KR102155113B1 - 고혈압 치료용 약학적 조성물 및 식품 조성물 - Google Patents
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Abstract
화학물질이 아닌 천연물질에서 추출된 추출물을 유효성분으로 포함하여 고혈압을 예방 및 치료하는데 효과적인 약학적 조성물이 개시된다. 본 발명은 비티스 라브루스카나 잎 추출물을 포함하는 고혈압의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
Description
본 발명은 고혈압 치료용 약학적 조성물에 관한 것으로 보다 상세하게는 천연 추출물을 포함하는 고혈압 치료용 조성물에 관한 것이다.
고혈압은 18세 이상의 성인에서 수축기 혈압이 140mmHg 이상이거나 확장기 혈압이 90 mmHg 이상인 경우를 말하며, 고혈압은 크게 두 가지로 분류할 수 있는데, 원인질환이 밝혀져 있고 이에 의해 고혈압이 발생하는 경우를 이차성 고혈압이라고 하며, 원인질환이 발견되지 않는 경우를 본태성(일차성) 고혈압이라고 한다. 전체 고혈압 환자의 약 95%는 본태성 고혈압으로, 본태성 고혈압이 생기는 근본적인 이유는 명확하지 않다.
이러한 고혈압을 치료하기 위한 약으로 칼슘 통로 차단제, 이뇨제, 엔지오텐신전환 효소 억제제 등이 있으나, 화학 합성 방법 등을 통하여 제조되었던 고혈압 제제는 두통, 간질환, 안면홍조, 방실 차단, 통풍 등의 부작용으로 인한 문제가 있었다. 이러한 문제점을 해결하기 위해 최근에는 천연 물질을 이용하여 고혈압을 예방 및 치료할 수 있는 연구가 지속되고 있다.
한편, 현재 우리나라에서 가장 많이 재배되고 있는 포도 품종은 미국종 포도(Vitis labruca BAILEY)인 캠벨 얼리(Campbell early)이다. 미국 오하이오주에서 켐벨 씨가 무어 얼리(moore early)(Vitis labruca L)에 벨비디어(belvidere)×머스캣 함부르크(muscat hamburg)(Vitis vinifera L)를 교배하여 육성한 품종으로 1892년에 명명한 품종으로 우리나라에는 1908년 도입되었다. 미네랄이 풍부한 포도는 알칼리성 식품으로 전화당, 주석산, 구연산, 칼륨 및 철분 등과 비타민 A, B1, B2, D 등 영양이 풍부하여 피부미용, 소화불량, 식욕부진에 효과를 나타낸다고 보고되었다.
본 출원인에게 허여된 한국등록특허 제1556524호에서 비티스 라브루스카나 잎의 추출물을 이용한 조성물에 대하여 제시하고 있으나, 비티스 라브루스카나 잎의 추출물을 고혈압이 아닌 혈전 질환 치료용으로 이용하고 있다.
따라서, 본 발명은 상기 문제를 해결하기 위해 안출된 것으로, 화학물질이 아닌 천연물질에서 추출된 추출물을 유효성분으로 포함하여 고혈압을 예방 및 치료하는데 효과적인 약학적 조성물을 제공하고자 한다.
또한, 본 발명의 다른 목적은 고혈압을 예방 및 개선하는데 효과적인 식품 조성물을 제공하고자 한다.
상기 문제를 해결하기 위하여 본 발명은 비티스 라브루스카나 잎 추출물을 포함하는 고혈압의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
또한, 상기 추출물은 물, 탄소수 1 내지 6인 알코올 및 아세트산으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 용매로 추출한 것임을 특징으로 하는 조성물을 제공한다.
또한, 상기 고혈압은 본태성 고혈압인 것을 특징으로 하는 고혈압의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
또한, 비티스 라브루스카나 잎 추출물을 포함하는 고혈압의 예방 또는 개선용 식품 조성물을 제공한다.
본 발명에 따르면, 혈관 이완, 혈압 강하 등의 효능이 있는 비티스 라브루스카나 잎 추출물을 포함함으로써 고혈압을 예방 및 치료할 수 있는 약학적 조성물 및 식품 조성물을 제공할 수 있다.
도 1a는 본 발명에 따른 조성물의 농도에 따른 흉부 대동맥의 혈관 이완률을 나타낸 그래프,
도 1b는 본 발명에 따른 조성물을 1×10-3 g/ml 농도로 처리한 경우의 경우 흉부 대동맥의 혈관 내피세포 존재 유/무에 따른 혈관 이완률(혈관 내피세포 의존성)을 나타낸 그래프,
도 2a는 아세틸콜린 농도에 따른 각군의 흉부 대동맥의 혈관 이완률을 나타낸 그래프,
도 2b는 각군을 3×10-7 g/ml 농도로 처리한 경우의 흉부 대동맥의 혈관 이완률을 나타낸 그래프,
도 3a는 각 군에 따른 수축기 혈압 변화를 측정한 결과를 나타낸 그래프이고, 도 3b는 각 군에 따른 3주차의 수축기 혈압을 나타낸 그래프
도 4a는 정상대조군의 흉부 대동맥을 촬영한 사진,
도 4b는 고혈압군의 흉부 대동맥을 촬영한 사진,
도 4c는 양성대조군의 흉부 대동맥을 촬영한 사진,
도 4d는 추출물군의 흉부 대동맥을 촬영한 사진,
도 5는 각군의 흉부 대동맥의 두께를 측정한 결과를 나타낸 그래프이다.
도 1b는 본 발명에 따른 조성물을 1×10-3 g/ml 농도로 처리한 경우의 경우 흉부 대동맥의 혈관 내피세포 존재 유/무에 따른 혈관 이완률(혈관 내피세포 의존성)을 나타낸 그래프,
도 2a는 아세틸콜린 농도에 따른 각군의 흉부 대동맥의 혈관 이완률을 나타낸 그래프,
도 2b는 각군을 3×10-7 g/ml 농도로 처리한 경우의 흉부 대동맥의 혈관 이완률을 나타낸 그래프,
도 3a는 각 군에 따른 수축기 혈압 변화를 측정한 결과를 나타낸 그래프이고, 도 3b는 각 군에 따른 3주차의 수축기 혈압을 나타낸 그래프
도 4a는 정상대조군의 흉부 대동맥을 촬영한 사진,
도 4b는 고혈압군의 흉부 대동맥을 촬영한 사진,
도 4c는 양성대조군의 흉부 대동맥을 촬영한 사진,
도 4d는 추출물군의 흉부 대동맥을 촬영한 사진,
도 5는 각군의 흉부 대동맥의 두께를 측정한 결과를 나타낸 그래프이다.
이하 바람직한 실시예를 통하여 본 발명을 상세히 설명하기로 한다. 이에 앞서, 본 명세서 및 청구범위에 사용된 용어나 단어는 통상적이거나 사전적인 의미로 한정해서 해석되어서는 아니 되며, 발명자는 그 자신의 발명을 가장 최선의 방법으로 설명하기 위해 용어의 개념을 적절하게 정의할 수 있다는 원칙에 입각하여, 본 발명의 기술적 사상에 부합하는 의미와 개념으로 해석되어야만 한다. 따라서, 본 명세서에 기재된 실시예의 구성은 본 발명의 가장 바람직한 일실시예에 불과할 뿐이고 본 발명의 기술적 사상을 모두 대변하는 것은 아니므로, 본 출원시점에 있어서 이들을 대체할 수 있는 다양한 균등물과 변형예들이 있을 수 있음을 이해하여야 한다. 또한, 명세서 전체에서, 어떤 부분이 어떤 구성요소를 "포함"한다고 할 때, 이는 특별히 반대되는 기재가 없는 한, 다른 구성요소를 제외하는 것이 아니라 다른 구성요소를 더 포함할 수 있음을 의미한다.
본 발명자들은 고혈압을 예방 및 치료할 수 있는 물질을 발굴하기 위해 예의 연구를 거듭한 결과, 비티스 라브루스카나 잎 추출물이 혈전 질환뿐만 아니라 혈관 이완, 혈압 강하 등의 효과가 있어 고혈압을 예방 및 치료할 수 있음을 발견하고 본 발명에 이르게 되었다.
본 발명에서 사용되는 용어 "예방"은, 본 발명의 추출물을 포함하는 조성물의 투여로 질환을 억제 또는 지연시키는 모든 행위를 의미한다. 또한, 본 발명에서 사용되는 용어 "치료"는, 본 발명의 추출물을 포함하는 조성물의 투여로 질환의 증세가 호전되거나 완치되는 모든 행위를 의미한다. 또한, 본 발명에서 "개선"은 본 발명의 추출물을 포함하는 조성물의 투여로 질환의 증세가 호전되는 모든 행위를 의미한다.
본 발명은 비티스 라브루스카나 잎 추출물을 포함하는 고혈압의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 개시한다.
본 발명에서 상기 고혈압은 본태성 고혈압일 수 있으며, 상기 본태성 고혈압은 원인질환이 발견되지 않는 경우로, 전체 고혈압 환자의 약 95%는 본태성 고혈압이다.
본 발명에서 상기 비티스 라브루스카나는 무어 얼리(Moore Early)(Vitis labrusca L; 미국종)와 머스캣 함부르크(Muscat Hamburg)(Vitis vinifera L; 유럽종)를 교배하여 육성한 품종으로, 일반적으로 미국종에 분류하고 미국계의 재배 품종을 모두 포함한다. 대표적으로 캠벨얼리, 델라웨어 등이 있으며, 이 밖에 일본에서 육성한 거봉, 머스켓 베일리어 등이 있다.
상기 비티스 라브루스카나 잎을 용매로 추출한 추출물은 혈관 이완 효능, 혈압 강하 효능, 혈관 병변 회복 효능 등이 있음이 확인되었고, 다른 부위의 추출물보다 고혈압의 예방 또는 치료 효과가 우수하다.
상기 추출물은 당업계의 통상적인 방법으로 하여 추출할 수 있으며, 추출용매는 물, 탄소수 1 내지 6인 알코올 및 아세트산으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 용매일 수 있고, 바람직하게는 40~60 부피% 알코올 수용액에 및 1~5 부피% 아세트산이 혼합된 혼합용액일 수 있고, 더욱 바람직하게는 45~55 부피% 알코올 수용액에 2~4 부피% 아세트산이 혼합된 혼합용액일 수 있다.
상기 추출 용매는 상기 비티스 라브루스카나 잎 중량 대비 1~50 배 중량일 수 있고, 바람직하게는 10~30 배 중량일 수 있다.
본 발명에서의 추출 방법은 당업계에 공지된 것이면 제한 없이 사용할 수 있으며, 그 예로 냉침, 열수 추출, 초음파 추출, 환류냉각 추출 등의 방법이 있으나 여기에 국한되는 것은 아니며, 상기 추출물의 형태나 성상에는 제한이 없으며, 용액, 농축물일 수도 있고, 추출물 제조에 사용된 용매를 제거한 고형분 또는 분말일 수도 있다.
본 발명에서 상기 약학적 조성물은 하기와 같은 제조공정으로 제조될 수 있다.
비티스 라브루스카나 잎에 1~50 배 중량의 추출 용매를 첨가하여 70 내지 100℃, 바람직하게는 80 내지 90℃에서 1 내지 5시간, 바람직하게는 2 내지 4시간 동안, 1 내지 5회, 바람직하게는 1 내지 3회 반복하여 추출하고, 추출 후 발생한 잔사를 동일한 조건으로 반복 추출한다. 상기 방법으로 제조된 추출액을 여지로 감압 여과한 다음, 여과액을 80℃ 이하, 바람직하게는 60℃ 이하에서 감압 농축 및 건조하여 본 발명에 따른 조성물을 제조할 수 있다.
본 발명에서 상기 조성물이 약학적 조성물의 형태로 제공이 되는 경우에는, 본 발명의 상기 혼합물 이외에 하나 이상의 약학적으로 허용되는 담체, 부형제 또는 희석제를 추가로 함유할 수 있다. 상기에서 "약학적으로 허용되는"이란 생리학적으로 허용되고 인간에게 투여될 때, 활성성분의 작용을 저해하지 않으며 통상적으로 위장 장애, 현기증과 같은 알레르기 반응 또는 이와 유사한 반응을 일으키지 않는 비독성의 조성물을 말한다.
약학적으로 허용되는 담체로는 예컨대, 경구 투여용 담체 또는 비경구 투여용 담체를 추가로 포함할 수 있다. 경구 투여용 담체는 락토스, 전분, 셀룰로스 유도체, 마그네슘 스테아레이트, 스테아르산 등을 포함할 수 있다. 아울러, 펩티드 제제에 대한 경구투여용으로 사용되는 다양한 약물전달물질을 포함할 수 있다. 또한, 비경구 투여용 담체는 물, 적합한 오일, 식염수, 수성 글루코오스 및 글리콜 등을 포함할 수 있으며, 안정화제 및 보존제를 추가로 포함할 수 있다. 적합한 안정화제로는 아황산수소나트륨, 아황산나트륨 또는 아스코르브산과 같은 항산화제가 있다. 적합한 보존제로는 벤즈알코늄 클로라이드, 메틸- 또는 프로필-파라벤 및 클로로부탄올이 있다. 본 발명의 약학적 조성물은 상기 성분들 이외에 윤활제, 습윤제, 감미제, 향미제, 유화제, 현택제 등을 추가로 포함할 수 있다. 그 밖의 약학적으로 허용되는 담체 및 제제는 다음의 문헌에 기재되어 있는 것을 참고로 할 수 있다(Remington's Pharmaceutical Sciences, 19th ed., Mack Publishing Company, Easton, PA, 1995).
본 발명의 조성물은 인간을 비롯한 포유동물에 어떠한 방법으로도 투여할 수 있다. 예를 들면, 경구 또는 비경구적으로 투여할 수 있다. 비경구적인 투여방법으로는 이에 한정되지는 않으나, 정맥내, 근육내, 동맥내, 골수내, 경막내, 심장내, 경피, 피하, 복강내, 비강내, 장관, 국소, 설하 또는 직장내 투여일 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물은 상술한 바와 같은 투여 경로에 따라 경구 투여용 또는 비경구 투여용 제제로 제형화할 수 있다.
경구 투여용 제제의 경우, 본 발명의 조성물은 분말, 과립, 정제, 환제, 당의정제, 캡슐제, 액제, 겔제, 시럽제, 슬러리제, 현탁액 등으로 당업계에 공지된 방법을 이용하여 제형화될 수 있다. 예를 들어, 경구용 제제는 활성성분을 고체 부형제와 배합한 다음 이를 분쇄하고 적합한 보조제를 첨가한 후 과립 혼합물로 가공함으로써 정제 또는 당의정제를 수득할 수 있다. 적합한 부형제의 예로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로즈, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨 및 말티톨 등을 포함하는 당류와 옥수수 전분, 밀 전분, 쌀 전분 및 감자 전분 등을 포함하는 전분류, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 나트륨 카르복시메틸셀룰로오즈 및 하이드록시프로필메틸-셀룰로즈 등을 포함하는 셀룰로즈류, 젤라틴, 폴리비닐피롤리돈 등과 같은 충전제가 포함될 수 있다. 또한, 경우에 따라 가교결합 폴리비닐피롤리돈, 한천, 알긴산 또는 나트륨 알기네이트 등을 붕해제로 첨가할 수 있다. 나아가, 본 발명의 약학적 조성물은 항응집제, 윤활제, 습윤제, 향료, 유화제 및 방부제 등을 추가로 포함할 수 있다.
비경구 투여용 제제의 경우에는 주사제, 크림제, 로션제, 외용연고제, 오일제, 보습제, 겔제, 에어로졸 및 비강 흡입제의 형태로 당업계에 공지된 방법으로 제형화할 수 있다. 이들 제형은 모든 제약 화학에 일반적으로 공지된 처방서인 문헌(Remington's Pharmaceutical Science, 19th ed., Mack Publishing Company, Easton, PA,1995)에 기재되어 있다.
본 발명의 조성물의 총 유효량은 단일 투여량(single dose)으로 환자에게 투여될 수 있으며, 다중 투여량(multiple dose)으로 장기간 투여되는 분할 치료 방법(fractionated treatment protocol)에 의해 투여될 수 있다. 본 발명의 약학적 조성물은 질환의 정도에 따라 유효성분의 함량을 달리할 수 있다. 바람직하게 본 발명의 약학적 조성물의 바람직한 전체 용량은 1일당 환자 체중 1㎏당 약 0.01㎍ 내지 10,000㎎, 가장 바람직하게는 0.1㎍ 내지 1,000㎎일 수 있다. 그러나 상기 약학적 조성물의 용량은 제제화 방법, 투여 경로 및 치료 횟수뿐만 아니라 환자의 연령, 체중, 건강 상태, 성별, 질환의 중증도, 식이 및 배설율 등 다양한 요인들을 고려하여 환자에 대한 유효투여량이 결정되는 것이므로, 이러한 점을 고려할 때 당 분야의 통상적인 지식을 가진 자라면 본 발명의 조성물의 적절한 유효 투여량을 결정할 수 있을 것이다. 본 발명에 따른 약학적 조성물은 본 발명의 효과를 보이는 한 그 제형, 투여 경로 및 투여 방법에 특별히 제한되지 아니한다.
본 발명의 다른 양태인 비티스 라브루스카나 잎 추출물을 포함하는 고혈압의 예방 또는 개선용 식품 조성물을 제공한다.
본 발명의 상기 식품 조성물은 기능성 식품(functional food), 영양 보조제(nutritional supplement), 건강식품(health food)및 식품 첨가제(food additives)등의 모든 형태를 포함한다. 상기 유형의 식품 조성물은 당업계에 공지된 통상적인 방법에 따라 다양한 형태로 제조할 수 있다.
예를 들면, 건강식품으로는 상기 조성물 자체를 차, 주스 및 드링크의 형태로 제조하여 음용하도록 하거나, 과립화, 캡슐화 및 분말화하여 섭취할 수 있다.
또한, 기능성 식품으로는 음료(알콜성 음료 포함), 과실 및 그의 가공식품(예: 과일통조림, 병조림, 잼, 마말레이드 등), 어류, 육류, 및 그 가공식품(예: 햄, 소시지 콘비프 등), 빵류 및 면류(예: 우동, 메밀국수, 라면, 스파게티, 마카로니 등), 과즙, 각종 드링크, 쿠키, 엿, 유제품(예: 버터, 치즈 등), 식용식물유지, 마아가린, 식물성 단백질, 레토르트 식품, 냉동식품, 각종 조미료(예: 된장, 간장, 소스 등)등에 추출물을 첨가하여 제조할 수 있다. 또한, 본 발명의 조성물을 식품 첨가제의 형태로 사용하기 위해서는 분말 또는 농축액 형태로 제조하여 사용할 수 있다.
본 발명의 식품용 조성물 중 상기 추출물의 바람직한 함량은 식품용 조성물 총 중량에 대하여 0.001 내지 50% 일 수 있으며, 바람직하게는 0.1 내지 50% 범위로 함유될 수 있다.
이하, 실시예 및 실험예를 들어 본 발명을 상세히 설명한다.
실시예
시중에서 구입한 비티스 라브루스카나 잎을 세척하여 이물질을 제거한 후 건조하여 분쇄한다. 상기 분쇄한 비티스 라브루스카나 잎 100 g에 50 부피% 에탄올 수용액 및 3 부피%의 아세트산을 혼합한 추출용매 2 L를 첨가하여 80~90℃에서 3시간씩 2회 반복 추출하고, 1㎛ 크기의 마이크로필터를 이용하여 여과한다. 여과된 액을 60℃ 이하에서 감압농축 및 건조하여 혼합분말 형태의 약학적 조성물을 제조하였다.
비교예
시판중인 항고혈압제인 로사르탄 칼륨(Losartan potassium, Santa cruz biotechnology, Dallas, TX, USA)을 준비하였다.
시험동물 및 시험설계
시험설계 1
시험관 내(ex vivo) 상태 내에서의 혈관 이완 효과를 확인하기 위하여, 일반 수컷 쥐(SD Rat, 8주령)을 준비하였다.
시험설계 2
생체내 (in vivo)에서의 해당 조성물의 체내 기능 효과를 확인하기 위하여 하기와 같이 시험을 설계하였다.
일반 수컷 쥐 10마리(WKY, 5주령)(Japan, Charles river사) 및 본태성 고혈압 수컷 쥐 29마리(SHR, 5주령)(Japan, Charles river사)을 공시하여 1주간 순화시킨 후 초기 혈압을 기준으로 난괴법에 따라 4군으로 나누고, 3주간 사육하였다.
시험군은 ⅰ)일반 수컷 쥐 10마리에 증류수 1 ml를 일정 시간에 주 7회 투입한 정상대조군(WKY), ⅱ)본태성 고혈압 수컷 쥐 15마리에 증류수 1 ml를 일정 시간에 주 7회 투입한 고혈압군(SHR), ⅲ) 본태성 고혈압 수컷 쥐 12마리에게 상기 비교예의 로사르탄 칼륨을 1ml의 증류수에 20 mg/kg을 녹여 일정 시간에 주 7회 투입한 양성대조군(SHR+Losa) 및 ⅳ) 본태성 고혈압 수컷 쥐 12마리에게 상기 실시예에서 제조한 조성물을 1ml의 증류수에 100 mg/kg을 녹여 일정 시간에 주 7회 투입한 추출물군(SHR+HP1)로 설계하였다.
시험예
1
본 발명에 따른 조성물의 시험관 내(ex vivo) 실혐 효과인 혈관 이완 효과를 확인하기 위하여 하기와 같은 방법으로 상기 시험설계 1에 따른 일반 쥐의 혈관 절편을 이용하여 내피세포 우무 상태에서의 혈관 이완률을 측정하였고, 그에 따른 결과를 도 1a 및 도 1b에 나타내었다.
시험설계 1에 따른 일반 쥐의 흉부대동맥을 분리한 후, 4℃ Krebs 용액(118 mM NaCl, 47 mM KCl, 11 mM MgSO4, 12 mM KH2PO4, 15 mM CaCl2, 25 mM NaHCO3, 10 mM glucose, pH 7.4)으로 지방을 제거한 후, 3 mm의 크기로 일정하게 조각 내어 흉부대동맥 절편(endo(+))을 제조하였고, 상기 절편 중 일부(endo(-))는 혈관 내에 200 ㎛의 스틸(steel)을 넣어 물리적인 방법으로 혈관 내피세포를 제거하였다.
이후, Krebs 용액(37℃)이 들어있는 장기 수조를 준비하여 95% 산소(O2) 및 5% 이산화탄소(CO2)의 혼합가스로 포화시켰다. 이때 열 순환장치(heat circulator, Model CW-10GL, JEIO TECH, Korea)에 의해 일정한 온도를 유지했다.
제작된 상기 흉부대동맥 절편의 한쪽 끝을 상기 장기 수조(organ bath)에 고정시키고, 다른 쪽 끝은 힘 전위 변화기(force displacement transducer, Grass FT 03,GRASS Instrument, M, USA)에 연결하여 등척성 장력(isometric tension)을 생리기록계(Grass Model 7E, Grass Instrument, MA, USA)로 측정했다.
등척성 장력을 측정한 후, 혈관 이완 반응을 실험하였다. 상기 혈관을 1 g의 힘까지 당겨 팽팽한 상태로 혈관을 안정시켰다. 안정기에 들어가면 1×10-6 M 페닐에프린(phenylephrine, PE)을 처리하여 혈관을 수축시켰다. 평형에 도달한 후 상기 실시예에서 제조된 조성물을 1×10-7 g/ml, 3×10-7 g/ml, 1×10-6 g/ml, 3×10-6 g/ml, 1×10-5 g/ml, 3×10-5 g/ml, 1×10-4 g/ml, 3×10-4 g/ml 및 1×10-3 g/ml의 총 9개의 농도도 처리하여 혈관 이완효과 효과를 측정하였다.
도 1a는 본 발명에 따른 조성물의 농도에 따른 흉부 대동맥의 혈관 이완률을 나타낸 그래프이고, 도 1b는 본 발명에 따른 조성물을 1×10-3 g/ml 농도로 처리한 경우의 흉부 대동맥의 혈관 이완률을 나타낸 그래프이다.
도 1a 및 1b를 참조하면, 흉부 대동맥의 혈관 이완률은 본 발명에 따른 조성물의 농도에 의존적이며, 혈관 내피세포를 제거한 경우(endo(-))에는 혈관 이완률이 매우 저조한 것을 확인할 수 있다. 이로부터 본 발명에 따른 조성물은 혈관 이완 효과가 있음을 확인할 수 있다.
시험예
2
본 발명에 따른 조성물의 생체 내(in vivo)의 실험 결과인 혈관 내피 손상 억제 효과를 확인하기 위하여 상기 시험설계 2에 따른 4군의 쥐를 이용하여 하기와 같은 방법으로 실험을 진행하였고, 그에 따른 결과를 도 2a 및 도 2b에 나타내었다.
사육이 끝난 각군의 쥐의 흉부대동맥을 분리한 후, 4℃ Krebs 용액(118 mM NaCl, 47 mM KCl, 11 mM MgSO4, 12 mM KH2PO4, 15 mM CaCl2, 25 mM NaHCO3, 10 mM glucose, pH 7.4)으로 지방을 제거한 후, 3 mm의 크기로 일정하게 조각 내어 흉부대동맥 절편(endo(+))을 제조하였다.
이후, Krebs 용액(37℃)이 들어있는 장기 수조를 준비하여 95% 산소(O2) 및 5% 이산화탄소(CO2)의 혼합가스로 포화시켰다. 이때 열 순환장치(heat circulator, Model CW-10GL, JEIO TECH, Korea)에 의해 일정한 온도를 유지했다.
제작된 상기 흉부대동맥 절편의 한쪽 끝을 상기 장기 수조(organ bath)에 고정시키고, 다른 쪽 끝은 힘 전위 변화기(force displacement transducer, Grass FT 03,GRASS Instrument, M, USA)에 연결하여 등척성 장력(isometric tension)을 생리기록계(Grass Model 7E, Grass Instrument, MA, USA)로 측정했다.
등척성 장력을 측정한 후, 혈관 이완 반응을 실험하였다. 상기 혈관을 1 g의 힘까지 당겨 팽팽한 상태로 혈관을 안정시켰다. 안정기에 들어가면 1×10-6 M 페닐에프린(phenylephrine, PE)을 처리하여 혈관을 수축시켰다. 평형에 도달한 후 아세틸콜린(Acetylcholine, ACh)을 1×10-10 M, 3×10-10 M, 1×10-9 M, 3×10-9 M, 1×10-8 M, 3×10-8 M, 1×10-7 M 및 3×10-7 M의 총 8개의 농도도 처리하여 혈관 이완효과 효과를 측정하였다.
도 2a는 아세틸콜린 농도에 따른 각군의 흉부 대동맥의 혈관 이완률을 나타낸 그래프이고, 도 2b는 각군을 3×10-7 g/ml 농도로 처리한 경우의 흉부 대동맥의 혈관 이완률을 나타낸 그래프이다.
도 2a 및 도 2b를 참조하면, 정상대조군은 85.23±3.15%의 이완효과를 보였으며, 그에 비하여 고혈압군은 50.72±2.53%의 이완효과를 보임으로써 혈관 손상이 일어났음을 확인할 수 있었고, 양성대조군과 추출물군은 각각 83.24±1.58% 및 89.23±3.25%의 이완효과를 보인 것으로 개선효과가 있음을 확인할 수 있었다. 따라서 본 발명에 따른 조성물은 고혈압에 있어서 혈관 기능이상을 개선시키는 효능이 있음을 확인할 수 있다.
시험예
3
본 발명에 따른 조성물의 체중 변화를 측정하기 위하여 상기 시험설계 2에 따른 4군의 쥐를 이용하여 하기와 같은 방법으로 몸무게를 측정하고, 그에 따른 결과를 표 1에 나타내었다.
정상대조군, 고혈압군, 양성대조군 및 추출물 군을 1주간의 적응기간 및 3주간의 약물투여기간 동안 총 4번의 체중을 측정하였다.
상기 표 1을 참조하면 각 군간의 유의적인 차이는 보이지 않았다.
시험예 4
본 발명에 따른 조성물의 혈압 강하 효능을 확인하기 위하여 상기 시험설계 2에 따른 4군의 쥐를 이용하여 하기와 같은 방법으로 혈압변화를 측정하였고, 그에 따른 결과를 도 3a, 도 3b 및 표 2에 나타내었다.
각군의 동물을 혈압측정용 용기에 고정한 후 37℃로 설정된 warming plat에 올려놓고 15분간 안정화시킨 후 Non-invasive Blood Pressure System (CODA® High Throughput System, Kent Scientific corporation, Torrington, CT, USA)를 이용하여 꼬리정맥에서 수축기 혈압(syspolic bloos pressure, SBP), 확장기 혈압(diastolic blood pressure, DBP), 평균동맥압 (mean arterial pressure, MAP), 심박동수(Heart rate), 심장 내 혈류속도(flow) 및 심장 내 혈액량(volume)을 측정하였으며, 10회 이상 반복 측정하여 평균값을 산출하였고, 0~3주간 주 1회씩 총 4회를 측정하였다.
도 3a는 각 군에 따른 수축기 혈압 변화를 측정한 결과를 나타낸 그래프이고, 도 3b는 각 군에 따른 3주차의 수축기 혈압을 나타낸 그래프이다.
상기 표 2, 도 3a 및 도 3b를 참조하면, 사육기간 동안 정상대조군에 비하여 고혈압군의 수축기 혈압(SBP)는 꾸준히 증가하였으며, 양성대조군과 추출물은 수축기 혈압, 심박동수 및 심장 내 혈액량이 유의적으로 감소하였고, 이로부터 본 발명에 따른 조성물은 수축기 혈압을 감소시키는 효과가 있음을 확인할 수 있다.
시험예 5
본 발명에 따른 조성물의 고혈압 증후 개선 효능을 확인하기 위하여 상기 시험설계 2에 따른 4군의 쥐를 이용하여 하기와 같은 방법으로 심장의 무게를 측정하였고, 그에 따른 결과를 표 3에 나타내었다.
각군의 동물을 사육이 끝난 3주 뒤에 약 12시간 절식시키고, 흡입 마취기를 이용하여 마취한 후 개복하여 심장을 적출하였다. 적출된 심장을 저온(4℃ 이하 임의기재)의 생리식염수로 세척하여 트리밍(trimming)한 후 여과지로 표면의 수분을 제거하고 무게를 측정하였다.
고혈압 상태가 되면 심장이 비후해 지는 현상이 발생하게 되는데, 상기 표 3을 참조하면 고혈압군에서 심장의 무게가 유의적으로 증가한 것을 확인할 수 있고, 좌심실의 무게가 증가한 것으로 보아 고혈압 발생으로 인해 심장 비대현상이 발생한 것을 알 수 있다. 본 발명의 조성물이 투입된 추출물군은 전체 심장의 무게가 유의적으로 감소한 것으로 보아 고혈압 증상을 개선시키는 효과가 있음을 알 수 있다.
시험예 6
본 발명에 따른 조성물의 혈관 조직 변화를 관찰하기 위하여 상기 시험설계 2에 따른 4군의 쥐를 이용하여 하기와 같은 방법으로 실험을 진행하였고, 그에 따른 결과를 도 4a 내지 도 4b 및 도 5에 나타내었다.
각군의 동물을 사육이 끝난 3주 뒤에 약 12시간 절식시키고, 흡입 마취기를 이용하여 마취한 후 개복하여 흉부 대동맥을 적출하였다. 흉부 대동맥을 10% 포르말린(formalin) 용액에 3일간 고정시킨 후, 수세하여 조직 내에 남아있는 포르말린을 제거하였다. 제거 후, 50 부피%, 60 부피%, 70 부피%, 80 부피%, 90 부피% 및 100 부피% 알코올 순으로 탈수하고, 알코올:자일렌의 비욜율 각각 2;1, 1:1, 1:2로 1시간씩 처리하여 투명화 과정을 실시한 후 파라핀을 이용하여 포매하여 블록을 제작하였다. 제작된 파라핀 블록을 회전형 박절기(microtome; Thermo Electron Corporation, Pittsburg, PA)를 사용하여 6-7㎛으로 자른 뒤 헤마토실린((Harris hematoxylin solution)(Sigma, USA)) 및 에오신(eosin Y solution)(Muto, Japan)(H&E)으로 염색하였다. 염색 후 광학현미경(Eclipse Ti-u, Nikon, Japan)으로 400배 시야에서 염색된 조각을 관찰하여 사진을 촬영하고, 흉부 대동맥의 두께를 측정하였다.
도 4a는 정상대조군의 흉부 대동맥을 촬영한 사진이고, 도 4b는 고혈압군의 흉부 대동맥을 촬영한 사진이고, 도 4c는 양성대조군의 흉부 대동맥을 촬영한 사진이고, 도 4d는 추출물군의 흉부 대동맥을 촬영한 사진이고, 도 5는 각군의 흉부 대동맥의 두께를 측정한 결과를 나타낸 그래프이다.
도 4a 내지 도 4d 및 도 5를 참고하면, 정상대조군에서는 혈관병변이 나타나지 않았으나, 고혈압군의 흉부대동맥의 내피층 표면은 정상대조군에 비하여 거칠고, 평활근은 비후해짐을 확인할 수 있었다. 한편, 양성대조군과 추출물군에서는 혈관 내막의 병변은 없으며 비후도는 고혈압군에 비하여 유의적으로 감소한 것을 확인할 수 있고, 이로부터 본 발명에 따른 조성물이 고혈압 모델에서 혈관병변을 회복시키는 효과가 있음을 알 수 있다.
상시 시험예 1 내지 6을 참조하면, 본 발명인 비티스 라브루스카나 잎(Vitis labruscana B.) 추출물을 포함하는 고혈압의 예방 또는 치료용 약학적 조성물은 로사르탄 칼륨과 유사한 효능을 보이고 있으며, 혈관 이완효과, 혈압 강하 효과, 혈관 기능 이상 개선효과, 혈관병변 회복 효과 등이 있어 고혈압을 예방 및 치료할 수 있음을 알 수 있다.
또한, 비티스 라브루스카나 잎(Vitis labruscana B.) 추출물을 포함하는 식품 조성물 또한 고혈압을 예방 및 개선할 수 있을 것으로 기대된다.
이상으로 본 발명의 바람직한 실시예를 도면을 참고하여 상세하게 설명하였다. 본 발명의 설명은 예시를 위한 것이며, 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자는 본 발명의 기술적 사상이나 필수적인 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 쉽게 변형이 가능하다는 것을 이해할 수 있을 것이다.
따라서, 본 발명의 범위는 상기 상세한 설명보다는 후술하는 특허청구범위에 의하여 나타내어지며, 특허청구범위의 의미, 범위 및 그 균등 개념으로부터 도출되는 모든 변경 또는 변형된 형태가 본 발명의 범위에 포함되는 것으로 해석되어야 한다.
Claims (4)
- 비티스 라브루스카나 잎(Vitis labruscana B.) 추출물을 포함하는 고혈압의 예방 또는 치료용 약학적 조성물로서, 상기 추출물은 물, 탄소수 1 내지 6인 알코올 및 아세트산으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 용매로 추출한 것임을 특징으로 하는 조성물.
- 삭제
- 제1항에 있어서,
상기 고혈압은 본태성 고혈압인 것을 특징으로 하는 고혈압의 예방 또는 치료용 약학적 조성물. - 비티스 라브루스카나 잎(Vitis labruscana B.) 추출물을 포함하는 고혈압의 예방 또는 개선용 식품 조성물로서, 상기 추출물은 물, 탄소수 1 내지 6인 알코올 및 아세트산으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 용매로 추출한 것임을 특징으로 하는 조성물.
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KR102712109B1 (ko) | 2022-11-17 | 2024-10-04 | 대한민국(농촌진흥청장) | 잡곡 혼합물을 포함하는 항고혈압용 조성물 |
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2019
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