(2.327 g, 10.2 m㏖) 및 DIPEA(2.82 ㎖, 16.32 m㏖)의 용액에 첨가하고, 반응물을 밤새 80℃까지 가열하였다. 냉각 후, 휘발물을 증발시키고, 이후 잔류물을 DCM 중에 용해시키고, 염수로 세척하였다. 유기 상을 건조시키고 증발시킨 후, 미정제 생성물을 플래시 실리카 크로마토그래피(용리 구배 헵탄 중 0% 내지 100% EtOAc)로 정제하였다. 순수한 분획을 증발 건조시켜 담황색의 오일로서 (R)-N-(1-(3-브로모-2-메틸페닐)프로판-2-일)-2,2-디플루오로-3-메톡시프로판-1-아민(2.330 g, 68%)을 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, CDCl3) 1.06 (3H, d), 2.40 (3H, s), 2.63 (1H, dd), 2.82 (1H, dd), 2.86 - 2.94 (1H, m), 2.95 - 3.11 (2H, m), 3.38 (3H, s), 3.51 - 3.63 (2H, m), 6.94 - 7 (1H, m), 7.07 (1H, dd), 7.4 - 7.51 (1H, m). m/z: ES+ [M+H]+ 336.
(
R
)-3-(2-((2,2-디플루오로-3-메톡시프로필)아미노)프로필)-2-메틸아닐린의 제법
Pd2(dba)3(0.184 g, 0.20 m㏖) 및 Rac-BINAP(0.250 g, 0.40 m㏖)를 탈기된 톨루엔(28.5 ㎖) 중 (R)-N-(1-(3-브로모-2-메틸페닐)프로판-2-일)-2,2-디플루오로-3-메톡시프로판-1-아민(2.25 g, 6.69 m㏖), 벤조페논 이민(1.334 g, 7.36 m㏖) 및 나트륨 tert-부톡사이드(0.965 g, 10.0 m㏖)의 현탁액에 첨가하고, 반응물을 3시간 동안 90℃까지 가열하였다. 냉각 후, 톨루엔을 주로 증발시키고, 이후 잔류물을 DCM 중에 용해시키고, 물로 세척하였다. 수성 상을 DCM으로 추출하고, 이후 유기물을 증발시켜 약 50 ㎖의 용적이 되게 하였다. 2 N HCl 용액(50 ㎖)을 첨가하고, 이상성 혼합물을 30분 동안 격렬히 교반하였다. 층을 분리시키고, 이후 수성물을 DCM으로 추출하였다. 유기 상을 1 N HCl로 역추출하였다. 합한 수성 상을 고체 K2CO3의 첨가에 의해 염기성화시키고, 이후 DCM(x3)으로 추출하고, 합한 DCM 추출물을 건조시키고 증발시켜 담갈색의 오일로서 (R)-3-(2-((2,2-디플루오로-3-메톡시프로필)아미노)프로필)-2-메틸아닐린(1.780 g, 98%)을 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, CDCl3) 1.06 (3H, d), 2.11 (3H, s), 2.59 (1H, dd), 2.75 (1H, dd), 2.86 - 2.94 (1H, m), 2.94 - 3.12 (2H, m), 3.38 (3H, s), 3.53 - 3.63 (4H, m), 6.5 - 6.68 (2H, m), 6.86 - 7.01 (1H, m). m/z: ES+ [M+H]+ 273.
(1
S
,3
R
)-1-(4-브로모-2-메톡시페닐)-2-(2,2-디플루오로-3-메톡시프로필)-3,5-디메틸-1,2,3,4-테트라하이드로이소퀴놀린-6-아민의 제법
(R)-3-(2-((2,2-디플루오로-3-메톡시프로필)아미노)프로필)-2-메틸아닐린(490 ㎎, 1.80 m㏖) 및 4-브로모-2-메톡시벤즈알데하이드(813 ㎎, 3.78 m㏖)를 아세트산(8.8 ㎖) 및 물(0.162 ㎖, 9.00 m㏖) 중에서 밤새 75℃까지 가열하였다. 냉각 후, 아세트산을 진공 하에 증발시키고, 이후 잔류물을 EtOAc(20 ㎖) 중에 용해시키고, 2 N HCl 용액(20 ㎖)을 첨가하였다. 이상성 혼합물을 30분 동안 교반하고, 이후 층을 분리시켰다. 유기 상을 물로 추출하고, 이후 수성 상을 2 N NaOH 용액의 첨가에 의해 염기성화시키고, DCM(x2)으로 추출하였다. 합한 DCM 층을 건조시키고 증발시킨, 후, 미정제 생성물을 플래시 실리카 크로마토그래피(용리 구배 헵탄 중 0% 내지 50% EtOAc)로 정제하였다. 순수한 분획을 증발 건조시켜 베이지색의 고체로서 (1S,3R)-1-(4-브로모-2-메톡시페닐)-2-(2,2-디플루오로-3-메톡시프로필)-3,5-디메틸-1,2,3,4-테트라하이드로이소퀴놀린-6-아민(384 ㎎, 46%)을 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, CDCl3, 27℃) 1.03 (3H, d), 2.07 (3H, s), 2.42 (1H, dd), 2.60 - 2.76 (2H, m), 2.99 (1H, ddd), 3.34 (1H, d), 3.36 (3H, s), 3.52 (2H, s), 3.54 - 3.66 (1H, m), 3.76 (1H, ddd), 3.87 (3H, s), 5.28 (1H, s), 6.47 (2H, s), 6.59 (1H, d), 6.88 (1H, dd), 7.01 (1H, d). m/z: ES+ [M+H]+ 469.
(6
S
,8
R
)-6-(4-브로모-2-메톡시페닐)-7-(2,2-디플루오로-3-메톡시프로필)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린의 제법
아질산나트륨(59.8 ㎎, 0.87 m㏖)을 -10℃에서 프로피온산(2628 ㎕)/물(526 ㎕) 중 (1S,3R)-1-(4-브로모-2-메톡시페닐)-2-(2,2-디플루오로-3-메톡시프로필)-3,5-디메틸-1,2,3,4-테트라하이드로이소퀴놀린-6-아민(370 ㎎, 0.79 m㏖)의 냉각된 용액으로 물(0.2 ㎖) 중에 첨가하였다. 반응물을 1시간 동안 교반하고, 이후 빙냉 EtOAc(20 ㎖)를 첨가하였다. 반응물을 차가운 포화 NaHCO3 용액의 첨가에 의해 켄칭시키고, 15분 동안 교반한 후, 실온까지 가온되게 하였다. 층을 분리시키고, 수성물을 EtOAc로 추출하였다. 합한 유기물을 건조시키고 증발시킨, 후, 미정제 생성물을 플래시 실리카 크로마토그래피(용리 구배 헵탄 중 0% 내지 50% EtOAc)로 정제하였다. 순수한 분획을 증발 건조시켜 베이지색의 고체로서 (6S,8R)-6-(4-브로모-2-메톡시페닐)-7-(2,2-디플루오로-3-메톡시프로필)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린(252 ㎎, 67%)을 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, CDCl3, 27℃) 1.10 (3H, d), 2.72 (1H, td), 2.85 (1H, dd), 3.08 (1H, ddd), 3.16 (1H, dd), 3.36 (3H, s), 3.48 - 3.66 (2H, m), 3.65 - 3.81 (1H, m), 3.90 (3H, s), 5.44 (1H, s), 6.59 (1H, d), 6.77 (1H, d), 6.89 (1H, dd), 7.05 (1H, d), 7.19 (1H, dd), 8.07 (1H, d). m/z: ES+ [M+H]+ 480.
(6
S
,8
R
)-6-(4-브로모-2-메톡시페닐)-7-(2,2-디플루오로-3-메톡시프로필)-8-메틸-3-(테트라하이드로-2
H
-피란-2-일)-6,7,8,9-테트라하이드로-3
H
-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린의 제법
3,4-디하이드로-2H-피란(0.064 ㎖, 0.70 m㏖)을 DCM(2.5 ㎖) 중 (6S,8R)-6-(4-브로모-2-메톡시페닐)-7-(2,2-디플루오로-3-메톡시프로필)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린(240 ㎎, 0.50 m㏖) 및 p-톨루엔설폰산 수화물(9.51 ㎎, 0.05 m㏖)의 용액에 첨가하고, 반응물을 1시간 동안 40℃까지 가열하였다. 냉각 후, 반응물을 DCM으로 희석하고, 포화 NaHCO3 용액으로 세척하였다. 유기 상을 건조시키고 증발시켰다. 미정제 잔류물을 실리카 겔(용리제로서 EtOAc/헵탄, 1:1)의 플러그를 통해 통과시키고, 여과액을 증발시켜 THP 위치이성질체의 5:1 비율로 담황색의 고체로서 (6S,8R)-6-(4-브로모-2-메톡시페닐)-7-(2,2-디플루오로-3-메톡시프로필)-8-메틸-3-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린(262 ㎎, 93%)을 수득하였다(각각의 THP 위치이성질체는 부분입체이성질체 혼합물임). m/z: ES+ [M+H]+ 564.
tert
-부틸 (1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일)카바메이트의 제법
탄산칼륨(1.605 g, 11.61 m㏖), tert-부틸 아제티딘-3-일카바메이트(1.0 g, 5.81 m㏖) 및 1-플루오로-3-요오도프로판(1.146 g, 6.10 m㏖)을 아세토니트릴(11.61 ㎖) 중에 현탁시키고, 마이크로파 관으로 밀봉하였다. 반응물을 마이크로파 반응기에서 15분 동안 95℃까지 가열하였다. 반응물을 실온까지 냉각시키고, EtOAc(100 ㎖)로 희석하고, 포화 NaHCO3(50 ㎖)으로부터 추출하였다. 유기 상을 MgSO4 위에서 건조시키고, 여과시키고 증발시켜 황색의 고체로서 tert-부틸 (1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일)카바메이트(1.248 g, 93%)를 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, CDCl3, 22℃) 1.44 (9H, s), 1.68 - 1.80 (2H, m), 2.56 (2H, t), 2.88 (2H, s), 3.66 (2H, t), 4.31 (1H, d), 4.43 (1H, t), 4.53 (1H, t), 4.90 (1H, s).
1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-아민의 제법
TFA(2.69 ㎖)를 DCM(8.06 ㎖) 중 tert-부틸 (1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일)카바메이트(1.248 g, 5.37 m㏖)의 용액에 첨가하고, 반응물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 휘발물을 증발시키고, SCX 칼럼을 사용하여 이온 교환 크로마토그래피로 정제하였다. 원하는 생성물을 1M NH3/MeOH를 사용하여 칼럼으로부터 용리시키고, 순수한 분획을 증발 건조시켜 무색의 오일로서 1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-아민(0.697 g, 98%)을 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, CDCl3, 27℃) 1.66 - 1.83 (2H, m), 1.96 (3H, s), 2.54 (2H, t), 2.67 (2H, td), 3.58 - 3.70 (2H, m), 4.43 (1H, t), 4.52 (1H, t).
실시예 2
6-((6
S
,8
R
)-7-(2,2-디플루오로-3-메톡시프로필)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3
H
-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)-N-(1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일)피리딘-3-아민
[(2-디-사이클로헥실포스피노-3,6-디메톡시-2',4',6'-트리이소프로필-1,1'-비페닐)-2-(2'-아미노-1,1'-비페닐)]팔라듐(II) 메탄설포네이트(BrettPhos Pd G3)(6.83 ㎎, 8.00 μ㏖) 및 나트륨 tert-부톡사이드(48.0 ㎎, 0.50 m㏖)를 1,4-디옥산(1.6 ㎖) 중 (6S,8R)-6-(5-브로모피리딘-2-일)-7-(2,2-디플루오로-3-메톡시프로필)-8-메틸-3-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린(107 ㎎, 0.20 m㏖) 및 1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-아민(52.9 ㎎, 0.40 m㏖)의 탈기된 용액에 첨가하고, 반응물을 5시간 동안 90℃까지 가열하였다. 냉각 후, 반응물을 DCM으로 희석하고, 물로 세척하였다. 유기 상을 증발시키고, 이후 DCM(2 ㎖) 중에 용해시킨 후, TFA(1 ㎖)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하고, 이후 DCM으로 희석하고, 포화 NaHCO3 용액으로 세척하였다. 층을 분리시키고, 수성물을 DCM으로 추출하였다. 합한 유기물을 건조시키고 증발시킨 후, 미정제 생성물을 플래시 실리카 크로마토그래피(용리 구배 EtOAc 중 0% 내지 20% MeOH)로 정제하였다. 순수한 분획을 증발 건조시켜 베이지색의 고체로서 6-((6S,8R)-7-(2,2-디플루오로-3-메톡시프로필)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)-N-(1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일)피리딘-3-아민(83 ㎎, 83%)을 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, CDCl3) 1.12 (3H, d), 1.79 (2H, ddd), 2.71 (2H, t), 2.75 - 2.90 (2H, m), 3.06 - 3.23 (3H, m), 3.39 (3H, s), 3.51 - 3.66 (2H, m), 3.66 - 3.76 (1H, m), 3.76 - 3.84 (2H, m), 4.14 (1H, s), 4.44 (2H, t), 4.53 (1H, t), 5.06 (1H, s), 6.80 (1H, dd), 6.88 (1H, d), 7.13 (2H, dd), 7.84 (1H, d), 7.99 (1H, d). m/z: ES+ [M+H]+ 503.
(6S,8R)-6-(5-브로모피리딘-2-일)-7-(2,2-디플루오로-3-메톡시프로필)-8-메틸-3-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린을 하기와 같이 제조하였다:
(1
S
,3
R
)-1-(5-브로모피리딘-2-일)-2-(2,2-디플루오로-3-메톡시프로필)-3,5-디메틸-1,2,3,4-테트라하이드로이소퀴놀린-6-아민의 제법
5-브로모피콜린알데하이드(1172 ㎎, 6.30 m㏖)를 물(270 ㎕, 15.0 m㏖) 및 아세트산(14.7 ㎖) 중의 (R)-3-(2-((2,2-디플루오로-3-메톡시프로필)아미노)프로필)-2-메틸아닐린(817 ㎎, 3.00 m㏖)의 용액에 첨가하고, 반응물을 2시간 동안 80℃까지 가열하였다. 냉각 후, 휘발물을 진공 하에 증발시켰다. 잔류물을 DCM 중에 용해시키고, 포화 NaHCO3 용액으로 세척하였다. 유기물을 증발시켜 약 20 ㎖의 용적이 되게 하고, 2 N HCl 용액(20 ㎖)을 첨가하였다. 이상성 혼합물을 15분 동안 교반하고, 이후 분리시켰다. 유기물을 물로 추출하고, 이후 수성 상을 DCM으로 역추출하였다. 이후, 수성 상을 고체 K2CO3의 첨가에 의해 염기성화시키고, 이후 DCM으로 추출하였다. 유기 추출물을 건조시키고 증발시켰다. 미정제 생성물을 플래시 실리카 크로마토그래피(용리 구배 헵탄 중 0% 내지 50% EtOAc)로 정제하였다. 순수한 분획을 증발 건조시켜 베이지색의 고체로서 (1S,3R)-1-(5-브로모피리딘-2-일)-2-(2,2-디플루오로-3-메톡시프로필)-3,5-디메틸-1,2,3,4-테트라하이드로이소퀴놀린-6-아민(810 ㎎, 61%)을 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, CDCl3) 1.07 (3H, d), 2.05 (3H, s), 2.49 (1H, d), 2.75 (2H, dd), 3.04 - 3.17 (1H, m), 3.30 - 3.36 (1H, m), 3.37 (3H, s), 3.58 - 3.74 (2H, m), 4.96 (1H, s), 6.51 (1H, d), 6.60 (1H, d), 7.22 (1H, d), 7.68 (1H, dd), 8.55 (1H, dd). m/z: ES+ [M+H]+ 440.
(6
S
,8
R
)-6-(5-브로모피리딘-2-일)-7-(2,2-디플루오로-3-메톡시프로필)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3
H
-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린의 제법
아질산나트륨(133 ㎎, 1.93 m㏖)을 -15℃에서 프로피온산(5833 ㎕)/물(1167 ㎕) 중 (1S,3R)-1-(5-브로모피리딘-2-일)-2-(2,2-디플루오로-3-메톡시프로필)-3,5-디메틸-1,2,3,4-테트라하이드로이소퀴놀린-6-아민(771 ㎎, 1.75 m㏖)의 냉각된 용액으로 물(0.5 ㎖) 중에 첨가하였다. 반응물을 30분 동안 교반하고, 이후 드라이아이스 중에서 냉각된 EtOAc(50 ㎖)를 첨가하였다. 버블링이 중단될 때까지, 반응물을 2 N Na2CO3의 첨가에 의해 켄칭시키고, 이후 층을 분리시켰다. 수성물을 EtOAc로 추출하고, 이후 유기물을 건조시키고 증발시켰다. 미정제 생성물을 플래시 실리카 크로마토그래피(용리 구배 헵탄 중 0% 내지 50% EtOAc)로 정제하였다. 순수한 분획을 증발 건조시켜 담황색의 고체로서 (6S,8R)-6-(5-브로모피리딘-2-일)-7-(2,2-디플루오로-3-메톡시프로필)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린(460 ㎎, 58%)을 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, CDCl3) 1.14 (3H, d), 2.81 (1H, dd), 2.88 (1H, dd), 3.10 - 3.26 (2H, m), 3.38 (3H, s), 3.46 - 3.55 (1H, m), 3.58 - 3.76 (2H, m), 5.13 (1H, s), 6.94 (1H, d), 7.23 (1H, dd), 7.29 (1H, d), 7.72 (1H, dd), 8.05 (1H, d), 8.57 (1H, dd). m/z: ES+ [M+H]+ 451.
(6
S
,8
R
)-6-(5-브로모피리딘-2-일)-7-(2,2-디플루오로-3-메톡시프로필)-8-메틸-3-(테트라하이드로-2
H
-피란-2-일)-6,7,8,9-테트라하이드로-3
H
-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린의 제법
3,4-디하이드로-2H-피란(0.114 ㎖, 1.25 m㏖)을 DCM(5 ㎖) 중 (6S,8R)-6-(5-브로모피리딘-2-일)-7-(2,2-디플루오로-3-메톡시프로필)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린(450 ㎎, 1.00 m㏖) 및 PTSA 수화물(37.9 ㎎, 0.20 m㏖)의 용액에 첨가하고, 반응물을 3시간 동안 45℃까지 가열하였다. 냉각 후, 반응물을 DCM으로 희석하고, 포화 NaHCO3 용액으로 세척하였다. 유기 상을 건조시키고 증발시킨 후, 미정제물을 실리카(1:1 EtOAc/헵탄)의 플러그를 통해 통과시켰다. 여과액을 증발시켜 오렌지색의 고체(THP 위치이성질체의 약 6.5:1 비율)로서 (6S,8R)-6-(5-브로모피리딘-2-일)-7-(2,2-디플루오로-3-메톡시프로필)-8-메틸-3-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린(510 ㎎, 9%)을 수득하였다. m/z: ES+ [M+H]+ 535.
실시예 3
6-((6
S
,8
R
)-7-((1-플루오로사이클로프로필)메틸)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3
H
-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)-
N
-(1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일)피리딘-3-아민
[(2-디-사이클로헥실포스피노-3,6-디메톡시-2',4',6'-트리이소프로필-1,1'-비페닐)-2-(2'-아미노-1,1'-비페닐)]팔라듐(II) 메탄설포네이트(BrettPhos Pd G3)(12.11 ㎎, 0.01 m㏖) 및 나트륨 tert-부톡사이드(85 ㎎, 0.89 m㏖)를 1,4-디옥산(2835 ㎕) 중 (6S,8R)-6-(5-브로모피리딘-2-일)-7-((1-플루오로사이클로프로필)메틸)-8-메틸-3-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린(177 ㎎, 0.35 m㏖) 및 1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-아민(94 ㎎, 0.71 m㏖)의 탈기된 용액에 첨가하고, 반응물을 5시간 동안 90℃까지 가열하였다. 냉각 후, 반응물을 DCM으로 희석하고, 물로 세척하였다. 유기 상을 증발시키고, 이후 DCM(2 ㎖) 중에 용해시킨 후, TFA(1 ㎖)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하고, 이후 DCM으로 희석하고, 포화 NaHCO3 용액으로 세척하였다. 층을 분리시키고, 수성 상을 DCM으로 추출하였다. 합한 유기물을 건조시키고 증발시켜 미정제 생성물을 생성시켰다. 미정제 생성물을 용리제로서 물(1% NH3 함유) 및 MeCN의 점감적으로 극성인 혼합물을 사용하여 분취용 LCMS(Waters SunFire 칼럼, 5 μ 실리카, 19 ㎜ 직경, 100 ㎜ 길이)로 정제하였다. 원하는 화합물을 함유하는 분획을 증발 건조시켜 베이지색의 고체로서 6-((6S,8R)-7-((1-플루오로사이클로프로필)메틸)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)-N-(1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일)피리딘-3-아민(17.0 ㎎, 10%)을 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, CDCl3, 27℃) 0.36 - 0.46 (1H, m), 0.49 - 0.59 (1H, m), 0.88 - 1.07 (2H, m), 1.09 (3H, d), 1.69 - 1.75 (1H, m), 1.75 - 1.81 (1H, m), 2.59 (2H, t), 2.70 (1H, dd), 2.86 - 2.96 (3H, m), 3.01 - 3.11 (1H, m), 3.37 - 3.44 (1H, m), 3.72 (2H, q), 3.78 - 3.88 (1H, m), 3.95 (1H, d), 4.04 - 4.13 (1H, m), 4.44 (1H, t), 4.53 (1H, t), 4.95 (1H, s), 6.75 (1H, dd), 6.91 (1H, d), 7.12 - 7.17 (2H, m), 7.86 (1H, d), 8.05 (1H, d), 10.04 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 467.
(6S,8R)-6-(5-브로모피리딘-2-일)-7-((1-플루오로사이클로프로필)메틸)-8-메틸-3-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린을 하기와 같이 제조하였다:
1-(3-브로모-2-메틸페닐)-2,5-디메틸-1
H
-피롤의 제법
톨루엔(300 ㎖) 중 3-브로모-2-메틸아닐린(40 g, 215 m㏖), 헥산-2,5-디온(25.3 ㎖, 215 m㏖) 및 p-톨루엔설폰산 1수화물(0.409 g, 2.15 m㏖)의 혼합물을 콘덴서 및 Dean-Stark 트랩이 장착된 플라스크에서 환류 조건에서 2시간 동안 가열하였다. 이후, 혼합물을 실온까지 냉각시키고, 포화 수성 중탄산나트륨, 수성 HCl(1 N) 및 포화 수성 염화나트륨으로 순차적으로 세척하였다. 유기 층을 황산나트륨 위에서 건조시키고, 여과시키고 감압 하에 농축시켜 담황색의 오일로서 미정제 1-(3-브로모-2-메틸페닐)-2,5-디메틸-1H-피롤(57.9 g, 102%)을 수득하였다. 1H NMR (300 MHz, DMSO-d 6, 27℃) 1.8 (6H, s), 1.9 (3H, s), 5.8 (2H, s), 7.2 - 7.4 (2H, m), 7.7 (1H, dd). m/z: ES+ [M+H]+ 264.
tert
-부틸 (
R
)-(1-(3-(2,5-디메틸-1
H
-피롤-1-일)-2-메틸페닐)프로판-2-일)카바메이트의 제법
헥산 중 n-부틸리튬(2.5 M; 89 ㎖, 221 m㏖)을 -78℃에서 THF(400 ㎖) 중 미정제 1-(3-브로모-2-메틸페닐)-2,5-디메틸-1H-피롤(55.7 g, 211 m㏖)의 용액에 15분에 걸쳐 첨가하였다. 30분 후, tert-부틸 (R)-4-메틸-1,2,3-옥사티아졸리딘-3-카복실레이트 2,2-디옥사이드(50 g, 211 m㏖)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 -78℃에서 15분 동안 교반하고, 2시간에 걸쳐 실온까지 가온되게 하였다. 수성 시트르산(1 N; 250 ㎖)을 첨가하고, 30분 동안 계속해서 교반하였다. 혼합물을 헥산으로 추출하고, 합한 유기 층을 포화 수성 탄산나트륨으로 세척하고, 황산나트륨 위에서 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 미정제 tert-부틸 (R)-(1-(3-(2,5-디메틸-1H-피롤-1-일)-2-메틸페닐)프로판-2-일)카바메이트인 생성된 갈색의 고체를 추가 정제 없이 다음 단계에서 사용하였다. m/z: ES+ [M+H]+ 343.
(
R
)-1-(3-(2,5-디메틸-1
H
-피롤-1-일)-2-메틸페닐)프로판-2-아민의 제법
디옥산 중 염산(4 M; 100 ㎖, 400 m㏖)을 MeOH(200 ㎖) 및 DCM(50 ㎖) 중 미정제 tert-부틸 (R)-(1-(3-(2,5-디메틸-1H-피롤-1-일)-2-메틸페닐)프로판-2-일)카바메이트의 현탁액에 첨가하였다. 생성된 적색의 용액을 실온에서 4시간 동안 교반하고, 이후 감압 하에 농축시켰다. 생성된 갈색의 고체를 추가 정제 없이 다음 단계에서 사용하였다. m/z: ES+ [M+H]+ 243.
(
R
)-3-(2-아미노프로필)-2-메틸아닐린의 제법
에탄올(400 ㎖) 중 미정제 (R)-1-(3-(2,5-디메틸-1H-피롤-1-일)-2-메틸페닐)프로판-2-아민 디하이드로클로라이드, 수성 하이드록실아민(50 중량%; 107 ㎖, 1.74 ㏖) 및 하이드록실아민 하이드로클로라이드(97 g, 1.39 ㏖)의 혼합물을 환류 조건으로 가온시켰다. 18시간 후, 반응물을 0℃까지 냉각시키고, 수성 수산화나트륨(50 중량%; 153 g, 1.92 ㏖)에 의해 염기성화시키고, DCM으로 추출하였다. 유기 층을 황산나트륨 위에서 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 CO2 중 0.2% NH4OH를 함유하는 25% 메탄올에 의해 용리되는 SFC(Princeton Chromatography DEAP 칼럼, 100 ㎜ 길이, 30 ㎜ 직경, 5 ㎛, 40℃ 칼럼 온도, 100 bar 칼럼 압력, 100 ㎎/㎖ 유속)로 정제하여 밝은 호박색의 고체로서 (R)-3-(2-아미노프로필)-2-메틸아닐린(24 g, 84%)을 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, DMSO, 27℃) 1.05 (3H, d), 1.99 (3H, s), 2.55 (1H, dd), 2.93 (1H, dd), 3.11 - 3.25 (1H, m), 4.77 (2H, s), 6.35 (1H, dd), 6.52 (1H, dd), 6.81 (1H, t). 관찰되지 않는 알킬 NH2 양성자. m/z: ES+ [M+H]+ 165.
(
R
)-
N
-(1-(3-아미노-2-메틸페닐)프로판-2-일)-1-플루오로사이클로프로판-1-카복사미드의 제법
(R)-3-(2-아미노프로필)-2-메틸아닐린(1.70 g, 10.4 m㏖)을 DMF(29.9 ㎖) 중에 용해시키고, 1-플루오로사이클로프로판-1-카복실산(1.00 g, 9.61 m㏖), HATU(4.02 g, 10.6 m㏖) 및 TEA(2.68 ㎖, 19.22 m㏖)로 처리하였다. 반응물을 실온에서 3시간 동안 교반하고, 이후 물로 켄칭시키고, EtOAc로 추출하였다. 유기 층을 포화 수성 염화나트륨으로 세척하고, 황산나트륨 위에서 건조시키고 여과시켰다. 여과액을 감압 하에 농축시키고, 생성된 잔류물을 진공 하에 밤새 건조시켜 잔류 DMF를 제거하였다. 이후, 잔류물을 실리카에 흡착시키고, 플래시 칼럼 실리카 크로마토그래피(용리 구배 헥산 중 0% 내지 80% 에틸 아세테이트)로 정제하여 담황색의 고체로서 (R)-N-(1-(3-아미노-2-메틸페닐)프로판-2-일)-1-플루오로사이클로프로판-1-카복사미드(1.47 g, 61.1%)를 수득하였다. 1H NMR (300 MHz, DMSO-d 6, 27℃) 1.01 - 1.28 (7H, m), 2.02 (3H, s), 2.54 - 2.62 (1H, m), 2.83 (1H, dd), 3.89 - 4.16 (1H, m), 4.68 (2H, s), 6.38 (1H, d), 6.49 (1H, d), 6.78 (1H, t), 8.14 (1H, d). m/z: ES+ [M+H]+ 251.
(
R
)-3-(2-(((1-플루오로사이클로프로필)메틸)아미노)프로필)-2-메틸아닐린의 제법
THF 중 보란 테트라하이드로푸란 복합체(1 M; 35.2 ㎖, 35.2 m㏖)를 질소 하에 실온에서 THF(13.7 ㎖) 중 (R)-N-(1-(3-아미노-2-메틸페닐)프로판-2-일)-1-플루오로사이클로프로판-1-카복사미드(1.47 g, 5.87 m㏖)의 용액에 첨가하였다. 이후, 반응물을 65℃에서 6시간 동안 가열하였다. 반응물을 0℃까지 냉각시키고, MeOH(가스 방출)로 조심스럽게 켄칭시켰다. 이후, 용액을 감압 하에 농축시키고, 18시간 동안 냉동고에서 저장하였다. 잔류물을 MeOH(6 ㎖) 중에 용해시키고, 65℃에서 3시간 동안 가열하였다. 용액을 실온까지 냉각시키고, 이후 감압 하에 농축시켰다. 수득된 잔류물을 플래시 실리카 크로마토그래피(용리 구배 DCM 중 0% 내지 16% 메탄올)로 정제하여 무색의 오일로서 (R)-3-(2-(((1-플루오로사이클로프로필)메틸)아미노)프로필)-2-메틸아닐린(1.14 g, 82%)을 수득하였다. 1H NMR (300 MHz, DMSO-d 6, 27℃) 0.54 - 0.70 (2H, m), 0.79 - 1.02 (5H, m), 1.64 (1H, br. s.), 1.99 (3H, s), 2.36 (1H, dd), 2.69 - 2.97 (4H, m), 4.68 (2H, s), 6.36 (1H, d), 6.49 (1H, d), 6.79 (1H, t). m/z: ES+ [M+H]+ 237.
(1
S
,3
R
)-1-(5-브로모피리딘-2-일)-2-((1-플루오로사이클로프로필)메틸)-3,5-디메틸-1,2,3,4-테트라하이드로이소퀴놀린-6-아민의 제법
5-브로모피콜린알데하이드(507 ㎎, 2.72 m㏖)를 아세트산(7028 ㎕) 및 물(143 ㎕) 중 (R)-3-(2-(((1-플루오로사이클로프로필)메틸)아미노)프로필)-2-메틸아닐린(322 ㎎, 1.36 m㏖)의 교반된 용액에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 90℃까지 가열하고, 이 온도에서 5시간 동안 교반하였다. 혼합물을 농축시키고, EtOAC(50 ㎖) 및 포화 NaHCO3(25 ㎖) 중에 용해시켰다. 수성 층을 EtOAc(2 x 50 ㎖)로 추출하였다. 합한 유기물을 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 DCM(20 ㎖) 및 1 M HCl(20 ㎖) 중에 용해시켰다. 혼합물을 30분 동안 격렬히 교반하였다. 층을 분리시키고, 수성 층을 DCM(20 ㎖)으로 세척하였다. 수성 층을 고체 NaOH에 의해 pH 10 초과로 염기성화시켰다. 용액을 DCM(3 x 25 ㎖)으로 추출하였다. 합한 유기물을 건조시키고(상 분리기 카트리지), 농축시켜 미정제 생성물을 수득하였다. 미정제 생성물을 플래시 실리카 크로마토그래피(용리 구배 헵탄 중 0% 내지 60% EtOAc)로 정제하였다. 순수한 분획을 증발 건조시켜 황색의 검으로서 (1S,3R)-1-(5-브로모피리딘-2-일)-2-((1-플루오로사이클로프로필)메틸)-3,5-디메틸-1,2,3,4-테트라하이드로이소퀴놀린-6-아민(217 ㎎, 39%)을 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, CDCl3, 27℃) 0.33 - 0.47 (1H, m), 0.49 - 0.6 (1H, m), 0.89 - 1.01 (2H, m), 1.04 (3H, d), 2.06 (3H, s), 2.55 - 2.64 (2H, m), 2.92 - 3.04 (2H, m), 3.51 (2H, s), 3.65 - 3.72 (1H, m), 4.88 (1H, s), 6.45 (1H, d), 6.58 (1H, d), 7.31 (1H, dd), 7.66 (1H, dd), 8.54 (1H, dd). m/z: ES+ [M+H]+ 404.
(6
S
,8
R
)-6-(5-브로모피리딘-2-일)-7-((1-플루오로사이클로프로필)메틸)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3
H
-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린의 제법
프로피온산(8291 ㎕) 중 (1S,3R)-1-(5-브로모피리딘-2-일)-2-((1-플루오로사이클로프로필)메틸)-3,5-디메틸-1,2,3,4-테트라하이드로이소퀴놀린-6-아민(295 ㎎, 0.73 m㏖)을 -20℃까지 냉각시켰다. 물(829 ㎕) 중 아질산나트륨(50.3 ㎎, 0.73 m㏖)을 2분 내지 3분에 걸쳐 적가하였다. 반응 혼합물을 -20℃에서 45분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 빙냉 EtOAc(30 ㎖)로 희석하였다. 반응 혼합물을 포화 NaHCO3(40 ㎖)에 부었다. 혼합물을 5분 동안 격렬히 교반하였다. 층을 분리시키고, 유기 층을 포화 NaHCO3(2 x 30 ㎖)으로 세척하였다. 합한 수성 층을 EtOAc(2 x 30 ㎖)로 역추출하였다. 합한 유기 상을 건조시키고(Na2SO4), 농축시켜 갈색의 오일로서 미정제 생성물을 수득하였다. 미정제 물질을 헵탄 중 0% 내지 45% EtOAc에 의해 용리되는 플래시 실리카 칼럼 크로마토그래피로 정제하여 오렌지색의 고체로서 (6S,8R)-6-(5-브로모피리딘-2-일)-7-((1-플루오로사이클로프로필)메틸)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린(107 ㎎, 35%)을 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, CDCl3, 27℃) 0.35 - 0.44 (1H, m), 0.51 - 0.63 (1H, m), 0.92 - 1.07 (2H, m), 1.09 (2H, d), 2.69 (1H, dd), 2.96 (1H, dd), 3.01 - 3.10 (1H, m), 3.33 - 3.49 (2H, m), 3.78 - 3.89 (1H, m), 5.03 (1H, s), 6.95 (1H, d), 7.19 (1H, d), 7.34 - 7.39 (1H, m), 7.68 (1H, dd), 8.07 (1H, d), 8.58 (1H, dd). m/z: ES+ [M+H]+ 415 및 417.
(6
S
,8
R
)-6-(5-브로모피리딘-2-일)-7-((1-플루오로사이클로프로필)메틸)-8-메틸-3-(테트라하이드로-2
H
-피란-2-일)-6,7,8,9-테트라하이드로-3
H
-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린의 제법
3,4-디하이드로-2H-피란(0.029 ㎖, 0.32 m㏖)을 DCM(2 ㎖) 중 (6S,8R)-6-(5-브로모피리딘-2-일)-7-((1-플루오로사이클로프로필)메틸)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린(107 ㎎, 0.26 m㏖) 및 4-메틸벤젠설폰산 수화물(9.80 ㎎, 0.05 m㏖)의 용액에 첨가하고, 반응물을 3시간 동안 45℃까지 가열하였다. 추가로 3,4-디하이드로-2H-피란(0.235 ㎖, 2.58 m㏖) 및 4-메틸벤젠설폰산 수화물(49.0 ㎎, 0.26 m㏖)을 첨가하고, 혼합물을 45℃에서 16시간 동안 가열하였다. 반응물을 DCM으로 희석하고, 포화 NaHCO3 용액으로 세척하였다. 유기 상을 건조시키고 증발시킨 후, 미정제물을 실리카(1:1 EtOAc/헵탄)의 플러그를 통해 통과시켰다. 여과액을 증발시켜 갈색의 오일로서 (6S,8R)-6-(5-브로모피리딘-2-일)-7-((1-플루오로사이클로프로필)메틸)-8-메틸-3-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린을 수득하고, 이것을 추가 정제 없이 사용하였다. m/z: ES+ [M+H]+ 499.
실시예 4
N
-(4-((6
S
,8
R
)-7-(2-플루오로-3-메톡시-2-메틸프로필)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3
H
-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)-3-메톡시페닐)-1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-아민(부분입체이성질체 혼합물)
1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-아민(50 ㎎, 0.37 m㏖), (6S,8R)-6-(4-브로모-2-메톡시페닐)-7-(2-플루오로-3-메톡시-2-메틸프로필)-8-메틸-3-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린 및 (6S,8R)-6-(4-브로모-2-메톡시페닐)-7-(2-플루오로-3-메톡시-2-메틸프로필)-8-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-6,7,8,9-테트라하이드로-2H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린의 혼합물(140 ㎎, 0.25 m㏖), 탄산세슘(163 ㎎, 0.50 m㏖) 및 [(2-디-사이클로헥실포스피노-3,6-디메톡시-2',4',6'-트리이소프로필-1,1'-비페닐)-2-(2'-아미노-1,1'-비페닐)]팔라듐(II) 메탄설포네이트(BrettPhos Pd G3)(23 ㎎, 0.02 m㏖)를 1,4-디옥산(2 ㎖) 중에 현탁시키고, 마이크로파 관으로 밀봉하였다. 반응물을 마이크로파 조사 하에 4시간 동안 100℃까지 가열하였다. 반응 혼합물을 DCM(25 ㎖)으로 희석하고, 물(25 ㎖)로 세척하였다. 유기 층을 증발시켰다. 잔류물을 DCM(3 ㎖) 및 TFA(1 ㎖) 중에 용해시켰다. 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하고, 이후 DCM과 2 M NaOH(각각 20 ㎖) 사이에 분배하였다. 유기 상을 증발시키고, 미정제 생성물을 용리제로서 물(1% NH3 함유) 및 MeCN의 점감적으로 극성인 혼합물을 사용하여 분취용 HPLC(Waters CSH C18 OBD 칼럼, 5 μ 실리카, 30 ㎜ 직경, 100 ㎜ 길이)로 정제하여 부분입체이성질체의 혼합물의 검으로서 N-(4-((6S,8R)-7-(2-플루오로-3-메톡시-2-메틸프로필)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)-3-메톡시페닐)-1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-아민(26.0 ㎎, 20%)을 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6, 27℃) 0.94 - 0.99 (3H, m), 1.16 - 1.24 (3H, m), 1.64 (2H, dq), 2.39 - 2.47 (3H, m), 2.70 (2H, t), 2.74 - 2.84 (2H, m), 3.03 - 3.21 (2H, m), 3.24 (3H, d), 3.48 (2H, dd), 3.58 - 3.64 (2H, m), 3.79 (3H, d), 3.88 - 3.94 (1H, m), 4.44 (2H, dt), 5.17 (1H, d), 5.88 (1H, td), 5.97 (1H, dd), 6.16 (1H, d), 6.32 - 6.38 (1H, m), 6.63 (1H, t), 7.16 (1H, dd), 8.02 (1H, s), 12.91 (1H, s). 19F NMR (471 MHz, DMSO-d 6, 27℃) -218.19, -149.21, -148.22. m/z: ES+ [M+H]+ 528.
(6S,8R)-6-(4-브로모-2-메톡시페닐)-7-(2-플루오로-3-메톡시-2-메틸프로필)-8-메틸-3-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린 및 (6S,8R)-6-(4-브로모-2-메톡시페닐)-7-(2-플루오로-3-메톡시-2-메틸프로필)-8-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-6,7,8,9-테트라하이드로-2H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린의 혼합물을 하기와 같이 제조하였다;
N
-((
R
)-1-(3-브로모-2-메틸페닐)프로판-2-일)-2-플루오로-3-메톡시-2-메틸프로판-1-아민의 부분입체이성질체 혼합물의 제법
트리플루오로메탄설폰산 무수물(2.148 ㎖, 12.79 m㏖)을 디클로로메탄(50 ㎖) 중에 용해된 ((2-플루오로-3-메톡시-2-메틸프로폭시)메탄트리일)트리벤젠(4.44 g, 12.18 m㏖)에 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반하였다. 이후, 트리에틸실란(2.140 ㎖, 13.40 m㏖)을 첨가하고, 혼합물을 추가로 30분 동안 교반하였다. 반응물을 농축시켜 미정제 라세미 2-플루오로-3-메톡시-2-메틸프로필 트리플루오로메탄설포네이트를 수득하고, 이것을 추가 정제 없이 다음 단계에서 바로 사용하였다.
DIPEA(5.36 ㎖, 30.68 m㏖)를 질소 하에 실온에서 1,4-디옥산(60 ㎖) 중 (R)-1-(3-브로모-2-메틸페닐)프로판-2-아민(2.80 g, 12.3 m㏖) 및 2-플루오로-3-메톡시-2-메틸프로필 트리플루오로메탄설포네이트(3.12 g, 12.3 m㏖)에 첨가하였다[발열]. 생성된 혼합물을 85℃에서 24시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 냉각되게 하고, 반응 혼합물을 증발시켰다. 미정제 생성물을 플래시 실리카 크로마토그래피(용리 구배 헵탄 중 0% 내지 60% EtOAc)로 정제하여 부분입체이성질체의 혼합물로서 오일로서 N-((R)-1-(3-브로모-2-메틸페닐)프로판-2-일)-2-플루오로-3-메톡시-2-메틸프로판-1-아민(2.480 g, 73%)을 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, CDCl3, 27℃) 1.02 - 1.07 (3H, m), 1.31 (1.5H, d), 1.32 (1.5H, d), 2.41 (3H, s), 2.57 - 2.66 (1H, m), 2.68 - 2.90 (4H, m), 3.34 (1.5H, d), 3.35 (1.5H, d), 3.38 - 3.46 (2H, m), 6.96 (1H, t), 7.07 (1H, d), 7.42 (1H, d). 보이지 않는 NH. 19F NMR (471 MHz, CDCl3, 27℃) -157.94, -157.53. m/z: ES+ [M+H]+ 332/334.
3-((
R
)-2-((2-플루오로-3-메톡시-2-메틸프로필)아미노)프로필)-2-메틸아닐린의 부분입체이성질체 혼합물의 제법
트리스(디벤질리덴아세톤)디팔라듐(0)(0.205 g, 0.22 m㏖) 및 (±)-2,2'-비스(디페닐포스피노)-1,1'-비나프탈렌(0.279 g, 0.45 m㏖)을 탈기된 톨루엔(30 ㎖) 중 N-((R)-1-(3-브로모-2-메틸페닐)프로판-2-일)-2-플루오로-3-메톡시-2-메틸프로판-1-아민의 부분입체이성질체 혼합물(2.48 g, 7.46 m㏖), 벤조페논 이민(1.487 g, 8.21 m㏖) 및 나트륨 tert-부톡사이드(1.076 g, 11.20 m㏖)의 현탁액에 첨가하고, 반응물을 3시간 동안 90℃까지 가열하였다. 냉각 후, 톨루엔을 증발시켰다. 잔류물을 DCM(250 ㎖) 중에 용해시키고, 물(250 ㎖)로 세척하였다. 수성물을 DCM(100 ㎖)으로 추출하고, 합한 유기물을 농축시켜 대략 50 ㎖가 되게 하였다. 2 M HCl 용액(50 ㎖)을 첨가하고, 이상성 혼합물을 30분 동안 격렬히 교반하였다. 층을 분리시키고, 수성 상을 DCM으로 추출하였다. 수성 상을 2 M 수성 NaOH에 의해 염기성화시켰다. 이것을 DCM(2 x 250 ㎖)으로 추출하고, 합한 DCM 추출물을 증발시켜 부분입체이성질체의 혼합물의 오일로서 3-((R)-2-((2-플루오로-3-메톡시-2-메틸프로필)아미노)프로필)-2-메틸아닐린(2.00 g, 100%)을 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, CDCl3, 27℃) 1.04 (3H, d), 1.31 (1.5H, d), 1.32 (1.5H, d), 2.11 (3H, s), 2.53 - 2.60 (1H, m), 2.70 - 2.89 (4H, m), 3.35 (2H, d), 3.36 (1.5H, d), 3.43 (1.5H, dd), 3.58 (2H, s), 6.57 (1H, d), 6.61 (1H, d), 6.94 (1H, t), 7.58 (1H, s). 19F NMR (471 MHz, CDCl3, 27℃) -157.61, -157.30. m/z: ES+ [M+H]+ 269.
(1
S
,3
R
)-1-(4-브로모-2-메톡시페닐)-2-(2-플루오로-3-메톡시-2-메틸프로필)-3,5-디메틸-1,2,3,4-테트라하이드로이소퀴놀린-6-아민의 부분입체이성질체 혼합물의 제법
3-((2R)-2-((2-플루오로-3-메톡시-2-메틸프로필)아미노)프로필)-2-메틸아닐린의 부분입체이성질체 혼합물(2.00 g, 7.45 m㏖) 및 4-브로모-2-메톡시벤즈알데하이드(3.37 g, 15.6 m㏖)를 아세트산(30 ㎖) 및 물(0.671 ㎖, 37.3 m㏖) 중에서 밤새 70℃까지 가열하였다. 냉각 후, 아세트산을 증발시켰다. 잔류물을 EtOAc(40 ㎖) 중에 용해시키고, 2 N HCl 용액(40 ㎖)을 첨가하였다. 이상성 혼합물을 30분 동안 교반하고, 이후 층을 분리시켰다. 유기 상을 물로 추출하고, 이후 합한 수성 상을 2 N NaOH 용액의 첨가에 의해 염기성화시키고, DCM(2 x 200 ㎖)으로 추출하였다. 합한 DCM 층을 증발시키고, 미정제 생성물을 플래시 실리카 크로마토그래피(용리 구배 헵탄 중 0% 내지 50% EtOAc)로 정제하여 단일 부분입체이성질체로서 제1 (1S,3R)-1-(4-브로모-2-메톡시페닐)-2-(2-플루오로-3-메톡시-2-메틸프로필)-3,5-디메틸-1,2,3,4-테트라하이드로이소퀴놀린-6-아민(0.354 g, 10%)을 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6, 27℃) 0.91 (3H, d), 1.22 (3H, d), 1.94 (3H, s), 2.26 - 2.40 (2H, m), 2.65 - 2.78 (2H, m), 3.16 - 3.25 (4H, m), 3.42 (1H, dd), 3.85 (3H, s), 4.61 (2H, s), 5.10 (1H, s), 6.24 (1H, d), 6.37 (1H, d), 6.61 (1H, d), 6.95 (1H, dd), 7.15 (1H, d). 물에 의해 부분적으로 모호한 1개의 양성자. 19F NMR (471 MHz, DMSO-d 6, 27℃) -149.65. m/z: ES+ [M+H]+ 465/467. 이어서, (1S,3R)-1-(4-브로모-2-메톡시페닐)-2-(-2-플루오로-3-메톡시-2-메틸프로필)-3,5-디메틸-1,2,3,4-테트라하이드로이소퀴놀린-6-아민의 부분입체이성질체의 혼합물(1.700 g, 49%)을 함유하는 분획. 19F NMR (471 MHz, DMSO-d 6, 27℃) -149.65, -148.78. m/z: ES+ [M+H]+ 465/467. 이어서, 단일 부분입체이성질체로서 (1S,3R)-1-(4-브로모-2-메톡시페닐)-2-(2-플루오로-3-메톡시-2-메틸프로필)-3,5-디메틸-1,2,3,4-테트라하이드로이소퀴놀린-6-아민의 제2 부분입체이성질체(0.274 g, 8%)를 함유하는 분획. 1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6, 27℃) 0.91 (3H, d), 1.16 (3H, d), 1.93 (3H, s), 2.26 - 2.4 (2H, m), 2.63 - 2.74 (2H, m), 3.23 (3H, s), 3.35 (1H, dd), 3.47 (1H, dd), 3.85 (3H, s), 4.60 (2H, s), 5.09 (1H, s), 6.24 (1H, d), 6.37 (1H, d), 6.61 (1H, d), 6.93 (1H, dd), 7.15 (1H, d). 물에 의해 모호한 1개의 양성자. 19F NMR (471 MHz, DMSO-d 6, 27℃) -148.78. m/z: ES+ [M+H]+ 465/467. 모두 검으로서.
(6
S
,8
R
)-6-(4-브로모-2-메톡시페닐)-7-(-2-플루오로-3-메톡시-2-메틸프로필)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3
H
-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린의 부분입체이성질체 혼합물의 제법
물(1.0 ㎖) 중 아질산나트륨(0.277 g, 4.02 m㏖)의 용액을 -10℃에서 프로피온산(15 ㎖) 중 (1S,3R)-1-(4-브로모-2-메톡시페닐)-2-(2-플루오로-3-메톡시-2-메틸프로필)-3,5-디메틸-1,2,3,4-테트라하이드로이소퀴놀린-6-아민의 부분입체이성질체 혼합물(1.70 g, 3.65 m㏖)의 용액에 첨가하였다. 반응물을 1시간 동안 교반하고, 이후 빙냉 EtOAc(20 ㎖)를 첨가하였다. 반응물을 수성 NaHCO3 용액(30 ㎖)의 첨가에 의해 켄칭시키고, 15분 동안 교반한 후, 실온까지 가온되게 하였다. 유기 상을 수성 NaHCO3 용액(30 ㎖) 및 염수(20 ㎖)로 세척하고, 건조시키고(Na2SO4), 여과시키고 증발시켰다. 미정제 생성물을 플래시 실리카 크로마토그래피(용리 구배 헵탄 중 0% 내지 50% EtOAc)로 정제하여 부분입체이성질체의 혼합물로서 갈색의 고체로서 (6S,8R)-6-(4-브로모-2-메톡시페닐)-7-(2-플루오로-3-메톡시-2-메틸프로필)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린(0.950 g, 55%)을 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6, 27℃) 0.95 - 0.97 (3H, m), 1.14 - 1.23 (3H, m), 2.31 - 2.40 (1H, m), 2.78 - 2.88 (2H, m), 3.11 - 3.21 (2.5H, s), 3.23 (1.5H, s), 3.32 - 3.38 (1H, m), 3.40 - 3.52 (2H, m), 3.88 (1.5H, s), 3.89 (1.5H, s), 5.28 (1H, s), 6.59 - 6.69 (2H, m), 6.92 - 6.96 (1H, m), 7.16 - 7.22 (2H, m), 8.05 (1H, s), 12.96 (1H, s). 19F NMR (471 MHz, DMSO-d 6, 27℃) -149.65, -148.68. m/z: ES+ [M+H]+ 476/478.
(6
S
,8
R
)-6-(4-브로모-2-메톡시페닐)-7-(2-플루오로-3-메톡시-2-메틸프로필)-8-메틸-3-(테트라하이드로-2
H
-피란-2-일)-6,7,8,9-테트라하이드로-3
H
-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린 및 (6
S
,8
R
)-6-(4-브로모-2-메톡시페닐)-7-(2-플루오로-3-메톡시-2-메틸프로필)-8-메틸-2-(테트라하이드로-2
H
-피란-2-일)-6,7,8,9-테트라하이드로-2
H
-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린의 혼합물의 제법
4-메틸벤젠설폰산 수화물(0.038 g, 0.20 m㏖)을 DCM(30 ㎖) 중 (6S,8R)-6-(4-브로모-2-메톡시페닐)-7-(2-플루오로-3-메톡시-2-메틸프로필)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린의 부분입체이성질체 혼합물(0.950 g, 1.99 m㏖) 및 3,4-디하이드로-2H-피란(0.546 ㎖, 5.98 m㏖)의 용액에 첨가하고, 혼합물을 40℃에서 밤새 가열하였다. 추가로 3,4-디하이드로-2H-피란(0.546 ㎖, 5.98 m㏖) 및 4-메틸벤젠설폰산 수화물(0.038 g, 0.20 m㏖)을 첨가하였다. 7시간 동안 계속해서 가열하였다. 3,4-디하이드로-2H-피란(0.546 ㎖, 5.98 m㏖) 및 4-메틸벤젠설폰산 수화물(0.038 g, 0.20 m㏖)의 추가 부분을 첨가하고, 반응물을 밤새 가열하였다. 반응 혼합물을 DCM(50 ㎖)으로 희석하고, 포화 수성 NaHCO3(50 ㎖)으로 세척하였다. 유기 상을 증발시켜 어두운 갈색의 오일이 되게 하고, 미정제 생성물을 플래시 실리카 크로마토그래피(용리 구배 헵탄 중 0% 내지 35% EtOAc)로 정제하여 부분입체이성질체의 혼합물로서 폼으로서 (6S,8R)-6-(4-브로모-2-메톡시페닐)-7-(2-플루오로-3-메톡시-2-메틸프로필)-8-메틸-3-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린 및 (6S,8R)-6-(4-브로모-2-메톡시페닐)-7-(2-플루오로-3-메톡시-2-메틸프로필)-8-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-6,7,8,9-테트라하이드로-2H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린(0.960 g, 86%)의 혼합물을 수득하였다. 19F NMR (471 MHz, DMSO-d 6, 27℃) -149.79, -149.74, -149.69, -149.65, -148.77, -148.73, -148.69, -148.66. m/z: ES+ [M+H]+ 560/562.
실시예 5
3-((6
S
,8
R
)-6-(2,6-디플루오로-4-((1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일)아미노)페닐)-8-메틸-3,6,8,9-테트라하이드로-7
H
-피라졸로[4,3-
f
]이소퀴놀린-7-일)-2,2-디플루오로프로판-1-올
THF 중 TBAF(1 M; 160 ㎕, 0.16 m㏖)를 실온에서 THF(0.5 ㎖) 중 N-(4-((6S,8R)-7-(3-((tert-부틸디페닐실릴)옥시)-2,2-디플루오로프로필)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)-3,5-디플루오로페닐)-1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-아민(80 ㎎, 0.10 m㏖)의 용액에 첨가하였다. 4시간 후, 반응물을 감압 하에 농축시키고, 생성된 잔류물을 플래시 실리카 크로마토그래피(용리 구배 DCM 중 30% 내지 90%(1% NH4OH를 함유하는 DCM 중 10% MeOH))로 정제하였다. 생성물 분획을 감압 하에 농축시키고, 생성된 잔류물을 동일한 조건을 이용하여 재정제하였다. 생성물 분획을 다시 감압 하에 농축시키고, 생성된 잔류물을 용리제(7분에 걸쳐 40% 내지 70%)로서 물(0.2% 수산화암모늄 함유) 및 MeCN의 점감적으로 극성인 혼합물을 사용하여 분취용 HPLC(Waters XBridge Prep C18 OBD 칼럼, 5 μ 실리카, 19 ㎜ 직경, 100 ㎜ 길이)로 정제하여 백색의 고체로서 3-((6S,8R)-6-(2,6-디플루오로-4-((1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일)아미노)페닐)-8-메틸-3,6,8,9-테트라하이드로-7H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-7-일)-2,2-디플루오로프로판-1-올(17 ㎎, 31%)을 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6, 27℃) 1.02 (3H, d), 1.59 - 1.69 (2H, m), 2.44 (2H, t), 2.56 - 2.67 (1H, m), 2.72 (2H, t), 2.88 (1H, dd), 3.02 - 3.13 (1H, m), 3.17 (1H, dd), 3.49 - 3.56 (1H, m), 3.57 - 3.69 (3H, m), 3.91 (1H, tdt), 4.44 (2H, dt), 5.08 (1H, s), 5.25 (1H, br. s), 6.07 (2H, d), 6.64 (1H, d), 6.69 (1H, d), 7.20 (1H, d), 8.04 (1H, s), 12.95 (1H, br. s). 관찰되지 않는 1개의 H. m/z: ES+ [M+H]+ 524.
N-(4-((6S,8R)-7-(3-((tert-부틸디페닐실릴)옥시)-2,2-디플루오로프로필)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)-3,5-디플루오로페닐)-1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-아민을 하기와 같이 제조하였다:
3-((
tert
-부틸디페닐실릴)옥시)-2,2-디플루오로프로판-1-올의 제법
광유 중 NaH(60 중량%; 343 ㎎, 8.58 m㏖)를 0℃에서 THF(32 ㎖) 중 2,2-디플루오로프로판-1,3-디올(874 ㎎, 7.80 m㏖)의 교반된 용액에 일 부분으로 첨가하였다. 반응물을 실온까지 가온되게 하고, 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 0℃까지 다시 냉각시키고, tert-부틸디페닐클로로실란(2.0 ㎖, 7.8 m㏖)을 주사기를 통해 적가하였다. 반응 혼합물을 1시간에 걸쳐 실온까지 가온되게 하고, 이후 물로 켄칭시키고, EtOAc로 추출하였다. 유기 층을 Na2SO4로 건조시키고, 여과시키고, 여과액을 감압 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 헥산 중 등용매 5% 에틸 아세테이트에 의해 용리되는 플래시 실리카 크로마토그래피로 정제하여 무색의 오일로서 3-((tert-부틸디페닐실릴)옥시)-2,2-디플루오로프로판-1-올(1.94, 71%)을 수득하였다. 1H NMR (300 MHz, 클로로폼-d, 27℃) δ ppm 1.03 - 1.14 (9H, s), 3.87 - 3.93 (4H, m), 7.37 - 7.44 (6H, m), 7.64 - 7.66 (4H, m).
3-((
tert
-부틸디페닐실릴)옥시)-2,2-디플루오로프로필 트리플루오로메탄 설포네이트의 제법
DCM(18 ㎖) 중 3-((tert-부틸디페닐실릴)옥시)-2,2-디플루오로프로판-1-올(1.94 g, 5.55 m㏖) 및 2,6-디메틸피리딘(1.94 ㎖, 16.6 m㏖)의 용액을 -10℃(염/얼음 배쓰)까지 냉각시켰다. 트리플루오로메탄설폰산 무수물(1.88 ㎖, 11.1 m㏖)을 10분에 걸쳐 천천히 적가하였다. 반응물을 이 조건 하에서 2시간 동안 유지시켰다. 이후, 반응물을 물, 수성 HCl(1 N; 100 ㎖) 및 포화 수성 중탄산나트륨으로 세척하였다. 유기 층을 MgSO4 위에서 건조시키고, 여과시키고 감압 하에 농축시켜 적색의 오일로서 3-((tert-부틸디페닐실릴)옥시)-2,2-디플루오로프로필 트리플루오로메탄설포네이트(2.68 g, 100%)를 수득하였다. 1H NMR (300 MHz, 클로로폼-d, 27℃) 1.03 - 1.14 (9H, s), 3.90 (2H, t), 4.76 (2H, t), 7.39 - 7.56 (6H, m), 7.59 - 7.75 (4H, m).
3-((tert-부틸디페닐실릴)옥시)-2,2-디플루오로프로필 트리플루오로메탄 설포네이트의 제법
3-((tert-부틸디페닐실릴)옥시)-2,2-디플루오로프로필 트리플루오로메탄설포네이트(1.92 g, 3.98 m㏖)를 1,4-디옥산(15 ㎖) 중 (R)-3-(2-아미노프로필)-2-메틸아닐린(0.784 g, 4.77 m㏖) 및 DIPEA(1.031 ㎖, 5.97 m㏖)의 용액에 첨가하였다. 반응물을 85℃에서 18시간 동안 가열하였다. 냉각 후, 반응물을 DCM으로 희석하고, 물로 세척하였다. 수성 층을 DCM으로 추출하고, 합한 유기 층을 황산마그네슘 위에서 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 실리카 크로마토그래피(용리 구배 DCM 중 0% 내지 4% 메탄올성 암모니아)로 정제하였다. 순수한 분획을 농축 건조시켜 황색의 오일로서 (R)-3-(2-((3-((tert-부틸디페닐실릴)옥시)-2,2-디플루오로프로필)아미노)프로필)-2-메틸아닐린(1.97 g, 100%)을 수득하였다. 1H NMR (300 MHz, 메탄올-d 4, 27℃) δ ppm 0.97 - 1.12 (12H, m), 2.10 (3H, s), 2.53 - 2.63 (1H, m), 2.74 - 2.84 (1H, m), 2.86 - 2.99 (1H, m), 3.00 - 3.19 (2H, m), 3.80 (2H, td), 6.53 (1H, d), 6.63 (1H, d), 6.86 (1H, t), 7.38 - 7.50 (6H, m), 7.64 - 7.72 (4H, m). m/z: ES+ [M+H]+ 497.
(1
S
,3
R
)-1-(4-브로모-2,6-디플루오로페닐)-2-(3-((
tert
-부틸디페닐실릴) 옥시)-2,2-디플루오로프로필)-3,5-디메틸-1,2,3,4-테트라하이드로이소퀴놀린-6-아민의 제법
4-브로모-2,6-디플루오로벤즈알데하이드(1.55 g, 7.02 m㏖)를 아세트산(17 ㎖) 및 물(0.32 ㎖, 18 m㏖) 중 (R)-3-(2-((3-((tert-부틸디페닐실릴)옥시)-2,2-디플루오로프로필)아미노)프로필)-2-메틸아닐린(1.74 g, 3.51 m㏖)의 용액에 첨가하고, 반응물을 80℃에서 밤새 가열하였다. 반응물을 감압 하에 농축시키고, 잔류물을 EtOAc와 포화 수성 NaHCO3 사이에 분배하였다. 유기 층을 감압 하에 농축시키고, 플래시 실리카 크로마토그래피(용리 구배 헥산 중 20% 내지 80% 에틸 아세테이트)로 정제하여 고체로서 (1S,3R)-1-(4-브로모-2,6-디플루오로페닐)-2-(3-((tert-부틸디페닐실릴)옥시)-2,2-디플루오로프로필)-3,5-디메틸-1,2,3,4-테트라하이드로이소퀴놀린-6-아민(1.33 g, 54.5%)을 수득하였다.
1H NMR (300 MHz, 클로로폼-d, 27℃) δ ppm 1.04 - 1.11 (12H, m), 2.25 - 2.38 (3H, m), 2.53 - 2.65 (1H, m), 2.73 (1H, q), 2.86 - 3.03 (1H, m), 3.15 - 3.38 (1H, m), 3.52 - 3.71 (2H, m), 3.85 - 4.01 (1H, m), 5.31 (1H, d), 6.58 - 6.64 (1H, m), 6.67 - 6.73 (1H, m), 6.88 - 6.95 (2H, m), 7.18 - 7.24 (2H, m), 7.37 - 7.50 (6H, m), 7.60 - 7.70 (4H, m). m/z: ES+ [M+H]+ 699.
(6
S
,8
R
)-6-(4-브로모-2,6-디플루오로페닐)-7-(3-((
tert
-부틸디페닐실릴) 옥시)-2,2-디플루오로프로필)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3
H
-피라졸로[4,3-
f
]이소퀴놀린의 제법
물(0.900 ㎖) 중 아질산나트륨(0.130 g, 1.89 m㏖)을 -8℃(염/얼음 배쓰)에서 프로피온산(9 ㎖) 중 (1S,3R)-1-(4-브로모-2,6-디플루오로페닐)-2-(3-((tert-부틸디페닐실릴)옥시)-2,2-디플루오로프로필)-3,5-디메틸-1,2,3,4-테트라하이드로이소퀴놀린-6-아민(1.32 g, 1.89 m㏖)의 용액에 적가하고, 이 조건 하에서 20분 동안 교반하였다. 반응물을 에틸 아세테이트(20 ㎖, -10℃까지 예비냉각)로 희석하고, 0℃에서 15분에 걸쳐 포화 수성 NaHCO3(30 ㎖, -10℃까지 예비냉각)의 느린 첨가에 의해 켄칭시켰다. 혼합물을 실온까지 가온되게 하고, 이 조건 하에서 18시간 동안 유지시켰다. 유기 층을 분리시키고, 수성 층을 EtOAc로 추출하였다. 합한 유기 층을 포화 수성 NaHCO3 및 물로 세척하고, 황산나트륨 위에서 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 실리카 크로마토그래피(용리 구배 헥산 중 15% 내지 50% 에틸 아세테이트)로 정제하여 담갈색의 고체로서 (6S,8R)-6-(4-브로모-2,6-디플루오로페닐)-7-(3-((tert-부틸디페닐실릴)옥시)-2,2-디플루오로프로필)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린(0.520 g, 38.8%)을 수득하였다. 1H NMR (300 MHz, 클로로폼-d, 27℃) δ ppm 1.07 (9H, s), 1.12 (3H, d), 2.72 - 2.92 (2H, m), 3.21 - 3.39 (2H, m), 3.51 - 3.66 (1H, m), 3.67 - 3.79 (1H, m), 3.86 - 4.00 (1H, m), 5.37 (1H, s), 6.81 (1H, d), 6.87 - 6.98 (2H, m), 7.25 - 7.29 (1H, m), 7.35 - 7.50 (6H, m), 7.59 - 7.70 (4H, m), 8.14 (1H, s). 관찰되지 않는 인돌 NH. m/z: ES+ [M+H]+ 710.
(6
S
,8
R
)-6-(4-브로모-2,6-디플루오로페닐)-7-(3-((
tert
-부틸디페닐실릴) 옥시)-2,2-디플루오로프로필)-8-메틸-3-(테트라하이드로-2
H
-피란-2-일)-6,7,8,9-테트라하이드로-3
H
-피라졸로[4,3-
f
]이소퀴놀린의 제법
3,4-디하이드로-2H-피란(95 ㎕, 1.04 m㏖)을 DCM(3.5 ㎖) 중 (6S,8R)-6-(4-브로모-2,6-디플루오로페닐)-7-(3-((tert-부틸디페닐실릴)옥시)-2,2-디플루오로프로필)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린(492 ㎎, 0.69 m㏖) 및 파라-톨루엔설폰산 1수화물(13 ㎎, 0.07 m㏖)의 용액에 첨가하고, 반응물을 환류 조건 하에서 6시간 동안 가열하였다. 냉각 후, 반응물을 포화 수성 NaHCO3으로해 세척하고, Na2SO4 위에서 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 플래시 실리카 크로마토그래피(용리 구배 헥산 중 10% 내지 30% 에틸 아세테이트)로 정제하여 담갈색의 검의 고체로서 (6S,8R)-6-(4-브로모-2,6-디플루오로페닐)-7-(3-((tert-부틸디페닐실릴)옥시)-2,2-디플루오로프로필)-8-메틸-3-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린(474 ㎎, 86%)을 수득하였다. 1H NMR (300 MHz, 클로로폼-d, 27℃) 1.06 (9H, s), 1.19 - 1.25 (3H, m), 1.74 - 1.84 (3H, m), 2.09 - 2.20 (2H, m), 2.49 - 2.67 (1H, m), 2.84 - 2.96 (2H, m), 3.27 - 3.45 (2H, m), 3.61 - 3.87 (3H, m), 4.04 (2H, d), 5.52 (1H, s), 5.66 - 5.72 (1H, m), 6.78 (1H, d), 6.94 (2H, d), 7.32 (1H, d), 7.36 - 7.50 (6H, m), 7.60 - 7.68 (4H, m), 8.04 (1H, s).
tert
-부틸 3-((4-((6
S
,8
R
)-7-(3-((
tert
-부틸디페닐실릴)옥시)-2,2-디플루오로프로필)-8-메틸-3-(테트라하이드로-2
H
-피란-2-일)-6,7,8,9-테트라하이드로-3
H
-피라졸로[4,3-
f
]이소퀴놀린-6-일)-3,5-디플루오로페닐)아미노)아제티딘-1-카복실레이트의 제법
디옥산(3 ㎖) 중 (6S,8R)-6-(4-브로모-2,6-디플루오로페닐)-7-(3-((tert-부틸디페닐실릴)옥시)-2,2-디플루오로프로필)-8-메틸-3-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린(0.474 g, 0.600 m㏖), tert-부틸 3-아미노아제티딘-1-카복실레이트(0.15 g, 0.89 m㏖), Xantphos(0.069 g, 0.12 m㏖), Pd2(dba)3(0.06 g, 0.06 m㏖) 및 탄산세슘(0.389 g, 1.19 m㏖)의 탈기된 혼합물을 115℃에서 4시간 동안 가열하였다. 이후, 반응물을 감압 하에 농축시키고, 생성된 잔류물을 실리카 겔에 흡착시키고, 플래시 실리카 크로마토그래피(용리 구배 헥산 중 5% 내지 50% 에틸 아세테이트)로 정제하여 고체로서 tert-부틸 3-((4-((6S,8R)-7-(3-((tert-부틸디페닐실릴)옥시)-2,2-디플루오로프로필)-8-메틸-3-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)-3,5-디플루오로페닐)아미노)아제티딘-1-카복실레이트(0.377 g, 71.3%)를 수득하였다. 1H NMR (300 MHz, 클로로폼-d, 27℃) 1.06 (9H, s), 1.12 (3H, d), 1.46 (9H, s), 1.65 - 1.84 (3H, m), 2.07 - 2.23 (2H, m), 2.58 (1H, d), 2.75 - 2.91 (2H, m), 3.16 - 3.34 (2H, m), 3.52 - 3.78 (5H, m), 3.91 - 4.07 (3H, m), 4.19 - 4.29 (2H, m), 5.23 - 5.34 (1H, m), 5.67 (1H, dd), 5.81 (2H, d), 6.81 (1H, d), 7.25 - 7.29 (1H, m), 7.35 - 7.48 (6H, m), 7.65 (4H, ddd), 8.02 (1H, s). 관찰되지 않는 아닐린 NH. m/z: ES+ [M+H]+ 886.
N
-(4-((6
S
,8
R
)-7-(3-((
tert
-부틸디페닐실릴)옥시)-2,2-디플루오로프로필)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3
H
-피라졸로[4,3-
f
]이소퀴놀린-6-일)-3,5-디플루오로페닐)아제티딘-3-아민의 제법
TFA(328 ㎕, 4.25 m㏖)를 0℃에서 DCM(2 ㎖) 중 tert-부틸 3-((4-((6S,8R)-7-(3-((tert-부틸디페닐실릴)옥시)-2,2-디플루오로프로필)-8-메틸-3-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)-3,5-디플루오로페닐)아미노)아제티딘-1-카복실레이트(377 ㎎, 0.43 m㏖)의 용액에 천천히 첨가하였다. 반응물을 실온까지 가온되게 하고, 이 조건 하에서 1시간 동안 교반하였다. 이후, 반응물을 감압 하에 농축시키고, 생성된 잔류물을 에틸 아세테이트와 포화 수성 NaHCO3 사이에 분배하였다. 유기 층을 MgSO4 위에서 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 실리카 크로마토그래피(용리 구배 DCM 중 30% 내지 70%(1% 수산화암모늄을 함유하는 DCM 중 10% 메탄올))로 정제하여 옅은 고체로서 N-(4-((6S,8R)-7-(3-((tert-부틸디페닐실릴)옥시)-2,2-디플루오로프로필)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)-3,5-디플루오로페닐)아제티딘-3-아민(166 ㎎, 55.6%)을 수득하였다. 1H NMR (300 MHz, 클로로폼-d, 27℃) 0.96 - 1.20 (12H, m), 2.62 - 3.03 (2H, m), 3.10 - 3.42 (2H, m), 3.42 - 3.63 (3H, m), 3.63 - 3.80 (2H, m), 3.81 - 4.08 (3H, m), 4.15 - 4.28 (1H, m), 4.38 (1H, d), 5.23 (1H, s), 5.83 (2H, m), 6.80 (1H, m), 7.15 (1H, d), 7.32 - 7.53 (6H, m), 7.61 - 7.81 (4H, m), 8.06 (1H, s). 관찰되지 않는 인다졸 NH. m/z: ES+ [M+H]+ 702.
N
-(4-((6
S
,8
R
)-7-(3-((tert-부틸디페닐실릴)옥시)-2,2-디플루오로프로필)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3
H
-피라졸로[4,3-
f
]이소퀴놀린-6-일)-3,5-디플루오로페닐)-1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-아민의 제법
1-플루오로-3-요오도프로판(40 ㎎, 0.21 m㏖)을 상온에서 DMF(1 ㎖) 중 N-(4-((6S,8R)-7-(3-((tert-부틸디페닐실릴)옥시)-2,2-디플루오로프로필)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)-3,5-디플루오로페닐)아제티딘-3-아민(144 ㎎, 0.21 m㏖) 및 DIPEA(107 ㎕, 0.62 m㏖)의 용액에 첨가하였다. 반응물을 실온에서 3시간 동안 교반하고, 이후 EtOAc(40 ㎖)로 희석하고, 포화 수성 염화나트륨(3 x 20 ㎖)으로 세척하였다. 유기 층을 MgSO4 위에서 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 실리카 크로마토그래피(용리 구배 DCM 중 15% 내지 30%(1% 수산화암모늄을 함유하는 DCM 중 10% 메탄올))로 정제하여 황색의 고체로서 N-(4-((6S,8R)-7-(3-((tert-부틸디페닐실릴)옥시)-2,2-디플루오로프로필)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)-3,5-디플루오로페닐)-1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-아민(87 ㎎, 56%)을 수득하였다. m/z: ES+ [M+H]+ 762.
실시예 6
N
-(4-((6
S
,8
R
)-7-((1-플루오로사이클로프로필)메틸)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3
H
-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)-3-메톡시페닐)-1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-아민
1-플루오로-3-요오도프로판(40.9 ㎕, 0.39 m㏖)을 실온에서 NMP(1.7 ㎖) 중 N-(4-((6S,8R)-7-((1-플루오로사이클로프로필)메틸)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)-3-메톡시페닐)아제티딘-3-아민(169 ㎎, 0.39 m㏖) 및 DIPEA(203 ㎕, 1.16 m㏖)의 용액에 첨가하였다. 18시간 후, 반응물을 감압 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 용리제로서 물(0.2% 수산화암모늄 함유) 및 MeCN의 점감적으로 극성인 혼합물에 의해 용리되는 역상 플래시 크로마토그래피(C18)로 정제하였다. 생성물 분획을 합하고 동결건조시켜 깨끗한 잔류물로서 N-(4-((6S,8R)-7-((1-플루오로사이클로프로필)메틸)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)-3-메톡시페닐)-1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-아민(75 ㎎, 39%)을 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6, 27℃) 0.39 - 0.46 (1H, m), 0.47 - 0.54 (1H, m), 0.77 - 0.85 (2H, m), 0.91 (3H, d), 1.51 - 1.64 (2H, m), 2.38 (2H, t), 2.54 (1H, dd), 2.63 (2H, q), 2.75 - 2.90 (2H, m), 3.14 (1H, dd), 3.52 - 3.64 (3H, m), 3.73 (3H, s), 3.79 - 3.88 (1H, m), 4.38 (2H, dt), 5.10 (1H, s), 5.82 - 5.87 (1H, m), 5.91 (1H, d), 6.09 (1H, d), 6.49 (1H, d), 6.57 (1H, d), 7.07 (1H, d), 7.94 (1H, s), 12.83 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 496.
N-(4-((6S,8R)-7-((1-플루오로사이클로프로필)메틸)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)-3-메톡시페닐)아제티딘-3-아민을 하기와 같이 제조하였다.
(1
S
,3
R
)-1-(4-브로모-2-메톡시페닐)-2-((1-플루오로사이클로프로필)메틸)-3,5-디메틸-1,2,3,4-테트라하이드로이소퀴놀린-6-아민의 제법
물(172 ㎎, 9.54 m㏖) 및 아세트산(7.5 ㎖)의 혼합물 중 (R)-3-(2-(((1-플루오로사이클로프로필)메틸)아미노)프로필)-2-메틸아닐린(451 ㎎, 1.91 m㏖) 및 4-브로모-2-메톡시벤즈알데하이드(410 ㎎, 1.91 m㏖)를 80℃에서 6시간 동안 가열하였다. 반응물을 감압 하에 농축시키고, 생성된 잔류물을 수성 HCl(1 N; 18 ㎖)로 처리하였다. 혼합물을 80℃에서 18시간 동안 교반하였다. 이후, 반응물을 냉각시키고, 포화 수성 NaHCO3을 첨가하였다. 혼합물을 DCM으로 추출하고, 유기 층을 감압 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 실리카 크로마토그래피(용리 구배 헥산 중 5% 내지 35% 에틸 아세테이트)로 정제하여 검의 필름으로서 (1S,3R)-1-(4-브로모-2-메톡시페닐)-2-((1-플루오로사이클로프로필)메틸)-3,5-디메틸-1,2,3,4-테트라하이드로이소퀴놀린-6-아민(591 ㎎, 71.5%)을 수득하였다. 1H NMR (300 MHz, DMSO-d 6, 27℃) 0.42 - 0.61 (2H, m), 0.81 - 0.91 (2H, m), 0.93 (3H, d), 1.93 (3H, s), 2.43 - 2.48 (2H, m), 2.72 - 2.89 (2H, m), 3.48 - 3.57 (1H, m), 3.87 (3H, s), 4.57 (2H, s), 5.12 (1H, s), 6.24 (1H, d), 6.35 (1H, d), 6.82 (1H, d), 6.96 (1H, d), 7.16 (1H, d). m/z: ES+ [M+H]+ 433.
(6
S
,8
R
)-6-(4-브로모-2-메톡시페닐)-7-((1-플루오로사이클로프로필)메틸)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3
H
-피라졸로[4,3-
f
]이소퀴놀린의 제법
아세트산(0.392 ㎖, 6.84 m㏖)을 CHCl3(5 ㎖) 중 (1S,3R)-1-(4-브로모-2-메톡시페닐)-2-((1-플루오로사이클로프로필)메틸)-3,5-디메틸-1,2,3,4-테트라하이드로이소퀴놀린-6-아민(0.593 g, 1.37 m㏖)에 첨가하고, 생성된 용액을 0℃까지 냉각시켰다. CHCl3(1 ㎖) 중 이소펜틸 니트라이트(0.321 g, 2.74 m㏖)를 반응물에 적가하고, 반응물을 0℃에서 추가 2시간 동안 교반하였다. 이후, 포화 수성 NaHCO3(20 ㎖의 물 중 1 g)을 천천히 첨가하였다. 반응물을 0℃에서 10분 동안 교반하고, 이후 층을 분리시켰다. 유기 층을 플래시 칼럼 크로마토그래피(용리 구배 헥산 중 5% 내지 35% 에틸 아세테이트)로 정제하여 담갈색의 고체로서 (6S,8R)-6-(4-브로모-2-메톡시페닐)-7-((1-플루오로사이클로프로필)메틸)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린(0.299 g, 49.2%)을 수득하였다. 1H NMR (300 MHz, DMSO-d 6, 27℃) δ ppm 0.39 - 0.65 (2H, m), 0.77 - 0.96 (2H, m), 1.00 (3H, d), 2.52 - 2.63 (1H, m), 2.87 - 3.03 (2H, m), 3.21 - 3.28 (1H, m), 3.71 (1H, d), 3.92 (3H, s), 5.31 (1H, s), 6.65 (1H, d), 6.86 - 6.92 (1H, m), 6.97 (1H, m), 7.18 (1H, d), 7.23 (1H, d), 8.05 (1H, s), 12.94 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 444.
(6
S
,8
R
)-6-(4-브로모-2-메톡시페닐)-7-((1-플루오로사이클로프로필)메틸)-8-메틸-3-(테트라하이드로-2
H
-피란-2-일)-6,7,8,9-테트라하이드로-3
H
-피라졸로[4,3-
f
]이소퀴놀린의 제법
3,4-디하이드로-2H-피란(176 ㎕, 1.93 m㏖)을 DCM(2.5 ㎖) 중 (6S,8R)-6-(4-브로모-2-메톡시페닐)-7-((1-플루오로사이클로프로필)메틸)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린(286 ㎎, 0.64 m㏖) 및 파라-톨루엔설폰산 1수화물(12 ㎎, 0.060 m㏖)의 용액에 첨가하였다. 반응물을 6시간 동안 마이크로파 조건(100℃, 300 W)으로 처리하였다. 냉각 시, 반응물을 포화 수성 NaHCO3으로 세척하고, Na2SO4 위에서 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 실리카 크로마토그래피(용리 구배 헥산 중 10% 내지 30% 에틸 아세테이트)로 정제하여 담갈색의 검의 고체로서 (6S,8R)-6-(4-브로모-2-메톡시페닐)-7-((1-플루오로사이클로프로필)메틸)-8-메틸-3-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린(299 ㎎, 88%)을 수득하였다. m/z: ES+ [M+H]+ 528.
tert
-부틸 3-((4-((6
S
,8
R
)-7-((1-플루오로사이클로프로필)메틸)-8-메틸-3-(테트라하이드로-2
H
-피란-2-일)-6,7,8,9-테트라하이드로-3
H
-피라졸로[4,3-
f
]이소퀴놀린-6-일)-3-메톡시페닐)아미노)아제티딘-1-카복실레이트의 제법
디옥산(2.5 ㎖) 중 (6S,8R)-6-(4-브로모-2-메톡시페닐)-7-((1-플루오로사이클로프로필)메틸)-8-메틸-3-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린(278 ㎎, 0.53 m㏖), tert-부틸 3-아미노아제티딘-1-카복실레이트(136 ㎎, 0.79 m㏖), 탄산세슘(343 ㎎, 1.05 m㏖) 및 BrettPhos 제3세대 전촉매(24 ㎎, 0.030 m㏖)를 6시간 동안 마이크로파 조건(100℃, 300 W)으로 처리하였다. 이후, 반응물을 감압 하에 농축시키고, 생성된 잔류물을 실리카 겔에 흡착시킨 후, 플래시 실리카 크로마토그래피(용리 구배 헥산 중 20% 내지 60% 에틸 아세테이트)를 통해 정제하여 tert-부틸 3-((4-((6S,8R)-7-((1-플루오로사이클로프로필)메틸)-8-메틸-3-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)-3-메톡시페닐)아미노)아제티딘-1-카복실레이트(296 ㎎, 91%)를 수득하였다. m/z: ES+ [M+H]+ 620.
N
-(4-((6
S
,8
R
)-7-((1-플루오로사이클로프로필)메틸)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3
H
-피라졸로[4,3-
f
]이소퀴놀린-6-일)-3-메톡시페닐)아제티딘-3-아민의 제법
디옥산 중 HCl(4 M; 1.2 ㎖, 4.78 m㏖)을 MeOH(3.5 ㎖) 중 tert-부틸 3-((4-((6S,8R)-7-((1-플루오로사이클로프로필)메틸)-8-메틸-3-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)-3-메톡시페닐)아미노)아제티딘-1-카복실레이트(296 ㎎, 0.48 m㏖)의 용액에 적가하였다. 실온에서 밤새 교반한 후, 반응물을 감압 하에 농축시키고, 생성된 잔류물을 MeOH(2 ㎖) 중에 용해시켰다. 이후, 이 용액을 메탄올에 의해 전처리된 SCX-2 이온 교환 카트리지에 로딩하였다. 카트리지를 메탄올, 이어서 메탄올 중 7 N 암모니아로 세척하였다. 생성물 분획을 감압 하에 농축시켜 옅은 고체로서 N-(4-((6S,8R)-7-((1-플루오로사이클로프로필)메틸)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)-3-메톡시페닐)아제티딘-3-아민(181 ㎎, 87%)을 수득하였다. m/z: ES+ [M+H]+ 436.
실시예 7
(6
S
,8
R
)-7-((1-플루오로사이클로프로필)메틸)-6-(4-((1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일)옥시)-2-메톡시페닐)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3
H
-피라졸로[4,3-
f
]이소퀴놀린
1-플루오로-3-요오도프로판(5.79 ㎕, 0.05 m㏖)을 실온에서 NMP(0.52 ㎖) 중 (6S,8R)-6-(4-(아제티딘-3-일옥시)-2-메톡시페닐)-7-((1-플루오로사이클로프로필)메틸)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린 트리플루오로아세트산 염(0.030 g, 0.050 m㏖) 및 DIPEA(0.029 ㎖, 0.16 m㏖)의 용액에 첨가하였다. 3시간 후, 반응물을 EtOAc(40 ㎖)로 희석하고, 포화 수성 염화나트륨(3 x 20 ㎖)으로 세척하였다. 유기 층을 MgSO4 위에서 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 실리카 크로마토그래피(용리 구배 DCM 중 15% 내지 30%(1% 수산화암모늄을 함유하는 DCM 중 MeOH))로 정제하여 백색의 고체로서 (6S,8R)-7-((1-플루오로사이클로프로필)메틸)-6-(4-((1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일)옥시)-2-메톡시페닐)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린(5 ㎎, 18%)을 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, 메탄올-d 4, 26℃) 0.45 - 0.56 (2H, m), 0.85 - 1.03 (2H, m), 1.12 (3H, d), 1.67 - 1.81 (2H, m), 2.50 - 2.62 (1H, m), 2.61 - 2.68 (2H, m), 2.92 (1H, dd), 3.08 - 3.21 (3H, m), 3.25 - 3.28 (1H, m), 3.70 - 3.84 (3H, m), 3.86 - 3.91 (3H, m), 4.45 (2H, dt), 4.73 - 4.82 (1H, m), 5.49 (1H, br. s), 6.19 (1H, d), 6.50 (1H, br. s.), 6.72 (1H, d), 6.79 (1H, d), 7.18 (1H, d), 8.05 (1H, s). 관찰되지 않는 인다졸 NH. m/z: ES+ [M+H]+ 497.
N-(4-((6S,8R)-7-((1-플루오로사이클로프로필)메틸)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)-3-메톡시페닐)아제티딘-3-아민 트리플루오로아세트산 염을 하기와 같이 제조하였다:
(6
S
,8
R
)-7-((1-플루오로사이클로프로필)메틸)-6-(2-메톡시-4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)페닐)-8-메틸-3-(테트라하이드로-2
H
-피란-2-일)-6,7,8,9-테트라하이드로-3
H
-피라졸로[4,3-
f
]이소퀴놀린의 제법
디옥산(3.50 ㎖) 중 (6S,8R)-6-(4-브로모-2-메톡시페닐)-7-((1-플루오로사이클로프로필)메틸)-8-메틸-3-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린(369 ㎎, 0.70 m㏖; 실시예 6에 따라 제조됨), 비스(피나콜라토)디보론(266 ㎎, 1.05 m㏖), [1,1'-비스(디페닐포스피노)페로센]디클로로팔라듐(II)(51 ㎎, 0.070 m㏖) 및 아세트산칼륨(233 ㎎, 2.37 m㏖)의 혼합물을 탈기시키고, 질소로 퍼징하였다. 이후, 반응 혼합물을 80℃까지 가온시켰다. 이 조건 하에서 18시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 실온까지 냉각시키고, 셀라이트®의 패드를 통해 여과시키고, EtOAc(100 ㎖)로 세척하였다. 여과액을 물(100 ㎖)로 세척하고, 수성 층을 EtOAc(2 x 70 ㎖)로 추출하고, 합한 유기 층을 물(3 x 70 ㎖) 및 포화 수성 염화나트륨(50 ㎖)으로 세척한 후, MgSO4 위에서 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 실리카 크로마토그래피(용리 구배 헥산 중 0% 내지 25% 에틸 아세테이트)로 정제하여 황색의 고체로서 (6S,8R)-7-((1-플루오로사이클로프로필)메틸)-6-(2-메톡시-4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)페닐)-8-메틸-3-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린(186 ㎎, 46.3%)을 수득하였다. m/z: ES+ [M+H]+ 576.
4-((6
S
,8
R
)-7-((1-플루오로사이클로프로필)메틸)-8-메틸-3-(테트라하이드로-2
H
-피란-2-일)-6,7,8,9-테트라하이드로-3
H
-피라졸로[4,3-
f
]이소퀴놀린-6-일)-3-메톡시페놀의 제법
수성 과산화수소(33%; 75 ㎕, 0.74 m㏖)를 공기 하에 5℃에서 THF(2.5 ㎖) 중 (6S,8R)-7-((1-플루오로사이클로프로필)메틸)-6-(2-메톡시-4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)페닐)-8-메틸-3-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린(186 ㎎, 0.32 m㏖) 및 수성 수산화나트륨(1 M; 350 ㎕, 0.32 m㏖)의 교반된 용액에 적가하였다. 생성된 혼합물을 5℃에서 5분 동안 교반하였다. 이후, 반응물을 물(50 ㎖) 및 DCM(100 ㎖)로 희석하였다. 층을 분리시키고, 수성 층을 DCM(2 x 50 ㎖)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 황산나트륨 위에서 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 실리카 크로마토그래피(용리 구배 헥산 중 20% 내지 50% 에틸 아세테이트)로 정제하여 황색의 고체로서 4-((6S,8R)-7-((1-플루오로사이클로프로필)메틸)-8-메틸-3-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)-3-메톡시페놀(94 ㎎, 62.5%)을 수득하였다. m/z: ES+ [M+H]+ 466.
tert
-부틸 3-(4-((6
S
,8
R
)-7-((1-플루오로사이클로프로필)메틸)-8-메틸-3-(테트라하이드로-2
H
-피란-2-일)-6,7,8,9-테트라하이드로-3
H
-피라졸로[4,3-
f
]이소퀴놀린-6-일)-3-메톡시페녹시)아제티딘-1-카복실레이트의 제법
디에틸 (E)-디아젠-1,2-디카복실레이트(88 ㎎, 0.20 m㏖)를 4-((6S,8R)-7-((1-플루오로사이클로프로필)메틸)-8-메틸-3-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)-3-메톡시페놀(94 ㎎, 0.20 m㏖), tert-부틸 3-하이드록시아제티딘-1-카복실레이트(35 ㎎, 0.20 m㏖), 트리페닐포스핀(53 ㎎, 0.20 m㏖) 및 톨루엔(2.03 ㎖)의 용액에 첨가하였다. 이후, 반응물을 110℃까지 가온시켰다. 15시간 후, 반응물을 냉각시키고, 감압 하에 농축시키고, 플래시 실리카 크로마토그래피(용리 구배 헥산 중 0% 내지 30% 에틸 아세테이트)로 정제하여 tert-부틸 3-(4-((6S,8R)-7-((1-플루오로사이클로프로필)메틸)-8-메틸-3-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)-3-메톡시페녹시)아제티딘-1-카복실레이트(95 ㎎, 75%)를 수득하였다. m/z: ES+ [M+H]+ 621.
tert-부틸 3-(4-((6
S
,8
R
)-7-((1-플루오로사이클로프로필)메틸)-8-메틸-3-(테트라하이드로-2
H
-피란-2-일)-6,7,8,9-테트라하이드로-3
H
-피라졸로[4,3-
f
]이소퀴놀린-6-일)-3-메톡시페녹시)아제티딘-1-카복실레이트 트리플루오로아세트산 염의 제법
디옥산 중 HCl(4 N; 383 ㎕, 1.53 m㏖)을 MeOH(1 ㎖) 중 tert-부틸 3-(4-((6S,8R)-7-((1-플루오로사이클로프로필)메틸)-8-메틸-3-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)-3-메톡시페녹시)아제티딘-1-카복실레이트(95 ㎎, 0.15 m㏖)의 용액에 적가하고, 반응물을 실온에서 18시간 동안 교반하였다. 반응물을 감압 하에 농축시키고, 생성된 잔류물을 용리제(20% 내지 80%)로서 물(0.01% TFA 함유) 및 MeCN의 점감적으로 극성인 혼합물을 사용하여 역상 플래시 크로마토그래피로 정제하여 TFA 염으로서 (6S,8R)-6-(4-(아제티딘-3-일옥시)-2-메톡시페닐)-7-((1-플루오로사이클로프로필)메틸)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린(30 ㎎, 36%)을 수득하였다. 1H NMR (300 MHz, 메탄올-d 4, 27℃) 0.86 - 1.09 (2H, m), 1.26 - 1.52 (3H, m), 1.59 (3H, d), 3.22 - 3.31 (1H, m), 3.36 - 3.47 (1H, m), 3.66 (1H, dd), 4.03 (3H, s), 4.07 - 4.27 (4H, m), 4.52 - 4.62 (2H, m), 5.14 - 5.27 (1H, m), 6.33 (1H, dd), 6.57 - 6.63 (1H, m), 6.68 (1H, d), 6.75 (1H, s), 6.93 (1H, d), 7.50 (1H, d), 8.23 (1H, s). 관찰되지 않는 인다졸 NH 및 첨가 H. m/z: ES+ [M+H]+ 437.
실시예 8
N
-(3,5-디플루오로-4-((6
S
,8
R
)-8-메틸-7-(2,2,2-트리플루오로에틸)-6,7,8,9-테트라하이드로-3
H
-피라졸로[4,3-
f
]이소퀴놀린-6-일)페닐)-1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-아민
1-플루오로-3-요오도프로판(5.4 ㎕, 0.050 m㏖) 및 디이소프로필에틸아민(0.013 ㎖, 0.070 m㏖)을 상온에서 NMP(0.4 ㎖) 중 N-(3,5-디플루오로-4-((6S,8R)-8-메틸-7-(2,2,2-트리플루오로에틸)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)페닐)아제티딘-3-아민(22 ㎎, 0.050 m㏖)의 교반된 용액에 첨가하였다. 16시간 후, 미정제 반응물을 역상 분취용 HPLC(Waters XBridge C18 칼럼, 19 ㎜ 직경, 100 ㎜ 길이, 5 ㎛ 실리카)(용리 구배 변경제로서의 0.2% 수산화암모늄을 함유하는 물 중 40% 내지 70% MeCN)로 바로 정제하였다. 생성물 분획을 농축 건조시켜 담황색의 고체로서 N-(3,5-디플루오로-4-((6S,8R)-8-메틸-7-(2,2,2-트리플루오로에틸)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)페닐)-1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-아민(9 ㎎, 36%)을 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, CD2Cl2, 27℃) 1.11 (3H, d), 1.69 - 1.78 (3H, m), 2.51 - 2.59 (2H, m), 2.81 - 2.94 (3H, m), 2.95 - 3.03 (1H, m), 3.16 - 3.30 (1H, m), 3.59 - 3.70 (3H, m), 3.94 - 4.05 (1H, m), 4.41 (1H, t), 4.45 (1H, d), 4.51 (1H, t), 5.27 (1H, s), 6.02 (2H, d), 6.83 (1H, d), 7.21 (1H, d), 8.03 (1H, s), 10.47 (1H, br. s). m/z: ES+ [M+H]+ 512.
N-(3,5-디플루오로-4-((6S,8R)-8-메틸-7-(2,2,2-트리플루오로에틸)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)페닐)아제티딘-3-아민을 하기와 같이 제조하였다;
2,2,2-트리플루오로에틸 트리플루오로메탄설포네이트의 제법
트리플루오로메탄설폰산 무수물(3.14 ㎖, 18.6 m㏖)을 -10℃에서 DCM(50 ㎖) 중 2,2,2-트리플루오로에탄-1-올(1.23 ㎖, 16.9 m㏖) 및 2,6-디메틸피리딘(2.36 ㎖, 20.3 m㏖)의 교반된 용액에 5분에 걸쳐 주사기를 통해 적가하였다. 2시간 후, 반응물을 수성 HCl(1 N; 2 x 30 ㎖) 및 포화 수성 NaHCO3(20 ㎖)으로 연속하여 세척하였다. 이후, 유기 층을 MgSO4 위에서 건조시키고, 여과시키고 감압 하에 농축시켜 적색의 오일로서 2,2,2-트리플루오로에틸 트리플루오로메탄설포네이트(0.92 g, 23%)를 수득하였다. 1H NMR (300 MHz, CDCl3, 27℃) 4.69 (2H, q).
(
R
)-2-메틸-3-(2-((2,2,2-트리플루오로에틸)아미노)프로필)아닐린의 제법
2,2,2-트리플루오로에틸 트리플루오로메탄설포네이트(1.3 g, 2.8 m㏖)를 1,4-디옥산(10 ㎖) 중 (R)-3-(2-아미노프로필)-2-메틸아닐린(0.460 g, 2.80 m㏖; 실시예 3에 따라 제조됨) 및 디이소프로필에틸아민(0.636 ㎖, 3.64 m㏖)의 교반된 용액에 첨가하였다. 반응물을 65℃에서 15시간 동안 가열하고, 이후 냉각시키고, 감압 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 EtOAc(50 ㎖) 중에 용해시키고, 포화 수성 NaHCO3 및 포화 수성 염화나트륨의 혼합물로 세척하였다. 수성 층을 EtOAc(20 ㎖)로 추출하고, 합한 유기 층을 MgSO4 위에서 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 MeOH 중에 용해시키고, 감압 하에 규조토에 흡착시키고, 플래시 실리카 크로마토그래피(용리 구배 DCM 중 1% 내지 6% MeOH)로 정제하였다. 생성물 분획을 농축 건조시켜 옅은 오렌지색의 검으로서 (R)-2-메틸-3-(2-((2,2,2-트리플루오로에틸)아미노)프로필)아닐린(0.30 g, 44%)을 수득하였다. 1H NMR (300 MHz, CDCl3, 27℃) 1.07 (3H, d), 2.09 (3H, s), 2.63 (1H, dd), 2.76 (1H, dd), 2.92 - 3.05 (1H, m), 3.15 (2H, q), 6.58 (2H, d), 6.85 - 7.00 (1H, m). 관찰되지 않는 3개의 NH에 대한 신호. m/z: ES+ [M+H]+ 247.
(1
S
,3
R
)-1-(4-브로모-2,6-디플루오로페닐)-3,5-디메틸-2-(2,2,2-트리플루오로에틸)-1,2,3,4-테트라하이드로이소퀴놀린-6-아민의 제법
(R)-2-메틸-3-(2-((2,2,2-트리플루오로에틸)아미노)프로필)아닐린(303 ㎎, 1.23 m㏖) 및 4-브로모-2,6-디플루오로벤즈알데하이드(544 ㎎, 2.46 m㏖)를 90℃에서 2시간 동안 아세트산(5 ㎖) 및 물(0.111 ㎖)의 혼합물 중에서 가열하였다. 반응물을 상온으로 천천히 냉각되게 하고, 밤새 교반하였다. 이후, 반응물을 감압 하에 농축시키고, 생성된 잔류물을 EtOAc(30 ㎖) 중에 용해시키고, 포화 수성 NaHCO3(2 x 20 ㎖)으로 세척하였다. 합한 수성 층을 EtOAc(2 x 20 ㎖)로 추출하고, 합한 유기 층을 포화 수성 염화나트륨으로 세척하고 농축시켜 최소 용적(약 20 ㎖)이 되게 하였다. 수성 HCl(1 N; 20 ㎖)을 첨가하고, 이상성 혼합물을 2시간 동안 격렬히 교반하였다. 층을 분리시키고, 수성 층을 EtOAc(20 ㎖)로 추출하였다. 수성 층을 (pH 스트립을 사용하여 측정된 바와 같이 pH 약 8까지) 고체 탄산나트륨의 첨가에 의해 염기성화시키고, 이후 DCM(3 x 20 ㎖)으로 추출하였다. 합한 DCM 추출물을 MgSO4 위에서 건조시키고, 여과시키고 감압 하에 농축시켜 40 ㎎의 미정제 생성물을 수득하였다. 한편, 합한 EtOAc 추출물을 포화 수성 염화나트륨으로 세척하고, 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 THF(10 ㎖) 중에 용해시키고, 폴리스티렌 결합된 토실하이드라지드(1.03 g, 2.76 m㏖)에 의해 14시간 동안 교반하였다. 혼합물을 여과시키고, 수지를 THF(10 ㎖) 및 MeOH(3 x 10 ㎖)로 연속하여 세척하였다. 여과액을 이전에 수득된 약 40 ㎎의 미정제 생성물과 합하고, 감압 하에 농축시켰다. 이 최종 잔류물을 플래시 실리카 크로마토그래피(용리 구배 헥산 중 0% 내지 30% EtOAc)로 정제하였다. 생성물 분획을 농축 건조시켜 담황색의 고체로서 (1S,3R)-1-(4-브로모-2,6-디플루오로페닐)-3,5-디메틸-2-(2,2,2-트리플루오로에틸)-1,2,3,4-테트라하이드로이소퀴놀린-6-아민(230 ㎎, 41%)을 수득하였다. 1H NMR (300 MHz, CDCl3, 27℃) 1.04 (3H, d), 2.42 (3H, s), 2.58 (1H, dd), 2.74 - 2.87 (1H, m), 3.02 - 3.28 (2H, m), 3.46 - 3.59 (1H, m), 5.27 (1H, s), 6.66 (1H, d), 7.02 (2H, d), 7.32 (1H, d), 9.95 - 10.73 (2H, br. s). m/z: ES+ [M+H]+ 449.
(6
S
,8
R
)-6-(4-브로모-2,6-디플루오로페닐)-8-메틸-7-(2,2,2-트리플루오로에틸)-6,7,8,9-테트라하이드로-3
H
-피라졸로[4,3-
f
]이소퀴놀린의 제법
물(0.20 ㎖) 중 아질산나트륨(35 ㎎, 0.51 m㏖)의 용액을 대략 -20℃(얼음-NaCl 배쓰)에서 프로피온산(2 ㎖) 중 (1S,3R)-1-(4-브로모-2,6-디플루오로페닐)-3,5-디메틸-2-(2,2,2-트리플루오로에틸)-1,2,3,4-테트라하이드로이소퀴놀린-6-아민(230 ㎎, 0.51 m㏖)의 교반된 용액에 1분에 걸쳐 적가하였다. 15분 후, 반응물을 빙냉 EtOAc(15 ㎖)로 희석하였다. 이상성 혼합물을 이 조건 하에서 격렬히 교반하고, (pH 스트립을 사용하여 측정된 바와 같이 염기성까지) 고체 Na2CO3의 느린 첨가에 의해 중화시켰다. 냉각 배쓰를 제거하였다. 상을 분리시키고, 유기 층을 포화 수성 NaHCO3(2 x 15 ㎖), 포화 수성 염화나트륨(15 ㎖)으로 세척하고, MgSO4 위에서 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 실리카 크로마토그래피(용리 구배 헥산 중 5% 내지 35% EtOAc)로 정제하였다. 생성물 분획을 농축 건조시켜 옅은 오렌지색의 필름으로서 (6S,8R)-6-(4-브로모-2,6-디플루오로페닐)-8-메틸-7-(2,2,2-트리플루오로에틸)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린(104 ㎎, 45%)을 수득하였다. 1H NMR (300 MHz, CDCl3, 27℃) 1.15 (3H, d), 2.89 - 3.04 (2H, m), 3.20 - 3.36 (1H, m), 3.50 (1H, dd), 3.61 - 3.75 (1H, m), 5.41 (1H, s), 6.80 (1H, d), 7.01 - 7.11 (2H, m), 7.23 (1H, d), 8.10 (1H, s), 10.24 (1H, br. s). m/z: ES+ [M+H]+ 460.
(6
S
,8
R
)-6-(4-브로모-2,6-디플루오로페닐)-8-메틸-3-(테트라하이드로-2
H
-피란-2-일)-7-(2,2,2-트리플루오로에틸)-6,7,8,9-테트라하이드로-3
H
-피라졸로[4,3-
f
]이소퀴놀린의 제법
3,4-디하이드로-2H-피란(0.103 ㎖, 1.13 m㏖) 및 p-톨루엔설폰산 1수화물(2 ㎎, 0.01 m㏖)을 DCM(1.5 ㎖) 중 (6S,8R)-6-(4-브로모-2,6-디플루오로페닐)-8-메틸-7-(2,2,2-트리플루오로에틸)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린(104 ㎎, 0.23 m㏖)의 교반된 용액에 첨가하였다. 반응물을 환류 조건 하에서 1시간 동안 유지시켰다. 냉각 후, 반응물을 DCM으로 희석하고, 포화 수성 NaHCO3으로 세척하고, MgSO4 위에서 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 실리카 크로마토그래피(용리 구배 헥산 중 0% 내지 30% EtOAc)로 정제하였다. 생성물 분획을 농축 건조시켜 담황색의 고체로서 (6S,8R)-6-(4-브로모-2,6-디플루오로페닐)-8-메틸-3-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-7-(2,2,2-트리플루오로에틸)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린(117 ㎎, 95%)을 수득하였다. m/z: ES+ [M+H]+ 544.
tert-부틸 3-((3,5-디플루오로-4-((6
S
,8
R
)-8-메틸-3-(테트라하이드로-2
H
-피란-2-일)-7-(2,2,2-트리플루오로에틸)-6,7,8,9-테트라하이드로-3
H
-피라졸로[4,3-
f
]이소퀴놀린-6-일)페닐)아미노)아제티딘-1-카복실레이트의 제법
바이알을 교반 막대, (6S,8R)-6-(4-브로모-2,6-디플루오로페닐)-8-메틸-3-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-7-(2,2,2-트리플루오로에틸)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린(55 ㎎, 0.10 m㏖), tert-부틸 3-아미노아제티딘-1-카복실레이트(26 ㎎, 0.15 m㏖), Pd2dba3(9 ㎎, 0.01 m㏖), Xantphos(12 ㎎, 0.02 m㏖) 및 탄산세슘(99 ㎎, 0.30 m㏖)으로 충전하였다. 바이알을 밀봉하고, 질소(3x)로 배기/역충전한 후, 주사기를 통해 탈기된 1,4-디옥산(1 ㎖)을 첨가하였다. 혼합물을 상온에서 2분 동안 교반하고, 이후 90℃까지 예열된 가열 블록에 배치하였다. 22시간 후, 혼합물을 실온까지 냉각되게 하고, 이후 EtOAc로 희석하였다. 혼합물을 규조토를 통해 여과시키고, 여과액을 감압 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 실리카 크로마토그래피(용리 구배 헥산 중 0% 내지 45% EtOAc)로 정제하였다. 생성물 분획을 농축 건조시켜 담황색의 고체로서 tert-부틸 3-((3,5-디플루오로-4-((6S,8R)-8-메틸-3-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-7-(2,2,2-트리플루오로에틸)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)페닐)아미노)아제티딘-1-카복실레이트(46 ㎎, 72%)를 수득하였다. 1H NMR (300 MHz, CDCl3, 27℃) 1.08 (3H, d), 1.42 (9H, s), 1.55 - 1.81 (4H, m), 1.97 - 2.23 (2H, m), 2.45 - 2.63 (1H, m), 2.80 - 3.02 (2H, m), 3.09 - 3.27 (1H, m), 3.34 - 3.47 (1H, m), 3.53 - 3.65 (1H, m), 3.66 - 3.75 (3H, m), 3.92 - 4.02 (1H, m), 4.19 - 4.32 (3H, m), 5.25 (1H, s), 5.58 - 5.67 (1H, m), 5.93 (2H, dd), 6.81 (1H, d), 7.22 - 7.27 (1H, m), 7.98 (1H, s). 클로로폼에 의해 7.22 내지 7.27 ppm에서 다중항의 부분 중첩. m/z: ES+ [M+H]+ 636.
N
-(3,5-디플루오로-4-((6
S
,8
R
)-8-메틸-7-(2,2,2-트리플루오로에틸)-6,7,8,9-테트라하이드로-3
H
-피라졸로[4,3-
f
]이소퀴놀린-6-일)페닐)아제티딘-3-아민의 제법
tert-부틸 3-((3,5-디플루오로-4-((6S,8R)-8-메틸-3-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-7-(2,2,2-트리플루오로에틸)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)페닐)아미노)아제티딘-1-카복실레이트(46 ㎎, 0.08 m㏖)를 포름산(0.50 ㎖, 13 m㏖) 중에 용해시키고, 교반된 용액을 30℃까지 가온시켰다. 27시간 후, 반응물을 감압 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 5% IPA/DCM 중에 용해시키고, 포화 수성 NaHCO3으로 중화시켰다. 상을 분리시키고, 수성 층을 5% IPA/DCM(2 x 4 ㎖)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 MgSO4 위에서 건조시키고, 여과시키고 감압 하에 농축시켜 담황색의 필름으로서 소량의 부분적으로 탈보호된 출발 재료로 오염된 미정제 N-(3,5-디플루오로-4-((6S,8R)-8-메틸-7-(2,2,2-트리플루오로에틸)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)페닐)아제티딘-3-아민(38 ㎎, 111%)을 수득하였다. m/z: ES+ [M+H]+ 452.
실시예 9
5-((6
S
,8
R
)-7-((1-플루오로사이클로프로필)메틸)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3
H
-피라졸로 [4,3-
f
]이소퀴놀린-6-일)-
N
-(1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일)-4-메톡시피리딘-2-아민
DMF(1 ㎖) 및 DIPEA(0.022 ㎖, 0.13 m㏖)를 N-(아제티딘-3-일)-5-((6S,8R)-7-((1-플루오로사이클로프로필)메틸)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)-4-메톡시피리딘-2-아민(22 ㎎, 0.050 m㏖)으로 충전된 플라스크에 순차적으로 첨가하였다. 이후, DMF(0.1 ㎖) 중 1-플루오로-3-요오도프로판(9 ㎎, 0.05 m㏖)을 첨가하였다. 2시간 후, 반응물을 포화 수성 염화나트륨으로 희석하고, 혼합물을 EtOAC(3x) 중에 추출하였다. 합한 유기 층을 물로 세척하고, 황산나트륨 위에서 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 생성된 미정제 필름을 플래시 실리카 크로마토그래피(용리 구배 DCM 중 2% 내지 10% MeOH)로 정제하여 건조 필름으로서 5-((6S,8R)-7-((1-플루오로사이클로프로필)메틸)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)-N-(1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일)-4-메톡시피리딘-2-아민(9.0 ㎎, 36%)을 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, 클로로폼-d, 27℃) δ ppm 0.46 - 0.66 (2H, m), 0.85 - 1.05 (2H, m), 1.09 (3H, d), 1.64 - 1.78 (2H, m), 2.50 - 2.61 (3H, m), 2.83 (1H, dd), 2.87 - 2.96 (2H, m), 3.04 - 3.21 (2H, m), 3.56 - 3.69 (2H, m), 3.70 - 3.76 (1H, m), 3.85 (3H, s), 4.30 - 4.37 (1H, m), 4.45 (2H, dt), 4.93 (1H, br d), 5.32 (1H, s), 5.82 (1H, s), 6.76 (1H, d), 7.00 (1H, d), 7.32 (1H, s), 7.99 (1H, s), 11.00 (1H, br s). m/z: ES+ [M+H]+ 497.
N-(아제티딘-3-일)-5-((6S,8R)-7-((1-플루오로사이클로프로필)메틸)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)-4-메톡시피리딘-2-아민을 하기 기재한 바와 같이 제조하였다.
(1
S
,3
R
)-1-(6-브로모-4-메톡시피리딘-3-일)-2-((1-플루오로사이클로프로필)메틸)-3,5-디메틸-1,2,3,4-테트라하이드로이소퀴놀린-6-아민의 제법
6-브로모-4-메톡시니코틴알데하이드(1.46 g, 6.77 m㏖)를 AcOH(27 ㎖) 및 물(0.305 g, 16.9 m㏖) 중 (R)-3-(2-(((1-플루오로사이클로프로필)메틸)아미노)프로필)-2-메틸아닐린(0.800 g, 3.39 m㏖)의 용액에 첨가하고, 반응물을 85℃에서 18시간 동안 가열하였다. 냉각 후, 반응물을 감압 하에 농축시키고, 생성된 잔류물을 에틸 아세테이트로 희석하고, 포화 수성 탄산수소나트륨에 의해 염기성화시켰다. 유기 층을 수성 HCl(1 N)과 합하고, 이상성 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반하였다. 유기 층을 수성 HCl(1 N)로 세척하고, 이후 합한 수성 층을 에틸 아세테이트로 추출하였다. 이후, 수성 층을 고체 K2CO3의 첨가에 의해 염기성화시키고, 에틸 아세테이트(2x)로 추출하였다. 염기성화된 수성 층으로부터 합한 에틸 아세테이트 추출물을 황산나트륨 위에서 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 실리카 플래시 크로마토그래피(용리 구배 헥산 중 10% 내지 100% 에틸 아세테이트)로 정제하여 검으로서 (1S,3R)-1-(6-브로모-4-메톡시피리딘-3-일)-2-((1-플루오로사이클로프로필)메틸)-3,5-디메틸-1,2,3,4-테트라하이드로이소퀴놀린-6-아민(0.450 g, 30.6%)을 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6, 27℃) δ ppm 0.47 - 0.64 (2H, m), 0.87 - 0.98 (5H, m), 1.95 (3H, s), 2.42 - 2.48 (1H, m), 2.79 (1H, dd), 2.87 - 2.99 (1H, m), 3.41 - 3.50 ( H, m), 3.92 - 3.97 (3H, m), 4.66 (2H, s), 5.11 (1H, s), 6.30 (1H, d), 6.39 (1H, d), 7.26 (1H, s), 7.64 (1H, s). DMSO에 의해 모호한 1개의 수소. m/z: ES+ [M+H]+ 434.
(6
S
,8
R
)-6-(6-브로모-4-메톡시피리딘-3-일)-7-((1-플루오로사이클로프로필)메틸)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3
H
-피라졸로[4,3-
f
]이소퀴놀린의 제법
물(0.75 ㎖) 중 아질산나트륨(0.045 g, 0.65 m㏖)의 용액을 -15℃(염/얼음 배쓰)에서 프로피온산(3.0 ㎖) 중 (1S,3R)-1-(6-브로모-4-메톡시피리딘-3-일)-2-((1-플루오로사이클로프로필)메틸)-3,5-디메틸-1,2,3,4-테트라하이드로이소퀴놀린-6-아민(0.270 g, 0.62 m㏖)의 용액에 적가하고, 반응물을 이 조건 하에서 1시간 동안 교반하였다. 빙냉 EtOAc(10 ㎖), 이어서 포화 수성 NaHCO3(15 ㎖)을 분액으로 첨가하였다. 층을 분리시키고, 유기 층을 포화 수성 NaHCO3(2X)으로 세척하였다. 합한 수성 층(pH = 8)을 EtOAc로 추출하고, 이후 모든 합한 유기 층을 황산나트륨 위에서 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 실리카 플래시 크로마토그래피(용리 구배 헥산 중 20% 내지 60% 에틸 아세테이트)로 정제하여 검으로서 (6S,8R)-6-(6-브로모-4-메톡시피리딘-3-일)-7-((1-플루오로사이클로프로필)메틸)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린(0.11 g, 41%)을 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6, 27℃) 0.47 - 0.64 (2H, m), 0.87 - 0.97 (2H, m), 0.97 - 1.01 (3H, m), 2.51 - 2.63 (1H, m), 2.89 (1H, dd), 2.94 - 3.06 (1H, m), 3.23 (1H, br dd), 3.54 - 3.67 (1H, m), 3.97 (3H, s), 5.28 (1H, s), 6.68 (1H, d), 7.21 (1H, d), 7.30 (1H, s), 7.68 (1H, s), 8.06 (1H, s), 12.98 (1H, br s). m/z: ES+ [M+H]+ 445.
(6
S
,8
R
)-6-(6-브로모-4-메톡시-3-피리딜)-7-[(1-플루오로사이클로프로필)메틸]-8-메틸-3-[(2
R
)-테트라하이드로피란-2-일]-8,9-디하이드로-6H-피라졸로[4,3-
f
]이소퀴놀린 및 (6
S
,8
R
)-6-(6-브로모-4-메톡시피리딘-3-일)-7-((1-플루오로사이클로프로필)메틸)-8-메틸-2-(테트라하이드로-2
H
-피란-2-일)-6,7,8,9-테트라하이드로-2
H
-피라졸로[4,3-
f
]이소퀴놀린의 제법
DCM(4 ㎖)을 (6S,8R)-6-(6-브로모-4-메톡시피리딘-3-일)-7-((1-플루오로사이클로프로필)메틸)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린(150 ㎎, 0.34 m㏖) 및 4-메틸벤젠설폰산 수화물(71 ㎎, 0.37 m㏖)로 충전된 플라스크에 첨가하였다. 3,4-디하이드로-2H-피란(43 ㎎, 0.51 m㏖)을 교반된 반응물에 첨가하고, 반응물을 RT에서 밤새 교반하였다. 반응물을 포화 수성 탄산수소나트륨으로 세척하고, 유기 층을 황산나트륨 위에서 건조시키고, 여과시키고 감압 하에 농축시켜 미정제 갈색의 검을 수득하였다. 이것을 플래시 크로마토그래피(용리 구배 헥산 중 5% 내지 40% EtOAc)로 정제하여 검으로서 (6S,8R)-6-(6-브로모-4-메톡시-3-피리딜)-7-[(1-플루오로사이클로프로필)메틸]-8-메틸-3-[(2R)-테트라하이드로피란-2-일]-8,9-디하이드로-6H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린 및 (6S,8R)-6-(6-브로모-4-메톡시피리딘-3-일)-7-((1-플루오로사이클로프로필)메틸)-8-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-6,7,8,9-테트라하이드로-2H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린(151 ㎎, 85%)의 혼합물을 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, 클로로폼-d, 27℃) 0.45 - 0.61 (2H, m), 0.96 - 1.06 (2H, m), 1.09 (3H, d), 1.46 - 1.91 (3H, m), 2.03 - 2.20 (2H, m), 2.47 - 2.63 (2H, m), 2.88 (1H, ddd), 3.14 (1H, dd), 3.20 - 3.31 (1H, m), 3.64 - 3.79 (2H, m), 3.96 (3H, d), 3.98 - 4.06 (1H, m), 5.40 (1H, d), 5.64 - 5.71 (1H, m), 6.78 (1H, d), 6.99 (1H, d), 7.25 - 7.33 (1H, m), 7.76 (1H, d), 8.02 (1H, d).
tert
-부틸 3-((5-((6
S
,8
R
)-7-((1-플루오로사이클로프로필)메틸)-8-메틸-3-(테트라하이드로-2
H
-피란-2-일)-6,7,8,9-테트라하이드로-3
H
-피라졸로[4,3-
f
]이소퀴놀린-6-일)-4-메톡시피리딘-2-일)아미노)아제티딘-1-카복실레이트 및
tert
-부틸 3-(5-((6
S
,8
R
)-7-((1-플루오로사이클로프로필)메틸)-8-메틸-2-(테트라하이드로-2
H
-피란-2-일)-6,7,8,9-테트라하이드로-2
H
-피라졸로[4,3-
f
]이소퀴놀린-6-일)-4-메톡시피리딘-2-일아미노)아제티딘-1-카복실레이트의 제법
디옥산(2.7 ㎖)을 (6S,8R)-6-(6-브로모-4-메톡시피리딘-3-일)-7-((1-플루오로사이클로프로필)메틸)-8-메틸-3-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린 및 (6S,8R)-6-(6-브로모-4-메톡시피리딘-3-일)-7-((1-플루오로사이클로프로필)메틸)-8-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-6,7,8,9-테트라하이드로-2H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린(140 ㎎, 0.26 m㏖), 탄산세슘(172 ㎎, 0.53 m㏖) 및 tert-부틸 3-아미노아제티딘-1-카복실레이트(68 ㎎, 0.40 m㏖)의 혼합물로 충전된 플라스크에 첨가하고, 반응 플라스크를 배기시키고, 질소(3x)로 역충전하였다. BrettPhos 제3세대 전촉매(24 ㎎, 0.030 m㏖)를 첨가하고, 플라스크를 다시 배기시키고, 질소(3x)로 역충전하였다. 반응물을 110℃에서 4시간 동안 가열하였다. 반응물을 실온까지 냉각시키고, 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 생성된 검을 플래시 실리카 크로마토그래피(용리 구배 헥산 중 30% 내지 100% 에틸 아세테이트)로 정제하여 건조 필름으로서 tert-부틸 3-((5-((6S,8R)-7-((1-플루오로사이클로프로필)메틸)-8-메틸-3-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)-4-메톡시피리딘-2-일)아미노)아제티딘-1-카복실레이트 및 tert-부틸 3-(5-((6S,8R)-7-((1-플루오로사이클로프로필)메틸)-8-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-6,7,8,9-테트라하이드로-2H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)-4-메톡시피리딘-2-일아미노)아제티딘-1-카복실레이트(53 ㎎, 32%)의 혼합물을 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, 클로로폼-d, 27℃) 0.50 - 0.68 (2H, m), 0.96 - 1.09 (2H, m), 1.12 (3H, d), 1.42 - 1.47 (9H, m), 1.60 - 1.88 (3H, m), 2.07 - 2.21 (2H, m), 2.50 - 2.67 (2H, m), 2.85 (1H, ddd), 3.10 - 3.23 (2H, m), 3.63 - 3.79 (4H, m), 3.87 - 3.91 (3H, m), 3.99 - 4.07 (1H, m), 4.24 - 4.33 (2H, m), 4.42 - 4.52 (1H, m), 5.36 (1H, d), 5.64 - 5.73 (1H, m), 5.83 (1H, d), 6.85 (1H, d), 7.26 - 7.32 (2H, m), 7.40 (1H, d), 8.00 - 8.03 (1H, m). m/z: ES+ [M+H]+ 621.
N
-(아제티딘-3-일)-5-((6
S
,8
R
)-7-((1-플루오로사이클로프로필)메틸)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3
H
-피라졸로[4,3-
f
]이소퀴놀린-6-일)-4-메톡시피리딘-2-아민의 제법
메탄올(0.5 ㎖)을 tert-부틸 3-((5-((6S,8R)-7-((1-플루오로사이클로프로필)메틸)-8-메틸-3-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)-4-메톡시피리딘-2-일)아미노)아제티딘-1-카복실레이트(0.047 g, 0.080 m㏖)로 충전된 플라스크에 첨가하였다. 디옥산 중 HCl(4 M; 0.5 ㎖, 2 m㏖)을 첨가하고, 2시간 동안 계속해서 교반하였다. 이후, 반응물을 감압 하에 농축시키고, 생성된 잔류물을 메탄올 중 3 N 암모니아에 의해 용리되는 SCX-2 카트리지를 사용하여 정제하여 검으로서 미정제 N-(아제티딘-3-일)-5-((6S,8R)-7-((1-플루오로사이클로프로필)메틸)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)-4-메톡시피리딘-2-아민(25 ㎎, 76%)을 수득하였다. 생성물을 추가 정제 없이 다음 단계에서 사용하였다. m/z: ES+ [M+H]+ 437.
실시예 10
N
-(4-((6
S
,8
R
)-7-((3-(플루오로메틸)옥세탄-3-일)메틸)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)-3-메톡시페닐)-1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-아민
1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-아민(47.3 ㎎, 0.36 m㏖)을 (6S,8R)-6-(4-브로모-2-메톡시페닐)-7-((3-(플루오로메틸)옥세탄-3-일)메틸)-8-메틸-3-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린(100 ㎎, 0.18 m㏖), 나트륨 tert-부톡사이드(34.4 ㎎, 0.36 m㏖) 및 [(2-디-사이클로헥실포스피노-3,6-디메톡시-2',4',6'-트리이소프로필-1,1'-비페닐)-2-(2'-아미노-1,1'-비페닐)]팔라듐(II) 메탄설포네이트(BrettPhos Pd G3)(8.10 ㎎, 8.95 μ㏖)를 함유하는 밀봉된 마이크로파 바이알에 1,4-디옥산(1.4 ㎖) 중에 첨가하였다. 바이알을 10분 동안 버블링 질소로 탈기시키고, 이후 1시간 동안 90℃까지 가열하였다. 냉각 후, 반응물을 EtOAc로 희석하고, 물로 세척하였다. 수성 상을 EtOAc로 추출하고, 이후 합한 유기물을 증발시켰다. 미정제 잔류물을 DCM(2 ㎖) 중에 용해시키고, TFA(1 ㎖)를 첨가하였다. 혼합물을 1시간 동안 교반하고, 이후 증발시켰다. 잔류물을 DCM 중에 용해시키고, 포화 수성 NaHCO3 용액으로 세척하였다. 수성 층을 DCM으로 추출하고, 이후 합한 유기물을 Na2SO4 위에서 건조시키고 증발시켰다. 미정제 생성물을 용리제로서 물(0.1% NH3 함유) 및 MeCN의 점감적으로 극성인 혼합물을 사용하여 분취용 HPLC(Waters XBridge Prep C18 OBD 칼럼, 5 μ 실리카, 19 ㎜ 직경, 100 ㎜ 길이)로 정제하였다. 원하는 화합물을 함유하는 분획을 증발 건조시켜 베이지색의 고체로서 N-(4-((6S,8R)-7-((3-(플루오로메틸)옥세탄-3-일)메틸)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)-3-메톡시페닐)-1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-아민(59.0 ㎎, 63%)을 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, CDCl3, 27℃) 1.07 (3H, d), 1.68 - 1.87 (2H, m), 2.62 (2H, t), 2.75 (1H, d), 2.83 (1H, dd), 2.87 - 2.96 (3H, m), 3.10 (1H, dd), 3.27 (1H, dt), 3.74 (2H, q), 3.84 (3H, s), 4.04 - 4.14 (2H, m), 4.43 (4H, td), 4.53 (1H, t), 4.58 (1H, d), 4.78 (2H, td), 5.11 (1H, s), 5.90 (1H, dd), 6.12 (1H, d), 6.48 (1H, d), 6.80 (1H, d), 7.15 (1H, d), 8.05 (1H, d); m/z: ES+ [M+H]+ 526.
N-(4-((6S,8R)-7-((3-(플루오로메틸)옥세탄-3-일)메틸)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)-3-메톡시페닐)-1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-아민을 하기와 같이 제조하였다:
(3-(플루오로메틸)옥세탄-3-일)메탄올의 제법
불화세슘(5.03 g, 33.14 m㏖)을 에틸렌 글리콜(6 ㎖) 중 (3-(브로모메틸)옥세탄-3-일)메탄올(2.00 g, 11.05 m㏖)을 함유하는 플라스크에 첨가하고, 반응물을 2시간 동안 150℃까지 가열하였다. 냉각 후, 반응물을 EtOAc(30 ㎖) 및 물(30 ㎖)로 희석하였다. 수성물을 디에틸 에테르(3 x 30 ㎖) 및 에틸 아세테이트(3 x 30 ㎖)로 추출하였다. 합한 유기물을 MgSO4 위에서 건조시키고, 여과시키고, 증발시킨, 후, 미정제 생성물을 플래시 실리카 크로마토그래피(용리 구배 헵탄 중 0% 내지 100% EtOAc)로 정제하였다. 생성물 함유 분획을 증발 건조시켜 무색의 액체로서 (3-(플루오로메틸)옥세탄-3-일)메탄올(0.734 g, 55%)을 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, CDCl3, 27℃) 3.92 (2H, s), 4.52 (4H, t), 4.59 - 4.89 (2H, m).
(3-(플루오로메틸)옥세탄-3-일)메틸 트리플루오로메탄설포네이트의 제법
트리플루오로메탄설폰산 무수물(1.47 ㎖, 8.74 m㏖), 이어서 2,6-디메틸피리딘(1.12 ㎖, 9.57 m㏖)을 DCM(30.7 ㎖) 중 (3-(플루오로메틸)옥세탄-3-일)메탄올(1.00 g, 8.32 m㏖)의 용액에 첨가하고, 반응물을 0℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응물을 물 및 1 N 시트르산 용액으로 세척하고, 이후 Na2SO4 위에서 건조시키고, 여과시키고 증발시켜 적색의 오일로서 (3-(플루오로메틸)옥세탄-3-일)메틸 트리플루오로메탄설포네이트(1.98 g, 94%)를 수득하였고, 이것을 추가 정제 없이 바로 사용하였다. 1H NMR (500 MHz, CDCl3, 27℃) 4.40 - 4.75 (8H, m).
(
R
)-3-(2-(((3-(플루오로메틸)옥세탄-3-일)메틸)아미노)프로필)-2-메틸아닐린의 제법
(3-(플루오로메틸)옥세탄-3-일)메틸 트리플루오로메탄설포네이트(1.92 g, 7.61 m㏖)를 1,4-디옥산(18.7 ㎖) 중 (R)-3-(2-아미노프로필)-2-메틸아닐린(1.00 g, 6.09 m㏖) 및 DIPEA(1.58 ㎖, 9.13 m㏖)의 용액에 첨가하고, 반응물을 5시간 동안 70℃까지 가열하였다. 냉각 후, 반응물을 EtOAc로 희석하고, 물로 세척하였다. 수성 상을 EtOAc로 추출하고, 이후 합한 유기물을 Na2SO4 위에서 건조시키고, 여과시키고 증발시켰다. 미정제 생성물을 플래시 실리카 크로마토그래피(용리 구배 EtOAc 중 0% 내지 10% MeOH)로 정제하였다. 순수한 분획을 증발 건조시켜 담황색의 검으로서 (R)-3-(2-(((3-(플루오로메틸)옥세탄-3-일)메틸)아미노)프로필)-2-메틸아닐린(0.673 g, 42%)을 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, CDCl3, 27℃) 1.11 (3H, d), 2.04 (3H, s), 2.59 - 2.71 (1H, m), 2.76 - 3.10 (4H, m), 4.34 - 4.52 (4H, m), 4.53 - 4.68 (2H, m), 6.58 (1H, d), 6.60 (1H, d), 6.95 (1H, t). m/z: ES+ [M+H]+ 267.
(1
S
,3
R
)-1-(4-브로모-2-메톡시페닐)-2-((3-(플루오로메틸)옥세탄-3-일)메틸)-3,5-디메틸-1,2,3,4-테트라하이드로이소퀴놀린-6-아민의 제법
4-브로모-2-메톡시벤즈알데하이드(645 ㎎, 3.00 m㏖)를 아세트산(7.4 ㎖) 및 물(135 ㎕, 7.50 m㏖) 중 (R)-3-(2-(((3-(플루오로메틸)옥세탄-3-일)메틸)아미노)프로필)-2-메틸아닐린(400 ㎎, 1.5 m㏖)의 용액에 첨가하였다. 반응물을 4시간 동안 80℃까지 가열하였다. 냉각 후, 아세트산을 증발시키고, 이후 잔류물을 DCM 중에 용해시키고, 포화 수성 NaHCO3으로 세척하였다. 유기 층을 Na2SO4 위에서 건조시키고, 여과시키고 증발시켰다. 잔류물을 메탄올(5 ㎖) 중에 용해시키고, 이후 하이드록실아민 하이드로클로라이드(313 ㎎, 4.50 m㏖) 및 아세트산 칼륨(588 ㎎, 6.00 m㏖)을 첨가하고, 반응물을 실온에서 30분 동안 교반하였다. 휘발물을 증발시키고, 이후 잔류물을 DCM 및 물 중에 용해시켰다. 층을 분리시키고, 이후 수성물을 DCM으로 추출하였다. 합한 유기물을 Na2SO4 위에서 건조시키고, 여과시키고, 증발시킨, 후, 미정제 생성물을 플래시 실리카 크로마토그래피(용리 구배 헵탄 중 0% 내지 50% EtOAc)로 정제하였다. 생성물 함유 분획을 증발 건조시켜 베이지색의 고체로서 (1S,3R)-1-(4-브로모-2-메톡시페닐)-2-((3-(플루오로메틸)옥세탄-3-일)메틸)-3,5-디메틸-1,2,3,4-테트라하이드로이소퀴놀린-6-아민(302 ㎎, 43%)을 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, CDCl3, 27℃) 1.01 (3H, d), 2.07 (3H, s), 2.45 (1H, dd), 2.61 - 2.73 (1H, m), 2.86 (1H, d), 3.01 - 3.14 (1H, m), 3.54 (2H, s), 3.87 (3H, s), 4.41 - 4.48 (2H, m), 4.51 (1H, d), 4.53 - 4.60 (2H, m), 4.67 (1H, d), 4.73 - 4.81 (1H, m), 5.00 (1H, s), 6.47 (1H, s), 6.47 (1H, s), 6.61 (1H, d), 6.88 (1H, dd), 7.01 (1H, d). m/z: ES+ [M+H]+ 463.
(6
S
,8
R
)-6-(4-브로모-2-메톡시페닐)-7-((3-(플루오로메틸)옥세탄-3-일)메틸)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린의 제법
아질산나트륨(39.1 ㎎, 0.57 m㏖)을 -15℃(드라이아이스/아세톤 배쓰)에서 프로피온산(2.2 ㎖) 중 (1S,3R)-1-(4-브로모-2-메톡시페닐)-2-((3-(플루오로메틸)옥세탄-3-일)메틸)-3,5-디메틸-1,2,3,4-테트라하이드로이소퀴놀린-6-아민(250 ㎎, 0.54 m㏖)의 냉각된 용액에 물(0.5 ㎖) 중에 첨가하였다. 30분 동안 교반한 후, 빙냉 톨루엔(15 ㎖)을 첨가하고, 반응물을 0℃에서 15분 동안 교반하고, 이후 1시간 동안 실온까지 가온시켰다. 물(15 ㎖)을 첨가하고, 층을 분리시켰다. 수성 층을 EtOAc(2 x 15 ㎖)로 추출하고, 이후 합한 유기물을 포화 수성 염화나트륨으로 세척하고, Na2SO4 위에서 건조시키고, 여과시키고 증발시켰다. 미정제 생성물을 플래시 실리카 크로마토그래피(용리 구배 헵탄 중 0% 내지 50% EtOAc)로 정제하였다. 생성물 함유 분획을 증발 건조시켜 베이지색의 고체로서 (6S,8R)-6-(4-브로모-2-메톡시페닐)-7-((3-(플루오로메틸)옥세탄-3-일)메틸)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린(188 ㎎, 74%)을 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, CDCl3, 27℃) 1.07 (3H, d), 2.70 (1H, d), 2.87 (1H, dd), 2.97 (1H, d), 3.11 - 3.18 (1H, m), 3.18 - 3.27 (1H, m), 3.90 (3H, s), 4.42 - 4.52 (3H, m), 4.59 (1H, d), 4.63 - 4.87 (2H, m), 5.19 (1H, s), 6.63 (1H, d), 6.76 (1H, d), 6.88 (1H, dd), 7.05 (1H, d), 7.19 (1H, d), 8.09 (1H, d). m/z: ES+ [M+H]+ 474.
(6
S
,8
R
)-6-(4-브로모-2-메톡시페닐)-7-((3-(플루오로메틸)옥세탄-3-일)메틸)-8-메틸-3-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린의 제법
3,4-디하이드로-2H-피란(67.3 ㎕, 0.74 m㏖)을 DCM(3.6 ㎖) 중 (6S,8R)-6-(4-브로모-2-메톡시페닐)-7-((3-(플루오로메틸)옥세탄-3-일)메틸)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린(175 ㎎, 0.37 m㏖) 및 4-메틸벤젠설폰산 수화물(14.0 ㎎, 0.07 m㏖)의 용액에 첨가하고, 반응물을 40℃에서 2시간 동안 교반하였다. 냉각 후, 반응물을 DCM으로 희석하고, 포화 수성 NaHCO3으로 세척하고, Na2SO4 위에서 건조시키고, 여과시키고 증발시켰다. 잔류물을 EtOAc/헵탄(1:1)에 의해 용리되는 실리카 플러그를 통해 통과시켰다. 여과액을 증발시켜 베이지색의 고체로서 (6S,8R)-6-(4-브로모-2-메톡시페닐)-7-((3-(플루오로메틸)옥세탄-3-일)메틸)-8-메틸-3-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린(196 ㎎, 95%)을 수득하였고, 이것을 다음 단계에서 바로 사용하였다. m/z: ES+ [M+H]+ 558.
실시예 11
N
-(3,5-디플루오로-4-((6
S
,8
R
)-7-((1-플루오로사이클로프로필)메틸)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)페닐)-1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-아민
디옥산 중 4 N HCl(0.25 ㎖, 0.99 m㏖)을 메탄올(0.30 ㎖) 중 N-(3,5-디플루오로-4-((6S,8R)-7-((1-플루오로사이클로프로필)메틸)-8-메틸-3-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)페닐)-1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-아민(58 ㎎, 0.10 m㏖)의 용액에 첨가하고, 반응물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 휘발물을 증발시키고, 잔류물을 포화 수성 NaHCO3(30 ㎖) 중에 현탁시키고, DCM(x2)으로 추출하였다. 유기 상을 MgSO4 위에서 건조시키고, 여과시키고 증발시켰다. 미정제 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피로 정제하고, DCM 중 0% 내지 10% 1 M NH3/MeOH의 구배를 이용하여 용리시켰다. 생성물 함유 분획을 증발 건조시켜 백색의 고체로서 N-(3,5-디플루오로-4-((6S,8R)-7-((1-플루오로사이클로프로필)메틸)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)페닐)-1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-아민(45.4 ㎎, 91%)을 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, CDCl3, 27℃) 0.47 (2H, dtd), 0.95 (2H, dt), 1.08 (3H, d), 1.68 - 1.85 (2H, m), 2.59 (2H, s), 2.69 (1H, dd), 2.91 (3H, dq), 3.14 (1H, dd), 3.43 (1H, dd), 3.69 (2H, q), 3.81 (1H, dd), 4.01 (1H, q), 4.28 (1H, d), 4.43 (1H, t), 4.53 (1H, t), 5.19 (1H, s), 5.96 (2H, d), 6.82 (1H, d), 7.15 (1H, d), 8.06 (1H, d), 10.36 (1H, s). m/z (ES+), [M+H]+ = 502.
N-(3,5-디플루오로-4-((6S,8R)-7-((1-플루오로사이클로프로필)메틸)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)페닐)-1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-아민을 하기와 같이 제조하였다:
(1
S
,3
R
)-1-(4-브로모-2,6-디플루오로페닐)-2-((1-플루오로사이클로프로필)메틸)-3,5-디메틸-1,2,3,4-테트라하이드로이소퀴놀린-6-아민의 제법
H2O(0.13 ㎖, 7.40 m㏖) 및 아세트산(5.79 ㎖)의 혼합물 중 (R)-3-(2-(((1-플루오로사이클로프로필)메틸)아미노)프로필)-2-메틸아닐린(0.35 g, 1.48 m㏖) 및 4-브로모-2,6-디플루오로벤즈알데하이드(0.33 g, 1.48 m㏖)를 80℃에서 7시간 동안 가열하였다. 용매를 증발시키고, 잔류물을 HCl(1 N, 10 ㎖)로 처리하고, 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 pH가 8 초과일 때까지, 반응물에 고체 Na2CO3을 첨가하였다. 혼합물을 H2O(40 ㎖)로 희석하고, EtOAc(2 x 50 ㎖)로 2회 추출하였다. 유기 상을 MgSO4 위에서 건조시키고, 여과시키고, 농축시키고, 실리카 크로마토그래피(헵탄 중 10% 내지 70% EtOAc)로 정제하여 담황색의 검으로서 (1S,3R)-1-(4-브로모-2,6-디플루오로페닐)-2-((1-플루오로사이클로프로필)메틸)-3,5-디메틸-1,2,3,4-테트라하이드로이소퀴놀린-6-아민(0.285 g, 44%)을 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, CDCl3, 27℃) 0.44 (2H, dq), 0.91 - 0.95 (1H, m), 0.95 - 0.99 (1H, m), 1.02 (3H, d), 2.06 (3H, s), 2.50 - 2.65 (2H, m), 3.00 - 3.15 (2H, m), 3.50 (2H, s), 3.69 (1H, d), 5.17 (1H, s), 6.42 (2H, s), 6.97 (1H, d), 6.99 (1H, d). m/z (ES+), [M+H]+ = 439.
(6
S
,8
R
)-6-(4-브로모-2,6-디플루오로페닐)-7-((1-플루오로사이클로프로필)메틸)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린의 제법
프로피온산(2.66 ㎖) 중 (1S,3R)-1-(4-브로모-2,6-디플루오로페닐)-2-((1-플루오로사이클로프로필)메틸)-3,5-디메틸-1,2,3,4-테트라하이드로이소퀴놀린-6-아민(0.280 g, 0.64 m㏖)을 -17℃까지 냉각시켰다(드라이아이스/아세톤 배쓰). 물(0.53 ㎖) 중 아질산나트륨(0.044 g, 0.64 m㏖)을 적가하고, 반응 혼합물을 -17℃에서 30분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 빙냉 톨루엔(15 ㎖)으로 희석하고, 4℃에서 15분 동안 교반하였다. 이후, 혼합물을 교반하고, 45분 동안 실온까지 가온시켰다. 반응 혼합물을 물(2 x 15 ㎖)로 세척하고, 합한 수성 상을 EtOAc(2 x 10 ㎖)로 세척하고, 합한 유기물을 포화 수성 염화나트륨(1 x 20 ㎖)으로 세척하고, 건조시키고(MgSO4), 여과시키고, 여과액을 증발시켜 오렌지색 내지 갈색의 오일이 되게 하였다. 미정제 재료를 플래시 실리카 크로마토그래피(용리 구배 헵탄 중 0% 내지 40% EtOAc)로 정제하여 회백색의 고체로서 (6S,8R)-6-(4-브로모-2,6-디플루오로페닐)-7-((1-플루오로사이클로프로필)메틸)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린(0.216 g, 75%)을 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, CDCl3, 27℃) 0.46 (2H, dddd), 0.91 - 1.04 (2H, m), 1.07 (3H, d), 2.66 (1H, dd), 2.95 (1H, dd), 3.15 (1H, dd), 3.46 (1H, dd), 3.83 (1H, dd), 5.32 (1H, s), 6.76 (1H, d), 7.00 (2H, d), 7.18 (1H, d), 8.09 (1H, d), 10.52 (1H, s). m/z (ES+), [M+H]+ = 450.
(6
S
,8
R
)-6-(4-브로모-2,6-디플루오로페닐)-7-((1-플루오로사이클로프로필)메틸)-8-메틸-3-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린 및 (6
S
,8
R
)-6-(4-브로모-2,6-디플루오로페닐)-7-((1-플루오로사이클로프로필)메틸)-8-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린의 제법
마이크로파 바이알을 (6S,8R)-6-(4-브로모-2,6-디플루오로페닐)-7-((1-플루오로사이클로프로필)메틸)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린(216 ㎎, 0.48 m㏖), 4-메틸벤젠설폰산 수화물(9.1 ㎎, 0.05 m㏖), 3,4-디하이드로-2H-피란(0.07 ㎖, 0.72 m㏖) 및 DCM(2 ㎖)에 의해 충전하였다. 혼합물을 마이크로파에서 80℃에서 20분 동안 가열하였다. 추가(0.035 ㎖, 0.36 m㏖)의 3,4-디하이드로-2H-피란을 첨가하고, 반응물을 추가로 15분 동안 85℃까지 가열하였다. 반응물을 DCM으로 희석하고, 포화 수성 NaHCO3으로 세척하고, 이후 유기 층을 Na2SO4 위에서 건조시키고, 여과시키고, 농축시켰다. 미정제 생성물을 플래시 실리카 크로마토그래피(용리 구배 헵탄 중 0% 내지 50% EtOAc)로 정제하였다. 생성물 함유 분획을 증발 건조시켜 담황색의 검으로서 2개의 위치이성질체 THP 보호된 생성물 (6S,8R)-6-(4-브로모-2,6-디플루오로페닐)-7-((1-플루오로사이클로프로필)메틸)-8-메틸-3-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린 및 (6S,8R)-6-(4-브로모-2,6-디플루오로페닐)-7-((1-플루오로사이클로프로필)메틸)-8-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린(237 ㎎, 92%)을 수득하였다(주어진 주요 이성질체에 대한 데이터). 1H NMR (500 MHz, CDCl3, 27℃) 0.35 - 0.55 (2H, m), 0.96 (2H, ddd), 1.05 (3H, dd), 1.58 - 1.84 (3H, m), 1.97 - 2.32 (3H, m), 2.64 (1H, dd), 2.77 (1H, dd), 3.14 (1H, ddd), 3.29 - 3.54 (1H, m), 3.62 - 3.91 (2H, m), 3.96 - 4.25 (1H, m), 5.26 (1H, d), 5.65 (1H, ddd), 6.64 (1H, d), 7.00 (2H, d), 7.26 - 7.45 (1H, m), 8.13 (1H, dd). m/z (ES+), [M+H]+ = 534.
N
-(3,5-디플루오로-4-((6
S
,8
R
)-7-((1-플루오로사이클로프로필)메틸)-8-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)페닐)-1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-아민의 제법
[(2-디-사이클로헥실포스피노-3,6-디메톡시-2',4',6'-트리이소프로필-1,1'-비페닐)-2-(2'-아미노-1,1'-비페닐)]팔라듐(II) 메탄설포네이트(BrettPhos Pd G3)(5.0 ㎎, 5.54 μ㏖)를 탈기된 1,4-디옥산(0.58 ㎖) 중 (6S,8R)-6-(4-브로모-2,6-디플루오로페닐)-7-((1-플루오로사이클로프로필)메틸)-8-메틸-3-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린 및 (6S,8R)-6-(4-브로모-2,6-디플루오로페닐)-7-((1-플루오로사이클로프로필)메틸)-8-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린(37 ㎎, 0.07 m㏖), 1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-아민(22.9 ㎎, 0.17 m㏖) 및 나트륨 tert-부톡사이드(13.3 ㎎, 0.14 m㏖)의 현탁액에 첨가하고, 반응물을 마이크로파에서 1.5시간 동안 95℃까지 가열하였다. 반응 혼합물을 EtOAc로 희석하고, 셀라이트를 통해 여과시키고, 증발 건조시켰다. 미정제 생성물을 플래시 실리카 크로마토그래피(용리 구배 DCM 중 0% 내지 10% 1 M NH3/MeOH)로 정제하였다. 순수한 분획을 증발 건조시켜 무색의 건조 필름으로서 N-(3,5-디플루오로-4-((6S,8R)-7-((1-플루오로사이클로프로필)메틸)-8-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)페닐)-1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-아민(18.0 ㎎, 44%)을 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, CDCl3, 27℃) 0.38 - 0.54 (2H, m), 0.94 (2H, ddd), 1.06 (3H, dd), 1.67 - 1.82 (4H, m), 2.04 - 2.25 (4H, m), 2.59 (2H, t), 2.63 - 2.77 (2H, m), 2.89 (2H, dd), 3.14 (1H, s), 3.29 - 3.37 (1H, m), 3.70 (2H, q), 3.75 - 3.81 (2H, m), 4.00 (1H, q), 4.12 - 4.17 (1H, m), 4.22 (1H, d), 4.43 (1H, t), 4.52 (1H, t), 5.10 (1H, s), 5.55 - 5.74 (1H, m), 5.96 (2H, d), 6.71 (1H, d), 7.28 - 7.44 (1H, m), 8.10 (1H, dd). m/z (ES+), [M+H]+ = 586.
실시예 12 및 실시예 13
(6
S
,8
R
)-7-(2-플루오로-3-메톡시-2-메틸프로필)-6-(4-(1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일옥시)-2-메톡시페닐)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린의 개별 부분입체이성질체의 제법
DMF(0.66 ㎖), 이어서 DIPEA(23.9 ㎕, 0.14 m㏖)를 (6S,8R)-6-(4-(아제티딘-3-일옥시)-2-메톡시페닐)-7-(2-플루오로-3-메톡시-2-메틸프로필)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린(32 ㎎, 0.07 m㏖)에 의해 충전된 플라스크에 첨가하였다. 교반된 반응물에 1-플루오로-3-요오도프로판(13.5 ㎎, 0.07 m㏖)을 적가 주입하고, 반응물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응물을 증발 건조시키고, 잔류물을 플래시 실리카 크로마토그래피(용리 구배 DCM 중 0% 내지 10% 1 M NH3/MeOH)로 정제하였다. 생성물 함유 분획을 증발 건조시켜 부분입체이성질체 혼합물로서 생성물을 수득하였다. 부분입체이성질체를 용리제로서 CO2 중 점감적으로 등용매성인 40% MeOH + 0.1% NH3을 사용하여 키랄 분취용 SFC(Phenomonex Lux C4 칼럼, 5 μ 실리카, 30 ㎜ 직경, 250 ㎜ 길이)에 의해 분리하여 담황색의 건조 필름으로서 제1 용리 이성질체(8.0 ㎎, 22%) 및 제2 용리 이성질체(8.0 ㎎, 22%)를 수득하였다.
이성질체 1: 1H NMR (500 MHz, CDCl3, 27℃) 1.06 (3H, d), 1.28 (3H, d), 1.72 - 1.83 (2H, m), 2.47 (1H, dd), 2.63 (2H, t), 2.8 - 2.95 (2H, m), 3.03 - 3.11 (2H, m), 3.19 (2H, s), 3.33 (3H, s), 3.56 (1H, dd), 3.67 (1H, d), 3.79 (2H, q), 3.86 (3H, s), 4.44 (1H, t), 4.53 (1H, t), 4.74 (1H, t), 5.32 (1H, s), 6.10 (1H, dd), 6.41 (1H, d), 6.69 (1H, d), 6.76 (1H, d), 7.13 (1H, d), 8.05 (1H, d), 10.20 (1H, s). m/z (ES+), [M+H]+ = 529;
이성질체 2: 1H NMR (500 MHz, CDCl3, 27℃) 1.06 (3H, d), 1.25 (3H, d), 1.70 - 1.82 (2H, m), 2.45 - 2.56 (1H, m), 2.63 (2H, t), 2.78 - 2.91 (2H, m), 3.02 - 3.11 (2H, m), 3.18 (1H, d), 3.36 (3H, s), 3.42 (1H, dd), 3.47 - 3.55 (1H, m), 3.62 (1H, d), 3.74 - 3.82 (2H, m), 3.86 (3H, s), 4.43 (1H, t), 4.53 (1H, t), 4.73 (1H, t), 5.36 (1H, s), 6.08 (1H, dd), 6.41 (1H, d), 6.67 (1H, d), 6.79 (1H, d), 7.15 (1H, d), 8.06 (1H, d), 10.20 (1H, s). m/z (ES+), [M+H]+ = 529.
(6S,8R)-6-(4-(아제티딘-3-일옥시)-2-메톡시페닐)-7-(2-플루오로-3-메톡시-2-메틸프로필)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린을 하기와 같이 제조하였다:
(6
S
,8
R
)-6-(4-(아제티딘-3-일옥시)-2-메톡시페닐)-7-(2-플루오로-3-메톡시-2-메틸프로필)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린의 부분입체이성질체 혼합물의 제법
tert-부틸 3-하이드록시아제티딘-1-카복실레이트(102 ㎎, 0.59 m㏖), (6S,8R)-6-(4-브로모-2-메톡시페닐)-7-(2-플루오로-3-메톡시-2-메틸프로필)-8-메틸-3-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린(110 ㎎, 0.20 m㏖), tert-부틸 3-하이드록시아제티딘-1-카복실레이트(102 ㎎, 0.59 m㏖), Pd RockPhos 제3세대(16.6 ㎎, 0.02 m㏖) 및 탄산세슘(128 ㎎, 0.39 m㏖)을 톨루엔(1.26 ㎖) 중에 현탁시키고, 마이크로파 관으로 밀봉하였다. 반응물을 20시간 동안 95℃까지 가열하였다. 반응 혼합물을 EtOAc(25 ㎖)로 희석하고, 셀라이트를 통해 여과시켰다. 미정제 생성물을 플래시 실리카 크로마토그래피(용리 구배 헵탄 중 0% 내지 100% EtOAc)로 정제하였다. 불순한 생성물을 함유하는 분획을 증발 건조시키고, DCM(1.3 ㎖) 중에 용해시키고, 여기에 TFA(378 ㎕, 4.91 m㏖)를 적가하였다. 반응물을 실온에서 2시간 동안 교반하고, 이후 휘발물을 진공 하에서 제거하였다. 잔류물을 포화 수성 NaHCO3(30 ㎖)으로 세척하고, DCM(2 x 30 ㎖)으로 추출하였다. 합한 유기 상을 MgSO4 위에서 건조시키고, 여과시키고 증발시켰다. 미정제 생성물을 플래시 실리카 크로마토그래피(용리 구배 DCM 중 0% 내지 40% 1 M NH3/MeOH)로 정제하였다. 순수한 분획을 증발 건조시켜 백색의 고체로서 (6S,8R)-6-(4-(아제티딘-3-일옥시)-2-메톡시페닐)-7-(2-플루오로-3-메톡시-2-메틸프로필)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린(35.0 ㎎, 38%)을 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, CDCl3, 27℃) 1.06 (3H, dd), 1.24 - 1.35 (3H, m), 2.49 (1H, dt), 2.76 - 2.96 (2H, m), 3.08 - 3.27 (2H, m), 3.34 (3H, d), 3.41 (1H, s), 3.53 - 3.69 (2H, m), 3.69 - 3.93 (7H, m), 4.81 - 5.08 (1H, m), 5.34 (1H, d), 6.02 - 6.12 (1H, m), 6.40 (1H, t), 6.68 (1H, s), 6.77 (1H, dd), 7.13 (1H, d), 8.05 (1H, t). m/z (ES+), [M+H]+ = 469.
실시예 14 및 실시예 15
N
-(4-((6
S
,8
R
)-7-(2-플루오로-3-메톡시-2-메틸프로필)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)-3-메톡시페닐)-1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-아민의 개별 부분입체이성질체의 제법
1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-아민(175 ㎎, 1.32 m㏖), (6S,8R)-6-(4-브로모-2-메톡시페닐)-7-(2-플루오로-3-메톡시-2-메틸프로필)-8-메틸-3-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린(370 ㎎, 0.66 m㏖) 및 나트륨 tert-부톡사이드(127 ㎎, 1.32 m㏖)를 1,4-디옥산(8 ㎖) 중에 현탁시켰다. 혼합물을 탈기시키고, [(2-디-사이클로헥실포스피노-3,6-디메톡시-2',4',6'-트리이소프로필-1,1'-비페닐)-2-(2'-아미노-1,1'-비페닐)]팔라듐(II) 메탄설포네이트 메탄설포네이트(Brett Phos G3)(60 ㎎, 0.07 m㏖)를 첨가하였다. 반응물을 3시간 동안 100℃까지 가열하였다. 반응 혼합물을 DCM(100 ㎖)로 희석하고, 물(100 ㎖)로 세척하였다. 유기 층을 증발시켰다. 이 공정을 114 ㎎(0.3 m㏖)의 아릴 브로마이드를 사용하여 반복하였다. 이 반응으로부터의 합한 미정제 생성물을 염산(2 M, 5 ㎖) 중에 현탁시키고, 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물(10 ㎖)로 희석하고, EtOAc(10 ㎖)로 세척하였다. 수성 상을 2 M 수성 수산화나트륨에 의해 염기성화시키고, DCM(2 x 15 ㎖)으로 추출하였다. 합한 유기물을 증발시키고, 미정제 생성물을 플래시 실리카 크로마토그래피(용리 구배 DCM 중 0% 내지 20% MeOH)로 정제하였다. 분획을 증발 건조시켜 부분입체이성질체의 혼합물로서 미정제 생성물을 수득하였고, 이것을 용리제로서 CO2 중 점감적으로 등용매성인 40% MeOH + 0.1% NH3을 사용하여 키랄 분취용 SFC(Phenomonex Lux C4 칼럼, 5 μ 실리카, 30 ㎜ 직경, 250 ㎜ 길이)로 분리하여 제1 용리 이성질체(42 ㎎, 19%) 및 제2 용리 이성질체(29 ㎎, 13%)를 수득하였다.
이성질체 1: 1H NMR (500 MHz, DMSO, 27℃) 0.96 (3H, d), 1.20 (3H, d), 2.36 - 2.44 (1H, m), 2.65 - 2.85 (3H, m), 2.92 (4H, q), 3.05 - 3.22 (3H, m), 3.23 (3H, s), 3.24 - 3.27 (2H, m), 3.46 - 3.59 (2H, m), 3.78 (3H, s), 4.49 (2H, dd), 5.16 (1H, s), 5.35 (1H, t), 5.95 (1H, dd), 6.23 (1H, d), 6.36 (1H, d), 6.63 (1H, d), 7.16 (1H, d), 8.02 (1H, s), 12.90 (1H, s); 19F NMR (471 MHz, DMSO, 27℃) -219.77, -149.11, m/z: ES+ [M+H]+ 528.
이성질체 2: 1H NMR (500 MHz, DMSO, 27℃) 0.97 (3H, d), 1.19 (3H, d), 2.68 - 2.81 (3H, m), 2.88 - 2.95 (3H, m), 3.05 - 3.11 (1H, m), 3.21 - 3.28 (5H, m), 3.32 - 3.39 (1H, m), 3.43 - 3.56 (2H, m), 3.79 (3H, s), 4.49 (2H, dd), 5.17 (1H, s), 5.34 (1H, t), 5.93 (1H, dd), 6.23 (1H, d), 6.35 (1H, d), 6.64 (1H, d), 7.16 (1H, d), 8.02 (1H, s), 12.90 (1H, s); 19F NMR (471 MHz, DMSO, 27℃) -219.76, -148.20; m/z: ES+ [M+H]+ 528.
실시예 16
2,2-디플루오로-3-((6
S
,8
R
)-6-(5-((1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일)아미노)피리딘-2-일)-8-메틸-3,6,8,9-테트라하이드로-7H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-7-일)프로판-1-올의 제법
염산(2.0 M, 0.5 ㎖)을 2,2-디플루오로-3-((6S,8R)-6-(5-((1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일)아미노)피리딘-2-일)-8-메틸-3-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-3,6,8,9-테트라하이드로-7H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-7-일)프로판-1-올(0.132 g, 0.23 m㏖)에 첨가하고, 용액을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 SCX 칼럼을 사용하여 이온 교환 크로마토그래피로 정제하였다. 원하는 생성물을 1 M NH3/MeOH를 사용하여 칼럼으로부터 용리시켜 백색의 고체로서 2,2-디플루오로-3-((6S,8R)-6-(5-((1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일)아미노)피리딘-2-일)-8-메틸-3,6,8,9-테트라하이드로-7H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-7-일)프로판-1-올(0.084 g, 75%)을 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, DMSO, 27℃) 1.04 (3H, d), 1.20 - 1.28 (2H, m) 1.59 - 1.71 (2H, m), 2.60 - 2.70 (1H, m), 2.73 - 2.84 (3H, m), 2.99 (1H, dd), 3.08 - 3.18 (1H, m), 3.41 (1H, d), 3.61 - 3.72 (4H, m), 3.93 (1H, d), 4.44 (2H, dt), 4.94 (1H, s), 5.42 (1H, t), 6.21 (1H, d), 6.78 - 6.82 (2H, m), 6.90 (1H, d), 7.21 (1H, d), 7.74 (1H, d), 8.03 (1H, s), 12.94 (1H, s); 19F NMR (471 MHz, DMSO, 27℃) -218.24, -108.31; m/z: ES+ [M+H]+ 489.
2,2-디플루오로-3-((6S,8R)-6-(5-((1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일)아미노)피리딘-2-일)-8-메틸-3-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-3,6,8,9-테트라하이드로-7H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-7-일)프로판-1-올을 하기와 같이 제조하였다:
(1
S
,3
R
)-1-(5-브로모피리딘-2-일)-2-(3-((tert-부틸디페닐실릴)옥시)-2,2-디플루오로프로필)-3,5-디메틸-1,2,3,4-테트라하이드로이소퀴놀린-6-아민의 제법
(R)-3-(2-((3-((tert-부틸디페닐실릴)옥시)-2,2-디플루오로프로필)아미노)프로필)-2-메틸아닐린(1.20 g, 2.42 m㏖) 및 5-브로모피콜린알데하이드(0.944 g, 5.07 m㏖)를 아세트산(12 ㎖) 및 물(0.22 ㎖, 12.08 m㏖) 중에 30분 동안 70℃까지 가열하였다. 반응 혼합물을 증발시키고, 잔류물을 에탄올(10 ㎖) 중에 재용해시켰다. 아세트산 칼륨(0.594 g, 6.05 m㏖) 및 하이드록실아민 하이드로클로라이드(0.252 g, 3.63 m㏖)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반한 후 증발시키고, 잔류물을 DCM(30 ㎖)과 포화 수성 중탄산나트륨(30 ㎖) 사이에 분배하였다. 유기 상을 증발시키고, 미정제 생성물을 플래시 실리카 크로마토그래피(용리 구배 헵탄 중 0% 내지 50% EtOAc)로 정제하여 무색의 검으로서 (1S,3R)-1-(5-브로모피리딘-2-일)-2-(3-((tert-부틸디페닐실릴)옥시)-2,2-디플루오로프로필)-3,5-디메틸-1,2,3,4-테트라하이드로이소퀴놀린-6-아민(1.090 g, 68%)을 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, DMSO, 27℃) 0.96 (9H, s), 0.98 (3H, d), 1.94 (3H, s), 2.40 (1H, dd), 2.57 (1H, dd), 2.66 - 2.78 (1H, m), 3.11 - 3.22 (2H, m), 3.84 - 3.93 (1H, m), 3.95 - 4.05 (1H, m), 4.69 (2H, s), 4.91 (1H, s), 6.39 (1H, d), 6.42 (1H, d), 6.99 (1H, d), 7.39 - 7.48 (6H, m), 7.59 (4H, ddd), 7.80 (1H, dd), 8.51 (1H, dd); 19F NMR (471 MHz, DMSO, 27℃) -109.84 (d), -108.39 (d); m/z: ES+ [M+H]+ 664/666.
(6
S
,8
R
)-6-(5-브로모피리딘-2-일)-7-(3-((tert-부틸디페닐실릴)옥시)-2,2-디플루오로프로필)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린의 제법
물(1.0 ㎖) 중 아질산나트륨(119 ㎎, 1.72 m㏖)을 아세토니트릴(6 ㎖) 중 (1S,3R)-1-(5-브로모피리딘-2-일)-2-(3-((tert-부틸디페닐실릴)옥시)-2,2-디플루오로프로필)-3,5-디메틸-1,2,3,4-테트라하이드로이소퀴놀린-6-아민(1.09 g, 1.64 m㏖) 및 파라-톨루엔설폰산 수화물(0.94 g, 4.92 m㏖)의 얼음 냉각된 용액에 첨가하였다. 반응물을 15분 동안 교반하고, 이후 45분 동안 실온까지 가온시켰다. 4℃까지 다시 냉각시킨 후, 빙냉 MeCN(40 ㎖) 중 테트라부틸암모늄 아세테이트(2.54 g, 8.20 m㏖)를 첨가하고, 반응물을 15분 동안 교반한 후, 추가로 30분 동안 실온까지 가온시키고, EtOAc(120 ㎖), 이어서 2 M NaOH(100 ㎖)를 첨가하였다. 유기 상을 포화 수성 염화나트륨으로 세척하고, 건조시키고(Na2SO4), 증발시켰다. 미정제 생성물을 플래시 실리카 크로마토그래피(용리 구배 헵탄 중 0% 내지 50% EtOAc)로정제하여 담갈색의 폼으로서 (6S,8R)-6-(5-브로모피리딘-2-일)-7-(3-((tert-부틸디페닐실릴)옥시)-2,2-디플루오로프로필)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린(0.330 g, 30%)을 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, DMSO, 27℃) 0.97 (9H, s), 1.06 (3H, d), 2.75 - 2.91 (2H, m), 2.99 - 3.06 (1H, m), 3.34 - 3.41 (2H, m), 3.88 - 4.01 (2H, m), 5.12 (1H, s), 6.83 (1H, d), 7.12 (1H, d), 7.26 (1H, d), 7.39 - 7.45 (4H, m), 7.46 - 7.50 (2H, m), 7.56 - 7.62 (4H, m), 7.85 (1H, dd), 8.07 - 8.09 (1H, m), 8.54 (1H, dd), 13.02 (1H, s); 19F NMR (471 MHz, DMSO, 27℃) -110.01 (d), -108.72 (d); m/z: ES+ [M+H]+ 675/677.
(6
S
,
8R)
-6-(5-브로모피리딘-2-일)-7-(3-((tert-부틸디페닐실릴)옥시)-2,2-디플루오로프로필)-8-메틸-3-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린의 부분입체이성질체 혼합물의 제법
DCM(5 ㎖) 중 (6S,8R)-6-(5-브로모피리딘-2-일)-7-(3-((tert-부틸디페닐실릴)옥시)-2,2-디플루오로프로필)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린(0.330 g, 0.49 m㏖) 및 3,4-디하이드로-2H-피란(0.13 ㎖, 1.47 m㏖)의 용액에 파라 톨루엔설폰산 수화물(93 ㎎, 0.49 m㏖)을 첨가하고, 반응물을 40℃에서 1시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 DCM(20 ㎖)으로 희석하고, 포화 수성 중탄산나트륨(20 ㎖)으로 세척하였다. 유기 상을 증발시켜 암갈색의 오일이 되게 하고, 미정제 생성물을 플래시 실리카 크로마토그래피(용리 구배 헵탄 중 0% 내지 50% EtOAc)로 정제하여 검으로서 (6S,8R)-6-(5-브로모피리딘-2-일)-7-(3-((tert-부틸디페닐실릴)옥시)-2,2-디플루오로프로필)-8-메틸-3-((S)-테트라하이드로-2H-피란-2-일)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린(0.330 g, 89%)을 수득하였다. 19F NMR (471 MHz, DMSO, 27℃) -110.03 (d), -108.83 (d), -108.79 (d); m/z: ES+ [M+H]+ 759/761.
6-((6
S
,8
R
)-7-(3-((
tert
-부틸디페닐실릴)옥시)-2,2-디플루오로프로필)-8-메틸-3-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)-
N
-(1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일)피리딘-3-아민의 부분입체이성질체 혼합물의 제법
1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-아민(0.115 g, 0.87 m㏖), (6S,8R)-6-(5-브로모피리딘-2-일)-7-(3-((tert-부틸디페닐실릴)옥시)-2,2-디플루오로프로필)-8-메틸-3-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린(0.330 g, 0.43 m㏖), 디사이클로헥실(2',4',6'-트리이소프로필-3,6-디메톡시-[1,1'-비페닐]-2-일)포스판(0.023 g, 0.04 m㏖) 및 나트륨 tert-부톡사이드(0.125 g, 1.30 m㏖)를 1,4-디옥산(4 ㎖) 중에 현탁시켰다. 혼합물을 탈기시키고, [(2-디-사이클로헥실포스피노-3,6-디메톡시-2',4',6'- 트리이소프로필-1,1'-비페닐)-2-(2'-아미노-1,1'-비페닐)]팔라듐(II) 메탄설포네이트 메탄설포네이트(BrettPhos G3)(0.039 g, 0.04 m㏖)를 첨가하였다. 반응물을 3시간 동안 100℃까지 가열하였다. 반응 혼합물을 DCM(50 ㎖)으로 희석하고, 물(50 ㎖)로 세척하였다. 유기 층을 증발시키고, 미정제 생성물을 플래시 실리카 크로마토그래피(용리 구배 DCM 중 0% 내지 20% MeOH)로 정제하여 부분입체이성질체의 혼합물로서 황색의 검으로서 6-((6S,8R)-7-(3-((tert-부틸디페닐실릴)옥시)-2,2-디플루오로프로필)-8-메틸-3-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)-N-(1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일)피리딘-3-아민(0.264 g, 75%)을 수득하였다. 19F NMR (471 MHz, DMSO, 27℃) -218.19, -110.13, -109.44, -108.6 -107.8; m/z: ES+ [M+H]+ 811.
2,2-디플루오로-3-((6
S
,8
R
)-6-(5-((1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일)아미노)피리딘-2-일)-8-메틸-3,6,8,9-테트라하이드로-7H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-7-일)프로판-1-올의 부분입체이성질체 혼합물의 제법
테트라부틸암모늄 플루오라이드(THF 중 1.0 M, 0.5 ㎖, 0.50 m㏖)를 THF(2 ㎖) 중 6-((6S,8R)-7-(3-((tert-부틸디페닐실릴)옥시)-2,2-디플루오로프로필)-8-메틸-3-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)-N-(1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일)피리딘-3-아민(0.264 g, 0.33 m㏖)의 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반하고, 반응 혼합물을 증발시키고, 잔류물을 DCM(20 ㎖)과 물(20 ㎖) 사이에 분배하였다. 유기 상을 증발시키고, 미정제 생성물을 플래시 실리카 크로마토그래피(용리 구배 DCM 중 0% 내지 20% MeOH)로 정제하여 부분입체이성질체의 혼합물로서 무색의 건조 필름으로서 2,2-디플루오로-3-((6S,8R)-6-(5-((1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일)아미노)피리딘-2-일)-8-메틸-3-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-3,6,8,9-테트라하이드로-7H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-7-일)프로판-1-올(0.132 g, 71%)을 수득하였다. 19F NMR (471 MHz, DMSO, 27℃) -218.19, -108.42, -108.39; m/z: ES+ [M+H]+ 573.
실시예 17
N
-(1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일)-6-((6
S
,8
R
)-8-메틸-7-(2,2,2-트리플루오로에틸)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)피리딘-3-아민의 제법
1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-아민(50 ㎎, 0.38 m㏖), (6S,8R)-6-(5-브로모피리딘-2-일)-8-메틸-3-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-7-(2,2,2-트리플루오로에틸)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린(0.100 g, 0.20 m㏖), 탄산세슘(128 ㎎, 0.39 m㏖) 및 [(2-디-사이클로헥실포스피노-3,6-디메톡시-2',4',6'-트리이소프로필-1,1'-비페닐)-2-(2'-아미노-1,1'-비페닐)]팔라듐(II) 메탄설포네이트 메탄설포네이트(Brett Phos G3)(23 ㎎, 0.02 m㏖)를 1,4-디옥산(2 ㎖) 중에 현탁시키고, 마이크로파 관으로 밀봉하였다. 반응물을 마이크로파 조사 하에 4시간 동안 100℃까지 가열하였다. 반응 혼합물을 DCM(20 ㎖)으로 희석하고, 물(20 ㎖)로 세척하였다. 유기 층을 증발시키고, 미정제 생성물을 DCM(3 ㎖) 및 TFA(0.3 ㎖) 중에 용해시켰다. 반응물을 실온에서 1시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 DCM(20 ㎖)과 2 M NaOH(20 ㎖) 사이에에 분배하였다. 유기 상을 증발시키고, 미정제 생성물을 플래시 실리카 크로마토그래피(용리 구배 DCM 중 0% 내지 20% MeOH)로 정제하였다. 생성물 함유 분획을 증발 건조시켜 무색의 건조 필름으로서 N-(1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일)-6-((6S,8R)-8-메틸-7-(2,2,2-트리플루오로에틸)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)피리딘-3-아민(9.0 ㎎, 10%)을 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, CDCl3, 27℃) 1.14 (3H, d), 1.70 - 1.82 (2H, m), 2.62 (2H, t), 2.85 (1H, dd), 2.93 - 3.06 (3H, m), 3.20 - 3.31 (2H, m), 3.59 (1H, td), 3.73 (2H, dt), 4.10 (2H, dd), 4.48 (2H, dt), 5.03 (1H, s), 6.80 (1H, dd), 6.89 (1H, d), 7.15 (1H, d), 7.21 (1H, d), 7.84 (1H, dd), 8.01 (1H, d); 19F NMR (471 MHz, DMSO, 27℃) -224.69, -75.55; m/z: ES+ [M+H]+ 477.
(6S,8R)-6-(5-브로모피리딘-2-일)-8-메틸-3-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-7-(2,2,2-트리플루오로에틸)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린을 하기와 같이 제조하였다.
(1
S
,3
R
)-1-(5-브로모피리딘-2-일)-3,5-디메틸-2-(2,2,2-트리플루오로에틸)-1,2,3,4-테트라하이드로이소퀴놀린-6-아민의 제법
(R)-2-메틸-3-(2-((2,2,2-트리플루오로에틸)아미노)프로필)아닐린(0.290 g, 1.18 m㏖) 및 5-브로모피콜린알데하이드(0.460 g, 2.47 m㏖)를 아세트산(6 ㎖) 및 물(0.1 ㎖) 중에 30분 동안 70℃까지 가열하였다. 반응 혼합물을 증발시키고, 잔류물을 에탄올(10 ㎖) 중에 용해시켰다. 아세트산 칼륨(0.290 g, 2.95 m㏖) 및 하이드록실아민 하이드로클로라이드(0.123 g, 1.77 m㏖)를 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 증발시키고, 잔류물을 DCM(30 ㎖)과 포화 수성 중탄산나트륨(30 ㎖) 사이에 분배하였다. 유기 상을 증발시키고, 미정제 생성물을 플래시 실리카 크로마토그래피(용리 구배 헵탄 중 0% 내지 50% EtOAc)로 정제하여 무색의 건조 필름으로서 (1S,3R)-1-(5-브로모피리딘-2-일)-3,5-디메틸-2-(2,2,2-트리플루오로에틸)-1,2,3,4-테트라하이드로이소퀴놀린-6-아민(0.264 g, 54%)을 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, DMSO, 27℃) 1.03 (3H, d), 1.94 (3H, s), 2.45 (1H, dd), 2.67 (1H, dd), 2.90 (1H, dd), 3.22 - 3.29 (1H, m), 3.49 (1H, dd), 4.69 (2H, s), 4.85 (1H, s), 6.40 - 6.46 (2H, m), 7.21 (1H, d), 7.95 (1H, dd), 8.56 (1H, dd); 19F NMR (471 MHz, DMSO, 27℃) -69.83; m/z: ES+ [M+H]+ 414/416.
(6
S
,8
R
)-6-(5-브로모피리딘-2-일)-8-메틸-3-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-7-(2,2,2-트리플루오로에틸)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린의 제법
아질산나트륨(0.048 g, 0.70 m㏖)을 -10℃에서 프로피온산(2.5 ㎖) 중 (1S,3R)-1-(5-브로모피리딘-2-일)-3,5-디메틸-2-(2,2,2-트리플루오로에틸)-1,2,3,4-테트라하이드로이소퀴놀린-6-아민(0.264 g, 0.64 m㏖)의 냉각된 용액에 물(0.2 ㎖) 중에 첨가하였다. 반응물을 1시간 동안 교반하고, 이후 빙냉 EtOAc(10 ㎖)를 첨가하였다. 반응물을 수성 포화 중탄산나트륨(15 ㎖)의 첨가에 의해 켄칭시키고, 15분 동안 교반한 후, 실온까지 가온되게 하였다. 유기 상을 건조시키고(Na2SO4), 증발시켜 갈색의 검으로서 미정제 (6S,8R)-6-(5-브로모피리딘-2-일)-8-메틸-7-(2,2,2-트리플루오로에틸)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린(0.272 g, 0.64 m㏖)을 수득하였다. 재료를 DCM(10 ㎖) 중에 용해시키고, 파라 톨루엔설폰산 수화물(0.012 g, 0.06 m㏖)을 첨가하고, 혼합물을 40℃에서 2시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 DCM(20 ㎖)으로 희석하고, 수성 NaOH(2 M, 30 ㎖)로 세척하였다. 유기 상을 증발시켜 암갈색의 오일이 되게 하고, 미정제 생성물을 플래시 실리카 크로마토그래피(용리 구배 헵탄 중 0% 내지 40% EtOAc)로 정제하여 (6S,8R)-6-(5-브로모피리딘-2-일)-8-메틸-3-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-7-(2,2,2-트리플루오로에틸)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린(0.142 g, 44%)을 수득하였다. m/z: ES+ [M+H]+ 509/511.
실시예 17에 대한 대안적인 경로 #1:
N
-[1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일]-6-[(6
S
,8
R
)-8-메틸-7-(2,2,2-트리플루오로에틸)-3,6,8,9-테트라하이드로피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일]피리딘-3-아민의 제법
트리플루오로 아세트산(1.30 ℓ, 17.04 ㏖)을 0.5시간에 걸쳐 0℃에서 DCM(1.50 ℓ) 중 tert-부틸 (1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일)카바메이트(0.50 ㎏, 2.04 ㏖)의 교반된 용액에 첨가하였다. 혼합물을 20℃까지 가온되게 하고, 20℃에서 2.5시간 동안 교반하였다. 혼합물을 30℃까지 가열하고, 1시간 동안 계속해서 교반하였다. 혼합물을 감압 하에 농축시키고, 잔류물을 톨루엔(3 x 3.00 ℓ)으로부터 감압 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 1,4-디옥산(3.00 ℓ) 중에 용해시키고, 45분에 걸쳐 Me-THF(5.50 ℓ, 13.63 ㏖) 중의 30% 나트륨 2-메틸부탄-2-올레이트 용액으로 처리하여, 온도가 29℃를 초과하지 않도록 보장하였다. BrettPhos Pd G3(0.077 ㎏, 0.085 ㏖) 및 1,4-디옥산(1.50 ℓ) 중의 90% w/w의 (6S,8R)-6-(5-브로모피리딘-2-일)-8-메틸-7-(2,2,2-트리플루오로에틸)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린(0.81 ㎏, 1.70 ㏖)의 용액을 첨가하고, 분위기를 진공 및 질소(3x)의 사이클을 사용하여 질소로 대체하였다. 혼합물을 55℃까지 가열하고, 55℃에서 2.5시간 교반하였다. 혼합물을 21℃까지 냉각시키고, 물 중 8% NaHCO3 용액(7.16 ℓ, 6.82 ㏖), 이어서 이소프로필 아세테이트(4.50 ℓ)를 첨가하였다. 혼합물을 2분 내지 3분 동안 교반하고, 층을 분리시켰다. 유기 층을 물 중 8% NaHCO3 용액(7.16 ℓ, 6.82 ㏖)으로 세척하고, 혼합물을 5분 동안 교반하고, 이후 층을 분리시켰다. 합한 수성 층을 이소프로필 아세테이트(4.50 ℓ)로 추출하였다. 합한 유기 층을 Silicycle(SiliaMetS-Thiol, 400 g, 1.26 m㏖/g, Pd에 대해 6 당량)로 처리하고, 혼합물을 16시간 동안 교반하였다. 고체를 셀라이트를 통한 여과에 의해 제거하여, 이소프로필 아세테이트로 필터 케이크를 세척하였다. 여과액을 감압(배쓰 온도 40℃) 하에 농축시켰다. 잔류물을 이소프로필 아세테이트(5.00 ℓ) 중에 용해시키고, 추가 Silicycle(SiliaMetS-Thiol, 250 g, 1,26 m㏖/g, Pd에 대해 3,7 당량)로 처리하였다. 생성된 혼합물을 21℃에서 16시간 동안 교반하였다. 고체를 셀라이트를 통한 여과에 의해 제거하여, 이소프로필 아세테이트(2.50 ℓ)로 필터 케이크를 세척하였다. 여과액을 감압(배쓰 온도 40℃) 하에 농축시켜 갈색의 폼을 수득하였다. 미정제 생성물을 40℃에서 400 ㎖/분의 유속으로 CO2, 140 bar 이동상 중의 EtOH/DEA 100/0.5의 구배 용리를 이용하여 분취용 SFC(Lux C4 칼럼, 50 ㎜ 직경, 250 ㎜ 길이)로 정제하여 담갈색의 고체 폼을 수득하였다. EtOAc(2.00 ℓ)를 첨가하고, 용액을 감압 하에 농축시켰다. EtOAc(1.90 ℓ) 및 헵탄(1.90 ℓ)을 첨가하고, 혼합물을 25℃에서 시딩하였다. 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 유지시켰다. 헵탄(6.50 ℓ)을 2시간에 걸쳐 교반하는 혼합물에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 22℃에서 18시간 동안 교반하였다. 생성된 고체를 여과에 의해 수집하여, 1:5 EtOAc/헵탄(2.50 ℓ)으로 필터 케이크를 세척하였다. 고체를 30분 동안 질소 블랭킷 하에 건조 흡인시키고, 이후 진공 하에 40℃에서 9일 동안 건조시켜 회백색의 고체로서 N-(1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일)-6-((6S,8R)-8-메틸-7-(2,2,2-트리플루오로에틸)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)피리딘-3-아민(626 g, 77%)을 수득하였다. 1H NMR (600 MHz, DMSO-d 6, 27℃) 1.07 (3H, d) 1.63 (2H, dquin), 2.45 (2H, t), 2.72 (2H, br t), 2.83 (1H, br dd), 2.91 - 3.00 (1H, m), 3.06 (1H, br dd) 3.42 - 3.55 (2H, m), 3.58-3.65 (2H, m), 3.92 (1H, dquin) 4.43 (2H, dt) 4.92 (1H, s), 6.22 (1H, d), 6.79 (1H, d) 6.82 (1H, dd), 6.96 (1H, d), 7.21 (1H, d), 7.73 (1H, d), 8.04 (1H, s), 12.96 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 477.
출발 재료 tert-부틸 (1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일)카바메이트 및 (6S,8R)-6-(5-브로모피리딘-2-일)-8-메틸-7-(2,2,2-트리플루오로에틸)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린을 제조하기 위해 이용된 절차는 하기와 같다.
tert
-부틸 (1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일)카바메이트의 제법
반응을 2회 수행하고, 후처리를 위해 조합하였다: 1-플루오로-3-요오도-프로판(189 g, 1.00 ㏖)을 20℃에서 THF(1.40 ℓ) 및 물(0.50 ㏖) 중 tert-부틸 N-(아제티딘-3-일)카바메이트;하이드로클로라이드(200 g, 0.96 ㏖) 및 K2CO3(331 g, 2.40 ㏖)의 교반된 혼합물에 첨가하였다. 반응 혼합물을 70℃까지 가열하고, 70℃에서 1.5시간 동안 교반하였다. 2개의 반응 혼합물을 합하고, 물(2.5 ℓ) 및 EtOAc(2.0 ℓ)에 첨가하였다. 혼합물을 21℃에서 3분 동안 교반하였다. 층을 분리시키고, 유기 층을 물(2 x 2.0 ℓ) 및 포화 염화암모늄 용액(2.0 ℓ)으로 세척하였다. 유기 층을 감압 하에 농축시켜 미정제 생성물을 수득하였다. 톨루엔(400 ㎖)을 첨가하고, 혼합물을 60℃까지 가열하였다. 헵탄(1.6 ℓ)을 첨가하고, 혼합물을 21℃까지 냉각되게 하고, 15분 동안 교반하였다. 고체를 여과에 의해 수집하고, 건조 흡인시켜 백색의 고체로서 tert-부틸 (1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일)카바메이트(230 g, 52%)를 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, CDCl3, 27℃) 1.44 (9H, s), 1.68 - 1.80 (2H, m), 2.56 (2H, t), 2.87 (2H, s), 3.66 (2H, t), 4.29 (1H, s), 4.43 (1H, t), 4.52 (1H, t), 4.86 (1H, s).
4-브로모-1-테트라하이드로피란-2-일-인다졸의 제법
DCM(2.40 ℓ) 중 4-브로모-1H-인다졸(1.50 ㎏, 7.60 ㏖) 및 3,4-디하이드로-2H-피란(0.96 ㎏, 11.40 ㏖)의 슬러리에 질소 하에 20℃에서 4-메틸벤젠설폰산 수화물(11.60 g, 0.06 ㏖)을 첨가하였다. 생성된 슬러리를 110분 동안 20℃ 내지 29℃(작은 발열)에서 교반하였다. 생성된 용액을 포화 수성 NaHCO3(2.00 ℓ)으로 세척하고, 유기 층을 감압 하에 증발시켰다. 뜨거운(70℃) 헵탄(2.50 ℓ)을 첨가하고, 혼합물을 감압 하에 증발시켜 결정질 고체를 수득하였다. 뜨거운(70℃) 헵탄(7.00 ℓ)으로부터 재결정화에 의한 정제를 수행하여 용액이 34℃까지 천천히 냉각되게 하였다. 생성된 고체를 여과에 의해 수집하고, 차가운 헵탄으로 세척하여 결정질 고체로서 4-브로모-1-테트라하이드로피란-2-일-인다졸(1.87 ㎏, 87%)을 수득하였다. 1H NMR (300 MHz, DMSO-d 6, 27℃) 1.54 - 1.66 (2H, m), 1.67 - 1.85 (1H, m), 1.94 - 2.09 (2H, m), 2.31 - 2.45 (1H, m), 3.70 - 3.81 (1H, m), 3.83 - 3.97 (1H, m), 5.88 (1H, dd), 7.32 - 7.39 (1H, m), 7.40 - 7.44 (1H, m), 7.79 (1H, dt), 8.09 (1H, d) m/z: ES- [M-H]- 282.
tert
-부틸
N
-[(1
R
)-1-메틸-2-(1-테트라하이드로피란-2-일인다졸-4-일)에틸]카바메이트의 제법
THF(3.50 ℓ) 중 4-브로모-1-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-1H-인다졸(0.70 ㎏, 2.49 ㏖)의 용액을 -70℃까지 10℃ 증분으로 점진적으로 냉각시켰다. 헥산 중 2.5 M 부틸리튬(1.10 ℓ, 2.74 ㏖)을 70분에 걸쳐 첨가하여, 내부 온도를 -60℃ 이하로 유지시켰다. 생성된 혼합물을 -72℃에서 1시간 동안 교반하였다. 헥산 중 2.3 M 헥실리튬(0.054 ℓ, 0.12 ㏖), 이어서 THF(2.80 ℓ) 중 tert-부틸 (R)-4-메틸-1,2,3-옥사티아졸리딘-3-카복실레이트 2,2-디옥사이드(652 g, 2.74 ㏖)의 용액을 2시간에 걸쳐 첨가하여, 내부 온도가 -58℃를 초과하지 않게 보장하였다. 생성된 혼합물을 -60℃에서 16시간 동안 교반하였다. 혼합물을 1.5시간에 걸쳐 -10℃까지 천천히 가온시켰다. 물(2.10 ℓ)을 조심스럽게 첨가하였다. 층을 분리시키고, 유기 층을 포화 염수(1.40 ℓ)로 세척하고, 유기 층을 감압 하에 농축시켜 오일을 수득하였다. IPA(1.50 ℓ)를 첨가하고, 혼합물을 감압 하에 농축시켜 갈색의 오일로서 tert-부틸 ((2R)-1-(1-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-1H-인다졸-4-일)프로판-2-일)카바메이트(1.27 ㎏, 100% 초과)를 수득하였다. 이것을 추가 정제 없이 취했다. 1H NMR (500 MHz, CDCl3, 27℃) 1.08 (3H, dd), 1.43 (9H, s), 1.63 - 1.69 (1H, m), 1.73 - 1.82 (2H, m), 2.07 (1H, dd), 2.17 (1H, dd), 2.53 - 2.64 (1H, m), 2.95 (1H, s), 3.21 (1H, dt), 3.70 - 3.80 (1H, m), 3.97 - 4.12 (2H, m), 4.33 - 4.49 (1H, m), 5.71 (1H, ddd), 6.96 (1H, dd), 7.31 (1H, ddd), 7.46 (1H, d), 8.13 (1H, s). m/z: ES+ [M.+] 359
(2
R
)-1-(1H-인다졸-4-일)프로판-2-아민.디하이드로클로라이드의 제법
12 M HCl(1.00 ℓ, 12.0 ㏖)을 20분에 걸쳐 IPA(1.50 ℓ) 중 tert-부틸 ((2R)-1-(1-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-1H-인다졸-4-일)프로판-2-일)카바메이트(1.27 ㎏, 1.76 ㏖)의 교반된 용액에 첨가하여 내부 온도를 30℃ 이하로 유지시켰다. 생성된 혼합물을 40℃까지 가열하고, 40℃에서 16시간 동안 교반하였다. 온도를 55℃까지 증가시키고, 12 M HCl(0.20 ℓ, 2.40 ㏖)의 추가 부분을 첨가하고, 7시간 동안 계속해서 교반하였다. MTBE(2.50 ℓ)를 첨가하고, 혼합물을 25℃에서 16시간 동안 교반되게 하였다. 생성된 고체를 여과에 의해 수집하고, 필터 케이크를 MTBE 중 10% IPA(2.00 ℓ)로 세척하였다. 생성된 고체를 감압 하에 40℃에서 72시간 동안 건조시켜 회백색의 고체로서 (2R)-1-(1H-인다졸-4-일)프로판-2-아민;디하이드로클로라이드(0.39 ㎏, 89%)를 수득하였다.
1H NMR (500 MHz, DMSO, 27℃) 1.12 (3H, d), 2.96 (1H, dd), 3.39 (1H, dd), 3.45 - 3.55 (1H, m), 6.94 (1H, d), 7.28 (1H, dd), 7.43 (1H, d), 8.23 (3H, s), 8.28 (1H, d). m/z: ES+ [M.+] 175.
(2
R
)-1-(1H-인다졸-4-일)-
N
-(2,2,2-트리플루오로에틸)프로판-2-아민의 제법
MeCN(2.00 ℓ) 중 2,2,2-트리플루오로에틸 트리플루오로메탄설포네이트(0.73 ㎏, 2.94 ㏖)의 용액을 질소 하에 25℃에서 MeCN(8.00 ℓ) 중 (R)-1-(1H-인다졸-4-일)프로판-2-아민 디하이드로클로라이드(0.77 ㎏, 2.94 ㏖) 및 K2CO3(1.26 ㎏, 9.13 ㏖)의 교반된 혼합물에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 60℃까지 가열하고, 60℃에서 18시간 동안 교반하였다. MeCN(5.00 ℓ)을 첨가하고, 고체를 여과에 의해 제거하였다. 여과액을 감압 하에 농축시키고, 생성된 고체를 EtOAc(10.00 ℓ) 중에 용해시키고, 물(4.0 ℓ) 및 희석 포화 수성 염화나트륨(4.8 ℓ)으로 세척하였다. 유기 층을 감압 하에 농축시켜 (2R)-1-(1H-인다졸-4-일)-N-(2,2,2-트리플루오로에틸)프로판-2-아민(0.73 ㎏, 96%)을 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, CDCl3, 27℃) 1.12 (3H, d), 2.96 (1H, dd), 3.08 (1H, dd), 3.14 - 3.33 (3H, m), 6.98 (1H, d), 7.32 (1H, dd), 7.37 - 7.41 (1H, m), 8.13 (1H, d), 10.86 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 257.
(6
S
,8
R
)-6-(5-브로모-2-피리딜)-8-메틸-7-(2,2,2-트리플루오로에틸)-3,6,8,9-테트라하이드로피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린의 제법
트리플루오로아세트산(0.66 ℓ, 8.66 ㏖)을 21℃에서 톨루엔(7.30 ℓ) 중 5-브로모피콜린알데하이드(0.55 ㎏, 2.89 ㏖) 및 (R)-1-(1H-인다졸-4-일)-N-(2,2,2-트리플루오로에틸)프로판-2-아민(0.83 ㎏, 2.89 ㏖)의 교반된 혼합물에 천천히 첨가하였다. 생성된 용액을 80℃까지 가열하고, 80℃에서 18시간 동안 교반하였다. 온도를 90℃까지 증가시키고, 가열을 4시간 동안 계속하였다. 혼합물을 80℃까지 냉각되게 하고, 5-브로모피콜린알데하이드(0.015 ㎏, 0.081 ㏖)의 추가 부분을 첨가하고, 용액을 80℃에서 16시간 동안 교반하였다. 혼합물을 21℃까지 냉각되게 하고, 포화 수성 NaHCO3(6.60 ℓ)을 20분에 걸쳐 첨가하였다. EtOAc(5.00 ℓ)를 첨가하고, 층을 분리시켰다. 유기 층을 포화 수성 NaHCO3(3.30 ℓ)으로 세척하고, 감압 하에 농축시켰다. 에탄올을 첨가하고, 혼합물을 감압 하에 농축시켜 바삭거리는 고체로서 미정제 생성물을 수득하였다. 시스 이성질체를 30℃에서 450 ㎖/분의 유속으로 CO2, 140 bar 이동상 중 28% EtOH에 의해 용리되는 분취용 SFC(SuperSep 1™ 칼럼(CelluCoat™ 10 ㎛로 충전됨), 50 ㎜ 직경, 250 ㎜ 길이)로 제거하여 담황색의 고체로서 (6S,8R)-6-(5-브로모-2-피리딜)-8-메틸-7-(2,2,2-트리플루오로에틸)-3,6,8,9-테트라하이드로피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린(0.94 ㎏, 77%)을 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, CDCl3, 27℃) 1.16 (3H, d), 2.89 (1H, dd), 2.99 (1H, dq), 3.25 - 3.34 (2H, m), 3.55 (1H, td), 5.10 (1H, s), 6.93 (1H, d), 7.22 (1H, d), 7.40 (1H, d), 7.75 (1H, dd), 8.05 (1H, d), 8.56 (1H, dd), 10.24 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 427.
실시예 17에 대한 대안적인 경로 #2:
N
-[1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일]-6-[(6
S
,8
R
)-8-메틸-7-(2,2,2-트리플루오로에틸)-3,6,8,9-테트라하이드로피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일]피리딘-3-아민의 제법
1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-아민(6.31 g, 37.98 m㏖)을 1,4-디옥산(175 ㎖) 중 (6S,8R)-6-(5-브로모피리딘-2-일)-8-메틸-7-(2,2,2-트리플루오로에틸)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린(15.47 g, 34.92 m㏖)의 용액에 첨가하였다. 생성된 용액을 진공 하에 5분 동안 탈기시키고, 이후 질소(x2)로 역충전하였다. 나트륨 tert-부톡사이드(13.43 g, 139.69 m㏖), 이어서 BrettPhos 제3세대 전촉매(0.95 g, 1.05 m㏖)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 55℃에서 18시간 동안 가열하였다. 혼합물을 EtOAc 및 물에 부었다. 포화 염수를 첨가하고, 층을 분리시켰다. 유기 층을 포화 수성 염화나트륨(x3)으로 세척하고, 합한 수성 층을 EtOAc로 추출하였다. 합한 유기 층을 Na2SO4 위에서 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 실리카 크로마토그래피(용리 구배 에틸 아세테이트 중 0% 내지 50% 메탄올)로 정제하였다. 원하는 생성물을 함유하는 분획을 합하고, 감압 하에 농축시킨 후, 플래시 실리카 크로마토그래피(용리 구배 헥산 중 0% 내지 40% EtOAc)로 재정제하여 적색 내지 오렌지색의 고체를 수득하였다. 이 고체를 DCM 중 10% MeOH 중에 용해시키고, 여과시키고, DCM으로 필터 케이크를 세척하였다. 합한 여과액을 감압 하에 농축시켜 밝은 오렌지색의 폼 고체로서 N-(1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일)-6-((6S,8R)-8-메틸-7-(2,2,2-트리플루오로에틸)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)피리딘-3-아민(15.28 g, 92%)을 수득하였다. 트랜스 및 시스 이성질체를 40℃에서 20 ㎖/분의 유속으로 CO2, 100 bar 이동상 중의 30%(MeOH 중 0.2% NH4OH)에 의해 용리되는 분취용 SFC((S,S) Whelk-O1 칼럼, 30 ㎜ 직경, 250 ㎜ 길이)로 분리시켰다. 트랜스 이성질체를 함유하는 분획을 감압 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 추가로 플래시 실리카 크로마토그래피(용리 구배 EtOAc 중 0% 내지 30% MeOH)로 정제하였다. 원하는 생성물을 함유하는 분획을 감압 하에 농축시키고, 이후 MeCN(x2)으로부터 농축시켜 담황색의 폼/고체로서 N-(1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일)-6-((6S,8R)-8-메틸-7-(2,2,2-트리플루오로에틸)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)피리딘-3-아민(10.76 g, 74%)을 수득하였다. 1H NMR (600 MHz, DMSO-d 6, 27℃) 1.07 (3H, d) 1.63 (2H, dquin), 2.45 (2H, t), 2.72 (2H, br t), 2.83 (1H, br dd), 2.91 - 3.00 (1H, m), 3.06 (1H, br dd) 3.42 - 3.55 (2H, m), 3.58-3.65 (2H, m), 3.92 (1H, dquin) 4.43 (2H, dt) 4.92 (1H, s), 6.22 (1H, d), 6.79 (1H, d) 6.82 (1H, dd), 6.96 (1H, d), 7.21 (1H, d), 7.73 (1H, d), 8.04 (1H, s), 12.96 (1H, s). m/z: ES+ (M+H)+ 477.
시스 이성질체를 함유하는 SFC로부터의 분획을 감압 하에 농축시키고, 생성된 잔류물을 추가로 플래시 실리카 크로마토그래피(용리 구배 EtOAc 중 0% 내지 30% MeOH)로 정제하였다. 원하는 생성물을 함유하는 분획을 감압 하에 농축시키고, 생성된 잔류물을 여과시켜 밝은 황색의 폼 고체로서 N-(1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일)-6-((6R,8R)-8-메틸-7-(2,2,2-트리플루오로에틸)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)피리딘-3-아민(1.13 g, 8%)을 수득하였다. 1H NMR (300 MHz, DMSO-d 6, 27℃) 1.28 (3H, d), 1.55 - 1.75 (2H, m), 2.42 - 2.49 (2H, m), 2.76 (2H, br t), 2.80 - 2.92 (1H, m), 3.07 - 3.18 (1H, m), 3.18 - 3.28 (1H, m), 3.38 - 3.54 (2H, m), 3.59 - 3.70 (2H, m), 3.95 (1H, sxt), 4.45 (2H, dt), 5.11 (1H, s), 6.21 (1H, d), 6.72 (1H, d), 6.82 (1H, dd), 7.02 (1H, d), 7.19 (1H, d), 7.78 (1H, d), 8.06 (1H, s), 12.94 (1H, s). m/z: ES+ (M+H)+ 477.
출발 재료 (6S,8R)-6-(5-브로모피리딘-2-일)-8-메틸-7-(2,2,2-트리플루오로에틸)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린을 제조하기 위해 이용된 절차는 하기에 기재되어 있다.
2,2,2-트리플루오로-
N
-[(1
R
)-2-(1H-인다졸-4-일)-1-메틸-에틸]아세트아미드의 제법
TEA(26.0 ㎖, 186.5 m㏖)를 실온에서 MeOH(150 ㎖) 중 (R)-1-(1H-인다졸-4-일)프로판-2-아민 디하이드로클로라이드(15.29 g, 61.61 m㏖) 및 에틸 2,2,2-트리플루오로아세테이트(8.09 ㎖, 67.8 m㏖)의 교반된 슬러리에 주사기를 통해 첨가하였다. 생성된 용액을 실온에서 18시간 동안 교반하고, 이후 감압 하에 농축시켰다. 이후, 생성된 고체를 DCM(40 ㎖) 중에 용해시키고, 잔류 트리에틸아민 하이드로클로라이드를 첨가 Et2O(300 ㎖)에 의해 침전시켰다. 슬러리를 5분 동안 교반하고, 이후 여과시키고, 여과액을 감압 하에 농축시켜 고체를 수득하였다. 고체를 EtOAc 및 포화 수성 염화나트륨 중에 용해시켰다. 층을 분리시키고, 유기 층을 포화 포화 수성 염화나트륨으로 세척하고, MgSO4 위에서 건조시키고, 여과시키고, 농축시켜 회백색의 고체로서 (R)-N-(1-(1H-인다졸-4-일)프로판-2-일)-2,2,2-트리플루오로아세트아미드(16.51 g, 99%)를 수득하였다. 1H NMR (300 MHz, DMSO-d 6, 27℃) 1.19 (3H, d), 3.03 (1H, dd), 3.13 (1H, dd), 4.13 - 4.30 (1H, m), 6.89 (1H, d), 7.25 (1H, dd), 7.38 (1H, d), 8.18 (1H, t), 9.35 (1H, br d), 13.01 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 272.
(2
R
)-1-(1H-인다졸-4-일)-
N
-(2,2,2-트리플루오로에틸)프로판-2-아민의 제법
THF 중 1 M 보란 THF 복합체(365 ㎖, 365.0 m㏖)를 실온에서 THF(100 ㎖) 중 (R)-N-(1-(1H-인다졸-4-일)프로판-2-일)-2,2,2-트리플루오로아세트아미드(16.5 g, 60.8 m㏖)의 교반된 용액에 캐뉼라를 통해 신속히 적가하였다(가스 전개; 첨가의 과정 동안 작은 발열이 관찰되었다). 이후, 반응물을 60℃에서 15.5시간 동안 가열한 후, 실온까지 냉각되게 하였다. 반응물을 상온 수조에 배치하고, MeOH(80 ㎖)를 천천히 적가하였다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축시키고, 생성된 잔류물을 MeOH(80 ㎖) 중에 용해시키고, 감압 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 MeOH(250 ㎖) 중에 용해시키고, 상온 수조에 배치하였다. MeOH(90 ㎖) 중 탄소 상 10% 팔라듐의 슬러리(6.47 g, 6.08 m㏖)를 첨가하고, MeOH(10 ㎖)로 플라스크를 세정하였다(약간의 가스 전개가 나타났다). 혼합물을 실온에서 대략 3분 동안 교반하고, 이후 65℃에서 2시간 동안 가열하고, 실온까지 냉각시킨 후, 혼합물을 셀라이트를 통해 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 담황색의 잔류물을 DCM 중에 용해시키고, 여과시키고, 여과액을 감압 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 실리카 크로마토그래피(용리 구배 헥산 중 10% 내지 60% EtOAc)로 정제하였다. 원하는 생성물을 함유하는 분획을 감압 하에 농축시켜 담황색의 오일로서 (R)-1-(1H-인다졸-4-일)-N-(2,2,2-트리플루오로에틸)프로판-2-아민(14.21 g, 86%)을 수득하였다. 1H NMR (300 MHz, DMSO-d 6, 27℃) 0.91 (3H, d), 2.17 - 2.30 (1H, m), 2.71 (1H, dd), 2.98 - 3.17 (2H, m), 3.22 - 3.38 (2H, m), 6.89 (1H, d), 7.24 (1H, dd), 7.35 (1H, d), 8.12 (1H, t), 12.97 (1H, br s). m/z: ES+ [M+H]+ 258.
(6
S
,8
R
)-6-(5-브로모-2-피리딜)-8-메틸-7-(2,2,2-트리플루오로에틸)-3,6,8,9-테트라하이드로피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린의 제법
5-브로모피콜린알데하이드(9.80 g, 52.7 m㏖)를 질소 하에 톨루엔(246 ㎖) 중 (R)-1-(1H-인다졸-4-일)-N-(2,2,2-트리플루오로에틸)프로판-2-아민(14.05 g, 51.66 m㏖)의 교반된 용액에 첨가하였다. 이후, 트리플루오로아세트산(12.30 ㎖)을 첨가하고, 반응물을 90℃에서 4.5시간 동안 가열하였다. 혼합물을 실온까지 냉각되게 하고, EtOAc(200 ㎖)를 첨가하였다. 혼합물을 5℃까지 냉각시키고, 혼합물을 포화 수성 NaHCO3의 느린 첨가에 의해 염기성화시켰다. 생성된 층을 분리시키고, 수성 층을 EtOAc(2 x 80 ㎖)로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 포화 수성 NaHCO3, 포화 수성 염화나트륨으로 세척하고, MgSO4 위에서 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 실리카 크로마토그래피(용리 구배 헥산 중 5% 내지 60% EtOAc)로 정제하였다. 원하는 생성물을 함유하는 분획을 감압 하에 농축시키고, 이후 진공에서 50℃에서 3시간 동안 건조시켜 옅은 오렌지색의 고체로서 (6S,8R)-6-(5-브로모피리딘-2-일)-8-메틸-7-(2,2,2-트리플루오로에틸)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린(19.29 g, 88%)을 수득하였다. 1H NMR 분석은 10:1 트랜스/시스 이성질체를 밝혀냈다. 1H NMR (300 MHz, DMSO-d 6, 27℃) 1.10 (3H, d), 2.83 - 2.94 (1H, m), 2.95 - 3.14 (2H, m), 3.34 - 3.47 (1H, m), 3.49 - 3.72 (1H, m), 5.10 (1H, s), 6.88 (1H, d), 7.25 (1H, d), 7.33 (1H, d), 7.99 (1H, dd), 8.06 (1H, d), 8.56 (1H, d), 13.00 (1H, s) m/z: ES+ [M+H]+ 425.
실시예 17의 합성에 사용된 중간체에 대한 대안적인 경로:
N
-[(1
R
)-2-(3-아미노-2-메틸-페닐)-1-메틸-에틸]-2,2,2-트리플루오로-아세트아미드의 제법
MeOH(9.5 ㎖) 중 (R)-3-(2-아미노프로필)-2-메틸아닐린(0.51 g, 3.13 m㏖), DIPEA(0.55 ㎖, 3.13 m㏖) 및 에틸 2,2,2-트리플루오로아세테이트(0.47 ㎖, 3.91 m㏖)의 용액을 질소 하에 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축시켰다. DCM 및 물을 첨가하고, 층을 분리시켰다. 수성 층을 DCM(3 x 50 ㎖)으로 추출하고, 합한 유기 층을 건조시키고(Na2SO4), 여과시켰다. 미정제 생성물을 플래시 실리카 크로마토그래피(용리 구배 헥산 중 0% 내지 100% EtOAc)로 정제하였다. 순수한 분획을 증발 건조시켜 N-[(1R)-2-(3-아미노-2-메틸-페닐)-1-메틸-에틸]-2,2,2-트리플루오로-아세트아미드(680 ㎎, 83%)를 수득하였다. 1H NMR (300 MHz, DMSO-d 6, 27℃) 1.06 - 1.14 (m, 3 H), 2.01 (s, 3 H), 2.54 - 2.71 (m, 1 H), 2.72 - 2.84 (m, 1 H), 4.04 - 4.12 (m, 1 H), 4.60 - 4.77 (m, 2 H), 6.24 - 6.37 (m, 1 H), 6.43 - 6.52 (m, 1 H), 6.72 - 6.84 (m, 1 H), 9.19 - 9.32 (m, 1 H). m/z: ES+ [M+H]+ 261.
2-메틸-3-[(2
R
)-2-(2,2,2-트리플루오로에틸아미노)프로필]아닐린의 제법
THF 중 1.0 M 보란(19.4 ㎖, 19.37 m㏖)을 THF(10 ㎖) 중 (R)-N-(1-(3-아미노-2-메틸페닐)프로판-2-일)-2,2,2-트리플루오로아세트아미드(840 ㎎, 3.23 m㏖)의 교반된 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 질소 하에 65℃에서 6시간 동안 가열하였다. 혼합물을 실온까지 냉각되게 하고, MeOH를 조심스럽게 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반하고, 이후 감압 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 MeOH 중에 용해시키고, 6시간 동안 65℃까지 가열하였다. 혼합물을 실온까지 냉각되게 하고, 이후 감압 하에 농축시켜 미정제 생성물을 수득하고, 이것을 플래시 실리카 크로마토그래피(용리 구배 헥산 중 0% 내지 100% EtOAc)로 정제하였다. 생성물 함유 분획을 증발 건조시켜 2-메틸-3-[(2R)-2-(2,2,2-트리플루오로에틸아미노)프로필]아닐린(665 ㎎, 84%)을 수득하였다. 1H NMR (300 MHz, DMSO-d 6, 27℃) 0.89 (s, 3 H), 1.98 (s, 3 H), 2.08 - 2.22 (m, 1 H), 2.25 - 2.42 (m, 1 H), 2.69 - 2.87 (m, 2 H), 3.15 - 3.29 (m, 2 H), 4.61 - 4.75 (m, 2 H), 6.30 - 6.40 (m, 1 H), 6.43 - 6.54 (m, 1 H), 6.71 - 6.83 (m, 1 H). m/z: ES+ [M+H]+ 247.
(2
R
)-1-(3-브로모-2-메틸-페닐)-N-(2,2,2-트리플루오로에틸)프로판-2-아민의 제법
DIPEA(2.99 ㎖, 17.10 m㏖)를 질소 하에 실온에서 1,4-디옥산(25 ㎖) 중 (R)-1-(3-브로모-2-메틸페닐)프로판-2-아민(1.30 g, 5.70 m㏖) 및 2,2,2-트리플루오로에틸 트리플루오로메탄설포네이트(DCM 중 0.23 M, 29.7 ㎖, 6.84 m㏖)에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 85℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축시키고, 미정제 생성물을 플래시 실리카 크로마토그래피(용리 구배 헵탄 중 0% 내지 50% EtOAc)로 정제하였다. 생성물 함유 분획을 감압 하에 농축시켜 오일로서 (R)-1-(3-브로모-2-메틸페닐)-N-(2,2,2-트리플루오로에틸)프로판-2-아민(0.56 g, 32%)을 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, DMSO, 27℃) 0.91 (3H, d), 2.26 (1H, q), 2.34 (3H, s), 2.78 - 2.86 (1H, m), 2.89 (1H, dd), 3.19 - 3.28 (2H, m), 7.01 - 7.06 (1H, m), 7.15 (1H, dd), 7.43 (1H, dd). m/z: ES+ [M+H]+ 310/312.
2-메틸-3-[(2
R
)-2-(2,2,2-트리플루오로에틸아미노)프로필]아닐린의 제법
트리스(디벤질리덴아세톤)디팔라듐(0)(0.050 g, 0.05 m㏖) 및 (±)-2,2'-비스(디페닐포스피노)-1,1'-비나프탈렌(0.067 g, 0.11 m㏖)을 탈기된 톨루엔(7 ㎖) 중 (R)-1-(3-브로모-2-메틸페닐)-N-(2,2,2-트리플루오로에틸)프로판-2-아민(0.56 g, 1.81 m㏖), 벤조페논 이민(0.33 ㎖, 1.99 m㏖) 및 나트륨 tert-부톡사이드(0.26 g, 2.71 m㏖)의 현탁액에 첨가하고, 반응물을 16시간 동안 90℃까지 가열하였다. 실온까지 냉각시킨 후, 혼합물을 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 DCM(50 ㎖) 중에 용해시키고, 물(50 ㎖)로 세척하였다. 수성물을 DCM(25 ㎖)으로 추출하고, 합한 유기물을 농축시켜 약 25 ㎖가 되게 하였다. 2 M HCl 용액(50 ㎖)을 첨가하고, 이상성 혼합물을 30분 동안 격렬히 교반하였다. 층을 분리시키고, 수성 층을 DCM으로 세척하였다. 수성 상을 2 M 수성 NaOH의 첨가에 의해 염기성화시켰다. 생성된 혼합물을 DCM(2 x 100 ㎖)으로 추출하고, 합한 유기 추출물을 감압 하에 농축시켜 오일로서 (R)-2-메틸-3-(2-((2,2,2-트리플루오로에틸)아미노)프로필)아닐린(0.31 g, 70%)을 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, DMSO, 27℃) 0.90 (3H, d), 1.98 (3H, s), 2.12 - 2.18 (1H, m), 2.30 - 2.36 (1H, m), 2.74 - 2.82 (2H, m), 3.17 - 3.29 (2H, m), 4.69 (2H, s), 6.35 (1H, dd), 6.48 (1H, dd), 6.78 (1H, t). ES+ [M+H]+ 247.
(1
S
,3
R
)-1-(5-브로모-2-피리딜)-3,5-디메틸-2-(2,2,2-트리플루오로에틸)-3,4-디하이드로-1H-이소퀴놀린-6-아민의 제법
트리플루오로메탄설폰산 이터븀(III) 염(0.17 g, 0.27 m㏖)을 MeCN(21.5 ㎖) 중 (R)-2-메틸-3-(2-((2,2,2-트리플루오로에틸)아미노)프로필)아닐린(1.35 g, 5.49 m㏖), 5-브로모피콜린알데하이드(1.02 g, 5.49 m㏖) 및 물(0.49 ㎖, 27.43 m㏖)의 교반된 용액에 첨가하였다. 생성된 용액을 80℃에서 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 감압 하에 농축시키고, 잔류물을 실리카 겔로 건조 로딩하고, 플래시 실리카 크로마토그래피(용리 구배 헥산 중 10% 내지 30% EtOAc)로 정제하였다. 원하는 생성물을 함유하는 분획을 농축 건조시켜 황색의 검으로서 (1S,3R)-1-(5-브로모피리딘-2-일)-3,5-디메틸-2-(2,2,2-트리플루오로에틸)-1,2,3,4-테트라하이드로이소퀴놀린-6-아민(2.22 g, 98%)을 수득하였다. 1H NMR (300 MHz, DMSO-d 6, 27℃) 0.88 (3H, d), 1.91 (3H, s), 2.37 - 2.46 (1H, m), 2.60 - 2.76 (1H, m), 2.76 - 3.00 (1H, m), 3.15 - 3.28 (1H, m), 3.34 - 3.63 (1H, m), 4.65 (2H, s), 4.85 (1H, s), 6.19 - 6.52 (2H, m), 7.10 - 7.31 (1H, m), 7.97 (1H, dd), 8.62 (1H, d). m/z: ES+ [M+H]+ 414.
(6
S
,8
R
)-6-(5-브로모-2-피리딜)-8-메틸-7-(2,2,2-트리플루오로에틸)-3,6,8,9-테트라하이드로피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린의 제법
프로피온산(14.0 ㎖) 중 (1S,3R)-1-(5-브로모피리딘-2-일)-3,5-디메틸-2-(2,2,2-트리플루오로에틸)-1,2,3,4-테트라하이드로이소퀴놀린-6-아민(2.21 g, 5.33 m㏖)을 -20℃까지 냉각시켰다. 물(2.8 ㎖) 중 아질산나트륨(0.40 g, 5.86 m㏖)의 용액을 5분에 걸쳐 적가하여 배쓰 온도를 -20℃ 내지 -15℃에서 유지시켰다. 생성된 혼합물을 -20℃에서 45분 동안 교반하였다. -15℃까지 냉각된 톨루엔(80 ㎖)을 반응물에 붓고, 반응물을 15분 동안 교반하였다. 물(125 ㎖) 중 탄산나트륨(12.0 g, 113 m㏖)의 용액을 천천히 첨가하고, 혼합물을 실온까지 가온되게 하였다. EtOAc(100 ㎖)를 첨가하고, 층을 분리시켰다. 수성 층을 CHCl3/IPA(3:1)(100 ㎖)로 추출하였다. 합한 유기 층을 MgSO4 위에서 건조시키고, 여과시키고 감압 하에 농축시켜 미정제 생성물을 수득하고, 이것을 플래시 실리카 크로마토그래피(용리 구배 헥산 중 15% 내지 50% EtOAc)로 정제하였다. 생성물 함유 분획을 증발 건조시켜 갈색의 고체로서 (6S,8R)-6-(5-브로모피리딘-2-일)-8-메틸-7-(2,2,2-트리플루오로에틸)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린(1.63 g, 72%)을 수득하였다. 1H NMR (300 MHz, DMSO-d 6, 27℃) 1.10 (3H, d), 2.83 - 2.96 (1H, m), 2.96 - 3.14 (2H, m), 3.35 - 3.48 (1H, m), 3.49 - 3.73 (1H, m), 5.11 (1H, s), 6.87 (1H, d), 7.27 (1H, d), 7.35 (1H, d), 7.99 (1H, dd), 8.09 (1H, s), 8.53 - 8.63 (1H, m), 12.96 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 425.
tert
-부틸 (1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일)카바메이트의 제법
MeCN(200 ㎖) 중 tert-부틸 아제티딘-3-일카바메이트(10.00 g, 58.06 m㏖), 1-플루오로-3-요오도프로판(11.13 g, 59.22 m㏖) 및 탄산칼륨(16.05 g, 116.13 m㏖)의 현탁액을 실온에서 2일 동안 교반하였다. 고체를 여과에 의해 제거하고, 여과액을 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 물로 처리하고, DCM으로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 Na2SO4 위에서 건조시키고, 여과시키고 감압 하에 농축시켜 담황색의 고체로서 tert-부틸 (1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일)카바메이트(13.40 g, 99%)를 수득하였다. 1HNMR (300 MHz, CDCl3, 27℃) 1.45 (9H, s), 1.61 - 1.92 (2H, m), 2.51 - 2.67 (2H, m), 2.85 (2H, br s), 3.57 - 3.72 (2H, m), 4.30 (1H, br d), 4.36 - 4.63 (2H, m), 4.89 (1H, br d).
tert
-부틸 (1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일)카바메이트의 대안적인 제법
트리플루오로메탄설폰산 무수물(2.31 ㎖, 13.75 m㏖), 이어서 2,6-디메틸피리딘(1.74 ㎖, 15.00 m㏖)을 0℃에서 DCM(47 ㎖) 중 3-플루오로프로판-1-올(0.94 ㎖, 12.5 m㏖)의 용액에 첨가하고, 반응물을 0℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 1 N HCl로 세척하고, 이후 유기 층을 건조시키고, 조심스럽게 증발시켰다. 이후, 잔류물을 디옥산/DCM(1:1, 40 ㎖) 중 tert-부틸 아제티딘-3-일카바메이트(1.94 g, 11.25 m㏖) 및 DIPEA(3.24 ㎖, 18.75 m㏖)의 현탁액을 함유하는 별개의 플라스크에 첨가하고, 반응물을 실온에서 교반하였다(트리플레이트의 첨가에서 발열성). 반응 혼합물을 DCM으로 희석하고, NH4Cl 용액으로 세척하였다. 유기 층을 건조시키고, 감압 하에 증발시켜 미정제 생성물을 수득하였다. 미정제 생성물을 플래시 실리카 크로마토그래피(용리 구배 DCM 중 0% 내지 10% 1 M NH3/MeOH)로 정제하였다. 순수한 분획을 증발 건조시켜 상기와 같이 담자색의 오일 1H NMR로서 tert-부틸 (1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일)카바메이트(2.82 g, 97%)를 수득하였다.
1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-아민의 제법
트리플루오로아세트산(39.8 ㎖, 517 m㏖)을 30분에 걸쳐 수조에 액침된 DCM(67.8 ㎖) 중 tert-부틸 (1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일)카바메이트(20.0 g, 86 m㏖)의 용액에 적가하였다. 18시간 후, 반응물을 감압 하에 농축시켜 오렌지색의 오일이 되게 하였다. 이 오일을 DCM 중 10% 메탄올(125 ㎖) 중에 용해시키고, 탄산칼륨(71.4 g, 517 m㏖)을 격렬한 교반에 의해 첨가하였다. 15분 후, 추가 30 g의 탄산칼륨을 첨가하였다. 교반은 부진하게 되고, 셀라이트(약 15 g)를 첨가하였다. 추가 15분 동안 계속해서 교반하고, 혼합물을 DCM 중 10% 메탄올 세척액으로 여과시켰다. 여과액을 회전 증발기(압력: 100 mbar, 수조 온도: 30℃)에서 감압 하에 농축시키고, 생성된 오렌지색의 오일을 DCM 중 플래시 실리카 크로마토그래피(용리 구배 0% 내지 15%(메탄올 중 2 M 암모니아))(λ 검출 = 210 ㎚)로 정제하여 황색의 오일로서 NMR 적분에 기초하여 28 중량% 메탄올에 의해 오염된 1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-아민(12.8 g)을 수득하였다. 이 재료를 바로 사용하거나, 차후의 사용을 위해 냉동고에서 저장하거나, 하기 실시예에 따라 진공 증류에 의해 추가로 정제할 수 있었다: 밝은 황색의 오일로서 1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-아민(14.8 g)을 진공(진공 펌프) 조건 하에 냉각하는 재킷팅된 물을 갖는 짧은 경로 증류 장치를 사용하여 증류시켰다. 아민을 함유하는 플라스크를 오일 배쓰 중에 액침시키고, 배쓰 온도를 30분의 기간에 걸쳐 140℃까지 점진적으로 증가시켰다. 증류가 110 내지 135℃의 배쓰 온도 및 70℃의 근사 헤드 온도에서 발생하여 투명한 무색의 오일로서 1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-아민(12.4 g, 84%)을 수득하였다. 이 오일을 사용 전에 냉동고에서 보관하였다. 1H NMR (300 MHz, DMSO-d 6, 27℃) 1.52 - 1.70 (2H, m), 1.75 (2H, br s), 2.38 (2H, t), 2.43 - 2.48 (2H, m), 3.27 - 3.39 (1H, m), 3.42 - 3.48 (2H, m), 4.43 (2H, dt). m/z: ES+ [M+H]+ 133.
실시예 17A:
N
-(1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일)-6-((6
S
,8
R
)-8-메틸-7-(2,2,2-트리플루오로에틸)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)피리딘-3-아민 A 형태(무수 형태)의 제법
방법 1
4.0 ㎎의 무정형 N-(1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일)-6-((6S,8R)-8-메틸-7-(2,2,2-트리플루오로에틸)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)피리딘-3-아민을 100 ㎕의 EtOAc 중에 용해시켜 투명한 용액을 형성하였다. 약 200 ㎕의 헵탄을 용액에 천천히 첨가하고, 혼탁한 현탁액을 형성하였다. 슬러리를 주변 조건에서 3일 동안 교반하였다. A 형태의 결정질 재료를 수득하였다.
방법 2
1.60 g의 무정형 N-(1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일)-6-((6S,8R)-8-메틸-7-(2,2,2-트리플루오로에틸)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)피리딘-3-아민을 15 ㎖의 아세톤/H2O(10:1) 혼합물 중에 현탁시켰다. 슬러리가 형성되었고, 이후 겔이 형성되었다. 10 ㎎의 N-(1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일)-6-((6S,8R)-8-메틸-7-(2,2,2-트리플루오로에틸)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)피리딘-3-아민 A 형태 시드를 2시간 후 첨가하고, 현탁액을 상온에서 1일 동안 교반하고, 이때 겔은 고체 케이크가 되었다. 벽 및 바닥에서의 고체 케이크를 용액으로 수동으로 제거하고, 균일한 슬러리를 1시간 동안 교반한 후 수득하였다. 고체를 여과에 의해 수집하고, 5.0 ㎖의 아세톤/H2O(1:10)로 2회, 이어서 H2O로 수회 세척하였다. 1.45 g의 백색 분말을 4시간 동안 진공에서 건조시킨 후 A 형태로서 수득하였다(90% 수율).
방법 3
501 ㎎의 N-(1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일)-6-((6S,8R)-8-메틸-7-(2,2,2-트리플루오로에틸)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)피리딘-3-아민의 무정형 재료를 1.0 ㎖의 EtOAc 중에 용해시켜 갈색의 용액을 형성하였다. 용액에 1.0 ㎖의 헵탄을 천천히 첨가하였다. 첨가 종료 시, 고체가 형성되기 시작하였지만, 이후 용해되었다. 2 내지 5 ㎎의 N-(1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일)-6-((6S,8R)-8-메틸-7-(2,2,2-트리플루오로에틸)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)피리딘-3-아민-A 형태를 투명한 갈색의 용액에 첨가하고, 이때 고체가 침전하기 시작하였다. 현탁액을 상온에서 1일 동안 교반하였다. 고체를 여과에 의해 수집하고, 공기 중에 건조시켰다. 345 ㎎의 회백색의 분말을 A 형태로서 수득하였다(수율: 약 69%).
방법 2로부터의 A 형태를 XRPD로 분석하고, 결과는 하기 표로 기재되고(표 1), 도 1에 도시되어 있다.
A 형태를 열적 기법으로 분석하였다. DSC 분석은 A 형태가 132℃에서의 개시 및 137℃에서의 피크로 융점을 갖는다는 것을 나타냈다. TGA는 A 형태가 약 25℃ 내지 약 100℃로 가열 시 약 0.2%의 질량 손실을 보인다는 것을 나타냈다. A 형태의 대표적인 DSC/TGA 온도기록도는 도 2에 도시되어 있다.
실시예 17B:
N
-(1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일)-6-((6
S
,8
R
)-8-메틸-7-(2,2,2-트리플루오로에틸)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)피리딘-3-아민 B 형태(TBME 용매화물)의 제법
100 ㎎의 N-(1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일)-6-((6S,8R)-8-메틸-7-(2,2,2-트리플루오로에틸)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)피리딘-3-아민(무정형 재료)을 부분적으로 1.0 ㎖의 TBME 중에 용해시켰다. 현탁액을 주변 조건 하에서 교반하고, 이때 더 많은 고체가 현탁액 중에 침전하였다. 슬러리를 2시간 동안 교반하였다. 슬러리가 XRPD 특징화를 위해 샘플 홀더에 바로 도달할 때 N-(1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일)-6-((6S,8R)-8-메틸-7-(2,2,2-트리플루오로에틸)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)피리딘-3-아민-B 형태가 확인되었다. 고체가 여과되고 주변 조건에서 건조된 후, B 형태는 C 형태로 전환되었다.
B 형태를 XRPD로 분석하고, 결과는 하기 표로 기재되고(표 2), 도 3에 도시되어 있다.
실시예 17C:
N
-(1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일)-6-((6
S
,8
R
)-8-메틸-7-(2,2,2-트리플루오로에틸)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)피리딘-3-아민 C 형태(TBME 용매화물)의 제법
200 ㎎의 N-(1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일)-6-((6S,8R)-8-메틸-7-(2,2,2-트리플루오로에틸)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)피리딘-3-아민 무정형 재료를 1 ㎖의 TBME 중에 거의 용해시켰다. 현탁액을 주변 조건 하에서 교반하고, 이때 더 많은 고체가 10분 후 침전하였다. 슬러리를 2시간 동안 교반하고, 이후 주변 조건 하에서 증발시켰다. 생성된 고체가 주변 조건 하에서 건조된 후, C 형태를 수득하였다.
C 형태를 XRPD로 분석하고, 결과는 하기 표로 기재되고(표 3), 도 4에 도시되어 있다.
C 형태를 열적 기법으로 분석하였다. DSC 분석은 C 형태가 75℃에서의 개시 및 84℃에서의 피크로 탈용매화의 흡열 사건을 갖는다는 것을 나타냈다. TGA는 C 형태가 약 25℃ 내지 약 150℃로 가열 시 약 7.1%의 질량 손실을 보인다는 것을 나타냈다. C 형태의 대표적인 DSC/TGA 온도기록도는 도 5에 도시되어 있다.
실시예 17D:
N
-(1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일)-6-((6
S
,8
R
)-8-메틸-7-(2,2,2-트리플루오로에틸)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)피리딘-3-아민 D 형태(CPME 용매화물)의 제법
150 ㎎의 N-(1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일)-6-((6S,8R)-8-메틸-7-(2,2,2-트리플루오로에틸)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)피리딘-3-아민 무정형 재료를 2.0 ㎖의 CPME(사이클로펜틸 메틸 에테르) 중에 교반하였다. 1일 동안 교반한 후, 고체를 여과에 의해 단리하고, 공기 중에 건조시켰다. D 형태의 약 50 ㎎의 백색 분말을 수득하였다.
D 형태를 XRPD로 분석하고, 결과는 하기 표로 기재되고(표 4), 도 6에 도시되어 있다.
D 형태를 열적 기법으로 분석하였다. DSC 분석은 D 형태가 76℃에서의 개시 및 81℃에서의 피크로 탈용매화의 흡열 사건, 이어서 128℃에서의 개시 및 133℃에서의 피크로 또 다른 흡열 사건을 갖는다는 것을 나타냈다. TGA는 D 형태가 약 25℃ 내지 약 150℃로 가열 시 약 6.8%의 질량 손실을 보인다는 것을 나타냈다. D 형태의 대표적인 DSC/TGA 온도기록도는 도 7에 도시되어 있다.
실시예 17E:
N
-(1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일)-6-((6
S
,8
R
)-8-메틸-7-(2,2,2-트리플루오로에틸)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)피리딘-3-아민 E 형태(무수 형태)의 제법
방법 1
100 ㎎의 무정형 N-(1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일)-6-((6S,8R)-8-메틸-7-(2,2,2-트리플루오로에틸)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)피리딘-3-아민을 2.0 ㎖의 헵탄에 첨가하여 슬러리를 형성하였다. 0.40 ㎖의 EtOAc를 첨가하였다. 2시간 동안 교반한 후, 추가로 0.10 ㎖의 EtOAc를 슬러리에 첨가하고, 슬러리를 주변 조건 하에서 18시간 동안 교반하고, 이때 E 형태인 새로운 결정질 형태는 XRPD에 의해 확인되었다. 고체가 단리되고 주변 조건에서 건조된 후, 75 ㎎의 E 형태의 백색 고체를 수득하였다(수율: 75%).
방법 2
1.002 g의 무정형 N-(1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일)-6-((6S,8R)-8-메틸-7-(2,2,2-트리플루오로에틸)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)피리딘-3-아민을 5.0 ㎖의 EtOAc 중에 용해시켜 투명한 담갈색의 용액을 수득하였다. 5.0 ㎖의 헵탄을 첨가하고, 용액은 투명하게 남았다. 10 ㎎의 N-(1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일)-6-((6S,8R)-8-메틸-7-(2,2,2-트리플루오로에틸)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)피리딘-3-아민-E 형태 시드를 첨가하고, 현탁액을 상온에서 교반하였다. 고체는 주변 조건 하에서 침전되기 시작하고, 1시간 후 습윤 케이크가 형성되었다. 5.0 ㎖의 EtOAc를 슬러리에 천천히 첨가하고, 생성된 슬러리를 상온에서 1시간 동안 교반하였다. 추가로 10 ㎖의 헵탄을 첨가하고, 더 많은 고체가 침전되기 시작하였다. 2시간 동안 주변 조건 하에서 교반한 후, 슬러리를 60℃까지 가열하고, 60℃에서 2시간 동안 교반하였다. 슬러리를 상온까지 냉각시키고, 18시간 동안 교반하였다. E 형태의 회백색의 고체를 여과에 의해 단리시키고, 1:4 EtOAc/헵탄 혼합된 용매로 3회 세척하였다. 공기 건조시킨 후, 0.875 g의 옅은 백색의 분말을 수집하였다(수율: 87%).
방법 1로부터의 E 형태를 XRPD로 분석하고, 결과는 하기 표로 기재되고(표 5), 도 8에 도시되어 있다.
E 형태를 열적 기법으로 분석하였다. DSC 분석은 E 형태가 126℃에서의 개시 및 133℃에서의 피크로 융점을 갖는다는 것을 나타냈다. TGA는 E 형태가 약 25℃ 내지 약 100℃로 가열 시 약 0.8%의 질량 손실을 보인다는 것을 나타냈다. E 형태의 대표적인 DSC/TGA 온도기록도는 도 9에 도시되어 있다.
실시예 17F:
N
-(1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일)-6-((6
S
,8
R
)-8-메틸-7-(2,2,2-트리플루오로에틸)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)피리딘-3-아민 F 형태(헵탄 용매화물)의 제법
20 ㎎의 무정형 N-(1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일)-6-((6S,8R)-8-메틸-7-(2,2,2-트리플루오로에틸)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)피리딘-3-아민을 200 ㎕의 아세톤 중에 용해시켰다. 1.0 ㎖의 헵탄을 용액에 천천히 첨가하였다. 용액은 혼탁해지기 시작하고, 이후 슬러리가 형성되었다. 1.0 ㎖의 헵탄을 첨가한 후, 슬러리를 상온에서 교반하였다. 침상 입자가 슬러리 중에 관찰되었다. 슬러리를 60℃까지 가열하고, 2시간 동안 교반한 후, 상온까지 냉각시켰다. 침상 입자가 형성되었다.
생성된 F 형태의 슬러리는 XRPD에 의해 분석되고, 결과는 도 10에 도시되어 있다. F 형태의 결정화도는 XRPD 특징화 동안 감소하고, XRPD의 제2 실행은 샘플 홀더에서 건조한 후 무정형 재료가 수득되었다는 것을 나타냈다.
실시예 17F:
N
-(1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일)-6-((6
S
,8
R
)-8-메틸-7-(2,2,2-트리플루오로에틸)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)피리딘-3-아민 G 형태(메틸펜타논 용매화물)의 제법
100 ㎎의 무정형 N-(1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일)-6-((6S,8R)-8-메틸-7-(2,2,2-트리플루오로에틸)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)피리딘-3-아민을 200 ㎕의 메틸펜타논 중에 현탁시키고, 2 내지 5 ㎎의 N-(1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일)-6-((6S,8R)-8-메틸-7-(2,2,2-트리플루오로에틸)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)피리딘-3-아민-A 형태를 첨가하고, 이때 케이크가 10분 동안 주변 조건 하에서 교반한 후 형성되었다. 200 ㎕의 메틸펜타논을 첨가하고, 슬러리가 형성되었다. 슬러리를 주변 조건에서 18시간 동안 교반하였다. XRPD는 N-(1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일)-6-((6S,8R)-8-메틸-7-(2,2,2-트리플루오로에틸)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)피리딘-3-아민-G 형태인 결정질 형태가 형성된 것을 보여주었다. G 형태는 단리 및 주변 조건 하에 건조 후 부분적으로 무정형인 재료로 전환되었다.
G 형태를 XRPD로 분석하고, 결과는 하기 표로 기재되고(표 6), 도 10에 도시되어 있다.
실시예 18
5-플루오로-6-((6
S
,8
R
)-7-((1-플루오로사이클로프로필)메틸)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)-
N
-(1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일)피리딘-3-아민
[(2-디-사이클로헥실포스피노-3,6-디메톡시-2',4',6'-트리이소프로필-1,1'-비페닐)-2-(2'-아미노-1,1'-비페닐)]팔라듐(II) 메탄설포네이트 메탄설포네이트(Brett Phos G3)(48.6 ㎎, 0.05 m㏖)를 질소 하에 1,4-디옥산(3 ㎖) 중 1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-아민(95 ㎎, 0.72 m㏖), (6S,8R)-6-(5-브로모-3-플루오로피리딘-2-일)-7-((1-플루오로사이클로프로필)메틸)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린(155 ㎎, 0.36 m㏖) 및 나트륨 tert-부톡사이드 (206 ㎎, 2.15 m㏖)의 탈기된 용액에 첨가하였다. 생성된 용액을 90℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 EtOAc(50 ㎖)로 희석하고, 물(50 ㎖) 및 포화 수성 염화나트륨(50 ㎖)으로 순차적으로 세척하였다. 유기 층을 MgSO4로 건조시키고, 여과시키고 증발시켜 미정제 생성물을 수득하였고, 이것을 용리제로서 물(0.1% NH3 함유) 및 MeCN의 점감적으로 극성인 혼합물을 사용하여 분취용 HPLC(Waters XBridge Prep C18 OBD 칼럼, 5 μ 실리카, 50 ㎜ 직경, 100 ㎜ 길이)로 정제하였다. 원하는 화합물을 함유하는 분획을 증발 건조시켜 백색의 고체로서 5-플루오로-6-((6S,8R)-7-((1-플루오로사이클로프로필)메틸)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)-N-(1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일)피리딘-3-아민(39.0 ㎎, 22%)을 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, CDCl3, 27℃) 0.48 - 0.61 (2H, m), 0.92 - 1.09 (2H, m), 1.13 (3H, d), 1.68 - 1.83 (2H, m), 2.56 - 2.62 (2H, m), 2.67 (1H, dd), 2.86 (1H, dd), 2.90 - 2.95 (2H, m), 3.17 (1H, dd), 3.27 (1H, dd), 3.70 (2H, q), 3.87 (1H, td), 4.04 (1H, q), 4.21 (1H, d), 4.43 (1H, t), 4.53 (1H, t), 5.39 (1H, s), 6.50 (1H, dd), 6.79 (1H, d), 7.12 (1H, d), 7.68 (1H, d), 8.03 (1H, s); m/z: ES+ [M+H]+ 485.
5-플루오로-6-((6S,8R)-7-((1-플루오로사이클로프로필)메틸)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)-N-(1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일)피리딘-3-아민을 하기와 같이 제조하였다:
1-(5-브로모-3-플루오로피리딘-2-일)-
N
-((1
S
,3
R
)-1-(5-브로모-3-플루오로피리딘-2-일)-2-((1-플루오로사이클로프로필)메틸)-3,5-디메틸-1,2,3,4-테트라하이드로이소퀴놀린-6-일)메탄이민의 제법
5-브로모-3-플루오로피콜린알데하이드(1.09 g, 5.33 m㏖)를 아세트산(12 ㎖) 중 (R)-3-(2-(((1-플루오로사이클로프로필)메틸)아미노)프로필)-2-메틸아닐린(630 ㎎, 2.67 m㏖) 및 물(0.240 ㎖, 13.33 m㏖)에 첨가하였다. 생성된 용액을 70℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 농축시키고, EtOAc(50 ㎖)로 희석하고, 포화 수성 NaHCO3(50 ㎖)으로 순차적으로 세척하였다. 유기 층을 MgSO4로 건조시키고, 여과시키고 증발시켜 미정제 생성물(1.53 g, 2.51 m㏖)로서 1-(5-브로모-3-플루오로피리딘-2-일)-N-((1S,3R)-1-(5-브로모-3-플루오로피리딘-2-일)-2-((1-플루오로사이클로프로필)메틸)-3,5-디메틸-1,2,3,4-테트라하이드로이소퀴놀린-6-일)메탄이민을 수득하였다. m/z: ES+ [M+H]+ 607.
(1
S
,3
R
)-1-(5-브로모-3-플루오로피리딘-2-일)-2-((1-플루오로사이클로프로필)메틸)-3,5-디메틸-1,2,3,4-테트라하이드로이소퀴놀린-6-아민의 제법
하이드록실아민 하이드로클로라이드(0.174 g, 2.51 m㏖)를 MeOH(12 ㎖) 중 1-(5-브로모-3-플루오로피리딘-2-일)-N-((1S,3R)-1-(5-브로모-3-플루오로피리딘-2-일)-2-((1-플루오로사이클로프로필)메틸)-3,5-디메틸-1,2,3,4-테트라하이드로이소퀴놀린-6-일)메탄이민(1.53 g, 2.51 m㏖) 및 아세트산 칼륨(0.62 g, 6.27 m㏖)에 첨가하였다. 생성된 용액을 20℃에서 5시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 농축시키고, DCM(75 ㎖)으로 희석하고, NaOH(2 M, 75 ㎖) 및 포화 수성 염화나트륨(50 ㎖)으로 순차적으로 세척하였다. 유기 층을 MgSO4로 건조시키고, 여과시키고 증발시켜 미정제 생성물을 수득하였고, 이것을 플래시 실리카 크로마토그래피(용리 구배 헵탄 중 0% 내지 20% EtOAc)로 정제하였다. 생성물 함유 분획을 증발 건조시켜 무색의 검으로서 (1S,3R)-1-(5-브로모-3-플루오로피리딘-2-일)-2-((1-플루오로사이클로프로필)메틸)-3,5-디메틸-1,2,3,4-테트라하이드로이소퀴놀린-6-아민(0.672 g, 63%)을 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, CDCl3, 27℃) 0.45 - 0.61 (2H, m), 0.92 - 1.06 (2H, m), 1.07 (3H, d), 2.07 (3H, s), 2.51 (1H, dd), 2.59 (1H, dd), 2.85 (1H, dd), 3.13 (1H, dd), 3.52 (2H, s), 3.64 - 3.75 (1H, m), 5.35 (1H, s), 6.48 (2H, s), 7.52 (1H, dd), 8.36 (1H, dd); m/z: ES+ [M+H]+ 422/424.
(6
S
,8
R
)-6-(5-브로모-3-플루오로피리딘-2-일)-7-((1-플루오로사이클로프로필)메틸)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린의 제법
프로피온산(6.63 ㎖) 중 (1S,3R)-1-(5-브로모-3-플루오로피리딘-2-일)-2-((1-플루오로사이클로프로필)메틸)-3,5-디메틸-1,2,3,4-테트라하이드로이소퀴놀린-6-아민(0.672 g, 1.59 m㏖)을 -17℃(드라이아이스/아세톤)까지 냉각시켰다. 물(1.33 ㎖) 중 아질산나트륨(0.110 g, 1.59 m㏖)을 적가하고, 반응 혼합물을 -17℃에서 30분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 빙냉 톨루엔(30 ㎖)으로 희석하고, 0℃에서 15분, 이어서 실온에서 45분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물(2 x 25 ㎖)로 세척하고, 합한 수성 상을 EtOAc(25 ㎖)로 세척하고, 합한 유기물을 포화 수성 염화나트륨(50 ㎖)으로 세척하고, 건조시키고(MgSO4), 여과시키고, 여과액을 증발시켜 오렌지색 내지 갈색의 오일이 되게 하였다. 미정제 재료를 플래시 실리카 크로마토그래피(용리 구배 헵탄 중 0% 내지 50% EtOAc)로 정제하여 오렌지색의 고체로서 (6S,8R)-6-(5-브로모-3-플루오로피리딘-2-일)-7-((1-플루오로사이클로프로필)메틸)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린(0.310 g, 45%)을 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, CDCl3, 27℃) 0.50 - 0.59 (2H, m), 1.03 (2H, dd), 1.13 (3H, d), 2.72 (1H, dd), 2.91 (1H, dd), 3.16 (1H, dd), 3.27 (1H, dd), 3.77 - 3.90 (1H, m), 5.50 (1H, s), 6.80 (1H, d), 7.20 (1H, dd), 7.56 (1H, dd), 8.07 (1H, d), 8.36 (1H, dd); m/z: ES+ [M+H]+ 433.
실시예 19
N
-(4-((6
S
,8
R
)-7-(2,2-디플루오로프로필)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3
H
-피라졸로[4,3-
f
]이소퀴놀린-6-일)-3-메톡시페닐)-1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-아민의 제법
DMF(2 ㎖) 및 DIPEA(0.074 ㎖, 0.42 m㏖)를 N-(4-((6S,8R)-7-(2,2-디플루오로프로필)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)-3-메톡시페닐)아제티딘-3-아민(75 ㎎, 0.17 m㏖)으로 충전된 플라스크에 순차적으로 첨가하였다. 이후, DMF(0.1 ㎖) 중 1-플루오로-3-요오도프로판(31.9 ㎎, 0.17 m㏖)을 첨가하고, 2시간 동안 계속해서 교반하였다. 반응을 중단시키고, 포화 수성 염화나트륨으로 희석하고, 화합물을 EtOAC(x3) 중에서 추출하였다. 합한 추출물을 물로 세척하고, 황산나트륨 위에서 건조시키고, 여과시키고 감압 하에 농축시켜 필름을 수득하였다. 이 재료를 DCM 중 2% 내지 10%(1% 수산화암모늄을 함유하는 메탄올)에 의해 용리되는 플래시 실리카 크로마토그래피로 정제하여 N-(4-((6S,8R)-7-(2,2-디플루오로프로필)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)-3-메톡시페닐)-1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-아민(43 ㎎, 51%)을 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6, 27℃) 1.00 (3H, d), 1.45 - 1.70 (5H, m), 2.44 (2H, t), 2.55 - 2.66 (1H, m), 2.66 - 2.72 (2H, m), 2.79 (1H, dd), 2.87 - 3.01 (1H, m), 3.10 (1H, br dd), 3.38 - 3.53 (1H, m), 3.56 - 3.67 (2H, m), 3.77 (3H, s), 3.85 - 3.97 (1H, m), 4.43 (2H, dt), 5.21 (1H, s), 5.88 (1H, dd), 6.00 (1H, d), 6.16 (1H, d), 6.35 (1H, d), 6.64 (1H, d), 7.17 (1H, d), 8.02 (1H, s), 12.92 (1H, d). m/z: (ES+), [M+H]+ = 502.
출발 재료 N-(4-((6S,8R)-7-(2,2-디플루오로프로필)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)-3-메톡시페닐)아제티딘-3-아민을 하기 절차에 따라 제조하였다.
2,2-디플루오로프로필 트리플루오로메탄설포네이트의 제법
트리플루오로메탄설폰산 무수물(3.29 ㎖, 19.5 m㏖)을 -10℃(염/얼음 배쓰)에서 DCM(40 ㎖) 중 2,2-디플루오로프로판-1-올(1.7 g, 18 m㏖)의 용액에 적가하였다. 이후, 2,6-디메틸피리딘(2.5 ㎖, 21 m㏖)을 첨가하고, 반응물을 이 조건 하에서 1시간 동안 교반하였다. 이후, 반응물을 물(x2)로 세척하고, 유기 층을 Na2SO4 위에서 건조시키고, 여과시키고, 감압(진공 약 200 mbar) 하에 농축시켜 적색의 오일로서 2,2-디플루오로프로필 트리플루오로메탄설포네이트(2.1 g, 52%)를 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, 클로로폼-d, 27℃) 4.48 (2H, t), 1.73 (3H, t).
(
R
)-3-(2-((2,2-디플루오로프로필)아미노)프로필)-2-메틸아닐린의 제법
2,2-디플루오로프로필 트리플루오로메탄설포네이트(1.68 g, 7.37 m㏖)를 1,4-디옥산(20 ㎖) 중 (R)-3-(2-아미노프로필)-2-메틸아닐린(1.1 g, 6.7 m㏖) 및 DIPEA(1.52 ㎖, 8.71 m㏖)의 교반된 용액에 첨가하였다. 반응물을 65℃에서 3시간 동안 가열한 후, 실온까지 냉각시키고, 이후 감압 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 EtOAc(30 ㎖) 중에 용해시키고, 포화 수성 NaHCO3으로 세척하였다. 수성 층을 EtOAc(20 ㎖)로 추출하고, 합한 유기 층을 Na2SO4 위에서 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 생성된 적색의 오일을 플래시 실리카 크로마토그래피(용리 구배 헥산 중 30% 내지 90% 에틸 아세테이트)로 정제하여 검으로서 (R)-3-(2-((2,2-디플루오로프로필)아미노)프로필)-2-메틸아닐린(1.02 g, 63%)을 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6, 27℃) 0.90 (3H, d), 1.55 (3H, t), 1.75 (1H, br s), 1.97 (3H, s), 2.29 - 2.38 (1H, m), 2.69 - 2.76 (2H, m), 2.86 (2H, br t), 4.69 (2H, s), 6.34 (1H, d), 6.47 (1H, d), 6.77 (1H, t). m/z: (ES+), [M+H]+ = 439.
(1
S
,3
R
)-1-(4-브로모-2-메톡시페닐)-2-(2,2-디플루오로프로필)-3,5-디메틸-1,2,3,4-테트라하이드로이소퀴놀린-6-아민의 제법
4-브로모-2-메톡시벤즈알데하이드(1.07 g, 4.95 m㏖)를 AcOH(12 ㎖) 및 물(0.223 g, 12.4 m㏖) 중 (R)-3-(2-((2,2-디플루오로프로필)아미노)프로필)-2-메틸아닐린(0.600 g, 2.48 m㏖)의 용액에 첨가하고, 반응물을 80℃에서 18시간 동안 가열하였다. 냉각 후, 휘발물을 감압 하에 농축시키고, 생성된 잔류물을 EtOAc 중에 용해시켰다. 용액을 포화 수성 NaHCO3으로 세척하여 중화시켰다. 유기 층을 수성 HCl(1 N)과 합하고, 이상성 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반하였다. 이후, 층을 분리시키고, 유기 층을 수성 HCl(1 N)로 세척하였다. 합한 수성 층을 EtOAc로 추출하고, 이후 고체 K2CO3의 첨가에 의해 염기성화시켰다. 이후, 유기 층을 EtOAc(x2)로 추출하고, 합한 유기 층을 황산나트륨 위에서 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 실리카 크로마토그래피(용리 구배 헥산 중 10% 내지 60% 에틸 아세테이트)로 정제하여 검으로서 (1S,3R)-1-(4-브로모-2-메톡시페닐)-2-(2,2-디플루오로프로필)-3,5-디메틸-1,2,3,4-테트라하이드로이소퀴놀린-6-아민(0.576 g, 53%)을 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6, 27℃) 0.95 (3H, d), 1.54 (3H, t), 1.93 (3H, s), 2.27 - 2.43 (2H, m), 2.57 - 2.74 (1H, m), 2.76 - 2.98 (1H, m), 3.19 - 3.26 (1H, m), 3.84 (3H, s), 4.63 (2H, s), 5.12 (1H, s), 6.26 (1H, d), 6.38 (1H, d), 6.58 (1H, d), 6.94 (1H, dd), 7.16 (1H, d). m/z: (ES+), [M+H]+ = 439.
검으로서 N-((1S,3R)-1-(4-브로모-2-메톡시페닐)-2-(2,2-디플루오로프로필)-3,5-디메틸-1,2,3,4-테트라하이드로이소퀴놀린-6-일)아세트아미드(0.081 g, 7%)가 또한 단리되었다.
(6
S
,8
R
)-6-(4-브로모-2-메톡시페닐)-7-(2,2-디플루오로프로필)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3
H
-피라졸로[4,3-
f
]이소퀴놀린의 제법
물(0.750 ㎖) 중의 용액으로서 아질산나트륨(0.049 g, 0.72 m㏖)을 -15℃에서 프로피온산(2.5 ㎖) 중 (1S,3R)-1-(4-브로모-2-메톡시페닐)-2-(2,2-디플루오로프로필)-3,5-디메틸-1,2,3,4-테트라하이드로이소퀴놀린-6-아민(0.30 g, 0.68 m㏖)의 냉각된 용액에 적가하고, 반응물을 이 조건 하에서 1시간 동안 교반하였다. 빙냉 EtOAc(10 ㎖), 이어서 포화 수성 NaHCO3(10 ㎖)을 부분적으로 첨가하였다. 층을 분리시키고, 유기 층을 포화 수성 NaHCO3으로 세척하였다. 합한 수성 층을 EtOAc로 추출하고, 모든 유기 층을 합하고, Na2SO4 위에서 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 실리카 크로마토그래피(용리 구배 헥산 중 20% 내지 70% 에틸 아세테이트)로 정제하여 검으로서 (6S,8R)-6-(4-브로모-2-메톡시페닐)-7-(2,2-디플루오로프로필)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린(0.23 g, 75%)을 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6, 27℃) 1.01 (3H, d), 1.53 (3H, t), 2.84 (1H, dd), 2.96 - 3.09 (1H, m), 3.14 (1H, br dd), 3.36 - 3.48 (1H, m), 3.89 (3H, s), 5.32 (1H, s), 6.64 (2H, app t), 6.94 (1H, dd), 7.16 - 7.27 (2H, m), 8.06 (1H, s), 12.99 (1H, br s). DMSO에 의해 모호한 1H. m/z: (ES+), [M+H]+ = 450.
(6
S
,8
R
)-6-(4-브로모-2-메톡시페닐)-7-(2,2-디플루오로프로필)-8-메틸-3-(테트라하이드로-2
H
-피란-2-일)-6,7,8,9-테트라하이드로-3
H
-피라졸로[4,3-
f
]이소퀴놀린 및 (6
S
,8
R
)-6-(4-브로모-2-메톡시페닐)-7-(2,2-디플루오로프로필)-8-메틸-2-(테트라하이드로-2
H
-피란-2-일)-6,7,8,9-테트라하이드로-2
H
-피라졸로[4,3-
f
]이소퀴놀린의 제법
DCM(7 ㎖)을 (6S,8R)-6-(4-브로모-2-메톡시페닐)-7-(2,2-디플루오로프로필)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린(0.3 g, 0.67 m㏖) 및 4-메틸벤젠설폰산 수화물(0.025 g, 0.13 m㏖)로 충전된 플라스크에 첨가하였다. 3,4-디하이드로-2H-피란(0.084 g, 1.0 m㏖)을 첨가하고, 반응물을 실온에서 18시간 동안 교반하였다. 반응물을 포화 수성 탄산수소나트륨으로 세척하고, 유기 층을 Na2SO4 위에서 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 헥산 중 5% 내지 40% 에틸 아세테이트에 의해 용리되는 플래시 크로마토그래피로 정제하여 검으로서 (6S,8R)-6-(4-브로모-2-메톡시페닐)-7-(2,2-디플루오로프로필)-8-메틸-3-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린(175 ㎎, 49%)을 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, 클로로폼-d, 27℃) 0.99 - 1.13 (3H, br s), 1.48 - 1.88 (6H, m), 2.01 - 2.08 (1H, m), 2.08 - 2.18 (1H, m), 2.48 - 2.70 (2H, m), 2.82 (1H, dt), 2.88 - 3.04 (1H, m), 3.20 (1H, br d), 3.55 - 3.67 (1H, m), 3.63 - 3.73 (1H, m), 3.88 (3H, s), 3.94 - 3.98 (1H, m), 5.42 (1H, br s), 5.63 (1H, dt), 6.64 (1H, dd), 6.73 (1H, dd), 6.86 (1H, dd), 7.03 (1H, t), 7.25 - 7.29 (1H, m), 7.98 (1H, d). m/z: (ES+), [M+H]+ = 534.
검으로서 (6S,8R)-6-(4-브로모-2-메톡시페닐)-7-(2,2-디플루오로프로필)-8-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-6,7,8,9-테트라하이드로-2H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린(68 ㎎, 19%)이 또한 단리되었다. 1H NMR (400MHz, 클로로폼-d, 27℃) 1.02 - 1.07 (3H, m), 1.42 - 1.53 (3H, m), 1.59 - 1.81 (3H, m), 2.03 - 2.09 (1H, m), 2.18 - 2.25 (2H, m), 2.59 (1H, qd), 2.69 (1H, dd), 2.86 - 2.98 (1H, m), 3.02 - 3.14 (1H, m), 3.46 - 3.57 (1H, m), 3.72 - 3.82 (1H, m), 3.87 - 3.90 (3H, m), 4.11 - 4.16 (1H, m), 5.31 (1H, s), 5.61 - 5.68 (1H, m), 6.60 (1H, dd), 6.72 (1H, dd), 6.88 (1H, dt), 7.01 - 7.05 (1H, m), 7.36 (1H, d), 8.09 (1H, s). m/z: (ES+), [M+H]+ = 534.
tert
-부틸 3-((4-((6
S
,8
R
)-7-(2,2-디플루오로프로필)-8-메틸-3-(테트라하이드로-2
H
-피란-2-일)-6,7,8,9-테트라하이드로-3
H
-피라졸로[4,3-
f
]이소퀴놀린-6-일)-3-메톡시페닐)아미노)아제티딘-1-카복실레이트의 제법
디옥산(3.5 ㎖)을 Cs2CO3(213 ㎎, 0.65 m㏖), tert-부틸 3-아미노아제티딘-1-카복실레이트(85 ㎎, 0.49 m㏖) 및 (6S,8R)-6-(4-브로모-2-메톡시페닐)-7-(2,2-디플루오로프로필)-8-메틸-3-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린(175 ㎎, 0.33 m㏖)으로 충전된 플라스크에 첨가하였다. 반응 플라스크를 배기시키고, 질소(x3)로 역충전하였다. BrettPhos 제3세대 전촉매(30 ㎎, 0.03 m㏖)를 첨가하고, 플라스크를 다시 배기시키고, 질소(x3)로 역충전하였다. 반응물을 100℃에서 4시간 동안 가열하였다. 반응물을 실온까지 냉각시키고, 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 생성된 미정제 검을 헥산 중 15% 내지 70% 에틸 아세테이트에 의해 용리되는 플래시 실리카 크로마토그래피로 정제하여 필름으로서 tert-부틸 3-((4-((6S,8R)-7-(2,2-디플루오로프로필)-8-메틸-3-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)-3-메톡시페닐)아미노)아제티딘-1-카복실레이트(152 ㎎, 74%)를 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, 클로로폼-d, 27℃) 1.05 (3H, d), 1.42(9 H, s), 1.44 - 1.57 (3H, m), 1.57 - 1.63 (1H, m), 1.66 - 1.77 (2H, m), 2.04 - 2.08 (1H, m), 2.09 - 2.18 (1H, m), 2.47 - 2.69 (2H, m), 2.79 (1H, dt), 2.84 - 2.99 (1H, m), 3.16 (1H, br dd), 3.48 - 3.61 (1H, m), 3.69 (3H, dt), 3.83 (3H, s), 3.94 - 4.04 (2H, m), 4.15 (1H, br s), 4.20 - 4.29 (2H, m), 5.32 (1H, s), 5.63 (1H, dt), 5.86 (1H, dd), 6.07 (1H, t), 6.55 (1H, dd), 6.78 (1H, dd), 7.20 - 7.23 (1H, m), 7.98 (1H, d). m/z: (ES+), [M+H]+ = 626.
N
-(4-((6
S
,8
R
)-7-(2,2-디플루오로프로필)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3
H
-피라졸로[4,3-
f
]이소퀴놀린-6-일)-3-메톡시페닐)아제티딘-3-아민의 제법
메탄올(1 ㎖) 및 이후 디옥산 중 HCl(4 M; 1 ㎖, 4 m㏖)을 tert-부틸 3-((4-((6S,8R)-7-(2,2-디플루오로프로필)-8-메틸-3-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)-3-메톡시페닐)아미노)아제티딘-1-카복실레이트(140 ㎎, 0.22 m㏖)로 충전된 플라스크에 순차적으로 첨가하였다. 2시간 후, 반응물을 감압 하에 농축시키고, 메탄올에 의해 전처리된 SCX-2 카트리지를 사용하여 생성된 잔류물을 정제하였다. 화합물은 처음에 메탄올, 이어서 메탄올(3 N) 중 암모니아에 의해 용리되었다. 생성물 분획을 감압 하에 농축시켜 검으로서 N-(4-((6S,8R)-7-(2,2-디플루오로프로필)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)-3-메톡시페닐)아제티딘-3-아민(91 ㎎, 92%)을 수득하였다. 생성물을 추가 정제 없이 다음 단계에서 사용하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6, 27℃) 1.00 (3H, d), 1.52 (3H, t), 2.55 - 2.59 (1H, m), 2.78 (1H, dd), 2.85 - 2.99 (1H, m), 3.09 (1H, dd), 3.39 - 3.50 (1H, m), 3.55 - 3.66 (2H, m), 3.77 (3H, s), 4.03 - 4.14 (1H, m), 5.21 (1H, s), 5.85 (1H, dd), 6.05 (1H, br d), 6.14 (1H, d), 6.34 (1H, d), 6.63 (1H, d), 7.17 (1H, d), 8.02 (1H, s), 12.93 (1H, br s). 관찰되지 않는 3H. m/z: (ES+), [M+H]+ = 442.
실시예 20
N
-(3-에톡시-4-((6
S
,8
R
)-7-((1-플루오로사이클로프로필)메틸)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3
H
-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)페닐)-1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-아민의 제법
DMF(2 ㎖) 및 DIPEA(0.050 ㎖, 0.28 m㏖)를 N-(3-에톡시-4-((6S,8R)-7-((1-플루오로사이클로프로필)메틸)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)페닐)아제티딘-3-아민(0.051 g, 0.11 m㏖)으로 충전된 플라스크에 순차적으로 첨가하였다. 1-플루오로-3-요오도프로판(0.021 g, 0.11 m㏖)을 DMF 중 용액(0.2 ㎖)으로서 첨가하고, 2시간 후, 반응물을 포화 수성 탄산수소나트륨으로 희석하였다. 혼합물을 에틸 아세테이트(x3)로 추출하고, 합한 유기 층을 물로 세척하고, 황산나트륨 위에서 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 실리카 크로마토그래피(용리 구배 DCM 중 2% 내지 10%(1% 수산화암모늄을 함유하는 메탄올))로 정제하였다. 생성물 분획을 합하고, 감압 하에 농축시키고, 생성된 잔류물을 상기 조건을 이용하여 플래시 실리카 크로마토그래피로 정제하여 N-(3-에톡시-4-((6S,8R)-7-((1-플루오로사이클로프로필)메틸)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)페닐)-1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-아민(0.023 g, 40%)을 수득하였다. 1H NMR (클로로폼-d, 27℃) 0.50 (2H, br d), 0.88 - 1.05 (2H, m), 1.12 (3H, br d), 1.45 (3H, t), 1.75 - 1.87 (2H, m), 2.59 - 2.73 (3H, m), 2.87 - 3.04 (3H, m), 3.04 - 3.15 (1H, m), 3.41 (1H, br dd), 3.73 - 3.90 (3H, m), 3.93 - 4.18 (4H, m), 4.52 (2H, dt), 5.37 (1H, br s), 5.99 (1H, dd), 6.13 (1H, br d), 6.80 - 6.89 (2H, m), 7.14 (1H, d), 8.06 - 8.08 (1H, m), 10.02 (1H, br s). m/z: (ES+), [M+H]+ = 510.
N-(3-에톡시-4-((6S,8R)-7-((1-플루오로사이클로프로필)메틸)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)페닐)아제티딘-3-아민을 제조하기 위해 이용된 절차는 하기에 기재되어 있다.
(1
S
,3
R
)-1-(4-브로모-2-에톡시페닐)-2-((1-플루오로사이클로프로필)메틸)-3,5-디메틸-1,2,3,4-테트라하이드로이소퀴놀린-6-아민의 제법
4-브로모-2-에톡시벤즈알데하이드(0.775 g, 3.39 m㏖)를 AcOH(9 ㎖) 및 물(0.152 g, 8.46 m㏖) 중 (R)-3-(2-(((1-플루오로사이클로프로필)메틸)아미노)프로필)-2-메틸아닐린(0.400 g, 1.69 m㏖)의 용액에 첨가하였다. 반응물을 80℃에서 18시간 동안 가열하였다. 냉각 후, 반응물을 감압 하에 농축시키고, 이후 잔류물을 EtOAc 중에 용해시키고, 포화 수성 NaHCO3으로 세척하였다. 층을 분리시키고, 유기 상을 수성 염산(1 N)과 합했다. 이상성 혼합물을 30분 동안 교반한 후, 층을 분리시켰다. 유기 층을 수성 HCl(1 N)로 세척하고, 합한 수성 층을 EtOAc(x2)로 추출하였다. 이후, 합한 수성 층을 고체 K2CO3의 첨가에 의해 염기성화시키고, EtOAc(x2)로 추출하였다. 유기 추출물을 합하고, 황산나트륨 위에서 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 실리카 크로마토그래피(용리 구배 헥산 중 10% 내지 60% 에틸 아세테이트)로 정제하여 고체로서 (1S,3R)-1-(4-브로모-2-에톡시페닐)-2-((1-플루오로사이클로프로필)메틸)-3,5-디메틸-1,2,3,4-테트라하이드로이소퀴놀린-6-아민(0.48 g, 63%)을 수득하였다. 1H NMR (400MHz, DMSO-d 6, 27℃) 0.40 - 0.59 (2H, m), 0.83 - 0.93 (2H, m), 0.94 (3H, d), 1.35 (3H, t), 1.93 - 1.96 (3H, m), 2.45 - 2.53 (2H, m), 2.80 - 2.93 (2H, m), 3.57 (1H, br d), 4.14 (2H, q), 4.58 (2H, s), 5.15 (1H, s), 6.26 (1H, d), 6.35 (1H, d), 6.86 (1H, d), 6.95 (1H, dd), 7.15 (1H, d). m/z: (ES+), [M+H]+ = 447.
(6
S
,8
R
)-6-(4-브로모-2-에톡시페닐)-7-((1-플루오로사이클로프로필)메틸)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3
H
-피라졸로[4,3-
f
]이소퀴놀린의 제법
물(0.750 ㎖) 중의 용액으로서 아질산나트륨(0.039 g, 0.56 m㏖)을 -15℃에서 프로피온산(3.0 ㎖) 중 (1S,3R)-1-(4-브로모-2-에톡시페닐)-2-((1-플루오로사이클로프로필)메틸)-3,5-디메틸-1,2,3,4-테트라하이드로이소퀴놀린-6-아민(0.240 g, 0.54 m㏖)의 냉각된 용액에 적가하고, 반응물을 이 조건 하에서 1시간 동안 유지시켰다. 이후, 빙냉 EtOAc(10 ㎖), 이어서 포화 수성 NaHCO3(15 ㎖)을 부분적으로 첨가하였다. 첨가가 완료되고 가스 전개가 중단되면, 층을 분리시켰다. 유기 층을 포화 수성 NaHCO3(x2)으로 세척하고, 합한 수성 층을 EtOAc(x2)로 추출하였다. 합한 유기 층을 황산나트륨 위에서 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 크로마토그래피(용리 구배 헥산 중 20% 내지 60% 에틸 아세테이트)로 정제하여 검으로서 (6S,8R)-6-(4-브로모-2-에톡시페닐)-7-((1-플루오로사이클로프로필)메틸)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린(0.145 g, 59%)을 수득하였다. 1H NMR (500MHz, DMSO-d 6, 27℃) 0.45 (1H, br s), 0.57 (1H, br s), 0.83 - 0.98 (2H, m), 1.00 (3H, d), 1.37 (3H, t), 2.54 - 2.63 (1H, m), 2.87 - 3.00 (2H, m), 3.27 - 3.32 (1H, m), 3.74 (1H, br d), 4.13 - 4.23 (2H, m), 5.32 (1H, s), 6.67 (1H, d), 6.94 (1H, s), 6.96 - 6.99 (1H, m), 7.19 (1H, d), 7.22 (1H, d), 8.06 (1H, s), 12.96 (1H, s). m/z: (ES+), [M+H]+ = 458.
(6
S
,8
R
)-6-(4-브로모-2-에톡시페닐)-7-((1-플루오로사이클로프로필)메틸)-8-메틸-3-(테트라하이드로-2
H
-피란-2-일)-6,7,8,9-테트라하이드로-3
H
-피라졸로[4,3-
f
]이소퀴놀린의 제법
DCM(3 ㎖) 및 3,4-디하이드로-2H-피란(35.8 ㎎, 0.43 m㏖)을 (6S,8R)-6-(4-브로모-2-에톡시페닐)-7-((1-플루오로사이클로프로필)메틸)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린(130 ㎎, 0.28 m㏖) 및 4-메틸벤젠설폰산 수화물(10.79 ㎎, 0.06 m㏖)로 충전된 플라스크에 첨가하였다. 반응물을 실온에서 18시간 동안 교반하였다. 반응물을 포화 수성 탄산수소나트륨으로 세척하고, 유기 층을 황산나트륨 위에서 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 생성된 갈색의 검을 플래시 실리카 크로마토그래피(용리 구배 헥산 중 5% 내지 40% 에틸 아세테이트)로 정제하여 건조 필름으로서 (6S,8R)-6-(4-브로모-2-에톡시페닐)-7-((1-플루오로사이클로프로필)메틸)-8-메틸-3-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린(147 ㎎, 96%)을 수득하였다. 1H NMR (500MHz, 클로로폼-d, 27℃) 0.42 - 0.51 (2H, m), 0.94 - 1.03 (2H, m), 1.07 - 1.12 (3H, m), 1.49 (3H, t), 1.61 - 1.68 (1H, m), 1.73 - 1.79 (2H, m), 2.02 - 2.10 (1H, m), 2.12 - 2.20 (1H, m), 2.53 - 2.63 (2H, m), 2.93 (1H, dt), 3.10 (1H, ddd), 3.38 - 3.46 (1H, m), 3.65 - 3.77 (1H, m), 3.83 - 3.92 (1H, m), 4.00 - 4.07 (1H, m), 4.12 - 4.19 (2H, m), 5.43 (1H, s), 5.66 (1H, ddd), 6.81 (1H, d), 6.89 - 6.93 (1H, m), 6.95 - 7.00 (1H, m), 7.03 - 7.06 (1H, m), 7.25 (1H, dd), 8.03 (1H, s). m/z: (ES+), [M+H]+ = 542.
tert
-부틸 3-((3-에톡시-4-((6
S
,8
R
)-7-((1-플루오로사이클로프로필)메틸)-8-메틸-3-(테트라하이드로-2
H
-피란-2-일)-6,7,8,9-테트라하이드로-3
H
-피라졸로[4,3-
f
]이소퀴놀린-6-일)페닐)아미노)아제티딘-1-카복실레이트의 제법
디옥산(2.7 ㎖)을 (6S,8R)-6-(4-브로모-2-에톡시페닐)-7-((1-플루오로사이클로프로필)메틸)-8-메틸-3-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린(140 ㎎, 0.26 m㏖), Cs2CO3(168 ㎎, 0.52 m㏖) 및 tert-부틸 3-아미노아제티딘-1-카복실레이트(67 ㎎, 0.39 m㏖)로 충전된 플라스크에 첨가하였다. 반응 플라스크를 배기시키고, N2(x3)로 충전하였다. BrettPhos 제3세대 전촉매(23 ㎎, 0.030 m㏖)를 첨가하고, 플라스크를 배기시키고, 질소(x3)로 충전하였다. 반응물을 90℃에서 1시간 동안 가열한 후, 90℃에서 44시간 동안 가열하였다. 반응물을 실온까지 냉각시키고, 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 생성된 검을 플래시 크로마토그래피(용리 구배 헥산 중 30% 내지 100% 에틸 아세테이트)로 정제하여 검으로서 tert-부틸 3-((3-에톡시-4-((6S,8R)-7-((1-플루오로사이클로프로필)메틸)-8-메틸-3-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)페닐)아미노)아제티딘-1-카복실레이트(86 ㎎, 53%)를 수득하였다. 1H NMR (500MHz, 클로로폼-d, 27℃) 0.39 - 0.49 (2H, m), 0.87 - 0.95 (2H, m), 1.06 (3H, d), 1.38 - 1.45 (12H, m), 1.57 - 1.62 (1H, m), 1.68 - 1.74 (2H, m), 1.98 - 2.06 (1H, m), 2.07 - 2.15 (1H, m), 2.49 - 2.63 (2H, m), 2.85 (1H, dt), 3.05 (1H, br t), 3.29 - 3.35 (1H, m), 3.63 - 3.73 (3H, m), 3.75 - 3.83 (1H, m), 3.92 (1H, br d), 3.99 (1H, br d), 4.05 (2H, q), 4.14 (1H, br dd), 4.18 - 4.26 (2H, m), 5.33 (1H, s), 5.58 - 5.63 (1H, m), 5.90 (1H, br d), 6.02 - 6.06 (1H, m), 6.76 (1H, dd), 6.80 (1H, d), 7.19 (1H, d), 7.97 (1H, s). m/z: (ES+), [M+H]+ = 634.
N
-(3-에톡시-4-((6
S
,8
R
)-7-((1-플루오로사이클로프로필)메틸)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3
H
-피라졸로[4,3-
f
]이소퀴놀린-6-일)페닐)아제티딘-3-아민의 제법
메탄올(0.5 ㎖)을 tert-부틸 3-((3-에톡시-4-((6S,8R)-7-((1-플루오로사이클로프로필)메틸)-8-메틸-3-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)페닐)아미노)아제티딘-1-카복실레이트(0.080 g, 0.13 m㏖)로 충전된 플라스크에 첨가하였다. 디옥산 중 염산(4 M; 0.5 ㎖, 2 m㏖)을 첨가하고, 2시간 동안 계속해서 교반하였다. 이후, 반응물을 감압 하에 농축시키고, 생성된 잔류물을 처음에 메탄올에 의해, 이어서 메탄올 중 암모니아(3 N)에 의해 용리되는 메탄올에 의해 전처리된 SCX-2 카트리지를 사용하여 정제하여 고체로서 N-(3-에톡시-4-((6S,8R)-7-((1-플루오로사이클로프로필)메틸)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)페닐)아제티딘-3-아민(0.057 g, 99%)을 수득하였다. 1H NMR (500MHz, 클로로폼-d, 27℃) 0.44 - 0.55 (2H, m), 0.90 - 1.00 (2H, m), 1.12 (3H, d), 1.45 (3H, t), 2.61 - 2.71 (1H, m), 2.92 (1H, br dd), 3.10 (1H, br dd), 3.40 (1H, br dd), 3.51 - 3.58 (2H, m), 3.83 - 3.90 (1H, m), 3.91 - 4.02 (2H, m), 4.03 - 4.16 (3H, m), 4.36 (1H, sxt), 5.38 (1H, s), 5.98 (1H, dd), 6.12 (1H, br d), 6.77 - 6.89 (2H, m), 7.13 (1H, d), 8.07 (1H, s), 10.09 (1H, br s). 관찰되지 않고 물 피크에 의해 모호할 것 같은 1개의 H. m/z: (ES+), [M+H]+ = 450.
실시예 21
N-(4-((6
S
,8
R
)-7-(2,2-디플루오로에틸)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3
H
-피라졸로[4,3-
f
]이소퀴놀린-6-일)-3-메톡시페닐)-1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-아민의 제법
디옥산 중 염산(4 M; 1.23 ㎖, 5.2 m㏖)을 MeOH(5 ㎖) 중 tert-부틸 3-(4-((6S,8R)-7-(2,2-디플루오로에틸)-8-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-6,7,8,9-테트라하이드로-2H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)-3-메톡시페닐아미노)아제티딘-1-카복실레이트(316 ㎎, 0.52 m㏖)의 교반된 용액에 적가하였다. 혼합물을 실온에서 18시간 동안 교반하였다. 반응물을 감압 하에 농축시키고, 생성된 잔류물을 MeOH 중에 용해시켰다. 과량의 테트라알킬암모늄 카보네이트 마크로다공성 수지(Aldrich; 18 내지 50 메시; 2.5 내지 3.5 m㏖/g N 로딩)를 첨가하고, 혼합물을 실온에서 5분 동안 교반하였다. 혼합물을 여과시키고, 여과액을 황산나트륨 위에서 건조시키고, 여과시키고 감압 하에 농축시켜 검(220 ㎎)으로서 미정제 N-(4-((6S,8R)-7-(2,2-디플루오로에틸)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)-3-메톡시페닐)아제티딘-3-아민을 수득하였다. 이 재료를 추가 정제 없이 다음 단계에서 바로 사용하였다. m/z: (ES+), [M+H]+ = 428.
DMF(5 ㎖) 중 N-(4-((6S,8R)-7-(2,2-디플루오로에틸)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)-3-메톡시페닐)아제티딘-3-아민(220 ㎎, 0.51 m㏖), 1-플루오로-3-요오도프로판(106 ㎎, 0.57 m㏖) 및 DIPEA(0.270 ㎖, 1.54 m㏖)의 혼합물을 실온에서 18시간 동안 교반하였다. 반응물을 DCM으로 희석하고, 포화 수성 염화암모늄으로 세척하였다. 수성 층을 DCM으로 추출하고, 합한 유기 층을 황산나트륨 위에서 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 0.2% 수산화암모늄을 함유하는 물 중 40% 내지 80% 아세토니트릴에 의해 용리되는 분취용 HPLC(Xbridge C18 칼럼, 19 ㎜ x 150 ㎜; 5 ㎛; 유속: 20 ㎖/분)로 정제하였다. 생성물 분획을 감압 하에 농축시키고, 생성된 잔류물을 이산화탄소 중 0.2% 수산화암모늄을 함유하는 15% 메탄올에 의해 용리되는 분취용 SFC(2-에틸피리딘 칼럼, 19 ㎜ x 150 ㎜, 5 ㎛; 유속: 75 ㎖/분; 칼럼 온도: 40℃; 출구 압력: 100 bar)로 정제하여 백색의 고체로서 N-(4-((6S,8R)-7-(2,2-디플루오로에틸)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)-3-메톡시페닐)-1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-아민(82 ㎎, 33% 2개의 단계)을 수득하였다. 1H NMR (300MHz, DMSO-d 6 , 27℃) 1.03 (3H, d), 1.55 - 1.74 (2H, m), 2.41 - 2.47 (2H, m), 2.53 - 2.83 (4H, m), 2.86 - 3.04 (1H, m), 3.10 (1H, br dd), 3.32 - 3.43 (1H, m), 3.58 - 3.66 (2H, m), 3.82 (3H, s), 3.86 - 3.98 (1H, m), 4.45 (2H, dt), 5.21 (1H, s), 5.89 (1H, t), 5.90 (1H, dd), 6.01 (1H, d), 6.19 (1H, d), 6.35 (1H, d), 6.67 (1H, d), 7.19 (1H, d), 8.03 (1H, s), 12.92 - 12.96 (1H, m). m/z: ES+ [M+H]+ 488.
출발 재료 tert-부틸 3-((4-((6S,8R)-7-(2,2-디플루오로에틸)-8-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)-3-메톡시페닐)아미노)아제티딘-1-카복실레이트를 하기 절차에 따라 제조하였다.
(6
S
,8
R
)-6-(4-브로모-2-메톡시페닐)-7-(2,2-디플루오로에틸)-8-메틸-3-(테트라하이드로-2
H
-피란-2-일)-6,7,8,9-테트라하이드로-3
H
-피라졸로[4,3-
f
]이소퀴놀린 및 (6
S
,8
R
)-6-(4-브로모-2-메톡시페닐)-7-(2,2-디플루오로에틸)-8-메틸-2-(테트라하이드로-2
H
-피란-2-일)-6,7,8,9-테트라하이드로-2
H
-피라졸로[4,3-
f
]이소퀴놀린의 제법
마이크로파 바이알을 (6S,8R)-6-(4-브로모-2-메톡시페닐)-7-(2,2-디플루오로에틸)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린(986 ㎎, 2.26 m㏖), 4-메틸벤젠설폰산 수화물(43 ㎎, 0.23 m㏖), 3,4-디하이드로-2H-피란(0.31 ㎖, 3.4 m㏖) 및 DCM으로 충전하였다. 반응물을 마이크로파 조건(300 W) 하에서 80℃에서 20분 동안 가열하였다. 이후, 반응물을 냉각시키고, DCM으로 희석한 후, 포화 수성 탄산수소나트륨으로 세척하였다. 층을 분리시키고, 유기 층을 황산나트륨 위에서 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 실리카 크로마토그래피(용리 구배 헥산 중 0% 내지 70% EtOAc)로 정제하여 오렌지색의 고체로서 더 빠르게 용리하는 (6S,8R)-6-(4-브로모-2-메톡시페닐)-7-(2,2-디플루오로에틸)-8-메틸-3-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린(457 ㎎, 39%)을 수득하였다. 1H NMR (300MHz, 클로로폼-d, 27℃) 1.04 - 1.22 (3H, m), 1.59 - 1.86 (3H, m), 2.04 - 2.23 (2H, m), 2.53 - 3.31 (5H, m), 3.40 - 3.57 (1H, m), 3.68 - 3.79 (1H, m), 3.97 (3H, s), 4.00 - 4.09 (1H, m), 5.41 (1H, br s), 5.69 (1H, br s), 5.66 - 5.73 (1H, m), 6.67 (1H, dd), 6.80 (1H, dd), 6.92 (1H, dd), 7.06 - 7.12 (1H, m), 7.29 - 7.37 (1H, m), 8.03 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 612. 베이지색의 분말로서 더 느리게 용리하는 (6S,8R)-6-(4-브로모-2-메톡시페닐)-7-(2,2-디플루오로에틸)-8-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-6,7,8,9-테트라하이드로-2H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린(627 ㎎, 57%)이 또한 단리되었다. 1H NMR (300MHz, 클로로폼-d, 27℃) 1.12 (3H, br d), 1.64 - 1.87 (3H, m), 2.03 - 2.17 (1H, m), 2.18 - 2.29 (2H, m), 2.61 - 2.83 (2H, m), 2.89 - 3.15 (2H, m), 3.43 (1H, br s), 3.75 - 3.86 (1H, m), 3.95 (3H, s), 4.13 - 4.20 (1H, m), 5.32 (1H, s), 5.79 (1H, br t), 5.66 - 5.73 (1H, m), 6.63 - 6.77 (2H, m), 6.93 (1H, d), 7.09 (1H, d), 7.43 (1H, d), 8.14 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 612.
tert
-부틸 3-(4-((6
S
,8
R
)-7-(2,2-디플루오로에틸)-8-메틸-2-(테트라하이드로-2
H
-피란-2-일)-6,7,8,9-테트라하이드로-2
H
-피라졸로[4,3-
f
]이소퀴놀린-6-일)-3-메톡시페닐아미노)아제티딘-1-카복실레이트의 제법
마이크로파 바이알을 (6S,8R)-6-(4-브로모-2-메톡시페닐)-7-(2,2-디플루오로에틸)-8-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-6,7,8,9-테트라하이드로-2H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린(310 ㎎, 0.60 m㏖), tert-부틸 3-아미노아제티딘-1-카복실레이트(154 ㎎, 0.89 m㏖), Cs2CO3(388 ㎎, 1.19 m㏖) 및 BrettPhos 제3세대 전촉매(54.0 ㎎, 0.06 m㏖)로 충전하였다. 바이알을 탈기시키고, 질소(x2)로 충전하였다. 바이알을 다시 탈기시키고, 1,4-디옥산(6 ㎖) 및 질소로 재충전하였다. 바이알을 다시 탈기시키고, 질소로 재충전하였다. 혼합물을 마이크로파 조건(300 W, 110℃) 하에서 3.5시간 동안 가열하였다. 반응물을 DCM으로 희석하고, 포화 수성 탄산수소나트륨으로 세척하였다. 유기 층을 황산나트륨 위에서 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 실리카 크로마토그래피(용리 구배 헥산 중 20% 내지 60% EtOAc)로 정제하여 회백색의 고체로서 tert-부틸 3-(4-((6S,8R)-7-(2,2-디플루오로에틸)-8-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-6,7,8,9-테트라하이드로-2H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)-3-메톡시페닐아미노)아제티딘-1-카복실레이트(322 ㎎, 88%)를 수득하였다. 1H NMR (300MHz, 클로로폼-d, 27℃) 1.08 (3H, br d), 1.39 - 1.43 (9H, m), 1.58 - 1.81 (3H, m), 2.06 (1H, br dd), 2.13 - 2.25 (2H, m), 2.58 - 2.71 (1H, m), 2.82 - 3.11 (2H, m), 3.34 - 3.50 (1H, m), 3.66 - 3.81 (3H, m), 3.86 (3H, s), 3.90 - 4.01 (1H, m), 4.08 - 4.20 (3H, m), 4.19 - 4.29 (2H, m), 5.22 (1H, s), 5.76 (1H, t), 5.64 (1H, t), 5.88 (1H, br d), 6.09 (1H, d), 6.59 (1H, br t), 6.67 (1H, d), 7.37 (1H, br d), 8.08 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 612.
실시예 22
(6
S
,8
R
)-7-(2,2-디플루오로에틸)-6-(4-((1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일)옥시)-2-메톡시페닐)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3
H
-피라졸로[4,3-
f
]이소퀴놀린의 제법
디옥산 중 HCl(4 M; 1.02 ㎖, 4.08 m㏖)을 MeOH(4 ㎖) 중 tert-부틸 3-(4-((6S,8R)-7-(2,2-디플루오로에틸)-8-메틸-3-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)-3-메톡시페녹시)아제티딘-1-카복실레이트(250 ㎎, 0.41 m㏖)의 교반된 용액에 적가하였다. 혼합물을 실온에서 18시간 동안 교반하였다. 이후, 반응물을 감압 하에 농축시키고, 생성된 잔류물을 MeOH에 의해 용해시켰다. 과량의 테트라알킬암모늄 카보네이트 마크로다공성 수지(Aldrich; 18 내지 50 메시; 2.5 내지 3.5 m㏖/g N 로딩)를 첨가하고, 혼합물을 실온에서 5분 동안 교반한 후, 황산나트륨 위에서 건조시키고, 여과시키고 감압 하에 농축시켜 미정제 (6S,8R)-6-(4-(아제티딘-3-일옥시)-2-메톡시페닐)-7-(2,2-디플루오로에틸)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린(179 ㎎)을 수득하였고, 이것을 추가 정제 없이 다음 단계에서 바로 사용하였다. m/z: ES+ [M+H]+ 429.
DMF(4 ㎖) 중 (6S,8R)-6-(4-(아제티딘-3-일옥시)-2-메톡시페닐)-7-(2,2-디플루오로에틸)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린(178 ㎎, 0.42 m㏖), 1-플루오로-3-요오도프로판(94 ㎎, 0.50 m㏖) 및 DIPEA(0.218 ㎖, 1.25 m㏖)의 혼합물을 실온에서 18시간 동안 교반하였다. 이후, 반응물을 DCM으로 희석하고, 포화 수성 염화암모늄으로 세척하였다. 층을 분리시키고, 수성 층을 DCM으로 추출하였다. 합한 유기 층을 황산나트륨 위에서 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 이산화탄소 중 15%(0.2% 수산화암모늄을 함유하는 메탄올)에 의해 용리되는 분취용 SFC(2-에틸피리딘 칼럼; 19 ㎜ x 150 ㎜; 5 ㎛; 유속: 75 ㎖/분; 칼럼 온도: 40℃; 출구 압력: 100 bar)로 정제하여 백색의 고체로서 (6S,8R)-7-(2,2-디플루오로에틸)-6-(4-((1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일)옥시)-2-메톡시페닐)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린(70 ㎎, 2개의 단계에 걸쳐 35%)을 수득하였다. 1H NMR (300MHz, DMSO-d 6 , 27℃) 1.02 (3H, d), 1.61 - 1.84 (2H, m), 2.55 - 2.84 (3H, m), 2.90 - 3.13 (2H, m), 3.18 - 3.43 (4H, m), 3.87 (3H, s), 3.89 - 4.00 (2H, m), 4.45 (2H, dt), 4.81 (1H, quin), 5.28 (1H, s), 5.74 - 6.16 (1H, m), 6.19 (1H, dd), 6.49 - 6.54 (2H, m), 6.66 (1H, d), 7.21 (1H, d), 8.04 (1H, s), 12.98 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 489.
출발 재료 tert-부틸 3-(4-((6S,8R)-7-(2,2-디플루오로에틸)-8-메틸-3-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)-3-메톡시페녹시)아제티딘-1-카복실레이트를 제조하기 위해 이용된 절차는 하기에 기재되어 있다.
tert
-부틸 3-(4-((6
S
,8
R
)-7-(2,2-디플루오로에틸)-8-메틸-3-(테트라하이드로-2
H
-피란-2-일)-6,7,8,9-테트라하이드로-3
H
-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)-3-메톡시페녹시)아제티딘-1-카복실레이트의 제법
마이크로파 바이알을 (6S,8R)-6-(4-브로모-2-메톡시페닐)-7-(2,2-디플루오로에틸)-8-메틸-3-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린(259 ㎎, 0.50 m㏖), tert-부틸 3-하이드록시아제티딘-1-카복실레이트(259 ㎎, 1.49 m㏖), 탄산세슘(324 ㎎, 1.00 m㏖) 및 RockPhos 제3세대 전촉매(42 ㎎, 0.050 m㏖)로 충전하였다. 바이알을 배기시키고, 질소(x2)로 재충전하였다. 이후, 바이알을 배기시키고, 톨루엔(3 ㎖)으로 재충전하였다. 바이알을 배기시키고, 질소로 재충전하였다. 혼합물을 110℃에서 4시간 동안 가열하였다. 반응물을 DCM으로 희석하고, 포화 수성 탄산수소나트륨으로 세척하였다. 유기 층을 황산나트륨 위에서 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 실리카 크로마토그래피(용리 구배 헥산 중 0% 내지 60% EtOAc)로 정제하여 백색의 폼 고체로서 tert-부틸 3-(4-((6S,8R)-7-(2,2-디플루오로에틸)-8-메틸-3-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)-3-메톡시페녹시)아제티딘-1-카복실레이트(220 ㎎, 72%)를 수득하였다. 1H NMR (400MHz, DMSO-d 6 , 100℃) 1.03 - 1.09 (3H, m), 1.40 (9H, s), 1.56 - 1.64 (2H, m), 1.67 - 1.84 (1H, m), 1.93 - 2.01 (1H, m), 2.02 - 2.12 (1H, m), 2.34 - 2.46 (1H, m), 2.59 - 2.74 (1H, m), 2.84 (1H, dt), 2.93 - 3.06 (1H, m), 3.13 - 3.23 (1H, m), 3.40 - 3.50 (1H, m), 3.65 - 3.74 (1H, m), 3.76 - 3.84 (2H, m), 3.84 - 3.91 (4H, m), 4.21 - 4.28 (2H, m), 4.97 (1H, tt), 5.33 (1H, s), 5.67 - 6.00 (1H, m), 5.74 (1H, dd), 6.23 (1H, ddd), 6.54 (1H, d), 6.66 (1H, t), 6.73 (1H, d), 7.35 (1H, d), 8.04 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 613.
실시예 23 및 실시예 24
3-((6
S
,8
R
)-6-(2,6-디플루오로-4-(1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일아미노)페닐)-8-메틸-8,9-디하이드로-3
H
-피라졸로[4,3-
f
]이소퀴놀린-7(6
H
)-일)-2-플루오로-2-메틸프로판-1-올의 개별 부분입체이성질체의 제법
THF 중 테트라부틸암모늄 플루오라이드(1 M; 0.114 ㎖, 0.11 m㏖)를 THF(0.75 ㎖) 중 N-(4-((6S,8R)-7-(3-((tert-부틸디페닐실릴)옥시)-2-플루오로-2-메틸프로필)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)-3,5-디플루오로페닐)-1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-아민(82 ㎎, 0.08 m㏖)의 교반된 용액에 주사기를 통해 적가하였다. 2.5시간 후, THF 중 추가 테트라부틸암모늄 플루오라이드(1 M; 0.08 ㎖, 0.08 m㏖)를 첨가하고, 반응물을 추가로 18시간 동안 교반하였다. 반응물을 DCM으로 희석하고, 포화 수성 NaHCO3 및 포화 수성 염화나트륨으로 연속하여 세척하고, MgSO4 위에서 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 실리카 크로마토그래피(용리 구배 DCM 중 0.5% 내지 10% MeOH)로 정제하였다. 생성물 분획을 감압 하에 농축시키고, 생성된 잔류물을 (0.2% NH4OH를 함유하는 물) 중 45% 내지 85% 아세토니트릴의 용리 구배를 이용하여 분취용 HPLC(Waters XBridge Prep C18 OBD 칼럼, 5 ㎛ 실리카, 19 ㎜ 직경, 150 ㎜ 길이)로 추가 정제하였다. 생성물 분획을 감압 하에 농축시켜 담황색의 필름으로서 3-((6S,8R)-6-(2,6-디플루오로-4-(1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일아미노)페닐)-8-메틸-8,9-디하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-7(6H)-일)-2-플루오로-2-메틸프로판-1-올의 제1 용리 이성질체 1(2.7 ㎎, 7%) 및 제2 용리 이성질체(2.1 ㎎, 5%)를 수득하였다.
이성질체 1: 1H NMR (500 MHz, CD2Cl2, 27℃) 1.13 (3H, d), 1.17 (3H, d), 1.66 - 1.78 (3H, m), 2.54 (2H, t), 2.69 (1H, dd), 2.81 - 2.94 (3H, m), 3.00 (1H, dd), 3.31 (1H, dd), 3.51 - 3.59 (1H, m), 3.60 - 3.71 (4H, m), 3.95 - 4.03 (1H, m), 4.38 (1H, br s), 4.46 (2H, dt), 5.26 (1H, s), 6.01 (2H, br d), 6.84 (1H, d), 7.21 (1H, d), 8.03 (1H, s), 10.19 (1H, br s). m/z: ES+ [M+H]+ 520.
이성질체 2: 1H NMR (500 MHz, CD2Cl2, 27℃) 1.05 (3H, d), 1.09 (3H, d), 1.65 - 1.80 (2H, m), 2.54 (2H, t), 2.62 (1H, dd), 2.83 - 2.88 (2H, m), 2.91 - 3.00 (1H, m), 3.13 - 3.24 (1H, m), 3.33 - 3.46 (2H, m), 3.48 - 3.58 (1H, m), 3.66 (2H, q), 3.96 - 4.04 (2H, m), 4.40 (1H, dt), 4.41 - 4.53 (2H, m), 4.64 (1H, br d), 5.03 (1H, s), 6.06 (2H, br d), 6.76 (1H, d), 7.19 (1H, d), 8.03 (1H, s), 10.19 (1H, br s). m/z: ES+ [M+H]+ 520.
출발 재료 N-(4-((6S,8R)-7-(3-((tert-부틸디페닐실릴)옥시)-2-플루오로-2-메틸프로필)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)-3,5-디플루오로페닐)-1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-아민을 제조하기 위해 이용된 절차는 하기에 기재되어 있다.
디메틸 2-플루오로-2-메틸-프로판디오에이트의 제법
수소화나트륨(광유 중 60% 분산액; 2.93 g, 73.3 m㏖)을 격렬히 교반하면서 THF(218 ㎖) 중 디메틸 2-플루오로말로네이트(10.0 g, 66.6 m㏖)의 용액에 첨가하였다. 30분 후, 요오도메탄(4.56 ㎖, 73.3 m㏖)을 첨가하였다. 반응물을 추가로 3시간 동안 교반하였다. 반응물을 물로 켄칭시키고, 이후 EtOAc(4 x 100 ㎖)로 추출하였다. 합한 유기 층을 Na2SO4 위에서 건조시키고, 여과시키고 감압 하에 농축시켜 오렌지색의 오일로서 디메틸 2-플루오로-2-메틸-프로판디오에이트(8.4 g, 77%)를 수득하였다. 1H NMR (300 MHz, DMSO-d 6 , 27℃) 1.72 (3H, d), 3.77 (6H, s).
2-플루오로-2-메틸프로판-1,3-디올의 제법
수소화알루미늄리튬(4.50 g, 112.6 m㏖)을 0℃에서 THF(205 ㎖) 중 디메틸 2-플루오로-2-메틸-프로판디오에이트(8.40 g, 51.2 m㏖)의 교반된 용액에 분획으로 첨가하였다. 반응물을 실온까지 가온시키고, 이 조건 하에서 1시간 동안 교반하였다. 이후, 반응 혼합물을 0℃까지 냉각시키고, 물(5.85 ㎖), 15 중량% 수성 NaOH(5.85 ㎖) 및 물(18 ㎖)의 순차적인 적가에 의해 조심스럽게 켄칭시켰다. 생성된 젤라틴성 현탁액을 1시간 동안 빠르게 교반하였다. 침전물을 여과에 의해 제거하고, 여과액을 감압 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 CHCl3/IPA의 혼합물(3:1) 중에 용해시키고, Na2SO4 위에서 건조시키고, 여과시키고 감압 하에 농축시켜 오렌지색의 오일로서 2-플루오로-2-메틸프로판-1,3-디올(3.28 g, 46%)을 수득하였다. 이 오일을 추가 정제 없이 다음 단계에서 사용하였다. 1H NMR (300 MHz, DMSO-d 6 , 27℃) 1.18 (3H, d), 3.42 (4H, dd), 4.80 (2H, t).
3-((
tert
-부틸디페닐실릴)옥시)-2-플루오로-2-메틸프로판-1-올의 제법
수소화나트륨(광유 중 60% 분산액; 1.1 g, 27.5 m㏖)을 0℃에서 THF(93 ㎖) 중 2-플루오로-2-메틸프로판-1,3-디올(2.7 g, 25 m㏖)의 교반된 용액에 첨가하고, 반응물을 1시간 동안 교반하였다. tert-부틸클로로디페닐실란(6.5 ㎖, 25 m㏖)을 첨가하고, 반응물을 추가 1시간 동안 교반하였다. 반응물을 물로 켄칭시키고, 층을 분리시키고, 수성 층을 EtOAc(2 x 100 ㎖)로 추출하였다. 합한 유기 층을 Na2SO4 위에서 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 실리카 겔에 흡착시켰다. 플래시 실리카 크로마토그래피(용리 구배 헥산 중 0% 내지 50% EtOAc)에 의한 정제는 투명한 검으로서 3-((tert-부틸디페닐실릴)옥시)-2-플루오로-2-메틸프로판-1-올(4.4 g, 51%)을 수득하였다. 1H NMR (300 MHz, DMSO-d 6 , 27℃) 1.00 (9H, s), 1.27 (3H, d), 3.48 (1H, dd), 3.53 (1H, dd), 3.66 (1H, d), 3.73 (1H, br s), 4.93 (1H, t), 7.40 - 7.48 (6H, m), 7.59 - 7.66 (4H, m). m/z: ES+ [M+H]+ 347.
3-((
tert
-부틸디페닐실릴)옥시)-2-플루오로-2-메틸프로필 트리플루오로메탄설포네이트의 제법
트리플루오로메탄설폰산 무수물(1.3 ㎖, 7.6 m㏖)을 -10℃(염/얼음 배쓰)에서 DCM(22 ㎖) 중 3-((tert-부틸디페닐실릴)옥시)-2-플루오로-2-메틸프로판-1-올(2.2 g, 6.35 m㏖) 및 2,6-디메틸피리딘(1.28 ㎖, 7.6 m㏖)의 교반된 용액에 적가하였다. 반응물을 이 조건 하에서 1.5시간 동안 유지시켰다. 이후, 반응물을 DCM(100 ㎖)으로 희석하고, 수성 HCl(1 N), 포화 수성 NaHCO3 및 포화 수성 NaCl로 연속하여 세척하였다. 유기 층을 Na2SO4 위에서 건조시키고, 여과시키고 감압 하에 농축시켜 적색의 오일로서 3-((tert-부틸디페닐실릴)옥시)-2-플루오로-2-메틸프로필 트리플루오로메탄설포네이트(3.2 g)를 수득하였다. 이 오일을 추가 정제 없이 다음 단계에서 사용하였다.
3-((2
R
)-2-((3-((
tert
-부틸디페닐실릴)옥시)-2-플루오로-2-메틸프로필)아미노)프로필)-2-메틸아닐린의 부분입체이성질체 혼합물의 제법
3-((tert-부틸디페닐실릴)옥시)-2-플루오로-2-메틸프로필 트리플루오로메탄설포네이트(3.04 g, 6.35 m㏖)를 1,4-디옥산(24 ㎖) 중 (R)-3-(2-아미노프로필)-2-메틸아닐린(1.04 g, 6.35 m㏖) 및 디이소프로필에틸아민(1.65 ㎖, 9.53 m㏖)의 용액에 첨가하였다. 반응물을 85℃에서 18시간 동안 가열하였다. 냉각 후, 반응물을 DCM(250 ㎖)으로 희석하고, 물로 세척하였다. 수성 층을 DCM(2 x 100 ㎖)으로 추출하고, 합한 유기물을 Na2SO4 위에서 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 실리카 크로마토그래피(용리 구배 DCM 중 0% 내지 25% MeOH)로 정제하였다. 생성물 분획을 감압 하에 농축시켜 검으로서 3-((2R)-2-((3-((tert-부틸디페닐실릴)옥시)-2-플루오로-2-메틸프로필)아미노)프로필)-2-메틸아닐린(2.10 g, 95%)을 수득하였다. 1H NMR (300 MHz, DMSO-d 6 , 27℃) 0.90 (3H, dd), 1.01 (9H, d), 1.29 (3H, dd), 1.41 (1H, br s), 1.97 (3H, d), 2.29 - 2.43 (1H, m), 2.65 - 2.91 (4H, m), 3.62 - 3.82 (2H, m), 4.67 (2H, s), 6.28 - 6.36 (1H, m), 6.47 (1H, dd), 6.69 - 6.81 (1H, m), 7.40 - 7.52 (6H, m), 7.61 - 7.69 (4H, m). m/z: ES+ [M+H]+ 494.
(1
S
,3
R
)-1-(4-브로모-2,6-디플루오로페닐)-2-(3-((
tert
-부틸디페닐실릴)옥시)-2-플루오로-2-메틸프로필)-3,5-디메틸-1,2,3,4-테트라하이드로이소퀴놀린-6-아민의 부분입체이성질체 혼합물의 제법
4-브로모-2,6-디플루오로벤즈알데하이드(628 ㎎, 2.84 m㏖)를 아세트산(10 ㎖) 및 톨루엔(4 ㎖)의 혼합물 중 3-((2R)-2-((3-((tert-부틸디페닐실릴)옥시)-2-플루오로-2-메틸프로필)아미노)프로필)-2-메틸아닐린(700 ㎎, 1.42 m㏖) 및 물(0.128 ㎖, 7.10 m㏖)의 교반된 용액에 첨가하였다. 반응물을 90℃에서 18시간 동안 가열한 후, 환류 조건에서 추가 4시간 동안 가열하였다. 반응물을 냉각되게 하고, 감압 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 DCM 중에 용해시키고, 포화 수성 NaHCO3으로 세척하였다. 수성 상을 DCM(20 ㎖)으로 추출하고, 합한 유기 층을 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 MeOH/DCM(5:1, 18 ㎖)의 혼합물 중에 용해시키고, 이후 하이드록실아민 하이드로클로라이드(148 ㎎, 2.13 m㏖) 및 아세트산나트륨(233 ㎎, 2.84 m㏖)을 첨가하였다. 혼합물을 35℃에서 5분 동안 교반하고, 이후 감압 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 EtOAc 중에 용해시키고, 포화 수성 NaHCO3 및 포화 수성 NaCl로 순차적으로 세척한 후, MgSO4 위에서 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 실리카 크로마토그래피(용리 구배 헥산 중 0% 내지 35% EtOAc)로 정제하여 담황색의 필름으로서 (1S,3R)-1-(4-브로모-2,6-디플루오로페닐)-2-(3-((tert-부틸디페닐실릴)옥시)-2-플루오로-2-메틸프로필)-3,5-디메틸-1,2,3,4-테트라하이드로이소퀴놀린-6-아민(339 ㎎, 34%)을 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, CDCl3, 27℃) 1.05 (9H, d), 1.19 (3H, dd), 2.08 (3H, s), 2.35 (1H, dd), 2.47 - 2.67 (2H, m), 2.84 - 3.01 (1H, m), 3.02 - 3.14 (1H, m), 3.22 (1H, dd), 3.40 - 3.63 (3H, m), 3.66 - 3.79 (1H, m), 3.92 (1H, dd), 5.15 (1H, d), 6.38 - 6.47 (2H, m), 6.83 (1H, d), 6.93 - 7.00 (1H, m), 7.38 - 7.49 (6H, m), 7.59 - 7.71 (4H, m), 8.69 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 695.
(6
S
,8
R
)-6-(4-브로모-2,6-디플루오로페닐)-7-(3-((
tert
-부틸디페닐실릴)옥시)-2-플루오로-2-메틸프로필)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3
H
-피라졸로[4,3-
f
]이소퀴놀린의 부분입체이성질체 혼합물의 제법
물(0.400 ㎖) 중의 용액으로서 아질산나트륨(33.6 ㎎, 0.49 m㏖)을 -20℃에서 프로피온산(4 ㎖) 중 (1S,3R)-1-(4-브로모-2,6-디플루오로페닐)-2-(3-((tert-부틸디페닐실릴)옥시)-2-플루오로-2-메틸프로필)-3,5-디메틸-1,2,3,4-테트라하이드로이소퀴놀린-6-아민(339 ㎎, 0.49 m㏖)의 냉각된 용액에 적가하고, 반응물을 이 조건 하에서 30분 동안 교반하였다. 빙냉 EtOAc(20 ㎖)를 첨가한 후, 포화 수성 NaHCO3(5 ㎖)을 부분으로 첨가하였다. 이상성 혼합물을 격렬히 교반하고, 고체 Na2CO3의 느린 첨가에 의해 중화시켰다. 상을 분리시키고, 유기 층을 포화 수성 NaHCO3(2 x 30 ㎖) 및 포화 수성 NaCl(30 ㎖)로 세척한 후, MgSO4 위에서 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 실리카 크로마토그래피(용리 구배 헥산 중 0% 내지 40% EtOAc)로 정제하여 담황색의 고체로서 (6S,8R)-6-(4-브로모-2,6-디플루오로페닐)-7-(3-((tert-부틸디페닐실릴)옥시)-2-플루오로-2-메틸프로필)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린(206 ㎎, 60%)을 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, CDCl3, 27℃) 0.98 (4.5H, s), 1.00 (1.5H, d), 1.02 (1.5H, d), 1.04 (4.5H, s), 1.15 (1.5H, d), 1.23 (1.5H, d), 2.30 - 2.47 (0.5H, m), 2.60 (0.5H, dd), 2.81 (0.5H, dd), 2.89 (0.5H, dd), 3.02 (0.5H, dd), 3.06 - 3.21 (1H, m), 3.22 - 3.33 (0.5H, m), 3.37 - 3.51 (1H, m), 3.51 - 3.60 (0.5H, m), 3.61 - 3.72 (0.5H, m), 3.73 - 3.83 (0.5H, m), 3.89 (0.5H, dd), 5.22 (0.5H, s), 5.27 (0.5H, s), 6.70 (1H, dd), 6.81 (1H, br d), 6.91 - 7.00 (1H, m), 7.14 (1H, t), 7.33 - 7.47 (6H, m), 7.55 - 7.67 (4H, m), 8.07 (1H, br d). 관찰되지 않는 인다졸 NH. m/z: ES+ [M+H]+ 706.
(6
S
,8
R
)-6-(4-브로모-2,6-디플루오로페닐)-7-(3-((
tert
-부틸디페닐실릴)옥시)-2-플루오로-2-메틸프로필)-8-메틸-3-(테트라하이드로-2
H
-피란-2-일)-6,7,8,9-테트라하이드로-3
H
-피라졸로[4,3-
f
]이소퀴놀린의 부분입체이성질체 혼합물의 제법
3,4-디하이드로-2H-피란(0.129 ㎖, 1.41 m㏖) 및 파라-톨루엔설폰산 1수화물(2.7 ㎎, 0.01 m㏖)을 DCM(2 ㎖) 중 (6S,8R)-6-(4-브로모-2,6-디플루오로페닐)-7-(3-((tert-부틸디페닐실릴)옥시)-2-플루오로-2-메틸프로필)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린(200 ㎎, 0.28 m㏖)의 교반된 용액에 첨가하였다. 반응물을 45℃에서 21시간 동안 가열하였다. 반응물을 냉각되게 하고, 이후 DCM으로 희석하고, 포화 수성 NaHCO3으로 세척하고, MgSO4 위에서 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 실리카 크로마토그래피(용리 구배 헥산 중 5% 내지 30% EtOAc)로 정제하여 무색의 필름으로서 (6S,8R)-6-(4-브로모-2,6-디플루오로페닐)-7-(3-((tert-부틸디페닐실릴)옥시)-2-플루오로-2-메틸프로필)-8-메틸-3-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린(176 ㎎, 79%)을 수득하였다. m/z: ES+ [M+H]+ 790.
tert
-부틸 3-((4-((6
S
,8
R
)-7-(3-((
tert
-부틸디페닐실릴)옥시)-2-플루오로-2-메틸프로필)-8-메틸-3-(테트라하이드로-2
H
-피란-2-일)-6,7,8,9-테트라하이드로-3
H
-피라졸로[4,3-
f
]이소퀴놀린-6-일)-3,5-디플루오로페닐)아미노)아제티딘-1-카복실레이트의 부분입체이성질체 혼합물의 제법
바이알을 교반 막대, (6S,8R)-6-(4-브로모-2,6-디플루오로페닐)-7-(3-((tert-부틸디페닐실릴)옥시)-2-플루오로-2-메틸프로필)-8-메틸-3-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린(126 ㎎, 0.16 m㏖), tert-부틸 3-아미노아제티딘-1-카복실레이트(41 ㎎, 0.24 m㏖), Pd2dba3(9.3 ㎎, 0.01 m㏖), 4,5-비스(디페닐포스피노)-9,9-디메틸크산텐(Xantphos)(16 ㎎, 0.02 m㏖) 및 탄산세슘(156 ㎎, 0.48 m㏖)으로 충전하였다. 바이알을 밀봉하고, 배기시키고, 질소(3x)로 역충전한 후, 1,4-디옥산(1 ㎖)을 주사기를 통해 첨가하였다. 혼합물을 상온에서 2분 동안 교반하고, 이후 90℃에서 16시간 동안 가열하였다. 혼합물을 냉각되게 하고, 이후 EtOAc로 희석하고, 규조토를 통해 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 실리카 크로마토그래피(용리 구배 헥산 중 0% 내지 40% EtOAc)로 정제하여 담황색의 고체로서 tert-부틸 3-((4-((6S,8R)-7-(3-((tert-부틸디페닐실릴)옥시)-2-플루오로-2-메틸프로필)-8-메틸-3-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)-3,5-디플루오로페닐)아미노)아제티딘-1-카복실레이트(95 ㎎, 68%)를 수득하였다. m/z: ES+ [M+H]+ 883.
N
-(4-((6
S
,8
R
)-7-(3-((
tert
-부틸디페닐실릴)옥시)-2-플루오로-2-메틸프로필)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3
H
-피라졸로[4,3-
f
]이소퀴놀린-6-일)-3,5-디플루오로페닐)아제티딘-3-아민의 부분입체이성질체 혼합물의 제법
포름산(0.5 ㎖, 13.04 m㏖)을 tert-부틸 3-((4-((6S,8R)-7-(3-((tert-부틸디페닐실릴)옥시)-2-플루오로-2-메틸프로필)-8-메틸-3-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)-3,5-디플루오로페닐)아미노)아제티딘-1-카복실레이트(53 ㎎, 0.06 m㏖)에 첨가하고, 생성된 용액을 상온에서 18시간 동안 교반하였다. 반응물을 감압 하에 농축시키고, 생성된 잔류물을 THF(0.5 ㎖) 중에 용해시키고, 수성 NaOH(5 N; 0.081 ㎖, 2.40 m㏖)로 처리하였다. 혼합물을 30℃에서 20시간 동안 교반하고, 이후 40℃에서 4시간 동안 유지시켰다. 추가 수성 NaOH(5 N; 0.081 ㎖, 2.40 m㏖)를 첨가하고, 반응물을 40℃에서 46시간 동안 교반한 후, 55℃에서 5시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 상온까지 냉각되게 하였다. 한편, 별개의 바이알에서, 디옥산 중 HCl(4 N; 0.38 ㎖, 1.5 m㏖)을 MeOH(0.5 ㎖) 중 tert-부틸 3-((4-((6S,8R)-7-(3-((tert-부틸디페닐실릴)옥시)-2-플루오로-2-메틸프로필)-8-메틸-3-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)-3,5-디플루오로페닐)아미노)아제티딘-1-카복실레이트(89 ㎎, 0.10 m㏖)의 교반된 용액에 첨가하였다. 반응물을 실온에서 5시간 동안 교반하고, 이후 감압 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 (수성 NaOH(5 N) 및 THF 중 혼합물로서) 이전의 반응물과 합했다. 새로운 혼합물을 DCM(5 ㎖)으로 희석하고, 상을 분리시키고, 수성 상을 DCM(2 x 5 ㎖)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 MgSO4 위에서 건조시키고, 여과시키고 감압 하에 농축시켜 담황색의 고체로서 N-(4-((6S,8R)-7-(3-((tert-부틸디페닐실릴)옥시)-2-플루오로-2-메틸프로필)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)-3,5-디플루오로페닐)아제티딘-3-아민(177 ㎎)을 수득하였고, 이것을 추가 정제 없이 다음 단계에서 사용하였다. m/z: ES+ [M+H]+ 698.
N
-(4-((6
S
,8
R
)-7-(3-((
tert
-부틸디페닐실릴)옥시)-2-플루오로-2-메틸프로필)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3
H
-피라졸로[4,3-
f
]이소퀴놀린-6-일)-3,5-디플루오로페닐)-1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-아민의 부분입체이성질체 혼합물의 제법
1-플루오로-3-요오도프로판(0.026 ㎖, 0.16 m㏖)을 NMP(0.75 ㎖) 중 N-(4-((6S,8R)-7-(3-((tert-부틸디페닐실릴)옥시)-2-플루오로-2-메틸프로필)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)-3,5-디플루오로페닐)아제티딘-3-아민(115 ㎎, 0.16 m㏖) 및 디이소프로필에틸아민(0.058 ㎖, 0.33 m㏖)의 교반된 용액에 첨가하였다. 반응물을 실온에서 16시간 동안 교반한 후, EtOAc로 희석하고, 포화 수성 NaHCO3으로 세척하였다. 층을 분리시키고, 수성 층을 EtOAc로 추출하였다. 합한 유기 층을 포화 수성 NaCl(2 x 5 ㎖)로 세척하고, MgSO4 위에서 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 실리카 크로마토그래피(용리 구배 DCM 중 1% 내지 20% MeOH)로 정제하여 담황색의 필름으로서 N-(4-((6S,8R)-7-(3-((tert-부틸디페닐실릴)옥시)-2-플루오로-2-메틸프로필)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)-3,5-디플루오로페닐)-1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-아민(82 ㎎, 66%)을 수득하였다. m/z: ES+ [M+H]+ 758.
실시예 25
6-((6
S
,8
R
)-7-(2,2-디플루오로에틸)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3
H
-피라졸로[4,3-
f
]이소퀴놀린-6-일)-
N
-(1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일)피리딘-3-아민의 제법
디옥산 중 HCl(4 N; 0.86 ㎖, 3.4 m㏖)을 MeOH(2.5 ㎖) 중 tert-부틸 3-((6-((6S,8R)-7-(2,2-디플루오로에틸)-8-메틸-3-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)피리딘-3-일)아미노)아제티딘-1-카복실레이트(0.20 g, 0.34 m㏖)의 용액에 적가하고, 반응물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응물을 감압 하에 농축시켜 고체로서 N-(아제티딘-3-일)-6-((6S,8R)-7-(2,2-디플루오로에틸)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)피리딘-3-아민 하이드로클로라이드(200 ㎎)를 수득하였다. m/z: (ES+), [M+H]+ 399.
DMF(0.5 ㎖) 및 1-플루오로-3-요오도프로판(0.036 ㎖, 0.34 m㏖)을 상온에서 순차적으로 첨가하였다. 이후, 과량의 디이소프로필에틸아민(1.2 ㎖, 6.80 m㏖)을 적가하였다. 반응물을 실온에서 18시간 동안 교반하고, 이후 감압 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 역상 플래시 C18 크로마토그래피(용리 구배 (0.2% NH4OH를 함유하는 물) 중 20% 내지 75% 아세토니트릴)로 정제하여 고체로서 6-((6S,8R)-7-(2,2-디플루오로에틸)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)-N-(1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일)피리딘-3-아민(45 ㎎, 29%)을 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6, 27℃) 1.04 (3H, d), 1.60 - 1.75 (2H, m), 2.51 - 2.70 (3H, m), 2.79 - 2.96 (3H, m), 3.03 (1H, dd), 3.13 (1H, br dd), 3.41 - 3.53 (1H, m), 3.74 (2H, br s), 3.98 (1H, br d), 4.45 (2H, dt), 4.86 (1H, s), 5.83 (1H, tt), 6.26 (1H, d), 6.74 (1H, d), 6.81 (1H, dd), 6.96 (1H, d), 7.18 (1H, d), 7.76 (1H, d), 8.04 (1H, s), 12.95 (1H, s). m/z: (ES+), [M+H]+ 459.
출발 재료 tert-부틸 3-((6-((6S,8R)-7-(2,2-디플루오로에틸)-8-메틸-3-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)피리딘-3-일)아미노)아제티딘-1-카복실레이트를 제조하기 위해 이용된 절차는 하기에 기재되어 있다.
(1
S
,3
R
)-1-(5-브로모피리딘-2-일)-2-(2,2-디플루오로에틸)-3,5-디메틸-1,2,3,4-테트라하이드로이소퀴놀린-6-아민의 제법
5-브로모피콜린알데하이드(2.74 g, 14.7 m㏖)를 아세트산(34.4 ㎖) 및 물(0.631 ㎖, 35.0 m㏖) 중 (R)-3-(2-((2,2-디플루오로에틸)아미노)프로필)-2-메틸아닐린(1.6 g, 7.0 m㏖)의 용액에 첨가하였다. 반응물을 80℃에서 3시간 동안 가열하고, 이후 감압 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 MeOH(40 ㎖) 중에 용해시키고, 아세트산나트륨(1.15 g, 14.0 m㏖) 및 하이드록실아민 하이드로클로라이드(0.730 g, 10.5 m㏖)를 첨가하였다. 반응물을 실온에서 3시간 동안 교반하고, 이후 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 물 중에 용해시키고, 포화 수성 NaHCO3으로 중화시키고, 이후 EtOAc로 추출하였다. 합한 유기 층을 감압 하에 농축시키고, 생성된 잔류물을 플래시 실리카 크로마토그래피(용리 구배 헥산 중 0% 내지 90% EtOAc)로 정제하였다. 생성물 분획을 감압 하에 농축시키고, 생성된 잔류물을 추가로 플래시 실리카 크로마토그래피(용리 구배 헥산 중 0% 내지 90% EtOAc)로 정제하여 검으로서 (1S,3R)-1-(5-브로모피리딘-2-일)-2-(2,2-디플루오로에틸)-3,5-디메틸-1,2,3,4-테트라하이드로이소퀴놀린-6-아민(1.40 g, 49%)을 수득하였다. 1H NMR (300 MHz, DMSO-d 6, 27℃) 0.99 (3H, d), 1.93 (3H, s), 2.38 - 2.47 (1H, m), 2.51 - 2.62 (1H, m), 2.72 (1H, dd), 2.92 - 3.14 (1H, m), 3.23 - 3.29 (1H, m), 4.65 (2H, s), 4.79 (1H, s), 5.98 (1H, tt), 6.39 (2H, s), 7.22 (1H, d), 7.91 (1H, dd), 8.55 (1H, d). m/z: ES+ [M+H]+ 396.
(6
S
,8
R
)-6-(5-브로모피리딘-2-일)-7-(2,2-디플루오로에틸)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3
H
-피라졸로[4,3-
f
]이소퀴놀린의 제법
아세트산(541 ㎎, 9.01 m㏖)을 CHCl3(8 ㎖) 중 (1S,3R)-1-(5-브로모피리딘-2-일)-2-(2,2-디플루오로에틸)-3,5-디메틸-1,2,3,4-테트라하이드로이소퀴놀린-6-아민(714 ㎎, 1.80 m㏖)의 교반된 용액에 첨가하였다. 반응물을 0℃까지 냉각시키고, CHCl3(1 ㎖) 중 이소펜틸 니트라이트(422 ㎎, 3.60 m㏖)의 용액을 적가하였다. 반응물을 0℃에서 2시간 동안 교반하고, 이후 물(20 ㎖) 중 NaHCO3(1.5 g, 18 m㏖)의 용액의 느린 첨가에 의해 켄칭시켰다. 상을 분리시키고, 유기 층을 감압 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 실리카 크로마토그래피(용리 구배 헥산 중의 5% 내지 35% EtOAc)로 정제하여 담갈색의 고체로서 (6S,8R)-6-(5-브로모피리딘-2-일)-7-(2,2-디플루오로에틸)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린(438 ㎎, 60%)을 수득하였다. 1H NMR (300 MHz, CDCl3, 27℃) 1.13 (3H, d), 2.68 - 2.85 (1H, m), 2.91 (1H, dd), 2.98 - 3.17 (1H, m), 3.34 (1H, dd), 3.47 - 3.63 (1H, m), 5.05 (1H, s), 5.63 (1H, tt), 6.87 (1H, d), 7.19 (1H, d), 7.28 (1H, d), 7.71 (1H, dd), 8.04 (1H, d), 8.57 (1H, dd). 관찰되지 않는 인다졸 NH. m/z: ES+ [M+H]+ 405.
(6
S
,8
R
)-6-(5-브로모피리딘-2-일)-7-(2,2-디플루오로에틸)-8-메틸-3-(테트라하이드로-2
H
-피란-2-일)-6,7,8,9-테트라하이드로-3
H
-피라졸로[4,3-
f
]이소퀴놀린의 제법
3,4-디하이드로-2H-피란(0.294 ㎖, 3.23 m㏖)을 DCM(4 ㎖) 중 (6S,8R)-6-(5-브로모피리딘-2-일)-7-(2,2-디플루오로에틸)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린(438 ㎎, 1.08 m㏖) 및 파라-톨루엔설폰산 1수화물(21 ㎎, 0.11 m㏖)의 용액에 첨가하였다. 반응물을 마이크로파 조건(300 W) 하에서 100℃에서 6시간 동안 가열하였다. 이후, 반응물을 냉각되게 하고, 이후 포화 수성 NaHCO3으로 세척하고, Na2SO4 위에서 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 실리카 크로마토그래피(용리 구배 헥산 중 10% 내지 30% EtOAc)로 정제하여 담갈색의 검의 고체로서 (6S,8R)-6-(5-브로모피리딘-2-일)-7-(2,2-디플루오로에틸)-8-메틸-3-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린(441 ㎎, 83%)을 수득하였다. m/z: ES+ [M+H]+ 491.
tert
-부틸 3-((6-((6
S
,8
R
)-7-(2,2-디플루오로에틸)-8-메틸-3-(테트라하이드로-2
H
-피란-2-일)-6,7,8,9-테트라하이드로-3
H
-피라졸로[4,3-
f
]이소퀴놀린-6-일)피리딘-3-일)아미노)아제티딘-1-카복실레이트의 제법
바이알을 교반 막대, (6S,8R)-6-(5-브로모피리딘-2-일)-7-(2,2-디플루오로에틸)-8-메틸-3-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린(0.22 g, 0.44 m㏖), tert-부틸 3-아미노아제티딘-1-카복실레이트(0.151 g, 0.88 m㏖), 탄산세슘(0.29 g, 0.88 m㏖) 및 BrettPhos 제3세대 전촉매(0.040 g, 0.040 m㏖)에 의해 충전하였다. 바이알을 밀봉하고, 배기시키고, 질소로 충전하였다. 1,4-디옥산(4 ㎖)을 첨가하고, 바이알을 다시 배기시키고, 질소로 역충전하였다. 반응물을 110℃에서 13시간 동안 교반하고, 이후 감압 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 실리카 크로마토그래피(용리 구배 헥산 중 10% 내지 30% EtOAc)로 정제하여 베이지색의 고체로서 tert-부틸 3-((6-((6S,8R)-7-(2,2-디플루오로에틸)-8-메틸-3-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)피리딘-3-일)아미노)아제티딘-1-카복실레이트(0.20 g, 78%)를 수득하였다. 1H NMR (300 MHz, CD3OD, 27℃) 1.10 (3H, dd), 1.43 (9H, s), 1.56 - 1.72 (2H, m), 1.72 - 1.87 (1H, m), 1.92 - 1.99 (1H, m), 2.03 - 2.17 (1H, m), 2.38 - 2.53 (1H, m), 2.62 - 2.82 (1H, m), 2.88 - 3.14 (2H, m), 3.33 - 3.44 (1H, m), 3.49 - 3.60 (1H, m), 3.67 - 3.83 (3H, m), 3.92 - 4.02 (1H, m), 4.17 - 4.33 (3H, m), 4.91 (1H, s), 5.34 - 5.57 (1H, m), 5.69 - 5.77 (1H, m), 6.79 (1H, d), 6.89 (1H, dd), 7.05 (1H, dd), 7.34 (1H, d), 7.78 - 7.81 (1H, m), 8.07 (1H, s), 관찰되지 않는 아닐린 NH. m/z: ES+ [M+H]+ 583.
실시예 26
(6
S
,8
R
)-7-(2,2-디플루오로에틸)-6-(5-((1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일)옥시)피리딘-2-일)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3
H
-피라졸로[4,3-
f
]이소퀴놀린의 제법
디옥산 중 HCl(4 N; 0.97 ㎖, 3.9 m㏖)을 MeOH(3 ㎖) 중 tert-부틸 3-((6-((6S,8R)-7-(2,2-디플루오로에틸)-8-메틸-3-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)피리딘-3-일)옥시)아제티딘-1-카복실레이트(0.227 g, 0.39 m㏖)의 용액에 적가하고, 반응물을 실온에서 18시간 동안 교반하였다. 반응물을 감압 하에 농축시켜 고체로서 (6S,8R)-6-(5-(아제티딘-3-일옥시)피리딘-2-일)-7-(2,2-디플루오로에틸)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린 하이드로클로라이드(0.235 g; 결정되지 않는 HCl의 당량의 수)를 수득하였고, 이것을 추가 정제 없이 사용하였다. m/z: (ES+), [M+H]+ 400.
1-플루오로-3-요오도프로판(0.041 ㎖, 0.34 m㏖)을 상온에서 DMF(0.6 ㎖) 중 (6S,8R)-6-(5-(아제티딘-3-일옥시)피리딘-2-일)-7-(2,2-디플루오로에틸)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린 하이드로클로라이드(235 ㎎)의 교반된 용액에 첨가하였다. 과량의 디이소프로필에틸아민(1.36 ㎖, 7.80 m㏖)을 적가하였다. 반응물을 실온에서 18시간 동안 교반하고, 이후 감압 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 역상 플래시 C18 크로마토그래피(용리 구배 (0.2% NH4OH를 함유하는 물) 중 20% 내지 75% 아세토니트릴)로 정제하였다. 생성물 분획을 합하고 동결건조시켜 고체로서 (6S,8R)-7-(2,2-디플루오로에틸)-6-(5-((1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일)옥시)피리딘-2-일)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린(53 ㎎, 30%)을 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6, 27℃) 1.05 (3H, d), 1.60 - 1.77 (2H, m), 2.54 - 2.70 (3H, m), 2.85 (1H, dd), 2.97 - 3.22 (4H, m), 3.39 - 3.50 (1H, m), 3.87 (2H, br s), 4.45 (2H, dt), 4.80 - 4.92 (1H, m), 5.00 (1H, s), 5.93 (1H, tt), 6.78 (1H, d), 7.19 - 7.26 (3H, m), 8.05 (1H, s), 8.06 (1H, d), 12.97 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 460.
출발 재료 tert-부틸 3-((6-((6S,8R)-7-(2,2-디플루오로에틸)-8-메틸-3-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)피리딘-3-일)옥시)아제티딘-1-카복실레이트를 제조하기 위해 이용된 절차는 하기에 기재되어 있다.
tert
-부틸 3-((6-((6
S
,8
R
)-7-(2,2-디플루오로에틸)-8-메틸-3-(테트라하이드로-2
H
-피란-2-일)-6,7,8,9-테트라하이드로-3
H
-피라졸로[4,3-
f
]이소퀴놀린-6-일)피리딘-3-일)옥시)아제티딘-1-카복실레이트의 제법
tert-부틸 3-하이드록시아제티딘-1-카복실레이트(227 ㎎, 1.31 m㏖), (6S,8R)-6-(5-브로모피리딘-2-일)-7-(2,2-디플루오로에틸)-8-메틸-3-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린(215 ㎎, 0.44 m㏖), RockPhos 제3세대 전촉매(37.1 ㎎, 0.04 m㏖) 및 탄산세슘(285 ㎎, 0.88 m㏖)을 밀봉된 마이크로파 바이알에서 톨루엔(4 ㎖) 중에 현탁시켰다. 반응물을 마이크로파 조건(300 W) 하에서 110℃에서 1시간 동안 가열하였다. 반응물을 감압 하에 농축시키고, 생성된 잔류물을 플래시 실리카 크로마토그래피(용리 구배 헥산 중 20% 내지 60% EtOAc)로 정제하여 고체로서 tert-부틸 3-((6-((6S,8R)-7-(2,2-디플루오로에틸)-8-메틸-3-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)피리딘-3-일)옥시)아제티딘-1-카복실레이트(227 ㎎, 89%)를 수득하였다. 1H NMR (300 MHz, CD3OD, 27℃) 1.11 (3H, dd), 1.41 - 1.43 (9H, m), 1.61 - 1.66 (1H, m), 1.66 - 1.86 (2H, m), 2.04 - 2.17 (1H, m), 2.36 - 2.54 (1H, m), 2.59 - 2.79 (1H, m), 2.89 - 3.02 (1H, m), 3.03 - 3.17 (1H, m), 3.31 - 3.43 (1H, m), 3.48 - 3.60 (1H, m), 3.70 (2H, dd), 3.88 - 3.95 (2H, m), 4.09 - 4.13 (1H, m), 4.27 - 4.39 (2H, m), 4.99 - 5.08 (2H, m), 5.64 (1H, tt), 5.73 (1H, dt), 6.81 (1H, dd), 7.20 (1H, dd), 7.27 (1H, dd), 7.36 (1H, d), 8.04 - 8.10 (2H, m). m/z: ES+ [M+H]+ 584.
실시예 27
1-(3-플루오로프로필)-
N
-(4-((6
R
,8
R
)-8-메틸-7-(2,2,2-트리플루오로에틸)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)페닐)아제티딘-3-아민
나트륨 tert-부톡사이드(2.118 g, 22.06 m㏖) 및 BrettPhos G3(0.166 g, 0.18 m㏖)을 1,4-디옥산(18.4 ㎖) 중 1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-아민(0.632 g, 4.78 m㏖) 및 (6R,8R)-6-(4-브로모페닐)-8-메틸-7-(2,2,2-트리플루오로에틸)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린(1.56 g, 3.68 m㏖)의 탈기된 용액에 첨가하고, 반응물을 90℃까지 가온시키고, 밤새 교반하였다. 냉각 후, 반응물을 EtOAc(20 ㎖) 및 물(20 ㎖)로 희석하고, 층을 분리시켰다. 수성물을 EtOAc(20 ㎖)로 추출하고, 이후 합한 유기물을 건조시키고 증발시켰다. 정제는 물의 점감적으로 극성인 혼합물(용리제로서 0.1% NH3 및 MeCN 함유)을 사용하여 HPLC(Waters CSH C18 OBD 칼럼, 5 μ 실리카, 30 ㎜ 직경, 100 ㎜ 길이)에 의해 검을 수득시켰다. 이것을 메탄올(5 ㎖) 중에 채우고, 이후 물(95 ㎖)을 첨가하고, 혼합물을 실온에서 밤새 슬러리화하였다. 생성된 고체를 여과에 의해 수집하고, 물 중 5% 메탄올로 세척하고, 진공 오븐에서 50℃에서 밤새 건조시켜 무색의 고체로서 1-(3-플루오로프로필)-N-(4-((6R,8R)-8-메틸-7-(2,2,2-트리플루오로에틸)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)페닐)아제티딘-3-아민(0.935 g, 54%)을 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, CDCl3, 27℃) 1.13 (3H, d), 1.68 - 1.83 (2H, m), 2.59 (2H, t), 2.77 (1H, dd), 2.86 (2H, t), 2.89 - 2.99 (1H, m), 3.04 (1H, dd), 3.15 - 3.26 (1H, m), 3.37 - 3.48 (1H, m), 3.71 - 3.76 (2H, m), 3.93 (1H, d), 4.10 (1H, q), 4.43 (1H, t), 4.53 (1H, t), 4.99 (1H, s), 6.41 - 6.46 (2H, m), 6.97 (1H, d), 7.00 (2H, d), 7.26 (1H, s), 8.06 (1H, d), 10.10 (1H, s); m/z: ES+ [M+H]+ 476.
출발 재료로서 사용된 (6R,8R)-6-(4-브로모페닐)-8-메틸-7-(2,2,2-트리플루오로에틸)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린을 하기와 같이 합성하였다:
(6
R
,8
R
)-6-(4-브로모페닐)-8-메틸-7-(2,2,2-트리플루오로에틸)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린
트리플루오로아세트산(1.85 ㎖)을 톨루엔(37 ㎖) 중 (R)-1-(1H-인다졸-4-일)-N-(2,2,2-트리플루오로에틸)프로판-2-아민(2.0 g, 7.77 m㏖) 및 4-브로모벤즈알데하이드(7.19 g, 38.9 m㏖)의 용액에 첨가하고, 생성된 혼합물을 90℃에서 30시간 동안 교반하였다. 반응물을 냉각되게 하고, DCM(100 ㎖)과 포화 수성 중탄산나트륨(50 ㎖) 사이에 분배하였다. 층을 분리시키고, 유기 층을 진공에서 농축시켰다. 정제는 헵탄 중 0% 내지 50% 에틸 아세테이트에 의해 용리되는 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 폼으로서, 그리고 이성질체의 6:1 비율로서 (6R,8R)-6-(4-브로모페닐)-8-메틸-7-(2,2,2-트리플루오로에틸)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린(1.560 g, 47%)을 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, CDCl3, 27℃) 1.14 (3H, d), 2.80 (1H, dd), 2.94 (1H, dd), 3.05 (1H, dd), 3.25 (1H, dd), 3.33 (1H, ddd), 5.04 (1H, s), 6.95 (1H, d), 7.08 - 7.12 (2H, m), 7.28 - 7.33 (1H, m), 7.37 - 7.40 (2H, m), 8.08 (1H, d), 10.12 (1H, s); m/z: ES- [M-H]- 422.
실시예 28
1-(3-플루오로프로필)-
N
-(3-메톡시-4-((6
S
,8
R
)-8-메틸-7-(2,2,2-트리플루오로에틸)-6,7,8,9-테트라하이드로-3
H
-피라졸로[4,3-
f
]이소퀴놀린-6-일)페닐)아제티딘-3-아민의 제법
BrettPhos 제3세대 전촉매(10 ㎎, 0.01 m㏖) 및 나트륨 tert-부톡사이드(0.127 g, 1.32 m㏖)를 1,4-디옥산(1.10 ㎖) 중 1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-아민(0.033 g, 0.25 m㏖) 및 (6S,8R)-6-(4-브로모-2-메톡시페닐)-8-메틸-7-(2,2,2-트리플루오로에틸)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린(0.10 g, 0.22 m㏖)의 탈기된 용액에 일 부분으로 첨가하였다. 이후, 오렌지색의 혼합물을 50℃까지 예열된 오일 배쓰 중에 액침시켰다. 5분 후, 반응물을 실온까지 냉각시켰다. 별개의 플라스크에서, 나트륨 tert-부톡사이드(1.81 g, 18.8 m㏖) 및 BrettPhos 제3세대 전촉매(0.17 g, 0.19 m㏖)를 1,4-디옥산(18.8 ㎖) 중 (6S,8R)-6-(4-브로모-2-메톡시페닐)-8-메틸-7-(2,2,2-트리플루오로에틸)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린(1.71 g, 3.76 m㏖) 및 1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-아민(0.597 g, 4.52 m㏖)의 탈기된 용액에 일 부분으로 첨가하였다. 밝은 오렌지색의 혼합물을 50℃까지 예열된 오일 배쓰 중에 액침시켰다. 5분 후, 반응물을 실온까지 냉각시켰다. 냉각되면, 반응물 둘 모두를 합하고, 에틸 아세테이트로 희석하고, 물(x2) 및 포화 수성 염화나트륨으로 순차적으로 세척하였다. 유기 층을 황산나트륨 위에서 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 생성된 오렌지색의 오일을 플래시 실리카 크로마토그래피(용리 구배 DCM 중 0% 내지 10% 메탄올)로 정제하여 고체 및 UV HPLC 프로필에 기초하여 약 84:16의 트랜스:시스 혼합물로서 1-(3-플루오로프로필)-N-(3-메톡시-4-((6S,8R)-8-메틸-7-(2,2,2-트리플루오로에틸)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)페닐)아제티딘-3-아민(1.84 g, 92%)을 수득하였다. 이 재료를 CO2 중 20%(0.2% NH4OH를 함유하는 메탄올)에 의해 용리되는 분취용 SFC(칼럼: Chiralpak AD, 21.2 x 250 ㎜, 5 ㎛; 75 ㎖/분)를 사용하여 분할하여 밝은 오렌지색의 고체 및 제2 용리 피크로서 1-(3-플루오로프로필)-N-(3-메톡시-4-((6S,8R)-8-메틸-7-(2,2,2-트리플루오로에틸)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)페닐)아제티딘-3-아민(1.01 g)을 수득하였다. 이 재료를 추가로 플래시 실리카 크로마토그래피(용리 구배 에틸 아세테이트 중 0% 내지 30% 메탄올)로 정제하여 백색의 고체로서 1-(3-플루오로프로필)-N-(3-메톡시-4-((6S,8R)-8-메틸-7-(2,2,2-트리플루오로에틸)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)페닐)아제티딘-3-아민(0.954 g)을 수득하였다. 이 재료를 (0.2% NH4OH를 함유하는 물) 중 40% 내지 70% 아세토니트릴에 의해 용리되는 분취용 HPLC(칼럼: Xbridge C18, 30 x 100 ㎜, 5 ㎛, 40 ㎖/분)로 마지막 시간에 정제하였다. 생성물 분획을 합하고, 에틸 아세테이트(x3)로 세척하고, 합한 유기 층을 포화 수성 염화나트륨으로 세척하고, 황산나트륨 위에서 건조시키고, 여과시키고 감압 하에 농축시켜 회백색의 폼 고체로서 1-(3-플루오로프로필)-N-(3-메톡시-4-((6S,8R)-8-메틸-7-(2,2,2-트리플루오로에틸)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)페닐)아제티딘-3-아민(551 ㎎, 27%)을 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6, 27℃) 1.04 (3H, d), 1.63 (2H, dtt), 2.44 (2H, t), 2.70 (2H, dd), 2.81 (1H, dd), 2.84 - 2.94 (1H, m), 3.09 (1H, dd), 3.34 (1H, br s), 3.44 (1H, dqd), 3.61 (2H, dd), 3.77 (3H, s), 3.90 (1H, m), 4.43 (2H, dt), 5.28 (1H, s), 5.87 (1H, dd), 6.02 (1H, d), 6.16 (1H, d), 6.32 (1H, d), 6.65 (1H, d), 7.18 (1H, d), 8.02 (1H, s), 12.95 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 506.
출발 재료 (6S,8R)-6-(4-브로모-2-메톡시페닐)-8-메틸-7-(2,2,2-트리플루오로에틸)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린을 제조하도록 이용된 절차는 하기에 기재되어 있다.
(
R
)-
N
-(1-(3-아미노-2-메틸페닐)프로판-2-일)-2,2,2-트리플루오로아세트아미드의 제법
에틸 2,2,2-트리플루오로아세테이트(3.75 ㎖, 31.5 m㏖)를 MeOH(70.1 ㎖) 중 (R)-3-(2-아미노프로필)-2-메틸아닐린(5.17 g, 31.5 m㏖) 및 트리에틸아민(4.83 ㎖, 34.6 m㏖)의 짙은 호박색을 띠는 적색의 용액에 첨가하였다. 15분 후, 반응물을 농축시켜 어두운 호박색의 오일이 되게 하였다. 오일을 에틸 아세테이트 중에 용해시키고, 물로 세척하고, 수성 층을 에틸 아세테이트(x2)로 추출하였다. 합한 유기 층을 황산나트륨 위에서 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 생성된 오일을 플래시 실리카 크로마토그래피(용리 구배 헥산 중 0% 내지 40% 에틸 아세테이트)로 정제하여 황색을 띠는 오렌지색의 오일로서 (R)-N-(1-(3-아미노-2-메틸페닐)프로판-2-일)-2,2,2-트리플루오로아세트아미드(6.47 g, 79%)를 수득하였고, 이것은 정치 시 밝은 오렌지색의 고체로 결정화되었다. 1H NMR (300MHz, DMSO-d 6, 27℃) 1.11 (3H, d), 2.01 (3H, s), 2.63 (1H, dd), 2.78 (1H, dd), 3.93 - 4.05 (1H, m), 4.71 (2H, s), 6.36 (1H, dd), 6.49 (1H, dd), 6.78 (1H, t), 9.25 (1H, br d). m/z: ES+ [M+H]+ 261.
(
R
)-2-메틸-3-(2-((2,2,2-트리플루오로에틸)아미노)프로필)아닐린의 제법
THF 중 보란 테트라하이드로푸란 복합체(1 M; 149 ㎖, 149 m㏖)를 0℃에서 테트라하이드로푸란(81 ㎖) 중 (R)-N-(1-(3-아미노-2-메틸페닐)프로판-2-일)-2,2,2-트리플루오로아세트아미드(6.47 g, 24.9 m㏖)의 용액에 주사기(6 x 25 ㎖)를 통해 첨가하였다. 얼음 배쓰를 제거하고, 가온 시, 가스 전개가 관찰되었다. 추가의 가스 전개가 가시적이지 않으면(약 20분), 반응물을 65℃까지 가온시켰다. 4시간 후, 반응물을 냉각시키고, 실온에서 18시간 동안 유지시켰다. 이후, 반응물을 0℃까지 냉각시키고, 메탄올(22 ㎖)을 적가하여 켄칭시켰다. 반응물을 실온까지 가온시키고, 가스 전개가 중단된 후, 반응물을 65℃까지 가온시켰다. 14시간 후, 이후 반응물을 실온까지 냉각시키고, 이 조건 하에서 3.5일 동안 교반한 후, 감압 하에 농축시켰다. 생성된 오일을 플래시 실리카 크로마토그래피(용리 구배 헥산 중 0% 내지 70% 에틸 아세테이트)로 정제하여 밝은 황색의 오일로서 (R)-2-메틸-3-(2-((2,2,2-트리플루오로에틸)아미노)프로필)아닐린(5.62 g, 92%)을 수득하였다. 1H NMR (300 MHz, DMSO-d 6, 27℃) 0.90 (3H, d), 1.98 (3H, s), 2.09 - 2.20 (1H, m), 2.25 - 2.40 (1H, m), 2.72 - 2.84 (2H, m), 3.17 - 3.29 (2H, m), 4.69 (2H, s), 6.36 (1H, dd), 6.49 (1H, dd), 6.78 (1H, t). m/z: ES+ [M+H]+ 247
(1
S
,3
R
)-1-(4-브로모-2-메톡시페닐)-3,5-디메틸-2-(2,2,2-트리플루오로에틸)-1,2,3,4-테트라하이드로이소퀴놀린-6-아민의 제법
4-브로모-2-메톡시벤즈알데하이드(1.83 g, 8.53 m㏖) 및 (R)-2-메틸-3-(2-((2,2,2-트리플루오로에틸)아미노)프로필)아닐린(2.00 g, 8.12 m㏖)을 물(0.7 ㎖, 41 m㏖) 및 아세트산(40 ㎖)의 용액에 첨가하였다. 생성된 밝은 황색의 용액을 65℃까지 예열된 오일 배쓰 중에 액침시키고, 이 조건 하에서 18시간 동안 유지시켰다. 이후, 생성된 어두운 호박색의 용액을 감압(수조: 55℃) 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 에틸 아세테이트로 희석하고, 수성 층이 pH 스트립을 사용하여 pH = 8인 것으로 확인될 때까지 포화 수성 탄산수소나트륨으로 세척하였다. 유기 층을 황산나트륨 위에서 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 메탄올(20 ㎖) 및 하이드록실아민 하이드로클로라이드(0.152 g, 2.19 m㏖) 중에 용해시키고, 과량의 탄산칼륨을 첨가하였다. 5분 후, 혼합물을 에틸 아세테이트로 희석하고, 여과시키고, 여과액을 감압 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 실리카 크로마토그래피(용리 구배 헥산 중 0% 내지 50% 에틸 아세테이트)로 정제하여 NMR 적분에 기초하여 83:17의 트랜스:시스 비율로 어두운 호박색의 오일로서 (1S,3R)-1-(4-브로모-2-메톡시페닐)-3,5-디메틸-2-(2,2,2-트리플루오로에틸)-1,2,3,4-테트라하이드로이소퀴놀린-6-아민을 수득하였다. 오일을 DCM으로부터 재농축시키고, 진공 하에 건조시켜 밝은 호박색의 폼 고체(2.55 g, 71%)가 되었다. 이 재료의 적은 양(150 ㎎)을 CO2 중 15%(0.2% NH4OH를 함유하는 메탄올)에 의해 용리되는 분취용 SFC(칼럼: (S,S) Whelk-O1, 21.2 x 250 ㎜, 5 ㎛; 75 ㎖/분)을 사용하여 분할하여 희미한 황색의 폼 고체로서 더 느리게 용리하는 (1S,3R)-1-(4-브로모-2-메톡시페닐)-3,5-디메틸-2-(2,2,2-트리플루오로에틸)-1,2,3,4-테트라하이드로이소퀴놀린-6-아민(101 ㎎) 및 더 빠르게 용리하는 (1R,3R)-1-(4-브로모-2-메톡시페닐)-3,5-디메틸-2-(2,2,2-트리플루오로에틸)-1,2,3,4-테트라하이드로이소퀴놀린-6-아민(18 ㎎)을 수득하였다.
(1S,3R): 1H NMR (300 MHz, DMSO-d 6, 27℃) 1.00 (3H, d), 1.95 (3H, s), 2.43 (1H, dd), 2.64 - 2.85 (2H, m), 3.19 - 3.43 (2H, m), 3.86 (3H, s), 4.67 (2H, s), 5.18 (1H, s), 6.29 (1H, d), 6.41 (1H, d), 6.60 (1H, d), 6.96 (1H, dd), 7.18 (1H, d). m/z: ES+ [M+H]+ 443.
(1R,3R): 1H NMR (300 MHz, DMSO-d 6, 27℃) 1.19 (3H, d), 1.94 (3H, s), 2.53 - 2.60 (1H, m), 2.78 (1H, br dd), 2.98 - 3.12 (1H, br m), 3.16 - 3.36 (2H, m), 3.84 (3H, s), 4.61 (2H, s), 5.31 (1H, s), 6.20 (1H, d), 6.33 (1H, d), 7.03 - 7.13 (2H, m), 7.19 (1H, d). m/z: ES+ [M+H]+ 443.
(6
S
,8
R
)-6-(4-브로모-2-메톡시페닐)-8-메틸-7-(2,2,2-트리플루오로에틸)-6,7,8,9-테트라하이드로-3
H
-피라졸로[4,3-
f
]이소퀴놀린의 제법
물(3.83 ㎖) 중 아질산나트륨(0.413 g, 5.98 m㏖)의 용액을 얼음, 고체 염화나트륨 및 포화 수성 염화나트륨으로 이루어진 냉각 배쓰를사용하여 -15℃에서 유지된 프로피온산(19.2 ㎖) 중 (1S,3R)-1-(4-브로모-2-메톡시페닐)-3,5-디메틸-2-(2,2,2-트리플루오로에틸)-1,2,3,4-테트라하이드로이소퀴놀린-6-아민(2.55 g, 5.75 m㏖; 83:17 트랜스:시스)의 교반된 용액에 5분에 걸쳐 적가하였다. 20분 후, 반응물을 -70℃까지 예냉된 톨루엔(100 ㎖)으로 희석하였다. 생성된 밝은 황색의 혼합물을 격렬히 교반하고, 5분 후, 냉각 배쓰를 제거하였다. 실온에 도달 시, 적색의 반응 혼합물을 이 조건 하에서 1.5시간 동안 유지시키고, 이후 물(x2)로 세척하였다. 합한 수성 층을 에틸 아세테이트로 추출하였다. 합한 유기 층을 황산나트륨 위에서 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 농축시켜 대략 20%의 출발 용적이 되게 하였다. 이 혼합물을 EtOAc(20 ㎖)로 희석하고, 포화 수성 중탄산나트륨으로 세척하였다. 이후, 가스 방출이 중단되고 혼합물이 pH 스트립을 사용하여 염기성으로 시험될 때까지 고체 탄산칼륨을 첨가하였다. 층을 분리시키고, 유기 층을 황산나트륨 위에서 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 생성된 오일을 플래시 실리카 크로마토그래피(용리 구배 헥산 중 0% 내지 70% 에틸 아세테이트)로 정제하여 밝은 오렌지색의 폼 고체 및 NMR 적분에 기초하여 약 9:1의 트랜스:시스 혼합물로서 (6S,8R)-6-(4-브로모-2-메톡시페닐)-8-메틸-7-(2,2,2-트리플루오로에틸)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린(1.96 g, 75%)을 수득하였다. 1H NMR (300 MHz, DMSO-d 6, 27℃) 1.06 (3H, d), 2.80 - 2.98 (2H, m), 3.15 (1H, br dd), 3.33 - 3.53 (2H, m), 3.90 (3H, s), 5.40 (1H, s), 6.63 (1H, d), 6.67 (1H, d), 6.96 (1H, dd), 7.20 - 7.27 (2H, m), 8.08 (1H, s), 13.00 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 454.
실시예 29
2-플루오로-
N
-(1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일)-6-((6
S
,8
R
)-8-메틸-7-(2,2,2-트리플루오로에틸)-6,7,8,9-테트라하이드로-3
H
-피라졸로[4,3-
f
]이소퀴놀린-6-일)피리딘-3-아민의 제법
나트륨 tert-부톡사이드(1.08 g, 11.3 m㏖) 및 BrettPhos 제3세대 전촉매(0.16 g, 0.18 m㏖)를 실온에서 1,4-디옥산(22.6 ㎖) 중 (6S,8R)-6-(5-브로모-6-플루오로피리딘-2-일)-8-메틸-7-(2,2,2-트리플루오로에틸)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린(2.00 g, 4.51 m㏖) 및 1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-아민 (0.90 g, 5.41 m㏖)의 탈기된 용액에 첨가하였다. 적색을 띠는 오렌지색의 혼합물을 44℃까지 예열된 오일 배쓰 중에 액침시켰다. 22분 후, 오렌지색의 혼합물을 열로부터 제거하고, 에틸 아세테이트 및 포화 수성 염화나트륨에 붓고, 층을 분리시켰다. 수성 층을 에틸 아세테이트로 추출하고, 합한 유기 층을 포화 수성 염화나트륨으로 세척하고, 황산나트륨 위에서 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 실리카 크로마토그래피(용리 구배 에틸 아세테이트 중 0% 내지 30% 메탄올)로 정제하여 밝은 황색의 폼 고체 및 NMR 적분에 기초하여 대략 84:16의 트랜스:시스 혼합물로서 2-플루오로-N-(1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일)-6-((6S,8R)-8-메틸-7-(2,2,2-트리플루오로에틸)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)피리딘-3-아민(1.58 g)을 수득하였다. 이 재료를 CO2 중 35%(0.2% NH4OH를 함유하는 메탄올)에 의해 용리되는 분취용 SFC(칼럼: Lux Cellulose-4, 21.2 x 250 ㎜, 5 ㎛; 70 ㎖/분)에 의해 분할하여 밝은 오렌지색의 폼 고체를 수득하였다. 이 고체를 플래시 실리카 크로마토그래피(용리 구배 에틸 아세테이트 중 0% 내지 30% 메탄올)로 재정제하였다. 생성물 분획을 감압 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 아세토니트릴 중에 채우고, 여과시키고 감압 하에 농축시켜 밝은 황색의 폼 고체로서 2-플루오로-N-(1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일)-6-((6S,8R)-8-메틸-7-(2,2,2-트리플루오로에틸)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)피리딘-3-아민(1.03 g, 46%)을 수득하였다. 1H NMR (600 MHz, DMSO-d 6, 27℃) 1.10 (3H, d), 1.64 (2H, dtt), 2.48 (2H, t), 2.83 (1H, dd), 2.86 (2H, br d), 2.97 (1H, br dq), 3.02 (1H, dd), 3.45 (1H, dqd), 3.54 (1H, dq), 3.63 (2H, br s), 3.96 (1H, dquin), 4.44 (2H, dt), 4.91 (1H, s), 6.13 (1H, br d), 6.87 (1H, d), 6.92 - 7.01 (2H, m), 7.25 (1H, d), 8.06 (1H, s), 13.00 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 495.
출발 재료 (6S,8R)-6-(5-브로모-6-플루오로피리딘-2-일)-8-메틸-7-(2,2,2-트리플루오로에틸)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린을 제조하기 위해 이용된 절차는 하기에 기재되어 있다.
tert
-부틸 (
R
)-(1-(1
H
-인다졸-4-일)프로판-2-일)카바메이트의 제법
헥산 중 n-부틸리튬(2.5 M; 96 ㎖, 241 m㏖)을 20분에 걸쳐 -78℃에서 THF(200 ㎖) 중 4-브로모-1H-인다졸(24.8 g, 126 m㏖)의 용액에 첨가하고, 혼합물을 -78℃에서 7시간 동안 교반하였다. tert-부틸 (R)-4-메틸-1,2,3-옥사티아졸리딘-3-카복실레이트 2,2-디옥사이드(26 g, 110 m㏖)를 첨가하고, 생성된 혼합물을 -78℃에서 15분 동안 교반하였다. 냉각 배쓰를 제거하고, 혼합물을 이 조건 하에서 18시간 동안 교반하였다. 수성 시트르산(1 N; 130 ㎖)을 첨가하고, 30분 동안 계속해서 교반하였다. 혼합물을 헥산으로 추출하고, 유기 층을 포화 수성 탄산나트륨으로 세척하고, 황산나트륨 위에서 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 헥산 중 0% 내지 60% EtOAc에 의해 용리되는 플래시 실리카 크로마토그래피로 정제하여 백색의 고체로서 tert-부틸 (R)-(1-(1H-인다졸-4-일)프로판-2-일)카바메이트(17.3 g, 57%)를 수득하였다. 1H NMR (300 MHz, DMSO-d 6, 27℃) 1.02 (3H, br d), 1.34 (9H, s), 2.82 (1H, br dd), 3.09 (1H, br dd), 3.82 (1H, dt), 6.82 (1H, br d), 6.88 (1H, d), 7.24 (1H, dd), 7.35 (1H, br d), 8.18 (1H, s), 12.97 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 276.
(
R
)-1-(1
H
-인다졸-4-일)프로판-2-아민 디하이드로클로라이드의 제법
HCl 디옥산(4 M, 100 ㎖, 400 m㏖)을 10분에 걸쳐 실온에서 DCM(200 ㎖) tert-부틸 (R)-(1-(1H-인다졸-4-일)프로판-2-일)카바메이트(17.3 g, 62.7 m㏖)의 현탁액에 첨가하였다. 생성된 슬러리를 밤새 교반하고, 이후 감압 하에 농축시켜 백색의 고체로서 (R)-1-(1H-인다졸-4-일)프로판-2-아민(15.9 g, 102%)을 수득하였다. 1H NMR (300 MHz, DMSO-d 6, 27℃) 1.14 (3H, d), 2.97 (1H, dd), 3.40 (1H, dd), 3.45 - 3.62 (1H, m), 6.96 (1H, d), 7.29 (1H, dd), 7.45 (1H, d), 7.97 - 8.27 (3H, br s), 8.29 (1H, d). m/z: ES+ [M+H]+ 176.
(
R
)-1-(1
H
-인다졸-4-일)-N-(2,2,2-트리플루오로에틸)프로판-2-아민의 제법
탄산칼륨(4.75 g, 34.3 m㏖)을 아세토니트릴(25 ㎖) 중 (R)-1-(1H-인다졸-4-일)프로판-2-아민 디하이드로클로라이드 염(2.13 g, 8.58 m㏖)의 교반된 현탁액에 첨가하고, 이후 DCM(12.6 ㎖) 중 2,2,2-트리플루오로에틸 트리플루오로메탄설포네이트(2.191 g, 9.44 m㏖)를 적가하였다. 혼합물을 실온에서 1.5일 동안 교반하였다. 이후, DCM(0.3 ㎖) 중 추가 2,2,2-트리플루오로에틸 트리플루오로메탄설포네이트(398 ㎎)를 첨가하였다. 반응물을 60℃까지 가온시키고, 3시간 후, 반응물을 실온까지 냉각시키고, 2,2,2-트리플루오로에틸 트리플루오로메탄설포네이트(398 ㎎)의 추가 부분을 DCM(0.3 ㎖) 중의 용액으로서 첨가하였다. 18시간 후, 반응물을 감압 하에 농축시켜 감소된 용적이 되게 하고, 이후 DCM으로 희석하였다. 혼합물을 물로 세척하고, 유기 층을 황산나트륨 위에서 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 실리카 크로마토그래피(용리 구배 헥산 중 0% 내지 60% 에틸 아세테이트)로 정제하여 검으로서 (R)-1-(1H-인다졸-4-일)-N-(2,2,2-트리플루오로에틸)프로판-2-아민(2.06 g, 93%)을 수득하였다. m/z: ES+ [M+H]+ 257.
(6
S
,8
R
)-6-(5-브로모-6-플루오로피리딘-2-일)-8-메틸-7-(2,2,2-트리플루오로에틸)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린의 제법
트리플루오로아세트산(1.7 ㎖)을 톨루엔(33.8 ㎖) 중 (R)-1-(1H-인다졸-4-일)-N-(2,2,2-트리플루오로에틸)프로판-2-아민(1.83 g, 7.11 m㏖) 및 5-브로모-6-플루오로피콜린알데하이드(1.45 g, 7.11 m㏖)의 용액에 첨가하였다. 반응물을 90℃에서 24시간 동안 가열하고, 이후 농축시켜 감소된 용적이 되게 하였다. 이후, 혼합물을 디클로로메탄으로 희석하고, 포화 수성 탄산수소나트륨에 의해 염기성화시켰다. 유기 층을 황산나트륨 위에서 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 실리카 크로마토그래피(용리 구배 헥산 중 0% 내지 50% 에틸 아세테이트)로 정제하여 백색의 고체로서 (6S,8R)-6-(5-브로모-6-플루오로피리딘-2-일)-8-메틸-7-(2,2,2-트리플루오로에틸)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린(2.01 g, 64%)을 수득하였다. 1H NMR (300MHz, DMSO-d 6, 27℃) 1.11 (3H, d), 2.89 (1H, br dd), 2.94 - 3.09 (2H, m), 3.31 - 3.42 (1H, m), 3.52 - 3.71 (1H, m), 5.07 (1H, s), 6.96 (1H, d), 7.24 - 7.36 (2H, m), 8.06 (1H, d), 8.23 (1H, dd), 13.02 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 443.
실시예 30
5-플루오로-
N
-(1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일)-6-((6
S
,8
R
)-8-메틸-7-(2,2,2-트리플루오로에틸)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)피리딘-3-아민
1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-아민(435 ㎎, 3.29 m㏖), (6S,8R)-6-(5-브로모-3-플루오로피리딘-2-일)-8-메틸-7-(2,2,2-트리플루오로에틸)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린(730 ㎎, 1.65 m㏖) 및 나트륨 tert-부톡사이드(950 ㎎, 9.88 m㏖)를 1,4-디옥산(18.3 ㎖) 중에 현탁시켰다. 혼합물을 탈기시키고, Brettphos 3G 전촉매(149 ㎎, 0.16 m㏖)를 첨가하였다. 반응물을 1시간 동안 80℃까지 가열하였다. 반응 혼합물을 실온까지 냉각시키고, 에틸 아세테이트(10 ㎖)로 희석하고, 물(10 ㎖)로 세척하였다. 유기 층을 황산마그네슘 위에서 건조시키고, 여과시키고, 진공 하에 농축시켰다. 미정제 생성물을 용리제로서 물(1% NH3 함유) 및 MeCN의 점감적으로 극성인 혼합물을 사용하여 분취용 LCMS(Waters XSelect CSH C18 칼럼, 5 μ 실리카, 50 ㎜ 직경, 100 ㎜ 길이)로 정제하였다. 샘플을 MeOH 중에 용해시키고, 하기 크로마토그래피 조건(칼럼: Phenomonex Lux C1, 30 x 250 ㎜, 5 마이크론, 이동상: 30% MeOH + 0.1% NH3 / 70% scCO2)을 이용하여 SFC로 분리하여 황색의 고체로서 5-플루오로-N-(1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일)-6-((6S,8R)-8-메틸-7-(2,2,2-트리플루오로에틸)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)피리딘-3-아민(396 ㎎, 49%)을 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, CDCl3, 27℃) 1.15 (3H, d), 1.69 - 1.81 (2H, m), 2.60 (2H, t), 2.77 (1H, dd), 2.92 - 3.03 (3H, m), 3.14 - 3.31 (2H, m), 3.65 - 3.79 (3H, m), 4.04 (1H, q), 4.43 (2H, t), 4.53 (1H, t), 5.35 (1H, s), 6.54 (1H, dd), 6.76 (1H, d), 7.00 (1H, d), 7.66 (1H, d), 7.93 (1H, d), 11.06 (1H, s); m/z: ES+ [M+H]+ 495.
출발 재료로서 사용된 (6S,8R)-6-(5-브로모-3-플루오로피리딘-2-일)-8-메틸-7-(2,2,2-트리플루오로에틸)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린을 하기와 같이 합성하였다:
(6
S
,8
R
)-6-(5-브로모-3-플루오로피리딘-2-일)-8-메틸-7-(2,2,2-트리플루오로에틸)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린
트리플루오로아세트산(2.13 ㎖)을 톨루엔(42.6 ㎖) 중 (R)-1-(1H-인다졸-4-일)-N-(2,2,2-트리플루오로에틸)프로판-2-아민(1.15 g, 4.47 m㏖) 및 5-브로모-3-플루오로피콜린알데하이드(912 ㎎, 4.47 m㏖)의 용액에 첨가하고, 생성된 혼합물을 100℃에서 30분 동안 교반하였다. 반응물을 증발시키고, 잔류물을 DCM(20 ㎖)과 2 M NaOH(20 ㎖) 사이에 분배하였다. 층을 분리시키고, 유기 상을 감압 하에 농축시켰다. 미정제 생성물을 플래시 실리카 크로마토그래피(용리 구배 헵탄 중 0% 내지 40% EtOAc)로 정제하였다. 생성물 함유 분획을 증발 건조시켜 황색의 고체로서 (6S,8R)-6-(5-브로모-3-플루오로피리딘-2-일)-8-메틸-7-(2,2,2-트리플루오로에틸)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린(1.15 g, 58%)을 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, CDCl3, 27℃) 1.16 (3H, d), 2.86 (1H, dd), 3.01 (1H, dq), 3.19 - 3.35 (2H, m), 3.68 - 3.78 (1H, m), 5.42 (1H, s), 6.80 (1H, d), 7.20 (1H, d), 7.59 (1H, dd), 8.05 (1H, d), 8.27 - 8.5 (1H, m). m/z: ES+ [M+H]+ 443.
실시예 31
2,2-디플루오로-3-((6
S
,8
R
)-6-(3-플루오로-5-((1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일)아미노)피리딘-2-일)-8-메틸-3,6,8,9-테트라하이드로-7H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-7-일)프로판-1-올
테트라부틸암모늄 플루오라이드(THF 중 1.0 M, 0.65 ㎖, 0.65 m㏖)를 실온에서 THF(2.66 ㎖) 중 6-((6S,8R)-7-(3-((tert-부틸디페닐실릴)옥시)-2,2-디플루오로프로필)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)-5-플루오로-N-(1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일)피리딘-3-아민(320 ㎎, 0.43 m㏖)의 용액에 첨가하고, 64시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 증발시키고, 이후 DMSO 중에 용해시키고, 미정제 생성물을 용리제로서 물(1% NH3 함유) 및 MeCN의 점감적으로 극성인 혼합물을 사용하여 플래시 역상(Puriflash, 220 g, C18, 30 μ 칼럼)으로 정제하였다. 원하는 화합물을 함유하는 분획을 증발 건조시켜 미정제 생성물(143 ㎎)을 수득하였다. 미정제 생성물을 플래시 실리카 크로마토그래피(용리 구배 EtOAc 중 0% 내지 20% MeOH)로 정제하였다. 생성물 함유 분획을 증발 건조시켜 이성질체의 혼합물로서 2,2-디플루오로-3-((6S,8R)-6-(3-플루오로-5-((1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일)아미노)피리딘-2-일)-8-메틸-3,6,8,9-테트라하이드로-7H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-7-일)프로판-1-올(118 ㎎, 54%)을 수득하였다. 재료를 용리제로서 물(0.1% 포름산 함유) 및 MeCN의 점감적으로 극성인 혼합물을 사용하여 분취용 HPLC(Waters XSelect CSH C18 칼럼, 5 μ 실리카, 30 ㎜ 직경, 100 ㎜ 길이)로 재정제하였다. 원하는 화합물을 함유하는 분획을 합하고, SCX-2 칼럼을 사용하여 이온 교환 크로마토그래피로 정제하였다. 원하는 생성물을 1 M NH3/MeOH를 사용하여 칼럼으로부터 용리시키고, 생성물 함유 분획을 증발 건조시켜 무색의 고체로서 2,2-디플루오로-3-((6S,8R)-6-(3-플루오로-5-((1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일)아미노)피리딘-2-일)-8-메틸-3,6,8,9-테트라하이드로-7H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-7-일)프로판-1-올(62.1 ㎎, 29%)을 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, DMSO, 27℃) 1.03 (3H, dd), 1.64 (2H, dq), 2.44 (2H, t), 2.60 - 2.66 (1H, m), 2.79 (3H, dd), 2.97 (1H, dd), 3.04 - 3.15 (1H, m), 3.50 - 3.73 (5H, m), 3.89 - 3.97 (1H, m), 4.39 (1H, t), 4.48 (1H, t), 5.21 (1H, s), 5.26 (1H, t), 6.58 (1H, d), 6.65 - 6.71 (2H, m), 7.19 (1H, d), 7.55 (1H, dd), 8.03 (1H, s), 12.94 (1H, s); m/z: ES+ [M+H]+ 507.
출발 재료로서 사용된 6-((6S,8R)-7-(3-((tert-부틸디페닐실릴)옥시)-2,2-디플루오로프로필)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)-5-플루오로-N-(1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일)피리딘-3-아민을 하기와 같이 합성하였다:
(
R
)-
N
-(1-(1H-인다졸-4-일)프로판-2-일)-3-((
tert
-부틸디페닐실릴)옥시)-2,2-디플루오로프로판-1-아민
3-((tert-부틸디페닐실릴)옥시)-2,2-디플루오로프로필 트리플루오로메탄설포네이트(2.59 g, 5.36 m㏖)를 1,4-디옥산(38.9 ㎖) 중 (R)-1-(1H-인다졸-4-일)프로판-2-아민(0.94 g, 5.36 m㏖) 및 DIPEA(1.39 ㎖, 8.05 m㏖)의 용액에 첨가하고, 반응물을 50℃에서 18시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 증발시키고, 이후 잔류물을 EtOAc로 희석하고, 물로 세척하고, 수성 층을 EtOAc로 추가 추출하였다. 합한 유기 층을 포화 염수로 세척하고, 황산마그네슘 위에서 건조시키고, 여과시키고, 증발 건조시켰다. 미정제 생성물을 플래시 실리카 크로마토그래피(용리 구배 헵탄 중 0% 내지 50% EtOAc)로 정제하였다. 순수한 분획을 증발 건조시켜 무색의 검으로서 (R)-N-(1-(1H-인다졸-4-일)프로판-2-일)-3-((tert-부틸디페닐실릴)옥시)-2,2-디플루오로프로판-1-아민(1.515 g, 52%)을 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, DMSO, 27℃) 0.92 (3H, d), 0.97 (9H, s), 1.78 - 1.86 (1H, m), 2.73 (1H, dd), 2.98 - 3.14 (4H, m), 3.83 (2H, td), 6.85 (1H, d), 7.20 (1H, dd), 7.34 (1H, d), 7.41 - 7.50 (6H, m), 7.58 - 7.64 (4H, m), 8.08 (1H, s), 12.98 (1H, s); m/z: ES+ [M+H]+ 508.
(6
S
,8
R
)-6-(5-브로모-3-플루오로피리딘-2-일)-7-(3-((
tert
-부틸디페닐실릴)옥시)-2,2-디플루오로프로필)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린
트리플루오로아세트산(319 ㎕)을 톨루엔(6.39 ㎖) 중 (R)-N-(1-(1H-인다졸-4-일)프로판-2-일)-3-((tert-부틸디페닐실릴)옥시)-2,2-디플루오로프로판-1-아민(681 ㎎, 1.34 m㏖) 및 5-브로모-3-플루오로피콜린알데하이드(287 ㎎, 1.41 m㏖)의 용액에 첨가하고, 생성된 혼합물을 110℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응물을 실온까지 냉각되게 하고, 증발 건조시키고, DMSO 중에 용해시켰다. 미정제 생성물을 용리제로서 물(0.1% 포름산 함유) 및 MeCN(60% 내지 100%)의 점감적으로 극성인 혼합물을 사용하여 플래시 역상 크로마토그래피(100 g Redisep Rf C18 칼럼)로에 의해 정제하였다. 원하는 화합물을 함유하는 분획을 합하고, SCX-2 칼럼을 사용하여 이온 교환 크로마토그래피로 단리하였다. 원하는 생성물을 1 M NH3/MeOH를 사용하여 칼럼으로부터 용리시키고, 순수한 분획을 증발 건조시켜 회백색의 고체로서 (6S,8R)-6-(5-브로모-3-플루오로피리딘-2-일)-7-(3-((tert-부틸디페닐실릴)옥시)-2,2-디플루오로프로필)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린(763 ㎎, 82%)을 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, DMSO, 27℃) 0.99 (9H, s), 1.04 (3H, d), 2.74 - 2.89 (2H, m), 2.97 - 3.04 (1H, m), 3.31 (1H, s), 3.54 - 3.62 (1H, m), 3.78 (1H, q), 3.92 - 4.02 (1H, m), 5.36 (1H, s), 6.72 (1H, d), 7.23 (1H, d), 7.41 - 7.49 (6H, m), 7.57 - 7.61 (4H, m), 8.04 (1H, dd), 8.09 (1H, s), 8.38 (1H, d), 13.01 (1H, s); m/z: ES+ [M+H]+ 693.
6-((6
S
,8
R
)-7-(3-((
tert
-부틸디페닐실릴)옥시)-2,2-디플루오로프로필)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)-5-플루오로-
N
-(1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일)피리딘-3-아민
1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-아민(114 ㎎, 0.86 m㏖), (6S,8R)-6-(5-브로모-3-플루오로피리딘-2-일)-7-(3-((tert-부틸디페닐실릴)옥시)-2,2-디플루오로프로필)-8-메틸-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린(300 ㎎, 0.43 m㏖) 및 나트륨 tert-부톡사이드(249 ㎎, 2.59 m㏖)를 탈기된 1,4-디옥산(4.81 ㎖) 중에 현탁시켰다. Brettphos 3G 전촉매(39.2 ㎎, 0.04 m㏖)를 첨가하고, 혼합물을 배기시키고, 질소(x2)로 퍼징하고, 이후 반응물을 45분 동안 80℃까지 가열하였다. 반응 혼합물을 실온까지 냉각되게 하고, EtOAc로 희석하고, 물로 세척하였다. 수성 층을 EtOAc로 추가 추출하고, 합한 유기 층을 포화 염수로 세척하고, 황산마그네슘 위에서 건조시키고, 여과시키고, 증발 건조시키고, 추가 정제 없이 바로 사용하였다. m/z: ES+ [M+H]+ 745.
실시예 32
6-((6
S
, 8
R
)-1-플루오로-8-메틸-7-(2,2,2-트리플루오로에틸)-6,7,9,8-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀸-6-일)-
N
-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일)피리딘-3-아민
나트륨 tert-부톡사이드(116 ㎎, 1.20 m㏖) 및 BrettPhos G3(9.09 ㎎, 10.04 μ㏖)을 1,4-디옥산(1.00 ㎖) 중 (6S,8R)-6-(5-브로모피리딘-2-일)-1-플루오로-8-메틸-7-(2,2,2-트리플루오로에틸)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린(89 ㎎, 0.20 m㏖) 및 1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-아민(39.8 ㎎, 0.30 m㏖)의 탈기된 용액에 첨가하고, 반응물을 90℃까지 가온시키고, 6시간 동안 교반하였다. 냉각 후, 반응물을 EtOAc 및 물로 희석하고, 층을 분리시켰다. 수성 층을 EtOAc로 추출하고, 이후 합한 유기물을 황산나트륨 위에서 건조시키고 증발시켰다. 정제는 물의 점감적으로 극성인 혼합물(용리제로서 0.1% NH3 및 MeCN 함유)을 사용하여 HPLC(Waters CSH C18 OBD 칼럼, 5 μ 실리카, 30 ㎜ 직경, 100 ㎜ 길이)에 의해 필름으로서 생성물(42.0 ㎎, 42%)을 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, CDCl3, 27℃) 1.13 (3H, d), 1.69 - 1.84 (2H, m), 2.61 (2H, td), 2.76 (1H, dd), 2.94 (3H, ddd), 3.16 - 3.28 (2H, m), 3.45 - 3.54 (1H, m), 3.67 - 3.76 (2H, m), 4.09 (1H, dt), 4.24 (1H, d), 4.43 (1H, td), 4.53 (1H, td), 5.02 (1H, s), 6.76 (1H, dd), 6.81 (1H, d), 6.89 (1H, dd), 7.39 (1H, d), 7.81 (1H, d), 11.10 (1H, s); m/z: ES+ [M+H]+ 495.
출발 재료로서 사용된 (6S,8R)-6-(5-브로모피리딘-2-일)-1-플루오로-8-메틸-7-(2,2,2-트리플루오로에틸)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린을 하기와 같이 합성하였다:
4-브로모-3-플루오로-1H-인다졸
Selectfluor(49.40 g, 139.6 m㏖)를 DMF(254 ㎖) 중 4-브로모-1H-인다졸(25.0 g, 127 m㏖)의 용액에 첨가하고, 반응물을 밤새 70℃까지 가열하였다. 냉각 후, 반응 혼합물을 물에 부었다. 침전된 고체를 여과시키고, 건조시키고, 이후 미정제 생성물을 플래시 실리카 크로마토그래피(용리 구배 헵탄 중 0% 내지 30% EtOAc)로 정제하였다. 생성물 함유 분획을 증발 건조시켜 담황색의 고체로서 4-브로모-3-플루오로-1H-인다졸(4.20 g, 15%)을 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, CDCl3, 27℃) 7.24 - 7.28 (1H, m), 7.32 - 7.36 (2H, m), 9.20 (1H, s); m/z: ES- [M-H]- 213.
tert
-부틸 (
R
)-(1-(3-플루오로-1H-인다졸-4-일)프로판-2-일)카바메이트
n-부틸 리튬(1.6 M, 51.9 ㎖, 83.01 m㏖)을 -78℃에서 THF(124 ㎖) 중 4-브로모-3-플루오로-1H-인다졸(8.50 g, 39.5 m㏖)에 첨가하고, 반응물을 15분 동안 교반하고, 15분 동안 -50℃까지 가온시키고, 이후 -78℃까지 다시 냉각시켰다. tert-부틸 (R)-4-메틸-1,2,3-옥사티아졸리딘-3-카복실레이트 2,2-디옥사이드(10.32 g, 43.48 m㏖)를 THF(20 ㎖) 중에 첨가하고, 반응물을 15분 동안 교반한 후, 30분에 걸쳐 -10℃까지 가온되게 하였다. 1 N 시트르산(200 ㎖)을 첨가하고, 혼합물을 15분 동안 교반한 후, EtOAc(x2)로 추출하였다. 합한 유기물을 황산마그네슘 위에서 건조시키고 증발시켰다. 미정제 생성물을 플래시 실리카 크로마토그래피(용리 구배 헵탄 중 0% 내지 40% EtOAc)로 정제하였다. 생성물 함유 분획을 증발 건조시켜 무색의 고체로서 tert-부틸 (R)-(1-(3-플루오로-1H-인다졸-4-일)프로판-2-일)카바메이트(5.93 g, 51%)를 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, CDCl3, 27℃) 1.17 (3H, d), 1.35 (9H, s), 3.09 (2H, d), 4.00 - 4.09 (1H, m), 4.41 - 4.49 (1H, m), 6.97 (1H, d), 7.22 (1H, dd), 7.33 (1H, dd), 9.36 (1H, s); m/z: ES- [M-H]- 292.
(
R
)-1-(3-플루오로-1H-인다졸-4-일)프로판-2-아민
디옥산 중 4 N 염산(23.86 ㎖, 95.45 m㏖)을 MeOH(23.9 ㎖) 중 tert-부틸 (R)-(1-(3-플루오로-1H-인다졸-4-일)프로판-2-일)카바메이트(5.60 g, 19.1 m㏖)에 첨가하고, 반응물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 미정제 혼합물을 농축시키고, 이후 EtOAc(100 ㎖) 중에 현탁시키고, 포화 수성 중탄산나트륨(50 ㎖)으로 세척하였다. 수성 층을 EtOAc(x5)로 추출하고, 이후 합한 유기물을 황산나트륨 위에서 건조시키고, 증발시켜 황색의 오일로서 (R)-1-(3-플루오로-1H-인다졸-4-일)프로판-2-아민(3.10 g, 84%)을 수득하였고, 이것은 정치 시 고형화되었다. 1H NMR (500 MHz, CDCl3, 27℃) 1.19 (3H, d), 2.86 (1H, dd), 3.09 (1H, dd), 3.33 (1H, dddd), 6.96 (1H, d), 7.22 (1H, dd), 7.33 (1H, dd), 9.93 (1H, s); m/z: ES+ [M+H]+ 194.
(
R
)-1-(3-플루오로-1H-인다졸-4-일)-N-(2,2,2-트리플루오로에틸)프로판-2-아민
DCM 중 2,2,2-트리플루오로에틸 트리플루오로메탄설포네이트 0.1 M 용액(25.9 ㎖, 2.59 m㏖)을 1,4-디옥산(20 ㎖) 중 (R)-1-(3-플루오로-1H-인다졸-4-일)프로판-2-아민(0.4 g, 2.07 m㏖) 및 DIPEA(0.541 ㎖, 3.11 m㏖)에 첨가하고, 생성된 혼합물을 75℃에서 밤새 교반하였다. 반응물을 진공에서 농축시키고, 에틸 아세테이트(25 ㎖)와 포화 수성 중탄산나트륨(25 ㎖) 사이에 분배하였다. 층을 분리시키고, 수성 층을 에틸 아세테이트(25 ㎖)로 추출하였다. 합한 유기물을 포화 수성 염화나트륨(25 ㎖)으로 세척하고, 황산나트륨 위에서 건조시키고, 여과시키고, 진공에서 농축시켰다. 생성된 검을 메탄올 중에 채우고, 미리 습윤된 (메탄올) SCX-2 카트리지에 적용하였다. 카트리지를 메탄올로 세척하고, 메탄올 중 1 M 암모니아에 의해 용리시켰다. 용리제를 진공에서 농축시켜 갈색의 검으로서 (R)-1-(3-플루오로-1H-인다졸-4-일)-N-(2,2,2-트리플루오로에틸)프로판-2-아민(0.455 g, 80%)을 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, CDCl3, 27℃) 1.11 (3H, d), 2.92 (1H, dd), 3.07 - 3.22 (4H, m), 6.96 (1H, d), 7.25 (1H, dd), 7.34 (1H, dd), 9.50 (1H, s); m/z: ES+ [M+H]+ 276.
(6
S
,8
R
)-6-(5-브로모피리딘-2-일)-1-플루오로-8-메틸-7-(2,2,2-트리플루오로에틸)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린
트리플루오로아세트산(87 ㎕)을 톨루엔(0.87 ㎖) 중 (R)-1-(3-플루오로-1H-인다졸-4-일)-N-(2,2,2-트리플루오로에틸)프로판-2-아민(100 ㎎, 0.36 m㏖) 및 5-브로모피콜린알데하이드(67.6 ㎎, 0.36 m㏖)의 용액에 첨가하고, 생성된 혼합물을 90℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응물을 실온까지 냉각되게 하고, DCM(5 ㎖)과 포화 수성 중탄산나트륨(5 ㎖) 사이에 분배하였다. 층을 분리시키고, 유기 층을 진공에서 농축시켰다. 정제는 헵탄 중 0% 내지 50% 에틸 아세테이트에 의해 용리되는 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 백색의 고체로서 (6S,8R)-6-(5-브로모피리딘-2-일)-1-플루오로-8-메틸-7-(2,2,2-트리플루오로에틸)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린(89 ㎎, 55%)을 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, CDCl3, 27℃) 1.16 (3H, d), 2.92 - 3.00 (2H, m), 3.25 - 3.36 (2H, m), 3.46 - 3.52 (1H, m), 5.07 (1H, s), 6.98 (1H, d), 7.09 (1H, dd), 7.43 (1H, d), 7.77 (1H, dd), 8.55 (1H, dd), 9.09 (1H, s); m/z: ES+ [M+H]+ 443.
실시예 33
5-플루오로-6-((6
S
,8
R
)-1-플루오로-8-메틸-7-(2,2,2-트리플루오로에틸)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)-
N
-(1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일)피리딘-3-아민
나트륨 tert-부톡사이드(3.12 g, 32.52 m㏖) 및 BrettPhos G3(0.245 g, 0.27 m㏖)을 1,4-디옥산(27.1 ㎖) 중 (6S,8R)-6-(5-브로모-3-플루오로피리딘-2-일)-1-플루오로-8-메틸-7-(2,2,2-트리플루오로에틸)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린(2.50 g, 5.42 m㏖) 및 1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-아민(1.075 g, 8.13 m㏖)의 탈기된 용액에 첨가하고, 반응물을 60℃까지 가온시키고, 2시간 동안 교반하였다. 냉각 후, 반응물을 EtOAc 및 물로 희석하고, 층을 분리시켰다. 수성 층을 EtOAc로 추출하고, 이후 합한 유기물을 황산나트륨 위에서 건조시키고 증발시켰다. 정제는 처음에 헵탄 중 0% 내지 100%(에틸 아세테이트 중 10% 메탄올)에 의해 용리되는 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피, 이어서 역상 Interchim(용리제로서 0.1% NH3 및 MeCN)에 의해 이성질체의 혼합물로서 생성물을 수득하였다. 생성물을 SFC로 분리시키고, 샘플을 MeOH 중에 용해시키고, 하기 SFC 조건(칼럼: Phenomonex C4, 30 x 250 ㎜, 5 마이크론, 이동상: 25% MeOH + 0.1% NH3, 유속: 100 ㎖/분, BPR 120 bar, 칼럼 온도: 40℃)을 이용하여 분리하여 폼으로서 5-플루오로-6-((6S,8R)-1-플루오로-8-메틸-7-(2,2,2-트리플루오로에틸)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)-N-(1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일)피리딘-3-아민(1.780 g, 64%)을 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, CDCl3, 27℃) 1.15 (3H, d), 1.67 - 1.81 (2H, m), 2.59 (2H, t), 2.81 - 3.03 (4H, m), 3.17 - 3.34 (2H, m), 3.70 (3H, q), 4.01 - 4.08 (1H, m), 4.20 (1H, d), 4.43 (1H, t), 4.53 (1H, t), 5.32 (1H, s), 6.54 (1H, dd), 6.81 (1H, d), 6.95 (1H, d), 7.64 - 7.68 (1H, m), 9.46 (1H, s); m/z: ES+ [M+H]+ 513.
출발 재료로서 사용된 (6S,8R)-6-(5-브로모-3-플루오로피리딘-2-일)-1-플루오로-8-메틸-7-(2,2,2-트리플루오로에틸)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린을 하기와 같이 합성하였다:
(6
S
,8
R
)-6-(5-브로모-3-플루오로피리딘-2-일)-1-플루오로-8-메틸-7-(2,2,2-트리플루오로에틸)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린
트리플루오로아세트산(2.16 ㎖)을 톨루엔(43.3 ㎖) 중 (R)-1-(3-플루오로-1H-인다졸-4-일)-N-(2,2,2-트리플루오로에틸)프로판-2-아민(2.50 g, 9.08 m㏖) 및 5-브로모-3-플루오로피콜린알데하이드(1.85 g, 9.08 m㏖)의 용액에 첨가하고, 생성된 혼합물을 90℃에서 90분 동안 교반하였다. 반응물을 냉각되게 하고, DCM(50 ㎖)과 포화 수성 중탄산나트륨(50 ㎖) 사이에 분배하였다. 층을 분리시키고, 유기 층을 진공에서 농축시켰다. 정제는 헵탄 중 0% 내지 50% 에틸 아세테이트에 의해 용리되는 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 백색의 고체로서 (6S,8R)-6-(5-브로모-3-플루오로피리딘-2-일)-1-플루오로-8-메틸-7-(2,2,2-트리플루오로에틸)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린(2.90 g, 69%)을 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, CDCl3, 27℃) 1.15 (3H, d), 2.88 - 3.04 (2H, m), 3.24 - 3.35 (2H, m), 3.63 - 3.71 (1H, m), 5.39 (1H, s), 6.83 (1H, d), 7.08 (1H, dd), 7.60 (1H, dd), 8.36 (1H, dd), 9.13 (1H, s); m/z: ES+ [M+H]+ 461.
실시예 34 내지 실시예 73(하기 표)을 상기 기재된 것과 유사한 합성 방법을 이용하여 제조하였다.
본 명세서가 특정한 사용의 요건에 가장 잘 맞을 수 있으면서, 당해 분야의 숙련자가 본 명세서를 이의 다수의 형태로 용이하게 적응시키고 적용할 수 있도록, 예시적인 구현예의 상기 설명은 당해 분야의 숙련자가 출원인의 명세서, 이의 원칙 및 이의 실용적인 적용을 익히도록 오직 의도된다. 이 설명 및 이의 구체적인 실시예는, 본 명세서의 구현예를 나타내면서, 오직 예시의 목적을 위해 의도된다. 따라서, 본 명세서는 본 명세서에 기재된 예시적인 구현예로 제한되지 않고, 다양하게 변형될 수 있다. 또한, 별개의 구현예의 맥락에서 명확성을 위해 기재된 본 명세서의 다양한 특징이 단일 구현예를 형성하도록 또한 조합될 수 있는 것으로 이해될것이다. 반대로, 단일 구현예의 맥락에서 간략화를 위해 기재된 본 명세서의 다양한 특징은 이의 하위조합을 형성하도록 또한 조합될 수 있다.
Claims (12)
- N-(1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일)-6-((6S,8R)-8-메틸-7-(2,2,2-트리플루오로에틸)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)피리딘-3-아민,
또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염. - N-(1-(3-플루오로프로필)아제티딘-3-일)-6-((6S,8R)-8-메틸-7-(2,2,2-트리플루오로에틸)-6,7,8,9-테트라하이드로-3H-피라졸로[4,3-f]이소퀴놀린-6-일)피리딘-3-아민,
.
- 제1항 또는 제2항에 청구된 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염, 및 약제학적으로 허용 가능한 부형제를 포함하는, 유방암 또는 부인암의 치료에서 사용하기 위한, 약제학적 조성물.
- 삭제
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