KR102094768B1 - 류코노스톡 메센테로이데스 cjnu 0705 균주 및 이의 용도 - Google Patents

류코노스톡 메센테로이데스 cjnu 0705 균주 및 이의 용도 Download PDF

Info

Publication number
KR102094768B1
KR102094768B1 KR1020190035732A KR20190035732A KR102094768B1 KR 102094768 B1 KR102094768 B1 KR 102094768B1 KR 1020190035732 A KR1020190035732 A KR 1020190035732A KR 20190035732 A KR20190035732 A KR 20190035732A KR 102094768 B1 KR102094768 B1 KR 102094768B1
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
strain
extract
kctc
cjnu
dextran
Prior art date
Application number
KR1020190035732A
Other languages
English (en)
Inventor
문기성
한민희
Original Assignee
주식회사 셀렌바이옴
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 주식회사 셀렌바이옴 filed Critical 주식회사 셀렌바이옴
Priority to KR1020190035732A priority Critical patent/KR102094768B1/ko
Application granted granted Critical
Publication of KR102094768B1 publication Critical patent/KR102094768B1/ko

Links

Images

Classifications

    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20Bacteria; Culture media therefor
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/715Polysaccharides, i.e. having more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic linkages; Derivatives thereof, e.g. ethers, esters
    • A61K31/716Glucans
    • A61K31/721Dextrans
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/66Microorganisms or materials therefrom
    • A61K35/74Bacteria
    • A61K35/741Probiotics
    • A61K35/744Lactic acid bacteria, e.g. enterococci, pediococci, lactococci, streptococci or leuconostocs
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/72Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic macromolecular compounds
    • A61K8/73Polysaccharides
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/96Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution
    • A61K8/99Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution from microorganisms other than algae or fungi, e.g. protozoa or bacteria
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00Drugs for dermatological disorders
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/10Anti-acne agents
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61QSPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q19/00Preparations for care of the skin
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61QSPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q19/00Preparations for care of the skin
    • A61Q19/007Preparations for dry skin
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12PFERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P19/00Preparation of compounds containing saccharide radicals
    • C12P19/04Polysaccharides, i.e. compounds containing more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic bonds
    • C12P19/08Dextran
    • C12R1/01
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12RINDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Birds (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Cosmetics (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

본 발명은 류코노스톡 메센테로이데스(Leuconostoc mesenteroides) CJNU 0705 균주(KCTC 13817BP), 이를 포함하는 보습 조성물, 여드름 원인균(Propionibacterium acnes)에 대한 항균용 조성물, 중금속 흡착용 조성물 및 상기 균주를 이용하는 덱스트란의 생산방법을 제공한다.
본 발명의 류코노스톡 메센테로이데스(Leuconostoc mesenteroides) CJNU 0705 균주(KCTC 13817BP) 및 이를 포함하는 조성물과 이를 이용한 덱스트란의 생산방법은 화장품 및 의약 분야에서 피부 건강을 위한 기능성 소재로서 유용하게 사용될 수 있다.

Description

류코노스톡 메센테로이데스 CJNU 0705 균주 및 이의 용도{Leuconostoc mesenteroides CJNU 0705 and use thereof}
본 발명은 신규한 균주 및 이의 용도에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 신규하게 동정된 류코노스톡 메센테로이데스 CJNU 0705 균주 및 이의 용도에 관한 것이다.
유산균은 인간과 그 역사를 함께 해 왔으며, 인간의 건강에 매우 유익한 영향을 미치는 미생물로서 그 유용성이 날로 증가하고 있다. 최근에는 유산균에 대한 연구가 활발히 진행되어 일반 식품뿐만 아니라 화장품 및 의약품으로 개발되는 등 그 응용범위가 넓어지고 있다. 유산균에 속하는 세균들로는 스트렙토코커스(Streptococcus) 속, 페디오코커스(Pediococcus) 속, 류코노스톡(Leuconostoc) 속, 락토바실러스(Lactobacillus) 속, 스포로락토바실러스(Sporolactobacillus) 속 및 비피도박테리움(Bifidobacterium) 속의 미생물 등이 있다.
유산균이 인간을 위한 화장품이나 의약품에 사용될 때 그 분리원이 인간일 경우에 효과가 가장 잘 나타날 수 있으며, 특히 여성의 모유로부터 분리된 유산균은 그 효능이 보다 광범위하며 안전성 또한 높은 것으로 평가받고 있다. 그러나, 지금까지 발견된 인간 유래 유산균들은 대부분 성인의 분변이나 모유를 먹고 자라는 신생아의 분변으로부터 분리된 것으로서, 모유에서 분리된 유산균들도 락토바실러스 루테리 종이 대부분이고, 다른 종에 속하는 유산균들은 거의 보고된 바가 없다.
한편, 덱스트란은 의가소성, 흡습성 및 점착성을 가지고, 식품의 물성에 매우 중요한 역할을 하며, 낮은 pH에서도 점도가 높기 때문에 아이스크림과 셔벗의 조직을 안정화하는데 뛰어난 효과를 가지고 있다. 특히, 의료용 또는 외용제용으로는 분자량 범위에 따라 보습제, 혈장 대체제 또는 혈액흐름 촉진제 등으로 사용된다.
한국특허공개 제10-2007-0089474호 (2007년08월31일) 한국특허공개 제10-2017-0072084호 (2017년06월26일)
Biotechnology & Biotechnological Equipment, 2014, Vol. 28, No. 4, 627-634
본 발명의 발명자들은 모유 유래 유산균에 대하여 연구하던 중, 류코노스톡 메센테로이데스로 동정된 균주가 덱스트란 생산 활성, 여드름 균에 대한 항균 활성 및 중금속 흡착 활성을 나타내는 것을 확인함으로써, 피부 건강을 위한 기능성 소재로 사용될 수 있다는 것을 발견하였다.
따라서, 본 발명은 덱스트란 생산 활성, 여드름 균에 대한 항균 활성 및 중금속 흡착 활성을 나타내는 류코노스톡 메센테로이데스(Leuconostoc mesenteroides) CJNU 0705 균주(KCTC 13817BP), 이를 포함하는 보습 조성물, 여드름 원인균(Propionibacterium acnes)에 대한 항균용 조성물, 중금속 흡착용 조성물 및 상기 균주를 이용하는 덱스트란의 생산방법을 제공하는 것을 목적으로 한다.
본 발명의 일 측면에 따라, 류코노스톡 메센테로이데스(Leuconostoc mesenteroides) CJNU 0705 균주(KCTC 13817BP)가 제공된다.
일 구현예에서, 상기 균주는 서열번호 1의 16S rRNA 유전자 염기서열을 포함할 수 있다.
일 구현예에서, 상기 균주는 덱스트란 생산 활성을 갖는 것일 수 있다.
일 구현예에서, 상기 균주는 여드름 원인균(Propionibacterium acnes)에 대한 항균 활성을 갖는 것일 수 있다.
일 구현예에서, 상기 균주는 중금속 흡착능이 있는 것일 수 있다.
본 발명의 다른 측면에 따라, 상기 균주 또는 그 배양물을 포함하는 보습 조성물이 제공된다.
본 발명의 또 다른 측면에 따라, 상기 균주 또는 그 배양물을 포함하는 여드름 원인균(Propionibacterium acnes)에 대한 항균용 조성물이 제공된다.
본 발명의 또 다른 측면에 따라, 상기 균주 또는 그 배양물을 포함하는 중금속 흡착용 조성물이 제공된다.
일 구현예에서, 상기 중금속은 납 또는 카드뮴일 수 있다.
본 발명의 또 다른 측면에 따라, (a) 천연물 추출물을 제조하는 단계; 및 (b) 류코노스톡 메센테로이데스 CJNU 0705 균주(KCTC 13817BP)를 상기 제조된 천연물 추출물 및 수크로오즈(sucrose)가 함유된 배지에서 배양하는 단계를 포함하는 덱스트란의 생산방법이 제공된다.
일 구현예에서, 단계(b)의 상기 배지는 효모 추출물을 추가로 포함할 수 있다.
본 발명에 의해, 신규하게 동정된 류코노스톡 메센테로이데스(Leuconostoc mesenteroides) CJNU 0705 균주(KCTC 13817BP)가 덱스트란 생산 활성, 여드름 균에 대한 항균 활성 및 중금속 흡착 활성을 나타내는 것이 확인되었다.
따라서, 본 발명의 류코노스톡 메센테로이데스(Leuconostoc mesenteroides) CJNU 0705 균주(KCTC 13817BP), 이를 포함하는 보습 조성물, 여드름 원인균(Propionibacterium acnes)에 대한 항균용 조성물, 중금속 흡착용 조성물 및 상기 균주를 이용하는 덱스트란의 생산방법은 화장품 및 의약 분야에서 피부 건강을 위한 기능성 소재로서 유용하게 사용될 수 있다.
도 1은 그람 염색 후 류코노스톡 메센테로이데스 CJNU 0705 균주의 광학현미경 사진이다.
도 2는 류코노스톡 메센테로이데스 CJNU 0705 균주의 덱스트란 생성 사진이다.
도 3은 류코노스톡 메센테로이데스 CJNU 0705 균주의 여드름 원인균 Propionibacterium acnes에 대한 항균활성 결과 사진이다.
도 4는 류코노스톡 메센테로이데스 CJNU 0705 균주의 중금속(납, 카드뮴) 흡착능 결과를 나타내는 주사전자현미경 사진이다.
도 5는 류코노스톡 메센테로이데스 CJNU 0705 균주의 녹차 추출물 고체 배지에서의 덱스트란 생성 결과이다[(a) 녹차 추출물, (b) 녹차 추출물 + 2% 수크로오즈, (c) 녹차 추출물 + 2% 수크로오즈 + 3% 효모 추출물].
도 6은 류코노스톡 메센테로이데스 CJNU 0705 균주의 당근 추출물 고체 배지에서의 덱스트란 생성 결과이다[(a) 당근 추출물, (b) 당근 추출물 + 2% 수크로오즈, (c) 당근 추출물 + 2% 수크로오즈 + 3% 효모 추출물].
도 7은 류코노스톡 메센테로이데스 CJNU 0705 균주의 개똥쑥 추출물 고체 배지에서의 덱스트란 생성 결과이다[(a) 개똥쑥 추출물, (b) 개똥쑥 추출물 + 2% 수크로오즈, (c) 개똥쑥 추출물 + 2% 수크로오즈 + 3% 효모 추출물].
도 8은 류코노스톡 메센테로이데스 CJNU 0705 균주의 파슬리 추출물 고체 배지에서의 덱스트란 생성 결과이다[(a) 파슬리 추출물, (b) 파슬리 추출물 + 2% 수크로오즈, (c) 파슬리 추출물 + 2% 수크로오즈 + 3% 효모 추출물].
도 9는 류코노스톡 메센테로이데스 CJNU 0705 균주의 브로콜리 추출물 고체 배지에서의 덱스트란 생성 결과이다[(a) 브로콜리 추출물, (b) 브로콜리 추출물 + 2% 수크로오즈, (c) 브로콜리 추출물 + 2% 수크로오즈 + 3% 효모 추출물].
도 10은 류코노스톡 메센테로이데스 CJNU 0705 균주의 옥수수 수염 추출물 고체 배지에서의 덱스트란 생성 결과이다[(a) 옥수수 수염 추출물, (b) 옥수수 수염 추출물 + 2% 수크로오즈, (c) 옥수수 수염 추출물 + 2% 수크로오즈 + 3% 효모 추출물].
도 11은 류코노스톡 메센테로이데스 CJNU 0705 균주의 천연원료 추출물 액체배지에서의 덱스트란 생성을 관찰한 주사전자현미경 사진이다[(a) Tryptic soy broth, (b) Tryptic soy broth + 2% 수크로오즈, (c) 녹차 추출물 + 2% 수크로오즈 + 3% 효모추출물, (d) 당근 추출물 + 2% 수크로오즈 + 3% 효모추출물, (e) 개똥쑥 추출물 + 2% 수크로오즈 + 3% 효모추출물, (f) 파슬리 추출물 + 2% 수크로오즈 + 3% 효모추출물, (g) 브로콜리 추출물 + 2% 수크로오즈 + 3% 효모추출물, (h) 옥수수 수염 추출물 + 2% 수크로오즈 + 3% 효모추출물].
도 12는 류코노스톡 메센테로이데스 CJNU 0705 균주의 16S rRNA 유전자의 염기서열이다.
본 발명은 류코노스톡 메센테로이데스(Leuconostoc mesenteroides) CJNU 0705 균주(KCTC 13817BP)를 제공한다.
상기 균주는 한국인 모유에서 유래된 것으로서, 분석 결과 서열번호 1의 16S rRNA 유전자 염기서열을 포함하고(도 12 참조), 류코노스톡 메센테로이데스(Leuconostoc mesenteroides)로 동정되어, 류코노스톡 메센테로이데스 CJNU 0705(Leuconostoc mesenteroides CJNU 0705) 균주로서 생물자원센터(KCTC, Korean Collection for Type Cultures)에 특허 기탁되었다(기탁번호: KCTC 13817BP).
상기 균주를 수크로오즈(sucrose)가 함유된 배지에서 배양하는 경우에 콜로니로부터 광택의 점질물이 생성되어, 상기 균주가 덱스트란 생산 활성을 갖는다는 것이 확인되었다. 상기 배지에 첨가되는 수크로오즈는 균주 성장이 가능한 농도라면 제한되지 않으며, 예를 들어, 0.2% ~ 5%(w/v), 바람직하게는 1% ~ 3%(w/v)일 수 있다. 배양 온도는 균주 성장이 가능한 온도라면 제한되지 않으며, 예를 들어, 20 ~ 37 ℃, 바람직하게는 23 ~ 27 ℃일 수 있다.
상기 균주가 여드름 원인균인 Propionibacterium acnes에 대한 항균 활성을 나타내는지 여부를 한천 확산법(agar diffusion method)으로 확인한 결과, 콜로니 주변에 생육저해환(inhibition zone)이 형성되는 것이 관찰되어, 본 발명의 균주는 여드름 원인균인 Propionibacterium acnes에 대한 항균 활성을 갖는다는 것이 확인되었다.
상기 균주가 중금속 흡착능을 나타내는지 여부를 알아보기 위해, 상기 균주를 납 또는 카드뮴 등의 중금속과 함께 인큐베이션한 결과, 균주 표면에 중금속으로 추정되는 물질이 흡착되어 있는 것이 확인되어, 본 발명의 균주는 중금속 흡착능이 있다는 것이 확인되었다. 또한, 이러한 중금속 흡착능은 생균과 사균 모두에서 나타났으며, 생균에서 흡착 효율이 우수한 것으로 나타났다.
상기 본 발명의 균주의 특성에 따라, 본 발명은 상기 균주 또는 그 배양물을 포함하는 보습 조성물을 제공한다. 상기 보습 조성물에는 본 발명의 균주에 의해 생성된 덱스트란이 포함되어 있어 보습 효과를 나타낸다.
또한, 본 발명은 상기 균주 또는 그 배양물을 포함하는 여드름 원인균(Propionibacterium acnes)에 대한 항균용 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 균주 또는 그 배양물을 포함하는 중금속 흡착용 조성물을 제공한다. 상기 중금속은 바람직하게는 납 또는 카드뮴일 수 있다.
또한, 본 발명은 (a) 천연물 추출물을 제조하는 단계; 및 (b) 류코노스톡 메센테로이데스 CJNU 0705 균주(KCTC 13817BP)를 상기 제조된 천연물 추출물 및 수크로오즈(sucrose)가 함유된 배지에서 배양하는 단계를 포함하는 덱스트란의 생산방법을 제공한다.
본 발명의 덱스트란의 생산방법은 천연물 추출물을 제조하는 단계[즉, 단계(a)]를 포함한다. 구체적으로, 천연물을 물과 혼합하여 추출하고 원심분리와 감압여과하여 천연물 추출물을 얻는다. 상기 추출은 통상적으로 사용되는 추출 공정으로 수행될 수 있으며, 예를 들어, 90 ~ 100 ℃에서 0.5 ~ 5시간 열수 추출할 수 있다. 단계(a)에서 천연물 추출물에 사용되는 천연물은 녹차, 당근, 개똥쑥, 파슬리, 브로콜리, 옥수수 수염 및 이들의 혼합물로 이루어진 군에서 선택되는 1종일 수 있다.
본 발명의 덱스트란의 생산방법은 류코노스톡 메센테로이데스 CJNU 0705 균주(KCTC 13817BP)를 상기 제조된 천연물 추출물 및 수크로오즈(sucrose)가 함유된 배지에서 배양하는 단계[즉, 단계(b)]를 포함한다. 천연물 추출물은 열수 추출물을 그대로 사용하며 첨가되는 수크로오즈의 농도는 상기 설명한 바와 같다.
일 구현예에서, 단계(b)의 상기 배지는 효모 추출물을 추가로 포함할 수 있다. 포함되는 효모 추출물은 균주 성장이 가능한 농도라면 제한되지 않으며, 예를 들어, 0.1% ~ 10%(w/v), 바람직하게는 1% ~ 5%(w/v)일 수 있다.
이상의 방법으로 본 발명의 균주를 배양하는 경우에 덱스트란이 생성되는 것이 확인되었으며, 효모추출물을 추가한 경우에 덱스트란 생성 정도가 확연히 증가하여 광택의 고형 물질이 육안으로 뚜렷이 확인되었다. 또한, 각 천연물 추출물을 포함한 배지에서 덱스트란 생성 정도는 주사전자현미경 관찰로도 확인되었다.
이하, 본 발명을 실시예를 통하여 더욱 상세히 설명한다. 그러나, 하기 실시예는 본 발명을 예시하기 위한 것으로, 본 발명의 범위가 이에 제한되는 것은 아니다.
<실시예>
1. 균주의 분리 및 동정
(1) 미생물 기원 및 균주 분리
CJNU 0705 균주는 한국인 모유에서 유래하였다. 구체적으로, 모유를 수유하는 산모로부터 일정량의 모유를 기증 받아 실험실로 운반한 후 0.1% 펩톤수로 단계 희석하여 MRS 고체배지에 도말하였다. 24시간 배양한 후, 배지 상에 형성된 콜로니를 무작위로 채취하여 MRS 배지(broth)에서 배양한 다음, 3분획법으로 순수분리한 후, 다시 MRS 액체배지에 배양하고 글리세롤(최종농도 40%)을 첨가하여 -76℃ 극저온 냉동고에 보관하였다.
(2) 균주 동정
보관된 균주들을 대상으로 그람염색, 현미경 관찰 등을 통하여 유산균으로 추정되는 CJNU 0705 균주를 선별하였다(도 1 참조). 선별된 CJNU 0705 균주를 (주)마크로젠에 의뢰하여 16S rRNA 유전자 염기서열을 분석하여 동정한 결과, 류코노스톡 메센테로이데스(Leuconostoc mesenteroides)로 동정되었다(도 12 참조).
(3) 특허균주 기탁
류코노스톡 메센테로이데스 CJNU 0705 균주는 생물자원센터(KCTC, Korean Collection for Type Cultures)에 특허 기탁하였다(기탁번호: KCTC 13817BP).
2. 균주의 활성 평가
(1) 보습소재 덱스트란 생성
극저온 냉동고에 보관된 류코노스톡 메센테로이데스 CJNU 0705 균주를 Tryptic soy broth에서 계대 배양하여 활성화시킨 후 2% 수크로오즈(sucrose)가 함유된 Tryptic soy agar 고체배지에 2 ul 점적하여 25 ℃에서 배양하면서 경시적으로 덱스트란 생산 유무를 확인한 결과, 콜로니로부터 광택의 점질물(덱스트란)이 생산되는 것이 관찰되었다(도 2 참조).
(2) 여드름 원인균 Propionibacterium acnes 에 대한 항균활성
여드름 원인균으로 알려진 P. acnes에 대한 항균활성을 한천 확산법(agar diffusion method)으로 하기와 같이 확인하였다. 즉, 류코노스톡 메센테로이데스 CJNU 0705 균주 배양액 2 ul를 MRS 고체배지에 점적하여 37 ℃, 12시간 배양한 후, 그 위에 지시균(P. acnes KCTC 3314) 배양액 1%를 접종한 5 ml RCM soft agar(0.7% agar) 배지를 부었다. 이를 37 ℃, 혐기적인 조건으로 배양하면서 항균활성을 확인한 결과, 콜로니 주변에 생육저해환(inhibition zone)이 형성되는 것이 관찰되었다(도 3 참조).
(3) 중금속 흡착능
류코노스톡 메센테로이데스 CJNU 0705 균주에 대한 중금속 흡착능 실험을 하기와 같이 수행하였다. 즉, MRS broth에서 배양된 류코노스톡 메센테로이데스 CJNU 0705 균주 100 ul를 취해 원심분리(13,000 rpm, 1분)하여 상등액을 제거한 다음, 균체에 0.1% 펩톤수(납, 카드뮴 25 ppm 포함)를 첨가하여 30 ℃ 진탕배양기(100 rpm)에서 2시간 반응 시켰다. 이후 원심분리(13,000 rpm, 1분)하여 균체를 회수한 후, 주사전자현미경(SEM)으로 사진 촬영을 수행하였다. 전처리로서 에탄올을 50%→60%→70%→90%→95%→100%순으로 15분씩 상온에서 탈수하였으며, 100% 에탄올 20 ul로 현탁하여 0.22 um 멤브레인 필터(membrane filter)에 고정시킨 후 SEM 사진 촬영을 수행하였다. 그 결과(도 4 참조), 류코노스톡 메센테로이데스 CJNU 0705 균주 표면에 중금속(납, 카드뮴)으로 추정되는 물질이 흡착되어 있는 것이 확인되었다.
중금속 흡착능에 대한 정량분석을 위해 시료 조제 후, 한국교통대학교 공동실험실습관에 의뢰하여 하기와 같이 분석하였다. 시료의 조제는 증류수 5 ml 기준으로 최종 농도 100 ppm이 되게 중금속(납, 카드뮴)을 첨가한 후, 균 배양액 5 ml을 원심분리(10,000 rpm, 5분)하여 상등액 제거한 다음, 물 100 ul에 현탁하여 중금속 용액에 첨가하였다. 30 ℃, 200 rpm으로 6시간 교반한 후 원심분리(10,000 rpm, 20 ℃, 10분)하여 상등액을 여과(0.45um)한 후 시료로 사용하였다. 분석 결과를 하기 표 1에 나타내었다. 표 1에 나타난 바와 같이, 류코노스톡 메센테로이데스 CJNU 0705 균주는 납과 카드뮴에 대하여 흡착능을 보였으며 생균과 사균 모두 효과가 있었다. 사균은 생균을 80 ℃, 30분 처리하여 제조하였다.
대조구(무처리구*) 생균 처리 사균 처리
납(Pb) (ppm) 55.90 13.28 33.85
카드뮴(Cd) (ppm) 20.34 15.09 15.57
(*무처리구: 균 대신 물을 첨가함)
(4) 천연추출물을 활용한 덱스트란 생성
피부 건강 기능성 원료로 알려져 있는 천연원료 중에 녹차, 당근, 개똥쑥, 파슬리, 브로콜리, 옥수수 수염의 건조분말(최종농도 2%)을 증류수와 혼합하여 100℃, 1시간 열수 추출한 후, 원심분리(4,000 rpm, 4 ℃, 10분)와 감압여과(0.45 um filter 사용)하여 추출물 시료로 제조하였다. 천연원료 추출물, 수크로오즈(최종농도 2%), 효모추출물(최종농도 3%)을 조합하여 최적의 덱스트란 생산 조건을 확립하였으며 이 조건에서 균의 생장도 가장 활발하였다(도 5 내지 도 10 참조). 각 천연물 추출물에 수크로오즈(최종농도 2%)를 추가한 경우에 덱스트란이 생성되는 것이 확인되었으며, 효모추출물(최종농도 3%)을 추가한 경우에는 덱스트란 생성 정도가 확연히 증가하여 광택의 고형 물질이 육안으로 뚜렷이 확인되었다.
또한, 동일 조건으로 액상에서 배양한 균체에 대한 덱스트란 생성 유무를 주사전자현미경(SEM)으로 관찰한 결과(도 11 참조), 각 천연물 추출물에 수크로오즈(최종농도 2%)와 효모추출물(최종농도 3%)을 추가한 경우에 세포 주변에 덱스트란이 생성되어 있는 것이 뚜렷하게 관찰되었다.
한국생명공학연구원 생물자원센터 KCTC13817BP 20190304
<110> KOREA NATIONAL UNIVERSITY OF TRANSPORTATION Industry-Academic Cooperation Foundation <120> Leuconostoc mesenteroides CJNU 0705 and use thereof <130> P190321 <160> 1 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 1576 <212> RNA <213> Leuconostoc mesenteroides <400> 1 cccctttaat aggtttttat tatcactctc aggatgaacg ctggcggcgt gcctaataca 60 tgcaagtcga acgcacagcg aaaggtgctt gcacctttca agtgagtggc gaacgggtga 120 gtaacacgtg gacaacctgc ctcaaggctg gggataacat ttggaaacag atgctaatac 180 cgaataaaac ttagtgtcgc atgacaaaaa gttaaaaggc gcttcggcgt cacctagaga 240 tggatccgcg gtgcattagt tagttggtgg ggtaaaggcc taccaagaca atgatgcata 300 gccgagttga gagactgatc ggccacattg ggactgagac acggcccaaa ctcctacggg 360 aggctgcagt agggaatctt ccacaatggg cgaaagcctg atggagcaac gccgcgtgtg 420 tgatgaaggc tttcgggtcg taaagcactg ttgtatggga agaacagcta gaataggaaa 480 tgattttagt ttgacggtac cataccagaa agggacggct aaatacgtgc cagcagccgc 540 ggtaatacgt atgtcccgag cgttatccgg atttattggg cgtaaagcga gcgcagacgg 600 tttattaagt ctgatgtgaa agcccggagc tcaactccgg aatggcattg gaaactggtt 660 aacttgagtg cagtagaggt aagtggaact ccatgtgtag cggtggaatg cgtagatata 720 tggaagaaca ccagtggcga aggcggctta ctggactgca actgacgttg aggctcgaaa 780 gtgtgggtag caaacaggat tagataccct ggtagtccac accgtaaacg atgaacacta 840 ggtgttagga ggtttccgcc tcttagtgcc gaagctaacg cattaagtgt tccgcctggg 900 gagtacgacc gcaaggttga aactcaaagg aattgacggg gacccgcaca agcggtggag 960 catgtggttt aattcgaagc aacgcgaaga accttaccag gtcttgacat cctttgaagc 1020 ttttagagat agaagtgttc tcttcggaga caaagtgaca ggtggtgcat ggtcgtcgtc 1080 agctcgtgtc gtgagatgtt gggttaagtc ccgcaacgag cgcaaccctt attgttagtt 1140 gccagcattc agatgggcac tctagcgaga ctgccggtga caaaccggag gaaggcgggg 1200 acgacgtcag atcatcatgc cccttatgac ctgggctaca cacgtgctac aatggcgtat 1260 acaacgagtt gccaacccgc gagggtgagc taatctctta aagtacgtct cagttcggat 1320 tgtagtctgc aactcgacta catgaagtcg gaatcgctag taatcgcgga tcagcacgcc 1380 gcggtgaata cgttcccggg tcttgtacac accgcccgtc acaccatggg agtttgtaat 1440 gcccaaagcc ggtggcctaa ccttttagga aggagccgtc taaggcagga cagatgactg 1500 gggtgaagtc gtaacaaggt agccgtagga gaacctgcgg ctggatacct tccttttcta 1560 actggatcac ctcctt 1576

Claims (11)

  1. 류코노스톡 메센테로이데스(Leuconostoc mesenteroides) CJNU 0705 균주(KCTC 13817BP).
  2. 제1항에 있어서, 상기 균주가 서열번호 1의 16S rRNA 유전자 염기서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 류코노스톡 메센테로이데스 CJNU 0705 균주(KCTC 13817BP).
  3. 제1항에 있어서, 상기 균주가 덱스트란 생산 활성을 갖는 것을 특징으로 하는 류코노스톡 메센테로이데스 CJNU 0705 균주(KCTC 13817BP).
  4. 제1항에 있어서, 상기 균주가 Propionibacterium acnes에 대한 항균 활성을 갖는 것을 특징으로 하는 류코노스톡 메센테로이데스 CJNU 0705 균주(KCTC 13817BP).
  5. 제1항에 있어서, 상기 균주가 납 또는 카드뮴의 중금속 흡착능이 있는 것을 특징으로 하는 류코노스톡 메센테로이데스 CJNU 0705 균주(KCTC 13817BP).
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항의 균주 또는 그 배양물을 포함하는 덱스트란 포함 보습용 화장품 조성물.
  7. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항의 균주 또는 그 배양물을 포함하는 Propionibacterium acnes에 대한 항균용 조성물.
  8. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항의 균주 또는 그 배양물을 포함하는 납 또는 카드뮴의 중금속 흡착용 화장품 조성물.
  9. 삭제
  10. (a) 천연물 추출물을 제조하는 단계; 및
    (b) 류코노스톡 메센테로이데스 CJNU 0705 균주(KCTC 13817BP)를 상기 제조된 천연물 추출물 및 수크로오즈(sucrose)가 함유된 배지에서 배양하는 단계를 포함하는 덱스트란의 생산방법.
  11. 제10항에 있어서, 단계(b)의 상기 배지가 효모 추출물을 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 덱스트란의 생산방법.
KR1020190035732A 2019-03-28 2019-03-28 류코노스톡 메센테로이데스 cjnu 0705 균주 및 이의 용도 KR102094768B1 (ko)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020190035732A KR102094768B1 (ko) 2019-03-28 2019-03-28 류코노스톡 메센테로이데스 cjnu 0705 균주 및 이의 용도

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020190035732A KR102094768B1 (ko) 2019-03-28 2019-03-28 류코노스톡 메센테로이데스 cjnu 0705 균주 및 이의 용도

Publications (1)

Publication Number Publication Date
KR102094768B1 true KR102094768B1 (ko) 2020-03-30

Family

ID=70003209

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020190035732A KR102094768B1 (ko) 2019-03-28 2019-03-28 류코노스톡 메센테로이데스 cjnu 0705 균주 및 이의 용도

Country Status (1)

Country Link
KR (1) KR102094768B1 (ko)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR102210223B1 (ko) 2020-06-25 2021-02-02 한국교통대학교산학협력단 락토바실러스 파라카제이 cjnu 1877 균주 및 이의 용도
KR20220030376A (ko) * 2020-08-28 2022-03-11 한국식품연구원 신규의 류코노스톡 메센테로이데스 Wikim0120 균주 및 이를 이용한 복합 미선나무 발효 추출물

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20070089474A (ko) 2006-02-28 2007-08-31 (주)아모레퍼시픽 여드름 피부 개선용 화장료 조성물
KR20170072084A (ko) 2015-12-16 2017-06-26 충북대학교 산학협력단 신규한 류코노스톡 메센테로이드 l-96 균주 및 이의 용도
KR20170089474A (ko) * 2016-01-26 2017-08-04 주식회사 효성 탄소섬유 다발 및 이의 제조방법

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20070089474A (ko) 2006-02-28 2007-08-31 (주)아모레퍼시픽 여드름 피부 개선용 화장료 조성물
KR20170072084A (ko) 2015-12-16 2017-06-26 충북대학교 산학협력단 신규한 류코노스톡 메센테로이드 l-96 균주 및 이의 용도
KR20170089474A (ko) * 2016-01-26 2017-08-04 주식회사 효성 탄소섬유 다발 및 이의 제조방법

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Biotechnology & Biotechnological Equipment, 2014, Vol. 28, No. 4, 627-634
Carbohydr. Polym., Vol.112, pp.556-62(2014.11.04.) *
Turk. J. Biochem., Vol.31, pp.21-26(2006.) *

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR102210223B1 (ko) 2020-06-25 2021-02-02 한국교통대학교산학협력단 락토바실러스 파라카제이 cjnu 1877 균주 및 이의 용도
KR20220030376A (ko) * 2020-08-28 2022-03-11 한국식품연구원 신규의 류코노스톡 메센테로이데스 Wikim0120 균주 및 이를 이용한 복합 미선나무 발효 추출물
KR102435154B1 (ko) 2020-08-28 2022-08-25 한국식품연구원 신규의 류코노스톡 메센테로이데스 Wikim0120 균주 및 이를 이용한 복합 미선나무 발효 추출물

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR101399712B1 (ko) 신규 유발효물 및 그의 이용
KR101111709B1 (ko) 신규 유산균
KR101141781B1 (ko) 신규 유산균을 이용한 발효유의 제조방법
CN107988115B (zh) 植物乳杆菌及其复合益生菌发酵液与制备方法
JP4456160B2 (ja) 新規乳酸菌株及びその利用
CN114072128B (zh) 具有皮肤保湿以及皮肤再生功能的皮肤益生菌块组合物的制造方法
CN113604395B (zh) 一株可发酵石斛且其发酵液可改善皮肤质量的植物乳杆菌
KR102094768B1 (ko) 류코노스톡 메센테로이데스 cjnu 0705 균주 및 이의 용도
EA024087B1 (ru) Способ получения ферментированного молочного продукта при синергетической ферментации lactobacillus rhamnosus и lactobacillus paracasei subsp. paracasei
CN108441436A (zh) 一种副干酪乳杆菌及其应用
CN106434483A (zh) 一种布氏乳杆菌及其应用
WO2014108937A1 (ja) 新規乳酸菌
CN114480214A (zh) 一株西藏阿里牦牛奶疙瘩中分离的副干酪乳杆菌及应用
KR101647631B1 (ko) 락토바실러스플란타룸 wikim18을 포함하는 진세노사이드 생물전환용 조성물
KR102234499B1 (ko) 신규 유산균 락토바실러스 플란타럼 kcc-35 균주
CN111836883B (zh) 芽孢杆菌属细菌、白介素-22产生诱导剂、皮肤屏障功能增强剂
KR102207949B1 (ko) 신규 유산균 락토바실러스 플란타럼 kcc-36 균주
RU2816652C1 (ru) Штамм бактерий lacticaseibacillus paracasei subsp. paracasei 1338 вкм b-3753d для производства кисломолочных продуктов и в качестве пробиотика
KR20080025795A (ko) 항균 활성을 갖는 락토바실루스 파라플란타룸 knuc25 및 그 배양액
JP5351113B2 (ja) ビフィドバクテリウム属細菌含有発酵食品の製造方法
JP4095816B2 (ja) ガラクトオリゴ糖の製造法
RU2787384C1 (ru) Штамм бактерий bacillus subtilis subsp. inaquosorum, обладающий антагонистическим действием в отношении патогенных и условно-патогенных микроорганизмов
KR101342791B1 (ko) 1,4-디히드록시-2-나프토산 생산능을 가지는 락토바실러스 카제이 lp1 균주 및 이의 이용
TWI812128B (zh) 乳酸菌或其發酵物用於維持或改善腸胃狀況的用途
Pham et al. Cholesterol-lowering potential and exopolysaccharide biosynthesis of Lactobacillus spp. isolated from human milk

Legal Events

Date Code Title Description
N231 Notification of change of applicant
GRNT Written decision to grant