KR102366303B1 - 식물성 복합 천연 계면활성제를 이용한 무세포 진피 기질 및 그 제조방법 - Google Patents

식물성 복합 천연 계면활성제를 이용한 무세포 진피 기질 및 그 제조방법 Download PDF

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Abstract

본 발명은 피부로부터 표피층을 제거하고 남겨진 진피층을 식물성 복합 천연 계면활성제를 사용하여 세포를 제거한 무세포 진피 기질 및 그 제조방법에 관한 것이다.
구체적으로는 기존의 소듐도데실설페이트(SDS, Sodium Dodecyl Sulfate)와 같은 인체에 유해한 독성이 포함되어 있는 계면활성제 대신 인체에 무해한 식물성 복합 천연 계면활성제를 사용하여 세포를 제거함으로써, 환자에 이식 후 독성의 유입을 감소시키고 세포 세척력을 증가시킴으로써 세포 잔류량을 감소시켜 환자에게 안전한 무세포 진피 기질과 이를 제조하는 방법에 관한 것이다.

Description

식물성 복합 천연 계면활성제를 이용한 무세포 진피 기질 및 그 제조방법{CELL-FREE DERMAL MATRIX USING PLANT COMPLEX NATURAL SURFACTANT AND MANUFACTURING METHOD THEREOF}
본 발명은 식물성 복합 천연 계면활성제를 이용한 무세포 진피 기질 및 그 제조방법에 관한 것이다.
인체의 피부조직은 크게 세 부분으로 나뉘어지는데, 피부의 가장 바깥쪽을 이루는 표피층과 그 아래층의 진피층, 그리고 피하조직으로 이루어진다. 이 중 표피층은 표피층과 진피층이 단단하게 결합할 수 있도록 하는 기저막(basement membrane)으로부터 여러 층으로 분화된 상피세포와 그 밖에 멜라닌세포, 면역세포로 이루어지며, 표피층 아래의 진피층은 주로 섬유아세포와 이 세포가 분비한 여러 세포외간물질(extracellular matrix)로 이루어진다.
심한 화상, 외상, 상피암 절제 및 피부 질환 등으로 피부가 심각하게 손실된 환자의 경우, 손상된 피부 조직을 재생시키기 위한 방법으로는 환자 자신의 피부를 이식하는 자가 이식(autograft), 다른 사람의 피부를 이식하는 동종이식(allograft), 동물의 피부를 이식하는 이종이식(xenograft)의 세 가지 방법이 있다.
이들 방법 중 자가이식이 가장 이상적이지만, 화상부위가 광범위한 경우 조직을 확보할 수 있는 부위에 제한이 따르며, 피부를 떼어낸 건강한 부위에 새로운 외상이 발생하여 환자의 고통이 증가하고, 완치되는데 시간이 많이 소요되며, 경제적 부담 또한 크다. 게다가 심한 화상환자와 같이 건강한 신체부위가 충분히 남아있지 않는 경우에는 자가 이식방법을 적용할 수 없거나 여러 차례에 걸쳐 이식수술을 시행하여야 한다는 문제점이 있다.
상기와 같은 문제점을 해결하기 위하여, 다른 사람의 피부를 이용하는 동종이식, 돼지 등과 같은 다른 동물의 피부를 이용하는 이종이식 등이 시도되고 있으나, 면역거부 반응뿐만 아니라 다른 부작용을 종종 초래하고 있다.
따라서, 현재 가장 일반적으로 사용되는 방법은 기증된 사체의 피부를 이용하여 표피를 제거한 후, 면역거부반응을 없애기 위해 진피 내 세포들을 제거한 무세포 진피를 이용하는 것이다.
진피 내 공여자의 세포가 잔존하는 경우, 이식자에게 면역거부 반응을 유발할 수 있어 세포를 제거하는 과정이 매우 중요하다. 하지만, 충분한 세포 제거 효과를 나타내는 계면활성제는 인체에 독성을 나타내는 소듐도데실 설페이트(SDS, Sodium Dodecyl Sulfate)와 같은 물질을 포함하고 있어, 인체에 무해하면서도 충분한 세포 제거효과를 보이는 새로운 계면활성제에 대한 연구개발의 필요성이 대두되고 있는 실정이다.
한국 등록특허 10-0469661호
본 발명의 목적은 기존에 세포 제거를 위해 사용되는 소듐도데실 설페이트(SDS, Sodium Dodecyl Sulfate)가 유해성과 위험성이 있는 물질로 분류되어 있음을 확인하고 이를 대체할 수 있는 독성이 없는 식물 유래의 천연 계면활성제 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은 상기 식물 유래의 천연 계면활성제를 이용한 무세포 진피 기질의 제조방법을 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은 상기 천연 계면활성제를 이용한 무세포 진피 기질의 제조 방법을 통하여 제조한 무세포 진피 기질을 제공하는 것이다.
본 발명은 (i) 피부로부터 표피층을 제거하여 진피층을 수득하는 단계, (ii) 표피가 제거된 진피층에 식물성 복합 천연 계면활성제를 처리하여 세포를 제거하는 단계, (iii) 세포가 제거된 진피층에 잔존하는 계면활성제를 제거하는 세척 단계, (ⅳ) 세척이 완료된 진피층을 동결건조하는 단계를 포함하는, 무세포 진피 기질의 제조방법을 제공한다.
구체적으로, 상기 (i) 단계의 표피층을 제거하는 과정은 항생제, 염화나트륨(NaCl), 과산화수소(H2O2) 및 트립신 EDTA(Trypsin EDTA)로 구성되는 군에서 하나 이상 선택된 것의 혼합물을 처리하는 과정을 포함할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
또한 구체적으로, 상기 (ii) 단계의 식물성 복합 천연 계면활성제는 식물성 복합 천연 계면활성제 100중량부 대비, 음이온성 계면활성제 5 내지 13 중량부, 유기산 1 내지 9 중량부, 염화나트륨(NaCl) 또는 수산화나트륨(NaOH) 2 내지 10 중량부 및 잔부의 멸균증류수 68 내지 92 중량부를 포함하여 제조된 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
이때, 상기 음이온성 계면활성제는 LES(Disodium Lauryl Sulfosuccinate), 올리브 계면활성제(Sodium PEG-7 Olive oil carboxylate), 코코클루코사이드(Coco-Glucoside), 애플워시(Sodium Cocoyl Apple Amino Acids) 및 잔탄검(Xanthan Gum)으로 구성된 군에서 하나 이상 선택된 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
이때, 상기 유기산은 황산(sulfuric acid), 인산(phosphoric acid), 아세트산(acetic acid), 옥살산(Oxalic Acid), 타르타르산(tartaric acid) 및 구연산(citric acid)으로 구성된 군에서 하나 이상 선택된 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
구체적으로, 상기 (iii) 단계의 세척은 에틸 알코올(ethyl alcohol), 이소프로필알코올(isopropyl alcohol), 뷰탄올(butanol) 및 프로판올(propanol)로 구성된 군에서 하나 이상 선택된 것의 혼합물로 세척하는 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
또한 구체적으로, 상기 (iv) 단계의 동결건조를 진행하기 앞서 동결보호제, 인산완충용액, EDTA 또는 구연산을 포함하여 제조된 동결보호 조성물을 처리하는 단계를 추가로 더 포함할 수 있으며, 더욱 구체적으로는 상기 세포가 제거된 피부조직을 동결보호 조성물에 넣어 상온에서 90분~120분간 교반 하는 단계를 추가로 더 포함하는 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
구체적으로, 상기 (iv) 단계의 동결건조는 -70℃ 이하에서 48시간동안 이루어지는 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 다른 측면은, 상기한 제조방법에 의해 제조되는 식물성 복합 천연 계면활성제를 제공한다.
본 발명의 다른 측면은, 상기한 제조방법 중 어느 하나의 제조방법에 의해 제조된 무세포 진피기질을 제공한다.
구체적으로, 본 발명의 무세포 진피기질은 세포독성을 띄지 않는 것을 구체적인 실험을 통해 확인하였으며(실험예 2, 도 2), 이로부터 본 발명의 무세포 진피기질은 인체에 이식되어도 독성을 나타내지 않을 것임을 기대할 수 있다.
또한, 본 발명의 천연 계면활성제를 이용하여 세포를 제거한 경우 종래에 주로 사용하는 계면활성제인 SDS 대비 현저히 우수한 세포 제거효과를 확인한 바(실험예 1, 도 1), 본 발명 무세포 진피기질은 인체에 이식된 후 면역 거부반응이 현저히 감소할 것임을 예상할 수 있다.
본 발명의 식물 유래의 천연 계면활성제는 천연물로부터 유래한 재료만을 이용하여 합성한 것으로서, 천연재료임에도 불구하고 기존 소듐도데실 설페이트(SDS, Sodium Dodecyl Sulfate) 보다 세포 세척력이 높아 세포 잔류량이 현저히 줄어드는 것을 특징으로 한다.
본 발명의 제조방법에 의해 제조된 무세포 진피 기질은 제조 과정에서 독성이 있는 계면활성제를 사용하지 않아 환자에 이식 시 독성의 유입량을 줄이고, 진피 기질 내에 세포의 잔류량을 줄여 면역거부 반응을 최소화함과 동시에 세균이나 바이러스의 감염 확률을 낮출 수 있는 것을 특징으로 한다.
본 발명의 효과는 상기한 효과로 한정되는 것은 아니며, 본 발명의 상세한 설명 또는 청구 범위에 기재된 발명의 구성으로부터 추론 가능한 모든 효과를 포함하는 것으로 이해되어야 한다.
도 1은 본 발명 실시예 및 비교예의 무세포 진피 기질을 대상으로 잔존 세포를 관찰한 결과를 나타낸 것이다.
도 2는 본 발명 천연 계면활성제 및 SDS를 처리한 경우의 세포독성 실험 결과를 나타낸 것이다.
이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 실시예를 들어 상세하게 설명하기로 한다. 다만 하기의 실시예는 본 발명의 내용을 예시하는 것일 뿐 본 발명의 범위가 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다.
제조예 1. 식물성 복합 천연 계면활성제의 제조
본 발명 무세포 진피 기질을 제조하기에 앞서, 천연물 유래의 재료만으로 제조하였음에도 SDS보다 우수한 세포 제거 능력을 가지는 식물성 복합 천연 계면활성제를 제조하였다.
구체적으로 상기 식물성 복합 천연 계면활성제는, 식물성 복합 천연 계면활성제 100중량부 대비, 음이온성 계면활성제 5 내지 13 중량부, 유기산 1 내지 9 중량부, 염화나트륨(NaCl) 또는 수산화나트륨(NaOH) 2 내지 10 중량부 및 잔부의 멸균증류수 68 내지 92 중량부를 포함하여 제조하였으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
이때, 상기 음이온성 계면활성제는 LES(Disodium Lauryl Sulfosuccinate), 올리브 계면활성제(Sodium PEG-7 Olive oil carboxylate), 코코클루코사이드(Coco-Glucoside), 애플워시(Sodium Cocoyl Apple Amino Acids) 및 잔탄검(Xanthan Gum)으로 구성된 군에서 하나 이상 선택된 것일 수 있다.
상기 유기산은 황산(sulfuric acid), 인산(phosphoric acid), 아세트산(acetic acid), 옥살산(Oxalic Acid), 타르타르산(tartaric acid) 및 구연산(citric acid)으로 구성된 군에서 하나 이상 선택된 것일 수 있다.
실시예 1. 천연 계면활성제를 이용한 무세포 진피 기질의 제조
피부조직을 항생제와 1M의 염화나트륨(NaCl)이 포함된 용액에 넣어서 37℃에 12시간 교반 후 핀셋을 사용하여 표피층을 제거하였다.
이때, 상기 항생제는 페니실린(penicillin), 스트렙토마이신(streptomycin), 카나마이신(kanamycin), 네오마이신(neomycin), 바시트라신(bacitracin), 젠타마이신(gentamicin) 및 반코마이신(Vancomycin)으로 구성된 군에서 하나 이상 선택된 것을 사용하였으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
표피층이 제거된 피부조직을 멸균증류수로 세척하여 남아있는 시약과 불필요 조직을 제거하고, 상기 제조예 1에서 제조한 식물성 복합 천연 계면활성제에 넣어 30℃에서 90분~120분간 교반하여 세포를 제거하였다. 이때, 상기 식물성 복합 천연 계면활성제의 농도는 10%(w/w)로 조절하였다.
이후, 상기 세포 제거과정이 완료된 피부조직을 에틸 알코올(ethyl alcohol), 이소프로필알코올(isopropyl alcohol), 뷰탄올(butanol) 및 프로판올(propanol)로 구성된 군에서 하나 이상 선택된 것의 혼합물로 세척하여 피부조직에 남아있는 시약이나 불필요 조직을 제거하였다.
세포가 제거된 피부조직을 동결보호 조성물에 넣어 상온에서 90분~120분간 교반하였다. 이때, 상기 동결보호 조성물은 말티톨(maltitol), 솔비톨(Sorbitol), 락토오스(lactose), 말토오스(maltose), 글루코스(glucose) 및 갈락토스(galactose)로 구성된 군에서 하나 이상 선택된 것을 포함하는 동결보호제; 인산완충용액(phosphate buffer saline); 에틸렌디아민테트라아세트산(EDTA) 또는 구연산(citric acid); 멸균증류수가 0.5~1.5 : 0.01~0.5 : 0.6~1.2 : 5~10의 중량비로 혼합된 것일 수 있고, 더욱 구체적으로는 1 : 0.1 : 0.9 : 8의 중량비로 혼합된 것을 사용하였으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
교반이 완료된 피부조직을 -70℃ 이하에서 48시간 동결건조하여 본 발명의 무세포 진피 기질을 제조하였다.
비교예 1. SDS를 사용하여 제조한 무세포 진피 기질
본 발명 식물성 복합 천연 계면활성제를 사용한 세포 제거 단계 대신에 소듐도데실설페이트(SDS,Sodium Dodecyl Sulfate)를 사용하여 세포를 제거하는 단계를 포함시켜 무세포 진피 기질을 제조하였다.
구체적으로, 제조예 1의 천연 계면활성제 대신 5~10중량%의 소듐도데실 설페이트(SDS,Sodium Dodecyl Sulfate)를 사용한 점을 제외하고는 상기 실시예 1과 동일한 과정을 거쳐 비교예 1의 무세포 진피 기질을 제조하였다.
비교예 2~4. 비율을 달리하여 제조한 천연 계면활성제를 사용한 무세포 진피 기질의 제조
상기 제조예 1에서 제조한 천연 계면활성제를 구성하는 성분의 비율을 달리하여 비교예 2 내지 4의 계면활성제를 제조한 후 실시예 1과 동일한 방법을 이용하여 무세포 진피 기질을 제조하였다.
구체적으로, 제조예 1의 제조 방법에서 음이온성 계면활성제를 20 중량부 포함하는 것으로 변경하여 제조한 것을 비교예 2로, 유기산을 15 중량부 포함하여 제조한 것을 비교예 3로, 염화나트륨 또는 수산화나트륨을 15 중량부 포함하여 제조한 것을 비교예 4로 설정하였다.
실험예 1. 무세포 진피 기질 내 잔존 세포의 비율 확인
본 발명은 천연 계면활성제를 사용함에도 불구하고, 종래에 일반적으로 사용되던 SDS를 사용한 것 이상의 세포 제거효과를 나타내는 것을 특징으로 하는 바, 상기 실시예 1 및 비교예 1 내지 4의 무세포 진피 기질을 대상으로 잔존 세포를 확인하였다.
구체적으로, 상기 실시예 및 비교예의 무세포 진피 기질을 H&E 염색법과 EVOS M5000 세포 이미징 시스템을 이용하여 관찰하고 그 결과를 도 1에 나타내었다.
그 결과, 도 1에 나타난 바와 같이 천연 계면활성제를 이용한 실시예 1(도 1a)은 잔존세포가 전혀 확인되지 않았으나, SDS를 이용한 비교예1(도 1b)은 잔존세포가 다수 검출되었음을 확인하였다.
나아가, 같은 성분을 사용하였음에도 그 혼합 비율을 달리한 비교예 2 내지 4의 경우, 실시예 1 대비 잔존 세포가 다수 검출된 것을 확인하였다(도 1 c~e).
실험예 2. 천연 계면활성제의 세포 독성 확인
본 발명 천연 계면활성제는 천연물로부터 유래한 원료만을 사용하여 제조된 것으로서, 기존에 계면활성제로서 사용되던 SDS 대비 현저히 낮은 세포 독성을 가질 것으로 예상되는 바, MTT-assay를 통한 세포생존실험을 실시하고 그 결과를 확인하였다.
구체적으로, 본 실험예에서는 상기 제조예 1의 계면활성제 및 SDS 처리에 따른 세포 독성을 평가하고자 하였다. 이를 위하여, 인간 섬유아세포 세포주(Hs68)에 다양한 농도(0.1, 1, 10 및 15% (w/w))의 계면활성제를 처리한 후, MTT-assay를 실시하여 처리 농도별 생존율을 각각 확인하였다. 상기 실험 결과는 총 2 번의 독립적인 실험으로으로부터 얻어졌으며, 대조군으로는 계면활성제 비처리군을 사용하였다.
그 결과, 도 2에 나타낸 바와 같이, 0.1~15% (w/w) 농도 범위 내에서, 제조예 1의 계면활성제를 처리한 경우는 인간 섬유아세포 세포주의 생존율에 유의적인 변화를 일으키지 않음을 확인할 수 있었다. 반면, SDS를 처리한 경우에는 농도가 1%를 넘어가는 순간부터 세포 생존율이 현저히 감소하는 것을 확인하였다.
즉, 본 발명의 천연 계면활성제는 세포 독성이 낮은 물질로서, 이를 이용한 무세포 진피 기질의 제조 및 이의 체내 투여 시에도 수반되는 부작용이 현저히 감소함을 의미하는 것이다.
전술한 본 발명의 설명은 예시를 위한 것이며, 본 발명이 속하는 기술분야의 통상의 지식을 가진 자는 본 발명의 기술적 사상이나 필수적인 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 쉽게 변형이 가능하다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 이상에서 기술한 실시예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적이 아닌 것으로 이해해야만 한다. 예를 들어, 단일형으로 설명되어 있는 각 구성 요소는 분산되어 실시될 수도 있으며, 마찬가지로 분산된 것으로 설명되어 있는 구성 요소들도 결합된 형태로 실시될 수 있다.
본 발명의 범위는 후술하는 청구범위에 의하여 나타내어지며, 청구범위의 의미 및 범위 그리고 그 균등 개념으로부터 도출되는 모든 변경 또는 변형된 형태가 본 발명의 범위에 포함되는 것으로 해석되어야 한다.

Claims (10)

  1. (i) 피부조직을 항생제 및 1M의 염화나트륨(NaCl)이 포함된 용액에 넣어서 37℃에서 12시간 교반 후 표피층이 제거된 진피층을 수득하는 단계;
    (ii) 표피층이 제거된 진피층에 식물성 복합 천연 계면활성제를 처리하여 세포를 제거하는 단계;
    (iii) 세포가 제거된 진피층에 에틸 알코올(ethyl alcohol), 이소프로필알코올(isopropyl alcohol), 뷰탄올(butanol) 및 프로판올(propanol)로 구성된 군에서 하나 이상 선택된 것의 혼합물을 처리하여 잔존하는 계면활성제를 제거하는 세척 단계;
    (ⅳ) 세척이 완료된 진피층에 동결보호 조성물을 90 내지 120분간 처리하는 단계; 및
    (v) 상기 동결보호 조성물의 처리가 완료된 진피층을 동결건조하는 단계를 포함하는, 무세포 진피 기질의 제조방법에 있어서,
    상기 (ii) 단계의 식물성 복합 천연 계면활성제는 식물성 복합 천연 계면활성제 100중량부 대비, 음이온성 계면활성제 5 내지 13 중량부, 유기산 1 내지 9 중량부, 염화나트륨(NaCl) 또는 수산화나트륨(NaOH) 2 내지 10 중량부 및 잔부의 멸균증류수 68 내지 92 중량부를 포함하여 제조된 것이고,
    상기 음이온성 계면활성제는 LES(Disodium Lauryl Sulfosuccinate), 올리브 계면활성제(Sodium PEG-7 Olive oil carboxylate), 코코클루코사이드(Coco-Glucoside), 애플워시(Sodium Cocoyl Apple Amino Acids) 및 잔탄검(Xanthan Gum)으로 구성된 군에서 하나 이상 선택된 것이며,
    상기 (iv) 단계의 동결보호 조성물은 동결보호제 : 인산완충용액(phosphate buffer saline) : 에틸렌디아민테트라아세트산(EDTA) 또는 구연산(citric acid) : 멸균증류수가 0.5~1.5 : 0.01~0.5 : 0.6~1.2 : 5~10의 중량비로 혼합된 것인, 무세포 진피 기질의 제조방법.
  2. 삭제
  3. 삭제
  4. 삭제
  5. 제1항에 있어서,
    상기 유기산은 황산(sulfuric acid), 인산(phosphoric acid), 아세트산(acetic acid), 옥살산(Oxalic Acid), 타르타르산(tartaric acid) 및 구연산(citric acid)으로 구성된 군에서 하나 이상 선택된 것인, 무세포 진피기질의 제조방법.
  6. 삭제
  7. 삭제
  8. 제1항 또는 제5항의 제조방법에 의해 제조된, 무세포 진피기질.
  9. 제8항에 있어서,
    상기 무세포 진피기질은 세포독성을 띄지 않아 인체에 무해한 것인, 무세포 진피기질.
  10. 제8항에 있어서,
    상기 무세포 진피기질은 환자에게 이식된 후 면역거부반응 및 세포 독성이 억제된 것인, 무세포 진피기질.
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2023136538A1 (ko) * 2022-01-12 2023-07-20 주식회사 이레텍코리아 식물성 복합 천연 계면활성제를 이용한 생체 삽입용 무세포 진피 기질 및 이의 제조방법

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20010092985A (ko) * 2000-03-28 2001-10-27 황호찬 이식용 무세포 진피층 가공 및 분리방법
KR20110098490A (ko) * 2010-02-26 2011-09-01 (주)시지바이오 무세포 진피 기질의 제조 방법 및 그로부터 제조된 무세포 진피 기질
KR20130105225A (ko) * 2012-03-15 2013-09-25 주식회사 엘앤씨바이오 기저막층이 제거된 무세포 진피조직 이식체
JP2014505111A (ja) * 2011-02-14 2014-02-27 ミメドックス グループ インコーポレーティッド 微粉化胎盤組織の組成物ならびにそれを作成および使用する方法
US10322835B1 (en) * 2009-01-02 2019-06-18 Lifecell Corporation Method for preparing collagen-based materials

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20010092985A (ko) * 2000-03-28 2001-10-27 황호찬 이식용 무세포 진피층 가공 및 분리방법
KR100469661B1 (ko) 2000-03-28 2005-02-02 한스바이오메드 주식회사 이식용 무세포 진피층 및 이의 제조방법
US10322835B1 (en) * 2009-01-02 2019-06-18 Lifecell Corporation Method for preparing collagen-based materials
KR20110098490A (ko) * 2010-02-26 2011-09-01 (주)시지바이오 무세포 진피 기질의 제조 방법 및 그로부터 제조된 무세포 진피 기질
JP2014505111A (ja) * 2011-02-14 2014-02-27 ミメドックス グループ インコーポレーティッド 微粉化胎盤組織の組成物ならびにそれを作成および使用する方法
KR20130105225A (ko) * 2012-03-15 2013-09-25 주식회사 엘앤씨바이오 기저막층이 제거된 무세포 진피조직 이식체

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
"화장품용 천연계면활성제의 제조 및 이용 최신기술"(2013.09)* *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2023136538A1 (ko) * 2022-01-12 2023-07-20 주식회사 이레텍코리아 식물성 복합 천연 계면활성제를 이용한 생체 삽입용 무세포 진피 기질 및 이의 제조방법

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