KR102243413B1 - 비배당체 함량이 증가된 감국 효소처리 추출물의 제조방법 및 이로 제조된 비만 예방 또는 치료용 조성물 - Google Patents

비배당체 함량이 증가된 감국 효소처리 추출물의 제조방법 및 이로 제조된 비만 예방 또는 치료용 조성물 Download PDF

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Abstract

본 발명은 비배당체 함량이 증가된 감국 효소처리 추출물의 제조방법 및 이로 제조된 비만 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것으로, 본 발명에 따르면, 복합 효소처리로 제조된 감국 효소처리 추출물은 추출 수율 및 비배당체 함량이 극대화 되며, 상기 추출물은 지방세포의 분화 및 중성지방의 생성을 억제하고, 비만과 관련된 발현인자를 억제하는 AMPK를 활성화시켜 항비만 효과를 나타내는 바, 비만의 예방 또는 치료용 약학 조성물, 또는 비만의 예방 또는 개선용 건강식품 조성물 등으로 유용하게 활용될 수 있다.

Description

비배당체 함량이 증가된 감국 효소처리 추출물의 제조방법 및 이로 제조된 비만 예방 또는 치료용 조성물{Method for preparing chrysanthemum indicum extract containing increased content of aglycon by enzymes, and composition for preventing or treating obesity made thereby}
본 발명은 비배당체 함량이 증가된 감국 효소처리 추출물의 제조방법 및 이로 제조된 비만 예방 또는 치료용 조성물, 또는 비만 예방 또는 개선용 건강식품 조성물에 관한 것이다.
비만은 비정상적으로 과다하게 지방이 체내에 축적되어 개인의 건강에 위협을 주는 일종의 질병으로 정의될 수 있다. 비만은 과식, 운동부족이 주된 원인이 되는 단순성 비만과 내분비계 질환이 원인이 되는 증후성 비만으로 구별된다. 단순성 비만의 원인으로는 과식, 폭식, 간식, 야식, 불규칙적인 식사 등 잘못된 식생활 습관과 운동 부족, 약물의 부작용 등이 있다.
경제 성장과 생활 방식의 변화에 따라 식습관에도 최근 많은 변화가 있어 왔다. 특히, 바쁜 현대인들은 패스트푸드 등의 고열량 식이와 적은 운동량으로 인하여 과체중 및 비만이 증가하고 있는 실정이다. 세계보건기구(WHO)에 따르면, 전 세계적으로 10억 명 이상의 성인이 과체중이고, 그 중 적어도 300만 명 이상이 임상적으로 비만이며, 특히, 유럽에서는 매년 25만 명, 전 세계에서 250만 명 이상이 과체중과 관련되어 사망한 것으로 보고된 바 있다.
과체중 및 비만은 혈압과 콜레스테롤 수치를 증가시켜 심장 질환, 당뇨병, 관절염, 지방간, 고지혈증, 암 등 다양한 만성 합병증 질환을 유발시키거나 악화시킬 수 있다. 또한, 과체중 및 비만은 성인뿐만 아니라, 어린이나 청소년에서도 동맥경화, 고혈압, 고지혈증 또는 심장질환 등의 발병률을 증가시키는 주요한 요인으로 알려져 있다. 따라서, 비만을 하나의 질환으로 인식하고 적극적으로 치료하고자 하는 필요성이 증대되고 있다.
현재까지 비만 치료제에 사용되는 물질은 위장에서 지방 흡수를 감소시키거나 식욕을 억제시키는 약제들이다. 그러나, 소장 및 췌장의 리파아제를 억제하여 지방 흡수를 방지하는 작용을 하는 제니칼(Roche) 및 알리(GlaxoSmithKline)는 위장 관련 부작용 및 지용성 비타민 흡수 감소 등의 부작용을 유발하는 것으로 보고된 바 있다. 또한, 식욕 억제를 통하여 비만 억제 효과를 나타내는 로카세린(5-HT2c receptor agonist) 및 큐넥사(Phentermine/Topiramate)는 주의력 결핍이나 기억력 저하 등 부작용을 일으킬 수 있으며, 항우울제나 편두통제와 함께 복용 시, 심장 판막질환 등 심각한 부작용을 유발할 가능성이 있는 것으로 보고된 바 있고, 시부트라민(serotin noradrenalin reuptake inhibitor)은 2010년 심혈관 질환 및 뇌경색 발생 증가로 퇴출된 바 있다. 이렇듯 현재 사용되고 있는 비만 치료제는 상기와 같은 심각한 문제점을 가지고 있어, 부작용이 적고 안전하면서도 항비만 효과가 우수한 새로운 비만 치료제의 개발이 절실한 실정이다.
한편, 감국(Chrysanthemum indicum)은 국화과(Compositae)에 속하는 다년생 초본으로 예로부터 차로 음용해 왔고, 한방에서는 그 꽃을 현기증, 해열, 염증, 고혈압 및 호흡계 질환에 사용해 왔다. 감국은 플라보노이드 화합물, 테르페노이드 화합물 및 페놀성 화합물 등 다양한 성분이 함유되어 있으며, 항균 활성, 항바이러스 활성, 항산화 활성, 면역조절 활성 등의 효과가 있는 것으로 보고된 바 있다. 감국 추출물은 다른 약재들과 쉽게 섞일 수 있는 장점이 있어 약품, 건강식품 및 화장품 원재료로 널리 활용되고 있으며, 복합 효소처리로 제조된 감국 추출물의 항비만 효과는 현재까지 보고된 바 없다.
대한민국 공개특허 제10-2012-0040890호 (2012.04.30 공개)
본 발명의 목적은 비배당체 함량이 증가된 감국 효소처리 추출물의 제조방법을 제공하는 데에 있다.
본 발명의 다른 목적은 상기 감국 효소처리 추출물을 유효성분으로 함유하는 비만 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공하는 데에 있다.
본 발명의 또 다른 목적은 상기 감국 효소처리 추출물을 유효성분으로 함유하는 비만 예방 또는 개선용 건강식품 조성물을 제공하는 데에 있다.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 (1) 감국에 물을 첨가하고 열수 침지하는 단계; (2) 상기 단계 (1)의 열수 침지 후 냉각한 침지물에, 펙티나아제(pectinase), 탄나아제(tannase), 셀룰라아제(cellulase), 베타-글루카나아제(β-glucanase), 헤미셀룰라아제(hemicellulase), 자일라나아제(xylanase), 알파-아밀라아제(α-amylase) 및 베타-글루코시다아제(β-glucosidase)로 이루어진 군에서 선택된 둘 이상의 효소를 처리하여 반응시킨 뒤 여과하여 1차 효소처리 추출물을 획득하는 단계; (3) 상기 단계 (2)에서 여과하고 남은 잔사에 물, C1 내지 C4의 저급 알코올 및 이들의 혼합으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나의 용매를 처리하여 2차 추출물을 획득하는 단계; 및 (4) 상기 단계 (2)의 1차 효소처리 추출물 및 상기 단계 (3)의 2차 추출물을 혼합한 후 농축 또는 건조하는 단계를 포함하는 감국 효소처리 추출물의 제조방법을 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 감국 효소처리 추출물을 유효성분으로 함유하는 비만 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 감국 효소처리 추출물을 유효성분으로 함유하는 비만 예방 또는 개선용 건강식품 조성물을 제공한다.
본 발명에 따르면, 복합 효소처리로 제조된 감국 효소처리 추출물은 추출 수율 및 비배당체 함량이 극대화 되며, 상기 추출물은 지방세포의 분화 및 중성지방의 생성을 억제하고, 비만과 관련된 발현인자를 억제하는 AMPK를 활성화시켜 항비만 효과를 나타내는 바, 비만의 예방 또는 치료용 약학 조성물, 또는 비만의 예방 또는 개선용 건강식품 조성물 등으로 유용하게 활용될 수 있다.
도 1은 본 발명의 효소처리 감국 추출물의 제조방법을 모식적으로 나타낸 공정도이다.
도 2는 고성능 액체 크로마토그래피(HPLC)를 이용하여 효소처리 또는 효소 무처리 감국 추출물의 성분 및 함량을 분석한 결과이다.
도 3은 3T3-L1 지방전구세포를 이용하여 효소처리 또는 효소 무처리 감국 추출물이 세포 생존율에 미치는 영향을 확인한 결과이다.
도 4는 3T3-L1 지방전구세포를 이용하여 효소처리 감국 추출물에 의한 지방 축적율 감소 효과를 확인한 결과이다.
도 5는 3T3-L1 지방전구세포를 이용하여 효소처리 감국 추출물에 의한 지방 축적 감소 효과를 Oil red O 염색으로 확인한 결과이다.
도 6은 3T3-L1 지방전구세포를 이용하여 효소처리 감국 추출물에 의한 AMPK 활성을 확인한 결과이다.
도 7은 동물실험으로 효소처리 감국 추출물에 의한 체중 증가율 억제 효과를 확인한 결과이다.
천연물 유래 추출물 내에 함유되어 있는 배당체를 섭취할 경우, 배당체는 고수용성 화합물이므로 인지질로 구성된 생체 세포막을 투과하기 힘들어 흡수가 되지 않는 문제점이 있다. 한편, 동물은 장내 미생물을 이용하여 고배당체를 저배당체로 전환한 후 흡수하는 것으로 알려져 있다. 그러나 장내 미생물의 구성은 체질, 식습관, 항생물질의 복용 및 스트레스 등의 영향을 받기 쉬워 배당체를 가수분해하는 능력은 개인별로 현격한 차이를 나타낸다. 따라서 배당체 흡수 정도에 차이가 발생하게 되고, 이는 약효에 있어서 개인차를 나타내는 원인으로 지목되고 있다.
열수 추출 또는 에탄올 추출 등의 일반 추출방법을 이용하여 감국 추출물을 제조하는 경우, 상기 감국 추출물의 유효성분들은 당과 결합되어 있는 배당체로 이루어져 있기 때문에 친수성이 높아 장내 세포막의 투과가 힘들고 체내로 흡수되는 비율 또한 낮을 가능성이 크다.
종래 연구에서 비배당체는 배당체에 비해 인체 내 흡수율이 최대 15배 증가되고, 흡수 시간 또한 2배 이상 빨라 생체 이용률이 증가하는 것으로 보고된 바 있다. 이는 배당체를 비배당체 또는 저배당체로 전환하여 섭취하였을 때, 인체 내에서 흡수가 원활하게 이루어져 유효성분들의 효과가 용이하게 나타낼 수 있다는 것을 의미한다.
이에, 비배당체 유효성분의 함량을 증대시키는 방법으로는 일반적으로 산처리 공정, 발효 공정, 효소처리 공정 등이 있다.
산처리 공정은 비교적 간단한 방법이지만 가혹 조건을 이용하므로 천연물 유래 추출물 내에 포함된 성분들까지 영향을 미쳐 비배당체를 생산하기 위한 화학적 안정성을 확보하기 어려운 단점이 있으며, 산처리 후 다시 중화 과정을 거쳐야하므로 이 과정에서 다량의 불순물이 발생할 수 있다.
발효 공정의 경우, 배당체를 비배당체로 분해하는 효소를 분비하는 미생물 균주를 선별하는 것이 어려우며, 선별하더라도 균주를 일정한 상태로 보관하고, 생육조건 등을 일정하게 유지시켜 주어야 하며, 발효 시간이 길다는 단점이 있다. 또한, 미생물은 생육조건에 따라 분비하는 효소의 양이 달라질 수 있으므로 추출물의 유효성분 함량 편차를 조절하기 어려우며, 생물전환을 원하지 않는 성분들까지 변화를 야기할 수 있다는 단점이 있다.
반면, 일반적으로 당과 비배당체가 베타 결합을 하고 있기 때문에 배당체에 효소를 직접 처리하는 효소처리 공정은 배당체를 저배당체 혹은 비배당체로 전환하는 기술로서, 베타-글루코시다아제를 이용하여 당을 분해시키는 해당과정이 대표적이다.
효소는 기본적으로 미생물로부터 얻어지기 때문에 각 효소는 그 미생물이 자란 환경에 따라서 같은 효소임에도 불구하고 기질 특이성이 약간씩 상이할 수 있다. 배당체 분해에 사용되는 베타-글루코시다제 역시 같은 성질을 가지고 있어, 그 미생물이 활동하는 지역의 식물이 생산하는 화합물의 배당체에는 특이적으로 잘 반응하지만 같은 결합구조를 가진 다른 화합물의 배당체에는 충분한 활성을 나타내지 않는 경우가 많다. 본 발명에서도 감국 추출물에 베타-글루코시다제를 처리하였을 때, 비배당체 전환 효율이 매우 미미한 것을 확인할 수 있었다.
그러나, 식물 추출물을 미생물로 발효시키는 경우, 거의 대부분의 배당체는 저배당체 혹은 비배당체로 전환된다. 이는 미생물이 가지고 있는 다양한 효소의 복합체가 기질, 즉 다양한 화합물의 배당체에 작용하여 당을 분해할 것으로 추측할 수 있다.
이에, 본 발명자들은 상기 가설을 수립하여 실제 연구를 거듭한 결과, 감국 추출물 제조 시, 두 가지 이상의 효소를 동시 처리하는 경우, 기질 특이성 없이 배당체가 비배당체로 전환되는 것을 확인하였다. 또한, 식물의 세포벽 성분인 펙틴을 분해하여 추출 수율이 향상되고, 결과적으로 유효성분의 총 수득률이 증가하는 것을 확인하였다. 즉, 본 발명의 발명자들은 복합 효소처리로 제조된 감국 추출물에서 추출 수율 및 비배당체 함량이 극대화 되고, 지방세포 분화 및 중성지방 축적을 억제하며, AMPK를 활성화시켜 항비만 효과를 나타내는 것을 확인하며, 본 발명을 완성하였다. 본 발명에 따른 감국 효소처리 추출물의 제조방법은 도 1에 도시화하여 나타내었다.
이에, 본 발명은 (1) 감국에 물을 첨가하고 열수 침지하는 단계; (2) 상기 단계 (1)의 열수 침지 후 냉각한 침지물에, 펙티나아제(pectinase) [EC 3.2.1.15], 탄나아제(tannase) [EC 3.1.1.20], 셀룰라아제(cellulase) [EC 3.2.1.4], 베타-글루카나아제(β-glucanase) [EC 3.2.1.6], 헤미셀룰라아제(hemicellulase) [EC 232-799-9], 자일라나아제(xylanase) [EC 3.2.1.8], 알파-아밀라아제(α-amylase) [EC 3.2.1.1] 및 베타-글루코시다아제(β-glucosidase) [EC 3.2.1.21]로 이루어진 군에서 선택된 둘 이상의 효소를 처리하여 반응시킨 뒤 여과하여 1차 효소처리 추출물을 획득하는 단계; (3) 상기 단계 (2)에서 여과하고 남은 잔사에 물, C1 내지 C4의 저급 알코올 및 이들의 혼합으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나의 용매를 처리하여 2차 추출물을 획득하는 단계; 및 (4) 상기 단계 (2)의 1차 효소처리 추출물 및 상기 단계 (3)의 2차 추출물을 혼합한 후 농축 또는 건조하는 단계를 포함하는 감국 효소처리 추출물의 제조방법을 제공한다.
상기 단계 (1)의 열수 침지는 감국 1 중량부에 대하여 1 내지 100 중량부의 물을 첨가하고, 70℃ 내지 130℃에서 수행되는 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아님을 명시한다.
상기 단계 (2)에서, 냉각은 20℃ 내지 80℃에서 이루어질 수 있고, 바람직하게는, 20℃ 내지 45℃에서 이루어질 수 있다.
상기 단계 (2)는 침지물 총 100 중량부에 대하여 효소를 각각 0.001 내지 90 중량부로 처리하고, 20℃ 내지 80℃에서 5분 내지 100시간 동안 수행될 수 있고, 바람직하게는, 30℃ 내지 60℃에서 2 내지 10시간 동안 수행될 수 있다. 상기 적정 효소의 반응시간은 효소의 첨가량에 대하여 반비례하므로, 효소의 첨가량이 많을수록 반응시간은 단축될 수 있다.
효소가 상기 중량부 및 반응시간의 범위를 벗어나 너무 적은 양으로 짧은 시간 동안 처리되면, 감국 열수 침지물에 존재하는 비만 억제 활성을 가지는 성분을 전구체로부터 원활하게 분리 및 전환하기 어려우며, 반대로 너무 많은 양으로 오랜 시간 처리되면, 과도한 효소 작용으로 인하여 비만 억제 활성을 가지는 성분의 기능기들이 가수분해되어 항비만 활성이 저하될 수 있고, 상업적으로도 제조공정 비용에 영향을 줄 수 있는 바, 바람직하지 않다.
상기 단계 (2)의 효소는, 펙티나아제(pectinase) [EC 3.2.1.15], 셀룰라아제(cellulase) [EC 3.2.1.4], 베타-글루카나아제(β-glucanase) [EC 3.2.1.6], 헤미셀룰라아제(hemicellulase) [EC 232-799-9], 자일라나아제(xylanase) [EC 3.2.1.8], 알파-아밀라아제(α-amylase) [EC 3.2.1.1] 및 베타-글루코시다아제(β-glucosidase) [EC 3.2.1.21]로 이루어진 군에서 선택되는 1종 이상의 제1효소 및 탄나아제의 제2효소를 처리하는 것이 바람직하며, 상기 제1효소의 상용효소는 1종 이상의 효소를 포함하는 판매 중인 복합효소 등일 수 있다.
본 발명의 일 실시예를 보면, 상기 단계 (2)에서, 특히, 펙티나아제 및 탄나아제 효소를 동시에 처리하는 경우, 추출 수율 및 비배당체 함량이 현저하게 증대되는 것을 확인한 바, 상기 두 효소의 동시 처리가 효소 조합 중 가장 우수한 효과를 나타낼 수 있으므로 바람직하다.
둘 이상의 효소를 순차적으로 처리하는 경우보다 동시에 처리하는 경우, 효소 반응시간이 더 길어져 세포벽 성분인 펙틴 및 셀룰로오스의 구조를 더 많이 분해하는 바, 추출 수율, 유효성분의 함량 및 효능이 더욱 증진된 감국 효소처리 추출물을 제조할 수 있다.
상기 단계 (2)의 효소는 감국에 포함되어 있는 플라보노이드 배당체를 플라보노이드 비배당체로 전환할 수 있다.
상기 단계 (3)은 잔사 1 중량부에 대하여 1 내지 100 중량부의 물 또는 알코올 수용액을 처리하고, 20℃ 내지 100℃에서 10분 내지 120시간 동안 수행될 수 있고, 바람직하게는, 50℃ 내지 100℃에서 2 내지 10시간 동안 수행될 수 있다. 상기 추출 온도가 상기 범위 미만이면 항비만 활성을 나타내는 유효성분들의 추출 수율이 낮아지며, 추출 온도가 상기 범위를 초과하면 유효성분들이 파괴되거나, 항비만 활성에 관여하지 않는 물질이 높은 함량으로 함께 추출되어 효능이 저하된 추출물이 제조될 수 있으므로 바람직하지 않다.
본 발명의 일 실시예를 보면, 상기 알코올 수용액은 5 내지 95%의 에탄올 수용액일 수 있고, 바람직하게는, 30 내지 70%의 에탄올 수용액일 수 있다.
상기 단계 (3)의 추출 전에 초음파 또는 마이크로파를 조사하는 전처리 단계를 더 수행할 수 있으며, 초음파와 마이크로파를 병용하여 조사할 수도 있다. 상기 감국 효소처리 추출물에 초음파 또는/및 마이크로파를 조사하는 경우, 그렇지 않은 경우에 비하여 항비만 효과가 우수한 추출물을 얻을 수 있어 바람직하다.
상기 초음파는 15 내지 25 kHz 및 500 내지 800 와트로 2 내지 30분간 조사될 수 있으며, 상기 마이크로파는 2000 내지 3000 MHz 및 50 내지 400 와트로 5 내지 60초간 조사될 수 있는 바, 초음파 또는 마이크로파의 조사 에너지 및 조사 시간이 상기 범위 미만이면 조사에 의한 효과가 미미하며, 상기 범위를 초과하면 활성에 관여하지 않는 물질의 추출률이 증가하여 바람직하지 않다.
상기 감국 효소처리 추출물은 통상의 여과 방법 또는 장치를 이용하여 불순물을 제거할 수 있으며, 예를 들어 원심분리 방법을 이용하거나 마이크로 필터를 이용하여 여과하여 불순물이 제거된 추출물을 획득할 수 있다.
상기의 감국 효소처리 추출물은 감압 증류, 동결건조 또는 분무건조 등과 같은 추가적인 과정을 거쳐 분말 상태로 제조될 수 있고, 효소 고정화 방식에 의한 연속공정 방식에 의해 제조될 수도 있다. 상기 방법에 의하면, 고형분의 수율이 20 중량% 이상인 감국 효소처리 추출물을 제공할 수 있다.
이렇게 제조된 추출물은 이후 여과하거나 농축 또는 건조과정을 수행하여 용매를 제거할 수 있으며, 여과, 농축 및 건조를 모두 수행할 수 있다. 예컨대, 여과지를 이용하거나 감압여과기를 이용할 수 있으며, 농축은 감압 농축기, 건조는 열풍건조, 분무건조, 저온건조, 동결건조법 등을 수행할 수 있으나, 명시한 방법으로 제한되는 것은 아니다.
상기 제조방법으로 제조된 감국 효소처리 추출물은 루테올린 0.01 내지 5중량%, 에피게닌 0.01 내지 5중량%, 아카세틴 0.01 내지 5중량%, 디오스메틴 0.01 내지 5중량% 및 잔량의 물을 포함할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아님을 명시한다.
루테올린, 에피게닌, 아카세틴, 디오스메틴 배당체 및 유도체의 배당체들은 당의 결합이 모두 R-O-β-D-glucopyranose로 상기 성분 및 유도체의 구조에 포도당이 베타의 결합으로 결합한 배당체들이다. 베타 결합을 한 포도당을 분해하는 가장 대표적인 효소인 베타-글루코시다아제를 이용하여 효소 반응을 진행한 결과, 상기 성분의 증가 효과가 나타나지 않았으며, 상기 결과로부터, 베타-글루코시다아제는 당과 당 사이의 베타 결합을 분해하지만 당과 상기 성분이 결합되어 있는 배당체에는 기질 특이성으로 인해 반응이 일어나지 않는 것을 확인할 수 있었다.
그러나, 본 발명의 일 실시예를 보면, 복합 효소를 처리하는 경우, 루테올린, 에피게닌, 아카세틴, 디오스메틴 배당체의 당 분해가 가능한 것을 확인하였다.
즉, 본 발명의 감국 효소처리 추출물은 전구물질로서 루테올린-7-O-β-D-글루코피라노사이드(luteolin 7-O-β-D-glucopyranoside, 하기 화학식 5), 아카세틴-7-O-루티노사이드(acatetin-7-O-rutinoside, 하기 화학식 6), 에피게닌-7-글루코사이드(apigenin-7-glucoside, 하기 화학식 7), 디오스메틴-7-O-베타-D-글루코피라노사이드(diosmetin-7-O-beta-D-glucopyranoside, 하기 화학식 8)를 루테올린(luteolin, 하기 화학식 1), 아카세틴(acacetin, 하기 화학식 2), 에피게닌(apigenin, 하기 화학식 3), 디오스메틴(diosmetin, 하기 화학식 4)으로 전환함으로써, 상기 유효성분의 함량이 증대된 감국 효소처리 추출물을 제공할 수 있다.
바람직하게는, 본 발명의 감국 효소처리 추출물은 루테올린 0.01 내지 5 중량%, 에피게닌 0.01 내지 5 중량%, 아카세틴 0.01 내지 5 중량% 및 디오스메틴 0.01 내지 5 중량%를 포함할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아님을 명시한다.
[화학식 1]
Figure 112019010988279-pat00001
[화학식 2]
Figure 112019010988279-pat00002
[화학식 3]
Figure 112019010988279-pat00003
[화학식 4]
Figure 112019010988279-pat00004
[화학식 5]
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[화학식 6]
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[화학식 7]
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[화학식 8]
Figure 112019010988279-pat00008
또한, 본 발명은 상기 제조방법으로 제조된 감국 효소처리 추출물을 유효성분으로 포함하는 비만의 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다.
상기 감국 효소처리 추출물을 조성물 총 100 중량부에 대하여 0.01 내지 100 중량부로 포함될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아님을 명시한다.
상기 조성물은 지방세포의 분화 및 중성지방의 생성을 억제하고, AMPK(AMP-activated protein kinase)를 활성화시켜 우수한 항비만 효과를 나타낼 수 있다.
본 발명의 조성물이 약학 조성물인 경우, 투여를 위하여, 상기 기재한 유효성분 이외에 약학적으로 허용 가능한 담체, 부형제 또는 희석제를 포함할 수 있다. 상기 담체, 부형제 및 희석제로는 락토오스, 덱스트로오스, 수크로오스, 소르비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로오스, 메틸 셀룰로오스, 미정질 셀룰로오스, 폴리비닐피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다.
본 발명의 약학 조성물은 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 또는 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용할 수 있다. 상세하게는 제형화할 경우 통상 사용하는 충진제, 중량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제될 수 있다. 경구투여를 위한 고형 제제로는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 이러한 고형 제제는 상기 유효성분 외에 적어도 하나 이상의 부형제, 예를 들면, 전분, 칼슘 카보네이트, 수크로오스, 락토오스, 젤라틴 등을 섞어 조제될 수 있다. 또한, 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용될 수 있다. 경구를 위한 액상물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등을 첨가하여 조제될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제는 멸균된 수용액, 비수성 용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제 및 과제를 포함한다. 비수성 용제 및 현탁제로는 프로필렌글리콜, 폴리에틸렌글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 오일, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔, 마크로솔, 트윈 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로젤라틴 등이 사용될 수 있다.
본 발명의 약학 조성물의 적합한 투여량은 환자의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물형태, 시간에 따라 다르지만, 당 업자에 의해 적절하게 선택될 수 있는 바, 상기 조성물의 일일 투여량은 바람직하게는 0.001 mg/kg 내지 50 mg/kg이며, 필요에 따라 일일 1회 내지 수회로 나누어 투여할 수 있다.
또한, 본 발명은 상기 제조방법으로 제조된 감국 효소처리 추출물을 유효성분으로 포함하는 비만의 예방 또는 개선용 건강식품 조성물을 제공한다.
상기 감국 효소처리 추출물을 조성물 총 100 중량부에 대하여 0.01 내지 100 중량부로 포함될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아님을 명시한다.
본 발명의 조성물이 건강식품 조성물인 경우, 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 중진제(치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그 밖에 천연 과일 주스, 합성 과일 주스 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 또한, 건강식품 조성물은 육류, 소세지, 빵, 초콜릿, 캔디류, 스넥류, 과자류, 피자, 라면, 껌류, 아이스크림류, 스프, 음료수, 차, 기능수, 드링크제, 알코올 및 비타민 복합제 중 어느 하나의 형태일 수 있다.
또한, 상기 건강식품 조성물은 식품첨가물을 추가로 포함할 수 있으며, 식품첨가물로서의 적합 여부는 다른 규정이 없는 한 식품의약품안전처에 승인된 식품첨가물공전의 총칙 및 일반 시험법 등에 따라 해당 품목에 관한 규격 및 기준에 의하여 판정한다.
상기 식품첨가물공전에 수재된 품목으로 예를 들어, 케톤류, 글리신, 구연산 칼륨, 니코틴산, 계피산 등의 화학적 합성품, 감색소, 감초추출물, 결정셀룰로오스, 고랭색소, 구아검 등의 천연첨가물, L-글루타민산나트륨 제제, 면류 첨가 알칼리제, 보존료제제, 타르색소 제제 등의 혼합 제제류 등을 들 수 있다.
이때, 건강식품 조성물을 제조하는 과정에서 식품에 첨가되는 본 발명에 따른 조성물은 필요에 따라 그 함량을 적절히 가감할 수 있다.
이하에서는 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 요지에 따라 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되지 않는다는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에 있어서 자명할 것이다.
실시예 1: 동시 효소(펙티넥스 및 탄나아제) 처리 감국 추출물의 제조
감국 50 g에 정제수 1 kg을 가하고 90℃에서 2시간 동안 열처리한 다음, 시트르산(citric acid) 또는 NaHCO3를 첨가하여 효소처리를 위한 적정 pH인 pH 4.5로 조정하였다. 이후 상기 열처리물을 5분 동안 100 rpm으로 교반한 후 냉각하였다.
상기 냉각시킨 열처리물에 제1효소인 펙티넥스(Pectinex Ultra Sp-L) 5 g과 제2효소인 탄나아제(Tannase-KTFH) 3 g을 동시에 첨가한 후, 45℃에서 6시간 동안 반응시켜 1차 효소처리물을 제조하였다. 상기 1차 효소처리물을 90℃에서 30분간 반응시켜 효소를 불활성화시키고, 여과하여 잔사를 회수하였다. 이후, 상기 잔사에 50% 에탄올 2 kg을 가하고 70℃에서 6시간 동안 반응시켜 2차 추출물을 제조하였다. 이후, 1차 효소처리물과 2차 추출물을 혼합하고, 감압 농축 및 동결 건조하여 동시 효소처리된 감국 추출물을 제조하였다.
실시예 2: 동시 효소(비스코자임 및 탄나아제) 처리 감국 추출물의 제조
효소처리물 제조 시, 제1효소로 비스코자임(Viscozyme-L)과 제2효소로 탄나아제(Tannase-KTFH)를 사용하는 것을 제외하고는 상기 실시예 1과 동일한 방법으로 동시 효소처리된 감국 추출물을 제조하였다.
실시예 3: 동시 효소(래피다아제 및 탄나아제) 처리 감국 추출물의 제조
효소처리물 제조 시, 제1효소로 래피다아제(Rapidase C80 Max)와 제2효소로 탄나아제(Tannase-KTFH)를 사용하는 것을 제외하고는 실시예 1과 동일한 방법으로 동시 효소처리된 감국 추출물을 제조하였다.
실시예 4: 동시 효소(플란타아제 및 탄나아제) 처리 감국 추출물의 제조
효소처리물 제조 시, 제1효소로 플란타아제(Plantase TL)과 제2효소로 탄나아제(Tannase-KTFH)를 사용하는 것을 제외하고는 실시예 1과 동일한 방법으로 동시 효소처리된 감국 추출물을 제조하였다.
실시예 5: 순차적 효소(펙티넥스 및 탄나아제) 처리 감국 추출물의 제조
감국 50 g에 정제수 1 kg을 가하고 90℃에서 2시간 동안 열처리한 다음, 시트르산(citric acid) 또는 NaHCO3를 첨가하여 효소처리를 위한 적정 pH인 pH 4.5로 조정하였다. 이후 상기 열처리물을 5분 동안 100 rpm으로 교반한 후 냉각하였다.
상기 냉각시킨 열처리물에 제1효소인 펙티넥스(Pectinex Ultra Sp-L) 5 g을 첨가한 후, 45℃에서 6시간 동안 반응시켜 1차 효소처리물을 제조하였다. 상기 1차 효소처리물을 90℃에서 30분간 반응시켜 효소를 불활성화시켰다. 이후, 제2효소인 탄나아제(Tannase-KTFH) 3 g을 첨가한 후, 45℃에서 6시간 동안 반응시켜 2차 효소처리물을 제조하였다. 상기 2차 효소처리물을 90℃에서 30분간 반응시켜 효소를 불활성화시키고, 여과하여 잔사를 회수하였다. 이후, 상기 잔사에 50% 에탄올 2 kg을 가하고 70℃에서 6시간 동안 반응시켜 3차 추출물을 제조하였다. 이후, 1차 효소처리물, 2차 효소처리물 및 3차 추출물을 순차적으로 혼합하고, 감압 농축 및 동결 건조하여 동시 효소처리된 감국 추출물을 제조하였다.
비교예 1: 효소 무처리 감국 추출물의 제조
감국 50 g에 70% 에탄올 1 kg을 가하고 70℃에서 6시간 동안 추출하여 효소처리되지 않은 감국 추출물을 제조하였다.
비교예 2: 단일 효소처리 감국 추출물의 제조
효소처리물 제조 시, 제1효소 처리만 진행하고, 제2효소 처리는 생략하는 것을 제외하고는 실시예 5와 동일한 방법으로 효소처리된 감국 추출물을 제조하였다.
상기 각각의 실시예 및 비교예의 감국 추출물의 제조방법을 하기 표 1에 정리하여 나타내었다.
효소처리 감국 추출물의 제조방법
실시예1 열수 침지 펙티넥스 + 탄나아제 에탄올 추출 동시 처리
실시예2 열수 침지 비스코자임 + 탄나아제 에탄올 추출
실시예3 열수 침지 래피다아제 + 탄나아제 에탄올 추출
실시예4 열수 침지 플란타아제 + 탄나아제 에탄올 추출
실시예5 열수 침지 펙티넥스 → 탄나아제 에탄올 추출 순차 처리
비교예1 - - 에탄올 추출 -
비교예2 열수 침지 펙티넥스 에탄올 추출 -
시험예 1: 효소처리 감국 추출물의 성분 분석
효소처리 또는 효소 무처리 감국 추출물의 분말 0.5 g을 25 ml 용량의 플라스크에 넣고, 80% 메탄올 10 ml을 첨가한 후 30분 동안 초음파 추출하였다. 이후, 상기 추출물을 원심분리(3,500 rpm, 10분)하여 상등액을 취한 다음 0.45 μm 멤브레인 필터로 여과하여 시료용액을 제조하였다. 표준물질로는 유효성분 및 전구체 표준품 10 mg을 100 ml 용량의 플라스크에 넣고, 메탄올로 표선을 맞춰 준비하였다.
실시예 및 비교예의 효소처리 또는 효소 무처리 감국 추출물의 시료용액을 고성능 액체 크로마토그래피(high performance liquid chromatography; HPLC)로 분석하였으며, 이의 결과를 도 2에 나타내다. 또한, 고형분 수율, 루테올린, 에피게닌, 아카세틴, 디오스메틴 함량을 하기 표 2에 나타내었다.
구분 고형분
수율
(중량%)		 루테올린(mg·g-1) 에피게닌(mg·g-1) 아카세틴(mg·g-1) 디오스메틴(mg·g-1)
실시예 1 50.03 6.33 4.84 4.07 1.27
실시예 2 48.10 4.82 4.54 3.80 0.98
실시예 3 41.48 4.45 3.51 2.85 0.89
실시예 4 46.01 5.61 4.74 3.32 0.85
실시예 5 50.03 3.92 3.34 2.59 0.75
비교예 1 29.85 1.77 1.76 0.94 0.25
비교예 2 39.98 2.35 2.48 1.14 0.23
시험예 2: 세포 생존율 분석
상기 실시예 또는 비교예의 효소처리 또는 효소 무처리 감국 추출물이 지방세포 생존에 미치는 영향을 확인하기 위하여, MTT(3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide) 분석을 수행하였다. 이는 탈수소효소 작용에 의해 노란색의 수용성 기질인 MTT 테트라졸륨을 청자색의 비수용성 MTT 포르마잔으로 환원시키는 미토콘드리아의 능력을 활용한 시험법이다.
간략하게, 3T3-L1 지방전구세포(ATCC, Manassas, VA, USA)를 5 X 104 세포/ml의 밀도로 24 웰 플레이트에 분주하고, 37℃ 5% CO2 배양기에서 배양하였다. 24시간 후 실시예 또는 비교예에서 얻어진 효소처리 또는 효소 무처리 감국 추출물을 농도별로 첨가한 후, 24시간 추가 배양하였다. 이후, 2 mg/ml MTT 용액을 처리하고 4시간 동안 반응시킨 뒤 배지를 제거하고, 펠렛(pellet)을 DMSO로 용해한 다음 ELISA 리더기를 이용하여 570 nm에서 흡광도를 측정하였다. 하기 계산식 1을 이용하여 세포 생존율을 계산하였다.
[계산식 1]
세포 생존율(%) = (시료 처리군의 흡광도 / 대조군의 흡광도) × 100
그 결과, 도 3을 참조하여 보면, 본 발명의 효소처리 또는 효소 무처리 감국 추출물은 100 μg/ml 농도까지 3T3-L1 지방전구세포에 독성을 나타내지 않는 것을 확인하였다.
시험예 3: 지방세포 분화 및 중성지방 생성 억제 효과
3-1. 지방세포 분화
상기 실시예 또는 비교예의 효소처리 또는 효소 무처리 감국 추출물이 지방전구세포와 지방세포의 증식 억제능에 미치는 영향을 확인하기 위하여, 3T3-L1 지방전구 세포를 사용하였다. 3T3-L1 지방전구세포는 지방세포의 대사 과정 연구에 널리 이용되는 세포주로서, 상기 세포의 분화가 활발히 일어날수록 지방세포 내의 지방 축적도 활발히 일어난다. 3T3-L1 지방전구세포는 10% 우아혈청(bovine calf serum; BCS, Gibco, Grand Island, NY, USA) 및 1% 페니실린/스트렙토마이신(P/S, Gibco, Grand Island, NY, USA)이 함유된 DMEM 배지(Lonza, Allendale, NJ, USA)를 이용하여 37℃, 5% CO2 배양기에서 배양하였다.
안정화된 3T3-L1 지방전구세포는 1 X 105 세포/ml의 밀도로 24 웰 플레이트에 분주하여 배양하고, 100% confluent 시점이 되면 2일간 더 유지시켰다. 이후, 0.5 mM IBMX(3-isobutyl-1-methylzanthine, Sigma, St. Louis, Mo, USA), 1μM 덱사메타손(dexamethasone, Sigma, St. Louis, MO, USA), 10 μg/ml 인슐린(Gibco, Grand Island, NY, USA), 10% 우태아혈청(fetal bovine serum; FBS, Gibco, Grand Island, NY, USA)이 함유된 DEME 배지로 2일 동안 지방세포 분화를 유도하고, 배양 2일 후 10 μg/ml 인슐린이 함유된 10% FBS DMEM 배지로 2일 간 더 배양하였다. 이후, 4일 동안 2일마다 10% FBS DMEM 배지를 교체하며 배양하였다.
지방세포 분화 과정 동안 효소처리 또는 효소 무처리 감국 추출물을 각 배양액에 각각 4, 20, 100 μg/ml의 농도로 처리하였고, 분화가 완성되는 시점인 10일 째에 지방세포 분화 정도를 관찰하였다.
3-2. Oil red O 염색
상기 실시예 또는 비교예의 효소처리 또는 효소 무처리 감국 추출물이 지방전구세포의 지방세포 분화 및 지방생성 억제에 미치는 영향을 확인하기 위하여, 중성지방을 특이적으로 염색시키는 Oil Red O 염색을 수행하였다.
간략하게, 상기 시험예 3-1에서 지방세포 분화를 유도한 세포로부터 배지를 제거하고, 인산완충식염수(phosphate buffered saline; PBS)로 2회 세척한 다음 4% 포름알데히드(formaldehyde)로 상온에서 30분 동안 세포를 고정시켰다. 이후 60% 아이소프로판올(isopropanol)로 세포를 세척하고, 0.2% oil red O 염색약(60% 아이소프로판올에 용해)으로 상온에서 1시간 동안 세포를 염색하였다.
염색 후 세포를 증류수로 세척한 후 광학 현미경으로 관찰하였다. 또한, 염색된 세포는 아이소프로판올로 용해한 다음 ELISA 리더기를 이용하여 570 nm에서 흡광도를 측정하였으며, 하기 계산식 2를 이용하여 지방세포에서의 지방 축적율을 계산하였다.
[계산식 2]
지방 축적율(%) = (시료 처리군의 흡광도 / 대조군의 흡광도) × 100
그 결과, 도 4 및 도 5를 참조하여 보면, 실시예 1 내지 실시예 5의 효소처리 감국 추출물은 100 μg/ml 농도에서 MDI 중성지방 축적율이 각각 50, 67, 75, 80 및 69%로 지방 축적율을 감소시켰으며, 통계학적으로 유의적인 차이를 나타내는 것을 확인하였다. 특히, 실시예 1 및 실시예 2의 효소처리 감국 추출물의 지방 축적율 감소 효과가 가장 우수한 것을 확인할 수 있었다.
상기 결과로부터, 본 발명의 효소처리 감국 추출물은 높은 수율로 산업화에 용이할 뿐만 아니라 지방전구세포의 지방세포 분화 및 중성지방의 생성을 효과적으로 억제하여 항비만 효과를 나타내는 것을 확인하였다.
시험예 4: AMPK 활성화 효과 분석
다음으로 상기 실시예 또는 비교예의 효소처리 또는 효소 무처리 감국 추출물을 이용하여 AMPK 활성화 효능을 분석하였다. 에너지 대사과정에서 AMPK 활성의 증가는 ACCs(acetyl-CoA carboxylase 1 및 2)의 인산화를 증가시키는 것으로 알려져 있다.
간략하게, 3T3-L1 지방전구세포를 6 웰 플레이트에 분주하고, 10% BSC가 함유된 DMEM 배지를 사용하여 배양한 후 분화를 유도하기 위하여 1% FBS가 함유된 DMEM 배지로 교체하여 배양하였다.
SDS 샘플 버퍼로 세포를 수확한 후 초음파 처리하여 단백질 용해물을 획득하였다. 이후 10% SDS-PAGE 전기영동을 수행하고 semi-dry transfer 기기를 이용하여 PVDF 트랜스퍼 멤브레인(transfer membrane)으로 단백질을 이동시켰다. 상기 멤브레인으로 이동된 단백질은 5% 탈지유(skim milk)로 상온에서 1시간 동안 블로킹(blocking)한 후, total AMPK 및 phospho-AMPK(Thr172) 항체와 4℃에서 밤새 반응시켰다. 0.1% 트윈-20이 첨가된 TBS 버퍼로 멤브레인을 3번 세척한 후 항-마우스 HRP 2차 항체를 이용하여 면역블롯(immunoblot)을 수행하였다.
그 결과, 도 6을 참조하여 보면, 실시예 1의 효소처리 감국 추출물을 처리한 세포에서 AMPK 활성이 강하게 증가하는 것을 확인하였다.
시험예 5: 동물실험
이에, 동물실험을 수행하여 실시예 1의 효소처리 감국 추출물을 섭취한 마우스의 체중 변화를 분석하고자 하였다.
간략하게, 마우스(SD rat, orient bio)를 정상대조군, 고지방식이 투여군(High fat diet; HFD), 고지방식이 및 비교예 1의 효소 무처리 감국 추출물 투여군(비교예 1), 고지방식이 및 실시예 1의 효소처리 감국 추출물 투여군(실시예 1)으로 나눈 후, 각 군에 해당되는 식이를 6주간 섭취시키며 마우스의 체중을 측정하였다.
그 결과, 도 7을 참조하여 보면, 실시예 1의 효소처리 감국 추출물을 투여한 군에서 마우스의 체중 증가 비율이 가장 낮은 것을 확인하였다.
이상으로 본 발명의 특정한 부분을 상세히 기술한 바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 이러한 구체적인 기술은 단지 바람직한 구현 예일 뿐이며, 이에 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백하다. 따라서, 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항과 그의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.
본 발명의 범위는 후술하는 특허청구범위에 의하여 나타내어지며, 특허청구범위의 의미 및 범위 그리고 그 균등 개념으로부터 도출되는 모든 변경 또는 변형된 형태가 본 발명의 범위에 포함되는 것으로 해석되어야 한다.

Claims (14)

  1. (1) 감국(Chrysanthemum indicum)에 물을 첨가하고 열수 침지하는 단계;
    (2) 상기 단계 (1)의 열수 침지 후 냉각한 침지물에 펙티넥스(pectinex) 또는 비스코자임(viscozyme)에서 선택된 효소, 및 탄나아제(tannase) 효소를 동시에 처리하여 반응시킨 뒤 여과하여 1차 효소처리 추출물을 획득하는 단계;
    (3) 상기 단계 (2)에서 여과하고 남은 잔사에 에탄올 또는 이의 수용액을 용매로 처리하여 2차 추출물을 획득하는 단계; 및
    (4) 상기 단계 (2)의 1차 효소처리 추출물 및 상기 단계 (3)의 2차 추출물을 혼합한 후 농축 또는 건조하는 단계를 포함하고,
    상기 펙티넥스는 펙티나아제(pectinase)를 포함하는 복합효소이며,
    상기 비스코자임은 베타-글루카나아제(β-glucanase), 셀룰라아제(cellulase), 헤미셀룰라아제(hemicellulase), 및 자일라나아제(xylanase)를 포함하는 복합효소인 것을 특징으로 하는 감국 효소처리 추출물의 제조방법.
  2. 제 1항에 있어서, 상기 단계 (1)의 열수 침지는 감국 1 중량부에 대하여 1 내지 100 중량부의 물을 첨가하고, 70℃ 내지 130℃에서 수행되는 것을 특징으로 하는 감국 효소처리 추출물의 제조방법.
  3. 제 1항에 있어서, 상기 단계 (2)의 효소는 침지물 총 100 중량부에 대하여 0.001 내지 90 중량부로 처리되는 것을 특징으로 하는 감국 효소처리 추출물의 제조방법.
  4. 제 1항에 있어서, 상기 단계 (2)는 효소를 처리하고 20℃ 내지 80℃에서 5분 내지 100시간 동안 반응시키는 것을 특징으로 하는 감국 효소처리 추출물의 제조방법.
  5. 제 1항에 있어서, 상기 1차 효소처리 추출물을 획득하는 단계 (2)는 상기 펙티넥스 및 탄나아제 효소를 동시에 처리하는 것을 특징으로 하는 감국 효소처리 추출물의 제조방법.
  6. 제 1항에 있어서, 상기 단계 (2)의 효소는 감국에 포함되어 있는 플라보노이드 배당체를 플라보노이드 비배당체로 전환하는 것을 특징으로 하는 감국 효소처리 추출물의 제조방법.
  7. 제 1항에 있어서, 상기 단계 (3)은 잔사 1 중량부에 대하여 1 내지 100 중량부의 에탄올 또는 이의 수용액을 처리하고 20℃ 내지 100℃에서 10분 내지 120시간 동안 추출하는 것을 특징으로 하는 감국 효소처리 추출물의 제조방법.
  8. 제 1항에 있어서, 상기 단계 (4)는 혼합물을 농축하여 농축액을 얻거나, 농축액을 건조하여 분말 형태의 추출물을 획득하는 것을 특징으로 하는 감국 효소처리 추출물의 제조방법.
  9. 제 1항에 있어서, 상기 감국 효소처리 추출물은 루테올린 0.01 내지 5중량%, 에피게닌 0.01 내지 5중량%, 아카세틴 0.01 내지 5중량%, 디오스메틴 0.01 내지 5중량% 및 잔량의 물을 포함하는 것을 특징으로 하는 감국 효소처리 추출물의 제조방법.
  10. 제 1항 내지 제 9항 중 어느 한 항에 따른 제조방법으로 제조된 감국 효소처리 추출물을 유효성분으로 포함하는 비만의 예방 또는 치료용 약학 조성물.
  11. 제 10항에 있어서, 상기 감국 효소처리 추출물을 조성물 총 100 중량부에 대하여 0.01 내지 100 중량부로 포함되는 것을 특징으로 하는 비만의 예방 또는 치료용 약학 조성물.
  12. 제 10항에 있어서, 상기 조성물은 지방세포의 분화 및 중성지방의 생성을 억제하고, AMPK를 활성화시키는 것을 특징으로 하는 비만의 예방 또는 치료용 약학 조성물.
  13. 제 1항 내지 제 9항 중 어느 한 항에 따른 제조방법으로 제조된 감국 효소처리 추출물을 유효성분으로 포함하는 비만의 예방 또는 개선용 건강식품 조성물.
  14. 제 13항에 있어서, 상기 감국 효소처리 추출물을 조성물 총 100 중량부에 대하여 0.01 내지 100 중량부로 포함되는 것을 특징으로 하는 비만의 예방 또는 개선용 건강식품 조성물.














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