KR101139434B1 - 돼지피부를 이용한 드레싱재의 제조방법 - Google Patents
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Abstract
의료용 돼지로부터 피부 전층을 분리하고 박피하여 채취하는 단계;채취된 피부를 저농도 글리세롤에 침지한 후 고농도 글리세롤로 교반배양하는 단계;고농도 글리세롤 배양 후 피부를 멸균 생리식염수로 세척하는 단계;세척 후 피부를 0.1 N NaOH 용액에 교반 배양하는 단계;NaOH 용액에 처리한 피부를 0.1 N HCl에서 중화시키고 생리식염수로 세척하는 단계;세척이 완료된 피부를 재단하고 망상구조를 만든 후 20~30% 글리세롤에 넣어 포장하는 단계;및 포장된 제품을 드라이 아이스를 적재한 상태에서 감마선 멸균하는 단계를 포함하는 피부드레싱재의 제조방법이 게시된다. 본 발명의 피부드레싱은 물리적 및 화학적 처리방법을 동시에 사용함으로써 털로 인한 오염원 및 고농도 글리세롤 처리에서도 남아있을 수 있는 면역원을 완전히 제거하는 효과가 있으며, 고농도의 글리세롤에 배양한 피부를 포장단계에서 저농도의 글리세롤에 담아 냉동보관을 하여 감마선 멸균을 함으로써 고농도 글리세롤에서 감마선 멸균을 실시하였을 경우 생기는 피부의 변형을 막을 수 있으며 글리세롤의 변색도 방지할 수 있는 효과가 있다.
감마선, 글리세롤, 돼지피부
Description
본 발명은 피부조직 본래의 구조변화 없이 안정하게 유지되는 범위 내에서 감마선 멸균을 하는 돼지피부를 이용한 드레싱재의 제조방법에 관한 것이다.
생체에 존재하는 자가치유 기능은 일정수준 이상의 손상이 발생할 경우, 그 기능을 상실하므로, 추가적인 치료과정이 필요하다. 특히 피부의 경우, 화상, 외상이나, 수술 또는 만성 궤양 등의 원인으로 손상된 경우 피부이식 과정이 요구된다. 피부가 손상되는 가장 대표적인 요인인 화상을 살펴보면 표피층이 손상된 1도 화상의 경우에는 피부에 넓게 퍼져 있는 아포크린선, 에크린선, 피지선, 모근 주위에 있는 표피세포 등이 빠르게 증식하여 손상부위를 회복시키고, 표피층과 진피층의 일부분이 손상된 2도 화상의 경우에는 1도 화상과 유사한 방식으로 상처부위가 회복되지만, 아포크린선, 에크k린선, 피지선, 모근의 많은 부분이 손상되고 일부만이 남아있기 때문에 회복속도가 느려 감염 등의 y위험이 증가한다. 표피층, 진피층 및 피하층까지 손상되는 3도화상의 경우에는 아포크린선, 에크린선, 모근의 모든 부분이 손상되어 건강한 피부와의 경계선에서만 표피세포가 증식되어 회복속도가 현저 히 감소하므로, 피부이식 치료가 필수적으로 요구된다,
현재 주로 사용되고 있는 피부이식 치료는 자기 신체의 건강한 피부조직을 떼어 외상부위에 이식하는 자가이식 방법을 이용하는데, 피부를 떼어낸 건강한 부위에 새로운 외상이 발생되어 환자의 고통이 증가하고 완치되는데 시간이 많이 소요되며, 경제적 부담 또한 매우 크다. 또한 심한 화상환자와 같이 건강한 신체부위가 충분히 남아있지 않은 경우에는 자가이식 방법을 적용할 수 없거나 또는 여러차례에 걸쳐 이식수술을 시행하여야 하는 문제점이 있다. 근래에는 건강한 피부를 망상으로 가공하여 더 넓은 부위에 이식하는 망상 이식 방법이 시행되고 있지만, 이식부위에 흉터나 수축현상 등이 발생하는 문제점이 있다. 그리고, 동종피부 사용하는 경우 초저온 동결로 보관하여야 하기 때문에 상기 보관을 위한 대형 초저온 냉동고가 필요하며 상기 초저온 보관으로 인하여 피부조직의 구조적 손상이 발생하는 문제점이 있었다. 또한 상기 보관된 피부를 사용하는 경우 사용전 해동과 세척 등의 준비작업이 필요하다는 문제점이 있었다.
게다가 상기 피부를 저장하여 사용하는 경우 멸균을 하여야 하는데, 상기 피부를 멸균하는 방법으로 에틸렌옥사이드를 이용하는 경우가 대부분이었다. 그러나 상기 에틸렌옥사이드의 경우 피이식 피부의 생물학적 특성을 변형시킬 수 있으며, 에틸렌 옥사이드, 에틸렌 클로로하이드린, 에틸렌 글리세롤과 같은 해로운 독성잔류물질을 생성할 수 있는 문제점이 있었다. 그리고 멸균의 방법으로 연한 조직에 열 또는 화학적 처리를 적용할 수 없다는 문제점이 있었다. 또한 고농도 글리세롤에 대한 감마선 멸균에 있어서도 콜라겐 매트릭스의 가교 혹은 고분자들의 결합조 직 파괴를 유발할 수 있고, 이러한 공정들은 제어하기 어려워 피부의 매트릭스 구조를 딱딱하게 하거나 악화시킬 수 있어 사용할 수 없다는 문제점이 있었다.
그리고 기존에 개발되었던 단순 글리세롤 배양에 의한 박테리아 멸균 및 장기 보관방법은 사람에 국한되어 사용할 수 있는 기술일 뿐 이종동물에서 유래하는 조직에 응용하기에는 질병전파에 대한 안전성 확보에 부족한 기술이라는 문제점이 있다.
본 발명은 저농도 글리세롤 배양을 이용한 감마선 멸균을 하여 안전한 생물학적 드레싱재를 제조함을 목적으로 한다. 본 발명은 의료용으로 선발된(인수공통질병에 대하여 혈액학적, 조직학적 검사를 통과한 돼지) 돼지로 부터 피부조직을 채취하여 피부외상환자 치료용 드레싱재로 활용하고자 한다.
또한 이종동물에서 유래하는 피부조직의 안전성을 확보하기 위해 저농도 글리세롤 배양방법과 드라이아이스를 이용한 냉동 감마선 멸균 방법을 이용하여 기존의 생물학적 드레징재보다 저렴하고 공급이 원할한 생물학적 드레싱재를 제조하고자 한다.
또한 본 발명은 제조과정에서 원재료인 돼지 피부의 털, 모낭, 모근의 제거와 함께 면역유발물질을 제거함을 목적으로 한다.
또한 고농도의 글리세롤에 배양한 피부를 포장단계에서 저농도의 글리세롤에 담아 냉동보관을 하여 감마선 멸균을 실시함으로써 피부조직 본래의 구조 변화를 막고 글리세롤의 변색을 방지하는 것을 목적으로 한다.
본 발명의 피부드레싱제의 제조방법은 상기의 문제점을 해결하기 위해 의료용 돼지로부터 피부 전층을 분리하고 박피하여 채취하는 단계;상기 채취된 피부를 저농도 글리세롤에 침지한 후 고농도 글리세롤로 교반배양하는 단계;상기 고농도 글리세롤 배양 후 피부를 멸균 생리식염수로 세척하는 단계;상기 세척 후 피부를 0.1 N NaOH 용액에 교반 배양하는 단계;상기 NaOH 용액에 처리한 피부를 0.1 N HCl에서 중화시키고 생리식염수로 세척하는 단계;상기 세척이 완료된 피부를 재단하고 망상구조를 만든 후 20~30% 글리세롤에 넣어 포장하는 단계;및 상기 포장된 제품을 드라이 아이스를 적재한 상태에서 감마선 멸균하는 단계를 포함한다.
본 발명은 의료용 돼지 피부를 이용하는 것으로 돼지의 피부는 사람의 피부와는 비교할 수 없을 정도로 털이 두껍고 밀도가 높게 분포하고 있기 때문에 물리적인 면도방법과 화학적 처리방법을 동시에 사용하여 털로 인한 오염원 및 면역원을 완전히 제거하였다. 특히 0.1 N NaOH 용액을 이용하면 털 뿐만 아니라 고농도 글리세롤 처리에서도 남아있을 수 있는 면역원을 완전히 제거할 수 있다.
상기 글리세롤은 피이식피부 미생물과 박테리아에 의한 오염을 방지하는 역할을 한다. 더불어 상기 글리세롤은 급냉동 시설 없이도 생물학적 드레싱재의 보관을 가능하게 한다. 상기 글리세롤은 항생제를 추가로 사용할 수 있다.
바람직하게는, 상기 감마선 조사단계의 감마선은 20 내지 30kGy 선량으로 조사하는 것을 특징으로 한다. 가장 바람직하게는 25kGy 선량의 감마선으로 조사한다. 상기 조사는 자가분해에 관련된 효소의 활성을 막아 저온에서 피부의 분해를 저해할 뿐만 아니라, 글리세롤 처치 후에 남아 있을 수 있는 세균 및 바이러스를 사멸할 수 있다. 상기 조사시에 상기 세척된 피부를 수분흡수를 최소화하기 위하여 알루미늄 파우치에 넣어 밀봉하여 조사하는 것이 바람직하다. 상기 감마선의 감수성은 해충, 대장균군, 무포자형성균, 포자형성균, 포자 및 바이러스 순으로 감소한다. 상기 해충에는 화랑곡나방, 권련벌레, 가루진드기, 바퀴벌레, 딱정벌레, 바구 미 등, 저곡해충류 등이 속하며 감마선 조사량이 0.5 내지 3 kGy에서 사멸한다. 상기 대장균군에는 대장균, 살모넬라, 장티푸스균, 리스테리아, 이질균,폐렴균(레지오넬라)등이 속하는데 감마선 조사량이 1 내지 5 kGy에서 사멸한다. 상기 무포자형성균과 포자형성균에는 비브리오균, 녹농균, 탄저균, 고초균, 포도상구균, 연쇄상구균, 각종 곰팡이 등이 속하는데 감마선 조사량이 5 내지 10 kGy에서 사멸한다. 상기 포자에는 세균포자, Endotoxin, Exotoxin, 곰팡이독(Mycotoxin, Aflatoxin), 보툴리늄독 등이 속하며, 감마선 조사량이 10 내지 20 kGy에서 사멸한다. 상기 바이러스에는 구제역, 에볼라, 각종 바이러스가 속하는데 감마선 조사량이 30 kGy 이상이 되어야 사멸한다. 상기 드레싱재는 20 내지 30kGy 선량의 감마선을 조사함으로써 안전하게 글리세롤 처리에도 불구하고 남아있을지 모르는 균을 사멸시킨다. 또한 감마선 멸균에 있어서 감마선은 20 ~ 30 kGy 인 것을 특징으로 하며 이는 드레싱재로서의 역할을 하기 위하여 피부조직의 변성이 없는 범위이다.
바람직하게는, 상기 글리세롤처리단계는, 포유동물의 피부를 0.2~2mm 두께로 채취하여 세척한 후 멸균된 45-55%의 1차 글리세롤 용액에 상기 피부를 보관하여 운반하는 단계; 상기 1차 글리세롤에 포함된 피부를 멸균된 70-80%의 2차 글리세롤용액에서 1.5-2.5시간 동안 37℃에서 진탕 배양하는 단계; 및 상기 진탕 배양된 피부를 멸균된 80 내지 90%의 4차 글리세롤용액에 2주간 4℃에서 냉장보관하는 단계 를 포함하도록 한다. 상기 글리세롤을 점차적으로 농도를 높이면서 처리하는 이유는 상기 피이식피부에 포함된 수분을 단계적으로 제거하기 위한 것이다. 이는 고농도의 글리세롤을 바로 처리하는 경우 삼투압에 의한 피부 조직이 손상이 될 수 있 으므로 저농도부터 단계적으로 처리하는 것이다. 상기 단계에서 고농도의 글리세롤을 사용하는데 상기 고농도의 글리세롤을 통해 세포를 사멸시키고 피이식피부에 포함되어 있을 수 있는 세균 및 바이러스를 사멸시키기 위한 것이다.
또한 글리세롤로 교반 배양시 조건은 20 ~ 25℃ 의 상온에서 3 ~ 12 시간 동안 배양하는 것을 특징으로 한다.
한편 상기 감마선 멸균시에는 20~30%의 저농도 글리세롤에 보관되어 포장이 끝난 제품을 드라이 아이스와 함께 - 70 ℃ 이하의 냉동상태를 유지하여 멸균하는 것을 특징으로 하며 이로써 피부조직의 변성이 일어나지 않도록 하여 안전한 드레싱재를 제조할 수 있다.
본 발명의 피부드레싱은 물리적 및 화학적 처리방법을 동시에 사용함으로써 사람의 피부와는 비교될 수 없을 정도로 털이 두껍고 밀도가 높게 분포하는 의료용 돼지의 피부를 이용할 경우 문제점을 해결하여 털로 인한 오염원 및 고농도 글리세롤 처리에서도 남아있을 수 있는 면역원을 완전히 제거하는 효과가 있다.
또한, 상온에서 가공공정을 거치므로 피부조직의 구조적 손상이 없으며, 감마선으로 조사함으로써, 자가분해에 관련된 효소의 활성을 막아 저온에서 피부의 분해를 저해하고 글리세롤 처치 후에 남아있을 수 있는 세균이나 바이러스를 사멸시킴으로써 피부이식시 2차 감염을 일으키지 않으며, 잔류 독성물질이 남아있지 않으므로 안전하고 유용하다.
또한 본 발명의 피부드레싱은 고농도의 글리세롤에 배양한 피부를 포장단계 에서 저농도의 글리세롤에 담아 냉동보관을 하여 감마선 멸균을 함으로써 기존의 고농도 글리세롤에서 감마선 멸균을 실시하였을 경우 생기는 피부의 변형을 막을 수 있으며 글리세롤의 변색도 방지할 수 있는 효과가 있다.
이상에서는 본 발명의 바람직한 실시예에 대해 설명하였으나 당해 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자라면 본원 발명의 요지를 벗어남이 없이 다양한 변형실시가 가능할 것이며, 이러한 변형실시는 본원발명의 보호범위에 속하는 것으로서 본원발명의 보호범위는 특허청구범위에 기재된 바에 따라 해석되어야 할 것이다.
이하 본 발명에 따른 피부 드레싱재의 제조방법에 대하여 단계별로 상세하게 설명하면 다음과 같다.
1. 의료용 돼지로부터 피부 채취
인수공통전염병 등의 혈액학적, 조직학적 검사를 통과한 의료용 돼지를 약물을 이용하여 희생시킨 후 소독약품을 이용하여 피부를 소독한 후 피부 전층을 분리하였다.
2. 박피
분리된 표피층과 진피층이 포함된 피부조직을 의료용 박피기를 이용하여 두께 0.2 ~ 0.8 mm로 박피하였다.
3. 글리세롤 배양
채취된 피부를 상온에서 항생제, 항균제를 포함하고 50%농도를 유지하는 글리세롤 용액에 1일간 보관하였다. 50% 농도의 글리세롤 용액에 보관된 피부조직이 육안검사로 피부 조직 및 용액에 문제가 없는 것을 확인하고 상온에서 항생제, 항균제를 포함하고 75%의 농도를 유지하는 글리세롤 용액으로 옮겨 2시간 동안 shaking incubator에서 37℃의 온도로 배양하고, 다시 85%의 농도를 유지하는 글리세롤 용액으로 옮겨 3 ~ 12 시간 동안 다시 같은 조건에서 배양하였다.
상기 글리세롤의 처리로 피부조직에 포함된 수분이 단계적으로 제거됨을 확인하였다. 상기 글리세롤을 처리한 피부를 다시 신선한 85%의 글리세롤로 다시 옮겨 4℃의 냉장에서 2주간 보관하여, 고농도의 글리세롤을 통해 세포를 사멸시키고 피부에 포함되어 있을 수 있는 세균 및 바이러스를 사멸시킬 수 있도록 하였다. 2주 후 냉장보관된 피부를 생리식염수로 10분간씩 2회 shaker에서 세척하였다.
4.
멸균생리식염수
세척
85%의 고농도 글리세롤로 배양이 끝난 피부는 0.9% 멸균 생리식염수로 10분간 3회 세척하였다.
5. 0.1N NaOH 처리
생리식염수로 세척이 끝난 피부를 0.1N NaOH 용액을 이용하여 24시간 동안 교반 배양하여, 피부의 털, 모낭, 모근과 기타 면역유발물질을 제거하였다. 즉, 돼지 피부의 특성상 0.1N NaOH 를 이용하여 화학적 처리를 함으로써 돼지피부의 털을 제거할 뿐만 아니라, 일반적인 고농도 글리세롤 처리에서도 남아있을 수 있는 면역원을 완전히 제거할 수 있는 효과가 있다. 도 3 및 도 4는 0.1N NaOH 처리하기 전과 후의 H&E 조직염색한 사진으로서 NaOH 처리로 면역원이 제거됨을 알 수 있다. 그리고 도 5와 도6은 각각 0.1N NaOH 처리전, 0.1N NaOH 처리하여 세포제거후 면역조직화학염색한 사진으로서 역시 NaOH 처리로 면역원이 제거됨을 알 수 있다.
6. 0.1N
HCl
처리
상기 0.1N NaOH 처리가 끝난 피부를 0.1N HCl에서 10분간 중화시키고 멸균 생리식염수를 이용하여 30분간 세척하였다.
7. 피부재단 및 그물망 절단기(
mesher
)로 제품 제작 및 포장
생리식염수로 세척이 완료된 피부를 규격에 맞게 재단하고 그물망 절단기를 이용하여 망상구조를 만든다. 저농도 글리세롤에 넣어 개별 포장용기에 포장하였다. 보관시 글리세롤 농도가 20% 이하일 경우에는 결정이 생겨 조직이 손상되는 문제가 있고 30 % 이상의 고농도일 경우에는 감마선 멸균시 피부변형이 생기기 때문에 작업이 완료된 제품은 20 ~ 30 % 글리세롤에 넣어 보관하여야 한다.
8. 감마선 멸균
고농도의 글리세롤에 배양한 피부를 포장단계에서 20% 의 저농도 글리세롤에 담아 보관하고 -78℃의 드라이아이스의 존재하에서 냉동보관을 하여 감마선(60-Co gamma irradiation)을 이용하여 멸균을 실시하였다.
도 1은 고농도의 글리세롤에 보관하면서 감마선 멸균한 피부조직의 사진으로서 피부조직의 변형이 생긴 반면, 도 2에서와 같이 20% 의 저농도 글리세롤에 담아 보관하고 -78℃의 냉동상태에서 감마 멸균한 피부조직은 변형이 없었다.
즉, 저농도의 글리세롤에 저장하고 -70℃ 이하의 냉동상태에서 감마선 멸균을 하기 때문에 고농도 글리세롤에서 감마선 멸균을 실시하였을 경우 생기는 피부의 변형(딱딱해짐) 및 글리세롤의 변색도 막을 수 있다.
표 1에서와 같이 본 발명의 피부드레싱재 제조를 위한 최적의 감마 조사선량은 20~30 kGy 범위내로 확인되었다.
| 방사선선량 (kGy) 멸균온도 글리세롤농도 |
15 | 20 | 25 | 30 | 35 | 40 | ||||||
| 상온 | -70 | 상온 | -70 | 상온 | -70 | 상온 | -70 | 상온 | -70 | 상온 | -70 | |
| 85 | 20 | 85 | 20 | 85 | 20 | 85 | 20 | 85 | 20 | 85 | 20 | |
| 일반 무포자형성균과 포자형성균 | 거의 사멸 |
사멸 | 사멸 | 사멸 | 사멸 | 사멸 | ||||||
| 케라티노사이트의 미세구조(공포형성) | 공포형성 11% |
변화없음 | 18% | 10% | 19% | 15% | 25% | 18% | 41% | 27% | 46% | 35% |
| 섬유아세포의 미세구조(사립체 팽창) | 사립체 팽창 28% |
17% | 28% | 18% | 29% | 20% | 35% | 20% | 37% | 20% | 사립체세포질파괴 | 25% |
| 혈관내피세포 | 손상 없음 |
손상없음 | 손상없음 | 손상없음 | 손상없음 | 손상없음 | 사립체팽창 15% |
손상없음 | 사립체팽창 23% |
손상없음 | 사립체팽창 28% |
사립체팽창 15% |
| 콜라겐 미세구조 | 손상없음 | 손상없음 | 손상없음 | 손상없음 | 손상없음 | 손상없음 | 손상 없음 |
손상없음 | 손상 없음 |
손상없음 | 손상 없음 |
손상없음 |
상기 표 1에서와 같이 감마선 조사량이 20~30 kGy인 경우 드레싱재의 피부조직을 조직 본래의 구조 변화 없이 안정하게 유지할 수 있다.
이하에서는 상기 감마선 조사에 따른 피부조직의 손상 여부에 대하여 실험을 통하여 알아보았다.
* 감마선 조사에 따른 진피의 미세구조의
손상여부
감마선이 피부조직에 어떠한 영향을 미치는지 알아보고자 상기 피부는 35세 여성의 일반적인 복부 피부를 채취하여 상기 피부를 진피층이 아래로 가도록 하여 24.5×24.5㎠ 크기의 분석접시 위에 올려놓고 직사각형이 되도록 4×12 내지 5×8 ㎠의 크기로 절단하여 대조군과 실험군을 마련하였다.
상기 실험군은 상기 설명한 방법으로 준비한 피부에 감마선을 선량을 15, 20, 25, 30, 35, 및 40 KGy 으로 하여 조사한 다음에 상기 피부의 미세구조를 전자현미경으로 관찰하였다. 도 8을 참고하면, 상기 글리세롤을 처리한 피부에 감마선을 조사한 것으로써 외관상 아무런 변화가 없음을 알 수 있다.
도 9를 참고하면, 상기 피부를 각각의 정도가 다른 감마선으로 조사한 다음 상기 피부의 구조의 손상 여부를 알아보기 위하여 H&E 스태인(hematoxylin and eosin stain)으로 염색하여 전자현미경을 100 배율로 하여 대조군와 실험군의 콜라겐 메트릭스를 관찰한 것이다. 상기 감마선을 조사한 피부와 감마선을 조사하지 않은 대조군을 진피 구조를 살펴보면 진피 구조가 파괴되거나 손상되지 않은 것을 관찰할 수 있었으며, 높은 조사량에도 불구하고 상기 진피구조가 대조군과 별다른 차이가 없음을 알 수 있었다.
* 감마선 조사에 따른 엘라스틴 섬유의 미세구조의 손상여부
감마선이 피부조직에 어떠한 영향을 미치는지 알아보고자 상기 피부는 35세 여성의 일반적인 복부 피부를 채취하여 상기 피부를 진피층이 아래로 가도록 하여 24.5×24.5㎠ 크기의 분석접시 위에 올려놓고 직사각형이 되도록 4×12 내지 5×8 ㎠의 크기로 절단하여 대조군과 실험군을 마련하였다.
상기 실험군은 상기 설명된 방법으로 준비한 피부에 감마선을 상기 마련된 피부에 15, 20, 25, 30, 35, 및 40 KGy 으로 각각 감마선을 조사한 다음에 상기 피부의 미세구조를 전자현미경으로 관찰하였다.
도 10을 참고하면, 상기 피부를 각각의 정도가 다른 감마선으로 조사한 다음 상기 피부의 구조의 손상 여부를 알아보기 위하여 엘라스틴 섬유를 전자현미경을 100배율로 하여 관찰하였다. 상기 엘라스틴 섬유는 감마선을 조사한 피부와 조사하지 않은 피부의 차이가 없었으며, 높은 정도의 감마선을 조사한 경우에도 엘라스틴 섬유의 구조의 변화시키지 않아 감마선이 엘라스틴 섬유에 영향을 미치지 않는 것을 알 수 있었다.
* 감마선 조사에 따른 콜라겐의 미세구조의
손상여부
감마선이 피부조직에 어떠한 영향을 미치는지 알아보고자 상기 피부는 35세 여성의 일반적인 복부 피부를 채취하여 상기 피부를 진피층이 아래로 가도록 하여 24.5×24.5㎠ 크기의 분석접시 위에 올려놓고 직사각형이 되도록 4×12 내지 5×8 ㎠의 크기로 절단하여 대조군과 실험군을 마련하였다.
상기 실험군은 상기와 동일한 방법으로 준비한 피부에 감마선을 상기 마련된 피부에 15, 25, 및 35 KGy 으로 각각 감마선을 조사한 다음에 상기 피부의 미세구조를 전자현미경으로 관찰하였다.
도 11을 살펴보면, 감마선 조사에 의하여 콜라겐의 손상 여부를 알아보기 위하여 상기 피부를 각각의 정도가 다른 감마선으로 조사한 다음 상기 콜라겐을 전자현미경으로 관찰하였다. 감마를 조사하지 않은 조직에 비해 조사선량별로 감마를 조사한 조직들의 구조적 차이가 없음을 관찰하였다. 또한, 상기 감마선의 조사량이 30KGy이상에서 세포가 영향을 받는 것으로 확인이 되었으며, 일부 자체의 자가용해(autolysis)에 의해 표피 (epidermis)가 떨어지는 현상을 확인할 수 있었다.
또한 상기와 동일한 실험을 통하여 감마선 조사에 따른 케라티노사이트의 미세구조, 섬유아세포의 미세구조, 혈과내피세포의 미세구조, 아교질섬유의 미세구조의 손상이 없음을 확인하였다.
도 1은 고농도 글리세롤에 배양된 감마선 멸균한 피부조직의 사진,
도 2는 저농도 글리세롤 보관된 감마선 멸균한 피부조직의 사진,
도 3은 0.1N NaOH 처리하여 면역원을 제거하기 전의 H&E 조직염색한 사진,
도 4는 0.1N NaOH 처리하여 면역원을 제거한 후의 H&E 조직염색한 사진,
도 5은 0.1N NaOH 처리전의 면역조직화학염색한 사진,
도 6은 NaOH 처리하여 세포제거후 면역조직화학염색한 사진,
도 7은 완제품을 드라이아이스와 함께 적재하여 감마선 멸균을 진행하는 사진,
도 8은 글리세롤로 세척하고 감마선을 조사한 피부를 나타내는 사진,
도 9는 상기 피부를 각각의 정도가 다른 감마선으로 조사한 다음 H&E 스태인(hematoxylin and eosin stain)으로 염색하여 전자현미경을 100 배율로 하여 나타낸 도면,
도 10은 상기 피부를 각각의 정도가 다른 감마선으로 조사한 다음 엘라스틴 섬유를 전자현미경을 100배율로 하여 나타낸 도면,
도 11은 상기 피부를 각각의 정도가 다른 감마선으로 조사한 다음 콜라겐을 전자현미경을 100배율로 하여 나타낸 도면이다.
Claims (4)
- 의료용 돼지로부터 피부 전층을 분리하고 박피하여 채취하는 단계;상기 채취된 피부를 45-55% 의 글리세롤에 침지한 후 70-90% 의 글리세롤로 교반배양하는 단계;상기 글리세롤 배양 후 피부를 멸균 생리식염수로 세척하는 단계;상기 세척 후 피부를 0.1 N NaOH 용액에 교반 배양하는 단계;상기 NaOH 용액에 처리한 피부를 0.1 N HCl에서 중화시키고 생리식염수로 세척하는 단계;상기 세척이 완료된 피부를 재단하고 망상구조를 만든 후 20~30% 글리세롤에 넣어 포장하는 단계;및상기 포장된 제품을 드라이 아이스를 적재한 상태에서 감마선 멸균하는 단계를 포함하는 피부드레싱재의 제조방법.
- 제1항에 있어서,상기 감마선은 20 ~ 30 kGy 인 피부드레싱재의 제조방법.
- 제1항에 있어서,글리세롤로 교반 배양시 20 ~ 25℃ 의 상온에서 3 ~ 12 시간 동안 배양하는 것을 특징으로 하는 피부드레싱재의 제조방법.
- 제1항에 있어서,상기 감마선 멸균시에 포장된 피부조직은 드라이아이스와 함께 - 70 ℃ 이하를 유지하는 것을 특징으로 하는 피부드레싱재의 제조방법.
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