KR102302392B1 - 항염증 활성을 갖는 펩티드 및 이를 포함하는 조성물 - Google Patents

항염증 활성을 갖는 펩티드 및 이를 포함하는 조성물 Download PDF

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Abstract

본 발명에서는 서열번호 1 내지 161 중 어느 한 항의 서열을 갖는 펩티드, 서열 번호 1의 서열의 단편인 펩티드 또는 상기 펩티드 서열과 80% 이상의 서열 상동성을 갖는 펩티드 및 이를 유효 성분으로 포함하는 항염 조성물이 개시된다. 본 발명에 따른 서열번호 1 내지 161 중 어느 하나의 서열을 갖는 펩티드 또는 상기 서열과 80%의 상동성을 갖는 서열을 갖는 펩티드 또는 단편인 펩티드는 우수한 염증 예방 또는 억제 효과를 가진다. 따라서 본 발명의 펩티드를 포함하는 조성물은 항염증 효과를 위한 약학적 조성물 또는 화장료 조성물로서 사용될 수 있어 다양한 염증성 질환의 치료 및 예방에 널리 이용될 수 있다.

Description

항염증 활성을 갖는 펩티드 및 이를 포함하는 조성물{Anti-inflammatory Peptides and Composition comprising the same}
본 발명은 항염증 활성을 갖는 펩티드 및 이를 포함하는 조성물에 관한 것이다.
염증은 외부의 물리적 자극, 각종 알레르기 유발 물질 접촉을 예로 들 수 있는 화학적 자극 또는 박테리아, 곰팡이 또는 바이러스와 같은 미생물의 침입 등에 의해 생체 조직이 손상되는 것을 막기 위한 생체의 방어 반응 중 하나이다.
염증 신호는 사이클로옥시게나제(COX) 경로 또는 리폭시게나제(LOX) 경로를 통하여 만들어지며, 프로스타글란딘, 트롬복산 등을 생성한다. 염증 신호가 전달되면 생체 내에서는 여러 가지 변화가 일어나는데, 그 중 하나로 염증이 필요한 부위의 혈관을 확장시켜 혈액 공급이 왕성하게 일어나도록 하여, 호중구 등 염증 반응에 필요한 혈액 세포가 집중 공급되는 현상을 들 수 있다. 그러나 이러한 생체의 방어 반응이 비정상적으로 과도하게 일어나면 여러 염증성 질환들이 발병하게 되므로, 이를 방지하고자 염증 신호 경로의 효소(예를 들어 COX-1, COX-2, 5-LOX, 12-LOX 등)를 억제하여 염증 신호 경로를 차단함으로써, 과도한 염증 반응을 억제할 수 있는 약물들이 개발되고 있다.
염증은 반응기간에 따라서 급성염증(acute inflammation, 즉각적 반응, 비특이적 반응, 수일~수주일), 만성염증(chronic inflammation, 지연된 반응, 특이성 반응, 수주일 이상), 아급성 염증(subacute inflammation, 급성과 만성염증의 중간단계, 다핵구와 단핵구의 혼합형 산출물의 특징)으로 나뉜다.
또한, 염증을 유발하는 인자에는 펩티드성 인자 이외에 프로스타그란딘, 루코트리엔, 혈소판활성인자와 같은 지질성 인자, 염증인자 합성효소, NO(nitric oxide)와 같은 자유라디칼, 여러 종류의 세포접착분자, 면역계, 응고인자 등이 관여한다.
현재까지 알려진 염증의 기전은 외부의 생물학적인 원인(세균, 바이러스, 기생충), 물리학적인 원인(기계적인 자극, 열, 방사선, 전기), 화학적 원인 등으로 인한 세포손상으로 히스타민 및 키닌 등이 방출되어 혈관확장, 모세혈관 투과성 증가 및 염증부위로 대식세포의 집결이 일어나고, 이에 따라서 감염부위의 혈류량 증가, 부종, 면역세포 및 항체 이동, 통증, 발열 등의 현상이 일어난다.
현재 사용되고 있는 염증의 치료제에는 이부프로펜과 같은 합성의약품, 항히스타민제, 스테로이드, 코티손, 면역억제제, 면역 항진제 등이 사용되고 있으나 치료효과가 일시적이거나 단순 증상완화, 과민반응, 면역체계 악화 등의 부작용이 많이 있고 염증의 근본적인 치료가 어렵다. 따라서, 최근 효과적인 염증 완화를 위하여, 상기 염증 관련 단백질의 발현을 억제할 수 있는 물질에 대한 연구가 진행되고 있다. 그러나, 이러한 연구에 의해 개발된 항염물질의 경우 몇 가지 부작용이 문제되고 있다. 비스테로이드성 항염증제(NSAID)와 스테로이드성 항염증제(SAID)를 비롯한 다양한 기전의 염증 억제용 약물들이 개발되어 있으나, 이들은 적지 않은 부작용을 나타낼 뿐만 아니라, 염증 반응을 근본적으로 억제하는 것이 아니기에, 좀 더 효과적이고 안전하며 경제성이 높은 약물에 대한 요구가 여전히 존재한다. 일 예로, 급성 또는 류마티스성 관절염과 같은 만성의 염증 질환의 치료에 사용되는 비스테로이드성 소염 약물들은 COX-2 효소를 억제할 뿐만 아니라 COX-1 효소도 억제함으로써 위장관 장애와 같은 부작용을 나타내는 것으로 알려져 있다.
[선행기술문헌]
[특허문헌]
KR2012-013996A
KR2012-0133661A
KR2011-0060940A
US2011-0150873A1
[비특허문헌]
Bonaldi T et al., EMBO J, (22)5551-60, 2003
Yankner BA et al., Science(New York, N.Y.)[1990, 250(4978):279-282]
Dahlgren KN et al., J. Biol. Chem. 277:32046-32053, 2002.
본 발명자들은 텔로머라제로부터 유래되는 펩티드들이 항염 활성을 가질 수 있음을 발견하고 본 발명을 완성하게 되었다.
따라서 본 발명의 목적은 신규 펩티드를 제공하는데 있다.
본 발명의 다른 목적은 신규 펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 제공하는데 있다.
본 발명의 다른 목적은 항염증 활성을 갖는 펩티드를 제공하는데 있다.
본 발명의 다른 목적은 항염증 활성을 갖는 펩티드를 유효성분으로 하는 항염증 조성물을 제공하는데 있다.
본 발명의 다른 목적은 항염증 활성을 갖는 펩티드를 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물을 제공하는데 있다.
본 발명의 다른 목적은 항염증 활성을 갖는 펩티드를 유효성분으로 포함하는 약학적 조성물을 제공하는데 있다.
본 발명의 일측면에 따르면, 항염증 활성을 갖는 펩티드로서, 서열번호 1 내지 161 중 어느 하나 이상의 아미노산 서열을 포함하는(comprising) 펩티드, 상기 아미노산 서열과 80%이상의 서열 상동성을 갖는 펩티드 또는 그 단편인 펩티드가 제공된다.
본 발명의 다른 측면에 따르면, 상기 단편은 3개 이상의 아미노산으로 구성된 단편일 수 있다. 예를 들어, 상기 단편은 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 또는 26개의 아미노산으로 구성된 단편일 수 있다.
본 발명의 다른 측면에 따르면, 상기 펩티드는 30개 이하의 아미노산으로 구성될 수 있다. 예를 들어, 상기 단편은 29, 28, 27, 26, 25, 24, 23, 22, 21, 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 또는 8개의 아미노산으로 구성된 단편일 수 있다.
본 발명의 다른 측면에 따르면, 상기 펩티드는 서열번호 1 내지 161 중 어느 하나의 아미노산 서열로 이루어질(consist of) 수 있다.
본 발명의 다른 측면에 따르면, 상기 펩티드는 서열번호 1 내지 서열번호 6, 서열번호 9, 서열번호 11, 서열번호 14 내지 21, 서열번호 23 내지 서열번호 37, 서열번호 39 내지 서열번호 44, 서열번호 47 내지 서열번호 53, 서열번호 55 내지 서열번호 61, 서열번호 63 내지 서열번호82, 서열번호 84 내지 서열번호 94, 서열번호 96, 서열번호 99 내지 서열번호 104, 서열번호 107 내지 서열번호 109, 서열번호 115, 서열번호 116, 서열번호 120 내지 서열번호 122, 서열번호 124, 서열번호 129 내지 서열번호 133, 서열번호 142 내지 서열번호 144, 서열번호 146, 서열번호 148, 서열번호 149 및 서열번호 155 내지 서열번호 159로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나의 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 다른 측면에 따르면, 상기 펩티드는 서열번호 15 내지 서열번호 18, 서열번호 23 내지 서열번호 27, 서열번호 29, 서열번호 31 내지 서열번호 34, 서열번호 39 내지 서열번호 41, 서열번호 47, 서열번호48, 서열번호 51 내지 서열번호 53, 서열번호 55 내지 서열번호 58, 서열번호 61, 서열번호 65 내지 서열번호 68, 서열번호 70, 서열번호 73 내지 서열번호 79, 서열번호 81, 서열번호 82, 서열번호 84 내지 서열번호 87, 서열번호 89 내지 서열번호 94, 서열번호 96, 서열번호 99, 서열번호 101 내지 서열번호 104, 서열번호 107 내지 서열번호 109, 서열번호 120, 서열번호 121, 서열번호 129 내지 서열번호 132, 서열번호 142 내지 서열번호 144, 서열번호 146, 서열번호 148, 서열번호 149, 및 서열번호 157 내지 서열번호 159로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나의 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 다른 측면에 따르면, 상기 펩티드는 서열번호 1 내지 서열번호 5, 서열번호 7, 서열번호 9, 서열번호 10, 서열번호 12, 서열번호 13, 서열번호 15, 서열번호 17 내지 서열번호 27, 서열번호 29, 서열번호 30, 서열번호 32 내지 서열번호 53, 서열번호 55 내지 서열번호 60, 서열번호 67, 서열번호 68, 서열번호 70, 서열번호 72 내지 서열번호 82, 서열번호 84 내지 서열번호 92, 서열번호 94, 서열번호 99 내지 서열번호 112, 서열번호 114, 서열번호 127 내지 서열번호 144, 서열번호 146, 서열번호 148, 서열번호 149, 서열번호 151 및 서열번호 153 내지 서열번호 161로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나의 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 다른 측면에 따르면, 상기 펩티드는 서열번호 1 내지 서열번호 5, 서열번호 7, 서열번호 9, 서열번호 10, 서열번호 12, 서열번호 13, 서열번호 15, 서열번호 17 내지 서열번호 23, 서열번호 25 내지 서열번호 27, 서열번호 29, 서열번호 30, 서열번호 33 내지 서열번호 43, 서열번호 156, 서열번호 157 및 서열번호 159로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나의 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 다른 측면에 따르면, 상기 펩티드는 서열번호 1, 서열번호 2, 서열번호 4, 서열번호 6, 서열번호 7, 서열번호 8, 서열번호 9, 서열번호 10, 서열번호 12, 서열번호 14, 서열번호 15, 서열번호 17, 서열번호 18, 서열번호 20, 서열번호 22, 서열번호 23, 서열번호 24, 서열번호 25, 서열번호 26, 서열번호 27, 서열번호 28, 서열번호 29, 서열번호 30, 서열번호 33, 서열번호 34, 서열번호 35, 서열번호 36, 서열번호 37, 서열번호 38, 서열번호 39, 서열번호 40, 서열번호 41, 서열번호 42, 서열번호 44, 서열번호 45, 서열번호 52, 서열번호 57, 서열번호 60, 서열번호 61, 서열번호 62, 서열번호 64, 서열번호 65, 서열번호 67, 서열번호 68, 서열번호 69, 서열번호 91, 서열번호 99, 서열번호 100, 서열번호 104, 서열번호 106, 서열번호 107, 서열번호 108, 서열번호 109, 서열번호 111, 서열번호 112, 서열번호 115, 서열번호 117, 서열번호 118, 서열번호 119, 서열번호 120, 서열번호 122, 서열번호 124, 서열번호 125, 서열번호 126, 서열번호 129, 서열번호 130, 서열번호 131, 서열번호 132, 서열번호 135, 서열번호 146, 서열번호 151, 서열번호 154 및 서열번호 156으로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나의 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 다른 측면에 따르면, 상기 펩티드는 인간의 텔로머라제로부터 유래된 것일 수 있다.
본 발명의 일측면에 따르면, 항염증 활성을 갖는 펩티드로서, 서열번호 1 내지 161 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 펩티드 또는 상기 아미노산 서열과 80%이상의 서열 상동성을 갖는 펩티드 또는 그 단편인 펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드가 제공된다.
본 발명의 다른 측면에 따르면, 상기 펩티드는 30개 이하의 아미노산을 코딩하는 폴리뉴클레오티드일 수 있다. 예를 들어, 상기 단편은 29, 28, 27, 26, 25, 24, 23, 22, 21, 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 또는 8개의 아미노산으로 구성된 단편일 수 있다.
본 발명의 다른 측면에 따르면, 상기 펩티드는 서열번호 1 내지 161 중 어느 하나의 아미노산 서열로 이루어진 펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드일 수 있다.
본 발명의 다른 측면에 따르면, 상기 펩티드는 인간의 텔로머라제로부터 유래된 것인 펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드일 수 있다.
본 발명의 일측면에 따르면 서열번호 1 내지 161 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 펩티드, 상기 아미노산 서열과 80%이상의 서열 상동성을 갖는 펩티드 또는 그 단편인 펩티드를 유효성분으로 포함하는 항염증 조성물이 제공된다.
본 발명의 다른 측면에 따른 조성물은 상기 펩티드는 30개 이하의 아미노산으로 구성된 것일 수 있다(상기 참조).
본 발명의 다른 측면에 따른 조성물은 상기 펩티드가 서열번호 1 내지 161 중 어느 하나의 아미노산 서열로 이루어진 것일 수 있다.
본 발명의 다른 측면에 따른 조성물은 상기 펩티드가 인간의 텔로머라제로부터 유래된 것일 수 있다.
본 발명의 다른 측면에 따른 조성물은 염증성 질환의 치료 또는 예방용일 수 있다.
본 발명의 다른 측면에 따른 조성물은 피부 염증의 개선 또는 예방용 화장료 조성물일 수 있다.
본 발명의 다른 측면에 따른 조성물은 염증성 질환의 치료 또는 예방을 위한 약학조성물일 수 있다.
본 발명의 다른 측면에 따른 조성물은 염증의 개선 또는 예방을 위한 식품조성물일 수 있다.
본 발명의 다른 측면에 따른 조성물에서 상기 염증성 질환은 (1) 전신 또는 국소 염증 질환(예를 들어, 알레르기; 면역 복합체 질환; 고초열; 과민성 쇼크; 내독소 쇼크; 악액질(cachexia); 이상 고열; 육아종증; 또는 유육종증); (2) 위장관계 질환(예를 들어, 충수염; 위궤양; 십이지장 궤양; 복막염; 췌장염; 궤양성, 급성 또는 허혈성 대장염; 담관염; 담낭염; 지방 변증; 간염; 크론병; 또는 휘플씨병); (3) 피부 관련 질환(예를 들어, 건선; 화상; 햇볕 화상; 피부염; 담마진성 사마귀 또는 팽진); (4) 심혈관계 질환(예를 들어, 혈관염; 맥관염; 심내막염; 동맥염; 죽상 동맥경화증; 혈전 정맥염; 심막염; 울혈성 심부전; 심근염; 심근 허혈증; 결절성 동맥 주위염; 재발성 협착증; 버거씨병; 또는 류머티즘열); (5) 호흡기계 질환(예를 들어, 천식; 후두개염; 기관지염; 폐기종(emphysema); 비염; 낭포성 섬유증; 간질성 폐렴; 만성폐쇄성 질환(COPD); 성인 호흡 장애 증후군; 진폐증; 폐포염; 세기관지염; 인두염; 늑막염; 또는 부비강염); (6) 뼈, 관절, 근육 및 결합 조직 관련 질환(예를 들어, 호산성 육아종; 관절염; 관절통; 골수염; 피부근염; 근막염; 패젯병; 통풍; 치주 질환; 류머티즘성 관절염; 중증 근무력증; 강직성 척추염; 또는 윤활막염); (7) 비뇨생식계 질환(예를 들어, 부고환염; 질염; 전립선염; 또는 요도염); (8) 중추 또는 말초 신경계 관련 질환(예를 들어, 알츠하이머병; 수막염; 뇌염; 다발성 경화증; 뇌경색; 뇌색전증; 길레인-바르 증후군(Guillain-Barre syndrome); 신경염; 신경통; 척수 외상; 마비; 또는 포도막염); (9) 바이러스(예를 들어, 인플루엔자; 호흡기 세포 융합 바이러스; HIV; B형 간염 바이러스; C형 간염 바이러스 또는 헤르페스 바이러스) 감염 질환(예를 들어, 뎅기열; 또는 패혈증(septicemia)), 진균 감염 질환(예를 들어, 칸디다증), 또는 박테리아, 기생충과 같은 기타 미생물 감염 질환(예를 들어, 산재성 균혈증; 말라리아; 사상충증; 또는 아메바증); (10) 기타 자가 면역성 질환(예를 들어, 갑상선염; 루푸스; 구드패스츄어 증후군; 동종 이식 거부 반응; 이식편 대 숙주병; 또는 당뇨병); 및 (11) 암 또는 종양성 질환(예를 들어, 호지킨병)로 이루어진 군으로부터 선택되는 것일 수 있다.
본 발명의 일측면에 따르면 본 발명에 따라 상기 언급된 항염증 조성물을 투여하는 것을 특징으로 하는 염증성 질환을 예방 또는 치료하는 방법이 제공된다.
본 발명의 일측면에 따르면 서열번호 1 내지 161 중 어느 하나 이상의 아미노산 서열을 포함하는(comprising) 펩티드, 상기 아미노산 서열과 80%이상의 서열 상동성을 갖는 펩티드 또는 그 단편인 펩티드 또는 이를 포함하는 조성물; 및 펩티드 또는 이를 포함하는 조성물의 투여량, 투여 경로, 투여 횟수 및 적응증 중 하나 이상을 개시한 지시서를 포함하는 염증성 질환 예방 또는 치료용 키트가 제공된다.
본 발명에 따른 서열번호 1 내지 161 중 어느 하나의 서열을 갖는 펩티드 또는 상기 서열과 80%의 상동성을 갖는 서열을 갖는 펩티드 또는 단편인 펩티드는 우수한 염증 예방 또는 억제 효과를 가진다. 따라서 본 발명의 펩티드를 포함하는 조성물은 항염증 효과를 위한 약학적 조성물 또는 화장료 조성물로서 사용될 수 있어 다양한 염증성 질환의 치료 및 예방에 널리 이용될 수 있다.
도 1 내지 도 16는 모노사이트에 대한 TNF-α저해 효과에 대해 스크리닝한 결과이다.
도 17 내지 도 35은 세포주 THP-1에 대한 TNF-α저해 효과에 대해 스크리닝한 결과이다.
도 36 내지 도 108은 세포 내 HMGB1의 축적을 보여주는 선택된 펩티드의 웨스턴 블랏(Western blot )분석 결과이다.
본 발명은 다양한 변환을 가할 수 있고 여러 가지 실시예를 가질 수 있는 바, 이하, 본 발명을 보다 구체적으로 설명한다. 그러나, 이는 본 발명을 특정한 실시 형태에 대해 한정하려는 것이 아니며, 본 발명의 사상 및 기술 범위에 포함되는 모든 변환, 균등물 내지 대체물을 포함하는 것으로 이해되어야 한다. 본 발명을 설명함에 있어서 관련된 공지 기술에 대한 구체적인 설명이 본 발명의 요지를 흐릴 수 있다고 판단되는 경우 그 상세한 설명을 생략한다.
텔로미어(telomere)는 염색체의 말단에 반복적으로 존재하는 유전 물질로서, 해당 염색체의 손상이나 다른 염색체와의 결합을 방지한다고 알려져 있다. 세포가 분열할 때마다 텔로미어의 길이는 조금씩 짧아지는데, 일정한 횟수 이상의 세포 분열이 있게 되면 텔로미어는 매우 짧아지고, 그 세포는 분열을 멈추고 죽게 된다. 반면 텔로미어를 길게 하면 세포의 수명이 연장된다고 알려져 있으며, 그 예로 암세포에서는 텔로머라제(telomerase)라는 효소가 분비되어 텔로미어가 짧아지는 것을 막기 때문에, 암세포가 죽지 않고 계속 증식할 수 있다고 알려져 있다. 본 발명자들은 텔로머라제로부터 유래되는 수많은 펩티드들이 항염 활성을 가질 수 있음을 발견하고 본 발명을 완성하게 되었다.
본 발명의 일측면은 항염증 활성을 갖는 펩티드로서, 서열번호 1 내지 161 중 어느 하나 이상의 아미노산 서열을 포함하는(comprising) 펩티드, 상기 아미노산 서열과 80%이상의 서열 상동성을 갖는 펩티드 또는 그 단편인 펩티드를 제공한다.
서열번호 1 내지 서열번호 161에 기재된 펩티드는 아래 표 1과 같다. 서열번호 162은 인간의 텔로머라제 전장 단백질의 서열이다. 서열번호 163은 텔로머라제 유래 16개 아미노산으로 구성된 펩티드를 나타낸다.
아래 표 1의 “이름”은 펩티드를 구별하기 위해 명명한 것이다. 본 발명의 다른 일측면에서, 서열 번호 1 내지 서열 번호 161에 기재된 펩티드 중 하나 이상의 펩티드는 텔로머라제에 포함된 펩티드 중 해당 위치의 펩티드를 선별해 합성한 “합성 펩티드”를 포함한다. 본 명세서에서 “pep”이라 함은 서열번호 1 내지 서열번호 161 중 어느 한 서열을 갖는 펩티드, 또는 그 서열과 80% 이상의 서열 상동성을 갖는 펩티드, 또는 상기 서열의 단편을 총칭하는 용어이다.
서열번호 이름 텔로머라제 상 위치 서열 길이
1 pep2 [660-689] ALFSVLNYERARRPGLLGASVLGLDDIHRA 30 aa
2 pep3 [663-677] SVLNYERARRPGLLG 15 aa
3 pep4 [674-683] GLLGASVLGL 10 aa
4 pep5 [615-624] ALLTSRLRFI 10 aa
5 pep6 [613-621] RPALLTSRL 9 aa
6 pep7 [653-661] RLTSRVKAL 9 aa
7 pep8 [691-705] RTFVLRVRAQDPPPE 15 aa
8 pep9 [653-667] RLTSRVKALFSVLNY 15 aa
9 pep10 [651-665] AERLTSRVKALFSVL 15 aa
10 pep11 [667-675] YERARRPGL 9 aa
11 pep12 [675-683] LLGASVLGL 9 aa
12 pep13 [680-689] VLGLDDIHRA 10 aa
13 pep14 [677-686] GASVLGLDDI 10 aa
14 pep15 [660-669] ALFSVLNYER 10 aa
15 pep16 [663-672] SVLNYERARR 10 aa
16 pep17 [679-688] SVLGLDDIHR 10 aa
17 pep18 [662-671] FSVLNYERAR 10 aa
18 pep19 [666-675] NYERARRPGL 10 aa
19 pep20 [667-676] YERARRPGLL 10 aa
20 pep21 [672-681] RPGLLGASVL 10 aa
21 pep22 [668-676] ERARRPGLL 9 aa
22 pep23 [680-688] VLGLDDIHR 9 aa
23 pep24 [663-671] SVLNYERAR 9 aa
24 pep25 [664-672] VLNYERARR 9 aa
25 pep26 [670-678] ARRPGLLGA 9 aa
26 pep27 [673-681] PGLLGASVL 9 aa
27 pep28 [671-679] RRPGLLGAS 9 aa
28 pep29 [660-668] ALFSVLNYE 9 aa
29 pep30 [674-682] GLLGASVLG 9 aa
30 pep31 [679-687] SVLGLDDIH 9 aa
31 pep32 [668-675] ERARRPGL 8 aa
32 pep33 [670-677] ARRPGLLG 8 aa
33 pep34 [674-681] GLLGASVL 8 aa
34 pep35 [669-676] RARRPGLL 8 aa
35 pep36 [676-683] LGASVLGL 8 aa
36 pep37 [563-577] VTETTFQKNRLFFYR 15 aa
37 pep38 [573-587] LFFYRKSVWSKLQSI 15 aa
38 pep39 [583-597] KLQSIGIRQHLKRVQ 15 aa
39 pep40 [603-617] EAEVRQHREARPALL 15 aa
40 pep41 [613-627] RPALLTSRLRFIPKP 15 aa
41 pep42 [623-637] FIPKPDGLRPIVNMD 15 aa
42 pep43 [643-657] RTFRREKRAERLTSR 15 aa
43 pep45 [683-697] LDDIHRAWRTFVLRV 15 aa
44 pep46 [693-707] FVLRVRAQDPPPELY 15 aa
45 pep47 [721-735] PQDRLTEVIASIIKP 15 aa
46 pep48 [578-592] KSVWSKLQSIGIRQH 15 aa
47 pep49 [593-608] LKRVQLRELSEAEVRQ 16 aa
48 pep50 [1-20] MPRAPRCRAVRSLLRSHYRE 20 aa
49 pep51 [21-40] VLPLATFVRRLGPQGWRLVQ 20 aa
50 pep52 [41-60] RGDPAAFRALVAQCLVCVPW 20 aa
51 pep53 [61-80] DARPPPAAPSFRQVSCLKEL 20 aa
52 pep54 [81-100] VARVLQRLCERGAKNVLAFG 20 aa
53 pep55 [101-120] FALLDGARGGPPEAFTTSVR 20 aa
54 pep56 [121-140] SYLPNTVTDALRGSGAWGLL 20 aa
55 pep57 [141-160] LRRVGDDVLVHLLARCALFV 20 aa
56 pep58 [161-180] LVAPSCAYQVCGPPLYQLGA 20 aa
57 pep59 [181-200] ATQARPPPHASGPRRRLGCE 20 aa
58 pep60 [201-220] RAWNHSVREAGVPLGLPAPG 20 aa
59 pep61 [221-240] ARRRGGSASRSLPLPKRPRR 20 aa
60 pep62 [241-260] GAAPEPERTPVGQGSWAHPG 20 aa
61 pep63 [261-280] RTRGPSDRGFCVVSPARPAE 20 aa
62 pep64 [281-300] EATSLEGALSGTRHSHPSVG 20 aa
63 pep65 [301-320] RQHHAGPPSTSRPPRPWDTP 20 aa
64 pep66 [321-340] CPPVYAETKHFLYSSGDKEQ 20 aa
65 pep67 [341-360] LRPSFLLSSLRPSLTGARRL 20 aa
66 pep68 [361-380] VETIFLGSRPWMPGTPRRLP 20 aa
67 pep69 [381-400] RLPQRYWQMRPLFLELLGNH 20 aa
68 pep70 [401-420] AQCPYGVLLKTHCPLRAAVT 20 aa
69 pep71 [421-440] PAAGVCAREKPQGSVAAPEE 20 aa
70 pep72 [441-460] EDTDPRRLVQLLRQHSSPWQ 20 aa
71 pep73 [461-480] VYGFVRACLRRLVPPGLWGS 20 aa
72 pep74 [481-500] RHNERRFLRNTKKFISLGKH 20 aa
73 pep75 [501-520] AKLSLQELTWKMSVRDCAWL 20 aa
74 pep76 [521-540] RRSPGVGCVPAAEHRLREEI 20 aa
75 pep77 [541-560] LAKFLHWLMSVYVVELLRSF 20 aa
76 pep78 [561-580] FYVTETTFQKNRLFFYRKSV 20 aa
77 pep79 [581-600] WSKLQSIGIRQHLKRVQLRE 20 aa
78 pep80 [601-620] LSEAEVRQHREARPALLTSR 20 aa
79 pep81 [621-640] LRFIPKPDGLRPIVNMDYVV 20 aa
80 pep82 [641-660] GARTFRREKRAERLTSRVKA 20 aa
81 pep83 [661-680] LFSVLNYERARRPGLLGASV 20 aa
82 pep84 [681-700] LGLDDIHRAWRTFVLRVRAQ 20 aa
83 pep85 [701-720] DPPPELYFVKVDVTGAYDTI 20 aa
84 pep86 [721-740] PQDRLTEVIASIIKPQNTYC 20 aa
85 pep87 [741-760] VRRYAVVQKAAHGHVRKAFK 20 aa
86 pep88 [761-780] SHVSTLTDLQPYMRQFVAHL 20 aa
87 pep89 [781-800] QETSPLRDAVVIEQSSSLNE 20 aa
88 pep90 [801-820] ASSGLFDVFLRFMCHHAVRI 20 aa
89 pep91 [821-840] RGKSYVQCQGIPQGSILSTL 20 aa
90 pep92 [841-860] LCSLCYGDMENKLFAGIRRD 20 aa
91 pep93 [861-880] GLLLRLVDDFLLVTPHLTHA 20 aa
92 pep94 [881-900] KTFLRTLVRGVPEYGCVVNL 20 aa
93 pep95 [901-920] RKTVVNFPVEDEALGGTAFV 20 aa
94 pep96 [921-940] QMPAHGLFPWCGLLLDTRTL 20 aa
95 pep97 [941-960] EVQSDYSSYARTSIRASLTF 20 aa
96 pep98 [961-980] NRGFKAGRNMRRKLFGVLRL 20 aa
97 pep99 [981-1000] KCHSLFLDLQVNSLQTVCTN 20 aa
98 pep100 [1001-1020] IYKILLLQAYRFHACVLQLP 20 aa
99 pep101 [1021-1040] FHQQVWKNPTFFLRVISDTA 20 aa
100 pep102 [1041-1060] SLCYSILKAKNAGMSLGAKG 20 aa
101 pep103 [1061-1080] AAGPLPSEAVQWLCHQAFLL 20 aa
102 pep104 [1081-1100] KLTRHRVTYVPLLGSLRTAQ 20 aa
103 pep105 [1101-1120] TQLSRKLPGTTLTALEAAAN 20 aa
104 pep106 [1121-1132] PALPSDFKTILD 12 aa
105 pep107 [1-10] MPRAPRCRAV 10 aa
106 pep108 [11-30] RSLLRSHYREVLPLATFVRR 20 aa
107 pep109 [31-50] LGPQGWRLVQRGDPAAFRAL 20 aa
108 pep110 [51-70] VAQCLVCVPWDARPPPAAPS 20 aa
109 pep111 [71-90] FRQVSCLKELVARVLQRLCE 20 aa
110 pep112 [91-110] RGAKNVLAFGFALLDGARGG 20 aa
111 pep113 [111-130] PPEAFTTSVRSYLPNTVTDA 20 aa
112 pep114 [131-150] LRGSGAWGLLLRRVGDDVLV 20 aa
113 pep115 [151-170] HLLARCALFVLVAPSCAYQV 20 aa
114 pep116 [171-190] CGPPLYQLGAATQARPPPHA 20 aa
115 pep117 [191-210] SGPRRRLGCERAWNHSVREA 20 aa
116 pep118 [211-230] GVPLGLPAPGARRRGGSASR 20 aa
117 pep119 [231-250] SLPLPKRPRRGAAPEPERTP 20 aa
118 pep120 [251-270] VGQGSWAHPGRTRGPSDRGF 20 aa
119 pep121 [271-290] CVVSPARPAEEATSLEGALS 20 aa
120 pep122 [291-310] GTRHSHPSVGRQHHAGPPST 20 aa
121 pep123 [311-330] SRPPRPWDTPCPPVYAETKH 20 aa
122 pep124 [331-350] FLYSSGDKEQLRPSFLLSSL 20 aa
123 pep125 [351-370] RPSLTGARRLVETIFLGSRP 20 aa
124 pep126 [371-390] WMPGTPRRLPRLPQRYWQMR 20 aa
125 pep127 [391-410] PLFLELLGNHAQCPYGVLLK 20 aa
126 pep128 [411-430] THCPLRAAVTPAAGVCAREK 20 aa
127 pep129 [431-450] PQGSVAAPEEEDTDPRRLVQ 20 aa
128 pep130 [451-470] LLRQHSSPWQVYGFVRACLR 20 aa
129 pep131 [471-490] RLVPPGLWGSRHNERRFLRN 20 aa
130 pep132 [491-510] TKKFISLGKHAKLSLQELTW 20 aa
131 pep133 [511-530] KMSVRDCAWLRRSPGVGCVP 20 aa
132 pep134 [531-550] AAEHRLREEILAKFLHWLMS 20 aa
133 pep135 [551-570] VYVVELLRSFFYVTETTFQK 20 aa
134 pep136 [571-590] NRLFFYRKSVWSKLQSIGIR 20 aa
135 pep137 [591-610] QHLKRVQLRELSEAEVRQHR 20 aa
136 pep138 [611-630] EARPALLTSRLRFIPKPDGL 20 aa
137 pep139 [631-650] RPIVNMDYVVGARTFRREKR 20 aa
138 pep140 [651-670] AERLTSRVKALFSVLNYERA 20 aa
139 pep141 [671-690] RRPGLLGASVLGLDDIHRAW 20 aa
140 pep142 [691-710] RTFVLRVRAQDPPPELYFVK 20 aa
141 pep143 [711-730] VDVTGAYDTIPQDRLTEVIA 20 aa
142 pep144 [731-750] SIIKPQNTYCVRRYAVVQKA 20 aa
143 pep145 [751-770] AHGHVRKAFKSHVSTLTDLQ 20 aa
144 pep146 [771-790] PYMRQFVAHLQETSPLRDAV 20 aa
145 pep147 [791-810] VIEQSSSLNEASSGLFDVFL 20 aa
146 pep148 [811-830] RFMCHHAVRIRGKSYVQCQG 20 aa
147 pep149 [831-850] IPQGSILSTLLCSLCYGDME 20 aa
148 pep150 [851-870] NKLFAGIRRDGLLLRLVDDF 20 aa
149 pep151 [871-890] LLVTPHLTHAKTFLRTLVRG 20 aa
150 pep152 [891-910] VPEYGCVVNLRKTVVNFPVE 20 aa
151 pep153 [911-930] DEALGGTAFVQMPAHGLFPW 20 aa
152 pep154 [931-950] CGLLLDTRTLEVQSDYSSYA 20 aa
153 pep155 [951-970] RTSIRASLTFNRGFKAGRNM 20 aa
154 pep156 [971-990] RRKLFGVLRLKCHSLFLDLQ 20 aa
155 pep157 [991-1010] VNSLQTVCTNIYKILLLQAY 20 aa
156 pep158 [1011-1030] RFHACVLQLPFHQQVWKNPT 20 aa
157 pep159 [1031-1050] FFLRVISDTASLCYSILKAK 20 aa
158 pep160 [1051-1070] NAGMSLGAKGAAGPLPSEAV 20 aa
159 pep161 [1071-1090] QWLCHQAFLLKLTRHRVTYV 20 aa
160 pep162 [1091-1110] PLLGSLRTAQTQLSRKLPGT 20 aa
161 pep163 [1111-1132] TLTALEAAANPALPSDFKTILD 22 aa
162 Telomerase [1-1132] MPRAPRCRAVRSLLRSHYREVLPLATFVRR LGAKGAAGPLPSEAVQWLCHQAFLLKLTRHRVTYVPLLGSLRTAQTQLSRKLPGTTLTALEAAANPALPSDFKTILD 1132 aa
163 pep1 [611-626] EARPALLTSRLRFIPK 16 aa
본 발명의 일측면은 항염증 활성을 갖는 펩티드로서, 서열번호 1 내지 161 중 어느 하나 이상의 아미노산 서열을 포함하는(comprising) 펩티드, 상기 아미노산 서열과 80% 이상의 서열 상동성을 갖는 펩티드 또는 그 단편인 펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 제공한다. 상기 폴리뉴클레오티드를 이용하여 펩티드를 대량 생산할 수 있다. 예컨대 펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터를 숙주세포에 넣어 배양함으로써, 펩티드를 대량 생산할 수 있다.
본 명세서에 개시된 펩티드는 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 96% 이상, 97% 이상, 98% 이상, 99% 이상의 서열 상동성을 갖는 펩티드를 포함할 수 있다. 또한, 본 명세서에 개시된 펩티드는, 서열번호 1을 포함하는 펩티드 또는 그 단편들과 1개 이상의 아미노산, 2개 이상의 아미노산, 3개 이상의 아미노산, 4개 이상의 아미노산, 5개 이상의 아미노산, 6개 이상의 아미노산 또는 7개 이상의 아미노산이 변화된 펩티드를 포함할 수 있다.
본 명세서에서 “상동성 (homology)”및 “서열 상동성 (sequence identity)”라 함은 상호변환가능하게 사용되었으며, 이는 2개의 아미노산 (또는 비슷한 것으로 핵산) 사이에서 서열의 오버랩 정도를 나타낸다.
본 명세서에서 펩타이드나 핵산에 대하여 “서열 상동성”의 용어를 사용하지 않는다면, 서열의 상동성은 (nref-ndif)*100/nref 를 사용하여 계산되었으며, 상기 계산식에서, 두 서열을 정렬하여 가장 많은 일치의 수가 나오게 하였을 때, ndif는 두 서열 사이에서 비일치 잔기들의 총개수를, nref는 두 서열 중 짧은 서열의 잔기들의 총개수를 뜻한다. 예를 들어, DNA 서열 agtcagtc는 aatcaatc의 서열과 서열 상동성을 상기 식으로 구하면 75% 이다 (nref=8, ndif=2).
본 명세서의 일측면에서, 서열의 상동성은 종래에 알려진 하기의 방법들로 결정되었다: Smith and Waterman, 1981, Adv. Appl. Math. 2:482, by the search for similarity method of Pearson ＆ Lipman, 1988, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:2444, using the CLUSTAL W algorithm of Thompson et al., 1994, Nucleic Acids Res 22:467380, by computerized implementations of these algorithms (GAP, BESTFIT, FASTA, and TFASTA in the Wisconsin Genetics Software Package, Genetics Computer Group). The BLAST algorithm (Altschul et al., 1990, Mol. Biol. 215:403-10) for which software may be obtained through the National Center for Biotechnology Information (www.ncbi.nlm.nih.gov/) may also be used. When using any of the aforementioned algorithms, the default parameters for "Window" length, gap penalty, 등.
본 발명의 일측면에서, 아미노산 변화는 펩티드의 물리화학적 특성이 변경되도록 하는 성질에 속한다. 예를 들어, 펩티드의 열안정성을 향상시키고, 기질 특이성을 변경시키고, 최적의 pH를 변화시키는 등의 아미노산 변화가 수행될 수 있다.
본 발명의 일측면에서, 서열번호 1 내지 161 중 어느 하나 이상의 아미노산 서열을 포함하는(comprising) 펩티드, 상기 아미노산 서열과 80%이상의 서열 상동성을 갖는 펩티드 또는 그 단편인 펩티드는, 30개 이하의 아미노산으로 구성될 수 있다.
본 발명의 일측면에서, 서열 번호 1 내지 161의 서열을 갖는 펩티드, 서열 번호 1 내지 161 서열의 단편인 펩티드 또는 상기 펩티드 서열과 80% 이상의 서열 상동성을 갖는 펩티드는 텔로머라제, 구체적으로 인간(Homo sapiens) 텔로머라제에서 유래한 펩티드를 포함한다.
본 명세서에서 “아미노산”이라 함은 자연적으로 펩티드로 통합되는 22개의 표준 아미노산들 뿐만 아니라 D-아이소머 및 변형된 아미노산들을 포함한다. 이에 따라, 본 발명의 일측면에서 펩티드는 D-아미노산을 포함하는 펩티드일 수 있다. 한편, 본 발명의 다른 측면에서 펩티드는 번역 후 변형(post-translational modification)된 비표준 아미노산 등을 포함할 수 있다. 번역 후 변형의 예는 인산화(phosphorylation), 당화(glycosylation), 아실화(acylation) (예컨대, 아세틸화(acetylation), 미리스토일화(myristoylation) 및 팔미토일화(palmitoylation)를 포함), 알킬화(alkylation), 카르복실화(carboxylation), 히드록실화(hydroxylation), 당화반응(glycation), 비오티닐화(biotinylation), 유비퀴티닐화(ubiquitinylation), 화학적 성질의 변화(예컨대, 베타-제거 탈이미드화, 탈아미드화) 및 구조적 변화(예컨대, 이황화물 브릿지의 형성) 를 포함한다. 또한, 펩티드 컨쥬게이트를 형성하기 위한 가교제(crosslinker)들과의 결합과정에서 일어나는 화학 반응들에 의해 생기는 아미노산의 변화, 예컨대 아미노기, 카르복시기 또는 사이드 체인에서의 변화와 같은 아미노산의 변화를 포함한다.
본 명세서에 개시된 펩티드는 자연 그대로의 공급원으로부터 동정 및 분리된 야생형 펩티드일 수 있다. 한편, 본 명세서에 개시된 펩티드는 서열번호 1의 단편들인 펩티드와 비교하여 하나 이상의 아미노산이 치환, 결실 및/또는 삽입된 아미노산 서열을 포함하는, 인공 변이체일 수 있다. 인공 변이체에서 뿐만 아니라 야생형 폴리펩티드에서의 아미노산 변화는 단백질의 폴딩(folding) 및/또는 활성에 유의한 영향을 미치지 않는 보존성 아미노산 치환을 포함한다. 보존성 치환의 예들은 염기성 아미노산(아르기닌, 리신 및 히스티딘), 산성 아미노산(글루탐산 및 아스파르트산), 극성 아미노산(글루타민 및 아스파라긴), 소수성 아미노산(루신, 이소로이신, 발린 및 메티오닌), 방향족 아미노산(페닐알라닌, 트립토판 및 티로신), 및 작은 아미노산(글리신, 알라닌, 세린 및 트레오닌)의 군의 범위 내에 있다. 일반적으로 특이적 활성을 변경시키지 않는 아미노산 치환이 본 분야에 공지되어 있다. 가장 흔하게 발생하는 교환은 Ala/Ser, Val/Ile, Asp/Glu, Thr/Ser, Ala/Gly, Ala/Thr, Ser/Asn, Ala/Val, Ser/Gly, Tyr/Phe, Ala/Pro, Lys/Arg, Asp/Asn, Leu/Ile, Leu/Val, Ala/Glu, 및 Asp/Gly, 그리고 이들과 반대인 것들이다. 보존적 치환의 다른 예는 다음 표 2와 같다.
원래 아미노산 예시적인 잔기 치환 바람직한 잔기 치환
Ala (A) val; leu; ile Val
Arg (R) lys; gln; asn Lys
Asn (N) gln; his; asp, lys; arg Gln
Asp (D) glu; asn Glu
Cys (C) ser; ala Ser
Gln (Q) asn; glu Asn
Glu (E) asp; gln Asp
Gly (G) ala Ala
His (H) asn; gln; lys; arg Arg
Ile (I) leu; val; met; ala; phe; norleucine Leu
Leu (L) norleucine; ile ; val; met; ala; phe Ile
Lys (K) arg; gln; asn Arg
Met (M) leu; phe; ile Leu
Phe (F) leu; val; ile; ala; tyr Tyr
Pro (P) ala Ala
Ser (S) thr Thr
Thr (T) ser Ser
Trp (W) tyr; phe Tyr
Tyr (Y) trp; phe ; thr; ser Phe
Val (V) ile; leu; met; phe; ala; norleucine Leu
펩티드의 생물학적 특성에 있어서의 실재적인 변형은 (a) 치환 영역 내의 폴리펩티드 골격의 구조, 예를 들면 시트 또는 나선 입체 구조를 유지하는데 있어서의 이들의 효과, (b) 표적 부위에서의 상기 분자의 전하 또는 소수성을 유지하는데 있어서의 이들의 효과, 또는 (c) 측쇄의 벌크를 유지하는데 있어서의 이들의 효과가 상당히 상이한 치환부를 선택함으로써 수행된다. 천연 잔기는 통상의 측쇄 특성에 기준하여 다음 그룹으로 구분된다:(1) 소수성: 노르루이신, met, ala, val, leu, ile;
(2) 중성 친수성: cys, ser, thr;
(3) 산성: asp, glu;
(4) 염기성: asn, gln, his, lys, arg;
(5) 쇄 배향에 영향을 미치는 잔기: gly, pro; 및
(6) 방향족: trp, tyr, phe.
비-보존적 치환은 이들 부류 중의 하나의 구성원을 또다른 부류로 교환함으로써 이루어질 것이다. 펩티드의 적당한 입체 구조를 유지하는 것과 관련이 없는 어떠한 시스테인 잔기도 일반적으로 세린으로 치환되어 상기 분자의 산화적 안정성을 향상시키고 이상한 가교결합을 방지할 수 있다. 역으로 말하면, 시스테인 결합(들)을 상기 펩티드에 가하여 그의 안정성을 향상시킬 수 있다
펩티드의 다른 유형의 아미노산 변이체는 항체의 글리코실화 패턴이 변화된 것이다. 변화란 의미는 펩티드에서 발견된 하나 이상의 탄수화물 잔기의 결실 및(또는) 펩티드 내에 존재하지 않는 하나 이상의 글리코실화 부위의 부가를 나타낸다.
펩티드의 글리코실화는 전형적으로 N-연결되거나 O-연결된 것이다. N-연결된이란 탄수화물 잔기가 아스파라긴 잔기의 측쇄에 부착된 것을 말한다. 트리펩티드 서열 아스파라긴-X-세린 및 아스파라긴-X-트레오닌 (여기서, X는 프롤린을 제외한 임의의 아미노산임)은 탄수화물 잔기를 아스파라긴 측쇄에 효소적 부착시키기 위한 인식 서열이다. 따라서, 이들 트리펩티드 서열 중의 하나가 폴리펩티드에 존재함으로써, 잠재적인 글리코실화 부위가 생성된다. O-연결된 글리코실화는 당 N-아세틸갈락토사민, 갈락토스 또는 크실로스 중의 하나를 히드록시아미노산, 가장 통상적으로는 세린 또는 트레오닌에 부착시키는 것을 의미하지만, 5-히드록시프롤린 또는 5-히드록시리신을 사용할 수도 있다.
펩티드로의 글리코실화 부위의 부가는 하나 이상의 상기 언급된 트리펩티드 서열을 함유하도록 아미노산 서열을 변화시킴으로써 편리하게 수행된다 (N-연결된 글리코실화 부위의 경우). 이러한 변화는 하나 이상의 세린 또는 트레오닌 잔기를 최초 항체의 서열에 부가하거나 이들 잔기로 치환함으로써 이루어질 수도 있다 (O-연결된 글리코실화 부위의 경우).
본 발명의 일측면에서, 폴리뉴클레오티드는 핵산 분자로서 자연발생적 또는 인공적 DNA 또는 RNA 분자일 수 있고, 단일 가닥 또는 이중 가닥일 수 있다. 핵산 분자는 하나 이상일 수 있는데, 동일한 유형의 (예컨대, 동일한 뉴클레오티드 서열을 갖는) 핵산 분자일 수도 있고, 다른 유형으로 핵산 분자들일 수 도 있다. DNA, cDNA, decoy DNA, RNA, siRNA, miRNA, shRNA, stRNA, snoRNA, snRNA, PNA, 안티센스 올리고머(antosense oligomer), 플라스미드(plasmid) 및 그 외 변형된 핵산 중 하나 이상을 포함하나, 이에 제한되는 것은 아니다.
HMGB1 단백질은 외부 자극에 의해 핵 내에 존재하는 HMGB1 단백질이 아세틸화(aceylation)되어 세포질로 이동하다가, 이후 세포 외부로 분비됨으로써 염증 유발 사이토카인(cytokine)의 역할을 한다고 알려져 있다. 이와 같이 염증이 있는 경우 HMGB1 단백질이 세포 외부로 분비되므로, 염증성 질환인 처그-스트라우스 증후군, 류머티스 관절염 및 쇼그렌증후군 환자의 혈청은 정상인보다 매우 많은 양의 HMGB1 단백질을 가진다. 따라서 염증이 유발되는 어떤 자극이 주어지더라도, 세포핵 내의 HMGB1 단백질 양이 많다면 이는 HMGB1 단백질이 세포 외부로 분비되지 않고 있음을 의미하므로, 염증이 억제되고 있다고 볼 수 있을 것이다.
본 발명의 일측면에 따른 서열 번호 1내지 161의 서열을 갖는 펩티드, 서열 번호 1내지 161의 서열의 단편인 펩티드 또는 상기 펩티드 서열과 80% 이상의 서열 상동성을 갖는 펩티드를 세포에 처리하면, 세포핵 내 HMGB1 단백질 양이 증가한다. 이는 서열 번호 1 내지 161의 서열을 갖는 펩티드, 서열 번호 1내지 161의 서열의 단편인 펩티드 또는 상기 펩티드 서열과 80% 이상의 서열 상동성을 갖는 펩티드가 우수한 염증 예방 또는 억제 효과를 가짐을 의미한다.
또한 본 발명의 일측면에 따른 서열 번호 1내지 161의 서열을 갖는 펩티드, 서열 번호 1내지 161의 서열의 단편인 펩티드 또는 상기 펩티드 서열과 80% 이상의 서열 상동성을 갖는 펩티드는 세포 내 독성이 낮아 생체 내 안정성이 높다는 장점을 가진다.
본 명세서에서, “염증성 질환”은 염증을 주 원인으로 하는 질환 또는 질환에 의해 염증이 발생하는 질환 등 염증과 관련된 질환을 모두 포함하는 광범위한 개념이다. 구체적으로, 염증성 질환은 (1) 전신 또는 국소 염증 질환(예를 들어, 알레르기; 면역 복합체 질환; 고초열; 과민성 쇼크; 내독소 쇼크; 악액질(cachexia); 이상 고열; 육아종증; 또는 유육종증); (2) 위장관계 질환(예를 들어, 충수염; 위궤양; 십이지장 궤양; 복막염; 췌장염; 궤양성, 급성 또는 허혈성 대장염; 담관염; 담낭염; 지방 변증; 간염; 크론병; 또는 휘플씨병); (3) 피부 관련 질환(예를 들어, 건선; 화상; 햇볕 화상; 피부염; 담마진성 사마귀 또는 팽진); (4) 심혈관계 질환(예를 들어, 혈관염; 맥관염; 심내막염; 동맥염; 죽상 동맥경화증; 혈전 정맥염; 심막염; 울혈성 심부전; 심근염; 심근 허혈증; 결절성 동맥 주위염; 재발성 협착증; 버거씨병; 또는 류머티즘열); (5) 호흡기계 질환(예를 들어, 천식; 후두개염; 기관지염; 폐기종(emphysema); 비염; 낭포성 섬유증; 간질성 폐렴; 만성폐쇄성 질환(COPD); 성인 호흡 장애 증후군; 진폐증; 폐포염; 세기관지염; 인두염; 늑막염; 또는 부비강염); (6) 뼈, 관절, 근육 및 결합 조직 관련 질환(예를 들어, 호산성 육아종; 관절염; 관절통; 골수염; 피부근염; 근막염; 패젯병; 통풍; 치주 질환; 류머티즘성 관절염; 중증 근무력증; 강직성 척추염; 또는 윤활막염); (7) 비뇨생식계 질환(예를 들어, 부고환염; 질염; 전립선염; 또는 요도염); (8) 중추 또는 말초 신경계 관련 질환(예를 들어, 알츠하이머병; 수막염; 뇌염; 다발성 경화증; 뇌경색; 뇌색전증; 길레인-바르 증후군(Guillain-Barre syndrome); 신경염; 신경통; 척수 외상; 마비; 또는 포도막염); (9) 바이러스(예를 들어, 인플루엔자; 호흡기 세포 융합 바이러스; HIV; B형 간염 바이러스; C형 간염 바이러스 또는 헤르페스 바이러스) 감염 질환(예를 들어, 뎅기열; 또는 패혈증(septicemia)), 진균 감염 질환(예를 들어, 칸디다증), 또는 박테리아, 기생충과 같은 기타 미생물 감염 질환(예를 들어, 산재성 균혈증; 말라리아; 사상충증; 또는 아메바증); (10) 기타 자가 면역성 질환(예를 들어, 갑상선염; 루푸스; 구드패스츄어 증후군; 동종 이식 거부 반응; 이식편 대 숙주병; 또는 당뇨병); 또는 (11) 암 또는 종양성 질환(예를 들어, 호지킨병)을 포함하나, 이에 제한되는 것은 아니다.
이와 같은 질병의 염증성 요소를 치료하는 것은 수십 년간 전 세계 제약 업계의 가장 중요한 목표였고 수많은 유용한 치료법이 개발되어왔다. 그 예는 코르티코스테로이드(프레드니솔론, 메틸프레드니솔론, 덱사메타손, 베타메타손, 플루티카손 등을 포함하여 코티솔의 효과를 모의하도록 고안된 다양한 범위의 천연, 반합성 및 합성 제제), 사이클로옥시게나아제 억제제(인도메타신, 설파살라진 및 아스피린 같이 비선택성 또는 콕스-1(cox-1) 선택성 및 더 최근의 셀레콕시브 같은 콕스-2(cox-2) 선택성), (몬테루카스트 같은) 류코트리엔 차단제 및 (탈리도마이드 같은저분자 TNF-α 합성 억제제뿐만 아니라 인플릭시마브(RemicadeTM) 및 아달리무마브(HumiraTm)를 포함하는 개량 모노클로날 중화 항체, 에타너셉트(EnbrelTM)같은 TNF 수용체 융합 단백질과 같은) 항-TNF를 포함한다.
본 발명의 일측면에서는 서열번호 1 내지 161 중 어느 하나 이상의 아미노산 서열을 포함하는(comprising) 펩티드, 상기 아미노산 서열과 80%이상의 서열 상동성을 갖는 펩티드 또는 그 단편인 펩티드를 유효 성분으로 포함하는 항염 조성물을 제공한다.
본 발명의 일측면에 따른 항염 조성물은 일측면에서는 서열번호 1 내지 161 중 어느 하나 이상의 아미노산 서열을 포함하는(comprising) 펩티드, 상기 아미노산 서열과 80%이상의 서열 상동성을 갖는 펩티드 또는 그 단편인 펩티드를 0.1 ㎍/㎎ 내지 1 ㎎/㎎, 구체적으로 1 ㎍/㎎ 내지 0.5 ㎎/㎎, 더 구체적으로 10 ㎍/㎎ 내지 0.1 ㎎/㎎의 함량으로 포함할 수 있다. 상기 범위로 포함하는 경우 본 발명의 의도한 효과를 나타내기에 적절할 뿐만 아니라, 조성물의 안정성 및 안전성을 모두 만족할 수 있으며, 비용 대비 효과의 측면에서도 상기 범위로 포함하는 것이 적절할 수 있다.
본 발명의 일측면에 따른 조성물은 인간, 개, 닭, 돼지, 소, 양, 기니아피그 또는 원숭이를 포함하는 모든 동물에 적용될 수 있다.
본 발명의 일측면에서 조성물은 서열 번호 1 내지 161로 이루어진 군으로부터 선택되는 서열을 갖는 펩티드, 서열 번호 1의 서열의 단편인 펩티드 또는 상기 펩티드 서열과 80% 이상의 서열 상동성을 갖는 펩티드를 유효 성분으로 포함하는 염증성 질환의 치료 또는 예방용 약학 조성물을 제공한다. 본 발명의 일측면에 따른 약학 조성물은 경구, 직장, 경피, 정맥 내, 근육 내, 복강 내, 골수 내, 경막 내 또는 피하 등으로 투여될 수 있다.
경구 투여를 위한 제형은 정제, 환제, 연질 또는 경질 캅셀제, 과립제, 산제, 액제 또는 유탁제일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 비경구 투여를 위한 제형은 주사제, 점적제, 로션, 연고, 겔, 크림, 현탁제, 유제, 좌제, 패취 또는 분무제일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 일측면에 따른 약학 조성물은 필요에 따라 희석제, 부형제, 활택제, 결합제, 붕해제, 완충제, 분산제, 계면 활성제, 착색제, 향료 또는 감미제 등의 첨가제를 포함할 수 있다. 본 발명의 일측면에 따른 약학 조성물은 당업계의 통상적인 방법에 의해 제조될 수 있다.
본 발명의 일측면에 따른 약학 조성물의 유효 성분은 투여 받을 대상의 연령, 성별, 체중, 병리 상태 및 그 심각도, 투여 경로 또는 처방자의 판단에 따라 달라질 것이다. 이러한 인자에 기초한 적용량 결정은 당업자의 수준 내에 있으며, 이의 1일 투여 용량은 예를 들어 0.1 ㎍/kg/일 내지 1 g/kg/일, 구체적으로는 1 ㎍/kg/일 내지 10 mg/kg/일, 더 구체적으로는 10 ㎍/kg/일 내지 1 mg/kg/일, 보다 더 구체적으로는 50 ㎍/kg/일 내지 100 ㎍/kg/일이 될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 본 발명의 일측면에 따른 약학 조성물은 1일 1회 내지 3회 투여될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 일측면은 일측면에서는 서열번호 1 내지 161 중 어느 하나 이상의 아미노산 서열을 포함하는(comprising) 펩티드, 상기 아미노산 서열과 80%이상의 서열 상동성을 갖는 펩티드 또는 그 단편인 펩티드를 유효 성분으로 포함하는 피부 염증의 개선 또는 예방용 피부 외용제 조성물을 제공한다.
본 발명의 다른 일측면은 일측면에서는 서열번호 1 내지 161 중 어느 하나 이상의 아미노산 서열을 포함하는(comprising) 펩티드, 상기 아미노산 서열과 80%이상의 서열 상동성을 갖는 펩티드 또는 그 단편인 펩티드를 유효 성분으로 포함하는 피부 염증의 개선 또는 예방용 화장료 조성물을 제공한다.
본 발명의 일측면에 따른 피부 외용제 조성물 또는 화장료 조성물은 국소 적용에 적합한 모든 제형으로 제공될 수 있다. 예를 들면, 용액, 수상에 유상을 분산시켜 얻은 에멀젼, 유상에 수상을 분산시켜 얻은 에멀젼, 현탁액, 고체, 겔, 분말, 페이스트, 포말(foam) 또는 에어로졸의 제형으로 제공될 수 있다. 이러한 제형은 당해 분야의 통상적인 방법에 따라 제조될 수 있다.
본 발명의 일측면에 따른 화장료 조성물은 주 효과를 손상시키지 않는 범위 내에서, 바람직하게는 주 효과에 상승 효과를 줄 수 있는 다른 성분들을 포함할 수 있다. 또한 본 발명의 일측면에 따른 화장료 조성물은 보습제, 에몰리언트제, 계면 활성제, 자외선 흡수제, 방부제, 살균제, 산화 방지제, pH 조정제, 유기 또는 무기 안료, 향료, 냉감제 또는 제한(制汗)제를 더 포함할 수 있다. 상기 성분의 배합량은 본 발명의 목적 및 효과를 손상시키지 않는 범위 내에서 당업자가 용이하게 선정 가능하며, 그 배합량은 화장료 조성물 전체 중량을 기준으로 0.01 내지 5 중량%, 구체적으로 0.01 내지 3 중량%일 수 있다.
본 발명의 일측면에서 조성물은 서열 번호 1 내지 161로 이루어진 군으로부터 선택되는 서열을 갖는 펩티드, 서열 번호 1 내지 161의 서열의 단편인 펩티드 또는 상기 펩티드 서열과 80% 이상의 서열 상동성을 갖는 펩티드를 유효 성분으로 포함하는 염증 예방 또는 억제용 식품 조성물을 제공한다.
본 발명의 일측면에 따른 식품 조성물의 제형은 특별히 한정되지 않으나, 예를 들어, 정제, 과립제, 분말제, 액제, 고형 제제 등으로 제형화 될 수 있다. 각 제형은 유효 성분 이외에 해당 분야에서 통상적으로 사용되는 성분들을 제형 또는 사용 목적에 따라 당업자가 어려움 없이 적의 선정하여 배합할 수 있으며, 다른 원료와 동시에 적용할 경우 상승 효과가 일어날 수 있다.
상기 유효 성분의 투여량 결정은 당업자의 수준 내에 있으며, 이의 1일 투여 용량은 예를 들어 구체적으로는 1 ㎍/kg/일 내지 10 mg/kg/일, 더 구체적으로는 10 ㎍/kg/일 내지 1 mg/kg/일, 보다 더 구체적으로는 50 ㎍/kg/일 내지 100 ㎍/kg/일이 될 수 있으나, 이에 제한되지 않으며, 투여하고자 하는 대상의 연령, 건강 상태, 합병증 등 다양한 요인에 따라 달라질 수 있다.
본 발명의 일측면에서는 서열번호 1 내지 161 중 어느 하나 이상의 아미노산 서열을 포함하는(comprising) 펩티드, 상기 아미노산 서열과 80%이상의 서열 상동성을 갖는 펩티드 또는 그 단편인 펩티드의 염증성 질환 예방 또는 치료 용도를 제공한다.
본 발명의 일측면에 따르면, 펩타이드를 상기 환자들에게 제공하는 것으로 염증성 질환을 예방 또는 치료하는 방법이 제공 된다.
본 발명의 일측면에서 조성물은 서열번호 1 내지 161 중 어느 하나 이상의 아미노산 서열을 포함하는(comprising) 펩티드, 상기 아미노산 서열과 80%이상의 서열 상동성을 갖는 펩티드 또는 그 단편인 펩티드 또는 이를 포함하는 조성물; 및 펩티드 또는 이를 포함하는 조성물의 투여량, 투여 경로, 투여 횟수 및 적응증 중 하나 이상을 개시한 지시서를 포함하는 염증성 질환 예방 또는 치료용 키트를 제공한다.
본 명세서에서 사용된 용어들은 특정 구체예들을 설명하기 위한 목적으로만 의도된 것이지 본 발명을 한정하고자 하는 의도가 아니다. 명사 앞에 개수가 생략된 용어는 수량을 제한하고자 하는 것이 아니라 언급된 명사 물품이 하나 이상 존재하는 것을 나타내는 것이다. 용어 "포함하는", "갖는", 및 "함유하는"은 열린 용어로 해석된다(즉, "포함하지만 이에 한정되지는 않는"의 의미).
수치의 범위를 언급하는 것은 단지 그 범위 내에 속하는 각각의 별개의 수치들을 개별적으로 언급하는 것을 대신하는 쉬운 방법이기 때문이며, 그것이 아님이 명시되어 있지 않는 한, 각 별개의 수치는 마치 개별적으로 명세서에 언급되어 있는 것처럼 본 명세서에 통합된다. 모든 범위의 끝 값들은 그 범위 내에 포함되며 독립적으로 조합 가능하다.
본 명세서에 언급된 모든 방법들은 달리 명시되어 있거나 문맥에 의해 명백히 모순되지 않는 한 적절한 순서로 수행될 수 있다. 어느 한 실시예 및 모든 실시예 또는 예시적 언어 (예컨대, "~과 같은")를 사용하는 것은, 청구범위에 포함되어 있지 않는 한, 단지 본 발명을 더 잘 기술하기 위함이지 본 발명의 범위를 제한하고자 함이 아니다. 명세서의 어떤 언어도 어떤 비청구된 구성요소를 본 발명의 실시에 필수적인 것으로 해석되어서는 아니된다. 다른 정의가 없는 한, 본 명세서에 사용되는 기술적 및 과학적 용어들은 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 갖는 사람에 의해 통상 이해되는 것과 같은 의미를 갖는다.
본 발명의 바람직한 구체예들은 본 발명을 수행하기 위해 발명자에게 알려진 가장 최적의 모드를 포함한다. 바람직한 구체예들의 변이들이 앞선 기재를 읽으면 당업자에게 명백하게 될 수 있다. 본 발명자들은 당업자들이 그러한 변이를 적절히 이용하길 기대하고, 발명자들은 본 명세서에 기재된 것과 다른 방식으로 본 발명이 실시되기를 기대한다. 따라서, 본 발명은, 특허법에 의해 허용되는 것과 같이, 첨부된 특허청구범위에서 언급된 발명의 요지의 균등물 및 모든 변형들을 포함한다. 더욱이, 모든 가능한 변이들 내에서 상기 언급된 구성요소들의 어떤 조합이라도 여기서 반대로 명시하거나 문맥상 명백히 모순되지 않는 한 본 발명에 포함된다. 본 발명은 예시적인 구체예들을 참조하여 구체적으로 나타내어지고 기술되었지만, 당업자들은 하기 청구범위에 의해 정의되는 발명의 정신 및 범위를 벗어나지 않고서도 형태 및 디테일에서 다양한 변화가 행해질 수 있음을 잘 이해할 것이다 .
종양 괴사 인자 (TNF), 특히 TNF－α 는 염증성 세포로부터 방출되어 다채로운 세포 상해 반응, 면역 반응 및 염증 반응을 일으키는 것으로 알려져 있다. TNF－α 는 많은 염증 질환 및 자기 면역 질환의 발증이나 천연화 (遷延化) 에 관여하고, 또한 혈액 중에 방출되어 전신에 작용하면, 중증의 패혈증 및 패혈증성 쇼크를 일으키는 것이 알려져 있다. 이와 같이 TNF－α 는 생체의 면역계에 광범위하게 관련된 인자이기 때문에, TNF－α 를 억제하는 약제의 개발이 활발히 실시되고 있다. TNF－α 는 불활성형으로 생합성되고 프로테아제에 의해 절단되어 활성형이 되지만, 이 활성화에 관여하는 효소는 종양 괴사 인자 변환 효소 (TACE) 로 불리고 있다. 따라서 이 TACE 를 저해하는 물질은 TNF－α 에서 기인되는 질환, 병태, 이상 상태, 상태가 좋지 않음, 좋지 않은 자각 증상 등을 치료, 개선, 예방할 수 있다.
High-mobility group box 1(HMGB1) 단백질은 흉선, 림프절, 고환, 태아의 간 등에서 높은 농도로 존재하며, 간세포와 뇌세포를 제외하면 대부분의 세포에서는 주로 핵내에 존재한다. 이러한 상기 HMGB1 단백질은 A-box, B-box, C-terminal으로 구성된 3개의 도메인(domain)을 가지고 있다.
HMGB1단백질이 염증을 유발하는 cytokine의 역할을 하는 것은 1999년 Tracey 등에 의해서 보고되었으며, 상기 HMGB1의 염증 유발 기작은 외부 자극에 의해서 핵내에 존재하는 HMGB1가 아세틸화(aceylation)된 후 세포질로 이동하다. 그 후 세포 밖으로 분비되거나 또는 괴사에 빠진 세포로부터 외부에 분비되는 것으로 알려졌다(Bonaldi T et al., EMBO J, (22)5551-60, 2003).
이하, 실시예 및 실험예를 들어 본 발명의 구성 및 효과를 보다 구체적으로 설명한다. 그러나 아래 실시예 및 실험예는 본 발명에 대한 이해를 돕기 위해 예시의 목적으로만 제공된 것일 뿐 본 발명의 범주 및 범위가 그에 의해 제한되는 것은 아니다.
실시예 1: PEP 1(서열번호 163)의 합성 및 항염 활성 측정
실험예 1: PEP 1(서열번호 163)의 합성
인간 텔로머라제로부터 선별된 하기의 서열 SEQ ID: 1(PEP 1)을 가지는 하기 화학식 1의 구조식을 갖는 16개의 아미노산으로 구성된 펩타이드를 합성하였다.
<화학식 1>
Figure 112020070014716-pat00001
서열번호 1의 펩티드 PEP 1은 종래에 알려진 고상 펩티드 합성법에 따라 제조할 수 있었다. 구체적으로, 펩티드들은 ASP48S(Peptron, Inc., 대한민국 대전)를 이용하여 Fmoc 고상 합성법(solid phase peptide synthesis, SPPS)을 통해 C-말단부터 아미노산 하나씩 커플링함으로써 합성하였다. 다음과 같이, 펩티드들의 C-말단의 첫 번째 아미노산이 수지에 부착된 것을 사용하였다. 예컨대 다음과 같다:
NH2-Lys(Boc)-2-chloro-Trityl Resin
NH2-Ala-2-chloro-Trityl Resin
NH2-Arg(Pbf)-2-chloro-Trityl Resin
펩타이드 합성에 사용한 모든 아미노산 원료는 N-term이 Fmoc으로 보호(protection)되고, 잔기는 모두 산에서 제거되는 Trt, Boc, t-Bu (t-butylester), Pbf (2,2,4,6,7-pentamethyl dihydro-benzofuran-5-sulfonyl) 등으로 보호된 것을 사용하였다. 예컨대 다음과 같다:
Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Glu(OtBu)-OH, Fmoc-Pro-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Phe-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Thr(tBu)-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Trp(Boc)-OH, Fmoc-Met-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH, Fmoc-Ahx-OH, Trt-Mercaptoacetic acid.
커플링 시약(Coupling reagent)으로는 HBTU[2-(1H-Benzotriazole-1-yl)-1,1,3,3-tetamethylaminium hexafluorophosphate] / HOBt [N-Hydroxxybenzotriazole] /NMM [4-Methylmorpholine] 를 사용하였다. Fmoc 제거는 20%의 DMF 중 피페리딘(piperidine in DMF)을 이용하였다. 합성된 펩타이드를 Resin에서 분리 및 잔기의 보호기 제거에는 절단 칵테일(Cleavage Cocktail) [TFA (trifluoroacetic acid) /TIS (triisopropylsilane) / EDT (ethanedithiol) / H2O=92.5/2.5/2.5/2.5] 를 사용하였다.
아미노산 보호기가 결합된 출발 아미노산이 고상 지지체에 결합되어 있는 상태를 이용하여 여기에 해당 아미노산들을 각각 반응시키고 용매로 세척한 후 탈보호하는 과정을 반복함으로써 각 펩티드를 합성하였다. 합성된 펩티드를 수지로부터 끊어낸 후 HPLC로 정제하고, 합성 여부를 MS로 확인하고 동결 건조하였다.
PEP 1의 구체적인 합성 과정을 설명하면 다음과 같다.
1) 커플링
NH2-Lys(Boc)-2-chloro-Trityl Resin 에 보호된 아미노산(8당량)와 커플링 시약 HBTU(8당량)/HOBt(8당량)/NMM(16당량) 을 DMF에 녹여서 첨가한 후, 상온에서 2시간 동안 반응하고 DMF, MeOH, DMF순으로 세척하였다.
2) Fmoc 탈보호
20%의 DMF 중의 피페리딘(piperidine in DMF) 을 가하고 상온에서 5분 간 2회 반응하고 DMF, MeOH, DMF순으로 세척하였다.
3) 1과 2의 반응을 반복적으로 하여 펩타이드 기본 골격 NH2-E(OtBu)-A-R(Pbf)-P-A-L-L-T(tBu)-S(tBu)-R(Pbf)L-R(Pbf)-F-I-P-K(Boc)-2-chloro-Trityl Resin)을 만들었다.
4) 절단(Cleavagge): 합성이 완료된 펩타이드 Resin에 절단 칵테일(Cleavage Cocktail) 을 가하여 펩타이드를 레진에서 분리하였다.
5) 얻어진 mixture에 Cooling diethyl ether를 가한 후, 원심 분리하여 얻어진 펩타이드를 침전시킨다.
6) Prep-HPLC로 정제 후, LC/MS로 분자량을 확인하고 동결하여 파우더로 제조하였다.
실험예 2: PEP 1의 항염증 활성 측정
세포주 배양
Murine macrophage cell line인 RAW264.7 세포(KCBL, 40071)를 페니실린(100 IU/㎖) 및 스트렙토마이신(100 ㎍/㎖) (Gibco Laboratories)과 10%의 FBS(fetal bovine serum; Gibco Laboratories)를 함유한 DMEM (Dulbeccon's modified Eagle's medium; PAA, Austria)배지를 이용해서 1 × 106 세포/㎖로 조절한 후, 96 웰 플레이트에 접종하고, 5% CO2 및 37℃에서 24시간 동안 전 배양하였다.
이후 배지를 제거하고 새로운 배지를 100 ㎕ 처리 후 실험에 이용된 샘플을 농도 별로 5ug/mL씩 처리하였다. 30분간 CO2 인큐베이터에서 배양 후 50 ㎕의 LPS(최종농도 1 ㎍/㎖)를 함유한 배지를 처리하여 인큐베이터(5% CO2, 37℃)에서 24시간 동안 배양하였다. 염증 반응 모델은 각 well 당 1 μg/mL 리포폴리사카라이드 (lipopolysaccharide, LPS; Sigma, USA)를 처리하였으며, 대조군은 포스페이트 버퍼 식염수 (phosphate buffered saline, PBS; pH 7.2) 처리하여 24시간 후 배양액을 에펜도르프 튜브(eppendorf tube)에 넣어 사용하였다.
실험 2-1. 산화질소(NO) 분석
산화질소의 정량은 Raw 264.7 세포(1 × 106 세포/㎖)를 이용하고, 그리스 반응액 시스템 (Griess reagent system, Promega, USA)을 사용하여 측정하는 방법을 사용하였다. 96-well plate에 배양액 50 μl를 넣고 그리스 반응액 I (NED, 나프틸에틸렌디아미드) solution)과 그리스 반응액 II (설파닐아마이드 용액, Sulfaniliamide solution)을 동량으로 섞어 넣고, 10분간 반응 후 30분 이내에 마이크로플레이트 리더 (microplate reader, Molecular Devices, USA)를 이용하여 광학 밀도 540 nm에서 측정하였다. 산화질소(NO)의 농도는 아질산나트륨의 표준곡선(0~100 μM)을 이용하여 계산하였다
하기 표 3에 나타난 바와 같이 LPS는 NO의 생성을 증가시켰지만 LPS와 펩타이드 PEP 1을 동시에 처리하였을 경우 NO 생성량이 감소하는 것을 확인할 수 있었다. 특히, PEP 1을 처리하였을 경우에는 염증 유발시 생성되는 NO의 생성량이 65% 감소한 것으로 미루어볼 때 염증유발이 억제되었음을 알 수 있었다.
인간 텔로머라제 유래 PEP 1의 항염증 활성 측정
Test sample 대조군의 NO 생성(%) NO 생성저해(%)
PBS 0 -
LPS 1ug/mL PBS 100 0
PEP 1 (0.5ug/mL) 35 65
실험 2-2. 사이토카인 생성억제 효과 분석
PEP 1의 염증성 사이토카인 생성억제효과를 조사하기 위하여 RAW 264.7 cell에 인간 텔로머라제 유래 PEP1 5 μg/mL 농도로 먼저 처리한 다음 LPS를 1 μg/mL 농도로 처리하여 24시간동안 더 배양하였다. 세포 배양액(culture medium)을 포함하는 상층액 샘플을 채집하여 ELISA 키트(eBioscience, San Diego)를 사용하여 사이토카인 레벨을 분석하였다.
96-웰 플레이트는 100μl의 캡쳐 항체(capture antibodies, 제조사의 프로토콜에 따른 추천 농도로 된 코팅 버퍼에 용해된 것)로 코팅되어 4℃ 에서 하룻밤 반응 시켰다. 그리고 플레이트를 5회 세척 후 200μl 의 어세이 희석액(diluents)을 각 웰에 첨가하고 블로킹을 동안 실온에서 1시간 반응시켰다. 각 웰을 워시 버퍼로 5회 세척 후, 세포 배양액 샘플 또는 각 사이토카인 표준 단백질 샘플은 희석되어 100μl씩 각 웰에 첨가되었다. 샘플을 포함한 플레이트는 4℃에서 하룻밤 반응시켰다. 그리고 나서 플레이트를 워시 버퍼로 5회 세척 한 뒤 100μl의 2차 항체와 아비딘(avidin)의 접합체(conjugate)를 첨가하고 실온에서 1시간 동안 반응 시켰다.
2차 항체와 함께 반응시킨 뒤에, 플레이트를 5회 세척하고 100μl의 아비딘-HRP(BD Bioscience)와 함께 30분 동안 실온에서 반응시켰다. 플레이트를 7회 세척한 뒤에 100μl의 TMB 용액(Pierce)를 첨가하고 15분 동안 실온에서 반응시켰다. 반응은 각 웰에 50μl의 2N 황산(H2SO4)을 첨가함으로서 종료되었다. 450nm에서 광학 밀도가 마이크로플레이트 리더(reader)를 사용하여 측정하였다. 통게학적 분석은 SPSS프로그램의 ANOVA 프로시져를 사용하여 변량분석으로 실시되었고, 분석 간의 유의점은 Duncan's multiple range test를 사용하여 검증되었다.
실험 2-3: IL-6 분비측정
하기 표 4에 나타난 바와 같이 LPS는 사이토카인 IL-6(interleukin-6)의 분비를 증가시켰지만 LPS와 PEP 1을 동시에 처리하였을 경우 염증관련 사이토카인 IL-6의 분비량이 감소하는 것을 확인할 수 있었다. 특히, PEP 1을 처리하였을 경우에는 염증 유발관련 사이토카인의 분비량을 70% 이상 감소시켜서 뛰어난 항염 활성을 나타냈다.
인간 텔로머라제 유래 펩타이드 RIA의 cytokine IL-6 분비 억제능 측정
Test sample cytokine IL-6 production
% of control inhibition %
PBS 0 -
LPS 1ug/ml PBS 100 0
PEP 1 (5ug/ml) 28 72
실험 2-4: HMGB1, TNF-α, COX-2의 발현 억제능 측정 단백질 발현의 분석은 웨스턴 블롯 분석(Western blot analysis)에 의해 수행하였는데, 인간 텔로머라제 유래 펩타이드가 처리된 배지에서 자란 세포들을 PBS로 씻어내고 0.05% 트립신-EDTA를 처리하여 부유시킨 다음 원심분리를 하여 세포를 모았다. 이렇게 모아진 세포에 적당량의 라이시스 버퍼로 용해한 후, 세포 내 잔사물을 분리시키고 동량의 단백질을 SDS-폴리아크릴아마이드 겔 전기영동으로 분리하였다. 분리된 단백질을 니트로섬유소막 (nitrocellulose membrane, Schleicherand Schuell, Keene, NH, USA)으로 전이시킨 후, 특정 단백질에 대한 항체와 그에 대한 이차항체 반응을 실시한 후 ECL (enhanced chemiluminoesence) 용액(Amersham Life Science Corp., Arlington Heights, IL, USA)을 적용시킨 다음 X-선 필름에 감광시켜 단백질의 발현 정도를 분석하였다.
NO 생성 억제 기작인 TNF-α와 COX-2 단백질의 관련성을 확인하기 위하여 웨스턴 블롯을 통해 발현량을 측정한 결과, 하기 표 5에 나타난 바와 같이 LPS는 사이토카인 HMGB1, TNF-α, COX의 발현을 증가시켰지만 LPS와 PEP 1을 동시에 처리하였을 경우 염증관련 단백질의 발현량이 감소하는 것을 확인할 수 있었다. 특히, 본 발명 PEP 1을 처리하였을 경우에는 염증 유발관련 사이토카인 단백질의 발현량을 70% 이상 감소시켜서 뛰어난 항염 활성을 나타냈다.
PEP1의 전-염증성 사이토카인 발현 레벨에 대한 저해 효능의 측정
Test sample 사이토카인 단백질의 발현정도(band intensity)
% of control
HMGB1 TNF -a COX-2
PBS - - -
LPS 1ug/ml PBS 100 100 100
PEP 1 (5ug/ml) 30 25 22
실시예 2: PEP RIA 시리즈(서열번호 1 내지 서열번호 161) 펩티드의 TNF- α 저해 활성 측정
상기 실시예 1에서 서열번호 1의 펩티드(PEP 1)에 대한 TNF-α 저해 활성을 확인하고, 이를 기초로 하여 서열번호 1 내지 서열번호 161의 펩티드에 대한 TNF-α 저해 활성을 확인하는 실험을 실시하였다. 서열번호 1 내지 서열번호 161의 펩티드를 합성하는 방법은 실시예 1에 기술된 서열번호 1의 펩티드를 합성하는 방법과 같은 방법을 사용하되, 붙여주는 아미노산을 달리하였다.
실험 1: 세포 배양
건강한 사람에게서 혈액을 채혈 (50 ml)한 후 Biocoll Separating Solution (Biochrom AG, Berlin, Germany)를 사용하여 PBMC (peripheral blood mononuclear cells) 층을 회수하였다. 회수된 PBMC는 사람의 혈청 (20%)이 첨가된 RPMI 1640 배지에 부유하여 30분 가량 사람의 혈청을 코팅한 100-mm 폴리스티렌(polystyrene) 세포 배양 플레이트에 옮겨 2시간 가량 37℃, 5% CO2 배양기에서 2시간 동안 배양하였다. 그 후 바닥에 붙은 모노사이트(monocytes)들을 차가운 PBS로 떼어낸 후 96 웰 플레이트(well plate)에 웰 당 1 × 105 셀이 되도록 RPMI 1640 배지 (supplemented with penicillin-streptomycin; 100 mg/ml, human serum; 20%)에 부유시켜 실험하기 하루 전에 배양시켜 놓았다.
실험 2: TNF-α 저해 활성 분석
PEP RIA 시리즈의 펩티드들이 TNF-α에 대해 어떠한 영향을 미치는지 알아보기 위해 ELISA 실험을 수행하였다. PBMC에서 유래한 모노사이트들(monocytes)을 96 웰 플레이트에 웰 당 1 × 105 셀이 되도록 실험 하루 전에 배양한 후 LPS (lipopolysaccharide; 10 ng/ml, Sigma)를 2 시간 처리하고 PBS로 3회 세척하였다. PBS로 3회 세척한 모노사이트들은 OPTI-MEM 배지를 가해, 1 시간 동안 기아 상태(starvation)에 놓아 둔 후 4μM 펩티드들 처리하여 2 시간 동안 배양하였다. 3개의 음성 대조군을 사용하였다. 첫 번째 그룹은 세포에 아무것도 처리하지 않았다. 두 번째 그룹은 세포에 에스트로겐(estrogen의 한 종류로서 estradiol을 사용)을 처리하였다. 세 번째 그룹은 LPS (10 ng/ml)를 처리하거나 LPS (10 ng/ml)와 함께 에스트로겐(20 nM)을 같이 처리하였다. TNF-α 저해 효능이 확인된 PEP1은 양성 대조군으로 TNF-α 저해능을 측정하는데 사용되었다. 배양이 끝난 후 세포 배양액을 걷어 ELISA (R＆D, Minneapolis, MN, USA) 키트 매뉴얼에 따라 TNF-α를 정량 하였다. 구체적인 정량방법은 실시예 1의 실험 2-2에 기재되어 있는 바와 같다.
상기와 같은 실험을 통하여 TNF-α의 레벨에 영향을 미치는 펩티드를 스크리닝하였다. PBMC 유래 모노사이트들을 엔도톡신(endotoxin)인 LPS (10 ng/ml)로 2 시간 자극 시키고 1 시간 동안 OPTI-MEM으로 기아상태(starvation)에 놓아둔 후 161개의 펩티드들을 4 μM의 농도로 2 시간 동안 반응 시켰다. 반응 후 세포 배양액의 TNF-α 레벨을 ELISA로 측정하여 음성 및 양성 대조군에 비하여 TNF- α의 레벨을 감소시키는 펩티드들을 스크리닝 하였다(도 1 내지 도 16).
LPS만을 처리한 비교군에 비해 TNF- α 저해효과를 보이는 펩티드로서, 서열번호 1 내지 6, 서열번호 9, 서열번호 11, 서열번호 14 내지 21, 서열번호 23 내지 37, 서열번호 39 내지 44, 서열번호 47 내지 53, 서열번호 55 내지 61, 서열번호 63 내지 82, 서열번호 84 내지 94, 서열번호 96, 서열번호 99 내지 104, 서열번호 107 내지 109, 서열번호 115, 서열번호 116, 서열번호 120 내지 122, 서열번호 124, 서열번호 129 내지 133, 서열번호 142 내지 144, 서열번호 146, 서열번호 148, 서열번호 149, 및 서열번호 155 내지 159가 선별되었다.
또한 또한, LPS+에스트로겐에 비해 TNF-α 저해효과를 보이는 펩티드로서, 서열번호 15 내지 18, 서열번호 23 내지 27, 서열번호 29, 서열번호 31 내지 34, 서열번호 39 내지 41, 서열번호 47, 서열번호 48, 서열번호 51 내지 53, 서열번호 55 내지 58, 서열번호 61, 서열번호 65 내지 68, 서열번호 70, 서열번호 73 내지 79, 서열번호 81, 서열번호 82, 서열번호 84 내지 87, 서열번호 89 내지 94, 서열번호 96, 서열번호 99, 서열번호 101 내지 104, 서열번호 107 내지 109, 서열번호 120, 서열번호 121, 서열번호 129 내지 132, 서열번호 142 내지 144, 서열번호 146, 서열번호 148, 서열번호 149 및 서열번호 156 내지 159가 선별되었다.
실험 3: THP1 세포주에서 TNF- α 의 레벨에 영향을 미치는펩타이드 분석
인간 급성 단핵구성 백혈병 (Human acute monocytic leukemia) 세포주인 THP-1 세포(American Type Culture Collectioni (ATCC), Manassas, VA, USA)를 사용하여 실험을 진행하였다. THP-1을 96 웰 플레이트에 웰 당 1 × 105 셀이 되도록 RPMI 1640 배지에 부유시켜 24시간 동안 배양시켰다. 이 때 대식세포(macrophage)로의 분화를 위해 PMA (phorbol 12-myristate 13-acetate)를 100 nM 처리하였다.
세포주(cell line)인 THP-1을 PMA로 분화시켜 실험하여 결과를 확인하기로 하였다. PMA로 하루 자극 시킨 THP-1 세포주를 사용하여 LPS를 2시간 먼저 처리하고 세척한 후 1 시간 기아상태 처리 및 PEP 1 시간 처리하는 방법을 사용하였다.
PMA로 분화시킨 THP-1 세포주를 엔도톡신(endotoxin)인 LPS (10 ng/ml, Sigma)로 2 시간 자극 시키고 2회 PBS로 세척 후 1 시간 동안 OPTI-MEM으로 기아상태 처리 하여 161개의 펩티드들을 1 μM의 농도로 1 시간 반응 시킨다. 반응 후 세포 배양액의 TNF-α 레벨을 ELISA로 측정하여 비교군에 비하여 TNF- α의 레벨을 감소시키는 펩티드들을 스크리닝 하였다 (도17 내지 도 35).
그 결과, 펩티드 서열번호 1 내지 5, 서열번호 7, 서열번호 9, 서열번호 10, 서열번호 12, 서열번호 13, 서열번호 15, 서열번호 17 내지 27, 서열번호 29, 서열번호 30, 서열번호 32 내지 53, 서열번호 55 내지 60, 서열번호 67, 서열번호 68, 서열번호 70, 서열번호 72 내지 82, 서열번호 114, 서열번호 127 내지 144, 서열번호 146, 서열번호 148, 서열번호 149, 서열번호 151 및 서열번호 153 내지 161이 대조군인 LPS만을 처리한 그룹에 비하여 TNF-α를 감소시키는 것으로 선별되었다.
실시예 3: 베타아밀로이드에 의해 유도된 염증반응 분석
HMGB1 단백질은 외부 자극에 의해 핵 내에 존재하는 HMGB1 단백질이 아세틸화(aceylation)되어 세포질로 이동하다가, 이후 세포 외부로 분비됨으로써 염증 유발 사이토카인(cytokine)의 역할을 한다고 알려져 있다. 이와 같이 염증이 있는 경우 HMGB1 단백질이 세포 외부로 분비되므로, 염증성 질환인 처그-스트라우스 증후군, 류머티스 관절염 및 쇼그렌증후군 환자의 혈청은 정상인보다 매우 많은 양의 HMGB1 단백질을 가진다. 따라서 염증이 유발되는 어떤 자극이 주어지더라도, 세포핵 내의 HMGB1 단백질 양이 많다면 이는 HMGB1 단백질이 세포 외부로 분비되지 않고 있음을 의미하므로, 염증이 억제되고 있다고 볼 수 있을 것이다.
실험 1. 세포배양
미분화된 PC12 세포는 (ATCC, Rockville, MD, USA) 10% 열비활성화 말 혈청 (heat-inactivated serum), 5% 열비활성화 소태아혈청 (heat-inactivated fetal bovine serum), 100 units/ml penicillin과 100g/ml streptomycin을 포함하는 RPMI 1640 배양액에 미리코팅된 100mm dishes (Corning, PA, USA)인 poly-l-lysine (Sigma, Saint Louis, MO, USA)을 이용하여 ogarithmic-phase growth 로 유지하였다. 배양액은 37oC, 5% CO2 조건에서 배양하였고, 50% confluence 조건에서 자라였고, 1 mM EDTA를 포함하는 free Hank's balanced salt solution 인 Ca2+/Mg2+에서 추출하였으며, 세포들은 100mm dish 당 1 x 106 이 되도록 분주 후 하루간 배양하였다. 신경분화를 위해, PC12 세포들은 12시간 동안 혈청 기아처리 (말혈청 또는 소태아혈청을 제외하고 100 units/ml penicillin과 100g/ml streptomycin 포함하는 RPMI 1640 medium) 하였고 따라서, PC12 세포들을 무혈청배지 조건에서 유지하였다. 이틀 후, 이전의 배지는 새로운 배지로 교체 되었으며, 3일째, NGF (50 ng/ml, Sigma, Saint Louis, MO, USA)를 배지에 가한 후, 추가로 3일 동안 무혈청배지 조건을 유지하였다. 세포분화 후, nPC 세포들은 다양한 농도의 peptides와 20μM 베타아밀로이드 단백질과 48시간 동안 배양하였다.
실험예 2. 웨스턴블랏 분석
웨스턴블랏을 이용하여 HMGB1의 레벨을 분석하였다. 5 x 106 세포들은 차가운 PBS로 2회 세척하였고, 용균완충제 [50 mM Tris (pH 8.0), 150 mM NaCl, 0.02% sodium azide, 0,2% SDS, 10 μg/ml phenyl methyl sulfonyl fluoride (PMSF), 50 μl/ml aprotinin, 1% Igepal 630, 100 mM NaF, 0.5% sodium deoxy choate, 0.5 mM EDTA, 0.1 mM EGTA] 얼음에 10분간 배양하였다. 10분간 2000 x g 에서 손상되지 않은 세포들과 핵은 원심분리 하였고, 10,000 x g 에서 용해물은 (lysates) 제거하였다. Anti-HMGB1 (1:1000, Cell Signaling, Beverly, MA, USA) 과 anti-β-tubulin (1:1000, Cell Signaling, Beverly, MA, USA) 항체를 사용하였다. 세포막은 0.05% Tween-20 (TBST)를 포함하는 Tris-buffered saline 으로 세척 하고, ECL (Amersham Pharmacia Biotech) 검출 후, HRP 결합된 anti-rabbit 항체 (Amersham Pharmacia Biotech, Piscataway, NJ, USA)를 이용해 처리하였고, blots는 이미지 어날라이저 (GE Healthcare, ImageQuant LAS 4000)을 이용해 정량하였다.
도 36 내지 도 108 은 웨스턴블랏 분석의 결과를 토대로, 세포 내 HMGB1 축적을 보여주는 선택된 펩티드를 나타낸다. 상기 도에 나타난 튜뷸린 (tubulins) 을 이용하여 단백질 발현량을 확인하였고, 선택된 펩티들의 서열은 다음과 같다:
서열번호 1, 서열번호 2, 서열번호 4, 서열번호 6, 서열번호 7, 서열번호 8, 서열번호 9, 서열번호 10, 서열번호 12, 서열번호 14, 서열번호 15, 서열번호 17, 서열번호 18, 서열번호 20, 서열번호 22, 서열번호 23, 서열번호 24, 서열번호 25, 서열번호 26, 서열번호 27, 서열번호 28, 서열번호 29, 서열번호 30, 서열번호 33, 서열번호 34, 서열번호 35, 서열번호 36, 서열번호 37, 서열번호 38, 서열번호 39, 서열번호 40, 서열번호 41, 서열번호 52, 서열번호 44, 서열번호 45, 서열번호 52, 서열번호 57, 서열번호 60, 서열번호 61, 서열번호 62, 서열번호 64, 서열번호 65, 서열번호 67, 서열번호 68, 서열번호 69, 서열번호 91, 서열번호 99, 서열번호 100, 서열번호 104, 서열번호 106, 서열번호 107, 서열번호 108, 서열번호 109, 서열번호 111, 서열번호 112, 서열번호 115, 서열번호 117, 서열번호 118, 서열번호 119, 서열번호 120, 서열번호 122, 서열번호 124, 서열번호 125, 서열번호 126, 서열번호 129, 서열번호 130, 서열번호 131, 서열번호 132, 서열번호 135, 서열번호 146, 서열번호 151, 서열번호 154 및 서열번호 156.
<110> KAEL-GemVax Co., Ltd. KIM, Sangjae <120> ANTI-INFLAMMATORY PEPTIDES AND COMPOSITION COMPRISING THE SAME <130> PN135035 <150> KR 10-2012-0079096 <151> 2012-07-20 <150> KR 10-2012-0089161 <151> 2012-08-14 <150> KR 10-2012-0089162 <151> 2012-08-14 <150> KR 10-2012-0089167 <151> 2012-08-14 <150> KR 10-2012-0104144 <151> 2012-09-19 <150> KR 10-2012-0104207 <151> 2012-09-19 <160> 163 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 30 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1 Ala Leu Phe Ser Val Leu Asn Tyr Glu Arg Ala Arg Arg Pro Gly Leu 1 5 10 15 Leu Gly Ala Ser Val Leu Gly Leu Asp Asp Ile His Arg Ala 20 25 30 <210> 2 <211> 15 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 2 Ser Val Leu Asn Tyr Glu Arg Ala Arg Arg Pro Gly Leu Leu Gly 1 5 10 15 <210> 3 <211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 3 Gly Leu Leu Gly Ala Ser Val Leu Gly Leu 1 5 10 <210> 4 <211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 4 Ala Leu Leu Thr Ser Arg Leu Arg Phe Ile 1 5 10 <210> 5 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 5 Arg Pro Ala Leu Leu Thr Ser Arg Leu 1 5 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Homo sapiens <400> 15 Ser Val Leu Asn Tyr Glu Arg Ala Arg Arg 1 5 10 <210> 16 <211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 16 Ser Val Leu Gly Leu Asp Asp Ile His Arg 1 5 10 <210> 17 <211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 17 Phe Ser Val Leu Asn Tyr Glu Arg Ala Arg 1 5 10 <210> 18 <211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 18 Asn Tyr Glu Arg Ala Arg Arg Pro Gly Leu 1 5 10 <210> 19 <211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 19 Tyr Glu Arg Ala Arg Arg Pro Gly Leu Leu 1 5 10 <210> 20 <211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 20 Arg Pro Gly Leu Leu Gly Ala Ser Val Leu 1 5 10 <210> 21 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 21 Glu Arg Ala Arg Arg Pro Gly Leu Leu 1 5 <210> 22 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 22 Val Leu Gly Leu Asp Asp Ile His Arg 1 5 <210> 23 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 23 Ser Val Leu Asn Tyr Glu Arg Ala Arg 1 5 <210> 24 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 24 Val Leu Asn Tyr Glu Arg Ala Arg Arg 1 5 <210> 25 <211> 9 <212> PRT <213> 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sapiens <400> 51 Asp Ala Arg Pro Pro Pro Ala Ala Pro Ser Phe Arg Gln Val Ser Cys 1 5 10 15 Leu Lys Glu Leu 20 <210> 52 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 52 Val Ala Arg Val Leu Gln Arg Leu Cys Glu Arg Gly Ala Lys Asn Val 1 5 10 15 Leu Ala Phe Gly 20 <210> 53 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 53 Phe Ala Leu Leu Asp Gly Ala Arg Gly Gly Pro Pro Glu Ala Phe Thr 1 5 10 15 Thr Ser Val Arg 20 <210> 54 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 54 Ser Tyr Leu Pro Asn Thr Val Thr Asp Ala Leu Arg Gly Ser Gly Ala 1 5 10 15 Trp Gly Leu Leu 20 <210> 55 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 55 Leu Arg Arg Val Gly Asp Asp Val Leu Val His Leu Leu Ala Arg Cys 1 5 10 15 Ala Leu Phe Val 20 <210> 56 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 56 Leu Val Ala Pro Ser Cys Ala Tyr Gln Val Cys Gly Pro Pro Leu Tyr 1 5 10 15 Gln Leu Gly Ala 20 <210> 57 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 57 Ala Thr Gln Ala Arg Pro Pro Pro His Ala Ser Gly Pro Arg Arg Arg 1 5 10 15 Leu Gly Cys Glu 20 <210> 58 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 58 Arg Ala Trp Asn His Ser Val Arg Glu Ala Gly Val Pro Leu Gly Leu 1 5 10 15 Pro Ala Pro Gly 20 <210> 59 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 59 Ala Arg Arg Arg Gly Gly Ser Ala Ser Arg Ser Leu Pro Leu Pro Lys 1 5 10 15 Arg Pro Arg Arg 20 <210> 60 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 60 Gly Ala Ala Pro Glu Pro Glu Arg Thr Pro Val Gly Gln Gly Ser Trp 1 5 10 15 Ala His Pro Gly 20 <210> 61 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 61 Arg Thr Arg Gly Pro Ser Asp Arg Gly Phe Cys Val Val Ser Pro Ala 1 5 10 15 Arg Pro Ala Glu 20 <210> 62 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 62 Glu Ala Thr Ser Leu Glu Gly Ala Leu Ser Gly Thr Arg His Ser His 1 5 10 15 Pro Ser Val Gly 20 <210> 63 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 63 Arg Gln His His Ala Gly Pro Pro Ser Thr Ser Arg Pro Pro Arg Pro 1 5 10 15 Trp Asp Thr Pro 20 <210> 64 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 64 Cys Pro Pro Val Tyr Ala Glu Thr Lys His Phe Leu Tyr Ser Ser Gly 1 5 10 15 Asp Lys Glu Gln 20 <210> 65 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 65 Leu Arg Pro Ser Phe Leu Leu Ser Ser Leu Arg Pro Ser Leu Thr Gly 1 5 10 15 Ala Arg Arg Leu 20 <210> 66 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 66 Val Glu Thr Ile Phe Leu Gly Ser Arg Pro Trp Met Pro Gly Thr Pro 1 5 10 15 Arg Arg Leu Pro 20 <210> 67 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 67 Arg Leu Pro Gln Arg Tyr Trp Gln Met Arg Pro Leu Phe Leu Glu Leu 1 5 10 15 Leu Gly Asn His 20 <210> 68 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 68 Ala Gln Cys Pro Tyr Gly Val Leu Leu Lys Thr His Cys Pro Leu Arg 1 5 10 15 Ala Ala Val Thr 20 <210> 69 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 69 Pro Ala Ala Gly Val Cys Ala Arg Glu Lys Pro Gln Gly Ser Val Ala 1 5 10 15 Ala Pro Glu Glu 20 <210> 70 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 70 Glu Asp Thr Asp Pro Arg Arg Leu Val Gln Leu Leu Arg Gln His Ser 1 5 10 15 Ser Pro Trp Gln 20 <210> 71 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 71 Val Tyr Gly Phe Val Arg Ala Cys Leu Arg Arg Leu Val Pro Pro Gly 1 5 10 15 Leu Trp Gly Ser 20 <210> 72 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 72 Arg His Asn Glu Arg Arg Phe Leu Arg Asn Thr Lys Lys Phe Ile Ser 1 5 10 15 Leu Gly Lys His 20 <210> 73 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 73 Ala Lys Leu Ser Leu Gln Glu Leu Thr Trp Lys Met Ser Val Arg Asp 1 5 10 15 Cys Ala Trp Leu 20 <210> 74 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 74 Arg Arg Ser Pro Gly Val Gly Cys Val Pro Ala Ala Glu His Arg Leu 1 5 10 15 Arg Glu Glu Ile 20 <210> 75 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 75 Leu Ala Lys Phe Leu His Trp Leu Met Ser Val Tyr Val Val Glu Leu 1 5 10 15 Leu Arg Ser Phe 20 <210> 76 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 76 Phe Tyr Val Thr Glu Thr Thr Phe Gln Lys Asn Arg Leu Phe Phe Tyr 1 5 10 15 Arg Lys Ser Val 20 <210> 77 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 77 Trp Ser Lys Leu Gln Ser Ile Gly Ile Arg Gln His Leu Lys Arg Val 1 5 10 15 Gln Leu Arg Glu 20 <210> 78 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 78 Leu Ser Glu Ala Glu Val Arg Gln His Arg Glu Ala Arg Pro Ala Leu 1 5 10 15 Leu Thr Ser Arg 20 <210> 79 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 79 Leu Arg Phe Ile Pro Lys Pro Asp Gly Leu Arg Pro Ile Val Asn Met 1 5 10 15 Asp Tyr Val Val 20 <210> 80 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 80 Gly Ala Arg Thr Phe Arg Arg Glu Lys Arg Ala Glu Arg Leu Thr Ser 1 5 10 15 Arg Val Lys Ala 20 <210> 81 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 81 Leu Phe Ser Val Leu Asn Tyr Glu Arg Ala Arg Arg Pro Gly Leu Leu 1 5 10 15 Gly Ala Ser Val 20 <210> 82 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 82 Leu Gly Leu Asp Asp Ile His Arg Ala Trp Arg Thr Phe Val Leu Arg 1 5 10 15 Val Arg Ala Gln 20 <210> 83 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 83 Asp Pro Pro Pro Glu Leu Tyr Phe Val Lys Val Asp Val Thr Gly Ala 1 5 10 15 Tyr Asp Thr Ile 20 <210> 84 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 84 Pro Gln Asp Arg Leu Thr Glu Val Ile Ala Ser Ile Ile Lys Pro Gln 1 5 10 15 Asn Thr Tyr Cys 20 <210> 85 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 85 Val Arg Arg Tyr Ala Val Val Gln Lys Ala Ala His Gly His Val Arg 1 5 10 15 Lys Ala Phe Lys 20 <210> 86 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 86 Ser His Val Ser Thr Leu Thr Asp Leu Gln Pro Tyr Met Arg Gln Phe 1 5 10 15 Val Ala His Leu 20 <210> 87 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 87 Gln Glu Thr Ser Pro Leu Arg Asp Ala Val Val Ile Glu Gln Ser Ser 1 5 10 15 Ser Leu Asn Glu 20 <210> 88 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 88 Ala Ser Ser Gly Leu Phe Asp Val Phe Leu Arg Phe Met Cys His His 1 5 10 15 Ala Val Arg Ile 20 <210> 89 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 89 Arg Gly Lys Ser Tyr Val Gln Cys Gln Gly Ile Pro Gln Gly Ser Ile 1 5 10 15 Leu Ser Thr Leu 20 <210> 90 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 90 Leu Cys Ser Leu Cys Tyr Gly Asp Met Glu Asn Lys Leu Phe Ala Gly 1 5 10 15 Ile Arg Arg Asp 20 <210> 91 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 91 Gly Leu Leu Leu Arg Leu Val Asp Asp Phe Leu Leu Val Thr Pro His 1 5 10 15 Leu Thr His Ala 20 <210> 92 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 92 Lys Thr Phe Leu Arg Thr Leu Val Arg Gly Val Pro Glu Tyr Gly Cys 1 5 10 15 Val Val Asn Leu 20 <210> 93 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 93 Arg Lys Thr Val Val Asn Phe Pro Val Glu Asp Glu Ala Leu Gly Gly 1 5 10 15 Thr Ala Phe Val 20 <210> 94 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 94 Gln Met Pro Ala His Gly Leu Phe Pro Trp Cys Gly Leu Leu Leu Asp 1 5 10 15 Thr Arg Thr Leu 20 <210> 95 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 95 Glu Val Gln Ser Asp Tyr Ser Ser Tyr Ala Arg Thr Ser Ile Arg Ala 1 5 10 15 Ser Leu Thr Phe 20 <210> 96 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 96 Asn Arg Gly Phe Lys Ala Gly Arg Asn Met Arg Arg Lys Leu Phe Gly 1 5 10 15 Val Leu Arg Leu 20 <210> 97 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 97 Lys Cys His Ser Leu Phe Leu Asp Leu Gln Val Asn Ser Leu Gln Thr 1 5 10 15 Val Cys Thr Asn 20 <210> 98 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 98 Ile Tyr Lys Ile Leu Leu Leu Gln Ala Tyr Arg Phe His Ala Cys Val 1 5 10 15 Leu Gln Leu Pro 20 <210> 99 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 99 Phe His Gln Gln Val Trp Lys Asn Pro Thr Phe Phe Leu Arg Val Ile 1 5 10 15 Ser Asp Thr Ala 20 <210> 100 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 100 Ser Leu Cys Tyr Ser Ile Leu Lys Ala Lys Asn Ala Gly Met Ser Leu 1 5 10 15 Gly Ala Lys Gly 20 <210> 101 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 101 Ala Ala Gly Pro Leu Pro Ser Glu Ala Val Gln Trp Leu Cys His Gln 1 5 10 15 Ala Phe Leu Leu 20 <210> 102 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 102 Lys Leu Thr Arg His Arg Val Thr Tyr Val Pro Leu Leu Gly Ser Leu 1 5 10 15 Arg Thr Ala Gln 20 <210> 103 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 103 Thr Gln Leu Ser Arg Lys Leu Pro Gly Thr Thr Leu Thr Ala Leu Glu 1 5 10 15 Ala Ala Ala Asn 20 <210> 104 <211> 12 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 104 Pro Ala Leu Pro Ser Asp Phe Lys Thr Ile Leu Asp 1 5 10 <210> 105 <211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 105 Met Pro Arg Ala Pro Arg Cys Arg Ala Val 1 5 10 <210> 106 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 106 Arg Ser Leu Leu Arg Ser His Tyr Arg Glu Val Leu Pro Leu Ala Thr 1 5 10 15 Phe Val Arg Arg 20 <210> 107 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 107 Leu Gly Pro Gln Gly Trp Arg Leu Val Gln Arg Gly Asp Pro Ala Ala 1 5 10 15 Phe Arg Ala Leu 20 <210> 108 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 108 Val Ala Gln Cys Leu Val Cys Val Pro Trp Asp Ala Arg Pro Pro Pro 1 5 10 15 Ala Ala Pro Ser 20 <210> 109 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 109 Phe Arg Gln Val Ser Cys Leu Lys Glu Leu Val Ala Arg Val Leu Gln 1 5 10 15 Arg Leu Cys Glu 20 <210> 110 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 110 Arg Gly Ala Lys Asn Val Leu Ala Phe Gly Phe Ala Leu Leu Asp Gly 1 5 10 15 Ala Arg Gly Gly 20 <210> 111 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 111 Pro Pro Glu Ala Phe Thr Thr Ser Val Arg Ser Tyr Leu Pro Asn Thr 1 5 10 15 Val Thr Asp Ala 20 <210> 112 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 112 Leu Arg Gly Ser Gly Ala Trp Gly Leu Leu Leu Arg Arg Val Gly Asp 1 5 10 15 Asp Val Leu Val 20 <210> 113 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 113 His Leu Leu Ala Arg Cys Ala Leu Phe Val Leu Val Ala Pro Ser Cys 1 5 10 15 Ala Tyr Gln Val 20 <210> 114 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 114 Cys Gly Pro Pro Leu Tyr Gln Leu Gly Ala Ala Thr Gln Ala Arg Pro 1 5 10 15 Pro Pro His Ala 20 <210> 115 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 115 Ser Gly Pro Arg Arg Arg Leu Gly Cys Glu Arg Ala Trp Asn His Ser 1 5 10 15 Val Arg Glu Ala 20 <210> 116 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 116 Gly Val Pro Leu Gly Leu Pro Ala Pro Gly Ala Arg Arg Arg Gly Gly 1 5 10 15 Ser Ala Ser Arg 20 <210> 117 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 117 Ser Leu Pro Leu Pro Lys Arg Pro Arg Arg Gly Ala Ala Pro Glu Pro 1 5 10 15 Glu Arg Thr Pro 20 <210> 118 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 118 Val Gly Gln Gly Ser Trp Ala His Pro Gly Arg Thr Arg Gly Pro Ser 1 5 10 15 Asp Arg Gly Phe 20 <210> 119 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 119 Cys Val Val Ser Pro Ala Arg Pro Ala Glu Glu Ala Thr Ser Leu Glu 1 5 10 15 Gly Ala Leu Ser 20 <210> 120 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 120 Gly Thr Arg His Ser His Pro Ser Val Gly Arg Gln His His Ala Gly 1 5 10 15 Pro Pro Ser Thr 20 <210> 121 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 121 Ser Arg Pro Pro Arg Pro Trp Asp Thr Pro Cys Pro Pro Val Tyr Ala 1 5 10 15 Glu Thr Lys His 20 <210> 122 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 122 Phe Leu Tyr Ser Ser Gly Asp Lys Glu Gln Leu Arg Pro Ser Phe Leu 1 5 10 15 Leu Ser Ser Leu 20 <210> 123 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 123 Arg Pro Ser Leu Thr Gly Ala Arg Arg Leu Val Glu Thr Ile Phe Leu 1 5 10 15 Gly Ser Arg Pro 20 <210> 124 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 124 Trp Met Pro Gly Thr Pro Arg Arg Leu Pro Arg Leu Pro Gln Arg Tyr 1 5 10 15 Trp Gln Met Arg 20 <210> 125 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 125 Pro Leu Phe Leu Glu Leu Leu Gly Asn His Ala Gln Cys Pro Tyr Gly 1 5 10 15 Val Leu Leu Lys 20 <210> 126 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 126 Thr His Cys Pro Leu Arg Ala Ala Val Thr Pro Ala Ala Gly Val Cys 1 5 10 15 Ala Arg Glu Lys 20 <210> 127 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 127 Pro Gln Gly Ser Val Ala Ala Pro Glu Glu Glu Asp Thr Asp Pro Arg 1 5 10 15 Arg Leu Val Gln 20 <210> 128 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 128 Leu Leu Arg Gln His Ser Ser Pro Trp Gln Val Tyr Gly Phe Val Arg 1 5 10 15 Ala Cys Leu Arg 20 <210> 129 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 129 Arg Leu Val Pro Pro Gly Leu Trp Gly Ser Arg His Asn Glu Arg Arg 1 5 10 15 Phe Leu Arg Asn 20 <210> 130 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 130 Thr Lys Lys Phe Ile Ser Leu Gly Lys His Ala Lys Leu Ser Leu Gln 1 5 10 15 Glu Leu Thr Trp 20 <210> 131 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 131 Lys Met Ser Val Arg Asp Cys Ala Trp Leu Arg Arg Ser Pro Gly Val 1 5 10 15 Gly Cys Val Pro 20 <210> 132 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 132 Ala Ala Glu His Arg Leu Arg Glu Glu Ile Leu Ala Lys Phe Leu His 1 5 10 15 Trp Leu Met Ser 20 <210> 133 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 133 Val Tyr Val Val Glu Leu Leu Arg Ser Phe Phe Tyr Val Thr Glu Thr 1 5 10 15 Thr Phe Gln Lys 20 <210> 134 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 134 Asn Arg Leu Phe Phe Tyr Arg Lys Ser Val Trp Ser Lys Leu Gln Ser 1 5 10 15 Ile Gly Ile Arg 20 <210> 135 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 135 Gln His Leu Lys Arg Val Gln Leu Arg Glu Leu Ser Glu Ala Glu Val 1 5 10 15 Arg Gln His Arg 20 <210> 136 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 136 Glu Ala Arg Pro Ala Leu Leu Thr Ser Arg Leu Arg Phe Ile Pro Lys 1 5 10 15 Pro Asp Gly Leu 20 <210> 137 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 137 Arg Pro Ile Val Asn Met Asp Tyr Val Val Gly Ala Arg Thr Phe Arg 1 5 10 15 Arg Glu Lys Arg 20 <210> 138 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 138 Ala Glu Arg Leu Thr Ser Arg Val Lys Ala Leu Phe Ser Val Leu Asn 1 5 10 15 Tyr Glu Arg Ala 20 <210> 139 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 139 Arg Arg Pro Gly Leu Leu Gly Ala Ser Val Leu Gly Leu Asp Asp Ile 1 5 10 15 His Arg Ala Trp 20 <210> 140 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 140 Arg Thr Phe Val Leu Arg Val Arg Ala Gln Asp Pro Pro Pro Glu Leu 1 5 10 15 Tyr Phe Val Lys 20 <210> 141 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 141 Val Asp Val Thr Gly Ala Tyr Asp Thr Ile Pro Gln Asp Arg Leu Thr 1 5 10 15 Glu Val Ile Ala 20 <210> 142 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 142 Ser Ile Ile Lys Pro Gln Asn Thr Tyr Cys Val Arg Arg Tyr Ala Val 1 5 10 15 Val Gln Lys Ala 20 <210> 143 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 143 Ala His Gly His Val Arg Lys Ala Phe Lys Ser His Val Ser Thr Leu 1 5 10 15 Thr Asp Leu Gln 20 <210> 144 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 144 Pro Tyr Met Arg Gln Phe Val Ala His Leu Gln Glu Thr Ser Pro Leu 1 5 10 15 Arg Asp Ala Val 20 <210> 145 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 145 Val Ile Glu Gln Ser Ser Ser Leu Asn Glu Ala Ser Ser Gly Leu Phe 1 5 10 15 Asp Val Phe Leu 20 <210> 146 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 146 Arg Phe Met Cys His His Ala Val Arg Ile Arg Gly Lys Ser Tyr Val 1 5 10 15 Gln Cys Gln Gly 20 <210> 147 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 147 Ile Pro Gln Gly Ser Ile Leu Ser Thr Leu Leu Cys Ser Leu Cys Tyr 1 5 10 15 Gly Asp Met Glu 20 <210> 148 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 148 Asn Lys Leu Phe Ala Gly Ile Arg Arg Asp Gly Leu Leu Leu Arg Leu 1 5 10 15 Val Asp Asp Phe 20 <210> 149 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 149 Leu Leu Val Thr Pro His Leu Thr His Ala Lys Thr Phe Leu Arg Thr 1 5 10 15 Leu Val Arg Gly 20 <210> 150 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 150 Val Pro Glu Tyr Gly Cys Val Val Asn Leu Arg Lys Thr Val Val Asn 1 5 10 15 Phe Pro Val Glu 20 <210> 151 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 151 Asp Glu Ala Leu Gly Gly Thr Ala Phe Val Gln Met Pro Ala His Gly 1 5 10 15 Leu Phe Pro Trp 20 <210> 152 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 152 Cys Gly Leu Leu Leu Asp Thr Arg Thr Leu Glu Val Gln Ser Asp Tyr 1 5 10 15 Ser Ser Tyr Ala 20 <210> 153 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 153 Arg Thr Ser Ile Arg Ala Ser Leu Thr Phe Asn Arg Gly Phe Lys Ala 1 5 10 15 Gly Arg Asn Met 20 <210> 154 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 154 Arg Arg Lys Leu Phe Gly Val Leu Arg Leu Lys Cys His Ser Leu Phe 1 5 10 15 Leu Asp Leu Gln 20 <210> 155 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 155 Val Asn Ser Leu Gln Thr Val Cys Thr Asn Ile Tyr Lys Ile Leu Leu 1 5 10 15 Leu Gln Ala Tyr 20 <210> 156 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 156 Arg Phe His Ala Cys Val Leu Gln Leu Pro Phe His Gln Gln Val Trp 1 5 10 15 Lys Asn Pro Thr 20 <210> 157 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 157 Phe Phe Leu Arg Val Ile Ser Asp Thr Ala Ser Leu Cys Tyr Ser Ile 1 5 10 15 Leu Lys Ala Lys 20 <210> 158 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 158 Asn Ala Gly Met Ser Leu Gly Ala Lys Gly Ala Ala Gly Pro Leu Pro 1 5 10 15 Ser Glu Ala Val 20 <210> 159 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 159 Gln Trp Leu Cys His Gln Ala Phe Leu Leu Lys Leu Thr Arg His Arg 1 5 10 15 Val Thr Tyr Val 20 <210> 160 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 160 Pro Leu Leu Gly Ser Leu Arg Thr Ala Gln Thr Gln Leu Ser Arg Lys 1 5 10 15 Leu Pro Gly Thr 20 <210> 161 <211> 22 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 161 Thr Leu Thr Ala Leu Glu Ala Ala Ala Asn Pro Ala Leu Pro Ser Asp 1 5 10 15 Phe Lys Thr Ile Leu Asp 20 <210> 162 <211> 1132 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 162 Met Pro Arg Ala Pro Arg Cys Arg Ala Val Arg Ser Leu Leu Arg Ser 1 5 10 15 His Tyr Arg Glu Val Leu Pro Leu Ala Thr Phe Val Arg Arg Leu Gly 20 25 30 Pro Gln Gly Trp Arg Leu Val Gln Arg Gly Asp Pro Ala Ala Phe Arg 35 40 45 Ala Leu Val Ala Gln Cys Leu Val Cys Val Pro Trp Asp Ala Arg Pro 50 55 60 Pro Pro Ala Ala Pro Ser Phe Arg Gln Val Ser Cys Leu Lys Glu Leu 65 70 75 80 Val Ala Arg Val Leu Gln Arg Leu Cys Glu Arg Gly Ala Lys Asn Val 85 90 95 Leu Ala Phe Gly Phe Ala Leu Leu Asp Gly Ala Arg Gly Gly Pro Pro 100 105 110 Glu Ala Phe Thr Thr Ser Val Arg Ser Tyr Leu Pro Asn Thr Val Thr 115 120 125 Asp Ala Leu Arg Gly Ser Gly Ala Trp Gly Leu Leu Leu Arg Arg Val 130 135 140 Gly Asp Asp Val Leu Val His Leu Leu Ala Arg Cys Ala Leu Phe Val 145 150 155 160 Leu Val Ala Pro Ser Cys Ala Tyr Gln Val Cys Gly Pro Pro Leu Tyr 165 170 175 Gln Leu Gly Ala Ala Thr Gln Ala Arg Pro Pro Pro His Ala Ser Gly 180 185 190 Pro Arg Arg Arg Leu Gly Cys Glu Arg Ala Trp Asn His Ser Val Arg 195 200 205 Glu Ala Gly Val Pro Leu Gly Leu Pro Ala Pro Gly Ala Arg Arg Arg 210 215 220 Gly Gly Ser Ala Ser Arg Ser Leu Pro Leu Pro Lys Arg Pro Arg Arg 225 230 235 240 Gly Ala Ala Pro Glu Pro Glu Arg Thr Pro Val Gly Gln Gly Ser Trp 245 250 255 Ala His Pro Gly Arg Thr Arg Gly Pro Ser Asp Arg Gly Phe Cys Val 260 265 270 Val Ser Pro Ala Arg Pro Ala Glu Glu Ala Thr Ser Leu Glu Gly Ala 275 280 285 Leu Ser Gly Thr Arg His Ser His Pro Ser Val Gly Arg Gln His His 290 295 300 Ala Gly Pro Pro Ser Thr Ser Arg Pro Pro Arg Pro Trp Asp Thr Pro 305 310 315 320 Cys Pro Pro Val Tyr Ala Glu Thr Lys His Phe Leu Tyr Ser Ser Gly 325 330 335 Asp Lys Glu Gln Leu Arg Pro Ser Phe Leu Leu Ser Ser Leu Arg Pro 340 345 350 Ser Leu Thr Gly Ala Arg Arg Leu Val Glu Thr Ile Phe Leu Gly Ser 355 360 365 Arg Pro Trp Met Pro Gly Thr Pro Arg Arg Leu Pro Arg Leu Pro Gln 370 375 380 Arg Tyr Trp Gln Met Arg Pro Leu Phe Leu Glu Leu Leu Gly Asn His 385 390 395 400 Ala Gln Cys Pro Tyr Gly Val Leu Leu Lys Thr His Cys Pro Leu Arg 405 410 415 Ala Ala Val Thr Pro Ala Ala Gly Val Cys Ala Arg Glu Lys Pro Gln 420 425 430 Gly Ser Val Ala Ala Pro Glu Glu Glu Asp Thr Asp Pro Arg Arg Leu 435 440 445 Val Gln Leu Leu Arg Gln His Ser Ser Pro Trp Gln Val Tyr Gly Phe 450 455 460 Val Arg Ala Cys Leu Arg Arg Leu Val Pro Pro Gly Leu Trp Gly Ser 465 470 475 480 Arg His Asn Glu Arg Arg Phe Leu Arg Asn Thr Lys Lys Phe Ile Ser 485 490 495 Leu Gly Lys His Ala Lys Leu Ser Leu Gln Glu Leu Thr Trp Lys Met 500 505 510 Ser Val Arg Asp Cys Ala Trp Leu Arg Arg Ser Pro Gly Val Gly Cys 515 520 525 Val Pro Ala Ala Glu His Arg Leu Arg Glu Glu Ile Leu Ala Lys Phe 530 535 540 Leu His Trp Leu Met Ser Val Tyr Val Val Glu Leu Leu Arg Ser Phe 545 550 555 560 Phe Tyr Val Thr Glu Thr Thr Phe Gln Lys Asn Arg Leu Phe Phe Tyr 565 570 575 Arg Lys Ser Val Trp Ser Lys Leu Gln Ser Ile Gly Ile Arg Gln His 580 585 590 Leu Lys Arg Val Gln Leu Arg Glu Leu Ser Glu Ala Glu Val Arg Gln 595 600 605 His Arg Glu Ala Arg Pro Ala Leu Leu Thr Ser Arg Leu Arg Phe Ile 610 615 620 Pro Lys Pro Asp Gly Leu Arg Pro Ile Val Asn Met Asp Tyr Val Val 625 630 635 640 Gly Ala Arg Thr Phe Arg Arg Glu Lys Arg Ala Glu Arg Leu Thr Ser 645 650 655 Arg Val Lys Ala Leu Phe Ser Val Leu Asn Tyr Glu Arg Ala Arg Arg 660 665 670 Pro Gly Leu Leu Gly Ala Ser Val Leu Gly Leu Asp Asp Ile His Arg 675 680 685 Ala Trp Arg Thr Phe Val Leu Arg Val Arg Ala Gln Asp Pro Pro Pro 690 695 700 Glu Leu Tyr Phe Val Lys Val Asp Val Thr Gly Ala Tyr Asp Thr Ile 705 710 715 720 Pro Gln Asp Arg Leu Thr Glu Val Ile Ala Ser Ile Ile Lys Pro Gln 725 730 735 Asn Thr Tyr Cys Val Arg Arg Tyr Ala Val Val Gln Lys Ala Ala His 740 745 750 Gly His Val Arg Lys Ala Phe Lys Ser His Val Ser Thr Leu Thr Asp 755 760 765 Leu Gln Pro Tyr Met Arg Gln Phe Val Ala His Leu Gln Glu Thr Ser 770 775 780 Pro Leu Arg Asp Ala Val Val Ile Glu Gln Ser Ser Ser Leu Asn Glu 785 790 795 800 Ala Ser Ser Gly Leu Phe Asp Val Phe Leu Arg Phe Met Cys His His 805 810 815 Ala Val Arg Ile Arg Gly Lys Ser Tyr Val Gln Cys Gln Gly Ile Pro 820 825 830 Gln Gly Ser Ile Leu Ser Thr Leu Leu Cys Ser Leu Cys Tyr Gly Asp 835 840 845 Met Glu Asn Lys Leu Phe Ala Gly Ile Arg Arg Asp Gly Leu Leu Leu 850 855 860 Arg Leu Val Asp Asp Phe Leu Leu Val Thr Pro His Leu Thr His Ala 865 870 875 880 Lys Thr Phe Leu Arg Thr Leu Val Arg Gly Val Pro Glu Tyr Gly Cys 885 890 895 Val Val Asn Leu Arg Lys Thr Val Val Asn Phe Pro Val Glu Asp Glu 900 905 910 Ala Leu Gly Gly Thr Ala Phe Val Gln Met Pro Ala His Gly Leu Phe 915 920 925 Pro Trp Cys Gly Leu Leu Leu Asp Thr Arg Thr Leu Glu Val Gln Ser 930 935 940 Asp Tyr Ser Ser Tyr Ala Arg Thr Ser Ile Arg Ala Ser Leu Thr Phe 945 950 955 960 Asn Arg Gly Phe Lys Ala Gly Arg Asn Met Arg Arg Lys Leu Phe Gly 965 970 975 Val Leu Arg Leu Lys Cys His Ser Leu Phe Leu Asp Leu Gln Val Asn 980 985 990 Ser Leu Gln Thr Val Cys Thr Asn Ile Tyr Lys Ile Leu Leu Leu Gln 995 1000 1005 Ala Tyr Arg Phe His Ala Cys Val Leu Gln Leu Pro Phe His Gln Gln 1010 1015 1020 Val Trp Lys Asn Pro Thr Phe Phe Leu Arg Val Ile Ser Asp Thr Ala 1025 1030 1035 1040 Ser Leu Cys Tyr Ser Ile Leu Lys Ala Lys Asn Ala Gly Met Ser Leu 1045 1050 1055 Gly Ala Lys Gly Ala Ala Gly Pro Leu Pro Ser Glu Ala Val Gln Trp 1060 1065 1070 Leu Cys His Gln Ala Phe Leu Leu Lys Leu Thr Arg His Arg Val Thr 1075 1080 1085 Tyr Val Pro Leu Leu Gly Ser Leu Arg Thr Ala Gln Thr Gln Leu Ser 1090 1095 1100 Arg Lys Leu Pro Gly Thr Thr Leu Thr Ala Leu Glu Ala Ala Ala Asn 1105 1110 1115 1120 Pro Ala Leu Pro Ser Asp Phe Lys Thr Ile Leu Asp 1125 1130 <210> 163 <211> 16 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 163 Glu Ala Arg Pro Ala Leu Leu Thr Ser Arg Leu Arg Phe Ile Pro Lys 1 5 10 15

Claims (10)

  1. 서열번호 48 내지 53, 서열번호 55 내지 62, 서열번호 64 내지 70, 서열번호 72 내지 82, 서열번호 84 내지 87, 서열번호 89 내지 94, 서열번호 96, 서열번호 99 내지 104, 서열번호 106 내지 109, 서열번호 111, 서열번호 112, 서열번호 114, 서열번호 115, 서열번호 117 내지 122, 서열번호 124 내지 144, 서열번호 146, 서열번호 148, 서열번호 149, 서열번호 151, 서열번호 153 내지 161로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나의 아미노산 서열로 구성되는 펩티드를 포함하는 항염증 조성물.
  2. 제1항에 있어서, 상기 조성물은 염증성 질환의 치료 또는 예방용인 항염증 조성물.
  3. 제1항에 있어서, 상기 조성물은 피부 염증의 개선 또는 예방용 화장료 조성물인 항염증 조성물.
  4. 제1항에 있어서, 상기 조성물은 염증성 질환의 치료 또는 예방을 위한 약학조성물인 항염증 조성물.
  5. 제1항에 있어서, 상기 조성물은 염증의 개선 또는 예방을 위한 식품조성물인 항염증 조성물.
  6. 제2항 또는 제4항에 있어서, 상기 염증성 질환은 (1) 전신 또는 국소 염증 질환(예를 들어, 알레르기; 면역복합체 질환; 고초열; 과민성 쇼크; 내독소 쇼크; 악액질(cachexia); 이상 고열; 육아종증; 또는 유육종증); (2) 위장관계 질환(예를 들어, 충수염; 위궤양; 십이지장 궤양; 복막염; 췌장염; 궤양성, 급성 또는 허혈성 대장염; 담관염; 담낭염; 지방 변증; 간염; 크론병; 또는 휘플씨병); (3) 피부 관련 질환(예를 들어, 건선; 화상;
    햇볕 화상; 피부염; 담마진성 사마귀 또는 팽진); (4) 심혈관계 질환(예를 들어, 혈관염; 맥관염; 심내막염; 동맥염; 죽상 동맥경화증; 혈전 정맥염; 심막염; 울혈성 심부전; 심근염; 심근 허혈증; 결절성 동맥 주위염; 재발성 협착증; 버거씨병; 또는 류머티즘열); (5) 호흡기계 질환(예를 들어, 천식; 후두개염; 기관지염; 폐기종(emphysema); 비염; 낭포성 섬유증; 간질성 폐렴; 만성폐쇄성 질환(COPD); 성인 호흡 장애 증후군; 진폐증; 폐포염; 세기관지염; 인두염; 늑막염; 또는 부비강염); (6) 뼈, 관절, 근육 및 결합 조직 관련 질환(예를 들어, 호산성 육아종; 관절염; 관절통; 골수염; 피부근염; 근막염; 패젯병; 통풍; 치주 질환; 류머티즘성 관절염; 중증 근무력증; 강직성 척추염; 또는 윤활막염); (7) 비뇨생식계 질환(예를 들어, 부고환염; 질염; 전립선염; 또는 요도염); (8) 중추 또는 말초 신경계 관련 질환(예를 들어, 알츠하이머병; 수막염; 뇌염; 다발성 경화증; 뇌경색; 뇌색전증; 길레인-바르 증후군(Guillain-Barre syndrome); 신경염; 신경통; 척수 외상; 마비; 또는 포도막염); (9) 바이러스(예를 들어, 인플루엔자; 호흡기 세포 융합 바이러스; HIV; B형 간염 바이러스; C형 간염 바이러스 또는 헤르페스 바이러스) 감염 질환(예를 들어, 뎅기열; 또는 패혈증(septicemia)), 진균 감염 질환(예를 들어, 칸디다증), 또는 박테리아, 기생충과 같은 기타 미생물 감염 질환(예를 들어, 산재성 균혈증; 말라리아; 사상충증; 또는 아메바증); (10) 기타 자가 면역성 질환(예를 들어, 갑상선염; 루푸스; 구드패스츄어 증후군; 동종 이식 거부 반응; 이식편 대 숙주병; 또는 당뇨병); 및 (11) 암 또는 종양성 질환(예를 들어, 호지킨병)로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 약학 조성물.
  7. 제1항에 있어서, 상기 펩티드는 TNF-α를 저해하거나, 세포핵 내 HMGB1 단백질을 증가시키는 것인 조성물.
  8. 제2항 또는 제4항에 있어서, 상기 염증성 질환은 처그-스트라우스 증후군, 류머티스 관절염 및 쇼그렌 증후군으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 약학 조성물.
  9. 삭제
  10. 제1항에 따른 조성물; 및 상기 조성물의 투여량, 투여 경로, 투여 횟수 및 적응증 중 하나 이상을 개시한 지시서를 포함하는 염증성 질환 예방 또는 치료용 키트.
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