KR102274658B1 - 염증성 피부질환 치료용 펩타이드 및 이의 용도 - Google Patents

Abstract

본 발명은 염증성 피부질환 치료용 펩타이드 및 이의 용도에 관한 것이다. 본 발명에 따른 신규 합성 펩타이드는 우수한 염증성 피부질환 치료 효과뿐만 아니라, 9개의 아미노산으로 구성된 매우 작은 규모의 펩타이드로 저분자이며 생분해성이기 때문에 과민반응 유발 가능성이 적어 외부 물질의 투여에 따른 부작용을 최소화시킬 수 있는바, 기존의 염증성 피부질환 치료용 제제를 대체할 수 있는 유효 물질로 활용될 수 있을 것으로 기대된다.

Description

염증성 피부질환 치료용 펩타이드 및 이의 용도{Peptide for treating inflammatory skin diseases and use thereof}

본 발명은 염증성 피부질환 치료용 펩타이드 및 이의 용도에 관한 것이다.

건선(psoriasis)은 피부에서 염증성 세포 침윤의 만성적 활성화와 표피 각질세포의 조절 장애에 의해 유도된 면역-매개 자가면역 피부질환이다.

현재까지 건선의 발명 메커니즘이 완전히 규명되지는 않았으나, 염증 유발 사이토카인이나 T 세포와 같은 면역 세포 침윤 간의 상호작용을 포함하는 복잡한 메커니즘과 관련되어 있는 것으로 보고되고 있으며, 특히, Th17 cells과 Th17 cells에서 분비되고 IL-23에 의해 분비가 촉진되는 IL-17은 건선을 유발시키는데 중요하게 관여하는 것으로 알려져있다.

이러한 건선의 일반적인 치료로는 국소 투약, 광선 요법 및 내복 투약법 등이 있다. 국소 투약은 스테로이드, 콜타르, 안트랄린, 비타민 D3 및 그의 유사체, 레티노이드 및 햇볕 등을 포함하는 치료이며, 이러한 국소 투약은 피부 얇아짐, 튼살, 화상, 자극 및 광과민증의 부작용이 있다. 또한, 스테로이드는 내성을 유도할 수 있어 이후의 치료에 영향을 미칠 수 있다는 문제가 있다. 광선 요법은 자외선 B 또는 자외선 A와 함께 소랄렌의 투여를 포함하는 것으로, 피부 노화를 촉진하고 피부암 발병률을 증가시키는 단점이 있다. 또한, 증상이 심각한 건선에 적용하는 내복 투여는 사이클로스포린과 같은 면역조절제를 투여하는 것으로 현재 널리 사용되고 있으나, 장시간 사용에 따른 신장독성(nephrotoxicity)이나 고혈압 발생의 위험성이 존재한다.

따라서, 상기와 같은 부작용을 최소화하면서도 향상된 치료 효능을 보이는 새로운 치료제의 개발이 요구되고 있다.

본 발명은 상기와 같은 문제점을 해결하기 위해 안출된 것으로서, 본 발명자들은 건선을 비롯한 염증성 피부질환 치료용 제제에 대해서 예의 연구한 결과, 9개의 아미노산으로 이루어진 작은 사이즈의 펩타이드를 제조하였으며, 상기 펩타이드가 염증성 피부질환 치료에 우수한 효과가 있음을 확인하고, 이에 기초하여 본 발명을 완성하였다.

이에, 본 발명의 목적은, 서열번호 1로 표시되는 아미노산으로 이루어진, 염증성 피부질환 치료용 펩타이드를 제공하는 것이다.

또한, 본 발명의 다른 목적은, 상기 펩타이드 또는 이를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 유효성분으로 포함하는, 염증성 피부질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.

또한, 본 발명의 또 다른 목적은, 상기 펩타이드를 유효성분으로 포함하는, 염증성 피부질환 예방 또는 개선용 건강기능식품/화장품 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명은 상기 과제를 해결하기 위하여, 서열번호 1로 표시되는 아미노산으로 이루어진, 펩타이드를 제공한다.

또한, 본 발명은 서열번호 1로 표시되는 아미노산으로 이루어진, 펩타이드 또는 이를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 유효성분으로 포함하는, 염증성 피부질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.

이때, 상기 염증성 피부질환은 건선(psoriasis), 과각화증(hyperkeratosis), 어린선(ichthyosis), 아토피 피부염(atopic dermatitis), 모공성각화증(keratosis pilaris), 광선각화증(actinic keratoses), 지루각화증(seborrheic keratoses), 천포창(pemphigus), 티눈(corns), 사마귀(warts), 및 편평태선(lichen planus)으로 이루어진 군에서 선택될 수 있다.

또한, 본 발명은 서열번호 1로 표시되는 아미노산으로 이루어진, 펩타이드를 유효성분으로 포함하는, 염증성 피부질환 예방 또는 개선용 화장품 조성물을 제공한다.

이때, 상기 조성물은 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 왁스 또는 스프레이 형태일 수 있다.

또한, 본 발명은 상기 펩타이드를 개체에 투여하는 단계를 포함하는, 염증성 피부질환 치료방법을 제공한다.

또한, 본 발명은 상기 펩타이드의 염증성 피부질환 치료 용도를 제공한다.

본 발명에 따른 신규 합성 펩타이드는 우수한 염증성 피부질환 치료 효과뿐만 아니라, 9개의 아미노산으로 구성된 매우 작은 규모의 펩타이드로 저분자이며 생분해성이기 때문에 과민반응 유발 가능성이 적어 외부 물질의 투여에 따른 부작용을 최소화시킬 수 있는바, 기존의 염증성 피부질환 치료용 제제를 대체할 수 있는 유효 물질로 활용될 수 있을 것으로 기대된다.

도 1은 본 발명의 펩타이드 처리에 따른 건선 치료 정도를 조직학적 염색을 통해 비교한 결과를 나타낸 것이다.
도 2는 본 발명의 펩타이드 처리에 따른 홍반(Erythema)의 감소 정도를 스코어링한 결과를 나타낸 것이다.
도 3은 본 발명의 펩타이드 처리에 따른 표피의 두께를 측정한 결과를 나타낸 것이다.
도 4는 본 발명의 펩타이드 처리에 따라 감소하는 Th17 cells population을 측정한 결과를 나타낸 것이다.

이하, 본 발명을 더욱 구체적으로 설명하기로 한다.

본 발명은 서열번호 1로 표시되는 아미노산으로 이루어진, 펩타이드를 제공한다.

본 발명에서, "펩타이드 (peptide)"는 아마이드 결합 (또는 펩타이드 결합)으로 연결된 2개 이상의 아미노산으로 이루어진 폴리머를 의미하며, 본 발명의 목적상, 건선을 비롯한 건조성 피부질환의 발생억제, 개선 및 치유 활성을 가지는 펩타이드를 의미한다. 펩타이드 치료제에 대한 다양한 연구에도 불구하고, 펩타이드 자체 크기가 너무 커서 표적 조직 또는 세포에 효과적으로 유입되지 못하거나 반감기가 짧아 단기간에 체내에서 소멸되는 단점을 드러내었는바, 본 발명은 유효한 치료 효과를 가짐과 동시에 9개의 아미노산으로 이루어진 펩타이드를 개발하였다는 점에 기술적 의의가 있다.

본 발명의 펩타이드는 서열번호 1로 표시되는 아미노산으로 이루어질 수 있고, 상기 서열번호 1로 표시되는 아미노산 서열과 각각 75% 이상, 바람직하게는 80% 이상, 더욱 바람직하게는 90% 이상, 가장 바람직하게는 95% 이상의 서열 상동성을 가지는 아미노산 서열을 포함할 수 있으며, 표적화 서열, 태그 (tag), 표지된 잔기, 반감기 또는 펩타이드 안정성을 증가시키기 위한 특정 목적으로 제조된 아미노산 서열도 추가적으로 포함할 수 있다.

또한, 본 발명의 펩타이드에 대한 기능성 변이체도 포함할 수 있다. 상기 기능성 변이체는 본 명세서에 기재된 펩타이드 서열 (서열번호 1)의 생물학적 균등물들을 포함한다. 예를 들면, 펩타이드의 결합 친화도 및/또는 기타 생물학적 특성을 보다 개선시키기 위하여 펩타이드의 아미노산 또는 폴리뉴클레오티드 서열에 추가적인 변화를 줄 수 있다. 이러한 변형은 펩타이드의 아미노산 서열 잔기의 결실. 삽입, 및/또는 치환을 포함하며, 아미노산 곁사슬 치환체의 상대적인 유사성, 예컨대, 소수성, 친수성, 전하 크기 등에 기초하여 이루어질 수 있다.

또한, 본 발명의 펩타이드는 당해 분야에서 널리 공지된 다양한 방법으로 획득할 수 있다. 일례로서, 폴리뉴클레오타이드 재조합과 단백질 발현 시스템을 이용하여 제조하거나 펩타이드 합성과 같은 화학적 합성을 통하여 시험관 내에서 합성하는 방법, 및 무세포 단백질 합성법 등으로 제조될 수 있다.

또한, 보다 나은 화학적 안정성, 강화된 약리 특성 (반감기, 흡수성, 역가, 효능 등), 변경된 특이성 (예를 들어, 광범위한 생물학적 활성 스펙트럼), 감소된 항원성을 획득하기 위하여, 펩타이드의 N- 또는 C-말단에 보호기가 결합되어 있을 수 있다. 바람직하게, 상기 보호기는 아세틸기, 플루오레닐 메톡시 카르보닐기, 포르밀기, 팔미토일기, 미리스틸기, 스테아릴기 또는 폴리에틸렌글리콜(PEG)일 수 있으나, 펩타이드의 개질, 특히 펩타이드의 안정성 증진시킬 수 있는 성분이라면, 제한없이 포함할 수 있다. 본 발명에서 사용되는 용어, "안정성"은 생체 내 단백질 절단효소의 공격으로부터 본 발명의 펩타이드를 보호하는 인 비보 안정성 뿐만 아니라, 저장 안정성 (예컨대, 상온 저장 안정성)도 의미한다. 본 발명에서, "폴리뉴클레오타이드 (polynucleotide)"는 뉴클레오티드가 결합된 중합체로서, 유전 정보를 전달하는 역할을 한다. 본 발명의 목적상, 서열번호 1의 펩타이드를 코딩하며, 상기 펩타이드를 코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열과 각각 75% 이상, 바람직하게는 85% 이상, 더욱 바람직하게는 90% 이상, 가장 바람직하게는 95% 이상 서열 상동성을 가지는 서열을 포함할 수 있다. 상기 "상동성"은 야생형 아미노산 서열 또는 폴리뉴클레오타이드 서열과의 유사한 정도를 나타내기 위한 것으로서, 이러한 상동성의 비교는 당업계에서 널리 알려진 비교 프로그램을 이용하여 수행할 수 있으며, 2개 이상의 서열간 상동성을 백분율 (%)로 계산할 수 있다.

본 발명의 다른 양태로서, 본 발명은 서열번호 1로 표시되는 아미노산으로 이루어진, 펩타이드 또는 이를 코딩하는 폴리뉴클레오타이드를 유효성분으로 포함하는, 염증성 피부질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물; 염증성 피부질환 예방 또는 치료를 위한 상기 펩타이드의 용도; 및 치료상 유효량의 상기 펩타이드를 개체에게 투여하는 단계를 포함하는, 염증성 피부질환 치료방법을 제공한다.

본 발명에서 사용되는 용어, "치료"는 본 발명에 따른 약학적 조성물의 투여에 의해 상처에 대한 증세가 호전되거나 이롭게 변경되는 모든 행위를 의미한다.

본 발명에서, "개체"는 상처의 치료를 필요로 하는 대상을 의미하며, 보다 구체적으로 인간 또는 비-인간인 영장류, 생쥐(mouse), 개, 고양이, 말 및 소 등의 포유류를 의미한다.

본 발명에서, 상기 염증성 피부질환은 건선(psoriasis), 과각화증(hyperkeratosis), 어린선(ichthyosis), 아토피 피부염(atopic dermatitis), 모공성각화증(keratosis pilaris), 광선각화증(actinic keratoses), 지루각화증(seborrheic keratoses), 천포창(pemphigus), 티눈(corns), 사마귀(warts), 및 편평태선(lichen planus)으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상일 수 있고, 바람직하게는 건선일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.

한편, 본 발명의 펩타이드 또는 이를 코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 콜로이드 현탁액, 분말, 식염수, 지질, 리포좀, 미소구체 microspheres), 또는 나노 구형입자와 같은 약학적으로 허용될 수 있는 담체에 운반될 수 있다. 이들은 운반 수단과 복합체를 형성하거나 관련될 수 있고, 지질, 리포좀, 미세입자, 금, 나노입자, 폴리머, 축합 반응제, 다당류, 폴리아미노산, 덴드리머, 사포닌, 흡착 증진 물질 또는 지방산과 같은 당업계에 공지된 운반 시스템을 사용하여 생체 내 운반될 수 있다.

이 외에도, 약학적으로 허용되는 담체는 제제시 통상적으로 이용되는 락토스, 덱스트로스, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 전분, 아카시아, 고무, 인산칼슘, 알기네이트, 젤라틴, 규산 칼슘, 미세 결정성 셀룰로스, 폴리비닐 피로리돈, 셀룰로스, 물, 시럽, 메틸 셀룰로스, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필 히드록시벤조에이트, 활석, 스테아르산 마그네슘 및 미네랄 오일 등을 포함할 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 또한, 상기 성분들 이외에 윤활제, 습윤제, 감미제, 향미제, 유화제, 현탁제, 보존제 등을 추가로 포함할 수 있다.

본 발명의 약학적 조성물은 목적하는 방법에 따라 경구 투여하거나 비경구투여 (예를 들어, 근육 내, 정맥 내, 복강 내, 피하, 피내, 또는 국소에 적용)할 수 있으며, 투여량은 환자의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물형태, 투여경로 및 시간에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다.

특히, 본 발명의 약학적 조성물을 피부 외용제로 사용하는 경우, 추가로 지방 물질, 유기 용매, 용해제, 농축제 및 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제(foaming agent), 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 유화제, 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온 봉쇄제, 킬레이트화제, 보존제, 비타민, 차단제, 습윤화제, 필수 오일, 염료, 안료, 친수성 활성제, 친유성 활성제 또는 지질 소낭 등 피부 외용제에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 피부 과학 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제를 함유할 수 있다. 또한 상기 성분들은 피부 과학 분야에서 일반적으로 사용되는 양으로 도입될 수 있다. 또한, 상기 약학적 조성물이 피부 외용제로 제공될 경우, 이에 제한되는 것은 아니나, 연고, 패취, 겔, 크림 또는 분무제 등의 제형일 수 있다.

본 발명의 약학적 조성물은 약학적으로 유효한 양으로 투여한다. 본 발명에 있어서 "약학적으로 유효한 양"은 의학적 치료에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 치료하기에 충분한 양을 의미하며, 유효 용량 수준은 환자의 질환의 종류, 중증도, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 시간, 투여 경로 및 배출 비율, 치료기간, 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다. 본 발명에 다른 약학적 조성물은 개별 치료제로 투여하거나 다른 치료제와 병용하여 투여될 수 있고 종래의 치료제와는 동시에, 별도로, 또는 순차적으로 투여될 수 있으며, 단일 또는 다중 투여될 수 있다. 상기 요소들을 모두 고려하여 부작용 없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여하는 것이 중요하며, 이는 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다.

구체적으로 본 발명의 약학적 조성물의 유효량은 환자의 연령, 성별, 상태, 체중, 체내에 활성 성분의 흡수도, 불활성율, 배설 속도, 질병 종류, 병용되는 약물에 따라 달라질 수 있으며, 투여 경로, 비만의 중증도, 성별, 체중, 연령 등에 따라 증감될 수 있다.

또한, 본 발명의 다른 양태로서, 본 발명은 서열번호 1로 표시되는 아미노산으로 이루어진, 펩타이드 또는 이를 코딩하는 폴리뉴클레오타이드를 유효성분으로 포함하는, 염증성 피부질환 예방 또는 개선용 건강기능식품/화장품 조성물을 제공한다.

본 발명에서 사용되는 용어, "개선"이란 치료되는 상태와 관련된 파라미터, 예를 들면, 증상의 정도를 적어도 감소시키는 모든 행위를 의미한다. 이때, 상기 건강기능식품/화장품 조성물은 염증성 피부질환 예방 또는 개선을 위하여, 관련 질환의 발병 단계 이전 또는 발병 후, 치료를 위한 약제와 동시에 또는 별개로서 사용될 수 있다.

본 발명의 건강기능식품 조성물에서, 유효성분을 식품에 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 유효 성분의 혼합량은 그의 사용 목적 (예방 또는 개선용)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 일반적으로, 식품 또는 음료의 제조시에 본 발명의 조성물은 원료에 대하여 바람직하게 15 중량% 이하, 바람직하게는 10 중량% 이하의 양으로 첨가될 수 있다. 그러나 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간 섭취의 경우에는 상기 양은 상기 범위 이하일 수 있다.

본 발명의 건강기능식품 조성물은 상기 유효성분을 함유하는 것 외에 특별한 제한없이 다른 성분들을 필수 성분으로서 함유할 수 있다. 예를 들면, 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물의 예는 모노사카라이드, 예를 들어, 포도당, 과당 등; 디사카라이드, 예를 들어 말토스, 슈크로스 등; 및 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 시클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당, 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당 알코올일 수 있다. 상술한 것 이외의 향미제로서 천연 향미제 (타우마틴, 스테비아 추출물 (예를 들어, 레바우디오시드 A, 글리시르히진등)) 및 합성 향미제 (사카린, 아스파르탐 등)를 유리하게 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 당업자의 선택에 의해 적절하게 결정될 수 있다.

상기 외에 본 발명의 건강기능식품 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물 (전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 중진제 (치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있으며, 이러한 첨가제의 비율 또한 당업자에 의해 적절히 선택될 수 있다.

본 발명의 화장품 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어, 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클린싱, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이 등으로 제형화될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 보다 상세하게는, 유연 화장수, 영양 화장수, 영양 크림, 마사지 크림, 에센스, 아이 크림, 클렌징 크림, 클렌징폼, 클렌징 워터, 팩, 스프레이 또는 파우더의 제형으로 제조될 수 있다.

본 발명의 화장품 조성물에 함유된 유효한 담체는 제형에 따라, 당업계에서 통상적으로 이용되는 담체가 이용될 수 있다. 본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.

본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.

본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 계면-활성제 함유 클린징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 라놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 화장품 조성물에 포함되는 성분은 유효 성분과 담체 성분 이외에, 화장품 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함하며, 예컨대 항산화제, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제를 포함할 수 있다.

[실시예]

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 예시하기 위한 것으로, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것으로 해석되지 않는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다. 따라서 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항들과 그것들의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.

펩타이드의 제조

먼저, 서열번호 1로 표시되는 아미노산 서열(RDGRDGPSP)로 이루어진 펩타이드를 제조하였다. 이후, 고성능액체크로마토그래피 (SHIMADZU Prominence HPLC)를 이용하여 합성된 펩타이드를 순수 분리하였으며, 컬럼은 Shiseido capcell pak C18 Column (4.6 x 50mm)을 이용하였다. 또한, 질량분석기 (HP 1100 series LC/MSD)를 이용하여, 합성된 펩타이드의 질량을 확인하였다.

마우스 동물모델의 확립 및 펩타이드 처리

건선 마우스 동물 모델을 확립하기 위하여, Imiquimod (IMQ)를 이용하여 건선과 유사한 피부 염증반응을 유도했다(Journal of Investigative Dermatology 2015;135:2764-2774.). 먼저, 6주령 female 마우스 (C57BL/6)의 등을 IMQ 도포하기 하루 전(Day 0)에 쉐이빙한 후, 다음날(Day 1)부터 5% IMQ (3M, aldara cream) 62.5 mg씩 매일 4일 동안 도포하여 건선을 유발시켰다. 본 발명에 따른 펩타이드를 IMQ 도포한 다음날(Day 2)부터 각각 0.1, 10 ug/kg씩 매일 3일 동안 SC injection하여 처리하였다. Control 마우스는 IMQ 대신 vehicle control 크림으로 바세린 (Vaselin Lanette cream; Fagron)을 도포하고, 상기 펩타이드 대신 PBS를 주입하였다. 양성 대조군(Positive control) 마우스는 상기 펩타이드 대신 methotrexate (MTX)를 2 mg/kg SC injection 하였다.

조직 분석

Day 5일째 마우스를 희생시켜 lesional skin tissue를 확보하고, paraformaldehyde로 고정하여 paraffin section을 만들고, hematoxylin & eosin (H&E) staining 결과를 분석하였다.

Erythema scoring

Clinical 변화를 수치화하는 Psoriasis area and severity index (PASI) 측정방법 중 하나인 redness를 관찰하여 Erythema score로 나타내었다. Day 5일째 마우스의 사진을 찍고 육안 관찰을 통하여 redness를 scoring 하였다. 점수는 다음과 같이 0점부터 4점까지 나타내었다(0점, no symptoms: 1점, mild: 2점, moderate: 3점, severe: 4점, very severe)

표피 두께 측정

H&E 조직을 Image scope 프로그램으로 epidermis 두께를 측정하였다. 각 조직별로 random 부위 5곳을 측정한 결과를 mean값으로 그래프를 그리고 standard deviation을 표시하였다.

Th17 cells 염색

Day 5일째 마우스로부터 lymph node를 제거하여 Th17 cells을 염색하여 비교하였다. 제거한 lymph node 조직을 가볍게 갈아서 세포를 수확한 후 counting 하였다. 1x10⁶/mL의 농도로 well당 2x10⁶/2 mL의 number로 24-well plate에 깔아주었다. 이때 T 세포의 활성화를 유도하기 위하여 PMA 25 ng/mL과 Ionomycin 1 ug/mL을 함께 처리하여 2시간 동안 37℃, CO₂의 조건하에서 인큐베이션 시켰다. PMA와 Ionomycin에 의해 세포 밖으로 분비되는 IL-17을 세포 내에 가두기 위해 Monensin을 5 ug/mL로 처리하고 2시간 더 인큐베이션 시켰다. 이후, PBS로 세포를 워싱하여 남아있는 PMA, Ionomycin, Monensin을 제거한 후, CD4-Alexa 488항체를 넣고 10분 동안 상온에서 표면 염색(surface staining)을 하였다. 세포를 워싱하여 남아있는 항체를 제거한 뒤, 4℃에서 30분 동안 Fixation buffer (BD bioscience)로 세포를 고정하였다. 세포를 워싱하여 남아 있는 fixation buffer를 제거한 뒤, perm/wash buffer (BD bioscience)로 permeabilization 시켜 intracellular staining 준비를 하였다. IL-17-APC 항체를 넣고 4℃에서 1시간 동안 intracellular IL-17을 염색하였다. 염색이 모두 끝난 세포를 워싱하여 남아 있는 항체를 모두 제거하고 유세포 분석기 (BD, FACS Calibur)를 이용하여 CD4+/IL-17+ Th17 세포를 분석하였다.

실시예 1. 건선 마우스 모델의 조직학적 분석

도 1은 본 발명의 펩타이드 처리에 따른 건선 치료 정도를 조직학적 염색을 통해 비교한 결과를 나타낸 것이다. 도 1에 나타난 바와 같이, 정상 마우스와 비교하여 PBS를 처리한 건선을 유발한 마우스에서는 표피층의 두께가 두꺼워지고, scaling이 많이 생성되었는바, IMQ에 의해 건선이 잘 유발되었음을 알 수 있다. 다음으로, 양성 대조군인 MTX를 처리한 마우스에서는 PBS에 비해 표피층이 다시 얇아지고 scaling도 정상 수준으로 떨어지는 것으로 확인되었다. 마찬가지로, 본 발명에 따른 펩타이드를 처리한 마우스에서도 MTX와 비슷한 수준으로 표피층의 두께가 얇아지고 scaling이 적어지는 것을 확인하였다. 이러한 결과를 통해 본 발명에 따른 펩타이드를 처리할 경우, 건선의 병변이 현저하게 줄어들어 건선의 치료 효과가 우수함을 확인하였다.

실시예 2. 건선 마우스의 Erythema scoring 결과

도 2는 본 발명의 펩타이드 처리에 따른 홍반(Erythema)의 감소 정도를 스코어링한 결과를 나타낸 것이다. 도 2에 나타난 바와 같이, 건선이 유발될수록 Erythema score가 높아지는 PBS 처리군(대조군)과 비교하여 본 발명에 따른 펩타이드를 처리한 마우스의 스코어가 MTX 처리군(양성 대조군)의 수준으로 떨어지는 것을 확인하였다. 특히, 본 발명에 따른 펩타이드를 10 ug/kg으로 처리한 그룹의 Erythema score는 실험 초반(Day 1과 Day 2)에는 MTX 보다 훨씬 낮은 수치를 기록했으나, 실험 후반(Day 3과 Day4)에는 MTX 혹은 펩타이드 0.1 ug/kg을 처리한 그룹과 비슷한 수준의 Erythema를 보이는 것으로 확인되었다. 즉, 본 발명에 따른 펩타이드 처리에 의해, PASI score중 하나의 척도인 Erythema 정도가 양성 대조군인 MTX 처리군과 비슷하거나 더 낮은 수준으로 떨어지는 바, 건선의 치료 효과가 매우 우수함을 확인하였다.

실시예 3. 건선 마우스 표피 두께 측정 결과

도 3은 본 발명의 펩타이드 처리에 따른 표피의 두께를 측정한 결과를 나타낸 것이다. 도 3에 나타난 바와 같이, 실제 조직에서 건선 마우스의 표피 두께를 측정한 결과, 본 발명에 따른 펩타이드를 처리할 경우, 양성 대조군인 MTX 처리군과 비슷하거나 정상 수준까지 두께가 줄어드는 것으로 확인되었다. 즉, 본 발명에 따른 펩타이드 처리에 의해 건선에 의해 증가한 표피층의 두께가 현저하게 줄어드는바, 건선의 치료 효과가 우수함을 확인하였다.

실시예 4. 건선 마우스의 Th17 cells population 변화

건선이 유발되면 Th17 cells의 활성화에 의해 IL-17 분비가 증가하고, 약물 처리에 의해 건선 증상이 완화될수록 IL-17도 함께 감소하는 것은 잘 알려져 있다. 따라서, 본 발명에서는 펩타이드 처리에 의한 Th17 cells 변화를 알아보고자, lymph node내 CD4+/IL-17+ cells을 염색하여 비교하였다.

도 4는 본 발명의 펩타이드 처리에 따라 감소하는 Th17 cells population을 측정한 결과를 나타낸 것이다. 도 4에 나타난 바와 같이, PBS 처리에 의해 증가한 Th17 cells population이 본 발명에 따른 펩타이드 처리에 의해 양성 대조군인 MTX 처리군과 유사한 수준으로 감소하는 것으로 확인되었다. 이러한 결과를 통해 본 발명에 따른 펩타이드를 처리할 경우, Th17 cells population이 현저하게 감소하여 건선의 치료 효과가 우수함을 확인하였다.

이상으로 본 발명 내용의 특정한 부분을 상세히 기술하였는 바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 이러한 구체적 기술은 단지 바람직한 실시태양일 뿐이며, 이에 의해 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백할 것이다. 따라서, 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항들과 그것들의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.

<110> Korea University Research and Business Foundation <120> Peptide for treating inflammatory skin diseases and use thereof <130> JKP-1164R1 <150> KR 10-2018-0141725 <151> 2018-11-16 <160> 1 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Peptide sequence for peptide1 <400> 1 Arg Asp Gly Arg Asp Gly Pro Ser Pro 1 5

Claims (5)

1. 서열번호 1로 표시되는 아미노산으로 이루어진, 펩타이드.
2. 서열번호 1로 표시되는 아미노산으로 이루어진, 펩타이드 또는 이를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 유효성분으로 포함하는, 건선(psoriasis) 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
   
3. 삭제
4. 서열번호 1로 표시되는 아미노산으로 이루어진, 펩타이드를 유효성분으로 포함하는, 건선(psoriasis) 예방 또는 개선용 화장품 조성물.
5. 제4항에 있어서,
   상기 조성물은 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 왁스 또는 스프레이 형태임을 특징으로 하는, 화장품 조성물.

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