KR102140982B1 - 데가렐릭스의 제조 방법 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 주사용수로 20 mg/ml의 양으로 재구성시 15 mPas 이하의 점도를 나타내는, 동결건조된 데가렐릭스 완제의 제조 방법을 제공한다. 또한, 본 발명은, 물에 20 mg/ml의 양으로 재구성시 3.2 mPas 이하의 점도를 나타내는, 동결건조된 데가렐릭스 물질, 및 상기한 동결건조된 데가렐릭스 원제의 공급 방법을 제공한다.

Description

데가렐릭스의 제조 방법 {MANUFACTURE OF DEGARELIX}
본 발명은 데가렐릭스의 제조 방법에 관한 것이다.
전립선 암은 산업화된 국가에서 남성 질환의 발병과 사망의 주된 요인이다. 데가렐릭스는 FE200486로도 불리우며, 안드로겐 차단 요법이 필요한 전립선 암 환자를 대상으로 개발되어, 승인된, 제3 세대 고나도트로핀 분비 호르몬 (GnRH) 수용체 길항제 (GnRH 차단제)이다 (Doehn et al., Drugs 2006, vol. 9, No. 8, pp. 565-571; WO　09846634). 데가렐릭스는 뇌하수체에서 GnRH 수용체를 즉각적이고 경쟁적으로 차단함으로써 작용하지만, 다른 GnRH 길항제들처럼 시상하부-뇌하수체-성샘 축을 통해 황체 형성 호르몬의 생산을 조기 자극하지 않아, 테스토스테론 서지 (testosterone surge)나 임상적인 플레어 (clinical flare)를 일으키지 않는다 (Van Poppel, Cancer Management and Research, 2010:2 39-52; Van Poppel et al., Urology, 2008, 71(6), 1001-1006); James, E.F. et al., Drugs, 2009, 69(14), 1967-1976).
데가렐릭스는, 7개의 비천연 아미노산을 포함하고, 이중 5개가 D-아미노산인, 선형의 합성 데카펩타이드이다. 이것은 데카펩타이드의 벡본에 10개의 키랄 센터를 가지고 있다. 서열에서 5번 위치의 아미노산 잔기는 측쇄 치환시 추가적인 키랄 센터를 가지게 되어, 총 11개의 키랄 센터를 제공한다. 이 화합물의 CAS 등록 번호는 214766-78-6 (유리 염기형)이며, 상표 Firmagon™으로 시판되고 있다. 이 약물은 화학적으로는 D-알라닌아미드, N-아세틸-3-(2-나프탈레닐)-D-알라닐-4-클로로-D-페닐알라닐-3-(3-피리디닐)-D-알라닐-L-세릴-4-[[[(4S)-헥사하이드로-2,6-다이옥소-4-피리미디닐]카르보닐]아미노]-L-페닐알라닐-4-[(아미노카르보닐)아미노]-D-페닐알라닐-L-루실-N6-(1-메틸에틸)-L-라이실-L-프로릴-로 지칭되며, 아래 화학 구조(이하 식 I로 지칭됨)로 표시된다:
Figure 112014123233092-pct00001
데가렐릭스의 구조는 또한 하기 식으로 표시될 수 있다:
Ac-D-2Nal-D-4Cpa-D-3Pal-Ser-4Aph(L-Hor)-D-4Aph(Cbm)-Leu-Lys(iPr)-Pro-D-Ala-NH2
상기 식에서, Ac는 아세틸이고, 2Nal은 2-나프틸알라닌이고, 4Cpa는 4-클로로페닐알라닌이고, 3Pal은 3-피리딜알라닌이고, Ser은 세린이고, 4Aph는 4-아미노페닐알라닌이고, Hor은 하이드로오로틸, Cbm은 카바모일이고, Leu는 루신이고, Lys(iPr)는 N6-이소프로필라이신이고, Pro는 프롤린이고, Ala는 알라닌이다.
본 발명을 설명하기 위한 목적으로, 데가렐릭스의 각 아미노산은 하기와 같은 약식 표시법으로 제공될 것이다:
AA1은 D-2Nal, AA2는 D-4Cpa, AA3는 D-3Pal, AA4는 Ser, AA5는 4Aph(L-Hor), AA6는 D-Aph(Cbm), AA7은 Leu, AA8은 Lys(iPr), AA9은 Pro, AA10은 D-Ala임.
즉, 데가렐릭스는 Ac-AA1-AA10-NH2로 표시될 수 있다.
데가렐릭스는 기존에 WO 98/46634 및 Jiang et al., J. Med. Chem. 2001, 44, 453-467에 보고된 바와 같이 Boc-고상 펩타이드 합성 (SPPS) 방법을 이용하여 제조되고 있다.
WO2010/12835 및 WO2011/066386은 Fmoc를 이용한 데가렐릭스 제조 방법을 개시하고 있다. WO2012/055905 및 WO2012/055903은 데가렐릭스 고상 합성법을 개시하고 있다.
데가렐릭스의 물리화학적 특정화를 통해, 이 데카펩타이드가 자가-조립 능력을 가지고 있으며, 궁극적으로 수성 용액 중에서 젤을 형성한다는 것이 확인되었다. 자가-응집은, 피하 또는 근육내 주입시, 이 화합물이 인 시추에서 디포트 (depot)를 형성하게 한다. 데가렐릭스 디포트는 투여량에 따라 구강을 통해 활성 성분의 지속적인 방출을 제공하는 것으로 확인되었다. 현재, 이 약물은 1차 주입시 120 mg (40 mg/ml)의 투여량으로 투여되며, 1개월에 걸쳐 지속적인 방출을 위해서는 80 mg (20 mg/ml)으로 투여된다.
본 발명자들은, 놀랍게도 펩타이드 조 산물 원제 (drug substance)의 가공 (예, Fmoc 전략, 액상 합성 또는 다른 경로를 통해 수득됨)을 통해 재구성된 완제 (drug product)의 점도, 따라서 지속적인 방출 특성과 생체이용성을 조절할 수 있음을 알게 되었다. 원제의 점도는 심지어 추가로 재구성 및 동결건조한 후에도 놀라울 정도로 완제의 점도와 상관성을 가지고 있다. 완제의 점도는, 적합한 디포트를 형성하여 서방성을 달성하기 위해, 최대 15 mPas 범위내로, 바람직하게는 12 mPas 범위내로 조절되어야 한다. 본 발명은, 재구성 유동액 ml 당 데가렐릭스를 20 mg의 농도로, 재구성 유동액에서 재구성하여 측정시, 상기한 점도를 나타내는 완제를 제조할 수 있는 방법을 제공한다.
제1 측면에서, 본 발명은, 하기 단계를 포함하는, 주사용수에서 데가렐릭스 유리 염기 20 mg/ml의 양으로 재구성하여 측정시, 데가렐릭스 완제의 점도가 15 mPas 이하, 바람직하게는 2 - 12 mPas 범위내에 있도록 조절하는 방법을 제공한다:
1. 데가렐릭스 유리 염기 20 mg/ml의 양으로 만니톨 함유 물 (2.5 % w/V)에 용해하여 측정시, 3.2 mPas 이하의 점도를 나타내는 동결건조된 데가렐릭스 원제를 제공하는 단계;
2. 만니톨-함유 물에 상기 동결건조된 데가렐릭스 원제를 용해하여, 데가렐릭스-만니톨의 수성 혼합물을 제공하는 단계;
3. 상기 데가렐릭스-만니톨의 수성 혼합물을 동결건조하여, 데가렐릭스 완제를 제공하는 단계.
제2 측면에서, 본 발명은, 하기 단계를 포함하는, 데가렐릭스 유리 염기 20 mg/ml의 양으로 주사용수에서 재구성하여 측정시, 15 mPas 이하, 바람직하게는 2 - 12 mPas 범위의 점도를 나타내는, 동결건조된 데가렐릭스 완제의 제조 방법을 제공한다:
1. 데가렐릭스 유리 염기 20 mg/ml의 양으로 만니톨 함유 물 (2.5 % w/V)에 용해하여 측정시, 3.2 mPas 이하의 점도를 나타내는 동결건조된 데가렐릭스 원제를 제공하는 단계;
2. 상기 동결건조된 데가렐릭스 원제를 만니톨-함유 물에 용해하여, 데가렐릭스-만니톨의 수성 혼합물을 제공하는 단계; 및
3. 상기 데가렐릭스-만니톨의 수성 혼합물을 동결건조하여, 데가렐릭스 완제를 제공하는 단계.
제3 측면에서, 본 발명은 액체에서 데가렐릭스 유리 염기 20 mg/ml의 양으로 재구성시, 15 mPas 이하, 바람직하게는 2 - 12 mPas 범위의 점도를 나타내는, 동결건조된 데가렐릭스 완제 및 재구성용 액체 (재구성 유동액)를 포함하는 데가렐릭스 완제의 제조 방법을 제공하며, 상기 방법은
1. 동결건조된 데가렐릭스 원제를 만니톨 함유 물 용액에 용해하여, 데가렐릭스-만니톨 혼합물을 제공하는 단계;
2. 상기 데가렐릭스-만니톨 혼합물을 동결건조하여, 데가렐릭스 완제를 제공하는 단계를 포함하며,
동결건조 전에 상기 데가렐릭스-만니톨 혼합물에 점도-강하제가 첨가된다.
또한, 본 발명은, 데가렐릭스 유리 염기 20 mg/ml의 양으로 2.5 wt.% 만니톨 함유 물에 용해시, 3.2 mPas 이하의 점도를 나타내는 동결건조된 데가렐릭스 원제와 이러한 동결건조된 데가렐릭스 원제의 제조 방법을 제공한다.
아울러, 본 발명은, 데가렐릭스 유리 염기 20 mg/ml의 양으로 재구성 유동액으로 재구성시, 15 mPas 이하, 바람직하게는 2 - 12 mPas 범위의 점도를 나타내며, 0.001 - 5 mg/ml 함량의 점도-강하제를 포함하는, 동결건조된 데가렐릭스 완제와 재구성 유동액을 포함하는, 데가렐릭스 완제를 제공한다.
도 1은 원제의 점도와 완제의 점도 간의 상관성을 도시한 것이다.
도 2 및 도 3은 3일 (도 2) 및 28일 (도 3)에 데가렐릭스 투약 현탁물 (20 mg/ml)의 역학 점도 (dynamic viscosity)와 데갈렐릭스 혈장 농도 (랫) 간의 상관성을 도시한 것이다.
데가렐릭스 원제를 이용하여 제1 측면 및 제2 측면에 따른 동결건조된 데가렐릭스 완제를 제조하는 방법이 보다 상세하게 기술될 것이다.
데가렐릭스 원제
데카펩타이드인 데가렐릭스는 WO98/46634, WO2010/12835 및 WO2011/066386에 기술된 바와 같은 고상 펩타이드 합성, 또는 WO2012/055905 또는 WO2012/055903에 기술된 바와 같은 액상 펩타이드 합성에 의해 제조할 수 있다. 이러한 펩타이드 합성으로 데가렐릭스 조산물이 수득되며, 이는 더욱 정제한 다음 동결건조하여, 데가렐릭스, 아세트산, 잔량의 물 및 있는 경우, 제조 방법에 기인한 미량의 불순물로 구성된 동결건조 산물로 제공된다. 이 산물은 본원에서 데가렐릭스 원제로 언급되거나 또는 주로 원제로 언급된다. 데가렐릭스 원제는, 바람직하게는, 데가렐릭스, 4.5 - 10 wt.% 아세트산 (w/w), 및 10 wt.% 이하의 물 (w/w)로 구성된다.
원제의 제조는 용액 중에 정제된 데가렐릭스를 제공하는 제1 단계 (A)와 데가렐릭스 원제를 제공하는 제2 단계 (B)로 나뉠 수 있다.
단계 (A): 정제
단계 (A)는 한 단계 이상, 바람직하게는 2 단계로 데가렐릭스 조산물을 정제한 다음, 선택적으로 이후의 컬럼 농축 및/또는 염 교환 단계를 포함한다.
LPPS 또는 SPPS에 의해 수득된 데가렐릭스 조산물을 먼저 정제한다. 정제는, 바람직하게는, SPPS 또는 LPPS에 의해 수득된 펩타이드 용액을 역상 물질이 충진된 컬럼에, 바람직하게는 완충제로 미리-평형화된 컬럼에 적용하여 수행된다. 이 1차 정제 단계는 바람직하게는 HPLC에 의한 측정시 95% 이상의 순도를 제공한다.
바람직한 구현예에서, 상기 역상 컬럼 크로마토그래피는 HPLC에 의한 측정시 97.5% 이상의 순도를 가진 산물을 수득하기 위해 반복 수행한다.
특히 바람직한 구현예에서, 순도가 95% 이상인, 바람직하게는 97.5% 이상인 정제된 데가렐릭스를, 추가로 컬럼 크로마토그래피 단계에 투입하여, 데가렐릭스 용액을 사전 농축하고, 및/또는 염 교환 (특히, 최종 정제 단계에서 용리액의 pH 조절에 아세트산이 사용된 경우라면)을 수행한다.
이러한 사전 농축 및/또는 염 교환 단계는 또한 바람직하게는 역상 컬럼에서 이루어진다: 정제된 데가렐릭스 용액을 물로 희석 (바람직하게는 1.5 - 2.5배)한 다음 완충제로 미리-평형화된 컬럼에 적용한다. 이 컬럼을 바람직하게는 먼저 에탄올 (저농도, 일반적으로 20% 이하) 및 암모늄 아세테이트 수용액으로 세척한 다음 에탄올 (저농도, 일반적으로 20% 이하)/아세트산/물로 세척한다. 그런 다음, 컬럼을, 예를 들어 에탄올 (고농도, 일반적으로 20 - 60%)/아세트산/물로 용리시켜, 정제 단계(들) 이후의 용액에 비해 데갈렐릭스가 더욱 농축된 용액을 수득한다. 이 과정에서 용리제는 유기 변형제로서 에탄올로 한정되지 않는다. 아세토니트릴과 같은 다른 용매들도 사용될 수 있다.
단계 (A)에 의해 용액 중의 정제된 데가렐릭스가 수득된다.
단계 (B)
데가렐릭스 원제를 수득하기 위한 용액 중의 정제된 데가렐릭스의 후속 처리는, 여러가지 방식으로 이행할 수 있다. 다음과 같은, 바람직한 4가지 방법이 예시된다 (단계 (B1), (B2), (B3), 및 (B4)).
단계 (B1): 농축 - 탈-응집 - 동결건조
용액 중의 정제된 데가렐릭스를 먼저 에탄올 또는 아세토니트릴과 같은 다른 유기 변형제를 증발에 의해 제거하는, 농축 단계에 투입한다. 이 단계는, 바람직하게는 rotavap 증발기를 이용하여 수행된다. 증발시 바람직한 최고 온도는 40℃이다. 그에 따라 수득되는 고도로 농축되고, 점도인 데가렐릭스 산물 (통상 젤 형태인 응집된 산물)에 아세트산 (탈-응집 단계)을 처리하고, 바람직하게는 여과 및 동결건조한다.
탈-응집 단계는 원제의 점도 조절에 있어 중요하다. 따라서, 탈-응집 단계는 바람직하게는 하기 조건들 중 하나 이상으로, 가장 바람직하게는 이들 모두를 이용하여 수행된다:
- 최종 아세트산 농도: 6 - 40%, 바람직하게는 15 - 30%(v/v)
- 온도 0 - 35℃, 바람직하게는 2 - 30℃, 가장 바람직하게는 5 - 15℃
- 데가렐릭스 농도 (유리 염기) 5 - 35 g/l, 바람직하게는 10 - 20 g/l
- 기간 1-15시간
이러한 제한내에서, 프로세스 파라미터들의 적정 조합은 간단한 실험을 통해 확인할 수 있다.
동결건조 단계는, 바람직하게는 1.2 - 2.4 cm 두께의 얼음에서 1-17시간의 2차 건조 시간으로 수행된다. 상기 2차 건조 온도는 통상 약 20℃ (15 - 25℃)이다.
바람직한 구현예에서, 따라서, 단계 (B1)은 (2.5 % (w/V) 만니톨 함유 물 1 ml에 데가렐릭스 유리 염기 20 mg을 용해시켜 측정시, 3.2 mPas 미만, 바람직하게는 1.15 - 2 mPas의 점도를 나타내는 동결건조된 원제를 제공해준다. 점도 측정 방법은 실험 섹션에 기술되어 있다. 이러한 점도 요건에 부합하는 원제는 또한 원제 (1)로 언급되며, 이 점도 요건에 부합되지 않는 원제는 원제 (2)로 지칭된다. 원제 (2)는 물 1 ml에 20 mg의 양으로 용해시 바람직한 점도 3.2 - 15 mPas를 가진다. 원제 (2)는 3.2 mPas 보다 현저하게 높은 조건에서는, 그 점도를 정확하게 측정할 순 없지만, 심지어 젤과 유사할 수 있다.
이와 관련하여, "물 1 ml에 20 mg의 양으로 용해시"는 주로 점도를 측정하기 위한 조건을 의미하는 것이며, 원제가 20 mg/ml의 용액으로 존재한다는 의미는 아니라는 것에 유념하여야 한다. 가장 바람직하게는, 원제는 동결건조된 형태로 존재한다.
원제, 특히 원제 (1)은 바람직하게는 아세트산 함량 4.5 - 10.0 % (w/w) 및 수분량 10 %(w/w) 미만인 것으로 추가로 특정화된다. 아울러, 원제, 특히 원제 (1)은, 바람직하게는, 0.10 AU 미만의 광학 밀도를 나타난다 (2.5 % 만니톨 (수용액) 중의 데가렐릭스 유리 염기 20 mg/ml 농도). 광학 밀도 측정 방법은 실험 섹션에 기술되어 있다.
이에, 본 발명은 하기 단계를 포함하는 데가렐릭스 원제 (1)의 제조 방법을 제공한다:
a. 액상 또는 고상 펩타이드 합성에 의해 수득된 데가렐릭스를 정제하여, 순도 95% 이상의 데가렐릭스 용액을 수득하는 단계;
b. 용매 증발을 통해 데가렐릭스 용액을 농축하여, 응집된 데가렐릭스를 수득하는 단계;
c. 응집된 데가렐릭스를 아세트산으로 탈-응집하는 단계; 및
d. 탈-응집된 데가렐릭스를 동결건조하여, 데가렐릭스 원제를 제공하는 단계.
본 발명은, 또한, 하기 단계를 포함하는, 동결건조 및 물을 이용한 재구성된 이후에, 2.5% w/v 만니톨 중의 20 mg/ml 데가렐릭스 용액의 점도가 15 mPas 이하가 되도록, 데가렐릭스의 점도를 조절하는 방법을 제공한다:
응집된 데가렐릭스에 아세트산을 처리하는 단계; 및
데가렐릭스 및 아세트산의 혼합물을 동결건조하는 단계.
특정 구현예들에서, 아세트산 첨가 및 동결건조를 위한 조건은 상기에 기술된 바와 같다. 특정 구현예에서, 동결건조한 이후의 아세트산 함량은 4.5 - 10.0 % (w/w)이다.
단계 (B2): 컬럼 농축 - 동결건조
단계 A에서 수득한 (바람직하게는, 한 단계 또는 2 단계 정제 방법 이후에, 예를 들어, 사전-농축/염 교환은 수행하지 않음) 데가렐릭스 용액을 크로마토그래피 컬럼에 주입하고, 이온 교환을 수행하고, 컬럼을 희석 아세트산 (약 1%)으로 헹군(세척한)다. AcOH 농도 20 - 50 wt.%, 바람직하게는 23 - 37 wt.%, 바람직하게는 23 - 27 wt.%, 바람직하게는 27 - 37 wt.%, 바람직하게는 33 - 37 wt.%, 바람직하게는 35 wt.%의 아세트산 수용액을 이용하여 컬럼으로부터 데가렐릭스를 용리시킨 다음, 선택적으로 적절한 AcOH 농도로 희석시키고, 여과한다. 그런 후, 데가렐릭스의 AcOH/물 용액을 동결건조한다. 컬럼에서 정지상은 여러가지 타입일 수 있다. 정지상은 탄화수소 (지방족 및 방향족), 알코올, 니트릴, 적정 산/염기 특성을 가진 기 및 이온-교환 기와 같은 관능기를 포함할 수 있지만, 이러한 타입의 기들로 한정되지 않는다. 이 공정으로 원제, 바람직하게는 원제 (1)이 수득된다.
따라서, 본 발명은 하기 단계를 포함하는 데가렐릭스 원제의 제조 방법을 제공한다:
a. 액상 또는 고상 펩타이드 합성에 의해 수득된 데가렐릭스를 정제하여, 순도 95% 이상의 데가렐릭스 용액을 수득하는 단계;
b. 데가렐릭스 용액을 크로마토그래피 컬럼에 주입하는 단계;
c. 데가렐릭스를 아세트산을 이용하여 컬럼으로부터 용리시켜, 용리된 데가렐릭스를 수득하는 단계;
d. 용리된 데가렐릭스를 동결건조하여, 데가렐릭스 원제를 수득하는 단계.
단계 (B3): 동결건조를 통한 분리 - AcOH/물에서의 재구성 - 동결건조
단계 A 이후에 수득된 정제된 데가렐릭스 용액을 동결건조를 통해 분리하고; 수득한 동결건조 산물을 2 % 아세트산에 10 - 20 g/L 농도로 용해하고, 다시 동결건조하여, 데가렐릭스 원제 (1)을 수득한다.
단계 (B4): 분무-건조
정제된 데가렐릭스 용액 (단계 A 이후에 수득되는, AcOH 함유 EtOH/물 또는 AcOH 함유 ACN/물, 또는 동결건조를 제외한 단계 B1 또는 동결건조를 제외한 단계 B2에 기술된 바와 같음)을 분무 건조를 통해 분리하여, 데가렐릭스 원제 (1)을 수득한다.
바람직한 구현예에서, 단계 A에서 수득한 정제된 데가렐릭스 용액을 직접 분무-건조 공정에 투입한다. 분무-건조에 투입되는 데가렐릭스 수용액의 AcOH 농도는, 6 - 40 % (v/v), 바람직하게는 15 - 35 % (v/v)로 조정된다.
원제의 제조에 대해 기술하였는 바, 이제 데가렐릭스 완제의 제조에 대해 설명한다. 동결건조된 데가렐릭스 완제는 데가렐릭스 원제와 만니톨을 포함하며, 즉, 데가렐릭스, 아세트산, 만니톨, 잔량의 물 및 있다면 제조 방법에 기인한 미량의 불순물을 포함한다 (바람직하게는 이들로 구성된다).
데가렐릭스 완제의 제조 공정 A
제조 공정 A는 전술한 본 발명의 제1 측면이며, 즉, 하기 단계를 포함하는, 데가렐릭스 유리 염기 20 mg/ml의 양으로 주사용수에서 재구성하는 경우, 15 mPas 이하, 바람직하게는 2 - 12 mPas 범위의 점도를 나타내는 데가렐릭스 완제의 제조 방법에 관한 것이다:
a. 동결건조된 데가렐릭스 원제, 바람직하게는 데가렐릭스 원제 (1)을 제공하는 단계;
b. 상기 동결건조된 데가렐릭스 원제를 만니톨-함유 물에 용해하여, 데가렐릭스-만니톨의 수성 혼합물을 제공하는 단계;
c. 상기 데가렐릭스-만니톨의 수성 혼합물을 동결건조하여, 데가렐릭스 완제를 제공하는 단계.
본 발명에서, "20 mg/ml의 양으로 주사용수에 재구성시"는 점도 측정 조건을 지칭하며, 완제가 20 mg/ml의 용액으로 존재한다는 의미는 아니다. 가장 바람직하게는, 완제는, 선택적으로, 재구성용 액체와 조합되어, 동결건조된 형태로 존재한다. 바이얼 당 바람직한 함량은 60 - 300 mg의 함량 (예, 120 mg, 80 mg 및 240 mg)이다. 다른 예로, 이는 2 - 100 mg/ml, 바람직하게는 10 - 70 mg/ml (예, 40 mg/ml, 20 mg/ml 및 60 mg/ml) 범위의 바람직한 농도를 가지는, 재구성된 완제로서 제공될 수 있다.
또한, 단계 b는 컴파운딩 단계 (compounding step)로 지칭될 수 있다. 바람직한 구현예에서, 컴파운딩 이후에, 그리고 냉동-건조하기 전에 여과 및 바이얼 충전이 수행되며, 바람직한 전체 생산 공정 A는 하기 단계들을 포함한다:
- 컴파운딩하여, 여과하지 않은 벌크 완제를 제공하는 단계
- 여과하는 단계 (멸균)
- 바이얼에 충전하는 단계
- 냉동-건조/동결건조하는 단계
컴파운딩하여, 벌크 완제를 수득하는 단계
원제를 컴파운딩 단계에 투입하며, 이는 일반적으로 하기와 같이 수행된다:
여과하지 않은 벌크 완제를 제조하기 위해, 원제와 만니톨을 물 (순수 물; 일반적으로 Milli-Q 워터)에 배치 크기 1000 g 당 각각 10 - 60 g의 양으로 용해한다. 전형적인 함량은 1000 g 당 원제 (HPLC로 측정시 데가렐릭스 유리 염기의 함량으로서) 20 - 50 g이며, 만니톨 10 - 50 g이다. 실제 함량은 완제에서의 데가렐릭스 최종 농도와, 재구성용 액체의 부피 (만니톨이, 바람직하게는, 삼투질 농도 (osmolality)가 300 mOsm +/-30 mOsm인 등장성 용액이 재구성으로 수득되도록, 첨가됨)에 따라 좌우된다.
제조를 위해, 물 (통상 물 총량의 약 80%)을 컴파운딩 바셀에 넣는다. 여기에 만니톨을 첨가하여, 교반함으로써 용해한다. 그런 후, 교반한 만니톨 용액에 원제를 첨가하고, 나머지 물을 첨가하여 최종 중량으로 제형화된 벌크 (배치)를 만든다. 이러한 컴파운딩은, 상당한 점도 증가를 방지하는 방식으로 이루어진다. 따라서, 벌크 산물의 점도는 컴파운딩 단계 동안에 바람직하게는 5 mPas 미만으로, 바람직하게는 3.2 mPas 미만으로 유지된다 (점도는, 2.5 % (w/V) 만니톨 수용액 1 ml 중의 20 mg 양으로 용해시, 여과한 후 측정함). 이는, 상대적으로 단기간 (최대 30분) 높은 교반 속도로 펩타이드를 적신 다음, 기포 발생 및 응집이 발생되지 않도록 하는 감속된 교반 속도로 펩타이드를 용해함으로써, 달성할 수 있다 (통상 30 - 90분). 온도는 일반적으로 6 - 15℃의 범위로 유지된다. 교반기는, 바람직하게는, 볼텍스 없이도 강력한 혼합을 제공하는 교반기이다.
여과
그런 다음, 벌크 완제를, 예를 들어, 제형화된 벌크에 질소를 가압함으로써, 연속 장착된 2개의 멸균 등급 필터를 통해 멸균 여과한다.
충전
멸균된 바이얼에 여과한 벌크 완제를 무균 조건 하에 충전하고, 세미-스토퍼를 장착한다 (냉동-건조 위치).
냉동-건조
냉동-건조기는 바람직하게는 사용전 멸균된 스팀이다. 바이얼을 냉동-건조기 선반에 둔다. 이후의 냉동-건조 공정은, 바람직하게는, 냉동, 주 건조 (승화) 및 2차 건조 단계들을 포함한다. 바람직한 조건은 다음과 같다:
냉동-건조 공정은, 바람직하게는, 3개의 주 단계들, 즉, 냉동, 주 건조 (승화) 및 2차 건조를 포함하거나, 또는 꼭 이들 단계로 구성된다.
● 냉동
바이얼을 2 - 10℃, 예컨대 5℃로 유지되는 냉장 선반에 넣어 둔다.
선반을 예를 들어, 5℃에서 -35℃ 등의 -30 내지 -40℃로 냉각시킨다. 선반 온도는 1차 건조를 개시하기 전 전체 배치의 완전한 냉동을 확실히 하기 위해 최소 2시간 동안 예를 들어 -35℃로 유지시킨다.
● 주 건조 (승화)
주 건조는 챔버 압력을 낮추고 (바람직하게는 0.100 mBar 이하로) 선반 온도를 승온시켜 (바람직하게는, 10 - 20℃, 예로, + 17℃), 수행된다.
주 건조 시간은 15시간 이상 동안 진행된다.
● 2차 건조
1차 건조 공정을 완료한 후, 챔버 압력을 낮추고 (바람직하게는 0.01 mBar 이하로) 선반 온도를 승온 (바람직하게는 20 - 30℃로, 예로 25℃로 승온)시킨다. 2차 건조는 전형적으로 7시간 이내에 종료된다.
그런 후, 동결건조된 완제에 라벨을 붙이고, 적량의 재구성용 액체와 함께 포장한다.
재구성용 액체는 원제의 점도에 따라 선택된다. 만일, 원제 (1)이 제조 공정 A의 출발 물질로서 사용된다면, 즉, (2.5 (w/v)% 만니톨 수용액 1 ml에 20 mg을 용해시) 점도가 3.2 mPas 미만, 바람직하게는 1.15 - 2 mPas인 동결건조된 원제인 경우, 수득되는 동결건조된 완제는 바람직하게는 재구성용 액체로서 주사용수 (WFI)와 조합된다. 동결건조된 완제가 WFI를 이용하여 재구성하는 경우, 그 점도는 (1 ml WFI에 데가렐릭스 (유리 염기) 20 mg을 용해하여 측정시) 일반적으로 2 - 15 mPas의 범위이다. 이 범위의 점도를 가진 완제가 생체내에서 데가렐릭스의 충분한 디포트 방출을 제공하는 것으로 확인되었다.
데가렐릭스 완제의 제조 공정 B
제조 공정 B는, 동결건조된 데가렐릭스 완제와 재구성용 액체 (재구성 유동액)을 포함하며, 15 mPas 이하, 바람직하게는 2 - 12 mPas 범위의 점도를 나타내는, 데가렐릭스 완제의 제조 방법으로서, 이 제조 방법은
a. 동결건조된 데가렐릭스 원제를 만니톨 함유 물 용액에 용해하여, 데가렐릭스-만니톨 혼합물을 제공하는 단계;
b. 상기 데가렐릭스-만니톨 혼합물을 동결건조하여, 데가렐릭스 완제를 제공하는 단계를 포함하며,
상기 데가렐릭스-만니톨 혼합물에는 동결건조 전에 점도-강하제가 첨가된다.
또한, 단계 a는 컴파운딩 단계로 지칭될 수 있다. 바람직한 구현예에서, 여과 및 바이얼 충전은, 컴파운딩한 후에, 그리고 냉동-건조 전에 수행하여, 바람직한 전체 제조 공정 B는 하기 단계를 포함한다:
● 컴파운딩하여, 여과하지 않은 벌크 완제를 제공하는 단계
● 여과 (멸균)
● 바이얼 충전
● 냉동-건조/동결건조
제조 공정 B는, 컴파운딩 단계에서, 점도-강하제, 바람직하게는 비-이온성 계면활성제를 동결건조하기 전에 첨가하는 것을 제외하고는, 제조 공정 A와 동일하다. 비-이온성 계면활성제는, 바람직하게는, 벌크 용액에 0.0003 - 1.5 mg/ml의 양으로 첨가되며, 이는 (데가렐릭스 유리 염기 60 mg/ml의 데가렐릭스 농도로 재구성시) 재구성된 완제에서 0.001 - 5 mg/ml, 더 바람직하게는 0.1 - 1 mg/ml의 양에 해당된다. 바람직한 비-이온성 계면활성제는, 8개 이상의 탄소 원자 (바람직하게는 이중 결합이 없음)와 탄수화물 모이어티를 가진 알킬 직쇄를 가진 것이다. 특히 바람직하게는, Tween 20 (폴리소르베이트 20)과 같이 피하 주사용으로 승인된 것이다. 그외 적합한 비-이온성 계면활성제로는 토코페릴-폴리에틸렌-글리콜-1000-숙시네이트 (TPGS) 및 기타 Tween류를 포함한다.
제조 공정 B의 출발 물질로서, 원제 (2)가 바람직하게 사용되며, 즉, (2.5 wt.% 만니톨 수용액 1 ml에 데가렐릭스 유리 염기 20 mg을 용해시) 점도가 3.2 mPas 이상인 동결건조된 원제가 사용된다. 제조되는 동결건조된 완제는, 전형적으로, 재구성용 액체로서 WFI와 조합된다. 만일 동결건조된 완제를 WFI를 이용하여 재구성한다면, 그 점도는 일반적으로 2 - 15 mPas (1 ml WFI에 데가렐릭스 유리 염기 20 mg을 용해하여 측정시)의 범위이다. 이 범위의 점도를 가진 완제가 데가렐릭스의 생체내 지연성 방출을 위한 충분한 디포트를 형성한다는 것이 확인되었다.
제조 공정 B는, 데가렐릭스 유리 염기 50 mg/ml 이상, 예컨대 데가렐릭스 유리 염기 60 mg/ml (완제 240 mg)과 같이, 재구성시 비교적 데가렐릭스 농도가 높은 데가렐릭스 완제에 대해, 바람직하다.
신규한 데가렐릭스 완제
제조 공정 B는, 재구성된 완제가 점도-강하제를 포함한다는 점에서, 기존의 완제와는 다른, 새로운 데가렐릭스 완제를 제공해준다. 이러한 점도-강하제는 단계 B에서 사용되는 것이며, 바람직하게는 비-이온성 계면활성제이다.
이에, 본 발명은, 데가렐릭스 유리 염기 20 mg/ml의 양으로 액체에 재구성시, 15 mPas 이하, 바람직하게는 2 - 12 mPas 범위의 점도를 나타내며, 점도-강하제를 0.001 - 5 mg/ml, 더 바람직하게는 0.1 - 1 mg/ml의 양으로 포함하는, 동결건조된 데가렐릭스 완제와 재구성용 액체를 포함하는, 데가렐릭스 완제를 제공한다.
실험 섹션
실시예 1 : 정제, 탈-응집 및 동결건조
데가렐릭스 조산물은, WO2012/055905 A1에 기술된 실시예 5의 단계 12까지 기술된 바와 같이 합성하였다. WO2012/055905 A1에 기재된 단계 13은 하기 단계로 대체하였으며, 요컨대, 마지막 탈보호 단계 이후에 수득되는 데가렐릭스 조산물 원제의 정제 공정은 3단계의 분취용 역상 크로마토그래피 (RPC) 단계들로 구성되며, 이때 3번째 RPC 단계는 주로 탈염 단계이다.
단계 13 (정제 단계):
WO2012/055905A1에서 단계 12로부터 유래된 데가렐릭스 조산물 용액을, 완충제 (0.12% TFA 90% + EtOH 10%)로 미리-평형화한 역상 물질로 충전된 컬럼에, 적용하였다. 주입: ≤30　g/L 컬럼 부피. 컬럼을 헹구고, 농도 구배로 용리시켰다: 완충제 (EtOH 29% -> 50 및 0.12% TFA (aq) 71% -> 50%). 수득한 분획들을 분석하고, 메인 풀의 순도가 공정 제어를 위한 허용 기준을 만족시키는 방식으로 조합하였다.
용리물을 HPLC로 체크하였을 때, 순도는 ≥95 %이다.
단계 14 (정제 단계):
단계 13에서 수득한 메인 풀을 물로 2번 희석하고, 완충제 (1% AcOH 90% + EtOH 10%)로 미리-평형화한 역상 물질로 충전된 컬럼에 적용하였다. 주입: ≤ 25 g/L 컬럼 부피. 컬럼을 먼저 1차 완충제 (EtOH 10% + 0.5 mol/L AcONH4 90%)로 헹군 다음, 2차 완충제 (1% AcOH 90% + EtOH 10%)로 헹구었다.
그런 후, 컬럼을 완충제와 에탄올 혼합물 ((1% AcOH 76% + EtOH 24%)을 사용하여 용리시켰다. 수득한 분획들을 분석하고, 메인 풀의 순도가 공정 제어를 위한 허용 기준을 만족시키는 방식으로 조합하였다. 용리물을 "HPLC 방법"으로 체크하였을 때, 순도는 ≥97.5 %이다.
단계 15 (사전-농축/염 교환):
단계 14에서 수득한 메인 풀을 물로 희석한 다음, 완충제 (1% AcOH 90% + EtOH 10%)로 미리-평형화한 역상 물질로 충전된 컬럼에 적용하였다. 주입: ≤ 18 g/L 컬럼 부피. 컬럼을 먼저 1차 완충제 (EtOH 10% + 0.5 mol/L AcONH4 90%)로 헹군 다음, 2차 완충제 (1% AcOH 90% + EtOH 10%)로 헹구었다. 그런 후, 컬럼을 완충제와 에탄올 혼합물 (1% AcOH 50% + EtOH 50%)로 용리시켰다.
다른 방법으로, 데가렐릭스는 수 중의 12% AcOH 및 22% MeCN와 같이, AcOH/MeCN/물 용액으로 희석시킬 수도 있다.
단계 16 (농축 - 탈-응집 - 동결건조):
동결건조하기 전에, 단계 15의 순수한 데가렐릭스 용액 풀을 40℃ 미만에서 농축하였다. 이 농축 용액에 아세트산 수용액과 물을 첨가하여, 15　g/L 이하의 농도를 만들고 아세트산의 농도는 30%로 만들었다. 그런 후, 이 용액을 여과 및 동결건조하여, 데가렐릭스 원제를 수득하였다.
압력: ≤0.5 mbar, 1차 및 2차 건조시
온도: 최종 (end) 냉동 온도: ≤-30℃
최종 1차 건조 온도: 20℃
최종 2차 건조 온도: 20℃
기간: 5 일
결과
일련의 단계들을 통해 수득한 원제의 점도는, 2.5 (w/V) % 만니톨 용액에서 20 mg/ml의 농도로 측정시, 2.5 mPas 미만이었다.
실시예 2: 원제 및 완제의 점도 측정법
원제와 완제의 점도를 측정하는 방법은 Ph. Eur. 및 USP 절차의 현행 버전을 기초로 하며, D = 60 mm 및 1°의 콘-플레이트 측정 시스템이 장착된 회전식 점도계를 사용하였다. 전단 속도는 조절된 속도 (CR) 회전 단계 프로그램을 20 ± 0.2℃의 일정한 온도에서 사용하여, 20 단계 동안 0 -> 500 s-1로 증가시켜, 점도를 전단 속도 500 s-1에서 기록하기 전에 시스템이 평형에 도달하는 것을 확인하였다.
실시예 3: 원제 및 완제의 광학 밀도 측정법
장치 및 재료
● UV 분광측정기
● UV 광 투과 큐벳, 10 mm 경로
● 큐벳 뚜껑
● 주사용수 (데가렐릭스 완제의 재구성용 액체 및 기준 셀)
분석 성능
재구성과 측정을 진행하는 동안, 재구성된 샘플들은 22℃ ± 1℃에서 유지시켜야 한다.
원제 바이얼을 2.5 % 만니톨 수용액 (w/V)으로 재구성한다. 완제 바이얼은 주사용수로 재구성한다. 용매를 바이얼에 넣고, 재구성이 완료될 때까지 바이얼을 빙빙 돌리거나 수 초간 볼텍스를 사용한다. 액체는 투명하게 보여야 하며, 용해되지 않은 분말이나 입자는 보이지 않는다. 바이얼을 똑바로 세워 두고, 흔들지 않는다. 샘플에 용매를 첨가한 지 120분 후에 350 nm에서 측정한다.
측정하기 4분 전에, 큐벳을 5번 앞뒤로 약 180도 천천히 흔들어 샘플을 균질화시켜야 한다. 4분 연기는 판독하기 전에 모든 공기 방울들이 없어지게 한다.
큐벳과 주사용수의 흡광도는 샘플 판독값에 제하여야 한다.
실시예 4: 분무 건조
공급물 (feed)의 제조
공급물의 제조시, 하기 표에 나타낸 칭량한 양의 데가렐릭스를 자기 교반기를 사용하여 용해시켰다. 아래 방식으로 Milli-Q 워터 또는 순수 빙초산 (99.9%)을 첨가하여, 여러가지 공급 용액 W-VI 및 AI-IV를 제조하였다:
a. 배치 W-IV: 적정 부피의 물을 칭량한 양의 데가렐릭스에 첨가하였다
b. 배치 A-I - A-III: 각 실험에서, 99.0 % 빙초산을 Milli-Q 워터로 희석하여, 30, 5, 2 % 용액들을 제조하여 아세트산 용액을 제조하고, 여기에 칭량한 양의 데가렐릭스를 첨가하였다.
모든 분무-건조 수행 전에, 재구성된 펩타이드는 메스 플라스크에 0.20 ㎛ Sartoriuos Ministar 필터를 통해 분무-건조 전에 여과하였다.
분무-건조
분무-건조하기 전에, 주입구 온도와 공급 속도를 조정하였다. 펌프의 관을 공급 용액 안에 넣고, 건조를 개시하였다. 건조가 완료되면, 주입구 온도를 700℃로 떨어뜨린 다음, 사이클론과 채집 바셀을 분말 채집을 위해 제거하였다. 분말을 페트리 디쉬로 브러시로 털어내 수집하고, 수율을 확인하기 위해 수집하기 전과 수집한 이후에 무게를 측정하였다.
분무-건조를 위해 적용되는 조건에 대한 총람
파라미터 W-IV A-I A-II A-III
주입구 온도, ℃ 120 120 120 120
유출구 온도, ℃ 85 85 85 85
분무용 에어 플로우, L/h 600 600 600 600
액체 공급 속도, mL/min. 3 3 3 3
흡입 속도, m3/h 30 30 30 30
용매 물 30 % AcOH 수용액 5 % AcOH 수용액 AcOH
용액 부피, mL 25 25 25 25
데가렐릭스 양 1 1 1 1
공급물의 농도, % 4 4 4 4
4가지 농도 (A-I 내지 A-III)의 아세트산 용액으로부터 분무-건조한 재구성된 데가렐릭스의 점도를 물로부터 분무-건조한 데가렐릭스 배치 1개 (W-IV)와 비교하였다
배치 번호 W-IV A-I A-II A-III
점도, mPas*S 2.40 1.68 2.11 2.10
실시예 5: 컬럼 농축 - 동결건조
실시예 1의 단계 14에서 수득한 풀을 물로 희석하여, 역상 물질이 충전된 컬럼에 적용하였다. 컬럼을 1% AcOH 수용액으로 헹군 다음, 35% AcOH 수용액으로 데가렐릭스로 용리시켰다. 분획들은 35 g 데가렐릭스/l, 27% AcOH (샘플 1) 및 15 g 데가렐릭스/l, 30% AcOH (샘플 2)를 포함하도록, 조절하였다. 조절한 분획들은 냉동-건조하고, 분석하였다. 결과: 하기 표를 참조한다.
원제에 대한 분석 샘플 1 샘플 2
물 (w/w) 2.1 % 2.5 %
잔류 AcOH (w/w) 7.2 % 7.0 %
OD 20 mg/ml (15 min/6h) <0.02 AU/0.02 AU <0.02 AU/0.02 AU
점도 20 mg/ml 1.88 mPas 1.94 mPas
실시예 6: 데가렐릭스 원제의 제조 및 탈-응집 실험
o 재료
정제된 조산물 원제에 대한 탈-응집 실험
- 정제된 조산물 데가렐릭스는 57.4 mg/ml의 농도로 공급받았다
- 아세트산 100%는 Merck 사로부터 공급받았다
- 탈-응집 장치:
● 컴파운딩 바셀: 300 ml의 2겹의 유리 바셀
● 블루 캡 바틀, 50 또는 100 ml
● 자기
● 자기 교반기
- 1차 포장:
● 무색 20R 유리 바이얼. 바이얼을 세척하여, 가열 챔버에서 건조시켰다.
● Ph. Eur에 따른 20 mm의 냉동-건조 마개 타입 I / USP 20 mm 플립 오프 캡
탈-응집된 원제를 이용한 완제의 제조
- 2종의 실험 원제를 사용하였다. 대조군으로서, 시판 원제를 사용한다.
- 만니톨: D (-) 만니톨 (PF-05-0232)
- 1차 포장:
● 무색 10R 유리 바이얼 (DIN ISO 8362에 준함). 바이얼을 세척하여, 가열 챔버에서 건조하였다.
● Ph. Eur에 따른 20 mm의 냉동-건조 마개 타입 I/USP (타입 1319, 고무 W4416/50/회색, The West Company)
● 20 mm 플립 오프 캡 (The West Company)
o 방법
원제 스톡 용액을 이용한 탈-응집 실험
실험 기간 동안의 온도:
탈-응집 실험을 수행하는 동안, 온도는 5, 20, 25 또는 35℃로 설정하였다.
실험시, 스톡 용액의 데가렐릭스 원제의 농도:
데가렐릭스 원제의 농도는 5, 15, 25 또는 35 mg/ml이었다.
실험시, 아세트산의 농도:
아세트산의 농도는 13, 15, 18, 20, 22, 26, 30, 35 또는 40%이다.
실험시 수행된 분석:
점도: T = 1, 60, 120 및 240분에 ~1.2 ml을 취함.
다른 시기에 샘플을 취하는 것이 스케줄 상 더 적합하다면, 그렇게 할 수 있으며, 단, 정확한 시간을 포뮬레이션 기록에 기재한다. 그러나, T = 1분에 수행하는 샘플링은 유지하여야 한다.
광학 밀도 (OD): 샘플 (~1 ml)을 최종 광학 밀도 측정을 위해 각 실험의 종료시에 취하여야 한다.
탈-응집 실험 프로토콜, 총 부피 20 또는 69 ml:
1. 스톡 용액을 필요한 양으로 칭량하여 비이커에 넣는다. 원하는 온도로 평형화한다.
2. 아세트산 (100%)을 필요한 양으로 비이커에 칭량하여 넣는다.
3. 아세트산 (100%)과 milli-Q 워터 3 또는 10 ml을 혼합하고, 원하는 온도로 평형화한다.
4. 데가렐릭스 스톡 용액을 상기 아세트산/milli-Q 워터 용액과 혼합한다.
5. milli-Q 워터를 20 또는 69 ml이 되게 첨가한다.
6. 잘 혼합한다.
7. 전술한 바와 같이 점도와 광학 밀도를 측정하기 위해 샘플을 취한다. 실험시 용액의 외양에 유념한다.
69 ml의 데가렐릭스 스톡 용액 2개에 대한 탈-응집 조건:
2종의 실험에서, 데가렐릭스 원제 농도 25 mg/ml
아세트산: 10% 또는 13%
온도: 5℃
2개의 탈-응집된 시험 원제 (69 ml)를 바이얼에 넣어, 냉동-건조한다:
탈-응집된 용액을 즉시 20 R 바이얼에 넣었다. 각 바이얼에 5 ml씩 넣었다. 바이얼들과 벌크는 충전하는 동안 차갑게 (바람직하게는 5 - 10℃) 유지시켜야 한다. 바이얼에 넣은 즉시, 냉동 건조기에 넣어 프로그램을 시작하였다.
냉동 건조 및 바이얼 밀봉 후, 바이얼을 냉동 건조기에 5℃에서 꺼낼 (de-loading) 때까지 보관하였다.
냉동 건조시킨 원제 2종을 대상으로 하기 분석을 수행하였다:
점도를 20 mg/ml 유리 염기 샘플에서 측정하였다.
광학 밀도를 20 mg/ml 샘플에서 측정하였다.
데가렐릭스 함량
아세테이트 함량
o 결과
온도
(℃)		 데가렐릭스 농도 mg/ml AcOH 농도 (%) 점도 @ 500 mPa*s
시간 = 240분		 광학 밀도
시간 = 240분
5 5 40 1.9 0.00
5 25 13 2.3 0.10
5 25 15 1.9 0.09
5 25 20 1.7 0.06
5 35 26 1.9 0.08
20 15 30 1.8 0.03
25 25 20 2.0 0.10
35 25 15 7.2 0.86
35 25 18 2.1 0.07
35 25 20 1.7 0.05
35 35 22 2.1 0.13
35 35 26 1.9 0.10
35 35 30 2.0 0.07
35 35 35 2.1 0.08
실시예 7: 점도-강하제가 무첨가된 완제의 제조
탈-응집된 원제 2종을 이용한 실험실 규모의 완제 배치들의 컴파운딩
아래 표 1에 열거된 부형제들은 모든 컴파운딩 실험에 사용된다.
부형제
만니톨
Milli-Q 워터
컴파운딩 장치:
컴파운딩 바셀: 300 ml의 2겹의 유리 바셀
블루 캡 바틀, 100 ml
자기
자기 교반기
- 1차 포장:
● 무색 10R 유리 바이얼. 바이얼을 세척하여, 가열 챔버에서 건조하였다.
● 20 mm의 냉동-건조 마개 타입 I
● 20 mm 플립 오프 캡
실험에 대한 설명
데가렐릭스 20 mg/g 및 만니톨 25 mg/g이 포함된 데가렐릭스 벌크 용액을, 여러가지 배치의 원제를 이용하여 여러가지 온도 조건에서 컴파운딩하였다.
벌크 용액의 점도를 컴파운딩 중/이후에 2번 측정한다 (용해 후, 및 t = 120분).
벌크 조성물:
2종의 벌크 용액의 배치 크기와 조성을 표 2에 나타낸다.
표 1: 벌크 용액의 배치 크기 및 조성
배치 크기 (g) 50
원제 (g) 1.000 g / 데가렐릭스 유리 염기 함유 원제
만니톨 (g) 1.25
Milli-Q 워터 - 총 (g) Ad. 50
벌크 용액의 배치 크기 및 조성
실험 설계:
컴파운딩 파라미터를 아래 표 2에 나타낸다.
표 2: 컴파운딩 파라미터
시간 파라미터
원제 테스트 원제 배치
온도 15℃
교반 속도 50 rpm
물, 출발 부피 80%
컴파운딩:
컴파운딩은, 중앙에 위치시킨 교반기를 이용하여 수행한다. 실험 개시 전에, 중앙 위치를 고정하여야 하다.
1. 필요한 성분들을 칭량한다
Milli-Q 워터 40 g을 컴파운딩 바셀에 칭량하여 넣는다.
만니톨 1.25 g을 적정 용기에 넣는다.
정확한 양으로 데가렐릭스 원제 (표 2 참조)를 칭량하여 적정 용기에 넣는다.
Milli-Q 워터의 나머지를 칭량하여 적정 용기에 넣는다.
2. Milli-Q 워터가 든 2겹의 컴파운딩 바셀을 냉각 순환기와 연결한다. 2번째 2겹 바셀을 연속하여 연결한다. 잔여량의 물이 든 용기를 상기 2번째 2겹 바셀 안에 넣고, 벌크에 첨가하기 전에 올바른 온도로 평형화한다 (단계 9).
3. 컴파운딩 바셀 안에 교반 자기를 조심하여 넣는다. 교반 속도를 유속계를 사용하여 50 rpm으로 설정한다.
4. 냉각기를 올바른 온도로 설정하고, 교반을 개시한 다음, 만니톨을 컴파운딩 바셀에 투입한다. 만니톨이 용해될 때까지 교반한다.
5. 시스템이 설정 온도로 평형화되게 한다.
6. 만니톨 용액에서 온도를 측정한다.
7. 교반기를 제거한다. 타이머를 작동시키고, 즉시 원제를 첨가한다. 그런 다음, 교반기를 다시 넣는다.
8. t = 5분에, Milli-Q 워터 나머지를 넣고, 파스퇴르 파이펫을 사용하여 원제의 표면을 균일하게 만든다.
9. 덩어리가 몇개 있는 경우에는, 용해 매질로 바셀의 측면으로 원제를 씻어 내렸다.
10. 원제가 완전히 용해되면, 시간을 기록하고, 온도를 측정한다. 벌크의 점도를 측정하기 위해 샘플을 취한다.
11. t = 120분이 될 때까지 실험을 계속한다. 벌크의 점도를 측정하기 위해 샘플을 취한다.
여과
하나 이상의 배치가 심하게 응집되어 여과하기 어려울 것이므로, 벌크는 여과하지 않는다. 또한, 배치들은 멸균성이 요구되는 경우에는 사용하지 않는다.
충전
10R 바이얼에 벌크 6.40 g을 충전한다. 바이얼과 벌크는 충전하는 동안 차갑게 (바람직하게는 5-10℃) 유지시켜야 한다. 바이얼에 충전한 즉시, 냉동 건조기에 넣고, 프로그램을 시작하여야 한다. 각 벌크로 대략 바이얼 6-7개가 완성된다.
o 결과
아래 표에 나타낸 바와 같이 점도가 다른 18개의 원제 배치들은 전술한 바와 같이 처리하였다. 대응되는 완제의 점도가 다음과 같이 측정되었다:
배치 점도 DS (20 mg/ml) mPas 점도 DP (20 mg/ml) mPas
1 2.3 5.8
2 2.3 7.81
3 2.1 4.75
4 2.3 8.62
5 2.1 7.85
6 2.1 7.09
7 2.3 7.76
8 2.1 7.69
9 2.1 7.96
10 2.3 8.1
11 1.8 7.82
12 1.7 4.14
13 2.3 8.46
14 2.3 9.57
15 2.3 10.96
16 2.3 8.47
17 2.5 8.05
18 2.5 10.4
이들 결과들을 도 1에 그래프로 도시한다. 도 1은 원제의 점도와 완제의 점도 간의 상관성을 보여준다.
실시예 8: 점도-강하제가 첨가된 완제의 제조
실험 1: 테스트한 계면활성제 (WFI/계면활성제 용액을 이용한 재구성)
절차 :
● WFI (대조군) 및 계면활성제가 포함된 WFI를 이용하여 재구성된 데가렐릭스 배치. 바이얼들을 데가렐릭스 60 mg/ml로 재구성한다. 이들 실험에 사용된 완제 배치는 벌크 점도가 약 3.8 mPas이었다.
● TPGS 및 Tween 20을 1 mg/ml 함유 용액 (0.1% 용액)으로 준비하였다.
● OD (흡광도)를 350 nm에서 측정하였다.
● 30분, 60분, 120분 및 24시간 후, 흡광도를 기록하였다.
결과:
TPCG와 Tween 20 둘다 광학 밀도를 대조군 보다 낮은 수준으로 떨어뜨렸다.
실험 2: [WFI + Tween 20]으로 데가렐릭스 바이얼의 재구성시 데가렐릭스 40 mg/ml에서의 시험관내 방출 프로파일 (IVD 분석)은 달라지지 않는다.
테스트한 Tween 20의 농도:
1 mg/ml; 0.5 mg/ml; 0.25 mg/ml
대조군: WFI
결과: 시험관내 방출 프로파일은 Tween-20의 첨가에 의해 달라지지 않는다.
실시예 9: 완제의 점도 및 생체이용성
요약
생체내 약물동태 데이타 (랫 모델)를 비롯하여, 데가렐릭스 완제 배치 n=38에서 수득한 데이타 세트를 이용하여, 다변량 데이타 분석을 수행하였다.
물리-화학적 특징과 랫 모델에서의 생체내 약물 동태 특성 간의 상관성을 확립하였다. 실험을 통해, 재구성된 데가렐릭스 완제가 디포트의 생체내 성능을 예측하는 어떤 능력을 가진 중요하며 유일한 매개변수인 것으로 확인되었다.
o 서론
데가렐릭스 완제는 만니톨이 포함된 냉동-건조시킨 산물로서 제조된다. 이 산물은 임상 실험들에서 연구 약제로 사용된다. 바이얼 당 데가렐릭스를 다양한 양으로, 즉, 10　mg, 20 mg, 40 mg, 88 mg, 128 mg, 120 mg (40 mg/ml), 180 mg (60 mg/ml) 및 240 mg (60 mg/ml)으로 포함하며, 여러가지 비율로 데가렐릭스/만니톨을 포함하는, 수종의 제형들로 조제되었다.
o 재료
여러가지 배치의 데가렐릭스 물질과 제형으로, 약 40개의 데가렐릭스 배치를 조제하였다. 벌크에서의 표준 데가렐릭스 농도는 달리 언급하지 않은 한 20 g/l이다.
o 방법
■ 물리-화학적 방법
응집성을 규명하기 위한 여러가지 방법들을 다변량 데이타 분석으로부터 선택하였다. 배치 n=38에 대한 데이타를 모아 편집하였다. 그러나, 일부 제형들로만 실행된 방법들에서는 더 작은 규모의 모집단이 사용되었다 (예, 40　mg/ml에서의 측정은 20 mg 제형으로는 수행하지 않았음).
■ 랫 바이오분석
28일간의 하기 데가렐릭스 약물 동태 프로파일로 구성된 표준화된 랫 분석을 사용하였다. 국소 부작용을 방지하기 위해, 랫에게 데가렐릭스를 주사 부피 100 ㎕로 20 mg/ml 현탁물로 투여하였다. n=8마리의 랫으로 구성된 그룹들을 사용하였으며, 이들 모두 하나의 바이얼에서 기원하여 재구성한 현탁물을 처리하였다. 혈장 농도를 2시간, 1일, 7일 및 28일에 측정하고, AUC 0-7일과 AUC 7-28일의 부분 AUC를 계산하였다. 그런 다음, (Cp)-2시간째의 혈장 농도 측정은 생략하고, Cp-3일로 대체하여, 계획을 변경하였다. 마찬가지로, AUC 0-7일을 AUC 1-7일로 대체하였다. 이는, 생체내 변수들 중 일부의 개체군 크기 불연속성을 설명해준다.
■ 다변량 데이타 분석
데이타 세트의 크기를 감안하여, Simca-P, 버전 10 소프트웨어 (Umetrics AB, SE-Umea)를 이용한 다변량 데이타 분석 (PCA 및 PLS)에 의한 접근법을 수행하였다. 소프트 블록 스케일링 (1/4 root), 단위 변량 (UV: unit variance)으로의 스케일링 및 센터링을 비롯하여, 기존과 같이 데이타를 처리하였다. 탁도 데이타를 로그 변환하여, 데이타 분포를 개선시켰다. 또한, 생체내 Cp 데이타도 로그 변환하여, 변량을 안정화하였다.
완제의 물리-화학적 특성과 랫 모델에서의 생체내 성능 간의 상관성
■ 물리-화학적 특성과 생체내 성능 간의 상관성
1차 모델은 2가지의 구성 요소로 계산하였다. 생물 데이타의 높은 편차를 감안하면 (20-30%), 적합도 (R2=0.58)가 상대적으로 낮았지만, 예측성 (goodness of predictability) (Q2=0.35)은 충분하였다 (R2-Q2가 0.2 - 0.3 범위여야 함). 20 mg/ml에서 측정한 탁도 등의 변수와 아세테이트 함량이 영향을 미치지 않는다는 것을 로딩 산점도 (도시 안함)에서 알 수 있었다.
이에, 2가지의 유의한 구성 요소를 기반으로 하여, 상기한 3가지 변수 (20 mg/ml에서 측정한 탁도 변수 2개 및 아세테이트)는 배제하고, 새로운 모델을 구축하였으며, 유사한 데이타 내역 (R2=0.53)이 확보되었지만, 예측성은 향상되었다 (Q2=0.42). 가장 잘 나타내주며 예측성이 우수한 랫 변수는 3일과 28일의 혈장 농도 (Cp-3d, Cp-28d)와 1일 및 7일 간의 곡선 하 면적 (AUC 1-7d)이었다.
계수 총괄 플롯 (coefficient overview plot)에서, 영향력이 더 큰 것이 20 mg/ml에서의 점도 데이타이고, 그 다음이 40 mg/ml에서의 점도 데이타인 것으로 나타났으며, 이들 모두 각 생물학적 변수에 대한 신뢰 수준 0.95에서 유의하였다. 비표면적과 탁도는 명백하게도 영향력이 낮았으며, 신뢰 수준 0.90에서도 유의하지 않았다.
20 mg/ml에서 측정된 다이나믹 점도와 가장 잘 부합되는 생물 변수 간의 상관성을 도 2 및 3에 도시한다.
● 결론
랫 모델에서 조사한 바와 같이, 재구성된 산물의 점도와 생체내 성능 간에 견고한 상관성이 확립되었다 (R2=0.53). 양쪽 모두에서, 점도가 높을 수록 디포트로부터의 방출이 저하되었다. 다른 물리-화학적 변수들은 시험관내 용해를 위한 아세테이트 함량을 제외하고는 관련성이 없었다.
따라서, 재구성된 데가렐릭스 완제의 점도는 디포트의 시험관내 방출과 생체내 성능을 예측할 수 있는 중요한 파라미터인 것으로 보인다.

Claims (22)

  1. 데가렐릭스 (degarelix), 4.5 - 10.0 % (w/w) 아세트산, 및 잔량의 물로 구성되거나, 데가렐릭스 (degarelix), 4.5 - 10.0 % (w/w) 아세트산, 잔량의 물, 및 제조 방법에 기인한 불순물로 구성되며,
    2.5 wt.% 만니톨 함유 물에 데가렐릭스 유리 염기 20 mg/ml의 양으로 용해시, 3.2 mPas 이하의 점도를 나타내는,
    동결건조된 데가렐릭스 원제 (drug substance).
  2. 제1항에 있어서, 2.5 wt.% 만니톨 함유 물에 데가렐릭스 유리 염기 20 mg/ml의 양으로 용해시, 1.15 - 2.0 mPas의 점도를 나타내는 것을 특징으로 하는, 동결건조된 데가렐릭스 원제.
  3. 제1항에 있어서, 물 함량이 10 %(w/w) 이하인 것을 특징으로 하는, 동결건조된 데가렐릭스 원제.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한항에 따른 데가렐릭스 원제의 제조 방법으로서,
    a. 액상 또는 고상 펩타이드 합성에 의해 수득한 데가렐릭스를 정제하여, 순도 95% 이상의 데가렐릭스 용액을 수득하는 단계;
    b. 용매 증발을 통해 데가렐릭스 용액을 농축하여, 응집된 데가렐릭스를 수득하는 단계;
    c. 응집된 데가렐릭스를 아세트산으로 탈-응집 (deaggregating)시키는 단계로서, 최종 아세트산의 농도가 15 - 35 % (v/v) 범위인, 단계; 및
    d. 탈-응집된 데가렐릭스를 동결건조하여, 데가렐릭스 원제를 제공하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  5. 제4항에 있어서, 단계 c의 온도가 -5 내지 30℃ 범위인 것을 특징으로 하는 방법.
  6. 제4항에 있어서, 데가렐릭스 유리 염기의 농도가 10 - 35 g/l 범위인 것을 특징으로 하는 방법.
  7. 제1항 내지 제3항 중 어느 한항에 따른 데가렐릭스 원제의 제조 방법으로서,
    a. 액상 또는 고상 펩타이드 합성에 의해 수득한 데가렐릭스를 정제하여, 순도 95% 이상의 데가렐릭스 용액을 수득하는 단계;
    b. 데가렐릭스 용액을 크로마토그래피 컬럼에 주입하는 단계;
    c. 아세트산을 이용하여 데가렐릭스를 컬럼으로부터 용리시켜, 용리된 데가렐릭스를 수득하는 단계;
    d. 용리된 데가렐릭스를 동결건조하여, 데가렐릭스 원제를 수득하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  8. 제7항에 있어서, 상기 단계 c에서 상기 아세트산의 농도가 27 - 37 wt.% 범위인 것을 특징으로 하는 방법.
  9. 제7항에 있어서, 상기 용리된 데가렐릭스는 동결건조 전에 여과되는 것을 특징으로 하는 방법.
  10. 제1항 내지 제3항 중 어느 한항에 따른 데가렐릭스 원제의 제조 방법으로서,
    a. 액상 또는 고상 펩타이드 합성에 의해 수득한 데가렐릭스를 정제하여, 순도 95% 이상의 데가렐릭스 용액을 수득하는 단계;
    b. 상기 정제된 데가렐릭스 용액의 아세트산 농도를, 필요에 따라, 6 - 40 % (w/w)로 조절하는 단계;
    c. 상기 데가렐릭스 용액을 분무-건조하여, 데가렐릭스 원제를 수득하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  11. 데가렐릭스 원제와 만니톨을 포함하는 데가렐릭스 완제 (drug product)의 제조 방법으로서,
    상기 데가렐릭스 완제는, 데가렐릭스 유리 염기 20 mg/ml의 양으로 주사용수 (water for injection)에 재구성시, 15 mPas 이하, 또는 2 - 12 mPas 범위의 점도를 나타내며,
    상기 방법은,
    a. 제1항 내지 제3항 중 어느 한항에 따른 동결건조된 데가렐릭스 원제를 제공하는 단계;
    b. 상기 동결건조된 데가렐릭스 원제를 만니톨-함유 물에 용해하여, 데가렐릭스-만니톨의 수성 혼합물을 제공하는 단계;
    c. 상기 데가렐릭스-만니톨의 수성 혼합물을 동결건조하여, 데가렐릭스 완제를 제공하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  12. 제11항에 있어서, 상기 용해 단계 b에서 상기 데가렐릭스-만니톨의 수성 혼합물의 점도가 3.2 mPas 이하로 유지되도록 수행되는 것을 특징으로 하는 방법.
  13. 동결건조된 데가렐릭스 완제의 점도를, 데가렐릭스 유리 염기 20 mg/ml의 양으로 주사용수로 재구성하여 측정시, 15 mPas 이하, 또는 2 - 12 mPas 범위가 되도록 조절하는 방법으로서,
    a. 제1항 내지 제3항 중 어느 한항에 따른 동결건조된 데가렐릭스 원제를 제공하는 단계;
    b. 상기 동결건조된 데가렐릭스 원제를 만니톨-함유 물에 용해하여, 데가렐릭스-만니톨의 수성 혼합물을 제공하는 단계;
    c. 상기 데가렐릭스-만니톨의 수성 혼합물을 동결건조하여, 데가렐릭스 완제를 제공하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  14. 제11항에 있어서, 상기 용해 단계 다음에 여과 단계가 수행되고, 동결건조 단계 전에 충전 단계가 수행되는 것을 특징으로 하는 방법.
  15. 제13항에 있어서, 상기 용해 단계 다음에 여과 단계가 수행되고, 동결건조 단계 전에 충전 단계가 수행되는 것을 특징으로 하는 방법.
  16. 제11항에 있어서, 상기 동결건조 단계는 붕괴 온도 (collapse temperature) 이하에서의 승화 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  17. 제13항에 있어서, 상기 동결건조 단계는 붕괴 온도 (collapse temperature) 이하에서의 승화 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
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Families Citing this family (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JOP20090061B1 (ar) 2008-02-11 2021-08-17 Ferring Int Center Sa طريقة معالجة سرطان البروستاتا بمضادات الهرمونات التناسلية GnRH
AR092840A1 (es) 2012-06-01 2015-05-06 Ferring Bv Elaboracion de degarelix
CN107693496A (zh) * 2017-10-23 2018-02-16 天津双硕医药科技有限公司 一种注射用地加瑞克冻干粉针及制备工艺
CN111036078B (zh) * 2018-10-14 2022-04-26 深圳市健元医药科技有限公司 一种GnRH拮抗剂的后处理方法
CN112125956A (zh) * 2019-06-25 2020-12-25 深圳市健元医药科技有限公司 一种地加瑞克的制备方法
EP4069863A4 (en) * 2019-12-05 2024-02-28 Fresenius Kabi Usa Llc METHOD FOR ANALYZING DEGARELIX AND RELATED PRODUCTS
CN114460179A (zh) * 2020-11-09 2022-05-10 深圳市健翔生物制药有限公司 一种注射用醋酸地加瑞克体外释放度的测定方法

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2011004260A2 (en) * 2009-07-06 2011-01-13 Ferring International Center Sa Composition for the treatment of benign prostate hyperplasia

Family Cites Families (44)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3773919A (en) 1969-10-23 1973-11-20 Du Pont Polylactide-drug mixtures
EP0002749B2 (en) 1977-12-26 1987-08-12 IHARA CHEMICAL INDUSTRY Co., Ltd. Process for producing aromatic monocarboxylic acid
DE69214818T2 (de) 1991-04-25 1997-02-27 Romano Deghenghi LHRH-Antagonisten
DE69330107T3 (de) 1992-02-12 2004-12-30 Daikyo Gomu Seiko, Ltd. Medizinisches Gerät
SI9300468A (en) 1992-10-14 1994-06-30 Hoffmann La Roche Injectable composition for the sustained release of biologically active compounds
US5506207A (en) 1994-03-18 1996-04-09 The Salk Institute For Biological Studies GNRH antagonists XIII
US5595760A (en) 1994-09-02 1997-01-21 Delab Sustained release of peptides from pharmaceutical compositions
US5710246A (en) 1996-03-19 1998-01-20 Abbott Laboratories Process for intermediates for the synthesis of LHRH antagonists
US5860957A (en) 1997-02-07 1999-01-19 Sarcos, Inc. Multipathway electronically-controlled drug delivery system
US5925730A (en) 1997-04-11 1999-07-20 Ferring Bv GnRH antagonists
US5821230A (en) 1997-04-11 1998-10-13 Ferring Bv GnRH antagonist decapeptides
WO1999026964A1 (en) 1997-11-20 1999-06-03 Ortho-Mcneil Pharmaceutical, Inc. LIQUID PHASE PROCESS FOR THE PREPARATION OF GnRH PEPTIDES
FR2776520B1 (fr) 1998-03-25 2000-05-05 Sod Conseils Rech Applic Nouvelles compositions pharmaceutiques destinees a la liberation prolongee de peptides et leur procede de preparation
MXPA01000674A (es) * 1998-07-20 2002-04-08 Peptech Ltd Formulacion de bioimplante.
US20020103131A1 (en) 2001-01-26 2002-08-01 Jacobson Jill D. Prevention of diabetes by administration of GnRH antagonists
GB0117057D0 (en) 2001-07-12 2001-09-05 Ferring Bv Pharmaceutical composition
SE0104463D0 (sv) 2001-12-29 2001-12-29 Carlbiotech Ltd As Mellanprodukter för syntes af LHRH-antagonister, sätt att framställa dem och sätt för framställning av LHRH-antagonister
CN1411803A (zh) 2002-08-29 2003-04-23 四川大学 制备前体脂质体的方法及其装置
EP1565160B1 (de) * 2002-09-27 2014-01-22 Æterna Zentaris GmbH Darreichungsform für pharmazeutisch aktive peptide mit anhaltender wirkstofffreigabe und verfahren zu deren herstellung
AR042815A1 (es) 2002-12-26 2005-07-06 Alza Corp Dispositivo de suministro de agente activo que tiene miembros compuestos
RU2390331C2 (ru) * 2004-06-04 2010-05-27 Камурус Аб Жидкие депо-препараты
EP1674082A1 (de) * 2004-12-22 2006-06-28 Zentaris GmbH Verfahren zur Herstellung von sterilen Suspensionen oder Lyophilisaten schwerlöslicher basischer Peptidkomplexe, diese enthaltende pharmazeutische Formulierungen sowie ihre Verwendung als Arzneimittel
WO2006069779A1 (en) 2004-12-30 2006-07-06 F. Hoffmann-La Roche Ag Preparing of peptides with excellent solubility
WO2007130809A2 (en) 2006-05-06 2007-11-15 Volodymyr Brodskyy An automatic injectable drug mixing device
EP1891964A1 (en) 2006-08-08 2008-02-27 AEterna Zentaris GmbH Application of initial doses of LHRH analogues and maintenance doses of LHRH antagonists for the treatment of hormone-dependent cancers and corresponding pharmaceutical kits
EP1967202A1 (en) 2007-03-05 2008-09-10 AEterna Zentaris GmbH Use of LHRH Antagonists for the Treatment of Lower Urinary Tract Symptoms, in particular Overactive Bladder and/or Detrusor Overactivity
IL182922A0 (en) 2007-05-02 2007-09-20 Medimop Medical Projects Ltd Automatic liquid drug reconstitution apparatus
JP6078217B2 (ja) 2008-01-15 2017-02-08 アッヴィ・ドイチュラント・ゲー・エム・ベー・ハー・ウント・コー・カー・ゲー 粉末化されたタンパク質組成物及びその作製方法
EP2257324B1 (en) 2008-02-11 2016-07-27 Safety Syringes, Inc. Syringe with safety needle guard and clip to prevent release of guard during reconstitution process
JOP20090061B1 (ar) 2008-02-11 2021-08-17 Ferring Int Center Sa طريقة معالجة سرطان البروستاتا بمضادات الهرمونات التناسلية GnRH
US20090280169A1 (en) * 2008-05-07 2009-11-12 Merrion Research Iii Limited Compositions of peptides and processes of preparation thereof
IT1390924B1 (it) 2008-07-31 2011-10-19 Peruffo Metodo di frenatura di attrezzi sportivi, dispositivo di frenatura ed attrezzo sportivo comprendente tale dispositivo di frenatura
WO2010121835A1 (en) * 2009-04-24 2010-10-28 Polypeptide Laboratories A/S Method for the manufacture of degarelix
BRPI1010874A8 (pt) 2009-05-01 2018-01-02 Ferring Bv composição para o tratamento de câncer de próstata
TW201043221A (en) 2009-05-06 2010-12-16 Ferring Int Ct Sa Kit and method for preparation of a Degarelix solution
US20110066386A1 (en) * 2009-09-16 2011-03-17 Chien-Chong Hong Anesthetic sensing optical microfluidic chip system
WO2011066386A1 (en) 2009-11-25 2011-06-03 Novetide, Ltd. Process for production of degarelix
ES2385240B1 (es) * 2010-07-26 2013-09-23 Gp-Pharm, S.A. Cápsulas de principios activos farmacéuticos y ácidos grasos poliinsaturados para el tratamiento de enfermedades de la próstata.
LT2632934T (lt) 2010-10-27 2017-01-10 Ferring B.V. Degarelikso ir jo tarpinių darinių gamybos būdas
EP2447276A1 (en) 2010-10-27 2012-05-02 Ferring B.V. Process for the manufacture of Degarelix and its intermediates
JO3755B1 (ar) 2011-01-26 2021-01-31 Ferring Bv تركيبات تستوستيرون
CN102204889B (zh) * 2011-05-23 2013-09-18 蚌埠丰原涂山制药有限公司 一种醋酸地加瑞克冻干粉针剂及其制备方法
HUE034895T2 (hu) 2011-07-15 2018-03-28 Ferring Bv Eljárás vastagbéltükrözés idõzítésére pikoszulfát készítmény beadásával
AR092840A1 (es) * 2012-06-01 2015-05-06 Ferring Bv Elaboracion de degarelix

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2011004260A2 (en) * 2009-07-06 2011-01-13 Ferring International Center Sa Composition for the treatment of benign prostate hyperplasia

Also Published As

Publication number Publication date
JP6226966B2 (ja) 2017-11-08
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AU2013269523A1 (en) 2015-01-15
BR112014029495A2 (pt) 2017-06-27
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EP2854831A2 (en) 2015-04-08
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US11260102B2 (en) 2022-03-01
CN104334182A (zh) 2015-02-04
TWI580443B (zh) 2017-05-01
US20190224271A1 (en) 2019-07-25
US9592266B2 (en) 2017-03-14
RU2014146272A (ru) 2016-07-27
NZ701978A (en) 2016-12-23
IL235856A0 (en) 2015-01-29
MX2014014662A (es) 2015-02-24
JO3586B1 (ar) 2020-07-05

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