KR102387122B1 - Ssea4 항원에 특이적인 키메라 항원 수용체 - Google Patents

Ssea4 항원에 특이적인 키메라 항원 수용체 Download PDF

Info

Publication number
KR102387122B1
KR102387122B1 KR1020177007467A KR20177007467A KR102387122B1 KR 102387122 B1 KR102387122 B1 KR 102387122B1 KR 1020177007467 A KR1020177007467 A KR 1020177007467A KR 20177007467 A KR20177007467 A KR 20177007467A KR 102387122 B1 KR102387122 B1 KR 102387122B1
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
cells
ser
car
cancer
gly
Prior art date
Application number
KR1020177007467A
Other languages
English (en)
Other versions
KR20170042774A (ko
Inventor
안드레아스 보시오
올라프 하르트
안드레아 알로이아
Original Assignee
밀테니 비오텍 비.브이. & 씨오. 케이지
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 밀테니 비오텍 비.브이. & 씨오. 케이지 filed Critical 밀테니 비오텍 비.브이. & 씨오. 케이지
Publication of KR20170042774A publication Critical patent/KR20170042774A/ko
Application granted granted Critical
Publication of KR102387122B1 publication Critical patent/KR102387122B1/ko

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
    • A61K35/14—Blood; Artificial blood
    • A61K35/17—Lymphocytes; B-cells; T-cells; Natural killer cells; Interferon-activated or cytokine-activated lymphocytes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/0005—Vertebrate antigens
    • A61K39/0011—Cancer antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/0005—Vertebrate antigens
    • A61K39/0011—Cancer antigens
    • A61K39/00118—Cancer antigens from embryonic or fetal origin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/3955—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against proteinaceous materials, e.g. enzymes, hormones, lymphokines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/46—Cellular immunotherapy
    • A61K39/461—Cellular immunotherapy characterised by the cell type used
    • A61K39/4611—T-cells, e.g. tumor infiltrating lymphocytes [TIL], lymphokine-activated killer cells [LAK] or regulatory T cells [Treg]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/46—Cellular immunotherapy
    • A61K39/463—Cellular immunotherapy characterised by recombinant expression
    • A61K39/4631—Chimeric Antigen Receptors [CAR]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/46—Cellular immunotherapy
    • A61K39/464—Cellular immunotherapy characterised by the antigen targeted or presented
    • A61K39/4643—Vertebrate antigens
    • A61K39/4645—Lipids; Lipoproteins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/70503—Immunoglobulin superfamily
    • C07K14/7051—T-cell receptor (TcR)-CD3 complex
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/70503—Immunoglobulin superfamily
    • C07K14/70517—CD8
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/70503—Immunoglobulin superfamily
    • C07K14/70521—CD28, CD152
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/70578—NGF-receptor/TNF-receptor superfamily, e.g. CD27, CD30, CD40, CD95
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0602—Vertebrate cells
    • C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
    • C12N5/0636—T lymphocytes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
    • A61K2035/124—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells the cells being hematopoietic, bone marrow derived or blood cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
    • A61K2039/515—Animal cells
    • A61K2039/5156—Animal cells expressing foreign proteins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
    • A61K2039/515—Animal cells
    • A61K2039/5158—Antigen-pulsed cells, e.g. T-cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C07K2317/53—Hinge
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
    • C07K2317/62—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising only variable region components
    • C07K2317/622—Single chain antibody (scFv)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/01—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif
    • C07K2319/02—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif containing a signal sequence
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/01—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif
    • C07K2319/03—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif containing a transmembrane segment
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/33—Fusion polypeptide fusions for targeting to specific cell types, e.g. tissue specific targeting, targeting of a bacterial subspecies

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Developmental Biology & Embryology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Gynecology & Obstetrics (AREA)
  • Pregnancy & Childbirth (AREA)
  • Reproductive Health (AREA)

Abstract

본 발명은 SSEA4 에 특이적인 항원 결합 도메인을 포함하는 키메라 항원 수용체 (CAR), 상기 CAR 를 발현하는 조작된 세포의 개체군, 및 상기 CAR 를 발현하는 상기 유전적으로 변형된 세포를 포함하는 약학 조성물을 제공한다. 약학 조성물은 암의 암성 세포의 적어도 부분모집단이 SSEA4 를 발현하는 그러한 암으로 고통받는 대상체에서 상기 암의 치료에 사용되기 위한 것일 수 있다.

Description

SSEA4 항원에 특이적인 키메라 항원 수용체{CHIMERIC ANTIGEN RECEPTOR SPECIFIC FOR SSEA4 ANTIGEN}
본 발명은 암 치료 분야, 특히 표적으로서의 항원 SSEA4 를 사용하는 암 치료에 관한 것이다.
암은 조절되지 않는 세포 성장에 관련된 폭넓은 질병군이다. 암에서, 악성 종양을 형성하는 세포는 통제불가능하게 분열하고 성장하고, 인근 신체 기관을 침식해간다. 또한, 암은 림프계 또는 혈류를 통해 보다 먼 거리의 신체 기관으로 퍼져나간다. 인간에게 영향을 미치는 공지되어 있는 상이한 암이 200 가지가 넘게 존재한다. 많은 유형의 암에 대해 양호한 치료 옵션이 이용가능하지만, 여전히 다른 유형의 암은 충족되지 않는 의학적 요구를 나타낸다. 특히, 난소암, 신장 세포 암종, 및 삼중 음성 유방암 (TNBC) 은 치료학적 옵션이 제한적인 악성물이다. TNBC 는 전이 및 조기 재발의 고위험성과 관련된 공격적인 유방암의 하위유형이다. 현재, TNBC 환자의 전신 요법에 대한 주요 옵션은 전반적으로 불량한 효능 및 심각한 부작용을 갖는 화학요법이다. 초기에는 대다수의 TNBC 환자가 네오아쥬반트 화학요법 치료에 반응하나, 오직 약 20% 만이 양호한 예후를 갖는 병리학적 완전 반응 (pCR) 에 도달한다. 특히, 대부분의 환자는 pCR 에 도달하지 않는데, 왜냐하면 종양이 화학요법에 대한 낮은 신생 민감성을 갖거나 화학요법에 대한 저항성을 발전시키기 때문이다. 이 경우, 종양은 화학요법으로 인해 퇴행되나, 잔류하는 암 세포가 지속되고, 환자의 약 40% 에서 화학요법 후 3년 이내 종양 재발 및 전이가 개시된다.
시알릴-당지질 단계-특이적인 배아 항원 4 (sialyl-glycolipid stage-specific embryonic antigen 4; SSEA4) 는 인간 배성암세포에서 초기 확인되는 모노시알로실 글로보펜타오실세라마이드 (MSGb5) 로서 또한 공지된 시알릴-당지질 에피토프이다 (문헌 [Kannagi R et al, EMBO J. 1983; 2(12):2355-61]; 문헌 [Saito S et al, J Biol Chem. 2003 Jul 18; 278(29):26474-9]). SSEA4 는 미분화된 인간 배아 줄기 (ES) 세포, 유도 다능성 (iPS) 세포, 배아 암종 (EC) 세포, 및 배아 생식 (EG) 세포 및 다양한 체세포 줄기 세포, 예컨대 치수 줄기 세포, 제대혈-유래의 매우 작은 배아 유사 줄기 세포 (VSEL) 및 중간엽 줄기세포에서 발견된다 (문헌 [Gang EJ et al, Blood. 2007 Feb 15; 109(4):1743-51]; 문헌 [Truong TT et al., Invest Ophthalmol Vis Sci. 2011 Aug 11; 52(9):6315-20]).
유럽 특허 제 EP14305477.3 호에서, SSEA4 가 암 세포에 저항성이 있는 화학요법의 부분모집단을 표시하기 위한 바이오마커임이 개시되어 있다.
SSEA4 의 기능은 여전히 알려지지 않았다.
키메라 항원 수용체 (CAR) 는 암에 대한 입양 세포 면역요법에 대해서 유망한 접근법을 제공한다. 통상적으로, CAR 는 T-세포 신호화 분자의 세포질 도메인에 경첩 및 막관통 영역을 통해 커플링되는 종양 연계 항원 (TAA) 에 특이적인 항체의 단쇄 단편 가변부 (scFv) 를 포함한다. 대부분의 통상적인 림프구 활성화 모이어티는 T-세포 촉발 (예를 들어 CD3ζ) 모이어티를 갖는 탠덤 (tandem) 에서 T-세포 공자극 (예를 들어 CD28, CD137, OX40, ICOS, 및 CD27) 도메인을 포함한다. CAR-매개 입양 면역요법은, CAR-이식된 세포가 비-HLA-제한 방식으로 표적 종양 세포 상의 TAA 를 직접 인식하게 한다.
비록 25% 미만의 유방암 환자가 화학요법 치료로부터 이득을 얻을지라도 (문헌 [CLIFFORD A. HUDIS and LUCA GIANNI, The Oncologist 2011;16 (suppl 1): 1-11]), 이러한 전신 접근법은 표준 케어로서 여전히 사용된다. 심각한 부작용 때문에, 인간 유방암과 같은 암의 치료에 대한 옵션으로서 사용될 수 있는 마커를 동정하는 것은 매우 이로운 것이다.
SSEA4 는 암성 세포의 세포 표면 항원이고, 따라서 난소암, 신장 세포 암종 및 TNBC 를 포함하는 (이에 한정되지는 않음) SSEA4 를 발현하는 암성 세포의 표적화 생물학적 요법 또는 면역학적 요법에 SSEA4 가 사용될 수 있다. 놀랍게도, 본 발명자들은, 조작된 세포, 바람직하게는 항원 SSEA4 에 특이적인 키메라 항원 수용체를 발현하는 조작된 T 세포가 생체외 및 생체내에서 SSEA4 를 발현하는 세포를 사멸시킬 수 있음을 밝혀냈다. 따라서, 본 발명은 키메라 항원 수용체를 발현하기 위해 형질도입되는 세포의 입양 세포 전달 전략에 관한 것이며, 이때 상기 CAR 는 SSEA4 를 발현하는 암성 세포의 인지 및 이에 대한 결합을 야기하는 SSEA4 ("SSEA4-CAR") 를 표적으로 한다. 이어서, 유전적으로 변형된 세포, 즉 CAR 발현 세포는 이의 특정 기능, 예를 들어 표적 세포 사멸, 사이토카인 분비 및/또는 증식을 수행한다.
도 1 : SSEA4 를 인식하는 CAR 의 구조
도 2: (a) 전체 SSEA4-CAR VH-링커-VL 의 아미노산 서열 (SEQ ID NO:5 에 상응) 및 (b) 전체 SSEA4-CAR VL-링커-VH 의 아미노산 서열 (SEQ ID NO:6 에 상응)
도 3: 말초 혈액 T 세포의 표면 상의 "중_경 scFv 배향" (SEQ ID NO:5) 및 "경_중 scFv 배향" (SEQ ID NO:6) 키메라 항원 수용체 구조물의 발현
도 4 A, B 및 C: 염증전 사이토카인 IFNγ, IL-2, 및 TNFα 의 분비를 야기하는 SSEA-4-양성 종양 세포를 이용한 자극에 따른 SSEA-4-CAR-의존적 T 세포 활성화
도 5 A 및 B: 형질도입된 T 세포에 의한 SSEA-4-양성 종양 세포의 SSEA-4-CAR-의존적 사멸
놀랍게도, 본 발명자들은, 항원 SSEA4 에 특이적인 CAR 를 발현하는 조작된 면역 세포에 의해 직접적으로 표적화되는 SSEA4 발현 암성 세포는 이들 세포가 성장하지 않고/않거나 즉각 사멸하는 방식으로 영향받음을 밝혀냈다.
제 1 양태에서, 본 발명은 SSEA4 에 특이적인 항원 결합 도메인을 포함하는 키메라 항원 수용체 (CAR) ("SSEA4-CAR") 를 제공한다.
상기 SSEA4-CAR 의 항원 결합 도메인은, 예를 들어 전장 중쇄, Fab 단편, 단쇄 Fv (scFv) 단편, 2가 단쇄 항체 또는 디아바디 (이들 각각은 표적 항원 SSEA4 에 특이적임) 를 포함할 수 있다.
상기 CAR 의 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO:1 및 SEQ ID NO:2 의 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 상기 CAR 의 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO:3 또는 SEQ ID NO:4 의 아미노산 서열을 포함하는 scFv 를 포함할 수 있다. 상기 CAR 는 SEQ ID NO:5 또는 SEQ ID NO:6 의 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
상기 CAR 는 막관통 도메인 및 세포내 신호화 도메인을 포함할 수 있으며, 이때 막관통 도메인은 예를 들어 CD8알파 및/또는 CD28 로부터 유래된 막관통 도메인의 서열을 포함하고, 이때 세포내 신호화 도메인은 예를 들어 하나 이상의 CD28, CD137, OX40 및 CD3제타의 세포내 신호화 도메인으로부터 유래된 서열을 포함한다. 대안적으로는, CAR 는 링커 및/또는 경첩과 같은 추가 부분으로 구성 (도 1 참조) 될 수 있고/있거나, 하기 기술된 바와 같은 이중- 또는 다중-사슬 CAR 로서 구성될 수 있다.
SSEA4-CAR 는 SEQ ID NO:5 또는 SEQ ID NO:6 의 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 한 양태에서, 본 발명의 CAR 는 암의 암성 세포의 적어도 부분모집단이 SSEA4 를 발현하는 그러한 암으로 고통받는 환자에서 암을 치료하기 위한 것이다.
상기 암은 인간 유방암, 인간 신장 세포 암종 (RCC) 및 인간 난소암으로 구성된 군으로부터 선택될 수 있다. 상기 암은 TNBC 일 수 있다.
SSEA4 를 발현하는 암성 세포의 상기 부분모집단은, 상기 암으로 고통받는 대상체에서 모든 암성 세포에서 SSEA4 를 발현하는 세포를 적어도 하나 포함할 수 있다. 바람직하게는, SSEA4 를 발현하는 암성 세포의 상기 부분모집단은 상기 암으로 고통받는 대상체의 모든 암성 세포의 적어도 1%, 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45% 또는 적어도 50% 를 포함할 수 있다.
암의 치료는 표적 분자로서의 SSEA4 와 관련된 임의의 방법을 포함할 수 있다. 그러한 방법은 예를 들어 SSEA4 분자에 결합하는 작용제를 이용한 치료일 수 있고, 이는 SSEA4 를 발현하는 암성 세포의 생존력에 영향을 주고, 바람직하게는 SSEA4 를 발현하는 암성 세포를 사멸시킨다. 예로는 종양용해 바이러스, BiTE®, ADCC 및 면역독소가 있다.
종양용해 바이러스는 바람직하게는 암 세포를 감염시키고 이를 사멸시키는 바이러스이다. 감염된 암 세포가 용해에 의해 파괴되면서, 이들은 잔류하는 종양의 파괴를 돕는 새로운 감염성 바이러스 입자를 방출한다. 종양용해 바이러스는 종양 세포의 직접적인 파괴를 야기할 뿐만 아니라, 숙주의 항-종양 면역 반응을 작극하는 것으로 생각된다. 특정 표적화 (예를 들어 SSEA4 로의 표적화) 는 비-종양 세포로의 진입을 감소시키면서 표적 종양 세포로의 바이러스 외피 단백질을 변형시키는 것을 수반한다.
이중-특이적 T-세포 인게이져(engager) (BiTE®) 는 항암 약물로서 사용되기 위해 조사된 인공 이중특이적 모노클로날 항체의 부류이다. 이들은 숙주의 면역체계를 향하고, 보다 구체적으로는 암 세포에 대항하여 T 세포의 세포독성 활성을 나타낸다.
BiTE 는 약 55 킬로달톤의 단일 펩티드 사슬 상에 4 개의 상이한 유전자로부터 아미노산 서열 또는 상이한 항체의 2 개의 단쇄 가변부 단편 (scFv) 으로 구성되는 융합 단백질이다. scFv 중 하나는 CD3 수용체를 통해 T 세포에 결합하고, 다른 하나는 종양 특이적인 분자 (예를 들어 SSEA4) 를 통해 종양 세포에 결합한다. 다른 이중특이적 항체와 유사하게, 그리고 보통의 모노클로날 항체와는 달리, BiTE® 는 T 세포와 종양 세포 사이에서 연결을 형성한다. 이는 퍼포린 및 그랜자임과 같은 단백질을 생산함으로써 MHC I 또는 공자극 분자의 존재와는 독립적으로 T 세포가 종양 세포 상에서 세포독성 활성을 발휘하게 한다. 이들 단백질은 종양 세포로 진입하고 세포의 세포사멸을 개시한다. 이러한 작용은 종양 세포에 대항하는 T 세포 공격 동안 관찰되는 생리학적 과정을 모방한다. 항체-의존적 세포-매개 세포독성 (ADCC) 은 표적 세포의 표면에 결합된 항체의 존재를 요구하는 면역체계에 의한 공격 기전이다. 항체는 결합 영역 (Fab) 으로 형성되고, 이는 표적 항원 (예를 들어, SSEA4), 및 이들의 표면 상의 Fc 수용체를 통해 면역 세포에 의해 검출될 수 있는 Fc 영역에 결합한다. 이들 Fc 수용체는 자연 살생 세포를 비롯하여 면역체계의 많은 세포의 표면 상에서 발견된다. 자연 살생 세포가 항체로 덮힌 세포를 만나게 되면, Fc 영역은 이들의 Fc 수용체와 상호작용하여, 퍼포린 및 그랜자임 B 의 방출을 야기한다. 이들 2 개의 화학물질은 종양 세포가 프로그래밍된 세포사 (세포사멸) 을 개시하는 것을 야기한다. 이러한 세포 살생 방법을 유도하는 것으로 공지된 항체에는 리툭시마브 (Rituximab), 오파투무마브 (Ofatumumab), 트라스투주마브 (Trastuzumab), 세툭시마브 (Cetuximab) 및 알렘투주마브 (Alemtuzumab) 가 포함된다. 현재 개발중인 제 3 세대 항체는 Fc 수용체의 특정 유형에 보다 높은 친화도를 갖는 변경된 Fc 영역 (FcγRIIIA) 을 갖고, 이는 ADCC 의 비율을 극적으로 증가시킬 수 있다.
면역독소는 독소에 연결된 표적화 부분 (예를 들어 SSEA4 를 표적으로 함) 으로 이루어진 인간이 제조한 단백질이다. 단백질이 그 세포에 결합하는 경우, 이는 내포작용을 통해 섭취되고, 독소가 세포를 사멸시킨다. 이들 키메라 단백질은 통상 독소의 단편에 부착된 변형된 항체 또는 항체 단편으로 제조된다. "표적화 부분" 은 세포, 바람직하게는 특정 유형의 세포 (예를 들어, SSEA4 발현 세포) 에 의해 발현되는 항원에 특이적으로 결합하는 항체의 Fv 부분으로 구성된다. 독소는 통상적으로 박테리아 또는 식물 단백질 유래의 세포독성 단백질이고, 이로부터의 자연 결합 도메인은 Fv 가 독소를 표적 세포 상의 항원으로 향하게 하도록 옮겨진다.
본 발명의 바람직한 실시양태에서, SSEA4 발현 암성 세포는, 본원에 개시된 바와 같은 SSEA4 에 특이적인 키메라 항원 수용체를 발현하는 조작된 세포, 바람직하게는 T 세포에 의해 표적화된다. 이러한 조작된 (T) 세포는 입양 (T) 세포 요법에서 사용될 수 있다.
한 양태에서, 본 발명은 본원에 개시된 바와 같은 항원 SSEA4 에 특이적인 키메라 항원 수용체 (SSEA4-CAR) 를 발현하는 유전적으로 변형된 세포를 포함하는 세포 개체군을 제공한다. 바람직하게는, 항원 SSEA4 에 특이적인 키메라 항원 수용체 (SSEA4-CAR) 를 발현하는 유전적으로 변형된 세포를 포함하는 세포의 상기 개체군은 단리된 세포 개체군이다.
한 양태에서, 본 발명은 면역요법에 사용하기 위한 본원에 개시된 바와 같은 SSEA4-CAR 를 발현하는 조작된 세포의 개체군 또는 단리된 개체군을 제공한다. 면역요법은 암으로 고통받는 대상체에서의 암의 치료를 위한 것일 수 있고, 이때 상기 암의 암성 세포의 적어도 부분모집단은 SSEA4 를 발현한다.
SSEA4 를 발현하는 암성 세포의 상기 부분모집단은 상기 암으로부터 고통받는 대상체에서 모든 암성 세포의 외부에 SSEA4 를 발현하는 세포를 적어도 하나 포함할 수 있다. 바람직하게는 SSEA4 를 발현하는 암성 세포의 상기 부분모집단은 상기 암으로부터 고통받는 대상체의 모든 암성 세포의 적어도 1%, 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45% 또는 적어도 50% 를 포함할 수 있다.
필요한 경우, 조작된 세포의 상기 개체군 또는 단리된 개체군은 상기 면역요법에서 사용되기 전 세포의 치료학적 유효량으로 팽창된다. 상기 암은 인간 유방암, 인간 신장 세포 암종 (RCC) 및 인간 난소암으로 구성된 군으로부터 선택될 수 있다. 상기 암은 TNBC 일 수 있다. 상기 세포는 면역 세포 또는 면역 세포 부분집합, 바람직하게는 T 세포 또는 T 세포 부분집합 또는 NK 세포 또는 NK 세포 부분집합일 수 있다.
한 양태에서 본 발명은, 상기 암을 치료하는데 유효한 본원에 개시된 바와 같은 SSEA-CAR 를 발현하는 조작된 세포를 풍부한 양으로 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 포함하는 암 치료 방법을 제공한다. 암 치료는, 암의 암성 세포의 적어도 부분모집단이 SSEA4 를 발현하는 그러한 암으로부터 고통받는 대상체에서의 치료일 수 있다.
상기 암은 인간 유방암, 인간 신장 세포 암종 (RCC) 및 인간 난소암으로 구성된 군으로부터 선택될 수 있다. 상기 암은 TNBC 일 수 있다. 상기 세포는 면역 세포 또는 면역 세포 부분집합, 바람직하게는 T 세포 또는 T 세포 부분집합 또는 NK 세포 또는 NK 세포 부분집합일 수 있다.
한 양태에서 본 발명은 본원에 개시된 바와 같은 항원 SSEA4 에 특이적인 CAR 를 발현하는 유전적으로 변형된 세포 및 약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 약학 조성물을 제공한다.
상기 약학 조성물은 암으로 고통받는 대상체에서의 암 치료에 사용될 수 있다. 상기 암은 인간 유방암, 인간 신장 세포 암종 (RCC) 및 인간 난소암으로 구성된 군으로부터 선택될 수 있다. 상기 암은 TNBC 일 수 있다.
상기 세포는 면역 세포 또는 면역 세포 부분집합, 바람직하게는 T 세포 또는 T 세포 부분집합 또는 NK 세포 또는 NK 세포 부분집합일 수 있다.
한 양태에서, 본 발명은 본원에 개시된 바와 같은 SSEA-CAR 를 발현하는 유전적으로 변형된 세포 및 약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 약학 조성물, 및 상기 암의 병용 치료를 위한 화학요법제를 제공한다.
한 양태에서, 본 발명은 본원에 개시된 바와 같은 본 발명의 SSEA4-CAR 를 인코딩하는 벡터와 같은 핵산 분자 및 핵산 구조물을 제공한다.
입양 세포 이동은 암 세포를 공격하기 위해 면역 세포-기반, 바람직하게는 T 세포-기반 세포독성 반응을 사용한다. 면역 세포, 바람직하게는 환자의 암에 대해 자연적으로 또는 유전적으로 조작된 반응성을 갖는 T 세포는 생체외 생성되고 이어서 암 환자로 다시 전달된다. 키메라 항원 수용체는 암에 대해 이러한 입양 세포 면역요법에 대한 유망한 접근법을 제공한다. 본 발명의 CAR 는 T 세포 항원 수용체 복합체 제타 사슬, 예를 들어 CD3 제타의 세포내 신호화 도메인에 융합된 항원 결합 도메인을 갖는 세포외 도메인을 포함하도록 조작될 수 있다. 세포외 및 세포내 도메인은 막관통 도메인을 통해 직접 연결될 수 있거나, 세포외 도메인은 막관통 도메인에 융합될 수 있고 세포내 도메인은 또다른 막관통 도메인에 융합될 수 있다. 세포외- 및 세포내 도메인이 별도의 막관통 도메인에 연결되는 경우, 막관통 도메인은 CAR (분할 CAR 또는 다중 사슬 CAR) 의 활성화를 위해 상호작용한다. 조작된 면역 세포, 바람직하게는 본 발명의 T 세포는 CAR 의 항원 결합 특이성을 기초로 한 항원 인식부로 다시 향할 수 있는 본 발명의 CAR 를 발현한다. CAR 의 특이성은 인간 유방암, RCC 및 인간 난소암과 같은 암성 세포 상에서 발현되는 것으로 밝혀진 항원 SSEA4 를 위한 것이다.
일반적으로, CAR 는 항원 결합 도메인, 막관통 도메인 및 세포내 신호화 도메인을 포함하는 세포외 도메인을 포함할 수 있다. 세포외 도메인은 링커에 의해 막관통 도메인에 연결될 수 있다. 세포외 도메인은 또한 신호 펩티드를 포함할 수 있다.
"신호 펩티드" 는 세포 내 단백질 예를 들어 특정 세포소기관 (예컨대 내형질의 망상조직) 및/또는 세포 표면 단백질의 수송 및 현지화에 관련된 펩티드 서열을 지칭한다.
"항원 결합 도메인" 은 항원에 특이적으로 결합하는 CAR 의 영역 (및 이로써 항원을 함유하는 세포를 표적화할 수 있음) 을 지칭한다. 본 발명의 CAR 는 하나 이상 항원 결합 도메인을 포함할 수 있다. 일반적으로, CAR 상의 표적화 영역은 세포외에 존재한다. 항원 결합 도메인은 항체 또는 이의 단편을 포함할 수 있다. 항원 결합 도메인은 예를 들어, 전장 중쇄, Fab 단편, 단쇄 Fv (scFv) 단편, 2가 단쇄 항체 또는 디아바디를 포함할 수 있다.
자연 발생 수용체로부터 애피바디 또는 리간드 결합 도메인과 같은 주어진 항원에 특이적으로 결합하는 임의의 분자는 항원 결합 도메인으로서 사용될 수 있다. 종종 항원 결합 도메인은 scFv 이다. 정상적으로는, scFv 에서 면역글로불린 중쇄 및 경쇄의 가변부 부분은 가요성 링커에 의해 융합되어 scFv 를 형성한다. 그러한 링커는 예를 들어 "(G4/S1)3-링커" 일 수 있다.
일부 예에서, 항원 결합 도메인이 CAR 가 사용될 동일한 종으로부터 유래되면 이점이 있다. 예를 들어, 이를 인간 치료용으로 사용할 계획인 경우, CAR 의 항원 결합 도메인이 인간 항체 또는 인간화 항체 또는 이의 단편을 포함하는 것이 이점이 될 수 있다. 인간 항체 또는 인간화 항체 또는 이의 단편은 당업계에 익히 공지된 다양한 방법에 의해 제조될 수 있다. 본원에 사용되는 바와 같은 "스페이서" 또는 "경첩" 은 항원 결합 도메인과 막관통 도메인 사이에서 존재하는 친수성 영역을 지칭한다. 본 발명의 CAR 는 세포외 스페이서 도메인을 포함할 수 있으나, 이러한 스페이서를 갖지 않는 것도 가능하다. 스페이서는 항체의 Fc 단편 또는 이의 단편, 항체의 경첩 영역 또는 이의 단편, 항체의 CH2 또는 CH3 영역, 보조 단백질, 인공 스페이서 서열 또는 이들의 조합을 포함할 수 있다. 스페이서의 현저한 예로는 CD8알파 경첩이 있다.
CAR 의 막관통 도메인은 그러한 도메인을 위한 임의의 원하는 자연 또는 합성 원천으로부터 유래될 수 있다. 원천이 자연적인 경우, 도메인은 임의의 막결합 또는 막관통 단백질로부터 유래될 수 있다. 막관통 도메인은 예를 들어 CD8알파 또는 CD28 로부터 유래될 수 있다.
본 발명의 CAR 의 세포질 도메인 또는 세포내 신호화 도메인은 CAR 가 발현되는 적어도 하나의 면역 세포의 정상적인 효과기 기능의 활성화를 책임진다. "효과기 기능" 이란 세포의 특화된 기능을 의미하며, 예를 들어 T 세포에서 효과기 기능은 사이토카인의 분비를 포함하는 세포용해 활성 또는 보조 활성일 수 있다. 세포내 신호화 도메인은 효과기 기능 신호를 형질도입하고 본 발명의 CAR 를 발현하는 세포를 향해 특화된 기능을 수행하는 단백질 부분을 지칭한다. 세포내 신호화 도메인은 효과기 기능 신호를 형질도입하는데 충분한 주어진 단백질의 세포내 신호화 도메인의 임의의 완전한 또는 말단이 잘린 부분을 포함할 수 있다.
CAR 에 사용되기 위한 세포내 신호화 도메인의 현저한 예에는 항원 수용체 맞물림에 따른 신호 형질도입을 개시하기 위해 일제히 작용하는 T 세포 수용체 (TCR) 및 공-수용체의 세포질 서열이 포함된다.
일반적으로, T 세포 활성화는, 첫번째로는 TCR 을 통한 항원-의존적 1차 활성화를 개시하는 것 (1차 세포질 신호화 서열) 및 두번째로는 항원-독립적인 방식으로 2차 또는 공자극 신호를 제공하도록 작용하는 것 (2차 세포질 신호화 서열) 의 두 부류의 별도의 세포질 신호화 서열에 의해 중재될 수 있다.
자극 방식으로 작용하는 1차 세포질 신호화 서열은 ITAM (면역수용체 타이로신-기반 활성화 모티프 신호화 모티프) 를 함유할 수 있다.
CAR 에서 종종 사용되는 1차 세포질 신호화 서열을 함유하는 ITAM 의 예에는 TCR 제타, FcR 감마, FcR 베타, CD3 감마, CD3 델타, CD3 엡실론, CD5, CD22, CD79a, CD79b, 및 CD66d 로부터 유래하는 것들이 있다. 가장 유망한 것은 CD3 제타로부터 유래되는 서열이다.
CAR 의 세포질 도메인은 그 자체로서 CD3-제타 신호화 도메인을 포함하는 것으로 설계될 수 있거나 임의의 다른 원하는 세포질 도메인(들)과 조합되도록 설계될 수 있다. CAR 의 세포질 도메인은 CD3 제타 사슬 부분 및 공자극 신호화 영역을 포함할 수 있다. 공자극 신호화 영역은 공자극 분자의 세포내 도메인을 포함하는 CAR 의 일부를 지칭한다. 공자극 분자는 항원에 대란 림프구의 효율적인 반응에 요구되는 항원 수용체 이외의 세포 표면 분자 또는 이들의 리간드이다. 공자극 분자의 예에는 CD27, CD28, 4-1BB (CD137), OX40, CD30, CD40, PD-1, ICOS, 림프구 기능-연계된 항원-1 (LFA-1), CD2, CD7, LIGHT, NKG2C, B7-H3 이 있다.
CAR 의 세포질 신호화 부분 내의 세포질 신호화 서열은 무작위 또는 특정 순서로 서로 연결될 수 있다. 짧은 올리고- 또는 폴리펩티드 링커 (이는 바람직하게는 2 내지 10 개의 아미노산 길이임) 는 연결을 형성할 수 있다. 유망한 링커는 글리신-세린 더블렛이다.
예로서, 세포질 도메인은 CD3-제타의 신호화 도메인 및 CD28 의 신호화 도메인을 포함할 수 있다. 또다른 예로서, 세포질 도메인은 CD3-제타의 신호화 도메인 및 CD27 의 신호화 도메인을 포함할 수 있다. 추가 예로서, 세포질 도메인은 CD3-제타의 신호화 도메인, CD28 의 신호화 도메인, 및 CD27 의 신호화 도메인을 포함할 수 있다.
본 발명의 CAR 는 본원에 기술된 바와 같은 상기 언급된 도메인의 임의의 부분 또는 상기 언급된 도메인 부분을 포함하도록 설계될 수 있다. 항원 결합 도메인에 의해 매개되는 본 발명의 CAR 의 특이성은 항원 SSEA4 를 위한 것이고, 기능적 CAR 에 필요한 모든 다른 도메인은 상기 언급되거나 당업자에게 익히 공지되어 있는 옵션으로부터 선택될 수 있다. 예시적인 본 발명의 CAR 는 SEQ ID NO:5 또는 SEQ ID NO:6 의 아미노산 서열을 가질 수 있다.
도 3 은 비-변형된 T 림프구를 포함하는 말초 혈액 T 세포의 표면 상에서의 키메라 항원 수용체 구조물 "중_경 scFv 배향" (SEQ ID NO:5) 및 "경_중 scFv 배향" (SEQ ID NO:6) 의 발현을 나타낸다. 자연 Pan T 세포는 말초 혈액 단핵 세포 (PBMC) 로부터 단리되었고 자극성 매트릭스 (막스(MACS)® GMP 트랜스액트 (TransAct) CD3/CD28 키트; 밀테니 바이오텍 게엠베하 (Miltenyi Biotec GmbH)), 및 IL-2 의 존재 하에 배양되었다. 영구적인 수용체 발현을 위해, 림프구는 2 의 감염 다중도 (MOI) 를 갖는 렌티바이러스로 형질도입되었다. 표면 발현을 IgG 스페이서 도메인으로 향하는 항체를 이용하여 유세포분석 측정하였다.
도 4 는 SSEA-4-양성 종양 세포 (NTERA2) 를 이용한 자극에 이어서, 염증전 사이토카인 IL-2 (도 4A), TNF알파 (도 4B), 및 IFN감마 (도 4C) 의 CAR-유도된 분비를 도시한다. 경 _중 scFv- 및 CH2CH3 스페이서 도메인-포함 수용체 구조물에 대한 실험 결과가 나타나 있다. 1*105 CAR+ T 세포를 24 시간 동안 1:2 비율로 종양 세포와 공생배양하고 이후 IL-2, TNF알파, 및 IFN감마의 사이토카인 수준을 막스플렉스(MACSPlex) 기술을 사용하여 측정하였다 (밀테니 바이오텍 게엠베하; 막스플렉스 검정은 단일 샘플에서 가용성 분석물의 농도를 측정하기 위해 설계된다. 분석은 막스플렉스 (MPx) 캡쳐 비드 (Capture Bead) 를 기반으로 한 것이며, 이는 규정된 형광 특성을 나타내고 표준 유세포분석 기술을 사용하여 동정될 수 있다. 막스플렉스 사이토카인 12 키트 (인간) 및 막스플렉스 사이토카인 10 키트 (마우스) 내의 MPx 캡쳐 비드는 다양한 형광 라벨링된 비드 집단의 칵테일을 함유하고, 각각은 샘플 내의 각 사이토카인 중 하나와 반응하는 특정 항체로 코팅되어 있다.). 동시에, CAR+ T 세포는 키메라 수용체의 백그라운드 활성을 결정하기 위해 항원 자극의 부자 해에 배양되었다. 종양 세포를 갖는 비-변형된 T 세포 및 종양 세포를 갖지 않는 비-변형된 T 세포의 배양 제어는 각각 CAR-매개 림프구 반응의 특이성을 평가하기 위해 제공된다. 실험은 2 개의 공여체로 수행되고 이중으로 수행되고 평균 및 표준 편차를 측정하였다. 세로좌표 축은 공생배양 상청액에서 측정된 바와 같은 각각의 사이토카인의 농도 (pg/mL) 를 나타낸다. 항원 접촉 후, 둘 모두의 공여체의 유전자이식 T 세포는 IL-2 (도 4A), TNF알파 (도 4B), 및 IFN감마 (도 4C) 에서 10배 이상 증가된 분비를 나타내는 반면, 비-변형된 T 세포와의 공생배양은 오직 무시할만한 양의 사이토카인 생산을 나타낸다. 또한, 시험 샘플에서 (이때 항-SSEA-4-CAR T 세포가 종양 세포 없이 배양됨), 사이토카인 생산은 "백그라운드 노이즈" 이내에 있다. 따라서, 이들 결과는 항원-의존적 방식 및 CAR-특이적인 방식으로 T 세포를 활성화시키는 개발된 키메라 수용체의 기능성을 증명한다.
도 5 는 항원 자극에 따른 변형된 CD8+ T 세포의 CAR-유도된 세포용해 활성의 평가에 대한 세포독성 검정 결곽를 나타낸다. 경 _중 scFv- 및 CH2CH3 스페이서 도메인-포함 수용체 구조물에 대한 실험 결과가 나타나 있다. 효과기 세포 (CD8+ CAR+ T 세포) 를 10:1, 5:1, 2.5:1, 1:1, 및 0.5:1 의 비율로 1*104 형광 라벨링된 SSEA-4-양성 종양 세포 (NTERA2) 로 플레이팅한다. 공생배양 24 시간 후, 각 세포에 대한 유세포분석 및 세포독성 효율을 평가함으로써 생존가능한 종양 세포의 양을 측정하였다. 특이성 비교를 위해, 비-변형된 T 세포와의 공생배양을 사용하였다. 2 개의 공여체로 시험을 수행하고 (도 5A: 공여체 #7; 도 5B: 공여체 #8), 4중으로 수행하고, 평균 및 표준편차를 측정하였다.
T 세포의 부재 하에 (0%) 인큐베이션된 NTERA2 표적 세포와 비교한 세포독성의 백분율로서 데이터를 나타낸다. 둘 모두의 공여체 #7 (도 5A) 및 공여체 #8 (도 5B) 에 대해, CAR+ T 세포에 의한 선택적 종양 세포 사멸은 CAR 활성화가 사이토카인 분비를 촉진할 뿐만 아니라, 세포독성 활성을 촉진하는 것으로 나타남이 관찰될 수 있다.
실시양태
본 발명은 SSEA4 에 특이적인 CAR 의 아미노산 서열을 인코딩하는 서열을 포함하는 핵산 (DNA 또는 RNA) 구조물을 또한 포함한다.
본 발명의 한 실시양태에서, SSEA4 에 특이적인 CAR 를 인코딩하는 DNA 구조물 (벡터, 플라스미드) 이 생성된다. SSEA4 에 특이적인 항원 결합 도메인을 인코딩하는 핵산 서열은 적어도 막관통 도메인을 인코딩하는 핵산 서열 및 후속적으로 세포내 도메인을 인코딩하는 핵산 서열에 융합된다. 이러한 발현 벡터의 구축은 당업계에 익히 공지되어 있는 재조합 방법에 의해 수행될 수 있다. 대안적으로는, 핵산 서열은 합성적으로 생산될 수 있다.
본 발명의 한 실시양태에서, 본 발명의 CAR 를 발현하는 세포가 생성된다. 본 발명의 CAR 를 인코딩하는 DNA 구조물은 당업계에 익히 공지되어 있는 방법 (예를 들어, 바이러스-기반 시스템, 물리적 방법, 생물학적 방법, 화학적 방법) 에 의해 숙주 세포로 형질감염되거나 형질도입될 수 있다. 숙주 세포 에서, 본 발명의 CAR 를 인코딩하는 핵산을 통합하기 위해 사용되는 방법, 바람직하게는 안정적으로 통합하기 위해 사용되는 방법에 상관없이, 결과적으로 숙주 세포는 SSEA4 에 특이적인 CAR 를 발현한다.
본 발명의 한 실시양태에서, 항원 SSEA4 에 특이적인 CAR 는 면역 세포 또는 면역 세포 부분집합에서 발현된다.
본 발명의 한 실시양태에서, 항원 SSEA4 에 특이적인 CAR 는 T 세포 또는 T 세포 부분집합에서 발현된다.
본 발명의 한 실시양태에서, 항원 SSEA4 에 특이적인 CAR 는 NK 세포 또는 NK 세포 부분집합에서 발현된다.
본 발명의 한 실시양태에서, SSEA4 에 특이적인 CAR 를 발현하는 ("SSEA4-CAR") 조작된 세포는, 당업계에 익히 공지되어 있는 방법, 예를 들어 형광 기반 분리 기술, 예컨대 팍스(FACS)® 또는 자성 세포 분리 방법, 예컨대 막스(MACS)® 에 의해 비-형질감염된/형질도입된 세포로부터 그러한 조작된 SSEA4-CAR 세포를 생성하는 형질감염/형질도입 과정 이후 단리된다 (풍부화되거나 분리된다).
본 발명의 실시양태에서, 면역 세포, 바람직하게는 T 세포의 원천은 대상체로부터 수득된다. 면역 세포, 바람직하게는 T 세포는 다양한 원천, 예컨대 말초 혈액 단핵 세포 (PMBC), 골수, 림프절 조직, 제대혈 또는 흉선 조직으로부터 수득될 수 있다. 이들 세포의 풍부화를 위한 당업계에 익히 공지되어 있는 방법, 예컨대 피콜(Ficoll)™ 또는 퍼콜(PERCOLL)™ 구배 또는 양성/음성 선택 기술, 예컨대 형광 분류 (예를 들어, 팍스소트(FCASsort)) 또는 자성 분류 (예를 들어 막스®) 를 통한 원심분리가 사용될 수 있다.
한 실시양태에서 대상체의 혈액 샘플의 T 세포는 자성적으로 라벨링되는데, 예를 들어 CD4 및 CD8 각각에 특이적인 항체에 커플링되고, 세척되고, 자성적으로 풍부화되고 수집된 자성 비드로 라벨링된다. 이후, 이들 T 세포는 이들 세포 표면 상에서 SSEA4-CAR 를 발현하기 위해 조작될 수 있다.
본 발명의 한 실시양태에서, 유전적 변형 전 또는 후에 SSEA4-CAR 를 발현하는 단리된/풍부화된 조작 T 세포는 활성화되고 당업계에 익히 공지되어 있는 방법 예를 들어 항-CD3/항-CD28 비드 또는 항-CD3/항-CD28 나노매트릭스 (유럽 특허 제 EP2711418A1 호) 를 이용한 폴리클로날 자극을 일반적으로 사용하여 조작된 T 세포의 양을 증가시키도록 팽창될 수 있다. 바람직하게는, 조작된 T 세포의 상기 양은 치료학적 유효량으로 증가된다.
본 발명의 한 실시양태에서, 본 발명의 CAR 를 발현하는 세포가 생성된다. 본 발명의 CAR 를 인코딩하는 RNA 는 당업계에 익히 공지된 방법 (예를 들어 바이러스-기반 시스템, 물리적 방법, 생물학적 방법, 화학적 방법) 에 의해 숙주 세포로 형질감염되거나 또는 형질도입될 수 있다. 일반적으로, 그러한 "RNA-조작된 세포" 는 국제공개공보 제 WO2013/040557 호에 상세히 개시되어 있다. 본 발명의 CAR 를 인코딩하는 RNA 를 숙주 세포에서 통합하는데 사용되는 방법에 상관없이, 결과적으로 숙주 세포는 SSEA4 에 특이적인 CAR 를 발현한다. "RNA-조작된 세포" 를 사용하는 것은 세포에서 한정된 시간 동안 CAR 가 발현된다 (일시적인 발현) 는 점을 야기한다.
본 발명의 한 실시양태에서, SSEA4-CAR 를 발현하는 유전적으로 변형된 세포, 바람직하게는 T 세포는 폐쇄 세포 배양 시스템에서 자동적으로 생성된다. 유전적으로 변형된 세포, 바람직하게는 T 세포, T 세포 부분집합 또는 T 세포 전구세포의 생성 방법은 하기 단계를 포함한다:
a) 세포 샘플을 제공하는 단계,
b) 원심분리에 의한 세포 샘플 제조 단계,
c) 세포, 바람직하게는 T 세포, T 세포 부분집합 또는 T 세포 전구세포의 자성 분리 단계,
d) 조절제를 사용한 풍부화된 세포, 바람직하게는 T 세포, T 세포 부분집합 또는 T 세포 전구세포의 활성화 단계,
e) 세포, 바람직하게는 T 세포, T 세포 부분집합 또는 T 세포 전구세포가 SSEA4-CAR 를 발현하도록 유전적으로 변형시키는 단계,
f) 유전적으로 변형된 T 세포, T 세포 부분집합 또는 T 세포 전구세포의 배양 챔버에서의 팽창 단계, 및
g) 배양된 세포, 바람직하게는 T 세포, T 세포 부분집합 또는 T 세포 전구세포의 세척 단계.
모든 이들 단계들은 폐쇄된 무균 시스템에서 수행될 수 있다.
본 방법은, 유전자 변형된 세포, 바람직하게는 T 세포, T 세포 부분집합 또는 T 세포 전구세포 (이때, 풍부화된 세포, 바람직하게는 T 세포, T 세포 부분집합 또는 T 세포 전구세포는 바이러스성 및/또는 비-바이러스성 벡터를 사용함으로써 유전자 변형됨) 의 제조에 특히 적합하다.
이들 단계들 중 임의의 단계는 배가되거나, 생략되거나 또는 상이한 순서로 일어날 수 있다.
본 발명의 실시양태에서, 조절제는 아고니스트 항체 및/또는 사이토카인으로부터 선택된다.
본 발명의 실시양태에서, 상기 자동화 공정에 있어서, 유전자-변형된 세포, 바람직하게는 T 세포, T 세포 부분집합 또는 T 세포 전구세포는, 최종 세포 산물에서 유전자-변형된 세포, 바람직하게는 T 세포, T 세포 부분집합 또는 T 세포 전구세포의 보다 높은 빈도를 수득하기 위해 배양 전 또는 배양 후에 세포의 자성 라벨링 및 자성 분리에 의해 풍부화된다.
세포 변형을 위한 폐쇄되고 무균의 시스템으로서, 완전히 자동화된 세포 가공 장치 클리니맥스 프로디지(CliniMACS Prodigy)® 및 연계된 튜빙 세트 (밀테니 바이오텍 게엠베하, 독일 소재) 가 사용될 수 있다 (국제공개공보 제 WO2009/072003 호). 이러한 폐쇄된 시스템은 거의 모든 임의의 종류의 세포 산물의 GMP-등급 가공 요건을 충족하고 클린룸 요건을 감소시킬 수 있고, 기술 이전을 향상시키고 세포 제조 공정을 조화시킬 수 있다. 세포성 치료제의 제조 과정을 완전히 자동화하고 표준화하는 것으로 발전되어 왔다. 이 장치는 절혈구 감소 및 혈장 수확, 자성 분리, 세포 활성화, 세포 변형 (형질도입), 세포 배양 및 최종 산물 제형화를 포함하는 샘플 적재, 세포 세척, 밀도-기반 세포 분리를 수행할 수 있다. 따라서, 복잡한 요구되는 생물학적 과정을 재생산하는 밀폐되고, 자동화되고 안전한 GMP 준수 작업흐름으로 공정 모듈 ("단계") 의 유연한 통합을 가능하게 한다.
본 발명의 한 실시양태에서, 본 발명의 SSEA4-CAR 는 비정상적인 SSEA4 발현과 연계된 질병, 장애 또는 병태를 갖는 대상체의 치료에 사용된다.
본 발명의 한 실시양태에서, 본 발명의 SSEA4-CAR 는 인간 유방암, RCC 및 인간 난소암과 같은 암으로 고통받는 대상체에서의 암 치료에 사용되기 위한 것이며, 이때 상기 암의 암성 세포의 적어도 부분모집단은 SSEA4 를 발현한다. 대상체의 면역 세포, 예를 들어 T 세포는 단리된다. 대상체는 상기 암으로부터 고통받는 대상체일 수 있거나, 또는 건강한 대상체일 수 있다. 이들 세포는 SSEA4-CAR 를 발현하도록 생체외 또는 생체내에서 유전적으로 변형된다. 이들 조작된 세포는 생 체외 또는 생체내에서 활성화되고 팽창될 수 있다. 세포성 요법에서, 이들 조작된 세포는 이를 필요로 하는 수용자에 융합된다. 이들 세포는 약학 조성물 (상기 세포 + 약학적으로 허용가능한 담체) 일 수 있다. 융합된 세포는 수용자에서 SSEA4 를 발현하는 암성 세포를 사멸시킬 수 있다 (또는 적어도 이의 성장을 정지시킬 수 있다). 수용자는 이로부터 세포가 수득되는 동일한 대상체 (자가유래 세포 요법) 일 수 있거나 또는 동일한 종의 또다른 대상체 (동종이형 세포 요법) 일 수 있다.
본 발명의 한 실시양태에서, 암으로 고통받는 대상체는 람파마이신 또는 PD-1/PD-L1 또는 CTLA4 신호화를 차단하는 작용제와 같은 (이에 한정되지는 않음) 면역조절제와 함께 본 발명의 약학 조성물로 치료될 수 있다.
본 발명의 한 실시양태에서, SSEA4 를 발현하는 암성 세포가 대상체의 암성 세포의 단지 부분모집단일 수 있다는 점으로 인해, 대상체는 화학요법으로 추가 치료될 수 있다. 화학요법제는 당업계에 익히 공지된 암을 치료하는데 적합하다.
본 발명의 또다른 실시양태에서, 상기 암으로 고통받는 대상체는 화학요법으로 치료하는 대신 항체 중재된 Her2 표적화와 같은 (이에 한정되지는 않음) 추가 표적화 요법으로 치료될 수 있다. 대안적으로는, 대상체는 또한 화학요법으로 치료될 수 있다.
암을 갖는 개체에서 화학요법에 저항성인 것에 연계된 예후를 측정하는 방법은 유럽 특허 제 EP14305477.3 호에 개시되어 있으며, 이 방법은 하기 단계를 포함한다: a) 시험될 샘플을 제공하는 단계, 및 b) 시험 샘플에서 SSEA4 의 발현을 검출하는 단계로서, 이때 시험 샘플에서의 SSEA4 의 발현은 불량한 예후의 지표임. 따라서, 본 발명의 한 실시양태에서, 암으로 고통받는 대상체는 본 발명의 조작된 세포를 이용한 치료 전에 암의 종류에 대해 분석된다 (진단이 이루어짐). 암이 SSEA4 를 발현하는 암성 세포의 적어도 부분모집단을 포함하는 것으로 암이 분석되는 경우, SSEA4-CAR 조작된 세포를 이용한 상기 암으로부터 고통받는 대상체의 치료는 유망하고 권장할 만하다. 그러나, 암이 SSEA4 를 발현하는 암성 세포를 갖지 않는 그러한 암으로 고통받는 대상체도 또한 예를 들어 화학요법 치료와 같은 암으로 고통받는 대상체의 치료 동안 SSEA4 를 발현하는 암성 세포의 생성을 예방하고 방지하는 척도로서 본원에 개시된 바와 같은 본 발명의 SSEA4-CAR 조작된 세포를 이용하여 치료될 수 있다.
본 발명의 한 실시양태에서, SSEA4-CAR 발현 세포는 상기 개시된 바와 같은 세포성 요법으로서 암으로 고통받는 대상체에 적용되나, 제 2 의 활성화 CAR 와 조합 적용되고, 이는 또한 동일한 조작된 세포 상에서 발현되고, 둘 모두의 CAR 를 발현하는 조작된 세포의 특이성을 증가시키기 위한 추가 에피토프를 인지한다. 이러한 에피토프는 세포외 매트릭스의 일부 또는 가용성 성분에 결합된 막일 수 있다. 본 발명의 한 실시양태에서, SSEA4-CAR 발현 세포는 상기 개시된 바와 같은 세포성 요법으로서 암으로 고통받는 대상체에 적용되나, 제 2 의 활성화 CAR 와 조합 적용되고, 이는 또한 동일한 조작된 세포 상에서 발현되고, 둘 모두의 CAR 를 발현하는 조작된 세포의 특이성을 증가시키기 위해 SSEA4 를 발현하는 암성 세포 상에서 추가 에피토프를 인지한다. 이러한 에피토프는 세포외 매트릭스의 일부 또는 가용성 성분에 결합된 막일 수 있다.
본 발명의 한 실시양태에서, SSEA4-CAR 발현 세포는 상기 개시된 바와 같은 세포성 요법으로서 암으로 고통받는 대상체에 적용되나, 제 2 의 저해성 CAR 와 조합 적용되고, 이는 또한 동일한 조작된 세포 상에서 발현되고, 둘 모두의 CAR 를 발현하는 조작된 세포의 특이성을 증가시키기 위한 추가 에피토프를 인지한다. 이러한 에피토프는 세포외 매트릭스의 일부 또는 가용성 성분에 결합된 막일 수 있다.
면역 세포, 바람직하게는 SSEA4-CAR 를 발현하도록 조작된 T 세포는 단독으로, 또는 희석제 및/또는 IL-2 또는 기타 사이토카인 또는 세포 개체군과 같은 기타 성분과 조합되어 약학 조성물로서 투여될 수 있다. 간단히 말하면, 본 발명의 약학 조성물은 본원에 기술된 바와 같은 유전적으로 변형된 세포의 세포 개체군을 하나 이상의 약학적으로 또는 생리학적으로 허용가능한 담체, 희석제 또는 부형제와 조합하여 포함할 수 있다. 그러한 조성물은 완충제, 예컨대 중성 완충 염수, 포스페이트 완충 염수 등; 탄수화물, 예컨대 글루코오스, 만노오스, 수크로오스 또는 덱스트란, 만니톨; 단백질; 폴리펩티드 또는 아미노산 예컨대 글리신; 항산화제; 킬레이팅제, 예컨대 EDTA 또는 글루타티온; 아쥬반트 (예를 들어, 수산화알루미늄); 및 방부제를 포함할 수 있다.
바람직하게는, 본 발명의 조성물은 정맥내 투여를 위해 제형화된다. 세포 조성물의 대상체로의 투여는 당업계에 공지된 임의의 편리한 방법으로 수행될 수 있다.
본 발명의 약학 조성물은 치료될 질병에 적절한 방식으로 투여될 수 있다. 적절한 용량은 임상 시험에 의해 결정될 수 있다. 그러나, 투여의 양 및 빈도는 또한 환자의 병태, 환자 질병의 유형 및 중증도와 같은 인자에 의해 영향받고 결정될 것이다.
면역 세포, 바람직하게는 본원에 개시된 T 세포를 포함하는 약학 조성물은 104 내지 109 세포/체중kg, 바람직하게는 105 내지 106 세포/체중kg 의 용량으로 투여될 수 있다. 또한, 세포 조성물은 이들 용량으로 수회 투여될 수 있다. 세포 조성물은 종양, 림프절 또는 감염 부위에 직접 주입될 수 있다.
세포는 활성화되고 당업계에 공지된 방법을 사용하여 치료학적 유효량으로 팽창될 수 있다.
본 발명의 세포는 예를 들어 화학요법, 방사선, 면역억제제, 항체 또는 항체 요법과 병용될 수 있다.
정의
달리 정의되지 않는 한, 본원에 사용되는 기술적 용어 및 과학적인 용어는 본 발명이 속하는 분야의 당업자에게 통상 이해되는 바와 동일한 의미를 갖는다.
용어 "화학요법에 저항성인" 이란, 암으로 고통받는 대상체의 암성 세포 중 일부 (적어도 하나의 세포) 가 화학요법 치료의 의도된 결과에 저항성이 있음을 의미한다.
용어 "종양" 은 의학적으로 신생물로서 공지된 것이다. 모든 종양이 암성은 아니며; 양성 종양은 인근 조직에 침입하지 않고 몸 전체에 퍼지지 않는다.
용어 "암" 은 의학적으로 악성 신생물로서 공지된 것이다. 암은 조절되지 않는 세포 성장과 관련된 폭넓은 질병군이다. 암에서, 세포 (암성 세포) 는 제어되지 않게 분열하고 성장하고, 악성 종양을 형성하고, 인근 신체 기관에 침입한다. 또한 암은 림프계 또는 혈류를 통해 보다 먼 거리의 신체 기관까지 퍼질 수 있다. 인간에게 영향을 주는 200 가지가 넘는 공지된 상이한 암이 존재한다.
용어 "화학요법" 또는 "화학요법 치료" 는 표준화된 섭생의 일부로서 하나 이상의 세포독성의 항-신생물 약물 ("화학요법제" 또는 "화학요법 약물") 을 이용하여 암 (암성 세포) 을 치료하는 것을 지칭한다. 화학요법은 치유에 전념하거나 또는 생명 연장을 목적으로 하거나 또는 단지 증상만 완화시키는 목적으로 제공될 수 있다. 종종 방사선 요법, 수술 및/또는 고체온증 요법과 같은 기타 암 치료와 함께 사용된다. 전통적인 화학요법제는 대부분의 암 세포의 주된 특성 중 하나인 신속하게 분열하는 세포를 사멸시킴으로써 작용한다. 이는 정상 환경 하에 신속하게 분열하는 세포 (즉: 골수, 소화관 및 모낭 내 세포) 에도 해를 끼칠 수 있음을 의미한다. 이는 화학요법의 가장 통상적인 부작용을 초래한다: 골수억제 (혈액 세포의 생산 감소, 따라서 또한 면역억제), 점막염 (소화관의 내벽의 염증), 및 탈모 (모발 손실).
일부 신규한 항암 약물 (에를 들어, 본 발명의 것과 유사한 다양한 모노클로날 항체 또는 조작된 세포) 은 무차별적인 세포독성은 아니며, 오히려 암 세포에서 비정상적으로 발현되는 표적 단백질 및 이의 성장에 필수적인 것에 세포독성이다. 그러한 치료는 종종 "표적화 요법" 으로 지칭되고 (전형적인 화학요법과는 거리가 있음) 종종 항-신생물 치료 섭생에서 전통적인 화학요법제와 함께 사용된다.
전형적인 화학요법 약물의 유형에서 본원에 사용되는 바와 같은 용어 "화학요법 약물" 및 "화학요법" 은 하기를 지칭한다:
알킬화제: 알킬화제는 오늘날 사용되는 화학요법 중 가장 오래된 군이다. 이들은 단백질, RNA 및 DNA 를 포함하는 많은 분자를 알킬화하는 이들의 능력으로 인해 이러한 명칭으로 불린다. 알킬기를 통해 DNA 또는 RNA 에 공유 결합하는 이러한 능력은 이들의 항암 효과에 대한 1차 원인이다. 이는 세포사멸이라 지칭되는 프로그램된 세포사의 형태를 야기한다. 알킬화제는 세포 주기에서 임의의 시점에서 작용할 것이고 따라서 세포 주기-독립적인 약물로서 공지되어 있다. 이러한 이유로, 세포 상의 결과는 용량 의존적이고; 사멸하는 세포의 분획은 약물의 용량에 직접 비례한다. 알킬화제의 하위유형에는 질소 머스타드, 니트로소 요소, 테트라진, 아지리딘, 시스플라틴 및 유도체, 및 비-전통적인 알킬화제가 있다. 질소 머스타드에는 메클로르에타민, 시클로포스파미드, 멜팔란, 클로르암부실, 이포스파미드 및 부술판이 포함된다. 니트로소 요소에는 N-니트로소-N-메틸우레아 (MNU), 카르무스틴 (BCNU), 로무스틴 (CCNU) 및 세무스틴 (MeCCNU), 포테무스틴 및 스트렙토조토신이 포함된다. 테트라진에는 다카르바진, 미토졸로미드 및 테모졸로미드가 포함된다. 아지리딘에는 티오테파, 마이토마이신 및 디아지쿠온 (AZQ) 이 포함된다. 시스플라틴 및 유도체에는 시스플라틴, 카르보플라틴 및 옥살리플라틴이 포함된다. 이들은 생물학적으로 중요한 분자에서 아미노, 카르복실, 술프히드릴 및 포스페이트 기와 공유 결합을 형성함으로써 세포 기능을 손상시킨다. 비-전통적인 알킬화제에는 프로카르바진 및 헥사메틸멜라민이 포함된다. 마포스파미데이스안 옥사자포스포린 (시클로포스파미드-유사) 알킬화제가 화학요법 약물로서 연구중에 있다.
항-대사산물: 본원에 사용되는 바와 같은 용어 "항-대사산물" 및 "DNA 합성 및 전사 저해제" 는 상호교환적 의미를 갖고 DNA 및 RNA 합성을 지연시키는 분자군을 정의한다. 이들 중 많은 것이 DNA 및 RNA 의 빌딩 블록과 유사한 구조를 갖는다. 항-대사산물은 핵염기 또는 뉴클레오시드 중 하나와 유사하나, 변경된 화학기를 갖는다. 이들 약물은 DNA 합성에 요구되는 효소를 차단하거나 DNA 또는 RNA 에 혼입됨으로써 약물 효과를 발휘한다. DNA 합성에 관련된 효소를 저해함으로써 이들은 유사분열을 방지하는데, DNA 가 그 자체를 복제할 수 없기 때문이다. 또한, 분자의 DNA 로의 오편입 후, DNA 손상이 일어나고 프로그램된 세포사 (세포사멸) 이 유도될 수 있다. 알킬화제와 달리, 항-대사산물은 세포 주기 의존적이다. 이는, 이들이 세포 주기의 오직 특정 부분 동안만 작업함 (이 경우, S-단계 (DNA 합성 단계)) 을 의미한다. 이러한 이유로, 특정 용량으로 안정기가 되고 비례하여 용량이 증가한다고 더 이상의 세포사멸이 일어나지 않는다. 항-대사산물의 하위유형에는 항-폴레이트, 플루오로피리미딘, 데옥시뉴클레오시드 유사체 및 티오퓨린이 있다. 항-폴레이트에는 메토트렉세이트 및 페메트렉세드가 포함된다. 플루오로피리미딘에는 플루오로우라실 및 카페시타빈이 포함된다. 플루오로피리미딘에는 플루오로우라실 및 카페시타빈이 포함된다. 플루오로우라실은 적어도 2 개의 활성 산물 (5-플루오로우리딘 모노포스페이트 (FUMP) 및 5-플루오로-2'-데옥시우리딘 5'-포스페이트 (fdUMP)) 을 형성하기 위해 세포에서 대사되는 핵염기 유사체이다. FUMP 는 RNA 로 혼입되고 fdUMP 는 티미딜레이트 신타아제 효소를 저해하고; 이들 둘 도무는 세포사를 야기한다. 카페시타빈은 활성 약물을 생산하기 위해 세포에서 분해된 5-플루오로우라실의 전구약물이다. 데옥시뉴클레오시드 유사체에는 시타라빈, 겜시타빈, 데시타빈, 비다자, 플루다라빈, 넬라라빈, 클라드리빈, 클로파라빈 및 펜토스타틴이 포함된다. 티오퓨린에는 티오구아닌 및 메르캅토퓨린이 포함된다.
항-미세소관 작용제: 항-미세소관 작용제는 미세소관 기능을 막음으로써 세포 분열을 차단하는 식물-유래 화학물질이다. 빈카 알카로이드 및 탁산은 항-미세소관 작용제의 2 개의 주요 군이다. 빈카 알카로이드는 미세소관의 형성을 방지하는 반면, 탁산은 미세소관 분해를 방지한다. 그렇게 함으로써, 이들은 암 세포가 유사분열을 완료하는 것을 방지한다. 이에 따라, 세포 주기 정지가 일어나고, 이는 프로그램된 세포사 (세포사멸) 를 유도한다. 빈카 알카로이드는 매일초 (Madagascar periwinkle) 의 칸타란투스로세우스 (Catharanthusroseus) 로부터 유래된 것이다. 탄산은 천연이며 반-합성 약물이다. 이들 부류의 첫번째 약물인 파클리탁셀은 본래 주목 (Yew tree) 의 탁수스브레비폴리아 (Taxusbrevifolia) 로부터 추출된 것이였다. 이제, 이 약물 및 이 부류에서 또다른 도세탁셀은 또다른 주목의 나무껍질에서 발견된 화학물질인 탁수스바카타 (Taxusbaccata) 로부터 반-합성적으로 생산된다. 이들 약물은 미세소관 안정도를 촉진하며, 이들의 분해를 방지한다. 도세탁셀은 S-단계 동안 이의 효과를 발휘한다.
국소이성화효소 저해제: 국소이성화효소 저해제는 2 가지 효소 (국소이성화효소 I 및 국소이성화효소 II) 의 활성에 영향을 미치는 약물이다. DNA 복제 또는 번역 동안 DNA 이중 가닥 나선이 풀리면, 예를 들어 꼬인 밧줄의 중간이 풀리는 것과 유사하세 인접한 열리지 않은 DNA 가 더 단단하게 감긴다 (슈퍼코일). 이러한 결과에 의해 야기되는 응력은 부분적으로 국소이성화효소에 의해 도움받는다. 이들은 단일 가닥 또는 이중 가닥이 DNA 로 분해되게 하고, DNA 가닥에서 장력을 감소시킨다. 이는 복제 또는 번역 동안 DNA 의 정상적인 풀림이 일어나게 한다. 국소이성화효소 I 또는 II 의 저해는 이들 과정 둘 모두를 방해한다. 2 개의 국소이성화효소 I 저해제, 이리노테칸 및 토포테칸은 캠프토테신으로부터 반-합성적으로 유래된 것이고, 이는 중국 관상수 (Chinese ornamental tree) 의 캠프토테카큐미나타 (Camptothecaacuminata) 로부터 수득된다. 국소이성화효소 II 를 표적으로 하는 약물은 2 개의 군으로 나뉠 수 있다. 국소이성화효소 II 독은 DNA 에 결합된 효소의 증가된 수준을 야기한다. 이는 DNA 복제 및 번역을 방지하여, DNA 가닥 분해를 야기하고, 프로그램된 세포사 (세포사멸) 을 초래한다. 이들 작용제에는 에토포시드, 독소루비신, 미토잔트론 및 테니포시드가 포함된다. 제 2 군인 촉매 저해제는 국소이성화효소 II 의 활성을 차단하고, 따라서 DNA 합성 및 번역이 방지되는 약물이다 (왜냐하면 DNA 가 적절하게 풀릴 수 없기 때문임). 이러한 군에는 노보비오신, 메르바론 및 아클라루비신이 포함된다.
세포독성 항생물질: 세포독성 항생물질은 다양한 작용 기전을 갖는 약물의 다양한 군이다. 이러한 군에는 안트라시클린, 및 안티노마이신, 블레오마이신, 플리카마이신 및 미토마이신을 비롯한 기타 약물이 포함된다. 독소루비신 및 다우노루비신은 우선적인 2 개의 안트라시클린이였고, 이들은 박테리움 스트렙토마이세스 퓨세티우스 (bacterium Streptomyces peucetius) 로부터 수득되었다. 이들 화합물의 유도체에는 에피루비신 및 이다루비신이 포함된다. 안트라실린 군에서의 다른 임상적으로 사용되는 약물에는 피라루비신, 아클라루비신 및 미토잔트론이 있다. 안트라시클린의 기전에는 DNA 개재 (DNA 의 2 개의 가닥 사이에 분자 삽입) 가 포함되고, 세포간 분자 및 국소이성화효소 저해에 손상을 주는 고도의 반응성인 자유 라디칼의 생성이 포함된다. 액티노마이신은 DNA 를 개재하고 RNA 합성을 방지하는 복합체 분자이다. 스트렙토마이세스 베르티실러스 (Streptomyces verticillus) 로부터 단리된 글리코펩티드인 블레오마이신도 또한 DNA 를 개재하나, DNA 를 손상시키는 자유 라디칼을 생성한다. 이는 블레오마이신이 금속 이온에 결합하여 화학적으로 환원되고 산소와 반응할 때 일어난다. 미토마이신은 DNA 를 알킬화하는 능력을 지닌 세포독성 항생물질이다.
병용 화학요법은 다수의 상이한 약물을 동시에 이용하여 환자를 치료하는 것에 관한 것이다. 약물은 이들의 기전 및 부작용 면에서 상이하다. 가장 큰 이점은 임의의 하나의 작용제에 대한 저항성이 발전될 가능성을 최소화한다는 점이다. 또한, 약물은 종종 저용량으로 사용되어 독성을 감소시킬 수 있다. 유망한 예에는 독소루비신과 시클로포스파미드의 조합 (A/C) 이 있다.
"화학요법에 저항성" 은, 암성 세포가 적어도 적용 농도에서는 저해되지 않거나 또는 치료에 의해 사멸되지 않을 때 일어난다. 즉, 암성 세포는 화학요법의 영향에 저항하는 것이다. 용어 "화학요법에 민감성" 은 상응하는 의미를 갖는다.
본원에 사용되는 바와 같은 용어 "자가유래" 는 나중에 재도입되는 것이 동일 대상체로부터 유래되는 그러한 임의의 물질을 지칭한다.
본원에 사용되는 바와 같은 용어 "동종이형" 은 물질이 재도입되는 대상체와 동일한 종이나 상이한 대상체로부터 유래되는 임의의 물질을 지칭한다.
용어 "치료학적 유효량" 이란 치료학적인 이점을 제공하는 양을 의미한다.
용어 "단리된" 이란, 자연 상태로부터 변경되거나 또는 제거됨을 의미한다. 예를 들어, 세포의 단리된 개체군이란, 자연적으로 발생하는 상태에서 상기 단리된 세포와 정상적으로 연계된 기타 세포로부터 이러한 세포의 풍부화 및 분리를 의미한다. 세포의 단리된 개체군은 세포의 동종 개체군인 실질적으로 순수한 세포의 개체군을 의미한다.
항체, 이의 단편 또는 CAR 의 항원-결합 도메인에 대해 용어 "특이적으로 결합하는" 또는 "~에 특이적인" 이란, 특이적인 항원을 인식하고 이에는 결합하나, 샘플 내에서 기타 분자를 실질적으로 인식하지 않거나 이에는 결합하지 않는 항원-결합 도메인을 지칭한다. 한 종으로부터 항원에 특이적으로 결합하는 항원-결합 도메인은 또다른 종으로부터의 항원에도 또한 결합할 수 있다. 이러한 종-간 반응성은 특이적인 것으로서의 항원-결합 도메인의 정의와 반대되는 것이 아니다. 항원에 특이적으로 결합하는 항원-결합 도메인은 또한 항원의 상이한 대립형질 형태로도 또한 결합할 수 있다 (대립형질 변이체, 스플라이스 변이체, 아이소형태 등). 이러한 교차 반응성은 특이적인 것으로서의 항원-결합 도메인의 정의와 반대되는 것이 아니다.
본원에 사용되는 바와 같은 용어 "조작된 세포" 및 "유전적으로 변형된 세포" 는 상호교환적으로 사용될 수 있다. 이 용어는, 세포 또는 이의 자손세포의 유전형 또는 표현형을 차례로 변형시키는 외래 유전자 또는 핵산 서열을 함유하고/함유하거나 발현함을 의미한다. 특히, 이 용어는, 세포, 바람직하게는 T 세포가 자연 상태에서 이들 세포에서 발현되지 않는 펩티드 또는 단백질을 안정적으로 또는 일시적으로 발현하도록 당업계에 익히 공지된 재조합 방법에 의해 조작될 수 있음을 나타낸다. 예를 들어, T 세포는 이들의 세포 표면 상에 키메라 항원 수용체와 같은 인공 구조물을 발현하도록 조작된다. 예를 들어, CAR 서열은 레트로바이러스 또는 렌티바이러스 벡터를 이용하여 세포 내로 전달될 수 있다.
SSEA4 VH, SSEA4 VL, SCFV VH-링커-VL, scFv VL-링커-VH, SSEA4-CAR VH-링커-VL 및 SSEA4-CAR VL-링커-VH 의 아미노산 서열은 각각 SEQ ID NO:1, SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5 및 SEQ ID NO:6 에서 주어진다 (아미노산의 한 문자 코드로 주어짐). SEQ ID NO:1 내지 SEQ ID NO:6 에서 주어지는 바와 같은 아미노산 서열 (단백질, 폴리펩티드) 은 본원에 정의된 바와 같은 각각의 아미노산 서열의 의도된 기능을 보유하는 각각의 아미노산 서열의 모든 배좌를 지칭한다. 즉, 각각 SEQ ID NO:1, SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5 및 SEQ ID NO:6 에 대한 차이는 항원 SSEA4 에 특이적으로 결합하는 것 및/또는 기능적 CAR 가 되는 것으로서 이의 잠재성에 영향미치지 않아야 한다. 따라서, SEQ ID NO:1 내지 SEQ ID NO:6 의 아미노산 서열은 각각 SEQ ID NO:1 내지 SEQ ID NO:6 의 전장 아미노산 서열일 수 있다. 이는 또한 본원에 기술된 바와 같은 의도된 기능을 여전히 보유하면서 일부 아미노산이 결실되거나, 첨가되거나 또는 대체된 이의 변이체일 수 있다. 따라서, SEQ ID NO:1, SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5 및 SEQ ID NO:6 각각에서 아미노산 서열의 변이체 (예컨대, SEQ ID NO:1, SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:4 및 SEQ ID NO:5 와 본질적으로 유사하고 아미노산 서열 수준에서 각각 적어도 70%, 또는 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 의 서열 일치성을 갖는 아미노산 서열) 가 이러한 정의 내에 포함된다. 본 발명의 문맥에서, "서열 일치성" 은 당업계에 익히 공지되어 있는 아미노산 서열에 대한 정렬 프로그램을 사용하여 쌍으로 정렬하여 측정될 수 있다.
T 세포 또는 T 림프구는 세포-매개 면역에서 중심 역할을 하는 한 유형의 림프구이다. 이들은 세포 표면 상에서의 T-세포 수용체 (TCR) 의 존재에 의해, 다른 림프구, 예컨대 B 세포 및 자연 살생 세포 (NK 세포) 와는 구별될 수 있다. T 세포 의 수 개의 부분집합이 존재하여, 이들 각각은 별도의 기능을 갖는다.
보조 T 세포 (TH 세포) 는 B 세포의 혈장 세포 및 기억 B 세포로의 성숙, 및 세포독성 T 세포 및 대식세포의 활성화를 비롯한 면역 과정에서 다른 백혈구 세포를 돕는다. 이들 세포는 또한 이들 표면 상에서 CD4 당단백질을 발현하기 때문에 CD4+ T 세포로서도 공지되어 있다. 보조 T 세포는 항원-제시 세포 (APC) 의 표면 상에서 발현되는 MHC 클래스 II 분자에 의해 펩티드 항원과 제시될 때 활성화된다. 일단 활성화되면, 이들은 신속하게 분열하고 면역 반응을 활성화하는 것을 조절하거나 돕는 사이토카인이라 지칭되는 작은 단백질을 분비한다. 이들 세포는 상이한 유형의 면역 반응을 가능하게 하는 상이한 사이토카인을 분비하는 TH1, TH2, TH3, TH17, Th9, 또는 TFH 를 비롯한 수 개의 하위유형 중 하나로 분화할 수 있다. APC 로부터의 신호화는 T 세포가 특정 하위유형으로 향하게 한다.
세포독성 T 세포 (Tc 세포, 또는 CTL) 는 바이러스 감염된 세포 및 종양 세포를 파괴하고, 이식 거부반응에도 관련되어 있다. 이들 세포는 이들의 표면에서 CD8 당단백질을 발현하기 때문에 CD8+ T 세포로서 공지되어 있다. 이들 세포는 모든 유핵 세포의 표면 상에 존재하는 MHC 클래스 I 분자와 연계된 항원으로의 결합에 의해 이들의 표적을 인식한다.
기억 T 세포는 감염이 해결된 후 장기간 지속하는 항원-특이적인 T 세포의 부분집합이다. 이들은 이들의 어원이 같은 항원에 재-노출시 다수의 효과기 T 세포로 신속하게 팽창하고, 따라서 지난 감염에 대해 "기억"하는 면역체계를 제공한다. 기억 T 세포는 3 개의 하위유형을 포함한다: 중심 기억 T 세포 (TCM 세포) 및 2 가지 유형의 효과기 기억 T 세포 (TEM 세포 및 TEMRA 세포). 기억 세포는 CD4+ 또는 CD8+ 중 하나일 수 있다. 기억 T 세포는 전형적으로 세포 표면 단백질 CD45RO 를 발현한다. 억제유전자 T 세포로서 이전에 공지된 조절 T 세포 (Treg 세포) 는 면역 내성의 유지에 결정적이다. 이들의 주요 역할은 면역 반응의 마지막을 향해 T 세포-매개 면역을 중단시키고 흉선에서 음성 선택 과정을 벗어나는 자가-반응성 T 세포을 억제하는 것이다.
CD4+ Treg 세포의 2 개의 주요 부류는 - Foxp3+ Treg 세포 및 Foxp3- Treg 세포로 기술되어 있다.
자연 살생 T 세포 (NKT 세포 - 타고난 면역체계의 자연 살생 세포와 융합되지 않음) 적응성 면역체계를 타고난 면역체계와 연결시킨다. 주요 조직적합성 복합체 (MHC) 분자에 의해 제시되는 펩티드 항원을 인식하는 통상적인 T 세포와 달리, NKT 세포는 CD1d 라 지칭되는 분자에 의해 제시되는 당지질 항원을 인식한다. 일단 활성화되면, 이들 세포는 둘 모두의 Th 및 Tc 세포에 할당되는 기능을 수행할 수 있다 (즉, 사이토카인 생산 및 세포용해/세포사멸 분자의 방출).
면역요법은 "면역 반응을 유도하거나, 증강시키거나, 또는 억제시킴으로써 질병을 치료하는 것"으로 정의되는 의학적 용어이다. 면역 반응을 이끌어내거나 증폭시키기 위해 설계되는 면역요법은 활성화 면역요법으로서 분류되는 반면, 면역 반응을 감소시키거나 억제시키는 면역요법은 억제 먼역요법으로서 분류된다. 면역요법을 활성화하는 것으로서의 암 면역요법은 면역체계가 종양을 거부하고 파괴하도록 자극하는 것을 시도한다. 입양 세포 이동은 암 세포를 공격하기 위한 세포-기반, 바람직하게는 T 세포-기반 세포독성 반응을 사용한다. 환자의 암에 대해 자연적인 또는 유전적으로 조작된 반응성을 갖는 T 세포는 생체외에서 생성되고 이어서 암 환자에게 다시 전달된다.
본원에 사용되는 바와 같은 용어 "치료" 는 질병의 적어도 하나의 신호 또는 증상의 빈도 또는 중증도를 감소시키는 것을 의미한다.
용어 "바이오마커" 또는 "마커" 는 예를 들어 개인의 상태에 대해 개인의 표현형 및/또는 유전형의 하나 이상의 양상에 대해 개인에서 이의 양 및/또는 정량적 평가는 예측가능하거나 정보를 주는 (예를 들어, 예측, 진단 및/또는 예후) 당업계에 널리 사용되는 생물학적 분자 및/또는 이의 검출가능한 부분을 폭넓게 지칭할 수 있다 (예를 들어, 핵산, 펩티드 또는 지질, 예컨대 당지질). 예를 들어, 바이오마커는 개인에서 암의 화학요법 치료 결과에 대해 예측적이거나 정보를 준다. 바이오마커가 당업계에 공지된 방법으로 검출가능한 경우 바이오마커가 발현된다 ("바이오마커의 발현"). 따라서, 바이오마커의 발현은 핵산 수준에서 (DNA 및/또는 RNA) 및 단백질 수준에서 발현하는 것 뿐만 아니라 단백질의 활성 또는 당지질과 같은 세포 상에서 또는 다른 생물학적 구조를 발현 (존재) 하는 것을 포함한다.
본원에 사용되는 바와 같은 용어 "대상체" 는 동물을 지칭한다. 바람직하게는, 대상체는 포유동물, 예컨대 마우스, 래트, 소, 돼지, 염소, 닭, 개, 원숭이 또는 인간이다. 보다 바람직하게는 개별 대상체는 인간이다. 대상체는 암과 같은 질병으로 고통받는 대상체 (환자) 일 수 있으나, 대상체는 또한 건강한 대상체일 수 있다.
본원에 사용되는 바와 같은 용어 "표적" 은 예를 들어 항체 또는 CAR 의 항원 결합 도메인과 같은 항원 결합 도메인을 특이적으로 인식하여야만 하는 세포와 연계된 항원 또는 에피토프를 지칭한다. 항원 또는 에피토프는 세포 표면에 결합되나, 또한 세포외막의 일부에서 분비될 수 있거나, 또는 세포로부터 나온다.
본원에 사용되는 바와 같은 용어 "암성 세포의 부분모집단" 은 대상체의 암의 암성 세포가 이종일 수 있다는 점을 나타낸다. 유럽 특허 제 EP14305477.3 호에서 나타낸 바와 같이, 일부 암에서, 일부 암성 세포는 이들의 세포 표면 상에 SSEA4 를 발현하나, 다른 암성 세포는 그렇지 않다. 따라서, SSEA4 를 발현하는 대상체의 암의 암성 세포는 상기 대상체의 암 내에서 암성 세포의 부분모집단 (또는 분획) 이다. 부분모집단은 대상체의 암의 모든 암성 세포 내에서 적어도 하나의 세포를 포함할 수 있다. 부분모집단은 상기 암으로 고통받는 대상체의 모든 암성 세포의 적어도 1%, 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45% 또는 적어도 50% 를 포함할 수 있다.
본원에 사용되는 바와 같은 용어 "항체" 는 당업자에게 익히 공지된 방법에 의해 생성될 수 있는 폴리클로날 또는 모노클로날 항체 및 이의 단편을 지칭한다. 항체는 임의의 종, 예를 들어 쥐과, 래트, 양, 인간의 것일 수 있다. 치료학적 목적을 위해, 비-인간 항원 결합 단편이 사용되는 경우, 이들은 당업계에 공지되어 있는 임의의 방법에 의해 인간화될 수 있다. 항체는 또한 변형된 항체 (예를 들어, 올리고머, 환원된 항체, 산화된 항체 및 라벨링된 항체) 일 수 있다.
실시예
하기 실시예는 본 발명의 보다 구체적인 설명을 위해 의도된 것이며, 이들 예로서 본 발명을 한정하지 않는다.
실시예 1: SSEA4 특이적인 항체의 아미노산 서열
SSEA4 에 특이적으로 결합하는 사용된 항체의 면역글로불린 중쇄 및 경쇄의 가변부 부분의 아미노산 서열은 각각 SEQ ID NO:1 및 SEQ ID NO:2 에 주어져 있다.
SSEA4 에 대해 특이성을 갖는 이들 서열 또는 이로부터 유래된 임의의 서열이 SSEA4 를 인식하는 CAR 를 생성하는데 사용될 수 있다. SEQ ID NO:1 및 SEQ ID NO:2 에서 주어진 서열은 항원 SSEA4 에 특이적인 서열에 대해 단지 예시적인 것이다 (서열은 아미노산에 대해 한 문자 코드로 주어짐). 다른 서열이 또한 항체의 항원 결합 도메인 또는 항원 SSEA4 에 특이적인 CAR 의 항원 결합 도메인을 생성하는데 사용될 수 있다.
실시예 2: SSEA4 를 인식하는 CAR 의 구조
사용된 링커는 도 1 에 도시된 바와 같은 CAR 의 검출을 허용하는 에피토프/태그를 포함할 수 있다. 에피토프/태그에 대한 예는 YOL, cMYC, 또는 HIS 가 있다. 항-SSEA4 특이적인 결합 단편은 SSEA4 에 특이적인 항체로부터 유래된다. 경첩 영역은 예를 들어 IgG 도메인, CD8α, 또는 CD28 로부터 유래될 수 있고 CAR 의 검출을 허용하는 에피토프/태그를 포함할 수 있다. 막관통 도메인은 CD8α 또는 CD28 이어서 1 개 내지 3 개의 신호화 도메인으로부터 유래될 수 있다. 이들 도메인은 예를 들어 CD28, 4-1BB, OX40, 또는 CD3 제타로부터 유래될 수 있다.
특정 서열로서 하기 서열이 사용되었다.
SSEA4-CAR 의 항원 결합 도메인에 대해, SEQ ID NO:3 또는 SEQ ID NO:4 의 아미노산 서열을 갖는 scFv 가 사용되었다 (서열은 아미노산의 한 문자 코드로 주어짐).
SEQ ID NO:5 및 SEQ ID NO:6 (도 2 에서의 서열 또한 참조) 은 항원 SSEA4 에 특이적인 CAR 의 전체 아미노산 서열 (서열은 아미노산의 한 문자 코드로 주어짐) 을 나타낸다.
실시예 3: 렌티바이러스 발현 벡터의 생성
SSEA4-CAR 를 인간 PGK 프로모터의 제어 하에서 제 3 세대 SIN-렌티바이러스 벡터 구조물로 복제하였다. 이러한 발현 플라스미드 및 구조 단백질 gag-pol, rev 및 VSV-G 외피 단백질을 인코딩하는 추가 플라스미드를 이용한 HEK 293T 세포의 일시적인 형질감염은 바이러스 벡터 입자의 상청액으로의 방출을 야기했다. 이후, 바이러스 벡터 입자는 저속 원심분리에 의해 풍부화되고 -70℃ 에서 저장하였다.
실시예 4: T 세포 분리 및 SSEA4 - CAR 를 이용한 유전적 변형
1차 T 세포를 공여체 분리반출법으로부터 단리하거나 마이크로비드 및 막스 테크놀로지® (밀테니 바이오텍 게엠베하, 독일 소재) 를 사용한 연층 샘플로부터 단리하여, 90% 가 넘는 순도를 달성하였다 (CD3+ 세포). 자성적으로 풍부화된 세포를 세척하고 200 IU/mL 인간 재조합체 IL-2 로 보충된 텍스막스(TexMACS) 배지 (밀테니 바이오텍 게엠베하, 독일 소재) 에서 재현탁하였다. 그런 다음, T 세포를 GMP 트랜스액트 CD3/CD28 시약 (밀테니 바이오텍 게엠베하, 독일 소재) 의 첨가에 의해 자극하였다.
24 시간 후, T 세포를 CD25 및 CD69 항체로 염색하고 막스콴트(MACSQuant) 분석기 (밀테니 바이오텍 게엠베하, 독일 소재) 에서 유세포분석에 의해 분석함으로써 연속적인 T 세포 자극을 확인하였다. 그런 다음, 자극된 T 세포를 MOI = 0.5-2 에서 SSEA4-CAR 를 인코딩하는 렌티바이러스 벡터를 첨가함으로써 형질도입시켰다. 정치 배양 4 일 후, 세포를 세척하여 과량의 바이러스 벡터 및 트랜스액트 시약을 제거하고 추가 5 내지 10 일 동안 배양하였다. 항-인간 Fc 형광색소 및 유세포분석을 사용하여 CD3+ 생세포 중에서 SSEA4-CAR의 표면 발현을 염색함으로써 바이러스 형질도입의 효율을 측정하였다. 유전자 표지된 T 세포의 수는 사용된 MOI 에 따라 10 내지 60% 범위였다.
실시예 5: SSEA4 -CAR 기능성
SSEA4 발현 표적 세포 또는 SSEA4 를 발현하지 않는 세포를, SSEA4-CAR 를 발현하는 팽창된 T 세포와 5 시간 동안 인큐베이션하고, 대조군으로서 다양한 효과기 대 표적 세포 비로 비-형질도입된 T 세포와 인큐베이션하였다. 특정 표적 세포 사멸을 유세포 분석으로 분석하였다.
대안적으로는, 효과기 세포를 SSEA4-양성 또는 -음성인 세포주로 재자극하였다. 사이토카인 생산 (IFN-γ, IL-2, TNF-α) 및 탈과립 (CD107a) 을 유세포분석으로 분석하였다. SSEA4-CAR 를 지닌 T 세포만이 표적 세포를 사멸시킬 수 있었고, 탈과립 마커 상위조절뿐만 아니라 증가된 사이토카인 생산을 나타냈다.
서열 목록
Figure 112017026756457-pct00001
Figure 112017026756457-pct00002
Figure 112017026756457-pct00003
Figure 112017026756457-pct00004
SEQUENCE LISTING <110> Miltenyi Biotec GmbH <120> Chimeric antigen receptor specific for SSEA4 antigen <130> Mil_073PCT <160> 6 <170> BiSSAP 1.2 <210> 1 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> SSEA4 VH <400> 1 Gln Val Gln Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser Gln 1 5 10 15 Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser Gln 20 25 30 Gly Val Tyr Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu 35 40 45 Gly Ala Ile Trp Ala Gly Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Ser Ala Leu Met 50 55 60 Ser Arg Leu Ser Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu 65 70 75 80 Lys Met Asn Ser Leu Gln Thr Asp Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Val Asp Gly Tyr Arg Gly Tyr Asn Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Ser Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 2 <211> 106 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> SSEA4 VL <400> 2 Glu Asn Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met 20 25 30 His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Ser Thr Ser Pro Lys Leu Trp Ile Tyr 35 40 45 Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Gly Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Asn Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Met Glu Ala Glu 65 70 75 80 Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly Ser Gly Tyr Pro Leu Thr 85 90 95 Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys 100 105 <210> 3 <211> 240 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> scFv VH-linker-VL <400> 3 Gln Val Gln Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser Gln 1 5 10 15 Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser Gln 20 25 30 Gly Val Tyr Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu 35 40 45 Gly Ala Ile Trp Ala Gly Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Ser Ala Leu Met 50 55 60 Ser Arg Leu Ser Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu 65 70 75 80 Lys Met Asn Ser Leu Gln Thr Asp Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Val Asp Gly Tyr Arg Gly Tyr Asn Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly 115 120 125 Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Asn Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile 130 135 140 Met Ser Ala Ser Pro Gly Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Ser Ala Ser 145 150 155 160 Ser Ser Val Ser Tyr Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Ser Thr Ser 165 170 175 Pro Lys Leu Trp Ile Tyr Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro 180 185 190 Gly Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Asn Ser Tyr Ser Leu Thr Ile 195 200 205 Ser Ser Met Glu Ala Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly 210 215 220 Ser Gly Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys 225 230 235 240 <210> 4 <211> 240 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> scFv VL-linker-VH <400> 4 Glu Asn Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met 20 25 30 His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Ser Thr Ser Pro Lys Leu Trp Ile Tyr 35 40 45 Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Gly Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Asn Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Met Glu Ala Glu 65 70 75 80 Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly Ser Gly Tyr Pro Leu Thr 85 90 95 Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly 100 105 110 Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Val Gln Leu Lys Glu Ser 115 120 125 Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser Gln Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr 130 135 140 Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser Gln Gly Val Tyr Trp Val Arg Gln 145 150 155 160 Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu Gly Ala Ile Trp Ala Gly Gly 165 170 175 Ser Thr Asn Tyr Asn Ser Ala Leu Met Ser Arg Leu Ser Ile Ser Lys 180 185 190 Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu Lys Met Asn Ser Leu Gln Thr 195 200 205 Asp Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Ala Arg Val Asp Gly Tyr Arg Gly 210 215 220 Tyr Asn Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser 225 230 235 240 <210> 5 <211> 679 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Full CAR sequence: SSEA4-CAR VH-linker-VL <400> 5 Met Asp Phe Gln Val Gln Ile Phe Ser Phe Leu Leu Ile Ser Ala Ser 1 5 10 15 Val Ile Met Ser Arg Gln Val Gln Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Leu 20 25 30 Val Ala Pro Ser Gln Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe 35 40 45 Ser Leu Ser Ser Gln Gly Val Tyr Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys 50 55 60 Gly Leu Glu Trp Leu Gly Ala Ile Trp Ala Gly Gly Ser Thr Asn Tyr 65 70 75 80 Asn Ser Ala Leu Met Ser Arg Leu Ser Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys 85 90 95 Ser Gln Val Phe Leu Lys Met Asn Ser Leu Gln Thr Asp Asp Thr Ala 100 105 110 Met Tyr Tyr Cys Ala Arg Val Asp Gly Tyr Arg Gly Tyr Asn Met Asp 115 120 125 Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly 130 135 140 Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Asn Val Leu Thr 145 150 155 160 Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly Glu Lys Val Thr Met 165 170 175 Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met His Trp Tyr Gln Gln 180 185 190 Lys Ser Ser Thr Ser Pro Lys Leu Trp Ile Tyr Asp Thr Ser Lys Leu 195 200 205 Ala Ser Gly Val Pro Gly Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Asn Ser 210 215 220 Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Met Glu Ala Glu Asp Val Ala Thr Tyr 225 230 235 240 Tyr Cys Phe Gln Gly Ser Gly Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr 245 250 255 Lys Leu Glu Leu Lys Ala Ala Ala Leu Pro Ala Glu Pro Lys Ser Pro 260 265 270 Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly 275 280 285 Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile 290 295 300 Ala Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu 305 310 315 320 Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 325 330 335 Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg 340 345 350 Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys 355 360 365 Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu 370 375 380 Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr 385 390 395 400 Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu 405 410 415 Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp 420 425 430 Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val 435 440 445 Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp 450 455 460 Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His 465 470 475 480 Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Ser Leu Ser 485 490 495 Pro Gly Lys Lys Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly 500 505 510 Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg 515 520 525 Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln 530 535 540 Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu 545 550 555 560 Glu Gly Gly Cys Glu Leu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp 565 570 575 Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn 580 585 590 Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg 595 600 605 Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly 610 615 620 Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu 625 630 635 640 Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu 645 650 655 Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His 660 665 670 Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 675 <210> 6 <211> 679 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Full CAR sequence: SSEA4-CAR VL-linker- VH <400> 6 Met Asp Phe Gln Val Gln Ile Phe Ser Phe Leu Leu Ile Ser Ala Ser 1 5 10 15 Val Ile Met Ser Arg Glu Asn Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met 20 25 30 Ser Ala Ser Pro Gly Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Ser Ala Ser Ser 35 40 45 Ser Val Ser Tyr Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Ser Thr Ser Pro 50 55 60 Lys Leu Trp Ile Tyr Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Gly 65 70 75 80 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Asn Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser 85 90 95 Ser Met Glu Ala Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly Ser 100 105 110 Gly Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys Gly 115 120 125 Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Val 130 135 140 Gln Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser Gln Ser Leu 145 150 155 160 Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser Gln Gly Val 165 170 175 Tyr Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu Gly Ala 180 185 190 Ile Trp Ala Gly Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Ser Ala Leu Met Ser Arg 195 200 205 Leu Ser Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu Lys Met 210 215 220 Asn Ser Leu Gln Thr Asp Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Ala Arg Val 225 230 235 240 Asp Gly Tyr Arg Gly Tyr Asn Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser 245 250 255 Val Thr Val Ser Ser Ala Ala Ala Leu Pro Ala Glu Pro Lys Ser Pro 260 265 270 Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly 275 280 285 Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile 290 295 300 Ala Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu 305 310 315 320 Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 325 330 335 Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg 340 345 350 Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys 355 360 365 Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu 370 375 380 Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr 385 390 395 400 Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu 405 410 415 Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp 420 425 430 Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val 435 440 445 Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp 450 455 460 Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His 465 470 475 480 Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Ser Leu Ser 485 490 495 Pro Gly Lys Lys Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly 500 505 510 Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg 515 520 525 Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln 530 535 540 Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu 545 550 555 560 Glu Gly Gly Cys Glu Leu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp 565 570 575 Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn 580 585 590 Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg 595 600 605 Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly 610 615 620 Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu 625 630 635 640 Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu 645 650 655 Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His 660 665 670 Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 675

Claims (14)

  1. 시알릴-당지질 단계-특이적인 배아 항원 4 (SSEA4) 에 특이적인 항원 결합 도메인을 포함하는 키메라 항원 수용체(CAR)로서, 상기 항원 결합 도메인은 아미노산 서열 SEQ ID NO:4로 이루어진 scFv(단쇄 가변부 단편)를 포함하는 키메라 항원 수용체(CAR).
  2. 제1항에 있어서, CAR 가 막관통 도메인 및 세포내 신호화 도메인을 포함하고, 막관통 도메인이 CD8 및/또는 CD28 의 막관통 도메인의 서열을 포함하고, 세포내 신호화 도메인이 하나 이상의 CD28, CD137 및 CD3제타의 세포내 신호화 도메인의 서열을 포함하는 CAR.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, CAR 가 아미노산 서열 SEQ ID NO:6 을 포함하는 CAR.
  4. 제1항 또는 제2항에 있어서, 암의 암성 세포의 적어도 부분모집단이 SSEA4 를 발현하는 그러한 암으로 고통받는 대상체에서 상기 암의 치료를 위한 CAR.
  5. 제4항에 있어서, 상기 암이 인간 유방암, 인간 신장 세포 암종 (RCC) 및 인간 난소암으로 구성된 군에서 선택되는 CAR.
  6. 제1항 또는 제2항에 따른 CAR 를 발현하는 조작된(engineered) 세포의 개체군.
  7. 제6항에 있어서, 상기 조작된 세포가 T 세포 또는 NK 세포인 조작된 세포의 개체군.
  8. 제6항에 있어서, 면역요법에 사용되기 위한 단리된 조작된 세포의 개체군.
  9. 제1항 또는 제2항에 따른 CAR 를 발현하는 유전적으로 변형된(genetically modified) 세포 및 약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는, 암의 암성 세포의 적어도 부분모집단이 SSEA4 를 발현하는 그러한 암으로 고통받는 대상체에서 상기 암의 치료에 사용되기 위한 약학 조성물.
  10. 제9항에 있어서, 상기 암의 병용 치료를 위한 화학요법제를 추가로 포함하는 약학 조성물.
  11. 제9항에 있어서, 상기 암이 인간 유방암, 인간 신장 세포 암종 (RCC) 및 인간 난소암으로 구성된 군에서 선택되는 약학 조성물.
  12. 제1항 또는 제2항에 따른 CAR 를 인코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 핵산.
  13. 삭제
  14. 삭제
KR1020177007467A 2014-08-19 2015-08-12 Ssea4 항원에 특이적인 키메라 항원 수용체 KR102387122B1 (ko)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201462038873P 2014-08-19 2014-08-19
US62/038,873 2014-08-19
PCT/EP2015/068515 WO2016026742A1 (en) 2014-08-19 2015-08-12 Chimeric antigen receptor specific for ssea4 antigen

Publications (2)

Publication Number Publication Date
KR20170042774A KR20170042774A (ko) 2017-04-19
KR102387122B1 true KR102387122B1 (ko) 2022-04-14

Family

ID=55350224

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020177007467A KR102387122B1 (ko) 2014-08-19 2015-08-12 Ssea4 항원에 특이적인 키메라 항원 수용체

Country Status (8)

Country Link
US (1) US10273295B2 (ko)
EP (1) EP3182994B1 (ko)
JP (1) JP6588084B2 (ko)
KR (1) KR102387122B1 (ko)
CN (1) CN106661129B (ko)
CA (1) CA2958757C (ko)
ES (1) ES2767399T3 (ko)
WO (1) WO2016026742A1 (ko)

Families Citing this family (21)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU2015267047A1 (en) 2014-05-27 2017-01-05 Academia Sinica Anti-CD20 glycoantibodies and uses thereof
TWI654202B (zh) 2014-05-27 2019-03-21 中央研究院 增進抗體功效之通用糖型之組合物及方法
CA2958757C (en) 2014-08-19 2021-04-27 Miltenyi Biotec Gmbh Chimeric antigen receptor specific for ssea4 antigen
CN107614521B (zh) * 2015-01-30 2022-02-08 台湾地区“中央研究院” 增进抗体功效的通用糖型组合物及方法
CN108350605A (zh) 2015-09-04 2018-07-31 台湾浩鼎生技股份有限公司 聚糖阵列以及使用方法
EP3184548A1 (en) 2015-12-23 2017-06-28 Miltenyi Biotec GmbH Chimeric antigen receptor with cytokine receptor activating or blocking domain
BR112018070097A2 (pt) * 2016-03-29 2019-02-12 Obi Pharma, Inc. anticorpo, hibridoma, composição farmacêutica, método para tratar câncer em um indivíduo, método para inibir a proliferação de células cancerígenas, método para diagnosticar o câncer em um indivíduo, método para tratar um paciente humano, método para fazer imagens de um indivíduo, conjugado de fármaco-anticorpo (adc), método para tratar câncer, anticorpo biespecífico e método para preparar uma população de anticorpos homogêneos
US10980894B2 (en) 2016-03-29 2021-04-20 Obi Pharma, Inc. Antibodies, pharmaceutical compositions and methods
SG11201809024UA (en) 2016-04-22 2018-11-29 Obi Pharma Inc Cancer immunotherapy by immune activation or immune modulation via globo series antigens
AU2017276706A1 (en) * 2016-06-07 2019-01-03 Max-Delbrück-Centrum Für Molekulare Medizin In Der Helmholtz-Gemeinschaft Chimeric antigen receptor and CAR-T cells that bind BCMA
CN110072545A (zh) 2016-07-27 2019-07-30 台湾浩鼎生技股份有限公司 免疫原性/治疗性聚糖组合物及其用途
KR102528998B1 (ko) 2016-07-29 2023-05-03 오비아이 파머 인코퍼레이티드 인간 항체, 제약 조성물 및 방법
TWI822055B (zh) 2016-11-21 2023-11-11 台灣浩鼎生技股份有限公司 共軛生物分子、醫藥組成物及方法
CN111542547B (zh) * 2018-01-04 2024-02-13 美天施生物科技有限两合公司 对bdca2抗原具有特异性的嵌合抗原受体
US10751399B2 (en) * 2018-03-20 2020-08-25 Cho Pharma Usa, Inc. Chimeric antigen receptors that bind to SSEA4 and uses thereof
TW202035444A (zh) 2018-06-27 2020-10-01 台灣浩鼎生技股份有限公司 用於糖蛋白工程的糖苷合成酶變體及其使用方法
WO2020072593A1 (en) 2018-10-02 2020-04-09 Obi Pharma, Inc. Combination therapy using anti-ssea-4 antibody in combination with therapeutic oncology agents
CN114438034A (zh) * 2020-11-06 2022-05-06 上海赛比曼生物科技有限公司 一种基因修饰的细胞制备方法
JP2023553313A (ja) * 2020-11-30 2023-12-21 チョ ファーマ インコーポレイテッド 細胞を富化するための抗体
JP2024500847A (ja) 2020-12-18 2024-01-10 センチュリー セラピューティクス，インコーポレイテッド 適合可能な受容体特異性を有するキメラ抗原受容体システム
WO2024040194A1 (en) 2022-08-17 2024-02-22 Capstan Therapeutics, Inc. Conditioning for in vivo immune cell engineering

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2014031687A1 (en) * 2012-08-20 2014-02-27 Jensen, Michael Method and compositions for cellular immunotherapy

Family Cites Families (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE3717649A1 (de) 1987-05-26 1988-12-15 Held Kurt Doppelbandpresse mit erwaerm- oder kuehlbaren teilen und verfahren zu deren herstellung
US8747290B2 (en) 2007-12-07 2014-06-10 Miltenyi Biotec Gmbh Centrifuge for separating a sample into at least two components
KR20140060541A (ko) 2011-09-16 2014-05-20 더 트러스티스 오브 더 유니버시티 오브 펜실바니아 암을 치료하기 위한 rna 조작된 t 세포
EP2711418B1 (en) 2012-09-25 2017-08-23 Miltenyi Biotec GmbH Method for polyclonal stimulation of T cells by flexible nanomatrices
US9365641B2 (en) 2012-10-01 2016-06-14 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Compositions and methods for targeting stromal cells for the treatment of cancer
WO2015142675A2 (en) 2014-03-15 2015-09-24 Novartis Ag Treatment of cancer using chimeric antigen receptor
US10118969B2 (en) * 2014-05-27 2018-11-06 Academia Sinica Compositions and methods relating to universal glycoforms for enhanced antibody efficacy
CA2958757C (en) 2014-08-19 2021-04-27 Miltenyi Biotec Gmbh Chimeric antigen receptor specific for ssea4 antigen
US9975965B2 (en) * 2015-01-16 2018-05-22 Academia Sinica Compositions and methods for treatment and detection of cancers

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2014031687A1 (en) * 2012-08-20 2014-02-27 Jensen, Michael Method and compositions for cellular immunotherapy

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Yi-Wei Lou et.al., "Stage-specific embryonic antigen-4 as a potential therapeutic target in glioblastoma multiforme and other cancers", Proceedings of the national academy of sciences, vol. 111, no. 7, pp. 2482-2487, 2014.02.03.*

Also Published As

Publication number Publication date
KR20170042774A (ko) 2017-04-19
CN106661129A (zh) 2017-05-10
JP2017525361A (ja) 2017-09-07
US10273295B2 (en) 2019-04-30
US20170283489A1 (en) 2017-10-05
JP6588084B2 (ja) 2019-10-09
WO2016026742A1 (en) 2016-02-25
CN106661129B (zh) 2021-02-05
EP3182994A1 (en) 2017-06-28
ES2767399T3 (es) 2020-06-17
CA2958757A1 (en) 2016-02-25
EP3182994B1 (en) 2019-12-04
CA2958757C (en) 2021-04-27

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR102387122B1 (ko) Ssea4 항원에 특이적인 키메라 항원 수용체
JP7222600B2 (ja) 腫瘍細胞に特異的なキメラ抗原レセプター
JP7469807B2 (ja) Ｍａｇｅ－ｂ２特異性を有するｔ細胞受容体およびその使用
EP4121079A1 (en) Novel antigen binding domains and synthetic antigen receptors incorporating the same
US11090336B2 (en) Tn-MUC1 chimeric antigen receptor (CAR) T cell therapy
US20230190796A1 (en) Engineered cells expressing prostate-specific membrane antigen (psma) or a modified form thereof and related methods
AU2017382902A1 (en) Engineered T cells for the treatment of cancer
KR20200064126A (ko) 면역요법을 위한 t 세포 수용체
US20230149460A1 (en) Methods for generating engineered memory-like nk cells and compositions thereof
US20230390393A1 (en) Chimeric antigen receptor comprising an antigen binding domain specific for msln having a specificity for tumor cells
US11919937B2 (en) T cell receptors for immunotherapy
JP2024074861A (ja) Ｍａｇｅ－ｂ２特異性を有するｔ細胞受容体およびその使用
JP2024061712A (ja) 葉酸受容体１に特異的なキメラ抗原受容体
TW202208418A (zh) 具有vgll1特異性之t細胞受體及其用途

Legal Events

Date Code Title Description
E902 Notification of reason for refusal
E902 Notification of reason for refusal
E701 Decision to grant or registration of patent right
GRNT Written decision to grant