TWI846355B - 用於預防、改善或治療肥胖症的包括作為活性成分的南非醉茄萃取物和西伯利亞菊萃取物的複合物(asc複合物)的組成物 - Google Patents

用於預防、改善或治療肥胖症的包括作為活性成分的南非醉茄萃取物和西伯利亞菊萃取物的複合物(asc複合物)的組成物 Download PDF

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Abstract

本發明涉及一種用於預防、改善或治療肥胖症的組成物，包含作為一 活性成分之南非醉茄(睡茄)萃取物以及一西伯利亞菊(Chrysanthemum zawadskii Herbich var.latilobum(Maxim.)Kitamura)萃取物之一複合物。本發明提供的複合物具有優異的抑制脂肪細胞分化、抑制脂肪細胞脂質堆積和抑制胰脂酶的作用，因此，可用於預防或治療肥胖症的醫藥組成物和用於預防或改善肥胖症的保健功能食品和食品組成物。

Description

用於預防、改善或治療肥胖症的包括作為活性成分的南非醉 茄萃取物和西伯利亞菊萃取物的複合物(ASC複合物)的組成物
本申請專利範圍基於2022年03月02日提交的韓國專利申請第10-2022-0026947號的優先權，該對應申請的說明書及附圖所揭露的全部內容併入本申請中。
本發明涉及一種用於預防、改善或治療肥胖症的組成物，包含作為活性成分的天然萃取物。
肥胖症(obesity)是指由於能量代謝不平衡導致過量脂質堆積的醫學疾病(medical condition)。它可以被定義為一種卡路里不平行的狀態，因為卡路里攝取量超過身體活動和生長所需的能量，過量的能量以中性脂肪(neutral fat)的形式堆積在脂肪組織中。眾所周知，遺傳、缺乏運動、卡路里攝取過量、腸道微生物不平衡和睡眠品質不良等許多因素共同作用導致肥胖。
至今為止，已經嘗試了許多治療肥胖症的方法，在韓國，根據韓國肥胖學會(Korean Society of Obesity)的肥胖治療指南(2018)，BMI為25kg/m2或以上的患者接受藥物治療，BMI為35kg/m2或以上、或BMI為30kg/m2或以上且合併肥胖症的患者建議考慮手術。美國FDA批准的抗肥胖症藥物有奧利司他(Orlistat)、氯卡色林(lorcaserin)、那曲酮(naltrexone)/安非他酮(bupropion)、苯丁胺(phentermine)/托吡酯(topiramate)、利拉魯肽(liraglutide)等。然而，在藥物治療的情況下，有報導指出存在例如抑鬱(depression)、焦慮、頭痛、暈眩、噁心(nausea)和疲勞(fatigue)等副作用，且關於安全和有效性的問題不斷被提出。此外，在手術治療的情況下，在手術或程序後必須長時間結合運動和飲食的限制，因此國內外正在積極展開各種天然物質的抗肥胖症效果和安全性研究。
因此，有必要發展用於改善或治療肥胖症的天然物質，其對人體安全且具有優異抗肥胖症效果。
本發明人發現南非醉茄(Ashwagandha)萃取物和西伯利亞菊(Siberian chrysanthemum)萃取物的組合可以表現出優異的抑制脂肪細胞(adipocytes)分化、抑制脂肪細胞脂質/脂肪堆積和抑制胰脂酶(pancreatic lipase)活性的作用，並可表現出預防、改善和治療肥胖症的效果。
因此，本發明之一目的為提供一種用於預防或治療肥胖症的醫藥組成物，包含作為一活性成分之南非醉茄萃取物和西伯利亞菊萃取物之複合物。
本發明之另一目的為提供一種用於預防或改善肥胖症的保健功能食品和食品組成物，包含作為一活性成分之南非醉茄萃取物和西伯利亞菊萃取物之複合物。
本發明之另一目的為提供一種包含該組成物的醫藥產物(pharmaceutical product)、保健功能食品和食品。
更具體地，本發明之一目的為提供以下實施例。
實施例1.一種用於預防或治療肥胖症之醫藥組成物，包含作為活性成分之南非醉茄(Ashwagandha)(睡茄(Withania somnifera))萃取物和西伯利亞菊(Siberian chrysanthemum)(Chrysanthemum zawadskii Herbich var.latilobum(Maxim.)Kitamura)萃取物之複合物；或一種南非醉茄(睡茄)萃取物和西伯利亞菊(Chrysanthemum zawadskii Herbich var.latilobum(Maxim.)Kitamura)萃取物之複合物在製造用於預防或治療肥胖症之醫藥產物中的用途。
實施例2.如實施例1所述之醫藥組成物或用途，其中，南非醉茄萃取物和西伯利亞菊萃取物是以溶劑萃取而得，該溶劑選自由水、具有1至4個碳原子的低級醇及其混合溶劑所組成之群組。
實施例3.如前述實施例中任一項所述之醫藥組成物或用途，其中，南非醉茄萃取物和西伯利亞菊萃取物在40℃至100℃下萃取而得。
實施例4.如前述實施例中任一項所述之醫藥組成物或用途，其中，南非醉茄萃取物和西伯利亞菊萃取物之複合物為乾粉。
實施例5.如前述實施例中任一項所述之醫藥組成物或用途，其中，南非醉茄萃取物和西伯利亞菊萃取物以1：1至5：1(南非醉茄萃取物：西伯利亞菊萃取物)的重量比混合在複合物中。
實施例6.如前述實施例中任一項所述之醫藥組成物或用途，其中，南非醉茄萃取物和西伯利亞菊萃取物之複合物具有抑制脂肪細胞分化、抑制脂肪細胞脂質堆積和抑制胰脂酶活性的作用。
實施例7.一種醫藥產物，包含如前述實施例中任一項所述之組成物。
實施例8.一種用於預防或改善肥胖症之食品組成物，包含作為活性成分之南非醉茄(睡茄)萃取物以及西伯利亞菊(Chrysanthemum zawadskii Herbich var.latilobum(Maxim.)Kitamura)萃取物之複合物；或一種南非醉茄(睡茄)萃取物和西伯利亞菊(Chrysanthemum zawadskii Herbich var.latilobum(Maxim.)Kitamura)萃取物之複合物在製造用於預防或改善肥胖症之食品中的用途。
實施例9.如實施例8所述之食品組成物或用途，其中，南非醉茄萃取物和西伯利亞菊萃取物是以溶劑萃取而得，該溶劑選自由水、具有1至4個碳原子的低級醇及其混合溶劑所組成之群組。
實施例10.如實施例8至9中任一項所述之食品組成物或用途，其中，南非醉茄萃取物和西伯利亞菊萃取物在40℃至100℃下萃取而得。
實施例11.如實施例8至10中任一項所述之食品組成物或用途，其中，南非醉茄萃取物和西伯利亞菊萃取物之複合物為乾粉。
實施例12.如實施例8至11中任一項所述之食品組成物或用途，其中，南非醉茄萃取物和西伯利亞菊萃取物以1：1至5：1(南非醉茄萃取物：西伯利亞菊萃取物)的重量比混合在複合物中。
實施例13.如實施例8至12中任一項所述之食品組成物或用途，其中，南非醉茄萃取物和西伯利亞菊萃取物之複合物具有抑制脂肪細胞分化、抑制脂肪細胞脂質堆積和抑制胰脂酶活性的作用。
實施例14.一種保健功能食品，包含如實施例8至13中任一項所述之組成物。
實施例15.一種食品，包含如實施例8至13中任一項所述之組成物。
本發明的其他目的和優點將從以下對本發明的詳細描述、專利範圍和附圖中變得更加明顯。
為了實現上述目的，本發明提供一種用於預防、改善或治療肥胖症之組成物，包含作為活性成分之南非醉茄(睡茄)萃取物和西伯利亞菊(Chrysanthemum zawadskii Herbich var.latilobum(Maxim.)Kitamura)萃取物之複合物。
在本發明中，南非醉茄萃取物和西伯利亞菊萃取物的特徵可為它們是以溶劑萃取而得，溶劑選自由水、有機溶劑或其混合溶劑所組成之群組。
在本發明中，南非醉茄萃取物和西伯利亞菊萃取物的特徵可為它們在40℃至100℃(更佳為40℃至80)℃的低溫下萃取而得。
在本發明中，南非醉茄萃取物和西伯利亞菊萃取物之複合物的特徵可為它們是乾粉。
在本發明中，南非醉茄萃取物和西伯利亞菊萃取物的特徵可為他們以1：1至5：1的重量比混合在複合物中。
在本發明中，南非醉茄萃取物和西伯利亞菊萃取物之複合物的特徵可為具有抑制脂肪細胞分化、抑制脂肪細胞脂肪堆積和抑制胰脂酶活性的作用。
此外，本發明提供包含該組成物的醫藥產物、保健功能食品和食品。
本發明提供之複合物具有優異的抑制脂肪細胞分化、抑制脂肪細胞脂肪堆積和抑制胰脂酶的作用，且因此可用於預防或治療肥胖症的醫藥組成物以及用於預防或改善肥胖症的保健功能食品和食品組成物。
圖1顯示了以南非醉茄萃取物和西伯利亞菊萃取物之複合物處理3T3-L1細胞抑制脂肪細胞分化的效果的顯微照片(photomicrograph)。
圖2顯示了以南非醉茄萃取物和西伯利亞菊萃取物之複合物處理3T3-L1細胞抑制脂肪細胞脂肪堆積的效果的圖。
圖3顯示了實施例2抑制脂肪細胞脂肪堆積的效果的圖。
除非另有定義，否則在本說明書中使用的所有技術和科學術語具有與本發明所屬領域的技術人員通常所理解的相同含意。一般來說，本說明書中使用的命名法是本技術領域眾所皆知和常用的。
在整個說明書中，當一個部分「包含」任何組分時，除非另有說明，否則表示可進一步包含其他組分，而不是排除其他組分。
根據本發明之一實施例，本發明涉及用於預防、改善或治療肥胖症之組成物，包含作為活性成分之南非醉茄(睡茄)(Ashwagandha(Withania somnifera))萃取物以及西伯利亞菊萃取物(Chrysanthemum zawadskii Herbich var.latilobum(Maxim.)Kitamura)之複合物。
根據本發明之萃取物可通過本發明所屬領域中已知的各種萃取方法獲得，具體地，其可通過溶劑萃取而得，溶劑選自由水、有機溶劑或其混合溶劑所組成之群組。
水可以是鹼性水，且有機溶劑可為無水或含水之具有1-4碳原子的低級醇，例如極性有機溶劑，例如甲醇、乙醇、丙醇、正丁醇或丙酮；非極性有機溶劑，例如乙醚、己烷、苯、氯仿和乙酸乙酯；植物性有機溶劑，例如大豆油和芝麻油；以及其混合物。有機溶劑可單獨使用或作為兩種或多種的混合物使用。
在萃取期間使用的溶劑，可以使用選自甲醇、乙醇、丙醇、正丁醇和丙酮中的一或多種有機溶劑，或在這些溶劑中包含水的混合溶劑。其中，從穩定萃取活性成分的方面，更佳為使用水和乙醇的混合溶劑進行萃取。在水和乙醇的混合溶劑中，乙醇的濃度可為10%至90%，較佳為30%至90%，更佳為50%至80%。
具體地，萃取溶劑的含量可為萃取材料的固體重的1至300倍，更佳為5至150倍，最佳為10至50倍。
此外，可以在萃取物的活性成分不被破壞或破壞最小化的條件下，通過加熱或在室溫下萃取萃取物。萃取方法沒有特別限制，可以取決於萃取物的種類和萃取方法，例如可以使用低溫萃取法、水浴萃取法、回流冷卻萃取法、超音波萃取法和冷萃取法(cold extraction)。
在萃取步驟中的萃取次數具體可重複1至5次。在這種情況下，可以進一步提高活性成分的萃取效率。
例如，在萃取步驟中，在萃取材料中加入萃取溶劑後，可以在40℃至100℃(更佳為40℃至80℃)的低溫下進行萃取2至80小時。此時，低溫萃取方法是通過加熱在低溫下萃取的方法。當使用低溫萃取方法時，最好最小化熱對活性成分的破壞。
在另一種方法中，可以通過向萃取材料中加入萃取溶劑，接著在80℃至100℃的熱水中加熱0.5至72小時來進行萃取。
在另一種方法中，可以通過將萃取材料和萃取溶劑加入至配有回流冷卻器的萃取器中後，在50℃至100℃下加熱回流4至20小時來進行萃取。此時，加熱及回流冷卻萃取法是通過加熱及回流萃取後冷卻的方法。具體地，由於溶劑損失可能會因為加熱蒸發而發生，所以一起進行冷卻步驟來最小化溶劑損失。
在另一種方法中，可以通過向萃取材料中加入萃取溶劑，接著在5℃至37℃下浸泡1至15天並冷卻來進行萃取。
在另一種方法中，萃取步驟可通過向萃取材料中加入基於萃取材料的乾固體的重量的10至50倍的乙醇，在20℃至80℃下萃取1至72小時、過濾並濃縮以得到濃縮狀態的萃取物。
此外，本發明的萃取材料不僅包含上述萃取溶劑萃取的萃取材料，也包含通過常規純化步驟萃取的萃取材料。例如，通過各種額外純化方法獲得的活性分餾物也包含在本發明的萃取物中，例如通過具有恆定分子量截留值(certain molecular weight cut-off value)的超濾膜而取得的分餾物(fraction)，或通過各種層析法(設計為根據尺寸、電荷、疏水性或親水性進行分離)等。
過濾是從萃取物中去除懸浮固體顆粒的過程，且可使用棉花、尼龍、紙等過濾顆粒，或者可使用超濾(ultrafiltration)、低溫過濾(cryofiltration)、離心等，但不限於此。
將濾液濃縮乾燥的步驟包含但不限於冷凍乾燥、真空乾燥、熱風乾燥、噴霧乾燥、減壓乾燥、泡沫乾燥(foam drying)、高頻乾燥和紅外線乾燥等。在一些情況下，可以添加粉碎最終乾燥萃取物的步驟。
根據本發明之一實施例，萃取物可以多種形式加工和使用，例如萃取溶液(extracted solution)、通過乾燥萃取物獲得的粉末和通過過濾和濃縮萃取物獲得的濃縮物。此外，萃取物沒有特別限制，例如可以使用含有含水醇類作為瀝濾(leaching)溶劑的酊劑(tincture)、濃縮物、萃取物、流質萃取物等型態使用。
根據本發明之另一實施例，如上述所製備的南非醉茄萃取物可包含3至9mg/g的睡茄皂苷IV(Withanoside IV)。此外，如上述所製備的西伯利亞菊萃取物可包含15至50mg/g的玄參苷(Linarin)。
根據本發明之另一實施例，南非醉茄萃取物和西伯利亞菊萃取物之複合物可以通過將南非醉茄萃取物和西伯利亞菊萃取物較佳以1：1至5：1(南非醉茄萃取物：西伯利亞菊萃取物)的重量比混合製備，且在提高抑制脂肪細胞分化、抑制脂肪細胞脂質堆積和抑制胰脂酶的所有效果方面，最佳為以3：1至5：1(南 非醉茄萃取物：西伯利亞菊萃取物)的重量比混合製備。如果超出上述範圍，則抑制脂肪細胞分化、抑制脂肪細胞脂質堆積和抑制胰脂酶的效果降低，較為不佳，且因此降低了作為預防、改善或治療肥胖症的組成物的功能。
因為南非醉茄萃取物和西伯利亞菊萃取物的複合物具有抑制脂肪細胞分化、抑制脂肪細胞脂質堆積和抑制胰脂酶的所有效果，因此不僅可以抑制脂質累積，還可以抑制體內脂質吸收。通過抑制它，可以實現抗肥胖症效果。
如上所述，南非醉茄萃取物和西伯利亞菊萃取物具有優異的抑制脂肪細胞分化、抑制脂肪細胞脂質堆積和抑制胰解脂酶(lipolytic enzyme)的作用，因此可用於預防或治療肥胖症之醫藥組成物和用於預防或改善肥胖症之保健功能食品和食品組成物。
根據本發明之一實施例，醫藥組成物可更包含製備醫藥組成物常用的合適的載體、賦形劑和稀釋劑，以及作為活性成分的南非醉茄萃取物和西伯利亞菊萃取物。此外，固體或液體製劑添加劑可用於製備醫藥組成物，但不限於此。
作為賦形劑，可使用乳糖、蔗糖、白砂糖、葡萄糖、低聚醣、玉米澱粉、澱粉、滑石、山梨糖醇、結晶纖維素、糊精、碳酸鈣和二氧化矽等。黏合劑的例子包含聚乙烯醇、聚乙烯醚、甲基纖維素、乙基纖維素、阿拉伯膠、明膠、羥丙基纖維素、羥丙基甲基纖維素、檸檬酸鈣、糊精和果膠。可以使用硬脂酸鎂、滑石、聚乙二醇、二氧化矽和氫化植物油作為潤滑劑。作為著色劑，可以使用任何著色劑，只要允許將其添加到普通藥物中即可。這些片劑和顆粒 可以根據其他需要適當地包衣，例如糖衣和明膠包衣。此外，可以根據需要添加防腐劑和抗氧化劑。
此外，本發明之醫藥組成物可以被製備成本領域常用的任何劑型，且劑型的形式沒有特別限制，可以是散劑、顆粒劑(granules)、片劑、膠囊劑、懸浮劑、乳劑、口服製劑(例如糖漿劑和氣霧劑(aerosols))、外用劑、栓劑和無菌注射液，可根據常規方法配置使用，但不限於此。
本發明之醫藥組成物的較佳劑量可根據患者的狀況和體重、疾病的嚴重性、傷口類型、施用部位、給藥次數、給藥時間、劑型類型和補充劑等而變化。劑量沒有特別限制，但通常本發明之醫藥組成物可為每天0.0001mg至500mg。給藥可以每天給藥一次，每天以適當的間隔分成2至3次給藥，或可以數天的間隔間歇性給藥。
此外，本發明之醫藥組成物的劑量取決於給藥途徑、患者的年齡、性別、體重、患者的嚴重性、傷口類型、施用部位、給藥次數、給藥時間、劑型、患者的狀況和佐劑的類型等。可根據各種相關的因素進行適當地調整，可有效用作預防或治療肥胖症之醫藥組成物。
由上述方法獲得的組成物顯示出抑制脂肪細胞分化、抑制脂肪細胞脂質堆積和抑制胰解脂酶的作用，因此可用於提供具有優異的預防和治療肥胖症之醫藥產物。
根據本發明之一實施例，保健功能食品和食品組成物可作為食品、食品添加劑、飲料、飲料添加劑、發酵乳和保健功能食品等。當作為食品、食品添加劑、飲料、飲料添加劑或保健功能食品時，其可以是各種食品、發酵 乳、肉類、飲料、巧克力、點心、糖果、披薩、拉麵、其他麵類、口香糖、冰淇淋、酒精飲料、維生素複合物、酒精製品和其他保健功能食品，但不限於此。
當本發明的南非醉茄萃取物和西伯利亞菊萃取物之複合物製備成保健功能食品和食品組成物時，其可以不僅包含南非醉茄萃取物和西伯利亞菊萃取物，也可以包含在食品製造過程中通常添加的成分作為活性成分。
附加成分包含例如蛋白質、碳水化合物、脂肪、營養素、調味料(seasonings)和香料。碳水化合物包含常見的醣類，例如單醣(例如葡萄糖、果糖等)、雙醣(例如麥芽糖、蔗糖、低聚醣等)和多醣(例如糊精、環糊精等)、木醣醇、山梨醣醇和糖醇(例如赤藻糖醇(erythritol))。作為調味劑(flavoring agents)，可使用天然調味劑(索馬甜(thaumatin)、甜菊萃(stevia extract)(例如瑞鮑迪甙A(rebaudioside A)、甘草酸苷(glycyrrhizin)等)和合成調味劑(糖精、阿斯巴甜等)。
例如當本發明的保健功能食品和食品組成物製備成飲料時，除了南非醉茄萃取物和西伯利亞菊萃取物外，還可以包含果膠、檸檬酸、高果糖玉米糖漿、砂糖、葡萄糖、醋酸、蘋果酸、果汁等。
本發明的保健功能食品和食品組成物包含所有天然材料的加工形式，例如食品、功能性食品、營養補充劑、保健食品和食品添加劑等。上述類型的保健功能食品和食品組成物可以根據本領域已知的常規方法製備成各種形式。
例如，作為保健食品，南非醉茄萃取物和西伯利亞菊萃取物之複合物可以以茶、果汁和飲料的形式製造和消費，或者可以以造粒(granulation)、膠囊和粉末攝取。此外，可以添加本發明的天然萃取物來製造食品，例如飲料(包含酒精飲料)、水果及其加工食品(例如水果罐頭、瓶裝水果、果醬、橘皮果醬 (marmalade)等)、魚類、肉類及其加工食品(例如火腿、香腸、鹹牛肉(corned beef)等)、麵包和麵條(例如烏龍麵、蕎麥麵(buckwheat noodles)、拉麵、義大利麵、通心麵等)、果汁、各種飲料、餅乾、太妃糖、乳製品(例如優格、發酵乳、奶油、起司等)、食用植物油(edible vegetable oil)、人造黃油、植物蛋白、蒸煮食品(retort food)、冷凍食品、各種調味料(例如大醬(soybean paste)、醬油、調味醬(sauce)等)等。此外，為了將本發明的南非醉茄萃取物和西伯利亞菊萃取物之複合物用作食品添加劑，可以將其製備成粉末或濃縮物形式來使用。
本發明之用於預防或改善肥胖症之功能食品和食品組成物的使用量可根據個體差異，例如年齡、健康狀況、配方和形態進行適當調整，可用作預防或改善肥胖症之保健功能食品和食品組成物。
由上述方法獲得的組成物顯示出抑制脂肪細胞分化、抑制脂肪細胞脂質堆積和抑制胰解脂酶的作用，從而提供優異的用於預防或改善肥胖症之保健功能食品和食品。
在下文中，將通過實施例更詳細地描述本發明。這些實施例旨在更具體地說明本發明，並且對本發明所屬領域的技術人員而言是顯而易見的，根據本發明的要旨，本發明的範圍不受這些實施例的限制。
<實施例1至3>南非醉茄萃取物和西伯利亞菊萃取物之複合物的製備
將20g乾燥的南非醉茄根用研磨機粉碎後，加入15倍南非醉茄重量的80%乙醇，且通過低溫萃取法在60℃下萃取2次持續8小時。將獲得的萃取物分別混合，並將用400目過濾器過濾後得到的濾液在迴旋真空濃縮機中濃縮至60白利糖度(brix)並冷凍乾燥，以製備粉末形式的南非醉茄萃取物。此外，將50% 乙醇添加至20g乾燥的西伯利亞菊(Chrysanthemum zawadskii Herbich var.latilobum(Maxim.)Kitamura,whole plant)中，乙醇用量為乾燥的西伯利亞菊整株植物(whole plant)重量的10倍，並通過低溫萃取法在80℃下萃取2次持續4小時。將獲得的萃取物分別混合，並將用400目過濾器過濾後得到的濾液在迴旋真空濃縮機中濃縮至60白利糖度並冷凍乾燥，從而製備粉末形式的西伯利亞菊萃取物。將如上所述的粉狀南非醉茄萃取物和西伯利亞菊萃取物以下表1所示的重量比合併，以製備作為最終產品的南非醉茄萃取物和西伯利亞菊萃取物之複合物。
Figure 112107360-A0305-02-0016-1
<比較例1至6>南非醉茄萃取物和西伯利亞菊萃取物之複合物的製備
以上述實施例相同的方式製備每種萃取物，並以下表2所示的重量比混合，以製備作為最終產品的南非醉茄萃取物和西伯利亞菊萃取物之複合物。
表2
Figure 112107360-A0305-02-0017-2
<實驗例1>南非醉茄萃取物和西伯利亞菊萃取物的成分分析
為了分析南非醉茄萃取物和西伯利亞菊萃取物的主要成分含量，並對萃取物標準化，將南非醉茄萃取物(比較例5-1、比較例5-2、比較例5-3)和西伯利亞菊萃取物(比較例6-1、比較例6-2、比較例6-3)分別製備三個樣品。
使用高效液相層析法對南非醉茄萃取物的成分進行分析，且主要成分設定為睡茄皂苷IV。使用Capcellpak C18 MG(4.6mm X 250mm,5μm)的管柱，並使用1Mm磷酸鉀溶液(A)和乙腈(B)作為流動相，通過梯度法進行分析。以UV檢測器在227nm波長下檢測睡茄皂苷IV。結果如下表3所示，發現根據比較例5製備的南非醉茄萃取物中的睡茄皂苷IV的含量在3mg/g至9mg/g的範圍內。
表3
Figure 112107360-A0305-02-0018-3
使用高效液相層析法對西伯利亞菊萃取物的成分進行分析，且主要成分設定為玄參苷。使用Zorbax Eclipse plus C18(4.6mm X 250mm,5μm)的管柱，並使用含有0.1%甲酸的純化水(A)和含有0.1%甲酸的乙腈(B)作為流動相，通過梯度法進行分析。以UV檢測器在310nm波長下檢測玄參苷。結果如下表4所示，發現根據比較例6製備的西伯利亞菊萃取物中的玄參苷的含量在15mg/g至50mg/g的範圍內。
Figure 112107360-A0305-02-0018-4
<實驗例2>細胞毒性測試：WST(水溶性四唑鎓鹽(tetrazolium salt))試驗
使用小鼠來源的脂肪前驅細胞(pre-adipocytes)細胞株進行細胞毒性測試，使用實施例1至3和比較例1至6來確認它們是否表現出對脂肪前驅細胞的毒性。
為了確認對小鼠來源的脂肪前驅細胞3T3-L1的毒性，使用DMEM(達爾伯克氏改良伊格爾氏培養基(Dulbecco’s Modified Eagle Medium))培養基將細胞以5 X 104細胞/孔的濃度接種到24孔盤中，然後在37℃和5% CO2條件下培養24小時。對培養24小時的細胞，將實施例1至3和比較例1至6按濃度與培養基混合，對各孔處理，在37℃和5% CO2條件下培養24小時，然後移除培養基。將各孔以WST-1試驗溶液處理，並在培養箱中反應2小時後，使用微盤分析儀在450nm下測量吸光度，並以下式1計算細胞存活率(cell viability)。
[式1]細胞存活率(%)=[(樣品處理組的吸光度/樣品未處理組的吸光度)X 100]
Figure 112107360-A0305-02-0019-5
Figure 112107360-A0305-02-0020-6
結果如表5所示，發現實施例1至3和比較例1至6在處理濃度為60μg/mL時沒有觀察到細胞毒性，因此可以作為藥品和食品的安全原料。
<實驗例3>脂質堆積抑制：抑制脂肪細胞分化和抑制脂肪細胞內脂質堆積
為了使用實施例1至3和比較例1至6來檢查細胞水平的脂質堆積抑制效果，將小鼠來源的脂肪前驅細胞3T3-L1用於抑制脂肪細胞分化和脂肪細胞內脂肪堆積。
為了評估脂肪前驅細胞株3T3-L1細胞向脂肪細胞的誘導分化過程中的抑制分化效果，以及誘導分化後抑制脂質堆積的效果，使用DMEM(達爾伯克氏改良伊格爾氏培養基(Dulbecco’s Modified Eagle Medium))培養基將細胞以5 X 104細胞/孔的濃度接種到24孔盤中，然後在37℃和5% CO2條件下在盤中培養直到100%細胞滿度(confluency)。當3T3-L1細胞達到100%細胞滿度時，更換新的DMEM培養基並再培養2天。2天後，向孔中加入含有10% FBS、1μM地塞米松(dexamethasone)(Dex)、0.5mM 3-三異丁基-1-甲基黃嘌呤(3-isobutyl-1-methylxanthine)(IBMX)和2μg/mL胰島素(insulin)的DMEM分化誘導培養基，以誘導分化為脂肪細胞，然後將細胞在37℃和5% CO2的條件下培養2天。
2天後，每孔以含有10% FBS和2μg/mL胰島素的DMEM培養基處理並培養2天。2天後，以含有10% FBS的DMEM培養基處理每孔，每2天更換培養基並再培養6天。從分化誘導培養基的處理開始，實施例1至3和比較例1至6在每次更換培養基時與培養基混合並經濃縮處理。
脂肪細胞分化和細胞內脂質堆積完成後，每孔以10%福馬林溶液處理1小時，並將細胞在室溫下固定。細胞固定後，以60%異丙醇洗滌並進行油紅o(oil red o)染色。油紅o染色後透過顯微鏡評估脂肪細胞分化，確認分化後，將被100%異丙醇染色的脂質球(lipid globules)洗脫(elute)，並使用微盤分析儀在520nm下測量吸光度。此時，將沒有樣品的組作為對照組，並以下式2計算各樣品在脂肪細胞中的脂質堆積抑制活性(%)。
[式2]脂肪細胞中的脂質堆積抑制活性(%)=[(樣品處理組的吸光度/樣品未處理組的吸光度)X 100]
結果如圖1至2所示，發現實施例1至3與比較例1至6相比在抑制脂肪細胞分化和抑制脂肪細胞內的脂肪堆積更有效。此外，在南非醉茄萃取物和西伯利亞菊萃取物之複合物中，當混合比例為1：1至5：1(南非醉茄萃取物：西伯利亞菊萃取物)時，對抑制脂肪細胞分化和抑制脂肪細胞內脂質堆積的協同作用優異，當混合比例超出上述範圍時，發現透過抑制脂質堆積的抗肥胖症效果顯著降低。
此外，如圖3所示，當實施例2的南非醉茄萃取物和西伯利亞菊萃取物的複合物以每個濃度處理時，觀察到在脂肪細胞中抑制脂質堆積的濃度依賴性增加，從而證實通過抑制脂肪堆積的抗肥胖症功效。
<實驗例4>抑制脂質消化(digestion)和吸收：胰脂酶抑制活性
為了使用實施例1至3和比較例1至6來測定脂質吸收抑制效果，評估胰脂酶抑制活性。
胰臟脂解酶是一種將三酸甘油脂水解成單酸甘油脂和脂肪酸的酶，並有助於消化和吸收腸道中的脂質。因此，通過抑制胰臟脂解酶的活性，使脂質在體內不被消化或吸收而排出體外，來達到抗肥胖症的功效。
分別將實施例1至3和比較例1至6溶解至具有2.5mg/mL豬胰脂肪酶(porcine pancreatic lipase)的酶緩衝溶液(10mM MOPS,1mM EDTA,pH 6.8)中到最終濃度為100μg/mL，以Tris-HCL緩衝溶液(pH 7.0)混合，並在37℃下反應15分鐘。然後，將其與溶解在N,N-二甲基甲醯胺(N,N-Dimethylformamide,DMF)中的10mM濃度的對-硝基苯基丁酸酯(p-nitrophenyl butyrate,p-NPB)的基質混合，在37℃下反應30分鐘，接著將其放入96孔盤中並使用微盤分析儀在405nm下測量吸光度。此時，將沒有樣品的組作為對照組，並以如下式3所示計算各樣品的胰脂酶抑制活性(%)。
[式3]胰脂肪分解(lipolysis)抑制活性(%)=[{1-((樣品處理組的吸光度-樣本處理組的空白吸光度)/(對照組的吸光度-對照組的空白吸光度))}X 100]
Figure 112107360-A0305-02-0022-7
Figure 112107360-A0305-02-0023-8
結果如表6所示，發現當以實施例1至3各100μg/mL處理時，胰解脂酶抑制活性為21.92%至28.07%，與比較例1至6各100μg/mL處理時的胰解脂酶抑制活性5.26%至11.47%相比，具有顯著優異性。其中，發現實施例2的胰解脂酶抑制活性最優異，且證實了通過抑制脂質吸收具有抗肥胖症功效。
以上已經對本發明的具體部分進行詳細描述，對本領域的技術人員來說，清楚的是這些具體描述僅為較佳的實施例，且本發明的範圍不限於此。因此，本發明的實質範圍將透過所附申請專利範圍和其等效物來定義。

Claims (15)

  1. 一種用於預防或治療肥胖症的醫藥組成物，包含作為一活性成分之一南非醉茄(睡茄)(Ashwagandha(Withania somnifera))萃取物和一西伯利亞菊(Chrysanthemum zawadskii Herbich var.latilobum(Maxim.)Kitamura)萃取物之一複合物；其中，該南非醉茄萃取物包含3至9mg/g的睡茄皂苷IV，且該西伯利亞菊萃取物包含15至50mg/g的玄參苷；以及其中，該南非醉茄萃取物和該西伯利亞菊萃取物以1：1至5：1(南非醉茄萃取物：西伯利亞菊萃取物)的重量比混合在該複合物中。
  2. 如請求項1所述之醫藥組成物，其中，該南非醉茄萃取物和該西伯利亞菊萃取物是以一溶劑萃取而得，該溶劑選自由水、具有1至4個碳原子的低級醇及其混合溶劑所組成之群組。
  3. 如請求項1所述之醫藥組成物，其中，該南非醉茄萃取物和該西伯利亞菊萃取物在40℃至100℃下萃取而得。
  4. 如請求項1所述之醫藥組成物，其中，該南非醉茄萃取物和該西伯利亞菊萃取物的該複合物為乾粉。
  5. 如請求項1所述之醫藥組成物，其中，該南非醉茄萃取物和該西伯利亞菊萃取物以1：1、3：1或5：1(南非醉茄萃取物：西伯利亞菊萃取物)的重量比混合在該複合物中。
  6. 如請求項1所述之醫藥組成物，其中，該南非醉茄萃取物和該西伯利亞菊萃取物之該複合物具有抑制脂肪細胞分化、抑制脂肪細胞脂質堆積和抑制胰脂酶活性的作用。
  7. 一種醫藥產物，包含如請求項1至6中任一項所述之醫藥組成物。
  8. 一種用於預防或改善肥胖症之食品組成物，包含作為一活性成分之一南非醉茄(睡茄)萃取物(Ashwagandha(Withania somnifera))以及一西伯利亞菊(Chrysanthemum zawadskii Herbich var.latilobum(Maxim.)Kitamura)萃取物之一複合物；其中，該南非醉茄萃取物包含3至9mg/g的睡茄皂苷IV，且該西伯利亞菊萃取物包含15至50mg/g的玄參苷；以及其中，該南非醉茄萃取物和該西伯利亞菊萃取物以1：1至5：1(南非醉茄萃取物：西伯利亞菊萃取物)的重量比混合在該複合物中。
  9. 如請求項8所述之食品組成物，其中，該南非醉茄萃取物和該西伯利亞菊萃取物是以一溶劑萃取而得，該溶劑選自由水、具有1至4個碳原子的低級醇及其混合溶劑所組成之群組。
  10. 如請求項8所述之食品組成物，其中，該南非醉茄萃取物和該西伯利亞菊萃取物在40℃至100℃下萃取而得。
  11. 如請求項8所述之食品組成物，其中，該南非醉茄萃取物和該西伯利亞菊萃取物的該複合物為乾粉。
  12. 如請求項8所述之食品組成物，其中，該南非醉茄萃取物和該西伯利亞菊萃取物以1：1、3：1或5：1(南非醉茄萃取物：西伯利亞菊萃取物)的重量比混合在該複合物中。
  13. 如請求項8所述之食品組成物，其中，該南非醉茄萃取物和該西伯利亞菊萃取物之該複合物具有抑制脂肪細胞分化、抑制脂肪細胞脂質堆積和抑制胰脂酶活性的作用。
  14. 一種保健功能食品，包含如請求項8至13中任一項所述之食品組成物。
  15. 一種食品，包含如請求項8至13中任一項所述之食品組成物。
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