KR20230024004A - 담팔수 추출물 또는 담팔수 추출물과 설파살라진의 혼합물을 유효성분으로 포함하는 관절염 예방, 치료, 또는 개선용 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 담팔수 추출물 또는 담팔수 추출물과 설파살라진의 혼합물을 유효성분으로 포함하는 관절염 예방, 치료, 또는 개선용 조성물에 관한 것으로서, 본 발명에 따른 담팔수 추출물은 일산화 질소 생성 억제, 염증성 사이토카인 억제, iNOS 또는 COX-2 생성 억제, NF-κB 또는 IκBα 활성 억제, 아그레칸 발현 억제, 관절염 지수 감소, 또는 발 부종 억제 활성을 나타내며, 특히 담팔수 추출물과 설파살라진의 혼합물은 설파살라진을 단독으로 처리하는 경우 보다도 일산화 질소 생성 억제, 염증성 사이토카인 억제, iNOS 또는 COX-2 생성 억제, NF-κB 또는 IκBα 활성 억제, 관절염 지수 감소, 또는 발 부종 억제 효과가 뛰어난 것을 확인하였다. 이에, 담팔수 추출물 또는 담팔수 추출물과 설파살라진의 혼합물은 부작용이 적어 안전하고 효과적인 관절염 치료용 의약품 또는 건강기능식품 등의 개발에 유용하게 이용될 것으로 기대된다.

Description

담팔수 추출물 또는 담팔수 추출물과 설파살라진의 혼합물을 유효성분으로 포함하는 관절염 예방, 치료, 또는 개선용 조성물 {Composition for preventing, treating, or improving arthritis comprising Elaeocarpus sylvestris extract or mixture of Elaeocarpus sylvestris extract and sulfasalazine as an active ingredient}

본 발명은 담팔수(Elaeocarpus sylvestris) 추출물 또는 담팔수 추출물과 설파살라진의 혼합물을 유효성분으로 포함하는 관절염 예방, 치료, 또는 개선용 조성물에 관한 것이다.

관절염은 관절의 염증성 변화를 말하며, 염증에 의해 관절에 압통 및 부종이 발생함에 따라 관절의 운동범위가 감소한다. 관절염은 크게 퇴행성 관절염과 류마티스 관절염으로 분류된다. 나이가 들어감에 따라 연골이 소실되고 관절이 변형되면서 염증성 변화가 나타나는 퇴행성 관절염은 골관절염이라고도 하며, 인구 고령화에 진입한 현대사회로 인해 환자가 매년 증가하고 있고, 최근에는 20~30대 젊은 층에서도 환자가 증가하고 있다. 류마티스 관절염은 만성 염증성 질환 중 가장 흔한 질병으로 40대에 주로 발병하고, 심질환, 감염 및 암발병율을 높이며, 고령화 및 경제성장에 따른 사회적인 영향으로 발병률이 더욱 증가할 것으로 예상되는 질병이다. 류마티스 관절염은 주로 관절을 둘러싸고 있는 활막과 주위 연부조직에 만성 염증을 일으키는 전신적인 질환으로 성인 인구의 약 1 %에서 나타나며, 발병원인은 아직 확실히 밝혀진 바 없다.

따라서 관절염을 치료하기 위한 목적은 관절의 통증과 염증을 감소시키고, 관절의 변형을 방지할 뿐만 아니라 보다 근본적으로는 관절염을 유발하는 세포내 작용기전을 밝히고 그 기전을 제어하는데 있다. 그러나 관절염의 발병 원인 및 기전에 대한 많은 연구와 그 결과를 이용한 다양한 신약개발에도 불구하고, 아직까지 완치에 이르게 하는 치료제는 개발되어 있지 않은 실정이며, 지금까지 알려진 관절염 치료제로는 비스테로이드성 항염증 약물(Non-sterodial anti-inflammatory drugs, NSAIDs; 아스피린, 이부프로펜), 금제제, 페니실라민(penicillamine), 스테로이드(steroid)성 호르몬제 등이 있다. 그러나 이러한 치료제는 장기간 복용 시 부작용이 따르는 문제점이 있다. 이에, 최근에는 염증 기전의 중심 역할을 하는 tumor necrosis factor(TNF)의 수용성 수용체를 유전자 재조합 기술로 생산하여 치료제로 개발하려는 노력이 있었으나, 이 또한 염증, 부종, 비정상적인 신혈관 생성, 골 및 연골조직의 침식 등 예상치 못했던 부작용이 발생하는 문제점이 있다.

비스테로이드성 염증치료제로서 설파살라진(Sulfasalazine)은 염증성 질환, 궤양성 장염 및 류마티스 관절염 등에 사용되는 약물이다. 최근 골관절염의 발병원인인 콘드로사이트의 변화를 보호하고, 관절막에서 연골 파괴에 관련된 인자들의 발현을 억제하여 골관절염의 치료에 활용 가능성이 있다는 결과가 발표된 바 있다. 또한 설파살라진은 생쥐 골수 유래 배양 비만세포와 흰쥐 복강 비만세포로부터 IgE 자극에 의한 히스타민 분비를 억제한다고 알려져 있다.

그러나, 상기 설파살라진은 고용량으로 장기간 투여 시 구역질, 구토, 식욕부진, 발진, 두통, 간장해, 백혈구 감소, 이상 적혈구, 단백뇨, 설사 등의 부작용이 나타난다고 보고되고 있다.

이러한 부작용 및 결점으로 인해, 효과적이고 안전한 관절염 치료제의 개발에 대한 요구가 지속되고 있으며, 특히 관절염의 치료를 위해서는 약제를 장기간 복용할 필요가 있기 때문에 부작용이 적은 약제를 개발하는 것이 매우 중요하고 시급한 문제가 되고 있다.

한편, 담팔수(Elaeocarpus sylvestris)는 담팔수과에 속하는 상록교목으로 국내의 제주도, 중국 및 일본의 남부를 포함한 아열대지역에서 서식하고 있으며, 함유되어 있는 유효성분과 알려진 효능이 거의 없는 자원으로 소재의 차별성과 연구개발의 희귀성이 매우 높은 소재라 할 수 있다.

이에, 본 발명자들은 담팔수의 단독 추출물 또는 담팔수 추출물과 설파살라진과의 혼합물을 이용하여 여러 가지 생리활성을 분석함으로써, 관절염 예방, 치료, 또는 개선에 대한 천연물 유래 기능성 소재로서의 개발을 시도하였다.

한국등록특허 제10-1895950호

본 발명자들은 관절염 치료를 위한 기존의 관절염 치료제가 가지는 부작용을 개선하고, 뛰어난 관절염 치료 효과를 나타내는 소재의 개발을 위해 연구한 결과, 담팔수 단독 추출물 또는 담팔수 추출물과 설파살라진의 혼합물이 설파살라진을 단독으로 처리하는 경우에 비해 뛰어난 항염증 효과 및 관절염 치료 효과를 나타내는 것을 확인하였는 바, 이에 기초하여 본 발명을 완성하였다.

이에, 본 발명의 목적은 담팔수 추출물; 또는 담팔수 추출물과 설파살라진 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염의 혼합물을 유효성분으로 포함하는, 관절염 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 다른 목적은 담팔수 추출물; 또는 담팔수 추출물과 설파살라진 또는 이의 식품학적으로 허용 가능한 염의 혼합물을 유효성분으로 포함하는, 관절염 예방 또는 개선용 식품 조성물을 제공하는 것이다.

그러나, 본 발명이 이루고자 하는 기술적 과제는 이상에서 언급한 과제에 제한되지 않으며, 언급되지 않은 또 다른 과제들은 아래의 기재로부터 본 발명이 속하는 기술 분야의 통상의 지식을 가진 자에게 명확하게 이해될 수 있을 것이다.

상기와 같은 목적을 달성하기 위해, 본 발명은 담팔수 추출물; 또는 담팔수 추출물과 설파살라진 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염의 혼합물을 유효성분으로 포함하는, 관절염 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 담팔수 추출물; 또는 담팔수 추출물과 설파살라진 또는 이의 식품학적으로 허용 가능한 염의 혼합물을 유효성분으로 포함하는, 관절염 예방 또는 개선용 식품 조성물을 제공한다.

본 발명의 일 구현예로서, 상기 관절염은 류마티스 관절염 또는 퇴행성 관절염일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

본 발명의 다른 구현예로서, 상기 담팔수 추출물은 물, C₁ 내지 C₄의 저급알코올, n-헥산, 에틸아세테이트, 아세톤, 아세토니트릴, 부틸아세테이트, 1,3-부틸렌 글리콜, 메틸렌클로라이드, 및 이들의 혼합용매로 구성된 군으로부터 선택된 하나의 용매로 추출될 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

본 발명의 또 다른 구현예로서, 상기 혼합물은 담팔수 추출물 : 설파살라진, 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 또는 이의 식품학적으로 허용 가능한 염의 중량비가 1 : 0.2 내지 3이 되도록 혼합되는 것일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

본 발명의 또 다른 구현예로서, 상기 담팔수 추출물은 담팔수 잎 추출물일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

본 발명의 또 다른 구현예로서, 상기 조성물은 일산화 질소(NO) 생성을 억제할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

본 발명의 또 다른 구현예로서, 상기 조성물은 산화질소 합성효소(inducible nitric oxide synthase, iNOS), 사이클로옥시게나제-2(cyclooxygenase-2, COX-2), 종양괴사인자 알파(tumor necrosis factor-α, TNF-α), 인터루킨-1베타(interleukin-1β, IL-1β), 및 인터루킨-6(interleukin-6, IL-6)로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 발현을 억제할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

본 발명의 또 다른 구현예로서, 상기 조성물은 I-κB(inhibitor of nuclear factor kappa B) 또는 핵 인자(nuclear factor, NF)-κB의 활성을 억제할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

본 발명의 또 다른 구현예로서, 상기 조성물은 대식세포 염증성 단백질(macrophage inflammatory protein, MIP)-1α 또는 RANTES(regulated on activation, normal T cell expressed and secreted)의 발현을 억제할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

본 발명의 또 다른 구현예로서, 상기 조성물은 관절염 지수 감소 또는 발 부종 억제 활성을 가지는 것일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

본 발명의 또 다른 구현예로서, 상기 조성물은 아그레칸(aggrecan)의 발현을 억제할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

또한, 본 발명은 담팔수 추출물; 또는 담팔수 추출물과 설파살라진 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염의 혼합물을 유효성분으로 포함하는 약학적 조성물을 이를 필요로 하는 개체에 투여하는 단계를 포함하는, 관절염 예방 또는 치료 방법을 제공한다.

또한, 본 발명은 담팔수 추출물; 또는 담팔수 추출물과 설파살라진 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염의 혼합물을 유효성분으로 포함하는 약학적 조성물의 관절염 예방 또는 치료 용도를 제공한다.

또한, 본 발명은 관절염 치료용 약제의 제조를 위한 담팔수 추출물; 또는 담팔수 추출물과 설파살라진 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염의 혼합물의 용도를 제공한다.

본 발명에 따른 담팔수 추출물은 일산화 질소 생성 억제, 염증성 사이토카인 억제, iNOS 또는 COX-2 생성 억제, NF-κB 또는 IκBα 활성 억제, 아그레칸 발현 억제, 관절염 지수 감소, 또는 발 부종 억제 활성을 나타내며, 특히 담팔수 추출물과 설파살라진의 혼합물은 설파살라진을 단독으로 처리하는 경우 보다도 일산화 질소 생성 억제, 염증성 사이토카인 억제, iNOS 또는 COX-2 생성 억제, NF-κB 또는 IκBα 활성 억제, 관절염 지수 감소, 또는 발 부종 억제 효과가 뛰어난 것을 확인하였다. 이에, 담팔수 추출물 또는 담팔수 추출물과 설파살라진의 혼합물은 부작용이 적어 안전하고 효과적인 관절염 치료용 의약품 또는 건강기능식품 등의 개발에 유용하게 이용될 것으로 기대된다.

도 1a는 본 발명의 일 구현예에 따른 담팔수 추출물의 처리에 의한 세포독성을 확인한 도면이다.
도 1b는 본 발명의 일 구현예에 따른 담팔수 추출물 및 설파살라진 혼합처리에 의한 세포독성을 확인한 도면이다.
도 2a는 본 발명의 일 구현예에 따른 담팔수 추출물의 처리에 의한 NO 생성 억제 효과를 확인한 도면이다.
도 2b는 본 발명의 일 구현예에 따른 담팔수 추출물 및 설파살라진 혼합처리에 의한 NO 생성 억제 효과를 확인한 도면이다.
도 3은 본 발명의 일 구현예에 따른 담팔수 추출물 또는 담팔수 추출물과 설파살라진 혼합처리에 의한 iNOS, COX-2 및 염증성 사이토카인의 mRNA 발현 억제 효과를 확인한 도면이다.
도 4a는 본 발명의 일 구현예에 따른 담팔수 추출물 또는 담팔수 추출물과 설파살라진 혼합처리에 의한 iNOS, COX-2, 및 TNF-α의 단백질 발현 억제 효과를 확인한 도면이다.
도 4b는 본 발명의 일 구현예에 따른 담팔수 추출물 또는 담팔수 추출물과 설파살라진 혼합처리에 의한 NF-κB(p65) 및 IκBα의 활성화 억제 효과를 확인한 도면이다.
도 5는 본 발명의 일 구현예에 따른 콜라겐 유도 류마티스 관절염 동물모델(CIA)에서 담팔수 추출물 또는 담팔수 추출물과 설파살라진 혼합 투여에 의한 관절염 지수 감소(좌측 도면) 및 발 부종 억제(우측 도면) 효과를 확인한 도면이다.
도 6a는 본 발명의 일 구현예에 따른 콜라겐 유도 류마티스 관절염 동물모델(CIA)의 혈액에서 담팔수 추출물 또는 담팔수 추출물과 설파살라진 혼합 투여에 의한 혈중 TNF-α, IL-1β, 및 IL-6의 단백질 발현 억제 효과를 확인한 도면이다.
도 6b는 본 발명의 일 구현예에 따른 콜라겐 유도 류마티스 관절염 동물모델(CIA)의 연골조직에서 담팔수 추출물 또는 담팔수 추출물과 설파살라진 혼합 투여에 의한 MIP-1α 및 RANTES의 mRNA 발현 억제 효과를 확인한 도면이다.
도 7은 본 발명의 일 구현예에 따른 콜라겐 유도 류마티스 관절염 동물모델(CIA)에서 담팔수 추출물(CSE100) 또는 담팔수 추출물과 설파살라진 혼합 투여(CSLZN)에 의한 발목관절 부위 파괴 정도 변화를 micro-CT 촬영 이미지로 확인한 도면이다.
도 8a는 본 발명의 일 구현예에 따른 monosodium iodoacetate 유도 퇴행성 관절염 동물모델(MIA)에서 담팔수 추출물 투여에 의한 혈중 IL-6 발현 억제 효과를 확인한 도면이다.
도 8b는 본 발명의 일 구현예에 따른 monosodium iodoacetate 유도 퇴행성 관절염 동물모델(MIA)에서 담팔수 추출물 투여에 의한 혈중 TNF-α 발현 억제 효과를 확인한 도면이다.
도 8c는 본 발명의 일 구현예에 따른 monosodium iodoacetate 유도 퇴행성 관절염 동물모델(MIA)에서 담팔수 추출물 투여에 의한 혈중 아그레칸 발현 억제 효과를 확인한 도면이다.

본 발명의 일 실험예에서는, in vitro 상에서 담팔수 추출물 또는 담팔수 추출물과 설파살라진 혼합 투여 시 세포독성이 거의 나타나지 않고, 높은 일산화 질소 생성 억제 효과가 나타나며. iNOS, COX-2 및 염증성 사이토카인의 발현이 억제되는 것을 확인하였다(실험예 1 내지 4 참조).

본 발명의 다른 실험예에서는, 콜라겐으로 유도한 류마티스 관절염 동물모델에서 담팔수 추출물 또는 담팔수 추출물과 설파살라진 혼합 투여 시 이를 투여하지 않은 류마티스 관절염 모델(CIA)과 비교하여 관절염 지수가 감소하고 발 부종이 억제되는 것을 확인하였다(실험예 5 참조).

본 발명의 또 다른 실험예에서는, 콜라겐으로 유도한 류마티스 관절염 동물모델의 혈액 또는 연골 조직에서 담팔수 추출물 또는 담팔수 추출물과 설파살라진 혼합 투여 시 염증성 사이토카인 또는 케모카인의 발현이 억제되는 것을 확인하였다(실험예 6 참조).

본 발명의 또 다른 실험예에서는, 콜라겐으로 유도한 류마티스 관절염 동물모델에서 담팔수 추출물과 설파살라진 혼합 투여 시 발목관절 부위 파괴가 상대적으로 적게 나타나는 것을 확인하였다(실험예 7 참조).

본 발명의 또 다른 실험예에서는, Monosodium iodoacetate(MIA)로 유도한 퇴행성 관절염 동물모델에서 담팔수 추출물 투여 시 혈중 IL-6, TNF-α, 및 연골조직에서 특이적인 프로테오글리칸인 아그레칸의 감소가 나타나는 것을 확인하였다(실험예 8 참조).

이에, 본 발명은 담팔수 추출물; 또는 담팔수 추출물과 설파살라진 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염의 혼합물을 유효성분으로 포함하는, 관절염 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.

본 발명에 있어서, “관절염”이란 어떤 원인에 의해서 관절 내에 염증성 변화가 생긴 것을 총괄해서 지칭하는 것으로, 본 발명의 일 구현예에 따르면, 상기 관절염은 류마티스 관절염 또는 퇴행성 관절염일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

본 발명에 있어서, “류마티스 관절염”이란 면역체계의 이상에 의해 자신의 관절이나 몸의 일부를 공격하여 염증을 일으키는 자가면역질환으로서, 염증성 매개체들과 사이토카인 (cytokine)의 국소적인 방출과 함께 T 세포가 중요한 역할을 하여 결과적으로 관절을 파괴한다. 주요 증상으로는 피로, 무력감, 통증 등이고, 손가락, 손, 발, 손목, 발목, 무릎 등 여러 관절이 아프고 붓는 증세를 나타내며, 근육, 피부, 폐, 눈 등 여러 장기에도 이상을 초래할 수 있는 전신적인 만성 염증성 질환으로, 특히 관절에 영향을 주어 비가역적인 증식성 활막염을 일으키고, 이는 관절연골의 파괴와 관절의 강직으로 진행된다. 류마티스 관절염의 원인은 아직 밝혀지지 않았으나 자가면역반응이 이 질환의 만성화와 진행에 중요한 역할을 하는 것으로 알려져 있다.

본 발명에 있어서, “퇴행성 관절염”이란 뼈의 관절면을 감싸고 있는 관절 연골이 마모되어 연골 밑의 뼈가 노출되고, 관절 주변의 활액막에 염증이 생겨서 통증과 변형이 발생하는 질환이며, 흔히 골관절염(osteoarthritis)이라고도 불리우며 관절 질환 중에서 가장 많이 발생하는 질환이다.

본 발명에 있어서, 상기 담팔수 추출물은 담팔수 잎, 줄기, 가지, 뿌리, 또는 이를 모두 포함한 식물 전체 추출물일 수 있으며, 본 발명의 일 실시예에 따르면 담팔수 잎 추출물일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 상기 담팔수는 직접 재배한 것 또는 시판되는 것 등을 제한 없이 사용할 수 있다.

본 발명에 있어서, “추출물”은 상기 담팔수의 추출처리에 의하여 얻어지는 추출액, 상기 추출액의 희석액이나 농축액, 상기 추출액을 건조하여 얻어지는 건조물, 상기 추출액의 조정제물이나 정제물, 또는 이들의 혼합물 등, 추출액 자체 및 추출액을 이용하여 형성 가능한 모든 제형의 추출물을 포함한다. 본 발명의 일 실시예에 따르면, 상기 담팔수 추출물은 건조물 형태일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

본 발명의 상기 담팔수의 추출물에 있어서, 상기 담팔수를 추출하는 방법은 특별히 제한되지 아니하며, 당해 기술분야에서 통상적으로 사용하는 방법에 따라 추출할 수 있다. 상기 추출 방법의 비제한적인 예로는, 열수 추출법, 초음파 추출법, 여과법, 환류 추출법, 초임계 추출법, 아임계 추출법, 고온 추출, 고압 추출 등을 들 수 있으며, 이들은 단독으로 수행되거나 2 종 이상의 방법을 병용하여 수행될 수 있다.

본 발명에서 상기 담팔수를 추출하는 데에 사용되는 추출 용매의 종류는 특별히 제한되지 아니하며, 천연물로부터 추출물을 추출하는 당업계에 공지된 통상적인 방법에 따라, 즉, 통상적인 온도, 압력의 조건 하에서 통상적인 용매를 사용하여 추출할 수 있다. 예컨대, 본 발명에 있어서 상기 담팔수 추출물은 물, C₁ 내지 C₄의 저급알코올, n-헥산, 에틸아세테이트, 아세톤, 아세토니트릴, 부틸아세테이트, 1,3-부틸렌 글리콜, 메틸렌클로라이드, 및 이들의 혼합용매로 구성된 군으로부터 선택된 하나의 용매로 추출될 수 있으며, 본 발명의 일 실시예에 따르면 에탄올을 용매로 사용하여 추출할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

본 발명에 있어서, 상기 에탄올을 용매로 사용하여 담팔수를 추출할 경우, 예컨대 10 % 내지 100 % 에탄올, 10 % 내지 90 % 에탄올, 10 % 내지 80 % 에탄올, 10 % 내지 70 % 에탄올, 10 % 내지 60 % 에탄올, 10 % 내지 50 % 에탄올, 20 % 내지 90 % 에탄올, 20 % 내지 80 % 에탄올, 20 % 내지 70 % 에탄올, 20 % 내지 60 % 에탄올, 20 % 내지 50 % 에탄올, 30 % 내지 90 % 에탄올, 30 % 내지 80 % 에탄올, 30 % 내지 70 % 에탄올, 30 % 내지 60 % 에탄올, 30 % 내지 50 % 에탄올, 40 % 내지 90 % 에탄올, 40 % 내지 80 % 에탄올, 40 % 내지 70 % 에탄올, 40 % 내지 60 % 에탄올, 40 % 내지 50 % 에탄올, 45 % 내지 55 % 에탄올, 또는 50 % 에탄올을 사용할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

상기 제조된 추출물은 이후 여과하거나 농축 또는 건조과정을 수행하여 용매를 제거할 수 있으며, 여과, 농축 및 건조를 모두 수행할 수 있다. 예컨대, 여과는 여과지를 이용하거나 감압여과기를 이용할 수 있으며, 농축은 진공 감압 농축기 또는 진공회전증발기를 이용할 수 있고, 건조는 감압건조, 진공건조, 비등건조, 분무건조, 동결건조법 등을 수행할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

추출 횟수는 1회 이상 실시할 수 있으나, 추출이 계속될수록 활성 성분은 수득량이 현저히 감소되므로 5회 이상 반복 실시하는 것은 경제적이지 않을 수 있다. 이에, 추출 횟수는 1 내지 5회인 것이 바람직하며, 2 내지 5회 반복 추출하는 것이 더욱 바람직하나, 이에 한정되는 것은 아니다.

본 발명에 있어서, “설파살라진(sulfasalazine)”은 2-하이드록시-5-[[4-(2-피리디닐아미노)설포닐]아조]벤조산으로, 설파피리딘 (Sulfapyridine)과 5-아미노살리실산(5-aminosalicylic acid, 5-ASA)이 아조 결합(azo bond)하여 형성된 화합물이며, 하기 화학식 1의 구조를 가진다. 본 발명에 있어서, 상기 설파살라진은 당업계에 공지된 방법으로 화학적으로 합성하거나 시판되는 물질을 사용할 수 있다.

[화학식 1]

본 발명에 있어서, 상기 담팔수 추출물과 설파살라진 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염의 혼합물은 담팔수 추출물 : 설파살라진 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염의 중량비가 1 : 0.2 내지 3, 1 : 0.2 내지 2.5, 1 : 0.2 내지 2, 1 : 0.2 내지 1.5, 1 : 0.2 내지 1, 1 : 0.2 내지 0.7, 1 : 0.3 내지 3, 1 : 0.3 내지 2.5, 1 : 0.3 내지 2, 1 : 0.3 내지 1.5, 1 : 0.3 내지 1, 1 : 0.3 내지 0.7, 1 : 0.5 내지 3, 1 : 0.5 내지 2.5, 1 : 0.5 내지 2, 1 : 0.5 내지 1.5, 1 : 0.5 내지 1, 1 : 0.7 내지 1.5, 1 : 1.5 내지 2.5, 또는 1 : 0.5가 되도록 혼합되는 것일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

본 발명에 있어서, “약학적으로 허용 가능한 염”이란 약학적으로 허용되는 무기산, 유기산, 또는 염기로부터 유도된 염을 포함한다.

적합한 산의 예로는 염산, 브롬산, 황산, 질산, 과염소산, 푸마르산, 말레산, 인산, 글리콜산, 락트산, 살리실산, 숙신산, 톨루엔-p-설폰산, 타르타르산, 아세트산, 시트르산, 메탄설폰산, 포름산, 벤조산, 말론산, 글루콘산, 나프탈렌-2-설폰산, 벤젠설폰산 등을 들 수 있다. 산부가염은 통상의 방법, 예를 들면 화합물을 과량의 산 수용액에 용해시키고, 이 염을 메탄올, 에탄올, 아세톤 또는 아세토니트릴과 같은 수혼화성 유기 용매를 사용하여 침전시켜서 제조할 수 있다. 또한, 동몰량의 화합물 및 물 중의 산 또는 알코올을 가열하고 이어서 상기 혼합물을 증발시켜서 건조시키거나, 또는 석출된 염을 흡인 여과시켜 제조할 수 있다.

적합한 염기로부터 유도된 염은 나트륨, 칼륨 등의 알칼리 금속, 마그네슘 등의 알칼리 토금속, 및 암모늄 등을 포함할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속염은, 예를 들면 화합물을 과량의 알칼리 금속 수산화물 또는 알칼리토 금속 수산화물 용액 중에 용해하고, 비용해 화합물염을 여과한 후 여액을 증발, 건조시켜 얻을 수 있다. 이 때, 금속염으로서는 특히 나트륨, 칼륨 또는 칼슘염을 제조하는 것이 제약상 적합하며, 또한 이에 대응하는 은염은 알칼리 금속 또는 알칼리토 금속염을 적당한 은염(예, 질산은)과 반응시켜 얻을 수 있다.

본 발명의 조성물 내의 상기 담팔수 추출물; 또는 담팔수 추출물과 설파살라진 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염의 혼합물의 함량은 질환의 증상, 증상의 진행 정도, 환자의 상태 등에 따라서 적절히 조절 가능하며, 예컨대, 전체 조성물 중량을 기준으로 0.0001 내지 99.9 중량%, 0.001 내지 99.9 중량%, 0.01 내지 99.9 중량%, 0.001 내지 90 중량%, 0.001 내지 80 중량%, 0.001 내지 70 중량%, 0.001 내지 60 중량%, 0.001 내지 50 중량%, 0.1 내지 90 중량%, 0.1 내지 80 중량%, 0.1 내지 70 중량%, 0.1 내지 60 중량%, 0.1 내지 50 중량%, 1 내지 90 중량%, 1 내지 80 중량%, 1 내지 70 중량%, 1 내지 60 중량%, 1 내지 50 중량%, 1 내지 40 중량%, 1 내지 30 중량%, 10 내지 90 중량%, 20 내지 90 중량%, 30 내지 90 중량%, 40 내지 90 중량%, 50 내지 90 중량%, 60 내지 90 중량%, 70 내지 90 중량%, 또는 80 내지 99.9 중량%일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 상기 함량비는 용매를 제거한 건조량을 기준으로 한 값이다.

본 발명에 따른 약학적 조성물은 약학적 조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더 포함할 수 있다. 상기 부형제는 예를 들어, 희석제, 결합제, 붕해제, 활택제, 흡착제, 보습제, 필름-코팅 물질, 및 제어방출첨가제로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상일 수 있다.

본 발명에 따른 약학적 조성물은, 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 서방형 과립제, 장용과립제, 액제, 점안제, 엘실릭제, 유제, 현탁액제, 주정제, 트로키제, 방향수제, 리모나아데제, 정제, 서방형정제, 장용정제, 설하정, 경질캅셀제, 연질캅셀제, 서방캅셀제, 장용캅셀제, 환제, 틴크제, 연조엑스제, 건조엑스제, 유동엑스제, 주사제, 캡슐제, 관류액, 경고제, 로션제, 파스타제, 분무제, 흡입제, 패취제, 멸균주사용액, 또는 에어로졸 등의 외용제 등의 형태로 제형화하여 사용될 수 있으며, 상기 외용제는 크림, 젤, 패치, 분무제, 연고제, 경고제, 로션제, 리니멘트제, 파스타제 또는 카타플라스마제 등의 제형을 가질 수 있다.

본 발명에 따른 약학적 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 올리고당, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로오스, 미정질 셀룰로오스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다.

제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다.

본 발명에 따른 정제, 산제, 과립제, 캡슐제, 환제, 트로키제의 첨가제로 옥수수전분, 감자전분, 밀전분, 유당, 백당, 포도당, 과당, 디-만니톨, 침강탄산칼슘, 합성규산알루미늄, 인산일수소칼슘, 황산칼슘, 염화나트륨, 탄산수소나트륨, 정제 라놀린, 미결정셀룰로오스, 덱스트린, 알긴산나트륨, 메칠셀룰로오스, 카르복시메칠셀룰로오스나트륨, 카올린, 요소, 콜로이드성실리카겔, 히드록시프로필스타치, 히드록시프로필메칠셀룰로오스(HPMC), HPMC 1928, HPMC 2208, HPMC 2906, HPMC 2910, 프로필렌글리콜, 카제인, 젖산칼슘, 프리모젤 등 부형제; 젤라틴, 아라비아고무, 에탄올, 한천가루, 초산프탈산셀룰로오스, 카르복시메칠셀룰로오스, 카르복시메칠셀룰로오스칼슘, 포도당, 정제수, 카제인나트륨, 글리세린, 스테아린산, 카르복시메칠셀룰로오스나트륨, 메칠셀룰로오스나트륨, 메칠셀룰로오스, 미결정셀룰로오스, 덱스트린, 히드록시셀룰로오스, 히드록시프로필스타치, 히드록시메칠셀룰로오스, 정제쉘락, 전분호, 히드록시프로필셀룰로오스, 히드록시프로필메칠셀룰로오스, 폴리비닐알코올, 폴리비닐피롤리돈 등의 결합제가 사용될 수 있으며, 히드록시프로필메칠셀룰로오스, 옥수수전분, 한천가루, 메칠셀룰로오스, 벤토나이트, 히드록시프로필스타치, 카르복시메칠셀룰로오스나트륨, 알긴산나트륨, 카르복시메칠셀룰로오스칼슘, 구연산칼슘, 라우릴황산나트륨, 무수규산, 1-히드록시프로필셀룰로오스, 덱스트란, 이온교환수지, 초산폴리비닐, 포름알데히드처리 카제인 및 젤라틴, 알긴산, 아밀로오스, 구아르고무(Guar gum), 중조, 폴리비닐피롤리돈, 인산칼슘, 겔화전분, 아라비아고무, 아밀로펙틴, 펙틴, 폴리인산나트륨, 에칠셀룰로오스, 백당, 규산마그네슘알루미늄, 디-소르비톨액, 경질무수규산 등 붕해제; 스테아린산칼슘, 스테아린산마그네슘, 스테아린산, 수소화식물유(Hydrogenated vegetable oil), 탈크, 석송자, 카올린, 바셀린, 스테아린산나트륨, 카카오지, 살리실산나트륨, 살리실산마그네슘, 폴리에칠렌글리콜(PEG) 4000, PEG 6000, 유동파라핀, 수소첨가대두유(Lubri wax), 스테아린산알루미늄, 스테아린산아연, 라우릴황산나트륨, 산화마그네슘, 마크로골(Macrogol), 합성규산알루미늄, 무수규산, 고급지방산, 고급알코올, 실리콘유, 파라핀유, 폴리에칠렌글리콜지방산에테르, 전분, 염화나트륨, 초산나트륨, 올레인산나트륨, dl-로이신, 경질무수규산 등의 활택제;가 사용될 수 있다.

본 발명에 따른 액제의 첨가제로는 물, 묽은 염산, 묽은 황산, 구연산나트륨, 모노스테아린산슈크로스류, 폴리옥시에칠렌소르비톨지방산에스텔류(트윈에스텔), 폴리옥시에칠렌모노알킬에텔류, 라놀린에텔류, 라놀린에스텔류, 초산, 염산, 암모니아수, 탄산암모늄, 수산화칼륨, 수산화나트륨, 프롤아민, 폴리비닐피롤리돈, 에칠셀룰로오스, 카르복시메칠셀룰로오스나트륨 등이 사용될 수 있다.

본 발명에 따른 시럽제에는 백당의 용액, 다른 당류 혹은 감미제 등이 사용될 수 있으며, 필요에 따라 방향제, 착색제, 보존제, 안정제, 현탁화제, 유화제, 점조제 등이 사용될 수 있다.

본 발명에 따른 유제에는 정제수가 사용될 수 있으며, 필요에 따라 유화제, 보존제, 안정제, 방향제 등이 사용될 수 있다.

본 발명에 따른 현탁제에는 아카시아, 트라가칸타, 메칠셀룰로오스, 카르복시메칠셀룰로오스, 카르복시메칠셀룰로오스나트륨, 미결정셀룰로오스, 알긴산나트륨, 히드록시프로필메칠셀룰로오스(HPMC), HPMC 1828, HPMC 2906, HPMC 2910 등 현탁화제가 사용될 수 있으며, 필요에 따라 계면활성제, 보존제, 안정제, 착색제, 방향제가 사용될 수 있다.

본 발명에 따른 주사제에는 주사용 증류수, 0.9%염화나트륨주사액, 링겔주사액, 덱스트로스주사액, 덱스트로스+염화나트륨주사액, 피이지(PEG), 락테이티드 링겔주사액, 에탄올, 프로필렌글리콜, 비휘발성유-참기름, 면실유, 낙화생유, 콩기름, 옥수수기름, 올레인산에칠, 미리스트산 이소프로필, 안식향산벤젠과 같은 용제; 안식향산나트륨, 살리실산나트륨, 초산나트륨, 요소, 우레탄, 모노에칠아세트아마이드, 부타졸리딘, 프로필렌글리콜, 트윈류, 니정틴산아미드, 헥사민, 디메칠아세트아마이드와 같은 용해보조제; 약산 및 그 염(초산과 초산나트륨), 약염기 및 그 염(암모니아 및 초산암모니움), 유기화합물, 단백질, 알부민, 펩톤, 검류와 같은 완충제; 염화나트륨과 같은 등장화제; 중아황산나트륨(NaHSO₃) 이산화탄소가스, 메타중아황산나트륨(Na₂S₂O₅), 아황산나트륨(Na₂SO₃), 질소가스(N₂), 에칠렌디아민테트라초산과 같은 안정제; 소디움비설파이드 0.1%, 소디움포름알데히드 설폭실레이트, 치오우레아, 에칠렌디아민테트라초산디나트륨, 아세톤소디움비설파이트와 같은 황산화제; 벤질알코올, 클로로부탄올, 염산프로카인, 포도당, 글루콘산칼슘과 같은 무통화제; 시엠시나트륨, 알긴산나트륨, 트윈 80, 모노스테아린산알루미늄과 같은 현탁화제를 포함할 수 있다.

본 발명에 따른 좌제에는 카카오지, 라놀린, 위텝솔, 폴리에틸렌글리콜, 글리세로젤라틴, 메칠셀룰로오스, 카르복시메칠셀룰로오스, 스테아린산과 올레인산의 혼합물, 수바날(Subanal), 면실유, 낙화생유, 야자유, 카카오버터+콜레스테롤, 레시틴, 라네트왁스, 모노스테아린산글리세롤, 트윈 또는 스판, 임하우젠(Imhausen), 모놀렌(모노스테아린산프로필렌글리콜), 글리세린, 아뎁스솔리두스(Adeps solidus), 부티룸 태고-G(Buytyrum Tego-G), 세베스파마 16(Cebes Pharma 16), 헥사라이드베이스 95, 코토마(Cotomar), 히드록코테 SP, S-70-XXA, S-70-XX75(S-70-XX95), 히드록코테(Hydrokote) 25, 히드록코테 711, 이드로포스탈(Idropostal), 마사에스트라리움(Massa estrarium, A, AS, B, C, D, E, I, T), 마사-MF, 마수폴, 마수폴-15, 네오수포스탈-엔, 파라마운드-B, 수포시로(OSI, OSIX, A, B, C, D, H, L), 좌제기제 IV 타입(AB, B, A, BC, BBG, E, BGF, C, D, 299), 수포스탈(N, Es), 웨코비(W, R, S, M ,Fs), 테제스터 트리글리세라이드 기제(TG-95, MA, 57)와 같은 기제가 사용될 수 있다.

경구 투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 상기 추출물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트(calcium carbonate), 수크로스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스티레이트 탈크 같은 윤활제들도 사용된다.

경구 투여를 위한 액상제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다.

본 발명에 따른 약학적 조성물은 약학적으로 유효한 양으로 투여한다. 본 발명에 있어서, "약학적으로 유효한 양"은 의학적 치료에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 치료하기에 충분한 양을 의미하며, 유효용량 수준은 환자 질환의 종류, 중증도, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 시간, 투여 경로 및 배출비율, 치료기간, 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다.

본 발명에 따른 약학적 조성물은 개별 치료제로 투여하거나 다른 치료제와 병용하여 투여될 수 있고 종래의 치료제와는 순차적 또는 동시에 투여될 수 있으며, 단일 또는 다중 투여될 수 있다. 상기한 요소들을 모두 고려하여 부작용 없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여하는 것이 중요하며, 이는 본 발명이 속하는 기술분야에 통상의 기술자에 의해 용이하게 결정될 수 있다.

본 발명의 약학적 조성물은 개체에게 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여의 모든 방식은 예상될 수 있는데, 예를 들면, 경구 복용, 피하 주사, 복강 투여, 정맥 주사, 근육 주사, 척수 주위 공간(경막내) 주사, 설하 투여, 볼점막 투여, 직장 내 삽입, 질 내 삽입, 안구 투여, 귀 투여, 비강 투여, 흡입, 입 또는 코를 통한 분무, 피부 투여, 경피 투여 등에 따라 투여될 수 있다.

본 발명의 약학적 조성물은 치료할 질환, 투여 경로, 환자의 연령, 성별, 체중 및 질환의 중등도 등의 여러 관련 인자와 함께 활성성분인 약물의 종류에 따라 결정된다.

본 발명의 다른 양태로서, 본 발명은 담팔수 추출물; 또는 담팔수 추출물과 설파살라진 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염의 혼합물을 유효성분으로 포함하는 약학적 조성물을 이를 필요로 하는 개체에 투여하는 단계를 포함하는, 관절염 예방 또는 치료 방법을 제공한다.

본 발명의 또 다른 양태로서, 본 발명은 담팔수 추출물; 또는 담팔수 추출물과 설파살라진 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염의 혼합물을 유효성분으로 포함하는 약학적 조성물의 관절염 예방 또는 치료 용도를 제공한다.

본 발명의 또 다른 양태로서, 본 발명은 관절염 치료용 약제의 제조를 위한 담팔수 추출물; 또는 담팔수 추출물과 설파살라진 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염의 혼합물의 용도를 제공한다.

본 발명에서 “예방”이란 관절염의 발병을 억제하거나 지연시키는 모든 행위를 의미하고, “치료”란 본 발명에 따른 약학적 조성물의 투여에 의해 관절염과 그에 따른 대사 이상 증세가 호전되거나 이롭게 변경되는 모든 행위를 의미하며, “개선”이란 본 발명에 따른 조성물의 투여에 의해 관절염과 관련된 파라미터, 예를 들면 증상의 정도를 감소시키는 모든 행위를 의미한다.

본 발명에 있어서 “개체”란 질병의 치료를 필요로 하는 대상을 의미하고, 보다 구체적으로는 인간 또는 비-인간인 영장류, 생쥐 (mouse), 쥐 (rat), 개, 고양이, 말, 및 소 등의 포유류를 의미한다.

본 발명에 있어서 “투여”란 임의의 적절한 방법으로 개체에게 소정의 본 발명의 조성물을 제공하는 것을 의미한다.

본 발명의 또 다른 양태로서, 본 발명은 담팔수 추출물; 또는 담팔수 추출물과 설파살라진 또는 이의 식품학적으로 허용 가능한 염의 혼합물을 유효성분으로 포함하는, 관절염 예방 또는 개선용 식품 조성물을 제공한다.

본 발명에 있어서, “식품학적으로 허용 가능한 염”이란 식품학적으로 허용되는 유기산, 무기산, 또는 염기로부터 유도된 염을 포함한다.

본 발명에 있어서, “식품”이란 영양소를 한 가지 또는 그 이상 함유하고 있는 천연물 또는 가공품을 의미하며, 바람직하게는 어느 정도의 가공 공정을 거쳐 직접 먹을 수 있는 상태가 된 것을 의미하며, 통상적인 의미로서, 건강기능성 식품, 음료, 식품 첨가제 및 음료 첨가제 등을 모두 포함하는 의미이다.

본 발명에 있어서, 상기 식품 조성물은 건강기능성 식품 조성물일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

본 발명에 있어서, 상기 “건강기능성 식품(functional food)”이란, 특정보건용 식품(food for special health use, FoSHU)과 동일한 용어로, 영양 공급 외에도 생체조절기능이 효율적으로 나타나도록 가공된 의학, 의료효과가 높은 식품을 의미하며, 정제, 캡슐제, 환제, 과립제, 분말, 액제, 편상(flake), 페이스트, 시럽제, 겔, 젤리, 바(bar), 또는 필름 제형으로 제조될 수 있다. 여기서 "기능성"이라 함은 인체의 구조 및 기능에 대하여 영양소를 조절하거나 생리학적 작용 등과 같은 보건용도에 유용한 효과를 얻는 것을 의미한다.

본 발명의 담팔수 추출물; 또는 담팔수 추출물과 설파살라진 또는 이의 식품학적으로 허용 가능한 염을 식품 첨가물로 사용할 경우, 이를 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용할 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용할 수 있다. 유효성분의 혼합양은 사용 목적(예방, 건강 또는 치료적 처치)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 일반적으로, 식품 또는 음료의 제조시 본 발명의 담팔수 추출물; 또는 담팔수 추출물과 설파살라진 또는 이의 식품학적으로 허용 가능한 염은 원료에 대하여 15 중량% 이하, 또는 10 중량% 이하의 양으로 첨가될 수 있다. 그러나, 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우 상기 양은 상기 범위 이하일 수 있으며, 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 유효성분은 상기 범위 이상의 양으로도 사용될 수 있다.

상기 식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 상기 물질을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 육류, 소세지, 빵, 쵸코렛, 캔디류, 스넥류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알콜 음료 및 비타민 복합제 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 건강기능식품을 모두 포함한다.

본 발명에 따른 건강음료 조성물은 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물은 포도당 및 과당과 같은 모노사카라이드, 말토오스 및 수크로오스와 같은 디사카라이드, 덱스트린 및 시클로덱스트린과 같은 폴리사카라이드, 및 자일리톨, 소르비톨 및 에리트리톨 등의 당알콜이다. 감미제로서는 타우마틴, 스테비아 추출물과 같은 천연 감미제나, 사카린, 아스파르탐과 같은 합성 감미제 등을 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100 mL당 일반적으로 약 0.01-0.20g, 또는 약 0.04-0.10g 이다.

상기 외에 본 발명의 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그 밖에 본 발명의 조성물은 천연 과일쥬스, 과일쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 크게 중요하진 않지만 본 발명의 조성물 100 중량부 당 0.01-0.20 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.

이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 바람직한 실시예 및 실험예를 제시한다. 그러나 하기의 실시예 및 실험예는 본 발명을 보다 쉽게 이해하기 위하여 제공되는 것일 뿐, 하기 실시예 및 실험예에 의해 본 발명의 내용이 한정되는 것은 아니다.

[실시예]

실시예 1. 담팔수 추출물의 제조

제주도 일대의 국내산 담팔수의 잎을 입수하여 건조한 후 세절한 다음 담팔수 잎 100 kg을 50 % 에탄올 2,000 L로 60 ℃에서 16시간 추출하였으며, 이를 여과 및 농축 후 건조하여 담팔수 추출물 28 kg(수율 28 %)을 얻었다.

실시예 2. 세포 배양

실험에 사용된 RAW264.7 대식세포주는 37 ℃, 5 % CO₂의 조건으로 10 % 소 태아 혈청(FBS, WelGENE) 및 1 % 페니실린/스트렙토마이신(P/S, WelGENE)이 포함된 DMEM(Dulbecco’s modified Eagle’s medium, WelGENE) 배지에서 배양하였다.

실시예 3. 관절염 동물모델 제작

상기 실시예 1에서 제조한 담팔수 추출물이 in vivo 상에서 류마티스 관절염과 퇴행성 관절염에 치료 효과가 있는지 확인하기 위하여, 7주령의 DBA/1J 수컷 마우스와 6주령의 수컷 SD랫드를 입수하였다. 모든 동물은 병원균이 없는 환경에서 사육되었고, 멸균된 표준 동물 사료와 물을 자유롭게 섭취하도록 하였다.

류마티스 관절염을 유발하기 위하여, 당업계에 알려진 방법에 따라 분리 정량된 우형 제Ⅱ형 콜라겐(Bovine type Ⅱ collagen, Central Lab, 한국)을 동량의 프로인트 완전 항원보강제(complete Freund’s adjuvant)(Sigma-Aldrich)에 고르게 섞어 에멀젼으로 만들고, 이를 마우스 꼬리의 기시부에서 2~3 cm 떨어진 부위에 50 μL 피내 주사한 다음, 2주 후 동일한 방법으로 프로인트 불완전 항원보강제(incomplete Freund’s adjuvant)(Sigma-Aldrich)를 추가 접종하여 콜라겐 유도 류마티스 관절염(collagen-induced arthritis, CIA) 마우스를 제작하였다.

이와 같이 제작한 CIA 마우스에 상기 실시예 1에서 제조한 담팔수 추출물과 설파살라진을 하기 표 1에 따른 용량으로 투여하였다.

그룹	CIA	설파살라진 (mg/kg)	담팔수 추출물 (mg/kg)
NC	-	-	-
CIA	+	-	-
CSLZN	+	50	-
CSE 25	+	50	25
CSE 50	+	50	50
CSE 100	+	50	100
CE 25	+	-	25
CE 50	+	-	50
CE 100	+	-	100

(NC: 정상 대조군, CIA: 콜라겐 유도 류마티스 관절염 대조군, CSLZN: 설파살라진을 처리한 콜라겐 유도 류마티스 관절염 대조군, CSE: 설파살라진+담팔수 추출물을 처리한 콜라겐 유도 류마티스 관절염 모델 시험군, CE: 담팔수 추출물을 처리한 콜라겐 유도 류마티스 관절염 모델 시험군)

또한, 퇴행성 관절염을 유발하기 위하여, 당업계에 알려진 방법에 따라 SD 랫드의 양쪽 슬관절강 내에 생리식염수로 희석된 Monosodium iodoacetate를 4 mg/kg 용량으로 0.1 mL씩 2주 간격으로 2회 주사하여 Monosodium iodoacetate 유도 퇴행성 관절염(MIA) 랫드를 제작하였다.

이와 같이 제작한 MIA 랫드에 상기 실시예 1에서 제조한 담팔수 추출물을 100 mg/kg의 용량으로 투여하여 혈중 퇴행성 관절염 지표를 측정하였다.

[실험예]

실험예 1. 담팔수 추출물 및 설파살라진의 세포독성 확인

마우스 대식세포인 RAW264.7 세포에 담팔수 추출물을 처리하여 세포독성을 확인하였다. 구체적으로, RAW264.7 세포를 96 well-plate에 1×10⁴ 세포/웰의 농도로 접종하였다. 그런 다음, 37 ℃, 5 % CO₂ 인큐베이터에서 24시간 동안 배양하고, 담팔수 추출물을 농도별(3.125, 6.25, 12.5, 25, 50, 100 μg/mL)로 24시간 동안 처리한 후 5 mg/mL MTT 용액을 10 μL씩 첨가하고 2시간동안 배양하였다. 그런 다음, 배지 상층액을 제거하고 DMSO 100 μL를 넣어 용해시킨 후 540 nm에서 흡광도를 측정하여 담팔수 추출물의 세포독성을 측정하였다.

그 결과 도 1a에 나타낸 바와 같이, 담팔수 추출물의 세포독성이 없는 것을 확인하였다.

또한, 설파살라진과 담팔수 추출물 동시 처리에 의한 세포독성을 확인하였으며, 이때 설파살라진 50 μg/mL의 농도에 담팔수 추출물을 농도별(25, 50, 100 μg/mL)로 24시간 동안 처리한 후 세포독성을 측정하였다.

그 결과, 도 1b에 나타낸 바와 같이, 담팔수 추출물 및 설파살라진 혼합처리에 의한 세포독성이 거의 나타나지 않는 것을 확인하였다.

실험예 2. 담팔수 추출물 및 설파살라진의 일산화 질소 생성 억제능 확인

마우스 대식세포인 RAW264.7 세포에서 담팔수 추출물 및 설파살라진의 일산화 질소(nitric oxide, NO) 생성 억제 효과를 확인하였다.

구체적으로, RAW264.7 세포를 96 웰-플레이트에 1×10⁴ 세포/웰의 농도로 접종하였다. 그런 다음, 37 ℃, 5 % CO₂ 인큐베이터에서 24시간 동안 배양하고, 담팔수 추출물을 농도별(3.125, 6.25, 12.5, 25, 50, 100 μg/mL)로 2시간 동안 전처리한 후 LPS를 1 μg/mL의 농도로 24시간 동안 처리하였다. 24시간 후 상층액 50 μL를 새로운 96 웰-플레이트에 옮기고 동량의 그리에스 시약(Griess reagent)(0.1 % 에틸렌디아민(ethylenediamine), 1 % 설파닐아마이드(sulfanilamide)(Sigma-Aldrich, 미국)와 5 % 인산(phosphoric acid))을 첨가하여 상온에서 10분간 반응시킨 후 540 nm에서 흡광도를 측정하였다.

그 결과 도 2a에 나타낸 바와 같이, LPS 처리에 의해 NO 생성이 증가하였으며, 담팔수 추출물 처리에 의해서 NO 생성이 억제되는 것을 확인하였다.

또한, 설파살라진과 담팔수 추출물 동시 처리에 의한 NO 생성 억제 효과를 확인하였으며, 이때 설파살라진 50 μg/mL의 농도에 담팔수 추출물을 농도별(25, 50, 100 μg/mL)로 2시간 동안 전처리한 후 LPS를 24시간 동안 처리하였다. 24시간 후 상층액 50 μL를 새로운 96 웰-플레이트에 옮기고 동량의 그리에스 시약(Griess reagent)을 첨가하여 상온에서 10분간 반응시킨 후 540 nm에서 흡광도를 측정하였다.

그 결과, 도 2b에 나타낸 바와 같이, 담팔수 추출물 및 설파살라진 혼합처리 시 LPS에 의해 유도된 NO 생성이 정상군과 비슷하게 억제되는 효과가 나타났으며, 이때 담팔수 추출물 처리군은 설파살라진 단독 처리군보다 우수한 효능을 나타내는 것을 확인하였다.

실험예 3. 실시간 중합연쇄반응(real time PCR) 분석

RAW264.7 세포에서 담팔수 추출물 및 설파살라진 처리에 의한 iNOS, COX-2 및 염증성 사이토카인의 mRNA 발현을 확인하였다. 이를 위해, 먼저 RAW264.7 세포를 6 웰-플레이트에 2×10⁵ 세포/웰로 접종하고 37 ℃, 5 % CO₂ 인큐베이터에서 24시간 동안 배양하였으며, 설파살라진(50 μg/mL)과 담팔수 추출물을 농도별(25, 50, 100 μg/mL)로 2시간 동안 전처리하였다. 2시간 후 LPS를 1 μg/mL의 농도로 24시간 동안 처리한 다음, 24시간 후 PBS로 세척한 후 TRIzol(Invitrogen, 미국)을 이용하여 제조사의 지침에 따라 분리하였다. 분리된 총 RNA는 cDNA 합성 키트(Takara, 일본)를 이용하여 cDNA로 합성한 후 real time PCR을 이용하여 iNOS, COX-2 및 염증성 사이토카인의 발현을 측정하였다. Real time PCR을 위하여 사용한 프라이머 서열은 하기 표 2에 나타내었다.

유전자	서열	서열번호
iNOS	5′-CTATCAGGAAGAAATGCAGGAGAT-3′ (sense)	1
	5′-GAGCACGCTGAGTACCTCATT-3′ (antisense)	2
COX-2	5′-GTAGCCAGCAAAGCCTAGGAGCAAC-3′ (sense)	3
	5′-CTACTGAGTACCAGGCCAGCACAA-3′ (antisense)	4
TNF-α	5′-GTCTACTGAACTTCGGGGTGAT-3′ (sense)	5
	5′-ATGATCTGAGTGTGAGGGTCTG-3′ (antisense)	6
IL-1β	5′-GAAGAGCCCATCCTCTGTGA-3′ (sense)	7
	5′-TTCATCTCGGAGCCTGTAGTG-3′ (antisense)	8
IL-6	5′-ACAAAGCCAGAGTCCTTCAGAG-3′ (sense)	9
	5′-CATTGGAAATTGGGGTAGGA-3′ (antisense)	10
IFN-γ	5′-AAGCGTCATTGAATCACACC-3′ (sense)	11
	5′-TGACCTCAAACTTGGCAATA-3′ (antisense)	12
β-actin	5′-CGTGAAAAGATGACCCAGAT-3′ (sense)	13
	5′-ACCCTCATAGATGGGCACA-3′ (antisense)	14

그 결과, 도 3에 나타낸 바와 같이, LPS 처리로 iNOS, COX-2 및 염증성 사이토카인의 발현이 모두 증가하였으며, 담팔수 단독 추출물, 담팔수 추출물과 설파살라진 혼합처리에 의해서 iNOS, COX-2 및 염증성 사이토카인의 발현이 억제되는 것을 확인하였다. 그 중 iNOS, COX-2, IL-1β, 및 IL-6는 설파살라진 단독 처리군보다 담팔수 추출물과의 혼합처리군에서 더 우수한 억제 효능을 나타내었다.

실험예 4. 웨스턴 블롯 분석

RAW264.7 세포에서 담팔수 추출물 및 설파살라진 처리에 의한 iNOS, COX-2 및 TNF-α의 단백질 발현을 확인하였다.

구체적으로, RAW264.7 세포에 상기 실험예 3에서와 동일한 농도의 담팔수 추출물 및 설파살라진을 처리한 후 LPS(1 μg/mL)로 30분 또는 24시간 동안 처리하고, RIPA 버퍼(Thermo Scientific, 미국)를 이용하여 단백질을 추출하였으며, 동량의 단백질(25 μg)을 SDS-PAGE 겔에 전기영동으로 분리하고 니트로셀룰로스 멤브레인으로 전기-블롯팅하였다. 그런 다음, 멤브레인을 5 % 탈지유(Skim milk)로 차단한 후 다른 항체들과 함께 배양하였으며, 상기 항체들은 화학형광 ECL 검정 키트 제조업자의 지시에 따라 사용하여 단백질을 검출하였다.

그 결과, 도 4a에 나타낸 바와 같이, LPS 처리로 iNOS, COX-2, 및 TNF-α의 단백질 발현이 증가하였으며, 담팔수 단독 추출물, 담팔수 추출물과 설파살라진의 혼합처리에 의해서 iNOS, COX-2, TNF-α의 단백질 발현이 모두 감소하였고, 설파살라진 단독 처리군보다 우수한 억제 효능을 나타내었다.

또한, iNOS, COX-2, 및 TNF-α의 상위 전사인자인 NF-κB(p65) 및 IκBα의 활성화를 측정하였다. 그 결과, 도 4b에 나타낸 바와 같이, LPS 처리로 NF-κB(p65) 및 IκBα의 활성화 (p-NF-κB(p65), p-IκBα)가 증가하였으며, 담팔수 단독 추출물, 담팔수 추출물과 설파살라진의 혼합처리에 의해 NF-κB 및 IκBα의 활성화가 억제되는 것을 확인하였다.

이러한 결과는 iNOS 및 COX-2의 저해가 LPS 자극 RAW264.7 세포에서 NF-κB 신호 전달 저해에 의해 매개된 것임을 나타낸다.

실험예 5. 콜라겐 유도 류마티스 관절염 마우스 모델에서 담팔수 추출물 및 설파살라진 혼합 투여에 따른 관절염 평가

상기 실시예 3에서 제작한 CIA 마우스에 담팔수 추출물 또는 담팔수 추출물과 설파살라진을 혼합하여 매일 1회씩 4주 동안 상기 표 1에 나타낸 다양한 농도별로 경구 투여하였다. 또한, 음성대조군 마우스로서 관절염을 유도하지 않은 마우스(Normal)도 함께 실험하였다.

실험 기간 동안 주 1회 사지에서의 붉어짐 및 부어오름 등의 변화를 기록하였다. 조사에 대한 점수 계산은 하기 표 3에 나타낸 관절염 지수(arthritis index) 5등급에 기초하였으며, 사지 당 4점을 만점으로, 마리당 16점을 최대값으로 산정하여 평가하였다.

스코어	증상
0 1 2 3 4	관절염 증상이 나타나지 않음 발바닥 및 발꿈치가 약간 붉고 부어 올랐음 발꿈치 및 발목이 적당히 붉고 부어 올랐음 발꿈치 및 발목이 심하게 붉고 부어 올랐음 관절이 경직되고, 뼈가 변형되었음

관절의 부어오름 정도의 측정은 부종측정기(plethysmometer)(BioSurpulus, 미국)를 사용하여 발 부종을 측정하고 각 그룹당 평균으로 나타내었다.

담팔수 단독 추출물 또는 담팔수 추출물과 설파살라진을 혼합하여 4주간 경구투여 후 마우스를 희생하고 혈액 및 연골조직 샘플에서 관절구조 분석을 실시하였다. 관절염의 발생 여부와 정도는 각 군의 마우스 앞발과 뒷발의 부종 유무와 그 볼륨으로 평가하였다.

그 결과, 도 5에 나타낸 바와 같이, 담팔수 단독 추출물 및 담팔수 추출물과 설파살라진 혼합 투여군 모두 상기 추출물 또는 설파살라진을 투여하지 않은 류마티스 관절염 모델(CIA)과 비교하여 관절염 지수가 감소한 것을 확인하였으며(도 5의 좌측 도면), 발 부종 또한 대조군과 비교하여 억제되는 것을 확인하였다(도 5의 우측 도면).

실험예 6. 콜라겐 유도 류마티스 관절염 마우스 모델에서 담팔수 추출물 및 설파살라진 혼합 투여에 따른 사이토카인 및 케모카인 발현 확인

상기 실험예 5에서와 동일한 방법으로 담팔수 단독 추출물 또는 담팔수 추출물과 설파살라진을 혼합하여 4주간 경구투여 후 마우스를 희생하고 혈액 및 연골조직 샘플에서 염증마커 분석을 실시하였다.

관절염의 염증에 중요한 매개체인 TNF-α, IL-1β, 및 IL-6에 대한 담팔수 추출물의 효과를 ELISA(Enzyme-linked immunosorbent assay) 키트를 이용하여 확인하였으며, TNF-α, IL-1β, 및 IL-6를 키트(R&D system, 미국)에 구성된 물품을 가지고 제조사의 프로토콜에 맞춰 반응시킨 뒤 측정하였고, 그 결과를 도 6a에 나타냈다.

도 6a에 나타낸 바와 같이, TNF-α, IL-1β, 및 IL-6는 류마티스 관절염 모델(CIA)에서 유의적으로 높게 나타났고, 담팔수 단독 추출물 및 담팔수 추출물과 설파살라진 혼합 투여군에서 감소되는 것을 확인할 수 있었다. 특히, 담팔수 추출물과 설파살라진 혼합 투여군에서 IL-1β 및 IL-6 감소 효과가 설파살라진 단독 투여군 및 담팔수 단독 추출물 투여군에 비해 뛰어난 것을 확인하였다.

또한, 마우스 연골조직에서 케모카인인 MIP-1α와 RANTES의 발현을 측정하기 위해, 상기 실험예 3의 방법으로 마우스의 연골조직에서 mRNA를 추출하여 cDNA로 합성한 후 real-time PCR로 유전자 발현량을 측정하였다. 이때 실험에 사용한 프라이머는 하기 표 4에 나타내었다.

유전자	서열	서열번호
MIP-1α	5′-CACCCTCTGTCACCTGCTCAAC-3′ (sense)	15
	5′-GGTTCCTCGCTGCCTCCAAGA-3′ (antisense)	16
RANTES	5'-ATGAAGATCTCTGCAGCTGCCC-3' (sense)	17
	5'-TGCTGGTGTAGAAATACTCCT-3' (antisense)	18
β-actin	5′-CGTGAAAAGATGACCCAGAT-3′ (sense)	13
	5′-ACCCTCATAGATGGGCACA-3′ (antisense)	14

상기 케모카인인 MIP-1α와 RANTES의 발현 변화를 확인한 결과, 도 6b에 나타낸 바와 같이, 담팔수 단독 추출물 및 담팔수 추출물과 설파살라진 혼합 투여군에서 MIP-1α와 RANTES의 발현이 억제되는 것을 확인하였으며, 특히 설파살라진 단독 처리군보다 더 우수한 효능을 나타내는 것을 알 수 있었다.

실험예 7. Micro-CT 이미지 분석

관절염 유도 후 이에 대한 담팔수 추출물의 효과를 살펴보기 위해, 상기 실험이 종료된 후 마우스를 희생하여 마우스의 발목관절과 넙다리뼈 주위의 피부와 근육을 제거하고, 포르말린에 24시간 고정하였다. 그리고 나서 Micro-CT 장비를 사용하여 이를 촬영하였다.

그 결과, 도 7에 나타낸 바와 같이, 류마티스 관절염 모델 (CIA)에서는 발목관절 부위의 파괴가 심하게 일어난 것을 확인하였으며, 담팔수 추출물과 설파살라진 혼합 투여군에서는 발목관절 부위 파괴가 상대적으로 적게 나타났음을 확인할 수 있었다.

실험예 8. Monosodium iodoacetate(MIA) 유도 퇴행성 관절염 랫드 모델에서 담팔수 추출물 투여에 따른 관절염 평가

상기 실시예 3에서 제작한 MIA 유도 퇴행성 관절염 랫드에 담팔수 추출물 100 mg/kg를 매일 1회씩 8주 동안 경구 투여하였으며, 음성대조군으로 관절염을 유도하지 않은 랫드(CON)도 함께 실험하였다.

8주간 경구투여 후 랫드를 희생하고 혈액을 수득하여 혈청을 분리하였다. 혈청에서 관절염의 염증에 중요한 매개체인 IL-6 및 TNF-α, 연골조직에서 특이적인 프로테오글리칸(proteoglycan)인 아그레칸(aggrecan)에 대한 담팔수 추출물의 감소 효과를 ELISA(Enzyme-linked immunosorbent assay) 키트를 이용하여 확인하였으며, IL-6 및 TNF-α, 아그레칸 키트(R&D system, 미국)에 구성된 물품을 이용하여 제조사의 프로토콜에 맞춰 반응시킨 뒤 이를 측정하고, 그 결과를 도 8a 내지 8c에 나타냈다.

도 8a 내지 8c에 나타낸 바와 같이, 혈중 IL-6(도 8a), TNF-α(도 8b), 및 아그레칸(도 8c)의 단백질 발현은 퇴행성 관절염 모델(MIA)에서 높게 나타났고, 이는 담팔수 추출물 투여군에서 감소되는 것을 확인할 수 있었다.

상기 실험예들로부터, 본 발명의 담팔수 추출물 또는 담팔수 추출물과 설파살라진의 혼합 처리는 LPS 자극 RAW264.7 세포에서 NF-κB를 통해 iNOS, COX-2 및 염증성 사이토카인의 발현을 억제함이 규명되었으며, 콜라겐으로 유도된 류마티스 관절염 동물모델에서 관절염 지수 및 발의 부종 감소, 혈중 염증성 사이토카인 함량 감소, 연골조직에서의 MIP-1α, RANTES 유전자 발현 감소를 통해 류마티스 관절염을 억제하는 효과를 가지는 것을 확인하였다. 또한, Monosodium iodoacetate(MIA)로 유도된 퇴행성 관절염 동물 모델에서 본 발명의 담팔수 추출물 투여에 의해 혈중 염증성 사이토카인의 발현이 억제되었으며, 연골조직에서 특이적인 프로테오글리칸인 아그레칸의 발현 억제를 통해 담팔수 추출물이 퇴행성 관절염을 억제하는 효과 또한 가지고 있는 것을 확인하였다.

전술한 본 발명의 설명은 예시를 위한 것이며, 본 발명이 속하는 기술분야의 통상의 지식을 가진 자는 본 발명의 기술적 사상이나 필수적인 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 쉽게 변형이 가능하다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 이상에서 기술한 실시예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적이 아닌 것으로 이해해야 한다.

<110> GENENCELL INC. <120> Composition for preventing, treating, or improving arthritis comprising Elaeocarpus sylvestris extract or mixture of Elaeocarpus sylvestris extract and sulfasalazine as an active ingredient <130> MP21-124 <160> 18 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> iNOS sense primer <400> 1 ctatcaggaa gaaatgcagg agat 24 <210> 2 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> iNOS antisense primer <400> 2 gagcacgctg agtacctcat t 21 <210> 3 <211> 25 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> COX-2 sense primer <400> 3 gtagccagca aagcctagga gcaac 25 <210> 4 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> COX-2 antisense primer <400> 4 ctactgagta ccaggccagc acaa 24 <210> 5 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> TNF-alpha sense primer <400> 5 gtctactgaa cttcggggtg at 22 <210> 6 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> TNF-alpha antisense primer <400> 6 atgatctgag tgtgagggtc tg 22 <210> 7 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> IL-1beta sense primer <400> 7 gaagagccca tcctctgtga 20 <210> 8 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> IL-1beta antisense primer <400> 8 ttcatctcgg agcctgtagt g 21 <210> 9 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> IL-6 sense primer <400> 9 acaaagccag agtccttcag ag 22 <210> 10 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> IL-6 antisense primer <400> 10 cattggaaat tggggtagga 20 <210> 11 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> IFN-gamma sense primer <400> 11 aagcgtcatt gaatcacacc 20 <210> 12 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> IFN-gamma antisense primer <400> 12 tgacctcaaa cttggcaata 20 <210> 13 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> beta-actin sense primer <400> 13 cgtgaaaaga tgacccagat 20 <210> 14 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> beta-actin antisense primer <400> 14 accctcatag atgggcaca 19 <210> 15 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> MIP-1alpha sense primer <400> 15 caccctctgt cacctgctca ac 22 <210> 16 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> MIP-1alpha antisense primer <400> 16 ggttcctcgc tgcctccaag a 21 <210> 17 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> RANTES sense primer <400> 17 atgaagatct ctgcagctgc cc 22 <210> 18 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> RANTES antisense primer <400> 18 tgctggtgta gaaatactcc t 21

Claims (16)

1. 담팔수 추출물; 또는 담팔수 추출물과 설파살라진 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염의 혼합물을 유효성분으로 포함하는, 관절염 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
   
2. 제1항에 있어서,
   상기 관절염은 류마티스 관절염 또는 퇴행성 관절염인 것을 특징으로 하는, 관절염 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
   
3. 제1항에 있어서,
   상기 담팔수 추출물은 물, C₁ 내지 C₄의 저급알코올, n-헥산, 에틸아세테이트, 아세톤, 아세토니트릴, 부틸아세테이트, 1,3-부틸렌 글리콜, 메틸렌클로라이드, 및 이들의 혼합용매로 구성된 군으로부터 선택된 하나의 용매로 추출되는 것을 특징으로 하는, 관절염 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
   
4. 제1항에 있어서,
   상기 혼합물은 담팔수 추출물 : 설파살라진 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염의 중량비가 1 : 0.2 내지 3이 되도록 혼합되는 것을 특징으로 하는, 관절염 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
   
5. 제1항에 있어서,
   상기 담팔수 추출물은 담팔수 잎 추출물인 것을 특징으로 하는, 관절염 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
   
6. 제1항에 있어서,
   상기 조성물은 일산화 질소(NO) 생성을 억제하는 것을 특징으로 하는, 관절염 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
   
7. 제1항에 있어서,
   상기 조성물은 산화질소 합성효소(iNOS), 사이클로옥시게나제-2(COX-2), 종양괴사인자 알파(TNF-α), 인터루킨-1베타(IL-1β), 및 인터루킨-6(IL-6)로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 발현을 억제하는 것을 특징으로 하는, 관절염 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
   
8. 제1항에 있어서,
   상기 조성물은 I-κB 또는 핵 인자(NF)-κB의 활성을 억제하는 것을 특징으로 하는, 관절염 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
   
9. 제1항에 있어서,
   상기 조성물은 대식세포 염증성 단백질(MIP)-1α 또는 RANTES의 발현을 억제하는 것을 특징으로 하는, 관절염 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
   
10. 제1항에 있어서,
    상기 조성물은 관절염 지수 감소 또는 발 부종 억제 활성을 가지는 것을 특징으로 하는, 관절염 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
    
11. 제1항에 있어서,
    상기 조성물은 아그레칸(aggrecan)의 발현을 억제하는 것을 특징으로 하는, 관절염 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
    
12. 담팔수 추출물; 또는 담팔수 추출물과 설파살라진 또는 이의 식품학적으로 허용 가능한 염의 혼합물을 유효성분으로 포함하는, 관절염 예방 또는 개선용 식품 조성물.
    
13. 제12항에 있어서,
    상기 관절염은 류마티스 관절염 또는 퇴행성 관절염인 것을 특징으로 하는, 관절염 예방 또는 개선용 식품 조성물.
    
14. 제12항에 있어서,
    상기 담팔수 추출물은 물, C₁ 내지 C₄의 저급알코올, n-헥산, 에틸아세테이트, 아세톤, 아세토니트릴, 부틸아세테이트, 1,3-부틸렌 글리콜, 메틸렌클로라이드, 및 이들의 혼합용매로 구성된 군으로부터 선택된 하나의 용매로 추출되는 것을 특징으로 하는, 관절염 예방 또는 개선용 식품 조성물.
    
15. 제12항에 있어서,
    상기 혼합물은 담팔수 추출물 : 설파살라진 또는 이의 식품학적으로 허용가능한 염의 중량비가 1 : 0.2 내지 3이 되도록 혼합되는 것을 특징으로 하는, 관절염 예방 또는 개선용 식품 조성물.
    
16. 제12항에 있어서,
    상기 담팔수 추출물은 담팔수 잎 추출물인 것을 특징으로 하는, 관절염 예방 또는 개선용 식품 조성물.

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